BR112021013887A2

BR112021013887A2 - Rna terapêutico para cânceres de tumor sólido em estágio avançado

Info

Publication number: BR112021013887A2
Application number: BR112021013887-0A
Authority: BR
Inventors: Serena Masciari; Timothy R. Wagenaar; Semra Yoruk; Karl Hsu; Nicolas Acquavella; Marie Bernardo; Robert Jabulowsky; Ugur Sahin; Friederike Gieseke; Zuzana Jirakova Trnkova
Original assignee: Sanofi
Priority date: 2019-01-21
Filing date: 2020-01-17
Publication date: 2021-09-21
Also published as: TW202043273A; US20220040218A1; AU2020211584A1; KR20210119451A; EP3914354A1; CA3125773A1; CN113557060A; MX2021008604A; WO2020154187A1; JP2022518235A; SG11202107395VA; IL284646A

Abstract

rna terapêutica para cânceres de tumor sólido em estágio avançado. a presente invenção refere-se ao campo de rnas terapêuticos para o tratamento de indivíduos que não obtiveram sucesso ou se tornaram intolerantes, resistentes ou refratários a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (pd-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 1 (pd-l1), incluindo terapia anti-pd-1 e/ou anti-pd-l1 inata e adquirida, bem como em indivíduos com cânceres de tumor sólido metastático ou não passível de ressecção em estágio avançado com ou sem sucesso, intolerância, resistência ou refração a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (pd-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 ligante 1 (pd-l1).

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "RNA

TERAPÊUTICO PARA CÂNCERES DE TUMOR SÓLIDO EM ESTÁGIO AVANÇADO".

[001] O presente pedido reivindica o benefício de prioridade ao Pedido Provisório dos Estados Unidos Nº 62/794.889, depositado em 21 de janeiro de 2019, Pedido Provisório dos Estados Unidos Nº 62/926.384, depositado em 25 de outubro de 2019 e Pedido de Patente Europeia Nº 19306461.5, depositado em 12 de novembro de 2019, os conteúdos de cada um dos quais são incorporados a título de referência na íntegra para todas as finalidades.

[002] A presente invenção refere-se ao campo de RNA terapêutico para tratar cânceres de tumor sólido incluindo, por exemplo, em indivíduos que não obtiveram sucesso ou se tornaram intolerantes, resistentes ou refratários a uma terapia antiproteína de morte celular programada (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 1 (PD-L1), incluindo indivíduos com resistência adquirida ou inata a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD- 1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1) e indivíduos com tumores sólidos em estágio avançado ou metastáticos.

[003] O National Cancer Institute define tumores sólidos como massas anormais de tecido que normalmente não contêm cistos ou áreas líquidas. Os tumores sólidos podem estar fisicamente localizados em qualquer tecido ou órgão, incluindo ovário, mama, cólon e outros tecidos e incluem melanoma, câncer de células escamosas cutâneas (CSCC), carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de rim, câncer de cabeça e pescoço, câncer de tireoide, câncer de cólon, câncer de fígado, câncer de ovário, câncer de mama.

[004] O bloqueio do ponto de verificação imune, tal como com terapia antipD-1 e antipD-L1, induz a respostas anticâncer na clínica, no entanto, uma grande proporção de pacientes não se beneficia do tratamento. Vários mecanismos de resistência inata e adquirida ao bloqueio do ponto de verificação foram definidos e incluem mutações das vias de sinalização ao MHC I e IFN. Consulte, por exemplo, Sade- Feldman et al. (2017) Nature Communications 8: 1136; consulte também Sharma et al. (2017) Cell 168: 707-723.

[005] Cânceres de tumor sólido em estágio avançado são particularmente difíceis de tratar. Os tratamentos atuais incluem cirurgia, radioterapia, imunoterapia e quimioterapia. A cirurgia por si só pode ser um tratamento apropriado para pequenos tumores localizados, mas grandes tumores invasivos podem não ser passíveis de ressecção através de cirurgia. Outros tratamentos comuns, como radioterapia e quimioterapia, estão associados a efeitos colaterais indesejáveis e danos às células saudáveis.

[006] Embora a cirurgia e as terapias atuais algumas vezes sejam capazes de eliminar a maior parte do tumor sólido, células adicionais (incluindo células-tronco potencialmente cancerosas) podem sobreviver à terapia. Estas células, com o tempo, podem formar um novo tumor, levando à recorrência do câncer. Apesar das terapias convencionais multimodais, a sobrevida sem doença é inferior a 25 % para muitos tipos de tumores sólidos. Os tumores sólidos que são resistentes à terapia multimodal ou que recorreram após a terapia são ainda mais difíceis de tratar e a sobrevida a longo prazo é inferior a 10 %. Em particular, há uma grande necessidade para pacientes que não obtiveram sucesso em imunoterapias, por exemplo, usando anticorpos monoclonais contra a proteína de morte celular programada 1 ou seu ligante (terapia antipD- 1 ou antipD-L1).

[007] São descritos no presente documento composições, usos e métodos que podem superar as deficiências atuais no tratamento de tumores sólidos, tais como cânceres de tumor sólido em estágio avançado, não passíveis de ressecção ou metastáticos, incluindo em indivíduos que não obtiveram sucesso ou se tornaram intolerantes, resistentes ou refratários a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1). A administração de RNAs terapêuticos, conforme descrito no presente documento, pode reduzir o tamanho do tumor, prolongar o tempo até doença progressiva e/ou proteger contra metástases e/ou recorrência do tumor e, finalmente, prolongar o tempo de sobrevida.

SUMÁRIO

[008] São fornecidos no presente documento, inter alia, métodos de tratamento de um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido que compreende administrar uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF, em que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[009] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de um câncer de tumor sólido em um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1) que compreendem administrar uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF a um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0010] São fornecidos métodos de tratamento de um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido resistente à terapia antipD-1 e/ou antipD- L1 que compreendem administrar uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF a um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido resistente à terapia antipD-1 e/ou antipD- L1.

[0011] Estão abrangidos no presente documento métodos de tratamento de um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido com resistência adquirida à terapia antipD-1 e/ou antipD-L1 que compreendem administrar uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF a um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido com resistência adquirida à terapia antipD-1 e/ou antipD-L1.

[0012] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido com resistência inata à terapia antipD-1 e/ou antipD-L1 que compreendem administrar uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF a um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido com resistência inata à terapia antipD-1 e/ou antipD-L1.

[0013] As modalidades fornecidas no presente documento não estão limitadas por qualquer teoria científica em relação à intolerância, resistência ou refração.

[0014] Em algumas modalidades, a intolerância, resistência,

refração (incluindo resistência adquirida e inata) a uma terapia antipD-1 e/ou antipD-1 resulta de uma célula cancerosa que compreende uma perda parcial ou total de função de beta-2-microglobulina (B2M). Em algumas modalidades, um indivíduo tem uma célula cancerosa que compreende uma perda parcial ou total da função de beta-2- microglobulina (B2M). Em algumas modalidades, a célula cancerosa tem uma perda parcial da função de B2M.

Em algumas modalidades, a célula cancerosa tem uma perda total da função de B2M.

Em algumas modalidades, a perda parcial ou total da função de B2M é avaliada ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa do mesmo indivíduo, opcionalmente em que a célula não cancerosa é do mesmo tecido do qual a célula cancerosa foi derivada.

Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido que compreende células cancerosas com função de B2M normal.

Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 25 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M.

Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 50 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M.

Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 75 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M.

Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 95 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M.

Em algumas modalidades, o tumor sólido como um todo (por exemplo, conforme avaliado em uma biópsia tirada do tumor sólido) tem uma perda parcial ou total da função de B2M comparado com células normais ou tecido do qual o tumor sólido é derivado.

Em algumas modalidades, o indivíduo compreende (por exemplo, a perda parcial ou total da função resulta de) uma mutação no gene de B2M.

A mutação pode ser uma substituição,

inserção ou eliminação. Em algumas modalidades, o gene de B2M compreende uma perda de heterozigosidade (LOH).

[0015] Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação de deslocamento de quadro (frameshift). Em algumas modalidades, a mutação de deslocamento de quadro está no éxon 1 de B2M. Em algumas modalidades, a mutação deslocamento de quadro compreende p.Leu13fs e/ou p.Ser14fs. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um nível reduzido de proteína B2M comparado com um indivíduo sem uma perda parcial ou total da função de B2M.

[0016] Em alguns casos, o tumor sólido (por exemplo, células cancerosas dentro do tumor sólido) tem um nível reduzido de proteína do principal complexo de histocompatibilidade de classe I (MHC I) expressa sobre a superfície celular (também denominado no presente documento como "expressa na superfície"). Em algumas modalidades, uma amostra de tumor sólido (por exemplo, uma biópsia que compreende células cancerosas do tumor sólido) tem um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície celular comparado com um controle, opcionalmente em que o controle é uma amostra não cancerosa correspondente do mesmo indivíduo. Em algumas modalidades, o nível de proteína MHC I expressa na superfície das células cancerosas no tumor sólido é reduzido como um resultado de uma mutação em um gene de B2M. Em algumas modalidades, um indivíduo tem uma célula cancerosa que compreende um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa não tem proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, o nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície é avaliado ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa do mesmo indivíduo, opcionalmente em que a célula não cancerosa é do mesmo tecido a partir do qual a célula cancerosa foi derivada. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido que compreende células cancerosas com um nível normal de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 25 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um sólido tumor em que 50 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 75 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 95 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, o tumor sólido como um todo (por exemplo, conforme avaliado em uma biópsia tirada do tumor sólido) tem um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície comparado com células normais ou tecido do qual o tumor sólido é derivado.

[0017] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para tratar um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático que compreende administrar uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF a um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido metastático ou não passível de ressecção em estágio avançado.

[0018] Em algumas modalidades, o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1). Em algumas modalidades, o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante,

resistente ou refratário a uma terapia antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0019] Em algumas modalidades, o indivíduo não obteve sucesso em uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0020] Em algumas modalidades, o indivíduo se tornou intolerante a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0021] Em algumas modalidades, o indivíduo se tornou resistente a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) e/ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0022] Em algumas modalidades, o indivíduo se tornou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1). Em algumas modalidades, o câncer refratário ou resistente é aquele que não responde a um tratamento especificado. Em algumas modalidades, a refração ocorre desde o início do tratamento. Em algumas modalidades, a refração ocorre durante o tratamento.

[0023] Em algumas modalidades, o câncer é resistente antes do início do tratamento. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um câncer que não responde à terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) e/ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1). Em algumas modalidades, o indivíduo tem um câncer que está se tornando refratário ou resistente a um tratamento especificado. Em algumas modalidades, o tratamento especificado é uma terapia antipD1. Em algumas modalidades, o tratamento especificado é como uma terapia antipD-L1. Em algumas modalidades, o indivíduo se tornou menos responsivo à terapia desde o primeiro recebimento. Em algumas modalidades, o indivíduo não recebeu a terapia, mas tem um tipo de câncer que normalmente não responde à terapia.

[0024] Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.

[0025] Em algumas modalidades, o indivíduo não foi tratado anteriormente com uma terapia antipD-1 ou antipD-L1. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é aquele no qual uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 não é usada rotineiramente.

[0026] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido metastático. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido não metastático. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido não passível de ressecção. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido metastático e não passível de ressecção. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido não metastático e não passível de ressecção.

[0027] Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor epitelial, tumor de próstata, tumor ovariano, tumor de células renais, tumor do trato gastrintestinal, tumor hepático, tumor colorretal, tumor da vasculatura, tumor mesotelioma, tumor pancreático, tumor de mama, tumor sarcoma, tumor de pulmão, tumor de cólon, tumor melanoma, tumor de pulmão de células pequenas, tumor neuroblastoma, tumor testicular, tumor carcinoma, tumor adenocarcinoma, tumor seminoma, retinoblastoma, carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC), carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de cabeça e pescoço, tumor osteossarcoma, câncer de células escamosas cutâneas (CSCC), câncer de pulmão de células não pequenas, tumor de rim, tumor de tireoide, tumor de fígado ou outros tumores sólidos passíveis de injeção intratumoral.

[0028] Em algumas modalidades, o tumor sólido é um linfoma, incluindo linfoma não Hodgkin ou linfoma de Hodgkin.

[0029] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma. Em algumas modalidades, o melanoma é melanoma uveal ou melanoma da mucosa. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma, opcionalmente melanoma uveal ou melanoma da mucosa e compreende metástases superficiais, subcutâneas e/ou linfonodos passíveis de injeção intratumoral.

[0030] Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em uma metástase de tumor sólido dentro de um linfonodo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor de linfoma dentro de um linfonodo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido primário ou secundário que está a 10 cm da superfície da pele do indivíduo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido primário ou secundário que está a 5 cm da superfície da pele do indivíduo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido cutâneo. Em algumas modalidades, o tumor sólido cutâneo é uma metástase. Em algumas modalidades, o tumor sólido cutâneo é um câncer de pele. Em algumas modalidades, o tumor sólido cutâneo não é um câncer de pele. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido subcutâneo. Em algumas modalidades, o tumor sólido subcutâneo é uma metástase. Em algumas modalidades, o tumor sólido subcutâneo é um câncer de pele. Em algumas modalidades, o tumor sólido subcutâneo não é um câncer de pele.

[0031] Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor epitelial. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de próstata. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor ovariano. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de células renais. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor do trato gastrintestinal. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor hepático. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor colorretal. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de vasculatura. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor mesotelioma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor pancreático. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de mama. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor sarcoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de pulmão. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de cólon. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor melanoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de pulmão de células pequenas. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de câncer de pulmão de células não pequenas. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor neuroblastoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor testicular. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor carcinoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor adenocarcinoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor seminoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um retinoblastoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC). Em algumas modalidades, o tumor sólido é um carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço (HNSCC). Em algumas modalidades, o tumor sólido é HNSCC. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor osteossarcoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer renal. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer de tireoide. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer anaplásico da tireoide (ATC). Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer de fígado. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de cólon. Em algumas modalidades, o tumor sólido é qualquer um dos dois acima. Em algumas modalidades, o tumor sólido é quaisquer dois ou mais dos anteriores.

[0032] Em algumas modalidades, o tumor sólido é linfoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é linfoma não Hodgkin. Em algumas modalidades, o tumor sólido é linfoma de Hodgkin. Em algumas modalidades, o linfoma de tumor sólido não é um linfoma do sistema nervoso central.

[0033] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é HNSCC. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma da mucosa com apenas locais da mucosa. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é HNSCC e melanoma da mucosa com apenas locais da mucosa.

[0034] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma uveal ou melanoma da mucosa. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é câncer de mama. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é sarcoma de mama ou câncer de mama triplo negativo.

[0035] Em algumas modalidades, os RNAs são administrados como monoterapia.

[0036] Em algumas modalidades, o indivíduo tem mais de um tumor sólido. Em alguns casos, o pelo menos um tumor é resistente, refratário ou intolerante à terapia antipD-1 ou antipD-L1. Em algumas modalidades, o pelo menos um tumor é resistente, refratário ou intolerante à terapia antipD-1 ou antipD-L1 e pelo menos um tumor não é. Em algumas modalidades, onde mais de um tumor sólido está presente, os tumores resistentes e não resistentes, se presentes, são tratados com sucesso.

[0037] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido em estágio III, subconjuntos do estágio III, estágio IV ou subconjuntos do estágio IV. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é câncer em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV.

[0038] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido está em um estágio avançado. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido não é passível de ressecção. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido está em um estágio avançado e não é passível de ressecção.

[0039] Em algumas modalidades, o tumor sólido se espalhou de sua origem para outro local no indivíduo.

[0040] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido tem uma ou mais lesões cutâneas ou subcutâneas. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido sofreu metástase. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido sofreu metástase, mas não é um câncer de pele.

[0041] Em algumas modalidades, o indivíduo não tem outras opções de tratamento.

[0042] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é aquele para o qual uma terapia antipD1 ou antipD-L1 é rotineiramente usada, mas que ainda não foi tratado com a terapia.

[0043] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma não passível de ressecção em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV que é resistente e/ou refratário à terapia antipD-1 ou antipD- L1. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido compreende lesões superficiais ou subcutâneas e/ou metástases.

[0044] Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença mensurável de acordo com os critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) 1.1. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma expectativa de vida de mais de 3 meses. Em algumas modalidades, o indivíduo tem pelo menos 18 anos de idade.

[0045] Em algumas modalidades, os RNAs são injetados intratumoralmente.

[0046] Em algumas modalidades, os RNAs são injetados intratumoralmente apenas em locais da mucosa do câncer de tumor sólido.

[0047] Em algumas modalidades, os RNAs são administrados durante cerca de 5 meses. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados uma vez por semana. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados durante um máximo de 52 semanas.

[0048] Em algumas modalidades, a proteína IFNα é uma proteína IFNα2b.

[0049] Em algumas modalidades, o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18; e/ou a proteína IL-12sc compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; e/ou o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p40 de IL-12sc (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p30 de IL-12sc (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e compreende ainda nucleotídeos entre as porções p40 e p35 que codificam um polipeptídeo ligante.

[0050] Em algumas modalidades, o RNA que codifica uma proteína de IL-15 sushi compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26; e/ou a proteína IL-15 sushi compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; e/ou o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com o domínio sushi do receptor alfa de IL-15 (nucleotídeos 1-321 de SEQ ID NO: 26) e pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a IL-15 madura (nucleotídeos 382-729 de SEQ ID NO: 26) e compreende ainda opcionalmente nucleotídeos entre o domínio sushi de IL-15 e a IL-15 madura que codifica um polipeptídeo ligante.

[0051] Em algumas modalidades, o RNA que codifica uma proteína IFNα compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 e/ou a proteína IFNα compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96%, 95%, 90%, 85% ou 80% de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19.

[0052] Em algumas modalidades, o RNA que codifica uma proteína GM-CSF compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 e/ou a proteína GM-CSF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27.

[0053] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina. Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina. Em algumas modalidades, cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é independentemente selecionado a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende mais de um tipo de nucleosídeo modificado e em que os nucleosídeos modificados são independentemente selecionados a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) e 5-metil- uridina (m5U). Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[0054] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG (também algumas vezes denominado como m27,3`OG(5')ppp(5')m2'-OApG). Em algumas modalidades, cada RNA compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'- O)ApG (também algumas vezes denominado como m27,3`OG(5')ppp(5')m2'-OApG).

[0055] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6. Em algumas modalidades, cada RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90%, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

[0056] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID

NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, cada RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

[0057] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, cada RNA compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende pelo menos 100 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende ou consiste na cauda poli-A mostrada em SEQ ID NO: 30.

[0058] Em algumas modalidades, um ou mais RNA compreendem: i um cap 5' que compreende m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G; ii uma 5' UTR que compreende (i) uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6; iii uma 3' UTR que compreende (i) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80% de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8; e iv uma cauda poli-A que compreende pelo menos 100 nucleotídeos.

[0059] Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende ou consiste em SEQ ID NO: 30.

[0060] Em algumas modalidades, o tratamento do tumor sólido compreende redução do tamanho de um tumor ou prevenção de metástase de câncer em um indivíduo.

[0061] Em algumas modalidades, os RNAs são administrados ao mesmo tempo. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados por meio de injeção. Em algumas modalidades, os RNAs são misturados em solução líquida antes da injeção.

[0062] Outras modalidades do presente pedido são as seguintes:

[0063] Modalidade A 1. Uma composição que compreende um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF para uso no tratamento de um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido, em que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0064] Modalidade A 2. Uma composição que compreende um RNA que codifica uma proteína IL-12sc para uso no tratamento de um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD- L1), em que o RNA é coadministrado com o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, o RNA que codifica uma proteína IFNα e o RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[0065] Modalidade A 3. Uma composição que compreende um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi para uso no tratamento de um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD- L1), em que o RNA é coadministrado com m RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[0066] Modalidade A 4. Uma composição que compreende um RNA que codifica uma proteína IFNα para uso no tratamento de um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1), em que o RNA é coadministrado com um RNA que codifica uma proteína IL- 12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[0067] Modalidade A 5. Uma composição que compreende um RNA que codifica uma proteína GM-CSF para uso no tratamento de um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD- L1), em que o RNA é coadministrado com um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi e um RNA que codifica uma proteína IFNα.

[0068] Modalidade A 6. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-5, em que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1).

[0069] Modalidade A 7. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-6, em que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0070] Modalidade A 8. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-7, em que o indivíduo não obteve sucesso na terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0071] Modalidade A 9. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-8, em que o indivíduo se tornou intolerante a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0072] Modalidade A 10. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-9, em que o indivíduo se tornou resistente a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0073] Modalidade A 11. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-10, em que o indivíduo se tornou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0074] Modalidade A 12. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-11, em que o câncer refratário ou resistente é aquele que não responde a um tratamento especificado.

[0075] Modalidade A 13. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-12, em que a refração ocorre desde o início do tratamento.

[0076] Modalidade A 14. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-13, em que a refração ocorre durante o tratamento.

[0077] Modalidade A 15. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-14, em que o câncer é resistente antes de início do tratamento.

[0078] Modalidade A 16. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-15, em que o indivíduo tem um câncer que não responde à terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD- 1) e/ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0079] Modalidade A 17. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-16, em que o indivíduo tem um câncer que está se tornando refratário ou resistente a um tratamento especificado.

[0080] Modalidade A 18. A composição de acordo com a modalidade A 17, em que o tratamento especificado é uma terapia antipD1 ou antipD-L1.

[0081] Modalidade A 19. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-18, em que o indivíduo se tornou menos responsivo à terapia desde a primeira vez que a recebeu.

[0082] Modalidade A 20. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-19, em que o indivíduo não recebeu a terapia, mas tem um tipo de câncer que normalmente não responde à terapia.

[0083] Modalidade A 21. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-20, em que o indivíduo tem câncer de tumor sólido resistente à terapia antipD-1 e/ou antipD-L1.

[0084] Modalidade A 22. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-21, em que o indivíduo tem um câncer de tumor sólido com resistência adquirida à terapia antipD-1 e/ou antipD- L1.

[0085] Modalidade A 23. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-22, em que o indivíduo tem um câncer de tumor sólido com resistência inata à terapia antipD-1 e/ou antipD-L1.

[0086] Modalidade A 24. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-23, em que o indivíduo tem um câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático.

[0087] Modalidade A 25. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-24 que compreende ainda a etapa inicial de selecionar um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[0088] Modalidade A 26. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-25, em que o indivíduo é um ser humano.

[0089] Modalidade A 27. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-26, em que o indivíduo tem um tumor sólido metastático.

[0090] Modalidade A 28. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-27, em que o indivíduo tem um tumor sólido não passível de ressecção.

[0091] Modalidade A 29. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-28, em que o indivíduo tem uma célula cancerosa que compreende uma perda parcial ou total da função de beta-2-microglobulina (B2M).

[0092] Modalidade A 30. A composição de acordo com as modalidades A 29, em que a célula cancerosa tem uma perda parcial da função de B2M.

[0093] Modalidade A 31. A composição de acordo com a modalidade A 29, em que a célula cancerosa tem uma perda total da função de B2M.

[0094] Modalidade A 32. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-31, em que a perda parcial ou total da função de B2M é avaliada ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa do mesmo indivíduo, opcionalmente em que a célula não cancerosa é do mesmo tecido do qual a célula cancerosa foi derivada.

[0095] Modalidade A 33. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-32, em que o indivíduo compreende uma mutação no gene de B2M.

[0096] Modalidade A 34. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-33, em que a mutação é uma substituição, inserção ou eliminação.

[0097] Modalidade A 35. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-34, em que o gene de B2M compreende uma perda de heterozigosidade (LOH).

[0098] Modalidade A 36. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-35, em que o indivíduo compreende uma mutação de deslocamento de quadro.

[0099] Modalidade A 37. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-36, em que o indivíduo compreende uma mutação de deslocamento de quadro no éxon 1 de B2M.

[00100] Modalidade A 38. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-37, em que o indivíduo compreende uma mutação de deslocamento de quadro que compreende p.Leu13fs e/ou p.Ser14fs.

[00101] Modalidade A 39. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-38, em que o indivíduo tem um nível reduzido de proteína B2M comparado com um indivíduo sem perda parcial ou total da função de B2M.

[00102] Modalidade A 40. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-39, em que o indivíduo tem um nível reduzido de proteína do principal complexo de histocompatibilidade de classe I (MHC I) expressa na superfície comparado com um controle, opcionalmente em que o controle é uma amostra não cancerosa do mesmo indivíduo.

[00103] Modalidade A 41. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-40, em que o câncer de tumor sólido é um tumor epitelial, tumor de próstata, tumor ovariano, tumor de células renais, tumor do trato gastrintestinal, tumor hepático, tumor colorretal, tumor de vasculatura, tumor mesotelioma, tumor pancreático, tumor de mama, tumor sarcoma, tumor de pulmão, tumor do cólon, tumor melanoma, tumor de pulmão de células pequenas, câncer pulmonar de células não pequenas, tumor neuroblastoma, tumor testicular, tumor carcinoma, tumor adenocarcinoma, tumor seminoma, retinoblastoma, carcinoma cutâneo de células escamosas (CSCC), carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de cabeça e pescoço, tumor osteossarcoma, tumor de rim, tumor de tireoide, câncer de tireoide anaplásico (ATC), tumor de fígado, tumor de cólon ou outros tumores sólidos passíveis de injeção intratumoral.

[00104] Modalidade A 42. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-41, em que o câncer de tumor sólido é melanoma.

[00105] Modalidade A 43. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-42, em que o câncer de tumor sólido não é melanoma.

[00106] Modalidade A 44. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-42, em que o câncer de tumor sólido é melanoma e em que o melanoma é melanoma uveal ou melanoma da mucosa.

[00107] Modalidade A 45. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-43, em que o câncer de tumor sólido é melanoma que compreende metástases superficiais, subcutâneas e/ou linfonodos passíveis de injeção intratumoral.

[00108] Modalidade A 46. A composição de acordo com a modalidade 15, em que o câncer do tumor sólido é HNSCC e/ou melanoma da mucosa apenas com locais da mucosa.

[00109] Modalidade A 47. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-46, em que os RNAs são administrados como monoterapia.

[00110] Modalidade A 48. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-47, em que o indivíduo tem mais de um tumor sólido.

[00111] Modalidade A 49. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-48, em que pelo menos um tumor é resistente, refratário ou intolerante a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 e pelo menos um tumor não é.

[00112] Modalidade A 50. A composição de acordo com a modalidade A 49, em que tumores resistentes e não resistentes são tratados com sucesso.

[00113] Modalidade A 51. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-50, em que o câncer de tumor sólido está no estágio III, subconjuntos do estágio III, estágio IV ou subconjuntos do estágio IV.

[00114] Modalidade A 52. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-51, em que o câncer de tumor sólido está em estágio avançado e não é passível de ressecção.

[00115] Modalidade A 53. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-52, em que o tumor sólido se espalhou desde a sua origem para outro local no indivíduo.

[00116] Modalidade A 54. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-53, em que o câncer de tumor sólido tem uma ou mais lesões cutâneas ou subcutâneas, opcionalmente em que o câncer não é um câncer de pele.

[00117] Modalidade A 55. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-54, em que o câncer do tumor sólido é melanoma em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV.

[00118] Modalidade A 56. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-55, em que o indivíduo não foi tratado anteriormente com uma terapia antipD-1 ou antipD-L1.

[00119] Modalidade A 57. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-56, em que o câncer de tumor sólido é aquele em que uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 não é usada rotineiramente.

[00120] Modalidade A 58. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-57, em que o câncer de tumor sólido não é melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de rim, câncer de cabeça e pescoço, câncer de mama ou CSCC.

[00121] Modalidade A 59. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-58, em que o indivíduo não tem outras opções de tratamento.

[00122] Modalidade A 60. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-59, em que: a. o câncer de tumor sólido não é melanoma, CSCC ou HNSCC; e b. uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 não é usada rotineiramente; e c. não há outras opções de tratamento adequadas.

[00123] Modalidade A 61. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-60, em que o câncer de tumor sólido é aquele para o qual uma terapia antipD1 ou antipD-L1 é rotineiramente usada, mas que ainda não foi tratado com a terapia.

[00124] Modalidade A 62. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-61, em que o câncer de tumor sólido é melanoma não passível de ressecção em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV que é resistente e/ou refratário à terapia antipD-1 ou antipD- L1.

[00125] Modalidade A 63. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-62, em que o câncer de tumor sólido compreende lesões superficiais ou subcutâneas e/ou metástases.

[00126] Modalidade A 64. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-63, em que o indivíduo tem duas ou três lesões tumorais.

[00127] Modalidade A 65. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-64, em que o indivíduo tem doença mensurável de acordo com os critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) 1.1.

[00128] Modalidade A 66. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-65, em que o indivíduo tem uma expectativa de vida de mais de 3 meses.

[00129] Modalidade A 67. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-66, em que o indivíduo tem pelo menos 18 anos de idade.

[00130] Modalidade A 68. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-67, em que: a. o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18; e/ou b. a proteína IL-12sc compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; e/ou c. o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96%, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p40 de IL- 12sc (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e pelo menos 99%, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p30 de IL-12sc (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e compreende ainda nucleotídeos entre as porções p40 e p35 que codificam um polipeptídeo ligante.

[00131] Modalidade A 69. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-68, em que: a. o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96%, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26; e/ou b. a proteína IL-15 sushi compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; e/ou c. o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com o domínio sushi do receptor alfa de IL-15 (nucleotídeos 1-321 de SEQ I D NO: 26) e pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a IL-15 madura (nucleotídeos 382-729 de SEQ ID NO: 26) e compreende ainda opcionalmente nucleotídeos entre o domínio sushi de IL-15 e a IL-15 madura que codifica um polipeptídeo ligante.

[00132] Modalidade A 70. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-69, em que: a. o RNA que codifica uma proteína IFNα compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90%, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 e/ou b. a proteína IFNα compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19.

[00133] Modalidade A 71. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-70, em que:

a. o RNA que codifica uma proteína GM-CSF compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 e/ou b. a proteína GM-CSF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27.

[00134] Modalidade A 72. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-71, em que pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina.

[00135] Modalidade A 73. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores A 1-72, em que pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

[00136] Modalidade A 74. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-73, em que cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina.

[00137] Modalidade A 75. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-74, em que cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

[00138] Modalidade A 76. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades 72-75, em que o nucleosídeo modificado é independentemente selecionado a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil- pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U).

[00139] Modalidade A 77. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-76, em que pelo menos um RNA compreende mais de um tipo de nucleosídeo modificado, em que os nucleosídeos modificados são independentemente selecionados a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina

(m5U).

[00140] Modalidade A 78. A composição de acordo com a modalidade A 77, em que o nucleosídeo modificado é N1-metil- pseudouridina (m1ψ).

[00141] Modalidade A 79. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-78, em que pelo menos um RNA compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G.

[00142] Modalidade A 80. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-79, em que cada RNA compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G.

[00143] Modalidade A 81. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-80, em que pelo menos um RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem em pelo menos 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85% ou 80% de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

[00144] Modalidade A 82. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-81, em que cada RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90%, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

[00145] Modalidade A 83. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-82, em que pelo menos um RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98%, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

[00146] Modalidade A 84. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-83, em que cada RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

[00147] Modalidade A 85. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-84, em que pelo menos um RNA compreende uma cauda poli-A.

[00148] Modalidade A 86. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-85, em que cada RNA compreende uma cauda poli-A.

[00149] Modalidade A 87. A composição de acordo com a modalidade A 84 ou A 85, em que a cauda poli-A compreende pelo menos 100 nucleotídeos.

[00150] Modalidade A 88. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 85-87, em que a cauda poli-A compreende a cauda poli-A mostrada em SEQ ID NO: 30.

[00151] Modalidade A 89. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-88, em que um ou mais RNA compreendem: a. um cap 5' que compreende m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G; b. uma 5' UTR que compreende (i) uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6; c. uma 3' UTR que compreende (i) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8; e d. uma cauda poli-A que compreende pelo menos 100 nucleotídeos.

[00152] Modalidade A 90. A composição de acordo com a modalidade A 89, em que a cauda poli-A compreende SEQ ID NO: 30.

[00153] Modalidade A 91. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-90, em que a composição é usada no tratamento de um câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático em um ser humano.

[00154] Modalidade A 92. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-91, em que o tratamento do tumor sólido compreende redução do tamanho de um tumor ou prevenção de metástase do câncer em um indivíduo.

[00155] Modalidade A 93. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-92, em que os RNAs são administrados ao mesmo tempo.

[00156] Modalidade A 94. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A 1-93, em que os RNAs são administrados via injeção.

[00157] Modalidade A 95. A composição de acordo com as modalidades A 93 ou A 94, em que os RNAs são misturados em solução líquida antes da injeção.

[00158] Modalidade A 96. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A1 - A96, em que o câncer de tumor sólido compreende um linfoma.

[00159] Modalidade A 97. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A1 - A96, em que o câncer de tumor sólido compreende linfoma de Hodgkin.

[00160] Modalidade A 98. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades A1 - A96, em que o câncer de tumor sólido compreende linfoma não Hodgkin.

[00161] Outras modalidades do presente pedido são as seguintes:

[00162] Modalidade B 1. Um método de tratamento de câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático em um indivíduo que compreende administrar um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, em que o RNA é coadministrado com um RNA que codifica um IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[00163] Modalidade B 2. Um método de tratamento de câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático em um indivíduo que compreende administrar um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, em que o RNA é coadministrado com um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[00164] Modalidade B 3. Um método de tratamento de câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático em um indivíduo que compreende administrar um RNA que codifica uma proteína IFNα, em que o RNA é coadministrado com um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[00165] Modalidade B 4. Um método de tratamento de câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático em um indivíduo que compreende administrar um RNA que codifica uma proteína GM-CSF, em que o RNA é coadministrado com um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi e um RNA que codifica uma proteína IFNα.

[00166] Modalidade B 5. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-4, em que o câncer de tumor sólido está no estágio III,

subconjuntos do estágio III, estágio IV ou subconjuntos do estágio IV.

[00167] Modalidade B 6. Método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-5, em que o câncer de tumor sólido está em estágio avançado e não é passível de ressecção.

[00168] Modalidade B 7. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-6, em que o tumor sólido se espalhou de sua origem para outro local no indivíduo.

[00169] Modalidade B 8. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-7, em que o câncer de tumor sólido é câncer em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV.

[00170] Modalidade B 9. O método de acordo com a modalidade B 8, em que o câncer em estágio IV não é passível de ressecção.

[00171] Modalidade B 10. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-9, em que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[00172] Modalidade B 11. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-10, em que o câncer de tumor sólido é melanoma, câncer de células escamosas cutâneo (CSCC), carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de rim, câncer de cabeça e pescoço, câncer de tireoide, câncer de cólon, câncer de fígado, câncer de ovário ou câncer de mama ou outros tumores sólidos passíveis de injeção intratumoral.

[00173] Modalidade B 12. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-11, em que o câncer de tumor sólido é melanoma.

[00174] Modalidade B 13. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-11, em que o câncer de tumor sólido é câncer de mama (por exemplo, sarcoma de mama, câncer de mama triplo negativo).

[00175] Modalidade B 14. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-11, em que o câncer de tumor sólido é câncer de ovário.

[00176] Modalidade B 15. O método de acordo com a modalidade B 14, em que o câncer de ovário é resistente à quimioterapia com base em platina.

[00177] Modalidade B 16. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-11, em que o câncer de tumor sólido é câncer de tireoide.

[00178] Modalidade B 17. O método de acordo com a modalidade B 16, em que o câncer de tireoide é câncer de tireoide anaplásico (ATC).

[00179] Modalidade B 18. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-11, em que o câncer de tumor sólido tem uma ou mais lesões cutâneas ou subcutâneas (por exemplo, metástase), mas não é um câncer de pele.

[00180] Modalidade B 19. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-12, em que o câncer do tumor sólido é melanoma em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV.

[00181] Modalidade B 20. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-19, em que o indivíduo não foi tratado anteriormente com uma terapia antipD-1 ou antipD-L1.

[00182] Modalidade B 21. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-20, em que o câncer de tumor sólido é aquele em que uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 não é usada rotineiramente.

[00183] Modalidade B 22. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-21, em que o câncer de tumor sólido não é melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de rim, câncer de cabeça e pescoço, câncer de mama ou CSCC.

[00184] Modalidade B 23. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-22, em que o indivíduo não tem outras opções de tratamento.

[00185] Modalidade B 24. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-23, em que: a. o câncer de tumor sólido não é melanoma, CSCC ou HNSCC; e b. uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 não é usada rotineiramente; e c. não há outras opções de tratamento adequadas.

[00186] Modalidade B 25. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-24, em que o câncer de tumor sólido é aquele para o qual uma terapia antipD1 ou antipD-L1 é usada rotineiramente, mas que não foi tratado com a terapia ainda.

[00187] Modalidade B 26. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-25, em que o câncer de tumor sólido é melanoma não passível de ressecção em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV que é resistente e/ou refratário à terapia antipD-1 ou antipD-L1.

[00188] Modalidade B 27. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-26, em que o câncer de tumor sólido compreende lesões superficiais ou subcutâneas e/ou metástases.

[00189] Modalidade B 28. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-27, em que o câncer de tumor sólido é um tumor epitelial, HNSCC, CSCC, tumor de próstata, tumor ovariano, tumor de células renais, tumor do trato gastrintestinal, tumor hepático, tumor colorretal, tumor de vasculatura, tumor mesotelioma, tumor pancreático, tumor de mama, tumor sarcoma, tumor de pulmão, tumor de cólon, melanoma, tumor de pulmão de células pequenas, tumor neuroblastoma, tumor testicular, tumor carcinoma, tumor adenocarcinoma, tumor seminoma, retinoblastoma ou tumor osteossarcoma.

[00190] Modalidade B 29. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-28, em que o indivíduo tem duas ou três lesões tumorais.

[00191] Modalidade B 30. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-29, em que o indivíduo tem doença mensurável de acordo com os critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) 1.1.

[00192] Modalidade B 31. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-30, em que o indivíduo tem uma expectativa de vida de mais de 3 meses.

[00193] Modalidade B 32. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-31, em que o indivíduo tem pelo menos 18 anos de idade.

[00194] Modalidade B 33. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-32, em que os RNAs são injetados intratumoralmente.

[00195] Modalidade B 34. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-33, em que os RNAs são administrados como monoterapia.

[00196] Modalidade B 35. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-34, em que os RNAs são administrados durante cerca de 5 meses.

[00197] Modalidade B 36. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-35, em que os RNAs são administrados uma vez por semana.

[00198] Modalidade B 37. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-36, em que os RNAs são administrados durante um máximo de 52 semanas.

[00199] Modalidade B 38. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-37, em que a proteína IFNα é uma proteína

IFNα2b.

[00200] Modalidade B 39. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-38, em que: a. o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90%, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18; e/ou b. a proteína IL-12sc compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; e/ou c. o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p40 de IL-12sc (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p30 de IL-12sc (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e compreende ainda nucleotídeos entre as porções p40 e p35 que codificam um polipeptídeo ligante.

[00201] Modalidade B 40. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-39, em que:

[00202] d. o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26; e/ou

[00203] e. a proteína IL-15 sushi compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; e/ou

[00204] f. o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com o domínio sushi do receptor alfa de IL-15 (nucleotídeos 1-321 de SEQ ID NO: 26) e pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a IL-15 madura (nucleotídeos 382- 729 de SEQ ID NO: 26) e compreende ainda opcionalmente nucleotídeos entre o domínio sushi de IL-15 e a IL-15 madura que codifica um polipeptídeo ligante.

[00205] Modalidade B 41. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-40, em que:

[00206] c. o RNA que codifica uma proteína IFNα compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90%, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 e/ou

[00207] d. a proteína IFNα compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19.

[00208] Modalidade B 42. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-41, em que:

[00209] c. o RNA que codifica uma proteína GM-CSF compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 e/ou

[00210] d. a proteína GM-CSF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27.

[00211] Modalidade B 43. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-42, em que pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina.

[00212] Modalidade B 44. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-43, em que pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

[00213] Modalidade B 45. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-44, em que cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina.

[00214] Modalidade B 46. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-45, em que cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

[00215] Modalidade B 47. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-46, em que o nucleosídeo modificado é independentemente selecionado a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil- pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U).

[00216] Modalidade B 48. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-47, em que pelo menos um RNA compreende mais de um tipo de nucleosídeo modificado, em que os nucleosídeos modificados são independentemente selecionados a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U).

[00217] Modalidade B 49. O método de acordo com a modalidade B 48, em que o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00218] Modalidade B 50. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-49, em que pelo menos um RNA compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G.

[00219] Modalidade B 51. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-50, em que cada RNA compreende o cap 5'

m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G.

[00220] Modalidade B 52. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-51, em que pelo menos um RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem em pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95%, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

[00221] Modalidade B 53. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-52, em que cada RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85% ou 80% de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

[00222] Modalidade B 54. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-53, em que pelo menos um RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97%, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

[00223] Modalidade B 55. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-54, em que cada RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96%, 95%, 90%, 85% ou 80% de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

[00224] Modalidade B 56. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-55, em que pelo menos um RNA compreende uma cauda poli-A.

[00225] Modalidade B 57. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-56, em que cada RNA compreende uma cauda poli-A.

[00226] Modalidade B 58. O método de acordo com a modalidade B 56 ou B 57, em que a cauda poli-A compreende pelo menos 100 nucleotídeos.

[00227] Modalidade B 59. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 56-58, em que a cauda poli-A compreende a cauda poli-A mostrada em SEQ ID NO: 30.

[00228] Modalidade B 60. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-59, em que um ou mais RNA compreendem: a. um cap 5' que compreende m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G; b. uma 5' UTR que compreende (i) uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6; c. uma 3' UTR que compreende (i) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80% de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8; e d. uma cauda poli-A que compreende pelo menos 100 nucleotídeos.

[00229] Modalidade B 61. O método de acordo com a modalidade B 60, em que a cauda poli-A compreende SEQ ID NO: 30.

[00230] Modalidade B 62. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-61, em que o indivíduo é um ser humano.

[00231] Modalidade B 63. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-62, em que o tratamento do tumor sólido compreende redução do tamanho de um tumor ou prevenção de metástase do câncer em um indivíduo.

[00232] Modalidade B 64. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-63, em que os RNAs são administrados ao mesmo tempo.

[00233] Modalidade B 65. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-64, em que os RNAs são administrados via injeção.

[00234] Modalidade B 66. O método de acordo com qualquer uma das modalidades B 1-65, em que os RNAs são misturados em solução líquida antes da injeção.

LEGENDAS DAS FIGURAS

[00235] A Figura 1A mostra um design global de tratamento exemplificativo.

[00236] A Figura 1B mostra um esquema de tratamento exemplificativo para administração da mistura de RNAs de citocina para o tratamento de um paciente com câncer de tumor sólido em estágio avançado, incluindo escalonamento de dose e expansão de dose da mistura de RNAs de citocina. A mistura de RNAs de citocina é administrada por via intratumoral como monoterapia.

[00237] As Figuras 2A-2I mostram a criação e caracterização de um modelo em murinos de resistência adquirida à terapia antipD-1. As Figuras 2A-2B mostram a geração de uma linhagem de tumor resistente à PD-1. A Figura 2A é um diagrama da abordagem de passagem in vivo. Resumidamente, camundongos C57BL6 com tumores MC38 foram tratados com anticorpo antipD-1 (clone RMP1-14), os tumores em crescimento foram excisados e células dos tumores foram cultivadas ex vivo antes da implantação em camundongos não expostos (näive). A Figura 2B mostra curvas de crescimento tumoral para MC38 e linhagens de células tumorais resistentes MC38 implantadas em camundongos C57BL6/J tratados com 10 mg/kg de anticorpo antipD-1 (n = 5/grupo). Os tratamentos com anticorpos foram administrados conforme indicado pelas setas. As Figuras 2C-2E mostram que as células resistentes MC38 não exibem mecanismos moleculares conhecidos de resistência à PD-1. As células resistentes MC38 e MC38 foram cultivadas in vitro e a expressão de diferentes proteínas foi avaliada por meio de citometria de fluxo. A Figura 2C é uma série de gráficos que mostram a expressão na superfície de PD- L1, B2M e IFNGR1 e IFNGR2. Linha, não coradas; amostra cheia e corada. A Figura 2D é um gráfico que mostra a expressão de PD-L1 após tratamento com IFNγ in vitro. A Figura 2E é um gráfico que mostra a expressão do complexo SIINFEKL-MHC I em células transduzidas por OVA. As células foram transduzidas para expressar ovalbumina e testadas quanto à apresentação de SIINFEKL em MHC I. As Figuras 2F-2I mostram tumores subcutâneos excisados e perfilados por meio de sequenciamento de RNA. A Figura 2F mostra a expressão gênica global de muitos genes desregulados em tumores resistentes (n = 13) comparado com MC38 precursor (n = 16). A Figura 2G mostra que a expressão de genes alvo de IFN é reduzida em tumores resistentes MC38. A Figura 2H mostra a análise MCPCounter que estima a abundância imune relativa, revelando linhagens de células T, NK, B e células de linhagem monocítica significativamente reduzidas. *, p < 0,05. A Figura 2I mostra a infiltração imune por meio de citometria de fluxo em células T CD8+ (CD45+ CD3+ CD4- CD8+), células T CD4+ (CD45+ CD3+ CD4+ CD8-), macrófagos (CD45+ CD11b+ F4/80+) e células assassinas naturais (CD45+ CD3- CD49b+ NK1.1+). Os resultados são representativos de doius experimentos independentes, n = 9 por grupo. * indica p < 0,05, ** p < 0,01, *** < 0,001 e **** p < 0,0001.

[00238] A Figura 3 mostra que células resistentes MC38 não expressam PD-L2. As células resistentes MC38 e MC38 foram cultivadas in vitro e a expressão de diferentes proteínas foi avaliada por meio de citometria de fluxo. A expressão de PD-L2 após o tratamento com IFN é mostrada.

[00239] As Figuras 4A-4B mostram frequência reduzida de células imunes em tumores resistentes através de coloração imuno- histoquímica. Os tumores resistentes MC38 e MC38 embebidos em parafina foram analisados através de coloração imuno-histoquímica quanto à infiltração de células CD45+ (cor escura). Os resultados são representativos de dois experimentos independentes; n = 10 tumores por grupo. A Figura 4A mostra imagens representativas. A Figura 4B mostra a quantificação.

[00240] As Figuras 5A-5B mostram imunogenicidade reduzida de tumores resistentes. Culturas de linfócitos T citotóxicos (CTL) foram geradas a partir de 5 camundongos C57BL6 individuais portadores de tumores MC38 precursores que exibiram regressão completa em resposta ao bloqueio de PD-1. Os CTLs foram cocultivados com células tumorais resistentes e MC38 e a morte (Figura 4A) e a liberação de IFN (Figura 5B) foram medidas.

[00241] As Figuras 6A-6D mostram que camundongos C57BL6/J com tumores subcutâneos resistentes MC38 ou MC38 foram tratados com sucesso com injeção intratumoral de mistura de RNAs de citocina (Figuras 6B e 6D), conforme medido pela carga tumoral. Os tratamentos com mRNA foram administrados a cada quatro dias (conforme indicado pelas setas) em uma dose de 40 µg de mRNA total. "Luc" (Figuras 6A e 6C) indica o mRNA de controle de luciferase.

[00242] A Figura 7 mostra que camundongos C57BL6/J com tumores subcutâneos resistentes MC38 ou MC38 foram tratados com sucesso com injeção intratumoral de mistura de RNAs de citocina conforme medido pela sobrevida global. Os tratamentos com mRNA foram administrados a cada quatro dias (conforme indicado pelas setas) em uma dose de 40 µg de mRNA total. "Luc" indica mRNA de controle de luciferase.

[00243] As Figuras 8A-8B mostram a análise de citometria de fluxo da expressão na superfície da microglobulina beta-2 (B2M) em MC38 (Figura 8A) e MC38 com eliminação de B2M (Figura 8B).

[00244] As Figuras 9A-9D mostram que uma combinação da mistura de RNAs de citocina com anticorpo antipD-1 aumentou a sobrevida em um modelo de câncer de flanco duplo B16F10 (Figura 9A) e um modelo de tumor MC38 (Figura 9B). Sobrevida global no modelo de flanco único com tumores com silenciamento (knockout) MC38-B2M tratados com mistura de RNAs de citocina (Figura 9C) ou no modelo de flanco duplo heterólogo com tumores com silenciamento MC38-B2M/MC38- WT (Figura 9D).

[00245] A Figura 10 mostra alterações no volume do tumor após mistura de mRNA de citocina, terapia antipD-1 ou uma combinação de mistura de mRNA de citocina e terapia antipD-1 em vários modelos de câncer de tumor sólido in vivo. Os valores numéricos correspondem às alterações no volume do tumor desde a linha de base (ΔT/ΔC, %). As alterações no volume do tumor para cada grupo tratado (T) e controle de veículo (C) são calculadas para cada animal subtraindo o volume do tumor no dia do primeiro tratamento do volume do tumor no último dia, quando todos os camundongos de controle ainda estavam vivos. O ΔT mediano é calculado para o grupo tratado e o ΔC mediano é calculado para o grupo de controle de veículo. A proporção ΔT/ΔC é calculada e expressa em porcentagem.

[00246] A Figura 11 mostra uma área "peritumoralmente" ou "peritumoral" que tem cerca de 2 mm de largura e é adjacente à frente invasiva da periferia do tumor. A área peritumoral compreende o tecido do hospedeiro.

DESCRIÇÃO DAS SEQUÊNCIAS

[00247] A Tabela 1 fornece uma lista de determinadas sequências citadas no presente documento.

