BRPI0905607A2 - processo para a produção de diacilgliceróis através de reações de hidrólise de oléo de palma catalisadas pelas enzimas amano ps e amano im - Google Patents
processo para a produção de diacilgliceróis através de reações de hidrólise de oléo de palma catalisadas pelas enzimas amano ps e amano im Download PDFInfo
- Publication number
- BRPI0905607A2 BRPI0905607A2 BRPI0905607-6A BRPI0905607A BRPI0905607A2 BR PI0905607 A2 BRPI0905607 A2 BR PI0905607A2 BR PI0905607 A BRPI0905607 A BR PI0905607A BR PI0905607 A2 BRPI0905607 A2 BR PI0905607A2
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- amano
- lipase
- hydrolysis
- reaction
- palm oil
- Prior art date
Links
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 53
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 title claims abstract description 46
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 title claims abstract description 34
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 85
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 85
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 85
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 85
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 46
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YCOZIPAWZNQLMR-UHFFFAOYSA-N heptane - octane Natural products CCCCCCCCCCCCCCC YCOZIPAWZNQLMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 59
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 52
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 52
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 34
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 7
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 7
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 7
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 7
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 7
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 150000002759 monoacylglycerols Chemical class 0.000 description 4
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 3
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000008162 cooking oil Substances 0.000 description 2
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 238000007210 heterogeneous catalysis Methods 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical group 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000498617 Mucor javanicus Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 1
- 241000235545 Rhizopus niveus Species 0.000 description 1
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical class COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- FMKVQUMELNWDNR-UHFFFAOYSA-N heptane-3,4,5-triol Chemical compound CCC(O)C(O)C(O)CC FMKVQUMELNWDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229940068065 phytosterols Drugs 0.000 description 1
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 1
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
PROCESSO PARA A PRODUçãO DE DIACILGLICERóIS ATRAVES DE REAçõES DE HIDRóLISE DE óLEO DE PALMA CATALISADAS PELAS ENZIMAS JIMANO PS E AMANO IM. A presente invenção refere-se a um processo para aprodução de 1,2 e 1,3 diacilgliceróis catalisado por enzimas, a partir da hidrólise de material lipidico. No processo ora em questão, são empregadas as lipases comerciais Amano PS eAmano IM para catalisar a produção de diacilgliceróis através da hidrólise de material lipídico de óleo de palma. Diferentes condições reacionais são empregadas, onde variações de temperatura, quantidade de enzima e velocidade de agitação foram estudados.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: "PROCESSOPARA A PRODUÇÃO DE DIACILGLI CERÓIS ATRAVÉS DE REAÇÕES DEHIDRÓLISE DE ÓLEO DE PALMA CATALISADAS PELAS ENZIMAS AMANO PSE AMANO IM".
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se à produção dediacilgliceróis por catálise heterogênea utilizando enzimascomerciais para catalisar a produção de diacilgliceróisatravés de reações de hidrólise do óleo de palma.
Antecedentes da Invenção
O uso de diacilgliceróis ao invés de triacilgliceróis,presentes em óleos e gorduras, começou na década de 80". Seuuso foi baseado em dois importantes benefícios à saúde. 0primeiro benefício refere-se à supressão da elevação pós-prandial dos triglicerídeos no soro, e o segundo é asupressão do acúmulo de gordura corpórea.
As gorduras e os óleos consistem em uma mistura detriacilgliceróis, também chamados triglicerídeos, e diferementre si apenas pelo estado físico, sendo as gorduras sólidasou pastosas e os óleos líquidos, em temperatura ambiente.Esta diferença deve-se principalmente ao fato de os óleosserem mais ricos em resíduos de ácidos graxos insaturados queas gorduras.
Os triacilgliceróis consistem em uma forma altamenteeficiente de armazenar energia metabólica, pois são menosoxidados que os carboidratos e as proteínas e não absorvemmuita água, devido à sua condição apoiar. Desta forma, ostriacilgliceróis ocupam um volume menor no organismo,diferente do glicogênio, o qual é outra fonte de energia quese liga à água em uma quantidade quase duas vezes o seu peso.
Os óleos vegetais são constituídos principalmente porglicerídeos de ácidos graxos vegetais e podem conterfosfolipídios, ácidos graxos livres e constituintesinsaponificáveis. Suas características físicas variam com aestrutura e distribuição dos ácidos graxos nostriacilgliceróis presentes. 0 triacilglicerol pode serrepresentado pela estrutura (I) a seguir:
<formula>formula see original document page 3</formula>
em que RI, R2 e R3 são resíduos de ácidos graxos.
