BRPI0908507A2 - genes e enzimas degradadores de biopolímero termoacidofílico e termofílico de alicyclobacillus acidocaldarius e métodos e organismos relacionados - Google Patents

Abstract

ENES E ENZIMAS DEGRADADORES DE BIOPOLÍMERO TERMOACIDOFÍLICO E TERMOFÍLICO DE ALICYCLOBACILLUS ACIDOCALDARIUS E MÉTODOS E ORGANISMOS RELACIONADOS. A presente invenção refere-se a sequências de ácido nucleico e polipeptídeos purificadas e/ou isoladas que codificam os polipeptídeos de Alicyclobacillus acidocaldarius. Além disso, são fornecidos métodos para, pelo menos parcialmente, degradar, clivar ou remover polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, Iignina, amido, quitina, polihidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupos de decoração xilano, glucano, galactano ou manano utilizando sequências de ácido nucleico e polipeptideos isoladas e/ou purificadas que codificam polipeptídeos de Alicyclobacillus acidocaldarius.

Description

~ b m m Relatório Descritivo da Patente de lnvenção para "GENES E

ENZIMAS DEGRADADORES DE BIOPOLÍMERO TERMOACIDOFÍLICO E TERMOFÍLICO DE ALICYCLOBACILLUS ACIDOCALDARIUS E MÉTO- DOS E ORGANISMOS RELACIONADOS". _ 5 RElVlNDICAçÃO DE PRIORIDADE Este pedido reivindica o beneficio de e a prioridade para o Pedi- do de Patente Provisória U.S. 61/025.136, depositado em 31 de janeiro de 2008 para "GENES E ENZIMAS DEGRADADORES DE BIOPOLÍMERO TERMOFÍLICOS E TERMOAClDOFÍLlCOS DE ALICYCLOBACILLUS ACl- 0 10 DOCALDARIUS E MÉTODOS E ORGANISMOS RELACIONADOS" aqui in- corporados em sua integralidade para referência.

DIREITOS DO GOVERNO O Governo dos Estados Unidos tem certos direitos na presente invenção, nos termos do Contrato No. DE-AC07-05ID14517 entre o Depar- - 15 tamento de Energia dos Estados Unidos e Battelle Energy Alliance, LLC.

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se, em geral, à biotecnologia- Mais especificamente, a presente invenção refere-se a polipeptídeos purificados e/ou isolados e sequências de ácido nucleico que codificam polipeptideos de 20 A/icyc/obaci//us acidoca/dahus e a métodos para o seu uso. 0 ANTECEDENTES Diluir a hidrólise ácida para remover a hemicelulose a partir de materiais |ignoce|u|ósicos é uma das técnicas mais desenvolvidas de pré- tratamento de lignocelulose e atualmente é favorecida (Hemelinck et al., 25 2005), pois resulta em rendimentos bastante elevados de xilose (75 a 9O°/j). As condições que são normalmente utilizadas variam de 0,1 a 1,5% de ácido sulfürico e as temperaturas acima de 160° C. As altas temperaturas utiliza- das resultam em niveis significativos de produtos de decomposição térmica que inibem a fermentação microbiana subsequente (Lavarack et al., 2002). A 30 hidrólise em alta temperatura requer sistemas pressurizados, geração de vapor e materiais resistentes à corrosão na constmção do reator, devido à natureza mais corrosiva do ácido em temperaturas elevadas.

m A hidrólise ácida em baixa temperatura é de interesse, já que têm o potencial para superar algumas das deficiências citadas (Tsao et al., 1987). Foi demonstrado que 90% da hemicelulose podem ser solubilizados como oligômeros em poucas horas de tratamento ácido na faixa de tempera- " -5 tura de 80°C -1OO°C.

Também foi demonstrado que o açúcar produzido na hidrólise ácida em baixa temperatura é estável, nas mesmas condições por, .. . pelo menos 24 horas, sem degradação detectável dos produtos de decom- posição furfural.

Por fim. o ácido sulfúrico normalmente utilizado em pré- tratamentos não é tão corrosivo em temperaturas mais baixas.

O uso de pré-

0 10 tratamentos ácidos em temperatura mais baixa exige tempos de reaçâo mui- to maiores para alcançar os niveis aceitáveis de hidrólise.

Embora seja de- monstrado 90% de solubilização da hemicelulose (Tsao, 1987), a maior par- te dos açúcares está na forma de oligômeros e não está na forma monomé- rica.

Os organismos atualmente favorecidos nas etapas subsequentes de

- 15 fermentação não podem utilizar oligômeros de açúcar (Garrote et al., 2001) e os hidrolisados que contêm oligõmeros exigem outro processamento para monômeros, geralmente como uma segunda hidrólise alcalina ou ácida (Gar- rote et al., 2001)- Outros métodos de pré-tratamento ácido incluem auto-hidrólise e 20 lavagem com água quente.

Na auto-hidrólise, a biomassa é tratada com va- 0 por em altas temperaturas (~240° C). que cliva cadeias Iaterais de acetila associadas com a hemicelulose para a produção de ácido acético, que fun- ciona de forma semelhante ao ácido sulfúrico na hidrólise ácida.

As tempera- turas de pré-tratamento mais elevadas são necessárias em comparação com 25 a hidrólise ácida diluida já que o ácido acético é um ácido muito mais fraco do que o sulfúrico.

Em temperaturas abaixo de 240"C, a hemicelulose não é com- pletamente hidrolisada em monômeros de açúcar e tem altos niveis de oli- gômeros (Garrote et al., 2001). Na lavagem com água quente, a biomassa 30 entra em contato com água (sob pressão) em temperaturas elevadas a 160° C - 220°C Este processo pode efetivamente hidrolisar mais do que 90% da hemicelulose presente e a hemicelulose soIubilizada era tipicamente acima

» - 0 m de 95% na forma de oIigômeros (Liu e Wyman, 2003).

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO As modalidades da invenção referem-se a sequências de nucle- otídeo purificadas e/ou isoladas do genoma de A//cyc/obaci/lus acidoca/dari- -5 us, ou um homólogo ou fragmento do mesmo- Em uma modalidade da in- d venção, a sequência de nucleotideos ê selecionada a partir de pelo menos um dos números SEQ ID NOS:l, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336, 353, 370, 387, 404, 421,

438. 455, 457, 459, 461, 463 ou um homólogo ou fragmento do mesmo. Em 0 10 outra modalidade da invenção, o homólogo é selecionado do grupo que con- siste em uma sequência de nucleotideos que tenham pelo menos 80% de identidade de sequência para SEQ ID NOS:l, 18, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167 , 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336, 353. 370, 387, 404, 421, Olj 438 e pelo menos 93% de identidade de sequência para SEQ - 15 ID NO:461; pelo menos 94% de identidade de sequência para SEQ ID NO:35; pelo menos 96% de identidade de sequência para SEQ ID NO:459: pelo menos 99% de identidade de sequência para SEQ ID NO:463; pelo menos 99,6% de identidade de sequência para SEQ ID NO:457; e pelo me- nos 99,7% de identidade de sequência para SEQ ID NO:455. 20 As modalidades da invenção podem ainda se referir a uma se- O quência de ácido nucleico isolada e/ou purificada que consiste em uma se- quência de ácido riucleico que codifica um polipeptídeo selecionado do gru- po que consiste em um polipeptideo com pelo menos 90% de identidade de sequência para SEQ ID NOS:2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 25 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422, ou 439 e pelo menos 93% de identidade de sequência para SEQ ID NO:462: pelo menos 94°/o de identidade de sequência para SEQ ID NO:36; pelo menos 96% de identidade de sequência para SEQ ID NO:460; pelo merios 99% de identidade de sequência para SEQ ID NO:464: pelo menos 99,6% de identi- 30 dade de sequência para SEQ ID NO:458; e pelo menos 99,7% de identidade de sequência para SEQ ID NO:456. As modalidades da invenção também se referem aos polipepti-

f deos purificados e/ou isolados codificados por uma sequência de nucleoti- . deo do genoma de Alicyc/obaci//us acidoca/darius, ou um homólogo ou frag- mento do mesmo- Em outra modalidade da invenção, o homólogo é selecio- nado do grupo que consiste em uma sequência de nucleotídeos que tenham 5 pelo menos 80% de identidade de sequência para SEQ ID NOS:l, 18, 51,

68. 85, 101, 118, 135, 152, 167 , 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336, 353, 370, 387, 404, 421, ou 438 e pelo menos 93% de identidade de sequência para SEQ ID NO:461; pelo menos 94% de identidade de se- quência para SEQ ID NO:35; pelo menos 96°6 de identidade de sequência 0 10 para SEQ ID NO:459; pelo menos 99% de identidade de sequência para SEQ ID NO:463; pelo menos 99,6% de identidade de sequência para SEQ ID NO:457; e pelo menos 99,7% de identidade de sequência para SEQ ID NO:455. Em outra modalidade da invenção, a sequência de nucleotídeo é - 15 selecionada a partir de SEQ ID NOS:l, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336, 353, 370, 387, . 404, 421, 438, 455, 457, 459, 461, 463 ou seu homólogo ou fragmento. Em ainda outra modalidade, o polipeptideo possui a sequência de aminoácido da SEQ ID NOS: 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 20 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422, 439, 456, 458, 0 460, 462, ou 464. Em ainda outra modalidade, o polipeptideo é selecionado do grupo que consiste em um polipeptídeo com pelo menos 90% de identi- dade de sequência para SEQ ID NOS:2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 25 422, ou 439; pelo menos 93% de identidade de sequência para SEQ ID NO:462; pelo menos 94% da identidade de sequência para SEQ ID NO:36: pelo menos 96% de identidade de sequência para SEQ ID NO:460; pelo menos 99% de identidade de sequência para SEQ ID NO:464; pelo menos 99,6°6 da identidade de sequência para SEQ ID NO:458; e pelo menos 30 99,7% de identidade de sequência para SEQ ID NO:456. Nas modalidades da invenção, os polipeptídeos podem ser aci- dofilicos e/ou termofilicos. Nas modalidades adicionais, os polipeptídeos po-

dem ser glicosilados, peguilados e/ou pós-translacionalmente mod ificados.

As modalidades da invenção incluem métodos para, pelo menos parcialmente, degradar, clivar ou remover polissacarídeos, lignocelulose, ce- lulose, hemicelulose, Iignina, am ido, quitina, poIi-hidroxibutirato, heteroxila- 5 nos, glicosídeos, grupo de decoração xilano, glucano, galactanoe/ou mana- no.

Tais métodos podem incluir a colocação de um polipeptideo selecionado do grupo que consiste em um polipeptideo com pelo menos 90% de identi- dade de sequência para SEQ ID NOS:2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136. 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304. 321, 337, 354, 371, 388, 405,

D 10 422, ou 439; pelo menos 93% de identidade de sequência para SEQ ID NO:462; pelo menos 94% de identidade de sequência para SEQ ID NO:36: pelo menos 96°/o de identidade de sequência para SEQ ID NO:460; pelo menos 99% de identidade de sequência para SEQ ID NO:464: pelo menos 99,6% de identidade de sequência para SEQ ID NO:458: e pelo menos

- 15 99,7% de identidade de sequência para SEQ ID NO:456 em fluido em conta- to com um polissacarideo, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, a- . mido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideo, grupo de deco- ração xilano, glucano, galactanoe/ou manano.

Estes e outros aspectos da invenção ficarão aparentes para a- 20 queles versados na técnica, tendo em conta os ensinamentos aqui contidos. 0 BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS As figuras 1A e 1B mostram um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO: 2 (RAACO0169), um esterase da superfamília alfa-beta hidrola- se e gi:121533815, gi:89099582, gi:16078568, gi:15615150, e gi:124524344 25 (SEQ ID NOS:3-7, respectivamente), que são todos esterases da superfami- lia atfa-beta hidrolase.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequên- cias alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 2A e 2B mostram um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO:19 (RAACO0501), um alfa beta hidrolase, gi:125974699, 30 gi:15613871, gi:5457696, gi:14520481, e gi:40744233 e (SEQ ID NOS:20-24, respectivamente), que são todos alfa beta hidrolases.

Os ami- noácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 3A, 3B e 3C mostram um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO36 (RAACO0568), um alfa beta hidrolase, gi:6686567, gi:4586418, gi|89098051, and gi|114844717 (SEQ ID NOS:37-40, respecti- 5 vamente), que são todos alfa beta hidrolases.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 4A, 4B e 4C mostram um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO: 52 (RAACO0594), e gi|16131527, gi|52081844, gi|52787233, gi|16504867. e gi]16422318 (SEQ ID NOS:53 -57, respectiva-

D 10 mente), que são todos alfa-xilosidases.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 5A e 5B mostram um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO:69 (RAACO0602), um alfa-L-arabinofuranosidase e gi:6079924, gi:89095985, gi:15614424, gi:52081375, e gi:52786751 e (SEQ ID 15 NOS:70-74, respectivamente), que são todos alfa-L-arabinofuranosidases.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indica- dos em negrito.

As figuras 6A e 6B mostram um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO:86 (RAACO0798), uma hidrolase associada à parede celular e 20 gi|15893601, gi|15896196, gi|15893600 e gi|116513351 (SEQ ID NOS: 0 87-90, respedivamente), que são todas hidrolases associadas à parede ce- lular.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 7A e 7B mostram um alinhamento de sequência entre 25 SEQ ID NO: 102 (RAACOO1076), uma altronato hidrolase e gij15613053, gi|121533397, gi|52081816, gi|52787203, e gi[15893984 (SEQ ID NOS: 103- 107, respectivamente), que são todas altronato hidrolases.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito- As figuras 8A e 8B mostram um alinhamento de sequência entre 30 SEQ ID NO: 119 (RAAC04341), e gi|125973125, gi|76796625, gi|20515428, gi|114843317, e gi|76795342 (SEQ ID NOS:120-124, respectivamente), que são todos celulase/endoglucanase Ms.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 9A e 9B mostram um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO: 136 (RAAC04342), e gi|125973126, gi|20515429, gi|76796624. gi|114843316 e gi|15893508 (SEQ ID NOS:137-141, respectivamente), que ' 5 são todos celulase/endoglucanase Ms.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito. .. A figura 10 mostra um alinhamento de sequência entre SEQ ID NO: 153 (RAAC04343), um M celulase/endoglucanase e gi:20515430, gi:76796623, gi:125973127, e gi:125973126 (SEQ ID NOS:154-156, respec-

D 10 tivamente). que são todos celulase/endoglucanase Ms.

Os aminoácidos co- muns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 11A-11C mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 168 (RAACO1275), uma poligalacturonase e gi:89098529, gi:116623151, gi:116620373, gi:52081815, e gi:52787202 (SEQ ID

- 15 NOS:169-173, respectivamente), que são todos poligalacturonase.

Os ami- noácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito.

As figuras 12A-12C mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 185 (RAACO1615), uma alfa-galactosidase e gi|15614786, 20 gi|9096i985, gi|148544139, gij76796346, e gi:114844315 (SEQ ID 0 NOS:186-190, respectivamente), que sào todos alfa-galactosidases.

Os a- minoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas sào indicados em negrito.

As figuras 13A-13K mostram um alinhamento de sequência en- 25 tre SEQ ID NO: 202 (RAACO1621), uma celobiose fosforilase e gi|125973736, gi|114844102, gi|20517160, gi|76795700, e gi|118725340 (SEQ ID NOS:203-207, respectivamente), que são todos celobiose fosforila- ses.

Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito. 30 As figuras 14A-14C mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 219 (RAACO1755), e gi|15616253, gi|89099466, gi|17227827, gi[72163378, e gi|13470878 (SEQ ID NOS:220 -224, respecti-

vamente), que sâo todos enzimas desramificadoras de glicogênio. Os ami- noácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito. As figuras 15A e 15B mostram um alinhamento de sequência en- 5 tre SEQ ID NO: 236 (RAACO1887), um M celulase/endoglucanase e gi|52081384, gij124521982, gi|89098880, gij121533826, and gi|15615819 . (SEQ ID NOS:237-240, respectivamente), que são todos celula- se/endoglucanase Ms. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequên- cias alinhadas são indicados em negrito.

D 10 As figuras 16A e 16B mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 253 (RAACO1897), uma acetii esterase/acetil hidrolase e gij21221842, gi|13470513. gi|13471782, gi|16329563, and gi|15600577 (SEQ ID NOS: 254-258, respectivamente), que são todos acetil estera- se/acetil hidrolase. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências 15 alinhadas são indicados em negrito, As figuras 17A e 17B mostram um alinhamento de sequência en- " tre SEQ (D NO: 270 (RAACO1917), um beta-1-4-xilanose e gi|114054545, gi|134266943, gi|39654242, gi|61287936, and gi|3201483 (SEQ ID NOS:271-275, respectivamente), que são todos beta-1-4-xilanoses. Os ami- 20 noácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em 0 negrito- As figuras 18A e 18B mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 287 (RAAC02404), um cinamoil éster hidrolase e gi|76796576. gi|114845181, gi|15896898, gij15806073, e gi|58448090 (SEQ 25 ID NOS: 288-292, respectivamente), que são todos éster hidrolases de ci- namoila. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito- As figuras 19A e 19B mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 304 (RAAC02424), um carboxilesterase tipo B e 30 gi|56421584, gi|134105165, gi|124521931, gi|33311865, e gi|138896639 (SEQ ID NOS:305-309, respectivamente), que são todos carboxilesterase tipo Bs. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito. " As figuras 20A-20C mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 321 (RAAC02616), uma beta-galactosidase/beta- glucuronodase e gi|29377189, gi|116493950, gi|40745013, e gi|49176308 " "5 (SEQ ID NOS:322-325, respectivamente), que são todos beta- . galactosidase/beta-glucuronidase. Os aminoácidos comuns para três ou

P - mais sequências alinhadas são indicados em negrito. As figuras 21A -21D mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 337 (RAAC02661), um alfa-1-2-glucuronidase xilano e 0 10 gi|15613624, gi|118725970, gi|148270004, gi|15642830, and gi|116621784 (SEQ ID NOS:338-342. respectivamente), que são todos alfa-1-2- glicuronidase xilanos. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito. As figuras 22A-22C mostram um alinhamento de sequência en- · 15 tre SEQ ID NO: 354 (RAAC02925), uma 3-hidróxi-isobutiril-CoA hidrolase e gi|52080473, gi|17552962, gi|15292329, gi|66851010, and gi|40739053 " (SEQ ID NOS:355-359, respectivamente), que são todos 3-hidróxi-isobutiril- COA hidrolases. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências ali- nhadas são indicados em negrito. 20 As figuras 23A-23D mostram um alinhamento de sequência en- 0 tre SEQ ID NO: 371 (RAAC03001), uma glicosidase relacionada à beta- glicosidase B e gi|125973771, gi|116617985, gi|116494248 gi|116334524, e gi|66851551 (SEQ ID NOS:372-376, respectivamente), que sào todos glico- sidases relacionadas a beta-glicosidase B. Os aminoácidos comuns para 25 três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito. As figuras 24A e 24B mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 388 (RAAC02913), uma chito-oligossacarideo desacetilase e gi|15614969, gi|124523066, gi|114843671 gi|89101184, e gi|2634042 (SEQ ID NOS:389-393, respectivamente), que sâo chito-oligossacarideo desaceti- 30 lase. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito, As figuras 25A e 25B mostram um alinhamento de sequência en-

d O tre SEQ ID NO: 405 (RAAC02839). uma ch ito-oligossacarÍdeo desacetilase e · gi|1595264, gi|20803949, gi|1738038i gi|128438, e gi|1001913 (SEQ ID NOS:406-409, respectivamente), que são chito-oligossacarídeo desacetila- se. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas sào in- " "5 dicados em negrito. As figuras 26A e 26C mostram um alinhamento de sequência . - entre SEQ ID NO: 422 (RAACO0961), uma chito-oligossacarideo desacetila- se e gij124523411, gi|158060979, gi|21219643 gi|13475158 e gi|21219455 (SEQ ID NOS:423-427, respectivamente), que são chito-oligossacarideo de- D 10 sacetilase. Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são indicados em negrito. As figuras 27A e 27B mostram um alinhamento de sequência en- tre SEQ ID NO: 439 (RAACO0361), uma chito-oligossacarideo desacetilase e gi|52078651, gi|16077225, gi|89100395 gi|15612806, e gi|121535454 (SEQ · 15 ID NOS:440-444, respectivamente), que são chito-oligossacarideo desaceti- lase- Os aminoácidos comuns para três ou mais sequências alinhadas são e indicados em negrito-

MODALIDADE PARA REALIZAR A INVENÇÃO A lignocelulose é uma matriz tridimensional altamente heterogê- 20 nea composta principalmente de celulose. hemicelulose e lignina. Muitos 0 combustiveis e produtos químicos podem ser feitos a partir destes materiais lignocelulósicos, Para utilizar a biomassa lignocelulósica para a produção de combustiveis e produtos químicos através de processos fermentativos, é ne- cessário converter os polissacarideos vegetais de monômeros de açúcar, 25 que depois são fermentados para produtos usando uma variedade de micro- organismos. A hidrólise direta de Iignocelulose por ácidos minerais para monômeros é possÍvel em alta temperatura e pressão, levando a perdas de produtividade devido à decomposição térmica dos açúcares. Utilizando en- zimas existentes comercialmente disponíveis, uma primeira estratégia para 30 reduzir essas perdas de produção é realizar o pré-tratamento na gravidade reduzida para produzir oligômeros solúveis, seguido pelo uso de celulases para uso e hemicelulases para despolimerizar os polissacarideos em tempe-

raturas moderadas. Em uma segunda abordagem, a adição de enzimas hi- " droliticas termotolerantes de ácido estável, incluindo celulases, xilanoses e outras hemicelulases para a pasta de biomassa durante o pré-tratamento permite o uso de temperaturas mais reduzidas e as pressões durante o pré- " "5 tratamento, bem como materiais de construção mais baratos, reduzindo tan-

P to os custos de capital e energia. Uma extensão desta segunda abordagem q é combinar o pré-tratamento da gravidade reduzida assistida por enzima, juntamente com a fermentação, nas mesmas condições, o que reduz ainda mais os custos.

0 10 Para as enzimas disponiveis comercialmente a serem utilizadas, a estratégia 1 deve ser usada. A segunda abordagem representa uma me- lhoria significativa na técnica, porque o pré-tratamento e a bioconversão de polissacarídeos em produtos podem ser alcançados em menos etapas/vasos e sem alterações intermediárias nas condições do processo.

· 15 As modalidades da invenção referem-se, em parte, às sequên- cias de genes e sequências de proteinas codificadas pelos genes de A/icy- . c/obaci//us acidoca/darius. Os genes incluídos sào aqueles necessários para despolimerizar biopolimeros incluindo polissacarideos lignocelulósicos, ami- dos, quitina, poli-hidroxibutirato e semelhantes aos monômeros ou oligôme- 20 ros. As atividades enzimáticas intracelulares serão termofilicas na natureza e 0 exernplos de genes semelhantes são descritos na literatura. As atividades enzimáticas extracelulares serão termoacidofilicas (simultaneamente termo- fílicas e acidofílicas)- As seguintes classes de enzimas são incluidas para despolimerização de polissacarideos: glicosil hidrolases (ou hidrolases de 25 glicosídeos): esterases incluindo esterases acetilxilano e esterases de ácido p-cumáricos e esterases de ácido ferúlico e uronidases. Uma classe adicio- nal de enzimas para despolimerização de biopolimero inclui enzimas degra- dadoras de poli-hidroxibutirato. A presente invenção refere-se às sequências de nucleotideos 30 que compreendem sequências de nucleotídeos purificadas e/ou isoladas do genoma de A/icyc/obaci//us acidoca/danus selecionados a partir das sequên- cias de SEQ ID Nos 2, 19, 36, 53, 70, 87, 104, 121, 138, 155. 172, 189, 206,

223, 240, 257, 274, 291 e 310 ou um de seus fragmentos.

. A presente invenção refere-se igualmente às sequências de nu- cleotideos purificadas e/ou isoladas, caracterizadas pelo fato de que são se- lecionados a partir de: a) uma sequência de nucleotideos de um fragmento " "5 específico da sequência SEQ ID Nos. 1, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336, 353, 370, 387, . 404, 421, 438, 455, 457, 459, 461, ou 463 ou um de seus fragmentos, b) uma sequência de nucleotideos homólogos para uma sequência de nucleo- tídeos, tal como definido em um a); C) uma sequência de nucleotídeos com- D 10 plementar a uma sequência de nucleotideos, tal como definido em a) ou b), e uma sequência de nucleotídeos de seu RNA correspondente; d) uma se- quência de nucleotideos capaz de hibridizar em condições severas com uma sequência, tal como definido em a), b) ou C), e) uma sequência de nucleoti- deos compreendendo uma sequência, tal como definido em a). b), C) ou d) e 15 f) uma sequência de nucleotideo modificado por uma sequência de nucleotí- deos, tal como definido em a), b), c). d) ou e). A sequência de nucleotídeos, polinucleotideo, ou ácido nucleico será compreendida de acordo com a presente invenção, tanto no sentido de um DNA de filamento duplo ou DNA de filamento único nas formas monomê- 20 ricas e diméricas (assim chamado tandem) e os produtos de transcrição de 0 tais DNAs. Os aspectos da invençào referem-se às sequências de nucleoti- deos que foram possÍveis isolar, purificar ou parcialmente, purificar, a partir de métodos de separação, tais como, por exemplo, cromatografia de troca 25 de ions, por exclusão com base no tamanho molecular, ou por afinidade, ou, altemativamente, técnicas de fracionamento com base na solubilidade em diferentes solventes, ou a partir de métodos de engenharia genética, como amplMcação, donagem e subclonagem, sendo possÍvel para as sequências da invenção a serem transportadas por vetores. 30 O fragmento de sequência de nucleotideos purificada e/ou isola- da de acordo com a invenção será entendido como designando qualquer fragmento de nucleotideo do genoma de Alicyc/obaci//us acidoca/daiius, e pode incluir, a titulo de exemplos não-restritos, o comprimento de pelo me- · nos 8, 12, 20 25, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 1000, ou mais, nucleoti- deos consecutivos da sequência a partir do qual se originam. O fragmento específico de uma sequência de nucleotídeo isola- " "5 da e/ou purificada de acordo com a invenção será entendido como desig- nando qualquer fragmento de nucleotídeos do genoma de Alicyclobacillus acidocaldarius, com após o alinhamento e comparação com os fragmentos correspondentes de sequências genõmicas de AlicyclobaciHus acidocaldari- us, pelo menos um nucleotideo ou base de natureza diferente.

D 10 A sequência homóloga de nucleotídeos isolada e/ou purificada no sentido da presente invenção ê compreendida no sentido isolado e/ou pu- rificado de uma sequência de nucleotideos que tenham pelo menos um per- centual de identidade com as bases de uma sequência de nucleotideos de acordo com a invenção, pelo menos, cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84°/,, · 15 85°6, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 °/), 98%, 99%, 99,5%, 99,6%, ou 99,7%, sendo esta percentagem puramente € estatistica e que seja possivel distribuir as diferenças entre as duas sequên- cias de nucleótidos de forma aleatória e em toda a sua extensão. A sequência homóloga de nucleotideos especifica no sentido da 20 presente invenção é compreendida como uma sequência de nucleotideos 0 homólogos com pelo menos uma sequência de nucleotideos de um fragmen- to especifico, tal como definido acima, Tais sequências homólogas "especifi- cas" podem incluir, por exemplo, as sequências correspondentes à sequên- cia genômica ou às sequências de seus representantes de fragmentos de 25 variações do genoma do A/icyclobaci//us acidocaldahus. Estas sequências homólogas especificas podem, assim, corresponder às variações ligadas às mutações dentro de cepas de Alicyc/obaci/lus acidoca/darius e, especialmen- te, correspondem aos truncamentos, substituições, supressões e/ou adições de pelo menos um nucleotideo. Tais sequências homólogas podem também 30 corresponder às variações ligadas à degeneração do código genético. O termo "grau ou percentagem de homologia de sequência" refe- re-se ao "grau ou à porcentagem de identidade de sequência entre dois gru-

pos após o alinhamento ideal", tal como definido no presente pedido. . Dois aminoácidos ou sequências nucleotídicas devem ser "idên- ticos", se a sequência de aminoácidos ou residuos nucleotÍdicos, nas duas sequências é a mesma quando alinhadas para correspondência máxima, " _5 como descrito abaixo.

As comparações da sequência entre dois (ou mais) peptídeos ou polinucleotídeos são normalmente realizadas por grupos de comparação de duas sequências alinhadas de forma ideal em um segmento ou "janela de comparação" para identificar e comparar as regiões locais de similaridade de sequência.

O alinhamento ideal de sequências para compa-

D 10 ração pode ser realizado através do algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, AD.

Gest.

Matemática 2: 482 (1981), pelo algoritmo de alinha- mento de homologia de Neddleman e Wunsch, j.

Mol.

Biol. 48: 443 (1970). pela busca de método de similaridade de Pearson e Lipman, Proc.

Natl.

A- cad.

Sci. (E.U.A.) 85: 2444 (1988), através da implementação computadori-

· 15 zada desses algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Dr.

Sci- . ence, Madison, Wisconsin), ou por inspeção visual. "Porcentagem de identidade de sequência" (ou grau de identida- de) é determinada pela comparação de duas sequências ideais alinhadas 20 em relaçâo a uma janela de comparação, em que parte da sequência de 0 peptídeo ou polinucleotideo em margem que pode incluir adições ou dele- ções (por exemplo, espaços) conforme comparado à sequência de referên- cia (que não inclui adições ou deleções) para alinhamento ideal de duas se- quências, A porcentagem é calculada pela determinação do número da po- 25 sição, em que o residuo do aminoácido idêntico ou a base do ácido nucleico ocorre em ambas as sequências para produzir o número de posições combi- nadas, dividindo o número de posições combinadas pelo número total da posição na janela de comparação e multiplicando o resultado por 100 para produzir a porcentagem da identidade de sequência. 30 A definição da identidade da sequência acima é a definição que seria usada por uma pessoa versada na técnica.

A definição por si só não precisa da ajuda de qualquer algoritmo, tais algoritmos sendo úteis somente para atingir os alinhamentos ideais de sequências, ao invés do cálculo de identidade da sequência.

A partir da definição dada acima, conclui-se que existe um valor bem definido e apenas um valor para a identidade de sequência entre duas 5 sequências comparadas em que o valor corresponde ao valor obtido para o melhor alinhamento ou alinhamento ideal.

Na sequência BLAST N Olj BLAST P BLAST 2, o software qUe está disponivd no site worldwideweb,ncbimlm,nih.gov/gorfN2.html e usado habitualmente pelos inventores e em geral por aqueles versados na técnica

0 10 para comparar e determinar a identidade entre duas sequências, o custo da abertura que depende do comprimento sequência a ser comparado é dire- tamente selecionado pelo software (isto é, 11,2 para a matriz de substituição BLOSUM-62 para o comprimento"85)- A sequência de nucleotideos complementares de uma sequên-

· 15 cia da invenção é entendida como qualquer DNA, cujo nucleotídeo é com- . pIementar àqueles da sequência da invenção, e cuja orientaçào é invertida 0

(sequência de antissenso)- A hibridação em condições de rigor, com uma sequência de nu- cleotideos de acordo com a invenção, é entendida no sentido de uma hibri- 20 dação em condições de temperatura e força iônica escolhida de forma que 0 permitam a manutenção da hibridação entre dois fragmentos de DNA com- plementar.

A título de ilustraçào, as condições de grande rigor da etapa de hibridação com o objetivo de definir os fragmentos de nudeotídeos acima 25 descritos são vantajosamente as seguintes: A hibridação é realizada a uma temperatura preferencial de 65°C na presença de tampâo SSC, 1 x SSC correspondente a NaCl a 0,15 M e citrato de sódio a 0,05 M.

As etapas de lavagem, por exemplo, podem ser as seguintes: 2 x SSC, em temperatura ambiente, seguido de duas Iava- 30 genscom2xSSC,0,5°/jdeSDSa65"C,2x0,5xSSC,0,5°/)deSDS:a 65"C por 10 minutos cada.

As cond ições de severidade intermediária, utilizando, por exem-

plo, uma temperatura de 42°C na presença de um tampão de 2 x SSC, ou de " menos rigor, por exemplo, uma temperatura de 37°C na presença de um tampão de 2 x SSC, respectivamente, exige uma complementaridade glo- balmente menos significativa para a hibridização entre as duas sequências. 5 As condições de hibridização rigorosas descritas acima para um polinucleotideo com um tamanho de aproximadamente 350 bases serào a- daptadas por aquele versado na técnica para oligonucleotídeos de tamanho maior ou menor, de acordo com o ensinamento de Sambrook et al., 1989. Entre as sequências de nucleotideo isoladas e/ou purificadas de 0 10 acordo com a invenção, estão aquelas que podem ser usadas como um ini- ciador ou uma sonda em métodos que permitam a obtenção de sequências homólogas de acordo com a invenção, sendo estes métodos, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), a cIonagem de ácido nucleico, e sequenci- amento, bem conhecidos por aqueles versados na técnica.

" 15 Entre tais sequências de nucleotídeos isoladas e/ou purificadas " de acordo com a invenção, estas são mais uma vez preferidas, porque po- . dem ser usadas como iniciador ou sonda em métodos que permitam a pre- sença de uma sequência de SEQ ID Nos 1, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336. 353, 370, 20 387, 404, 421, 438, 455, 457, 459, 461, ou 463, ou um de seus fragmentos, 0 ou uma de suas variantes, como definido abaixo a ser diagnosticado. Os fragmentos de sequência de nucleotideo de acordo com a iri- venção podem ser obtidos, por exemplo, por amplificação especifica, como o PCR, ou após a digestão com enzimas de restrição adequadas de sequên- 25 cias de nucleotideos de acordo com a invenção, sendo estes métodos em particular descritos na obra de Sambrook et al., 1989. Tais fragmentos re- presentativos podem também ser obtidos por sintese química, de acordo com métodos bem conhecidos de pessoas versadas na técnica. A sequência de nucleotideos modificados será entendida como 30 qualquer sequência de nucleotídeos obtida por mutagênese, de acordo com técnicas conhecidas pelas pessoas versadas na técnica, e que contenha modificações em relação à sequência normal de acordo com a invenção, por exemplo, mutações nas sequências regulamentares e/ou promotoras de ex-

· pressão de polipeptideos, especialmente levando a uma alteração da taxa de expressão de tal polipeptideo ou uma modulação do ciclo replicativo.

A sequência de nucleotideos modificados será igualmente en- 5 tendida como qualquer sequência de nudeotideos que codifica um polipepti- deo modificado, tal como definido abaixo. + A presente invenção refere-se às sequências de nucleotideos que compreendem sequências de nucleotídeos purificadas e/ou isoladas do genoma de Alicyc/obaci//us acidoca/darius, caracterizadas pelo fato de que

0 10 são selecionadas a padir das sequências de SEQ ID Nos 1, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336, 353, 370, 387, 404. 421, 438, 455, 457, 459, 461, ou 463 ou um de seus fragmentos.

As modalidades da invenção referem-se igualmente às sequên-

· 15 cias de nucleotídeos purificadas e/ou isoladas caracterizadas pelo fato de ' que compreende uma sequência de nucleotideos selecionada a partir de: a) « uma sequên.cia de nucleotideos SEQ ID NOS: 1, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336 , 353, 370, 387, 404, 421, 438, 455, 457, 459, 461, ou 463 ou um de seus fragmen- 20 tos ou um de seus fragmentos, b) uma sequência de nucleotídeos do frag- 0 mento especifico de uma sequência tal como definido em a); C) uma se- quência de nucleotideos homólogos com, pelo menos, 8Õ°/o de identidade de sequência com uma sequência tal como definido em a) ou b): d) uma se- quência de nucleotideos complementares ou sequência de RNA que corres- 25 ponde a uma sequência tal como definido em a), b ) ou c): e e) uma sequên- cia de nucleotídeos modificados por uma sequência tal como definido em a), b), c) ou d). Entre as sequências de nucleotideos purificadas e/ou isoladas de acordo com a inyenção são as sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 30 8-12, 25-29, 41-45, 58-62, 75-79, 91-95, 108-112, 125-129, 142-146, 157- 161, 174-178, 191-195, 208-212. 225-229, 242-246, 259-263, 276-280, 293- 297, 310-314, 326-330, 343-347, 360-364. 377-381, 394-398, 411-41 5, 428-

432, ou 445-449 ou seus fragmentos e qualquer outra sequência de nucleo- tideos purificadas e/ou isoladas que têm uma homologia de pelo menos ^ 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89°/o, 90%, 91%, 92°6, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98°/,, 99%, 99,5%, 99,6%, ou 99,7% de identi- " 5 dade com a sequência SEQ ID NOS: 1, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 286, 303, 320, 336, 353, 370, 387, . 404, 421, 438, 455, 457, 459, 461, ou 463 ou seus fragmentos. As sequên- cias homólogas podem incluir, por exemplo, as sequências correspondentes às sequências genõmicas A/icyc/obaci//us acidoca/darius. Da mesma forma, 0 10 estas sequências homólogas especificas podem corresponder a variações ligadas às mutações em cepas de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e, especi- almente, correspondem aos truncamentos. substituições, deleções e/ou adi- ções de pelo menos um nucleotideo. As modalidades da invenção compreendem os poIipeptideos iso- 15 lados e/ou purificados codificados por uma sequência de nucleotídeos de acordo com a invenção, ou seus fragmentos, cuja sequência é representada por um fragmento. As sequências de aminoácidos correspondentes aos po- Iipeptídeos isolados e/ou purificados que podem ser codificados de acordo com um dos três possiveis quadros de leitura da sequência de SEQ ID No. 20 1, 18, 35, 51, 68, 85, 101, 118, 135, 152, 167, 184, 201, 218, 235, 252, 269, 0 286, 303, 320, 336, 353, 370, 387, 404, 421, 438, 455, 457, 459, 461, ou

463. As modalidades da invenção se relacionam igualmente com os polipeptídeos isolados e/ou purificados, caracterizadas pelo fato de que 25 compreendem um polipeptídeo selecionado das sequências de aminoácidos de SEQ ID Nq. 2, 19, 52. 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422, 439, 456, 458, 460, 462, ou 464 ou um de seus fragmentos. Entre os polipeptídeos purificados e/ou isolados, de acordo com 30 as modalidades da invenção, são polipeptídeos purificados e/ou isolados da sequência de aminoácidos SEQ ID NOS: 13-17, 30-34. 46-50, 63-67, 80-84, 96-100, 113-117, 130-134, 147-151, 162-166, 179-183, 196-200, 213- 217,

· 230-234, 247-251, 264-268, 281-285, 298-302, 315-319, 331-335, 348-352, 365-369, 382-386, 399-403, 416-420, 433-437, ou 450-454 ou seus fragmen- . tos ou quaisquer outros polipeptídeos purificados e/ou purificados que têm uma homobgia de pelo menos 80%, 81%, 82%, 83°6, 84°6, 85%, 86°6, 87°/,, 5 88%, 89°6, 90%, 91 °/j, 92°/o, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98°6, 99°6, 99,5%, 99,6%, ou 99,7 °/j de identidade com sequência SEQ ID NOS: 2, 19, 52, 69, - * 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354 , 371, 388, 405, 422, 439, 456, 458, 460, 462, ou 464 ou seus fragmentos. 10 As modalidades da invenção também se relacionam com os po- 0 lipeptídeos, caracterizadas pelo fato de que compreende um polipeptideo selecionado a partir de: a) um fragmento específico de pelo menos 5 amino- ácidos de um polipeptídeo de uma sequência de aminoácidos de acordo com a invenção; b) um poIipeptideo homõlogo a um poIipeptideo tal como 15 definido em a); c) um fragmento especifico biologicamente ativo de um poli- peptideo tal como definido em a) ou b); e d) um polipeptídeo modificado por um polipeptideo tal como definido em a), b) ou c)- No presente relatório, os termos polipeptideo, peptideo e protei- na são intercambiáveis. 20 Nas modalidades da invenção, os poIipeptídeos purificados e/ou

0 isolados de acordo com a invenção podem ser glicosilados, peguilados e/ou pós translacionalmente modificados.

Em outras modalidades, a glicosila- ção,a peguilação e/ou outras modificações pós-translacionais podem ocor- rer in vivo ou in vitro e/ou podem ser realizadas usando técnicas químicas. 25 Em outras modalidades, qua!qLler glicosilação, peguilação e/ou outras modi- ficações pós-translacionais podem ser ligadas a N ou O, Nas modalidades da invenção, qualquer um dos polipeptideos isolados e/ou purificados de acordo com a invenção pode ser enzimatica- mente ativo em temperaturas iguais ou superiores a 25, 30, 35, 40, 45, 50, 30 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, e/ou 95 graus Celsius, e/ou pode ser enzimati- camente ativado em um pH igual, abaixo e/ou acima de 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, e/ou 0. Em outras modalidades da invenção. a glicosilação, a peguilação ou

· outra modificação pós-translacional pode ser necessária para que os poli- peptídeos isolados e/ou purificados de acordo com a invenção estejam en- . zimaticamente ativos em pH igual ou inferior a 7, 6, 5, 4, 3. 2, 1, e/ou 0, ou a em temperaturas iguais ou superiores a 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 5 70, 75, 80, 85, 90 e/ou 95 graus Celsius.

r Os aspectos da invenção referem-se aos polipeptídeos que sâo isolados ou obtidos por purifícação a partir de fontes naturais, ou obtidos por recombinação genética, ou, alternativamente, pela sintese quimica e que podem, assim, conter aminoácidos nâo-naturais, como será descrito abaixo- 0 10 Um "fragmento de poIipeptideo", de acordo com as modalidades da invenção, é compreendido como sendo um poIipeptídeo contendo pelo menos 5 aminoácidos consecutivos, de preferência, 10 aminoácidos conse- cutivos ou 15 aminoácidos consecutivos. Na presente invenção, um fragmento de polipeptideo específico 15 é entendido como fragmetno de poIipeptídeo consecutivo codificado por L|ma sequência de nucleotideo de fragmento específico de acordo com a inven- ção- "Polipeptídeo homólogo" será entendido como sendo os poIi- peptideos com, em relação ao polipeptideo natural, algumas modificações, 20 tais como, em particular, uma deleção, adição ou substituição de pelo menos 0 um aminoácido. um truncamento, um prolongamento, uma fusão quimérica e/ou mutação. Entre os polipeptideos homólogos, são preferenciais aqueles cuja sequência de aminoácidos tem pelo menos 80°6 ou 90% de homologia com as sequências de aminoácidos dos polipeptideos de acordo com a in- 25 vençào. "Polipeptideo homólogo especifico" será entendido como sendo os polipeptideos homólogos, tal como definido anteriormente, e tendo um fragmento específico de polipeptídeos, de acordo com a invenção. No caso de uma substituiçâo, um ou mais aminoácidos consecu- 30 tivos ou não consecutivos são substituidos por aminoácidos "equivalentes". A expressão aminoácido "equivalente" é direcionada aqui para designar qualquer aminoácido capaz de ser substituído por um dos aminoácidos da estrutura base, sem, no entanto, essencialmente, modificar as atividades biológicas dos peptideos correspondentes e de forma que será definido pelo

O seguinte. Exemplos de tais substituições nas sequências de aminoácidos SEQ )D NOS: 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 5 253, 270, 287, 304. 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422, 439, 456, 458, 460, . 462, 464 ou podem incluir os polipeptideos isolados e/ou putficados da se- quência de aminoácidos SEQ ID NOS: 13-17, 30-34, 46-50, 63-67, 80-84, 96-100, 113-117, 130-134, 147-151, 162-166, 179-183, 196-200, 213-217, 230-234, 247-251, 2M-268, 281-285, 298-302, 315-319, 331-335, 348-352, 0 10 365-369, 382-386, 399-403, 416-420, 433-437, ou 450-454. Estes aminoácidos equivalentes podem ser determinados tanto por dependendência da sua homologia estmtural com os aminoácidos que o substituem ou em resultados de testes comparativos de atividade biológica entre os diferentes polipeptldeos, que são capazes de serem realizados. 15 A titulo de exemplo não restrito, as possibilidades de substitui- ções que podem ser realizadas sem resultar em uma profunda alteração da atividade biológica dos polipeptídeos modificados correspondentes serão mencionadas, por exemplo, a substituição de leucina por valina ou isoleuci- na, ou do ácido aspártico por ácido glutâmico, da glutamina por asparagina, 20 de arginina por lisina, etc, sendo as substituições inversas naturalmente i- 0 magináveis nas mesmas condições. Em outra modalidade, as substituições são limitadas a substitui- ções de aminoácidos não conservados entre outras proteinas que têm a ati- vidade enzimãtica similar identificada. Por exemplo, as figuras aqui fornecem 25 alinhamentos de sequência entre alguns poIipeptideos da invenção e outros polipeptÍdeos identificados como tendo atividade enzimática similar, com a- mirioácidos comuns a três ou mais das sequências alinhadas são indicados em negrito. Assim, de acordo com uma modalidade da invenção, substitui- ções ou mutação podem ser feitas em posições que não são indicadas como 30 em negrito nas figuras. Exemplos de tais polipeptideos podem incluir, entre outros. aqueles encontrados na sequência de aminoácidos SEQ ID NOS: 13- 17, 30-34. 46-50. 63-67, 80-84, 96-100, 113-117, 130-134, 147-151, 162-

166. 179-183, 196-200, 213-217, 230-234, 247-251, 264-268, 281-285. 298- 302, 315-319, 331-335, 348-352, 365-369, 382-386, 399-403, 416-420, 433- . 437, ou 450-454. Em uma outra modalidade, as sequências de ácido nuclei- co podem ser transformadas ou substituidas de modo que o aminoácido que " 5 cod ifica mantém-se inalterado (degenerar substituições e/mutações) e/ou . transformado ou substituído de foma que quaisquer substituições ou muta- . ção de aminoácido resultantes sejam feitas nas posições que não são indi- cadas em negrito nas figuras. Exemplos de tais sequências de ácido nucle- ico podem incluir, entre outros, aqueles encontrados que são as sequências 0 10 de nucleotideos de SEQ ID NOS: 13-17, 30-34, 46-50, 63-67, 80-84, 96-100,

W 113-117, 130-134. 147-151, 162-166, 179-183. 196-200, 213-217, 230-234, 247-251, 264-268, 281-285, 298-302, 315-319, 331-335, 348-352, 365-369, ' 382-386, 399-403, 416-420, 433-437, ou 450-454 ou seus fragmentos. Os polipeptídeos homólogos específicos correspondem igual- 15 mente aos poIipeptideos codificados por sequências específicas de nucleotí- deos homólogos tal como definido acima e, portanto, compreendem na pre- sente definição de polipeptideos que são mutantes ou correspondem às va- riantes que podem existir em A/icyc/obaci/lus acidoca/darius, e que corres- pondem especialmente aos truncamentos, substituições, deleções elou adi- 20 ções de pelo menos um resíduo de aminoácido. 0 "Fragmento específico biologicamente ativo de um polipeptideo", de acordo com uma modalidade da invenção, será compreendido em espe- cial como um fragmento de poIipeptideos especificos, tal como definidos a- cima, com pelo menos uma das caracteristicas dos polipeptídeos de acordo 25 com a invenção. Em algumas modalidades, o peptideo é capaz de agir co- mo uma Alfa-glicosidase, 1-4-alfa-malto-hidrolase de glicano, Glicosidase, Amilase, Acetil esterase, Beta-gaiactosidase, Alfa amilase, Acetil esterase, Alfa-xilosidase, Ciclomaltodextrinase; Neopululinase; alfa-amilase maltogêni- ca, Familia 31 de glicosil hidrolase, Alfa-L-arabinofuranosidase, hidrolase da 30 parede celular, Altronato hidrolase, po1i-1-4-alfa-D-galacturonido, alfa-1- 2-glicuronosidase de xilano, Ce|ulase/Endog|icanase M, Poligalacturonase, Glicosil hidrdase, Peptidoglicano hidrolase, N-acetilglicosaminidase, Endo-

quitinase, Alfa-galactosidase, Endo-beta-1-4-mananose, Celobiose fosf'orila- se, sintase beta-1-2-glucano ciclica, Enzima desramificadora do glicogênio, acetil hidrolase, beta 1-4 xilanose, Beta glicosidase. 6-fosfo-beta glicosidase, cinamoil éster hidrolase , beta-glicuronidase, alfa-1-2-glicuronosidase de xi- 5 lano, 3-hidróxi-isobutiril-CoA hidrolase, glicosidase relacionada a Beta-

_ glicosidase B, e/ou atividade chito-oligossacarideo desacetilase.

Os fragmentos de polipeptideo de acordo com as modalidades da invençào podem corresponder aos fragmentos isolados ou purificados naturalmente presentes em um A/icyc/obaci//us acidoca/darius ou correspon-

O 10 der a fragmentos que podem ser obtidos por clivagem do referido polipepti- deo por uma enzima proteolitica, como a tripsina, quimiotripsina, ou colage- nase, ou por um reagente quimico, como o brometo cianogênio (CN8r). Esses fragmentos de polipeptideos podem também ser facilmente prepara- dos por sÍntese quimica, a partir de hospedeiros transformados por um vetor 15 de expressão de acordo com a invenção que contém um ácido nucleico que permite a expressão dos fragmentos, colocado sob o controle de uma regu- lação adequada e/ou elementos de expressão. "Polipeptideos modificados°' de um polipeptideo de acordo com uma modalidade da invenção são compreendidos como um polipeptideo ob- 20 tido por recombinaçào genética ou por sÍntese quimica, como será descrito a 0 seguir, tendo pelo menos uma modificação no que diz respeito à sequência normal.

Estas alterações podem ou não ser capazes de supoi1ar aminoáci- dos na origem da especificidade e/ou de atividade, ou na origem da confor- mação estrutural, localização e da capacidade de inserção da membrana do 25 polipeptideo de acordo com a invenção.

Assim, será possivel a criação de polipeptideos de atividade equivalente, aumentada ou reduzida e especifici- dade equivalente, menor ou maior.

Entre os polipeptídeos modificados, é necessário mencionar os polipeptideos em que até cinco aminoácidos po- dem ser modificados, truncados na extremidade terminal N ou C, ou mesmo 30 deletados ou adicionados.

Os métodos que permitem as modulações em células eucarióti- cas ou procarióticas a serem demonstrados são bem conhecidos por aque-

" les versados na técnica.

Também é bem compreendido que será possivel utilizar a codificação de sequências de nucleotideos para tais polipeptideos modificados para tais modulações, por exemplo, através de vetores, de a- cordo com a invenção e descrição abaixo. 5 Os poIipeptideos modificados anteriormente podem ser obtidos

. usando quimica combinatória, em que é possÍvel variar sistematicamente as · partes do polipeptídeo antes de testá-los em modelos, culturas de células ou micr+organismos, por exemplo, para selecionar os compostos que são mais ativos ou que tenham as propriedades procuradas. 0 10 A síntese quimica também tem a vantagem de ser capaz de uti- lizar aminoácidos não-naturais, ou Iigações não peptídicas.

