BRPI0710111A2 - proteìna psarc ("sparc") e métodos de uso da mesma - Google Patents

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Abstract

<B>PROTEINA PSARC ("SPARC"> E METODOS DE USO DA MESMA<D> A invenção fornece métodos para predizer ou determinar a resposta de um tumor de um mamífero a um agente quimioterápico e para tratar um tumor de um mamífero compreendendo a detecção e quantificação de RNA ou proteína SPARC em uma amostra isolada do mamífero. A invenção ainda fornece kit para predizer a resposta de um tumor de um mamífero a um agente quimioterápico, compreendendo um meio para o isolamento de RNA ou proteína do tumor, um meio para detecção e quantificação de RNA ou proteína SPARC, RNAs de controle, e regras para predizer a resposta do tumor baseado no nível de RNA ou proteína SPARC no tumor.

Description

PROTEINA PSARC ("SPARC") E METODOS DE USO DA MESMA
CAMPO DA INVENÇÃO
Esta invenção se refere a métodos para o tratamento docâncer; assim como outras doenças envolvendo atividadeproliferativa, hiperplásica, remodeladora e inflamatõriaanormal em tecidos e órgãos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Formulações de nanopartículas de albumina têm mostradoreduzir a toxicidade de agentes terapêuticos fracamentesolúveis. Por exemplo, a patente americana No. 6.537.579descreve uma formulação de paclitaxel em nanopartículas dealbumina a qual é livre de emulsificantes tóxicos.-
O agente anti-câncer paclitaxel, comercializado sob amarca comercial Taxol® pela Bristol Myers Squibb éatualmente aprovado para o tratamento de diversos cânceresincluindo câncer de ovário, de pulmão e de mama. A maiorlimitação do uso do paclitaxel é sua fraca solubilidade.Conseqüentemente, a formulação de Taxol® contém Cremophor®EL como o veículo de solubilização, no entanto, a presençade Cremophor® em sua formulação tem sido ligada a severasreações de hipersensibilidade em animais (Lorenz et al.,Agents Actions 7, 63-67, 1987) e em humanos (Weiss et al. ,J. Clin Oncol. 8, 1263-1268, 1990). Concordantemente,pacientes que recebem Taxol requerem pré-medicação comcorticosteróides (dexametasona) e anti-histamínicos parareduzir a hipersensibilidade e anafilaxia que ocorremdevido â presença de Cremophor® .
Ao contrário, Abraxane®, também conhecido como ABI-007, é uma formulação de paclitaxel em nanopartícula de30 albumina livre de Cremophor®, comercializado pela AbraxisOncology. 0 uso de uma nanopartícula de albumina como umveículo resulta na formação de um colóide quandoreconstituído com salina. Baseado em estudos clínicos, foidemonstrado que o uso de Abraxane se caracteriza pelaredução das reações de hipersensibilidade quando comparadocom Taxol® . Consequentemente, a pre-medicação não érequerida para pacientes recebendo Abraxane® .
Outra vantagem da formulação em nanopartícula dealbumina é que, através da exclusão de emulsificantestóxicos, é possível administrar doses maiores de paclitaxelem intervalos mais freqüentes do que é atualmente possívelcom o Taxols. A existência potencial de que uma eficáciaintensificada poderia ser vista em tumores sólidos como umaconseqüência de (i) doses toleráveis maiores (300 mg/m2) ,(ii) meia-vida mais longa, (iii) viabilidade do tumor localaumentada e/ou (iv) liberação prolongada in vivo. Abraxaneereduz as reações de hipersensibilidade enquanto mantém oumelhora o efeito quimioterápico do fármaco.
Sabe-se que nanopartículas coloidais ou partículas<200 nm em tamanho tendem a se concentrar no sítio tumoraldevido à vasculaturas vazadas. Este efeito tem sidodescrito para diversas formulações lipossomais(Papahadjopoulos, et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88,11460, 1991); (Gabizon, A., Câncer Res., 52, 891, 1992);(Dvorak, et al. , Am. J. Pathol., 133, 95, 1988); (Dunn, etal. , Pharm. Res., 11, 1016-1022, 1994); e (Gref, et al. ,Science 263, 1600-1603, 1994). É possível quenanopartículas de paclitaxel localizadas no sítio tumoralpodem resultar na liberação lenta do fármaco no sítiotumoral resultando em uma melhor eficácia quando comparadoà administração do fármaco em sua forma solubilizada(contendo Cremophore) .
Tais formulações de nanopartículas compreendem pelomenos cerca de 50% do princípio ativo na forma denanopartícula. Além disso, tais formulações denanopartículas compreendem pelo menos cerca de 60%, pelomenos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80% ou pelo menoscerca de 90% do princípio ativo na forma de nanopartícula.Ademais, tais formulações de nanopartículas compreendempelo menos cerca de 95% ou pelo menos cerca de 98% doprincípio ativo na forma de nanopartícula.
Proteína Secretada, Ácida, Rica em Cisteína (SPARC),também conhecida como osteonectina, é uma glicoproteína com281 aminoácidos. SPARC possui uma alta afinidade por umaampla variedade de ligantes, incluindo cátions (porexemplo, Ca2+, Cu2+, Fe2+) , fatores de crescimento (porexemplo, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF),e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF)),proteínas de matriz extracelular (ECM) (por exemplo,colágeno I-V e colágeno IX, vitronectina e trombospondina-1), células endoteliais, plaquetas, albumina ehidroxiapatita. A expressão de SPARC é regulada de maneiradesenvolvida, e é predominantemente expressa em tecidossubmetidos à remodelação durante o desenvolvimento normalou em resposta a ferimento (ver, por exemplo, Lane et al. ,FASEB J., 8, 163-173 (1994)). Altos níveis de proteínaSPARC são expressos em ossos e dentes em desenvolvimento.
SPARC é uma proteína matricelular supra-regulada emdiversos cânceres agressivos, mas é ausente em tecidos30 normais (Porter et al. , J. Histochem. Cytochem. , 43, 791(1995)). De fato, a expressão de SPARC é induzida dentreuma variedade de tumores (por exemplo, bexiga, fígado,ovário, rim, intestino, e mama). Em câncer de bexiga, porexemplo, a expressão de SPARC tem sido associada comcarcinoma avançado. Tumores de bexiga invasivos de estágioT2 ou maior têm mostrado expressar níveis de SPARC maioresem relação a tumores de bexiga de estágio Tl (ou tumoresmenos superficiais), e possuem prognoses mais pobres (ver,por exemplo, Yamanaka et al. , J. Urology, 166, 2495-2499(2001)). Em meningiomas, a expressão de SPARC tem sidoassociada somente com tumores invasivos (ver, por exemplo,Rempel et al. , Clinicai Câncer Res., 5, 237-241 (1999)). Aexpressão de SPARC também tem sido detectada em 74,5% delesões de carcinoma de mama invasivo in si tu (ver, porexemplo, Bellahcene, et al. , Am. J. Pathol., 146, 95-100(1995)), e 54,2% de carcinoma ductal infiltrante da mama(ver, por exemplo, Kim et al. , J. Korean Med. Sci., 13,652-657 (1998) ). A expressão de SPARC também tem sidoassociada com microcalcificação freqüente em câncer de mama(ver, por exemplo, Bellahcene, et al. , supra), sugerindoque a expressão de SPARC possa ser responsável pelaafinidade da metástase de mama pelo osso. SPARC também éconhecida por se ligar à albumina (ver, por exemplo,Schnitzer, J. Biol. Chem., 269, 6072 (1994)).
A terapia de anticorpo é um método efetivo para ocontrole da doença em que uma proteína marcadora específicapode ser identificada. Exemplos incluem Avastin - umanticorpo anti-VEGF, Rituxan - um anticorpo anti-CD20, eRemicade - um anticorpo anti-TNF. Tal como, um anticorpocontra SPARC representaria um agente terapêutico importantepara o tratamento de tumores humanos e de outros mamíferos,assim como de outras doenças proliferativas, hiperplásicas,remodeladoras, e inflamatórias que expressam a proteínaSPARC. Adicionalmente, um anticorpo contra SPARC conjugadocom um agente de imagem ou de contraste poderia ser um meiode detectar e diagnosticar tais doenças.
Permanece a necessidade por um método para otratamento de tumores humanos e de outros mamíferos, assimcomo de outras doenças proliferativas, hiperplásicas,remodeladoras, e inflamatórias. Além disso, permanece anecessidade de predizer ou determinar a resposta de umtumor humano ou de outro mamífero a fim de prever ouavaliar a efetividade do agente quimioterápico.Adicionalmente, meios adequados são necessários a fim dedetectar e diagnosticar tais doenças. Essas e outrasvantagens da invenção, assim como outras característicasinventivas adicionais, serão aparentes a partir dadescrição da invenção fornecida aqui.
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A invenção fornece um método para predizer oudeterminar a resposta de um tumor ou outra doençaproliferativa de um mamífero a um agente quimioterápico ououtro agente anti-câncer, em que o método compreende asetapas de (a) isolar uma amostra biológica de um mamífero,(b) detectar a expressão de RNA ou proteína SPARC naamostra biológica, e (c) quantificar a quantidade deproteína SPARC na amostra biológica. A invenção fornecemodalidades em que a amostra biológica é isolada do tumor(ou do tecido envolvido com a doença proliferativa) ou deum fluido corpóreo, tal como, por exemplo, fluidocerebrospinal, sangue, plasma, soro ou urina.
Adicionalmente, a invenção fornece um método para otratamento de um tumor ou de outra doença proliferativa emum mamífero com um agente quimioterápico ou outro agente anti-câncer compreendendo (a) isolar uma amostra biológicade um mamífero, (b) detectar a expressão de RNA ou proteínaSPARC na amostra biológica, (c) quantificar a quantidade deproteína SPARC na amostra biológica, (d) determinar se oRNA ou proteína SPARC está presente em um nível que indica o uso de um agente quimioterápico ou de outro agente anti-câncer, e (e) se, baseado no nível de RNA ou proteínaSPARC, for indicado, administrar uma. quantidadeterapeuticamente eficaz do agente quimioterápico ou outroagente anti-câncer. Além disso, a invenção fornece um kit para predizer aresposta de um tumor ou de outra doença proliferativa de ummamífero a um agente quimioterápico ou outro agente anti-câncer, compreendendo um meio para o isolamento de proteínado tumor, meios para a detecção e identificação de proteína SPARC, proteínas de controle e regras para predizer aresposta do tumor. A invenção também fornece um kit parapredizer a resposta de um tumor ou de outra doençaproliferativa de um mamífero a um agente quimioterápico ououtro agente anti-câncer, compreendendo um meio para o isolamento de RNA do tumor, meios para a detecção eidentificação de RNA SPARC, RNAs de controle e regras parapredizer a resposta do tumor baseado no nível de RNA SPARCno tumor.
A invenção fornece um método para predizer oudeterminar a reposta de um tumor de mamífero a um agentequimioterápico, assim como um método para o tratamento deum tumor de mamífero com um agente quimioterápico, em que oagente quimioterápico é, por exemplo, docetaxel,paclitaxel, tal como Abraxane®, ou combinações do mesmo. Ainvenção ainda fornece modalidades em que a previsão daresposta de um tumor de mamífero a um agente quimioterápicoé positivamente ou negativamente correlacionada com níveisde SPAC.
A invenção fornece métodos para predizer ou determinara resposta de um tumor de mamífero ou para tratar tumoresde mamífero com agentes quimioterápicos, onde inclui, porexemplo, sem limitação, em que o mamífero é um humano e otumor é um carcinoma de mama, ovário, cabeça e pescoço,pulmão, cólon, bexiga ou rim.
A invenção ainda fornece um método para utilizar aproteína ligada à albumina como uma terapêutica, parautilizar SPARC ou anticorpos contra SPARC ou proteínasligadas à SPARC como terapêuticas, para liberar um agentequimioterápico a um sítio de doença em um mamífero, no qualo método compreende a administração a um mamífero de umaquantidade terapeuticamente eficaz de uma composiçãofarmacêutica, em que a composição farmacêutica compreendeum agente quimioterápico acoplado a um composto capaz de seligar a uma proteína ligada à albumina e um veículofarmaceuticamente aceitável. Adicionalmente, a invençãofornece uma composição compreendendo um agentequimioterápico acoplado a um composto capaz de se ligar àproteína SPARC e um veículo farmaceuticamente aceitável.Além disso, a invenção fornece um agente de liberaçãocompreendendo um grupo de reconhecimento de SPARC e umagente terapêutico, em que o agente terapêutico é acopladoao grupo de reconhecimento de SPARC. Fora isto, a invençãofornece um método para a liberação do agente quimioterápicoa um tumor em um mamífero, em que o método compreende aadministração a um mamífero de uma quantidadeterapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica, emque a composição farmacêutica compreende um agentequimioterápico acoplado a uma proteína SPARC capaz de seligar à albumina e um veículo farmaceuticamente aceitável.As composições da invenção devem ser moléculas pequenas,moléculas grandes ou proteínas.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A Figura 1 descreve a seqüência de aminoácido SPARChumana (SEQ ID NO: 1).
A Figura 2 descreve a seqüência de cDNA SPARC humana(SEQ ID NO: 2).
A Figura 3 ilustra a coloração de albumina e de SPARCem xenoenxertos tumorais MX-I.
A Figura 4 ilustra a transcitose do paclitaxel atravésdas monocamadas de célula endotelial.
As Figuras 5 A-B ilustram a eficácia comparativa (A,volume do tumor) e toxicidade (B, perda de peso %) deAbraxane e Taxotere para o tratamento de um xenoenxerto MX-1.
As Figuras 6 A-B ilustram a eficácia comparativa (A,volume do tumor) e toxicidade (B, perda de peso %) deAbraxane e Taxotere para o tratamento de um xenoenxerto LX-1.
As Figuras 7 A-B ilustram o status de Her2 e SPARC decinco tipos de tumor (A) (SPARC, barra esquerda e Her2,barra direita em cada par) e a eficácia relativa deAbraxane versus Taxotere (B).
As Figuras 8 A-B ilustram a eficácia comparativa (A,volume do tumor) e toxicidade (B, perda de peso %) deAbraxane e Taxotere para o tratamento de um xenoenxertoHT29.
As Figuras 9 A-B ilustram a eficácia comparativa (A,volume do tumor) e toxicidade (B, perda de peso %) deAbraxane e Taxotere para o tratamento de um xenoenxertoPC3.
As Figuras 10 A-B ilustram a eficácia comparativa (A,volume do tumor) e toxicidade (B, perda de peso %) deAbraxane e Taxotere para o tratamento de um xenoenxertoMDA-MB-231.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Agora foi descoberto que um mecanismo adicional delocalização existe para composições compreendendo proteínasligadas à albumina. Proteínas ligadas à albumina, tais comoSPARC, cubilina, e TGFβ, podem ser usadas para alvejar umagente terapêutico a um sítio da doença caracterizado poruma super expressão de uma proteína ligada à albumina.
A invenção fornece o uso de um grupo, acoplado a umagente, em que o grupo é capaz de se ligar a uma proteínaligada à albumina, tal como SPARC, cubilina, ou TGFβ e oagente é um agente terapêutico, de imagem, ou de liberaçãopara doenças em que a proteína ligada à albumina representaum papel dominante e é super expresso em relação a tecidosnormais. Preferivelmente, a proteína ligada à albumina éselecionada de SPARC, cubilina, ou TGFβ. Mais preferido, aproteína ligada à albumina é SPARC e o grupo o qual liga aproteína ligada à albumina é um grupo de reconhecimento deSPARC. Grupos de reconhecimento de SPARC adequados incluem,mas não estão limitados a ligantes, moléculas pequenas,anticorpos.
A invenção também fornece um método para predizer oudeterminar a resposta de um tumor ou de outra doençaproliferativa de humano ou de outro mamífero a um agentequimioterápico ou outro agente anti-câncer. O métodocompreende (a) isolar uma amostra biológica de um humano oude outro mamífero, (b) detectar a expressão de proteínaSPARC na amostra biológica, e (c) quantificar a quantidadede proteína SPARC na amostra biológica. Uma vez que aquantidade de SPARC expressa pelo tumor é determinada, aefetividade do agente terapêutico pode ser prevista ouaveriguada, por exemplo, pela correlação da expressão deSPARC à dosagem do agente terapêutico administrado. Ainvenção também fornece o uso de anticorpos levantadoscontra SPARC como um agente terapêutico, ou um agente deimagem para doenças onde SPARC representa um papeldominante e é super expresso em relação a tecidos normais.