Os óleos tem um papel fundamental na alimentação, poissão importantes fontes de ácidos graxos essenciais, veículopara as vitaminas lipossolúveis e participam da síntese demuitas substâncias endógenas, entre outros. Contudo, seuconsumo excessivo está diretamente relacionado a doençascardiovasculares, obesidade e resistência à insulina.
Diacilgliceróis ou diglicerideos são ésteres de glicerolque possuem dois grupos hidroxila esterifiçados por ácidosgraxos, podendo existir em duas formas estereoquimicas,conhecidas como sn-1,2-DAG (ou 2,3) e sn-l,3-DAG, cujarelação isomérica natural é de 3:7 em função da migração dogrupo acila durante o processo de refino do óleo.
A isoforma 1,2-DAG é considerada como um intermediáriometabólico, o qual é formado após a ingestão detriacilglicerol. A isoforma 1,3-DAG é responsável pelo efeitobenéfico, pois é metabolizada por uma via diferente do TAG edo 1,2-DAG. 0 1,3-DAG, 2,3-DAG e 1,2-DAG são representados,respectivamente, pelas estruturas (II), (III) e (IV) aseguir:
<formula>formula see original document page 4</formula>
O diacilglicerol é um componente natural em vários óleose gorduras, em torno de 10% em peso, como demonstrado naTabela 1 a seguir.
Tabela 1
<table>table see original document page 5</column></row><table><table>table see original document page 6</column></row><table>
1Não detectado
2Abaixo do limite de detecção
0 diacilglicerol é muito usado como emulsificante eestabilizante em indústria alimentícia, cosmética efarmacêutica. Também tem sido utilizado no Japão e nosEstados Unidos como óleo para cozinhar, em função de suaspropriedades recentemente descobertas de redução dos níveisde lipídios, reduzindo o peso e o acúmulo de gordura.
O óleo comercial foi introduzido no Japão em 1999 com onome comercial Econa. Nos Estados Unidos, o referido óleo foiregistrado como Enova© oil após 15 anos de pesquisas, estudosclínicos e experimentos realizados pela Kao Corporation.
0 Enova contém aproximadamente 20% em peso detriacilglicerol e 80% em peso de diacilglicerol, sendo 56% naisoforma sn-l,3-DAG. Suas aplicações incluem o uso como óleode cozinha, o uso para o preparo de molhos e temperos e paraprodutos a base de óleos e gorduras.Segundo estudos clínicos nos Estados Unidos e Japão, opeso e a massa gorda podem ser reduzidos com a substituiçãode 10 a 20 gramas dos óleos convencionais da dieta pordiacilglicerol.
O DAG é produzido por glicerólise, hidrólise ouesterificação química de óleos e gorduras. Esses processosnormalmente usam altas temperaturas e/ou catalisadorestóxicos. Tais condições geram alterações no sabor e nacoloração do óleo, reduzem a seletividade e aumentam o gastoenergético, aumentando assim o custo do processo.
Técnicas por via enzimática apresentam inúmerasvantagens em relação ao processo químico, dentre eles oaumento da seletividade, aumento da pureza do produto,utilização de temperaturas mais brandas e supressão decatalisadores tóxicos. Para este fim, o uso de lipases vemsendo amplamente estudado.
Os processos mais utilizados para a obtenção dodiacilglicerol são as reações de glicerólise e hidrólise dosésteres de ácido graxo conforme mostrado a seguir.REACÕES DE GLICERÓLISE
<formula>formula see original document page 8</formula>
Estas reações não levam necessariamente à formação dediacilglicerol, uma vez que as condições reacionais devem sercontroladas para que a mesma não leve à quebra total do ésterdo ácido graxo. Neste caso, podemos obter como subprodutosreacionais, ácidos graxos, glicerol e monoacilgliceróis.
No processo de glicerólise ocorre uma reação detransesterificação entre o triacilglicerídeo e o glicerolcatalisada pela lipase. Normalmente, as reações são semsolvente e é utilizada agitação mecânica, visto que ostriacilglicerídeos possuem uma viscosidade alta. Nas reaçõesde hidrólise, a água é o agente que, em conjunto com alipase, vai hidrolisar as ligações éster dotriacilglicerídeo. Assim como na reação de glicerólise, asreações ocorrem na ausência de solvente e é utilizadaagitação mecânica.A estequiometria dos reagentes é tão importante quanto oajuste de fatores mecânicos (agitação) e térmicos(aquecimento). Dessa forma, uma variedade enorme de condiçõesreacionais pode ser utilizada a fim de se chegar ao resultadodesej ado.