Assim, a fim de melhorar o tempo de vida dos poIipeptideos de acordo com a invenção, pode ser de interesse usar aminoácidos não natu- rais, por exemplo, em forma de D, ou então, análogos de aminoácidos, es- 15 pecialmente formas contendo enxofre, por exemplo.

Por fim, será possivel integrar a estrutura dos polipeptídeos de acordo com a invenção, suas formas homólogas especificas ou modificadas, em estruturas químicas do tipo polipeptideo ou outras.

Assim, pode ser de interesse fornecer, compostos de extremidades N-temiinal e C-terminal não 20 reconhecidas por proteases. 0 A codificação de sequências de nucleotideos para um polipepti- deo, de acordo com a invenção, é igualmente parte da invenção.

A invençào também diz respeito às sequências de nucleotideos utilizáveis como iniciador ou sonda, caracterizadas pelo fato de que tais se- 25 quências são selecionadas a partir de sequências de nucleotideos de acordo com a invenção.

Ficará bem entendido que a presente invenção, em várias moda- lidades, também se refere aos polipeptideos específicos de A/icyc/obaci//us acidoca/daiius, codificados por sequências de nucleotideos que podem ser 30 obtidas por purificação de polipeptídeos naturais, por recombinação genética ou por sintese química, através de procedimentos bem conhecidos por a- queles versados na técnica e, como descrito em especial abaixo.

Da mes-

ma forma, os anticorpos mono ou poHclonais marcados ou não marcados direcionados em relação a tais polipeptideos especificos codificados por tais sequências de nucleotídeos tambêm são abrangidos pela invenção.

As modalidades da invenção adicionalmente se relacionam com "5 o uso de uma sequência de nucleotideos de acordo com a invenção como

, um iniciador ou sonda de detecção e/ou a amplificação de sequências de ácidos nucleicos.

As sequências de nucleotídeos de acordo com modalidades da invenção podem, portanto. ser utilizadas para amplificar sequências de nu-

0 10 cIeotídeos, especialmente pela técnica de PCR (polymerase chain reaction) (Erlich, 1989; Innis et al., 1990; Rolfs et al., 1991 e White et al., 1997). Estes iniciadores de oligodesoxirribonucleotÍdeo ou oligorribonu- cleotideo têm um comprimento vantajoso de pelo menos 8 nucleotídeos, de preferência pelo menos 12 nucleotídeos, e ainda mais de preferência pelo 15 menos 20 nucleotideos.

Outras técnicas de amplificação do ácido riucleico alvo podem ser vanta josamente empregadas como altemativas para a PCR.

As sequências de nucleotídeos da invenção, em particular, os i- niciadores de acordo com a invenção. podem também ser empregadas em 20 outros processos de amplificação de ácido nucleico alvo, tais como: a técni- 0 ca TAS (Transcriptjon-based amplification System), descrita por Kwoh et al . em 1989, a técnica 3SR (Self-Sustained Sequence Replication), descrita por Guatelli et al- em 1990, a técnica NASBA (Nucleic Acid Sequence Based Amplification), descrita por Kievitis et al. em 1991, a técnica SDA (Strand 25 Displacement Amplification) (Walker et al., 1992); a técnica TMA (Transcrip- tion Mediated Amplification). Os polinucleotídeos da invenção também podem ser emprega- dos em técnicas de amplificação ou de modificação do ácido nucleico que serve como uma sonda, tais como: a técnica de LCR (Ligase Chain Reacti- 30 on). descrita por Landegren et al- em 1988 e aperfeiçoada por Barany et al. em 1991, que emprega uma Iigase temoestável, a têcnica RCR (Repair Chain Reaction), descrita por Segev. em 1992, a técnica CPR (Cycling Pro-

" be Reaction), descrita por Duck et al. em 1990, a técnica de amplificação com replicase Q-beta, descrita por Miele et al. em 1983, e especialmente © melhorada por Chu et al. em 1986, Lizardi et a). em 1988, seguida por Burg et al. bem como por Stone et al- em 1996. ". 5 No caso do polinucleotideo-alvo a ser detectado ser possivel-

. mente um RNA, por exemplo, um mRNA, será possÍvel a ublizaçào, antes do emprego de uma reação de amplificação com o auxilio de pelo menos um iniciador de acordo com a invenção ou o emprego de um procedimento de detecção com o auxilio de pelo menos uma sonda da invenção, uma enzima

0 10 de tipo de transcritase reversa, a fim de obter um CDNA a partir do RNA con- tido na amostra biológica.

O cDNA obtido, assim, serve como um alvo para O(S) iniciador(s) ou a(s) sonda(s) empregada(s) na amplificação ou de um processo de detecção de acordo com a invenção.

A sonda de detecção será escolhida de forma que hibridiza com 15 a sequência alvo ou o amplicon gerado a partir da sequência-alvo.

Por meio da sequência, tal sondagem terá de forma vantajosa uma sequência de peto menos 12 nucleotideos, em particular de pelo menos 20 nucleotídeos, e de preferência de pelo menos 100 nucleotídeos.

As modalidades da invenção também compreendem as sequên- 20 cias de nucleotideos utilizáveis como uma sonda ou iniciador, de acordo com 0 a invenção, caracterizada pelo fato de que são identihcadas com um com- posto radioativo ou com um composto não radioativo.

As sequências de nucleotídeos não marcadas podem ser usa- das diretamente como sondas ou iniciadores, embora as sequências sejam 25 normalmente identificadas com um elemento radioativo (32P, 35S, 3H, 1251) ou com uma molécula não radioativa (biotina, acetilaminofluoreno, digoxige- nina, 5-bromodesoxiuridina, fluoresceina) para obter as sondas que sào utili- záveis para inúmeras aplicações, Exemplos de marcação não radioativa das sequências de nucle- 30 otídeos são descritas, por exemplo, na Patente Francesa 78,10975 ou Urdea et al. ou por Sanchez et al Pescador. em 1988. Neste último caso, também será possivel utilizar um dos méto-

" dos de marcação descritos nas Patentes FR 2 422 956 e 2 518 755. A técnica de hibridízação pode ser realizada de diversas formas

H (Matthews et al., 1998). O método mais geral consiste em imobilizar o extra- to de ácidos nucleicos de células em um suporte (tais como nitrocelulose, " "5 náilon, poliestireno) e na incubação, sob condições bem definidas, o ácido _ nucleico alvo imobilizado com a sonda. Após a hibridação, o excesso de sonda é eliminado e as moléculas hibridas fomadas são detectadas pelo método apropriado (medição da radioatividade, da fluorescência ou da ativi- dade enzimática ligada à sonda). 0 10 A invenção, em várias modalidades, também compreende as sequências de nucleotideos de acordo com a invençào, caracterizadas pelo fato de que elas são imobilizadas em um suporte, covalentemente ou não covalentemente. De acordo com outra modalidade vantajosa do emprego de se- 15 quências de nucleotídeos de acordo com a invenção, estas últimas podem ser usadas imobilizadas em um suporte e podem assim servir para capturar, por hibridação especifica, o ácido nucleico alvo obtido a partir da amostra biológica a ser testada- Se necessário, o suporte sólido é separado da a- mostra e o complexo de hibridização formado entre a sonda de captura e o 20 ácido nucleico alvo é então detectado com o auxilio de uma segunda sonda, 0 o chamado teste de detecção, marcado com um elemento facilmente detec- tável. Outro aspecto da presente invenção é um vetor de clonagem e/ou expressão de uma sequência, caracterizado pelo fato de que contém 25 uma sequência de nucleotídeos de acordo com a invenção. Os vetores de acordo com a invenção, caracterizados pelo fato de que contêm os elementos que permitam a expressão e/ou secreção de tais sequências de nucleotídeos em uma determinada célula hospedeira, sâo igualmente parte da invenção. 30 O vetor pode então conter um promotor, os sinais de inicio e de término da tradução, bem como nas regiões adequadas de regulação da transcrição. Pode ser capaz de se manter estável na célula hospedeira e e pode, opcionalmente, ter sinais especificando a secreção da proteína tradu- zida. Esses elementos diferentes podem ser escolhidos em função da célula

W do hospedeiro utilizado- Para este efeito, as sequências de nucleotídeo de acordo com a invenção podem ser inseridas em vetores de replicação autô- "_"5 noma dentro do hospedeiro escolhido ou vetores integrados do hospedeiro escolhido. Esses vetores serão preparados de acordo com os métodos a- tualmente utilizados por aqueles versados na técnica e será possÍvel intro- duzir os clones resultantes em um hospedeiro apropriado por métodos con- D 10 vencionais, como, por exemplo, lipofecção, eletroporaçào, e choque térmico. Os vetores de acomo com a invenção, por exemplo, são vetores de origem viral ou plasmidial. Um exemplo de um vetor para a expressão de polipeptídeos da invenção é baculovírus. Esses vetores são úteis para a transformação de células hospe- 15 deiras para clonar ou expressar as sequências de nucleotideos da invenção. A invenção também compreende as células hospedeiras trans- formadas por um vetor de acordo com a invenção. Essas células podem ser obtidas através da introdução nas célu- las hospedeiras de uma sequência de nucleotideos inseridos em um vetor, 20 tal como definido acima, em seguida, a cultura de tais células em condições 0 que permitam a replicação e/ou expressão da sequência de nucleotídeos transfectados. A célula hospedeira pode ser selecionada a partir de sistemas procarióticos ou eucarióticos, como, por exemplo, as células bacterianas (0- 25 lins e Lee, 1993), mas igualmente células de levedura (Buckholz, 1993), bem como células vegetais (tais como, entre outros, Arabidopsis sp. e as células de animais, em especial as culturas de células de mamíferos (Edwards e A- ruffo, 1993). por exempto, células de ovário de hamster chinês (CHO), mas igualmente as células de insetos em que é possivel utilizar os processos que 30 empregam baculovírus, por exemplo células de inseto sf9 (Luckow, 1993). As modalidades da invenção da mesma forma se referem aos orgariismos que compreendem células transformadas de acordo com a in-

venção.

A obtenção de organismos transgênicos de acordo com a inven- . ção superexpressam um ou mais genes de A/icyc/obaci//us acidoca/daiius oij em parte, os genes podem ser realizadas, por exemplo, ratos, camundongos 5 ou coelhos de acordo com métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, tal como por transfecção viral ou não viral- Será possível obter or- ganismos transgênicos com superexpressão de um ou mais dos genes de transfecção de múltiplas cópias de genes sob o controle de um promotor for- te de natureza ublqua, ou seletiva para unj tipo de tecido, Da mesma forma,

0 10 será possÍvel obter os organismos transgênicos por recombinação homóloga em linhagens de células embrionárias, a transferência dessas Iinhagens de células de embriões, a seleção de quimeras afetadas, ao nível das linhas de reprodução e crescimento das quimeras.

As células transformadas, bem como os organismos transgêni- 15 cos de acordo com a invenção são utilizáveis nos processos de preparação de polipeptideos recombinantes.

É possivel hoje produzir polipeptídeos recombinantes em quan- tidade relativamente grande por engenharia genética utilizando células trans- formadas por vetores de expressão de acordo com a invenção ou a utiliza- 20 ção de organismos transgênicos de acordo com a invenção. 0 Os procedimentos para a preparação de um polipeptídeo da in- venção na forma recombinante, caracterizados pelo fato de que empregam um vetor e/ou uma célula transformada por um vetor de acordo com a inven- ção e/ou um organismo transgênico que compreende uma das células trans- 25 formadas referidas de acordo com a invenção estão contidos na presente invenção- Como aqui usado, "transformação" e "transformada" referem-se à introdução de ácidos nucleicos em uma célula, seja procariótica ou eucari- ótica.

Além dísso, "transformação" e "transfórmado", como utilizado aqui, 30 não precisa se referir ao controle de crescimento ou desregulação do cres- cimento.

Entre esses procedimentos para a preparação de um poIipeptí-

deo da invenção na foma recombinante, estão os procedimentos de prepa- ração que empregam um vetor, elou uma célula transformada por tal vetor 0 e/ou um organismo transgênico composto por uma das células transforma- das, contendo uma sequência de nucleótideos de acordo com a invenção _'5 que codifica para um polipeptídeo de A//cyc/obaci//us acidoca/dahus. Uma variante de acordo com a invenção pode consistir na pro- dução de um polipeptideo recombinante fundido em uma proteina "transpor- tadora" (proteína quimérica). A vantagem deste sistema é que pode permitir a estabilização e/ou uma diminuição na proteólise do produto recombinante, 0 10 um aumento na solubilidade no curso de renaturação in vitro e/ou simplifica- ção da purificação quando o parceiro de fusão tem uma afinidade com um ligante especifico.

. Mais particularmente, a invençào refere-se a um processo para a preparação de um polipeptídeo da invenção que compreende as seguintes 15 etapas: a) cultura de células transformadas em condições que permitam a expressão de um polipeptideo recombinante da sequência de nucleotideos de acordo com a invenção, b) se necessário, recuperação de tal polipeptideo recornbinante. Quando o procedimento para a preparação de um polipeptideo 20 da invenção emprega um organismo transgênico de acordo com a invenção, 0 o polipeptideo recombinante é então extraído desse organismo- A invenção também se refere a um polipeptideo que é capaz de ser obtido através de um processo da invenção, como descrito anteriormen- te. 25 A invenção também compreende um procedimento para a pre- paração de um polipeptídeo sintético, caracterizado pelo fato de que usa uma sequência de aminoácidos dos poIipeptídeos de acordo com a inven- ção- A invenção refere-se igualmente a um poIipeptideo sintético ob- 30 tido por um procedimento de acordo com a invenção. Os polipeptídeos de acordo com a invenção podem também ser preparados por técnicas convencionais que estão no campo da sintese de peptideos.

Esta sintese pode ser realizada em soIução homogênea ou em fase sólida, Por exemplo, o recurso pode ser feito com a técnica de síntese em solução homogênea descrita por Houben-Weyl em 1974. ",'5 Este método de sintese consiste na condensação sucessiva,

. , dois a dois, dos aminoácidos sucessivos na ordem estabelecida, ou na con- densação de aminoácidos e de fragmentos formados anteriomente, e que já contém diversos aminoácidos na ordem apropriada, ou, altemativamente, diversos fragmentos previamente preparados desta forma, ficando entendido

D 10 que será necessário proteger antecipadamente todas as funções reativas transportadas por estes aminoácidos ou fragmentos, com exceção das fün- ções de uma amina de um e carboxilas de outro ou vice-versa, o que deve normalmente estar envolvido na formação de ligações peptídicas, especial- mente após a ativação da função carboxila, de acordo com os métodos co- 15 nhecidos na sintese de peptideos.

O recurso também pode ser feito com a técnica descrita por Mer- rifield.

Para fazer uma cadeia peptídica de acordo com o procedimento Merrifield, o recurso é feito por uma resina polimérica muito porosa, na qual 20 é imobilizada o primeiro terminal C de aminoácidos da cadeia.

Este aminoá- cido é imobilizado em uma resina através do seu grupo carboxila e a função 0 amina está protegida.

Os aminoácidos que formarão a cadeia de peptideos são, portanto, imobilizados, um após o outro, sobre o grupo amino, que é desprotegido previamente todas as vezes, de parte da cadeia peptidica já 25 formada, e que está Iigada à resina- Quando toda a cadeia peptídica dese- jada tenha sido formada, os grupos de proteção dos diferentes aminoácidos que formam a cadeia peptídica são eliminados e o peptideo é separado da resina com o auxílio de um ácido.

A invenção também se refere aos poIipeptídeos hibridos com pe- 30 lo menos um polipeptídeo de acordo com a invenção e uma sequência de um polipeptideo capaz de induzir uma resposta imurie nos seres humanos ou animais.

P

Vantajosamente, o determinante antigênico é tal que seja capaz de induzir uma resposta humoral e/ou resposta celular.

Será possivel para tal determinante compreender um polipeptí- deo de acordo com a invenção na forma glicosilada, peguilada e/ou de outra "_"5 forma modificada pós-translacionalmente utilizada com vista à obtenção de

. composições imunogênicas capazes de induzir a sÍntese de anticorpos diri- ' gidos contra diversos epitopos.

Estas moléculas híbridas podem ser fomadas, em parte, de uma molécula velculo de polipeptídeo ou de seus fragmentos de acordo com

0 10 a invenção, associada a uma parte, possive|n]ente imunogênica, em particu- Iar, um epitopo da toxina da difteria, toxina do tétano, um antigeno de super- ficie do virus da hepatite B (Patente FR 79 21811), o antigeno VPl do vírus da poliomielite ou qualquer outra toxina bacteriana ou viral ou antigeno, " Os procedimentos para a síntese de moléculas híbridas abran- 15 gem os métodos utilizados na engenharia genética para a construção de se- quências de nucleotideos hibridas que codifica as sequências de poIipepti- deos procuradas.

Será possivel, por exemplo, se referir de forma vantajosa à técnica de obtenção de genes que codificam as proteínas de fusão descri- tas por Minton, em 1984- 20 Tais sequências de nucleotideos hibridos que codificam um poli- 0 peptideo hibrido, bem como os polipeptideos hibridos de acordo com a in- vençào caracterizados pelo fato de que são polipeptideos recombinantes ob- tidos pela expressão de tais sequências de nucleótideos hibridos que fazem igualmente parte da invenção. 25 A invenção compreende igualmente os vetores caracterizados pelo fato de que contêm uma sequência de nucleotídeos hibridos.

As célu- las hospedeiras transformadas por vetores, os organismos transgênicos que compreendem uma das referidas células transformadas, bem como os pro- cedimentos para a preparação de polipeptídeos recombinantes utilizando 30 tais vetores, tais células transformadas e/ou organismos transgênicos são, naturalmente, também parte da invenção.

Os polipeptídeos de acordo com a invenção, os anticorpos de

*

acordo com a invenção a seguir descritos e as sequências de nucleotideos de acordo com a invenção podem ser vantajosamente empregados nos pro- . cessos de detecção e/ou identificação de Alicyclobacillus acidocaldarius em uma amostra capaz de contê-los.

Estes procedimentos, de acordo com a " "5 especificidade dos polipeptídeos, os anticorpos e as sequências de nucleoti-

, deos de acordo com a invenção que serão utilizados, em especial, serão ca- pazes de detectar e/ou identificar A/icyc/obaci/lus acidoca/datius.

Os polipeptideos de acordo com a invenção podem ser vantajo- samente empregados em um processo para a detecção e/ou a identificação

0 10 de Al/cyc/obacil/us acidoca/darius em uma amostra capaz de contê-los, ca- racterizados pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a) contatar esta amostra com um polipeptideo ou um de seus fragmentos de acordo com a invenção (em condições que permitam uma reação imunológica entre " os polipeptídeos e anticorpos, possivelmente presentes nas amostras bioló- 15 gicas), b) demonstrar complexos antigeno-anticorpo. possivelmente forma- dos.

Qualquer procedimento convencional pode ser empregado para a realização de tal detecção dos complexos antigeno-anticorpo possivelmen- te formados. 20 A título de exemplo, um método preferido põe em jogo proces- 0 sos imunoenzimáticos de acordo com a técnica ELISA, por imunofluorescên- cia ou processos radioimunológicos (RIA) ou seus equivalentes.

Assim, a invenção refere-se também aos polipeptídeos de acor- do com a invenção, marcados com o auxilio de uma marca adequada, como 25 do tipo enzimático, fluorescente ou radioativo.

Tais métodos incluem, por exemplo, as seguintes etapas: depo- sitar quantidades determinadas de uma composiçào polipeptídica de acordo com a invenção dos poços de uma placa de microtitulaçào, introduzir em tais poços de düuições crescentes de soro, ou de uma amostra biológica que não 30 seja aquela definida anteriormente, devendo ser analisada, incubar a micro- placa, introduzir nos poços da placa de microtitulação de anticorpos marca- dos dirigidos contra as imunoglobulinas de porcos, a marcação destes anti-

corpos sendo realizada com o auxílio de uma enzima selecionada dentre aquelas que são capazes de hidrolisar um substrato pela modificação da ab- . sorção da radiação desse último, pelo menos em um determinado compri- mento de onda, por exemplo, a 550 nm, a detecção, por comparação com

_ 5 um teste de controle da quantidade de substrato hidrolisado.

Os polipeptideos de acordo com a invenção permitem anticorpos

" monoclonais ou policlonais a serem preparados que são caracterizados pelo fato de que reconhecem especificamente os polipeptídeos de acordo com a invenção.

Serã possivel de forma vantajosa preparar os anticorpos mono-

O 10 donais de hibridomas de acordo com a técnica descrita por Kohler e Milstein em 1975. Será possível preparar os anticorpos policlonais, por exemplo, por imunização de um animal, em particujar, um camundongo, com um polipep- tideo ou um DNA, de acordo com a invenção, associado a um adjuvante da ' resposta imune e, em seguida por purificação dos anticorpos específicos 15 contidos no soro dos animais imunizados em uma coluna de afinidade, em que o polipeptideo que tem servido como um antigeno foi previamente imo- bilizado.

Os anticorpos polidonais de acordo com a invenção também po- dem ser preparados por purificação, em uma coluna de afinidade em que um polipeptideo de acordo com a invenção já havia sido imobilizado, dos anti- 20 corpos contidos no soro de um animal imunologicamente desafiado por A-

D /icyc/obaci//us acidocaldarius ou um polipeptideo ou kagmento de acordo com a invenção.

A invenção refere-se igualmente aos anticorpos monoclonais ou policlonais ou seus fragmentos, ou anticorpos quiméricos, que se caracteri- 25 zam pelo fato de que são capazes de reconhecer especificamente um poli- peptídeo de acordo com a invenção- Também será possivel para os anticorpos da invenção serem marcados da mesma forma como descrito anteriormente para as sondas nu- cléicas da invenção, tais como a marcaçào de um tipo enzimático, fluores- 30 cente ou radioativo.

A invenção é adicionalmente direcionada a um processo para a detecção e/ou identificação de A/icyc/obaci//us acidoca/darius em uma amos-

' tra, caraderizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a) con- tatar esta amostra com um anticorpo mono ou poIiclonal de acordo com a > invenção (sob condições que permitem uma reaçâo imunológica entre os an- ticorpos e os polipeptideos de A/icyclobaci//us acidoca/danius possivelmente " "5 presente em uma amostra biológica); b) demonstrar complexos antigeno-

. anticorpo possivelmente formados.

A presente invenção refere-se igualmente a um procedimento para a detecção e/ou identificação de A/icyc/obaci//us ac/docaldarius em uma amostra, que se caracteriza pelo fato de que utiliza uma sequência de nu-

0 10 cleotídeos de acordo com a invenção.

Mais particulannente, a invenção refere-se a um procedimento para a detecção e/ou identificação de A/icyc/obaci//us acidocaldan'us em uma amostra, caracterizada pelo fato de que compreende as seguintes etapas: " a) se for necessário, o isolamento do DNA da amostra a ser analisada, b) 15 reforço especifico do DNA da amostra com o auxilio de pelo menos um inici- ador ou um par de iniciador, de acordo com a invenção; C) demonstração dos produtos da amplificação.

Estes podem ser detectados, por exemplo, pela técnica de hibri- dização molecular utilizando uma sonda nucleica de acordo com a invenção. 20 Esta sonda será vantajosamente marcada com um elemento não radioativo 0 (sonda fria) ou elemento radioativo, Para efeitos da presente invençáo, o "DNA da amostra biológica" ou "DNA contido na amostra biológica" será entendido como o DNA presente na amostra biológica considerado, ou, possivelmente, o cDNA obtido após a 25 ação de uma enzima de transcriptase reversa do RNA presente na referida amostra biológica.

Outra modalidade da invenção compreende um método, caracte- rizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a) contatar uma sonda de nucleotídeos de acordo com a invenção com uma amostra biológi- 30 ca, o DNA contido na amostra biológica com, se necessário, previamente acessível a hibridação em condições que permitam a hibridização da sonda com o DNA da amostra, b) demonstrar o hlbrido formado entre a sonda de

.

nucleotideo e o DNA da amostra biológica. A presente invenção também se refere a um processo de acordo com a invenção, caracterizada pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a) contatar uma sonda de nucleotídeo imobilizada sobre um supor- ° 5 te de acordo com a invenção com uma amostra biológica, o DNA da amostra . sendo, se necessário, previamente acessível a hibridação. em condições que permitam a hibridização da sonda com o DNA da amostra, b) contatar o híbrido formado entre a sonda de nucleotideos imobilizada sobre um suporte e o DNA contido na amostra biológica, se necessário, após a eliminação do 0 10 DNA da amostra biológica, que não tenha hibridizado com a sonda, com uma sonda de nucleotídeo marcada de acordo com a invenção; c) demons- trar o novo hibrido formado na etapa b). De acordo com uma modalidade vantajosa do processo de de- ' tecção e/ou identificação definida anteriormente, este é caracterizado pelo 15 fato de que, antes da etapa a), o DNA da amostra biológica é primeiro ampji- ficado com o auxílio de pelo menos um iniciador de acordo com a invenção. Outras modalidades da invenção compreendem métodos para pelo menos degradar, clivar ou remover parcialmente polissacarideos, lig- nocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina. poli- 20 hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, gluca- 0 no, galactano e/ou manano, caracterizado pelo fato de que compreende: degradar, clivar e/ou remover estas estruturas com a têcnica reconhecida, tal como as descrito em Mielenz 2001; Jeffries 1996: Shallom e Shoham 2003: Lynd et al. 2002: Vieille e Zeikus 2001; Bertoldo et al. 2004; e/ou Malherbe e 25 Cloete 2002. As modalidades da invenção incluem a colocação de um poli- peptídeo recombinante, purificado e/ou isolado selecionado do grupo que consiste em polipeptídeo com pelo menos 90% de identidade de sequência SEQ ID NOS: 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119,136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 30 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422 e 439 e pelo menos 93°6 de identidade de sequência da SEQ ID NO: 462: pelo menos 94% de identidade de sequência SEQ ID NO: 36; pelo menos 96% de identidade de

" sequência SEQ ID NO: 460: pelo menos 99% de identidade de sequência SEQ ID NO:464; pelo menos 99,6% de identidade de sequência SEQ ID NO: « 458; e pelo menos 99,7% de identidade de sequência SEQ ID NO: 456 em fluido em contato com um polissacarideo, lignocelulose, celulose, hemicelu- 5 Iose, Iignina, am ido, quitina, poIi-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeo,

. grupo de decoração xilano, glucano, galactanoe/ou manano.

Outras modalidades da invenção incluem a colocação de uma célula que produz ou codifica um poIipeptideo recombinante, purificado e/ou isolado selecionado do grupo que consiste em polipeptideo com pelo menos

0 10 90% de identidade de sequência SEQ ID NOS: 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422 e 439 e pelo menos 93% de identidade de sequência da SEQ ID NO: 462; pelo menos 94% de identidade de sequência SEQ ID NO: 36: " pelo menos 96% de identidade de sequência SEQ ID NO: 460; pelo menos 15 99°/o de identidade de sequência SEQ ID NO:464; pelo menos 99,6% de i- dentidade de sequência SEQ ID NO: 458; e pelo menos 99,7% de identidade de sequência SEQ ID NO: 456 em fluido em contato com um polissacarideo, |jgnoce|u|ose, celulose, hemice|u|ose, lignina, amido, quitina, poli- hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideo, grupo de decoração xilano, gluca- 20 no, galactanoe/ou manano. 0 Como usado aqui, "parcialmente degradante" refere-se ao rear- ranjo ou clivagem das ligações químicas na estrutura-alvo.

Em outras modalidades, os métodos de degradação pelo menos parcialmente, clivagem, e/ou remoção de um polissacarideo, Iignocelulose, 25 celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxi- lano, glicosídeos, gmpo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou ma- nano podem ocorrer em tempetaturas iguais ou superiores a 25, 30. 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 elou 95 graus Celsius e/ou a um pH i- gual, abaixo, elou acima de 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 e/ou 0 30 Outras modalidades da invenção podem compreender um kit pa- ra pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover um polissacarí- deo, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-

" hidroxibutirato, heteroxilano, glicosideo, grupo de decoração xilano, glucano, galãctano e/ou manano, o kit constituido por uma célula de produção ou co- . dificação de um polipeptídeo recombinante, isolado e/ou purificado selecio- nado do grupo constituido por um polipeptideo com identidade de sequência 5 de pelo menos 90% de SEQ ID NOS:2, 19 , 52 2 69, 86, 102. 119, 136, 153,

. 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, " 422 ou 439; pelo menos 93°6 identidade de sequência de SEQ ID NO:462; identidade de sequência pelo menos 94% de SEQ ID NO:36; identidade de sequência pelo menos 96% de SEQ ID NO:460; identidade de sequência pe-

0 10 lo menos 99% de SEQ ID NO:464; identidade de sequência, pelo menos, q 99,6% de SEQ ID NO:458; e identidade de sequência, pelo menos, 99,7%

f de SEQ ID NO:456 e/ou um polipeptideo recombinante, purificado e/ou iso- '4 ·' lado selecionado a partir do grupo que consiste em um polipeptideo com i- " dentidade de sequência de pelo menos 90% de SEQ ID NOS: 2, 19, 52, 69,

. 15 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202. 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422 ou 439; pelo menos 93% de identidade de se- " quência de SEQ ID NO:462: pelo menos 94% de identidade de sequência de

SEQ ID NO:36: pelo menos 96% de identidade de sequência de SEQ ID NO:460; menos 99% de identidade de sequência de SEQ ID NO:464; pelo 20 menos, 99,6% de identidade de sequência de SEQ ID NO:458; e pelo me- O nos, 99,7% de identidade de sequência de SEQ ID NO:456. A presente invenção é descrita mais detalhadamente nos exem- plos a seguir.

Embora os exemplos possam representar apenas as modali- dades da invenção selecionadas, deve-se entender que os seguintes exem- 25 plos são ilustrativos e não restritos.

Nas modalidades da invençâo, qualquer um dos polipeptideos isolados e/ou purificados de acordo com a invenção pode ser enzimatica- mente ativo em temperaturas iguais ou superiores a 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, e/ou 95 graus Celsius, e/ou pode ser enzimati- 30 camente ativado em um pH igual, abaixo e/ou acima de 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, e/ou 0. Em outras modalidades da invenção, a glicosilação, a peguilação ou outra modificação pós-translacional pode ser necessária para que os poli-

peptídeos isolados e/ou purificados de acordo com a invenção estejam en- zimaticamente ativos em pH igual ou inferior a 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, e/ou 0, ou a em temperaturas iguais ou superiores a 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 e/ou 95 graus Celsius. 5 à

EXEMPLOS Exemplo 1: RAACO0169: uma esterase da superfamilia alfa- beta hidrolase Fornecida na SEQ ID No:l está uma sequência de nucleotideos 0 10 isdados de Alicyc/obacMus acidocaldarius e a codificação do polipeptideo de SEQ ID NO:2- Como pode ser visto nas figuras 1A e 1B, SEQ ID NO:2 alinha « b bem com outras proteinas identificadas como esterases da superfamília hi- '' drolase alfa beta. De particular importância, observa-se que, quando os a- " minoácidos são conservados em outras esterases da superfamília hidrolase . 15 alfa beta, os aminoácidos são geralmente conservados na SEQ ID NO:2. Assim, o polipeptídeo fornecido na SEQ ID NO:2 é devidamente classificado

H

P como um esterase da superfamilia alfa-beta hidrolase. Os polipeptídeos da SEQ ID NOS: 13-17 são exemplos repre- . sentativos de substituições conservadoras do poIipeptideo de SEQ ID NO:2 20 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 8-12, res- D pectivamente. As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 1 e 8-12 são colo- cadas em vetores de expressão usando têcnicas-padrão. Os vetores são então fornecidos para as cétulas, tais como bactérias ou células eucarióticas 25 como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 1 e 8-12 produzem os poIipeptideos de SEQ ID NOS: 2 e 13-17. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 2 e 13-17 são então isolados e/ou purificados. Os polipeptí- deos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS: 2 e 13-17 demonstraram ter 30 atividade como esterases. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 2 e 13-17 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hem ice-

' lulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, gmpo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os polipeptí- . deos purificados e/ou is'olados de SEQ ID NOS: 2 e 13-17 demonstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remoção ,'5 de polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, qui- - . tina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de decoração xila- no, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 2: RAACO0501: uma alfa-beta hidrolase Fornecida na SEQ ID No: 18 está uma sequência de nucleoti- O 10 deos isolados de A/icyclobaci//us acidoca/darius e a codificação do polipeptí- deo de SEQ ID NO:19. Como pode ser visto nas figuras 2A e 2B, SEQ ID ' b- NO:19 alinha bem com outras proteinas identificadas como esterases da su- l" perfamília hidrolase alfa beta. De particular importância, observa-se que, " quando os aminoácidos são conseNados em outras esterases da superfamí- . 15 lia hidrolase alfa beta, os aminoácidos são geralmente consemados na SEQ ID NO:19. Assim, o polipeptídeo fornecido na SEQ ID NO: 19 é devidamente

W u classificado como uma esterase da superfamília alfa-beta hidrolase. Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 30-34 são exemplos repre- . sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo de SEQ ID NO: 20 19 e são codificados por sequèncias de nucleotideos SEQ ID NOS: 25-29, 0 respectivamente. As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 18 e 25-29 são co- Iocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarióticas 25 como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 18 e 25- 29 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS: 19 e 30-34. Os poIipepti- deos de SEQ ID NOS: 19 e 30-34 são então isolados e/ou purificados. Os poIipeptídeos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:19 e 30-34 demons- 30 traram ter atividade como alfa-beta hidrolases. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 19 e 30-34 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemice-

' Iulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de decoraçâo xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Os polipepti- . deos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 19 e 30-34 demonstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem elou remo-

. 5 ção de polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, . . quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Exemplo 3: RAACO0568: uma alfa-glicosidase Fornecida na SEQ ID No: 35 está uína sequência de nucleoti-

0 10 deos isolados de A/icyc/obaci//us acidocaldarius e a codificação do polipeptí- deo de SEQ ID NO:36. Como pode ser visto nas figuras 3A, 3B e 3C SEQ ID . b NO:36 alinha bem com outras proteinas identificadas como alfa-glicosidases. '" " " De particular importância, observa-se que, quando os aminoácidos são con- " servados em outro alfa-glicosidase, tais aminoácidos são geralmente con-

. 15 servados na SEQ ID NO: 36- Assim, o polipeptídeo fornecido na SEQ ID NO: 36 é devidamente cIassificado como uma alfa-glicosidase. > » Os polipeptídeos da SEQ ID NOS: 46-50 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo de SEQ ID NO: 36 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 41-45, 20 respectivamente. 0 As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 35 e 41-45 são co- Iocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão, Os vetores sâo então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarióticas como células Sf9 ou células CHO.

Em conjunto com o maquinário normal 25 presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 35 e 41- 45 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 36 e 46-50. Os poIipeptí- deos de SEQ ID NOS: 36 e 46-50 são entào isolados e/ou purificados.

Os polipeptídeos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:36 e 46-50 demons- traram ter atividade como alfa-glicosidases. 30 Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 36 e 46-50 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose. celulose, hemice- Iulose, lignina, amido, q uitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos,

.

N + * ' grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os polipeptí- deos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 36 e 46-50 demonstraram e ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remo- ção de potissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, _ 5 quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração . . xilano, glucano, galactano e/ou manano. . Exempjo 4: Produção e purificação de RAACO0568: uma al- fa-glicosidase A sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 35 foi clonada a O 10 partir de A//cyc/obaci//us acidoca/darius. A SEQ ID NO: 35 codifica o poli- peptideo de SEQ ID NO: 36, A SEQ ID NO: 35 foi clonada no pBAD/HIS A P vetor de expressão para E- co/i e pPlC6a A do vetor de expressão de P- pas- t" " toris e fornecido para E. co/i e P. pastoíis via eletroporação e choque térmico " em células competentes, respectivamente . A expressão da SEQ ID NO:36 . 15 foi detectada tanto em E. CO/í transformada e P. pastoris compreendendo a SEQ ID NO: 35 e RAACO0568 foi purificado por afinidade utilizando uma re- . . sina de cobalto a partir destas fontes para o teste de atividade. Exemplo 5: Atividade de alfa-gjicosidase de RAACO0568 RAACO0568 purificado de P. paston's foi testado para a atividade 20 de alfa-glicosidase utilizando um método resumido da seguinte forma: 0 A solução estoque de a-glicopiranosÍdeo-p-nitrofenol (Sigma Cat. No N1377) foi preparado pela adição de 90,375 mg a 10 mL de água. Este estoque foi diluído 1:15 em 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0, 3,5e 5,5. 25 As amostras de RAACO0568 purificadas produzidas no Exemplo 4 foram diluidas 1:5, 1:10, 1:20, 1:50 e em 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0, 3,5 e 5,5. As amostras (amostms RAACO0568 e os contro- Ies positivos) foram colocadas nos poços de uma placa de 96 poços em 10 µL de aliquotas, As soluções em branco do tampão só foram colocadas em 30 alguns poços. 190 uL de solução de a-gHcopiranosideo-p-nitrofenol, prea- quecido a 60 ou 80 graus Celsius, foi então adicionado a cada célula e a placa ainda incubada a 60 ou 80 graus Celsius por mais 10 minutos- 100 µL

+ * " de 2M de carbonato de sódio foram acrescentados a cada poço e a atividade " de a-glicosidase medida em um leitor de placa de 96 poços (Dispositivos á Moteculares UV-Vis) com um comprimento de onda de 405 nm.

Aatividade específica para RAACO0568 como determinado apa- "5 rece na Tabela 1.

+ Tabela 1 g

ENSAJO ATIVIDADE ESPECÍFICA Alfa-glicosidase: P. E)astDris _ pH 3,5, 60°C 2,5 µmols/min- mg .

0 ) pH 5,5, 60°C i,4 µmol/min mg .

. N pH 3,5, 80°C 2,8 µmo1s/min- mg .

b: ."" I pH 2.0, 60"C 2,4 µmols/min. mg b Exemplo 6: A atividade alfà-xilosidase de RAACO0568 RAACO0307 purificado de P. pastoris foi testado para a atividade + de xilosidase utilizando um ensaio fluorescente resumido da seguinte forma: _ . 10 Uma solução de a-xilopiranosida p-nitrofenol (Sigma Cat, No N1895) foi criada pela diluição de 50 mg de a-xilopiranosideo p-nitrofenol em 2 ml de metanol. As aliquotas individuais desta soIução foram diluidas 1:50 com 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0, 3,5 e 5,5- As amostras de RAACO0568 purificadas produzidas no Exemplo 0 15 5 foram diluidas 1:5, 1:10, 1:20, 1:50 e em 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0, 3,5 e 5,5. As amostras (amostras RAACO0568 e os contro- les positivos) foram colocadas nos poços de uma placa de 96 poços em 10 µL de aliquotas. As soluções em branco do tanipão só foram colocadas em alguns poços, Foram adicionados 190 uL de solução de a-glicopiranosideo- 20 p-nitrofenol, preaquecido a 60 ou 80 graus Celsius a cada cêlula e a placa ainda incubada a 60 ou 80 graus Celsius por mais 10 minutos. Foram adi- cionados 100 µL de 2.0 de carbonato de sódio a cada poço e a atividade de a-glicosidase medida em um leitor de placa de 96 poços (Dispositivos Mole- culares UV-Vis) com um comprimento de onda de 405 nm.

25 A atividade específica para RAACO0568 como determinado apa- rece na Tabela 2-

P m Tabela 2 t m

ENSAIO ATIVIDADE ESPECÍFICA Alfà-xilosidase: P. pastMs pH 3,5, 60°C 2,5 µmols/min. mg pH 5,5, 60"C 6,2 µmols/min. mg

W © pH 3,5, 80°C I 14 µmo1s/min. mg pH 2,0, 60"C 1,36 µmoVmin. mg EXEMPLO 7: RAACO0594 Fomecida na SEQ ID No: 51 está uma sequência de nucieotí- D deos isolados de Aicydobaci'/lus acidoca/darius e a codificação do polipeptí- . 5 deo de SEQ ID NO:52. Como pode ser visto nas figuras 4A, 4B e 4C SEQ ID 0§ ·, NO:52 alinha bem com outras proteinas identificadas como alfa-xilosidases- . . De particular importância, observa-se que, quando os aminoácidos são con- servados em outro aifa-xilosidases, tais aminoácidos são geralmente con- . servados na SEQ ID NO: 52.

. - 10 Os poIipeptídeos da SEQ ID NOS: 63-67 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptídeo de SEQ ID NO: 52 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 58-62, respectivamente- As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 51 e 58-62 são co- 0 15 locadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presente nas cêlulas, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 51 e 58- 62 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS: 52 e 63-67. Os polipeptí- 20 deos de SEQ ID NOS: 52 e 63-67 são então isolados e/ou purificados. Exemplo 8: Produção e purificação de RAACO0594 A sequência de nucleotideos de SEQ ID NO: 51 foi clonada a partir de A/icyc/obacil/us acidoca/daiius. A SEQ ID NO: 51 codifica o poIi- peptídeo de SEQ ID NO: 52. A SEQ ID NO: 51 foi clonada no pBAD/HIS A 25 vetor de expressão para E. co/i e pPlC6a A do vetor de expressão de P. pas- toris e fornecido para E. co/i e P. pastoris via eletroporação em células com-

" petentes, respectivamente , A expressão da SEQ ID NO:52 foi detectada " tanto em E. cO/i transformada que compreende a SEQ ID NO: 51 e RA- . ACO0594 foi purificado por afinidade utilizando uma resiria de cobalto a partir destas fontes para o teste de atividade. 5 Exemplo 9: RAACO0602: uma alfa-L-arabinofuranosidase Fornecida na SEQ ID No: 68 está uma sequência de nucleotí- . " deos isolados de A/icyc/obacil/us acidoca/darius e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:69. Como pode ser visto nas figuras 5A e 5B, SEQ ID NO: 69 alinha bem com outras proteínas identificadas como alfa-L- 0 10 arabinofuranosidases. De particular importância, observa-se que, quando os aminoácidos são conseivados em outras alfa-L-arabinofuranosidases, :" tais aminoácidos sào geralmente conservados na SEQ ID NO: 69. Assim, o

W

P poIipeptÍdeo fornecido na SEQ ID NO: 69 é devidamente classificado como ' uma alfa-L-arabinofuranosidases- 15 Os polipeptídeos da SEQ ID NOS: 80-84 são exemplos repre- - sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo da SEQ ID NO:

W 69 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 75-79, respectivamente. - As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 68 e 75-79 são co- 20 locadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são 0 então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarióticas como oélulas Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 68 e 75- 79 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 69 e 80-84. Os polipepti- 25 deos de SEQ ID NOS: 69 e 80-84 são então isolados e/ou purificados. Os poIipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:69 e 80-84 demons- traram ter atividade como alfa-L-arabinofuranosidases. Os poIipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 69 e 80-84 são desafiados com poIissacarideos, |jgnoce|u|ose, celulose, hemice- 30 Iulose, Iignina, amido, quitina, po|i-hidroxibUtjrato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os polipeptí- deos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 69 e 80-84 demonstraram

" ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remo- ' ção de polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, 0 quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. 5 Exemplo 10: Produção e purificação de RAACO0602: uma al-

. fa-L-arabinofuranosidase A sequência de nucleotideos de SEQ ID NO: 68 foi clonada a partir de Alicyc/obaci//us acidoca/darius.

A SEQ ID NO: 68 codifica o poli- peptideo de SEQ ID NO: 69. A SEQ ID NO: 68 foi clonada no pBAD/HIS A

0 10 vetor de expressão para E. cO/i e fornecido para E. co/i via eletroporação em _, célutas competentes, respectivamente . A expressão da SEQ ID NO:69 foi ' detectada tanto em E. coh" transformada que compreende a SEQ ID NO: 68 4 e RAACO0602 foi purificado por afinidade utilizando uma resina de cobalto a partir destas fontes para o teste de atividade.

W 15 Exemplo 11: Atividade de alfa-L-arabinofuranosidase de RAACO0602 +

RAACO0602 purificado de E. co/i foi testado para a atividade de alfa-L-arabinofuranosidase utilizando um método resumido da seguinte for- ma: 20 Uma solução de a-arabinofuranosideo p-nitrofenol (Sigma Cat. 0 No.

N3641) foi criado pela diluição de 271,2 mg de a-arabinofúranosideo p- nitrofenol em 10 ml de metanol.

As alíquotas individuais desta solução fò- ram diluidas 1:50 com 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0 e 3,5. 25 As amostras de RAACO0568 purificadas produzidas no Exemplo 10 foram diluidas 1:5, 1:10, 1:20, 1:50 e em 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0 e 3,5. As amostras (amostras RAACO0568 e os controles positivos) foram colocadas nos poços de uma placa de 96 poços em 10 µL de aliquotas.

As soIuções em branco do tampão só foram colocadas em 30 alguns poços.

Foram adicionados 190 µL de solução de a- arabinofuranosideo p-nitrofenol, preaquecido a 60 ou 80 graus Celsius a ca- da célula e a placa ainda incubada a 60 ou 80 graus Celsius por mais 10 mi-

n 0i mi 47 nutos. Foram adicionados 100 µL de 2,0 M de carbonato de sódio a cada 0 poço e a atividade de a-glicosidase medida em um leitor de placa de 96 po- q ços (Dispositivos Moleculares UV-Vis) com um comprimento de onda de 405 nm. 5 A atividade especifica para RAACO0692 como determinado apa- . rece na Tabela 3- Tabela 3

ENSAIO ATIVIDADE ESPECÍFICA ATIVIDADE ESPECÍFICA a-L-arabinofuranosidase P- pastonis E. co/i pH 3,560C 5,54 µmols/min mg 15,2 µmols/min mg pH 2,060C 0,1 µmol/min mg 0,07 µmoVmin mg -0 pH 3,580C " 3,53 µmosl/min mg 9,77 µmols/min mg ," 4 pH 2,080C 1,46 µmol/min mg 0 µmol/min mg ~ Exemplo 12: Atividade beta-xilosidase de RAACO0602 RAACO0602 purificado de E.co/i e P. pastoris foi testado para a 10 atividade de beta-xilosidase utilizando um ensaio fluorescente resumido da

W seguinte forma: A solução de MUXy1 (4-metilumbeliferil {3-D-Xilopkanosideo)

W

P (Sigma M7008-1G CAS No. 6734-33-4) foi criada por diluição 10 mg (O,O1g) MUXy1 em 1mL de dimetil sulfóxido (DMSO). As aliquotas individuais da 15 solução de DMSO foram diluidas 1:100 com 50 mM de tampão de acetato 0 desódioempH2,Oe3,5. As amostras de RAACO0602 purificado geradas no Exemplo 10 foram diluidas 1:5, 1:10, 1:20, 1:50 e em 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0 e 3,5- O j3-xilosidase de A niger (Sigma-X3501 5UN-CAS 20 No. 9025-530) foi diluído 1:100 em 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0 e 3,5 como controles positivos. As amostras (amostras RA- ACO0602 e controles positivos) foram colocadas nos poços de uma placa de 96 poços em 50 µL de aliquotas. As soIuções em branco do tampão só fo- ram colocadas em alguns poços. A placa é então preaquecida a 60 ou 80 25 graus Celsius por 5 minutos. Foram adicionados 10 µL de solução MUXy1 a cada célula e a placa jncubada a 60 ou 80 graus Celsius por mais 10 minu- tos. Foram adicionados 100 µL de 0,5 M de carbonato de sódio a cada po-

¶F 0 " b 48 " ço e a atividade B-xi|osidase medida em um leitor de placa de 96 poços : (Spectramax Gemini) com excitação 355 e emissâo 460. A atividade especi- . fica para RAACO0602 como determinado aparece na Tabela 4 Tabela 4

I ENSAIO I ATIVIDADE ESPECÍFICA I ATIVIDADE ESPECÍFICA I B:xilosidase , P. pastoris I E. coh' |pH3,56QC 2,5 µmols/min mg |pH2,õ6OC 1,2 µmol/min mg |pHZ,08OC 0,7 µmol/min mg .D 5 Exemplo 13: RAACO0798: hidrolase associada à parede ce- m " lular - Fornecida na SEQ ID No: 85 está uma sequência de nucleoti- deo"s isolados de A/icyc/obac/l/us acicbca/dàhus e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:86. Como pode ser visto nas figuras 6A e 6B, SEQ ID 10 NO:86 alinha bem com outras proteinas identificadas como hidrofases asso- . ciadas a parede celular. De particular importància, obseNa-se que, quando os aminoácidos são conseNados em outras hidrolases associadas à parede celular, tais aminoácidos são geralmente conservados na SEQ ID NO:86. Assim, o polipeptídeo fornecido na SEQ ID NO: 86 é devidamente classifica- 15 do como um hidrolase associada parede celular. 0 Os polipeptídeos da SEQ ID NOS: 96-100 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do poIipeptideo da SEQ ID NO: 86 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 91-95, respectivamente. 20 As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 85 e 91-95 são co- locadas em vetores de expressão usando técnicas-padrào. Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 85 e 91- 25 95 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS: 86 e 96-100. Os polipeptí- deos de SEQ ID NOS: 86 e 96-100 são então isolados e/ou purificados. Os polipeptideos Ísolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:86 e 96-100 de-

y 49 monstraram ter atividade como hidrolases associadas à parede celular.

Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 86 e 96-1 00 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemice- lulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, 5 grupo de decoraçâo xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Os polipeptí-

- deos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 86 e 96-100 demonstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, divagem e/ou remo- ção de polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosldeos, grupo de decoração

0 10 xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Exemplo 14: RAACO1076: uma altronato hidrolase Fornecida na SEQ ID No: 101 está uma sequência de nucleotí- deos isolados de A/i"cyc/obacil/us acidoca/dahus e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:102. Como pode ser visto nas figuras 7A e 7B, SEQ ID '15 NO:102 alinha bem com outras proteinas identificadas como altronatos hi- drolases.

De particular importância, observa-se que, quando os aminoáci- dos são conservados em outras altronatos hidrolases, tais aminoácidos são geralmente conservados na SEQ ID NO:102, Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO: 102 é devidamente classificado como uma altronato hidrola- " 20 se. 0 Os poIipeptídeos da SEQ ID NOS: 113-117 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo da SEQ ID NO: 102 e são md"Mcados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 108- 112, respectivamente. 25 As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:1O1 e 108 112 são coIocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão.

Os vetores sào então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO.

Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 30 101 e 108-112 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS: 102 e 113-117. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 102 e 113-117 são então isolados e/ou purificados.

Os polipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:102 e 113-117 demonstraram ter atividade como altronatos hidrolases.

Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 102 e 113-117 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- 5 deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Os po-

- lipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 102 e 113-117 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remoção de polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, Iig- nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de

0 10 decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

EXEMPLO 15: RAAC04341 Fornecida na SEQ ID No: 118 está uma sequência de nucleoti- deos isolada de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e a codificação do polipepti- " deo de SEQ ID NO:119, Como pode ser visto nas figuras 8A e 8B, SEQ ID

15 NO:119 alinha bem com as proteínas identificadas como celula- se/endoglucanase Sra.

De particular importãncia, é de notar que, quando os . aminoácidos são conservados em outros celulase/endoglucanase Ms, os aminoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:119. Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 130-134 sâo exemplos repre- " 20 sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo da SEQ ID NO: 0 119 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 125- 129, respectivamente.