TABELA 1: DESCRIÇÃO DAS SEQUÊNCIAS SEQ ID Descrição SEQUÊNCIA NO: 5’ UTR 1 Não usada 2 Não usada 3 5’ UTR (DNA) GGAATAAACTAGTCTCAACACAACATATACAAAACAAACGAATCTCAAGCAATCAAGCATTCTACTTCT

ATTGCAGCAATTTAAATCATTTCTTTTAAAGCAAAAGCAATTTTCTGAAAATTTTCACCATTTACGAACG

ATAGCC 4 5’ UTR (RNA) GGAAUAAACUAGUCUCAACACAACAUAUACAAAACAAACGAAUCUCAAGCAAUCAAGCAUUCUACU

UCUAUUGCAGCAAUUUAAAUCAUUUCUUUUAAAGCAAAAGCAAUUUUCUGAAAAUUUUCACCAUUU

ACGAACGAUAGCC 48/281 5 5' UTR Mod AGACGAACTAGTATTCTTCTGGTCCCCACAGACTCAGAGAGAACCCGCCACC alternativa (DNA) 6 5' UTR Mod AGACGAACUAGUAUUCUUCUGGUCCCCACAGACUCAGAGAGAACCCGCCACC alternativa (RNA) 3’ UTR 7 3’ UTR (DNA) CTCGAGCTGGTACTGCATGCACGCAATGCTAGCTGCCCCTTTCCCGTCCTGGGTACCCCGAGTCTCCC

CCGACCTCGGGTCCCAGGTATGCTCCCACCTCCACCTGCCCCACTCACCACCTCTGCTAGTTCCAGAC ACCTCCCAAGCACGCAGCAATGCAGCTCAAAACGCTTAGCCTAGCCACACCCCCACGGGAAACAGCA GTGATTAACCTTTAGCAATAAACGAAAGTTTAACTAAGCTATACTAACCCCAGGGTTGGTCAATTTCGT GCCAGCCACACCGAGACCTGGTCCAGAGTCGCTAGCCGCGTCGCT

8 3’ UTR (RNA) CUCGAGCUGGUACUGCAUGCACGCAAUGCUAGCUGCCCCUUUCCCGUCCUGGGUACCCCGAGUCUC

CCCCGACCUCGGGUCCCAGGUAUGCUCCCACCUCCACCUGCCCCACUCACCACCUCUGCUAGUUCC AGACACCUCCCAAGCACGCAGCAAUGCAGCUCAAAACGCUUAGCCUAGCCACACCCCCACGGGAAA CAGCAGUGAUUAACCUUUAGCAAUAAACGAAAGUUUAACUAAGCUAUACUAACCCCAGGGUUGGUC

AAUUUCGUGCCAGCCACACCGAGACCUGGUCCAGAGUCGCUAGCCGCGUCGCU 9-13 Não usada IL-12sc 14 IL-12sc MCHQQLVISWFSLVFLASPLVAIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGS humana GKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTC (aminoácidos) WWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVD

AVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREK KDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGSSGGGGSPGGGSSRNLPVATPDPGMF

PCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNG 49/281

SCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQ KSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

15 IL-12sc ATGTGTCACCAGCAGTTGGTCATCTCTTGGTTTTCCCTGGTTTTTCTGGCATCTCCCCTCGTGGCCATAT humana não GGGAACTGAAGAAAGATGTTTATGTCGTAGAATTGGATTGGTATCCGGATGCCCCTGGAGAAATGGTGG otimizada (CDS TCCTCACCTGTGACACCCCTGAAGAAGATGGTATCACCTGGACCTTGGACCAGAGCAGTGAGGTCTTAG DNA) GCTCTGGCAAAACCCTGACCATCCAAGTCAAAGAGTTTGGAGATGCTGGCCAGTACACCTGTCACAAAG

GAGGCGAGGTTCTAAGCCATTCGCTCCTGCTGCTTCACAAAAAGGAAGATGGAATTTGGTCCACTGATAT

TTTAAAGGACCAGAAAGAACCCAAAAATAAGACCTTTCTAAGATGCGAGGCCAAGAATTATTCTGGACGT Notação de TTCACCTGCTGGTGGCTGACGACAATCAGTACTGATTTGACATTCAGTGTCAAAAGCAGCAGAGGGTCTT sequência CTGACCCCCAAGGGGTGACGTGCGGAGCTGCTACACTCTCTGCAGAGAGAGTCAGAGGGGACAACAAG CAPS: domínio GAGTATGAGTACTCAGTGGAGTGCCAGGAGGACAGTGCCTGCCCAGCTGCTGAGGAGAGTCTGCCCAT p40; TGAGGTCATGGTGGATGCCGTTCACAAGCTCAAGTATGAAAACTACACCAGCAGCTTCTTCATCAGGGA CAPS: ligante; CATCATCAAACCTGACCCACCCAAGAACTTGCAGCTGAAGCCATTAAAGAATTCTCGGCAGGTGGAGGT CAPS: p35. CAGCTGGGAGTACCCTGACACCTGGAGTACTCCACATTCCTACTTCTCCCTGACATTCTGCGTTCAGGTC

CAGGGCAAGAGCAAGAGAGAAAAGAAAGATAGAGTCTTCACGGACAAGACCTCAGCCACGGTCATCTGC

CGCAAAAATGCCAGCATTAGCGTGCGGGCCCAGGACCGCTACTATAGCTCATCTTGGAGCGAATGGGC 50/281

ATCTGTGCCCTGCAGTGGCTCTAGCGGAGGGGGAGGCTCTCCTGGCGGGGGATCTAGCAGAAACCTC CCCGTGGCCACTCCAGACCCAGGAATGTTCCCATGCCTTCACCACTCCCAAAACCTGCTGAGGGCCGT CAGCAACATGCTCCAGAAGGCCAGACAAACTCTAGAATTTTACCCTTGCACTTCTGAGGAAATTGATC ATGAAGATATCACAAAAGATAAAACCAGCACAGTGGAGGCCTGTTTACCATTGGAATTAACCAAGAAT GAGAGTTGCCTAAATTCCAGAGAGACCTCTTTCATAACTAATGGGAGTTGCCTGGCCTCCAGAAAGAC CTCTTTTATGATGGCCCTGTGCCTTAGTAGTATTTATGAAGACTTGAAGATGTACCAGGTGGAGTTCAA GACCATGAATGCAAAGCTTCTGATGGATCCTAAGAGGCAGATCTTTCTAGATCAAAACATGCTGGCAG TTATTGATGAGCTGATGCAGGCCCTGAATTTCAACAGTGAGACTGTGCCACAAAAATCCTCCCTTGAA GAACCGGATTTTTATAAAACTAAAATCAAGCTCTGCATACTTCTTCATGCTTTCAGAATTCGGGCAGTG ACTATTGATAGAGTGATGAGCTATCTGAATGCTTCCTGATGA

16 IL-12sc ATGTGTCACCAGCAGCTGGTGATCTCATGGTTCTCCCTGGTATTTCTGGCATCTCCTCTTGTCGCAATCT humana GGGAACTGAAGAAAGACGTGTATGTCGTTGAGCTCGACTGGTATCCGGATGCGCCTGGCGAGATGGTG otimizada (CDS GTGCTGACCTGTGACACCCCAGAGGAGGATGGGATCACTTGGACCCTTGATCAATCCTCCGAAGTGCTC DNA) GGGTCTGGCAAGACTCTGACCATACAAGTGAAAGAGTTTGGCGATGCCGGGCAGTACACTTGCCATAAG

GGCGGAGAAGTTCTGTCCCACTCACTGCTGCTGCTGCACAAGAAAGAGGACGGAATTTGGAGTACCGAT

ATCCTGAAAGATCAGAAAGAGCCCAAGAACAAAACCTTCTTGCGGTGCGAAGCCAAGAACTACTCAGGG Notação de AGATTTACTTGTTGGTGGCTGACGACGATCAGCACCGATCTGACTTTCTCCGTGAAATCAAGTAGGGGAT sequência CATCTGACCCTCAAGGAGTCACATGTGGAGCGGCTACTCTGAGCGCTGAACGCGTAAGAGGGGACAAT CAPS: domínio AAGGAGTACGAGTATAGCGTTGAGTGCCAAGAGGATAGCGCATGCCCCGCCGCCGAAGAATCATTGCC p40; CATTGAAGTGATGGTGGATGCTGTACACAAGCTGAAGTATGAGAACTACACAAGCTCCTTCTTCATCCGT CAPS: ligante; GACATCATCAAACCAGATCCTCCTAAGAACCTCCAGCTTAAACCTCTGAAGAACTCTAGACAGGTGGAAG CAPS: p35. TGTCTTGGGAGTATCCCGACACCTGGTCTACACCACATTCCTACTTCAGTCTCACATTCTGCGTTCAGGT

ACAGGGCAAGTCCAAAAGGGAGAAGAAGGATCGGGTCTTTACAGATAAAACAAGTGCCACCGTTATATG

CCGGAAGAATGCCTCTATTTCTGTGCGTGCGCAGGACAGATACTATAGCAGCTCTTGGAGTGAATGGGC 51/281

CAGTGTCCCATGTTCAGGGTCATCCGGTGGTGGCGGCAGCCCCGGAGGCGGTAGCTCCAGAAATCTCC CTGTGGCTACACCTGATCCAGGCATGTTTCCCTGTTTGCACCATAGCCAAAACCTCCTGAGAGCAGTC AGCAACATGCTCCAGAAAGCTAGACAAACACTGGAATTCTACCCATGCACCTCCGAGGAAATAGATCA CGAGGATATCACTAAGGACAAAACAAGCACTGTCGAAGCATGCCTTCCCTTGGAACTGACAAAGAAC GAGAGTTGCCTTAATTCAAGAGAAACATCTTTCATTACAAACGGTAGCTGCTTGGCAAGCAGAAAAAC ATCTTTTATGATGGCCCTTTGTCTGAGCAGTATTTATGAGGATCTCAAAATGTACCAGGTGGAGTTTAA GACCATGAATGCCAAGCTGCTGATGGACCCAAAGAGACAGATTTTCCTCGATCAGAATATGCTGGCTG TGATTGATGAACTGATGCAGGCCTTGAATTTCAACAGCGAAACCGTTCCCCAGAAAAGCAGTCTTGAA GAACCTGACTTTTATAAGACCAAGATCAAACTGTGTATTCTCCTGCATGCCTTTAGAATCAGAGCAGTC ACTATAGATAGAGTGATGTCCTACCTGAATGCTTCCTGATGA

17 IL-12sc AUGUGUCACCAGCAGUUGGUCAUCUCUUGGUUUUCCCUGGUUUUUCUGGCAUCUCCCCUCGUGGCC humana não AUAUGGGAACUGAAGAAAGAUGUUUAUGUCGUAGAAUUGGAUUGGUAUCCGGAUGCCCCUGGAGA otimizada (RNA AAUGGUGGUCCUCACCUGUGACACCCCUGAAGAAGAUGGUAUCACCUGGACCUUGGACCAGAGCA que codifica GUGAGGUCUUAGGCUCUGGCAAAACCCUGACCAUCCAAGUCAAAGAGUUUGGAGAUGCUGGCCAG CDS) UACACCUGUCACAAAGGAGGCGAGGUUCUAAGCCAUUCGCUCCUGCUGCUUCACAAAAAGGAAGAU

GGAAUUUGGUCCACUGAUAUUUUAAAGGACCAGAAAGAACCCAAAAAUAAGACCUUUCUAAGAUGC GAGGCCAAGAAUUAUUCUGGACGUUUCACCUGCUGGUGGCUGACGACAAUCAGUACUGAUUUGAC AUUCAGUGUCAAAAGCAGCAGAGGGUCUUCUGACCCCCAAGGGGUGACGUGCGGAGCUGCUACAC UCUCUGCAGAGAGAGUCAGAGGGGACAACAAGGAGUAUGAGUACUCAGUGGAGUGCCAGGAGGAC AGUGCCUGCCCAGCUGCUGAGGAGAGUCUGCCCAUUGAGGUCAUGGUGGAUGCCGUUCACAAGCU CAAGUAUGAAAACUACACCAGCAGCUUCUUCAUCAGGGACAUCAUCAAACCUGACCCACCCAAGAA CUUGCAGCUGAAGCCAUUAAAGAAUUCUCGGCAGGUGGAGGUCAGCUGGGAGUACCCUGACACCU GGAGUACUCCACAUUCCUACUUCUCCCUGACAUUCUGCGUUCAGGUCCAGGGCAAGAGCAAGAGAG

AAAAGAAAGAUAGAGUCUUCACGGACAAGACCUCAGCCACGGUCAUCUGCCGCAAAAAUGCCAGCA 52/281

UUAGCGUGCGGGCCCAGGACCGCUACUAUAGCUCAUCUUGGAGCGAAUGGGCAUCUGUGCCCUGC AGUGGCUCUAGCGGAGGGGGAGGCUCUCCUGGCGGGGGAUCUAGCAGAAACCUCCCCGUGGCCAC UCCAGACCCAGGAAUGUUCCCAUGCCUUCACCACUCCCAAAACCUGCUGAGGGCCGUCAGCAACAU GCUCCAGAAGGCCAGACAAACUCUAGAAUUUUACCCUUGCACUUCUGAGGAAAUUGAUCAUGAAGA UAUCACAAAAGAUAAAACCAGCACAGUGGAGGCCUGUUUACCAUUGGAAUUAACCAAGAAUGAGAG UUGCCUAAAUUCCAGAGAGACCUCUUUCAUAACUAAUGGGAGUUGCCUGGCCUCCAGAAAGACCUC UUUUAUGAUGGCCCUGUGCCUUAGUAGUAUUUAUGAAGACUUGAAGAUGUACCAGGUGGAGUUCA AGACCAUGAAUGCAAAGCUUCUGAUGGAUCCUAAGAGGCAGAUCUUUCUAGAUCAAAACAUGCUGG CAGUUAUUGAUGAGCUGAUGCAGGCCCUGAAUUUCAACAGUGAGACUGUGCCACAAAAAUCCUCCC UUGAAGAACCGGAUUUUUAUAAAACUAAAAUCAAGCUCUGCAUACUUCUUCAUGCUUUCAGAAUUC GGGCAGUGACUAUUGAUAGAGUGAUGAGCUAUCUGAAUGCUUCCUGAUGA

18 IL-12sc AUGUGUCACCAGCAGCUGGUGAUCUCAUGGUUCUCCCUGGUAUUUCUGGCAUCUCCUCUUGUCGCA humana AUCUGGGAACUGAAGAAAGACGUGUAUGUCGUUGAGCUCGACUGGUAUCCGGAUGCGCCUGGCGA otimizada (RNA GAUGGUGGUGCUGACCUGUGACACCCCAGAGGAGGAUGGGAUCACUUGGACCCUUGAUCAAUCCU que codifica CCGAAGUGCUCGGGUCUGGCAAGACUCUGACCAUACAAGUGAAAGAGUUUGGCGAUGCCGGGCAG CDS) UACACUUGCCAUAAGGGCGGAGAAGUUCUGUCCCACUCACUGCUGCUGCUGCACAAGAAAGAGGA

CGGAAUUUGGAGUACCGAUAUCCUGAAAGAUCAGAAAGAGCCCAAGAACAAAACCUUCUUGCGGUG CGAAGCCAAGAACUACUCAGGGAGAUUUACUUGUUGGUGGCUGACGACGAUCAGCACCGAUCUGA CUUUCUCCGUGAAAUCAAGUAGGGGAUCAUCUGACCCUCAAGGAGUCACAUGUGGAGCGGCUACU CUGAGCGCUGAACGCGUAAGAGGGGACAAUAAGGAGUACGAGUAUAGCGUUGAGUGCCAAGAGGA UAGCGCAUGCCCCGCCGCCGAAGAAUCAUUGCCCAUUGAAGUGAUGGUGGAUGCUGUACACAAGC UGAAGUAUGAGAACUACACAAGCUCCUUCUUCAUCCGUGACAUCAUCAAACCAGAUCCUCCUAAGA ACCUCCAGCUUAAACCUCUGAAGAACUCUAGACAGGUGGAAGUGUCUUGGGAGUAUCCCGACACCU GGUCUACACCACAUUCCUACUUCAGUCUCACAUUCUGCGUUCAGGUACAGGGCAAGUCCAAAAGGG

AGAAGAAGGAUCGGGUCUUUACAGAUAAAACAAGUGCCACCGUUAUAUGCCGGAAGAAUGCCUCUA 53/281

UUUCUGUGCGUGCGCAGGACAGAUACUAUAGCAGCUCUUGGAGUGAAUGGGCCAGUGUCCCAUGU UCAGGGUCAUCCGGUGGUGGCGGCAGCCCCGGAGGCGGUAGCUCCAGAAAUCUCCCUGUGGCUAC ACCUGAUCCAGGCAUGUUUCCCUGUUUGCACCAUAGCCAAAACCUCCUGAGAGCAGUCAGCAACAU GCUCCAGAAAGCUAGACAAACACUGGAAUUCUACCCAUGCACCUCCGAGGAAAUAGAUCACGAGGA UAUCACUAAGGACAAAACAAGCACUGUCGAAGCAUGCCUUCCCUUGGAACUGACAAAGAACGAGAG UUGCCUUAAUUCAAGAGAAACAUCUUUCAUUACAAACGGUAGCUGCUUGGCAAGCAGAAAAACAUC UUUUAUGAUGGCCCUUUGUCUGAGCAGUAUUUAUGAGGAUCUCAAAAUGUACCAGGUGGAGUUUAA GACCAUGAAUGCCAAGCUGCUGAUGGACCCAAAGAGACAGAUUUUCCUCGAUCAGAAUAUGCUGGC UGUGAUUGAUGAACUGAUGCAGGCCUUGAAUUUCAACAGCGAAACCGUUCCCCAGAAAAGCAGUCU UGAAGAACCUGACUUUUAUAAGACCAAGAUCAAACUGUGUAUUCUCCUGCAUGCCUUUAGAAUCAG

AGCAGUCACUAUAGAUAGAGUGAUGUCCUACCUGAAUGCUUCCUGAUGA IFNalfa2b (IFNα2b) 19 IFNα2b MALTFALLVALLVLSCKSSCSVGCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRRISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQ humana KAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRK (aminoácidos) YFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE

20 IFNα2b ATGGCCTTGACCTTTGCTTTACTGGTGGCCCTCCTGGTGCTCAGCTGCAAGTCAAGCTGCTCTGTGGGC humana não TGTGATCTGCCTCAAACCCACAGCCTGGGTAGCAGGAGGACCTTGATGCTCCTGGCACAGATGAGGA otimizada (CDS GAATCTCTCTTTTCTCCTGCTTGAAGGACAGACATGACTTTGGATTTCCCCAGGAGGAGTTTGGCAACC DNA) AGTTCCAAAAGGCTGAAACCATCCCTGTCCTCCATGAGATGATCCAGCAGATCTTCAACCTTTTCAGCA

CAAAGGACTCATCTGCTGCTTGGGATGAGACCCTCCTAGACAAATTCTACACTGAACTCTACCAGCAG CTGAATGACCTGGAAGCCTGTGTGATACAGGGGGTGGGGGTGACAGAGACTCCCCTGATGAAGGAGG ACTCCATTCTGGCTGTGAGGAAATACTTCCAAAGAATCACTCTCTATCTGAAAGAGAAGAAATACAGC CCTTGTGCCTGGGAGGTTGTCAGAGCAGAAATCATGAGATCTTTTTCTTTGTCAACAAACTTGCAAGAA

AGTTTAAGAAGTAAGGAATGATGA 21 IFNα2b ATGGCCCTGACTTTTGCCCTTCTCGTGGCTTTGTTGGTGCTGAGTTGCAAATCTTCCTGTAGTGTCGGAT humana GTGATCTGCCTCAAACCCACAGTCTGGGATCTAGGAGAACACTGATGCTGTTGGCACAGATGAGGAG otimizada (CDS AATTAGCCTCTTTTCCTGCCTGAAGGATAGACATGACTTCGGCTTTCCCCAAGAGGAGTTTGGCAATCA DNA) GTTCCAGAAAGCGGAAACGATTCCCGTTCTGCACGAGATGATCCAGCAGATCTTCAACCTCTTTTCAA

CCAAAGACAGCTCAGCAGCCTGGGATGAGACACTGCTGGACAAATTCTACACAGAACTGTATCAGCA 54/281

GCTTAACGATCTGGAGGCATGCGTGATCCAAGGGGTTGGTGTGACTGAAACTCCGCTTATGAAGGAG GACTCCATTCTGGCTGTACGGAAGTACTTCCAGAGAATAACCCTCTATCTGAAGGAGAAGAAGTACTC ACCATGTGCTTGGGAAGTCGTGAGAGCCGAAATCATGAGATCCTTCAGCCTTAGCACCAATCTCCAGG

AATCTCTGAGAAGCAAAGAGTGATGA 22 IFNα2b AUGGCCUUGACCUUUGCUUUACUGGUGGCCCUCCUGGUGCUCAGCUGCAAGUCAAGCUGCUCUGU humana não GGGCUGUGAUCUGCCUCAAACCCACAGCCUGGGUAGCAGGAGGACCUUGAUGCUCCUGGCACAGA otimizada (RNA UGAGGAGAAUCUCUCUUUUCUCCUGCUUGAAGGACAGACAUGACUUUGGAUUUCCCCAGGAGGAG que codifica UUUGGCAACCAGUUCCAAAAGGCUGAAACCAUCCCUGUCCUCCAUGAGAUGAUCCAGCAGAUCUUC CDS) AACCUUUUCAGCACAAAGGACUCAUCUGCUGCUUGGGAUGAGACCCUCCUAGACAAAUUCUACACU

GAACUCUACCAGCAGCUGAAUGACCUGGAAGCCUGUGUGAUACAGGGGGUGGGGGUGACAGAGAC UCCCCUGAUGAAGGAGGACUCCAUUCUGGCUGUGAGGAAAUACUUCCAAAGAAUCACUCUCUAUCU GAAAGAGAAGAAAUACAGCCCUUGUGCCUGGGAGGUUGUCAGAGCAGAAAUCAUGAGAUCUUUUU CUUUGUCAACAAACUUGCAAGAAAGUUUAAGAAGUAAGGAAUGAUGA

23 IFNα2b AUGGCCCUGACUUUUGCCCUUCUCGUGGCUUUGUUGGUGCUGAGUUGCAAAUCUUCCUGUAGUGU humana CGGAUGUGAUCUGCCUCAAACCCACAGUCUGGGAUCUAGGAGAACACUGAUGCUGUUGGCACAGA otimizada (RNA UGAGGAGAAUUAGCCUCUUUUCCUGCCUGAAGGAUAGACAUGACUUCGGCUUUCCCCAAGAGGAG que codifica UUUGGCAAUCAGUUCCAGAAAGCGGAAACGAUUCCCGUUCUGCACGAGAUGAUCCAGCAGAUCUUC CDS) AACCUCUUUUCAACCAAAGACAGCUCAGCAGCCUGGGAUGAGACACUGCUGGACAAAUUCUACACA

GAACUGUAUCAGCAGCUUAACGAUCUGGAGGCAUGCGUGAUCCAAGGGGUUGGUGUGACUGAAAC UCCGCUUAUGAAGGAGGACUCCAUUCUGGCUGUACGGAAGUACUUCCAGAGAAUAACCCUCUAUCU GAAGGAGAAGAAGUACUCACCAUGUGCUUGGGAAGUCGUGAGAGCCGAAAUCAUGAGAUCCUUCA

GCCUUAGCACCAAUCUCCAGGAAUCUCUGAGAAGCAAAGAGUGAUGA IL-15 sushi 24 IL-15 sushi MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSL humana TECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDL (aminoácidos) IQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECE

ELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS 55/281 25 IL-15 sushi ATGGCCCCGCGGCGGGCGCGCGGCTGCCGGACCCTCGGTCTCCCGGCGCTGCTACTGCTGCTGCTGC humana (CDS TCCGGCCGCCGGCGACGCGGGGCATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTG DNA) GGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGG

CACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTC

TCAAATGCATTAGAGACCCTGCCCTGGTTCACCAAAGGCCAGCGCCACCCGGGGGAGGATCTGGCGGC Notação de GGTGGGTCTGGCGGGGGATCTGGCGGAGGAGGAAGCTTACAGAACTGGGTGAATGTAATAAGTGATTT sequências GAAAAAAATTGAAGATCTTATTCAATCTATGCATATTGATGCTACTTTATATACGGAAAGTGATGTTCAC CAPS: IL-15 CCCAGTTGCAAAGTAACAGCAATGAAGTGCTTTCTCTTGGAGTTACAAGTTATTTCACTTGAGTCCGGA sushi; GATGCAAGTATTCATGATACAGTAGAAAATCTGATCATCCTAGCAAACAACAGTTTGTCTTCTAATGGG CAPS: ligante; AATGTAACAGAATCTGGATGCAAAGAATGTGAGGAACTGGAGGAAAAAAATATTAAAGAATTTTTGCA CAPS: IL-15 GAGTTTTGTACATATTGTCCAAATGTTCATCAACACTTCTTGATGA madura

26 IL-15 sushi AUGGCCCCGCGGCGGGCGCGCGGCUGCCGGACCCUCGGUCUCCCGGCGCUGCUACUGCUGCUGCU humana (RNA GCUCCGGCCGCCGGCGACGCGGGGCAUCACGUGCCCUCCCCCCAUGUCCGUGGAACACGCAGACA que codifica UCUGGGUCAAGAGCUACAGCUUGUACUCCAGGGAGCGGUACAUUUGUAACUCUGGUUUCAAGCGU CDS) AAAGCCGGCACGUCCAGCCUGACGGAGUGCGUGUUGAACAAGGCCACGAAUGUCGCCCACUGGAC

AACCCCCAGUCUCAAAUGCAUUAGAGACCCUGCCCUGGUUCACCAAAGGCCAGCGCCACCCGGGGG AGGAUCUGGCGGCGGUGGGUCUGGCGGGGGAUCUGGCGGAGGAGGAAGCUUACAGAACUGGGUG AAUGUAAUAAGUGAUUUGAAAAAAAUUGAAGAUCUUAUUCAAUCUAUGCAUAUUGAUGCUACUUUA UAUACGGAAAGUGAUGUUCACCCCAGUUGCAAAGUAACAGCAAUGAAGUGCUUUCUCUUGGAGUUA CAAGUUAUUUCACUUGAGUCCGGAGAUGCAAGUAUUCAUGAUACAGUAGAAAAUCUGAUCAUCCUA GCAAACAACAGUUUGUCUUCUAAUGGGAAUGUAACAGAAUCUGGAUGCAAAGAAUGUGAGGAACU GGAGGAAAAAAAUAUUAAAGAAUUUUUGCAGAGUUUUGUACAUAUUGUCCAAAUGUUCAUCAACAC

UUCUUGAUGA GM-CSF 27 GM-CSF MWLQSLLLLGTVACSISAPARSPSPSTQPWEHVNAIQEARRLLNLSRDTAAEMNETVEVISEMFDLQEPTC 56/281 humana LQTRLELYKQGLRGSLTKLKGPLTMMASHYKQHCPPTPETSCATQIITFESFKENLKDFLLVIPFDCWEPVQ (aminoácidos) E 28 GM-CSF ATGTGGCTCCAGAGCCTGCTGCTCTTGGGCACTGTGGCCTGCTCCATCTCTGCACCCGCCCGCTCGCC humana (CDS CAGCCCCAGCACGCAGCCCTGGGAGCATGTGAATGCCATCCAGGAGGCCCGGCGTCTGCTGAACCTG DNA) AGTAGAGACACTGCTGCTGAGATGAATGAAACAGTAGAAGTCATCTCAGAAATGTTTGACCTCCAGGA

GCCGACCTGCCTACAGACCCGCCTGGAGCTGTACAAGCAGGGCCTGCGGGGCAGCCTCACCAAGCTC AAGGGCCCCTTGACCATGATGGCCAGCCACTACAAGCAGCACTGCCCTCCAACCCCGGAAACTTCCT GTGCAACCCAGATTATCACCTTTGAAAGTTTCAAAGAGAACCTGAAGGACTTTCTGCTTGTCATCCCCT

TTGACTGCTGGGAGCCAGTCCAGGAGTGATGA 29 GM-CSF AUGUGGCUCCAGAGCCUGCUGCUCUUGGGCACUGUGGCCUGCUCCAUCUCUGCACCCGCCCGCUC humana (RNA GCCCAGCCCCAGCACGCAGCCCUGGGAGCAUGUGAAUGCCAUCCAGGAGGCCCGGCGUCUGCUGA que codifica ACCUGAGUAGAGACACUGCUGCUGAGAUGAAUGAAACAGUAGAAGUCAUCUCAGAAAUGUUUGACC CDS) UCCAGGAGCCGACCUGCCUACAGACCCGCCUGGAGCUGUACAAGCAGGGCCUGCGGGGCAGCCUC

ACCAAGCUCAAGGGCCCCUUGACCAUGAUGGCCAGCCACUACAAGCAGCACUGCCCUCCAACCCCG GAAACUUCCUGUGCAACCCAGAUUAUCACCUUUGAAAGUUUCAAAGAGAACCUGAAGGACUUUCUG CUUGUCAUCCCCUUUGACUGCUGGGAGCCAGUCCAGGAGUGAUGA

30 Poli-A AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCAUAUGACUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA exemplificativa AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA 31 sgRNA no GGCGTATGTATCAGTCTCAG Exemplo 3

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DESCRIÇÃO DETALHADA Definições

[00248] Conforme usado no presente documento, uma "mistura de RNAs de citocina", também algumas vezes denominada como "mistura de mRNAs de citocina", "mistura de citocina mRNAs" ou "mistura de citocina RNAs" compreende um RNA que codifica IFNα, um RNA que codifica IL-15 sushi, um RNA que codifica IL-12sc e um RNA que codifica GM-CSF, conforme descrito no presente documento.

[00249] "PD-1" também pode ser denominada como proteína de "morte celular programada 1" ou "morte celular programada-1". "PD-L1" também pode ser denominado como "ligante de proteína de morte celular programada 1", "ligante de proteína de morte celular programada-1" ou "ligante 1 de morte celular programada".

[00250] Conforme usado no presente documento, um "câncer de tumor sólido em estágio avançado", algumas vezes denominado no presente documento como "tumor sólido avançado" ou "câncer de tumor sólido avançado", compreende um câncer de tumor sólido cujo estágio é identificado como estágio III, subconjuntos do estágio III, estágio IV ou subconjuntos do estágio IV, avaliados por um sistema conhecido, por exemplo, o sistema de estadiamento de tumor, nódulo e metástase (TNM) desenvolvido pelo American Joint Committee on Cancer (AJCC) (consulte AJCC Cancer Staging Manual, 8ª Edição). Em algumas modalidades, o sistema de estadiamento TNM é usado para cânceres de tumor sólido diferentes de melanoma. Em algumas modalidades, o câncer é melanoma ou melanoma avançado, o qual compreende o estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio V, conforme avaliado pelo estadiamento AJCC de melanoma (8ª edição, 2018). Descrições não limitativas relacionadas ao estadiamento AJCC de melanoma são fornecidas em Gershenwald J.E., Scolyer R.A., Hess K.R. et al. Melanoma of the Skin. em: Amin MB, ed. AJCC Cancer Staging Manual.

8ª ed. Chicago, IL: AJCC-Springer; 2017: 563-585, todo o conteúdo do qual é incorporado ao presente documento a título de referência. Em algumas modalidades, o câncer é carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), ambos os quais podem estar avançados. Há sistemas de estadiamento similares para todos os principais cânceres e geralmente são com base nos detalhes clínicos e/ou patológicos do tumor e como estes fatores demonstraram afetar a sobrevida.

[00251] "Tumor" também pode ser denominado no presente documento como "neoplasma". Por exemplo, os termos "tumor sólido" e "neoplasia sólida" são permutáveis.

[00252] Um câncer "não passível de ressecção" (por exemplo, não passível de ressecção em estágio avançado) normalmente não pode ser removido com cirurgia.

[00253] RECIST (Critérios de Avaliação de Resposta para Tumores Sólidos (também Tumores)) fornece uma metodologia para avaliar a atividade e eficácia da terapia do câncer em tumores sólidos. As diretrizes RECIST foram criadas pelo Grupo de Trabalho RECIST que compreende representantes da European Organization for Research and Treatment of Cancer, National Cancer Institute of the United States e Canadian Cancer Trials Group, bem como várias empresas farmacêuticas e publicadas em Eisenhauer E.A., Therasse P., Bogaerts J. et al. New Response Evaluation Criteria in Solid Tumours: Revised RECIST Guideline (versão 1.1) Eur J Cancer. 45 (2009) 228-247, todo o conteúdo do qual é incorporado ao presente documento a título de referência. A seção 4.3.1 das diretrizes (página 232-233 de Eisenhauer) fornece o seguinte em relação à avaliação das lesões-alvo:

[00254] Resposta Completa (CR): Desaparecimento de todas as lesões-alvo. Qualquer linfonodo patológico (seja alvo ou não alvo) deve ter redução no eixo curto para < 10 mm.

[00255] Resposta Parcial (PR): Diminuição de pelo menos 30 % na soma dos diâmetros das lesões-alvo, tomando como referência a soma dos diâmetros basais.

[00256] Doença Progressiva (PD): Aumento de pelo menos 20 % na soma dos diâmetros das lesões-alvo, tomando como referência a menor soma do estudo (inclui a soma da linha de base se for a menor do estudo). Além do aumento relativo de 20 %, a soma também deve demonstrar um aumento absoluto de pelo menos 5 mm. (Nota: o aparecimento de uma ou mais novas lesões também é considerado progressão).

[00257] Doença Estável (SD): Nem redução suficiente para se qualificar para PR nem aumento suficiente para se qualificar para PD, tomando como referência os menores diâmetros de soma durante o estudo.

[00258] A seção 4.3.3 das diretrizes (página 233 de Eisenhauer) fornece o seguinte em relação à avaliação de lesões não alvo:

[00259] Embora algumas lesões não alvo possam realmente ser mensuráveis, elas não precisam ser medidas e, em vez disso, devem ser avaliadas apenas qualitativamente nos pontos de tempo especificados no protocolo.

[00260] Resposta Completa (CR): Desaparecimento de todas as lesões não alvo e normalização do nível do marcador tumoral. Todos os gânglios linfáticos devem ter tamanho não patológico (eixo curto < 10 mm).

[00261] Não CR/Não PD: Persistência de uma ou mais lesões não alvo e/ou manutenção do nível do marcador tumoral acima dos limites normais.

[00262] Doença Progressiva (PD): Progressão inequívoca de lesões não alvo existentes. (Nota: o aparecimento de uma ou mais novas lesões também é considerado progressão).

[00263] Um indivíduo que tem resistência "inata" ou "primária" a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 não responde inicialmente à terapia antipD-1 ou antipD-L1. Um indivíduo que tem resistência inata ou primária nunca demonstrou uma resposta clínica ao bloqueio de PD- 1/PD-L1. Consulte, por exemplo, Sharma et al. (2017) Cell 168: 707-723 em 709; consulte também Hugo et al. (2016) Cell 165 (1) 35-44; consulte também Nowicki et al. (2018) Cancer J. 24 (1): 47-53, cujos conteúdos são incorporados ao presente documento a título de referência. Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-1 ou antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo Doença Progressiva ou Doença Estável de acordo com os critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-1 ou antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo CR/Não PD para lesões não alvo que compreendem células cancerosas viáveis. Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 é caracterizado após o tratamento com terapia antipD-1 (qualquer período de tempo) como tendo Doença Progressiva de acordo com os critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo Doença Progressiva de acordo com os critérios RECIST (versão

1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 é caracterizado após o tratamento com terapia antipD-1 (qualquer período de tempo) como tendo Doença Estável de acordo com os critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo Doença Estável de acordo com os critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-1 ou antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo pelo menos um aumento de 20 % no diâmetro mais longo de um tumor sólido e/ou o aparecimento de um ou mais novos tumores sólidos.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-1 (qualquer período de tempo), como tendo pelo menos um aumento de 20 % no diâmetro mais longo de tumores sólidos e/ou o aparecimento de um ou mais novos tumores sólidos.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo pelo menos um aumento de 20 % no diâmetro mais longo de tumores sólidos e/ou o aparecimento de um ou mais novos tumores sólidos.

Em algumas modalidades, o aumento no diâmetro mais longo é um aumento de pelo menos 5 mm.

Em algumas modalidades, o período de tempo é cerca de 6 semanas, cerca de 8 semanas ou pelo menos 6 ou 8 semanas.

Em algumas modalidades, o período de tempo é 2, 3, 6, 12 ou mais meses.

Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor primário.

Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor passível de injeção.

Em algumas modalidades, o tumor sólido foi injetado com a mistura de mRNAs de citocina.

Em algumas modalidades, o tumor sólido foi selecionado para injeção com a mistura de mRNAs de citocina.

Em algumas modalidades, o tumor sólido é uma lesão subcutânea de ≥ 0,5 cm no diâmetro mais longo.

Em algumas modalidades, o tumor sólido está dentro de um grupo de múltiplas lesões de fusão passíveis de injeção que são confluentes.

Em algumas modalidades, o tumor sólido está dentro de um grupo de múltiplas lesões de fusão passíveis de injeção que são confluentes e têm o diâmetro mais longo (soma dos diâmetros de todas as lesões-alvo envolvidas) de ≥ 0,5 cm.

Em algumas modalidades, o tumor sólido não está sangrando ou supurando.

Em algumas modalidades, o diâmetro mais longo do tumor sólido é de pelo menos 10 mm (por exemplo, conforme medido por meio de varredura ou medição por tomografia computadorizada (CT)). Em algumas modalidades, o tumor sólido está no tórax de um indivíduo e o diâmetro mais longo do tumor sólido é de pelo menos 20 mm (por exemplo, conforme medido por raios X do tórax). Em algumas modalidades, o tumor sólido está em um linfonodo.

Em algumas modalidades, o linfonodo tem pelo menos 15 mm no eixo curto (por exemplo, quando avaliado por meio de tomografia computadorizada). Em algumas modalidades, o tumor sólido é um linfoma.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-1 ou antipD-L1 (qualquer período de tempo), como não tendo resposta ou doença estável de acordo com a Classificação de Lugano.

A versão da Classificação de Lugano citada no presente documento é descrita em Cheson et al., 2014, J Clin Oncol. 32 (27): 3059-68, cujo conteúdo inteiro é incorporado ao presente documento a título de referência.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-1 ou antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo Doença Progressiva de acordo com a Classificação de Lugano.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é caracterizado, após o tratamento com terapia antipD-1 ou antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo um tumor linfoma dentro de um linfonodo.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência inata a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é caracterizado,

após o tratamento com terapia antipD-1 ou antipD-L1 (qualquer período de tempo), como tendo um tumor linfoma dentro de um linfonodo, em que o linfonodo tem (i) um diâmetro mais longo maior do que 1,5 cm e (ii) um aumento de pelo menos 50 % do produto do nadir dos diâmetros perpendiculares (PPDs). Em algumas modalidades, o aumento no diâmetro mais longo é um aumento de pelo menos 5 mm. Em algumas modalidades, o período de tempo é cerca de 6 semanas, cerca de 8 semanas ou pelo menos 6 ou 8 semanas. Em algumas modalidades, o período de tempo é 2, 3, 6, 12 ou mais meses.

[00264] Um indivíduo que tem resistência "adquirida" ou "adaptativa" a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 responde inicialmente à terapia (por exemplo, qualquer nível de resposta), porém, após um período de tempo, apresenta recaídas e progride. Em algumas modalidades, a resposta à terapia é avaliada de acordo com os critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, a resistência adquirida ou adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é observada em indivíduos que eventualmente progridem durante a terapia, apesar de uma Resposta Completa ou Resposta Parcial inicial, tudo de acordo com os critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, a resistência adquirida ou adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 é observada em indivíduos que não respondem ao reinício de uma terapia antipD-1 ou antipD-L1. Consulte Sharma et al. (2017) Cell 168: 707-723 em 708; consulte também Nowicki et al. (2018) Cancer J. 24 (1): 47-53, cujos conteúdos inteiros são incorporados ao presente documento a título de referência. Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 compreende um tumor sólido cujo volume (i) diminuiu durante um período de tempo após o início da terapia antipD-1; e, então, (ii) aumentou após o período de tempo, apesar de terapia antipD-1 contínua. Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-L1 compreende um tumor sólido cujo volume (i) diminuiu durante um período de tempo após o início da terapia antipD-L1; e, então, (ii) aumentou após o período de tempo, apesar da terapia antipD-L1 contínua.

Em algumas modalidades, a resistência adaptativa está associada a um mecanismo de resistência subjacente adquirido.

Nas modalidades, a resistência adaptativa está associada a uma mutação ou variação epigenética.

Em algumas modalidades, a resistência adaptativa está associada a uma mutação em um gene de B2M.

Em algumas modalidades, o período de tempo é 6 a 12 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é 6 a 18 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é 6 a 36 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é 3 a 9 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é 3 a 24 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é 12 a 24 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é pelo menos cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23 ou cerca de 24 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é pelo menos cerca de 4 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é pelo menos cerca de 6 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é pelo menos cerca de 12 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é pelo menos cerca de 24 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é pelo menos cerca de 30 meses.

Em algumas modalidades, o período de tempo é pelo menos cerca de 36 meses.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo uma Resposta Completa e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo Doença

Progressiva de acordo com Critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo uma Resposta Parcial e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo uma Doença Progressiva ou Doença estável, tudo de acordo com os critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo uma Resposta Parcial e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo Doença Progressiva de acordo com Critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo uma Resposta Parcial e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo Doença Estável de acordo com Critérios RECIST (versão 1.1). Em algumas modalidades, o diâmetro mais longo de tumores sólidos no indivíduo diminuiu em pelo menos 30 % após o início da terapia antipD-1 ou antipD-L1 e, em seguida, aumentou.

Em algumas modalidades, o diâmetro mais longo de tumores sólidos no indivíduo diminuiu em pelo menos 30 % após o início da terapia antipD- 1 ou antipD-L1 e, em seguida, aumentou em pelo menos 20 %. Em algumas modalidades, o diâmetro mais longo de tumores sólidos no indivíduo diminuiu em pelo menos 30 % após o início da terapia antipD- 1 ou antipD-L1 e, em seguida, um ou mais novos tumores sólidos apareceram.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo pelo menos uma diminuição de 30 % no diâmetro mais longo de tumores sólidos e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo pelo menos um aumento de 20 % no diâmetro mais longo de um tumor sólido e/ou o aparecimento de um ou mais novos tumores sólidos.

Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo um desaparecimento de um tumor sólido (por exemplo, todo tumor sólido que estava presente se mais de um tumor sólido estava presente) e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo o reaparecimento do tumor sólido (por exemplo, no mesmo local que um tumor sólido que desapareceu) e/ou o aparecimento de um ou mais novos tumores sólidos.

Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor primário.

Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor passível de injeção.

Em algumas modalidades, o tumor foi injetado com a mistura de mRNAs de citocina.

Em algumas modalidades, o tumor foi selecionado para injeção com a mistura de mRNAs de citocina.

Em algumas modalidades, o tumor sólido é uma lesão subcutânea ≥ 0,5 cm no diâmetro mais longo.

Em algumas modalidades, o tumor sólido está dentro de um grupo de múltiplas lesões de fusão passíveis de injeção que são confluentes e têm o diâmetro mais longo (soma dos diâmetros de todas as lesões-alvo envolvidas) ≥ 0,5 cm.

Em algumas modalidades, o tumor sólido não está sangrando ou supurando.

Em algumas modalidades, o diâmetro mais longo do tumor sólido é de pelo menos 10 mm (por exemplo, conforme medido por meio de varredura ou medição por tomografia computadorizada (CT)). Em algumas modalidades, o tumor sólido está no tórax de um indivíduo e o diâmetro mais longo do tumor sólido é de pelo menos 20 mm (por exemplo, conforme medido por raios X do tórax). Em algumas modalidades, o tumor sólido está em um linfonodo. Em algumas modalidades, o linfonodo tem pelo menos 15 mm no eixo curto (por exemplo, quando avaliado por meio de tomografia computadorizada). Em algumas modalidades, o tumor sólido é um linfoma. Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo uma Resposta Completa e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo Doença Progressiva de acordo com a Classificação de Lugano. Em algumas modalidades, um indivíduo que tem resistência adaptativa a uma terapia antipD-1 ou antipD-L1 foi caracterizado, em qualquer ponto durante o tratamento, como tendo pelo menos uma diminuição de 50 % na soma do produto dos diâmetros perpendiculares (PPDs) para lesões múltiplas (por exemplo, para 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 linfonodos ou locais extranodais) e, posteriormente (e durante o tratamento), foi caracterizado como tendo um tumor linfoma dentro de um linfonodo, em que o linfonodo tem (i) um diâmetro mais longo maior do que 1,5 cm e (ii) um aumento de pelo menos 50 % do nadir PPD.

[00265] Um câncer "refratário" ou "resistente" é aquele que não responde a um tratamento especificado. Em algumas modalidades, a refração ocorre desde o início do tratamento. Em algumas modalidades, a refração ocorre durante o tratamento. Em algumas modalidades, um câncer é resistente antes do início do tratamento. Em algumas modalidades, um câncer é refratário ou resistente à terapia antipD-1 (ou seja, o câncer não responde à terapia). Em algumas modalidades, um câncer é refratário ou resistente à terapia antipD-L1 (ou seja, o câncer não responde à terapia). Em algumas modalidades, um indivíduo tem um câncer que está se tornando refratário ou resistente a um tratamento especificado (tal como uma terapia antipD1 ou antipD-L1), por exemplo, o indivíduo se tornou menos responsivo ao tratamento desde que o recebeu pela primeira vez. Em algumas modalidades, o indivíduo não recebeu o tratamento, mas tem um tipo de câncer que normalmente não responde ao tratamento.

[00266] Uma lesão ou metástase "superficial" (também algumas vezes denominada como "cutânea") é uma lesão ou metástase que está dentro da pele ou sobre a superfície da pele. Em algumas modalidades, uma lesão ou metástase superficial está dentro da cútis. Em algumas modalidades, uma lesão ou metástase superficial está dentro da derme. Em algumas modalidades, uma lesão ou metástase superficial está dentro da epiderme.

[00267] Uma lesão ou metástase "subcutânea" está sob a pele. Em algumas modalidades, uma lesão ou metástase subcutânea é na subderme.

[00268] Em algumas modalidades e no contexto de um câncer de tumor sólido, uma "lesão tumoral" ou "lesão" é um tumor sólido, por exemplo, um tumor sólido primário ou um tumor sólido que surgiu a partir de uma metástase de outro tumor sólido.

[00269] O termo "célula escamosa" refere-se a quaisquer células finas achatadas encontradas, por exemplo, na superfície da pele, olhos, vários órgãos internos e no revestimento de órgãos ocos e dutos de algumas glândulas.

[00270] O termo "carcinoma de células escamosas cutâneo" (ou "CSCC") refere-se a todos os estágios e todas as formas de câncer que começam nas células que formam a epiderme (camada externa da pele). O termo "carcinoma de células escamosas cutâneo" é usado alternadamente com o termo "carcinoma de células escamosas" da pele.

[00271] O termo "carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço" (ou "carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço" ou "HNSCC" ou "carcinoma de células escamosas para a cabeça e pescoço") refere-se a todos os estágios e todas as formas de câncer da cabeça e pescoço que começam nas células escamosas. O carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço inclui (porém sem limitações) cânceres da cavidade nasal, seios da face, lábios, boca, glândulas salivares, garganta e laringe (caixa vocal).

[00272] O termo "melanoma" refere-se a todos os estágios e todas as formas de câncer que começam nos melanócitos. O melanoma geralmente começa em uma verruga (melanoma cutâneo), mas também pode começar em outros tecidos pigmentados, tal como nos olhos ou intestinos.

[00273] Um "linfonodo regional envolvido em um tumor" ou "nódulo envolvido em um tumor" refere-se a um linfonodo regional que contém metástase. Em algumas modalidades, um linfonodo regional envolvido em um tumor é um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente oculto. Em algumas modalidades, um linfonodo regional envolvido em um tumor é um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente detectável. Um linfonodo regional envolvido em um tumor "clinicamente oculto" descreve metástases em nódulos regionais identificados microscopicamente sem evidência clínica ou radiográfica de metástases em nódulos regionais. Em algumas modalidades, um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente oculto é detectado por meio de biópsia de linfonodo sentinela (SLN) e sem evidência clínica ou radiográfica de metástase de linfonodo regional. Em algumas modalidades, metástase nodal "clinicamente detectável" descreve pacientes com metástase de nódulo regional identificável através de exame clínico, radiográfico ou de ultrassom e geralmente (mas não necessariamente) confirmado por meio de biópsia.

[00274] "Locais locorregionais não nodais" refere-se a metástases que são uma consequência da disseminação do tumor intralinfático ou angiotrófico e incluem metástases microssatélites, satélites e em trânsito. Metástases "satélite" refere-se a metástases cutâneas e/ou subcutâneas clinicamente evidentes que ocorrem dentro de 2 cm de um melanoma primário.

[00275] Metástases "microssatélites" refere-se a metástases microscópicas cutâneas e/ou subcutâneas encontradas adjacentes ou profundas a um melanoma primário quando de exame patológico do local primário. Em algumas modalidades, as metástases microssatélites são completamente descontínuas de um melanoma primário com estroma não afetado ocupando o espaço entre elas.

[00276] Metástases "em trânsito" refere-se a metástases cutâneas e/ou subcutâneas clinicamente evidentes identificadas a uma distância de mais de 2 cm de um melanoma primário na região entre o melanoma primário e o primeiro escalão de linfonodos regionais. Em algumas modalidades, metástases satélites ou em trânsito podem ocorrer distais a um melanoma primário.

[00277] "Nódulos emaranhados" referem-se a dois ou mais nódulos aderentes entre si através do envolvimento por doença metastática. Em algumas modalidades, os nódulos emaranhados são identificados no momento em que um espécime é examinado macroscopicamente em um laboratório de patologia.

[00278] Uma "metástase distante" refere-se ao câncer que se espalhou do tumor primário para um órgão distante ou um linfonodo distante. Em algumas modalidades, a metástase distante é detectável na pele, tecido subcutâneo, músculo ou linfonodos distantes. Em algumas modalidades, a metástase distante é detectável em um pulmão. Em algumas modalidades, a metástase à distância é detectável no sistema nervoso central (SNC). Em algumas modalidades, a metástase distante é detectável em qualquer outro local visceral que não o SNC, incluindo os pulmões, o coração ou um órgão do sistema digestivo, excretor, reprodutivo ou circulatório. Em algumas modalidades, uma metástase distante está em um tecido ou órgão que não está em contato direto (por exemplo, tocando ou diretamente conectado a) o tecido ou órgão que contém o tumor primário.

[00279] Em algumas modalidades, uma metástase (por exemplo, uma metástase distante) está (por exemplo, é detectável) no fígado.

[00280] "Extensão extranodal" (ENE) refere-se à extensão de células metastáticas através da cápsula nodal no tecido perinodal durante metástase nodal. Metástase cística que se estende, mas não rompe, a cápsula do linfonodo pode ser classificada como negativa para ENE. Em algumas modalidades, a ENE-positiva inclui grandes vasos extranodais. Em algumas modalidades, a ENE-positiva se estende menos de 2 mm da cápsula do nódulo. Em algumas modalidades, a ENE-positiva se estende mais de 2 mm da cápsula do linfonodo ou é aparente a olho nu quando de dissecção.

[00281] "Invasão profunda" refere-se a uma espessura maior do que 6 mm ou invasão mais profunda do que a gordura subcutânea. Em algumas modalidades, a invasão está presente em nervos mais longos do que 0,1 mm, mais profundos do que a derme.

[00282] O termo "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade de um agente (tal como uma mistura de RNAs) que fornece um resultado biológico, terapêutico e/ou profilático desejado. Este resultado pode ser redução, melhoria, paliação, diminuição, retardo, prevenção e/ou alívio de um ou mais dos sinais, sintomas ou causas de uma doença (tal como câncer de tumor sólido em estágio avançado). Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz compreende uma quantidade suficiente para fazer com que um tumor sólido/lesão retraia. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para diminuir a taxa de crescimento de um tumor sólido (tal como para suprimir o crescimento do tumor). Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para retardar o desenvolvimento do tumor. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para prevenir ou retardar a recorrência do tumor. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para aumentar a resposta imune de um indivíduo a um tumor, de modo que o crescimento e/ou tamanho e/ou metástase do tumor seja reduzido, retardado, melhorado e/ou evitado. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações. Em algumas modalidades, a administração de uma quantidade eficaz (por exemplo, de uma composição que compreende mRNAs) pode: (i) reduzir o número de células cancerosas; (ii) reduzir o tamanho do tumor; (iii) inibir, retardar, desacelerar até certo ponto e interromper a infiltração de células cancerosas em órgãos periféricos; (iv) inibir (por exemplo, retardar até certo ponto e/ou bloquear ou prevenir) metástases; (v) inibir o crescimento do tumor; (vi) prevenir ou retardar a ocorrência e/ou recorrência do tumor; e/ou (vii) aliviar até certo ponto um ou mais dos sintomas associados ao câncer. Em algumas modalidades, inibir, inibidor e assim por diante referem-se a um bloqueio completo ou parcial de uma interação ou uma redução em um efeito biológico, por exemplo, inibir o crescimento do tumor ou metástase inclui redução ou cessação completa.

[00283] O termo "coadministrado" ou "coadministração" ou similar, conforme usado no presente documento, refere-se à administração de dois ou mais agentes concorrente, simultânea ou essencialmente ao mesmo tempo, como parte de uma única formulação ou como múltiplas formulações que são administradas através das mesmas vias ou por vias diferentes. "Essencialmente ao mesmo tempo", conforme usado no presente documento, significa um período de cerca de 1 minuto, 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas ou 6 horas um do outro.

[00284] Em algumas modalidades, o RNA compreende uma nucleobase modificada no lugar de pelo menos uma (por exemplo, cada) uridina. Em algumas modalidades, o RNA compreende uma estrutura Cap1 na extremidade 5' do RNA. Em algumas modalidades, o RNA compreende uma nucleobase modificada no lugar de pelo menos uma (por exemplo, cada) uridina e uma estrutura Cap1 na extremidade 5' do RNA. Em algumas modalidades, a 5' UTR compreende SEQ ID NOs: 4 ou 6. Em algumas modalidades, o RNA foi processado para reduzir o RNA fita dupla (dsRNA) tal como, por exemplo, por meio de purificação em celulose (conforme descrito nos Exemplos e conhecido na técnica) ou por meio de cromatografia de líquido de alta eficiência (HPLC). A estrutura "Cap1" pode ser gerada após a transcrição in vitro por meio de capeamento enzimático ou durante a transcrição in vitro (capeamento (capping) cotranscricional).

[00285] Em algumas modalidades, o cap do bloco de construção para RNA modificado é o seguinte, o qual é usado quando de capeamento cotranscricional: m27,3’-OGppp(m12’-O)ApG (também algumas vezes denominado como m27,3`OG(5’)ppp(5’)m2’-OApG), o qual tem a seguinte estrutura:

[00286] Abaixo está um exemplo de Cap1 RNA após capeamento cotranscricional, o qual compreende um RNA e m27,3`OG(5’)ppp(5’)m2’-

O ApG:

[00287] Abaixo está outro exemplo de Cap1 RNA após capeamento enzimático (sem análogo de cap):

[00288] Em algumas modalidades, o RNA é modificado com estruturas "Cap0" geradas durante a transcrição in vitro (capeamento cotranscricional) usando, em uma modalidade, o cap análogo anti-cap reverso (ARCA Cap (m27,3`OG(5’)ppp(5’)G)) com a estrutura:

[00289] Abaixo está um exemplo de Cap0 RNA que compreende um RNA e m27,3`OG(5’)ppp(5’)G:

[00290] Em algumas modalidades, as estruturas "Cap0" são geradas durante a transcrição in vitro (capeamento cotranscricional) usando o análogo de cap Beta-S-ARCA (m27,2`OG(5’)ppSp(5’)G) com a estrutura:

[00291] Abaixo está um exemplo de Cap0 RNA que compreende Beta-S-ARCA (m27,2`OG(5’)ppSp(5’)G) e RNA.