Após as reações de hidrólise e glicerólise, os produtossão formados por dois tipos de diacilgliceróis que diferemapenas na posição das cadeias" de ácido graxo (1,3 e 1,2) .Porém, a catálise enzimática nos fornece apenas um delesdevido a sua alta especificidade.
O estado da técnica contempla alguns documentos depatente relacionados ao processo de produção dediacilgliceróis a partir de óleos e gorduras, catalisado porlipases.
O documento japonês JP 1071495 descreve um método para apreparação de diglicerideos altamente puros e com altorendimento, no qual ocorre uma reação de esterificação entreácidos graxos saturados ou insaturados contendo de 4 a 22átomos de carbono e glicerol, na presença de uma lipase 1,3-seletiva imobilizada em resina de troca iônica e no qual aágua ou álcool inferior produzidos pela reação são removidosao máximo do sistema reacional para aumentar o rendimento dasíntese de ésteres e diminuir a quantidade demonoglicerídeos. As lipases 1,3-seletivas são selecionadasdentre as provenientes de microorganismos dos gênerosRhizopus, Aspergillus e Mucor, mais especificamente deRhizopus delemar, Rhizopus japonicus, Rhizopus niveus,Aspergillus niger, Mucor javanicus e Mucor miehei.
O processo para produção de diacilgliceróis descrito nodocumento norte-americano US 2007/0148745 envolve autilização de uma lipase 1, 3 seletiva imobilizada em presençade água para promover a hidrólise dos triacilgliceróispresentes em óleos e gorduras.
O referido documento ensina a hidrólise controlada comdesidratação ao final do processo, utilizando diversos óleosvegetais, incluindo óleo de palma. Além disso, são utilizadaslipases como catalisadores, preferencialmente as lipasesimobilizadas em resinas de troca iônica. Temperaturas entre20 e 90°C são aplicadas e a quantidade de água varia de 20 a180 partes de água por 100 partes de óleo. A quantidade deenzima utilizada nas reações não é especificada, contudo, osexemplos sugerem 10% em peso de enzima em relação ao óleo. Aofinal do processo, o diacilglicerol é purificado e 0,5% a 25%em peso de fitoesteróis e ésteres de ácido ferúlico sãoadicionados em relação ao peso de diacilglicerol.
Na presente invenção, as reações são catalisadas pelasenzimas Amano PS e Amano IM. Entretanto, a quantidade de águautilizada no processo da presente invenção é quatro vezesmenor do que a quantidade de água adicionada no processorevelado pelo documento US 2007/0148745, pois o percentualmínimo utilizado neste documento foi de 20% em peso, enquantoque na presente invenção foi utilizado apenas 5% em peso.Adicionalmente, resultados interessantes foram obtidosatravés dos ensinamentos da presente invenção com apenas 1%em peso de enzima em relação ao peso de óleo de palma e com0,5% em peso para oleína de palma, enquanto que no referidodocumento norte-americano o percentual de enzima não écitado, sugerindo 10% em peso em seus exemplos, conformemencionado anteriormente.
O documento W02008/018147 Al ' ensina a composição dedeterminados óleos, identificando a relação que deve existirentre ácidos graxos livres, 1,2 e 1,3 diacilgliceróis etriacilgliceróis.
O processo descrito no documento W02008/003314 Alenvolve a formação de glicosideos derivados de mono ediacilgliceróis a partir de material vegetal. O referidodocumento descreve detalhadamente o processo de extração dosglicosídeos derivados de mono e diacilgliceróis, nãopossuindo nenhum processo enzimático envolvido.
O processo descrito no documento WO2007/097160 Alenvolve a utilização de microorganismos do gênero Moritellasp. na produção de monoacilgliceróis.
O processo revelado no documento japonês JP 330289/1992descreve reações de glicerólise onde quantidadesestequiométricas de glicerol são utilizadas para a formaçãode diacilglicerol. Neste processo, é utilizada uma série defosfolipases para a produção de diacilglicerol através dareação de transesterificação de óleos vegetais com glicerol.