As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:118 e 125-129 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão.

Os vetores 25 são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO.

Em conjunto com o maquinário nomal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 118 e 125-129 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 119 e 130-134. Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 119 e 130-134 são então isolados elou 30 purificados.

Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 119 e 130-134 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he-

micelulose, Iignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Os po- lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 119 e 130-134 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradaçâo, cIivagem 5 e/ou remoção de polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lig-

- nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, gmpo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Exemplo 16: Produção e purificação de RAAC04341 A sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 118 foi clonada a

0 10 partir de A/icyclobací7/us acidoca/danus, A SEQ ID NO: 118 codifica o poli- peptideo de SEQ ID NO: 119. A SEQ ID NO: 118 foi clonada no pBAD/HIS A v.etor de expressão para E. co/i e pPlC6a A do vetor de expressão de P. pas- " toris e fomecido para E. co/i e P. pastoris via eletroporação e choque térmico . em células competentes, respectivamente . A expressão da SEQ ID 15 NO119 foi detectada tanto em E. co/i transformada e P. pastoris compreen- dendo a SEQ ID NO: 118 e RAAC04341 foi purificado por afinidade utilizan- . do uma resina de cobalto a partir destas fontes para o teste de atividade. m EXEMPLO 17: RAAC04342 Fornecida na SEQ ID No: 135 está uma sequência de nucleoti- " 20 deos isolada de Alicyc/obaci/lus acidoca/dan'us e a codificação do polipepti- 0 deo de SEQ ID NO:136. Como pode ser visto nas figuras 9A e 9B, SEQ ID NO:136 alinha bem com as proteinas identificadas como celula- se/endoglucanase Ms.

De particular importância, observa-se que, quando os aminoácidos são conservados em outros celdase/endoglucanase Ms, os 25 aminoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:136- Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 147-151 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptídeo da SEQ ID NO: 136 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 142- 146, respectivamente. 30 As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:135 e 142-146 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão.

Os vetores sào então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió-

ticas como células Sf9 ou células CHO.

Em conjunto com o maquinário nomal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 135 e 142-146 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 136 e 147-151. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 136 e 147-151 são então isolados e/ou 0

. 5 purificados.

Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 136 " e 147-151 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosí- deos, gmpo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Os po- 0 10 lipeptídeos purificados elou isolados de SEQ ID NOS: 136 e 147-151 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem -- e/ou remoção de polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lig- nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de ' decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano- 15 Exemplo 18: Produção e purificação de RAAC04342 A sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 135 foi clonada a < partir de A/icyclobaci//us acidoca/dahus.

A SEQ ID NO: 135 codifica o poIi-

- peptideo de SEQ ID NO: 136. A SEQ ID NO: 135 foi clonada no pBAD/HIS A vetor de expressão para E. co/i e pPlC6a A do vetor de expressão de P. pas- " 20 ton's e fornecido para E, co/i e P. pastoris via eletroporação e choque térmico 0 em cêlulas competentes, respectivamente , A expressão da SEQ ID NO:136 foi detectada tanto em E, coli transformadâ e P. pastonis compreendendo a SEQ ID NO: 135 e RAAC04342 foi purificado por afinidade utilizando uma resina de cobalto a partir destas fontes para o teste de atividade. 25 Exemplo 19: RAAC04343: uma celujase/endoglucanase M Fornecida na SEQ ID No: 152 está uma sequência de nucleoti- deos isolada de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:153. Como pode servisto nas figuras IOA e 108, SEQ ID NO:153 alinha bem com as proteinas identificadas como celula- 30 se/endoglucanase Ms.

De particular importância, observa-se que, quando os aminoácidos são conservados em outra ce|u|aselendog|ucanase Ms, os a- minoácidos são geralmente conseNados em SEQ ID NO:153. Assim, o poli-

peptideo fornecido na SEQ ID NO:153 é adequadamente classificado como celulose/endoglucanase M.

Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 162-166 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptídeo da SEQ ID NO: "."5 153 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 157-

. 161, respectivamente.

As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:152 e 157-161 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão.

Os vetores são então fomecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió-

0 10 ticas como células Sf9 ou células CHO- Em conjunto com o maquinário nor- + mal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 152 e 157-161 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 153 e 162-166. Os po- lipeptídeos de SEQ ID NOS: 153 e 162-166 são então isolados e/ou purifica- dos.

Os polipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:153 e 162- 15 166 demonstraram ter atividade como celulase/endoglucanase Ms- - Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 153 e 162-166 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he-

. micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Os po- " 20 lipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 153 e 162-166 de- 0 monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradaçào, clivagem e/ou remoção de polissacarideos, lignocelulose, ceíulose, hemicelulose, lig- nina, amido, quitina, poIi-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. 25 Exemplo 20: Produção de RAAC04343 A sequência de nucleotideos de SEQ ID NO: 152 foi cloriada a partir de A/icycbbaci//us acidoca/dahus- A SEQ ID NO: 152 codifica o poli- peptideo de SEQ ID NO: 153. A SEQ ID NO: 152 foi clonada no pBAD/HIS A vetor de expressão para E. co/i e pPlC6a A do vetor de expressão de P. pas- 30 toris e fomecido para E. coli e P- paston"s via eletroporação e choque térmico em células competentes, respectivamente . Expressào de SEQ ID NO:153 foi detectada tanto em E. coli transformada e P- pastoiis compreendendo

SEQ ID NO:152. Exemplo 21: RA,ACO1275: um poliga|acturonase Fornecida na SEQ ID No: 167 está uma sequência de nucleotí- deos isolada de A/icyc/obaci//us acidocaldanús e a codificação do polipepti- ."5 deo de SEQ ID NO:168, Como pode ser visto nas figuras 11A 11C, SEQ ID

- . NO:168 alinha bem com outras proteinas identificadas como poIigalacturo- nases.

De particular importância, observa-se que, quando os aminoácidos são conservados em outro poIigalacturonases, tais aminoácidos são geral- mente conservados na SEQ ID NO: 168. Assim, o polipeptideo fornecido na 0 10 SEQ ID NO: 168 é devidamente classificado como uma poligalacturonase.

Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 179-183 são exemplos repre- .. sentativos de substituições conseNadoras do polipeptideo da SEQ ID NO: 168 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 174- . 178, respectivamente. 15 As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:167 e 174-178 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão, Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO- Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: " 20 167 e 174-178 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 168 e 179-183. 0 Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 168 e 179-183 são então isolados e/ou purificados.

Os poIipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS: 168 e 179-183 demonstraram ter atividade como poligalacturonases, Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 168 25 e 172-183 são desafiados com polissacarideos, Íignocelulose, celulose, he- micelulose, Iignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Os po- Iipeptideos purif'icados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 168 e 179-183 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação. clivagem 30 e/ou remoção de polissacarideos, Iignocelulose, ceiulose, hemicelulose, lig- nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano.

Exemplo 22: RAACO1615: uma alfa-galactosidase Fornecida na SEQ ID No: 184 está uma sequência de nucleoti- deos isolada de A/icyc/obaci//us acidoca/danius e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:185. Como pode ser visto nas figuras 12A-12C, SEQ ID ."5 NO:185 alinha bem com as proteinas identificadas como alfa-galactosidase.

- . De particulat importância, observa-se que, quando os aminoácidos são con- servados em outra alfa-galactosidase, os aminoácidos são geralmente con- servados em SEQ ID NO:185. Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO:185 é adequadamente classificado como alfa-galactosidase.

0 10 Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 196-200 sào exemplos repre- m , sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo da SEQ ID NO: 185 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 191- 195, respectivamente. & As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:184 e 191-195 são 15 colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão- Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário - normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 184 e 191-195 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 185 e 196-200. " 20 Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 185 e 196-200 são então isolados e/ou 0 purificados- Os polipeptideos isolados elou purificados de SEQ ID NOS:185 e 196-200 demonstraram ter atividade como alfa-galactosidases. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 185 e 196-200 são desafiados com poIissacarídeos, lignocelulose, celulose, he- 25 micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano. galactano e/ou manano. Os po- lipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 185 e 196-200 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remoção de polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lig- 30 nina, amida, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 23: RAACO1621: um celobiose fosforijase

Fornecida na SEQ ID No: 201 está uma sequência de nucleoti- deos isolada de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:202, Como pode ser visto nas figuras 13A-13K, SEQ ID NO: 202 alinha bem com outras proteinas identificadas como celobiose fos- . 5 forilases. De particular importância, observa-se que, quando os aminoáci- . dos são conservados em outro celobiose fosforilases, tais aminoácidos são " geralmente conservados na SEQ ID NO: 202. Assim, o polipeptídeo forneci- dQ na SEQ ID NO: 202 é devidamente classificado como um celobiose fosfo- rilase.

0 10 Os polipeptídeos da SEQ ID NOS: 213-217 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo da SEQ ID NO: «, 202 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 208- 212, respectivamente. e As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:201 e 208-212 sào 15 colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário - normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 201 e 208-212 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 202 e 213-217. " 20 Os poIipeptideos de SEQ ID NOS: 202 e 213-217 são então isolados e/ou 0 purificados. Os polipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:202 e 213-217 demonstraram ter atividade como celobiose fosforilases. Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 202 e 213-217 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose, celulose, he- 25 micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- lipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 202 e 213'-217 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remoção de polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lig- 30 nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração xil'ano, glucano, galactano e/ou manano. EXEMPLO 24: RAACO1755

Fornecida na SEQ ID No: 218 está uma sequência de nucleotí- deos isolada de A/icyc/obaci//us acidoca/dMus e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:219. Como pode ser visto nas figuras 14A 14C, SEQ ID r NO:219 alinha bem com as proteínas identificadas como enzimas desramifi-

K 5 cadoras de glicogênio. De particular importância, observa-se que, quando - os aminoácidos sâo conservados em outra enzima desramificadora de glico- " gêriio, tais aminoácidos são geralmente conservados na SEQ ID NO: 219. Os poÍipeptídeos da SEQ ID NOS: 230-234 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do poIipeptideo da SEQ ID NO: p 10 219 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS: 225- 229, respectivamente. As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:218 e 225-229 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores m são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- 15 ticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: " 218 e 225-229 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS: 219 e 230-234- · Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 219 e 230-234 são então isolados e/ou " purificados. Os polipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS: " 20 219 e 230-234 demonstraram ter atividade. 0 Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 219 e 230-234 são desafiados com poIissacarídeos, Iignocelu)ose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, qu itina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, gmpo de decoração xilano, glucano. galactano e/ou manano. Os po- 25 Iipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 219 e 230-234 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remoção de polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, Iig- nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxila nos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano- 30 Exemplo 25: Produção e purificação de RAACO1755: um al- fa-glicosidase A sequência de nucleotideos de SEQ ID NO: 218 foi cIonada a partir de A/içyclobacü/us acidocaldarius.

A SEQ ID NO: 218 codifica o poli- peptideo de SEQ ID NO: 219. A SEQ ID NO: 218 foi clonada no pBAD/HIS A vetor de expressão para E. coli e pPlC6a A do vetor de expressão de P. pas- r tons e fornecido para E. co/i e P. pastoiis via eletroporaçâo e choque térmico q

. ,"5 em células competentes, respectivamente . A expressão da SEQ ID - - NO:219 foi detectada tanto em E. co/i transformada e P. pastoris compreen- " dendo a SEQ ID NO: 218 e RAACO1755 foi purificado por afinidade utilizan- do uma resina de cobalto a partir destas fontes para o teste de atividade.

Exemplo 26: RAACO1887: uma ceiulase/endoglucanase M

0 10 Fornecida na SEQ ID No: 235 está uma sequência de nucleoti- deos Ísolada de A//cyc/obaci//us acidoca/da/ius e a codificação do polipepti- . deo de SEQ ID NO:236- Como pode ser visto nas figüras 15A e 15B, SEQ ID NO:236 alinha bem com as proteinas identificadas como celula- se/endoglucanase Ms.

De particular importância, observa-se que, quando os 15 aminoácidos são conservados em outra celulase/endoglucanase Ms, os a- minoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:236. Assim, o poli- . peptídeo fornecido na SEQ ID NO:236 é adequadamente classificado como

- celulase/endogiucanase M. — Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 247-251 são exemplos repre- " 20 sentativos de substituições conservadoras do poIipeptideo da SEQ ID NO:

0 236 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 242- 246, respectivatnente, As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:235 e 242-246 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão.

Os vetores 25 são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO.

Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 235 e 242-246 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS: 236 e 247-251. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 236 e 247-251 são então isolados e/ou 30 purificados, Os polipeptídeos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS:236 e 247-251 demonstraram ter atividade como celulase/endoglucanase Ms.

Os polipeptideos purificados elou isolados de SEQ ID NOS: 236 e 247-251 são desafiados com poIissacarídeos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lign ina, amido, quitina, poIi-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoraçào xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- n lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 236 e 247-251 de- . 5 monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remoção de poIissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lig- nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicos ideos, grupo de decoração xilano, glucano. galactano e/ou manano- Exemplo 27: Produção de RAACO1887 O 10 A sequência de nucleotideos de SEQ ID NO: 235 foi clonada a partir de Alicyc/obaci//us acidoca/darius. A SEQ ID NO: 235 codifica o poli- peptideo de SEQ ID NO: 236. A SEQ ID NO: 235 foi clonada no pBAD/HIS A vetor de expressão para E. coli e pPlC6a A do vetor de expressão de P. pas- toris e fornecido para E. cO/i e P. pastoris via eletroporação e choque térmico 15 em células competentes, respectivamente . A expressão de SEQ ID NO: 236 foi detectada tanto em E. co/i transformada e P. pastoris compreendendo

O SEQ ID NO: 235.

. Exemplo 28: RAACO1897: uma acetil-esterase/aceül- " hidrolase 20 Fornecida na SEQ ID No: 252 está uma sequência de nucleoti- 0 deos isolada de A//cyc/obaci//us acidoca/darius e a codificação dó polipepti- deo de SEQ ID NO:253. Como pode ser visto nas figuras 16A e 16B, SEQ ID NO:253 alinha bem com outras proteínas identificadas como acetil- esterase/acetil-hidrolases. De particular importância, observa-se que, 25 quando os aminoácidos sáo conservados em outra acetil-estearasel acetil- hidrolases, tais aminoácidos são geralmente conseNados na SEQ ID NO:253- Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO: 253 é devidamente classificado como uma acetil-estearasel acetil-hidrolases. Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 264-268 são exemplos repre- 30 sentativos de substituições conservadoras do polipeptídeo da SEQ ID NO: 253 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 259- 263, respectivamente.

As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:252 e 259-263 são cobcadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão.

Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células' eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO.

Em conjunto com o maquinário - 5 normal preserite nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS:

- 252 e 259-263 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS: 253 e 264-268- " Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 253 e 264-268 são então isolados e/ou purificados.

Os poIipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS: 253 e 264-268 demonstraram ter atividade como acetil-hidrolases/acetil- 1O estearase. 0 Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 253 e 264-268 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- - micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- . deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano- Os po- 15 lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 253 e 264-268 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, cIivagem e/ou remoção de polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, Iig-

" nina, amido, quitina, poIi-hid roxibutirato, heteroxi|anos, glicosideos, grupo de " decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. " 20 EXEMPLO 29: RAACO1917: uma beta-1-4-xilanose Fornecida na SEQ ID No: 269 está uma sequência de nucleoti- 0 deos isolada de A/icyclobaci//us acidoca/darius e a codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:270. Como pode ser visto nas figuras 17A e 17B e SEQ ID NO: 270 alinha bem com outras proteínas identificadas como beta-1-4- 25 xilanoses.

De particular importância, observa-se que, quando os aminoáci- dos sâo conservados em outro beta-1-4-xilanoses, tais aminoácidos são ge- ralmente conservados na SEQ ID NO: 270. Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO: 270 é devidamente classificado como um beta-1-4-xilanose, Os poIipeptideos da SEQ ID NOS: 281-285 são exemplos repre- 30 sentativos de substituições conservadoras do poIipeptideo da SEQ ID NO: 270 e sào codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 276- 280, respectivamente.

As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:269 e 276-280 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão, Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- - ticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário . _ 5 normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: - · 269 e 276-280 produzem os poIipeptideos de SEQ ID NOS: 270 e 281-285. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 270 e 281-285 são então isolados e/ou purificados. Os polipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS: 270 e 281-285 demonstraram ter atividade como beta-1-4-xilanoses.

0 10 Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 270 e 281-285 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 270 e 281-285 de- 15 monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem e/ou remoção de poIissacari'deos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lig- . nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de " decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. " Exemplo 30: Produção de RAACO1917 " 20 A sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 269 foi cIonada a 0 partir de Alicyc/obacil/us acidoca/dan'us- A SEQ ID NO: 269 codifica o poli- peptideo de SEQ ID NO: 270. A SEQ ID NO: 269 foi clonada no pBADIHIS A vetor de expressão para E. co/i e pPlC6a A do vetor de expressão de P. pas- tonis e fornecido para E- co/i e P. pastoris via eletroporação e choque térmico 25 em células competentes, respectivamente . Expressão de SEQ ID NO:270 foi detectada tanto em E. cO// transformada e P. pastoris compreendendo SEQ ID NO:269, Exemplo 31: RAAC02404: um cinamoil éster hidrolase Fornecida na SEQ ID No: 286 está uma sequência de nucleoti- 30 deos isolada de Alicyc/obaci//us acidoca/dahus e a codificação do polipeptí- deo de SEQ ID NO:287. Como pode ser visto nas figuras 18A e 18B, SEQ ID NO:287 alinha bem com outras proteínas identificadas como cinamoil éster hidrolase . De particular importância, observa-se que, quando os aminoáci- dos são conservados em outro cinamoil éster hidrolase , tais aminoácidos são geralmente conservados na SEQ ID NO:287. Assim, o polipeptídeo for- . necido na SEQ ID NO: 287 é devidamente classificado como um cinamoil . 5 éster hidrolase . Os polipeptideos da SEQ ID NOS: 298-302 são exemplos repre- " sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo da SEQ ID NO: 287 e sào codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS: 293- 297, respectivamente.

0 10 As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:286 e 293-297 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são então fornecidos para as células, tais como bactérias ou células eucarió- ticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: . 15 286 e 293-297 produzem os poIipeptideos de SEQ ID NOS: 287 e 298-302, Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 287 e 298-302 são então isolados e/ou

V purificados. Os polipeptideos isolados e/ou purificados de SEQ ID NOS: · 287 e 298-302 demonstraram ter atividade como cinamoil éster hidrolase- " Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 287 " 20 e 298-302 são desafiados coni polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- 0 micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoraçâo xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 270 e 281-285 de- monstraram ter atividade pelo menos parcialmente na degradação, clivagem 25 elou remoção de polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lig- nina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 32: RAAC02424: carboxilesterase tipo B Fornecida na SEQ ID No: 303 está uma sequência de nucleotí- 30 deos isolada de A/icyc/obaci//us acidocaldarius e a codificação do polipeptí- deo de SEQ ID NO:304. Como pode ser visto nas figuras 19A e 19B e SEQ ID NO: 304 alinha bem com outras protelnas identificadas como carboxiles-

terase tipo Bs. De particular importância, observa-se que, quando os ami- noácidos são conservados em outro carboxilesterase tipo Bs, tais aminoáci- dos são geralmente conservados na SEQ ID NO: 304. Assim, o polipeptídeo — fomecido na SEQ ID NO: 304 é devidamente classificado como um carboxi- . 5 lesterase tipo B. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 315-319 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo de SEQ ID NO:304 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:310 314, respectivamente.

0 10 As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:303 e 310 314 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são então fornecidos para as células, tais como cêlulas de bactérias ou célu- Ias eucarióticas como células Sf9 ou células CHO- Em conjunto com o ma- . quinário normal presente nas células. os vetores que compreendem SEQ ID i5 NOS: 303 e 310-314 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS:304 e 315-

319. Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 304 e 315-319 são então isolados e/ou puhficados. Os poÍipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID · NOS: 304 e 315-319 mostraram, então, ter atividade como carboxilesterase "' tipo Bs. " 20 Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 304 0 e 315-319 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 304 e 315-319 de- 25 monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, ami- do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decora- ção xilano, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 33: Produção e purificação de RAAC02424 30 A sequência de nucleotídeos SEQ ID NO: 303 foi clonada a par- tir de A/icyc/obaci/lus acidocaldarius. A SEQ ID NO:303 codifica o polipeptí- dio de SEQ ID NO:304. A SEQ ID NO: 303 foi clonada no vetor de expres-

são pBAD/HIS para E. cO// e fornecido para E. co/i por eletroporação em cé- Iulas competentes, respectivamente.

A expressão de SEQ ID NO:304 foi de- tectada tanto em E- co/i transformada que compreende a SEQ ID NO:303 e RAACO02424 foi purificado por afinidade utilizando uma resina de cobalto a n

5 partir destas fontes para o teste de atividade, +

Exemplo 34: RAAC02616: a betaqalactosidase/beta glicuro- nidase Fornecida na SEQ ID NO:320 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de A//cyclobaci//us acidoca/darius e codificação do polipeptí- lO deo de SEQ ID NO:321. Corno pode ser visto nas FIGURAS 20A a 20D, a 0 SEQ ID NO:321 se alinha bem com outras proteínas identificadas como be- ta-galactosidasel beta-glicuronidases.

De particular importância, deve-se observar que, quando os aminoácidos são conservados em outros beta- - galactosidase/beta-glicuronidases, os aminoácidos são gerdmente conser- 15 vados em SEQ ID NO:321. Assim, o polipeptideo fomecido na SEQ ID NO:321 está corretamente classificado como um beta-galactosidase/beta- glicuronidase- Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 331-335 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do poIipeptídeo de SEQ ID 20 NO:304 e são codificados por sequências de nücleotideos SEQ ID NOS:326- 330, respectivamente. 0 As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:320 e 326-330 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão.

Os vetores são então fomecidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- 25 las eucarióticas como células Sf9 ou células CHO.

Em conjunto com o ma- quinário nomal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 320 e 326-330 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS:321 e 331- 335, Os poIipeptideos de SEQ ID NOS: 321 e 331-335 são então isolados elou purificados.

Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID 30 NOS:321 e 331-335 demonstraram então ter atividade como beta- galactosidase/beta-glicu ronidases.

Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 321 e 331-335 são desafiados com polissacarideos, Iignocelulose, celulose, he- micelulose. lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- - |jpeptÍdeQs purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 321 e 331-335 de- . ,. 5 monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou . '4 " remover polissacarídeos, lignocelulose, oelulose, hemicelulose, Iignina, ami- do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de decora- ção xilano, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 35: RAAC02661: a alfa-1-2-glucuronidase de xilano 0 10 Fornecida na SEQ ID NO:336 está Llma sequência de nucleoti- deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:337. Como pode ser visto nas FIGURAS 21A 21D, SEQ ID NO:337 se alinha bem com outras proteinas identificadas como alfa-1-2 giicuronidases xilano. De particular importância, deve-se observar que, 15 quando os aminoácidos são conservados em outros alfa-1-2-glicuronidases de xilano, os aminoácidos são geralmente conseivados em SEQ ID NO:337. « Assim, o polipeptídeo fornecido na SEQ ID NO:337 está corretamente classi- ficado como um alfa-1-2-glicuronidase xilano- Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 348-352 são exemplos repre- 20 sentativos de substituições conservadoras do poIipeptideo de SEQ ID 0 NO:337 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:343- 347, respectivamente- As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:336 e 343-347 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores 25 sâo então fornecidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- las eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o ma- quinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 336 e 343-347 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS:337 e 348-

352. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 337 e 348-352 são então isolados 30 e/ou purificados. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 337 e 348-352 mostraram, então, ter atividade como alfa-1-2- glicuronidases de xilano,

Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 337 e 348-352 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, Iignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosí- - deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- 5 lipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 337 e 348-352 de- . "" monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, Iignina, ami- do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decora- ção xilano, glucano, galactano e/ou manano.

0 10 Exemplo 36: RAAC02925: um 3-hidróxi-isobutiril-CoA hidro- lase Fomecida na SEQ ID NO:353 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e codificação do polipepti- . deo de SEQ ID NO:354. Como pode ser visto nas FIGURAS 22A 22D. SEQ i5 ID NO:354 se alinha bem com outras proteinas identificadas como 3-hidróxi- isobutiril-CoA hidrolases. De particular importância, deve-se observar que,

P quando os aminoácidos são conservados em outro 3-hidróxi-isobutiril-CoA hidrolases, os aminoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:354. Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO:354 está correta- 20 mente classificado como um 3-hidróxi-isobutiriI-CoA- hidrolase.

0 Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 365-369 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo de SEQ ID NO:354 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:360- 364, respectivamente. 25 As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:353 e 360-364 são colocadas em vetores de expressâo usando técnicas-padrào. Os vetores são então fomecidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- las eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o ma- quinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID 30 NOS: 353 e 360-364 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS:354 e 365- 369, Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 354 e 365-369 são então isolados e/ou puriftcados. Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID

NOS: 354 e 365-369 mostraram, então, ter atividade como 3-hidróxi- isobútiril-CoA hidrolases. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 354 - e 365-369 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose, celulose, he- _5 micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- - ' · deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano elou manano. Os poli- peptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 354 e 365-369 de- monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarídeos, lignocelulose, celutose, hemicelulose, Iignina, ami- 0 10 do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de decora- ção xilano, glucano, galactano e/ou manano. - Exemplo 37: RAAC03001: uma beta-glicosidase Fornecida na SEQ ID NO:370 está uma sequência de nucleotí- . deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e codificação do polipepti- , í5 deo de SEQ ID NO:371. Como pode ser visto nas FIGURAS 23A 23D, SEQ ID NO:371 se alinha bem com outras proteinas identificadas como beta- . glicosidases. De particular importância, deve-se observar que, quando os aminoácidos são coriservâdos em outros beta-glicosidases, os aminoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:371. Assim, o poIipeptídeo for- 20 necido na SEQ ID NO:371 está corretamente classificado como uma beta- 0 glicosidase. Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 382-386 são exemplos repre- sentativos de substituições conseNadoras do poIipeptídeo de SEQ ID NO:371 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:377- 25 381, respectivamente. As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:370 e 377-381 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são então fomecidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- las eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o ma- 30 quinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 370 e 377-381 produzem os polipeptÍdeos de SEQ ID NOS:371 e 382-

386. Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 371 e 382-386 são então isolados e/ou purificados. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 371 e 382-386 mostraram, então, ter atividade como beta- glicosidases. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 371

W .5 e 382-386 são desafiados com polissacarídeos, lignocelubse, celulose, he- . " " micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- Iipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 371 e 382-386 de- monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou 10 remover polissacarideos, Hgnocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, ami- », do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decora- . çâo xilano, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 38: Produção e purificação de RAAC03001: um be- ta-glicosidase i5 A sequência de nucleotideos SEQ ID NO: 370 foi clonada a par- tir de A/icyc/obacMus ac/doca/daiius. A SEQ ID NO:370 codifica o polipepti- dio de SEQ ID NO:371. A SEQ ID NO: 370 foi clonada no vetor de expres- são pBAD/HIS para E. co/i e o vetor de expressão pPlC6a para P, pastoris e fornecido para E. coIi e P. pastoris por eletroporação e choque térmico em 20 células competentes, respectivamente. A expressão de SEQ ID NO:370 foi detectada tanto em E. co/i transformada e P, pastoris que compreende a 0 SEQ ID NO:370 e RAAC03001 foi purificado por afinidade utilizando uma resina de cobalto a partir destas fontes para o teste de atividade. Exemplo 39: atividade da enzima beta-glicosidase de RA- 25 AC03001 O RAAC03001 purificado de ambos E. co/i foi testado para ativi- dade da enzima beta-glicosidase utilizando o ensaio resumido como se se- gue: Uma solução de í3-glicopjranosjdeo p-nitrofenol (Sigma Cat No. 30 N7006) foi criado por diluição de 301,25 mg de [3-glicopiranosÍdeo de p- nitrofenol em 20 mL de água. As alíquotas individuais desta solução foram diluídas 1:25 com 50 mM de tampão de acetato de sódio em pH 2,0, 3,5 e

5,5. Amostras de RAAC03001 purificado produzidas no Exemplo 39 foram diluidas em 1:5, 1:10. 1:20, 1:50 e em 50 mM de tampào de acetato " de sódio em pH 2.0, 3,5 e 5,5. As amostras (amostras RAAC03001 e os con- .5 troles positivos) foram colocadas nos poços de uma pIaca de 96 poços em &

" " 10 µL de aliquotas.

As soluções em branco do tampão foram somente colo- . cadas em alguns poços- Foram adicionados 190 µL de solução de B- glicopiranosídeo de p-nitrofenol, preaqueddo a 60 ou 80 graus Celsius a ca- da célula e a placa ainda incubada a 60 ou 80 graus Celsius por mais 10 mi-

0 10 nutos- Foram adicionados 100 µL de 2,0 M de carbonato de sódio a cada poço e a atividade B-xi|osjdase medida em um leitor de placa de 96 poços (Molecular Devices UV-Vis) com um comprimento de onda de 405 nm.

O ensaio acima demonstrou que a proteina RAAC03001 isolada de E. co/i apresentaram ab"vidade beta-glicosidase nos pHs de 3,5 e 5,5 e

- 15 uma temperatura de 60 graus Celsius e a proteína RAAC03001 isolada de P, pastoris teve atividade beta-glicosidase em pH 5,5 e 60 graus Celsius. . Exemplo 40: RAAC02913: uma chito-oligossacarídeo desa- cetilase Fornecida na SEQ ID NO:387 está uma sequência de nucleotí- 20 deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e codificaçâo do pojipepti- deo de SEQ ID NO:388. Como pode ser visto nas FIGURAS 24A e 24B, 0 SEQ ID NO:388 se alinha bem com outras proteínas identificadas como chi- to-oligossacarídeo desacetilases De particular importância, deve-se obser- var que, quando os aminoácidos são conseNados em outros chito- 25 oligossacarideo desacetilases, os aminoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:388. Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO:388 está corretamente classificado como um chito-oligossacarideo desacetilases.

Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 399-403 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo de SEQ ID 30 NO:388 e são codificados por sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:394- 398, respectivamente.

As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:387 e 394-398 são colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores são então fome.cidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- las eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o ma- . quinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID .5 NQS: 387 e 394-398 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS:388 e 399- . " · 403. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 388 e 399-403 são então isolados e/ou purificados. Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 388 e 399-403 mostraram, então, ter atividade como chito- oligossacarídeo desacetilases.

0 10 Os polipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 388 e 399-403 são desafiados com polissacarídeos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- . deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- lipeptídeos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 388 e 399-403 de- - 15 monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, ami- do, quitina, poíi-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decora- ção xilano, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 41: RAAC02839: uma chito-oligossacarideo desa- 20 cetilase 0 Fornecida na SEQ ID NO:404 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/daíius e codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:405- Como pode ser visto nas FIGURAS 25A e 25B, SEQ ID NO:405 se alinha bem com outras proteínas identificadas como chi- 25 to-oligossacarideo desacetilases De particular importância, deve-se obser- var que, quando os aminoácidos são conservados em outros chito- oligossacarídeo desacetilases, os aminoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:405. Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO:405 está corretamente classificado como uma chito-oligossacarídeo desacetilase. 30 Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 416-420 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptideo de SEQ ID NO:405 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:411-

415, respectivamente. As sequências de nucleotídeos SEQ ID NOS:404 e 411-415 são coIocadas em vetores de expressâo usando técnicas-padrão. Os vetores © são então fornecidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- .5 Jas eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o ma- . " " quinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID " NOS: 404 e 411-415 produzem os polipeptídeos de SEQ ID NOS:405 e 416-

420. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 405 e 416-420 são então isolados e/ou purificados. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID 0 10 NOS: 405 e 416-420 mostraram, então, ter atividade como chito- oligossacarídeo desacetilases. . Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ÍD NOS: 405 e 416-420 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- ~ 15 deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 405 e 416-420 de- . monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarideos, Iignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, ami- do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decora- 20 ção xilano, glucano, galactano e/ou manario- 0 Exemplo 42: RAACO0961: uma chito-oligossacarideo desa- cetilase Fornecida na SEQ ID NO:421 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/dan"us e codificação do polipeptí- 25 deo de SEQ ID NO:422. Como pode ser visto nas FIGURAS 26A e 26B, SEQ ID NO:422 se alinha bem com outras proteinas identificadas como chi- to-oligossacarídeo desacetilases. De particular importância, deve-se obser- var que, quando os aminoácidos são conservados em outros chito- oligossacarideo desacetilases, os aminoácidos são geralmente conseNados 3'0 em SEQ ID NO:422. Assim, o polipeptídeo fornecido na SEQ ID NO:422 está corretamente class ificado como um chito-oligossacarídeo desacetilase. Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 433-437 são exemplos repre-

sentativos de substituições conservadoras do polipeptídeo de SEQ ID NO:422 e sào codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:428- 432, respectivamente. As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:421 e 428-432 são 5 colocadas em vetores de expressão usando técnicas-padrão. Os vetores

N ' ' são então fornecidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- las eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o ma- quinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 421 e 428-432 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS:422 e 433- 0 10 437. Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 422 e 433-437 são então isolados elou purificados. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 422e 433-437 mostraram, então, ter atividade como chito- . oligossacarideo desacetilases. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 422 ~ 15 e 433-437 sâo desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosí- deos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 422 e 433-437 de- monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, cIivar e/ou 20 remover poIissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, Iignina, ami- 0 do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de decora- ção xilano, glucano, galactano e/ou manano. Exemplo 43: RAACO0361: uma chito-oligossacarídeo desa- cetilase 25 Fomecida na SEQ ID NO:438 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de A/icyc/obacil/us acidoca/darius e codificação do polipeptí- deo de SEQ ID NO:439- Como pode ser visto nas FIGURAS 27A e 27B, SEQ ID NO:439 se alinha bem com outras proteinas identificadas como chi- to-oligossacarideo desacetilases De particular importância, deve-se obser- 30 var que, quando os aminoácidos são conservados em outras chito- oligossacarídeo desacetilases, os aminoácidos são geralmente conservados em SEQ ID NO:439. Assim, o polipeptideo fomecido na SEQ ID NO:439 está

~ 73 =retamente classificado como uma chito-oligossacarideo desacetilase. Os polipeptídeos de SEQ ID NOS: 450-454 são exemplos repre- sentativos de substituições conservadoras do polipeptídeo de SEQ ID " NO:439 e são codificados por sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:445- . .5 449. respectivamente. 4 As sequências de nucleotideos SEQ ID NOS:438 e 445-449 são T· W colocadas em vetores de expressâo usando técnicas-padrão. Os vetores são então fornecidos para as células, tais como células de bactérias ou célu- las eucarióticas como células Sf9 ou cêlulas CHO, Em conjunto com o ma- 0 10 quinário normal presente nas células, os vetores que compreendem SEQ ID NOS: 438 e 445-449 produzem os polipeptideos de SEQ ID NOS:439 e 450-

454. Os polipeptideos de SEQ ID NOS: 439 e 450-454 são entâo isolados . e/ou purificados. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 439 e 450-454 mostraram, então, ter atividade como chito- 15 oligossacarideo desacetilases. Os polipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 439 e 450-454 são desafiados com polissacarideos, lignocelulose, celulose, he- micelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosi- deos, grupo de decoração xüano, glucano, galactano e/ou manano. Os po- . 20 lipeptideos purificados e/ou isolados de SEQ ID NOS: 439 e 450-454 de- 0 monstraram ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou « remover polissacarideos, |jgnoce|u|ose, celulose, hemicelulose, lignina, ami- do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de decora- ção xilano, glucano, galactano e/ou manano. 25 Exemplo 44: RAACO0569: uma 1A-alk-malto-hidrolase de glucano Fornecida na SEQ ID NO:455 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de Ah'cyc/obaci/lus acldoca/darius e codificação do polipeptí- deo de SEQ ID NO:456. A SEQ ID NO: 456 se alinha em cerca de 99% de 30 identidade com gi:6686566, um M-aka-malto-hidrolase glucano. Assim, o polipeptídeo fornecido na SEQ ID NO:456 está corretamente classificado como um 1-4-alfa-malto-hidrolase de glucano.

A sequência de nucleotideos SEQ ID NOS:455 é colocada em vetores de expressão usando técnicas-padrão. O vetor é então fornecido para as células, tais como células de bactérias ou células eucarióticas como

P células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presen- .5 te nas células, o vetor que compreende a SEQ ID NOS: 455 produz o poli- . ' peptideo de SEQ ID NO:456. O polipeptideo de SEQ ID NO: 456 ê então isolado e/ou purificado. O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 456 mostrou, então, ter atividade como 1-4-alfà-malto-hidrolase de glu- cano. 0 10 O polipeptídeo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 456 é de- safiado com polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de de- m coração xilano, glucano, galactano e/ou manano. O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 456 demonstrou ter atividade em pelo menos 15 parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxi- lanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou ma- nano. Exemplo 45: RAACO0574: um glicosidase 20 Fornecida na SEQ ID NO:457 está uma sequência de nucleotí- 0 deos isofados de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e codificação do polipepti- . deo de SEQ ID NO:458, A SEQ ID No: 458 se alinha em cerca de 99% de identidade com gi:39301, um glicosidase. Assim, o polipeptideo fornecido na SEQ ID NO:458 está corretamente classificado como um glicosidase. 25 A sequência de nucleotídeo de SEQ ID NOS:457 é coIocada em vetores de expressão usando têcnicas-padrão. O vetor é então fornecido para as células, tais como células de bactérias ou células eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presen- te nas células. o vetor que compreende a SEQ ID NOS: 457 produz o poli- 30 peptideo de SEQ ID NO:458. O polipeptideo de SEQ ID NO: 458 é então isolado e/ou purificado. O polipeptldeo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 458 mostrou, então, ter atividade como glicosidase.

O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 458 é de- safiado com polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelujose, lignina, amido, quitina, poIi-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de de- . coração xilano, glucano, galactano e/ou manano. O polipeptideo purificado .5 e/ou isolado de SEQ ID NO: 458 demonstrou ter atividade em pelo menos

B parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxi- lanos, glicosídeos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou ma- nano. 0 10 Exemplo 46: RAACO0575: uma acetil esterase Fornecida na SEQ ID NO:459 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/dari'us e codificaçâo do polipepti- . deo de SEQ ID NO:460. A SEQ ID No: 460 se alinha em cerca de 95% de identidade com gi:151567607, um acetil esterase. Assim, o polipeptideo for- . 15 necido na SEQ ID NO:460 está corretamente classificado como uma acetil esterase. ~ A sequência de nucleotídeo de SEQ ID NOS:459 é colocada em vetores de expressão usando técnicas-padrão. O vetor é então fomecido para as células, tais como células de bactérias ou células eucarióticas como . 20 células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presen- 0 te nas células, o vetor que compreende a SEQ ID NOS: 459 produz o poli- . peptideo de SEQ ID NO:460. O polipeptideo de SEQ ID NO: 460 é então isolado e/ou purificado. O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 460 mostrou, eritão, ter atividade como acetil esterase. 25 O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 460 é de- safiado com polissacarideos, lignocdulose, celulose, hemicelulose, Iignina, amido, quitina, poli-hidroxbutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de de- coração xilano, glucano, galactano e/ou manano- O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 460 demonstrou ter atividade em pelo menos 30 parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, Iignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxi- lanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou ma-

nano. Exemplo 47: RAACO1618: uma endo-beta-1-4-mananase Fornecida na SEQ ID NO:461 está uma sequência de nucleoti- deos isolados de A/icyc/obac//lus acidoca/darius e codificação do polipepti- - .5 deo de SEQ ID NO:462. A SEQ ID No: 462 se alinha em cerca de 92% de

D ' " identidade com gi:110611196, um endo-beta-1-4-mananose, Assim, o poli- peptídeo fornecido na SEQ ID NO:462 está corretamente classificado como um 1-endo-beta-1-4-mananose. A sequência de nucleotídeo de SEQ ID NOS:461 é colocada em D 10 vetores de expressão usando técnicas-padrão. O vetor è então fornecido para as células, tais como células de bactérias ou células eucarióticas como células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presen- . te nas células, o vetor que compreende a SEQ ID NOS: 461 produz o poli- peptídeo de SEQ ID NO:462. O polipeptideo de SEQ ID NO: 462 é então . 15 isolado e/ou purificado. O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 462 mostrou, então, ter atividade como endo-beta-1-4-mananose. m O polipeptideo purificado e/ou isoiado de SEQ ID NO: 462 é de- safiado com polissacarídeos, |jgnoce|u|ose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosídeos, grupo de de- .- 20 coração xilano, glucano, galactano e/ou manano- O polipeptideo purificado 0 e/ou isolado de SEQ ID NO: 462 demonstrou ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarídeos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxi- lanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou ma- 25 nano. Exemplo 48: RA,ACO1994: uma beta-glicosidase Fornecida na SEQ ID NO:463 está uma sequência de nucleotí- deos isolados de A/icyc/obaci//us acidoca/darius e codificação do polipepti- deo de SEQ ID NO:464, A SEQ ID No: 464 se alinha em cerca de 92% de 30 identidade com gi:110611196, um beta-glicosidase. Assim, o polipeptídeo fornecido ria SEQ ID NO:464 está corretamente classificado como um beta- glicosidase.

A sequência de nucleotideo de SEQ ID NOS:463 é colocada em vetores de expressão usando técnicas-padrão. O vetor é então fornecido para as cêlulas, tais como células de bactérias ou células eucarióticas como

R células Sf9 ou células CHO. Em conjunto com o maquinário normal presen- -5 te nas células, o vetor que compreende a SEQ ID NOS: 463 produz o poli- . " " peptídeo de SEQ ID NO:464. O polipeptideo de SEQ ID NO: 464 é então isolado e/ou purificado. Q polipeptídeo purificado e/ou isolado de SEQ ID NOS: 464 mostrou, então, ter atividade como beta-glicosidase. O polipeptideo purificado e/ou isolado de SEQ ID NO: 464 é de- D 10 safiado com polissacarideos, Kgnocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideos, grupo de de- coração xilano, glucano, galactano e/ou manano. O polipeptideo purificado . e/ou isolado de SEQ ID NO: 464 demonstrou ter atividade em pelo menos parcialmente degradar, clivar e/ou remover polissacarideos, lignocelulose, . 15 celulose, hemicelulose, lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxi- . lanos, glicosideos, grupo de decoração xilano, glucano, galactano e/ou ma- . nano. Embora esta invenção tenha sido descrita em algumas modali- dades, a presente invenção pode ser modificada dentro do espirito e escopo . 20 da divulgação. Este pedido, portanto, pretende incluir todas as variações, 0 usos ou adaptações da invenção usando seus principios gerais. Além disso, este pedido pretende incluir tais desvios da presente divulgaçào como co- nhecido na prática usual da técnica a que esta invenção pertence e se en- quadra dentro dos limites das reivindicações anexas e seus equivalentes le- 25 gais.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Barany F., 1911. PNAS USA 88:189-193. Bertoldo et al., 2004. Eng. Life Sci. 4, Nd. 6. Buckholz R.G., 1993- Yeast systems for the express'ion of hete- 30 rologous gene products. Curr- Op. Biotechno/ogy 4:538-542. Burg J.L. et al., 1996. MOL and Cell. Probes 10:257-271. Chu B.C.F. et al., 1986. NAR 14:5591-5603.

Duck P. et al., 1990. Biotechniques 9:142-147. Edwards C,P, and A. Aruffo, 1993. Current applications of COS cell-based transient expression systems. Curr. Op. Bibtechno/ogy ' + 4:558-563. .5 Garrote G, H. Dominguez and J,C. Parajo, 2001. Manufacture of

O " " xylose-based fermentation media from comcobs by post-hydrolysis of auto- " hydrolysis liquors. Appl. Biochem. Biotechnol. 95:195-207.

Guateli J.C, et al., 1990. PNAS USA 87:1874-1878. Hamelinck C-N.. G. van Hooijdonk, and A.P.C. Faaij, 2005.

0 10 Ethanol from lignoceúulosic biomass: techno-economic performance in short-, middle-, and long-term- Blomass Bioenergy 28:384-410. Houben-Weyl, 1974. ln Methode der Organischen Chemie, E.

. Wunsch Ed., VoIume 15-1 and 15-11, Thieme, Stuttgart. Huygen K. et al., 1996. Nature Medicine 2(8):893-898.

, 15 lnnis M.A. et al,, 1990. ln PCR Protoco/s A guide to Methods - q and App/ications, San Diego, Academic Press. 'V jeffries, 1996. Cun". Op. in Biotech- 7:337-342. Kievitis T- et al., 1991. J. Virol. Methods 35:273-286. Kohler G. et al., 1975. Nature 256(5517):495497.

. 20 Kwoh D.Y. et al., 1989- PNAS. USA 86:1173-1177. 0 Liu C. e C.E. Wyman, 2003, The effect of flow rate of com- pressed hot water on xylan, lignin, and total mass removal from corn stover. lnd. Eng. Chem. Res. 42:5409-5416- Luckow V.A., 1993. Bacu/ovirus systems for the expression of 25 human gene products. Cum Op. Biotechno/ogy 4:564-572. Lynd et al., 2002. Micro. and Mol. Biol. Rev., VoI, 66, No- 3, P. 506-577. Malherbe and Cioete, 2002. Review in Envi'mnmental Science and Bio/Techno/ogy 1:105-114. 30 Matthews j. A. et al., 1988. Anal. Biochem. 169:1-25. Merrifield R.D., 1966. J. Am. Chem. Soc. 88(21):5051-5052. Miele E.A. et al., 1983. J. MOL Biol. 171:281-295-

Mielenz, 2001. Cum Op. in M/cro. 4:324-329. Olins P.O. e S.C. Lee, 1993. Recent advances in heterologous gene expression in E. co/i. Curr. Op. Biotechno/ogy 4:520-525. ~ Rolfs A. et al., 1991. ln PCR Topics. Usage of PoIymerase ~ .5 Chain reaction in Genetic and lnfectious Disease. Berlin: Springer-Verlag-

P r Sambrook J. et al., 1989. ln Mo/ecu/ar C/oning: A Laboratory Manual. CoId Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press. Sanchez-Pescador R., 1988. J. C/in. Microbiol. 26(10):1934-1938. D 10 Segev D., 1992. ln Non-radioactive Labe//ng and Detection of Biomo/ecu/es. Kessler C. Springer Verlag, Berlin, New-York: 197-205. Shallom e Shoham, 2003. Curr. Op. in Micm. 6:219-228. . Tsao G.T., M,R. Ladisch, and H.R. Bungay. 1987. Biomass Re- fining, ln Advanced Biochemical Engineen'ng, Wiley lnterscience, N.Y., 15 79-101. Urdea M.S., 1988. Nuc/eic Acids Research, //: 4937-4957. -I Vieille e Zeikus, 2001. Micro. and Mol. Biol. Rev., VoI. 65, No. 1, P. 1-43- Walker G.T. et al., 1992. NAR 20:1691-1696. 20 Walker G.T. et al., 1992. PNAS. USA 89:392-396. 0 White B-A- et al., 1997. Methods in Mo/ecu/ar Bio/ogy 67, Hu- 0: mana Press, Totowa, NJ. r

Claims (1)

1. REIVINDICAçÕES

   1. Sequência de ácido nucleico isolada ou purificada, que com- preende uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptideo se- . W " lecionado do grupo consistindo em polipeptideos com pelo menos 9O°/j de .5 identidade de sequència para a SEQ ID No. 69. ¥

   2. Sequência de ácido nucleico isolada ou purificada, de acordo r

   W com a reivindicação 1. em que o polipeptideo exibe atividade enzimática i- gual ou inferior a cerca do pH 7-

   3. Sequência de ácido nucleico isolada ou purificada, de acordo 0 10 com a reivindicação 1, em que o polipeptídeo exibe atividade enzimática a + uma temperatura igual ou superior a 50 graus Celsius.

   4. Sequência de ácido nucleico isolada ou purificada, de acordo © com a reivindicação 1, em que a sequência de ácido nucleico está presente em um vetor. 15 5. Polipeptideo isolado ou purificado, que compreende um poli- peptideo selecionado do grupo consistindo em poIipeptideos com pelo me- nos 9O°/j de identidade de sequência para a SEQ ID No. 69.

   6. Polipeptideo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- cação 5, em que o polipeptideo exibe atividade enzimática igual ou inferior a

   W 20 cerca de pH 7. 6 7. Polipeptídeo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- cação 5, em que o polipeptídeo exibe atividade enzimática a uma temperatu- . ra igual ou superior a 50 graus Celsius. 8, PoÍipeptideo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- 25 caçâo 5, em que o polipeptideo é glicosilado, peguilado ou de outra foma pós-translacionalmente modificado.

   9. Polipeptídeo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- cação 5, em que o polipeptideo exibe atividade como um arabinofuranosida- se. 30 10. Método para pelo menos parcialmente degradar ou clivar a- rabinofuranosidase, arabinoxilanos, ou xilanos, o método compreendendo: colocar um poiipeptideo selecionado a partir do grupo que con-

   siste em polipeptideo com pelo menos 9O°/j de identidade de sequência para a SEQ ID No. 69. no fluido em contato com xarabinofuranosídeo, arabinoxi- lano ou xilano. 0

   11. Método, de acordo com a reivindicâção 10, em que compre- . · .5 ende colocar um polipeptideo selecionado do grupo que consiste em poli- . " " peptideos com pelo menos 90% de identidade de sequência para a SEQ ID " No. 69 no fluido em contato com arabinofuranosideo, arabinoxilano ou xilano que ocorre em ou abaixo de cerca do pH 4.

   12. Método, de acordo com a reivindicação 10, em que compre- 0 10 ende coIocar um polipeptideo selecionado do gmpo que consiste em poli- peptideos com pelo menos 90% de identidade de sequência para a SEQ ID No. 69 no fluido em contato com arabinofuranosideo, arabinoxilano ou xilano - que ocorre em uma temperatura igual ou acima de cerca de 50 graus Celsi- us. 15 13. Método de acordo com a reivindicação 10, em que o polipep- tideo é glicosilado, peguilado, ou de outra forma pós-translacionalmente mo- dificado.

   14. Método, de acordo com a reivindicação 10, em que o poli- peptideo possui atividade arabinofuranosidase- 20 15. Sequência de ácido nucleico purificada ou isolada, compre- 6 endendo uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo se- lecionado a partir do grupo que consiste em um polipeptideo com pelo me- . nos 90°/o de identidade de sequência para SEQ ID Nos. 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 25 354, 371, 388, 405, 422 e 439: peio menos 93% da identidade de sequência para SEQ ID No: 462: pelo menos 94'/o da identidade de sequência para SEQ ID NO: 36: pelo menos 96°/ô da identidade da sequência para SEQ ID NO:460; pelo menos 99% da identidade de sequência para SEQ ID NO:464; pelo menos 99,6% da identidade de sequência para SEQ ID No: 458: e pelo 30 menos 99,7% da identidade de sequência para SEQ ID NO:456.

