BRPI0516576B1 - Vetores quiméricos - Google Patents

Abstract

vetores quiméricos. a presente invenção refere-se a vetores quiméricos. mais especificamente, a invenção refere-se a vetores de poxvírus e vírus recombinantes que são capazes de expressar um replicon de rna alfaviral que expressa uma seqüência heteróloga de interesse.

Description

PEDIDOS RELACIONADOS [0001] Esse pedido reivindica prioridade para o Pedido de Patente dos Estados Unidos 10/958.267 intitulado “Vetores Quiméricos” depositado em 5 de outubro de 2004.

[0002] Cada um dos pedidos e patentes citados nesse texto, assim como cada documento ou referência citada em cada um dos pedidos e patentes (incluindo durante o julgamento de cada patente depositada: “documentos citados no pedido”), e cada uma das PCT e pedidos ou patentes estrangeiros correspondendo a e/ou reivindicando prioridade a partir de quaisquer desses pedidos e patentes e cada um dos documentos citados ou referidos em cada um dos documentos citados no pedido, estão por meio desse expressamente incorporados aqui por referência. Mais geralmente, documentos ou referências são citados nesse texto, tanto em uma Lista de Referências antes das reivindicações quanto no próprio texto; e, cada um desses documentos ou referências (“referências aqui citadas”), assim como cada documento ou referência citada em cada uma das referências aqui citadas (incluindo quaisquer especificações do fabricante, instruções, etc.) está por meio desse expressamente incorporada aqui por referência.

CAMPO DA INVENÇÃO [0003] A presente invenção refere-se a vetores quiméricos. Mais especificamente, a invenção refere-se a vetores de poxvírus recombinantes e vírus que são capazes de expressar um replicon de RNA alfaviral expressando uma seqüência heteróloga de interesse.

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ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0004] Poxvírus é um dos mais promissores vetores de vacina da atualidade. ALVAC, um poxvírus de canário, é um membro do gênero de vírus avipox na família Chordopoxvírus, e tem sido desenvolvido como um vetor de vacina para expressar genes exógenos. As evidentes vantagens de ALVAC como um vetor de vacina incluem seu amplo tropismo, capacidade de inserção de grandes fragmentos de DNA e alta imunogenicidade, tal como a indução de uma forte resposta de linfócito T. Vacinas recombinantes a base de ALVAC têm um excelente perfil de segurança e sua eficácia contra uma variedade de agentes infecciosos tem sido demonstrada tanto em animais como seres humanos. ALVAC sofre replicação abortiva em células de mamíferos. Em recombinantes de ALVAC, os genes alvo são controlados por promotores precoces e são expressos antes do bloqueio na replicação. A inoculação de um recombinante de ALVAC expressando a glicoproteína G da raiva em cães foi suficiente para proteger contra estímulo letal com vírus da raiva (Taylor, J. et al (1991) Vaccine 9: 190-93). Vacinação de gatos com um recombinante de ALVAC expressando proteína Env e Gag de vírus leucemia felina (FelV) subtipo A protege contra o desenvolvimento de viremia persistente após a exposição ao vírus FelV (Tartaglia, J. et al (1993) J. Virol. 67(4): 2370-5). Recombinantes de ALVAC expressando Env e Gag-pol de HIV-1 foram mostrados induzindo anticorpos específicos para HIV-1 e respostas de linfócitos T citotóxicos em seres humanos (Evans, T.G. et al (1999) (J. Infect. Dis. 18(2): 290-8; Girard, M. et al (1997) Virology 232(1): 98-104)). Entretanto, altas doses de ALVAC são

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3/223 freqüentemente necessárias para se obter imunidade protetora. Portanto, há uma necessidade de melhorar a imunogenicidade de recombinantes a base de ALVAC. Da mesma forma que ALVAC, o fowlpoxvirus, outro membro do gênero de vírus avipox na família Orthopoxvirus, também foi desenvolvido como um vetor de vacina. Vacinas recombinantes a base de fowlpoxvirus têm demonstrado sua eficácia contra várias doenças infecciosas em animais e particularmente em aves domésticas.

[0005] O vírus Semliki Forest (SFV), um vírus de RNA de filamento simples de sentido positivo, é um membro do gênero alfavírus na família Togarividae. O RNA genômico (49S) de SFV tem 11.442 bp de extensão e contém uma cap-5' e um cauda 3'-poliadenilada. Dois-terços do genoma na terminação 5' codificam proteínas não-estruturais (nsP) e o terço remanescente na terminação 3' codifica proteínas estruturais (sP). Na infecção das células, o RNA genômico serve como mRNA para iniciar a tradução de uma poliproteína nãoestrutural, que é subseqüentemente clivada em 4 proteínas não-estruturais denominadas nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4. Essas proteínas formam complexos de replicação com fatores do hospedeiro para iniciar a replicação do RNA viral e transcrição do RNA sub-genômico (26S). O RNA sub-genômico, correspondendo a um terço do genoma na terminação 3', é usado como um molde para tradução de proteínas estruturais, que não são necessárias para a replicação viral.

[0006] SFV foi recentemente manipulado para produzir um replicon” de RNA auto-replicante pela deleção dos genes de proteínas estruturais (Liljestrom, P. e Garoff, H. (1991)

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Nat. Biotechnol. 9(12): 1356-61). Esse replicon de RNA autoreplicante pode replicar em uma variedade de tipos celulares variando de células de insetos a células de mamíferos e expressa genes alvo em níveis elevados. Vacina recombinante a base do replicon de SFV foram desenvolvidas e têm mostrado imunidade protetora contra uma variedade de patógenos (Berglund, P. et al; Vaccine 17(5): 497-507; Berglund, P. et al (1997) AIDS Res. Hum. Retroviruses 13(7) 1487-95; Nilsson, C. et al (2001) Vaccine 19(25-26): 3526-36; Feeton, M.N. et al (2001) J. Infect. Dis. 183(9): 1395-8). Entretanto, o sistema de expressão do replicon de SFV tem limitações. Por exemplo, para liberação eficiente dos replicons de SFV in vivo, é necessário acondicionar os replicons de SFV em partículas virais. O acondicionamento é obtido pela cotransfecção de células com SFV e replicons auxiliares, que expressam as proteínas do capsídio viral e do envelope usando eletroporação (Smerdou, C. e Liljestrom, P. (1999) J. Virol. 73(2): 1092-8). Esse procedimento de acondicionamento não apenas requer a síntese de RNAs in vitro, mas também ainda não foi desenvolvido para produção de partícula viral em larga escala. Adicionalmente, na maioria das células de mamíferos, a síntese macromolecular do hospedeiro é inibida após a introdução do replicon de alfavírus, levando à morte celular por um mecanismo apoptótico. Isso limita o uso desses replicons para expressar proteínas estranhas por expressão transitória. Isso também limita o uso desse sistema de expressão para produção em larga escala desses vetores para aplicações terapêuticas.

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5/223 [0007] A Patente U.S. N° 6.015.686 descreve um sistema de vetor a base de eucariotos. Nesse sistema, um vetor de cDNA é usado para lançar um replicon de alfavírus. Embora esse sistema envolva a necessidade de isolar RNA, ele ainda sofre de pouca eficiência na liberação de gene comum a todos os vetores de plasmídio. Portanto, é essencial desenvolver alternativas para liberação eficiente de replicons de SFV in vivo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0008] A presente invenção trata de vetores recombinantes de poxvírus e vírus que podem expressar seqüências heterólogas de interesse a partir de um replicon viral capaz de amplificação como RNA. Esses vetores recombinantes de poxvírus podem então ser usados para introduzir e expressar uma seqüência heteróloga de interesse em um animal. Esses vetores de poxvírus e vírus podem ser produzidos em níveis de grande escala industrial.

[0009] Em um aspecto, a presente invenção fornece um vetor recombinante de poxvírus, compreendendo uma seqüência de ácido nucléico operavelmente ligada a um promotor poxviral que direciona a transcrição da seqüência de ácido nucléico para gerar um replicon viral transcrito capaz de amplificação como RNA, em que o replicon viral transcrito compreende pelo menos um promotor viral operavelmente ligado a uma seqüência heteróloga de interesse e uma polimerase específica para replicação do replicon viral.

[0010] O poxvírus pode ser vírus de vacínia, Vacínia Ankara Modificado, NYVAC, canaripox, ALVAC, vírus de aves domésticas, ou TROVAC e o promotor poxviral é selecionado a

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6/223 partir do grupo que consiste em promotor poxviral H6, promotor poxviral 13L, promotor poxviral 42K, promotor poxviral 7,5K, promotor poxviral de timidina quinase, promotor poxviral E3L, promotor poxviral K3L e um promotor poxviral sintético. A invenção também contém promotores poxvirais que são mutados.

[0011] Em uma modalidade, o vetor de poxvírus compreende um lócus de inserção C6 e seqüências flanqueadoras do lócus de inserção C6, em que as seqüências flanqueadoras promovem recombinação homóloga da seqüência de ácido nucléico com o lócus de inserção C6. As seqüências flanqueadoras compreendem vantajosamente as seqüências C6L e C6R de canaripox, tal como ALVAC. Em outra modalidade, um vetor de poxvírus compreende um lócus de inserção F8 e as seqüências flanqueadoras compreendem as seqüências F8L e F8R de vírus de aves domésticas, tal como TROVAC.

[0012] Outra modalidade da presente invenção descreve um replicon viral derivado de um alfavírus selecionado a partir do grupo que consiste em vírus Semliki Forest, vírus Sindbis, vírus Aura, vírus VEE, vírus WEE, vírus EEE, vírus Ross River, vírus Mayaro, vírus Chikungunya, vírus Getah, vírus Sagyama, vírus Mucambo, vírus Pixuna, vírus Middelburg, vírus O'nyong-Nyong, vírus Barmah Forest, vírus Beberu, vírus Una, vírus Whataroa, vírus Babanki, vírus Kyzylagach, vírus Highlands J, vírus Fort Morgan e vírus Ndumu.

[0013] Em outra modalidade da invenção, o replicon viral é derivado de um vírus de RNA de filamento simples sentido-positivo selecionado a partir do grupo que consiste

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7/223 em poliovírus, rinovírus, vírus coxsackie, vírus da febre amarela, HCV, TGEV, IBV, MHV, BCV, astrovírus, tobamovírus, potivírus e bromovírus.

[0014] Vantajosamente, o promotor viral é o promotor 26S e a polimerase é nsP2 de alfavírus. Em modalidades particulares, a nsP2 de alfavírus é mutada na leucina 713 para produzir um mutante condicional de nsP2. A mutação pode também resultar em um fenótipo não-sensível à temperatura, tornando o replicon menos citopático, por exemplo, pela alteração das funções de nsP2.

[0015] Outra modalidade da presente invenção descreve a seqüência heteróloga de interesse, que pode ser um antígeno, um fragmento antigênico de uma proteína, um agente terapêutico, uma citocina, uma toxina, um imunomodulador, um RNA anti-sentido, um RNA catalítico, pequeno RNA de interferência, uma proteína, um peptídeo, um anticorpo, um fragmento de ligação de antígeno de um anticorpo, ou um adjuvante.

[0016] Outro aspecto da presente invenção fornece um poxvírus recombinante compreendendo uma seqüência de ácido nucléico operavelmente ligada a um promotor que direciona a transcrição da seqüência de ácido nucléico para gerar um replicon viral transcrito capaz de amplificação como RNA, em que o replicon viral transcrito compreende pelo menos um promotor viral operavelmente ligado a uma seqüência heteróloga de interesse e uma polimerase específica para replicação do replicon viral.

[0017] Em um aspecto adicional, um método para produzir um vetor recombinante de poxvírus é fornecido,

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8/223 compreendendo as etapas de linearizar um plasmídeo doador com uma endonuclease de restrição, em que o plasmídeo doador compreende sítios de clivagem de endonuclease de restrição ou um sítio de clonagem múltipla; e ligando pelo menos uma seqüência de ácido nucléico compreendendo (i) um promotor operavelmente ligado à molécula de ácido nucléico que direciona a transcrição da seqüência de ácido nucléico para gerar um replicon viral transcrito capaz de amplificação como RNA, em que o replicon viral transcrito compreende pelo menos um promotor viral operavelmente ligado a uma seqüência heteróloga de interesse e uma polimerase específica para replicação do replicon viral; e (ii) uma seqüência promotora poxviral e (iii) seqüências de inserção flanqueando (i) e (ii) que tem sítios de clivagem de endonuclease de restrição complementares ao plasmídeo doador na seqüência de ácido nucléico, dessa maneira produzindo o vetor de poxvírus recombinante.

[0018] Vantajosamente, o método compreende adicionalmente as etapas de introdução do vetor em uma célula permissiva para replicação do vetor; e isolamento do vetor a partir da célula.

[0019] Uma modalidade da presente invenção compreende adicionalmente um gene repórter, que é selecionado a partir do grupo que consiste em gene de resistência à neomicina, gene de resistência à ampicilina, lac-Z (β-galactosidase), luciferase e proteína verde fluorescente (GFP).

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9/223 [0020] Em outra modalidade, a célula permissiva para o crescimento do vetor é um fibroblasto embrionário de galinha.

[0021] Outro aspecto da presente invenção fornece um método para introduzir e expressar uma seqüência heteróloga de interesse em um animal, compreendendo administrar um vetor de poxvírus ao animal, em que o vetor de poxvírus compreende uma seqüência de ácido nucléico operavelmente ligada a um promotor poxviral que direciona a transcrição da seqüência de ácido nucléico para gerar um replicon viral transcrito capaz de amplificação como RNA, em que o replicon viral transcrito compreende pelo menos um promotor viral operavelmente ligado a uma seqüência heteróloga de interesse e uma polimerase específica para replicação do replicon viral, dessa maneira expressando a seqüência heteróloga de interesse no animal.

[0022] Em um aspecto adicional, um método para introduzir e expressar uma seqüência heteróloga de interesse em um animal é fornecido, compreendendo administrar um poxvírus ao animal, em que o poxvírus compreende uma seqüência de ácido nucléico operavelmente ligada a um promotor poxviral que direciona a transcrição da seqüência de ácido nucléico para gerar um replicon viral transcrito capaz de amplificação como RNA, em que o replicon viral transcrito compreende pelo menos um promotor viral operavelmente ligado a uma seqüência heteróloga de interesse e uma polimerase específica para replicação do replicon viral, dessa maneira expressando a seqüência heteróloga de interesse no animal.

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10/223 [0023] Outras características e vantagens da presente invenção se tornarão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0024] A seguinte Descrição Detalhada, dada como forma de exemplo, mas não pretendida para limitar a invenção às modalidades específicas descritas, pode ser compreendida em conjunto com os desenhos que a acompanham, incorporados aqui por referência. Várias características e modalidades preferidas da presente invenção serão agora descritas como exemplos não-limitantes e com referência aos desenhos que as acompanham nos quais:

[0025] Figura 1 mostra uma ilustração esquemática do vírus quimérico ALVAC-SFV.

[0026] Figura 2 mostra um diagrama esquemático ilustrando o genoma de ALVAC e o lócus C6.

[0027] Figura 3 mostra uma ilustração do replicon de SFV.

[0028] Figura 4 mostra uma ilustração esquemática da geração da quimera ALVAC-SFV.

[0029] Figuras 5A e 5B mostram o esquema de construção para mutantes de SFV nsP2 Leu713 pela mutação de Leu 713. Figura 5B descreve as SEQ ID NOS: 15-24, respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0030] Figura 6 mostra uma análise de imunoblot da expressão de proteína a partir dos mutantes de replicon de SFV em células BHK-21.

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11/223 [0031] Figura 7 mostra um imunoblot demonstrando a sensibilidade à temperatura do replicon SFV Leu713Ala expressando GFP/Blasticidina.

[0032] Figuras 8A e 8B mostram o esquema de construção de um plasmídeo doador de ALVAC C6 contendo SFVGFP/Bsd Leu713Ala.

[0033] Figura 8C mostra os oligonucleotídeos iniciadores usados para mutar as seqüências T5NT no replicon de SFV. Figura 8C descreve as SEQ ID NOS: 25-33, respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0034] Figura 9 mostra uma ilustração esquemática do plasmídeo doador ALVAC C6 (pJY 505.1) contendo a mutação SFV-GFP/Bsd Leu713Ala.

[0035] Figura 10A até I mostra a seqüência de nucleotídeos e a tradução de SEQ ID NOS: 6 e 7, respectivamente, em ordem de aparecimento do inserto C6 SFVGFP/Bsd Leu713Ala de pJY 505.1. Essa seqüência de nucleotídeos também é fornecida como SEQ ID NO: 1.

[0036] Figura 11 mostra uma ilustração da geração de uma quimera de ALVAC-SFV usando um plasmídeo doador C6 contendo a mutação SFV-GFP/Bsd Leu713Ala.

[0037] Figura 12 mostra um ensaio de imuno-placa da quimera ALVAC- GFP/Bsd Leu713Ala usando anticorpo anti-GFP.

[0038] Figura 13 mostra uma análise por imunoblot da expressão de proteína da quimera ALVAC- GFP/Bsd Leu713Ala em 37°C e 38°C.

[0039] Figura 14A até D mostra o esquema de construção para um plasmídeo doador ALVAC-SFV Leu713Ala C6 contendo um sítio de clonagem múltipla no painel A enquanto

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12/223 que a Figura 14B mostra a construção de um plasmídeo doador ALVAC-SFV Leu713Ala C6 contendo dois promotores 26S.

[0040] Figura 15 mostra os oligonucleotídeos iniciadores das SEQ ID NOS: 34-36, respectivamente, em ordem de aparecimento para a construção de um plasmídeo doador ALVAC-SFV Leu713Ala C6 contendo um sítio de clonagem múltipla e/ou dois promotores 26S.

[0041] Figura 16 mostra uma ilustração do plasmídeo doador de ALVAC-SFV Leu713Ala C6 contendo um sítio de clonagem múltipla, pJY C6 SFV L713A 1.

[0042] Figura 17A até H mostra a seqüência de nucleotídeos e a tradução (SEQ ID NO: 8) de pJY C6 SFV L713A 1 de 17A até 17H. A seta indica o ponto de inserção da seqüência do 2^a promotor 26S para produzir o plasmídeo pJYC6SFVL713A2, enquanto que a seqüência do 1a promotor 26S está sublinhada. Essa seqüência de nucleotídeos também é fornecida como SEQ ID NO: 2.

[0043] Figura 18 mostra uma ilustração do plasmídeo doador ALVAC-SFV Leu713Ala C6 contendo dois promotores 26S, pJY C6 SFV L713A 2.

[0044] Figuras 19 A e 19 B mostram o esquema de construção para um plasmídeo doador ALVAC C6 contendo SFVLeu713Ala/FIV gag-pro. A Figura 19 C mostra os oligonucleotídeos iniciadores usados para a construção. Figura 19 C descreve as SEQ ID NOS: 37-39, 60, 40-41, respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0045] Figura 20 mostra uma ilustração esquemática do plasmídeo doador ALVAC C6 (pJY654.1) contendo SFV Leu713Ala/FIV gag-pro.

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13/223 [0046] Figura 21 mostra uma ilustração da geração de uma quimera ALVAC-SFV Leu713Ala expressando FIV gag-pro.

[0047] Figuras 22A e 22B mostram o esquema de construção para o mutante SFV nsP2 Arg650Asp.

[0048] Figuras 22C e 22D mostram o esquema de construção para o mutante SFV nsP2 Ser259Pro.

[0049] Figura 22E mostra os oligonucleotídeos iniciadores usados para a construção. Figura 22 E descreve as SEQ ID NOS: 43, 42, 44, 46 e 45 respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0050] Figura 23 mostra uma análise de imunoblot da expressão da proteína de mutantes SFV Arg650Asp e Ser259Pro em células BHK-21.

[0051] Figuras 24A até 24C mostram o esquema de construção para um plasmídeo doador ALVAC C6 contendo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro ou SFV Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle do promotor H6.

[0052] Figura 24 D mostra os oligonucleotídeos iniciadores usados para a construção. Figura 24 D descreve as SEQ ID NOS: 48 e 49 respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0053]	Figura	25A e	25B mostram	o	esquema	de
construção para um plasmídeo	doador ALVAC	C6	contendo	SFV
Arg650Asp/FIV	gag-pro	sob o	controle de	um	promotor	H6

mutante. Figura 25C mostra os oligonucleotídeos iniciadores usados para a construção. Figura 25C descreve as SEQ ID NOS: 50 e 53 respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0054] Figuras 26A e 26B mostram o esquema de construção para o plasmídeo doador ALVAC C6 contendo SFV

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Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutado.

[0055] Figura 27 mostra uma ilustração esquemática do plasmídeo doador ALVAC C6 (pJY1099.1) contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro.

[0056] Figura 28A até 28J mostra a seqüência de nucleotídeos SEQ ID NO: 4 e de tradução SEQ ID NOS: 9-11, respectivamente em ordem de aparecimento do plasmídeo doador ALVAC C6 contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutante de pJY1099.1.

[0057] Figura 29 mostra uma ilustração da geração de uma quimera ALVAC- SFV Arg650Asp + Ser259Pro expressando FIV gag-pro.

[0058] Figura 30 mostra o esquema de construção de um plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutado.

[0059] Figura 31 mostra uma ilustração esquemática de um plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutante.

[0060] Figuras 32A até 32K mostram a seqüência de nucleotídeos SEQ ID NO: 5 e de tradução SEQ ID NOS: 12-14, respectivamente, em ordem de aparecimento no plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutante a partir de pJY1302.4.

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15/223 [0061] Figura 33 mostra uma ilustração da geração de uma quimera vírus de aves domésticas-SFV Arg650Asp + Ser259Pro expressando FIV gag-pro.

[0062] Figura 34A mostra uma análise imunoblot da expressão da proteína FIV gag-pro em células mioblásticas C2C12 de murino.

[0063] Figura 34B mostra uma análise imunoblot de um meio de cultura celular, detectando a secreção da proteína

FIV gag processada	a	partir	de	células	mioblásticas
infectadas C2C12 de murino.
[0064] Figura	35	mostra	uma	análise	imunoblot	da
expressão da proteína	FIV	gag-pro	em	células	CRFK de rim	de

felino.

[0065] Figura 36 representa a expressão da proteína FIV gag-pro de quimeras em várias células de mamíferos.

[0066] SEQ ID NO:1 é a seqüência de nucleotídeo e tradução do inserto C6 SFV-GFP/Bsd Leu713Ala de pJY505.1. Essa seqüência também é fornecida na Figura 10A até I.

[0067] SEQ ID NO: 2 é a seqüência de nucleotídeos de pJY C6 SFV L713A 1 de 17A até 17H. A seta indica o ponto de inserção da seqüência do 2^a promotor 26S para produzir o plasmídeo pJYC6SFVL713A2, enquanto que a seqüência do 1° promotor 26S está sublinhada. Essa seqüência é fornecida nas Figuras 17A até 17H.

[0068] SEQ ID NO: 3 é a seqüência de nucleotídeo do promotor subgenômica 26S do alfavírus.

[0069] SEQ ID NO: 61 é a sequência do promotor poxviral H6 mutado.

DESCRIÇÃO DETALHADA

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16/223 [0070] Nessa descrição, compreende, compreendendo, contendo e tendo e semelhantes podem ter o significado atribuído a eles na lei de Patente U.S. e podem significar inclui, incluindo e similares; que consiste essencialmente em ou consiste essencialmente da mesma maneira tem o significado atribuído na lei de Patente U.S e o termo não tem restrição, permitindo a presença de mais do que aquilo que é citado desde que as características novas ou básicas daquilo que é citado não sejam alteradas pela presença de mais do que aquilo que foi citado, mas exclua as modalidades da técnica anterior.

[0071] Como usado aqui, o termo operavelmente ligado significa que os componentes descritos estão em um relacionamento que permite que eles funcionem da maneira pretendida.

[0072] Um antígeno é uma substância que é reconhecida pelo sistema imune e induz uma resposta imune. Um termo similar usado nesse contexto é imunógeno.

[0073] Essa invenção, em modalidades limitadas, descreve a geração e o uso de uma quimera de ALVAC-SFV ou de uma quimera de vírus de aves domésticas-SFV, em que um replicon de cDNA de SFV é integrado ao genoma de canaripox, ALVAC, vírus de aves domésticas ou TROVAC sob o controle de um promotor precoce H6 poxviral. Esse promotor H6 direciona a transcrição do replicon de RNA de SFV, tal que o replicon de RNA de SFV transcrito é capaz de se auto-replicar e expressar uma seqüência heteróloga, que é direcionada pelo promotor sub-genômico 26S de SFV. Uma ilustração esquemática de um vírus quimérico ALVAC-SFV é mostrada na Figura 1.

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Entretanto, a invenção não está limitada às modalidades acima.

[0074] O vírus usado de acordo com a presente invenção é vantajosamente um poxvírus, tal como o vírus da vacínia, Vacínia Ankara Modificado (MVA) e NYVAC, particularmente um vírus avipox, tal como o vírus de aves domésticas ou vírus canaripox. O vírus da vacínia tem sido usado com sucesso para imunizar contra a varíola, culminando na erradicação mundial da varíola em 1980. Com a erradicação da varíola, um novo papel para os poxvírus tornou-se importante, que é de um vetor geneticamente manipulado para expressão de genes exógenos (Panicali e Paoletti, 1982; Paoletti et al., 1984). Genes que codificam antígenos heterólogos foram expressos em vacínia, freqüentemente resultando em imunidade protetora contra estímulo com o patógeno correspondente (revisado em Tartaglia et al., 1990). Uma cepa altamente atenuada de vacinas, designadas como MVA, também foi usada como um vetor para vacinas a base de poxvírus. O uso de MVA está descrito na Patente U.S. N° 5.185.146.

[0075] Outros vetores de poxvírus atenuados foram preparados por modificações genéticas de cepas selvagens do vírus. O vetor NYVAC, derivado por deleção de genes hospedeiros e de virulência específicos da cepa Copenhagen de vacínia (Tartaglia et al., 1992) provou se útil como um vetor recombinante fazendo surgir uma resposta imune contra um antígeno exógeno expresso.

[0076] TROVAC refere-se a um vírus de aves domésticas atenuado que era um isolado clonado em placa derivado da

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18/223 cepa de vacina FP-1 de fowlpoxvirus que é licenciado para vacinação de pintos de 1 dia de idade. ALVAC é um vetor a base de vírus canaripox atenuado que era um derivado plaquecloned da vacina licenciada de canaripox, Kanapox (Tartaglia et al., 1992). Vírus recombinantes a base de ALVAC que expressam imunógenos extrínsecos também foram demonstrados eficazes como vetores de vacina (Tartaglia et al., 1993 a,b). Esse vetor de avipox está restrito a espécies de aves para replicação produtiva. Em culturas celulares humanas, a replicação do vírus canaripox é abortada precocemente no ciclo de replicação viral antes da síntese de DNA viral. Apesar disso, quando manipulado para expressar imunógenos extrínsecos, a expressão autêntica e o processamento são observados em células de mamíferos in vitro e a inoculação em várias espécies de mamíferos induz as respostas imunes de anticorpos e celular ao imunógeno extrínseco e fornece proteção contra estímulo com o patógeno cognato (Taylor et al., 1992; Taylor et al., 1991).

[0077] ALVAC e TROVAC também foram reconhecidos como únicos entre os vírus avipox aos quais o National Institutes of Health (NIH; U.S. Public Health Service), Recombinant DNA Advisory Committee, que emite regras para a contenção física de material genético tais como vírus e vetores, isto é, regras para procedimentos de segurança para uso de tais vírus e vetores, que são baseados na patogenicidade do vírus ou vetor em particular, conferiu uma redução no nível de contenção física: de BSL2 para BSL1. Nenhum outro vírus avipox tem o nível de contenção física BSL1. Até a cepa Copenhagen de vírus de vacínia - a vacina antivaríola comum

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- tem um nível de contenção física mais elevado; ou seja, BSL2. Conseqüentemente, a técnica reconheceu que ALVAC e TROVAC têm uma patogenicidade menor do que outros vírus avipox.

[0078] Vantajosamente, o vetor de poxvírus é um ALVAC ou vírus canaripox (cepa de vacina Rentschler), que foi atenuado através de 200 ou mais passagens seriadas em fibroblastos de embrião de pinto, após o que uma semente-mãe desse foi submetida a quatro purificações sucessivas em placas com Ágar, da qual um clone foi amplificado através de cinco passagens adicionais. O vetor de vírus avipox também pode ser um vírus vírus de aves domésticas, ou um vírus vírus de aves domésticas atenuado tal como TROVAC.

[0079] Tres sítios de inserção e os plasmídeos doadores de inserção correspondentes foram desenvolvidos como descrito na Patente U.S. N° 5.756.103 para ALVAC, designados como C3, C5 e C6. Uma ilustração do genoma de ALVAC e do lócus C6 é mostrada na Figura 2. Regiões não essenciais foram definidas na técnica (Jonhson et al., (1993) Virology 196: 381-401) para o vírus da vacínia. Esses sítios, também referidos aqui como “loci de inserção”, são descritos na Patente U.S. N°s 6.340.462 e 5.756.103 para ALVAC, os conteúdos das quais estão incorporados aqui por referência, e incluem, mas não são limitados a timidina quinase (TK), hemaglutinina (HA), M2L, C6 e outros loci. Em uma modalidade preferida, o lócus de inserção é C6. Em outra modalidade onde o vírus de aves domésticas ou TROVAC é usado, o lócus de inserção é F8.

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20/223 [0080] Inserção de seqüências de ácido nucléico que codificam seqüências heterólogas pode ser facilitada por recombinação homóloga, em que o replicon de RNA viral expressando a seqüência heteróloga de interesse é flanqueado pelas seqüências correspondentes às fases abertas de leitura virais de poxvírus imediatamente adjacentes ao lócus de inserção (daqui por diante referidas como “seqüências flanqueadoras” ou seqüências de inserção”. A recombinação homóloga é facilitada pelo reconhecimento de seqüências flanqueadoras homólogas, que promove a integração do replicon viral no lócus de inserção de interesse. Como forma de exemplo, a inserção de seqüências heterólogas no lócus C6 requer a presença de seqüências C6L e C6R em cada lado da seqüência de ácido nucléico que codifica a seqüência heteróloga de interesse expressa a partir de um replicon viral no vetor viral. Assim, vantajosamente o loci de inserção é C6 e as seqüências flanqueadoras compreendem C6L e C6R. Quando o lócus de inserção F8 é usado, as seqüências flanqueadoras compreendem F8L e F8R.

[0081] Os vetores virais recombinantes da invenção expressando seqüências heterólogas expressas a partir de replicon de RNA viral podem ser replicados ou produzidos em células ou linhagens celulares, ou in vivo em um hospedeiro ou indivíduo. Uma modalidade alternativa consiste em replicar o vetor em células permissivas para replicação do vetor.

[0082] Deve ser observado que certos poxvírus, tais como MVA, NYVAC e avipox podem se replicar produtivamente apenas em ou sendo passados através de espécies de aves ou

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21/223 linhagens celulares de aves tais como, por exemplo, fibroblastos embrionários de galinha. Os poxvírus recombinantes coletados a partir de células hospedeiras de aves, quando inoculados em um vertebrado não-ave, tal como um mamífero, de uma maneira análoga à inoculação de mamíferos por vírus de vacínia, produzem uma lesão de inoculação sem replicação produtiva do vírus avipox. Apesar da falha de certos poxvírus, tais como MVA, NYVAC e avipox, de se replicarem produtivamente em tal vertebrado não-ave inoculado, expressão suficiente do vírus ocorre tal que o animal inoculado responde imunologicamente aos determinantes antigênicos do poxvírus recombinante e também aos determinantes antigênicos codificados nesses genes exógenos. Assim, em uma modalidade, quando certos poxvírus ou vetores virais (como descrito acima) são usados, fibroblastos embrionários de galinha são preferidos como células permissivas para replicação do vetor viral.

[0083] Os vetores virais recombinantes e vírus recombinantes podem conter promotores que são operavelmente ligados aos replicons de RNA viral da presente invenção. O promotor é vantajosamente de origem poxviral, que podem ser, em particular, o promotor 7.5K do vírus da vacínia, promotor poxviral 13L, promotor poxviral 42K, promotor poxviral H6, promotor poxviral de timidina quinase, promotor poxviral E3L, promotor poxviral K3L ou um promotor poxviral sintético. O promotor pode ser vantajosamente um promotor precoce. Um promotor precoce é conhecido na técnica e é definido como um promotor que direciona a expressão de um gene que é rapidamente e transitoriamente expresso na ausência de

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22/223 síntese protéica de novo. O promotor também pode ser um promotor forte ou fraco. Os termos “promotor forte” e promotor fraco são conhecidos na técnica e podem ser definidos pela freqüência relativa de iniciação da transcrição (vezes por minuto) no promotor. Um promotor forte ou fraco também pode ser definido por sua afinidade para RNA polimerase poxviral.

[0084] A invenção também fornece promotores poxvirais que são mutados. Sem ser limitado pela teoria, acredita-se que altos níveis de expressão de seqüências heterólogas potencialmente tóxicas expressas a partir de replicons de RNA viral, tais como replicons alfavirais, podem impedir a formação de recombinantes poxvirais estáveis. Portanto, a presente invenção também abrange o uso de um promotor poxviral mutado, tal como, por exemplo, um promotor H6 mutado, tal que os níveis de expressão das seqüências heterólogas expressas a partir de replicons de RNA viral estão diminuídos em comparação com os níveis de expressão das seqüências heterólogas sob um promotor selvagem. O promotor H6 mutado da presente invenção pode ser considerado um promotor fraco.

[0085] Os promotores mutados podem conter mutações pontuais. A invenção também pode empregar outros promotores além de H6, que contém mutações pontuais que reduzem sua freqüência de iniciação da transcrição em comparação com o promotor tipo selvagem. Em adição, outros tipos de promotores mutados são adequados para uso na presente invenção. Por exemplo, o pedido U.S. no 10/679.520, incorporado aqui por referência, descreve uma forma truncada do promotor H6 (veja

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23/223 também Davison, A. et al(1989) J. Mol. Biol. 210: 749769; Taylor J. et al., Vaccine, 1988, 6, 504-508; Guo P. et al, J. Virol., 1989, 63, 4189-4198; Perkus M. et al., J. Virol., 1989, 63, 3829-3836).

[0086] Os vetores de poxvirus ou vírus da presente invenção podem compreender adicionalmente seqüências adicionais para controlar a transcrição e a tradução das seqüências heterólogas expressas a partir de replicons de RNA viral. Por exemplo, tais seqüências podem compreender um sinal de reconhecimento de terminação T5NT, que pode ser reconhecido pela RNA polimerase poxviral para a finalização da transcrição precoce de RNA.

[0087] A presente invenção também refere-se a um método de produção de um vetor de poxvírus recombinante compreendendo seqüências heterólogas expressas a partir de replicons de RNA viral, compreendendo as etapas de linearizar um plasmídeo doador com uma endonuclease de restrição, em que o plasmídeo doador compreende sítios de clivagem de endonuclease de restrição ou um sítio de clonagem múltipla, e ligar pelo menos uma seqüência de ácido nucléico compreendendo (i) uma seqüência de ácido nucléico codificando um replicon de RNA viral expressando uma ou mais seqüências heterólogas de interesse, (ii) uma seqüência promotora viral e (iii) seqüências de inserção flanquando (i) e (ii) que tem sítios de clivagem de endonuclease de restrição complementares ao plasmídeo doador nas seqüências do replicon de RNA viral, dessa maneira produzindo o vetor recombinante de poxvírus. Vantajosamente, o método compreende adicionalmente as etapas de introduzir o vetor em

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24/223 uma célula permissiva para a replicação do vetor e isolar o vetor a partir da célula.

[0088] Por definição, um vetor de expressão de plasmídeo doador (ou plasmídeo doador) inclui uma unidade de transcrição de DNA compreendendo uma seqüência de polinucleotídeo contendo o cDNA a ser expresso e os elementos necessários para sua expressão in vivo. A forma circular, super-espiralada ou não-espiralada do plasmídeo é preferida. A forma linear também está dentro do escopo dessa invenção.

[0089] Métodos para produzir e/ou usar vetores (ou recombinantes) para expressão e usos de produtos de expressão e produtos desses (tais como anticorpos) podem ser por ou análogos aos métodos descritos em documentos citados aqui e documentos referenciados ou citados nos documentos aqui citados. Veja, por exemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning (1999). A invenção também inclui o uso de vetores de poxvírus que expressam seqüências heterólogas expressas a partir de replicons de RNA viral no ambiente de pesquisa. Os vetores de poxvírus recombinantes e poxvírus recombinantes podem ser usados para transfectar ou infectar células ou linhagens celulares de interesse para estudar,por exemplo, respostas celulares a produtos de genes expressos a partir das seqüências heterólogas de interesse ou vias de transdução de sinal mediadas por proteínas codificadas pelas seqüências heterólogas de interesse.

[0090] No ambiente de pesquisa, freqüentemente é vantajoso projetar vetores ou vírus recombinantes que compreendam genes repórter que podem ser facilmente detectados por ensaios e técnicas laboratoriais. Genes

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25/223 repórter são bem-conhecidos na técnica e podem compreender genes de resistência a antibióticos tais como, mas nãolimitados a, ampicilina, neomicina, zeocina, canamicina, bleomicina, higromicina, cloranfenicol, entre outros. Genes repórter também podem compreender a proteína verde fluorescente, o gene lacZ (que codifica a β-galactosidase), luciferase e β-glicuronidase.

[0091] Alfavírus são membros da família Togaviridae e são bem-conhecidos na técnica. Os virions são pequenas partículas envelopadas de RNA de filamento positivo de 6065 nm. O RNA genômico (RNA 49S) dos alfavírus tem aproximadamente 11-12 kb de extensão e contém uma cap 5' e uma cauda 3' poliadenilada. Agrupar proteínas de nucleocapsídio virais em RNA genômico no citoplasma produz vírus infecciosos envelopados. Envelopamento ocorre através da membrana da célula hospedeira, que tem glicoproteínas virais codificadas inseridas dentro dela. Durante a replicação viral, o RNA 49S genômico serve como um molde para a síntese de um filamento complementar negativa. A fita negativa por sua vez serve como molde para o RNA genômico de extensão completa e para um RNA 26S sub-genômico de fita positiva, internamente iniciado. As proteínas não estruturais são traduzidas a partir do RNA genômico. As proteínas alfavirais estruturais são traduzidas a partir do RNA 26S sub-genômico. Todas as proteínas virais são sintetizadas primeiro como poli-proteínas e processadas em proteínas individuais por clivagem proteolítica póstraducional.

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26/223 [0092] Os termos replicon viral” ou replicou de RNA”, como usados no contexto da presente invenção, são usados intercambiavelmente para se referir a RNA ou DNA compreendendo porções do RNA genômico viral 49S que são essenciais para a transcrição e para a amplificação citoplasmática do RNA transportado e para expressão do RNA subgenômico de uma seqüência de ácido nucléico heteróloga. Assim, o replicon codifica e expressa proteínas virais nãoestruturais necessárias para a amplificação citoplasmática do RNA do vírus e expressão do RNA subgenômico 2 6S. Vantajosamente, o replicon viral não é encapsulado para produzir partículas virais ou virions. Isso pode ser alcançado por replicons que não têm um ou mais dos genes estruturais virais e vantajosamente todos os genes estruturais. Vantajosamente, replicons de RNA viral da invenção são capazes de serem transcritos e processados em moléculas de RNA com extremidades 5' e 3' autênticas semelhantes às virais. Tais replicons e vetores de expressão contendo-os são bem-conhecidos na técnica, tal como nas Patentes U.S. N°s 5.739.026; 5.766.602; 5.789.245; 5.814.482 e 5.843.723. Será evidente para o versado que embora muitas das características desses replicons sejam úteis para a presente invenção, nem todas são essenciais. Contanto que uma porção do replicon viral não interfira com a produção do transcrito de RNA primário, amplificação citoplasmática desse e expressão de seqüências heterólogas, tais porções podem permanecer como parte do replicon. O versado na técnica pode facilmente determinar a natureza e remover quaisquer seqüências desnecessárias ou que estejam interferindo.

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[0093]	Os	replicons	de RNA	viral podem	ser
incorporados	como	DNA ou cDNA	em genomas	virais, tais	como
genomas virais	de poxvírus	usando	técnicas de	DNA

recombinante conhecidas na técnica.

[0094] De acordo com a presente invenção, o replicon de RNA viral compreende seqüências de controle de ácidos nucléicos operavelmente ligadas a uma seqüência de ácido nucléico heteróloga para controlar a expressão desse. Essas seqüências de controle são elementos de seqüência para controlar a transcrição e tradução como necessário. Os elementos de seqüência podem incluir, mas não são limitados a, promotores, intensificadores, sinais de terminação de transcrição e tradução, sítios de início de tradução, seqüências regulatórias pós-transcricionais, e similares. Vantajosamente, o replicon também compreende uma seqüência 3' de ribozima de hepatite δ, que pode auto-clivar o RNA transcrito para produzir o RNA de replicon de viral com um trato poli-A.

[0095] Como usado aqui, o termo heterólogo referese ao relacionamento entre a fonte do replicon viral e o vetor poxviral, e a fonte da seqüência de ácido nucléico heteróloga de interesse. Assim, a seqüência de ácido nucléico heterólogo não-codifica um gene poxviral ou um gene comum ao vírus a partir do qual o replicon de RNA é derivado, mas ao invés disso codifica um gene que tanto é exógeno quanto endógeno para as células hospedeiras infectadas com os vetores de poxvírus abrigando replicons virais da invenção. Como usado aqui, gene ou seqüência de ácido nucléico exógena podem se referir a um gene ou uma seqüência de ácido

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28/223 nucléico que codifica uma proteína ou um fragmento dessa, ou RNA anti-sentido, RNA catalítico ou pequeno RNA de interferência, que é estranho ao animal, célula ou tecido receptores, tal como um antígeno de vacina, um imunomodulador ou um agente terapêutico. Um “gene ou seqüência de ácido nucléico endógena” significa um gene ou seqüência de ácido nucléico que codifica uma proteína ou parte dessa, ou RNA anti-sentido, RNA catalítico ou pequeno RNA de interferência, que está naturalmente presente no animal, célula ou tecido receptores.

[0096] A seqüência heteróloga de interesse pode ser construída a partir de seqüências de genes de ocorrência natural ou podem ser construídas a partir de seqüências de genes sinteticamente construídas.

[0097] O uso de replicons virais diferentes do Vírus Semliki Forest também está abrangido pela presente invenção. Será óbvio para aquele versado na técnica que quaisquer vírus no gênero alfavírus da família Togarividae podem ser adequados como a fonte para contrução de replicon. Representantes incluem, mas não são limitados a, vírus Sindbis, vírus Aura, vírus da Encefalite Eqüina Venezuelana (VEE), vírus da Encefalite Eqüina Ocidental (WEE), vírus da Encefalite Eqüina Oriental (EEE), vírus Ross River, vírus Mayaro, vírus Chikungunya, vírus Getah, vírus Sagyama, vírus Mucambo, vírus Pixuna, vírus Middelburg, vírus O'nyongNyong, vírus Barmah Forest, vírus Beberu, vírus Una, vírus Whataroa, vírus Babanki, vírus Kyzylagach, vírus Highlands J, vírus Fort Morgan e vírus Ndumu. O replicon de RNA viral também pode ser derivado de um vírus selecionado a partir do

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29/223 grupo que consiste em um vírus de RNA de filamento simples sentido positivo, tais como poliovírus, rinovírus, vírus coxsackie, vírus da febre amarela, vírus da hepatite C (HCV), vírus da gastroenterite transmissível (TGEV), vírus da bronquite infecciosa (IBV), vírus da hepatite de murino (MHV), coronavírus bovino (BCV), astrovírus ou um grupo que consiste em tobamovírus, potivírus e bromovírus.

[0098] Para gerar uma quimera de poxvírus-vírus de RNA, é freqüentemente necessário permitir a recombinação entre o genoma poxviral e o plasmídeo doador contendo o replicon de RNA para ocorrer e para isolar a quimera pelo rastreamento de placas virais recombinantes. Entretanto, a replicação alfaviral, por exemplo, é muito mais rápida do que a maioria dos poxvírus, tais como vacínia, MVA, NYVAC, ALVAC, canaripox, TROVAC ou vírus de aves domésticas, e pode ser lítica para as células hospedeiras. Replicação de vírus de RNA pode afetar a replicação poxviral e portanto inibir a geração recombinante. Tentativas anteriores de isolar quimeras de poxvírus-SFV foram malsucedidas e podem ser atribuídas ao efeito citopático do replicon de alfavírus. Para evitar a citotoxicidade da replicação do vírus de RNA, é particularmente vantojoso gerar um replicon de RNA viral mutante com citotoxicidade reduzida ou gerar replicons de RNA viral condicionalmente mutantes, com, por exemplo, sensibilidade à temperatura. O replicon de RNA viral mutante seria incapaz de se replicar durante a fase de geração recombinante em uma temperatura não permissiva, mas seria capaz de desencadear a replicação sob condições permissivas. Uma ilustração da geração de uma quimera de ALVAC-SFV usando

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30/223 um replicon de SFV sensível à temperatura é mostrada na Figura 4.

[0099] A expressão de seqüências heterólogas de interesse a partir de replicons de RNA viral e autoreplicação do replicon requerem a presença de uma polimerase de vírus RNA. Essa polimerase pode estar contida no mesmo replicon de RNA viral que a(s) seqüência(s) heteróloga(s) de interesse, ou fornecida(s) separadamente in situ em um plasmídeo doador separado. Por exemplo, a replicase de RNA alfaviral é codificada pelos genes alfavirais nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4, que interagem com fatores do hospedeiro para iniciar a replicação alfaviral e a transcrição do RNA subgenômico 26S. Mutações nessas proteínas ns podem afetar a replicação do replicon alfaviral, assim tornando as proteínas ns alvos atrativos para geração de replicons mutantes condicionais, tais como mutantes sensíveis à temperatura. Outras polimerases de vírus de RNA podem ser usadas no contexto da presente invenção, quando replicons virais de RNA diferentes dos alfavírus são usados. O versado na técnica pode escolher qual polimerase é adequada para o replicon de vírus de RNA desejado em particular, sem experimentação excessiva.

[0100] No contexto de SFV, os presentes inventores demonstraram que a mutação de leucina (daqui em diante Leu) 713 na proteína nsP2 para alanina (Ala), treonina (Thr), arginina (Arg), glutamina (Gln) ou fenilalanina (Phe), pode gerar replicons de SFV mutantes condicionais (veja Exemplo 1). Foi relatado que mutação da Leu713 na proteína nsP2 para prolina afeta a replicação de SFV (Perri, S. et al (2000) J.

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Virol. 74(20):9802-7). Diversas mutações sensíveis à temperatura exibindo síntese de DNA reduzida foram descritas para o vírus Sindbis (Boorsma, M. et al. (2000) Nat. Biotechnol. 18: 429-432) e todas foram mapeadas ao gene nsP4. Sistemas de expressão de DNA a base de replicons sensíveis à temperatura mapeados ao gene nsP4 também foram descritos (Hahn, Y. et al. (1989) J. Virol. 63:1194-1202) no vírus Sindbis. Nesse sistema, a replicase é ativa em temperatura menor do que 35°C e inativa em 37°C. Dos mutantes de SFV descritos na presente invenção, um replicon mutante contendo a mutação de Leu713 para Ala (SFV Leu713Ala) foi identificado como sendo menos citopático para as células e sensível à temperatura. O replicon SFV Leu713Ala mostrou um nível reduzido de citotoxicidade em 37°C e não pode replicar em 40°C. Entretanto, ele ainda expressa o gene marcador GFP/Blasticidina em 37°C, que é uma temperatura fisiologicamente relevante para o desenvolvimento de vacinas para mamíferos ou aves. A inabilidade do replicon mutante SFV Leu713Ala de replicar em 40°C permite a geração da quimera ALVAC-SFV em 40°C. Portanto, uma modalidade preferida da presente invenção descreve um replicon mutante alfaviral compreendendo um mutante sensível à temperatura da proteína nsP2 alfaviral. Vantajosamente, a mutação é na leucina 713 da proteína nsP2 alfaviral.

[0101] Além do mutante SFV Leu713Ala, outros mutantes de nsP2 de SFV também podem ser usados para a geração de quimera da presente invenção. Exemplo 7 descreve a construção de mutantes de nsP2 de SFV adicionais com citotoxicidade reduzida. Um mutante é a base de uma cepa

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32/223 atenuada de SFV (Rikkonen, M. (1996) Virology 218: 352-361) que tem uma mutação pontual que troca Arg650 para Asp no sinal de transporte nuclear na proteína nsP2. Outro mutante de nsP2 é derivado de uma única mutação de Ser 259 para Pro na proteína nsP2, que também foi relatada tornando o replicon de SFV menos citopático (Lundstrom, K. et al. (1999) Gene Ther. Mol. Biol. 4: 23-31). Exemplo 10 descreve plasmídeos doadores ALVAC C6 contendo um mutante duplo de SFV Arg650Asp+Ser359Pro.

[0102] Na presente invenção, as seqüências heterólogas também podem compreender um antígeno, um fragmento antigênico de uma proteína, um agente terapêutico, uma citocina, uma toxina, um imunomodulador, um RNA antisentido, um RNA catalítico, um pequeno RNA de interferência, uma proteína, um peptídeo, um anticorpo, um fragmento de ligação de antígeno de um anticorpo, um adjuvante ou qualquer outra molécula codificável por DNA e desejada para liberação para um animal ou célula ou tecido de animal.

[0103] A seqüência heteróloga pode ser a seqüência que codifica uma proteína expressa em patógenos tais como HIV, HCV, HBV, HPV, EBV, HSV, CMV, HTLV, vírus Hanta, vírus Ebola, vírus Lassa e vírus influenza entre outros. Esses constructos podem ser usados vantajosamente como vacinas para proteger humanos contra doença causada por esses vírus. As seqüências heterólogas selecionadas também podem ser antígenos de câncer tais como, mas não-limitados a, antígeno prostático específico, CEA, KSA, p53, gp 100, Mart-1, Mage 1/2, NY-ESO-1, BF-44 e outros.

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33/223 [0104] As seqüências heterólogas também podem ser os genes HN e F do Vírus da Doença de Newcastle, a poliproteína e genes VP2 do Vírus da Doença infecciosa da Bursa, os genes S e N do Vírus da Bronquite Infecciosa e os genes gB e gD do Vírus da Doença de Mareks. Esses construtos podem ser usados como vacinas para proteger aves domésticas contra doença causada por esses vírus.

[0105] As seqüências heterólogas também podem ser selecionadas a partir dos genes gB, gC , gD e ImmediateEarly de Herpesvírus Bovino tipo 1, os genes F e G de BRSV, a poliproteína, genes E1 e E2 de BVDV, os genes HN e F do vírus P13 ou genes de Rotavírus. Esses construtos podem ser úteis como vacinas para proteger o gado contra doença causada por esses vírus.

[0106] As seqüências heterólogas também podem incluir os genes gB, gC, gD e Immedaite-Early de PRV, os genes HA, NA, M e NP do vírus da influenza Suína, a poliproteína, E1 e E2 do vírus Hog Cholera, os genes ORF1 e ORF2 do vírus PCV2, ORF3, ORF4, ORF5, ORF6 ou ORF7 do vírus de PRRSV ou genes de Mycoplasma hyopneumoniae. Esses construtos podem ser úteis como vacinas para proteger porcos contra doença causada por esses vírus.

[0107] As seqüências heterólogas também podem incluir os genes gB, gC, gD e Immediate-Early de herpesvírus Eqüino tipo 1, os genes gB, gC, gD e Immediate-Early de herpesvírus Eqüino tipo 4, os genes HA, NA, M e NP do vírus da influenza Eqüina, genes do vírus da Encefalite Equina Oriental, genes do vírus da Encefalite Eqüina Ocidental, genes do vírus da Encefalite Eqüina Venezuelana, os genes

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34/223 prM--M-E do vírus do Oeste do Nilo e genes do vírus da arterite Eqüina, mas não-limitadas a essas seqüências. Esses construtos podem ser úteis como vacinas para proteger cavalos contra doença causada por esses vírus.

[0108] As seqüências heterólogas também podem incluir os genes HA, F, NP do Vírus da Cinomose Canina, o gene do capsídio do Parvovírus Canino, os genes Spike, M e N do coronavírus Canino, os genes HN e F da parainfluenza 2 canina, genes de leptospira, e os genes gB, gC e gD do herpesvírus canino, entre outros. Esses construtos podem ser úteis como vacinas para proteger cães contra doença causada por esses vírus.

[0109] As seqüências heterólogas também podem incluir os genes gB, gC e gD do herpesvírus felino, os genes env e gag/pro de FelV, os genes env, gag/pol e tat do vírus FIV, o gene do capsídio do calicivírus Felino, o gene S modificado, o gene M e N do Vírus da Peritonite Infecciosa Felina, e o gene VP2 do parvovírus Felino. Esses construtos podem ser úteis como vacinas para proteger gatos contra doença causada por esses vírus.

[0110] As seqüências heterólogas também podem ser selecionadas a partir de antígenos bacterianos, por exemplo, a partir de qualquer uma das seguintes bactérias patogênicas: Bordetella pertussis, Bordetella bronchiseptica, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus equi, Chlamydia trachomatis, Chlamydía pneumoniae, Chlamydía psittaci, Mycobacteríum tuberculosis, Mycobacterium pseudotuberculosis, Streptococcus do Grupo A, Streptococcus agalactíae, Neíssería gonorrhoeae, E. colí Enterotoxigênica,

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Vibrio cholerae, Bacillus anthracis, Heamophilus influenzae, Heamophilus somnus, espécies de Salmonella, espécies de Rickettsia, Helícobacter pylori, Helícobacter felis, espécies de Shigella, espécies de Listeria, Legionella pneumoniae, Pseudomonas, Borrelia burgdorferi, Neisseria meningitides, espécies de Clostridium, entre outros.

[0111] As seqüências heterólogas também podem ser selecionadas a partir de antígenos de parasitas incluindo, mas não-limitados a, espécies de Plasmodium, espécies de Tripanossoma, espécies de Giardia, espécies de Boophilus, espécies de Entamoeba, espécies de Eimeria, espécies de Leishmania, espécies de Esquistossoma, espécies de Brugia, espécies de Fascida, espécies de Dirofilaria, espécies de Wuchereria, e espécies de Onchocerea.

[0112] As seqüências heterólogas podem ser também espécies de RNA anti-sentido, catalítico ou pequeno RNA interferência, que podem ser direcionados contra qualquer molécula presente dentro da célula receptora ou que provavelmente está presente dentro da célula receptora. Esses incluem, mas não se limitam a espécies de RNA que codificam moléculas reguladoras da célula, tais como interleucina-6, oncogenes tais como Ras, agentes causadores de câncer tais como papilomavírus humano, enzimas, RNA viral e RNA derivado de patógenos, tais como RNA de HIV-1. Os RNAs também podem ser direcionados para seqüências de DNA nãotranscritas, tais como regiões promotoras ou intensificadoras, ou em qualquer outra molécula presente nas células receptoras, tais como mas não-limitadas a, enzimas envolvidas na síntese de DNA ou moléculas de tRNA.

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36/223 [0113] Além disso, citocinas e imunomoduladores podem ser co-expressos com os vetores e vírus da presente invenção. Exemplos incluem, mas não são limitados a, IL-2, IL-4, GM-CSF, IL-12, IGF-1, IFN-a, IFN-β e IFN-γ.

[0114] A invenção também refere-se a um método de fazer surgir uma resposta imune contra um antígeno heterólogo de interesse em um indivíduo compreendendo administrar os vetores de poxvírus recombinantes ou poxvírus recombinantes de acordo com a presente invenção ao indivíduo. O indivíduo pode ser um animal, em particular espécies de bovino, ovino, suíno ou caprino. Métodos de administração e doses são definidos aqui.

[0115] Os poxvírus recombinantes expressando antígenos heterólogos de interesse expressos a partir de um replicon de RNA viral ou produto de expressão desse, composições imunológicas, antigênicas ou de vacina ou composições terapêuticas podem ser administradas por uma via parenteral (intradérmica, intramuscular ou subcutânea). Tal administração possibilita uma resposta imune sistêmica ou respostas humoral ou mediada por células.

[0116] Como usado aqui, os termos “composição imunogênica” e “composições imunológicas” e “composição imunogênica ou imunológica” cobrem qualquer composição que faça surgir uma resposta imune contra antígenos alvo de interesse expressos a partir de replicons de RNA viral; por exemplo, após a administração de injeção ao animal, surge uma resposta imune contra o antígeno alvo de interesse. Os termos “composição vacinal” e “vacina” e “composição de vacina” cobrem qualquer composição que induza uma resposta

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37/223 imune protetora contra o(s) antígeno(s) de interesse ou que protegem eficazmente contra o antígeno; por exemplo, após administração ou injeção em um animal, faz surgir uma resposta imune protetora contra o antígeno alvo ou fornece proteção eficaz contra o antígeno expresso a partir de replicons de RNA viral. O termo “composição farmacêutica” significa qualquer composição compreendendo um vetor expressando uma proteína terapêutica como, por exemplo, eritropoietina (EPO).

[0117] Mais comumente, os vetores poxvirais recombinantes inventivos e poxvírus recombinantes expressando antígeno(s) expressos a partir de replicons de RNA viral, composições antigênicas, imunogênicas, imunológicas ou vacinas de vírus poxvírus ou composições terapêuticas, podem ser preparadas de acordo com técnicas padronizadas bem-conhecidas daqueles versados nas artes farmacêutica e veterinária. Tais composições podem ser administradas em dosagens e por técnicas bem-conhecidas daqueles versados nas artes farmacêutica e veterinária levando em consideração tais fatores como idade, sexo, peso, espécie e condição do paciente em particular e a via de administração.

