BR122024010999A2 - Uso de uma composição e composição para tratar transtornos intestinais - Google Patents

Abstract

Patente de Invenção: "USO DE UMA COMPOSIÇÃO E COMPOSIÇÃO PARA TRATAR TRANSTORNOS INTESTINAIS". A presente invenção refere-se de uma forma geral à administração de compostos para promover a cicatrização da mucosa em mamíferos com sua necessidade incluindo, mas não limitados a seres humanos. Os compostos podem incluir bifidobactérias e oligossacarídeos do leite de mamífero.

Description

CAMPO DE INVENÇÃO

[0001] As modalidades aqui descritas referem-se de uma forma geral aos cuidados de saúde e, mais particularmente, à administração de compostos para promover a cicatrização da mucosa em mamíferos com sua necessidade, incluindo, mas não limitado a seres humanos. ANTECEDENTES

[0002] O microbioma intestinal é a comunidade de microrganismos que vivem no trato gastrointestinal, a maioria dos quais é encontrada no intestino grosso ou cólon. Em um indivíduo saudável, a maioria dos nutrientes alimentares consumidos é absorvida pelo organismo antes de chegar ao cólon. Muitos alimentos, no entanto, contêm carboidratos indigeríveis (isto é fibra dietética) que permanecem intactos e não são absorvidos durante o trânsito através do intestino até o cólon. O microbioma colônico compreende certas espécies bacterianas que são capazes de consumir parcialmente essas fibras e utilizar os açúcares constituintes (monômeros livres de açúcar ou FSMs liberados pela digestão microbiana das fibras) para energia e metabolismo, assim como um maior número de espécies bacterianas que simplesmente prospera nos FSMs produzidos por esses degradantes de fibra. Os métodos para medir a fibra dietética em vários alimentos são bem conhecidos da pessoa com habilidade prática na técnica.

[0003] Em espécies de mamífero, o microbioma intestinal do lactente é bastante diferente do microbioma adulto, em que o microbioma intestinal do adulto geralmente contém uma grande diversidade de organismos, todos presentes em uma baixa porcentagem da população total. O microbioma do lactente humano, por outro lado, pode ser composto quase exclusivamente (até 80 %) de uma única espécie. A dieta impulsiona a abundância, complexidade e diversidade de espécies microbianas no microbioma. A abundância de diferentes espécies no microbioma colônico é o resultado da diversidade da fibra na dieta de um adulto típico, enquanto que o lactente possui apenas uma única fonte de fibra dietética - oligossacarídeos do leite de mamífero (MMOs) - e, portanto, o microbioma do bebê resultante pode ser dominado pelos organismos que preferencialmente utilizam esse tipo de fibra dietética.

[0004] A transição do microbioma simples e não diversificado do lactente para um microbioma complexo e diversificado de um adulto reflete a transição do mamífero de uma única fonte de nutrientes de uma fibra complexa (por exemplo, oligossacarídeos do leite de mamíferos - MMOs) para fontes de fibras dietéticas mais diversas. O pós-desmame através do microbioma de mamíferos adultos contém um número mais diversificado de espécies microbianas capazes de competir nos nichos alimentares variáveis que são gerados pela diversidade das fibras na dieta complexa de um adulto em relação àquela do lactente.

[0005] Os bebês mamíferos pré-desmamados possuem apenas uma fonte de nutrição: leite de mamífero. Os componentes no leite de mamífero, isto é, os oligossacarídeos do leite de mamíferos, foram selecionados, ao longo da evolução, para um pequeno número de organismos que são particularmente adequados para o ambiente intestinal, crescem seletivamente no MMO e conferem benefícios ao hospedeiro. No caso da criança amamentada, a parte indigerível do leite é efetivamente decomposta e consumida por esses organismos selecionados. Como resultado, esses organismos são capazes de superar e aumentar a sua abundância em comparação com outras espécies ambientais, e isso tem o efeito geral de reduzir a complexidade do microbioma.

[0006] Por exemplo, os HMOs representam cerca de 15 % do peso seco total (e energia) e são a terceira família mais abundante de nutrientes no leite humano. Estes oligossacarídeos compreendem resíduos de açúcar em uma forma complexa e ramificada que não é utilizável diretamente como uma fonte de energia para o bebé ou um adulto, ou para a maioria dos microrganismos no intestino daquele bebê ou adulto. Alguns microrganismos distintos, tais como Bifidobacterium longum subsp. infantis (B. infantis) e Bifodobacterium breve, possuem a capacidade única de consumir MMOs específicos, tais como aqueles encontrados no leite humano ou bovino (ver, por exemplo, a Patente U.S. No. 8.198.872 e Pedidos de Patente U.S. Nos. 13/809.556 e 62/307.425, cujas divulgações são aqui incorporadas por referência na sua totalidade). Quando a B. infantis entra em contato com certos oligossacarídeos do leite de mamífero, vários genes são especificamente induzidos, os quais são responsáveis pela absorção e desconstrução interna desses oligossacarídeos do leite de mamífero, e os componentes de açúcar individuais são então catabolizados para fornecer energia para o crescimento e reprodução desse organismo (Sela et al, 2008).

[0007] Se as bactérias apropriadas não estiverem presentes no organismo do mamífero, os carboidratos indigeríveis, por exemplo, do leite de mamífero se tornam suscetíveis à hidrólise não específica, liberando FSMs capazes de promover o crescimento de patógenos oportunistas ou altamente destrutivos que não teriam florescidos de outra forma, ou são de outra maneira excretados do corpo nas fezes. A consequência de um microbioma disbiótico é a distorção em relação à infecção, inflamação, dano intestinal e patogênese.

[0008] O ensino convencional com relação ao microbioma de mamífero é que a complexidade fornece estabilidade. Para ser capaz de efetivamente consumir a complexa dieta não infantil, a manutenção de uma diversidade de microrganismos no microbioma é considerada a chave para promover a saúde intestinal. Lozupone, Nature, vol. 489, pp. 220-230 (2012). Os inventores descobriram que este não é necessariamente o caso e que o microbioma mais simples pode ser de grande benefício para a estabilização e recuperação do intestino danificado pela inflamação e/ou agitação.

SUMÁRIO

[0009] Os inventores descobriram que a cicatrização da mucosa no intestino disbiótico pode ser promovida por microrganismos probióticos que direciona o microbioma intestinal em direção a um estado infantil, que é simples, menos diversificado e menos pró- inflamatório que um microbioma intestinal adulto particularmente quando inflamado por doença ou disbiose. Os inventores descobriram também que o uso de microrganismos probióticos para os quais os MMOs servem como uma fonte de energia seletiva (fonte de carbono) é particularmente benéfico para a cicatrização da mucosa. Os mamíferos disbióticos com necessidade de cicatrização da mucosa incluem seres humanos que apresentam condições tais como, mas não limitadas a estas, Síndrome do Intestino Irritável (IBS), Doença de Crohn (CD), Colite Ulcerativa (UC) (coletivamente Doença do Intestino Irritável ou IBD), Síndrome do intestino curto, cólica, diarreia geral, crescimento excessivo de certas bactérias patogênicas tais como Clostridium difficile, ou qualquer outra condição (tal como o uso extensivo de antibióticos), onde o intestino é se torna suscetível à infecção por patógenos, tais como, por exemplo, Escherichia, Clostridium, Shigella, Campylobacter e Salmonella.

