BRPI0618214A2 - inibição de rnai de replicação do influenza vìrus - Google Patents

Abstract

<B>INIBIçãO DE RNAi DE REPLICAçãO DO INFLUENZA VìRUS<D>A presente invenção refere-se às composições e métodos paramodular a expressão de genes virais da influenza, e mais particularmente à sub-regulaçáo de genes virais da influenza por oligonucleotídeos quimicamente modificados

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIÇÃO DERNAi DE REPLICAÇÃO DO INFLUENZA VÍRUS".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica prioridade para o Pedido U.S. n9 de série60/732.243, depositado em 1 de novembro de 2005; n9 de serie 60/748.317,depositado em 07 de dezembro de 2005; e ns de série 60/799.000, deposi-tado em 09 de maio de 2006. Os teores de cada destes pedidos são pelopresente incorporados por referência em sua totalidade.

CAMPO TÉCNICO

A presente invenção refere-se ao campo da terapia viral de in-fluenza e composições e métodos para modular a replicação viral, e maisparticularmente à sub-regulação de um gene(s) de um vírus influenza poroligonucleotídeos por meio da interferência de RNA que são administradoslocalmente aos pulmões e passagem nasal por meio de administração porinalação /intranasal, ou são administrados sistemicamente, por exemplo, pormeio de injeção intravenosa.

ANTECEDENTES

Interferência de RNA ou "RNAi" é um termo inicialmente adotadopor Fire e co-trabalhdores para descrever a observação de que RNA de fila-mento duplo (dsRNA) pode bloquear a expressão de gene quando ela é in-troduzida em vermes (Fire e outros, Nature 391:806-811, 1998). dsRNA cur-to controla o silenciamento pós-transcricional, específico do gene em muitosorganismos, incluindo vertebrados, e forneceu uma nova ferramenta paraestudar a função do gene. Esta tecnologia foi revista numerosas vezes re-centemente, vide, por exemplo Novina, CD:, e Sharp, P., Nature 2004,430:161, e Sandy, P., e outros, Biotechniques 2005, 39:215, pelo presenteincorporado por referência.

O Influenza é uma das infecções mais amplamente dissemina-das em todo o mundo. Ela pode ser extremamente: uma estimativa de 20 a40 milhões de pessoas mortas durante o ano de 1918 pelo vírus da InfluenzaA pandêmica. Nos Estados Unidos entre 20 e 40 mil pessoas morrem deinfecção pelo vírus influenza A ou suas complicações a cada ano. Duranteepidemias o número de hospitalizações relacionadas com o influenza podeatingir acima de 300.000 em uma única estação de inverno.

Diversas propriedades contribuem para o sucesso epidemiológi-co do vírus influenza. Primeiro, ele é disseminado facilmente de pessoa parapessoa por aerossol (infecção por gotícula). Segundo, pequenas mutaçõesem antígenos do vírus da influenza são freqüentes (desvio antigênio) de mo-do que o vírus facilmente da imunidade protetora induzida por uma exposi-ção anterior para uma variante diferente do vírus. Terceiro, novas cepas dovírus da influenza podem ser facilmente geradas por reagrupamento ou mis-tura de material genético entre diferentes cepas (modificação antigênica). Nocaso de vírus da Influenza A, tal mistura pode ocorrer entre subtipos ou ce-pas que afetam diferentes espécies. A pandemia de 1918 é suposta ter sidocausada por uma cepa híbrida de vírus derivado de reagrupamento entre umvírus da Influenza A suíno e um ser humano. No momento, existe um concei-to de disseminação em torno da emergência potencial de novas cepas dainfluenza infecciosas para humanos, particularmente de variantes da influen-za aviária, e mais particularmente da cepa H5N1, misturando-se em sereshumanos concomitantemente expostos ao vírus da influenza humana e aviá-ria. Tem peritos convencidos de que o contato íntimo entre pássaros agríco-las e seus criadores humanos familiares na maioria das sociedades asiáticasnão é uma dúvida de que seja porém o único quando uma tal cepa mistasurgirá. Um pandemia mundial poderia rapidamente resultar, com conse-qüência mesmo mais graves do que em 1918.

A despeito de esforços intensivos, não existe ainda terapia efi-caz para infecção pelo vírus da influenza e as vacinas existentes são de va-lor limitado em parte, por causa das propriedades de modificação e desvioantigênicos descritos acima. Por estas razões, vigilância global do vírus daInfluenza A foi posta em prática durante muitos anos, e o National Institutesof Health designa-o como um dos patógenos de prioridade para biodefesa.Embora vacinas atuais com base no vírus inativado são capazes de prevenirenfermidade em aproximadamente 70 a 80% de indivíduos sadios com me-nos de 65 anos de idade, esta percentagem é muito menor nos idosos ouimunocomprometidos. Além disso, o custo e potencial dos efeitos colateraisassociados com a administração de vacina torna este método menos ideal.Embora os fármacos antivirais atualmente aprovados nos Estados Unidospara tratamento e profilaxia de influenza sejam úteis, seu uso é limitado noque refere-se aos efeitos colaterais, submissão, e emergência possível decepas resistentes.

O Pedido de Patente U.S. 20040242518 e correspondente WO04/028471, ambos depositados em 29 de setembro de 2003, propõem umnúmero limitado de agentes RNAi para o tratamento de influenza. Sua eficá-cia em seres humanos não é descrita.

Portanto, nesse contexto permanece uma necessidade de de-senvolvimento de terapias eficazes para o tratamento e prevenção de infec-ção por influenza em seres humanos e animais, e particularmente para tera-pias com alta eficiência que permite o alvejamento de uma ampla faixa desubtipos de influenza. Um pré-requisito para alta eficiência é que o ingredi-ente ativo não é degradado rapidamente em um meio ambiente fisiológico.

SUMÁRIO

A presente invenção é baseada na demonstração in vitro e /7?vivo de que a infecção por vírus da influenza pode ser inibida através daadministração intranasal de agentes de iRNA, bem como por administraçãoparenteral de tais agentes e a identificação de agentes de iRNA potentes dogene MP, NP, PB1, PB2, ou PA de vírus da influenza que pode reduzir ní-veis de RNA de diversos subtipos de vírus da influença. Com base nestasdescobertas, a presente invenção fornece composições específicas e méto-dos que são úteis na redução dos níveis de mRNA de vírus da influenza,níveis de proteína de vírus da influenza e títulos virais de vírus da influenzaem um indivíduo, por exemplo, um mamífero, tal como um ser humano.

A presente invenção especificamente fornece agentes de iRNAconsistindo em, consistindo essencialmente em, ou compreendendo pelomenos 15 ou mais contíguos nucleotídeos de um dos genes de vírus da in-fluenza, particularmente os genes MP, NP, PB1, PB2 e PA de vírus da influ-enza, e mais particularmente agentes que compreendem 15 ou mais contí-guos nucleotídeos de uma das seqüências fornecidas nas Tabelas 1A-IH. Oagente iRNA preferivelmente compreende menos do que 30 nucleotídeospor filamento, por exemplo, 21-23 nucleotídeos, tais como aqueles forneci-dos nas Tabelas 1A- IH. O agente de iRNA de filamento duplo pode ou ter extremidades embotadas ou mais preferivelmente ter protuberâncias de 1-4nucleotídeos de uma ou abas as extremidades 3' do agente.

Além disso, o agente de iRNA pode ou conter apenas subunida-des de ribonucleotídeo de ocorrência natural, ou pode ser sintetizado a fimde conter uma ou mais modificações ao açúcar ou base de uma ou mais su- bunidades do ribonucleotídeo que é incluído no agente. O agente de iRNApode ser também modificado de modo a ser ligado a um Iigante que é sele-cionado para melhorar a estabilidade, distribuição ou captação celular doagente, por exemplo, colesterol. Os agentes de iRNA podem também ser emforma isolada ou podem ser parte de uma composição farmacêutica usada para os métodos descritos aqui, particularmente como uma composição for-mulada para a liberação para os pulmões ou passagem nasal ou formuladapaa administração parental. As composições farmacêuticas podem conterum ou mais agentes de iRNA, e em algumas modalidades, conterão dois ou.mais agentes de iRNA, cada um direcionado para um segmento diferente de um gene do vírus da influenza ou um gene do vírus da influenza diferente.

Um aspecto da presente invenção refere-se a um oligonucleotí-deo de filamento duplo compreendendo pelo menos uma nucleobase não-natural. Em certas modalidades, a nucleobase não-natural é difluorotolila,nitroindolila, nitropirrolila, ou nitroimidazolila. Em uma modalidade preferida, a nucleobase não-natural é difluorotolila. Em certas modalidades, apenas umdos filamentos de oligonucleotide compreendendo o oligonucleotídeo de fi-lamento duplo contém uma nucleobase não-natural. Em certas modalidades,ambos os filamentos de oligonucleotídeo compreendendo o oligonucleotídeode filamento duplo independentemente contêm uma nucleobase não-natural.

A presente invenção também fornece métodos para reduzir onível de RNA viral de vírus da influenza em uma célula. Tais métodos com-preendem a etapa e administrar um dos agentes de iRNAs da presente in-venção a um inivíduo como também descrito abaixo. Os presentes métodosutilizam os mecanismos celulares envolvidos em interferência de RNA paraseletivamente degradar o RNA viral em uma célula e são compreendidos daetapa de contatar uma célula com um dos agentes iRNA antiviral da presen-te invenção. Tais métodos podem ser realizados diretamente sobre uma cé-lula ou podem ser realizados em um indivíduo mamífero administrando a umindivíduo um dos agentes de iRNAs/composições farmacêuticas da presenteinvenção. Redução de RNA viral em uma célula resulta em uma redução naquantidade de proteína viral produzida, e em um organismo, resulta em umdecréscimo em replicação de título viral (como mostrado nos Exemplos).

Os métodos e composições da invenção, por exemplo, os méto-dos e composições de agente de iRNA podem ser usados com qualquer do-sagem e/ou formulação descrita aqui, bem como com qualquer rotina deadministration descrita aqui. Particularmente importante é a demonstraçãoaqui de administração intranasal de um agente de iRNA e sua capacidadede inibir a replicação viral em tecidos respiratórios.

Os detalhes de uma ou mais modalidades da invenção sãomencionados nos desenhos de acompanhamento e a descrição abaixo. Ou-tros aspectos, objetos e vantagens da invenção ficarão evidentes a partirdesta descrição, dos desenhos, e das reivindicações. Este pedido incorporatodas as referências citadas, patentes, e pedidos de patente por referênciasem sua totalidade para todos os propósitos.BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Figuras 1 A-11: As curvas de resposta de dose para a inibiçãode expressão de gene alvo para agentes de RNAi selecionados. O respecti-vo gene alvo foi recombinantemente clonado em células Cos-7 em um plas-mídeo resultando em expressão de um mRNA codificando o gene alvo eRenila luciferase, as células tratadas com o agente RNAi, e Renila Iuciferasefoi quantificada. As células foram tratadas com o agente de RNAi em con-centrações de 100 nM, 25 nM, 6,3 nM, 1,6 nM, 400 pM, 100 pM, 24 pM, 6pM, 1,5 pM, e 380 fM, e valores IC50 determinados por ajuste de curva pa-rametrizada utilizando o programa XLfít.DESCRIÇÃO DETALHADA

O termo "vírus da influenza" é utilizado aqui para referir-se aqualquer cepa de vírus da influenza que é capaz de causar doença em umindivíduo animal ou ser humano, ou que é um candidato interessante paraanálise experimental. As viroses de influenza são descritas em Fields, B., eoutro, Fields1 Virology, 4a ed. 2001, Lippincott Williams and Wilkins; Philadel-phia, ISBN: 0781718325. Em particular, o termo abrange qualquer cepa devírus da influenza A que é capaz de causar doença em um indivíduo animalou humano, ou que é um candidasto interessante para análise experimental.Um grande número de isolados de influenza A foi parcialmente ou comple-tamente seqüenciado. A Tabela 6 apresenta meramente uma lista parcial deseqüências completas para segmentos de genoma de influenza A que foramdepositados em uma base de dados pública (The influenza Sequence Data-base (ISD), vide Macken, C1 Lu, H., Goodman, J., & Boykin, L., "The value ofa database in surveillance and vaccine selection." in Options for the Controlof influenza IV. A. D. Μ. E. Osterhaus, N. Cox & A. W. Hampson (Eds.) 2001,Elsevier Science, Amsterdam, pp 103-106). Esta base de dados tambémcontém seqüências completas para segmentos de genoma de influenza B eC. A base de dados está disponível no World Wide Web e inclui uma má-quina de pesquisa conveniente que permite ao usuário pesquisar por seg-mento de genoma, por espécies infectadas pelo vírus, e por ano de isola-mento. As seqüências de influenza estão também disponíveis no Genbank.Seqüências de genes de influenza estão, portanto, facilmente disponíveispara, ou determináveis por, aqueles versados na técnica.

Para facilidade de exposição o termo "nucleotídeo" ou "ribonu-cleotídeo" é algumas vezes usado aqui em referência a uma ou mais subu-nidades monomélicas de um agente de RNA. Será entendido que o uso dotermo "ribonucleotídeo" ou "nucleotídeo" aqui pode, no caso de um RNAmodificado ou sub-rogado de nucleotídeo, também referir-se a um nucleotí-deo modificado, ou porção de substituição de sub-rogado, como tambémdescrito abaixo, em uma ou mais posições.

Um "agente de RNA" como aqui usado, é um RNA não modifi-cado, RNA modificado, ou nucleosídeo sub-rogado, cada dos quais é descri-to aqui ou é bem-conhecido na técnica sintética de RNA. Enquanto numero-sos RNAs modificados e sub-rogados de nucleosídeo são descritos, exem-plos preferidos incluem aqueles que têm maior resistência à degradação denuclease do que os RNAs não modificados. Exemplos preferidos incluemaqueles que têm uma modificação de açúcar 2', uma modificação em umaúnica protuberância de filamento, preferivelmente uma protuberância de fi-lamento único 3', ou, particularmente se uma modificação 5', de filamentoúnico, que inclui um ou mais grupos fosfato ou um ou mais análogos de umgrupo fosfato.

Um "agente iRNA" (abreviação para "agente de RNA de interfe-rência") como usado aqui, é um agente de RNA, que pode sub-regular a ex-pressão de um gene alvo, por exemplo, vírus da influenza. Ao mesmo tem-po que não desejando ser ligado pela teoria, um agente de iRNA pode agirpor um ou mais de diversos mecanismos, incluindo clivagem pós-transcricional de um mRNA alvo, algumas vezes referido na técnica comoRNAi, ou mecanismos pré-transcricionais ou pré-translacionais. Um agenteiRNA pode ser um agente de iRNA de filamento duplo.

Um "agente de ds iRNA" (abreviação para "agente de iRNA defilamento duplo "), como usado aqui, é um agente de iRNA que inclui maisdo que um, e preferivelmente dois, filamentos em que a hibridização interfi-lamento poe formar uma região de estrutura dúplex. Um "filamento" aqui re-fere-se a uma seqüência contígua de nucleotídeos (incluindo nucleotídeosde ocorrência não-natural ou modificados). Os dois ou mais filamentos po-dem ser, ou cada um formar uma parte de, moléculas separadas, ou elespodem ser covalentemente interconectados, por exemplo, por um elo, porexemplo, um elo de polietilenoglicol, para formar uma molécula. Pelo menosum filamento pode incluir uma região que é suficientemente complementar aum RNA alvo. Tal filamento é denominado o "filamento de anti-senso". Umsegundo filamento do agente de dsRNA, que compreende uma região com-plementar ao filamento anti-sentido, é denominado o "filamento de sentido".Entretanto, um agente de ds iRNA pode também ser formado de uma molé-cuia de RNA única, que é pelo menos parcialmente auto-complementar, for-mando, por exemplo, um estrutura de grampo de cabelo ou cabo de panela,incluindo uma região dúplex. As últimas são aqui referidas como RNAs oushRNAs grampo de cabelo curto. Em tal caso, o termo "filamento" refere-sea uma as regiões da molécula de RNA que é complementar à outra regiãoda mesma molécula de RNA.

Embora, em células mamíferas, agentes de ds iRNA longos po-dem induzir a resposta de interferon que é freqüentemente deletéria, agen-tes de ds iRNA curto não disparam a resposta de interferon, pelo menos nãoem uma extensão que é deletéria para a célula e/ou hospedeiro (Manche eoutro, Mol. Cell. Biol. 12:5238, 1992; Lee e outros, Virology 199:491, 1994;Castelli e outros, J. Exp. Med. 186:967, 1997; Zheng e outros, RNA 10:1934,2004; Heidel e outros, "Lack of interferon response in animais to naked SiR-NAs" Natwe Biotechn. advance online publication doi: 10.1038/nbtl038, 21 denovembro de 2004). Os agentes de iRNA da presente invenção inclue mo-léculas que são suficientemente curtas para que elas não disparem uma res-posta de interferon não-específica deletéria em células mamíferas normais.Desse modo, a administração de uma composição incluindo um agente deiRNA (por exemplo, formulado como aqui descrito) a um indivíduo, pode serusada para expressão diminuída dos genes do vírus da influenza em célulasexpressando o vírus da influenza no indivíduo, enquanto que envolvendouma resposta de interferon. Moléculas que são suficientemente curtas paraque não disparem uma resposta de interferon deletéria são denominadasagentes de siRNA ou siRNAs aqui. "Agente de siRNA" ou "siRNA" comoaqui usado, referem-se a um agente de iRNA, por exemplo, um agente de dsiRNA, que é suficientemente curto para que não induza uma resposta deinterferon deletéria em uma célula mamífera, e particularmente uma huma-na, por exemplo, ela tem uma região dupla de menos do que 60, porém pre-ferivelmente menos do que 50, 40, ou 30 pares de nucleotídeo.

Os agentes de iRNA isolado descritos aqui, incluindo agentes deds iRNA e agentes siRNA, podem mediar a expressão diminuída de um áci-do nucléico do vírus da influenza, por exemplo, por degradação de RNA. Porconveniência, tal RNA é também referido aqui como o RNA a ser silenciado.Um tal ácido nucléico é também referido como um gene alvo. Preferivelmen-te, o RNA a ser silenciado é um produto de gene de um gene de vírus dainfluenza que é parte de uma cepa do vírus da influenza que é patogênicapara seres humanos.

Como aqui usada, a frase "medeia RNAi" refere-se à capacidadede um agente silenciar, de uma maneira específia de seqüência, um genealvo. "Silenciar um gene alvo" significa o processo pelo qual uma célula con-tendo e/ou expressando um certo produto do gene alvo quando não em con-tato com o agente, conterá e/ou expressará pelo menos 10%, 20%, 30%,40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ou 90% menos de tal produto de gene quandocontatado com o agente, quando comparado a uma célula similar que não foicontatada com o agente. Tal produto do gene alvo pode, por example, serum RNA mensageiro (mRNA), uma proteína, ou um elemento regulador.

Como aqui usado, o termo "complementar" é usado para indicarum grau suficiente de complementaridade, tal que ligação estável e específi-ca ocorra entre um composto da invenção e uma molécula de RNA alvo, porexemplo, um mRNA do vírus da influenza. Ligação específica requer umgrau suficiente de complementaridade para evitar a ligação não-específicado composto oligomérico às seqüências não-alvo sob condições em que aligação específica é desejada, isto é, sob condições fisiológicas no caso deensaios in vivo ou tratamento terapêutico, ou no caso de ensaios in vitro, sobcondições em que os ensaios são realizados. As seqüências não alvo tipi-camente diferem das seqüências alvo em pelo menos 2, 3 ou 4 nucleotí-deos.

Como aqui usado, um agente de iRNA é "suficientemente com-plementar" a um alvo RNA, por exemplo, um mRNA alvo (por exemplo, ummRNA do vírus da influenza alvo) se o agente de iRNA reduzir a produçãode uma proteína codificada pelo RNA alvo em uma célula. O agente de iRNApode também ser "exatamente complementar" ao RNA alvo, por exemplo, oRNA alvo e o agente de iRNA recozido, preferivelmente para formar um hí-brido feito exclusivamente de pares de base Watson-Crick na região decomplementaridade exata. Um agente de iRNA "suficientemente comple-mentar" pode incluir uma região interna (por exemplo, de pelo menos 10 nu-cleotídeos) que é exatamente complementarr a um RNA do vírus da influen-za alvo. Além disso, em algumas modalidades, o agente de iRNA especifi-camente discrimina uma diferença de único-nucleotídeo. Neste caso, O a-gente de iRNA apenas medeia o RNAi se complementaridade exata é en-contrada na região (por exemplo, dentro de 7 nucleotídeos de) da diferençade nucleotídeo único. Agentes de iRNA preferidos serão baseados em ouconsistirão em, ou compreenderão as seqüências de sentido e anti-sentidofornecidas nas Tabelas IA-1H.

Como aqui usado, "essencialmente idêntica" quando usado refe-rindo-se a uma primeira seqüência de nucleotídeo em comparação com umasegunda de nucleotídeo significa que a primeira seqüência de nucleotídeo éidêntica à segunda seqüência de nucleotídeo, exceto para até uma, duas outrês substituições de nucleotídeo (por exemplo, adenosina substituída poruracila). "Essencialmente retendo a capacidade de inibir a expressão do ví-rus da influenza em células expressando o vírus da influenza humana culti-vada", como usado aqui referindo-se a um agente de iRNA não idêntico, po-rém derivado de um dos agentes de iRNAs das Tabelas 1A-1H por deleção,adição ou substituição de nucleotídeos, significa que o agente de iRNA deri-vado possui uma atividade inibitória não menor do que 20% da atividade ini-bitória do agente de iRNA das Tabelas 1A-1H da qual ele foi derivado. Porexemplo, um Um agente de iRNA derivado de um agente iRNA das Tabelas1A-1H que reduz a quantidade de mRNA do vírus da influenza presente emcélulas humanas cultivadas infectadas com o vírus da influenza em 70% po-de em si reduzir a quantidade de mRNA do vírus da influenza presente emcélulas humanas cultivadas infectadas com o vírus da influenza em pelo me-nos 50% a fim de ser consideradas como essencialmente mantendo a capa-cidade de inibir a replicação do vírus da influenza em células humanas culti-vadas infectadas com o vírus da influenza. Opcionalmente, um agente deiRNA da invenção pode reduzir a quantidade de mRNA do vírus da influenzapresente em células humanas cultivadas infectadas com o vírus da influenzaem pelo menos 50%.

Como aqui usado, um "indivíduo" refere-se a um organismomamífero que passa por tratamento ara um distúrbio mediado por infecçãocom um vírus da influenza. O indivíduo pode ser qualquer mamífero, tal co-mo uma vaca, cavalo, camundongo, rato, cão, porco, cabra, ou um primata.Na modalidade preferida, o indivíduo é um ser humano.Características Virais da Influenza

As viroses da influenza são viroses de RNA de filamento negati-vo, envelopadas, da família Orthomyxoviridae. Elas são classificadas comoinfluenza tipos A, B, e C, das quais a influenza A é a mais patogênica e éacreditada ser o único tipo capaz de sofrer reagrupamento com cepas ani-mais. A Influenza tipos A, B, e C podem ser distinguidas por diferenças emsuas nucleoproteínas e proteínas matriz. Como descrito também abaixo, ossubtipos da influenza A são definidos por variação em seus genes de hema-glutinina (HA) e neuraminidase (NA) e geralmente distingüidos por anticor-pos que ligam-se às correspondentes proteínas.

O gene viral da influenza A consiste em dez genes distribuídosem oito segmentos de RNA. Os genes codificam 10 proteínas: a hemagluti-nina de glicoproteínas envelope (HA) e neuraminidase (NA); proteína matrix(referida como M1 ou MP aqui); nucleoproteína (NP); três polimerases (PB1,PB2, e PA) que são componentes de uma transcriptase de RNA dependentede RNA também referida como uma polimerase ou complexo de polimeraseaqui; proteína de canal de íon (M2), e proteínas não-estruturais (NSI e NS2).Vide Julkunen, I., e outro, Cytokine and Growth Factor Reviews, 12: 171-180, 2001 para maiores detalhes considerando o vírus da Influenza A e suapatogênese molecular. Vide também Fields, B., e outro, Fields1 Virology,4.sup.th. ed., Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins; ISBN:0781718325, 2001. A organização do genoma viral da influenza B é extre-mamente similar àquela da influenza A visto que o genoma viral da influenzaC contém sete segmentos de RNA e não têm o gene de NA.

A classificação do vírus da Influenza A é baseada nos genes dahemaglutinina (H1 -H15) e neuraminidase (N1-N9). A nomenclatura da Wor-Id Health Organization (WHO) define cada cepa do vírus por seu hospedeiroanimal de origem (especificada a menos que ser humano), origem geográfi-ca, número de cepa, ano de isolamento, e descrição antigênica de HA e NA.Por exemplo, A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) designa a cepa A, isolado 8, surgiuem seres humanos em Porto Rico em 1934 e tem subtipos antigênicos 1 deHA e NA. Como outro exemplo, A/Frango/Hong Kong/258/97 (H5N1) desig-na a cepa A, isolado 258, que surgiu em frangos em Hong Kong em 1997 etem o subtipo antigênico 5 de HA e 1 de NA. As epidemias humanas foramcausadas por viroses com HA tipos Η1, H2, e H3 e NA tipos N1 e N2.

Como mencionado acima, variação genética ocorre por dois me-canismos primários em vírus da influenza A. Desvio antigênico ocorre pormeio de mutações de ponto, que freqüentemente ocorrem em posições anti-genicamente significantes evido à pressão seletiva de respostas imunes dehospedeiro, e modificação antigênica (também referida como reagrupamen-to), envolvendo substituição de um segmento de genoma viral total de umsubtipo por outro. Muitos diferentes tipos de espécies animais incluindo se-res humanos, suíno, pássaros, cavalos, mamíferos aquáticos, e outros, po-dem tornar-se infectados com as viroses da Influenza A. Algumas viroses daInfluenza A são restritas a uma espécie particular e não infectarão normal-mente uma espécie diferente. Entretanto, algumas viroses da Influenza Apodem infectar diversas diferentes espécies animais, principalmente pássa-ros (particularmente aves domésticas de água migratórias), suínos, e sereshumanos. Esta capacidade é considerada ser responsável pelas maioresmodificações antigênicas em vírus da Influenza A. Por exemplo, suponhaque um suíno torne-se infectado com um vírus da Influenza A de um ser hu-mano e ao mesmo tempo torne-se infectado com um vírus diferente da Influ-enza A de um pato. Quando as duas diferentes viroses reproduzem-se nascélulas suínas, os genes da cepa humana e da cepa de pato podem "mistu-ra-se", resultando em um novo vírus com uma única combinação de seg-mentos de RNA. Este processo é chamado de reagrupamento genético.(Observe que este tipo de reagrupamento genético é distinto do intercâmbiode informação genética que ocorre entre cromossomas durante meiose).Como outras viroses e certas espécies bacterianas, as virosesda influenza replicam-se intracelularmente. As viroses da Influenza A repli-cam-se em células epiteliais do trato respiratório superior. Entretanto, monó-citos/macrófagos e outras células brancas do sangue podem também ser infectadas. Numerosos outros tipos de célula com glicoproteínas da superfí-cie celular, contendo ácido siálico são suscetíveis à infecção in vitro, viscoque o vírus usa estas moléculas como um receptor.Designação e Seleção de agentes de iRNA

Como aqui usado, "distúrbios associados com a expressão de vírus da influenza" referem-se a qualquer estado biológico ou patológico que(1) é mediado pelo menos em parte pela presença de um vírus da influenzae (2) cujo resultado pode ser afetado pela redução do nível do vírus da influ-enza presente. Distúrbios específicos associados com a expressão do vírusda influenza são observados abaixo.

A presente invenção é baseada no projeto, síntese e geração deagentes de iRNA dos genes virais alvo de vírus da influenza, e a demonstra-ção de silenciamento de um gene viral in vitro em células cultivadas após aincubação com um agente de iRNA, e o efeito protetor resultante para a in-fecção viral.

Um agente de iRNA pode ser racionalmente designada com ba-se na informação de seqüência e características desejadas. Por exemplo,um agente de iRNA pode ser designado de acordo com a temperatura defusão relativa da dupla candidato. Geralmente, a dupla deve ter uma tempe-ratura e fusão menor na extremidade 5' do filamento anti-sentido do que na extremidade 3' do filamento anti-sentido.

A presente invenção fornece composições contendo siRNA(s)e/ou shRNA(s) alvejadas para uma ou mais transcrições do vírus da influen-za. Como a descrição do ciclo replicativo do vírus da influenza apresentadoacima demonstra, vários tipos de transcrições de RNA virais (vRNA primário e segundário, mRNA viral primário e secundário, e cRNA viral) estão presen-tes dentro das células infectadas com o vírus da influenza e desempenhamimportantes papéis no ciclo de vida viral. Qualquer destas transcrições sãoalvos apropriados para inibição mediada por siRNA por um mecanismo dire-to ou um indireto de acordo com as presente invenção. siRNAs e sliRNAsque alvejam qualquer transcrição de mRNA viral especificamente reduzirão onível da própria transcrição de uma maneira direta, isto é, causando a de-gradação da transcrição. Além disso, como descrito abaixo, siRNAs e shR-NAs que alvejam certas transcrições virais (por exemplo, MP, PA, PB1) indi-retamente causarão a redução nos níveis de transcrições virais para asquais eles não são especificamente alvejados. Em situações em que a uni-ão alternativa é possível, como para o mRNA que codifica MP e M2 e o mR-NA que codifica NSI e NS2, a transcrição desunida ou transcrição unida po-de servir como uma transcrição alvo.

As transcrições virais potenciais que podem servir como um alvopara RNAi com base em terapia de acordo com a presente invenção inclu-em, por exemplo, 1) qualquer segmento genômico do vírus influenza; 2)transcrições que codificam quaisquer proteínas virais incluindo transcriçõescodificando as proteínas PB1, PB2, PA, NP, NS1, NS2, MP, M2, HA, ou NA.Como será apreciado, transcrições podem ser alvejadas em sua(s) forma(s)de vRNA, cRNA, e/ou mRNA por um único siRNA ou shRNA. Entretanto,pode ser que o mRNA viral seja o único ou primário alvo de RNAi como su-gerido por Ge e outro, WO 04/028471.

Para qualquer alvo de gene particular que é selecionado, o pro-jeto de siRNAs ou shRNAs para uso de acordo com a presente invençãopreferivelmente seguirá ceras normas. Em geral, é desejável alvejar seqüên-cias que sejam específicas para o vírus (quando comparado com o hospe-deiro), e que, preferivelmente, sejam importantes ou essenciais para a fun-ção viral. Embora certos genes virais, particularmente aqueles codificandoHA e NA sejam caracterizados por uma taxa elevada de mutação e sejamcapazes de tolerar mutações, certas regiões e/ou seqüências tendem a serconservadas. De acordo com certas modalidades da invenção tais seqüên-cias podem ser alvos particularmente apropriados.

Como descrito também abaixo, tais regiões conservadas podemser identificadas, por exemplo, por meio de revisão da literatura e/ou compa-rações de seqüências de gene da influenza, um grande número das quaisestá publicamente disponível. Além disso, em muitos casos, o agente que éliberado para a célula de acordo com a presente invenção pode ser submeti-do a uma ou mais etapas de processamento antes de tornar-se um agentede supressão ativo (vide abaixo para outra descrição); em tais casos, aque-les versados na técnica apreciarão que o agente relevante preferivelmenteseja designado para incluir seqüências que possam ser necessárias paraseu processamento. Um aspecto da presente invenção é o reconhecimentode que quando múltiplas cepas, subtipos, etc. (referidos coletivamente comovariantes), de um agente infeccioso existe, cujos genomas variam em se-qüência, será freqüentemente desejável selecionar e/ou planejar siRNAs eshRNAs que alvejam regiões que são altamente conservadas entre diferen-tes variantes. Em particular, comparando um número suficiente de seqüên-cias e selecionando regiões altamente conservadas, será possível alvejarmúltiplas variantes com um único siRNA, cuja porção dupla inclui uma talregião altamente conservada. Geralmente tais regiões devem ser de com-primento suficiente para incluir a porção dupla inteira do siRNA (por exem-plo, 19 nucleotídeos) e, opcionalmente, uma ou mais protuberâncias 3', em-bora regiões mais curtas do que o tamanho natural da dupla possam tam-bém ser utilizadas (por exemplo, 15, 16, 17, ou 18 nucleotídeos). De acordocom certas modalidades da invenção uma região é altamente conservadaentre múltiplas variantes se ela for idêntica entre as variantes. De acordocom certas modalidades da invenção uma região (de qualquer que seja ocomprimento deve ser incluída na porção dupla do siRNA, por exemplo, 15,16, 17, 18, ou, preferivelmente, 19 nucleotídeos) é altamente conservada seela diferir por no máximo um nucleotídeo (isto é, 0 ou 1 nucleotídeo) entre asvariantes. De acordo com certas modalidades da invenção, uma tal região éaltamente conservada entre múltiplas variantes se ela diferir por no máximodois nucleotídeos (isto é, 0, 1, ou 2 nucleotídeos) entre as variantes. De a-cordo com certas modalidade da invenção, uma região é altamente conser-vada entre múltiplas variantes se ela diferir por no máximo três nucleotídeosou (isto é, 0, 1, 2, ou 3 nucleotídeos) entre as variantes. De acordo com cer-tas modalidades da invenção um siRNA inclui uma porção dupla que alvejauma região que é altamente conservada entre pelo menos 5 variantes, pelomenos 10 variantes, pelo menos 15 variantes, pelo menos 20 variantes, pelomenos 25 variantes, pelo menos 30 variantes, pelo menos 40 variantes, oupelo menos 50 ou mais variantes.

A fim de determinar se uma região é altamente conservaa entreum grupo de múltiplas variantes, o seguinte procedimento pode ser utilizado.Um membro do grupo de seqüências é selecionado como a seqüência debase, isto é, a seqüência à qual outras seqüências devem ser comparadas.Tipicamente o comprimento da seqüência1 de base será o comprimento de-sejado para a porção dupla do siRNA, por exemplo, 15, 16, 17, 18, ou, prefe-rivelmente 19 nucleotídeos. De acordo com diferentes modalidades da in-venção a seqüência de base pode ser ou uma das seqüências no grupo queestá sendo comparado ou pode ser uma seqüência de consenso derivada,por exemplo, determinando-se para cada posição o nucleotídeo mais fre-qüentemente encontrado naquela posição entre as seqüências no grupo.

Tendo selecionado uma seqüência de base, a seqüência de ca-da membro do grupo de múltiplas variantes é comparada com a seqüênciade base. O número de diferenças entre a seqüência de base e qualquermembro do grupo de múltiplas variantes sobre uma região da seqüência éutilizado para determinar se a seqüência de base e aquele membro são al-tamente conservados sobre a região particular de interesse. Como observa-do acima, em várias modalidades da invenção se o número de diferenças deseqüência entre duas regiões é 0; 0 ou 1, 0, 1, ou 2; ou 0, 1,2, ou 3, as regi-ons são consideradas altamente conservadas. Nas posições em que as dife-renças ocorrem, a seqüência de siRNA pode ser selecionada para ser idên-tica à seqüência de base ou a uma das outras seqüências. Geralmente onucleotídeo presente na seqüência de base será selecionado. Entretantoem certas modalidades da invenção, particularmente se um nucleotídeo pre-sente em uma posição particular em uma segunda seqüência no grupo queestá sendo comparado é encontrado na maioria das seqüências que estãosendo comparadas do que o nucleotídeo na seqüência de base, então a se-qüência de siRNA pode ser selecionada para ser idêntica à segunda se-qüência. Além disso, de acordo com certas modalidades da invenção, se onucleotídeo de consenso (nucleotídeo de ocorrência mais comum) na posi-ção em que a diferença ocorre é diferente daquela encontrada na seqüênciade base, o nucleotídeo de consenso pode ser usado. Observe que isto poderesultar em uma seqüência que não é idêntica a qualquer das seqüênciasque estão sendo comparadas (como pode o uso de uma seqüência de con-senso como a seqüência de base).

Os inventores descobriram que uma proporção significante dasseqüências selecionadas usando os parâmetros de projeto descritos aquiabaixo (vide o Exemplo 1) prova ser eficiente na supressão de replicaçãoviral quando incluída em um siRNA ou shRNA e testada como descrito abai-xo.

Com base nos resultados mostrados aqui, a presente invençãofornece agentes de iRNA que reduzem a replicação do vírus da influenza emcélulas cultivadas infectadas com o vírus da influenza e em um indivíduo, porexemplo, um mamífero, por exemplo um ser humano. As Tabelas 1A-1H for-necem agentes de iRNA exemplares alvejando o vírus da influenza. A Table1A, C, D, e E lista siRNAs que não compreendem modificações de nucleotí-deo exceto para uma ligação de fosforotioato entre o terminal 3 1 e as penúl-timas timidinas. A Tabela IBeH lista os siRNAs em que todos os nucleotí-deos compreendendo bases de pirimidina são nucleotídeos modificados por2'-0-metila no filamento de sentido, e todas as uridinas em um contexto deseqüência de 5'-ua-3' bem como todas as citidinas em um contexto de se-qüência de ou 5'-ca-3' são nucleotídeos modificados por 2'-0-metila no fila-mento anti-sentido, exceto pra os agentes de iRNA com dupla identificadaAL-DP-2295, AL-DP-2301, e AL-DP-2302, em que todas as uridinas em umcontexto de seqüência de 5'-ug-3' são nucleotídeos modificados por 2 '-O-metila no filamento anti-sentido. Estes últimos siRNAs não tiveram nenhumaocorrência dos motivos de seqüência 5'-ua-3' ou 5'-ca-3', e uma análise defragmentos de degradação após a incubação destes agentes em soro decamundongo revelaram que o motivo de seqüência 5'-ug-3' foi o ponto pri-mário de ataque endonucleolítico.

Com base nestes resultados, a invenção especificamente forne-ce um agente de iRNA que inclui um filamento de sentido tendo pelo menos15 nucleotídeos contíguos de seqüências de filamento de sentido dos agen-tes fornecidos nas Tabelas 1A-1H, e um filamento anti-sentido tendo pelomenos 15 nucleotídeos contíguos de seqüências anti-sentido dos agentesfornecidos nas Tabelas 1A-1H.

Os agentes de iRNA mostrados nas Tabelas 1A- 1H são com-postas de dois filamentos de 19 nucleotídeos de comprimento que são com-plementares ou idênticos à seqüência alvo, mais uma protuberância TT 3'. Apresente invenção fornece agentes que compreendem pelo menos 15, oupelo menos 16, 17, ou 18, ou 19 nucleotídeos contíguos destas seqüências.Entretanto, enquanto estes comprimentos podem potencialmente ser ideais,os agentes de iRNA não se destinam a ser limitados a estes comprimentos.A pessoa versada é bem ciente de que agentes de iRNA mais curtos oumais longos podem ser similarmente eficazes, uma vez que, dentro de cer-tas faixas de comprimento, a eficácia é de preferência uma função da se-qüência de nucleotídeo do que o comprimento do filamento. For exemplo,Yang, e outros, PNAS 99:9942-9947 (2002), demonstraram eficácias simila-res para agentes de iRNA de comprimentos entre 21 e 30 pares de base.Outros mostraram silenciamento efetivo de genes por agentes de iRNA atéum comprimento de aproximadamente 15 pares de base (Byrom, e outros,"lnducing RNAi with siRNA Cocktails Generated by RNase III" Tech Notes10(1), Ambion, Inc., Austin, TX).

Portanto, é possível e contemplado pela presente invenção sele-cionar das seqüências fornecidas nas Tabelas 1A-1H, uma seqüência parcialentre 15 a 19 nucleotídeos para a geração de um agente de iRNA derivadode uma das seqüências fornecidas nas Tabela 1A-1H. Alternativamente, al-guém pode adicionar um ou diversos nucleotídeos a uma das seqüênciasfornecidas nas Tabelas 1A-1H, ou um agente compreendendo 15 nucleotí-deos contíguos destes agentes, preferivelmente, porém não necessariamen-te, de um tal modo que os nucleotídeos adicionados complementares à res-pectiva seqüência do gene alvo, por exemplo, um gene do vírus da influen-za. Por exemplo, os primeiros 15 nucleotídeos de um dos agentes podemser combinados com os 8 nucleotídeos encontrados 5' à estas seqüênciasno mRNA do vírus da influenza para obter um agente com 23 nucleotídeosnos filamentos de sentido e anti-sentido. Todos os tais agentes de iRNAderivados são incluídos nos agentes de iRNA da presente invenção, contan-to que eles essencialmente mantenham a capacidade de inibir a replicaçãodo vírus da influenza em células humanas cultivadas infectadas com o vírusda influenza.<table>table see original document page 21</column></row><table><table>table see original document page 22</column></row><table><table>table see original document page 23</column></row><table><table>table see original document page 24</column></row><table><table>table see original document page 25</column></row><table><table>table see original document page 26</column></row><table><table>table see original document page 27</column></row><table><table>table see original document page 28</column></row><table><table>table see original document page 29</column></row><table><table>table see original document page 30</column></row><table><table>table see original document page 31</column></row><table><table>table see original document page 32</column></row><table><table>table see original document page 33</column></row><table><table>table see original document page 0</column></row><table><table>table see original document page 35</column></row><table><table>table see original document page 36</column></row><table><table>table see original document page 37</column></row><table><table>table see original document page 38</column></row><table>Continuacao..

<table>table see original document page 39</column></row><table><table>table see original document page 40</column></row><table><table>table see original document page 41</column></row><table><table>table see original document page 42</column></row><table><table>table see original document page 43</column></row><table><table>table see original document page 44</column></row><table><table>table see original document page 45</column></row><table><table>table see original document page 46</column></row><table><table>table see original document page 47</column></row><table><table>table see original document page 48</column></row><table><table>table see original document page 49</column></row><table><table>table see original document page 50</column></row><table><table>table see original document page 51</column></row><table><table>table see original document page 52</column></row><table><table>table see original document page 53</column></row><table><table>table see original document page 54</column></row><table><table>table see original document page 55</column></row><table><table>table see original document page 56</column></row><table><table>table see original document page 57</column></row><table><table>table see original document page 58</column></row><table><table>table see original document page 59</column></row><table><table>table see original document page 60</column></row><table><table>table see original document page 61</column></row><table>Tabela 2: Concentração em inibição de 50% (ICs0) para agentes de RNAi

<table>table see original document page 62</column></row><table>

O filamento anti-sentido de um agente de iRNA seriam iguais oupelo menos, 14, 15, 16 17, 18, 19, 25, 29, 40, ou 50 nucleotídeos em com-primento. Deveria ser igual a ou menos do que 60, 50, 40, ou 30, nucleotí-deos em comprimento. As faixas preferidas são 15-30, 17 a 25, 19 a 23, e 19a 21 nucleotídeos em comprimento.

O filamento de sentido de um agente de iRNA deveria ser igual aou pelo menos 14, 15, 16 17, 18, 19, 25, 29, 40, ou 50 nucleotídeos emcomprimento. Deveria ser igual a ou menos do que 60, 50, 40, ou 30 nucleo-tídeos em comprimento. As faixas preferidas são 15-30, 17 a 25, 19 a 23, e19 a 21 nucleotídeos em comprimento.

A porção de filamento duplo de um agente de iRNA deveria serigual a ou pelo menos, 15,16 17,18,19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 29, 40, ou 50pares de nucleotídeo em comprimento. Deveria ser igual a ou menor do que60, 50, 40, ou 30 pares de nucleotídeo em comprimento. As faixas preferidassão 15-30, 17 a 25, 19 a 23, e 19 a 21 pares de nucleotídeo em comprimento.

Geralmente, os agentes de iRNA da presente invenção incluemuma região de complementaridade suficiente ao gene de vírus da influenzarespectivo, e são de comprimento suficiente em termos de nucleotídeos, queo agente de iRNA, ou um fragmento deste, pode mediar a sub-regulação dogene de vírus da influenza. Não é necessário que haja complementaridadeperfeita entre o agente de iRNA e o gene alvo designado, porém a corres-pondência deve ser suficiente para permitir o agente de iRNA, ou um produ-to de clivagem deste, direcionar o silenciamento específico de seqüência,por exemplo, por clivagem de RNAi de um RNA de vírus da influenza.

Então, os agentes de iRNA da presente invenção incluem agen-tes compreendendo um filamento de sentido e filamento anti-sentido cadaqual compreendendo uma seqüência de pelo menos 16, 17 ou 18 nucleotí-deos que são essencialmente idênticos, como definido abaixo, a uma dasseqüências das Tabelas 1A-1H, exceto que não mais do que 1, 2 ou 3 nu-cleotídeos por filamento, respectivamente, foram substituídos por outros nu-cleotídeos (por exemplo, adenosina substituída por uracila), ao mesmo tem-po em que essencialmente retendo a capacidade de inibir a replicação devírus da influenza em células humanas cultivadas infectadas com vírus dainfluenza, respectivamente. Estes agentes possuirão então pelo menos 15nucleotídeos idênticos a uma das seqüências das Tabelas 1A-1H, porém 1,2 ou 3 combinações imperfeitas de base com respeito a seqüência de RNAde vírus da influenza alvo ou entre o filamento de sentido e anti-sentido são.introduzidas. As combinações imperfeitas para a seqüência de RNA de vírusda influenza alvo, particularmente no filamento anti-sentido, são as mais tole-radas nas regiões terminais e, se presentes, estão preferivelmente em umaregião ou regiões terminais, por exemplo, dentro de 6, 5, 4, ou 3 nucleotí-deos de um terminal 5' e/ou 3', preferivelmente dentro de 6, 5, 4, ou 3 nucle-otídeos do terminal 5' do filamento de sentido ou o terminal 3' do filamentoanti-sentido. O filamento de sentido necessita somente ser suficientementecomplementar com o filamento anti-sentido para manter o caráter de filamen-to duplo da molécula.

É preferido que os filamentos de sentido e anti-sentido sejamescolhidos tal que o agente de iRNA inclua uma região de filamento único ounão pareado em uma ou ambas terminações da molécula. Deste modo, umagente de iRNA contém filamentos de sentido e anti-sentido, preferivelmentepareados para conter uma protuberância, por exemplo, uma ou duas protu-berâncias 5' ou 3' porém preferivelmente uma protuberância 3' de 2-3 nucle-otídeos. A maioria das modalidades terá uma protuberância 3'. Os agentesde siRNA preferidos terão protuberância de filamento único, preferivelmenteprotuberância 3', de 1 a 4, ou preferivelmente 2 ou 3 nucleotídeos, em com- primento, em uma ou ambas terminações do agente de iRNA. As protube-râncias podem ser o resultado de um filamento sendo mais longo do que ooutro, ou o resultado de dois filamentos do mesmo comprimento estandoalternados. Os nucleotídeos não pareado, que formam a protuberância po-dem ser ribonucleotídeos, ou eles podem ser deoxirribonucleotídeos, preferi- velmente timidina. As terminações 5' são preferivelmente fosforiladas, ouelas podem ser não fosforiladas.

Os comprimentos preferidos para a região em dúplex estão entre15 e 30, mais preferivelmente 18, 19, 20, 21, 22, e 23 nucleotídeos em com-primento, por exemplo, na faixa de agente de siRNA descrita acima. Os a- gentes de siRNA podem se parecer em comprimento e estrutura com osprodutos processados Dicer naturais de dsRNAs longos. As modalidadesnas quais dois filamentos do agente de siRNA estão ligados, por exemplo,covalentemente ligados, também são incluídas. Grampo de cabelo, ou ou-tras estruturas de filamento único que fornecem a região de filamento duplo requerida, e preferivelmente uma protuberância 3' estão também na inven-ção.