[00292] O termo "uracila", conforme usado no presente documento, descreve uma das nucleobases que podem ocorrer no ácido nucleico do RNA. A estrutura da uracila é:

[00293] O termo "uridina", conforme usado no presente documento, descreve um dos nucleosídeos que podem ocorrer no RNA. A estrutura da uridina é:

[00294] UTP (uridina 5'-trifosfato) tem a seguinte estrutura:

[00295] Pseudo-UTP (pseudouridina 5'-trifosfato) tem a seguinte estrutura:

[00296] "Pseudouridina" é um exemplo de um nucleosídeo modificado que é um isômero da uridina, onde a uracila é ligada ao anel de pentose através de uma ligação carbono-carbono, em vez de uma ligação glicosídica nitrogênio-carbono A pseudouridina é descrita, por exemplo, em Charette e Gray, Life; 49: 341-351 (2000).

[00297] Outro exemplo de nucleosídeo modificado é N1-metil- pseudouridina (m1Ψ), a qual tem a estrutura:

[00298] N1-metil-pseudo-UTP tem a seguinte estrutura:

[00299] Outro exemplo de nucleosídeo modificado é 5-metil-uridina (m5U), a qual tem a estrutura:

[00300] Conforme usado no presente documento, o termo "cauda poli-A" ou "sequência poli-A" refere-se a uma sequência ininterrupta ou interrompida de resíduos de adenilato que está, tipicamente, localizada na extremidade 3' de uma molécula de RNA. Caudas poli-A ou sequências poli-A são conhecidas por aqueles versados na técnica e podem seguir a 3 'UTR nos RNAs descritos no presente documento. Uma cauda poli-A ininterrupta é caracterizada por resíduos de adenilato consecutivos. Na natureza, uma cauda poli-A ininterrupta é típica. Os RNAs descritos no presente documento podem ter uma cauda poli-A ligada à extremidade 3' livre do RNA através de uma RNA polimerase independente de modelo após a transcrição ou uma cauda poli-A codificada por DNA e transcrita por uma RNA polimerase dependente de modelo.

[00301] Foi demonstrado que uma cauda poli-A de cerca de 120 nucleotídeos A tem uma influência benéfica sobre os níveis de RNA em células eucariotas transfectadas, bem como nos níveis de proteína que é traduzida a partir de um quadro de leitura aberto que está presente a montante (5') da cauda poli-A (Holtkamp et al., 2006, Blood, vol. 108, páginas 4009-4017).

[00302] A cauda poli-A pode ser de qualquer comprimento. Em algumas modalidades, uma cauda poli-A compreende, consiste essencialmente em ou consiste em pelo menos 20, pelo menos 30, pelo menos 40, pelo menos 80 ou pelo menos 100 e até 500, até 400, até 300, até 200 ou até 150 nucleotídeos A e, em particular, cerca de 120 nucleotídeos A. Neste contexto, "consiste essencialmente em" significa que a maioria dos nucleotídeos na cauda poli-A, normalmente pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 %, pelo menos 96 %, pelo menos 97 %, pelo menos 98% ou pelo menos 99 % dos nucleotídeos na cauda poli-A são nucleotídeos A, mas permite que os nucleotídeos restantes sejam nucleotídeos diferentes de nucleotídeos A, tais como nucleotídeos U (uridilato), nucleotídeos G (guanilato) ou nucleotídeos C (citidilato). Neste contexto, "consiste em" significa que todos os nucleotídeos na cauda poli-A, ou seja, 100 % dos nucleotídeos na cauda poli-A, são nucleotídeos A. O termo "nucleotídeo" ou "A" refere-se a adenilato.

[00303] Em algumas modalidades, uma cauda poli-A é ligada durante a transcrição do RNA, por exemplo, durante a preparação de RNA transcrito in vitro, com base em um modelo de DNA que compreende nucleotídeos dT repetidos (desoxitimidilato) na fita complementar à fita codificadora. A sequência de DNA que codifica uma cauda poli-A (fita codificadora) é denominada como cassete poli(A).

[00304] Em algumas modalidades, o cassete poli(A) presente na fita codificadora de DNA consiste essencialmente em nucleotídeos dA, mas é interrompido por uma sequência aleatória dos quatro nucleotídeos (dA, dC, dG e dT). Esta sequência aleatória pode ter 5 a 50, 10 a 30 ou 10 a 20 nucleotídeos de comprimento. Tal cassete é descrito no documento WO 2016/005324 A1, incorporado ao presente documento a título de referência. Qualquer cassete poli(A) descrito no documento WO 2016/005324 A1 pode ser usado na presente invenção. Um cassete poli(A) que consiste essencialmente em nucleotídeos dA, mas é interrompido por uma sequência aleatória com uma distribuição igual dos quatro nucleotídeos (dA, dC, dG, dT) e com um comprimento, por exemplo, de 5 a 50 nucleotídeos mostra, ao nível do DNA, propagação constante do DNA plasmídico em E. coli e ainda está associado, ao nível do RNA, a propriedades benéficas em relação ao suporte da estabilidade do RNA e a eficiência da tradução está abrangida. Consequentemente, em algumas modalidades, a cauda poli-A contida em uma molécula de RNA no presente documento consiste essencialmente em nucleotídeos A, mas é interrompida por uma sequência aleatória dos quatro nucleotídeos (A, C, G, U). Esta sequência aleatória pode ter 5 a 50, 10 a 30 ou 10 a 20 nucleotídeos de comprimento.

[00305] Em algumas modalidades, nenhum nucleotídeo diferente de nucleotídeos A flanqueia uma cauda poli-A em sua extremidade 3', isto é, a cauda poli-A não é mascarada ou seguida, em sua extremidade 3', por um nucleotídeo diferente de A.

[00306] Em algumas modalidades, uma cauda poli-A compreende a sequência:

AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCAUAUGACUAAAAAA

AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAAA (SEQ ID NO: 30), a qual é também mostrada na Tabela 1.

[00307] Em geral, "RNA" e "mRNA" são usados indistintamente, exceto onde o contexto deixa claro que um ou outro é apropriado, como quando "mRNA" é apropriado para usar para distinguir de outros tipos de RNA (rRNA ou tRNA) e onde "RNA" é apropriado para referir-se à estrutura do produto da transcrição antes de capeamento 5' para formar um mRNA.

[00308] "IFNα" é usado genericamente no presente documento para descrever qualquer citocina de interferon alfa de Tipo I, incluindo IFNα2b e IFNα4.

[00309] O termo "tratamento", conforme usado no presente documento, cobre qualquer administração ou aplicação de um agente terapêutico para a doença em um indivíduo e inclui inibir a doença, interromper seu desenvolvimento, aliviar um ou mais sintomas da doença, curar a doença ou prevenir a recorrência da doença. Por exemplo, o tratamento de um tumor sólido pode compreender aliviar os sintomas do tumor sólido, diminuir o tamanho do tumor sólido, eliminar o tumor sólido, reduzir o crescimento adicional do tumor ou reduzir ou eliminar a recorrência de um tumor sólido após o tratamento. O tratamento também pode ser medido como uma alteração em um biomarcador de eficácia ou em uma imagem ou medida radiográfica.

[00310] O termo "monoterapia", conforme usado no presente documento, significa uma terapia que usa um tipo de tratamento tal como, por exemplo, terapia de RNA apenas, radioterapia apenas ou cirurgia apenas para tratar uma determinada doença ou condição (tal como câncer). Na terapia medicamentosa, monoterapia refere-se ao uso de um único medicamento (o qual pode incluir vários agentes ativos tais como, por exemplo, uma mistura de RNAs) para tratar uma doença ou condição. Em algumas modalidades, a monoterapia é uma terapia administrada para tratar o câncer, sem que qualquer outra terapia seja usada para tratar o câncer. Em algumas modalidades, uma monoterapia para tratar um câncer pode, opcionalmente, ser combinada com outro tratamento para melhorar um sintoma do câncer, mas não tratar o câncer em si (por exemplo, o tratamento não se destina ou se espera que afete o crescimento ou tamanho de um tumor sólido), mas não pode ser combinada com qualquer outra terapia dirigida contra o câncer tal como, por exemplo, um agente quimioterapêutico ou radioterapia. Em tais modalidades, a administração de uma mistura de RNAs como uma monoterapia significa administrar a mistura de RNAs sem, por exemplo, radioterapia ou qualquer agente quimioterapêutico. No entanto, em tais modalidades, a administração de uma mistura de RNAs como uma monoterapia não impede a administração concomitante ou simultânea com a mistura de RNAs, de agentes que não são direcionados contra o câncer tais como, por exemplo, agentes que reduzem a dor.

[00311] O termo "prevenção", conforme usado no presente documento, significa inibir ou interromper o desenvolvimento de câncer, incluindo tumores sólidos, em um indivíduo considerado sem câncer.

[00312] "Metástase" significa o processo pelo qual o câncer se espalha do local em que surgiu pela primeira vez como um tumor primário para outros locais no corpo.

[00313] O termo "intratumoralmente" ou "intratumoral", conforme usado no presente documento, significa dentro do tumor. Por exemplo, injeção intratumoral significa injetar o agente terapêutico em qualquer local que toque o tumor.

[00314] Conforme usado no presente documento, "linfoma" é um câncer de tumor sólido derivado de linfócitos. Linfoma inclui linfoma de Hodgkin e não Hodgkin. O linfoma forma tumores/neoplasias sólidas dentro dos linfonodos e também pode ser encontrado em tecidos não linfáticos quando metastatizados.

[00315] O termo "peritumoralmente" ou "peritumoral" ou "peritumoral" ou "peritumoralmente", conforme usado no presente documento, é uma área que tem cerca de 2 mm de largura e é adjacente à frente invasiva do periferia do tumor. A área peritumoral compreende o tecido do hospedeiro. Consulte, por exemplo, a Figura 11.

[00316] "Administração" significa fornecer um agente farmacêutico ou composição a um indivíduo e inclui, porém sem limitações, administração por um profissional médico e autoadministração.

[00317] A invenção descreve sequências de ácidos nucleicos e sequências de aminoácidos com um determinado grau de identidade com uma dada sequência de ácidos nucleicos ou sequência de aminoácidos, respectivamente (uma sequência de referência).

[00318] "Identidade de sequência" entre duas sequências de ácidos nucleicos indica a porcentagem de nucleotídeos que são idênticos entre as sequências. "Identidade de sequência" entre duas sequências de aminoácidos indica a porcentagem de aminoácidos que são idênticos entre as sequências.

[00319] Os termos "% idêntico", "identidade %" ou termos similares se destinam a referir-se, em particular, à porcentagem de nucleotídeos ou aminoácidos que são idênticos em um alinhamento ideal entre as sequências a serem comparadas. A dita porcentagem é puramente estatística e as diferenças entre as duas sequências podem ser, mas não estão necessariamente, distribuídas aleatoriamente ao longo de todo o comprimento das sequências a serem comparadas. As comparações de duas sequências são geralmente realizadas ao comparar as sequências, após o alinhamento ideal, em relação a um segmento ou "janela de comparação", a fim de identificar regiões locais das sequências correspondentes. O alinhamento ideal para uma comparação pode ser realizado manualmente ou com o auxílio do algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, 1981, Ads App. Math. 2, 482, com o auxílio do algoritmo de homologia local de Neddleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48, 443, com o auxílio do algoritmo de busca de similaridade de Pearson e Lipman, 1988, Proc. Natl Acad. Sci. USA 88, 2444 ou com o auxílio de programas de computador usando os ditos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA, BLAST P, BLAST N e TFASTA no Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.). Em algumas modalidades, a porcentagem de identidade de duas sequências é determinada usando o algoritmo BLASTN ou BLASTP, conforme disponível no website do United States National Center for Biotechnology Information (NCBI) (por exemplo, em blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)?PAGE_TYPE=BlastSearch&BLAST_S PEC = blast2seq & LINK_LOC=align2seq). Em algumas modalidades, os parâmetros do algoritmo usados para o algoritmo BLASTN no website do NCBI incluem: (i) Limiar esperado definido para 10; (ii) Tamanho de palavra definido para 28; (iii) Máximo de correspondências em uma faixa de consulta definido como 0; (iv) Pontuações de correspondência/incompatibilidade definidas para 1, -2; (v) Custos por lacuna definido como Linear; e (vi) o filtro para regiões de baixa complexidade em uso. Em algumas modalidades, os parâmetros do algoritmo usados para o algoritmo BLASTP no website do NCBI incluem: (i) Limiar esperado definido para 10; (ii) Tamanho de palavra definido para 3; (iii) Máximo de correspondências em uma faixa de consulta definido como 0; (iv) Matriz configurada para BLOSUM62; (v) Custos por lacuna definido para Existência: 11 Extensão: 1; e (vi) Ajuste da matriz de pontuação composicional condicional.

[00320] A porcentagem de identidade é obtida ao determinar o número de posições idênticas nas quais as sequências a serem comparadas correspondem, dividir este número pelo número de posições comparadas (por exemplo, o número de posições na sequência de referência) e multiplicar este resultado por 100.

[00321] Em algumas modalidades, o grau de identidade é dado para uma região que é pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90% ou cerca de 100% de todo o comprimento da sequência de referência. Por exemplo, se a sequência de ácidos nucleicos de referência consiste em 200 nucleotídeos, o grau de identidade é dado para pelo menos cerca de 100, pelo menos cerca de 120, pelo menos cerca de 140, pelo menos cerca de 160, pelo menos cerca de 180 ou cerca de 200 nucleotídeos, em algumas modalidades em nucleotídeos contínuos. Em algumas modalidades, o grau de identidade é dado para todo o comprimento da sequência de referência.

[00322] As sequências de ácidos nucleicos ou sequências de aminoácidos com um determinado grau de identidade com uma dada sequência de ácidos nucleicos ou sequência de aminoácidos, respectivamente, podem ter pelo menos uma propriedade funcional da dita sequência, por exemplo e, em alguns casos, são funcionalmente equivalentes à dita sequência dada. Uma propriedade importante inclui a capacidade de atuar como uma citocina, em particular quando administrada a um indivíduo. Em algumas modalidades, uma sequência de ácidos nucleicos ou sequência de aminoácidos com um determinado grau de identidade com uma dada sequência de ácidos nucleicos ou sequência de aminoácidos é funcionalmente equivalente à sequência dada.

[00323] A menos que especificamente indicado no relatório descritivo acima, modalidades no relatório descritivo que citam "que compreende" vários componentes também são consideradas como "que consiste em" ou "que consiste essencialmente em" os componentes citados; modalidades no relatório descritivo que citam "que consiste em" vários componentes também são consideradas como "que compreende" ou "que consiste essencialmente em" os componentes citados; e modalidades no relatório descritivo que citam "que consiste essencialmente em" vários componentes também são consideradas como "que consiste em" ou "que compreende" os componentes citados (tal permutabilidade não se aplica ao uso destes termos nas reivindicações). Conforme usado em uma cláusula de uma reivindicação, o termo de transição "que compreende", o qual é sinônimo de "que inclui", "que contém" ou "caracterizado por", é inclusivo ou em aberto e não exclui elementos ou métodos adicionais não citados. Conforme usado em uma cláusula de uma reivindicação, a frase de transição "que consiste em" exclui qualquer elemento, etapa ou componente não especificado na reivindicação e a frase de transição "que consiste essencialmente em" limita o escopo do termo da reivindicação aos componentes citados e aqueles que não afetam materialmente as características básicas e novas do termo reivindicado, conforme entendido a partir do relatório descritivo. RNAs Administrados

[00324] Em algumas modalidades, são abrangidos métodos para tratar cânceres de tumor sólido em estágio avançado que compreendem administrar a um indivíduo um RNA em câncer de tumor sólido em estágio avançado que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF. Seguem detalhes do RNA administrado.

[00325] Em algumas modalidades, a administração de RNAs compreende administrar um RNA que codifica IFNα, um RNA que codifica IL-15 sushi, um RNA que codifica IL-12sc e um RNA que codifica GM-CSF, opcionalmente modificado para ter uma nucleobase modificada no lugar de cada uridina e uma estrutura Cap1 na extremidade 5' do RNA.

[00326] Em algumas modalidades, a administração de RNAs compreende administrar um RNA que codifica IL-12sc e ainda administrar um RNA que codifica IFNα, IL-15 sushi e GM-CSF.

[00327] Em algumas modalidades, a administração de RNAs compreende administrar um RNA que codifica IFNα e ainda administrar um RNA que codifica IL-12sc, IL-15 sushi e GM-CSF.

[00328] Em algumas modalidades, a administração de RNAs compreende administrar um RNA que codifica IL-15 sushi e ainda administrar um RNA que codifica IL-12sc, IFNα e GM-CSF.

[00329] Em algumas modalidades, a administração de RNAs compreende administrar um RNA que codifica GM-CSF sushi e ainda administrar um RNA que codifica IL-12sc, IFNα e IL-15 sushi.

[00330] Em algumas modalidades, a proteína IFNα na mistura de RNAs de citocina é uma proteína IFNα2b e o método compreende administrar um RNA que codifica uma proteína IFNα2b.

[00331] Em algumas modalidades, (i) o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18 e/ou (ii) a proteína IL-12sc compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou um sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14.

[00332] Em algumas modalidades, (i) o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26 e/ou (ii) a proteína IL-15 sushi compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24.

[00333] Em algumas modalidades, (i) o RNA que codifica uma proteína IFNα compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 e/ou (ii) a proteína IFNα compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19.

[00334] Em algumas modalidades, (i) o RNA que codifica uma proteína GM-CSF compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 e/ou (ii) a proteína GM- CSF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27. Interleucina-12 de Cadeia Única (IL-12sc)

[00335] Em algumas modalidades, é fornecido um RNA que codifica a interleucina-12 de cadeia única (IL-12sc). Em algumas modalidades, o RNA de interleucina-12 de cadeia única (IL-12sc) é codificado por uma sequência de DNA que codifica a interleucina-12 de cadeia única (IL- 12sc) (por exemplo, SEQ ID NO: 14) que compreende IL-12 p40 (algumas vezes denominada como IL-12B; codificada pelos nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 15), um ligante, tal como um ligante

GS e IL-12 p35 (algumas vezes denominado como IL-12A; codificado por nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 15). Em algumas modalidades, IL-12p40, ligante e IL-12p35 são consecutivos sem nucleotídeos intervenientes. Uma sequência de DNA exemplificativa que codifica IL-12sc é fornecida em SEQ ID NO: 15. Em algumas modalidades, o RNA de interleucina-12 de cadeia única (IL-12sc) é fornecido em SEQ ID NO: 17 ou 18, ambos os quais codificam a proteína de SEQ ID NO: 14. A sequência de RNA de IL-12 p40 é mostrada nos nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 17 ou 18 e a sequência de RNA de IL-12 p35 é mostrada nos nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 17 ou 18.

[00336] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc é codificado por uma sequência de DNA com códons otimizados que codifica IL-12sc. Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc é codificado por uma sequência de DNA com códons otimizados que codifica IL-12 p40. Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc é codificado por uma sequência de DNA com códons otimizados que codifica IL-12 p35. Em algumas modalidades, a sequência de DNA com códons otimizados compreende ou consiste em SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, a sequência de DNA compreende uma sequência de DNA com códons otimizados com 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98% ou 99 % de identidade com SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, a sequência de DNA com códons otimizados que codifica IL-12 p40 compreende os nucleotídeos que codificam IL-12sc-p40 (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, a sequência de DNA com códons otimizados que codifica IL-12 p35 compreende os nucleotídeos que codificam IL-12sc-p35 (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, a sequência de DNA com códons otimizados que codifica IL-12sc compreende os nucleotídeos que codificam as porções IL-12sc-p40 (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID

NO: 16) e -p35 (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 16) de SEQ ID NO: 16 e compreende ainda nucleotídeos entre as porções p40 e p35 (por exemplo, nucleotídeos 985-1026 de SEQ ID NO: 16) que codificam um polipeptídeo ligante que conecta as porções p40 e p35. Qualquer ligante conhecido por aqueles versados na técnica pode ser usado. A porção p40 pode ser 5' ou 3' em relação à porção p35.

[00337] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que codifica IL-12sc. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, a sequência de RNA é transcrita a partir de uma sequência de nucleotídeos que compreende SEQ ID NOs: 15 ou 16. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende ou consiste em SEQ ID NOs: 17 ou 18. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende ou consiste em uma sequência de RNA que tem 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOs: 17 ou 18. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende os nucleotídeos que codificam as porções IL-12sc- p40 (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NOs: 17 ou 18) e -p35 (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NOs: 17 ou 18) de SEQ ID NOs: 17 ou 18. Em algumas modalidades, a sequência de RNA com códons otimizados que codifica IL-12sc compreende os nucleotídeos que codificam as porções IL-12sc-p40 (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 18) e -p35 (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 18) de SEQ ID NO: 18 e compreende ainda nucleotídeos entre as porções p40 e p35 que codificam um polipeptídeo ligante que conecta as porções p40 e p35. Qualquer ligante conhecido por aqueles versados na técnica pode ser usado.

[00338] Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IL-12sc são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00339] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende um nucleotídeo alterado na extremidade 5'. Em algumas modalidades, o RNA compreende um cap 5'. Qualquer cap 5' conhecido na técnica pode ser usado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5'. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5' que inclui uma modificação de tiofosfato. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo 2'-O ou 3'-O-ribose metilado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo de guanosina modificado ou nucleotídeo de adenosina modificado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende 7-metilguanilato. Em algumas modalidades, o cap 5' é Cap0 ou Cap1. Estruturas de cap exemplificativas incluem m7G(5')ppp(5')G, m7,2`O-mG(5') ppSp (5')G, m7G(5')ppp(5')2'O-mG e m7,3'O-mG(5')ppp(5')2'O-mA.

[00340] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma região 5' não traduzida (UTR). Em algumas modalidades, a 5' UTR está a montante do códon inicial. Em algumas modalidades, a 5' UTR regula a tradução do RNA. Em algumas modalidades, a 5' UTR é uma sequência de estabilização. Em algumas modalidades, a 5' UTR aumenta a meia-vida do RNA. Qualquer 5' UTR conhecida na técnica pode ser usada. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR é transcrita a partir de SEQ ID NOs: 3 ou 5. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NOs: 4 ou 6. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99% idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6.

[00341] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma 3' UTR. Em algumas modalidades, a 3' UTR segue o códon de terminação de tradução. Em algumas modalidades, a 3' UTR regula a poliadenilação, a eficiência da tradução, a localização ou a estabilidade do RNA. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é transcrita a partir de SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica à SEQ ID NO: 8.

[00342] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma 5' UTR e uma 3' UTR. Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende apenas uma 5' UTR. Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende apenas uma 3' UTR.

[00343] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, o RNA compreende uma cauda poli-A de pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 50 nucleotídeos, pelo menos cerca de 70 nucleotídeos ou pelo menos cerca de 100 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende 200 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende ou consiste em SEQ ID NO:

30.

[00344] Em algumas modalidades, o RNA compreende um cap 5', uma UTR 5', um ácido nucleico que codifica IL-12sc, uma 3' UTR e uma cauda poli-A, nesta ordem.

[00345] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %,

85%, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 15 ou 16 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5.

[00346] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 15 ou 16 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IL-12sc são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00347] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 15 ou 16 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00348] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 15 ou 16 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %

ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IL-12sc são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00349] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 15 ou 16; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97%, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70%, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00350] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 15 ou 16; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70 %, 75 %, 80%, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IL-12sc são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-

metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00351] Em algumas modalidades, o RNA de IL-12sc compreende uma sequência de RNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 17 ou 18; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97%, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6; e pelo menos 70%, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IL-12sc são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Interferon Alfa (IFNα)

[00352] Em algumas modalidades, o RNA de interferon alfa (IFNα) é codificado por uma sequência de DNA que codifica o interferon alfa (IFNα) (por exemplo, SEQ ID NO: 19). Uma sequência de DNA exemplificativa que codifica este IFNα é fornecida em SEQ ID NO: 20.

[00353] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα é codificado por uma sequência de DNA com códons otimizados que codifica IFNα. Em algumas modalidades, a sequência de DNA com códons otimizados compreende ou consiste nos nucleotídeos de SEQ ID NO: 21. Em algumas modalidades, a sequência de DNA compreende ou consiste em uma sequência de DNA com códons otimizados que tem 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21.

[00354] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que codifica IFNα. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, a sequência de RNA é transcrita a partir de uma sequência de nucleotídeos que compreende SEQ ID NOs: 20 ou 21. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende ou consiste em SEQ ID NOs: 22 ou 23. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende ou consiste em uma sequência de RNA que tem 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOs: 22 ou 23.

[00355] Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IFNα são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, cada uridina no RNA é modificada. Em algumas modalidades, cada uridina no RNA é modificada com N1-metil- pseudouridina (m1ψ).

[00356] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende um nucleotídeo alterado na extremidade 5'. Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende um cap 5'. Qualquer cap 5' conhecido na técnica pode ser usado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5'. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5' que inclui uma modificação de tiofosfato. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo 2'-O ou 3'-O-ribose metilado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo de guanosina modificado ou nucleotídeo de adenosina modificado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende 7-metilguanilato. Em algumas modalidades, o cap 5' é

Cap0 ou Cap1. Estruturas de cap exemplificativas incluem m7G(5')ppp(5')G, m7,2'O-mG(5')ppSp (5')G, m7G(5')ppp(5')2'O-mG e m7,3'O-mG(5')ppp(5')2'O-mA.

[00357] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma região 5' não traduzida (UTR). Em algumas modalidades, a 5' UTR está a montante do códon inicial. Em algumas modalidades, a 5' UTR regula a tradução do RNA. Em algumas modalidades, a 5' UTR é uma sequência de estabilização. Em algumas modalidades, a 5' UTR aumenta a meia-vida do RNA. Qualquer 5' UTR conhecida na técnica pode ser usada. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR é transcrita a partir de uma sequência de nucleotídeos que compreende SEQ ID NOs: 3 ou 5. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NOs: 4 ou 6. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR é pelo menos 70 %, 75 %, 80%, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6.

[00358] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma 3' UTR. Em algumas modalidades, a 3' UTR segue o códon de término de tradução. Em algumas modalidades, a 3' UTR regula a poliadenilação, a eficiência da tradução, a localização ou a estabilidade do RNA. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é transcrita a partir de uma sequência de nucleotídeos que compreende SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica à SEQ ID NO: 8.

[00359] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma 5' UTR e uma 3' UTR. Em algumas modalidades, a composição compreende apenas um 5' UTR. Em algumas modalidades, a composição compreende apenas uma 3' UTR.

[00360] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma cauda poli-A de pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 50 nucleotídeos, pelo menos cerca de 70 nucleotídeos ou pelo menos cerca de 100 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende 200 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende ou consiste em SEQ ID NO: 30.

[00361] Em algumas modalidades, o RNA compreende um cap 5', uma UTR 5', um ácido nucleico que codifica IFNα, uma 3' UTR e uma cauda poli-A, nesta ordem.

[00362] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 20 ou 21 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5.

[00363] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 20 ou 21 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IFNα são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00364] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 20 ou 21 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97%, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00365] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 20 ou 21 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA do IFNα são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00366] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 20 ou 21; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00367] Em algumas modalidades, o RNA de IFNα compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 20 ou 21; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99% ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70 %, 75 %, 80%, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante.

Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IFNα são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento.

Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ). Em algumas modalidades, a composição compreende uma sequência de RNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 22 ou 23; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95%, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6; e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98%, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, uma ou mais uridina no RNA de IFNα são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento.

Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Interleucina 15 Sushi (IL-15)

[00368] Em algumas modalidades, é administrado um RNA que codifica uma interleucina-15 sushi (IL-15). Conforme usado no presente documento, o termo "IL-15 sushi" descreve uma construção que compreende o domínio sushi do receptor alfa de interleucina 15 (IL-15) solúvel e a interleucina alfa madura (IL-15) como uma proteína de fusão. Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi é codificado por uma sequência de DNA que codifica IL-15 sushi (SEQ ID NO: 24) que compreende a cadeia do receptor alfa de IL-15 solúvel (sushi), seguido por um ligante de glicina-serina (GS), seguido pela sequência madura de IL-15. A sequência de DNA que codifica esta IL-15 sushi é fornecida em SEQ ID NO: 25.

[00369] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi é uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que codifica IL-15 sushi. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, a sequência de RNA é transcrita a partir de uma sequência de nucleotídeos que compreende SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, os nucleotídeos que codificam o ligante podem estar completamente ausentes ou substituídos, em parte ou na totalidade, por quaisquer nucleotídeos que codificam um ligante adequado. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende ou consiste em SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende uma sequência de RNA que tem 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NO:

26. Em algumas modalidades, a sequência de DNA ou RNA que codifica IL-15 sushi compreende os nucleotídeos que codificam o domínio sushi do receptor alfa de IL-15 (por exemplo, nucleotídeos 1-321 de SEQ ID NOs: 25 ou 26) e IL-15 madura (por exemplo, nucleotídeos 382-729 de SEQ ID NO: 25 ou 26). Em algumas modalidades, a sequência de DNA ou RNA que codifica IL-15 sushi compreende os nucleotídeos que codificam o domínio sushi do receptor alfa de IL-15 (por exemplo, nucleotídeos 1-321 de SEQ ID NOs: 25 ou 26) e IL-15 madura (por exemplo, nucleotídeos 382-729 de SEQ ID NOs: 25 ou 26) e compreende ainda nucleotídeos entre estas porções que codificam um polipeptídeo ligante que conecta as porções. Em algumas modalidades, o ligante compreende os nucleotídeos 322-381 de SEQ ID Nos: 25 ou

26. Qualquer ligante conhecido por aqueles versados na técnica pode ser usado.

[00370] Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IL-15 sushi são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00371] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende um nucleotídeo alterado na extremidade 5'. Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende um cap 5'. Qualquer cap 5' conhecido na técnica pode ser usado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5'. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5' que inclui uma modificação de tiofosfato. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo 2'-O ou 3'-O-ribose metilado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo de guanosina modificado ou nucleotídeo de adenosina modificado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende 7-metilguanilato. Em algumas modalidades, o cap 5' é Cap0 ou Cap1. Estruturas de cap exemplificativas incluem m7G(5')ppp(5')G, m7,2'O-mG(5')ppSp (5')G, m7G(5')ppp(5')2'O-mG e m7,3'O-mG(5')ppp(5')2'O-mA.

[00372] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma região 5' não traduzida (UTR). Em algumas modalidades, a 5' UTR está a montante do códon inicial. Em algumas modalidades, a 5' UTR regula a tradução do RNA. Em algumas modalidades, a 5' UTR é uma sequência de estabilização. Em algumas modalidades, a 5' UTR aumenta a meia-vida do RNA. Qualquer 5' UTR conhecida na técnica pode ser usada. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR é transcrita a partir de SEQ ID NOs: 3 ou 5. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NOs: 4 ou 6. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6.

[00373] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma 3' UTR. Em algumas modalidades, a 3' UTR segue o códon de término de tradução. Em algumas modalidades, a 3' UTR regula a poliadenilação, a eficiência da tradução, a localização ou a estabilidade do RNA. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é transcrita a partir de SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica à SEQ ID NO: 8.

[00374] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma 5' UTR e uma 3' UTR. Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende apenas uma 5' UTR. Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende apenas uma 3' UTR.

[00375] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, o RNA compreende uma cauda poli-A de pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 50 nucleotídeos, pelo menos cerca de 70 nucleotídeos ou pelo menos cerca de 100 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende 200 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende ou consiste em SEQ ID NO: 30.

[00376] Em algumas modalidades, o RNA compreende um cap 5', uma 5' UTR, um ácido nucleico que codifica IL-15 sushi, uma 3 'UTR e uma cauda poli-A, nesta ordem.

[00377] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85%, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 25 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5.

[00378] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 25 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IFNα são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00379] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 25 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00380] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 25 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98%, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IFNα são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00381] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85%, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 25; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98%, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00382] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 25; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98%, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de IFNα é substituída por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00383] Em algumas modalidades, o RNA de IL-15 sushi compreende uma sequência de RNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85%, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 26; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98%, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6; e pelo menos 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, uma ou mais uridina no RNA de IFNα é substituída por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Fator Estimulador de Colônia de Granulócitos-Macrófagos (GM- CSF)

[00384] Em algumas modalidades, é administrado um RNA que codifica o fator estimulador de colônia de granulócitos-macrófagos (GM- CSF). Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF é codificado por uma sequência de DNA que codifica o fator estimulador de colônia de granulócitos-macrófagos (GM-CSF) (por exemplo, SEQ ID NO: 27). Em algumas modalidades, a sequência de DNA que codifica GM-CSF é fornecida em SEQ ID NO: 28.

[00385] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que codifica GM-CSF. Em algumas modalidades, a sequência de RNA é transcrita a partir de SEQ ID NO: 28. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende ou consiste em SEQ ID NO: 29. Em algumas modalidades, a sequência de RNA compreende uma sequência de RNA que tem 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com as SEQ ID NOs: 29.

[00386] Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de GM-CSF são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ). Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende um nucleotídeo alterado na extremidade 5'. Em algumas modalidades, o RNA compreende um cap 5'. Qualquer cap 5' conhecido na técnica pode ser usado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5'. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende uma ligação trifosfato de 5' a 5' que inclui uma modificação de tiofosfato. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo 2'-O ou 3'-O-ribose metilado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende um nucleotídeo de guanosina modificado ou nucleotídeo de adenosina modificado. Em algumas modalidades, o cap 5' compreende 7-metilguanilato. Em algumas modalidades, o cap 5' é Cap0 ou Cap1. Estruturas cap exemplificatives incluem m7G(5')ppp(5')G, m7,2'O-mG(5')ppSp (5')G, m7G(5')ppp(5')2'O-mG e m7,3'O-mG(5')ppp(5')2'O-mA.

[00387] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma região 5' não traduzida (UTR). Em algumas modalidades, a 5' UTR está a montante do códon inicial. Em algumas modalidades, a 5' UTR regula a tradução do RNA. Em algumas modalidades, a 5' UTR é uma sequência de estabilização. Em algumas modalidades, a 5' UTR aumenta a meia-vida do RNA. Qualquer 5' UTR conhecida na técnica pode ser usada. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR é transcrita a partir de SEQ ID NOs: 3 ou 5. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 5' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NOs: 4 ou 6. Em algumas modalidades, o 5' A sequência de UTR RNA é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99% idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6.

[00388] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma 3' UTR. Em algumas modalidades, a 3' UTR segue o códon de término de tradução. Em algumas modalidades, a 3' UTR regula a poliadenilação, a eficiência da tradução, a localização ou a estabilidade do RNA. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é transcrita a partir de SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR compreende ou consiste em SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a sequência de RNA 3' UTR é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica à SEQ ID NO: 8.

[00389] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma 5' UTR e uma 3' UTR. Em algumas modalidades, o RNA compreende apenas uma 5' UTR. Em algumas modalidades, a composição compreende apenas uma 3' UTR.

[00390] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, o RNA compreende uma cauda poli-A de pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 50 nucleotídeos, pelo menos cerca de 70 nucleotídeos ou pelo menos cerca de 100 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o A cauda poli-A compreende 200 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende ou consiste em SEQ ID NO:

30.

[00391] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende um cap 5', uma UTR 5', nucleotídeos que codificam GM-CSF, uma 3' UTR e uma cauda poli-A, nesta ordem.

[00392] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85%, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 28 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97%, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5.

[00393] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 28 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de GM-CSF são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00394] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF é codificado por uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 28 e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97%, 98%, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00395] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 28 e pelo menos 70%, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 7. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de GM-CSF são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00396] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 28; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 %

idêntica à SEQ ID NO: 7.

[00397] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma sequência de RNA a qual é, por exemplo, transcrita a partir de uma sequência de DNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 28; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 3 ou 5; e pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO:

7. O RNA também pode ser produzido de forma recombinante. Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA de GM-CSF são substituídas por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil- pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

[00398] Em algumas modalidades, o RNA de GM-CSF compreende uma sequência de RNA que compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 29; pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99% ou 100 % idêntica à SEQ ID NOs: 4 ou 6; e pelo menos 70 %, 75%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, uma ou mais uridina no RNA de GM-CSF é substituída por um nucleosídeo modificado, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil-uridina (m5U).

Modificações

[00399] Cada um dos RNAs descritos no presente documento pode ser modificado de qualquer forma conhecida por aqueles versados na técnica. Em algumas modalidades, cada RNA é modificado da seguinte forma:  uma nucleobase modificada no lugar de cada uridina;  uma estrutura Cap1 na extremidade 5' do RNA.

[00400] Em algumas modalidades, a 5' UTR compreende SEQ ID NOs: 4 ou 6. Em algumas modalidades, o RNA foi processado para reduzir o RNA fita dupla (dsRNA), conforme descrito acima. A estrutura "Cap1" pode ser gerada após transcrição in vitro por meio de capeamento enzimático ou durante transcrição in vitro (capeamento cotranscricional).

[00401] Em algumas modalidades, uma ou mais uridinas no RNA são substituídas por um nucleosídeo modificado. Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é uma uridina modificada.

[00402] Em algumas modalidades, a uridina modificada que substitui a uridina é pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) ou 5-metil- uridina (m5U).

[00403] Em algumas modalidades, uma ou mais citosinas, adeninas ou guaninas no RNA são substituídas por nucleobase(s) modificada(s). Em uma modalidade, a nucleobase modificada que substitui a citosina é 5-metilcitosina (m5C). Em outra modalidade, a nucleobase modificada que substitui a adenina é N6-metiladenina (m6A). Em outra modalidade, qualquer outra nucleobase modificada conhecida na técnica por reduzir a imunogenicidade da molécula pode ser usada.

[00404] Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado que substitui uma ou mais uridinas no RNA pode ser qualquer um ou mais de 3-metil-uridina (m3U), 5-metóxi-uridina (mo5U), 5-aza-uridina, 6 - aza-uridina, 2-tio-5-aza-uridina, 2-tio-uridina (s2U), 4-tio-uridina (s4U),

4-tio-pseudouridina, 2-tio-pseudouridina, 5-hidróxi-uridina (ho5U), 5- aminoalil-uridina, 5-halo-uridina (por exemplo, 5-iodo-uridina ou 5- bromo-uridina), uridina de ácido 5-oxiacético (cmo5U), uridina de éster metílico de ácido 5-oxiacético (mcmo5U), 5-carboximetil-uridina (cm5U), 1-carboximetil-pseudouridina, 5-carbóxi-hidroximetil-uridina (chm5U), éster metílico de 5-carbóxi-hidroximetil-uridina (mchm5U), 5- metoxicarbonilmetil-uridina (m5U), tio-uridina (mcm5s2U), 5- aminometil-2-tio-uridina (nm5s2U), 5-metilaminometil-uridina (mnm5U), 1-etil-pseudouridina, 5-metilaminometil-2-tio-uridina (mnm5s2U), metilaminometil-2-seleno-uridina (mnm5se2U), 5-carbamoilmetil-uridina (ncm5U), 5-carboximetilaminometil-uridina (cmnm5U), 5- carboximetilaminometil-2-tio-uridina (cmnm5s2U), 5-propinil-uridina, 1- propinil-pseudouridina, 5-taurinometil-uridina (τm5U), 1-taurinometil- pseudometil-pseudinometil-5,2-tio-uridina (τm5s2U), 1-taurinometil-4- tio-pseudouridina), 5-metil-2-tio-uridina (m5s2U), 1-metil-4-tio- pseudouridina (m1s4ψ), 4-tio-1-metil-pseudouridina, 3-metil- pseudouridina (m3ψ), 2-tio-1-metil-pseudouridina, 1-metil-1-desaza- pseudouridina, 2-tio-1-metil-1-desaza-pseudouridina, di-hidrouridina (D), di-hidropseudouridina, 5,6-di-hidrouridina, 5-metil-di-hidrouridina (m5D), 2-tio-di-hidrouridina, 2-tio-di-hidropseudouridina, 2-metóxi- uridina, 2-metóxi-4-tio-uridina, 4-metóxi-pseudouridina, 4-metóxi-2-tio- pseudouridina, N1-metil-pseudouridina, 3-(3-amino-3- carboxipropil)uridina (acp3U), 1-metil-3-(3-amino-3- carboxipropil)pseudouridina (acp3 ψ), 5-(isopentenilaminometil)uridina (inm5U), 5-(isopentenilaminometil)-2-tio-uridina (inm5s2U), α-tio- uridina, 2'-O-metil-uridina (Um), 5,2'-O-dimetil-uridina (m5Um), 2'-O- metil-pseudouridina (ψm), 2-tio-2'-O-metil-uridina (s2Um), 5- metoxicarbonilmetil-2'-O-metil-uridina (mcm5Um), 5-carbamoilmetil-2'- O-metil-uridina (ncm5Um), 5-carboximetilaminometil-2'-O-metil-uridina (cmnm5Um), 3,2'-O-dimetil-uridina (m3Um), 5-(isopentenilaminometil)-

2'-O-metil-uridina (inm5Um), 1-tio-uridina, desoxitimidina, 2'-F-ara- uridina, 2'-F-uridina, 2'-OH-ara-uridina, 5-(2-carbometoxivinil)uridina, 5- [3-(1-E-propenilamino)uridina ou qualquer outra uridina modificada conhecida na técnica.

[00405] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina. Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina. Em algumas modalidades, cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina. Em algumas modalidades, cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

[00406] Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado é independentemente selecionado a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil- pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado compreende pseudouridina (ψ). Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado compreende N1- metil-pseudouridina (m1ψ). Em algumas modalidades, o nucleosídeo modificado compreende 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, pelo menos um RNA pode compreender mais de um tipo de nucleosídeo modificado e os nucleosídeos modificados são independentemente selecionados a partir de pseudouridina (ψ), N1- metil-pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, os nucleosídeos modificados compreendem pseudouridina (ψ) e N1-metil-pseudouridina (m1ψ). Em algumas modalidades, os nucleosídeos modificados compreendem pseudouridina (ψ) e 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, o núcleo modificado os lados compreendem N1-metil-pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U). Em algumas modalidades, os nucleosídeos modificados compreendem pseudouridina (ψ), N1-metil- pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U).

[00407] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA usado no método compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me- m7G(5')ppp(5')G. Em algumas modalidades, cada RNA usado no método compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me- m7G(5')ppp(5')G. Em algumas modalidades, cada RNA usado no método compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG. Em algumas modalidades, cada RNA usado no método compreende o 3'-O-Me- m7G(5')ppp(5')G. Em algumas modalidades, cada RNA usado no método compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG e 3'-O-Me- m7G(5')ppp(5')G.

[00408] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6. Em algumas modalidades, cada RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

[00409] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, cada RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

[00410] Em algumas modalidades, pelo menos um RNA compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, cada RNA compreende uma cauda poli-A. Em algumas modalidades, a cauda poli-A pode compreender pelo menos 20, pelo menos 30, pelo menos 40, pelo menos 80 ou pelo menos 100 e até 500, até 400, até 300, até 200 ou até a 150 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A pode consistir essencialmente em pelo menos 20, pelo menos 30, pelo menos 40, pelo menos 80 ou pelo menos 100 e até 500, até 400, até 300, até 200 ou até 150 nucleotídeos A. Em algumas modalidades, a cauda poli- A pode consistir em pelo menos 20, pelo menos 30, pelo menos 40, pelo menos 80 ou pelo menos 100 e até 500, até 400, até 300, até 200 ou até 150 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A pode compreender a cauda poli-A mostrada em SEQ ID NO: 30. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende pelo menos 100 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende cerca de 150 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a cauda poli-A compreende cerca de 120 nucleotídeos.

[00411] Em algumas modalidades, um ou mais RNA compreende: (1) um cap 5' que compreende m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me- m7G(5')ppp(5')G; (2) uma 5' UTR que compreende (i) uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6; (3) uma 3' UTR que compreende (i) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8; e (4) uma cauda poli-A que compreende pelo menos 100 nucleotídeos. Métodos Terapêuticos

[00412] A mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento pode ser usada em métodos, por exemplo, métodos terapêuticos. Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para tratar cânceres de tumor sólido em estágio avançado, não passíveis de ressecção ou metastáticos que compreendem administrar a mistura de RNAs de citocina, em que o câncer de tumor sólido em estágio avançado compreende um tumor epitelial, tumor de próstata, tumor ovariano, tumor de célula renal, tumor do trato gastrintestinal, tumor hepático, tumor colorretal, tumor de vasculatura, tumor mesotelioma, tumor pancreático, tumor de mama, tumor sarcoma, tumor de pulmão, tumor de cólon, tumor melanoma, tumor de pulmão de células pequenas, tumor neuroblastoma, tumor testicular, tumor carcinoma, tumor adenocarcinoma, tumor seminoma, retinoblastoma, carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC), linfoma, incluindo linfoma não Hodgkin e linfoma de Hodgkin, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de cabeça e pescoço, tumor osteossarcoma, câncer de pulmão de células não pequenas, tumor de rim, tumor de tireoide, tumor de fígado, outros tumores sólidos passíveis de injeção intratumoral ou combinações dos mesmos.

[00413] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido em estágio avançado compreende um tumor epitelial, tumor de próstata, tumor ovariano, tumor de células renais, tumor do trato gastrintestinal, tumor hepático, tumor colorretal, tumor de vasculatura, tumor mesotelioma, tumor pancreático, tumor de mama, tumor sarcoma, tumor de pulmão, tumor de cólon, tumor melanoma, tumor de pulmão de células pequenas, tumor neuroblastoma, tumor testicular, tumor carcinoma, tumor adenocarcinoma, tumor seminoma, retinoblastoma, carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC), carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de cabeça e pescoço, tumor osteossarcoma, câncer de pulmão de células não pequenas, tumor de rim, tumor de tireoide, tumor de fígado, outros tumores sólidos passíveis de injeção intratumoral ou combinações dos mesmos.

[00414] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido em estágio avançado compreende linfoma, tal como linfoma não Hodgkin ou linfoma de Hodgkin.

[00415] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma. Em algumas modalidades, o melanoma é melanoma uveal ou melanoma da mucosa. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma, opcionalmente melanoma uveal ou melanoma da mucosa e compreende metástases superficiais, subcutâneas e/ou de linfonodos passíveis de injeção intratumoral.

[00416] Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em uma metástase de tumor sólido dentro de um linfonodo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor linfoma dentro de um linfonodo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido primário ou secundário que está dentro de 10 cm da superfície da pele do indivíduo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido primário ou secundário que está a 5 cm da superfície da pele do indivíduo. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido cutâneo. Em algumas modalidades, o tumor sólido cutâneo é uma metástase. Em algumas modalidades, o tumor sólido cutâneo é um câncer de pele. Em algumas modalidades, o tumor sólido cutâneo não é um câncer de pele. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral compreende injeção em um tumor sólido subcutâneo. Em algumas modalidades, o tumor sólido subcutâneo é uma metástase. Em algumas modalidades, o tumor sólido subcutâneo é um câncer de pele. Em algumas modalidades, o tumor sólido subcutâneo não é um câncer de pele.

[00417] Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor epitelial. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de próstata. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor ovariano. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de células renais. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor do trato gastrintestinal. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor hepático. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor colorretal. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de vasculatura. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor mesotelioma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor pancreático. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de mama. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor sarcoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de pulmão. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de cólon. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor melanoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de pulmão de células pequenas. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de câncer de pulmão de células não pequenas. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor neuroblastoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor testicular. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor carcinoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor adenocarcinoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor seminoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um retinoblastoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC). Em algumas modalidades, o tumor sólido é um carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço (HNSCC). Em algumas modalidades, o tumor sólido é HNSCC. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor osteossarcoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer renal. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer de tireoide. Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer anaplásico da tireoide (ATC). Em algumas modalidades, o tumor sólido é câncer de fígado. Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor de cólon. Em algumas modalidades, o tumor sólido é qualquer um dos dois acima. Em algumas modalidades, o tumor sólido é qualquer um ou mais dos anteriores.

[00418] Em algumas modalidades, o tumor sólido é linfoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido é linfoma não Hodgkin. Em algumas modalidades, o tumor sólido é linfoma de Hodgkin.

[00419] Em algumas modalidades, o método compreende o uso de uma mistura de RNAs de citocina que compreende um RNA que codifica IFNα, um RNA que codifica IL-15 sushi, um RNA que codifica IL-12sc e um RNA que codifica GM-CSF, opcionalmente modificado para ter uma nucleobase modificada em lugar de cada uridina e uma estrutura Cap1 na extremidade 5' do RNA.

[00420] Em algumas modalidades, é fornecido um método para o tratamento de um câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático que compreende administrar, a um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de resseção ou metastático, um RNA de que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[00421] Em algumas modalidades, os métodos para o tratamento de cânceres de tumor sólido em estágio avançado, não passíveis de ressecção ou metastáticos são englobados que compreende administrar a um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido em estágio avançado de uma quantidade terapeuticamente eficaz de RNA que compreende um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF.

[00422] Em algumas modalidades, é fornecida uma composição para uso no tratamento de cânceres de tumor sólido em estágio avançado, não passíveis de ressecção ou metastáticos que compreende administrar de RNA que codifica IL-12sc e ainda administrar um RNA que codifica IFNα, IL-15 sushi e GM-CSF.

[00423] Em algumas modalidades, é fornecida uma composição para uso no tratamento de cânceres de tumor sólido em estágio avançado, não passíveis de ressecção ou metastáticos que compreende administrar de RNA que codifica IFNα e ainda administrar um RNA que codifica IL-12sc, IL-15 sushi e GM-CSF.

[00424] Em algumas modalidades, é fornecida uma composição para uso no tratamento de cânceres de tumor sólido em estágio avançado, não passíveis de ressecção ou metastáticos que compreende administrar de RNA que codifica IL-15 sushi e ainda administrar um RNA que codifica IL-12sc, IFNα e GM-CSF.

[00425] Em algumas modalidades, é fornecida uma composição para uso no tratamento de cânceres de tumor sólido em estágio avançado, não passíveis de ressecção ou metastáticos que compreende administrar de RNA que codifica GM-CSF sushi e ainda administrar um RNA que codifica IL-12sc, IFNα e IL-15 Sushi. A. Vias de Administração e Tempo

[00426] Em algumas modalidades, os RNAs são coadministrados. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados simultânea ou sequencialmente. Se sequencial, a administração pode ser em qualquer ordem e em qualquer intervalo de tempo apropriado conhecido por aqueles versados na técnica. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados por meio de injeção no tumor (por exemplo, intratumoralmente) ou próximo ao tumor (peritumoralmente). Em algumas modalidades, os RNAs são misturados em solução líquida antes da injeção. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados por meio de injeção intratumoral direta.

[00427] Em algumas modalidades, os RNAs são injetados intratumoral ou peritumoralmente. Em algumas modalidades, os RNAs são injetados intratumoralmente.

[00428] Em algumas modalidades, os RNAs são administrados em um cenário neoadjuvante. "Cenário neoadjuvante" refere-se a um cenário clínico no qual o método é realizado antes da terapia primária/definitiva (por exemplo, antes da ressecção cirúrgica de um tumor).

[00429] Em algumas modalidades, os RNAs são administrados como monoterapia. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados como parte de uma terapia combinada com uma ou mais outras opções de tratamento (por exemplo, radiação e/ou um ou mais agentes quimioterapêuticos).

[00430] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina é administrada por via intratumoral uma vez por semana em um ciclo de 3 ou 4 semanas (ou seja, três doses a cada 21 ou quatro doses a cada 28 dias). Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina é administrada intratumoral ou peritumoralmente uma vez por semana. Em algumas modalidades, a injeção intratumoral continua semanalmente até a segunda avaliação do tumor, momento no qual uma alteração na faixa de dosagem da mistura de RNAs de citocina a cada três semanas pode ser feita.

[00431] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina é administrada em um ciclo de 3 ou 4 semanas, em que a mistura de RNAs de citocina é administrada uma vez por semana. Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina é administrada em um ciclo de 3 ou 4 semanas, em que a mistura de RNAs de citocina é administrada uma vez a cada 2 semanas. Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina é administrada em um ciclo de 3 ou 4 semanas, em que a mistura de RNAs de citocina é administrada uma vez a cada 3 semanas. Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina é administrada em um ciclo de 3 ou 4 semanas, em que a mistura de RNAs de citocina é administrada uma vez a cada 4 semanas.

[00432] Em algumas modalidades, os RNAs são administrados durante cerca de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados durante cerca de 5 meses. Em algumas modalidades, os RNAs são administrados durante um máximo de 52 semanas.

[00433] Em algumas modalidades, as combinações de RNA são administradas como uma proporção de 1:1:1:1 com base na massa de RNA igual (ou seja, 1:1:1:1 % (p/p/p/p)).

[00434] Em algumas modalidades, os RNAs são administrados em uma quantidade terapeuticamente eficaz. B. Indicações e Populações de Pacientes

[00435] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um indivíduo que tem um tumor sólido, em que o indivíduo: i não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD- L1); e/ou ii tem um tumor sólido resistente à PD-1 e/ou PD-L1; e/ou iii adquiriu resistência a uma terapia antipD-1 e/ou antipD- L1; e/ou iv tem resistência inata à terapia antipD-1 e/ou antipD-L1.

[00436] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um tumor sólido em um indivíduo que não obteve sucesso em uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[00437] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um tumor sólido em um indivíduo que se tornou intolerante a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[00438] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um tumor sólido em um indivíduo que se tornou resistente a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[00439] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um tumor sólido em um indivíduo que se tornou intolerante a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

[00440] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um tumor sólido em um indivíduo que tem um tumor sólido resistente à PD-1 e/ou PD-L1.