O documento W003/094634 Al discorre sobre os efeitosbenéficos da utilização de diacilgliceróis em alimentos ebebidas. O referido documento revela as modificações fisico-químicas obtidas pela adição de diferentes quantidades dediacilgliceróis em alimentos, levando a novas propriedadesorganolépticas.
O documento W02005/048722 Al discorre sobre os efeitosbenéficos da ingestão regular de diacilgliceróis. Assim comoo processo descrito anteriormente, o dito documento mostra ainfluência da utilização de diacilgliceróis como aditivos emsuplementos e alimentos.
0 processo revelado no documento W02006/022356 Aldescreve a formação de diacilgliceróis catalisada pela açãode microorganismos. Neste processo, os microorganismosutilizados levam a formação de uma mistura dediacilgliceróis, monoacilgliceróis e ácidos graxos livres.Sumário da Invenção
0 objeto da presente invenção refere-se à produção dediacilgliceróis por catálise heterogênea. No processo dapresente invenção, são empregadas as enzimas comerciais AmanoPS e Amano IM para catalisar a produção de diacilgliceróisatravés da reação de hidrólise do óleo de palma refinado.
Descrição Detalhada da Invenção
O objeto da presente invenção inclui um processo para aprodução de diacilgliceróis a partir da hidrólise do óleo depalma refinado catalisado pelas lipases comerciais Amano PS eAmano IM.
Na presente invenção, as lipases comerciais Amano PS eAmano IM são empregadas como fonte de lipase para catalisar ahidrólise do óleo de palma refinado.
A fim de obterem-se conversões de diacilgliceróis apartir do óleo de palma refinado, as reações devem serconduzidas nas condições ótimas para a atividade da lipase ouo mais próximo possível dessas condições. As condições ótimasenvolvem temperatura, concentração dos reagentes e agitação.
A hidrólise enzimática em questão é realizada em meioaquoso em um período de tempo na faixa de 1 a 24 horas,resultando em uma mistura de diacilgliceróis, ácidos graxos eglicerol.
A reação catalisada por lipases deve ser operada embatelada.
Após o fim da reação, é adicionado ao meio reacional umsolvente orgânico apoiar (por exemplo: t-butanol, hexano,heptano ou isooctano puros ou associados à 10 a 90% em pesode água) e então a mistura reacional é filtrada e lavada comsolução saturada de cloreto de sódio. As fases orgânicas sãoseparadas, secas com sulfato de sódio anidro e o solvente éevaporado à pressão reduzida.
Os exemplos apresentados a seguir tem a finalidade deapenas ilustrar a invenção e facilitar sua compreensão, nãopossuindo qualquer caráter limitante da mesma.
Exemplos
Exemplo 1: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 2: Hidrólise do óleo de palma pela lipase Amano IM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 3: Hidrólise do óleo de palma pela lipase Amano PS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 2,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 4: Hidrólise do óleo de palma pela lipase Amano IM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 2,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 5: Hidrólise do óleo de palma pela lipase Amano PS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 3,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 6: Hidrólise do óleo de palma pela lipase Amano IM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 3,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 7: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 40°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 8: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 40°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 9: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 50°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 10: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 50°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).
Exemplo 11: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 55°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm) .
Exemplo 12: Hidrólise do óleo de palma pela lipase TtoanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 55°Cpor 24h, sob agitação (1300 rpm).Exemplo 13: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 14: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 15: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo' depalma, 0,1 mL de água e 2,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 16: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 2,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 17: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 3,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 18: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 3,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 19: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 40°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 20: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 40°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 21: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 50°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 22: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 50°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 23: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS .
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 55°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 24: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 55°Cpor 24h, sob agitação (700 rpm).
Exemplo 25: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 26: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 27: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 2,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 28: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 2,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 29: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 3,0% p/p de lipase Amano PS a 60°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 30: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 3,0% p/p de lipase Amano IM a 60°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 31: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 40°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 32: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 40°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 33: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 50°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm). (
Exemplo 34: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 50°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 35: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoPS.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano PS a 55°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Exemplo 36: Hidrólise do óleo de palma pela lipase AmanoIM.
A reação foi conduzida incubando-se 2,0 g do óleo depalma, 0,1 mL de água e 1,0% p/p de lipase Amano IM a 55°Cpor 24h, sob agitação (100 rpm).
Na tabela 2 a seguir, são mostrados os resultados dasreações de hidrólise dos exemplos acima.