[0010] Esta invenção fornece métodos de tratamento da disbiose gastrointestinal através de abastecer um paciente com uma composição compreendendo (i) um carboidrato complexo de uma fonte de leite de mamífero e (ii) bifidobactérias que internalizam o MMO antes da sua hidrólise; tipicamente a composição é administrada durante um período de tempo (por exemplo, durante pelo menos 5 dias). Embora os microrganismos e oligossacarídeos sejam componentes normais da nutrição infantil, os métodos desta invenção são direcionados a outros indivíduos além dos bebês (isto é, além dos 6 meses de vida); portanto, as composições desta invenção são formuladas para indivíduos mais maduros (e tipicamente maiores) e para compatibilidade com dietas mais complexas. A disbiose pode ser o resultado da síndrome do intestino irritável, doença de Crohn, colite ulcerativa, enterocolite necrosante, supercrescimento bacteriano, diarreia bacteriana induzida, tratamento com antibióticos, transtornos alimentares, obesidade ou baixa diversidade na ingestão alimentar. O Bifidobacterium é preferivelmente selecionado de B. longum, B. pseudocatanulatum, B. adolescentis, B. animalis (por exemplo, B. animalis subsp. animalis, B. animalis subsp. lactis), B. longum subsp. longum, B. pseudolongum, e B. breve, e mais preferivelmente, a B. longum é B. longum subs. infantis. As fontes de leite de mamífero podem ser humanas, caprinas, suínas, ovinas, equinas ou bovinas e, de preferência, a fonte bovina é do colostro bovino. O MMO pode ser de soro de leite, soro de leite materno, soro de leite em pó, permeado de soro de leite e/ou o oligossacarídeo do leite de mamífero pode ser fucosilado, sialilado ou ser seus derivados. Em particular, o MMO pode compreender 2'-fucosilactose, 3'-fucosilactose, difucosilactose, lacto- N-fucosilpentose I, lacto-N-fucosilpentose II, lacto-N-fucosilpentose III, lacto-N-fucosilpentose V, 3'-sialilactose, 6'-sialilactose, 3'-sialil-3- fucosilactose, sialilacto-N-tetraose, 3'-sialilactoseamina e 6'- sialilactosamina, produzido sinteticamente e purificado ou isolado de fontes naturais ou microrganismos recombinantes. O Bifidobacterium é tipicamente fornecido em uma dose diária de 10 milhões a 1 trilhão de cfu, preferivelmente de 10 a 100 bilhões de cfu, e mais preferivelmente de 4 a 50 bilhões de cfu. O MMO é fornecido em uma dose diária de 1 a 60 g, preferivelmente de 2 a 40 g.

[0011] Algumas modalidades da presente invenção incluem composições compreendendo um MMO e um microrganismo em que o MMO induz uma mudança no microrganismo de tal modo que o MMO então se torna uma fonte de energia para o organismo, e quando ingerido por um mamífero, o microrganismo induzido ou ativado fornece um benefício ao intestino daquele mamífero. As modalidades adicionais envolvem a manutenção do microrganismo induzido no intestino do mamífero através da manutenção do fornecimento dietético de MMOs ou outros glicanos que são seletivos para esse microrganismo. Uma outra modalidade envolve a depuração subsequente do microrganismo a partir do intestino pela cessação do fornecimento do MMO ao mamífero.

[0012] Em um método desta invenção, o MMO e as bifidobactérias são fornecidos em uma forma seca que também pode estar envolvida em um material que fornece proteção entérica. Em outro método, o MMO e as bifidobactérias são encapsulados e a cápsula pode ainda compreender um revestimento entérico tal como um revestimento que não é interrompido pela passagem através do estômago. Em outro método, o MMO é fornecido como uma solução e as bifidobactérias são fornecidas como um pó, comprimido ou cápsula com revestimento entérico.

[0013] Em mais outro modo, o método desta invenção compreende ainda administrar Lactobacillus ou Pediococcus ao mesmo tempo que a composição. O Lactobacillus pode ser selecionado de L. plantarum, L. casei, L. antri, l. brevis, L. coleohominis, L. fermentum, L. gasseri, L. johnsonii, L. pentosus, L. sakei, L. salivarius, L. rhamnosus (por exemplo, LGG), L. acidophilus, L. curvatus, L. mucosae, L. crispatus, e/ou L. reuteri. De preferência, o Lactobacillus é L. reuteri. O Pediococcus pode ser selecionado de P. acidilactici, P. stilesii, P. argentinicus, P. claussenii e/ou P. pentosaceus. O Lactobacillus ou o Pediococcus pode ser fornecido em uma dose diária de 10 milhões a 1 trilhão de cfu, preferivelmente o Lactobacillus e o Pediococcus são fornecidos em uma dose diária de 5 bilhões a 50 bilhões de cfu.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0014] A FIGURA 1: Gráfico que mostra a alteração de base 10 log nos níveis de B. infantis por dia durante a dieta de cicatrização da mucosa incluindo BMO, GOS e B. infantis. Os dados são relatados como CFU B. Infantil por μg DNA dividido por CFU total de bactérias por μg DNA.

[0015] A FIGURA 2: Gráfico que mostra o ganho de peso total em 28 dias para leitões recebendo antibióticos padrão ao nascimento, nenhum antibiótico ou a preparação de cicatrização da mucosa descrita no pedido.

DESCRIÇÃO DETALHADA Desenvolvimento do Microbioma Neonatal

[0016] Certas bifidobactérias, tais como B. longum subsp. infantis, possuem certos genes individualmente ou em aglomerados de genes que são dedicados à internalização e desconstrução de HMOs (Sela and Mills, 2010, Trends in Microbiol., 18:298-307). Quando tais bactérias interagem com MMOs, como aquelas encontradas no leite de mamíferos, estes genes que transportam e catabolizam oligossacarídeos fucosilados e/ou sialilados, são supra-regulados (Kim, et al., 2013, PLoS ONE, 8(2): e 57535; Garrido, et al., 2015, Nature Scientific Reports). Os inventores descobriram recentemente que certas bifidobactérias incluindo, mas não limitado a B. infantis, podem ser “ativadas” pela sua interação com certos MMOs (Publicação de Patente Internacional No. WO 2016/065324, aqui incorporada por referência). A B. infantis ativada é aqui definida como o estado das células, como medido pela supra-regulação positiva ou infra-regulação de certos genes incluindo, mas não limitados a estes, proteínas de ligação a oligossacarídeos, permeados e enzimas responsáveis pela absorção e desconstrução interna do MMO. Na forma ativada, a B. infantis se torna o principal consumidor de todos os MMOs e tem se mostrado aumentar sua proporção relativa na microbiota intestinal de humanos infantis amamentados para níveis significativamente mais elevados do que seus níveis naturais e tão altos quanto 70 % da população microbiana total do cólon distal. Quando B. infantis está presente no intestino de um bebê, e que o bebê também é abastecido com leite materno como uma fonte primária ou única de nutrição, a população de B. infantis pode aumentar para níveis tão elevados quanto 90 % da população bacteriana total do intestino como medida pela quantificação microbiana das fezes. Quando presentes nessa situação, muitos outros genes também são supra-regulados, incluindo aqueles para a produção de vários outros metabólitos.

[0017] Quando ativada, a B. infantis é conhecida de se liga fortemente à mucosa intestinal do bebê e facilita o desenvolvimento do intestino do bebê (Underwood, et al., 2015, Pediatr. Res., 77:229-235). A proliferação de B. infantis ativada no intestino de um recém-nascido, acionada e exclusivamente ativada pelos MMOs fornecidos no leite materno, é de benefício significativo para a saúde e a sobrevivência a longo prazo desse bebê. B. infantis está associada com os benefícios significativos para um recém-nascido que incluem, mas não são limitados a estes, uma maior afinidade de ligação à mucosa intestinal, maior colonização do trato GI, impedindo assim o crescimento de outros clados bacterianos, maior consumo de MMOs e uma maior estimulação da resposta imune (Lewis, et al., 2015, Microbiome, 3:13; Huda, et al., 2014, Pediatrics, 134:2 e362-e372).

[0018] Assim que administrada com uma quantidade suficiente de MMOs como uma fonte dietética, a B. infantis ativada permanecerá no intestino de um mamífero em altas concentrações e ativada, contanto que a fonte alimentar de MMOs seja continuamente fornecida ao mamífero. Os inventores descobriram que uma vez que a fonte dos MMOs é retirada da dieta (por exemplo, no desmame), a B. infantis não é mais ativada, e ela não consegue mais colonizar ou competir com sucesso com outra microbiota intestinal por nutrientes no intestino, e sua população diminui rapidamente para menos de 5 % do microbioma total. A B. infantis geralmente não é encontrada naturalmente no intestino de um bebê desmamado, criança ou adulto em níveis superiores a 1 %.