Por "predizer a resposta de um tumor ou outra doençaprolif erativa de um humano ou de outro mamífero a um agentequimioterápico" entende-se fazer um julgamento, baseado nosresultados de testes combinado com a experiência clínica,relativo à probabilidade de uma resposta antes daadministração do agente quimioterápico. Por "determinar aresposta de um tumor ou outra doença proliferativa de umhumano ou de outro mamífero a um agente quimioterápico"entende-se fazer um julgamento, baseado nos resultados detestes combinado com a experiência clínica, relativo àprobabilidade de uma resposta depois da administração doagente quimioterápico, mas antes a resposta pode serdeterminada clinicamente ou por estudos convencionais delaboratório ou de imagem conhecidos por aqueles comumentehabilitados nas artes médicas.
Conforme usado aqui, "a resposta de um tumor de umhumano ou de outro mamífero a um agente quimioterápico" serefere ao grau ou à quantidade que o paciente melhoraclinicamente ou que o tumor decresce em tamanho ouagressividade devido a um agente quimioterápico. Pode serdito que o paciente melhore clinicamente baseando-se emcritérios objetivos, tais como, por exemplo, status deatuação, exame físico, estudos de imagem, ou resultados deteste de laboratório. Também pode ser dito que o pacientemelhore clinicamente baseando-se em critérios subjetivosdescritos pelo paciente, tais como, por exemplo, dor,sofrimento, fatiga ou percepção mental. Diminuições namedida do tamanho do tumor podem ser baseadas no tumorprimário ou na carga completa de tumor medida por qualquermétodo adequado conhecido na técnica, por exemplo, examefísico, estudo de imagem ou avaliação laboratorial. Por"Diminuição no tamanho do tumor" entende-se uma mudança depelo menos cerca de 10%. Além disso, é desejável que umamudança de pelo menos cerca de 20% esteja presente,preferivelmente uma mudança de pelo menos cerca de 25%,mais pref erivelmente uma mudança de pelo menos 33%, maispreferivelmente uma mudança de pelo menos 50%, maispreferivelmente uma mudança de pelo menos 90%, maispreferivelmente uma mudança de pelo menos 95%, e ainda maispref erivelmente uma mudança de pelo menos 99%. Pordiminuição na "agressividade do tumor" entende-se, porexemplo, uma redução da graduação histológica, % de célulasviáveis no tumor, % de células em proliferação no tumor, ainvasividade do tumor, a habilidade do tumor de sofrer metástase ou outra medida de agressividade tumoralconhecida na técnica. Por "diminuição da agressividade dotumor" entende-se uma mudança de pelo menos cerca de 10% emum parâmetro mensurável relacionado à agressividade dotumor o qual é comumente usado por aqueles habilitados nasartes médicas. Além disso, é desejável que uma mudança depelo menos cerca de 20% esteja presente, preferivelmenteuma mudança de pelo menos cerca de 25%, maispreferivelmente uma mudança de pelo menos 33%, maispreferivelmente uma mudança de pelo menos 50%, maispref erivelmente uma mudança de pelo menos 90%, maispreferivelmente uma mudança de pelo menos 95%, e ainda maispref erivelmente uma mudança de pelo menos 99% em umparâmetro mensurável relacionado à agressividade do tumor oqual é comumente usado por aqueles habilitados nas artesmédicas.
Conforme aqui utilizado, os termos "resistente" ou"resistência a um agente quimioterápico ou outro agenteanti-câncer" se referem a uma resistência natural ouadquirida de uma amostra de câncer ou de um mamífero a umaterapia, isto é, sendo não-responsivo ou tendo uma respostareduzida ou limitada ao tratamento terapêutico, porexemplo, tendo uma resposta reduzida a um tratamentoterapêutico por 25% ou mais. Além disso, a resistênciatambém pode ser indicada por uma resposta reduzida de, porexemplo, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ou mais, a 2-vezes,3-vezes, 4-vezes, 5-vezes, 10-vezes, 15-vezes, 20-vezes oumais. A redução na resposta é medida pela comparação com amesma amostra de câncer ou mamífero antes da aquisição deresistência, ou pela comparação com uma amostra de câncerou mamífero diferente o qual se sabe não haver nenhumaresistência ao tratamento terapêutico. Conforme aquiutilizado, os termos "sensível" ou "sensível a um agentequimioterápico ou outro agente anti-câncer" se referem àausência de resistência.
Adicionalmente, a invenção fornece um método para otratamento de um tumor ou outra doença proliferativa em ummamífero com um agente quimioterápico ou outro agente anti-câncer compreendendo: (a) isolar uma amostra biológica deum mamífero, (b) detectar a expressão de RNA ou proteínaSPARC na amostra biológica, (c) quantificar a quantidade deRNA ou proteína SPARC na amostra biológica, (d) determinarse o RNA ou proteína SPARC está presente em um nível queindica o uso do agente quimioterápico ou de outro agenteanti-câncer, e (e) se, baseado no nível de RNA ou proteínaSPARC, for indicado, administrar uma quantidadeterapeuticamente eficaz do agente quimioterápico ou deoutro agente anti-câncer.
Os termos "tratar", "tratamento", "terapia", e"tratamento terapêutico", conforme aqui utilizados sereferem à terapia curativa, terapia profilática, ou terapiapreventiva. Um exemplo de "terapia preventiva" é aprevenção ou diminuição da chance de uma doença alvo (porexemplo, câncer ou outra doença proliferativa) ou condiçãorelacionada a isto. Essas necessidades de tratamentoincluem aquelas já com a doença ou condição assim comoàquelas que tendem a possuir a doença ou condição a serprevenida. Os termos "tratar", "tratamento", "terapia", e"tratamento terapêutico", conforme aqui utilizados tambémdescrevem a supervisão e o cuidado de um mamífero com opropósito de combater a doença, ou condição relacionada, einclui a administração de uma composição para aliviar ossintomas, efeitos colaterais, ou outras complicações dadoença, condição. Tratamento terapêutico para o câncerinclui, mas não está limitado a, cirurgia, quimioterapia, radioterapia, terapia gênica, e imunoterapia.
Por "determinar se o RNA ou proteína SPARC estápresente em um nível que indica o uso do agentequimioterápico" entende-se que o nível quantificado de RNAou proteína SPARC que está presente em uma espécie de mamífero com um tumor é alto o suficiente, baseado em umacomparação de dados de correlação históricos de nível SPARCe resposta ao tratamento, para indicar que o tumor pode serrazoavelmente esperado a responder ao agentequimioterápico. Por "indicando" ou "indicado" entende-se que, em vista do nível de SPARC e baseado em um julgamentomédico razoável, o agente quimioterápico deveria ser usado.Por exemplo, sem limitação, uma biópsia de um tumor podeser preparada para imunohistologia com anticorpos anti-SPARC pela preparação de uma seção fina da biópsia em umalâmina de microscópio. Então, a lâmina da biópsia é coradausando um protocolo imunohistológico anti-SPARC (ver, porexemplo, Sweetwyne et al. , J. Histochem, Cytochem. 52(6):723-33 (2004); Tai et al. , J. Clin Invest. 115(6): 1492-502(2005)) simultaneamente com lâminas de controle contendoseções de biópsia com níveis de SPARC conhecidos de outrostumores sensíveis ao e resistentes ao agente quimioterápicoconsiderado para uso. É uma prática comum na arte graduar aintensidade da coloração imunohistológica usandomicroscopia de luz. 0 artesão comumente habilitado (porexemplo, um patologista) pode, baseado na comparação com acoloração das lâminas de controle, determinar um grau decoloração (por exemplo, 0, 1+, 2 + , 3+, 4 + ) para a biópsiado tumor. 0 tratamento com o agente quimioterápico pode ser"indicado" se a coloração da biópsia do tumor estivergraduado em, por exemplo, 3+ ou 4+. Tais comparações edeterminações de graus de coloração são boas dentro dahabilidade de um artesão médico comumente habilitado natécnica (por exemplo, médico, patologista, oncologista,veterinário) no tratamento de mamíferos com tumores.
Por "quantidade terapeuticamente eficaz" entende-seuma quantidade que alivie (por alguma extensão, conformejulgado por um médico habilitado em exercício) um ou maissintomas da doença ou condição em um mamífero.Adicionalmente, por "quantidade terapeuticamente eficaz"entende-se uma quantidade que retorne ao normal, ouparcialmente ou completamente, parâmetros fisiológicos oubioquímicos associados com ou causadores de uma doença oucondição. Um clínico habilitado na técnica pode determinara quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição afim de tratar ou prevenir uma doença ou condição de doençaparticular quando é administrada, tal como por viaintravenosa, subcutânea, intraperitoneal, oral ou atravésde inalação. A quantidade precisa requerida da composiçãopara ser terapeuticamente eficaz dependerá de váriosfatores, por exemplo, tal como a atividade específica doagente ativo, o dispositivo de liberação empregado,características físicas do agente, propósito para aadministração, além de várias considerações específicas dopaciente. A determinação da quantidade de uma composiçãoque deve ser administrada para ser terapeuticamente eficazé rotina na técnica e dentro da habilidade de um clínicocomumente habilitado.
Os métodos praticados de acordo com a invençãorequerem uma amostra biológica a qual pode ser isolada detumores ou tecidos envolvidos com uma doença proliferativaatravés de qualquer procedimento adequado incluindo, semlimitação, ressecção, biópsia, aspiração, punção venosa, oucombinações do mesmo. Alternativamente, os métodospraticados de acordo com a invenção requerem uma amostrabiológica a qual pode ser de um fluido biológico, tal como,por exemplo, fluido cerebrospinal, sangue, plasma, soro, eurina. Além disso, amostras biológicas de controle oureferência incluindo materiais de tumor e fluidos corporaispodem ser obtidos de tecidos normais do mesmo mamífero,outros indivíduos livres de tumor ou outra doençaproliferativa ou de outros tumores com níveis conhecidos deSPARC e conhecidos por ser sensíveis ou resistentes a umdeterminado agente quimioterápico. Adicionalmente, osmétodos da invenção podem ser praticados onde o mamíferosofrendo de tumor ou de doença proliferativa é um humano.
Além disso, a invenção fornece um kit para predizer aresposta de um tumor ou de outra doença proliferativa de ummamífero a um agente quimioterápico ou outro agente anti-câncer, compreendendo um meio para o isolamento de proteínado tumor, um detector de proteína SPARC e meios dequantificação, proteínas de controle, e regras parapredizer a resposta do tumor. A invenção também fornece umkit para predizer a resposta de um tumor ou de outra doençaproliferativa de um mamífero a um agente quimioterápico ououtro agente anti-câncer, compreendendo um meio para oisolamento de RNA do tumor, um detector de RNA SPARC emeios de quantificação, RNAs de controle, e regras parapredizer a resposta do tumor baseado no nível de RNA SPARCno tumor. Por exemplo, RNA ou proteína SPARC em uma biópsiade tumor podem ser "isolados" colocando uma seção fina dabiópsia do tumor em uma lâmina de microscópio. Qualquer RNAou proteína SPARC presente pode então ser detectado equantificado através de coloração imunohistológica com umanticorpo anti-SPARC (ver, por exemplo, Sweetwyne et al. ,J. Histochem. Cytochem. 52(6): 723-33 (2004); Tai et al. ,J. Clin. Invest. 115(6): 1492-502 (2005)) ou hibridizaçãoin situ usando uma sonda de ácido nucléico complementar aoRNA SPARC (ver, por exemplo, Thomas et al. , Clin. Can. Res.6:1140-49 (2000)). Ao mesmo tempo lâminas de controlepositivo e negativo devem ser coloridas para RNA ouproteína SPARC. O artesão comumente habilitado podeprontamente utilizar microscopia de luz para graduar aintensidade da coloração de SPARC na biópsia do tumor (porexemplo, 0, 1+, 2 + , 3 + , 4 + ). O kit inventivo tambémcompreende regras para predizer a resposta do tumorbaseadas no nível de RNA ou proteína SPARC no tumor, talcomo, por exemplo, "tratamento com o agente quimioterápicoé indicado se a coloração estiver graduada em, por exemplo,3+ ou 4 + " ou "tumores com colorações 3+ ou 4+ têm uma altataxa de resposta". As regras específicas relacionadas a umamodalidade particular dos kits da invenção podemprontamente ser gerada pela realização de estudos decorrelação retrospectiva ou prospectiva os quais são rotinana técnica e os quais não devem requerer experimentaçãoindevida.
0 gene humano SPARC codifica uma proteína de 3 03aminoácidos, enquanto um SPARC maduro é uma glicoproteínade 285 aminoácidos. Após a clivagem da seqüência sinal, umaforma secretada de 32-kD é produzida a qual migra para 4 3kD em SDS-PAGE devido à glicosilação. A seqüência deaminoácido da proteína SPARC completa está revelada na SEQID NO: 1 (Figura 1) e a seqüência de ácido nucléico de umRNA codificando tal proteína SPARC está revelada na SEQ IDNO: 2 (apresentada como uma seqüência de cDNA, isto é, comas uridinas do RNA ("U") como timinas ("T)) (Figura 2).
Conforme usados aqui, os termos "polipeptídio" e"proteína" são usados alternadamente. A invenção fornece adetecção e quantificação de um polipeptídio ou proteínaSPARC, tal como, por exemplo, um polipeptídio ou proteínacompreendendo uma seqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 1.A invenção também fornece a detecção do polipeptídio SPARC,em que o polipeptídio compreende uma seqüência deaminoácido com pelo menos cerca de 10 aminoácidosseqüenciais da SEQ ID NO: 1, preferencialmente pelo menoscerca de 15 aminoácidos seqüenciais da SEQ ID NO: 1, maispreferencialmente pelo menos cerca de 2 0 aminoácidosseqüenciais da SEQ ID NO: 1, e ainda mais preferencialmentepelo menos cerca de 100 aminoácidos seqüenciais da SEQ IDNO: 1. Além disso, a invenção fornece a detecção de umpolipeptídio SPARC compreendendo um polipeptídio em que aseqüência é pelo menos cerca de 80% homóloga à seqüênciacorrespondente à SEQ ID NO: 1, preferencialmente pelo menoscerca de 90% homóloga à seqüência correspondente ã SEQ IDNO: 1, ainda mais preferencialmente pelo menos cerca de 95%homóloga à seqüência correspondente à SEQ ID NO: 1, e aindamais preferencialmente pelo menos cerca de 99% homóloga àseqüência correspondente à SEQ ID NO: 1. Por "seqüênciacorrespondente à SEQ ID NO: 1" entende-se que a seqüência aqual se alinha com a seqüência de SEQ ID NO: 1 écaracterizada pelo fato de que a região de alinhamento tempelo menos cerca de 10 aminoácidos de comprimento,preferencialmente tem pelo menos cerca de 15 aminoácidos decomprimento, mais preferencialmente tem pelo menos cerca de20 aminoácidos de comprimento, mais preferencialmente tempelo menos cerca de 30 aminoácidos de comprimento, maispreferencialmente tem pelo menos cerca de 4 0 aminoácidos decomprimento, mais preferencialmente tem pelo menos cerca de50 aminoácidos de comprimento, e ainda maispreferencialmente tem pelo menos cerca de 100 aminoácidosde comprimento. Vários métodos para alinhamento deseqüência são conhecidos nas artes de biotecnologia (ver,por exemplo, Rosenberg, BMC Bioinformatics 6:278 (2005);Altschul et al., FEBS J. 272(20): 5101-5109 (2005)).
A invenção fornece a detecção e quantificação de umRNA SPARC, tal como, por exemplo, um RNA compreendendo aseqüência de ácido nucléico da SEQ ID NO: 2. A invençãotambém fornece a detecção de um RNA SPARC, em que o RNAcompreende a seqüência nucléica de pelo menos cerca de 15nucleotídeos seqüenciais da seqüência de SEQ ID NO: 2,preferencialmente pelo menos cerca de 20 nucleotídeosseqüenciais da seqüência de SEQ ID NO: 2, e maispreferencialmente pelo menos cerca de 3 0 nucleotideosseqüenciais da seqüência de SEQ ID NO: 2. Além disso, ainvenção fornece a detecção de um RNA SPARC compreendendoum ácido nucléico em que a seqüência é pelo menos cerca de80% homóloga à seqüência correspondente à SEQ ID NO: 2,preferencialmente pelo menos cerca de 90% homóloga àseqüência correspondente ã SEQ ID NO: 2, ainda maispreferencialmente pelo menos cerca de 95% homóloga àseqüência correspondente à SEQ ID NO: 2, e ainda maispreferencialmente pelo menos cerca de 99% homóloga àseqüência correspondente à SEQ ID NO: 2. Por "seqüênciacorrespondente à SEQ ID NO: 2" entende-se que a seqüência aqual se alinha com a seqüência da SEQ ID NO: 2 écaracterizada pelo fato de que a região de alinhamento tempelo menos cerca de 15 nucleotideos de comprimento,preferencialmente tem pelo menos cerca de 20 nucleotideosde comprimento, mais preferencialmente tem pelo menos cercade 30 nucleotideos de comprimento, mais preferencialmentetem pelo menos cerca de 6 0 nucleotideos de comprimento,mais preferencialmente tem pelo menos cerca de 12 0nucleotideos de comprimento, mais preferencialmente tempelo menos cerca de 150 nucleotideos de comprimento, aindamais preferencialmente tem pelo menos cerca de 200nucleotideos de comprimento. Vários métodos paraalinhamento de seqüência são conhecidos nas artes debiotecnologia (ver, por exemplo, Rosenberg, BMCBioinformatics 6:278 (2005); Altschul et al. , FEBS J.272(20): 5101-5109 (2005)). Por RNA SPARC entende-sequalquer RNA SPARC, incluindo, mas sem se limitar a, mRNASPARC, hnRNA, transcrito primário ou variante de junção.