Avaliação dos Agentes de iRNA Candidatos

Como notado acima, a presente invenção fornece um sistemapara identificar siRNAs que são úteis como inibidores de infecção e/ou repli- cação do vírus da influenza. Desde então, como notado acima, shRNAs sãoprocessados intracelularmente para produzir siRNAs tendo porções de dú-plex com a mesma seqüência como a estrutura de tronco do shRNA, o sis-tema é igualmente útil para identificar shRNAs que são úteis como inibidoresde infecção de vírus da influenza. Para propósitos de descrição esta seçãose referirá aos siRNAs, porém o sistema também abrange shRNAs corres-pondentes. Especificamente, a presente invenção demonstra a preparaçãobem-sucedida de siRNAs alvejados pelos genes virais para bloquear ou ini-bir a replicação e/ou infecção viral. As técnicas e reagentes descritos aquipodem facilmente ser aplicados para designar novos siRNAs potenciais, al-vejados por outros genes ou regiões de gene, e testados quanto à sua ativi-dade na inibição da infecção e/ou replicação do vírus da influenza, comodescrito aqui. É esperado que o vírus da influenza continue a sofrer mutaçãoe sofrer reagrupamento e que possa ser desejável continuar a desenvolver etestar novos siRNAs, diferentemente alvejados.

Em várias modalidades da invenção, os inibidores de vírus dainfluenza potenciais podem ser testados introduzindo-se siRNA(s) de candi-dato em células (por exemplo, por administração exógena ou introduzindoum vetor ou construção que direcione a síntese endógena de siRNA na célu-la), ou animais de laboratório, antes de, simultaneamente com, ou após atransfecção com um genoma de influenza ou porção deste (por exemplo,dentro de minutos, horas, ou no máximo alguns dias) ou antes de, simulta-neamente com, ou após a infecção com vírus da influenza. Alternadamente,os inibidores de vírus da influenza potenciais podem ser testados introduzin-do-se siRNA(s) candidato em células ou animais de laboratório que são pro-dutivamente infectados com os vírus da influenza (isto é, células que estão:produzindo o vírus progênie). A capacidade do siRNA(s) candidato reduziros níveis de transcrição alvo e/ou inibir ou suprimir um ou mais aspectos oucaracterísticas do ciclo de vida viral tal como replicação viral, patogenicida-de, e/ou infecciosidade, é então avaliada. Por exemplo, a produção de partí-culas virais e/ou a produção de proteínas virais, etc., podem ser avaliadasdiretamente ou indiretamente usando métodos bem-conhecidos na técnica.

As células ou animais de laboratório aos quais as composiçõesde siRNA inventivas foram liberadas (células/animais de teste) podem sercomparados com células ou animais de laboratório similares ou comparáveisque não receberam a composição inventiva (células/animais de controle, porexemplo, células/animais que não receberam nenhum siRNA ou um siRNAde controle tal como um siRNA alvejado para uma transcrição não viral talcomo GFP). A suscetibilidade das células/animais de teste à infecção devírus da influenza pode ser comparada com a suscetibilidade de célu-las/animais de controle à infecção. A produção de proteína(s) viral e/ou vírusde progênie pode ser comparada nas células/animais de teste relativo àscélulas/animais de controle. Outro indício de infecciosidade, replicação, pa-togenicidade viral, etc., pode ser comparado similarmente. Os ensaios antivi-rais in vitro padrões podem utilizar inibição de placas virais, efeito citopáticoviral (CPE), e hemaglutinina viral ou outra proteína, inibição de produçãoviral, etc. O CPE pode ser determinado visualmente e através de captaçãode tinta. Vide, por exemplo, Sidwell, R., W. e Smee, D., F, "In vitro and invivo assay systems for study of influenza vírus inhibitors" Antiviral Res 2000,48:1. Geralmente, as células/animais de teste e células/animais de controleseriam das mesmas espécies e, para as células, de tipo de célula similar ouidêntico. Por exemplo, as células da mesma cepa celular poderiam ser pare-adas. Quando a célula de teste for uma célula primária, tipicamente a célulade controle também seria uma célula primária. Tipicamente a mesma cepade vírus da influenza seria usada para comparar células/animais de teste ecélulas/animais de controle.

Por exemplo, a capacidade de um siRNA candidato de inibir aprodução de vírus da influenza pode ser determinada convenientemente por(i) liberação do siRNA candidato às células (ou antes de, ao mesmo tempoque, ou após a exposição ao vírus da influenza); (ii) avaliação da produçãode hemaglutinina viral usando um ensaio de hemaglutinina, e (iii) compara-ção da quantidade de hemaglutinina produzida na presença do siRNA com aquantidade produzida na ausência do siRNA. (O teste não necessita incluirum controle no qual o siRNA esteja ausente porém pode fazer uso de infor-mação prévia relativo à quantidade de hemaglutinina produzida na ausênciade inibição.) Uma redução na quantidade de hemaglutinina fortemente suge-re uma redução na produção de vírus. Este ensaio pode ser usado para tes-tar os siRNAs que alvejam qualquer transcrição viral e não está limitado aossiRNAs que alvejam a transcrição que codifica a hemaglutinina viral.

A capacidade de um siRNA candidato de reduzir o nível datranscrição alvo também pode ser avaliada medindo-se a quantidade datranscrição alvo, por exemplo, northern blots, ensaios de proteção de nucle-ase, (TEMPERATURA AMBIENTE)-PCR de transcrição inversa, TEMPE-RATURA AMBIENTE-PCR em tempo real, análise de microdisposição, etc..A capacidade de um siRNA candidato de inibir a produção de um polipeptí-deo codificada pela transcrição alvo (ou no nível transcricional ou pós-transcricional) pode ser medida usando uma variedade de abordagens combase em anticorpo incluindo, porém não limitado a, western blots, imunoen-saios, ELISA, citometria de fluxo, microdisposições de proteína, etc.. Em ge-ral, qualquer método de medição da quantidade da transcrição alvo ou deum polipeptídeo codificado pela transcrição alvo pode ser usado.

Em geral, certos inibidores de vírus da influenza preferidos redu-zem o nível de transcrição alvo pelo menos cerca de 2 vezes, preferivelmen-te pelo menos cerca de 4 vezes, mais preferivelmente pelo menos cerca de8 vezes, pelo menos cerca de 16 vezes, pelo menos cerca de 64 vezes ou aum grau ainda maior relativo ao nível que estaria presente na ausência doinibidor (por exemplo, em uma célula de controle comparável necessitandodo inibidor). Em geral, certos inibidores de vírus da influenza preferidos ini-bem a replicação viral, de forma que o nível de replicação seja mais baixoem uma célula que contém o inibidor que em uma célula de controle que nãocontém o inibidor em pelo menos cerca de 2 vezes, preferivelmente pelomenos cerca de 4 vezes, mais preferivelmente pelo menos cerca de 8 vezes,pelo menos cerca de 16 vezes, pelo menos cerca de 64 vezes, pelo menoscerca de 100 vezes, pelo menos cerca de 200 vezes, ou para um grau aindamaior.

Certos inibidores de vírus da influenza preferidos inibem a repli-cação viral de forma que o desenvolvimento de títulos virais detectáveis sejaprevenido durante pelo menos 24 horas, pelo menos 36 horas, pelo menos48 horas, ou pelo menos 60 horas seguinte a administração do siRNA e in-fecção das células. Certos inibidores de vírus da influenza preferidos previ-nem (isto é, reduzem para níveis indetectáveis) ou significantemente redu-zem a replicação viral durante pelo menos 24 horas, pelo menos 36 horas,pelo menos 48 horas, ou pelo menos 60 horas seguinte a administração dosiRNA. De acordo com várias modalidades de uma invenção uma reduçãosignificante na replicação viral é uma redução para menos do que aproxima-damente 90% do nível que ocorreria na ausência do siRNA, uma reduçãopara menos do que aproximadamente 75% do nível que ocorreria na ausên-cia do siRNA, uma redução para menos do que aproximadamente 50% donível que ocorreria na ausência do siRNA, uma redução para menos do queaproximadamente 25% do nível que ocorreria na ausência do siRNA, ouuma redução para menos do que aproximadamente 10% do nível que ocor-reria na ausência do siRNA. A redução na replicação viral pode ser medidausando qualquer método adequado incluindo, porém não limitado a, mediçãode título de HA.

Teste de estabilidade, modificação, e novo teste dos agentes de iRNA

Um agente de iRNA candidato pode ser avaliado com respeito aestabilidade, por exemplo, sua suscetibilidade à clivagem por uma endonu-clease ou exonuclease, tal como quando o agente de iRNA é introduzido nocorpo de um indivíduo. Os métodos podem ser empregados para identificarsítios que sejam suscetíveis à modificação, particularmente clivagem, porexemplo, clivagem por um componente encontrado no corpo de um indiví-duo. Tais métodos podem incluir o isolamento e identificação da maioria dosfragmentos abundantes formados por degradação do agente de iRNA candi-dato após sua incubação com meios biológicos isolados in vitro, por exem-plo, soro, plasma, cuspe, fluido cérebro-espinhal, ou célula ou homogenadosde tecido, ou após contatar um indivíduo com o agente de iRNA candidato invivo, desse modo identificando os sítios propensos à clivagem. Por exemplo,tais métodos estão sem limitação, no Pedido Internacional co-apropriado N9PCT/US2005/018931, arquivado no dia 27 de maio de 2005.

Quando os sítios suscetíveis à clivagem são identificados, umoutro agente de iRNA pode ser designado e/ou sintetizado em que o sítio declivagem potencial é feito resistente à clivagem, por exemplo, por introduçãode uma 2'-modificação no sítio de clivagem, por exemplo, um grupo 2'-0-metila. Este agente de iRNA adicional pode ser novamente testado quanto àestabilidade, e este processo pode ser repetido até que um agente de iRNAexibindo a estabilidade desejada, seja encontrado.Teste In Vivo

Um agente de iRNA identificado como sendo capaz de inibir aexpressão de gene do vírus da influenza pode ser testado quanto à funcio-nalidade in vivo em um modelo de animal (por exemplo, em um mamífero, talcomo em camundongo ou rato). Por exemplo, o agente de iRNA pode seradministrado a um animal, e o agente de iRNA avaliado com respeito a suabiodistribuição, estabilidade, e sua capacidade de inibir a replicação de vírusda influenza ou reduzir um processo biológico ou patológico mediado pelomenos em parte pelo vírus da influenza.

O agente de iRNA pode ser administrado diretamente ao tecidoalvo, tal como através de injeção, ou o agente de iRNA pode ser administra-do ao modelo animal da mesma maneira que seria administrado a um serhumano. Preferivelmente, o agente de iRNA é liberado às vias aéreas doindivíduo, tal como intranasalmente.

O agente de iRNA também pode ser avaliado quanto à sua dis-tribuição intracelular. A avaliação pode incluir determinar se o agente de iR-NA foi absorvido na célula. A avaliação pode também incluir determinar aestabilidade (por exemplo, a meia-vida) do agente de iRNA. A avaliação detum agente de iRNA in vivo pode ser facilitada por uso de um agente de iRNAconjugado a um marcador de localizável (por exemplo, um marcador fluores-cente tal como fluoresceína; um rótulo radioativo, tal como 35S, 32P, 33P,ou 3H; partículas de ouro; ou partículas de antígeno para imunoistoquímica).

O agente de iRNA pode ser avaliado com respeito a sua capaci-dade de sub-regular a replicação de vírus da influenza. Os níveis de expres-são de gene do vírus da influenza in vivo podem ser medidos, por exemplo,por em hibridização in situ, ou pelo isolamento de RNA de tecido antes eseguinte à exposição ao agente de iRNA. Em que o animal necessita sersacrificado para colher o tecido, um animal de controle não tratado servirápara comparação. O RNA de vírus da influenza pode ser detectado porqualquer método desejado, incluindo, porém não limitado a TEMPERATURAAMBIENTE-PCR, northern blot, ensaio de filamento de DNA, ou ensaio deproteção de RNAase. Alternativamente, ou adicionalmente, a expressão degene de vírus da influenza pode ser monitorada realizando-se análise dewestern blot ou ensaios de formação de placa em extratos de tecido tratadoscom o agente de iRNA.

Os inibidores de vírus da influenza potenciais podem ser testa- dos usando qualquer de uma variedade de modelo animal que tenha sidodesenvolvido. As composições compreendendo siRNA(s) candidato, cons-tructos ou vetores capazes de direcionar a síntese de tais siRNAs dentro deuma célula hospedeira, ou células construídas ou manipuladas para contersiRNAs candidatos podem ser administradas a um animal antes, simultane- amente com, ou seguinte a infecção com um vírus da influenza. A capacida-de da composição de prevenir infecção viral e/ou retardar ou prevenir o apa-recimento de sintomas relacionados com a influenza e/ou diminuir sua seve-ridade relativo aos animais infectados por influenza que não receberam oinibidor de influenza potencial, é avaliada. Tais modelos incluem, porém não estão limitados a, murino, frango, furão, e modelos de primata não humanopara infecção de influenza, todos dos quais são conhecidos na técnica e sãousados para testar a eficácia de terapêuticas e vacinas de influenza potenci-ais. Vide, por exemplo, Sidwell, R., W. e Smee, D., F, referenciado acima.Tais modelos podem envolver o uso de cepas de vírus da influenza de ocor- rência natural e/ou cepas que foram modificadas ou adaptadas à existênciaem um hospedeiro particular (por exemplo, as cepas WSN ou PR8, que sãoadaptadas para replicação em camundongos). Os modelos de animais ante-riores também podem ser usados para estabelecer a concentração necessá-ria para alcançar um certo efeito desejado (por exemplo, EC50). Química de iRNA

Descritos aqui são os agentes de iRNA isolados, por exemplo,os agentes de RNA que medeiam RNAi para inibir expressão de um gene devírus da influenza.

Os agentes de RNA descritos aqui incluem RNA de outro modo inalterado como também RNA que foi modificado, por exemplo, para melho-rar a eficácia, e polímeros de substitutos de nucleosídeo. RNA não modifica-do se refere a uma molécula na qual os componentes do ácido nucléico, istoé açúcares, bases, e porções de fosfato, são iguais ou essencialmente i-guais àqueles de ocorrência natural, preferivelmente de ocorrência naturalno corpo humano. A técnica se referiu aos RNAs raros ou incomuns, porémde ocorrência natural, como RNAs modificados, vide, por exemplo, Limbache outros, Nucleic Acids Res. 22 : 2183 -2196, 1994. Tais RNAs raros ou in-comuns, freqüentemente chamados de RNAs modificados (aparentementeporque eles são tipicamente o resultado de uma modificação pós-transcricional) está dentro do termo RNA não modificado, como usado aqui.

O RNA modificado como usado aqui se refere a uma molécula na qual umou mais dos componentes do ácido nucléico, isto é, porções de açúcares,bases, e fosfato, são diferentes daqueles de ocorrência natural, preferivel-mente diferente daquele que ocorre no corpo humano. Ao mesmo tempo emque eles são referidos como RNAs "modificados", eles certamente, por cau-sa da modificação, incluirão moléculas que não são RNAs. Os substitutos denucleosídeo são moléculas nas quais a cadeia principal de ribofosfato ésubstituída com um constructo de não ribofosfato que permite as bases seapresentarem na relação espacial correta tal que a hibridização seja subs-tancialmente similar a que é vista com uma cadeia principal de ribofosfato,por exemplo, imitações não carregadas da coluna principal de ribofosfato.Os exemplos do anterior são descritos aqui.

As modificações descritas aqui podem ser incorporadas emqualquer RNA de filamento duplo e molécula tipo RNA descrita aqui, por e-xemplo, um agente de iRNA. Pode ser desejável modificar um ou ambos dosfilamentos de sentido e anti-sentido de um agente de iRNA. Como ácidosnucléicos são polímero de subunidades ou monômeros, muitas das modifi-cações descritas abaixo ocorrem em uma posição que é repetida dentro deum ácido nucléico, por exemplo, uma modificação de uma base, ou umaporção de fosfato, ou o O de não ligação de uma porção de fosfato. Em al-guns casos a modificação ocorrerá em todas as posições objeto no ácidonucléico, porém em muitos, e na realidade na maioria, casos não ocorrerá.Por via de exemplo, uma modificação pode ocorrer somente uma posição determinal 3' ou 5', pode somente ocorrer em uma região de terminal, por e-xemplo, em uma posição em um nucleotídeo terminal ou nos últimos 2, 3, 4,5, ou 10 nucleotídeos de um filamento. Uma modificação pode ocorrer emuma região de filamento duplo, uma região de filamento único, ou em am-bos. Por exemplo, uma modificação de fosforotioato em uma posição de Ode não ligação somente pode ocorrer em um ou ambos terminais, pode so-mente ocorrer em uma região terminal, por exemplo, em uma posição emum nucleotídeo terminal ou nos últimos 2, 3, 4, 5, ou 10 nucleotídeos de umfilamento, ou pode ocorrer nas regiões de filamento duplo e filamento único,particularmente no terminal. Similarmente, uma modificação pode ocorrer nofilamento de sentido, filamento anti-sentido, ou ambos. Em alguns casos, osfilamentos de sentido e anti-sentido terão as mesmas modificações ou amesma classe de modificações, porém em outros casos os filamentos desentido e anti-sentido terão modificações diferentes, por exemplo, em algunscasos pode ser desejável modificar somente um filamento, por exemplo, ofilamento de sentido.

Dois objetos principais para a introdução de modificações emagentes de iRNA são sua estabilização para degradação em ambientes bio-lógicos e a melhora de propriedades farmacológicas, por exemplo, proprie-dades farmacodinâmicas, que são também descritas abaixo. Outras modifi-cações adequadas para um açúcar, base, ou cadeia principal de um agentede iRNA são descritas no Pedido PCT co-apropriado No.PCT/US2004/01193, depositado em 16 de janeiro de 2004. Um agente deiRNA pode incluir uma base de ocorrência não natural, tal como as basesdescritas no Pedido PCT co-apropriado No. PCT/US2004/011822, deposita-do em 16 de abril de 2004. Um agente de iRNA pode incluir um açúcar deocorrência não natural, tal como uma molécula portadora cíclica de não car-boidrato. As características exemplares de açúcares de ocorrência não natu-ral para uso em agentes de iRNA são descritas no Pedido PCT co-apropriado No. PCT/US2004/11829, depositado em 16 de abril de 2003.

Um agente de iRNA pode incluir uma ligação de internucleotídeo(por exemplo, a ligação de fosforotioato quiral) útil para resistência de nucle-ase crescente. Além disso, ou na alternativa, um agente de iRNA pode inclu-ir um mímico de ribose para resistência a nuclease aumentada. As ligaçõesde internucleotídeo exemplares e mímicos de ribose para resistência de nu-clease aumentada são descritos no Pedido PCT co-apropriado No.PCT/US2004/07070, depositado em 8 de março de 2004.

Um agente de iRNA pode incluir subunidades de monômero con-jugado com Iigante e monômeros para síntese de oligonucleotídeo. Os mo·nômeros exemplares são descritos no Pedido U.S. co-apropriado No.10/916.185, depositado em 10 de agosto de 2004.

Um agente de iRNA pode ter uma estrutura de ZXY, como édescrito no Pedido PCT co-apropriado No. PCT/US2004/07070, depositadoem 8 de março de 2004.

Um agente de iRNA pode ser complexo com uma porção antipá-tica. As porções antipáticas exemplares para uso com agentes de iRNA sãodescritas no Pedido PCT co-apropriado No. PCT/US2004/07070, depositadoem 8 de março de 2004.

Em outra modalidade, o agente de iRNA pode ser complexadopara um agente de liberação que caracteriza um complexo modular. O com-plexo pode incluir um agente veículo ligado a um ou mais de (preferivelmen-te dois ou mais, mais preferivelmente todos os três de): (a) um agente decondensação (por exemplo, agente capaz de atrair, por exemplo, ligar, umácido nucléico, por exemplo, por interações iônicas ou eletrostáticas); (b) umagente fusogênico (por exemplo, agente capaz de fundir e/ou ser transporta-do por uma membrana de célula); e (c) um grupo alvejante, por exemplo, umagente alvejante de célula ou tecido, por exemplo, uma lectina, glicoproteína,lipídio ou proteína, por exemplo, um anticorpo que se liga a um tipo de célulaespecificado. Os agentes de iRNA complexados para um agente de libera-ção são descritos no Pedido PCT co-apropriado No. PCT/US2004/07070,depositado em 8 de março de 2004.

Um agente de iRNA pode ter pareamentos não canônicos, talcomo entre as seqüências de sentido e anti-sentido do dúplex de iRNA. Ascaracterísticas exemplares de agentes de iRNA não canônicos, são descri-tas no Pedido PCT co-apropriado No. PCT/US2004/07070, depositado em 8de março de 2004.Resistência a nuclease realçada

O agente de iRNA, por exemplo, um agente de iRNA que alvejavírus da influenza, pode ter resistência aumentada a nuclease.

Um modo para aumentar a resistência é identificar os sítios declivagem e modificar tais sítios para inibir a clivagem, como descrito em Pe-dido U.S. co-apropriado N2 60/559.917, depositado em 4 de maio de 2004.Por exemplo, os dinucleotídeos 5'-ua-3', 5'-ca-3', 5'-ug-3', 5' - uu-3', ou 5'-cc-3' podem servir como sítios de clivagem. Em certas modalidades, todas aspirimidinas de um agente de iRNA carregam uma modificação em 2' ou nofilamento de sentido, ou filamento anti-sentido, ou ambos os filamentos, e oagente de iRNA então aumentou a resistência a endonuclease. A resistên-cia à nuclease realçada também pode ser alcançada modificando o nucleotí-deo 5', resultando, por exemplo, em pelo menos um S^uridina-adenina-S' (51-ua-31) dinucleotídeo em que a uridina é um nucleotídeo modificado em 2';pelo menos um 5'-citidina-adenina-3' (5'-ca-3') dinucleotídeo, em que a 5'-citidina é um nucleotídeo modificado em 2'; pelo menos um 5'-uridina-guanina-31 (5'-ug-3') dinucleotídeo, em que a 5'- uridina é um nucleotídeomodificado em 2'; pelo menos um S1-Uridina-Uridina-S' (5'-uu-3') dinucleotí-deo, em que a 5'-uridina é um nucleotídeo modificado em 2'; ou pelo menosum 5'-citidina-citidina-3' (5'-cc-3') dinucleotídeo, em que a 5'-citidina é umnucleotídeo modificado em 2', como descrito no Pedido Internacional co-apropriado No.

PCT/US2005/018931, arquivado no dia 27 de maio de 2005. Oagente de iRNA pode incluir pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4 oupelo menos 5 de tais dinucleotídeos. Em uma modalidade particularmentepreferida, o nucleotídeo 5' em todas as ocorrências dos motifs de seqüência5'-ua-3' e 5'-ca-3' no filamento de sentido, no filamento anti-sentido, ou emambos os filamentos, é um nucleotídeo modificado. Preferivelmente, o nu-cleotídeo 5' em todas as ocorrências dos motifs de seqüência 5' - ua-31, 5'-ca-31 e 5'-ug-3' no filamento de sentido, no filamento anti-sentido, ou ambosos filamentos é um nucleotídeo modificado. Mais preferivelmente, todos onucleotídeos de pirimidina no filamento de sentido são nucleotídeos modifi-cados, e o nucleotídeo 5' em todas as ocorrências dos motifs de seqüência5'-ua-3' e 5'-ca-3' no filamento anti-sentido são nucleotídeos modificados, ouem que o filamento anti-sentido compreende nenhum dos motifs de 5'-ua-3'e 5'-ca-3', em todas as ocorrências do motif de seqüência 5'-ug-3.'

Preferivelmente, os nucleotídeos modificados em 2' incluem, porexemplo, uma unidade de ribose modificada em 2', por exemplo, o grupohidroxila 2' (OH) pode ser modificado ou substituído com vários substituintesde "óxi" ou "deóxi" diferentes.

Os exemplos de modificações de grupo hidroxila "óxi"-2' incluemalcóxi ou arilóxi (OU, por exemplo, R = H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila,heteroarila ou açúcar); polietilenoglicóis (PEG), O(CH2CH2O)nCH2CH2OR;ácidos nucléicos "fechados" (LNA) nos quais a hidroxila 2' está conectada,por exemplo, por uma ponte de metileno, ao carbono 4' do mesmo açúcar deribose; O - AMINA e aminoalcóxi, O(CH2)nAMINA, (por exemplo, AMINA =NH2; alquilamino, dialquilamino, amino de heterociclila, arilamino, amino dediarila, amino de heteroarila, ou amino de dieteroarila, diamina de etileno,poliamino). É notável que os oligonucleotídeos que contêm somente o grupometoxietila (MOE), (OCH2CH2OCH3, um derivado de PEG), exibam estabili-dades de nuclease comparável àquelas modificadas com a modificação defosforotioato robusta.

As modificações de "Deóxi" incluem hidrogênio (isto é, açúcaresde deoxirribose, que são de relevância particular para as porções de protu-berância de parcialmente ds RNA); halo (por exemplo, flúor); amino (por e-xemplo, NH2; alquilamino, dialquilamino, heterociclila, arilamino, amino dediarila, amino de heteroarila, amino de dieteroarila, ou aminoácido);NH(CH2CH2NH)nCH2CH2-AMINA (AMINA = NH2; alquilamino, dialquilamino,amino de heterociclila, arilamino, amino de diarila, amino de dieteroarila, ouamino de heteroarila), -NHC(O)R (R = alquila, cicloalquila, arila, aralquila,heteroarila ou açúcar), ciano; mercapto; alquil-tio-alquila; tioalcóxi; e alquila,cicloalquila, arila, alquenila e alquinila, que podem ser opcionalmente substi-tuídos com, por exemplo, uma funcionalidade amino.Os substituintes preferidos são 2'-metoxietila, 2'-OCH3) 2'-0-alila,2'-C-alila, e 2'-flúor.

A inclusão de açúcares de furanose na cadeia principal de oligo-nucleotídeo também pode diminuir a clivagem endonucleolítica. Um agentede iRNA pode ser também modificado incluindo-se um grupo catiônico 3', ouinvertendo-se o nucleosídeo no terminal 3' com uma ligação 3' -3'. Em outraalternativa, o terminal 3' pode ser bloqueado com um grupo aminoalquila,por exemplo, um C5-aminoalquila dT 3'. Outros conjugados 3' podem inibir aclivagem exonucleolítica 3' -5'. Ao mesmo tempo em que não estando ligadopor teoria, um conjugado 3', tal como naproxen ou ibuprofen, pode inibir aclivagem exonucleolítica estericamente bloqueando-se exonuclease de ligarà terminação 3' de oligonucleotídeo. Até mesmo pequenas cadeias de alqui-la, grupos arila, ou conjugados heterocíclicos ou açúcares modificados (D-ribose, deoxiribose, glicose etc.) podem bloquear exonucleases 3'-5'.

A clivagem nucleolítica também pode ser inibida pela introduçãode modificações de Iigadores de fosfato, por exemplo, ligações de fosforotio-ato. Deste modo, os agentes de iRNA preferidos incluem dímeros de nucleo-tídeo enriquecidos ou puros para uma forma quiral particular de um grupo de;fosfato modificado que contém um heteroátomo em uma posição de nãoponte normalmente ocupada por oxigênio. O heteroátomo pode ser S, Se,Nr2, ou Br3. Quando o heteroátomo é S, a ligação de Sp quiralmente pura ouenriquecida é preferida. Enriquecido significa pelo menos 70, 80, 90, 95, ou99% da forma preferida. As ligações de fosfato modificadas são particular-mente eficientes na inibição da clivagem exonucleolítica quando introduzidaspróximas das posições de terminal 5' - ou 3', e preferivelmente nas posiçõesde terminal 5', de um agente de iRNA.

Os conjugados 5' também podem inibir a clivagem exonucleolíti-ca 5'-3'. Ao mesmo tempo em que não estando ligado por teoria, um conju-gado 5', tal como naproxen ou ibuprofen, pode inibir a clivagem exonucleolí-tica estericamente bloqueando-se a exonuclease de se ligar ao terminal 5'de oligonucleotídeo. Até mesmo pequenas cadeias de alquila, os grupos ari-la, ou conjugados heterocíclicos ou açúcares modificados (D-ribose, deoxir-ribose, glicose etc.) pode bloquear exonucleases 3' -5'.

Um agente de iRNA pode ter resistência aumentada a nucleasesquando um agente de iRNA em dúplex inclui que uma protuberância de nu-cleotídeo de filamento único em pelo menos uma terminação. Em modalida-des preferidas, a protuberância de nucleotídeo inclui 1 a 4, preferivelmente 2a 3, nucleotídeos não pareados. Em uma modalidade preferida, o nucleotí-deo não pareado da protuberância dè filamento único que está diretamenteadjacente ao par de nucleotídeo terminal contém uma base de purina, e opar de nucleotídeo terminal é um par de G-C, ou pelo menos dois dos últi-mos quatro pares de nucleotídeo complementares são pares G-C. Em moda-lidades adicionais, a protuberância de nucleotídeo pode ter 1 ou 2 nucleotí-deos não pareado, e em uma modalidade exemplar a protuberância de nu-cleotídeo é 5'-gc-3'. Em modalidades preferidas, a protuberância de nucleo-tídeo está na terminação 3' do filamento anti-sentido. Em uma modalidade, oagente de iRNA inclui o motif 5'-cgc-3' na terminação 3' do filamento anti-sentido, tal que uma protuberância de 2 nt 5'-gc-3' seja formada.

Deste modo, um agente de iRNA pode incluir modificações parainibir a degradação, por exemplo, por nucleases, por exemplo, endonuclea-ses ou exonucleases, encontradas no corpo de um indivíduo. Este monôme-ros são referidos aqui como NRMs, ou Monômeros de promoção de Resis-tência à Nuclease, as modificações correspondentes como modificações deNRM. Em muitos casos estas modificações modularão outras propriedadesdo agente de iRNA tembém, por exemplo, a capacidade de interagir comuma proteína, por exemplo, uma proteína de transporte, por exemplo, albu-25 mina de soro, ou um membro de RISC, ou a capacidade das primeiras e se-gundas seqüências de formar um dúplex com uma outra para formar um dú-plex com outra seqüência, por exemplo, uma molécula alvo.

Uma ou mais modificações de NRM diferentes podem ser intro-duzidas em um agente de iRNA ou em uma seqüência de um agente de iR-NA. Uma modificação de NRM pode ser usada mais de uma vez em umaseqüência ou em um agente de iRNA.

As modificações de NRM incluem algumas que podem ser colo-cadas somente no terminal e outras que podem ir em qualquer posição. Al-gumas modificações de NRM podem inibir a hibridização, então é preferívelusá-las somente nas regiões terminais, e preferível não usa-las no sítio declivagem ou na região de clivagem de uma seqüência que alveja uma se- qüência ou gene objeto, particularmente no filamento anti-sentido. Elas po-dem ser usadas em qualquer lugar em um filamento de sentido, contantoque hibridização suficiente entre os dois filamentos do agente de ds iRNAseja mantida. Em algumas modalidades é desejável pôr o NRM no sítio declivagem ou na região de clivagem de um filamento de sentido, uma vez que ele pode minimizar o silenciamento fora do alvo.

Na maioria dos casos, modificações de NRM serão distribuídasdiferentemente dependendo se elas estão compreendidas em um filamentode sentido ou anti-sentido. Se em um filamento anti-sentido, as modificaçõesque interferem com ou inibem a clivagem de endonuclease não deveriam ser inseridas na região que está sujeita a clivagem mediada por RISC, por e-xemplo, o sítio de clivagem ou a região de clivagem (Como descrito em El-bashire outros, 2001, Genes and Dev. 15: 188, desse modo incorporado porreferência). A clivagem do alvo ocorre aproximadamente no meio de um fi-lamento anti-sentido de 20 ou 21 nt, ou aproximadamente 10 ou 11 nucleotí- deos a montante do primeiro nucleotídeo no mRNA alvo que é complemen-tar ao filamento anti-sentido. Como usado aqui, o sítio de clivagem se refereaos nucleotídeos no lado do sítio de clivagem, no alvo ou no filamento doagente de iRNA que hibridiza para ele. A região de clivagem significa os nu-cleotídeos em 1, 2, ou 3 nucleotídeos do sítio de clivagem, em qualquer di- reção.

Tais modificações podem ser introduzidas nas regiões terminais,por exemplo, na posição terminal ou com 2, 3, 4, ou 5 posições do terminal,de um filamento de sentido ou anti-sentido.Liqantes presos

As propriedades de um agente de iRNA, incluindo suas proprie-dades farmacológicas, podem ser influenciadas e adaptadas, por exemplo,pela introdução de ligantes, por exemplo, Iigantes presos. Além disso, aspropriedades farmacológicas de um agente de iRNA podem ser melhoradasincorporando um Iigante em uma formulação do agente de iRNA quando oagente de iRNA tem ou teve um Iigante preso.

Uma ampla variedade larga de entidades, por exemplo, ligantes,pode ser presa a um agente de iRNA ou usada como conjugado ou aditivode formulação, por exemplo, para o veículo de uma subunidade de monôme-ros conjugados por ligante. Os exemplos são descritos abaixo no contextode uma subunidade de monômero conjugado por ligante, porém que é so-mente é preferido, entidades podem ser acopladas em outros pontos a umagente de iRNA.

As porções preferidas são ligantes, que são acoplados, preferi-velmente covalentemente, diretamente ou indiretamente por um elo interme-diário, ao veículo. Em modalidades preferidas, o Iigante é preso ao veículopor um elo intermediário. O ligante ou ligante preso pode estar presente nosmonômeros conjugados ao ligante quando o monômero conjugado ao ligan-te é incorporado no filamento crescente. Em algumas modalidades, o ligantepode ser incorporado em uma subunidade de monômero conjugado por li-gante "precursora" após uma subunidade de monômero conjugado por ligan-te "precursora" ter sido incorporada no filamento crescente. Por exemplo, ummonômero tendo, por exemplo, um elo terminada em amino, por exemplo,TAP-(CH2)nNH2 pode ser incorporada em um filamento de sentido ou anti-sentido crescente. Em uma operação subseqüente, isto é, após incorpora-ção da subunidade de monômero precursor no filamento, um ligante tendoum grupo eletrofílico, por exemplo, um grupo éster de pentafluorofenila oualdeído, pode subseqüentemente ser preso ao monômero conjugado porligante precursor acoplando-se o grupo eletrofílco do ligante com grupo nu-cleofílico terminal do elo de subunidade de monômero precursor conjugadopor ligante.

Em modalidades preferidas, um ligante altera a distribuição, al-vejamento ou duração da vida de um agente de iRNA no qual está incorpo-rado. Em modalidades preferidas, um ligante fornece uma afinidade realçadapara um alvo selecionado, por exemplo, molécula, célula ou tipo de célula,compartimento, por exemplo, um compartimento de órgão ou celular, tecido,órgão ou região do corpo, tal como, por exemplo, comparado a uma espécieausente tal como ligante.

Os ligantes preferidos podem melhorar o transporte, hibridiza-ção, e propriedades de especificidade e também podem melhorar a resistên-cia de nuclease do oligorribonucleotídeo natural ou modificado resultante, ouuma molécula polimérica compreendendo qualquer combinação de monô-meros descrita aqui e/ou ribonucleotídeos naturais ou modificados.

Os ligantes em geral podem incluir modificadores terapêuticos,por exemplo, para realçar a absorção; os compostos diagnósticos ou gruposrepórteres, por exemplo, para monitorar distribuição; agentes de reticulação;porções que conferem resistência a nuclease; e nucleobases naturais ouincomuns. Os exemplos gerais incluem moléculas lipofílicas, lipídios, Iecti-nas, esteróides (por exemplo, uvaol, hecigenina, diosgenina), terpenos (porexemplo, triterpenos, por exemplo, sarsasapogenin, Friedelin, ácido litocólicoderivado de epifriedelanol), vitaminas, carboidratos (por exemplo, um dex-trano, pululan, quitina, quitosana, inulina, ciclodextrina ou ácido hialurônico),proteínas, agentes de ligação de proteína, moléculas de alvejamento de in-tegrina, policatiônicos, peptídeos, poliaminas, e mímicos de peptídeo.

O ligante pode ser uma molécula sintética ou recombinante oude ocorrência natural, tal como um polímero sintético, por exemplo, um ácidode poliamino sintético. Os exemplos de ácidos de poliamino incluem polilisi-na (PLL), ácido poli L-aspártico, ácido poli L-glutâmico, copolímero de estire-no-anidrido de ácido maléico, copolímero de poli(L-lactídeo-co-glicolida), co-polímero de éter de divinila- anidrido maléico, copolímero de N-(2-hidroxipropil)metacrilamida (HMPA), polietileno glicol (PEG), álcool de polivi-nila (PVA), poliuretano, ácido poli(2-etilacrílico), polímero de N-isopropilacrilamida, ou polifosfazina. O exemplo de poliaminas inclui: polieti-lenimina, polilisina (PLL), espermina, espermidina, poliamina, pseudopeptí-deos-poliamina, poliamina peptidomimética, polimina de dendrímero, argini-na, amidina, protamina, porções catiônicas, por exemplo, lipídio catiônico,porfirina catiônica, sal quaternário de uma poliamina, ou um peptídeo alfahelicoidal.

Os ligantes podem também incluir grupos de alvejamento, porexemplo, um agente de alvejamento de célula ou tecido, por exemplo, umatirotropina, melanotropina, proteína A de tensoativo, carboidrato de Mucina,um poliaminoácido glicosilado, transferrina, bisfosfonato, poliglutamato, poli-aspartato, ou um peptídeo de RGD ou peptídeo mimético de RGD.

Os ligantes podem ser proteínas, por exemplo, glicoproteínas,lipoproteínas, por exemplo, lipoproteína de baixa densidade (LDL), ou albu-minas, por exemplo, albumina de soro humano (HSA), ou peptídeos, por e-xemplo, moléculas que têm uma afinidade específica para um co-ligante, ouanticorpos, por exemplo, um anticorpo que se liga a um tipo de célula espe-cífico tal como uma célula de câncer, célula endotelial, ou célula do osso. Osligantes também podem incluir hormônios e receptores de hormônio. Elestambém podem incluir espécies não peptídicas, tal como co-fatores, Iactosemultivalente, galactose multivalente, N-acetil-galactosamina, N-acetil-glicosamina, manose multivalente, ou fucose multivalente. Por exemplo, oIigante pode ser um lipopolissacarídeo, um ativador de cinase MAPA p38, ouum ativador de NF-kB.

O ligante pode ser uma substância, por exemplo, um fármaco,que pode aumentar a absorção do agente de iRNA na célula, por exemplo,rompendo-se o citoesqueleto da célula, por exemplo, rompendo os microtú-bulos da célula, microfilamentos, e/ou filamentos intermediários. O fármacopode ser, por exemplo, taxon, vincristina, vinblastina, citocalasina, nocoda-zol, japlacinolida, Iatrunculin A, faloidina, swinholide A, indanocina, ou mio-servina.

Em um aspecto, o Iigante é um lipídio ou molécula com base emlipídio. Um tal lipídio ou molécula com base em lipídio preferivelmente se ligaa uma proteína de soro, por exemplo, albumina de soro humano (HSA). Umligante de ligação de HSA permite a distribuição do conjugado a um tecidoalvo, por exemplo, tecido do fígado, incluindo células parenquimatosas dofígado. Outras moléculas que podem ligar HSA também podem ser usadascomo ligantes. Por exemplo, neproxina ou aspirina podem ser usadas. Umlipídio ou Iigante com base em lipídio pode (a) aumentar a resistência a de-gradação do conjugado, (b) aumentar o alvejamento ou transporte em umacélula alvo ou membrana de célula, e/ou (c) pode ser usada para ajustar aligação a uma proteína de soro, por exemplo, HSA.

Um ligante com base em lipídio pode ser usado para modular,por exemplo, controlar a ligação do conjugado a um tecido alvo. Por exem-plo, um lipídio ou Iigante com base em lipídio que se liga a HSA mais forte-mente será menos provável de ser alvejado pelo rim e então menos provávelde ser removido do corpo. Um lipídio ou Iigante com base em lipídio que seliga menos fortemente ao HSA pode ser usado para alvejar o conjugado ao rim.

Em uma modalidade preferida, Iigante com base em lipídio ligaHSA. Preferivelmente, liga HSA com uma afinidade suficiente tal que o con-jugado seja distribuído preferivelmente para um tecido de não rim. Porém, épreferido que a afinidade não seja tão forte que a ligação de HSA-Iigante nãopossa ser invertida.

Em outro aspecto, o Iigante é uma porção, por exemplo, umavitamina ou nutriente que são absorvidos por uma célula alvo, por exemplo,uma célula em proliferação. Estes são particularmente úteis para tratar dis-túrbios caracterizados por proliferação de célula não desejada, por exemplo,do tipo maligno ou não maligno, por exemplo, células de câncer. As vitami-nas exemplares incluem vitamina A, E, e K. Outras vitaminas exemplaresincluem as vitaminas B, por exemplo, ácido fólico, B12, riboflavina, biotina,piridoxal ou outras vitaminas ou nutrientes absorvidos por células de câncer.

Em outro aspecto, o Iigante é um agente de permeação de célu-la, preferivelmente um agente de permeação de célula helicoidal. Preferivel-mente, o agente é antipático. Um agente exemplar é um peptídeo tal comotat ou antennapedia. Se o agente for um peptídeo, pode ser modificado, in-cluindo um peptidilmimético, invertômeros, ligações de não peptídeo oupseudo-peptídeo, e uso de D-aminoácidos. O agente helicoidal é preferivel-mente um agente alfa-helicoidal que preferivelmente tem uma fase lipofílicae uma fase lipofóbica.Modificações de 5'-fosfato

Em modalidades preferidas, os agentes de iRNA são 5' fosforila-dos ou incluem um análogo de fosforila no terminal 5' principal. As modifica-ções de 5'-fosfato do filamento anti-sentido incluem aquelas que são compa-tíveis com silenciamento de gene mediado por RISC. As modificações ade-quadas incluem: 5'-monofosfato ((H0)2(0)P-0-5); 5'-difosfato ((H0)2(0)P-0-P(H0)(0)-0-5); 5'-trifosfato ((H0)2(0)P-0 - (H0)(0)P-0-P(H0)(0)-0-5);tampão de guanosina 5' (7-metilado ou não metilado) (7m-G-0-5'-(H0)(0)P-0-(H0)(0)P-0-P(H0)(0)-0-5'); tampão de adenosina 5" (Appp), e qualquerestrutura de tampão de nucleotídeo modificada ou inalterada (N-O-5 -(HO)(O)P-O - (H0)(0)P-0-P(H0)(0)-0-5); 5'-monotiofosfato (fosforotioato;(H0)2(S)P-0-5'); 5'-monoditiofosfato (fosforoditioato; (H0)(HS)(S)P-0-5), 5'-fosforotiolato ((H0)2(0)P-S-5); qualquer combinação adicional de monofos-fato substituído por oxigênio/súlfur, difosfato e trifosfatos (por exemplo, 5'-alfa - tiotrifosfato, 5'-gama-tiotrifosfato, etc.), 5'-fosforamidatos ((H0)2(0)P-NH-5', (H0)(NH2)(0)P-0-5), 5'-alquilfosfonatos (R=alquila=metila, etila, iso-propila, propila, etc., por exemplo, RP(0H)(0)-0-5 (0H)2(0)P-5'-CH2 -),5'-alquileterfosfonatos (R=alquiléter=metoximetila (MeOCH2 -), etoximetila,etc., por exemplo, RP(0H)(0)-0-5 -).

O filamento de sentido pode ser modificado para inativar o fila-mento de sentido e prevenir a formação de um RISC ativo, desse modo re-duzindo potencialmente os efeitos fora do alvo. Isto pode ser realizado poruma modificação que previne 5'-fosforilação do filamento de sentido, por e-xemplo, por modificação com um ribonucleotídeo de 5'-0-metila (vide Nyka-nen e outros, (2001) ATP requirements and small interfering RNA structure inthe RNA interference pathway. Cell 107, 309-321). Outras modificações queprevinem a fosforilação também podem ser usadas, por exemplo, simples-mente substituindo o 5'-OH por H em lugar de OMe. Alternativamente, umgrupo volumoso grande pode ser adicionado ao 5'-fosfato que se transformaem uma ligação de fosfodiéster.Nucleobases não naturais

Nitropirrolila e nitroindolila são nucleobases não naturais que sãoos membros de uma classe de compostos conhecidos como bases univer-sais. As bases universais são aqueles compostos que podem substituirquaisquer das quatro bases de ocorrência natural sem substancialmenteafetar o comportamento de fusão ou atividade do dúplex de oligonucleotídeo.

Em contraste com as interações de ligação de hidrogênio, estabilizantes as-sociadas com nucleobases de ocorrência natural, é postulado que os dúple-xes de oligonucleotídeo contendo nucleobases de 3-nitropirrolila são estabi-lizados somente empilhando-se as interações. A ausência de interações deligação de hidrogênio significantes com nucleobases de nitropirrolila obvia aespecificidade para uma base complementar específica. Além disso, váriosrelatos confirmam que 4-, 5- e 6-nitroindolila exibem muito pouca especifici-dade para as quatro bases naturais. De forma interessante, um dúplex deoligonucleotídeo que contém 5-nitroindolila foi mais estável do que os oligo-nucleotídeos correspondentes que contêm 4-nitroindolila e 6-nitroindolila. Osprocedimentos para a preparação de 1-(2'-0-metil-p-D-ribofuranosil)-5-nitroindol são descritos em Gaubert, G.; Wengel, J., Tetrahedron Letters2004, 45, 5629. Outras bases universais tratáveis pela presente invençãoincluem hipoxantinila, isoinosinila, 2-aza-inosinila, 7-deaza-inosinila, nitroimi-dazolila, nitropirazolila, nitrobenzimidazolila, nitroindazolila, aminoindolila,pirrolopirimidinila, e derivados estruturais destes. Para uma descrição maisdetalhada, incluindo os procedimentos sintéticos, de nitropirrolila, nitroindoli-la, e outras bases universais mencionados acima vide Vallone e outros, Nu-cleic Acids Research, 27(17):3589-3596 (1999); Loakes e outros, J. Mol. Βί-ο., 270:426-436 (1997); Loakes e outros, Nucleic Acids Research,22(20):4039-4043 (1994); Oliver e outros, Organie Letters, Vol. 3(13): 1977-1980 (2001); Amosova e outros, Nueleic Acids Research, 25(10):1930-1934(1997); Loakes e outros, Nucleic Acids Research, 29(12):2437-2447 (2001);Bergstrom e outros, J. Am. Chem. Soe, 117:1201-1209 (1995); Franchetti eoutros, Biorg. Med. Chem. Lett. 11 :67-69 (2001); e Nair e outros, Nucelosi-des, Nucleotides & Nucleic Acids, 20(4-7):735-738 (2001).

