BRPI0719746A2 - Combinação - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMBINA- ÇÃO".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a uma combinação que compre-

ende:

(a) um inibidor da histona desacetilase (HDAI); e

(b) um antimetabólito,

para uso simultâneo, concorrente, separado ou seqüencial, especialmente para uso no tratamento de doenças proliferativas, mais especificamente sín- 10 drome mielodisplástica (MDS) ou leucemia mieloblástica (AML). A invenção também se refere às composições farmacêuticas compreendendo uma tal combinação e a um método de tratamento de MDS ou AML, em um mamífe- ro, particularmente um ser humano, com uma tal combinação. A presente invenção também ainda se refere a uma embalagem ou um produto comer- 15 ciai compreendendo uma tal combinação.

Antecedentes da Invenção

A acetilação reversível de histonas é um principal regulador da expressão do gene que atua mediante a alteração da acessibilidade dos fa- tores de transcrição ao DNA. Nas células normais, a histona desacetilase 20 (HDA) e a histona acetiltransferase conjuntamente controlam o nível de ace- tilação das histonas para manter um equilíbrio. A inibição da HDA resulta no acúmulo de histonas hiperacetiladas, que resulta em uma variedade de res- postas celulares. O HDAI tem sido estudado com relação a seus efeitos te- rapêuticos sobre as células cancerosas. Recentes desenvolvimentos no 25 campo de pesquisa de HDAI têm fornecido compostos ativos, tanto altamen- te eficazes quanto estáveis, que são adequados para o tratamento de tumo- res.

O acúmulo de evidências sugere que os HDAI são ainda mais eficazes quando usados em combinação com outros agentes quimioterapêu- ticos. Existem vantagens tanto sinergísticas quanto aditivas, com relação tanto a eficácia quanto a segurança. Os efeitos terapêuticos das combina- ções de agentes quimioterapêuticos com HDAI podem resultar em faixas de dosagem com segurança mais baixa de cada componente na combinação. Sumário da Invenção

Esta invenção refere-se aos compostos orgânicos, em particular, às composições farmacêuticas para uso em combinação com um antimeta- bólito para o retardo do progresso ou tratamento de uma doença proliferati- va, especialmente uma doença tumoral sólida.

Temos agora observado que certos HDAIs, isto é, HDACs, são eficazes quando usados em combinação com um antimetabólito para o re- tardo da progressão ou tratamento de uma doença proliferativa, especial- mente MDS ou AML.

Descrição Detalhada dos Desenhos

A Figura 1 ilustra LBH589 em combinação com níveis de p21 mais elevados induzidos por 5-AzaC e clivagem de PARP do que cada com- posto como agente isolado.

A Figura 2 ilustra a indução de apoptose por LBH589, 5-

azacitidina ou LBH589 + 5-azacitidina na linhagem celular de U937 AML. Descrição Detalhada da Invenção

Consequentemente, a invenção fornece um método para o re- tardo da progressão ou tratamento de MDS ou AML em um indivíduo com necessidade de tal tratamento que compreende a administração ao indivíduo

de uma quantidade eficaz de uma HDAC de fórmula (I):

O R1

M I 1

HCL

N

H

R,. R4 (!)

ÒCl L-R

X

5

em que

Ri é H; halo; ou uma CrCeaIquiIa de cadeia reta, especialmente metila, etila ou n-propila, cujos substituintes de metila, etila e n-propila são não- substituídos ou substituídos por um ou mais substituintes descritos abaixo para substituintes de alquila;

R2 é selecionado de H; C1-C10 alquila, preferivelmente CrC6 alquila, por e- xemplo, metila, etila ou -CH2CH2-OH; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloal- quila; C4-Cg heterocicloalquilalquila; cicloalquilalquila, por exemplo, ciclopro- pilmetila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; -(CH2)nC(O)Re; -(CH2)nOC(O)Re; amino acila; H0N-C(0)-CH=C(Ri)-aril-alquil-; e -(CH2)nR7;

R3 e R4 são os mesmos ou diferentes e, independentemente, H; Cr C6alquila; acila; ou acilamino, ou

R3 e R4, juntamente com o carbono a qual eles são ligados, representam C=O, C=S ou C=NR8, ou

R2, juntamente com o nitrogênio ao qual é ligado, e R3, juntamente com o carbono ao qual é ligado, podem formar uma C4-Cg heterocicloalquila; uma heteroarila; uma polieteroarila; um polieterociclo não-aromático; ou um anel polieterociclo de arila e não-arila misturado;

Rs é selecionado de H; CrC6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-Cg heterocicloal- quila; acila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalqui- 15 Ia, por exemplo, piridilmetila; policiclos aromáticos; policiclos não-aromáticos; policiclos de arila e não-arila misturados; polieteroarila; polieterociclos não- aromáticos; e polieterociclos de arila e não-arila misturados; n, n-ι, n2 e n3 são os mesmos ou diferentes e independentemente seleciona- dos de O a 6, quando ni for de 1 a 6, cada átomo de carbono pode ser op- 20 cional e independentemente substituído com R3 e/ou R4;

XeY são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H; halo; CrC4 alquila, tal como CH3 e CF3; NO2; C(O)Ri; OR9; SRg; CN; e NR10R11;

Re é selecionado de H; CrC6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-Cg heterocicloal- quila; cicloalquilalquila, por exemplo, ciclopropilmetila; arila; heteroarila; ari- lalquila, por exemplo, benzila e 2-feniletenila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; ORi2; e NRi3Ri4;

R7 é selecionado de OR15; SR15; S(0)Ri6í SO2Ri7; NRi3Ri4; © NRi2SO2Re;

Re é selecionado de H; ORi5; NRi3Ri4; CrC6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4- Cg heterocicloalquila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; e heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila;

R9 é selecionado de CrC4 alquila, por exemplo, CH3 e CF3; C(0)-alquila, por exemplo, C(O)CH3; e C(O)CF3;

R-io e R1-I são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H; CrC4 alquila; e -C(0)-alquila;

R12 é selecionado de H; Ci-C6 alquila; C4-Cgcicloalquila; C4-Cg heterocicloal- quila; C4-Cg heterocicloalquilalquila; arila; policiclo de arila e não-arila mistu- rado; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; e heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila;

Ri3 e Ri4 são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H; C1-Cealquila; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloalquila; arila; heteroa- rila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilme- tila; amino acila, ou

Ri3 e R-I4, juntamente com o nitrogênio ao qual eles são ligados, são C4-Cg heterocicloalquila; heteroarila; polieteroarila; polieterociclo não-aromático; ou polieterociclo de arila e não-arila misturado;

Ri5 é selecionado de H; C1-C6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-Cg heterocicloal- quila; arila; heteroarila; arilalquila; heteroarilalquila; e (CH2)mZRi2;

Rie é selecionado de Ci-C6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-C9 heterocicloalqui- la; arila; heteroarila; polieteroarila; arilalquila; heteroarilalquila; e (CH2)mZRi2; R-17 é selecionado de C1-C6 alquila; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloalqui- Ia; arila; policiclos aromáticos; heteroarila; arilalquila; heteroarilalquila; polie- teroarila e NR13R14;

m é um número inteiro selecionado de 0 a 6; e Z é selecionado de O; NRi3; S; e S(O),

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste em combinação com um anti- metabólito.

Como apropriado, "não-substituído" significa que não existe ne- nhum substituinte ou que os únicos substituintes são hidrogênio.

Os substituintes de halo são selecionados de flúor, cloro, bromo e iodo, preferivelmente flúor ou cloro.