Por "quantificação", conforme aqui utilizado, entende-se a determinação da quantidade ou concentração presente. Ainvenção fornece um método para quantificar o nível de RNAou proteína SPARC em que o RNA ou proteína SPARC é superexpresso ou sub expresso no tumor em relação a tecidosnormais incluindo, mas sem se limitar ao nível encontradono tecido normal correspondente ao tecido de origem dotumor. Alternativamente, a invenção fornece um método paraquantificar o nível de RNA ou proteína SPARC em que o RNAou proteína SPARC é super expresso ou sub expresso no tumorem relação a outros tumores incluindo, mas sem se limitar atumores do mesmo tecido ou histologia. Além disso, ainvenção fornece um método para quantificar o nível de RNAou proteína SPARC em que o RNA ou proteína SPARC é superexpresso ou sub expresso no tumor em relação a outrostumores incluindo, mas sem se limitar a tumores os quaissão sensíveis ou resistentes a um agente quimioterãpico oua uma combinação de agentes quimioterápicos. Por superexpresso ou sub expresso entende-se que os níveis de RNA ouproteína SPARC diferem entre dois espécimes ou amostras porpelo menos cerca de 5%. Além disso, é desejável que adiferença entre dois espécimes ou amostras seja pelo menoscerca de 10%, mais preferivelmente pelo menos cerca de 20%,mais pref erivelmente pelo menos cerca de 50%, maispreferivelmente pelo menos cerca de 100%, maispreferivelmente pelo menos cerca de 3 vezes, maispreferivelmente pelo menos cerca de 5 vezes, e ainda maispreferivelmente pelo menos cerca de 10 vezes.
A invenção fornece um método para quantificar o nívelde RNA ou proteína SPARC em que o RNA ou proteína SPARC ésuper expresso ou sub expresso no teste de fluido biológicorelativo ao fluido correspondente a um paciente livre detumor. Alternativamente, a invenção fornece um método paraquantificar o nível de RNA ou proteína SPARC em que o RNAou proteína SPARC é super expresso ou sub expresso no testede fluido biológico relativo ao fluido correspondente aoutro paciente com um tumor, incluindo, mas sem se limitara tumores os quais são sensíveis ou resistentes a agentesquimioterápicos ou a uma combinação de agentesquimioterápicos. Por super expresso ou sub expressoentende-se que os níveis de RNA ou proteína SPARC diferementre dois espécimes por pelo menos cerca de 5%. Alémdisso, é desejável que uma diferença de pelo menos cerca de10% esteja presente, mais preferivelmente pelo menos cercade 20%, mais pref erivelmente pelo menos cerca de 50%, maispreferivelmente pelo menos cerca de 100%, maispreferivelmente pelo menos cerca de 3 vezes, maispreferivelmente pelo menos cerca de 5 vezes, e ainda maispreferivelmente pelo menos cerca de 10 vezes.
A invenção fornece métodos para predizer ou determinara resposta de um tumor a um agente quimioterápico ou aoutros agentes anti-câncer, métodos para tratar um tumor ekits para predizer a resposta de um tumor de um mamífero aum agente quimioterápico ou a outro agente anti-câncer, emque o tumor é selecionado do grupo consistindo de tumoresda cavidade oral, tumores de faringe, tumores do sistemadigestivo, tumores do sistema respiratório, tumores ósseos,tumores cartilaginosos, metástase óssea, sarcomas, tumoresde pele, melanomas, tumores de mama, tumores do sistemagenital, tumores do trato urinário, tumores da órbita,tumores de cérebro e sistema nervoso central, gliomas,tumores do sistema endõcrino, tumores da tireóide, tumoresde esôfago, tumores gástricos, tumores do intestino delgado, tumores de cólon, tumores do reto, tumores anais,tumores do fígado, tumores da vesicula biliar, tumorespancreáticos, tumores de laringe, tumores de pulmão,tumores brônquicos, carcinoma de células não pequenas depulmão, carcinoma de células pequenas de pulmão, tumores uterinos cervicais, tumores de corpos uterinos, tumores deovário, tumores de vulva, tumores vaginais, tumores depróstata, carcinoma prostático, tumores testiculares,tumores de pênis, tumores de bexiga urinária, tumores derim, tumores de pelve renal, tumores de uretra, tumores de cabeça e pescoço, câncer de paratireóide, doença deHodgkin, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia,leucemia linfocitica aguda, leucemia linfocítica crônica,leucemia mielóide aguda, leucemia mielóide crônica.Adicionalmente, a invenção fornece um método para predizerou determinar a resposta do tumor a um agentequimioterápico, métodos para tratar um tumor, e kits parapredizer a resposta de um tumor de um mamífero a um agentequimioterápico, em que o tumor é um sarcoma,adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células grandes, carcinoma de células pequenas,carcinoma de células basais, carcinoma de células claras,oncocitoma, ou combinações dos mesmos. Além disso, ainvenção fornece um método para predizer ou determinar aresposta de um tumor a um agente quimioterápico, métodospara tratar um tumor, e kits para predizer a resposta de umtumor de um mamífero a um agente quimioterápico, em que otumor é um tumor benigno ou um tumor maligno. Ainda, alémdisso, a invenção fornece um método para predizer oudeterminar a resposta de uma doença proliferativa a umagente quimioterápico ou para tratar a doença proliferativaincluindo, mas não se limitando a, onde a doençaproliferativa é, por exemplo, hiperplasia prostáticabenigna, endometriose, hiperplasia endometrial,aterosclerose, psoríase ou uma glomerulopatia proliferativarenal. A invenção fornece modalidades nas quais o tumor oua doença proliferativa é em um mamífero incluindo, mas semse limitar a, onde o mamífero é um humano.
Conforme utilizado aqui, o termo "agente" ou "fármaco"ou "agente terapêutico" se refere a um composto químico, auma mistura de compostos químicos, a uma macromoléculabiológica, ou a um extrato feito a partir de materiaisbiológicos tais como bactérias, plantas, fungos ou célulasou tecidos animais (particularmente mamíferos) os quaissejam suspeitos de ter propriedades terapêuticas. 0 agenteou fármaco deve ser purificado, substancialmente purificadoou parcialmente purificado. Um "agente" de acordo com apresente invenção, também inclui agentes de terapia deradiação. Conforme utilizado aqui, o termo "agentequimioterápico" se refere a um agente com atividade contracâncer, neoplasia e/ou doenças proliferativas.
Agentes quimioterápicos ou outros agentes anti-cânceradequados para o uso de acordo com a invenção incluem, masnão estão limitados a inibidores de tirosina quinase(genisteína) , agentes biologicamente ativos (TNF, de tTF) ,radionuclídeos (131Ii 90Y, 111In, 211At, 32P, e outrosradionuclídeos terapêuticos conhecidos), adriamicina,antibióticos ansamicina, asparaginase, bleomicina,busulfan, cisplatina, carboplatina, carmustina,capecitabina, clorambucil, citarabina, ciclofosfamida,camptotecina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina,dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina, etoposídeo,epotilonas, floxuridina, fIudarabinaf fluoracil,gencitabina, hidroxiuréia, idarubicina, ifosfamida,irinotecano, lomustina, mecloretamina, mercaptopurina,melfalano, metotrexato, rapamicina (sirolimus) e derivados,mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nitrosurea, paclitaxel,pamidronato, pentostatina, plicamicina, procarbazina,rituximab, estreptozocina, teniposídeo, tioguanina,tiotepa, taxanos, vimblastina, vincristina, vinorelbina,taxol, combrestatinas, discodermolidas, e transplatina.Conseqüentemente, agentes quimioterápicos adequados parauso de acordo com a invenção incluem, sem limitação,antimetabólitos (por exemplo, asparaginase), antimitóticos(por exemplo, alcalóides da vinca) , agentes de dano ao DNA(por exemplo, cisplatina) , proapoptóticos (agentes queinduzem a morte celular programada ou apoptose) (porexemplo, epipodofilotoxinas) , agentes de indução dediferenciação (por exemplo, retinóides), antibióticos (porexemplo, bleomicina) , e hormônios (por exemplo, tamoxifeno,dietilbestrol) . Além disso, agentes quimioterápicosadequados para uso de acordo com a invenção incluem agentesantiangiogênese (inibidores de angiogênese) tais como, porexemplo, INF-alfa, fumagilina, angiostatina, endostatina,talidomida, e semelhantes. "Outros agentes anti-câncer"também incluem, sem limitação, polipeptídios biologicamenteativos, anticorpos, lectinas, e toxinas. Anticorposadequados para uso de acordo com a invenção incluem, semlimitação, anticorpos conjugados (acoplados) ou nãoconjugados (desacoplados) , anticorpos monoclonais oupoliclonais, anticorpos humanizados ou não humanizados,assim como fragmentos Fab', Fab, ou Fab2, anticorpos decadeia única e semelhantes.
Agentes quimioterápicos preferidos incluem docetaxel,paclitaxel e combinações dos mesmos. "Combinações dosmesmos" se referem a ambas as formas de administração dedosagem incluindo mais de um fármaco, por exemplo,docetaxel e paclitaxel, assim como à administraçãoseqüencial, mas temporalmente distinta de docetaxel epaclitaxel (por exemplo, o uso de docetaxel em um ciclo epaclitaxel no próximo). Agentes quimioterápicosparticularmente preferidos compreendem partículas defármaco ligado à proteína incluindo, mas sem se limitar a,em que a proteína complementando as partículas de fármacoligado à proteína compreende albumina incluindo sercaracterizado por mais de 50% do agente quimioterápicoestar sob a forma de nanopartícula. O agente quimioterápicomais preferível compreende partículas de paclitaxel ligadasà albumina, tal como, por exemplo, Abraxane . Taxsformulações de paclitaxel ligado a albumina podem serusadas de acordo com a invenção onde a dose de paclitaxeladministrada é de cerca de 3 0 mg/m2 a cerca de 100 0 mg/m2com um ciclo de dosagem de cerca de 3 semanas (isto é,administração da dose de paclitaxel uma vez a cada cerca de3 semanas). Além disso, é desejável que a dose depaclitaxel administrada seja de cerca de 50 mg/m2 a cercade 800 mg/m2, preferivelmente de cerca de 80 mg/m2 a cercade 700 mg/m2, e ainda mais pref erivelmente de cerca de 250mg/m2 a cerca de 3 00 mg/m2 com um ciclo de dosagem de cercade 3 semanas.
Qualquer amostra biológica adequada pode ser isoladade um mamífero no contexto do método inventivo e usada paradetecção e quantificação de polipeptídio e/ou RNA.Preferivelmente, a amostra biológica é isolada do tumor,tal como através de uma biópsia de tumor. A amostra biológica é isolada do mamífero utilizando métodosconhecidos na técnica. Alternativamente, a amostrabiológica pode ser isolada de um fluido corporal domamífero, incluindo, por exemplo, fluido cerebrospinal,sangue, plasma, soro, ou urina. Em particular, muitas técnicas de purificação de proteínas são conhecidas na arte(ver, por exemplo, Harlow & Lane, Antibodies, A LaboratoryManual, Cold Spring Harbor, pp. 421-696 (1988)).
Qualquer método adequado para a detecção equantificação de uma proteína SPARC pode ser utilizado de acordo com a invenção, incluindo, mas sem se limitar ao usode anticorpos anti-SPARC (por exemplo, Western blot, ELISA)(ver, por exemplo, Sweetwyne et al. , J. Histochem.Cytochem. 52(6): 723-33 (2004); Tai et al., J. Clin.Invest. 115(6): 1492-502 (2005)), o uso de proteína de ligação específica a.SPARC (por exemplo, ligantes de SPARCradiomarcadores, ensaios do tipo ELISA), eletroforese deduas dimensões, espectroscopia de massa ou combinações dosmesmos (ver, por exemplo, Nedelkov D. et al. , Proc. Natl.Acad. Sei. U.S.A. 102(31): 10852-7 (2005); Chen et al. , Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 101(49): 17039-44 (2004)).Além disso, a imunoistoquímica pode ser usada para oisolamento, detecção e quantificação de proteína SPARCm umaamostra (ver, por exemplo, Sweetwyne et al. , J. Histochem.Cytochem. 52(6): 723-33 (2004); Tai et al., J. Clin.Invest. 115(6): 1492-502 (2005)).
A invenção fornece um método no qual o RNA SPARC édetectado e quantificado. Numerosos métodos são conhecidosna técnica para isolar RNA, tais como aqueles descritos porChomezynski (Patente americana No. 5.495.515) ou porDiMartino et al. (Leukemia 20(3): 426-32 (2006)).Alternativamente, RNA pode ser isolado em uma formaadequada para detecção e quantificação de acordo com ainvenção através do preparo de uma lâmina de microscópiocontendo uma seção de tecido (ver, por exemplo, Thomas etal., Clin. Can. Res. 6:1140-49 (2000)). RNA SPARC pode serdetectado e quantificado por qualquer método conhecido natécnica, incluindo, mas sem se limitar a, hibridização insitu (ver, por exemplo, Thomas et al. , Clin. Can. Res.6:1140-49 (2000)), Northen blot (ver, por exemplo, Wrana etal., Eur. J. Biochem. 197: 519-28 (1991)), RT-PCR em temporeal (ver, por exemplo, DiMartino et al. , Leukemia 20(3) :426-32 (2006)), amplificação baseada em seqüência de ácidonucléico em tempo real (ver, por exemplo, Landry et al. , J.Clin. Microbiol. 43(7): 3136-9 (2005)), análise demicroarranjo (ver, por exemplo, Tai et al. , J. Clin.Invest. 115(6): 1492-502 (2005); DiMartino et al., Leukemia20(3): 426-32 (2006)) e combinações dos mesmos.
A invenção também fornece um método para predizer oudeterminar a resposta de um tumor ou outra doençaproliferativa de um humano ou de outro mamífero a um agentequimioterãpico ou outros agentes anti-câncer em que aresposta de um tumor de mamífero a um agente quimioterãpicoé positivamente ou negativamente correlacionada com níveisde SPARC. Por "correlacionada com níveis de SPARC" entende-se, por exemplo, que uma relação mútua ou recíproca entre aresposta do tumor a um dado agente quimioterápico e o nívelde RNA ou proteína SPARC detectado. Isto é, a qualidade, ograu, a magnitude, ou o nível da resposta do tumor variacom o nível do nível de RNA ou proteína SPARC detectado.Uma "correlação positiva" está presente quando a qualidade,o grau, a magnitude, ou o nível da resposta do tumor cresceenquanto o nível de RNA ou proteína SPARC detectado cresce.Uma "correlação negativa" está presente quando a qualidade,o grau, a magnitude, ou o nível da resposta do tumordecresce enquanto o nível de RNA ou proteína SPARCdetectado cresce. A relação entre o nível de resposta dotumor e o nível de RNA ou proteína SPARC detectado podeempregar a forma de, ou se aproximar a uma função deetapas, uma função linear ou uma função logarítmica.
Adicionalmente, a invenção também fornece um métodopara predizer ou determinar a resposta de um tumor ou deoutra doença prolif erativa de um humano ou de outromamífero a um agente quimioterápico ou outros agentes anti-câncer através da comparação do nível de RNA ou proteínaSPARC detectado àquele detectado em uma amostra dereferência conhecida. Tal amostra de referência pode ser,por exemplo, de um tecido ou fluido corpóreo normal.Alternativamente, a amostra de referência pode ser um tumorcom um nível de SPARC, resposta, sensibilidade ouresistência conhecido a um dado agente quimioterápico ououtros agentes anti-câncer ou combinações do mesmo.
Além disso, a resposta prevista pode ser caracterizadacomo efetiva ou como não efetiva de forma que umdeterminado agente quimioterápico deveria ser usado ou queum agente quimioterápico alternativo deveria ser usado.Como tal, a resposta prevista pode ser caracterizada comouma razão da resposta resultante do uso de um agentequimioterápico versus o ouso de outro agentequimioterápico, por exemplo, a razão da resposta produzidapor Abraxane® àquela produzida por Taxotere®.