   16. Sequência de ácido nucleico isolada ou purificada, de acordo com a reivindicação 15, em que o polipeptideo exibe atividade enzimática igual ou inferior a cerca do pH 7.

   17. Sequência de ácido nucleico isolada ou purificada, de acordo com a reivindicação 15, em que o polipeptideo exibe atividade enzimática a + Y - uma temperatura igual ou superior a 50 graus Celsius. -5 18. Sequência de ácido nucleico isolada ou purificada, de acordo m " ' com a reivindicação 15. em que a sequência de ácido nucleico está presente . em um vetor.

   19. Polipeptídeo isolado ou purificado, compreendendo um poli- peptideo selecionado do grupo que consiste em polipeptídeo com pelo me- 0 10 nos 90°/o de identidade de sequência para SEQ ID Nos. 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422, e 439: pelo menos 93% da identidade de sequência 0 para SEQ ID No: 462; pelo menos 94°/o da identidade de sequêricia para SEQ ID NO: 36: pelo menos 96% da identidade da sequência para SEQ ID 15 NO:460; pelo menos 99% da identidade de sequência para SEQ ID NO:464; pelo menos 99,6% da identidade de sequência para SEQ ID No: 458: e pelo menos 99,7% da identidade de sequência para SEQ ID NO:456. 20, Polipeptideo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- cação 19, em que o polipeptideo exibe atividade enzimática igual ou inferior

   W 20 acercadepH7. 6 21. Polipeptideo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- cação 19, em que o polipeptldeo exibe atividade enzimática a uma tempera- tura igual ou superior a 50 graus Celsius.

   22. Polipeptideo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- 25 cação 19, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo é glicosilado, pegui- lado ou de outra forma pós-translacionalmente modificado. 23, Polipeptídeo isolado ou purificado, de acordo com a reivindi- cação 19, em que o polipeptideo possui uma atividade enzimática selecio- nada do grupo que consiste em Alfa beta hidrolase, Alfa-glicosidase, Glucan 30 1-4-alfa-malto-hidrolase, Glicosidase, Amilase, Acetil esterase, Be- ta-galactosidase, Alfa amilase, Acetil esterase, Alfa-xilosidase, Ciclomalto- dextrinase: Neopululinase; alfa-amilase maltogênica, Familia 31 de gíicosil hidrolase, Alfa-L-arabinofuranosidase, hidrolase da parede celular, Altronate hidrolase, poli-1A-alfa-D-galacturonida, Xilano alfa-1-2-glicuronosidase, Ce- ldase/Endoglicanase M, Poligalacturonase, GIicosil h idrolase, Peptidoglica- . y P no hidrolase, N-acetilglicosaminidase, Endoquitinase, Alfa-galactosidase, m .5 Endo-beta-1-4-mananose, Celobiose fosforilase, sintase beta-l -2-glucano

   V ' " ciclica, Enzima desramificadora do glicogênio, acetil hidrolase, beta 1-4 xila- nose, Beta glicosidase, 6-fosfo-beta glicosidase, hidrolase de éster de cina- moila, beta-glicuronidase, alfa-1-2-glicuronosidase de xilano, 3-hidróxi- isobutiril-CoA hidrolase, Beta glicosidase glicosidase B relacionada, e/ou ati- D 10 vidade chito-oligossacarídeo desacetilase.

   24. Método para pelo menos parcialmente degradar, clivar ou remover polissacarideos, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, ami- do, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilarios, glicosídeos, grupo de decora- ção xilano-, glucano, galactano ou manano, o método compreendendo: 15 colocar um polipeptideo selecionado do grupo que consiste em polipeptídeo com pelo menos 9Õ°/o de identidade de sequência SEQ ID NOS: 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185. 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422 e 439 e pelo menos 93% de identi- dade de sequência da SEQ ID NO: 462: pelo menos 94°6 de identidade de 20 sequência SEQ ID NO: 36 : pelo menos 96% de identidade de sequência 6 SEQ ID NO: 460; pelo menos 99°/o de identidade de sequência SEQ ID NO:464; peio menos 99,6% de identidade de sequência SEQ ID NO: 458: e + pelo menos 99,7% de identidade de sequência SEQ ID NO: 456 em fluido em contato com um polissacarídeo, lignocelulose, celulose, hemicelulose, 25 lignina, amido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideo, grupo de decoração xilano, glucano, galactanoe/ou manano.

   25. Método, de acordo com a reivindicação 24, em que compre- ende colocar um poIipeptídeo selecionado do grupo que consiste em poli- peptideo com pelo menos 90°/o de identidade de sequência SEQ ID NOS: 2, 30 19, 52, 69, 86, 102, 119, 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422 e 439 e pelo menos 93°/o de identi- dade de sequência SEQ ID NO: 462; pelo menos 94% de identidade de se-

   quência SEQ ID NO: 36; pelo menos 96% de identidade de sequência SEQ ID NO: 460: pelo menos 99°/o de identidade de sequência SEQ ID NO: 464: pelo menos 99,6% de identidade de sequência SEQ ID NO: 458; e pelo me- y. nos 99,7°6 de identidade de sequência SEQ ID NO: 456 em fluido em conta- -5 to com um polissacarideo, lignocelulose, celulose, hemicelulose, |ignma, a- . " mido, quitina, poIi-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideo, grupo de deco- ração xilano, glucano, galactano e/ou manano ocorre em ou abaixo de pH 4.

   26. Método, de acordo com a reivindicação 24, em que compre- ende colocar um poIipeptideo selecionado do grupo que consiste em poIi- 0 10 peptídeo com pelo menos 90% de identidade de sequência SEQ ID NOS: 2, 19, 52, 69, 86, 102, 119. 136, 153, 168, 185, 202, 219, 236, 253, 270, 287, 304, 321, 337, 354, 371, 388, 405, 422 e 439 e pelo menos 93% de identi- dade de sequência SEQ ID NO: 462: pelo menos 94% de identidade de se- quência SEQ ID NO: 36; pelo menos 96% de identidade de sequência SEQ 15 ID NO: 460: pelo menos 99% de identidade de sequência SEQ ID NO: 464; pelo menos 99,6% de identidade de sequência SEQ ID NO: 458; e pelo me- nos 99,7% de identidade de sequência SEQ ÍD NO: 456 em fluido em conta- to com um polissacarideo, lignocelulose, celulose, hemicelulose, lignina, a- . mido, quitina, poli-hidroxibutirato, heteroxilanos, glicosideo, grupo de deco- 20 ração xilano, glucano, galactanoe/ou manano ocorre a uma temperatura i- 6 gual ou superior a 70°C.

   27. Método, de acordo com a reivindicação 24, em que o poli- . peptídeo é glicosilado. peguilado ou de outra forma pós-translacionalmente modificado. 25 28. Método. de acordo com a reivindicação 24em que o polipep- tideo possui uma atividade enzimática selecionada do grupo que consiste em Alfa beta hidrolase, Alfa-glicosidase, 1-4-alfa-malto-hidrolase de Gluca- no, Glicosidase, Amilase, Acetil esterase, Beta-galactosidase, Alfa amilase, Acetil esterase, Alfa-xilosidase, Ciclomaltodextrinase: Neopululinase; al- 30 fa-amilase maltogênica, Família 31 de glicosil hidrolase, Al- fa-L-arabinofuranosidase, hidrolase da parede celular, Altronato hidrolase, poli-1-4-alfa-D-galacturonida, alfa-1-2-glicuronosidase de Xilano, Celula-

   se/Endoglicanase M, Poligalacturonase, Glicosil hidrolase, Peptidoglicano hidrolase, N-acetilglicosaminidase, Endoquitinase, Alfa-galactosidase, En- do-beta-1-4-mananose, Celobiose fosforilase, beta-1-2-glucano sintase cÍcli-

   v. ca, Enzima desramificadora do gíicogênio, acetil hidrolase, beta 1-4 xilanose, .5 Beta glicosidase, 6-fosfo-beta glicosidase, cinamoil éster hidrolase, beta- . " ' glicuronidase, alfa-1-2-glicuronosidase de xilano, 3-hidróxi-isobutiril-CoA hi- drolase.

   Beta glicosidase glicosidase B relacionada, e/ou atividade chito- digossacarideo desacetilase-

   0 r

   V 1/75

   FIGIA I6Q78568 L mKFKIg=gsggAR W 89Ú995B2 I MFDAEVSKFLTI&RF1ES2 rKggldLMRQpvIggAR g- 12452434€ 156í5l50

   I MÀGRPKIGLAIG I MGKVliRPKIGLAWSGGAR W 121533815 I MRPKIGLAIGSGGLR V m:c0aF6g I MPRAREDWRIAMSDKRIRARDNVKVGVALG I607B5E8 i"/ gLAHIgvLssLaKHQ1EvDyIAgs.vgsFY='!w

   8.9099$82 41 gKvLKEEgINvDvIAgsvgcmmg1jf]I lZ45243Sá IB gFmzgvL=EEEgIwDµjsgssi=vaALY 156l5i5Q 20 gYAHjmLKvLEQEKIpíDYIAgssmA1N7'.5LYgAmpT 12í5338z5 L6 gIiAHvgvIbiwLEREgIp:DcTAgcsí~vçaLYcAgwE RAAa0Q16g 35 gE'AmgmAIü4E!lgvwHA1AgssMgAIbvAgvmmF? D 16078568 89C92592 5? A:n«KvAKm¢RRLYnDYTvpKLgFuQgDRvRQLMFiAyTF BL [mAKLAgREKRKwIDFTvp~FLãIRLFTH 124524344 50 REmÁs=mmKILTs~zEDL!íIRL'LwI 156L5l5C 60' EHLTRFANLEmKyYIDETvpm3ETAgE[RgEEL!RM= 12L5338L5 56 DTrmÁAbKHTKRRHwLDFI IpmgITRgEwbhMLKbLTQ RAÀC00l69 75 RVMRALAYNL,RRRHWIDETVP~FIQG 16078568 97 GKPÍEELQIPLGTVACDLQT#RIVFRKGSVS DAVRASIS 89Q995B.2 Z2L lrpvRv¶niTDLKAgEKvvFsKgRmnAvRÃsIs í2452434c 98 GKKLEELNFP\1KNAANLSNGEKTVFKKGNEAVRASIS 156L5l5C ZOO Km}=LDFpvRNtAÈD1iLK~v'xRFgDvAEAvRAs1A l2t5338lS 96 çmFADLRIpLÃm=TTgQEívmBgDnQAvRAsIs RAAC0QL69 zi5 QgTFhDmlF'IAIvATDLIKmwFRsgLIADAvRAsIs 16Ô7856B m IPGIKPQRLDGRLLWGAVVDRIPVSVVK7 IÍAS 990995B2 L6L 1pgIETpEkLED=yDgwIDRvpvsWÊLIIAv 124524344 L38 IpgrFvmuggFumlDggvvDRvFvLhIw I56L5L5C Z4Ò IpgxFvpKNm)RLLIDggvIDRvwsvvKLTav 121533BU 136 vpgrwpIuUm)==Av1NpTpi W3IVIAV ~ RAACDÕI63 Z5S IpgvFvpvm]gAvyvDggvLERvm!Mm)LgvDLvIAv 6 Isà7B56B 89U99582 377 201 DVSRVRKTETAYH T FDvneQsMDILQNELvRHQTTAADrM W5RW.T$$DIT5 í:mTmsLDvsNREIAsDIM 124524344 in WSVMKKEAELRE! TYDvIMQsID1mMELAE=KTEAHvh 15615150 ZBD DLTIFREELEIRsvmmQTMDm3KELmKm DCTVM l2l5338i5 176 DLAHAgTvcKrm!FDvIzQsIDKHRQHYcWL RA,A¢OQIG9 í95 ww=RgTpE=AMDv1msLELmDEARgA5 LT "-""""'"+ ""N""" 16078568 2 I1 IRPS. . . .LETYSSSSFAN zEEM/sAÈEA'L¶NRMi SKXRK 89099582 2ci IRPH. . . NEWSSRAFM LED IIm GEEÊARKQVPRIKE 124524344 2IB IRPD. . . ;v5MYssb!AF¶NA'gQmcíQs\nEIQQ lS6l5l50 22D DRYR3wssIDmvNDLILL=RAÀIAm PEIKD 121533815 21 6 IRPD. . . .VMI TP5SFETFDECVALGEQAGEAÀLPK1KA RÀACO0!69 23 5 LVPE. . . .vsHI«-4QLQwYQmwQLDwm

   FIG 1B 16078568 253 EIEN.........WEUS

   P 89099582 277 AIQN.........WKGQEDDEEK ?- 124524344 254 LLEK.........WKEPDK 15gL5i50 260 A!Lm........wKETH¥ETnEm W í2í5338í5 252 LLAEwQRcrrmgENp$RpsDsgg 0 RAACODL69 271. AIDR..........MAFV3 0 6

   \ u « 3/75 FIG 2A 156!38'7 t j ~"'HS FLsmmmHLl'1Rv1wvcm=K;LstvgIs RARcD05'n"1 i MTNAG RmLR1AszgvMvwIAwLÀTMAIg l259746gg 1 mT5TLTY$RQ. .KmmczlLFm.LALIF5v\N5Avs W 5457696 1 MIWTWFT'=LZTIF'GFF là52048't ! MlwTwTÍLLFLn.íFgEF 40744233' i m=sKElRbQp. . . . . .lg'pi hpprlgvdaqpif pq 0 V-:· w6í39"71 41 vYmwNLsRp=víD. . .ESP7D¥GLWEDVVFYSEKDE RAÀCO"05CL 3! YwAEmTHp=ns. , A$PAA¥GLKYESIREPSRVDH 1'25974699 39 VI.4ZL. . .DF5RNIVKSYTWSFKDI=

   54.57'696 i9 AFvgm4yTppRR'vgK. . ÀqTm]LgeDYEKvEFKsR.Dg I45204B'L i 9 hFvgmwTp~vgK. . .mpKDLg¶DYEKvEFKsR.Dg ü0'74423'3 3'5 ín=wAIwspm|YD=A%$'ÀvÍLvsg=g L·561387Z 78 vIeAQDmwLg7DmwEsH~smQgENDI 0 RMCO0'90L L2.5'97469.9. 68 >ILA PA'ARÊ?. . . . .7DRIWRAHGYRQNRVL. DHPA 76 FEFNVTGS. . . . . .SKTVILARGYGKNRLNFGENT 54'57696 55 I TLRmIDQgKD. . . . . . ArvIvumTAsKwN.E= l4.52D48'L 55 I0LR~IDQGKD. . . . . . =vTvw=AsKwN.E'jyM 4074g23'3 75 vsgps(3í?psLAí)KIAi LLGVWVRLDYRVAÃRTDXCVPD í56l3B7Z 113 LpFKKRIjAQEgYEILLLmmgs=ggTYTTIgQYETmL RRACD050"1 3 02. L,mKKuiÍ)=AyIMEDmmEgpg5ÊvTvgDYELRDL í25974699 110 IHLÍ KStLUKGYNYLµ.FbERNS=E:GNKTTFWCEKNDL 54k57.69'6 B7 KEAmvÃNLgnmAFDERALiesEg$KTTLgUmwL l452048i 87 KPAI EIvANLgYNvLTEDERÀ![=Eg5KTTrgDKEILDL -4'07442'33' JJ5 IÃms1mjQDNEgsTRFvvvgwsFgg.s PC7·TIAAQQPDR¥ í56l387í i58 LSAIAEVKAEKHVEEIAVIG. . . . MVSATLATQQS RAÃCQOSQL IA2 D¥AKKLG.YDEVGLIG. . . . .YSTÀLEAmAAD L259'7'469g J5Õ 9YVKNKG. SE.KIVLMG. . . . -ESTGASÀCTLAAÀES

   5457696. 127 DWLLSNTNTK·KIAL1G. . . . .FMVb=RALAED L452Q4BI 127 S=DNLLSNTNTKKIALIG. . . . . ED 4074'4233 J 55 xg5LAmlAsQrAQ'rs.gvRKLspRpLLYLHgsgDFcLpQRcs Ó 156L3B7Z RARCO0501 12597¢699

   1.9â EIIVQWTADSPEL .RNLRQYLS%5VPPNVV l7g PWDATIADSPE. jjDLE=LEmsx1w=psFpFNgEr 184 DUVMVLAESPY. . SDLNFYFEQNVNNLA IPFNK? L

   5457.6g6 1,62 ERVCCGIADSPP. . mDKTgARgLKYEEn#TIK 14520481 Z 62 cguDspp. cíYIDKTgARgLKYzF"LYpT * 40744233 195 wLYwYeµpsg$RE,IRI"ÊKgDm@5mRKk¶

   V L5gI3B7i 23 I LQTI PVLIGM2TDWSPVDWSPI g€t?RL?uHgRwD. . . RMCO05QI 2'14 LwEvKHLFgLDpNmDpLKQLÃsmRp=1AgT^. . . l25974G99 222 mTEFLADrKFDEAspvKAvQAv$FRpvLLIHsKDD. . . %%E96 20'0' PFTKMFSGAKEVN T TD"tADKvÀ. . . ,KPLLI1AGGND. . .. !AA04BI 20Q E'FTK!£ES¢3AK®VNI IDYADKVR. . ..!íu¢gND. .. 407!54233 23'5 F~aLgLEDEL=Ks=AAQDwvgsEgERMKMAEgH D t 4/75 FIG 2B 4 II i56i3B7l 2.6'8 . . ,, .. ..ài =FMD&. , .QAELWLPENEGRV RAkco050'í 25'1 . . . . . . .TTZ PFSNSEALYDELHRRDPEDTLWLV PGAKKV' !25974'69.9 259 . . . . . . A!WPVEN3RLIYKASNP. . Y"!nm=gKDHE 5457G96 23'3' . .. . . . .EÚFYKRNKTT NPRIENWIT .DAÁKV I'452O4BZ 233 . . . . - . . I?LVKVEEVEEE¥KRNKTI NPRIE"MZT .. 407¢4233 275 FEGGEALNHN$ ITspQALFIsHvERr~gs'gLsgmgsY M·...-._.

   l56j387í 2.98 KTINEQsa. . .YE£RíLAFLEKsF= 'D0s0i 284 GRYDVEPKA, , .?ES5 125974699 290 EIYQIiNREE. . .FLEKLSQT S4S7696 2.65 RTIvk. ..wmNgEFTRANL 1452048l 265 RTTVKYKEE. ..L 4U74A233 315 EL\"sLsaRQwAR?¥FADmpEg7m= WRK 0 L56L.3B7Z RARCQ05.U

   12.5374699 545%96 146204M 40744233' 355 QK.TARMj!wjm

   Ó

   \r 5/75 FIG 3A RAÁCO0568' ! MGNII ImmF¶TsEAIRmLtsppDDNAELgRRsRFTwp 668656? á5864í8 L mEDTsFnIQpE.QI)DK"QBTIiRI DIGNMHTFS m 89098Q5i Á MNDTSEAIRPG. KSRKL'ENSDYQEAGDVLAIE LJAB.447L7 L MYQ RILKIQQ 568 4.1 HDmTvQYDAgvAALwTvyms=wp.TsT 6686561 1 bmvRALTmvLmAYcRs=wpTsT 4506418 33 HmNFsEHcDTgwKTRFYREDwRiAFN. PF«TSLST 8909B05Z 32 EcRNgETgEhRwFYANEIvRí'mq. E"E=DAGT LLqBá47z7 4 K¶8WIEGWWKIIS . DKEEKRKDT ~QQ568 BI EATmM$"QRi{swm!mRRvQIEcvAgwQIQjmRDDw 668656'1 2B E=EQMsQRjtsNRL'7QEERRvAgwQIQINRDDw 4586418 72 wmMEpEKvIjAsvHETEEw=sAKQTvvLQmmv 890980$i "7 L SPRNU ggÍÀQEvKIjEFjYEsgDQAEvKq'scLTvKLTKsp[,Rí kkãBáà7Z7 43 =ErtKEYrz E'EmKmdEsTLlETDsIjKmMKNDL$v '~. m' -m - -m RAM3Q56B 121 wsIRHLgFgmmuT.mmLKggALTFA$LDNAR. FYG 660656"7 68' wsmlLgFg=vEAITwYKRK. KGGALTE'ASLDNAR- FYG 45&64L& LL2 Et]=NHgRLLwmKKgMAFTYQgEvccEKmmIjHFYg 89G9905Z J j I TvRDREgRyíAgENQKgmYKEI5KFvícmMEÊEDQEYg JÀ¢8.447Z7 83 3FLDKNENI INÊDYNGG'/KFS .ETDw<cÍDIi. FYG RAMJQ56B í59 l=KpgpwmiEAYTMwNsDvyApHvpEMRÁLYLg 668656'7 10 6 piqEAYsDvYApHvpEMEÊm¥LsrpEF 45864Z8 152 GFETMVYAPWPETDPLYQSHPYF 8909905t IS'I TgKL'sDwApHNmTDmYQs1pw !l48447Z7 i2i =KAgmjKKgERI,EMNNTDEFMmwm:LLYEsypFF RAA.Ç0056B 199 ItRLQDQTAvgIFvDNEgRsREDERsRYpDvEIs,. TERGGL 6696567 I4 6 L=wTAwI=Np==mRYpDvEI S.. TERGGL ü5864i8 192 MTvRNgsAHgIFEDNTYKTTmmTATDEY=s .AEGGÀI 8%99051 191 I,TLREGQAHGIFE"DN=RAEFDMR. GDEFYSFS.ADGGQL

   P l148447l7 161 IgMNDyTlTYgIFIDN5ERsFFD=£cQEmYFt"AY=M RAAM056B 23B wjEEIFgmjM=RYTKLTgmpMppQsRYs 6696567 i85 DTMPQSRYS 45064k8 23L Dm/FÁgmKDv'EQYTDLTgRN!Iipm[Mgn{QsRYs B909%5L 229 D¥YL§!RgpsEKDvrRQYTsLTgmpLpi\mAj=QsRYs 1UB44717 20 I NYYFT=DneEvvENYTyT=RINIipp1;mLgNQQsRYs RÁACD0568 279 YETQswLsvmTFvERDIpvDALYLDFD 668€5G7 225 ¥ETQsEvIs\mQTFvERDIp\/DALYLDIKnDgmmFD 4586418 zn =EQEvRE:AQTFmmpLDvIxIDIFmQmR 8909905k 2 69 YE5QQEvmAAAFKEKgIpIDsIí=ImDEYRvFTFD 1148447:7 241 YTpQEmE:AKTMmrpcDvÍYLDID~gYRvET"NN

   FIG 3b b

   RkkCO0568 318 lsRRFEDpAmmsL!uçLgURvvprvDpgvKQDpEYwYMD 66-86"567 2 G5 ERREEDpAm:DELRKLgvRvvpIyDpgvKQDpE¥wYMD m 458g'4i0 311 RNREpNLKQLI:ADIíKQKg:RvvpIvDpgvKED=wIYQE 89Q9805l 309 RDKFpDpEmIsDLKEMgzurvprvDpgvKEDEEYwYKQ Ll48'44717 2 81 KDTEmyKENjKQIiKwlqgmNmmpgvKpDYDYmrRE

   RAACOQ568 358 GljAANHFCQ:=GQVYLGEV'WPGLSAFPDFRS~ 668656'7 305 gLÀmFIFcQ=EgQvngEvwpgLsAEEDFAsEEvRA~. 4586"¢18 351 GIRHD¥FFK:'IEGNVYFGWWPGKD 89'Q98Q51 3 4 9 GTQEDL"LEGHW¥GDNSVE'PDFTS 114844717 321 gIEEDYnKDKygl TYvgKvwpgEp.cmFLQEm=g

   RMC3Q568 398 KWHRVXTQMG1EGTNNDMNEPAVFNE.VNVVHRX3D G686567 34 5 vml4gIEgpAvENE.

   TVNVVHRGD D 458'6418 89098051 391 ¶KHmTDLgIEgpsvFNE.TwvIHDND 3 8 g S%YYTELGTEGPAVFN£. GDND Í.JA84A7!7 3 61 EKHREnK[NI1jgpAvFETpTKTMpKDNIHI LD .V ,. ,«, .V

   RbA"jCi5'68 C 3 7 gm:gTHgEvHNLYTYRgLKAç}LAgKRpFvLTRA ü86s67 38 4 gRLYTHgK\muxgFhMA£ATYRgLKAQLAwLTRA 45864i8 430 gDFKTHRELm{YgnMgEATYKgmcLLN== 89Qg8Q5: 4 2 8 wpRYgLwgKswEg~N"wFwTm jjg844717 4 01 gEKv'&KKEmwYAtMATR[)gLLR IRPNERPFVLTRA

   RAAFM568 4 7 7 gYsgI=YAAvwTgDNRsÀMAíFMvLNMgMsgIpL 6686567 4 2 4 gYsgIQRYAAvwTgDNRsEwERNÚMAmmAl·!gMsgIpT- 458'6418 4 7 0 gFsgIQRYAAmgDNRsEYEKLQMsLwc=~gLsgjAF B9Q98Q52 468 gY$gy'QKYAAvwTgDNRsFwEHLçM3LvsgIpF 114844117 4 4 Z AFsgIQRY@NRsLgEKL~4mL,IN[gT.sgQpF 4 m-ca05g8 5í 7 GGPDHÀSGAFEPSAMGTE1R 66865,67 464 ggpDvggFxHHAsgELiIARwTQMgAKpEEmHsNygTfm 4586¢!8 $10 cgpDvggn:HNTNg=TmQ\,gAFTpYmNHcAIgFRR B9U980'51 508 ggF!Dvgg~DsMgELL=TQÁgAETpETRNHsvLgsAR ll48447l7 ¢ 81 AgÃDwgEEgDcI[EELFIRwrE&TFTpFLRvH= Ó RAACDQ568 557 QEpgaFgpT:EEA\/rRRÀ1RL&YRFLm=LÀRÊAKETgL 6686567 5gi4 QEpwAE!gpTFEAgIRRA[RLRYRELpYLYTLAREAHETgL 4$&6418 550 EKYERIIKKY1RLRYQWLPKL& 89098051 548 QEEKYEAImçYIELRY¶jqdpHLY$LFml&çEgT Ll4844717 52 í QFgKRcEDIs~IKF4RYEmípYLYljLFYíAsQ=

   RÁACOQ568 597 pLyIiEYpDD=HHvDDQnóygsDw~I 6686567 54 4 .p=YmDpmH[jv=nvg5Dw~ILFmw 4S86418 5 90 LFSEYPDDENTYNLYDE:E:LVGANVL»PI«TPS= 8909BQ52 588 pFLEE7EDEnTwNLsDQFMIgijNvIIÀp»[Qpg= IL48447Í7 561 PWEYQEDENTHKZ YDgLLgDmvApI¥=3KE

   FIG 3C RN4Cl]0"¶68 637 HmvYI,pDgEwTDYETRERYRgRQmmtApÍDRIpLYvR 6686567 58 4 KRMvnM=w7DYETRERYQgRQYILr!sApIDR1pL=

   P 458'6418 630 RRvAYFpKgNmDm@vLEggQYHLITLp'IFíK B909BQ52 G2 8 m=pEDmgs7YEgmj[míETLpíFíK LI48447:-7 60 1 KREvYIM(gnnDYwTgKEFKgEsYnNmplDnpLm .~ -....W.

   RAACCI0.568 677 AGSAIPVNLLERSGET. . mLgwBmDANgRAsgRcYED 6686567 &24 AGSAIPVNLLERSGE7. . .Q'.GWEIFVDANGRASGBCYED 45'864!B 6'70 Qg$AIALs]wKRsTEMpDEnnmTA1YKANggKA=vLYDD B909BD.5Z 668 KG7MAÂHGEAGAAGPL. . . . .¶LHLkY&EGSEc$Y=YED li48447Z7 .64.1 EGG·Í LLKRE PQSFYEÉ.KEI KEZ IVEIYMEEGH '"" 00568 714 DGETF$YEDWYCDWLQÀLÀTCFILVQGSGDW 6686567 661 DGETFSYE[JGAYCDRVLQÀLA=EGTL1E~VQGSGDGG 0 45B64í8 9909&C)Sd 710 DgQTwYEKgDYLRMnwEYg.ÈNsvH=KsEgrYQps 7 à3 FÁYEEgEYRErcFK\/KcE.mTvYLNsA"AgTwpv Íi48447z7 680 MKsFWTFegvYNLFDIsFcyKEgRMDIwDKIHF=Kg ~OO56C 754 sgLEsvvRvFTpImREARR= SFSIIN 668656"7 '7Ql SLESVVPDDQGISFSM 4586418 74 9 wKLspAmíATEQTKvTID=QpHQRíLLTQsE B.909B08Z 7%2 WSTVQLAVHS GSSTLLPEK IEEGRHYFILS II'4Ba47:7 720 VKKYKFI@IKElR7NGNCE= ¥ 0

   FIG 4A Ig4223i8 ! MKI sDgNwLmpgLNLjHpvQvEDvEQÁigNEMvÍYAAFRD l65Q4867 l = sDIQpgLímÀFjpvQvqDyEjQj4gNEMvvYmRD Í6L3L52"/ L MKZ sDgNwLu2pgLNLu!pLQvFEvEQQDNEwNYAApRD 5208LB44 l wFsDgYK[=EgmN=KEÀYD= DQQS ',TVYGPVKA 5Z787Z33 1 mFsDgYwI=Eg¥HíNFpKEAYDRMI DQQSLTVYGWKA RN¥CQ059È 1 .wmjgNwINREg\mllpguvQEwRQEgDcmFwAcRp .···"-"N~n- i64223t8 àl vRERmmTpLFTLmspQEwILDNgp L6504B67 41 vRERTwRtDTpL£'TspQEgvIwRMEmgALDNgp L6L3L527 á'l vRERYmIDTpLFTLRFFsmEgwgwuE~ALNNm 52oBt844 41 vRmgDTyRFsspLEDM1RvQw~ETpRKp 52787233 4 À vQmmbDTRKm/RFs'spLEDMrRvQysTmgE?pRKp RAACO059€ 41 vAFlRgmgLDmIdTcRIsFpREgmw"i2gRMpRgp .

   16422318 8/ Hm&n/LQDrNvEMQNNµEFAELKsgsL5vRwmEIwsL 0 1650¢867 t6l3l52"/ 8'1 KYmmADmlEmNNAEEÃELKsgsL5vRvTKgEIMsL 8 L KyFLNILQDvK1n !FNTERYAEFKSGbtLsARV5KGEFWSL 52ÔBl844 91 DFQL. HTADVEPV rr£KDDíu,m2sgsLcgEvsK.NgwgY 527Êl7233 81 DEQL. HmAWEE'yTI!EH12DALTFQsgSL~$K. NGWGY RAAC00594 Bl HFE'L. ELKFgpFDMETE=vvLRAgE!q£mvRL. spwsí ,—.—— t64223í8 22J DFLRNg\/RI.TgsQLKNNI3=DmsgRNYMzERLDIgvgD L65Q486"/ L21 DF!LRNgvR!TgsQLRtnmvQD:NsigRNYKeERLrIgvgE l6l3i527 Z2l DF|LRNgEmTgsQvKNNgYvQD=NQRNYMFERLD=gE 520BI84A 2L9 QE=DgQsLTasEsNsLAY.TT3 .Dr)mTQLN :GVGE 527B7233 íl 9 QFSRDGQS LTASESNSLAYITS .DDGRTQLNIGVGE RAAcD059à Z-L9 AFYEN=SG=TAYVV. .DHGRP[*GQLilLSVGE b · !G4223l8 ;gi TvYAwRNgQTvETsTEQ5mIpn 16504867 :tn TwALvFmNEggTsTEQnKNIpw !6&31527 :a TvYg=RFTALvRNgQTvETwNRDggTsTEgAYmIpn 52081844 158 umagERFTAmKNgQTvDmNQDggTsTmYKNvpK 52787233 ?58 LLYgLgERFTAFvKNgQm)IwNQDggTsTEQAYKmpn RAACÔÜ594 m NVY:GQ5LDIGSDQAJPW l64223í8 2Di nNRgYgvLvNE{pQcysFEIgsEKvsKvQFsvEsEt"LEw 6 !§5Q4867 i6l31527 20 l ÍTNRg¥gvTNNHpQcvsEEIgsEKvsKvnFswsEYLEYF 26Z mNRgYgvLvNmcvsEEvgsEKvsKvQFwEsEt"LE= 52Q8184ê í9'8 LsNKgYgvEvNHpEws"tEIgsEvvsKAQFsvE3EsLDYF 52787233 í98 LSNKGYGQWNHPELVSYE1GSEVVSKÃQFSVEGESLDW KbACC)05@4 Z97 LTNRG¥G!VFVNHPERVWÊEIGTEFVSKVQFSVEGEµ.LDYV 16422318 241 v1DgpTpNRYTçFTgRpAIippAwswLwTTsET»I lG504867 241 v1[mTpmvLNRYmFTgRpALppAwsEgLwLTTsnTN 16131527 24! VIDGPTPKAVLDRYTR 7TGRPALPPAWSFGLWLTTSETTN 52081844 238 w5gAEpmvLKRYAALTgKpALppAwsFgLmsTsnTD 52787233 2 38 yI3gAEpmvLKRYAALTgKpALppAwsmLwLsTsFTTD RAACO0594 237 VIGGCFII ERYTÀLT=ALPPMWSEGLWLSTSFTTD

   FIG 4B

   16.422318 281 YDEATvNsRNLpLENFHFDcFwMKAFQmDm 16504867 2 Bl YDEhTvNRF1DqLpImFKFDcFwmtmcDFEw i6131527 281 YDEATvNsE1RNLpL!NFHFDcFwm\FcmDm 52081844 2 7 8 YsEETvTRFID=a(3ípLsvEKFDc 5,Z787233 278 YEÊETVTREIERGIPL5WHFDC ." » RAACOG5 94 2 7 7 =ETv5QFjD~sRgipLsvFHFDcE¶o«pFEwcNFAw lG422318 321 Dpv=pDF!KeÜTRLKexgIiK\KmuNpYImpvmEL lFS04867 321 DpvT=pKm!|mxAmLKv=INpYIgQKspvmEL 16131527 321 DpLTwDpEw!RRLmKgLKIcvwINpYIcmpvFKEL

   5.2'081844 318 DERyEKQpEmLsRIxEKgIKIcvwINpYIµ.wmmEg 5278?233 319 DERYFKQEEÈML5GLKICVWINPYIRQKSG RAACQQ594 317 DTÁcEFDEAgMLARIxsRgLR1=wINpYrAQKs 0 16422318 16504867 361 mmLImpljg$LwQwDKwQpgIAIYDFTNpQAc=AD 3 61 KEKGYLLKRPDGS LwQwDKwQpgLAI¶'DFTNpQAc=àD í'6131527 361 QEKgpDgsLwQwDKmpgLAIYDFTNpnAmmD 52C8l&44 3 5 g mNsRgDvwpwDRwQh0gAr\/DFTNEKARDwT= 5Z787233 35S mNgmmsRgDvwQwDRwQÀgMAr,(DFTNEKARrjwj= RAAGO0594 3 5 7 baERgYI&KRpNgDvwQwDLmpgtjmvDFTNpDAmms IB42231È 40i ~gLFKTDmERrpTDvQlqEbgmw l650486j 4 0 i m(lKgLvEbm7DcEm:DEgER1pTDvQwFDgsDmmww 16131527 4 lj í KhKgLEKTDmRIpTDvQwFDgsDiY 52981844 398 mEsLL[MwDcFmDFgERrpsmYFDgsD 52?872?3 3 98 KLEsLlmwvDcE7=FgER1psDAvYFDgsDp mc3D594 397 wARLLAEKTDEgER1FTDvv}tHDgsDpQ~Nw Lkê '' " "M· 1642z3i8 441 &YrFNELvwNvLKETvgvEEAvLEÂRsAsvgAQQEwHwg I.65Q4867 4 4 I AYrYNELvwNvLKETvgvEEAvLEARsNvgAm 16131527 ui AYTwmnoNIjlDTvg=EAvLEARsAsvgÀQK 52Q8IM4 4 3 8 SXLXNKWFDLLRQKRG2REAWATA 52787233 438 sYL='TvEjILLRQKRgEr<EAwETAg= ? RAACM5-9€ 4 3 7 SYLYNEAE JGGGEAL,VEARSA7'AGGQR » 16422318 4 8 1 LRGGLSl(;LSGFGFWSHDIGGFEN~ 16504861 481 SLRGGLSIGLSSHDIGGFENTAP 0 16131527 4 81 @ç¥ANYEsLRggLsIgLsgEg~HDImFEN~ 52Q'8L844 478 =msYDsLRggLsLsLsgEgFwsHDIggFEsTAT 52'7.â7233 4 7 8 @cmssLRggLsLsLssmIggFEsTAT R&&CDÜ594 476 gDcRATYEmlET1AggLsLALsgFgwsHD=FEDTAp 1M22318 521 cAF=ssHsmgsKsYR=AYDDE'scDm I65048F"7 52 1 SKSRLHGSKSYRVPWAYDDEVR lI6l3z5z7 521 ÀFGLLSSEISRLHGSKSYRVPWAYDDESC 5,2Q.8!'84·4 51& ADLAFgLLs7HsRLHgsEsYRvFwLFDEmAD= 527&723.3 518 ADLYmm=IiLsTF{sRImsEsYRvpKL!iDEE~vMR RAAC.O(J594 51 E mLI'FssRsRLHgsgsYRvpwLFDEEs

   FIG 4C 'm —.

   l6q223l8 5.61 ffteqkcylyreaaraneagtfpddp9. 16504867 561 F=QKYREAARANmÀgTmDpA í6l3l527 56'1 FmuiKEjrREAARANárgTFpDDpA 52081844 55& m/KLKHmmamAAHEAnAEgígDNT

   5278.7233. 55& YFvK1iKHRlMpYImAAHEAF!AEgI=EpgDm RAACQO594 55G YIhNSCAVEAHR=TFPDDPT 16¢22318 601 =ImQDAvMv!AEvFswgDyEFxLpEgRmnÁwR L65Q4867 6'01 cmDRQ=gDAvMwMmEÃgwEmípEgRwTKIMR t6131527 GQ 1 çDYLDRQmjgoNvMvApwTEÀgwlmLLpwH

   520018.44 5% CÍIWIDGGRLLQEWAVRYYLPKGTWTHLLT $2787233 59& ckmDRQjMLggRLLvAwF'QEDg&vwYLpKg+ Rraco0594 596 cD"TIDRQnagpsLLvAwFsETgEvvYYLFEFT 0 I64223lé X65Q4867 64 1 NDEvQg5RwHK'mDFLsIlhmNRimuÁLgNNsQKpDx 641 NDEVQGKQQHDFLSLWYVRDNTM^LGNNSQ=Y Z6l.31527 6'41 NDELIjgsRmKQc!HgFIsLmmjNmjugtqNDQRpDY

   52.0818¢4 638 gKM!EggEwKEERYgYMRLpLFvRENTLLípLgQEsgRFDY 52707233 '6'3'8 sKETis=wKEER)mMRLpLEvRENTI=mEsgRpDY RAACD0594 636 GETRQRER:"DH4SLWFVREGSI=GAFTDRPNQ 16422318 681 kwHEmlmLEHLDDgcEAvcEvp§TtjgsTIg 1&5Q4B.67 681 Am!!}gTAK!IEH1ÁjDgcmvcwpATDg5Tg í6.í31.527' 681 VWHEGII.FNLQDG!4EAVCEVPSAWSVZ 52C'8'1844 '6'7& wujwm=t:HLKDgcTAEQTmIEKgm\lmRxsmQ 5278'7233 679 DYLMwTFcLYHLKDgc!rAEQTFI"NEKg.m RAACOQ.594 67 6 wmEYAIEfvYpIRpD|qRs·AcnEDEoNELg 164223L8 721 NTLTvsgEmRNw==NI?QIsgTKc. .GSYAGSELG L65'Q4863 721 NT=tsgE:=mqTLcLRmQíksgTKc. .GSYAÇSELG l6l3l527 721 NTITVTGAGEGLQD. .GSQAESEQG S2Q81B44 7 Z7 NTTÃmFgvQKNwKIi=gLsv=vINg. . .AAEALQÉG 52787233 717 NTmKr=mKLLLRgLsvTsvTNg. . AAERLQEG m RAA'COOS84 7i 6 DHLYLTA=sEÀwsÀvLHgIDDpQgAEcR'\/si?Eg Ó L64223t8 16504867 755 WV¶PQGNE\/WTL 759 \NVTPQGNE17VITL 16!3'L527 7 5S LVVKPQGNALTTTL 520818-44 754 TAvnFíYF 5278'7233 3 54 =VQPKEKERDVFZ= m'cÜ0594 75'E VVISWHPQEAVRVASCRÈQ

   FIG 5A 160'79924 1 MKKAjRK[vDKEYKIcmDKRIYgsFIED!=vYEg ÊulAcQQ602 1 MsNLxAjmrIDpµxRLAETDpRTrgsgRAwc;g 89095985 1 MTLNAIIDKsFRIsDID[?RTYgsFrEQLgRAwgg — + I561442A 1 M=TÃ~jDKsFK1 gEmçRIYgsETEKIgRAvYEg 520BL375 1 MTvHKAmTIDKEYKvkIDmIYgsFIE=RAvYEg 527BE75Í I mnIKAxKmKE=vAEIDmIYgsFIEHLgRAvYEg 'ÜV.'v'v L6Q799Z4 37 IYEppHpE:ADEDgERKDvQsLIKELQvpi IRYPGGNFLSG 'RAACO0602 39 =ps=ADEDgnQDvIDLvKELNvpIvRY=NFvsg 890'959&5 4 L rm,sH$sÁDEDgÈRQDvIELvKgLRvpI IRYPGGNKWSP. l56i4424 38 rYEpgHpDc;DEQgFRKDvIRLvQELQvpL\7RYsg 520BL375 3.9 1YEpDKpE:ADEsgERKDvIKLvRELKvpFrRYpggNFvsg 527BG75: '3"9 1YEPDHP&ÁDESVIKLWEKKVPFIRYP I6Q'7992'4 77 gvgwEbjRpRRIDLAwmETNET/gTNEFLswEKK 0 iUÚ!LCOQ602 89095985 "7 9 YRWEDGVGWEQRP\/QLDLAWRSLEPNRVGLNEFAR 8J IGPKELRPKRlDWNS=2NWG=F& L56L442'4 78 mvEDgvgpvsERpKRLDLiAwFtTTE=IgTNE 52gBi375 "7 9 RpTRIDLAwATTEpNLIg=nQ 527BE75L 79 mgEDgvgEvEQRpTRLDLAwAT1!EpNLIg=FMDmKL i6g7eg24 117 vNwumRgIDAARNLwY=pRgswsDLRRs MRCQ0602 Z L 9 ANsQw4wLgTRg1EmKQívEYcmpggsYwsD=« 890959&5 12 i vNAEmamuàTRgIDAARNINEY=pggTYwsD

   1561442.4 L L8 VVNLG5.RGVDAARNLVEYCNHPSGSYWSDLRIS 52QB1375 n g vNLgTRgIDAARNLvEmn{p3gsYYsDLRKs 527B675: ll 9 vnugTRgIDAARNLvEYcNHpsgsY:'sDm[s 16079924 i57 HG¥EQPYGIKTWCIaGPWQIGHKTADEYTA RÃÀCQQ 6Ü2 159 HGI Ec!pAsrRvweImEMDgpwQ1g=ADEYgRLAQm 89Q95965 151 HgTn)pRNIK\/wcLgF'wQIg!YmAg:EYgRI»ETA L56144.24 i 5S HGYKDPHNIKTWCLGNEMDGPWQIGQKTAEEYGRVAÃEAG 520Bl375 í.59 KGYKEPHKIKTWCGPWQIGHKTWY 527BE75? 159 HgYKEpRKIKTwcLgNEMDgpwQ1gHKTAàEY

   P i6079924 I 97 KvmqvDps1ELvAcgssNs=TFTDwEAKvLEHTmN 0 RAÀC006Ó2 89Q95985 199 PS1EL'VACGSSGSMATE¶?DWER:VI=ÀYDÊV 201 mpsIELwcgssgsmpTFE'EwE.4mLEHTYEAµ. 15614424 198 Kn«LvDpsrKLvÃcgssNsKMRTFADwEANL=YDYv 52Q8Z375 19 9 KvmqTDEs1ELvAç:=sgs~TFIDwE=vujHTmN 5278615i 199 psIELvAcgssgsmpTFiDwETTvLDv í6(j7992á 2 37 DYIsLmYYgNRnNNLpNYLARslv!DLDIlFIKsvAA"a)w RAA¢QQ6C2 233 DYLs1a{TYYgNRD(imANFI^csAFTRAvyATcDTv 89095985 24L Dx1sLHQYYgNRDm£s:°IDm3FIK=m0m i56l4424 2.38 DYjsLRTYYgNRDDDILANYLAQsmmEFImvíAíADw 52Qêi375 2.39 Ew=sYYgNRDNDLpNYIARsLDMD!lFIm!vI SVCDYM 5278E75í 2 39 E¥IsLAsYYgNRDNDLFNYLARsLmDHF7x= svmm

   FIG 5B Í6.079924 277 KAKTRsKKTINLsIDEwNvwYHsNEADKKyEwITARpa RkCOOGC2 2 7 9 RAKKRsNKT1YLsFDEwNvwnísKQvEpmwppLL 89095985 281 KAKKRsmMNIsI?1jFHsNDQDKAIEwsLsppw 15614·424 2 7 g mIHLsL'DEgmwFHsNEADRQlFpwsvAp= 52081375 2?9 KAm¢smIlTLsYD-°HsNEKDKEAERwAF:ApHLL 52786751 2 7 9 KAKKKHLSYDHSNEKD= !GQ79924 3 1 7 EDrYNEEDALLvgsLLITMLQHADRvKIAcLAQLvwTAp RAAC30'602 319 EDvY:MEDALmmtmjITLLKFLADRvRIAcIiAQLvNvTAp 89095985 32 1 wIY=EDALLvgsbqdqTLLKE{sDRvKIAcMAQL i561442q 318 mrYIFEDALINgmLjTLLKKADRvKTAcLAQL 52(J8L375 319 EDrYNFÊDALLvgcbqATN£LxHADRvKrAcLAQL 52%G75! 3lS EDIYNEElmÁNgmLITMLKHmRyK1AcLAQL~IAp 0 16079'924 RÀ*Lc0a602 357 QFImgRgE5LF:pLi SSPKYD 3 59 Nwp5wRQTIE"YpF:&E{AsNLAE!gvvLz"RwEspm

   89095.985 3 61 .TgggIwKQsIFYpFYYTsvYgRgTALIt.sIvDspKYD L5614424 3 5 g PAWKQTIFYPÍGRGVALQRQ1 SSPKYD 5208t375 359 ImmgEAwRQTIFYpFMHAswgRgTvLQ=vsspKYD

   527.86752 3 59 %EAWRQTIFYPGRGTVLQTÃV Ig:Q7g924 397 csDF'TDwYvDAAwYsEEEmIbTImvNKAEDQ NETEI RAÀCCIQ 6'C)2 399 sKDETwpYLEAvE'TgNEAAgEmÁAvNRAEEp .WLDV 89'Q.95985 4 Ol sKDFTDvpFLDQsvvn[EEsEELvIFAvNRs»TQLLvDv 15Gl44Z4 398 smTDvpYumw[uEEAEEvTIEAvNKHQTR5LNwc 520813i75 399 ~FTDvpYLEsvsvFNEEAEELT\/EANNRATDAgLEm

   5278.675.: M9 AmE:rDvpYLEsvsvFNEEAEELT'\jFwNRKmgLEMEA

   C 1607'99.24 436 sYQíAEQD=mQ!·.mHsms R,ÀACO0602 438 DLRABsEmIvL=EmçAyNTKERpNmpQKm g9.Qy.5'gI'g5 4 ¢1 DíRsFEgYKLAEQrvLKNEmKAvNs indeq .'vkpekgnd í5:6l4424 438 VNMKATNQ. GREQ .V¶!PHHNGD .52l0.81375 439 DmEEgYsvsEHrvLEHEDuKATNE;KIjRNNNvpH5= 4, S278675Z 439 DMRsEEgY$v5EKrULEHEDrlKATNEKDRNN.vvpHs= « 0 L5Q'79924 ~J06Q2 4 75 ssvsENgLTNtETpLQs 478 GÁVDAVELPALR1RV 8'9.095985 4 80 SYI ENgn=vLpmLEv ]56I4424 47G SALÍGKK S2'R'8l375 4 78 AKvcDm=nLpKLmmRMm! 527B675í 4 7 8. AKvcDgRLmILpKLswNv1mçKQ

   FIG 6A í589'36oi 1 MHRK=ALI1ug.

   1.58'936Q4J 1 MY S màwAsvKwTMEsRgRYvviíKR=sTvvAFg. !5896'196' 1 MKKLETNLLLLcsLvELgALLNguNvmI}sFTYp=gw li6513'351 1 mcKNL;LM=LATLsAsg. RAACO0'798 I KEPGÀG.

   L58936ljl 14 .. .. . .. .. . . . . . .. , . . ... . . ,...,. . . . . . . . . . . Í5B9.360C 36 l.589G19"6 dl wsvDNsEDvNNvN3RM\rsgIjENgDgKADvA=wgNgA's Lí6513351 19 RAAC3:0:7 9'8 E .. .....,. g W 0 0 0 0 €€ q -e L589360! 14 . . . !TVSC$GNÍVEASP. . ... . ·. . . .. .LQDQ~QQQY L5eg36aü 36 . . . ívasmgst5vfakp lqd. . . .aqskz" L589619"6 81 RIFnmsNgssFDYAsAYmmmpsgY1jpKmAANAgDE' 0 116513351 RAACDD79B i9 . - AIAaTTGASÀLADgY TVVKNDTL E ,. . . . . . . IGRDRRHGSG. . . . . . . . . . . . . . . . INCQGCF " L58936QI EQ QNÀLKsvQumuclEhLDNQIg£LNN$, ,. . .INDTnKRI L589360Ü 58 DAS EIKNVQNLEEDI QKMDNQIETIMSQ. . . . . RD"5VDKKZ

   1.589€196 121 NgrjliKDDIRvIYNymsE7R1HvFT5Tg$sF8y"DcNgww Ll651335l 4! mgvsvsDLKKAN@vsgKLIYvg. . . . . . . .QKLQ RARC 3D? 9É 23 ESGS:X IKESPRPPRNRN.. . . . ... . ., ,. . . . . . . . . . , , V.

   L.5893'6lj.j 75 NEsKeM&j"TQgKID. . .- .QAKQNITNQQEIYG. .ERLR 15'89360U 93 TQSQQN INQAQNDI'A. . . . .vsmuREEKDKF&. .DRVR l-5896'í9.6 ,161 NkFgy 9A=TgAvàgDFN.aDgKs pIATMY'Dj¢gggE=l H LL6513'3'51 7 3 í PTKSTKATKTÀKTS. . . . .TSTSTVDTTSFTHTVVKGDT mco'079.8 41 LSNTEDSMRR. . .. . %Amn'TLTLsFmgHA'r -% ··" l58936di 108 amyvng.. .TTAQY'IGV 'Lesqs i599360'0 126 ry'isg. . .stpsyvd' llksks L5896L96 201 vwsfg. . .SSF"¥TG»G~$TGWSNRVK@W'AGDF il65l33'5z 108 lwslak. . .k*gvsvsr. . . .. .. . . .. .. . . . . .LmKNN % raaco07 98 76 vlaateqqpatytvr. . . .. , . - . .b . . .. . . . . . . . . . .