Os substituintes de alquila incluem C1-C6 alquila reta ou ramifi-

cada, a não ser que de outra maneira mencionada. Exemplos de substituin- tes de CrC6 alquila reta ou ramificada adequados incluem metila, etila, n- propila, 2-propila, n-butila, sec-butila, t-butila e similares. A não ser que de outra maneira mencionada, os substituintes de alquila incluem tanto grupos de alquila não-substituídos quanto grupos de alquila que são substituídos por um ou mais substituintes adequados, incluindo insaturação, isto é, exis- 5 tem uma ou mais ligações C-C duplas ou triplas; acila; cicloalquila; halo; oxi- alquila; alquilamino; aminoalquila; acilamino; e ORi5, por exemplo, alcóxi. Os substituintes preferidos para grupos de alquila incluem halo, hidróxi, alcóxi, oxialquila, alquilamino e aminoalquila.

Os substituintes de cicloalquila incluem grupos de C3-C9 cicloal- 10 quila, tais como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila e similares, a não ser que de outra maneira especificada. A não ser que de outra manei- ra mencionada, os substituintes de cicloalquila incluem tanto grupos de ci- cloalquila não-substituídos quanto grupos de cicloalquila que são substituí- dos por um ou mais substituintes adequados, incluindo Ci-C6 alquila, halo, 15 hidróxi, aminoalquila, oxialquila, alquilamino e ORi5, tais como alcóxi. Os substituintes preferidos para grupos de cicloalquila incluem halo, hidróxi, al- cóxi, oxialquila, alquilamino e aminoalquila.

O debate acima de substituintes de alquila e cicloalquila também se aplica às partes de alquila de outros substituintes, tais como, sem Iimita- ção, substituintes de alcóxi, alquil aminas, alquil cetonas, arilalquila, heteroa- rilalquila, alquilsulfonila e éster alquílico e similares.

Os substituintes de heterocicloalquil incluem anéis alifáticos de 3 a 9 membros, tais como anéis alifáticos de 4 a 7 membros, contendo de 1 a

3 heteroátomos selecionados de nitrogênio, enxofre, oxigênio. Exemplos de 25 substituintes de heterocicloalquila adequados incluem pirrolidila, tetrahidrofu- rila, tetrahidrotiofuranila, piperidila, piperazila, tetrahidropiranila, morfilino, 1,3-diazapano, 1,4-diazapano, 1,4-oxazepano e 1,4-oxatiapano. A não ser que de outra maneira mencionado, os anéis são não-substituídos ou substi- tuídos nos átomos de carbono por um ou mais substituintes adequados, in- 30 cluindo CrC6 alquila; C4-C9 cicloalquila; arila; heteroarila; arilalquila, por e- xemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; halo; amino; al- quil amino e ORi5, por exemplo, alcóxi. A não ser que de outra maneira mencionada, os heteroátomos de nitrogênio são não-substituídos ou substi- tuídos por H, CrC4 alquila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; acila; aminoacila; alquilsulfonila; e arilsulfonila.

Os substituintes de cicloalquilalquila incluem compostos da for- 5 mula -(CH2)nS-CicIoaIquiIa, em que n5 é um número de 1 a 6. Os substituintes de alquilcicloalquila adequados incluem ciclopentilmetila, ciclopentiletila, ci- clo-hexilmetil e similares. Tais substituintes são não-substituídos ou substitu- ídos na parte de alquila ou na parte de cicloalquila por um substituinte ade- quado, incluindo aqueles listados acima para alquila e cicloalquila.

Os substituintes de arila incluem fenila não-substituída e fenila

substituída por um ou mais substituintes adequados incluindo CrC6 alquila; cicloalquilalquila, por exemplo, ciclopropilmetila; 0(C0)alquila; oxialquila; halo; nitro; amino; alquilamino; aminoalquila; alquil cetonas; nitrila; carboxial- quila; alquilsulfonila; aminossulfonila; arilsulfonila e OR15, tal como alcóxi. Os 15 substituintes preferidos incluem CrC6 alquila; cicloalquila, por exemplo, ci- clopropilmetila; alcóxi; oxialquila; halo; nitro; amino; alquilamino; aminoalqui- la; alquil cetonas; nitrila; carboxialquila; alquilsulfonila; arilsulfonila e aminos- sulfonila. Exemplos de grupos de arila adequados incluem C1-C4 alquilfenila, C1-C4 alcoxifenila, trifluorometilfenila, metoxifenila, hidroxietilfenila, dimetila- 20 minofenila, aminopropilfenila, carbetoxifenila, metanossulfonilfenila e tolilsul- fonilfenila.

Policiclos aromáticos incluem naftila, e naftila substituída por um ou mais substituintes adequados incluindo CrC6 alquila; alquilcicloalquila, por exemplo, ciclopropilmetila; oxialquila; halo; nitro; amino; alquilamino; a- minoalquila; alquil cetonas; nitrila; carboxialquila; alquilsulfonila; arilsulfonila; aminossulfonila e ORi5, tal como alcóxi.

Os substituintes de heteroarila incluem compostos com um anel aromático de 5 a 7 membros contendo um ou mais heteroátomos, por exem- plo, de 1 a 4 heteroátomos, selecionados de N, O e S. Os substituintes de 30 heteroarila típicos incluem furila, tienila, pirrol, pirazol, triazol, tiazol, oxazol, piridina, pirimidina, isoxazolila, pirazina e similares. A não ser que de outra maneira mencionada, os substituintes de heteroarila são não-substituídos ou substituídos em um átomo de carbono por um ou mais substituintes adequa- dos, incluindo alquila, os substituintes de alquila identificados acima, e um outro substituinte de heteroarila. Os átomos de nitrogênio são não- substituídos ou substituídos, por exemplo, por Ri3; os substituintes N espe- 5 cialmente úteis incluem H, C1-C4 alquila, acila, aminoacila e sulfonila.

Os substituintes de arilalquila incluem grupos da fórmula - (CH2)n5-arila, -(CH2)n5-i-(CH-aril)-(CH2)n5-aril ou -(CH2)n5-iCH(aril)(aril), em que arila e n5 são definidos acima. Tais substituintes de arilalquila incluem benzila, 2-feniletila, 1 -feniletila, tolil-3-propila, 2-fenilpropila, difenilmetila, 2- 10 difeniletila, 5,5-dimetil-3-fenilpentila e similares. Os substituintes de arilalquila são não-substituídos ou substituídos no componente de alquila ou no com- ponente de arila ou ambos como descrito acima para os substituintes de al- quila e arila.

Os substituintes de heteroarilalquila incluem grupos da fórmula - 15 (CH2)n5-heteroarila, em que heteroarila e n5 são definidos acima e o grupo de ligação com ponte é ligado a um carbono ou um nitrogênio da parte hete- roarila, tal como 2-, 3- ou 4-piridilmetila, imidazolilmetila, quinoliletila e pirro- lilbutila. Os substituintes de heteroarila são não-substituídos ou substituídos como debatido acima para os substituintes de heteroarila e alquila.

Os substituintes de amino acila incluem grupos da fórmula -

C(O)-(CH2)n-C(H)(NR13R14)-(CH2)n-R5, em que n, R13, R14 e R5 são descritos acima. Os substituintes de aminoacila adequados incluem aminoácidos natu- rais e não-naturais, tais como glicinila, D-triptofanila, L-lisinila, D- ou L- homosserinila, 4-aminobutric acil e ±-3-amin-4-hexenoíla.