[0118] As composições podem ser administradas sozinhas ou podem ser co-administradas ou administradas seqüêncialmente com composições, por exemplo, com “outras” composições imunológicas, antigênicas ou vacinas ou composições terapêuticas dessa maneira fornecendo composições multivalentes ou “coquetéis” ou composições de combinação da invenção e métodos de empregá-las. Novamente,

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38/223 os ingredientes e a maneira de administração (seqüencial ou co-administração), assim como as dosagens podem ser determinadas levando em consideração tais fatores como idade, sexo, peso, espécie e condição do indivíduo em particular e a via de administração. Com relação a isso, é feita referência a Patente U.S. N° 5.843.456, incorporada aqui por referência e direcionada à composições para raiva e composições de combinação e usos dessas.

[0119] Exemplos de composições da invenção incluem preparações líquidas para orifício ou mucosa, por exemplo, oral, nasal, anal, vaginal, peroral, intragástrica, etc., administração tal como suspensões, soluções, pulverizações, xaropes ou elixires; e, preparações para administração parenteral, subcutânea, intradérmica, intramuscular ou intravenosa (por exemplo, administração injetável) tais como suspensões ou emulsões estéreis. Em tais composições, o vírus poxvírus recombinante ou os vetores recombinantes virais de poxvírus podem estar em mistura com um transportador, diluente ou excipiente adequado tal como água estéril, solução salina fisiológica, glicose ou similares. As composições também podem ser liofilizadas. As composições podem conter substâncias auxiliares, tais como agentes umectantes ou emulsificantes, agentes de tamponamento de pH, adjuvantes, gelificantes ou aditivos para aumentar a viscosidade, conservantes, agentes flavorizantes, corantes e semelhantes, dependendo da via de administração e da preparação desejadas. Textos clássicos, tais como REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE”, 17^a edição, 1985, incorporados aqui por referência, podem ser consultados para

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39/223 preparar preparações adequadas, sem experimentação excessiva.

[0120] As composições em formas para várias vias de administração estão previstas pela invenção. E novamente, a dosagem eficaz e a via de administração são determinadas por fatores conhecidos, tais como idade, sexo, peso, condição e natureza do animal, assim como LD5₀ e outros procedimentos de rastreamento que são bem-conhecidos e não requerem experimentação excessiva. Dosagens de cada agente ativo podem ser como nos documentos aqui citados (ou documentos referidos ou citados nos documentos aqui citados) e/ou podem variar entre um ou poucos a algumas centenas ou milhares de microgramas, por exemplo, 1μ a 1 mg, para uma composição imunogênica, imunológica ou vacina; e 10³ a 10¹⁰ TCID50 vantajosamente 10⁶ a 10⁸ TCID50 para uma composição imunogênica, imunológica, farmacêutica ou vacina.

[0121] Recombinantes ou vetores podem ser administrados em uma quantidade adequada para se obter expressão in vivo correspondente às dosagens aqui descritas e/ou nos documentos aqui citados. Por exemplo, faixas adequadas para suspensões virais podem ser determinadas empiricamente. O vetor ou recombinante viral da invenção pode ser administrado a um animal ou infectado ou transfectado em células em uma quantidade de cerca de pelo menos 10³ pfu; mais vantajosamente cerca de 10⁴ pfu a cerca de 10¹⁰ pfu, por exemplo, cerca de 10⁵ pfu a cerca de 10⁹ pfu, por exemplo cerca de 10⁶ pfu a cerca de 10⁸ pfu, com doses geralmente variando entre cerca de 10⁶ a cerca de 10¹⁰, vantajosamente cerca de 10¹⁰ pfu/dose, e vantajosamente cerca

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40/223 de 10⁸ pfu por dose de 2 ml. E, se mais do que um produto gênico é expresso por mais de um recombinante, cada recombinante pode ser administrado nessas quantidades; ou, cada recombinante pode ser administrado tal que há, em combinação, uma soma de recombinantes compreendendo essas quantidades. Nas composições de vetor ou plasmídeo empregadas na invenção, as dosagens podem ser como descritas nos documentos citados aqui ou como descritas aqui ou como em documentos referidos ou citados em documentos aqui citados. Vantajosamente, a dosagem deve ser uma quantidade suficiente de plasmídeo para fazer surgir uma resposta análoga a composições em que o(s) antígeno(s) expresso(s) a partir de replicons de RNA viral estão diretamente presentes; ou ter expressão análoga às dosagens em tais composições; ou ter expressão análoga à expressão obtida in vivo pelas composições recombinantes. Por exemplo, onde vacinas de DNA são administradas, as quantidades adequadas de cada plasmídeo de DNA nas composições de plasmídeo podem ser de 1pg a 2 mg, vantajosamente 50 pg a 1 mg. Os documentos citados aqui (ou documentos citados ou referidos em documentos aqui citados) com relação a vetores plasmidiais de DNA podem ser consultados pelo versado para determinar outras dosagens adequadas para composições de vetor de plasmídeo de DNA da invenção, sem experimentação excessiva.

[0122] Entretanto, a dosagem da(s) composição(ões), concentração de componentes nela e regulação do tempo de administração da(s) composição(ões), que faz surgir uma resposta imunológica adequada, podem ser determinados por métodos tais como titulações de anticorpo de soro, por

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41/223 exemplo, por ELISA e/ou análise de ensaio de soroneutralização. Tais determinações não requerem experimentação excessiva a partir do conhecimento do versado na técnica, dessa descrição e dos documentos citados aqui. E, o tempo para administrações seqüenciais pode ser determinado da mesma maneira com métodos determináveis a partir dessa descrição e com o conhecimento da técnica, sem experimentação excessiva.

[0123] As composições imunogênicas ou imunológicas contempladas pela invenção também podem conter um adjuvante. Adjuvantes particularmente adequados para uso na prática da presente invenção são (1) polímeros de ácido acrílico ou metacrílico, polímeros derivados de anidrido maléico e de alquenila, (2) seqüências imunoestimulantes (ISS), tais como seqüências de oligodesoxirribonucleotídeo tendo uma ou mais unidades CpG não-metiladas (Klinman D. M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1996, 93, 2879-2883; WO 98/16247), (3) uma emulsão de óleo em água, tal como a emulsão SPT descrita na pag. 147 de Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach” publicado por M. Powell, M. Newman, Plenum Press 1995, e a emulsão MF59 descrita na pág. 183 do mesmo trabalho, (4) lipídios catiônicas contendo um sal de amônio quaternário, (5) citocinas, (6) hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ou (7) outros adjuvantes discutidos em qualquer documento citado e incorporado por referência no presente pedido, ou (8) quaisquer combinações ou misturas desses. As vacinas de DNA ou composições imunogênicas ou imunológicas abrangidas pela invenção podem ser formuladas

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42/223 com um lipossomo, na presença ou ausência de um adjuvante como acima descrito.

[0124] Outros adjuvantes adequados incluem fMLP (Nformil-metionil-leucil-fenilalanina; Pat. U.S. N° 6.017.537) e/ou polímero de ácido acrílico ou ácido metacrílico e/ou um co-polímero de anidrido maléico e de derivado de alquenila. Os polímeros de ácido acrílico ou ácido metacrílico podem ser reticulados, por exemplo, com éteres de polialquenil de açúcares ou de poliálcoois. Esses compostos são conhecidos sob o termo de carbômero (Pharmeuropa, Vol. 8, N° 2, junho de 1996) . Uma pessoa perita na técnica também pode se referir à Patente U.S. N° 2.909.462 (incorporada por referência), que discute tais polímeros de acrílico reticulados com um composto poli-hidroxilado contendo pelo menos 3 grupos de hidroxila: em uma modalidade, um composto poli-hidroxilado não contém mais do que 8 grupos de hidroxila; em outra modalidade, os átomos de hidrogênio de pelo menos 3 hidroxilas são substituídos por radicais alifáticos insaturados contendo pelo menos 2 átomos de carbono; em outras modalidades, os radicais contém de cerca de 2 a cerca de 4 átomos de carbono, vinis, alis e outros grupos etilenicamente insaturados. Os radicais insaturados podem eles mesmos conter outros substituintes, tais como metila. Os produtos vendidos sob o nome Carbopol® (Noveon Inc., Ohio, USA) são particularmente úteis para uso como adjuvante. Eles são reticulados com uma sacarose de alila ou com alilpentaeritritol, em relação aos quais, menção é feita aos produtos Carbopol® 974P, 934P e 971P.

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43/223 [0125] Com relação aos copolímeros de anidirido maléico e de derivado de alquenil, menção é feita aos produtos EMA® (Monsanto), que são copolímeros de anidrido maléico e de etileno, que podem ser lineares ou reticulados, por exemplo reticulados com éter divinílico. Ainda, referência pode ser feita a J. Fields et al., Nature 186: 778-780, 1960 (incorporado por referência).

[0126] Com relação à estrutura, os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico e EMA são vantajosamente formados por unidades básicas que tem a

COOH em que:

- R1 e R2, que podem seguinte fórmula:

4— C—hCH₂l — /x | \ ²/y

COOH ser iguais ou diferentes, representam H ou CH₃

- x = 0 ou 1, vantajosamente x = 1

- y = 1 ou 2, com x + y = 2.

Para EMA, x = 0 e y = 2 e para carbômeros x = y = 1.

[0127] Esses polímeros são solúveis em água ou solução salina fisiológica (NaCl 20 g/l) e o pH pode ser ajustado para 7.3 a 7.4, por exemplo, por soda (NaOH), para fornecer a solução adjuvante na qual o(s) vetor(es) de expressão pode(m) ser incorporado(s). A concentração do polímero na composição final da vacina pode variar entre

0,01 e 1,5%	v/v,	vantajosamente 0,05 a	1% v/v	e
vantajosamente	0,1 a	0,4% v/v.
[0128]	Os lipídios catiônicos contendo	um sal	de
amônio quaternário	que são favoravelmente	mas	não

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44/223 exclusivamente adequados para plasmídeos, são vantajosamente aqueles que tem a seguinte fórmula:

CH₃ l+³

R-O-CH—CH-CH-N—R—X

OR

CH3 [0129] na qual R₁ é um radical alifático de cadeia linear saturado ou insaturado tendo 12 a 18 átomos de carbono, R₂ é outro radical alifático contendo 2 ou 3 átomos de carbono e é uma amina ou grupo hidroxila.

[0130]

Dentre esses lipídios catiônicos, preferência é dada para

DMRIE (N-(2-hidroxietil)-N,N-dimetil-2,3bis(tetradecilóxi)-1-propano amônio;

WO

96/34109), vantajosamente associado a um lipídio neutro, vantajosamente

DOPE (amina de dioleoil-fosfatidil-etanol;

Behr, J. P.,

1994, Bioconjugate Chemistry,

5, 382-389), para formar

DMRIE-DOPE.

[0131]

Vantajosamente, a mistura de plasmídeo, ou mistura de vacina recombinante com o adjuvante é formada extemporaneamente ou contemporaneamente com a administração da preparação ou pouco antes da administração da preparação;

por exemplo, pouco antes ou antes da administração, a mistura de plasmídeo-adjuvante é formada, vantajosamente de modo a dar tempo suficiente antes da administração para a mistura formar um complexo, p.ex entre cerca de 10 a cerca de minutos antes da administração, tal como aproximadamente minutos antes da administração.

[0132]

Quando DOPE está presente, a razão molar de

DMRIE:DOPE é vantajosamente cerca de 95: cerca de 5 a cerca

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45/223 de 5:cerca de 95, mais vantajosamente cerca de 1:cerca de 1,

por	exemplo,	1:1.
	[0133]	A razão de	peso de adjuvante:	plasmídeo	de
DMRIE ou DMRIE-DOPE pode	estar entre cerca	de	50: cerca	de
1 e	cerca de	1: cerca de	10	, tal como cerca	de	10: cerca	de
1 e	cerca de	1:cerca de 5	e	vantajosamente cerca de 1: cerca
de	1 e cerca	de 1: cerca	de	2, por exemplo,	1:	1 e 1:2.
	[0134]	Uma vacina	recombinante	ou	composição

imunogênica ou imunológica pode também ser formulada na forma de uma emulsão óleo-em-água. A emulsão óleo-em-água pode ser baseada, por exemplo, em óleo de parafina líquida leve (tipo European Pharmacopea); óleo de isoprenóide tal como esqualano, esqualeno, EICOSANE® ou tetracontane; óleo resultante da oligomerização de alceno(s), por exemplo, isobuteno ou deceno; ésteres de ácidos ou de alcoóis contendo um grupo alquila linear, tais como óleos de planta, oleato de etila, di(caprilato/caprato) de propileno glicol, tri(caprilato/ caprato) de glicerila ou dioleato de propileno glicol; ésteres de ácidos graxos ramificados ou alcoóis, por exemplo, ésteres de ácido isoesteárico. O óleo vantajosamente é usado em combinação com emulsificantes para formar a emulsão. Os emulsificantes podem ser tensoativos não-iônicos, tais como ésteres de sorbitano, manide (por exemplo, oleato de anidromanitol), glicerol, poliglicerol, propileno glicol, e ácido oléico, isoesteárico, ricinoléico ou hidroxiesteárico, que são opcionalmente etoxilados, e blocos de copolímeros de polioxipropileno-polioxietileno, tais como os produtos Pluronic®, por exemplo, L121. O adjuvante pode ser uma mistura de emulsificante(s), agentes

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46/223 formadores de micela e óleo, tais como aquele que está disponível sob o nome de Provax® (IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA).

[0135] O termo “prime boost” refere-se a administrações sucessivas de dois tipos diferentes de vacina ou composições imunogênicas ou imunológicas que tem pelo menos um antígeno em comum. A administração inicial (priming) é a administração de uma primeira vacina ou composição do tipo imunogênica ou imunológica e pode compreender uma, duas ou mais administrações. A administração de reforço é a administração de uma segunda vacina ou um tipo de composição imunogênica ou imunológica e pode compreender uma, duas ou mais administrações, e, por exemplo, pode compreender ou consistir essencialmente em administrações anuais.

[0136] Dessa forma, a invenção abrange a imunização inicial-reforço ou método de vacinação de um animal contra pelo menos um antígeno expresso a partir de replicons de RNA viral, compreendendo administrar ao animal uma vacina de DNA ou composição imunológica ou imunogênica inicial compreendendo molécula(s) de ácido nucléico que codificam e expressam in vivo antígeno(s) expresso(s) a partir de replicons de RNA viral, e depois disso administrar uma composição de reforço que compreende o(s) antígeno(s) expresso(s) pela vacina de DNA ou composição imunológica ou imunogênica, ou um vetor recombinante ou modificado, por exemplo, vírus, tal como um poxvírus (tal como vacínia, MVA, NYVAC, ALVAC, canripox, TROVAC, ou vírus de aves domésticas) que contém e expressa em uma célula hospedeira animal uma seqüência de nucleotídeos que codifica o(s) antígeno(s)

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expresso(s)	pela	vacina de DNA	ou	composição imunogênica	ou
imunológica.	A	vacina ou	composição	imunogênica	ou
imunológica	de reforço pode ser	a mesma	ou diferente	da
vacina de DNA ou	composição imunogênica ou	imunológica.
[0137]	Por exemplo,	a	vacina	ou composição
imunogênica	ou	imunológica		de reforço pode	ser

vantajosamente o(s) antígeno(s) expresso(s) pela vacina de DNA (ou composição imunogênica ou imunológica) e/ou um vetor de poxvírus recombinante ou modificado, por exemplo, vírus, vacina ou composição imunogênica ou imunológica. Um vetor recombinante ou modificado é vantajosamente em um vetor de expressão in vivo, tal como uma bactéria recombinante ou modificada, levedura, vírus, por exemplo, vírus poxvírus, compreendendo molécula(s) de ácido nucléico que codificam e expressam in vivo antígeno(s) expresso(s) pela vacina de DNA ou composição imunogênica ou imunológica. O reforço é vantajosamente realizado com uma vacina ou composição imunogênica ou imunológica inativada ou com uma vacina ou composição imunogênica ou imunológica compreendendo um vetor viral vivo recombinante, tal como um vírus poxvírus recombinante, que compreende molécula(s) de ácido nucléico que codificam e expressam in vivo antígeno(s) expresso(s) pela vacina de DNA ou composição imunogênica ou imunológica. Assim, é vantajoso que o reforço compreenda tanto o antígeno expresso pela vacina de DNA ou composição imunogênica ou imunológica quanto expresse in vivo antígeno(s) expresso(s) pela vacina de DNA ou composição imunogênica ou imunológica. Vantajosamente, o reforço compreende o poxvirus recombinante

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48/223 expressando antígenos expressos a partir de replicons de RNA viral descritos aqui.

[0138] Adicionalmente ou alternativamente, composições imunogênicas ou imunológicas da invenção podem conter GM-CSF (fator estimulador de colônias de granulócito macrófago; Clark, S.C. et al., Science 1987, 230: 1229; Grant

S.M. et al., Drugs 1992, 53:516) ou um vetor de expressão que assim expressa GM-CSF, com o “vetor de expressão” incluindo o replicon viral que expressa o antígeno de interesse. O vetor de expressão que contém e expressa GM-CSF pode ser um plasmídeo ou um vetor recombinante ou modificado tal como um vírus recombinante ou modificado, bactéria, levedura ou pode estar contido no replicon de RNA viral que expressa o antígeno de interesse. Assim, à vacina de DNA ou composição imunogênica ou imunológica é adicionado GM-CSF ou um vetor que expressa GM-CSF, por exemplo, adicionado às vacinas ou composições imunogênicas ou imunológicas formuladas sem adjuvante ou com adjuvante e/ou lipossomo; ou, o plasmídeo de DNA que expressa antígenos expressos a partir de replicons de RNA viral é construído de tal maneira que ele também expressa GM-CSF. Se um vetor de expressão está fornecendo GM-CSF, uma seqüência de ácido nucléico que codifica GM-CSF está no vetor de expressão sob condições que permitem sua expressão in vivo (por exemplo, ela está operavelmente ligada a um promotor adequado). Vantajosamente, o vetor de expressão que expressa GM-CSF é um plasmídeo, por exemplo, o plasmídeo que contém a seqüência de ácido nucléico que codifica o(s) antígeno(s) de interesse ou outro plasmídeo.

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49/223 [0139] Nas vacinas ou composições imunogênicas ou imunológicas contempladas pela invenção, por exemplo, vacinas ou composições imunogênicas ou imunológicas formuladas sem adjuvante ou com adjuvante e/ou lipossomo, contendo ou não GM-CSF ou um vetor de expressão que expressa GM-CSF, a(s) seqüências(s) de nucleotídeos que codifica(m) os produtos de expressão estão em uma forma otimizada ou modificada. Otimização é entendida como significando qualquer modificação da seqüência de nucleotídeos que se manifesta pelo menos por um nível de expressão mais alto dessa seqüência de nucleotídeos, e/ou por um aumento da estabilidade do RNA mensageiro que codifica esse antígeno, e/ou pela secreção desencadeada desse antígeno no meio extracelular, e que pode ter como conseqüência direta ou indireta um aumento na resposta imune induzida.

[0140] Ainda alternativamente ou adicionalmente, nas composições imunogênicas ou imunológicas abrangidas pela presente invenção, a seqüência de nucleotídeos que codifica os antígenos expressos a partir de replicons de RNA viral pode ter deletado dela uma porção que codifica um domínio transmembrana. Novamente ainda alternativamente ou adicionalmente, o plasmídeo na vacina de DNA ou composição imunogênica pode conter e expressar adicionalmente em uma célula hospedeira animal uma seqüência de nucleotídeo que codifica uma seqüência de sinal tPA heteróloga tal como tPA humana e/ou um intron estabilizador, tal como o intron II do gene da β-globina de coelho.

[0141] O plasmídeo de DNA, ou o vetor recombinante de poxvírus ou poxvírus recombinante, que expressa uma ou

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50/223 mais seqüências de ácido nucléico que expressam uma seqüência heteróloga de interesse expressa a partir de replicons de RNA viral, por exemplo, vírus e vetor de acordo com essa descrição, pode ser preservado e/ou conservado e armazenado tanto na forma líquida, em cerca de 5°C, quanto na forma liofilizada ou seca por congelamento, na presença de um estabilizador. A secagem por congelamento pode ser de acordo com procedimentos padronizados bem-conhecidos de secagem por congelamento. Os estabilizadores farmaceuticamente aceitáveis podem ser SPGA (sacarose fosfato glutamato albumina; Bovarnik et al., J. Bacteriology 59:509, 1950), carboidratos por exemplo, sorbitol, manitol, lactose, sacarose, glicose, dextran, trealose, glutamato de sódio (Tsvetkov T. et al., Cryobiology 20(3): 318-23, 1983; Israeli, E. et al., Cryobiology 30(5):519-23, 1993), proteínas tais como peptona, albumina ou caseína, agentes contendo proteína tais como leite desnatado (Mills CK et al., Cryobiology 25(2):148-52, 1988; Wolff E. et al., Cryobiology 27(5):569-75, 1990), e tampões (por exemplo, tampão fosfato, tampão de fosfato de metal alcalino). Um adjuvante e/ou um veículo ou excipiente podem ser usados para tornar as preparações secas por congelamento solúveis.

[0142] A invenção ainda refere-se ao produto de expressão do poxvírus recombinante inventivo e usos do mesmo, tais como produzir uma proteína in vitro ou formar composições antigênicas, imunológicas ou de vacina para tratamento, prevenção, diagnóstico ou teste; e, ao DNA dos poxvírus recombinantes que é útil na construção de sondas de DNA e iniciadores de PCR.

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51/223 [0143] Em um aspecto, a presente invenção refere-se a poxvírus recombinantes que contém pelo menos uma seqüência de ácido nucléico que expressa uma ou mais seqüências heterólogas expressas a partir de replicons de RNA viral, vantajosamente em uma região não-essencial do genoma do poxvírus. O poxvírus pode ser um vírus de vacínia, especialmente um vírus de vacínia atenuado tal como MVA e NYVAC, ou um vírus vírus de aves domésticas, especialmente um vírus vírus de aves domésticas atenuado como TROVAC, ou um vírus canaripox, especialmente um vírus canaripox atenuado tal como ALVAC.

[0144] De acordo com a presente invenção, o poxvírus recombinante e vetores poxvirais expressam pelo menos uma seqüência de ácido nucléico que codifica um ou mais produtos expressos a partir de replicons de RNA viral. Em particular, qualquer ou todos os genes e fases abertas de leitura (ORFs) que codificam os produtos podem ser isolados, caracterizados e inseridos nos poxvírus recombinantes. O poxvírus recombinante resultante é usado para infectar um animal. A expressão no animal da seqüência heteróloga pode resultar em uma resposta imune no animal aos produtos de expressão da seqüência heteróloga. Assim, o poxvírus recombinante da presente invenção pode ser usado em uma composição imunológica ou vacina para fornecer um meio de induzir uma resposta imune, que pode, mas não precisa ser, protetora. As técnicas de biologia molecular usadas são descritas por Sambrook et al. (1989). A invenção também contempla seqüências heterólogas expressas a partir de replicons de RNA viral que podem ser liberadas como um vetor ou plasmídeo

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52/223 de DNA nu, ou vacina de DNA ou composições imunológicas ou imunogênicas compreendendo moléculas de ácido nucléico que codificam e expressam in vivo o(s) produto(s) de expressão da seqüência heteróloga expressada em replicons de RNA viral.

[0145] A invenção será descrita agora por meio dos seguintes Exemplos não-limitantes, dados como meio de ilustração. Métodos de genética molecular, bioquímica de proteínas e imunologia usados mas não explicitamente descritos nessa descrição e nesses Exemplos estão amplamente relatados na literatura científica e estão dentro da habilidade daqueles versados na técnica.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Construção e caracterização de mutantes de nsP2 de SFV [0146] A construção de mutantes de nsP2 de SFV pela mutação de Leu 713 na proteína nsP2 está ilustrada nas Figuras 5A e 5B. O plasmídeo SFV1 (GIBCO BRL) contendo o cDNA do replicon de SFV foi usado para a construção do mutante. Para facilitar a construção, o plasmídeo SFV1 foi digerido com Kpnl ou SacI/XhoI, e o fragmento de Kpnl de 1,4kb e o fragmento de SacI/XhoI de 3,5kb foram isolados. Esses dois fragmentos foram clonados em pBluescript(+) digerido por KpnI para criar pBluescript-SFV-KpnI (pJY216.3) e em pBluescript(+) digerido por SacI/XhoI para criar pBluescript-SFV-SacI/XhoI (pJY217.5). A mutagênese foi realizada usando um kit de mutagenese direcionada ao sítio QuickChange (Stratagene) para trocar Leu713 de nsP2 para Ala, Thr, Gln, Arg ou Phe usando pBluescript-SFV-KpnI

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53/223 (pJY216.3) como molde e os iniciadores mostrados na Tabela 1.

Tabela 1: Iniciadores de Mutagênese para Gerar uma nsP2 Sensível à Temperatura SEQ ID NOS: 15-24, respectivamente, em ordem de aparecimento.

Mutação	Seqüência do Iniciador
Leu713Ala8063JY	5'-CAG ATG CTT GGG GGA GAT GCG GCA CGA CTG CTA AAA CCC GGC GGC-3' 5'-GCC GCC GGG TTT TAG CAG TCG TGC CGC ATC TCC CCC AAG CAT CTG-3'
Leu713Thr8067JY	5'-CAG ATG CTT GGG GGA GAT GCG ACA CGA CTG CTA AAA CCC GGC GGC-3' 5'-GCC GCC GGG TTT TAG CAG TCG TGT CGC ATC TCC CCC AAG CAT CTG-3'
Leu713Gln8069JY	5'-CAG ATG CTT GGG GGA GAT GCG CAA CGA CTG CTA AAA CCC GGC GGC-3' 5'-GCC GCC GGG TTT TAG CAG TCG TTG CGC ATC TCC CCC AAG CAT CTG-3'
Leu713Phe8073JY	5'-CAG ATG CTT GGG GGA GAT GCG TTT CGA CTG CTA AAA CCC GGC GGC-3' 5'-GCC GCC GGG TTT TAG CAG TCG AAA CGC ATC TCC CCC AAG CAT CTG-3'
Leu713Arg8075JY	5'-CAG ATG CTT GGG GGA GAT GCG AGA CGA CTG CTA AAA CCC GGC GGC-3' 5'-GCC GCC GGG TTT TAG CAG TCG TCT CGC ATC TCC CCC AAG CAT CTG-3'

[0147] O fragmento de Kpnl contendo cada mutação foi isolado e ligado a pBluescript-SFV-SacI/XhoI digerido por Kpnl (pJY217.5) para criar uma série de plasmídeos pBluescript-SFV-SacI/Kpnl contendo Leu713Ala (pJY343713Ala#3), Leu713Thr (pJY343-713Thr#1), Leu713Gln (pJY343713Gln#4), Leu713Arg (pJY343-713Arg#1) ou Leu713Phe (pJY343713Phe#3). As mutações foram confirmadas por análise de seqüência.

[0148] Para examinar a função de mutantes Leu 713 de nsP2 de SFV, um gene marcador, GFP/Blasticidina, foi isolado

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54/223 a partir de pTracer CMV/ Blasticidina (Invitrogen) e clonado no sítio SmaI de SFV1 para criar SFV GFP/Blasticidina (pJY310.13). Para construir SFV GFP/Blasticidina contendo Leu713Ala, Leu713Thr, Leu713Gln, Leu713Arg ou Leu713Phe, os plasmídeos pBluescript-SFV-SacI/Kpnl foram digeridos com SacI/Bsu36I e os fragmentos de SacI/Bsu36I contendo cada mutação foram isolados. Esses fragmentos foram então ligados a SFV GFP/Blasticidina digerido por SacI/ Bsu36I (pJY310.13) para criar uma série de plasmídeos SFV GFP/ Blasticidina contendo Leu713Arg (pJy350-713Arg#1), Leu713Ala (pJY354713Ala#3), Leu713Thr (pJY354-713Thr#2), Leu713Gln (pJY354713Gln#1) ou Leu713Phe (pJY354-713Phe#1).

[0149] Para analisar o efeito de cada mutação sobre a replicação do replicon de SFV, a análise de immunoblot foi realizada para examinar a expressão de GFP/Blasticidina. Resumidamente, o RNA foi transcrito a partir de cada mutante de Leu713 de SFV GFP/Blasticidina e os RNAs transcritos foram então eletroporados em células BHK-21. As células transfectadas foram incubadas em 37°C em uma incubadora com 5% de CO₂. Após 48 h, lisados celulares foram preparados, separados em gel SDS-PAGE 10% e transferidos para membranas de náilon. Os blots foram então testados com anti-soro antiGFP de coelho (Invitrogen) e visualizados usando um reagente quimioluminescente (NEN) após reação com anticorpos de cabra anticoelho conjugados com peroxidase. Uma quantidade considerável de expressão de GFP/Blasticidina foi observada com mutantes Leu713Ala e Leu713Thr em 37°C (Figura 6 raias 2 e 5), enquanto que quantidades muito pequenas de expressão

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55/223 de GFP/Blasticidina foram observadas com os mutantes Leu713Gln, Leu713Phe e Leu713Arg (Figura 6).

[0150] Para determinar a sensibilidade à temperatura dos mutantes SVF GFP/Blasticidina Leu713Ala e SVF GFP/Blasticidina Leu713Thr, os RNAs mutantes foram eletroporados em células BHK-21 e as células transfectadas foram incubadas em 37°C e 40°C. A expressão de GFP/Blasticidina foi então examinada por immunoblot. Foi descoberto que a replicação dos mutantes SVF GFP/Blasticidina Leu713Ala e SVF GFP/Blasticidina Leu713Thr é sensível à temperatura, já que não foi observada expressão de proteína em 40°C (Figura 7, raias 6 e 7).

[0151] O efeito citopático (CPE) de cada mutação sobre as células BHK também foi investigado por análise qualitativa de CPE após a transfecção com mutantes. Por exame microscópico, CPE óbvio foi visto nas células BHK transfectadas com os mutantes Leu713Ala e Leu713Thr após 48h. Em contraste, as células foram completamente lisadas 48 h após a transfecção com o replicon de SFV parental. Esses resultados demonstraram que a alteração de Leu713 para Ala ou Thr torna o replicon de SFV sensível à temperatura e menos citopático para células enquanto mantem a expressão de proteína. O mutante SFV GFP/Blasticidina Leu713Ala (pJY354713Ala#3) foi escolhido para construção subseqüente do plasmídeo doador quimérico ALVAC-SFV C6.

Exemplo 2: Construção de um plasmídeo doador C6 contendo SFV-GFP/ Bsd Leu713Ala [0152] O esquema de construção está ilustrado nas Figuras 8A e 8B. A análise da seqüência de cDNA de SFV1

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56/223 mostrou que existem duas seqüências T5NT; TTTTTGT localizada em 7049-7055 bp e TTTTTAT localizada em 8155-8161 bp. Foi mostrado que a seqüência T5NT resulta no término prematuro da transcrição de RNA em poxvírus (Yuen, L. e Moss, B. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 6417-6421). Essas duas seqüências T5NT foram removidas por mutagênese usando um kit de mutagênese direcionada ao sítio QuikChange (Stratagene) e os iniciadores descritos na Figura 8C.

[0153] Para facilitar as mutações, o plasmídeo SFVGFP/Bsd (pJY310.13) foi digerido com EcoRV/XbaI e religado para criar um plasmídeo de SFV GFP/Bsd EcoRV/XbaI- religado (pJY390.1). A mutação de TTTTTGT para TTTCTCG foi obtida usando pJY390.1 como molde e iniciadores 8255JY e 8256JY para gerar o plasmídeo pJY415.1.

[0154] Para mutar TTTTTAT e introduzir uma seqüência que consiste na seqüência da ribozima de hepatite δ seguida por TTTTTCT no final do trato poli A do replicon de SFV, a amplificação por PCR foi realizada para produzir um fragmento de DNA compreendendo as seqüências de SFV-3-poliA-ribozima seguidas pelo sítio TTTTTCT-SpeI usando o plasmídeo pMP76 (ATCC 203462) como molde e os iniciadores 8257JY, 8258JY, 8259JY e 8284JY (Fig. 8B). pMP76 contém um cDNA de replicon de SFV de extensão completa seguido pela seqüência da ribozima da hepatite δ. Os fragmentos de DNA amplificados foram então digeridos com StuI/SpeI e ligados à pJY415.1 digerido com StuI/SpeI para criar o plasmídeo de SFV GFP/Bsd EcoRV/XbaI-religado-T5NT + RibozimaT5NT (pJY482.2). O plasmídeo pJY482.2 foi então digerido com BglII/SpeI e o fragmento BglII/SpeI isolado foi ligado a SFV GFP/Bsd

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Leu713Ala digerido com BglII/SpeI (pJY354-713Ala#3) para criar o plasmídeo de extensão completa SFV GFP/Bsd Leu713AlaT5NT + RibozimaT5NT (pJY490.1). A adição da seqüência TTTTTCT no final do trato poli A do replicon de SFV é para a terminação da transcrição do RNA. A seqüência da ribozima de hepatite δ é para a clivagem do RNA transcrito a fim de produzir o RNA do replicon de SFV com um trato poli A.

[0155] Para facilitar a construção do plasmídeo doador C6 contendo SFV-GFP/Bsd Leu713Ala, um fragmento de DNA que consiste no promotor H6 imediatamente a montante da seqüência SFV-5' foi produzido por amplificação por PCR usando o plasmídeo SFV GFP/Bsd como molde e os iniciadores 8279JY e 8280JY como mostrados na Figura 8C. O DNA amplificado foi digerido com SmaI/SpeI e, ligado ao plasmídeo doador pC6L digerido com SmaI/SpeI, para gerar pC6L-H6-SFV5' (pJY450.1). O plasmídeo pJY450.1 foi então digerido com EcoRV/SpeI e ligado com o fragmento EcoRV/SpeI isolado de pJY490.1 para criar o plasmídeo doador C6 contendo o SFV GFP/Bsd Leu713Ala-T5NT + RibozimaT5NT (pJY505.1). O plasmídeo pJY505.1 foi usado para a geração da quimera ALVACSFV. Uma ilustração do plasmídeo doador pJY505.1 é mostrada na Figura 9 e a seqüência de pJY505.1 é mostrada na Figura 10A até I (SEQ ID NO:1).

Exemplo 3: Geração e caracterização de uma quimera ALVAC-SFV Leu713Ala expressando GFP/Blasticidina [0156] Uma ilustração da geração da quimera ALVACSFV usando o plasmídeo doador C6 contendo SFV-GFP/Bsd Leu713Ala é mostrada na Figura 11. Para gerar a quimera ALVAC-SFV Leu713Ala, uma recombinação in vitro (IVR) foi

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58/223 realizada pela transfecção de células CEF primárias com o plasmídeo doador C6 linearizado por SapI, contendo SFV GFP/Bsd Leu713Ala-T5NT + RibozimaT5NT (pJY505.1), usando eletroporação. As células transfectadas foram subseqüentemente infectadas com ALVAC como vírus de resgate em MOI de 1.0 e incubadas em 40°C. Após 24 h, as células transfectadas-infectadas foram coletadas, sonicadas e usadas para rastreamento de vírus recombinante.

[0157] As placas recombinantes foram rastreadas baseado no método de hibridação de plaque lift” usando uma sonda específica para SFV, que foi rotulada com peroxidase de rábano silvestre de acordo com o protocolo do fabricante (Amersham). Após cinco ciclos seqüenciais de purificação da placa em 40°C, o recombinante ALVAC-SFV GFP/Bsd Leu713Ala designado como vCP2064 foi gerado. Placas únicas foram selecionadas a partir do quinto ciclo de purificação da placa e expandidas para obter os estoques P1 (60 mm), P2 (frasco T75) e P3(garrafa cilíndrica) de vCP2064.

[0158] Para examinar se a placa de vírus quimérico é capaz de expressar o gene marcador de GFP/Blasticidina, punções da placa consistindo no vírus quimérico e do vírus ALVAC parental foram retiradas durante o processo de purificação da placa e foram usados para infectar dois grupos de células CEF primárias. As células infectadas foram incubadas em 40°C por 4 dias para permitir a formação de placas individuais. Um grupo de células CEF infectadas foi transferido para 37°C e incubado adicionalmente por 1 dia. Um ensaio de imunoplaca das placas virais em 37°C e 40°C foi então realizado. Os resultados mostraram que as placas de

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59/223 vírus quiméricos expressaram GFP/Blasticidina (indicado pela seta) em 37°C mas não em 40°C (Figura 12).

[0159] Para examinar a expressão de proteína da quimera de ALVAC-SFV Leu713Ala em células de mamíferos, células BHK-21 foram infectadas com o estoque vCP2064 P3 em MOI de 10 e incubadas por 24 horas em 37°C e 38°C, respectivamente. As células infectadas foram coletadas e suspensas em um tampão de lise. Os lisados celulares foram clarificados e separados por SDS-PAGE 10%. As proteínas foram transferidas para membranas de náilon e testadas com antisoro anti-GFP de coelho como anticorpo primário. Após a reação com um anticorpo secundário de cabra anticoelho conjugado a peroxidase, o blot foi visualizado usando o reagente de quimioluminescência (NEN). Como mostrado na Figura 13, a quimera ALVAC-SFV Leu713Ala expressou GFP/Blasticidina (indicada pela seta) tanto em 37°C quanto em 38°C, mas a expressão em 38°C parece menor do que em 37°C, confirmando a sensibilidade à temperatura da quimera ALVACSFV Leu713Ala.

Exemplo 4: Construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala contendo um sítio de clonagem múltipla ou dois promotores 26S de SFV.

[0160] A construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala contendo um sítio de clonagem múltipla está ilustrada nas Figuras 14A e 14B. A construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala contendo dois promotores 26S de SFV é mostrada na Figura 14C e 14D. Para construir o plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala que contém um sítio de clonagem múltipla, a amplificação por PCR

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60/223 foi realizada para produzir um fragmento de DNA contendo um cassete do sítio de clonagem múltipla PacI-SbfI-PmeI, usando pJY505.1 como molde e iniciadores 8314JY e 8284JY como descrito na Figura 15. O fragmento de DNA amplificado que contém o sítio de clonagem múltipla PacI-SbfI-PmeI foi então digerido com EcoRI/SpeI e ligado a pJy482.2 digerido com EcoRI/SpeI, para criar pJY592.3. O fragmento BglII/SpeI foi isolado a partir do plasmídeo pJY592.3 e ligado a SFV GFP/Bsd Leu713Ala digerido com BglII/SpeI (pJY354-713Ala#3) para criar o plasmídeo SFV Leu713Ala contendo os sítios de clonagem PacI-SbfI-PmeI (pJY618.1). O plasmídeo pJY618.1 foi digerido com EcoRV/SpeI e o fragmento EcoRV/SpeI foi ligado ao plasmídeo pJY450.1 digerido com EcoRV/SpeI para criar o plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV contendo os sítios de clonagem múltipla designados como pJY C6 SFV L713A 1 (pJY641.2) (Figura 16). A seqüência de nucleotídeos de pJY C6 SFV L713A 1é mostrada nas Figuras 17A até H (SEQ ID NO:2).

[0161] Similarmente, para contruir o plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala contendo dois promotores 26S de SFV, uma amplificação por PCR foi realizada para produzir um fragmento de DNA contendo uma seqüência do promotor-PacI-SbfI 26S-promotor-PmeI 26S, usando pJY505.1 como molde e os iniciadores 8315JY e 8284JY como mostrado na Figura 15. O fragmento de DNA amplificado contendo a seqüência do promotor-PacI-SbfI 26S-promotor-PmeI 26S foi digerido com EcoRI/SpeI e ligado a pJY482.2 digerido com EcoRI/SpeI, para criar pJY591.6. O plasmídeo pJY591.6 foi digerido com BglII/SpeI e o fragmento de BglII/SpeI isolado foi então ligado a SFV GFP/Bsd Leu713Ala digerido com

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BglII/Spel (pJY354-713Ala#3), para criar o plasmídeo SFV Leu713Ala, contendo dois promotores 26S de SFV (pJY619.1). Finalmente, o plasmídeo pJY619.1 foi digerido com EcoRV/SpeI e o fragmento de EcoRV/SpeI foi ligado a pJY450.1 digerido com EcoRV/SpeI, para criar o plasmídeo doador C6 de ALVACSFV contendo dois promotores 26S designados como pJY C6 SFV L713A 2 (pJY642.2) (Figura 18). A seqüência de nucleotídeos de pJY C6 SFV L713A 2 é idêntica àquela de pJY C6 SFV L713A1(pJY641.2) como mostrado nas Figuras 17A até H com a adição do 2° promotor 26S que tem a seqüência 5'-ACC TCT ACG GCG GTC CTA GAT TGG TGC GTT AAT ACA CA-3' (SEQ ID No: 3) inserida logo antes do sítio de restrição Pme I mostrado na Fig. 17A até H. O ponto de inserção da 2^a seqüência promotora 26S está indicado com uma seta na Fig. 17A até H.

Exemplo 5: Construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo o gene gag-pro de SFV Leu713Ala/FIV sob o controle do promotor H6 [0162] O esquema de construção para um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo o gene gag-pro de SFV Leu713Ala/FIV sob o controle do promotor H6 é mostrado na Figura 19A e 19B. Para construir o plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala/FIV gag-pro, uma amplificação por PCR foi realizada para produzir um fragmento de DNA compreendendo PacI-FIV gag-pro-PmeI, usando pMM121 como o molde e um par de iniciadores; 8330JY 5'-GGT TAA TTA AAT GGG GAA TGG ACA GGG GCG A-3' (SEQ ID NO:37) e 8331JY 5'-GGG TTT AAA CTT ACA TTA CTA ACC TAA TAT TGA A-3' SEQ ID NO: 39; Figura 19C. O fragmento de DNA amplificado foi digerido com Pacl/Pmel e ligado a pNEB193 digerido com Pacl/Pmel (NEB) para criar

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62/223 pJY624.3. O plasmídeo pMM121 contém um gene gag-pol de FIV derivado da cepa Villefranche de FIV. Há uma seqüência TTTTTAT localizada em 177-184bp na proteína protease de FIV. Portanto, a mutagênese direcionada ao sítio para remover T5NT foi realizada usando pMM121 como molde e o iniciador 8331JY (como mostrado acima) e o iniciador 8332JY 5'-AAT GGA TAT CCT ATA AAA TTC TTA TTA GAT ACA GGA GCA-3' (SEQ ID NO: 41; Figura 19C). Esse fragmento de DNA amplificado foi digerido com EcoRV/Pmel e ligado a pJY624.3 digerido com EcoRV/Pmel para criar pJY643.2. O fragmento gag-pro de FIV foi então isolado do plasmídeo pJY643.2 por digestão com Pacl/Pmel e ligado a pJY641.2 digerido com Pacl/Pmel (descrito no Exemplo 4) para criar o plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Leu713Ala/FIV gag-pro (pC6 H6p-SFV L713A/FIV gag-pro, pJY654.1). Uma ilustração do plasmídeo doador pJY654.1 é mostrada na Figura 20.

Exemplo 6: Geração e caracterização de uma quimera de ALVAC-SFV Leu713Ala expressando gag-pro de FIV (vCP2092) [0163] A geração de uma quimera ALVAC-SFV Leu713Ala expressando gag-pro de FIV está ilustrada na Figura 21. Resumidamente, uma recombinação in vitro (IVR) foi realizada pela transfecção de células CEF primárias com o plasmídeo doador C6 linearizado por SapI contendo SFV Leu713Ala/FIV gag-pro (pJY654.1) usando reagentes de transfecção FuGENE 6. As células trransfectadas foram subseqüentemente infectadas com ALVAC como vírus de resgate em MOI de 10. Após 27 h, as células transfectadas-infectadas foram coletadas, sonicadas e usadas para rastreamento de vírus recombinante.

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63/223 [0164] Placas recombinantes foram rastreadas baseando-se no método de hibridação de “plaque lift” usando uma sonda específica para SFV que foi marcada com peroxidase de rábano silvestre de acordo com o protocolo do fabricante (Amersham). Após quatro ciclos seqüenciais de purificação da placa em 40°C, o recombinante ALVAC-SFV Leu713Ala/FIV gagpro designado como vCP2092 foi gerado. Placas únicas foram selecionadas a partir do quarto ciclo de purificação de placa e expandidas para obter estoques P1 (60 mm), P2 (frasco T75) e P3 (garrafa cilíndrica) de vCP2092. Os estoques P3 de vCP2092 foram confirmados pela hibridação como 100% positivo para a sonda específica de SFV e 100% negativo para ORF de C6. Os vírus quiméricos foram caracterizados por enzima de restrição e análises Southern blot. O lócus C6-H6p-SFV Leu713Ala replicon-C6 foi amplificado por PCR e a seqüência completa confirmada. A expressão das proteínas gag-pro de FIV foi confirmada por análise de immunoblot.

Exemplo 7: Construção e caracterização de mutantes de nsP2 de SFV adicionais: mutante Arg650Asp de SFV e mutante Ser259Pro de SFV [0165] A construção do mutante de SFV nsP2 Arg650Asp está ilustrada nas Figuras 22A e 22B e a construção do mutante de SFV nsP2 Ser259Pro está ilustrada na Figura 22C e 22D.

[0166] Para construir os mutantes Arg650Asp de SFV e Ser259Pro de SFV expressando gag-pro de FIV, um replicon de SFV selvagem contendo gag-pro de FIV foi construído primeiro. Resumidamente, um fragmento de BglII-SpeI foi isolado de pJY 592.3 (descrito no Exemplo 4) e ligado a SFV GFP/Bsd digerido

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64/223 com BglII-SpeI (pJY310.13, descrito no Exemplo 1). O plasmídeo resultante pJY622.1 foi digerido com PacI/PmeI e ligado ao fragmento gag-pro de FIV isolado a partir do plasmídeo pJY643.2 (descrito no Exemplo 5) para criar o replicon de SFV selvagem contendo gag-pro de FIV (pJY663.1).

[0167] Para mutar Arg 650 para Asp na proteína nsP2, mutagênese direcionada ao sítio foi realizada usando pBluescript-SFV-SacI/XhoI-pJY217.4 (idêntico à pJY217.5 como descrito no Exemplo 1) como molde e os iniciadores: 8267JY 5'-AGA GGG TAC CAC GTC CTG CTG GTG AGT GAG TAC AAC CTG GCT TTG CCT CGA CGC GAC GTC ACT TGG TTG TCA-3' SEQ ID NO: 42 e 8286JY 5'-TCG TAA CGA CCG ATC TGA GTG GTC CGT CGT AGA TGC3' (SEQ ID NO: 44; Figura 22E). O fragmento de DNA amplificado foi digerido com KpnI, e o fragmento de KpnI contendo a mutação Arg650Asp foi ligado a pBluescript-SFVSacI/XhoI digerido com KpnI (pJY217.5) para criar um plasmídeo pBluescript-SFV-SacI/KpnI contendo a mutação de Arg650Asp (pJY408.5). Como o fragmento de KpnI contendo a mutação estava na orientação errada em pJY408.5, uma etapa subseqüente para corrigir a orientação foi realizada. O plasmídeo resultante pJY456.6 foi digerido com Sac1/Bsu361, e o fragmento de DNA Sac1/Bsu361 contendo a mutação Arg650Asp foi isolado e ligado a SFV selvagem/gag-pro de FIV digerido com Sac1/Bsu361 (pJY663.1, como mostrado acima) para criar o mutante de SFV Arg650Asp contendo gag-pro de FIV (pJY793.1).

[0168] Para mutar Ser 259 para Pro na proteína nsP2, mutagênese direcionada ao sítio foi realizada usando o plasmídeo pJY217.5 (descrito no Exemplo 1) como o molde e um

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65/223 par de iniciadores: 82 65JY 5'-GTG GAC GAG GCT TTC GCT TGC CAT CCC GGT ACT CTG CTG GCC CTA ATT GCT-3' SEQ ID NO: 45 e 8266JY 5'-AGC AAT TAG GGC CAG CAG AGT ACC CCC ATG GCA AGC GAA AGC CTC GTC CAC-3' (SEQ ID NO: 47; Figura 22E). O plasmídeo resultante pJY394.1 foi confirmado contendo a mutação Ser259Pro exceto que uma mutação adicional por erro de PCR foi encontrada no fragmento de KpnI. Esse fragmento de KpnI contendo o erro de PCR foi subseqüentemente substituído com um correto isolado de SFV-GFP/Bsd (pJY310.13 como descrito no Exemplo 1), resultando em um novo plasmídeo pJY458.6. Um fragmento de DNA de Sacl/Bsu36l contendo a mutação Ser259Pro foi então isolado a partir de pJY458.6 e ligado a SFV elvagem/gag-pro de FIV digerido com Sacl/Bsu36l (pJY663.1 como mostrado acima) para criar o mutante de SFV Ser259Pro contendo gag-pro de FIV (pJY792.1).

[0169] O efeito de cada mutação sobre a replicação do replicon de SFV foi então examinado por análise immunoblot da expressão da proteína gag-pro de FIV. Resumidamente, RNA foi transcrito a partir do mutante de SFV Arg650Asp ou do mutante de SFV Ser259Pro e os RNAs transcritos foram eletroporados em células BHK-21. As células transfectadas foram incubadas em 37°C em incubadora com 5% de CO₂. Após 24 h, lisados celulares foram preparados, separados em gel SDSPAGE 10% e transferidos para membranas de náilon. Os blots foram então testados com um anticorpo monoclonal anti-gag de FIV e visualizados usando um reagente quimioluminescente (NEN) após reagir com anticorpos de cabra anticamundongo conjugados a peroxidase. Gag-pro de FIV foi expressa em células BHK-21 transfectadas com ambos os mutantes Arg650Asp

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66/223 de SFV e Ser259Pro de SFV e o nível de expressão da proteína é comparável àquele do replicon de SFV selvagem (Figura 23).

Exemplo 8: Construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro ou SFV Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle do promotor H6.

[0170] A construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro ou SFV Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle do promotor precoce H6 está ilustrada na Figura 24A até C. Nesses dois plasmídeos, a seqüência da ribozima da hepatite δ (descrita no Exemplo 2) foi removida a fim de examinar se essa seqüência tem um efeito adverso sobre a geração de quimeras. Para construir esses dois plasmídeos doadores, um fragmento de DNA consistindo em gag-pro de FIV e a seqüência 3' de SFV foi amplificado usando pJY654.1 (descrito no Exemplo 5) como molde e um par de iniciadores: 8281JY 5'-TAA TAC ACA GAA TTC TGA TTG-3' SEQ ID NO: 4 8 e 82 60JY 5'-CAG ACT AGT AGA AAA ATTTTTTTTTTTTTTT TTT-3' (SEQ ID NO: 49; Figura 24D). O fragmento de DNA amplificado foi digerido com Pmel/Spel e ligado ao plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala/FIV gag-pro digerido com Pmel/Spel (pJY654.1, descrito no Exemplo 5) para criar o plasmídeo doador C6 de ALVAC-SFV Leu713Ala/FIV gag-pro (pJY842.3) sem a seqüência da ribozima da hepatite δ. Um fragmento de DNA EcoRV-EcoRV compreendendo a seqüência gag-pro de FIV e o replicon de SFV Arg650Asp foi isolado a partir do plasmídeo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro (pJY793.1, descrito no Exemplo 7) e ligado a pJY842.3 digerido com EcoRV para criar o plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro (pC6 H6p-SFV R650D/FIV

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67/223 gag-pro, pJY876.2). Similarmente, um fragmento de DNA de EcoRV-EcoRV foi isolado a partir do plasmídeo SFV Ser259Pro/FIV gag-pro (pJY792.1, descrito no Exemplo 7) e ligado pJY842.3 digerido com EcoRV para criar o plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Ser259Pro/FIV gag-pro (pC6 H6p SFV S259P/FIV gag-pro, pJY885.1).

[0171] A geração de uma quimera ALVAC-SFV Arg650Asp ou de uma quimera ALVAC-SFV Ser259Pro expressando gag-pro de FIV sob o controle do promotor H6 selvagem foi tentada, entretanto recombinantes não puderam ser isolados. A remoção da seqüência da ribozima da hepatite δ não ajudou na geração de quimera.

Exemplo 9: Construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutante [0172] A construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutante está ilustrada na Figura 25A.

[0173] Para mutar o promotor H6, um fragmento de DNA compreendendo um promotor H6 mutado e a seqüência 5' de SFV foi amplificado usando pJY654.1 (descrito no Exemplo 5) como molde e um par de iniciadores: 8424JY 5'-AA CCC GGG TTC TTT ATT CTA TAC TTA AAA AGT GCA AAT AAA TAC AAA GGT-3' SEQ ID NO: 52 e 8280JY 5'-GCG TAC ACT AGT GCC GAT ATC CAA GAT GAG TGT GTC TTT GTC-3' SEQ ID NO: 53. No iniciador 8424JY, uma única alteração de nucleotídeo (A para C) foi introduzida no promotor H6 (Figura 25C). O fragmento de DNA amplificado foi digerido com Smal/EcoRV e ligado a pC6L-H6-SFV-5' digerido com Smal/EcoRV (pJY450.3 como descrito no Exemplo 2) para

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68/223 criar um plasmídeo doador C6 contendo as seqüências de um promotor H6 mutante e SFV-5' (pJY747.2). Um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Leu713Ala sob o controle do promoter H6 mutado (pJY764.1) foi então construído pela ligação de pJY747.2 digerido com EcoRV/Spel com um fragmento de DNA de EcoRV/Spel isolado a partir do plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Leu713Ala (pJY641.2, descrito no Exemplo 4). Um fragmento de DNA de PacI-FIV gag-pro-PmeI isolado a partir de pJY643.2 (descrito no Exemplo 5) foi então ligado a pJY764.1 digerido com PacI/PmeI para criar um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo ALVAC-SFV Leu713Ala/FIV gag-pro sob o controle do promotor H6 mutado (pJY778.1). Finalmente, um fragmento de DNA de EcoRV-EcoRV contendo o replicon de SFV Arg650Asp e a seqüência gag-pro de FIV foi isolado a partir do plasmídeo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro (pJY793.1 descrito no Exemplo 7) e ligado a pJY778.1 digerido com EcoRV para criar um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp/FIV gag-pro sob o controle do promotor H6 mutado (pC6 mutante H6p-SFV R650D/FIV gag-pro, pJY863.1).

[0174] A geração de uma quimera de ALVAC-SFV Arg650Asp expressando gag-pro de FIV sob o controle do promotor H6 mutado foi bem-sucedida, entretanto, o recombinante era instável e uma população pura de recombinantes não pôde ser obtida.

Exemplo 10: Construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutante [0175] A construção de um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o

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69/223 controle de um promotor H6 mutado é mostrada na Figura 26A e 26B. Para construir esse plasmídeo doador, um replicon de SFV contendo as mutações duplas Arg650Asp e Ser259Pro foi inicialmente construído. Resumidamente, o fragmento de DNA de Kpnl contendo a mutação Arg650Asp foi isolado a partir de pJY456.6 (como descrito no Exemplo 7) e ligado a pJY458.6 digerido com Kp l, que contém a mutação Ser259Pro (descrita no Exemplo 7) para criar o plasmídeo pJY1092.1. Um fragmento de DNA de Sacl/Bsu36l contendo as mutações duplas foi então isolado a partir de pJY1092.1 e ligado a pJY663.1 digerido com Sacl/Bsu36l (descrito no Exemplo 7) para criar SFV Arg650Asp+Ser259Pro/FIV gag-pro (pJY1095.8). Finalmente, um fragmento de DNA de EcoRV-EcoRV compreendendo a seqüência gag-pro de FIV e o replicon de SFV contendo as mutações duplas Arg650Asp e Ser259Pro foi isolado a partir de pJY1095.8 e ligado a pJY778.1 digerido com EcoRV (descrito no Exemplo 9) para criar o plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo SFV Arg650Asp+Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle do promotor H6 mutado (pC6 mutante H6p-SFV R650D+S259P/FIV gag-pro, pJY1099.1). Uma ilustração esquemática de pC6 mutante H6p-SFV R650D+S259P/FIV gag-pro (pJY1099.1) é mostrada na Figura 27. A seqüência de nucleotídeos de pC6 mutante H6p-SFV R650D+S259P/FIV gag-pro (pJY1099.1) é mostrada na Figura 28 até J (SEQ ID No: 4).

Exemplo 11: Geração e Caracterização de uma quimera ALVAC-SFV Arg650Asp + Ser259Pro expressando gag-pro de FIV sob o controle de um promotor H6 mutante (vCP2161) [0176] A geração de uma quimera ALVAC-SFV Arg650Asp + Ser259Pro expressando gag-pro de FIV está ilustrada na

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Figura 29. Resumidamente, uma recombinação in vitro (IVR) foi realizada pela transfecção de células CEF primárias com plasmídeo doador C6 linearizado por SapI contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro (pJY1099.1) usando reagentes de transfecção FuGENE 6. As células transfectadas foram subseqüentemente infectadas com ALVAC como vírus de resgate em MOI de 10. Após 48h de incubação em 37°C, as células transfectadas-infectadas foram colhidas, sonicadas e usadas para rastreamento de vírus recombinante.

[0177] As placas recombinantes foram rastreadas baseado no método de hibridação de “plaque lift” usando uma sonda específica para SFV que foi marcada com peroxidase de rábano silvestre de acordo com o protocolo do fabricante (Amersham). Após quatro ciclos seqüenciais de purificação da placa em 37°C, o recombinante ALVAC-SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro designado como vCP2161 foi gerado. Placas únicas foram selecionadas a partir do quarto ciclo de purificação de placa e expandidas para obter estoques P1 (60mm), P2 (frasco T75) e P3 (garrafa cilíndrica) de vCP2161.

Exemplo 12:Construção de um plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutante.

[0178] A construção de um plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro sob o controle de um promotor H6 mutado está mostrada na Figura 30. Para construir esse plasmídeo doador, um fragmento de DNA de Xmal/Spel compreendendo o cassete de expressão promotor H6 mutante-SFV

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Arg650Asp+Ser259Pro/FIV gag-pro foi isolado pela digestão com Xmal/Spel de pJY1099.1 (descrito no Exemplo 10) e ligado ao plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas digerido com Xmal/Spel, para criar o plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas contendo SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gagpro sob o controle de um promotor H6 mutado (pF8 mutante H6p-SFV R650D+S259P/FIV gag-pro, pJY1302.4). Uma ilustração esquemática do pF8 mutante H6p-SFV R650D+S259P/FIV gag-pro (pJY1302.4) é mostrada na Figura 31. A seqüência de nucleotídeos de pF8 mutante H6p-SFV R650D+S259P/FIV gag-pro (pJY1302.4) é mostrada na Figura 32A até K (SEQ ID NO: 5).