Nutrientes de Oligossacarídeo do Leite de Mamífero

[0019] Para esta invenção, os MMOs são tipicamente obtidos de equivalentes idênticos ou funcionais daqueles oligossacarídeos em leites de mamífero incluindo, mas não limitados a estes, leite humano, caprino, bovino, equino ou ovino. O termo “oligossacarídeo do leite de mamífero” (MMO), como aqui utilizado, refere-se àqueles glicanos indigestos, às vezes referidos como “fibra dietética”, ou aos polímeros de carboidrato que não são hidrolisados pelas enzimas hospedeiras endógenas no trato digestivo e permanecem geralmente não absorvidos no lúmen intestinal (por exemplo, o intestino delgado) do mamífero. Embora “fibra dietética” geralmente se refira a polissacarídeos vegetais indigestos com grau de polimerização (D.P.) de 20 ou mais resíduos de carboidrato, o MMO inclui oligossacarídeos de cadeia ramificada e oligossacarídeos entre DP-3 e DP-20. Os oligossacarídeos podem estar livres no leite ou ligados a proteínas ou lipídeos e são também referidos como glicanos. Os oligossacarídeos que possuem a estrutura química dos oligossacarídeos indigeríveis encontrados em qualquer leite de mamífero são designados por “MMO” ou “fibra láctea” neste artigo, se ou não forem realmente obtidos a partir do leite de mamífero.

[0020] Nas modalidades alternativas da presente invenção, o MMO (por exemplo, oligossacarídeos de leite bovino (BMO) ou oligossacarídeos de leite humano (HMO)) pode ser suplementado com oligossacarídeos sinteticamente produzidos incluindo fucosilactose (SPF) e/ou sialilactose (SPS) ou estruturas mais complicadas tais como, mas não limitadas a estas, 2'-fucosilactose, 3-fucosilactose, difucosilactose, lacto-N-fucosilpentaose I, lacto-N-fucosilpentaose II, lacto-N-fucosilpentaose III, lacto-N-fucosilpentaose V, 3'-sialilactose, 6'-sialilactose, 3'-sialil-3-fucosilactose, sialilacto-N-tetraose, N- acetilgalactosamina e 6'-sialilactosamina, que foram sinteticamente produzidos e podem ser purificados a pelo menos 50 % de pureza antes da adição aos MMOs. A definição de oligossacarídeos sinteticamente produzidos nesta invenção inclui aqueles oligossacarídeos produzidos em organismos geneticamente modificados, assim como através de processos quimiossintéticos que são de outra maneira idênticos aos MMOs, assim como galactooligossacarídeos (GOS) que são enriquecidos em polímeros DP-4 e DP-5l como descritos na USP 8.425.930 (aqui incorporada por referência na sua totalidade), uma vez que estas estruturas também fornecem crescimento diferencial de B. infantis. Em uma modalidade preferida, os derivados produzidos sinteticamente podem ser utilizados isoladamente ou adicionados ao MMO de origem láctea e perfazer pelo menos 5 % a pelo menos 80 % do peso seco da composição. Em algumas modalidades da presente invenção, a razão de massa de MMO: SPF ou MMO:SPS de 20:1 a 1:5, em uma modalidade preferida, a razão de massa de MMO:SPF ou MMO:SPS de 10:1 a 1:2, e em uma modalidade mais preferida, a razão de massa de MMO:SPF ou MMO:SPS é de 5:1 a 1:1. Os alvos de relação também podem ser aqueles do leite humano em que se inicia com composições dominantes de Sialilactose tais como o leite bovino, e se adiciona uma ou mais 2'-fucosilactose purificada, 3-fucosilactose, difucosilactose, lacto-N-fucosilpentaose I, lacto-N-fucosilpentaose II, lacto-N- fucosilpentaose III, lacto-N-fucosilpentaose V, lacto-N-tetrose e lactose-N-neotetrose.

Afetando a Mucosa Intestinal além do Estágio Neonatal

[0021] A presente invenção pode ser utilizada para tratar um paciente mamífero infantil ou não infantil (além de 6 meses de idade), onde o paciente possui um desconforto gastrointestinal provocado por níveis elevados de bactérias patogênicas (disbiose) tais como, mas não limitadas a estas, Listeria, Chlamydia, Escherichia, Helicobacter, Shigella, Salmonella, Yersinia, Clostridium, Campylobacter, e outros membros das Proteobactérias que podem danificar o epitélio intestinal e a mucosa. Tais disbioses incluem, mas não são limitadas a estas, síndrome do intestino irritável (IBS), doença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC); (coletivamente IBD) Enterocolite necrosante (NEC), crescimento bacteriano (BO), diarreia bacteriana induzida (BID), doença celíaca (CEL) e tratamento com antibióticos (AT). Em algumas modalidades da presente invenção, a disbiose pode ser definida por um microbioma menos complexo e/ou menos abundante do que o normal, que pode ser devido a causas incluindo, mas não limitadas a estas, tratamentos prolongados com antibiótico, diversidade dietética rigorosa e distúrbios alimentares, tais como, mas não limitados a bulimia nervosa, anorexia nervosa e transtorno da compulsão alimentar periódica.

[0022] Nesta invenção, o tratamento do sofrimento gastrointestinal é suprido de uma dose oral de bactérias tais como, mas não limitado a bifidobactérias, e MMOs incluindo, mas não limitado a oligossacarídeos de leite de uma fonte de mamífero, MMOs de outras fontes biológicas ou MMOs química ou biologicamente sintetizados que são o equivalente funcional daqueles encontrados em fontes de leite de mamífero, e polímeros de GOS enriquecidos em DP-4 e DP-5.

[0023] Em algumas modalidades, qualquer uma das composições aqui descritas pode ser fornecida a um mamífero não amamentando. O mamífero que não amamenta pode ser um ser humano, assim como outras espécies domesticadas de mamífero tais como, mas não limitadas a estas, um mamífero de produção relevante na agricultura (por exemplo, vaca, porco, coelho, cabra, búfalo e ovelha), um animal de companhia mamífero (por exemplo, gato, cachorro, coelho e cavalo), mamíferos de laboratório (por exemplo, ratos e camundongos) e mamíferos performáticos (por exemplo, um cavalo de raça puro sangue, camelo e cão de trabalho).

[0024] Em algumas modalidades, uma composição compreendendo um Bifidobacterium e um MMO é concedida. O Bifidobacterium pode ser B. longum (por exemplo, B. longum subsp. infantis, B. longum subsp. longum), B. breve, B. bifidum, B. animalis (por exemplo, B. animalis subsp lactis, B. animalis subsp animalis), B. pseudocatenulatum, B. adolescentis, B. catenulatum, B. pseudolongum, ou qualquer combinação destes. Em algumas modalidades, a composição fornece uma cicatrização da mucosa a um mamífero mediante a atuação como um anti-inflamatório para suavizar a inflamação intestinal provocada pela disbiose ou outras doenças e também prevenção do crescimento e, desse modo, removendo as bactérias indesejadas ou de crescimento excessivo. A composição, quando fornecida a um mamífero, pode levar em conta a colonização pelas bifidobactérias e o deslocamento de outras bactérias. Quando a composição é administrada e, opcionalmente, combinada com uma dieta ajustada, o microbioma pode ter números reduzidos de espécies não bifidobactérias em comparação com um microbioma daquele não sendo administrado na composição. Em uma modalidade, a administração da composição resulta em um “microbioma simples” devido ao aumento da colonização proporcional pelas bifidobactérias.

[0025] Um microbioma simples pode ser descrito como a presença de mais de 106 cfu/g de fezes de um único gênero de bactérias (por exemplo, Bifidobacterium), mais particularmente, de uma única espécie ou cepa de bactérias (por exemplo, B. longum subsp. infantis [B. infantis]). Isto pode refletir-se, por exemplo, em até 80 % do microbioma sendo dominado pelo gênero bacteriano ou, mais particularmente, pela subespécie única de uma bactéria, tal como B. infantis, em um lactente humano amamentando. Um microbioma simples também pode ser descrito como a presença de mais do que 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 % ou 90 % de um único gênero de bactérias (por exemplo, Bifidobacterium), mais particularmente, de uma única subespécie como uma porcentagem das células bacterianas totais (por exemplo, B. longum subsp. infantis [B. infantis]) em animais, ou em outros grupos de pacientes.

[0026] Em uma modalidade preferida, as bifidobactérias são selecionadas de B. longum, B. breve, B. bifidum, B. animalis subsp lactis, B. animalis subsp animalis, B. pseudocatenulatum, B. catenulatum, ou qualquer combinação destes. Em uma modalidade mais preferida, as bifidobactérias são selecionadas de um grupo de bifidobactérias que internalizam os oligossacarídeos do leite de mamífero antes da sua hidrólise tais como, mas não limitado a estas, B. longum, B. breve e B. pseudocatentulatum. Em uma modalidade particularmente preferida da invenção, as bifidobactérias são B. longum subespécie infantis.