A invenção ainda fornece métodos para predizer aresposta de um tumor ou de outra doença proliferativa de ummamífero a um agente quimioterápico ou a outro agente anti-câncer compreendendo (a) isolar uma amostra biológica de ummamífero, (b) detectar a expressão de RNA ou proteína SPARCna amostra biológica, (c) quantificar a quantidade de RNAou proteína SPARC na amostra biológica, e (d) determinar ostatus Her2 do tumor ou doença proliferativa. A invençãotambém fornece métodos para tratar um tumor ou outra doençaproliferativa em um mamífero com um agente quimioterápicoou outro agente anti-câncer compreendendo: (a) isolar umaamostra biológica de um mamífero, (b) detectar a expressãode RNA ou proteína SPARC na amostra biológica, (c)quantificar a quantidade de RNA ou proteína SPARC naamostra biológica, (d) determinar o status Her2 do tumor oudoença proliferativa, (e) determinar se, baseado no nívelde RNA ou proteína SPARC presente e no status Her2 do tumorou doença proliferativa, se o uso do agente quimioterápicoou outro agente anti-câncer é indicado, e (f) se indicado,administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz doagente quimioterápico ou outro agente anti-câncer.
Por "determinar o status Her2 do tumor ou doençaproliferativa" entende-se determinar se, ou não, RNA ouproteína Her2 é expresso pelo tumor ou doença proliferativaatravés da detecção de RNA ou proteína SPARC no tumor,tecido evolvido envolvido por outra doença proliferativa ououtra amostra biológica e quantificar a quantidade de RNAou proteína Her2 presente. Métodos adequados paradeterminar se um RNA ou proteína SPARC é expresso por umtumor ou doença proliferativa incluem, sem limitação,imunoistoquímica, Western blot, ELISA, eletroforese de duasdimensões, espectroscopia de massa, hibridização in situ,amplificação de RNA, Northern blot, análise demicroarranjo, ou combinações dos mesmos. O status Her2 podeser fatorado em predizer uma resposta a um agentequimioterápico ou outro agente anti-câncer ou determinar seum agente quimioterápico ou outro agente anti-câncer éindicado tanto positivamente quanto negativamente, como umfator aditivo ou como um fator predominante. Por exemplo,sem limitação, a ausência da expressão de Her2 pode indicarque não há correlação positiva entre o nível de SPARC e aresposta, enquanto a presença da expressão de Her2 podeindicar que há correlação positiva entre o nível de SPARC ea resposta. A distinção entre a expressão de Her2 e suaausência está dentro da habilidade daqueles comumentehabilitados na técnica e pode ser feita com base, porexemplo, nos resultados de amostras de controle positivo enegativo correndo simultaneamente com amostras de mamíferoscom o tumor ou outra doença proliferativa.
Conseqüentemente, a invenção fornece um kit parapredizer a resposta de um tumor ou outra doençaproliferativa de um mamífero a um agente quimioterápico ououtros agentes anti-câncer, compreendendo um meio para oisolamento de RNA ou proteína do tumor, meios para detecçãoe quantificação de RNA ou proteína SPARC, RNAs ou proteínasde controle, e regras para predizer a resposta do tumor.Tal kit pode, por exemplo, sem limitação, ser usado parapredizer a resposta de um carcinoma de mama, de ovário ou ecabeça e pescoço a um agente quimioterápico compreendendonanopartículas de paclitaxel ligado, à albumina. Meiosadequados para isolar RNA ou proteína e detectar equantificar RNA ou proteína SPARC foram descritos aqui.RNAs ou proteínas de controle adequadas devem incluircontroles positivos tais como, por exemplo, material detumor ou fluido biológico de um tumor produzido por ummamífero ou RNA ou proteína isolada de um material de tumorou de um fluido biológico colhido de um tumor produzido porum mamífero. RNAs ou proteínas de controle adequadasincluem controles negativos tais como, por exemplo, tecidonormal ou fluido biológico de um mamífero livre de tumor ouRNA ou proteína isolada de tecido normal ou fluidobiológico colhido de um mamífero livre de tumor. Oscontroles no kit podem também incluir uso de materiais paraestabilizar curvas padrões para quantificação de RNA ouproteína SPARC ou material de tumores sensíveis eresistentes. Os kits da invenção pode também compreender ummeio para determinar o status Her2 do tumor.
Os kits da invenção devem ainda compreender regraspara predizer a resposta do tumor. Tais regras devem baseara previsão da resposta a um dado agente quimioterápico nonível de RNA ou proteína SPARC detectado conforme aquidescrito em relação aos métodos para predizer ou determinaruma resposta ao agente quimioterãpico. Por exemplo, umnível particular de RNA ou proteína SPARC, baseado emexperiência anterior, pode indicar que um agentequimioterápico deveria ser indicado. Está dentro dahabilidade do artesão comumente habilitado gerar, semexperiência indevida, dados adequados (através de estudosprospectivos, estudos retrospectivos ou uma combinação dosmesmos) para determinar o nível de RNA ou proteína SPARCprevisto de resposta a um dado agente quimioterápico.
Daqui em diante, por simplicidade, todas as proteínas,incluindo SPARC, que se ligam ã albumina são referidas comoSPARC. A proteína SPARC é responsável pelo acúmulo dealbumina em certos tumores humanos. Como a albumina é ocarreador principal de fármacos quimioterápicos, o nível deexpressão de SPARC é indicativo da quantidade do fármacoquimioterápico que penetra e é retido pelo tumor. Portanto,o nível de SPARC é preditivo da correspondência do tumor àquimioterapia.
Qualquer amostra biológica adequada pode ser isoladado mamífero de interesse no contexto do método inventivo.Preferencialmente, a amostra biológica é isolada do tumor,tal como através de uma biópsia de tumor. Alternativamente,a amostra biológica pode ser isolada de um fluido corporalde um mamífero, incluindo, por exemplo, fluidocerebrospinal, sangue, plasma, soro, ou urina. Técnicas emétodos para o isolamento de amostras biológicas sãoconhecidos àqueles na técnica.
Qualquer agente farmaceuticamente ativo adequado podeser usado no método inventivo (por exemplo, um agentequimioterápico acoplado a um grupo de reconhecimento deSPARC) desde que o transporte ou ligação do agente ativorequeira albumina. Agentes ativos adequados incluem, masnão estão limitados a inibidores de tirosina quinase(genisteina) , agentes biologicamente ativos (TNF, ou tTF) ,radionuclideos (131I, 90Y, 111In, 211At, 32P, e outrosradionuclideos terapêuticos conhecidos), adriamicina,antibióticos ansamicina, asparaginase, bleomicina, busulfan, cisplatina, carboplatina, carmustina,capecitabina, clorambucil, citarabina, ciclofosfamida,camptotecina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina,dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina, etoposídeo,epotilonas, floxuridina, fludarabina, fluoracil,gencitabina, hidroxiuréia, idarubicina, ifosfamida,irinotecano, lomustina, mecloretamina, mercaptopurina,melfalano, metotrexato, rapamicina (sirolimus) e derivados,mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nitrosurea, paclitaxel,pamidronato, pentostatina, plicamicina, procarbazina, rituximab, estreptozocina, teniposídeo, tioguanina,tiotepa, taxanos, vimblastina, vincristina, vinorelbina,taxol, combrestatinas, discodermolídas, transplatina,agentes de alvo vascular, compostos de fatores decrescimento endotelial anti-vascular ("anti-VEGFs") , compostos de receptores de fatores de crescimento anti-epidermal ("anti-EGFRs") , 5-fluoracil e derivados do mesmo.
Adicionalmente, o agente farmaceuticamente ativo podeser toxinas tal como ricina A, radionuclideos, o própriofragmento Fc de anticorpo, anticorpos de cadeia única,fragmentos Fab, diacorpos, e semelhantes. Os própriosagentes farraaceuticamente ativos selecionados podemreconhecer e se ligar a SPARC ou são adequadamente presos aum grupo de reconhecimento de SPARC o qual reconhece SPARC,incluindo, por exemplo, uma proteína ou não-proteína, umanticorpo, o próprio fragmento Fc de anticorpo, anticorposde cadeia única, fragmentos Fab, diacorpos, peptídeos, ououtras moléculas pequenas não-proteínas.
Uma ou mais doses de um ou mais agentesquimioterápicos podem ser administradas de acordo com osmétodos inventivos. 0 tipo e o número de agentesquimioterápicos usados no método inventivo dependerão doregime quimioterápico padrão para um tipo particular detumor. Em outras palavras, enquanto um câncer particularpode ser tratado rotineiramente com um único agente15 quimioterápico, outro pode ser tratado rotineiramente comuma combinação de agentes quimioterápicos. Métodos para oacoplamento ou conjugação de fármacos, quimioterápicos,radionuclídeos, etc. a anticorpos ou fragmentos do mesmoestão bem descritos na técnica.
Doenças para as quais a presente invenção é útilincluem condições anormais de proliferação, remodelação detecido, hiperplasia, cicatrização de feridas exagerada emqualquer tecido corporal, incluindo tecido mole, tecidoconjuntivo, osso, órgãos sólidos, vasos sangüíneos, esemelhantes. Exemplos de doenças tratáveis oudiagnosticáveis pelas composições da invenção incluemcâncer, diabetes ou outra retinopatia, inflamação, artrite,restenose em vasos sangüíneos ou enxertos artificiais devasos sangüíneos ou dispositivos intravasculares esemelhantes.Os tipos de tumor a serem detectados, cuja resposta ãquimioterapia é para ser prevista ou determinada, os quaispodem ser tratados de acordo com a invenção são geralmenteaqueles encontrados em humanos e em outros mamíferos. Ostumores também podem ser o resultado de inoculação, talcomo em animais de laboratório. Muitos tipos e formas detumores são encontrados em condições de humanos e de outrosanimais, e não há a intenção de limitar a aplicação dosmétodos da presente a algum tipo de tumor particular ouvariedade. Tumores, como se sabe, incluem uma massa anormalde tecido que resulta de uma divisão celular descontroladae progressiva, e também são tipicamente conhecidos como"neoplasmas". Os métodos inventivos são úteis para célulastumorais e células e células do estroma associadas, tumoressólidos e tumores associados ao tecido mole, tal comosarcoma de tecido mole, por exemplo, em um humano. 0 tumorou câncer pode estar localizado na cavidade oral e faringe,no sistema digestivo, no sistema respiratório, ossos ejuntas (por exemplo, metástase óssea), tecido mole, na pele(por exemplo, melanoma), mama, no sistema genital, nosistema urinário, no olho e órbita, no cérebro e sistemanervoso central (por exemplo, glioma), ou no sistemaendócrino (por exemplo, tireóide) e não estánecessariamente limitado ao tumor ou câncer primário.Tecidos associados com a cavidade oral incluem, mas nãoestão limitados à língua e tecidos da boca. 0 câncer podesurgir em tecidos do sistema digestivo incluindo, porexemplo, o esôfago, estômago, intestino delgado, cólon,reto, ânus, fígado, vesícula biliar, e pâncreas. Cânceresdo sistema respiratório podem afetar a laringe, pulmão ebrônquios e incluem, por exemplo, carcinoma pulmonar decélulas não-pequenas. Tumores podem surgir no colo doútero, corpo do útero, vulva do ovário, vagina, próstata,testículo, e pênis, os quais constituem os sistemasgenitais masculino e feminino, e a bexiga urinária, rim,pelve renal, e uretra, os quais compreendem o sistemaurinário. O tumor ou câncer pode estar localizado na cabeçae/ou pescoço (por exemplo, câncer de laringe e câncer deparatireóide) . 0 tumor ou câncer também pode estarlocalizado no sistema hematopoiético ou sistema Iinfóide, einclui, por exemplo, Iinfoma (por exemplo, doença deHodgkin e Iinfoma não-Hodgkin) , mieloma múltiplo, ouleucemia (por exemplo, leucemia linfocítica aguda, leucemialinfocítica crônica, leucemia mielóide aguda, leucemiamielóide crônica, e semelhante). Preferencialmente, o tumorestá localizado na bexiga, fígado, ovário, rim, intestinos,cérebro, ou mama.
A proteína SPARC possui afinidade por uma amplavariedade de ligantes. Portanto, o método inventivo paraliberar um agente terapêutico a um sítio de doença estábaseado na descoberta de que compostos ou ligantes,incluindo albumina, os quais possuem afinidade por SPARCpodem ser usados para liberar fármacos terapêuticos aosítio de doença, com pouca ou nenhuma liberação a tecidosnormais.
A invenção também fornece um meio para transportar acomposição farmacêutica através da barreira endotelial dosvasos sangüíneos para dentro do interstício tumoral. Oprincipal obstáculo na terapia de anticorpos equimioterapia é a translocação através da barreiraendotelial para dentro do interstício tumoral. A albuminautiliza o mecanismo de transporte do receptor de albuminapara atravessar a barreira endotelial. Este mecanismo detransporte poderia ser o mesmo daqueles descritos pelaliteratura (gp60 e albondina) ou através de outrosmecanismos desconhecidos. Tem sido previamente relatado queo agente terapêutico "piggy backed" sobre a albumina exibiupercepção tumoral aprimorada (Desai, N. et al. Increasedendothelial transcytosis of nanoparticle albumin-boundpaclitaxel (ABI-007) by endothelial gp60 receptors: apathway inhibited by Taxol®, 2 7th Annual San Antonio BreastCâncer Symposium (SABCS) (2004) , abstract #1071) . Alémdisso, translocação aprimorada através da barreiraendotelial pode ser alcançada usando o mecanismofisiológico de transporte de albumina (Schnitzer, J.E.; Oh,P. J. Biol Chem. 269, 6072-6082 (1994)).
Para moléculas pequenas, podem ser feitas modificaçõesde forma que a afinidade do fármaco pela albumina éaumentada. Para formulações de moléculas pequenas, umsolvente o qual previne a ligação do fármaco à albuminadeve ser removido. Alternativamente, a molécula pequenapode estar ligada à albumina, anticorpo contra albumina,fragmentos do mesmo, ou ligantes para um receptor dealbumina tal como descrito abaixo.
Para moléculas biológicas tais como proteínas,anticorpos e fragmentos do mesmo, é possível projetar osmedicamentos biológicos com um peptídeo de ligação àalbumina de forma que os medicamentos biológicos exibirãouma afinidade pela albumina. 0 peptídeo pode tanto ser umaseqüência de ligação à albumina, um anticorpo ou fragmentode anticorpo contra albumina, anticorpo ou fragmento deanticorpo contra carreadores de albumina
(gp60/albondina/receptor "scavenger"/ou receptor TGF-beta),ou anticorpo para qualquer uma das proteínas encontradas nocaveolae, o transportador de albumina. A invenção tambémcontempla um anticorpo ou fragmento adequado do mesmopreparado como um quimérico para uma valência para SPARC eoutra valência para um efetor do transporte transendotelialtal como gp60/albondina/receptor "scavenger"/ou receptorTGF-beta, ou contra qualquer uma das proteínas encontradasno caveolae da célula endotelial.
A invenção também fornece um método para a destruiçãode tecidos de expressão de SPARC tais como tumor e tecidosrestenóticos via fixação de complemento e/ou recrutamentode resposta imune mediada por célula por anticorpo SPARC.Neste caso, igualmente ao Rituxan, um anticorpo anti-CD2 0,a porção efetora é o fragmento Fc o qual pode mediar tantoa ativação do complemento com a destruição direta decélulas de expressão de SPARC quanto o recrutamento decélulas imunes para o tecido de expressão de SPARC com a
destruição resultante do tecido via uma resposta imunemediada por células.
A invenção também fornece um método para a inibição daatividade de SPARC usando um anticorpo neutralizante contraSPARC. 0 anticorpo neutralizante possui a habilidade debloquear a interação de SPARC com seus efetores in vivo.Por exemplo, o anticorpo neutralizante pode bloquear ainteração de SPARC com um componente de superfície celularou a ligação de SPARC com seus ligantes naturais tais comoalbumina, fatores de crescimento, e Ca2+.A invenção também fornece um método para determinar aresposta de um tumor de um humano ou de outro mamífero àterapia anti-SPARC. 0 método compreende (a) isolar umaamostra biológica de um humano, (b) detectar a expressão deproteína SPARC na amostra biológica, e (c) quantificar aquantidade de proteína SPARC na amostra biológica. Como umaterapia anti-SPARC recai sobre a ligação do anticorpo SPARCem SPARC no tecido doentio, a presença de SPARC no tecidodoentio é necessária para a atividade.
A invenção ainda fornece um método para usar um oumais agentes de diagnóstico conjugados a grupos dereconhecimento de SPARC, tais como os anticorpos oufragmentos do mesmo, conforme descrito acima. Os agentes dediagnóstico incluem radioisótopos ou radionuclídeos,agentes de contraste em RMI, agentes de contraste de raios -X, agentes de contraste de ultra-som, e agentes decontraste de PET. Métodos para conjugação são conhecidos natécnica.