Exemplo 13:Geração e caracterização de uma quimera de vírus de aves domésticas-SFV Arg650Asp + Ser259Pro expressando gag-pro de FIV sob o controle de um promotor H6 mutante (vFP2192) [0179] A geração de uma quimera de um vírus de aves domésticas-SFV Arg650Asp + Ser259Pro expressando gag-pro de FIV está ilustrada na Figura 33. Para gerar esse recombinante, uma recombinação in vitro (IVR) foi realizada pela transfecção de células CEF primárias com o plasmídeo doador F8 linearizado por SapI contendo SFV Arg650Asp+Ser259Pro/FIV gag-pro (pJY1302.4) usando reagentes de transfecção FuGENE 6. As células transfectadas foram subseqüentemente infectadas com vírus de aves domésticas como vírus de resgate em MOI de 10. Após 48 h de incubação em 37°C, as células transfectadas-infectadas foram coletadas, sonicadas e usadas para rastreamento de recombinantes.

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72/223 [0180] As placas recombinantes foram rastreadas com base no método de hibridação de “plaque lift” usando uma sonda específica para SFV que foi marcada com peroxidase de rábano silvestre de acordo com o protocolo do fabricante (Amersham). Após cinco ciclos seqüenciais de purificação da placa em 37°C, o recombinante vírus de aves domésticas-SFV Arg650Asp + Ser259Pro/FIV gag-pro designado como vCP2192 foi gerado. Placas únicas foram selecionadas a partir do quarto ciclo de purificação de placa e expandidas para obter estoques P1 (60mm), P2 (frasco T75) e P3 (garrafa cilíndrica) de vCP2192.

Exemplo 14: Geração e caracterização de um recombinante de ALVAC expressando FIV gag/pro (vCP2089) como controle [0181] Para gerar um recombinante de ALVAC-FIV gagpro como um controle, um plasmídeo doador C6 de ALVAC contendo gag-pro de FIV foi construído. Resumidamente, um fragmento de DNA de 292bp que consiste em protease de FIV foi amplificado usando o plasmídeo pMM121 (descrito no Exemplo 5) como o molde e um par de iniciadores: 8332JY: 5'AAT GGA TAT CCT ATA AAA TTC TTA TTA GAT ACA GGA GCA-3' SEQ ID NO: 41 e 8336CXL: 5'-TCC CCC GGG AGAAAAA TTA CAT TAC TAA CCT AAT-3' SEQ ID NO: 54. O fragmento de DNA amplificado foi digerido com EcoRV/Xmal e ligado ao plasmídeo doador C6 digerido com EcoRV/Xmal para fazer pCXL518.1. Um fragmento de DNA compreendendo as seqüências do promotor EcoRV-H6 e gag-pro de FIV foi amplificado usando pMM121 como o molde e um par de iniciadores: 8334CXL5'-GG GATATC CGT TAA GTT TGT ATC GTA ATG GGG AAT GGA CAG GGG CGA GAT TGG-3' (SEQ ID NO:

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55) e 8335CXL 5'-TAG GATATC CAT TTA CAA ATA TAA GTA-3' (SEQ ID NO: 56). O DNA amplificado foi digerido com EcoRV e ligado a pCXL518.1 digerido com EcoRV para criar pC6 H6p-FIV gagpro (pCXL520.1). A análise da seqüência desse plasmídeo pC6 H6p-FIV gag-pro, entretanto, encontrou uma ausência de nucleotídeo na região do promotor H6, que foi subseqüentemente corrigida. O plasmídeo resultante foi designado como pCXL530.1.

[0182] Uma recombinação in vitro (IVR) foi realizada pela transfecção de células CEF primárias com o plasmídeo doador C6 linearizado por NotI contendo gag-prox de FIV (pCXL530.1) usando reagentes de transfecção FuGENE 6. As células transfectadas foram subseqüentemente infectadas com ALVAC como vírus de resgate em MOI de 10. Após 26 h de incubação em 37°C, as células transfectadas-infectadas foram colhidas, sonicadas e usadas para rastreamento de vírus recombinante. As placas recombinantes foram rastreadas com base no método de hibridação de “plaque lift” usando uma sonda específica para gag-pro de FIV que foi marcada com peroxidase de rábano silvestre de acordo com o protocolo do fabricante (Amersham). Após quatro ciclos seqüenciais de purificação da placa em 37°C, o recombinante expressando gag-pro de FIV designado como vCP2089 foi gerado. Placas únicas foram selecionadas a partir do quarto ciclo de purificação de placa e expandidas para obter estoques P1 (60mm), P2 (frasco T75) e P3 (garrafa cilíndrica) de vCP2089. Os estoques P3 de vCP2089 foram confirmados pela hibridação como 100% positivos para a sonda específica para FIV e 100% negativos para ORF de C6. Vírus recombinantes foram

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74/223 caracterizados por enzima de restrição e análises Southern blot. O lócus C6-H6p-FIV gag-pro-C6 foi amplificado por PCR e a seqüência completa confirmada. Expressão das proteínas gag-pro de FIV foi confirmada por análise immunoblot.

Exemplo 15:Geração e caracterização de um recombinante de vírus de aves domésticas expressando gag-pro de FIV (vFP2095) como um controle [0183] Para gerar um recombinante vírus de aves domésticas-FIV gag pro como um controle, um plasmídeo doador F8 de vírus de aves domésticas contendo gag-pro de FIV foi construído. Resumidamente, um plasmídeo pMM121 (descrito no Exemplo 5) foi usado como molde para amplificação por PCR do gene gag-pro de FIV. Amplificação com iniciadores 8337.SL 5'-CGT CGC GAT ATC CGT TAA GTT TGT ATC GTA AAT GGG GAA TGG ACA GGG GCG AGA TTG GAA A-3' (SEQ ID NO: 57) e 8338.SL 5'GCG GTC CAG AAA AAT TAC ATT ACT AAC CTA ATA TTG AAT TTA ATC AT-3' (SEQ ID NO: 58), resultou em um fragmento de extensão completa de gag-pro de FIV que foi clonado em pCR2.1, gerando pSL5994.1.1. A análise de seqüências revelou que esse plasmídeo continha quarto erros de PCR no fragmento 3' 1.1 kb. A amplificação por PCR com iniciadores 8338.SL (como mostrado acima) e 8339.SL 5'-GAG GAA GGC CCT CCA CAG GCA TAT C-3' (SEQ ID NO: 59), produziu um fragmento 3' de gag-pro de FIV de 1.4 kb, que foi clonado em pCR2.1, gerando pSL6012.1.2. A seqüência inserida estava correta. O plasmídeo doador F8 de folwpox foi digerido com NruI e BarnHI e ligado com o fragmento 5' gag-pro de FIV de NruI-HindIII de 0.6 kb a partir de pSL5994.1.1 e o fragmento 3' gag-pro

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75/223 de FIV de HindIII-BamHI de 1.1 kb a partir de pSL6012.1.2, gerando pF8 H6p-FIV gag-pro (pSL6032.1.6).

[0184] Uma recombinação in vitro (IVR) foi realizada pela transfecção de células CEF primárias com o plasmídeo doador pF8 linearizado por NotI contendo gag-pro de FIV (pSL6032.1.6) usando reagentes de transfecção FuGENE 6. As células transfectadas foram subseqüentemente infectadas com vírus de aves domésticas como vírus de resgate em MOI de 10. Após 40 h de incubação em 37°C, as células transfectadasinfectadas foram colhidas, sonicadas e usadas para rastreamento de recombinantes. As placas recombinantes foram rastreadas com base no método de hibridação de “plaque lift” usando uma sonda específica para gag-pro de FIV que foi marcada com peroxidase de rábano silvestre de acordo com o protocolo do fabricante (Amersham). Após três ciclos seqüenciais de purificação da placa em 37°C, o recombinante expressando gag-pro de FIV designado como vFP2095 foi gerado. Placas únicas foram selecionadas a partir do terceiro ciclo de purificação de placa e expandidas para obter estoques P1 (60mm), P2 (frasco T75) e P3 e P4 (garrafa cilíndrica) de vFP2095. Os estoques P4 de vFP2095 foram confirmados por hibridação como 100% positivos para a sonda específica para FIV e 100% negativos para ORF de F8. Vírus recombinantes foram caracterizados por enzima de restrição e análises Southern blot. O lócus F8-H6p-FIV gag-pro-F8 foi amplificado por PCR e a seqüência completa confirmada. Expressão das proteínas gag-pro de FIV foi confirmada por análise de immunoblot.

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76/223 [0185] A expressão das proteínas gag-pro de FIV pelas várias quimeras em células de mamíferos foi analisada por immunoblot usando anticorpos monoclonais anti-gag de FIV de murino (mAbs) e comparada com aquela do recombinante ALVACFIV gag-pro ou vírus de aves domésticas-FIV gag-pro. Células mioblásticas C2C12 de camundongo ou células CRFK de rim de felino foram infectadas com as quimeras vCP2092, vCP2161 e vFP2192 e o recombinante ALVAC-FIV gag-pro vCP2089 e o recombinante vírus de aves domésticas-FIV gag-pro vFP2095 em MOI de 10 em 37°C. Após 24 h de infecção, os lisados celulares foram preparados e os meios de cultura coletados para análise por immunoblot. Amostras foram sumetidas à eletroforese em géis SDS-PAGE 10%, transferidas para uma membrana de náilon e testadas com mAbs anti-gag de FIV de murino. As análises de imunoblot dos lisados celulares de células C2C12 infectadas demonstrou a expressão de proteínas gag-pro de FIV a partir de todas as quimeras de vCP2092, vCP2161 e vFP2192 e o nível de expressão é comparável àquele do recombinante vCP2089 a base de ALVAC e do recombinante vFP2095 a base de vírus de aves domésticas (Figura 34A).

[0186] Também é notável que o processamento da proteína gag expressa pelas quimeras vCP2092, vCP2161 e vFP2192 foi muito mais eficiente do que aquele expresso pelo recombinante vCP2089 de ALVAC ou recombinante vFP2095 de vírus de aves domésticas. Adicionalmente, a proteína gag de FIV processada foi eficientemente secretada a partir de células C2C12 infectadas com as quimeras vCP2161 e vFP2192 (Figura 34B). Em contraste, não há secreção de proteína gag nas células infectadas com recombinante vCP2089 de ALVAC ou

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77/223 recombinante vFP2095 de vírus de aves domésticas (Figura 34B). A análise de imunoblot dos lisados celulares a partir de células CRFK infectadas, entretanto, mostrou um perfil de expressão diferente entre as quimeras. A quimera vFP2192 a base de vírus de aves domésticas expressou uma quantidade considerável de proteínas gag-pro, que é comparável àquela de vCP2089 e vFP2095 (Figura 35). Por outro lado, houve muito menos expressão de proteína gag observada com quimeras vCP2092 e vCP2161 a base de ALVAC (Figura 35) indicando que o nível de expressão de proteína entre as quimeras é dependente dos tipos celulares. A expressão de proteína de quimeras de vários mamíferos está resumida na Figura 36.

[0187] Embora a invenção anterior tenha sido descrita em alguns detalhes como meio de ilustração e exemplo com os propósitos de esclarecimento e compreensão, será evidente para aqueles versados na técnica que determinadas alterações e modificações podem ser feitas. Portanto, a descrição e os exemplos não devem ser considerados como limitantes do escopo da invenção, que está delineada nas reivindicações anexas.

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81/223

LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA <110> YAO, JIANSHENG

LOOSMORE, SHEENA MAY

AUDONNET, JEAN-CHRISTOPHE <120> VETORES QUIMÉRICOS <130> 574313-3242 <140> 10/958,267 <141> 2004-10-05 <160>60 <170> PatentIn Ver. 3.3 <210>1 <211>11150 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência de DNA sintético pJY505.1 <220>

<221> CDS <222> (538)..(7830) <220>

<221> CDS <222> (7932)..(9032) <400> 1 gcggccgcct atcaaaagtc ttaatgagtt aggtgtagat agtatagata ttactacaaa 60 ggtattcata tttcctatca attctaaagt agatgatatt aataactcaa agatgatgat 120 agtagataat agatacgctc atataatgac tgcaaatttg gacggttcac attttaatca 180 tcacgcgttc ataagtttca actgcataga tcaaaatctc actaaaaaga tagccgatgt 240 atttgagaga gattggacat ctaactacgc taaagaaatt acagttataa ataatacata 300 atggattttg ttatcatcag ttatatttaa cataagtaca ataaaaagta ttaaataaaa 360

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 224/695

82/223 atacttactt acgaaaaaat gactaattag ctataaaaac ccgggttctt tattctatac420 ttaaaaagtg aaaataaata caaaggttct tgatggcgga tgtgtgacat acacgacgcc480 aaaagatttt gttccagctc ctgccacctc cgctacgcga gagattaacc acccacg537

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Ser

Lys

Leu

Ala

565

570

575

ccc

gtg

cac

cct

cta

gca

gag

cag

gtg

aaa

ata

ata

aca

cat

aac

ggg

Pro

Val

HiS

Pro

Leu

Ala

Glu

Gln

Val

Lys

Ile

Ile

Thr

His

Asn

Gly

580

585

590

agg

gcc

ggc

ggt

tac

cag

gtc

gac

gga

tat

gac

ggc

agg

gtc

cta

cta

Arg

Ala

Gly Gly

Tyr

Gln

Val

Asp

Gly

Tyr

Asp

Gly

Arg

Val

Leu

Leu

595

600

605

cca

tgt

gga tcg

gcc

att

ccg

gtc

cct

gag

ttt

caa

gct

ttg

agc

gag

Pro

Cys

Gly Ser

Ala

Ile

Pro

Val

Pro

Glu

Phe

Gln

Ala

Leu

Ser

Glu

610 615 620

1977

2025

2073

2121

2169

2217

2265

2313

2361

2409

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 228/695

86/223

agc

gcc

act

atg

gtg

tac

aac

gaa

agg

gag

ttc

gtc

aac

agg

aaa

cta

2457

Ser

Ala

Thr

Met

Val

Tyr

Asn

Glu

Arg

Glu

Phe

Val

Asn

Arg

Lys

Leu

625

630

635

640

tac

cat

att

gcc

gtt

cac

gga

ccg

tcg

ctg

aac

acc

gac

gag

gag

aac

2505

Tyr

His

Ile

Ala

Val

His

Gly

Pro

Ser

Leu

Asn

Thr

Asp

Glu

Glu

Asn

645

650

655

tac

gag

aaa

gtc

aga

gct

gaa

aga

act

gac

gcc

gag

tac

gtg

ttc

gac

2553

Tyr

Glu

Lys

Val

Arg

Ala

Glu

Arg

Thr

Asp

Ala

Glu

Tyr

Val

Phe

Asp

660

665

670

gta

gat

aaa

aaa

tgc

tgc

gtc

aag

aga

gag

gaa

gcg

tcg

ggt

ttg

gtg

2601

Val

Asp

Lys

Lys

Cys

Cys

Val

Lys

Arg

Glu

Glu

Ala

Ser

Gly

Leu

Val

675

680

685

ttg

gtg

gga

gag

cta

acc

aac

ccc

ccg

ttc

cat

gaa

ttc

gcc

tac

gaa

2649

Leu

Val

Gly

Glu

Leu

Thr

Asn

Pro

Pro

Phe

His

Glu

Phe

Ala

Tyr

Glu

690

695

700

ggg

ctg

aag

atc

agg

ccg

tcg

gca

cca

tat

aag

act

aca

gta

gta

gga

2697

Gly

Leu

Lys

Ile

Arg

Pro

Ser

Ala

Pro

Tyr

Lys

Thr

Thr

Val

Val

Gly

705

710

715

720

gtc

ttt

ggg

gtt

ccg

gga

tca

ggc

aag

tct

gct

att

att

aag

agc

ctc

2745

Val

Phe

Gly

Val

Pro

Gly

Ser

Gly

Lys

Ser

Ala

Ile

Ile

Lys

Ser

Leu

725

730

735

gtg

acc

aaa

cac

gat

ctg

gtc

acc

agc

ggc

aag

aag

gag

aac

tgc

cag

2793

Val

Thr

Lys

His

Asp

Leu

Val

Thr

Ser

Gly

Lys

Lys

Glu

Asn

Cys

Gln

740

745

750

gaa

ata

gtt

aac

gac

gtg

aag

aag

cac

cgc

ggg

aag

ggg

aca

agt

agg

2841

Glu

Ile

Val

Asn

Asp

Val

Lys

Lys

His

Arg

Gly

Lys

Gly

Thr

Ser

Arg

755

760

765

gaa

aac

agt

gac

tcc

atc

ctg

cta

aac

ggg

tgt

cgt

cgt

gcc

gtg

gac

2889

Glu

Asn

Ser

Asp

Ser

Ile

Leu

Leu

Asn

Gly

Cys

Arg

Arg

Ala

Val

Asp

770 775 780

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 229/695

87/223

atc

cta

tat

gtg

gac

gag

gct

ttc

gct

tgc

cat

tcc

ggt

act

ctg

ctg

2937

Ile

Leu

Tyr

Val

Asp

Glu

Ala

Phe

Ala

Cys

His

Ser

Gly

Thr

Leu

Leu

785

790

795

800

gcc

cta

att

gct

ctt

gtt

aaa

cct

cgg

agc

aaa

gtg

gtg

tta

tgc

gga

2985

Ala

Leu

Ile

Ala

Leu

Val

Lys

Pro

Arg

Ser

Lys

Val

Val

Leu

Cys

Gly

805

810

815

gac

ccc

aag

caa

tgc

gga

ttc

ttc

aat

atg

atg

cag

ctt

aag

gtg

aac

3033

Asp

Pro

Lys

Gln

Cys

Gly

Phe

Phe

Asn

Met

Met

Gln

Leu

Lys

Val

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820

825

830

ttc

aac

cac

aac

atc

tgc

act

gaa

gta

tgt

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agt

ata

tcc

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3081

Phe

Asn

His

Asn

Ile

Cys

Thr

Glu

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Lys

Ser

Ile

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835

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cgt

tgc

acg

cgt

cca

gtc

acg

gcc

atc

gtg

tct

acg

ttg

cac

tac

gga

3129

Arg

Cys

Thr

Arg

Pro

Val

Thr

Ala

Ile

Val

Ser

Thr

Leu

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Tyr

Gly

850

855

860

ggc

aag

atg

cgc

acg

acc

aac

ccg

tgc

aac

aaa

ccc

ata

atc

ata

gac

3177

Gly

Lys

Met

Arg

Thr

Thr

Asn

Pro

Cys

Asn

Lys

Pro

Ile

Ile

Ile

Asp

865

870

875

880

acc

aca

gga

cag

acc

aag

ccc

aag

cca

gga

gac

atc

gtg

tta

aca

tgc

3225

Thr

Thr

Gly

Gln

Thr

Lys

Pro

Lys

Pro

Gly

Asp

Ile

Val

Leu

Thr

Cys

885

890

895

ttc

cga

ggc

tgg

gca

aag

cag

ctg

cag

ttg

gac

tac

cgt

gga

cac

gaa

3273

Phe

Arg

Gly

Trp

Ala

Lys

Gln

Leu

Gln

Leu

Asp

Tyr

Arg

Gly

His

Glu

900

905

910

gtc

atg

aca

gca

gca

gca

tct

cag

ggc

ctc

acc

cgc

aaa

ggg

gta

tac

3321

Val

Met

Thr

Ala

Ala

Ala

Ser

Gln

Gly

Leu

Thr

Arg

Lys

Gly

Val

Tyr

915

920

925

gcc

gta

agg

cag

aag

gtg

aat

gaa

aat

ccc

ttg

tat

gcc

cct

gcg

tcg

3369

Ala

Val

Arg

Gln

Lys

Val

Asn

Glu

Asn

Pro

Leu

Tyr

Ala

Pro

Ala

Ser

930 935 940

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 230/695

88/223

gag	cac	gtg aat gta	ctg ctg acg	cgc	act gag gat	agg	ctg	gtg	tgg	3417
Glu	His	Val Asn Val	Leu Leu Thr	Arg	Thr Glu Asp	Arg	Leu	Val	Trp
945			950		955				960
aaa	acg	ctg gcc ggc	gat ccc tgg	att	aag gtc cta	tca	aac	att	cca	3465
Lys	Thr	Leu Ala Gly	Asp Pro Trp	Ile	Lys Val Leu	Ser	Asn	Ile	Pro
		965			970			975
cag	ggt	aac ttt acg	gcc aca ttg	gaa	gaa tgg caa	gaa	gaa	cac	gac	3513
Gln	Gly	Asn Phe Thr	Ala Thr Leu	Glu	Glu Trp Gln	Glu	Glu	His	Asp
		980		985			990
aaa	ata	atg aag gtg	att gaa gga	ccg	gct gcg cct	gtg	gac	gcg	ttc	3561
Lys	Ile	Met Lys Val	Ile Glu Gly	Pro	Ala Ala Pro	Val	Asp	Ala	Phe
		995	1000		1005
cag	aac	aaa gcg aac	gtg tgt tgg	gcg	aaa agc ctg	gtg	cct	gtc	ctg	3609
Gln	Asn	Lys Ala Asn	Val Cys Trp	Ala	Lys Ser Leu	Val	Pro	Val	Leu
1010		1015		1020
gac	act	gcc gga atc	aga ttg aca	gca	gag gag tgg	agc	acc	ata	att	3657
Asp	Thr	Ala Gly Ile	Arg Leu Thr	Ala	Glu Glu Trp	Ser	Thr	Ile	Ile
1025	1030		1035			1040
aca	gca	ttt aag gag	gac aga gct	tac	tct cca gtg	gtg	gcc	ttg	aat	3705
Thr	Ala	Phe Lys Glu	Asp Arg Ala	Tyr	Ser Pro Val	Val	Ala	Leu	Asn
		1045		1050		1055
gaa	att	tgc acc aag	tac tat gga	gtt	gac ctg gac	agt	ggc	ctg	ttt	3753
Glu	Ile	Cys Thr Lys	Tyr Tyr Gly	Val	Asp Leu Asp	Ser	Gly	Leu	Phe
		1060	1065		1070
tct	gcc	ccg aag gtg	tcc ctg tat	tac	gag aac aac	cac	tgg	gat	aac	3801
Ser	Ala	Pro Lys Val	Ser Leu Tyr	Tyr	Glu Asn Asn	His	Trp	Asp	Asn
	1075	1080		1085
aga	cct	ggt gga agg	atg tat gga	ttc	aat gcc gca	aca	gct	gcc	agg	3849
Arg	Pro	Gly Gly Arg	Met Tyr Gly	Phe	Asn Ala Ala Thr	Ala	Ala	Arg

1090 1095 1100

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 231/695

89/223

ctg	gaa	gct aga cat	acc ttc ctg	aag	ggg cag tgg	cat	acg	ggc	aag	3897
Leu	Glu	Ala Arg His	Thr Phe Leu	Lys	Gly Gln Trp	His	Thr	Gly Lys
1105	1110		1115			1120
cag	gca	gtt atc gca	gaa aga aaa	atc	caa ccg ctt	tct	gtg	ctg	gac	3945
Gln	Ala	Val Ile Al a	Glu Arg Lys	Ile	Gln Pro Leu	Ser	Val	Leu	Asp
		1125		1130		1135
aat	gta	att cct atc	aac cgc agg	ctg	ccg cac gcc	ctg	gtg	gct	gag	3993
Asn	Val	Ile Pro Ile	Asn Arg Arg	Leu	Pro His Ala	Leu	Val	Ala	Glu
		1140	1145		1150
tac	aag	acg gtt aaa	ggc agt agg	gtt	gag tgg ctg	gtc	aat	aaa	gta	4041
Tyr	Lys	Thr Val Lys	Gly Ser Arg	Val	Glu Trp Leu	Val	Asn	Lys	Val
	1155	1160		1165
aga	ggg	tac cac gtc	ctg ctg gtg	agt	gag tac aac	ctg	gct	ttg	cct	4089
Arg	Gly	Tyr His Val	Leu Leu Val	Ser	Glu Tyr Asn	Leu	Ala	Leu	Pro
1170		1175		1180
cga	cgc	agg gtc act	tgg ttg tca	ccg	ctg aat gtc	aca	ggc	gcc	gat	4137
Arg Arg	Arg Val Thr	Trp Leu Ser	Pro	Leu Asn Val	Thr	Gly	Ala	Asp
1185	1190		1195			1200
agg	tgc	tac gac cta	agt tta gga	ctg	ccg gct gac	gcc	ggc	agg	ttc	4185
Arg	Cys	Tyr Asp Leu	Ser Leu Gly	Leu	Pro Ala Asp	Ala	Gly	Arg	Phe
		1205		1210		1215
gac	ttg	gtc ttt gtg	aac att cac	acg	gaa ttc aga	atc	cac	cac	tac	4233
Asp	Leu	Val Phe Val	Asn Ile His	Thr	Glu Phe Arg	Ile	His	His	Tyr
		1220	1225		1230
cag	cag	tgt gtc gac	cac gcc atg	aag	ctg cag atg	ctt	ggg	gga	gat	4281
Gln	Gln	Cys Val Asp	His Ala Met	Lys	Leu Gln Met	Leu	Gly Gly	Asp
	1235	1240		1245
gcg	gca	cga ctg cta	aaa ccc ggc	ggc	atc ttg atg	aga	gct	tac	gga	4329
Ala	Ala	Arg Leu Leu	Lys Pro Gly Gly	Ile Leu Met	Arg	Ala Tyr	Gly

1250 1255 1260

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 232/695

90/223

tac

gcc

gat

aaa

atc

agc

gaa

gcc

gtt

gtt

tcc

tcc

tta

agc

aga

aag

Tyr

Ala

Asp

Lys

Ile

Ser

Glu

Ala

Val

Val

Ser

Ser

Leu

Ser

Arg

Lys

1265

1270

1275

1280

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tcg

tct

gca

aga

gtg

ttg

cgc

ccg

gat

tgt

gtc

acc

agc

aat

aca

Phe

Ser

Ser

Ala

Arg

Val

Leu

Arg

Pro

Asp

Cys

Val

Thr

Ser

Asn

Thr

1285

1290

1295

gaa

gtg

ttc

ttg

ctg

ttc

tcc

aac

ttt

gac

aac

gga

aag

aga

ccc

tct

Glu

Val

Phe

Leu

Leu

Phe

Ser

Asn

Phe

Asp

Asn

Gly

Lys

Arg

Pro

Ser

1300

1305

1310

acg

cta

cac

cag

atg

aat

acc

aag

ctg

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gcc

gtg

tat

gcc

gga

gaa

Thr

Leu

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Gln

Met

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Thr

Lys

Leu

Ser

Ala

Val

Tyr

Ala

Gly

Glu

1315

1320

1325

gcc

atg

cac

acg

gcc

ggg

tgt

gca

cca

tcc

tac

aga

gtt

aag

aga

gca

Ala

Met

His

Thr

Ala

Gly

Cys

Ala

Pro

Ser

Tyr

Arg

Val

Lys

Arg

Ala

1330

1335

1340

gac

ata

gcc

acg

tgc

aca

gaa

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gct

gtg

gtt

aac

gca

gct

aac

gcc

Asp

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Ala

Thr

Cys

Thr

Glu

Ala

Ala

Val

Val

Asn

Ala

Ala

Asn

Ala

1345

1350

1355

1360

cgt

gga

act

gta

ggg

gat

ggc

gta

tgc

agg

gcc

gtg

gcg

aag

aaa

tgg

Arg

Gly

Thr

Val

Gly

Asp

Gly

Val

Cys

Arg

Ala

Val

Ala

Lys

Lys

Trp

1365

1370

1375

ccg

tca

gcc

ttt

aag

gga

gca

gca

aca

cca

gtg

ggc

aca

att

aaa

aca

Pro

Ser

Ala

Phe

Lys

Gly

Ala

Ala

Thr

Pro

Val

Gly

Thr

Ile

Lys

Thr

1380

1385

1390

gtc

atg

tgc

ggc

tcg

tac

ccc

gtc

atc

cac

gct

gta

gcg

cct

aat

ttc

Val

Met

Cys

Gly

Ser

Tyr

Pro

Val

Ile

His

Ala

Val

Ala

Pro

Asn

Phe

1395

1400

1405

tct

gcc

acg

act

gaa

gcg

gaa

ggg

gac

cgc

gaa

ttg

gcc

gct

gtc

tac

Ser

Ala Thr

Thr

Glu

Ala

Glu Gly

Asp

Arg

Glu

Leu

Ala

Ala

Val

Tyr

4377

4425

4473

4521

4569

4617

4665

4713

4761

4809

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 233/695

91/223

1410

1415

1420

cgg

gca

gtg

gcc

gcc

gaa

gta

aac

aga

ctg

tca

ctg

agc

agc

gta gcc

Arg

Ala

Val

Ala

Ala Glu

Val

Asn

Arg

Leu

Ser

Leu

Ser

Ser

Val

Ala

1425

1430

1435

1440

atc

ccg

ctg

ctg

tcc

aca

gga

gtg

ttc

agc

ggc

gga

aga

gat

agg

ctg

Ile

Pro

Leu

Leu

Ser

Thr

Gly

Val

Phe

Ser

Gly Gly

Arg

Asp

Arg

Leu

1445

1450

1455

cag

caa

tcc

ctc

aac

cat

cta

ttc

aca

gca

atg

gac

gcc

acg

gac

gct

Gln

Gln

Ser

Leu

Asn

His

Leu

Phe

Thr

Ala

Met

Asp

Ala

Thr

Asp

Ala

1460

1465

1470

gac

gtg

acc

atc

tac

tgc

aga

gac

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agt

tgg

gag

aag

aaa

atc

cag

Asp

Val

Thr

Ile

Tyr

Cys

Arg

Asp

Lys

Ser

Trp

Glu

Lys

Lys

Ile

Gln

1475

1480

1485

gaa

gcc

att

gac

atg

agg

acg

gct

gtg

gag

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ctc

aat

gat

gac

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Glu

Ala

Ile

Asp

Met

Arg

Thr

Ala

Val

Glu

Leu

Leu

Asn

Asp

Asp

Val

1490

1495

1500

gag

ctg

acc

aca

gac

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gtg

aga

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cac

ccg

gac

agc

agc

ctg

gtg

Glu

Leu

Thr

Thr

Asp

Leu

Val

Arg

Val

His

Pro

Asp

Ser

Ser

Leu

Val

1505

1510

1515

1520

ggt

cgt

aag

ggc

tac

agt

acc

act

gac

ggg

tcg

ctg

tac

tcg

tac

ttt

Gly

Arg

Lys

Gly

Tyr

Ser

Thr

Thr

Asp

Gly

Ser

Leu

Tyr

Ser

Tyr

Phe

1525

1530

1535

gaa

ggt

acg

aaa

ttc

aac

cag

gct

gct

att

gat

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gag

ata

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Glu

Gly

Thr

Lys

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Gln

Ala

Ala

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Leu

1540

1545

1550

acg

ttg

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ccc

aga

ctg

caa

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gca

aac

gaa

cag

ata

tgc

cta

tac

Thr

Leu

Trp

Pro

Arg

Leu

Gln

Glu

Ala

Asn

Glu

Gln

Ile

Cys

Leu

Tyr

1555

1560

1565

gcg

ctg

ggc

gaa

aca

atg

gac

aac

atc

aga

tcc

aaa

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ccg

gtg

aac

Ala

Leu Gly

Glu

Thr

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Asp Asn

Ile

Arg

Ser

Lys

Cys

Pro

Val

Asn

4857

4905

4953

5001

5049

5097

5145

5193

5241

5289

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 234/695

92/223

1570 1575 1580

gat	tcc	gat tca tca	aca cct ccc	agg	aca gtg ccc	tgc	ctg	tgc	cgc	5337
Asp	Ser	Asp Ser Ser	Thr Pro Pro	Arg	Thr Val Pro	Cys	Leu	Cys	Arg
1585	1590		1595			1600
tac	gca	atg aca gca	gaa cgg atc	gcc	cgc ctt agg	tca	cac	caa	gtt	5385
Tyr	Ala	Met Thr Ala	Glu Arg Ile	Ala	Arg Leu Arg	Ser	His	Gln	Val
		1605		1610		1615
aaa	agc	atg gtg gtt	tgc tca tct	ttt	ccc ctc ccg	aaa	tac	cat	gta	5433
Lys	Ser	Met Val Val	Cys Ser Ser	Phe	Pro Leu Pro	Lys	Tyr	His	Val
		1620	1625		1630
gat	ggg	gtg cag aag	gta aag tgc	gag	aag gtt ctc	ctg	ttc	gac	ccg	5481
Asp	Gly	Val Gln Lys	Val Lys Cys	Glu	Lys Val Leu	Leu	Phe	Asp	Pro
	1635	1640		1645
acg	gta	cct tca gtg	gtt agt ccg	cgg	aag tat gcc	gca	tct	acg	acg	5529
Thr	Val	Pro Ser Val	Val Ser Pro	Arg	Lys Tyr Ala	Ala	Ser	Thr	Thr
1650		1655		1660
gac	cac	tca gat cgg	tcg tta cga	ggg	ttt gac ttg	gac	tgg	acc	acc	5577
Asp	His	Ser Asp Arg	Ser Leu Arg	Gly	Phe Asp Leu	Asp	Trp	Thr	Thr
1665	1670		1675			1680
gac	tcg	tct tcc act	gcc agc gat	acc	atg tcg cta	ccc	agt	ttg	cag	5625
Asp	Ser	Ser Ser Thr	Ala Ser Asp	Thr	Met Ser Leu	Pro	Ser	Leu	Gln
		1685		1690		1695
tcg	tgt	gac atc gac	tcg atc tac	gag	cca atg gct	ccc	ata	gta	gtg	5673
Ser	Cys	Asp Ile Asp	Ser Ile Tyr	Glu	Pro Met Ala	Pro	Ile	Val	Val
		1700	1705		1710
acg	gct	gac gta cac	cct gaa ccc	gca	ggc atc gcg	gac	ctg	gcg	gca	5721
Thr	Ala	Asp Val His	Pro Glu Pro	Ala	Gly Ile Ala	Asp	Leu	Ala	Ala
	1715	1720		1725
gat	gtg	cac cct gaa	ccc gca gac	cat	gtg gac ctc	gag	aac	ccg	att	5769
Asp	Val	His Pro Glu	Pro Ala Asp	His	Val Asp Leu	Glu	Asn	Pro	Ile

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 235/695

93/223

1730 1735 1740

cct	cca	ccg cgc ccg	aag aga gct	gca	tac ctt gcc	tcc	cgc	gcg	gcg	5817
Pro	Pro	Pro Arg Pro	Lys Arg Ala	Ala	Tyr Leu Ala	Ser	Arg	Ala Ala
1745	1750		1755			1760
gag	cga	ccg gtg ccg	gcg ccg aga	aag	ccg acg cct	gcc	cca	agg	act	5865
Glu	Arg	Pro Val Pro	Ala Pro Arg	Lys	Pro Thr Pro	Ala	Pro	Arg	Thr
		1765		1770		1775
gcg	ttt	agg aac aag	ctg cct ttg	acg	ttc ggc gac	ttt	gac	gag	cac	5913
Ala	Phe	Arg Asn Lys	Leu Pro Leu	Thr	Phe Gly Asp	Phe	Asp	Glu	His
		1780	1785		1790
gag	gtc	gat gcg ttg	gcc tcc ggg	att	act ttc gga	gac	ttc	gac	gac	5961
Glu	Val	Asp Ala Leu	Ala Ser Gly	Ile	Thr Phe Gly	Asp	Phe	Asp	Asp
	1795	1800		1805
gtc	ctg	cga cta ggc	cgc gcg ggt	gca	tat att ttc	tcc	tcg	gac	act	6009
Val	Leu	Arg Leu Gly	Arg Ala Gly	Ala	Tyr Ile Phe	Ser	Ser	Asp	Thr
1810		1815		1820
ggc	agc	gga cat tta	caa caa aaa	tcc	gtt agg cag	cac	aat	ctc	cag	6057
Gly Ser	Gly His Leu	Gln Gln Lys	Ser	Val Arg Gln	His	Asn	Leu	Gln
1825	1830		1835			1840
tgc	gca	caa ctg gat	gcg gtc cag	gag	gag aaa atg	tac	ccg	cca	aaa	6105
Cys	Ala	Gln Leu Asp	Ala Val Gln	Glu	Glu Lys Met	Tyr	Pro	Pro	Lys
		1845		1850		1855
ttg	gat	act gag agg	gag aag ctg	ttg	ctg ctg aaa	atg	cag	atg	cac	6153
Leu	Asp	Thr Glu Arg	Glu Lys Leu	Leu	Leu Leu Lys	Met	Gln	Met	His
		1860	1865		1870
cca	tcg	gag gct aat	aag agt cga	tac	cag tct cgc	aaa	gtg	gag	aac	6201
Pro	Ser	Glu Ala Asn	Lys Ser Arg	Tyr	Gln Ser Arg	Lys	Val	Glu	Asn
	1875	1880		1885
atg	aaa	gcc acg gtg	gtg gac agg	ctc	aca tcg ggg	gcc	aga	ttg	tac	6249
Met	Lys	Ala Thr Val	Val Asp Arg	Leu	Thr Ser Gly Ala	Arg	Leu	Tyr

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 236/695

94/223

1890 1895 1900

acg	gga	gcg gac gta	ggc cgc ata	cca	aca tac gcg	gtt	cgg	tac	ccc	6297
Thr Gly	Ala Asp Val	Gly Arg Ile	Pro	Thr Tyr Ala	Val	Arg	Tyr	Pro
1905	1910		1915			1920
cgc	ccc	gtg tac tcc	cct acc gtg	atc	gaa aga ttc	tca	agc	ccc	gat	6345
Arg	Pro	Val Tyr Ser	Pro Thr Val	Ile	Glu Arg Phe	Ser	Ser	Pro	Asp
		1925		1930		1935
gta	gca	atc gca gcg	tgc aac gaa	tac	cta tcc aga	aat	tac	cca	aca	6393
Val	Ala	Ile Ala Ala	Cys Asn Glu	Tyr	Leu Ser Arg	Asn	Tyr	Pro	Thr
		1940	1945		1950
gtg	gcg	tcg tac cag	ata aca gat	gaa	tac gac gca	tac	ttg	gac	atg	6441
Val	Ala	Ser Tyr Gln	Ile Thr Asp	Glu	Tyr Asp Ala	Tyr	Leu	Asp	Met
	1955	1960		1965
gtt	gac	ggg tcg gat	agt tgc ttg	gac	aga gcg aca	ttc	tgc	ccg	gcg	6489
Val	Asp	Gly Ser Asp	Ser Cys Leu	Asp	Arg Ala Thr	Phe	Cys	Pro	Ala
1970		1975		1980
aag	ctc	cgg tgc tac	ccg aaa cat	cat	gcg tac cac	cag	ccg	act	gta	6537
Lys	Leu	Arg Cys Tyr	Pro Lys His	His	Ala Tyr His	Gln	Pro	Thr	Val
1985	1990		1995			2000
cgc	agt	gcc gtc ccg	tca ccc ttt	cag	aac aca cta	cag	aac	gtg	cta	6585
Arg	Ser	Ala Val Pro	Ser Pro Phe	Gln	Asn Thr Leu	Gln	Asn	Val	Leu
		2005		2010		2015
gcg	gcc	gcc acc aag	aga aac tgc	aac	gtc acg caa	atg	cga	gaa	cta	6633
Ala	Ala	Ala Thr Lys	Arg Asn Cys	Asn	Val Thr Gln	Met	Arg	Glu	Leu
		2020	2025		2030
ccc	acc	atg gac tcg	gca gtg ttc	aac	gtg gag tgc	ttc	aag	cgc	tat	6681
Pro	Thr	Met Asp Ser	Ala Val Phe	Asn	Val Glu Cys	Phe	Lys	Arg	Tyr
	2035	2040		2045
gcc	tgc	tcc gga gaa	tat tgg gaa	gaa	tat gct aaa	caa	cct	atc	cgg	6729
Ala	Cys	Ser Gly Glu	Tyr Trp Glu	Glu	Tyr Ala Lys	Gln	Pro	Ile	Arg

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 237/695

95/223

2050 2055 2060

ata	acc	act gag aac	atc act acc	tat	gtg acc aaa	ttg	aaa	ggc	ccg	6777
Ile	Thr	Thr Glu Asn	Ile Thr Thr	Tyr	Val Thr Lys	Leu	Lys	Gly Pro
2065	2070		2075			2080
aaa	gct	gct gcc ttg	ttc gct aag	acc	cac aac ttg	gtt	ccg	ctg	cag	6825
Lys	Ala	Ala Ala Leu	Phe Ala Lys	Thr	His Asn Leu	Val	Pro	Leu	Gln
		2085		2090		2095
gag	gtt	ccc atg gac	aga ttc acg	gtc	gac atg aaa	cga	gat	gtc	aaa	6873
Glu	Val	Pro Met Asp	Arg Phe Thr	Val	Asp Met Lys	Arg	Asp	Val	Lys
		2100	2105		2110
gtc	act	cca ggg acg	aaa cac aca	gag	gaa aga ccc	aaa	gtc	cag	gta	6921
Val	Thr	Pro Gly Thr	Lys His Thr	Glu	Glu Arg Pro	Lys	Val	Gln	Val
	2115	2120		2125
att	caa	gca gcg gag	cca ttg gcg	acc	gct tac ctg	tgc	ggc	atc	cac	6969
Ile	Gln	Ala Ala Glu	Pro Leu Ala	Thr	Ala Tyr Leu	Cys	Gly	Ile	His
2130		2135		2140
agg	gaa	tta gta agg	aga cta aat	gct	gtg tta cgc	cct	aac	gtg	cac	7017
Arg	Glu	Leu Val Arg	Arg Leu Asn	Ala	Val Leu Arg	Pro	Asn	Val	His
2145	2150		2155			2160
aca	ttg	ttt gat atg	tcg gcc gaa	gac	ttt gac gcg	atc	atc	gcc	tct	7065
Thr	Leu	Phe Asp Met	Ser Ala Glu	Asp	Phe Asp Ala	Ile	Ile	Ala	Ser
		2165		2170		2175
cac	ttc	cac cca gga	gac ccg gtt	cta	gag acg gac	att	gca	tca	ttc	7113
His	Phe	His Pro Gly	Asp Pro Val	Leu	Glu Thr Asp	Ile	Ala	Ser	Phe
		2180	2185		2190
gac	aaa	agc cag gac	gac tcc ttg	gct	ctt aca ggt	tta	atg	atc	ctc	7161
Asp	Lys	Ser Gln Asp	Asp Ser Leu	Ala	Leu Thr Gly	Leu	Met	Ile	Leu
	2195	2200		2205
gaa	gat	cta ggg gtg	gat cag tac	ctg	ctg gac ttg	atc	gag	gca	gcc	7209
Glu	Asp	Leu Gly Val	Asp Gln Tyr	Leu	Leu Asp Leu	Ile	Glu	Ala	Ala

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 238/695

96/223

2210 2215 2220

ttt	ggg	gaa ata tcc	agc tgt cac	cta	cca act ggc	acg	cgc	ttc	aag	7257
Phe Gly	Glu Ile Ser	Ser Cys His	Leu	Pro Thr Gly	Thr	Arg	Phe	Lys
2225	2230		2235			2240
ttc	gga	gct atg atg	aaa tcg ggc	atg	ttt ctg act	ttg	ttt	att	aac	7305
Phe	Gly	Ala Met Met	Lys Ser Gly	Met	Phe Leu Thr	Leu	Phe	Ile	Asn
		2245		2250		2255
act	gtt	ttg aac atc	acc ata gca	agc	agg gta ctg	gag	cag	aga	ctc	7353
Thr	Val	Leu Asn Ile	Thr Ile Ala	Ser	Arg Val Leu	Glu	Gln	Arg	Leu
		2260	2265		2270
act	gac	tcc gcc tgt	gcg gcc ttc	atc	ggc gac gac	aac	atc	gtt	cac	7401
Thr	Asp	Ser Ala Cys	Ala Ala Phe	Ile	Gly Asp Asp	Asn	Ile	Val	His
	2275	2280		2285
gga	gtg	atc tcc gac	aag ctg atg	gcg	gag agg tgc	gcg	tcg	tgg	gtc	7449
Gly	Val	Ile Ser Asp	Lys Leu Met	Ala	Glu Arg Cys	Ala	Ser	Trp	Val
2290		2295		2300
aac	atg	gag gtg aag	atc att gac	gct	gtc atg ggc	gaa	aaa	ccc	cca	7497
Asn	Met	Glu Val Lys	Ile Ile Asp	Ala	Val Met Gly	Glu	Lys	Pro	Pro
2305	2310		2315			2320
tat	ttc	tgt ggg gga	ttc ata gtt	ttt	gac agc gtc	aca	cag	acc	gcc	7545
Tyr	Phe	Cys Gly Gly	Phe Ile Val	Phe	Asp Ser Val	Thr	Gln	Thr	Ala
		2325		2330		2335
tgc	cgt	gtt tca gac	cca ctt aag	cgc	ctg ttc aag	ttg	ggt	aag	ccg	7593
Cys	Arg	Val Ser Asp	Pro Leu Lys	Arg	Leu Phe Lys	Leu	Gly	Lys	Pro
		2340	2345		2350
cta	aca	gct gaa gac	aag cag gac	gaa	gac agg cga	cga	gca	ctg	agt	7641
Leu	Thr	Ala Glu Asp	Lys Gln Asp	Glu	Asp Arg Arg	Arg	Ala	Leu	Ser
	2355	2360		2365
gac	gag	gtt agc aag	tgg ttc cgg	aca	ggc ttg ggg	gcc	gaa	ctg	gag	7689
Asp	Glu	Val Ser Lys	Trp Phe Arg	Thr	Gly Leu Gly Ala	Glu	Leu	Glu

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 239/695

97/223

2370 2375 2380

gtg	gca cta	aca tct agg tat	gag gta gag ggc tgc aaa agt	atc ctc	7737
Val	Ala Leu	Thr Ser Arg Tyr	Glu Val Glu Gly Cys Lys Ser	Ile Leu
2385	2390	2395	2400
ata	gcc atg	gcc acc ttg gcg	agg gac att aag gcg ttt aag	aaa ttg	7785
Ile	Ala Met	Ala Thr Leu Ala	Arg Asp Ile Lys Ala Phe Lys	Lys Leu
		2405	2410 2415
aga	gga cct	gtt ata cac ctc	tac ggc ggt cct aga ttg gtg	cgt	7830
Arg	Gly Pro	Val Ile His Leu	Tyr Gly Gly Pro Arg Leu Val	Arg
	2420	2425 2430
taatacacag	aattctgatt ggatccccgg accgtgttga caattaatca tcggcatagt	7890
atatcggcat	agtataatac gacaaggtga ggaactaaac c atg gcc tcc aaa gga	7946

Met Ala Ser Lys Gly

2435

gaa

gaa

ctt

ttc

act

gga

gtt

gtc

cca

att

ctt

gtt

gaa

tta

gat

ggt

7994

Glu

Glu

Leu

Phe

Thr

Gly

Val

Val

Pro

Ile

Leu

Val

Glu

Leu

Asp

Gly

2440

2445

2450

gat

gtt

aat

ggg

cac

aaa

ttt

tct

gtc

agt

gga

gag

ggt

gaa

ggt

gat

8042

Asp

Val

Asn

Gly

His

Lys

Phe

Ser

Val

Ser

Gly

Glu

Gly

Glu

Gly

Asp

2455

2460

2465

gct

aca

tac

gga

aag

ctt

acc

ctt

aaa

ttt

att

tgc

act

act

gga

aaa

8090

Ala

Thr

Tyr

Gly

Lys

Leu

Thr

Leu

Lys

Phe

Ile

Cys

Thr

Thr

Gly

Lys

2470

2475

2480

cta

cct

gtt

cca

tgg

cca

aca

ctt

gtc

act

act

ttc

tct

tat

ggt

gtt

8138

Leu

Pro

Val

Pro

Trp

Pro

Thr

Leu

Val

Thr

Thr

Phe

Ser

Tyr

Gly

Val

2485

2490

2495

2500

caa

tgc

ttt

tcc

cgt

tat

ccg

gat

cat

atg

aaa

cgg

cat

gac

ttt

ttc

8186

Gln

Cys

Phe

Ser

Arg

Tyr

Pro

Asp

His

Met

Lys

Arg

His

Asp

Phe

Phe

2505

2510

2515

aag

agt

gcc

atg

ccc

gaa

ggt

tat

gta

cag

gaa

cgc

act

ata

tct

ttc

8234

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 240/695

98/223

Lys

Ser

Ala Met 2520

Pro

Glu

Gly Tyr Val 2525

Gln Glu

Arg Thr Ile 2530

Ser

Phe

aaa

gat

gac

ggg

aac

tac

aag

acg

cgt

gct

gaa

gtc

aag

ttt

gaa

ggt

8282

Lys

Asp

Asp

Gly

Asn

Tyr

Lys

Thr

Arg

Ala

Glu

Val

Lys

Phe

Glu

Gly

2535

2540

2545

gat

acc

ctt

gtt

aat

cgt

atc

gag

tta

aaa

ggt

att

gat

ttt

aaa

gaa

8330

Asp

Thr

Leu

Val

Asn

Arg

Ile

Glu

Leu

Lys

Gly

Ile

Asp

Phe

Lys

Glu

2550

2555

2560

gat

gga

aac

att

ctc

gga

cac

aaa

ctc

gag

tac

aac

tat

aac

tca

cac

8378

Asp Gly

Asn

Ile

Leu

Gly

His

Lys

Leu

Glu

Tyr

Asn

Tyr

Asn

Ser

His

2565

2570

2575

2580

aat

gta

tac

atc

acg

gca

gac

aaa

caa

aag

aat

gga

atc

aaa

gct

aac

8426

Asn

Val

Tyr

Ile

Thr

Ala

Asp

Lys

Gln

Lys

Asn

Gly

Ile

Lys

Ala

Asn

2585

2590

2595

ttc

aaa

att

cgt

cac

aac

att

gaa

gat

gga

tcc

gtt

caa

cta

gca

gac

8474

Phe

Lys

Ile

Arg

His

Asn

Ile

Glu

Asp

Gly

Ser

Val

Gln

Leu

Ala

Asp

2600

2605

2610

cat

tat

caa

caa

aat

act

cca

att

ggc

gat

ggc

cct

gtc

ctt

tta

cca

8522

His

Tyr

Gln

Gln

Asn

Thr

Pro

Ile

Gly

Asp

Gly

Pro

Val

Leu

Leu

Pro

2615

2620

2625

gac

aac

cat

tac

ctg

tcg

aca

caa

tct

gcc

ctt

tcg

aaa

gat

ccc

aac

8570

Asp

Asn

His

Tyr

Leu

Ser

Thr

Gln

Ser

Ala

Leu

Ser

Lys

Asp

Pro

Asn

2630

2635

2640

gaa

aag

cgt

gac

cac

atg

gtc

ctt

ctt

gag

ttt

gta

act

gct

gct

ggg

8618

Glu

Lys

Arg

Asp

His

Met

Val

Leu

Leu

Glu

Phe

Val

Thr

Ala

Ala

Gly

2645

2650

2655

2660

att

aca

cat

ggc

atg

gat

cag

gcc

aag

cct

ttg

tct

caa

gaa

gaa

tcc

8666

Ile

Thr

His

Gly

Met

Asp

Gln

Ala

Lys

Pro

Leu

Ser

Gln

Glu

Glu

Ser

2665

2670

2675

acc

ctc

att

gaa

aga

gca

acg

gct

aca

atc

aac

agc

atc

ccc

atc

tct

8714

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 241/695

99/223

Thr

Leu

Ile Glu Arg Ala Thr Ala Thr Ile Asn

Ser Ile Pro 2690

Ile

Ser

2680

2685

gaa

gac

tac

agc

gtc

gcc

agc

gca

gct

ctc

tct

agc

gac

ggc

cgc

atc

Glu

Asp

Tyr

Ser

Val

Ala

Ser

Ala

Ala

Leu

Ser

Ser

Asp

Gly

Arg

Ile

2695

2700

2705

ttc

act

ggt

gtc

aat

gta

tat

cat

ttt

act

ggg

gga

cct

tgt

gca

gaa

Phe

Thr

Gly

Val

Asn

Val

Tyr

His

Phe

Thr

Gly Gly

Pro

Cys

Ala

Glu

2710

2715

2720

ctc

gtg

gtg

ctg

ggc

act

gct

gct

gct

gcg

gca

gct

ggc

aac

ctg

act

Leu

Val

Val

Leu

Gly

Thr

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

Gly

Asn

Leu

Thr

2725

2730

2735

2740

tgt

atc

gtc

gcg

atc

gga

aat

gag

aac

agg

ggc

atc

ttg

agc

ccc

tgc

Cys

Ile

Val

Ala

Ile

Gly

Asn

Glu

Asn

Arg

Gly

Ile

Leu

Ser

Pro

Cys

2745

2750

2755

gga

cgg

tgc

cga

cag

gtg

ctt

ctc

gat

ctg

cat

cct

ggg

atc

aaa

gcc

Gly

Arg

Cys

Arg

Gln

Val

Leu

Leu

Asp

Leu

His

Pro

Gly

Ile

Lys

Ala

2760

2765

2770

ata

gtg

aag

gac

agt

gat

gga

cag

ccg

acg

gca

gtt

ggg

att

cgt

gaa

Ile

Val

Lys

Asp

Ser

Asp

Gly

Gln

Pro

Thr

Ala

Val

Gly Ile

Arg

Glu

2775

2780

2785

ttg

ctg

ccc

tct

ggt

tat

gtg tgg

gag

ggc

taagcacttc gtgggtaatt

Leu

Leu

Pro

Ser

Gly

Tyr

Val

Trp

Glu

Gly

2790 2795

8762

8810

8858

8906

8954

9002

9052 aattgaatta cccgtccttg agcagatgca ctcctgctag agcccaagaa agaagaagaa tcttcgtatg catccctacg gccgttgcag gcaactcatc gcctcccaaa gatcaacgga gaaacccgga cggctagcca caaacgtttt gccactccgg agcgccgtaa ccaaagaaga aaaacgcagc aaaagagaaa cagtaacgta acggccgccg tggctcccgt atgcgctgac agaagacaac agcaaaagaa gaatgtgcat gtgtttccag gtggcgcccg cgtccccgac aatgagacag caaaccaaag gaaagacaag gaagattgaa acatgtcggg cgcccggcgg ttccaggccc aacgcaattg ccgaaaacgc caagccgaca aatgactgta caccgcacta

9112

9172

9232

9292

9352

9412

9472

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 242/695

100/223

tcatgggtgc	agaaaatctc gggtggtctg ggggccttcg caatcggcgc tatcctggtg 9532
ctggttgtgg	tcacttgcat tgggctccgc agataagtta gggtaggcaa tggcattgat 9592
atagcaagaa	aattgaaaac agaaaaagtt agggtaagca atggcatata accataactg 9652
tataacttgt	aacaaagcgc aacaagacct gcgcaattgg ccccgtggtc cgcctcacgg 9712
aaactcgggg	caactcatat tgacacatta attggcaata attggaagct tacataagct 9772
taattcgacg	aataattgga tttatatttt attttgcaat tggtttttaa tatttccaaa 9832
aaaaaaaaaa	aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaacgggtc 9892
ggcatggcat	ctccacctcc tcgcggtccg acctgggcat ccgaaggagg acgcacgtcc 9952
actcggatgg	ctaagggagt ttttctacta gtcaaatgag tatatataat tgaaaaagta 10012
aaatataaat	catataataa tgaaacgaaa tatcagtaat agacaggaac tggcagattc 10072
ttcttctaat	gaagtaagta ctgctaaatc tccaaaatta gataaaaatg atacagcaaa 10132
tacagcttca	ttcaacgaat taccttttaa ttttttcaga cacaccttat tacaaactaa 10192
ctaagtcaga	tgatgagaaa gtaaatataa atttaactta tgggtataat ataataaaga 10252
ttcatgatat	taataattta cttaacgatg ttaatagact tattccatca accccttcaa 10312
acctttctgg	atattataaa ataccagtta atgatattaa aatagattgt ttaagagatg 10372
taaataatta	tttggaggta aaggatataa aattagtcta tctttcacat ggaaatgaat 10432
tacctaatat	taataattat gataggaatt ttttaggatt tacagctgtt atatgtatca 10492
acaatacagg	cagatctatg gttatggtaa aacactgtaa cgggaagcag cattctatgg 10552
taactggcct	atgtttaata gccagatcat tttactctat aaacatttta ccacaaataa 10612
taggatcctc	tagatattta atattatatc taacaacaac aaaaaaattt aacgatgtat 10672
ggccagaagt	attttctact aataaagata aagatagtct atcttatcta caagatatga 10732
aagaagataa	tcatttagta gtagctacta atatggaaag aaatgtatac aaaaacgtgg 10792
aagcttttat	attaaatagc atattactag aagatttaaa atctagactt agtataacaa 10852
aacagttaaa	tgccaatatc gattctatat ttcatcataa cagtagtaca ttaatcagtg 10912
atatactgaa	acgatctaca gactcaacta tgcaaggaat aagcaatatg ccaattatgt 10972
ctaatatttt	aactttagaa ctaaaacgtt ctaccaatac taaaaatagg atacgtgata 11032
ggctgttaaa	agctgcaata aatagtaagg atgtagaaga aatactttgt tctatacctt 11092
cggaggaaag	aactttagaa caacttaagt ttaatcaaac ttgtatttat gaaggtac 11150

<210> 2 <211> 9981

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 243/695

101/223 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência DNA sintético pJYC6SFL713A1

<220>

<221> CDS

<222> (530)..(7822)