[0027] As modalidades adicionais envolvem a alimentação de um mamífero de qualquer idade com necessidade de desenvolvimento ou cicatrização da mucosa com uma composição compreendendo bifidobactérias (por exemplo, bifidobactérias ativadas), e uma composição de MMO. Uma tal composição pode ser fornecidas em um nível de dose de 10 milhões a 1 trilhão de cfu/dia de bifidobactérias, e de 1 a 60 g/dia de composição de MMO durante um período de 1 a 60 dias. Um mamífero (por exemplo, ser humano) com necessidade de cicatrização da mucosa incluiria, mas não se limitaria a estes, indivíduos com sinais ou sintomas de NEC, IBS, IBD, Doença de Crohn, intestino solto, doenças auto-inflamatórias, autismo, obesidade, asma, alergias alimentares, distúrbios alimentares ou crescimento excessivo bacteriano patogênico, assim como indivíduos que tiveram um curso de terapia com antibióticos e estão repovoando o seu trato GI.

[0028] Em outras modalidades da presente invenção, o tratamento do transtorno gastrointestinal é fornecido por uma dose oral de bifidobactérias descritas acima que podem internalizar e consumir MMO, tais como HMO ou BMO, junto com bactérias comensais que podem consumir monômeros de açúcar livre, onde tais bactérias comensais são de preferência espécies Lactobacillus e/ou Pediococcus que consomem seletivamente açúcares monoméricos tais como, mas não limitados a estes, fucose e/ou ácido siálico.

[0029] Em algumas modalidades da presente invenção, o MMO, bifidobactérias e, opcionalmente, lactobacilos, são fornecidos a um paciente juntamente em uma forma de pó seco ou encapsulados em uma csula de duas partes revestida com um revestimento entérico, e fornecidos a um paciente com necessidade de tal tratamento em uma dose de 10 milhões a 1 trilhão cfu de bifidobactérias e 10 milhões a 100 bilhões cfu de lactobacilos por dia e de 1 a 60 g de MMO por dia. Em uma modalidade mais preferida, o MMO e as bactérias probióticas são fornecidos a um paciente em uma dose de 4 a 50 bilhões cfu de bifidobactérias acrescida de 4 a 50 bilhões cfu de lactobacilos por dia e de 2 a 30 g de MMO por dia. Em uma modalidade particularmente preferida, a Bifidobacterium é B. longum subsp. infantis, e o Lactobacillus é L. reuteri.

[0030] Em várias modalidades da invenção, a composição que compreende as bifidobactérias e um MMO selecionado de MMO, SPF e/ou SPS e/ou GOS, é concedida a um mamífero (por exemplo, um ser humano) a fim de superar os distúrbios relacionados com o intestino na obesidade incluindo, mas não são limitados a estes, distúrbios metabólicos relacionadas com o intestino tais como hiperfagia e diabetes do Tipo I e Tipo II por qualquer um de vários mecanismos incluindo, mas não são limitados a estes, o restabelecimento da função da barreira intestinal e a redução da ingestão de alimentos. Esta modalidade inclui todas as idades de mamíferos (por exemplo, seres humanos), incluindo recém-nascidos, crianças, adolescentes, adultos e mamíferos geriátricos (por exemplo, seres humanos).

[0031] Em algumas modalidades da presente invenção, a combinação de (a) bifidobactérias capazes de internalizar um MMO antes da hidrólise e (b) um MMO, tal como, mas não limitado a BCO, BMO, HMO, SPF e/ou SPS e/ou GOS, é fornecido a um paciente humano ou mamífero que apresenta uma patologia intestinal relacionada com a disbiose. Um tal tratamento é mantido diariamente até que a concentração das bifidobactérias alcance pelo menos um aumento de 2 vezes no número de bifidobactérias no intestino do mamífero. Em uma modalidade preferida, os níveis alcançam pelo menos um aumento de 10 vezes. Em uma modalidade mais preferida, os níveis alcançam pelo menos um aumento de 100 vezes. Em uma modalidade preferida da invenção, o paciente não receberá essencialmente nenhum outro oligossacarídeo ou fibra dietética diferente de BCO, BMO, HMO, SPF e/ou SPS e/ou GOS liberados durante o período de tratamento. Embora opcional, pode ser benéfico “esvaziar” o intestino antes do tratamento, tipicamente através do uso de laxantes para encorajar a expulsão de qualquer fibra residual presente antes do tratamento. Em certas modalidades, as bifidobactérias capazes de internalizar um oligossacarídeo do leite de mamífero antes da hidrólise são bifidobactérias ativada. Uma bifidobactéria ativada é uma bifidobactéria que, através do contato com glicanos do leite, possui genes de um aglomerado de genes HMO que são regulados positivamente. Em certas outras modalidades, as bifidobactérias capazes de internalizar um MMO antes da hidrólise são cultivadas de uma maneira que não é ativadora.

[0032] Em certas modalidades da presente invenção, uma "ração diária" das bifidobactérias e MMO é fornecida ao paciente. Uma “ração diária” é uma quantidade fornecida ao paciente dentro do mesmo período de 24 horas. Um paciente pode receber uma dose das bifidobactérias e uma dose do MMO substancialmente de forma contemporânea (por exemplo, dentro de seis horas, dentro de quatro horas, dentro de duas horas, dentro de uma hora, dentro de quarenta e cinco minutos, dentro de trinta minutos, dentro de vinte minutos, dentro de quinze minutos, dentro de dez minutos, dentro de cinco minutos, dentro de três minutos ou dentro de um minuto).

[0033] Em algumas modalidades da presente invenção, a dosagem das bifidobactérias e MMO é mantida durante um período de pelo menos 1 semana para permitir a cicatrização da mucosa. Em uma modalidade mais preferida, a dosagem das bifidobactérias e MMO é mantida durante um período de pelo menos 1 mês para permitir a cicatrização completa da mucosa. Em uma modalidade particularmente preferida, a dosagem das bifidobactérias e MMO pode ser contínua através do período de tempo durante o qual os sintomas da patologia intestinal são aliviados. Preferivelmente, a dosagem é descontinuada quando os sintomas GI foram aliviados, e o paciente é capaz de fazer a transição sem sintomas para fontes de fibras alimentares adultas utilizando uma estratégia de desmame de uma única fonte de fibras para múltiplas fontes de fibra sustentadas com organismos comensais adaptados às fibras dietéticas de adultos. Um tal processo de desmame é descrito no Pedido de Patente U.S. No. 62/307.425, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade. A dosagem pode ser contínua enquanto os sintomas são aliviados durante um período de tempo (por exemplo, uma hora, duas horas, três horas, quatro horas, seis horas, oito horas, dez horas, um dia, dois dias, três dias, uma semana, duas semanas, pelo menos 1 mês, pelo menos de 1 mês a 6 meses e pelo menos de 6 meses a um ano).

[0034] Em várias modalidades da invenção, os níveis elevados de bifidobactérias retornam para níveis normais (baixos) através da eliminação do fornecimento dietético de MMO, BCO, BMO, HMO, SPS e/ou SPF e GOS e introdução de outras fontes de fibras alimentares convencionais como parte da dieta diária durante um período de pelo menos 1 semana. Em uma modalidade preferida, os níveis de bifidobactérias são reduzidos para níveis normais mediante a eliminação do fornecimento dietético de MMO, BCO, BMO, HMO, SPS, SPF e GOS e permitindo outras fontes convencionais de fibra alimentar como parte do dia a dia durante um período de pelo menos 1 mês.

Formulação de Composições para esta Invenção

[0035] A preparação de MMO pode ser fornecida juntamente com as bactérias preferidas ou separadamente. Em uma modalidade preferida, o MMO é preparado a partir de um colostro bovino (BCO), permeado de soro de leite ou outras correntes lácteas (BMO) e combinado com as bifidobactérias em uma relação de 0,01 a 10 g de MMO por Bilhão cfu de bifidobactérias. Em uma modalidade mais preferida, o MMO é combinado com as bifidobactérias em uma relação de 0,1 a 1,0 g de MMO por Bilhão cfu de bifidobactérias.