Difluorotolila é uma nucleobase não natural que funciona comouma base universal. Difluorotolila é um isóstere de timina de nucleobase na-tural. Porém timina distinta, Difluorotolila não mostra nenhuma seletividadeapreciável para quaisquer das bases naturais. Outros compostos aromáticosque funcionam como bases universais e são tratáveis pela presente inven-ção são 4-flúor-6-metilbenzimidazol e 4-metilbenzimidazol. Além disso, osderivados de isocarboestirilila relativamente hidrofóbicos, isocarboestirila de3-metila, isocarboestirilila de 5-metila, e isocarboestirila de 3-metil-7-propinilasão bases universais que causam dèsestabilização somente leve de dúple-xes de oligonucleotídeo comparados à seqüência de oligonucleotídeo quecontém somente bases naturais. Outras nucleobases não naturais contem-piadas na presente invenção incluem 7-azaindolila, 6-metil-7-azaindolila, i-midizopiridinila, 9-metil-imidizopiridinila, pirrolopirizinila, isocarbostirilila, iso-carbostirilila de 7-propinila, propinila-7-azaindolila, 2,4,5-trimetilfenila, 4-metilindolila, 4,6-dimetilindolila, fenila, naptalenila, antracenila, fenantraceni-la, pirenila, estilbenila, tetracenila, pentacenila, e derivados estruturais des-tes. Para uma descrição mais detalhada, incluindo procedimentos sintéticos,de Difluorotolila, 4-flúor-6-metilbenzimidazol, 4-metilbenzimidazol, e outrasbases não naturais mencionadas acima, vide: Schweitzer e outro, J. Org.Chem., 59:7238 - 7242 (1994); Berger e outros, Nucleic Acids Research,(15):2911-2914 (2000); Moran e outros, J. Am. Chem. Soe, 119:2056-2057 (1997); Morais e outros, J. Am. Chem. Soe, 121:2323-2324 (1999);Guckian e outros, J. Am. Chem. Soe, 118:8182-8183 (1996); Morais e ou-tros, J. Am. Chem. Soe, 122(6):1001-1007 (2000); McMinn e outros, J. Am.Chem. Soe, 121:11585-11586 (1999); Guckian e outros, J. Org. Chem.,63:9652-9656 (1998); Moran e outros, Proc Natl. Acad. Sci., 94:10506-10511(1997); Das e outros, J. Chem. Soe, Perkin Trans., 1 :197-206 (2002); Shiba-ta e outros, J. Chem. Soe, Perkin Trans., 1:1605-1611 (2001); Wu e outros,J. Am. Chem. Soe, 122(32):7621-7632, (2000); O1NeiII e outros, J. Org.Chem., 67:5869-5875 (2002); Chaudhuri e outros, J. Am. Chem. Soe,117:10434-10442 (1995); e Patente U.S. N2 6.218.108.

Outros detalhes para a síntese e uso de bases universais sãodeterminados em PCT/US2005/025967 co-apropriado e co-pendente, depo-sitado em 21 de julho de 2005, desse modo incorporado nisto por referênciaem sua totalidade.

As bases universais podem ser particularmente úteis em situa-ções em que a pessoa tenta alvejar um gene em um organismo que mostrauma variabilidade entre cepas diferentes daquele organismo. Isto é freqüen- temente verdade até mesmo para regiões de um genoma viral que são con-sideradas como altamente conservadas. A incorporação de uma base uni-versal pode permitir o desígnio de agentes de iRNA que alvejam um númerogrande de cepas diferentes de um vírus embora elas difiram em um, ou al-guns, por exemplo, em até três, posições de nucleotídeo.

As bases universais são mais bem-incluídas em uma região deum agente de iRNA que seja menos sensível às combinações imperfeitas denucleotídeo com respeito a especificidade e atividade do agente de iRNA.Foi mostrado que a posição 2-9 do filamento anti-sentido de um agente deiRNA é muito sensível às combinações imperfeitas entre o filamento anti- sentido e um mRNA alvo, e esta região foi chamada a "região semente" deum agente de iRNA. Conseqüentemente, ao incorporar uma ou várias baseou bases universais em um agente de iRNA, ela ou elas são preferivelmenteincorporadas fora desta região de semente.

A Tabela 1F e Tabela 1G mostram os agentes de iRNA compre- endendo bases universais em posições mutuamente complementares nofilamento de sentido e anti-sentido. Porém, ao mesmo tempo em que esta éuma modalidade preferida dos agentes de iRNAs da presente invenção, oefeito da base universal em um agente de iRNA é mais pronunciado quandoa base universal esta presente no filamento anti-sentido. É então pressentido que a base no filamento de sentido em uma posição em que emparelharácom uma base universal no filamento anti-sentido, ou pode ser uma baseuniversal, ou qualquer outra base adequada, tal como a, u, c ou g. Preferi-velmente, a pessoa testará qual base em tal posição do filamento de sentidodeterminará a seletividade e/ou de atividade superior para o agente de iRNA. Alternativamente, a base pode ser escolhida a qual esteja presente nestaposição particular em uma maioria das variantes de gene alvo pretendidasserem inibidas em sua expressão através do agente de iRNA em questão.Transporte de agentes de iRNA em células

Não desejando estar ligado por qualquer teoria, a similaridadequímica entre os agentes de iRNA conjugados por colesterol e certos com-ponentes de lipoproteínas (por exemplo, colesterol, ésteres de colesterila,fosfolipídios) pode levar à associação de agentes de iRNA com lipoproteínas(por exemplo, LDL1 HDL) em sangue e/ou na interação do agente de iRNAcom componentes celulares que têm uma afinidade com colesterol, por e-xemplo, componentes da série de reações que transporta colesterol. As lipo-proteínas como também seus constituintes são absorvidos e processadospelas células por vários mecanismos de transporte ativos e passivos, porexemplo, sem limitação, endocitose de LDL ligado por receptor de LDL, en-docitose de LDLs oxidados ou de outro modo modificado por interação comreceptor A recuperador, absorção mediada por receptor B1 Recuperador decolesterol HDL no fígado, pinocitose, ou transporte de colesterol através dasmembranas por proteínas transportadoras de ABC (cassete de ligação deATP), por exemplo, ABC-A1, ABC-G1 ou ABC-G4. Conseqüentemente, osagentes de iRNA conjugados por colesterol poderiam desfrutar da captaçãofacilitada por células que possuem tais mecanismos de transporte, por e-xemplo, células do fígado. Como tal, a presente invenção fornece evidênciae métodos gerais para alvejar os agentes de iRNA para células que expres-sam certos componentes de superfície de célula, por exemplo, receptores,conjugando-se um Iigante natural para tal componente (por exemplo, coles-terol) ao agente de iRNA, ou conjugando-se uma porção química (por exem-plo, colesterol) ao agente de iRNA que se associa com ou se liga a um Iigan-te natural para o componente (por exemplo, LDL, HDL).

Outras Modalidades

Um RNA, por exemplo, agente de iRNA, pode ser produzido emuma célula in vivo, por exemplo, de modelos de DNA exógenos que são libe-rados na célula. Por exemplo, os modelos de DNA podem ser inseridos emvetores e usados como vetores de terapia de gene. Os vetores de terapia degene podem ser liberados a um indivíduo por, por exemplo, injeção intrave-nosa, administração local (Patente U.S. No. 5.328.470), ou através de inje-ção estereotática (vide, por exemplo, Chen e outro, Proc. Natl. Acad. Sei.USA 91:3054-3057, 1994). A preparação farmacêutica do vetor de terapia degene pode incluir o vetor de terapia de gene em um diluente aceitável, oupode compreender uma matriz de liberação lenta na qual o veículo de Iibera-ção de gene é incrustado. Por exemplo, os modelos de DNA podem incluirduas unidades de transcrição, uma que produz uma transcrição que inclui ofilamento de topo de um agente de iRNA e uma que produz uma transcriçãoque inclui a filamento de base de um agente de iRNA. Quando os modelossão transcritos, o agente de iRNA é produzido, e processado em fragmentosde agente de siRNA que medeiam o gene silenciando.

Formulação

A presente invenção também inclui composições e formulaçõesfarmacêuticas as quais incluem os compostos de dsRNA da invenção. Ascomposições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradasde vários modos dependendo de se tratamento local ou sistêmico é deseja-do e da área a ser tratada. Administração pode ser tópica, pulmonar, porexemplo, através de inalação ou insuflação de pós ou aerossóis, incluindopor nebulizador; intratraqueal, intranasal, epidérmica e transdérmica, oral ouparenteral. Administração parenteral inclui injeção ou infusão intravenosa,intraarterial, subeutânea, intraperitoneal ou intramuscular; ou administraçãointracraniana, por exemplo, intratecal ou intraventricular.

Composições e formulações farmacêuticas para administraçãotópica podem incluir emplastros transdérmicos, ungüentos, loções, cremes,géis, gotas, supositórios, sprays, líquidos e pós. Veículos farmacêuticos con-vencionais, bases aquosas, em pó ou oleosas, espessantes e outros maispodem ser necessários ou desejáveis. Conservantes revestidos, luvas e ou-tros mais podem também ser úteis. Formulações tópicas preferidas incluemaquelas nas quais os dsRNAs de uma invenção estão em mistura com umagente de liberação tópico tal como lipídeos, lipossomas, ácidos graxos, és-teres de ácido graxo, esteróides, agentes de quelação e tensoativos. Lipí-deos e lipossomas preferidos incluem neutros (por exemplo, dioleoilfosfatidiletanolamina = DOPE, dimiristoilfosfatidil colina = DMPC, distearolifosfatidilcolina), negativos (por exemplo, dimiristoilfosfatidil glicerol = DMPG) e catiô-nicos (por exemplo, dioleoiltetrametilaminopropila = DOTAP e dioleoilfosfati-dil etanolamina = DOTMA). DsRNAs de uma invenção podem ser encapsu-lados dentro de Iipossomas ou podem formar complexos a estes, em particu-lar a Iipossomas catiônicos. Alternativamente, dsRNAs podem ser comple-xados a lipídeos, em particular a lipídeos catiônicos. Ácidos graxos e ésterespreferidos incluem mas não são limitados a ácido araquidônico, ácido oléico,ácido eicosanóico, ácido láurico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido mirísti-co, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido linoléico, ácido linolênico, dicapra-to, tricaprato, monooleína, dilaurina, 1-monocaprato de glicerila, 1-dodecilazacicloeptan-2-ona, uma acilcarnitina, uma acilcolina, ou um ésterde C1-10 alquila (por exemplo, isopropilmiristato IPM), monoglicerídeo, digli-cerídeo ou sal farmaceuticamente aceitável destes. Formulações tópicas sãodescritas em detalhe em pedido de Patente U.S. No. de Série 09/315.298depositado em 20 de maio de 1999 o qual é incorporado aqui através de re-ferência em sua totalidade.

Composições e formulações para administração oral incluempós ou grânulos, microparticulados, nanoparticulados, suspensões ou solu-ções em água ou meios não aquosos, cápsulas, cápsulas de gel, sachês,comprimidos ou minicomprimidos.. Espessantes, agentes aromatizantes, di-luentes, emulsificantes, auxiliares de dispersão ou aglutinantes podem serdesejáveis. Formulações orais preferidas são aquelas nas quais dsRNAs deuma invenção são administradas em conjunção com um ou mais realçadoresde penetração, tensoativos, e quelantes. Tensoativos preferidos incluem áci-dos graxos e/ou ésteres ou sais destes, ácidos de bílis e/ou sais destes. Áci-dos/sais de bílis preferidos incluem ácido quenodesoxicólico (CDCA) e ácidoursodesoxiquenodesoxicólico (UDCA), ácido cólico, ácido desidrocólico, áci-do desoxicólico, ácido glicólico, ácido glicólico, ácido glicodesoxicólico, ácidotaurocólico, ácido taurodesoxicólico, tauro-24,25-diidro-fusidato de sódio eglicodiidrofusidato de sódio. Ácidos graxos preferidos incluem ácido araqui-dônico, ácido undecanóico, ácido oléico, ácido láurico, ácido caprílico, ácidocáprico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido linoléico, áci-do linolênico, dicaprato, tricaprato, monooleína, dilaurina, 1-monocaprato deglicerila, 1-dodecilazacicloeptan-2-ona, uma acilcarnitina, uma acilcolina, ouum monoglicerídeo, um diglicerídeo ou um sal farmaceuticamente aceitáveldestes (por exemplo, sódio). Também preferidas são combinações de real-çadores de penetração, por exemplo, ácidos/sais graxos em combinaçãocom ácidos/sais de bílis. Uma combinação particularmente preferida é o salde sódio de ácido láurico, ácido cáprico e UDCA. Realçadores de penetra-ção adicionais incluem éter de polioxietileno-9-laurila, éter de polioxietileno-20-cetila. DsRNAs de uma invenção podem ser liberados oralmente, emforma granular incluindo partículas secadas pulverizadas, ou complexadospara formar micro ou nanopartículas. Agentes de complexação de DsRNAincluem ácidos de poliamino; poliiminas; poliacrilatos; polialquilacrilatos, poli-oxetanos, polialquilcianoacrilatos; gelatinas cationizadas, albuminas, amidos,acrilatos, polietilenoglicóis (PEG) e amidos; polialquilcianoacrilatos; poliimi-nas derivadas de DEAE, pollulans, celuloses e amidos. Agentes de comple-xação particularmente preferidos incluem quitosana, N- trimetilquitosana,poli-L-lisina, polihistidina, poliornitina, poliesperminas, protamina, polivinilpiri-dina, politiodietilaminometiletileno P(TDAE), poliaminoestireno (por exemplo,p-amino), poli(metilcianoacrilato), poli(etilcianoacrilato), po-li(butilcianoacrilato), poli(isobutilcianoacrilato), poli(isohexilcianoacrilato),DEAE-metacrilato, DEAE-hexilacrilato, DEAE-acrilamida, DEAE-albumina eDEAE-dextrano, polimetilacrilato, polihexilacrilato, poli(ácido D,L-lático), po-li(ácido DL-lático-co-glicólico (PLGA), alginato, e polietilenoglicol (PEG).Formulações orais para dsRNAs e sua preparação são descritas em detalheem Pedido U.S. No. de Série 08/886.829 (depositado em 1 de julho de1997), No. de Série 09/108.673 (depositado em 1 de M. de 1998), No. deSérie 09/256.515 (depositado em 23 de fevereiro de 1999), No. de Série09/082.624 (depositado em 21 de maio de 1998) e No. de Série 09/315.298(depositado em 20 de maio de 1999), cada um dos quais é incorporado aquiatravés de referência em sua totalidade.

Composições e formulações para administração parenteral, in-tratecal ou intraventricular podem incluir soluções aquosas estéreis as quaispodem também conter tampões, diluentes e outros aditivos adequados taiscomo, mas não limitados a, realçadores de penetração, compostos de veícu-los e outros veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Composições farmacêuticas da presente invenção incluem, massão não limitadas a, soluções, emulsões, e formulaçõescontendo lipossoma.Estas composições podem ser geradas de uma variedade de componentesque incluem, mas não são limitados a, líquidos pré-formados, sólidos auto-emulsificantes e semisólidos auto-emulsificantes.

As formulações farmacêuticas da presente invenção, as quaispodem convenientemente ser apresentados em forma de dosagem unitária,podem ser preparadas de acordo com técnicas convencionais bem-conhecidas na indústria farmacêutica. Tais técnicas incluem a etapa de in-trodução em associação dos ingredientes ativos com o(s) veículo(es) ou ex-cipiente(s) farmacêutico(s). Em geral, as formulações são preparadas atra-vés de introdução uniformemente e intimamente em associação dos ingredi-entes ativos com veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ouambos, e em seguida, se necessário, moldagem do produto.

As composições da presente invenção podem ser formuladasem quaisquer de muitas formas de dosagem possíveis tais como, mas nãolimitadas a, comprimidos, cápsulas, cápsulas de gel, xaropes líquidos, géismacios, supositórios, e enemas. As composições da presente invenção po-dem também ser formuladas como suspensões em meios aquosos, não a-quosos ou mistos. Suspensões aquosas podem também conter substânciasas quais aumentam a viscosidade da suspensão incluindo, por exemplo,carboximetilcelulose de sódio, sorbitol e/ou dextrano. A suspensão podetambém conter estabilizantes.

Em uma modalidade da presente invenção, as composiçõesfarmacêuticas podem ser formuladas e usadas como espumas. Espumasfarmacêuticas incluem formulações tais como, mas não limitadas a, emul-sões, microemulsões, cremes, geléias e lipossomas. Embora basicamentesimilares por natureza, estas formulações variam nos componentes e naconsistência do produto final. A preparação de tais composições e formula-ções é geralmente conhecida àqueles versados nas técnicas de formulaçãoe farmacêuticas e pode ser aplicada à formulação das composições da pre-sente invenção.

Emulsões

As composições da presente invenção podem ser preparadas eformuladas como emulsões. Emulsões são sistemas tipicamente heterogê-neos de um líquido disperso em outro na forma de gotas geralmente exce-dendo 0,1 pm de diâmetro (ldson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lie-berman, Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman,Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N. Y., Vo-lume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger eBanker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N. Y., volume 2, p.335; Higuchi e outros, in Remington1S Pharmaceutical Sciences, Mack Publi-shing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301). Emulsões são freqüentemente siste-mas bifásicos compreendendo duas fases líquidas imiscíveis intimamentemisturadas e dispersas uma com a outra. Em geral, emulsões podem ser deou a variedade de água em óleo (água / óleo) ou a óleo em água (óleo / á-gua). Quando uma fase aquosa é finamente dividida em e dispersa comogotas de minuto em uma fase oleosa de volume, a composição resultante échamada uma emulsão de água em óleo (água / óleo). Alternativamente,quando uma fase oleosa é finamente dividida em e dispersa como gotas deminuto em uma fase aquosa de volume, a composição resultante é chamadauma emulsão de óleo em água (óleo / água). Emulsões podem conter com-ponentes adicionais além das fases dispersas, e o fármaco ativo o qual podeestar presente como uma solução ou na fase aquosa, fase oleosa ou sozi-nho como uma fase separada. Excipientes farmacêuticos tais como emulsifi-cantes, estabilizantes, tinturas, e anti-oxidantes podem também estar pre-sentes em emulsões quando necessário.

Emulsões farmacêuticas podem também ser emulsões múltiplasque são compreendidas de mais do que duas fases tais como, por exemplo,no caso de emulsões de óleo em água em óleo (óleo /água / óleo) e águaem óleo em água (água / óleo / água). Tais formulações de complexo fre-qüentemente fornecem certas vantagens que emulsões binárias simples nãofornecem. Múltiplas emulsões nas quais gotas de óleo individuais de umaemulsão de óleo / água encerram gotas de água pequenas constituem umaemulsão de água / óleo / água. Da mesma maneira um sistema de gotas deóleo encerradas em glóbulos de água estabilizados em uma fase contínuaoleosa fornece uma emulsão de óleo /água / óleo.

Emulsões são caracterizadas por pouca ou nenhuma estabilida-de termodinâmica. Freqüentemente, a fase dispersa ou descontínua da e-mulsão é bem dispersada na fase externa ou contínua e mantida nesta for-ma através de mecanismo de emulsificantes ou a viscosidade da formula-ção. Cada uma das fases da emulsão pode ser um semisólido ou um sólido,como é o caso de cremes e bases de ungüento de estilo de emulsão. Outromecanismo de emulsões de estabilização implica o uso de emulsificantesque possam ser incorporados em cada fase da emulsão. Emulsificantes po-dem amplamente ser classificados em quatro categorias: tensoativos sintéti-cos, emulsificantes de ocorrência natural, bases de absorção, e sólidos fi-namente dispersos (ldson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman,,Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N.Y., volu-me,p. 199).

Tensoativos sintéticos, também conhecidos como agentes ten-soativos, forneceram ampla aplicabilidade na formulação de emulsões e fo-ram revistos na literatura (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieber-man, Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N. Y.,volume 1, p. 285; ldson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rie-ger e Banker (Eds.), Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N.Y., 1988, volume 1,p. 199). Tensoativos são tipicamente anfifílicos e compreendem uma porçãohidrofílica e uma hidrofóbica. A relação da natureza hidrofílica para a hidro-fóbica do tensoativo foi chamada o equilíbrio de hidrófilo/lipófilo (HLB) e éuma ferramenta valiosa na categorização e seleção de tensoativos na prepa-ração de formulações. Tensoativos podem ser classificados em classes dife-rentes com base na natureza do grupo hidrofílico: não iônicos, aniônicos,catiônicos e anfotéricos (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieber-man, Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekkerl Inc., Nova Iorque, N. Y.,volume 1, p. 285).

Emulsifieantes de ocorrência natural usadas em formulações de emulsão incluem lanolina, cera de abelha, fosfatídeos, Iecitina e acácia. Ba-ses de absorção possuem propriedades hidrofílicas de modo que elas pos-sam absorver água para formar emulsões de água / óleo ainda reter suasconsistências semisólidas, tais como lanolina anidrosa e petrolato hidrofílico.Sólidos finamente divididos também foram usados como bons emulsificantesespecialmente em combinação com tensoativos e em preparações viscosas.Estes incluem sólidos inorgânicos polares, tais como hidróxidos de metalpesado, argilas não dilatáveis tais como bentonita, atapulgita, hectorita, cau-lim, montmorilonita, silicato de alumínio coloidal e silicato de alumínio demagnésio coloidal, pigmentos e sólidos não polares tais como carbono ou triestearato de glicerila.

Uma grande variedade de materiais não emulsificantes são tam-bém incluídos em formulações de emulsão e contribui para as propriedadesde emulsões. Estes incluem gorduras, óleos, ceras, ácidos graxos, álcooisgraxos, ésteres graxos, umectantes, colóides hidrofílicos, conservantes e antioxidantes (Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger eBanker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N. Y., volume 1, p.335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger e Banker(Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova lorque, N.Y., volume 1, p. 199).

Colóides ou hidrocolóides hidrofílicos incluem gomas de ocor- rência natural e polímeros sintéticos tal como polissacarídeos (por exemplo,acácia, ágar, ácido algínico, carragenina, goma guar, goma caraia, e traga-canto), derivados de celulose (por exemplo, carboximetilcelulose e carboxi-propilcelulose), e polímeros sintéticos (por exemplo, carbômeros, éteres decelulose, e polímeros de carboxivinila). Estes dispersam ou intumescem-se em água para formar soluções coloidais que estabilizam emulsões atravésde formação de películas interfaciais fortes em torno das gotas de fase dis-persa e através de aumento da viscosidade da fase externa.Uma vez que emulsões freqüentemente contêm vários ingredi-entes tais como carboidratos, proteínas, esteróis e fosfatídeos que podemfacilmente suportar o desenvolvimento de micróbios, estas formulações fre-qüentemente incorporam conservantes. Conservantes comumente usadosincluídos em formulações de emulsão incluem parabeno de metila, parabenode propila, sais de amônio quaternário, cloreto de benzalcônio, ésteres deácido p-hidroxibenzóico, e ácido bórico. Antioxidantes são também comu-mente adicionados a formulações de emulsão para prevenir deterioração daformulação. Antioxidantes usados podem ser eliminadores de radical livretais como tocoferóis, gaiatos de alquila, hidroxianisol butilado, hidroxitoluenobutilado, ou agentes de redução tais como ácido ascórbico e metabissulfetode sódio, e sinergistas de antioxidante tais como ácido cítrico, ácido tartári-co, e lecitina.

A aplicação de formulações de emulsão por meio de rotinas emétodos dermatológicos, orais e parenterais para sua manufatura foi revistana literatura (ldson, in Pharmaceutical Dosage Forms, LiebeTTnan, Rieger eBanker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N. Y., volume 1, p.199). Formulações de emulsão para liberação oral foram muito amplamente,usadas por causa de facilidade de formulação, assim como eficácia de umaabsorção e ponto de vista de biodisponibilidade (Rosoff, in PharmaceuticalDosage Forms, Lieberman1 Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker,Inc., Nova lorque, N. Y., volume 1, p. 245; ldson, in Pharmaceutical DosageForms, Lieberman, Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Novalorque, N. Y., volume 1, p. 199). Laxantes de base de óleo mineral, vitaminassolúveis em óleo e preparações nutritivas de gordura elevada estão entre osmateriais foram comumente administrados oralmente como emulsões deóleo / água.

Em uma modalidade da presente invenção, as composições dedsRNAs e ácidos nucléicos são formuladas como microemulsões. Uma mi-croemulsão pode ser definida como um sistema de água, óleo e anfífilo aqual é uma solução opticamente isotrópica única e líquida termodinamica-mente estável (Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Riegere Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N.Y., volume 1, p.245). Tipicamente microemulsões são sistemas que são preparados por pri-meiramente dispersão de um óleo em uma solução de tensoativo aquosa eem seguida adição de uma quantidade suficiente de um quarto componente,geralmente um álcool de comprimento de cadeia intermediário para formarum sistema transparente. Por esse motivo, microemulsões também foramdescritas como dispersões termodinamicamente estáveis isotropicamenteclaras de dois líquidos imiscíveis que são estabilizadas por películas interfa-ciais de moléculas tensoativas (Leung e Shah, in: controlada liberar ofDrugs: Polymers and agregado Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publi-shers, Nova Iorque, páginas 185 a 215). Microemulsões comumente sãopreparadas por meio de uma combinação de três a cinco componentes queincluem óleo, água, tensoativo, cotensoativo e eletrólito. Se a microemulsãoé do tipo de água em óleo (água / óleo) ou um óleo em água (óleo / água) édependente das propriedades do óleo e tensoativo usados e da estrutura eembalagem geométrica das cabeças polares e filas de hidrocarboneto dasmoléculas de tensoativo (Schott, in Remington1S Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).

Os métodos fenomenológicos utilizando diagramas de fase fo-ram extensivamente estudados e renderam um conhecimento compreensivo,àquele versado na técnica, de como formular microemulsões (Rosoff, inPharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger e Banker (Eds.), 1988,Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N. Y., volume 1, p. 245; Block, in Pharma-ceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger e Banker (Eds.), 1988, MareeiDekker, Inc., Nova Iorque, N.Y., volume 1, p. 335). Comparado a emulsõesconvencionais, microemulsões oferecem a vantagem de solubilização defármacos insolúveis em água em uma formulação de gotas termodinamica-mente estáveis que são formadas espontaneamente.

Tensoativos usados na preparação de microemulsões incluem,mas não são limitados a, tensoativos iônicos, tensoativos não iônicos, Brij96, éteres de oleíla de polioxietileno, ésteres de ácido graxo de poliglicerol,monolaurato de tetraglicerol (ML310), monooleato de tetraglicerol (M0310),monooleato de hexaglicerol (P0310), pentaoleato de hexaglicerol (P0500),monocaprato de decaglicerol (MCA750), monooleato de decaglicerol(M0750), sequioleato de decaglicerol (S0750), decaoleato de decaglicerol(DA0750), sozinhos ou em combinação com cotensoativos. O cotensoativo,geralmente um álcool de cadeia curta tal como etanol, 1-propanol, e 1-butanol, serve para aumentar a fluidez interfacial através de penetração napelícula de tensoativo e conseqüentemente criando uma película desorde-nada por causa do espaço vazio gerado entre moléculas de tensoativo.

Microemulsões podem, no entanto, ser preparadas sem o uso decotensoativos e sistemas de microemulsão auto-emulsificante livre de álcoolsão conhecidas na técnica. A fase aquosa pode tipicamente ser, mas é nãolimitada a, água, uma solução aquosa do fármaco, glicerol, PEG300,PEG400, poligliceróis, propileno glicóis, e derivados de etileno glicol. A fasede óleo pode incluir, mas é não limitada a, materiais tais como Captex 300,Captex 355, Capmul MCM, ésteres de ácido graxo, mono, di, e tri-glicerídeosde (C8-Ci2) de cadeia média, ésteres de ácido graxo de glicerila polioxietila-da, álcoois graxos, glicerídeos poliglicolizados, glicerídeos de C8-Ci0 poligli-colizados saturados, óleos vegetais e óleo de silicone.

Microemulsões são particularmente de interesse do ponto devista de solubilização de fármaco e a absorção realçada de fármacos. Micro-emulsões com base em lipídeo (tanto óleo / água quanto água / óleo) forampropostas para realçar a biodisponibilidade oral de fármacos, incluindo pep-tídeos (Constantinides e outros, Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385 a1390; Ritschel, met. encontram. Exp. Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205). Mi-croemulsões fornecem vantagens de solubilização de fármaco melhorada,proteção de fármaco de hidrólise enzimática, realce possível de absorção defármaco devido a alterações induzidas por tensoativo na fluidez e permeabi-lidade de membrana, facilidade de preparação, facilidade de administraçãooral sobre formas de dosagem sólidas, potência clínica melhorada, e toxici-dade diminuída (Constantinides e outros, Pharmaceutical Research, 1994,11, 1385; Ho e outros, J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138 a 143). Freqüentementemicroemulsões podem formar-se espontaneamente quando seus componen-tes são postos juntos em temperatura ambiente. Isto pode ser particularmen-te vantajoso quando formulando fármacos termolábeis, peptídeos ou dsR-NAs. Microemulsões também foram eficazes na liberação transdérmica decomponentes ativos em aplicações tanto cosméticas quanto farmacêuticas.

É esperado que as composições e formulações de microemulsão da presen-te invenção facilitem a absorção sistêmica aumentada de dsRNAs e ácidosnucléicos do trato gastrointestinal, assim como melhorem a captação celularlocal de dsRNAs e ácidos nucléicos dentro do trato gastrointestinal, vagina,cavidade bucal e outras áreas de administração.

Microemulsões da presente invenção podem também contercomponentes e aditivos adicionais tais como monoestearato de sorbitano(Grill 3), Labrasol, e realçadores de penetração para melhorar as proprieda-des da formulação e para realçar a absorção dos dsRNAs e ácidos nucléicosda presente invenção. Realçadores de penetração usados nas microemul-sões da presente invenção podem ser classificados como pertencendo a umde cinco tensoativos de categorias amplas, ácidos graxos, sais de bílis, a-gentes de quelação, e não tensoativos de não quelação (Lee e outros, Criti-cai Reviews in terapêutico Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). Cada umadestas classes foram discutidas acima.

Lipossomas

Há muitas estruturas de tensoativo organizadas além de micro-emulsões que foram estudadas e usadas para a formulação de fármacos.Estas incluem monocamadas, micelas, bicamadas e vesículas. Vesículas,tais como lipossomas, atraíram grande interesse por causa de sua especifi-cidade e a duração de ação que elas oferecem do ponto de vista de libera-ção de fármaco. Tal como usado na presente invenção, o termo "lipossoma"quer dizer uma vesícula composta de lipídeos anfifílicos arranjados em umabicamada ou bicamadas esféricas.

Lipossomas são vesículas unilamelares ou multilamelares asquais possuem uma membrana formada de um material Iipof ílico e um interi-or aquoso. A porção aquosa contém a composição a ser liberada. Liposso-mas catiônicos possuem a vantagem de serem capazes de fundir-se à pare-de celular. Lipossomas não catiônicos, ainda que não capazes de fundir-setão eficientemente com a parede celular, são absorvidos por macrófagos invivo.

A fim de atravessar pele de mamífero intacta, vesículas de lipí-deo devem passar através de uma série de poros finos, cada um com umdiâmetro menor do que 50 nm, sob a influência de um gradiente transdérmi-co adequado. Por esse motivo, é desejável usar um Iipossoma o qual é al-tamente deformável e capaz de passar através de tais poros finos.

Vantagens adicionais de Iipossomas incluem; Iipossomas obti-dos de fosfolipídeos naturais são biocompatíveis e biodegradáveis; Iiposso-mas podem incorporar uma ampla faixa de água e fármacos solúveis emlipídeo; Iipossomas podem proteger fármacos encapsulados em seus com-partimentos internos de metabolismo e degradação (Rosoff, in Pharmaceuti-cal Dosage Forms, Lieberman, Rieger e Banker (Eds.), 1988, Mareei Dekker,Inc., Nova Iorque, N.Y., volume 1, p. 245). Considerações importantes napreparação de formulações de Iipossoma são a carga de superfície de lipí-deo, tamanho de vesícula e o volume aquoso dos lipossomas.

Lipossomas são úteis para a transferência e liberação de ingre-dientes ativos ao sítio de ação. Porque a membrana lipossômica é estrutu-ralmente similar a membranas biológicas, quando lipossomas são aplicadosa um tecido, os lipossomas começam a fundir-se com as membranas celula-res e quando a fusão de célula e Iipossoma progride, os conteúdos lipossô-micos são esvaziados na célula em que o agente ativo pode agir.

Formulações lipossômicas foram o foco de investigação extensi-va como o modo de liberação para muitos fármacos. Neste sentido está cri-ando evidência de que para administração tópica, lipossomas apresentamdiversas vantagens sobre outras formulações. Tais vantagens incluem efei-tos colaterais reduzidos relacionados a absorção sistêmica alta do fármacoadministrado, acúmulo aumentado do fármaco administrado no alvo deseja-do, e a capacidade para administrar uma ampla variedade de fármacos, tan-to hidrofílicos quanto hidrofóbicos, na pele.

Diversas relatos detalharam a capacidade de lipossomas paraliberar agentes incluindo DNA de peso molecular elevado na pele. Compos-tos incluindo analgésicos, anticorpos, hormônios e DNAs de peso molecularelevado foram administrados à pele. A maior parte das aplicações resultouno alvejamento da epiderme superior.

Lipossomas classificam -se em duas amplas classes. Liposso-mas catiônicos são lipossomas positivamente carregados os quais interagemcom as moléculas de DNA negativamente carregadas para formar um com-plexo estável. O complexo de DNA/lipossoma positivamente carregado liga-se à superfície celular negativamente carregada e é internalizado em umendossoma. Devido ao pH acídico dentro do endossoma, os lipossomas sãorompidos, liberando seus conteúdos no citoplasma celular (Wang e outros,Biochem. Biophys. Res. Commun., 1987, 147, 980 a 985).

Lipossomas os quais são sensíveis a pH ou negativamente car-regados, capturam DNA em vez de complexar-se com ele. Uma vez que tan-to o DNA quanto o lipídeo são similarmente carregados, repulsão em vez deformação de complexo ocorre. No entanto, um pouco de DNA é capturadodentro do interior aquoso destes lipossomas. Lipossomas sensíveis a pHforam usados para liberar DNA codificando o gene de timidina cinase a mo-nocamadas de célula em cultura. Expressão do gene exógeno foi detectadanas células alvo (Zhou e outros, Journal of controlada liberar, 1992, 19, 269a 274).

Um tipo principal de composição lipossômica inclui fosfolipídeosoutro a não ser fosfatidilcolina naturalmente derivada. Composições de li-possoma neutras, por exemplo, podem ser formadas de fosfatidilcolina dedimiristoíla (DMPC) ou fosfatidilcolina de dipalmitoíla (DPPC). Composiçõesde lipossoma aniônicas geralmente são formadas de fosfatidilglicerol de di-miristoíla, enquanto lipossomas fusogênicos aniônicos são formados prima-riamente de fosfatidiletanolamina de dioleoíla (DOPE). Outro tipo de compo-sição lipossômica é formado de fosfatidilcolina (PC) tal como, por exemplo,PC de soja, e PC de ovo. Outro tipo é formado de misturas de fosfolipídeoe/ou fosfatidilcolina e/ou colesterol.

Diversos estudos avaliaram a liberação tópica de formulações defármaco lipossômico à pele. Aplicação de Iipossomas contendo interferon apele de cobaia resultou em uma redução de feridas de herpes de pele en-quanto liberação de interferon por meio de outro mecanismo (por exemplo,como uma solução ou como uma emulsão) foi ineficaz (Weiner e outros,Journal of Drug Targeting, 1992, 2, 405 a 410). Além disso, um estudo adi-cional testou a eficácia de interferon administrado como parte de uma formu-lação lipossômica à administração dé interferon usando um sistema aquoso,e concluiu que a formulação lipossômica foi superior a administração aquosa(du Plessis e outros, Antiviral Research, 1992, 18, 259 a 265).

Sistemas lipossômicas não iônicos também foram examinadospara determinar sua utilidade na liberação de fármacos à pele, em sistemasparticulares compreendendo tensoativo não tônico e colesterol. Formulaçõeslipossômicas não tônicas compreendendo Novasome.TM. I (dilaurato de gli-cerila/colesterol/éter de polioxietileno-10-estearila) e Novasome.TM. Il (dies-tearato de glicerila/colesterol/ éter de polioxietileno-10-estearila) foram usa-das para liberar ciclosporina-A na derme de pele de camundongo. Resulta-dos indicaram que tais sistemas lipossômicos não iônicos foram eficazes nafacilitação da deposição de ciclosporina-A em diferentes camadas da pele-(Hu e outros S.T.P.Pharma. ScL, 1994, 4, 6, 466).

Lipossomas também incluem Iipossomas "estericamente estabi-lizados", um termo o qual, tal como usado aqui, refere-se a Iipossomas com-preendendo um ou mais lipídeos especializados que, quando incorporadosem lipossomas, resultam em tempos de vida de circulação realçados relati-vos a lipossomas necessitando de tais lipídeos especializados. Exemplos delipossomas estericamente estabilizados são aqueles nos quais parte da por-ção de lipídeo de formação de vesícula do Iipossoma (A) compreende um oumais glicolipídeos, tais como monossialogangliosídeo Gn, 1, ou (B) é deriva-da com um ou mais polímeros hidrofílicos, tais como uma porção de polieti-leno glicol (PEG). Embora não desejando ser ligado por qualquer teoria par-ticular, é pensado na técnica que, pelo menos para lipossomas estericamen-te estabilizados contendo gangliosídeos, esfingomielina, ou lipídeos deriva-dos de PEG, a meia vida de circulação realçada destes lipossomas esteri-camente estabilizados deriva de uma captação reduzida ern células do sis-tema reticuloendotelial (RES) (Allen e outros, FEBS letras, 1987, 223, 42;Wu e outros, Câncer Research, 1993, 53, 3765).

Vários Iipossomas compreendendo um ou mais glicolipídeos sãoconhecidos na técnica. Papahadjopoulos e outros (Ann. Ν. Y. Acad. Sci.,1987, 507, 64) relataram a capacidade de monosialogangliosídeo GjnI, sulfa-to de galactocerebrosídeo e fosfatidilinositol de melhorar meias vidas desangue de lipossomas. Estes resultados foram expostos em Gabizon e ou-tros (Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.uma., 1988, 85, 6949). Patente U.S. No.4.837.028 e WO 88/04924, ambos para Allen e outros, descrevem liposso-mas compreendendo (1) esfingomielina e (2) o gangliosídeo GmI ou um ésterde sulfato de galactocerebrosídeo. Patente U.S. N- 5.543.152 (Webb e ou-tros) descreve lipossomas compreendendo esfingomielina. Lipossomascompreendendo 1,2-sn-dimiristoilfosfatidilcolina são descritos em WO97/13499 (Lim e outros).

Muitos lipossomas compreendendo lipídeos derivados com umou mais polímeros hidrofílicos, e métodos de preparação destes, são conhe-cidos na técnica. Sunamoto e outros (Buli. Chem. Soe. Jpn., 1980, 53, 2778)descreveram lipossomas compreendendo um detergente não iônico, 2C1215G,que contém uma porção de PEG. Ilium e outros (FEBS Lett., 1984, 167, 79)notou que revestimento hidrofílico de partículas dé poliestireno com glicóispoliméricos resulta em meias vidas de sangue significantemente realçadas.Fosfolipídeos sintéticos modificados pela ligação de grupos carboxílicos depolialquileno glicóis (por exemplo, PEG) são descritos por Sears (PatenteU.S. N25 4.426.330 e 4.534.899). Klibanov e outros (FEBS Lett., 1990, 268,235) descreveu experimentos demonstrando que lipossomas compreenden-do fosfatidiletanolamina (PE) derivada com estearato de PEG ou PEG pos-suem significantes aumentos em meias vidas de circulação sangüínea. Blu-me e outros (Biochimica et Biophysica Acta, 1990, 1029, 91) estendeu taisobservações a outros fosfolipídeos derivados de PEG, por exemplo, DSPE-PEG, formados da combinação de distearoilfosfatidiletanolamina (DSPE) ePEG. Lipossomas possuindo porções de PEG covalentemente ligadas emsua superfície externa são descritos em Patente Européia Ne EP 0 445 131Bl e WO 90/04384 para Fisher. Composições de Iipossoma contendo por-centagem de 1 a 20 mole de PE derivado com PEG, e métodos de uso des-tes, são descritas por Woodle e outros (Patente U.S. N— 5.013.556 e5.356.633) e Martin e outros (Patente U.S. N9 5.213.804 e Patente EuropéiaN9 EP 0 496 813 BI). Lipossomas compreendendo vários outros conjugadosde lipídeo-polímero são descritos em WO 91/05545 e Patente U.S. N95.225.212 (ambos a Martin e outros) e em WO 94/20073 (Zalipsky e outros).Lipossomas compreendendo lipídeos de ceramida modificados por PEG sãodescritos em WO 96/10391 (Choi e outros). Patente U.S. N9 5.540.935 (Mi-yazaki e outros) e Patente U.S. N9 5.556.948 (Tagawa e outros) descrevemlipossomas contendo PEG que podem ser também derivados com porçõesfuncionais em suas superfícies.

Um número limitado de Iipossomas compreendendo ácidos nu-cléicos é conhecido na técnica. WO 96/40062 para Thierry e outros descrevemétodos para encapsulamento de ácidos nucléicos de peso molecular ele-vado em lipossomas. Patente U.S. N9 5.264.221 para Tagawa e outros des-creve Iipossomas ligados a proteína e afirma que os conteúdos de tais lipos-somas podem incluir dsRNA. Patente U.S. Ns 5.665.710 para Rahman e ou-tros descreve certos métodos de encapsulamento de oligodesoxinucleotí-deos em lipossomas. WO 97/04787 para Love e outros descreve lipossomascompreendendo dsRNAs alvejados ao gene de raf.

Transfersomas são ainda outro tipo de lipossomas, e são agre-gados de lipídeo altamente deformáveis os quais são candidatos atrativospara veículos de liberação de fármaco. Transfersomas podem ser descritoscomo gotas de lipídeo as quais são tão altamente deformáveis que elas sãofacilmente capazes de penetrar através de poros os quais são menores doque a gota. Transfersomas são adaptáveis ao meio ambiente no qual elessão usados, por exemplo, eles são auto-otimizantes (adaptáveis à forma deporos na pele), auto-reparadores, freqüentemente alcançam seus alvos semfragmentação, e freqüentemente auto-carregadores. Para produzir transfer-somas é possível adicionar ativadores de borda de superfície, geralmentetensoativos, a uma composição lipossômica padrão. Transfersomas foramusados para liberar albumina de soro à pele. A liberação mediada por trans-fersoma de soro albumina mostrou ser tão eficaz como injeção subcutâneade uma solução contendo albumina de soro.

Tensoativos encontram ampla aplicação em formulações taiscomo emulsões (incluindo microemulsões) e lipossomas. O mais comummodo de classificação e graduação das propriedades dos muitos diferentestipos de tensoativos, ambos naturais e sintéticos, é pelo uso do equilíbrio dehidrófilo/lipófilo (HLB). A natureza do grupo hidrofílico (também conhecidocomo a "cabeça") fornece o mais úteis mecanismo para categorização dosdiferentes tensoativos usados em formulações (Rieger, in PharmaceuticalDosage Forms, Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque, N. Y., 1988, p. 285).

Se a molécula de tensoativo é não ionizada, ela é classificadacomo um tensoativo não iônico. Tensoativos não iônicos encontram amplaaplicação em produtos farmacêuticos e cosméticos e são utilizáveis sobreuma ampla faixa de valores de pH. Em geral seus valores de HLB variam de2 a cerca de 18 dependendo de sua estrutura. Tensoativos não iônicos in-cluem ésteres não iônicos tais como ésteres de etileno glicol, ésteres depropileno glicol, ésteres de glicerila, ésteres de poliglicerila, ésteres de sorbi-tano, ésteres de sacarose, e ésteres etoxilados. Alcanolamidas e éteres nãoiônicos tais como etoxilados de álcool graxo, álcoois propoxilados, e políme-ros em bloco etoxilados/propoxilados são também incluídos nesta classe. Ostensoativos de polioxietileno são os membros mais populares da classe detensoativo não iônico.

Se a molécula de tensoativo porta uma carga negativa quandoela é dissolvida ou dispersa em água, o tensoativo é classificado como aniô-nico. Tensoativos aniônicos incluem carboxilatos tais como sabões, Iactilatosde acila, amidas de acila de ácidos de amino, ésteres de ácido sulfúrico taiscomo sulfatos de alquila e sulfatos de alquila etoxilados, sulfonatos tais co-mo sulfonatos de benzeno de alquila, isetionatos de acila, tauratos de acila esulfosucinatos, e fosfatos. Os membros mais importantes da classe de ten-soativo aniônico são os sulfatos de alquila e os sabões.Se a molécula de tensoativo porta uma carga positiva quandoela é dissolvida ou dispersa em água, o tensoativo é classificado como cati-ônico. Tensoativos catiônicos incluem sais de amônio quaternário e aminasetoxiladas. Os sais de amônio quaternário são os membros mais usadosdesta classe.

Se a molécula de tensoativo possui a capacidade para portar ouuma carga positiva ou negativa, o tensoativo é classificado como anfotérico.Tensoativos anfotéricos incluem derivados de ácido acrílico, alquilamidassubstituídas, N-alquilbetaínas e fosfatídeos.

O uso de tensoativos em produtos de fármaco, formulações eem emulsões foi revisto (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, MareeiDekker, Inc., Nova Iorque, N. Y., 1988, p. 285).Realcadores de penetração

Em uma modalidade, a presente invenção emprega vários real-çadores de penetração para efetuar a liberação eficiente de ácidos nucléi-cos, particularmente dsRNAs, à pele de animais. Mais fármacos estão pre-sentes em solução em formas tanto ionizada quanto não ionizada. No entan-to, geralmente apenas fármacos solúveis em lipídeo ou lipofílicos facilmenteatravessam membranas de célula. Foi descoberto que até fármacos não Ii-pofílicos podem atravessar membranas de célula se a membrana a ser atra-vessada é tratada com um realçador de penetração. Além de auxílio da difu-são de fármacos não lipofílicos através de membranas de célula, realçado-res de penetração também realçam a permeabilidade de fármacos lipofílicos.

Realçadores de penetração podem ser classificados como per-tencendo a um de cinco amplas categorias, isto é, tensoativos, ácidos gra-xos, sais de bílis, agentes de quelação, e não tensoativos de não quelação(Lee e outros, Criticai Reviews in terapêutico Drug Carrier Systems, 1991,p.92). Cada uma das classes mencionadas acima de realçadores de pene-tração são descritas abaixo em maior detalhe.Tensoativos: com relação à presente invenção, tensoativos (ou"agentes tensoativos") são entidades químicas as quais, quando dissolvidasem uma solução aquosa, reduzem a tensão de superfície da solução ou atensão interfacial entre a solução aquosa e outro líquido, com o resultado deque absorção dé dsRNAs através da mucosa é realçada. Além de sais debílis e ácidos graxos, estes realçadores de penetração incluem, por exemplo,lauril sulfato de sódio, éter de polioxietileno-9- Iaurila e éter de polioxietileno-20-cetila) (Lee e outros, Criticai Reviews in terapêutico Drug Carrier Sys-tems, 1991, p.92); e emulsões perfluoroquímicas, tais como FC-43 (Takaha-shi e outros, J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252).

Ácidos graxos: vários ácidos graxos e seus derivados os quaisagem como realçadores de penetração incluem, por exemplo, ácido oléico,ácido láurico, ácido cáprico (ácido n-decanóico), ácido mirístico, ácido palmí-tico, ácido esteárico, ácido linoléico, ácido linolênico, dicaprato, tricaprato,monooleína (1-monooleoil-rac-glicerol), dilaurina, ácido caprílico, ácido ara-quidônico, 1-monocaprato de glicerol, 1 -dodecilazacicloeptan-2-ona, acilcar-nitinas, acilcolinas, ésteres de Ci - C-ιο alquila destes (por exemplo, metila,isopropila e t-butila), e mono- e diglicerídeos destes (isto é, oleato, laurato,caprato, miristato, palmitato, estearato, linoleato, etc.) (Lee e outros, CriticaiReviews in terapêutico Drug Carryier Systems, 1991, p.92; Muranishi, CriticaiReviews in terapêutico Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1 a 33; El Hariri e ou-tros, J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651 a 654).