A expressão de proteína SPARC em uma amostra pode serdetectada e quantificada por qualquer método adequadoconhecido na técnica. Métodos adequados de detecção equantificação de proteínas incluem Western blot, ensaioimunossorvente ligado à enzima (ELISA), coloração de prata,o ensaio BCA (Smith et al. , Anal. Biochem., 150, 76-85(1985) ) , o ensaio de proteína de Lowry (descrito em, porexemplo, Lowry et al. , J. Biol. Chem., 193, 265-275(1951)), o qual é um ensaio colorimétrico baseado emcomplexos cobre-proteína, e o ensaio de proteína deBradford (descrito em, por exemplo, Bradford et al. , Anal.Biochem., 72, 248 (1976)), o qual depende da alteração daabsorbância no Azul de Coomassie sobre a ligação deproteína. A biópsia do tumor pode ser analisada porqualquer um dos métodos precedentes ou pode ser analisadapor imunoistoquímica usando anticorpo anti-SPARC (oumonoclonal ou policlonal) em conjunto com um sistemaapropriado de visualização (isto é, substrato HRP eanticorpo secundário conjugado a HRP).
Quaisquer anticorpos adequados contra SPARC podem serusados no método inventivo, desde que o anticorpo apresenteligação específica a SPARC. 0 anticorpo pode ser oumonoclonal ou policlonal; e pode ser produzido ou atravésda imunização de um animal ou produzido através detecnologia de DNA recombinante tal como apresentação defago e mutagênese in vitro ou síntese dos genes das regiõesvariáveis da cadeia leve e pesada do anticorpo. Anticorpospoliclonais incluem, mas não estão limitados a, anticorposhumanos e anticorpos humanizados derivados de animais taiscomo aves (por exemplo, galinha), roedores (por exemplo,rato, camundongo, hamster, porquinho da índia), vaca,cabra, carneiro, coelho e semelhantes. Anticorposmonoclonais incluem anticorpos derivados de um clone únicode anticorpo produzindo células incluindo, mas sem selimitar a, células humanas, e anticorpos derivados decélulas de outros tipos de animais, por exemplo, galinha,coelho, rato, camundongo, hamster, porquinho da índia,vaca, cabra, carneiro, e semelhantes. Anticorpos sintéticosincluem anticorpos produzidos utilizando a tecnologia deDNA recombinante via manipulação genética dos genes dasregiões variáveis da cadeia leve e pesada. Anticorpossintéticos também incluem fragmentos de anticorpoquimicamente sintetizados com atividade de ligação a SPARCou anticorpos derivados de apresentação de fago outecnologia similar.
Para uso humano, em ordem de evitar imunogenicidade eresposta imune, é preferível usar anticorpo humanizadoanti-SPARC ou fragmentos adequados tais como Fab', Fab, ouFab2. O anticorpo humanizado ou fragmentos do mesmo podemser produzidos, por exemplo, usando um dos seguintesmétodos estabelecidos: 1) o anticorpo humanizado pode serconstruído usando IgG de medula óssea humana trocando delugar a região variável CDR com aquele do anticorpo contraSPARC, onde a cadeia leve e pesada são independentementeexpressas sob promotores separados ou co-expressos sob umpromotor com seqüência IRES; 2) o anticorpo monoclonalhumanizado pode ser suscitado contra SPARC usando umcamundongo manipulado para ter um sistema imune humano; 3)o anticorpo humanizado contra SPARC pode ser suscitadousando fagemídeo (M13, colifago lambda, ou qualquer sistemade fago capaz de apresentação na superfície) . Paraconstruir o anticorpo de comprimento completo, a regiãovariável pode ser transferida sobre o CDR ou ambas a cadeialeve e a cadeia pesada. A co-expressão da cadeia leve e dacadeia pesada em células de mamíferos tais como CHO, 293,ou células mielóides humanas, resultam em anticorpo decomprimento completo. Similarmente, fragmentos Fab', Fab,ou Fab2 e anticorpos de cadeia única podem ser preparadosutilizando métodos bem estabelecidos.
Anticorpo contra SPARC também não está limitado aoanticorpo integral ou ao fragmento de anticorpo retendo osítio de ligação a SPARC (por exemplo, Fab e Fab2) . 0anticorpo também não está limitado a qualquer uma classe deanticorpo, por exemplo, IgM, IgA, IgG, IgE, IgD, e IgY. Oanticorpo também não está limitado a anticorpo divalente,monovalente, ou quimérico com uma valência para SPARC eoutra para um efetor tipo tTF ou ricina A. O anticorpohumanizado não está limitado a IgG. As mesmas tecnologiaspodem ser usadas para gerar todas as outras classes deanticorpos tais como IgE, IgA, IgD, IgM, cada uma possuindoatividades de citotoxidade celular dependente de anticorpo(ADCC) e de citotoxidade dependente de complemento (CDC)diferentes apropriadas para um alvo particular de doença.Fragmentos funcionais do anticorpo podem ser gerados porproteólise limitada. Esses fragmentos podem sermonovalentes tal como Fab' ou divalentes, tal como Fab2.
Fragmentos também podem ser sintetizados como cadeia únicascfv ou diacorpos em E. coli.
A invenção ainda fornece uma composição compreendendoum agente farmaceuticamente ativo diretamente capaz deexercer seu efeito farmacológico ou um agentefarmaceuticamente ativo acoplado a um composto capaz de seligar a SPARC, ou outra porção de ligação à albumina, e umveículo farmaceuticamente aceitável. O agente de liberação,o qual pode ser uma composição farmacêutica, compreende oagente farmaceuticamente ativo acoplado a um grupo dereconhecimento de SPARC, é administrado a um mamífero, talcomo um humano, em uma quantidade de forma que umaquantidade terapeuticamente eficaz do agentefarmaceuticamente ativo é liberada para o mamífero.
A invenção também fornece um método para liberar oagente quimioterápico a um tumor em um mamífero. O métodocompreende a administração a um humano ou outro mamífero deuma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composiçãofarmacêutica, em que a composição farmacêutica compreendeum agente quimioterápico acoplado a um composto ou ligantecapaz de se ligar à proteína SPARC e um veículofarmaceuticamente aceitável. Descrições do agentequimioterápico, tumor, mamífero, e componentes do mesmo,aqui expostos em conexão com outras modalidades da invençãotambém são aplicáveis àqueles mesmos aspectos do métodomencionado acima de liberação do agente quimioterápico a umtumor.
Preferencialmente, a composição farmacêutica nãocompreende mais do que 50% do agente terapêutico sob aforma de nanopartícula. Mais preferencialmente, acomposição farmacêutica não compreende mais do que 10% doagente terapêutico sob a forma de nanopartícula. Ainda maispreferencialmente, a composição farmacêutica não compreendemais do que 5%, ou mais do que 4%, ou mais do que 3% doagente terapêutico sob a forma de nanopartícula. Em umamodalidade mais preferida, a composição farmacêutica nãocompreende mais do que 2%, ou mais do que 1% do agenteterapêutico sob a forma de nanopartícula. O maispreferível, a composição farmacêutica não compreende nenhumagente terapêutico sob a forma de nanopartícula.
A invenção também fornece um método para a liberaçãode um agente quimioterápico a um tumor em um humano ououtro mamífero. 0 método compreende a administração a umhumano ou outro mamífero de uma quantidade terapeuticamenteeficaz de um agente de liberação, tal como uma composiçãofarmacêutica, em que o agente de liberação (por exemplo,composição farmacêutica) compreende o agente quimioterápicoacoplado ao grupo de reconhecimento de SPARC. Por exemplo,o agente quimioterápico pode estar acoplado a um grupo dereconhecimento de SPARC tal como um anticorpo que reconheceproteína SPARC, ou o anticorpo SPARC sozinho. Composiçõesfarmacêuticas preferencialmente incluem o agentequimioterápico acoplado ao grupo de reconhecimento de SPARCe um veículo farmaceuticamente aceitável. Descrições doagente quimioterápico, tumor, mamífero, e componentes domesmo, aqui expostos em conexão com outras modalidades dainvenção também são aplicáveis àqueles mesmos aspectos dométodo mencionado acima de liberação do agentequimioterápico a um tumor.
Em outras modalidades, a invenção fornece um métodopara a liberação do agente farmaceuticamente ativo por viade um grupo de reconhecimento de SPARC a um sítio de doençao qual é caracterizado pela super expressão de SPARC ou deoutra proteína de ligação ã albumina ou marcador em umhumano, ou outro animal que expresse tal proteína oumarcador. Tais doenças incluem condições anormais deproliferação, remodelação tecidual, hiperplasia, ecicatrização exagerada de ferimento em tecido corporal (porexemplo, tecido mole, tecido conjuntivo, osso, órgãossólidos, vasos sangüíneos e semelhantes). Exemplos dedoenças que são tratáveis ou podem ser diagnosticadas pelaadministração de uma composição farmacêutica compreendendoum agente terapêutico acoplado a um composto ou ligantecapaz de se ligar a uma proteína SPARC, ou outra proteínade ligação à albumina, incluem câncer, diabetes ou outraretinopatia, inflamação, artrite, restenose, em vasossangüíneos, enxertos artificiais de vasos sangüíneos, oudispositivos intravasculares, e semelhantes. Descrições doagente farmaceuticamente ativo, tumor, mamífero, ecomponentes do mesmo, aqui expostos em conexão com outrasmodalidades da invenção também são aplicáveis àquelesmesmos aspectos do método mencionado acima de liberação deum agente farmaceuticamente ativo.
Em ainda outras modalidades, a invenção fornece ummétodo para a liberação de um agente farmaceuticamenteativo (por exemplo, anticorpo SPARC sozinho, ou agentequimioterápico conjugado ao grupo de reconhecimento deSPARC, tal como anticorpo SPARC, anticorpo SPARCradiomarcado e semelhantes) a um sítio de doença que écaracterizado pela super expressão de SPARC em um humano ououtro animal que expresse tal proteína ou marcador. Taisdoenças incluem condições anormais de proliferação,remodelação tecidual, hiperplasia, e cicatrização exageradade ferimento em tecido corporal (por exemplo, tecido mole,tecido conjuntivo, osso, órgãos sólidos, vasos sangüíneos esemelhantes). Exemplos de doenças que são tratáveis oupodem ser diagnosticadas pela administração de umacomposição farmacêutica compreendendo um agente terapêuticoacoplado a um composto ou ligante capaz de se ligar a umaproteína SPARC, ou outra proteína de ligação à albumina,incluem câncer, diabetes ou outra retinopatia, inflamação,artrite, restenose, em vasos sangüíneos, enxertosartificiais de vasos sangüíneos, ou dispositivosintravasculares, e semelhantes. Descrições do agentefarmaceuticamente ativo, tumor, mamífero, e componentes domesmo, aqui expostos em conexão com outras modalidades dainvenção também são aplicáveis àqueles mesmos aspectos dométodo mencionado acima de liberação de um agentefarraaceuticamente ativo.
Em outras modalidades o método inventivo compreende aadministração a um mamífero de uma quantidadeterapeuticamente eficaz de uma composição farmacêuticacompreendendo um agente quimioterápico acoplado a umcomposto ou ligante capaz de se ligar à proteína SPARC. 0agente quimioterápico pode ser acoplado a um composto ouligante capaz de se ligar à proteína SPARC usando qualquermétodo adequado. Preferencialmente o agente quimioterápicoestá quimicamente acoplado ao composto via ligaçõescovalentes incluindo, por exemplo, ligações disulfeto.
A invenção também fornece um método compreendendo aadministração a um mamífero de uma quantidadeterapeuticamente eficaz de uma composição farmacêuticacompreendendo um agente quimioterápico ou elementoradioativo acoplado a um sítio de reconhecimento de SPARC.O agente quimioterápico ou elemento radioativo pode seracoplado ao anticorpo que reconhece SPARC usando qualquermétodo adequado. Preferencialmente, o agente quimioterápicopode ser quimicamente acoplado ao composto via ligaçõescovalentes incluindo, por exemplo, ligações disulfeto.
Preferencialmente, o composto ou ligante útil nométodo inventivo é capaz de se ligar à proteína SPARC. Emuma modalidade preferida da invenção, o composto é umligante que se liga à proteína SPARC. Exemplos de ligantesadequados incluem cátion de cálcio (Ca2+) , cátion de cobre(Cu2+) , cátion de ferro (Fe2+) , fator de crescimentoderivado de plaqueta (PDGF), fator de crescimentoendotelial vascular (VEGF), colágeno (por exemplo, colágenoI, colágeno II, colágeno III, colágeno IV, colágeno V, ecolágeno IX), vitronectina, trombospondina-1, célulasendoteliais, plaquetas, e cátions de hidroxiapatita. Emoutra modalidade preferida da invenção, o composto é umamolécula pequena. 0 termo "molécula pequena" se refere aqualquer molécula possuindo um peso molecular menor quecerca de 600. Exemplos de moléculas pequenas adequadasincluem uma proteína, um ácido nucléico, um carboidrato, umlipideo, uma coenzima (por exemplo, uma vitamina) , umantígeno, um hormônio, e um neurotransmissor.Preferencialmente, a molécula pequena é um composto químico(por exemplo, um composto químico orgânico ou inorgânico),um peptídeo, ou mimético de peptídeo, uma proteína, oucarboidrato. Em ainda outra modalidade preferida dainvenção, o composto é um anticorpo que está diretamentecontra uma proteína SPARC. Qualquer anticorpo adequado, oufragmento do mesmo, que se ligue à proteína SPARC pode serusado no método inventivo.
A expressão de SPARC em tecidos tumorais tem sidodemonstrada em quase todos os tipos de câncer. Tem-seevidência de que a elaboração de SPARC em tecidos tumoraispode ser ou derivada da expressão tumoral de SPARC ouatravés de células do estroma. 0 fenótipo de SPARC do tumorpode ser convertido de SPARC negativo para SPARC positivopela administração de SPARC exógeno. Conseqüentemente, otumor SPARC positivo poderia então se tornar sensível aagentes quimioterápicos. Alternativamente, SPARC poderiaser radiomarcado ou conjugado com várias toxinas para3 0 conferir a habilidade de matar o tumor diretamente ouindiretamente.
SPARC pode ser sintetizado e purificado usandotecnologias conhecidas. Células expressando SPARC exógenopodem ser geradas colocando o gene estrutural/cDNA de SPARCsob o controle de um forte promotor/inicio de tradução e ovetor transfectado para dentro de células de mamíferos paradirecionar a expressão de SPARC nestas células.Alternativamente. SPARC pode ser expresso usandobaculovírus ou outros vírus tal como adenovírus. SPARCexpresso por essas células pode ser purificado por métodostradicionais de purificação tais como cromatografia detroca iônica, de exclusão por tamanho, e de C18. O SPARCpurificado pode ser formulado em soro fisiológico comconservantes e administrado intravenosamente, por aerossol,por injeção subcutânea, ou outros métodos.
A invenção também fornece um método para liberar umagente quimioterápico a um tumor em um mamífero. O métodocompreende a administração a um mamífero de uma quantidadeterapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica, emque a composição farmacêutica compreende o agentequimioterápico acoplado a uma proteína SPARC capaz de seligar à albumina e um veículo farmaceuticamente aceitável.Descrições do agente quimioterápico, tumor, mamífero, ecomponentes do mesmo, aqui expostos em conexão com outrasmodalidades da invenção também são aplicáveis àquelesmesmos aspectos do método mencionado acima de liberação doagente quimioterápico a um tumor.
Para uso in vivo, o agente quimioterápico acoplado aum composto ou ligante capaz de se ligar à proteína SPARCdesejável é formulada dentro de uma composição farmacêuticacompreendendo um veículo fisiologicamente aceitável.Qualquer veículo fisiologicamente aceitável pode ser usadodentro do contexto da invenção, e tais veículos são bemconhecidos na técnica.
Para uso in vivo, o agente de terapia anti-SPARCdesejável é formulado dentro de uma composição farmacêuticacompreendendo um veículo fisiologicamente aceitável.Qualquer veículo fisiologicamente aceitável pode ser usadodentro do contexto da invenção, e tais veículos são bemconhecidos na técnica.
O veículo tipicamente será líquido, mas também podeser sólido, ou uma combinação de componentes líquidos esólidos. O veículo desejável é um veículo (por exemplo,excipiente ou diluente) fisiologicamente aceitável (porexemplo, farmaceuticamente ou farmacologicamente
aceitável). Veículos fisiologicamente aceitáveis são bemconhecidos e estão prontamente disponíveis. A escolha doveículo será determinada, pelo menos em parte, pelalocalização do tecido e/ou células alvo, e pelo métodoparticular utilizado para administrar a composição.