[00441] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um tumor sólido em um indivíduo, em que o indivíduo adquiriu resistência a uma terapia antipD-1 e/ou antipD-L1.

[00442] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um tumor sólido em um indivíduo, em que o indivíduo tem resistência inata a uma terapia antipD-1 e/ou antipD-L1.

[00443] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido metastático. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido não passível de ressecção. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido em estágio avançado. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um câncer de tumor sólido metastático. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido metastático, não passível de ressecção e em estágio avançado. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um estágio avançado e um tumor sólido não passível de ressecção. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um estágio avançado e um tumor sólido metastático. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido não passível de ressecção e metastático.

[00444] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma célula cancerosa que compreende uma perda parcial ou total da função de beta-2-microglobulina (B2M). Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma célula cancerosa com perda parcial da função de B2M. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma célula cancerosa com uma perda total da função de B2M. Em algumas modalidades, a perda parcial ou total da função de B2M é avaliada ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa do mesmo indivíduo, em que a célula não cancerosa é do mesmo tecido do qual a célula cancerosa foi derivada. Em algumas modalidades, a perda parcial ou total da função de B2M é avaliada ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa do mesmo indivíduo, em que a célula não cancerosa não é do mesmo tecido do qual a célula cancerosa foi derivada. Em algumas modalidades, a perda parcial ou total da função de B2M é avaliada ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa de um indivíduo diferente. Em algumas modalidades, a perda parcial ou total da função de B2M é avaliada ao comparar uma célula cancerosa com um controle de célula não cancerosa.

[00445] Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido que compreende células cancerosas com função de B2M normal. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 25 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 50 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 75 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 95 % ou mais das células cancerosas têm uma perda parcial ou total da função de B2M.

[00446] Em algumas modalidades, o indivíduo compreende uma célula que compreende uma mutação no gene de B2M.

[00447] Em algumas modalidades, a mutação é uma substituição, inserção ou eliminação. Em algumas modalidades, o gene de B2M compreende uma perda de heterozigosidade (LOH). Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação de deslocamento de quadro. Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação de eliminação. Em algumas modalidades, a mutação de deslocamento de quadro está no éxon 1 de B2M. Em algumas modalidades, a mutação de deslocamento de quadro resulta em um truncamento de B2M. Em algumas modalidades, a mutação é uma eliminação completa ou parcial (por exemplo, truncamento) de B2M. Em algumas modalidades, uma mutação de eliminação está no éxon 1 de B2M. Em algumas modalidades, a mutação deslocamento de quadro compreende p.Leu13fs e/ou p.Ser14fs. Em algumas modalidades, a mutação de deslocamento de quadro compreende V69Wfs*34, L15fs*41, L13P, L15fs*41 e/ou p.S31* de acordo com Middha et al. (2019) JCO Precis

Oncol. (doi: 10.1200/PO.18.00321). Em algumas modalidades, a mutação compreende uma mutação de deslocamento de quadro e/ou eliminação (por exemplo, truncamento) a montante de um domínio de quinase para JAK1 e/ou JAK2.

[00448] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um nível reduzido de proteína B2M comparado com um indivíduo sem uma perda parcial ou total da função de B2M.

[00449] Em algumas modalidades, o indivíduo compreende uma perda parcial ou total da função de beta-2-microglobulina (B2M). Em algumas modalidades, o indivíduo compreende uma perda parcial da função de B2M. Em algumas modalidades, o indivíduo compreende uma perda total da função de B2M. A perda parcial ou total da função de B2M pode ser avaliada ao comparar com uma amostra de tecido do mesmo indivíduo. A perda parcial ou total da função de B2M pode ser avaliada ao comparar uma amostra de tecido do tumor com uma amostra de tecido do mesmo tecido a partir do qual a amostra de tumor foi derivada.

[00450] Em algumas modalidades, o tumor sólido como um todo (por exemplo, conforme avaliado em uma biópsia retirada do tumor sólido) tem uma perda parcial ou total da função de B2M comparado com células normais ou tecido do qual o tumor sólido é derivado. Em algumas modalidades, o indivíduo compreende (por exemplo, a perda parcial ou total da função resulta de) uma mutação no gene de B2M.

[00451] Em algumas modalidades, determinadas células dentro do tumor têm uma perda de função de B2M. Em algumas modalidades, determinadas células dentro do tumor têm uma perda parcial ou total da função de B2M, enquanto que outras células no tumor não.

[00452] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um nível reduzido de proteína do principal complexo de histocompatibilidade de classe I (MHC I) expressa na superfície comparado com um controle, opcionalmente em que o controle é uma amostra não cancerosa do mesmo indivíduo. Em algumas modalidades, um indivíduo tem uma célula cancerosa que compreende um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa não tem uma proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, o nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície é avaliado ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa do mesmo indivíduo, opcionalmente em que a célula não cancerosa é do mesmo tecido a partir do qual a célula cancerosa foi derivada. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido que compreende células cancerosas com um nível normal de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 25 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 50 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido no qual 75 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície. Em algumas modalidades, a célula cancerosa está em um tumor sólido em que 95 % ou mais das células cancerosas têm um nível reduzido de MHC I expressa na superfície.

[00453] Em algumas modalidades, o tumor sólido como um todo (por exemplo, conforme avaliado em uma biópsia retirada do tumor sólido) tem um nível reduzido de proteína MHC I expressa na superfície comparado com células normais ou tecido do qual o tumor sólido é derivado.

[00454] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um câncer de tumor sólido em estágio avançado.

[00455] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um câncer de tumor sólido não passível de ressecção.

[00456] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina fornecida no presente documento é usada em um método de tratamento de um câncer de tumor sólido metastático.

[00457] Em algumas modalidades, a mistura de RNAs de citocina é injetada em um ou mais câncer de tumor sólido dentro de um linfonodo.

[00458] Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido em estágio avançado compreende um tumor que é adequado para injeção intratumoral direta. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido em estágio avançado está no estágio III, subconjuntos do estágio III, estágio IV ou subconjuntos do estágio IV. Em algumas modalidades, o câncer é melanoma. Em algumas modalidades, o melanoma está no estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV. Em algumas modalidades, o câncer é carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC). Em algumas modalidades, o câncer é carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC). Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC está no estágio III ou estágio IV. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma, opcionalmente em que o melanoma é melanoma uveal ou melanoma da mucosa; e compreende metástases superficiais, subcutâneas e/ou de linfonodos passíveis de injeção intratumoral. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é HNSCC e/ou melanoma da mucosa com apenas locais da mucosa. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é HNSCC. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma uveal ou melanoma da mucosa. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma uveal. Em algumas modalidades, o câncer de tumor sólido é melanoma da mucosa. Em algumas modalidades, os RNAs são injetados intratumoralmente apenas em locais da mucosa do câncer de tumor sólido, em que o câncer de tumor sólido é HNSCC ou melanoma da mucosa.

[00459] Em alguns modalidades, o indivíduo não obteve sucesso em uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1) anterior. Em outras modalidades, o indivíduo não foi tratado anteriormente com uma terapia antipD-1 ou antipD-L1. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem outras opções de tratamento.

[00460] Em algumas modalidades, o método pode compreender redução do tamanho de um tumor ou prevenção de metástase do câncer em um indivíduo.

[00461] Em algumas modalidades, o indivíduo tem pelo menos duas lesões tumorais ou pelo menos três lesões tumorais. Em algumas modalidades, o indivíduo tem duas lesões tumorais. Em algumas modalidades, o indivíduo tem três lesões tumorais.

[00462] Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença mensurável de acordo com os critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) 1.1, conforme descrito no presente documento.

[00463] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor que é adequado para injeção intratumoral direta. Em algumas modalidades, se um tumor é adequado para injeção intratumoral direta pode ser com base no volume da dose. Em algumas modalidades, um tumor é adequado para injeção intratumoral direta de uma mistura de RNAs de citocina se incluir uma lesão cutânea ou subcutânea ≥ 0,5 cm no diâmetro mais longo ou múltiplas lesões de fusão injetáveis que se tornam confluentes e têm o diâmetro mais longo (soma dos diâmetros de todas as lesões-alvo envolvidas) ≥ 0,5 cm adequado para injeção (ou seja, sem sangramento ou supuração). Em algumas modalidades, linfonodos > 1,5 cm que são adequados para injeção intratumoral orientada por ultrassonografia (USG) e confirmados como doença metastática também são adequados. Em algumas modalidades, o tumor é melanoma uveal ou melanoma da mucosa. Em algumas modalidades, o tumor é melanoma uveal ou melanoma da mucosa; e compreende metástases superficiais, subcutâneas e/ou de linfonodos passíveis de injeção intratumoral.

[00464] Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano. Em algumas modalidades, o indivíduo pode ter uma expectativa de vida de mais de 3 meses, 4 meses, 5 meses ou 6 meses. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma expectativa de vida de mais de 3 meses. Em algumas modalidades, o indivíduo tem pelo menos 18 anos de idade.

[00465] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para o tratamento de um melanoma em estágio avançado, carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) que compreende administrar a um indivíduo que tem melanoma em estágio avançado um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF. Em algumas modalidades, (a) o indivíduo tem pelo menos 18 anos de idade; (b) o indivíduo não obteve sucesso em terapias antipD1 ou antipD-L1 anteriores; (c) o indivíduo tem um mínimo de 2 lesões; e (d) o melanoma, CSCC ou HNSCC compreende um tumor que é adequado para injeção intratumoral direta.

[00466] Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença mensurável de acordo com os critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) 1.1. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma expectativa de vida de mais de 3 meses.

[00467] Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor epitelial, tumor de próstata, tumor ovariano, tumor de células renais, tumor do trato gastrintestinal, tumor hepático, tumor colorretal, tumor de vasculatura, tumor mesotelioma, tumor pancreático, tumor de mama, tumor sarcoma, tumor de pulmão, tumor de cólon, tumor melanoma, tumor de pulmão de células pequenas, tumor neuroblastoma, tumor testicular, tumor carcinoma, tumor adenocarcinoma, tumor seminoma, retinoblastoma, carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC), carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de cabeça e pescoço ou tumor osteossarcoma.

[00468] Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário de qualquer tamanho. Em algumas modalidades, as medições da espessura do tumor são relatadas de forma arredondada para o 0,1 mm mais próximo. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com ≤ 1,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 ou 1,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com < 0,8 mm (ou menos de 0,8 mm) de espessura sem ulceração. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com < 0,8 mm (ou menos de 0,8 mm) de espessura com ulceração. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com de 0,8 a 1,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com 0,8, 0,9 ou 1,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com 0,8 a 1,0 mm de espessura sem ou com ulceração. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com > 1,0 - 2,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 ou 2,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com > 1,0 - 2,0 mm de espessura sem ou com ulceração. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com > 2,0

- 4,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com 3,0 - 4,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9 ou 4,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com > 2,0 - 4,0 mm de espessura sem ou com ulceração. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com > 4,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0 ou 10,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o tumor sólido compreende um tumor primário com > 4,0 mm de espessura sem ou com ulceração. Em algumas modalidades, a espessura está na dimensão mais espessa (ou seja, maior) do tumor. Em algumas modalidades, o tumor é um tumor de câncer de pele e a espessura vai da superfície da pele até a parte mais profunda do tumor (por exemplo, a espessura não é a propagação lateral do tumor). Em algumas modalidades, o tumor é uma metástase de pele de um câncer diferente de um câncer de pele e a espessura do tumor vai da superfície da pele até a parte mais profunda do tumor (por exemplo, a espessura não é a propagação lateral do tumor)

[00469] Em algumas modalidades, o tumor sólido é um tumor sólido melanoma. Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário de qualquer tamanho. Em algumas modalidades, as medições da espessura do tumor são relatadas de forma arredondada para o 0,1 mm mais próximo. Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com ≤ 1,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 ou 1,0 mm de espessura. Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com < 0,8 mm (ou menos de 0,8 mm) de espessura sem ulceração.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com < 0,8 mm (ou menos de 0,8 mm) de espessura com ulceração.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com de 0,8 a 1,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com 0,8, 0,9 ou 1,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com 0,8 a 1,0 mm de espessura sem ou com ulceração.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com > 1,0 - 2,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 ou 2,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com > 1,0 - 2,0 mm de espessura sem ou com ulceração.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com > 2,0 - 4,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com 3,0 - 4,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9 ou 4,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com > 2,0 - 4,0 mm de espessura sem ou com ulceração.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com > 4,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0 ou 10,0 mm de espessura.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com > 4,0 mm de espessura sem ou com ulceração.

Em algumas modalidades, a espessura vai da superfície da pele até a parte mais profunda do tumor (a espessura não é a propagação lateral do tumor).

[00470] Em algumas modalidades, o melanoma compreende um linfonodo regional envolvido em um tumor ou qualquer número de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites sem nódulos envolvidos no tumor.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente oculto.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente detectável.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende qualquer número de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites sem nódulos envolvidos no tumor.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor ou qualquer número de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites sem nódulos envolvidos no tumor.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor clinicamente ocultos.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor, pelo menos um dos quais é clinicamente detectável.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor, um dos quais é clinicamente oculto ou clinicamente detectável e com presença de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende qualquer número de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites com um nódulo envolvido no tumor.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende quatro ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor ou qualquer número de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites com dois ou mais nódulos envolvidos no tumor ou qualquer número de nódulos emaranhados sem ou com metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites.

Em algumas modalidades, o melanoma compreende quatro ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor clinicamente ocultos. Em algumas modalidades, o melanoma compreende quatro ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor clinicamente ocultos, pelo menos um dos quais é clinicamente detectável ou com presença de qualquer número de nódulos emaranhados. Em algumas modalidades, o melanoma compreende dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor, um dos quais é clinicamente oculto ou clinicamente detectável. Em algumas modalidades, o melanoma compreende quatro ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor clinicamente ocultos, dois ou mais dos quais são clinicamente ocultos ou clinicamente detectáveis e/ou com presença de qualquer número de nódulos emaranhados e com presença de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites.

[00471] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um tumor primário de qualquer tamanho; b. compreende um ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor; ou metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites sem linfonodos regionais envolvidos no tumor; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00472] Em algumas modalidades, o melanoma tem uma metástase à distância detectável.

[00473] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um tumor primário com < 0,8 mm de espessura sem ulceração; ou um tumor primário com 0,8 a 1,0 mm de espessura e um tumor primário com menos de 0,8 mm de espessura com ulceração; ou um tumor primário com > 1,0-2,0 mm de espessura sem ulceração; b. compreende um ou dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor clinicamente ocultos; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00474] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um tumor primário com < 0,8 mm de espessura sem ulceração; ou um tumor primário com 0,8 a 1,0 mm de espessura e um tumor primário com menos de 0,8 mm de espessura com ulceração; ou um tumor primário com > 1,0-2,0 mm de espessura sem ulceração; b. compreende um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente detectável; ou nenhum linfonodo regional envolvido em um tumor com presença de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites; ou dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor, pelo menos um dos quais é clinicamente detectável; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00475] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um tumor primário com > 1,0-2,0 mm de espessura com ulceração; ou um tumor primário com > 2,0-4,0 mm de espessura sem ulceração; b. compreende um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente detectável ou clinicamente oculto; ou nenhum ou nenhum linfonodo regional envolvido em um tumor com metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00476] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente detectável; ou nenhum linfonodo regional envolvido em um tumor com presença de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites; e b. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00477] Em algumas modalidades, o melanoma não tem metástases distantes detectáveis; e compreende: a. dois ou três linfonodos regionais envolvidos no tumor,

pelo menos um dos quais é clinicamente detectável; b. um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente oculto ou detectável com presença de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites; c. quatro ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor, pelo menos um dos quais é clinicamente detectável ou a presença de um ou mais nódulos emaranhados; ou d. dois ou mais linfonodos regionais clinicamente ocultos ou clinicamente detectáveis e/ou presença de um ou mais nódulos emaranhados com presença de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites.

[00478] Em algumas modalidades, o melanoma compreende um tumor primário com < 0,8 mm ou > 1,0-2,0 ou > 2,0-4,0 mm de espessura sem ulceração; não compreende metástases à distância detectáveis; e compreende: a. um linfonodo regional envolvido em um tumor clinicamente oculto ou detectado clinicamente com presença de metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites; ou b. quatro ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor; ou uma ou mais metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites com dois ou mais nódulos envolvidos no tumor; ou um ou mais nós emaranhados sem ou com metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites.

[00479] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um tumor primário com > 2,0-4,0 mm de espessura com ulceração ou um tumor primário com > 4,0 mm de espessura sem ulceração; b. compreende um ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor; ou uma ou mais metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites, opcionalmente com um ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor; ou um ou mais nós emaranhados sem ou com metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00480] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um tumor primário com espessura > 4,0 mm sem ulceração; b. compreende um ou dois ou três linfonodos regionais envolvidos em tumor; ou uma ou mais metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites com nenhum ou um linfonodo regional envolvido em um tumor; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00481] Em algumas modalidades, o melanoma: a. compreende um tumor primário > 4,0 mm de espessura com ulceração; b. compreende quatro ou mais linfonodos regionais envolvidos no tumor; ou uma ou mais metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites com dois ou mais linfonodos regionais envolvidos em tumor ou um ou mais nódulos emaranhados sem ou com metástases em trânsito, satélites e/ou microssatélites; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00482] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) compreende um tumor de qualquer tamanho. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC não compreende nenhum tumor identificado. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende um tumor que tem 2 cm ou menor em sua dimensão mais longa. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende um tumor maior do que 2 cm, mas não maior do que 4 cm em sua dimensão mais longa. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende um tumor que é maior do que 4 cm na dimensão mais longa ou tem erosão mínima do osso ou invasão perineural ou invasão profunda. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende um tumor com extenso envolvimento do osso cortical ou medular ou invasão da base do crânio ou invasão através do forame da base do crânio.

[00483] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) não compreende metástases em linfonodos regionais. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende metástases em um único linfonodo ipsilateral, tem 3 cm ou menos na dimensão mais longa e é ENE-negativo. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende metástases em um único linfonodo ipsilateral maior do que 3 cm, mas não maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende metástases em múltiplos linfonodos ipsilaterais, nenhum maior do que 6 cm em sua dimensão mais longa e é ENE-negativo. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende metástases em linfonodos bilaterais ou contralaterais, nenhum maior do que 6 cm na dimensão mais longa e é ENE-negativo. Em algumas modalidades, o CSCC ou HNSCC compreende metástases em um linfonodo maior do que 6 cm em sua dimensão mais longa e é ENE-negativo; ou metástase em qualquer linfonodo e ENE- negativo. Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC): a. compreende um tumor maior do que 4 cm na dimensão mais longa ou tem erosão óssea mínima ou invasão perineural ou invasão profunda; e b. compreende i sem metástase de linfonodo regional; ou ii metástase em um único linfonodo ipsilateral, 3 cm ou menor na dimensão mais longa e ENE-negativo; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00484] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) compreende: a. um tumor de 2 cm ou menor na dimensão mais longa; b. metástase em um único linfonodo ipsilateral, 3 cm ou menor em sua dimensão mais longa e é ENE-negativo; e c. nenhuma metástase à distância detectável.

[00485] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) compreende: a. um tumor maior do que 2 cm, mas não maior do que 4 cm em sua dimensão mais longa; b. metástase em um único linfonodo ipsilateral, 3 cm ou menor em sua dimensão mais longa e é ENE-negativo; e c. nenhuma metástase à distância detectável.

[00486] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC): a. compreende: i um tumor de 2 cm ou menor em sua dimensão mais longa; ou ii um tumor maior do que 2 cm, mas não maior do que 4 cm em sua dimensão mais longa; ou iii um tumor maior do que 4 cm em sua dimensão mais longa ou erosão mínima do osso ou invasão perineural ou invasão profunda; e b. compreende:

i metástase em um único linfonodo ipsilateral maior do que 3 cm, mas não maior do que 6 cm em sua dimensão mais longa e é extensão extranodal (ENE)-negativo; ou ii metástases em múltiplos linfonodos ipsilaterais, nenhum maior do que 6 cm em sua dimensão mais longa e ENE- negativo; ou iii metástase em linfonodos bilaterais ou contralaterais, nenhum maior do que 6 cm em sua dimensão mais longa e ENE- negativo; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00487] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC):

[00488] a. compreende: i um tumor de 2 cm ou menor na dimensão mais longa; ou ii um tumor maior do que 2 cm, mas não maior do que 4 cm em sua dimensão mais longa; ou iii um tumor maior do que 4 cm na dimensão mais longa ou erosão mínima do osso ou invasão perineural ou invasão profunda; ou iv um tumor com extenso envolvimento ósseo cortical ou medular ou invasão da base do crânio ou invasão através do forame da base do crânio; e b. compreende metástase em linfonodo maior do que 6 cm em sua dimensão mais longa e é ENE-negativo; ou metástase em qualquer linfonodo e é ENE-negativo; e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00489] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC): a. compreende um tumor com extenso envolvimento cortical ou medular ou invasão da base do crânio ou invasão através do forame da base do crânio; b. compreende: i nenhuma metástase de linfonodo regional; ou ii metástase em um único linfonodo ipsilateral, 3 cm ou menor na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou iii metástase em um único linfonodo ipsilateral maior do que 3 cm, mas não maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou metástases em múltiplos linfonodos ipsilaterais, nenhum maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou metástases em linfonodos bilaterais ou contralaterais, nenhum maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou iv metástase em linfonodo maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou metástases em quaisquer linfonodos e ENE-negativo e c. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00490] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC): a. compreende um tumor com extenso envolvimento ósseo cortical ou medular ou invasão da base do crânio ou invasão pelo forame da base do crânio; e b. não compreende metástases à distância detectáveis.

[00491] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC): a. compreende: i um tumor de 2 cm ou menor na dimensão mais longa; ou ii um tumor maior do que 2 cm, mas não maior do que 4 cm na dimensão mais longa; ou iii um tumor maior do que 4 cm na dimensão mais longa ou erosão mínima do osso ou invasão perineural ou invasão profunda; ou iv um tumor com extenso envolvimento ósseo cortical ou medular ou invasão da base do crânio ou invasão pelo forame da base do crânio; b. compreende: i nenhuma metástase de linfonodo regional; ou ii metástase em um único linfonodo ipsilateral, 3 cm ou menor na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou iii metástase em um único linfonodo ipsilateral maior do que 3 cm, mas não maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou metástases em múltiplos linfonodos ipsilaterais, nenhum maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou metástases em linfonodos bilaterais ou contralaterais, nenhum maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; iv metástase em linfonodo maior do que 6 cm na dimensão mais longa e ENE-negativo; ou metástase em qualquer linfonodo e ENE-negativo; e c. compreende metástases distantes detectáveis.

[00492] Em algumas modalidades, o carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC) ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) não compreende metástases à distância detectáveis.

[00493] Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz dos RNAs resulta em um ou mais dentre: (a) uma redução na gravidade ou duração de um sintoma de câncer; (b) inibição do crescimento do tumor ou aumento de necrose do tumor, redução do tumor e/ou desaparecimento do tumor; (c) retardo no crescimento e/ou desenvolvimento do tumor; (d) metástase tumoral inibida ou retardada ou interrompida; (e) prevenção ou retardo da recorrência do crescimento do tumor; (f) aumento na sobrevida de um indivíduo; e/ou (g) uma redução no uso ou necessidade de terapia anticâncer convencional (por exemplo, uso reduzido ou eliminado de agentes quimioterapêuticos ou citotóxicos), opcionalmente comparado com um indivíduo não tratado ou um indivíduo que recebeu apenas 1, 2 ou 3 dos RNAs na mistura de RNAs. ***

[00494] A presente descrição e modalidades exemplificativas não devem ser tomadas como limitativas. Para fins do presente relatório descritivo e reivindicações em anexo, a menos que indicado de outra forma, todos os números que expressam quantidades, porcentagens ou proporções e outros valores numéricos usados no relatório descritivo e reivindicações devem ser entendidos como sendo modificados, em todos os casos, pelo termo "cerca de", na medida em que ainda não tenham sido modificados. "Cerca de" indica um grau de variação que não afeta substancialmente as propriedades do indivíduo descrito, por exemplo, dentro de 10%, 5%, 2% ou 1%. Consequentemente, a menos que indicado em contrário, os parâmetros numéricos estabelecidos no relatório descritivo a seguir e reivindicações em anexo são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas que se busca obter. No mínimo e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina dos equivalentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deve ser interpretado pelo menos à luz do número de dígitos significativos relatados e aplicando técnicas de arredondamento comuns.

[00495] Deve ser observado que, conforme usado no presente relatório descritivo e nas reivindicações em anexo, as formas no singular "um", "uma", "o" e "a" e qualquer uso no singular de qualquer palavra incluem as referências no plural, a menos que expressa e inequivocamente limitado a uma referência. Conforme usado no presente documento, o termo "incluir" e suas variantes gramaticais se destinam a ser não limitativas, de modo que a citação de itens em uma lista não exclua outros itens similares que possam ser substituídos ou adicionados aos itens listados.

EXEMPLOS

[00496] Os exemplos a seguir são fornecidos para ilustrar determinadas modalidades descritas e não devem ser interpretados como limitando o escopo da presente invenção de qualquer forma. Nos Exemplos discutidos abaixo, a mistura de RNAs de citocina, conforme definido acima, também pode ser denominada como "a mistura", "a mistura de citocinas", "a composição" ou "o medicamento" de forma alternada. Exemplo 1 - Escalonamento de Dose e Expansão de Dose da Mistura de RNAs de Citocina

[00497] Design Global: Um primeiro estudo em ser humano, aberto, de escalonamento e expansão de dose para avaliação das doses máximas toleradas e administradas, segurança, tolerabilidade, farmacocinética, farmacodinâmica e atividade antitumoral da mistura de RNAs de citocina administrada intratumoralmente como um único agente.

[00498] Número de Participantes: A inscrição de até 72 participantes é planejada, dependendo dos níveis de dose investigados durante a fase de escalonamento.

[00499] Fase de Escalonamento de Dose: Não há cálculo formal do tamanho da amostra na fase de escalonamento de dose. A mistura de

RNAs de citocina é administrada a pacientes com tumores sólidos avançados que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com base em terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1 e/ou pacientes sem outras opções de tratamento para aquelas indicações nas quais a terapia anti- PD-1 é não usada rotineiramente. Até 38 participantes avaliáveis quanto às toxicidades limitantes de dose (DLT) se inscrevem na fase de escalonamento de dose com avaliação esperada de cerca de 8 níveis de dose. O tamanho real da amostra varia dependendo das DLTs observadas e do número de níveis de dose realmente explorados.

[00500] Fase de Expansão de Dose: Um design de dois estágios de Simon é usado na fase de expansão e cerca de 34 participantes com melanoma avançado que não obtiveram sucesso com terapias anti-PD- 1/anti-PD-L1 anteriores foram inscritos. Após os primeiros 16 participantes tratados, há uma análise provisória e, se a resposta for observada em pelo menos 2 participantes, o acréscimo continua para o tamanho total da amostra de 34 participantes.

[00501] Grupos de Intervenção e Duração: A duração do estudo para um participante inclui um período de triagem de até 28 dias. Uma vez selecionados com sucesso, os participantes podem receber a intervenção do estudo até progressão da doença, AE inaceitável, decisão do participante de interromper o tratamento ou por um máximo de 1 ano se nenhuma progressão da doença ocorrer. A continuação da mistura de citocinas RNA será considerada além de 1 ano pelo comitê de estudo, caso a caso, para aqueles participantes que claramente continuam a obter benefícios clínicos de maneira segura com toxicidade razoável. Após a interrupção da intervenção do estudo, os participantes retornam ao local do estudo aproximadamente 30 dias após a última administração do IMP ou antes que o participante receba outra terapia anticâncer, o que ocorrer primeiro, para avaliações de final de tratamento. Se o participante interromper a intervenção do estudo por razões diferentes da progressão, as visitas de acompanhamento são realizadas a cada 3 meses até progressão da doença, início de outro tratamento anticâncer ou morte (o que ocorrer primeiro).

[00502] A duração esperada do tratamento para participantes que se beneficiam da mistura de RNAs de citocina pode variar, com base na data de progressão; mas a duração média esperada do estudo por participante é estimada em 9 meses (1 mês para triagem, 5 meses para tratamento e 3 meses para final do tratamento).

[00503] IMP é administrado através da via intratumoral uma vez por semana em um ciclo de 4 semanas (isto é, quatro doses a cada 28 dias). Após cada ciclo de tratamento, a frequência de injeção intratumoral pode continuar semanalmente. Após a segunda avaliação do tumor, pode ocorrer a alteração do intervalo de dosagem, por exemplo, para uma vez por mês.

[00504] O avanço para níveis de dose mais elevados durante a fase de escalonamento ocorre com base na toxicidade; doses intermediárias também podem ser consideradas. Uma vez que os primeiros sinais de eficácia são observados em um nível de dose declarado seguro, ele pode ser expandido para confirmar a eficácia.

[00505] Omissões de dose ou atraso de dose podem ocorrer ao longo do estudo; a ocorrência de toxicidades limitantes de dose (DLTs) determina a necessidade destas modificações. Os participantes que experimentam uma DLT interrompem o tratamento e são acompanhados até a resolução para Grau ≤ 1 ou linha de base. Após recuperação de uma omissão de dose que não exceda duas semanas (ou seja, omissões de 2 doses), o participante pode retomar a terapia com um novo ciclo de tratamento no mesmo nível de dose ou menor; nenhum re-escalonamento de dose é permitido para os participantes com nova dosagem em um nível de dose mais baixo. Se o participante apresentar o mesmo AE que leva a uma segunda omissão de dose por

2 semanas (ou seja, 2 omissões de dose), o participante pode ser descontinuado permanentemente.

[00506] Via de Administração: Injeção intratumoral.

[00507] Regime de Dosagem: A mistura de RNAs de citocina é administrada em níveis de dose atribuídos uma vez por semana, 4 injeções em um ciclo de 28 dias.

[00508] Medicamento(s) Não Investigacional(is): Nenhuma pré- medicação predefinida é administrada.

[00509] Acesso Pós-Ensaio à Medicação do Estudo: Todos os participantes são tratados durante 1 ano ou até progressão da doença, o que ocorrer primeiro. Considerações Estatísticas: a. Análise Primária:

[00510] Escalonamento de Dose: Na fase de escalonamento de dose, as DLTs são resumidas por nível de dose. Os detalhes das DLTs são fornecidos pelo participante. Os AEs/SAEs emergentes do tratamento e as anormalidades laboratoriais durante o período de tratamento são resumidos usando estatísticas descritivas por nível de dose.

[00511] Expansão de Dose: Taxa de resposta objetiva (ORR) de acordo com o RECIST 1.1 é resumida com estatísticas descritivas. Um intervalo de confiança bilateral de 90 % é calculado usando o método de Clopper-Pearson. A inferência estatística é com base na hipótese e no nível alfa definido na seção de cálculo do tamanho da amostra. b. Análise de Parâmetros Secundários:

[00512] Escalonamento de Dose: Os parâmetros de concentração e PK das citocinas codificadas pela mistura são resumidos com estatísticas descritivas durante os ciclos nos quais a PK é avaliada. Os anticorpos antimedicamento (ADAs) contra as citocinas codificadas pela mistura são resumidos descritivamente.

[00513] Expansão de Dose: Os AEs/SAEs emergentes do tratamento e as anormalidades laboratoriais durante o período de tratamento são resumidos usando estatísticas descritivas. DoR e PFS de acordo com o RECIST 1.1 e iRECIST são resumidos usando o método de Kaplan- Meier. Uma análise similar à ORR de acordo com o RECIST 1.1 é fornecida para DCR de acordo com o RECIST 1.1 e iRECIST e ORR pelo iRECIST. A concentração PK e os parâmetros das citocinas codificadas pela mistura de citocinas são resumidos com estatísticas descritivas durante os ciclos nos quais a PK é avaliada. Os ADAs contra as citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocinas são resumidos descritivamente.

[00514] A mistura de RNAs de citocina é uma proporção em peso de 1:1:1:1 (p:p:p:p) de mRNAs sintéticos quimicamente modificados que codificam as citocinas humanas IL-15 sushi, IL-12sc, GM-CSF e IFNα2b. Espera-se que a mistura escolhida de citocinas exiba atividade antitumoral superior em relação às citocinas individuais.

[00515] A Figura 1A mostra um gráfico do design geral do estudo, enquanto que a Figura 1B mostra um gráfico do esquema de tratamento por paciente. A fase de escalonamento de dose visa determinar a MTD ou MAD da mistura de RNAs de citocina administrada semanalmente como monoterapia para pacientes que não obtiveram sucesso com terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1. Durante a fase de escalonamento acelerada, a ocorrência de toxicidades observadas no Ciclo 1 é avaliada em um participante. Assim que um AE ≥ Grau 2 ou DLT relacionada ocorrer em qualquer um dos DLs de escalonamento acelerado (DL1 ou 2, o que ocorrer primeiro) ou a partir de DL3, um escalonamento bayesiano com controle de sobredosagem é iniciado com avaliação de pelo menos 3 participantes/coorte. Quando a fase de escalonamento de dose termina, a MTD/MAD a ser avaliada na fase de expansão é determinada com base na segurança. Na fase de expansão, o teste de

MTD/MAD da dose fixa administrada semanalmente em pacientes com melanoma em estágio IIIB, IIIC ou IV após não obterem sucesso com terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1 é planejado.

[00516] As Tabelas 2 e 3 mostram o Esquema de Atividades (SOA), com a Tabela 2 mostrando o fluxograma de tratamento e a Tabela 3 mostrando o fluxograma de PK e PDy para as fases de escalonamento e expansão de dose.

Tabela 2: Esquema de Atividades (SOA) e Fluxograma de Tratamento Ciclo 2 de Tratamento e subsequentes Ciclo 1 de Tratamento b Avaliação a Triagem Duração de ciclo de 28 dias em EOTx FU t,y Duração de ciclo de 28 dias em monoterapia monoterapia Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 Dias antes da D1 D2 D8 D9 D15 D16 D22 D23 D1 D2 D8 D15 D22 D24 dose inicial Critérios de inclusão/exclusão / < 28 consentimento por

152/281 escrito Dados demográficos e histórico < 28 médico/da doença c ECOG PS, peso corporal d, altura e < 28 X X X X X X X X X (linha de base apenas) Sinais vitais f <7 X X X X X X X X X X Exame físico g <7 X X X X X X X X X Fotografia digital h <7 Fotografias digitais devem corresponder aos pontos de tempo de avaliação radiográfica Teste sérico de <7 X X

Ciclo 2 de Tratamento e subsequentes Ciclo 1 de Tratamento b Avaliação a Triagem Duração de ciclo de 28 dias em EOTx FU t,y Duração de ciclo de 28 dias em monoterapia monoterapia Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 Dias antes da D1 D2 D8 D9 D15 D16 D22 D23 D1 D2 D8 D15 D22 D24 dose inicial gravidez i Sorologia de HBsAg & HCV (e teste de HIV para os participantes < 28

153/281 nos locais de estudo na Alemanha apenas) Hematologia <7 X X X X X X X X X sanguínea j Coagulação k <7 X X X X X X X X X Química sérica l <7 X X X X X X X X X CRP/ferritina m < 28 X X X X X X X X X Xm X X X X Citocinas plasmáticas X X X X Xm Xm X secundárias m ECG de 12- < 28 X Xn X

Ciclo 2 de Tratamento e subsequentes Ciclo 1 de Tratamento b Avaliação a Triagem Duração de ciclo de 28 dias em EOTx FU t,y Duração de ciclo de 28 dias em monoterapia monoterapia Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 Dias antes da D1 D2 D8 D9 D15 D16 D22 D23 D1 D2 D8 D15 D22 D24 dose inicial derivações n Biópsia/aspirado De acordo com a Classificação de Lugano de 2014 (consulte o mesmo) da medula óssea o 154/281 FDG PET/CT, CT do pescoço, tórax, Varreduras por FDG PET-CT/CT aproximadamente a cada 12 semanas para confirmar < 28 abdominal, pélvica CR ou PD e conforme clinicamente indicado (consulte o mesmo) p Avaliação de sintomas de < 28 De acordo com avaliação de resposta da doença X linfoma B Urinálise q < 28 X X X X X X X X X Biomarcador na Xr X X urina r Exame

X oftalmológico s Avaliação de X Contínuo ao longo da intervenção do estudo Xt

Ciclo 2 de Tratamento e subsequentes Ciclo 1 de Tratamento b Avaliação a Triagem Duração de ciclo de 28 dias em EOTx FU t,y Duração de ciclo de 28 dias em monoterapia monoterapia Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 Dias antes da D1 D2 D8 D9 D15 D16 D22 D23 D1 D2 D8 D15 D22 D24 dose inicial eventos adversos t Medicamentos Contínuo ao longo da intervenção do estudo concomitantes u Administração do Medicamento de Estudo v 155/281 A mistura de RNAs

X X X X X X X X de citocina Avaliação de Tumor w RECIST1.1 e iRECIST < 28 Xw,y Farmacocinética (PK) Avaliações PK da mistura de RNAs Veja detalhes no fluxograma de PK/PDy para monoterapia (Tabela 3) de citocina Farmacodinâmica Avaliações de farmacodinâmica Veja detalhes no fluxograma de PK/PDy para monoterapia (Tabela 3) (PDy)

Ciclo 2 de Tratamento e subsequentes Ciclo 1 de Tratamento b Avaliação a Triagem Duração de ciclo de 28 dias em EOTx FU t,y Duração de ciclo de 28 dias em monoterapia monoterapia Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 Dias antes da D1 D2 D8 D9 D15 D16 D22 D23 D1 D2 D8 D15 D22 D24 dose inicial Imunogenicidade Sangue para anticorpos contra citocinas Veja detalhes no fluxograma de PK/PDy para monoterapia (Tabela 3) codificadas pela

156/281 mistura de RNAs de citocina a Avaliação: As avaliações são realizadas antes de administração do medicamento sob estudo, a menos que indicado de outra forma.

Os resultados são revisados pelo investigador antes de administração da próxima dose.

A biópsia do tumor é coletada para análises de imuno- histoquímica, genômica, sequenciamento de RNA e neo-antígeno. b Um ciclo é de 28 dias, com a mistura de RNAs de citocina administrada intratumoralmente todas as semanas como monoterapia. c Dados demográficos: Inclui idade, sexo, raça e etnia.

Histórico Médico/Cirúrgico: Inclui histórico relevante de patologias e cirurgias anteriores.

Histórico da doença: Inclui o estágio no diagnóstico e no início do estudo e terapia antitumoral anterior (tipo, duração, motivo da descontinuação e resposta à terapia). Além disso, mutações específicas dependendo do tipo de tumor. d O peso corporal é medido antes do tratamento, no primeiro dia de cada ciclo. e A altura é medida apenas durante a linha de base. f Os sinais vitais incluem: temperatura, pressão arterial, frequência cardíaca, frequência respiratória.

Os sinais vitais devem ser verificados a cada 6 horas durante cada período de internação hospitalar de 24 horas durante C1D1 em cada novo nível de dose, enquanto os participantes são monitorados para avaliar a toxicidade aguda.

g O exame físico inclui: Exame dos principais sistemas do corpo, incluindo sistema cardiovascular, sistema digestivo, sistema nervoso central, sistema respiratório e sistema hematopoiético (hepatomegalia, esplenomegalia, linfadenopatia) e pele. Os sinais e sintomas são relatados no eCRF como AEs apenas se ainda estiverem presentes no momento da primeira administração do IMP. h Dado que um efeito farmacológico modesto (por exemplo, vermelhidão, edema ou achatamento de uma lesão tumoral injetada com mistura de RNAs de citocina) deve ocorrer após DL3, as fotografias digitais coloridas são obrigatórias a partir de DL4 de mono escalonamento, a partir do primeiro DL em escalonamento combinado e durante a fase de expansão. Fotografias digitais são obrigatórias na triagem antes da primeira dose da mistura de RNAs de citocina e no momento da avaliação radiográfica do tumor de lesões subcutâneas superficiais e/ou visíveis injetadas para documentar o estado geral da doença e documentar as respostas. Além disso, fotografias digitais coloridas ad hoc devem ser tiradas entre as janelas de triagem e avaliação do tumor para capturar outras alterações da mistura de RNAs de citocinas potencialmente induzidas, tais como vermelhidão e/ou edema da pele. Tudo coletado pelo centro clínico deve ser sistematicamente compartilhado com o Patrocinador para revisão de acordo com o manual de referência do estudo. i O teste sérico de gravidez é realizado para mulheres em idade fértil. Uma janela de sete dias é aceitável na avaliação inicial. j Hematologia do sangue: Hemoglobina, hematócrito, leucócitos com diferencial (incluindo contagem absoluta de neutrófilos [ANC]), contagem de plaquetas. Estes testes são feitos antes de cada administração de IMP (janela de -1 dia é aceitável). Se houver neutropenia de Grau 4, avaliar ANC a cada 2-3 dias até ANC ≥ 0,5 x 109/L e, a seguir, semanalmente até recuperação. A avaliação do Dia 1 do Ciclo 1 é feita dentro de 2 dias da administração do IMP, se anormal na linha de base.

157/281 k Coagulação: Tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT), PT, proporção internacional normalizada (INR), fibrinogênio (e dímero D na triagem). A avaliação do Dia 1 do Ciclo 1 é feita dentro de 2 dias da administração do IMP, se anormal no início do estudo. l Química sérica: Testes de função hepática: AST, ALT, bilirrubina total, bilirrubina direta, fosfatase alcalina (ALP). Testes de função renal: Ureia ou BUN e creatinina e determinação de CrCL estimado quando necessário (se creatinina entre 1,0 e 1,5x ULN). Eletrólitos: sódio, potássio, cálcio total, fósforo, cloreto, magnésio e bicarbonato. Outros: glicose, lactato desidrogenase (LDH), albumina, proteínas totais e amilase. Os testes de função hepática, testes de função renal, eletrólitos, glicose, LDH, albumina e proteínas totais são realizados antes de administração do IMP (janela de -1 dia é aceitável), a menos que clinicamente indicado. No caso de testes de função hepática de Grau ≥ 3, testes adicionais são repetidos a cada 2-3 dias até recuperação para o valor de linha de base. A avaliação química sérica do Dia 1 do Ciclo 1 é feita dentro de 2 dias da administração do IMP, se anormal na linha de base. m Proteína C reativa sérica (CRP), ferritina e citocinas plasmáticas secundárias (incluindo interleucina-6 e interferon-alfa) são coletadas nos pontos de tempo especificados e em caso de ocorrência de sintomas de CRS de Grau ≥ 2. Amostras de soro para CRP e ferritina são coletadas pouco antes de cada intervenção do estudo (D1) e em 24 horas (D2) durante o Ciclo 1 (para cada Semana, 1 - 4) e durante o Ciclo 3, Semana 1. Em outros dias de intervenção do estudo, apenas amostras pré-dose são coletadas; amostras adicionais são retiradas sempre que o aparecimento de sintomas de CRS de Grau ≥ 2. A amostragem de rotina de citocinas plasmáticas secundárias ocorre apenas nos ciclos 1 e 3 e na EOT. As amostras são coletadas na pré-dose e 6 e 24 horas após a administração da mistura de RNAs de citocina no Ciclo 1, Semanas 1 e 2 e Ciclo 3, Semana 1; na EOT; e no caso de sintomas de CRS de Grau ≥ 2.

n ECG de 12 derivações: A ser feito na triagem e pré-tratamento no Ciclo 1, Dia 1, Ciclo 3, Dia 1, Ciclo 7, Dia 1 e EOT e quando clinicamente indicado. o Aspirado de medula óssea: Somente para pacientes com linfoma. p FDG-PET-CT/CT: FDG PET aplicável apenas para pacientes com linfoma de acordo com a classificação de Lugano a ser realizada dentro de 28 dias após a administração de IMP (-7 dias) e aproximadamente a cada 12 semanas (± 7 dias) para confirmar CR e PD e conforme indicação clínica. q Urinálise: Testes de fita (qualitativos) no ponto matinal são realizados na consulta inicial e antes de cada administração de IMP e na EOT.

A análise de urina quantitativa para leucócitos e glóbulos vermelhos na urina matinal é realizada no início, em ciclos irregulares, ao final do tratamento e em caso de anormalidade no teste de fita reagente (qualitativo). Em caso de proteinúria ≥ ++ (fita reagente), a quantificação da proteinúria por proteinúria/coleta de urina de 24 horas é realizada. r Biomarcador de urina: Molécula de lesão renal-1 (KIM-1), microalbumina urinária e creatinina urinária (na urina localizada) são avaliados na pré-dose no Dia 1 do Ciclo 1 (dentro de 7 dias antes é aceitável), 24 horas após a primeira administração de IMP e pré-dose no dia 8 após a primeira administração de IMP. s O exame oftalmológico, incluindo o teste de Schirmer, é realizado no início do estudo e em caso de sintomas oculares durante a terapia.

Os sintomas oculares e visuais são avaliados no dia 1 de cada ciclo. t Avaliação de evento adverso: O período de observação para coleta de eventos adversos estende-se desde a assinatura do Termo de

158/281 Consentimento Livre e Esclarecido (CIF) até 30 dias após a última administração do medicamento sob estudo.

Os eventos adversos graves são avaliados e relatados conforme descrito no protocolo.

Após a visita EOT, SAEs e AESIs em andamento, AEs relacionados e novos AEs relacionados devem ser acompanhados até estabilização, recuperação ou início de terapia adicional. u Avaliação de medicamento concomitante: Os medicamentos concomitantes são registrados 14 dias antes da dose inicial do medicamento do estudo até 30 dias após a última administração do medicamento do estudo, resolução de eventos adversos relacionados ao medicamento do estudo em andamento ou quando outra terapia anticâncer é recebida. v Administração do medicamento de estudo: Os participantes podem receber pré-medicação conforme especificado no presente documento.

A cada novo nível de dose no Ciclo 1 e Dia 1, os participantes são monitorados durante pelo menos 24 horas no hospital para avaliar a toxicidade aguda.

Com as administrações subsequentes, os participantes são submetidos à observação durante 4-6 horas com hospitalização opcional por até 24 horas a critério do investigador.

A mistura de RNAs de citocina pode ser administrada com uma janela de +/- 1 dia durante o Ciclo 1 e com uma janela de +/- 3 dias a partir do Ciclo 2. w Avaliação do tumor: Tomografia computadorizada ou ressonância magnética (MRI) e quaisquer outros exames clinicamente indicados são realizados para avaliar o estado da doença no início do estudo (dentro de 28 dias após a administração do IMP +/- 7 dias), a cada 8 semanas após a administração do IMP (-/+ 7 dias) até a semana 24, depois a cada 12 semanas (-/+ 7 dias) e ao final da intervenção do estudo, exceto se já tiver sido feito no último ciclo.

Os pacientes que descontinuaram a intervenção do estudo sem Doença Progressiva são acompanhados a cada 12 semanas até Doença Progressiva documentada.

A avaliação do tumor é repetida para confirmar uma resposta parcial ou completa,

bem como Doença Progressiva (pelo menos 4 semanas após a resposta inicial documentada). Para os participantes que não têm lesões linfáticas viscerais/profundas, a avaliação radiológica do tumor de abdome e tórax é realizada em 24 semanas, se não houver nenhum sinal clínico de doença metastática e na EOT se já não for feito no último ciclo. A ultrassonografia (USG) intermitente ou avaliação clinicamente indicada pode ser considerada em caso de sinais clínicos ou anomalias laboratoriais, principalmente testes de função hepática, para excluir potencial doença metastática. x Fim de tratamento (30 ± 5 dias após o último tratamento): Obter avaliações de fim de tratamento se não realizadas durante a última semana do estudo. y Acompanhamento pós-estudo quanto ao estado da doença: Os participantes sem progressão da doença documentada ao final de uma visita de tratamento que ainda não iniciaram o tratamento com outra terapia anticâncer prosseguem com visitas de acompanhamento de 3 meses até o início de outra terapia anticâncer, progressão da doença, morte ou data limite do estudo (o que ocorrer primeiro).

159/281

Tabela 3: Fluxograma de PK e PDy para fases de escalonamento e expansão de dose Semana 1 dos ciclos de Semanas após Ciclo 1 numeração primeira Fim de Acom- Tria- Ciclo 1, Semana 1 e Ciclo 3 Ciclo Ciclo Ciclo 1 (Semana 2) (Semanas ímpar administração trata- panham gem Semana 1 6 3,4) subsequentes no Ciclo 1, mento ento além do Ciclo Semana 1 3 Dia D1 D2 D3 D5/6 D8 D9 D10 D15, D22 D1 5Wk 8Wk Tempo 24 48 96/ (hora/minu- 0H 1H 2H 6H 0H 2H 6H 24H 48H 0H 0H 6H H H 120H to) =RNT Tempo 8:0 9:0 10:0 14:0 8:0 8:0 indicativo no 8:00 8:00 10:00 14:00 8:00 8:00 8:00 8:00 14:00 0 0 0 0 0 0

160/281 relógio Administração do Tratamento de Estudo A mistura de RNAs de X X X X citocina Farmacocinética Sangue para expressão no alvo das citocinas b a b codificadas Xb X X X X X X X Xa X X X X X Xb Xa Xa X Xa pela mistura de RNAs de citocinas a Farmacodinâmica

Semana 1 dos ciclos de Semanas após Ciclo 1 numeração primeira Fim de Acom- Tria- Ciclo 1, Semana 1 e Ciclo 3 Ciclo Ciclo Ciclo 1 (Semana 2) (Semanas ímpar administração trata- panham gem Semana 1 6 3,4) subsequentes no Ciclo 1, mento ento além do Ciclo Semana 1 3 Dia D1 D2 D3 D5/6 D8 D9 D10 D15, D22 D1 5Wk 8Wk Tempo 24 48 96/ (hora/minu- 0H 1H 2H 6H 0H 2H 6H 24H 48H 0H 0H 6H H H 120H to) =RNT Tempo 8:0 9:0 10:0 14:0 8:0 8:0 indicativo no 8:00 8:00 10:00 14:00 8:00 8:00 8:00 8:00 14:00 0 0 0 0 0 0 relógio

161/281 Sangue para PDy de X X X X X X Xd Xd X Xc citocinas c Sangue para tipagem de HLA e X análise e genética Sangue para células T específicas X Xf X para f antígeno Biópsia do g g tumor para X X X avaliação

Semana 1 dos ciclos de Semanas após Ciclo 1 numeração primeira Fim de Acom- Tria- Ciclo 1, Semana 1 e Ciclo 3 Ciclo Ciclo Ciclo 1 (Semana 2) (Semanas ímpar administração trata- panham gem Semana 1 6 3,4) subsequentes no Ciclo 1, mento ento além do Ciclo Semana 1 3 Dia D1 D2 D3 D5/6 D8 D9 D10 D15, D22 D1 5Wk 8Wk Tempo 24 48 96/ (hora/minu- 0H 1H 2H 6H 0H 2H 6H 24H 48H 0H 0H 6H H H 120H to) =RNT Tempo 8:0 9:0 10:0 14:0 8:0 8:0 indicativo no 8:00 8:00 10:00 14:00 8:00 8:00 8:00 8:00 14:00 0 0 0 0 0 0 relógio imune e 162/281 análise de sequência de g

RNA Imunogenicidade Anticorpos contra citocinas codificadas h h h pela mistura X X X X X de RNAs de citocina h (ADA) a Amostras de sangue para PK são coletadas para avaliação da expressão no alvo das citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocina em todos os participantes inscritos no Ciclo 1, Semana 1 na pré-dose e 1, 2, 6, 24, 48 e 96 ou 120 horas após administração de IMP. No Ciclo 1, Semana 2, na fase de escalonamento de dose, as amostras são coletadas na pré-dose e 2, 6, 24 e 48 horas após a dosagem; na fase de expansão de dose, a amostragem do Ciclo 1, Semana 2 ocorre apenas na pré-dose, 6 e 24 horas após a dosagem. No Ciclo 1, Semana 3 e nos Ciclos subsequentes, consulte a nota de rodapé b.

As amostras também são coletadas logo antes da biópsia do tumor, na EOT e na primeira visita de acompanhamento.

Mais informações são detalhadas no manual do laboratório de estudo.

Nenhuma amostra de PK é coletada após a data limite do segundo estudo (consulte o mesmo). b Para PK, para o Ciclo 3, Semana 1 (ou seja, semana 9 a partir da primeira administração), o esquema para o Ciclo 1, Semana 1 é repetido.

Além do Ciclo 3, a amostragem de PK deve ocorrer em 0 e 6 horas na Semana 1 de cada ciclo de numeração ímpar.

Além do Ciclo 3, as amostras de PK de ciclos ímpares podem ser omitidas através de notificação do Patrocinador, se os dados disponíveis forem considerados suficientes. c Amostra de sangue para avaliação imune e fatores em circulação: As amostras de sangue são coletadas na pré-dose, 6 e 24 horas do Ciclo 1, semanas 1 e 2, na EOT e FU em todos os participantes para avaliar as modulações imunes sistêmicas, incluindo IFNγ e IP10. Mais informações podem ser detalhadas no manual do laboratório de estudo. d Apenas no Ciclo 3, Semana 1, o esquema de amostragem do Ciclo 1, Semana 1, é repetido para avaliação imune e fatores em circulação.