Sais de bílis: o papel fisiológico de bílis inclui a facilitação dedispersão e absorção de lipídeos e vitaminas solúveis em gordura (Brunton,Chapter 38 em: bonsman & Gilman's The Pharmacological Basis of terapêu-ticos, 9th Ed., Hardman e outros Eds., MçGraw-Hill, Nova Iorque, 1996, pá-ginas 934 a 935). Vários sais de bílis naturais, e seus derivados sintéticos,agem como realçadores de penetração. Desta forma o termo "sais de bílis"inclui quaisquer dos componentes de ocorrência natural de bílis assim comoquaisquer de seus derivados sintéticos. Os sais de bílis de uma invençãoincluem, por exemplo, ácido eólico (ou seu sal de sódio farmaceuticamenteaceitável, colato de sódio), ácido desidrocólico (desidrocolato de sódio), áci-do desoxicólico (desoxicolato de sódio), ácido glicólico (glucolato de sódio),ácido glicólico (glicocolato de sódio), ácido glicodesoxicólico (glicodesoxico-Iato de sódio), ácido taurocólico (taurocolato de sódio), ácido taurodesoxicó-Iico (taurodesoxicolato de sódio), ácido quenodesoxicólico (quenodesoxicola-to de sódio), ácido ursodesoxicólico (UDCA), tauro-24,25-diidro-fusidato desódio (STDHF), glicodiidrofusidato de sódio e éter de polioxietileno-9-laurila(POE) (Lee e outros, Criticai Reviews in terapêutico Drug Carrier Systems,1991, página 92; Swinyard, Chapter 39 hi: Remington1S Pharmaceutical Sci-ences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pá-ginas 782 a 783; Muranishi, Criticai Reviews in terapêutico Drug Carrier Sys-tems, 1990, 7, 1 a 33; Yamamoto e outros, J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263,25; Yamashita e outros, J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579 a 583).

Agentes de quelação: agentes de quelação, tal como usadoscom relação à presente invenção, podem ser definidos como compostos queremovem íons metálicos de solução por formação de complexos com este,com o resultado de que absorção de dsRNAs através da mucosa é realçada.Em relação a seu uso como realçadores de penetração na presente inven-ção, agentes de quelação possuem a vantagem adicionada de também ser-vir como inibidores de DNase, quando mais DNA nucleases caracterizadasrequerem um íon de metal bivalente para catálise e são desta forma inibidospor agentes de quelação (Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315 a 339).Agentes de quelação de uma invenção incluem mas não são limitados a eti-Ienodiaminatetraacetato de disódio (EDTA), ácido cítrico, salicilatos (por e-xemplo, salicilato de sódio, 5-metoxisalicilato e homovanilato), derivados deN-acila de colágeno, laureth-9 e derivados de acila de N-amino de beta-dicetonas (enaminas) (Lee e outros, Criticai Reviews in terapêutico DrugCarrier Systems, 1991, página 92; Muranishi, Criticai Reviews in terapêuticoDrug Carrier Systems, 1990, 7, 1 a 33; Buur e outros, J. Control Rel., 1990,14, 43 a 51).

Não tensoativos de não quelação: tal como usado aqui, compos-tos de realce de penetração de não tensoativo de não quelação podem serdefinidos como compostos que demonstram atividade insignificante comoagentes de quelação ou como tensoativos mas que todavia realçam absor-ção de dsRNAs através da mucosa alimentar (Muranishi, Criticai Reviews interapêutico Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1 a 33). Esta classe de realçado-res de penetração incluem, por exemplo, uréias cíclicas insaturadas, deriva-dos de 1 -alquil- e 1 -alquenilazaciclo-alcanona (Lee e outros, Criticai Reviewsin terapêutico Drug Carrier Systems, 1991, página 92); e agentes antiinfla-matórios não esteroidais tais como diclofenaco sódico, indometacina e fenil-butazona (Yamashita e outros, J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621 a 626).

Agentes que realçam captação de dsRNAs no nível celular po-dem também ser adicionados às composições farmacêuticas e outras dapresente invenção. Por exemplo, lipídeos catiônicos, tais como Iipofectina(Junichi e outros, Patente U.S. Nq 5.705.188), derivados de glicerol catiônico,e moléculas policatiônicas, tais como polilisina (Lollo e outros, Pedido dePCT WO 97/30731), são também conhecidos realçarem a captação celularde dsRNAs.

Outros agentes podem ser utilizados para realçar a penetraçãodos ácidos nucléicos administrados, incluindo glicóis tais como etileno glicole propileno glicol, pirróis tais como 2-pirrol, azonas, e terpenos tais comolimoneno e mentona.Veículos

Certas composições da presente invenção também incorporam·compostos de veículo na formulação. Tal como usado aqui, "composto deveículo" ou "veículo" podem referir-se a um ácido nucléico, ou análogo des-tes, o qual é inerte (isto é, não possui atividade biológica de per si) mas éreconhecido como um ácido nucléico através de processos in vivo que redu-zem a biodisponibilidade de um ácido nucléico possuindo atividade biológicaatravés de, por exemplo, degradação do ácido nucléico biologicamente ativoou promoção de sua remoção de circulação. A coadministração de um ácidonucléico e um composto veículo, tipicamente com um excesso da últimasubstância, pode resultar em uma redução substancial da quantidade deácido nucléico recuperado no fígado, rim ou outros reservatórios extracircu-latórios, presumivelmente devido a competição entre o composto veículo e oácido nucléico para um receptor comum. Por exemplo, a recuperação de umdsRNA de fosforotioato parcialmente em tecido hepático pode ser reduzidaquando ele é coadministrado com ácido poliinosínico, sulfato de dextrano,ácido policitídico ou ácido 4-acetamido-4'isotiociano-estilbeno-2,2l-dissulfônico (Miyao e outros, anti-sentido Res. Dev., 1995, 5, 115 a 121; Ta-kakura e outros, anti-sentido & Nucl. Acid Drug Dev., 1996, 6, 177 a 183.Excipientes

Em contraste a um composto de veículo, um "veículo farmacêu-tico" ou "excipiente" é um solvente farmaceuticamente aceitável, agente desuspensão ou qualquer outro veículo farmacologicamente inerte para libera-ção de um ou mais ácidos nucléicos a um animal. O excipiente pode ser lí-quido ou sólido e é selecionado, com a maneira planejada de administração em mente, a fim de fornecer o volume desejado, consistência, etc., quandocombinado com um ácido nucléico e os outros componentes de uma dadacomposição farmacêutica. Veículos farmacêuticos típicos incluem, mas nãosão limitados a, agentes de ligação (por exemplo, amido de milho pré-gelatinado, polivinilpirrolidona ou hidroxipropil metilcelulose, etc.); cargas (por exemplo, Iactose e outros açúcares, celulose microcristalina, pectina,gelatina, sulfato de cálcio, celulose de etila, poliacrilatos ou fosfato de hidro-gênio de cálcio, etc.); lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, tal-co, sílica, dióxido de silício coloidal, ácido esteárico, estearatos metálicos,óleos vegetais hidrogenados, amido de milho, polietileno glicóis, benzoato de sódio, acetato de sódio, etc.); desintegrantes (por exemplo, amido, glicolatode amido de sódio, etc.); e agentes umectantes (por exemplo, Iauril sulfatode sódio, etc.).

Excipiente orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitáveladequado para administração não parenteral o qual não reage deleteriamen- te com ácidos nucléicos pode também ser usado para formular as composi-ções da presente invenção. Veículos farmaceuticamente aceitáveis adequa-dos incluem, mas não são limitados a, água, soluções de sal, álcoois, polieti-leno glicóis, gelatina, lactose, amilose, estearato de magnésio, talco, ácidosilícico, parafina viscosa, hidroximetilcelulose, polivinilpirrolidona e similares.

Formulações para administração tópica de ácidos nucléicos po-dem incluir soluções aquosas estéreis e não estéreis, soluções não aquosasem solventes comuns tais como álcoois, ou soluções dos ácidos nucléicosem bases de óleo líquido ou sólido. As soluções podem também conter tam-pões, diluentes e outros aditivos adequados. Excipientes orgânicos ou inor-gânicos farmaceuticamente aceitáveis adequados para administração nãoparenteral os quais não reagem deleteriamente com ácidos nucléicos podemser usados.

Excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem,mas não são limitados a, água, soluções de sal, álcool, polietileno glicóis,gelatina, lactose, amilose, estearato de magnésio, talco, ácido silícico, para-fina viscosa, hidroximetilcelulose, polivinilpirrolidona e similares.Composições farmacêuticas para a liberação ao trato respiratório

Outro aspecto da invenção fornece a liberação de agentes deIRNA ao trato respiratório, particularmente para o tratamento de fibrose císti-ca. O trato respiratório inclui as vias aéreas superiores, incluindo a orofarin-ge e laringe, seguido pelas vias aéreas inferiores, as quais incluem a tra-quéia seguido por bifurcações nos brônquios e bronquíolos. As vias aéreassuperiores e inferiores são chamadas as vias aéreas condutoras. Os bron-quíolos terminais então dividem-se em bronquíolos respiratórios os quais emseguida levam à zona respiratória final, os alvéolos, ou pulmão profundo. Opulmão profundo, ou alvéolos, são o alvo primário de aerossóis terapêuticosinalados para liberação sistêmica de agentes de iRNA.

Composições de liberação pulmonar podem ser liberadas atra-vés de inalação pelo paciente de uma dispersão de modo que a composição,de preferência o agente de iRNA, dentro da dispersão possa alcançar o pul-mão em que ela pode, por exemplo, ser facilmente absorvida através da re-gião alveolar diretamente em circulação sangüínea. Liberação pulmonar po-de ser eficaz tanto para liberação sistêmica quanto para liberação localizadapara tratar doenças dos pulmões.

Liberação pulmonar pode ser obtida através de métodos diferen-tes, incluindo o uso de formulações com base em pó nebulizado, aerossoli-zado, micelar e seco; administração por inalação pode ser oral e/ou nasal.Liberação pode ser obtida com nebulizadores líquidos, inaladores com baseem aerossol, e dispositivos de dispersão de pó seco. Dispositivos de dosecom medidor são preferidos. Um dos benefícios de uso de um atomizador ouinalador é que o potencial para contaminação é minimizado porque os dis-positivos são auto contidos. Dispositivos de dispersão de pó seco, por e-xemplo, liberam fármacos que podem ser facilmente formulados como pósseco. Uma composição de iRNA pode ser estavelmente armazenada comopós Iiofilizados ou secados por spray por si só ou em combinação com veí-culos de pó adequados. A liberação de uma composição para inalação podeser mediada por um elemento de determinação do tempo de dosagem o qualpode incluir um cronômetro, um contador de dose, dispositivo de medição detempo, ou um indicador de tempo o qual quando incorporado no dispositivopermite rastreamento de dose, monitoramento de complacência, e/ou dispa-ro de dose a um paciente durante administração do medicamento de aeros-sol.

Exemplos de dispositivos farmacêuticos para liberação de ae-rossol incluem inaladores de dose com medidor (MDIs), inaladores de póseco (DPIs), e nebulizadores de jato de ar. Sistemas de liberação exempla-res através de inalação os quais podem ser facilmente adaptados para libe-ração dos agentes de iRNA tema são descritos em, por exemplo, PatenteU.S. Nes 5.756.353; 5.858.784; e Pedidos de PCT W098/31346;W098/10796; WOOO/27359; WOO 1/54664; W002/060412. Outras formula-ções de aerossol que podem ser usadas para liberação o agentes de iRNAsão descritas em Patente U.S. N- 6.294.153; 6.344.194; 6.071.497, e Pedi-dos de PCT W002/066078; W002/053190; W001/60420; WO00/66206. A-lém disso, métodos para liberação de agentes de iRNA podem ser adapta-dos daqueles usados na liberação de outros oligonucleotídeos (por exemplo,um oligonucleotídeo de anti-sentido) através de inalação, tal como descritoem Templin e outros, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2000, 10:359 a 68;Sandrasagra e outros, Expert Opin Biol Ther, 2001, 1 :979 a 83; Sandrasa-gra e outros, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12:177 a 81.

A liberação dos agentes inventivos pode também envolver aadministração de assim chamados "pró-fármacos", isto é formulações oumodificações químicas de uma substância terapêutica que requerem algumaforma de processamento ou transporte por sistemas inatos ao organismo dopaciente para liberar a substância terapêutica, de preferência no sítio emque sua ação é desejada; esta última modalidade pode ser usada em con-junção com liberação do trato respiratório, mas também juntamente com ou-tras modalidades da presente invenção. Por exemplo, os pulmões humanospodem remover ou rapidamente degradar aerossóis depositados hidrolitica-mente cliváveis durante períodos variando de minutos a horas. Nas vias aé-reas superiores, epitélios ciliados contribuem para o "excalador mucociliar"pelos quais partículas são varridas das vias aéreas para a boca. Pavia, D.,"Lung Mucociliary Clearance," em Aerosols and the Lung: Clinicai and Ex-perimental Aspects1 Clarke, S. W. e Pavia, D., Eds., Butterworths, London,1984. Nos pulmões profundos, macrófagos alveolares são capazes de partí-culas fagocitosante logo depois de sua deposição. Warheit e outros Micros-copy Res. Tech., 26: 412 a 422 (1993); e Brain, J. D., "Physiology and Pa-thophysiology of Pulmonary Macrophages," em The Reticuloendothelial Sys-tem, S. M. Reichard e J. Filkins, Eds., Plenum, Nova Iorque, páginas 315 a327, 1985.

Em modalidades preferidas, particularmente em que dosagemsistêmica com o agente de iRNA é desejada, os agentes de iRNA aerossoli-zados são formulados como micropartículas. Micropartículas possuindo umdiâmetro de entre 0,5 e dez mícrons podem penetrar os pulmões, passandoatravés da maior parte das barreiras naturais. Um diâmetro de menos do quedez mícrons é requerido desviar da garganta; um diâmetro de 0,5 mícron oumaior é requerido para evitar ser exaladas.

Outros Componentes

As composições da presente invenção podem adicionalmenteconter outros componentes adjuntos convencionalmente encontrados emcomposições farmacêuticas, em seus níveis de uso estabelecido por técnica.Desta forma, por exemplo, as composições podem conter materiais farma-ceuticamente ativos compatíveis adicionais tais como, por exemplo, antipru-riginosos, adstringentes, agentes anestésicos ou antiinflamatórios locais, oupodem conter materiais adicionais úteis na formulação fisicamente de váriasformas de dosagem das composições da presente invenção, tais como tintu-ras, agentes aromatizantes, conservantes, antioxidantes, opacificantes, a-gentes de espessamento e estabilizantes. No entanto, tais materiais, quandoadicionados, não deveriam desnecessariamente interferir com as atividadesbiológicas dos componentes das composições da presente invenção. Asformulações podem ser esterilizadas e, se desejado, misturadas com agen-tes auxiliares, por exemplo, lubrificantes, conservantes, estabilizantes, agen-tes umectantes, emulsificantes, sais para influência da pressão osmótica,tampões, corantes, aromatizantes e/ou substâncias aromáticas e outrosmais os quais não deleteriamente interagem com o(s) ácido(s) nucléico(s) daformulação.

Suspensões aquosas podem conter substâncias as quais au-mentam a viscosidade da suspensão incluindo, por exemplo, carboximetilce-lulose de sódio, sorbitol e/ou dextrano. A suspensão pode também conterestabilizantes.

Certas modalidades de uma invenção fornecem composiçõesfarmacêuticas contendo (a) um ou mais agentes de dsRNA e (b) um ou maisoutros agentes quimioterapêuticos os quais funcionam por um mecanismo;de interferência de não RNA. Exemplos de tais agentes quimioterapêuticosincluem mas não são limitados a daunorrubicina, daunomicina, dactinomici-na, doxorrubicina, epirrubicina, idarabicina, esorrubicina, bleomicina, mafos-famida, ifosfamida, arabinosídeo de citosina, bis-cloroetilnitrosuréia, bussul-fano, mitomicina C, actinomicina D, mitramicina, prednisona, hidroxiproges-terona, testosterona, tamoxifeno, dacarbazina, procarbazina, hexametilme-lamina, pentametilmelamina, mitoxantrona, amsacrina, clorambucila, metilçi-cloexilnitrosuréia, mostardas de nitrogênio, melfalano, ciclofosfamida, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-azacitidina, hidroxiuréia, desoxi-coformicina, 4-hidroxiperoxiciclofosforamida, 5-flúoruracila (5-FU), 5- fluoro-desoxiuridina (5-FUdR), metotrexato (MTX), colchicina, taxol, vincristina, vin-blastina, etoposídeo (VP- 16), trimetrexato, irinotecano, topotecano, gencita-bina, teniposida, cisplatina e dietilstilbestrol (DES). Vide, geralmente, TheMerck Manual of Diagnosis and terapia, 15th Ed. 1987, páginas 1206 a1228, Berkow e outros, eds., Rahway, NJ. Quando usados com os compos-tos da invenção, tais agentes quimioterapêuticos podem ser usados indivi-dualmente (por exemplo, 5-FU e oligonucleotídeo), seqüencialmente (porexemplo, 5-FU e oligonucleotídeo para um período de tempo seguido por MTX e oligonucleotídeo), ou em combinação com um ou mais outros taisagentes quimioterapêuticos (por exemplo, 5-FU, MTX e oligonucleotídeo, ou5-FU, radioterapia e oligonucleotídeo). Fármacos antiinflamatórios, incluindomas não limitados a fármacos e corticoesteróides antiinflamatórios não este-roidais, e fármacos antivirais, incluindo mas não limitados a ribivirina, vidara-bina, aciclovir e ganciclovir, podem também ser combinados em composi-ções ds invenção. Vide, geralmente, The Merck Manual of Diagnosis andterapia, 15th Ed., Berkow e outros, eds., 1987, Rahway, NJ., páginas 2499 a2506 e 46 a 49, respectivamente). Outros agentes quimioterapêuticos denão dsRNA estão também dentro do escopo desta invenção. Dois ou maiscompostos combinados talvez usados juntos ou seqüencialmente.

Toxicidade e eficácia terapêutica de tais compostos podem serdeterminadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas de célulaou animais experimentais, por exemplo, para determinação da LD50 (a doseiletal para 50% da população) e da ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em50% da população). A relação de dose entre efeitos tóxicos e terapêuticos éo índice terapêutico e ela pode ser expressa como a relação LD50/ED50.Compostos os quais exibem índices terapêuticos elevados são preferidos.

Os dados obtidos de ensaios de cultura de célula e animal estu-dos podem ser usados em formulação de uma faixa de dosagem para usoem seres humanos. A dosagem de composições de uma invenção encontra-se geralmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes que inclu-em a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar den-tro desta faixa dependendo da forma de dosagem empregada e a rotina deadministração utilizada. Para qualquer composto usado no método da inven-ção, a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente de en-saios de cultura de célula. Uma dose pode ser formulada em modelos deanimal para obter uma faixa de concentração de plasma circulante do com-posto ou, quando apropriado, do produto de polipeptídeo de uma seqüênciaalvo (por exemplo, obtendo uma concentração diminuída do polipeptídeo)que inclui a IC50 (isto é, a concentração do composto de teste o qual obtémuma inibição quase máxima de sintomas) tal como determinado em cultura de célula. Tal informação pode ser usada para determinar mais acuradamen-te doses úteis em seres humanos. Níveis em plasma podem ser medidos,por exemplo, através de cromatografia líquida de alto desempenho.

Além de sua administração individualmente ou como uma plura-lidade, tal como discutido acima, os dsRNAs de uma invenção podem seradministrados em combinação com outros agentes conhecidos eficazes emtratamento de infecção de influenza. Em qualquer evento, a administraçãodo médico pode ajustar a quantidade e determinação do tempo de adminis-tração de dsRNA com base em resultados observados usando medidas pa-drões de eficácia conhecida na técnica ou descritos aqui. Métodos de Tratamento e Rotinas de Liberação

Uma composição que inclui um agente de iRNA, por exemplo,um agente iRNA que alveja vírus influenza, pode ser liberada a um pacienteatravés de uma variedade de rotinas para obter cada liberação local ao sítiode ação de liberação sistêmica ao paciente. Rotinas exemplares incluem administração local direta ao sítio de tratamento, tais como os pulmões epassagem nasal assim como liberação intravenosa, nasal, oral, e ocular. Omecanismo preferido de administração dos agentes de iRNA da presenteinvenção é através de admisitração direta aos pulmões e passagem nasalcomo uma solução líquida, de aerossol ou nubulizada.

Em geral, a liberação do agente de iRNAs da presente invençãoé feita para obter liberação no paciente ao sítio de infecção. O mecanismopreferido de obtenção desta é através de ou uma administração local aospulmões ou passagem nasal, por exemplo, nos tecidos respiratórios pormeio de inalação ou administração intranasal, ou por meio de administraçãosistêmica, por exemplo, administração parental.

Formulações para inalação ou administração parenteral sãobem-conhecidas na técnica. Tal formulação pode incluir soluções aquosasestéreis as quais podem também conter tampões, diluentes e outros aditivosadequados. Para uso intravenoso, a concentração total de solutos deveriaser controlada para render a preparação isotônica.

Os compostos ativos descritos aqui são de preferência adminis-trados ao pulmão(s) ou passagem nasal de um paciente por qualquer meca-nismo adequado. Compostos ativos podem ser administrados por adminis-tração de uma suspensão de aerossol de partículas respirável compreendidado composto ativo ou compostos ativos, o qual o paciente inala. O compostoativo pode ser aerossolizado em uma variedade de formas, tais como, masnão limitados á, inalantes de pó seco, inalantes de dose com medidor, oususpensões de líquido/líquido. As partículas respiráveis podem ser líquidasou sólidas. As partículas podem opcionalmente conter outros ingredientesterapêuticos tais como amilorida, benzamila ou fenamila, com o compostoselecionado incluído em uma quantidade eficaz para inibir a reabsorção deágua de secreções de mucosa de via aérea, tal como descrito em PatenteU.S. N9 4.501.729.

A composição farmacêutica particulada pode opcionalmente sercombinada com um veículo para auxiliar em dispersão ou transporte. Umveículo adequado tal como um açúcar (isto é, lactose, sacarose, trealose,manitol) pode ser combinado com o composto ou compostos ativos emqualquer relação adequada (por exemplo, uma relação de 1 para 1 em peso).

Partículas compreendidas do composto ativo para prática dapresente invenção deveriam incluir partículas de tamanho respirável, que é,partículas de um tamanho suficientemente pequeno para passar através daboca ou nariz e Iaringe em inalação e nos brônquios e alvéolos dos pulmões.Em geral, partículas variando de cerca de 1 a 10 mícrons em tamanho (maisparticularmente, menor do que cerca de 5 mícrons em tamanho) são respi-ráveis. Partículas de tamanho não respirável as quais são incluídas no ae-rossol tendem a depositar-se na garganta e ser engolidas, e a quantidade departículas não respiráveis no aerossol é de preferência minimizada. Paraadministração nasal, um tamanho de partícula na faixa de 10 a 500 uM épreferido para assegurar retenção na cavidade nasal.

Composições farmacêuticas líquidas de composto ativo paraprodução de um aerossol podem ser preparadas através de combinação docomposto ativo com um veículo adequado, tal como água livre de pirogênioestéril. As soluções de salina hipertônicas usadas para efetuar a presenteinvenção são de preferência estéreis, soluções livres de pirogênio, compre-endendo de um a quinze porcento (em peso) do sal fisiologicamente aceitá-vel, e mais preferivelmente de três a sete porcento em peso do sal fisiologi-camente aceitável.

Aerossóis de partículas líquidas compreendendo o compostoativo podem ser produzido por qualquer mecanismo adequado, tal comocom um nebulizador de jato impulsionado por pressão ou um nebulizadorultra-sônico. Vide, por exemplo, Patente U.S. N9 4.501.729. Nebulizadoressão dispositivos comercialmente disponíveis os quais transformam soluçõesou suspensões do ingrediente ativo em uma névoa de aerossol terapêuticoou por meio de aceleração de gás comprimido, tipicamente ar ou oxigênio,através de um orifício de venturi estreito ou por meio de agitação ultra-sônica.

Formulações adequadas para uso em nebulizadores consistemdo ingrediente ativo em um veículo líquido, o ingrediente ativo compreen-dendo até 40% de peso/peso da formulação, mas de preferência menos doque 20% de peso/peso. O veículo é tipicamente água (e mais preferivelmen-te água livre de pirogênio estéril) ou uma solução alcóolica aquosa diluída,de preferência tornada isotônica, mas pode ser hipertônico com fluidos cor-porais pela adição de, por exemplo, cloreto de sódio. Aditivos opcionais in-cluem conservantes se a formulação não é tornada estéril, por exemplo, hi-droxibenzoato de metila, antioxidantes, agentes aromatizantes, óleos volá-teis, agentes de tamponamento e tensoativos.

Aerossóis de partículas sólidas compreendendo o composto ati-vo podem da mesma maneira ser produzidos com qualquer gerador de ae-rossol terapêutico particulado sólido. Geradores de aerossol para adminis-tração de terapêuticos particulados sólidos a um paciente produzem partícu-las as quais são respiráveis e geram um volume de aerossol contendo umadose medida com medidor predeterminada de um terapêutico em uma taxaadequada para administração humana. Um tipo ilustrativo de gerador de ae-rossol de particulado sólido é um insuflador. Formulações adequadas paraadministração por insuflação incluem pós finamente fragmentados os quaispodem ser liberados por meio de um insuflador ou levado na cavidade nasalna maneira de uma inalação. No insuflador, o pó (por exemplo, uma dosemedida com medidor deste eficaz para efetuar o tratamento descrito aqui) écontido em cápsulas ou cartuchos, tipicamente feita de gelatina ou plástico,as quais são ou furadas ou abertas in situ e o pó liberado por ar puxado a-través do dispositivo em inalação ou por meio de uma bomba manualmenteoperada. O pó empregado no insuflador consiste ou somente no ingredienteativo ou de uma combinação de pó compreendendo o ingrediente ativo, umdiluente de pó adequado, tal como lactose, e um tensoativo opcional. O in-grediente ativo tipicamente compreende de 0,1 a 100 de peso/peso da for-mulação.

Um segundo tipo de gerador de aerossol ilustrativo compreendeum inalador com medidor dose. Inaladores com medidor dose são pressuri-zados aerossol aplicadores, tipicamente contendo uma formulação de sus-pensão ou solução do ativo ingrediente em um propelente liqüefeito. Duranteo uso, estes dispositivos descarregam a formulação através de uma válvulaadaptada para liberar um volume medido com medidor, tipicamente de 10para 200 ul, para produzir um spray de partícula fina contendo o ingredienteativo. Propelentes adequados incluem certos compostos de clorofluorocar-bono, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetra-fluoroetano e misturas destes. A formulação pode adicionalmente conter umou mais co-solventes, por exemplo, etanol, tensoativos, tais como ácido oléi-co ou trioleato de sorbitano, antioxidante e agentes aromatizantes adequa-dos.

Um agente iRNA pode ser incorporado em composições farma-cêuticas adequadas para administração. Por exemplo, composições podemincluir uma ou mais espécie de um agente iRNA e um veículo farmacêutica-mente aceitável. Tal como usado aqui a linguagem "veículo farmaceutica-mente aceitável" pretende incluir quaisquer e todos os solventes, meios dedispersão, revestimentos, agentes antibacteriais e antifúngicos, agentes deatraso de absorção e isotônicos, e similares, compatíveis com administraçãofarmacêutica. O uso de tais meios e agentes para substâncias farmaceuti-camente ativas é bem-conhecido na técnica. Exceto na medida em quequaisquer meios ou agente convencionais são incompatíveis com o compos-to ativo, uso destes nas composições é contemplado. Compostos ativos su-plementares podem também ser incorporados nas composições.

Administração pode ser fornecida pelo paciente ou por outrapessoa, por exemplo, um cuidador. Um cuidador pode ser qualquer entidadeenvolvida com fornecimento de cuidado para os humanos: por exemplo, umhospital, hospício, escritório de doutor, clínica de doente externo; um traba-lhador de saúde tal como um doutor, enfermeira, ou outros médico; ou umesposo ou guardião, tal como um parente. A medicação pode ser fornecidaem doses medidas ou em um aplicador o qual libera uma dose medida commedidor.

O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" é a quantidadepresente na composição que é necessária para fornecer o nível desejado defármaco no paciente a ser tratado para produzir a resposta fisiológica anteci-pada.

O termo "quantidade fisiologicamente eficaz" é aquela quantida-de liberada a um paciente para produzir o efeito paliativo ou curativo deseja-do.

O termo "veículo farmaceuticamente aceitável" quer dizer que oveículo pode ser levado nos pulmões com nenhum efeito toxicológico adver-so significante nos pulmões.

O termo "co-administração" refere-se a administração para umpaciente de dois ou mais agentes, e em particular dois ou mais agentes deiRNA. Os agentes podem ser contidos em uma composição farmacêuticaúnica e ser administrados ao mesmo tempo, ou o agentes podem ser conti-dos em formulação separada e administrados serialmente a um paciente. Jáque os dois agentes podem ser detectados no paciente ao mesmo tempo, osdois agentes são referidos serem co-administrados.

Os tipos de excipientes farmacêuticos que são úteis como veícu-lo incluem estabilizantes tais como albumina de soro humano (HSA), agen-tes de volume tais como carboidratos, aminoácidos e polipeptídeos; ajusta-dores de pH ou tampões; sais tais como cloreto de sódio; e outros mais. Es-tes veículos podem estar em uma forma cristalina ou amorfa ou podem seruma mistura das duas.

Agentes de volume que são particularmente valiosos incluemcarboidratos compatíveis, polipeptídeos, aminoácidos ou combinações des-tes. Carboidratos adequados incluem monossacarídeos tais como galactose,D-manose, sorbose, e outros mais; dissacarídeos, tais como Iactose, trealo-se, e similares; ciclodextrinas, tal como 2-hidroxipropil-.beta.-ciclodextrina; epolissacarídeos, tais como rafinose, maltodextrinas, dextranos, e similares;alditóis, tais como manitol, xilitol, e outros mais. Um grupo preferido de car-boidratos inclui lactose, trealose, rafinose maltodextrinas, e manitol. Polipep-tídeos adequados incluem aspartame. Aminoácidos incluem alanina e giici-na, com glicina sendo preferido.

Ajustadores ou tampões de pH adequados incluem sais orgâni-cos preparados de ácidos e bases orgânicos, tais como citrato de sódio, as-corbato de sódio, e outros mais; citrato de sódio é preferido.Dosagem

Um agente iRNA pode ser administrado em uma dose unitáriamenor do que cerca de 75 mg por kg de peso corporal, ou menor do quecerca de 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5, 2, 1, 0,5, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, 0,001,ou 0,0005 mg por kg de peso corporal, e menor do que 200 nmol de agentede iRNA (por exemplo, cerca de 4,4 χ 1016 cópias) por kg de peso corporal,ou menor do que 1500, 750, 300, 150, 75, 15, 7,5, 1,5, 0,75, 0,15, 0,075,0,015, 0,0075, 0,0015, 0,00075, 0,00015 nmol de agente de iRNA por kg depeso corporal. A dose unitária, por exemplo, pode ser administrada por inje-ção (por exemplo, intravenosa ou intramuscular, intratecalmente, ou direta-mente em um órgão), uma dose inalada, ou uma aplicação tópica.Liberação de um agente iRNA diretamente a um órgão (por e-xemplo, ao pulmão) pode ser em uma dosagem na ordem de cerca de0,00001 mg a cerca de 3 mg por órgão, ou de preferência cerca de 0,0001 a0,001 mg por órgão, cerca de 0,03 a 3,0 mg por órgão, cerca de 0,1 a 3,0mg por olho ou cerca de 0,3 a 3,0 mg por órgão.

A dosagem pode ser uma quantidade eficaz para tratar ou pre-venir uma doença ou distúrbio. Ela pode ser dada profilaticamente ou comoo primário ou uma parte de um protocolo de tratamento.

Em uma modalidade, a dose unitária é administrada menos fre-qüentemente do que uma vez ao dia, por exemplo, menor do que cada 2, 4,8 ou 30 dias. Em outra modalidade, a dose unitária não é administrada comuma freqüência (por exemplo, não uma freqüência regular). Por exemplo, adose unitária pode ser administrada por um tempo único. Porque silencia-mento mediado por agente de iRNA pode persistir durante diversos dias de-pois de administração da composição de agente de iRNA, em muitos exem-plos, é possível administrar a composição com uma freqüência de menos doque uma vez ao dia, ou, para alguns exemplos, apenas uma vez durante oregime terapêutico inteiro.

Em uma modalidade, a um paciente é administrado uma doseinicial, e uma ou mais doses de manutenção de um agente de iRNA, por e-xemplo, um agente de iRNA de filamento duplo, ou agente de iRNA, (porexemplo, uma precursor, por exemplo, um agente de iRNA maior o qual po-de ser processado em um agente de iRNA, ou um DNA o qual codifica umagente de iRNA, por exemplo, um de agente de iRNA de filamento duplo, ouagente de iRNA, ou precursor destes). A dose ou doses de manutenção sãogeralmente inferiores do que a dose inicial, por exemplo, uma metade a me-nos da dose inicial. Um regime de manutenção pode incluir tratamento dopaciente com uma dose ou doses variando de 0,01 para 75 mg/kg de pesocorporal por dia, por exemplo, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5, 2, 1, 0,5, 0,1,0,05, 0,01, 0,005, 0,001, ou 0,0005 mg por kg de peso corporal por dia. Asdoses de manutenção são de preferência administradas não mais do queuma vez a cada 5, 10, ou 30 dias. Além disso, o regime de tratamento podedurar durante um período de tempo o qual variará dependendo da naturezada doença particular, sua severidade e a condição total do paciente. Em mo-dalidades preferidas, a dosagem pode ser liberada não mais do que uma vezao dia, por exemplo, não mais do que uma vez por 24, 36, 48, ou mais ho-ras, por exemplo, não mais do que uma vez a cada 5 ou 8 dias. Seguindo otratamento, o paciente pode ser monitorado quanto a mudanças em suacondição e para alívio dos sintomas do estado de doença. A dosagem docomposto pode ou ser aumentada no evento em que o paciente não respon-de significantemente a níveis de dosagem atuais, ou a dose pode ser dimi-nuída se um alívio dos sintomas do estado de doença é observado, se o es-tado de doença tiver sofrido ablação, ou se efeitos colaterais indesejadossão observados.

A dose eficaz pode ser administrada em uma dose única ou emduas ou mais doses, tal como desejado ou considerado apropriado sob ascircunstâncias específicas. Se desejado para infusões repetidas ou freqüen-tes facilitadas, implantação de um dispositivo de liberação, por exemplo,uma bomba, sonda semi-permanente (por exemplo, intravenosa, intraperito-neal, intracisternal ou intracapsular), ou reservatório pode ser aconselhável.

Seguindo tratamento bem-sucedido, pode ser desejável ter opaciente passando por terapia de manutenção para prevenir a recorrênciado estado de doença, em que um composto de uma invenção é administradoem doses de manutenção, variando de 0,001 g a 100 g por kg de peso cor-poral (vide US 6.107.094).

A concentração da composição de agente de iRNA é uma quan-tidade suficiente para ser eficaz no tratamento ou prevenção de um distúrbioou para regular uma condição fisiológica em seres humanos. A concentraçãoou quantidade de agente de iRNA administrada dependerá dos parâmetrosdeterminados para o agente e o método de administração, por exemplo, na-sal, bucal, ou pulmonar. Por exemplo, formulações nasais tendem para re-querir muitas concentrações inferiores de alguns ingredientes a fim de evitarirritação ou abrasamento das passagens nasais. É algumas vezes desejáveldiluir uma formulação oral até 10 a 100 vezes a fim de fornecer uma formu-lação nasal adequada.

Certos fatores podem influenciar a dosagem requerida para tra-tar eficazmente um paciente, incluindo mas não limitado à severidade dadoença ou distúrbio, tratamentos prévios, a saúde geral e/ou idade do paci-ente, e outras doenças presentes. Também será apreciado que a dosagemeficaz de um agente iRNA tal como um siRNA usado para tratamento podeaumentar ou diminuir durante o curso de um tratamento particular. Mudan-ças na dosagem podem resultar e tornar-se aparente dos resultados de en-saios de diagnóstico. Por exemplo, o paciente pode ser monitorado depoisde administração de uma composição de agente de iRNA. Com base eminformação do monitoramento, uma quantidade adicional da composição deagente de iRNA pode ser administrada.

Dosagem é dependente de severidade e sensibilidade da condi-ção de doença a ser tratada, com o curso de tratamento durando de diversosdias a diversos meses, ou até que uma cura seja efetuada ou uma diminui-ção de estado de doença seja obtida. Programações de dosagem ideais po-dem ser calculadas de medições de acúmulo de fármaco no corpo do paci-ente. Pessoas versadas podem facilmente determinar dosagens ideais, me-todologias de dosagem e taxas de repetição. Dosagens ideais podem variardependendo da potência relativa de compostos individuais, e podem geral-mente ser estimados com base em EC50s constatados serem eficazes emmodelos de animal in vitro e in vivo tal como descrito acima.

A invenção é também ilustrada pelos seguintes exemplos, osquais não deveriam ser interpretados como também limitantes.

Exemplos

Seqüências de ácido nucléico são reapresentadas abaixo usan-do nomenclatura padrão, e especificamente as abreviações da Tabela 3.

Tabela 3: abreviações de monômeros de nucleotídeo usados em represen-tação de seqüência de ácido nucléico. Será entendido que estes monôme-ros, quando presentes em um oligonucleotídeo, são mutuamente ligados porligações de 5'-3'-fosfodiéster.

<table>table see original document page 123</column></row><table><table>table see original document page 124</column></row><table>

a letras maiúsculas representam 2'-desoxiribonucleotídeos (DNA), letras cai-xa baixa representam ribonucleotídeos (RNA)

Fonte de reagentes

Em que a fonte de um reagente não é especificamente dada a-qui, tal reagente pode ser obtido de qualquer fornecedor de reagentes parabiologia molecular em um padrão de qualidade/pureza para aplicação embiologia molecular.

Exemplo 1 : Seleção de seqüências

O esquema de siRNA foi realizado para identificar siRNAs alve-jando mRNAs de Influenza A de proteína de MP1 NP, PA, PB1 e PB2. Emuma primeira rodada, a seleção in silico de siRNA resultou em 44 seqüên-cias alvejando MP, 3 seqüências alvejando NP e 1 seqüência alvejandoPB1. Nenhum siRNA específico para genes PA ou PB2 de influenza A pas-sou o primeiro processo de seleção exigindo 80% de cobertura de alvo e80% de eficiência de alvo (vide abaixo).

Para levantamento de um meio ambiente para análise de se-qüência, o pacote de fastA (Pearson, W.R., & Lipman, DJ., PNAS 1988,85:2444) foi baixado de ftp://ftp.virginia.edu/pub/ e instalado em uma estaçãode trabalho sob o sistema operacional Suse Linux® 9.3 com aplicações deinstalação padrões. Para o propósito de condução de manuscritos Perl, foiassegurado que o interpretador Perl, versão 5.8.6 {copyright 1987-2004, Lar-ry Wall), vindo com a instalação padrão de Suse Linux 9.3 era funcional. Bi-oEdit Sequence alinhamento Editor (Hall, Τ. A., Nucl. Acids. Symp. Ser.

1999, 41 :95) foi baixado do Servidor da Web Brown Lab no site da web daUniversidade do Estado da Carolina do Norte e instalado em um computadorsob sistema operacional Micromacios Windows2000®.

O ritmo de trabalho para a seleção in silico foi como segue: se-qüências de influenza A de interesse foram baixadas, alinhadas e uma esta-tística foi gerada para obter distribuição de bases em cada posição relativa aum consenso calculado. Um manuscrito Perl foi usado para identificar regi-ões alvo de candidato satisfazendo critérios de corte definidos. Seqüênciasde siRNA para regiões alvo de candidato foram analisadas quanto a especi-ficidade por algoritmo de fastA a base de dados de RefSeq humano. Outromanuscrito Perl foi usado para classificar siRNAs de acordo com especifici-dade predita. Finalmente, aqueles siRNAs foram manualmente selecionadosem que satisfizeram critérios de especificidade.

Seqüências de influenza A de interesse disponíveis em 24 dejunho de 2005, foram baixadas de Base de dados de Vírus de Influenza deNCBI disponível no site da web do Centro Nacional para Informação de Bio-tecnologia. O número de seqüências por gene é mostrado para MP, NP3PB1, PB2, e PA na Tabela 4, os correspondentes números de acessão sãodados na Tabela 4.

Tabela 4: Número de seqüências de gene para genes de influenza MP, NPPB1, PB2, e PA de vários subtipos virais que foram empregados em seleçãoin silico de seqüências de siRNA

<table>table see original document page 125</column></row><table>A função de alinhamento múltiplo CIustaIW (Thompson, J.D., eoutros, Nucleic Acids Res. 1994; 22:4673) de Editor de Alinhamento de Se-qüência de BioEdit foi usada para gerar um alinhamento global de todas asseqüências usando parâmetros padrões para cada alvo, respectivamente.

Uma produção sumária numérica de nucleotídeo posiciona! foi gerada forne-cendo informação em distribuição de base em cada posição relativa à se-qüência de consenso calculada para cada alvo.

Critérios de corte para a identificação de candidato alvejandoregiões de 19 nucleotídeos de comprimento foram definidos como:Critério 1, cobertura de alvo: pelo menos 80% de todas as se-qüências disponíveis para o gene de influenza A respectivo necessitavamser representados em uma região de candidato.

Critério 2, eficiência de alvejamento: pelo menos 80% de todasas seqüências nas quais a região de candidato foi representada necessita-vam ser idênticos dentro da região de candidato.

Critério 1 foi definida a fim de evitar regiões pelas quais poucainformação de seqüência estava disponível, critério 2 assegura alvejamentode um alto número de subtipos.

Um manuscrito Perl foi usado para análise do arquivo sumárionumérico de nucleotídeo posicionai para identificar regiões alvo de candidatocom um comprimento de 19 bases igualando-se aos critérios de corte e paragerar um arquivo para ser usado como entrada de fastA na seguinte etapade análise. Para entrada de manuscrito o número total de seqüências foi re-gistrado para cada alvo e um valor de 80 para conservação de porcentagem.Todas as seqüências de siRNA de sentido de candidato correspondentespara as seqüências mais freqüentes nas regiões alvo de candidato foramextraídas e salvas em um arquivo formatado por fastA. A fim de considerarinterações de projeção de dTdT potenciais de siRNAs com a seqüência alvo,todas as seqüências foram estendidas no terminal 5' com 1AA1 resultando emseqüências de entrada de 21 mer. Um arquivo adicional foi gerado para cadaregião alvo de candidato com informação em propriedades de região: cober-tura de alvo (presente em seqüências) eficiência de alvejamento, númerototal de desequilíbrios, número de seqüências conservadas, e número deseqüências presentes.

Para seleção adicional, siRNAs de candidato foram classificadosde acordo com seu potencial predito para interação com genes (potencialfora de aivo) de hospedeiro (aqui, sem limitação, seres humanos). siRNAscom potencial de fora de alvo baixo são assumidos serem mais específicosin vivo.

Para prognóstico de potencial fora de alvo específico por siRNA,as seguintes assunções foram feitas:

1) posições 2 a 9 (contando de 5'a 3') de um filamento (regiãode semente) contribuem mais para o potencial de fora de alvo do que a se-qüência restante (região de não semente) (Haley, B., e Zamore, P.D., NatStruct Mol Biol. 2004, 11 :599).

2) um escore fora de alvo pode ser calculado para cada golpe,com base em identidade para seqüência de siRNA e posição de desequilí-brios.

3) através de introdução de modificações de nucleotídeo apro-priadas no filamento de sentido (por exemplo, todos os nucleotídeos com-preendendo uma base de pirimidina são nucleotídeos modificados por 2'-0-metila), o filamento de sentido pode ser tornado inativo para interferência deRNA; em conseqüência, apenas o potencial fora de alvo do filamento anti-sentido necessitava ser considerado.

Para identificar genes fora de alvo potenciais, as seqüências de21mer correspondentes para as regiões alvo de candidato mais uma fila AAde 3 '-terminal (para responder pelas projeções de TT) foram submetidas auma busca de homologia contra seqüências de mRNA humano publicamen-te disponíveis. Para este propósito, buscas de fastA (versão 3.4) foram de-sempenhadas com todas as seqüências de entrada de 21mer contra umabase de dados de RefSeq humana (versão disponível baixada deftp://ftp.ncbi.nih.gov/refseq/ em 25/07/2005). A busca de fastA foi executadacom parâmetros- valores-pares -b 30 -g 30 a fim de levar em conta a homo-logia sobre o comprimento total do 21 mer. A busca resultou em uma listafora de alvo potencial para siRNAs de candidato.

Para classificar a lista resultante fora de alvo potencial, arquivosde produção de fastA foram analisados para identificar o gene de hospedeirocom o escore fora de alvo mais alto. As seguintes propriedades de off- alvopara cada seqüência de entrada de 21 mer foram extraídas para cada po-tencial fora do alvo para calcular o escore off-alvo:

1. Número de nucleotídeos idênticos a seqüência de 21 mer (Identidade).

2. Número de desequilíbrios em região de semente.

O escore fora de alvo foi calculado para consideração de assun-ção 1 e 2 como segue:

Identidade - 0,2 * número de desequilíbrios de semente.

Todos os siRNAs foram classificados de acordo com seu escorefora de alvo mais alto (ascendente). Um escore fora de alvo de 16,8 foi usa-do como um corte para seleção de siRNA. 42 siRNAs específicos para prote-ína de matriz (MP) de influenza A, 3 siRNAs específicos para nucleocapsí-deo de matriz (NP) de influenza A, e 1 siRNA específico para proteína 1 Bá-sica de Polimerase (PB1) de influenza A tinham escores de off alvo em ouabaixo deste limiar.

Dado o número comparativamente baixo de siRNAs de candida-to resultantes do procedimento de seleção acima, o sumário numérico denucleotídeo posicionai foi re- examinado com corte para critério 1 (coberturade alvo) fixado a 70% e critério 2 (especificidade de alvo) restante em 80%,seguido por uma repetição de graduação de escore fora de alvo tal comodescrito acima. 2 siRNAs adicionais específicos para mRNA de MP de influ-enza A com uma eficiência de alvejamento de 79,9% foram adicionalmenteselecionados, para um total de 48 siRNAs de candidato. As seqüências des-tes 48 siRNAs de candidato são mostrados na Tabela IA.

Porque o processo de seleção descrito acima resultou apenasem um número limitado de agentes de candidato, os critérios de seleção fo-ram um tanto relaxados para produzir agentes de candidato adicionais. Es-pecificamente, critério 1, acima, foi relaxado a 50% de cobertura de alvo,critério 2, eficiência de alvo, foi mantido em 80%, e o processo de seleçãoacima foi repetido. Este procedimento produziu os agentes adicionais AL-DP-8001 a AL-DP-8040, listados na Tabela 1C.

Neste processo, foi percebido que a etapa de escore fora de al-vo leva à maior taxa de atrito em agentes potenciais. A fim de obter aindamais agentes de candidato, o processo de seleção foi por esse motivo repe-tido uma vez mais, usando critério 1 em 80% de cobertura de alvo, critério 2em 80% de eficiência de alvo, e o escore fora de alvo foi omitido. Este pro-cedimento produziu os agentes adicionais listados na Tabela ID. Ainda agen-tes de candidato adicionais, listados na Tabela IE, foram obtidos por repeti-ção da seleção de novo, usando critério 1 em 50% de cobertura de alvo, cri-tério 2 em 80% de eficiência de alvo, e omitindo escore fora de alvo.

Agentes de candidato adicionais de iRNA foram identificados porpermissão da incorporação de bases universais. Um manuscrito Perl foi u-sado para primeiro identificar seqüências de candidato possuindo coberturade alvo e eficiência de alvo de 100% quando a incorporação de até 3 basesuniversais na região de não semente (correspondente a posições 2 a 9 dofilamento anti-sentido) do agente de iRNA por filamento. A Tabela IF mostraos agentes identificados desta maneira. Em uma segunda rodada, agentes,adicionais de iRNA foram identificados que possuem cobertura de alvo eeficiência de alvo de 80% quando permitindo a incorporação de uma baseuniversal. Estes agentes de iRNA são mostrados na Tabela IG.Exemplo 2: síntese de siRNA

Síntese de nucleotídeos compreendendo bases naturais

RNAs de filamento único foram produzidos por síntese de fasesólida em uma escala de 1 μιηοΙ usando um sintetizador Expedite 8909 (Ap-plied Biosystems, Applera Deutschland GmbH, Darmstadt, Alemanha) e vi-dro de poro controlado (CPG, 50ΘΑ, Glen Research, Sterling VA) como su-porte sólido. RNA e RNA contendo nucleotídeos de 2'-0- metila foram gera-dos por síntese de fase sólida empregando as correspondentes fosforamidi-tas e fosforamiditas de 2'-0-metila, respectivamente (Proligo Biochemie Gm-bH, Hamburg, Alemanha). Eses blocos de construção foram incorporadosem síteos selecionados dentro da seqüência da cadeia de oligorribonucleotí-dio usando química de fosforamidita de nucleosídeo padrão tal como descri-to em Current protocols in nucleic acid chemistry, Beaucage, S.L. e outros(Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, NY, USA. Ligações de fosfo-rotioato foram introduzidas por substituição da solução de oxidador de iodinacom uma solução do reagente de Beaucage (Chruachem Ltd, Glasgow, UK)em acetonitrila (1%). Reagentes auxiliares adicionais foram obtidos de Mal-IinckrodtBaker(Griesheim1AIemanha).