Tipicamente, tais composições podem ser preparadascomo injetáveis, ou como soluções líquidas ou suspensões,formas sólidas adequadas para usar para preparar soluçõesou suspensões sob a adição de um líquido anterior à injeçãopode também ser preparada; e as preparações podem tambémser emulsifiçadas. As formulações farmacêuticas adequadaspara uso injetável incluem soluções ou dispersões aquosasestéreis; formulações contendo estabilizantes de proteína elioprotetores conhecidos, formulações contendo óleo degergelim, óleo de amendoim ou propilenoglicol aquoso, e pósestéreis para a preparação extemporânea de soluções oudispersões injetáveis estéreis. Em todos os casos, aformulação deve ser estéril e deve ser fluida à medida queexista fácil "seringabilidade". Ela deve ser estável sob ascondições de produção e estoque e deve ser preservadacontra a ação de contaminação de microorganismos, tais comobactérias e fungos. Soluções dos compostos ativos como baselivre ou como sais farmacologicamente aceitáveis podem serpreparadas em água adequadamente misturadas com umsurfactante, tal como hidroxicelulose. Dispersões tambémpodem ser preparadas em glicerol, polietilenoglicóislíquidos, e misturas dos mesmos e em óleos. Sob condiçõescomuns de estocagem e uso, essas preparações contêm umconservante para prevenir o crescimento de microorganismos.
0 agente quimioterápico (por exemplo, terapia anti-SPARC) acoplado a um composto ou ligante o qual se liga àproteína SPARC pode ser formulado em uma composição em umaforma neutra ou de sal. Sais farmaceuticamente aceitáveisincluem sais de adição ácida (formados com os grupos aminolivres da proteína) e os quais são formados com ácidosinorgânicos tais como, por exemplo, ácidos hidroclórico oufosfórico, ou ácidos orgânicos tais como acético, oxálico,tartárico, mandélico, e semelhantes. Sais formados comgrupos carboxil livres também podem ser derivados de basesinorgânicas tais como, por exemplo, hidróxidos de sódio, depotássio, de amônia, de cálcio, ou férrico, e basesorgânicas tais como isopropilamina, trimetilamina,histidina, procaína e semelhantes.
A composição pode ainda compreender quaisquer outroscomponentes adequados, especialmente para aumentar aestabilidade da composição e/ou seu termo de uso.Conseqüentemente, existe uma ampla variedade de formulaçõesadequadas para a composição da invenção. As seguintescomposições e métodos são meramente exemplares e não sãolimitantes de nenhuma forma.
Formulações adequadas para administração através deinalação incluem formulações de aerossol. As formulações deaerossol podem ser colocadas dentro de propelentespressurizados adequados, tais como diclorofluormetano,propano, nitrogênio, e semelhantes. Elas também podem serformuladas como preparações não-pressurizadas, paraliberação a partir de um nebulizador ou de um atomizador.
Formulações adequadas para administração parenteralincluem soluções isotônicas estéreis de injeção aquosas enão-aquosas, as quais contêm antioxidantes, tampões,bacteriostáticos, e solutos que fazem a formulaçãoisotônica com o sangue do recipiente pretendido, esuspensões estéreis aquosas e não-aquosas que incluemagentes de suspensão, solubilizantes, agentes deengrossamento, estabilizantes, e conservantes. Asformulações podem ser apresentadas em recipientes fechadosde dose unitária ou multi-dose, tais como ampolas efrascos, e podem ser estocados em uma condição de "freeze-dried" (liofilização) que requerem somente a adição de umexcipiente líquido estéril, por exemplo, água, parainjeções, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensõesde injeção extemporâneas podem ser preparadas a partir depós estéreis, grânulos, e tabletes dos tipos previamentedescritos. Em uma modalidade preferida da invenção, oagente quimioterápico acoplado a um composto o qual se ligaã proteína SPARC (por exemplo, terapia anti-SPARC) éformulado para injeção (por exemplo, administraçãoparenteral). Nesta consideração, a formulação desejável éadequada para administração intratumoral, mas também podeser formulada para injeção intravenosa, injeçãointraperitoneal, injeção subcutânea, e semelhante.
Formulações adequadas para administração anal podemser preparadas como supositório através da mistura doingrediente ativo com uma variedade de bases tais comobases emulsificantes ou bases solúveis em água. Formulaçõesadequadas para administração vaginal podem ser apresentadascomo pessários, tampões, cremes, géis, pomadas, espumas, oufórmulas contendo spray, além do ingrediente ativo, taisveículos conhecidos na técnica como sendo apropriados.
Além disso, a composição pode compreender agentesterapêuticos ou biologicamente ativos. Por exemplo, fatoresterapêuticos úteis no tratamento de uma indicaçãoparticular podem estar presentes. Fatores que controlaminflamações, tal como ibuprofeno ou esteróides, podem serparte da composição para reduzir o inchaço e a inflamaçãoassociada com a administração in vivo da composiçãofarmacêutica e sofrimento fisiológico.
Os seguintes exemplos ainda ilustram a invenção, masnão devem ser interpretados de nenhuma forma que limite seuescopo.
EXEMPLO 1
Este exemplo ilustra a co-localização de SPARC comalbumina em um xenoenxerto tumoral MX-1.
Paclitaxel em nanopartículas de albumina (Abraxane,ABX ou ABI-007) têm mostrado possuir uma taxa de respostamelhorada sobre o Taxol (TAX) em uma triagem de câncer demama metastásico de fase 3 (33% vs. 19%, p<0,0001) (ver,por exemplo, O'Shaughnessy, SABCS). O transportetransendotelial mediado por albumina de paclitaxel (P) e a acumulação intratumoral aumentada de paclitaxel para ABXversus TAX foi demonstrada recentemente (ver, por exemplo,Desai, SABCS 2003) . A albumina se liga a SPARC (ver, porexemplo, Schnitzer, J. Biol. Chem, 269, 6072-82, (1994)).
A linhagem celular tumoral MX-I é derivada a partir de um câncer de mama humano. Criosecções seriais dexenoenxerto tumoral MX-I humano, tecidos de tumor de mamaprimário humano (n=141) , e tecido de mama humano normal(n=115) foram imunomarcados e pontuados (0-4) paraalbumina, SPARC (usando anticorpo anti-SPARC), e coloração de caveolina-1. Células MX-I cultivadas também foramimunomarcados para SPARC. Paclitaxel em nanoparticuias dealbumina (Abraxane, ABX ou ABI-007) e Taxol (TAX) forampreparados com paclitaxel (P) radioativo (20 mg/kg IV) , etambém foram usados para determinar a biodistribuição de paclitaxel em tecidos normais de camundongos atimicos.
Coloração de albumina no tumor MX-1 foi focai e co-localizado com SPARC (Figura 3). A coloração de caveolina-1confirmou que a densidade dos vasos sangüíneos em áreascontendo albumina não era diferente de áreas livres dealbumina. A expressão de SPARC por células MX-I cultivadasfoi confirmada pela coloração positiva com anticorpo anti-SPARC. A acumulação de paclitaxel em tecidos normais (SPARCnegativos) foi significativamente mais baixa para ABXquando comparado com TAX (p<0,004) para 7/10 tecidos. 46% dos tumores de mama primários humanos exibiram altacoloração SPARC (pontuação > 2) , quando comparado a 1% paratecidos normais (p<0,0001) . Em um subsistema de 50 tecidostumorais, a expressão de SPARC não correlacionou comestágio, status ER, ou status PgR; entretanto, haviatendência para alta expressão de SPARC entre tumores p53-negativos.
A co-localização de SPARC e albumina sugere que SPARC,por sua atividade de ligação à albumina, pode comportar-secomo um alvo intratumoral para ligação de albumina emtumores de mama. Como o transporte de paclitaxel em ABX édependente de albumina (ver, por exemplo, Desai, SABCS2003), isso pode explicar a acumulação melhorada de ABX emtumor quando comparada ao TAX. A acumulação de ABX emtecidos normais foi mais baixa do que a de TAX, consistentecom a falta de expressão de SPARC em tecidos normais. Avarredura de pacientes para SPARC leva em conta aidentificação de pacientes mais responsivos a ABX. Apresença de SPARC nesses tumores leva em conta alvo eterapia usando anticorpo anti-SPARC.
EXEMPLO 2
Este exemplo ilustra a expressão de SPARC em célulastumorais MX-1.
Células MX-I foram cultivadas sobre uma lamínula ecoradas com um anticorpo direcionado contra SPARC humanousando métodos conhecidos na técnica. A coloração poranticorpos foi observada, a qual demonstrou que MX-I estavaexpressando SPARC. Estes resultados sugerem que a expressãode SPARC detectada em células tumorais MX-I é um resultadoda secreção de SPARC por células tumorais MX-I. A coloraçãofoi mais intensa para células tumorais MX-I do que paracélulas normais primárias tais como HUVEC (célulasendoteliais da veia umbilical humana), HLMVEC (célulasendoteliais de microvasos de pulmão humano), e HMEC(células epiteliais mamárias humanas). Apesar da maioria dacoloração SPARC ter sido SPARC interno, nível significativode SPARC de superfície foi detectado como demonstrado pormicroscopia confocal e coloração de célulasimpermeabilizadas.EXEMPLO 3
Este exemplo ilustra a super expressão de proteínaSPARC em células de carcinoma de mama humano.
A expressão de SPARC em células de carcinoma de mamahumano foi determinada usando um banco de dados tumoral deCybrdi, Inc. (Gaithersburg, MD). Os resultados dessaanálise estão expostos na Tabela 1. A intensidade decoloração foi pontuada de "Negativo" a 4+, com o númeromaior correspondendo a uma maior intensidade de superexpressão. 4 9% de carcinoma de mama coloridos positivospara SPARC (2+ e acima) , quando comparado a 1% de tecidonormal (p<0,0001).
<formula>formula see original document page 57</formula>
EXEMPLO 4
Este exemplo ilustra a transcitose calveolar mediadapor receptor endotelial (gp60) de paclitaxel emnanopartículas de albumina (ABI-007).
Paclitaxel (P) em nanopartículas de albumina(Abraxane, ABX ou ABI-0 07) demonstrou taxa de respostamelhorada sobre Taxol em uma triagem de câncer de mamametastásico de fase 3 (33% vs. 19%, p<0,0001) (SABCS,0'Shaughnessy et al. , 2003). Cremofor em Taxol (TAX)captura P em micelas no plasma, reduzindo o paclitaxeldisponível para divisão celular (ver, por exemplo,Sparreboom et al. , Câncer Res., 59, 1454 (1999)). Estudosem camundongos atímicos têm mostrado concentrações depaclitaxel com ABX intratumoral 3 0-4 0% maior quandocomparado com doses equivalentes de TAX (SABCS, Desai etal. , 2003) . A albumina é transportada através das célulasendoteliais (EC) por transporte calveolar específicomediado por receptor (gp60) (ver, por exemplo, John et al. ,Am. J. Physiol., 284, L187 (2001)). Foi hipotetizado de queo paclitaxel em ABX ligado à albumina pode ser transportadoatravés dos microvasos EC tumorais por gp60, e essemecanismo pode ser particularmente ativo para ABX quandocomparado a TAX.
Uma série de experimentos foi realizada para avaliar aligação e transporte de paclitaxel por células endoteliaisda veia umbilical humana (HUVEC) e células endoteliais demicrovasos de pulmão humano (HLMVEC) para ABX e TAX.Paclitaxel fluorescente (FP) foi usado como uma sonda e ABXe TAX fluorescente foram formulados com FP para sondar aligação e transporte de paclitaxel através de monocamadasde EC crescidas sobre um aparelho "transwell".
A ligação de paclitaxel a células (HUVEC) foi IOXmaior para ABX do que para TAX. 0 transporte de paclitaxelde ABX através de monocamadas de EC foi melhorado por 2-3vezes e 2-4 vezes para HUVEC e HMVEC, respectivamente,guando comparado a TAX. O transporte foi dependente dealbumina. O transporte de paclitaxel de ABX foi inibidopela presença de anticorpo anti-SPARC, o qual é conhecidopor se ligar a gp60, o receptor requerido para transcitosecalveolar de albumina. Inibidores conhecidos de transcitosecalveolar, NEM e {3-metil ciclodextrina (BMC) , tambéminibiram o transporte de paclitaxel de ABX através dasmonocamadas endoteliais (Figura 4). A inibição detransporte caveolar diminuiu o transporte de P de ABX aonível de transporte TAX.
Esses resultados demonstram que paclitaxel de ABX éativamente transportado através de EC por transcitosecaveolar mediada por gp60, enquanto que P de TAX parece sertransportado a uma taxa 2-4 vezes menor primariamente porum mecanismo paracelular (não-caveolar) . Esta via pode emparte ser responsável pelo aumento das concentraçõesintratumorais de paclitaxel visto para ABX em relação ãTAX. Cremofor em TAX inibe e transcitose de paclitaxelatravés de células endoteliais.
EXEMPLO 5
Este exemplo demonstra a correlação da super expressãode SPARC com altas taxas de resposta usando nanopartículasde paclitaxel ligado à albumina (ABI-007) em cânceres decabeça e pescoço escamosos.
Em estudos clínicos de fase I e II de pacientes comcarcinoma de células escamosas (SCC) de cabeça e pescoço(H&N) e canal anal, foram observadas taxas de resposta de78% e 64%, respectivamente, para Nanopartículas dePaclitaxel Ligado à Albumina (Abraxane®, ABX ou ABI-007)intra-arterialmente liberadas (ver, por exemplo, Damascelliet al., Câncer, 92(10), 2592-2602 (2001), e Damascelli etal. , AJR1 181, 253-260 (2003)). Comparando a citotoxidadein vitro de ABX e Taxol (TAX) , nós observamos que umalinhagem escamosa de cerviz (A431) demonstrou IC50Smelhorados para ABX (0,004 μg/ml) vs TAX (0,012 pg/ml).Transporte de paclitaxel (P) caveolar transendotelialmediado por albumina e acumulação intratumoral de Paumentada para ABX vs TAX foi demonstrada recentemente(ver, por exemplo, Desai, SABCS, 2 003).
Tecidos tumorais de H&N humanos (n=119) e tecidosnormais de H&N humanos (n=15) foram imunocoloridos epontuados (0-4) para coloração SPARC usando um banco dedados de tecidos tumorais e normais. Imunomanchamento foirealizada utilizando anticorpo policlonal de coelho anti-SPARC. Em um novo estudo de escala de dose de fase I (ABXdado IV durante 3 0 minutos q3w) , um subgrupo de pacientescom câncer de cabeça e pescoço (n=3) foi analisado pararesposta a ABX.
SPARC foi super expresso (pontuação > 2) em 60%(72/119) dos tumores H&N versus 0% (0/15) em tecidosnormais (p<0,0001). No estudo de fase I, 2/3 dos pacientesH&N alcançaram resposta parcial (PR) após 2 ciclos detratamento a níveis de dose de 13 5 mg/m2 (1 pt) e de 225mg/m2 (1 pt). Um terceiro paciente a 260 mg/m2 progrediu.
SPARC foi notado ser super expresso em 6 0% dos tumoresde H&N escamosos. Isto pode explicar a alta atividade deúnico agente de ABX vista previamente em cânceres H&Nescamosos devido ã ligação de paclitaxel ligado à albumina60/69
ao SPARC expresso nestes tumores. 2/3 dos pacientes comtumores H&N escamosos alcançaram PR em um novo estudo defase I.
<table>table see original document page 61</column></row><table>
Tecidos de tumor H&N humanos (n=119) e tecido normalde H&N humano (n=15) foram imunocoloridos e pontuados (0-4)para coloração SPARC usando uma base de dados de tecidotumoral e normal. O imunomanchamento foi realizada usandoanticorpo policlonal de coelho anti-SPARC. SPARC foi superexpresso (pontuação > 2) em 6 0% (72/119) dos tumores de H&Nversus 0% (0/15) em tecidos normais (p<0,0001). Isto podeexplicar a alta atividade de agente único para ABX vistapreviamente em cânceres de H&N escamosos devido à ligaçãode paclitaxel ligado à albumina ao SPARC expresso nessestumores.