Além do Ciclo 3, a amostragem PDy deve ocorrer em 0 e 6 horas na Semana 1 de cada Ciclo de numeração ímpar.

Nenhuma amostragem de sangue para citocinas PDy ocorre durante os ciclos pares durante a parte da monoterapia do estudo. e O sangue para análise genética é usado para estabelecer a sequência de DNA de linhagem germinativa e a tipagem de HLA. f Amostras de sangue (leucaferese ou 80 mL de sangue) são coletadas na pré-dose Ciclo 1, Semana 1, Pré-dose Ciclo 2, Semana 2 (ou seja, 5 semanas pós-dose no Ciclo 1) e na EOT para análise de células T específicas para antígeno.

Esta análise ocorrerá apenas para participantes

163/281 com melanoma na fase de escalonamento da monoterapia e para todos os participantes (melanoma) na fase de expansão da monoterapia. g Biópsia de tumor para avaliação imune: As biópsias são coletadas durante o período de triagem (antes de administração de IMP no Ciclo 1, Dia 1), entre as Semanas 5 e 8 e no Ciclo 6 ou na progressão da doença (o que ocorrer primeiro), para avaliar as modulações imunes.

Transcriptômica de tumor (sequenciamento de RNA), genômica, neoantígenos e isolamento de TIL (expansão apenas em pacientes com melanoma) também podem ser realizados mediante disponibilidade de amostra (consulte o mesmo). Apenas para pacientes com melanoma, uma única biópsia do núcleo do tumor realizada entre as semanas 5-8 é dedicada ao isolamento dos TILs.

Isso é aplicado a um número limitado (visando não mais do que 10 pacientes com isolamento de TILs bem-sucedido) de pacientes com melanoma selecionados (expansão para monoterapia e apenas na Coorte A de expansão da terapia combinada). Esta não será uma biópsia adicional, porém, em vez disso, a amostra dedicada à avaliação genômica será usada para isolamento de TILs (manuseado sob condições especiais - não fixado em formalina). Este tipo de amostra e teste é aplicado a pacientes com sinais clínicos de resposta ao tratamento (redução do tamanho do tumor e/ou vermelhidão no local do tumor), conforme determinado pelo investigador responsável pelo tratamento. h Amostras de plasma para monitorar o desenvolvimento de anticorpos às citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocinas são coletadas pré-dose no Dia 1 para os Ciclos 1, 3, 6, 9, 12 e/ou EOT e no FU (Dia 90 após a última administração de IMP). Coletas adicionais além destes pontos de tempo são a cada 3 meses se o participante continuar no estudo para visitas de acompanhamento.

Nenhuma amostra para ADA é coletada após a segunda data limite.

[00517] Objetivos e parâmetros para o tratamento são mostrados na Tabela 4. Tabela 4: Objetivos e parâmetros Objetivos Parâmetros Primários Escalonamento de Dose: Para determinar a dose máxima tolerada Incidência de DLTs durante os (MTD) ou a dose máxima primeiros 28 dias de tratamento. administrada (MAD) e o perfil global MTD, definida como o nível de dose de segurança e tolerabilidade da mais alto com uma taxa de DLT mistura de RNAs de citocina verdadeira durante os primeiros 28 quando administrada por via dias de tratamento dentro da faixa- intratumoral como monoterapia em alvo de 16 % a 33 % e com menos pacientes com tumores sólidos de 0,25 probabilidade de uma taxa de avançados que não obtiveram DLT verdadeira maior do que 33 %. sucesso em uma terapia anti-PD-1 Doses acima de DL8 não são ou terapia anti-PD-L1 anterior e/ou testadas e se esta MAD for segura, pacientes sem outras opções de será considerada a MTD. tratamento para aquelas indicações Eventos adversos (AEs)/eventos nas quais a terapia anti-PD-1 não é adversos graves (SAEs) e usada rotineiramente. anormalidades laboratoriais.

Expansão de Dose: Para determinar a taxa de resposta objetiva da mistura de RNAs de A taxa de resposta objetiva (ORR) é citocina administrada por via avaliada pela avaliação das intratumoral em monoterapia em informações de resposta antitumoral pacientes com melanoma avançado de acordo com o RECIST 1.1 que não obtiveram sucesso em uma terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1 anterior. Secundários Escalonamento e Expansão de Cmax e AUC das citocinas Dose: Para caracterizar o perfil codificadas pela mistura de RNAs no farmacocinético (PK) das citocinas Ciclo 1, Semana 1 e Ciclo 3 Semana codificadas pela mistura 1; Csérica das citocinas codificadas administrada como monoterapia. pela mistura de RNAs antes de administração do IMP em cada ciclo. Escalonamento e Expansão de Anticorpos humanos contra as Dose: Para avaliar a citocinas codificadas pela mistura até imunogenicidade das citocinas o final da intervenção do estudo e codificadas pela mistura. durante o acompanhamento serão avaliados. Expansão de Dose: Para AE/SAEs e anormalidades caracterizar a segurança da mistura laboratoriais. de RNAs de citocina quando administrada por via intratumoral como monoterapia em pacientes com melanoma avançado. Expansão de Dose: Para determinar a taxa de controle da DCR, DoR e PFS avaliados de doença (DCR), a duração da acordo com os critérios do RECIST resposta (DoR) e a sobrevida sem 1.1 e iRECIST; ORR avaliada de progressão (PFS) da mistura de acordo com os critérios do iRECIST. RNAs de citocina. Escalonamento de Dose: Para determinar a dose recomendada da Dose recomendada com base na mistura de RNAs de citocina para a MTD/MAD definida pelo modelo fase de expansão. Bayesiano, dados gerais de segurança, atividade e PK/PDy.

Terciários/Exploratórios O benefício clínico preliminar é avaliado através de avaliação da resposta antitumoral de acordo com Escalonamento de Dose: Para os critérios do RECIST 1.1 e avaliar o benefício clínico preliminar iRECIST da monoterapia com através de avaliação da atividade mistura de RNAs de citocina. antitumoral da mistura de RNAs de Categorias de resposta, tais como citocina de acordo com os critérios Resposta Completa (CR), Resposta do RECIST 1.1 e iRECIST. Parcial (PR), Doença Estável como Melhor Resposta ou Doença Progressiva, são obtidas em participantes para avaliação de ORR e DCR. Escalonamento e Expansão de Amostras de sangue são coletadas Dose: Para avaliar os efeitos pré e pós-tratamento durante o Ciclo farmacodinâmicos relacionados à 1 e ciclos subsequentes para avaliar imunomodulação (PDy) da mistura os efeitos farmacodinâmicos de RNAs de citocina no sangue relacionados à imunomodulação periférico, medir as alterações dos (PDy) (por exemplo, IFNγ e IP10) e fatores em circulação, incluindo medir um painel de citocinas em citocinas, quimiocinas e outras circulação para monitorar a proteínas solúveis, e correlacionar segurança e correlacionar com os com parâmetros clínicos. parâmetros clínicos.

As biópsias do tumor são coletadas Escalonamento e Expansão de pré e pós-tratamento para definir: Dose: Para avaliar as alterações Mudanças nos perfis de expressão relacionadas ao tratamento nos gênica e expressão do antígeno perfis do transcriptoma e no tumoral através de sequenciamento infiltrado imune do tumor através de de RNA sequenciamento de RNA (RNAseq) Mudanças em tipos, quantidades e e imuno-histoquímica (IHC), localização de células imunes no respectivamente. microambiente tumoral por IHC

• Mudanças na expressão de citocinas expressas por ELISPOT Escalonamento e Expansão de Amostras de sangue são coletadas Dose: Para avaliar a resposta antes da primeira administração de imune contra antígenos tumorais IMP e após o Ciclo 1 para avaliar a relevantes para a respectiva resposta imune pela detecção da entidade tumoral por meio da resposta de células T específicas detecção de respostas de células T para antígeno para antígenos específicas para antígeno do compartilhados e neoantígenos sangue periférico (em pacientes específicos para tumor. com melanoma). O DNA e o RNA genômico são Escalonamento e Expansão de extraídos do sangue periférico e do Dose: Para explorar marcadores tecido da biópsia tumoral e genéticos tumorais no início do analisados através de exoma estudo, incluindo carga de mutação completo e sequenciamento de RNA. tumoral (TMB; avaliada apenas na A carga de mutação tumoral é terapia combinada) e tipagem de calculada ao determinar o número HLA (avaliada em monoterapia e total de variantes de um único terapia combinada). nucleotídeo em cada amostra. Alelos de HLA e grupos de alelos são determinados usando métodos com base em DNA.

Exemplo 1.2 - Escalonamento de Dose e Expansão de Dose da Mistura de RNAs de Citocina na Fase de Escalonamento e Fase de Expansão

[00518] Um estudo de escalonamento de dose e expansão de dose da mistura de RNAs de citocina é realizado em pacientes com tumores sólidos avançados em fase de escalonamento e melanoma avançado em fase de expansão, com base em avaliações clínicas, farmacocinéticas [PK], farmacodinâmicas [PDy] e biomarcadores, para avaliar a segurança e a atividade preliminar da mistura de RNAs de citocina quando administrada através da via intratumoral como monoterapia e definir a dose ideal de medicamento como um agente único.

[00519] A triagem ocorre por até 28 dias antes que os participantes recebam sua primeira dose da mistura de RNAs de citocina e as avaliações ocorrem em um esquema com administração de medicamentos intratumoralmente nos dias 1, 8, 15 e 22 de um ciclo de 4 semanas. O tratamento é continuado semanalmente em um ciclo de 4 semanas até a progressão da doença ou AE que leva à descontinuação permanente; caso contrário, é continuado até 1 ano de tratamento. Um escalonamento de dose de um único participante para os primeiros dois níveis de dose (DLs) é usado na fase de escalonamento, seguido por escalonamento para doses mais altas usando um design racional. Exemplo 1.2A. Fase de Escalonamento de Dose

[00520] Durante o escalonamento de dose, são inscritos os participantes com tumores sólidos avançados passíveis de injeção intratumoral que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com base em terapia anti-PD-1/PD-L1. Os participantes com tumores sólidos (exceto melanoma), para os quais a terapia anti-PD-1/PD-L1 não é usada rotineiramente, também são elegíveis se não houver outras opções de tratamento adequadas, com base no critério do investigador. Os participantes são tratados com injeção intratumoral da mistura de RNAs de citocina administrada semanalmente como monoterapia.

[00521] O nível de dose inicial (DL1) é determinado a partir dos resultados de vários estudos pré-clínicos que examinam a PK de citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocina em modelos de xenoenxerto humano e escala alométrica de camundongo para ser humano usando modelagem e simulação.

[00522] Os experimentos incluem um design de escalonamento de dose acelerado para os primeiros dois DLs (DL1 e DL2), onde um participante é tratado por DL e um escalonamento entre dois níveis de dose é aplicado até a observação de qualquer AE relacionado ao IMP de Grau ≥ 2 ou toxicidade limitante de dose (DLT). Se um AE de Grau ≥ 2 relacionado ao IMP for observado em qualquer um dos dois primeiros DLs, dois participantes adicionais serão tratados no mesmo DL e o escalonamento de dose continuará usando um design racional adaptativo.

[00523] Se nenhum AE relacionado ao IMP de Grau ≥ 2 ou DLT ocorrer nos primeiros 2 DLs, então, um escalonamento de dose adaptável começa a partir de DL3. O escalonamento de dose para coortes subsequentes (DL3-DL8) continua. A inscrição para o próximo DL não prossegue antes de pelo menos três participantes tratados no DL anterior terem sido seguidos por uma duração de pelo menos 1 ciclo (ou seja, 28 dias) e são avaliáveis para avaliação de DLT sem DLT. Nenhum escalonamento de dose intra-participante é permitido. Há um intervalo de pelo menos uma semana entre os primeiro e segundo participantes tratados com o mesmo nível de dose. Exemplo 1.2B. Lesões a Receberem Injeção

[00524] Todos os níveis de dose (DL1-DL8) seguem a orientação sobre o tamanho da lesão fornecido na Tabela 5. Os participantes têm no mínimo uma lesão mensurável como lesão-alvo de acordo com os critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST 1.1) (consulte Critério de inclusão I 05) e mínimo de uma ou mais lesões cutâneas/subcutâneas para injeção e biópsia tumoral. Os participantes são selecionados com base no tamanho das lesões tumorais que devem ser suficientes para o volume de injeção daquele determinado nível de dose (Tabela 5), com a consideração de biópsia de uma lesão no início do estudo, bem como entre as semanas 5 a 8 da primeira administração como avaliação durante o tratamento.

[00525] Apenas na fase de escalonamento, se lesões não alvo permitirem avaliação de sinal de resposta, os participantes que não têm lesões mensuráveis podem ser avaliados caso a caso para elegibilidade com o acordo do Comitê de Estudo. O registro de pacientes com apenas locais de mucosa para injeção é feito apenas em níveis de dose em que inflamação significativa de metástases superficiais, subcutâneas e/ou linfonodais não foram observadas com mistura de RNAs de citocina para minimizar o risco de obstrução das vias aéreas. Exemplo 1.2C. Tratamentos

[00526] Para o primeiro tratamento, entre as 3 lesões mínimas, uma lesão mensurável (cutânea, visceral ou linfonodo) é deixada intacta para medições de acordo com os critérios RECIST 1.1 e uma lesão é usada para biópsia. Se a lesão a receber a injeção for grande o suficiente para ser usada para biópsia sem impacto na administração da dose no nível de dose planejado, então, duas lesões são suficientes para elegibilidade. Um mínimo de uma lesão está sujeita à administração da mistura de RNAs de citocina (tamanho da[s] lesão[ões] deve ser avaliado por nível de dose para elegibilidade do participante). As maiores lesões são injetadas primeiro com a mistura de RNAs de citocina. Para a(s) lesão(ões) restante(s), a classificação da injeção é com base no tamanho da lesão até que o volume máximo de injeção seja usado (consulte Tabela 5 abaixo). Tabela 5 - Volume de injeção Tamanho da lesão Volume de injeção (diâmetro mais longo) > 5 cm Até 4 mL > 2,5 cm a 5 cm Até 2 mL > 1,5 cm a 2,5 cm Até 1 mL > 0,5 cm a 1,5 cm Até 0,5 mL

[00527] Para todos os tratamentos subsequentes (semanais), a injeção na(s) lesão(ões) é classificada com base no tamanho da lesão até que o volume máximo de injeção seja usado ou até que todas as lesões injetáveis sejam tratadas.

[00528] O volume a ser injetado é com base no tamanho da lesão e o volume máximo de injeção para cada visita de tratamento não deve exceder o volume designado para este DL para todas as lesões injetadas combinadas. O volume máximo de injeção permitido para DL8 é de 4 mL.

[00529] Se as lesões estão agrupadas, elas são injetadas como uma única lesão de acordo com a tabela e orientação acima.

[00530] É preferível injetar apenas uma lesão por tratamento com base no volume e tamanho da proporção de lesão na Tabela 5. Se não for possível injetar apenas uma lesão, então, o volume/dose é dividido em múltiplas lesões. Em cada visita, as lesões injetáveis são priorizadas com base no tamanho, começando com a maior lesão primeiro. A maior lesão é injetada com o volume máximo de injeção com base no tamanho da lesão e nos níveis de dose. Se o volume não for totalmente usado, a próxima lesão recebe o volume máximo de injeção permitido para o tamanho da lesão. A administração continua da maior para a menor até que todo o volume da dose tenha sido administrado.

[00531] Quando não é possível injetar todas as lesões em cada visita de tratamento ou ao longo do curso completo do tratamento, as lesões previamente injetadas e/ou não injetadas são injetadas nas visitas de tratamento subsequentes. Os detalhes da administração por lesão são coletados no formulário de relato eletrônico de caso (eCRF). Exemplo 1.2D. Decisão de Escalonamento de Dose

[00532] As decisões sobre escalonamento consideram os resultados de segurança clínica. O período de observação de DLT são as primeiras 4 semanas de tratamento (Ciclo 1). Um participante é considerado avaliável para avaliação de DLT se recebe pelo menos 70% da dose planejada de sua coorte nos primeiros 28 dias do tratamento (ou seja, período de DLT) e é avaliado durante 28 dias ou se ocorrer uma DLT anterior. Os participantes que não são avaliáveis para avaliação de DLT na fase de escalonamento de dose (por exemplo, Doença Progressiva precoce antes do Ciclo 1 Dia 28; quaisquer parâmetros de avaliação de DLT ausentes) são substituídos.

[00533] Para o escalonamento dos dois primeiros DLs, o segundo DL começa após o período de observação de DLT para o primeiro participante ser concluído sem um AE relacionado ao IMP de Grau ≥ 2 ou DLT. Se um AE relacionado ao IMP de Grau ≥ 2 ou qualquer DLT for observada em qualquer um dos dois primeiros DLs, dois participantes adicionais são tratados no mesmo DL e o escalonamento de dose prossegue usando um design adaptativo. Se nenhum AE relacionado ao IMP de Grau ≥ 2 ocorrer nos dois primeiros DLs, então, um EWOC Bayesiano adaptativo começa a partir de DL3. A inscrição em DL2 ou DL3 na parte de monoterapia do estudo pode não prosseguir até que o paciente inscrito em DL1 ou DL2 tenha sido acompanhado durante 28 dias e seja avaliável para avaliação de AE sem nenhum AE relacionado ao IMP de Grau 2.

[00534] O escalonamento de dose é interrompido assim que a MTD é determinada. Se uma MTD não for determinada, o aumento da dose continua até que a MAD seja alcançada. Exemplo 1.2E. Fase de Expansão de Dose

[00535] Com base na MTD/MAD, nos dados gerais de segurança, atividade e PK/PDy, a dose recomendada para a fase de expansão é decidida.

[00536] Até 34 participantes com melanoma avançado que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com base em terapia anti- PD-1/PD-L1 são inscritos na MAD ou MTD para avaliar ainda mais a segurança (especialmente qualquer toxicidade cumulativa), atividade antitumoral, PDy e atividades de PK. Exemplo 1.2F. Duração do Período de Estudo

[00537] A duração para cada participante inclui um período de triagem de até 28 dias. A duração do ciclo é de 28 dias. Após conclusão do primeiro ciclo, os participantes podem continuar a receber administrações adicionais da mistura de RNAs de citocina no mesmo

DL todas as semanas, se este regime de dosagem for considerado seguro e o participante estiver obtendo um benefício clínico. O período de tratamento esperado para os participantes que se beneficiam da mistura de RNAs de citocinas pode variar, com base na data de progressão.

[00538] Após a descontinuação da intervenção, os participantes retornam 30 dias (para avaliações de final de tratamento [EOT]) e 90 dias (para amostragem de ADA) após a última administração de IMP ou antes do início de outra terapia anticâncer, o que ocorrer primeiro.

[00539] Após a visita EOT, visitas de acompanhamento adicionais podem ser necessárias para monitorar todos os AEs relacionados e novos AEs relacionados em andamento até a resolução ou estabilização (ou seja, um evento em andamento sem qualquer alteração durante pelo menos 3 meses). Após a EOT, durante o período de acompanhamento de segurança, os eventos a serem relatados, monitorados e acompanhados até a resolução ou estabilização são os seguintes: todos os AEs, SAEs ou Eventos de Interesse Especial em andamento, independentemente da relação, e todos os novos AEs, SAEs ou Eventos de Interesse Especial considerados relacionados, incluindo mortes devido a eventos relacionados.

[00540] Além disso, se o participante interromper a intervenção por razões diferentes da progressão, as visitas de acompanhamento são realizadas a cada 3 meses até a progressão ou início de outro tratamento antitumoral ou morte (o que ocorrer primeiro), a fim de documentar a progressão da doença.

[00541] A duração média total estimada de inscrição é de aproximadamente 24 meses. A duração esperada do tratamento para participantes que se beneficiam da mistura de RNAs de citocinas pode variar, com base na data de progressão; mas a duração média esperada do tratamento por participante é estimada em 9 meses (1 mês para triagem, 5 meses para tratamento e 3 meses para a EOT e primeiras visitas de acompanhamento).

[00542] Regras de Interrupção: Em caso de qualquer morte (exceto morte relacionada à Doença Progressiva (PD)) dentro de 30 dias de terapia ou TAEEs de Grau 4 em mais de um terço dos pacientes inscritos em um determinado nível de dose (por exemplo, 2 em de 3 pacientes), a inscrição no estudo será interrompida até que uma avaliação apropriada da causa da morte e toxicidade seja conduzida pelo Comitê de Estudo e um plano de correção seja estabelecido. Exemplo 1.2G. Escolha da Dose Inicial

[00543] A dose inicial é geralmente estabelecida para compostos anticâncer com base nos resultados de estudos de toxicologia em espécies de roedores e não roedores. A mistura de RNAs de citocina é administrada por meio de injeção intratumoral e sua atividade biológica depende da absorção e tradução do mRNA administrado. Os estudos de toxicologia pré-clínica foram realizados em roedores não portadores de tumor e em espécies não roedores e vias de administração substitutas podem não refletir com precisão a via de administração intratumoral. Como um resultado, o procedimento convencional para determinação de uma primeira dose inicial em seres humanos com base na recomendação S9 do International Council for Harmonisation (ICH) de 1/10 da Dose Severamente Tóxica em 10 % dos animais (STD 10) em roedores e nenhum nível de efeito adverso observado (NOAEL) não é relevante para agentes de mRNA intratumorais administrados localmente.

[00544] Para determinar uma dose inicial para seres humanos, experimentos in vivo são realizados em camundongos imunocomprometidos com xenoenxertos de melanoma A375 humano. A administração intratumoral da mistura de RNAs de citocina no xenoenxerto A375 leva à tradução de cada um dos componentes de citocina da mistura de RNAs de citocina. Enquanto que a mistura de citocinas é expressa localmente dentro do tumor, as citocinas codificadas são secretadas e entram na circulação, levando à exposição sistêmica às citocinas. Os parâmetros PK das citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocinas são avaliados. Os parâmetros de PK do soro da mistura de RNAs de citocinas codificadas por citocinas no xenoenxerto A375 mostraram uma relação de expressão dependente da dose.

[00545] Assumindo um potencial de expressão tumoral comparável da mistura de RNAs de citocinas codificadas por citocinas entre camundongos e seres humanos, os modelos de PK individuais em camundongo são dimensionados para seres humanos usando alometria e as simulações são realizadas para prever a exposição às citocinas humanas sistêmicas em diferentes níveis de dose da mistura de RNAs de citocina. Em virtude das incertezas da atividade farmacológica em seres humanos versus animais e às diferenças entre espécies relacionadas às citocinas, uma ampla margem de segurança é aplicada e uma dose humana é selecionada. Exemplo 1.2H - Definição de Final de estudo

[00546] Um participante é considerado como tendo concluído o estudo se tiver concluído todas as fases da intervenção do estudo até um máximo de 1 ano (incluindo Fim do Tratamento) ou se o tratamento for encerrado por outro motivo e o participante completaram as visitas de acompanhamento até Doença Progressiva.

[00547] Há duas datas limite para o estudo:

[00548] A data limite do primeiro ensaio é no final dos 28 dias do último participante tratado na fase de escalonamento de dose, a fim de ter todos os participantes com dados de DLT avaliáveis para determinação da MTD/MAD.

[00549] A segunda data de corte é quando o último participante em tratamento na fase de expansão terá duas avaliações de tumor pós- basal ou avaliação de final de tratamento, o que ocorrer primeiro, a fim de avaliar a resposta do tumor.

[00550] Se um participante, tratado na fase de escalonamento de dose ou na fase de expansão, continuar a se beneficiar do tratamento após o segundo corte do estudo, o participante pode continuar a intervenção do estudo (por até 1 ano de tratamento) e irá se submeter a avaliações para AEs relacionados ao IMP, qualquer SAE e amostras de sangue para ensaio de imunogenicidade, se aplicável.

[00551] O final do estudo é definido como a data da última visita do último participante do estudo. Exemplo 1.3 - População de Estudo Exemplo 1.3A - Critérios de Inclusão

[00552] Os participantes são elegíveis para serem incluídos no estudo apenas se todos os seguintes critérios se aplicam, conforme mostrado na Tabela 6. Tabela 6 - Critérios de Inclusão Categoria Critério I 01. Os participantes devem ter 18 anos inclusive, no momento da Idade assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido.

I 02. Fase de Escalonamento de Dose: Participantes com tumor sólido metastático ou não passível de ressecção avançado confirmado histologicamente, incluindo linfomas, de acordo com as Tipo de diretrizes internacionais de tratamento e na opinião do participante investigador, para os quais não existem opções de tratamento e alternativas adequadas. característi- I 03. Fase de Expansão de Dose: Participantes com melanoma cas da avançado ou metastático confirmado histologicamente, doença independentemente do estado BRAF, incluindo estágio IIIB-C ou estágio IV não passível de ressecção (M1a-c e M1d se o critério E09 for satisfeito) conforme avaliado pelo American Joint Committee on Cancer Melanoma Staging, edição 8, para os quais

Categoria Critério não existem opções alternativas de tratamento adequadas. Os pacientes elegíveis devem ser inelegíveis ou recusar-se a receber os cuidados padrão disponíveis (SOC). Os investigadores devem informar os pacientes participantes em potencial sobre a disponibilidade das opções atuais de tratamento do SOC antes da participação no estudo. I 04. Para falha de terapia anti-PD-1/PD L1 de melanoma (fase de expansão), participantes previamente tratados com terapia anti- PD-1/PD-L1 e tinham Doença Progressiva confirmada. - Apenas na fase de Expansão de Dose em monoterapia: no melanoma, os pacientes que se tornam intolerantes às terapias anti-PD-1/PD-L1 também são elegíveis. I 05. Os participantes têm no mínimo 3 lesões (ou 2 para casos selecionados, conforme descrito abaixo) no momento da inscrição, com doença mensurável definida como: - Uma lesão como lesão-alvo para doença mensurável *, definida como: - Uma lesão cutânea de pelo menos 1 cm como lesão-alvo a ser medida de acordo com os critérios RECIST

OU - Uma ou múltiplas lesões viscerais que podem ser medidas com precisão e em série em pelo menos 2 dimensões e para as quais o diâmetro mais longo é ≥ 1 cm (conforme medido por meio de tomografia computadorizada [TC] intensificada por contraste ou espiral) para doença visceral ou de tecidos moles ou ≥ 1,5 cm no eixo curto para linfonodos. Estas lesões viscerais serão usadas para medições dos critérios RECIST. - Pacientes com linfomas não ávidos por FDG eram obrigados a ter doença mensurável definida como pelo menos um nódulo mensurável que deve ter um LDi (diâmetro mais longo) > 1,5 cm e/ou lesão extranodal mensurável que deve um LDi > 1 cm através de CT com contraste de acordo com a classificação de Lugano (29) (consulte o mesmo). Os pacientes com linfomas ávidos por FDG não eram obrigados a ter doença mensurável.

Categoria Critério *Apenas na fase de escalonamento, se as lesões não alvo forem adequadas para avaliação de resposta substituta, os participantes que não têm doença mensurável também serão elegíveis com base na discussão caso a caso com o Patrocinador. - Uma lesão para biópsia (cutânea, subcutânea ou linfonodo passível de biópsia); esta lesão também pode ser usada para injeção, se possível; neste caso, 2 lesões podem ser suficientes para a elegibilidade dos participantes. - Pelo menos uma lesão passível de injeção intratumoral, conforme detalhado em I06. I 06. Os participantes têm lesões nas quais uma injeção pode ser realizada (ou seja, adequada para injeção intratumoral direta com base no volume do nível de dose de cada coorte e de acordo com o julgamento do investigador) definidas como lesões cutâneas ou subcutâneas ≥ 0,5 cm no diâmetro mais longo ou múltiplas lesões de fusão passíveis de injeção que se tornam confluentes e têm o diâmetro mais longo (soma dos diâmetros de todas as lesões-alvo envolvidas) de ≥ 0,5 cm adequado para injeção (ou seja, sem sangramento ou supuração) a ser tratado com a mistura de RNAs de citocina em cada visita.

Linfonodos > 1,5 cm que são adequados para injeção intratumoral guiada por ultrassonografia (USG) e confirmados como doença metastática também são aceitáveis.

I 07. Os participantes devem ser capazes e estar dispostos a fornecer biópsias tumorais obrigatórias antes e depois da intervenção do estudo.

I 08. Participantes elegíveis para terapia de segunda linha, se não forem candidatos às opções de tratamento disponíveis devido às características do tumor, comorbidades, doença autoimune pré- existente, indisponibilidade de medicamentos ou não um padrão de atendimento em cada país, bem como se o participante recusou essas opções que foram descritas de forma transparente.

I 09. Participantes com expectativa de vida superior a 3 meses.

I 10. Os participantes com melanoma metastático uveal e da mucosa são elegíveis para as partes de escalonamento de dose

Categoria Critério de monoterapia do estudo se tiverem metástases superficiais, subcutâneas e/ou linfonodais passíveis de injeção intratumoral. Os participantes com HNSCC e melanoma da mucosa com apenas locais da mucosa para injeção intratumoral são elegíveis para as partes de monoterapia e escalonamento de dose de combinação do estudo após uma discussão e aprovação do Patrocinador. I 11. Masculino ou feminino - Participantes do sexo masculino: um participante do sexo masculino deve concordar em usar anticoncepcionais durante o período de intervenção e durante pelo menos 6 meses após a última dose da intervenção do estudo e abster-se de doar esperma durante este período. - Participantes do sexo feminino: uma participante do sexo feminino é elegível para participar se não estiver grávida, não estiver amamentando e pelo menos uma das seguintes condições se aplicar: - Não é uma mulher com potencial para engravidar (WOCBP)

OU - Um WOCBP que concorda em seguir as orientações anticoncepcionais durante o período de intervenção e durante pelo Sexo menos 6 meses após a última dose da intervenção do estudo. I 12. Melanoma Metastático Uveal e da Mucosa - Os participantes com melanoma metastático uveal e da mucosa são elegíveis para as partes de escalonamento de dose de monoterapia do estudo se tiverem metástases superficiais, subcutâneas e/ou linfonodais passíveis de injeção intratumoral. Os participantes com HNSCC e melanoma de mucosa com apenas locais de mucosa para injeção intratumoral são elegíveis para as partes de escalonamento de dose de monoterapia do estudo após uma discussão e aprovação do Patrocinador. I 13. Os participantes devem ter função cardíaca adequada com fração de ejeção do ventrículo esquerdo (FEVE) de pelo menos 50%.

I 14. Capaz de dar consentimento informado assinado, o que inclui Consentime nto por o cumprimento dos requisitos e restrições listados no formulário de escrito consentimento informado (CIF) e neste protocolo.

Exemplo 1.3B - Critérios de Exclusão

[00553] Os participantes são excluídos do estudo se qualquer um dos seguintes critérios se aplicar, conforme mostrado na Tabela 7.

Tabela 7 - Critérios de exclusão Categoria Critério E 01. Estado de desempenho no Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) > 1. E 02. Doença concomitante significativa e não controlada, incluindo qualquer condição psiquiátrica que, na opinião do investigador ou Patrocinador, afetaria adversamente a participação do participante no estudo.

E 03. Infecções ativas, incluindo febre inexplicada (temperatura > 38,1 °C) ou terapia com antibióticos até 1 semana antes da inscrição.

E 04. Qualquer transplante de órgão anterior, incluindo aqueles que receberam transplante alogênico de medula óssea.

E 05. Histórico nos últimos 5 anos de uma malignidade invasiva diferente daquela tratada neste estudo, com exceção de carcinoma basal ou espinocelular ressecado/ablacionado ou carcinoma in situ do colo do Condições médicas útero ou outros tumores locais considerado curado por tratamento local.

E 06. Histórico de doenças conhecidas relacionadas à síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) ou doença conhecida por HIV que requer tratamento antirretroviral ou hepatite A, B ativa (definida como HBsAg positivo ou HBsAg negativo com anticorpo HBc positivo) ou C (definida como um resultado positivo conhecido de anticorpos para hepatite C e resultados quantitativos conhecidos de RNA de infecção por HCV superiores aos limites mínimos de detecção do ensaio). A sorologia para HIV na triagem será conduzida apenas para participantes em centros de estudo Alemães.

E 07. Participantes que fizeram esplenectomia.

E 08. Lesões tumorais a serem injetadas localizadas em regiões mucosais ou próximas a uma via aérea, vaso sanguíneo principal ou medula espinhal que, na opinião

Categoria Critério dos investigadores, poderiam causar oclusão ou compressão no caso de inchaço do tumor ou erosão em um vaso principal no caso de necrose.

E 09. Metástases cerebrais não tratadas que possam ser consideradas ativas.

Pacientes com metástases cerebrais tratadas anteriormente podem participar, desde que estejam estáveis (ou seja, sem evidência de progressão por imagiologia durante pelo menos 6 semanas antes da primeira dose do tratamento do estudo e quaisquer sintomas neurológicos tenham retornado para a linha de base) e não há evidência de metástases cerebrais novas ou crescentes e o paciente não requer nenhum corticosteroide sistêmico para o controle de metástases cerebrais nas 4 semanas anteriores à primeira dose da mistura de RNAs de citocina.

E 10. Insuficiência cardíaca congestiva sintomática (NYHA 3 ou 4), histórico de miocardite, arritmia cardíaca grave não controlada, infarto do miocárdio 6 meses antes da entrada no estudo, angina pectoris instável, insuficiência renal aguda não controlada ou não resolvida ou condições pulmonares significativas, como segue: - Doença pulmonar crônica não controlada - Um histórico conhecido (últimos 5 anos) ou qualquer evidência de doença pulmonar intersticial - Pneumonite ativa não infecciosa.

E 11. Evidência contínua ou recente (dentro de 5 anos) de doença autoimune significativa que requer tratamento com imunossupressores sistêmicos, o que pode sugerir risco de eventos adversos relacionados ao sistema imune.

Os itens a seguir não são excludentes: vitiligo, asma infantil que se resolveu, hipotireoidismo residual que requereu apenas reposição hormonal ou psoríase que não requereu tratamento sistêmico.

Categoria Critério E 12. Não resolução de qualquer toxicidade anterior relacionada ao tratamento para Grau < 2, exceto quanto à alopecia, vitiligo, fadiga e hipotireoidismo ativo de acordo com os critérios de terminologia comum para eventos adversos do National Cancer Institute (NCI CTCAE) versão 5.0. E 13. Histórico de reação de hipersensibilidade sistêmica, diferente de reação localizada no local da injeção, a qualquer produto biológico e hipersensibilidade conhecida a qualquer constituinte da mistura de citocinas RNA.

E 14. Melanoma uveal primário injetável sem doença metastática superficial, subcutânea ou em linfonodo.

E 15. Tratamento concomitante com qualquer outra terapia anticâncer (incluindo radioterapia ou agentes em investigação) ou participação em outro estudo clínico intervencionista.

E 16. Período de intervalo de menos de 3 semanas para a terapia anticâncer anterior (incluindo quimioterapia, agentes de terapia-alvo, radioterapia, imunoterapia, vacinação ou qualquer agente em investigação) ou 5 vezes a meia-vida, o que for mais curto.

Para participantes que receberam imunoterapias anteriores (incluindo terapias anti-PD-1), um período de intervalo Terapia anterior/concomitante de pelo menos 4 semanas é necessário antes que um participante receba o IMP.

E 17. Doses de corticosteroides imunossupressores (prednisona > 7,5 mg por dia por via oral [PO] ou por via intravenosa [IV] ou equivalente) dentro de 2 semanas antes da primeira dose de IMP e terapia de manutenção com prednisolona > 7,5 mg/dia por via oral ou equivalente durante o estudar.

E 18. Tratamento prévio com outros agentes imunomoduladores em menos de 4 semanas ou 5x a meia-vida do agente (o que for mais curto) antes da

Categoria Critério primeira dose do IMP.

Exemplos de agentes de modulação imune incluem bloqueadores de CTLA 4, 4- 1BB (CD137), OX-40, vacinas terapêuticas ou tratamentos com citocinas.

E 19. Tratamento prévio com vacinas vivas atenuadas nas 4 semanas anteriores ao início da intervenção do estudo, durante o tratamento e por 3 meses após a última dose do IMP.

E 20. Inscrição anterior neste estudo.

E 21. O participante é o Investigador ou qualquer Experiência em estudo clínico subinvestigador, assistente de pesquisa, farmacêutico, anterior/concorrente coordenador do estudo, outra equipe ou parente diretamente envolvido na condução do protocolo.

Categoria Critério E 22. Função hematológica inadequada incluindo neutrófilos < 1,5 x 109/L; hemoglobina < 9,0 g/dL; contagem de plaquetas < 100 x 109/L.

E 23. Função renal inadequada com creatinina ≥ 1,5x ULN ou entre 1,0-1,5x ULN com um CrCl < 60 mL/min/1,73 m² conforme estimado usando a fórmula aMDRD.

E 24. Função hepática inadequada ou teste de coagulação: bilirrubina total > 1,5x ULN, a menos que a síndrome de Gilbert (para esta situação, bilirrubina total > 2,5x ULN) ou ALT, AST ou ALP > 2,5x ULN na Avaliações diagnósticas ausência de metástases hepáticas.

Na presença de metástases hepáticas, bilirrubina total < 3x ULN e AST ou ALT < 5x ULN são aceitáveis.

A fosfatase alcalina (ALP) até o Grau 2 ou seja, < 5x ULN, seria aceitável apenas se relacionada à presença de metástases ósseas, conforme avaliado pelo Investigador.

Tempo de protrombina (TP) ou proporção normalizada internacional (INR) > 1,5x ULN.

Os participantes sob terapia anticoagulante serão excluídos.

Os participantes que tomaram aspirina em dose baixa (≤ 100 mg por dia) e heparina em dose baixa profilática não foram excluídos.

E 25. Prisioneiros ou indivíduos legalmente institucionalizados ou aqueles que não desejam ou não podem cumprir as visitas programadas, plano de administração de medicamentos, testes laboratoriais, outros procedimentos do estudo e restrições ao estudo.

Outras exclusões E 26. Linfoma do sistema nervoso central.

E 27. TCTH alogênico prévio para pacientes com linfoma.

E 28. Auto-HSCT menos de 90 dias antes do início da intervenção do estudo.

Exemplo 1.4 - Intervenção do Estudo

[00554] A intervenção do estudo é definida como qualquer/quaisquer intervenção(ões) investigacional(is), produto(s) comercializado(s), placebo ou dispositivo(s) médico(s) destinados a serem administrados a um participante do estudo de acordo com o protocolo do estudo. Exemplo 1.4A - Intervenção(ões) de Estudo Administrada(s) Tabela 8 - Visão geral das intervenções do estudo administradas Nome da intervenção do A mistura de RNAs de citocina estudo Formulação de Concentrado para solução injetável dosagem Via de administração Injeção intratumoral Injeção(ões) administrada(s) no nível de Instruções de dosagem dose designado uma vez por semana; 4 doses em um ciclo de 28 dias. a Nenhuma pré-medicação predefinida será administrada a todos os participantes, mas pré-medicação secundária pode ser recomendada para alguns participantes.

[00555] A mistura de RNAs de citocina é o medicamento experimental e é uma proporção em peso de 1:1:1:1 de mRNAs sintéticos modificados quimicamente que codificam as citocinas humanas IL-15sushi, IL-12sc, GM-CSF e IFNα2b.

[00556] A mistura de RNAs de citocina é administrada por via intratumoral uma vez por semana em um ciclo de 4 semanas (isto é, quatro doses a cada 28 dias). Após cada ciclo de tratamento, a frequência de injeção intratumoral continua semanalmente. No entanto, durante a condução do estudo, a frequência de administração da dose pode ser reduzida para uma administração menos frequente com base na diminuição da carga tumoral, o que pode interferir com a administração da dose pretendida.

[00557] Uma vez que a via de administração é injeção intratumoral, nenhuma reação alérgica aguda é esperada, portanto, não há pré- medicação predefinida a ser administrada a todos os participantes; no entanto, pré-medicação pode ser recomendada para alguns participantes. Todos os medicamentos usados como pré-medicação são inseridos nas páginas de medicamentos concomitantes. Exemplo 1.4A1 - Diretrizes Para o Manejo da Síndrome de Lise Tumoral Potencial (TLS)

[00558] No caso de TLS, o tratamento do estudo (mistura de mRNAs de citocinas) deve ser realizado até que todas as químicas do soro tenham sido resolvidas. Para assegurar hidratação normal, corrija as anormalidades laboratoriais, sobrecarga de fluidos, eletrólito ou desvio ácido-básico. O manejp deve ser feito de acordo com as diretrizes do local. O uso de inibidores (por exemplo, alopurinol) ou urato oxidase (por exemplo, rasburicase) é permitido. Complicações de TLS, incluindo função renal, devem ser monitoradas e o tratamento do estudo pode ser reinstituído em doses completas após a resolução.

[00559] As anormalidades laboratoriais normalmente associadas à TLS e as possíveis manifestações clínicas que podem estar associadas à TLS são apresentadas na Tabela 9. Tabela 9 - Anormalidades laboratoriais e clínicas possivelmente consistentes com TLS Laboratoriais Clínicas Ácido úrico > 8 mg/dL ( > 475,8 Lesão renal aguda: aumento no nível de µmol/L) creatinina sérica de (≥ 1,5 vezes o ULN) ou a Potássio > 6,0 mmol/L presença de oligúria, definida como um Fósforo > 4,5 mg/dL ( > 1,5 mmol/L) débito urinário médio de < 0,5 mL/kg/hora durante 6 horas. Convulsões, disritmia cardíaca, irritabilidade neuromuscular

Cálcio corrigido < 7,0 mg/dL (< 1,75 (tetania, parestesias, contração muscular, mmol/L) ou cálcio ionizado < 1,12 espasmo carpopedal, sinal de Trousseau, mg/dL (< 0,3 mmol/L) sinal de Chvostek, laringoespasmo, Aumento no nível de creatinina sérica broncoespasmo), hipotensão ou insuficiência (≥ 1,5 vezes o limite superior do cardíaca provavelmente ou definitivamente normal [ULN] causada por hipocalcemia. Disritmias provável ou definitivamente causadas por hipercalemia. a O nível de cálcio corrigido em miligramas por decilitro = nível de cálcio medido em miligramas por decilitro + 0,8 x (4-albumina em gramas por decilitro) Exemplo 1.4B - Terapia Concomitante

[00560] Qualquer medicamento (incluindo medicamentos de venda livre ou prescritos, vitaminas e/ou suplementos de ervas) que o participante esteja recebendo no momento da inscrição ou receba durante o estudo deve ser registrado com o motivo do uso e as datas de administração, incluindo data de início e término.

[00561] Os medicamentos concomitantes são registrados no eCRF de 14 dias antes da dose inicial do medicamento do estudo até 30 dias após a última administração do medicamento do estudo, resolução de eventos adversos relacionados ao medicamento sob estudo em andamento ou quando outra terapia anticâncer é recebida.

[00562] A medicação concomitante pode ser considerada caso a caso, de acordo com as seguintes diretrizes:

[00563] ● Os esteroides sistêmicos e os antagonistas do TNF-α podem atenuar o benefício potencial do IMP, entretanto, em uma situação de emergência, o investigador responsável pelo tratamento pode aplicar estes medicamentos. No entanto, isto deve ser comunicado ao Patrocinador o mais rápido possível e uma decisão em comum se e como os participantes podem prosseguir com a participação no estudo.

[00564] ● Se possível, alternativas aos corticosteroides devem sempre ser consideradas. Doses fisiológicas de corticosteroides ou esteroides de reposição são permitidas após consulta com o Patrocinador. O uso de esteroides inalados e mineralocorticoides orais (por exemplo, fludrocortisona para participantes com hipotensão ortostática ou insuficiência adrenocortical) é permitido.

[00565] - Um participante pode receber corticosteroides de forma aguda para uma emergência, reação alérgica ou similar; os participantes não podem receber terapia de manutenção com prednisolona > 7,5 mg/dia (PO ou IV) ou equivalente durante o estudo. Doses igualmente fisiológicas de corticosteroides administradas para a insuficiência adrenal são permitidas.

[00566] ● O tratamento concomitante com quimioterapia mielossupressora é proibido para todos os participantes durante a fase de tratamento, bem como 3 semanas ou 5x a meia-vida, o que for mais curto, antes do início do tratamento.

[00567] ● O tratamento concomitante com antipiréticos (por exemplo, 1 g de acetaminofeno/paracetamol quando um participante desenvolve febre ≥ 38,5 °C) é permitido.

[00568] ● A radioterapia paliativa pode ser administrada para o controle da dor com intenções paliativas. O Patrocinador deve ser notificado para obter aprovação prévia antes do tratamento, se a radioterapia paliativa estiver sendo considerada e antes de retomar a terapia no estudo. A área irradiada deve ser a menor possível e nunca deve envolver mais de 20 % da medula óssea em um determinado período de 3 semanas. Em todos estes casos, a possibilidade de progressão do tumor deve ser excluída pela avaliação física e radiológica do tumor. Se as únicas lesões avaliáveis forem irradiadas, o participante interromperá a intervenção do estudo. A área irradiada não pode ser usada como parâmetro para avaliação da resposta.

[00569] ● Eventos graves manifestados por dispneia, hipotensão, sibilância, broncoespasmo, taquicardia, saturação de oxigênio reduzida ou dificuldade respiratória devem ser tratados com terapias de suporte conforme indicado clinicamente (por exemplo, oxigênio suplementar e agonistas β2 adrenérgicos).

[00570] ● Qualquer terapia de base tomada pelo participante para doenças concomitantes diferentes do câncer (por exemplo, terapia de reposição hormonal, estatina, medicação anti-hipertensiva) pode ser continuada em uma dose estável.

[00571] ● Pré-medicação pode ser necessária nos participantes selecionados. Exemplo 1.4C - Terapia Anterior

[00572] Qualquer terapia anticâncer anterior ao estudo recebida antes do início deste estudo (medicamentos e terapias, incluindo radioterapias) deve ser registrado no eCRF.

[00573] Qualquer tratamento anterior deve ter sido concluído de acordo com os seguintes prazos:

[00574] ● Qualquer terapia anticâncer anterior, seja experimental ou aprovada, incluindo quimioterapia, terapia hormonal e/ou radioterapia, deve ser encerrada pelo menos 3 semanas antes do início da intervenção do estudo.

[00575] ● Se o participante recebeu terapia experimental antes de entrar neste estudo, pelo menos 3 semanas ou 5x a meia-vida devem ter passado antes de entrar neste estudo.

[00576] ● Qualquer terapia com base em ervas deve ser encerrada pelo menos 1 semana antes de administração do IMP.

[00577] ● O tratamento prévio com citocinas é permitido, desde que pelo menos 4 semanas ou 5x a meia-vida do medicamento, o que for mais curto, tenham decorrido entre a última dose e a primeira administração planejada do IMP.

[00578] ● O tratamento prévio com inibidores do ponto de verificação imune, anticorpo monoclonal imunomodulador (mAbs) e/ou terapias derivadas de mAb é permitido, desde que 4 semanas ou 5x a meia-vida (o que for mais curto) tenham decorrido até o início da terapia.

[00579] Se um participante recebe terapia de manutenção com corticosteroides, os participantes são elegíveis apenas se a dose pode ser reduzida para < 7,5 mg/dia durante 2 semanas antes da primeira administração de IMP e o participante não deve ter o risco de aumento da dose durante todo o período de intervenção do estudo. Exemplo 1.4D - Pré-medicação

[00580] Uma vez que a via de administração é a injeção intratumoral, nenhuma reação alérgica aguda é esperada, portanto, não há pré- medicação pré-definida a ser administrada a todos os participantes. No entanto, a pré-medicação durante e após o segundo ciclo pode ser recomendada, dependendo se o participante experimentou uma reação inflamatória após a primeira administração.

[00581] Se os participantes experimentaram anteriormente reações alérgicas relacionadas ao medicamento (isto é, de coceira leve a sintomas moderados que ocorreram dentro de 24 horas após a administração de IMP), pré-medicação com um antagonista de histamina H1 (50 mg de difenidramina por via oral ou equivalente [por exemplo, dexclorfeniramina], administrada aproximadamente 30-60 minutos antes de administração da mistura de RNAs de citocina) pode ser considerada antes de administração da mistura de RNAs de citocina. Se os participantes tiveram eventos de Grau 2, incluindo hipersensibilidade ou CRS, a pré-medicação também pode incluir esteroides orais (20 mg de dexametasona ou equivalente) para administrações futuras. O uso de corticosteroides deve ser limitado ao tratamento de reações alérgicas graves induzidas por medicamentos ou condições de risco de vida.

[00582] Pré-medicação com antipiréticos é permitida para participantes que desenvolveram sintomas inflamatórios, tais como febre e calafrios após a primeira administração do IMP. Os anestésicos locais podem ser usados com base na localização da(s) lesão(ões) a ser(em) injetada(s). Exemplo 1.4E - Terapia Proibida

[00583] O uso das seguintes terapias é proibido durante o estudo:

[00584] ● Terapia concomitante destinada ao tratamento do câncer (por exemplo, quimioterapia ou imunoterapia), com exceção da radioterapia paliativa, não é permitida durante o estudo.

[00585] - Radioterapia pode ser considerada para paliação dos sintomas (por exemplo, tratamento de metástases ósseas dolorosas, obstrução de lesão pulmonar) se os participantes estiverem obtendo benefícios de outra forma.

[00586] ● Vacinas vivas atenuadas são proibidas nas 4 semanas anteriores ao início da intervenção do estudo, durante o tratamento e por 3 meses após a última dose do IMP. Todas as outras vacinas devem ser evitadas se não forem a melhor solução para a condição do participante.

[00587] ● O tratamento concomitante com IFN é proibido para todos os participantes durante a participação no estudo.

[00588] Os agentes imunoestimuladores sistêmicos (incluindo, porém sem limitações, IFNs e IL-2) são proibidos dentro de 4 semanas ou 5x a meia-vida do medicamento (o que for mais longo) antes do início da intervenção e durante a intervenção, porque uma interação não pode ser excluída e pode resultar um risco aumentado para o participante.

[00589] ● Medicamentos imunossupressores, incluindo, porém sem limitações, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexato e talidomida. Estes agentes podem alterar potencialmente a atividade.

[00590] ● Terapia de manutenção com prednisolona > 7,5 mg/dia (PO ou IV) ou equivalente é proibida.

[00591] ● Fatores estimuladores de colônias de granulócitos (por exemplo, fator de estimulação de colônias de granulócitos, GM-CSF e/ou pegfilgrastim), uma vez que isto pode alterar a atividade do IMP.

[00592] ● Os participantes neste estudo não estão autorizados a receber qualquer outro IMP concomitantemente. Exemplo 1.4F - Modificação de Dose Modificação de Dose para a Mistura de RNAs de Citocina

[00593] Se necessário ou no caso de um AE relacionado ao IMP de Grau ≥ 2, o início da mistura de RNAs de citocina pode ser atrasado em até 3 dias além do dia previsto de tratamento em qualquer semana e um atraso de 2 ou 3 dias será considerado como um atraso na dose. A próxima dose deve ser planejada 7 dias após a última dose para respeitar um intervalo de 7 dias entre as doses.

[00594] Se a dose da mistura de RNAs de citocina precisar ser atrasada ≥ 4 dias além do dia previsto de tratamento para a dose semanal, esta dose deve ser ignorada e, portanto, será considerada uma omissão de dose. O participante pode retomar a mistura de RNAs de citocina se o AE relacionado ao IMP de Grau ≥ 2 tiver resolvido para Grau ≤ 1 (ou Grau 2 se controlado com terapias de reposição) dentro de um período aceitável. Em caso de omissão de duas doses sequenciais, o paciente pode ser tratado novamente com a mistura de RNAs de citocina se o AE não for fatal e a continuação do tratamento for considerada a melhor para a condição do paciente. No caso de omissões de mais de duas doses sequenciais, a mistura de citocinas RNA será definitivamente encerrada.

[00595] Os participantes que experimentam uma DLT na parte de escalonamento de dose de monoterapia do estudo terão sua intervenção de estudo interrompida e serão acompanhados até que a toxicidade seja resolvida.

[00596] ● Se a DLT ocorrer durante os primeiros 28 dias a partir do início da mistura de RNAs de citocina (período de observação de DLT na fase de escalonamento), a mistura de RNAs de citocina será definitivamente encerrada.

[00597] ● Se um AE que satisfaz a definição de DLT ocorrer após 28 dias do início da mistura de RNAs de citocina (período de observação de DLT), a mistura de RNAs de citocina pode ser retomada após uma discussão com o Patrocinador e potencial endosso pelo Comitê de Estudo após assegurar que o seguinte critérios são atendidos:

[00598] o AE resolveu para Grau ≤ 1 (ou Grau 2 se controlado com terapias de reposição)

[00599] o O investigador acredita que é de interesse do paciente retomar a intervenção do estudo

[00600] Aplicável apenas para escalonamento de dose (não fase de expansão), o participante retomará a terapia com um novo ciclo de tratamento no mesmo nível de dose da mistura de RNAs de citocina com tratamento profilático (se disponível) ou em um nível de dose inferior, com base em acordo com o Patrocinador. Nenhum reajuste de dose é permitido.