Desproteção e purificação através de HPLC de permuta de â-nion dos oligoribonucleotídeos brutos foram realizadas de acordo com pro-cedimentos estabelecidos. Rendimentos e concentrações foram determina-dos através de absorção de UV de uma solução do respectivo RNA em umcomprimento de onda de 260 nm usando um fotômetro espectral (DU 640B,Beckman Coulter GmbH, UnterschIeiBheim, Alemanha). RNA de filamentoduplo foi gerado através de mistura de uma solução equimolar de filamentoscomplementares em tampão de anelamento (20 mM de fosfato de sódio, pH6,8; 100 mM de cloreto de sódio), aquecida em um banho de água em 85 a90°C durante 3 minutos e resfriada a temperatura ambiente durante um pe-ríodo de 3 a 4 horas. A solução de RNA purificada foi armazenada em -20 0Caté o uso.

Como um resultado da estratégia de síntese descrita acima, to-dos os oligonucleotídeos sintetizados tal como descrito acima não compre-endem porção um grupo de fosfato em seu nucleotídeo mais 5'.

Síntese de nucleotídeos compreendendo bases universais

Síntese de Fosforamidita e suporte de vidro de poro controladode 5,-0-(4,4,-dimetoxitritil)-2,-0-(íerc-butildimetilsilil)-1 '-(5-nitroindol)-D-ribosídeo<formula>formula see original document page 131</formula>

Etapa A: 1 -O-Metil-D-ribosídeo (102).

Para uma solução de D-ribose (25g) em metanol seco (300 mL)foi adicionado ácido sulfúrico concentrado (1,88 mL) e agitada em tempera-tura ambiente durante 3 dias. A mistura de reação foi em seguida neutraliza-da com solução de hidróxido de sódio a 1 N e concentrada em um resíduobruto. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol (200mL) e os sólidos foramfiltrados. O filtrado foi concentrado em um resíduo bruto, o qual foi aplicado auma coluna de sílica-gel eluída com diclorometano-metanol (5:1) para pro-duzir um composto puro (23,0 g, 82%) como um xarope.

Etapa B: 1 -0-Metil-2,3,5-tri-0-(2,4-diclorobenzil)-D-ribosídeo (103).

Para uma solução de 1-O-metil-D-ribosídeo (13,43g, 81,83 mmo-les), 18-coroa-6 (13,43g) em THF seco (100 mL) e hidróxido de potássio pul-verizado (69g, 1,23mol) foram adicionados e agitados em temperatura ambi-ente durante 40 a 60 min. Cloreto de 2,4-diclorobenzila (51 mL, 368,2 mmo-les) foi adicionado em gotas e a mistura de reação foi agitada na mesmatemperatura durante a noite. Os sólidos foram filtrados e o filtrado foi con-centrado em um resíduo bruto o qual foi aplicado a uma coluna de sílica-geleluída com hexanos-acetato de etila (4:1) para produzir um composto puro(48g, 92%) como um sólido branco.

1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): δ 7,46 a 7,34 (m, 5 H, ArH), 7,24 a7,16 (m, 4 H, ArH), 4,99 (s, 1 H3 H-I), 4,71 (dd, 2 H, Jgem = 12,8 Hz, OCH2Ar),4,63 a 4,61 (m, 4 H, 2 OCH2Ar), 4,38 a 4,36 (m, 1 H), 4,19 a 4,16 (dd, 1 H),3,98 (d, 1 H, J a 4,4 Hz), 3,75 (dd, 1 H, J= 3,6, 7=10,2 Hz, H-5a), 3,66 (dd, 1H,J=3,6,J=10,4Hz,H-5b), 3,37 (s, 3 H1OCH3).

Etapa B: 1-Bromo-2,3,5-tri-(9-(2,4-diclorobenzil)-D-ribose (104).

Para uma solução gelada de 1-0-metil-2,3,5-tri-0(2,4-diclorobenzil)-D-ribosídeo (3,22g, 5,02 mmoles) em diclorometano seco (50mL) resfriada com banho de gelo foi adicionado HOAc-HBr (5,3mL, 30%) eagitada em 0 a 25°C durante 3 h. A mistura de reação foi concentrada emum resíduo bruto o qual foi co-evaporado com tolueno (3x 30mL) em um re-síduo bruto o qual foi secado sob um bom vácuo e usado para a próximareação sem purificação e identificação como um xarope.

Etapa D: 1-(5-Nitroindol)-2,3,5-tri-0-(2,4-diclorobenzil)-D-ribosídeo (105).

Para uma solução de 5-nitroindol (2,44g, 15,06 mmoles) emCH3CN seco (30mL) foi adicionado hidreto de sódio (602mg, 15,06 mmoles,60%) e agitado em temperatura ambiente durante 3 a 4 h sob uma atmosfe-ra de argônio. O doador de açúcar obtido acima (104) em CH3CN seco(10mL) foi adicionado e agitado na mesma temperatura sob uma atmosferade argônio durante a noite. Os sólidos foram filtrados e o filtrado foi concen-trado em um resíduo bruto o qual foi aplicado a uma coluna de sílica-gel elu-ída com hexanos-acetato de etila (3:1) para produzir um composto puro 105(2,16g, 60%) como uma mistura de α e β (1:1).

Etapas E, F: 5'-0-(4,4,-dimetoxitritil)-l'-(5-nitroindol)-D-ribosídeo (106) e(107)

Para uma solução gelada de 1-(5-nitroindol)-2,3,5-tri-0-9-(2,4-diclorobenzil)-D-ribosídeo 105 (1,16g, 1,51 mmol) em diclorometano seco(100mL) em -78 0C foi adicionado BCI3 em diclorometano (23mL, 1,0M) eagitada na mesma temperatura durante 2h sob uma atmosfera de argônio eem - 40 0C durante 2h. A mistura de reação foi extingüida com metanol-diclorometano (1:1, 50mL) e neutralizada com solução de amônia-metanol.

Os sólidos foram filtrados e o filtrado foi concentrado em um resíduo bruto oqual foi aplicado a uma coluna de sílica-gel eluída com diclorometano-metanol (10:1) para produzir um composto puro (300mg, 68%) como umamistura de α e β (1:1). Para uma solução do composto obtido acima (840mg,2,86 mmoles) em piridina seca (3 a 4ml) e DMAP (90mg) foi adicionado DM-TrCl (1,06g) e agitada em temperatura ambiente sob uma atmosfera de ar-gônio durante a noite. A mistura de reação foi concentrada em um resíduobruto o qual foi aplicado a uma coluna de sílica-gel eluída com hexanos-acetato de etila (1:1) para produzir um composto puro 106 (550mg) e com-posto 107 (190mg), uma mistura de composto 106 e 107 ( 360mg).

Composto 106: 1H-RMN (CDCI3, 2D g-COSY e 2D NOESY, 400MHz): δ 8,49 (d, 1 H, J= 1,6 Hz), 8,35 (d, 1 H), 8,03 (dd, 1 H, J= 2,0, J=9,0Hz), 7,70 a 7,69 (m, 2 H), 7,47 a 7,14 (m, 8 H, ArH), 6,86-6,81 (m, 5 H,ArH), 6,71 (d, 1 H, J= 3,6 Hz), 6,41 (d, J= 5,2 Hz, H'-l), 4,73 (t, 1 H, J= 4,8Hz,H'-2), 4,46 a 4,42 (m, 3H, H'-3, H'- 4, H'-5), 3,79 (s, 6 H, 20CH3), 3,51 (dd, 1H, J= 3,2, J= 10,4 Hz, H'-5a), 3,26 (dd, 1 H, J= 3,2, J= 10,6 Hz, H'-5b).

Composto 107: 1H-RMN (CDCI3, 2D g-COSY e 2D NOESY, 400MHz): δ 8,55 (d, 1 H, J= 2,0Hz), 7,98 (dd, 1 H, J= 2,4, J= 9,2 Hz), 7,60 (d, 1H, J= 9,2 Hz), 7,53 (d, 1 H, J= 3,2 Hz), 7,44 a 7,42 (m, 2 H), 7,34 a 7,24 (m,7 H, ArH), 6,84 a 6,81 (m, 4 H, ArH), 6,68 (d, 1 H, J= 3,2 Hz), 6,00 (d, 1 H, J=5,2 Hz, H1-I), 4,53 (t, 1 H, J= 7,6 Hz), 4,46 a 4,44 (m, 1 H), 4,23 a 4,20 (m, 1H)5 3,80 a 3,76 (m, 7 H, 20CH3, H'-5), 3,55 (dd, 1 H, H'-5a), 3,43 (dd, 1 H,H'-5b).

Etapa G: 5'-0-(4,4,-dimetoxitritil)-2,-0-(íerc-butildimetilsilil)-r-(5-nitroindol)-D-ribosídeo (108) e 5 ,-0-(4,4'-dimetoxitritil)-3 '-0-(terc- butildime-tilsilil)-1 '-(5-nitroindol)-D-ribosídeo (109)

Para uma solução de 5'-0-(4,4,-dimetoxitritil)-1,-(5-nitroindol)-D-ribosídeo (106) (550mg, 0,92 mmoles), AgNO3 (188mg, 1,104 mmol), e piri-dina (0,74mL, 9,2 mmoles) em THF seco (9,2 mL) foi adicionado TBDMSCI(188mg, 1,196 mmol) e agitada em temperatura ambiente sob uma atmosfe-ra de argônio durante a noite. Os sólidos foram filtrados e o filtrado foi con-centrado em um resíduo bruto o qual foi aplicado a uma coluna de sílica-geleluída com hexanos-acetato de etila (4:1) para produzir um composto puro108 (230mg, 35%), composto 109 (150mg, 23%), e uma mistura de compos-to 108 e 109 (1 IOmg, 17%) em rendimento total de 75%.

Composto 108: 1H-RMN (CDCI3, 2D g-COSY, 2D NOESY, 400MHz): δ 8,56 (d, 1 H, J= 2,4 Hz), 7,88 (dd, 1 H, J= 2,4, J= 8,8 Hz), 7,62 (d, 1H, J= 9,2 Hz), 7,54 (d, 1 H, J= 3,6 Hz), 7,46 a 7,44 (m, 2 H), 7,36 a 7,25 (m,6 H, ArH), 6,85 a 6,83 (d, 5 H, ArH), 6,69 (d, 1 H, J= 3,6 Hz), 5,94 (d, 1 H, J=7,2 Hz, H1-I), 4,69 (dd, 1 H, H'- 2), 4,31 a 4,29 (m, 2 H, H'-3, H'-4), 3,80 (s, 6H, 20CH3), 3,58 (dd, 1 H, J= 2,0, J= 10,6 Hz, H'-5a), 3,40 (dd, 1 H, J= 2,0,J= 10,4 Hz, H'-5b), 2,85 (d, 1 H, J= 0,8 Hz, 3'-OH), 0,78 (s, 9 H, t-Bu), -,016(s, 3 H, SiCH3), - 0,43 (s, 3 H, SiCH3).

Composto 109: 1H-RMN (CDCI3, 2D g-COSY, 2D NOESY, 400MHz): δ 8,61 (d, 1 H, J= 2,4 Hz), 8,05 (dd, 1 H, J= 2,0, J = 8,8 Hz), 7,69 a7,65 (m, 2 H), 7,47 a 7,45 (m, 2 H, ArH), 7,36 a 7,27 (m, 5 H, ArH), 6,86 a6,83 (m, 3 H, ArH), 6,71 (d, I H1J = 3,2 Hz), 5,99 (d, 1 H, J= 4,8 Hz, H1-I),4,51 (t, 1 H, J= 4,8 Hz, J= 5,6 Hz, H'-3), 4,40 a 4,36 (m, 1 H, H'-2), 4,17 a4,15 (m, 2 H, H'-4, H'-5), 3,82 (s, 3 H, OCH3), 3,81 (s, 3 H1 OCH3), 3,63 (dd,1 H, J= 2,4, J= 11,0 Hz, H'-5a), 3,31 (dd, 1 H, J= 2,8, J= 11,0 Hz, H'-5b), 2,95(d, 1 H, J= 6,0 Hz, 2'-OH), 0,91 (s, 9H, t-Bu), 0,05 (s, 3 H, SiCH3), 0,00 (s, 3H, SiCH3).

Etapa H: 5,-0-(4,4,-dimetoxitritil)-2'-0-(ferc-butildimetilsilil)-1,-(5-nitroindol)-D-ribosídeo-3'-0-cianoetil-N,N-diisopropilfosforamidato (UO)

2-cianoetil-N,N-diisopropilclorofosforamidita (153mg, 0,646mmol) foi adicionada a uma solução de 5l-0(4,4'-dimetoxitritil)-3,-0-(íerc-butildimetilsilil)-1-(5-nitroindol)-D-j8-ribosídeo 108 (230mg, 0,323 mmol), dii-sopropiletilamina (306μL, 1,78 mmol) e DMAP (10 mg) em diclorometanoseco (3 mL) e agitada em temperatura ambiente durante 4 a 6 h sob umaatmosfera de argônio. A mistura de reação foi concentrada a um resíduo bru-to o qual foi aplicado a uma coluna de sílica-gel a qual foi saturada com trieti-Iamina a 2% em hexanos e eluída com hexanos-acetato de etila (2:1) paraproduzir uma composto do título puro 110 (250mg, 85%) como um sólidoamorfo.

31P-RMN (CDC13, 400MHz): δ 149,54 (s), 146,57 (s). Anal. Cald

de C50H65N4O9PSi: 924,43. Encontrado: 947,43 [M+Na]+.

Etapa I: Suporte sólido de 5'-0-(4,4'-dimetoxitritil)-1-(5-nitroindol)-D-ribosídeo de 2'-hidroxila ou 3'-hidroxila (111).

Anidrido succínico foi adicionado a uma solução de uma misturade 2'-OTBDMS (108) ou 3'-0-TBDMS de 5,-0-(4,4'-Dimetoxitritil)-1-(5-nitroindol)-D-/3-ribosídeo (109), e DMAP em diclorometano seco. A misturade reação é agitada em temperatura ambiente sob uma atmosfera de argô-nio durante 6 h. Outra porção de succinato anidrosa e DMAP é adicionada eagitada durante total de 16 h. A mistura é concentrada a um resíduo bruto oqual é dissolvido em acetato de etila (50ml), lavado com ácido cítrico(400mg/20ml), salmoura, e secado (Na2SO4). A camada orgânica é concen-trada a um succinato de nucleosídeo bruto o qual foi diretamente usado paraa próxima reação sem purificação adicional.

Succinato de nucleosídeo, DMAP, DTNP, e Ph3P são agitadosem temperatura ambiente durante 20 min [nucleosídeo e nucleotídeos, 1996,15(4), 879 a 888.]. Em seguida Icaa-CPG é adicionado e agitado na mesmatemperatura durante 45 min. Os sólidos são filtrados e lavados com dicloro-metano de CH3CN5, e éter. Os suportes sólidos são secados, capeados sobprocedimento padrão, e lavados para fornecer o suporte sólido.

O Suporte de Vidro Controlado compreendendo nitroindol e fos-foramidato, desse modo obtidos são empregados em síntese de oligonucleo-tídeo padrão como descrito acima para oligonucleotídeos compreendendobases naturais.

Exemplo 3: teste de siRNA in vitro

A capacidade dos agentes de iRNAs para inibir a replicação dovírus da influenza foi testada em cepas de célula humana in vitro, ou é testa-da em camundongos in vivo. O agente de iRNA é transfectado nas células,por exemplo, por transfecção ou eletroporação, deixado agir sobre as célulasdurante um certo tempo, por exemplo, 24 horas, e níveis de infectividadeforam determinados por um ensaio formador de placa ou ELISA. Comple-mentando estes ensaios diretos, testamos a inibição da expressão de genealvo por agentes de RNAi para diversos genes da influenza recombinante-mente expressos em células hospedeiras mamíferas.Viroses e linhagens celulares

O vírus da Influenza A/PR/8/34 (PR8), subtipo H1N1, foi obtidode Charles River Laboratories (ATCC ns VR- 1469). A/WSN/33 (WSN), sub-tipo H1N1, pode ser obtido de Thomas Chambers, University of Kentucky,Lexington, KY. USA (vide Castrucci, M.R., e outros, J Virol. 1992, 66:4647),ou Dr. Peter Palese, Mount Sinai School of Medicine, Cidade de Nova lor-que, NY, USA (vide WO 04/028471). As cepas do vírus foram propagadasna cavidade alantóica de ovos de galinha embrionados a 34°C durante 48-72horas (PR8) ou 37°C durante 24 horas (WSN) (Tompkins, S.M., e outro,Proc. Natl Acad. Sei. 2004, 101:8682).

As células MDCK foram obtidas da American Type Culture Col-lection (ATCC, Rockville MD, USA; ATCC n9 CCL-34) e foram cultivadas emMEM contendo soro bovino fetal inativado por calor a 8% (FBS), 2 mM de L-glutamina, 1 mM de Piruvato de Sódio, 1,5 g/L de bicarbonato de sódio eaminoácidos não-essenciais a 37°C sob uma atmosfera de 5% de C02/95%de ar.

Células epiteliais de rim e macaco verde Africano Vero E6 foramobtidas de ATCC (Rockville MD, USA, ATCC ns CRL-1586) e foram cultiva-das em DMEM suplementado com 4,5 g/1 de D-Glicose, 2 mM L-Glutamina,110 mg/1 piruvato de sódio, 10% de soro bovino fetal (Hyclone, Cat ne30070.03) e 0.1% de penicilina/estreptomicina a 37°C sob uma atmosfera de5% de CO2/95% de ar.

Células de rim de macaco verde Africano Cos-7 foram obtidasda German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ, Brauns-chweig, Alemanha, DSMZ ns ACC 60) e foram cultivadas em MEM de Dul-becco, 10% de soro de bezerro fetal, 2 mM de L-glutamina, 1,2 Mg/ml de bi-carbonato de sódio, 100u de penicilina / 100 pg/ml de estreptomicina (Bioc-hrom AG, Berlin, Alemanha).

Exemplo 3.1: Ensaio formador de placa

Cultura Celular, transfecção de siRNA, e infecção por vírus.

As células MDCK foram semeadas em placas de 24 cavidades a7,5 χ 10 células por cavidade em 0,5 M1 de meio de crescimento um dia an-tes da infecção. As células MDCK foram 80% confluentes no dia da trans-fecção de siRNA. Antes das células de transfecção serem alimentadas com0,25 M1 de meio e crescimento.

Antes de adicionar às células, 1,5 M1 (50 μΙ por cavidade) deOptimem I (Invitrogen) e 90 μΙ (3 μl por cavidade) Lipofectamin 2000 (Invitro-gen), a quantidade suficiente para transfecção de uma placa de 24 cavida-des, foram combinados em um tubo de 2 M1 Sarstedt e incubados durante10-15 minutos em temperatura ambiente. A quantidade apropriada de siRNAdissolvida em tampão de recozimento é então adicionada à mistura de Opti-mem/lipofectamina 2000 para fornecer a concentração final desejada, mistu-rada, e incubada por mais 15 a 25 minutos em temperatura ambiente. Emseguida, 50 μΙ do complexo de siRNA/reagente são adicionados gota a gotaa cada cavidade como ditado pelo projeto experimental. Placas são entãosuavemente agitadas para assegurar mistura completa e incubadas a 37°C a5% C02 / 95% ar durante 14 horas.

Subseqüentemente, o meio de transfecção foi suavemente as-peirado, as células lavadas uma vez com 0,25-0,5 M1 de PBS, e 100 μΙ deconcentrações variáveis de PR8 em meio MEM foram adicionados a cadacavidade. Após incubação a 37-C durante 1 a 2 horas, 0,5 M1 de meios derevestimento (MEM, 20 mM de HEPES, 0,075% de NaHC03, 2 mM de glu-tamina, 0,6% de agarose, 0,5 pg/ml de TPCK-tripsina) foi adicionado, e asplacas incubadas durante 48 horas a 372C em uma incubadora a 5% deC02 / 95% de ar. As placas foram então fixadas e imunomanchadas paraplacas virais como descrito abaixo.

Imunoexpressão e quantificação viral

48 horas após a infecção, as células foram fixadas em formalinaa 10% tamponada neutra durante 45 minutos, e as cavidades enxagüadascom PBS. As cavidades foram então bloqueadas com tampão de permeabi-lização (1 χ PBS, 2% de FBS1 0,5% de saponina, 0,1% de azida de sódio)durante 15 minutos em temperatura ambiente, e 125 μΙ de uma solução con-tendo 0,5 pg/ml de anticorpo MAB8258B biotinilado antiinfluenza A de ca-mundongo (Chemicon) foi adicionado. Seguindo a incubação durante 1 horaem temperatura ambiente, as cavidades foram enxagüadas duas vezes comPBS para remover anticorpo solto, e 125 μΙ de uma solução de 1 ^g/ml deestreptavidina conjugada a rábano picante peroxidase (HRP) (Vector Labo-ratories) em PBS por cavidade foi adicionada, as placas incubadas durante45 minutos, e lavadas três vezes com PBS. 200 μΙ de substrato de TMB(Vector Laboratories n9SK-4400) por cavidade foram adicionados. Seguindoa incubação durante 5 a 10 minutos em temperatura ambiente no escuro, areação colorimétrica foi interrompida com água destilada, a água descartadae as placas secadas ao ar. As placas de influenza foram contadas por mi-croscopia de luz invertida em magnificação de 4X. A atividade formadora deplaca foi comparada às células transfectadas com Lipofectamina apenas(tratadas por simulação), e expressa em termos de [(atividade formadora deplaca em células tratadas) / (atividade formadora de placa em células trata-das por simulação)] χ 100 = % infectividade restante.Exemplo 3.2: Ensaio ELISA:

Células MDCK ou Vero foram semeadas em placas de 96 cavi-dades a 104 células por cavidade em 0,1 ml de meio de crescimento um diaantes da transfecção. As células foram 80% confluentes no dia de transfec-ção de siRNA. Antes da transfecção, as células foram alimentadas com 44 μlde meio de crescimento.

1,08 Ml (9 μl por cavidade) Optimem I (Invitrogen) e 42 μl (0,35μl por cavidade). Lipofectamina 2000 (Invitrogen), a quantidade suficientepara transfecção de uma placa de 96 cavidades, foi combinada em um tubode 2 Ml Sarstedt e incubada durante 10-15 minutos em temperatura ambien-te. A quantidade apropriada de siRNA dissolvida em tampão de recozimentofoi então adicionada à mistura de Optimem/lipofectamina 2000 para fornecera concentração final desejada, misturada, e incubada por mais 15-25 minu-tos em temperatura ambiente. Em seguida, 10 μΙ do complexo de siR-NA/reagente foram adicionados a cada cavidade como ditado pelo projetoexperimental. As placas foram suavemente agitadas para assegurar comple-ta mistura e em seguida incubadas a 379C em uma incubadora a 5% de CO2/ 95% de ar durante 14 horas.

Subseqüentemente, as células foram lavadas uma vez comPBS, infectadas com o vírus da influenza PR8 em 50 μΙ de MEM por cavida-de, e incubada durante 1 a 2 horas. A seguir, as placas foram lavadas umavez com PBS, e 200 μΙ de MEM com 0,25/0,5 μg/ml (MDCK/VERO, respecti-vamente) de tripsina foram adicionados. Dois dias após a infecção, as placasforam fixadas em 10% de Formalina Tamponada durante 15 minutos. Ascélulas foram enxagüadas com PBS, bloqueadas com tampão de bloqueiodurante 15 minutos em TEMPERATURA AMBIENTE, e 50 μΙ de uma solu-ção contendo 0,5 μg/ml de anticorpo MAB8258B monoclonal antiinfluenza Abiotinilado (Chemicon) por cavidade foram adicionados. As placas foramincubadas em TEMPERATURA AMBIENTE durante 1 hora, lavadas duasvezes com PBS, e 50 μΙ por cavidade de uma solução contendo 1 μg/ml deestreptavidina conjugada a AP (Vector Laboratories) em tampão de bloqueioforam adicionados. Após incubação durante 45 minutos e lavagem 3X comPBS, 100 μΙ por cavidade de solução de substrato de pNPP foram adiciona-dos. As placas foram desenvolvidas em TEMPERATURA AMBIENTE noescuro e lidas a 405 nm.

Exemplo 3.3: Inibição de genes alvo de influenza recombinantementeexpressos por siRNA:

Seqüências de consenso de MP (SEQ ID NO: 1453), NP (SEQID NO: 1454), PA (SEQ ID NO: 1455), PB1 (SEQ ID NO: 1456) e PB2 (SEQID NO: 1457) (vide a Tabela 5) foram sintetizadas por GENEART (Regens-burg, Alemanha) e clonadas em vetores padrão GENEART. MP e PA foramsubclonados em psiCheck-2 (Promega, Mannheim, Alemanha) por meio desítios AsiSI e Notl (ambos NEBn, Frankfurt, Alemanha), NP, (PB1) e PB2 pormeio de Xhol e Notl, resultando em um constructo com o gene flu entre ocódon de interrupção e o sinal polyA de Renila luciferase. Clonagem corretafoi confirmada por seqüenciamento final realizado por GATC Biotech (Kons-tanz, Alemanha).Transfeccões:

As células Cos-7 foram semeadas a 1,5 χ 104 células / cavidadeem placas de 96 cavidades brancas com base transparente (Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Alemanha) em 75 μl de meio de crescimento.Diretamente após a semeadura das células, 50 ng de plasmídeo /cavidadeforam transfectados com Lipofectamine2000 (Invitrogen) como descrito abai- xo para os siRNAs, com o plasmídeo diluído em Opti-MEM para um volumefinal de 12,5 μl / cavidade, preparado como uma mistura mestre para a placainteira.

As transfecções de siRNA foram realizadas em quadruplicatas 4horas após a transfecção de plasmídeo. Para cada cavidade 0,5 μl de Lipo- fectamine2000 (Invitrogen GmbH, Karlsruhe, Alemanha) foi misturado com12 μl de Opti-MEM (Invitrogen) e incubado durante 15 minutos em tempera-tura ambiente. Para uma concentração de siRNA de 50 nM no volume detransfecção de 100 μl, 1 μl de um siRNA de 5 μΜ foram misturados com 11,5μl de Opti-MEM por cavidade, combinados com a mistura de Lipofectami-ne2000-Opti-MEM e novamente incubados durante 15 minutos em tempera-tura ambiente. Durante a incubação, o meio de crescimento foi removido dascélulas e substituído por 75 μl / cavidade de meio fresco. Os complexos desiRNA-Lipofectamine2000- foram aplicados completamente (25 μl cada porcavidade) às células e as células foram incubadas durante 24 horas a 37°C e 5 % de CO2 em um incubador umidificado (Heraeus GmbH, Hanau, Ale-manha).

As células foram coletadas removendo o meio de crescimento eaplicação de 150 μl de uma mistura de 1 : 1 consistindo em meio e substratode Dual-Glo Luciferase, do Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega, Mannheim, Alemanha). O ensaio de luciferase foi realizado de acordo com oprotocolo do fabricante para ensaio de Dual-Glo Luciferase e a luminescên-cia foi medida em uma Registradora de Luminescência Victor-Light 1420(Perkin Elmer, Rodgau-Jügesheim, Alemanha). Os valores obtidos com Re-nila Iuciferase foram normalizados para os valores respectivos obtidos comIuciferase de vaga-lume. Valores adquiridos com siRNAs direcionados contraum gene da influenza foram normalizados para o valor obtido com um siRNAinespecífico (direcionado contra o gene de resistência à neomicina) estabe-lecidos a 100%.

siRNAs eficazes a partir da peneira foram também caracteriza-dos pelas curvas de resposta de dose. Transfecções de curvas de respostade dose foram realizadas nas seguintes concentrações de siRNA de acordocom o protocolo acima: 100 nM, 25 nM, 6,3 nM, 1,6 nM, 400 pM, 100 pM, 24pM, 6 pM, 1,5 pM, 380 fM. Valores de IC5o determinados por ajuste de curvaparametrizada usando o programa XLfit.

Tabela 5: Seqüências de consenso virtual para genes da influenza MP (SEQID NO: 1453), NP (SEQ ID NO: 1454), PA (SEQ ID NO: 1455), PB1 (SEQ IDNO: 1456) e PB2 (SEQ ID NO: 1457) para clonagem em células Cos-7.

<table>table see original document page 141</column></row><table><table>table see original document page 142</column></row><table>ATGGAAGACT TTGTGCGACA ATGCTTCAAT CCAATGATTG TCGAGCTTGC GGAAAAGGCA 60

ATGAAAGAAT ATGGGGAAGA TCCGAAAATC GAAACGAACA AATTTGCAGC AATATGCACA 120

CACTTAGAAG TCTGTTTCAT GTATTCAGAT TTTCACTTTA TTGATGAACG GGGCGAATCA 180

ATAATTGTAG AATCTGGCGA TCCGAATGCA TTATTGAAAC ACCGATTTGA AATAATTGAA 24 0

GGAAGAGACC GAACAATGGC CTGGACAGTG GTGAATAGTA TCTGCAACAC CACAGGAGTT 300

GAGAAACCTA AATTTCTCCC AGATTTGTAT GACTACAAAG AGAACCGATT CATTGAAATT 360

GGAGTGACAC GGAGGGAAGT TCATATATAC TATCTAGAGA AAGCCAACAA GATAAAATCC 420

GAGAAGACAC ACATTCACAT ATTCTCATTC ACTGGGGAGG AAATGGCCAC CAAAGCGGAC 480

TACACCCTTG ATGAAGAGAG CAGGGCAAGA ATCAAAACCA GGCTGTTCAC CATAAGGCAG 54 0

GAAATGGCCA GTAGGGGTCT ATGGGATTCC TTTCGTCAGT CCGAGAGAGG CGAAGAGACA 600

ATTGAAGAAA GATTTGAAAT CACAGGAACC ATGCGCAGGC TTGCCGACCA AAGTCTCCCA 660

CCGAACTTCT CCAGCCTTGA AAACTTTAGA GCCTATGTGG ATGGATTCGA ACCGAACGGC 720

TGCATTGAGG GCAAGCTTTC TCAAATGTCA AAAGAAGTGA ACGCCAGAAT TGAGCCATTT 780

CTGAAGACAA CACCACGCCC TCTCAGATTA CCTGATGGGC CTCCCTGCTC TCAGCGGTCG 840

AAGTTCTTGC TGATGGATGC CCTTAAATTA AGCATCGAAG ACCCGAGTCA TGAGGGGGAG 900

GGGATACCGC TATATGATGC AATCAAATGC ATGAAAACAT TTTTCGGCTG GAAAGAGCCC 960

AACATCGTAA AACCACATGA AAAAGGCATA AACCCCAATT ACCTCCTGGC TTGGAAGCAA 1020

GTGCTGGCAG AACTCCAAGA TATTGAAAAT GAGGAGAAAA TCCCAAAAAC AAAGAACATG 1080

AAGAAAACAA GCCAATTGAA GTGGGCACTC GGTGAGAACA TGGCACCAGA GAAAGTAGAC 1140

TTTGAGGATT GCAAAGATGT TAGCGATCTA AGACAGTATG ACAGTGATGA ACCAGAGCCT 1200

AGATCACTAG CAAGCTGGAT CCAGAGTGAA TTCAACAAGG CATGTGAATT GACAGATTCG 1260

AGTTGGATTG AACTTGATGA AATAGGGGAA GACGTTGCTC CAATTGAGCA CATTGCAAGT 1320

ATGAGAAGGA ACTATTTCAC AGCGGAAGTA TCCCATTGCA GGUCeACTGA ATACATAATG 1380AAQGGGGTGT ACATAAACAC AGCTCTGTTG AATGCATCCT GTGCAGCCAT GGATGACTTT 1440CAACTGATTC CAATGATAAG CAAATGCAGA ACCAAAGAAG GAAGACGGAA AACTAACCTG 1500TATGGATTCA TTATAAAAGG AAGATCCCAT TTGAGGAATG ATACCGATGT GGTAAACTTT 1560GTGAGTATGG AATTCTCTCT TACTGACCCG AGGCTGGAGC CACACAAGTG GGAAAAGTAC 1620TGTGTTCTCG AGATAGGAGA CATGCTCCTA CGGACTGCAA TAGGCCAAGT TTCAAGGCCC 1680ATGTTCCTGT ATGTGAGAAC CAATGGAACC TCCAAGATCA AAATGAAATG GGGAATGGAG 1740ATGAGGCGAT GCCTTCTTCA ATCCCTTCAA CAGATTGAGA GCATGATTGA GGCCGAGTCT 1800TCTGTCAAAG AGAAAGACAT GACCAAAGAA TTCTTTGAAA ACAAATCAGA AACATGGCCA 1860ATTGGAGAGT CACCCAAAGG AGTGGAGGAA GGCTCCATCG GGAAGGTGTG CAGAACCTTA 1920CTGGCGAAAT CTGTGTTCAA CAGTCTATAT GCATCTCCAC AACTCGAGGG GTTTTCAGCT 1980GAATCAAGAA AATTGCTTCT CATTGTTCAG GCACTTAGGG ACAACCTGGA ACCTGGGACC 2040TTCGATCTTQ GAGGGCTATA TGAAG CAATT GAGGAGTGCC TGATTAATGA TCCCTGGGTT 2100TTGCTTAATG CGTCTTGGTT CAACTCCTTC CTCACACATG CACTGAAATA GTT 2153SEQ ID NO: 1455

ΡΒ1 : consenso virtual derivado de H5N1gi / 58531084 / AB166860 / genePB1 de vírus da Influenza A (A/frango/Yamaguchi/7/2004 (H5N1)) para pro-teína 1 básica de polimerase, cds completo.<table>table see original document page 144</column></row><table><table>table see original document page 145</column></row><table>

A Tabela 1A, C1 D e E lista o identificador dúplex, as seqüênciasde filamento de sentido e anti-sentido, os genes alvo dos agentes, e os re-sultados dos ensaios acima, em que realizado, para agentes exemplaresselecionados da invenção. A Tabela IBeH lista o identificador dúplex, oidentificador dúplex da seqüência não modificada correspondente, as se-qüências de filamento de sentido e anti-sentido, e os genes alvo dos agen-tes, para agentes exemplares selecionados transportando grupos de ácidosnucléicos modificados, a fim de estabilizar estes agentes contra a degrada-ção, em que toda a base de pirimidina compreendendo nucleotídeos com-preendidos em grupo a 2'-0-metila no filamento de sentido, e toda a base depirimidina compreendendo nucleotídeos em um contexto de seqüência de 5'-ca-3' ou 5'-ua-3' compreendia um grupo 2'-0-metila no filamento anti-sentido,exceto para aqueles agentes em que o filamento anti-sense não compreen-de nucleotídeos em um contexto de seqüência de 5'-ca-3' ou 5'-ua-3', emque todas as uridinas em um contexto de seqüência de 5'-ug-3' são nucleo-tídeos modificados por 2'-0-metil no filamento anti-sense (por exemplo, AL-DP-2295, AL-DP-2301, e AL-DP- 2302). A Table 2 lista concentrações eminibição máxima de 50% calculada das determinações de resposta de doseem células Cos-7 construídas para expressar genes da infIuenza para al-guns agentes RNAi particularmente preferidos da invenção.

Tabela 6

Seqüências usadas em análise de Proteína Matriz de Influenza A (MP)

AY180470 cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/12-340/2000(Η1N1) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY633213 Vírus da InfIuenza A (A/pato selvagem/Alberta/211/98 (H1N1) )gene de proteína matriz (M), cds completo.

AY664487 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/119/98 (H1N1) )mRNA de proteína matriz não funcional, seqüência parcial.

M55476 Gene (M1) da Proteína matriz tipo A do vírus da Influenza, cdscompleto e gene (M2) de proteíma M2, cds completo.

M55479 Gene de proteína matriz tipo A (M1) do vírus da Influenza, cds com-pleto e gene de proteína M2 (M2), cds completo.

M55480 Gene de proteína matriz tipo A (M1) do vírus da Influenza, cdscompleto e gene de proteína M2 (M2), cds completo.

M63528 Vírus da Influenza A (A/Peru/Minnesota/166/81 (H1N1)) genes deproteína M1de membrana e proteína M2 de membrana, cds completo .

U49119 Gene M1 e M2 (M) de proteínas matriz do vírus da Influenza A , cdscompleto.

K26859 Genes M e M2 tipo A do vírus da Influenza para proteínas matrizΖ26860 Genes M e M2 tipo A do vírus da Influenza para proteínas matrizAY422021 Vírus da Influenza A (A/pato/Hokkaido/95/ΟΙ (H2N2) ) gene (M)de proteína matriz 1 , cds parcial.

M12699 Influenza A Aviária/Pato selvagem/NY/6750/78 RNA proteínas M1 eM2 de codificação de segmento 7 de RNA1 cds completo.

AF213915 Vírus da Influenza A (A/Frango/ltália/5945/95 (H3N2) ) proteínamatriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.

AY180498 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/3-120/2001(H3N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY664458 Vírus da Influenza A (AIruddy íumsto/ie/Delaware/142/99 (H3N2))mRNA de proteína matriz não funcional, seqüência parcial.

AY769614 Vírus da Influenza A (A/Peru/Ohio/313053/04 (H3N2)) gene daproteína matriz, cds parcial.

AY779257 Vírus da Influenza A (A/Peru/Carolina do Norte/12344/03 (H3N2)) gene de proteína matriz 2 (M), cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M),cds completo.

AY779258 Vírus da Influenza A (A/Peru/Minnesota/764-2/03 (H3N2) ) genede proteína matriz 2 (M) , cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M) , cdscompleto.

AY862623 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S6/03 (H3N2) ) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AY862624 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S7/03 (H3N2)) gene de pro-teína matriz (M), cds completo.

AY862625 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S8/03 (H3N2)) gene de pro-teína matriz (M), cds completo.

AY8S2626 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S9/03 (H3N2)) gene de pro-teína matriz (M), cds completo.

AY852627 Vírus da Influenza A (A/pato/Co ré ia/S 10/03 (H3N2)) gene de pro-teína matriz (M), cds completo.

AY862628 Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S11/03 (H3N2) ) gene deproteína matriz (M), cds completo.

Z26858 Genes M e M2 tipo A do vírus da Influenza para proteínas matrizΑΒ166865 Vírus da Influenza A (A/frango/Yamaguchi/7/2004 (H5N1)) genesM1 e M2 para proteína matriz e canal de íon de membrana, cds completo.

AB188819 Vírus da Influenza A (A/frango/Oita/8/2004 (H5N1) ) genes M2,M1 para canal 2 de íon de membrana, proteína matriz 1, cds completo.

AF509043 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY150/01 (H5N1) )gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509044 Vírus da Influenza A (A/Faisão/Hong Kong/FY155/01 (H5N1) )gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509045 Vírus da InfIuenza A (A/Frango macio/Hong Kong/SF189/01(H5N1)) gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509046 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/SF203/01 (H5N1) )gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509047 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/SF215/01 (H5N1) )gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509048 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/SF219/01 (H5N1) )gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509049 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/715.5/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509050 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/751.1/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (Mt), cds completo.

AF509051 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/822.1/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509052 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/829.2/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509053 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/830.2/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509054 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/858.3/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509055 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/866.3/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509056 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/867.1/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.AF509057 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/879.1/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509058 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/873.3/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509059 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/876. 1/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509060 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/891.1/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509061 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/893.2/01 (H5N1)) ge-ne M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509062 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/76.1/01 (H5N1)) geneM1 de proteína (M1), cds completo.

AF509063 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww100/01 (H5N1) )gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509064 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/573.4/01 (H5N1) ) geneM1 de proteína (M1), cds completo.

AF509065 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/646.3/01 (H5N1) ) geneM1 de proteína (M1), cds completo.

AY059506 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww26/2000 (H5N1))proteína matriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.

AY059507 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww28/2000 (H5N1))proteína matriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.

AY059508 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/ww381/2000 (H5N1) )proteína matriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.

AY059509 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/ww4S1/2000 (H5N1) )proteína matriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.

AY059510 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww49l/2000 (H5N1) )proteína matriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.

AY059511 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/298S. 1/2000 (H5N1) )proteína matriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.

AY059512 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/3014.8/2000 (H5N1))proteína matriz (M) de gene de segmento 7, cds parcial.ΑΥ075029 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/317.5/2001 (H5N1) )gene de proteína matriz 1 e proteína matriz 2 (M)1 cds completo.

AY075035 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/380.5/2001 (H5N1)) ge-ne de proteína matriz 1 e proteína matriz 2 (M), cds completo.

AY221530 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT873.3/01 -MB(HSNI)) gene de proteína matriz (M)1 cds completo.

AY221531 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT873.3/01 (H5N1) )gene de proteína matriz (M), cds completo.

AY221532 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/PY150/01-MB (H5N1))gene de proteína matriz (M), cds completo.

AY221533 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY150/01 (H5N1)) ge-ne de proteína matriz (M)1 cds completo.

AY221534 Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/FY155/61- MB(HSNI))gene de proteína matriz (M)1 cds completo.

AY221535 Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/FY155/01 (H5N1)) ge-ne de proteína matriz (M), cds completo.

AY221536 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU822.2/01-MB(H5N1)) gene de proteína matriz (M)1 cds completo.

AY221537 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/Yü822.2/01 (H5N1))gene de proteína matriz (M)1 cds completo.

AY221538 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU562/01 (H5N1))gene de proteína matriz (M), cds completo.

AY518361 Vírus da Influenza A (A/pato/China/E319-2/03 (H5N1)) gene M2de canal de íon de membrana e M1 de proteína matriz (M), cds completo.

AY575895 Vírus da Influenza A (A/Gs/HK/739.2/02 (H5N1)) gene de proteí-na matriz (M), cds completo.

AY575896 Vírus da Influenza A (A/Eg/HK/757.3/02 (H5N1)) gene de proteínamatriz (M), cds parcial.

AY575897 Vírus da Influenza A (A/G.H/HK/793.1/02 (H5N1)) gene de proteí-na matriz (M), cds parcial.

AY575898 Vírus da Influenza A (A/Dk/HK/821/02 (H5N1)) gene de proteínamatriz (M), cds parcial.ΑΥ575899 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.4/02 (H5N1)) gene de proteínamatriz (M), cds completo.

AY575900 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/61.9/02 (H5N1)) gene de proteínamatriz (M), cds completo.

AY575901 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU777/02 (H5N1)) gene de proteí-na matriz (M), cds completo.

AY575902 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/96.1/02 (H5N1)) gene de proteínamatriz (M), cds completo.

AY575903 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/409.1/02 (H5N1)) gene de proteínamatriz (M)1 cds completo.

AY575904 Vírus da Influenza A (A/Ph/HK/sv674.15/02 (H5N1)) gene de pro-teína matriz (M), cds completo.

AY585378 Vírus da Influenza A (A/pato/Pujian/61/2002 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585379 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/13/2002 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585380 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/17/2001 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585381 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/19/2000 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585382 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/01/2001 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo.

AY585383 Vírus da Influenza A (A/pato/G uangdong/07/2000 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo .

AY585384 Vírus da Influenza A (A/pato/G uangdong/12/2000 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo .

AY585385 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/22/2002 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo .

AY585386 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/40/2000 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo .

AY585387 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/07/1999 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .ΑΥ585388 Vírus da Influenza A (A/pato/G uangxi/22/2001 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds parcial.

AY585389 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/35/2001 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585390 Vírus da !nfluenza A (A/pato/Guangxi/53/2002 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585391 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/08/2001 (Η5Ν1)) mRNAde proteína matriz, cds completo .

AY585392 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/13/2001 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo .

AY585393 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/35/2002 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo .

AY585394 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/37/2002 (H5N1)) mRNAde proteína matriz, cds completo.

AY585395 Vírus da Influenza A (A/pato/shanghai/38/2001 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585396 Vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/11/2000 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585397 Vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/52/2000 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY585398 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/50/2001 (H5N1)) mRNA deproteína matriz, cds completo .

AY590578 Vírus da Influenza A (A/frango/Nakorn-Patom/Thailand/CU-K2/2004 (H5N1)) proteína matriz M2 e proteína matriz M1 (M) gene, parcialand cds completo .

AYS09315 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/l74/04 (H5N1)) seg-mento 7, seqüência completa.

AY651374 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonesia/BLy2003 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo.

AY651375 Vírus da Influenza A (A/Dk/lndonésia/MS/2004 (H5N1)) canal deíon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AYS51376 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/PA/2003 (H5N1)) canal deíon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651377 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/2A/2003 (H5N1)) canal deíon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY851378 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/4/2004 (H5N1)) cana! de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651379 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/5/2004 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651380 Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/1/2004 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.

AY651381 Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/73/2004 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo .

AY651382 Vírus da InfIuenzaA (A/Ck/Thailand/9.1/2004 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo.

AY651383 Vírus da Influenza A (A/Qa/Thailand/57/2004 (H5N1)) canal deíon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651384 Vírus da Influenza A (A/pássaro/Thailand/3.1/2004 (H5N1)) genede canal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo.

AY651385 Vírus da Influenza A (A/Dk/Thailand/71.1/2004 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo.

AY651386 Vírus da Influenza A (A/Gs/Thailand/79/2004 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo .

AY651391 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/33/2004 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651392 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/35/2004 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651393 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/36/2004 (H5N1)) gene de153

canal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo .

AY651394 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/37/2004 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo. AY651395 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/38/2004 (H5N1)) cana! de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651396 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/39/2004 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo .

AY651397 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/C57/2004 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo.

AYS51398 Vírus da Influenza A (A/Dk/Vietnam/11/2004 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo. AY651399 Vírus da Influenza A (A/Gf/HK/38/2002 (H5N1)) canal de íon 2 demembrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds parcial.AY651400 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.2/2002 (H5N1)) canal de íon 2de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651401 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/37.4/2002 (H5N1)) canal de íon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.

AY651402 Vírus da Influenza A (A/SCk/HK/YU 100/2002 (H5N1)) canal deíon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.AY651403 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU22/2002 (H5N1)) canal de íon 2de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo. AY651404 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3176.3/2002 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds parcial.AY651405 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3169.1/2002 (H5N1)) proteína ma-triz 1 e canal de íon de membrana 2 (M) gene, cds parcial.AY651406 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/FY157/2003 (H5N1)) canal de íon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.

AY651407 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU324/2003 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.ΑΥ651408 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/2133.1/2003 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds parcial.AY651409 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/NT93/2003 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AY651410 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/SSP141/2003 (H5N1)) gene decanal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1(M), cds completo .

AY651411 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/WF157/2003 (H5N1)) canal de íon2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.

AY651412 Vírus da Influenza A (A/falcão peregrino/HK/D0028/2004 (H5N1))gene de canal de íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteínamatriz 1 (M), cds completo.

AY651413 Vírus da Influenza A (A/gaivota da cabeça preta/H K/12.1/2003(H5N1)) canal de íon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M) , cdscompleto.

AY651414 Vírus da Influenza A (A/garça cinza/H K/861.1/2002 (H5N1)) canalde íon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.