Em um novo estudo de escala de dose de fase I (ABXdado IV durante 3 0 minutos q3w) , um subgrupo de pacientescom câncer de cabeça e pescoço (n=3) foi analisado pararesposta a ABX. No estudo de fase I, 2/3 dos pacientes H&Nalcançaram resposta parcial (PR) após 2 ciclos detratamento a níveis de dose de 13 5 mg/m2 (1 pt) e de 225mg/m2 (1 pt) . Um terceiro paciente a 260 mg/m2 progrediu.Tecidos tumorais destes pacientes foram imunocoloridos paraSPARC e 1 paciente respondendo mostrou forte superexpressão para SPARC. Em outro estudo clínico de fase II de54 pacientes com carcinoma de células escamosas de cabeça epescoço tratados com ABX intra-arterial, uma taxa deresposta geral de 78% foi notada. Biópsias de câncer de 16pacientes neste estudo recebendo ABX intra-arterial foramavaliadas para expressão de SPARC e correlacionadas com aresposta clínica. Coloração com anticorpo policlonal anti-SPARC (R&D Systems, Minneapolis, MNi USA) foi pontuada emuma escala de 0-4 (0 = nenhuma coloração, 4 = positivoforte). A expressão de SPARC positiva foi identificada comocoloração > 2+ e a expressão de SPARC negativa foiidentificada como coloração < 2+. Os que respondem a ABXexibiram alta incidência de expressão de SPARC (10/11, 91%)versus aos que não respondem (2/5, 40%) (p=0,06) . Aresposta a ABX foi significativamente mais alta parapacientes SPARC-positivos (10/12, 83%) versus pacientesSPARC-negativos (1/4, 25%) (p=0,06). Além disso, ospacientes SPARC-negativos exibiram taxas de respostassignificativamente mais baixas do que a taxa de respostageral no estudo (incluindo pacientes tratados com ABX ououtros agentes quimioterápicos) (1/4, 25% vs. 42/54, 78%;p<0,05).
EXEMPLO 6
Este exemplo ilustra a internalização de albuminamarcada em células tumorais MX-I e a co-localização dentroda célula MX-1 com a expressão intracelular de SPARC.
As células MX-1 foram cultivadas em uma lamínula epermeabilizadas com agentes adequados. Células foramexpostas à albumina fluorescente e a lavagem seguinte foiexposta ao anticorpo SPARC. Isto foi seguido pela exposiçãoa anticorpos secundários possuindo uma etiquetafluorescente diferente do que albumina. Foisurpreendentemente observado que a albumina marcada co- localizada com a presença de SPARC dentro da célulaindicando que a albumina foi rapidamente internalizada ealvejou SPARC intracelular.
EXEMPLO 7
Este exemplo demonstra um aumento na transcitose endotelial via gp60 (receptor de albumina) de composiçõesfarmacêuticas compreendendo paclitaxel e albumina quandocomparado ao Taxol.
Células endoteliais de microvasos de pulmão humano(HLMVEC) foram crescidas em confluência em um "transwell". A composição farmacêutica inventiva compreendendopaclitaxel e albumina, ou Taxol compreendendo paclitaxelfluorescente (Flutax) a uma concentração de 20 pg/mL, foiadicionada à câmara superior do "transwell".
O transporte de paclitaxel por transcitose a partir da câmara superior para a câmara inferior foi monitoradacontinuamente usando um fluorômetro. Um controle contendosomente Flutax sem albumina também foi usado. O controlecom Flutax mostrou nenhum transporte, validando aintegridade da monocamada HMLVEC confluente. O transporte de paclitaxel da composição de albumina-paclitaxel foimuito mais rápido do que de paclitaxel de Taxol na presençade 5% de HSA (concentração fisiológica) . As constantes detaxa de transporte (Kt) para a composição albumina-paclitaxel e Taxol foram 1,396 h-1 e 0,03 h-1, respectivamente. A quantidade total de paclitaxeltransportado através da monocamada foi três vezes maisrápida para a composição de albumina-paclitaxel do que paraTaxol. Portanto, o uso de albumina ou outro miméticoadequado incluindo anticorpos ou fragmentos contra o5 receptor gp60 ou outro receptor celular endotelial podeajudar no transporte de um agente terapêutico desejadoatravés da barreira endotelial para dentro do interstíciotumoral.
EXEMPLO 8
Este exemplo demonstra a ligação específica deanticorpo anti-SPARC ao SPARC.
Extrato total de célula foi preparado a partir decélulas HUVEC por ultra-som. A proteína foi separada em ums5-15% SDS-PAGE, transferida sobre membrana PVDF evisualizada com um anticorpo policlonal contra SPARC e umanticorpo monoclonal contra SPARC. Ambos os anticorposreagiram para uma banda única a 3 8 kDa, o peso molecularcorreto para SPARC. Quando MX-I foi analisado pelo mesmométodo, SPARC foi detectado em ambos os lisados celularesclarificados ou em membrana rica em fração de membrana.
EXEMPLO 9
Este exemplo demonstra a ausência da expressão deSPARC em tecidos normais.
Tecidos normais de humanos e de camundongos foramimunocoloridos e pontuados (0-4) para coloração SPARCusando uma base de dados de tecido tumoral e normal. Aimunocoloração foi realizada usando anticorpo policlonal decoelho anti-SPARC. SPARC não foi expresso em nenhum dostecidos normais, com a exceção do esôfago. Da mesma forma,
SPARC não foi expresso em nenhum dos tecidos normais decamundongo, com a exceção do rim do camundongo fêmea.Entretanto, é possível que esta expressão tenha sido devidoà folistatina a qual é homóloga ao SPARC.
Expressão de SPARC em Tecidos Normais Humanos
Estômago 0/8Cólon 0/9Reto 0/15Fígado 0/14Baço 0/10Pulmão 0/14Rim 1/14Cérebro 1/14Testículo 0/8Próstata 0/3Coração 0/9Amígdala 0/10Nódulos linfáticos 0/10Apêndice 0/10Esôfago 5/5Pâncreas 0/5Globo ocular 0/5Ovário 0/5
Tecidos Normais de Camundongo
Fígado 0/19
Rim (M) 0/8
Rim (F) 6/8
Pulmão 0/16
Músculo 0/20
Cérebro 0/20Tecidos Normais de CamundongoCoração 0/18
Estômago 0/20
Baço 0/20
EXEMPLO 10
Este exemplo demonstra a superioridade de Abraxane(nanopartículas de paclitaxel ligado à albumina, "ABX")para Taxotere (docetaxel formulado com Tween 80 e etanol"TAT") e que a resposta relativa para ABX correlacionapositivamente com a expressão de SPARC nos xenoenxertosHer2-positivos testados.
Um modelo de sistema de xenoenxerto tumoral de murinofoi usado para comparar a eficácia de ABX versus TAT emxenoenxertos Her2-negativos de linhagens celulares decarcinoma de mama humano MX-I e de carcinoma de pulmãohumano LX-I. No estudo MX-1, 8 animais foram usados em cadaum dos três grupos: TAT (uma vez por semana por trêssemanas, iv) a 15 mg/kg; ABX (uma vez por semana por trêssemanas, iv) a 15 mg/kg; e soro fisiológico (uma vez porsemana por três semanas, iv) . Cada peso e tamanho de tumordos animais foram obtidos semanalmente por três semanas. Noestudo LX-1, 8 animais foram usados em cada um dos trêsgrupos: TAT (uma vez a cada quatro dias por três ciclos,iv) a 15 mg/kg; ABX (uma vez a cada quatro dias por trêsciclos, iv) a 50 mg/kg ou 120 mg/kg, e soro fisiológico(uma vez a cada quatro dias por três ciclos, iv). Cada pesoe tamanho de tumor dos animais foram obtidos semanalmentepor três semanas.
Os status do xenoenxerto tumoral Her2 e de SPARC foramdeterminados por imunoistoquímica usando um anticorpomonoclonal anti-humano Her2 e um anticorpo policlonal anti-humano SPARC. As lâminas foram pontuadas usando uma escala0-4, 0 sendo negativo e 4 sendo positivo forte.
No estudo MX-1, ABX em uma dose equivalente foi maisefetivo do que TAT (p<0,0001, estatística ANOVA) (verFigura 5A) . Para as células LX-1, ABX foi mais efetivo doque TAT (15 mg/kg) em ambos os níveis de dose (p = 0,0001para ABX 50 mg/kg e p<0,0001 para ABX 120 mg/kg) (verFigura 6A) . Entretanto, a resposta ABX não correlacionoucom o nível de SPARC por imunoistoquímica (ver Figura 7).
Em um segundo estudo, um modelo de sistema de xenoenxertotumoral de murino foi usado para comparar a Eficácia de ABXversus TAT em três xenoenxertos Her2-positivos (HT29:linhagem celular de carcinoma de cólon humano, PC3:linhagem celular de carcinoma de próstata humano, MDA-MB-231: linhagem celular de carcinoma de mama humano). Trintae dois camundongos foram usados para cada xenoenxerto comoito animais tratados com TAT (uma vez a cada quatro diaspor três ciclos, iv) a 15 mg/kg, oito animais tratados comABX (uma vez a cada quatro dias por três ciclos, iv) a 50mg/kg, oito animais tratados com ABX (uma vez a cada quatrodias por três ciclos, iv) a 120 mg/kg, e oito animaiscontrole tratados com soro fisiológico (uma vez a cadaquatro dias por três ciclos, iv) . Cada peso e tamanho detumor dos animais foram obtidos para cada uma das trêssemanas.
Os status do xenoenxerto tumoral Her2 e de SPARC foramdeterminados por imunoistoquímica usando um anticorpomonoclonal anti-humano Her2 e um anticorpo policlonal anti-humano SPARC. As lâminas foram pontuadas usando uma escala0-4, 0 sendo negativo e 4 sendo positivo forte.
No xenoenxerto HT29, ABX foi mais efetivo do que TAT(15 mg/kg) a 50 mg/kg (p<0,0001), mas, igualmente efetivoquanto TAT 15 mg/kg) a 120 mg/kg (p=ns) (Figura 9A) e menostóxico (menos perda de peso, Figura 9B) . Finalmente, com oxenoenxerto MDA-MB-231, ABX foi menos efetivo do que TAT(15 mg/kg) em ambos os níveis de dose (p<0,0001 e p<0,0001)(ver Figura 10A).
Os status Her2 e SPARC dos cinco tipos de tumor sãomostrados na Figura 7A e a eficácia relativa de ABX versusTAT é mostrada na Figura 7B. A eficácia relativa (TATvolume do tumor/ABX volume do tumor) foi calculada usandoTAT 15 mg/kg e ABX 12 0 mg/kg, (exceto para MX-I onde aeficácia relativa do tumor foi calculada usando TAT 15 mg/kg e ABX 15 mg/kg). Nos xenoenxertos Her2-positivos(HT29, PC3, e MDA-MB-231), a eficácia relativa de ABX paraTAT aumentou com o aumento da expressão de SPARC (verFigura 7).
Portanto, este exemplo mostra que, no modelo desistema usado, em quatro dos cinco xenoenxertos de tumortestados, ABX foi mais efetivo ou igualmente efetivocomparado ao TAT e que, nos xenoenxertos Her2-positivostestados, a eficácia relativa de ABX para TAT épositivamente correlacionada com a expressão de SPARC.
Todas as referências, incluindo publicações, pedidosde patentes, e patentes citadas aqui são por meio desteincorporadas por referência para a mesma extensão que secada referência fosse individualmente e especificamenteindicada para ser incorporada por referência e foramexpostas em sua totalidade aqui.O uso dos termos "um" e "uma" e "o" e similar referentes nocontexto da invenção descrita (especialmente no contextodas seguintes reivindicações) são para serem interpretadospara cobrir ambos o singular e o plural, a menos que deoutra forma indicado aqui ou claramente contradito pelocontexto. Os termos "compreendendo", "tendo", "incluindo",e "contendo" são para serem interpretados como termos nãolimitados (isto é, significando "incluindo, mas nãolimitado a,") a menos que de outra forma apontado. Aexposição das escalas de valores aqui tem meramente aintenção de servir como um método estenográfico sereferindo individualmente a cada valor separado caindodentro de uma escala, a menos que de outra forma indicadoaqui, e cada valor separado é incorporado dentro daespecificação como se fosse individualmente recitado aqui.Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados emqualquer ordem adequada a menos que de outra forma indicadoaqui ou de outra forma claramente contradito pelo contexto.O uso de qualquer um e todos os exemplos, ou linguagemexemplar (por exemplo, "tal como") fornecido aqui, tem aintenção meramente de iluminar melhor a invenção e nãocoloca em posição uma limitação no escopo da invenção amenos que de outra forma reivindicado.
Nenhuma linguagem na especificação deve serinterpretada como indicando qualquer elemento nãoreivindicado como essencial ã prática da invenção.