Os substituintes de policiclo não-aromáticos incluem sistemas de

anel fundidos bicíclicos e tricíclicos onde cada anel pode ser de 4 a 9 mem- bros e cada anel pode conter zero, uma ou mais ligações duplas e/ou triplas. Exemplos adequados de policiclos não-aromáticos incluem decalina, octa- hidroindeno, peridrobenzociclo-hepteno e peridrobenzo-[f]-azuleno. Tais 30 substituintes são não-substituídos ou substituídos como descrito acima para grupos de cicloalquila.

Os substituintes de policiclo de arila e não-arila misturado inclu- em sistemas de anel fundidos bicíclicos e tricíclicos onde cada anel pode ser de 4 a 9 membros e pelo menos um anel é aromático. Exemplos adequados de policiclos de arila e não-arila misturados incluem metilenodioxifenila, bis- metilenodioxifenila, 1,2,3,4-tetrahidronaftaleno, dibenzossuberano, diidroan- 5 traceno e 9H-fluoreno. Tais substituintes são não-substituídos ou substituí- dos por nitro ou como descrito acima para grupos de cicloalquila.

Os substituintes de polieteroarila incluem sistemas de anel fun- didos bicíclicos e tricíclicos onde cada anel pode independentemente ser de ou 6 membros e conter um ou mais heteroátomos, por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos, selecionados de O, N ou S tal que o sistema de anel fundi- do seja aromático. Exemplos adequados de sistemas de anel de polieteroari- la incluem quinolina, isoquinolina, piridopirazina, pirrolopiridina, furopiridina, indol, benzofurano, benzotiofurano, benzindol, benzoxazol, pirroloquinolina e similares. A não ser que de outra maneira mencionada, substituintes de poli- eteroarila são não-substituídos ou substituídos em um átomo de carbono por um ou mais substituintes adequados, incluindo alquila, os substituintes de alquila identificados acima e um substituinte da fórmula -O- (CH2CH=CH(CH3)(CH2))i-3H. Os átomos de nitrogênio são não-substituídos ou substituídos, por exemplo, por Ri3, os substituintes de N especialmente úteis incluem H, CrC4 alquila, acila, aminoacila e sulfonila.

Os substituintes polieterocíclicos não-aromáticos incluem siste- mas de anel fundidos bicíclicos e tricíclicos onde cada anel pode ser de 4 a 9 membros, conter um ou mais heteroátomos, por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 hete- roátomos, selecionados de O, N ou S e conter zero ou um ou mais ligações 25 C-C duplas ou triplas. Exemplos adequados de polieterociclos não- aromáticos incluem hexitol, cis-peridro-ciclo-hepta[b]piridinila, deca-hidro- benzo[f][1,4]oxazepinila, 2,8-dioxabiciclo[3.3.0]octano, hexa-hidro-tieno[3,2- bjtiofeno, peridropirrolo[3,2-b]pirrol, peridronaftiridina, peridro-1H- diciclopenta[b,e]pirano. A não ser que de outra maneira mencionada, substi- 30 tuintes polieterocíclicos não-aromáticos são não-substituídos ou substituídos em um átomo de carbono por um ou mais substituintes, incluindo alquila e os substituintes de alquila identificados acima. Os átomos de nitrogênio são não-substituídos ou substituídos, por exemplo, por R13, os substituintes de N especialmente úteis incluem H, C1-C4 alquila, acila, aminoacila e sulfonila.

Os substituintes de polieterociclos de arila e não-arila misturados incluem sistemas de anel fundidos bicíclicos e tricíclicos onde cada anel po- 5 de ser de 4 a 9 membros, conter um ou mais heteroátomos selecionados de O, N ou S, e pelo menos um dos anéis deve ser aromático. Exemplos ade- quados de polieterociclos de arila e não-arila misturados incluem 2,3- diidroindol, 1,2,3,4-tetrahidroquinolina, 5,11-diidro-10H-

dibenz[b,e][1,4]diazepina, 5H-dibenzo[b,e][1,4]diazepina, 1,2-

diidropirrolo[3,4-b][1,5]benzodiazepina, 1,5-diidro-pirido[2,3-b][1,4]diazepin-4- ona, 1,2,3,4,6,11-hexa-hidro-benzo[b]pirido[2,3-e][1,4]diazepin-5-ona. A não ser que de outra maneira mencionada, os substituintes polieterocíclicos de aril e não-arila misturados são não-substituídos ou substituídos em um áto- mo de carbono por um ou mais substituintes adequados incluindo -N-OH, 15 =N-OH, alquila e os substituintes de alquila identificados acima. Os átomos de nitrogênio são não-substituídos ou substituídos, por exemplo, por R13; os substituintes de N especialmente úteis incluem H, C1-C4 alquila, acila, ami- noacila e sulfonila.

Os substituintes de amino incluem aminas primárias, secundá- rias e terciárias e na forma de sal, aminas quaternárias. Exemplos de substi- tuintes de amino incluem mono- e di-alquilamino, mono- e di-aril amino, mo- no- e di-arilalquil amino, aril-arilalquilamino, alquil-arilamino, alquil- arilalquilamino e similares.

Os substituintes de sulfonila incluem alquilsulfonila e arilsulfonila, por exemplo, metano sulfonila, benzeno sulfonila, tosila e similares.

Os substituintes de acima incluem grupos de fórmula -C(O)-W, - OC(O)-W, -C(O)-O-W ou -C(O)NR13R14, onde W é R16, H ou cicloalquilalqui- la.

Os substituintes de acilamino incluem substituintes da fórmula - N(R12)C(O)-W, -N(R12)C(O)-O-W e -N(R12)C(O)-NHOH e R12 e W são defini- dos acima.

O substituinte de R2 H0N-C(0)-CH=C(R-i)-aril-alquil- é um grupo da fórmula

As preferências para cada um dos substituintes incluem os que

seguem:

Ri é H, halo ou uma CrC4alquila de cadeia reta;

R2 é selecionado de H, CrC6 alquila, C4-C9 cicloalquila, C4-C9 heterocicloal- quila, cicloalquilalquila, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila, - (CH2)nC(O)Re, amino acila e -(CH2)nR7;

R3 e R4 são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H e Ci-C6 alquila, ou

R3 e R4, juntamente com o carbono a qual eles são ligados, representam C=O, C=S ou C=NR8;

R5 é selecionado de H, CrC6 alquila, C4-Cg cicloalquila, C4-C9 heterocicloal- quila, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila, um policiclo aromático, um policiclo não-aromático, um policiclo de arila e não-arila misturado, polie- teroarila, um polieterociclo não-aromático, e um polieterociclo de arila e não- arila misturado;

n, n-ι, n2 e n3 são os mesmos ou diferentes e independentemente seleciona- dos de 0 a 6, quando ni for de 1 a 6, cada átomo de carbono é não- substituído ou independentemente substituído com R3 e/ou R4;

XeY são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H, halo, CrC4alquila, CF3, NO2, C(O)Ri, ORg, SR9, CN e NR10R11;

R6 é selecionado de H, CrC6 alquila, C4-Cg cicloalquila, C4-Cg heterocicloal- quila, alquilcicloalquila, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila, ORi2 e NRi3Ri4;

R7 é selecionado de ORi5, SRi5, S(O)Ri6, SO2Ri7, NRi3Ri4 e NRi2SO2R6;

R8 é selecionado de H, ORi5, NRi3Ri4, CrC6 alquila, C4-Cg cicloalquila, C4- Cg heterocicloalquila, arila, heteroarila, arilalquila e heteroarilalquila;

R9 é selecionado de CrC4 alquil e C(0)-alquila; Rio e Rn são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H, C1-C4 alquila e -C(0)-alquila;