AY651415 Vírus da Influenza A (A/pombo se Ivage m/H K/862.7/2002 (H5N1))canal de íon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds completo.

AY651416 Vírus da Influenza A (A/pardal das árvores/HK/854/2002 (H5N1))proteína matriz 1 e canal de íon de membrana 2 (M) gene, cds parcial.

AY651417 Vírus da Infiuenza A (A/marreco/China/2978.1/2002 (H5N1)) ca-nal de íon 2 de membrana e gene de proteína matriz 1 (M), cds parcial.

AY651418 Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/5806/2003 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AYS51419 Vírus da Influenza A (A/Dk/ST/4003/2003 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AY651420 Vírus da Influenza A (A/Ck/ST/4231/2003 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AY651421 Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6255/2003 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AY651422 Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6445/2003 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AY651423 Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/374/2004 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AY651424 Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/l0l/2004 (H5N1)) gene de canal deíon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M) , cdscompleto.

AY651425 Vírus da Influenza A (A/D k/H N/303/2004 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto .

AY651426 Vírus da Influenza A (A/Ph/ST/44/2004 (H5N1)) gene de canal deíon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M) , cdscompleto.

AY651427 Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/115/2004 (H5N1)) gene de canalde íon 2 (M) de membrana, cds parcial; e gene de proteína matriz 1 (M), cdscompleto.

AY653194 Vírus da Influenza A (A/frango/ailin/9/2004 (H5N1)) segmento 7,seqüência completa.

AY676045 Cepa do vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/82l/02 (H5N1))gene (M) de proteína de membrana, cds completo.

AY67S045 Cepa do vírus da Influenza A (A/garçota/HongKong/757.2/03(H5N1)) gene (M) de proteína de membrana, cds completo.

AY676047 Cepa do vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/ES/03 (H5N1))gene (M) de proteína de membrana, cds completo.

AY676048 Cepa do vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/ESDI/03 (H5N1))gene (M) de proteína de membrana, cds completo.ΑΥ684709 Vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/327/2004 (H5N1)) proteínamatriz 2 (M2) e gene (M1) da proteína matriz 1s, cds completo.AY737292 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/191/04 (H5N1)) seg-mento 7, seqüência completa.AY737298 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/178/04 (H5N1)) seg-mento 7, seqüência completa.AY737306 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/173/04 (H5N1)) seg-mento 7, seqüência completa.AY770077 Vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/489/2004 (H5N1)) proteínamatriz 2 (M2) e gene (M1) da proteína matriz 1 s, cds completo.AY770998 Vírus da Influenza A (A/frango/Ayutthaya/Thailand/CU- 23/04(H5N1)) gene da proteína matriz, cds completo.AY818145 Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/C58/04 (H5N1)) gene M1de proteína matriz, cds completo.AY818146 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Vietnam/36/04 (H5N1)) gene M1de proteína matriz, cds completo.AY856865 Vírus da Influenza A (A/pato/Shandong/093/2004 (H5N1)) seg-mento 7, seqüência completa.DQ055851 Vírus da Influenza A (A/frango/Yunnan/K001/2004 (H5N1)) geneM1 de proteína matriz, cds completo.AB189048 Vírus da Influenza A (A/frango/Kyoto/3/2004 (H5N1)) genes M2,M1 para canal de íon de membrana; M2, proteína matriz 1, cds completo,.AB189056 Vírus da Influenza A (A/corvo/Kyoto/53/2004 (H5N1)) genes M2,M1 para canal de íon de membrana; M2, proteína matriz 1, cds completo.AB189064 Vírus da Influenza A (A/corvo/0saka/102/2004 (H5N1)) genes M2,M1 para canal de íon de membrana; M2, proteína matriz 1, cds completo, .AF046082 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/220/97 (H5N1)) prote-ína matriz 2 (M2) e gene (M1) da proteína matriz 1s, cds completo.AF098560 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/258/97 (H5N1)) genesde proteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.AF098561 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/y388/97 (H5N1)) ge-nes de proteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.AF098562 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/728/97 (H5N1)) genesde proteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.

AF098563 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/786/97 (H5N1)) genesde proteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.

AF098564 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/915/97 (H5N1)) genesde proteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.

AF098566 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/p46/97 (H5N1)) genes deproteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.

AF098567 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/y283/97 (H5N1)) genesde proteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.

AF098568 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/w355/97 (H5N1)) ge-nes de proteína matriz M1 (M) e de proteína matriz M2 (M)s, cds parcial.

AF144306 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/1/96 (H5N1)) gene M1e M2 de proteínas matriz (M), alternativamente produtos unidos, cds completo.

AF216711 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-4/99(H5N1)) genes proteína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AF216719 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-6/99:(H5N1)) proteína matriz 1 e gene da proteína matriz, cds completo.

AF216727 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-8/99(H5N1)) genes proteína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AF216735 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-10/99(H5N1)) genes proteína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AF359560 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/3/97 (H5N1)) gene deproteína matriz 1 e proteína matriz 2 (M), cds completo.

AF398429 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/385.3/2000 (H5N1))gene (M) de proteína matriz 1 , cds parcial.

AF398430 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/385.5/2000 (H5N1))gene (M) de proteína matriz 1 , cds parcial.

AF468843 Vírus da Influenza A (A/pato/Anyang/AVL-l/2001 (H5N1)) genesproteína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AF509040 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY77/0I (H5N1)) geneM1 de proteína (M1), cds completo.

AF509041 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/YU562/01 (H5N1))gene M1 de proteína (M1), cds completo.

AF509042 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/YU5S3/01 (H5N1))gene M1 de proteína (Ml), cds completo.

AF073180 Vírus da Influenza A (A/Frango/New Jersey/15086-3/94(H7N3NSA)) genes proteína matriz 1 (M1) e proteína matriz 2 (M2), cdscompleto.

AF073197 Vírus da Influenza A (A/Peru/Oregon/71 (H7N3NSB)) genes pro-teína matriz 1 (M1) e proteína matriz 2 (M2), cds completo.

AY664433 Vírus da Influenza A (,Nruddy turnstone/New Jersey/65/85(H7N3)) mRNA de proteína matriz não funcional, seqüência parcial.

AY677732 Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbia/CN7-3/04(H7N3)) gene (M1) da proteína matriz 1, cds completo.

AF073198 Vírus da Influenza A (A/Peru/Colorado/13356/91 (H7N3NSA))genes proteína matriz 1 (M1) e proteína matriz 2 (M2), cds completo.

AF073200 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Arkansas/16309-7/94(H7N3NSA)) genes proteína matriz 1 (M1) e proteína matriz 2 (M2), cds;completo.

AF073201 Vírus da Influenza A (A/Peru/Utah/24721-10/95 (H7N3NSA)) ge-nes proteína matriz 1 (M1) e proteína matriz 2 (M2), cds completo.

AJS27492 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/214845/2002 (H7N3)) genepara proteína de membrana 1 e gene para proteína de membrana 2, RNAgenômico.

AJ627497 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/220158/2002 (H7N3)) genepara proteína de membrana 1 e gene para proteína de membrana 2, RNAgenômico.

AY241600 Vírus da Influenza A (A/Frango/Nova lorque/12273-11/99 (H7N3))genes proteína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AY241602 Vírus da Influenza A (A/frango/NY/14714-9/99 (H7N3)) genes pro-teína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AY241615 Vírus da Influenza A (A/pato/NJ/117228-7/01 (H7N3)) genes pro-teína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AY241616 Vírus da Influenza A (A/pato/PA/143585/01 (H7N3)) genes prote-ína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo .

AY300975 Vírus da Influenza A (A/Marreco de asa azul/TX/2/01 (H7N3) ge-ne (M) de proteína de membrana, cds completo,

AY303652 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/176822/02 (H7N3)) genesproteína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AY303653 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4322/02 (H7N3)) genes pro-teína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AY303654 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4957/02 (H7N3)) gene deproteína matriz 1, cds completo; e gene de proteína matriz 2, cds parcial.

AY303655 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4968/02 (H7N3)) genes pro-teína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AY303656 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4977/02 (H7N3)) genes pro-teína matriz 1 e proteína matriz 2, cds completo.

AY303657 Vírus da Influenza A (A/Peru/Chile/4418/02 (H7N3)) gene de pro-teína matriz 1, cds completo; e gene de proteína matriz 2, cds parcial.

AY586427 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/214845/02 (H7N3)) gene daproteína matriz, cds parcial.

AY586428 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltál ia/220158/2002 (H7N3)) gene daproteína matriz, cds parcial.

AY586429 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/43/01 (H7N3)) geneda proteína matriz, cds parcial.

AY586430 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/33/01 (H7N3)) geneda proteína matriz, cds parcial.

AY611525 Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbia/04 (H7N3)) prote-ína matriz 2 (M) e gene de proteína matriz 1 (M) s, cds completo.

AY646079 Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbi-a/GSC_human_B/04 (H7N3)) proteína matriz 2 e gene de proteína matriz 1(M), cds completo.

AY648288 Vírus da Influenza A (A/GSC_frango_B/British Columbia/04(H7N3)) proteína matriz 2 (M) e gene de proteína matriz 1 (M) s, cds comple-to.

AY650271 Vírus da Influenza A (A/GSC_frango/British Columbia/04 (H7N3))proteína matriz 2 (M) e gene de proteína matriz 1 (M) s, cds completo.AJS19676 Vírus da Influenza A (A/frango/Alemanha/R28/03 (H7N7)) geneMl para proteína 1 de membrana, RNA genômico.

AY340086 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/124/03 (H7N7)) gene daproteína matriz, cds parcial.

AY340087 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/126/03 (H7N7)) gene daproteína matriz, cds parcial. AY340088 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/127/03 (H7N7)) gene daproteína matriz, cds parcial.

AY340089 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/219/03 (H7N7)) gene daproteína matriz, cds completo.

AY340090 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/33/03 (H7N7)) gene da proteína matriz, cds completo.

AY340091 Vírus da Influenza A (A/frango/Países Baixos/l/03 (H7N7)) geneda proteína matriz, cds completo.

AY664468 Vírus da Influenza A (A/ruddy turnstone/Delaware/134/99 (H7N7))mRNA de proteína matriz não funcional, seqüência parcial.L37795 Influenza vírus A/frango/Brescia/1902 (H7N7) gene de proteína ma-triz (M1) e gene de proteína (M2) de transmembrana, cds completo.L37796 Influenza vírus A/FPV/Dobson (H7N7) gene de proteína matriz (M1)e gene de proteína (M2) de transmembrana, cds completo.L37797 Influenza vírus A/FPV/Weybridge (H7N7) gene de proteína matriz(M1) e gene de proteína (M2) de transmembrana, cds completo.

M23917 Influenza A/frango/FPV/Weybridge (H7N7) gene M1 da proteínamatriz, cds completo.

M23921 Influenza A/frango/FPV/Weybridge (H7N7) M2 gene da proteínamatriz, cds completo.M38299 Influenza A/FPV/Weybridge (H7N7) matrix (M) proteína (seg 7) ge-ne, cds completo.

M63523 Vírus da Influenza A (A/frango/Victoria/1/85 (H7N7)) genes de prote-ína M1 de membrana e proteína M2 de membrana, cds completo .

M6352S vírus da Influenza tipo A (cepa A/FPV/Dobson/27 (H7N7)) genes deproteína M1 de membrana e proteína M2 de membrana, cds completo.

AB049165 Vírus da Influenza A (A/periquito/Chiba/1/97 (H9N2 )) genes M1,M2 para cana! de íon de membrana, proteína matriz, cds completo.

AB049166 Vírus da Influenza A (A/periquito/Narita/92A/98 (H9N2 )) genesMl, M2 para canal de íon de membrana, proteína matriz, cds completo.

AF222671 Vírus da Influenza A (A/Frango macio/HongKong/SF44/99(H9N2)) gene (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF508684 Vírus da Influenza A (A/Ostrich/South Africa/9508103/95 (H9N2))gene (M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo .

AF508685 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/4/99 (H9N2)) gene (M)de proteína matriz M1 de segmento 7, cds parcial.

AF50868S Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/5/99 (H9N2)) gene (M)de proteína matriz M1 de segmento 7, cds parcial.

AF508687 Vírus da Influenza A (A/Frango/Alemanha/R45/98 (H9N2)) gene(M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508688 Vírus da Influenza A (A/pato/Alemanha/113/95 (H9N2)) gene (M).de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508689 Vírus da Influenza A (A/Frango/lran/IIT/99 (H9N2)) gene (M) deproteína matriz M1 de segmento 7, cds parcial.

AF508690 Vírus da Influenza A (A/Frango/Saudi Arabia/532/99 (H9N2)) ge-ne (M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds parcial.

AF508691 Vírus da Influenza A (A/Faisão/Ireland/PV 18/97 (H9N2)) gene (M)de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508692 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/99029/99 (H9N2)) gene(M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508693 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/8/98 (H9N2)) gene (M) deproteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508694 Vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/10/00 (H9N2)) gene(M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508695 Vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/11/97 (H9N2)) gene(M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.AF508696 Vírus da Influenza A (A/Frango/Heilongjiang/10/97 (H9N2)) gene(M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.AF508697 Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/62/00 (H9N2)) gene (M) deproteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508698 Vírus da Influenza A (A/Frango/Ningxia/5/99 (H9N2)) gene (M) deproteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508699 Vírus da Influenza A (A/Frango/Sichuan/5/97 (H9N2)) gene (M) deproteína matriz M1 de segmento 7, cds parcial.AF508700 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shandong/6/96 (H9N2)) gene (M)de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508701 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shij iazhuang/2/99 (H9N2 )) gene(M) de proteína matriz M1 de segmento 7, cds parcial.AF508702 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shenzhen/9/97 (H9N2)) gene (M)de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508703 Vírus da Influenza A (A/pato/Nanj ing/1/97 (H9N2)) gene (M) deproteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.

AF508704 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Shanghai/8/96 (H9N2)) gene (M)de proteína matriz M1 de segmento 7, cds completo.AF523482 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1043/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M)1 cds completo.

AF523483 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2134/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523484 Vírus da Influenza A (A/Pato bravo/Shantou/4808/1 (H9N2 )) genede proteína matriz (M)1 cds completo.

AF523485 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1042/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M)1 cds completo.

AF523486 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2143/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M)1 cds completo.AF523487 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2144/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523488 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1881/00 (H9N2 )) gene deproteína matriz (M)1 cds completo.

AF523489 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/l796/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523490 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2102/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M)1 cds completo.

AP523491 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/830/00 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523492 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2088/1 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523493 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1605/01 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523494 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/610/79 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523495 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/552/79 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523496 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/289/78 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523497 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/8S/7p (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF523498 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/366/78 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds parcial.

AF536719 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/1/95 (H9N2)) gene nãofuncional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536720 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/2/97 (H9N2)) gene nãofuncional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536721 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/3/99 (H9N2)) gene nãofuncional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536722 Vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/97 (H9N2)) gene nãofuncional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536723 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/1/96 (H9N2)) gene não fun-cional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536724 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/2/98 (H9N2)) gene não fun-cional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536725 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/3/98 (H9N2)) gene não fun-cional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536726 Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/98 (H9N2 )) gene não fun-cional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536727 Vírus da Influenza A (A/Frango/Liaoning/99 (H9N2)) gene nãofuncional da proteína matriz, seqüência parcial.

AF536728 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shandong/98 (H9N2)) gene nãofuncional da proteína matriz, seqüência parcial.

AJ291398 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/2/99 (H9N2)) gene M1para proteína matriz 1 (exon 1) e gene M2 para proteína matriz 2 (exons 1 e2), RNA genômico

AJ427865 Vírus da Influenza A (A/guail/Hong Kong/FY298/00 (H9N2)) parci-al m gene for proteína matriz, RNA genômico

AY180461 cepa A do vírus da Influenza A/Pombo/Nanchang/2-0461/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M)1 cds parcial.

AY180462 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-290/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180463 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-197/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180464 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-392/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180477 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-361/2001(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180485 cepa A do vírus da Influenza A/Pombo/Nanchang/11-145/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180486 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/1-0070/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180489 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/10-389/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180490 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/1-0016/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.ΑΥ180492 cepa A do vírus da Influenza A/Pombo/Nanchang/7-058/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M)1 cds parcial.

AY180495 cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/2-0460/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.AYI80502 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-010/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M)1 cds parcial.

AY180504 cepa A do vírus da Influénza A/Codorna/Nanchang/4-040/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180506 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-301/2001(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180516 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/7-092/2000(H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.

AY180519 cepa A do vírus da Influenza A/Pato bravo/Nanchang/2-0480/2000 (H9N2) gene de proteína matriz (M), cds parcial.AY253755 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shanghai/F/98 (H9N2)) proteínamatriz M1 e canal de íon de membrana M2 genes, cds completo .AY496852 Vírus da Influenza A (A/frango/Mudanjiang/0823/2000 (H9N2))proteína matriz (M1) mRNA, cds completo.

AY633165 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/17/91 (H9N2)) ge-ne de proteína matriz (M), cds completo.

AY633277 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/321/88 (H9N2))gene de proteína matriz (M)1 cds completo.

AY633293 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/ll/91 (H9N2)) genede proteína matriz (M)1 cds completo.AY664464 Vírus da Influenza A (A/Pássaro do litoral/Delaware/276/99(H9N2)) mRNA de proteína matriz não funcional, seqüência parcial.AY664679 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW153/03 (H9N2))gene (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteínaM1 de membrana, cds completo.AY664680 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/AP45/03 (H9N2)) gene(M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1 demembrana, cds completo.ΑΥ664681 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/BD90/03 (H9N2)) gene(M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1 demembrana, cds completo.

AY664682 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW291/03 (H9N2))gene (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteínaM1 de membrana, cds completo.

AY664683 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW304/03 (H9N2))proteína M2 de membrana (M) e gene (M) de proteína M1 de membranas,cds parcial.

AY664684 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/FY23/03 (H9N2)) gene(M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1 demembrana, cds completo.

AY664685 Vírus da Influenza A (A/galinha d'angola/HongKong/NT10l/03(H9N2)) gene (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) deproteína M1 de membrana, cds completo.

AY664686 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/NT142/03 (H9N2)) ge-ne (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1de membrana, cds completo.

AY664687 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SF1/03 (H9N2)) gene(M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1 demembrana, cds completo.

AY664688 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SSP/01/03 (H9N2))gene (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteínaM1 de membrana, cds completo.

AY664689 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/TP38/03 (H9N2)) gene(M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1 demembrana, cds completo.

AY664690 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF126/03 (H9N2)) ge-ne (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1de membrana, cds completo.

AY664691 Vírus da Influenza A (A/pombo/HongKong/WF53/03 (H9N2)) gene(M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1 demembrana, cds completo.

AY664692 Vírus da Influenza A (A/faisão/HongKong/WF54/03 (H9N2)) gene(M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1 demembrana, cds completo.

AY664693 Vírus da Influenza A (A/galinha d'angola/HongKong/NT184/03(H9N2)) gene (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) deproteína M1 de membrana, cds completo.

AY664694 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF120/03 (H9N2)) pro-teína M2 de membrana (M) e gene (M) de proteína M1 de membranas, cdsparcial.

AY664695 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/NT3S6/03 (H9N2)) ge-ne (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1de membrana, cds completo.

AY664696 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SSP418/03 (H9N2))gene (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteínaM1 de membrana, cds completo.

AY664697 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/YU427/03 (H9N2)) ge-ne (M) de proteína M2 de membrana, cds parcial; e gene (M) de proteína M1de membrana, cds completo.

AY800234 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S1/2003 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AY862614 Vírus da Influenza A (A/frango macio/Coréia/S3/03 (Η9Ν2)) genede proteína matriz (M), cds completo.

AY8S2615 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S4/03 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AY8S2616 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S5/03 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AY862617 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S 12/03 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AY862618 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S 13/03 (H9N2)) gene de pro-teína matriz (M), cds completo.

AY862619 Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S14/03 (H9N2)) gene deproteína matriz (Μ), cds parcial.

AY8G2620 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S 15/03 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AY862621 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S16/03 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AY862622 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S18/03 (H9N2)) gene deproteína matriz (M), cds completo.

AF156458 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/G9/97 (H9N2)) seg-mento 7 proteína matriz Μ1 (M1) e gene (M2) de proteína matriz M2s, cdscompleto.

AF156459 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/G23/97 (H9N2)) seg-mento 7 proteína matriz Μ1 (M1) e gene (M2) de proteína matriz M2s, cdscompleto .

AFI56460 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/Y233/97 (H9N2))segmento 7 proteína matriz Μ1 (M1) e gene (M2) de proteína matriz M2s,cds completo.

AF156461 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/Y280/97 (H9N2)) seg-mento 7 proteína matriz Μ1 (M1) e gene (M2) de proteína matriz M2s, cdscompleto .

AF156462 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/Y439/97 (H9N2)) seg-mento 7 proteína matriz Μ1 (M1) e gene (M2) de proteína matriz M2s, cdscompleto .

AF156463 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/G1/97 (H9N2)) seg-mento 7 gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo; e gene (M2) deproteína matriz M2, cds parcial.

AF156464 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/739/94 (H9N2)) seg-mento 7 gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo; e gene (M2) deproteína matriz M2, cds parcial.

AF156465 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/AF157/92 (H9N2))segmento 7 gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo,- e gene (M2) deproteína matriz M2, cds parcial.

AF156466 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/l/94 (H9N2)) segmento 7gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo; e gene (M2) de proteínamatriz M2, cds parcial.

AF156467 Vírus da InfIuenza A (A/Frango/Coréia/38349- p96323/96 (H9N2))segmento 7 gene (M1) de proteína matriz Ml1 cds completo; e gene (M2) deproteína matriz M2, cds parcial.

AF156468 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/25232-96006/96 (H9N2))segmento 7 gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo; e gene (M2) deproteína matriz M2, cds parcial.

AF156469 Vírus da Influenza A (A/Pássaro do litoral/Delaware/9/9S (H9N2))segmento 7 gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo; e gene (M2) deproteína matriz M2, cds parcial.

AF156470 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Arkansas/29209-l/93 (H9N2))segmento 7 gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo; e gene (M2) deproteína matriz M2, cds parcial.

AF15S471 Vírus da Influenza A (A/Peru/California/189/66 (H9N2)) segmento7 gene (M1) de proteína matriz M1, cds completo; e gene (M2) de proteínamatriz M2, cds parcial.

AF203788 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/MS96/96 (H9N2)) mRNAde proteína matriz 1, cds completo; e mRNA de proteína matriz 2, cds parcial.

AF222662 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/A17/99 (H9N2)) ge-ne (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF222SS3 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/FYe/99 (H9N2)) gene(M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF222664 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/NT16/99 (H9N2)) ge-ne (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF222665 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/SSP10/99 (H9N2 ))gene (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF222666 Vírus da Influenza A (A/Faisão/Hong Kong/SSPII/99 (H9N2 )) ge-ne (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF222667 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY20/99 (H9N2)) ge-ne (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.AF222668 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/KC12/99 (H9N2)) ge-ne (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF222669 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/NT28/99 (H9N2 ))gene (M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

AF222670 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/SF2/99 (H9N2)) gene(M1) de segmento 7 M1, cds parcial.

Seqüências usadas em análise de Proteína de Nucleocapsídeo (NP) daInfluenza A

AF156415 Vírus da Influenza A (A/Peru/California/189/66 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF523423 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/86/76 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AP523424 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/366/78 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AP523421 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/289/78 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AF523422 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/552/79 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY633279 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/321/88 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY633295 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/11/91 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY633167 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/17/91 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP), cds completo.

AF156410 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/AF157/92 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds completo.

AF156414 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Arkansas/29209-l/93 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF156408 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/739/94 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds completo.

AF156409 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/l/94 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP) de segmento 5, cds completo.AF536699 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/l/95 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP), cds parcial.

AF508596 Vírus da Influenza A (A/Ostrich/South Africa/9508103/95 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508600 Vírus da Influenza A (A/pato/Alemanha/113/95 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AB020778 gene do vírus da Influenza A para nucleoproteína, cds completo.

AP508613 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shandong/6/96 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AP508617 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Shanghai/8/96 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF536703 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/l/96 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP), cds parcial.

AF156411 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/38349-96323/96 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds completo.

AF156412 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/25232-96006/96 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

M63779 Influenza A/FPV/Dobson/ 'Holandês' /27 (H7N7) mRNA de nucleo-proteína, cds completo.

M63784 Influenza A/marreco/lceland/29/80 (H7N7) mRNA de nucleoproteí-na, cds completo.

J620352 Vírus da Influenza A (A/Frango/Alemanha/R28/03 (H7N7)) gene NPpara nucleoproteína, RNA genômico.

AY342425 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/219/03 (H7N7)) gene deproteína de nucleocapsídeo, cds completo.

AY342426 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/033/03 (H7N7)) gene deproteína de nucleocapsídeo, cds completo.

AY342427 Vírus da Influenza A (A/frango/Países Baixos/1/03 (H7N7)) genede proteína de nucleocapsídeo, cds completo.

AF156413 Vírus da Influenza A (A/Pássaro do litoral/Delaware/9/96 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF203787 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/MS96/96 (H9N2)) mRNAde nucleoproteína, cds completo .

AF156402 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/G9/97 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds completo.

AF156403 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/G23/97 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds completo.

AF156404 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/Y233/97 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF156405 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/Y280/97 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF156406 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/Y439/97 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds completo.

AF156407 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/G1/97 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508612 Vírus da Influenza A (A/Frango/Sichuan/5/97 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF536702 Vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/97 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP), cds parcial.

AF53S700 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beij ing/2/97 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP), cds parcial.

AF508615 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shenzhen/9/97 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508616 Vírus da Influenza A (A/pato/Nanjing/1/97 (H9N2)) gene de nucle-oproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AB049161 Vírus da Influenza A (A/periquito/Chiba/1/97 (H9N2)) gene NPpara nucleoproteína, cds completo.

AF508603 Vírus da InfIuenza A (A/Faisão/lreland/PV18/97 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508607 Vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/11/97 (H9N2 )) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508609 Vírus da Influenza A (A/Frango/Heilongjiang/10/97 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508608 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/4/98 (H9N2 )) gene de nu-cléoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508605 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/8/98 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508599 Vírus da Influenza A (A/Frango/Alemanha/R45/98 (H9N2)) gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF536708 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shandong/98 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP), cds parcial.

AY253753 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shanghai/F/98 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP), cds completo. AF536704 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/2/98 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP), cds parcial.

AF536705 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/3/98 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP), cds parcial.

AF536706 Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/98 (H9N2)) gene de nucle- oproteína (NP), cds parcial.

AB049162 Vírus da Influenza A (A/periquito/Narita/92A/98 (H9N2 )) gene NPpara nucleoproteína, cds completo.

AF186270 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/NT28/99 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial. AP186271 Vírus da Influenza A (A/Silkie Frango/Hong Kong/SF43/99(H9N2)) gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.AP186272 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/SF2/99 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF222614 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/A17/99 (H9N2)) ge- ne de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF222615 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/FY6/99 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF222616 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/NTie/99 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial. AF222617 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/SSPI6/99 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.AF222618 Vírus da Influenza A (A/Faisão/Hong Kong/SSP11/99 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.AF536707 Vírus da Influenza A (A/Frango/Liaoning/99 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP), cds parcial.

AJ291394 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/2/99 (H9N2)) gene NPpara nucleoproteína, RNA genômico.

AF53S701 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beij ing/3/99 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP), cds parcial.

AF508611 Vírus da Influenza A (A/Frango/Ningxia/5/99 (H9N2)) gene de nu-cleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508614 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shij iazhuang/2/99 (H9N2 )) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508604 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/99029/99 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF222619 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY20/99 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF222620 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/KC12/99 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF222621 Vírus da Influenza A (A/Frango macio/HongKong/SF44/99(H9N2)) gene de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508601 Vírus da Influenza A (A/Frango/lran/11T/99 (H9N2 )) gene de nu-cleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508602 Vírus da Influenza A (A/Frango/Saudi Arabia/532/99 (H9N2 )) ge-ne de nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508597 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/4/99 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508598 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/5/99 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508606 Vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/10/00 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF508610 Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/62/00 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF523410 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1043/00 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523411 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2134/00 (H9N2 )) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523413 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1042/00 (H9N2 )) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523415 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2102/00 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523416 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/830/00 (H9N2 )) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523417 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2144/00 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523419 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2143/00 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523420 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1881/00 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AJ4278S4 Vírus da Influenza A (A/codorna/Hong Kong/FY298/00 (H9N2))parcial gene NP para nucleoproteína, RNA genômico.

ΑΥ180525 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Nanchang/2-0461/2000 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180534 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/7-092/2000(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180537 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-392/2000(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180538 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Nanchang/11-145/2000 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180542 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-197/2000(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180544 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-290/2000(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180560 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Nanchang/7-058/2000 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180562 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-010/2000(Η9Ν2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180563 cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/4-040/2000(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180564 Vírus da Influenza A (A/Pato bravo/Nanchang/2- 0480/2000(H9N2)) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180575 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Nanchang/2-0460/2000 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY496851 Vírus da Influenza A (A/frango/Mudanjiang/0823/2000 (H9N2))mRNA de nucleoproteína (np), cds completo.

AY180581 Vírus da Influenza A (A/Frango/Nanchang/1-0016/2000 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180583 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/10-389/2000(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AYI80584 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/1-0070/2000(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY768567 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU0028/00 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY7685S8 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU0037/00 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY768569 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU0057/00 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY7S8570 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU0073/00 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY768571 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU009l/00 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY768572 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU0140/00 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY7S8573 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU014S/00 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY768574 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU1035C/00 (H9N2 ))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY268949 Vírus da Influenza A (A/frango/Wangcheng/4/2001 (H9N2)) mR-NA de nucleoproteína, cds completo .

AY180578 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-301/2001(H9N2) gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY180551 Vírus da Influenza A (A/Frango/Nanchang/4-361/2001 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial,

AF523418 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2088/ΘΙ (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523414 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1605/01 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF523412 Vírus da Influenza A (A/Pato bravo/Shantou/4808/01 (H9N2)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY800236 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SI/2003 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP), cds parcial.

AY862646 Vírus da Influenza A (A/frango macio/Coréia/S3/03 (H9N2)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862S47 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S4/03 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862648 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S5/03 (H9N2)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862649 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S12/03 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862650 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S 13/03 (H9N2)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862651 Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S 14/03 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862652 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S 15/03 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862653 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S 16/03 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY8S2654 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S18/03 (H9N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY664717 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW153/03 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AYSS4718 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/AP45/03 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AY6S4719 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/BD90/03 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP)i cds completo.

AY664720 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW291/03 (H9N2 ))gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664721 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW304/03 (H9N2 ))gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664722 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/FY23/03 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664723 Vírus da Influenza A (A/galinha d'angola/HongKong/NT10l/03(H9N2)) gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664724 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/NT142/03 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY6S4725 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SF1/03 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664726 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SSP101/03 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664727 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/TP38/03 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664728 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF126/03 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664729 Vírus da Influenza A (A/pombo/HongKong/WF53/03 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664730 Vírus da Influenza A (A/faisão/HongKong/WF54/03 (H9N2)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664731 Vírus da Influenza A (A/galinha d'angola/HongKong/NT184/03(H9N2)) gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY664732 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF120/03 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY6S4733 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/NT366/03 (H9N2 ))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY664734 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SSP418/03 (H9N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY664735 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/YU427/03 (H9N2)) ge-ne de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY788915 Vírus da Influenza A (A/frango/China/HSS2004 (H9N2)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AY586423 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/33/ΘΙ (H7N3 )) genede nucleoproteína, cds parcial.

AY586424 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/43/ΘΙ (H7N3)) genede nucleoproteína, cds parcial.

AY586425 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/220158/2002 (H7N3)) gene denucleoproteína, cds parcial.

AY586426 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/214845/02 (H7N3)) gene denucleoproteína, cds parcial.

AJ627486 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/214845/2002 (H7N3)) gene NPpara nucleoproteína, RNA genômico.

AJS27495 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/220158/2002 (H7N3)) gene NPpara nucleoproteína, RNA genômico.

AY303658 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/176822/02 (H7N3)) gene denucleoproteína, cds completo.

AY303659 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4957/02 (H7N3)) gene denucleoproteína, cds completo.

AY611527 Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbia/04 (H7N3)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AY646081 Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbi-a/GSC_human_B/04 (H7N3)) gene de nucleoproteína (NP), cds completo.AY648290 Vírus da Influenza A (A/GSC_frango_B/British Columbia/04(H7N3)) gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY650273 Vírus da Influenza A (A/GSC_frango/British Columbia/04 (H7N3))gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AF144303 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/l/96 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AF046084 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/220/97 (H5N1)) genede nucleoproteína, cds completo.

AF057293 Vírus da Influenza A (A/frango/Hong Kong/258/97 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína, cds completo .

AF098617 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/y388/97 (H5N1)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AF098618 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/728/97 (H5N1)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.AF098619 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/786/97 (H5N1)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AF098620 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/915/97 (H5N1)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AF098621 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/p46/97 (H5N1)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AF098622 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/y283/97 (H5N1)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AF098623 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/w355/97 (H5N1)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.AF370122 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/3/97 (H5N1)) gene denucleoproteína, cds completo.

AF216712 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-4/99(H5N1)) gene de nucleoproteína, cds completo.

AF216720 Vírus da InfIuenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-6/99(H5N1)) gene de nucleoproteína, cds completo.

AF216728 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-8/99(H5N1)) gene de nucleoproteína, cds completo.

AF216736 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-10/99(H5N1)) gene de nucleoproteína, cds completo.AY585429 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/07/1999 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo .

AY585439 Vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/ll/2000 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY585440 Vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/52/2000 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY585428 Vírus da Influenza A (A/pato/G uangdong/40/2000 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.

ΑΥ585423 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/19/2000 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY585425 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/07/2000 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.AY585426 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/12/2000 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.

AY059492 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww26/2000 (H5N1))segmento 5 gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY059493 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww28/2000 (H5N1))segmento 5 gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY059494 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/ww381/2000 (H5N1))segmento 5 gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY059495 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/ww461/2000 (H5N1))segmento 5 gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY059496 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww491/2000 (H5N1))segmento 5 gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY059497 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/2986.1/2000 (H5N1))segmento 5 gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY059498 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/3014.8/2000 (H5N1))segmento 5 gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF398419 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/385.3/2000 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AF398420 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/385.5/2000 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AF468842 Vírus da Influenza A (A/pato/Anyang/AVL-1/2001 (H5N1)) genede nucleoproteína (NP), cds completo.

AF509117 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY77/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.AF509118 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/YU562/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.AF509119 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/YU5S3/01 (H5N1)) gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY585438 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/38/2001 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.

AY221548 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT873.3/01-MB(HSNI)) gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial. AY221549 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT873.3/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY221550 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY150/01-MB (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY221551 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY150/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY221552 Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/FY155/01- MB(HSNI))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY221553 Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/FY155/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial. AY221554 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU822,2/01-MB(HSNI)) gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY221555 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU822.2/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY221556 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU552/01 (H5N1)) gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509120 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY150/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.AF509121 Vírus da Influenza A (A/Faisão/Hong Kong/FY155/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo. AF509122 Vírus da Influenza A (A/Frango macio/Hong Kong/SF189/01(H5N1)) gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AF509123 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/SF203/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509124 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/SF215/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509125 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/SP219/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509126 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/715.5/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509127 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/751.1/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509128 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/822. 1/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509129 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/829.2/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509130 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/830.2/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509131 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/858.3/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509132 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/866.3/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509133 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/867.1/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509134 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/879.1/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509135 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/873.3/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509136 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/876.1/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509137 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/891. 1/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509138 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/893.2/01 (H5N1)) ge-ne de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509139 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/76.1/01 (H5N1)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AF509140 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww100/01 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AF509141 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/573.4/01 (H5N1)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AF509142 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/646.3/01 (H5N1)) geneproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY585424 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/01/2001 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.AY585422 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/17/2001 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY585430 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/22/2001 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY585431 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/35/2001 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY585432 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/50/2001 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY585434 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/08/2001 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.AY585435 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/13/2001 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.AY585436 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/35/2002 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.AY585437 Vírus da InfIuenza A (A/pato/Shanghai/37/2002 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo.AY585433 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/53/2002 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.AY585427 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/22/2002 (H5N1)) mRNAde nucleoproteína (np), cds completo .AY585420 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/01/2002 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.AY585421 Vírus da Influenza A (A/pato/Fuj ian/13/2002 (H5N1)) mRNA denucleoproteína (np), cds completo.

AY575907 Vírus da Influenza A (A/Gs/HK/739.2/02 (H5N1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP)1 cds parcial.

AY575908 Vírus da Influenza A (A/Eg/HK/757.3/02 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY575909 Vírus da Influenza A (A/G. H/HK/793.1/02 (H5N1)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY575910 Vírus da Influenza A (A/Dk/HK/821/02 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY575911 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.4/02 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY575912 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/61.9/02 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY575913 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU777/02 (H5N1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY575914 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/96.1/02 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY575915 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/409.1/02 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY575916 Vírus da Influenza A (A/Ph/HK/sv674.15/02 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

DQ02314S Vírus da Influenza A (A/frango/sd/1/02 (H5N1)) mRNA de nucle-oproteína (np), cds completo.

AY676037 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/821/02 (H5N1)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AY651510 Vírus da Influenza A (A/Gf/HK/38/2002 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY651511 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.2/2002 (Η5Ν1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY651512 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/37.4/2002 (H5N1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY651513 Vírus da Influenza A (A/SCk/HK/YU 100/2002 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP)1 cds completo.

AY651514 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU22/2002 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651521 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3176.3/2002 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651522 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3169.1/2002 (Η5Ν1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AYS51524 Vírus da Influenza A (A/pombo selvagem/HK/862.7/2002 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651525 Vírus da Influenza A (A/pardal das árvores/HK/864/2002 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651526 Vírus da Influenza A (A/garça cinza/HK/861.1/2002 (H5N1)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651527 Vírus da Influenza A (A/marreco/China/2978.1/2002 (H5N1)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651523 Vírus da Influenza A (A/gaivota da cabeça preta/HK/12.1/2003(H5N1)) gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651487 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/PA/2003 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AYS51515 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/2133.1/2003 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651516 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/NT93/2003 (H5N1)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651517 Vírus da InfIuenza A (A/Ck/HK/SSP141/2003 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651518 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/WP157/2003 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651519 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/FY157/2003 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651520 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU324/2003 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AYS51490 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonesia/2A/2003 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY676038 Vírus da Influenza A (A/garçota/Hong Kong/757.2/03 (H5N1)) ge-ne de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY676039 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/ES/03 (H5N1)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AY676040 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/ESD1/03 (H5N1)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AY651529 Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/5806/2003 (H5N1)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651532 Vírus da Influenza A (A/Ck/ST/4231/2003 (H5N1)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651534 Vírus da Influenza A (A/Dk/ST/4003/2003 (H5N1)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651535 Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/S255/2003 (H5N1)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651536 Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/e445/2003 (H5N1)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651485 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonesia/BL/2003 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP)1 cds parcial.

AY518364 Vírus da Influenza A (A/pato/China/E319-2/03 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY574189 Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/HDl/2004 (H5N1)) genede nucleoproteína, cds parcial.

AY574192 Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/HD2/2004 (H5N1)) genede nucleoproteína, cds parcial.

AJ867076 Vírus da Influenza A (A/Hatay/2004/ (H5N1)) gene NP para nucle-oproteína, RNA genômico

AY651486 Vírus da Influenza A (A/Dk/lndonesia/MS/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY590579 Vírus da Influenza A (A/frango/Nakorn-Patom/Thailand/CU-K2/2004 (H5N1)) gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds completo.

AY609313 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/174/04 (H5N1)) seg-mento 5, seqüência completa.

AY576929 Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/CM/2004 (H5N1)) seg-mento 5 gene de nucleoproteína, cds parcial.

AY57S931 Vírus da Influenza A (A/pato muscovita/Vietnam/MdGL/2004(H5N1)) segmento 5 gene de nucleoproteína, cds parcial.

AB166863 Vírus da Influenza A (A/frango/Yamaguchi/7/2004 (H5N1)) geneNP para nucleoproteína, cds completo.

AB188817 Vírus da Influenza A (A/frango/Oita/8/2004 (H5N1)) gene NP paranucleoproteína, cds completo.

AY651537 Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/374/2004 (H5N1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651538 Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/115/2004 (H5N1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY65319S Vírus da Influenza A (A/frango/Jilin/9/2004 (H5N1)) segmento 5,seqüência completa.

AY651533 Vírus da Influenza A (A/Ph/ST/44/2004 (H5N1)) gene de proteínade nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651530 Vírus da InfIuenza A (A/D k/H N/303/2004 (H5N1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651531 Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/101/2004 (H5N1)) gene de proteí-na de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY684707 Vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/327/2004 (H5N1)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AY737290 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/191/04 (H5N1)) seg-mento 5, seqüência completa .

AY737297 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/178/04 (H5N1)) seg-mento 5, seqüência completa.

AY737305 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/173/04 (H5N1)) seg-mento 5, seqüência completa.

AY770081 Vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/489/2004 (H5N1)) gene denucleoproteína (NP), cds completo.

AY770996 Vírus da Influenza A (A/frango/Ayutthaya/Thailand/CU- 23/04(Η5Ν1)) gene de nucleoproteína, cds parcial.

AY818139 Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/C58/04 (H5N1)) nucleo-proteína NP gene, cds completo.

AY818140 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Vietnam/36/04 (H5N1)) nucleo-proteína NP gene, cds completo.

AY856864 Vírus da Influenza A (A/pato/Shandong/093/2004 (H5N1)) seg-mento 5, seqüência completa .

AB18904S Vírus da Influenza A (A/frango/Kyoto/3/2004 (H5N1)) gene NPpara nucleoproteína, cds completo.AB189054 Vírus da Influenza A (A/corvo/Kyoto/53/2004 (H5N1)) gene NPpara nucleoproteína, cds completo.

AB1890S2 Vírus da Influenza A (A/corvo/9saka/l02/2004 (H5N1)) gene NPpara nucleoproteína, cds completo .

AY651491 Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/l/2004 (H5N1)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651492 Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/73/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651493 Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/9.1/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY651494 Vírus da Influenza A (A/Qa/Thailand/57/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651495 Vírus da Influenza A (A/pássaro/Thailand/3.1/2004 (H5N1)) genede proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651496 Vírus da Influenza A (A/Dk/Thailand/71.1/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651497 Vírus da Influenza A (A/Gs/Thailand/79/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651502 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/33/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.AY651503 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/35/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651504 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/36/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651505 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/37/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651506 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/38/2004 (H5N1)) gene deproteína de nuc leocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651507 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/39/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651508 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/C57/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651509 Vírus da Influenza A (A/Dk/Vietnam/11/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651488 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/4/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651489 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonesia/5/2004 (H5N1)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY651528 Vírus da Influenza A (A/falcão peregrino/HK/D0028/2004 (H5N1))gene de proteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

M22573 Influenza A/pato/Hong Kong/7/75 (H3N2), nucleoproteína (seg 5),RNA.

AY180555 Vírus da Influenza A (A/Frango/Nanchang/3-120/2001 (H3N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY779261 Vírus da Influenza A (A/Peru/Carolina do Norte/12344/03 (H3N2))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY779262 Vírus da Influenza A (A/Peru/Minnesota/764-2/03 (H3N2)) genede nucleoproteína (NP), cds parcial.

AY862655 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S6/03 (H3N2)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862656 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S7/03 (H3N2 )) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862657 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S8/03 (H3N2)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862658 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S9/03 (H3N2)) gene de prote-ína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862659 Vírus da Influenza A (A/pato/Co ré ia/S 10/03 (H3N2)) gene de pro-teína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

AY862660 Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S11/03 (H3N2)) gene deproteína de nucleocapsídeo (NP), cds parcial.

D00050 gene do vírus da Influenza A para nucleoproteína, cds completo.M14921 Influenza A/Pato selvagem/NY/6750/78 (H2N2) nucleoproteína (seg5) RNA, cds completo .

AY422026 Vírus da Influenza A (A/pato/Hokkaido/95/01 (H2N2)) gene denucleoproteína (NP), cds parcial.

U49093 Vírus da Influenza A mRNA de nucleoproteína (np), cds parcial.M22574 Influenza A/pato/Bavaria/2/77 (H1N1), nucleoproteína (seg 5), RNA.M76603 Influenza A/Peru/lnglaterra/647/77 (H1N1) mRNA, cds completo.

M63783 Influenza A/pato/Australia/749/80 (H1N1) mRNA de nucleoproteína,cds completo.

M63778 Influenza A/Peru/Mi η nesota/1661/81 (H1N1) mRNA de nucleoproteí-na, cds completo.

Z26855 Vírus da Influenza tipo A gene NP para nucleoproteínaM76609 Influenza A/Peru/Carolina do Norte/1790/88 (H1N1) mRNA, cdscompleto.

Z26857 Vírus da Influenza tipo A gene NP para nucleoproteínaAF213905 Vírus da Influenza A (A/Pato selvagem/ltália/24/95 (H1N1)) genede nucleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AF213906 Vírus da Influenza A (A/Frango/ltália/24/95 (H1N1)) gene de nu-cleoproteína (NP) de segmento 5, cds parcial.

AY633215 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/211/98 (H1N1))gene de nucleoproteína (NP), cds completo.

AY180543 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Nanchang/12-340/2000 (H1N1))gene de nucleoproteína (NP), cds parcial.

Seqüências usadas em análise de proteína 1 básica de polimerase deInfIuenzaA(PBI)

AY633218 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/211/98 (H1N1))gene de subunidade Ρ1 (PB1) de RNA polimerase direcionado ao RNA1 cdsparcial.

U48284 mRNA de polimerase (PB1) do vírus da Influenza A, cds parcial.AY180855 Cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/12 -340/2000(H1N1) gene (PBI) de subunidade de polimerase PBI1 cds parcial.

AY422038 Vírus da Influenza A (A/pato/Hokkaido/95/01 (H2N2)) gene (PB1)de subunidade de polimerase, cds parcial.

M25926 Influenza A/Pato selvagem/Nova lorque/6750/78 (H2N2) gene PB1,cds completo.

AY180871 Cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/3 -120/2001(H3N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.

AY779265 Vírus da Influenza A (A/Peru/Carolina do Norte/12344/03 (H3N2))gene de proteína 1 (PBI) básica de polimerase, cds parcial.

AY779266 Vírus da Influenza A (A/Peru/Miηnesota/764-2/03 (H3N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY862703 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S6/03 (H3N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862704 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S7/03 (H3N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862705 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S8/03 (H3N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY8S2706 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S9/03 (H3N2 )) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862707 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S10/03 (H3N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY852708 Vírus da InfIuenza A (A/pombo/Coréia/S11/03 (H3N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AF213911 Vírus da Influenza A (A/Frango/ltália/5945/95 (H3N2 )) gene deproteína de PB1 polimerase de segmento 8, cds parcial.

AB166860 Vírus da Influenza A (A/frango/Yamaguchi/7/2004 (H5N1)) genePB1 para proteína 1 básica de polimerase, cds completo.

AB188814 Vírus da Influenza A (A/frango/6ita/8/2004 (H5N1)) gene PB1 pa-ra proteína 1 básica de polimerase, cds completo.

AF398423 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/385.3/2000 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF398424 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/385.5/2000 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF468839 Vírus da Influenza A (A/pato/Anyang/AVL-1/2001 (H5N1)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds completo.

AF509169 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY77/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509170 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/YU5S2/01 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509171 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/YU563/01 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509172 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY150/01 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509173 Vírus da Influenza A (A/Faisão/Hong Kong/FY155/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509174 Vírus da Influenza A (A/Frango macio/Hong Kong/SF189/01(H5N1)) gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509175 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/SF203/01 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509176 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/SF215/01 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509177 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/SF219/01 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509178 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/715.5/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509179 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/751.1/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509180 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/822. 1/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509181 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/829.2/01 (H5N1)) ge-ne (ΡΒ1) de polimerase, cds parcial.