[00601] No caso de DLTs atribuídas à mistura de RNAs de citocina, cuja recorrência não seria necessariamente uma ameaça à vida (ou seja, erupção cutânea não relacionada a CRS, endocrinopatias, tal como hipotireoidismo, febre, fadiga, artromialgia, dor de cabeça) e recuperação para CTCAE de Grau ≤ 1 ou valores de linha de base ocorrerem prontamente, a situação será avaliada caso a caso e determinar se é seguro retomar a terapia no mesmo nível de dose ou em um nível de dose inferior e se está de acordo com o equilíbrio benefício/risco para o participante. Ao contrário, no caso de DLTs cuja recorrência pode ser potencialmente fatal (ou seja, síndrome de liberação de citocinas, pneumonite), os participantes serão removidos do tratamento adicional e não serão substituídos. Exemplo 1.4G - Descontinuação da Intervenção do Estudo e

Participante

[00602] Descontinuação/Retirada. No caso do IMP ser descontinuado, é determinado se esta descontinuação é temporária (ou seja, uma omissão de dose ou atraso de ciclo); a descontinuação permanente do IMP antes da progressão da doença, a menos que se atinja o final do período de tratamento de 1 ano, é o último recurso. Qualquer descontinuação do IMP deve ser totalmente documentada no eCRF. Em qualquer caso, o participante deve permanecer no estudo até a documentação de Doença Progressiva.

[00603] Descontinuação Definitiva da Intervenção de Estudo: A descontinuação da intervenção permanente é qualquer descontinuação da intervenção associada à decisão definitiva do investigador de não expor novamente o participante ao IMP a qualquer momento durante o estudo ou do participante não ser novamente exposto ao IMP seja qual for o motivo.

[00604] A intervenção do estudo é descontinuada se, na opinião do investigador, a continuação da intervenção do estudo for prejudicial ao bem-estar do participante, tal como em qualquer um dos seguintes casos:

[00605] 1. Evento adverso inaceitável.

[00606] 2. Progressão de doença confirmada.

[00607] 3. Fraca conformidade com o protocolo do estudo.

[00608] 4. Conclusão do período de tratamento de 1 ano.

[00609] 5. Outras condições, tais como doenças concomitantes, que impeçam a administração posterior da intervenção do estudo.

[00610] Se os participantes estão clinicamente estáveis e obtendo benefício clínico da terapia com toxicidade mínima, eles serão mantidos em tratamento até Doença Progressiva ou por um tratamento máximo de 1 ano, o que ocorrer primeiro.

[00611] A descontinuação da intervenção do estudo para função hepática anormal é considerada pelo investigador quando o aumento não está relacionado à doença subjacente e se o investigador acredita que é no melhor interesse da segurança do participante.

[00612] Os participantes podem retirar o tratamento com IMPs se decidirem fazê-lo, a qualquer momento e independentemente do motivo ou isso pode ser feito a critério do Investigador. O tratamento com o IMP deve ser interrompido em qualquer um dos seguintes casos: A pedido do participante, a qualquer momento e independentemente do motivo (retirada do consentimento) ou a pedido de seu representante legalmente autorizado.

[00613] "Representante legalmente autorizado" é considerado um indivíduo ou órgão judicial ou outro órgão autorizado nos termos da lei aplicável a consentir em nome de um possível participante para a participação do participante no(s) procedimento(s) envolvido(s) na pesquisa. A retirada do consentimento para o tratamento é distinta da retirada do consentimento para visitas de acompanhamento e da retirada do consentimento para acompanhamento de contato de não participante, por exemplo, verificação de registros médicos.

[00614] Os participantes que solicitam a retirada são informados de que a retirada do consentimento para acompanhamento pode colocar em risco o valor do estudo para a saúde pública. Os participantes que se retiram são explicitamente questionados sobre a contribuição de possíveis AEs para sua decisão de retirar o consentimento e qualquer informação sobre AE obtida é documentada. De preferência, o participante retira o consentimento por escrito e, se o participante ou o representante do participante se recusar ou estiver fisicamente indisponível, o local documenta e assina a proporção para a falha do participante em retirar o consentimento por escrito.

[00615] Os participantes são acompanhados de acordo com os procedimentos do estudo especificados neste protocolo até a data agendada de conclusão do estudo ou até a recuperação ou estabilização de qualquer AE a ser seguido conforme especificado neste protocolo, o que ocorrer por último.

[00616] Se possível e após a descontinuação permanente da intervenção, os participantes são avaliados usando o procedimento normalmente planejado para o último d o primeiro dia com o IMP incluindo uma amostra farmacocinética, se apropriado.

[00617] Todos os casos de descontinuação da intervenção permanente são registrados pelo Investigador nas páginas apropriadas do eCRF quando considerados como confirmados. Exemplo 1.4H – Sem Contato para Acompanhamento

[00618] Um participante é considerado sem contato para acompanhamento se ele repetidamente não retornar para as visitas agendadas e não puder ser contatado pelo Centro de Estudo.

[00619] As seguintes ações são tomadas se um participante não retornar à clínica para uma visita de estudo necessária:

[00620] ● O Centro tenta entrar em contato com o participante e reagendar a visita perdida o mais rápido possível e aconselhar o participante sobre a importância de manter o esquema de visita designado e verificar se o participante deseja e/ou deve continuar no estudo.

[00621] ● Antes que um participante seja considerado sem contato para acompanhamento, o Investigador ou pessoa designada faz todos os esforços para recuperar o contato com o participante (quando possível, 3 ligações telefônicas e, se necessário, uma carta autenticada para o último endereço de correspondência conhecido do participante ou métodos locais equivalentes). Estas tentativas de contato são documentadas no prontuário médico do participante.

[00622] ● Um participante que continua inacessível é considerado como tendo desistido do estudo.

Exemplo 1.4I - Avaliações e Procedimentos do Estudo

[00623] Os procedimentos conduzidos como parte do gerenciamento clínico de rotina do participante (por exemplo, hemograma) e obtidos antes da assinatura do CIF podem ser usados para fins de triagem ou linha de base, desde que os procedimentos atendam aos critérios especificados do protocolo e sejam realizados dentro do prazo definido no SoA.

[00624] Amostras repetidas ou não programadas podem ser retiradas por razões de segurança ou por problemas técnicos com as amostras. Exemplo 1.5 - Avaliações de Eficácia

[00625] Na fase de escalonamento, a informação de resposta objetiva é obtida com base em RECIST 1.1, se houver lesões intactas mensuráveis com base em RECIST 1.1.

[00626] Na fase de expansão, a avaliação da resposta à mistura de RNAs de citocina é um objetivo principal. Todos os participantes tratados na fase de expansão devem ter pelo menos uma lesão intacta mensurável para inclusão (consulte critério de inclusão I 05 acima). A avaliação do tumor é realizada em intervalos fixos, conforme descrito no Esquema de Atividades (SOA) nas Tabelas 2 e 3 e a janela de avaliação não é afetada pelo atraso ou omissão da dose.

[00627] Todos os dados de avaliação de tumor são registrados em páginas do eCRF relacionadas com base nos critérios RECIST 1.1. Como um requisito dos critérios RECIST 1.1, uma resposta parcial ou completa deve ser confirmada em um segundo exame feito com pelo menos 4 semanas de intervalo, a fim de ser documentado como uma resposta confirmada à terapia. Com base no RECIST para imunoterapias (iRECIST), a Doença Progressiva também deve ser confirmada em um segundo exame feito com pelo menos 4 semanas de intervalo para excluir a pseudoprogressão, no caso de nenhuma doença clinicamente progressiva.

[00628] Os critérios RECIST 1.1 são seguidos para avaliação da resposta do tumor e os critérios iRECIST também são seguidos para relatar os critérios de resposta como parâmetros secundários/exploratórios. No caso de Doença Progressiva ser confirmada na segunda avaliação, a data de progressão é registrada com base na avaliação inicial. Se a progressão da doença não for confirmada, os participantes continuam o tratamento e Doença Progressiva não confirmada (iUPD) é registrada.

[00629] Todas as lesões mensuráveis (mesmo aquelas abaixo do valor limite de mensurabilidade com base em RECIST 1.1), são medidas para otimização da intervenção do estudo. Uma análise exploratória, como parte de uma avaliação de eficácia em termos de ORR, é realizada pela avaliação do volume total do tumor que leva em consideração o tamanho das lesões não alvo e análises de lesões injetadas versus não injetadas farão parte deste estudo exploratório avaliação. Os procedimentos de medição e documentação no eCRF são detalhados no SRM e o plano de análises estatísticas é detalhado no SAP.

[00630] As variáveis de eficácia secundárias incluem taxas de controle da doença, duração da resposta e sobrevida sem progressão. Todos estes parâmetros são detalhados no SAP. Exemplo 1.5A - FDG-PET-CT e/ou CT com Contraste para Pacientes com Linfoma

[00631] A ORR é definida como a proporção de participantes com CR e PR com base nas respostas avaliadas usando a escala de 5 pontos de acordo com a classificação de Lugano 2014 (Cheson B.D. et al. (2014) J Clin Onc 32 (27): 3059 -68).

[00632] A avaliação do tumor inclui varredura por FDG-PET-CT no caso de linfomas ávidos por FDG e CT intensificada por contraste no caso de linfomas não ávidos por FDG. As avaliações do tumor são realizadas em intervalos fixos, conforme descrito no SoA e a janela de avaliação não é afetada pelo atraso ou omissão da dose.

[00633] Se as tomografias e/ou PET na triagem forem negativas para o envolvimento da doença no pescoço, as tomografias subsequentes podem não incluir a área do pescoço. Se as imagens de PET e/ou TC na triagem forem positivas para o envolvimento de doença no pescoço, as TCs subsequentes devem incluir a área do pescoço. As avaliações de resposta do tumor devem ocorrer na triagem (dentro de 28 dias [-7 dias] antes do primeiro IMP) e a cada 12 semanas (± 7 dias) a partir de então. O tempo de obtenção de imagens deve seguir dias corridos e não deve ser ajustado para atrasos no ciclo. Para participantes que descontinuam por motivos diferentes do PD, as avaliações devem continuar até que o participante tenha documentado o PD ou inicie uma nova terapia anticâncer. A primeira avaliação pode ser realizada antes de 12 semanas se, na opinião do investigador, o participante estiver progredindo clinicamente.

[00634] Se os participantes têm uma PR ou uma CR, uma varredura repetida com 4 semanas de intervalo é necessária para confirmação e os pacientes devem continuar a cada programa de avaliação de 12 semanas. No caso onde um participante está clinicamente estável, mas a imagiologia mostra PD na Semana 12, o medicamento do estudo pode ser continuado, a critério do investigador, até a próxima avaliação de resposta à doença. No entanto, a imagiologia deve ocorrer a qualquer momento quando houver suspeita clínica de progressão.

[00635] A avaliação dos sintomas do linfoma B deve ocorrer com cada avaliação de resposta à doença.

[00636] Em participantes com PD na Semana 12 que continuam a terapia do estudo além da Semana 12, uma avaliação radiológica é realizada no momento da descontinuação do tratamento. Se a varredura anterior foi obtida dentro de 4 semanas antes da data de descontinuação, uma repetição da varredura na descontinuação do tratamento não é obrigatória. Exemplo 1.5B Biópsia e Aspirado de Medula Óssea para Pacientes com Linfoma

[00637] Todos os participantes podem ter biópsia/aspirado de medula óssea realizada conforme indicado clinicamente de acordo com os critérios de Lugano 2014 (Cheson B.D. et al. (2014)). FDG-PET-CT é adequada para determinação do envolvimento da medula óssea e pode ser considerada altamente sugestiva de envolvimento da medula óssea. A confirmação da biópsia da medula óssea pode ser considerada se necessário no início do estudo (se FDG PET-CT for negativa no local da medula óssea, então, a biópsia/aspiração é realizada para identificar o envolvimento). As avaliações subsequentes da medula óssea serão realizadas apenas em participantes com envolvimento da medula óssea no início do estudo. Exemplo 1.5C - Avaliações de Segurança

[00638] O principal objetivo deste estudo FIH é estabelecer, com base em DLTs, a dose biologicamente ideal da mistura de RNAs de citocina quando administrada como uma injeção intratumoral semanal. A segurança é, portanto, um parâmetro primário do estudo e é avaliada continuamente. O perfil de segurança é avaliado a partir dos resultados do exame físico (de preferência pelo mesmo médico) e dos testes laboratoriais e será com base na incidência, gravidade (conforme classificado pelo NCI CTCAE versão 5.0) e natureza cumulativa dos AEs. Pontos de tempo planejados para todas as avaliações de segurança são fornecidos no SOA. Exemplo 1.5D - Exames Físicos

[00639] Um exame físico completo inclui, no mínimo, avaliações do sistema nervoso central e dos sistemas cardiovascular, respiratório,

gastrintestinal, hematopoiético (hepatomegalia, esplenomegalia, linfadenopatia) e dermatológico. A altura (apenas na linha de base) e o peso (na pré-dosagem de cada ciclo) são medidos e registrados no eCRF.

[00640] O estado de desempenho no ECOG é avaliado antes de cada administração de IMP e registrado no eCRF. Os investigadores prestam atenção aos sinais clínicos relacionados a doenças graves anteriores, bem como ao progresso das lesões cutâneas. Qualquer novo achado ou piora do achado anterior é relatado como um novo evento adverso. O esquema para exames físicos é descrito no SOA. Exemplo 1.5E - Sinais Vitais

[00641] Durante a fase de tratamento, os sinais vitais são monitorados imediatamente antes de iniciar a infusão do IMP e ao final da injeção. O monitoramento também é realizado conforme indicação clínica. Temperatura, frequência de pulso, frequência respiratória e pressão arterial são avaliadas. As medições de pressão arterial e pulso devem ser precedidas por pelo menos 5 minutos de descanso para o participante em um ambiente silencioso e sem distrações (por exemplo, televisão, telefones celulares). Exemplo 1.5F - Eletrocardiogramas, Ecocardiograma e Varredura

MUGA

[00642] ECGs individuais de 12 derivações são obtidos conforme descrito no SOA. Anormalidades clinicamente significativas devem ser relatadas como AE, desenvolvidas após a assinatura do CIF. Condições pré-existentes devem ser registradas no histórico médico do participante. Ecocardiogramas ou varreduras MUGA serão obtidos conforme descrito no SoA (consulte o mesmo) apenas na triagem de pacientes na parte de combinação do estudo. Exemplo 1.5G - Teste de Função Pulmonar

[00643] A DLCO é realizada no início do estudo para participantes com linfoma previamente tratado com bleomicina. Exemplo 1.5H - Avaliações Laboratoriais de Segurança Clínica

[00644] O investigador analisa o relatório do laboratório e documenta esta revisão. Os relatórios laboratoriais são arquivados com os documentos de origem. Anormalidades laboratoriais são relatadas como AEs apenas no caso de:

[00645] - Levar à descontinuação, ao tratamento ou à modificação da dose do medicamento experimental.

[00646] - Preencher uma definição grave ou AE de interesse especial (AESI) (nota: os testes laboratoriais restantes são relatados na página de exames laboratoriais do eCRF).

[00647] - Ensaios anteriores de mRNA e de desencadeamento de interleucina mostraram alterações transitórias nos parâmetros hematológicos; estas alterações temporárias como parte do modo de ação não devem ser registradas como AEs por padrão. No entanto, o investigador clínico decide se em um caso específico uma alteração laboratorial deve ser relatado como clinicamente significativo e/ou como AE.

[00648] - Todos os testes laboratoriais com valores considerados clinicamente significativamente anormais durante a participação no estudo ou dentro de 30 dias após a última dose da intervenção do estudo (ou seja, avaliação na EOT) são repetidos até que os valores voltem ao normal ou basal ou não sejam mais considerados clinicamente significativos pelo investigador ou monitor médico.

[00649] - Se tais valores não retornarem ao normal/linha de base dentro de um período de tempo considerado razoável pelo Investigador, a etiologia é identificada e o Patrocinador notificado.

[00650] Todas as avaliações laboratoriais requeridas pelo protocolo são realizadas de acordo com o manual do laboratório e o SoA.

[00651] Se os valores laboratoriais de avaliações laboratoriais não especificadas em protocolo realizadas no laboratório local da instituição exigirem uma mudança na gestão do participante ou forem considerados clinicamente significativos pelo investigador (por exemplo, SAE ou AE ou modificação de dose), então, os resultados são registrados no eCRF. Todos os testes laboratoriais não planejados realizados para acompanhamento de segurança ou para investigação adicional de AE são relatados no eCRF. Exemplo 1.5I - Toxicidades Limitantes de Dose (DLTs)

[00652] DLTs são definidas como qualquer um dos seguintes AEs relacionados aos IMPs na ausência de evidência clara em contrário, após validação pelo Comitê de Estudo e se não relacionadas a uma graduação de progressão da doença usando NCI CTCAE ver. 5.0. A duração do período de observação de DLT é mais longa para participantes que atrasam o início do Ciclo 2 em virtude de AEs relacionados ao tratamento para o qual a duração deve ser avaliada a fim de determinar se o evento é uma DLT. O NCI CTCAE ver. 5.0 é usado para avaliar a gravidade dos AEs.

[00653] Toxicidade Hematológica:  Neutropenia febril de grau ≥ 3 ou neutropenia de grau ≥ 3 com infecção documentada.  Toxicidade hematológica de grau ≥ 3 com duração > 72 horas.  Trombocitopenia de grau 4 ou grau 3 com hemorragia ou necessitando de transfusão.

[00654] Toxicidade Não Hematológica:

[00655] ● Quaisquer AEs imuno-relacionados de Grau ≥ 3, exceto quanto a reações cutâneas de Grau 3.

[00656] - Um irAE pode ocorrer logo após a primeira dose ou vários meses após a última dose do tratamento. Todos os AEs de etiologia desconhecida associados à exposição ao medicamento são avaliados para determinar a possível etiologia imune. Se houver suspeita de um irAE, esforços são feitos para descartar neoplásica, infecciosa, metabólica, toxina ou outras causas etiológicas antes de rotular um AE como um irAE.

[00657] ● Quaisquer outras toxicidades não hematológicas de Grau ≥ 3;

[00658] - Excluindo náuseas, vômitos e diarreia de Grau 3, se controlados com terapia antidiarreica adequada e com resolução para Grau ≤ 1 em 48 horas.

[00659] - Se um participante com metástases hepáticas conhecidas foi inscrito com AST Grau 2 ou anormalidades ALT no início do estudo, um aumento de AST ou ALT é considerado uma DLT apenas se o aumento foi > 3 vezes o valor basal e a elevação foi confirmada ≥ 5 dias depois.

[00660] - Se um participante com Síndrome de Gilbert foi inscrito com uma anormalidade da bilirrubina de Grau 2 no início do estudo, um aumento na bilirrubina é considerado uma DLT apenas se o aumento foi > 3 vezes o valor basal e a elevação foi confirmada ≥ 5 dias depois.

[00661] ● Uveíte de grau ≥ 2.

[00662] Outras toxicidades "não graduáveis":

[00663] ● Um evento adverso emergente do tratamento que, na opinião do Comitê de Estudo, é de significância clínica potencial, de modo que o aumento da dose exporia os participantes a um risco inaceitável.

[00664] ● Toxicidade relacionada ao IMP que leva à omissão de mais de 1 dose, na ausência de recuperação ao valor basal ou Grau ≤ 1 (exceto para alopecia, vitiligo, fadiga e hipotireoidismo).

[00665] A ocorrência de DLTs durante os primeiros 28 dias de tratamento para a fase de escalonamento é usada para definir a MTD ou MAD. No Ciclo 1 e nos ciclos subsequentes, a ocorrência de DLTs determina a necessidade de omissões ou reduções de dose (se a DLT ocorrer durante o período de observação de DLT, a intervenção do estudo é definitivamente encerrada; além do período de observação de DLT).

[00666] Os participantes que experimentam uma DLT terão sua terapia com a mistura de RNAs de citocina interrompida e serão acompanhados até que esta toxicidade tenha resolvido para CTCAE de Grau ≤ 1 ou para o valor de linha de base do participante, se maior. Após a recuperação da toxicidade em questão, com omissão de no máximo 2 doses e concordância do Comitê de Estudo e se o Investigador acreditar que é do interesse do participante retomar a terapia com a mistura de RNAs de citocina, o participante pode retomar a terapia com um novo ciclo de tratamento no mesmo nível de dose ou em um nível de dose mais baixo, com base no acordo com o Patrocinador. Nenhum novo escalonamento de dose é permitido para esses participantes redimensionados. Exemplo 1.5J - Reações Sistêmicas

[00667] O manejo de hipersensibilidade e reações anafiláticas, juntamente com as modificações de dose associadas, são detalhadas abaixo. Reação Inflamatória Sistêmica

[00668] Reação sistêmica em virtude de reações inflamatórias pode ocorrer com a administração da mistura de RNAs de citocina. Respostas antígeno-específicas de linfócitos T, sinalização mediada por TLR e liberação transitória de citocinas pró-inflamatórias podem causar reações inflamatórias sistêmicas. Os sintomas clínicos típicos de reações inflamatórias sistêmicas podem incluir taquicardia, redução da pressão arterial, dispneia, calafrios, vômitos, tontura e febre.

[00669] As ações possíveis em caso de reações inflamatórias sistêmicas são:

 avaliação das funções vitais (BP, HR, respiração, temperatura corporal)  tratamento com paracetamol e/ou medicamentos anti- inflamatórios não esteroidais (AINEs)  coleta de amostra de sangue para IL-6, IFNγ, TNFα, IL- 2; GM-CSF, IL-10, IL-8, IL-5, CRP e Ferritina  hospitalização até recuperação a critério do investigador pode ser necessária, acompanhada, por exemplo, por:  monitoramento rigoroso da função vital (BP, HR, respiração, temperatura corporal)  administração de AINEs  dose alta única de cortisona intravenosa  dose única de infusão de tocilizumabe 8mg/kg (se não houver recuperação) Síndrome de Liberação de Citocinas

[00670] A toxicidade associada a citocinas, também conhecida como CRS, é uma toxicidade não específica para antígeno que ocorre como resultado de uma potente ativação imune. A CRS se manifesta clinicamente quando um grande número de linfócitos (células B, células T e/ou células NK) e/ou células mieloides (macrófagos, células dendríticas e monócitos) tornam-se ativados e liberam citocinas inflamatórias. A CRS tem sido classicamente associada a infusões terapêuticas de anticorpos monoclonais e, nestes cenários, o início dos sintomas geralmente ocorre minutos a horas após o início da infusão. Embora não seja esperado que os níveis de citocinas séricas após a injeção intratumoral com a mistura de RNAs de citocinas se aproximem dos níveis observados em participantes após a injeção direta de citocinas recombinantes, há uma possibilidade de que, no curso de níveis sustentados de citocinas intratumorais que conferem benefício clínico, os participantes possam ter níveis sustentados de níveis de citocinas sistêmicas que podem causar efeitos adversos. Assim, os participantes que recebem injeções intratumorais da mistura de RNAs de citocina são monitorados de perto quanto a sinais de toxicidades associadas a citocinas. No caso de um participante desenvolver sinais e sintomas de CRS de Grau 2 ou superior, ele precisa ser hospitalizado. O monitoramento dos sinais vitais deve ser feito continuamente se desenvolver CRS de Grau ≥ 2. O participante deve ser transferido para a unidade de terapia intensiva (UTI) caso apresente comprometimento hemodinâmico ou respiratório. A equipe da UTI deve ser composta por um médico intensivista com experimento no tratamento da CRS. Além disso, a UTI deve ter o equipamento necessário para iniciar o tratamento imediato e o monitoramento de um participante com CRS de Grau ≥ 2 antes de ser admitido na UTI.

[00671] Para sinais e sintomas clínicos associados à CRS, consulte abaixo.

[00672] O momento do início dos sintomas e da gravidade da CRS depende do agente indutor e da magnitude da ativação das células imunes. A incidência e a gravidade da síndrome também parecem maiores quando os pacientes têm grandes cargas tumorais, presumivelmente porque isto leva a níveis mais elevados de ativação de células T. Tal como acontece com a CRS associada à terapia com anticorpos monoclonais, a CRS associada a terapias com células T adotivas foi associada a níveis elevados de IFNγ, IL-6 e TNFα; aumentos de IL-2, GM-CSF, IL-10, IL-8, IL-5 e fracktalcina também foram relatados. Evidências emergentes implicam a IL-6 como um mediador central de toxicidade na CRS; a IL-6 é uma citocina pleiotrópica com propriedades anti-inflamatórias e pró-inflamatórias. No entanto, a análise em tempo real de um amplo painel de citocinas não afeta significativamente o manejo de pacientes individuais com CRS no momento atual e as decisões de tratamento são, tipicamente, com base em parâmetros clínicos.

[00673] Os ensaios para proteína C reativa sérica (CRP) e ferritina são realizados. Os níveis plasmáticos de citocinas, incluindo IL-6 e IFNγ, são coletados e analisados retrospectivamente apenas em caso de desenvolvimento de sintomas de grau ≥ 2 de CRS. A amostragem é realizada após a dose inicial e após cada aumento de dose, a fim de avaliar os sinais de CRS e em caso de desenvolvimento de sintomas de grau ≥ 2 de CRS. A CRP é um reagente de fase aguda produzido pelo fígado, principalmente em resposta à IL-6. Os níveis séricos de CRP servem como substituto para os aumentos na bioatividade da IL-6. Durante a CRS, os níveis séricos de CRP podem aumentar em vários logs. O ensaio de PCR no soro é rápido, barato e prontamente disponível na maioria dos hospitais. Em algumas séries, os níveis máximos de CRP e a alteração na dobra da CRP identificaram pacientes em risco de CRS grave. É importante enfatizar, entretanto, que os níveis de CRP também são elevados durante a infecção e não podem ser usados para distinguir entre inflamação causada por infecção e inflamação relacionada à CRS. Elevações extremas na ferritina sérica foram observados em muitos pacientes com CRS após infusão de células T do receptor antigênico quimérico (CAR), o que sustenta uma similaridade entre a CRS e a síndrome de ativação macrofágica/linfo- histiocitose hemofagocítica (HLH).

[00674] Para avaliar a gravidade de CRS em participantes individuais, o sistema de classificação e a estratégia de mitigação para CRS que se baseia nas Diretrizes de Consenso de 2014 do NCI são usados. Este sistema de classificação foi modificado para definir CRS leve, moderada, grave e com risco de vida, independentemente do agente incitante e para orientar as recomendações de tratamento com corticosteroides e/ou anticorpos monoclonais anti-IL-6 humana, como tocilizumabe.

Exemplo 1.6 - Eventos Adversos e Eventos Adversos Graves Evento Adverso de Interesse Especial

[00675] Um AESI é um AE (grave ou não) de preocupação científica e médica específica para o produto ou programa do Patrocinador, para o qual é necessário monitoramento contínuo e notificação imediata do Investigador ao Patrocinador. Tais eventos podem requerer investigação adicional a fim de caracterizá-los e entendê-los. Os eventos adversos de interesse especial podem ser adicionados, modificados ou removidos durante um estudo por meio de emendas ao protocolo.

[00676] ● Gravidez de um indivíduo do sexo feminino inscrito em um estudo, bem como gravidez ocorrida em uma parceira feminina de um indivíduo do sexo masculino inscrito em um estudo com o IMP é qualificada como SAE somente se preencher um dos critérios de seriedade (consulte abaixo).

[00677] - Em caso de gravidez em uma participante do sexo feminino, o IMP é interrompido. O acompanhamento da gravidez da participante do sexo feminino ou da parceira de participante do sexo masculino é obrigatório até que o parâmetro seja determinado.

[00678] ● Superdosagem sintomática (grave ou não grave) com IMP/medicamento não investigativo (NIMP)

[00679] - Uma overdose (acidental ou intencional) com o IMP/NIMP é um evento suspeito pelo Investigador ou notificado espontaneamente pelo participante e definido como pelo menos 30 % acima da dose administrada pretendida.

[00680] - Digno de nota, a sobredosagem assintomática é relatada como um AE padrão.

[00681] ● Outros AESIs específicos do design

[00682] - Todos os potenciais definidos pelo protocolo ou DLTs relacionadas ao IMP são considerados como AESI, independentemente do ciclo de ocorrência (ou seja, após os primeiros 28 dias de tratamento nas fases de escalonamento e expansão)

[00683] - Síndrome de liberação de citocinas (qualquer grau)

[00684] AE é relatado pelo participante (ou, quando apropriado, por um cuidador, substituto ou representante legalmente autorizado do participante).

[00685] O Investigador e quaisquer designados qualificados são responsáveis por detectar, documentar e registrar eventos que atendam à definição de um AE ou SAE e permanecem responsáveis pelo acompanhamento de AEs que sejam graves, considerados relacionados à intervenção do estudo ou procedimentos do estudo ou que fez com que o participante interrompesse a mistura de citocinas RNA. Evento Adverso (AE)

[00686] Um AE é qualquer ocorrência médica desagradável em um participante ou participante do estudo clínico, temporariamente associada ao uso da intervenção do estudo, seja ou não considerada relacionada à intervenção do estudo. AE pode, portanto, ser qualquer sinal desfavorável e não intencional (incluindo um achado laboratorial anormal), sintoma ou doença (novo ou exacerbado) temporariamente associado ao uso da intervenção do estudo. Evento Adverso Grave (SAE)

[00687] Um SAE é qualquer ocorrência médica desagradável que, em qualquer dose:

[00688] - Resulta em morte,

[00689] - É uma ameaça à vida (observação: o termo "ameaça à vida" refere-se a um evento/reação em que o participante estava em risco de morte no momento do evento/reação; não se refere a um evento/reação que hipoteticamente pode causaram a morte se fosse mais grave),

[00690] - Requer internação hospitalar ou resulta no prolongamento da hospitalização existente,

[00691] - Resulta em deficiência/incapacidade persistente ou significativa, permanente ou significativa (se transitória) e interrupção substancial de sua capacidade de realizar as funções normais da vida. A deficiência não se destina a incluir experiências de significado relativamente pequeno, tais como dor de cabeça, náuseas, vômitos ou pequenos traumas acidentais,

[00692] - É uma anomalia congênita/defeito de nascença, uma anomalia fetal ou qualquer anomalia que resulta em perda fetal,

[00693] - É um evento ou reação importante do ponto de vista médico. O julgamento médico e científico deve ser exercido para decidir se outras situações devem ser consideradas graves, tais como eventos médicos importantes que podem não ser imediatamente fatais ou resultar em morte ou hospitalização, mas podem colocar o participante em risco ou exigir intervenção para prevenir um dos outros resultados listados na definição acima. O investigador é responsável por avaliar AEs clinicamente importantes como AEs graves (AEGs). Exemplos: tratamento intensivo em um pronto-socorro ou em casa para broncoespasmo alérgico; discrasias sanguíneas sem hospitalização; aumento de ALT assintomático acima de 10 x ULN sem hospitalização).

[00694] Um Evento Adverso Emergente do Tratamento (TAEE) é definido como um AE que é relatado durante o período de tratamento até 30 dias após a última dose das intervenções do estudo.

[00695] Evento Adverso Relacionado: há uma possibilidade razoável de acordo com os estudos patrocinados pelo investigador (ISS) de que o produto possa ter causado o evento. A causalidade do SAE (ou seja, sua relação com a intervenção do estudo) será avaliada pelo médico que está preenchendo o CRF. Para fins de relatórios regulamentais, se a relação for desconhecida ou não declarada, ela atende à definição de uma reação adversa ao medicamento (associação suspeita - ADR).

[00696] Evento Adverso Relacionado ao Sistema Imune (ir-AE): um subconjunto de eventos adversos relacionados ao tratamento é definido como um evento adverso clinicamente significativo de qualquer órgão que está associado à terapia de base imune (por exemplo, exposição ao inibidor do ponto de verificação imune), de etiologia desconhecida e é consistente com um mecanismo imunomediado.

[00697] Evento Adverso de Interesse Especial (AESI): um evento adverso (grave ou não grave) de preocupação científica e médica específica para o produto ou programa do Patrocinador, para o qual o monitoramento contínuo e a comunicação rápida do Investigador ao Patrocinador podem ser apropriado. Tais eventos podem requerer investigação adicional a fim de caracterizá-los e entendê-los. Os AESIs podem ser adicionados ou removidos durante um estudo por meio de emendas ao protocolo.

[00698] Novo achado de segurança: qualquer achado diferente do relatório de segurança de caso individual relatável (ICSR) ou problema de segurança que pode impactar a proporção risco/benefício conhecida ou o perfil de segurança do produto.

[00699] AE/SAE esperado: A determinação da expectativa sob uma indicação e regime aprovado do produto deve ser determinada com base no rótulo local (se disponível) ou no EU Summary of Product Characteristics (SmPC). Quando o produto é administrado em qualquer combinação/regime não aprovado ou para uma indicação/população não aprovada ou uma dosagem não aprovada, a determinação da expectativa deve ser com base no IB (considere a rotulagem de cada medicamento específico comercializado dentro da combinação, com base em documentos de referência, conforme definido no protocolo do estudo).

[00700] Suspeita de reação adversa grave inesperada (SUSAR): A causalidade, a gravidade e a previsibilidade são critérios independentes. É uma combinação que define a notificação rápida às autoridades sanitárias.

[00701] Eventos que atendem à definição AE:

[00702] ● Quaisquer resultados de testes laboratoriais anormais (por exemplo, hematologia, química clínica ou urinálise) ou outras avaliações de segurança (por exemplo, ECG, varreduras radiológicas, medições de sinais vitais), incluindo aqueles que pioram desde a linha de base, considerados clinicamente significativos ao julgamento médico e científico do investigador (ou seja, não relacionado à progressão da doença subjacente).

[00703] ● Exacerbação de uma condição pré-existente crônica ou intermitente, incluindo um aumento na frequência e/ou intensidade da condição.

[00704] ● Novas condições detectadas ou diagnosticadas após a administração da intervenção do estudo, embora possam estar presentes antes do início do estudo.

[00705] ● Sinais, sintomas ou sequelas clínicas de uma suspeita de interação medicamentosa.

[00706] ● Sinais, sintomas ou sequelas clínicas de uma sobredosagem suspeita de qualquer intervenção do estudo ou medicação concomitante. Eventos que NÃO atendem à definição de AE:

[00707] ● A doença/transtorno sob estudo ou progressão, sinais ou sintomas esperados da doença/transtorno sob estudo, a menos que seja mais grave do que o esperado para a condição do participante.

[00708] ● Procedimento médico ou cirúrgico (por exemplo, endoscopia, apendicectomia): a condição que leva ao procedimento é o AE.

[00709] ● Situações em que não ocorreu uma ocorrência médica desagradável (internação social e/ou de conveniência em um hospital).

[00710] ● Flutuações diárias antecipadas de doenças ou condições pré-existentes presentes ou detectadas no início do estudo que não pioram

[00711] Se um evento não for um AE pela definição acima, então, não pode ser um SAE, mesmo se condições graves forem atendidas (por exemplo, hospitalização por sinais/sintomas da doença sob estudo, morte em virtude de progressão da doença). REGISTRO E ACOMPANHAMENTO DE AE E/OU SAE Registro de AE e SAE

[00712] Quando ocorre um AE/SAE, toda a documentação (por exemplo, notas de progresso do hospital, relatórios de laboratório e relatórios de diagnóstico) relacionada ao evento é revisada e todas as informações relevantes de AE/SAE no eCRF são registradas. Pode haver casos em que cópias de registros médicos para determinados casos sejam solicitadas pelo Patrocinador. Neste caso, todos os identificadores dos participantes, com exceção do número do participante, são redigidos nas cópias dos prontuários antes do envio ao Patrocinador. O investigador tenta estabelecer um diagnóstico do evento com base em sinais, sintomas e/ou outras informações clínicas. Sempre que possível, o diagnóstico (não os sinais/sintomas individuais) é documentado como AE/SAE. Avaliação de Intensidade

[00713] A intensidade de AE/SAE é avaliada com base no NCI CTCAE versão 5.0. Avaliação de Causalidade

[00714] O investigador é obrigado a avaliar a relação entre a intervenção do estudo e cada ocorrência de cada AE/SAE. Uma "possibilidade razoável" de uma relação transmite que existem fatos,

evidências e/ou argumentos para sugerir uma relação causal, ao invés de uma relação que não pode ser descartada. O investigador usa o julgamento clínico para determinar a relação. Causas alternativas, tais como doença(s) subjacente(s), terapia concomitante e outros fatores de risco, bem como a relação temporal do evento com a administração da intervenção do estudo, serão consideradas e investigadas. O Investigador também consulta a Brochura do Investigador (IB) e/ou Informações do Produto, para produtos comercializados, em sua avaliação.

[00715] Para cada AE/SAE, o Investigador deve documentar nas notas médicas que ele revisou sobre o AE/SAE e fornecer uma avaliação de causalidade. Pode haver situações em que tenha ocorrido um SAE e o Investigador tenha informações mínimas para incluir no relatório inicial ao Patrocinador. No entanto, é muito importante que o Investigador sempre avalie a causalidade para cada evento antes da transmissão inicial dos dados SAE ao Patrocinador. O Investigador pode mudar sua opinião de causalidade à luz das informações de acompanhamento e enviar um relatório de acompanhamento de SAE com a avaliação de causalidade atualizada. Acompanhamento de AEs e SAEs

[00716] O Investigador é obrigado a realizar ou providenciar a realização de medições e/ou avaliações suplementares conforme indicação médica ou conforme solicitado pelo representante da equipe de monitoramento para elucidar a natureza e/ou causalidade do AE ou SAE tão completamente possível. Isto pode incluir exames laboratoriais ou investigações adicionais, exames histopatológicos ou consulta com outros profissionais de saúde. As informações novas ou atualizadas serão registradas no eCRF originalmente preenchido. RELATÓRIO DE SAEs

[00717] O relatório de SAE ao Patrocinador por meio de uma ferramenta eletrônica de coleta de dados. O principal mecanismo para relatar uma SAE ao Patrocinador é a ferramenta eletrônica de coleta de dados. Se o sistema eletrônico ficar indisponível por mais de 24 horas, o site usa a ferramenta de coleta de dados SAE em papel (consulte o mesmo). O site insere os dados SAE no sistema eletrônico assim que estiverem disponíveis. Após conclusão do estudo em um determinado local, a ferramenta eletrônica de coleta de dados é desligada para evitar a entrada de novos dados ou alterações nos dados existentes. Se um local receber um relatório de um novo SAE de um participante do estudo ou receber dados atualizados em um SAE relatado anteriormente após a ferramenta eletrônica de coleta de dados ter sido colocada off-line, o local pode relatar estas informações em um formulário de SAE em papel (consulte o mesmo a seguir) ou ao Patrocinador ou representante por fax. Relatório de SAE ao Patrocinador via CRF em Papel

[00718] A transmissão por fax do CRF de papel SAE é o método preferido para transmitir esta informação ao Patrocinador ou representante. Em raras circunstâncias e na ausência de equipamento de fax, a notificação por telefone é aceitável com uma cópia da ferramenta de coleta de dados de SAE enviada por correio noturno ou serviço de entrega rápida. A notificação inicial por telefone não substitui a necessidade de o Investigador preencher e assinar as páginas do SAE no CRF dentro dos prazos de relatórios designados. Exemplo 1.6A - Período de Tempo e Frequência Para Coleta de Informações sobre AE e SAE

[00719] Todos os AEs (incluindo SAEs) são coletados desde a assinatura do ICF até a EOT nos pontos de tempo especificados no SOA. Após a EOT, apenas eventos inesperados ou relacionados ao IMP (incluindo aqueles para os quais a relação com o IMP não é clara) são relatados.

[00720] Todos os SAEs e AESI são registrados e relatados ao Patrocinador ou pessoa designada dentro de 24 horas, conforme indicado abaixo. O Investigador envia quaisquer dados de SAE atualizados ao Patrocinador no prazo de 24 horas após sua disponibilização.

[00721] Os investigadores não são obrigados a buscar ativamente AE ou SAE após a conclusão da participação no estudo. No entanto, se o investigador souber de qualquer SAE, incluindo morte, a qualquer momento após um participante ter recebido alta do estudo e ele considerar que o evento está razoavelmente relacionado à intervenção do estudo ou à participação no estudo, o investigador deve notificar prontamente o Patrocinador.

[00722] O método de registro, avaliação e avaliação da causalidade de AE e SAE e os procedimentos para preencher e transmitir relatórios de SAE são fornecidos abaixo. Exemplo 1.6B - Método de Detecção de AEs e SAEs

[00723] Cuidado deve ser tomado para não introduzir tendência ao detectar AEs e/ou SAEs. O questionamento verbal aberto e não direcionado do participante é o método preferido para indagar sobre as ocorrências de AE. Exemplo 1.6C - Acompanhamento de AEs e SAEs

[00724] Após o relatório inicial de AE/SAE, o Investigador é obrigado a seguir proativamente cada participante nas visitas subsequentes. Após a EOT, durante o período de acompanhamento de segurança, os eventos a serem relatados, monitorados e acompanhados até a resolução ou estabilização são os seguintes:

[00725] ● Todos os AEs, SAEs ou eventos de interesse especial em andamento, independentemente da relação

[00726] Todos os novos AEs, SAEs ou Eventos de Interesse Especial considerados relacionados, incluindo mortes em virtude de eventos relacionados

[00727] ● Mais informações sobre os procedimentos de acompanhamento são fornecidas abaixo. Exemplo 1.6D - Eventos Relacionados à Doença e/ou Resultados Relacionados à Doença Não Qualificados como AEs ou SAEs

[00728] Os seguintes eventos relacionados à doença (DREs) são comuns em participantes com câncer e podem ser graves/fatais:

[00729] ● Progressão da doença subjacente, pois é o parâmetro do estudo.

[00730] ● Morte em virtude de progressão da doença subjacente, se ocorrer após 30 dias da última administração de IMP. Todas as mortes ocorridas nos 30 dias anteriores à última intervenção do estudo devem ser relatadas como SAE.

[00731] Uma vez que estes eventos estão, tipicamente, associados à doença sob estudo, eles não são relatados de acordo com o processo padrão para notificação acelerada de SAEs, embora o evento possa atender à definição de um SAE. Estes eventos são registrados na página correspondente no eCRF do participante dentro do prazo apropriado.

[00732] No entanto, se qualquer uma das seguintes condições se aplicar, então, o evento deve ser registrado e relatado como um SAE (em vez de um DRE): o evento é, na opinião do Investigador, de maior intensidade, frequência ou duração do que o esperado para o participante individual; ou o investigador considera que existe uma possibilidade razoável de que o evento estava relacionado à intervenção do estudo. Gravidez:

[00733] Detalhes de todas as gestações em participantes do sexo feminino e, se indicado, parceiras de participantes do sexo masculino, serão coletados após o início da intervenção do estudo e pelo menos 6 meses após a última dose da intervenção do estudo.

[00734] Se uma gravidez for relatada, o Investigador informa o Patrocinador dentro de 24 horas após saber da gravidez. Os resultados anormais da gravidez (por exemplo, aborto espontâneo, morte fetal, natimorto, anomalias congênitas, gravidez ectópica) são considerados SAEs. O acompanhamento da gravidez descreve o resultado da gravidez, incluindo qualquer interrupção voluntária ou espontânea, detalhes do nascimento, a presença ou ausência de quaisquer anomalias congênitas, defeitos de nascença, complicações maternas ou neonatais e sua relação presumida com o medicamento sob estudo. Exemplo 1.7 - Farmacocinética Exemplo 1.7A - Tempo de Amostragem

[00735] Os seguintes pontos de coleta de sangue são definidos para medir as concentrações de citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocina no plasma e conduzir a análise de PK:

[00736] Os tempos de amostragem para coleta de sangue podem ser encontrados no fluxograma PK/PDy (Tabela 3). É de extrema importância coletar todas as amostras de sangue nos horários especificados e de acordo com as especificações.

[00737] As amostras perdidas ou esquecidas por qualquer motivo são registradas. Os tempos reais de coleta de sangue são registrados no eCRF. As datas e horários de amostragem e administração de medicamentos também são registrados com precisão. Exemplo 1.7B - Método Bioanalítico

[00738] Os métodos bioanalíticos são resumidos na Tabela 10. Resumidamente, os níveis sistêmicos das quatro citocinas alvo (IL- 12sc, IL-15 sushi, GM-CSF e IFNα2b) traduzidas a partir da mistura de RNAs de citocina no plasma são monitorados retrospectivamente em cada coorte de participantes. Estes ensaios de citocinas (IL-12sc, GM- CSF, IFNα e IL-15 sushi) são realizados nas plataformas MSD ou

Quanterix SIMOA com base nas necessidades de sensibilidade de detecção. Tabela 10 - Métodos bioanalíticos para citocinas codificadas pela análise farmacocinética da mistura de RNAs de citocinas Analito IL-15sushi IL-12sc GM-CSF IFNα2b Matriz Plasma Plasma Plasma Plasma Ensaio de Ensaio de Ensaio de Ensaio de citocinas citocinas citocinas citocinas Técnica individuais ou individuais ou individuais ou individuais ou analítica multiplexadas multiplexadas multiplexadas multiplexadas em MSD ou em MSD ou em MSD ou em MSD ou similar similar similar similar Exemplo 1.7C - Parâmetros PK

[00739] Os parâmetros farmacocinéticos são calculados com o software PKDMS (Pharsight), usando métodos não compartimentais, a partir de concentrações plasmáticas de citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocinas. Os parâmetros incluem, porém sem limitações, o seguinte: Tabela 11 - Lista de parâmetros farmacocinéticos e definições Parâmetros Analito Definição IL- IL- GM- IFNα2b 15sushi 12sc CSF Concentração plasmática máxima Cmax X X X X observada durante o intervalo de dosagem Tempo para atingir a tmax X X X X Cmax Última concentração observada acima do Cúltimo X X X X limite mínimo de quantificação durante o intervalo de dosagem túltimo X X X X Tempo de Cúltimo

Parâmetros Analito Definição IL- IL- GM- IFNα2b 15sushi 12sc CSF Concentração plasmática observada imediatamente antes de Csérico X X X X administração do tratamento durante dosagem repetida Área sob a curva de concentração plasmática em função do tempo calculada AUC0-7d X X X X usando o método trapezoidal ao longo do intervalo de dosagem (7 dias)

[00740] Abordagens de PK de população podem ser usadas para citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocina. Se feito, os dados gerados são relatados em relatório(s) independente(s). Exemplo 1.8 - Farmacodinâmica

[00741] O envolvimento do alvo, PDy e biomarcadores de segurança da mistura de RNAs de citocina são importantes para o escalonamento de dose e o sucesso do ensaio PoC. Biomarcadores quantitativos ou semiquantitativos podem ajudar a estabelecer a correlação do nível de dose com a expressão alvo, PDy e parâmetros PK e auxiliar na determinação da MTD/MAD. Os biomarcadores para o programa de mistura de RNAs de citocinas podem ser amplamente classificados em expressão alvo em circulação, PDy/marcadores de segurança e marcadores PDy derivados de tecido.

[00742] Quando possível, a coleta de amostra PDy coincide com a amostragem PK programada. Exemplo 1.8A - Envolvimento do Alvo em Circulação e Plano de Monitoramento de Biomarcador de Segurança

[00743] Níveis sistêmicos das quatro citocinas alvo (IL-12sc, IL- 15sushi, GM-CSF e IFNα2b) traduzidos a partir da mistura de RNAs de citocina e seus alvos PDy a jusante (IFNγ e proteína 10 induzida por

IFNγ [IP10]) no plasma são monitorados retrospectivamente em cada coorte de participantes.

[00744] Os biomarcadores de segurança CRP e ferritina são usados juntamente com parâmetros clínicos (por exemplo, febre, náusea, fadiga, dor de cabeça, mialgias, mal-estar, hipóxia, hipotensão) para auxiliar na identificação de AEs clínicos. Amostras de plasma são coletadas para monitoramento de CRS secundária. Um painel de 6 citocinas (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10 e TNFα) é avaliado retrospectivamente durante a condução do estudo apenas em caso de desenvolvimento de sintomas de CRS de Grau ≥ 2. Exemplo 1.8B - Biópsia de Tumor Para Avaliação Imune

[00745] Biópsias de tumor obrigatórias são coletadas antes da primeira administração de IMP, entre as semanas 5 e 8 e no Ciclo 6 ou após a progressão da doença (o que ocorrer primeiro). Para espécimes de biópsia em tratamento (ou seja, um na semana 5 - 8 e o outro no Ciclo 6 ou no momento da progressão da doença), é necessário obter espécimes de biópsia de lesões injetadas e não injetadas. De preferência, uma das lesões a ser biopsiada durante o tratamento deve ser aquela que foi biopsiada no início do estudo. Se isso não for viável, uma amostra de tecido de outra lesão injetada pode ser considerada. Se houver uma limitação de lesões a serem biopsiadas, então, a biópsia apenas da lesão não injetada pode ser considerada se outra amostra do mesmo local tiver sido coletada anteriormente ou puder ser coletada no ponto de tempo de amostragem seguinte.

[00746] As biópsias de todos os participantes são submetidas à coloração com hematoxilina e eosina e IHC padrão para CD3, CD8 e células tumorais serão determinadas por marcadores SOX10 (para melanoma) ou pancitoqueratina ([CK] para pacientes com tumores epiteliais HNSCC e CSCC) e linfoma marcadores em relação ao tipo de tumor investigado; um subconjunto de biópsias de participantes (de respondentes e não respondedores) é submetido a um IHC multiplex de 12 marcadores, que consistirá em CD3, CD4, CD8, CD38, CD45, CD45RO, CD56, CD68, FoxP3, PD-1, PD-L1 e marcadores SOX10 ou PanCK ou linfoma. O IHC em biópsias pré e pós-tratamento é coletado e usado para avaliar as mudanças no microambiente tumoral, avaliando especificamente a frequência e a densidade das células T infiltrantes no tumor e no estroma. Aumentos nas células T entre pré e pós-biópsias são um correlato imunológico positivo usado para ajudar a definir a prova do mecanismo.

[00747] Para pacientes com melanoma apenas durante a monoterapia de expansão, uma única biópsia do núcleo do tumor realizada entre as semanas 5-8 será dedicada ao isolamento dos TILs. Isto será aplicado a um número limitado (por exemplo, não mais do que dez pacientes com isolamento de TILs bem-sucedido) de pacientes com melanoma selecionados. Esta não será uma biópsia adicional, mas em vez disso, a amostra dedicada à avaliação genômica será usada para isolamento de TILs (manipulado sob condições especiais - não fixado em formalina). Este tipo de amostra e teste é aplicado a pacientes com sinais clínicos de resposta ao tratamento (redução do tamanho do tumor e/ou vermelhidão no local do tumor) conforme determinado pelo investigador responsável pelo tratamento.

[00748] Transcriptômica de tumor (sequenciamento de RNA) e neo- antígenos também são analisados de acordo com a disponibilidade da amostra. Exemplo 1.9 - Genômica

[00749] Várias análises são conduzidas para analisar a genômica no contexto do tratamento, incluindo mutações somáticas e tipagem HLA em PBMCs; Sequenciamento de RNA (RNAseq) em tumores. Além disso, os dados de RNAseq do tumor (também planejados como parte da análise do biomarcador) são necessários para determinar as assinaturas gênicas, neoantígenos dentro do tumor, TMB e diversidade de TCR. A tipagem HLA será realizada no sangue. A participação nestas análises é obrigatória se houver material de amostra adequado disponível.

[00750] Neoantígenos são avaliados apenas em participantes com melanoma.

[00751] Em caso de falha na extração de DNA ou RNA, uma amostra de reposição (tumor ou sangue) é solicitada ao participante. O consentimento informado assinado é necessário para obter uma amostra de reposição, a menos que tenha sido incluída no consentimento original. Em caso de restrições de viabilidade no manuseio e envio de amostras, as amostras de centros clínicos relacionados não serão avaliadas para estas (ou algumas destas) análises. Exemplo 1.9A - Avaliações de Imunogenicidade

[00752] Os anticorpos para as citocinas codificadas por mistura de RNAs de citocina são avaliados em amostras de plasma coletadas de todos os participantes de acordo com o SOA. Além disso, as amostras de plasma também são coletadas na visita final dos participantes que descontinuaram a intervenção do estudo ou foram retirados do estudo. Estas amostras são testadas pelo Patrocinador ou pessoa designada pelo Patrocinador.

[00753] As amostras de plasma são rastreadas quanto a anticorpos que se ligam a cada uma das quatro citocinas expressas a partir da mistura de RNAs de citocinas e a titulação de amostras positivas confirmadas é relatada. Outras análises são realizadas para caracterizar ainda mais a imunogenicidade da mistura de RNAs de citocina.