Modalidades preferidas dessa invenção são descritasaqui, incluindo o melhor modo conhecido pelos inventorespara realizar a invenção. Variações dessas modalidadespreferidas podem se tornar aparentes para aqueles comumentehabilitados na técnica ao ler a descrição precedente. Osinventores esperam que artesãos habilitados empreguem taisvariações como apropriado, e os inventores têm a intençãode que a invenção seja praticada a menos queespecificamente descrito aqui. Conseqüentemente, estainvenção inclui todas as modificações e equivalentes doassunto relatado nas reivindicações anexadas aqui comopermitidas pela lei aplicável. Além disso, qualquercombinação dós elementos descritos acima em todas asvariações possíveis dos mesmos está abrangida pela invençãoa menos que de outra forma indicado aqui ou de outra formaclaramente contradito pelo contexto.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA
<110> TRIEU, Vuong
DESAI, Neil P.SOON-SHIONG, Patrick<120 > PROTEÍNA PSARC ("SPARC" ) E MÉTODOS DE USO DA MESMA<13 0> 257260<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210 > 1
<211> 303
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu1 5 10 15
Ala Ala Pro Gln Gln Glu Ala Leu Pro Asp Glu Thr Glu Val Val Glu20 25 30
Glu Thr Val Ala Glu Val Thr Glu Val Ser Val Gly Ala Asn Pro Val35 40 45
Gln Val Glu Val Gly Glu Phe Asp Asp Gly Ala Glu Glu Thr Glu Glu50 55 60
Glu Val Val Ala Glu Asn Pro Cys Gln Asn His His Cys Lys His Gly65 70 75 80
Lys Val Cys Glu Leu Asp Glu Asn Asn Thr Pro Met Cys Val Cys Gln85 90 95
Asp Pro Thr Ser Cys Pro Ala Pro Ile Gly Glu Phe Glu Lys Val Cys100 105 110
Ser Asn Asp Asn Lys Thr Phe Asp Ser Ser Cys His Phe Phe Ala Thr115 120 125
Lys Cys Thr Leu Glu Gly Thr Lys Lys Gly His Lys Leu His Leu Asp130 135 140
Tyr Ile Gly Pro Cys Lys Tyr Ile Pro Pro Cys Leu Asp Ser Glu Leu145 150 155 160
Thr Glu Phe Pro Leu Arg Met Arg Asp Trp Leu Lys Asn Val Leu Val165 170 175Thr Leu Tyr Glu Arg Asp Glu Asp Asn Asn Leu Leu Thr Glu Lys Gln180 185 190
Lys Leu Arg Val Lys Lys Ile His Glu Asn Glu Lys Arg Leu Glu Ala195 200 205
Gly Asp His Pro Val Glu Leu Leu Ala Arg Asp Phe Glu Lys Asn Tyr210 215 220
Asn Met Tyr Ile Phe Pro Val His Trp Gln Phe Gly Gln Leu Asp Gln225 230 235 240
His Pro Ile Asp Gly Tyr Leu Ser His Thr Glu Leu Ala Pro Leu Arg245 250 255
Ala Pro Leu Ile Pro Met Glu His Cys Thr Thr Arg Phe Phe Glu Thr260 265 270
Cys Asp Leu Asp Asn Asp Lys Tyr Ile Ala Leu Asp Glu Trp Ala Gly275 280 285
Cys Phe Gly Ile Lys Gln Lys Asp Ile Asp Lys Asp Leu Val Ile290 295 300
<210> 2
<211> 3178
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
gttgcctgtc tctaaacccc tccacattcc cgcggtcctt cagactgccc ggagagcgcg 60
ctctgcctgc cgcctgcctg cctgccactg agggttccca gcaccatgag ggcctggatc 120
ttctttctcc tttgcctggc cgggagggcc ttggcagccc ctcagcaaga agccctgcct 180
gatgagacag aggtggtgga agaaactgtg gcagaggtga ctgaggtatc tgtgggagct 240
aatcctgtcc aggtggaagt aggagaattt gatgatggtg cagaggaaac cgaagaggag 300
gtggtggcgg aaaatccctg ccagaaccac cactgcaaac acggcaaggt gtgcgagctg 360
gatgagaaca acacccccat gtgcgtgtgc caggacccca ccagctgccc agcccccatt 420
ggcgagtttg agaaggtgtg cagcaatgac aacaagacct tcgactcttc ctgccacttc 480
tttgccacaa agtgcaccct ggagggcacc aagaagggcc acaagctcca cctggactac 540
atcgggcctt gcaaatacat ccccccttgc ctggactctg agctgaccga attccccctg 600
cgcatgcggg actggctcaa gaacgtcctg gtcaccctgt atgagaggga tgaggacaac 660
aaccttctga ctgagaagca gaagctgcgg gtgaagaaga tccatgagaa tgagaagcgc 720ctggaggcag gagaccaccc cgtggagctg ctggcccggg acttcgagaa gaactataac 780
atgtacatct tccctgtaca ctggcagttc ggccagctgg accagcaccc cattgacggg 840
tacctctccc acaccgagct ggctccactg cgtgctcccc tcatccccat ggagcattgc 900
accacccgct ttttcgagac ctgtgacctg gacaatgaca agtacatcgc cctggatgag 960
tgggccggct gcttcggcat caagcagaag gatatcgaca aggatcttgt gatctaaatc 1020
cactccttcc acagtaccgg attctctctt taaccctccc cttcgtgttt cccccaatgt 1080
ttaaaatgtt tggatggttt gttgttctgc ctggagacaa ggtgctaaca tagatttaag 1140
tgaatacatt aacggtgcta aaaatgaaaa ttctaaccca agacatgaca ttcttagctg 1200
taacttaact attaaggcct tttccacacg cattaatagt cccatttttc tcttgccatt 1260
tgtagctttg cccattgtct tattggcaca tgggtggaca cggatctgct gggctctgcc 1320
ttaaacacac attgcagctt caacttttct ctttagtgtt ctgtttgaaa ctaatactta 1380
ccgagtcaga ctttgtgttc atttcatttc agggtcttgg ctgcctgtgg gcttccccag 1440
gtggcctgga ggtgggcaaa gggaagtaac agacacacga tgttgtcaag gatggttttg 1500
ggactagagg ctcagtggtg ggagagatcc ctgcagaacc caccaaccag aacgtggttt 1560
gcctgaggct gtaactgaga gaaagattct ggggctgtgt tatgaaaata tagacattct 1620
cacataagcc cagttcatca ccatttcctc ctttaccttt cagtgcagtt tcttttcaca 1680
ttaggctgtt ggttcaaact tttgggagca cggactgtca gttctctggg aagtggtcag 1740
cgcatcctgc agggcttctc ctcctctgtc ttttggagaa ccagggctct tctcaggggc 1800
tctagggact gccaggctgt ttcagccagg aaggccaaaa tcaagagtga gatgtagaaa 1860
gttgtaaaat agaaaaagtg gagttggtga atcggttgtt ctttcctcac atttggatga 1920
ttgtcataag gtttttagca tgttcctcct tttcttcacc ctcccctttt ttcttctatt 1980
aatcaagaga aacttcaaag ttaatgggat ggtcggatct cacaggctga gaactcgttc 2040
acctccaagc atttcatgaa aaagctgctt cttattaatc atacaaactc tcaccatgat 2100
gtgaagagtt tcacaaatcc ttcaaaataa aaagtaatga cttagaaact gccttcctgg 2160
gtgatttgca tgtgtcttag tcttagtcac cttattatcc tgacacaaaa acacatgagc 2220
atacatgtct acacatgact acacaaatgc aaacctttgc aaacacatta tgcttttgca 2280
cacacacacc tgtacacaca caccggcatg tttatacaca gggagtgtat ggttcctgta 2340
agcactaagt tagctgtttt catttaatga cctgtggttt aacccttttg atcactacca 2400
ccattatcag caccagactg agcagctata tccttttatt aatcatggtc attcattcat 2460
tcattcattc acaaaatatt tatgatgtat ttactctgca ccaggtccca tgccaagcac 2520tggggacaca gttatggcaa agtagacaaa gcatttgttc atttggagct tagagtccag 2580
gaggaataca ttagataatg acacaatcaa atataaattg caagatgtca caggtgtgat 2640
gaagggagag taggagagac catgagtatg tgtaacagga ggacacagca ttattctagt 2700
gctgtactgt tccgtacggc agccactacc cacatgtaac tttttaagat ttaaatttaa 2760
attagttaac attcaaaacg cagctcccca atcacactag caacatttca agtgcttgag 2820
agccatgcat gattagtggt taccctattg aataggtcag aagtagaatc ttttcatcat 2880
cacagaaagt tctattggac agtgctcttc tagatcatca taagactaca gagcactttt 2940
caaagctcat gcatgttcat catgttagtg tcgtattttg agctggggtt ttgagactcc 3000
ccttagagat agagaaacag acccaagaaa tgtgctcaat tgcaatgggc cacataccta 3060
gatctccaga tgtcatttcc cctctcttat tttaagttat gttaagatta ctaaaacaat 3120
aaaagctcct aaaaaatcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3178

Claims (20)

1. Método para tratar um tumor em um mamífero com umagente quimioterápico ou outro agente anti-câncercaracterizado pelo fato de compreender: (a) isolar umaamostra biológica do mamífero, (b) detectar a expressão deRNA ou proteína SPARC na amostra biológica, (c) quantificara quantidade de RNA ou proteína SPARC na amostra biológica,(d) determinar se o RNA ou proteína SPARC está presente emum nível que indica o uso de um agente quimioterápico ououtro agente anti-câncer, e (e) administrar uma quantidadeterapeuticamente eficaz do agente quimioterápico ou outroagente anti-câncer.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de ainda compreender a detecção daexpressão de RNA ou proteína Her2 na amostra biológica,quantificar a quantidade de RNA ou proteína Her2 na amostrabiológica, determinar se o RNA ou proteína Her2 estápresente em um nível que indica o uso de um agentequimioterápico ou outro agente anti-câncer, e administraruma quantidade terapeuticamente eficaz do agentequimioterápico ou outro agente anti-câncer.
3. Método, de acordo com as reivindicações 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que o agente quimioterápico ouanti-câncer é selecionado do grupo consistindo dedocetaxel, paclitaxel, taxanos, compostos de platina, anti-folatos, anti-metabólitos, anti-mitóticos, agentes de danoao DNA, proapoptóticos, agentes de indução dediferenciação, agentes anti-angiogênicos, antibióticos,hormônios, peptídeos, anticorpos, e combinações dos mesmos.
4. Método, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 1 ,2 ou 3, caracterizado pelo fato de que oagente quimioterápico compreende partículas do fármacoligadas à proteína.
5. Método, de acordo com a reivindicação 4,caracterizado pelo fato de que o componente de proteína daspartículas de fármaco ligadas à proteína compreendealbumina.
6. Método, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que oagente quimioterápico compreende partículas de paclitaxelligado à albumina.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que mais do que 50% do agentequimioterápico está sob a forma de nanopartícula.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7,caracterizado pelo fato de que a dose de paclitaxel é decerca de 30 mg/m2 até cerca de 1000 mg/m2 com um ciclo dedose de cerca de três semanas.
9. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o mamífero é um humano.
10. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o tumor é um carcinoma demama, ovário, cabeça e pescoço, cólon, próstata, bexiga ourim.
11. Método, de acordo com a reivindicação 7,caracterizado pelo fato de que o mamífero é um humano.
12. Método, de acordo com a reivindicação 7,caracterizado pelo fato de que o tumor é um carcinoma demama, ovário, cabeça e pescoço, cólon, próstata, bexiga ourim.
13. Kit para predizer a resposta de um tumor de ummamífero a um agente quimioterápico ou outro agente anti-câncer caracterizado pelo fato de compreender um meio parao isolamento de proteína do tumor, um meio para detecção equantificação de proteína SPARC, proteínas de controle, eregras para predizer a resposta do tumor.
14. Kit, de acordo com a reivindicação 13,caracterizado pelo fato de ainda compreender um meio paradeterminar o status Her2 do tumor.
15. Kit, de acordo com a reivindicação 13,caracterizado pelo fato de que o agente quimioterápicocompreende partículas de fármaco ligadas à albumina e maisdo que 50% do agente quimioterápico está sob a forma denanopartículas.
16. Kit, de acordo com a reivindicação 15,caracterizado pelo fato de que o fármaco ligado à albuminaé paclitaxel.
17. Kit para predizer a resposta de um tumor de ummamífero a um agente quimioterápico ou outro agente anti-câncer caracterizado pelo fato de compreender um meio parao isolamento de RNA do tumor, um meio para detecção equantificação de RNA SPARC, RNAs de controle, e regras parapredizer a resposta do tumor baseado no nível de RNA SPARCno tumor.
18. Kit, de acordo com a reivindicação 17,caracterizado pelo fato de ainda compreender um meio paradeterminar o status Her2 do tumor.
19. Kit, de acordo com a reivindicação 17,caracterizado pelo fato de que o agente quimioterápicocompreende partículas de fármaco ligadas à albumina e maisdo que 50% do agente quimioterápico está sob a forma denanopartículas.
20. Kit, de acordo com a reivindicação 19,caracterizado pelo fato de que o fármaco ligado à albuminaé paclitaxel.
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006249235B2 (en) 2004-05-14 2010-11-11 Abraxis Bioscience, Llc Sparc and methods of use thereof
NZ623273A (en) 2008-12-05 2015-09-25 Abraxis Bioscience Llc Sparc binding scfvs
CA2960887C (en) 2009-05-28 2018-09-04 Abraxis Bioscience, Llc Use of 2 anti-sparc antibodies to predict response to chemotherapy
AU2010295324B2 (en) * 2009-09-18 2015-04-30 Abraxis Bioscience, Llc Use of the SPARC microenvironment signature in the treatment of cancer
CA2785469C (en) * 2009-12-22 2019-07-23 Expression Pathology, Inc. Secreted protein acidic and rich in cysteine (sparc) protein srm/mrm assay
CA2792667A1 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 Abraxis Bioscience, Llc Sparc angiogenic domain and methods of use
CA2794147A1 (en) 2010-03-29 2011-10-06 Abraxis Bioscience, Llc Use of a composition comprising nanoparticles comprising a taxane and an albumin to improve uptake of chemotherapeutics by tumors and for treating a cancer that is highly fibrotic and/or has a dense stroma
MX364637B (es) 2010-03-29 2019-05-03 Abraxis Bioscience Llc Star Platino y nanopartículas que incluyen placlitaxel/albúmina para usarse en el trartamiento de nsclc.
NZ604029A (en) * 2010-06-02 2015-07-31 Abraxis Bioscience Llc Methods of treating bladder cancer
KR20130086546A (ko) * 2010-06-03 2013-08-02 아브락시스 바이오사이언스, 엘엘씨 암 치료에 있어 ｓｐａｒｃ 미세환경 시그니처의 용도
AU2011261270A1 (en) * 2010-06-03 2012-12-13 Abraxis Bioscience, Llc Peripheral blood SPARC antibodies and uses thereof
RU2016103126A (ru) * 2010-06-07 2018-11-22 АБРАКСИС БАЙОСАЙЕНС, ЭлЭлСи Способы комбинированной терапии для лечения пролиферативных заболеваний
WO2012051220A1 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Wichita State University Composite magnetic nanoparticle drug delivery system
KR20200051841A (ko) 2011-04-28 2020-05-13 아브락시스 바이오사이언스, 엘엘씨 나노입자 조성물의 혈관내 전달 및 그의 용도
JP6042527B2 (ja) 2012-04-04 2016-12-14 ハロザイム インコーポレイテッド 抗ヒアルロナン剤と腫瘍標的タキサンの組み合わせ治療
US20170000899A1 (en) * 2013-11-26 2017-01-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor-targeted nanoparticles for enhanced transcytosis mediated drug delivery
US10527604B1 (en) 2015-03-05 2020-01-07 Abraxis Bioscience, Llc Methods of assessing suitability of use of pharmaceutical compositions of albumin and paclitaxel
GB201721308D0 (en) * 2017-12-19 2018-01-31 Nordic Bioscience As SPARC assay
US20190356621A1 (en) * 2018-05-17 2019-11-21 Koninklijke Philips N.V. Adapting silence periods for digital messaging

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4968603A (en) 1986-12-31 1990-11-06 The Regents Of The University Of California Determination of status in neoplastic disease
IL108497A0 (en) 1993-02-01 1994-05-30 Seq Ltd Methods and apparatus for dna sequencing
US5439686A (en) 1993-02-22 1995-08-08 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods for in vivo delivery of substantially water insoluble pharmacologically active agents and compositions useful therefor
US6537579B1 (en) * 1993-02-22 2003-03-25 American Bioscience, Inc. Compositions and methods for administration of pharmacologically active compounds
US6749868B1 (en) 1993-02-22 2004-06-15 American Bioscience, Inc. Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
US6096331A (en) 1993-02-22 2000-08-01 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions useful for administration of chemotherapeutic agents
US5738852A (en) 1993-04-20 1998-04-14 Solis Therapeutics, Inc. Methods of enhancing antigen-specific T cell responses
US5945515A (en) * 1995-07-31 1999-08-31 Chomczynski; Piotr Product and process for isolating DNA, RNA and proteins
HUP9900017A3 (en) 1995-09-21 2001-08-28 Andaris Ltd Ruddington Transcytosis vehicles and enhancers for drug delivery
AU5333298A (en) 1996-12-27 1998-07-31 Instituto De Investigaciones Bioquimicas Fundacion Campomar Compositions and methods for tumour therapy
US6187307B1 (en) 1997-01-31 2001-02-13 Research Corporation Technologies, Inc. Cancer immunotherapy with semi-allogeneic cells
DE19740571C1 (de) 1997-09-15 1999-03-18 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Stimulation von T-Zellen mit gewünschter Antigenspezifität
WO2000006152A1 (en) 1998-07-30 2000-02-10 Novopharm Biotech, Inc. Pharmaceutically acceptable composition comprising an aqueous solution of paclitaxel and albumin
US6316193B1 (en) 1998-10-06 2001-11-13 Origene Technologies, Inc. Rapid-screen cDNA library panels
US20040018188A9 (en) * 1999-01-20 2004-01-29 Incyte Genomics, Inc. Sparc-related proteins
US20020015950A1 (en) 1999-07-07 2002-02-07 Karen Anne Jones Atherosclerosis-associated genes
US6387664B1 (en) 1999-02-26 2002-05-14 Secretary Of Agency Of Industrial Science And Technology Sparc fusion protein and method for producing the same
EP1182929A4 (en) 1999-05-28 2003-04-16 Univ Virginia TOXIC GENE THERAPY BASED ON OSTEONECTIN FOR TREATING CALCIFIED TUMORS AND TISSUES
WO2001020989A1 (en) 1999-09-22 2001-03-29 Mayo Foundation For Medical Education And Research Therapeutic methods and compositions using viruses of the recombinant paramyxoviridae family
BR0014491A (pt) 1999-10-04 2004-03-09 Vion Pharmaceuticals Inc Bactérias atenuadas marcadas para tumor, composição farmacêutica, uso de bactérias atenuadas, e, proteina de fusão
US6962696B1 (en) 1999-10-04 2005-11-08 Vion Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for tumor-targeted delivery of effector molecules
JP2003530893A (ja) 2000-04-25 2003-10-21 ディーエヌエー サイエンシーズ インコーポレーテッド ポリメラーゼのプルーフリーディング活性によるヌクレオチド配列変異の検出
ITMI20001107A1 (it) 2000-05-18 2001-11-18 Acs Dobfar Spa Metodo per il trattamento di tumori solici mediante microparticelle di albumina incorporanti paclitaxel
WO2002002771A2 (en) 2000-07-05 2002-01-10 Eli Lilly And Company Human sparc-homologous (hsparc-h1) gene and methods and uses thereof
WO2004005883A2 (en) 2002-07-02 2004-01-15 The Johns Hopkins University Secreted and cytoplasmic tumor endothelial markers
EP1572934A4 (en) 2002-02-21 2007-12-19 Wyeth Corp FOLLISTATIN DOMAIN CONTAINING PROTEINS
US20050272052A1 (en) 2002-04-09 2005-12-08 Affymetrix, Inc. Molecular genetic profiling of gleason grades 3 and 4/5 prostate cancer
EP2561887B8 (en) 2003-01-14 2016-12-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cancer therapy sensitizer
EP2060918A3 (en) * 2003-04-01 2009-08-26 The Johns Hopkins University Breast endothelial cell expression patterns
JP2007507222A (ja) * 2003-05-28 2007-03-29 ゲノミック ヘルス， インコーポレイテッド 化学療法に対する応答を予測するための遺伝子発現マーカー
FR2857675B1 (fr) * 2003-07-18 2006-01-13 Staubli Sa Ets Cadre lisses et metier a tisser pourvu d'au moins un tel cadre
US7700280B2 (en) 2003-12-31 2010-04-20 The Penn State Research Foundation Methods for assessing cisplatin resistance, disease progression, and treatment efficacy in ovarian cancer
AU2006249235B2 (en) * 2004-05-14 2010-11-11 Abraxis Bioscience, Llc Sparc and methods of use thereof
EP1755653B1 (en) * 2004-05-14 2014-12-31 Abraxis BioScience, LLC Treatment methods utilizing albumin-binding proteins as targets
US8420603B2 (en) * 2004-05-14 2013-04-16 Abraxis Bioscience, Llc SPARC and methods of use thereof

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