<400> 2

ctatcaaaag tcttaatgag ttaggtgtag atagtataga tattactaca aaggtattca 60

tatttcctat caattctaaa gtagatgata ttaataactc aaagatgatg atagtagata 120

atagatacgc tcatataatg actgcaaatt tggacggttc acattttaat catcacgcgt 180

tcataagttt caactgcata gatcaaaatc tcactaaaaa gatagccgat gtatttgaga 240

gagattggac atctaactac gctaaagaaa ttacagttat aaataataca taatggattt 300

tgttatcatc agttatattt aacataagta caataaaaag tattaaataa aaatacttac 360

ttacgaaaaa atgactaatt agctataaaa acccgggttc tttattctat acttaaaaag 420

tgaaaataaa tacaaaggtt cttgatggcg gatgtgtgac atacacgacg ccaaaagatt 480

ttgttccagc tcctgccacc tccgctacgc gagagattaa ccacccacg atg gcc gcc 538

Met Ala Ala

aaa

gtg

cat

gtt

gat

att

gag

gct

gac

agc

cca

ttc

atc

aag

tct

ttg

586

Lys

Val

His

Val

Asp

Ile

Glu

Ala

Asp

Ser

Pro

Phe

Ile

Lys

Ser

Leu

5

10

15

cag

aag

gca

ttt

ccg

tcg

ttc

gag

gtg

gag

tca

ttg

cag

gtc

aca

cca

634

Gln

Lys

Ala

Phe

Pro

Ser

Phe

Glu

Val

Glu

Ser

Leu

Gln

Val

Thr

Pro

20

25

30

35

aat

gac

cat

gca

aat

gcc

aga

gca

ttt

tcg

cac

ctg

gct

acc

aaa

ttg

682

Asn

Asp

His

Ala

Asn

Ala

Arg

Ala

Phe

Ser

His

Leu

Ala

Thr

Lys

Leu

40

45

50

atc

gag

cag

gag

act

gac

aaa

gac

aca

ctc

atc

ttg

gat

atc

ggc

agt

730

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 244/695

102/223

Ile Glu Gln

Glu 55

Thr

Asp Lys Asp Thr Leu Ile Leu 60

Asp

Ile 65

Gly

Ser

gcg

cct

tcc

agg

aga

atg

atg

tct

acg

cac

aaa

tac

cac

tgc

gta

tgc

778

Ala

Pro

Ser

Arg

Arg

Met

Met

Ser

Thr

His

Lys

Tyr

His

Cys

Val

Cys

70

75

80

cct

atg

cgc

agc

gca

gaa

gac

ccc

gaa

agg

ctc

gat

agc

tac

gca

aag

826

Pro

Met

Arg

Ser

Ala

Glu

Asp

Pro

Glu

Arg

Leu

Asp

Ser

Tyr

Ala

Lys

85

90

95

aaa

ctg

gca

gcg

gcc

tcc

ggg

aag

gtg

ctg

gat

aga

gag

atc

gca

gga

874

Lys

Leu

Ala

Ala

Ala

Ser

Gly

Lys

Val

Leu

Asp

Arg

Glu

Ile

Ala

Gly

100

105

110

115

aaa

atc

acc

gac

ctg

cag

acc

gtc

atg

gct

acg

cca

gac

gct

gaa

tct

922

Lys

Ile

Thr

Asp

Leu

Gln

Thr

Val

Met

Ala

Thr

Pro

Asp

Ala

Glu

Ser

120

125

130

cct

acc

ttt

tgc

ctg

cat

aca

gac

gtc

acg

tgt

cgt

acg

gca

gcc

gaa

970

Pro

Thr

Phe

Cys

Leu

His

Thr

Asp

Val

Thr

Cys

Arg

Thr

Ala

Ala

Glu

135

140

145

gtg

gcc

gta

tac

cag

gac

gtg

tat

gct

gta

cat

gca

cca

aca

tcg

ctg

1018

Val

Ala

Val

Tyr

Gln

Asp

Val

Tyr

Ala

Val

His

Ala

Pro

Thr

Ser

Leu

150

155

160

tac

cat

cag

gcg

atg

aaa

ggt

gtc

aga

acg

gcg

tat

tgg

att

ggg

ttt

1066

Tyr

His

Gln

Ala

Met

Lys

Gly

Val

Arg

Thr

Ala

Tyr

Trp

Ile

Gly

Phe

165

170

175

gac

acc

acc

ccg

ttt

atg

ttt

gac

gcg

cta

gca

ggc

gcg

tat

cca

acc

1114

Asp

Thr

Thr

Pro

Phe

Met

Phe

Asp

Ala

Leu

Ala

Gly

Ala

Tyr

Pro

Thr

180

185

190

195

tac

gcc

aca

aac

tgg

gcc

gac

gag

cag

gtg

tta

cag

gcc

agg

aac

ata

1162

Tyr

Ala

Thr

Asn

Trp

Ala

Asp

Glu

Gln

Val

Leu

Gln

Ala

Arg

Asn

Ile

200

205

210

gga

ctg

tgt

gca

gca

tcc

ttg

act

gag

gga

aga

ctc

ggc

aaa

ctg

tcc

1210

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 245/695

103/223

Gly

Leu

Cys

Ala

Ala

Ser

Leu

Thr

Glu

Gly

Arg

Leu

Gly

Lys

Leu

Ser

215

220

225

att

ctc

cgc

aag

aag

caa

ttg

aaa

cct

tgc

gac

aca

gtc

atg

ttc

tcg

Ile

Leu

Arg

Lys

Lys

Gln

Leu

Lys

Pro

Cys

Asp

Thr

Val

Met

Phe

Ser

230

235

240

gta

gga

tct

aca

ttg

tac

act

gag

agc

aga

aag

cta

ctg

agg

agc

tgg

Val

Gly

Ser

Thr

Leu

Tyr

Thr

Glu

Ser

Arg

Lys

Leu

Leu

Arg

Ser

Trp

245

250

255

cac

tta

ccc

tcc

gta

ttc

cac

ctg

aaa

ggt

aaa

caa

tcc

ttt

acc

tgt

His

Leu

Pro

Ser

Val

Phe

His

Leu

Lys

Gly

Lys

Gln

Ser

Phe

Thr

Cys

260

265

270

275

agg

tgc

gat

acc

atc

gta

tca

tgt

gaa

ggg

tac

gta

gtt

aag

aaa

atc

Arg

Cys

Asp

Thr

Ile

Val

Ser

Cys

Glu

Gly

Tyr

Val

Val

Lys

Lys

Ile

280

285

290

act

atg

tgc

ccc

ggc

ctg

tac

ggt

aaa

acg

gta

ggg

tac

gcc

gtg

acg

Thr

Met

Cys

Pro

Gly

Leu

Tyr

Gly

Lys

Thr

Val

Gly

Tyr

Ala

Val

Thr

295

300

305

tat

cac

gcg

gag

gga

ttc

cta

gtg

tgc

aag

acc

aca

gac

act

gtc

aaa

Tyr

His

Ala

Glu

Gly

Phe

Leu

Val

Cys

Lys

Thr

Thr

Asp

Thr

Val

Lys

310

315

320

gga

gaa

aga

gtc

tca

ttc

cct

gta

tgc

acc

tac

gtc

ccc

tca

acc

atc

Gly

Glu

Arg

Val

Ser

Phe

Pro

Val

Cys

Thr

Tyr

Val

Pro

Ser

Thr

Ile

325

330

335

tgt

gat

caa

atg

act

ggc

ata

cta

gcg

acc

gac

gtc

aca

ccg

gag

gac

Cys

Asp

Gln

Met

Thr

Gly

Ile

Leu

Ala

Thr

Asp

Val

Thr

Pro

Glu

Asp

340

345

350

355

gca

cag

aag

ttg

tta

gtg

gga

ttg

aat

cag

agg

ata

gtt

gtg

aac

gga

Ala

Gln

Lys

Leu

Leu

Val

Gly

Leu

Asn

Gln

Arg

Ile

Val

Val

Asn

Gly

360 365 370

1258

1306

1354

1402

1450

1498

1546

1594

1642

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 246/695

104/223

aga

aca

cag

cga

aac

act

aac

acg

atg

aag

aac

tat

ctg

ctt

ccg

att

Arg

Thr

Gln

Arg

Asn

Thr

Asn

Thr

Met

Lys

Asn

Tyr

Leu

Leu

Pro

Ile

375

380

385

gtg

gcc

gtc

gca

ttt

agc

aag

tgg

gcg

agg

gaa

tac

aag

gca

gac

ctt

Val

Ala

Val

Ala

Phe

Ser

Lys

Trp

Ala

Arg

Glu

Tyr

Lys

Ala

Asp

Leu

390

395

400

gat

gat

gaa

aaa

cct

ctg

ggt

gtc

cga

gag

agg

tca

ctt

act

tgc

tgc

Asp

Asp

Glu

Lys

Pro

Leu

Gly

Val

Arg

Glu

Arg

Ser

Leu

Thr

Cys

Cys

405

410

415

tgc

ttg

tgg

gca

ttt

aaa

acg

agg

aag

atg

cac

acc

atg

tac

aag

aaa

cys

Leu

Trp

Ala

Phe

Lys

Thr

Arg

Lys

Met

His

Thr

Met

Tyr

Lys

Lys

420

425

430

435

cca

gac

acc

cag

aca

ata

gtg

aag

gtg

cct

tca

gag

ttt

aac

tcg

ttc

Pro

Asp

Thr

Gln

Thr

Ile

Val

Lys

Val

Pro

Ser

Glu

Phe

Asn

Ser

Phe

440

445

450

gtc

atc

ccg

agc

cta

tgg

tct

aca

ggc

ctc

gca

atc

cca

gtc

aga

tca

Val

Ile

Pro

Ser

Leu

Trp

Ser

Thr

Gly

Leu

Ala

Ile

Pro

Val

Arg

Ser

455

460

465

cgc

att

aag

atg

ctt

ttg

gcc

aag

aag

acc

aag

cga

gag

tta

ata

cct

Arg

Ile

Lys

Met

Leu

Leu

Ala

Lys

Lys

Thr

Lys

Arg

Glu

Leu

Ile

Pro

470

475

480

gtt

ctc

gac

gcg

tcg

tca

gcc

agg

gat

gct

gaa

caa

gag

gag

aag

gag

Val

Leu

Asp

Ala

Ser

Ser

Ala

Arg

Asp

Ala

Glu

Gln

Glu

Glu

Lys

Glu

485

490

495

agg

ttg

gag

gcc

gag

ctg

act

aga

gaa

gcc

tta

cca

ccc

ctc

gtc

ccc

Arg

Leu

Glu

Ala

Glu

Leu

Thr

Arg

Glu

Ala

Leu

Pro

Pro

Leu

Val

Pro

500

505

510

515

atc

gcg

ccg

gcg

gag

acg

gga

gtc

gtc

gac

gtc

gac

gtt

gaa

gaa

cta

Ile

Ala

Pro

Ala

Glu

Thr

Gly

Val

Val

Asp

Val

Asp

Val

Glu

Glu

Leu

520

525

530

1690

1738

1786

1834

1882

1930

1978

2026

2074

2122

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 247/695

105/223

gag

tat

cac

gca

ggt

gca

ggg

gtc

gtg

gaa

aca

cct

cgc

agc

gcg

ttg

2170

Glu

Tyr

His

Ala

Gly

Ala

Gly

Val

Val

Glu

Thr

Pro

Arg

Ser

Ala

Leu

535

540

545

aaa

gtc

acc

gca

cag

ccg

aac

gac

gta

cta

cta

gga

aat

tac

gta

gtt

2218

Lys

Val

Thr

Ala

Gln

Pro

Asn

Asp

Val

Leu

Leu

Gly

Asn

Tyr

Val

Val

550

555

560

ctg

tcc

ccg

cag

acc

gtg

ctc

aag

agc

tcc

aag

ttg

gcc

ccc

gtg

cac

2266

Leu

Ser

Pro

Gln

Thr

Val

Leu

Lys

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Pro

Val

His

565

570

575

cct

cta

gca

gag

cag

gtg

aaa

ata

ata

aca

cat

aac

ggg

agg

gcc

ggc

2314

Pro

Leu

Ala

Glu

Gln

Val

Lys

Ile

Ile

Thr

His

Asn

Gly

Arg

Ala

Gly

580

585

590

595

ggt

tac

cag

gtc

gac

gga

tat

gac

ggc

agg

gtc

cta

cta

cca

tgt

gga

2362

Gly

Tyr

Gln

Val

Asp

Gly

Tyr

Asp

Gly

Arg

Val

Leu

Leu

Pro

Cys

Gly

600

605

610

tcg

gcc

att

ccg

gtc

cct

gag

ttt

caa

gct

ttg

agc

gag

agc

gcc

act

2410

Ser

Ala

Ile

Pro

Val

Pro

Glu

Phe

Gln

Ala

Leu

Ser

Glu

Ser

Ala

Thr

615

620

625

atg

gtg

tac

aac

gaa

agg

gag

ttc

gtc

aac

agg

aaa

cta

tac

cat

att

2458

Met

Val

Tyr

Asn

Glu

Arg

Glu

Phe

Val

Asn

Arg

Lys

Leu

Tyr

His

Ile

630

635

640

gcc

gtt

cac

gga

ccg

tcg

ctg

aac

acc

gac

gag

gag

aac

tac

gag

aaa

2506

Ala

Val

His

Gly

Pro

Ser

Leu

Asn

Thr

Asp

Glu

Glu

Asn

Tyr

Glu

Lys

645

650

655

gtc

aga

gct

gaa

aga

act

gac

gcc

gag

tac

gtg

ttc

gac

gta

gat

aaa

2554

Val

Arg

Ala

Glu

Arg

Thr

Asp

Ala

Glu

Tyr

Val

Phe

Asp

Val

Asp

Lys

660

665

670

675

aaa

tgc

tgc

gtc

aag

aga

gag

gaa

gcg

tcg

ggt

ttg

gtg

ttg

gtg

gga

2602

Lys

Cys

Cys

Val

Lys

Arg

Glu

Glu

Ala

Ser

Gly

Leu

Val

Leu

Val

Gly

680 685 690

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 248/695

106/223

gag

cta

acc

aac

ccc

ccg

ttc

cat

gaa

ttc

gcc

tac

gaa

ggg

ctg

aag

2650

Glu

Leu

Thr

Asn

Pro

Pro

Phe

His

Glu

Phe

Ala

Tyr

Glu

Gly

Leu

Lys

695

700

705

atc

agg

ccg

tcg

gca

cca

tat

aag

act

aca

gta

gta

gga

gtc

ttt

ggg

2698

Ile

Arg

Pro

Ser

Ala

Pro

Tyr

Lys

Thr

Thr

Val

Val

Gly

Val

Phe

Gly

710

715

720

gtt

ccg

gga

tca

ggc

aag

tct

gct

att

att

aag

agc

ctc

gtg

acc

aaa

2746

Val

Pro

Gly

Ser

Gly

Lys

Ser

Ala

Ile

Ile

Lys

Ser

Leu

Val

Thr

Lys

725

730

735

cac

gat

ctg

gtc

acc

agc

ggc

aag

aag

gag

aac

tgc

cag

gaa

ata

gtt

2794

His

Asp

Leu

Val

Thr

Ser

Gly

Lys

Lys

Glu

Asn

Cys

Gln

Glu

Ile

Val

740

745

750

755

aac

gac

gtg

aag

aag

cac

cgc

ggg

aag

ggg

aca

agt

agg

gaa

aac

agt

2842

Asn

Asp

Val

Lys

Lys

His

Arg

Gly

Lys

Gly

Thr

Ser

Arg

Glu

Asn

Ser

760

765

770

gac

tcc

atc

ctg

cta

aac

ggg

tgt

cgt

cgt

gcc

gtg

gac

atc

cta

tat

2890

Asp

Ser

Ile

Leu

Leu

Asn

Gly

Cys

Arg

Arg

Ala

Val

Asp

Ile

Leu

Tyr

775

780

785

gtg

gac

gag

gct

ttc

gct

tgc

cat

tcc

ggt

act

ctg

ctg

gcc

cta

att

2938

Val

Asp

Glu

Ala

Phe

Ala

Cys

His

Ser

Gly

Thr

Leu

Leu

Ala

Leu

Ile

790

795

800

gct

ctt

gtt

aaa

cct

cgg

agc

aaa

gtg

gtg

tta

tgc

gga

gac

ccc

aag

2986

Ala

Leu

Val

Lys

Pro

Arg

Ser

Lys

Val

Val

Leu

Cys

Gly

Asp

Pro

Lys

805

810

815

caa

tgc

gga

ttc

ttc

aat

atg

atg

cag

ctt

aag

gtg

aac

ttc

aac

cac

3034

Gln

Cys

Gly

Phe

Phe

Asn

Met

Met

Gln

Leu

Lys

Val

Asn

Phe

Asn

His

820

825

830

835

aac

atc

tgc

act

gaa

gta

tgt

cat

aaa

agt

ata

tcc

aga

cgt

tgc

acg

3082

Asn

Ile

Cys

Thr

Glu

Val

Cys

His

Lys

Ser

Ile

Ser

Arg

Arg

Cys

Thr

840 845 850

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 249/695

107/223

cgt

cca

gtc

acg

gcc

atc

gtg

tct

acg

ttg

cac

tac

gga

ggc

aag

atg

Arg

Pro

Val

Thr

Ala

Ile

Val

Ser

Thr

Leu

His

Tyr

Gly

Gly

Lys

Met

855

860

865

cgc

acg

acc

aac

ccg

tgc

aac

aaa

ccc

ata

atc

ata

gac

acc

aca

gga

Arg

Thr

Thr

Asn

Pro

Cys

Asn

Lys

Pro

Ile

Ile

Ile

Asp

Thr

Thr

Gly

870

875

880

cag

acc

aag

ccc

aag

cca

gga

gac

atc

gtg

tta

aca

tgc

ttc

cga

ggc

Gln

Thr

Lys

Pro

Lys

Pro

Gly

Asp

Ile

Val

Leu

Thr

Cys

Phe

Arg

Gly

885

890

895

tgg

gca

aag

cag

ctg

cag

ttg

gac

tac

cgt

gga

cac

gaa

gtc

atg

aca

Trp

Ala

Lys

Gln

Leu

Gln

Leu

Asp

Tyr

Arg

Gly

His

Glu

Val

Met

Thr

900

905

910

915

gca

gca

gca

tct

cag

ggc

ctc

acc

cgc

aaa

ggg

gta

tac

gcc

gta

agg

Ala

Ala

Ala

Ser

Gln

Gly

Leu

Thr

Arg

Lys

Gly

Val

Tyr

Ala

Val

Arg

920

925

930

cag

aag

gtg

aat

gaa

aat

ccc

ttg

tat

gcc

cct

gcg

tcg

gag

cac

gtg

Gln

Lys

Val

Asn

Glu

Asn

Pro

Leu

Tyr

Ala

Pro

Ala

Ser

Glu

His

Val

935

940

945

aat

gta

ctg

ctg

acg

cgc

act

gag

gat

agg

ctg

gtg

tgg

aaa

acg

ctg

Asn

Val

Leu

Leu

Thr

Arg

Thr

Glu

Asp

Arg

Leu

Val

Trp

Lys

Thr

Leu

950

955

960

gcc

ggc

gat

ccc

tgg

att

aag

gtc

cta

tca

aac

att

cca

cag

ggt

aac

Ala

Gly

Asp

Pro

Trp

Ile

Lys

Val

Leu

Ser

Asn

Ile

Pro

Gln

Gly

Asn

965

970

975

ttt

acg

gcc

aca

ttg

gaa

gaa

tgg

caa

gaa

gaa

cac

gac

aaa

ata

atg

Phe

Thr

Ala

Thr

Leu

Glu

Glu

Trp

Gln

Glu

Glu

His

Asp

Lys

Ile

Met

980

985

990

995

aag

gtg

att

gaa

gga

ccg

gct

gcg

cct

gtg

gac

gcg

ttc

cag

aac

aaa

Lys

Val

Ile

Glu

Gly

Pro

Ala

Ala

Pro

Val

Asp

Ala

Phe

Gln

Asn

Lys

1000 1005 1010

3130

3178

3226

3274

3322

3370

3418

3466

3514

3562

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 250/695

108/223

gcg aac gtg tgt tgg gcg aaa agc	ctg	gtg cct gtc	ctg	gac	act	gcc	3610
Ala Asn Val Cys Trp Ala Lys Ser	Leu	Val Pro Val	Leu	Asp	Thr	Ala
1015 1020		1025
gga atc aga ttg aca gca gag gag	tgg	agc acc ata	att	aca	gca	ttt	3658
Gly Ile Arg Leu Thr Ala Glu Glu	Trp	Ser Thr Ile	Ile	Thr	Ala	Phe
1030 1035		1040
aag gag gac aga gct tac tct cca	gtg	gtg gcc ttg	aat	gaa	att	tgc	3706
Lys Glu Asp Arg Ala Tyr Ser Pro	Val	Val Ala Leu	Asn	Glu	Ile	Cys
1045 1050		1055
acc aag tac tat gga gtt gac ctg	gac	agt ggc ctg	ttt	tct	gcc	ccg	3754
Thr Lys Tyr Tyr Gly Val Asp Leu	Asp	Ser Gly Leu	Phe	Ser	Ala	Pro
1060 1065		1070			1075
aag gtg tcc ctg tat tac gag aac	aac	cac tgg gat	aac	aga	cct	ggt	3802
Lys Val Ser Leu Tyr Tyr Glu Asn	Asn	His Trp Asp	Asn	Arg	Pro	Gly
1080	1085		1090
gga agg atg tat gga ttc aat gcc	gca	aca gct gcc	agg	ctg	gaa	gct	3850
Gly Arg Met Tyr Gly Phe Asn Ala	Ala	Thr Ala Ala	Arg	Leu	Glu	Ala
1095 1100		1105
aga cat acc ttc ctg aag ggg cag	tgg	cat acg ggc	aag	cag	gca	gtt	3898
Arg His Thr Phe Leu Lys Gly Gln	Trp	His Thr Gly	Lys	Gln	Ala	Val
1110 1115		1120
atc gca gaa aga aaa atc caa ccg	ctt	tct gtg ctg	gac	aat	gta	att	3946
Ile Ala Glu Arg Lys Ile Gln Pro	Leu	Ser Val Leu	Asp	Asn	Val	Ile
1125 1130		1135
cct atc aac cgc agg ctg ccg cac	gcc	ctg gtg gct	gag	tac	aag	acg	3994
Pro Ile Asn Arg Arg Leu Pro His	Ala	Leu Val Ala	Glu	Tyr	Lys	Thr
1140 1145		1150			1155
gtt aaa ggc agt agg gtt gag tgg	ctg	gtc aat aaa	gta	aga	ggg	tac	4042
Val Lys Gly Ser Arg Val Glu Trp	Leu	Val Asn Lys	Val	Arg	Gly Tyr
1160	1165		1170

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 251/695

109/223

cac	gtc	ctg ctg gtg	agt gag tac	aac	ctg gct ttg	cct	cga	cgc	agg	4090
His	Val	Leu Leu Val	Ser Glu Tyr	Asn	Leu Ala Leu	Pro	Arg	Arg	Arg
		1175	1180		1185
gtc	act	tgg ttg tca	ccg ctg aat	gtc	aca ggc gcc	gat	agg	tgc	tac	4138
Val	Thr	Trp Leu Ser	Pro Leu Asn	Val	Thr Gly Ala	Asp	Arg	Cys	Tyr
	1190	1195		1200
gac	cta	agt tta gga	ctg ccg gct	gac	gcc ggc agg	ttc	gac	ttg	gtc	4186
Asp	Leu	Ser Leu Gly	Leu Pro Ala	Asp	Ala Gly Arg	Phe	Asp	Leu	Val
1205		1210		1215
ttt	gtg	aac att cac	acg gaa ttc	aga	atc cac cac	tac	cag	cag	tgt	4234
Phe	Val	Asn Ile His	Thr Glu Phe	Arg	Ile His His	Tyr	Gln	Gln	Cys
1220	1225		1230			1235
gtc	gac	cac gcc atg	aag ctg cag	atg	ctt ggg gga	gat	gcg	gca	cga	4282
Val	Asp	His Ala Met	Lys Leu Gln	Met	Leu Gly Gly	Asp	Ala	Ala	Arg
		1240		1245		1250
ctg	cta	aaa ccc ggc	ggc atc ttg	atg	aga gct tac	gga	tac	gcc	gat	4330
Leu	Leu	Lys Pro Gly	Gly Ile Leu	Met	Arg Ala Tyr	Gly	Tyr	Ala	Asp
		1255	1260		1265
aaa	atc	agc gaa gcc	gtt gtt tcc	tcc	tta agc aga	aag	ttc	tcg	tct	4378
Lys	Ile	Ser Glu Ala	Val Val Ser	Ser	Leu Ser Arg	Lys	Phe	Ser	Ser
	1270	1275		1280
gca	aga	gtg ttg cgc	ccg gat tgt	gtc	acc agc aat	aca	gaa	gtg	ttc	4426
Ala	Arg	Val Leu Arg	Pro Asp Cys	Val	Thr Ser Asn	Thr	Glu	Val	Phe
1285		1290		1295
ttg	ctg	ttc tcc aac	ttt gac aac	gga	aag aga ccc	tct	acg	cta	cac	4474
Leu	Leu	Phe Ser Asn	Phe Asp Asn	Gly	Lys Arg Pro	Ser	Thr	Leu	His
1300	1305		1310			1315
cag	atg	aat acc aag	ctg agt gcc	gtg	tat gcc gga	gaa	gcc	atg	cac	4522
Gln	Met	Asn Thr Lys	Leu Ser Ala	Val	Tyr Ala Gly	Glu	Ala	Met	His

1320 1325 1330

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 252/695

110/223

acg	gcc	ggg tgt gca	cca tcc tac	aga	gtt aag aga	gca	gac	ata	gcc	4570
Thr	Ala	Gly Cys Ala	Pro Ser Tyr Arg	Val Lys Arg	Ala Asp	Ile	Ala
		1335	1340		1345
acg	tgc	aca gaa gcg	gct gtg gtt	aac	gca gct aac	gcc	cgt	gga	act	4618
Thr	Cys	Thr Glu Ala	Ala Val Val	Asn	Ala Ala Asn	Ala	Arg	Gly	Thr
	1350	1355		1360
gta	ggg	gat ggc gta	tgc agg gcc	gtg	gcg aag aaa	tgg	ccg	tca	gcc	4666
Val	Gly	Asp Gly Val	Cys Arg Ala	Val	Ala Lys Lys	Trp	Pro	Ser	Ala
1365		1370		1375
ttt	aag	gga gca gca	aca cca gtg	ggc	aca att aaa	aca	gtc	atg	tgc	4714
Phe	Lys	Gly Ala Ala	Thr Pro Val	Gly	Thr Ile Lys	Thr	Val	Met	Cys
1380	1385		1390			1395
ggc	tcg	tac ccc gtc	atc cac gct	gta	gcg cct aat	ttc	tct	gcc	acg	4762
Gly	Ser	Tyr Pro Val	Ile His Ala	Val	Ala Pro Asn	Phe	Ser	Ala	Thr
		1400		1405		1410
act	gaa	gcg gaa ggg	gac cgc gaa	ttg	gcc gct gtc	tac	cgg	gca	gtg	4810
Thr	Glu	Ala Glu Gly	Asp Arg Glu	Leu	Ala Ala Val	Tyr	Arg	Ala	Val
		1415	1420		1425
gcc	gcc	gaa gta aac	aga ctg tca	ctg	agc agc gta	gcc	atc	ccg	ctg	4858
Ala	Ala	Glu Val Asn	Arg Leu Ser	Leu	Ser Ser Val	Ala	Ile	Pro	Leu
	1430	1435		1440
ctg	tcc	aca gga gtg	ttc agc ggc	gga	aga gat agg	ctg	cag	caa	tcc	4906
Leu	Ser	Thr Gly Val	Phe Ser Gly Gly	Arg Asp Arg	Leu	Gln	Gln	Ser
1445		1450		1455
ctc	aac	cat cta ttc	aca gca atg	gac	gcc acg gac	gct	gac	gtg	acc	4954
Leu	Asn	His Leu Phe	Thr Ala Met	Asp	Ala Thr Asp	Ala	Asp	Val	Thr
1460	1465		1470			1475
atc	tac	tgc aga gac	aaa agt tgg	gag	aag aaa atc	cag	gaa	gcc	att	5002
Ile	Tyr	Cys Arg Asp	Lys Ser Trp	Glu	Lys Lys Ile	Gln	Glu	Ala	Ile

1480 1485 1490

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 253/695

111/223

gac	atg	agg acg gct	gtg gag ttg	ctc	aat gat gac	gtg	gag	ctg	acc	5050
Asp	Met	Arg Thr Ala	Val Glu Leu	Leu	Asn Asp Asp	Val	Glu	Leu	Thr
		1495	1500		1505
aca	gac	ttg gtg aga	gtg cac ccg	gac	agc agc ctg	gtg	ggt	cgt	aag	5098
Thr	Asp	Leu Val Arg	Val His Pro	Asp	Ser Ser Leu	Val	Gly	Arg	Lys
	1510	1515		1520
ggc	tac	agt acc act	gac ggg tcg	ctg	tac tcg tac	ttt	gaa	ggt	acg	5146
Gly	Tyr	Ser Thr Thr	Asp Gly Ser	Leu	Tyr Ser Tyr	Phe	Glu	Gly	Thr
1525		1530		1535
aaa	ttc	aac cag gct	gct att gat	atg	gca gag ata	ctg	acg	ttg	tgg	5194
Lys	Phe	Asn Gln Ala	Ala Ile Asp	Met	Ala Glu Ile	Leu	Thr	Leu	Trp
1540	1545		1550			1555
ccc	aga	ctg caa gag	gca aac gaa	cag	ata tgc cta	tac	gcg	ctg	ggc	5242
Pro	Arg	Leu Gln Glu	Ala Asn Glu	Gln	Ile Cys Leu	Tyr	Ala	Leu	Gly
		1560		1565		1570
gaa	aca	atg gac aac	atc aga tcc	aaa	tgt ccg gtg	aac	gat	tcc	gat	5290
Glu	Thr	Met Asp Asn	Ile Arg Ser	Lys	Cys Pro Val	Asn	Asp	Ser	Asp
		1575	1580		1585
tca	tca	aca cct ccc	agg aca gtg	ccc	tgc ctg tgc	cgc	tac	gca	atg	5338
Ser	Ser	Thr Pro Pro	Arg Thr Val	Pro	Cys Leu Cys	Arg	Tyr	Ala	Met
	1590	1595		1600
aca	gca	gaa cgg atc	gcc cgc ctt	agg	tca cac caa	gtt	aaa	agc	atg	5386
Thr	Ala	Glu Arg Ile	Ala Arg Leu	Arg	Ser His Gln	Val	Lys	Ser	Met
1605		1610		1615
gtg	gtt	tgc tca tct	ttt ccc ctc	ccg	aaa tac cat	gta	gat	ggg	gtg	5434
Val	Val	Cys Ser Ser	Phe Pro Leu	Pro	Lys Tyr His	Val	Asp	Gly	Val
1620	1625		1630			1635
cag	aag	gta aag tgc	gag aag gtt	ctc	ctg ttc gac	ccg	acg	gta	cct	5482
Gln	Lys	Val Lys Cys	Glu Lys Val	Leu	Leu Phe Asp	Pro	Thr	Val	Pro

1640 1645 1650

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 254/695

112/223

tca gtg

gtt agt ccg

cgg aag tat

gcc

gca tct acg

acg

gac

cac

tca

5530

Ser Val

Val

Ser

Pro

Arg

Lys

Tyr

Ala

Ala

Ser

Thr

Thr

Asp

His

Ser

gat cgg

1655 tcg tta

cga

ggg

ttt

1660 gac ttg

gac

tgg

acc

1665 acc gac

tcg

tct

5578

Asp Arg

Ser

Leu

Arg

Gly

Phe

Asp

Leu

Asp

Trp

Thr

Thr

Asp

Ser

Ser

1670 tcc act gcc

agc

gat

acc

1675 atg tcg

cta

ccc

agt

1680 ttg cag

tcg

tgt

gac

5626

Ser Thr

Ala

Ser

Asp

Thr

Met

Ser

Leu

Pro

Ser

Leu

Gln

Ser

Cys

Asp

1685 atc gac

tcg

atc

tac

1690 gag cca

atg

gct

ccc

1695 ata gta

gtg

acg

gct

gac

5674

Ile Asp

Ser

Ile

Tyr

Glu

Pro

Met

Ala

Pro

Ile

Val

Val

Thr

Ala

Asp

1700 gta cac

cct

gaa

1705 ccc gca

ggc

atc

gcg

1710 gac ctg

gcg

gca

gat

1715 gtg cac

5722

Val His

Pro

Glu

Pro

Ala

Gly

Ile

Ala

Asp

Leu

Ala

Ala

Asp

Val

His

cct gaa

ccc

1720 gca gac

cat

gtg

gac

1725 ctc gag

aac

ccg

att

1730 cct cca

ccg

5770

Pro Glu

Pro

Ala

Asp

His

Val

Asp

Leu

Glu

Asn

Pro

Ile

Pro

Pro

Pro

cgc ccg

1735 aag aga

gct

gca

tac

1740 ctt gcc

tcc

cgc

gcg

1745 gcg gag

cga

ccg

5818

Arg Pro

Lys

Arg

Ala

Ala

Tyr

Leu

Ala

Ser

Arg

Ala

Ala

Glu

Arg

Pro

1750 gtg ccg gcg

ccg

aga

aag

1755 ccg acg

cct

gcc

cca

1760 agg act

gcg

ttt

agg

5866

Val Pro

Ala

Pro

Arg

Lys

Pro

Thr

Pro

Ala

Pro

Arg

Thr

Ala

Phe

Arg

1765 aac aag

ctg

cct

ttg

1770 acg ttc

ggc

gac

ttt

1775 gac gag

cac

gag

gtc

gat

5914

Asn Lys

Leu

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Asp

Phe

Asp

Glu

His

Glu

Val

Asp

1780 gcg ttg

gcc

tcc

1785 ggg att

act

ttc

gga

1790 gac ttc

gac

gac

gtc

1795 ctg cga

5962

Ala Leu

Ala

Ser

Gly Ile

Thr

Phe

Gly Asp

Phe

Asp

Asp

Val

Leu

Arg

1800 1805 1810

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 255/695

113/223

cta ggc cgc gcg ggt gca tat att	ttc	tcc tcg gac	act	ggc	agc	gga	6010
Leu Gly Arg Ala Gly Ala Tyr Ile	Phe	Ser Ser Asp	Thr Gly	Ser	Gly
1815 1820		1825
cat tta caa caa aaa tcc gtt agg	cag	cac aat ctc	cag	tgc	gca	caa	6058
His Leu Gln Gln Lys Ser Val Arg	Gln	His Asn Leu	Gln	Cys	Ala	Gln
1830 1835		1840
ctg gat gcg gtc cag gag gag aaa	atg	tac ccg cca	aaa	ttg	gat	act	6106
Leu Asp Ala Val Gln Glu Glu Lys	Met	Tyr Pro Pro	Lys	Leu	Asp	Thr
1845 1850		1855
gag agg gag aag ctg ttg ctg ctg	aaa	atg cag atg	cac	cca	tcg	gag	6154
Glu Arg Glu Lys Leu Leu Leu Leu	Lys	Met Gln Met	His	Pro	Ser	Glu
1860 1865		1870			1875
gct aat aag agt cga tac cag tct	cgc	aaa gtg gag	aac	atg	aaa	gcc	6202
Ala Asn Lys Ser Arg Tyr Gln Ser	Arg	Lys Val Glu	Asn	Met	Lys	Ala
1880	1885		1890
acg gtg gtg gac agg ctc aca tcg	ggg	gcc aga ttg	tac	acg	gga	gcg	6250
Thr Val Val Asp Arg Leu Thr Ser	Gly	Ala Arg Leu	Tyr	Thr	Gly	Ala
1895 1900		1905
gac gta ggc cgc ata cca aca tac	gcg	gtt cgg tac	ccc	cgc	ccc	gtg	6298
Asp Val Gly Arg Ile Pro Thr Tyr	Ala	Val Arg Tyr	Pro	Arg	Pro	Val
1910 1915		1920
tac tcc cct acc gtg atc gaa aga	ttc	tca agc ccc	gat	gta	gca	atc	6346
Tyr Ser Pro Thr Val Ile Glu Arg	Phe	Ser Ser Pro	Asp	Val	Ala	Ile
1925 1930		1935
gca gcg tgc aac gaa tac cta tcc	aga	aat tac cca	aca	gtg	gcg	tcg	6394
Ala Ala Cys Asn Glu Tyr Leu Ser	Arg	Asn Tyr Pro	Thr	Val	Ala	Ser
1940 1945		1950			1955
tac cag ata aca gat gaa tac gac	gca	tac ttg gac	atg	gtt	gac	ggg	6442
Tyr Gln Ile Thr Asp Glu Tyr Asp	Ala	Tyr Leu Asp	Met	Val	Asp Gly
1960	1965		1970

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 256/695

114/223

tcg gat agt tgc ttg gac aga gcg	aca	ttc tgc ccg	gcg	aag	ctc	cgg	6490
Ser Asp Ser Cys Leu Asp Arg Ala Thr	Phe Cys Pro	Ala	Lys	Leu	Arg
1975	1980		1985
tgc tac ccg aaa cat cat gcg tac	cac	cag ccg act	gta	cgc	agt	gcc	6538
Cys Tyr Pro Lys His His Ala Tyr	His	Gln Pro Thr	Val	Arg	Ser	Ala
1990 1995		2000
gtc ccg tca ccc ttt cag aac aca	cta	cag aac gtg	cta	gcg	gcc	gcc	6586
Val Pro Ser Pro Phe Gln Asn Thr	Leu	Gln Asn Val	Leu	Ala	Ala	Ala
2005 2010		2015
acc aag aga aac tgc aac gtc acg	caa	atg cga gaa	cta	ccc	acc	atg	6634
Thr Lys Arg Asn Cys Asn Val Thr	Gln	Met Arg Glu	Leu	Pro	Thr	Met
2020 2025		2030			2035
gac tcg gca gtg ttc aac gtg gag	tgc	ttc aag cgc	tat	gcc	tgc	tcc	6682
Asp Ser Ala Val Phe Asn Val Glu	Cys	Phe Lys Arg	Tyr	Ala	Cys	Ser
2040	2045		2050
gga gaa tat tgg gaa gaa tat gct	aaa	caa cct atc	cgg	ata	acc	act	6730
Gly Glu Tyr Trp Glu Glu Tyr Ala	Lys	Gln Pro Ile	Arg	Ile	Thr	Thr
2055 2060		2065
gag aac atc act acc tat gtg acc	aaa	ttg aaa ggc	ccg	aaa	gct	gct	6778
Glu Asn Ile Thr Thr Tyr Val Thr	Lys	Leu Lys Gly	Pro	Lys	Ala	Ala
2070 2075		2080
gcc ttg ttc gct aag acc cac aac	ttg	gtt ccg ctg	cag	gag	gtt	ccc	6826
Ala Leu Phe Ala Lys Thr His Asn	Leu	Val Pro Leu	Gln	Glu	Val	Pro
2085 2090		2095
atg gac aga ttc acg gtc gac atg	aaa	cga gat gtc	aaa	gtc	act	cca	6874
Met Asp Arg Phe Thr Val Asp Met	Lys	Arg Asp Val	Lys	Val	Thr	Pro
2100 2105		2110			2115
ggg acg aaa cac aca gag gaa aga	ccc	aaa gtc cag	gta	att	caa	gca	6922
Gly Thr Lys His Thr Glu Glu Arg	Pro	Lys Val Gln	Val	Ile	Gln	Ala
2120	2125		2130

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 257/695

115/223

gcg	gag	cca ttg gcg	acc gct tac	ctg	tgc ggc atc	cac	agg	gaa	tta	6970
Ala	Glu	Pro Leu Ala	Thr Ala Tyr	Leu	Cys Gly Ile	His	Arg	Glu	Leu
		2135	2140		2145
gta	agg	aga cta aat	gct gtg tta	cgc	cct aac gtg	cac	aca	ttg	ttt	7018
Val	Arg	Arg Leu Asn	Ala Val Leu	Arg	Pro Asn Val	His	Thr	Leu	Phe
	2150	2155		2160
gat	atg	tcg gcc gaa	gac ttt gac	gcg	atc atc gcc	tct	cac	ttc	cac	7066
Asp	Met	Ser Ala Glu	Asp Phe Asp	Ala	Ile Ile Ala	Ser	His	Phe	His
2165		2170		2175
cca	gga	gac ccg gtt	cta gag acg	gac	att gca tca	ttc	gac	aaa	agc	7114
Pro Gly	Asp Pro Val	Leu Glu Thr	Asp	Ile Ala Ser	Phe	Asp	Lys	Ser
2180	2185		2190			2195
cag	gac	gac tcc ttg	gct ctt aca	ggt	tta atg atc	ctc	gaa	gat	cta	7162
Gln	Asp	Asp Ser Leu	Ala Leu Thr	Gly	Leu Met Ile	Leu	Glu	Asp	Leu
		2200		2205		2210
ggg	gtg	gat cag tac	ctg ctg gac	ttg	atc gag gca	gcc	ttt	ggg	gaa	7210
Gly	Val	Asp Gln Tyr	Leu Leu Asp	Leu	Ile Glu Ala	Ala	Phe	Gly	Glu
		2215	2220		2225
ata	tcc	agc tgt cac	cta cca act	ggc	acg cgc ttc	aag	ttc	gga	gct	7258
Ile	Ser	Ser Cys His	Leu Pro Thr	Gly	Thr Arg Phe	Lys	Phe	Gly	Ala
	2230	2235		2240
atg	atg	aaa tcg ggc	atg ttt ctg	act	ttg ttt att	aac	act	gtt	ttg	7306
Met	Met	Lys Ser Gly	Met Phe Leu	Thr	Leu Phe Ile	Asn	Thr	Val	Leu
2245		2250		2255
aac	atc	acc ata gca	agc agg gta	ctg	gag cag aga	ctc	act	gac	tcc	7354
Asn	Ile	Thr Ile Ala	Ser Arg Val	Leu	Glu Gln Arg	Leu	Thr	Asp	Ser
2260	2265		2270			2275
gcc	tgt	gcg gcc ttc	atc ggc gac	gac	aac atc gtt	cac	gga	gtg	atc	7402
Ala Cys	Ala Ala Phe	Ile Gly Asp	Asp	Asn Ile Val	His	Gly	Val	Ile

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 258/695

116/223

2280 2285 2290

tcc

gac

aag

ctg

atg

gcg

gag

agg

tgc

gcg

tcg

tgg

gtc

aac

atg

gag

7450

Ser

Asp

Lys

Leu

Met

Ala

Glu

Arg

Cys

Ala

Ser

Trp

Val

Asn

Met

Glu

2295

2300

2305

gtg

aag

atc

att

gac

gct

gtc

atg

ggc

gaa

aaa

ccc

cca

tat

ttc

tgt

7498

Val

Lys

Ile

Ile

Asp

Ala

Val

Met

Gly

Glu

Lys

Pro

Pro

Tyr

Phe

Cys

2310

2315

2320

ggg

gga

ttc

ata

gtt

ttt

gac

agc

gtc

aca

cag

acc

gcc

tgc

cgt

gtt

7546

Gly

Gly

Phe

Ile

Val

Phe

Asp

Ser

Val

Thr

Gln

Thr

Ala

Cys

Arg

Val

2325

2330

2335

tca

gac

cca

ctt

aag

cgc

ctg

ttc

aag

ttg

ggt

aag

ccg

cta

aca

gct

7594

Ser

Asp

Pro

Leu

Lys

Arg

Leu

Phe

Lys

Leu

Gly

Lys

Pro

Leu

Thr

Ala

2340

2345

2350

2355

gaa

gac

aag

cag

gac

gaa

gac

agg

cga

cga

gca

ctg

agt

gac

gag

gtt

7642

Glu

Asp

Lys

Gln

Asp

Glu

Asp

Arg

Arg

Arg

Ala

Leu

Ser

Asp

Glu

Val

2360

2365

2370

agc

aag

tgg

ttc

cgg

aca

ggc

ttg

ggg

gcc

gaa

ctg

gag

gtg

gca

cta

7690

Ser

Lys

Trp

Phe

Arg

Thr

Gly

Leu

Gly

Ala

Glu

Leu

Glu

Val

Ala

Leu

2375

2380

2385

aca

tct

agg

tat

gag

gta

gag

ggc

tgc

aaa

agt

atc

ctc

ata

gcc

atg

7738

Thr

Ser

Arg

Tyr

Glu

Val

Glu

Gly

Cys

Lys

Ser

Ile

Leu

Ile

Ala

Met

2390

2395

2400

gcc

acc

ttg

gcg

agg

gac

att

aag

gcg

ttt

aag

aaa

ttg

aga

gga

cct

7786

Ala

Thr

Leu

Ala

Arg

Asp

Ile

Lys

Ala

Phe

Lys

Lys

Leu

Arg

Gly

Pro

2405

2410

2415

gtt

ata

cac

ctc

tac

ggc

ggt

cct

aga

ttg

gtg

cgt

taatacacag

7832

Val

Ile

His

Leu

Tyr

Gly

Gly

Pro

Arg

Leu

Val

Arg

2420

2425

2430

aattctgatt ttaattaacc tgcagggttt aaactaatta attgaattac atccctacgc 7892 aaacgtttta cggccgccgg tggcgcccgc gcccggcggc ccgtccttgg ccgttgcagg 7952

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 259/695

117/223 ccactccggt gcgccgtaaa caaagaagaa aaacgcagca aaagagaaag agtaacgtag ggtggtctgg gggctccgca gaaaaagtta acaagacctg gacacattaa ttatatttta aaaaaaaaaa tctccacctc gctaagggag tcatataata tgaagtaagt attcaacgaa atgatgagaa ttaataattt gatattataa atttggaggt ttaataatta gcagatctat tatgtttaat ctagatattt tattttctac atcatttagt tattaaatag atgccaatat

ggctcccgtc	gtccccgact	tccaggccca	gcagatgcag	caactcatca	8012
tgcgctgaca	atgagacaga	acgcaattgc	tcctgctagg	cctcccaaac	8072
gaagacaacc	aaaccaaagc	cgaaaacgca	gcccaagaag	atcaacggaa	8132
gcaaaagaag	aaagacaagc	aagccgacaa	gaagaagaag	aaacccggaa	8192
aatgtgcatg	aagattgaaa	atgactgtat	cttcgtatgc	ggctagccac	8252
tgtttccaga	catgtcgggc	accgcactat	catgggtgca	gaaaatctcg	8312
gggccttcgc	aatcggcgct	atcctggtgc	tggttgtggt	cacttgcatt	8372
gataagttag	ggtaggcaat	ggcattgata	tagcaagaaa	attgaaaaca	8432
gggtaagcaa	tggcatataa	ccataactgt	ataacttgta	acaaagcgca	8492
cgcaattggc	cccgtggtcc	gcctcacgga	aactcggggc	aactcatatt	8552
ttggcaataa	ttggaagctt	acataagctt	aattcgacga	ataattggat	8612
ttttgcaatt	ggtttttaat	atttccaaaa	aaaaaaaaaa	aaaaaaaaaa	8672
aaaaaaaaaa	aaaaaaaaaa	aaaaaaaaaa	aaaaacgggt	cggcatggca	8732
ctcgcggtcc	gacctgggca	tccgaaggag	gacgcacgtc	cactcggatg	8792
tttttctact	agtcaaatga	gtatatataa	ttgaaaaagt	aaaatataaa	8852
atgaaacgaa	atatcagtaa	tagacaggaa	ctggcagatt	cttcttctaa	8912
actgctaaat	ctccaaaatt	agataaaaat	gatacagcaa	atacagcttc	8972
ttacctttta	attttttcag	acacacctta	ttacaaacta	actaagtcag	9032
agtaaatata	aatttaactt	atgggtataa	tataataaag	attcatgata	9092
acttaacgat	gttaatagac	ttattccatc	aaccccttca	aacctttctg	9152
aataccagtt	aatgatatta	aaatagattg	tttaagagat	gtaaataatt	9212
aaaggatata	aaattagtct	atctttcaca	tggaaatgaa	ttacctaata	9272
tgataggaat	tttttaggat	ttacagctgt	tatatgtatc	aacaatacag	9332
ggttatggta	aaacactgta	acgggaagca	gcattctatg	gtaactggcc	9392
agccagatca	ttttactcta	taaacatttt	accacaaata	ataggatcct	9452
aatattatat	ctaacaacaa	caaaaaaatt	taacgatgta	tggccagaag	9512
taataaagat	aaagatagtc	tatcttatct	acaagatatg	aaagaagata	9572
agtagctact	aatatggaaa	gaaatgtata	caaaaacgtg	gaagctttta	9632
catattacta	gaagatttaa	aatctagact	tagtataaca	aaacagttaa	9692
cgattctata	tttcatcata	acagtagtac	attaatcagt	gatatactga	9752

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 260/695

118/223 aacgatctac agactcaact atgcaaggaa taagcaatat gccaattatg tctaatattt 9812 taactttaga actaaaacgt tctaccaata ctaaaaatag gatacgtgat aggctgttaa 9872 aagctgcaat aaatagtaag gatgtagaag aaatactttg ttctatacct tcggaggaaa 9932 gaactttaga acaacttaag tttaatcaaa cttgtattta tgaaggtac 9981 <210> 3 <211> 38 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência promoter sintético <400>3 acctctacgg cggtcctaga ttggtgcgtt aatacaca38 <210>4 <211>11661 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência DNA sintético pJY1099.1 <220>

<221> CDS <222> (530)..(7825) <220>

<221> CDS <222> (7854)..(9203) <400> 4 ctatcaaaag tcttaatgag ttaggtgtag atagtataga tattactaca aaggtattca 60 tatttcctat caattctaaa gtagatgata ttaataactc aaagatgatg atagtagata 120 atagatacgc tcatataatg actgcaaatt tggacggttc acattttaat catcacgcgt 180

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 261/695

119/223 tcataagttt caactgcata gatcaaaatc tcactaaaaa gatagccgat gtatttgaga 240 gagattggac atctaactac gctaaagaaa ttacagttat aaataataca taatggattt 300 tgttatcatc agttatattt aacataagta caataaaaag tattaaataa aaatacttac 360 ttacgaaaaa atgactaatt agctataaaa acccgggttc tttattctat acttaaaaag 420 tgcaaataaa tacaaaggtt cttgatggcg gatgtgtgac atacacgacg ccaaaagatt 480 ttgttccagc tcctgccacc tccgctacgc gagagattaa ccacccacg atg gcc gcc 538