R12 é selecionado de H, C1-Cealquila, C4-Cgcicloalquila, C4-Cg heterocicloal- quila, arila, heteroarila, arilalquila e heteroarilalquila;

R13 e R14 são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H, C1-C6 alquila, C4-Cg cicloalquila, C4-Cg heterocicloalquila, arila, heteroa- rila, arilalquila, heteroarilalquila e amino acila;

R15 é selecionado de H, C1-Cealquila, C4-Cg cicloalquila, C4-Cg heterocicloal- quila, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila e (CH2)mZR12;

R16 é selecionado de C1-C6 alquila, C4-C9 cicloalquila, C4-Cg heterocicloalqui- la, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila e (CH2)mZRi2;

R17 é selecionado de C1-C6 alquila, C4-C9 cicloalquila, C4-C9 heterocicloalqui- la, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila e NR13R14; m é um número inteiro selecionado de 0 a 6; e Z é selecionado de O, NR13, S e S(O);

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Os compostos úteis da fórmula (I), incluem aqueles em cada um de R1, X, Y, R3 e R4 é H, incluindo aqueles em que um de n2 e n3 é O e o ou- tro é 1, especialmente aqueles em que R2 é H ou -CH2-CH2-OH.

Um gênero adequado de compostos de hidroxamato é aquele de

fórmula (Ia):

O

em que n4 é de 0 a 3;

R2 é selecionado de H, C1-C6 alquila, C4-Cg cicloalquila, C4-Cg heterocicloal- quila, cicloalquilalquila, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila, - (CH2)nC(O)R6, amino acila e -(CH2)nR7; e

R5 é heteroarila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; policiclos aromá- ticos; policiclos não-aromáticos; policiclos de arila e não-arila misturados; 10

15

polieteroarila ou arila miturada; e polieterociclos não-arila; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Um outro gênero adequado de compostos de hidroxamato é a- quele de fórmula (Ia):

O

em que n4 é de 0 a 3;

R2 é selecionado de H, C1-C6 alquila, C4-Cg cicloalquila, C4-C9 heterocicloal- quila, cicloalquilalquila, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila, - (CH2)nC(O)R6, amino acila e -(CH2)nR7;

R5 é'arila; arilalquila; policiclos aromáticos; policiclos não-aromáticos e arila misturada; e policiclos não-arila, especialmente arila, tal como p-fluorofenila, p-clorofenila, P-O-CrC4 alquilfenila, tal como p-metoxifenila, e p-Ci-C4 alquil- fenila; e arilalquila, tal como benzila, orto-, meta- ou para-fluorobenzila, orto-, meta- ou para-clorobenzila, orto-, meta- ou para-mono, di- ou tri-0-CrC4 al- quilbenzila, tal como orto-, meta- ou para-metoxibenzila, m,p-dietoxibenzila, o,m,p-tri-imetoxibenzila e orto-, meta- ou para-mono, di- ou tri-Ci-C4 alquilfe- nila, tal como p-metila, m,m-dietilfeniia; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Um outro gênero de interesse é os compostos de fórmula (Ib):

O

R2 é selecionado de H; CrC6 alquila; C4-C6 cicloalquila; cicloalquilalquila, por exemplo, ciclopropilmetila; (CH2)2.4OR2i, onde R2I é H, metila, etila, propila e i-propila; e

R5 é ΐ H-indol-3-ila, benzofuran-3-iia ou quinolin-3-ila não-substituída, ou 1H-

(Ia)

‘5

(Ib)

em que indol-3-ila substituída, tal como 5-fluoro-1 H-indol-3-ila ou 5-metóxi-1 H-indol- 3-ila, benzofuran-3-ila ou quinolin-3-ila; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Um outro gênero interessante de compostos de hidroxamato é os compostos de fórmula (Ic):

em que

o anel contendo Zi é aromático ou não-aromático, em que os anéis não- aromáticos são saturados ou insaturados,

Zi é O, S ou N-R2o;

Ris é H; halo; CrCeaIquiIa (metila, etila, t-butila); C3-C7 cicloalquila; arila, por exemplo, fenil não-substituída ou fenila substituída por 4-OCH3 ou 4-CF3; ou heteroarila, tal como 2-furanila, 2-tiofenila ou 2-, 3- ou 4-piridila;

R20 é H; CrC6 alquila; CrC6 alquil-C3-C9 cicloalquila, por exemplo, ciclopro- pilmetila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; acila, por exemplo, acetila, propionila e benzoíla; ou sulfonila, por exemplo, metanossulfonila, etanossulfonila, benzenossulfo- nila e toluenossulfonila;

Ai é 1, 2 ou 3 substituintes que são independentemente H; CrC6 alquila; - OR-I9; halo; alquilamino; aminoalquila; halo; ou heteroarilalquila, por exem- pio, piridilmetila;

Ri9 é selecionado de H; CrC6 alquila; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloal- quila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila e -(CH2CH=CH(CH3)(CH2))-i_3H;

R2 é selecionado de H, CrC6 alquila, C4-C9 cicloalquila, C4-C9 heterocicloal- quila, cicloalquilalquila, arila, heteroarila, arilalquila, heteroarilalquila, - (CH2)nC(O)R6, amino acila e -(CH2)nR7; v é 0, 1 ou 2; p é de O a 3; e

q é de 1 a 5 e r é 0, ou

qé0eréde1a5;

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Os outros substituintes variáveis são como definidos acima.

Os compostos especialmente úteis de fórmula (Ic), são aqueles em que R2 é H, ou -(CH2)pCH2OH1 em que p é de 1 a 3, especialmente a- queles em que Ri é H; tal como aqueles em que Ri é H e X e Y são cada um H, e em que q é de 1 a 3 e r é 0 ou em que qéOerédel a 3, especi- 10 almente aqueles em que Z1 é N-R20. Entre estes compostos R2 é preferivel- mente H ou -CH2-CH2-OH e a soma de q e r é preferivelmente 1.

Um outro gênero de interesse de compostos de hidroxamato são os compostos de fórmula (Id):

em que Zi é O, S ou N-R20;

R-I8 é H; halo; CrCeaIquiIa (metila, etila, t-butila); C3-C7 cicloalquila; arila, por exemplo, fenila não-substituída ou fenila substituída por 4-OCH3 ou 4-CF3; ou heteroarila;

R20 é H; CrC6 alquila, CrC6 alquil-C3-C9 cicloalquila, por exemplo, ciclopro- pilmetila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; acila, por exemplo, acetila, propionila e benzoíla; ou sulfonila, por exemplo, metanossulfonila, etanossulfonila, benzenossulfo- nila, toluenossulfonila;

Ai é 1, 2 ou 3 substituintes que são independentemente H, CrC6 alquila, - OR19 ou halo;

R19 é selecionado de H; C1-C6 alquila; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloal- quila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; e heteroarilalquila, 10

15

20

25

por exemplo, piridilmetila; p é de 0 a 3; e q é de 1 a 5 e r é 0, ou qéOerédel a 5;

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Os outros substituintes variáveis são como definidos acima.

Os compostos especialmente úteis de fórmula (Id), são aqueles em que R2 é H ou -(CH2)pCH2OH, em que p é de 1 a 3, especialmente aque- les em que Ri é H; tal como aqueles em que Ri é H e X e Y são cada um H, e em que q é de 1 a 3 e r é 0 ou em que qéOerédel a 3. Entre estes compostos R2 é preferivelmente H ou -CH2-CH2-OH e a soma de q e r é pre- ferivelmente 1.

A presente invenção ainda se refere aos compostos da fórmula

(le):

(Ie)

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Os substituintes variáveis são como definidos acima.