Tabela 2
<table>table see original document page 21</column></row><table><table>table see original document page 22</column></row><table><table>table see original document page 23</column></row><table><table>table see original document page 24</column></row><table>
Os resultados mostrados na tabela comparativa acimaresumem as condições reacionais estudadas para este processobem como os rendimentos do produto diacilglicerol encontradosem diferentes condições reacionais. Os resultados obtidosmostram que a enzima Amano IM apresenta resultados superioresquando comparada com a enzima Amano PS, independente dascondições reacionais utilizadas. Porém, quando temperaturasna faixa de 60°C são utilizadas, os melhores rendimentos sãoobtidos. Este resultado não era esperado para estas enzimas,visto que as mesmas não são conhecidas por sua capacidadehidrolitica e sim por sua capacidade de realizar reações deesterificação.
Sendo assim, as enzimas Amano PS e Amano IM apresentam-se como uma alternativa ao uso de outras enzimas comerciaismostrando que seus resultados são dependentes da temperaturareacional, da concentração de enzima utilizada e davelocidade de agitação.
A descrição acima da presente invenção foi apresentadacom o propósito de ilustração e descrição. Dessa forma, adescrição não tenciona limitar a invenção à forma aquirevelada. Portanto, variações e modificações compatíveis comos ensinamentos acima baseados na habilidade ou conhecimentoda técnica relevante estão dentro do escopo da presenteinvenção. A presente invenção tenciona incluir todas asmodificações e variações da mesma, as quais estejam dentro doescopo descrito no presente relatório descritivo, bem comonas reivindicações em anexo.
Claims (5)
1. Processo para a produção de diacilgliceróis através dereação de hidrólise de óleos de palma caracterizado pelo fatode ser catalisado por 0,1 a 5,0% em peso de lipases emtemperatura variando de 25 a 80°C em meio aquoso, sobagitação e na presença de um solvente orgânico apoiar.
2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que a lipase é escolhida dentre as enzimas AmanoPS e Amano IM.
3. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o solvente pode ser escolhido dentre t-butanol, hexano, heptano ou isooctano puros ou associados àa 90% em peso de água.
4. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o tempo de reação varia entre 1 e 24 horas.
5. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que a agitação varia entre 100 e 1300 rpm.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BRPI0905607-6A BRPI0905607A2 (pt) | 2009-12-24 | 2009-12-24 | processo para a produção de diacilgliceróis através de reações de hidrólise de oléo de palma catalisadas pelas enzimas amano ps e amano im |
| PCT/BR2010/000384 WO2011075802A1 (en) | 2009-12-24 | 2010-11-24 | Production of diacylglycerols by lipase - catalyzed hydrolysis of palm oil |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BRPI0905607-6A BRPI0905607A2 (pt) | 2009-12-24 | 2009-12-24 | processo para a produção de diacilgliceróis através de reações de hidrólise de oléo de palma catalisadas pelas enzimas amano ps e amano im |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BRPI0905607A2 true BRPI0905607A2 (pt) | 2011-08-23 |
Family
ID=43813726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BRPI0905607-6A BRPI0905607A2 (pt) | 2009-12-24 | 2009-12-24 | processo para a produção de diacilgliceróis através de reações de hidrólise de oléo de palma catalisadas pelas enzimas amano ps e amano im |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| BR (1) | BRPI0905607A2 (pt) |
| WO (1) | WO2011075802A1 (pt) |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0665311B2 (ja) | 1987-09-09 | 1994-08-24 | 花王株式会社 | ジグリセリドの製造法 |
| JP2983655B2 (ja) | 1991-01-24 | 1999-11-29 | 花王株式会社 | ジグリセリドの製造法 |
| KR20050083570A (ko) | 2002-05-06 | 2005-08-26 | 아처 다니엘 미드랜드 캄파니 | 디아실글리세롤을 함유하는 식음료 |
| US20060177561A1 (en) | 2003-11-18 | 2006-08-10 | Dawn Sikorski | Foods and drinks containing diacylglycerol |
| CA2577676A1 (en) | 2004-08-24 | 2006-03-02 | Suntory Limited | Process for production of microbial fat/oil containing discretional amount of diacylglycerol and said fat/oil |
| MY142033A (en) * | 2005-12-28 | 2010-08-16 | Univ Putra Malaysia | Process for the production of diacylglycerol |