[0036] Em uma modalidade mais preferida, o oligossacarídeo é fornecido em uma forma concentrada, em que a concentração do MMO compreende pelo menos 10 % da massa da preparação (sobre uma base de peso seco) fornecida ao ser humano ou outro mamífero com necessidade do tratamento. A preparação pode ser fornecida em uma formulação de pó seco, uma solução, uma suspensão ou em um formato de comprimido ou cápsula com ou sem um revestimento entérico para permitir a passagem através do estômago e liberar no intestino. Tais revestimentos entéricos incluem, mas não são limitados a estes, proteínas lácteas, proteínas de soro de leite, ácidos graxos, ceras, goma-laca, plásticos, fibras vegetais, copolímeros de ácido metil acrilato-metacrílico, succinato de acetato de celulose, ftalato de hidróxi propil metil celulose, succinato de acetato de hidróxi propil metil celulose, ftalato de acetato de polivinila (PVAP), copolímeros de ácido metil metacrilato-metacrílico, trimelitato de acetato de celulose, alginato de sódio e Zein.

Administração da Composição desta Invenção

[0037] Em algumas modalidades da presente invenção, o MMO e bifidobactérias são fornecidos a um paciente juntamente em uma forma de pó seco e/ou encapsulado em uma cápsula de duas partes revestida com um revestimento entérico, e fornecida a um paciente com necessidade de tal tratamento em uma dose de 10 milhões a 100 milhões cfu de bactérias por dia e de 1 a 60 g de oligossacarídeos do leite de mamífero por dia. Em uma modalidade mais preferida, o oligossacarídeo do leite de mamífero e as bactérias são fornecidos a um paciente em uma dose de 4 bilhões a 50 bilhões cfu de bactérias por dia e de 2 a 40 g de MMO por dia.

[0038] Em algumas modalidades, o componente oligossacarídeo pode ser dissolvido em um líquido tal como, mas não limitado a estes, água, soro fisiológico, leite de mamífero ou formulação projetada para fornecer todo ou parte de uma necessidade nutricional diária tal como, mas não limitada a uma fórmula infantil ou uma fórmula entérica e fornecida em uma forma líquida ao paciente, enquanto que as bifidobactérias são fornecidas separadamente como um pó ou suspensão em um líquido portador que pode opcionalmente incluir uma solução compreendendo o MMO.

[0039] Em algumas modalidades da invenção, o paciente é mantido em uma dieta estritamente controlada durante todo o curso do tratamento com as bactérias e MMO. Tal dieta conteria nenhuma ou uma quantidade mínima de qualquer outra fibra dietética, mas pode conter carboidratos simples tais como monossacarídeos e dissacarídeos em quantidades necessárias para manter o peso pré- intervenção do paciente. Em uma modalidade preferida da presente invenção, a quantidade diária da outra fibra dietética é menor do que 30 g/dia, preferivelmente menor do que 10 g/dia, mais preferivelmente menor do que 5 g/dia e mais preferivelmente menor do que 1 g/dia. Em uma modalidade preferida da presente invenção, os carboidratos simples dietéticos são menos do que 50 g/d. Em uma modalidade preferida da presente invenção, a quantidade diária dos carboidratos simples é menor do que 40 g/d, de preferência menor do que 20 g/dia, mais preferivelmente menor do que 10 g/dia e o mais preferível menor do que 5 g/dia.

[0040] Em outras modalidades, o componente de oligossacarídeo e as bifidobactérias são fornecidos juntos em uma composição para tomar com colher, tal como, mas não limitado a estes, iogurte, kefir, pudim, creme, chocolate ou qualquer óleo comestível.

[0041] Em algumas modalidades da invenção, qualquer uma das composições aqui descritas pode ser administrada a um paciente. Os pacientes incluem mamíferos que sofrem de distúrbios relacionados com o intestino, incluindo, mas não limitado a estes, obesidade ou distúrbios metabólicos relacionados com o intestino tais como hiperfagia e diabetes Tipo I e Tipo II, por qualquer um de vários mecanismos, incluindo, mas não limitado a estes, a restauração da função de barreira intestinal e a redução da ingestão de alimentos. Os mamíferos podem incluir seres humanos, assim como outras espécies de mamífero domesticadas incluindo, mas não limitados aos mamíferos de produção relevantes na agricultura (por exemplo, vacas, porcos, coelhos, cabras e ovelhas), animais de companhia mamíferos (por exemplo, gatos, cães e cavalos) e mamíferos performáticos (por exemplo, cavalos de raça puro sangue, camelos de corrida e cães de trabalho). Os pacientes podem incluir todas as idades de mamíferos, incluindo mamíferos infantis, mamíferos jovens, mamíferos adolescentes, mamíferos adultos e mamíferos geriátricos.

[0042] Aqueles que particularmente se beneficiariam do processo desta invenção incluem pacientes com uma eflorescência bacteriana que rapidamente expande a presença de um organismo particular, ou pacientes com diversidade reduzida onde espécies comensais importantes estão ausentes. Ambos os casos podem se apresentar como um microbioma de menor diversidade do que o esperado em um indivíduo saudável, e esses pacientes são caracterizados como tendo um microbioma disbiótico. As mudanças no microbioma podem ser determinadas utilizando Next Generation Sequencing (ver, por exemplo, Ji et al., “From next-generation sequencing to systematic modeling of the gut microbiome”, Front Genet. (June 23, 2015), publicado online em doi.org/10.3389/fgene.2015.00219) ou full Metagenomics approaches (ver, por exemplo, Wang et al., “Application of metagenomics in the human gut microbiome”, World J. Gastroenterol. (2015), Vol. 21, No. 3, pp. 803-814) para monitorar a alteração em organismos específicos, ou mudanças gerais nas famílias conhecidas de conter membros de organismos oportunistas ou patogênicos. A qPCR também pode ser utilizada para monitorar as alterações nas espécies ou subespécies específicas. Tipicamente, as medições podem ser normalizadas utilizando a quantidade de DNA por grama de fezes. Um microbioma simples pode ser saudável no caso de uma criança cuja dieta é quase inteiramente composta de uma única fonte de nutrientes (por exemplo, leite materno). No entanto, para um indivíduo que consume uma dieta mais variada, uma mudança do microbioma para uma estrutura mais simples é tipicamente uma indicação de disbiose.

[0043] Em algumas modalidades, administra-se a um paciente uma composição compreendendo bifidobactérias e um componente de oligossacarídeo durante um período de tempo, após o qual o paciente é administrado com uma composição compreendendo um componente de oligossacarídeo que não compreende bifidobactérias para manter as bifidobactérias colonizadas.

[0044] Em outras modalidades, um paciente é administrado com uma composição que compreende bifidobactérias durante um período de tempo, após o qual o paciente é administrado com uma composição compreendendo bifidobactérias e um componente de oligossacarídeo.

[0045] Em algumas modalidades, um paciente é administrado com uma composição que compreende bifidobactérias e um componente de oligossacarídeo durante um período de tempo, após o qual o paciente é administrado com uma composição compreendendo bifidobactérias que não incluem um componente de oligossacarídeo.

[0046] Em algumas modalidades, um paciente é administrado com um componente de oligossacarídeo durante um período de tempo, após o qual o paciente é administrado com uma composição que compreende bifidobactérias e um componente de oligossacarídeo. O componente de oligossacarídeo inicial pode ser fornecido em uma quantidade que fornece pelo menos 1 g por dia de MMO ao paciente. Por exemplo, o componente de oligossacarídeo inicial pode ser fornecido em uma quantidade que fornece pelo menos 1 g por dia, pelo menos 3 g por dia, pelo menos 5 g por dia, pelo menos 8 g por dia, pelo menos 10 g por dia, pelo menos 15 g por dia, pelo menos 20 g por dia, pelo menos 25 g por dia, pelo menos 30 g por dia, pelo menos 35 g por dia, pelo menos 40 g por dia, pelo menos 50 g por dia ou pelo menos 60 g por dia de oligossacarídeos do leite de mamífero ao paciente.

[0047] Em várias modalidades, administra-se a um paciente uma composição que compreende bifidobactérias e/ou um componente de oligossacarídeo durante um período de tempo, após o qual o paciente é administrado com uma composição compreendendo bifidobactérias e/ou um componente de oligossacarídeo durante um período de tempo no qual a quantidade administrada é reduzida gradualmente (por exemplo, administrada em uma taxa geralmente decrescente) durante um segundo período de tempo.