Os compostos especialmente úteis de fórmula (le), são aqueles em que Ri8 é H, flúor, cloro, bromo, um grupo de CrC4 alquila, um grupo de CrC4 alquila substituído, um grupo de C3-C7 cicloalquila, fenila não- substituída, fenila substituída na para posição, ou um heteroarila, por exem- plo, anel de piridila.

Um outro grupo de compostos úteis de fórmula (le), é aqueles em que R2 é H ou -(CH2)pCH2OH, em que p é de 1 a 3, especialmente aque- les em que Ri é H; tal como aqueles em que Ri é H e X e Y são cada um H, e em que q é de 1 a 3 e r é 0 ou em que qéOerédel a 3. Entre estes compostos R2 é preferivelmente H ou -CH2-CH2-OH e a soma de q e r é pre- ferivelmente 1. Entre estes compostos p é preferivelmente 1 e R3 e R4 são preferivelmente Η.

Outro grupo de compostos úteis de fórmula (le), é aqueles em que Rie é H, metila, etila, t-butila, trifluorometila, ciclo-hexila, fenila, 4- metoxifenila, 4-trifluorometilfenila, 2-furanila, 2-tiofenila, ou 2-, 3- ou 4-piridila 5 em que os substituintes de 2-furanila, 2-tiofenila e 2-, 3- ou 4-piridila são não-substituídos ou substituídos como descrito acima para os anéis de hete- roarila; R2 é H ou -(CH2)pCH2OH, em que p é de 1 a 3; especialmente aque- les em que Ri é H e X e Y são cada um H, e em que qéde1a3eré0ou em que qéOerédel a 3. Entre estes compostos R2 é preferivelmente H 10 ou -CH2-CH2-OH e a soma de q e r é preferivelmente 1.

Aqueles compostos de fórmula (le), em que R2O é H ou C1-C6 alquila, especialmente H, são membros importantes de cada um dos subgê- neros de compostos de fórmula (Ie) descritos acima.

N-hidróxi-3-[4-[[(2-hidroxietil)[2-(1H-indol-3-il)etil]- amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida, N-hidróxi-3-[4-[[[2-(1 H-indol-3-il)etil]- amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida e N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3- il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida ou um sal farmaceuticamente aceitável destes, são compostos importantes de fórmula (le).

Em uma modalidade específica, N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H- indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida é o inibidores de HDAC.

A presente invenção ainda se refere aos compostos da fórmula

(If):

R,

(If)

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Os substituintes variáveis são como definidos acima.

Os compostos úteis de fórmula (If), incluem aqueles em que R2 é

H ou -(CH2)pCH2OH, em que p é de 1 a 3, especialmente aqueles em que Ri é H; tal como aqueles em que Ri é H e X e Y são cada um H, e em que q é de 1 a 3 e r é O ou em que qéOerédel a 3. Entre estes compostos R2 é preferivelmente H ou -CH2-CH2-OH e a soma de q e r é preferivelmente 1.

N-hidróxi-3-[4-[[[2-(benzofur-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2- propenamida ou um sal farmaceuticamente aceitável desta, é um composto importante de fórmula (If).

Os compostos descritos acima são frequentemente usados na forma de um sal farmaceuticamente aceitável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando apropriado, sais de adição de base e sais de a- dição de ácido farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, sais de metal, 10 tais como sais de metal alcalino e alcalino terroso, sais de amônio, sais de adição de amina orgânicos e sais de adição de aminoácido e sais de sulfo- nato. Os sais de adição de ácido incluem sais de adiçãode ácido inorgâni- cos, tais como cloridrato, sulfato e fosfato; e sais de adição de ácido orgâni- cos, tais como alquil sulfonato, arilsulfonato, acetato, maleato, fumarato, tar-

trato, citrato e lactato. Exemplos de sais de metal são sais de metal alcalino, tais como sal de lítio, sal de sódio e sal de potássio; os sais de metal terroso alcalino, tais como sal de magnésio e sal de cálcio, sal de alumínio e sal de zinco. Exemplos de sais de amônio são sal de amônio e sal de tetrametila- mônio. Exemplos de sais de adição de amina orgânicos são sais com morfi- 20 Iino e piperidina. Exemplos de sais de adição de aminoácido são sais com glicina, fenilalanina, ácido glutâmico e lisina. Os sais de sulfonato incluem sais de mesilato, tosilato e ácido benzeno sulfônico.

Os compostos de HDAI adicionais dentro do escopo de fórmula (I), e sua síntese, são descritos na WO 02/22577. Dois compostos preferidos dentro do escopo da WO 02/22577 são N-hidróxi-3-[4-[(2-hidroxietil){2-(1H- indol-3-il)etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida, de fórmula (II):

OH O

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil- 1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida, de fórmula (III):

O

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

O termo "antimetabólito", como aqui usado, refere-se a um com- posto que inibe ou rompe a síntese de DNA resultando na morte celular. E- 5 xemplos de um antimetabólito incluem, mas não são limitados a eles, 6- mercaptopurina; citarabina; fludarabina; flexuridina; fluorouracil; capecitabi- na; raltitrexed; metotrexato; cladribina; gencitabina; cloridrato de gencitabina; tioguanina; hidroxiuréia; agentes de desmetilação do DNA, tais como 5- azacitidina e decitabina; edatrexato; e antagonistas de ácido fólico tais como, 10 mas não são limitados a eles, pemetrexed. A capecitabina pode ser adminis- trada, por exemplo, na forma como é vendida, por exemplo, sob a marca comercial; e a gencitabina como GEMZAR.

Em uma modalidade preferida, o antimetabólito é 5-azacitidina.

Ainda a invenção fornece o uso de um composto de fórmula (I), ou sal farmaceuticamente aceitável ou éster de promedicamento deste, para a preparação de um medicamento para uso em combinação com um antime- tabólito no tratamento de uma doença proliferativa.

Em um outro aspecto a invenção fornece o uso de um inibidor de HDAC em combinação com um antimetabólito para o tratamento de uma doença proliferativa, especialmente MDS ou AML.

Em mais outro aspecto a invenção fornece um inibidores de HDAC como ingrediente ativo para uso em combinação com um antimetabó- lito para o tratamento de uma doença proliferativa, especialmente MDS ou AML.

Em mais outro aspecto, a invenção fornece uma embalagem que

compreende um inibidor de HDAC juntamente com instruções para o use em combinação com um antimetabólito para o tratamento de uma doença proli- ferativa, especialmente MDS ou AML.

O termo "retardo do progresso", como aqui usado, significa a administração da combinação aos pacientes estando em uma fase inicial da doença proliferativa a ser tratada.

Combinação refere-se à administração de uma quantidade de

inibidor de HDAC em combinação com a administração de uma quantidade de um antimetabólito tal que exista um efeito sinergístico que não seria obti- do se um inibidor de HDAC fosse administrado sem a administração separa- da, simultânea ou seqüencial de um antimetabólito. Em que a administração 10 de um antimetabólito pode ser contínua, seqüencial ou esporádica. Ou um efeito que não seria obtido se fosse administrado um antimetabólito sem a administração separada, simultânea ou seqüencial de um inibidor de HDAC, em que a administração pode ser contínua, seqüencial ou esporádica.

Preferivelmente, combinação se refere à administração de uma quantidade de inibidor de HDAC em combinação com a administração de uma quantidade de um antimetabólito tal que exista um efeito antiproliferati- vo sinergístico e/ou um efeito mortal da célula clonogênica que não seria obtido se:

a) A HDAC é administrada sem a administração anterior, simultânea ou sub- sequente de um antimetabólito. Em que a administração pode ser contínua,

seqüencial ou esporádica;

b) Existe a administração de um antimetabólito sem a administração anterior, simultânea ou subsequente de um inibidor de HDAC. Onde, em administra- ção, pode ser continua, seqüencial ou esporádica.

Uma combinação que compreende:

(a) um inibidor de HDAC, que pode estar presente na forma livre ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável e opcionalmente pelo menos um por- tador farmaceuticamente aceitável; e

(b) um antimetabólito, será referido a seguir como uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO.

Na combinação da invenção, o inibidor de HDAC e sais farma- ceuticamente aceitáveis e derivados de promedicamento são preferivelmen- te usados na forma de preparações farmacêuticas que contêm a quantidade terapeuticamente eficaz pertinente de ingrediente ativo opcionalmente em conjunto ou em mistura com portadores inorgânicos ou orgânicos, sólidos ou líquidos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para a adminis- 5 tração.

Em uma modalidade alternativa, o antimetabólito é fornecido como um pré-tratamento, isto é, antes que o tratamento com a COMBINA- ÇÃO DA INVENÇÃO seja iniciado; o antimetabólito isoladamente é adminis- trado ao paciente durante um período de tempo definido.

As composições farmacêuticas de HDAC podem ser, por exem-

plo, composições para a administração entérica, tal como oral, retal, inalação de aerossol ou nasal, composições para a administração parenteral, tal co- mo intravenosa ou subcutânea, ou composições para a administração trans- dérmica (por exemplo, passiva ou iontoforética), ou composições para a ad- ministração tópica.

Preferivelmente, as composições farmacêuticas de HDAC são adaptadas para a administração oral.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção po- dem se preparadas em uma maneira conhecida per se e são aquelas ade- 20 quadas para a administração entérica, tal como oral ou retal, e parenteral em mamíferos (animais de sangue quente), incluindo o homem, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um par de combina- ção farmacologicamente ativa isoladamente ou em combinação com um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis, especialmente adequados 25 para aplicação entérica ou parenteral.

A nova composição farmacêutica contém, por exemplo, de cerca de 10 % a cerca de 100 %, preferivelmente de cerca de 20 % a cerca de 60 %, dos ingredientes ativos. As preparações farmacêuticas para a terapia de combinação para administração entérica ou parenteral são, por exemplo, 30 aquelas em formas de dosagem unitárias, tais como comprimidos revestidos de açúcar, comprimidos, cápsulas ou supositórios, e, além disso, ampolas. Se não indicado de outra maneira, estes são preparados em uma maneira conhecida per se, por exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, granulação, revestimento de açúcar, dissolução ou liofilização. Será observado que o teor unitário de um par de combinação contido em uma dose individual de cada forma de dosagem não necessita em si mesmo 5 constituir uma quantidade eficaz, visto que a quantidade eficaz necessária pode ser obtida mediante a administração de uma pluralidade de unidades de dosagem.

Na preparação das composições para a forma de dosagem oral, qualquer um dos meios farmacêuticos habituais pode ser empregado, tal 10 como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois, agentes flavorizantes, con- servantes, agentes colorantes; ou portadores tais como amidos, açúcares, celulose microcristalina, diluentes, agentes de granulação, lubrificantes, a- glutinantes, agentes desintegrantes e similares no caso de preparações sóli- das orais, tais como, por exemplo, pós, cápsulas e comprimidos, com as 15 preparações orais sólidas sendo preferidas sobre as preparações líquidas. Por causa de sua facilidade de administração, os comprimidos e cápsulas representam a forma de unidade de dosagem oral mais vantajosa em cujo caso os portadores farmacêuticos sólidos são obviamente empregados.

Em particular, uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada 20 par de combinação da COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO pode ser administra- da simultânea ou seqüencialmente e em qualquer ordem, e os componentes podem ser administrados separadamente ou como uma combinação fixa. Por exemplo, o método de retardo do progresso ou tratamento ou uma do- ença proliferativa de acordo com a invenção pode compreender:

(95 a administração do primeiro par de combinação; e

(ii) a administração do segundo par de combinação,

em que a administração de um par de combinação pode ser simultânea ou seqüencial em qualquer ordem, em quantidades terapeuticamente eficazes em conjunto, preferivelmente em quantidades sinergisticamente eficazes, 30 por exemplo, em dosagens diárias ou semanais que correspondem às quan- tidades aqui descritas. Os pares de combinação individuais da COMBINA- ÇÃO DA INVENÇÃO podem ser administrados separadamente em momen- tos diferentes durante o curso de terapia ou concorrentemente. Além disso, o termo administração também abrange o uso de um promedicamento de ini- bidor de HDAC que se converte in vivo no par de combinação como tal. A presente invenção deve, portanto, ser entendida como abrangendo todos 5 tais regimes de tratamento simultâneo ou alternado e o termo "administra- ção" deve ser interpretado desta maneira.

A dosagem de um antimetabólito e um inibidor de HDAC em re- lação de um com o outro é preferivelmente em uma relação que seja siner- gística.

Se o animal de sangue quente for um ser humano, a dosagem

de um composto de fórmula (I) é preferivelmente uma dose apropriada na faixa de 100 a 1.500 mg diariamente, por exemplo, 20 a 1.000 mg/dia, tal como 200, 400, 500, 600, 800, 900 ou 1.000 mg/dia, administrada em uma ou duas doses diárias. As dosagens apropriadas e a frequência de adminis- 15 tração do ligando de receptor mortal dependerão de tais fatores, como a na- tureza e gravidade da indicação sendo tratada, a resposta desejada, a con- dição do paciente e assim por diante.

O modo particular de administração e a dosagem de um inibidor de HDAC podem ser selecionados pelo médico atendente levando em conta os particulares do paciente, especialmente idade, peso, estilo de vida, nível de atividade, etc.

A dosagem de um inibidor de HDAC pode depender de vários fatores, tais como a eficácia e duração da ação do ingrediente ativo, modo de administração, eficácia e duração de ação da radiação ionizante e/ou se- xo, idade, peso e condição individual do indivíduo a ser tratado.

A dosagem de radiação ionizante pode depender de vários fato- res, tais como a eficácia e a duração da ação da radiação ionizante, modo de administração, local de administração, eficácia e duração da ação do ini- bidor de HDAC e/ou sexo, idade, peso e condição individual do indivíduo a 30 ser tratado. A dosagem de radiação ionizante é geralmente definida em ter- mos de dose absorvida por radiação, tempo e fração, e deve ser cuidado- samente definida pelo médico atendente. Em uma modalidade preferida da invenção a combinação com- preende um antimetabólito e N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]- amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida, de fórmula (III) acima ou um sal farma- ceuticamente aceitável deste.

Em uma outra modalidade preferida da invenção, a combinação

compreende 5-azacitidina e N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]- amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida, de fórmula (III) acima ou um sal farma- ceuticamente aceitável deste.

Além do mais, a presente invenção refere-se a um método de 10 tratamento de um animal de sangue quente tendo uma doença proliferativa que compreende a administração ao animal de uma COMBINAÇÃO DA IN- VENÇÃO em uma maneira que é em conjunto terapeuticamente eficaz con- tra uma doença proliferativa e em que os pares de combinação também po- dem estar presentes na forma de seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Além disso, a presente invenção pertence ao uso de uma COM-

BINAÇÃO DA INVENÇÃO para o retardo do progresso ou tratamento de uma doença proliferativa e para a preparação de um medicamento para o retardo do progresso ou tratamento de uma doença proliferativa.