Met Ala Ala

aaa

gtg

cat

gtt

gat

att

gag

gct

gac

agc

cca

ttc

atc

aag

tct

ttg

586

Lys

Val

HiS

Val

Asp

Ile

Glu

Ala

Asp

Ser

Pro

Phe

Ile

Lys

Ser

Leu

5

10

15

cag

aag

gca

ttt

ccg

tcg

ttc

gag

gtg

gag

tca

ttg

cag

gtc

aca

cca

634

Gln

Lys

Ala

Phe

Pro

Ser

Phe

Glu

Val

Glu

Ser

Leu

Gln

Val

Thr

Pro

20

25

30

35

aat

gac

cat

gca

aat

gcc

aga

gca

ttt

tcg

cac

ctg

gct

acc

aaa

ttg

682

Asn

Asp

His

Ala

Asn

Ala

Arg

Ala

Phe

Ser

His

Leu

Ala

Thr

Lys

Leu

40

45

50

atc

gag

cag

gag

act

gac

aaa

gac

aca

ctc

atc

ttg

gat

atc

ggc

agt

730

Ile

Glu

Gln

Glu

Thr

Asp

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile

Leu

Asp

Ile

Gly

Ser

55

60

65

gcg

cct

tcc

agg

aga

atg

atg

tct

acg

cac

aaa

tac

cac

tgc

gta

tgc

778

Ala

Pro

Ser

Arg

Arg

Met

Met

Ser

Thr

His

Lys

Tyr

His

Cys

Val

Cys

70

75

80

cct

atg

cgc

agc

gca

gaa

gac

ccc

gaa

agg

ctc

gta

tgc

tac

gca

aag

826

Pro

Met

Arg

Ser

Ala

Glu

Asp

Pro

Glu

Arg

Leu

Val

Cys

Tyr

Ala

Lys

85

90

95

aaa

ctg

gca

gcg

gcc

tcc

ggg

aag

gtg

ctg

gat

aga

gag

atc

gca

gga

874

Lys

Leu

Ala

Ala

Ala

Ser

Gly

Lys

Val

Leu

Asp

Arg

Glu

Ile

Ala

Gly

100

105

110

115

aaa

atc

acc

gac

ctg

cag

acc

gtc

atg

gct

acg

cca

gac

gct

gaa

tct

922

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 262/695

120/223

Lys

Ile

Thr

Asp Leu Gln 120

Thr Val

Met

Ala 125

Thr

Pro Asp

Ala

Glu 130

Ser

cct

acc

ttt

tgc

ctg

cat

aca

gac

gtc

acg

tgt

cgt

acg

gca

gcc

gaa

Pro

Thr

Phe

Cys

Leu

His

Thr

Asp

Val

Thr

Cys

Arg

Thr

Ala

Ala

Glu

135

140

145

gtg

gcc

gta

tac

cag

gac

gtg

tat

gct

gta

cat

gca

cca

aca

tcg

ctg

Val

Ala

Val

Tyr

Gln

Asp

Val

Tyr

Ala

Val

His

Ala

Pro

Thr

Ser

Leu

150

155

160

tac

cat

cag

gcg

atg

aaa

ggt

gtc

aga

acg

gcg

tat

tgg

att

ggg

ttt

Tyr

His

Gln

Ala

Met

Lys

Gly

Val

Arg

Thr

Ala

Tyr

Trp

Ile

Gly

Phe

165

170

175

gac

acc

acc

ccg

ttt

atg

ttt

gac

gcg

cta

gca

ggc

gcg

tat

cca

acc

Asp

Thr

Thr

Pro

Phe

Met

Phe

Asp

Ala

Leu

Ala

Gly

Ala

Tyr

Pro

Thr

180

185

190

195

tac

gcc

aca

aac

tgg

gcc

gac

gag

cag

gtg

tta

cag

gcc

agg

aac

ata

Tyr

Ala

Thr

Asn

Trp

Ala

Asp

Glu

Gln

Val

Leu

Gln

Ala

Arg

Asn

Ile

200

205

210

gga

ctg

tgt

gca

gca

tcc

ttg

act

gag

gga

aga

ctc

ggc

aaa

ctg

tcc

Gly

Leu

Cys

Ala

Ala

Ser

Leu

Thr

Glu

Gly

Arg

Leu

Gly

Lys

Leu

Ser

215

220

225

att

ctc

cgc

aag

aag

caa

ttg

aaa

cct

tgc

gac

aca

gtc

atg

ttc

tcg

Ile

Leu

Arg

Lys

Lys

Gln

Leu

Lys

Pro

Cys

Asp

Thr

Val

Met

Phe

Ser

230

235

240

gta

gga

tct

aca

ttg

tac

act

gag

agc

aga

aag

cta

ctg

agg

agc

tgg

Val

Gly

Ser

Thr

Leu

Tyr

Thr

Glu

Ser

Arg

Lys

Leu

Leu

Arg

Ser

Trp

245

250

255

cac

tta

ccc

tcc

gta

ttc

cac

ctg

aaa

ggt

aaa

caa

tcc

ttt

acc

tgt

His

Leu

Pro

Ser

Val

Phe

His

Leu

Lys

Gly

Lys

Gln

Ser

Phe

Thr

Cys

260

265

270

275

agg

tgc

gat

acc

atc

gta

tca

tgt

gaa

ggg

tac

gta

gtt

aag

aaa

atc

970

1018

1066

1114

1162

1210

1258

1306

1354

1402

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 263/695

121/223

Arg Cys

Asp Thr Ile 280

Val

Ser

Cys Glu Gly Tyr 285

Val

Val

Lys

Lys 290

Ile

act

atg

tgc

ccc

ggc

ctg

tac

ggt

aaa

acg

gta

ggg

tac

gcc

gtg

acg

Thr

Met

Cys

Pro

Gly

Leu

Tyr

Gly

Lys

Thr

Val

Gly

Tyr

Ala

Val

Thr

295

300

305

tat

cac

gcg

gag

gga

ttc

cta

gtg

tgc

aag

acc

aca

gac

act

gtc

aaa

Tyr

His

Ala

Glu

Gly

Phe

Leu

Val

Cys

Lys

Thr

Thr

Asp

Thr

Val

Lys

310

315

320

gga

gaa

aga

gtc

tca

ttc

cct

gta

tgc

acc

tac

gtc

ccc

tca

acc

atc

Gly

Glu

Arg

Val

Ser

Phe

Pro

Val

Cys

Thr

Tyr

Val

Pro

Ser

Thr

Ile

325

330

335

tgt

gat

caa

atg

act

ggc

ata

cta

gcg

acc

gac

gtc

aca

ccg

gag

gac

Cys

Asp

Gln

Met

Thr

Gly

Ile

Leu

Ala

Thr

Asp

Val

Thr

Pro

Glu

Asp

340

345

350

355

gca

cag

aag

ttg

tta

gtg

gga

ttg

aat

cag

agg

ata

gtt

gtg

aac

gga

Ala

Gln

Lys

Leu

Leu

Val

Gly

Leu

Asn

Gln

Arg

Ile

Val

Val

Asn

Gly

360

365

370

aga

aca

cag

cga

aac

act

aac

acg

atg

aag

aac

tat

ctg

ctt

ccg

att

Arg

Thr

Gln

Arg

Asn

Thr

Asn

Thr

Met

Lys

Asn

Tyr

Leu

Leu

Pro

Ile

375

380

385

gtg

gcc

gtc

gca

ttt

agc

aag

tgg

gcg

agg

gaa

tac

aag

gca

gac

ctt

Val

Ala

Val

Ala

Phe

Ser

Lys

Trp

Ala

Arg

Glu

Tyr

Lys

Ala

Asp

Leu

390

395

400

gat

gat

gaa

aaa

cct

ctg

ggt

gtc

cga

gag

agg

tca

ctt

act

tgc

tgc

Asp

Asp

Glu

Lys

Pro

Leu

Gly

Val

Arg

Glu

Arg

Ser

Leu

Thr

Cys

Cys

405

410

415

tgc

ttg

tgg

gca

ttt

aaa

acg

agg

aag

atg

cac

acc

atg

tac

aag

aaa

Cys

Leu

Trp

Ala

Phe

Lys

Thr

Arg

Lys

Met

His

Thr

Met

Tyr

Lys

Lys

420

425

430

435

cca

gac

acc

cag

aca

ata

gtg

aag

gtg

cct

tca

gag

ttt

aac

tcg

ttc

1450

1498

1546

1594

1642

1690

1738

1786

1834

1882

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 264/695

122/223

Pro Asp

Thr

Gln

Thr Ile Val 440

Lys

Val

Pro Ser Glu 445

Phe

Asn

Ser 450

Phe

gtc

atc

ccg

agc

cta

tgg

tct

aca

ggc

ctc

gca

atc

cca

gtc

aga

tca

Val

Ile

Pro

Ser

Leu

Trp

Ser

Thr

Gly

Leu

Ala

Ile

Pro

Val

Arg

Ser

455

460

465

cgc

att

aag

atg

ctt

ttg

gcc

aag

aag

acc

aag

cga

gag

tta

ata

cct

Arg

Ile

Lys

Met

Leu

Leu

Ala

Lys

Lys

Thr

Lys

Arg

Glu

Leu

Ile

Pro

470

475

480

gtt

ctc

gac

gcg

tcg

tca

gcc

agg

gat

gct

gaa

caa

gag

gag

aag

gag

Val

Leu

Asp

Ala

Ser

Ser

Ala

Arg

Asp

Ala

Glu

Gln

Glu

Glu

Lys

Glu

485

490

495

agg

ttg

gag

gcc

gag

ctg

act

aga

gaa

gcc

tta

cca

ccc

ctc

gtc

ccc

Arg

Leu

Glu

Ala

Glu

Leu

Thr

Arg

Glu

Ala

Leu

Pro

Pro

Leu

Val

Pro

500

505

510

515

atc

gcg

ccg

gcg

gag

acg

gga

gtc

gtc

gac

gtc

gac

gtt

gaa

gaa

cta

Ile

Ala

Pro

Ala

Glu

Thr

Gly

Val

Val

Asp

Val

Asp

Val

Glu

Glu

Leu

520

525

530

gag

tat

cac

gca

ggt

gca

ggg

gtc

gtg

gaa

aca

cct

cgc

agc

gcg

ttg

Glu

Tyr

His

Ala

Gly

Ala

Gly

Val

Val

Glu

Thr

Pro

Arg

Ser

Ala

Leu

535

540

545

aaa

gtc

acc

gca

cag

ccg

aac

gac

gta

cta

cta

gga

aat

tac

gta

gtt

Lys

Val

Thr

Ala

Gln

Pro

Asn

Asp

Val

Leu

Leu

Gly

Asn

Tyr

Val

Val

550

555

560

ctg

tcc

ccg

cag

acc

gtg

ctc

aag

agc

tcc

aag

ttg

gcc

ccc

gtg

cac

Leu

Ser

Pro

Gln

Thr

Val

Leu

Lys

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Pro

Val

His

565

570

575

cct

cta

gca

gag

cag

gtg

aaa

ata

ata

aca

cat

aac

ggg

agg

gcc

ggc

Pro

Leu

Ala

Glu

Gln

Val

Lys

Ile

Ile

Thr

His

Asn

Gly

Arg

Ala

Gly

580

585

590

595

cgt

tac

cag

gtc

gac

gga

tat

gac

ggc

agg

gtc

cta

cta

cca

tgt

gga

1930

1978

2026

2074

2122

2170

2218

2266

2314

2362

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 265/695

123/223

Arg

Tyr

Gln

Val

Asp 600

Gly

Tyr Asp

Gly Arg 605

Val

Leu

Leu Pro

Cys 610

Gly

tcg

gcc

att

ccg

gtc

cct

gag

ttt

caa

gct

ttg

agc

gag

agc

gcc

act

Ser

Ala

Ile

Pro

Val

Pro

Glu

Phe

Gln

Ala

Leu

Ser

Glu

Ser

Ala

Thr

615

620

625

atg

gtg

tac

aac

gaa

agg

gag

ttc

gtc

aac

agg

aaa

cta

tac

cat

att

Met

Val

Tyr

Asn

Glu

Arg

Glu

Phe

Val

Asn

Arg

Lys

Leu

Tyr

His

Ile

630

635

640

gcc

gtt

cac

gga

ccg

tcg

ctg

aac

acc

gac

gag

gag

aac

tac

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aaa

Ala

Val

His

Gly

Pro

Ser

Leu

Asn

Thr

Asp

Glu

Glu

Asn

Tyr

Glu

Lys

645

650

655

gtc

aga

gct

gaa

aga

act

gac

gcc

gag

tac

gtg

ttc

gac

gta

gat

aaa

Val

Arg

Ala

Glu

Arg

Thr

Asp

Ala

Glu

Tyr

Val

Phe

Asp

Val

Asp

Lys

660

665

670

675

aaa

tgc

tgc

gtc

aag

aga

gag

gaa

gcg

tcg

ggt

ttg

gtg

ttg

gtg

gga

Lys

Cys

Cys

Val

Lys

Arg

Glu

Glu

Ala

Ser

Gly

Leu

Val

Leu

Val

Gly

680

685

690

gag

cta

acc

aac

ccc

ccg

ttc

cat

gaa

ttc

gcc

tac

gaa

ggg

ctg

aag

Glu

Leu

Thr

Asn

Pro

Pro

Phe

His

Glu

Phe

Ala

Tyr

Glu

Gly

Leu

Lys

695

700

705

atc

agg

ccg

tcg

gca

cca

tat

aag

act

aca

gta

gta

gga

gtc

ttt

ggg

Ile

Arg

Pro

Ser

Ala

Pro

Tyr

Lys

Thr

Thr

Val

Val

Gly

Val

Phe

Gly

710

715

720

gtt

ccg

gga

tca

ggc

aag

tct

gct

att

att

aag

agc

ctc

gtg

acc

aaa

Val

Pro

Gly

Ser

Gly

Lys

Ser

Ala

Ile

Ile

Lys

Ser

Leu

Val

Thr

Lys

725

730

735

cac

gat

ctg

gtc

acc

agc

ggc

aag

aag

gag

aac

tgc

cag

gaa

ata

gtc

His

Asp

Leu

Val

Thr

Ser

Gly

Lys

Lys

Glu

Asn

Cys

Gln

Glu

Ile

Val

740

745

750

755

2410

2458

2506

2554

2602

2650

2698

2746

2794

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 266/695

124/223

aac

gac

gtg

aag

aag

cac

cgc

gga

ctg

gac

atc

cag

gca

aaa

aca

gtg

Asn

Asp

Val

Lys

Lys

His

Arg

Gly

Leu

Asp

Ile

Gln

Ala

Lys

Thr

Val

760

765

770

gac

tcc

atc

ctg

cta

aac

ggg

tgt

cgt

cgt

gcc

gtg

gac

atc

cta

tat

Asp

Ser

Ile

Leu

Leu

Asn

Gly

Cys

Arg

Arg

Ala

Val

Asp

Ile

Leu

Tyr

775

780

785

gtg

gac

gag

gct

ttc

gct

tgc

cat

ccc

ggt

act

ctg

cta

gcc

cta

att

Val

Asp

Glu

Ala

Phe

Ala

Cys

His

Pro

Gly

Thr

Leu

Leu

Ala

Leu

Ile

790

795

800

gct

ctt

gtt

aaa

cct

cgg

agc

aaa

gtg

gtg

tta

tgc

gga

gac

ccc

aag

Ala

Leu

Val

Lys

Pro

Arg

Ser

Lys

Val

Val

Leu

Cys

Gly

Asp

Pro

Lys

805

810

815

caa

tgc

gga

ttc

ttc

aat

atg

atg

cag

ctt

aag

gtg

aac

ttc

aac

cac

Gln

Cys

Gly

Phe

Phe

Asn

Met

Met

Gln

Leu

Lys

Val

Asn

Phe

Asn

His

820

825

830

835

aac

atc

tgc

act

gaa

gta

tgt

cat

aaa

agt

ata

tcc

aga

cgt

tgc

acg

Asn

Ile

Cys

Thr

Glu

Val

Cys

His

Lys

Ser

Ile

Ser

Arg

Arg

Cys

Thr

840

845

850

cgt

cca

gtc

acg

gcc

atc

gtg

tct

acg

ttg

cac

tac

gga

ggc

aag

atg

Arg

Pro

Val

Thr

Ala

Ile

Val

Ser

Thr

Leu

His

Tyr

Gly

Gly

Lys

Met

855

860

865

cgc

acg

acc

aac

ccg

tgc

aac

aaa

ccc

ata

atc

ata

gac

acc

aca

gga

Arg

Thr

Thr

Asn

Pro

Cys

Asn

Lys

Pro

Ile

Ile

Ile

Asp

Thr

Thr

Gly

870

875

880

cag

acc

aag

ccc

aag

cca

gga

gac

atc

gtg

tta

aca

tgc

ttc

cga

ggc

Gln

Thr

Lys

Pro

Lys

Pro

Gly

Asp

Ile

Val

Leu

Thr

Cys

Phe

Arg

Gly

885

890

895

tgg

gta

aag

cag

ctg

cag

ttg

gac

tac

cgt

gga

cac

gaa

gtc

atg

aca

Trp

Val

Lys

Gln

Leu

Gln

Leu

Asp

Tyr

Arg

Gly

His

Glu

Val

Met

Thr

900

905

910

915

2842

2890

2938

2986

3034

3082

3130

3178

3226

3274

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 267/695

125/223

gca

gca

gca

tct

cag

ggc

ctc

acc

cgc

aaa

ggg

gta

tac

gcc

gta

agg

3322

Ala

Ala

Ala

Ser

Gln

Gly

Leu

Thr

Arg

Lys

Gly

Val

Tyr

Ala

Val

Arg

920

925

930

cag

aag

gtg

aat

gaa

aat

ccc

ttg

tat

gcc

cct

gcg

tcg

gag

cac

gtg

3370

Gln

Lys

Val

Asn

Glu

Asn

Pro

Leu

Tyr

Ala

Pro

Ala

Ser

Glu

His

Val

935

940

945

aat

gta

ctg

ctg

acg

cgc

act

gag

gat

agg

ctg

gtg

tgg

aaa

acg

ctg

3418

Asn

Val

Leu

Leu

Thr

Arg

Thr

Glu

Asp

Arg

Leu

Val

Trp

Lys

Thr

Leu

950

955

960

gcc

ggc

gat

ccc

tgg

att

aag

gtc

cta

tca

aac

att

cca

cag

ggt

aac

3466

Ala

Gly

Asp

Pro

Trp

Ile

Lys

Val

Leu

Ser

Asn

Ile

Pro

Gln

Gly

Asn

965

970

975

ttt

acg

gcc

aca

ttg

gaa

gaa

tgg

caa

gaa

gaa

cac

gac

aaa

ata

atg

3514

Phe

Thr

Ala

Thr

Leu

Glu

Glu

Trp

Gln

Glu

Glu

His

Asp

Lys

Ile

Met

980

985

990

995

aag

gtg

att

gaa

gga

ccg

gct

gcg

cct

gtg

gac

gcg

ttc

cag

aac

aaa

3562

Lys

Val

Ile

Glu

Gly

Pro

Ala

Ala

Pro

Val

Asp

Ala

Phe

Gln

Asn

Lys

1000

1005

1010

gcg

aac

gtg

tgt

tgg

gcg

aaa

agc

ctg

gtg

cct

gtc

ctg

gac

act

gcc

3610

Ala

Asn

Val

Cys

Trp

Ala

Lys

Ser

Leu

Val

Pro

Val

Leu

Asp

Thr

Ala

1015

1020

1025

gga

atc

aga

ttg

aca

gca

gag

gag

tgg

agc

acc

ata

att

aca

gca

ttt

3658

Gly

Ile

Arg

Leu

Thr

Ala

Glu

Glu

Trp

Ser

Thr

Ile

Ile

Thr

Ala

Phe

1030

1035

1040

aag

gag

gac

aga

gct

tac

tct

cca

gtg

gtg

gcc

ttg

aat

gaa

att

tgc

3706

Lys

Glu

Asp

Arg

Ala

Tyr

Ser

Pro

Val

Val

Ala

Leu

Asn

Glu

Ile

Cys

1045

1050

1055

acc

aag

tac

tat

gga

gtt

gac

ctg

gac

agt

ggc

ctg

ttt

tct

gcc

ccg

3754

Thr

Lys

Tyr

Tyr

Gly Val

Asp

Leu

Asp

Ser

Gly Leu

Phe

Ser

Ala

Pro

1060

1065

1070

1075

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 268/695

126/223

aag

gtg

tcc

ctg

tat

tac

gag

aac

aac

cac

tgg

gat

aac

aga

cct

ggt

Lys

Val

Ser

Leu

Tyr

Tyr

Glu

Asn

Asn

His

Trp

Asp

Asn

Arg

Pro

Gly

1080

1085

1090

gga

agg

atg

tat

gga

ttc

aat

gcc

gca

aca

gct

gcc

agg

ctg

gaa

gct

Gly

Arg

Met

Tyr

Gly

Phe

Asn

Ala

Ala

Thr

Ala

Ala

Arg

Leu

Glu

Ala

1095

1100

1105

aga

cat

acc

ttc

ctg

aag

ggg

cag

tgg

cat

acg

ggc

aag

cag

gca

gtt

Arg

His

Thr

Phe

Leu

Lys

Gly

Gln

Trp

His

Thr

Gly

Lys

Gln

Ala

Val

1110

1115

1120

atc

gca

gaa

aga

aaa

atc

caa

ccg

ctt

tct

gtg

ctg

gac

aat

gta

att

Ile

Ala

Glu

Arg

Lys

Ile

Gln

Pro

Leu

Ser

Val

Leu

Asp

Asn

Val

Ile

1125

1130

1135

cct

atc

aac

cgc

agg

ctg

ccg

cac

gcc

ctg

gtg

gct

gag

tac

aag

acg

Pro

Ile

Asn

Arg

Arg

Leu

Pro

His

Ala

Leu

Val

Ala

Glu

Tyr

Lys

Thr

1140

1145

1150

1155

gtt

aaa

ggc

agt

agg

gtt

gag

tgg

ctg

gtc

aat

aaa

gta

aga

ggg

tac

Val

Lys

Gly

Ser

Arg

Val

Glu

Trp

Leu

Val

Asn

Lys

Val

Arg

Gly

Tyr

1160

1165

1170

cac

gtc

ctg

ctg

gtg

agt

gag

tac

aac

ctg

gct

ttg

cct

cga

cgc

gac

His

Val

Leu

Leu

Val

Ser

Glu

Tyr

Asn

Leu

Ala

Leu

Pro

Arg

Arg

Asp

1175

1180

1185

gtc

act

tgg

ttg

tca

ccg

ctg

aat

gtc

aca

ggc

gcc

gat

agg

tgc

tac

Val

Thr

Trp

Leu

Ser

Pro

Leu

Asn

Val

Thr

Gly

Ala

Asp

Arg

Cys

Tyr

1190

1195

1200

gac

cta

agt

tta

gga

ctg

ccg

gct

gac

gcc

ggc

agg

ttc

gac

ttg

gtc

Asp

Leu

Ser

Leu

Gly

Leu

Pro

Ala

Asp

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

Leu

Val

1205

1210

1215

ttt

gtg

aac

att

cac

acg

gaa

ttc

aga

atc

cac

cac

tac

cag

cag

tgt

Phe

Val

Asn

Ile

His

Thr

Glu

Phe

Arg

Ile

His

His

Tyr

Gln

Gln

Cys

1220 1225 1230 1235

3802

3850

3898

3946

3994

4042

4090

4138

4186

4234

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 269/695

127/223

gtc	gac	cac gcc atg	aag ctg	cag	atg ctt	ggg gga gat	gcg	cta	cga
Val	Asp	His Ala Met	Lys Leu	Gln	Met Leu	Gly Gly Asp	Ala	Leu	Arg
		1240			1245		1250
ctg	cta	aaa ccc ggc	ggc agc	ctc	ttg atg	aga gct tac	gga	tac	gcc
Leu	Leu	Lys Pro Gly	Gly Ser	Leu	Leu Met	Arg Ala Tyr	Gly	Tyr	Ala
		1255		1260	1265
gat	aaa	atc agc gaa	gcc gtt	gtt	tcc tcc	tta agc aga	aag	ttc	tcg
Asp	Lys	Ile Ser Glu	Ala Val	Val	Ser Ser	Leu Ser Arg	Lys	Phe	Ser
	1270	1275		1280
tct	gca	aga gtg ttg	cgc ccg	gat	tgt gtc	acc agc aat	aca	gaa	gtg
Ser	Ala	Arg Val Leu	Arg Pro	Asp	Cys Val	Thr Ser Asn	Thr	Glu	Val
1285		1290			1295
ttc	ttg	ctg ttc tcc	aac ttt	gac	aac gga	aag aga ccc	tct	acg	cta
Phe	Leu	Leu Phe Ser	Asn Phe	Asp	Asn Gly	Lys Arg Pro	Ser	Thr	Leu
1300	1305		1310		1315
cac	cag	atg aat acc	aag ctg	agt	gcc gtg	tat gcc gga	gaa	gcc	atg
His	Gln	Met Asn Thr	Lys Leu	Ser	Ala Val	Tyr Ala Gly	Glu	Ala	Met
		1320			1325		1330
cac	acg	gcc ggg tgt	gca cca	tcc	tac aga	gtt aag aga	gca	gac	ata
His	Thr	Ala Gly Cys	Ala Pro	Ser	Tyr Arg	Val Lys Arg	Ala	Asp	Ile
		1335		1340	1345
gcc	acg	tgc aca gaa	gcg gct	gtg	gtt aac	gca gct aac	gcc	cgt	gga
Ala	Thr	Cys Thr Glu	Ala Ala	Val	Val Asn	Ala Ala Asn	Ala	Arg	Gly
	1350	1355		1360
act	gta	ggg gat ggc	gta tgc	agg	gcc gtg	gcg aag aaa	tgg	ccg	tca
Thr	Val	Gly Asp Gly	Val Cys	Arg	Ala Val	Ala Lys Lys	Trp	Pro	Ser
1365		1370			1375
gcc	ttt	aag gga gaa	gca aca	cca	gtg ggc	aca att aaa	aca	gtc	atg
Ala	Phe	Lys Gly Glu	Ala Thr	Pro	Val Gly	Thr Ile Lys	Thr	Val	Met

1380 1385 1390 1395

4282

4330

4378

4426

4474

4522

4570

4618

4666

4714

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 270/695

128/223

tgc	ggc	tcg tac ccc	gtc atc cac	gct	gta gcg cct	aat	ttc	tct	gcc	4762
Cys	Gly	Ser Tyr Pro	Val Ile His	Ala	Val Ala Pro	Asn	Phe	Ser	Ala
		1400		1405		1410
acg	act	gaa gcg gaa	ggg gac cgc	gaa	ttg gcc gct	gtc	tac	cgg	gca	4810
Thr	Thr	Glu Ala Glu	Gly Asp Arg	Glu	Leu Ala Ala	Val	Tyr	Arg	Ala
		1415	1420		1425
gtg	gcc	gcc gaa gta	aac aga ctg	tca	ctg agc agc	gta	gcc	atc	ccg	4858
Val	Ala	Ala Glu Val	Asn Arg Leu	Ser	Leu Ser Ser	Val	Ala	Ile	Pro
	1430	1435		1440
ctg	ctg	tcc aca gga	gtg ttc agc	ggc	gga aga gat	agg	ctg	cag	caa	4906
Leu	Leu	Ser Thr Gly	Val Phe Ser	Gly	Gly Arg Asp	Arg	Leu	Gln	Gln
1445		1450		1455
tcc	ctc	aac cat cta	ttc aca gca	atg	gac gcc acg	gac	gct	gac	gtg	4954
Ser	Leu	Asn His Leu	Phe Thr Ala	Met	Asp Ala Thr	Asp	Ala	Asp	Val
1460	1465		1470			1475
acc	atc	tac tgc aga	gac aaa agt	tgg	gag aag aaa	atc	cag	gaa	gcc	5002
Thr	Ile	Tyr Cys Arg	Asp Lys Ser	Trp	Glu Lys Lys	Ile	Gln	Glu	Ala
		1480		1485		1490
ata	gac	atg agg acg	gct gtg gag	ttg	ctc aat gat	gac	gtg	gag	ctg	5050
Ile	Asp	Met Arg Thr	Ala Val Glu	Leu	Leu Asn Asp	Asp	Val	Glu	Leu
		1495	1500		1505
acc	aca	gac ttg gtg	aga gtg cac	ccg	gac agc agc	ctg	gtg	ggt	cgt	5098
Thr	Thr	Asp Leu Val	Arg Val His	Pro	Asp Ser Ser	Leu	Val	Gly	Arg
	1510	1515		1520
aag	ggc	tac agt acc	act gac ggg	tcg	ctg tac tcg	tac	ttt	gaa	ggt	5146
Lys	Gly	Tyr Ser Thr	Thr Asp Gly	Ser	Leu Tyr Ser	Tyr	Phe	Glu	Gly
1525		1530		1535
acg	aaa	ttc aac cag	gct gct att	gat	atg gca gag	ata	ctg	acg	ttg	5194
Thr	Lys	Phe Asn Gln	Ala Ala Ile	Asp	Met Ala Glu	Ile	Leu	Thr	Leu

1540 1545 1550 1555

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 271/695

129/223

tgg ccc aga ctg caa gag gca aac	gaa	cag ata tgc	cta	tac	gcg	ctg	5242
Trp Pro Arg Leu Gln Glu Ala Asn	Glu	Gln Ile Cys	Leu	Tyr Ala	Leu
1560	1565		1570
ggc gaa aca atg gac aac atc aga	tcc	aaa tgt ccg	gtg	aac	gat	tcc	5290
Gly Glu Thr Met Asp Asn Ile Arg	Ser	Lys Cys Pro	Val	Asn	Asp	Ser
1575	1580		1585
gat tca tca aca cct ccc agg aca	gtg	ccc tgc ctg	tgc	cgc	tac	gca	5338
Asp Ser Ser Thr Pro Pro Arg Thr	Val	Pro Cys Leu	Cys	Arg	Tyr	Ala
1590 1595		1600
atg aca gca gaa cgg atc gcc cgc	ctt	agg tca cac	caa	gtt	aaa	agc	5386
Met Thr Ala Glu Arg Ile Ala Arg	Leu	Arg Ser His	Gln	Val	Lys	Ser
1605 1610		1615
atg gtg gtt tgc tca tct ttt ccc	ctc	ccg aaa tac	cat	gta	gat	ggg	5434
Met Val Val Cys Ser Ser Phe Pro	Leu	Pro Lys Tyr	His	Val	Asp	Gly
1620 1625		1630			1635
gtg cag aag gta aag tgc gag aag	gtt	ctc ctg ttc	gac	ccg	acg	gta	5482
Val Gln Lys Val Lys Cys Glu Lys	Val	Leu Leu Phe	Asp	Pro	Thr	Val
1640	1645		1650
cct tca gtg gtt agt ccg cgg aag	tat	gcc gca tct	acg	acg	gac	cac	5530
Pro Ser Val Val Ser Pro Arg Lys	Tyr	Ala Ala Ser	Thr	Thr	Asp	His
1655	1660		1665
tca gat cgg tcg tta cga ggg ttt	gac	ttg gac tgg	acc	acc	gac	tcg	5578
Ser Asp Arg Ser Leu Arg Gly Phe	Asp	Leu Asp Trp	Thr	Thr	Asp	Ser
1670 1675		1680
tct tcc act gcc agc gat acc atg	tcg	cta ccc agt	ttg	cag	tcg	tgt	5626
Ser Ser Thr Ala Ser Asp Thr Met	Ser	Leu Pro Ser	Leu	Gln	Ser	Cys
1685 1690		1695
gac atc gac tcg atc tac gag cca	atg	gct ccc ata	gta	gtg	acg	gct	5674
Asp Ile Asp Ser Ile Tyr Glu Pro	Met	Ala Pro Ile	Val	Val	Thr	Ala
1700 1705		1710			1715

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 272/695

130/223

gac

gta

cac

cct

gaa

ccc

gca

ggc

atc

gcg

gac

ctg

gcg

gca gat

gtg

Asp

Val

His

Pro

Glu

Pro

Ala

Gly

Ile

Ala

Asp

Leu

Ala

Ala Asp

Val

1720

1725

1730

cat

cct

gaa

ccc

gca

gac

cat

gtg

gac

ctc

gag

aac

ccg

att

cct

cca

His

Pro

Glu

Pro

Ala

Asp

His

Val

Asp

Leu

Glu

Asn

Pro

Ile

Pro

Pro

1735

1740

1745

ccg

cgc

ccg

aag

aga

gct

gca

tac

ctt

gcc

tcc

cgc

gcg

gcg

gag

cga

Pro

Arg

Pro

Lys

Arg

Ala

Ala

Tyr

Leu

Ala

Ser

Arg

Ala

Ala

Glu

Arg

1750

1755

1760

ccg

gtg

ccg

gcg

ccg

aga

aag

ccg

acg

cct

gcc

cca

agg

act

gcg

ttt

Pro

Val

Pro

Ala

Pro

Arg

Lys

Pro

Thr

Pro

Ala

Pro

Arg

Thr

Ala

Phe

1765

1770

1775

agg

aac

aag

ctg

cct

ttg

acg

ttc

ggc

gac

ttt

gac

gag

cac

gag

gtc

Arg

Asn

Lys

Leu

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Asp

Phe

Asp

Glu

His

Glu

Val

1780

1785

1790

1795

gat

gcg

ttg

gcc

tcc

ggg

att

act

ttc

gga

gac

ttc

gac

gac

gtc

ctg

Asp

Ala

Leu

Ala

Ser

Gly

Ile

Thr

Phe

Gly

Asp

Phe

Asp

Asp

Val

Leu

1800

1805

1810

cga

cta

ggc

cgc

gcg

ggt

gca

tat

att

ttc

tcc

tcg

gac

act

ggc

agc

Arg

Leu

Gly

Arg

Ala

Gly

Ala

Tyr

Ile

Phe

Ser

Ser

Asp

Thr

Gly

Ser

1815

1820

1825

gga

cat

tta

caa

caa

aaa

tcc

gtt

agg

cag

cac

aat

ctc

cag

tgc

gca

Gly

His

Leu

Gln

Gln

Lys

Ser

Val

Arg

Gln

His

Asn

Leu

Gln

Cys

Ala

1830

1835

1840

caa

ctg

gat

gcg

gtc

gag

gag

gag

aaa

atg

tac

ccg

cca

aaa

ttg

gat

Gln

Leu

Asp

Ala

Val

Glu

Glu

Glu

Lys

Met

Tyr

Pro

Pro

Lys

Leu

Asp

1845

1850

1855

act

gag

agg

gag

aag

ctg

ttg

ctg

ctg

aaa

atg

cag

atg

cac

cca

tcg

Thr

Glu

Arg

Glu

Lys

Leu

Leu

Leu

Leu

Lys

Met

Gln

Met

His

Pro

Ser

1860 1865 1870 1875

5722

5770

5818

5866

5914

5962

6010

6058

6106

6154

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 273/695

131/223

gag	gct	aat aag agt	cga tac cag	tct	cgc aaa gtg	gag	aac	atg	aaa	6202
Glu	Ala	Asn Lys Ser	Arg Tyr Gln	Ser	Arg Lys Val	Glu	Asn	Met	Lys
		1880		1885		1890
gcc	acg	gtg gtg gac	agg ctc aca	tcg	ggg gcc aga	ttg	tac	acg	gga	6250
Ala	Thr	Val Val Asp	Arg Leu Thr	Ser	Gly Ala Arg	Leu	Tyr	Thr	Gly
		1895	1900		1905
gcg	gac	gta ggc cgc	ata cca aca	tac	gcg gtt cgg	tac	ccc	cgc	ccc	6298
Ala	Asp	Val Gly Arg	Ile Pro Thr	Tyr	Ala Val Arg	Tyr	Pro	Arg	Pro
	1910	1915		1920
gtg	tac	tcc cct acc	gtg atc gaa	aga	ttc tca agc	ccc	gat	gta	gca	6346
Val	Tyr	Ser Pro Thr	Val Ile Glu	Arg	Phe Ser Ser	Pro	Asp	Val	Ala
1925		1930		1935
atc	gca	gcg tgc aac	gaa tac cta	tcc	aga aat tac	cca	aca	gtg	gcg	6394
Ile	Ala	Ala Cys Asn	Glu Tyr Leu	Ser	Arg Asn Tyr	Pro	Thr	Val	Ala
1940	1945		1950			1955
tcg	tac	cag ata aca	gat gaa tac	gac	gca tac ttg	gac	atg	gtt	gac	6442
Ser	Tyr	Gln Ile Thr	Asp Glu Tyr	Asp	Ala Tyr Leu	Asp	Met	Val	Asp
		1960		1965		1970
ggg	tcg	gat agt tgc	ttg gac aga	gcg	aca ttc tgc	ccg	gcg	aag	ctc	6490
Gly	Ser	Asp Ser Cys	Leu Asp Arg	Ala	Thr Phe Cys	Pro	Ala	Lys	Leu
		1975	1980		1985
cgg	tgc	tac ccg aaa	cat cat gcg	tac	cac cag ccg	act	gta	cgc	agt	6538
Arg	Cys	Tyr Pro Lys	His His Ala	Tyr	His Gln Pro	Thr	Val	Arg	Ser
	1990	1995		2000
gcc	gtc	ccg tca ccc	ttt cag aac	aca	cta cag aac	gtg	cta	gcg	gcc	6586
Ala	Val	Pro Ser Pro	Phe Gln Asn	Thr	Leu Gln Asn	Val	Leu	Ala	Ala
2005		2010		2015
gcc	acc	aag aga aac	tgc aac gtc	acg	caa atg cga	gaa	cta	ccc	acc	6634
Ala Thr	Lys Arg Asn	Cys Asn Val	Thr	Gln Met Arg	Glu	Leu	Pro	Thr

2020 2025 2030 2035

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 274/695

132/223

atg	gac	tcg gca gtg	ttc aac	gtg	gag tgc	ttc aag cgc	tat	gcc	tgc
Met	Asp	Ser Ala Val	Phe Asn	Val	Glu Cys	Phe Lys Arg	Tyr Ala	Cys
		2040			2045		2050
tcc	gga	gaa tat tgg	gaa gaa	tat	gct aaa	caa cct atc	cgg	ata	acc
Ser	Gly	Glu Tyr Trp	Glu Glu	Tyr	Ala Lys	Gln Pro Ile	Arg	Ile	Thr
		2055		2060	2065
act	gag	aac atc act	acc tat	gtg	acc aaa	ttg aaa ggc	ccg	aaa	gct
Thr	Glu	Asn Ile Thr	Thr Tyr	Val	Thr Lys	Leu Lys Gly	Pro	Lys	Ala
	2070	2075		2080
gct	gcc	ttg ttc gct	aag acc	cac	aac ttg	gtt ccg ctg	cag	gag	gtt
Ala	Ala	Leu Phe Ala	Lys Thr	His	Asn Leu	Val Pro Leu	Gln	Glu	Val
2085		2090			2095
ccc	atg	gac aga ttc	acg gtc	gac	atg aaa	cga gat gtc	aaa	gtc	act
Pro	Met	Asp Arg Phe	Thr Val	Asp	Met Lys	Arg Asp Val	Lys	Val	Thr
2100	2105		2110		2115
cca	ggg	acg aaa cac	aca gag	gaa	aga ccc	aaa gtc cag	gta	att	caa
Pro	Gly	Thr Lys His	Thr Glu	Glu	Arg Pro	Lys Val Gln	Val	Ile	Gln
		2120			2125		2130
gca	gcg	gag cca ttg	gcg acc	gct	tac ctg	tgc ggc atc	cac	agg	gaa
Ala	Ala	Glu Pro Leu	Ala Thr	Ala	Tyr Leu	Cys Gly Ile	His	Arg	Glu
		2135		2140	2145
tta	gta	agg aga cta	aat gct	gtg	tta cgc	cct aac gtg	cac	aca	ttg
Leu	Val	Arg Arg Leu	Asn Ala	Val	Leu Arg	Pro Asn Val	His	Thr	Leu
	2150	2155		2160
ttt	gat	atg tcg gcc	gaa gac	ttt	gac gcg	atc atc gcc	tct	cac	ttc
Phe	Asp	Met Ser Ala	Glu Asp	Phe	Asp Ala	Ile Ile Ala	Ser	His	Phe
2165		2170			2175
cac	cca	gga gac ccg	gtt cta	gag	acg gac	att gca tca	ttc	gac	aaa
His	Pro	Gly Asp Pro	Val Leu	Glu	Thr Asp	Ile Ala Ser	Phe	Asp	Lys

2180 2185 2190 2195

6682

6730

6778

6826

6874

6922

6970

7018

7066

7114

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 275/695

133/223

agc cag gac gac tcc ttg gct ctt	aca	ggt tta atg	atc	ctc	gaa	gat	7162
Ser Gln Asp Asp Ser Leu Ala Leu	Thr	Gly Leu Met	Ile	Leu	Glu	Asp
2200	2205		2210
cta ggg gtg gat cag tac ctg ctg	gac	ttg atc gag	gca	gcc	ttt	ggg	7210
Leu Gly Val Asp Gln Tyr Leu Leu	Asp	Leu Ile Glu	Ala	Ala	Phe	Gly
2215 2220		2225
gaa ata tcc agc tgt cac cta cca	act	ggc acg cgc	ttc	aag	ttc	gga	7258
Glu Ile Ser Ser Cys His Leu Pro	Thr	Gly Thr Arg	Phe	Lys	Phe	Gly
2230 2235		2240
gct atg atg aaa tcg ggc atg ttt	ctg	act ttg ttt	att	aac	act	gtt	7306
Ala Met Met Lys Ser Gly Met Phe	Leu	Thr Leu Phe	Ile	Asn	Thr	Val
2245 2250		2255
ttg aac atc acc ata gca agc agg	gta	ctg gag cag	aga	ctc	act	gac	7354
Leu Asn Ile Thr Ile Ala Ser Arg	Val	Leu Glu Gln	Arg	Leu	Thr	Asp
2260 2265		2270			2275
tcc gcc tgt gcg gcc ttc atc ggc	gac	gac aac atc	gtt	cac	gga	gtg	7402
Ser Ala Cys Ala Ala Phe Ile Gly	Asp	Asp Asn Ile	Val	His	Gly	Val
2280	2285		2290
atc tcc gac aag ctg atg gcg gag	agg	tgc gcg tcg	tgg	gtc	aac	atg	7450
Ile Ser Asp Lys Leu Met Ala Glu	Arg	Cys Ala Ser	Trp	Val	Asn	Met
2295 2300		2305
gag gtg aag atc att gac gct gtc	atg	ggc gaa aaa	ccc	cca	tat	ttc	7498
Glu Val Lys Ile Ile Asp Ala Val	Met	Gly Glu Lys	Pro	Pro	Tyr	Phe
2310 2315		2320
tgt ggg gga ttc ata gtt ttt gac	agc	gtc aca cag	acc	gcc	tgc	cgt	7546
Cys Gly Gly Phe Ile Val Phe Asp	Ser	Val Thr Gln	Thr	Ala	Cys	Arg
2325 2330		2335
gtt tca gac cca ctt aag cgc ctg	ttc	aag ttg ggt	aag	ccg	cta	aca	7594
Val Ser Asp Pro Leu Lys Arg Leu	Phe	Lys Leu Gly	Lys	Pro	Leu	Thr
2340 2345		2350			2355

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 276/695

134/223

gct gaa gac aag cag gac gaa gac	agg	cga cga gca	ctg	agt	gac	gag	7642
Ala Glu Asp Lys Gln Asp Glu Asp	Arg	Arg Arg Ala	Leu	Ser Asp	Glu
2360	2365		2370
gtt agc aag tgg ttc cgg aca ggc	ttg	ggg gcc gaa	ctg	gag	gtg	gca	7690
Val Ser Lys Trp Phe Arg Thr Gly	Leu	Gly Ala Glu	Leu	Glu	Val	Ala
2375 2380		2385
cta aca tct agg tat gag gta gag	ggc	tgc aaa agt	atc	ctc	ata	gcc	7738
Leu Thr Ser Arg Tyr Glu Val Glu	Gly	Cys Lys Ser	Ile	Leu	Ile	Ala
2390 2395		2400
atg gcc acc ttg gcg agg gac att	aag	gcg ttt aag	aaa	ttg	aga	gga	7786
Met Ala Thr Leu Ala Arg Asp Ile	Lys	Ala Phe Lys	Lys	Leu	Arg	Gly
2405 2410		2415
cct gtt ata cac ctc tac ggc ggt	cct	aga ttg gtg	cgt	taatacacag	7835
Pro Val Ile His Leu Tyr Gly Gly	Pro	Arg Leu Val	Arg
2420 2425		2430
aattctgatt ttaattaa atg ggg aat	gga	cag ggg cga	gat	tgg	aaa	atg	7886
Met Gly Asn	Gly	Gln Gly Arg	Asp	Trp	Lys	Met
2435		2440
gcc att aag aga tgt agt aat gtt	gct	gta gga gta	ggg	ggg	aag	agt	7934
Ala Ile Lys Arg Cys Ser Asn Val	Ala	Val Gly Val	Gly Gly	Lys	Ser
2445 2450		2455
aaa aaa ttt gga gaa ggg aat ttc	aga	tgg gcc att	aga	atg	gct	aat	7982
Lys Lys Phe Gly Glu Gly Asn Phe	Arg	Trp Ala Ile	Arg	Met	Ala	Asn
2460 2465		2470			2475
gta tct aca gga cga gaa cct ggt	gat	ata cca gag	act	tta	gat	caa	8030
Val Ser Thr Gly Arg Glu Pro Gly	Asp	Ile Pro Glu	Thr	Leu	Asp	Gln
2480	2485		2490
cta agg ttg gtt att tgc gat tta	caa	gaa aga aga	gaa	aaa	ttt	gga	8078
Leu Arg Leu Val Ile Cys Asp Leu	Gln	Glu Arg Arg	Glu	Lys	Phe	Gly
2495 2500		2505

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 277/695

135/223

tct	agc	aaa gaa att	gat atg gca	att	gtg aca tta	aaa	gtc	ttt	gcg	8126
Ser	Ser	Lys Glu Ile	Asp Met Ala	Ile	Val Thr Leu	Lys	Val	Phe	Ala
	2510	2515		2520
gta	gca	gga ctt ttg	aat atg acg	gtg	tct act gct	gct	gca	gct	gaa	8174
Val	Ala	Gly Leu Leu	Asn Met Thr	Val	Ser Thr Ala	Ala	Ala	Ala	Glu
2525		2530		2535
aat	atg	tat tct caa	atg gga tta	gac	act agg cca	tct	atg	aaa	gaa	8222
Asn	Met	Tyr Ser Gln	Met Gly Leu	Asp	Thr Arg Pro	Ser	Met	Lys	Glu
2540	2545		2550			2555
gca	ggt	gga aaa gag	gaa ggc cct	cca	cag gca tat	cct	att	caa	aca	8270
Ala	Gly	Gly Lys Glu	Glu Gly Pro	Pro	Gln Ala Tyr	Pro	Ile	Gln	Thr
		2560		2565		2570
gta	aat	gga gta cca	caa tat gta	gca	ctt gac cca	aaa	atg	gtg	tcc	8318
Val	Asn	Gly Val Pro	Gln Tyr Val	Ala	Leu Asp Pro	Lys	Met	Val	Ser
		2575	2580		2585
att	ttc	atg gaa aag	gca aga gaa	gga	cta gga ggg	gag	gaa	gtt	caa	8366
Ile	Phe	Met Glu Lys	Ala Arg Glu	Gly	Leu Gly Gly	Glu	Glu	Val	Gln
	2590	2595		2600
cta	tgg	ttt act gcc	ttc tct gca	aat	tta aca cct	act	gac	atg	gcc	8414
Leu	Trp	Phe Thr Ala	Phe Ser Ala	Asn	Leu Thr Pro	Thr	Asp	Met	Ala
2605		2610		2615
aca	tta	ata atg gcc	gca cca ggg	tgc	gct gca gat	aaa	gaa	ata	ttg	8462
Thr	Leu	Ile Met Ala	Ala Pro Gly	Cys	Ala Ala Asp	Lys	Glu	Ile	Leu
2620	2625		2630			2635
gat	gaa	agc tta aag	caa ctg aca	gca	gaa tat gat	cgc	aca	cat	ccc	8510
Asp	Glu	Ser Leu Lys	Gln Leu Thr	Ala	Glu Tyr Asp	Arg	Thr	His	Pro
		2640		2645		2650
cct	gat	gct ccc aga	cca tta ccc	tat	ttt act gca	gca	gaa	att	atg	8558
Pro	Asp	Ala Pro Arg	Pro Leu Pro	Tyr	Phe Thr Ala	Ala	Glu	Ile	Met

2655 2660 2665

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 278/695

136/223

ggt	ata	gga tta act	caa gaa caa	caa	gca gaa gca	aga	ttt	gca	cca	8606
Gly	Ile	Gly Leu Thr	Gln Glu Gln	Gln	Ala Glu Ala Arg	Phe	Ala	Pro
	2670	2675		2680
gct	agg	atg cag tgt	aga gca tgg	tat	ctc gag gca	tta	gga	aaa	ttg	8654
Ala	Arg	Met Gln Cys	Arg Ala Trp	Tyr	Leu Glu Ala	Leu	Gly	Lys	Leu
2685		2690		2695
gct	gcc	ata aaa gct	aag tct cct	cga	gct gtg cag	tta	aga	caa	gga	8702
Ala Ala	Ile Lys Ala	Lys Ser Pro	Arg	Ala Val Gln	Leu	Arg	Gln	Gly
2700	2705		2710			2715
gct	aag	gaa gat tat	tca tcc ttt	ata	gac aga ttg	ttt	gcc	caa	ata	8750
Ala	Lys	Glu Asp Tyr	Ser Ser Phe	Ile	Asp Arg Leu	Phe	Ala	Gln	Ile
		2720		2725		2730
gat	caa	gaa caa aat	aca gct gaa	gtt	aag tta tat	tta	aaa	cag	tca	8798
Asp	Gln	Glu Gln Asn	Thr Ala Glu	Val	Lys Leu Tyr	Leu	Lys	Gln	Ser
		2735	2740		2745
tta	agc	ata gct aat	gct aat gca	gac	tgt aaa aag	gca	atg	agc	cac	8846
Leu	Ser	Ile Ala Asn	Ala Asn Ala	Asp	Cys Lys Lys	Ala	Met	Ser	His
	2750	2755		2760
ctt	aag	cca gaa agt	acc cta gaa	gaa	aag ttg aga	gct	tgt	caa	gaa	8894
Leu	Lys	Pro Glu Ser	Thr Leu Glu	Glu	Lys Leu Arg	Ala	Cys	Gln	Glu
2765		2770		2775
ata	ggc	tca cca gga	tat aaa atg	caa	ctc ttg gca	gaa	gct	ctt	aca	8942
Ile	Gly	Ser Pro Gly	Tyr Lys Met	Gln	Leu Leu Ala	Glu	Ala	Leu	Thr
2780	2785		2790			2795
aaa	gtt	caa gta gtg	caa tca aaa	gga	tca gga cca	gtg	tgt	ttt	aat	8990
Lys	Val	Gln Val Val	Gln Ser Lys	Gly	Ser Gly Pro	Val	Cys	Phe	Asn
		2800		2805		2810
tgt	aaa	aaa cca gga	cat cta gca	aga	caa tgt aga	gaa	gtg	aaa	aaa	9038
Cys	Lys	Lys Pro Gly	His Leu Ala	Arg	Gln Cys Arg	Glu	Val	Lys	Lys

2815 2820 2825

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 279/695

137/223 tgt aat aaa tgt gga aaa cct ggt cat cta gct gcc aaa tgt tgg caa 9086

Cys Asn Lys Cys Gly Lys Pro Gly His Leu Ala Ala Lys Cys Trp Gln

2830

2835

2840 gga aat aga aag aat tcg gga aac tgg aag gcg ggg cga gct gca gcc 9134

Gly Asn Arg Lys Asn Ser Gly Asn Trp Lys Ala Gly Arg Ala Ala Ala

2845

2850

2855 cca gtg aat caa atg cag caa gca gta atg cca tct gca cct cca atg 9182

Pro Val Asn Gln Met Gln Gln Ala Val Met Pro Ser Ala Pro Pro Met

2860

2865

2870

2875 gag gag aaa cta ttg gat tta taaattataa taaagtaggt acgactacaa

9233

Glu Glu Lys Leu Leu Asp Leu

2880 cattagaaaa gaggccagaa atacttatat ttgtaaatgg atatcctata aaattcttat9293 tagatacagg agcagatata acaattttaa ataggagaga ttttcaagta aaaaattcta9353 tagaaaatgg aaggcaaaat atgattggag taggaggagg aaagagagga acaaattata9413 ttaatgtaca tttagagatt agagatgaaa attataagac acaatgtata tttggtaatg9473 tttgtgtctt agaagataac tcattaatac aaccattatt ggggagagat aatatgatta9533 aattcaatat taggttagta atgtaagttt aaactaatta attgaattac atccctacgc9593 aaacgtttta cggccgccgg tggcgcccgc gcccggcggc ccgtccttgg ccgttgcagg9653 ccactccggt ggctcccgtc gtccccgact tccaggccca gcagatgcag caactcatca9713 gcgccgtaaa tgcgctgaca atgagacaga acgcaattgc tcctgctagg cctcccaaac9773 caaagaagaa gaagacaacc aaaccaaagc cgaaaacgca gcccaagaag atcaacggaa9833 aaacgcagca gcaaaagaag aaagacaagc aagccgacaa gaagaagaag aaacccggaa9893 aaagagaaag aatgtgcatg aagattgaaa atgactgtat ctatgcggct agccacagta9953 acgtagtgtt tccagacatg tcgggcaccg cactatcatg ggtgcagaaa atctcgggtg10013 gtctgggggc cttcgcaatc ggcgctatcc tggtgctggt tgtggtcact tgcattgggc10073 tccgcagata agttagggta ggcaatggca ttgatatagc aagaaaattg aaaacagaaa10133 aagttagggt aagcaatggc atataaccat aactgtataa cttgtaacaa agcgcaacaa10193 gacctgcgca attggccccg tggtccgcct cacggaaact cggggcaact catattgaca10253 cattaattgg caataattgg aagcttacat aagcttaatt cgacgaataa ttggatttat10313

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 280/695

138/223

attttatttt	gcaattggtt	tttaatattt	ccaaaaaaaa	aaaaaaaaaa	aaaaaaaaaa	10373
aaaaaaaaaa	aaaaaaaaaa	aaaaaaaaac	gggtcggcat	ggcatctcca	cctcctcgcg	10433
gtccgacctg	ggcatccgaa	ggaggacgca	cgtccactcg	gatggctaag	ggagtttttc	10493
tactagtcaa	atgagtatat	ataattgaaa	aagtaaaata	taaatcatat	aataatgaaa	10553
cgaaatatca	gtaatagaca	ggaactggca	gattcttctt	ctaatgaagt	aagtactgct	10613
aaatctccaa	aattagataa	aaatgataca	gcaaatacag	cttcattcaa	cgaattacct	10673
tttaattttt	tcagacacac	cttattacaa	actaactaag	tcagatgatg	agaaagtaaa	10733
tataaattta	acttatgggt	ataatataat	aaagattcat	gatattaata	atttacttaa	10793
cgatgttaat	agacttattc	catcaacccc	ttcaaacctt	tctggatatt	ataaaatacc	10853
agttaatgat	attaaaatag	attgtttaag	agatgtaaat	aattatttgg	aggtaaagga	10913
tataaaatta	gtctatcttt	cacatggaaa	tgaattacct	aatattaata	attatgatag	10973
gaatttttta	ggatttacag	ctgttatatg	tatcaacaat	acaggcagat	ctatggttat	11033
ggtaaaacac	tgtaacggga	agcagcattc	tatggtaact	ggcctatgtt	taatagccag	11093
atcattttac	tctataaaca	ttttaccaca	aataatagga	tcctctagat	atttaatatt	11153
atatctaaca	acaacaaaaa	aatttaacga	tgtatggcca	gaagtatttt	ctactaataa	11213
agataaagat	agtctatctt	atctacaaga	tatgaaagaa	gataatcatt	tagtagtagc	11273
tactaatatg	gaaagaaatg	tatacaaaaa	cgtggaagct	tttatattaa	atagcatatt	11333
actagaagat	ttaaaatcta	gacttagtat	aacaaaacag	ttaaatgcca	atatcgattc	11393
tatatttcat	cataacagta	gtacattaat	cagtgatata	ctgaaacgat	ctacagactc	11453
aactatgcaa	ggaataagca	atatgccaat	tatgtctaat	attttaactt	tagaactaaa	11513
acgttctacc	aatactaaaa	ataggatacg	tgataggctg	ttaaaagctg	caataaatag	11573
taaggatgta	gaagaaatac	tttgttctat	accttcggag	gaaagaactt	tagaacaact	11633
taagtttaat	caaacttgta	tttatgaa				11661

<210> 5 <211> 12945 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência DNA sintético pJY1302.4

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 281/695

139/223

<220>
<221>	CDS
<222>	(1586).	.(8881)
<220>
<221>	CDS
<222>	(8910).	.(10259)
<400>	5

gaccctttac	aagaataaaa	gaagaaacaa	ctgtgaaata	gtttataaat	gtaattcgta	60
tgcagaaaac	gataatatat	tttggtatga	gaaatctaaa	ggagacatag	tttgtataga	120
catgcgctct	tccgatgaga	tattcgatgc	ttttctaatg	tatcatatag	ctacaagata	180
tgcctatcat	gatgatgata	tatatctaca	aatagtgtta	tattattcta	ataatcaaaa	240
tgttatatct	tatattacga	aaaataaata	cgttaagtat	ataagaaata	aaactagaga	300
cgatattcat	aaagtaaaaa	tattagctct	agaagacttt	acaacggaag	aaatatattg	360
ttggattagt	aatatataac	agcgtagctg	cacggttttg	atcattttcc	aacaatataa	420
accaatgaag	gaggacgact	catcaaacat	aaataacatt	cacggaaaat	attcagtatc	480
agatttatca	caagatgatt	atgttattga	atgtatagac	ggatcttttg	attcgatcaa	540
gtatagagat	ataaaggtta	taataatgaa	gaataacggt	tacgttaatt	gtagtaaatt	600
atgtaaaatg	cggaataaat	acttttctag	atggttgcgt	ctttctactt	ctaaagcatt	660
attagacatt	tacaataata	agtcagtaga	taatgctatt	gttaaagtct	atggtaaagg	720
taagaaactt	attataacag	gattttatct	caaacaaaat	atgatacgtt	atgttattga	780
gtggataggg	gatgatttta	caaacgatat	atacaaaatg	attaatttct	ataatgcgtt	840
attcggtaac	gatgaattaa	aaatagtatc	ctgtgaaaac	actctatgcc	cgtttataga	900
acttggtaga	tgctattatg	gtaaaaaatg	taagtatata	cacggagatc	aatgtgatat	960
ctgtggtcta	tatatactac	accctaccga	tattaaccaa	cgagtttctc	acaagaaaac	1020
ttgtttagta	gatagagatt	ctttgattgt	gtttaaaaga	agtaccagta	aaaagtgtgg	1080
catatgcata	gaagaaataa	acaaaaaaca	tatttccgaa	cagtattttg	gaattctccc	1140
aagttgtaaa	catatttttt	gcctatcatg	tataagacgt	tgggcagata	ctaccagaaa	1200
tacagatact	gaaaatacgt	gtcctgaatg	tagaatagtt	tttcctttca	taatacccag	1260
taggtattgg	atagataata	aatatgataa	aaaaatatta	tataatagat	ataagaaaat	1320
gatttttaca	aaaataccta	taagaacaat	aaaaatataa	ttacatttac	ggaaaatagc	1380

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 282/695

140/223 tggttttagt ttaccaactt agagtaatta tcatattgaa tctatattgc taattagcta 1440 ataaaaaccc gggttcttta ttctatactt aaaaagtgca aataaataca aaggttcttg 1500 atggcggatg tgtgacatac acgacgccaa aagattttgt tccagctcct gccacctccg 1560 ctacgcgaga gattaaccac gag gct gac agc cca ttc

Glu Ala Asp Ser Pro Phe

15 ttc gag gtg gag tca ttg Phe Glu Val Glu Ser Leu aga gca ttt tcg cac ctg Arg Ala Phe Ser His Leu aaa gac aca ctc atc ttg Lys Asp Thr Leu Ile Leu atg tct acg cac aaa tac

Met Ser Thr His Lys Tyr gac ccc gaa agg ctc gta

Asp Pro Glu Arg Leu Val

95 ggg aag gtg ctg gat aga Gly Lys Val Leu Asp Arg

110 acc gtc atg gct acg cca

Thr Val Met Ala Thr Pro

125 ccacg atg gcc gcc aaa gtg

Met Ala Ala Lys Val

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85 tgc tac gca aag aaa ctg Cys Tyr Ala Lys Lys Leu