   0 ^....—.

   lS&"9360i 128 FsDLI5RL=KDvINYDKgííNNFKT 3S&9360Q ' G FsDMIsRImIKQr5wDQKLvsmKD, .. . . . . . . . . . . i4 L58'96L9.6 238 NGDGKTPIAAMYDXGGSESRI mm3sTgDsKKYTgRNgww llG5l3351 '1 20 LSSSTILIGQ3LNIgRAGmT¥GVNWT. .. . . . . . . . . . . RkACljO7 98 91 QgDTLYRIAuDHLRLTmELANpQLs , .. .. . . . .. . . .

   i58936hZ 155 QKQEvENQQKL~NmmLQNmNNKKNTQ IS993GDC J73 SQGMEAKKDK IvsEKQQLEALNKENljmmLNuEKsKQ L589gi96 27'8 sTTgmNKvTgRwAgwNgDgKADIAAmYRI !I6'SI335L i 55 TgsssmAsANm$sTs=AssQÃmjmA5=TN RAACDU7 98 118 . .. . . .NPNE u¥AgQKvALpTAYIvQpgDTvYLIAmIHLT

   " *

   W m 14/75 FIG 6b · lS8936OX 1.95 NsLTvAAKDEEÊLKHmmQQzQmKDDEKKK. . I.EAIJL V L58936DR 213 NvLIA~DEsKNAAE\7KAÈKDAEmAAQ~5zAMNTA lS896.í96 3IB wLTsNgDssTyTgANgwwN=g¥DANRv=Rvv»DFNg LL6S1335L 195. TSSNSNTSTSANTQSQ$TKSNS5ASTTASNANTT € 'W RAA'CIJO798' 153 ESAILQAN4FHPLDLIVGQTLYLPI P»NSTASXP?NTS ·V··~- IS89'36DZ 232 STNIQLKPVSWTS. . ..QNT"7QS35TN. . . . .gLAyvKY 15893600 253 AssAmcAYÂKAQmpRgvs'HgsFAgs. . .. .GNDUVSF lS.896196 358 DHKADIAÃwDYgssksR=vEssNADs*ssmkELvAY i.165133'51 235 ssmT»-ss.sQAvsQApTAsrATTTRàs. . . .ÀSAITSY RAACO0'798 I 93 cmAsÃgQir=TQmUsRÀQLR. . . . . . . . . . ..QE ILTY t5893601 264 AETnm!pYvwggNKpg.gFDcsgLvwvYAHFgINLm 0 i58936!jo !5896!96 288 AEsF$gLmmAEDmgFDcsgINwvYsLgRT 39B AEsELgvpYvwggADps^EDcsgImjtc:nsHEg!v=RT LL6.51.33.51 2.71 AI=LGVPYVWGGTTPS.GEDC$GLVWVYS= RAÃ'CQQ798 22L AKsETgTp'YcwggD5pRTgEDcsgEvEYvmmI 15&93'6OL 3Q3 TmvNQgNpvTgNNw~LLnEpg.stq. . ... . .GPEH Í58936DA 328 TYEgvNQgTTvT. mLQpgDLIiFFgp:%s . . . . .. . .KP¥H L5.896196 4 37 C. ÀDLQPGDLLEFGSAT. . . ... . .SPTH Ll651335í 31Q TmQYAgTKI5vA5AQAgDLYFwgsYg. . . . .. . .sAyH RAAC3D798 2 61 sHWqTvgTwspsNFQpgDD?DsyASLY AIHVTH ' L58Ig360j 336 VGIYVGDGNFTEAP. .HTGANVRFSP. . . .. .. . CA 1589360C 358 Á. .RTGENVRKTÀ. . .. . . .NRGYSI L5.@96i9g S 68 WSMVEAP, ,HTGàNVRLVlj. . .. . .., IRSYFI Jj65l335] 342 YV6QAP. .A7'GS. . .. . ... .VSSYTP RAAC3'0798 3'0! vgIYTIE5ssAKNgEgv\/IvmvFQNRYws=g Z589360Z 366 VN Wf t5ê9.3goc 3'88 L589í6L9.6 4.9B A&R-IEN 116513'3'51 372 smmns 0 R&&CUQ798 34! ~WGP

   Y h- '

   W u 15175 FIG 7A S20&18'lG I MKIjcIMINpQDNvgUüRELQ¶gETU 52787203 1 MK]jcIjlgINFQDNvgIAI0RELQTgETv l5.0939'9á 1 MKNvIKíNEm~v&NDLNKgDYI

   12.15'3'339.7 1 MALLK\lALRôlRCGETL

   1.56'13053 1 MNEKEÀYIH&KDNvnALspLEQgEvL RMCUIQ76 1 7RvApKvLHLs=wvv=pLDvavv . * 52'0'8L&l'€ 27 TW3ER"IV 7KEpILxgHKFALKDIAÊNEKmw=Im 527972'03 27 TvmmvíKEp1FALm=NENvIKYgEprgm L5893984 27 u DgRyITAmvIAITDIQKNs'NIyKYgEpTm l2L5333.97 QE AMmTv=RED1pRgHKIALcDLQpgEHvIKYgFp1gm' i56l3053 28 mN(aEITLsEsTpR'gmAIvTIEQgEmIgKA RAACDlC|76 41 ETP¶GQV5ARAPIÀLVW'IKCGE.4WWGWW\'A ·rn $2:(J8L8L6 67 TEMIQTTKNVKTNLGGVEEYSYKPI<FTENRYQKEP 0 527872Õ3 i5893%4 67 TÊM1QTgEwvHTKNvmNLr;gvEEYsYKpKnRNRyQKFp 67 LEEIKKgmHTHNítKDYEYNKm'FENpFKNEN L.ZL'533397 6.6 TSS¶HNVRE MAYÊYKPEPPAVSWPC-R 1561305"3 68 TTTIQpgA~5çmmKLEgvQEYDYTpsTp"sFRKQvEK RAkCDí076 B1 TQDIEpgEwvmíNLRTALsERg$YwRpHgspALvLDDg 52'G8.181'6 Iô7 L.TEmFKRKDgKTgIRNELwIvpTvgcvNg=F1KEF 5278?203 I D7 L.Twgm7gLwrg[.! KEF L58939H 1Q7 L.TETçg¥RR£Dgmgm[ELwIvpTvgcvNgTAljLmERF 121533397 !0 e H .TERgYmpDgRvgvRNErwIIpTvscvNRTAQL~Rg 156'13053 108 wmng¥T/RIjNglwgrRNEIwIINTvgcINKTAERLAAÍ S RHACDID'76 i: 21 1nTFbmvR3Dg9vwRNEIwrnm7gcvNKvAER S2Q8'1B16 L46 KAEVGS mpFEsvHvLKHc2YDRINTRTILANlw 527&72n3. !46 KÂEIVGS rmE5vF[vLKmgcsQIgDDH:NTRTrLANkv IS8.939B4 IA.& KSEF ., . . .En¢wHvn"mFgcsQ=DHNNTRTILwIv L2 L533397 14 5 mARNmuDgvFAFTHFYesQImDHRRTQTMDLv lS6Z3Cj53 14 8 NETCG. mgvDgvYHYpHL!?gcsQI:gDDLLYTQKn&NLv RAKCO.1076 !60 DAK'RRG.GGIDGWHFAHPYGCSQ=DLV=SLÍAGbV 0 52QB1816 1 8 6. NKSHEMHHS8 0 52787203 L599.39B4 186 NHpNAggy'wLm=ENNsIigEE'REALgDYDRsL$ í8z mpNAggvIN!ImgcENNTM£sKKEsLF[sYNKEAvRFLIA 121533397 Z85 NÀv1mmgcENNNvEEE'QKUvgsYNÃ1jRvKFLw L5GI3Q53 i86 LKpNAAgyLvIgIgcENNHmAEKQvLgwDDv RRACQLQ¶ 6 19 9 RHpNAAgy1N'IgLgcI:EÀFRERLDQAs 520B1B16 Z2E ~NEWEGVYKHAKGDL 527B7203 22'6 QEvsNwTEgvKLIàKEIyElIAKgnqwvpL I58939M 222 QWEDEISSGCEI&KELYEKIQKDEREEVS ISGLKC

   1.2L533397 225 =DEIm@EmDLIAYMQF=Dcpp.=w=c 15613053 226 QEADNEMEQGLRF IEELF SYAKTAKREPIPLSKLKVGLKC mml076 239 QRTTlm?AngMRLLEDLvERARAEvRQwpw.RLKLgLKc

   ~ 16/75 FI'G 7B 5208L&L6 2 66 gggITANpLLgRLsDnjIAQggTAvL $2.'7g72i0'3 'ué gggitanpllgrlsdfwaqggtavl L58939'84 262 GASDGF$GITANPLLGKLSDTTIL 12L533397 2 65 ÀFVGAFSDLLIACGG5TVL í5g!3053 2-66 sgITANF!LvgAE"sDKv\mHggTTvM R&ACOID'76 27'9 ggsDgLsgvTANFu/gQvADKvvARggTALLTEwmFm 5209lB'l6 3OG ETLNEEVFFINDEKQYFIDHRQPVXENPS 52?87203 3,06 ETÉnuNRIÀNDEKQYFIDKRQwYENps 15'893984 '302 ETEKVFAKNDEKKYEMSYNQS LZL533397 305 ETmQmQDKAvFDKTvRLíNDFKNYEMAyNQpImps 1561'3053 '3'06 ETmwRAmQA!rFEKMvRLlNDEKEYFLmQEvYENps mc[ji076 31.9 ETVWDRADS pmFAKrvDIíIQswKDYYTmgQpvYENps 0 52UBI8.Z6

   52.78'7703 346 TTLEI)KsLgcTmg. TSKVADVLEYGDVLKK '34 6 GGITTLEDKSWCTQKAG. T'SFCVÁDVLE.YGDVLKK L5893984 342 ITTLEDKSLGCTQKSG. S·YGETLEN 12153339¶ 3 4 5 KTQKGG. RATVVDVLGYGETVTR L5GZ3053 34.6 GGITTLEEKSLGCVQKGG. FAÈVVDVLPYGERLEK ~DJJJ76 359 TIiEEKsLgAvQKggmmvvDvLc:YgDpk\« 520BL9I6 38 5 LvAssALAAAgcQrvIETTagTpFgTF 52787203 38:5 KgENLLsApgNDLvAsmLAAAgcQIvIiETTgRgTpFgTF l58939B4 381 KgIi;NLLsÁpgNDLvAsTALAsAgcHmLFTTgRgTp=F L2L·533397 38¢ KGLNLLNGPGNDAVAATALAAAGCHINLETT~PLGTA 15613053 38 5 QvsvTALAAAgA[nNLETTpFggp ~C'0L07.6 399 PGIXLÁ 1·NSVGAQLILFTTGRGTPEGGP 520BLB16 42'5 ypTl«ÍsTN:rAlYEAKRHw1DFNAgKvLEDRsEDDvLKEL 5278721)3 425 vpTbfK[sTNmIYEAmHKrDENAgKvIEDRsEDw L5B93984 421 vpTvK1sTNsbIYNKKKNwTDmgAL=QsMDQvLKEF í2is33397 424 vpTvKIATNsELFRRKTTgqMDENAgELLEgKsLEALADEf 156L3QS3' 425 vmnas=sLYERKKEMmNAgRLvEgRTLDEv

   B RAACOIW7G 4'39 vpTLKIAsNHQLÈ3sKpgw1DFDAgRIÃLgEsMm . 5208!Blê 46'5 TAXLI EVÃSGRQ .LNNE nu)FREÊA1FKTgvTL 5278"72Q3' «S TmnEnsg®QnjNNEINDFRELAIFmmL 15B939B4 âg'i iNYLgNM.ANNEKNN=Is1m Í2L5333H 464 FÊ,m»jÂ,sgRELTKREEMgFRE1AIEKN 15613053 465 LNYgmAsgE~~EYgm1sIEmgvIL ~CQLQ7G 479 LHKvgEE>=vNgYREwmmTL

   M m

   Y u 17/75 FIG 8A ilá&43317 ] MDYKDESYGVSGI·YDF 76795342 í mYKNLLKKLcEsHgvsgKERgIYDLvKEm ?6?96625 ' mYKDsENHgvsgIYDF - ?Q5i542'8 í msEsHgvsgHERgIY 125§73!25 2 mm n ilkdlstypgvsgqedklsgy lrklf mc'04 341 í MRYEEv'spLsKYvsvFKQLLEAHggpgFEEDrLpHL ., .,, 114B433Z7 32 Ep1$DgvKEDNFgNLIEmçgTm. .EIG 76795342 32· AQrsDKFmgTm. .KYEIG 76796625 32 EpIsImncÊDNFgNLIFKKKg=. .EIG 20SI54ZB 32 EErsDEv=NFgNLLKg. .IG L25973i25 32 &KYCD$VEIDEFYNVIGI~Z GGS [3GRRINTTXHID= RAA'CQ434! 42 sEYmEmFDRL~rg]&vpgvgEgRRpRvLvm IDEIA I!AB433Z7 7Q mvmrDEKgFxKFTTvggvDQRTLpsQEvIvH~.nLL V 7'679.5.34.2 76'796625 70 LNmDDNgFIKETTvggIDQRTLpsQwIvH~.D= 70 [MvmrDEKgFTKEm?vggvDQRTLmwIvHm.ELL ·2051.5428 70 wnmDEKgFIKFTpvggvDQRTLpsQwIvHgKK.ELL i2s973i2s 7'2 wvKsrDEmFrT'L/5NTggvDsKvLLàQwviHgKK.EIY MACO4 34 L 8'! LvyTRIEswELRLA{2Aggj DI'RTLVGQEWVHÀQSGWW + ." ' ll4B43327 lO 9 gv1gsKpmmsDD=KNgLmcEvEELv 76'795j42 109 gv;rgsKppKLbLsLgDxExAIKIEDMYIDvgMsw=ELv

   7.67'96625 LÜ9 gvlmKppKujssEm«KA1Ku=YvDvgL~EvE:@v 20Sl5428 í Q 9. gvTgsKppHIjissEDMEmIKum«vDvgLpKEEw:av i25973iz5 l1 L GI jm'LwpK[=pEEIKKAm{EDLvíDTgL5AEEvRKYv RAA'C043'4L 12 I wIg~~TFFsERs,mL=u=~m4w .mm.VV..

   Ll48433Z7 J 49 KrgDrITtm)FRELLNDyvsgKAIDDRAglvvMAvcLDE 76795342 14 9 K1wv1TiyvsgKALDDRAgIÀvMAvcLEE 76796626 !.49 SIGDTITVKREFKELWENVSGKALDDRAGWVMAVCLEE 205í542â í4 9 $IeIITvmEFFmwDNvsgKALDDRAg\NvMAvcLDE l2S973I2S ] 51 sv@wTFmEpLvLQNNREwKswN~wàLLDtMEN RAAm434l l 61 Rc/@RmLRRsE'vDLLNgRugKsvDNRAsmvLLE=L LI4.8433Z7 ! 89 vmvvTLQEEvgvRgATTs&YNvEpD 0 7679S342 767'96G25 J89 LNKLvYAyATIáQEEvgvRgAITsAYNvEpD 189 VYAVVTTTSSYNI= 2D5IS428 18'9 VATLQEEVGVRGAITSSYNTEPD 1259731·25 19'1 LTLLNm)DvwFvAgLRgANíAmuNFDLArvI RAÀC0434I ZQI LKgtdwsmLn='I~gTAg5gupDv II4B43337 22.9 WTHGKARGVSLE. .IEL~pAIgKgpNIRpAvYmvE 76'795342 22.9 WTHLS IE. .IEI,ÉGPA1ALVE 7679662S 22.9 "SRD. nm=pAIgm=HpAvYmLvD 2QAI542B 229 SRD. .IEEWIWAVD L25973l2S 231 ==I=p=svk'e'Qgm^vAvL~YT'~IE RÀiÀC0434L ui DvTFgAFpgQÀFDEsm.EggvAIsFgpNLmRvD

   . * ~

   À 18/75 FIG 8B LI4B43317 2 67 &ÁmYN1NmvEpLpgF'sgTDA~QvsRE.gvpTgLvsIp 76795342 2 é7 AAKSYN1NYQVEPLPGHSGTDQ!SK@VSIP 0 7'67:96625 2'67 IAKKYNINYQIEpLpgIlsgmAmIQv$KKgvp=wIp

   20.SI5¢2& 2 67 L=nnNYplEpINgHsgTD6m1Qy$KKgvpTgLw» I2'59.73L2'5 21 1 WNI PYQI1JVEPGDTGTFARVQVSREGÍPTLLVSIP RÀAÇ0434 L 281 cADNiiRIpxQIEL3QgwgADANAFQIAgpgÍgpp Il48433I.7 3 Q7 SVETVISSGYY.EELE m 7'67'95342 J 07 LE=HTsvETAmmINsgKLLAYnANLp.EE * 76796625 307 IIESP.EELE 205Â5428 307 svEIIEsgRLLA!mANLp.EELEgHLc I25973125 31 l LkIETLs,IDDIKNTAR"1SMTG.NEMEEGlC RÀÁF04341 321 IRYMHTsvETvAYDDImcÁRLLA!m^EvDÀAQYEEL-Tc 0 I14B43317 76795342 346 'X 34 8 Y

   767966.25 34G Y 2D6í5420 346 Y I·25g?3l25 RARCD43A2 361 Y 0

   FIG 9A l25973i26 í mIwLTELNgvsgNED 1583350'8 l =DKLeNRÀgF'$sFEg 20515429 L TE.LLGASGUEK

   767.g6624 I TELLGASGDEK ll4843.3t6 1 IMGASGDEK RAACD4342 L 6àAvRA¶FRpELgggggvTEÀFgpTgFED i25973i26 .LB EvRKQKY=I=D&tvmLIeYmggssKYRmL 15893508 í8 I IKKE:Rµ;NDr·IKvDRlmuIN. .SG > 205L5429 L8 EvREKIKuUKpYvREL¥vDRlgNLIA¢wgKKE À. 76796624 l8 wREKIKEímmmIMvDRI=tAEmgKKEKp LI4B43326 LB EíREKIKs!yEpYvDNvYvDK1gNLIAçKKgK'KD=m RAAC04342 Ql EVRGI vRRELDAMgLsvR=vL~ms=HHpgm~ l25973l26 ·58 =G¥. . . . .DDGLIKF6SIGGÍPGK 15893508 5á EVGFI ITSIN. . . .IKFAS L'GGINGKIIPSK 2Ó515429 59 µMN. . . .WGTILSFSPVGGVDNRILVÀK 76796624 58 EVAJMVKSVN. . . .EDGTLSFSPVGGVDNRILVAK lI4B433:6 58 µEvmMvRs\'N. . . .=TLsFmNgvDNRrL= R&KX)4342 81 HIg6gREEggLLmRpwgvDpRvLvsK l259731.26 93 Rnv=upwIgsm1mEmR=rKLrg 15E935Q8 92 wYígENKIwvIgíKp~sAEERKgsAsYDt¶1cFIDIg 2Q5L54.29 94 m¢vlmçK:INgvIgÀKp1;EuQK=QEmjDEDELYIDIg 7629%24 94 mçvgmçINgYI=KKgEQIsKpLDF"DELYIDw li48433Z6 9ii TvKvgEKgrNgv!IgAKpIwQQKpLDFDsLYIDIg RAAÇÇ)4342 12 L wLwERRrpgvIgAKw=QpsEREKpí PMEKLYIDIG 125§73i26 133 AEmsA£KLmAE=AF2sM=EEgDgcTKÀKALDDRv 15893508 I32 SKSKEETKKYVSIJGDYAVES¶EYGEFGEG7I\/ 20515429 134 AAs=EALKHIspgDYvwEsNEE:rIgDgY\iKAKALDDm 7679£G24 L34 AAsKEEALKHvspgDYvYFEsNFInLgDgnKAKALDDRí lí§8433i6 L 34 ATSPGDYVYFDSNFETLGNGWKAKALDDM RAACQ 4342 161 ARDADjmRRKv!¢ÊgDpvvFATAYQELFuRMAKAKs=Rv

   W 125973126 L73 GCAILLEILKERY. ç;FDLYvcFrnEEigLRgÁgnAmv 0 158935DB 20515429 172 gcavL1ELLKEm-EcDL"A\?FNvQEEvyYsAemv 174 gcNvLIEIIiKNTYAmK1uLFTvQEEwI&gAgnAm 7G79F624 L74 TWTY.EYWCAAFTVQW 114843316 174 gcNv]=NImEx.EYTvcAAFTvEEEvgLRgAgvÀA= RAAC04342 2'0 I gcYI1|kLEMjr(r[wKcniLLpvFgAFTvQEEIQz 125973I2G 2 12 NpDmwvEgTTcmn'gAREHEYsTvMmgAALFImw 15B93508 2IL FípDIgIAÍEgTvuDM?NvpEYLRÁTELAIsimKs 20515429 2 13 EpDEA:wvEgTvAADvv{)sEpHLvsTELgKgpAIs=m 7Q96624 2 13 =EAmlEgT¶nkAIjvvclsEpHLvsm=gpAIs=RT 1148433Z6 2 !3 EpDFAII~vTDM/pmvsTELgKgpms=RT RAACO4 342 241 EPDI:A:[1'\LEGTVA![DVVGTPSHGQSTVV«GPA=/QDW

   V

   W Q + d 20/75 FIG 9B !259731.26 252 sysNKKL\lDEMYK~DKNIpvQYKQ==QLT J589350B 2'5'L síYNEErnFLíKIAKENNLAFlQMRKs7AgAIAsT 2O5l5429 253 TLYDRKjzDK!mmlEmNpxQFRRIAs 76796624 253 TLYDRK'nDKn/KIAEKNKIpy~IAsHLT Ii4B433L6 2'53 TLm«LLDKIAKLAD=vpyQFRRIÀsggNImgKIHLT RAAC04342 28·1 TVANRRFÀEFLWETAKARNIPVQWRRVKGG=FGAIHRV l25973l2G 2 92 REgvvvAsvsvpcRY1HspvsvMNRRDYEscLNLwAm L5B935'J& 29.1 GEGÀKVÃAVSVPCRYIHSWSVASLÉDIENTIELLKKYLL 205i5¢29 2 93 KcgrKnÃIsvpcRYI:HsFNsvAKI,sDFENTvKLvDtvIK 76796624 293 Kggm¶MsvpçRjtIHsnmmKLsDmmiKLvDLv7K llEB433i6 2.93 Nwm'myYIHsFNw&1EDFmwLItR RAAC04342 3'2L gKgvLsvpvRmamvwLDDvsHAíDLwAvLD 0 i259731.26 15893508 33·2 EEDNNESLIES FKLHNVK 33'1 'SFKGGK 2Q5í5429 33.3 NJEEVL& 76?96624 3'3'3 NIEEVLK il¢8433íG 333 NIE'KEM,Í RMCQ4342 36L EIAKGGFRP 0

   Y . 4 +

   J ^ 21/75 FIG 10 20515430 j M5V!NVEL1KKLTQRFGPSGS EIREEIVKGFCDEIT 7679'€623 I MsvNvELImTQ&jFgpsgsEEKvFEIIEEEvKgF=EIT i25973127 1 m)LLKKETgr\/gvsg IREA1IEETKECVDEIK t25973126 1 MLjxE:LTEL!qgvsgNEDEvR:KEIKEEAQKYèDsIT RA1¥C9.4343 1 MR1jjNyMRLI DFVAPSGSÊEAVVQSLLDFNREÀAD= 20515430 4 l 'FlCVKKGKGKK. . nmAHADE1g:mqIEEEg 76'796623 41 GKGKK. . IMvAAHADE1g:xvTnIEEEg I25973127 38 VDTLGNLIÁGKK. .EIgvMvTYrDDRg 12597312G 3 6 EDscyKKggssKm/MLsEvgÊMvTgyDD.g b RAA¢04343 38 VDALGNGIÂRKRGEGPH . . LMLAAHVDE DIDDRG 20515430 79 TIvgRmçEm. . . .GTVG. .VIG.VE '?.c7g6g73 7 9 I. . . .GTVG. .vra..vE

   125.973127 76 5NVRYDCIGQ. . . .GVVG. .AVYYEE 125973126 7 5 L[KFasrw:DERILpgKRvLv_pm]gsKpIALQE 0 RAAC04343 76 :txRv1m/gEmukRE~EmFTN. . . .GANG. . . .LVEA 20515430 l J2 Íumçmm,EKLYIDIgÁRDKKEAKELvKIgEsgsFvgE 76¶96.€23 112 wEKIijnDIgAKDKKEAEELvRIgDsE 125973127 110 =QLSKMYIDIWSREEALKMVNIGDUACFVGP 125973126 115 mERgNNImKNwIDIKLApLgEnm SM RAACQ4343 i 0 B bpAKQgDLDFDALvvD\mRsREDAEmpIgTAmwwp " 20515é3c J 5 2 NEAgD.RL?'smFDDRIgcmi.Tm

   7.6796623 !52 FvEAgD.RLvsKAEDDRIgcYvAm=wK=NELYw l25973l27 l5Ò AVLQGD. T\K SKALDNRSGCAVVVKAIKELKKTDNEIYW l2Sg73l26 1 5 5 YTE"®gcIwmIDDRygcAILLEÍLKERy . .gfdlyvc RAAC'J4343 i48 AK[y7gEswTgRÂ=RLgcAvARwERNLAARgLNvsvA 2051543G 190 FTVQEEVGLRGÀ=AAYSINFDFA1AVDVTTP. .KA 7§796623 190 ETvQEE\mLRgATTAAYsINpDFA1AvDvTATgDTp. .KA l25973.l27 18 9 FTvQEEvgLRgAKTAAEsIKFDmfAvDvTMT@Tp. -ES 125973126 ! 93 .VAAFR IAIVVEGTTCSDVPGME RAAC04343 18 8 ETAQNAQÀAAF'QLEpRvALvíDgAzADD\/EN. . .

   2Q5l543C Z Z g KmàvÃLgKgAA1RsIrvspsyRDm:E\mKENsw 6 76796623 125973127 2 2 8 RSÍ WSPWRDMEVP 2 2 7 ElPCGGGE'à1KVKDRSV1CHPIP 12'5g73126 233 m{sTvMgNgAALTImRTsY sNKKL'7DFMyKTAKD=p RAACD¢34 3 2 2 5 Hmbs=gE'vRgTvvpLEgKRAwKAA'D=LL 20515430 ¶ gg YQ=I=EmTDAgAIHLsRggwswIsIpTRwHsvsE

   7679662.3 2 68 YQLm&FggmjAgAIHLsRggvp$gv1sIp=wHwsE !25973127 2 67 YQLErLEAlggsDpgs1HL:i»mípsgÃIsIpvRwHspw J25'973126 273 VQYKQT&TWNDAGKIRLTREGVVVÁ$VSVPCRXMSWS RAÀCD43'43 265 LQYEVSREAWSDT=QIjmG(NAVRLWPVRRA~W 20'5!5430 308 MVDKKDVEA5"LNLLI KIIEK 76796623 308 MVDKNDVEASINLLIKIWK 125973127' 307 TASMSDTNNNJKLLVEMC ]25g73j2'6 313 yMNRRDYEsgLNLvKAvIREFmEsk,ÍEsm;HNw màcn4343 305 tad! sdaerlv=vatvetllg

   *

   W q 22/75 FIG 11A 89¢9è529 I1662D37/3'

   5.2GBi8l'5 52'7872'02 Ll6G2.3l51 RAACÒI27.5 1 mcv'HRwKRgLsAmsLALvAÀAÀmmHARmLAMm7 8909B$29 I MVYH IS ll662Q373 1 mTcRUALvgLLÁAcAwsk 52ÜBL8.L5 ] M5LQK-"KEEI WCKLKVPVEPNRS= 5Z7'872Q2 l MSLQR:KEEZVKKLKVWFFUVT Ll6623í51 1 MRvL'mLIFm mA¢Ql275 41 DLyÀgTgDLDA5LAQvt,HgAFF=.í p5Li?DTYpRRYD,~ "" 8809'8529 & EYW.WAG- . wTEgIQKAu)EAyQNgggmnmgEFLr D Il6â20373 S2Q&L815 2% T'=4gDgKmmAmRAIDAAAKAgggmm PGRYLT 28 sFgAjmmND5TEA1QKA1DQAmAgggRynp 5È7872lj2 28 sEgkDENmêND5TEAIQKAIDQA!iQÁgggRywpEgvni3 ii6623!1.51 22 DYgAKADmvNT¶/ALQKA1DAAAKAgKgvwTA RAA'COI275 '8J EY~pgíxmnqTQAIRAAIDAAsQ[igggrvTjIppT P —

   89.098529 46 gELe:LKnN=uEhmmcFsDKQEDYpNvTsRNE~ 116620373 66 gÀwLKmnLDwA=I)LgspDpEDYp. LRENvm. .E 52C)8L8'15 68 ~F! Lk!çmvFKFsQNE!EDYL?vvLrRE7EgvE 527'872Q2 68' G&LOLH rAKgAv:¥FsQNI2EDYLp\NL=%w l!G6'23l51 62 gAL5bRsNbfELRLDEgvE:RgvQDLuYp. LMQ¶RVAGIE RkacQ1275 lzl gpÍüvDLwEswQLQFs@wLYp. . . . . LVPSGN "w"m WT"W 8%98529 85 RKvuscLEAEgARNIAvTg=IDgNg. . . . . . . . .. .. 1166203¶3 J Q3 KKEYssLImngAvHI'rIRgRgT.=Rg. . .. . . .. . . . . 5'2QBIBL5 108 LyNj[sFLrm=ADN1AITgKgTLDgQgm . . . . . . .. .. 52'7B72ã2 ] 08 LnrrspLrãYEAjjN1AITgKgTLDgQgD. . .. . , .. . . . 11662'3'151 101 mFAAL[m¥EcisNvRLsgKgTvDgDg. . . .. . . . .. .. RRR'COÍ27'5 15& SYTVQS pIsAmAYwA1TgHgvIDgAgNT&mvEK$KLs · 8g:09852g L! 3 .. .. . . . . . . , . . . . . . .MEWWD'. .VfRNRR. . . . .. . . .

   e 116620373

   520.&1&15: 131 QRGWFDRRKI'AEEQRTA i37 , . ,. . . . . . . . .. . . . .DEwKRgTNgQp$QEKwNà 527"872i}2 137' DEHwwpwKRgmgQpsQEK[jmA il662315.1 L2.9 ... ,, , ,. . . . .. . . . . . ju~LmMRREE¥E PKGLRIN raaco12'75 196 hDQwN&UvA5ggvv5pDgsMwpm.Qg^NAQAy ímlpNM 8909852"9 12'4 .. . . . . E&íàxv P. . . . . . . . . .RPKLTSFDKCEHIFLRDV .....- Ii6g2'0'373' 15.3 YG. . . . . . . . . APHMIKLVRSKKVV1EGL 52()BIBI5 J60 L'I WTERQFGKGHYLRPNFIQP¥I'LIQGV 527B.72D'2 IGQ bFRgImERQFgKgIçmRcKK1:IàQw Lí6623,l5l 151 ÊkvançR rprliqj irsqgvdinsl RRACOI275. 23E TYQDDLQ~YL.. . . . . . . . .mYmYEQgcQRvwLçm

   W 0 - « 23/75 FIG 11B B9Ü9B5"29 l48 RLTNSPSWTVNPICCRDI TVDNVSILN. . pàI)sENTDgID Il6I620373. 183 HLINSASWTVNPLLCEFVRÍDGI. . PVPSPNTDGLN a 52Q8I8&5 2'00 T\jnjNspMwQvHpvI=NvTVDgI KIÜIG . ... . HGPNTDGVN

   5278.72Q2 ZG(J wwsp1pvwÊí Kvíg. . . .HGPNTDGVN Ií6623151 I7E TLKRpgrwTvHwr5ERLTIRNNTDgKgp3=ID RAACQL275 Z6.G TFEN$PEATVKVNTSKDVV IDDVNIRN. . PWYGQNTDGID B9.Q9B529 iu pEscRNvRI5NcHIw@Dcm=gTEDT£ERvAc. .m l1Ü6203'73 2.2i =cRNvmAsR1w@Dc«LKs%DEA~vgR'pDm 52Q818L5 236 FEscKNvvIKgcFlFDNgDDc1Aj7KsgRNA£mRíN[psEN 5278?202 236 FEscwvv1mcHFDN@DcIÁvKs=AEgRRINlp= zl6623í5'l Zl6 IDs'ssmNRFIc[=cNDDÀIcLKagRDAD=wu== RAACOL275 304 vsÀDENvvLyÊ?DvTD.T"@DgmMssgND»g. .VFNEQD B9Q9'B·529 224 I¶TTNcmmHgAwFgsEMsgDIRNvT I.S. .NCVF'QDT IL66203?3 2 61 ITITNcmiKgHgAvTwms7vs. .NCVFQ.GT 52Q8iBjs 27G IVIEüE1%DGHGGVT1GSEl SGGVKNVIAEGNLMD8PNL 52787202 27.6' IVIEHNEMKDGIWGVTIGSEI SGG\/KNVIP.EGNLMDSPNL L]6623L51 256 v&íTDNvvRggAAgvTIgsETsgg=!E"jD. HLTVMBAU RaAcDl275 342 vvvmÁvÈiNgHsgm/gs=ggmmN7. .GDVYDGT 89098529 262 DRRRGRGGVVEDVRVDN .IVMEGV ZCPIFÍTNLYY ÍL6620373 239 Dwmi'KsQRgRggIvEgF\NsNjvvMQDvAsaFrLmY 52QBLBI5 3'16 DRAIAIKTNrIYFFlKNTVXSLKREVIY 52787202 3JE DRALMKFNa"vRggvLENIyETlKN LiKR£vI.mMEY lI6623l5l 235 PAGI LmAsTRggTIEDIâi RN!jj7TVGVATWSIZLNW RÃACDI2¶5 3CQ EsgLR=g\7gK=vEDIDMDuIvMRDIsgàÀITm= B%9B529 301 FCGPR. . . . ... . , jmjQYv'myçNpYwTAETmERRLH 1166'20373 33'8 hGTDK P(3D. . . . . . . LF1?VGEGTPRLRDFR 52OBLBL5 356 EEGD. . . . . . ... ... . . . . . . . . . . . .. .AgDncpvvR=D 527B72C2 3'56 EEGD AGDFKPVVRTVD LL6623L5L 334 Np&xsEAKLEEgvKDMpoywRvLTEwppgmIpH RAACQI215 42D UDNgÀiDIF5 SLQAPGPNSWPQFENMT 'é 89098529 LL662Q3Z3 520B!8i5 3'3·1 FAN!TKRNwlAsAgYrL"gLAEQYATDITFspEDI6

   3.61 F3NI=R.gsKm3QImLKEMpIENITETwRI. . .. .. 372 VKQLKSM.GGQYG IRVLAYDIISPVTGLKVADSE1DG. . . . 527&7202 372 vKQEK&M.ggQygIRvLAYDHswTgLKvAD$Ewg.. . . ll6623lSí 37¢ ISRVKST .GAQRÂEM/'SSXAESPLVDFQFKDIDIE. -. . . RAÈr0l275 44 6 ISNVSCEEAGQS €nMNgLpNApIsNIMLDDvNIT. .-..

   89098529 371 vp(AçpAmAgmjMANRgRcvgF=RLFsRn íí6620373 394 . . . . .. . . . . . . .«TgMKíTN~v¶mDvl1EÀÃKgD 52Q818Z5 407' . . . . , ... .. . ·. ·. .nD\/FMELKHvmpmNLmgKRYD 52787202 407 vDvpMELKK\/mpvFsNL¥INgKRYD 116623i5l 40& . . . . , . . . . . . . . mmAgsrmQgYiKFENMT1KTADgT RAÃca1275 4B0 . . . . . .. . . . . . . ÀiNKPPQ[QNTSNLVEN9vQIQs&vTM

   ~ ~ ·K ~

   E

   W 24/75 FIG 11C

   89098.529 411 AFHIEHSEDVEVI SCKSRNEKEGEELVREWAK

   1.]6'620373 42i }WWVDSVG!ELGRLK.. . . NR'ER'P 52Q8l815 433 SHK7\ '52787202 433 SHKÀ ll6623.15i 434 TUK RAÃCO1275 5D6 LGETPH 0

   W 0

   4 m " r 25/75 FIG 12A l5Gl4786 ] mrmr.EQTKmuQTKgs$Y=vuDNQQL 9096L98'5 1 WITXNEQSREFKLYNNK IsYLIKIiANEQL 148544Í39 :t m=DEQQRwHLKNKErsYLFsvEEgNl L + b '7679G3'4.E j wmmmRTFmmajTgYzIKvLKNDAv I14'8443Á5 l wrHENDKTKTF¥LTAKDTsYv1mKNgAv

   T RAACDI635' 1 MAlgK==ImsDm,FHLMTpRssYwmTgHDg4 L56L4786 3'2 =w=IEFíRDspTHLLRFQ=T5scjFEgNLEF$w

   909619.85 32 GQIPNRGNIID¥LVENTYRPVTSYVFDDDYSF5LG q L48544L39 3i sRL¥FgpÃIRNYElgERRYpm)RmgNLpgsMDRTYsKD 76796346 32 LHÀIYHVLKLSHVS . IDTDNZNFGNYLMLD íi4b44325' 32 LHÀYmçIIKTpNlYHLLKL!?ii :s . imot infgnqlkd RKAC.016Z5 4 I EHVYWGARbEDASDLVRLARACQR .LWRPEHMR.ÀIDEG L5gI47g.6 72 LI KQEFpsYgTTDYRE~QILQENgsmMFEYKNwIs 0 9D96L985 I4B544l39 72 NvKQEYpA¥gTTnQRRpALDImFNgsRITDFKwsHKIY 71 DujQws3NNT@YRvpATIIK:RLTDFRYKsmL 76?96346 7! FLmEmLYgNTDFRspA!tQI!=NgsTvsDLRyL II4B4A315 71 FLpQExpAYgNTDFRspAYQIQimgsTvsDLR=mY RXK,C1JI6F5 79 sLRLEYpsFgTgDÈiRDpAYEyLQps'gsIIA'sQLv¥EsHQIR L56!U86 liZ sgKKpLK=AT=sEÈmAT=nYDsL1DvELvLm 9Q96í985' 1 12 ÁT=ATwEDEsEATTIEnmYDEL1QvFLcLQx L48'544Z39 !1! KamFAswmlKEAETLEvILvDEmmQL= '76796346 1 1 1 KgKFKLE~ATYyENEDEADTLEIÈaYDKvÀNLKv=w ii48443t5 ljZ GLPADEALELYDK'VANLKVTLÍY KRAC.OÍ615 ! ! 9 PAFDFISLWPATSLR'7#SY ÍS6JA786 152 TvFAEMvIINHMSFvQLPDkDF 9Ü'96L98:5 1 52 TIFE]NsMImvKFsNNsDQKYQLKTALsLNLDLpD= I4B"S4¢Í39 1 51 TIYNERF'v1=NARLvNTsNQELRrEK IDLTKIIDY 7 679.G346 151 TAFRDYmI="vRFENMgKR,Dz KLLÈNDDÉÈ I14B4¢315 1 51 TAFRDYDvITR8vRFENFqgKED:KLLRALmNDFND3NE ~D-L62 5 J 59 TAYRDFDLVCRHARLENAI3TEPLVLÀSVDLD'.= 0&&&&&.

   'W LSQ4H.6 í.92 ~LsgswswRYvKERAINpgnlQIss=gAsssQm 0 9096L985 L4B544Z39 I 92 EwIQFsgAmRERHLHKTpLRpgIQAR¢sAR=smQw L91 DvIsvFgQYAIERQpERQELRRgITEFssmwsssHH~ 7679G3¢.6 J 9! DµmQ1=AAARERHv]mRpLTpgvQsI=RRmsH= I!ÀB443L5 i.9i DMLQI=mRERHvIR!mNpgAQsIE'sRR=sH mEç)L6z5 7 9.9 DFvQLs=íRmFzQRTpLsmRFtE1M=wgp í56I4786 2 32 FIALKR1?QrmE1igEvygEsLwsgmm'LwDQYDv .S 90%1985 232 FvILKRm=EQgEALgvsiNYEYsv.T l4&544í39 231 yDKNTDEF(?gNALgvLLvYs!iQwLEKDQTDQ A 76796346 231 nmLRKDAFEwHgwYgF'sLvYsgNFTAQvEvDQm.A ll4B4'43Z5 231 F'LALLRNDADEWFIGDVYGESLVYSQYEVDWNM .A RÃÁCÜ L6Z5 239 FFALAApHT:íEEf3gEmU\FALvYsgNFLgAcmEpMRQNv & ~

   U

   P

   N " Ü W

   P A 'r h r

   Ô 26/75 FIG 12B 156147B6 27! RvQb4gmpFDFQyu=AgE5FpTpE\nMvY=gLNnL,sQ 9096i985 271 RLQígÍDpFQFwcLKpNETFQíLAYT3EgwQLsQ L4B544i3g 270 RLITgrND¥DFEmLEFgKDFpTpEAIMgF"sQQgLNgMsQ 76796346 2"70 K'\7sMgINpETjE=LLKpgETFnTmmNYsD5=~N 1I4B4¢3Z5' 2.70 RvwgINpEDFswLLKpgEmTpEvmvYsD=NMsN RAACCllê:5 27'9 RAQIGIW(qRFSWRLEWRFVTPEAA LVYSDEGWGGMSR 15614786 311 LYHsIbYR5RLvR%RDRpRpILw£.mTYm=DsLv 9D36i985 31 1 TÊm=TRLARg¥wRD:aíRpn=NwEAFTEEKLL L4B544139' 31 0 IMjRAARgKYQYADRpIvTFmFDD~D 76?9©'46 31 0 Tn{KLm[RLlmsKFl<DKERpILINNwEAT=FTEEKLK IL4B443Z5 3LO YRNRIàqRsmcDRETpILINNwEATYFDFTl< mco16z5 3! 9 TE'mIRKRLcmTyRDRvRpvLINNwEATYÊHFDEEDLv 0 L56L4786 909619B5 35! ETmDDTTsLs« 351 mxKAm,gIELFvLDDERTKETagLgDwrvNRNR ià8'544í39 35U Qí IL2&ÀKpLgIEMEvLDDgwF'griRNÍMQssLgDwFvmDK 76796346 350 EDKRNsDNssLm:EK i1A8'44325 35Q ELG1ELFVLDDGWFGKRNSDN$SLGlNFVNI<EK RKAcQi6z5 359 E=QAmgAEMFvLDDRDDDu'rsLwwwpHpRK 15614'786 39Í LpNg:EgLAEK1EAAALÂEmwFEEsE= 9096L985 391 LKNGZ sgL$RMÈíDIlgMMmwFEpmmKDsDLYRKwD l48544í3.9 390 LTTmKRvADRTHEA~EgLwEEpm1svDsKImçEHpD 767 9634E 39Ü IpsgLEmAKg1NsLgLKEgL~pDNspDsDLYREHpN II4B443'15' 390 i p=DgLÀiKgrNsIgpawspDsDLYREHpD KAACO L6!5' 399 LpNgLRHLADRmeLgLRFgIwMEpDNsFKsEL '.b i56i47B6 431 mIKvEcR$QsÉlgRNQ]NIDFsRAmDArmqmELLRK 9Q9EZ9B5 431 YIIE::pmLRsHgRKQYvIDFsRKENvDNI=QLvKmjE L'4&544l39 43"0 YALAHmIRgMTL5RNQI0yIMsRKEm/DNrYNQMcLniDK 76?9'63¢6 43Q WCIKVPNRFBSE3RNQLVLDLSRKDVQDYI :KVVSD/I&S LL4B'44qz5 430 w=NRswEs~=Ls«wQDYr:mjsDbEs ~MI615 439 wcURpRsERRElQLMIDL=EDvRAnNNAvsRv.tEE k ~. - . .'...-. 0 lS6i478.6 9Q96is85 47 E AprsiLTEIgspAwpKERQQE LAHRYILGVYD 471 gEI1mmMNRNITEc)'sIAyppEQQgE TMHRYILGVYD l48544í39 41ci vLLDyINRNLTEvFssAADADEQgEI=wImYD 767g63'l6 470 xt$TEígsALLppERQ!RETAHRY1LgLYR lí48443X5 470 ANIS4TEIGSM,LPPERQN2AHRYILGLYR ~QL6Z5 479 çm'IjYÈ'ldTE\/gsAALppERQREvAKRmmYE 156i4786 511 L}cRRLv5EmNLEEscAsggcREDpQa=m=sDD A096I9BS 521 L¥ERLI ERYPK I=scAsgggmè=YYApQAmsDD 1A&544i.39 5iâ vTKYpNILEEgcsg=REDAgíLYYMpQ3wsDD 76796346 5i Q IL,EEITTRFPDSCAGGGGREDTMPQTWTSDN 11A8443L5 5] Ü I LE!mTRmNLEEscAg=mF~YYMpQ=TsDD RAACOL6L5 519 Z Lm'bT$RmmEENcA"ggg=L=FiYMmTwTsDN b 0 27/75 FIG 12C 15'&14786' 551 mAIERLK1QxgTsMvYpLss IgAmsAvpNHQvRRvTsL 9Q96I985 551 5DAIQYGTSi?GYPQHPNEQTPL 'L48544l3g 550 TnNERLK1QmTsLTYpzssMTAKvsv8pNQQTmT$F 76796346 550 TDAvÊRLK[QYgTsN'm,í~sHvsAvpmQvIiRITpL 114844315 55Q QYgTsIvYpLIHI9AwNKQwíRITpL RAACQ1G'15 559 =VSQHGTSLVYPPVGRVTPF r 156JA786 5 9Z ETRg|mFT=FgyEIDvmLTDEEKEN~IA-EiR 9Q96Z985 591 KIRgD'vAFFgÀFgyELDLDKLssTELAs IKKQI ELMKKJÇR 14&.544139 590 msyE=AD=ErjRQ!qvKEQIKFYmI* 78796346 59Q sgmwL"wsEwKDIR 114844315 590 KIRAFNbMsANF¶gEEIDLmssEíKKwEKYKEIR RAACDI.6Z5 599 ALRAgvAb4cgNEg!mLDpRRLsljAERREARQwEmKALR 0 I5€14786 90961985 631 ELrMFgwmÁspFvgDgN\/'TswI\NsEDQmLvgYYQ 631 5 I'mygTEYRLKspFEg. .NrvswMvvswmQATvgwK 148544139 630 üLtQYgAF"RLEspFDs . .NTVANEFVSPDKSEALL 76796:346 63Q KLIQFGDE=LLSPFEG. .NETINEEKTE

   114.844315 630 KLVQWDFYRLLSPFEG. .NETAALZVSED~ELL/YYFR raè£01615 '639 ímwmomw. . pEµÁmFAvEDt3sEALvA= Á5614786 671 TIÀRKvNAgfmLKL=QEcgLYQ IDGMiGTY=ELNlS 9'0"9-6í985 669 nlNwj!NcEYRRLcLpgLDADTLYNvQEELgsYímL=@

   146.544139 668 Q-NNmgmLDm=HDEMTDK7Y=. . .. . 7È79F34 6 6G8 'vüATENDTUcRi m&LNp[mYALQDTgEv¥=.. . . . íl48443j5 668 vLggANEpIKKmLKgíNpDENwLEDDgsws@. . . .. RAACDI 61 S 67 7 FY pDpLDppARmulEARYRgEsFR@L.. . . .

   í56l4786 711 gLQLpNEEsg&aLREDEQs0mYvEKwíEsm 90961985 7Q8 ELI'1N mNT=ÀsAgQNQETmFYsKLFrLERcgELsu 14:8$44l3g 7q3 GLFR. . . .. . DpTHTgDFTsEvHmgE 76796346 m EW)1AGXA r. . . . . . .pQLE=RsvmHFKKEA 1148443Z5 703 EIXZAGKVT . . . . . .. .pElLKgDmsí!mHFKEEs I KEG RAAca'l6z5 712 AWRHGLVÍ. . . . . . .pRQv=AvLíHLKQI SEGDRP 0

   FIG 13A 76'1357O.Ô: 11484¢102' l mYIvAINu.hIATsIvHIsmQRLsREQs IR. JJFDO 20SI7UO i =WWVÍjÍ I.blíkM . .IXLK'SKKI WMJSMR. . EFDD

   1.259737.36 1 =QLYILYbwLFglLw'LELw1K.mNELKU® llC?25340 [ MN,Í Iit Ltji ITL IA I'VAÈÚLZ'GZ VLK.'NRRSYEVQIED RÁ3C0I62'1 7¶795700

   Y IIAB44IQ2 37 TILNS- mQNHNIMKRTKLsYLLrpRMNKNYN 2Q5i7l6Q à4 ]==EMu1ÍAEmiQNHv1mmA$FLLIm4NmE 1259'73'736 4 L ASLTFDE'WWAKE IAmzwsgKKsMFswptpRMNDNYR Ib872539"0 37 vmgsInjLmiAEQLAKTQT1'DL«KLgI RRVRERIERNFH RAÀCQL62I L MAFD=LERRAHÀLALTQE)ISSTRGGGSDLWPI LRRKÀA 76795700 0 II¢B44I02 205I'7Í60. 77 YÍKmRNL;Nsn,KEEE}vmQlnmmDNFYIIEEQwE 7¢ YIwms%LLwmTxIs.Q=IIEm'iKE lZ59737'3'6 a.:í Yms"mEm[wQK·gt5=RNFYIIEEQvK5 lí8725340 77 RvLEwQKm LDISASFPVPPWEEQKSM R1WJ0L62L 4Ü R-VRNIATRLE.. . .KEpAkcsEpAHmÁDHAAy LELQAML ' 76795700 IHB44lf)2 L L7 mKsLsKs¥YsgbpgLKNgLFKgYpRI y&IArTELvLmDg 20517160 I14 IRK's=KYYAgLpvLKNgÁFRgYpRvYMAFELvmw 125973736 122 LRRDLTKEVYAKLWLDSGFILKI YSIALEL.LSKTDG 11B725340 íl6 LMKELS mKQALm$Em¥AgwRvEAIAADLvsKcng ~CO1621 '77 wm'@m. . . TGEPRVVTLAAATLDATBG 767957QQ 11qB4AlQ2 L57 KíDEmINnKAmTKAI;L$ssEIMAL$LM1RLAINEKT 205í7l60 is'4 Kí;iINwKAYQKKALLTT$ELwàLs= RIALIEKI 125973%6 160 RiDmLvNmcÂmsNNvLTgRELwAFpIMLKLvLI= l1C725340 í 55 NvNEKíTRDFTÃAYQKHT= IQSMLKAALLEKL RA,A0Q162I Ii4 ÍWEAETL1 =m¥QDvQ%TTHEcHQLANgLRv& Ltrl M·· 7679570Ô 114944ID2 L97 mcEKTvEm1QREKAEKILTLLIEKEMKYEEvKKL1RN 20517160 194 KKveEEIvEsRLQR£KÁEKMLsALMEkEMsYavKKLIK5 125973736 2 UO 'R¥ICEK1AKAQEQRRKVEE ImFDENIEN=QLrrAIDN 118725340 195 wAvcDRMnNRQDNYmEsIvNgIRHNNENcDDFm·l1D .. RAACO1621 I 5 4 KERSDETQHRYETCRAVGRLLDE TERG. ,WPVÀVRRAI [J 767957Qê IL¢844102 237 NwvAURFpLQFmíwsRLRKEgsNsvmQs1w1= 2-a517l6a 2 3 ç NTKvvDRFpLQmmvsRIKREgsNs5D 12'5973736 24lj E1,KgKYÊvNsAFIEYIAYKERkMgRAxTHvLRYIDEmE 118725340 2 3 4 . . .QLEEITPILIKK1&KDGAKTLWMZ ECLDS.ILVQ RZ\ACQ1621 192 RmgRgLgAvEvvHwHHL5EwE pDsQELREwLmluN

   FIG 13B 767g57QÜ LL4B44IQ2 777 YDTSZ NDvAEKAHQ'rmRQIsIwÀ1TsLKm/8sLmAQ 2Q5i7!í60 274 YDSSI NDLKEKAKYFQAKRQVSIOAIVSLKTWS LDWAE L25973736 '283 SGTTVDDITQKEHNEQTA.SKASIWCIMSLKTTSTVNWVD 118725340 zn KnsTDsLIsBDKFNeTLQvsTmms7RAL3gFDNTv RAACOI 62.1 232 ssm Em=mLEwEiAE':gvLImLvQsLF!ÃLERMswQp "— 76795700 LL4B44L02 317 IFEsLssvEQvI&QDpDgmKMDFEsRDYmíE IEKIAK 205!7!6Ó 3'14 IFETLs~vImDpDg!i:Yp~FEsKD IEKLÃR L2597373'6 320 IFEQIbsKyEQ]=EDpsgFYsLmbsRNmNR 118725340 311 LFmLsEvERIimDpcgíYpQbdDFDsRNYYRDís RAÁCOL62L 272. Ixsm s~=QEETgwLRInp.TmvbTQQvsw5E 0 767957'00 !l4B44l62 3.57 YYNTSET"ECAKEVTEQEGKLG. . . .. ,YINHV6 205L7L60 354 mrvsmvAKKÀk/EcmREvAoQgRNLg'- . . .. .YtNHvg 12$973736 365 Km/sEsE[mKKAvBIARNAvF,NgNL,TDK.- . .. . RLFHVG LLB725340 351 KYDT=íNIARLcLDLAREKyDENp$IT.. . . . .AETHNG RÀRCQI62L '3í2 A=LpEAMTAETAjm:AREAwEKAgsnAssULpmm

   7679570.0. LL4844 i02 391 FYLy=R$ :LENK1sNK«RT75mcíAKEs PFTbWGL 205í1I6c 388 FYLT=RS aÁEsKLNNKKRREEDwK RQKN PMNYFGL L25973736 395 yYLY~Im,EKEIgYEKsE7gQmFERTmpAcwF% IIB725340 3'8.5 YYLA&E5NKIG. . . . . . .KYKEEisEKNcEKwn= RAACEJ L62A 352 ·DpDLHRspRAvpQIALmpbRs'nL -vm 76795700 Ll48à4LO2 A 31 ILI ELLvEEnmxmlNFsmQgLLE! SGYILI~ APES .2Q5l7i60 428 IImALglàI mgYLm=sFwNL"p.sswLA. .ipls 125973736 A 35 1gEU7vLLLLmnK!LsLEmEKYgI ÂLS T téYIAT IIPAT LÁ8725340 418 IVLF'SVVIALL FT\/!NSFSRENGRLAFTVLL7G ILS IIPAS ~COL62Z 392 GVÀFLEÃAI uqÀvLggn'ggERAEm3ÈmaLAvLLALpvs

   H 767357UO' IL4'84410·2 469 EM5yQLMNma\nuFKpvvLFmELKEgrE!EDAKTmv1s 2Qsí7160. 4GE EIyIQMTNmLMi!KEKmapKíELK1jg=DDAKTmn$ 125973736 475 DImmmm3cKMIKpsLLpKLDn=rpEEYÁmNIp lt872534(j .A5'8 gn"vsvwscIsm/KF!ARLpKLEIADgIpEDmTMvI= ~01621 43.2 uvIsLvHEgImvRwpIiLRLDFs'EgIpwmTLmp 767957QO ll'484àiC)2 5'0 g sLLpDEKRmKELu;:NLEvmlANREKNLwgLImFKDAp 2Q5I7160 50G sIjMjEKKAKELvENLEvm{ANRERNLYFgFLgD~Ap U5973736 515 AL,LPDENRAREIAWLEVYYLANREKNLWS IÀ@J kLB'725340 q 98 TL.I PNVKRTVELIG5NTYFS LA@msD RAACOI62L 472 vímsEADvDEÀFDKíELHHLTmgAHLwa"jLsD

   FIG 13C 76795700 114844102 549 FEVMSEDEK1VKCALEQIS . . . . . . .KFF 205171@ 54G LEvMpEDEKIvKATíRE IEENGE. . . . . . . KVF 125973Y36 555 NKEmmKKIí etalsr'abgrkneggekdskdif !19725340 538 DETIhs1mEIvmAjmvQI)LNRKYcKDAK. . . . . . . PIF RAÀC016·2l 5lZ ApFILpEDEp'uARAmRL~RHKYg. . . . . . . . . .AARF K7.957'0Q iU84.4102 582 YYm~vEDTs 20517lGC 579 YY tNmQKsEvI=RgE@TT

   12.5973736 595 YYFmHRQFNEKQNKmgwERmgALLEFNEmg'sR=s 118725340 571 Y.YNEKQKKWL_WFN RAikCOiG21 542 Fmvinpadgvyvedtt D 7'6795700 i]Ag441c2 622 FYUvsmvRh"LN- IKYV1TNLPIDT @517160 619 FY' IVSWV&KLG. IKmTIDADTNLpzDTAmNgAmR 125973736 6 3 5 YsnqsHDvsQLi?KIKYvITwmT7LpLg&ARKLl 11872'53'40 6il YvENsM=3LnuKYvI=ADTQLp",DTARQ RAAC31 621 5 82 ERNKDguLÁvLF'TIRYvmADLDTELpIgTvQRIL 7G7957UC 114844102 661 pIimNIDRDYgvvvEgmjQpRígí'DIEsmnEsn 20517l£0 G5B pImKEíDRDEgnNEg=LQpRIgvDIEsANA=sKI 1ZS973736 675 pLHRpvIDFQKgIvTEgYgLIQmgFDIEsvNKsLEsRI 118725340 65í PWKA¥FDKEKGVVTKWGIMQPRVDVNIESKRV RAàc01621 6Z2 pYNRpRLNARgTImQgjm'7QpAvAv5mTgÀsRFm .'.'VTT 76195700 l148441(j2 701 u@w1DpYT£AvsDvYQD«yT 2051716'0 698 Ycmsg1mr=rsDImDLEUEgIYTgKgImvD 725973736 71 5 Fô=gIDpYÀsA!sD\nQDgTFT=íYDLEvFQK ZI9723340 691 ÊAgQggmmTm/sDvYQD:KwwIFT=IYDyDTnT RAACOI621 662 wEm?gvDpYAEAísNpYQD"«FgRgLE"vgKgLI ÉNDAFHT 0 76795700 jl4844ici2 7dl L|LRD=pmgmsHDLLEgsFvR'?gLvsDIELrDgYpm 2'Q5E7E6a 738 LLKD=pDNsnksmLIEgsFURTgLrDIEL=F 1259?3736 755 ImKDATp=yIsHDIiIEgsYvRAgL=IEFIDwpsKL

   11872.534â 731 AujK:IpENsvIsHDIjmsFLmALmDIEL=YpAKY RKÀCO1.6.21 702 vLcDRT=sHDIIEggF'^mmDvEvvEsQpATL 767957'Q0 L1«44]a2 7 8 1 NsY!mLmNRgDwQLLpYLKE:KIKbjRKgEmaTELsLI 2n517l6'g 778 NsmwpYwwoLlL7 1Z»73736 7 95 NSYGDWQLLPWLRGKTKHRKGNV1 KNPLSLI í18725.34lj 771 NWPWT [jG. . . . . . . . . .KNPLSML RAÀcoj62i 7 4 2 RAmwQL="wL.qRveRDRRgEmpvDLc=

   FIG 13D 7'679570f íI4&4t4LO2 821 T'svALMuu,EwEs. LLPGSSF=GV 2Q5Z7I6Q &'3 & TKwKILIsIsLmangEs~ALpAsALEwmv 125973736 8 35 sRmIvÀps=LL"LALgFs. rLpgssLnagÀ 118725340 801 sRmsL.vQpIRww.L·msYxL RAACO !62 2 7 82 TRmIwF=·IsLmpALvmMgwMsguwpAnywv 7679'57(J.Q 114B44l02 &60 AILTvFmLRALvDTmcgQFRE!Yv{EmUawI=3EAA 2ASl7l60 8'57 AALpALFDL7FRgQLRm&mIRAvrTgvmL 125973736 )874 $LLT7 YFP'4ITGTIDYÍASKPL=IT=YKPAICGLKAS IJA7253'40 &40 ALI sLcspvLNyFvQLLmgNym X"!II?G2KAI ~QL621 822 LLI'TvFLpnRQLdEsI= EWDNRSAATÃ 0 7iG?|9570"G t24'844102 2Ü517'L6Q 900 &9"7 E"yQsLLNmFbFmAAívRTL=¥ i. FYQA=pmjpYNADA7 ZRTI í £2W73'736 9lG ansL=LF JIR72534.0 C8Q LLgtgLLL=n=LMvNAnK5í ?r\7yz mco.í 621 8'5i LgQsLmw=mwNEADAsLRALm£Lvs 7g7957üo JI4'B441C2 940 F&sveglal~~7kpp

   2.0:5I7i6C @37 taèd L5WKR&VVLLKWTàY7KPG 125973736 954 AQãü¶AFRTg li&'72-53'4q 92.0 tãadz&ngvg5wrrmnecpvygwzllls ÍLYRQS r&a¢01621 & 91 pssrlAmDgsF'HpLLYEpAwAvmc5w=g=w

   VV '?Q9570'0 il4844lC2 980 D. LIgAr^EnMAIspy:AFYI$QpIIsKEKTvseEM. 20517160 977 7L LI mw!AFsp¥vAFyI&QpYL1mKF ILDEDI. 12597373'6 994 EsmvsvLmwvsspFmnusKETvYKTETLsDEEN. IIB.?253'à'õ 96'0. F. vms WVLSPW:AYYTSVPTEFNR'JVLDSAGV. mccü62i 93! L. . . ssTvwLpAHAvARFLàKpAgEARvAApDFÀL3 0 767957QQ l14044l02 I0L8 I57'EDw'i'E:sQNYLpmNTFDppNg~

   W 2D5L7L6Q JQJ5 EK\mLn;RmK=DTvTEAQNYLppDNmEDpeNgm 125973736 '1'03'3 W=y:"EEEvNRRNNYLÀpDwQEDpE'NgIAY iL872%5'3'4o: 998 EEvRLI^RRTwcm)EFAgEEENYLpADNYQEEpYK RAACQlÈ2l 96'8 AElLRE\mm4g4wRE"muvgEEDIuiLpFDmQEEpvEIaAH '7679570.0. LL4844 iaz LO 58 RTspTN1mmnm/vgARDImITTTEMvERrKKTLTmg 205l7l6.0 I 055 RTspmI#ywsT\m=ImITT-sEMvDRÍENTíNTIK 125973736 L073 RTspTN1mmLAAL¶aRDLgYrgTl,ELçm:I5RmsTvE llB725340 L039 wspmIgMANsNIAARDlqgYINTLDFENTIsTw ~CD1621 IOUB RTspTNIm=c\LAAAADLE=pKEgAINu=TLATLT

   FIG 13E 7'67'957DiO ll4S44lü2 1098 yNwYNTRTLEFIRpYYvs=smvm 205L7L60 lã95 =~~NWYDTRTLF(YVS=SGNLV=IT 1·2597'3736 1113 GHLZNWYDTRTLET=RYISTVDS=ZT Lí8'72-53q0 1078 ~YNwYNTvTLEvLRpKFIsTvDsmI RAACDÍ 621 !048 SLDRWHGHLSNWYDTRTLR pLApRYvsTvDs=vcmLA 76795'700 Á 148.44102. 1 í38 vwA:=LlqKpLIDIE^F:gLµpTI~N. . . . . . . . .7 2ósL7í60 1 1 35 w¢EAíiEEF.L[jKpvID:LEELRgLKD¶vmjç. . . . . . . . .1 L2E973736 i i 53 [íKmLkAEYLNRpLIsDRAn DgIRDTàsLIADENENFYKDz 119?25MQ 111.8 LHEGLSELk5PíYD'FSTí EGLEDLLE TCN. . . . . . . . . . mco.I6.23 1(JB"8 tgQAA5DA[zIApmR. . . - - ... .. . . . . . . . . .. AN6 mo· ~···· ·· 0 767957WJ ilG84d1'à2 1! 6Á wnEwmumpsDwEvn5KIsEKLs5TEnEv ·205171ÜQ J !'66 ERIDKS hEEEn&KgDI DFLAN«KI bDIjLEWEE. . . . . . 1259?37"36 J 193 SCLKECTVISEGRSYVDI PQLTKLSEDGNKMKD3KD LI&72'S34Q 114'8 .. . . . .ásEzEgsKAYF]nELLKKLm5 &AA'CO162L 1108 k « « m ¶ * ¶ q K 0 r r e ? '~ a" mr.

   76?g's7D:ô i 148441q2 1209 igni=kn ugkLmEb!KmAnEEDEmKEQE. . . . . .

   2.Q5t?í60 I 2QQ . . .EKLRDIVEJ REFMPWLEEEIJÃEG. . . . . . . . . L25-973'736 1233 VWKAKYDSM ZEMLKI ELxmwwaMTnELTEAFEKsEAD 1JM25340 1A69 . . . . . .DN IEESFRQLLPAVLKLVDELDKSK. . . . . . . . . RZl&CO1621 1108 , . ,. . . . .,. - 76K57% ll484!41:0Z !243 . - . I FKRm\lFEEE{sspKELEKvYKNYLLErEEv. . . FE '2D517lI6Q 1228 ,. . . . . .GYOEFNECNWEELKKVYEKYLEEFFRA. . . KK 12597'3736 í m IG ISDYSLKAMPVVYRET LKQTEKLRKKLK 11872'5340 Li94 RTG¥WFKKLDSNINT5NSEYTKYRGÍLF RAÁ'CO1G21 JJ.OÁ . . ... ,.. 4 0 * 0 b 7679S7OÚ lIqa4qín2 í W&RK. . . . .. ... . .. . . . .·. . . .NLQSLIMI j27? kakai&ksq@kvki RNL£n£:£N ikstien 20si¶l6'0 1259 eglbetktkqiqr. . .W . .AvuuEELKERímm=D 12-5973736 13L 3 DGQQKN rE@m&EALEgATE3ADKLYKR~INRIcR LIB.7253'4Q 1222 àpL&Nv1?QELKRIQ. . . .. . QLQTKVQQ RAACQ1621 11.08 Ó. . ,- . . .. mg 767957% 14 CNLR .., ,K I148S4LC2 L31 7 L,vEK!!]EmiLYDEKRQLFsrgYNvEEEmTKs=LI^sÊ 20517160 im uEKTEm[LYDEKH¢lLFsIgmmEE:KL=wYDtLAsE I2S9'?373.6 1353 IÀDE?EEvHLYDKKKQIiFsIgYNsLTN8YYDLLAsE LLW25340 ] 24.4 Li MMEEKYLFDpARN=1gFwEDm5KsYYDL-msE RAÀ'C0J62Í J11F FÀRET DmuxRpDLRLF$Lgn!ADRNELEN[vYDuAs£

   FIG 1W 767957DQ 1Q QGKQVLLLLQKEKL]XK1lWFKLGRMLÀj ENRYKGLVSWSG ll.4á44lU2 1357 ARQAsFIAíAKREIDKKu ENKZKGLVSWSG 2'05"!7!60 1333 ARQ&FIVDITRANRSKGLVWSG l2597373G 1 393 ARQs:srrAIÃRgEvT)QQHmamTLTQx[]RYKgMvswsg ZZB.725340 J28E ARQTsLvEAgRQÊMmmKLvRvNgMKgLAswTg Ri%AcDÀ62L ll 5 6 ARQAsF1AIA5gQvpµsHwF.4LsRTMTRA=QpLIíswsg

   767.9.g70Ü 59 QNT=ETYAFAvRvQKNYAjoLgI LL4B44102. 13G7 YQETYAEÀVRVQKNYAKELG7 20'5l7l6U 137 3 mEYfMpw,n«NYENTLLDET¥sFÀµ.KvQKEYgvKLgí LZ5S7 373 6 1433 HKNTLIDETY5EYVRS='GKQRNL i1B72534 Ü 1 32 áç RLLiKsYsNTLIDKTYEF\NK'rQIKYgLANKà ~CO1621 1196 Y=LpHTLwy'ETYRsvvwRQIAYARERm 767957Q0 99 pmIsEsgFYAFDINLNYQYKAFgvp5LgLsHDKw U4B 44 102 1€37 ~ISESINLNYQYKAFGVPSGL,SliDKVV 2D'53 7160 1 €à13 PWGISESGFYAE'DM3LNYQYKAFGVPILGLKRGL5HD= í2'5g73736 147 3 sEs=sFD=DYQwIgIiKRgLvEDMvv l lS72 534 Q 1 3 64 .FmIsEscYyAFDIgINYQYRAFgvpHLgLmgLANDFvA RAAC61 621 1 236 PFGISESGEYAFDRDLNYQYRAFGVPGLGLDR@EQ11LW 76795"70Q 139 ApYgsLLAum:wEgvLQNIRm¢KEgvEmYgE"¥EAIDY· LL4B4il102 íe 77 ApYW=ÍgvDwgvLQNIRFLKKEmgKYY 2A5l7j6õ 1453 APYGS ILAís\mpEgvMKNIEimcKEgAEmYgLYEAIDY 125 97 3736 1513 gpYmavLpLvpRDAM[MLKRLrA=YgHYgMYEAmr 1ÁB'72534Q 1404 AF'Lm7MALDLÃpQEcLENmui"KEmAFgNFgLYEA"ÜDF RAACDI62J 1 2 7 6 mAmIALpFApEQvA=ÀIA"sQLmmLgpYgYmvDF 767957DA 179 TpER=ms=AwALtK IL4844LQ2 1517 FgKKsAIYKsnwn{WwALDNF 2U5!7160 jq 93 TpERvpEgKKNAIyKsnmu{=IEvAIwFIHENImK 12'5973'7 36 1553 IpLgEKKgIyKsyMAHH~ nÀLNNYENpN1mK LL872534Q u u TNsRz·sKDQsYAwmmvHK=5MLALvNEFKNN~ RAACOI 621 131 E TÀ5RLPI?GDRYKVVQSFMAHHF"ALKNYWW m 76795700 2 i9 PS ImTQIMum!TREEREIQKvR' Ií48.4'4 L02 1557 RFHKDmKAAQILIQgF0qFMyLDITREEREEARKEQKw e ZOSI?I6IJ 1 533 REHRDpRvmTQíLLQEKApI YLDWFWIQKIR L2597373 6 1593 REAADwvMm.LLMEKvpsNívFTKENKEKrLpmw íl&725340 JA84 RFHgNpLIKAv[]sLLQEKFpTKEYREQpy)g RkàCO i621 L356 mmipLYRAAEYMLxERMpKRpALLLKF. . . . . .VHÀÀH 76795700 259 KEDgDwRngEsKTwLpEvH=sgRYs Il'4&à4102 ] 5.97 KED@MILGE5KEVHILSSGRYYS 205I7I6Q 15?3 KEDIDWRVLGESRSWIPIWKWS$TEKS L2S973736 1633 YDEKDELREcgMpDwLpKAHIIsN~svMyTDRmgYs um 5340 1524 vNHKDTvrREYNKLspmnHLIsNgNY!=m)KgsgYA ~COI 621 139(J ApNmRpvyARRR5gDDvAwNÃvsmsLTsFADARoggz

   FIG 13G ?g79570Q 299 mRgInàLAQD.FgTErwQNIlsÁTYA IL4.844102 1637 KNSRGIFLLÀQD .FgTErFvçNINsNTvwsvTYA 20'51 7160 1613' kni KgirrUQDjmErF~mTwwsATm 12'5373736 1673 R. mujjvnDNYgNFFYIRD'vQNDEvwTsTFA !.L872534Q í! 564 .K. YUSMAINDYMQB .swnYNsNEFwsTTYN RÀACOÁ 621 1430 R. wRgIAvTRmpDRHLpYRgpnm/RDyDRggv":"RTTLH "76?9570'0 338 PNYRVVESADKAEYEKRVWÍDTKLEI'NSPEDD Ll4844 102 J 67 6 pFY~NYRvvEsAD~mcRvgNIDT=I·vIspEDD 2Q517Á6Q' 1 652 pFYQKgQmmEsADmEmcRyggIDsY LEITYS L2597373 6 !7 !2 pgRKKI?DEYKvEFTsgmm=DgDIDTL=IvvcAgEN Ll872534c| 1 602 m=pEAYKvN:míKAEFvmmIETN=n ÍSSEDN RkACÓí62! ! 4 69 GG, . .GGDK33WKRVVDGESEWSVLVKEDRD 0 76795"700 I ÁAèà4'lU2 37 8 VEIRRMWNRSKHPRILELTSFGEI SLI DLPTDVAHEAE í71 G VE~TLRNHSKHPRILEVTSFGEI sLíDLpmyAHpAF 205FM60 ! 692 vE1RRLlTLKNHsKypQILEImsEIsLmlM!mAHEAiÊ 125973736 } "752 AEIRS mLèiNHgQEsc:\/MEzTsyTEpQL"AAgAD TÀAPAF l1872534Q !.642 TwRRvsI%sssm=LTs=v=QHEADsARpAF RAACDI 621 150G vEIR=vLQN'mDvTY~Lp3»F

   7679.5"7QQ 4 Íà mFvKTEmcEEmILvcRKpREQgKNKLmvKKvRvLs LWB4UA2 !%6 KEEDArLvcRKpRI3QmucLmvRKvÀvLs 2q5l7l6o i: 732 nklevkteel&dedkwvcdpeksrlnvls 125973736 !7 92 GNLFZ RTEET={NcLIAgRRE!R$=KpvwIm .T\N1E ll'é'725340 1682 @"àDDTKQTSWGYH. IASTN mcoi62l 2 54 6 QRLwBTgwD~QvLwAQRRpE5DDQpDvymHLv&D.

   76795700 45â gErvgDTQ:ETDRAKF!IgRgRsLKNpIALEÁDQpImTEg 3 i484álG2 1796 ai vgDTQTETDRAKF1m=IiKNpíALEADQpLmTEg 2"0'517160 j772. gmm)TQmDRL=gRgRsvRxpLAÍEpDQpLsNTEg

   12597.3736 Í 832 gEgvgsLQYETDRmF'lsRgRNvsEpvALEpmpLmsvg L L87253q0 ! 721 gKAmwwETDRsIiEImNRNLAYpRAMEi?DRpLsNsvg HACDL 62'1 1 585 EÊAPAPVEWDSARARFVSLAAPRGLWRRLRGE . . . . 0 .— V·u 0 a 7B7957QC LI4B.44LG2 20SI7L6Q' 4 9B APTVVAKVVYISAITETKEKMK IA 3 836 AVLDPI v$LRKFN!KvMpgwAKmIsAITETKEEAnçI^ Z 8i2 AvLDprvsLRKRIRlmgvAKIRYIsAíTETKEavKív L25973.736 1&71 ÀvLDpYMst'RQíKsvKisÊvTAvANsREDvvEMA ll9"72$340 L7 61 svTDpvFsLRIRyTvE=5TIvNFeMgÃcDNRKTAvEML WlàCU 1621 1 621 gvixDpáAILRTÀvTLApm¢RALYvITALgEARDEvvETA I0 767'95700 53'8 AKYKEENVVERDFLWWLKPRELG !I4B44l0.2 L876 EN4wERDF~LDYImKpRELgLLQm ZQ5l7i6Q 1852 sKYKEENAIERAmdswTRsRyELEYINLKpRELgLFQm l2S9"73'736 L9í L =FKSF'QVIKEELCMµNTKSRVEARYLNLDTEEI BLYQDM lW7.Z534D L80Z msDpAAADRvImâwm n1EE:gnNvlíADEEKAYIKL oL62í I66L FEMRQPSAR5RAAQLAQI DLRQLÊ1Ls·pDDvEDãMEL

   FIG 13H 7679570(J 57B IíAHlLFvspQRRYR£ELaLKNvKgQsYgIsgDLpIv 114844102 1916 LAHjm'vsK!RRyREKNvKgQsgLmYgIsgDLpIv 2051716D LB92 LPYLZ nspQRKmEEM1LKN~sgLwlgIsgDLpIv !25873736 19'51 ísHIWlsPLQRQKQKwvMNNKK%pgLWpYg1sgD[pw 118725340 IB4L LPRL=. I DRREQÀEYILSNSLGQSDLWPFGISGDLPW RAAGQl62l I70I LsRasRIw"sF&Rr<3.p.IWw.=s@m[ígIs@Rpw 76"795700 6LB 1NEIEKMEEmNKwmçAyEYwK=7NIDLvIINKDKs 114B44102 I 956 LvEíEmEEIEMvKwELKAyEYwKb/!Kg[NIDLvILNKDKs 205L7I6Ô l 932 I,LEV&EEIEL NIDLVTYNKDKS 1259737 36 1 991 LvMLDKTDDIDnREmçÃE!EYwRuçKIAvDLnLNIüEEN i1b7 2534 0 1.880 6vtvksrdsfeei mujKuíDncKImvvmLv1LLmEE RAACO lG21 17'41 ÀvRIAsAÃEvFFvAK1mRLm¥LAHMgFAsDLvvt Uet I'S 7679571)0. 658 gYIQpLEiDKIKELINTTFsmrFgKYggvY=QNm¢EE 0 ti¢844102 205l7l60. 1996 gmpLiiDbFNTTFsYDíFgKY=y1Ám L9"72 gYLQpLNDmc!sv/NmFAYDvFgKyggn LLQENNLKED L2597 37 36 2031 sYTNpvNsLIMDIxAEsFnumFmggvs=RK5NMppE íl8'72 534O 'I92lj SYEQPIFEMIRDMAVSGRSYELLDKRGGI S:WSR RAÁCQ162L l7B1l mDEmRIAÀT. . . .LAvyKADQLss·A 76?95700 699' DVYLLNTVVAM. . . . . . . . .ESIYDQIÉIKETKN ll4844l0.2 2Q3E D\/YL&N!NVALXEEGGN. . . . . . . . .ESIYDQIMIKETKN 20517160 ·2.0.12 mLLNAvÃALkKFDgKN. . . . .. . . .ESIYDQI l25g'73736 207'1 WDLIRIILKGDR »LKDwKyAR$IÀ !I87h2 5340 19 60 QKNLLmsAKIIbDADEgípsLMEzzEgIEgsmvEíHTp ~C0162I L8 L7 ERALMESVÁVÃTLRAGG. . . . . . . . .PSVGAQLSGGRVRR "·W '76795%0 729 APKLK. . . . .Nm(KyÍQN£EEIKLEELpLDyYNgsY IIA844 102 20 67 kPFLK. . .. .Enwm/'QNFEEIKLEELpLnYYNgFggFsY 20517i60 2043 RLRR.. .. .seREKv$8cRDDgLEEI=YYNgEggFTp I 2 5 973736 2'1 OQ . . . . .QFEKKPASYDSKLAKDLEWFYNGLGGFGK FI872534Q 2 0 QJ LEp3EEss&psLvsEsEYsgKDvv"ÀAELLFFNg=m ~01621 1B4 g EESAR. .LRJS DF:LEPEPKRAPRDAGQVErmEFANGYGAFZD m 7679570G 7 6¢ IIKWE.PAPW1NWSNPSFGFQVSEF 0 m II¢B44Z02 zDA7i60 2 102 Yl IKwE.gKsTsFgFQv5mgAgYT 207g rgTKwE.gK$spAFwnu=NpNFgEnvsEvgÃm U5973736 2133 wIFLENgQNTpLpwINvIsNQr~ívTE$gs= íis725340 2.040 DgREr\7IQL3TpwERmF:.cTEsgggY1 RAACIJ162I 1 8 8 E. DGRAY!MW=AKRPPRFW3NVLÀNPNFGALVTELG=T m" " Alb- 75795700 8 03 sREYmbTpwyNDpvLDpHgEvIYLTDEETgDRwsIT íí4B44l0Z ZÁA í sRE¥KLEN'IDpHgEvIyLmEETgDRwsTT

   2051716.0 2í l7 YKLTNLNDWLDPHGEVIYLIDEITGE=IT

   12597.3736 2177 wFKNsmuçLTFwsNDpvsDTpgEII,m=FLAgDvwsvT llÈ725340 2 0 8 D mmssQmTsw=pz=7'pmlIYI"NTm«mçT RAA¢0162I 1926 wwRNsREmTmmRAFDppgEAvYImLDRgi IASAT

   FIG 13I 76¶957QC 843 PLPAGKAKvlWIKHGFGYTS=lCCGLsQl!LKMFVAXED 1L48¢¢102 21Bi pI&ÀgKAKvHYIKHgEgYTsEmíccgLsQImQmr ?"Q5i716â 2L5"/ PHPÃGNSG! YYIRHgFgYsTEE$'AscELK=TMm*ED A5973736 221'7 pLpvREKEpYMm{gFgm/FsEIAsHgí'EQ~QFvpvDD ll872534Q 2l2j pLpvREAEpYmíHgEgYTcFgnKsNgINQ=TQEAAm RAAE31621 l96G pDERTYDvm!qpgvTTmsDvEgvRvTLHsÀE

   H 7679570G 8 8 3 S IKINLvTgNEtQRKLTv3YYIRpvLgvTDEíT !1Q8441çi2 222L S IKnlummLgNENRRLT1/sYY1RpvwvTDEITspYL

   2051716.0 2 I 97 SVKINL ÜCLRTTSKNSRK rQXvYYIrATsQYI 12597373 6 22 57 svKí".ILKLmQsQENRgL$LTYYIRwIgvsDQnAMHI

   1187253.4Q 2 l 60 AvKgsíiLKLENI=s£cqLLETAYYFw=FEEFQTsKI RÃACQ1621 2006 .vmRNQsgERvApYAEmgvDpFsNTnv 0 7,67357D0 1 i484 41G2 923 fTKYDEKX=LMIKNvYNEDFA»s. .EKINSFT 22 61 STKYDEKIIFTNSAS. .EKINSFT 2U517169 22 37 ASEEDK|EEK: LYIRNVYNEDFVNRÍAFLATS. .EGINSYE 125W 37 36 22 97 NTKÁDN. .GMI nmjYNDEFpgRvAFE DSS. . LKJINSLT 11872534Q 2200 U=FDETgNAiI IIDNVYGLRAFLÁCS. .ESGYSYT MAc0i62i 2046 vvRKMgEpmIAAENRYQEAFRgALgnAvggAgRTFgwL 7'6795700 g 61 gDRAEF1gvKsLTLmALE'tE?LsNsmI SLDPGAAIQF 1JA8441Q2 2299 CDR5EF1GVÀSSLT5EXEKLSN5TGISWQF 205i7l6.0 227 5 5£mgFDLs5pQALsYE¶wNsEgLÂvDpcsAIEF 125973736 2 333 CDRKEFFWG. ÍJIANPEG IKR=LSGTTGAG.FDPCAÃI5V lle72534g 22 38 gsrlkffgpmi snpagmr.eeldsitgagidacaalka RWCâl 621 208 6 GDKTRF'LGEG. SYARPRALLEDAWR'GGDGPFP'TPCA ¶ 76795700 l00l HvE\7KAKmuTIj=HgKNEEwKRLIcQN 114844102 2 3 39 fnevk&qfaig=eevarm swmmcm 2"05171.60 23i5 5vEmgmmsmmAKEKmKDLvLKYLKv!EN= 125973736 2372 5VNLKPDIÍ EIjmgRDEEEARQLsÃKY !1SJ 25340 2.ZJ7 sÍRLRpgETmILFIvgQÊKsEKN?Ew$ÀETNíEN.~ RMCO1621 2125 DLjnjgpElEEAEv\/mÁm&pDEHEÀARLAR. =PR m 0 767957Q(J 1l4s441e2 lõ4i ELlQRvQEm2ELLRRtQtKTpnKsmLL\MgwLpYQT'= 237 9 ÊLQRvKEm«!mmuQvKTpDEçsMDLLvN~!'YQTlAc é 20.517160 23 55 ELEKvKgÊwgEILgKLT\1mpDKsLDLL\nma!?YQTIAc !2.5973736 24 i2 @gE=ç=L=ALQFETpNrBILw~LYQvvsc il 87 25340 2 3i6 EMEmKDswNRRImíQvKTpDDsTNLE€LNgwLQYQvLsc RAÀC31621 2U4 Ru=rRE'wDDIjgRvQIRTpDRRLEDILm~vYQA= 76795700 lÔ8l RLms&FYQsggAYgERDQLQD~MvYLEpEFTmQIv 714844 1(12 24 19 RLmRsAFYQsggAYg~LQDAMNMT[LEFEFTKNQIv 2,Q5i7I60 2395 RLvmRsAFYQsggÂjtgERDQLQDAmNLueEFTKRQI! 12-597373 G 24 52 RIMTRSGFYQSGGAYGERDQLQDS TSLTHIWPEATRNQIL j]8725340 23'íg RImRT=ÀggAFg~QLQD~vvYsLwLIL ~DI62Í 2204 RL~mFYQÀggAFgFRDqLQDALALuMpDILRDQn

   FIG 13J 76795700 1121 NAcQHQFy=vQHwwKFwId«gIRTKEÀDDwmpYvTA 11'484àl02 2459 NACQHQFVEGDWHWWHPVLNKGIRTKE7lDDLLWLP.WTÀ

   205.171 60 2435 NAcEHQEIEgDvQHwwHp\1LNKgIRTKFsDDLLmpYwA 125W373É 2â92 LasRHQFIEgDvQEK*gTRTKFsDDLLwM.p¥ATI 11,'872534(1 2396 LF1CRHQFVE=RHWWHNQKMÍ.lGIRTRl'SDDILWLPWTC RAACOJ 62 L 2244 RÁARHQvQHwmEELgKgIRTRFsDDLLmpYA'qs "k0k0q "767957QQ I I 6l DYIEK=WPILD7E'JNYLEDLEEEERYSTPRISET I1Á84U02 2 4 gg DYIEKT@wpILDIEvNnmLp=EEEERYsTpRLsET '2õ5l7l6ü 2 4 7 5 mEKTEDwµ.ILEEI"AgYLED,L PLKEEEEERYSVPSISSH 125 9'73736 2 532 EuK"T@YDuYwTpp=wDEAYRvpR1sHT Li872<340 2 e 36 D=AT@FEILNLEERYTTS FTLNENEÈIERYEVPSDSGL Raacdj 621 2 2 8 4 RYLEATWAALLDERÀPYLVSAFLGDEDSVWSQE 0 76R57OQ u ¢'è44102 1201 DYSLKFEXGLPWG4 2539 mTvYEHcDYsLKEg£HgLpLmA 2U317160 2515 KgTv¥EHcvKAIDYÁLKFgEKgLpLrgTgDwND%Kml L2$97373 6 2572 qmiYDHçIRAINR8gFpLrgsgD~gN 11872'5340 2 4 7 E KgTvnjHcIRAIDKgLKFg21{gmMggvgv mc'oi K21À 2324 EgTLÀEwARAvERALHmDH~LrgIgLsmm 7B7957QQ 12 41 KgKgErmQKFsprcQ7'KKDEEHAKKYQE= 114844102 257 9 KgKgEsvwLm=7LQKF$pIcQmcDEEHAKKYQEIA 2DSl7i60 2555 RwLKKEÀsIsEKMgDIERKEKYíKâ L2S97373 6 2 €12 ,YS.IWNÈAPLCWWRYLDM Ll9725340 251 6 QGKGES =CVLLRMI PI@VERAENYKTKÃ RÀACJI Õ2J 2364 KgRgEsvwI.AwELjummmEID[LpEEAQHRAR.wLAm 7679570A 1281 NKIA:KA1EENAwDgswYRRAYmDgTpwsvDNsEs LL4'&4ÀIQ2 2 619 NKLtKAIEENAwDgswYRRAYEDDgTpLgsvm5EcKIDs 2P.517I60 2595 ER1,LKsIEENANqDgswYKRAYFtmgTpws:NNLEcK1Ds !2-59737 36 2 652 DRIVENIEKNAWDGKWYRRA:YEDNWPLGS:QN5ECQIDS ii8725340 2556 DAuEAIEgswYRRAmjDgTpLgsMENDEcKrDs RM'CDI621 2 403 ERyLíLÀANE3~gQwYRRAI7DDgL=sµAspRcRvDA 0 767957DC I L4'84 4 IQ2 1 32 1 IsQswsv1smgKE\/RvKEAMKAvvNYLvNEEEg Z 659 IsQsw5vIsKAgKEmvKEAiK<Av\mLvNEEEg! Zosj7l6c 2 635 ISQTSKGGRIERAKEAMKAVVNYLVNEEEGI i359 7373 6 2 692 LA~vIsE|3gDKERÍAEmsALENYLvKRDEgLI=T IIB72S340 2 596 LsQrrgÀAKNsRvEEAMsAvEKYINDRRNgLT T mcm 621 2%4 3 IA~V1SGr3AÈ'PDRAV~SFmELVFRRLGVAF= 76'7957ÒO 1361 PGDHAAAWVT

   H I I4B ¢41 02 2 699 ppEDNmI:NpgY1KgYvpgvRENggQYTKAAAwvILAFAE + 2Q517I60 267 5 ppmswwpgYíKgyvpgvRENggQYTKAAAwILAFTE t2 5 973736 2732 ppEDEmLEpgYIKsYvpgvRENggQYTHAAAawvMAFRK L L&72 5 340 2 6.3 6 ppm)sE1NpgYIKgYLpgvRENggQYTHAATwvvYNcK RKACO l 62 :i 2 4'8 3 PPSPGYIQGYI'PG2 RENGGQYTHGVIWSVIAWTR

   FIG 13K 7G7957ÔQ 14oi LgI=mvç}LYNMINpINHTRTpIEcMKYKvEmnaADv íl4844l02. 2739 =®~LY/NHTRTpm-MKYKvE 2Q5L7Í6Q z7í5 I,gDgDTYNM]m1NHmRTpIEcMKYKvEpwMAADv I25973'736 2772 6mgEKAMELnmjNprNHsRT|31EYsRYKvEpYvMAmv Li"872.534'Q 267G wDgLrsMINpvNHARTlssEswYKvEpv 'RAKcoi62j 2523 LEAYEL?sMwpIFlHar]TpREw,RYgNEpADv U795700 144 I AVEPWTlAIENLIGLKKY'GE"& IL4844 io2 277 9 YAVEPHVTÀIENLLGGEKL 20$I1l60 2755 YAvDpmvÀvEHíIgLKKYgDKF LZS9737 36 2812 YsvippmmggwTwYTg&AgwIYRvgmIIgm=ETL IIS72$340 27li6 YAV¥PNEZGIDHLWIKKQGNSI RI¥ACUI62 í 2563 mE·pNygQggw$KYT!gAAsmYQAgLEAI=RRÈmRL ..~4.

   0 767957Q0 I1AB44L02 148J u=IpKNw[:KYvIEYNYKNTKYL1IwRNpEgvNKgyKE 2'81 9 I IDPC1PKNWDKYVIEYN¥KNTKYI)IEVRNPE ·2Q5!ÁI6Ú 27 95 TYDpcvpRNwE5p1mYAHgHmvIKvINpDRvNK l2S973? 3 6 2'852 ETDpcIpg=DFTIKYímTnDYrIEvKNpEàvm L LB7.25340 2756 LLNPCIP=NEYSVRYVYGSSVYNITVKNPG!lKNTTVER &RA'C03 62 L 2 6'03 LYEPCVPA!MPGFEVAYRYG5TLYRIRVERAPQG'.-D . 76'795700. 1 sz:í VY LLmDKT1DLíREgNgHQvLv= li4844 i02 2859 mDgEmT)KTIw=EgN(3s{QvLvIm

   205.í'?160 2835 i Yw.DwvpLmrNmFRn 12597 3"7 3'6 2892. VI \mgKmDDsKvÍQLvNDKDmMnmmcK Ll872S3 40 2796 zTIDgmTETNRmA1)DgRTHEvEAw KNÃCD L6Zl 2642. sw=AEIDLvDLAAmÃEvb5 DVQ 7679'5700 l1'48441.02' 205l7.l60 I2S973736 118725340 mcõ L62i 2GB2 maARpREgmR%m5gARAFpÀsmpQp 0

   R

   W

   FIG 14A 15E16'25'3 8909946E 1 MHFNm/sERqEDL. RRAm1755 L mNAAKRpREssÍccjRRARcE[QARccRRNss¢ARRpEu FN 13470878 I KLSEERLTVGGRS . 772?7827 L MTPDTLTNFDKI EKEgKrF ÍPADQLPI PE'NPCVVSERFQ

   72163.378 I MKVWNISTGTSGEGS . ~~——I 15i616253 í MWR.W=NDVFLLTDEK=PENHS . -Ygà@M 9'9G994E6 i 5 . . . . .btt[}YRvIKENDmiLTDsRgNu?ENE!s- .YGLGLYT m.cmss 4 í HgRgmIlaNDLFwyswgLsNwENvsgll@n !3q70878 14 . . . . . . . .. .. . .. . . .TSLLGASLSQDN 17227827 4Q RTL=DDDLs'LyTDTTgN[sg"csLsEgNps. . . .mrc 72163378 L6 . . . . . mvmEgTsn-"sAgDgsMLp1Mip. . , .HGVFY 15616253 34 KLD[AINGEEE=N'SEAQNA¥MA5ILI=PÊM 0 890994'GE R6AÇQ1K5 4B KRTRFLSRLDIRINGEEP n1L$s=ENYMAK I LLTNPFIH 8i Rn=yLsAINwRIEpwwvMmkLAEs'gsEsvYRY=pp

   13.47087& 26 VWZZNLTN. . . LFTESAAGRQ 17227827 7.g mTRFLmLuQI DgRmmlssTApKgFAIsvu=FRI 721'63'378 46 QD[KzvsKwEEsvDNQALEpLmwHDQpY9AvF

   V 156ÍG253 7@ EKDGDLJ LwREsvELEAKRFIÀNDvwEKIRAKNm'!wv B'gg994§6 BB EKDGELI LWRÉWÊ tERvRFImm=TvKLKNYEpKEI &»-C0l755 L2í RADHEPF. .RE5LLyERRQRvDgHcmEsg77RNFg=v 13q7Q878 4 5 [pq. . . ..Samh IERVR. . LLWEERLYERITLSNYSREHS 17227827 l l6 DER. . .. .MKAIJS'LS IRRELVLNGÀLEEI'TEVÁNYSWW 721633"78 &6 GGR. . . , . J'S.NT I?UERERRVGTGMREDITLRNMGRE PA 15616253 li4 TEmuaiFDeDFmmrvRgFÜHgD\/g krtgq »g'0994.66 i28 EFNFSTVRGEQNGDIG. . . . . .. . ..KRTGQ rMlç01755 I59 RLAU! YWÀÃDFFQVEAPK. . . .. . . . mIRs 13470878 7B TILLSLRFMDTRLKRG- . . . . . . AADZR l7227827 151 AFELsIm»DEvDbFEvRg)cNRDKRgm=vE RIAEBG 7·2JÈ3378 12CI AC7'VZ'LYEADLKGEPQNDG. . . . . . . . . FIIN? 15616253 IáG SVÍF'DN. . .. . .. . . . . . .., .mmDMQRT"LI5wD 0 89'099466 RAACO1755 160 TCGNQ NLSFHYEGÀDGTWSWD I9I RUSGN. . ... . . .,. . . .. . .'vcgFsYsssDgRTwETmgLA !347Q878 llO ÊÍAGN, .. ó. - -. .. ... ,AV\ILRYEGIDKVVRTWSE5 17'227827 I9l INImgAAvIdTQElFAHKEQ$LTLAYwEDgs~sRmFQ

   72.163378 lSi RSEGE. . ,. . . -. .. . .. . JÜIVERQRGVIIQAD

   R 15'61'6253 172 QTA QT\m)AgYLDn'cTLglzEEsQEIYLT '89Q99'96'6 IB6 KEG 4E\i!E5SGEX7SFREKLQüLEEEAVTW

   W

   Õ RAAcal755 2i7 EHP5HAGE6EPVRWTESAWGRAELLI TVDAGGAÃEWTLT Í347D.878 t36 QT. . . . . .. . . . - - PDQLUSERADFVIASQ£LYVE 17227&27 231 HRQ. . . . ... . . . . PDDFKGYTAMRLELPSF!STQKbGYR 72!6337& L'76 DÃT SVWUMTFRAVVPERGQWSTTVL

   FIG 14B Z5-616253 201 IApnNg...............ji}EpntLpFwALEQvK B9.C3946'6 215 IEPQTGQ EATOIQPÀEKAKELLR RAAC'QJ 755 257 VRPEVRGGTEFPAA=G"GLSVSENV$SHPRGNAAE.GLR 13471J'878 164 VIMATDDR fÈSRR..... .17227827 26Q ...............sssRvsAAvTLvQms. 7·2J 6337& 203 VRPVURGE DhRPRFPKEQPVDEsE L5.616253 224 ESMWNEGYTKVKTDEIPRLQRLLDQ'GZT 89'C9946.6 2 32 . . . . . .. . . . .D8YQKwNDE!mçvETDYEF'LQRLwNgzD me|jl75'5 2'97 sr@arnaeddassargwlnw.ftvs .gfieafgrwyeqgmr Z34,7UB78 18 4 . . . . . . . . .ARFgm\KRRHgAFLH 5$GRVENDW 17227'8'27 28 5 . . . . . . . . .EpRvEEQNwvQ&mqíRADKsíFNLvíERAEQ 72'163378 2 27 .- . , . . . . .VARRLREWQSNTPVVSTDNDALLAVLRRSQQ 0 LS6J62.53 B9C99466 2 53 UL. .. .&vLL'2DLgygsFp'\mgLpwFÃy!?FgRD=AALQM 2 68 ,DL. . .R?m=LgI!gEFpvAgL~gvpsLI=QM RAACDJ 755 336 DI . . =iLQsDFgÊgpFLwgUpwyAvpsLIAÀRQz L3q7ljB7k8 21 5 dv. . .mA=LATgp?p~I~sTAwrsALQM L722?e2? 31E DM- . m:LRQsFDKYKTvsM:EgRD'sL1TAsQT 7216337E 2$8 DUGA=FDSRHPQR3I wAg?LE¶gRDmTAym L56J6'253 2 93 LpF'QEE'\mKgTíFmqAAmgTKRDF~EEMHELR.s 89lj99466 305 LAFCEE\1AKGTLRTMASRRKLD=EQ RAACIJ1755 37 3 LsMpEvARgTLAT"WR\mTERDEQ L3470878 "52 LWLNPG%GQELQ&TEmS PFSDSEMKETRK l7227627 353 mNmAKE=qLLAAyQgKAEDEwREEAFgKI 72i63378 29& LpLDpsLALgTLQTLADRQg'ÜmgI LTEEEPGRILKESRL 15616253 333 aLANTKQvpFspYYgTIDATpL¥=Iumm@nL 89(J99¢66 34 5 =w=QíwTpYYwIDATpLTLMLLTEITI RARCDL75'5 413 GKVPERPYYGS IDmmaILLADTmFTwTp.F 13¢70878 2 92 '=m=LkFgRYYTTpLYIF[LAcAYADRTA'F L7ZZ7827 393 cQETpHTpYYgmmpLm4LYsEYy=HDRET 72163378 339 GKE5GbWLGDGT«YGTµDATPLLWILLGELSRWgADpAE 0 L$GL6253 89"099466 3?0 LEISLDSS IEAALRwIDK=RDmgFvEYYQEAAKgrANQ 385 ADm;EmEAALNwIDEHLFvEYE{QEssKgmNQ RÀÀCOÁ?5'5 4 53 =MlMuiERALAwMí4DY@RDgD=EYwREµEggnm L3.4,7D878 33'2 IDCAAAEWIETÀSRSTG. .FISYQRAAESGLANQ n227827 433 LEQLn'RKaAMDwrDRNMQpsg. m.TYHRK5KBgLwQ "B 7.2L63378 378 lEKLLpmDRALEwIERYFYEYRRRTDQgLvNQ i56i6253. 410 sgDsm!RNgDYAKTpIALAmgwYQAKTgLAEL « 89099466 42 5 swsImRNgEmç7plALsEvUmjYNRg IASL .

   mc0L75'5 493 SGDSIAQGP:YAWWREI l347qb79 37? smeípK@m~wwL I7227B27 g 7J s=m)iiusgDLANgsIAL$EMQ=¥AKKTRLAE[ 72L6337B 4 18 mmsmgINFADgRIAEApm=RgYvY&mARAyL

   FIG 14C L56í6253 450 YESLNRI DIARKISEEAQÇ)LSE!:REEQAFWMEDVGFYA= B9Q99E66 465 YEQLGKEAEAMKLRNQAEXLKEKENEAFWMEDQQFYAW mLcQr755 533 YmgEpEEAERLARLADgLRsREL,QHERNEj' L3470.87B 4LD ARLRgEAERAEswEIBÀDà IRQKVERHLG L7'Z27827 511 ARmçRLDL=ERmEEAR$wERENQDNímDF 72t63378 4SB AHQTgDW~YwTF:~DwK=E,=QpELgm"Ü& 15616253 490 DQEKKwgTiTsNpgHI:IEsNMLsKERAKQvmQLU$~ 89099466 5n5 DExKQw=TsN=LFsgIvEDAvsDmvwKM RAAC0I"?S$ 573 DgNmpLcvAssNMgQvLwsDILpsEvA£R~RLwpDL L347QBJB 4 50 DgDgLpcKyRTsNA=LwgLpgpmRmDQLLsA5F I7221B27 5'S'L DGAGKQVDSITSNPGKCLLLGLFTP\"RAPDM 72L63378 4 98. DHEKKpvDAcTsNMgHçLwsgIvDEwApYvmRLbsFTM 0 15616253

   890.99466 53(1 FsgYgIRTmEgEtAgYNRmHDgsvNFHDNsíI u«m 545 xsgFgvRTMgEgEAgYNmsYHDgsNmLIm5K R,ÊÜLC0l755 613 FsgsgIRTLsAm,RYNHNgsvmlD=LvEmLvR 134'70878 4 9Q H=G=LADDÀIFW~YHNGSZWPHDTÈÁCAÀ L7.227B27 S9I FNGNSS I.S pmmmHIgsvm{DNsLIA=R$ 7-23633'7B 538 FsgwgTRTLÀTE|MgAYDwsYHNgsvwpmNÃíIAs 15616253 57 3 IgHHEQANRvíb1gLIDsAssF£YDEKe. .R 89093466 585 LgKTAiIAsavMImÀKÀsAsEEmjKL&ELFc=mRg .K RAACQI7 SS 653 HGAWEEAEQ: FEGLMRAQAQFFSREES PR L3470878 5 3.Q YgsRmvRLM5gTFEsAvuFN.mpEL=ETRRAm

   17221.82'7 631 IGLIF TQgLLlDm5QQpxQRpÊELFcgst=gDRs 72L6337U 578 YgFTEI~vATALEÊtFg. LFCGFDKéDYfK 15616253 60'9 kTPLWIQT7«TfFS 89-Q99466 624 MvKYpvAcspQAaaAgTpLv!FzQÀLwLFpDs LKEEUMS RkkCO1755 693 EVPYFVSCSVPAIVLENLWWPDÃPRWT W I34"7ÓB7B 5 69 p"xmskQs=w»wTorHm L72.27827: 671 wQYFncTpQAmTgsIFQLIQMIvNLvpDApNNçLRII 72L6337& 617 PVPYPTSCSTPZ HLLR.TLLRFDpmpR@.

   0 15616253 89099466 64 g .psLLpDgMKELT\iENMK\?gKgTmLTLKKKmT'QLDvM$ 664 .PSLLEGMNKIoTVRNIK IgKgw5LQAnRTEsgvKLEíTE RAÀCOI755 73'3. .pRLpAsmELKvl[gI&LgRgKLsvE-IARRDg=vD= K3S%87B 6Q9 RpKIiptgI nNLvIRHLwgQÀA'vDLTFQRmRvga í72z7s27 711 DPALPESI SRLSLF[NIQVGTTVLDLEFERS=T=¶AR. & 72L6337e 657 .PSLP=TRLkIERLEUAgSQLWDVTgDEVSVEgL*g i56l6253 6B7 N=GLDVQCAS. .. .VTSQG b 8%99466 7D3 N¶7WQZNIH m RAAiCQL755 77'2 NTTGWV=GAKEVMSAS 13§'7Q878 6á9 PHEGLVPLVVRS 17227827 751 .KRGNLRVVI EA 72163378 6 96 LALVSEPRELDSLSLVE

   FJG 15A 52CU384 l KAKLDETELG/PANEKEPRQVMKS ¥ IEPFAIJ &9'0gg880 l MAKLDETIi=LKEImDA:KgIpgNEREvREvMKKYITsm] 12452198Z I MAKLDETLsMLKDImAKgIAgNEAE=vvKKY IEp!mD 121533826 l MDKTwwLKEu&ApgvsgEEQpíRTu:TQKLss ÍA,. RAACO1887 I MHPHVEVLRDLCDAF[GTSGYESGVRKL=RRLRELS£ 15615819 l MNQETQsLnmmELQgApgEEHKmw\/RgELEKym 52091384 4 t EvTmugsgQADgmLDR-» 89098880 41 Ev=gIgsLvKn=KEggpKINng=T$ID 12452i982 41 ELWDGLGSLI.GQADGPHMDQ1D 121533826 37 EVSSDNÍGSVI F~ggsDTpHMDEígmvKYIT RAACD1887 3 8 ELLRDR7!%vvc;RKTgDpNgpKy°EI[iIT 15615819 39 EIVQDRIGS; FGVKRGNEQGPKVMVAGMWGSW 52081384 SI DRgYggwwsQwaAQRyTwTKKgDTTgIIgsw 0 890%880

   12452198.2 Bl DKgFLRFpT'vggwwsQyMLAQ=í vTsmDvTgTIgsKp BI ESGFLRFQT2GGWWSQVMLAQRVTVVTD=VTGVIGSKP 121533826 77 KEgFLKFTTLggwyqEQvMLgQFNmíTTKghI PGVIGSKP RAACQ1887 7.B sEgFLi!íFpFcggwwsQv\/1ÀQFm%TRKgpLLgvTgsKp i56l58l9 79 EKGL:RERT·LSWLIAQRVQMTDEGPVI=GSíP

   V —I 5ugl3g4 l2l pHvLsQEmcKsvDI1DIgAss .wgvlpgd 89Q9888Q L2'l pH1LpFEARKKENDIKDMFIDíassY!EN 1245ZI9B2 121 PK1LSPDSZ"E IIDTGATSREEALE MGVKPGD 121533826 Ll7 pHIIspEERKKwUsmdy1DIgAEDEKEARERFm~ RÀÀc0l887 L LB puII,pADERKK'NE=vFvDIgATsKEiaEE.¥gvRpgD 15615819 L L9 pHLj;js1mRKKFMDvKNMyIDIgADDF:EDAm IGIKPGQ 52Q8138Q J6'D QwpxFEFT\n4NNE~NRIgcAíAIjLKg 8gQ9888D L6D ly[ÈNpYEEFTvMNNmaLAKÀwDNKIgcAIAIwLmLKD 1245219è2 i60 LAmmmImvvIl·[K 121533826 157 pvTpFs=7L%rgmm=m!QH RAAe018g7 15? AIvpYspm}Lc;;NpmYvsKA"DmLgcAT¢LQg 15Gl58l9 138 Qj:vpxEETpLµNEKKmAKAwDNRYgvsIAIELLKELQg 444—U 5"Q81384 200 ADKmvYgvgTvRgwgLRgAKTÀAHTIKpD1AFgwm 0 89C9888Ü 124521982 ·200 AEHFmvYgvgTvQEEvgLRgAKTµANLIEpD1g 2ÒD ENKENN4gvmTQEEvgLRgAKTAAsKvKpD= 121533826 I27 EMHlANTvYgvmREEvgLRgAKTsAs\TIf!pDw.wDTc 0í887 137 QAHFNrvEÂgATAQEEvgLRgAKTLvEiL'/DpDm SIDVG' 15615819 L9B E=pNILmµTvQEEvgLRgAATsAQM.IEpn1sntDAs 520813&4 2 40 E&GDTPGIT. .EKE 5GKGPQIIL¥DAHK &%98890 24D .I=TPGIS. .EKEALSKMGKGPQIZ LmAsLvsHKgLRD & 1M521982 240 !=TPGTS. .EKEALsgoq~pQ1vrYDAsbNAHK Ln533826 2 3? TPGVT. . SDQASSKLGKGVAISIYDSSL! EHTGLRD RÃAC01887 2 37 v=TpgIEsgERQUIjgDAgKgpLIMTmmdI PNNRFRD 15Gl58í9 2 3B PANDATÃGK. . . . DA?GQLGKGALVR1YDR7MYTKRGIRD

   FIG 15B 52Q'8L.384 278 E'vTNvmEAgIpYQFDAI,sgggTDsgs1HLTAblgvpALsI 89C98BB.Q 2'7B LvTD7ADmIpYQFDs IAGGGADSGAIHLS HNGVPSLAI L29 52 i982 278 TvvKyAEE=pYQFEs LPGGGTDAGSIHLTC5GIPSLAI 121533·826 2'75 QNHIPYQLEFTEAGRIHL1!AQGVPSLVL R!w20i%7 277 EVLDZAA=IPVQLSSLAGGGTDAGSFHLllGIWPSVNI L56Á58!9 274 WLDFAETENIPYQF. FI.¶QWTDAGRVHLSGNGVPSAVI .....- 52Q8.L38.C 3IB TIATRY1H!I!HAAMLARDDYEHAVKL! TEVIKRIDKETVQN 8909888Ü 318 T1ÃTRymHAÀbfL~DYENAvKLLwEvI»sIDR I24T.2Ig82. 318 Z'IATRG ILHRDDYENTVKLÍTH WZ533826 315 sIpTRnRsKNsrQHRDDYDAAvRLLv&vEK=QNK= OIB97 '317' gEaTRFIHsmmi'HEDDYLQA=Lv'mK LS61h5Èl9 313 gIcsRnHTÁA$t m/DDYAAAKALLvKLv=DmKT 0 52081 384 Bg($9B.B.Bo h24'521982

   3.5& ITFTÇ 358 ITFD 35& IIFD' L2Z5'338'26 355 LVK RAÀc0'L8a7 35i IQÃW ls8l56Lg 353 ilang' 0

   W F'

   FIG 16A

   1347.Q'ú3 L MMTI IipLswDAEALAA Z122LD42 Í347L782 1 masieseànrn . .iivm mcoi897 í XPSWLSVRS . .MLQQ 16329563 1 MvYAprLpLpsRsLwpRsvspALKKAIAQsLmMEAFKN + l5G00577 'I MÀAKYPLS PAMWREVEH & 1347Q5l3 18 mQAAsAHKgE~pERpMFD~MTpmD%vEAA" ZL22I842 I KVSRRTV l34il782 16 IG. .ANAGKLS RQAFvEmDsswTALTg. EFGGVDY IEVD RAAcQ18g7 1,6 MR. AsíçmAEQsliE\/(mdmjQMgImFKKNvKvERT5 1&329563 4 í zppLEDKpAwQFLrHyDQKsWLwQKLRQQFpvmrKKs l56(jQ577 18 =EAsDsE=AQRAÀYAR.McQAFAp'mpAgI,MbDsc 13470513 5'B A«IAGFWLRP. ,.., j7$i4RsgÈm=LHgggYvLgsAg 0 2122!842 l347L782 8 LGGRPALELKP. . .. . . DF&5GP-GRLLLAGSPD 53 A='pg'Lwyw. ... . jçgADERRvLFYAmggn=sI·Y ~.C0I891 5G FGGVPGEWIÃM. .. . . mDEpTAiRv=nmgÁYYmscE 16329563 81 »GVbWYRV"PRIT. . .àE€N8QRIwvH==AIÂggE 15600577 37 LpàAppywRR¥RpDRpAppggwp~YlmggwMLggiÁD µ lá4'705i3 92. AILrNFAgQIAsRvgMnmípDYRLApEKpFpAM=m 2lWí842 ¢2 T~IAGELXRRAGLR:R,VS\/DYRIAPEHPFPAA íHTi'782 8!7 THRKI,v(mAKÂygcRALLz=pLAsQAwpmL &AAE0I897 8& sHRsI^m;AQAsg$RvALIEYRLApEHKFpA*BDAvKA 16329563 LL B LgmEÀ5mAÀiwgQv"m S IDYRQPPNYPEPAALEDALIM U60q577 97 SHRE'Z càw&ARLgLL1/LAvDYRL^mlpFpAALQDcLa i3470Sl3 L32 YRGL. . . .VADGAER. . IVWLTLS LLSÀLAAD 2Lz2Lg42 82 YREL. . . .LSTGTDPQDLV. . . IATLLM k347I782 127 WDWI,, . . .IDQDFDTRRIAT^ADSCGAVIbT'. . . 9gvlq@ RAAC01897 Í2 B. XE'SL. . . . LÃQgTApImIAI=sAgggLT. . .MATLISL

   163.29563 1.5B NQEL. . . .VKT'. EiDvNRLAL=sÀçgggLL. . .LALVCOL 15600577 L37 HQÀIbSI,GELDEAIDGRRLL"SAGGNLA. . .AALCLAL I3G705I3 166 K¶NgMYQEvgèAvMsEwmIAd=DsLgTRAEAD. ..PI n 0 21221842 13471782 115 REAgLpQpAK\/ALFsm/DLTLTwsíRsKE=. .'PI n 16D RAQERPLPAATLI ISGWEDMALTAASYETNREKD. ..PFEA RAAcQ1Bg7 161 RpAgKpLpAcAALLs~IAgTgpsu$. .EWLD 16329563 19D RQLNLpLpmIAfLsLTKTgDTHETNEYvDws! S± 1560(J577 174 RD"GAPSP~ILLYPLL5~S. . . .PSRI DcAnApLLig iMj0513 20 4 GGVLQGMDWLQGQDPR .NPKASPLYA.RLN=PI RID 2lZZl842 i 5 3 EADVRÀYADLYVGAGDRA.kPItASPVEA.DPPLLVQ h 13471782 L9B KgwDm¶sn(3DYDRL.EjmIspLYA.DLsoppvnQ 0lC97 193 PEGZRKRPLLYCSÁEQLT .iieLvspLYA.DLA@ppI LI H 16329563 2 30 wLÍEgLÁRLYAgELFLT.uK:spIYN .DIAgLppTIiLI 156005?7 210 LgwQAcImAYLpLAALuRQpILALETgLpRAFv&

   FIG16B 1347Q513 2 4 2 VGDDE1ÁJADSVR¥ADRÃRAAGVEV=SVWQGMFH. .VEQ 2J22J 842 !91 AGANEVLLDDAVRLA=GADÍNEVTLEVGPGLPH. NYQ 13Á71782 2 3 G AgAnEnNDEsRMnLEmRQAgvETRLDrFDDMLH. . SEQ mcoi.8'97 237 vgFjDEcLLDDsvRLmcLFvQAgvDARLHvwErMm.. .VFl'l 16329563 268 SGTRDLIiLSDTARLQRK1iRQNlKVPVDLQLFEGLSH. .AEY e" I$GQQ577 2 S Q UAE?DpwDDgFR"gAALRAAggEAgFYpgs@MHgeLRg.

   J3.47D5J3 28è) SSLGEIERSVRAIVD .ELRQRLVGTSPSNSTASEA 21221842 2 2 9 LLm;KLEEADµALDmR. nTAFILgAgIipDAgRLA,p« L347J.782 2 7 4 mgRApEAD= gRLAAbwvRpRIkgLETw3DNAvsuKvA RAAé0l897 275 m. . IPâDTGD.KZ pd I6329563 3QE TYE7UTPESAEVFRELSQ.QK l5:60ò5,77 290 KG rnisvEíuAEALRRAvQDsgERQAgEEsTAEaQp .—.. — í3470513 0 21221'8M? l347'1782 3í3 GRAA RAAc318'g7 163"29563 !56(J?577 33Q 'GE 0

   N ^

   FIG 17A 39634242 J MNSSLPSLR1JVEANDF!R1GAAVNPVT IE64QKQ 6I2B7936 í MnEIpsLHAÀY=EK1gAm=MLQsEgE 320L4B3 ] MSTE rpsLsAsYANsFKIgAAvuTRMLQ.=gE 134266943 l MsvsQ$LpsLREvFw=[mvNwTIEsQKQ ~'C019Z7 2 M1'DQApsLKEAYAsmvgAATvHTHAH 1140'54545 l msgwMmqmêpsLRwFmAwpvT"IEMQKQ

   W 39654242 33 LLI DKvNsITAENmrFEHLQpEEgKFTFQEADR1vDmc 61287936 33 FIAKHFNsITAENçMKFEEnLFEEDRsmEAADQrvDnv

   3.20JAB3 33 FIAKHYNSVEVIIPREilEYTFEAADEWDEAV 1342G6343 35 LLI SHVN8LTAENlqH«EEKLQEEEGRFTFD:ÁDRIND~ RARC(J19Z7 3.3 IÁARmsvTFENIn«wERnIpAEDTY5FsAÀDQ

   1140.5454.5 4 L LLI DRvNsITAENFK«EEIu.QpEEMc"TEwADRrvDnc 3g654242 73 SLVWKNQTPMNFQDGQGEL"VSRD 0 612B7936 32WAB3

   73. AQgI(3vRgmvwfÍNQTsKwvFEDTmpAsRELI&mx 7 3 ARgIgvRgHTLvwHNQTpÈNMFEDµ5gcnAsRmase 134266943 75 sR~vRgKTLvwHNQTp[MvFQDgç2gm3Rw1&ERMK ~CQ19Z7 73 DHgxiNRgRTLvwHNgTpswvFLDsLgç!pÃpAKLvEARLE LL4Ü545¢5 .81 sm€AvmmNwÊlNQTp[]wvFQDgQgELn1sRD&MK 396542e2 Jl3 cHIsTvvRRYKgKrY~v!NEAvADEgDE=pQI 61287936 113 QHIDTvvgRYKgILYÀwD:vvNEAvEDK7DLnqRmmLEL 3201483 Jl3 qhidtvvgrykdqiya rdktdl :t·mom I34266943 115 sHIsÃvvRRYKgKvYEgsEwmQF RMc0i9í7 113 çmAEmmHYRgAALcwDvvNEAylDQgDgwLRpspwRQA 1l4QS4S45 L22 cHIsTvvRRYKgK1YcwDvnIEAvÃDEmFj.LRpsKwRQI 39654242 153 IgDDENBQAE7myEADpDALLFYND=cFpEKREKIFA 61287936 153 VGEDY[ÁAAE5b!RHEADPNALLEYNDYNETDPVKREK= 3201493 /S3 WEDYL¥AHEADPNM&FYNDDPVYN L3426G943 155 IgDDFIEgAFLpDALLYNEcFpYT RAàC0l3l7 1 53 ígDDYIEMAFKLAHQADpYNETKMjmDRILR 114054545 l 61 IgDDFMEgAFbYAYEADp[tALLFYNDYNEcFpEmEKIEA ·· 39654242 L 33 LvKsIiRDKg[piHgI~gAwsLTRpsLDEIRAA1ERm 0 EI2B793G 32eI483 193 LVRSULDKGÀPVKGIGLQG Í'ispsIEEIYN L 93 LvRs=QgApvHgIwgHwNi !1E-PS6!DEJRQAIERYAS 1342669¢3 .1 95 LvKsLRDmzpIHgIaQAKwsIAjIíps»EIRÃAIERYAs RAACQ19Z7 1'9 3 LLEHLmRgvwHgvgImwsLDDpµiEERYRA ll405á5U' 2Q.l LVKSLRDRG2PIHGISLTRPSLDE 39G54242 233 LgvvLHlmx)vspfFEFHDmTDLAApT. . . .SMIERQA 6l287936 23'3 b1jvQImTELDMsvmiEDRRTDLTApT. . . .5EMµELQE m 3201483 Z33 LiDvQLKvTwiDLsvEmEDQRTDm=pT. . . .]=AELQQ 1342669€3 235 ujvvliH]=LDvsMFEF![DHRKDLAApT. . . .=Imu RAÃC019@7 2 33 I1GLRI,HVTELDVSVY PWVLIEPDRPQAPARPYDDE 114054545 241 Lgvvuí]=IDv$MFEFÊlDRRTDLAApT. . . .S=ERQA

   FIG 17B 39654Z42 269 ERYgQIFÁLFKE~v:rQsvTFwgIADDHNFpvidgR 61287936 2£g LRYEEIFNLFREYKssrm7TF¶mmDNYTwLDH

   320148.3 269 KRmmgLFREYRsNITsvTFmvADNnwLDNFwRgR 1'34'266943 27i ERmµFTLEKEYRDyTEsvTDYTwLD!lmQgR 6 RAACÚ1917 273 ARYEALE'ÂLyLRHQDAIDNvTLwg\/ADDsTwRDD 0 JA4Q54545 ?77 ERYGQIFALFKEYRDVIQSVTFWGLADDHNF'WE1GR 39'6'54242 3(J9 EQHKPKPVSV 6JRB7936 309 EVFDQQLQPKVSWRI INSMS 32'01483 309 WWPFVEDTELQPKDSWM IGQD 134266943 311 1?LEDEQHEPK5AFWWASZ RAACOI917 31 3 WERPVVRLAQN 114054545 317 LLFDEQHKPKPV3V 0 0

   W r

   FIG 18A

   V RAAcD2áD4 1 MRKLSHSGKSMA íppRÊRv=RÃvELmDgLvLmEKv 58338090 1 MSR.ITIERDGLTLVGDR. . 76796576 ] mmw!:¶¥NgKT I14845L81 l mKINEfTYNg 15896S3B ] MWGKT ImKsw!Ks.KsLTLRgvLHk! 15806073 i ma;F7.QFsyEgç)mY=HT RAAC02404 41 P. . . . . . DEAµNRwpAAiLFKT[iíEpHQLFvKLsR 5B33B090 !.8 . . . . . . . BEPFGE IyDb4AI=gFTANRNTp. .LLRQIAD 76796576 21 P. . . . . .DDVKK5K.VSRFIWKMSR tL%B45i£í 2! P. . .. . . Dgri{gK.vpMvAÍFHgngNKMEpKFI$'R 15896898 27 P. .. . . . Lmm.Lp-= YHGFCGPRFIEVKLAR L5BD6073 2! pDgsAmQQAppQgwpswgDKvssHRLLvLLAR RAAC024D4 75 ÀL&AEg'aAAmpEÀgsgl:ÉsDgEn=AxwRDAKAIL 58338090 49 NIRmN!AsvRFDENgl{gEsDgRFEmTycNExADAQKIL 767g6576 54 =KVGIGS"Fv-GSGESDGDFSSSELEDNQ# IL4B451Bl 54 QLEKvgIgsvRFDEYgsgEsDgDFm=sgE=ARQIx L5836S3B 60 EwKLgt&=mEAgTgEw=fsNEvYDANvµ 15806073 .6.í RLTAAGIAALRFDCRGSGESS2GDFSEMTVGREVQDYEME' RÀA£02404 1L5 DWVRRDPRIDPDRVSLTGL IIVAGWPDKVDRL 5B33BD 90 8à ETVR7DPÜVR. .N1àwUsLYpDIvKw 76796516 94 mrKEQpÍnDpERIgIiLgL4IAmTvAREYmEncM, kLà8e5iBI 94 kfi KNEyENIgLLgImmmgymsELKEEm¢L L5B96B9B lOCl DYvK=EvDKnRIsIIgF.IAsgmgD~EIN'rL l59õ6073 :Z 01 Dnml!Qpgu)pER\n!=gymggLvs&LAÁEm EL .EIRF RAAIC02404 355 VÍLAPAGMADIAEK. . . . .QAEALGAAADADVVDL-GGNL 5833B091) 127 VMAPÁ&ÂLRDGD. .TQGATYNPEH IPAAI PFHGKK 76'796576 Z3S N?MFELImEs. . NKQYgAIMEQLgFvDrWHK IL4845LBl 134 ELnáEQ5KsRDEKML=EREg [ íDI=Ii& I5B9G89B !40 çLmpQm5DT.YIgDKYmMmgIYDvEgLL 15806073 139 PALREbWLRHLRG gI,LFpvT_sDYewp RAÀC024Q4 1 9Q vgRgLYED!jKQrDnnmpFRg=1íFmEDQàvpYEv 5833BQ90 ! 65 wssYLRTAQvLpIYETAKEmNmrIvgsNDQ\mpKY 7679G57G 171 ImçDE'vEDIsKLNIFmm¥IjKKvLIUHgmDEAvEYKy II#Bà5lBl 174 L&KEFItmmmIFEFsNm)KpyLrv=EDMvKYEv 15896898 178 wEKnEDíKK\Rq1FDRAsm«QsLrímTsDE rvpL5'r 1580€073 1 70 wRAFLQEUvQ¶RpLEAAARwggvAHvFmDRD0Tc NEW RAA002ea4 23Q sIiKYQNwYgERARLHLFE=HTFNNRÜMEsEvm= 5833809C 2Ü5 s¥mD.EvY. ENsEuiMvp=Hsng .QYKIJSÃVDLTAE 7G796576 211 sDR!LKwYgDNMRmENADKrn:sLEwm(AIEEsvE Il4845b8l 214 $DKnEwxRníE(»DmFNKL[NEKKk1EEsIN I58gE89B 2IB SER¥L.EMYGENTSLELVEGANKIFEKNSWNRVI DLTKK l58Q6073 21D ~TpRp»3?FpR¶pmgTm7wNR

   F1G18B RAA¢024¢4 ·2?0 ELTDVDK59 58339090 242 FLKPLF 76796576 ·2.51 FFKKELLKG ll4B45lêl 2S 4 FFK .ENLKG 15896898 2.57 YFS'~VKF 15806073

   0

   0 n FIG 19A 12452!931 I m7AFg.K&gYEEKwQmgwYmpzw=R 33311865 j m(TIvg"vYgKLQgEQvDgvc=wpmpLRF[< 134105165 l NERmNETRYElqNE=rpY 56421584 L MERTvvETRYgIíLRgvvlqgsvF~gIpYAKAw i38896639 I MgT\mETKYgRI={3TNEm7mqKgTpYAKAwgERREL RAAC02424 L MDvIyET]m:wMgREEj=vFLg\,TpYAKApQg

   124521931 4 1 pFELpEmÜgvKRcTQFgpLAwQpwELNrD .EIGNPAENM 33311865 41 ApERpDswEmRQATsFspvÃI?'QFQREME.

   FFGNDE SNM 1341051E5 4 í ppEpFDAwDgvREATsFgpvvMQpsDpIFsgLLgFMma!? S6421584 41 pE!gppDAw=mEAÀAFgpvmQpsDp7 FSGLLGRMSEAL' 138896639 4 L =ppDAwDgvREATsFgEvvmpsljsMFsQLIgFMNEpk! RÀÃC(J2¢24 4Q ppEpvEmDvLIjARAIplgp7cmjAN.pLNp- . . . 'ÍDGEVQ l2452i93í BE) DEDCLPGADGERRFV!MVWIHGGAF'ANGAGSAPSiY 0 33311865 i34iÔ5l65 80 NEDc=LN\MspgADDKKRpvmwIHggAFvsgsgss$m B z sEDgLYLNrwspAADgKKRpvu?wIR=sgssm 56421584 B ! sEDgLYLNIwspAADgKmwLFwTHggAFLEUsgssm l38896639 81 SEDGLPAADLLWSGSIPWY RAÀCÍJ2424 7 6 smcLRLNI"Ap ,AEgT(;nFvmq1HggAFyFgsgQs~

   12452!93L 120 DgsAFmmvvvvTINYRLgALgFLYLgE=. EYEASG 33311865 L2D DGA,QGDVVVVTINYRLCJLGFLHLGEIATS'G 134!05165 12 I Dg:|:AmeH@vvvvTINYRMNvFgFLHLgEsíaAYAQAg 5642J$84 12 I DGTALAXH@VVVVTINYRMNVFGFLHLGDAYÀQÃG 13889GG39 121 RgmnK!i@vvvvTINYRtqmgELYLgDAF@TYAQAg RÁAC02¢24 us D[G.VVLV5 INYRLGPLGFLKLAI1LYASSG

   124521931 L39 NcguDQlAAIiKwvKENIílAFggDpDcvTI=sMaMsv 333\1865 L60 NcgrLj:}QwuujQwvQENI.E%sEggDpNmTv~sAgAMsí l34l05165 L6L RwvKENIjAAFggDpDNITI=sAgAAsv 5642!58g L6Z NLg=QnALIm1KENmKFggDpDNiTIm 138996639 16L NLgrLDQvAALpDNITIFgEsv RAACQZ424 154 NAgI1mvmLAmn=1E3FggDpNRvTv.uww 0· ~·4AuÁ · · -

   í2452193l I 99 AaUiIs$pAkAsgLFHmII,Esg.AANFTR'rpERÁAKN 0 33311865 1341lj5l65 200 gvLLgEpsAQgIm~IQsg.

   AAANvHs.sETATKyA~ 20 L sLpasgLER~RsgsgsLLLRspETT= 56421584' 2Dl gvLLsLsEAsaERRAnQsgs~LLRspKTAMAMTERI i388%632 201 LPEASGL$GSGSLLLRSP RAAC02424 i94 g'rI&vMEsARgLKQAILQsg. zpEàU/RTpEFAEwwTTQL

   124521931 23B WTL=KKDVAKI,AEVPAKNLAÊAVNSL. . . PE'MSLLW 33311865 2 39 LAALWEPTNL$KLEEbWEQL:QvÃDLV. . .PPMSLGPV 134IÜ5L65 24 í LUKAGIRPGDRERLLS LPAEELLRAALSLG. .PGVMYGPV 56421584 '2 41 I£RAgrRpgDRgRLb5 IPAEELLSLG. .PGIMYGFV 138896639 241 LERAGIRPGDRDRLLS IPAAELLQAAMSLG. .PGI TYGFV RAACQZ424 2.3 3 LDALgLNQA.qq|qmFDwmDLR1pLNLm

   FIG 19B JZ452193L 275 TDgrnEpEHpBNAAKDIpvLIgTNmEYRLFTvwD 33311865 27 E mgvsIãm{pQEÃLèDgsAKDvs1LvgTNmEYN1 FSWD 134105165 279 \mgmimlpIEA:LRygAAsgIprLiIgELTD 56421584 279 vDgRw&RHpIEALuNAAsgIp1LELm 13:8896.639 279 =IPILIGFSLW RARC32424 27 3 IDGV=TRSEWDAI&EGQAAEWPTLAGSWMARD

   12452.1931 3IA p\/wKRQDpKmQDy!FQKTFAKYwmus . . .AKITDPSAFT 3»l1865 3le PEWKNADEAKVTAL.'EKTPGPLVQW S. . . KFI pt3. .GLN ]341(J5lES 3i9 PSWTKLGEKELLDRIGPVPEEM RYYKETAEPSAPT

   5.6.421584 319 PSWMKLGÈÍIELLDRINREVWVPEÀAT RyYÁETAEpsApD ]3a8g6g3g 3i3 psLTFumKELLDRMNRE'7gpuEEAvRYyumjRsAph RÀA£02424 313 pEwR=DEERiARvDRMNgpLgDRAR. . W?VDGRTGDE — . . V ..

   0 í2452i93i 33311865 351 QELYDR.ImcNFTg?Auu;AD=AQTgEKmdYQFD@ 3 5 L QOLTNK .LLTDTIFTN PAQVNQGTWMYRFD'8E l34i05lG5 359 wQ.INrmiF\7EgMLRmDAQAA=nvYMYRFDYE S642l584 359 wQmu,R.mYRvF¶EgMLR=DAQAÃElgADm=FD= 13'889'6639 359 wQ=IiRmmINFvDcMLRTADAQAAw RÀACQ2E24 3 51 LETWLVRFASMRSETY n IRAAETQSEY .AFVYLYRFDXR . J2452J931 39J spvyNgTIxAcHALEmvNHTLEQEgTENLT=pgm 333118'65 390 TmggALKsTKALEmvFNTLRTpNTENFTgss~QQ L341DSIE5 39B TWFGGQLXACElALELPFVFHNLFLQPGWíNFV 56421584 398 PHQ I388g6'639 39B TpAEggQI;iKAcH=ELpFvEE{NLHQpgvE:NFvgNRp RAAC32424 390 'P. . . .sQIÁaAHALEIpFvFt3TYAHpsARvLvgijRps»Á """"~" m" "" 124521931 4 33 FAQAwíAEAQbigDwcsLLpE.wppYNTRQRpmíF 333118E5 43J IADQbg[QRmmKsgii=DRLLE .WPSYDMNNRSTMIF A34l3.5165 4 39 ms~7'gDwgp.mpEAwÀYTNERKAA~ 5642158¢ 438 sFARFgDpNgAHLmmíYTNERKpvFv.F 138896639 438 IAsmlgmmEARTgNpNgmLpEFMpvY7KEHKpv~ RAAQO242E 426 V5DPQAF'HLPE.DPKRRSMIF 0 124521931 33!311865 469 469 gQ1jcRvEKDpl)iQÀERALmsLgE

   NNESIVVNDPNREDRLKWEQLS !34105165 478 5AASHVEWPFGAWQSR 56421584 478 sMsEivEDDpFgcERAAwmRA .13.8636639 478 $WPFGÀWQGRL « RkAéO2424 465 DRTSRVEEDPD==LWS~SLSM

   FIG 20A 29377l.B9 i mKvDs!swew ii6<939'50 i MTTAKLEL=mmRsHFQT=p. 4074'5.013 1 msLsÁvsEMpTYIn'TMsNLNvLHRNTLppRAHFYsYpN£ RAAC02'6Z 6 í MEvMKgEQKYvEsFYpps!jx. .. . . .RLPPRAFEIPHSTE 49Í7G30B 1 NRQL¶i·¥FFSZ'DSV ~&.".^ 29377ZB9. 2'8 ETkLNENK¥mAmumcmFLFLEApE¥$pENFFAT 116C9395Q 30 .. ,. . .gENRQm1YQI:LNgTwQ~-Dm¥ApEDEMAv 40¶@5.023. 41 EáXb7. . ENRDEGLFQSINGTWKFFIYD8SP. ... IWN mçQ26E6 35 RuLARgFYRA$TQvLpLEgKwKmLmNpRAYpTw= ¢9Y76308 29 AQARF . nLRE=sI3FLpLsgQwNFHFEDHpLQvmAFTsE 29'377189 67 DF'DTsQmQITvpgNmvQgYgsDLwYNFpINppw 116€93950 6A wNDQ[MKlIFvpsNwQIRgamcMHYsDLwYNmNFpw

   40.745013 7G TmTTEwDDInpggRpQYTN!HYpIvnppNv RÀAEQ26Í6 75 DnDsswEmHvmMQMEg¥gRFmTNv?mEpvDppRv 49L?E31)B 67 LMAD. .W3HIWPGHGKLQ=EGF"PFPIDVPW 293'"7lB9 LQ7 p"wpTgíYKRTFAIwTnlD= nRFegyDsAYKvwvN 116¢93950 10'4 p$ENpTgLYRRTFT'mEvAvN"Qn IGFDGµDSAEKLYLN ¢0.745.DL3 ] Z G SYMNPTGSYWREFDVPRDWDGQQI :qLRvEgvnsAFHvwyN RkáçCl·2 6.X ii5 psENpTgmíTKFFLTHHwg.RvgvDgLY 49L763Q'B ! Q5 psDNpTgAYQRIF:rLs.DgNQgK«LIKFwv=YFEvrvN

   29.377199 J47 gHwgysKgARNEAEmITpYÂKígE=LTvmYumg L164&395Q í44 gDFIges=RLpsEEDvTKAImg.TNTíAvEw 4ü'745013 1 56 gEEvgYsQgsRNps=1Tg¥L"sm"msDg RAÀçCl26:6 i 54 GHDIGFGYGSRLPITDFVHA. gDNyLvvvvcQwsAQ '49I7C3OB 145 gQyvgFsKgsRL=EEDIsAMUmg. DNLLcvRvMuADs 29377L89 1-87 TYLEDQDSGLI,GVPENGLEDFf1 I@IDDS 116493950 18 3 TnAD©gLb~v5LYsRpQNgLYDvrsvRTYLLKD ãO"l450i3 'L9E VYLVPFPSSAI TDFFÍQ PEVDDG RÀAg026i6 1 93 gT'~vrILKRpQI YbsDyRvRÀLLgTD ©176308 184 sêgIERDv¥LvgKllLTH»lDFTvRTDmEA 0 · 29377L89 227 Xqnghiaxtgkfwqdkgqq. . . .VQ. . AQGKTVL lí6493950 22'3 YRAGEWVTPTLSGAVPSK. . . .IHYELT. .. .KDGATLI 4D745n3 236 EAW7IW. . . . .L,SVKVLS. . . FGGN.VV RAAcô26íg 23'3 GRTGCL5NEVE·IGGI LSRDKPVPLRFKLID. . .SIGDSEI á9l'7G308 224 YCDA=SCEmLENLAA$PV1lTTLEYmLEDG£RVVHSSAI 29377IB9 2 60 KETvMNQsm}FsA$LFsvTAwsAEKpyLYQLFITvE5E 116493950 2.55 DQTISTD. . ^lsLwTuqDIQAwsAEÀ~YDLTMTYLQN 4Q7¢5QI3 26"7 DEWTGSSSG! YSKDI=DFLLWSAETFNL=VLI R2N- . RAACÔ26LG 27 0 IEN=L$Dc7EA7YEµ£ípNvRpwTAET~=Lvs I DED K 4917G30B 2 6:4 DHLAL EKLTsRsFKmTEç)pQQwsAEspYLYRLmwm

   FIG 20B 29377L89 3ÍJO . =VVWL EQKVGFRNJMVSGE=LVNGVAI=GMNRRD lt64939.50 292 . DAPLEWRQR ígFRQIELNgK:'ET,yNgmIKFK 4D'7450L3 3"05 . . . .gR=$QKvgFRRgEMsgsNETNNgQpIIIx mcD26l6 3!0 .sLymmLQvgERR1EI3íDgQLK7NgvpIvw, 49L7630& 3lj'4 NgNyLgvvµQRvgmmç\}RljgLFpnNNRYvMLHgvNRm

   29377183 339 YNmmwsREEIEmrR«QEmNAIRT5wpÀ5AYF 1L649'3'95Q 331 YsRT=\n4sE&DFKKNi I STAHYPKAPYF 4n7e,'5Q.13. 34 1 HNYTSGRTVPYESMRADLI ~QSNÍNAIRHP5F RAAC02.6Í6 34 9 HD'=DvMrRDvQl«QNNmvRT=pHHpvF 49U7G3Q8 34 Ü NDmmAvgMnRv=LQ~Qi|NINspN1jpRF

   ·29377183 379 YDLEDEYmYvrDEcHgEELTgEYDw. . . . .ISNDP ILB49395Q 371 YD=ELgb4YvIDETDI=HgFELTEmmw. . . . .rTDDp

   0 4W<5013 RARCD'26L6 381 YDVADELG.TECRGERDIAG5EENAAAWTSDNP 389 'YD=RYgjmIDEµ.DLEcHgFALTgNkDR. . . . .LSDDP 49176308 38¢ Y_IYGLEWAETDVESHGFANVGDI·SR. . . . .rmDp

   2937718'9' G14 EWETAWSRMVRM1QRDKNHPSIIEWSSAFGHNFZE i16.49395Q M6 RNKTANDRl%'R"mRDm{p&InMsImEsDFgDNFRA 4Q7¢5nl3. 421 ~[mDRÀE.QL\/ER\mHpcQYgQNQAA RXKCD26.Z6 424 QLmÀ=RLERM1cRDRNHàcvmsLgNEsgYgRNmÍ 491763P8 419 gwEKvYvm\/RElLHAQm{ps1IImLgNEsgYg=RA

   29377LB9 4 54 ~IVHYE@FE. . .. . .. .. .DVYST ZI649395Q 4'4 .6 ,YPTRLVKY·EGDFE. . . . . . .. . .AEVSDVYST 4D.M5013 461 MYKw:KEmpsRLmEQDFlN. . .. .. . .. .AE¶ADTYSQ RAACQ2 Gl 6 4 64 ~DpTRpvKYEgETR·NLLELgsDLQjlA~wsT 4917630'9 459 WLSTRLVWEEDRD. . .. . . . . . .AEVVDIIST

   293771B9 484 ,WTWL£A PMELLNNTZ XENSKKPHILCEYCGPGN LLG49'3'95CI 47 6 MYTwLEmuw=AD\ÍLQKTQKpHn=tAHs~gpgN 4Q7450L3 á 91 MYS. . . . .spwrMítEHmNHTDmL1=¶pw RXKCCI26Í6 504 MYT. . . . .5vDusm=wLpww 49176308 489 i«m . . . .RwFoYpú'p#wiow%

   0 293'71i.89 524 KLQggF2mFDxgIEsvmjNgEvYYRY Li£49395'0 51 5 =YQDLEYgHQQLQggE':=n2DQgvAAQQgD.QTYYRY 40745013 526 =xíELFRsHpL3QggLm]naqHgLLKKE(m.

   LEYYAY KÃ&C0262G 539 QQRRLQGGDKGIÍAY=GRPYFAY 49116308 524 LTwQNNmrKHDcEQgHYvwEwcDHgIQAQDDÈlgNvwYKF

   2g377lB9 564 =EgD!jpsNKDFclDmLMpDRTpspsLYEpIT il6£93950 554 ggD=QNFFIDm=pDgÍQpsTALTEmc=pFQ 40345013 5 65 ==Em)MjFvBDgL¶LsDHTpMpsLLEY=1çlpvs RAACQ26L6 579 ==mmNFvIDgLLFpDRTpspgL7Em¢µ:IEm 49L?63QB 5 6á =Y@ypíDgLzYsDQTpgpgLKEYKQvIAwK

   FIG 20C 29377189 60 él TsAFD\&sgEF5LLsRFD«NLAr9KLvxTzTEDQTvIQs. 116E93950 594 MmRDLpTQ=TvTNRLDFLssDQndFgYELEwgKIMAT 497'¢5013 6lj5 vNLTDI)ss.$MvITNHyAFvDL5gLm7swHzvRDgE=M RÁÀCD26l G 619 vLàEFDRssgIíKvQNRYDFL=cLv&wsLQDEQsvLAg 491763'08 604 IllARDLTRg£LmNmQFTTLD[mrImEvRAEgETLAT 29377189 644 GTVAVPA rAARÃE1mMwmxEpKKAgAÀYY1=sYQL Zl¶49395(j 634 g==.ImgTTKm KLDIELP m,DpEvlYNLHvLTE|L 407¢5:Ql 3 644 QE UDLPFVP. . AgE3RTvDLpLf)pssLsKETmIEFKL RAACO2 62 6 Eh9 gí LEWFVPPRSIGQI RwcA=LNRHFmRcLnmmFLL 49176308 644 QQIKLRINAF. . . .NsEApLQmjpQu)AREÃEIMITnK 29377189 684 KETTAYASAGHELATÀQFÊLPIA. . .. . . . . .TPGIETTP

   11.6E93'950 673 KMg=ADAgNLsQmNN[QRp. QHHMTHQQ 0 407¢5'013 RAACQ262 6 49176308 68i wDmmYLwpgssAs7sssK·mTpIsm 699 RH pTDYApAEKEsvAsFcEnE=QNAs. . . . .IDIYRPV 68Q Ij5RTRYsEAgHpiATYQn=NTAQp. . . . . .VPFAPNN 293771&9 7 I 5 VGSLMKKEZGPHLYIEGPNES IGALTNVTRDGKK 116E93"95B 7Q4 =ALQK$ENATTmvTg=¥REDKIKgT'Fs .LTHDGMK 407¢5Ql3 7 21 sgmjEvKQNQ7's=I FGTS I FgFNLxQgNvmEAN .GÃS RAACQZ6! 6 734 ER.EE r!/EKgssLcImjsFsvEFDLLRgRzsgvgYRgsçl 49176308 714 mpLmmDRLscTyRIFFgmsgKpTswQYNgEs 2937'7189 755 LLF=~TFwRApIsm. . . . . .ME TIDEMKLHLE 116-493950 743 LTeu)gImg1DND. . . . . .mylldijyynkyflnlw 407¢5'013 7 60 LEQRgmsFíRAmmEgQs . . . .GNEAEWDDAWVGTM RAACQ26! 6 773 nMsE'L5m'wRApDp!2NmE$vaKvwRuYgv[IRL 491763ü8 754 bLFRE=NEFKP=NFL . . . . .KQEYEGWQENlúQIM 29377189 7 g 9 mFEwKKvD. .DEIQvIUK!nNAmyçK=Q I.LG493950 777 HE$TREVQLHPQTNGDYVVNLTKQW.TWS1QQQ 40745013 7 9€ IHmvRDvTwRssD. =Amtmmi!ÀipQvLEmvEADw RMLC02.6J 6 813 SESVSNIEIKKHD. JWVRALVESRVNRGLLQXE 491763Qà 788 QEEILRDFAVEQSD. .GEVLIISRTV[APWEDEGbt!RC¶YI 0 .V..

   29377l89 827 YLIAPNG. . =FFDLKOPAGKIENAFMLPRLGVT= 11649395Ü 816 YTMHQW. . .SFDWVIG 40745013 834 YTISTEDSVPTLIlílWTWWG, ,SVVPRLGLQ"IL RAACQ261.6 851 YIFLÊÍGG. . .LVMVRICGKFEG. .&YFp.TIiRRIgEL=I 49176308 826 WRXAADG. . ..QVNVALSGERYG. . .wEpü I"PC./GFTMGI 2à377l8.3 864 DKSLSEVKYFGKGPRWYVDSQEAGLWVYDATV ·¢' 116¢93950 853 pKAYQwsYDgLgpTENL5DsilQAµyY5IETssvDDLFvN 40745013 872 pssF=vRwLgRgpgENYKDsmAcR=YsATvEmFTH W RAACQ26Z6 885 lILDE[mMqFgRgpgE5YRDsKEsQL1gRmaADEL= 49176308 a GO NgEYDQyAYygRgpgENYADsQQANIrDrnRs=AMEEN gg 55/75

   FlG 20D 29377189 9N YvvmAtmumATKwsAE'TD. .. . . .. . . .DRgQgvYàTà !16493950 893 N{=DQíALTD. . . .. . .. . .GQDQ.

   LTVTM 407450i3 91 2 YDypQENgNKEDLRwI,QIsDpg7g\dTuj&RRADAm1QTb MAc926i6 925 ¥WPQDV"zWT5ITN KYMEGL7ITG 491763DB 9âo YPFPQNNGNRQWRWTÂLTN. . . .. . .. . .R'HGNGLLWP

   2937?i89 934 ADsmsvs.YEEEQ=vw==EsEYUvLNIDYKQN 116493950 922 AKplâNFsvsNYADETIEAÀmujIbKKsDALNLx@FRQN 407é5013 952 vE¶7sF=sQYMnDLNFDLKpLDm==YDNF1 RÃAc02gi6 955 E?QpLNFQvsFws!m)KERÁRHpymEspwRYI,RIDmíH 49176308 330 QE?p=AwjmQEN UIAAQHcNELQRsDDz±LNLDiIQLL ·

   29377189 974 ÀIgsYscgQwQIEKYRTTFEEFQLj'\ERLTpENNKErQAAD 11649395(J 962 amNscgii:NQI&RHRcKET)DFELgFNFK'w 40745013 992 mgsAsvgpQpFEQYRcKREpFDFAmsLL" RAACD26Z6 9 95 gIgsAscgpg!n&E'iQLR'[EpFENTLcF&pl.ARHEz DESI 49276308 97 Q gwsNsNgsEvLDswR\MmjFsygnLLpvsggEATAQs

   Z9377l89 10 í 4. VAKER'/KRPTE S íl.6493950 407€5013 RÀAC(J26Z 6 io3s WQWTÊRLKFI 491763Q8 lOlâ [AsYÊmgFFmm~

   0

   !

   FIG 2IA L564.2&3'Q 1. MDYRMCWLE¥WLP.ADVAGKLK Í4B270QQ4 1 MDYRM=EYRGLP .ADVAKKLK 15Ri3624 1 =. . . . . . . j=mEm=mmj$ALlITQYR IIB72S9'7D Z M¥KsNyNDgLYmNgYN=gYMLLENgELRENY5 RAÀCD266L 7 MTN LPEGDWES PLFRAY FEAARR llG62l"?94 J MsFKFLRLLLTIpAvHAEzgYDmRm?LsARpYLT l564263Ci 2.3 DwFssvstLEpgs. . SVLKDE'ARFSERS IGITPRFYSRE' l48.270004 23 DNFSSVSUEPGS. .SVLKWÍRRL'$ERS IG"ITPGF?SRP 15613624 28 AYFQ?IEIKGNSPZ íEsAKEEwQgLRsELmTpKcLsÃr Lmz5g7'a 36 QmsNIv·I5m'DEÍKíALsELKsgI ngilgvrawvtre ~C02661 3'í . . mENYg?ADDpLLc=AAEwgRAvRAAEgEspARL= EIG§2L78'4 41 ALpuwvYgAsmvQmQREL=vRgMwRTLRMEsKL

   K56L2B30 61 ucm ..KYTKVGRLE3LP. . . , ..1Kío. .vNLg=nj 0 1#27QO04 !5613624 6L LKKE . . . KYIMVGRLESLP. . . . . .IKFI)'. .ENLGEEGFM 68 GEQA. ..SCL.

   IgT.TàDv&E.vsQAIK. . - .ERLREEGYÀ il87259'70 7 6 PEQS. . .SCIALGVL5R6.QN.