[00754] A detecção e caracterização de anticorpos para a mistura de RNAs de citocina são realizadas usando um método de ensaio validado por ou sob a supervisão do Patrocinador. Os anticorpos são ainda caracterizados e/ou avaliados quanto à sua capacidade de neutralizar a atividade da intervenção do estudo. As amostras são armazenadas por um máximo de 5 anos (ou de acordo com os regulamentos locais) após a última visita do último participante para o estudo em uma instalação selecionada pelo Patrocinador para permitir uma análise mais aprofundada das respostas imunes à mistura de RNAs de citocina. Exemplo 1.9B - Pesquisa de Transcriptoma de RNA

[00755] Estudos exploratórios de transcriptoma são conduzidos usando microarranjo e/ou tecnologias equivalentes alternativas, o que facilita a medição simultânea das abundâncias relativas de milhares de espécies de RNA, resultando em um perfil de transcriptoma para cada amostra de biópsia de tecido. O tecido tumoral remanescente após IHC é indivíduo a análise de sequenciamento de RNA para avaliar as mudanças globais de expressão gênica dentro do ambiente tumoral, em particular procurando o desenvolvimento de assinaturas de genes pró- inflamatórios e/ou IFNγ. Isso permite a avaliação das mudanças nos perfis do transcriptoma que se correlacionam com uma resposta imune adaptativa relacionada à ação da mistura de RNAs de citocinas.

[00756] As mesmas amostras também são usadas para confirmar as descobertas pela aplicação de tecnologias alternativas. Exemplo 1.10 - Considerações Estatísticas Exemplo 1.10A - Hipóteses Estatísticas Escalonamento de Dose

[00757] Não há hipótese estatística formal na parte de escalonamento de dose deste estudo. Este estudo tem como objetivo estabelecer a MTD ou MAD da mistura de RNAs de citocinas de acordo com os DLTs observados. O escalonamento de dose prossegue usando um escalonamento de dose de um único participante para os dois primeiros DLs seguido por um design racional.

Expansão de Dose

[00758] A hipótese nula é que a verdadeira ORR de acordo com o RECIST 1.1 é ≤ 10 % e a hipótese alternativa é que a verdadeira ORR de acordo com o RECIST 1.1 é ≥ 26 %. Exemplo 1.10B - Determinação de Tamanho da Amostra Fase de escalonamento de Dose

[00759] Não há cálculo formal do tamanho da amostra na fase de escalonamento de dose. Aproximadamente 38 participantes com DLT avaliável são inscritos na fase de escalonamento de dose com avaliação de cerca de 8 DLs. O tamanho real da amostra varia dependendo das DLTs observadas e do número de níveis de dose realmente explorados. Fase de Expansão de Dose

[00760] Um design racional é usado na fase de Expansão de Dose. A hipótese nula de que a taxa de resposta verdadeira é de 10 % é testada contra uma alternativa unilateral. Na primeira etapa, são contabilizados 16 participantes. Se houver 1 ou menos respostas, de acordo com os critérios RECIST 1.1, nestes 16 participantes, o estudo é interrompido. Caso contrário, 18 participantes adicionais são acumulados para um total de 34. A hipótese nula é rejeitada se 7 ou mais respostas são observadas em 34 participantes com melanoma avançado que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com base em anti-PD-1 ou anti-PD-L1. Este design produz uma taxa de erro de tipo I unilateral de 5 % e potência de 80 % quando a taxa de resposta verdadeira é de 26 %. Exemplo 1.10C - Populações para Análises

[00761] Para fins de análise, as seguintes populações são definidas, conforme mostrado na Tabela 12: Tabela 12 - Populações para análises População Descrição Todos tratados Tanto para a fase de escalonamento como expansão de dose do estudo, toda a população tratada incluirá todos os participantes que deram seu consentimento informado e receberam pelo menos uma dose (mesmo incompleta) de tratamento com a mistura de RNAs de citocina. Esta população é a população primária para as análises de parâmetros de eficácia e segurança. Todas as análises usando esta população serão com base no nível de dose realmente recebido no primeiro ciclo. DLT avaliável (fase de escalonamento de dose) - A população avaliável de DLT é definida como participantes na fase de escalonamento de dose que recebem pelo DLT avaliável (fase menos 70 % das doses planejadas da mistura de RNAs de de escalonamento citocina durante os primeiros 28 dias de tratamento e que concluíram o período de observação de DLT após a de dose) primeira administração de IMP, a menos que descontinuem a(s) intervenção(ões) do estudo em virtude de DLT. A dose recomendada para a fase de Expansão de Dose será determinada com base na população avaliada por DLT. A população de PK incluirá todos os participantes de toda a PK população tratada com pelo menos 1 citocina mensurável codificada pela concentração da mistura de RNAs de citocina após a primeira dose da intervenção do estudo. A população farmacodinâmica incluirá todos os PDy participantes de toda a população tratada com pelo menos 1 resultado de marcador farmacodinâmico após a primeira dose da intervenção do estudo. A população com ADA avaliável inclui todos os ADA avaliável participantes de toda a população tratada com pelo menos 1 resultado de ADA não ausente após a primeira dose da intervenção do estudo. A população de segurança é igual a todas as populações Segurança tratadas Exemplo 1.10D - Análises Estatísticas Análises de Eficácia

[00762] Taxa de resposta objetiva (ORR) de acordo com o RECIST

1.1 com base em lesões pré-selecionadas, incluindo lesões injetadas e não injetadas, são resumidas com estatísticas descritivas. Um intervalo de confiança bilateral de 90 % é calculado usando o método de Clopper- Pearson. A inferência estatística é com base na hipótese e no nível alfa definido na seção de cálculo do tamanho da amostra. Uma análise similar é fornecida para a DCR de acordo com o RECIST 1.1 e iRECIST e a ORR pelo iRECIST. Além disso, um resumo da alteração da carga tumoral é fornecido para lesões injetadas e não injetadas separadamente como uma análise de suporte. DoR e PFS são resumidos usando o método de Kaplan-Meier.

Tabela 13 - Análise de eficácia Parâmetro Métodos de Análise Estatística Primário Expansão de Dose: ORR de Estatística descritiva e método de Clopper- acordo com o RECIST 1.1 Pearson Secundário Expansão de Dose: DoR e PFS Método de Kaplan-Meier de acordo com o RECIST 1.1 e iRECIST Expansão de Dose: DCR de Estatística descritiva e método de Clopper- acordo com o RECIST 1.1 e Pearson iRECIST, e ORR pelo iRECIST Será descrito no plano de análise estatística Exploratório finalizado antes de bloqueio do banco de dados Análises de Segurança

[00763] Todas as análises de segurança serão realizadas na população totalmente tratada. Tabela 14 - Análises de segurança Métodos de Análise Parâmetro Estatística Primário Escalonamento de dose: DLTs Estatística descritiva Escalonamento de dose: AEs/SAEs e Estatística descritiva anormalidades laboratoriais Secundário Escalonamento de dose: Imunogenicidade Estatística descritiva Expansão de dose: Imunogenicidade Estatística descritiva Expansão de dose: AEs/SAEs e anormalidades Estatística descritiva laboratoriais Toxicidades Limitantes de Dose

[00764] Na fase de escalonamento de dose, as DLTs são resumidas por nível de dose. Os detalhes das DLTs são fornecidos pelo participante. DLTs são definidas usando NCI CTCAE versão 5.0, conforme descrito acima. Análises de Eventos Adversos

[00765] O período de observação é dividido em 3 segmentos: triagem, TAEE e pós-tratamento. O período de triagem é definido como o tempo que o consentimento informado é assinado até a administração da primeira dose da intervenção do estudo. O período de evento adverso emergente do tratamento (TAEE) é definido como o tempo desde a primeira dose das intervenções do estudo até 30 dias após a última dose das intervenções do estudo. O período de pós-tratamento é definido como o tempo que começa 31 dias após a última dose das intervenções do estudo para o encerramento do estudo ou morte, o que ocorrer primeiro.

[00766] AEs pré-tratamento são definidos como qualquer AE durante o período de triagem. AEs emergentes do tratamento são definidos como AEs que se desenvolvem, pioram (de acordo com a opinião do investigador) ou se tornam graves durante o período TAEE. AEs pós- tratamento são definidos como AEs que são relatados durante o período pós-tratamento. O foco principal dos relatórios de AE são os TAEEs. Os AEs pré- e pós-tratamento são descritos separadamente.

[00767] Os TAEEs são codificados de acordo com o Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA). Os AEs são classificados de acordo com o NCI CTCAE versão 5.0. A nota é considerada no resumo. Para participantes com múltiplas ocorrências do mesmo termo preferencial (PT), a nota máxima é usada.

[00768] Um resumo geral de TAEEs é fornecido. O número e a porcentagem de participantes que experimentam qualquer um dos seguintes são fornecidos:

 TAEEs.  TAEEs de Grau ≥ 3.  TAEEs de Grau 3 ou 4.  TAEE de Grau 5 (qualquer TAEE com resultado fatal durante o período de tratamento).  TAEEs graves.  TAEEs graves relacionados ao tratamento.  TAEE que leva à interrupção do tratamento.  AESIs.  TAEEs relacionados ao tratamento.  TAEEs relacionados ao tratamento de Grau ≥ 3.

[00769] O número e a porcentagem de participantes que experimentam TAEEs por classe de sistema primário de órgãos (SOC) e PT são resumidos pelo grau no NCI CTCAE (todos os graus e Grau ≥ 3). Tabelas similares são preparadas para TAEEs, AESIs, TAEEs relacionados ao tratamento que levam à descontinuação do tratamento, TAEEs que levam à modificação da dose, TAEEs graves, TAEEs com resultado fatal e AEs/SAEs que ocorrem durante o período de dosagem pós-tratamento. Avaliações Laboratoriais Clínicas

[00770] Os resultados laboratoriais clínicos são classificados de acordo com NCI CTCAE versão 5.0, quando aplicável. O número (%) de participantes com anormalidades laboratoriais (ou seja, todos os graus e Grau ≥ 3) usando o pior grau durante o período TAEE é fornecido para toda a população tratada.

[00771] Conforme explicado acima, nem todas as alterações transitórias nos valores laboratoriais com base no modo de ação são documentadas como TAEEs; o investigador avalia se uma alteração laboratorial é clinicamente relevante para documentá-la como um TAEE.

[00772] Quando a escala NCI CTCAE versão 5.0 não é aplicável, o número de participantes com anormalidade laboratorial fora do valor da faixa laboratorial normal é exibido. Exemplo 1.11 - Testes Laboratoriais Clínicos

[00773] Os testes detalhados nas Tabelas 14 e 15 são realizados e os resultados são inseridos no eCRF. Os requisitos específicos do protocolo para inclusão ou exclusão de participantes são detalhados no protocolo. Testes adicionais são realizados a qualquer momento durante o estudo, conforme determinado como necessário pelo investigador ou requerido pelos regulamentos locais. Os investigadores devem documentar sua revisão de cada relatório de segurança do laboratório. Tabela 15 - Avaliações laboratoriais de segurança requeridas pelo protocolo Avaliações Parâmetros laboratoriais Hematologia Contagem de plaquetas Contagem de Contagem de células sanguíneas vermelhas células sanguíneas (RBC) brancas (WBC) Hemoglobina com diferencial: Hematócrito Neutrófilos Linfócitos Monócitos Eosinófilos Basófilos Química Ureia ou Potássio Bicarbonato Fósforo clínica nitrogênio de ureia no sangue (BUN) Creatinina Sódio Magnésio Cloreto Glicose Cálcio total Fosfatase Bilirrubina Ácido úrico alcalina total e direta Aspartato Alanina Proteína Albumina aminotransferase aminotransferase total (AST)/ (ALT)/ transaminase transaminase glutâmica- glutâmica- oxaloacética pirúvica (SGPT) (SGOT) no soro no soro Lactato Amilase desidrogenase (LDH) Urinálise de ● Avaliação por tira medidora para: rotina - pH, glucose, proteína, sangue, cetonas através de tira medidora - Leucócitos e RBCs - Microalbumina ● Exame microscópico (se sangue ou proteína estiverem anormais) Outros testes ● Teste de gravidez de gonadotrofina coriônica humana (hCG) (conforme necessário para mulheres com potencial para engravidar) ● CRP, ferritina • Coagulação: tempo de trombina parcial ativada (aPTT), PT, proporção normalizada internacional (INR) e fibrinogênio Testes de ● Sorologia (antígeno na superfície da hepatite B [HBsAg], triagem anticorpo do núcleo da hepatite [HBcAb], anticorpo do vírus da hepatite C, RNA do HCV e, apenas para participantes em centros de estudo na Alemanha, anticorpos ao HIV) • Coagulação: D-dímero

NOTAS : a Detalhes dos critérios da química de insuficiência hepática e ações necessárias e avaliações de acompanhamento após insuficiência hepática ou evento de monitoramento são fornecidos abaixo.

Todos os eventos de ALT 3 × limite máximo do normal (ULN) e bilirrubina 2 × ULN ( > 35 % de bilirrubina direta) ou ALT 3 × ULN e proporção normalizada internacional (INR) > 1,5, se INR medido, o que pode indicar grave lesão hepática (possível Lei de Hy) devem ser relatados como SAE.

Tabela 16 - Avaliações requeridas pelo protocolo Avaliações Parâmetros laboratoriais Citocinas IL-6 IL-1β IL-2 IL-8 secundárias no IL-10 TNFα plasma PK de citocinas IL-12sc IFNα IL-15sushi GM-CSF (Expressão das citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocina) PDy de citocinas IP-10 IFNγ Avaliação PDy de Respostas de células T Fenótipo de HLA células T específicas CD4/CD8 contra antígenos para antígeno associados a melanoma bem expressos Imunogenicidade Anticorpos contra citocinas codificadas pela mistura de RNAs de citocina (isto é, ADAs contra IL-12sc, IFNα, IL- 15sushi e GM-CSF) Biópsia de tumor IHC padrão (todos os IHC Multiplex (subconjunto para avaliação imune participantes) de participantes) CD3 CD8 SOX10 oi CD3 CD4 CD8 CK CD38 CD45 CD45RO CD56 CD68 FoxP3 PD-1 PD- SOX10 or L1 CK Biomarcador na KIM-1 creatinina urinária microalbumina urinária urina Exemplo 1.12 - Orientação Contraceptiva e Coleta de Gravidez

INFORMAÇÕES

[00774] Mulher com potencial para engravidar (WOCBP): Uma mulher com potencial para engravidar é uma mulher que:

[00775] 1. atingiu a menarca em algum momento,

[00776] 2. não sofreu histerectomia ou ooforectomia bilateral, ou

[00777] 3. não esteve naturalmente na pós-menopausa (amenorreia após terapia do câncer não descarta potencial para engravidar) por pelo menos 24 meses consecutivos (ou seja, teve menstruação em qualquer hora em mais de 24 meses consecutivos).

ORIENTAÇÃO CONTRACEPTIVA

[00778] ● Participantes masculinos

[00779] o Participantes do sexo masculino com parceiras com potencial para engravidar são elegíveis para participar se concordarem com UM dos seguintes durante o período de intervenção e por 6 meses após a última dose da intervenção do estudo:

[00780] ■ Abster-se de relações sexuais penianas-vaginais como seu estilo de vida habitual e preferido (abstinência a longo prazo e persistente) e concordam em permanecer abstinentes

[00781] ■ o Concordar em usar um preservativo masculino mais o uso de um método contraceptivo pelo parceiro com uma taxa de falha de < 1 % ao ano, conforme descrito abaixo, quando tiver relação sexual peniana-vaginal com uma mulher em idade fértil que não está grávida

[00782] o Além disso, os participantes do sexo masculino devem abster-se de doar esperma durante o estudo e por 6 meses após a última dose da intervenção do estudo

[00783] o Os participantes do sexo masculino com uma parceira grávida ou amamentando devem concordar em permanecer abstinentes de relações sexuais penianas-vaginais ou usar um preservativo masculino durante cada episódio de penetração peniana durante o período de intervenção e por 6 meses após a última dose da intervenção do estudo.

[00784] ●Participantes do sexo feminino

[00785] o Participantes do sexo feminino com potencial para engravidar são elegíveis para participar se concordarem em usar um método anticoncepcional altamente eficaz de forma consistente e correta, conforme descrito abaixo:

[00786] Métodos anticoncepcionais altamente eficazes que são dependentes do usuário: Taxa de falha de < 1% ao ano quando usados de forma consistente e correta.

[00787] i) Contracepção hormonal combinada (contendo estrogênio e progestogênio) associada à inibição da ovulação: Oral, Intravaginal ou Transdérmica

[00788] ii) Progestogênio apenas contracepção hormonal associada à inibição da ovulação: oral ou injetável Métodos altamente eficazes que são independentes do usuário:

[00789] iii) Contracepção hormonal apenas com progestagênio implantável associada à inibição da ovulação: dispositivo intrauterino (DIU), sistema de liberação de hormônio intrauterino (SIU) ou oclusão tubária bilateral

[00790] Parceiro vasectomizado: Um parceiro vasectomizado é um método de contracepção altamente eficaz, desde que o parceiro seja o único parceiro sexual masculino do WOCBP e a ausência de espermatozoides tenha sido confirmada. Caso contrário, um método anticoncepcional altamente eficaz adicional é usado.

[00791] Abstinência sexual: A abstinência sexual é considerada um método altamente eficaz apenas se definida como abster-se de relações heterossexuais durante todo o período de risco associado à intervenção do estudo. A confiabilidade da abstinência sexual é avaliada em relação à duração do estudo e ao estilo de vida preferido e usual do participante.

[00792] NOTAS: As taxas de falha de uso típicas podem diferir daquelas quando usadas de forma consistente e correta. O uso deve ser consistente com os regulamentos locais em relação ao uso de métodos anticoncepcionais para participantes de estudos clínicos. A contracepção hormonal pode ser suscetível à interação com a intervenção do estudo, o que pode reduzir a eficácia do método anticoncepcional. Neste caso, dois métodos anticoncepcionais altamente eficazes são usados durante o período de intervenção e durante pelo menos 6 meses após a última dose da intervenção do estudo. A contracepção hormonal oral pode ser suscetível à interação com a intervenção do estudo, o que pode reduzir a eficácia do método anticoncepcional. Neste caso, se o contraceptivo oral não puder ser substituído por outro método de contracepção altamente eficaz com uma via de administração diferente, o método de contracepção hormonal deve ser complementado com um preservativo masculino (para parceiro) durante o período de intervenção e durante pelo menos 6 meses após a última dose da intervenção do estudo. TESTE DE GRAVIDEZ:

[00793] WOCBP é incluído apenas após um período menstrual confirmado e um teste de gravidez de soro altamente sensível negativo. Testes de gravidez adicionais são realizados no início de cada ciclo de tratamento durante o período de intervenção e no EOT. O teste de gravidez é realizado sempre que um ciclo menstrual é interrompido ou quando há outra suspeita de gravidez. O teste de gravidez é realizado de acordo com o procedimento do laboratório local. Qualquer participante do sexo feminino que engravidar durante a participação no estudo deve descontinuar a intervenção do estudo e será retirada do estudo. COLETA DE INFORMAÇÕES SOBRE GRAVIDEZ:

[00794] Participantes do sexo masculino com parceiras que engravidam - O investigador tenta coletar informações sobre a gravidez de qualquer parceira do sexo masculino que engravida enquanto o participante do sexo masculino está neste estudo. Isto se aplica apenas a participantes do sexo masculino que recebem a mistura de RNAs de citocina. Depois de obter o consentimento informado assinado necessário diretamente da parceira grávida, o Investigador registra as informações sobre a gravidez no formulário apropriado e o envia ao Patrocinador no prazo de 24 horas após saber da gravidez da parceira. A parceira também é acompanhada para determinar o resultado da gravidez. Informações sobre a situação da mãe e do filho é encaminhada ao Patrocinador. Geralmente, o acompanhamento não será mais do que 6 a 8 semanas após a data de parto estimada. Qualquer interrupção da gravidez será comunicada independentemente do estado fetal (presença ou ausência de anomalias) ou indicação do procedimento.

[00795] Participantes do sexo feminino que engravidam - O investigador coleta informações sobre a gravidez de qualquer participante do sexo feminino que engravida durante a participação neste estudo. As informações são registradas no formulário apropriado e enviadas ao Patrocinador dentro de 24 horas após o conhecimento da gravidez de uma participante. O participante é acompanhado para determinar o resultado da gravidez. O Investigador coletará informações de acompanhamento do participante e do neonato e as informações serão encaminhadas ao Patrocinador. Geralmente, o acompanhamento não é necessário por mais de 6 a 8 semanas além da data de parto estimada. Qualquer interrupção da gravidez é relatada, independentemente do estado fetal (presença ou ausência de anomalias) ou da indicação do procedimento. Qualquer complicação ou interrupção eletiva da gravidez é relatada como um AE ou SAE. Um aborto espontâneo é sempre considerado um SAE e será relatado como tal. Qualquer SAE pós-estudo relacionado à gravidez considerado razoavelmente relacionado à intervenção do estudo pelo Investigador é relatado ao Patrocinador. Embora o investigador não seja obrigado a buscar ativamente estas informações com ex-participantes do estudo, ele pode tomar ciência de um SAE por meio de relato espontâneo.

[00796] Qualquer participante do sexo feminino que engravida enquanto participa do estudo interrompe a intervenção do estudo e é retirada do estudo. Exemplo 1.13 - Cuidados de suporte Recomendados ou Diretrizes de Modificação de Dose para Eventos Adversos Relacionados a Medicamentos Tabela 17 - Sistema de classificação e estratégia de mitigação para hipersensibilidade com base em CTCAE v. 5.0 Gravidade Grau de Toxicidade Intervenção acordo com CTCAE v.

5.0 Hipersensibilidade "reação Rubor ou erupção Intervenção sistêmica leve alérgica" de cutânea transitória, não indicada. Grau 1 febre < 38 °C (< Continue o 100,4 °F) tratamento de acordo com o julgamento do investigador, acompanhando de perto o monitoramento direto do participante. O tratamento pode ser interrompido a qualquer momento, se necessário. Intervenção não indicada, mas o tratamento pode ser retomado somente após a recuperação do participante e com monitoramento contínuo e cuidadoso.

Hipersensibilidade "reação Hipersensibilidade Pare o tratamento; moderada alérgica" de moderada de grau intervenção oral Grau 2 2 que responde profilática indicada prontamente ao por ≤ 24 horas (por tratamento exemplo, anti- sintomático histamínicos, AINEs). O tratamento pode ser retomado somente após a recuperação do participante, com monitoramento de perto e após avaliação pelo Comitê de Estudo.

Hipersensibilidade "reação Grau 3 - Descontinuação grave/risco de alérgica" de Broncoespasmo definitiva do vida Graus 3 & 4 sintomático, com tratamento ou sem urticária; (interromper o intervenção tratamento). parentérica Intervenção urgente indicada; indicada. edema/angioedema Hospitalização relacionado à indicada por alergia; hipotensão. sequelas clínicas.

Grau 4, além dos Indicada intervenção sintomas de Grau intravenosa. 3, tem Dê medicação consequências adicional com 25 mg potencialmente de difenidramina IV fatais. (ou equivalente) e/ou 100 mg de metilprednisolona IV (ou equivalente) e/ou epinefrina conforme necessário.

Hipersensibilidade "anafilaxias" Broncoespasmo Descontinuação grave/risco de de Graus 3 & sintomático, com definitiva do vida 4 ou sem urticária; tratamento intervenção (interromper o parenteral indicada; tratamento). edema/angioedema Intervenção urgente relacionado à indicada. alergia; hipotensão.

Dê medicação O grau 4 tem adicional com 25 mg consequências de difenidramina IV fatais. (ou equivalente) e/ou 100 mg de metilprednisolona IV (ou equivalente) e/ou epinefrina conforme necessário.

Sintomas, Classificação e Manejo de CRS Sinais e sintomas clínicos associados à CRS  Cardiovasculares: taquicardia, pressão de pulso aumentada, hipotensão, débito cardíaco aumentado (precoce), débito cardíaco potencialmente diminuído (tardio)  Coagulação: dímero-D elevado, hipofibrinogenemia ± sangramento  Gastrintestinais: náuseas, vômitos, diarreia  Gerais: febre ± calafrios, mal-estar, fadiga, anorexia, mialgia, artralgia, dor de cabeça  Hepáticos: transaminite, hiperbilirrubinemia  Neurológicos: cefaleia, alterações do estado mental, confusão, delírio, dificuldade em encontrar palavras ou afasia franca, alucinações, tremor, dismetria, marcha alterada, convulsões  Renais: azotemia  Respiratórios: taquipneia, hipoxemia  Pele: erupção cutânea

[00797] A classificação e manejo de CRS são fornecidos na Tabela

18. Tabela 18 - Sistema de classificação e estratégia de mitigação para CRS, com base nas diretrizes do Consenso de 2014 NCI Grau Toxicidade Intervenção • Febre com ou sem sintomas Cuidados de suporte vigilantes. constitucionais (náuseas, Avalie e trate a infecção se presente. Reanimação com fluidos. Grau 1 fadiga, cefaleia, mialgias, mal- • Fornecer antipiréticos e analgésicos, estar, sem complicações com se necessário risco de vida)

Grau Toxicidade Intervenção Necessidade de oxigênio < 40 Conforme para Grau 1, mas monitorar % FiO2 a função cardíaca e de outros órgãos Hipotensão responsiva a baixa de perto dose ou vasopressor único Considerar corticosteroides e/ou • Toxicidade de órgão de Grau terapia anti-IL6 para participantes com Grau 2 idade avançada ou múltiplas 2 comorbidades • A continuação da intervenção do estudo deve ser avaliada caso a caso pelo Comitê de Estudo Necessidade de oxigênio > 40 Conforme para o Grau 2, mas com a % FiO2 adição de corticosteroides e/ou Hipotensão responsiva a terapia anti-IL6 Grau 3 vasopressores em alta dose • Descontinuação definitiva do ou múltiplos tratamento (interromper o Toxicidade de órgão de grau 3 • Aumento de grau 4 em ALT tratamento) ou AST Sintomas de risco de vida Conforme para o Grau 2, mas com a Requisito de ventilação adição de corticosteroides e/ou mecânica terapia anti-IL6 Grau 4 • Toxicidade de órgão de grau • Descontinuação definitiva do 4, excluindo aumento de ALT tratamento (interromper o ou AST tratamento) Grau 5 Morte Orientação para Outros AEs

[00798] A Tabela 19A fornece diretrizes para o gerenciamento de uveíte; observe que todas as tentativas são feitas para descartar outras causas, como doença metastática, infecção ou outra doença ocular (por exemplo, glaucoma ou catarata).

[00799] A Tabela 19B fornece orientações e estratégias de cuidados de suporte para o gerenciamento de eventos adversos que são atribuídos à mistura de RNAs de citocina. Tabela 19A - Manejo de AE oftalmológica (uveíte)

O manejo da Uveíte dosagem Manejo da dosagem de CTCAE Ação e Diretrizes da mistura cemiplimabe v5.1 de citocinas Comece com lágrimas artificiais e encaminhe ao oftalmologista.

Grau 1 Continuar a imunoterapia (branda) Tratar com esteroides tópicos, como suspensão de acetato de prednisolona a 1 %. Retardar o tratamento até a Consultar recuperação para o Grau 1. oftalmologista urgente.

Interromper o tratamento se Tratamento orientado Grau 2 os sintomas persistirem pelo oftalmologista para Nenhuma apesar do tratamento com incluir corticosteroide (uveíte alteração terapia imunossupressora oftalmológico e anterior) na dose tópica e sem melhora para o sistêmico.

Grau 1 dentro do período de retratamento ou se requer tratamento sistêmico.

Consulta com oftalmologista urgente.

Tratamento orientado pelo oftalmologista para Grau ≥3 incluir corticosteroide Atrasar ou (uveíte omitir a oftalmológico e posterior Descontinuar o tratamento. sistêmico.

Quando os dose até ou pan- Grau ≤ 2 sintomas melhoram uveíte) para Grau ≤ 1, a redução dos esteroides é iniciada e continuada por não menos que 4 semanas.

Todas as tentativas são feitas para descartar outras causas, tais como doença metastática, infecção ou outra doença ocular (por exemplo, glaucoma ou catarata).

Tabela 19B - Orientação de cuidados de suporte para eventos adversos e modificações de dose Cuidados/Tratame Manejo de Descrição Gradação ntos de Suporte dosagem do IMP Tratamento dos Evitar injetar a sintomas (por mesma lesão se exemplo, dor, possível, caso eritema, inchaço, contrário, Grau 1 – 2 infecção bacteriana recuperação total é sobreposta)). necessária para Reações no injetar a mesma local de injeção lesão.

Intervenção cirúrgica Parar indicada. definitivamente o Grau 3-4 tratamento para eventos de Grau 3 ou 4. Teste de Schirmer na linha de base • Monitorar os Minimização participantes em cada visita quanto a sinais e sintomas oculares.

Consulta com Nenhuma Olho seco Grau 2 oftalmologista e modificação da (atrofia (Sintomático) tratamento multi- dose. agente. da glândula lacrimal) Consulta com Omitir a dose até a oftalmologista e recuperação para tratamento multi- Grau ≤1 agente. • Em caso de evento Grau 3 recorrente de Grau 3; descontinuação definitiva da administração da mistura de RNAs de citocina.

Cuidados/Tratame Manejo de Descrição Gradação ntos de Suporte dosagem do IMP Verificar novamente Suspender até a as enzimas recuperação para Grau 2 com hepáticas, bilirrubina Grau < 1. AST ou ALT > 3 e albumina a cada 3 a 5 x ULN ( > dias. 3,0 - 5,0 x linha Analisar os de base se a medicamentos linha de base foi potencialmente anormal) ou associados bilirrubina total > (estatinas, 1,5 a 3 x ULN ( antibióticos, > 1,5 - 3,0 x consumo de álcool, linha de base se etc.). a linha de base Sorologia viral. foi anormal) • Considerar exames de imagiologia da doença metastática.

Hepatite Conforme acima, Suspender o mas repetir os testes tratamento até das enzimas recuperação para hepáticas, bilirrubina Grau ≤ 1 ou valor Grau 3: AST ou e albumina basal.

ALT > 5,0 – 20,0 x ULN (> diariamente. • Se confirmado 5,0 – 20,0 x • Realizar USG com como relacionado ao linha de base se doppler.

IMP, a nova linha de base administração pode estivesse ser discutida pelo anormal) Comitê de Estudo.

Se evento G3 recorrente, descontinuação permanente.

Além do Grau 3: Descontinuar Grau 4 AST ou definitivamente a Consulta com ALT >20,0 x administração da hepatologista.

ULN ( >20,0 x mistura de RNAs de linha de base se • Considerar biópsia do fígado quando a citocinas. linha de base estivesse condição do anormal) participante for adequada.

O grupo vulnerável de inclui Lesão renal participantes com aguda diabetes mellitus, doença coronariana ou vascular Risco teórico: periférica Degeneração/re significativa, bem generação dos como aqueles que túbulos corticais recebem renais medicamentos nefrotóxicos.

A prevenção da necrose tubular aguda inclui manter a euvolemia, evitar medicamentos nefrotóxicos e apoiar a pressão arterial com vasopressores, se necessário.

Monitorar os participantes de perto quanto a sinais e sintomas de lesão renal; cuidados Minimização especiais são necessários para a população vulnerável (ou seja, participantes com diabetes mellitus, Aumento na doença coronariana Creatinina: ou vascular periférica significativa, bem como aqueles que recebem medicamentos nefrotóxicos.

Monitorar parâmetros químicos em tempo real; manter a euvolemia, evitando medicamentos nefrotóxicos e dando suporte à pressão arterial com vasopressores, se necessário. • Coletar amostras de urina para

Cuidados/Tratame Manejo de Descrição Gradação ntos de Suporte dosagem do IMP medição exploratória do biomarcador Kim- 1 retrospectivamente e em caso de aumento da creatinina ou outros sinais de lesão renal.

Se MDRD calculada Se MDRD calculada como TFG > 60 como TFG > 60 mL/min; nenhuma mL/min; nenhuma ação. modificação de Se TFG calculada dose. entre 40 - 60 Se TFG < 40 Grau 1 - mL/min, avaliar os mL/min, retardar o Creatinina > 1 – testes de urina de ciclo e considerar a 1,5 x linha de 24 horas (TFG, descontinuação da base; > ULN – proteína, eletrólitos). intervenção do 1,5 x ULN estudo se o evento Tratamento não melhorar com o sintomático tratamento conforme sintomático. mencionado acima.

Tratamento Retardar a mistura Grau 2 - sintomático de RNAs de Creatinina 1,5 - conforme citocinas e 3 x acima da mencionado acima. descontinuar linha de base; permanentemente >1,5 – 3,0 x se o evento persistir

ULN > 7 dias ou piorar.

Cuidados/Tratame Manejo de Descrição Gradação ntos de Suporte dosagem do IMP Grau 3: Hospitalização é Graus 3 - 4: Creatinina > 3 x indicada; diálises descontinuar a linha de base; > temporárias podem mistura de RNAs de 3,0 – 6,0 ULN ser consideradas citocina.

Grau 4: para equilibrar Creatinina > 6,0 fluidos e eletrólitos.

ULN Diálise indicada. (Se Se possível, biópsia consequências renal é com risco de recomendada para vida, relatar assegurar a como Lesão patogênese.

Renal Aguda de Grau 4) Exclusão de participantes com doença autoimune Minimização subjacente. • Monitorar os participantes quanto a sinais e sintomas Grau 1 Sem intervenção, Grau 1- Sem (assintomático, manejo sintomático. modificação da Eventos sorológico ou dose.

Imunomediados outra evidência (Classificação de doença de acordo com autoimune) a classificação Grau 2 Intervenção médica Grau 2- Sem NCI CTCAE (sintomas é indicada. modificação da v5.0 de cada moderados) dose. evento) Pulso com Grau 3 - Retardar a Pneumonia Grau 3 metilprednisolona a dose até que os Hipotireoidite (indicação de 1–2 mg/kg/dia em sintomas se intervenção caso de resolvam para um médica com envolvimento de evento de Grau ≤ 1; sintomas graves órgãos importantes descontinuação e/ou (por exemplo, definitiva se Grau 3 hospitalização) pneumonite); terapia deriva de eventos > imunossupressora omissão de 1 dose. adicional pode ser Descontinuação Grau 4 indicada. definitiva. (risco de vida)

Em uma tentativa de harmonizar o relato de reações tumorais locais em locais clínicos, quaisquer sinais locais de inflamação tumoral (tumores cutâneos, subcutâneos ou de linfonodos) em lesões injetadas e não injetadas após injeções intratumorais de mistura de mRNAs de citocina serão relatados usando o CTCAE versão 5.0 sob o termo: pele e tecido subcutâneo ou "reação no local da injeção".

Exemplo 1.14- Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos Versão 1.1 Mensurabilidade do Tumor na Linha de Base

[00800] Na linha de base, as lesões tumorais/linfonodos são categorizados como mensuráveis ou não mensuráveis como segue.

[00801] Lesões mensuráveis são medidas com precisão em pelo menos 1 dimensão (diâmetro mais longo no plano da medição a ser registrado) com um tamanho mínimo de:  10 mm por meio de tomografia computadorizada (espessura de corte de tomografia computadorizada não superior a 5 mm).  Medição por paquímetro de 10 mm através de exame clínico (as lesões que não podem ser medidas com precisão com paquímetros devem ser registradas como não mensuráveis).  20 mm através de radiografia do tórax.

[00802] Linfonodos malignos: Para ser considerado patologicamente aumentado e mensurável, um linfonodo deve ter ≥ 15 mm em eixo curto quando avaliado por meio de tomografia computadorizada (espessura de corte de tomografia computadorizada recomendada não superior a 5 mm). No início e no acompanhamento, apenas o eixo curto é medido e acompanhado.

[00803] Lesões não mensuráveis são todas as outras lesões, incluindo lesões pequenas (maior diâmetro < 10 mm ou linfonodos patológicos com ≥ 10 a < 15 mm de eixo curto), bem como lesões não mensuráveis. As lesões consideradas não mensuráveis incluem: doença leptomeníngea, ascite, derrame pleural ou pericárdico, doença inflamatória da mama, envolvimento linfangítico da pele ou pulmão, massas abdominais/organomegalia abdominal identificada por exame físico que não é mensurável por técnicas de imagiologia reprodutíveis. Considerações especiais em relação à mensurabilidade da lesão:

Lesões Ósseas:  Cintilografia óssea, tomografia por emissão de pósitrons ou chapas simples não são considerados técnicas de imagiologia adequadas para medir lesões ósseas. No entanto, estas técnicas podem ser usadas para confirmar a presença ou desaparecimento de lesões ósseas.  Lesões ósseas líticas ou lesões líticas-blásticas mistas, com componentes de tecido mole identificáveis, que podem ser avaliadas por técnicas de imagiologia transversal, como TC ou RNM, podem ser consideradas lesões mensuráveis se o componente de tecido mole atender à definição de mensurabilidade descrita acima.

[00804] Lesões ósseas blásticas não são mensuráveis. Lesões Císticas:  As lesões que atendem aos critérios para cistos simples definidos radiograficamente não são consideradas lesões malignas (nem mensuráveis nem não mensuráveis), pois são, por definição, cistos simples.  'Lesões císticas' que se acredita representar metástases císticas podem ser consideradas lesões mensuráveis, se atenderem à definição de mensurabilidade descrita acima. No entanto, se lesões não císticas estiverem presentes no mesmo paciente, elas são preferidas para seleção como lesões-alvo. Lesões com Tratamento Local Prévio:

[00805] Lesões tumorais situadas em uma área previamente irradiada ou em uma área submetida a outra terapia locorregional, geralmente não são consideradas mensuráveis, a menos que tenha sido demonstrada progressão na lesão. Método de Avaliação

[00806] Todas as medições são registradas em notação métrica, usando paquímetros se avaliados clinicamente. Todas as avaliações iniciais são realizadas o mais próximo possível do início do tratamento e nunca mais de 4 semanas antes do início do tratamento.

[00807] O mesmo método de avaliação e a mesma técnica são usados para caracterizar cada lesão identificada e relatada no início e durante o acompanhamento. A avaliação com base em imagens é sempre realizada em vez do exame clínico, a menos que as lesões que estão sendo acompanhadas não possam ser visualizadas, mas sejam avaliáveis por exame clínico.

[00808] Lesões Clínicas: As lesões clínicas só são consideradas mensuráveis quando são superficiais e ≥ 10 mm de diâmetro, conforme avaliado usando paquímetros. Para o caso de lesões cutâneas, sugere- se a documentação por fotografia colorida incluindo régua para estimar o tamanho da lesão. Conforme observado acima, quando as lesões podem ser avaliadas tanto por exame clínico quanto através de imagiologia, a avaliação por imagiologia é realizada por ser mais objetiva e pode ser revisada ao final do estudo.

[00809] Raios X de Tórax: TC de tórax é preferida em relação à radiografia de tórax, particularmente quando a progressão é um parâmetro importante, uma vez que a TC é mais sensível do que os raios X, particularmente na identificação de novas lesões. No entanto, as lesões na radiografia de tórax são consideradas mensuráveis se forem claramente definidas e circundadas por pulmão aerado.

[00810] CT, MRI: CT é o melhor método atualmente disponível e reproduzível para medir lesões selecionadas para avaliação de resposta. A mensurabilidade das lesões na TC é com base na suposição de que a espessura do corte da TC é de 5 mm ou menos. Quando as tomografias têm espessura de corte superior a 5 mm, o tamanho mínimo para uma lesão mensurável deve ter o dobro da espessura do corte.

[00811] Ultrassom: O ultrassom não é útil na avaliação do tamanho da lesão e não deve ser usado como um método de medição. Se novas lesões forem identificadas por ultrassom no decorrer do estudo, a confirmação por meio de tomografia computadorizada ou ressonância magnética é recomendada.

[00812] Endoscopia, Laparoscopia: O uso destas técnicas para avaliação objetiva do tumor não é recomendada.

[00813] Marcadores Tumorais: Os marcadores tumorais por si só não podem ser usados para avaliar a resposta tumoral objetiva.

[00814] Citologia, Histologia: Estas técnicas podem ser usadas para diferenciar entre PR e CR em casos raros, se requerido pelo protocolo.

[00815] Varreduras de FDG PET-CT/CT: Realizadas em pacientes com linfoma aproximadamente a cada 12 semanas para confirmar CR ou PD. Documentação de Linha de Base de Lesões "Alvo" e "Não Alvo"

[00816] Quando mais de 1 lesão mensurável está presente na linha de base, todas as lesões até um máximo de 5 lesões no total (e um máximo de 2 lesões por órgão) representativas de todos os órgãos envolvidos devem ser identificadas como lesões-alvo e serão registradas e medidas na linha de base.

[00817] Lesões-alvo são selecionadas com base em seu tamanho (lesões com o diâmetro mais longo), são representativas de todos os órgãos envolvidos e se prestam a medições repetidas reproduzíveis.

[00818] Os linfonodos merecem menção especial, uma vez que são estruturas anatômicas normais que podem ser visíveis por imagiologia, mesmo que não estejam envolvidos pelo tumor. Os nódulos patológicos que são definidos como mensuráveis e podem ser identificados como lesões-alvo devem atender ao critério de um eixo curto de ≥ 15 mm por meio de tomografia computadorizada. Apenas o eixo curto destes nódulos contribui para a soma da linha de base. Todos os outros nódulos patológicos (aqueles com eixo curto ≥ 10 mm, mas < 15 mm)

não devem ser considerados lesões não alvo. Os nódulos com eixo curto < 10 mm são considerados não patológicos e não devem ser registrados ou acompanhados.

[00819] Uma soma dos diâmetros (mais longo para lesões não nodais, eixo curto para lesões nodais) para todas as lesões-alvo é calculada e relatada como os diâmetros de soma de linha de base. Os diâmetros de soma da linha de base são usados como referência para caracterizar ainda mais qualquer regressão tumoral objetiva na dimensão mensurável da doença.

[00820] Todas as outras lesões (ou locais de doença), incluindo linfonodos patológicos, são identificadas como lesões não alvo e também são registradas na linha de base. As medições não são necessárias e estas lesões são acompanhadas como "presentes", "ausentes" ou "progressão inequívoca". Além disso, é possível registrar múltiplas lesões não alvo envolvendo o mesmo órgão como um único item no caso (por exemplo, "múltiplos linfonodos pélvicos aumentados" ou "múltiplas metástases hepáticas").

[00821] Os critérios de resposta são descritos na Tabela 20. Tabela 20 - Critérios de resposta Critérios de Avaliação de lesões-alvo resposta CR Desaparecimento de CR para todas as lesões-alvo. Qualquer linfonodo patológico (seja alvo ou não alvo) deve ter redução no eixo curto para < 10 mm. PR Diminuição de pelo menos 30 % na soma dos diâmetros das lesões-alvo, tomando como referência a soma dos diâmetros da linha de base.

Critérios de Avaliação de lesões-alvo resposta PD Aumento de pelo menos 20 % na soma dos diâmetros das lesões-alvo, tomando como referência a menor soma do estudo (inclui a soma da linha de base se for a menor do estudo). Além do aumento relativo de 20 %, a soma também deve demonstrar um aumento absoluto de pelo menos 5 mm. (Nota: o aparecimento de 1 ou mais novas lesões também é considerado progressão). SD Nem redução suficiente do estudo de linha de base para se qualificar para PR nem aumento suficiente para se qualificar para PD, tomando como referência os menores diâmetros de soma durante o estudo. Abreviaturas: CR = Resposta Completa; PD = Doença Progressiva; PR = Resposta Parcial; SD = Doença Estável.

Notas Especiais Sobre a Avaliação de Lesões-Alvo

[00822] Os linfonodos identificados como lesões-alvo sempre têm a medição do eixo curto real registrada e são medidos no mesmo plano anatômico que o exame de linha de base, mesmo se os nódulos regredirem para menos de 10 mm no estudo. Isto significa que, quando os linfonodos são incluídos como lesões-alvo, a "soma" das lesões pode não ser zero, mesmo se os critérios CR forem atendidos, uma vez que um linfonodo normal é definido como tendo um eixo curto de < 10 mm. Para PR, SD e PD, a medição real do eixo curto dos nódulos deve ser incluída na soma das lesões-alvo.

[00823] Lesões-alvo que se tornam "muito pequenas para medir": Todas as lesões (nodais e não nodais) registradas na linha de base devem ter suas medidas reais registradas em cada avaliação subsequente, mesmo quando muito pequenas (por exemplo, 2 mm). No entanto, algumas vezes as lesões ou linfonodos que são registrados como lesões-alvo no início do estudo tornam-se tão fracos na tomografia computadorizada que o radiologista pode não se sentir confortável atribuindo uma medida exata e pode relatá-los como sendo "muito pequenos para medir". Quando isto ocorrer, é importante que um valor seja registrado no CRF. Se for opinião do radiologista que a lesão provavelmente desapareceu, a medição é registrada como 0 mm. Se a lesão for beli eved estar presente e for visto fracamente, mas muito pequeno para medir, um valor padrão de 5 mm é atribuído.

[00824] Quando as lesões não nodais "fragmentam", os diâmetros mais longos das porções fragmentadas são somados para calcular a soma da lesão-alvo. Da mesma forma, conforme as lesões coalescem, um plano entre elas é mantido, o que ajudaria na obtenção das medidas do diâmetro máximo de cada lesão individual. Se as lesões realmente coalesceram de modo que não sejam mais separáveis, o vetor do diâmetro mais longo neste caso é o diâmetro mais longo máximo para a "lesão coalescida". Avaliação de Lesões Não Alvo

[00825] Embora algumas lesões não alvo possam ser mensuráveis, elas não precisam ser medidas e, em vez disso, são avaliadas apenas qualitativamente nos pontos de tempo especificados no protocolo.

[00826] CR: Desaparecimento de todas as lesões não alvo e normalização do nível do marcador tumoral. Todos os gânglios linfáticos devem ter tamanho não patológico (eixo curto < 10 mm).

[00827] Não CR/Não PD: Persistência de 1 ou mais lesão (ões) não alvo e/ou manutenção do nível do marcador tumoral acima dos limites normais.

[00828] Doença Progressiva: Progressão inequívoca de lesões não alvo existentes. (Nota: o aparecimento de 1 ou mais novas lesões também é considerado progressão).

[00829] O conceito de progressão de doença não alvo requer explicação adicional da seguinte forma:

[00830] Quando o participante também tem doença mensurável; neste cenário, para atingir a "progressão inequívoca" com base na doença não alvo, deve haver um nível geral de agravamento substancial na doença não alvo de modo que, mesmo na presença de SD ou PR na doença-alvo, a carga geral do tumor aumentou o suficiente para merecer a descontinuação da terapia. Um modesto "aumento" no tamanho de 1 ou mais lesões não alvo geralmente não é suficiente para se qualificar para um estado de progressão inequívoco.

[00831] Quando o participante tem apenas doença não mensurável; para atingir a "progressão inequívoca" com base na doença não alvo, deve haver um nível geral de piora substancial de modo que a carga tumoral global tenha aumentado o suficiente para merecer a descontinuação da terapia. Um modesto "aumento" no tamanho de 1 ou mais lesões não alvo geralmente não é suficiente para se qualificar para o estado de progressão inequívoca. Como o agravamento da doença não alvo não pode ser facilmente quantificado (por definição: se todas as lesões forem realmente não mensuráveis), um teste útil que pode ser aplicado ao avaliar os pacientes quanto à progressão inequívoca é considerar se o aumento na carga geral da doença com base no mudança na doença não mensurável é comparável em magnitude ao aumento que seria necessário para declarar PD para doença mensurável: ou seja, um aumento na carga tumoral que representa um aumento adicional de 73 % no 'volume' (o que é equivalente a um aumento de 20 % no diâmetro em uma lesão mensurável). Exemplos incluem um aumento em um derrame pleural de 'vestigial' para 'grande', um aumento na doença linfangítica de localizada para disseminada ou podem ser descritos em protocolos como 'suficientes para requerer uma mudança na terapia'. Se for observada "progressão inequívoca", o paciente é considerado como tendo PD geral naquele ponto.

Novas Lesões

[00832] O aparecimento de novas lesões malignas denota progressão da doença. O achado de uma nova lesão deve ser inequívoco: ou seja, não atribuível a diferenças na técnica de varredura, mudança na modalidade de imagiologia ou achados considerados representativos de algo diferente do tumor (por exemplo, algumas lesões ósseas "novas" podem ser simplesmente cicatrização ou alargamento de lesões pré-existentes). Isto é particularmente importante quando as lesões da linha de base do participante mostram PR ou CR. Por exemplo, a necrose de uma lesão hepática pode ser relatada em um relatório de tomografia computadorizada como uma "nova" lesão cística, o que não é.

[00833] Uma lesão identificada em um estudo de acompanhamento em uma localização anatômica que não foi digitalizada na linha de base é considerada uma nova lesão e indica progressão da doença. Um exemplo disto é o paciente que tem doença visceral no início do estudo e, durante o estudo, foi solicitada uma tomografia computadorizada ou ressonância magnética do cérebro que revela metástases. As metástases cerebrais do participante são consideradas como PD, mesmo que não tivesse imagens cerebrais no início do estudo.

[00834] Se uma nova lesão for duvidosa, por exemplo, em virtude de seu pequeno tamanho, a terapia continuada e a avaliação de acompanhamento esclarecem se ela representa uma nova doença. Se as varreduras repetidas confirmarem que há uma nova lesão, a progressão é declarada usando a data da varredura inicial.

[00835] Embora as avaliações de resposta da tomografia por emissão de pósitrons (FDG-PET) precisem de estudo adicional, algumas vezes é razoável incorporar o uso de varredura FDG-PET para complementar a varredura CT na avaliação da progressão (particularmente possível 'nova' doença). Novas lesões com base na imagem FDG-PET são identificadas de acordo com o seguinte algoritmo:

[00836] A. FDG-PET negativa na linha de base do estudo, com FDG- PET positiva no acompanhamento é um sinal de PD com base em uma nova lesão.

[00837] B. Sem FDG-PET na linha de base e uma FDG-PET positiva no acompanhamento:

[00838] Se a FDG-PET positiva no acompanhamento corresponder a um novo local da doença confirmado por TC, este é a PD.

[00839] Se a FDG-PET positiva no acompanhamento não for confirmado como um novo local da doença na TC, varreduras adicionais de TC de acompanhamento são necessárias para determinar se há realmente progressão ocorrendo naquele local (em caso afirmativo, a data de PD será ser a data da varredura da FDG PET anormal inicial). Se FDG PET positiva no acompanhamento corresponder a um local pré- existente da doença na TC que não está progredindo com base nas imagens anatômicas, isto não é PD. Avaliação da Melhor Resposta Global

[00840] Resposta de Ponto de Tempo: Em cada ponto de tempo especificado de protocolo, uma avaliação de resposta deve ocorrer. A Tabela 21 fornece um resumo do cálculo do estado de resposta geral em cada momento para pacientes com doença mensurável no início do estudo. Tabela 21 - Resposta em pacientes com doença-alvo Novas Resposta Lesões-alvo Lesões não alvo lesões global CR CR Não CR CR Não CR/não PD Não PR CR Não avaliado Não PR Não PD ou não avaliado PR Não PR em geral

Novas Resposta Lesões-alvo Lesões não alvo lesões global Não PD ou não avaliado SD Não SD em geral Não avaliado Não PD Não Não estimável PD Qualquer Sim ou Não PD Qualquer PD Sim ou Não PD Qualquer Qualquer Sim PD Abreviaturas: CR = Resposta Completa; PD = Doença Progressiva; PR = Resposta Parcial; SD = Doença Estável.

[00841] Quando os pacientes têm apenas doença não mensurável (portanto, não alvo), a Tabela 22 deve ser usada. Tabela 22 - Resposta em pacientes com doença não alvo apenas Lesões não alvo Novas lesões Resposta global CR Não CR Não CR/não PD Não Não CR/não PD Não avaliado em geral Não Não estimável PD inequívoca Sim ou Não PD Qualquer Sim PD Abreviaturas: CR = Resposta Completa; PD = Doença Progressiva; PR = Resposta Parcial; SD = Doença Estável.

[00842] Avaliações ausentes e designação inevitável: Quando nenhuma imagiologia/medição é feita em um ponto de tempo particular, o paciente não é avaliável (NE) naquele ponto de tempo.

[00843] Se apenas um subconjunto de medições de lesão é feito em uma avaliação, geralmente o caso também é considerado NE naquele momento, a menos que um argumento convincente possa ser feito de que a contribuição da(s) lesão(ões) individual(is) ausente(s) não mudaria o resposta de ponto de tempo atribuída. Isto seria mais provável de acontecer no caso de PD. Quando nenhuma imagiologia/medição é realizada em um determinado momento, o paciente está NE naquele momento.

[00844] Se apenas um subconjunto de medições de lesão for feito em uma avaliação, geralmente o caso também é considerado NE naquele momento, a menos que um argumento convincente possa ser feito de que a contribuição da(s) lesão(ões) individual(is) ausente(s) não mudaria o resposta de ponto de tempo atribuída. Isto seria mais provável de acontecer no caso de PD. Notas Especiais Sobre Avaliação de Resposta

[00845] Quando a doença nodal é incluída na soma das lesões-alvo e os nódulos diminuem para o tamanho "normal" (< 10 mm), eles ainda podem ter uma medição relatada em varreduras. Esta medição é registrada mesmo que os nódulos sejam normais, a fim de não exagerar a progressão caso seja com base no aumento no tamanho dos nódulos. Conforme observado anteriormente, isto significa que os pacientes com CR podem não ter uma soma total de 'zero' no CRF.