100 gag atc gca gga aaa atc Glu Ile Ala Gly Lys Ile

115 gac gct gaa tct cct acc Asp Ala Glu Ser Pro Thr 130 cat gtt gat att1612

His Val AspIle gca ttt ccg tcg1660

Ala Phe ProSer cat gca aat gcc1708

His Ala AsnAla cag gag act gac1756

Gln Glu ThrAsp tcc agg aga atg1804

Ser Arg ArgMet cgc agc gca gaa1852

Arg Ser AlaGlu gca gcg gcc tcc1900

Ala Ala AlaSer

105 acc gac ctg cag1948

Thr Asp LeuGln

120 ttt tgc ctg cat1996

Phe Cys LeuHis

135

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 283/695

141/223

aca

gac

gtc

acg

tgt

cgt

acg

gca

gcc

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gtg

gcc

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tac

cag

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Asp

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Cys

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Ala

Glu

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Ala

Val

Tyr

Gln

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140

145

150

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ctg

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gcg

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Tyr

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Leu

Tyr

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Gln

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155

160

165

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tat

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gac

acc

acc

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ttt

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Gly

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Asp

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Thr

Pro

Phe

Met

170

175

180

185

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gac

gcg

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gca

ggc

gcg

tat

cca

acc

tac

gcc

aca

aac

tgg

gcc

Phe

Asp

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Leu

Ala

Gly

Ala

Tyr

Pro

Thr

Tyr

Ala

Thr

Asn

Trp

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190

195

200

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gag

cag

gtg

tta

cag

gcc

agg

aac

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gga

ctg

tgt

gca

gca

tcc

Asp

Glu

Gln

Val

Leu

Gln

Ala

Arg

Asn

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Gly

Leu

Cys

Ala

Ala

Ser

205

210

215

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act

gag

gga

aga

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ggc

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ctg

tcc

att

ctc

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aag

aag

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Leu

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Glu

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Arg

Leu

Gly

Lys

Leu

Ser

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Leu

Arg

Lys

Lys

Gln

220

225

230

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gac

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gga

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Leu

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Leu

Tyr

235

240

245

act

gag

agc

aga

aag

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ccc

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Glu

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Lys

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Leu

Arg

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Val

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250

255

260

265

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ttt

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tgt

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acc

atc

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Leu

Lys

Gly

Lys

Gln

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Phe

Thr

Cys

Arg

Cys

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Thr

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Val

270

275

280

tca

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gaa

ggg

tac

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aag

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act

atg

tgc

ccc

ggc

ctg

Ser

Cys

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Gly

Tyr

Val

Val

Lys

Lys

Ile

Thr

Met

Cys

Pro

Gly

Leu

285

290

295

2044

2092

2140

2188

2236

2284

2332

2380

2428

2476

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 284/695

142/223

tac

ggt

aaa

acg

gta

ggg

tac

gcc

gtg

acg

tat

cac

gcg

gag

gga

ttc

Tyr

Gly

Lys

Thr

Val

Gly

Tyr

Ala

Val

Thr

Tyr

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Ala

Glu

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300

305

310

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gtg

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acc

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ttc

Leu

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Thr

Asp

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Val

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Gly

Glu

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Val

Ser

Phe

315

320

325

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ccc

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Pro

Val

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Tyr

Val

Pro

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Thr

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Cys

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Thr

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330

335

340

345

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cta

gcg

acc

gac

gtc

aca

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gag

gac

gca

cag

aag

ttg

tta

gtg

Ile

Leu

Ala

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Asp

Val

Thr

Pro

Glu

Asp

Ala

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Lys

Leu

Leu

Val

350

355

360

gga

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gtg

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gga

aga

aca

cag

cga

aac

act

Gly

Leu

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Gln

Arg

Ile

Val

Val

Asn

Gly

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Thr

Gln

Arg

Asn

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365

370

375

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acg

atg

aag

aac

tat

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ctt

ccg

att

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gcc

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ttt

agc

Asn

Thr

Met

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Leu

Leu

Pro

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Ala

Val

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Phe

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385

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gcg

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gat

gat

gaa

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cct

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Lys

Trp

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Lys

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Leu

Asp

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Glu

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395

400

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ctt

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tgc

tgc

tgc

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ttt

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Gly

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Cys

Cys

Cys

Leu

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Ala

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415

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acg

agg

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cag

aca

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Arg

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Met

Tyr

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430

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445 450 455

2524

2572

2620

2668

2716

2764

2812

2860

2908

2956

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 285/695

143/223

tct

aca

ggc

ctc

gca

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cca

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aga

tca

cgc

att

aag

atg

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Leu

Ala

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Arg

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Leu

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aag

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tcg

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Lys

Lys

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Lys

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Ala

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agg

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gct

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gag

aag

gag

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gcc

gag

ctg

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Ala

Arg

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Ala

Glu

Gln

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Glu

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Glu

Arg

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Ala

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act

aga

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Pro

Pro

Leu

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Pro

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gac

gtc

gac

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gaa

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tat

cac

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gca

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Val

Val

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Val

Asp

Val

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Ala

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525

530

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cgc

agc

gcg

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gca

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3244

Gly

Val

Val

Glu

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Leu

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Ala

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540

545

550

aac

gac

gta

cta

cta

gga

aat

tac

gta

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tcc

ccg

cag

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3292

Asn

Asp

Val

Leu

Leu

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Asn

Tyr

Val

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Leu

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Val

555

560

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aag

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aag

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Lys

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

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585

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ata

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cgt

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cag

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Val

Leu

Leu

Pro

Cys

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Ala

Ile

Pro

Val

Pro

605

610

615

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 286/695

144/223

gag

ttt

caa

gct

ttg

agc

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tac

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Val

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Ser

635

640

645

ctg

aac

acc

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gag

gag

aac

tac

gag

aaa

gtc

aga

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gaa

aga

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Glu

Asn

Tyr

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650

655

660

665

gac

gcc

gag

tac

gtg

ttc

gac

gta

gat

aaa

aaa

tgc

tgc

gtc

aag

aga

Asp

Ala

Glu

Tyr

Val

Phe

Asp

Val

Asp

Lys

Lys

Cys

Cys

Val

Lys

Arg

670

675

680

gag

gaa

gcg

tcg

ggt

ttg

gtg

ttg

gtg

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gag

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acc

aac

ccc

ccg

Glu

Glu

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Gly

Leu

Val

Leu

Val

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Glu

Leu

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Asn

Pro

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685

690

695

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cat

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gaa

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cca

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Phe

Ala

Tyr

Glu

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Lys

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Pro

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Ala

Pro

700

705

710

tat

aag

act

aca

gta

gta

gga

gtc

ttt

ggg

gtt

ccg

gga

tca

ggc

aag

Tyr

Lys

Thr

Thr

Val

Val

Gly

Val

Phe

Gly

Val

Pro

Gly

Ser

Gly

Lys

715

720

725

tct

gct

att

att

aag

agc

ctc

gtg

acc

aaa

cac

gat

ctg

gtc

acc

agc

Ser

Ala

Ile

Ile

Lys

Ser

Leu

Val

Thr

Lys

His

Asp

Leu

Val

Thr

Ser

730

735

740

745

ggc

aag

aag

gag

aac

tgc

cag

gaa

ata

gtc

aac

gac

gtg

aag

aag

cac

Gly

Lys

Lys

Glu

Asn

Cys

Gln

Glu

Ile

Val

Asn

Asp

Val

Lys

Lys

His

750

755

760

cgc

gga

ctg

gac

atc

cag

gca

aaa

aca

gtg

gac

tcc

atc

ctg

cta

aac

Arg

Gly

Leu

Asp

Ile

Gln

Ala

Lys

Thr

Val

Asp

Ser

Ile

Leu

Leu

Asn

765

770

775

3484

3532

3580

3628

3676

3724

3772

3820

3868

3916

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 287/695

145/223

ggg

tgt

cgt

cgt

gcc

gtg

gac

atc

cta

tat

gtg

gac

gag

gct

ttc

gct

Gly

cys

Arg

Arg

Ala

Val

Asp

Ile

Leu

Tyr

Val

Asp

Glu

Ala

Phe

Ala

780

785

790

tgc

cat

ccc

ggt

act

ctg

cta

gcc

cta

att

gct

ctt

gtt

aaa

cct

cgg

cys

His

Pro

Gly

Thr

Leu

Leu

Ala

Leu

Ile

Ala

Leu

Val

Lys

Pro

Arg

795

800

805

agc

aaa

gtg

gtg

tta

tgc

gga

gac

ccc

aag

caa

tgc

gga

ttc

ttc

aat

Ser

Lys

Val

Val

Leu

cys

Gly

Asp

Pro

Lys

Gln

cys

Gly

Phe

Phe

Asn

810

815

820

825

atg

atg

cag

ctt

aag

gtg

aac

ttc

aac

cac

aac

atc

tgc

act

gaa

gta

Met

Met

Gln

Leu

Lys

Val

Asn

Phe

Asn

His

Asn

Ile

cys

Thr

Glu

Val

830

835

840

tgt

cat

aaa

agt

ata

tcc

aga

cgt

tgc

acg

cgt

cca

gtc

acg

gcc

atc

cys

His

Lys

Ser

Ile

Ser

Arg

Arg

cys

Thr

Arg

Pro

Val

Thr

Ala

Ile

845

850

855

gtg

tct

acg

ttg

cac

tac

gga

ggc

aag

atg

cgc

acg

acc

aac

ccg

tgc

Val

Ser

Thr

Leu

His

Tyr

Gly

Gly

Lys

Met

Arg

Thr

Thr

Asn

Pro

cys

860

865

870

aac

aaa

ccc

ata

atc

ata

gac

acc

aca

gga

cag

acc

aag

ccc

aag

cca

Asn

Lys

Pro

Ile

Ile

Ile

Asp

Thr

Thr

Gly

Gln

Thr

Lys

Pro

Lys

Pro

875

880

885

gga

gac

atc

gtg

tta

aca

tgc

ttc

cga

ggc

tgg

gta

aag

cag

ctg

cag

Gly

Asp

Ile

Val

Leu

Thr

cys

Phe

Arg

Gly

Trp

Val

Lys

Gln

Leu

Gln

890

895

900

905

ttg

gac

tac

cgt

gga

cac

gaa

gtc

atg

aca

gca

gca

gca

tct

cag

ggc

Leu

Asp

Tyr

Arg

Gly

His

Glu

Val

Met

Thr

Ala

Ala

Ala

Ser

Gln

Gly

910

915

920

ctc

acc

cgc

aaa

ggg

gta

tac

gcc

gta

agg

cag

aag

gtg

aat

gaa

aat

Leu

Thr

Arg

Lys

Gly

Val

Tyr

Ala

Val

Arg

Gln

Lys

Val

Asn

Glu

Asn

925 930 935

3964

4012

4060

4108

4156

4204

4252

4300

4348

4396

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 288/695

146/223

ccc

ttg

tat

gcc

cct

gcg

tcg

gag

cac

gtg

aat

gta

ctg

ctg

acg

cgc

Pro

Leu

Tyr

Ala

Pro

Ala

Ser

Glu

His

Val

Asn

Val

Leu

Leu

Thr

Arg

940

945

950

act

gag

gat

agg

ctg

gtg

tgg

aaa

acg

ctg

gcc

ggc

gat

ccc

tgg

att

Thr

Glu

Asp

Arg

Leu

Val

Trp

Lys

Thr

Leu

Ala

Gly

Asp

Pro

Trp

Ile

955

960

965

aag

gtc

cta

tca

aac

att

cca

cag

ggt

aac

ttt

acg

gcc

aca

ttg

gaa

Lys

Val

Leu

Ser

Asn

Ile

Pro

Gln

Gly

Asn

Phe

Thr

Ala

Thr

Leu

Glu

970

975

980

985

gaa

tgg

caa

gaa

gaa

cac

gac

aaa

ata

atg

aag

gtg

att

gaa

gga

ccg

Glu

Trp

Gln

Glu

Glu

His

Asp

Lys

Ile

Met

Lys

Val

Ile

Glu

Gly

Pro

990

995

1000

gct

gcg

cct

gtg

gac

gcg

ttc

cag

aac

aaa

gcg

aac

gtg

tgt

tgg

gcg

Ala

Ala

Pro

Val

Asp

Ala

Phe

Gln

Asn

Lys

Ala

Asn

Val

Cys

Trp

Ala

1005

1010

1015

aaa

agc

ctg

gtg

cct

gtc

ctg

gac

act

gcc

gga

atc

aga

ttg

aca

gca

Lys

Ser

Leu

Val

Pro

Val

Leu

Asp

Thr

Ala

Gly

Ile

Arg

Leu

Thr

Ala

1020

1025

1030

gag

gag

tgg

agc

acc

ata

att

aca

gca

ttt

aag

gag

gac

aga

gct

tac

Glu

Glu

Trp

Ser

Thr

Ile

Ile

Thr

Ala

Phe

Lys

Glu

Asp

Arg

Ala

Tyr

1035

1040

1045

tct

cca

gtg

gtg

gcc

ttg

aat

gaa

att

tgc

acc

aag

tac

tat

gga

gtt

Ser

Pro

Val

Val

Ala

Leu

Asn

Glu

Ile

Cys

Thr

Lys

Tyr

Tyr

Gly

Val

1050

1055

1060

1065

gac

ctg

gac

agt

ggc

ctg

ttt

tct

gcc

ccg

aag

gtg

tcc

ctg

tat

tac

Asp

Leu

Asp

Ser

Gly

Leu

Phe

Ser

Ala

Pro

Lys

Val

Ser

Leu

Tyr

Tyr

1070

1075

1080

gag

aac

aac

cac

tgg

gat

aac

aga

cct

ggt

gga

agg

atg

tat

gga

ttc

Glu

Asn

Asn

His

Trp

Asp

Asn

Arg

Pro

Gly

Gly

Arg

Met

Tyr

Gly

Phe

1085 1090 1095

4444

4492

4540

4588

4636

4684

4732

4780

4828

4876

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 289/695

147/223

aat	gcc	gca aca gct	gcc agg ctg	gaa	gct aga cat	acc	ttc	ctg	aag	4924
Asn	Ala	Ala Thr Ala	Ala Arg Leu	Glu	Ala Arg His	Thr	Phe	Leu	Lys
	1100	1105		1110
ggg	cag	tgg cat acg	ggc aag cag	gca	gtt atc gca	gaa	aga	aaa	atc	4972
Gly	Gln	Trp His Thr	Gly Lys Gln	Ala	Val Ile Ala	Glu	Arg	Lys	Ile
1115		1120		1125
caa	ccg	ctt tct gtg	ctg gac aat	gta	att cct atc	aac	cgc	agg	ctg	5020
Gln	Pro	Leu Ser Val	Leu Asp Asn	Val	Ile Pro Ile	Asn	Arg	Arg	Leu
1130	1135		1140			1145
ccg	cac	gcc ctg gtg	gct gag tac	aag	acg gtt aaa	ggc	agt	agg	gtt	5068
Pro	His	Ala Leu Val	Ala Glu Tyr	Lys	Thr Val Lys	Gly	Ser	Arg	Val
		1150		1155		1160
gag	tgg	ctg gtc aat	aaa gta aga	ggg	tac cac gtc	ctg	ctg	gtg	agt	5116
Glu	Trp	Leu Val Asn	Lys Val Arg	Gly	Tyr His Val	Leu	Leu	Val	Ser
		1165	1170		1175
gag	tac	aac ctg gct	ttg cct cga	cgc	gac gtc act	tgg	ttg	tca	ccg	5164
Glu	Tyr	Asn Leu Ala	Leu Pro Arg	Arg	Asp Val Thr	Trp	Leu	Ser	Pro
	1180	1185		1190
ctg	aat	gtc aca ggc	gcc gat agg	tgc	tac gac cta	agt	tta	gga	ctg	5212
Leu	Asn	Val Thr Gly	Ala Asp Arg	Cys	Tyr Asp Leu	Ser	Leu	Gly	Leu
1195		1200		1205
ccg	gct	gac gcc ggc	agg ttc gac	ttg	gtc ttt gtg	aac	att	cac	acg	5260
Pro	Ala	Asp Ala Gly	Arg Phe Asp	Leu	Val Phe Val	Asn	Ile	His	Thr
1210	1215		1220			1225
gaa	ttc	aga atc cac	cac tac cag	cag	tgt gtc gac	cac	gcc	atg	aag	5308
Glu	Phe	Arg Ile His	His Tyr Gln	Gln	Cys Val Asp	His	Ala	Met	Lys
		1230		1235		1240
ctg	cag	atg ctt ggg	gga gat gcg	cta	cga ctg cta	aaa	ccc	ggc	ggc	5356
Leu	Gln	Met Leu Gly	Gly Asp Ala	Leu	Arg Leu Leu	Lys	Pro Gly Gly

1245 1250 1255

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 290/695

148/223

agc	ctc	ttg atg aga	gct tac gga	tac	gcc gat aaa	atc	agc	gaa	gcc	5404
Ser	Leu	Leu Met Arg	Ala Tyr Gly	Tyr	Ala Asp Lys	Ile	Ser	Glu	Ala
	1260	1265		1270
gtt	gtt	tcc tcc tta	agc aga aag	ttc	tcg tct gca	aga	gtg	ttg	cgc	5452
Val	Val	Ser Ser Leu	Ser Arg Lys	Phe	Ser Ser Ala	Arg	Val	Leu	Arg
1275		1280		1285
ccg	gat	tgt gtc acc	agc aat aca	gaa	gtg ttc ttg	ctg	ttc	tcc	aac	5500
Pro Asp	Cys Val Thr	Ser Asn Thr	Glu	Val Phe Leu	Leu	Phe	Ser	Asn
1290	1295		1300			1305
ttt	gac	aac gga aag	aga ccc tct	acg	cta cac cag	atg	aat	acc	aag	5548
Phe	Asp	Asn Gly Lys	Arg Pro Ser	Thr	Leu His Gln	Met	Asn	Thr	Lys
		1310		1315		1320
ctg	agt	gcc gtg tat	gcc gga gaa	gcc	atg cac acg	gcc	ggg	tgt	gca	5596
Leu	Ser	Ala Val Tyr	Ala Gly Glu	Ala	Met His Thr	Ala	Gly	Cys	Ala
		1325	1330		1335
cca	tcc	tac aga gtt	aag aga gca	gac	ata gcc acg	tgc	aca	gaa	gcg	5644
Pro	Ser	Tyr Arg Val	Lys Arg Ala	Asp	Ile Ala Thr	Cys	Thr	Glu	Ala
	1340	1345		1350
gct	gtg	gtt aac gca	gct aac gcc	cgt	gga act gta	ggg	gat	ggc	gta	5692
Ala	Val	Val Asn Ala	Ala Asn Ala	Arg	Gly Thr Val	Gly	Asp	Gly	Val
1355		1360		1365
tgc	agg	gcc gtg gcg	aag aaa tgg	ccg	tca gcc ttt	aag	gga	gaa	gca	5740
Cys	Arg	Ala Val Ala	Lys Lys Trp	Pro	Ser Ala Phe	Lys	Gly	Glu	Ala
1370	1375		1380			1385
aca	cca	gtg ggc aca	att aaa aca	gtc	atg tgc ggc	tcg	tac	ccc	gtc	5788
Thr	Pro	Val Gly Thr	Ile Lys Thr	Val	Met Cys Gly	Ser	Tyr	Pro	Val
		1390		1395		1400
atc	cac	gct gta gcg	cct aat ttc	tct	gcc acg act	gaa	gcg	gaa	ggg	5836
Ile	His	Ala Val Ala	Pro Asn Phe	Ser	Ala Thr Thr	Glu	Ala Glu	Gly

1405 1410 1415

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 291/695

149/223

gac	cgc	gaa ttg gcc	gct gtc tac	cgg	gca gtg gcc	gcc	gaa	gta	aac	5884
Asp	Arg	Glu Leu Ala	Ala Val Tyr	Arg	Ala Val Ala Ala	Glu	Val	Asn
	1420	1425		1430
aga	ctg	tca ctg agc	agc gta gcc	atc	ccg ctg ctg	tcc	aca	gga	gtg	5932
Arg	Leu	Ser Leu Ser	Ser Val Ala	Ile	Pro Leu Leu	Ser	Thr	Gly	Val
1435		1440		1445
ttc	agc	ggc gga aga	gat agg ctg	cag	caa tcc ctc	aac	cat	cta	ttc	5980
Phe	Ser	Gly Gly Arg	Asp Arg Leu	Gln	Gln Ser Leu	Asn	His	Leu	Phe
1450	1455		1460			1465
aca	gca	atg gac gcc	acg gac gct	gac	gtg acc atc	tac	tgc	aga	gac	6028
Thr	Ala	Met Asp Ala	Thr Asp Ala	Asp	Val Thr Ile	Tyr	Cys	Arg	Asp
		1470		1475		1480
aaa	agt	tgg gag aag	aaa atc cag	gaa	gcc ata gac	atg	agg	acg	gct	6076
Lys	Ser	Trp Glu Lys	Lys Ile Gln	Glu	Ala Ile Asp	Met	Arg	Thr	Ala
		1485	1490		1495
gtg	gag	ttg ctc aat	gat gac gtg	gag	ctg acc aca	gac	ttg	gtg	aga	6124
Val	Glu	Leu Leu Asn	Asp Asp Val	Glu	Leu Thr Thr	Asp	Leu	Val	Arg
	1500	1505		1510
gtg	cac	ccg gac agc	agc ctg gtg	ggt	cgt aag ggc	tac	agt	acc	act	6172
Val	His	Pro Asp Ser	Ser Leu Val	Gly	Arg Lys Gly	Tyr	Ser	Thr	Thr
1515		1520		1525
gac	ggg	tcg ctg tac	tcg tac ttt	gaa	ggt acg aaa	ttc	aac	cag	gct	6220
Asp Gly	Ser Leu Tyr	Ser Tyr Phe	Glu	Gly Thr Lys	Phe	Asn	Gln	Ala
1530	1535		1540			1545
gct	att	gat atg gca	gag ata ctg	acg	ttg tgg ccc	aga	ctg	caa	gag	6268
Ala	Ile	Asp Met Ala	Glu Ile Leu	Thr	Leu Trp Pro	Arg	Leu	Gln	Glu
		1550		1555		1560
gca	aac	gaa cag ata	tgc cta tac	gcg	ctg ggc gaa	aca	atg	gac	aac	6316
Ala	Asn	Glu Gln Ile	Cys Leu Tyr	Ala	Leu Gly Glu	Thr	Met Asp	Asn

1565 1570 1575

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 292/695

150/223

atc	aga	tcc aaa tgt	ccg gtg aac	gat	tcc gat tca	tca	aca	cct	ccc	6364
Ile	Arg	Ser Lys Cys	Pro Val Asn	Asp	Ser Asp Ser	Ser	Thr	Pro	Pro
	1580	1585		1590
agg	aca	gtg ccc tgc	ctg tgc cgc	tac	gca atg aca	gca	gaa	cgg	atc	6412
Arg	Thr	Val Pro Cys	Leu Cys Arg	Tyr	Ala Met Thr	Ala	Glu	Arg	Ile
1595		1600		1605
gcc	cgc	ctt agg tca	cac caa gtt	aaa	agc atg gtg	gtt	tgc	tca	tct	6460
Ala Arg	Leu Arg Ser	His Gln Val	Lys	Ser Met Val	Val	Cys	Ser	Ser
1610	1615		1620			1625
ttt	ccc	ctc ccg aaa	tac cat gta	gat	ggg gtg cag	aag	gta	aag	tgc	6508
Phe	Pro	Leu Pro Lys	Tyr His Val	Asp	Gly Val Gln	Lys	Val	Lys	Cys
		1630		1635		1640
gag	aag	gtt ctc ctg	ttc gac ccg	acg	gta cct tca	gtg	gtt	agt	ccg	6556
Glu	Lys	Val Leu Leu	Phe Asp Pro	Thr	Val Pro Ser	Val	Val	Ser	Pro
		1645	1650		1655
cgg	aag	tat gcc gca	tct acg acg	gac	cac tca gat	cgg	tcg	tta	cga	6604
Arg	Lys	Tyr Ala Ala	Ser Thr Thr	Asp	His Ser Asp	Arg	Ser	Leu	Arg
	1660	1665		1670
ggg	ttt	gac ttg gac	tgg acc acc	gac	tcg tct tcc	act	gcc	agc	gat	6652
Gly	Phe	Asp Leu Asp	Trp Thr Thr	Asp	Ser Ser Ser	Thr	Ala	Ser	Asp
1675		1680		1685
acc	atg	tcg cta ccc	agt ttg cag	tcg	tgt gac atc	gac	tcg	atc	tac	6700
Thr	Met	Ser Leu Pro	Ser Leu Gln	Ser	Cys Asp Ile	Asp	Ser	Ile	Tyr
1690	1695		1700			1705
gag	cca	atg gct ccc	ata gta gtg	acg	gct gac gta	cac	cct	gaa	ccc	6748
Glu	Pro	Met Ala Pro	Ile Val Val	Thr	Ala Asp Val	His	Pro	Glu	Pro
		1710		1715		1720
gca	ggc	atc gcg gac	ctg gcg gca	gat	gtg cat cct	gaa	ccc	gca	gac	6796
Ala	Gly	Ile Ala Asp	Leu Ala Ala	Asp	Val His Pro	Glu	Pro Ala	Asp

1725 1730 1735

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 293/695

151/223

cat gtg gac ctc gag aac ccg att cct cca ccg cgc ccg aag aga

gct Ala

His Val

Asp Leu

Glu Asn

Pro

Ile

Pro

Pro

Pro

Arg

Pro

Lys

Arg

1740 gca tac ctt

gcc

tcc

cgc

1745 gcg gcg

gag

cga

ccg

1750 gtg ccg

gcg

ccg

aga

Ala Tyr

Leu

Ala

Ser

Arg

Ala

Ala

Glu

Arg

Pro

Val

Pro

Ala

Pro

Arg

1755 aag ccg

acg

cct

gcc

1760 cca agg

act

gcg

ttt

1765 agg aac

aag

ctg

cct

ttg

Lys Pro

Thr

Pro

Ala

Pro

Arg

Thr

Ala

Phe

Arg

Asn

Lys

Leu

Pro

Leu

1770 acg ttc

ggc

gac

1775 ttt gac

gag

cac

gag

1780 gtc gat

gcg

ttg

gcc

1785 tcc ggg

Thr Phe

Gly

Asp

Phe

Asp

Glu

His

Glu

Val

Asp

Ala

Leu

Ala

Ser

Gly

att act

ttc

1790 gga gac

ttc

gac

gac

1795 gtc ctg

cga

cta

ggc

1800 cgc gcg

ggt

Ile Thr

Phe

Gly

Asp

Phe

Asp

Asp

Val

Leu

Arg

Leu

Gly

Arg

Ala

Gly

gca tat

1805 att ttc

tcc

tcg

gac

1810 act ggc

agc

gga

cat

1815 tta caa

caa

aaa

Ala Tyr

Ile

Phe

Ser

Ser

Asp

Thr

Gly

Ser

Gly

His

Leu

Gln

Gln

Lys

1820 tcc gtt agg

cag

cac

aat

1825 ctc cag

tgc

gca

caa

1830 ctg gat

gcg

gtc

gag

Ser Val

Arg

Gln

His

Asn

Leu

Gln

Cys

Ala

Gln

Leu

Asp

Ala

Val

Glu

1835 gag gag

aaa

atg

tac

1840 ccg cca

aaa

ttg

gat

1845 act gag

agg

gag

aag

ctg

Glu Glu

Lys

Met

Tyr

Pro

Pro

Lys

Leu

Asp

Thr

Glu

Arg

Glu

Lys

Leu

1850 ttg ctg

ctg

aaa

1855 atg cag

atg

cac

cca

1860 tcg gag

gct

aat

aag

1865 agt cga

Leu Leu

Leu

Lys

Met

Gln

Met

His

Pro

Ser

Glu

Ala

Asn

Lys

Ser

Arg

tac cag

tct

1870 cgc aaa

gtg

gag

aac

1875 atg aaa

gcc

acg

gtg

1880 gtg gac

agg

Tyr Gln

Ser

Arg

Lys

Val

Glu

Asn

Met

Lys

Ala

Thr

Val

Val

Asp

Arg

6844

6892

6940

6988

7036

7084

7132

7180

7228

7276

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 294/695

152/223

1885 1890 1895

ctc	aca	tcg ggg gcc	aga ttg tac	acg	gga gcg gac	gta	ggc	cgc	ata	7324
Leu	Thr	Ser Gly Ala	Arg Leu Tyr	Thr	Gly Ala Asp Val	Gly	Arg	Ile
	1900	1905		1910
cca	aca	tac gcg gtt	cgg tac ccc	cgc	ccc gtg tac	tcc	cct	acc	gtg	7372
Pro	Thr	Tyr Ala Val	Arg Tyr Pro	Arg	Pro Val Tyr	Ser	Pro	Thr	Val
1915		1920		1925
atc	gaa	aga ttc tca	agc ccc gat	gta	gca atc gca	gcg	tgc	aac	gaa	7420
Ile	Glu	Arg Phe Ser	Ser Pro Asp	Val	Ala Ile Ala	Ala	Cys	Asn	Glu
1930	1935		1940			1945
tac	cta	tcc aga aat	tac cca aca	gtg	gcg tcg tac	cag	ata	aca	gat	7468
Tyr	Leu	Ser Arg Asn	Tyr Pro Thr	Val	Ala Ser Tyr	Gln	Ile	Thr	Asp
		1950		1955		1960
gaa	tac	gac gca tac	ttg gac atg	gtt	gac ggg tcg	gat	agt	tgc	ttg	7516
Glu	Tyr	Asp Ala Tyr	Leu Asp Met	Val	Asp Gly Ser	Asp	Ser	Cys	Leu
		1965	1970		1975
gac	aga	gcg aca ttc	tgc ccg gcg	aag	ctc cgg tgc	tac	ccg	aaa	cat	7564
Asp	Arg	Ala Thr Phe	Cys Pro Ala	Lys	Leu Arg Cys	Tyr	Pro	Lys	His
	1980	1985		1990
cat	gcg	tac cac cag	ccg act gta	cgc	agt gcc gtc	ccg	tca	ccc	ttt	7612
His	Ala	Tyr His Gln	Pro Thr Val	Arg	Ser Ala Val	Pro	Ser	Pro	Phe
1995		2000		2005
cag	aac	aca cta cag	aac gtg cta	gcg	gcc gcc acc	aag	aga	aac	tgc	7660
Gln	Asn	Thr Leu Gln	Asn Val Leu	Ala	Ala Ala Thr	Lys	Arg	Asn	Cys
2010	2015		2020			2025
aac	gtc	acg caa atg	cga gaa cta	ccc	acc atg gac	tcg	gca	gtg	ttc	7708
Asn	Val	Thr Gln Met	Arg Glu Leu	Pro	Thr Met Asp	Ser	Ala	Val	Phe
		2030		2035		2040
aac	gtg	gag tgc ttc	aag cgc tat	gcc	tgc tcc gga	gaa	tat	tgg	gaa	7756
Asn	Val	Glu Cys Phe	Lys Arg Tyr	Ala	Cys Ser Gly	Glu	Tyr	Trp	Glu

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 295/695

153/223

2045 2050 2055

gaa	tat	gct aaa caa	cct atc cgg	ata	acc act gag	aac	atc	act	acc	7804
Glu	Tyr	Ala Lys Gln	Pro Ile Arg	Ile	Thr Thr Glu	Asn	Ile	Thr	Thr
	2060	2065		2070
tat	gtg	acc aaa ttg	aaa ggc ccg	aaa	gct gct gcc	ttg	ttc	gct	aag	7852
Tyr	Val	Thr Lys Leu	Lys Gly Pro	Lys	Ala Ala Ala	Leu	Phe	Ala	Lys
2075		2080		2085
acc	cac	aac ttg gtt	ccg ctg cag	gag	gtt ccc atg	gac	aga	ttc	acg	7900
Thr	His	Asn Leu Val	Pro Leu Gln	Glu	Val Pro Met	Asp	Arg	Phe	Thr
2090	2095		2100			2105
gtc	gac	atg aaa cga	gat gtc aaa	gtc	act cca ggg	acg	aaa	cac	aca	7948
Val	Asp	Met Lys Arg	Asp Val Lys	Val	Thr Pro Gly	Thr	Lys	His	Thr
		2110		2115		2120
gag	gaa	aga ccc aaa	gtc cag gta	att	caa gca gcg	gag	cca	ttg	gcg	7996
Glu	Glu	Arg Pro Lys	Val Gln Val	Ile	Gln Ala Ala	Glu	Pro	Leu	Ala
		2125	2130		2135
acc	gct	tac ctg tgc	ggc atc cac	agg	gaa tta gta	agg	aga	cta	aat	8044
Thr	Ala	Tyr Leu Cys	Gly Ile His	Arg	Glu Leu Val	Arg	Arg	Leu	Asn
	2140	2145		2150
gct	gtg	tta cgc cct	aac gtg cac	aca	ttg ttt gat	atg	tcg	gcc	gaa	8092
Ala	Val	Leu Arg Pro	Asn Val His	Thr	Leu Phe Asp	Met	Ser	Ala	Glu
2155		2160		2165
gac	ttt	gac gcg atc	atc gcc tct	cac	ttc cac cca	gga	gac	ccg	gtt	8140
Asp	Phe	Asp Ala Ile	Ile Ala Ser	His	Phe His Pro	Gly	Asp	Pro	Val
2170	2175		2180			2185
cta	gag	acg gac att	gca tca ttc	gac	aaa agc cag	gac	gac	tcc	ttg	8188
Leu	Glu	Thr Asp Ile	Ala Ser Phe	Asp	Lys Ser Gln	Asp	Asp	Ser	Leu
		2190		2195		2200
gct	ctt	aca ggt tta	atg atc ctc	gaa	gat cta ggg	gtg	gat	cag	tac	8236
Ala	Leu	Thr Gly Leu	Met Ile Leu	Glu	Asp Leu Gly	Val	Asp	Gln	Tyr

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 296/695

154/223

2205 2210 2215

ctg

ctg

gac

ttg

atc

gag

gca

gcc

ttt

ggg

gaa

ata

tcc

agc

tgt

cac

Leu

Leu

Asp

Leu

Ile

Glu

Ala Ala

Phe

Gly

Glu

Ile

Ser

Ser

Cys

His

2220

2225

2230

cta

cca

act

ggc

acg

cgc

ttc

aag

ttc

gga

gct

atg

atg

aaa

tcg

ggc

Leu

Pro

Thr

Gly

Thr

Arg

Phe

Lys

Phe

Gly

Ala

Met

Met

Lys

Ser

Gly

2235

2240

2245

atg

ttt

ctg

act

ttg

ttt

att

aac

act

gtt

ttg

aac

atc

acc

ata

gca

Met

Phe

Leu

Thr

Leu

Phe

Ile

Asn

Thr

Val

Leu

Asn

Ile

Thr

Ile

Ala

2250

2255

2260

2265

agc

agg

gta

ctg

gag

cag

aga

ctc

act

gac

tcc

gcc

tgt

gcg

gcc

ttc

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Gln

Arg

Leu

Thr

Asp

Ser

Ala

Cys

Ala

Ala

Phe

2270

2275

2280

atc

ggc

gac

gac

aac

atc

gtt

cac

gga

gtg

atc

tcc

gac

aag

ctg

atg

Ile

Gly

Asp

Asp

Asn

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Val

His

Gly

Val

Ile

Ser

Asp

Lys

Leu

Met

2285

2290

2295

gcg

gag

agg

tgc

gcg

tcg

tgg

gtc

aac

atg

gag

gtg

aag

atc

att

gac

Ala

Glu

Arg

Cys

Ala

Ser

Trp

Val

Asn

Met

Glu

Val

Lys

Ile

Ile

Asp

2300

2305

2310

gct

gtc

atg

ggc

gaa

aaa

ccc

cca

tat

ttc

tgt

ggg

gga

ttc

ata

gtt

Ala

Val

Met

Gly

Glu

Lys

Pro

Pro

Tyr

Phe

Cys

Gly Gly

Phe

Ile

Val

2315

2320

2325

ttt

gac

agc

gtc

aca

cag

acc

gcc

tgc

cgt

gtt

tca

gac

cca

ctt

aag

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Asp

Ser

Val

Thr

Gln

Thr

Ala

Cys

Arg

Val

Ser

Asp

Pro

Leu

Lys

2330

2335

2340

2345

cgc

ctg

ttc

aag

ttg

ggt

aag

ccg

cta

aca

gct

gaa

gac

aag

cag

gac

Arg

Leu

Phe

Lys

Leu

Gly

Lys

Pro

Leu

Thr

Ala

Glu

Asp

Lys

Gln

Asp

2350

2355

2360

gaa

gac

agg

cga

cga

gca

ctg

agt

gac

gag

gtt

agc

aag

tgg

ttc

cgg

Glu

Asp

Arg

Arg Arg

Ala

Leu

Ser

Asp

Glu

Val

Ser

Lys

Trp

Phe

Arg

8284

8332

8380

8428

8476

8524

8572

8620

8668

8716

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 297/695

155/223

2365 2370 2375 aca ggc ttg ggg gcc gaa ctg gag Thr Gly Leu Gly Ala Glu Leu Glu

23802385 gta gag ggc tgc aaa agt atcctc

Val Glu Gly Cys Lys Ser IleLeu

23952400 gac att aag gcg ttt aag aaattg

Asp Ile Lys Ala Phe Lys LysLeu

24102415 gtg gca cta aca tct agg tat gag Val Ala Leu Thr Ser Arg Tyr Glu 2390 ata gcc atg gcc acc ttg gcg agg

Ile Ala Met Ala Thr Leu Ala Arg

2405 aga gga cct gtt ata cac ctc tac

Arg Gly Pro Val Ile His Leu Tyr

2420 2425

8764

8812

8860 ggc ggt cct aga ttg gtg cgt taatacacag aattctgatt ttaattaa atg 8912

Gly Gly Pro Arg Leu Val Arg

Met

2430

ggg

aat

gga

cag

ggg

cga

gat

tgg

aaa

atg

gcc

att

aag

aga

tgt

agt

8960

Gly

Asn

Gly

Gln

Gly

Arg

Asp

Trp

Lys

Met

Ala

Ile

Lys

Arg

Cys

Ser

2435

2440

2445

aat

gtt

gct

gta

gga

gta

ggg

ggg

aag

agt

aaa

aaa

ttt

gga

gaa

ggg

9008

Asn

Val

Ala

Val

Gly

Val

Gly

Gly

Lys

Ser

Lys

Lys

Phe

Gly

Glu

Gly

2450

2455

2460

2465

aat

ttc

aga

tgg

gcc

att

aga

atg

gct

aat

gta

tct

aca

gga

cga

gaa

9056

Asn

Phe

Arg

Trp

Ala

Ile

Arg

Met

Ala

Asn

Val

Ser

Thr

Gly

Arg

Glu

2470

2475

2480

cct

ggt

gat

ata

cca

gag

act

tta

gat

caa

cta

agg

ttg

gtt

att

tgc

9104

Pro

Gly

Asp

Ile

Pro

Glu

Thr

Leu

Asp

Gln

Leu

Arg

Leu

Val

Ile

Cys

2485

2490

2495

gat

tta

caa

gaa

aga

aga

gaa

aaa

ttt

gga

tct

agc

aaa

gaa

att

gat

9152

Asp

Leu

Gln

Glu

Arg

Arg

Glu

Lys

Phe

Gly

Ser

Ser

Lys

Glu

Ile

Asp

2500

2505

2510

atg

gca

att

gtg

aca

tta

aaa

gtc

ttt

gcg

gta

gca

gga

ctt

ttg

aat

9200

Met

Ala

Ile

Val

Thr

Leu

Lys

Val

Phe

Ala

Val

Ala

Gly

Leu

Leu

Asn

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 298/695

156/223

2515 2520 2525

atg	acg	gtg tct act	gct gct gca	gct	gaa aat atg	tat	tct	caa	atg	9248
Met	Thr	Val Ser Thr	Ala Ala Ala	Ala	Glu Asn Met	Tyr	Ser	Gln	Met
2530	2535		2540			2545
gga	tta	gac act agg	cca tct atg	aaa	gaa gca ggt	gga	aaa	gag	gaa	9296
Gly	Leu	Asp Thr Arg	Pro Ser Met	Lys	Glu Ala Gly Gly	Lys	Glu	Glu
		2550		2555		2560
ggc	cct	cca cag gca	tat cct att	caa	aca gta aat	gga	gta	cca	caa	9344
Gly	Pro	Pro Gln Ala	Tyr Pro Ile	Gln	Thr Val Asn	Gly	Val	Pro	Gln
		2565	2570		2575
tat	gta	gca ctt gac	cca aaa atg	gtg	tcc att ttc	atg	gaa	aag	gca	9392
Tyr	Val	Ala Leu Asp	Pro Lys Met	Val	Ser Ile Phe	Met	Glu	Lys	Ala
	2580	2585		2590
aga	gaa	gga cta gga	ggg gag gaa	gtt	caa cta tgg	ttt	act	gcc	ttc	9440
Arg	Glu	Gly Leu Gly	Gly Glu Glu	Val	Gln Leu Trp	Phe	Thr	Ala	Phe
2595		2600		2605
tct	gca	aat tta aca	cct act gac	atg	gcc aca tta	ata	atg	gcc	gca	9488
Ser	Ala	Asn Leu Thr	Pro Thr Asp	Met	Ala Thr Leu	Ile	Met	Ala	Ala
2610	2615		2620			2625
cca	ggg	tgc gct gca	gat aaa gaa	ata	ttg gat gaa	agc	tta	aag	caa	9536
Pro	Gly	Cys Ala Ala	Asp Lys Glu	Ile	Leu Asp Glu	Ser	Leu	Lys	Gln
		2630		2635		2640
ctg	aca	gca gaa tat	gat cgc aca	cat	ccc cct gat	gct	ccc	aga	cca	9584
Leu	Thr	Ala Glu Tyr	Asp Arg Thr	His	Pro Pro Asp	Ala	Pro	Arg	Pro
		2645	2650		2655
tta	ccc	tat ttt act	gca gca gaa	att	atg ggt ata	gga	tta	act	caa	9632
Leu	Pro	Tyr Phe Thr	Ala Ala Glu	Ile	Met Gly Ile	Gly	Leu	Thr	Gln
	2660	2665		2670
gaa	caa	caa gca gaa	gca aga ttt	gca	cca gct agg	atg	cag	tgt	aga	9680
Glu	Gln	Gln Ala Glu	Ala Arg Phe	Ala	Pro Ala Arg	Met	Gln	Cys	Arg

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 299/695

157/223

2675 2680 2685

gca tgg

tat

ctc

gag

gca

tta

gga

aaa

ttg

gct

gcc

ata

aaa

gct

aag

Ala Trp

Tyr

Leu

Glu

Ala

Leu

Gly

Lys

Leu

Ala

Ala

Ile

Lys

Ala

Lys

2690

2695

2700

2705

tct

cct

cga

gct

gtg

cag

tta

aga

caa

gga

gct

aag

gaa

gat

tat

tca

Ser

Pro

Arg

Ala

Val

Gln

Leu

Arg

Gln

Gly

Ala

Lys

Glu

Asp

Tyr

Ser

2710

2715

2720

tcc

ttt

ata

gac

aga

ttg

ttt

gcc

caa

ata

gat

caa

gaa

caa

aat

aca

Ser

Phe

Ile

Asp

Arg

Leu

Phe

Ala

Gln

Ile

Asp

Gln

Glu

Gln

Asn

Thr

2725

2730

2735

gct

gaa

gtt

aag

tta

tat

tta

aaa

cag

tca

tta

agc

ata

gct

aat

gct

Ala

Glu

Val

Lys

Leu

Tyr

Leu

Lys

Gln

Ser

Leu

Ser

Ile

Ala

Asn

Ala

2740

2745

2750

aat

gca

gac

tgt

aaa

aag

gca

atg

agc

cac

ctt

aag

cca

gaa

agt

acc

Asn

Ala

Asp

Cys

Lys

Lys

Ala

Met

Ser

His

Leu

Lys

Pro

Glu

Ser

Thr

2755

2760

2765

cta

gaa

gaa

aag

ttg

aga

gct

tgt

caa

gaa

ata

ggc

tca

cca

gga

tat

Leu

Glu

Glu

Lys

Leu

Arg

Ala

Cys

Gln

Glu

Ile

Gly

Ser

Pro

Gly

Tyr

2770

2775

2780

2785

aaa

atg

caa

ctc

ttg

gca

gaa

gct

ctt

aca

aaa

gtt

caa

gta

gtg

caa

Lys

Met

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Leu

Leu

Ala

Glu

Ala

Leu

Thr

Lys

Val

Gln

Val

Val

Gln

2790

2795

2800

tca

aaa

gga

tca

gga

cca

gtg

tgt

ttt

aat

tgt

aaa

aaa

cca

gga

cat

Ser

Lys

Gly

Ser

Gly

Pro

Val

Cys

Phe

Asn

Cys

Lys

Lys

Pro

Gly

His

2805

2810

2815

cta

gca

aga

caa

tgt

aga

gaa

gtg

aaa

aaa

tgt

aat

aaa

tgt

gga

aaa

Leu

Ala

Arg

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Cys

Arg

Glu

Val

Lys

Lys

Cys

Asn

Lys

Cys

Gly

Lys

2820

2825

2830

cct

ggt

cat

cta

gct

gcc

aaa

tgt

tgg

caa

gga

aat

aga

aag

aat

tcg

Pro

Gly His

Leu

Ala

Ala

Lys

Cys

Trp

Gln

Gly

Asn

Arg

Lys

Asn

Ser

9728

9776

9824

9872

9920

9968

10016

10064

10112

10160

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 300/695

158/223

2835 2840 2845 gga aac tgg aag gcg ggg cga gct gca gcc cca gtg aat caa atg cag

Gly Asn Trp Lys Ala Gly Arg Ala Ala Ala Pro Val Asn Gln Met Gln

2850 2855 2860 2865 caa gca gta atg cca tct gca cct cca atg gag gag aaa cta ttg gat

Gln Ala Val Met Pro Ser Ala Pro Pro Met Glu Glu Lys Leu Leu Asp

2870 2875 2880 tta taaattataa taaagtaggt acgactacaa cattagaaaa gaggccagaa

Leu atacttatat acaattttaa atgattggag agagatgaaa tcattaatac atgtaagttt tggcgcccgc gtccccgact atgagacaga aaaccaaagc aaagacaagc aagattgaaa tcgggcaccg ggcgctatcc ggcaatggca atataaccat tggtccgcct aagcttacat tttaatattt aaaaaaaaac ggaggacgca ttgtaaatgg ataggagaga taggaggagg attataagac aaccattatt aaactaatta gcccggcggc tccaggccca acgcaattgc cgaaaacgca aagccgacaa atgactgtat cactatcatg tggtgctggt ttgatatagc aactgtataa cacggaaact aagcttaatt ccaaaaaaaa gggtcggcat crghtarmgt atatcctata ttttcaagta aaagagagga acaatgtata ggggagagat attgaattac ccgtccttgg gcagatgcag tcctgctagg gcccaagaag gaagaagaag ctatgcggct ggtgcagaaa tgtggtcact aagaaaattg cttgtaacaa cggggcaact cgacgaataa aaaaaaaaaa ggcatctcca ccactcggat aaattcttat aaaaattcta acaaattata tttggtaatg aatatgatta atccctacgc ccgttgcagg caactcatca cctcccaaac atcaacggaa aaacccggaa agccacagta atctcgggtg tgcattgggc aaaacagaaa agcgcaacaa catattgaca ttggatttat aaaaaaaaaa cctcctcgcg ggctaaggga tagatacagg tagaaaatgg ttaatgtaca tttgtgtctt aattcaatat aaacgtttta ccactccggt gcgccgtaaa caaagaagaa aaacgcagca aaagagaaag acgtagtgtt gtctgggggc tccgcagata aagttagggt gacctgcgca cattaattgg attttatttt aaaaaaaaaa gtccgacctg gtttttctac agcagatata aaggcaaaat tttagagatt agaagataac taggttagta cggccgccgg ggctcccgtc tgcgctgaca gaagacaacc gcaaaagaag aatgtgcatg tccagacatg cttcgcaatc agttagggta aagcaatggc attggccccg caataattgg gcaattggtt aaaaaaaaaa ggcatccgaa tagttaatca

10208

10256

10309

10369

10429

10489

10549

10609

10669

10729

10789

10849

10909

10969

11029

11089

11149

11209

11269

11329

11389

11449

11509

11569

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 301/695

159/223

taagataaat aatatacagc	attgtaacca tcgtcatccg ttatacgggg aataatatta 11629
ccatacagta ttattaaatt	ttcttacgaa gaatatagat cggtatttat cgttagttta 11689
ttttacattt attaattaaa	catgtctact attacctgtt atggaaatga caaatttagt 11749
tatataattt atgataaaat	taagataata ataatgaaat caaataatta tgtaaatgct 11809
actagattat gtgaattacg	aggaagaaag tttacgaact ggaaaaaatt aagtgaatct 11869
aaaatattag tcgataatgt	aaaaaaaata aatgataaaa ctaaccagtt aaaaacggat 11929
atgattatat acgttaagga	tattgatcat aaaggaagag atacttgcgg ttactatgta 11989
caccaagatc tggtatcttc	tatatcaaat tggatatctc cgttattcgc cgttaaggta 12049
aataaaatta ttaactatta	tatatgtaat gaatatgata tacgacttag cgaaatggaa 12109
tctgatatga cagaagtaat	agatgtagtt gataaattag taggaggata caatgatgaa 12169
atagcagaaa taatatattt	gtttaataaa tttatagaaa aatatattgc taacatatcg 12229
ttatcaactg aattatctag	tatattaaat aattttataa attttaataa aaaatacaat 12289
aacgacataa aagatattaa	atctttaatt cttgatctga aaaacacatc tataaaacta 12349
gataaaaagt tattcgataa	agataataat gaatcgaacg atgaaaaatt ggaaacagaa 12409
gttgataagc taattttttt	catctaaata gtattatttt attgaagtac gaagttttac 12469
gttagataaa taataaaggt	cgatttttat tttgttaaat atcaaatatg tcattatctg 12529
ataaagatac aaaaacacac	ggtgattatc aaccatctaa cgaacagata ttacaaaaaa 12589
tacgtcggac tatggaaaac	gaagctgata gcctcaatag aagaagcatt aaagaaattg 12649
ttgtagatgt tatgaagaat	tgggatcatc ctctcaacga agaaatagat aaagttctaa 12709
actggaaaaa tgatacatta	aacgatttag atcatctaaa tacagatgat aatattaagg 12769
aaatcataca atgtctgatt	agagaatttg cgtttaaaaa gatcaattct attatgtata 12829
gttatgctat ggtaaaactc	aattcagata acgaaacatt gaaagataaa attaaggatt 12889
attttataga aactattctt	aaagacaaac gtggttataa acaaaagcca ttaccc 12945

<210> 6 <211> 2431 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência de aminoácido sintético pJY505.1

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 302/695

160/223 <400> 6

Met Ala Ala Lys Val

His

Val

Asp Ile Glu 10

Ala Asp

Ser Pro

Phe 15

Ile

1

5

Lys

Ser

Leu

Gln

Lys

Ala

Phe

Pro

Ser

Phe

Glu

Val

Glu

Ser

Leu

Gln

20

25

30

Val

Thr

Pro

Asn

Asp

His

Ala

Asn

Ala

Arg

Ala

Phe

Ser

His

Leu

Ala

35

40

45

Thr

Lys

Leu

Ile

Glu

Gln

Glu

Thr

Asp

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile

Leu

Asp

50

55

60

Ile

Gly

Ser

Ala

Pro

Ser

Arg

Arg

Met

Met

Ser

Thr

His

Lys

Tyr

His

65

70

75

80

Cys

Val

Cys

Pro

Met

Arg

Ser

Ala

Glu

Asp

Pro

Glu

Arg

Leu

Asp

Ser

85

90

95

Tyr

Ala

Lys

Lys

Leu

Ala

Ala

Ala

Ser

Gly

Lys

Val

Leu

Asp

Arg

Glu

100

105

110

Ile

Ala

Gly

Lys

Ile

Thr

Asp

Leu

Gln

Thr

Val

Met

Ala

Thr

Pro

Asp

115

120

125

Ala

Glu

Ser

Pro

Thr

Phe

Cys

Leu

His

Thr

Asp

Val

Thr

Cys

Arg

Thr

130

135

140

Ala

Ala

Glu

Val

Ala

Val

Tyr

Gln

Asp

Val

Tyr

Ala

Val

His

Ala

Pro

145

150

155

160

Thr

Ser

Leu

Tyr

Hi s

Gln

Ala

Met

Lys

Gly

Val

Arg

Thr

Ala

Tyr

Trp

165

170

175

Ile

Gly

Phe

Asp

Thr

Thr

Pro

Phe

Met

Phe

Asp

Ala

Leu

Ala

Gly

Ala

180

185

190

Tyr

Pro

Thr

Tyr

Ala

Thr

Asn

Trp

Ala

Asp

Glu

Gln

Val

Leu

Gln

Ala

195

200

205

Arg

Asn

Ile

Gly

Leu

Cys

Ala

Ala

Ser

Leu

Thr

Glu

Gly

Arg

Leu

Gly

210

215

220

Lys

Leu

Ser

Ile

Leu

Arg

Lys

Lys

Gln

Leu

Lys

Pro

Cys

Asp

Thr

Val

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 303/695

161/223

225

Met Phe

Arg Ser

Phe Thr

Lys Lys

290

Ala Val

305

Thr Val

Ser Thr

Pro Glu

Val Asn

370

Leu Pro

385

Ala Asp

Thr Cys

Tyr Lys

Asn Ser

450

Ser Val

Trp His

260

Cys Arg

275

Ile Thr

Thr Tyr

Lys Gly

Ile Cys

340

Asp Ala

355

Gly Arg

Ile Val

Leu Asp

Cys Cys

420

Lys Pro

435

Phe Val

Gly

245

Leu

Cys

Met

His

Glu

325

Asp

Gln

Thr

Ala

Asp

405

Leu

Asp

Ile

230

Ser Thr

Pro Ser

Asp Thr

Cys Pro

295

Ala Glu

310

Arg Val

Gln Met

Lys Leu

Gln Arg

375

Val Ala

390

Glu Lys

Trp Ala

Thr Gln

Pro Ser

455

Leu Tyr

Val Phe

265

Ile Val

280

Gly Leu

Gly Phe

Ser Phe

Thr Gly

345

Leu Val

360

Asn Thr

Phe Ser

Pro Leu

Phe Lys

425

Thr Ile

440

Leu Trp

235

Thr Glu

250

His Leu

Ser Cys

Tyr Gly

Leu Val

315

Pro Val

330

Ile Leu

Gly Leu

Asn Thr

Lys Trp

395

Gly Val

410

Thr Arg

Val Lys

Ser Thr

Ser Arg

Lys Gly

Glu Gly

285

Lys Thr

300

Cys Lys

Cys Thr

Ala Thr

Asn Gln

365

Met Lys

380

Ala Arg

Arg Glu

Lys Met

Val Pro

445

Gly Leu

460

Lys

Lys

270

Tyr

Val

Thr

Tyr

Asp

350

Arg

Asn

Glu

Arg

His

430

Ser

Ala

240

Leu Leu

255

Gln Ser

Val Val

Gly Tyr

Thr Asp

320

Val Pro

335

Val Thr

Ile Val

Tyr Leu

Tyr Lys

400

Ser Leu

415

Thr Met

Glu Phe

Ile Pro

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 304/695

162/223

Val

Arg

Ser

Arg

Ile

Lys

Met

Leu

Leu

Ala

Lys

Lys

Thr

Lys

Arg

Glu

465

470

475

480

Leu

Ile

Pro

Val

Leu

Asp

Ala

Ser

Ser

Ala

Arg

Asp

Ala

Glu

Gln

Glu

485

490

495

Glu

Lys

Glu

Arg

Leu

Glu

Ala

Glu

Leu

Thr

Arg

Glu

Ala

Leu

Pro

Pro

500

505

510

Leu

Val

Pro

Ile

Ala

Pro

Ala

Glu

Thr

Gly

Val

Val

Asp

Val

Asp

Val

515

520

525

Glu

Glu

Leu

Glu

Tyr

His

Ala

Gly

Ala

Gly

Val

Val

Glu

Thr

Pro

Arg

530

535

540

Ser

Ala

Leu

Lys

Val

Thr

Ala

Gln

Pro

Asn

Asp

Val

Leu

Leu

Gly

Asn

545

550

555

560

Tyr

Val

Val

Leu

Ser

Pro

Gln

Thr

Val

Leu

Lys

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

565

570

575

Pro

Val

His

Pro

Leu

Ala

Glu

Gln

Val

Lys

Ile

Ile

Thr

His

Asn

Gly

580

585

590

Arg

Ala

Gly

Gly

Tyr

Gln

Val

Asp

Gly

Tyr

Asp

Gly

Arg

Val

Leu

Leu

595

600

605

Pro

Cys

Gly

Ser

Ala

Ile

Pro

Val

Pro

Glu

Phe

Gln

Ala

Leu

Ser

Glu

610

615

620

Ser

Ala

Thr

Met

Val

Tyr

Asn

Glu

Arg

Glu

Phe

Val

Asn

Arg

Lys

Leu

625

630

635

640

Tyr

Hi s

Ile

Ala

Val

His

Gly

Pro

Ser

Leu

Asn

Thr

Asp

Glu

Glu

Asn

645

650

655

Tyr

Glu

Lys

Val

Arg

Ala

Glu

Arg

Thr

Asp

Ala

Glu

Tyr

Val

Phe

Asp

660

665

670

Val

Asp

Lys

Lys

Cys

Cys

Val

Lys

Arg

Glu

Glu

Ala

Ser

Gly

Leu

Val

675

680

685

Leu

Val

Gly

Glu

Leu

Thr

Asn

Pro

Pro

Phe

His

Glu

Phe

Ala

Tyr

Glu

690

695

700

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 305/695

163/223

Gly

Leu

Lys

Ile

Arg

Pro

Ser

Ala

Pro

Tyr

Lys

Thr

Thr

Val

Val

Gly

705

710

715

720

Val

Phe

Gly

Val

Pro

Gly

Ser

Gly

Lys

Ser

Ala

Ile

Ile

Lys

Ser

Leu

725

730

735

Val

Thr

Lys

His

Asp

Leu

Val

Thr

Ser

Gly

Lys

Lys

Glu

Asn

Cys

Gln

740

745

750

Glu

Ile

Val

Asn

Asp

Val

Lys

Lys

His

Arg

Gly

Lys

Gly

Thr

Ser

Arg

755

760

765

Glu

Asn

Ser

Asp

Ser

Ile

Leu

Leu

Asn

Gly

Cys

Arg

Arg

Ala

Val

Asp

770

775

780

Ile

Leu

Tyr

Val

Asp

Glu

Ala

Phe

Ala

Cys

His

Ser

Gly

Thr

Leu

Leu

785

790

795

800

Al a

Leu

Ile

Ala

Leu

Val

Lys

Pro

Arg

Ser

Lys

Val

Val

Leu

Cys

Gly

805

810

815

Asp

Pro

Lys

Gln

Cys

Gly

Phe

Phe

Asn

Met

Met

Gln

Leu

Lys

Val

Asn

820

825

830

Phe

Asn

Hi s

Asn

Ile

Cys

Thr

Glu

Val

Cys

His

Lys

Ser

Ile

Ser

Arg

835

840

845

Arg

Cys

Thr

Arg

Pro

Val

Thr

Ala

Ile

Val

Ser

Thr

Leu

His

Tyr

Gly

850

855

860

Gly

Lys

Met

Arg

Thr

Thr

Asn

Pro

Cys

Asn

Lys

Pro

Ile

Ile

Ile

Asp

865

870

875

880

Thr

Thr

Gly

Gln

Thr

Lys

Pro

Lys

Pro

Gly

Asp

Ile

Val

Leu

Thr

Cys

885

890

895

Phe

Arg

Gly

Trp

Ala

Lys

Gln

Leu

Gln

Leu

Asp

Tyr

Arg

Gly

His

Glu

900

905

910

Val

Met

Thr

Ala

Ala

Ala

Ser

Gln

Gly

Leu

Thr

Arg

Lys

Gly

Val

Tyr

915

920

925

Ala

Val

Arg

Gln

Lys

Val

Asn

Glu

Asn

Pro

Leu

Tyr

Ala

Pro

Ala

Ser

930 935 940

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 306/695

164/223

Gl u Hi s	Val	Asn Val	Leu	Leu	Thr Arg Thr	Glu	Asp	Arg	Leu Val	Trp
945			950			955				960
Lys Thr	Leu	Ala Gly	Asp	Pro	Trp Ile Lys	Val	Leu	Ser	Asn Ile	Pro
		965			970				975
Gln Gly	Asn	Phe Thr	Ala	Thr	Leu Glu Glu	Trp	Gln	Glu	Glu His	Asp
		980			985				990
Lys Ile	Met	Lys Val	Ile	Glu	Gly Pro Ala	Ala	Pro	Val	Asp Ala	Phe
	995			1000		1005
Gln Asn	Lys	Ala Asn	Val	Cys	Trp Ala Lys	Ser	Leu	Val	Pro Val	Leu
1010			1015		1020
Asp Thr	Ala	Gly Ile	Arg	Leu	Thr Ala Glu	Glu	Trp	Ser	Thr Ile	Ile
1025		1030		1035			1040
Thr Ala	Phe	Lys Glu	Asp	Arg	Ala Tyr Ser	Pro	Val	Val	Ala Leu	Asn
		1045			1050				1055
Glu Ile	Cys	Thr Lys	Tyr	Tyr	Gly Val Asp	Leu	Asp	Ser	Gly Leu	Phe
	1060			1065			1070
Ser Ala	Pro	Lys Val	Ser	Leu	Tyr Tyr Glu	Asn	Asn	His	Trp Asp	Asn
1075			1080		1085
Arg Pro	Gly	Gly Arg	Met	Tyr	Gly Phe Asn	Ala	Ala	Thr	Ala Ala	Arg
1090			1095		1100
Leu Glu	Ala	Arg His	Thr	Phe	Leu Lys Gly	Gln	Trp	His	Thr Gly	Lys
1105		1110		1115			1120
Gln Ala	Val	Ile Ala	Glu	Arg	Lys Ile Gln	Pro	Leu	Ser	Val Leu	Asp
		1125			1130				1135
Asn Val	Ile	Pro Ile	Asn	Arg	Arg Leu Pro	His	Ala	Leu	Val Ala	Glu
	1140			1145			1150
Tyr Lys	Thr	Val Lys	Gly	Ser	Arg Val Glu	Trp	Leu	Val	Asn Lys	Val
1155			1160		1165
Arg Gly Tyr	His Val	Leu	Leu	Val Ser Glu	Tyr	Asn	Leu	Ala Leu	Pro