AF509182 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/830.2/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509183 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/858.3/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509184 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/866.3/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509185 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/867. 1/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.AF509186 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/879. 1/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AP509187 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/873.3/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509188 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/876.1/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509189 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/891.1/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509190 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/893.2/01 (H5N1)) ge-ne (PB1) de polimerase, cds parcial.AF509191 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/76.1/01 (H5N1)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509192 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww100/01 (H5N1))gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509193 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/573.4/01 (H5N1)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF509194 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/646.3/01 (H5N1)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AY035888 Vírus da Influenza A (A/ganso/Guangdong/3/97 (H5N1)) gene deproteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds completo.AY059513 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww26/2000 (H5N1))segmento 2 gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AY059514 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww28/2000 (H5N1))segmento 2 gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AY059515 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/ww381/2000 (H5N1))segmento 2 gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AY059516 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/ww461/2000 (H5N1))segmento 2 gene (PBI) de polimerase, cds parcial.

AY059517 Vírus da Infiuenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww491/2000 (H5N1))segmento 2 gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AY059518 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/2986.1/2000 (H5N1))segmento 2 gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AY059519 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/3014.8/2000 (H5N1))segmento 2 gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AY221575 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT873.3/01-MB(H5N1)) gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221576 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT873.3/01 (H5N1))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221577 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY150/01-MB (H5N1))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221578 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY150/01 (H5N1)) ge-ne de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221579 Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/PY155/01 - MB(H5N1))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221580 Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/PY155/01 (H5N1)) ge-ne de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221581 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU822.2/01-MB(H5N1)) gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221582 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/Yü822.2/01 (H5N1))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY221583 Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU562/01 (H5N1))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY518366 Vírus da Influenza A (A/pato/China/E319-2/03 (H5N1)) gene(PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds completo.

AY576394 Vírus da Influenza A (A/GS/HK/739.2/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY576395 Vírus da Influenza A (A/Eg/HK/757.3/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY576396 Vírus da Influenza A (A/G.H/HK/793.1/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY576397 Vírus da Influenza A (A/Dk/HK/821/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds completo.

AY576398 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31,4/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY576399 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/61.9/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY576400 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU777/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY576401 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/96.1/02 (H5N1)) gene (PB1) de polimerase, cds parcial.

AY576402 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/409 I 1/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY576403 Vírus da Influenza A (A/Ph/HK/674.15/02 (H5N1)) gene (PB1) depolimerase, cds parcial.

AY585483 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/01/2002 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585484 Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/13/2002 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585485 Vírus da InfIuenza A (A/pato/Fujian/17/2001 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.

AY585486 Vírus da Influenza A (A/pato/Fuj ian/19/2000 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585487 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/01/2001 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585488 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/07/2000 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585489 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/12/2000 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585490 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/22/2002 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585491 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/40/2000 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.

AY585492 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/07/1999 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585493 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/22/2001 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585494 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/35/2001 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585495 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/50/2001 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585496 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/53/2002 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.

AY585497 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/08/2001 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585498 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/13/2001 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585499 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/35/2002 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585500 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/37/2002 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585501 Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/38/2001 (H5N1)) mRNAde proteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.

AY585502 Vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/ll/2000 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY585503 Vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/52/2000 (H5N1)) mRNA deproteína 1 básica de polimerase (PB1), cds completo.AY590582 Vírus da Influenza A (A/frango/Nakorn-Patom/Thailand/CU-K2/2004 (H5N1)) proteína 1 básica de polimerase (PBPI) gene, cds comple-to.ΑΥ609310 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/174/04 (H5N1)) seg-mento 2, seqüência completa.AY651651 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/BL72003 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651652 Vírus da Influenza A (A/Dk/lndonésia/MS/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651653 Vírus da Influenza A (A/Ck/Indonésia/PA/2003 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651654 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/4/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AYS51655 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/2A/2003 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651656 Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/5/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651657 Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/1/2004 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651658 Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/73/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651659 Vírus da Influenza A (A/Ck^Thailand/9.1/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651660 Vírus da Influenza A (A/Qa/Thailand/57/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651661 Vírus da Influenza A (A/pássaro/Thailand/3.1/2004 (H5N1)) genede subunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651662 Vírus da Influenza A (A/Dk/Thailand/71.1/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651663 Vírus da Influenza A (A/Gs/Thailand/79/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651668 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/33/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AYS51669 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/35/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.ΑΥ651670 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/36/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651671 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/37/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651672 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/38/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651673 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/39/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651674 Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/C57/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651675 Vírus da Influenza A (A/Dk/Vietnam/11/2004 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651676 Vírus da Influenza A (A/Gf/HK/38/2002 (H5N1)) gene de subuni-dade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651677 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.2/2002 (H5N1)) polymerasebasic subunit 1 gene, cds parcial.

AY651678 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/37.4/2002 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651679 Vírus da Influenza A (A/SCk/HK/Y 100/2002 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651680 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU22/2002 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651681 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3176.3/2002 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651682 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3169.1/2002 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651683 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/FY157/2003 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY651684 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU324/2003 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651685 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/2133.1/2003 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.ΑΥ651686 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/NT93/2003 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651687 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/SSP141/2003 (H5N1)) gene desubunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651688 Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/WF157/2003 (H5N1)) gene de su-bunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651689 Vírus da Influenza A (A/gaivota da cabeça preta/HK/12.1/2003(H5N1)) gene de subunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651690 Vírus da Influenza A (A/pombo selvagem/HK/862.7/2002 (H5N1))gene de subunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651691 Vírus da Influenza A (A/garça cinza/HK/861.1/2002 (H5N1)) genede subunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651692 Vírus da Influenza A (A/pardal das árvores/HK/864/2002 (H5N1))gene de subunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651693 Vírus da Influenza A (A/marreco/China/2978.1/2002 (H5N1)) genede subunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651694 Vírus da Influenza A (A/falcão peregrino/HK/D0028/2004 (H5N1))gene de subunidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651695 Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/5806/2003 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651696 Vírus da Influenza A (A/Dk/ST/4003/2003 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651697 Vírus da Influenza A (A/Ck/ST/4231/2003 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651698 Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6255/2003 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651699 Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6445/2003 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651700 Vírus da Influenza A (A/Ph/ST/44/2004(H5N1)) gene de subuni-dade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651701 Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/303/2004 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.ΑΥ651702 Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/101/2004 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651703 Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/374/2004 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY651704 Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/115/2004 (H5N1)) gene de subu-nidade 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY653199 Vírus da Influenza A (A/frango/Jilin/9/2004 (H5N1)) segmento 2,seqüência completa.

AY676025 Cepa do vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/821/02 (H5N1))polymerase basic 1 (PB1) gene, cds completo.

AY676026 Cepa do vírus da Influenza A (A/garçota/HongKong/757.2/03 (Η5Ν1)) polymerase basic 1 (PB1) gene, cds completo.

AYS76027 Cepa do vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/ES/03 (H5N1))polymerase basic 1 (PB1) gene, cds completo.

AY676028 Cepa do vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/ESD1/03 (H5N1))polymerase basic 1 (PB1) gene, cds completo.

AY684704 Vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/327/2004 (H5N1)) gene deproteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds completo.

AY737287 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/191/04 (H5N1)) seg-mento 2, seqüência completa.

AY737294 Vírus da Influenza A (A/frango/Guangdong/178/04 (H5N1)) seg-mento 2, seqüência completa.

AY737302 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/173/04 (H5N1)) seg-mento 2, seqüência completa.

AY770083 Vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/489/2004 (H5N1)) gene deproteína 1 (PB1) básica de polimerase não funcional, seqüência completa.

AY770994 Vírus da Influenza A (A/frango/Ayutthaya/Thailand/CU- 23/04(H5N1)) proteína 1 básica de polimerase gene, cds parcial.

AY818130 Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/C58/04 (H5N1)) gene deproteína PB1 de polimerase, cds completo.

AY818131 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Vietnam/36/04 (H5N1)) gene deproteína PB1 de polimerase, cds completo.ΑΥ856862 Vírus da Influenza A (A/pato/Shandong/093/2004 (H5N1)) seg-mento 2, seqüência completa.

AB188822 Vírus da Influenza A (A/frango/Kyoto/3/2004 (H5N1)) gene PB1para proteína 1 básica de polimerase, cds completo.

AB189051 Vírus da !nfluenza A (A/corvo./Kyoto/53/2Q04 (H5N1)) gene PB1para proteína 1 básica de polimerase, çds completo.

AB189060 Vírus da Influenza A (A/corvo/Osaka/102/2004 (H5N1)) gene PB1para proteína 1 básica de polimerase, cds completo,.

AF046085 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/220/97 (H5N1)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds completo.

AF098590 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/258/97 (H5N1)) PB1proteína (PB1) gene, cds parcial.

AF098591 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/y388/97 (H5N1)) PB1proteína (ΡΒ1) gene, cds parcial.

AP098592 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/728/97 (H5N1)) PB1proteína (PB1) gene, cds parcial.

AP098593 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/786/97 (H5N1)) PB1proteína (PB1) gene, cds parcial.

AF098594 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/915/97 (H5N1)) PB1proteína (PB1) gene, cds parcial.

AF098595 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/p46/97 (H5N1)) PB1 pro-teína (PB1) gene, cds parcial.

AF098596 Vírus da InfIuenza A (A/pato/Hong Kong/y283/97 (H5N1)) PB1proteína (PB1) gene, cds parcial.

AF098598 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/w355/97 (H5N1)) PB1proteína (PB1) gene, cds parcial.

AF144301 Vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/1/96 (H5N1)) gene(PB1) de polimerase, cds completo.

AF216716 Vírus da Influenza A (A/Ambiente/Hong Kong/437-4/99 (H5N1))proteína 1 básica de polimerase gene, cds completo.

AF216724 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-6/99(H5N1)) proteína 1 básica de polimerase gene, cds completo.AF216732 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-8/99(H5N1)) proteína 1 básica de polimerasé gene, cds completo.AF216740 Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/Hong Kong/437-10/99(H5N1)) proteína 1 básica de polimerase gene, cds completo.AY303663 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/176822/02 (H7N3)) proteína1 básica de polimerase gene, cds completo.

AY303664 Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4957/02 (H7N3)) proteína 1básica de polimerase gene, cds parcial.

AY586435 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/214845/02 (H7N3)) gene PB1,cds parcial.

AY586435 Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/220158/2002 (H7N3)) genePB1, cds parcial.

AY586437 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/33/ΘΙ (H7N3)) genePB1, cds parcial.

AY586438 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/43/ΘΙ (H7N3)) genePB1, cds parcial.

AY616765 Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbia/04 (H7N3)) Gene(PB1) de subunidade de PB1 polimerase, cds completo.AY646084 Vírus da Influenza A (A/frango/BritishColumbia/GSC_human_B/04 (H7N3)) gene de proteína 1 (PB1) básica depolimerase, cds completo.

AY648293 Vírus da Influenza A (A/GSC_frango_B/British Columbia/04(H7N3)) Gene (PB1) de subunidade de PB1 polimerase, cds completo.AY653039 Vírus da Influenza A (A/GSC_frango/BritishColumbia/04 (H7N3)) Gene (PB1) de subunidade de PB1 polimerase, cdscompleto.

AJ620348 Vírus da Influenza A (A/Frango/Alemanha/R28/03 (H7N7)) genePB1 para RNA polimerase, RNA genômico.

AY340080 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/124/03 (H7N7)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AY340081 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/126/03 (H7N7)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.ΑΥ340082 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/127/03 (H7N7)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AY340083 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/219/03 (H7N7)) gene(PB1) de polimerase, cds completo.

AY340084 Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/033/03 (H7N7)) gene(PB1) de polimerase, cds completo.

AY340085 Vírus da Influenza A (A/frango/Países Baixos/1/03 (H7N7)) gene(PB1) de polimerase, cds completo.

AB049155 Vírus da Influenza A (A/periquito/Chiba/1/97 (H9N2)) gene PB1para proteína 1 básica de polimerase, cds completo.

AB049156 Vírus da Influenza A (A/periquito/Narita/92A/98 (H9N2)) gene PB1para proteína 1 básica de polimerase, cds completo.

AF508618 Vírus da Influenza A (A/Ostrich/SouthAfrica/9508103/95 (H9N2)) gene PB1 de polimerase de segmento 2 (PB1),cds parcial.

AF508619 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/4/99 (H9N2 )) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508620 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/5/99 (H9N2)) gene PB1de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508621 Vírus da Influenza A (A/Frango/Alemanha/R45/98 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508622 Vírus da Influenza A (A/pato/Alemanha/113/95 (H9N2)) gene PB1de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508623 Vírus da Influenza A (A/Frango/lran/IIT/99 (H9N2)) gene PB1 depolimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508624 Vírus da InfIuenza A (A/Frango/Saudi Arabia/532/99 (H9N2)) ge-ne PB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AP508625 Vírus da Influenza A (A/Faisão/lreland/PV18/97 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508626 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/99029/99 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508627 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/8/98 (H9N2)) gene PB1 depolimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.

AF508628 Vírus da Influenza A (A/Frango/G uangdong/10/00 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.AF508629 Vírus da Influenza A (A/Frango/G uangdong/11/97 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.

AF508630 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/4/98 (H9N2)) gene PB1 depolimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.

AF508631 Vírus da Influenza A (A/Frango/Heilongjiang/10/97 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.AF508632 Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/62/00 (H9N2)) gene PB1de polimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.

AF508633 Vírus da Influenza A (A/Frango/Ningxia/5/99 (H9N2 )) gene PB1de polimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.

AF508634 Vírus da Influenza A (A/Frango/Sichuan/5/97 (H9N2)) gene PB1de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508635 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shandong/6/96 (H9N2)) gene PB1de polimerase de segmento 2 (PB1), cds parcial.

AF508636 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shijiazhuang/2/99 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.AF508637 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shenzhen/9/97 (H9N2)) gene PB1de polimerase de segmento 2 (PBI)1 cds completo.

AF508638 Vírus da Influenza A (A/pato/Nanjing/1/97 (H9N2)) gene PB1 depolimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.

AF508639 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Shanghai/8/96 (H9N2)) genePB1 de polimerase de segmento 2 (PB1), cds completo.

AF523427 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/830/00 (H9N2)) gene (PB1)de polimerase, cds parcial.

AF523428 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2102/00 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.AF523429 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1043/00 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523430 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2134/00 (H9N2)) gene(ΡΒ1) de polimerase, cds parcial.

AP523431 Vírus da Influenza A (A/Pato bravo/Shantou/4808/ΘΙ (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523432 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2144/00 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523433 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2143/00 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523434 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1796/00 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523435 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2088/1 (H9N2)) gene (PB1)de polimerase, cds parcial.

AF523436 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1881/00 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523437 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/366/78 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523438 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/552/79 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523439 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/86/76 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523440 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/289/78 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523441 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/610/79 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF523442 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1605/1 (H9N2)) gene (PB1)de polimerase, cds parcial.

AF523443 Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1042/00 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase, cds parcial.

AF536659 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beij ing/1/95 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AF536660 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beij ing/2/97 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AF536661 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beij ing/3/99 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AF536662 Vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/97 (H9N2)) genePB1, cds parcial.

AF536663 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/1/96 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AP536664 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/2/98 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AF536665 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/3/98 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AF536666 Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/98 (H9N2)) gene PB1, cdsparcial.

AF536P67 Vírus da Influenza A (A/Frango/Liaoning/99 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AF536668 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shandong/98 (H9N2)) gene PB1,cds parcial.

AJ291396 Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/2/99 (H9N2)) gene PB1para polymerase PB1, RNA genômico.

AJ427862 Vírus da Influenza A (A/guail/Hong Kong/FY298/00 (H9N2)) genePB1 parcial para proteína de PB1 polimerase, RNA genômico.AY180840 cepa A do vírus da Influenza A/Pombo/Nanchang/7-058/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180843 cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/2-0460/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180844 cepa A do vírus da Influenza A/Pombo/Nanchang/2-0461/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.

AY180851 cepa A do vírus da Influenza A/Pombo/Nanchang/11-145/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180852 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-197/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180854 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-290/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180856 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/1-0070/2000(Η9Ν2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180866 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/7-092/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PBI, cds parcial.AY180867 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/1 -0016/2000δ (H9N2) gene (PBI) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.

AY180873 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-010/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180874 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-301/2001(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180875 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4-361/2001(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180892 cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/4-040/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AYI80897 cepa A do vírus da Influenza A/Pato bravo/Nanchang/2-0480/2000 (H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parci-al.

AY180900 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/10-389/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY180901 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11-392/2000(H9N2) gene (PB1) de subunidade de polimerase PB1, cds parcial.AY253751 Vírus da Influenza A (A/Frango/Shanghai/F/98 (H9N2)) gene deproteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds completo.AY307947 Vírus da Influenza A (A/frango/Beijing/1/00 (H9N2)) gene (PB1)de subunidade de polimerase, cds parcial.AY307948 Vírus da Influenza A (A/frango/Hebei/1/01 (H9N2)) gene (PB1) desubunidade de polimerase, cds parcial.AY633170 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/17/91 (H9N2)) ge-ne de subunidade Ρ1 (PB1) de RNA polimerase direcionado ao RNA, cdsparcial.AY633282 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/321/88 (H9N2))gene de subunidade Ρ1 (PB1) de RNA polimerase direcionado ao RNA, cdsparcial.ΑΥ633298 Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/11/91 (H9N2)) ge-ne de subunidade Ρ1 (PB1) de RNA polimerase direcionado ao RNA, cdsparcial.

AY664774 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW153/03 (H9N2))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664775 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/AP45/03 (H9N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664776 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/BD90/03 (H9N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664777 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW291/03 (H9N2 ))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664778 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/CSW304/03 (H9N2))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664779 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/FY23/03 (H9N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664780 Vírus da Influenza A (A/galinha d'angola/HongKong/NT101/03(H9N2)) gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664781 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/NT142/03 (H9N2)) ge-ne de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664782 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SF1/03 (H9N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AYS64783 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/SSP101/03 (H9N2))gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664784 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/TP38/03 (H9N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664785 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF126/03 (H9N2)) ge-ne de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664786 Vírus da Influenza A (A/pombo/HongKong/WF53/03 (H9N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664787 Vírus da Influenza A (A/faisão/HongKong/WF54/03 (H9N2)) genede proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY564788 Vírus da Influenza A (A/galinha d'angola/HongKong/NT184/03(Η9Ν2) gene de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.AY664789 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF120/03 (H9N2)) ge-ne de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664790 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/NT366/03 (H9N2)) ge-ne de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY664791 Vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/YU427/03 (H9N2)) ge-ne de proteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY800239 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S1/2003 (H9N2)) gene deproteína 1 (PB1) básica de polimerase, cds parcial.

AY862694 Vírus da Influenza A (A/frango macio/Coréia/S3/03 (H9N2)) genePB1 (PB1), cds parcial.

AY862695 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S4/03 (H9N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862696 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S5/03 (H9N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862697 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S12/03 (H9N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862698 Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S 13/03 (H9N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862699 Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S14/03 (H9N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY8S2700 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S15/03 (H9N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY862701 Vírus da InfIuenza A (A/frango/Coréia/S 16/03 (H9N2 )) gene PB1(PB1), cds parcial.

AY8S2702 Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S 18/03 (H9N2)) gene PB1(PB1), cds parcial.

AF156416 Vírus da Influenza A (A/Fràngo/Hong Kong/G9/97 (H9N2)) gene(PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.

AF156417 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/G23/99 (H9N2)) gene(PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.

AF156418 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/Y233/97 (H9N2)) gene(ΡΒ1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156419 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/Y280/97 (H9N2)) gene(PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156420 Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/Y439/97 (H9N2)) gene(PB1) de subunidade de PBI polimerase de segmento 2, cds parcial.

AF156421 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/G1/97 (H9N2)) gene(PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156422 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/739/94 (H9N2)) gene(PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156423 Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/1/94 (H9N2)) gene (PB1)de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156424 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/AF157/92 (H9N2 ))gene (PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156425 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/38349- p96323/96 (H9N2))gene (PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156426 Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/25232-96006/96 (H9N2 ))gene (PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156427 Vírus da Influenza A (A/Pássaro do litoral/Delaware/9/96 (H9N2))gene (PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156428 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Arkansas/29209-1/93 (H9N2))gene (PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF156429 Vírus da Influenza A (A/Peru/California/189/66 (H9N2)) gene(PB1) de subunidade de PB1 polimerase de segmento 2, cds parcial.AF222632 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/A17/99 (H9N2)) ge-ne (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.

AF222633 Vírus da Influenza A (A/Pombo/Hong Kong/FY6/99 (H9N2)) gene(PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.

AF222634 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/NT16/99 (H9N2)) ge-ne (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.AF222635 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/SSPI0/99 (H9N2))gene (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.AF222636 Vírus da Influenza A (A/Faisão/Hong Kong/SSP11/99 (H9N2))gene (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.AF222637 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/FY20/99 (H9N2)) ge-

ne (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.AF222638 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/KC12/99 (H9N2)) ge-

ne (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.AF222639 Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/NT2899 (H9N2))

gene (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.AF222640 Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/SF2/99 (H9N2)) gene

(PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.AF222641 Vírus da Influenza A (A/Frango macio/HongKong/SF44/99(H9N2)) gene (PB1) de polimerase 1 de segmento 2, cds parcial.

Seqüências usadas em análise de proteína 2 (PB2) Básica de Polimera-se da Influenza A

gi | 49356919 | AY633219 | vírus da Influenza A (A/pato selvagem/Alberta/211/98 (H1N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.

gi/parcial / 2746S107 / AY180748 | cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/12- 340/2000 (H1N1) gene (PB2) de subunidade PB2 de polime-rase, cds.

gi parcial/45272173/AY422042 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hokkaido/95/01H2N2)) gene (PB2) subunidade de polimerase, cds.

gi parcial/18091825 /AF213910/Vírus da Influenza A (A/Frango/ltália/5945/95(H3N2)) gene de proteína de PB2 polimerase de segmento 1, cds.

gi parcial/27466133/AY180761 cepa A do vírus da Influenza A/Frango/ Nan-chang/3- 120/2001 (H3N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimerase,cds.

gi parcial | 56160002 | AY779267 | Vírus da Influenza A (A/Peru/Carolina doNorte/12344/03 (H3N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 56160004 | AY779268I Vírus da Influenza A(A/Peru/Minnesota/764- 2/03 (H3N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico depolimerase, cds.

gi parcial | 58429704 | AY862719 | Vírus da Influenza A(A/frango/Coréia/S6/03 (H3N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial I 58429706 | AY862720 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S7/03

(H3N2 )) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429708 | AY862721 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S8/03(H3N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429710 | AY862722 / Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S9/03(H3N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429712 | AY862723 / Vírus da Influenza A(A/pato/Coréia/S 10/03 (H3N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429714 | AY862724 | Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S11/03 (H3N2)) gene de ΡΒ2 (PB2), cds.

gi parcial | 5805276 | AF144300 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/1/96 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds completo,gi /3335416 | AF046086 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/220/97(H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.

gi parcial/ 60488411 AF098577 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/258/97 (H5N1)) Gene de proteína PB2 (PB2), cds parcial,gi | 5048843 | AF098578 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/y388/97 (H5N1)) gene de proteína PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 6048845 | AF098579 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/728/97 (H5N1)) gene de proteína PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 6048847 | AP098580 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/786/97 (H5N1)) gene de proteína PB2 (PB2), cds.gi parcial | 6048849 | AF098581 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/915/97 (H5N1)) gene de proteína PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 60488511 AF098582 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/p46/97 (H5N1)) gene de proteína PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 6048853 | AF098583 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/y283/97 (H5N1)) gene de proteína PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 6048855 | AF098584 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/w355/97 (H5N1)) gene de proteína PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 14860983 | AY038798 | vírus da Influenza A(A/ganso/Guangdong/3/1997 (H5N1)) Gene de proteína PB2 (PB2), cdscompleto.

gi 47156244 AY585513 vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/07/1999(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.

gi | 9863884 | AF216717 j Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/HongKong/437- 4/99 (H5N1)) gene de proteína 2 básica de polimerase, cds.

gi parcial | 9863903 | AF216725 | Vírus da Influenza A (A/Meio ambien-te/Hong Kong/437- 6/99 (H5N1)) gene de proteína 2 básica de polimerase,cds.

gi parcial | 98639211 AF216733 | Vírus da Influenza A (A/Meio ambien-te/Hong Kong/437- 8/99 1 (H5N1)) gene de proteína 2 básica de polimerase,cds.

gi parcial | 9863939 | AF216741 | Vírus da Influenza A (A/Meio ambien-te/Hong Kong/437- 10/99 (H5N1)) gene de proteína 2 básica de polimerase,cds.

gi parcial | 47156264 | AY585523 | Vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/11/2000 (H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds com-pleto.

gi | 47156266 | AY585524 | vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/52/2000(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.

gi | 47156232 | AY585507 | Vírus da Influenza A (A/pato/Fuj ian/19/2000(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 47156236 | AY585509 | vírus da Influenza A (A/pato/G uangdong/07/2000(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.

gi | 47156238 | AY585510 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/12/2000(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 47156242 | AY585512 | Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/40/2000(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 19697849 | AY059520 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/Hong Kong/ww26/ 2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 19697851 | AY059521 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/ww28/2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2) de segmento 1, cds.gi parcial | 19697853 | ΑΥ059522 | Vírus da Influenza A(A/pato/HongKong/ww381/2000 (Η5Ν1)) gene da polimerase (PB2) de seg-mento 1, cds.

gi parcial | 19697855 | AY059523 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/ww461/2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 19697857 | AY059524 | Vírus da Influenza A (A/Ganso / Hong-Kong/ww491/2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 19697859 | AY059525 | Vírus da Influenza A (A/pato/ Hong-Kong/2986.1/2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 19697867 | AY059529 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/3014.8/2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 18092181 | AF398425 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/385.3/2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

i parcial 118092183 | AF398426 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/385.5/2000 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 21359665 | AF468840 | Vírus da Influenza A (A/pato/Anyang/AVL-1/2001 (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.

gi parcial | 28849606 | AF509143 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY77/9l (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849608 | AF509144 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU562/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849610 | AF509145 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU563/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849612 | AF509146 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY150/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849614 | AF509147 | Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/FY155/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849616 | AF509148 | Vírus da Influenza A (A/Frango maci-o/Hong Kong/SF189/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds parcial.

gi | 28849618 | AF509149 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/SF203/ 01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849620 | AF509150 | Vírus da Influenza A (A/Pombo/HongKong/SF215/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849622 | AF509151 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/SF219/01 (H5N1)") gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849624 | AF509152 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/715.5/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2). cds.

gi parcial | 28849626 | AF509153 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/751.1/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849628 | AF509154 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/822.1/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849630 | AF509155 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/829.2/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849632 | AF509156 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/830.2/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849634 | AF509157 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/858.3/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849636 | AF509158 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/866.3/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849638 | AF509159 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/867. 1/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849640 | AF509160 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/879.1/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849642 | AF509161 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/873.3/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849644 | AF509162 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/876. 1/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 28849646 | AF509163 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/891. 1/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849648 | AF509164 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/893.2/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial ] 28849650 | AF509165 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/76. 1/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849652 | AF509166 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/ww100/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 28849654 | AF509167 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/573.4/01 (H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds parcial,gi | 28849656 | AF509168 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/646.3/01(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds,

gi parcial | 28823262 | AY221584 | vírus da Influenza A (A/Frango/ Hong-Kong/NT873.3/01 -MB (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimera-se, cds.

gi parcial | 28823443 | AY221585 | vírus da Influenza A (A/Frango/ Hong-Kong/NT873.3/01 (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 28823612 | AY221586 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ Hong-Kong/FY 150/01- MB(H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial 28823783 | AY221587 vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/PY150/01 (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.gi parcial | 28823961 | AY221588 | Vírus da Influenza A (A/Faisão/ Hong-Kong/ FY155/01-MB(H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 28824143 | AY221589 | vírus da Influenza A A/Faisão/HongKong/FY155/01 (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.gi parcial | 28824334 | AY221590 | vírus da Influenza A (A/Frango/ Hong-Kong/ YU822.2/01-MB (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polime-rase, cds.

gi parcial | 28824502 | AY221591 | vírus da Influenza A (A/Frango/ Hong-Kong/YU822.2/01 (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial 28824684 | AY221592 vírus da Influenza A (A/Frango/ Hong-Kong/YU562/01 (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 47156230 | AY585506 | Vírus da Influenza A(A/pato/Fujian/17/2001 (H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de poli-merase, cds completo.

gi | 47156234 | AY585508 ) vírus da Influenza A(A/pato/Guangdong/01/2001 (H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica depolimerase, cds completo,

gi | 47156246 | AY585514 | Vírus da Influenza A(A/pato/Guangxi/22/2001 (H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de poli-merase, cds completo.

gi | 47156248 | AY585515 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/35/2001(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.

gi | 47156250 | AY585516 | vírus da Influenza A(A/pato/Guangxi/50/2001 (H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de poli-merase, cds completo.

gi | 47156254 | AY585518 | vírus da Influenza A(A/pato/Shanghai/08/2001 (H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de po-limerase, cds completo.

gi]47156256 | AY585519 | vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/13/2001(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 47156262 | AY585522 | vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/38/2001(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.

gi | 47156258 | AY585520 | vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/35/2002(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 47156260 | AY5855211 vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/37/2002(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 47156252 | AY585517 j vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/53/2002(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.

gi 47156240 | AY5855111 Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/22/2002(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 47834791 | ΑΥ576382 | Vírus da Influenza A (A/Gs/HK/739.2/02 (H5N1))gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834793 | AY576383 | Vírus da Influenza A (A/Eg/HK/757.3/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834795 | AY576384 | Vírus da Influenza A (A/G.H/HK/793.1/02(Η5Ν1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834797 | AY576385 | Vírus da Influenza A (A/Dk/HK/821/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834799 | AY576386 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.4/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834801 | AY576387 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/61.9/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834803 | AY576388 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU777/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834805 | AY576389 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/96.1/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47834807 | AY576390 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/409.1/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds parcial.

gi | 47834809 | ΑΥ576391 | Vírus da Influenza A (A/Ph/HK/sv674.15/02(H5N1)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 47156226 | AY585504 | Vírus da Influenza A(A/pato/Fujian/θ1/2002 (H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de poli-merase, cds completo.

gi | 47156228 | AY585505 | Vírus da Influenza A (A/pato/Pujian/13/2002(H5N1)) mRNA de proteína 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.

gi | 50296597 | AY651744 | Vírus da Influenza A (A/garça cin-za/H K/861.1/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimera-se, cds.

gi parcial | 50296599 | AY651745 | Vírus da Influenza A (A/pombo selva-gem/H K/862.7/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polime-rase, cds.

gi parcial | 50296601 | AY651746 | Vírus da Influenza A (A/pardal das árvo-res/H K/864/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimera-se, cds.

gi parcial | 50296603 | AY651747 | vírus da Influenza A (A/marreco/China/2978.1/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.gi parcial | 56548879 | ΑΥ676021 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/821/02 (H5N1)) gene 2 (PB2) básico de polimerase, cds completo,gi | 50296569 | AY651730 | Vírus da Influenza A (A/Gf/HK/38/2002 (H5N1))gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296571 | AYS51731 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.2/2002(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296573 | AYS51732 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/37.4/2002(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296575 | AY651733 | Vírus da Influenza A(A/SCk/HK/YU 100/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de po-limerase, cds.

gi parcial | 50296577 | AY651734 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/YU22/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de poli-merase, cds.

gi parcial | 50296579 | AY651735 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/3176.3/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de poli-merase, cds.

gi parcial | 50296581 | AY651736 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/3169.1/2002 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de poli-merase, cds.

gi parcial | 50296583 | AY651737 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/FY157/2003 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de poli-merase, cds.

gi parcial | 50296585 | AY651738 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/YU324/2003 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de poli-merase, cds parcial.

gi | 50296587 | AY651739 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/2133.1/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296589 | AY651740 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/NT93/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.

gi parcial | 50296591 | AY651741 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/SSP141/2003 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 50296593 | ΑΥ651742 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/WF157/2003 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de poli-merase, cds.

gi parcial \ 50296595 | AY651743 \ Vírus da Influenza A (A/gaivota da cabeçapreta/HK/12.1/2003 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polime-rase, cds.

gi parcial | 50296607 | AY651749 | Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/5806/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296609 IAY651750 | Vírus da Influenza A (A/Dk/ST/4003/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296611 | AY651751 | Vírus da Influenza A (A/Ck/ST/4231/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial j 50296613 | AY651752 | Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6255/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296615 | AY651753 | Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6445/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296529 | AY651710 | vírus da Influenza A(A/Ck/lndonésia/2A/2003 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica depolimerase, cds.

gi parcial | 56548881 | AY676022 | Vírus da Influenza A(A/garçota/HongKong/757.2/03 (H5N1)) gene 2 (PB2) básico de polimerase,cds completo.

gi | 56548883 | AY676023 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/ES/03(H5N1)) gene 2 (PB2) básico de polimerase, cds completo.gi | 56548885 | AY676024 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/ESDI/03(H5N1)) gene 2 (PB2) básico de polimerase, cds completo,gi | 50296519 | AY651705 | vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/PA/2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.gi | 50296523 | AY651707 | Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/BU2003(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,gi | 41207501 | AY518367 | Vírus da Influenza A (A/pato/China/E319- 2/03(Η5Ν1)) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimerase, cds completo,gi | 45359369 | AY550147 | Vírus da Influenza A (A/frango/Nakorn-PatomThailand/CU-K2/04 (H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds parcial.

gi í 50296525 j AY651708 ] Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonesia/5/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.

gi parcial | 50296527 | AY651709 | Vírus da Influenza A(A/Ck/lndonésia/4/2004 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de po-limerase, cds.

gi parcial | 50296521 | AY651706 | vírus da Influenza A (A/Dk/Indonesia/MS/2004 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cdscompleto.

gi | 51094103 | AY590581 | Vírus da Influenza A (A/frango/Nakorn- Pa-tom/Thailand/Cü-K2/2004(H5N1)) gene de proteína 2 (PBP2) básico de po-limerase, cds.

gi parcial | 47716766 | AY609309 | Vírus da Influenza A(A/frango/Guangdong/l74/04 (H5N1)) segmento 1, seqüência completa,

gi | 58531082 | AB166859 | vírus da Influenza A (A/frango/Yamaguchi/7/2004(H5N1)) gene PB2 para proteína 2 básica de polimerase, cds completo.

gi | 58531114 | AB188813 | Vírus da Influenza A (A/frango/Oita/8/2004(H5N1)) gene PB2 para proteína 2 básica de polimerase, cds completo,

gi | 509566211AY684703 | vírus da Influenza A(A/frango/Hubei/327/2004(H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de poli-merase, cds completo.

gi | 57915957 | AY737286 | Vírus da Influenza A(A/frango/Guangdong/191/04 (H5N1)) segmento 1, seqüência completa,

gi | 57916006 | AY737293 | Vírus da Influenza A(A/frango/Guangdong/178/04 (H5N1)) segmento 1, seqüência completa,

gi | 57916060 | AY737301 | Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/173/04(H5N1)) segmento 1, seqüência completa.

gi | 55233237 | AY770084 | vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/489/2004(H5N1)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds completo.gi | 54873461 | ΑΥ770993 | vírus da Influenza A(A/frango/Ayutthaya/Thailand/CU-23/04 (Η5Ν1)) gene de proteína 2 básicade polimerase, cds.

gi parcial | 58618421 | AY818127 | vírus da Influenza A(A/frango/Vietnam/C58/04 (H5N1)) gene PB2 de proteína de polimerase, cdscompleto.

gi | 58618423 | AY818128 | Vírus dâ Influenza A (A/Codorna/Vietnam/36/04(H5N1)) gene PB2 de proteína de polimerase, cds completo,

gi | 58374183 | AY856861 | Vírus da Influenza A (A/pato/Shandong/093/2004(H5N1)) segmento 1, seqüência completa.

gi | 58531132 | AB188821 | vírus da Influenza A (A/frango/Kyoto/3/2004(H5N1)) gene PB2 para proteína 2 básica de polimerase, cds completo,

gi | 5853115Θ | ΑΒ18905Θ | Vírus da Influenza A (A/corvo/Kyoto/53/2004(H5N1)) gene PB2 para proteína 2 básica de polimerase, cds completo.

gi | 58531168 | AB189058 | Vírus da Influenza A (A/corvo/0saka/102/2004(H5N1)) gene PB2 para proteína 2 básica de polimerase, cds completo,

gi | 50296605 | AY651748 | Vírus da Influenza A (A/falcão peregri-no/H K/D0028/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimera-se, cds completo.

gi | 50296531 | AY651711 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/1/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.

gi parcial | 50296533 | AY651712 | Vírus da Influenza A(A/Ck/Thailand/73/2004 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de po-limerase, cds.

(A/Ck/Thailand/9.1/2004 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de po-limerase, cds completo.

gi | 50296537 | AY651714 | Vírus da Influenza A (A/Qa/Thailand/57/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,

gi | 50296539 | AY651715 | vírus da Influenza A (A/pássaro/ Thai-land/3.1/2004 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds completo.

gi | 50296541 | AY651716 | vírus da Influenza A (A/Dk/Thailand/71.1/2004(Η5Ν1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.gi]5029S543 | AY651717 | Vírus da Influenza A (A/Gs/Thailand/79/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296553 )AY651722 | Vírus da Influenza A (A/Ck/ Viet-nam/33/2004 (H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds completo.

gi | 50296555 | AY651723 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/35/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,gi | 50296557 | AY651724 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/36/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,gi | 5029S559 | AY651725 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/37/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,gi | 50296561 | AY651726 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/38/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo.gi | 50296563 | AY651727 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/39/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,gi | 50296565 | AY651728 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/C57/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,gi | 50296567 | AY651729 | Vírus da Influenza A (A/Dk/Vietnam/11/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds completo,gi | 5029S617 | AY651754 | Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/374/2004 (H5N1))gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296619 | AY651755 | Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/115/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296621 | AY651756 | Vírus da Influenza A (A/Ph/ST/44/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296623 | AY651757 | Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/303/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50296625 | AY651758 | Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/101/2004(H5N1)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase, cds.gi parcial | 50365712 | AY653193 | vírus da Influenza A (A/frango/Jilin/9/2004(H5N1)) segmento 1, seqüência completa.gi I 47680940 | ΑΥ586445 | Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/43/ΘΙ(H7N3 )) gene PB2, cds.

gi parcial | 47680930 | AY586440 | Vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/ltália/33/01 (H7N3)) gene PB2, cds.gi parcial | 47680932 | AY586441 I Vírus da Influenza A(A/Peru/ltália/220158/2002 (H7N3)) gene PB2, cds.

gi parcial | 45124743 | AJ627485 | vírus da Influenza A(A/Peru/ltália/214845/2002 (H7N3)) gene PB2 para RNA polimerase, RNAgenômico.

gi | 45124767 | AJ627496 | Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/220158/2002(H7N3)) gene PB2 para RNA polimerase, RNA genômico.gi | 34597782 | AY303665 | vírus da Influenza A (A/frango/Chile/176822/02(H7N3)) gene de proteína 2 básica de polimerase, cds parcial,gi | 34597784 | AY303666 | vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4957/02(H7N3)) gene de proteína 2 básica de polimerase, cds parcial.

gi | 47680928 | AY586439 | Vírus da Influenza A (A/Peru/ltália/214845/02(H7N3)) gene PB2, cds parcial.

gi | 47834374 | AYS16766 | Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbi-a/04 (H7N3)) gene PB2 (PB2) subunidade de polimerase, cds completo.gi I 50542651 | AY646085 | Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbia /GSC_human_B/04 (H7N3)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds completo.

gi | 50083053 | AY648294 | Vírus da Influenza A (A/GSC_frango_B/BritishColumbia/04 (H7N3)) gene PB2 (PB2) subunidade de polimerase, cds com-pleto.

gi | 50059194 | AY65027S | Vírus da Influenza A (A/GSC_frango/British Co-lumbia/04 (H7N3)) gene PB2 (PB2) subunidade de polimerase, cds comple-to.

gi | 60700 | X58691 | Vírus da Influenza A (A/FPV/Dobson/27 (H7N7)) genepara proteína PB2 de ligação por tamponamento, RNA genômico.

gi | 325001 | M382911 Influenza vírus A/FPV/Weybridge gene (PB2)(seg. 3)de proteína 2 básica de polimerase, cds completo.gi I 99886611AF268120 | Vírus da Influenza A (A/RedKnot/Delaware/259/94(H7N7)) gene PB2 de proteína de polimerase, cds parcial,gi | 40732893 | AJ620347 | vírus da Influenza A((A/Frango/Alemanha/R28/03 (H7N7)) A/Frango/Alemanha/R28/03 (H7N7))gene PB2 para RNA polimerase, RNA genômico.gi | 37813157 | ΑΥ34241Θ | Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/124/03(H7N7)) gene de proteína 2 de polimerase, cds.

gi parcial | 37813159 | AY342411 | Vírus da Influenza A (A/Países Bai-xos/126/03 (H7N7)) gene de proteína 2 de polimerase, cds.gi parcial | 37813161 | AY342412 | Vírus da Influenza A (A/Países Bai-xos/127/03 (H7N7)) gene de proteína 2 de polimerase, cds.gi parcial | 37813163 | AY342413 | Vírus da Influenza A (A/Países Bai-xos/219/03 (H7N7)) gene de proteína 2 de polimerase, cds.gi parcial | 37813165 | AY342414 | vírus da Influenza A (A/frango/Países Bai-xos/1/03 (H7N7)) gene de proteína 2 de polimerase, cds parcial.gi | 5732354 | AF156443 | vírus da Influenza A (A/Peru/California/189/66(H9N2)) gene (PB2) subunidade de PB2 polimerase de segmento 1, cds.gi parcial | 31339587 | AF523469 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/86/76 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 31339583 | AF523467 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/366/78 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 31339605 | AF523478 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/289/78 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds parcial,gi | 31339585 | AF523468 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/552/79(H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds parcial.

gi | 31339589 | AP523470 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/610/79(H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 49356935 | AY633283 | vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Alberta/321/88 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 49356939 | AY633299 | vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Alberta/11/91 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 49356907 | ΑΥ633171 | vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Alberta/l7/91(H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.

gi parcial | 5732342 j AFI56437 j Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/AF157/92 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de po-limerase, cds parcial.

gi | 5732352 | AF156442 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/Arkansas/29209-1/93 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de polimerase, cds.

gi parcial | 5732340 | AF156436 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/739/94 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de poli-merase, cds parcial.

gi | 5732344 | AF156438 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Beij ing/1/94(H9N2 )) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de polimerase, cds.

gi parcial 22759060 | AF536679 Vírus da Influenza A(A/Frango/Beijing/1/95(H9N2)) gene PB2, cds.

gi parcial | 33318110 | AF508640 | Vírus da Influenza A (A/Ostrich/South A-frica/9508103/95 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1 (PB2),cds completo.

gi | 33318118 | AF508644 | Vírus da Influenza A (A/pato/Alemanha/113/95(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1 (PB2), cds.

gi parcial | 33318144 | AF508657 | vírus da Influenza A(A/Frango/Shandong/6/96 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento1 (PB2), cds parcial.

gi | 33318152 | AF508661 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/Shanghai/8/96(H9N2 )) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds.

gi parcial | 5732346 | AF156439 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Coréia/38349- p96323/96 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1(PB2) subunidade de polimerase, cds parcial.

gi | 5732348 | AF156440 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/25232-96006/96 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de polimera-se, cds parcial.

gi I 5732350 | AF156441 | vírus da Influenza A (A/Pássaro do Iito-ral/Delaware/9/96(H9N2)) gene PB2 (PB2) subunidade de polimerase desegmento 1, cds.

gi parciai | 22759068 | AP536683 j Vírus da Influenza A(A/Frango/Hebei/1 /96 (H9N2)) gene PB2, cds.

gi parcial | 5732328 | AF156430 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/G9/97 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de polime-rase, cds completo.

gi | 5732330 | AP156431 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/G23/97 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de poli-merase, cds.

gi parcial | 5732332 | AF156432 | Vírus da Influenza A (A/Pombo/HongKong/Y233/97 (Η9Ν2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de poli-merase, cds parcial.

gi | 5732334 | AF156433 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/Y280/97(H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de polimerase, cds.gi parcial | 5732336 | AF156434 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/Y439/97 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de poli-merase, cds.

gi parcial | 5732338 | AF156435 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/G1/97 (H9N2)) gene PB2 de segmento 1 (PB2) subunidade de polime-rase, cds.

gi parcial | 33318148 | AF508659 | vírus da Influenza A(A/Frango/Shenzhen/9/97 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento1(PB2), cds parcial.

gi | 33318150]AF508660 | Vírus da Influenza A (A/pato/Nanj ing/1/97 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds.gi parcial | 33318124 | AF508647 | vírus da Influenza A(A/Faisão/lreland/PV18/97(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento1(PB2), cds.

gi parcial | 13383266 | AB049153 | Vírus da Influenza A (A/periquito/ Chi-bá/1/97 (H9N2)) gene PB2 para proteína 2 básica de polimerase, cds com-pleto.

gi | 33318132 | AF508651 | vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/11/97(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1 (PB2), cds.gi parcial | 33318136 IAF508653 j vírus da Influenza A (A/Frango/ Meilongji-ang/10/97 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1 (PB2), cds.gi parcial | 22759062 | AF536680 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ Bei-jing/2/97(H9N2)) gene PB2, cds parcial.

gi | 33318142 | AF508656 | vírus da Influenza A (A/Frango/Sichuan/5/97(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds.

gi parcial | 22759066 | AF536682 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ Guang-dong/97 (H9N2)) gene PB2, cds.

gi parcial | 22759078 | AF536688 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ Shan-dong/98 (H9N2)) gene PB2, cds.gi parcial | 33318116 | AF508643 | vírus da Influenza A (A/Frango/ Alema-nha/R45/98 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds.gi parcial | 33318134 | AF508652 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ He-bei/4/98 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds.gi parcial | 33318128 | AF508649 | vírus da Influenza A (A/Frango/ Bei-jing/8/98 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds com-pleto.

gi | 13383268 | AB049154 | vírus da Influenza A (A/periquito/Narita/92A/98(H9N2)) gene PB2 para proteína 2 básica de polimerase, cds completo,gi | 22759070 | AF536684 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/2/98(H9N2)) gene PB2, cds.

gi parcial | 22759072 | AF536685 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Hebei/3/98 (H9N2)) gene PB2, cds.

gi parcial | 22759074 | AF536686 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/98(H9N2)) gene PB2, cds.gi parcial | 30025722 | AY253750 | vírus da Influenza A(A/Frango/Shanghai/F/98 (H9N2)) RNA gene da polimerase (PB2), cds com-pleto.gi I 12060631 | AF222622 | Vírus da Influenza A(A/Codorna/HongKong/A17/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de seg-mento 1, cds.

gi parcial 112060633 | AF222623 | Vírus da Influenza A (A/Pombo/HongKong/FY6/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 12060635 | AF222624 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT16/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 12060637 | AF222625 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/SSPIO/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 12060639 | AF222626 | Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/SSP11/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial 1120606411 AF222627 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY20/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds par-cial,

gi 112060643 | AF222628 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/KC 12/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial 112060645 | AF222629 | Vírus da Influenza A(A/Codorna/HongKong/NT28/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de;segmento 1, cds.

gi parcial | 12060647 | AP222630 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ Hong-Kong/SF2/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 12060649 | AF222631 | Vírus da Influenza A (A/Frango macio/Hong Kong/SF44/99 (H9N2)) gene de polimerase 2 (PB2) de segmento 1, cds.

gi parcial | 22759076 | AF536687 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ Liao-ning/99 (H9N2)) gene PB2, cds.

gi parcial | 33318112 | AF508641] vírus da Influenza A (A/Frango/ Paquis-tão/4/99 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds com-pleto.