[00846] Em ensaios onde a confirmação da resposta é necessária, avaliações repetidas de ponto de tempo ‘NE' podem complicar a determinação da melhor resposta. O plano de análise para o ensaio deve abordar como os dados/avaliações ausentes são tratados na determinação da resposta e progressão. Por exemplo, na maioria dos ensaios, é razoável considerar um paciente com respostas pontuais de PR-NE-PR como uma resposta confirmada.

[00847] Pacientes com uma deterioração global do estado de saúde exigindo a descontinuação do tratamento sem evidência objetiva de progressão da doença naquele momento são relatados como "deterioração sintomática". Todo esforço deve ser feito para documentar a progressão objetiva, mesmo após a descontinuação do tratamento. A deterioração sintomática não é um descritor de uma resposta objetiva:

é uma proporção para interromper a terapia do estudo.

[00848] O estado de resposta objetiva de tais pacientes é determinado pela avaliação da doença alvo e não alvo. Para descobertas duvidosas de progressão (por exemplo, lesões novas muito pequenas e incertas; alterações císticas ou necrose em lesões existentes), o tratamento pode continuar até a próxima avaliação agendada. Se na próxima avaliação agendada, a progressão for confirmada, a data de progressão será a data anterior em que houve suspeita de progressão. Duração da Resposta

[00849] A duração da resposta geral é medida a partir do tempo que os critérios de medição são atendidos pela primeira vez para CR/PR (o que for primeiro registrado) até a primeira data em que recorrente ou PD é documentado objetivamente (tomando como referência para PD as menores medições registradas em estudar).

[00850] A duração da CR geral é medida a partir do tempo que os critérios de medição são atendidos pela primeira vez para a CR até a primeira data em que a doença recorrente é objetivamente documentada.

[00851] Doença estável é medida desde o início do tratamento até que os critérios de progressão sejam atendidos, tomando como referência o menor valor sob estudo (se o valor da linha de base for o menor, esta é a referência para o cálculo do PD).

[00852] Descrições não limitativas relativas às diretrizes RECIST são fornecidas em Eisenhauer A.E., Therasse P., Bogaerts J. et al. New Response Evaluation Criteria in Solid Tumours: Revised RECIST Guideline (versão1.1). Eur J Cancer. 2009; 45: 228-47, todo o conteúdo do qual é incorporado ao presente documento a título de referência. Exemplo 1.15 - Critérios de Avaliação de Resposta Modificada em Tumores Sólidos para Produtos Imunoterapêuticos

[00853] Os detalhes são fornecidos em Seymour L., Bogaerts J., Perrone A., Ford R., Schwartz L.H., Mandrekar S. et al. iRECIST: Guidelines For Response Criteria for Use in Trials Testing Immunotherapeutics.

Lancet Oncol.

Março de 2017; 18(3): e143-52. Tabela 23 - Comparação dos critérios de avaliação de resposta em tumores sólidos (RECIST) 1.1 e critérios de avaliação de resposta modificados em tumores sólidos para imunoterapias (iRECIST) RECIST 1.1 iRECIST Lesões mensuráveis têm Sem alteração de RECIST 1.1; diâmetro ≥ 10 mm (≥ 15 no entanto, novas lesões são mm para lesões nodais); avaliadas de acordo com Definições de máximo de 5 lesões (2 RECIST 1.1, mas são doença mensurável por órgão); todas as registradas separadamente no e não mensurável; outras doenças são formulário de relatório de caso número e local da consideradas não alvo (mas não incluídas na soma doença-alvo (deve ser ≥ 10 mm no das lesões para lesões-alvo eixo curto para doença identificadas na linha de base) nodal) Não pode ter preenchido Pode ter iUPD (uma ou mais Resposta Completa, os critérios de progressão instâncias), mas não iCPD, resposta parcial ou antes da Resposta antes de iCR, iPR ou iSD doença estável Completa, resposta parcial ou doença estável Confirmação da Necessária apenas para De acordo com RECIST 1.1 Resposta Completa ensaios não ou resposta parcial randomizados Confirmação de Não necessária De acordo com RECIST 1.1 doença estável Resultam em progressão; Resultados em iUPD, mas registrado, mas não iCPD só é atribuído com base medido nesta categoria se na próxima avaliação novas lesões adicionais aparecerem ou um aumento no tamanho de novas lesões for observado (≥ 5 mm Novas lesões para soma de nova lesão-alvo ou qualquer aumento em nova lesão não alvo); o aparecimento de novas lesões quando nenhuma foi previamente registrada, também pode confirmar iCPD.

RECIST 1.1 iRECIST Recomendado em Coleta de varreduras (mas não algumas circunstâncias, revisão independente) Revisão às cegas por exemplo, em alguns recomendada para todos os independente e estudos com parâmetros estudos. coleta central de com base em progressão varreduras planejados para aprovação de comercialização Confirmação de Não necessária (a menos Necessária progressão que seja duvidosa) Não incluído na avaliação A estabilidade clínica é Consideração do considerada ao decidir se o estado clínico tratamento deve ser continuado após iUPD. "I" indicou respostas imunes atribuídas usando o iRECIST.

Abreviaturas: iCPD = Progressão Confirmada; iCR = Resposta Completa; iPR = Resposta Parcial; iSD = Doença Estável; iUPD = Progressão Não Confirmada; RECIST = Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos

Tabela 24 - Avaliação da resposta de ponto de tempo usando critérios de avaliação de resposta modificados em tumores sólidos para imunoterapias (iRECIST) Resposta de ponto de Resposta de ponto de Lesões- Lesões não Novas tempo sem tempo com iUPD alvo alvo lesões iUPD anterior anterior em qualquer em qualquer categoria categoria iCR iCR Não iCR iCR Não iCR/não iCR Não iPR iPR iUPD Não iCR/não iPR Não iPR iPR iUPD Não iCR/não iSD Não iSD iSD iUPD

Resposta de ponto de Resposta de ponto de Lesões- Lesões não Novas tempo sem tempo com iUPD alvo alvo lesões iUPD anterior anterior em qualquer em qualquer categoria categoria Novas lesões confirmam iCPD se novas lesões foram identificadas iUPD anteriormente e sem aumentaram de alteração iUPD sem tamanho (≥ 5 mm na ou com alteração ou soma das medidas para uma diminuição nova lesão-alvo ou Sim Não aplicável diminuiç do último qualquer aumento para ão do ponto de nova lesão não alvo) ou último tempo número; se nenhuma ponto de mudança for observada tempo em novas lesões (tamanho ou número) desde o último ponto de tempo, a atribuição permanece iUPD Permanece iUPD a menos que iCPD seja confirmada com base em um aumento iSD, iPR, adicional no tamanho iUPD Não iUPD iCR da doença não alvo (não precisa atender aos critérios do RECIST

1.1 para progressão inequívoca) Permanece iUPD, a menos que a iCPD seja confirmada com base Não iCR/não em um novo aumento iUPD Não iUPD iUPD ou iCR na soma das medidas ≥ 5 mm; caso contrário, a atribuição permanece iUPD

Resposta de ponto de Resposta de ponto de Lesões- Lesões não Novas tempo sem tempo com iUPD alvo alvo lesões iUPD anterior anterior em qualquer em qualquer categoria categoria Permanece iUPD a menos que iCPD seja confirmada com base em um aumento adicional na lesão-alvo previamente iUPD iUPD Não iUPD identificada iUPD na soma das medidas ≥ 5 mm ou lesão não alvo iUPD (avaliação anterior não precisa ter mostrado progressão inequívoca) Permanece iUPD a menos que iCPD seja confirmada com base em um aumento adicional na lesão-alvo previamente identificada iUPD; soma de medidas ≥ 5 iUPD iUPD Sim iUPD mm, lesão não alvo previamente identificada iUPD (não precisa ser inequívoca) ou um aumento no tamanho ou número de novas lesões previamente identificadas Permanece iUPD a menos que iCPD seja Não confirmada com base iUPD ou Não iUPD ou em um aumento no Sim iUPD progress progressão tamanho ou número de ão novas lesões previamente identificadas

Resposta de ponto de Resposta de ponto de Lesões- Lesões não Novas tempo sem tempo com iUPD alvo alvo lesões iUPD anterior anterior em qualquer em qualquer categoria categoria Anteriormente identificada na avaliação imediatamente antes deste ponto de tempo. "I" indica respostas imunes atribuídas pelo iRECIST usando lesões-alvo, lesões não alvo e novas lesões definidas de acordo com os princípios do RECIST 1.1; se não ocorrer pseudoprogressão, as categorias RECIST 1.1 e iRECIST para Resposta Completa, Resposta Parcial e Doença Estável seriam as mesmas. Abreviaturas: iCPD = Progressão Confirmada; iCR = Resposta Completa; iPR = Resposta Parcial; iSD = Doença Estável; iUPD = Progressão Não Confirmada; não iCR/não iUPD = critérios nem para CR nem PD foram atendidos; RECIST = Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos.

Tabela 25 - Escala de estado de desempenho no Eastern Cooperative Oncology Group Estado de Desemprenho Descrição Totalmente ativo, capaz de realizar todo o desempenho 0 anterior à doença sem restrição. Restrito a atividades fisicamente extenuantes, mas deambulante e capaz de realizar trabalhos de natureza leve 1 ou sedentária, por exemplo, trabalho doméstico leve, trabalho de escritório. Deambulante e capaz de todo autocuidado, mas incapaz de 2 realizar qualquer atividade laboral; e cerca de mais de 50 % das horas de vigília. Capaz de autocuidado apenas limitado; confinado à cama ou 3 cadeira mais de 50 % das horas de vigília. Completamente incapaz; não pode cuidar de si mesmo; 4 totalmente confinado à cama ou cadeira. Morto. 5 Desenvolvido pelo Eastern Cooperative Oncology Group, Robert L. Comis, MD, Presidente do Grupo.

Tabela 26: Estadiamento TNM de melanoma cutâneo (AJCC Cancer Staging ed 8º) Classificação TNM de Melanoma Classificação T Espessura Estado de Ulceração Tis Não aplicável Não aplicável a: < 0,8 mm com ou sem T1 ≤ 1,0 mm ulceração b: < 0,8 mm com ulceração 0,8- 1,0 mm com ou sem ulceração T2 1,01 – 2,0 mm a: sem ulceração b: com ulceração T3 2,01 – 4,0 mm a: sem ulceração b: com ulceração T4 > 4,0 mm a: sem ulceração b: com ulceração Nº de Nódulos Classificação N Massa Nodal Metastática Metastáticos N1 1 nódulo a: Clinicamente oculto0 b: Clinicamente detectado0 c: Met(s)/satélites(s) em trânsito sem nódulos metastáticos N2 2 – 3 nódulos a: Clinicamente oculto0 b: Clinicamente detectado0 c: Met(s)/satélites(s) em trânsito com um nódulo metastático 4 ou mais nódulos metastáticos ou nódulos emaranhados N3 ou metastático(s) em trânsito com nódulos metastáticos Classificação M Local LDH Sérica Metástases cutâneas M1a (0) distantes, subcutâneas Normal ou nodais

Classificação TNM de Melanoma M1a (1) Elevada Metástases M1b (0) Normal pulmonares M1b (1) Elevada Todas as outras M1c (0) Normal metástases viscerais M1c (1) Elevada Metástase para o M1d sistema nervoso central a Clinicamente ocultos são diagnosticados após linfadenectomia sentinela ou eletiva. b Clinicamente detectadas são definidas como metástases nodais clinicamente detectáveis confirmadas por linfadenectomia terapêutica ou quando a metástase nodal exibe extensão extracapsular grosseira.

Fonte: adaptado a partir de Gershenwald J.E., Scolyer R.A., Hess K.R. et al. Melanoma of the Skin. em: Amin MB, ed. AJCC Cancer Staging Manual. 8ª ed. Chicago, IL: AJCC-Springer; 2017: 563-585.

Tabela 27 - Estágio de melanoma/Grupos prognósticos - Estágio IIIB e acima Estágio T N M Estágio IIIB T1-4b N1a M0 T1-4b N1b M0 T1-4a N1b M0 T1-4a N2c M0 Estágio IIIC T1-4b N1b M0 T1-4b N2b M0 T1-4b N2c M0 Qualquer T N3 M0 Estágio IV Qualquer T Qualquer N M1 Fonte: adaptado a partir de Gershenwald J.E., Scolyer R.A., Hess K.R. et al. Melanoma of the Skin. em: Amin MB, ed. AJCC Cancer Staging Manual. 8ª ed. Chicago, IL: AJCC-Springer; 2017: 563-585.

[00854] A resposta da doença será avaliada usando a Classificação de Lugano 2014 (Cheson B.D. et al. (2014) J.

Clinical Oncology 32 (27) 3059-3068). As avaliações de resposta ocorrem na triagem e a cada 12 semanas (± 7 dias). Tabela 28: Avaliação da doença e classificação de Lugano Reproduzido a partir de Lugano Classification 2014, Cheson et al. 2014, Table 3. Revised Criteria for Response Assessment Resposta e Local Resposta com base em Resposta com base em CT PET-CT Completa Resposta metabólica Resposta radiológica completa completa (todos os seguintes) Nódulos linfáticos Pontuação 1, 2 ou 3 * com Nódulos alvo/massas nodais e locais ou sem massa residual no devem regredir para ≤ 1,5 cm extralinfáticos 5PS ** em LDi É reconhecido que no anel de Waldeyer ou locais Sem locais extralinfáticos de extranodais com alta doença absorção fisiológica ou com ativação no baço ou medula (por exemplo, com quimioterapia ou fatores estimuladores de colônia mieloide), a absorção pode ser maior do que o mediastino e/ou fígado normais.

Nesta circunstância, a resposta metabólica completa pode ser inferida se a absorção nos locais de envolvimento inicial não for maior do que o tecido normal circundante, mesmo se o tecido tiver alta absorção fisiológica Lesão não medida Não aplicável Ausente

Alargamento de Não aplicável Retorna para o normal órgão Novas lesões Nenhuma Nenhuma

Medula óssea Nenhuma evidência de Normal por morfologia; se doença ávida por FDG na indeterminado, IHC negativo medula Parcial Resposta metabólica Remissão parcial (todos os parcial seguintes Nódulos linfáticos Pontuação 4 ou 5 ** com Redução ≥ 50% na SPD de e locais absorção reduzida até 6 nós mensuráveis alvo e extralinfáticos comparado com a linha de locais extranodais base e massa(s) residual(is) de qualquer Quando uma lesão é muito tamanho pequena para medir na TC, atribuir 5 mm × 5 mm como o Nesse ínterim, estas valor padrão descobertas sugerem doença em resposta Quando não estiver mais visível, 0 × 0 mm Ao final do tratamento, estes achados indicam Para um nódulo > 5 mm × 5 doença residual mm, mas menor do que o normal, usar a medição real para o cálculo

Lesão não medida Não aplicável Ausente/normal, regrediu, mas sem aumento

Alargamento de Não aplicável O baço deve ter regredido em órgão > 50% do comprimento além do normal Novas lesões Nenhuma Nenhuma Medula óssea Absorção residual superior Não aplicável à absorção na medula normal, mas reduzida em comparação com a linha de base (absorção difusa compatível com alterações reativas da quimioterapia permitida). Se houver alterações focais persistentes na medula no contexto de uma resposta nodal, deve-se considerar uma avaliação adicional com ressonância magnética ou biópsia ou uma varredura de intervalo

Sem resposta ou Sem resposta metabólica Doença estável doença estável Nódulos Pontuação 4 ou 5 sem Redução de < 50 % da linha alvo/massas alteração significativa na de base na SPD de até 6 nodais, lesões absorção de FDG da linha nódulos dominantes extranodais de base no ínterim ou no mensuráveis e locais final do tratamento extranodais; nenhum critério para doença progressiva é atendido

Lesão não medida Não aplicável Nenhum aumento consistente com progressão

Alargamento de Não aplicável Nenhum aumento consistente órgão com progressão Novas lesões Nenhuma Nenhuma Medula óssea Nenhuma alteração a partir Não aplicável da linha de base Doença Doença metabólica Doença progressiva requer progressiva progressiva pelo menos 1 dos seguintes Nódulos alvo Pontuação 4 ou 5 com um progressão para PPD: individuais/massas aumento na intensidade de nodais absorção da linha de base e/ou Lesões Novos focos ávidos por Um nódulo/lesão individual extranodais FDG consistentes com deve ser anormal com: linfoma na avaliação LDi > 1,5 cm e intermediária ou final do Aumento em ≥ 50 % do nadir tratamento PPD e Um aumento no LDi ou SDi do nadir 0,5 cm para lesões ≤ 2 cm 1,0 cm para lesões > 2 cm No cenário de esplenomegalia, o comprimento do baço deve aumentar em > 50% da extensão de seu aumento anterior além da linha de base (por exemplo, um baço de 15 cm deve aumentar para > 16 cm). Se não houver esplenomegalia anterior, deve aumentar em pelo menos 2 cm da linha de base Esplenomegalia nova ou recorrente

Lesão não medida Nenhuma Nenhuma progressão nova ou clara de lesões preexistentes não medidas Novas lesões Novos focos ávidos por Recrescimento de lesões FDG consistentes com previamente resolvidas linfoma, em vez de outra Um novo nódulo > 1,5 cm em etiologia (por exemplo, qualquer eixo infecção, inflamação). Se Um novo sítio extranodal > 1,0 houver dúvida quanto à cm em qualquer eixo; se < 1,0 etiologia de novas lesões, cm em qualquer eixo, sua biópsia ou varredura de presença deve ser inequívoca intervalo pode ser e deve ser atribuída ao linfoma considerada Doença avaliável de qualquer tamanho inequivocamente atribuível ao linfoma

Medula óssea Novos ou recorrentes Envolvimento novo ou focos ávidos por FDG recorrente

Abreviaturas: 5PS, escala de 5 pontos; TC, tomografia computadorizada; FDG, fluorodeoxiglicose; IHC, imuno-histoquímica; LDi, o maior diâmetro transversal de uma lesão; MRI, imagem por ressonância magnética; PET, tomografia por emissão de pósitrons; PPD, produto vetorial do LDi e diâmetro perpendicular; SDi, menor eixo perpendicular ao LDi; SPD, soma do produto dos diâmetros perpendiculares para lesões múltiplas.

Uma pontuação de 3 em muitos pacientes indica um bom prognóstico com o tratamento padrão, especialmente se no momento de uma varredura intermediária.

No entanto, em ensaios envolvendo PET, em que não escalonamento é investigado, pode ser preferível considerar uma pontuação de 3 como uma resposta inadequada (para evitar o subtratamento). Lesões dominantes medidas: até seis dos maiores nódulos dominantes, massas nodais e lesões extranodais selecionadas para serem claramente mensuráveis em dois diâmetros.

Os nódulos devem ser, de preferência, de regiões distintas do corpo e devem incluir, quando aplicável, áreas mediastinais e retroperitoneais.

Lesões não nodais incluem aquelas em órgãos sólidos (por exemplo, fígado, baço, rins, pulmões), envolvimento gastrintestinal, lesões cutâneas ou aquelas observadas na palpação.

Lesões não medidas: Qualquer doença não selecionada como medida, doença dominante e doença verdadeiramente avaliável deve ser considerada não medida.

Estes locais incluem quaisquer nódulos, massas nodais e locais extranodais não selecionados como dominantes ou mensuráveis ou que não atendam aos requisitos de mensurabilidade, mas ainda são considerados anormais, bem como doença verdadeiramente avaliável, que é qualquer local de suspeita de doença que seria difícil de acompanhar quantitativamente com medição, incluindo derrames pleurais, ascite, lesões ósseas, doença leptomeníngea, massas abdominais e outras lesões que não podem ser confirmadas e acompanhadas por imagiologia.

No anel de Waldeyer ou em locais extranodais (por exemplo, trato GI, fígado, medula óssea), a absorção de FDG pode ser maior do que no mediastino com resposta metabólica completa, mas não deve ser maior do que a absorção fisiológica normal circundante (por exemplo, com ativação da medula como resultado de quimioterapia ou fatores de crescimento mieloide).

** PET 5PS: 1, sem absorção acima do fundo; 2, absorção ≤ mediastino; 3, absorção> mediastino, mas ≤ fígado; 4, absorção moderada > fígado; 5, absorção acentuadamente maior do que no fígado e/ou novas lesões; X, novas áreas de absorção improváveis de estarem relacionadas ao linfoma.

[00855] O tempo de geração de imagens deve seguir os dias corridos e não deve ser ajustado para atrasos no ciclo. Para participantes que descontinuaram por motivos diferentes de PD, as avaliações devem continuar até que o participante tenha documentado a PD. A primeira avaliação pode ser realizada antes de 12 semanas se, na opinião do investigador, o participante estiver progredindo clinicamente. Tabela 29 – Abreviações ADA: anticorpos antimedicamento ALT: alanina aminotransferase ANC: contagem absoluta de neutrófilos AST: aspartato aminotransferase CAR: receptor antigênico quimérico CK: pancitoqueratina CRP: proteína C reativa DL: nível de dose DL1: nível de dose inicial DLT: toxicidade limitante de dose DoR: duração de resposta DRE: evento relacionado à doença ECOG: Eastern Cooperative Oncology Group eCRF: formulário eletrônico de relato de caso EOT: final de tratamento HBsAg: antígeno na superfície de hepatite B hCG: gonadotrofina coriônica humana HLH: linfo-histiocitose hemofagocítica ICF: Formulário de Consentimento Livre e Esclarecido ICH: Conselho Internacional de Harmonização IP10: proteína 10 induzida por INFγ iRECIST: RECIST para imunoterapias iUPD: doença progressiva não confirmada IV: através da via intravenosa KIM-1: molécula de lesão renal-1 LDH: lactato desidrogenase MRI: ressonância magnética NCI CTCAE: Critérios Comuns de Terminologia do National Cancer Institute para Eventos Adversos

NOAEL: nenhum nível de efeito adverso observado AINE: medicamento anti-inflamatório não esteroidal PDy: farmacodinâmica PFS: sobrevida sem progressão PK: farmacocinética PO: oralmente RNAseq: sequenciamento de RNA SAE: evento adverso grave STD 10: dose gravemente tóxica em 10 % dos animais USG: ultrassonografia WOCBP: mulheres com potencial para engravidar Exemplo 2 - Atividade Antitumoral em Camundongos com Tumores com Resistência Adquirida à Terapia Anti-PD1 Modelo de Camundongo Para Resistência Adquirida à Terapia Anti- PD1

[00856] Um modelo de tumor de camundongo que exibe resistência adquirida ao tratamento com anticorpo anti-PD-1 foi gerado essencialmente como segue. Consulte também Dunn et al. (2002) Nature Immunology 3: 991-998; e Wang X. et al. (2017) Cancer Res 77 (4): 839-850. Camundongos C57BL6/J fêmeas (Jackson Laboratory, Bar Harbor, IMP, EUA) com tumores MC38 foram tratados com um anticorpo anti-PD-1 (clone RMP1-14; conforme descrito pela primeira vez em Yamazaki et al. (2005) J Immunol 175 (3): 1586-1592 nos métodos), os tumores em crescimento foram excisados e as células foram cultivadas ex vivo em PRMI-1640 com L-glutamina (Life Technologies) suplementado com FBS a 10%. Camundongos C57BL6/J fêmeas com idades entre 6 e 8 semanas foram alojados em um ambiente de temperatura controlada em ciclo de luz de 12 horas com livre acesso a alimentos e água esterilizada. Todos os camundongos foram aclimatados durante pelo menos 3 dias antes da experimentação. O peso corporal e o volume do tumor, se medidos, foram medidos duas vezes por semana até os parâmetros experimentais. O volume do tumor é expresso como o produto dos diâmetros perpendiculares usando a seguinte fórmula: a2*b/2, onde a < b.

[00857] Para as Figuras 2A-3, um milhão de células resistentes MC38 ou MC38 foram suspensas em 200 µl de PDBS e injetadas através da via subcutânea no flanco direito de cada camundongo. Administração de Medicamentos In Vivo

[00858] Quatro doses de mistura de mRNAs de citocina de camundongo ou mRNA de controle que codifica luciferase (mRNA de Luc) foram administradas a cada quatro dias (Q4D) através de injeção intratumoral (IT) a 40 µg em 50 µl por tumor começando quando os tumores atingiram uma média de 60 mm3. O peso corporal do camundongo e o volume do tumor foram medidos duas vezes por semana até os parâmetros experimentais. O volume do tumor foi expresso como o produto dos diâmetros perpendiculares usando a seguinte fórmula: a2*b/2, onde a < b. Todos os procedimentos foram aprovados por um Institutional Animal Care and Use Committee e foram conduzidos de acordo com o NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Preparação de mRNA

[00859] Fragmentos de DNA sintético que codificam o gene de interesse foram clonados em um vetor inicial comum que compreende uma região 5' não traduzida (UTR) e 3' UTR, uma 3 'UTR e uma cauda poli (A) de 110 nucleotídeos no total. A linearização do DNA de plasmídeo foi realizada a jusante da poli(dA:dT) com uma enzima de restrição classIIS para gerar um modelo sem nucleotídeos adicionais, além da poli(dA:dT) (consulte, por exemplo, Holtkamp et al. (2006) Blood. 15 de Dez; 108 (13): 4009-17). O DNA de plasmídeo linearizado foi submetido à transcrição in vitro com RNA polimerase T7 (Thermo Fisher, Waltham MA, EUA) conforme descrito por Grudzien-Nogalska et al. (2013) Methods Mol Bio. 969: 55-72, na presença de ATP a 7,5 mM, CTP, GTP e N1-metil-pseudouridinotrifosfato. O RNA foi purificado usando partículas magnéticas (Berensmeier S. (2006) Applied Microbiology and Biotechnology 73 (3): 495-504) e subsequentemente uma estrutura Cap1 foi introduzida usando o sistema Vaccinia Capping (New England Biolabs, Ipswich, MA, EUA) e 2'-O-metilação do cap do mRNA. O RNA foi ainda purificado usando cromatografia com base em celulose para remover impurezas de RNA fita dupla (dsRNA) (consulte Day P.R. et al. (1977) Phytopathology 67: 1393; Morris T.J. et al. (1979) Phytopathology 69: 854-858; e Castillo A. et al. (2011) Virol J. 8: 38). A concentração e a qualidade do RNA foram avaliadas por meio de espectrofotometria e sistemas de eletroforese em gel capilar. A presença de dsRNA foi avaliada em um ensaio dot-blot da Northwestern usando mAb J2 específico para dsRNA (English & Scientific Consulting, KFt. Szirák, Hungria) conforme descrito por Karikó et al. (2011) Nucleic Acids Res. Novembro; 39 (21): e142. Resultados

[00860] Vários mecanismos de resistência inata e adquirida ao bloqueio do ponto de verificação foram definidos e incluem mutações das vias de sinalização de MHC I e IFNγ. Consulte, por exemplo, Sharma et al. (2017) Cell 168 (4): 707-723; Sade-Feldman M. et al. (2017) Nat Commun 8 (1): 1136; Zaretsky J.M. et al. (2016) N Engl J Med 375 (9): 819-29; Gettinger S. et al. (2017) 7 (12): 1420-1435; Rodig S.J. et al. (2018) Sci Transl Med 10 (450). No entanto, tais mutações ocorrem em uma baixa frequência de pacientes e mecanismos adicionais ainda não foram definidos. Em um esforço para entender melhor a resistência adquirida ao bloqueio do ponto de verificação, geramos um modelo de tumor de camundongo que exibe resistência in vivo ao tratamento com anticorpo anti-PD-1. Os tumores MC38 adquiriram resistência ao bloqueio de PD-1 após passagem in vivo em série (Figuras 2A, B). A falta de sensibilidade ao bloqueio de PD-1 não foi atribuída à desregulação da expressão de PD-L1 ou B2M, pois ambos foram expressos em níveis similares em células precursoras e resistentes (Figura 2C). Da mesma forma, a sinalização ao IFNγ e as vias de processamento e apresentação de antígeno foram funcionais tanto em linhagens de células precursoras como resistentes (Figuras 2D, 2E). A análise imparcial da expressão gênica foi usada para caracterizar ainda mais os mecanismos de resistência potenciais. O sequenciamento de RNA revelou diferenças substanciais na expressão gênica global com tumores resistentes a PD-1 que exibem uma redução acentuada na expressão de genes relacionados à imunidade relativos a tumores MC38 precursores (Figuras 2F, 2G). Na verdade, os tumores resistentes à PD-1 exibem infiltração imune reduzida em vários tipos de células, incluindo células T e NK (Figuras 2H, 2I).

[00861] Uma validação adicional do modelo foi realizada e os resultados são mostrados nas Figuras 3-5. Resumidamente, foi mostrado que células resistentes MC38 não expressam PD-L2 e a expressão não foi induzida após o tratamento com IFN (Figura 3). A coloração imuno-histoquímica mostrou frequência reduzida de células imunes em tumores resistentes (Figura 4A). Tumores resistentes MC38 e MC38 embebidos em parafina foram analisados por meio de coloração imuno-histoquímica quanto à infiltração de células CD45+ (cor escura). Resultados são representativos de dois experimentos independentes; n = 10 tumores por grupo. A Figura 4A mostra imagens representativas. A Figura 4B mostra a quantificação. As Figuras 5A-5B mostram imunogenicidade reduzida de tumores resistentes. Em suma, culturas de linfócitos T citotóxicos (CTL) foram geradas a partir de 5 camundongos C57BL6 individuais portadores de tumores MC38 precursores que exibiram regressão completa em resposta ao bloqueio de PD-1. Os CTLs foram cocultivados com MC38 e células tumorais resistentes e a morte (Figura 5A) e a liberação de IFN (Figura 5B) foram medidas.

[00862] Usando este modelo validado, a mistura de RNAs de citocina foi administrada intratumoralmente como monoterapia. A monoterapia com mistura de RNAs de citocina em murinos inibiu o crescimento de tumores resistentes MC38 e MC38 comparado com o controle. Consulte as Figuras 6A-6D. A monoterapia com mistura de RNAs de citocina em murinos também prolongou significativamente a sobrevida de camundongos portadores de tumores resistentes MC38 e MC38. Consulte a Figura 7. Cinco de oito (62,5 %) camundongos com tumores MC38 (Figura 6B) e três de oito (37,5 %) camundongos com tumores resistentes MC38 (Figura 6D) exibiram remissão completa do tumor e estavam isentos do tumor ao final do experimento. Consulte também a Figura 7. Exemplo 3 - Atividade Antitumoral em Camundongos com Tumores Resistentes à Terapia Anti-PD1 Modelo de Camundongo para Resistência à Terapia Anti-PD1

[00863] Células MC38, uma cortesia do Dr. S. A. Rosenberg (National Institute of Health, Bethesda, MD, EUA), foram cultivadas em PRMI-1640 com L-glutamina (Life Technologies) suplementado com FBS a 10%. Em geral, para o modelo de tumor de flanco único, as células MC38 foram suspensas em PDBS e 1 x 106 células em 200 µl foram implantadas SC no flanco direito de camundongos C57BL/6J. Em geral, para o modelo MC38 de tumor de flanco duplo, 1 x 106 células no lado direito e 0,5 x 106 células foram implantadas no lado esquerdo SC no dia 0.

[00864] Para gerar um modelo de tumor in vivo de resistência à terapia anti-PD-1, células com silenciamento MC38-B2M foram geradas usando CRISPR usando o sgRNA 5'-GGCGTATGTATCAGTCTCAG-3' (SEQ ID NO: 31). As células MC38 foram transfectadas transitoriamente (Lipofectamine™ CRISPRMAX™; ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, EUA) com Cas9 em um pré-complexo e sgRNA (GeneArt™

Platinum™ Cas9 Nuclease V.2; ThermoFisher Scientific) de acordo com as instruções do fabricante. As células B2M-/- foram enriquecidas usando a tecnologia MACS (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Alemanha), então, as colônias de células únicas foram isoladas e o silenciamento confirmado por meio de citometria de fluxo. Administração de Medicamentos In Vivo

[00865] A mistura de RNAs de citocina foi administrada através de injeção intratumoral. Os camundongos foram anestesiados com isoflurano e 80 µg em 50 µl de mRNA em solução salina injetados por via intratumoral (IT) no tumor direito a cada 4 dias por quatro doses no total, a menos que especificado de outra forma. Os anticorpos foram obtidos a partir da BioXCell (West Lebanon, NH, EUA), a menos que indicado de outra forma, e administrados através de injeção IP. Controle (MOPC-21) e anti-PD-1 (RMP1-14) foram administrados na dose de 5 mg/kg a cada três dias (Q3D). Resultados

[00866] Para investigar a eficácia terapêutica do tratamento de mRNA de citocina em um ambiente resistente ao ponto de verificação, B2M foi geneticamente excluído em células MC38 (Figura 8), o que levou à resistência in vivo ao tratamento anti-PD-1 (Figuras 9C), enquanto que camundongos portadores de tumores precursores permaneceram parcialmente responsivos ao tratamento anti-PD-1 (Figuras 9B). O tratamento com mistura de RNAs de citocina por si só conferiu sobrevida prolongada em animais com tumores com silenciamento de B2M, no entanto, nenhum aumento adicional na sobrevida foi observado pela combinação de mRNA de citocina com bloqueio do ponto de verificação anti-PD-1 (Figura 9C).

[00867] Para modelar a heterogeneidade inter-tumoral frequentemente observada em doenças malignas humanas, uma configuração de flanco duplo foi estabelecida com silenciamento MC38-

B2M em um lado e os tumores MC38-WT no flanco contralateral (Figura 9D). Os tumores com silenciamento MC38-B2M foram injetados com mistura de RNAs de citocina, enquanto que os tumores MC38-WT contralaterais foram deixados sem tratamento. O tratamento com terapia anti-PD-1 apenas não teve efeito sobre a sobrevida de camundongos com tumor, enquanto que a mistura de RNAs de citocina por si só prolongou a sobrevida, embora todos os camundongos eventualmente sucumbissem à carga tumoral (Figura 9D). O tratamento combinado aumentou ainda mais a sobrevida global neste cenário, indicando que o tratamento combinado com mistura de RNAs de citocina e anticorpo anti-PD-1 tem um efeito cumulativo, mesmo quando a lesão tratada é resistente à morte mediada por células T em virtude da falta de expressão de MHC I (Figura 9D). Exemplo 4 - Atividade Antitumoral em Modelos de Murino Adicionais Materiais e Métodos

[00868] Doze linhagens de células singênicas foram mantidas in vitro com meio diferente (mostrado abaixo) a 37 °C em uma atmosfera de 5% de CO2 no ar. As células tumorais serão subcultivadas rotineiramente duas vezes por semana. As células em uma fase de crescimento exponencial foram coletadas e contadas para inoculação do tumor. Cada camundongo foi inoculado através da via subcutânea com células tumorais em 0,1 mL de PBS para o desenvolvimento do tumor. Após a inoculação das células tumorais, os animais foram verificados diariamente quanto à morbidade e mortalidade. Durante o monitoramento de rotina, os animais foram verificados quanto a quaisquer efeitos do crescimento do tumor e tratamentos sobre o comportamento, tais como mobilidade, consumo de comida e água, ganho/perda de peso corporal (pesos corporais seriam medidos duas vezes por semana após a randomização), transtornos oculares/capilares e quaisquer outras anormalidades.

Mortalidade e sinais clínicos observados foram registrados em detalhes para animais individuais.

Os volumes do tumor foram medidos duas vezes por semana após a randomização em duas dimensões usando um paquímetro e o volume foi expresso em mm3 usando a fórmula: V = (L x W x W)/2, onde V é o volume do tumor, L é o comprimento do tumor (a dimensão tumoral mais longa) e W é a largura do tumor (a dimensão tumoral mais longa perpendicular a L). A dosagem, bem como as medições do tumor e do peso corporal, foram conduzidas em uma Câmara de Fluxo Laminar.

Os pesos corporais e os volumes do tumor foram medidos usando o software StudyDirectorTM (versão 3.1.399.19). Tabela 30. Informações sobre meio e linhagem de células Fornecedor da Quantidade de Linhagem Local de linhagem de Meio células/ de células inoculação células camundongo SIBS, Shanghai flanco Institutes for RPMI1640 + CT26 5 × 10e5 inferior Biological FBS a 10 % direito Sciences flanco RPMI1640 + Pan02 NIH 1 × 10e6 dianteiro FBS a 10 % direito CCTCC， China flanco RPMI1640 + H22 Center for Type 3 × 10e6 dianteiro FBS a 10 % Culture Collection direito flanco FDCC, Fudan DMEM + MC38 1×10e6 inferior Cell Center FBS a 10 % direito flanco RPMI1640 + A20 ATCC 5 × 10e5 inferior FBS a 10 % direito flanco Nanjing Keygen RPMI1640 + B16BL6 2 × 10e5 inferior biotech FBS a 10 % direito flanco DMEM + Renca ATCC 1 × 10e6 inferior FBS a 10 % direito SIBS, Shanghai flanco Institutes for DMEM + LL/2 5 × 10e5 inferior Biological FBS a 10 % direito Sciences flanco DMEM + EMT-6 ATCC 3 × 10e5 inferior FBS a 10 % direito

SIBS, Shanghai flanco Institutes for RPMI1640 + RM-1 1 × 10e6 inferior Biological FBS a 10 % direito Sciences SIBS, Shanghai flanco Institutes for DMEM + B16F10 2 × 10e5 inferior Biological FBS a 10 % direito Sciences SIBS, Shanghai flanco Institutes for DMEM + Hepa 1-6 5 × 10e6 dianteiro Biological FBS a 10 % direito Sciences Tabela 31. Design de Estudo Nível Solução Volume Frequência de de de & Duração N Tratamento ROA dose dosagem dosagem de (mg/kg) (mg/ml) (μL/g) Dosagem* Mistura de Q4D x 4 40 μg/ 40 μg/50 50 10 mRNAs de intratumoral (dias 1, 5, 9, tumor μl μl/tumor citocina 13) BIW x 3 semanas 10 Anti-PD-1 10 1 10 i.p. (dias 1, 4, 8, 11, 15, 18) Anti-PD-1 10 1 10 i.p. BIW x 3 semanas (dias 1, 4, 8, 11, 15, 18) 10 + Q4D x 4 Mistura de 40 μg/ 40 μg/50 50 (dias 1, 5, 9, RNAs de intratumoral tumor μl μl/tumor 13) citocina Resultados

[00869] Para entender melhor a influência da heterogeneidade do tumor, doze modelos de murino foram testados quanto à sensibilidade em relação à mistura de mRNAs de citocinas ou tratamento combinado com um anticorpo anti-PD-1. Em contraste com o anticorpo anti-PD1 individualmente, a maioria dos tipos de tumor eram sensíveis à terapia com mRNA de agente único. Além disso, todos os modelos mostraram desaceleração do crescimento do tumor após o tratamento combinado com mRNAs de citocina e terapia anti-PD1 (Figura 10), destacando ainda mais a versatilidade da terapia local com mRNAs que codificam citocinas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de tratamento de um indivíduo que tem um câncer de tumor sólido, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM-CSF, em que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1).

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiligante 1 de morte celular programada 1 (PD-L1).

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo não obteve sucesso em uma terapia de antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou terapia de antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo se tornou intolerante a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo se tornou resistente a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo se tornou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem câncer de tumor sólido resistente a anti- PD-1 e/ou anti-PD-L1.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um câncer de tumor sólido com resistência adquirida à terapia anti-PD-1 e/ou anti-PD-L1.

10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um câncer de tumor sólido com resistência inata à terapia anti-PD-1 e/ou anti-PD-L1.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um câncer de tumor sólido em estágio avançado, não passível de ressecção ou metastático.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer refratário ou resistente é aquele que não responde a um tratamento especificado.

13. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a refração ocorre desde o início do tratamento.

14. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a refração ocorre durante o tratamento.

15. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer é resistente antes do início do tratamento.

16. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um câncer que não responde à terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) e/ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

17. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um câncer que está se tornando refratário ou resistente a um tratamento especificado.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o tratamento especificado é uma terapia anti-PD1 ou anti-PD-L1.

19. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo se tornou menos responsivo à terapia desde que a recebeu pela primeira vez.

20. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo não recebeu a terapia, mas tem um tipo de câncer que normalmente não responde à terapia.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda selecionar um indivíduo que não obteve sucesso ou se tornou intolerante, resistente ou refratário a uma terapia antiproteína de morte celular programada 1 (PD-1) ou antiligante de proteína de morte celular programada 1 (PD-L1).

22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano.

23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um tumor sólido metastático.

24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um tumor sólido não passível de ressecção.

25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma célula cancerosa que compreende uma perda parcial ou total da função de beta-2-microglobulina (B2M).

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a célula cancerosa tem uma perda parcial da função de B2M.

27. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a célula cancerosa tem uma perda total da função de B2M.

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 27, caracterizado pelo fato de que a perda parcial ou total da função de B2M é avaliada ao comparar uma célula cancerosa com uma célula não cancerosa do mesmo indivíduo, opcionalmente em que a célula não cancerosa é do mesmo tecido do qual a célula cancerosa foi derivada.

29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 28, caracterizado pelo fato de que o indivíduo compreende uma célula que compreende uma mutação no gene de B2M.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que a mutação é uma substituição, inserção ou eliminação.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 30, caracterizado pelo fato de que o gene de B2M compreende uma perda de heterozigosidade (LOH).

32. Método, de acordo com a reivindicação 29 ou 30, caracterizado pelo fato de que a mutação é uma mutação deslocamento de quadro.

33. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a mutação de deslocamento de quadro está no éxon 1 de B2M.

34. Método, de acordo com a reivindicação 32 ou 33, caracterizado pelo fato de que a mutação deslocamento de quadro compreende p.Leu13fs e/ou p.Ser14fs.

35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um nível reduzido de proteína B2M comparado com um indivíduo sem uma perda parcial ou total da função de B2M.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um nível reduzido de proteína do principal complexo de histocompatibilidade de classe I (MHC I) expressa sobre a superfície comparado com um controle, opcionalmente em que o controle é uma amostra não cancerosa do mesmo indivíduo.

37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é um tumor epitelial, tumor de próstata, tumor ovariano, tumor de células renais, tumor do trato gastrintestinal, tumor hepático, tumor colorretal, tumor de vasculatura, tumor mesotelioma, tumor pancreático, tumor de mama, tumor sarcoma, tumor de pulmão, tumor de cólon, tumor melanoma, tumor de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas, tumor neuroblastoma, tumor testicular, tumor carcinoma, tumor adenocarcinoma, tumor seminoma, retinoblastoma, carcinoma de células escamosas cutâneas (CSCC), carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), câncer de cabeça e pescoço, tumor osteossarcoma, tumor de rim, tumor de tireoide, câncer de tireoide anaplásico (ATC), tumor de fígado, tumor de cólon ou outros tumores sólidos passíveis de injeção intratumoral.

38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é linfoma.

39. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o linfoma é linfoma não Hodgkin.

40. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é linfoma de Hodgkin.

41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é melanoma.

42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é melanoma e em que o melanoma é melanoma uveal ou melanoma da mucosa.

43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é melanoma que compreende metástases superficiais, subcutâneas e/ou linfonodos passíveis de injeção intratumoral.

44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é HNSCC e/ou melanoma da mucosa com apenas locais da mucosa.

45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é melanoma.

46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido não é melanoma.

47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que os RNAs são administrados como monoterapia.

48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 47, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem mais de um tumor sólido.

49. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que pelo menos um tumor é resistente, refratário ou intolerante a uma terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1 e pelo menos um tumor não é.

50. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que tumores resistentes e não resistentes são tratados com sucesso.

51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido está no estágio III, subconjuntos do estágio III, estágio IV ou subconjuntos do estágio IV.

52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 51, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido está em estágio avançado e não é passível de ressecção.

53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 52, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido se espalhou de sua origem para outro local no indivíduo.

54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 53, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido tem uma ou mais lesões cutâneas ou subcutâneas, opcionalmente em que o câncer não é um câncer de pele.

55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 45 e 47 a 54, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é melanoma em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV.

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 55, caracterizado pelo fato de que o indivíduo não foi tratado anteriormente com uma terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1.

57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 56, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é aquele em que uma terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1 não é usada rotineiramente.

58. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido não é melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de rim, câncer de cabeça e pescoço, câncer de mama ou CSCC.

59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 58, caracterizado pelo fato de que o indivíduo não tem outras opções de tratamento.

60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, 46 a 54 e 56 a 58, caracterizado pelo fato de que: i. o câncer de tumor sólido não é melanoma, CSCC ou HNSCC; e ii. uma terapia anti-PD-1 ou anti-PD-L1 não é usada rotineiramente; e iii. não há outras opções de tratamento adequadas.

61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é aquele para o qual uma terapia anti-PD1 ou anti-PD-L1 é usada rotineiramente, mas que ainda não foi tratado com a terapia.

62. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 61, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido é melanoma não passível de ressecção em estágio IIIB, estágio IIIC ou estágio IV que é resistente e/ou refratário à terapia anti-PD-1 ou anti- PD-L1.

63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 62, caracterizado pelo fato de que o câncer de tumor sólido compreende lesões superficiais ou subcutâneas e/ou metástases.

64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem duas ou três lesões tumorais.

65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 64, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem doença mensurável de acordo com os critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) 1.1.

66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 65, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma expectativa de vida de mais de 3 meses.

67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 66, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem pelo menos 18 anos de idade.

68. Método para o tratamento de um melanoma em estágio avançado, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo que tem um melanoma em estágio avançado uma quantidade eficaz de RNAs que compreendem um RNA que codifica uma proteína IL-12sc, um RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi, um RNA que codifica uma proteína IFNα e um RNA que codifica uma proteína GM- CSF, em que: i. o indivíduo tem pelo menos 18 anos de idade; ii. o indivíduo não obteve sucesso em terapias anti-PD1 ou anti-PD-L1 anteriores; iii. o indivíduo tem um mínimo de 2 lesões; e iv. o melanoma compreende um tumor que é adequado para injeção intratumoral direta.

69. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 68, caracterizado pelo fato de que: i. o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90%, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 17 ou 18; e/ou ii. a proteína IL-12sc compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; e/ou iii. o RNA que codifica uma proteína IL-12sc compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %,

96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p40 de IL-12sc (nucleotídeos 1-984 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a porção p30 de IL-12sc (nucleotídeos 1027-1623 de SEQ ID NO: 17 ou 18) e compreende ainda nucleotídeos entre as porções p40 e p35 que codificam um polipeptídeo ligante.

70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 69, caracterizado pelo fato de que: i. o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 26; e/ou ii. a proteína IL-15 sushi compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; e/ou iii. o RNA que codifica uma proteína IL-15 sushi compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com o domínio sushi do receptor alfa de IL-15 (nucleotídeos 1-321 de SEQ ID NO: 26) e pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a IL-15 madura (nucleotídeos 382- 729 de SEQ ID NO: 26) e compreende ainda opcionalmente nucleotídeos entre o domínio sushi de IL-15 e a IL-15 madura que codifica um polipeptídeo ligante.

71. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 70, caracterizado pelo fato de que: i. o RNA que codifica uma proteína IFNα compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %,

90%, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 22 ou 23 e/ou ii. a proteína IFNα compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19.

72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 71, caracterizado pelo fato de que: i. o RNA que codifica uma proteína GM-CSF compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 29 e/ou ii. a proteína GM-CSF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27.

73. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 72, caracterizado pelo fato de que pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina.

74. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 73, caracterizado pelo fato de que pelo menos um RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

75. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 74, caracterizado pelo fato de que cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de pelo menos uma uridina.

76. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 75, caracterizado pelo fato de que cada RNA compreende um nucleosídeo modificado no lugar de cada uridina.

77. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

73 a 76, caracterizado pelo fato de que o nucleosídeo modificado é independentemente selecionado a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil- pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U).

78. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 77, caracterizado pelo fato de que pelo menos um RNA compreende mais de um tipo de nucleosídeo modificado, em que os nucleosídeos modificados são independentemente selecionados a partir de pseudouridina (ψ), N1-metil-pseudouridina (m1ψ) e 5-metil-uridina (m5U).

79. Método, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que o nucleosídeo modificado é N1-metil-pseudouridina (m1ψ).

80. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 79, caracterizado pelo fato de que pelo menos um RNA compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G.

81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 80, caracterizado pelo fato de que cada RNA compreende o cap 5' m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G.

82. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 81, caracterizado pelo fato de que pelo menos um RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

83. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 82, caracterizado pelo fato de que cada RNA compreende uma 5' UTR que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90%, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6.

84. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 83, caracterizado pelo fato de que pelo menos um RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98%, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

85. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 84, caracterizado pelo fato de que cada RNA compreende uma 3' UTR que compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8.

86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 85, caracterizado pelo fato de que pelo menos um RNA compreende uma cauda poli-A.

87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 86, caracterizado pelo fato de que cada RNA compreende uma cauda poli-A.

88. Método, de acordo com a reivindicação 86 ou 87, caracterizado pelo fato de que a cauda poli-A compreende pelo menos 100 nucleotídeos.

89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 86 a 88, caracterizado pelo fato de que a cauda poli-A compreende ou consiste na cauda poli-A apresentada em SEQ ID NO: 30.

90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 89, caracterizado pelo fato de que um ou mais RNA compreendem: i. um cap 5' que compreende m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG ou 3'-

O-Me-m7G(5')ppp(5')G; ii. uma 5' UTR que compreende (i) uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % de identidade com uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 4 e 6; iii. uma 3' UTR que compreende (i) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8 ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80% de identidade com a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 8; e iv. uma cauda poli-A que compreende pelo menos 100 nucleotídeos.

91. Método, de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que a cauda poli-A compreende ou consiste em SEQ ID NO: 30.

92. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 91, caracterizado pelo fato de que o tratamento do câncer de tumor sólido compreende redução do tamanho de um tumor ou prevenção de metástase do câncer em um indivíduo.

93. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 92, caracterizado pelo fato de que os RNAs são administrados ao mesmo tempo.

94. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 93, caracterizado pelo fato de que os RNAs são administrados por meio de injeção.

95. Método, de acordo com a reivindicação 93 ou 94, caracterizado pelo fato de que os RNAs são misturados em solução líquida antes da injeção.

96. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 95, caracterizado pelo fato de que os RNAs são administrados em um ambiente neoadjuvante.

Design geral de tratamento

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 309/363 Fase de escalonamento de dose: Esquema de dose fixa Fase de expansão: Esquema de dose fixa

Escalonamento 1/16

Escalonamento com controle de dosagem excessiva (EWOC) acelerado

Ínterim

Esquema de tratamento Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 310/363 Triagem Período de tratamento Acompanhamento (ciclo de 28 dias) se necessário Administrações de mistura de RNAs de citocina 4 injeções intratumorais por ciclo (C) 2/16

S S S S S S S S S S S S

PK completa PK parcial PK completa Registro ICF de Triagem Período de avaliação de DLT (Ciclo 1) Visita de final de tratamento (30 5 dias após Última o último injeção tratamento)

Excisar e cultivar ex vivo

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 311/363 Implantar em camundongos não expostos (näive) 3/16

MC38-Resistente

IgG de controle

Volume do tumor Dias após implante

Expressão de marcador MC38-Resistente

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 313/363 Linhagem de células

Não corado 5/16

MC38-Resistente MC38-Resistente MC38-Resistente

MC38-Resistente

Genes regulados de MC38-Resistente

Expressão gênica global

Células T CD3+ Células T CD8+ Células NK

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 315/363 Resistente Resistente Resistente 7/16

Linhagem de células B Linhagem monocítica Fibroblastos

Pontuação MCPCounter Resistente Resistente Resistente

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 316/363 8/16

Macrófagos

% células

% células % células

% células MC38- MC38- MC38- MC38- Resistente Resistente Resistente Resistente

Linhagem de células

MC38-Resistente

MC38-Resistente Área % de CD45+

MC38- Resistente

Intensidade de caspase 3/7

MC38-Resistente

Sem efetores

MC38-Resistente

Não expostos (näive)

mRNA de Luc mRNA de citocina

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 319/363 Volume do tumor Volume do tumor 11/16

Dias após implante Dias após implante mRNA de Luc mRNA de citocina

MC38-Resistente Volume do tumor

Volume do tumor Dias após implante Dias após implante

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 320/363 mRNA de Luc

Mistura de mRNAs de citocina

MC38-Resistente 12/16

Sobrevida percentual Mistura de mRNAs de citocina

Dias após tratamento

Contagem

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 322/363 Sobrevida percentual

Sobrevida percentual Dias após inoculação do tumor Dias após inoculação do tumor mRNA de controle mRNA de controle Mistura de mRNAs de citocina 14/16

Sobrevida percentual Sobrevida percentual

Dias após inoculação do tumor Dias após inoculação do tumor mRNA de controle Mistura de mRNAs de citocina mRNA de controle Mistura de mRNAs de citocina

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 323/363 Tratamento

Mistura de mRNAs de citocina 15/16

Mistura de mRNAs de citocina e anti-PD1

Petição 870210063836, de 14/07/2021, pág. 324/363 Peritumoral Área não cancerosa

Periferia do tumor

Centro do tumor 16/16