1170 1175 1180

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 307/695

165/223

Arg Arg Arg Val	Thr Trp Leu	Ser Pro	Leu Asn	Val	Thr	Gly	Ala	Asp
1185	1190		1195				1200
Arg Cys Tyr Asp	Leu Ser Leu	Gly Leu	Pro Ala	Asp	Ala	Gly Arg	Phe
1205	1210			1215
Asp Leu Val Phe	Val Asn Ile	His Thr	Glu Phe	Arg	Ile	His	His	Tyr
1220		1225			1230
Gln Gln Cys Val	Asp His Ala	Met Lys	Leu Gln	Met	Leu	Gly	Gly	Asp
1235	1240		1245
Ala Ala Arg Leu	Leu Lys Pro	Gly Gly	Ile Leu	Met	Arg	Ala	Tyr	Gly
1250	1255		1260
Tyr Ala Asp Lys	Ile Ser Glu	Ala Val	Val Ser	Ser	Leu	Ser	Arg	Lys
1265	1270		1275				1280
Phe Ser Ser Ala	Arg Val Leu	Arg Pro	Asp Cys	Val	Thr	Ser	Asn	Thr
1285	1290			1295
Glu Val Phe Leu	Leu Phe Ser	Asn Phe	Asp Asn	Gly	Lys	Arg	Pro	Ser
1300		1305			1310
Thr Leu His Gln	Met Asn Thr	Lys Leu	Ser Ala	Val	Tyr	Ala	Gly	Glu
1315	1320		1325
Ala Met His Thr	Ala Gly Cys	Ala Pro	Ser Tyr	Arg	Val	Lys	Arg	Ala
1330	1335		1340
Asp Ile Ala Thr	Cys Thr Glu	Ala Ala	Val Val	Asn	Ala	Ala	Asn	Ala
1345	1350		1355				1360
Arg Gly Thr Val	Gly Asp Gly	Val Cys	Arg Ala	Val	Ala	Lys	Lys	Trp
1365	1370			1375
Pro Ser Ala Phe	Lys Gly Ala	Ala Thr	Pro Val	Gly	Thr	Ile	Lys	Thr
1380		1385			1390
Val Met Cys Gly	Ser Tyr Pro	Val Ile	His Ala	Val	Ala	Pro	Asn	Phe
1395	1400		1405
Ser Ala Thr Thr	Glu Ala Glu	Gly Asp	Arg Glu	Leu	Ala	Ala	Val	Tyr
1410	1415		1420

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 308/695

166/223

Arg

Ala

Val

Ala

Ala Glu Val

Asn Arg

Leu

Ser

Leu

Ser

Ser

Val

Ala

1425

1430

1435

1440

Ile

Pro

Leu

Leu

Ser Thr Gly

Val Phe

Ser

Gly Gly

Arg

Asp Arg

Leu

1445

1450

1455

Gln

Gln

Ser

Leu

Asn His Leu

Phe Thr

Ala

Met

Asp

Ala

Thr

Asp

Ala

1460

1465

1470

Asp

Val

Thr

Ile

Tyr Cys Arg

Asp Lys

Ser

Trp

Glu

Lys

Lys

Ile

Gln

1475

1480

1485

Glu

Ala

Ile

Asp

Met Arg Thr

Ala Val

Glu

Leu

Leu

Asn

Asp

Asp

Val

1490

1495

1500

Glu

Leu

Thr

Thr

Asp Leu Val

Arg Val

Hi s

Pro

Asp

Ser

Ser

Leu

Val

1505

1510

1515

1520

Gly

Arg

Lys

Gly

Tyr Ser Thr

Thr Asp

Gly

Ser

Leu

Tyr

Ser

Tyr

Phe

1525

1530

1535

Glu

Gly

Thr

Lys

Phe Asn Gln

Ala Ala

Ile

Asp

Met

Ala

Glu

Ile

Leu

1540

1545

1550

Thr

Leu

Trp

Pro

Arg Leu Gln

Glu Ala

Asn

Glu

Gln

Ile

Cys

Leu

Tyr

1555

1560

1565

Al a

Leu

Gly

Glu

Thr Met Asp

Asn Ile

Arg

Ser

Lys

Cys

Pro

Val

Asn

1570

1575

1580

Asp

Ser

Asp

Ser

Ser Thr Pro

Pro Arg

Thr

Val

Pro

Cys

Leu

Cys

Arg

1585

1590

1595

1600

Tyr

Ala

Met

Thr

Ala Glu Arg

Ile Ala

Arg

Leu

Arg

Ser

His

Gln

Val

1605

1610

1615

Lys

Ser

Met

Val

Val Cys Ser

Ser Phe

Pro

Leu

Pro

Lys

Tyr

His

Val

1620

1625

1630

Asp

Gly

Val

Gln

Lys Val Lys

Cys Glu

Lys

Val

Leu

Leu

Phe

Asp

Pro

1635

1640

1645

Thr

Val

Pro

Ser

Val Val Ser

Pro Arg

Lys

Tyr

Ala

Ala

Ser

Thr

Thr

1650 1655 1660

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 309/695

167/223

Asp	Hi s	Ser	Asp Arg	Ser Leu Arg	Gly	Phe	Asp Leu Asp	Trp	Thr	Thr
1665		1670		1675		1680
Asp	Ser	Ser	Ser Thr	Ala Ser Asp	Thr	Met	Ser Leu Pro	Ser	Leu	Gln
			1685		1690		1695
Ser	Cys	Asp	Ile Asp	Ser Ile Tyr	Glu	Pro	Met Ala Pro	Ile	Val	Val
		1700	1705		1710
Thr	Ala	Asp	Val His	Pro Glu Pro	Ala	Gly	Ile Ala Asp	Leu	Ala	Ala
	1715		1720			1725
Asp	Val	His	Pro Glu	Pro Ala Asp	His	Val	Asp Leu Glu	Asn	Pro	Ile
1730			1735			1740
Pro	Pro	Pro	Arg Pro	Lys Arg Ala	Ala	Tyr	Leu Ala Ser	Arg	Ala	Ala
1745		1750		1755		1760
Glu	Arg	Pro	Val Pro	Ala Pro Arg	Lys	Pro	Thr Pro Ala	Pro	Arg	Thr
			1765		1770		1775
Al a	Phe	Arg	Asn Lys	Leu Pro Leu	Thr	Phe	Gly Asp Phe	Asp	Glu	His
		1780	1785		1790
Glu	Val	Asp	Ala Leu	Ala Ser Gly	Ile	Thr	Phe Gly Asp	Phe	Asp	Asp
	1795		1800			1805
Val	Leu	Arg	Leu Gly	Arg Ala Gly	Ala	Tyr	Ile Phe Ser	Ser	Asp	Thr
1810			1815			1820
Gly	Ser	Gly	His Leu	Gln Gln Lys	Ser	Val	Arg Gln His	Asn	Leu	Gln
1825		1830		1835		1840
Cys	Ala	Gln	Leu Asp	Ala Val Gln	Glu	Glu	Lys Met Tyr	Pro	Pro	Lys
			1845		1850		1855
Leu	Asp	Thr	Glu Arg	Glu Lys Leu	Leu	Leu	Leu Lys Met	Gln	Met	His
		1860	1865		1870
Pro	Ser	Glu	Ala Asn	Lys Ser Arg	Tyr	Gln	Ser Arg Lys	Val	Glu	Asn
	1875		1880			1885
Met	Lys	Ala	Thr Val	Val Asp Arg	Leu	Thr	Ser Gly Ala Arg	Leu	Tyr

1890 1895 1900

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 310/695

168/223

Thr	Gly	Ala Asp Val	Gly Arg Ile Pro	Thr Tyr	Ala Val	Arg	Tyr	Pro
1905	1910	1915			1920
Arg	Pro	Val Tyr Ser	Pro Thr Val Ile	Glu Arg	Phe Ser	Ser	Pro	Asp
		1925	1930		1935
Val	Ala	Ile Ala Ala	Cys Asn Glu Tyr	Leu Ser	Arg Asn	Tyr	Pro	Thr
		1940	1945		1950
Val	Ala	Ser Tyr Gln	Ile Thr Asp Glu	Tyr Asp	Ala Tyr	Leu	Asp	Met
	1955	1960		1965
Val	Asp	Gly Ser Asp	Ser Cys Leu Asp	Arg Ala	Thr Phe	Cys	Pro	Ala
1970		1975	1980
Lys	Leu	Arg Cys Tyr	Pro Lys His His	Ala Tyr	His Gln	Pro	Thr	Val
1985	1990	1995			2000
Arg	Ser	Ala Val Pro	Ser Pro Phe Gln	Asn Thr	Leu Gln	Asn	Val	Leu
		2005	2010		2015
Ala	Ala	Ala Thr Lys	Arg Asn Cys Asn	Val Thr	Gln Met	Arg	Glu	Leu
		2020	2025		2030
Pro	Thr	Met Asp Ser	Ala Val Phe Asn	Val Glu	Cys Phe	Lys	Arg	Tyr
	2035	2040		2045
Ala	Cys	Ser Gly Glu	Tyr Trp Glu Glu	Tyr Ala	Lys Gln	Pro	Ile	Arg
2050		2055	2060
Ile	Thr	Thr Glu Asn	Ile Thr Thr Tyr	Val Thr	Lys Leu	Lys	Gly	Pro
2065	2070	2075			2080
Lys	Ala	Ala Ala Leu	Phe Ala Lys Thr	His Asn	Leu Val	Pro	Leu	Gln
		2085	2090		2095
Glu	Val	Pro Met Asp	Arg Phe Thr Val	Asp Met	Lys Arg	Asp	Val	Lys
		2100	2105		2110
Val	Thr	Pro Gly Thr	Lys His Thr Glu	Glu Arg	Pro Lys	Val	Gln	Val
	2115	2120		2125
Ile	Gln	Ala Ala Glu	Pro Leu Ala Thr	Ala Tyr	Leu Cys	Gly	Ile	His

2130 2135 2140

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 311/695

169/223

Arg Glu	Leu	Val	Arg Arg	Leu	Asn Ala	Val	Leu	Arg Pro Asn	Val	His
2145			2150			2155		2160
Thr Leu	Phe	Asp	Met Ser	Ala	Glu Asp	Phe	Asp	Ala Ile Ile	Ala	Ser
		2165		2170		2175
His Phe	His	Pro	Gly Asp	Pro	Val Leu	Glu	Thr	Asp Ile Ala	Ser	Phe
	2180			2185			2190
Asp Lys	Ser	Gln	Asp Asp	Ser	Leu Ala	Leu	Thr	Gly Leu Met	Ile	Leu
2195			2200			2205
Glu Asp	Leu	Gly	Val Asp	Gln	Tyr Leu	Leu	Asp	Leu Ile Glu	Ala	Ala
2210			2215			2220
Phe Gly	Glu	Ile	Ser Ser	Cys	His Leu	Pro	Thr	Gly Thr Arg	Phe	Lys
2225			2230			2235		2240
Phe Gly	Ala	Met	Met Lys	Ser	Gly Met	Phe	Leu	Thr Leu Phe	Ile	Asn
		2245		2250		2255
Thr Val	Leu	Asn	Ile Thr	Ile	Ala Ser	Arg	Val	Leu Glu Gln	Arg	Leu
	2260			2265			2270
Thr Asp	Ser	Ala	Cys Ala	Ala	Phe Ile	Gly	Asp	Asp Asn Ile	Val	His
2275			2280			2285
Gly Val	Ile	Ser	Asp Lys	Leu	Met Ala	Glu	Arg	Cys Ala Ser	Trp	Val
2290			2295			2300
Asn Met	Glu	Val	Lys Ile	Ile	Asp Ala	Val	Met	Gly Glu Lys	Pro	Pro
2305			2310			2315		2320
Tyr Phe	Cys	Gly	Gly Phe	Ile	Val Phe	Asp	Ser	Val Thr Gln	Thr	Ala
		2325		2330		2335
Cys Arg	Val	Ser	Asp Pro	Leu	Lys Arg	Leu	Phe	Lys Leu Gly	Lys	Pro
	2340			2345			2350
Leu Thr	Ala	Glu	Asp Lys	Gln	Asp Glu	Asp	Arg	Arg Arg Ala	Leu	Ser
2355			2360			2365
Asp Glu	Val	Ser	Lys Trp	Phe	Arg Thr	Gly	Leu	Gly Ala Glu	Leu	Glu

2370 2375 2380

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 312/695

170/223

Val

Ala

Leu

Thr

Ser

Arg

Tyr

Glu

Val

Glu

Gly

Cys

Lys

Ser

Ile

Leu

2385

2390

2395

2400

Ile

Ala

Met

Ala

Thr

Leu

Ala

Arg

Asp

Ile

Lys

Ala

Phe

Lys

Lys

Leu

2405

2410

2415

Arg

Gly

Pro

Val

Ile

Hi s

Leu

Tyr

Gly

Gly

Pro

Arg

Leu

Val

Arg

2420

2425

2430

<210> 7 <211> 367 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência aminoácido sintético pJY505.1 de

<400>

7

Met

Ala

Ser

Lys

Gly

Glu

Glu

Leu

Phe

Thr

Gly

Val

Val

Pro

Ile

Leu

1

5

10

15

Val

Glu

Leu

Asp

Gly

Asp

Val

Asn

Gly

His

Lys

Phe

Ser

Val

Ser

Gly

20

25

30

Glu

Gly

Glu

Gly

Asp

Ala

Thr

Tyr

Gly

Lys

Leu

Thr

Leu

Lys

Phe

Ile

35

40

45

Cys

Thr

Thr

Gly

Lys

Leu

Pro

Val

Pro

Trp

Pro

Thr

Leu

Val

Thr

Thr

50

55

60

Phe

Ser

Tyr

Gly

Val

Gln

Cys

Phe

Ser

Arg

Tyr

Pro

Asp

His

Met

Lys

65

70

75

80

Arg

His

Asp

Phe

Phe

Lys

Ser

Ala

Met

Pro

Glu

Gly

Tyr

Val

Gln

Glu

85

90

95

Arg

Thr

Ile

Ser

Phe

Lys

Asp

Asp

Gly

Asn

Tyr

Lys

Thr

Arg

Ala

Glu

100

105

110

Val

Lys

Phe

Glu

Gly

Asp

Thr

Leu

Val

Asn

Arg

Ile

Glu

Leu

Lys

Gly

115 120 125

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 313/695

171/223

Ile Asp Phe

Lys Glu

Asp Gly Asn Ile Leu Gly His

Lys

Leu

Glu

Tyr

130

135

140

Asn

Tyr

Asn

Ser

Hi s

Asn

Val

Tyr

Ile

Thr

Ala

Asp

Lys

Gln

Lys

Asn

145

150

155

160

Gly

Ile

Lys

Ala

Asn

Phe

Lys

Ile

Arg

His

Asn

Ile

Glu

Asp

Gly

Ser

165

170

175

Val

Gln

Leu

Ala

Asp

His

Tyr

Gln

Gln

Asn

Thr

Pro

Ile

Gly

Asp

Gly

180

185

190

Pro

Val

Leu

Leu

Pro

Asp

Asn

His

Tyr

Leu

Ser

Thr

Gln

Ser

Ala

Leu

195

200

205

Ser

Lys

Asp

Pro

Asn

Glu

Lys

Arg

Asp

His

Met

Val

Leu

Leu

Glu

Phe

210

215

220

Val

Thr

Ala

Ala

Gly

Ile

Thr

His

Gly

Met

Asp

Gln

Ala

Lys

Pro

Leu

225

230

235

240

Ser

Gln

Glu

Glu

Ser

Thr

Leu

Ile

Glu

Arg

Ala

Thr

Ala

Thr

Ile

Asn

245

250

255

Ser

Ile

Pro

Ile

Ser

Glu

Asp

Tyr

Ser

Val

Ala

Ser

Ala

Ala

Leu

Ser

260

265

270

Ser

Asp

Gly

Arg

Ile

Phe

Thr

Gly

Val

Asn

Val

Tyr

His

Phe

Thr

Gly

275

280

285

Gly

Pro

Cys

Ala

Glu

Leu

Val

Val

Leu

Gly

Thr

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

290

295

300

Ala

Gly

Asn

Leu

Thr

Cys

Ile

Val

Ala

Ile

Gly

Asn

Glu

Asn

Arg

Gly

305

310

315

320

Ile

Leu

Ser

Pro

Cys

Gly

Arg

Cys

Arg

Gln

Val

Leu

Leu

Asp

Leu

His

325

330

335

Pro

Gly

Ile

Lys

Ala

Ile

Val

Lys

Asp

Ser

Asp

Gly

Gln

Pro

Thr

Ala

340

345

350

Val

Gly

Ile

Arg

Glu

Leu

Leu

Pro

Ser

Gly

Tyr

Val

Trp

Glu

Gly

355

360

365

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 314/695

172/223 <210> 8 <211> 2431 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência de aminoácido sintético pJYC6SFL713A1 <400> 8

Met

Ala

Ala

Lys

Val

His

Val

Asp

Ile

Glu

Ala

Asp

Ser

Pro

Phe

Ile

1

5

10

15

Lys

Ser

Leu

Gln

Lys

Ala

Phe

Pro

Ser

Phe

Glu

Val

Glu

Ser

Leu

Gln

20

25

30

Val

Thr

Pro

Asn

Asp

His

Ala

Asn

Ala

Arg

Ala

Phe

Ser

His

Leu

Ala

35

40

45

Thr

Lys

Leu

Ile

Glu

Gln

Glu

Thr

Asp

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile

Leu

Asp

50

55

60

Ile

Gly

Ser

Ala

Pro

Ser

Arg

Arg

Met

Met

Ser

Thr

His

Lys

Tyr

His

65

70

75

80

Cys

Val

Cys

Pro

Met

Arg

Ser

Ala

Glu

Asp

Pro

Glu

Arg

Leu

Asp

Ser

85

90

95

Tyr

Ala

Lys

Lys

Leu

Ala

Ala

Ala

Ser

Gly

Lys

Val

Leu

Asp

Arg

Glu

100

105

110

Ile

Ala

Gly

Lys

Ile

Thr

Asp

Leu

Gln

Thr

Val

Met

Ala

Thr

Pro

Asp

115

120

125

Ala

Glu

Ser

Pro

Thr

Phe

Cys

Leu

His

Thr

Asp

Val

Thr

Cys

Arg

Thr

130

135

140

Ala

Ala

Glu

Val

Ala

Val

Tyr

Gln

Asp

Val

Tyr

Ala

Val

His

Ala

Pro

145

150

155

160

Thr

Ser

Leu

Tyr

Hi s

Gln

Ala

Met

Lys

Gly

Val

Arg

Thr

Ala

Tyr

Trp

165

170

175

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 315/695

173/223

Ile Gly

Tyr Pro

Arg Asn

210

Lys Leu

225

Met Phe

Arg Ser

Phe Thr

Lys Lys

290

Ala Val

305

Thr Val

Ser Thr

Pro Glu

Val Asn

370

Leu Pro

385

Ala Asp

Phe Asp

180

Thr Tyr

195

Ile Gly

Ser Ile

Ser Val

Trp His

260

Cys Arg

275

Ile Thr

Thr Tyr

Lys Gly

Ile Cys

340

Asp Ala

355

Gly Arg

Ile Val

Leu Asp

Thr

Ala

Leu

Leu

Gly

245

Leu

Cys

Met

His

Glu

325

Asp

Gln

Thr

Ala

Asp

Thr Pro

Thr Asn

Cys Ala

215

Arg Lys

230

Ser Thr

Pro Ser

Asp Thr

Cys Pro

295

Ala Glu

310

Arg Val

Gln Met

Lys Leu

Gln Arg

375

Val Ala

390

Glu Lys

Phe Met

185

Trp Ala

200

Ala Ser

Lys Gln

Leu Tyr

Val Phe

265

Ile Val

280

Gly Leu

Gly Phe

Ser Phe

Thr Gly

345

Leu Val

360

Asn Thr

Phe Ser

Pro Leu

Phe Asp

Asp Glu

Leu Thr

Leu Lys

235

Thr Glu

250

His Leu

Ser Cys

Tyr Gly

Leu Val

315

Pro Val

330

Ile Leu

Gly Leu

Asn Thr

Lys Trp

395

Gly Val

Ala Leu

Gln Val

205

Glu Gly

220

Pro Cys

Ser Arg

Lys Gly

Glu Gly

285

Lys Thr

300

Cys Lys

Cys Thr

Ala Thr

Asn Gln

365

Met Lys

380

Ala Arg

Arg Glu

Ala

190

Leu

Arg

Asp

Lys

Lys

270

Tyr

Val

Thr

Tyr

Asp

350

Arg

Asn

Glu

Arg

Gly Ala

Gln Ala

Leu Gly

Thr Val

240

Leu Leu

255

Gln Ser

Val Val

Gly Tyr

Thr Asp

320

Val Pro

335

Val Thr

Ile Val

Tyr Leu

Tyr Lys

400

Ser Leu

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 316/695

174/223

405 410 415

Thr

Cys

Cys

Cys 420

Leu Trp Ala

Phe Lys Thr Arg 425

Lys

Met

His 430

Thr

Met

Tyr

Lys

Lys

Pro

Asp

Thr

Gln

Thr

Ile

Val

Lys

Val

Pro

Ser

Glu

Phe

435

440

445

Asn

Ser

Phe

Val

Ile

Pro

Ser

Leu

Trp

Ser

Thr

Gly

Leu

Ala

Ile

Pro

450

455

460

Val

Arg

Ser

Arg

Ile

Lys

Met

Leu

Leu

Ala

Lys

Lys

Thr

Lys

Arg

Glu

465

470

475

480

Leu

Ile

Pro

Val

Leu

Asp

Ala

Ser

Ser

Ala

Arg

Asp

Ala

Glu

Gln

Glu

485

490

495

Glu

Lys

Glu

Arg

Leu

Glu

Ala

Glu

Leu

Thr

Arg

Glu

Ala

Leu

Pro

Pro

500

505

510

Leu

Val

Pro

Ile

Ala

Pro

Ala

Glu

Thr

Gly

Val

Val

Asp

Val

Asp

Val

515

520

525

Glu

Glu

Leu

Glu

Tyr

His

Ala

Gly

Ala

Gly

Val

Val

Glu

Thr

Pro

Arg

530

535

540

Ser

Ala

Leu

Lys

Val

Thr

Ala

Gln

Pro

Asn

Asp

Val

Leu

Leu

Gly

Asn

545

550

555

560

Tyr

Val

Val

Leu

Ser

Pro

Gln

Thr

Val

Leu

Lys

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

565

570

575

Pro

Val

His

Pro

Leu

Ala

Glu

Gln

Val

Lys

Ile

Ile

Thr

His

Asn

Gly

580

585

590

Arg

Ala

Gly Gly

Tyr

Gln

Val

Asp

Gly

Tyr

Asp

Gly

Arg

Val

Leu

Leu

595

600

605

Pro

Cys

Gly

Ser

Ala

Ile

Pro

Val

Pro

Glu

Phe

Gln

Ala

Leu

Ser

Glu

610

615

620

Ser

Ala

Thr

Met

Val

Tyr

Asn

Glu

Arg

Glu

Phe

Val

Asn

Arg

Lys

Leu

625

630

635

640

Tyr

Hi s

Ile

Ala

Val

His

Gly

Pro

Ser

Leu

Asn

Thr

Asp

Glu

Glu

Asn

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 317/695

175/223

Tyr Glu

Val Asp

Leu Val

690

Gly Leu

705

Val Phe

Val Thr

Glu Ile

Glu Asn

770

Ile Leu

785

Ala Leu

Asp Pro

Phe Asn

Arg Cys

850

Gly Lys

865

Lys Val

660

Lys Lys

675

Gly Glu

Lys Ile

Gly Val

Lys His

740

Val Asn

755

Ser Asp

Tyr Val

Ile Ala

Lys Gln

820

His Asn

835

Thr Arg

Met Arg

645

Arg

Cys

Leu

Arg

Pro

725

Asp

Asp

Ser

Asp

Leu

805

Cys

Ile

Pro

Thr

Ala Glu

Cys Val

Thr Asn

695

Pro Ser

710

Gly Ser

Leu Val

Val Lys

Ile Leu

775

Glu Ala

790

Val Lys

Gly Phe

Cys Thr

Val Thr

855

Thr Asn

870

Arg Thr

665

Lys Arg

680

Pro Pro

Ala Pro

Gly Lys

Thr Ser

745

Lys His

760

Leu Asn

Phe Ala

Pro Arg

Phe Asn

825

Glu Val

840

Ala Ile

Pro Cys

650

Asp Ala

Glu Glu

Phe His

Tyr Lys

715

Ser Ala

730

Gly Lys

Arg Gly

Gly Cys

Cys His

795

Ser Lys

810

Met Met

Cys His

Val Ser

Asn Lys

875

Glu Tyr

Ala Ser

685

Glu Phe

700

Thr Thr

Ile Ile

Lys Glu

Lys Gly

765

Arg Arg

780

Ser Gly

Val Val

Gln Leu

Lys Ser

845

Thr Leu

860

Pro Ile

Val

670

Gly

Ala

Val

Lys

Asn

750

Thr

Ala

Thr

Leu

Lys

830

Ile

His

Ile

655

Phe Asp

Leu Val

Tyr Glu

Val Gly

720

Ser Leu

735

Cys Gln

Ser Arg

Val Asp

Leu Leu

800

Cys Gly

815

Val Asn

Ser Arg

Tyr Gly

Ile Asp

880

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 318/695

176/223

Thr Thr Gly

Gln

Thr Lys Pro Lys Pro 885

Gly Asp Ile 890

Val

Leu

Thr 895

Cys

Phe

Arg

Gly

Trp

Ala

Lys

Gln

Leu

Gln

Leu

Asp

Tyr

Arg

Gly

His

Glu

900

905

910

Val

Met

Thr

Ala

Ala

Ala

Ser

Gln

Gly

Leu

Thr

Arg

Lys

Gly

Val

Tyr

915

920

925

Al a

Val

Arg

Gln

Lys

Val

Asn

Glu

Asn

Pro

Leu

Tyr

Ala

Pro

Ala

Ser

930

935

940

Glu

Hi s

Val

Asn

Val

Leu

Leu

Thr

Arg

Thr

Glu

Asp

Arg

Leu

Val

Trp

945

950

955

960

Lys

Thr

Leu

Ala

Gly

Asp

Pro

Trp

Ile

Lys

Val

Leu

Ser

Asn

Ile

Pro

965

970

975

Gln

Gly

Asn

Phe

Thr

Ala

Thr

Leu

Glu

Glu

Trp

Gln

Glu

Glu

His

Asp

980

985

990

Lys

Ile

Met

Lys

Val

Ile

Glu

Gly

Pro

Ala

Ala

Pro

Val

Asp

Ala

Phe

995

1000

1005

Gln

Asn

Lys

Ala

Asn

Val

Cys

Trp

Ala

Lys

Ser

Leu

Val

Pro

Val

Leu

1010

1015

1020

Asp

Thr

Ala

Gly

Ile

Arg

Leu

Thr

Ala

Glu

Glu

Trp

Ser

Thr

Ile

Ile

1025

1030

1035

1040

Thr

Ala

Phe

Lys

Glu

Asp

Arg

Ala

Tyr

Ser

Pro

Val

Val

Ala

Leu

Asn

1045

1050

1055

Glu

Ile

Cys

Thr

Lys

Tyr

Tyr

Gly

Val

Asp

Leu

Asp

Ser

Gly

Leu

Phe

1060

1065

1070

Ser

Ala

Pro

Lys

Val

Ser

Leu

Tyr

Tyr

Glu

Asn

Asn

His

Trp

Asp

Asn

1075

1080

1085

Arg

Pro

Gly Gly

Arg

Met

Tyr

Gly

Phe

Asn

Ala

Ala

Thr

Ala

Ala

Arg

1090

1095

1100

Leu

Glu

Ala Arg

His

Thr

Phe

Leu

Lys

Gly

Gln

Trp

His

Thr

Gly

Lys

1105 1110 1115 1120

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 319/695

177/223

Gln

Ala

Val

Ile Ala 1125

Glu

Arg

Lys

Ile Gln 1130

Pro

Leu

Ser

Val Leu 1135

Asp

Asn

Val

Ile

Pro Ile

Asn

Arg

Arg

Leu Pro

His

Ala

Leu

Val Ala

Glu

1140

1145

1150

Tyr

Lys

Thr

Val Lys

Gly

Ser

Arg

Val Glu

Trp

Leu

Val

Asn Lys

Val

1155

1160

1165

Arg

Gly

Tyr

His Val

Leu

Leu

Val

Ser Glu

Tyr

Asn

Leu

Ala Leu

Pro

1170

1175

1180

Arg

Arg

Arg

Val Thr

Trp

Leu

Ser

Pro Leu

Asn

Val

Thr

Gly Ala

Asp

1185

1190

1195

1200

Arg

Cys

Tyr

Asp Leu

Ser

Leu

Gly

Leu Pro

Ala

Asp

Ala

Gly Arg

Phe

1205

1210

1215

Asp

Leu

Val

Phe Val

Asn

Ile

His

Thr Glu

Phe

Arg

Ile

His His

Tyr

1220

1225

1230

Gln

Gln

Cys

Val Asp

His

Ala

Met

Lys Leu

Gln

Met

Leu

Gly Gly

Asp

1235

1240

1245

Al a

Ala

Arg

Leu Leu

Lys

Pro

Gly

Gly Ile

Leu

Met

Arg

Ala Tyr

Gly

1250

1255

1260

Tyr Ala

Asp

Lys Ile

Ser

Glu

Ala

Val Val

Ser

Ser

Leu

Ser Arg

Lys

1265

1270

1275

1280

Phe

Ser

Ser

Ala Arg

Val

Leu

Arg

Pro Asp

Cys

Val

Thr

Ser Asn

Thr

1285

1290

1295

Glu

Val

Phe

Leu Leu

Phe

Ser

Asn

Phe Asp

Asn

Gly

Lys

Arg Pro

Ser

1300

1305

1310

Thr

Leu

Hi s

Gln Met

Asn

Thr

Lys

Leu Ser

Ala

Val

Tyr

Ala Gly

Glu

1315

1320

1325

Ala

Met

His

Thr Ala

Gly Cys

Ala

Pro Ser

Tyr

Arg

Val

Lys Arg

Ala

1330

1335

1340

Asp

Ile

Ala

Thr Cys

Thr

Glu

Ala

Ala Val

Val

Asn

Ala

Ala Asn

Ala

1345

1350 1355 1360

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 320/695

178/223

Arg Gly Thr Val	Gly	Asp	Gly Val	Cys	Arg Ala	Val	Ala	Lys	Lys	Trp
1365			1370			1375
Pro Ser Ala Phe	Lys	Gly	Ala Ala	Thr	Pro Val	Gly	Thr	Ile	Lys	Thr
1380			1385			1390
Val Met Cys Gly	Ser	Tyr	Pro Val	Ile	His Ala	Val	Ala	Pro	Asn	Phe
1395			1400			1405
Ser Ala Thr Thr	Glu	Ala	Glu Gly	Asp	Arg Glu	Leu	Ala	Ala	Val	Tyr
1410		1415		1420
Arg Ala Val Ala	Ala	Glu	Val Asn	Arg	Leu Ser	Leu	Ser	Ser	Val	Ala
1425	1430			1435				1440
Ile Pro Leu Leu	Ser	Thr	Gly Val	Phe	Ser Gly Gly	Arg	Asp	Arg	Leu
1445			1450			1455
Gln Gln Ser Leu	Asn	Hi s	Leu Phe	Thr	Ala Met	Asp	Ala	Thr	Asp	Ala
1460			1465			1470
Asp Val Thr Ile	Tyr	Cys	Arg Asp	Lys	Ser Trp	Glu	Lys	Lys	Ile	Gln
1475			1480			1485
Glu Ala Ile Asp	Met	Arg	Thr Ala	Val	Glu Leu	Leu	Asn	Asp	Asp	Val
1490		1495		1500
Glu Leu Thr Thr	Asp	Leu	Val Arg	Val	His Pro	Asp	Ser	Ser	Leu	Val
1505	1510			1515				1520
Gly Arg Lys Gly	Tyr	Ser	Thr Thr	Asp	Gly Ser	Leu	Tyr	Ser	Tyr	Phe
1525			1530			1535
Glu Gly Thr Lys	Phe	Asn	Gln Ala	Ala	Ile Asp	Met	Ala	Glu	Ile	Leu
1540			1545			1550
Thr Leu Trp Pro	Arg	Leu	Gln Glu	Ala	Asn Glu	Gln	Ile	Cys	Leu	Tyr
1555			1560			1565
Ala Leu Gly Glu	Thr	Met	Asp Asn	Ile	Arg Ser	Lys	Cys	Pro	Val	Asn
1570		1575		1580
Asp Ser Asp Ser	Ser	Thr	Pro Pro	Arg	Thr Val	Pro	Cys	Leu	Cys	Arg

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 321/695

179/223

1585 1590

1595

1600

Tyr Ala Met Thr	Ala Glu Arg Ile Ala Arg	Leu Arg Ser His	Gln 1615	Val
	1605	1610
Lys Ser Met Val 1620	Val	Cys Ser Ser Phe 1625	Pro	Leu Pro Lys Tyr 1630	His	Val
Asp Gly Val Gln 1635	Lys	Val Lys Cys Glu 1640	Lys	Val Leu Leu Phe 1645	Asp	Pro
Thr Val Pro Ser 1650	Val	Val Ser Pro Arg 1655	Lys	Tyr Ala Ala Ser 1660	Thr	Thr
Asp His Ser Asp	Arg	Ser Leu Arg Gly	Phe	Asp Leu Asp Trp	Thr	Thr
1665	1670	1675	1680
Asp Ser Ser Ser	Thr 1685	Ala Ser Asp Thr	Met 1690	Ser Leu Pro Ser Leu 1695	Gln
Ser Cys Asp Ile 1700	Asp	Ser Ile Tyr Glu 1705	Pro	Met Ala Pro Ile 1710	Val	Val
Thr Ala Asp Val 1715	His	Pro Glu Pro Ala 1720	Gly	Ile Ala Asp Leu 1725	Ala	Ala
Asp Val His Pro 1730	Glu	Pro Al a Asp Hi s 1735	Val	Asp Leu Glu Asn 1740	Pro	Ile
Pro Pro Pro Arg	Pro	Lys Arg Ala Ala	Tyr	Leu Ala Ser Arg	Ala	Ala
1745	1750	1755	1760
Glu Arg Pro Val	Pro 1765	Ala Pro Arg Lys	Pro 1770	Thr Pro Ala Pro Arg 1775	Thr
Ala Phe Arg Asn 1780	Lys	Leu Pro Leu Thr 1785	Phe	Gly Asp Phe Asp 1790	Glu	His
Glu Val Asp Ala 1795	Leu	Ala Ser Gly Ile 1800	Thr	Phe Gly Asp Phe 1805	Asp	Asp
Val Leu Arg Leu 1810	Gly	Arg Ala Gly Ala 1815	Tyr	Ile Phe Ser Ser 1820	Asp	Thr
Gly Ser Gly His	Leu	Gln Gln Lys Ser	Val	Arg Gln His Asn	Leu	Gln

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 322/695

180/223

1825

1830

1835

1840

cys

Ala

Gln

Leu

Asp

Ala

Val

Gln

Glu

Glu

Lys

Met

Tyr

Pro

Pro

Lys

1845

1850

1855

Leu

Asp

Thr

Glu

Arg

Glu

Lys

Leu

Leu

Leu

Leu

Lys

Met

Gln

Met

His

1860

1865

1870

Pro

Ser

Glu

Ala

Asn

Lys

Ser

Arg

Tyr

Gln

Ser

Arg

Lys

Val

Glu

Asn

1875

1880

1885

Met

Lys

Ala

Thr

Val

Val

Asp

Arg

Leu

Thr

Ser

Gly

Ala

Arg

Leu

Tyr

1890

1895

1900

Thr

Gly

Ala

Asp

Val

Gly

Arg

Ile

Pro

Thr

Tyr

Ala

Val

Arg

Tyr

Pro

1905

1910

1915

1920

Arg

Pro

Val

Tyr

Ser

Pro

Thr

Val

Ile

Glu

Arg

Phe

Ser

Ser

Pro

Asp

1925

1930

1935

Val

Ala

Ile

Ala

Ala

Cys

Asn

Glu

Tyr

Leu

Ser

Arg

Asn

Tyr

Pro

Thr

1940

1945

1950

Val

Ala

Ser

Tyr

Gln

Ile

Thr

Asp

Glu

Tyr

Asp

Ala

Tyr

Leu

Asp

Met

1955

1960

1965

Val

Asp

Gly

Ser

Asp

Ser

Cys

Leu

Asp

Arg

Ala

Thr

Phe

Cys

Pro

Ala

1970

1975

1980

Lys

Leu

Arg

Cys

Tyr

Pro

Lys

Hi s

His

Ala

Tyr

His

Gln

Pro

Thr

Val

1985

1990

1995

2000

Arg

Ser

Ala

Val

Pro

Ser

Pro

Phe

Gln

Asn

Thr

Leu

Gln

Asn

Val

Leu

2005

2010

2015

Ala

Ala

Ala

Thr

Lys

Arg

Asn

Cys

Asn

Val

Thr

Gln

Met

Arg

Glu

Leu

2020

2025

2030

Pro

Thr

Met

Asp

Ser

Ala

Val

Phe

Asn

Val

Glu

Cys

Phe

Lys

Arg

Tyr

2035

2040

2045

Ala

Cys

Ser Gly

Glu

Tyr

Trp

Glu

Glu

Tyr

Ala

Lys

Gln

Pro

Ile

Arg

2050 2055 2060

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 323/695

181/223

Ile Thr Thr Glu Asn	Ile 2070	Thr Thr Tyr Val	Thr 2075	Lys Leu Lys Gly	Pro 2080
2065 :
Lys Ala Ala Ala Leu 2085	Phe	Ala Lys Thr His 2090	Asn	Leu Val Pro Leu 2095	Gln
Glu Val Pro Met Asp 2100	Arg	Phe Thr Val Asp 2105	Met	Lys Arg Asp Val 2110	Lys
Val Thr Pro Gly Thr 2115	Lys	His Thr Glu Glu 2120	Arg	Pro Lys Val Gln 2125	Val
Ile Gln Ala Ala Glu	Pro	Leu Ala Thr Ala	Tyr	Leu Cys Gly Ile	His
2130	2135	2140
Arg Glu Leu Val Arg	Arg	Leu Asn Ala Val	Leu	Arg Pro Asn Val	His
2145 :	2150	2155	2160
Thr Leu Phe Asp Met 2165	Ser	Ala Glu Asp Phe 2170	Asp	Ala Ile Ile Ala 2175	Ser
His Phe His Pro Gly 2180	Asp	Pro Val Leu Glu 2185	Thr	Asp Ile Ala Ser 2190	Phe
Asp Lys Ser Gln Asp 2195	Asp	Ser Leu Ala Leu 2200	Thr	Gly Leu Met Ile 2205	Leu
Glu Asp Leu Gly Val	Asp	Gln Tyr Leu Leu	Asp	Leu Ile Glu Ala	Ala
2210	2215	2220
Phe Gly Glu Ile Ser	Ser	Cys His Leu Pro	Thr	Gly Thr Arg Phe	Lys
2225 :	2230	2235	2240
Phe Gly Ala Met Met 2245	Lys	Ser Gly Met Phe 2250	Leu	Thr Leu Phe Ile 2255	Asn
Thr Val Leu Asn Ile 2260	Thr	Ile Ala Ser Arg 2265	Val	Leu Glu Gln Arg 2270	Leu
Thr Asp Ser Ala Cys 2275	Ala	Ala Phe Ile Gly 2280	Asp	Asp Asn Ile Val 2285	His
Gly Val Ile Ser Asp	Lys	Leu Met Ala Glu	Arg	Cys Ala Ser Trp	Val

2290 2295 2300

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 324/695

182/223

Asn Met	Glu	Val Lys Ile	Ile Asp	Ala Val Met	Gly Glu	Lys Pro Pro
2305 Tyr Phe	Cys	2310 Gly Gly Phe	Ile	Val	2315 Phe Asp Ser	Val	Thr	2320 Gln Thr Ala
Cys Arg	Val	2325 Ser Asp Pro	Leu	Lys	2330 Arg Leu Phe	Lys	Leu	2335 Gly Lys Pro
Leu Thr	Ala	2340 Glu Asp Lys	Gln	Asp	2345 Glu Asp Arg	Arg	2350 Arg Ala Leu Ser
2355 Asp Glu Val	Ser Lys Trp	Phe	2360 Arg	Thr Gly Leu	2365 Gly Ala	Glu Leu Glu
2370 Val Ala	Leu	2375 Thr Ser Arg Tyr	Glu	Val Glu Gly	2380 Cys	Lys	Ser Ile Leu
2385 Ile Ala	Met	2390 Ala Thr Leu	Ala	Arg	2395 Asp Ile Lys	Ala	Phe	2400 Lys Lys Leu
Arg Gly	Pro	2405 Val Ile His	Leu	Tyr	2410 Gly Gly Pro	Arg	Leu	2415 Val Arg

2420 24252430 <210>9 <211>2432 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência aminoácido sintético pJY1099.1 <400> 9 de

Met

Ala

Ala

Lys

Val

Hi s

Val

Asp

Ile

Glu

Ala

Asp

Ser

Pro

Phe

Ile

1

5

10

15

Lys

Ser

Leu

Gln

Lys

Ala

Phe

Pro

Ser

Phe

Glu

Val

Glu

Ser

Leu

Gln

20

25

30

Val

Thr

Pro

Asn

Asp

His

Ala

Asn

Ala

Arg

Ala

Phe

Ser

His

Leu

Ala

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 325/695

183/223

Thr Lys

Ile Gly

Cys Val

Tyr Ala

Ile Ala

Ala Glu

130

Ala Ala

145

Thr Ser

Ile Gly

Tyr Pro

Arg Asn

210

Lys Leu

225

Met Phe

Arg Ser

Phe Thr

Leu Ile

Ser Ala

Cys Pro

Lys Lys

100

Gly Lys

115

Ser Pro

Glu Val

Leu Tyr

Phe Asp

180

Thr Tyr

195

Ile Gly

Ser Ile

Ser Val

Trp His

260

Cys Arg

Glu

Pro

Met

Leu

Ile

Thr

Ala

His

165

Thr

Ala

Leu

Leu

Gly

245

Leu

Cys

Gln Glu

Ser Arg

Arg Ser

Ala Ala

Thr Asp

Phe Cys

135

Val Tyr

150

Gln Ala

Thr Pro

Thr Asn

Cys Ala

215

Arg Lys

230

Ser Thr

Pro Ser

Asp Thr

Thr Asp

Arg Met

Ala Glu

Ala Ser

105

Leu Gln

120

Leu His

Gln Asp

Met Lys

Phe Met

185

Trp Ala

200

Ala Ser

Lys Gln

Leu Tyr

Val Phe

265

Ile Val

Lys Asp

Met Ser

Asp Pro

Gly Lys

Thr Val

Thr Asp

Val Tyr

155

Gly Val

170

Phe Asp

Asp Glu

Leu Thr

Leu Lys

235

Thr Glu

250

His Leu

Ser Cys

Thr Leu

Thr His

Glu Arg

Val Leu

Met Ala

125

Val Thr

140

Ala Val

Arg Thr

Ala Leu

Gln Val

205

Glu Gly

220

Pro Cys

Ser Arg

Lys Gly

Glu Gly

Ile

Lys

Leu

Asp

110

Thr

Cys

His

Ala

Ala

190

Leu

Arg

Asp

Lys

Lys

270

Tyr

Leu Asp

Tyr His

Val Cys

Arg Glu

Pro Asp

Arg Thr

Ala Pro

160

Tyr Trp

175

Gly Ala

Gln Ala

Leu Gly

Thr Val

240

Leu Leu

255

Gln Ser

Val Val

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 326/695

184/223

Lys Lys

290

Ala Val

305

Thr Val

Ser Thr

Pro Glu

Val Asn

370

Leu Pro

385

Ala Asp

Thr Cys

Tyr Lys

Asn Ser

450

Val Arg

465

Leu Ile

Glu Lys

Leu Val

275

Ile Thr

Thr Tyr

Lys Gly

Ile Cys

340

Asp Ala

355

Gly Arg

Ile Val

Leu Asp

Cys Cys

420

Lys Pro

435

Phe Val

Ser Arg

Pro Val

Glu Arg

500

Pro Ile

Met

His

Glu

325

Asp

Gln

Thr

Ala

Asp

405

Leu

Asp

Ile

Ile

Leu

485

Leu

Ala

Cys Pro

295

Ala Glu

310

Arg Val

Gln Met

Lys Leu

Gln Arg

375

Val Ala

390

Glu Lys

Trp Ala

Thr Gln

Pro Ser

455

Lys Met

470

Asp Ala

Glu Ala

Pro Ala

280

Gly Leu

Gly Phe

Ser Phe

Thr Gly

345

Leu Val

360

Asn Thr

Phe Ser

Pro Leu

Phe Lys

425

Thr Ile

440

Leu Trp

Leu Leu

Ser Ser

Glu Leu

505

Glu Thr

Tyr Gly

Leu Val

315

Pro Val

330

Ile Leu

Gly Leu

Asn Thr

Lys Trp

395

Gly Val

410

Thr Arg

Val Lys

Ser Thr

Ala Lys

475

Ala Arg

490

Thr Arg

Gly Val

285

Lys Thr

300

Cys Lys

Cys Thr

Ala Thr

Asn Gln

365

Met Lys

380

Ala Arg

Arg Glu

Lys Met

Val Pro

445

Gly Leu

460

Lys Thr

Asp Ala

Glu Ala

Val Asp

Val

Thr

Tyr

Asp

350

Arg

Asn

Glu

Arg

Hi s

430

Ser

Ala

Lys

Glu

Leu

510

Val

Gly Tyr

Thr Asp

320

Val Pro

335

Val Thr

Ile Val

Tyr Leu

Tyr Lys

400

Ser Leu

415

Thr Met

Glu Phe

Ile Pro

Arg Glu

480

Gln Glu

495

Pro Pro

Asp Val

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 327/695

185/223

Glu Glu

530

Ser Ala

545

Tyr Val

Pro Val

Arg Ala

Pro Cys

610

Ser Ala

625

Tyr His

Tyr Glu

Val Asp

Leu Val

690 Gly Leu 705

Val Phe

Val Thr

Glu Ile

515

Leu Glu

Leu Lys

Val Leu

His Pro

580

Gly Arg

595

Gly Ser

Thr Met

Ile Ala

Lys Val

660

Lys Lys

675

Gly Glu

Lys Ile

Gly Val

Lys His

740

Val Asn

Tyr

Val

Ser

565

Leu

Tyr

Ala

Val

Val

645

Arg

Cys

Leu

Arg

Pro

725

Asp

Asp

His Ala

535

Thr Ala

550

Pro Gln Ala Glu Gln Val

Ile Pro

615

Tyr Asn

630

His Gly Ala Glu Cys Val

Thr Asn

695

Pro Ser

710

Gly Ser

Leu Val

Val Lys

520

Gly Ala

Gln Pro

Thr Val

Gln Val

585

Asp Gly

600

Val Pro

Glu Arg

Pro Ser

Arg Thr

665

Lys Arg

680

Pro Pro

Ala Pro

Gly Lys

Thr Ser

745

Lys His

Gly Val

Asn Asp

555

Leu Lys

570

Lys Ile

Tyr Asp

Glu Phe

Glu Phe

635

Leu Asn

650

Asp Ala

Glu Glu

Phe His

Tyr Lys

715

Ser Ala

730

Gly Lys

Arg Gly

525

Val Glu

540

Val Leu

Ser Ser

Ile Thr

Gly Arg

605

Gln Ala

620

Val Asn

Thr Asp

Glu Tyr

Ala Ser

685

Glu Phe

700

Thr Thr

Ile Ile

Lys Glu

Leu Asp

Thr

Leu

Lys

His

590

Val

Leu

Arg

Glu

Val

670

Gly

Ala

Val

Lys Asn

750

Ile

Pro Arg

Gly Asn

560

Leu Ala

575

Asn Gly

Leu Leu

Ser Glu

Lys Leu

640

Glu Asn

655

Phe Asp

Leu Val

Tyr Glu

Val Gly

720

Ser Leu

735

Cys Gln

Gln Ala

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 328/695

186/223

Lys Thr

770

Ile Leu

785

Ala Leu

Asp Pro

Phe Asn

Arg Cys

850 Gly Lys 865

Thr Thr

Phe Arg

Val Met

Ala Val

930

Gl u Hi s

945

Lys Thr

Gln Gly

Lys Ile

755

Val Asp

Tyr Val

Ile Ala

Lys Gln

820

His Asn

835

Thr Arg

Met Arg

Gly Gln

Gly Trp

900

Thr Ala

915

Arg Gln

Val Asn

Leu Ala

Asn Phe

980

Met Lys

Ser

Asp

Leu

805

Cys

Ile

Pro

Thr

Thr

885

Val

Ala

Lys

Val

Gly

965

Thr

Val

Ile Leu

775

Glu Ala

790

Val Lys

Gly Phe

Cys Thr

Val Thr

855

Thr Asn

870

Lys Pro

Lys Gln

Ala Ser

Val Asn

935

Leu Leu

950

Asp Pro

Ala Thr

Ile Glu

760

Leu Asn

Phe Ala

Pro Arg

Phe Asn

825

Glu Val

840

Ala Ile

Pro Cys

Lys Pro

Leu Gln

905

Gln Gly

920

Glu Asn

Thr Arg

Trp Ile

Leu Glu

985

Gly Pro

Gly Cys

Cys His

795

Ser Lys

810

Met Met

Cys His

Val Ser

Asn Lys

875

Gly Asp

890

Leu Asp

Leu Thr

Pro Leu

Thr Glu

955

Lys Val

970

Glu Trp

Ala Ala

765

Arg Arg

780

Pro Gly

Val Val

Gln Leu

Lys Ser

845

Thr Leu

860

Pro Ile

Ile Val

Tyr Arg

Arg Lys

925

Tyr Ala

940

Asp Arg

Leu Ser

Gln Glu

Pro Val

Ala

Thr

Leu

Lys

830

Ile

His

Ile

Leu

Gly

910

Gly

Pro

Leu

Asn

Glu

990

Asp

Val Asp

Leu Leu

800

Cys Gly

815

Val Asn

Ser Arg

Tyr Gly

Ile Asp

880

Thr Cys

895

His Glu

Val Tyr

Ala Ser

Val Trp

960

Ile Pro

975

His Asp

Ala Phe

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 329/695

187/223

995 1000 1005

Gln Asn 1010 Asp Thr	Lys Ala Asn Val Cys	Trp Thr	Ala Lys Ser Leu	Val Ser	Pro Val Leu
1015	1020
Ala Gly Ile Arg Leu	Ala Glu Glu Trp	Thr Ile Ile
1025 Thr Ala	1030 Phe Lys Glu Asp Arg	Ala	1035 Tyr Ser Pro Val	Val	1040 Ala Leu Asn
Glu Ile	1045 Cys Thr Lys Tyr Tyr	Gly	1050 Val Asp Leu Asp	Ser	1055 Gly Leu Phe
Ser Ala	1060 Pro Lys Val Ser Leu	1065 Tyr Tyr Glu Asn Asn	His	1070 Trp Asp Asn
1075 Arg Pro Gly Gly Arg Met Tyr	1080 Gly	Phe Asn Ala Ala	1085 Thr	Ala Ala Arg
1090 Leu Glu	1095 Ala Arg His Thr Phe	Leu	1100 Lys Gly Gln Trp	His	Thr Gly Lys
1105 Gln Ala	1110 Val Ile Ala Glu Arg	Lys	1115 Ile Gln Pro Leu	Ser	1120 Val Leu Asp
Asn Val	1125 Ile Pro Ile Asn Arg	Arg	1130 Leu Pro His Ala	Leu	1135 Val Ala Glu
Tyr Lys	1140 Thr Val Lys Gly Ser	1145 Arg Val Glu Trp Leu	Val	1150 Asn Lys Val
1155 Arg Gly Tyr His Val Leu Leu	1160 Val	Ser Glu Tyr Asn	1165 Leu	Ala Leu Pro
1170 Arg Arg	1175 Asp Val Thr Trp Leu	Ser	1180 Pro Leu Asn Val	Thr	Gly Ala Asp
1185 Arg Cys	1190 Tyr Asp Leu Ser Leu	Gly	1195 Leu Pro Ala Asp	Ala	1200 Gly Arg Phe
Asp Leu	1205 Val Phe Val Asn Ile	Hi s	1210 Thr Glu Phe Arg	Ile	1215 His His Tyr

1220 1225 1230

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 330/695

188/223

Gln Gln Cys 1235	Val	Asp	His	Ala Met 1240	Lys	Leu Gln	Met Leu 1245	Gly	Gly	Asp
Ala Leu Arg	Leu	Leu	Lys	Pro Gly	Gly	Ser Leu	Leu Met	Arg	Ala	Tyr
1250			1255		1260
Gly Tyr Ala	Asp	Lys	Ile	Ser Glu	Ala	Val Val	Ser Ser	Leu	Ser	Arg
1265		1270			1275			1280
Lys Phe Ser	Ser	Ala	Arg	Val Leu	Arg	Pro Asp	Cys Val	Thr	Ser	Asn
	1285			1290		1295
Thr Glu Val	Phe	Leu	Leu	Phe Ser	Asn	Phe Asp	Asn Gly	Lys	Arg	Pro
1300			1305		1310
Ser Thr Leu	Hi s	Gln	Met	Asn Thr	Lys	Leu Ser	Ala Val	Tyr	Ala	Gly
1315				1320			1325
Glu Ala Met	His	Thr	Ala	Gly Cys	Ala	Pro Ser	Tyr Arg	Val	Lys	Arg
1330			1335		1340
Ala Asp Ile	Ala	Thr	Cys	Thr Glu	Ala	Ala Val	Val Asn	Ala	Ala	Asn
1345		1350			1355			1360
Ala Arg Gly	Thr	Val	Gly	Asp Gly	Val	Cys Arg	Ala Val	Ala	Lys	Lys
	1365			1370		1375
Trp Pro Ser	Ala	Phe	Lys	Gly Glu	Ala	Thr Pro	Val Gly	Thr	Ile	Lys
1380			1385		1390
Thr Val Met	Cys	Gly	Ser	Tyr Pro	Val	Ile His	Ala Val	Ala	Pro	Asn
1395				1400			1405
Phe Ser Ala	Thr	Thr	Glu	Ala Glu	Gly	Asp Arg	Glu Leu	Ala	Ala	Val
1410			1415		1420
Tyr Arg Ala	Val	Ala	Ala	Glu Val	Asn	Arg Leu	Ser Leu	Ser	Ser	Val
1425		1430			1435			1440
Ala Ile Pro	Leu	Leu	Ser	Thr Gly	Val	Phe Ser	Gly Gly	Arg	Asp Arg
	1445			1450		1455
Leu Gln Gln	Ser	Leu	Asn	His Leu	Phe	Thr Ala	Met Asp	Ala	Thr Asp

1460 1465 1470

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 331/695

189/223

Ala Asp Val 1475	Thr	Ile	Tyr Cys Arg 1480	Asp	Lys Ser Trp Glu 1485	Lys	Lys	Ile
Gln Glu Al a	Ile	Asp	Met Arg Thr	Ala	Val Glu Leu Leu	Asn	Asp	Asp
1490			1495		1500
Val Glu Leu	Thr	Thr	Asp Leu Val	Arg	Val His Pro Asp	Ser	Ser	Leu
1505		1510		1515		1520
Val Gly Arg	Lys	Gly	Tyr Ser Thr	Thr	Asp Gly Ser Leu	Tyr	Ser	Tyr
	1525		1530	1535
Phe Glu Gly	Thr	Lys	Phe Asn Gln	Ala	Ala Ile Asp Met	Ala	Glu	Ile
1540		1545	1550
Leu Thr Leu	Trp	Pro	Arg Leu Gln	Glu	Ala Asn Glu Gln	Ile	Cys	Leu
1555			1560		1565
Tyr Ala Leu	Gly	Glu	Thr Met Asp	Asn	Ile Arg Ser Lys	Cys	Pro	Val
1570			1575		1580
Asn Asp Ser	Asp	Ser	Ser Thr Pro	Pro	Arg Thr Val Pro	Cys	Leu	Cys
1585		1590		1595		1600
Arg Tyr Ala	Met	Thr	Ala Glu Arg	Ile	Ala Arg Leu Arg	Ser	His	Gln
	1605		1610	1615
Val Lys Ser	Met	Val	Val Cys Ser	Ser	Phe Pro Leu Pro	Lys	Tyr	His
1620		1625	1630
Val Asp Gly	Val	Gln	Lys Val Lys	Cys	Glu Lys Val Leu	Leu	Phe	Asp
1635			1640		1645
Pro Thr Val	Pro	Ser	Val Val Ser	Pro	Arg Lys Tyr Ala	Ala	Ser	Thr
1650			1655		1660
Thr Asp His	Ser	Asp	Arg Ser Leu	Arg	Gly Phe Asp Leu	Asp	Trp	Thr
1665		1670		1675		1680
Thr Asp Ser	Ser	Ser	Thr Ala Ser	Asp	Thr Met Ser Leu	Pro	Ser	Leu
	1685		1690	1695
Gln Ser Cys	Asp	Ile	Asp Ser Ile	Tyr	Glu Pro Met Ala	Pro	Ile	Val