Os seguintes exemplos são meramente ilustrativos e não são propostos para limitar o escopo da presente invenção de qualquer maneira: Exemplo 1: Combinação de LBH589 com o Agente de Desmetilação 5-Aza Induz mais Apoptose de Células Tumorais do que cada Agente Isoladamen- te

O silenciamento dos genes supressores tumorais no nível de 25 cromativa é um aspecto principal da tumorigênese. LBH589 e 5-azacitidina são ambos compostos que intensificam a expressão dos genes supressores tumorais através da modulação da estrutura de cromatina. LBH589, um HDAI, causa aumento de acetilação da histona levando ao relaxamento da estrutura de cromatina que é favorável à ligação e atividade do fator de 30 transcrição. Muitos genes supressores tumorais também são silenciados pela metilação de DNA nas ilhotas CpG e 5-azacitidina causa a desmetila- ção das ilhotas CpG levando à re-expressão destes genes. Vários estudos têm relatado diafonia e sinergia entre estes dois mecanismo epigenéticos principais e postulamos que a combinação de LBH589 com 5-azacitidina pode intensificar a morte celular tumoral induzida por cada composto isola- damente.

5 Materiais, Métodos e Resultados

A linhagem celular AML U937 é incubada com LBH589 ou 5-aza como agente único ou em combinação. Com pode ser visto na Figura 1. A LBH589, mas não 5-aza, induz o aumento da acetilação de alfa-tubulina, cada composto induz a expressão do inibidor do crescimento celular p21, 10 mas uma combinação de ambos os compostos induz níveis mais elevados de p21 do que cada composto isoladamente. Além disso, enquanto cada composto induz apenas uma clivagem PARP leve como uma medida da morte celular apoptótica, a combinação de ambos os compostos induzi uma clivagem PARP super-aditiva. Assim, mecanicamente, a LBH589 quando 15 combinada com 5-aza intensifica a expressão do supressor de crescimento p21 e sinergisticamente induz mais apoptose quando comparado com cada composto isoladamente.

As células U937 são tratadas com 2 μΜ 5-aza, 10 nM LBH589 ou com uma combinação de 5-aza + LBH589 durante 24 horas. As células são submetidas a lise, as proteínas separadas por SDS-PAGE e análise western immunoblotting feita com anticorpos contra a tubulina acetilada, p21, PARP e β-actina (controle com relação a carga).

Indução de apoptose por LBH589, 5-aza ou LBH589 + 5-aza na linhagem celular U937 AML e nas células de reserva AML humanas.

Para ainda testar a combinação de LBH589 + 5-aza para induzir

a morte celular em AML, as linhagens celulares U937 AML e células de re- serva de leucemia novas de pacientes AML são incubadas com os compos- tos como um combinação ou como agentes isolados. A morte celular é moni- torada pelo manchamento das células por Annexin V (que quer dizer apop- 30 tose) ou mediante a contagem das células vivas pela exclusão de tripano- azul. Como mostrado nas Figuras 2, as células U937 tratadas com a combi- nação de LBH589 + 5-aza produzem apoptose muito mais elevada (medida pelo manchamento de annexin V) do que aquelas induzidas pelos agentes isolados. Igualmente, uma porcentagem mais elevada de morte celular é induzida pela combinação de LBH589 + 5-aza do que os agentes isolados nas células de reserva AML humanas primárias isoladas de pacientes como 5 mostrado na Tabela 1. Importante, nenhum antagonismo é observado quan- do os dois compostos são combinados.

As células U937 são incubadas com 1 μΜ, 2 μΜ, 5 μΜ 5-aza, 10 nM, 20 nM LBH589 ou com uma combinação de LBH589 e 5-aza durante 24 horas. O manchamento por Annexin V é conduzido e as porcentagens de células de manchamento verde (apoptóticas) são calculadas e marcadas em gráfico.

Table 1. Co-tratamento com aumentos de 5-Aza da perda mediada por L-

BH589 da viabilidade de células AML de pacientes primários % de Morte Celular

LBH-589 Aza 1 μΜ, Aza + 2 μΜ, Aza ■+ LBH-589 LBH-589 Paciente Controle 10 50 1 μΜ 2 μΜ 10 50 10 50 nM nM nM nM nM nM 1 13,4 35,9 48,9 19,3 40,4 39,5 48,6 45,6 54 2 6,3 15,4 45,1 8,6 10,1 24,9 57,4 44,6 54,7 3 16,7 22,3 34,2 16,5 19,3 26,5 49,2 43 55 4 15,6 41,9 62,6 25,9 28,5 62,8 71,3 66,3 84,1 12,9 19,5 41,6 13,1 15,9 34 54,2 42,4 62,6 6 18,1 73,7 85,6 15 22,6 80,7 89,4 86,3 92 Células precursoras leucêmicas primárias isoladas de pacientes com AML são incubadas 10 nM, 20 nM LBH589, 1 μΜ, 2 μΜ 5-aza ou com combinação de LBH589 + 5-aza. A exclusão de tripano-azul é utilizada para contar o número de células viáveis e porcentagem de células mortas para cada tratamento calculado e classificado.

Exemplo 2: Um Estudo de escala de dose de múltiplos centros de rótulo a- berto de fase I de N-Hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]- amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida oral administrada com 5-Aza em paci- entes adultos com MDS ou AML.

Durante a fase de escala de dose em ambas subdivisões, 5-aza é administrado em um plando de 4 a 6 semanas em 75 mg/m2 SQ em um plano de uma vez ao dia durante 7 dias em pacientes com MDS (RAEB ou CMML) que são reincididos ou refratários à terapia de 5-Aza, e são conside- rados candidatos inapropriados para terapia padrão, ou pacientes com AML 5 reincidido após ou refratário à terapia padrão ou pacientes anteriormente não tratados devido à idade, mau prognóstico, ou condições médicas con- corrente e aqueles que são considerados candidatos inapropriados para a terapia de indução padrão, ou que recusam a terapia de indução padrão. A N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2- 10 propenamida é administrada em dois planos que dependem da subdivisão.

5-Aza é administrado em plano de 4 a 6 semanas.

Subdivisão 1 escala de dose: Subdivisão 1: dosagem PM de LBH589 15 mg (nível de dose inicial), po, MWF semanas de 1 a 3, Q4-6 se- manas. Dosagem AM de 5-Aza 75 mg/m2 dias de 1 a 7 Q4-6 semanas.

N-Hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-

2E-2-propenamida é administrada como 15 mg oralmente na segunda-feira, quarta-feira, sexta-feira nas semanas 1, 2, e 3. Se a toxicidade for aceitável, N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2- propenamida é aumentada de acordo com um modelo de regressão logístico 20 Bayesian de 3 parâmetros com controle de dose excessiva. Para a Subdivi- são 1, o nível de dose de MTD é definido em uma dose mais baixa de N- hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2- propenamida usando este plano de 3 semanas. Um grupo de 6 pacientes adicionais é tratado usando o nível de dose de N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil- 25 1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida DLT de 3 semanas durante apenas 2 semanas para avaliar a toxicidade.

Subdivisão 2 escala de dose: N-Hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H- indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida é administrada como 15 mg oralmente segunda-feira, quarta-feira, sexta-feira nas semanas 2 e 3. Se 30 a toxicidade for aceitável, a N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]- amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida é aumentada em 5 a 10 mg per coorte. Para a Subdivisão 2, o nível de dose MTD é definido em uma dose mais bai- xa de N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]feníl]-2E-2- propenamida usando este plano de 2 semanas. Um grupo de 6 pacientes adicionais é tratado usando um nível de dose abaixo do nível de dose de N- hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2- propenamida MTD durante 3 semanas para avaliar a toxicidade.