| WO2007097160A1 (ja) | 2006-02-27 | 2007-08-30 | Tokyo University Of Marine Science And Technology | 新規微生物、脂質改質剤、２－アシルリゾリン脂質の製造方法、ジアシルグリセロールの製造方法、セラミドの製造方法及び油脂の脱ガム法 |
| WO2008003314A1 (en) | 2006-07-03 | 2008-01-10 | Hyben Vital Licens Aps | A method of preparing a glycoside of a mono- or diacylglycerol product from a plant material |
| WO2008018147A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Kao Corporation | Fat or oil composition |
-
2009
- 2009-12-24 BR BRPI0905607-6A patent/BRPI0905607A2/pt not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-11-24 WO PCT/BR2010/000384 patent/WO2011075802A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2011075802A1 (en) | 2011-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lo et al. | Diacylglycerol oil—properties, processes and products: a review | |
| Lee et al. | Diacylglycerol in food industry: Synthesis methods, functionalities, health benefits, potential risks and drawbacks | |
| US7943335B2 (en) | Process for the production of diacylglycerol | |
| Cheong et al. | Production of a diacylglycerol-enriched palm olein using lipase-catalyzed partial hydrolysis: Optimization using response surface methodology | |
| KR100684642B1 (ko) | 어유 유래 글리세라이드 유지 조성물 및 이의 제조방법 | |
| Qin et al. | Preparation and characterization of 1, 3-dioleoyl-2-palmitoylglycerol | |
| Wang et al. | Preparation of diacylglycerol-enriched oil from free fatty acids using lecitase ultra-catalyzed esterification | |
| Diao et al. | Preparation of diacylglycerol from lard by enzymatic glycerolysis and its compositional characteristics | |
| Li et al. | Enzymatic preparation and facile purification of medium-chain, and medium-and long-chain fatty acid diacylglycerols | |
| Bebarta et al. | Medium chain and behenic acid incorporated structured lipids from sal, mango and kokum fats by lipase acidolysis | |
| Wang et al. | Effect of purification methods on the physicochemical and thermodynamic properties and crystallization kinetics of medium-chain, medium–long-chain, and long-chain diacylglycerols | |
| Álvarez et al. | Enzymatic synthesis of high sn-2 DHA and ARA modified oils for the formulation of infant formula fat analogues | |
| Kim et al. | Enzymatic synthesis of structured monogalactosyldiacylglycerols enriched in pinolenic acid | |
| JP2003113396A (ja) | 共役脂肪酸含有モノグリセリドおよびその製造方法 | |
| He et al. | Synthesis of novel medium-long-medium type structured lipids from microalgae oil via two-step enzymatic reactions | |
| Mao et al. | Preparation, acyl migration and applications of the acylglycerols and their isomers: A review | |
| Wang et al. | 1, 3-Dioleoyl-2-palmitoylglycerol-rich triacylglycerol characterization by three processing methods | |
| Marsaoui et al. | Incorporation of omega-3 polyunsaturated fatty acids into soybean lecithin: Effect of amines and divalent cations on transesterification by lipases | |
| ES2324368T3 (es) | Procedimiento para la sintesis enzimatica de trigliceridos. | |
| BRPI0903937A2 (pt) | processo para a produção de diacilgliceróis através de reações de glicerólise e hidrólise de óleos vegetais catalisadas pelas enzimas lipozyme tl im, lipozyme rm im e novozyme 435 | |
| Karabulut et al. | C18 unsaturated fatty acid selectivity of lipases during the acidolysis reaction between tripalmitin and oleic, linoleic, and linolenic acids | |
| EP0576556A1 (en) | Regioselective synthesis of 1,3-disubstituted glycerides | |
| BRPI0905607A2 (pt) | processo para a produção de diacilgliceróis através de reações de hidrólise de oléo de palma catalisadas pelas enzimas amano ps e amano im | |
| Subroto et al. | Oil to glycerol ratio in enzymatic and chemical glycerolysis for the production of mono-And diacylglycerol | |
| Zheng et al. | Enzymatic preparation of mono-and diacylglycerols: a review |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B03A | Publication of a patent application or of a certificate of addition of invention [chapter 3.1 patent gazette] | ||
| B06F | Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette] | ||
| B08F | Application dismissed because of non-payment of annual fees [chapter 8.6 patent gazette] |
Free format text: REFERENTE A 7A ANUIDADE. |
|
| B08K | Patent lapsed as no evidence of payment of the annual fee has been furnished to inpi [chapter 8.11 patent gazette] |