gi | 33318114 | AF508642 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/5/99(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds completo,

gi | 33318126 | AF508648 | vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/99029/99(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds par-cial.

gi| 33318120 | AF508645 | Vírus da Influenza A (A/Frango/lran/11T/99 (H9N2))gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds completo.gi j 33318122 j AF508646 | Vírus da Influenza A (A7FrangoZSaudi Arabi-a/532/99 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds par-cial.

gi | 33318140 | AF508655 | vírus da Influenza A (A/Frango/Ningxia/5/99(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds parcial.gi | 33318146 | AF508658 | vírus da Influenza A (A/Frango/Shijiazhuang/2/99(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds.gi parcial | 12038893 | AJ291395 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/2/99 (H9N2)) gene PB2 para polymerase PB2, RNA genômico.gi | 22759064 | AF536681 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/3/99(H9N2)) gene PB2, cds.

gi parcial | 31339607 | AF523479 | vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1881/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 31339601 | AF523476 | Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/830/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 31339603 | AF523477 | Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1796/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds parcial,gi | 18496117 | AJ427861 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/Hong Kong/FY298/00 (H9N2)) parcial gene PB2 para PB2 proteína de polimerase, RNAgenômico

gi 127466041 | AY180715 | cepa A do vírus da Influenza A/Pato bra-vo/Nanchang/2-0480/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de poli-merase, cds parcial.

gi | 27466043 | AY180716 j cepa A do vírus da Influenza A/Pombo/ Nan-chang/ 2- 0461/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimerase,cds.

gi parcial | 27466045 | AY180717 | cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/1- 0070/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polime-rase, cds.

gi parcial | 27466055 | AY180722 | cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/10- 389/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polime-rase, cds.

gi parcial | 27466057 IAYI80723 | cepa A do vírus da Influenza A'Pombo/Nanchang/7- 058/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimera-se, cds.

gi parcial | 27466067 IAY180728 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Codorna/Nanchang/2- 0460/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2de polimerase, cds.

gi parcial | 27466085 | AY180737 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Pombo/Nanchang/11 - 145/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2de polimerase, cds.

gi parcial | 27466087 | AY180738 | cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11- 197/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polime-rase, cds.

gi parcial | 27466091 | AY180740 | cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/11- 290/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polime-rase, cds.

gi parcial | 27466093 | AY1807411 cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/ll- 392/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimera-se, cds.

gi parcial | 31339575 | AF523463 | vírus da Influenza A (A/pato/ Shan-tou/2134/00(H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 31339579 | AF523465 | vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1043/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 313395811 AF523466 | vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1042/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 31339593 | AF523472 | vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2102/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 31339595 | AF523473 | vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2144/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.gi parcial | 31339597 | AF523474 | Vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2143/00 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 33318138 | AF508654 | Vírus da Influenza A (A/Frango/ He-nan/62/00 (H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds par-ciai.

gi | 33318130 ] AF508650 | vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/10/00(H9N2)) gene de PB2 de polimerase e segmento 1(PB2), cds.gi parcial | 274661211 AY180755 | cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/7- 092/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimera- se, cds.

gi parcial | 274661411 AY180765 | cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4- 010/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimera-se, cds.

gi parcial | 27466157 | AY180773 | cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/Nanchang/4- 040/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimera-se, cds.

gi parcial | 27466159 f AY180774 | cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/I- 0016/2000 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimera-se, cds.

gi parcial | 55469788 | AY768575 | vírus da Influenza A (A/frango/ Coréi-a/SNU0028/00 (H9N2)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 55469790 | AY768576 | vírus da Influenza A (A/frango/ Coréi-a/SNU0037/00 (H9N2)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 55469792 | AY768577 | vírus da InfIuenza A (A/frango/ Coréi-a/SNU0073/00 (H9N2)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 55469794 | AY768578 | vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/SNU0091/00 (H9N2)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 55469796 | AY768579 | Vírus da Influenza A (A/frango/ Coréi-a/SNU0140/00 (H9N2)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 55469798 | AY768580 | vírus da Influenza A (A/frango/ Coréi-a/SNU0146/00 (H9N2)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 55469800 | AY7685811 | vírus da Influenza A (A/frango/ Goréi-a/SNU1035C/00 (H9N2)) gene de subunidade 2 (PB2) básica de polimerase,cds.

gi parcial | 27466143 | AY180766 | cepa A do vírus da Influenza A/Frango/Nanchang/4- 301/2001 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimera-se, cds.

gi parcial | 31339599 | AF523475 | vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/2088/01 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 31339591 | AP523471 | vírus da Influenza A (A/pato/Shantou/1605/01 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds.

gi parcial | 31339577 | AF523464 | Vírus da Influenza A (A/Pato bra-vo/Shantou/4808/01 (H9N2)) gene da polimerase (PB2), cds parcial,

gi | 27466097 | AY180743 | cepa A do vírus da Influenza A/Frango/ Nan-chang/4- 361/2001 (H9N2) gene (PB2) de subunidade PB2 de polimerase, cds.

gi parcial | 543986311 | ΑΥ664792 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/CSWIÔS/OS (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.

gi parcial | 54398633 | AY664793 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/AP45/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.

gi parcial | 54398635 ]AY664794 | Vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/BD90/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.

gi parcial | 54398637 | AY664795 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/CSW291/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerasenão funcional, seqüência parcial.

gi | 54398638 | AY664796 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/CSW304/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerasenão funcional, seqüência parcial.

gi I 54398639 | AY664797 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/FY23/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase nãofuncional, seqüência parcial.gi I 54398640 j AY664798 j vírus da Influenza A (A/galinha d'ango!a/ Hong-Kong/NT101/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 54398642 | AY664799 | Vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/NT142/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase,cds.

gi parcial | 54398644 | AY664800 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/SF1/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase nãofuncional, seqüência parcial.

gi | 54398645 | AY664801 | vírus da Influenza A (A/frango/ HongKong/ SS-P101/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase não funcio-nal, seqüência parcial.

gi | 54398646 | AY664802 | vírus da Influenza A (A/frango/ HongKong/TP38/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.gi parcial | 54398648 | AY664803 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/WF126/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase nãofuncional, seqüência parcial.

gi 54398649 | AY664804 J Vírus da Influenza A (A/pombo/HongKong/WF53/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase não fun-cional, seqüência parcial.gi | 54398650 | AY6S4805 | vírus da Influenza A(A/faisão/HongKong/WF54/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico depolimerase não funcional, seqüência parcial.

gi | 54398651 | AY6S4806 | Vírus da Influenza A (A/galinhad'angola/HongKong/NT184/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico depolimerase, cds.

gi parcial | 54398653 | AY664807 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/WF120/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico depolimerase não funcional, seqüência parcial.

gi | 54398654 | AYS64808 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/NT366/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico depolimerase, cds.

gi parcial j 54398656 j AY664809 | vírus da InfluenzaA(A/frango/HongKong/SSP418/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básicode polimerase, cds.

gi parcial | 54398658 | AY664810 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/YU427/03 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico depolimerase, cds.

gi parcial | 55793686 | AY800240 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S1/2003 (H9N2)) gene de proteína 2 (PB2) básico de polimerase, cds.gi parcial | 58429686 | AY862710 | Vírus da Influenza A (A/frango macio/ Co-réia/S3/03 (H9N2)) gene de PB2 (PB2), cds.gi parcial | 58429688 | AY862711 | Vírus da Influenza A (A/frango/ Coréia/S4/03 (H9N2 )) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429690 | AY862712 | Vírus da Influenza A (A/frango/ Coréia/S5/03 (Η9Ν2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429692 | AY862713 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S12/03 (H9N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429694 | AY862714 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S13/03 (H9N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429696 | AY862715 | Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S14/03 (H9N2)) gene de PB2 (PB2), cds.gi parcial | 58429698 | AY862716 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S15/03 (H9N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429700 | AY862717 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S16/03 (H9N2)) gene de PB2 (PB2), cds.

gi parcial | 58429702 | AY862718 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S18/03 (H9N2)) gene de PB2 (PB2), cds parcial.

Seqüências usadas em análise de proteína acídica (PA) de polimeraseda Influenza Agi I 27465935 | ΑΥ180662 | cepa A do vírus da Influenza A/Codorna/ Nan-chang/12- 340/2000 (H1N1) gene de PA (PA) de subunidade de polimerase,cds.

gi parcial | 49357063 | AY633217 | vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Albería/211/98 (H1N1)) gene de proteína A (PA) de polimerase, cds.

gi parcial | 5918195 | AJ243994 | Vírus da Influenza A (cepa A/ pato selva-gem /Nova lorque/6750/78) parcial mRNA para PA proteína,

gi | 45272157 | AY422034 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hokkaido/95/01(H2N2 )) Gene de proteína PA (PA)1 cds.

gi parcial | 27465965 | AY180677 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Frango/Nanchang/3- 120/2001 (H3N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 56159994 | AY779263 | Vírus da Influenza A (A/Peru/Carolina doNorte/12344/03 (H3N2)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 56159996 | AY779264 | Vírus da Influenza A (A/Peru/Minnesota/764- 2/03 (H3N2)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 58429736 j AY862687 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S6/03 (H3N2 )) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429738 | AY862688 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S7/03(H3N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429740 | AY862689 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S8/03(H3N2 )) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429742 | AY862690 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S9/03(H3N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429744 | AY862691 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/S10/03 (H3N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429746 | AY862692 | Vírus da Influenza A (A/pombo/Coréia/S11/03 (H3N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 18091833 | AF213914 | vírus da Influenza A (A/Frango/Itália/5945/95 (H3N2)) gene de proteína de polimerase PA de segmento 3, cds.

gi parcial | 58531086 | AB1668611 | Vírus da Influenza A(A/frango/Yamaguchi/7/2004 (H5N1)) Gene PA para proteína acídica de po-limerase, cds completo.

gi I 58531118 | AB188815 | Vírus da Influenza A (A/frango/Oita/8/2004(H5N1)) gene PA para proteína acídica de polimerase, cds completo,gi | 9863935 | AF216739 | Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/HongKong/437- 10/99 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase, cds com-pleto.

gi I 14165201 | AF380163 J vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/3/97(H5N1)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds completo,gi | 18092185 | AF398427 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/385.3/2000 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 18092187 | AF398428 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/385.5/2000 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 21359667 | AF468841 | Vírus da Influenza A (A/pato/Anyang/AVL-1/2001 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849710 | AF509195 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY77/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849712 | AF509196 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU562/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849714 | AF509197 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/YU563/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.gi | 28849716 | AF509198 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY150/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849718 | AF509199 | Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/FY155/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849720 | AF509200 | Vírus da Influenza A (A/Frango maci-o/Hong Kong/SF189/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849722 | AF509201 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/SF203/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849724 | AF509202 | Vírus da Influenza A (A/Pombo/HongKong/SF215/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 28849726 | AF509203 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/SF219/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849728 | AF509204 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/715.5/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849730 | AF509205 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/751.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial j 28849732 | AF509206 | Vírus da !nfluenza A (Ai7FrangoZHongKong/822.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds parcial,gi | 28849734 | AF509207 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/829.2/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds parcial,gi | 28849736 | AF509208 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/830.2/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 28849738 | AP509209 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/858.3/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849740 | AF509210 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/866 3/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849742 | AF509211 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/867.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849744 | AF509212 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/879.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849746 | AF509213 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/873.3/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 28849748 | AF509214 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/876.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849750 | AF509215 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/891.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849752]AF509216 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/893.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849754 | AF509217 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/76.1/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849756 | AF509218 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/ww100/ΘΙ (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 28849758 | AF509219) Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/573.4/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28849760 | AF509220 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/646.3/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 1196978611 | AY059526 | Vírus da Influenza A(A/Ganso/HongKong/ww26/2000 (H5N1)) gene de polimerase de segmento3 (PA), cds.

gi parcial | 119697863 | AY059527 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/ww28/2000 (H5N1)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.gi parcial | I9697865 | AY059528 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/ww381/2000 (H5N1)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 19697869 | AY059530 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/ww461/2000 (H5N1)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.gi parcial | 19697871 | AY059531 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/ww491/2000 (H5N1)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cdsparcial.

gi | 19697873 | AY059532 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/2986.1/2000 (H5N1)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.gi parcial | 19697875 | AY059533 | Vírus da Influenza A(A/Ganso/HongKong/3014.8/2000 (H5N1)) gene de polimerase de segmento3 (PA), cds.

gi parcial | 28821204 | ΑΥ22156β | vírus da Influenza A(A/Frango/HongKong/NT873.3/01 -MB(H5N1)) gene de polimerase (PA), cdsparcial.

gi | 28821206 | AY221567 | vírus da Influenza A(A/Frango/HongKong/NT873.3/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 28821208 | AY221568 | Vírus da Influenza A(A/Frango/HongKong/PY150/01 - MB(HSNI)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 2882121 θ | AY221569 | vírus da Influenza AA/Frango/HongKong/FY150/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28821212 | AY221570 | vírus da Influenza A

(A/Faisão/HongKong/FY155/01 -MB(H5N 1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 28821214 | AY221571 | Vírus da Influenza A(A/Faisão/HongKong/FY155/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds parei-al.

gi | 28821216 | ΑΥ221572 | vírus da Influenza A(A/Frango/HongKong/YU822.2/01 -MB(H5N1)) gene de polimerase (PA), cdsparcial.

gi | 28821218 | AY221573 | vírus da Influenza A(A/Frango/HongKong/YU822.2/01 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cdsparcial.

gi | 28821220 | AY221574 | vírus da Influenza A(A/Frango/HongKong/YU562/01(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds parci-al.

gi | 41207483 | AY518365 | Vírus da InfIuenza A (A/pato/China/E319- 2/03(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 51094114 | AY551934 | Vírus da Influenza A (A/frango/Nakorn-PatomThailand/CU-K2/04 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.gi | 47834839 | AY576406 | Vírus da Influenza A (A/GS/HK/739.2/02 (H5N1))gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 47834841 | AY576407 | Vírus da Influenza A (A/Eg/HK/757.3/02(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 47834843 | AY576408 | Vírus da Influenza A (A/G.H/HK/793.1/02(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds parcial.

gi | 47834845 | AY576409 | Vírus da Influenza A (A/D k/H K/821/02 (H5N1))gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 47834847 | AY576410 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.4/02(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47834849 | AY576411 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/61.9/02 (H5N1))gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 4783485I | AY576412 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU777/02 (H5N1))gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47834853 | AY576413 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/96.1/02 (H5N1))gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 47834855 | AY576414 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/409.1/02(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 47834857 | ΑΥ576415 | Vírus da Influenza A(A/Ph/HK/sv674.15/02 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo,gi | 47156478 | AY585462 | Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/1/2002(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156480 | AY585463 J Vírus da Influenza A (A/pato/Fujian/13/2002(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156482 | AY585464 | Vírus da Influenza A (A/pato/Fujían/17/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156484 | AY585465 | Vírus da Influenza A (A/pato/Fuj ian/19/2000(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156486 | AY585466 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/01/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156488 | ΑΥ585467 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/07/2000(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156490 | AY585468 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/12/2000(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156492 | AY585469 | Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/22/2002(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156494 | AY585470 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/40/2000(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156496 | AY585471 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/07/1999(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156498 | AY585472 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/22/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi 47156500 AY585473 | vírus da Influenza A(A/pato/Guangxi/35/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156502 | AY585474 | Vírus da Influenza A(A/pato/Guangxi/50/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo,

gi | 47156504 | AY585475 | vírus da Influenza A (A/pato/Guangxi/53/2002(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156506 | AY585476 | vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/08/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.gi I 47156508 | ΑΥ585477 | vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/13/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156510 | AY585478 | Vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/35/2002(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.gi | 47156512 j AY585479 | vírus da InfIuenza A (A/pato/Shanghai/37/2002(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156514 | ΑΥ58548Θ | vírus da Influenza A (A/pato/Shanghai/38/2001(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47156516 | AY585481 | vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/11/2000(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.gi | 47156518 | AY585482 | vírus da Influenza A (A/pato/Zhejiang/52/2000(H5N1)) mRNA de polimerase (PA), cds completo.

gi | 47716770 | AY609311 | Vírus da Influenza A(A/frango/Guangdong/174/04 (H5N1)) segmento 3, seqüência completa.gi | 50313026 | AY651597 | Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonésia/4/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313028 j AY651598 | Vírus da Influenza A(A/Ck/lndonesia/5/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase(PA), cds.

gi parcial | 50313030 | AY651599 | vírus da Influenza A(A/Ck/lndonesia/2A/2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase(PA)1 cds parcial.

gi | 50313032 | AY651600 | vírus da Influenza A (A/Dk/lndonesia/MS/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313034 | AY6516011 | vírus da Influenza A(A/Ck/lndonesia/BL/2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase(PA), cds parcial.

gi | 50313036 | AY651602 | Vírus da Influenza A (A/Ck/lndonesia/PA/2003(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313038 | AY651603 | Vírus da Influenza A(A/Ck/Thailand/1/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA),cds parcial.gi I 50313040 | ΑΥ651604 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/73/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds parcial,gi | 50313042 | AY651605 | vírus da Influenza A (A/Ck/Thailand/9.1/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial j 50313044 | AY651606 | Vírus da Influenza A (A/Qa/Thailand/57/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313046 | AY651607 | vírus da Influenza A (A/pássaro/ Thai-land/3.1/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313048 | AY651608 | vírus da Influenza A (A/Dk/Thailand/71.1/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds parcial,gi | 50313050 | AY651609 | Vírus da Influenza A (A/Gs/Thailand/79/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313060 | AY651614 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/33/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds parcial.gi parcial / 50313062 / AY551615 / Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/35/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313064 | AY651616 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/36/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313066 | AY651617 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/37/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 50313068 | AY651618 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/38/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313070 | AY651619 | Vírus da Influenza A (A/Ck/Vietnam/39/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313072 | AY651620 | Vírus da Influenza A (A/Ck/VietNam/C57/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313074 | AY651621 | Vírus da Influenza A (A/Dk/Vietnam/11/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313076 | AY651622 | Vírus da Influenza A (A/Gf/HK/38/2002(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds completo.

gi | 50313078 | AY651623 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/31.2/2002(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds completo.gi I 50313080 | ΑΥ651624 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/37.4/2002(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313082 | AY651625 | Vírus da Influenza A (A/SCk/HK/YU100/2002 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cdscompleto.

gi | 50313084 | AY651626 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/Yü22/2002(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds parcial,gi | 50313086 | AY651627 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3176.3/2002(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313088 | AY651628 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/3169.1/2002 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313090 | AY651629 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/FY157/

2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 50313092 | AY651630 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/YU324/2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 50313094 | AY651631 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/2133.1/2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA),cds.

gi parcial | 50313096 | AY651632 | Vírus da Influenza A (A/Ck/HK/NT93/2003(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 50313098 | AY651633 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/SSP141/2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase(PA), cds.

gi parcial | 50313100 | AY651634 | Vírus da Influenza A(A/Ck/HK/WF157/2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase(PA), cds.

gi parcial | 50313102 | AY651635 | Vírus da Influenza A (A/gaivota da cabeçapreta/HK/12.1/2003 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA),cds parcial.

gi | 50313104 | AY651636 | Vírus da Influenza A (A/garça cin-za/H K/861.1/2002 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cdsparcial.gi [ 50313106 | ΑΥ651637 | Vírus da Influenza A (A/pombo selva-gem/HK/862.7/2002 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA),cds parcial.

gi | 50313108 | AY651638 | Vírus da Influenza A (A/pardal das árvo-res/HK/864/2002 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cdsparcial.

gi | 50313110 | AY651639 | vírus da Influenza A(A/marreco/China/2978.1/2002 (H5N1)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA)1 cds parcial.gi | 50313112 | AY651640 | Vírus da Influenza A (A/falcão peregri-no/H K/D0028/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA),cds parcial.

gi | 50313114 | AY651541 | Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/5806/2003(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313116 | AY651642 | Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/303/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds parcial,gi | 50313118 | AY651543 | Vírus da Influenza A (A/Dk/HN/101/2004 (H5N1))gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 50313120 | AY651644 | Vírus da Influenza A (A/Dk/ST/4003/2003(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 50313122 | ΑΥ651645 | Vírus da Influenza A (A/Ph/ST/44/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313124 | AY651646 | Vírus da Influenza A (A/Ck/ST/4231/2003(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313126 | AY651647 | Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6255/2003(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313128 | AY651648 | Vírus da Influenza A (A/Dk/YN/6445/2003(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 50313130 | AY651649 | Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/115/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 50313132 | ΑΥ65165Θ | Vírus da Influenza A (A/Ck/YN/374/2004(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 503S5724 | ΑΥ653198 | Vírus da Influenza A(A/frango/Jilin/9/2004 (H5N1)) segmento 3, seqüência completa,gi | 56548923 | AY676029 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/821/02(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.gi | 56548925 j AY676030 | Vírus da Influenza A (A/garçota/Hong Kong/757.2/03 (H5N1)) gene de polimerase (PA)1 cds completo,gi | 56548927 | AY676031 | Vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/ES/03(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 55548929 | AY676032 | Vírus da Influenza A (A/pato/Coréia/ESD1/03(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 50956625 | AY684705 | vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/327/2004(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 561192211AY720944 | Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/DT-171/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 56119227 | AY720947 | Vírus da Influenza A (A/pato/Vietnam/TG-007A/2004 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 57924419 | AY724784 | Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/HCM- 022/2004 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 57924480 | AY724786 | Vírus da Influenza A(A/frango/Vietnam/DN- 045/2004 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 57924569 | AY724788 | Vírus da Influenza A(A/frango/Vietnam/VL- 008/2004 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds par-cial.

gi | 57924680 | AY724790 | Vírus da Influenza A (A/frango/vietnam/AG-010/2004 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 57924765 | AY724792 | Vírus da Influenza A (A/frango/Vietnam/DT- 015/2004 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 57924882 | AY724796 | Vírus da Influenza A(A/frango/Vietnam/LA- 024/2004 (H5N1)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 57915971 | AY737288 | vírus da Influenza A (A/frango/Guang-dong/191/04 (H5N1)) segmento 3, seqüência completa,gi | 57916018 | AY737295 | Vírus da Influenza A (A/frango/Guang-dong/178/04 (H5N1)) segmento 3, seqüência completa.gi | 57916074 | AY737303 | Vírus da Influenza A (A/pato/Guangdong/173/04(H5N1)) segmento 3, seqüência completa.

gi | 55233234 | AY770082 | vírus da Influenza A (A/frango/Hubei/489/2004(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.gi I 54873465 | AY770995 | vírus da InfIuenza A(A/frango/Ayutthaya/Thailand/ CU-23/04 (H5N1)) gene de polimerase, cdsparcial.

gi | 58618433 | AY818133 | vírus da Influenza A (A/frango/VietnaTn/C58/04(H5N1)) gene PA de proteína de polimerase, cds completo.gi | 58618435 | AY818134 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/Vietnam/36/04(H5N1)) gene PA de proteína de polimerase, cds completo,gi | 58374187 | AY856863 | vírus da Influenza A (A/pato/Shandong/093/2004(H5N1)) segmento 3, seqüência completa.gi | 58531136 | AB188823 | vírus da Influenza A (A/frango/Kyoto/3/2004(H5N1)) Gene PA para proteína acídica de polimerase, cds completo,gi | 58531154 | AB189052 | Vírus da Influenza A (A/corvo/Kyoto/53/2004(H5N1)) Gene PA para proteína acídica de polimerase, cds completo,gi | 58531170 | AB189059 | Vírus da Influenza A (A/corvo/Osaka/102/2004(H5N1)) Gene PA para proteína acídica de polimerase, cds completo.

gi | 3335418 | AF046087 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/220/97(H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 6048895 | AF098604 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/258/97 (H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo.gi | 6048897 | AF098605 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/y388/97 (H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo,gi | 6048899 | AF098606 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/728/97(H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo.

gi | 60489011 | AP098607 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/786/97 (H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo.gi | 6048903 | AF098608 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Hong Kong/915/97(H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo.gi | 6048905 | AF098609 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/p46/97(H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo.

gi | 6048907 | AF098610 | Vírus da Influenza A (A/pato/Hong Kong/y283/97(H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo.

gi | 6048909 | AF098611 \ Vírus da Influenza A (A/Ganso/HongKong/w355/97 (H5N1)) Gene de proteína PA (PA), cds completo,

gi | 5805280 | AF144302 | Vírus da Influenza A (A/Ganso/Guangdong/1/96(H5N1)) gene de polimerase (PA), cds completo.

gi | 9863880 | AF216715 | Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/HongKong/437- 4/99 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase, cds com-pleto.

gi | 9863899 | AF216723 | Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/HongKong/437- 6/99 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase, cds com-pleto.

gi | 9863917 | AF2167311 | Vírus da Influenza A (A/Meio ambiente/HongKong/437- 8/99 (H5N1)) gene de proteína acídica de polimerase, cds com-pleto.

gi | 34597776 | AY303660 | Vírus da Influenza A (A/frango/Chile/176822/02(H7N3)) gene de proteína acídica de polimerase, cds completo.

gi | 34597778 | AY303661 | vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4957/02(H7N3)) gene de proteína acídica de polimerase, cds completo,

gi | 34597780 | AY303662 | vírus da Influenza A (A/frango/Chile/4322/02(H7N3)) gene de proteína acídica de polimerase, cds parcial,

gi | 47680912 | AY586431 | Vírus da Influenza A (A/pato selvagem/ltália/43/ΘΙ(H7N3)) gene PA, cds.

gi parcial | 47680914 | AY586432 | Vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Itália/33/ΘΙ (H7N3)) gene PA, cds.

gi parcial | 47680916 IAY586433 | Vírus da Influenza A(A/Peru/Itália/220158/2002 (H7N3)) gene PA, cds.

gi parcial | 47680918 | AY586434 | Vírus da Influenza A(A/Peru/Itália/214845/02 (H7N3)) gene PA, cds.

gi parcial | 47834370 | AY616764 | Vírus da Influenza A (A/frango/British Co-lumbia/04 (H7N3)) gene de proteína 2 (PA) acídico de polimerase, cds com-pleto.

gi I 50542647 | AY646083 | Vírus da Influenza A (A/frango/British Columbi-a/GSC_human_B/04 (H7N3)) gene de proteína 2 (PA) acídico de polimera-se, cds completo.

gi I 50083049 | AY648292 | Vírus da Influenza A (A/GSC_frango_B/BritishColumbia/04 (H7N3)) gene de proteína 2 (PA) acídico de polimerase, cdscompleto.

gi I 50059192 | AY650275 | Vírus da Influenza A (A/GSC_frango/British Co-lumbia/04 (H7N3)) gene de proteína 2 (PA) acídico de polimerase, cds com-pleto.

gi I 9988639 | AF268109 | vírus da Influenza A (A/RedKnot/Delaware/259/94(H7N7)) gene PA de proteína de polimerase, cds parcial,gi | 40353080 | AJ619677 | vírus da Influenza A (A/frango/Alemanha/R28/03(H7N7)) gene PA para polymerase complex subunit PA, RNA genômico.

gi | 37813167 | AY342415 | Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/124/03(H7N7 )) gene de proteína A de polimerase, cds.

gi parcial | 37813169 | AY342416 | Vírus da Influenza A (A/Países Bai-xos/126/03 (H7N7)) gene de proteína A de polimerase, cds.gi parcial | 37813171 | AY342417 | Vírus da Influenza A (A/Países Bai-xos/127/03 (H7N7)) gene de proteína A de polimerase, cds.gi parcial | 37813173 | AY342418 | Vírus da Influenza A (A/Países Bai-xos/219/03 (H7N7)) gene de proteína A de polimerase, cds completo,gi | 37813175 | AY342419 | Vírus da Influenza A (A/Países Baixos/033/03(H7N7)) gene de proteína A de polimerase, cds completo.

gi | 37813177 | AY342420 | vírus da Influenza A (A/frango/Países Bai-xos/1/03 (H7N7)) gene de proteína A de polimerase, cds completo,gi | 13383274 | AB049157 | Vírus da Influenza A (A/periquito/Chiba/1/97(H9N2)) Gene PA para proteína acídica de polimerase, cds completo.gi | I3383276 | AB049158 | vírus da Influenza A (A/periquito/Narita/92A/98(H9N2)) Gene PA para proteína acídica de polimerase, cds completo,gi | 33318154 | AF508662 | Vírus da Influenza A (A/Ostrich/South Afri-ca/9508103/95 (H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cdscompleto:

gi | 33318156 | AF508663 | vírus da Influenza A (A/Frango/Paquistão/4/99(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo.gi | 33318158 | AF508664 | vírus da !nfluenza A (A/Frango/Paauistão/5/99(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds parcial,gi | 3331816Θ | AF508665 | vírus da Influenza A(A/Frango/Alemanha/R45/98 (H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de seg-mento 3, cds completo.gi | 33318162 | AF508666 | Vírus da Influenza A (A/pato/Alemanha/ll3/95(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo,gi | 33318164 | AF508667 | Vírus da Influenza A (A/Frango/lran/IIT/99(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial j 33318166 ] AF508668 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Saudi A-rabia/532/99 (H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds com-pleto.

gi | 33318168 | AF508669 | vírus da Influenza A (A/Faisão/lreland/PV18/97(H9N2)), polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo,gi | 33318170 | AF508670 J vírus da Influenza A (A/Frango/Coréia/99029/99(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo.

gi | 33318172 | AF508671 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Beij ing/8/98(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo,gi | 33318174 | AF508672 | vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/IO/OO(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo.gi | 33318176 | AF508673 | vírus da Influenza A (A/Frango/Guangdong/11/97(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo,gi | 33318178 | AF508674 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Hebei/4/98(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo,gi | 33318180 | AF508675 | vírus da Influenza A (A/Frango/Heilongjiang/l0/97(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo.

gi | 33318182 | AF508676 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/62/00(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 33318184 | AF508677 | vírus da Influenza A(A/Frango/Ningxia/5/99 (H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3,cds completo.

gi | 33318186 | AF508678 | vírus da Influenza A (A/Frango/Sichuan/5/97(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo.

gi | 33318188 | AF508679 | vírus da Influenza A (A/Frango/Shandong/6/96(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds parcial,

gi | 33318190 | AF508680 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Shijiazhuang/2/99(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds.

gi parcial | 33318192 | AF5086811 vírus da Influenza A(A/Frango/Shenzhen/9/97 (H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmen-to 3, cds completo.

gi | 33318194 | AF508682 | Vírus da Influenza A (A/pato/Nanjing/1/97(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds completo.

gi | 33318196 | AF508683 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/Shanghai/8/96(H9N2)) polimerase de gene PA (PA) de segmento 3, cds.

gi parcial | 313395411 | AF523446 | Vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/l043/00 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339543 | AF523447 | vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/1042/00 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339545 | AF523448 | vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/2088/01 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339547 | AF523449 | Vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/830/00 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339549 | AF523450 | Vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/1796/00 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 313395511 | AF5234511 | Vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/2143/00 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339553 | AF523452 | vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/2134/00 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339555 | AF523453 | vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/2144/00 (H9N2)) gene de polimerase (PA), cds.gi parcial | 31339557 | AF523454 | Vírus da Influenza A (A/Pato bra-vo/Shantou/4808/01 (H9N2)) gene de põlimerase (PA), cds.gi parcial | 31339559 | AF523455 | vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/1881/00 (H9N2)) gene de põlimerase (PA), cds.gi parciai | 313395611 | AF523456 j Vírus da Influenza A(A/pato/Shantou/2102/00 (H9N2)) gene de põlimerase (PA), cds.gi parcial | 31339563 | AF523457 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/289/78 (H9N2)) gene de põlimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339565 | AF523458 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/610/79 (H9N2)) gene de põlimerase (PA), cds parcial.

gi | 31339567 | AF523459 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/86/76(H9N2)) gene de põlimerase (PA), cds.

gi parcial | 31339569 | AF523460 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/366/78 (H9N2)) gene de põlimerase (PA), cds.gi parcial | 22759040 | AF536669 | vírus da Influenza A(A/Frango/Beijing/1 /95 (H9N2)) gene PA, cds.

gi parcial | 22759042 | AF536670 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Beijing/2/97(H9N2)) gene PA, cds.

gi parcial | 22759044 | AF536671 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/3/99 (H9N2)) gene PA1 cds.

gi parcial | 22759046 | AF536672 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Guangdong/97 (H9N2)) gene PA, cds.

gi parcial | 22759048 | AF536673 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Hebei/1/9S (H9N2)) gene PA, cds.gi parcial | 22759050 | AF536674 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Hebei/2/98 (H9N2)) gene PA, cds.

gi parcial | 22759052 | AF536675 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Hebei/3/98 (H9N2)) gene PA, cds.

gi parcial | 22759054 | AF536676 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Henan/98(H9N2)) gene PA1 cds.

gi parcial | 2275905S | AF536677 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Liaoning/99 (H9N2)) gene PA, cds.gi parcial | 22759058 | AF536678 ) vírus da Influenza A(A/Frango/Shandong/98 (H9N2)) gene PA, cds.

gi parcial ]I2038897 | AJ291397 | vírus da Influenza A(A/Frango/Paquistão/2/99 (H9N2)) Gene PA para PA de polimerase, RNAgenôrnico.

gi 1184961211AJ427863 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/FY298/00 (H9N2)) gene pa parcial para proteína de polimerase de PA,RNA genôrnico

gi | 274659111AY180650 | cepa A do vírus da InfluenzaA/pato/Nanchang/11 - 392/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27465913 | AY180651 | cepa A do vírus da InfluenzaA/pato/Nanchang/ll- 290/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27465915 | AY180652 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Frango/Nanchang/I- 0016/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidadede polimerase, cds.

gi parcial | 27465917 j AY180653 | cepa A do vírus da InfluenzaA/pato/Nanchang/ll- 197/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27465937 | AY180663 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Pombo/Nanchang/2- 0461/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidadede polimerase, cds parcial.

gi | 274659411 | AY180665 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Frango/Nanchang/4- 301/2001 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27465943 | AY180666 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Frango/Nanchang/4- 361/2001 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27465961 | AY180675 | cepa A do vírus da Influenza A/Pato bra-vo/Nanchang/2-0480/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade de poli-merase, cds parcial.gi I 27465983 | ΑΥ180686 | cepa A do vírus da Influenza A/pato/Nanchang/l-0070/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade de polimerase, cds.gi parcial | 27465989 | AY180689 | cepa A do vírus da InfluenzaA/pato/Nanchang/10- 389/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27465993 | AY1806911 J cepa A do vírus da InfluenzaA/Pombo/Nanchang/11- 145/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidadede polimerase, cds.

gi parcial | 274660011 AY180695 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Codorna/Nanchang/2- 0460/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidadede polimerase, cds.

gi parcial | 27466003 IAY180696 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Codorna/Nanchang/4- 040/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidadede polimerase, cds.

gi parcial | 27466009 | AY180699 | cepa A do vírus da InfluenzaA/Frango/Nanchang/4- 010/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27466015 | AY180702 | cepa A do vírus da InfluenzaA/pato/Nanchang/7- 092/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade depolimerase, cds.

gi parcial | 27466019 | AY180704 | cepa A do vírus da Influenza A/ Pombo/Nanchang/7- 058/2000 (H9N2) gene de PA (PA) de subunidade de polime-rase, cds.

gi parcial | 30025973 | AY253752 | Vírus da Influenza A(A/Frango/Shanghai/F/98 (H9N2)) gene de proteína acídica de polimerase(PA), cds completo.

gi | 49357051 | AY633169 | vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Alberta/17/91 (H9N2)) gene de proteína A (PA) de polimerase, cds.gi parcial | 49357079 | AY633281 | vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Alberta/321/88 (H9N2)) gene de proteína A (PA) de polimerase, cdsparcial.

gi | 49357083 | AY633297 | vírus da Influenza A (A/pato selva-gem/Alberta/11/91 (H9N2)) gene de proteína A (PA) de polimerase, cds par-cial.

gi | 54301528 | AY664755 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/CSW153/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de poli- merase (PA), cds parcial.

gi | 54301530 | ΑΥ664756 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/AP45/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 54301532 | AY664757 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/BD90/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 54301534 | AY664758 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/CSW291/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de poli-merase (PA), cds.

gi parcial | 54301536 | AY664759] vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/CSW304/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de poli-merase (PA), cds.

gi parcial | 54301538 | AY6647S0 | vírus da Influenza A (A/frango/ Hong-Kong/ PY23/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds.gi parcial | 54301540 | AY664761 | vírus da Influenza A {A/galinha d'angola /HongKong/ NT101/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polimerase (PA),cds.

gi parcial | 54301542 | AY664762 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/NT142/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 54301544 | AY664763 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/SF1/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polimera-se (PA), cds.

gi parcial | 54301546 | AYS64764 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/SSPI01/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de poli-merase (PA), cds.

gi parcial | 54301548 | AY664765 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/TP38/03 (H9N2)) gene semelhante à proteína acídica(PA) de polimerase, seqüência completa.

gi | 54301549 | AY664766 | vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF126/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polimerase (PA), cds. gi parcial j 543015511 \ AY664767 \ Vírus da Influenza A(A/pombo/HongKong/WF53/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 54301553 | AY664768 | vírus da Influenza A(A/faisao/HongKong/WF54/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime- rase (PA), cds.

gi parcial | 54301555 | AY664769 | vírus da Influenza A (A/galinhad'angola/HongKong/NT184/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 54301557 | AY664770 | vírus da Influenza A (A/frango/HongKong/WF120/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 54301559 | AY664771 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/NT366/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 54301561 | AY664772 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/SSP418/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de poli-merase (PA), cds.

gi parcial | 54301563 | AY664773 | vírus da Influenza A(A/frango/HongKong/YU427/03 (H9N2)) gene de proteína acídica de polime-rase (PA), cds.

gi parcial | 55793682 | AY800238 | vírus da Influenza A(A/frango/Coréia/S1/2003 (H9N2)) gene de proteína acídica de polimerase(PA), cds completo.

gi | 58429718 | AY862678 | vírus da Influenza A (A/frango maci-o/Coréia/S3/03(H9N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429720 | AY862679 | Vírus da Influenza A(A/frango/Coréia/S4/03 (H9N2)) PA (PA) gene, cds.gi parcial | 58429722 | ΑΥ86268Θ | Vírus da Influenza A(A/frango/Coréia/S5/03 (H9N2)) PA (PA) gene, cds completo,gi I 58429724 | AY862681 | vírus da Influenza A (A/frango/Coréia/S 12/03(H9N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429726 | AY862682 | Vírus da Influenza A(A/pato/Coréia/S 13/03 (H9N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429728 | AY862683 | Vírus da Influenza A(A/pombo/Coréia/S14/03 (H9N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429730 | AY862684 | Vírus da Influenza A(A/frango/Coréia/S 15/03 (Η9Ν2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429732 | AY862685 | vírus da Influenza A(A/frango/Coréia/S 16/03 (H9N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 58429734 | AY862686 | Vírus da Influenza A(A/frango/Coréia/S 18/03 (H9N2)) PA (PA) gene, cds.

gi parcial | 5732356 | AF156444 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/G9/97 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732358 | AF156445 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/G23/97 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds completo.

gi | 5732360 | AF156446 | Vírus da Influenza A (A/Pombo/HongKong/Y233/97 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732362 | AF156447 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/Y280/97 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732364 | AFI56448 | Vírus da Influenza A (A/pato/HongKong/Y439/97 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732366 | AF156449 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/G1/97 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732368 | AF156450 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/739/94 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732378 | AF156451 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/AF157/92 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732372 | AF156452 | Vírus da Influenza A (A/Frango/Beijing/1/94(Η9Ν2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.gi parcial | 5732374 | AF15Õ453 /Vírus da Influenza A(A/Frango/Coréia/38349- p96323/96 (H9N2)) gene de polimerase de seg-mento 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732376 | AF156454 j Vírus da Influenza A(A/Frango/Coréia/25232- 96006/96 (H9N2)) gene de polimerase de segmen-to 3 (PA), cds.

gi parcial | 5732378 | AF156455 | vírus da Influenza A (A/Pássaro do lito-ral/Delaware/9/96 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cdsparcial.

gi | 5732380 | AF156456 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/Arkansas/29209-1/93 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA), cds.gi parcial | 5732382 | AF156457 | vírus da Influenza A(A/Peru/California/189/66 (H9N2)) gene de polimerase de segmento 3 (PA),cds parcial.

gi | 12060671 | AF222642 | vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/A17/99 (H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 12060673 | AF222643 | Vírus da Influenza A (A/Pombo/HongKong/FY6/99 (H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 12060675 | AF222644 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/NT16/99 (H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 12060677 | AF222645 | vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/SSP 10/99 (H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 12060679 | AF222646 | Vírus da Influenza A (A/Faisão/HongKong/SSP11/99 (H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 12060681 | AF222647 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/FY20/99(H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 12060683 | AF222648 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/KC12/99(H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds parcial.Gi | 12060685 | AF222649 | Vírus da Influenza A (A/Codorna/HongKong/NT28/99(H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 120S0687 | AF222650 | Vírus da Influenza A (A/Frango/HongKong/SF2/99(H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds.gi parcial | 12060689 | AF22265I | Vírus da Influenza A (A/ Frango Maci-o/Hong Kong/SF44/99(H9N2)) gene PA (PA) de segmento 3, cds parcial.

Claims (23)

1. Agente iRNA compreendendo um filamento de sentido, emque o filamento de sentido compreende pelo menos 15 nucleotídeos contí-guos que diferem por não mais do que 1, 2, ou 3 nucleotídeos das seqüên-cias de filamento de sentido de qualquer um dos agentes fornecidos nas Ta-belas 1A- 1H, agentes numerados AL-DP -2241 - AL-DP-8631, e um filamen-to anti-sentido, em que o filamento anti-sentido compreende pelo menos 15nucleotídeos contíguos que diferem por não mais do que 1, 2, ou 3 nucleotí-deos das seqüências anti-sentido de qualquer um dos agentes fornecidosnas Tabelas 1 A-1H, agentes numerados AL-DP-2241 - AL- DP-8631.

2. Agente iRNA incluindo um filamento de sentido, em que o fi-lamento de sentido compreende pelo menos 15 nucleotídeos contíguos quediferem por não mais do que 1, 2, ou 3 nucleotídeos das seqüências de fila-mento de sentido de qualquer um dos agentes fornecidos nas Tabelas IA-IH5 agentes numerados AL-DP-2241 - AL-DP-8631, e um filamento anti-sentido em que o filamento anti-sentido compreende pelo menos 15 nucleo-tídeos contíguos das seqüências anti-sentido de qualquer um dos agentesfornecidos nas Tabelas 1 A- 1 H, agentes numerados AL-DP-2241 - AL-DP-8631 , e em que o agente iRNA reduz a expressão de seu respectivo genealvo em células Cos-7 construídas para expressar o respectivo gene alvo emmais do que 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, ou 80% em comparação comas células que não foram incubadas com o agente de iRNA.

3. Agente iRNA compreendendo um filamento de sentido e umfilamento anti-sentido cada qual compreendendo uma seqüência de pelomenos 16, 17 ou 18 nucleotídeos que é essencialmente idêntica a uma dasseqüências de qualquer um dos agentes fornecidos nas Tabelas 1A - 1H,agentes numerados AL-DP-2241 - AL-DP-8631, exceto que não mais do que-1, 2 ou 3 nucleotídeos por filamento, respectivamente, foram substituídos poroutros nucleotídeos (por exemplo, adenosina substituída por uracila), en-quanto que essencialmente mantendo a capacidade de reduzir a quantidadede placas de influenza A formadas em células em um ensaio de formação deplaca.

4. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, em que o filamento de RNA de anti-sentido é de 30 ou menosnucleotídeos de comprimento, e a região dúplex de Agente de iRNA é de 15a 30 pares de nucleotídeo de comprimento.

5. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, compreendendo uma modificação que faz com que Agente deiRNA tenha estabilidade aumentada em uma amostra biológica.

6. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, compreendendo um fosforotioato ou um nucleotídeo modificadoem 2'.

7. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, compreendendo pelo menos um dinucleotídeo 5'-uridina- adeni-na-31 (5'-ua-3') em que a uridina é um nucleotídeo modificado em 2'; pelomenos um dinucleotídeo 5 1 -uridina-guanina-3 1 (5 1 -ug-3 1 ), em que a 5 1 -uridina é um nucleotídeo modificado em 2'; pelo menos um dinucleotídeo 5'-citidina-adenina-3' (5'-ca-3'), em que a 5'-citidina e um nucleotídeo modifica-do em 2'; ou pelo menos um dinucleotídeo S1-Uridina-Uridina-S1 (S1-UU-S'), emque a 5 '-uridina é um nucleotídeo modificado em 2'.

8. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma reivindicação 6ou 7, em que uma modificação em 2' é selecionada do grupo que consisteem : 2'-deóxi, 2,-deóxi-2'-flúor, 2'-0-metila, 2'-0- metoxietila (2'-C)-MOE), 2'-O-aminopropila (2'-0-AP), 2'-0- dimetilaminoetila (2'-0-DMA0E), 2'-0-dime-tilaminopropila (2'-0-DMAP), 2'-0-dimetilaminoetiloxietila (2'-0-DMAEOE), e2'-0-N-metilacetamido (2'-0-NMA).

9. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, compreendendo uma projeção de nucleotídeo tendo 1 a 4 nucle-otídeos não pareados.

10. Agente de iRNA de acordo com a reivindicação 9, em queuma projeção de nucleotídeo tem 2 ou 3 nucleotídeos não pareados.

11. Agente de iRNA de acordo com a reivindicação 9, em queuma projeção de nucleotídeo está na extremidade 3' do filamento anti-sentido do agente de iRNA.

12. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 1 a 3, compreendendo uma porção de colesterol.

13. Agente de iRNA de acordo com a reivindicação 12, em queuma porção de colesterol é conjugada à extremidade 3' do filamento de sen-tido dAgente de iRNA.

14. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 1 a 3, em que o agente de iRNA é alvejado por captação por célulasdo pulmão.

15. Agente de iRNA de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 1 a 3, em que Agente de iRNA compreende pelo menos uma nucle-obase não-natural.

16. Agente de iRNA de acordo com a reivindicação 15, em queuma nucleobase não-natural é difluorotolila, nitroindolila, nitropirrolila, ou ni-troimidazolila.

17. Agente de iRNA de acordo com a reivindicação 15, em queuma nucleobase não-natural é difluorotolila.

18. Agente de iRNA de acordo com a reivindicação 15, em queapenas um dos dois filamentos de oligonucleotídeo compreendendo o oligo-nucleotídeo de filamento duplo, contém uma nucleobase não-natural.

19. Agente de iRNA de acordo com a reivindicação 15, em queambos os filamentos de oligonucleotídeo compreendendo o oligonucleotídeode filamento duplo, independentemente, contêm uma nucleobase não-na-tural.

20. Método de tratar um indivíduo humano tendo um processopatológico mediado em parte pela replicação de vírus influenza A, em que oagente de iRNA compreende um filamento de sentido, em que o filamento desentido compreende pelo menos 15 nucleotídeos contíguos que diferem pornão mais do que 1, 2, ou 3 nucleotídeos das seqüências de filamento desentido qualquer um dos agentes fornecidos nas tabelas 1 A-IH, agentesnumerados AL- DP -2241 - AL-DP-8631, e um filamento anti-sentido, em queo filamento anti-sentido compreende pelo menos 15 nucleotídeos contíguosque diferem por não mais do que 1, 2, ou 3 nucleotídeos das seqüências defilamento anti-sentido de qualquer um dos agentes fornecidos nas Tabelas 1A-1H, agentes numerados AL-DP-2241 - AL-DP-8631.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, em que o agentede iRNA é administrado em um quantidade suficiente para reduzir a replica-ção de influenza vírus em uma célula ou tecido do indivíduo.

22. Método de acordo com a reivindicação 20, em que o indiví-duo é um ser humano.

23. Composição farmacêutica, compreendendo:a.) um agente de iRNA como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3; eb.) um veículo farmaceuticamente aceitável.