   IDSYVKYDEVVQIGNEGFI ~Q266L 68 p=pgvpwAMgLLsAMpRgLrqEAAQAALAgÂp$bEm ll%2l704 B'L P~. . . .AILLGSMGDLQA. . .AI PQLHLPPDLPADSYL ..V~~~mvv rv

   1564Z83Q @0 LRT wwNoKT^LwgETKKALvYgIFD=Rm=D IE !48?7QQQ'4 9Q =LEvmgsK=vTgETKwLwgIF IRLGEDIE 15613624 39 IYSEKGR. . . ^yLvgKTETgvIbYgTFíiLmD= !l87.z5g7Q 112 lm'KTgNmvvngTTTKgLLwvF$LLRLlLQTuTIs RAAC0266L LD 8' ELpyDgQg. . .yAvv3RTpAgvLYgvFt@I=RLgEpLH !!66217&4 i L4 VTTUTWGAPHLV IÀGANDRAVLYGVEALLRK1GTGQTLN

   1564283(J 130 mmAKmKFmÀHwmDgTIERgngwTm= í48zM0c4 i30 ET=S1 15613624 135 DLRjvENpRNQLm!sÍERg¥Aggsm 118725970 152 GILKZENPANQLRI íN1DgsíFnTNK RAA9JQ266L i45 EE'&v5spKNawRMLDHwDNADgTIERLFm3gQ lí662í78S ise DD"Dp¥QTp¥A!'vRwvNEwNNíDgTíERgYwRs1wD=

   156¢2830 n D FTI N.Qm'm LgINgvvnamNKKREmA D$ 0 148270004 15613624 170 IIINAR:nmAR1jasIgINgNvmwNvKmEvmDs L75 'v1'NNLmmYARÍbss IGINA=FNNVNVHEEEmAmR 118725g70 102 vTEDLgRImYARILcsvgINsIvrNNvNvE{KYgm= RAAC0266! l84 xDFDEgRmDjLARLIkAsvgvNA!AINNvNvHETETw"L= 116621784 i34 ARADLm'ADYgRMI^s'K1QAcsmNNAN. . .PRVLA3

   156É283C 209 nLKKmaADIFREYgIxmsrNmspv2LggLDTADp 148270004 203 íY:LiKRLKKIA'DIFREYgIKmmNFAspvyLRgLDTmp 15613624 215 KELFDvAKvA!qIEmYgIK=LsINYAspzQwKLETADp llW72S970 2 32 KYLNWhSIAQ1ERDYGIKLvLSANFASTIEíGGLATADP RAA¢(J2661 2?4 MLpmRLAjmRpYgTRvFLs1NEAspvDwDLFmDp 1I6G21?84 Z 31 DFLpET\TREAEAFRpwgrRvALAvDFgspKsíggLDTEDp

   FIG21B Á56'42'83Q 2¢9 IDEFmuiNwREKARgIY7jyIpDFggnNKADsEFNpgp!7y. /4B270QQ4 249 LDERvÃHwwREmREIYDÜIED~nvKADsEFNpgpEn4

   156136.24 255 IDEKvRAwwKmmDmuIpDFggEwKADsE!3RpgpFT 11&725970 272 mpQvRKwwKEKADE1YsLImmní~pFT RAAC02'661 264 IDpRvEDwwRATADRIYíulrpDFggELvmDsEERpgp* 116621"784 271 VDPKWAWWKSKI DELYRAVEDLAGTVLKADSEGRVGPST L5642830 289 FFWWRDYK 'là8'270004 28 9 mR=AEEgg\NTwRAFvYNcLQD~YK 15:G"1362.4 295 YmNbaAEALApEggmjwRcE'vYN~m)RK lle725|37Q 312 YgRTKAImNbaAEAIEFYggLvIwRcFvYNcmDHRDRI mco2.6g'l 304 Y~HAEgANMLARALApwgvv1wRAFvYNmMD~RR ll662l78.4 311 mTmDmv"QARgLQpElwLLFYmFwDI{Iwm~pK 0 l56'4283Q L48270OQ4 32 9 TDRm^YDNE!KpIDgQFDDNvTTQIKYgmmvREml 32 g TDRAKAAYDNFKPLDGQFDDNVZ ZQIKYEWREPV7d 156'13624 335 mRARAAiyDEIFKpIDgLFE!DNvvLQIKNg~FyvREpvs íU7259K 352 TDRARAAYDNFMPLDG!JFR£NVLLQIKNG~FWREWS RAACD2'66L 3¢4 ADRARAAYm¶jpIDgRFLDNvLIQIKNg~mvREpvs LL,662-1784 351 NDRgRAAYDNFQpLDgKF[]ÀNvzvQmigp=gvREpks i5'64283Cl 369 EIíEggl!{EmNQILEIQITQEYTgQQn=FLgTL~= l[4B27i0'ÚÜ.4 369 pLEggMERTNQlLELQITQEYTgQQmicFLgNL~ILE L66l3G24 375 pLEgAME?KTNQµLEEQImEYTgQQKKLcYLvpQ~= íje725'g7c| 392 pLEggLQmNQu0EIQITQEYTmKw=Lvp= ~CD2661 384 pL=Lam/µµFQITQExT=mcyLA= ll662l7&4 391 PLEÀALEKTNQAIELQITQWEGQSVPMWKTÀLD ~e"~ I564283Q 409 FDTmKgEgsnKR1vDg=ET)REbjNgFAgvsNvgDs~ L'482700j04 4D g FDT7AKgEgsYvmrvDg7LFDRKNNgmgvD,s= I56L3624 41 5 FDwANgKEspvK5rvDgsQ=YKvsgr!'AvsNvgNDEm ILB725970 432 FDTMAKgRN=mmTgsvFwU(LgglgAAvTNÍgND= RAACD266'1 424 FDTELARgpgsTv"nEIAsgRLFgRpmg\/ÁgnNvgDDm LL662L784 431 FDmAgg-=wKALÀAgKvFiiRmgFvgvsNlgLD= D L56€2&3Q I4B.2?QOC4 4 49 TgHDImANLYAFgRLAjqNpDEEIERIvEEwmmgDDE 44 9. IáAQANLYAEEíEBIvEEwIKLT=DE L56L3624 455 TYg¥gRLAMNF'NLsTEEvTmn'RATFgDNE IIB7259% 472 TgmèaQsNTYgjcARLcwNpDLsAEmTDEwvRMTYs-NYE mc0266L 4 64 Tm{sLAQÁNI=DpsLDpAgLAREwÁRLTygDDp llG6·2l%4 4 73 SGNQLSQANLYGLTSQQIIRLTNNE,P 156'42830 48 9 KvLENvsnmqKsFLF(TYEKYTTpFg.pgHKYgpN

   P V l48.27Q0O'4 489 KvLENmm4KsHRTYEKYTTpFgI=mL PGHHYGPN

   1561362.4 495 INIQTI n=LQswLj=sYTApLgvmm. PGHHYGPN il8725970 512 LgsmTYENYTspLgIgm/N. PNHHYGPN RAAC02GGI 't04 INvRTvvgmsAswpÀYEAmpwvmwN. PGHHDGPN Iig62i7B4 S.Llj KTvETI=LAswpvFEKYTgpImQTLTD IVGDHYGVA

   _ T 58/75 FIG 21C l564283C 528 WG¥EYTYHRANWE.4IGVDRTSR. GTGYTLQYHSPW

   1482700.04 52B pEgYEYTYHRANm4IgvDRTsR. =PW 156L3624 5.34 vDgYE'mNgTYHYADcHgígvDRT"]hT=gnRQm% IIB725970 SSl vDgYEY]mm=RADjUmmDRTvKsgTgYagQv RAAL0266I 543 FEgYEYmmYHYADwRgvgvDRTMM!gTgng=pM lí662l784 550 vEÀsEHN~"mNADEKgvgbê!DRTvATegY[gQ=Ev ^ 156€2830 56f7 KE=DDINTcpEDLLLnHRvRY=aKsgKTLLQTwDL 1¢827ÕÔ(J4 5 67 KErYDDn=pEDLLLFFKRvRYDHRLQTIYDL í56l362à 5'74 yELmuEmK}sLLLEEmvpYTKKLKsg!QTvIQtíIYDT Il872597Q 591 AgIxED!qDKcEEELIiwEHHMpYDYiLKsgETLIQyIYN7 RAAC02E61 S B3 RSLYEHLETCPDVWS=·lIQiLIYDÊ, íi66.21784 590 AlKMYEsI=cpDDLLLFLHHvpYm=sQYLms ~.".".".' , 0 156¢2830 1A&27000'4 607 mmEENEEnEKwEELKDRvspDm2RvKERLHmLm 607 HEEgvEEvEp,nKKwEmKI)RvppDmsRyKERuHqQLEH

   156136.24 6JA HF5gAEQÀmuiEswRsLEmvDsERFQQv1âERL£[¶IQ~ ííê725970 631 HFKgvEEiivEELRNKwFsLmwIsEE!FLHvLERLDgQ= RAXCQ2661 623 HFTjgvEAvm=Aw!UUbQgRTE)pvRFER\mALE[QmR íl662iN4 630 KYEmDA~NwRDFQsLRgHTDDQRm^m\m YQAAH !56à283c 647 G. . . .. . . . . . . . . .. t¢8'270004 647 GIPD. . . . . . .. . . .. . .. it56l362¢ 654 AKEwRwINTYFYRugIpDEKKRT. . . . . . . . . . . . . . . ll8'72597Cl 67Í svTNTYn&qTgIsDELgRK RAACCI2661 663 ACGIPDARGLH. . . .. . . . . . . . . . . Í!66.2L784 67D VEAVNNWFRR"SGIADVGNHPGRS

   M l564283C 672 . .... .IYP lqB27Q{jQ4 672 . . . . . .FYP 15613624 679 ..... .IYPI !!8725970 696 . . . . . .IY RAACQ2661 68.8 ......IXP 11662Í734 7 LD GYTVAEITPWESASGGKAVTCFA$KC"A·SMQFSGAPGW¥T !56¢283Q L4é2)0004 15GI3624 118725970 RAÃC02GGI 116g2i784 150 LRYQyFnLNgpvssFKLwvgNQLvDENsATDHLpARKLDA l$6tg283Q u 14827QQQ4 0 15613624 118725970 RAACQ266L ljG62l704 7 90 $$sTRREvsgI&LREgDgyRIEaIFEgRELkALwLEILp

   FIG 21D 156¢2830 14B270OD4 15613624 118725970 RAÀe0266I 11662L7B4 B30 NEPRQ

   0

   0

   FIG 22A Rmm2@25 52Q80Â73 i7552962 i5292329

   6.6851Q1Q L MEKmcsE'FRe!R"ARNRg I'GDV.LGSKTVIZLVQLPRENQ 4Ò?39Õ53 RAÃC(J292 5 52'080473 175S29h2 1529'2329 uàsibU #i TmK=RssvHpKRRNDFLSRwsTNFLHFHsLsLspQm 40739053 RAAC0292$ 0 52â&0473 17552962 L MmYRNLpbLFR. .. .,. . . .. 'i529z329 L QRIMY?FgEtmc5QLFMLgg. . . . . . . - - '6685JÔ1Q Bl Tvmm!I!mFLmNAmmll=u=mRQ5wssF 4073%53 l MPLR. .AKuTNpsmTsN. . .. . .. .. .. . .

   RAÃcn2925 I MDSVLE'RQTG 520BD973 L MSPWLFSVNQ 17'55·29'62 F S . . . . . . . . . . .gLHsKEvcQKmFsvsÀAAKsErLvDTHg 15292329 2 5 . . . . . . . . . . ATI SQTKPT"MALWRQSS .SSVLATESS 668510lG i 2 í RGCCE=YSLSLFAM5tAPELPKfLPGDEPDSSL·Y 40739'053 !8 . .. . . . . . . . . . .MSTASN ED mçAQugDEpDwLFNsLF RÀAC0Z925 it jFvAm=tEmLNÀL5LEMIRLLRRHLDmAgDp$vEL 52CL8DG73 12 w'sLrYrgETDQN"sI 1-75ã29.g2 43 . $KKvmmmjNuNjm€vREFméujAwN$wDvDL i5'2923·29 â 3 NK=:lINLEMvRKryKHLKKcEKsK. . SL 6685L910 161 .gvRLÍELNmtK1íN3LNgsb{ARKILpKsQIANí 4'U739Q53 4 5 ^vK[jiUEwRpKK1:iNsLNgsMvRK1LpRLKE~;sQLANl RAACOZ 925 5 0 VVLYGEGDIRAL?DÃKD.EPNLETAA. . .AFF 0 52080473 17552962 52 vmcgAgpKlacAggDIKALYEARssKQALQDAE. . .REF 8 2 VI hKGSGDVLAWRSFKD$ESGKE=MHKDW

   1529232.9 9Q vm¢gTgDmmggwRALvEAgpTDEs. . . . . . .KSFF 668'11010 200 VML5GAGASLALQNEQGPEGQQKS . .TDEF 4OT39Q53 84 nqw(gÈgnaLcAggwAALiÃIANEKgpEcwA-s. .Tjjff RAÀGJ2325 8'6 5EIjRvARFpKpvvÁL=L=mmw $2080473 8 9 KEgYEyDmvHRrsKpI rAcLDgTymsIiRI lZ55296Z 122 REmLNHLIgm«QYvcIjIDgI¶MsggçmsvNgREm 1$2923'29 123 SGNYKTPY1AIIDGISVHGKYRV

   668.51Q1Q 238 nIIATYTm'TsvMDgr=ggvgLwHAp= 40"73'%'53 122 gLm=wçrÀTY5KpFIs~gIsvHApFRT.

   FIG 22B RAACD29'25 126 ATDRETgIgFFpDveKmALsRmggwFmALT 52'Q8D473 129 EMN/gEFpDvgAAYmdKApgRLgR¥IágLT 17552'9.62 162 =KTTALgLFpD~sYnsRLKT 15292329 Z6'3 AsDRTLETAIgLFpDwgsYELpRLQLngLT 66'951OLC 278 ATERETTIGFEPDWG?RL1JGEIGTT 40'739053 1 62 ETTTGFFPDVGGS!?ELP IG"YLALT mAco2g25 ! 66 sEsvgADmjíAgLANgwLpsgEr¢psfEAELvKRgEQgE. 52080473 1 69 àsn PAADVLYTNGADAYMESGALERLLQAVEQTDWRLA.

   17.5'52962 2"02. smugADÃEmgLATKFvEssELAmEmNN IKDVTEN 15292329 203 GADVYX5GCESSKI FDLFTALWC PDkíjiO. 6G85i0.lC 3 l.'8 sERLNgvQabYAgLATHmissvL5NLTwRD& 40733053' 20.2 sÀRmwQAtngmTHYFDssvLgNLTQRLsELvmDsA 0 mkcD2 925 S2'Q8D473

   20.5 TAEQu}R~AKLAvEHR. . . .. . . . .PSEAVADFLRRVQ 208 svEE=QLrREsKTEps. . . . . . . ... QEsTLAM]QQAIu 17552962 242 WDEVI RS SEFYKIPEFS LSQIR 1629'2329 242 NK¥Ê!5FPEKPF$ LQPVLEQIN 66B510IC 3'58 SLAERLDÍVN .KmAEFsvgLppvEQFFíQLAgsbRs=

   40739.033 2.42. TLQERLDLEN .RmAAEFATgLp . . . . EEEQLAGQ LRSAIÜ RAACDZ9Z5 236 kYFDSFsLSDILARLREGSSRDPEAAQ=zLRQRSPLSL 520BD413 239 KIEÉILQSLE. .SEGWFS3KSPFSL L7552962 269 DSEKAKSVEEII&SL&KDG. .SQÀATLGKMSPTSL 15292329 268 ADSNEGILENLQNML .S5£SM 66B5 LO io 397 RcmiiNnEEIERAImEm/HmaQKnE=ssEspTsL 40739053 277 Remnj=QIMKRlEREKKQ==M5QRspT# RAAC0292 S 276 RmFEàLRRAgNmYREvLE=LTLALQFTRRgD 520BO47 3 277 KITLKQLAImQKTLEEcnTDLvLAKNFTxlxNDnE= 115$2962 3'07 KmmrrEgsKMsYAmFT!qE¥RLTQRFLADKDFHEg= L5292329 3Ü6 KvTFmLELgsQLsLÀQcLImYlaAvRHuFsD 66B510IC à37 sIsE:rFQREYQIAAQFMKFwDFvEgv!¢ 40739053 317 KvMmMRwQ&'gIRETFQREYEIAARFMQHpD 0 RAACO'2925 521)80473 3l6 AQLvDm.R!im{wRHADIA]3vTAEEvrAnEpIAHLsIpF 3L7 SVLTDRD .QepNYKY=s=DEÀwmQpsE. .SVRF 17552962 34 7 AíLvDm.RKmNpm7AwKDs~NYFsnpNNsDbK 15292329 3¢ 6 AIAADm.QKpQwQpTKLADvTEEHvRpDTww 66&5IQIQ 477 ARwsKpE!RQA!nKmn;EEm1DAvDàmad?A[jKsRLT 40739053 357 ARIdma?m2A5wQpATIÁEvsEKwDEFFKIpQgmRIg ··· ~CD29Z5 3S5 AD 52Q8Q473 17552962 3B6 L 15292329 3&5 L 65ê5l0l0 517 &YmDyKQ1m?AEgLps£AE IEKFVRDSS. . . . ESASKT 4Q739Q53 3 97 ELsQENwnYpusYgL?sEmIEKFIRERDpK$m=v

   FIG 22C ~C02.92'5 52Q'81J473. 17"55·2962 IS292329' 66B51.0I0 553 vAD.g.«+mQTpEgLRwE 407390'53 437 mmTKEEElIKEgvmu/ÁEvLARmK$AEgLÍwQgEgA BAAcQ2g25

   52.08047'3. L7.55296À 152923·29 66B5.IÔ'I¢' 4073'9053 477 ETDGQ 0 0

   FIG 23A 72-5973771 1 ravo ÍKKJ : KQMTLEEKAsLçsgLDFwmçpvE]RLgFps mcomo.i l M4YmwsRLTLLcsgLQTKpIERLgIps 1l6334524 1 mLERTL. . .mmj?EKAALvsgKNNwYTAAvDRLDLpA I1G6L7985 j KsTEFNLsFvQgLT\lRmLELv¶gKDFwiETRENIisNDrpK j1.ü494248 ! MgvwsNE1nAKmEEK\/KLTsgKDFwTsEH1ADKgIps 66&5L5.52 l M\/QLDVEKT7 EEIiTLgEK\7AL'mgIDFwHTAAvFRLNIps 125973771 40 nnmgpHgLRKQREDAEIADíNN5vpA7cFpsAAg=s RAACO30U1 38 LHGVRLQRQSGS.FTDSE. . .PATCFPTAAÂLASS IlG334524 38 mmgpsgLRKQTNsgTTN gmjAjQArTYpAAAL~T 316e179b5 Ql IN1/TDmgLRKQAssADÂLgLNQ5vEAIAFpssALm5" 116¢9F248 4l m€sDgpµgljR¥QALAADmgIND5vpsTsEpTAsAsAAA SW5I.552 4i PNGVRGTR. . . .. . .FFNCFP¢ATALGAT 3=97377! 80 mRELvERvgAAIAE=QAÉNvsILLgpgANíKRspLc= 0 RáÁE03001 ?J9334524 7 5 mpALvERIgQÀIgDEcRALgvHvLLgpgANImpLtgR 77 wNE$wHQLgEÊtwIEARAEwspLggR ILG6L7985 8 I nqy'MqLYQLgQNIgTAsRA£Nv$vLLgpg=_mpLAa Llu9'4248 81 w)píjLzQM'gKA=EAQsLgvI»mgFg\/NMmqpL= mms'z 74 WTKLEXEVGRLMGEES mlKgAHvvIgpT=QRspLL:gR 125973771 120 mYFsEDpyLsm^ÂsÊuKgvQsQgvl3ÀcLKHEAANNQ MCQ30C1 !15 NFEYFsEDpLLssEtvtAAAHIRgvRsRwgssmFAANNQ IL6334524 ll 7 NEEYLAEDpLvAgKLgsAyvQgvQsQKvmnwKHFAANNR Jl.£'.6l7985 121 NFEYFsEDpYLTgmmYvKgvQsQgvgvsvKHFAANNR JÂ6¢94248 J2I NEEXF3EDPFbÁGKLG3AW rNgíRsQgLAAcLmFAANNQ &685l55l 114 gmsg\msg'=wÉlYcKgLQETgvAAFvcNDQ ]2.5'97377l 16Ç) EÊrRRMTvDTnDERTIjREIm5EENAwKARp'AY RÃÁCQ30D1 í 5 5 EYm=sAEvDERn&ErYLAsegAvKggRpM!¶Mcw jl.6334524 157 EN'QRFTAssmsEmLRELYLRTm 1yKsAYpAT-LMT5Y lLG'6L7985 í6l EDQRFTsssNvDERALREIYLLAFEKI~ÀHpATíMcsY jl6¢94248 161 ENDRLs3DsLyDpTAu!EIyLEAFR'IAvTEsHpm~5Y 66851551 J 54 m£RLAvDsÍvTmAMREm,LpERLAMRIcKTAcvM1!AY J2'59737H 2 0 0 EYcsENRYLLTEvLmEm!iDgFvvsDevNDRv 0 1ULÀÇO3001

   1163.34524 195 NRLNgTYcsEHpwIiLT'Qv1;RREwgETg\/v\7sDmAvmRv í 97 wíNgvLNsQNERLLRRtLRDEwgEYlg&vMsDmAv»1m II.E6L7.985 20! NA1Ng\mN$=RLLTEI1;RmqmgwMsDmyADm 11649'4248 2Ql mINgT}cksDNLmmvI&xlFgFggAvImmRLNDKv

   66.851 551 194 NKvNgm/sEKsçmmm&KÊwgwDgLvM=FgTY5Tc 1259?3771 24Q sgLBmDm{g1TDKKIyEAvK$Iv

   W RAAC03001 2 3 5 QgggF%AQDAEwQAvRwRLDmvIDÃAv l1e34s24 237 QALgQAsrNDI=AyHTgELDEg=NKAv 116617985 2 41 A5LKAGLDGRYS u]uv3AvQNgQIiEEsKLDí SV lj6494248 241 AALNAgTDI=pgDIjm'TlmlLQAyumLKLAsIDRAv 66851551 2 3 q DAí!agIDLRggpTRwRgTAIAHAvs5N~EFvlnDERv

   FIG 23B 125'973771 281) mLKvIEMAL. . . .ENKKENàQYDKAAAEs RAAC'03'O'QI 275 ERLLALI DRAY. . . .RPQGDSA. ,DQAAÂES

   1163345.24 2.77 RtmKwDDh'. . . . .lpadhaqpydqeddg 1166179'85 28Í LRVIALVEKFR. . . .vsEDDsTDm=QwF~Ds LI649424.9 281 TKIAEIÂRKQR. . . .pwQgsAEQL+%mç}Kí&3A GGB5'15.5.L 2"74 RNILNLmFvEpLgTpmÁpW .125.97377! 31 6 tmamEDDyLF'LK. jtsgTIALIGARYQgsgssH NAACO3'0CI1 309 FNIíImDgAvLpIA. .PGRRVAVTYSPRYQGGGSSH 116'33'!4524 312 I IEDEbF!LDpQTTgKvvvIgELAENmTQgsgssH il6617"985 317 IÓ1NLPIK. .Q=mL=tAQNpRYQgggssH 1'16'494248 3,1 7 LLPI.Q. .ATDTVAVIGEFR"QSH 66B5l551 3'1 q vnTwQl2N ILPLK. .WPILWG.WYC%GS.ÜS 0 i2'59.7'377l RAACQ'3'QO1 35¢ TTp.=LDDíYEEíKKAgg 3¢ 7 VNE'C,RLDEPLAEMRRAFG. . . . . .., . . . . . . . . . . . . .. .., ÁÍ633'4524 352 mTKLvsp\LDELAgs 11g617g05' 355 vNK*KvnYdEvAsNs. . . . . ... .. . . . . .. . . . . . .. .. 116F9'4·248 3'55 SNASBIVSVLDGLKQK 6685'L5.5Z 352 LDÂYYTVTPFEGWAQSQGEVTFSQGVYS I"KELP LL'GP LL 325973771 372 . .. ...... ..... jmNLyYsEgYRLE R&RC33UO1 365 DQL,NLYA=A» L LE3'345:24 3.58 . . . . G·LKADW LL6i617395 3.71 DYNVTYTAGYSLS 11Fa94248 .3?1 ... .... .. , .. . . . ., , .....KYS G635l55l 392 KTDDgKKmcEmYNEppsEpNRQL-I DELHLES3 5G?% Me·~ ··L L259737'71 3'86 . K M K A A & & K & K m k * q a. e. " *, r r m r. F. r r r R&àco3nQ1 378 .... ... ....... .........,... í263'34s2.¢ 381 W LL6GZ7985 3B4 .. .. .... ...... ¥ W W W ii6494248 384 6685L55Z 432 YKHpKIKmF"FyVDME'gYFrpEEwI YbFsvTvvmKgF 0 i25g7:3j'7l RRACO3D.D1

   3.86 .... .. 378 # N # M M M & k & Á K Á k k « q « 4 q p q e 0 0 r. r Li6334524 381 ..., ... ... .. ... . .. ......... ll66í79B"l 384 Lí6494248 384 . . .. . .. .. ... .... ... . ,....,. .. ,..., ,.,., 66B5í$5i 472 vDDELYvDNsKNQRQgTmFgNAmEEKgsKELKR%TYK V·· l2S9737'7i 386 NDGIDEELI MbCQ3QQí 378 .. DDAPRLELI IIE334524 391 QSETNGDLA LL6GL7985 384 .. EEKGNLDLE li6494248 ·3'84 DQD.DSQAT gg85í55i 5L2 mQEgmp?sDLDMRgvvIEgpggF'RFguRRvsQEELI

   FIG 23C 12597377i 3 95 NEmçAAsssDvAv\/FAgLpD~YEsEgFDR:'uMsIpENQN RÃACD30DL 3B7 ADVAÀ !TAgLpEsçqEsEgYDRpDAF']v 116334524 390 EÃÁLTENT íngYpEAAEsEgFDKµs»apENQs 1166L7985 3 93 QmEsIAELsDKI IFEAGVPEQDESEGEDKKmIDLPENQíj 116¢94248 392 AmALARmDKvvsmgLpmqYEsEgFDRQmALpKvQN 6685L55Z 532 sKAAEIAsQgsQvvImgI=EwETEgY=Ê&LppgsD 1259737'7:1 435 BLI'&sxnjEvQsNmNLLNgspvEh£mDKvKsvLEAYLg RAÀQO30QL 421 íuirEàN'T$AQpímNvLsNgAI HRvpAvIEAm4 116334524 430 DLI:gsLAKANvÊnmNLQNgsAmmu FlSVAAVVETYLÀ 1i66t79B5 433 NLIQH.L$ÀINPN INVLQNGSAVÃTPWRNKVKAWE ll6gg€248 é32 DLLQAvTAvNpNvrvLLvADQvKAvvNL5L"g 6685t55i 592 E:MTsRvLDANpDT\NvTQsguKAmL·LQANFg 0 125973771 raàc03001 475 GQALVLFSTWVKLSHNPS¥LNFP 4 67 ~smwpswFí pyêp il633¢524 47lj GEAVGEATWDI rrgwNpsg!uà=TFpRRLmmQApTm ii66i7%5 473 gEAvgEATiNNzLTgQ=psgKLAETFp"KI EDTPAYGTEN ilH9424B 472 gERFgAAAÃNvLTmvNpssYpLK¥QDvpsADvYD 6685L55i 632 gNEcgNg[ADvLYgNwRFL.gFpvRLQDNps 12597377L 5L'5 gEpDRvEmgLEvgYRYYDTKgíEpLFpFgR=YTKFE RaAc0300l sm RsEmwwgYRYYDTKEMDwFp==YTTn II633g524 $10 QDpl=g!~nnTn il6Gl7985 513 '=D==mjFYRFíYDLKRKEnFp~=YTDw Il6qg424B 5lZ KKPR"VHVES¶Y !mRm«AKvFvAFpmgLsYTsFA 6685L55L 672 sEmRvLY=Dí wplftes ~"·.

   1259?à77l S$'$ Y-5ÍDzssmKKDvs . . . .DNSI nws,vKvKN\/gKMAigKEm rãã003qql 547 ¥E±rRMsrm'jR .·. -.di)dvltvüvuvi?ntgqragkevvq llG334524 550 WNLKLTQN,. . . . . . . .ERGATVTFDVTNTGÂRSGQWFQ IIE6L7985 55 3 YDDLEIVANM . . . . . :KKHvTgKiKlTNvgsIYgKETÁQ 116¢94248 552 LKMQLSSDRVT. . . .DDQpLTísLQvTNTgQvDgAE"NR 6685L55L 7 L2 RsDLsaTTpEKpQLEDgEp1mvsvTNTgsvAgwIvQ 0 l25g7377I R»:C030õl 'igj LYvKlwKssvTqRpEKEIx(mmE:LNpgEEKTvT=DKR 5B3 vwEp'RssRvvRpRRELRAFkKv:ÈjApgETRTvEEQLgm 116334524 5B.2 L¥LANHAslívpMpTKEI&AFTKvAmpgETETvT=l3RR lí66l7985 58 6 =QNLESRVEKPRQEI&AF\/KV)3LNPGESKTVEFFLDRR 116¢94248 58"8 vmEQQpm)RpEK5LKAmNFvKAgQT\nmLELKAQ 6685l55Z 752 LmpppTgFTKvFLQpgETKKvEIvvEKK VV-'¶mvv. .

   125973771 631 AFAYYNTQTKDWHVESGEFLI LIGRSSR. -DIVLKESVR RAAcQ3QQi 6.2 3 .myYDvmgDEAvEsmYEÍRvg5ssR.. »T.R!bTàSVE 11633452¢ 622 .DFsmcEpADsgDYEvMIgEssR. .DI RLQVKLT 11661H85 6.26 . snw¥mKKsIwwDggDYNLKÍgsssR. .PI RLEKTVS 116E94248 628 mEKEwREQ=zTwvLpEAQKÂíAvgTsvz'N:DÃvLpvs5T 6685155: 7 92 =SWWDEQREKWASEKGTYEVLVTGTGD. . .. . . .. . ,,,

   FIG 23D l259¶377l 668 VNSTVKI R. KR RAÈLça3a0l g6[) . . . . . . . . . .. . . , . . , . . ... , , . . . . . N?SA&PRRFÜS 116334524 659 MDFFNSP.AP"Í T7ET llG'6179G5 663 .. . . .=I SGDT 11'6¢94248 667 .GETFNNFATI pNwn=sgRpsvQDFEQLmQmApHEF 6E'851551 821 t q ? 0 0 0 2 ± P P'P *ú P 0 0 0 « « e « > 0 0 g *'+ * b 0 125973771 678 mNsAvEmmD'ssAAAyI=/LKEImjLQi D'. .,. .Md RAA¢Q300I 67L 1IHANAALGDI&DDPATGWI&EDSPW. . . .SE

   11.6334524 673 nEAAwKNpQLRDLFKQMvUu'EYAgpENnAIT . . .DDQ 116"617985 678 YISEIIN. . ..RDmIE5L1&s=TAIEszs«. . .DSN llGE9424é 7 D 7 vpgEFTRLmpREMKKusLLLRLvAw=Ym RTKDYI DKQ 6N5155i 821 S5FWFKTRL 0 125.973771 Rk&CÔ3â0 I 714 NLAHDMMAÀNinMF!m . .5LVGYSQGRLS,VD 7 D 7 MDÊLNpMFERFm?!mgR= LFGVPRD .ENERR 116334524 7l0 GSLQIFQD. . .&mLgg. . .PQWJ TDFI T 11e617g85 7JJ R. . . . . . .ELMISNLPLR. , .AIZMLGÀ. . .NVDQVNKEI E 116¢94248 747 gpuLKFQQAmDTpLI. . .RLAQQASGARLVA G6"85l551 225973771 750 MNNVE RÀACD3001 746 AçEEGQPEl=G LW33'4524 7 44 LRRQ l1.G6l7985 738 LANN I1g4g42F8 784 AANHQíVKb=R

   6685.15$1 0

   FIG 24A RAAC02913 L MT=l,mHwpgc=mQwwwàgAcA«Fg L56l'4g6g l 'bGCkí LíEigcvFAIILLMT¥gAyWFssQxI 124523Q66 Z NgKAKR^ÁAL'gLrAmLLLAgNpLsTR¥L tl§9436ÍL '— nlk ímt iry.pkksewi í esláillli 89LQLL84 L G. .,. , MLI=AFsLMLyNNpFTDLw 2634042 I FVPFAVFLELEFVSFEMMENPEALDYI RAÀCD2913 4l AgLw=ÀDAppQpTpAF3ER1mEEvsRA~fpI R L5614969 32 gQIãçmLevAMT12sLYÊEÍKDRApE .YEQPAI IJAKIDR 124S23Q66 3L . . . .QERRAESTKENELQEKIEQAAER .FYRPPENAKIDR I1AB43671 26 FLÍYiITksys.. .. .4.. . ... . . . . . .. B9!ÕI!84 2 B 5QLKMDSLAVTÁESDSbLQRíEKESEN .YYiApQImRTDp 2634042 32 gAMKKwvTv"AsKDpLyÊELLQKApE. YEVKPQNARIDK RÁM029Í3 BL miNIm5gEALDTaAsERETARmlDgm!LvwRTvpp 0 L56I496R 124523066 7L ¶mULTpg~LEvDjQEssYNRMKçEgRFDEKYLvF"RE7w 66 ywK}mgnmEvDKKAmMKQM3RyDERKwEKQTFp íí4'84367í 37 VFNSNEP 891OLl8'€ 67 vmL1FgYNgvKvDA/EAsyKKmm3KwLFQIEp 2634042 7 L vwKsIpgYN!gLKvNux2sFtgKFREKDLvYsQvKp RAAC329Z3 i20. RVRLRDLPPDVIYRGPÀFEKSVALMVNVSWGEAWP 15614969 lll 5vHu:DLppmmkgNmçE!bwTLLnN[amaK 124523066 i06 ãvHLmLDpApvYT=DINvAmNwLp 1l484367l 44 . . . . . . . . . . ,mcgDTKEKKIAEmmmDEYIpKMLD 89íOil84 iO.7 EKKLGDLPPÀPIYKWPDKFMVSFI LS 263¢042 in $vHLmxIpEpmcgNpDKmmEmNAwgNEYLIsKMLp AAÂc029i3 160 l1jRDAHv=mmAwAKKFpDLvRAMAQDgHAvEsHgs 15Gl4969 i5i mgNKyTNKsTEELDgswmipQLm:MIvEEgHEI 124523066 146 TLmLFlLRATFnjwRHAKENpEjARMIvsggHET~sY' 1I4M367L 73 íFKDNNIHFTFEEg~DvvFDI¥QKgHmgsHgY 89LOI18¢ 147 TLKmKvmTmiEgRwvQQNpELAKMI==R~sf 263EN2 I5I nQKÉLgvKATFETmNwmsmQmgNHsY 0 meQ29:3 i56j4969 2Q3 gHpDFRRLNDÀKLRAçmjETNmj\aLTgRApRLIAppAg l9l sHFDMQRbTRERMI)EEwQTNEvImTmmpKwEAppsg I7q523066 i BG mEDFsTLpEsKIKsQLvE=RyLEAmEKvKwnkppsg l1484367] ll3 TmcmasRc!QYEEwKÈcsc=LEKIpTLFApwg 89IÕll84 r B 7 THpDMKTI55ARIREExBKTNQvrm7TgQEvTwEAppsg 2634342 19L NKFDMsKL=gR:I5EQLDmNEQTEQrrwKpKNFAppsg RÀAC02913 240 sYRARLApLAKsRQmmiwTRDT1/!DwKNE'ppAANERvQ e 15EI4969 231, sYFmvvKsvDTrDwRNpDpNEMvD= 124$23066 226 sxmElw5:mKsN[mEmnMTvDT\zwQwspE=vERn li4843G71 153 DFNDEUvF«mEQIsm/'rLwsLDTlDwNNpspQTIyDm 89101184 227 SYRiDETVRIAAEKKLSLDTVDWRKP5PEEL".NRW

   2.G3€OU 2 31 sFRKRvIwAAEKQME;TvMym7DT=QKpApwLQTRvL

   FIG 24B R/%ACD2 gj 3 283 RgAEpTksTvEaLpTMIRmEARgYR'D lS6149b9 271 SKVHPESLENWRGZQDRGLHZD 124523'066' 2'66 AKAQGG$LI1iMHPTASTE FbrARLEKKNLQvgTvsK li484367i 193 TKYHNgÀ".QNTvuLpQíIKQu¢E=KIT 891Ql184 267 pKvmgKI~pTDsTAK5LDM4ITQ rKgKDFEKA8vsR 2634342 271 SKIRDPTAESI7QIKDKGYALG RAACIJ2923 32 g vtDERp8vTppT!IARETI RL

   1.56149.69 311 ~SRTNAGVTP l24523O66 3QE LIDEERm'NEDgsELNsEKDEÀMEKDgTE J14B4367l 233 'VTVDM B9lCll84 307 LL 263'LN2 311 =W 0 0

   W

   FIG 25A 5952E4 1 m"EI.IpL 2Q8939.49 1 WÍRLDDR 1738D381 J MKHLDYI J2843'8' 1 MKRE'AYM

   10.Q1913 1 XKNLNII RÁAçp2s3g 1 MÊDASY rHRgDLcmEgRHvsm4gsALIgLLAAssw= 5952G9. 8 sAvRcNYgDv8gsRsvYLTmDgwpFcTpL=wTQHR 208D3949 8 wmsE=D(m3RRsvnmDDgENpcFTpQ=vLAQNR ] 738D38i B wY$NcBtgTEmç'ÍuTmwwpF[cTpEIwYg 12'8438 8 sEypvNHTsgQEARcvYLTmDg~FcTpQTwwAEE!R

   1.0'0'19!3 8 DSVUVDAG. ~ADDpcvYLTFDDgE!NpFcTpH=vIAQ[iA RAÀC0283 9 4 l gTpmiA=sgQAKvvYLTFDDgpsclRYTpI[LID rLRNQH ....VWVMTK 595264 4 e ypATnv1gFYAµjjQpELrRRMmEHmTHpDLs 0 2Q803949 173803'8! €8 vpATEFvIgmAEHpDLIQRMIAEgKEv(mmEHpDLs 4 8 ypATwvIg2'YAKsQpELmIvAEHpDLs

   1.28.438 48 WAW,'TWKDl'iPELIWLV=HWDLA i'oà1913 4 € vsATnvIgANAE,vi'lpgLvQRIvsEgHKpDbA RAAé()2839 81 Í5ATGYRCEQFPDWRRIQISHLDPK

   5.952'E4 aa RCEÁAE IHI:EvLrAsRAIRIAcpQALmDqRApYgFw=D 2'080394·9 8 B KcgLgEv=vFEANQArMlAcmAsíRYí~YgAwsEE A3"8038Z 88 Tc3pIvEAsEAIIAAcmmRHIRApYgvw.sEp. iz8g38 8 8 TcDpKDIDEA:u2AIvsAcpQALvmLRApYg'=ED L,OQI%3 8E TcsEpQvEREIQEANRAIIsAcpgAsIRHIRApYgKmEF. RÃACD2B39 .12 í KIjALEEFnmIRKTDTAvvKÀcg. TKPLYXRPPYGSZDAS

   5.9'52E4 í28 vIa=KKAgLÀAvHwsvDpRDwsREgvDsrvKsvIAmtp 2Q&A949 128 vLTAsElAgI.AALRwsTDpRDwsRpgTDAIyDAvRp i73BQ38i 128 ÃIzrRs&sAgLmíHwsím!RDwsRpg&NANDAvLDs~ 12&.438. 128 VLSASVHWSÁDPRDWSCPGVDV= 100I913 12G A1mcsAsLmApvHwsvDpRDwscpgvDArgDR RAAÇQ2.B39 160 EIDcvHKLmpIALATvDsMwKAKsÀNArvsQvERHAQp

   Ú 535264 16.8 yppgEEAscI DS "?3REQ 0 2D803949

   173.8Q3&Z 168 PPDESTRS7Q& 1 68 WD. .ES'GALT

   SLRNQ

   GIÁÍJQ L2&938 168 PPDEVEQCSLR- . . . .. ... . . . . . .GLRDQ 1QQ1913 i 66 g$mÀiHBDgppgAADpTKLp 7LRDQ RAAC()28·39 Z.qõ gsIIwmgz55sRYTLEAMpRI IRDFRRDgYTFK=piR 59$26'4 294 YI=ALQLRG"WIWLPQLH

   208.03'9.49 1.94 TVMALSNb1PALDAcGYEIR$LFEHE %" t738o3'8í 192 T1MKLsRM1pALHELppüB 12:8438' 194 TLÍA&smpALusRgEETRsLp I0OL9I3 '2 92 T'8AIIKSLRT1RSLP RàkcO.2'839 240 DsLRzEÀNpKTDDDAILpRnTErDvQRKHRF$YgTRcrgR

   FIG 25B

   595264. 20&03949 l730O38l 128438 J'QPl'913 02839 280 QSRD 0 0 P^

   FIG 26A ~CQ096I 1 MgvvHFRvgHÂvpHHLKHssTgApLLmsE~ PRURW I245·234II l$8D60g7 2L2L96¢3 134'75158 2i,.2i9455 RAAC0096I 41 QRwEvFÁgDgg5HRHEÃgRADÀDmHRDAFAR^wDsR I24S234il 1580G097 2I2í96¢3 13475158 2I21945S RAACD096I 8.1 SGGGECAYRRAGGCGGVREVSGGSS RVHPEP 0 124523411 L58Q6097

   21.219643 I3¢75I5B zL2'iè455 d RAAC0096L L2'l HARgvQRDÁEbwmgAF[RAKDHAUc RÍiRy-4çNRA L24523¢ii l5g060g7 2I2l96§3 1 tdNRPEARR i3s7.5I58 21219455 RMc3Q%i LGI RÀssDYRrusÀyrMLv&vvLAvLwmgLpEwTRgmRs l2c52xll i = mNLm==YMIp~n L5eôFa97 I ~gmgLLLgm:YIgLuLLyQygNL'g 2b2l9643 9 TRHgFFTgRMr¥AwnvAAkLARígp^m.RE I.RRRK? 134'75159 l µRRLDDR"^WQSE 21219455 l MR. .... ...5EP &&&& RAAQQQ96L 20 I ç=R=Kp.gcvAIóTFDDgpHpwTpRLLiNÀIREgg 0 í2¢5234íi l5806Q97 3D vcwKgKKD.AEíALTEDwpDpvYTpv=LuçRERIm 30 L'VREGRRARREVALTEDDGPDPQTTPAVLAALREAD@T 2l2í9693 ¢9 pgLágRgspgHvALTEDwpDpAsTpRFw7LDgLg 13475158 14 CADG"GR. .RsvYLTFDDgpNpcETpcL'mmAQNRvRÀT 2l2i9455 6 ILRMFGRG. RTMLLTPEIPEYTPK=TLÃKYEVRAT ~CM96I 2·40 FEvíAEliAuutpEr\7EmLÀEgHEvpvKgyLLEp 124523411 69 mNgERAARí'pELvlRMsRÉgHjcIgLKNYKmcNm $3P r l580G097 70 FFvIAgKAQÀHpDLIRQbaEmREvEAKADKmHAwI RTP 21219H3 89 mpuT.wL'jmgww=~B@ l3¢75i58 52 FwIgAxAREHpELIQmíAEgHEvgNw'MsHpDLsKQgL 21219455 45 Em:gEMÀwNRDLLTMADEgK\NgNHTwsmLTKLTR

   FIG 26B RAAC30.961 280 GLTARQWGARDI LAQRE'GIDP .RwRpLÀTLm I245234íl L09 HKNARTLEQSA'RIIENITGERP. VFYRPPWEEL J5806097 I10 WGÀALDPLRAVRÃVG .AMTgRp~HRppHmYTL5TwLg Zi2196¢3 129 RRDTRELLmvRyvDE\/sgRApmwYRppYgILTsgRm I.3475i58 92 GEVQREVFEANQAIMLACFQAS IRYIRApmwsEEvFT& 21219455 85 RRI RsEMER=EvvEQA¥gEAp.RwERApYgAwNmAFQLI RAAC309G1 3 L g LRRSRM5MLLVGDWRRTP. PEELARR-"LAKLDARSV 124523411 148 HK, .QFmwwsKMF=KRKggsKK'jsNgLtTR=gDv :i 5à0E'o?Ã 1§ g QRlAg¥mÀHwsíE=DwH RES IpDm/'RERLAAL,LvpgÃv 2'12196'43 16B xRRAgLRm;wTAwgKDHRHDATpAsvHATv»DLcgggT !347515E L32 SEIÁGLAALHWSIDPRDWSRPG .TDMVDAVLASVRPGAI 2i21gq55 l24 g$ElmgEEqimyunDwTTFg.TgTIv[jRYEEgAApgw 0 RAACO0961 124523411 358 WEHDSDESP. . . =ERgApEsvmupAwEwRRRgj[ I B 6 I.CGVTP. . . .GÃDEDÀPQYT IEgIiRvAIpALKARgF l58060g7 189 IvLmkgpg. . .,-.. . .·- mRvTvpu0p5LLADLmRgY 22219643 208 TRKAS . . . . . .ÃpgsmTLgALpDI VRDCREAGL l3'ê75í58 j7j gcEenEsTRsmAsLRNQrmAL°NLl PALOACGY 2L219"455 163 '7LsmÁgg1j R5QSV·YLPELLDSGY ma 39ã ísULAsEcE 12¢523'411 222 RFNRMImFDr¢IlF$lmIíRRKEIEp is80.6097 2 L B :RsvnAELggARpQDwmàKRRgFLALDAvEDmm W& 2'1219.6"43 .2 4.2 AvmREHgAggATgTp=ÀngTmTAg?ÀAsFR.spAp í3475i 58 211 ELRSLPWH 21219'455 192 HL,TVPK9RIÁ RAÁEO.0961 374523'421 15&06097 2 5 B GGRMNLFRI w'wFpLEmaw'rRx'pH~=FHm A2196'43 282 "G 13475158 2'I.2l9455 0 RAAC'O0.961 124523411 l$806'Q@7 298 NPtLvDLGPRA,8VRQARRED~l=LQTWEYADVGYV 212196'43 13475158 2'121945.5 kh & mco'09'61 ~b 124523411 1580 6097 339 FC bsAwpLLgLLgmn!DLpAADµARLmLmYg

   2.1.21 3643 1347'5l5á 212í9455

   FTG 26C RAMD096L 1-24-523421 i5306097 37& ND.NAm%LswTmEFl,ALYgs: 21219643 1347'5158 21219455 m4

   0

   0

   FIG 27A mc0.03.61 ! wpTRgpE$RQLLpml-sRppRspf=ER&LLR.smAR 52U7B65L J6'Q7722S. 891%3Q'5 LS6.1280'6 1215354'54 RAAC.D03'61 41 ARKRmRL¶sLmuqNRíÀEQÀQI PBLPTSVVLDTGR'N S2Q7B6S.I 16ÍJ77225 B:9iQQ3'Q.5: 15612'806 l2-1'S354'á4 ~ Tm¶··~ RAkCD:Q:3'EI '8! PAKMMGLMHEPVTKRDPADGQGE zRisgt 0 52Q786.5i LG.C'77225 i 1

   MNHFYVM IKRIKQLI IIM MN!lÊYvwHxKRvmII1L '891QQ3K5 1 wFFYvvmKAImgLLIM L'SG12.'8'06 1 MKFÊWVTJRAKKIKQLT ITL 121535454 i MÍVDLRR7MGIlRllL7FGI RAAc'DU3'6l 121 YERAVRAFAPFHQALIWLLRAMD TGSPRED s2'â78.g51 2Q IAA è'h m d # a m & m 1607722'5 2'0 IAA.. .... .. .... .. 8'9IÕÔ3'05 20 IAS 15612806 20 LTA..¥.,á . L2L535454 'í9 IG Rkaco:o3:61 lSl RRmsQEw3M]EiERDDLgI,LDDTgmLKRFEQLpRRpp 5'2g?'9.'65i ·23 L6Q772Z5 2'3 ..,,..... e.

   8g1ÜfD305 23 l5!612'8,Q'6 23 .. . . --- -. .. b * ¶ .* O 0 r r r ? ? r t q q q ? 12'1535454 2L .... ··"~.····· RAACOÕ3'6'1 201 mDLA'=AgãwLRw.L=TRTvAIeNmk 0 52Q7865L 160772'25 2·3 ..... --.... 23 V * 0 .* 0 0 e. 0 q-q e. r q ¶ ¶ 4 BYIOQ'3D5 2·3 ..... .- .. . P'·P 7 ¶ 0 0 0 0 e r q r. r *'4 €q 15612'806 2'3 I2lá3645!4 2.1 .. ,.. .... ... .....,.......... ,.,,,.. .....

   RAACD03'.6L 24J REm!íD=LgEsLwsYgL8RKwTRgARAEvmHMc 5207'B65í 23' wd i6s?7225 23 ....... -..... ..........., ... .. .... .... .. B910'D305 2'3 ,...... ... .. ISM2BD6 2.3 h M · Á N N & & K K + IZI535454 ·2'1 ,,,.

   FIG 27B RAACOQ361 281 gmcilgRQNllRggwpMRsEwKRLRAgvAAL=ÂcvcAvsc 52078651 23 . . .EATASF

   7611772.2.5 23 .. . . . . .EAAASE 89l00305 23 . . .FFTNF 15612'806' 23 ¶ 0 0 r r r r fF ? " 0 · 0 k Á2'l535'454 21 . FFCASL . . .I'FAJST F&ÀC0'03G1 32i MsLQµsTKàQApKAvYKvDTKEmvÀLTFDr=

   52.0786,51 2 g =QNLLpL'~sTEwmwRgDsDTTmr= L6U7'7225 29 FnQRÀvpLwFsTDTgpKAIYKgETD&m:sLTFDIswg

   89.ZO"Q3'(J5 29 LXMENT IE!HWFSÀNDGRKAIYKGE. . ..KDAALTENIGWG l$61280G 29 LY'= .KIMvFsTE'EgpQAmKmDEKyAALTFNTsm 121 535454 27 LWQAANI IAG. . . . ^pzMmTNTDl:ÍKvvALTFDHswg RAÀCOQ36l 36'1 HR=&pyLmxFç:cwTKATFFLsgEM=HHp£La¥K1!a 52078651 6.9 w="NgiF.DD=mw L6g772.25 69 DERàEE'Rgí KNATmsD'!NÃRIvK 89100'305 66 I2EKÂEm»=KQNmATnmsgsmERHpELvAmvK í5:gj.2i8'0.6 .68 EQRVKPT IDVIQSKKVEEATFFISÀLVELIQE 221535454 62 NKFTFs=mrRElNLmNFFlMgmwcyKvAQRMvk ~CO03GL 4Dl HGYEIGSHYSNYPDSWIR£QKAEQQWGV 52Q%65Z 109 DgFlQIgsMgYAYKNmMKKsEmmAKÀRHsFQKLgLD L60T7225 109 DgRQIgsMgxALE3sEucKDMNRAQTÈFEKL= 89!00305 1(1 6 Ea"EIYDmYTDLEEsKIRQDmgm~wvK 15612806 108 ÀgYHmHgYQmYTTwEDEKIRmiRQsQQnssITu 121535454 l (Jl wuEIAsEmRFIENYgDM=EwvKEDILKAHALÍKEvTg\' RAACO03 6'1 4¢ 1 KpKLERTpNgDLNLRvI:RcLTsMgnvvçmTDs 52'078652 u 9 DLTLLRppTgQFNKDvLDvAKQFgnvvKYsINsm l6077225 JA9 DIQLLRpp=FNENvLK\mKQYNYTwHYsvNsQD &3L0Q305 146 DI @VRAPTG1#QKTW IDSKDWTNP WQ2806 I 48 KmLRppNgm)K-RsyD INSRDYENP

   30153.5454 141 DPTL=WG!lY5QRSLKÀADELWKTí TWNVDSLDWKNP · · ·.-~-V— .

   0 &AAC3036L 52W.865Z 48 I gvDArYNRvTKRvvEmssKRIvEALpRrvEN 189 GVQK1VQNYNGTVT\/LSAKQTKEXLPE l8ú??22S 189 GVEKII QVSG@IZLLHASDEALPDI IFIQ 6gL0o305 J 86 gvER:IÀENAAKAgK.gDmíLRAsDsAKQTNmLEmgN L$GI2806 188 gvDArvRQvvDHIspgDIN'LmAsDsAmTKmip=TDQ m53.5454 !81 g!ujvIÁmMKRLKpgAI=MKAsDm7QTAEALpILLw RÀACD'0361 5.21 LRcAgmvTvsELLAsANvQsKyQ 5207B65'i 229 LRsmuçlNTvsELmNTDAmsEvK L6Q7Z225 229 LKEmLxNvTvgDLIANsDAKs 8910030"5 2'25' YKDKGLKWSVSTKSNETK 156LZ8"06 22B LK%Y8FRS IEELMÀDARPTHDEIK lZ!53545á 221 YQTm=LswsEKgíèMt

   I

   Q Este anexo apresenta o código de controle da listagem de sequências blológicas de que trata a Resolução INPI 228 de 11/11/2009: Códígo de Controle Campo 1 |N|l||I|iI|||I|Il|II|||||IIllh D37A3DC140CD9D38 0 Campo 2 ||l|||||||l||||l|l[H|lll|lhnjIII|l CA6AC2C2B209F5E2 Outras lnformações: - Nome do Arquivo: p167800.txt - Data de Geraçâo do Código: 29-07-2010 - Hora de Geração do Código: 14:19:00 - Código de Controle: - Campo 1: D37A3DC140CD9D38 - Campo 2: CA6AC2C2B209F5E2 0 Gerado pelo Sisterm de Lktagem de Sequêncías Biolõgicas (SisBioList)