[0048] Certas modalidades da invenção envolvem uma combinação de uma composição compreendendo MMO e/ou SPF e/ou SPS e/ou GOS e uma bifidobactéria em que a Bifidobacterium é selecionada de B. longum, B. breve, B. bifidus, B. animalis subsp lactis, B. animalis subsp animalis, B. pseudocatenulatum e B. catenulatum ou qualquer combinação destas. Em uma modalidade mais preferida, a Bifidobacterium é B. longum subsp infantis.

[0049] Em outras modalidades da invenção, a espécie Bifidobacterium é utilizada em combinação com uma espécie Lactobacillus incluindo, mas não são limitada a estas, L. plantarum, L. antri, L. brevis, L. casei, L. coleohominis, L. fermentum, L. gasseri, L. johnsonii, L. pentosus, L. sakei, L. salivarius, L. rhamnosus (por exemplo, LGG), L. acidophilus, L. curvatus e L. reuteri. Em uma modalidade preferida, a composição compreende MMO e/ou SPF e/ou SPS e/ou GOS, ou seus derivados, L. rhamnosis e B. longum subsp. infantis.

EXEMPLOS Exemplo 1. Preparação de Composições de Oligossacarídeo de Leite Humano (HMO) que podem ser utilizadas Exclusivamente por certas Bifidobactérias.

[0050] Uma mistura concentrada de HMO é obtida por um processo semelhante àquele descrito em Fournell et al. (Pedido de Patente US 2015/0140175). O leite humano é pasteurizado e depois desengordurado por centrifugação, separando-o em creme (predominantemente gordura) e leite desnatado (produto desengordurado). O leite desnatado é então ultrafiltrado utilizando membranas com um corte de 5 a 10 kDa para concentrar uma fração de proteína (predominantemente proteínas de soro e caseínas). O permeado da ultrafiltração, compreendendo lactose e os HMOs complexos, é secado diretamente através da secagem por pulverização, ou a lactose é parcialmente eliminada por uma ultrafiltração adicional utilizando um filtro de corte de 1 kDa antes da secagem. A composição desta fração seca é tipicamente cerca de 50 % de lactose e cerca de 30 % de oligossacarídeos do leite de mamífero (HMO), com o restante da massa sendo principalmente peptídeos e cinzas. A fração de HMO é predominantemente fucosilada. No entanto, estas composições podem variar entre 20 a 70 % de lactose e 10 a 50 % de oligossacarídeos do leite de mamífero (HMO), dependendo dos processos de ultrafiltração.

Exemplo 2. Preparação de Composições de Oligossacarídeo de Leite Bovino (BMO) que podem ser utilizadas Exclusivamente por Certas Bifidobactérias.

[0051] Uma mistura concentrada de oligossacarídeo de leite bovino (BMO) foi obtida de leite integral que foi pasteurizado por aquecimento a 145 graus F (63 oC) durante 30 minutos, esfriado e com centrifugada desengordurado, separando-o em creme (predominantemente gordura) e leite desnatado (produto desengordurado). O leite desnatado foi então ultrafiltrado utilizando membranas com um corte de 5 a 10 kDa para concentrar uma fração de proteína (predominantemente proteínas do soro de leite e caseínas). A lactose no permeado foi parcialmente eliminada por uma nanofiltração adicional utilizando um corte de 1 kDa. A composição foi então secada por pulverização. Esta composição de BMO secos compreendia cerca de 15 % de lactose e cerca de 10 % de BMO, com o restante da massa sendo principalmente peptídeos, cinzas e outros componentes. Vinte gramas desta composição foram combinados com 5 g de GOS (Vivinal GOS) como a ração diária para o tratamento.

Exemplo 3. Preparação de Composições de Oligossacarídeo de Colostro Bovina (BCO) que podem ser utilizadas Exclusivamente por Certas Bifidobactérias.

[0052] Uma mistura concentrada de BCO é obtida por um processo tal como aquele descrito em Christiansen et al (2010) International Dairy Journal, 20:630-636. O colostro bovino (preferivelmente da primeira ordenha) é pasteurizado por aquecimento a 145 graus F (63 oC) durante 30 minutos, esfriado e centrifugamente desengordurado, separando-o em creme (predominantemente gordura) e leite desnatado (produto desengordurado). O leite desnatado desengordurado é então ultrafiltrado utilizando membranas com um corte de 5 a 10 kDa para concentrar uma fração de proteína (predominantemente proteínas do soro de leite e caseínas). O permeado, compreendendo a lactose e oligossacarídeos do leite de mamífero, é secado diretamente através da secagem por pulverização. Alternativamente, a lactose é parcialmente eliminada por uma nanofiltração adicional utilizando um corte de 1 kDa. A composição desta fração de oligossacarídeo seco é de cerca de 40 % de lactose e de cerca de 40 % de oligossacarídeos de colostro bovino (BCO) com o restante da massa sendo principalmente peptídeos e cinzas. A fração de BCO é predominantemente sialilada.

Exemplo 4. Preparação de uma Composição de Bifidobactérias Ativadas que podem utilizar Exclusivamente certos Oligossacarídeos do leite de mamífero.

[0053] A Bifidobacterium longum subsp infantis foi isolada e purificada a partir das fezes de uma criança humana de parto vaginal alimentada ao seio, e sua identificação foi confirmada através da análise de DNA que refletiu a presença de um conjunto de genes que está especificamente associado a este organismo (Sela et al., 2008, PNAS, 105:18964-18969). Uma cultura de semente deste organismo foi adicionada a um meio de crescimento padrão compreendendo glicose e o BCO do Exemplo 3 como fontes de carbono em um fermentador agitado de 500 L. Após 3 dias de crescimento sob condições anaeróbicas, uma amostra da cultura foi testada quanto à presença de Bifidobacterium longum subsp. infantis. A B. infantis ativada foi identificada pela presença de transcritos de genes para a sialidase. O fermentador foi colhido por centrifugação, a massa celular concentrada foi misturada com um criopreservador (trealose mais proteínas do leite) e liofilizada. O produto final seco foi de 5,5 kg de massa bacteriana com uma contagem de células vivas de 130 x 109 cfu/g.

Exemplo 5. Preparação e uso de Composições Terapêuticas para o Tratamento de Patologias Digestivas.

[0054] O produto de B. infantis ativada do Exemplo 4 foi misturado com lactose de grau farmacêutico para fornecer uma dose mínima de 30 bilhões de cfu de B. longum subsp. infantis por grama. 0,625 g deste produto de B. infantis ativada diluído foi então acondicionado em sache resistentes ao oxigênio e à umidade, para fornecer doses de 15 bilhões cfu de B. longum subsp. infantis por sache. Um sache de 18 bilhões cfu de B. longum subsp. infantis foi consumido com um café da manhã e um com uma refeição noturna.

[0055] Vinte gramas da preparação de BMO do Exemplo 2 foram combinados com cinco g de GOS, acondicionados em sacos separados e administrados em uma ração diária de 20 g de BMO + 5 g de GOS. Esta preparação forneceu a fonte de carbono (BMO e GOS) para sustentar o crescimento específico da B. longum subsp. Infantis suplementa no cólon do paciente, fornecendo assim um ambiente intestinal que favorece a cicatrização da mucosa.

[0056] A preparação de BMO foi consumida 5 vezes por dia (5 x 5 g de mistura de BMO/GOS do Exemplo 2), aproximadamente a cada 3 a 4 horas através da mistura de 5 g de pó com um substituto de refeição (Boost, Nestle Nutrition) contendo 240 Cal/bebida com 15 g/proteína e 6 g de gordura e 0 g de fibra alimentar. O indivíduo foi deixado consumir 2 a 3 ovos a cada manhã, e uma porção de peixe ou carne com almoço e jantar. Qualquer consumo de fibra dietética fora da formulação terapêutica de BMO foi mantido em menos de 1 g por dia.

[0057] Como uma etapa para acelerar a mudança de um microbioma que consome fibra alimentar de adulto para um microbioma que consome fibra à base de leite, o indivíduo completou uma preparação de colonoscopia envolvendo uma dieta líquida transparente e laxantes para limpar as entranhas de fibra na preparação para a alteração da dieta. Assim que isso foi concluído, o indivíduo seguiu o regime de dieta específico que limitou a fibra dietética não láctea para menos de 1 grama por dia e assegurou que o indivíduo ainda estava comendo uma dieta com proteína, gordura e carboidrato suficientes para manter um peso constante.