Subdivisões 1 e 2 expansão do grupo: Subdivisão 2: LBH58915 mg (nível de dose inicial), po, MWF semanas 2-3, Q4-6 semanas. 5-Aza 75 mg/m2 dias 1-7 Q4-6 semanas.

A fase de expansão de dose é iniciada no MTD com relação a 10 cada subdivisão para tratar as mesmas populações de paciente como na fase de escala de dose e expansão para incluir todos os pacientes MDS a- ceitáveis para o tratamento com 5-Aza os quais foram anteriormente não tratados devido à idade, mau prognóstico ou condições médicas concorren- tes e aqueles que são considerados candidatos inapropriados para a terapia 15 de indução padrão, ou que recusam a terapia de indução padrão.

Cada plano se dirige aos resultados da combinação de 2 medi- camentos com superposição de toxicidade (isto é, mielossupressão) e se- qüência de administração.

Escala de dose Regressão Logística Bayesian. Um modelo de 20 regressão logística Bayesian de 3 parâmetros com controle de dose exces- siva é usado par a escala de dose. Este modelo inclui os parâmetros de in- clinação e interceptação que descrevem a curva de dose-toxicidade de cada agente envolvido isoladamente, acrescido de um parâmetro adicional para descrever qualquer toxicidade adicional associada com o plano de dose 25 mais densa (Subdivisão 1). A distribuição resume a probabilidade que cada combinação de dose possui de cair nas seguintes categorias:

1) Sub dosagem: taxa de DLT sob 20 %

2) Toxicidade direcionada: taxa de DLT entre 20 % e < 35 % (exclusiva)

3) Toxicidade excessiva: taxa de DLT entre 35 % e < 60 % (exclusiva)

4) Toxicidade inaceitável: taxa de DLT de 60 % ou maior.

O controle de dose excessiva manda que qualquer dose de L- BH589A que tenha mais do que uma escala de dose a 25 % seja finalizada para cada subdivisão quando pelo menos 12 pacientes avaliados quanto a MTD estiverem envolvidos na dose recomendada para esta subdivisão.

Claims (6)

1. Método para o tratamento de doença proliferativa selecionada da Síndrome Mielodisplástica (MDS) ou Leucemia Mieloblástica Aguda (A- ML) em um indivíduo com necessidade de tal tratamento, em que o método compreende a administração de: (a) um HDAC de fórmula (I): <formula>formula see original document page 30</formula> em que Ri é H; halo; ou uma CrC6alquila de cadeia reta, especialmente metila, etila ou n-propila, cujos substituintes de metila, etila e n-propila são não- substituídos ou substituídos por um ou mais substituintes descritos abaixo ' para substituintes de alquila; R2 é selecionado de H; C1-C10 alquila, preferivelmente C1-C6 alquila, por e- xemplo, metila, etila ou -CH2CH2-OH; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloal- quila; C4-C9 heterocicloalquilalquila; cicloalquilalquila, por exemplo, ciclopro- pilmetila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; -(CH2)nC(O)R6; -(CH2)nOC(O)R6; amino acila; H0N-C(0)-CH=C(R1)-aril-alquil-; e -(CH2)nR7; R3 e R4 são os mesmos ou diferentes e, independentemente, H; Cr C6alquila; acila; ou acilamino, ou R3 e R4, juntamente com o carbono a qual eles são ligados, representam C=O, C=S ou C=NR8, ou R2, juntamente com o nitrogênio ao qual é ligado, e R3, juntamente com o carbono ao qual é ligado, podem formar uma C4-Cg heterocicloalquila; uma heteroarila; uma polieteroarila; um polieterociclo não-aromático; ou um anel polieterociclo de arila e não-arila misturado; R5 é selecionado de H; C1-C6 alquila; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloal- quila; acila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalqui- la, por exemplo, piridilmetila; policiclos aromáticos; policiclos não-aromáticos; policiclos de arila e não-arila misturados; polieteroarila; polieterociclos não- aromáticos; e polieterociclos de arila e não-arila misturados; n, n-ι, n2 e n3 são os mesmos ou diferentes e independentemente seleciona- dos de 0 a 6, quando n-ι for de 1 a 6, cada átomo de carbono pode ser op- cional e independentemente substituído com R3 e/ou R4; XeY são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H; halo; CrC4 alquila, tal como CH3 e CF3; NO2; C(O)Ri; ORg; SRg; CN; e NR10R11; R6 é selecionado de H; CrC6 alquila; C4-C9 cicloalquila; C4-C9 heterocicloal- quila; cicloalquilalquila, por exemplo, ciclopropilmetila; arila; heteroarila; ari- lalquila, por exemplo, benzila e 2-feniletenila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; ORi2; e NRi3R14; R7 é selecionado de OR15; SR15; S(O)R16; SO2R17; NR13R14; e NR12SO2R6; R8 é selecionado de H; OR15; NR13R14; C1-C6 alquila; C4-C9 cicloalquila; C4- C9 heterocicloalquila; arila; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; e heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; Rg é selecionado de C1-C4 alquila, por exemplo, CH3 e CF3; C(0)-alquila, por exemplo, C(O)CH3; e C(O)CF3; R1O e R11 são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H; C1-C4 alquila; e -C(0)-alquila; R12 é selecionado de H; C1-C6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-Cg heterocicloal- quila; C4-Cg heterocicloalquilalquila; arila; policiclo de arila e não-arila mistu- rado; heteroarila; arilalquila, por exemplo, benzila; e heteroarilalquila, por exemplo, piridilmetila; R13 e R14 são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de H; C1-C6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-Cg heterocicloalquila; arila; heteroa- rila; arilalquila, por exemplo, benzila; heteroarilalquila, por exemplo, piridilme- tila; amino acila, ou R13 e R14, juntamente com o nitrogênio ao qual eles são ligados, são C4-Cg heterocicloalquila; heteroarila; polieteroarila; polieterociclo não-aromático; ou polieterociclo de arila e não-arila misturado; R15 é selecionado de H; C1-C6 alquila; C4-C9 cicloalquila; C4-Cg heterocicloal- quila; arila; heteroarila; arilalquila; heteroarilalquila; e (CH2)mZRi2; R16 é selecionado de CrC6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-C9 heterocicloalqui- la; arila; heteroarila; polieteroarila; arilalquila; heteroarilalquila; e (CH2)mZRi2; R-I7 é selecionado de CrC6 alquila; C4-Cg cicloalquila; C4-Cg heterocicloalqui- Ia; arila; policiclos aromáticos; heteroarila; arilalquila; heteroarilalquila; polie- teroarila e NR13Ri4; m é um número inteiro selecionado de 0 a 6; e Z é selecionado de O; NR13; S; e S(O), ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em combinação com (b) um antimetabólito.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, que compreende a administração de: (a) um composto de fórmula (I), em combinação com (b) um antimetabólito.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o HDAC é N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2- propenamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste em combinação com (b) um antimetabólito.

4. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o antimeta- bólito é 5-Azacitidina.

5. Uso de um composto de fórmula (I), como definido na reivindi- cação 1, para a preparação de um medicamento para uso em combinação com um antimetabólito para o retardo do progresso ou tratamento de doença proliferativa selecionada de MDS ou AML.

6. Embalagem compreendendo um composto de fórmula (I), na forma farmaceuticamente aceitável, juntamente com instruções para o uso em combinação com um antimetabólito para o tratamento de uma doença proliferativa selecionada de MDS ou AML.