1700 1705 1710

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 332/695

190/223

Val Thr	Ala 1715	Asp Val His Pro	Glu Pro Ala Gly Ile Ala	Asp Leu Ala
		1720	1725
Ala Asp 1730	Val	His Pro Glu Pro 1735	Ala	Asp His Val Asp 1740	Leu	Glu Asn Pro
Ile Pro 1745	Pro	Pro Arg Pro Lys 1750	Arg	Ala Ala Tyr Leu 1755	Ala	Ser Arg Ala 1760
Ala Glu	Arg	Pro Val Pro Ala 1765	Pro	Arg Lys Pro Thr 1770	Pro	Ala Pro Arg 1775
Thr Ala	Phe	Arg Asn Lys Leu	Pro	Leu Thr Phe Gly	Asp	Phe Asp Glu
	1780	1785	1790
Hi s Glu	Val	Asp Ala Leu Ala	Ser	Gly Ile Thr Phe	Gly	Asp Phe Asp
1795	1800	1805
Asp Val 1810	Leu	Arg Leu Gly Arg 1815	Ala	Gly Ala Tyr Ile 1820	Phe	Ser Ser Asp
Thr Gly 1825	Ser	Gly His Leu Gln 1830	Gln	Lys Ser Val Arg 1835	Gln	His Asn Leu 1840
Gln Cys	Ala	Gln Leu Asp Ala 1845	Val	Glu Glu Glu Lys 1850	Met	Tyr Pro Pro 1855
Lys Leu	Asp	Thr Glu Arg Glu	Lys	Leu Leu Leu Leu	Lys	Met Gln Met
	1860	1865	1870
His Pro	Ser	Glu Ala Asn Lys	Ser	Arg Tyr Gln Ser	Arg	Lys Val Glu
1875	1880	1885
Asn Met 1890	Lys	Ala Thr Val Val 1895	Asp	Arg Leu Thr Ser 1900	Gly	Ala Arg Leu
Tyr Thr 1905	Gly	Ala Asp Val Gly 1910	Arg	Ile Pro Thr Tyr 1915	Ala	Val Arg Tyr 1920
Pro Arg	Pro	Val Tyr Ser Pro 1925	Thr	Val Ile Glu Arg 1930	Phe	Ser Ser Pro 1935
Asp Val	Ala	Ile Ala Ala Cys	Asn	Glu Tyr Leu Ser	Arg	Asn Tyr Pro
	1940	1945	1950

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 333/695

191/223

Thr Val Ala Ser Tyr Gln Ile Thr Asp Glu Tyr Asp Ala Tyr	Leu	Asp
1955	1960	1965
Met Val Asp Gly Ser Asp	Ser Cys Leu	Asp Arg Ala Thr Phe	Cys	Pro
1970 1975	1980
Ala Lys Leu Arg Cys Tyr	Pro Lys His	His Ala Tyr His Gln	Pro	Thr
1985 1990		1995	2000
Val Arg Ser Ala Val Pro	Ser Pro Phe	Gln Asn Thr Leu Gln	Asn	Val
2005	2010 ;	2015
Leu Ala Ala Ala Thr Lys	Arg Asn Cys	Asn Val Thr Gln Met	Arg	Glu
2020	2025	2030
Leu Pro Thr Met Asp Ser	Ala Val Phe	Asn Val Glu Cys Phe	Lys	Arg
2035	2040	2045
Tyr Ala Cys Ser Gly Glu	Tyr Trp Glu	Glu Tyr Ala Lys Gln	Pro	Ile
2050 2055	2060
Arg Ile Thr Thr Glu Asn	Ile Thr Thr	Tyr Val Thr Lys Leu	Lys	Gly
2065 2070		2075	2080
Pro Lys Ala Ala Ala Leu	Phe Ala Lys	Thr His Asn Leu Val	Pro	Leu
2085	2090 ;	2095
Gln Glu Val Pro Met Asp	Arg Phe Thr	Val Asp Met Lys Arg	Asp	Val
2100	2105	2110
Lys Val Thr Pro Gly Thr	Lys His Thr	Glu Glu Arg Pro Lys	Val	Gln
2115	2120	2125
Val Ile Gln Ala Ala Glu	Pro Leu Ala	Thr Ala Tyr Leu Cys	Gly	Ile
2130 2135	2140
Hi s Arg Glu Leu Val Arg	Arg Leu Asn	Ala Val Leu Arg Pro	Asn	Val
2145 2150		2155	2160
His Thr Leu Phe Asp Met	Ser Ala Glu	Asp Phe Asp Ala Ile	Ile	Ala
2165	2170 ;	2175
Ser His Phe His Pro Gly	Asp Pro Val	Leu Glu Thr Asp Ile	Ala	Ser

2180 2185 2190

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 334/695

192/223

Phe Asp Lys 2195	Ser	Gln Asp Asp Ser Leu Ala Leu Thr Gly	Leu Met	Ile
2200	2205
Leu Glu Asp	Leu	Gly Val Asp Gln	Tyr Leu Leu Asp Leu	Ile Glu	Ala
2210		2215	2220
Ala Phe Gly	Glu	Ile Ser Ser Cys	His Leu Pro Thr Gly	Thr Arg	Phe
2225		2230	2235	2240
Lys Phe Gly	Ala	Met Met Lys Ser	Gly Met Phe Leu Thr	Leu Phe	Ile
	2245	2250	2255
Asn Thr Val	Leu	Asn Ile Thr Ile	Ala Ser Arg Val Leu	Glu Gln	Arg
2260	2265 2270
Leu Thr Asp	Ser	Ala Cys Ala Ala	Phe Ile Gly Asp Asp	Asn Ile	Val
2275		2280	2285
His Gly Val	Ile	Ser Asp Lys Leu	Met Ala Glu Arg Cys	Ala Ser	Trp
2290		2295	2300
Val Asn Met	Glu	Val Lys Ile Ile	Asp Ala Val Met Gly	Glu Lys	Pro
2305		2310	2315	2320
Pro Tyr Phe	Cys	Gly Gly Phe Ile	Val Phe Asp Ser Val	Thr Gln	Thr
	2325	2330	2335
Ala Cys Arg	Val	Ser Asp Pro Leu	Lys Arg Leu Phe Lys	Leu Gly	Lys
2340	2345 2350
Pro Leu Thr	Ala	Glu Asp Lys Gln	Asp Glu Asp Arg Arg	Arg Ala	Leu
2355		2360	2365
Ser Asp Glu	Val	Ser Lys Trp Phe	Arg Thr Gly Leu Gly	Ala Glu	Leu
2370		2375	2380
Glu Val Ala	Leu	Thr Ser Arg Tyr	Glu Val Glu Gly Cys	Lys Ser	Ile
2385		2390	2395	2400
Leu Ile Ala	Met	Ala Thr Leu Ala	Arg Asp Ile Lys Ala	Phe Lys	Lys
	2405	2410	2415
Leu Arg Gly	Pro	Val Ile His Leu	Tyr Gly Gly Pro Arg	Leu Val	Arg

2420 2425 2430

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 335/695

193/223 <210> 10 <211> 450 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência aminoácido sintético pJY1099.1 <400> 10 de

Met

Gly

Asn

Gly

Gln

Gly

Arg

Asp

Trp

Lys

Met

Ala

Ile

Lys

Arg

Cys

1

5

10

15

Ser

Asn

Val

Ala

Val

Gly

Val

Gly

Gly

Lys

Ser

Lys

Lys

Phe

Gly

Glu

20

25

30

Gly

Asn

Phe

Arg

Trp

Ala

Ile

Arg

Met

Ala

Asn

Val

Ser

Thr

Gly

Arg

35

40

45

Glu

Pro

Gly

Asp

Ile

Pro

Glu

Thr

Leu

Asp

Gln

Leu

Arg

Leu

Val

Ile

50

55

60

Cys

Asp

Leu

Gln

Glu

Arg

Arg

Glu

Lys

Phe

Gly

Ser

Ser

Lys

Glu

Ile

65

70

75

80

Asp

Met

Ala

Ile

Val

Thr

Leu

Lys

Val

Phe

Ala

Val

Ala

Gly

Leu

Leu

85

90

95

Asn

Met

Thr

Val

Ser

Thr

Ala

Ala

Ala

Ala

Glu

Asn

Met

Tyr

Ser

Gln

100

105

110

Met

Gly

Leu

Asp

Thr

Arg

Pro

Ser

Met

Lys

Glu

Ala

Gly

Gly

Lys

Glu

115

120

125

Glu

Gly

Pro

Pro

Gln

Ala

Tyr

Pro

Ile

Gln

Thr

Val

Asn

Gly

Val

Pro

130

135

140

Gln

Tyr

Val

Ala

Leu

Asp

Pro

Lys

Met

Val

Ser

Ile

Phe

Met

Glu

Lys

145

150

155

160

Ala

Arg

Glu

Gly

Leu

Gly

Gly

Glu

Glu

Val

Gln

Leu

Trp

Phe

Thr

Ala

165

170

175

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 336/695

194/223

Phe

Ser

Ala

Asn Leu 180

Thr

Pro

Thr Asp Met Ala Thr Leu Ile

Met

Ala

185

190

Al a

Pro

Gly

Cys

Ala

Ala

Asp

Lys

Glu

Ile

Leu

Asp

Glu

Ser

Leu

Lys

195

200

205

Gln

Leu

Thr

Ala

Glu

Tyr

Asp

Arg

Thr

His

Pro

Pro

Asp

Ala

Pro

Arg

210

215

220

Pro

Leu

Pro

Tyr

Phe

Thr

Ala

Ala

Glu

Ile

Met

Gly

Ile

Gly

Leu

Thr

225

230

235

240

Gln

Glu

Gln

Gln

Ala

Glu

Ala

Arg

Phe

Ala

Pro

Ala

Arg

Met

Gln

Cys

245

250

255

Arg

Ala

Trp

Tyr

Leu

Glu

Ala

Leu

Gly

Lys

Leu

Ala

Ala

Ile

Lys

Ala

260

265

270

Lys

Ser

Pro

Arg

Ala

Val

Gln

Leu

Arg

Gln

Gly

Ala

Lys

Glu

Asp

Tyr

275

280

285

Ser

Ser

Phe

Ile

Asp

Arg

Leu

Phe

Ala

Gln

Ile

Asp

Gln

Glu

Gln

Asn

290

295

300

Thr

Ala

Glu

Val

Lys

Leu

Tyr

Leu

Lys

Gln

Ser

Leu

Ser

Ile

Ala

Asn

305

310

315

320

Ala

Asn

Ala

Asp

Cys

Lys

Lys

Ala

Met

Ser

His

Leu

Lys

Pro

Glu

Ser

325

330

335

Thr

Leu

Glu

Glu

Lys

Leu

Arg

Ala

Cys

Gln

Glu

Ile

Gly

Ser

Pro

Gly

340

345

350

Tyr

Lys

Met

Gln

Leu

Leu

Ala

Glu

Ala

Leu

Thr

Lys

Val

Gln

Val

Val

355

360

365

Gln

Ser

Lys

Gly

Ser

Gly

Pro

Val

Cys

Phe

Asn

Cys

Lys

Lys

Pro

Gly

370

375

380

Hi s

Leu

Ala

Arg

Gln

Cys

Arg

Glu

Val

Lys

Lys

Cys

Asn

Lys

Cys

Gly

385

390

395

400

Lys

Pro

Gly

His

Leu

Ala

Ala

Lys

Cys

Trp

Gln

Gly

Asn

Arg

Lys

Asn

405

410

415

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 337/695

195/223

Ser Gly Asn Trp Lys Ala Gly Arg Ala Ala Ala Pro Val Asn Gln Met

420 425430

Gln Gln Ala Val Met Pro Ser Ala Pro Pro Met Glu Glu Lys Leu Leu

435 440445

Asp Leu

450 <210>11 <211>149 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência aminoácido sintético pJY1099.1 <400> 11 de

Leu Glu Gly Gly Ala Ser Cys Ser

Ser Asn Ala Ile Cys Thr Ser Asn

Asn Tyr Asn Lys Val Gly Thr Thr

3540

Ile Leu Ile Phe Val Asn Gly Tyr

5055

Gly Ala Asp Ile Thr Ile Leu Asn

6570

Ser Ile Glu Asn Gly Arg Gln Asn

Arg Gly Thr Asn Tyr Ile Asn Val

100

Tyr Lys Thr Gln Cys Ile Phe Gly

Pro Ser Glu Ser Asn Ala Ala Ser

15

Gly Gly Glu Thr Ile Gly Phe Ile

30

Thr Thr Leu Glu Lys Arg Pro Glu

Pro Ile Lys Phe Leu Leu Asp Thr

Arg Arg Asp Phe Gln Val Lys Asn

7580

Met Ile Gly Val Gly Gly Gly Lys

9095

His Leu Glu Ile Arg Asp Glu Asn

105110

Asn Val Cys Val Leu Glu Asp Asn

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 338/695

196/223

Ser Leu

130

Ile Arg

145 <210>

<211>

<212>

<213>

<220>

<223>

<400>

Met Ala

Lys Ser

Val Thr

Thr Lys

Ile Gly

Cys Val

Tyr Ala

Ile Ala

Ala Glu

115 120 125

Ile Gln Pro Leu Leu Gly Arg Asp Asn Met Ile Lys Phe Asn

135 140

Leu Val Met

2432

PRT

Seqüência Artificial

Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência de aminoácido sintético pJY1302.4

12

Ala

Lys

Val

Hi s

Val

Asp

Ile

Glu

Ala

Asp

Ser

Pro

Phe

Ile

5

10

15

Leu

Gln

Lys

Ala

Phe

Pro

Ser

Phe

Glu

Val

Glu

Ser

Leu

Gln

20

25

30

Pro

Asn

Asp

His

Ala

Asn

Ala

Arg

Ala

Phe

Ser

His

Leu

Ala

35

40

45

Leu

Ile

Glu

Gln

Glu

Thr

Asp

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile

Leu

Asp

55

60

Ser

Ala

Pro

Ser

Arg

Arg

Met

Met

Ser

Thr

His

Lys

Tyr

His

70

75

80

Cys

Pro

Met

Arg

Ser

Ala

Glu

Asp

Pro

Glu

Arg

Leu

Val

Cys

85

90

95

Lys

Lys

Leu

Ala

Ala

Ala

Ser

Gly

Lys

Val

Leu

Asp

Arg

Glu

100

105

110

Gly

Lys

Ile

Thr

Asp

Leu

Gln

Thr

Val

Met

Ala

Thr

Pro

Asp

115

120

125

Ser

Pro

Thr

Phe

Cys

Leu

His

Thr

Asp

Val

Thr

Cys

Arg

Thr

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 339/695

197/223

130 135 140

Ala Ala 145

Glu

Val

Ala Val 150

Tyr Gln

Asp

Val

Tyr 155

Ala

Val

His

Ala

Pro 160

Thr

Ser

Leu

Tyr

His

Gln

Ala

Met

Lys

Gly

Val

Arg

Thr

Ala

Tyr

Trp

165

170

175

Ile

Gly

Phe

Asp

Thr

Thr

Pro

Phe

Met

Phe

Asp

Ala

Leu

Ala

Gly

Ala

180

185

190

Tyr

Pro

Thr

Tyr

Ala

Thr

Asn

Trp

Ala

Asp

Glu

Gln

Val

Leu

Gln

Ala

195

200

205

Arg

Asn

Ile

Gly

Leu

Cys

Ala

Ala

Ser

Leu

Thr

Glu

Gly

Arg

Leu

Gly

210

215

220

Lys

Leu

Ser

Ile

Leu

Arg

Lys

Lys

Gln

Leu

Lys

Pro

Cys

Asp

Thr

Val

225

230

235

240

Met

Phe

Ser

Val

Gly

Ser

Thr

Leu

Tyr

Thr

Glu

Ser

Arg

Lys

Leu

Leu

245

250

255

Arg

Ser

Trp

Hi s

Leu

Pro

Ser

Val

Phe

His

Leu

Lys

Gly

Lys

Gln

Ser

260

265

270

Phe

Thr

Cys

Arg

Cys

Asp

Thr

Ile

Val

Ser

Cys

Glu

Gly

Tyr

Val

Val

275

280

285

Lys

Lys

Ile

Thr

Met

Cys

Pro

Gly

Leu

Tyr

Gly

Lys

Thr

Val

Gly

Tyr

290

295

300

Ala

Val

Thr

Tyr

His

Ala

Glu

Gly

Phe

Leu

Val

Cys

Lys

Thr

Thr

Asp

305

310

315

320

Thr

Val

Lys

Gly

Glu

Arg

Val

Ser

Phe

Pro

Val

Cys

Thr

Tyr

Val

Pro

325

330

335

Ser

Thr

Ile

Cys

Asp

Gln

Met

Thr

Gly

Ile

Leu

Ala

Thr

Asp

Val

Thr

340

345

350

Pro

Glu

Asp

Ala

Gln

Lys

Leu

Leu

Val

Gly

Leu

Asn

Gln

Arg

Ile

Val

355

360

365

Val

Asn

Gly

Arg

Thr

Gln

Arg

Asn

Thr

Asn

Thr

Met

Lys

Asn

Tyr

Leu

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 340/695

198/223

370 375 380

Leu

Pro

Ile

Val

Ala

Val

Ala

Phe

Ser

Lys

Trp

Ala

Arg

Glu

Tyr

Lys

385

390

395

400

Al a

Asp

Leu

Asp

Asp

Glu

Lys

Pro

Leu

Gly

Val

Arg

Glu

Arg

Ser

Leu

405

410

415

Thr

cys

Cys

Cys

Leu

Trp

Ala

Phe

Lys

Thr

Arg

Lys

Met

Hi s

Thr

Met

420

425

430

Tyr

Lys

Lys 435

Pro

Asp Thr

Gln

Thr 440

Ile Val

Lys

Val

Pro 445

Ser

Glu

Phe

Asn

Ser

Phe

Val

Ile

Pro

Ser

Leu

Trp

Ser

Thr

Gly

Leu

Ala

Ile

Pro

450

455

460

Val

Arg

Ser

Arg

Ile

Lys

Met

Leu

Leu

Ala

Lys

Lys

Thr

Lys

Arg

Glu

465

470

475

480

Leu

Ile

Pro

Val

Leu

Asp

Ala

Ser

Ser

Ala

Arg

Asp

Ala

Glu

Gln

Glu

485

490

495

Glu

Lys

Glu

Arg

Leu

Glu

Ala

Glu

Leu

Thr

Arg

Glu

Ala

Leu

Pro

Pro

500

505

510

Leu

Val

Pro

Ile

Ala

Pro

Ala

Glu

Thr

Gly

Val

Val

Asp

Val

Asp

Val

515

520

525

Glu

Glu

Leu

Glu

Tyr

His

Ala

Gly

Ala

Gly

Val

Val

Glu

Thr

Pro

Arg

530

535

540

Ser

Ala

Leu

Lys

Val

Thr

Ala

Gln

Pro

Asn

Asp

Val

Leu

Leu

Gly

Asn

545

550

555

560

Tyr

Val

Val

Leu

Ser

Pro

Gln

Thr

Val

Leu

Lys

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

565

570

575

Pro

Val

His

Pro

Leu

Ala

Glu

Gln

Val

Lys

Ile

Ile

Thr

His

Asn

Gly

580

585

590

Arg

Ala

Gly

Arg

Tyr

Gln

Val

Asp

Gly

Tyr

Asp

Gly

Arg

Val

Leu

Leu

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 341/695

199/223

Pro Cys

610

Ser Ala

625

Tyr His

Tyr Glu

Val Asp

Leu Val

690 Gly Leu 705

Val Phe

Val Thr

Glu Ile

Lys Thr

770

Ile Leu

785

Ala Leu

Asp Pro

Phe Asn

595

Gly Ser

Thr Met

Ile Ala

Lys Val

660

Lys Lys

675

Gly Glu

Lys Ile

Gly Val

Lys His

740

Val Asn

755

Val Asp

Tyr Val

Ile Ala

Lys Gln

820

His Asn

Ala

Val

Val

645

Arg

Cys

Leu

Arg

Pro

725

Asp

Asp

Ser

Asp

Leu

805

Cys

Ile

Ile Pro

615

Tyr Asn

630

His Gly

Ala Glu

Cys Val

Thr Asn

695

Pro Ser

710

Gly Ser

Leu Val

Val Lys

Ile Leu

775

Glu Ala

790

Val Lys

Gly Phe

Cys Thr

600

Val Pro

Glu Arg

Pro Ser

Arg Thr

665

Lys Arg

680

Pro Pro

Ala Pro

Gly Lys

Thr Ser

745

Lys His

760

Leu Asn

Phe Ala

Pro Arg

Phe Asn

825

Glu Val

Glu Phe

Glu Phe

635

Leu Asn

650

Asp Ala

Glu Glu

Phe His

Tyr Lys

715

Ser Ala

730

Gly Lys

Arg Gly

Gly Cys

Cys His

795

Ser Lys

810

Met Met

Cys His

605

Gln Ala

620

Val Asn

Thr Asp

Glu Tyr

Ala Ser

685

Glu Phe

700

Thr Thr

Ile Ile

Lys Glu

Leu Asp

765

Arg Arg

780

Pro Gly

Val Val

Gln Leu

Lys Ser

Leu

Arg

Glu

Val

670

Gly

Ala

Val

Lys

Asn

750

Ile

Ala

Thr

Leu

Lys

830

Ile

Ser Glu

Lys Leu

640

Glu Asn

655

Phe Asp

Leu Val

Tyr Glu

Val Gly

720

Ser Leu

735

Cys Gln

Gln Ala

Val Asp

Leu Leu

800

Cys Gly

815

Val Asn

Ser Arg

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 342/695

200/223

835

840

845

Arg

Cys

Thr

Arg

Pro

Val

Thr

Ala

Ile

Val

Ser

Thr

Leu

His

Tyr

Gly

850

855

860

Gly

Lys

Met

Arg

Thr

Thr

Asn

Pro

Cys

Asn

Lys

Pro

Ile

Ile

Ile

Asp

865

870

875

880

Thr

Thr

Gly

Gln

Thr

Lys

Pro

Lys

Pro

Gly

Asp

Ile

Val

Leu

Thr

Cys

885

890

895

Phe

Arg

Gly

Trp

Val

Lys

Gln

Leu

Gln

Leu

Asp

Tyr

Arg

Gly

His

Glu

900

905

910

Val

Met

Thr

Ala

Ala

Ala

Ser

Gln

Gly

Leu

Thr

Arg

Lys

Gly

Val

Tyr

915

920

925

Al a

Val

Arg

Gln

Lys

Val

Asn

Glu

Asn

Pro

Leu

Tyr

Ala

Pro

Ala

Ser

930

935

940

Glu

Hi s

Val

Asn

Val

Leu

Leu

Thr

Arg

Thr

Glu

Asp

Arg

Leu

Val

Trp

945

950

955

960

Lys

Thr

Leu

Ala

Gly

Asp

Pro

Trp

Ile

Lys

Val

Leu

Ser

Asn

Ile

Pro

965

970

975

Gln

Gly

Asn

Phe

Thr

Ala

Thr

Leu

Glu

Glu

Trp

Gln

Glu

Glu

His

Asp

980

985

990

Lys

Ile

Met

Lys

Val

Ile

Glu

Gly

Pro

Ala

Ala

Pro

Val

Asp

Ala

Phe

995

1000

1005

Gln

Asn

Lys

Ala

Asn

Val

Cys

Trp

Ala

Lys

Ser

Leu

Val

Pro

Val

Leu

1010

1015

1020

Asp

Thr

Ala

Gly

Ile

Arg

Leu

Thr

Ala

Glu

Glu

Trp

Ser

Thr

Ile

Ile

1025

1030

1035

1040

Thr

Ala

Phe

Lys

Glu

Asp

Arg

Ala

Tyr

Ser

Pro

Val

Val

Ala

Leu

Asn

1045

1050

1055

Glu

Ile

Cys

Thr

Lys

Tyr

Tyr

Gly Val

Asp

Leu

Asp

Ser

Gly

Leu

Phe

1060

1065

1070

Ser

Ala

Pro

Lys

Val

Ser

Leu

Tyr

Tyr

Glu

Asn

Asn

His

Trp Asp

Asn

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 343/695

201/223

1075	1080	1085
Arg Pro Gly Gly Arg Met	Tyr Gly Phe Asn	Ala Ala Thr Ala Ala Arg
1090 1095	1100
Leu Glu Ala Arg His Thr	Phe Leu Lys Gly	Gln Trp His Thr Gly Lys
1105 1110	1115 1120
Gln Ala Val Ile Ala Glu	Arg Lys Ile Gln	Pro Leu Ser Val Leu Asp
1125	1130	1135
Asn Val Ile Pro Ile Asn	Arg Arg Leu Pro	His Ala Leu Val Ala Glu
1140	1145	1150
Tyr Lys Thr Val Lys Gly	Ser Arg Val Glu	Trp Leu Val Asn Lys Val
1155	1160	1165
Arg Gly Tyr His Val Leu	Leu Val Ser Glu	Tyr Asn Leu Ala Leu Pro
1170 1175	1180
Arg Arg Asp Val Thr Trp	Leu Ser Pro Leu	Asn Val Thr Gly Ala Asp
1185 1190	1195 1200
Arg Cys Tyr Asp Leu Ser	Leu Gly Leu Pro	Ala Asp Ala Gly Arg Phe
1205	1210	1215
Asp Leu Val Phe Val Asn	Ile His Thr Glu	Phe Arg Ile His His Tyr
1220	1225	1230
Gln Gln Cys Val Asp His	Ala Met Lys Leu	Gln Met Leu Gly Gly Asp
1235	1240	1245
Ala Leu Arg Leu Leu Lys	Pro Gly Gly Ser	Leu Leu Met Arg Ala Tyr
1250 1255	1260
Gly Tyr Ala Asp Lys Ile	Ser Glu Ala Val	Val Ser Ser Leu Ser Arg
1265 1270	1275 1280
Lys Phe Ser Ser Ala Arg	Val Leu Arg Pro	Asp Cys Val Thr Ser Asn
1285	1290	1295
Thr Glu Val Phe Leu Leu	Phe Ser Asn Phe	Asp Asn Gly Lys Arg Pro
1300	1305	1310
Ser Thr Leu His Gln Met	Asn Thr Lys Leu	Ser Ala Val Tyr Ala Gly

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 344/695

202/223

1315 1320 1325

Glu Ala 1330	Met His Thr Ala	Gly Cys Ala Pro Ser	Tyr Arg Val Lys Arg
	1335		1340
Ala Asp	Ile Ala Thr Cys	Thr	Glu Ala Ala Val	Val Asn Ala Ala Asn
1345	1350		1355	1360
Ala Arg	Gly Thr Val Gly 1365	Asp	Gly Val Cys Arg 1370	Ala Val Ala Lys Lys 1375
Trp Pro	Ser Ala Phe Lys 1380	Gly	Glu Ala Thr Pro 1385	Val Gly Thr Ile Lys 1390
Thr Val	Met Cys Gly Ser	Tyr	Pro Val Ile His	Ala Val Ala Pro Asn
1395	1400	1405
Phe Ser	Ala Thr Thr Glu	Ala	Glu Gly Asp Arg	Glu Leu Ala Ala Val
1410	1415	1420
Tyr Arg	Ala Val Ala Ala	Glu	Val Asn Arg Leu	Ser Leu Ser Ser Val
1425	1430		1435	1440
Ala Ile	Pro Leu Leu Ser 1445	Thr	Gly Val Phe Ser 1450	Gly Gly Arg Asp Arg 1455
Leu Gln	Gln Ser Leu Asn 1460	His	Leu Phe Thr Ala 1465	Met Asp Ala Thr Asp 1470
Ala Asp	Val Thr Ile Tyr	Cys	Arg Asp Lys Ser	Trp Glu Lys Lys Ile
1475	1480	1485
Gln Glu	Ala Ile Asp Met	Arg	Thr Ala Val Glu	Leu Leu Asn Asp Asp
1490	1495	1500
Val Glu	Leu Thr Thr Asp	Leu	Val Arg Val Hi s	Pro Asp Ser Ser Leu
1505	1510		1515	1520
Val Gly	Arg Lys Gly Tyr 1525	Ser	Thr Thr Asp Gly 1530	Ser Leu Tyr Ser Tyr 1535
Phe Glu	Gly Thr Lys Phe 1540	Asn	Gln Ala Ala Ile 1545	Asp Met Ala Glu Ile 1550
Leu Thr	Leu Trp Pro Arg	Leu	Gln Glu Ala Asn	Glu Gln Ile Cys Leu

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 345/695

203/223

	1555	1560	1565
Tyr	Ala Leu Gly	Glu Thr Met Asp	Asn Ile Arg Ser Lys Cys Pro Val
1570	1575	1580
Asn	Asp Ser Asp	Ser Ser Thr Pro	Pro Arg Thr Val Pro Cys Leu Cys
1585	1590	1595 1600
Arg	Tyr Ala Met	Thr Ala Glu Arg	Ile Ala Arg Leu Arg Ser His Gln
	1605	1610 1615
Val	Lys Ser Met	Val Val Cys Ser	Ser Phe Pro Leu Pro Lys Tyr His
	1620	1625 1630
Val	Asp Gly Val	Gln Lys Val Lys	Cys Glu Lys Val Leu Leu Phe Asp
	1635	1640	1645
Pro	Thr Val Pro	Ser Val Val Ser	Pro Arg Lys Tyr Ala Ala Ser Thr
1650	1655	1660
Thr	Asp His Ser	Asp Arg Ser Leu	Arg Gly Phe Asp Leu Asp Trp Thr
1665	1670	1675 1680
Thr	Asp Ser Ser	Ser Thr Ala Ser	Asp Thr Met Ser Leu Pro Ser Leu
	1685	1690 1695
Gln	Ser Cys Asp	Ile Asp Ser Ile	Tyr Glu Pro Met Ala Pro Ile Val
	1700	1705 1710
Val	Thr Ala Asp	Val His Pro Glu	Pro Ala Gly Ile Ala Asp Leu Ala
	1715	1720	1725
Ala	Asp Val His	Pro Glu Pro Ala	Asp His Val Asp Leu Glu Asn Pro
1730	1735	1740
Ile	Pro Pro Pro	Arg Pro Lys Arg	Ala Ala Tyr Leu Ala Ser Arg Ala
1745	1750	1755 1760
Ala	Glu Arg Pro	Val Pro Ala Pro	Arg Lys Pro Thr Pro Ala Pro Arg
	1765	1770 1775
Thr	Ala Phe Arg	Asn Lys Leu Pro	Leu Thr Phe Gly Asp Phe Asp Glu
	1780	1785 1790
Hi s	Glu Val Asp	Ala Leu Ala Ser	Gly Ile Thr Phe Gly Asp Phe Asp

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 346/695

204/223

17951800

Asp Val Leu Arg Leu Gly Arg Ala

18101815

Thr Gly Ser Gly His Leu Gln Gln

18251830

Gln Cys Ala Gln Leu Asp Ala Val

1845

Lys Leu Asp Thr Glu Arg Glu Lys

1860

His Pro Ser Glu Ala Asn Lys Ser

18751880

Asn Met Lys Ala Thr Val Val Asp

18901895

Tyr Thr Gly Ala Asp Val Gly Arg

19051910

Pro Arg Pro Val Tyr Ser Pro Thr

1925

Asp Val Ala Ile Ala Ala Cys Asn

1940

Thr Val Ala Ser Tyr Gln Ile Thr

19551960

Met Val Asp Gly Ser Asp Ser Cys

19701975

Ala Lys Leu Arg Cys Tyr Pro Lys

19851990

Val Arg Ser Ala Val Pro Ser Pro

2005

Leu Ala Ala Ala Thr Lys Arg Asn

2020

Leu Pro Thr Met Asp Ser Ala Val

1805

Gly Ala Tyr Ile Phe Ser Ser Asp

1820

Lys Ser Val Arg Gln His Asn Leu

18351840

Glu Glu Glu Lys Met Tyr Pro Pro

18501855

Leu Leu Leu Leu Lys Met Gln Met 18651870

Arg Tyr Gln Ser Arg Lys Val Glu

1885

Arg Leu Thr Ser Gly Ala Arg Leu

1900

Ile Pro Thr Tyr Ala Val Arg Tyr

19151920

Val Ile Glu Arg Phe Ser Ser Pro

19301935

Glu Tyr Leu Ser Arg Asn Tyr Pro 19451950

Asp Glu Tyr Asp Ala Tyr Leu Asp

1965

Leu Asp Arg Ala Thr Phe Cys Pro

1980

His His Ala Tyr His Gln Pro Thr

19952000

Phe Gln Asn Thr Leu Gln Asn Val

20102015

Cys Asn Val Thr Gln Met Arg Glu

20252030

Phe Asn Val Glu Cys Phe Lys Arg

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 347/695

205/223

2035 2040 2045

Tyr Ala Cys Ser Gly Glu Tyr Trp Glu Glu Tyr Ala	Lys	Gln	Pro	Ile
2050	2055	2060
Arg Ile Thr	Thr Glu Asn Ile	Thr Thr Tyr Val Thr	Lys	Leu	Lys	Gly
2065	2070	2075			2080
Pro Lys Ala	Ala Ala Leu Phe	Ala Lys Thr His Asn	Leu	Val	Pro	Leu
	2085	2090		2095
Gln Glu Val	Pro Met Asp Arg	Phe Thr Val Asp Met	Lys	Arg	Asp	Val
2100	2105	2110
Lys Val Thr	Pro Gly Thr Lys	His Thr Glu Glu Arg	Pro	Lys	Val	Gln
2115	2120 2125
Val Ile Gln	Ala Ala Glu Pro	Leu Ala Thr Ala Tyr	Leu	Cys	Gly	Ile
2130	2135	2140
Hi s Arg Gl u	Leu Val Arg Arg	Leu Asn Ala Val Leu	Arg	Pro	Asn	Val
2145	2150	2155			2160
His Thr Leu	Phe Asp Met Ser	Ala Glu Asp Phe Asp	Ala	Ile	Ile	Ala
	2165	2170		2175
Ser His Phe	His Pro Gly Asp	Pro Val Leu Glu Thr	Asp	Ile	Ala	Ser
2180	2185	2190
Phe Asp Lys	Ser Gln Asp Asp	Ser Leu Ala Leu Thr	Gly	Leu	Met	Ile
2195	2200 2205
Leu Glu Asp	Leu Gly Val Asp	Gln Tyr Leu Leu Asp	Leu	Ile	Glu	Ala
2210	2215	2220
Ala Phe Gly	Glu Ile Ser Ser	Cys His Leu Pro Thr	Gly	Thr	Arg	Phe
2225	2230	2235			2240
Lys Phe Gly	Ala Met Met Lys	Ser Gly Met Phe Leu	Thr	Leu	Phe	Ile
	2245	2250		2255
Asn Thr Val	Leu Asn Ile Thr	Ile Ala Ser Arg Val	Leu	Glu	Gln	Arg
2260	2265	2270
Leu Thr Asp	Ser Ala Cys Ala	Ala Phe Ile Gly Asp	Asp Asn	Ile	Val

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 348/695

206/223

2275 2280 2285

His Gly Val 2290	Ile Ser Asp Lys Leu 2295	Met Ala	Glu Arg 2300	Cys Ala	Ser	Trp
Val Asn Met	Glu Val Lys Ile Ile	Asp Ala	Val Met	Gly Glu	Lys	Pro
2305	2310	2315		2320
Pro Tyr Phe	Cys Gly Gly Phe Ile	Val Phe	Asp Ser	Val Thr	Gln	Thr
	2325	2330		2335
Ala Cys Arg	Val Ser Asp Pro Leu	Lys Arg	Leu Phe	Lys Leu	Gly	Lys
2340 ;	2345		2350
Pro Leu Thr	Ala Glu Asp Lys Gln	Asp Glu	Asp Arg	Arg Arg	Ala	Leu
2355	2360		2365
Ser Asp Glu	Val Ser Lys Trp Phe	Arg Thr	Gly Leu	Gly Ala	Glu	Leu
2370	2375		2380
Glu Val Ala	Leu Thr Ser Arg Tyr	Glu Val	Glu Gly	Cys Lys	Ser	Ile
2385	2390	2395		2400
Leu Ile Ala	Met Ala Thr Leu Ala	Arg Asp	Ile Lys	Ala Phe	Lys	Lys
	2405	2410		2415
Leu Arg Gly	Pro Val Ile His Leu	Tyr Gly	Gly Pro	Arg Leu	Val	Arg

2420 2425 2430 <210> 13 <211> 450 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência de aminoácido sintético pJY1302.4 <400>13

Met Gly Asn Gly Gln Gly Arg Asp Trp Lys Met Ala Ile Lys ArgCys

5 1015

Ser Asn Val Ala Val Gly Val Gly Gly Lys Ser Lys Lys Phe Gly Glu

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 349/695

207/223

20

25

30

Gly

Asn

Phe

Arg

Trp

Ala

Ile

Arg

Met

Ala

Asn

Val

Ser

Thr

Gly

Arg

35

40

45

Glu

Pro

Gly

Asp

Ile

Pro

Glu

Thr

Leu

Asp

Gln

Leu

Arg

Leu

Val

Ile

50

55

60

Cys

Asp

Leu

Gln

Glu

Arg

Arg

Glu

Lys

Phe

Gly

Ser

Ser

Lys

Glu

Ile

65

70

75

80

Asp

Met

Ala

Ile

Val

Thr

Leu

Lys

Val

Phe

Ala

Val

Ala

Gly

Leu

Leu

85

90

95

Asn

Met

Thr

Val

Ser

Thr

Ala

Ala

Ala

Ala

Glu

Asn

Met

Tyr

Ser

Gln

100

105

110

Met

Gly

Leu

Asp

Thr

Arg

Pro

Ser

Met

Lys

Glu

Ala

Gly

Gly

Lys

Glu

115

120

125

Glu

Gly

Pro

Pro

Gln

Ala

Tyr

Pro

Ile

Gln

Thr

Val

Asn

Gly

Val

Pro

130

135

140

Gln

Tyr

Val

Ala

Leu

Asp

Pro

Lys

Met

Val

Ser

Ile

Phe

Met

Glu

Lys

145

150

155

160

Al a

Arg

Glu

Gly

Leu

Gly

Gly

Glu

Glu

Val

Gln

Leu

Trp

Phe

Thr

Ala

165

170

175

Phe

Ser

Ala

Asn

Leu

Thr

Pro

Thr

Asp

Met

Ala

Thr

Leu

Ile

Met

Ala

180

185

190

Al a

Pro

Gly

Cys

Ala

Ala

Asp

Lys

Glu

Ile

Leu

Asp

Glu

Ser

Leu

Lys

195

200

205

Gln

Leu

Thr

Ala

Glu

Tyr

Asp

Arg

Thr

Hi s

Pro

Pro

Asp

Ala

Pro

Arg

210

215

220

Pro

Leu

Pro

Tyr

Phe

Thr

Ala

Ala

Glu

Ile

Met

Gly

Ile

Gly

Leu

Thr

225

230

235

240

Gln

Glu

Gln

Gln

Ala

Glu

Ala

Arg

Phe

Ala

Pro

Ala

Arg

Met

Gln

Cys

245

250

255

Arg

Ala

Trp

Tyr

Leu

Glu

Ala

Leu

Gly

Lys

Leu

Ala

Ala

Ile

Lys

Ala

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 350/695

208/223

260

265

270

Lys

Ser

Pro

Arg

Ala

Val

Gln

Leu

Arg

Gln

Gly

Ala

Lys

Glu

Asp

Tyr

275

280

285

Ser

Ser

Phe

Ile

Asp

Arg

Leu

Phe

Ala

Gln

Ile

Asp

Gln

Glu

Gln

Asn

290

295

300

Thr

Ala

Glu

Val

Lys

Leu

Tyr

Leu

Lys

Gln

Ser

Leu

Ser

Ile

Ala

Asn

305

310

315

320

Al a

Asn

Ala

Asp

Cys

Lys

Lys

Ala

Met

Ser

His

Leu

Lys

Pro

Glu

Ser

325

330

335

Thr

Leu

Glu

Glu

Lys

Leu

Arg

Ala

Cys

Gln

Glu

Ile

Gly

Ser

Pro

Gly

340

345

350

Tyr

Lys

Met

Gln

Leu

Leu

Ala

Glu

Ala

Leu

Thr

Lys

Val

Gln

Val

Val

355

360

365

Gln

Ser

Lys

Gly

Ser

Gly

Pro

Val

Cys

Phe

Asn

Cys

Lys

Lys

Pro

Gly

370

375

380

Hi s

Leu

Ala

Arg

Gln

Cys

Arg

Glu

Val

Lys

Lys

Cys

Asn

Lys

Cys

Gly

385

390

395

400

Lys

Pro

Gly

His

Leu

Ala

Ala

Lys

Cys

Trp

Gln

Gly

Asn

Arg

Lys

Asn

405

410

415

Ser

Gly

Asn

Trp

Lys

Ala

Gly

Arg

Ala

Ala

Ala

Pro

Val

Asn

Gln

Met

420

425

430

Gln

Gln

Ala

Val

Met

Pro

Ser

Ala

Pro

Pro

Met

Glu

Glu

Lys

Leu

Leu

435

440

445

Asp Leu

450

<210>	14
<211>	149
<212>	PRT
<213>	Seqüência Artificial

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 351/695

209/223 <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Seqüência de aminoácido sintético pJY1302.4 <400> 14

Leu

Glu

Gly

Gly

Ala

Ser

Cys

Ser

Pro

Ser

Glu

Ser

Asn

Ala

Ala

Ser

1

5

10

15

Ser

Asn

Ala

Ile

Cys

Thr

Ser

Asn

Gly

Gly

Glu

Thr

Ile

Gly

Phe

Ile

20

25

30

Asn

Tyr

Asn

Lys

Val

Gly

Thr

Thr

Thr

Thr

Leu

Glu

Lys

Arg

Pro

Glu

35

40

45

Ile

Leu

Ile

Phe

Val

Asn

Gly

Tyr

Pro

Ile

Lys

Phe

Leu

Leu

Asp

Thr

50

55

60

Gly

Ala

Asp

Ile

Thr

Ile

Leu

Asn

Arg

Arg

Asp

Phe

Gln

Val

Lys

Asn

65

70

75

80

Ser

Ile

Glu

Asn

Gly

Arg

Gln

Asn

Met

Ile

Gly

Val

Gly

Gly

Gly

Lys

85

90

95

Arg

Gly

Thr

Asn

Tyr

Ile

Asn

Val

Hi s

Leu

Glu

Ile

Arg

Asp

Glu

Asn

100

105

110

Tyr

Lys

Thr

Gln

Cys

Ile

Phe

Gly

Asn

Val

Cys

Val

Leu

Glu

Asp

Asn

115

120

125

Ser

Leu

Ile

Gln

Pro

Leu

Leu

Gly

Arg

Asp

Asn

Met

Ile

Lys

Phe

Asn

130

135

140

Ile Arg	Leu Val Met
145
<210>	15
<211>	45
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 352/695

210/223 <400>15 cagatgcttg ggggagatgc ggcacgactg ctaaaacccg gcggc 45

<210>	16
<211>	45
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	16

gccgccgggt tttagcagtc gtgccgcatc tcccccaagc atctg 45

<210>	17
<211>	45
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	17

cagatgcttg ggggagatgc gacacgactg ctaaaacccg gcggc 45

<210>	18
<211>	45
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	18

gccgccgggt tttagcagtc gtgtcgcatc tcccccaagc atctg <210>19 <211>45 <212> DNA <213> Seqüência Artificial

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 353/695

211/223 <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador <400>19 cagatgcttg ggggagatgc gcaacgactg ctaaaacccg gcggc <210>20 <211>45 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador <400>20 gccgccgggt tttagcagtc gttgcgcatc tcccccaagc atctg <210>21 <211>45 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador <400>21 cagatgcttg ggggagatgc gtttcgactg ctaaaacccg gcggc <210>22 <211>45 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador <400>22 gccgccgggt tttagcagtc gaaacgcatc tcccccaagc atctg <210>23 <211>45 sintético sintético sintético sintético

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 354/695

212/223

<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético
<400>	23
cagatgcttg ggggagatgc gagacgactg ctaaaacccg gcggc	45
<210>	24
<211>	45
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético
<400>	24
gccgccgggt tttagcagtc gtctcgcatc tcccccaagc atctg	45
<210>	25
<211>	36
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético
<400>	25
gaaaaacccc catatttctg tgggggattc atagtt		36
<210>	26
<211>	36
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético
<400>	26

aactatgaat cccccacaga aatatggggg tttttc 36

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 355/695

213/223

<210>	27
<211>	34
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético
<400>	27
gacgaataat tggatttata ttttattttg caat		34
<210>	28
<211>	34
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético
<400>	28
attgcaaaat aaaatataaa tccaattatt cgtc		34
<210>	29
<211>	25
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético
<400>	29
gaacgcaatt gctcctgcta ggcct		25
<210>	30
<211>	47
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de Seqüência Artificial:	Iniciador	sintético

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 356/695

214/223 <400> 30 ttctttattc tatacttaaa aagtgaaaat aaatacaaag gttcttg <210>

<211>

<212>

DNA <213>

Seqüência

Arti fici al <220>

<223>

Descrição de Seqüência Artificial:

Iniciador sintético <400>

atggcggatg tgtgacatac acgacgcca <210>

<211>

<212>

DNA <213>

Seqüência

Artificial <220>

<223>

Descrição de Seqüência Artificial:

Iniciador sintético <400>

gcgtacacta gtgccgatat ccaagatgag tgtgtctttg tc <210>

<211>

<212>

DNA <213>

Seqüência

Artificial <220>

<223>

Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético <400>

cgactagtag aaaaactccc ttagccatcc gagtggac

<210>	34
<211>	38
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 357/695

215/223 <220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	34

cgactagtag aaaaactccc ttagccatcc gagtggac 38

<210>	35
<211>	66
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	35

ggaattctga ttttaattaa cctgcagggt ttaaactaat taattgaatt acatccctac 60 gcaaac 66

<210>	36
<211>	104
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	36

ggaattctga ttttaattaa cctgcaggac ctctacggcg gtcctagatt ggtgcgttaa 60 tacacagttt aaactaatta attgaattac atccctacgc aaac 104

<210>	37
<211>	31
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>

Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético

<220>

<221>

CDS

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 358/695

216/223 <222> (11)..(31) <400>37 ggttaattaa atg ggg aat gga cag ggg cga

Met Gly Asn Gly Gln Gly Arg <210>38 <211>7 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial:

<400>38

Met Gly Asn Gly Gln Gly Arg <210>39 <211>34 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial:

<400>39 gggtttaaac ttacattact aacctaatat tgaa <210>40 <211>7 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial:

<400> 40

Phe Asn Ile Arg Leu Val Met

Peptídeo sintético

Iniciador sintético

Peptídeo sintético

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 359/695

217/223

1	5
<210>	41
<211>	39
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	41

aatggatatc ctataaaatt cttattagat acaggagca 39

<210>	42
<211>	72
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>

Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético

<220>

<221>	CDS
<222>	(10)..(72)
<400>	42

agagggtac cac gtc ctg ctg gtg agt gag tac aac ctg gct ttg cct cga 51

cgc gac	His Val Leu Leu Val Ser Glu Tyr Asn Leu Ala Leu Pro Arg 1 5 10 gtc act tgg ttg tca 72
Arg Asp	Val Thr Trp Leu Ser
15	20
<210>	43
<211>	21
<212>	PRT
<213>	Seqüência Artificial

<220>

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 360/695

218/223

<223>	Descrição de	Seqüência Artificial:	Peptídeo sintético
<400>	43
His Val	Leu Leu Val Ser Glu Tyr Asn Leu Ala	Leu Pro Arg Arg Asp
1	5	10	15
Val Thr	Trp Leu Ser
	20
<210>	44
<211>	36
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial
<220>
<223>	Descrição de	Seqüência Artificial:	Iniciador sintético
<400>	44

tcgtaacgac cgatctgagt ggtccgtcgt agatgc36 <210>45 <211>51 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético <220>

<221> CDS <222> (1)..(51) <400>45

gtg

gac

gag

gct

ttc

gct

tgc

cat

ccc ggt

act

ctg

ctg

gcc

cta

att 48

Val

Asp

Glu

Ala

Phe

Ala

Cys

Hi s

Pro Gly

Thr

Leu

Leu

Ala

Leu

Ile

1

5

10

15

gct51

Ala <210>46

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 361/695

219/223

<211>	17
<212>	PRT
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Peptídeo sintético
<400>	46
Val Asp	Glu Ala Phe Ala Cys His Pro Gly Thr Leu Leu Ala Leu Ile
1	5 10 15

Al a

<210>	47
<211>	51
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	47

agcaattagg gccagcagag tacccccatg gcaagcgaaa gcctcgtcca c 51

<210>	48
<211>	21
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	48

taatacacag aattctgatt g 21

<210>	49
<211>	34
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 362/695

220/223

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	49

cagactagta gaaaaatttt tttttttttt tttt 34

<210>	50
<211>	31
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	50

aaaaagtgaa aataaataca aaggttcttg a 31

<210>	51
<211>	31
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	51

aaaaagtgca aataaataca aaggttcttg a 31

<210>	52
<211>	50
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	52

aacccgggtt ctttattcta tacttaaaaa gtgcaaataa atacaaaggt 50

<210>	53
<211>	42
<212>	DNA

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 363/695

221/223 <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético <400>53 gcgtacacta gtgccgatat ccaagatgag tgtgtctttg tc42 <210>54 <211>34 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético <400>54 tcccccggga gaaaaattac attactaacc taat34 <210>55 <211>53 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético <400>55 gggatatccg ttaagtttgt atcgtaatgg ggaatggaca ggggcgagat tgg 53 <210>56 <211>27 <212> DNA <213> Seqüência Artificial <220>

<223> Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético <400>56 taggatatcc atttacaaat ataagta27 <210>57

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 364/695

222/223

<211>	61
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	57

cgtcgcgata tccgttaagt ttgtatcgta aatggggaat ggacaggggc gagattggaa 60 a 61

<210>	58
<211>	47
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	58

gcggtccaga aaaattacat tactaaccta atattgaatt taatcat 47

<210>	59
<211>	25
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>	Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético
<400>	59

gaggaaggcc ctccacaggc atatc 25

<210>	60
<211>	24
<212>	DNA
<213>	Seqüência Artificial

<220>

<223>

Descrição de Seqüência Artificial: Iniciador sintético

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 365/695

223/223 <220>

<221>

<222>

<400> ttc aat Phe Asn

CDS (1)..(21) att agg tta gta atg taa 24

Ile Arg Leu Val Met

Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 366/695

Claims (18)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Vetor de poxvírus recombinante caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de ácido nucléico operavelmente ligada a um promotor poxviral que direciona a transcrição da sequência de ácido nucléico para gerar um replicon viral transcrito capaz de amplificação como RNA, em que o replicon viral transcrito compreende um promotor viral operavelmente ligado a uma sequência heteróloga de interesse, e codifica uma polimerase específica para replicação do replicon viral, em que a polimerase é nsP2 alfaviral mutada:

   - a qual é mutada na leucina 713, em que a leucina 713 é trocada para um aminoácido selecionado a partir do grupo que consiste em alanina, arginina, glutamina, treonina e fenilalanina, e em que a sequência que codifica a nsP2 alfaviral mutada é conforme estabelecida nos nucleotídeos 530 a 7822 da SEQ ID NO: 2, em que os nucleotídeos nas posições 4277 a 4279, que codificam para o aminoácido da posição 713, podem ser qualquer tríade de nucleotídeos que codifique para alanina (tal como, GCT, GCC, GCA, GCG), arginina (tal como, AGA, AGG), glutamina (tal como, GAA, GAG), treonina (tal como, ACT, ACC, ACA, ACG) ou fenilalanina (tal como, TTT, TTC); ou

   - a qual é mutada na arginina 650 e na serina 259, em que arginina 650 é trocada por aspartato e serina 259 é trocada por prolina, em que a sequência que codifica a nsP2 alfaviral mutada é conforme estabelecida nos nucleotídeos 1586 a 8881 da SEQ ID NO: 5, em que os nucleotídeos nas posições 5144 a 5146 que codificam para o aminoácido da

   Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 591/695
2. 2/6 posição 650, podem ser qualquer tríade de nucleotídeos que codifique para aspartato (tal como, GAT, GAC); e em que os nucleotídeos nas posições 3971 a 3973 que codificam para o aminoácido da posição 259, podem ser qualquer códon que codifique para prolina (tal como, CCT, CCC, CCA, CCG).

   2. Vetor de poxvírus de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o promotor poxviral é promotor poxviral H6 ou um promotor poxviral H6 mutado capaz de reduzir o nível de expressão da sequência heteróloga comparado aos níveis de expressão da sequência heteróloga sob um promotor do tipo selvagem.
3. 3. Vetor de poxvírus de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o promotor poxviral H6 mutado possui uma mutação pontual.
4. 4. Vetor de poxvírus de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o promotor poxviral H6 mutado possui a sequência conforme definida na SEQ ID NO: 61.
5. 5. Vetor de poxvírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a polimerase nsP2 alfaviral é mutada na leucina 713, em que a leucina 713 é trocada para alanina.
6. 6. Vetor de poxvírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o poxvírus é selecionado dentre vírus da Vacínia Ankara Modificado, NYVAC, canaripox, ALVAC, fow1pox ou TROVAC.
7. 7. Vetor de poxvírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a sequência heteróloga de interesse codifica um antígeno, um fragmento antigênico de uma proteína, um agente terapêutico,

   Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 592/695

   3/6 uma citocina, uma toxina, um imunomodulador, um RNA antisentido, um RNA catalítico, um pequeno RNA de interferência, uma proteína, um peptídeo, um anticorpo, um fragmento de ligação de antígeno de um anticorpo, ou um adjuvante.
8. 8. Vetor de poxvírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a sequência heteróloga de interesse codifica FIV gag-pro e é conforme estabelecida nos nucleotídeos 8910 a 10259 da SEQ ID NO: 5.
9. 9. Método de produzir um vetor de poxvírus recombinante caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

   a. linearizar um plasmídeo doador com uma endonuclease de restrição, em que o plasmídeo doador compreende sítios de clivagem de endonuclease de restrição ou um sitio de clonagem múltipla; e

   b. ligar pelo menos uma sequência de ácido nucléico compreendendo

   i. um promotor operativamente ligado a molécula de ácido nucléico que direciona a transcrição da sequência de ácido nucléico para gerar um replicon viral capaz de amplificação como RNA, em que o replicon viral transcrito compreende pelo menos um promotor viral operavelmente ligado a uma sequência heteróloga de interesse e uma polimerase específica para replicação do replicon viral ii. uma sequência promotora poxviral e, iii. inserção de sequências flanqueando (i) e (ii) que têm sítios de clivagem de endonuclease de restrição

   Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 593/695

   4/6 complementares ao plasmídeo doador na sequência de ácido nucléico, dessa forma produzindo o vetor de poxvírus recombinante, em que a polimerase é nsP2 alfaviral é mutada:

   - a qual é mutada na leucina 713, em que a leucina 713 é trocada para um aminoácido selecionado a partir do grupo que consiste em alanina, arginina, glutamina, treonina e fenilalanina, e em que a sequência que codifica a nsP2 alfaviral mutada é conforme estabelecida nos nucleotídeos 530 a 7822 da SEQ ID NO: 2, em que os nucleotídeos nas posições 4277 a 4279, que codificam para o aminoácido da posição 713, podem ser qualquer tríade de nucleotídeos que codifique para alanina (tal como, GCT, GCC, GCA, GCG), arginina (tal como, AGA, AGG), glutamina (tal como, GAA, GAG), treonina (tal como, ACT, ACC, ACA, ACG) ou fenilalanina (tal como, TTT, TTC); ou

   - a qual é mutada na arginina 650 e na serina 259, em que arginina 650 é trocada por aspartato e serina 259 é trocada por prolina, em que a sequência que codifica a nsP2 alfaviral mutada é conforme estabelecida nos nucleotídeos 1586 a 8881 da SEQ ID NO: 5, em que os nucleotídeos nas posições 5144 a 5146 que codificam para o aminoácido da posição 650, podem ser qualquer tríade de nucleotídeos que codifique para aspartato (tal como, GAT, GAC); e em que os nucleotídeos nas posições 3971 a 3973 que codificam para o aminoácido da posição 259, podem ser qualquer códon que codifique para prolina (tal como, CCT, CCC, CCA, CCG).
10. 10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a sequência promotora poxviral

    Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 594/695

    5/6 é promotor poxviral H6 ou um promotor poxviral H6 mutado capaz de reduzir o nível de expressão da sequência heteróloga comparado aos níveis de expressão da sequência heteróloga sob um promotor do tipo selvagem.
11. 11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o promotor poxviral H6 mutado possui uma mutação pontual.
12. 12. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o promotor poxviral H6 mutado possui a sequência conforme definida na SEQ ID NO: 61.
13. 13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 12, caracterizado pelo fato de que a polimerase nsP2 alfaviral é mutada na leucina 713, em que a leucina 713 é trocada para alanina.
14. 14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 13, caracterizado pelo fato de que o poxvírus é selecionado dentre vírus da Vacínia Ankara Modificado, NYVAC, canaripox, ALVAC, fow1pox ou TROVAC.
15. 15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 14, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente as etapas de:

    c. introduzir in vitro o vetor em uma célula permissiva para replicação do vetor; e

    d. isolar o vetor da célula.
16. 16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 15, caracterizado pelo fato de que a sequência heteróloga de interesse codifica um antígeno, um fragmento antigênico de uma proteína, um agente terapêutico, uma citocina, uma toxina, um imunomodulador, um RNA anti

    Petição 870190048955, de 24/05/2019, pág. 595/695

    6/6 sentido, um RNA catalítico, um pequeno RNA de interferência, uma proteína, um peptídeo, um anticorpo, uni fragmento de ligação de antígeno de um anticorpo, ou um adjuvante.
17. 17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 16, caracterizado pelo fato de que o vetor compreende adicionalmente um gene repórter.

    18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o gene repórter é selecionado a partir do grupo que consiste em gene de resistênc ia a neomicina , gene de resistência a ampicilina, lacZ (que codifica β-galactosidas e), gene que codifica luciferase, e gene que codifica proteína verde fluorescente (GFP). 19. Método, de acordo com qualquer uma das

    reivindicações 15 a 18, caracterizado pelo fato de que a célula permissiva para crescimento do vetor é um fibroblasto embrionário de galinha.
18. 20. Vetor de poxvírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que é para ser utilizado para introduzir e expressa um sequência heteróloga de interesse em um animal.