[0058] As amostras fecais foram tiradas no dia anterior à preparação da colonoscopia (pré-tratamento) e diariamente durante os 7 dias no regime alimentar de consumo da B. infantis e do BMO. O indivíduo também preencheu formulários de questionário referentes a uma autoavaliação das respostas gastrointestinais do indivíduo ou indicadores do efeito paliativo da composição sobre os sintomas de transtorno gastrointestinal. Após os sete dias de regime alimentar, o indivíduo foi deixado retornar à sua dieta padrão de pré-tratamento e as amostras fecais de pós-tratamento foram tomadas durante uma fase de pós-tratamento de 1 semana. O DNA foi extraído e submetido à análise de qPCR e sequenciamento NextGen para análise de microbioma. B. infantis foi especificamente medida utilizando qPCR (Figura 1). No valor de referência, B. infantis estava abaixo do limite de detecção em um intestino adulto. Níveis detectáveis foram observados com suplementação e alterações na dieta. A Figura 1 mostra que houve pelo menos uma diferença de 1000 vezes nos níveis de B. infantis do cólon entre o valor de referência e o tratamento. Os dados NGS forneceram um meio de visualizar as alterações relativas em diferentes clados e famílias de bactérias. As amostras também foram preparadas para outras medidas incluindo o teor de BMO por Espectrometria de Massa nas fezes para monitorar o consumo in vivo, o ácido graxo de cadeia curta e lactato, as determinações de pH, as medidas de citocinas e uma determinação metabolômica completa. Tabela 1: Cronograma de Estudo Participante Tratado com BMO/GOS

Exemplo 6. Uso de uma composição de B. longum subsp. infantis com Lactobacillus plantarum para reduzir espécies de Clostridium em potros recém-nascidos.

[0059] Os potros recém-nascidos nascidos de éguas em um grande celeiro de criação de cavalos foram monitorados durante um surto de diarreia hemorrágica grave entre os potros. Os potros foram observados de serem positivos em cultura e toxina para Clostridium difficile. Dezessete potros nasceram durante a fase inicial do surto, dos quais quinze animais ficaram doentes e necessitaram de intervenção de acordo com o padrão de atendimento descrito no Merck Veterinary Manual. O padrão de tratamento envolveu o tratamento com metronidazol administrado em uma dose de 15 a 20 mg/kg, PO, tid- qid. e também pode envolver a administração de grandes volumes de fluidos poliônicos intervenientes, com eletrólitos suplementares (potássio, magnésio e cálcio), coloides plasmáticos ou sintéticos para baixa pressão oncótica, antiinflamatórios tais como flunixina meglumina e antibióticos de amplo espectro se o equino for leucopênico e em risco de translocação bacteriana através do trato GI comprometido. A polimixina B pode auxiliar na endotoxina sistêmica de ligação.

[0060] Destes dezessete potros, quinze desenvolveram fezes soltas ou diarreia com duração de 3 a 4 dias, e 2 morreram como um resultado da infecção. Após a observação do surto, os potros seguintes receberam uma formulação de 3 x 1012 CFU de Bifidobacterium longum subsp. infantis EVBL001 e 5 x 109 CFU de Lactobacillus plantarum EVLP001 a cada 12 horas. Os dois potros que receberam a formulação em 12 horas de idade desenvolveram uma diarreia moderada, mas recuperaram-se dentro de 8 horas em comparação com 3 a 4 dias com o padrão de tratamento. Nenhum dos potros fornecidos com esta dose a partir do nascimento desenvolveu diarreia (n = 6).

[0061] O tempo de recuperação para os dois animais tratados que eventualmente desenvolveram a infecção foi de aproximadamente oito horas, que foi significativamente mais curto do que o tempo de recuperação normal de pelo menos 3 a 4 dias para os animais que receberam o regime de cuidados padrão. Nenhum evento adverso foi registrado entre os animais tratados e as dosagens foram bem toleradas. Um teste exato de Fisher das duas populações (Standard of Care and Probiotic treated) produz uma diferença significativa nas incidências de infecção por C. difficile (p = 0,0016) (Tabela 2). Tabela 2. Uma tabela de contingência 2x2 analisada pelo teste Exato de Fisher indica uma redução significativa em animais doentes entre aqueles tratados com a mistura probiótica (Tratado), em relação ao padrão de tratamento (Controle).

[0062] Duas opções de tratamento foram tentadas. Na primeira, os animais foram dosados em 12 horas de vida, mas isso não reduz significativamente a incidência de diarreia (dado o n pequeno), embora a gravidade (duração) tenha sido drasticamente reduzida para 12 horas ou menos (p = 0,0074; teste exato de Fisher, comparando as populações de potros com diarreia segregados pela duração da diarreia). A segunda opção, a dosagem ao nascer, foi significativa na redução da incidência de diarreia (p = 0,0025). Todos os animais foram dosados no nascimento com 6,6 mg/kg de ceftiofur (Excede), e isso não afetou o resultado de saúde relacionado à diarreia. Adicionalmente, a população tratada não desenvolveu diarreia por calor de potro, que tipicamente afeta > 50 % dos animais, e requer tratamento em aproximadamente 10 % dos casos (Weese and Rousseau 2005). Se um risco de > 50 % for extrapolado para uma população hipotética de 8 animais para corresponder aos 8 observados; isto produz uma redução significativa na diarreia por calor de potro (p = 0,0256).

[0063] Os resultados descritos acima demonstram que a administração de uma composição que inclui Bifidobactérias (por exemplo, B. longum subespécie infantis) com um Lactobacillus (por exemplo, L. plantarum) que foi escolhido para consumir os monômeros de açúcar livres que um patógeno conhecido (por exemplo, uma espécie Clostridium) preferiu consumir, foi eficaz na redução dos episódios de disbiótica para os potros recém-nascidos. Este exemplo não está limitado a potros recém-nascidos, mas demonstra que a administração das composições aqui descritas pode ser eficaz para reduzir ou eliminar episódios disbióticos em mamíferos. Embora este exemplo forneça suporte experimental para o conceito subjacente a esta invenção, deve ser observado que esses potros eram animais de amamentação onde o MMO era fornecido pelo leite materno. Portanto, um MMO suplementar não foi fornecido. Resultados semelhantes devem ser esperados, se o MMO for fornecido como suplemento, em vez do leite materno.

Exemplo 7. Fornecer B. infantis a leitões em amamentação.

[0064] Em porcos em amamentação jovens não tratados, populações de Enterobacteriaceae no intestino foram observadas de se correlacionar com a abundância de Bacteroides (r2 = 0,661, p < 0,001). Descobriu-se também que estas populações de Enterobacteriaceae não podem, por si só, consumir oligossacarídeos de leite de porco sialilados, mas os Bacteroides possuem enzimas capazes de liberar ácido siálico a partir de oligossacarídeos de leite de porco, o que está associado à maior abundância de ácido siálico nas fezes. Enterobacteriaceae podem consumir o ácido siálico liberado por Bacteroides. O tratamento de suínos com Bifidobacterium e/ou Lactobacillus reduziu a quantidade de ácido siálico disponível e resultou em uma redução da diarreia (ver WO 2016/094836 e WO 2016/149149, cujas divulgações são aqui incorporadas na sua totalidade).

Exemplo 8. Aumento do Ganho de Peso em Leitões em Amamentação alimentados com uma Composição Prebiótica.

[0065] As crias de porcos recebem antibióticos profilaticamente ao nascimento para prevenir infecções precoces durante a amamentação, incluindo diarreia. A diarreia pode ser infecciosa a partir de causas virais ou bacterianas (a maioria é viral) ou pode estar associada ao início do desmame. A diarreia é prejudicial para o desempenho geral e a saúde do porco.

[0066] Várias crias foram randomizadas em um de três grupos. Um grupo recebeu uma dose padrão de tratamento de benzilpenicilina ao nascimento, outro grupo não recebeu benzilpenicilina e outro grupo não recebeu benzilpenicilina, mas recebeu 18 bilhões CFU de B. infantis ativada EVC001 (Exemplo 4) e 1 bilhão CFU de L. plantarum EVLP001 diariamente por gavagem oral durante sete dias, do dia 14 a 21 de vida. L. plantarum EVLP001 foi isolada das fezes de um leitão em amamentação e cultivada em um meio de leite estéril de qualidade alimentar, sem agitação, a 37 °C e enumerada em meio MRS para confirmar a dosagem. Todos os animais foram pesados aos 28 dias de vida e comparados entre os grupos de tratamento. Como mostrado na Figura 2, os leitões que receberam B. infantis em 14 a 21 dias tiveram o maior ganho de peso.

Claims (18)

1. Uso de uma composição, caracterizado pelo fato de que compreende um oligossacarídeo do leite de mamífero e uma bifidobactéria para preparar um medicamento para tratar um paciente com transtornos intestinais, em que a bifidobactéria internaliza dito oligossacarídeo do leite de mamífero antes da sua hidrólise.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o transtorno intestinal representa uma disbiose microbiana, que pode ser o resultado de Doença do Intestino Irritável, Doença de Crohn, Colite Ulcerativa, Enterocolite Necrosante, crescimento excessivo bacteriano ou viral, diarreia induzida por bactérias, tratamento com antibiótico, distúrbios alimentares, autismo, obesidade ou baixa diversidade na ingestão de alimentos.

3. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo fato de que as bifidobactérias são selecionadas de B. longum, B. animalis, B. catenulatum, B. pseudolongum, B. pseudocatanulatum e B. breve, particularmente em que a B. longum é B. longum subs. Infantis, dita bifidobacteria preferencialmente é fornecida em uma dose diária de 10 milhões a 1 trilhão cfu, mais preferencialmente uma dose diária de 10 bilhões a 50 bilhões cfu.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o oligossacarídeo do leite de mamífero é de leite de mamífero, que pode ser de origem humana, bovina ou caprina, ou em que a fonte bovina é de colostro bovino, ou em que o oligossacarídeo do leite de mamífero é de permeado de soro de leite, ou em que o oligossacarídeo do leite de mamífero compreende lacto-N-tetraose, lacto-N-neotetraose, fucosilactose, sialilactose ou derivados dos mesmos, ou em que o oligossacarídeo do leite de mamífero compreende um ou mais carboidratos selecionados de lacto-N-tetraose, lacto-N-neotetraose, 2'- fucosilactose, 3-fucosilactose, difucosilactose, lacto-N-fucosilpentaose I, lacto-N-fucosilpentaose II, lacto-N-fucosilpentaose III, lacto-N- fucosilpentaose V, 3'-sialilactose, 6'-sialilactose, 3'-sialil-3- fucosilactose, sialilacto-N-tetraose, N-acetilgalactosamina e 6'- silalactosamina sinteticamente produzidos e purificados.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o medicamento ainda compreende Lactobacillus e/ou Pediococcus, o Lactobacillus é preferencialmente selecionado de L. plantarum, L. antri, L. brevis, L. coleohominis, L. fermentum, L. gasseri, L. johnsonii, L. pentosus, L. sakei, L. salivarius, L. casei, L. rhamnosus (por exemplo, LGG), L. acidophilus, L. curvatus, L. reuteri, L. mucosae, e L. crispatus, o Lactobacillus mais preferencialmente é L. reuteri, o Lactobacillus é fornecido em uma dose diária de 10 milhões a 1 trilhão cfu, mais preferencialmente, o Lactobacillus é fornecido em uma dose diária de 10 bilhões a 50 bilhões cfu.

6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o oligossacarídeo do leite de mamífero está na forma de um pó, mais preferencialmente em que o medicamento está na forma de um pó.

7. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o oligossacarídeo é formulado para fornecer fibra dietética em uma quantidade adequada para um paciente não infantil, o paciente não infantil sendo preferencialmente pelo menos 6 meses de idade, ou em que o medicamento é formulado para fornecer uma ração diária suficiente para sustentar o microbioma intestinal de um paciente com um peso corporal maior do que 10 kg.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o oligossacarídeo do leite de mamífero é fornecido em uma dose diária de 1 a 20 g, preferencialmente em que o oligossacarídeo do leite de mamífero é fornecido em uma dose diária de 1 a 10 g.

9. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o transtorno intestinal é a disbiose gastrointestinal, e em que a composição é fornecida ao paciente por pelo menos 5 dias.

10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o oligossacarídeo do leite de mamífero e as bifidobactérias estão presentes em uma forma seca e revestidos em um material que deve fornecer proteção entérica, tal como em que o oligossacarídeo do leite de mamífero e as bifidobactérias são encapsulados e a cápsula possui um revestimento entérico, ou em que o oligossacarídeo do leite de mamífero é fornecido como uma solução e as bifidobactérias são fornecidas como um comprimido ou cápsula com revestimento entérico.

11. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o paciente está em uma dieta estrita que restringe todas as outras fibras dietéticas quando dita composição é concedida a dito paciente.

12. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o oligossacarídeo do leite de mamífero está na forma de um pó, e/ou em que a composição está na forma de um pó.

13. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende oligossacarídeos do leite humano (HMO) ou oligossacarídeos do leite bovino (BMO) e glicanos fucosilados (SPF) e/ou glicanos sialilados (SPS), em que o SPF e/ou SPS não são de origem láctea, preferencialmente em que a relação de HMO:SPF é de 20:1 a 1:5, e/ou em que a composição compreende oligossacarídeos do leite humano e sialil glicanos (SPS) sinteticamente produzidos e purificados, e em que a relação de HMO:SPS é de 5:1 a 1:1, particularmente em que o SPF ou SPS compreende um ou mais de 2'- fucosilactose, 3'-fucosilactose, difucosilactose, lacto-N-fucosilpentose I, lacto-N-fucosilpentose II, lacto-N-fucosilpentose III, lacto-N- fucosilpentose V, 3'-sialilactose, 6'-sialilactose, 3'-sialil-3-fucosilactose, sialilacto-N-tetraose e 6'-sialilactosamina, e/ou em que o HMO ou BMO compreende adicionalmente lacto N-tetraose sintético e/ou lacto-N- neotetraose.

14. Composição de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que a composição é formulada para fornecer fibra dietética em uma quantidade adequada para um paciente não infantil, preferencialmente em que o paciente não infantil possui pelo menos 6 meses de idade, mais preferencialmente, em que a composição é formulada para fornecer uma ração diária suficiente para sustentar o microbioma intestinal de um paciente com um peso corporal maior do que 10 kg.

15. Uso da composição, caracterizado pelo fato de que compreende um oligossacarídeo do leite de mamífero para fabricar um medicamento para tratar um paciente com disbiose gastrointestinal, em que o paciente tem microbioma disbiótico, particularmente em que o microbioma disbiótico é um crescimento excessivo bacteriano de patógenos oportunistas e/ou patógenos evidentes, mais particularmente, em que o microbioma disbiótico possui uma diversidade microbiana reduzida, preferencialmente em que o leite de mamífero é de origem humana, bovina ou caprina, ou em que a fonte bovina é do colostro bovino, ou em que o oligossacarídeo do leite de mamífero é de permeado de soro de leite, preferencialmente, em que o oligossacarídeo do leite de mamífero é selecionado de lacto-N- tetraose, lacto-N-neotetraose, fucosilactose, sialilactose, suas combinações e seus derivados, e/ou em que o oligossacarídeo do leite de mamífero é selecionado de lacto-N-tetraose, lacto-N-neotetraose, 2'-fucosilactose, 3-fucosilactose, difucosilactose, lacto-N- fucosilpentaose I, lacto-N-fucosilpentaose II, lacto-N-fucosilpentaose III, lacto-N-fucosilpentaose V, 3'-sialilactose, 6'-sialilactose, 3'-sialil-3- fucosilactose, sialilacto-N-tetraose, N-acetilgalactosamina, 6'- sialilactosamina e suas combinações sinteticamente produzidas e purificadas, ou em que o leite de mamífero é de origem humana.

16. Uso de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o oligossacarídeo do leite de mamífero está na forma de um pó.

17. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 15-16, caracterizado pelo fato de que o paciente em necessidade é não infantil, preferencialmente em que oligossacarídeo do leite de mamífero é formulado para fornecer fibra dietética em uma quantidade adequada para um paciente não infantil, e/ou em que o paciente não infantil possui pelo menos 6 meses de idade, preferencialmente, em que o oligossacarídeo do leite de mamífero é formulado para fornecer uma ração diária suficiente para sustentar o microbioma intestinal de um paciente com um peso corporal maior do que 10 kg.

18. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concretizações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inicialmente revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados.