JP2022518235A - 進行期固形腫瘍がんの治療用ｒｎａ - Google Patents

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Abstract

本開示は、先天性および後天性ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１療法を含む、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象を治療するための、ならびに抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法が失敗しているか、不耐容であるか、抵抗性であるか、または不応性であるかを問わず、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを有する対象を治療のための、治療用ＲＮＡの分野に関する。【選択図】図７

Description

本出願は、２０１９年１月２１日に出願された米国特許仮出願第６２／７９４，８８９号、２０１９年１０月２５日に出願された米国特許仮出願第６２／９２６，３８４号、および２０１９年１１月１２日に出願された欧州特許出願第１９３０６４６１．５号に対する優先権の利益を主張するものであり、これらの文献の各々の内容は、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照によって組み入れられる。
本開示は、例えば、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に対して後天的または先天的抵抗性を有する対象、および進行期または転移性固形腫瘍を有する対象を含む、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象におけるものを含む、固形腫瘍がんを治療するための治療用ＲＮＡの分野に関する。
国立がん研究所は、固形腫瘍を、通常は嚢胞または液体領域を含まない組織の異常な塊であると定義している。固形腫瘍は、卵巣、乳房、結腸、および他の組織を含む任意の組織または臓器に物理的に位置することができ、黒色腫、皮膚扁平上皮がん（ＣＳＣＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、非小細胞肺がん、腎臓がん、頭頸部がん、甲状腺がん、結腸がん、肝臓がん、卵巣がん、乳がんが挙げられる。
抗ＰＤ－１療法および抗ＰＤ－Ｌ１療法などによる免疫チェックポイント遮断は、臨床にて抗がん応答を誘発するが、患者の大部分は治療から利益を得ることがない。チェックポイント遮断に対する先天的および後天的抵抗性の幾つかの機序が明らかにされており、そうした機序としては、ＭＨＣＩおよびＩＦＮγシグナル伝達経路の突然変異が挙げられる。例えば、非特許文献１を参照されたい。また非特許文献２を参照されたい。
進行期固形腫瘍がんは、治療が特に困難である。現行の治療としては、外科手術、放射線療法、免疫療法、および化学療法が挙げられる。小さな局所腫瘍の場合は、外科手術のみで適切に治療することができるが、大きな浸潤腫瘍は、外科手術では切除できない場合がある。放射線療法および化学療法などの他の一般的治療は、望ましくない副作用および健康な細胞に対する損傷に関連する。
Ｓａｄｅ－Ｆｅｌｄｍａｎら（２０１７年）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ８巻：１１３６頁 Ｓｈａｒｍａら（２０１７年）Ｃｅｌｌ １６８巻：７０７～７２３頁
外科手術および現行療法は、固形腫瘍の大部分を死滅させることができることがあるものの、追加の細胞（がん幹細胞を含む可能性がある）が療法を生き伸びる場合がある。こうした細胞は、時間の経過と共に、がん再発に結び付く新しい腫瘍を形成することができる。集学的従来療法にも関わらず、多くのタイプの固形腫瘍で無病生存率は２５％未満である。集学的療法に抵抗性であるかまたは療法後に再発した固形腫瘍は、治療がさらにより困難であり、長期生存率は１０％未満である。特に、例えば、抗プログラム細胞死タンパク質１またはそのリガンドに対するモノクローナル抗体を使用した免疫療法（抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法）に失敗した患者には高度な必要性が存在する。
本明細書には、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象におけるものを含む、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんなどの固形腫瘍の治療における現在の欠点を克服することができる組成物、使用、および方法が開示されている。本明細書に開示の通りの治療用ＲＮＡの投与は、腫瘍サイズを低減し、進行疾患までの時間を延長し、ならびに／または腫瘍の転移および／もしくは再発を防ぎ、最終的には生存期間を延長することができる。
本明細書には、とりわけ、固形腫瘍がんを有する対象を治療するための方法であって、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量のＲＮＡを投与することを含み、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、方法が提供される。
一部の実施形態では、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている患者の固形腫瘍がんを治療するための方法であって、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている患者に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量のＲＮＡを投与することを含む方法が提供される。
抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１抵抗性固形腫瘍がんを有する対象を治療するための方法であって、抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１抵抗性固形腫瘍がんを有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量ＲＮＡを投与することを含む方法が提供される。
本明細書には、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して後天的抵抗性を示す固形腫瘍がんを有する対象を治療するための方法であって、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して後天的抵抗性を示す固形腫瘍がんを有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量のＲＮＡを投与することを含む方法が包含される。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を示す固形腫瘍がんを有する対象を治療するための方法であって、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を示す固形腫瘍がんを有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量のＲＮＡを投与することを含む方法が提供される。
本明細書に提供されている実施形態は、不耐容性、抵抗性、または不応性に関して、いかなる科学理論にも限定されない。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－１療法に対する不耐容、抵抗性、不応性（後天的および先天的抵抗性を含む）は、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）機能の部分的または完全な喪失を含むがん細胞に起因する。一部の実施形態では、対象は、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）機能の部分的または完全な喪失を含むがん細胞を有する。一部の実施形態では、がん細胞は、Ｂ２Ｍ機能の部分的な喪失を有する。一部の実施形態では、がん細胞は、Ｂ２Ｍ機能の完全な喪失を有する。一部の実施形態では、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失は、がん細胞を、同じ対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価し、場合により、非がん細胞は、がん細胞が由来したのと同じ組織に由来する。一部の実施形態では、がん細胞は、正常なＢ２Ｍ機能を有するがん細胞を含む固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の２５％またはそれよりも多くがＢ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の５０％またはそれより多くがＢ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の７５％またはそれより多くがＢ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の９５％またはそれより多くがＢ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、固形腫瘍は全体が（例えば、固形腫瘍から採取された生検で評価して）、固形腫瘍が由来する正常な細胞または組織と比較して、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する。一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ遺伝子に突然変異（例えば、機能の部分的または完全な喪失をもたらすもの）を含む。突然変異は、置換、挿入、または欠失であってもよい。一部の実施形態では、Ｂ２Ｍ遺伝子は、ヘテロ接合性の喪失（ＬＯＨ）を含む。
一部の実施形態では、突然変異はフレームシフト突然変異である。一部の実施形態では、フレームシフト突然変異は、Ｂ２Ｍのエクソン１に存在する。一部の実施形態では、フレームシフト突然変異は、ｐ．Ｌｅｕ１３ｆｓおよび／またはｐ．Ｓｅｒ１４ｆｓを含む。一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を示さない対象と比較して、低減されたレベルのＢ２Ｍタンパク質を有する。
一部の場合では、固形腫瘍（例えば、固形腫瘍内のがん細胞）は、低減されたレベルの細胞表面発現（本明細書では「表面発現」とも呼ばれる）主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）を有する。一部の実施形態では、固形腫瘍サンプル（例えば、固形腫瘍のがん細胞を含む生検）は、対照と比較して、低減されたレベルの細胞表面発現ＭＨＣ Ｉを有し、場合により対照は、同じ対象に由来する対応する非がん性サンプルである。一部の実施形態では、固形腫瘍のがん細胞の表面に発現されるＭＨＣ Ｉのレベルは、Ｂ２Ｍ遺伝子の突然変異の結果として低減される。一部の実施形態では、対象は、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを含むがん細胞を有する。一部の実施形態では、がん細胞は、表面発現ＭＨＣ Ｉを有していない。一部の実施形態では、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉは、がん細胞を、同じ対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価され、場合により非がん細胞は、がん細胞が由来したのと同じ組織に由来する。一部の実施形態では、がん細胞は、正常レベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有するがん細胞を含む固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の２５％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の５０％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の７５％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の９５％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、固形腫瘍は全体が（例えば、固形腫瘍から採取された生検で評価して）、固形腫瘍が由来する正常な細胞または組織と比較して、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する。
一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを有する対象を治療するための方法であって、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量のＲＮＡを投与することを含む方法が提供される。
一部の実施形態では、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている。一部の実施形態では、対象は、抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている。
一部の実施形態では、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗している。
一部の実施形態では、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に対して不耐容になっている。
一部の実施形態では、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法および／または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に対して抵抗性になっている。
一部の実施形態では、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に対して不応性になっている。一部の実施形態では、不応性または抵抗性がんは、指定の治療に応答しないがんである。一部の実施形態では、不応性は、治療のまさに最初から生じる。一部の実施形態では、不応性は治療中に生じる。
一部の実施形態では、がんは、治療が始まる前に抵抗性である。一部の実施形態では、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法および／または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に応答しないがんを有する。一部の実施形態では、対象は、指定の治療に対して不応性または抵抗性になりつつあるがんを有する。一部の実施形態では、指定の治療は、抗ＰＤ１療法としてである。一部の実施形態では、特定の治療は、抗ＰＤ－Ｌ１療法としてである。一部の実施形態では、対象は、療法を最初に受けて以来、療法に対する応答性が低下している。一部の実施形態では、対象は、療法を受けたことがないが、典型的には療法に応答しないタイプのがんを有する。
一部の実施形態では、対象はヒトである。
一部の実施形態では、対象は、以前に抗ＰＤ－１療法でも抗ＰＤ－Ｌ１療法でも治療されたことがない。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法も抗ＰＤ－Ｌ１療法も常用的に使用されないがんである。
一部の実施形態では、対象は、転移性固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、非転移性固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、切除不能な固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、転移性で切除不能な固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、非転移性で切除不能な固形腫瘍を有する。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、上皮腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、胃腸管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を有する腫瘍（ｔｕｍｏｒ ｗｉｔｈ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ）、中皮腫腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、黒色腫腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽細胞腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、頭頸部がん、骨肉腫腫瘍、皮膚扁平上皮がん（ＣＳＣＣ）、非小細胞肺がん、腎臓腫瘍、甲状腺腫瘍、肝臓腫瘍、または腫瘍内注射に適した他の固形腫瘍である。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫を含むリンパ腫である。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、黒色腫である。一部の実施形態では、黒色腫は、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、黒色腫、場合によりブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫であり、腫瘍内注射に適した表在性転移、皮下転移、および／またはリンパ節転移を含む。
一部の実施形態では、腫瘍内注射は、リンパ節内の固形腫瘍転移への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、リンパ節内のリンパ腫腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、対象の皮膚表面から１０ｃｍ以内にある原発性または二次性固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、対象の皮膚表面から５ｃｍ以内にある原発性または二次性固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、皮膚固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、皮膚固形腫瘍は、転移したものである。一部の実施形態では、皮膚固形腫瘍は、皮膚がんである。一部の実施形態では、皮膚固形腫瘍は、皮膚がんではない。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、皮下固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、皮下固形腫瘍は、転移したものである。一部の実施形態では、皮下固形腫瘍は、皮膚がんである。一部の実施形態では、皮下固形腫瘍は、皮膚がんではない。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、上皮腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、前立腺腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、卵巣腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腎細胞腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、胃腸管腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肝腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸直腸腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、脈管構造を有する腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、中皮腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、膵臓腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳房腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肉腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肺腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、黒色腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、小細胞肺腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、非小細胞肺がん腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、神経芽細胞腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、精巣腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、癌腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腺癌腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、精上皮腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、網膜芽細胞腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、ＨＮＳＣＣである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、頭頸部がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、骨肉腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腎臓がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、甲状腺がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、未分化甲状腺がん（ＡＴＣ）である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肝臓がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、上記のいずれか２つである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、上記のいずれか２つまたはそれ以上である。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、リンパ腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、非ホジキンリンパ腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、ホジキンリンパ腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍リンパ腫は、中枢神経系リンパ腫ではない。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ＨＮＳＣＣである。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、粘膜部位のみを有する粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ＨＮＳＣＣおよび粘膜部位のみを有する粘膜黒色腫である。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、乳がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、乳房肉腫またはトリプルネガティブ乳がんである。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、単独療法として投与される。
一部の実施形態では、対象は、１つよりも多くの固形腫瘍を有する。一部の場合では、少なくとも１つの腫瘍は、ＰＤ－１療法またはＰＤ－Ｌ１療法に抵抗性、不応性、または不耐容である。一部の実施形態では、少なくとも１つの腫瘍は、ＰＤ－１療法またはＰＤ－Ｌ１療法に抵抗性、不応性、または不耐容であり、少なくとも１つの腫瘍はそうではない。１つよりも多くの固形腫瘍が存在する一部の実施形態では、抵抗性腫瘍および非抵抗性腫瘍が存在する場合、その両方とも治療が成功する。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩのサブセット、ステージＩＶ、またはステージＩＶのサブセットである。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＩＶのがんである。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、進行期である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、切除不能である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、進行期および切除不能である。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、その発生源から対象の別の部位へと広がっている。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、１つまたはそれ以上の皮膚病変または皮下病変を有する。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、転移している。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、転移しているが、皮膚がんではない。
一部の実施形態では、対象には、他の治療選択肢がない。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法が常用的に使用されるが、こうした療法ではまだ治療されていない固形腫瘍がんである。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に抵抗性および／または不応性であるステージＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、または切除不能なステージＩＶの黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、表在性または皮下の病変および／または転移を含む。
一部の実施形態では、対象は、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）１．１基準に従って測定可能な疾患を有する。一部の実施形態では、対象は、３カ月よりも長い平均余命を有する。一部の実施形態では、対象は、少なくとも１８歳である。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、腫瘍内注射される。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、固形腫瘍がんの粘膜部位のみに腫瘍内注射される。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、約５カ月間投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、毎週１回投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、最大で５２週間投与される。
一部の実施形態では、ＩＦＮαタンパク質は、ＩＦＮα２ｂタンパク質である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列、もしくは配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／またはＩＬ－１２ｓｃタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列、もしくは配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／またはＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃのｐ４０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１～９８４）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性およびＩＬ－１２ｓｃのｐ３０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１０２７～１６２３）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ｐ４０部分とｐ３５部分との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２６のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／またはＩＬ－１５スシタンパク質は、配列番号２４のアミノ酸配列、もしくは配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／またはＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１５受容体アルファのスシドメイン（配列番号２６のヌクレオチド１～３２１）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性および成熟ＩＬ－１５（配列番号２６のヌクレオチド３８２～７２９）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、場合によりＩＬ－１５のスシドメインと成熟ＩＬ－１５との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む。
一部の実施形態では、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；および／またはＩＦＮαタンパク質は、配列番号１９のアミノ酸配列、もしくは配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２９のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；および／またはＧＭ－ＣＳＦタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列、もしくは配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、１つよりも多くのタイプの修飾ヌクレオシドを含み、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧ（ｍ２ ７，３｀ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ｍ２’－ＯＡｐＧとも呼ばれることがある）を含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧ（ｍ２ ７，３｀ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ｍ２’－ＯＡｐＧとも呼ばれることがある）を含む。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列番号３０に示されているポリＡテールを含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＲＮＡは、
ｉ． ｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む５’キャップ；
ｉｉ． （ｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲ；
ｉｉｉ． （ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲ；ならびに
ｉｖ． 少なくとも１００個のヌクレオチドを含むポリＡテール
を含む。
一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列番号３０を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、固形腫瘍の治療は、対象において腫瘍のサイズを低減することまたはがん転移を予防することを含む。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、同時に投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、注射により投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、注射前に液体溶液中で一緒に混合される。
本出願のさらなる実施形態は、以下の通りである：
実施形態Ａ１． 固形腫瘍がんを有する対象の治療に使用するための、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む組成物であって、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法もしくは抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、組成物。
実施形態Ａ２． 抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法もしくは抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象の治療に使用するための、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡを含む組成物であって、このＲＮＡは、ＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、組成物。
実施形態Ａ３． 抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法もしくは抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象の治療に使用するための、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡを含む組成物であって、このＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、組成物。
実施形態Ａ４． 抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法もしくは抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象の治療に使用するための、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡを含む組成物であって、このＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、組成物。
実施形態Ａ５． 抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法もしくは抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象の治療に使用するための、ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む組成物であって、このＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、組成物。
実施形態Ａ６． 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、実施形態Ａ１～Ａ５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７． 対象は、抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、実施形態Ａ１～Ａ６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８． 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗している、実施形態Ａ１～Ａ７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９． 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に不耐容になっている、実施形態Ａ１～Ａ８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１０． 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に抵抗性になっている、実施形態Ａ１～Ａ９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１１． 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に不応性になっている、実施形態Ａ１～Ａ１０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１２． 不応性または抵抗性がんは、指定の治療に応答しないがんである、実施形態Ａ１～Ａ１１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１３． 不応性は、治療のまさに最初から生じる、実施形態Ａ１～Ａ１２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１４． 不応性は、治療中に生じる、実施形態Ａ１～Ａ１３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１５． がんは、治療が始まる前に抵抗性である、実施形態Ａ１～Ａ１４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１６． 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法および／または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に応答しないがんを有する、実施形態Ａ１～Ａ１５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１７． 対象は、指定の治療に不応性または抵抗性になりつつあるがんを有する、実施形態Ａ１～Ａ１６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ１８． 指定の治療は、抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法としてである、実施形態Ａ１７に記載の組成物。
実施形態Ａ１９． 対象は、療法を最初に受けて以来、療法に対する応答性が低下している、実施形態Ａ１～Ａ１８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２０． 対象は、療法を受けたことがないが、典型的には療法に応答しないタイプのがんを有する、実施形態Ａ１～Ａ１９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２１． 対象は、抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１抵抗性固形腫瘍がんを有する、実施形態Ａ１～Ａ２０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２２． 対象は、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して後天的抵抗性を示す固形腫瘍がんを有する、実施形態Ａ１～Ａ２１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２３． 対象は、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を示す固形腫瘍がんを有する、実施形態Ａ１～Ａ２２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２４． 対象は、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを有する、実施形態Ａ１～Ａ２３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２５． 抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法もしくは抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象を選択する初期ステップをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ２４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２６． 対象はヒトである、実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２７． 対象は、転移性固形腫瘍を有する、実施形態Ａ１～Ａ２６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２８． 対象は、切除不能な固形腫瘍を有する、実施形態Ａ１～Ａ２７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ２９． 対象は、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）機能の部分的または完全な喪失を含むがん細胞を有する、実施形態Ａ１～Ａ２８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３０． がん細胞は、Ｂ２Ｍ機能の部分的喪失を有する、実施形態Ａ２９に記載の組成物。
実施形態Ａ３１． がん細胞は、Ｂ２Ｍ機能の完全な喪失を有する、実施形態Ａ２９に記載の組成物。
実施形態Ａ３２． Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失は、がん細胞を、同じ対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価され、場合により非がん細胞は、がん細胞が由来したのと同じ組織に由来する、実施形態Ａ１～Ａ３１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３３． 対象は、Ｂ２Ｍ遺伝子に突然変異を含む、実施形態Ａ１～Ａ３２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３４． 突然変異は、置換、挿入、または欠失である、実施形態Ａ１～Ａ３３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３５． Ｂ２Ｍ遺伝子は、ヘテロ接合性の喪失（ＬＯＨ）を含む、実施形態Ａ１～Ａ３４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３６． 対象は、フレームシフト突然変異を含む、実施形態Ａ１～Ａ３５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３７． 対象は、Ｂ２Ｍのエクソン１にフレームシフト突然変異を含む、実施形態Ａ１～Ａ３６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３８． 対象は、ｐ．Ｌｅｕ１３ｆｓおよび／またはｐ．Ｓｅｒ１４ｆｓを含むフレームシフト突然変異を含む、実施形態Ａ１～Ａ３７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ３９． 対象は、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有していない対象と比較して、低減されたレベルのＢ２Ｍタンパク質を有する、実施形態Ａ１～Ａ３８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４０． 対象は、対照と比較して、低減されたレベルの表面発現主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）を有し、場合により対照は、同じ対象に由来する非がん性サンプルである、実施形態Ａ１～Ａ３９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４１． 固形腫瘍がんは、上皮腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、胃腸管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を有する腫瘍、中皮腫腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、黒色腫腫瘍、小細胞肺腫瘍、非小細胞肺がん、神経芽細胞腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、頭頸部がん、骨肉腫腫瘍、腎臓腫瘍、甲状腺腫瘍、未分化甲状腺がん（ＡＴＣ）、肝臓がん、結腸腫瘍、または腫瘍内注射に適した他の固形腫瘍である、実施形態Ａ１～Ａ４０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４２． 固形腫瘍がんは、黒色腫である、実施形態Ａ１～Ａ４１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４３． 固形腫瘍がんは、黒色腫ではない、実施形態Ａ１～Ａ４２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４４． 固形腫瘍がんは黒色腫であり、黒色腫は、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫である、実施形態Ａ１～Ａ４２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４５． 固形腫瘍がんが、腫瘍内注射に適した表在性転移、皮下転移、および／またはリンパ節転移を含む黒色腫である、実施形態Ａ１～Ａ４３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４６． 固形腫瘍がんは、ＨＮＳＣＣおよび／または粘膜部位のみを有する粘膜黒色腫である、実施形態１５に記載の組成物。
実施形態Ａ４７． ＲＮＡは、単独療法として投与される、実施形態Ａ１～Ａ４６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４８． 対象は、１つよりも多くの固形腫瘍を有する、実施形態Ａ１～Ａ４７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ４９． 少なくとも１つの腫瘍は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に抵抗性であるか、不応性であるか、または不耐容であり、少なくとも１つの腫瘍はそうではない、実施形態Ａ１～Ａ４８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５０． 抵抗性腫瘍および非抵抗性腫瘍の治療が両方とも成功する、実施形態Ａ４９に記載の組成物。
実施形態Ａ５１． 固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩのサブセット、ステージＩＶ、またはステージＩＶのサブセットである、実施形態Ａ１～Ａ５０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５２． 固形腫瘍がんは、進行期であり切除不能である、実施形態Ａ１～Ａ５１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５３． 固形腫瘍は、その発生源から対象の別の部位に広がっている、実施形態Ａ１～Ａ５２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５４． 固形腫瘍がんは、１つまたはそれ以上の皮膚病変または皮下病変を有し、場合により、がんは皮膚がんではない、実施形態Ａ１～Ａ５３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５５． 固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＩＶの黒色腫である、実施形態Ａ１～Ａ５４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５６． 対象は、以前に抗ＰＤ－１療法でも抗ＰＤ－Ｌ１療法でも治療されたことがない、実施形態Ａ１～Ａ５５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５７． 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法も抗ＰＤ－Ｌ１療法も常用的に使用されない固形腫瘍がんである、実施形態Ａ１～Ａ５６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５８． 固形腫瘍がんは、黒色腫でもなく、非小細胞肺がんでもなく、腎臓がんでもなく、頭頸部がんでもなく、乳がんでもなく、ＣＳＣＣでもない、実施形態Ａ１～５７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ５９． 対象は、他の治療選択肢を有していない、実施形態Ａ１～Ａ５８のいずれか１つの組成物。
実施形態Ａ６０．
ａ． 固形腫瘍がんは、黒色腫でもなく、ＣＳＣＣでもなく、ＨＮＳＣＣでもなく、および
ｂ． 抗ＰＤ－１療法も抗ＰＤ－Ｌ１療法も常用的に使用されず、および
ｃ． 他の好適な治療選択肢がない、
実施形態Ａ１～Ａ５９のいずれか１つの組成物。
実施形態Ａ６１． 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法が常用的に使用される固形腫瘍がんであるが、こうした療法でまだ治療されていない、実施形態Ａ１～Ａ６０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６２． 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して抵抗性および／または不応性である、ステージＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、または切除不能なステージＩＶの黒色腫である、実施形態Ａ１～Ａ６１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６３． 固形腫瘍がんは、表在性または皮下の病変および／または転移を含む、実施形態Ａ１～６２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６４． 対象は、２つまたは３つの腫瘍病変を有する、実施形態Ａ１～Ａ６３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６５． 対象は、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１基準に従って測定可能な疾患を有する、実施形態Ａ１～Ａ６４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６６． 対象は、３カ月よりも長い平均余命を有する、実施形態Ａ１～Ａ６５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６７． 対象は、少なくとも１８歳である、実施形態Ａ１～Ａ６６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６８．
ａ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列、もしくは配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
ｂ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列、もしくは配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／または
ｃ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃのｐ４０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１～９８４）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性およびＩＬ－１２ｓｃのｐ３０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１０２７～１６２３）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ｐ４０部分とｐ３５部分との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む、
実施形態Ａ１～Ａ６７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ６９．
ａ． ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２６のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
ｂ． ＩＬ－１５スシタンパク質は、配列番号２４のアミノ酸配列、もしくは配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／または
ｃ． ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１５受容体アルファのスシドメイン（配列番号２６のヌクレオチド１～３２１）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性および成熟ＩＬ－１５（配列番号２６のヌクレオチド３８２～７２９）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、場合により、ＩＬ－１５のスシドメインと成熟ＩＬ－１５との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む、
実施形態Ａ１～Ａ６８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７０．
ａ． ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
ｂ． ＩＦＮαタンパク質は、配列番号１９のアミノ酸配列、もしくは配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態Ａ１～Ａ６９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７１．
ａ． ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２９のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
ｂ． ＧＭ－ＣＳＦタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列、もしくは配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態Ａ１～Ａ７０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７２． 少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ａ１～Ａ７１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７３． 少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ａ１～Ａ７２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７４． 各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ａ１～Ａ７３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７５． 各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ａ１～Ａ７４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７６． 修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される、実施形態Ａ７２～Ａ７５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７７． 少なくとも１つのＲＮＡは、１つよりも多くのタイプの修飾ヌクレオシドを含み、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される、実施形態Ａ１～Ａ７６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ７８． 修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である、実施形態Ａ７７に記載の組成物。
実施形態Ａ７９． 少なくとも１つのＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む、実施形態Ａ１～Ａ７８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８０． 各ＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む、実施形態Ａ１～Ａ７９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８１． 少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、実施形態Ａ１～Ａ８０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８２． 各ＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、実施形態Ａ１～Ａ８１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８３． 少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、実施形態Ａ１～Ａ８２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８４． 各ＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、実施形態Ａ１～Ａ８３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８５． 少なくとも１つのＲＮＡは、ポリＡテールを含む、実施形態Ａ１～Ａ８４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８６． 各ＲＮＡは、ポリＡテールを含む、実施形態Ａ１～Ａ８５のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８７． ポリＡテールは、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む、実施形態Ａ８４またはＡ８５に記載の組成物。
実施形態Ａ８８． ポリＡテールは、配列番号３０に示されているポリＡテールを含む、実施形態Ａ８５～Ａ８７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ８９． １つまたはそれ以上のＲＮＡは、
ａ． ｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む５’キャップ；
ｂ． （ｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲ；
ｃ． （ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲ；ならびに
ｄ． 少なくとも１００個のヌクレオチドを含むポリＡテール
を含む、実施形態Ａ１～Ａ８８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９０． ポリＡテールは配列番号３０を含む、実施形態Ａ８９に記載の組成物。
実施形態Ａ９１． ヒトの進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんの治療に使用される、実施形態Ａ１～Ａ９０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９２． 固形腫瘍の治療は、対象において腫瘍のサイズを低減することまたはがん転移を予防することを含む、実施形態Ａ１～Ａ９１のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９３． ＲＮＡは同時に投与される、実施形態Ａ１～Ａ９２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９４． ＲＮＡは注射により投与される、実施形態Ａ１～Ａ９３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９５． ＲＮＡは、注射前に液体溶液中で一緒に混合される、実施形態Ａ９３またはＡ９４に記載の組成物。
実施形態Ａ９６． 固形腫瘍がんはリンパ腫を含む、実施形態Ａ１～Ａ９６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９７． 固形腫瘍がんはホジキンリンパ腫を含む、実施形態Ａ１～Ａ９６のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態Ａ９８． 固形腫瘍がんは非ホジキンリンパ腫を含む、実施形態Ａ１～Ａ９６のいずれか１つに記載の組成物。
本出願のさらなる実施形態は、以下の通りである：
実施形態Ｂ１． 対象の進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを治療するための方法であって、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含み、このＲＮＡは、ＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、方法。
実施形態Ｂ２． 対象の進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを治療するための方法であって、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含み、このＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、方法。
実施形態Ｂ３． 対象の進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを治療するための方法であって、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含み、このＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、方法。
実施形態Ｂ４． 対象の進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを治療するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含み、このＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡと同時投与される、方法。
実施形態Ｂ５． 固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩのサブセット、ステージＩＶ、またはステージＩＶのサブセットである、実施形態Ｂ１～Ｂ４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ６． 固形腫瘍がんは、進行期であり切除不能である、実施形態Ｂ１～Ｂ５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ７． 固形腫瘍は、その発生源から対象の別の部位に広がっている、実施形態Ｂ１～Ｂ６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ８． 固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＩＶのがんである、実施形態Ｂ１～Ｂ７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ９． ステージＩＶのがんは、切除不能である、実施形態Ｂ８に記載の方法。
実施形態Ｂ１０． 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、実施形態Ｂ１～Ｂ９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ１１． 固形腫瘍がんは、黒色腫、皮膚扁平上皮がん（ＣＳＣＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、非小細胞肺がん、腎臓がん、頭頸部がん、甲状腺がん、結腸がん、肝臓がん、卵巣がん、もしくは乳がん、または腫瘍内注射に適した他の固形腫瘍である、実施形態Ｂ１～Ｂ１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ１２． 固形腫瘍がんは、黒色腫である、実施形態Ｂ１～Ｂ１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ１３． 固形腫瘍がんは、乳がん（例えば、乳房肉腫、トリプルネガティブ乳がん）である、実施形態Ｂ１～Ｂ１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ１４． 固形腫瘍がんは、卵巣がんである、実施形態Ｂ１～Ｂ１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ１５． 卵巣がんは、白金ベースの化学療法に抵抗性である、実施形態Ｂ１４に記載の方法。
実施形態Ｂ１６． 固形腫瘍がんは、甲状腺がんである、実施形態Ｂ１～Ｂ１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ１７． 甲状腺がんは、未分化甲状腺がん（ＡＴＣ）である、実施形態Ｂ１６に記載の方法。
実施形態Ｂ１８． 固形腫瘍がんは、１つまたはそれ以上の皮膚病変または皮下病変（例えば、転移）を有するが、皮膚がんではない、実施形態Ｂ１～Ｂ１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ１９． 固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＩＶの黒色腫である、実施形態Ｂ１～Ｂ１２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２０． 対象は、以前に抗ＰＤ－１療法でも抗ＰＤ－Ｌ１療法でも治療されたことがない、実施形態Ｂ１～Ｂ１９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２１． 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法も抗ＰＤ－Ｌ１療法も常用的に使用されない固形腫瘍がんである、実施形態Ｂ１～Ｂ２０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２２． 固形腫瘍がんは、黒色腫でもなく、非小細胞肺がんでもなく、腎臓がんでもなく、頭頸部がんでもなく、乳がんでもなく、ＣＳＣＣでもない、実施形態Ｂ１～Ｂ２１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２３． 対象は、他の治療選択肢を有していない、実施形態Ｂ１～Ｂ２２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２４．
ａ． 固形腫瘍がんは、黒色腫でも、ＣＳＣＣでも、ＨＮＳＣＣでもなく；
ｂ． 抗ＰＤ－１療法も抗ＰＤ－Ｌ１療法も常用的に使用されず；
ｃ． 他の好適な治療選択肢がない、
実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２５． 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法が常用的に使用されるが、こうした療法でまだ治療されていない固形腫瘍がんである、実施形態Ｂ１～Ｂ２４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２６． 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して抵抗性および／または不応性である、ステージＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、または切除不能なステージＩＶの黒色腫である、実施形態Ｂ１～Ｂ２５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２７． 固形腫瘍がんは、表在性または皮下の病変および／または転移を含む、実施形態Ｂ１～Ｂ２６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２８． 固形腫瘍がんは、上皮腫瘍、ＨＮＳＣＣ、ＣＳＣＣ、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、胃腸管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を有する腫瘍、中皮腫腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、黒色腫、小細胞肺腫瘍、神経芽細胞腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、または骨肉腫腫瘍である、実施形態Ｂ１～Ｂ２７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ２９． 対象は、２つまたは３つの腫瘍病変を有する、実施形態Ｂ１～Ｂ２８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３０． 対象は、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１基準に従って測定可能な疾患を有する、実施形態Ｂ１～Ｂ２９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３１． 対象は、３カ月よりも長い平均余命を有する、実施形態Ｂ１～Ｂ３０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３２． 対象は、少なくとも１８歳である、実施形態Ｂ１～Ｂ３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３３． ＲＮＡは、腫瘍内に注射される、実施形態Ｂ１～Ｂ３２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３４． ＲＮＡは、単独療法として投与される、実施形態Ｂ１～Ｂ３３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３５． ＲＮＡは、約５カ月間投与される、実施形態Ｂ１～Ｂ３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３６． ＲＮＡは、毎週１回投与される、実施形態Ｂ１～Ｂ３５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３７． ＲＮＡは、最大で５２週間投与される、実施形態Ｂ１～Ｂ３６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３８． ＩＦＮαタンパク質は、ＩＦＮα２ｂタンパク質である、実施形態Ｂ１～Ｂ３７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ３９．
ａ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列、もしくは配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列の少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
ｂ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列、もしくは配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／または
ｃ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃのｐ４０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１～９８４）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性およびＩＬ－１２ｓｃのｐ３０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１０２７～１６２３）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ｐ４０部分とｐ３５部分との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む、
実施形態Ｂ１～Ｂ３８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４０．
ｄ． ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２６のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
ｅ． ＩＬ－１５スシタンパク質は、配列番号２４のアミノ酸配列、もしくは配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／または
ｆ． ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１５受容体アルファのスシドメイン（配列番号２６のヌクレオチド１～３２１）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性および成熟ＩＬ－１５（配列番号２６のヌクレオチド３８２～７２９）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、場合により、ＩＬ－１５のスシドメインと成熟ＩＬ－１５との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む、
実施形態Ｂ１～Ｂ３９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４１．
ｃ． ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ならびに／または
ｄ． ＩＦＮαタンパク質は、配列番号１９のアミノ酸配列、もしくは配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態Ｂ１～Ｂ４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４２．
ｃ． ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２９のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ならびに／または
ｄ． ＧＭ－ＣＳＦタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列、もしくは配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態Ｂ１～Ｂ４１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４３． 少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４４． 少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４５． 各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ４４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４６． 各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ４５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４７． 修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される、実施形態Ｂ１～Ｂ４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４８． 少なくとも１つのＲＮＡは、１つよりも多くのタイプの修飾ヌクレオシドを含み、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される、実施形態Ｂ１～Ｂ４７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ４９． 修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である、実施形態Ｂ４８に記載の方法。
実施形態Ｂ５０． 少なくとも１つのＲＮＡは、５’キャップｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ４９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５１． 各ＲＮＡは、５’キャップｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５２． 少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５３． 各ＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５４． 少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５５． 各ＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５６． 少なくとも１つのＲＮＡは、ポリＡテールを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５７． 各ＲＮＡは、ポリＡテールを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ５８． ポリＡテールは、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む、実施形態Ｂ５６またはＢ５７に記載の方法。
実施形態Ｂ５９． ポリＡテールは、配列番号３０に示されているポリＡテールを含む、実施形態Ｂ５６～Ｂ５８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ６０． １つまたはそれ以上のＲＮＡは、
ａ． ｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む５’キャップ；
ｂ． （ｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲ；
ｃ． （ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲ；ならびに
ｄ． 少なくとも１００個のヌクレオチドを含むポリＡテール
を含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５９に記載の方法。
実施形態Ｂ６１． ポリＡテールは、配列番号３０を含む、実施形態Ｂ６０に記載の方法。
実施形態Ｂ６２． 対象はヒトである、実施形態Ｂ１～Ｂ６１に記載の方法。
実施形態Ｂ６３． 固形腫瘍の治療は、対象において腫瘍のサイズを低減することまたはがん転移を予防することを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ６２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ６４． ＲＮＡは、同時に投与される、実施形態Ｂ１～Ｂ６３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ６５． ＲＮＡは、注射により投与される、実施形態Ｂ１～Ｂ６４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態Ｂ６６． ＲＮＡは、注射前に液体溶液中で一緒に混合される、実施形態Ｂ１～Ｂ６５のいずれか１つに記載の方法。
図１Ａは、治療の例示的な全体設計を示す図である。 図１Ｂは、サイトカインＲＮＡ混合物の用量漸増および用量拡大を含む、進行期固形腫瘍がんを有する患者を治療するためのサイトカインＲＮＡ混合物を投与する例示的な治療スケジュールを示す図である。サイトカインＲＮＡ混合物は、単独療法として腫瘍内に投与される。 図２Ａ～２Ｉは、抗ＰＤ－１療法に対して後天的抵抗性のマウスモデルの作出および特性決定を示す図である。図２Ａ～２Ｂは、ＰＤ－１抵抗性腫瘍株の生成を示す。図２Ａは、ｉｎ ｖｉｖｏ継代アプローチの図である。手短には、ＭＣ３８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ６マウスを抗ＰＤ－１抗体で治療し（クローンＲＭＰ１－１４）、増殖する腫瘍を切り出し、腫瘍から得た細胞をｅｘ ｖｉｖｏで培養し、その後、ナイーブマウスに移植した。図２Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体で治療されたＣ５７ＢＬ６／Ｊマウスに移植されたＭＣ３８およびＭＣ３８抵抗性腫瘍細胞株の腫瘍成長曲線を示す（ｎ＝５／群）。抗体治療は矢印によって示されるように投与された。図２Ｃ～２Ｅは、ＭＣ３８抵抗性細胞がＰＤ－１抵抗性の既知分子機構を示さないことを示す。ＭＣ３８およびＭＣ３８抵抗性細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで培養し、フローサイトメトリーによって種々のタンパク質の発現をアッセイした。図２Ｃは、ＰＤ－Ｌ１、Ｂ２ＭならびにＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２の表面発現を示す一連のグラフである。線、染色されていない；塗りつぶし、染色されたサンプル。図２Ｄは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＩＦＮγ治療後のＰＤ－Ｌ１発現を示すグラフである。図２Ｅは、ＯＶＡ形質導入細胞におけるＳＩＩＮＦＥＫＬ－ＭＨＣ Ｉ複合体の発現を示すグラフである。細胞にオボアルブミンを発現するように形質導入し、ＭＨＣ ＩにおけるＳＩＩＮＦＥＫＬの提示についてアッセイした。図２Ｆ～２Ｉは、切り出され、ＲＮＡシーケンシングによってプロファイリングされた皮下腫瘍を示す。図２Ｆは、親ＭＣ３８（ｎ＝１６）と比較した、抵抗性腫瘍において調節不全の多数の遺伝子の全体的な遺伝子発現を示す（ｎ＝１３）。図２Ｇは、ＭＣ３８抵抗性腫瘍においてＩＦＮγ標的遺伝子の発現が低減されることを示す。図２Ｈは、相対免疫量を推定し、有意に低減したＴ、ＮＫ、Ｂ細胞系統および単球系統細胞を示すＭＣＰＣｏｕｎｔｅｒ分析を示す。＊、ｐ＜０．０５。図２Ｉは、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８＋）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８－）、マクロファージ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋）およびナチュラルキラー細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３－ＣＤ４９ｂ＋ＮＫ１．１＋）におけるフローサイトメトリーによる免疫浸潤を示す。結果は、２つの独立実験を代表するものである、群あたりｎ＝９。＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１、＊＊＊は＜０．００１および＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。 図２－１の続き。 図２－２の続き。 図２－３の続き。 図２－４の続き。 図２－５の続き。 図３は、ＭＣ３８抵抗性細胞がＰＤ－Ｌ２を発現しないことを示す図である。ＭＣ３８およびＭＣ３８抵抗性細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで培養し、種々のタンパク質の発現をフローサイトメトリーによってアッセイした。ＩＦＮγ治療後のＰＤ－Ｌ２発現が示されている。 図４Ａ～４Ｂは、免疫組織化学的染色による抵抗性腫瘍における免疫細胞の低減した頻度を示す図である。パラフィン包埋されたＭＣ３８およびＭＣ３８抵抗性腫瘍を、ＣＤ４５＋細胞の浸潤（暗色）について免疫組織化学的染色によって分析した。結果は、２つの独立実験を代表するものである；群あたりｎ＝１０腫瘍。図４Ａは、代表的画像である。図４Ｂは、定量化を示す。 図５Ａ～５Ｂは、抵抗性腫瘍の低減した免疫原性を示す図である。ＰＤ－１遮断に応じて完全退縮を示した親ＭＣ３８腫瘍を有する５個体のＣ５７ＢＬ６マウスから、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）培養物を作成した。ＣＴＬをＭＣ３８および抵抗性腫瘍細胞とともに同時培養し、死滅させ（図４Ａ）、ＩＦＮγ放出を測定した（図５Ｂ）。 図６Ａ～６Ｄは、腫瘍量によって測定されるように、皮下ＭＣ３８またはＭＣ３８抵抗性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ６／ＪマウスをサイトカインＲＮＡ混合物の腫瘍内注射で成功裏に治療したことを示す図である（図６Ｂおよび６Ｄ）。ｍＲＮＡ治療は、４０μｇの総ｍＲＮＡの用量で４日毎に（矢印によって示されるように）投与した。「Ｌｕｃ」（図６Ａおよび６Ｃ）は、ルシフェラーゼ対照ｍＲＮＡを示す。 図７は、全生存によって測定されるように、皮下ＭＣ３８またはＭＣ３８抵抗性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ６／ＪマウスをサイトカインＲＮＡ混合物の腫瘍内注射で成功裏に治療したことを示す図である。ｍＲＮＡ治療は、４０μｇの総ｍＲＮＡの用量で４日毎に（矢印によって示されるように）投与した。「Ｌｕｃ」は、ルシフェラーゼ対照ｍＲＮＡを示す。 図８Ａ～８Ｂは、ＭＣ３８（図８Ａ）およびＢ２Ｍの欠失したＭＣ３８（図８Ｂ）におけるベータ２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）表面発現のフローサイトメトリー分析を示す図である。 図９Ａ～９Ｄは、サイトカインＲＮＡ混合物の抗ＰＤ－１抗体との組合せが、両側側腹部Ｂ１６Ｆ１０がんモデル（図９Ａ）およびＭＣ３８腫瘍モデル（図９Ｂ）において生存を高めたことを示す図である。サイトカインＲＮＡ混合物で治療された片側側腹部ＭＣ３８－Ｂ２Ｍノックアウト（図９Ｃ）またはＭＣ３８－Ｂ２Ｍノックアウト／ＭＣ３８－ＷＴ腫瘍を有する異種両側側腹部モデル（図９Ｄ）における全生存。 図１０は、種々のｉｎ ｖｉｖｏ固形腫瘍がんモデルにおけるサイトカインｍＲＮＡ混合物、抗ＰＤ－１またはサイトカインｍＲＮＡ混合物および抗ＰＤ－１療法の組合せ後の腫瘍体積における変化を示す図である。数値は、ベースラインからの腫瘍体積変化（ΔＴ／ΔＣ、％）に対応している。各動物の治療された（Ｔ）群および媒体対照（Ｃ）群各々の腫瘍体積の変化は、すべての対照マウスがまだ生存していた最終日の腫瘍体積から第１の治療当日の腫瘍体積を差し引くことによって算出されている。治療された群の中央値ΔＴが算出され、媒体対照群の中央値ΔＣが算出されている。比ΔＴ／ΔＣが算出され、パーセンテージとして表されている。 図１１は、約２ｍｍ幅であり、腫瘍周辺の浸潤前部に隣接する、「腫瘍周囲に」または「腫瘍周囲の」領域を示す図である。腫瘍周囲の領域は、宿主組織を含む。
表１は、本明細書で参照されているある特定の配列のリストを提供する。
Figure 2022518235000002
Figure 2022518235000003
Figure 2022518235000004
Figure 2022518235000005
Figure 2022518235000006
詳細な説明
１．定義
本明細書で使用される場合、「サイトカインｍＲＮＡ混合物」、「ｍＲＮＡサイトカイン混合物」、または「ＲＮＡサイトカイン混合物」とも呼ばれることがある「サイトカインＲＮＡ混合物」は、本明細書に記載の通り、ＩＦＮαをコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡ、ＩＬ－１２ｓｃをコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡを含む。
「ＰＤ－１」は、「プログラム細胞死１」または「プログラム細胞死－１」とも呼ばれる場合がある。また、「ＰＤ－Ｌ１」は、「プログラム細胞死１リガンド」、「プログラム細胞死－１リガンド１」、または「プログラム細胞死－リガンド１」とも呼ばれる場合がある。
本明細書で使用される場合、本明細書では「進行性固形腫瘍」または「進行性固形腫瘍がん」とも呼ばれることがある「進行期固形腫瘍がん」は、公知の方式、例えば、対がん米国合同委員会（ＡＪＣＣ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ）により開発された、腫瘍、リンパ節、および転移（ＴＮＭ）病期分類方式（ｔｕｍｏｒ，ｎｏｄｅ，ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（ＴＮＭ）ｓｔａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）（ＡＪＣＣ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ、第８版を参照）により評価して、その病期がステージＩＩＩ、ステージＩＩＩのサブセット、ステージＩＶ、またはステージＩＶのサブセットであると識別される固形腫瘍がんを含む。一部の実施形態では、ＴＮＭ病期分類方式は、黒色腫以外の固形腫瘍がんに使用される。一部の実施形態では、がんは、ＡＪＣＣ黒色腫病期分類（第８版、２０１８年）により評価して、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＶを含む黒色腫または進行性黒色腫である。ＡＪＣＣ黒色腫病期分類に関連する非限定的な説明は、Ｇｅｒｓｈｅｎｗａｌｄ ＪＥ、Ｓｃｏｌｙｅｒ ＲＡ、Ｈｅｓｓ ＫＲら、Ｍｅｌａｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ．Ｉｎ：Ａｍｉｎ ＭＢ編、ＡＪＣＣ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ．第８版、シカゴ、イリノイ州：ＡＪＣＣ－Ｓｐｒｉｎｇｅｒ；２０１７年：５６３～５８５頁などに記載されている。これらの文献は、それらの内容全体が参照によって本明細書に組み入れられる。一部の実施形態では、がんは、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）であり、これらは両方とも進行性であってもよい。すべての主要ながんには同様の病期分類方式が存在し、一般に、腫瘍の臨床的および／または病理学的詳細に基づき、そうした要因が如何に生存に影響を及ぼすかが示されている。
「腫瘍」は、本明細書では「新生物」とも呼ばれる場合がある。例えば、「固形腫瘍」および「固形新生物」という用語は、同義的である。
「切除不能な」（例えば、進行期の切除不能な）がんは、典型的には外科手術で除去することができない。
ＲＥＣＩＳＴ（固形腫瘍効果判定基準（腫瘍も同様））は、固形腫瘍において、がん療法薬の活性および効能を評価するための方法論を提供する。ＲＥＣＩＳＴガイドラインは、欧州がん研究治療機構（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ）、米国国立がん研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ）、およびカナダがん治験グループ（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｉａｌｓ Ｇｒｏｕｐ）、ならびに幾つかの製薬会社からの代表者で構成されるＲＥＣＩＳＴワーキンググループにより作成され、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡ、Ｔｈｅｒａｓｓｅ Ｐ、Ｂｏｇａｅｒｔｓ Ｊら、Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：Ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．４５巻（２００９年）２２８～２４７頁に発表された。この文献の内容は全体が参照によって本明細書に組み入れられる。ガイドラインのセクション４．３．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒの２３２～２３３頁）は、標的病変の評価に関して以下を提供する。
完全奏功（ＣＲ）：すべての標的病変が消失。あらゆる病理学的リンパ節（標的または非標的に関わらず）は、短軸が＜１０ｍｍに退縮していなければならない。
部分奏功（ＰＲ）：基線合計直径を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも３０％減少。
進行疾患（ＰＤ）：治験での最小値合計を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも２０％増加（これは、その値が治験での最小値である場合、基線合計を含む）。２０％の相対的増加に加えて、合計は、少なくとも５ｍｍの絶対的増加も示さなければならない。（注：１つまたはそれ以上の新しい病変の出現も進行とみなされる）。
安定疾患（ＳＤ）：治験中の最小合計直径を基準として、ＰＲに値する十分な縮小もＰＤに値する十分な増加もみられない。
ガイドラインのセクション４．３．３（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒの２３３頁）は、非標的病変の評価に関して以下を提供する。
一部の非標的病変は実際に測定可能であってもよいが、それらを測定する必要はなく、代わりにプロトコールで指定された時点で定性的に評価すれば事足りる。
完全奏功（ＣＲ）：すべての非標的病変の消失および腫瘍マーカーレベルの正常化。すべてのリンパ節は、サイズが非病理学的でなければならない（＜１０ｍｍ短軸）。
非ＣＲ／非ＰＤ：１つまたはそれ以上の非標的病変の持続、および／または正常限界を上回る腫瘍マーカーレベルの維持。
進行疾患（ＰＤ）：既存非標的病変の明白な進行。（注：１つまたはそれ以上の新しい病変の出現も進行とみなされる）。
抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して「先天的」または「一次的」抵抗性を有する対象は、初めから抗ＰＤ－１療法にも抗ＰＤ－Ｌ１療法にも応答しない。先天的または一次的抵抗性を有する対象は、ＰＤ－１遮断／ＰＤ－Ｌ１遮断に対する臨床応答を全く示さなかった。例えば、Ｓｈａｒｍａら（２０１７年）Ｃｅｌｌ １６８巻：７０７～７２３頁の７０９頁目を参照された。また、Ｈｕｇｏら（２０１６年）Ｃｅｌｌ １６５巻（１号）３５～４４頁を参照されたい。また、Ｎｏｗｉｃｋｉら（２０１８年）Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２４巻（１号）：４７～５３頁を参照されたい。これらの文献の内容は全体が参照によって本明細書に組み入れられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）による進行疾患または安定疾患を有すると特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、生存がん細胞を含む非標的病変が非ＣＲ／非ＰＤであることにより特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法による治療後に（任意の期間）、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）による進行疾患を有すると特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）による進行疾患を有すると特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法による治療後に（任意の期間）、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）による安定疾患を有すると特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）による安定疾患を有すると特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、固形腫瘍の最長直径の少なくとも２０％増加および／または１つもしくはそれ以上の新しい固形腫瘍の出現を示すと特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法に対する先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法による治療後に（任意の期間）、固形腫瘍の最長直径の少なくとも２０％増加および／または１つもしくはそれ以上の新しい固形腫瘍の出現を示すと特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、固形腫瘍の最長直径の少なくとも２０％増加および／または１つもしくはそれ以上の新しい固形腫瘍の出現を示すと特徴付けられる。一部の実施形態では、最長直径の増加は、少なくとも５ｍｍの増加である。一部の実施形態では、期間は、約６週間、約８週間、または少なくとも６週間もしくは８週間である。一部の実施形態では、期間は、２、３、６、１２カ月、またはそれよりも長い月数である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、原発腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、注射可能な腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍には、サイトカインｍＲＮＡ混合物が注射されている。一部の実施形態では、固形腫瘍は、サイトカインｍＲＮＡ混合物を注射するために選択されている。一部の実施形態では、固形腫瘍は、最長直径が≧０．５ｃｍの皮下病変である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、コンフルエントである複数の注射可能な併合病変の群内に存在する。一部の実施形態では、固形腫瘍は、コンフルエントであり、≧０．５ｃｍの最長直径（すべての関与する標的病変の直径の合計）を有する複数の注射可能な併合病変の群内に存在する。一部の実施形態では、固形腫瘍は、出血性でも浸出性でもない。一部の実施形態では、固形腫瘍の最長直径は、少なくとも１０ｍｍである（例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンまたはカリパスにより測定して）。一部の実施形態では、固形腫瘍は対象の胸部に存在し、固形腫瘍の最長直径は少なくとも２０ｍｍである（例えば、胸部Ｘ線で測定して）。一部の実施形態では、固形腫瘍は、リンパ節に存在する。一部の実施形態では、リンパ節は、短軸が少なくとも１５ｍｍである（例えば、ＣＴスキャンにより評価した場合）。一部の実施形態では、固形腫瘍は、リンパ腫である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、Ｌｕｇａｎｏ分類による応答も安定疾患も有しないと特徴付けられる。本明細書で参照されているＬｕｇａｎｏ分類のバージョンは、Ｃｈｅｓｏｎら、２０１４年、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．３２巻（２７号）：３０５９～６８頁に記載されている。この文献の内容は全体が参照によって本明細書に組み入れられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、Ｌｕｇａｎｏ分類による進行疾患を有すると特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、リンパ節内にリンパ腫腫瘍を有すると特徴付けられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する対象は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療後に（任意の期間）、リンパ節内にリンパ腫腫瘍を有し、リンパ節は、（ｉ）最長直径が１．５ｃｍよりも大きく、（ｉｉ）直交直径の積（ＰＰＤ）が最低値から少なくとも５０％増加すると特徴付けられる。一部の実施形態では、最長直径の増加は、少なくとも５ｍｍの増加である。一部の実施形態では、期間は、約６週間、約８週間、または少なくとも６週間もしくは８週間である。一部の実施形態では、期間は、２、３、６、１２カ月、またはそれよりも長い月数である。
抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して「後天的」または「適応的」抵抗性を有する対象は、初期には療法に応答するが（例えば、任意のレベルの応答）、一定期間後に再発し、進行する。一部の実施形態では、療法に対する応答は、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）に従って評価される。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する後天的または適応的抵抗性は、すべてＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）により初期に完全奏功したかまたは部分奏功したかに関わらず、療法中に最終的に進行する対象にみられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する後天的または適応的抵抗性は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法を再開しても応答しない対象にみられる。例えば、Ｓｈａｒｍａら（２０１７年）Ｃｅｌｌ １６８巻：７０７～７２３頁の７０８頁を参照されたい。また、Ｎｏｗｉｃｋｉら（２０１８年）Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２４巻（１号）：４７～５３頁を参照されたい。これらの文献の内容は全体が参照によって本明細書に組み入れられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、その体積が（ｉ）抗ＰＤ－１療法を始めた一定期間後に減少し、次いで（ｉｉ）抗ＰＤ－１療法を継続したにも関わらず一定期間後に増加した固形腫瘍を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、その体積が（ｉ）抗ＰＤ－Ｌ１療法を始めた一定期間後に減少し、次いで（ｉｉ）抗ＰＤ－Ｌ１療法を継続したにも関わらず一定期間後に増加した固形腫瘍を含む。一部の実施形態では、適応的抵抗性は、根底にある後天的抵抗性機序に関連する。実施形態では、適応的抵抗性は、突然変異または後成的変化に関連する。一部の実施形態では、適応的抵抗性は、Ｂ２Ｍ遺伝子の突然変異に関連する。一部の実施形態では、一定期間は、６～１２カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、６～１８カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、６～３６カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、３～９カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、３～２４カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、１２～２４カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、少なくとも約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、または約２４カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、少なくとも約４カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、少なくとも約６カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、少なくとも約１２カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、少なくとも約２４カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、少なくとも約３０カ月である。一部の実施形態では、一定期間は、少なくとも約３６カ月である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）により、治療中の任意の時点で完全奏功を有すると特徴付けられ、その後（および治療中）、進行疾患を有すると特徴付けられた。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、すべてＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）により、治療中の任意の時点で部分奏功を有すると特徴付けられ、その後（および治療中）、進行疾患または安定疾患を有すると特徴付けられた。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）により、治療中の任意の時点で部分奏功を有すると特徴付けられ、その後（および治療中）、進行疾患を有すると特徴付けられた。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、ＲＥＣＩＳＴ基準（バージョン１．１）により、治療中の任意の時点で部分奏功を有すると特徴付けられ、その後（および治療中）、安定疾患を有すると特徴付けられた。一部の実施形態では、対象における固形腫瘍の最長直径は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法を始めた後に少なくとも３０％減少し、次いで増加した。一部の実施形態では、対象における固形腫瘍の最長直径は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法を始めた後に少なくとも３０％減少し、次いで少なくとも２０％増加した。一部の実施形態では、対象における固形腫瘍の最長直径は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法を始めた後に少なくとも３０％減少し、次いで１つまたはそれ以上の新しい腫瘍が出現した。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、治療中の任意の時点で固形腫瘍の最長直径が少なくとも３０％減少し、その後（および治療中に）固形腫瘍の最長直径が少なくとも２０％増加し、および／または１つもしくはそれ以上の新しい固形腫瘍が出現すると特徴付けられた。一部の実施形態では、最長直径の増加は、少なくとも５ｍｍの増加である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、治療中の任意の時点で固形腫瘍（例えば、１つよりも多くの腫瘍が存在した場合、存在したすべての固形腫瘍）が消失したと特徴付けられ、その後（および治療中に）固形腫瘍が再発し（例えば、消失した固形腫瘍と同じ場所に）、および／または１つもしくはそれ以上の新しい固形腫瘍が出現すると特徴付けられた。一部の実施形態では、固形腫瘍は、原発腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、注射可能な腫瘍である。一部の実施形態では、腫瘍には、サイトカインｍＲＮＡ混合物が注射されている。一部の実施形態では、腫瘍は、サイトカインｍＲＮＡ混合物を注射するために選択されている。一部の実施形態では、固形腫瘍は、最長直径が≧０．５ｃｍの皮下病変である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、コンフルエントである複数の注射可能な併合病変の群内に存在する。一部の実施形態では、固形腫瘍は、コンフルエントであり、≧０．５ｃｍの最長直径（すべての関与する標的病変の直径の合計）を有する複数の注射可能な併合病変の群内に存在する。一部の実施形態では、固形腫瘍は、出血性でも浸出性でもない。一部の実施形態では、固形腫瘍の最長直径は、少なくとも１０ｍｍである（例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンまたはカリパスにより測定して）。一部の実施形態では、固形腫瘍は対象の胸部に存在し、固形腫瘍の最長直径は少なくとも２０ｍｍである（例えば、胸部Ｘ線で測定して）。一部の実施形態では、固形腫瘍は、リンパ節に存在する。一部の実施形態では、リンパ節は、短軸が少なくとも１５ｍｍである（例えば、ＣＴスキャンにより評価した場合）。一部の実施形態では、固形腫瘍は、リンパ腫である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、Ｌｕｇａｎｏ分類により、治療中の任意の時点で完全奏功を示すと特徴付けられ、その後（および治療中）進行疾患を有すると特徴付けられた。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する適応的抵抗性を有する対象は、治療中の任意の時点で、複数の病変（例えば、１、２、３、４、５、または６つのリンパ節またはリンパ節外部位）の直交直径の積（ＰＰＤ）の合計が少なくとも５０％減少すると特徴付けられ、その後（および治療中）リンパ節内にリンパ腫腫瘍を有し、リンパ節は、（ｉ）１．５ｃｍよりも大きな最長直径および（ｉｉ）ＰＰＤ最低値から少なくとも５０％の増加を有すると特徴付けられた。
「不応性」または「抵抗性」がんは、指定の治療に応答しないがんである。一部の実施形態では、不応性は、治療のまさに最初から生じる。一部の実施形態では、不応性は治療中に生じる。一部の実施形態では、がんは、治療が始まる前に抵抗性である。一部の実施形態では、がんは、抗ＰＤ－１療法に対して不応性または抵抗性である（つまり、がんはこの療法に応答しない）。一部の実施形態では、がんは、抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して不応性または抵抗性である（つまり、がんはこの療法に応答しない）。一部の実施形態では、対象は、指定の治療（抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法など）に対して不応性または抵抗性になりつつあるがんを有し、例えば、対象は、最初に治療を受けて以来、治療に対する応答性が低下している。一部の実施形態では、対象は、治療を受けたことがないが、典型的には治療に応答しないタイプのがんを有する。
「表在性」（「皮膚性」とも呼ばれることがある）病変または転移は、皮膚内に存在するかまたは皮膚の表面に存在する病変または転移である。一部の実施形態では、表在性病変または転移は、皮膚内に存在する。一部の実施形態では、表在性病変または転移は、真皮内に存在する。一部の実施形態では、表在性病変または転移は、上皮内に存在する。
「皮下」病変または転移は、皮膚の下に存在する。一部の実施形態では、皮下病変または転移は、皮下組織と共に存在する。
一部の実施形態では、および固形腫瘍がんの状況では、「腫瘍病変」または「病変」は、固形腫瘍、例えば、原発性固形腫瘍または別の固形腫瘍からの転移から生じた固形腫瘍である。
「扁平上皮細胞」という用語は、例えば、皮膚、眼、種々の内臓の表面、ならびに中空器官および一部の腺の管の裏層に見出される任意の薄く平坦な細胞を指す。
「皮膚扁平上皮癌」（または「ＣＳＣＣ」）という用語は、表皮（皮膚の外側層）を形成する細胞で発症する、すべての病期およびすべての形態のがんを指す。「皮膚扁平上皮癌」という用語は、皮膚の「扁平上皮癌」という用語と同義的に使用される。
「頭頸部の扁平上皮癌」（または「頭頸部扁平上皮癌」または「ＨＮＳＣＣ」または「頭頸部に関する扁平上皮癌」）という用語は、扁平上皮細胞で発症する、すべての病期およびすべての形態の頭頸部がんを指す。頭頸部の扁平上皮癌としては、鼻腔、副鼻腔、唇、口、唾液腺、喉、および喉頭（発声器）のがんが挙げられる（しかしながら、これらに限定されない）。
「黒色腫」という用語は、メラノサイトで発症する、すべての病期およびすべての形態のがんを指す。黒色腫は、典型的にはほくろで発症するが（皮膚黒色腫）、目または腸などの他の色素組織でも発症する場合がある。
「腫瘍関与領域リンパ節」または「腫瘍関与節」は、転移含有領域リンパ節を指す。一部の実施形態では、腫瘍関与領域リンパ節は、臨床的に潜在性の腫瘍関与領域リンパ節である。一部の実施形態では、腫瘍関与領域リンパ節は、臨床的に検出可能な腫瘍関与領域リンパ節である。「臨床的に潜在性の」腫瘍関与領域リンパ節は、領域リンパ節転移の臨床的証拠もＸ線撮影的証拠も無い、顕微鏡的に識別された領域リンパ節転移を記述する。一部の実施形態では、臨床的に潜在性の腫瘍関与領域リンパ節は、センチネルリンパ節（ＳＬＮ）生検により検出され、領域リンパ節転移の臨床的証拠もＸ線撮影的証拠も無い。一部の実施形態では、「臨床的に検出可能な」リンパ節転移は、臨床検査、Ｘ線撮影検査、または超音波検査により識別可能であり、通常は（必ずではないが）生検により確認される領域リンパ節転移を有する患者を記述する。
「非結節性局所領域部位」は、リンパ内のまたは血管栄養的な腫瘍の広がりの帰結である転移を指し、マイクロサテライト転移（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍｅｔａｓｔａｓｅ）、衛星転移、およびイントランジット転移（ｉｎ－ｔｒａｎｓｉｔ ｍｅｔａｓｔａｓｅ）が挙げられる。「衛星」転移は、原発性黒色腫の２ｃｍ以内に生じる臨床的に明白な皮膚転移および／または皮下転移を指す。
「マイクロサテライト」転移は、原発部位の病理学的検査において原発性黒色腫に隣接してまたはその深部に見出される顕微鏡的な皮膚転移および／または皮下転移を指す。一部の実施形態では、マイクロサテライト転移は、原発性黒色腫とは完全に非連続性であり、影響を受けていない間質がその間の空間を占めている。
「イントランジット」転移は、領域リンパ節の原発層と第１の層との間の領域にて原発性黒色腫から２ｃｍを上回る距離において識別される臨床的に明白な皮膚転移および／または皮下転移を指す。一部の実施形態では、衛星転移またはイントランジット（ｉｎ－ｔｒａｎｓｍｉｔ）転移は、原発性黒色腫の遠位で生じる場合がある。
「密集節（Ｍａｔｔｅｄ ｎｏｄｅｓ）」は、転移性疾患の関与により互いに接着している２つまたはそれ以上の節を指す。一部の実施形態では、密集節は、標本を病理検査室で肉眼的に検査する際に識別される。
「遠隔転移」は、原発腫瘍から遠隔臓器または遠隔リンパ節へと広がったがんを指す。一部の実施形態では、遠隔転移は、皮膚、皮下組織、筋肉、または遠隔リンパ節で検出可能である。一部の実施形態では、遠隔転移は、肺で検出可能である。一部の実施形態では、遠隔転移は、中枢神経系（ＣＮＳ）で検出可能である。一部の実施形態では、遠隔転移は、肺、心臓、または消化器系、排泄系、生殖器系、もしくは循環器系の臓器を含む、ＣＮＳ以外の任意の他の内臓部位で検出可能である。一部の実施形態では、遠隔転移は、原発腫瘍を含む組織または臓器に直接接触していない（例えば、触れていないかまたは直接接続されていない）組織または臓器に存在する。
一部の実施形態では、転移（例えば、遠隔転移）は、肝臓内に存在する（例えば、検出可能である）。
「リンパ節外進展」（ＥＮＥ、ｅｘｔｒａｎｏｄａｌ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）は、リンパ節転移中に結節被膜からリンパ節周囲組織へと転移細胞が進展することを指す。リンパ節被膜が伸びるが破れはしない嚢胞性転移は、ＥＮＥ陰性として分類することができる。一部の実施形態では、ＥＮＥ陽性は、大きな結節外血管を含む。一部の実施形態では、ＥＮＥ陽性は、結節被膜からの進展が２ｍｍ未満である。一部の実施形態では、ＥＮＥ陽性は、リンパ節被膜からの進展が２ｍｍを越えているか、または切開時に肉眼で明らかである。
「深部浸潤」は、厚さが６ｍｍを上回るか、または皮下脂肪よりも深い浸潤を指す。一部の実施形態では、浸潤は、真皮よりも０．１ｍｍ深い神経に存在する。
「有効量」という用語は、所望の生物学的、療法的、および／または予防的結果を提供する作用剤（ＲＮＡの混合物など）の量を指す。その結果は、疾患（進行期固形腫瘍がんなど）の徴候、症状、または原因の１つまたはそれ以上の低減、改善、鎮静、軽減、遅延、予防、および／または緩和であってもよい。一部の実施形態では、有効量は、固形腫瘍／病変の縮小を引き起こすのに十分な量を含む。一部の実施形態では、有効量は、固形腫瘍の成長速度の減少（例えば、腫瘍成長の抑制など）に十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、腫瘍発達の遅延に十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、腫瘍再発の予防または遅延に十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、腫瘍の成長および／またはサイズおよび／または転移が低減、遅延、改善、および／または予防されるように、腫瘍に対する対象の免疫応答を増加させるのに十分な量である。有効量は、１つまたはそれ以上の投与で投与することができる。一部の実施形態では、有効量（例えば、ｍＲＮＡを含む組成物の）の投与は、（ｉ）がん細胞の数を低減すること；（ｉｉ）腫瘍のサイズを低減すること；（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞浸潤を、ある程度まで阻害、減速、緩徐させること、および停止させること；（ｉｖ）転移を阻害すること（例えば、ある程度まで緩徐させること、および／または遮断もしくは予防すること）；（ｖ）腫瘍成長を阻害すること；（ｖｉ）腫瘍の発生および／もしくは再発を予防または遅延させること；ならびに／または（ｖｉｉ）がんに関連する症状の１つもしくはそれ以上をある程度まで和らげることができる。一部の実施形態では、「阻害する」および「阻害性」などは、相互作用の完全なもしくは部分的な遮断、または生物学的効果の低減を指し、例えば、腫瘍成長または転移の阻害は、退縮または完全停止を含む。
「同時投与される」または「同時投与」などの用語は、本明細書で使用される場合、単一製剤の一部として、または同じもしくは異なる経路で投与される複数の製剤としてのいずれかで、２つまたはそれ以上の作用剤を時を同じくして、同時に、または本質的に同時に投与することを意味する。「本質的に同時に」とは、本明細書で使用される場合、互いに約１分、５分、１０分、１５分、３０分、１時間、２時間、または６時間の期間以内であることを意味する。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも１つの（例えば、すべての）ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、ＲＮＡの５’末端にＣａｐ１構造を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも１つの（例えば、すべての）ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を、およびＲＮＡの５’末端にＣａｐ１構造を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号４または６を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、例えば、セルロースでの精製（実施例に記載の通りのおよび当技術分野で公知の通りの）または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などにより、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を低減するように処理されている。「Ｃａｐ１」構造は、酵素キャッピングによるｉｎ－ｖｉｔｒｏ転写後に生成してもよく、またはｉｎ－ｖｉｔｒｏ転写中に生成してもよい（同時転写キャッピング）。
一部の実施形態では、同時転写キャッピング時に使用される修飾ＲＮＡの基本単位キャップは以下の通り：
ｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧ（ｍ２ ７，３｀ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ｍ２’－ＯＡｐＧとも呼ばれることがある）であり、以下の構造を有する。
Figure 2022518235000007
下記は、同時転写キャッピング後の例示的なＣａｐ１ ＲＮＡであり、このＣａｐ１ ＲＮＡは、ＲＮＡおよびｍ２ ７，３｀ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ｍ２’－ＯＡｐＧ：
Figure 2022518235000008
 を含む。
下記は、酵素キャッピング後の別の例示的なＣａｐ１ ＲＮＡである（キャップアナログ無し）。
Figure 2022518235000009
一部の実施形態では、ＲＮＡは、一実施形態では、下記の構造を有するキャップアナログであるアンチリバースキャップ（ａｎｔｉ－ｒｅｖｅｒｓｅ ｃａｐ）（ＡＲＣＡキャップ（ｍ２ ７，３｀ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ））を使用して、ｉｎ－ｖｉｔｒｏ転写中に生成される（同時転写キャッピング）「Ｃａｐ０」構造で修飾される。
Figure 2022518235000010
下記は、ＲＮＡおよびｍ２ ７，３｀ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む例示的なＣａｐ０ ＲＮＡである。
Figure 2022518235000011
一部の実施形態では、「Ｃａｐ０」構造は、以下の構造を有するキャップアナログであるベータ－Ｓ－ＡＲＣＡ（ｍ２ ７，２｀ＯＧ（５’）ｐｐＳｐ（５’）Ｇ）を使用して、ｉｎ－ｖｉｔｒｏ転写中に生成される（同時転写キャッピング）。
Figure 2022518235000012
下記は、ベータ－Ｓ－ＡＲＣＡ（ｍ２ ７，２｀ＯＧ（５’）ｐｐＳｐ（５’）Ｇ）およびＲＮＡを含む例示的なＣａｐ０ ＲＮＡである。
Figure 2022518235000013
「ウラシル」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡの核酸に生じ得る核酸塩基の１つを記述する。ウラシルの構造は以下の通りである。
Figure 2022518235000014
「ウリジン」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡに生じ得るヌクレオシドの１つを記述する。ウリジンの構造は以下の通りである。
Figure 2022518235000015
ＵＴＰ（ウリジン５’－三リン酸）は、以下の構造を有する。
Figure 2022518235000016
プソイド－ＵＴＰ（プソイドウリジン５’－三リン酸）は、以下の構造を有する。
Figure 2022518235000017
「プソイドウリジン」は、ウリジンの異性体であり、ウラシルが、窒素－炭素グリコシド結合の代わりに炭素－炭素結合を介してペントース環に付着している修飾ヌクレオシドの一例である。プソイドウリジンは、例えば、ＣｈａｒｅｔｔｅおよびＧｒａｙ、Ｌｉｆｅ；４９巻：３４１～３５１頁（２０００年）に記載されている。
別の例示的な修飾ヌクレオシドは、以下の構造を有するＮ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
Figure 2022518235000018
Ｎ１－メチル－プソイド－ＵＴＰは、以下の構造を有する。
Figure 2022518235000019
別の例示的な修飾ヌクレオシドは、以下の構造を有する５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）である。
Figure 2022518235000020
本明細書で使用される場合、「ポリＡテール」または「ポリＡ配列」という用語は、典型的にはＲＮＡ分子の３’末端に位置するアデニル酸残基の中断されていないかまたは中断されている配列を指す。ポリＡテールまたはポリＡ配列は当業者に公知であり、本明細書に記載のＲＮＡの３’ＵＴＲの後に続いていてもよい。中断されていないポリＡテールは、連続したアデニル酸残基により特徴付けられる。自然界では、中断されていないポリＡテールが典型的である。本明細書に開示のＲＮＡは、転写後にテンプレート非依存性ＲＮＡポリメラーゼによりＲＮＡの遊離３’末端に付着されるポリＡテールを有していてもよく、またはＤＮＡによりコードされ、テンプレート依存性ＲＮＡポリメラーゼにより転写されるポリＡテールを有していてもよい。
約１２０個のＡヌクレオチドのポリＡテールは、トランスフェクトされた真核細胞におけるＲＮＡのレベル、ならびにポリＡテールの上流（５’）に存在するオープンリーディングフレームから翻訳されるタンパク質のレベルに有益な影響を及ぼすことが実証されている（Ｈｏｌｔｋａｍｐら、２００６年、Ｂｌｏｏｄ、１０８巻、４００９～４０１７頁）。
ポリＡテールは、任意の長さであってもよい。一部の実施形態では、ポリＡテールは、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個、または少なくとも１００個、および最大で５００個、最大で４００個、最大で３００個、最大で２００個、または最大で１５０個のＡヌクレオチド、特に約１２０個のＡヌクレオチドを含むか、から本質的になるか、またはからなる。この状況では、「から本質的になる」は、ポリＡテールのほとんどのヌクレオチド、典型的には、ポリＡテールのヌクレオチド数の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、Ａヌクレオチドであるが、残りのヌクレオチドは、Ｕヌクレオチド（ウリジル酸）、Ｇヌクレオチド（グアニル酸）、またはＣヌクレオチド（シチジル酸）などの、Ａヌクレオチド以外のヌクレオチドであることが許容されることを意味する。この状況では、「からなる」は、ポリＡテールのすべてのヌクレオチド、つまり、ポリＡテールのヌクレオチド数の１００％がＡヌクレオチドであることを意味する。「Ａヌクレオチド」または「Ａ」という用語は、アデニル酸を指す。
一部の実施形態では、ポリＡテールは、コード鎖に相補的な鎖に繰返しｄＴヌクレオチド（デオキシチミジル酸）を含むＤＮＡテンプレートに基づき、ＲＮＡ転写中に、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ＲＮＡの製造中に付着する。ポリＡテールをコードするＤＮＡ配列（コード鎖）は、ポリ（Ａ）カセットと呼ばれる。
一部の実施形態では、ＤＮＡのコード鎖に存在するポリ（Ａ）カセットは、ｄＡヌクレオチドから本質的になるが、４つのヌクレオチド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、およびｄＴ）のランダム配列により中断されている。そのようなランダム配列は、５～５０、１０～３０、または１０～２０ヌクレオチド長であってもよい。そのようなカセットは、国際公開第２０１６／００５３２４号（Ａ１）パンフレットに開示されている。この文献は、参照によって本明細書に組み入れる。国際公開第２０１６／００５３２４号（Ａ１）パンフレットに開示の任意のポリ（Ａ）カセットを、本発明に使用することができる。ｄＡヌクレオチドから本質的になるが、４つのヌクレオチド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、ｄＴ）が等しく分布しており、例えば５～５０個ヌクレオチドの長さを有するランダム配列により中断されており、ＤＮＡレベルでは、大腸菌におけるプラスミドＤＮＡの常時増幅を示し、ＲＮＡレベルでは、ＲＮＡ安定性および翻訳効率の支持に関する有益な特性とさらに関連するポリ（Ａ）カセットが包含される。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ分子に含まれるポリＡテールは、Ａヌクレオチドから本質的になるが、４つのヌクレオチド（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕ）のランダム配列により中断されている。このようなランダム配列は、５～５０、１０～３０、または１０～２０ヌクレオチド長であってもよい。
一部の実施形態では、ポリＡテールの３’末端は、Ａヌクレオチド以外のヌクレオチドではフランキングされておらず、つまりポリＡテールは、その３’末端がＡ以外のヌクレオチドで遮蔽されてもおらず、Ａ以外のヌクレオチドがその後に続いてもいない。
一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列：ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＣＡＵＡＵＧＡＣＵＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号３０）を含み、この配列は表１にも示されている。
一般に、「ＲＮＡ」および「ｍＲＮＡ」は、他のタイプのＲＮＡ（ｒＲＮＡまたはｔＲＮＡ）と区別するために「ｍＲＮＡ」を使用することが適切である場合、およびｍＲＮＡを形成するための５’キャッピング前の転写産物の構造を指すために「ＲＮＡ」が適切である場合など、状況により一方または他方が適切であることが明らかである場合を除いて、同義的に使用される。
「ＩＦＮα」は、本明細書では概して、ＩＦＮα２ｂおよびＩＦＮα４を含む任意のインターフェロンアルファＩ型サイトカインを記述するために使用される。
「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、対象の疾患に対する療法薬のあらゆる投与または塗布を包含し、疾患を阻害すること、その発生を停止させること、疾患の１つまたはそれ以上の症状の和らげること、疾患を治癒すること、または疾患の再発を予防することを含む。例えば、固形腫瘍の治療は、固形腫瘍の症状を緩和すること、固形腫瘍のサイズを減少させること、固形腫瘍を排除すること、腫瘍のさらなる成長を低減すること、または治療後の固形腫瘍の再発を低減もしくは排除することを含んでいてもよい。また、治療は、有効性のバイオマーカーの変化として、または画像診断測定もしくはＸ線撮影測定の変化として測定することができる。
「単独療法」という用語は、本明細書で使用される場合、ある特定の疾患または状態（がんなど）を治療するために、例えば、ＲＮＡ療法のみ、放射線療法のみ、または外科手術のみなど、１つのタイプの治療が使用される療法を意味する。薬物療法では、単独療法は、疾患または状態を治療するための、単一薬物（例えばＲＮＡの混合物など、複数の活性作用剤を含んでいてもよい）の使用を指す。一部の実施形態では、単独療法は、がんを治療するために使用される他の療法を一切用いずに、がんを治療するために施される療法である。一部の実施形態では、がんを治療するための単独療法は、場合により、がんの症状を改善するが、がん自体は治療しない別の治療（例えば、治療は、固形腫瘍の成長またはサイズに影響を及ぼすことが意図されていないかまたは予想されていない）と組み合わせることができるが、例えば、化学療法剤または放射線療法など、がんに対するあらゆる他の療法とは組み合わせることができない。そのような実施形態では、ＲＮＡの混合物を単独療法として投与することは、例えば、放射線療法もいかなる化学療法剤も用いずに、ＲＮＡの混合物を投与することを意味する。しかしながら、そのような実施形態では、ＲＮＡの混合物を単独療法として投与することは、例えば痛みを低減する作用剤など、がんに対するものではない作用剤を、ＲＮＡの混合物と時を同じくしてまたは同時に投与することを除外しない。
「予防」という用語は、本明細書で使用される場合、がんがないとみなされる対象において、固形腫瘍を含むがんの発生を阻害するかまたは停止させることを意味する。
「転移」は、がんが、原発腫瘍として最初に生じた場所から体内の他の場所へと広がるプロセスを意味する。
「腫瘍内に」または「腫瘍内の」という用語は、本明細書で使用される場合、「腫瘍の中へ」を意味する。例えば、腫瘍内注射は、腫瘍に触れている任意の場所に療法薬を注射することを意味する。
本明細書で使用される場合、「リンパ腫」は、リンパ球に由来する固形腫瘍がんである。リンパ腫としては、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。リンパ腫は、リンパ節内に固形腫瘍／新生物を形成し、転移すると非リンパ節組織にも見出すことができる。
「腫瘍周囲的に（ｐｅｒｉ－ｔｕｍｏｒａｌｌｙ）」または「腫瘍周囲の（ｐｅｒｉ－ｔｕｍｏｒａｌ）」または「腫瘍周囲の（ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ）」または「腫瘍周囲的に（ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌｌｙ）」という用語は、本明細書で使用される場合、幅が約２ｍｍであり、腫瘍周囲の浸潤最前部に隣接する領域である。腫瘍周囲領域は宿主組織を含む。例えば、図１１を参照されたい。
「投与すること」は、医薬作用剤または医薬組成物を対象に提供することを意味し、医療専門家による投与および自己投与を含むが、それらに限定されない。
本開示は、所与の核酸配列またはアミノ酸配列（参照配列）に対してそれぞれある度合いの同一性を有する核酸配列およびアミノ酸配列を記述する。
２つの核酸配列間の「配列同一性」は、配列間で同一であるヌクレオチドのパーセンテージを示す。２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、配列間で同一であるアミノ酸のパーセンテージを示す。
「％同一の」、「％同一性」という用語、または類似の用語は、特に、最適にアラインメントした際に、比較しようとする配列間で同一であるヌクレオチドまたはアミノ酸のパーセンテージを指すことが意図されている。上記パーセンテージは、純粋に統計的であり、２つの配列間の差異は、比較しようとする配列の長さ全体にわたってランダムに分布してもよいが、必ずしもそうとは限らない。２つの配列の比較は、通常、対応する配列の局所領域を識別するために、最適にアラインメントした後でセグメントまたは「比較窓」に関して配列を比較することにより実施される。比較のための最適なアラインメントは、手作業で、またはＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１年、Ａｄｓ Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２巻、４８２頁による局所相同性アルゴリズムの助けをかりて、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８巻、４４３頁による局所相同性アルゴリズムの助けをかりて、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８巻、２４４４頁による類似性検索アルゴリズムの助けをかりて、もしくは上記アルゴリズムが使用されているコンピュータープログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５サイエンスドライブ、マジソン、米国ウィスコンシン州のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ Ｎ、およびＴＦＡＳＴＡ）の助けをかりて実施することができる。一部の実施形態では、２つの配列の同一性パーセントは、米国国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイト（例えば、ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ？ＰＡＧＥ＿ＴＹＰＥ＝ＢｌａｓｔＳｅａｒｃｈ＆ＢＬＡＳＴ＿ＳＰＥＣ＝ｂｌａｓｔ２ｓｅｑ＆ＬＩＮＫ＿ＬＯＣ＝ａｌｉｇｎ２ｓｅｑ）にて利用可能なような、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムを使用して決定される。一部の実施形態では、ＮＣＢＩウェブサイトのＢＬＡＳＴＮアルゴリズムに使用されるアルゴリズムパラメータとしては、以下のものが挙げられる：（ｉ）閾値期待値（Ｅｘｐｅｃｔ Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）を１０に設定する；（ｉｉ）ワードサイズ（Ｗｏｒｄ Ｓｉｚｅ）を２８に設定する；（ｉｉｉ）クエリ範囲の最大一致を０に設定する；（ｉｖ）一致／不一致スコアを１、－２に設定する；（ｖ）ギャップコスト（Ｇａｐ Ｃｏｓｔ）を線形に設定する；および（ｖｉ）低複雑性領域のフィルターを使用する。一部の実施形態では、ＮＣＢＩウェブサイトのＢＬＡＳＴＰアルゴリズムに使用されるアルゴリズムパラメータとしては、以下のものが挙げられる：（ｉ）閾値期待値を１０に設定する；（ｉｉ）ワードサイズを３に設定する；（ｉｉｉ）クエリ範囲の最大一致を０に設定する；（ｉｖ）マトリックスをＢＬＯＳＵＭ６２に設定する；（ｖ）ギャップコストを存在（Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ）：１１ 伸長（Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）：１に設定する；および（ｖｉ）条件付き構成スコアマトリックス調整（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｓｃｏｒｅ ｍａｔｒｉｘ ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）。
同一性パーセンテージは、比較しようとする配列が対応する同一位置の数を決定し、その数を、比較しようとする位置の数（例えば、参照配列中の位置の数）で除算し、その結果に１００を乗算することにより得られる。
一部の実施形態では、同一性の度合いは、参照配列の長さ全体の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％である領域について求められる。例えば、参照核酸配列が２００個のヌクレオチドからなる場合、同一性の度合いは、少なくとも約１００個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１４０個、少なくとも約１６０個、少なくとも約１８０個、または約２００個のヌクレオチド、一部の実施形態では連続したヌクレオチドについて求められる。一部の実施形態では、同一性の度合いは、参照配列の長さ全体について求められる。
それぞれ、所与の核酸配列またはアミノ酸配列に対して特定の度合いの同一性を有する核酸配列またはアミノ酸配列は、上記所与の配列の少なくとも１つの機能的特性を有してもよく、例えば、一部の場合では、上記の所与の配列と機能的に等価である。１つの重要な特性は、特に対象に投与された場合にサイトカインとして作用する能力を含む。一部の実施形態では、所与の核酸配列またはアミノ酸配列に対して特定の度合いの同一性を有する核酸配列またはアミノ酸配列は、上記の所与の配列と機能的に等価である。
本明細書の上記に別様の記載がない限り、種々の成分を「含む」と記載されている本明細書の実施形態は、記載の成分「からなる」または「から本質的になる」ことも企図されており；種々の成分「からなる」と記載されている本明細書の実施形態は、記載の成分を「含む」または「から本質的になる」ことも企図されており；種々の成分「から本質的になる」と記載されている本明細書の実施形態は、記載の成分「からなる」または「含む」ことも企図されている（この同義性は、特許請求の範囲におけるこうした用語の使用には適用されない）。請求項の条項で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という移行用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「により特徴付けられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義であり、包括的または非限定的であり、追加の記載されていない要素または方法ステップを除外しない。請求項の条項で使用される場合、「からなる」という移行句は、その請求項で指定されていないあらゆる要素、ステップ、または成分を除外し、「から本質的になる」という移行句は、請求項用語の範囲を、記載されている成分、および本明細書から理解される通りの特許請求されている用語の根本的で新規の特徴に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。
投与されるＲＮＡ
一部の実施形態では、進行期固形腫瘍がんを治療するための方法は、進行期固形腫瘍がんを有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含む。投与されるＲＮＡの詳細は以下の通りである。
一部の実施形態では、ＲＮＡの投与は、ＩＦＮαをコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡ、ＩＬ－１２ｓｃをコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡであって、場合により各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を有し、ＲＮＡの５’末端にＣａｐ１構造を有するように修飾されているＲＮＡを投与することを含む。
一部の実施形態では、ＲＮＡの投与は、ＩＬ－１２ｓｃをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＦＮα、ＩＬ－１５スシ、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡをさらに投与することを含む。
一部の実施形態では、ＲＮＡの投与は、ＩＦＮαをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＬ－１２ｓｃ、ＩＬ－１５スシ、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡをさらに投与することを含む。
一部の実施形態では、ＲＮＡの投与は、ＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＬ－１２ｓｃ、ＩＦＮα、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡをさらに投与することを含む。
一部の実施形態では、ＲＮＡの投与は、ＧＭ－ＣＳＦスシをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＬ－１２ｓｃ、ＩＦＮα、およびＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡをさらに投与することを含む。
一部の実施形態では、サイトカインＲＮＡ混合物中のＩＦＮαタンパク質は、ＩＦＮα２ｂタンパク質であり、本方法は、ＩＦＮα２ｂタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含む。
一部の実施形態では、（ｉ）ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列、もしくは配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列の少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）ＩＬ－１２ｓｃタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列、もしくは配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、（ｉ）ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２６のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）ＩＬ－１５スシタンパク質は、配列番号２４のアミノ酸配列、もしくは配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、（ｉ）ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）ＩＦＮαタンパク質は、配列番号１９のアミノ酸配列、もしくは配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、（ｉ）ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２９のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）ＧＭ－ＣＳＦタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列、もしくは配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
インターロイキン－１２単鎖（ＩＬ－１２ｓｃ）
一部の実施形態では、インターロイキン－１２単鎖（ＩＬ－１２ｓｃ）をコードするＲＮＡが提供される。一部の実施形態では、インターロイキン－１２単鎖（ＩＬ－１２ｓｃ）ＲＮＡは、ＩＬ－１２ ｐ４０（ＩＬ－１２Ｂと呼ばれることがあり；配列番号１５のヌクレオチド１～９８４によりコードされる）、ＧＳリンカーなどのリンカー、およびＩＬ－１２ ｐ３５（ＩＬ－１２Ａと呼ばれることがあり；配列番号１５のヌクレオチド１０２７～１６２３によりコードされる）を含むインターロイキン－１２単鎖（ＩＬ－１２ｓｃ）（例えば、配列番号１４）をコードするＤＮＡ配列によりコードされる。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｐ４０、リンカー、およびＩＬ－１２ｐ３５は連続しており、介在するヌクレオチドはない。ＩＬ－１２ｓｃをコードする例示的なＤＮＡ配列は、配列番号１５に提供されている。一部の実施形態では、インターロイキン－１２単鎖（ＩＬ－１２ｓｃ）ＲＮＡは、配列番号１７または１８に提供され、これらは両方とも、配列番号１４のタンパク質をコードする。ＩＬ－１２ ｐ４０のＲＮＡ配列は、配列番号１７または１８のヌクレオチド１～９８４に示されており、ＩＬ－１２ ｐ３５のＲＮＡ配列は、配列番号１７または１８のヌクレオチド１０２７～１６２３に示されている。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列によりコードされる。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列によりコードされる。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列によりコードされる。一部の実施形態では、コドン最適化ＤＮＡ配列は、配列番号１６を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、ＤＮＡ配列は、配列番号１６と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するコドン最適化ＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列は、ＩＬ－１２ｓｃ－ｐ４０をコードするヌクレオチド（配列番号１６のヌクレオチド１～９８４）を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列は、ＩＬ－１２ｓｃ－ｐ３５をコードするヌクレオチド（配列番号１６のヌクレオチド１０２７～１６２３）を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列は、配列番号１６の、ＩＬ－１２ｓｃ－ｐ４０（配列番号１６のヌクレオチド１～９８４）部分およびＩＬ－１２ｓｃ－ｐ３５（配列番号１６のヌクレオチド１０２７～１６２３）部分をコードするヌクレオチドを含み、ｐ４０部分とｐ３５部分との間に、ｐ４０部分およびｐ３５部分を接続するリンカーポリペプチドをコードするヌクレオチド（例えば、配列番号１６のヌクレオチド９８５～１０２６）をさらに含む。当業者に公知の任意のリンカーを使用することができる。ｐ４０部分は、ｐ３５部分に対して５’であってもよく、または３’であってもよい。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、例えば、ＩＬ－１２ｓｃをコードするＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号１５または１６を含むヌクレオチド配列から転写される。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号１７または１８を含むかまたはからからなる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号１７または１８と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＲＮＡ配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号１７または１８の、ＩＬ－１２ｓｃ－ｐ４０部分（配列番号１７または１８のヌクレオチド１～９８４）およびＩＬ－１２ｓｃ－ｐ３５部分（配列番号１７または１８のヌクレオチド１０２７～１６２３）をコードするヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃをコードするコドン最適化ＲＮＡ配列は、配列番号１８のＩＬ－１２ｓｃ－ｐ４０部分（配列番号１８のヌクレオチド１～９８４）およびＩＬ－１２ｓｃ－ｐ３５部分（配列番号１８のヌクレオチド１０２７～１６２３）をコードするヌクレオチドを含み、ｐ４０部分とｐ３５部分との間に、ｐ４０部分およびｐ３５部分を接続するリンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む。当業者に公知の任意のリンカーを使用することができる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、変更されたヌクレオチドを５’末端に含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは５’キャップを含む。当技術分野で公知の任意の５’キャップを使用することができる。一部の実施形態では、５’キャップは、５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、チオホスフェート修飾を含む５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、２’－Ｏまたは３’－Ｏ－リボース－メチル化ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、修飾グアノシンヌクレオチドまたは修飾アデノシンヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、７－メチルグアニレートを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、Ｃａｐ０またはＣａｐ１である。例示的なキャップ構造としては、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ｍ７，２｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｓｐ（５’）Ｇ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＧ、およびｍ７，３｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＡが挙げられる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、開始コドンの上流にある。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの翻訳を調節する。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、安定化配列である。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの半減期を増加させる。当技術分野で公知の任意の５’ＵＴＲを使用することができる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号３または５から転写される。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、翻訳終止コドンに後に続いている。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、ＲＮＡのポリアデニル化、翻訳効率、局在化、または安定性を調節する。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号７から転写される。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲを両方とも含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、５’ＵＴＲのみを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、３’ＵＴＲのみを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドのポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、２００個またはそれ以上のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列番号３０を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、５’キャップ、５’ＵＴＲ、ＩＬ－１２ｓｃをコードする核酸、３’ＵＴＲ、およびポリＡテールをこの順序で含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、配列番号１５または１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、例えば、配列番号１５または１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、配列番号１５または１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、例えば、配列番号１５または１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、配列番号１５または１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、例えば、配列番号１５または１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡは、配列番号１７または１８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１２ｓｃ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオチドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。
インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）
一部の実施形態では、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）ＲＮＡは、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）をコードするＤＮＡ配列によりコードされる（例えば、配列番号１９）。このＩＦＮαをコードする例示的なＤＮＡ配列は、配列番号２０に提供されている。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、ＩＦＮαをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列によりコードされる。一部の実施形態では、コドン最適化ＤＮＡ配列は、配列番号２１のヌクレオチドを含むかまたはからなる。一部の実施形態では、ＤＮＡ配列は、配列番号２１と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するコドン最適化ＤＮＡ配列を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、例えば、ＩＦＮαをコードするＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２０または２１を含むヌクレオチド配列から転写される。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２２または２３を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２２または２３と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＲＮＡ配列を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡの各ウリジンは修飾されている。一部の実施形態では、ＲＮＡの各ウリジンは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）で修飾されている。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、変更されたヌクレオチドを５’末端に含む。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、５’キャップを含む。当技術分野で公知の任意の５’キャップを使用することができる。一部の実施形態では、５’キャップは、５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、チオホスフェート修飾を含む５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、２’－Ｏまたは３’－Ｏ－リボース－メチル化ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、修飾グアノシンヌクレオチドまたは修飾アデノシンヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、７－メチルグアニレートを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、Ｃａｐ０またはＣａｐ１である。例示的なキャップ構造としては、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ｍ７，２｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｓｐ（５’）Ｇ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＧ、およびｍ７，３｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＡが挙げられる。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、開始コドンの上流にある。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの翻訳を調節する。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、安定化配列である。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの半減期を増加させる。当技術分野で公知の任意の５’ＵＴＲを使用することができる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号３または５を含むヌクレオチド配列から転写される。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、翻訳終止コドンの後に続く。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、ＲＮＡのポリアデニル化、翻訳効率、局在化、または安定性を調節する。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号７を含むヌクレオチド配列から転写される。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲを両方とも含む。一部の実施形態では、組成物は、５’ＵＴＲのみを含む。一部の実施形態では、組成物は、３’ＵＴＲのみを含む。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドのポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、２００個またはそれ以上のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列番号３０を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、５’キャップ、５’ＵＴＲ、ＩＦＮαをコードする核酸、３’ＵＴＲ、およびポリＡテールをこの順序で含む。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、配列番号２０または２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、例えば、配列番号２０または２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、配列番号２０または２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、例えば、配列番号２０または２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、配列番号２０または２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡは、例えば、配列番号２０または２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。一部の実施形態では、組成物は、配列番号２２または２３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオチドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。
インターロイキン１５（ＩＬ－１５）スシ
一部の実施形態では、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）スシをコードするＲＮＡが投与される。本明細書で使用される場合、「ＩＬ－１５スシ」という用語は、可溶性インターロイキン１５（ＩＬ－１５）受容体アルファスシドメインおよび成熟インターロイキンアルファ（ＩＬ－１５）を融合タンパク質として含む構築物を記述する。一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、可溶性ＩＬ－１５受容体アルファ鎖（スシ）およびそれに続くグリシン－セリン（ＧＳ）リンカーおよびそれに続くＩＬ－１５の成熟配列を含むＩＬ－１５スシ（配列番号２４）をコードするＤＮＡ配列によりコードされる。このＩＬ－１５スシをコードするＤＮＡ配列は、配列番号２５に提供されている。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、例えば、ＩＬ－１５スシをコードするＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列である。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２５を含むヌクレオチド配列から転写される。一部の実施形態では、リンカーをコードするヌクレオチドは、完全に存在しなくともよく、または好適なリンカーをコードする任意のヌクレオチドで部分的にもしくは全体が置き換えられていてもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２６を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２６と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシをコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列は、ＩＬ－１５受容体アルファのスシドメイン（例えば、配列番号２５または２６のヌクレオチド１～３２１）および成熟ＩＬ－１５（例えば、配列番号２５または２６のヌクレオチド３８２～７２９）をコードするヌクレオチド含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシをコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列は、ＩＬ－１５受容体アルファのスシドメイン（例えば、配列番号２５または２６のヌクレオチド１～３２１）および成熟ＩＬ－１５（例えば、配列番号２５または２６のヌクレオチド３８２～７２９）をコードするヌクレオチド含み、こうした部分の間に、こうした部分を接続するリンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２５または２６のヌクレオチド３２２～３８１を含む。当業者に公知の任意のリンカーを使用することができる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、変更されたヌクレオチドを５’末端に含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、５’キャップを含む。当技術分野で公知の任意の５’キャップを使用することができる。一部の実施形態では、５’キャップは、５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、チオホスフェート修飾を含む５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、２’－Ｏまたは３’－Ｏ－リボース－メチル化ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、修飾グアノシンヌクレオチドまたは修飾アデノシンヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、７－メチルグアニレートを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、Ｃａｐ０またはＣａｐ１である。例示的なキャップ構造は、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ｍ７，２｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｓｐ（５’）Ｇ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＧ、およびｍ７，３｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＡが挙げられる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、開始コドンの上流にある。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの翻訳を調節する。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、安定化配列である。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの半減期を増加させる。当技術分野で公知の任意の５’ＵＴＲを使用することができる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号３または５から転写される。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、翻訳終止コドンに後にある。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、ＲＮＡのポリアデニル化、翻訳効率、局在化、または安定性を調節する。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号７から転写される。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲを両方とも含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、５’ＵＴＲのみを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、３’ＵＴＲのみを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドのポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、２００個またはそれ以上のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列番号３０を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、５’キャップ、５’ＵＴＲ、ＩＬ－１５スシをコードする核酸、３’ＵＴＲ、およびポリＡテールをこの順序で含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、配列番号２５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、例えば、配列番号２５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、配列番号２５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、例えば、配列番号２５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、配列番号２５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、例えば、配列番号２５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ウリジンにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＩＬ－１５スシＲＮＡは、例えば、配列番号２６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＩＦＮα ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）
一部の実施形態では、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）をコードするＲＮＡが投与される。一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）（例えば、配列番号２７）をコードするＤＮＡ配列によりコードされる。一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦをコードするＤＮＡ配列は、配列番号２８に提供されている。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、例えば、ＧＭ－ＣＳＦをコードするＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２８から転写される。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２９を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、ＲＮＡ配列は、配列番号２９と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＲＮＡ配列を含む。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、変更されたヌクレオチドを５’末端に含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは５’キャップを含む。当技術分野で公知の任意の５’キャップを使用することができる。一部の実施形態では、５’キャップは、５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、チオホスフェート修飾を含む５’－５’三リン酸連結を含む。一部の実施形態では、５’キャップは、２’－Ｏまたは３’－Ｏ－リボース－メチル化ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、修飾グアノシンヌクレオチドまたは修飾アデノシンヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、７－メチルグアニレートを含む。一部の実施形態では、５’キャップは、Ｃａｐ０またはＣａｐ１である。例示的なキャップ構造は、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ｍ７，２｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｓｐ（５’）Ｇ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＧ、およびｍ７，３｀Ｏ－ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）２｀Ｏ－ｍＡが挙げられる。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、開始コドンの上流にある。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの翻訳を調節する。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、安定化配列である。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡの半減期を増加させる。当技術分野で公知の任意の５’ＵＴＲを使用することができる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号３または５から転写される。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、翻訳終止コドンに後にある。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、ＲＮＡのポリアデニル化、翻訳効率、局在化、または安定性を調節する。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号７から転写される。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ ＲＮＡ配列は、配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲを両方とも含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、５’ＵＴＲのみを含む。一部の実施形態では、組成物は、３’ＵＴＲのみを含む。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドのポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、２００個またはそれ以上のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列番号３０を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、５’キャップ、５’ＵＴＲ、ＧＭ－ＣＳＦをコードするヌクレオチド、３’ＵＴＲ、およびポリＡテールをこの順序で含む。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、例えば、配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列によりコードされる。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、例えば、配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列を含む。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、例えば、配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号３または５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＤＮＡ配列から転写されるＲＮＡ配列を含む。また、ＲＮＡは、組換え的に産生することができる。一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である。
一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡは、配列番号２９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号４または６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり；配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含むかまたはからなるＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、本明細書に記載の通りの修飾ヌクレオチドにより置き換えられている。一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。
修飾
本明細書に記載のＲＮＡの各々は、当業者に公知である任意の方法で修飾することができる。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、以下の通り修飾されている：
・各ウリジンの代わりの修飾核酸塩基；
・ＲＮＡの５’末端のＣａｐ１構造。
一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号４または６を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは、上記に記載の通り二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を低減するように処理されている。「Ｃａｐ１」構造は、酵素キャッピングによりｉｎ－ｖｉｔｒｏ転写後に生成さてもよく、またはｉｎ－ｖｉｔｒｏ転写中に生成されてもよい（同時転写キャッピング）。
一部の実施形態では、ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンは、修飾ヌクレオシドにより置き換えられている。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、修飾ウリジンである。
一部の実施形態では、ウリジンを置き換える修飾ウリジンは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）である。
一部の実施形態では、ＲＮＡの１つまたはそれ以上のシトシン、アデニン、またはグアニンが、修飾核酸塩基により置き換えられている。一実施形態では、シトシンを置き換える修飾核酸塩基は、５－メチルシトシン（ｍ５Ｃ）である。別の実施形態では、アデニンを置き換える修飾核酸塩基は、Ｎ６－メチルアデニン（ｍ６Ａ）である。別の実施形態では、分子の免疫原性を低減するための当技術分野で公知の任意の他の修飾核酸塩基を使用することができる。
一部の実施形態では、ＲＮＡの１つまたはそれ以上のウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、以下のものの任意の１つまたはそれ以上であってもよい：３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジン ５－ブロモ－ウリジン）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、１－エチル－プソイドウリジン、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ３Ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３－Ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－プソイドウリジン（Ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－アラ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）ウリジン、または当技術分野で公知である任意の他の修飾ウリジン。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。
一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）を含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）を含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、１つよりも多くのタイプの修飾ヌクレオシドを含んでいてもよく、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）およびＮ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）を含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。
一部の実施形態では、本方法で使用される少なくとも１つのＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む。一部の実施形態では、本方法で使用される各ＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む。一部の実施形態では、本方法で使用される各ＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧを含む。一部の実施形態では、本方法で使用される各ＲＮＡは、３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む。一部の実施形態では、本方法で使用される各ＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧおよび３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、各ＲＮＡは、ポリＡテールを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個、または少なくとも１００個、および最大で５００個、最大で４００個、最大で３００個、最大で２００個、または最大で１５０個のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個、または少なくとも１００個、および最大で５００個、最大で４００個、最大で３００個、最大で２００個、または最大で１５０個のＡヌクレオチドから本質的になっていてもよい。一部の実施形態では、ポリＡテールは、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個、または少なくとも１００個、および最大で５００個、最大で４００個、最大で３００個、最大で２００個、または最大で１５０個のヌクレオチドからなっていてもよい。一部の実施形態では、ポリＡテールは、配列番号３０に示されているポリＡテールを含んでいてもよい。一部の実施形態では、ポリＡテールは、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、約１５０個のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡテールは、約１２０個のヌクレオチドを含む。
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＲＮＡは、（１）ｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－ＯＭｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む５’キャップ；（２）（ｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲ；（３）（ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲ；ならびに（４）少なくとも１００個のヌクレオチドを含むポリＡテールを含む。
治療法
本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、方法に、例えば治療法に使用することができる。一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを治療するための方法であって、サイトカインＲＮＡ混合物を投与することを含み、進行期固形腫瘍がんは、上皮腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、胃腸管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を有する腫瘍、中皮腫腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、黒色腫腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽細胞腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、頭頸部がん、骨肉腫腫瘍、非小細胞肺がん、腎臓腫瘍、甲状腺腫瘍、肝臓腫瘍、腫瘍内注射に適した他の固形腫瘍、またはそれらの組合せを含む、方法が包含される。
一部の実施形態では、進行期固形腫瘍がんは、上皮腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、胃腸管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を有する腫瘍、中皮腫腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、黒色腫腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽細胞腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、頭頸部がん、骨肉腫腫瘍、非小細胞肺がん、腎臓腫瘍、甲状腺腫瘍、肝臓腫瘍、腫瘍内注射に適した他の固形腫瘍、またはそれらの組合せを含む。
一部の実施形態では、進行期固形腫瘍がんは、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫などのリンパ腫を含む。
一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、黒色腫である。一部の実施形態では、黒色腫は、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、黒色腫、場合によりブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫であり、腫瘍内注射に適した表在性転移、皮下転移、および／またはリンパ節転移を含む。
一部の実施形態では、腫瘍内注射は、リンパ節内の固形腫瘍転移への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、リンパ節内のリンパ腫腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、対象の皮膚表面の１０ｃｍ以内にある原発性または二次性固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、対象の皮膚表面の５ｃｍ以内にある原発性または二次性固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、皮膚固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、皮膚固形腫瘍は、転移したものである。一部の実施形態では、皮膚固形腫瘍は、皮膚がんである。一部の実施形態では、皮膚固形腫瘍は、皮膚がんではない。一部の実施形態では、腫瘍内注射は、皮下固形腫瘍への注射を含む。一部の実施形態では、皮下固形腫瘍は、転移したものである。一部の実施形態では、皮下固形腫瘍は、皮膚がんである。一部の実施形態では、皮下固形腫瘍は、皮膚がんではない。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、上皮腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、前立腺腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、卵巣腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腎細胞腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、胃腸管腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肝腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸直腸腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、脈管構造を有する腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、中皮腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、膵臓腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳房腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肉腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肺腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、黒色腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、小細胞肺腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、非小細胞肺がん腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、神経芽細胞腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、精巣腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、癌腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腺癌腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、精上皮腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、網膜芽細胞腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、ＨＮＳＣＣである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、頭頸部がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、骨肉腫腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、腎臓がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、甲状腺がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、未分化甲状腺がん（ＡＴＣ）である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肝臓がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、上記のいずれか２つである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、上記のいずれか２つまたはそれ以上である。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、リンパ腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、非ホジキンリンパ腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、ホジキンリンパ腫である。
一部の実施形態では、本方法は、場合により、各ウリジンの代わりに修飾核酸塩基を有し、およびＲＮＡの５’末端にＣａｐ１構造を有するように修飾された、ＩＦＮαをコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡ、ＩＬ－１２ｓｃをコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡを含むサイトカインＲＮＡ混合物の使用を含む。
一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを治療するための方法であって、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含む方法が提供される。
一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを治療するための方法であって、進行期固形腫瘍がんを有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む治療有効量のＲＮＡを投与することを含む方法が包含される。
一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんの治療に使用するための組成物は、ＩＬ－１２ｓｃをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＦＮα、ＩＬ－１５スシ、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡをさらに投与することを含むことが包含される。
一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんの治療に使用するための組成物は、ＩＦＮαをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＬ－１２ｓｃ、ＩＬ－１５スシ、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡをさらに投与することを含むことが包含される。
一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんの治療に使用するための組成物は、ＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＬ－１２ｓｃ、ＩＦＮα、およびＧＭ－ＣＳＦをコードするＲＮＡをさらに投与することを含むことが包含される。
一部の実施形態では、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんの治療に使用するための組成物は、ＧＭ－ＣＳＦスシをコードするＲＮＡを投与すること、ならびにＩＬ－１２ｓｃ、ＩＦＮα、およびＩＬ－１５スシをコードするＲＮＡをさらに投与することを含むことが包含される。
Ａ． 投与経路およびタイミング
一部の実施形態では、ＲＮＡは同時投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、時を同じくしてまたは順次に投与される。順次の場合、投与は、当業者に公知の任意の順序および任意の適切な時間間隔であってもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡは、腫瘍への注射（例えば、腫瘍内）または腫瘍の付近（腫瘍周囲）への注射により投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、注射前に液体溶液中で一緒に混合される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、直接腫瘍内注射により投与される。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、腫瘍内にまたは腫瘍周囲に注射される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、腫瘍内に注射される。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、ネオアジュバント設定で投与される。「ネオアジュバント設定」は、本方法が、一次／根治療法の前に（例えば、腫瘍の外科的切除の前に）実施される臨床設定を指す。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、単独療法として投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、１つまたはそれ以上の他の治療選択肢（例えば、放射線および／または１つもしくはそれ以上の化学療法剤）との併用療法の一部として投与される。
一部の実施形態では、サイトカインＲＮＡ混合物は、３または４週間サイクルで投与され、サイトカインＲＮＡ混合物は、毎週１回投与される。一部の実施形態では、サイトカインＲＮＡ混合物は、３または４週間サイクルで投与され、サイトカインＲＮＡ混合物は、２週毎に１回投与される。一部の実施形態では、サイトカインＲＮＡ混合物は、３または４週間サイクルで投与され、サイトカインＲＮＡ混合物は、３週毎に１回投与される。一部の実施形態では、サイトカインＲＮＡ混合物は、３または４週間サイクルで投与され、サイトカインＲＮＡ混合物は、４週毎に１回投与される。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、約５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月間投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、約５カ月間投与される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、最大で５２週間投与される。
一部の実施形態では、ＲＮＡの組合せは、等しいＲＮＡ質量に基づき１：１：１：１の比で投与される（つまり、１：１：１：１％（重量／重量／重量／重量））。
一部の実施形態では、ＲＮＡは、治療有効量で投与される。
Ｂ． 適応症および患者集団
一部の実施形態では、本明細書中で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、固形腫瘍を有する対象を治療するための方法で使用され、対象は、
ｉ． 抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法もしくは抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、もしくは不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっており；ならびに／または
ｉｉ． ＰＤ－１および／もしくはＰＤ－Ｌ１抵抗性固形腫瘍を有し；ならびに／または
ｉｉｉ． 抗ＰＤ－１療法および／もしくは抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して後天的抵抗性を有し；ならびに／または
ｉｖ． 抗ＰＤ－１療法および／もしくは抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗している対象の固形腫瘍を治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に不耐容になっている対象の固形腫瘍を治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に抵抗性になっている対象の固形腫瘍を治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に不耐容になっている対象の固形腫瘍を治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１抵抗性固形腫瘍を有する対象の固形腫瘍を治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、対象の固形腫瘍を治療する方法であって、対象は、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して後天的抵抗性を有する方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、対象の固形腫瘍を治療する方法であって、対象は、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する方法で使用される。
一部の実施形態では、対象は、転移性固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、切除不能な固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、進行期固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、転移性固形腫瘍がんを有する。一部の実施形態では、対象は、進行期の切除不能で転移性の固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、進行期の切除不能な固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、進行期の転移性固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、対象は、切除不能な転移性固形腫瘍を有する。
一部の実施形態では、対象は、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）機能の部分的または完全な喪失を含むがん細胞を有する。一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ機能の部分的な喪失を示すがん細胞を有する。一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ機能の完全な喪失を有するがん細胞を有する。一部の実施形態では、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失は、がん細胞を、同じ対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価し、非がん細胞は、がん細胞が由来したのと同じ組織に由来する。一部の実施形態では、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失は、がん細胞を、同じ対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価し、非がん細胞は、がん細胞が由来したのと同じ組織に由来しない。一部の実施形態では、Ｂ２Ｍ機能の部分的または全体的な喪失は、がん細胞を、異なる対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価される。一部の実施形態では、Ｂ２Ｍ機能の部分的または全体的な喪失は、がん細胞を、非がん細胞対照と比較することにより評価される。
一部の実施形態では、がん細胞は、正常なＢ２Ｍ機能を有するがん細胞を含む固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の２５％またはそれより多くが、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の５０％またはそれより多くが、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の７５％またはそれより多くが、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の９５％またはそれより多くが、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する固形腫瘍に存在する。
一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ遺伝子に突然変異を含む細胞を含む。
一部の実施形態では、突然変異は、置換、挿入、または欠失である。一部の実施形態では、Ｂ２Ｍ遺伝子は、ヘテロ接合性の喪失（ＬＯＨ）を含む。一部の実施形態では、突然変異は、フレームシフト突然変異である。一部の実施形態では、突然変異は、欠失突然変異である。一部の実施形態では、フレームシフト突然変異は、Ｂ２Ｍのエクソン１に存在する。一部の実施形態では、フレームシフト突然変異は、Ｂ２Ｍの短縮をもたらす。一部の実施形態では、突然変異は、Ｂ２Ｍの完全なまたは部分的な欠失（例えば、短縮）である。一部の実施形態では、欠失突然変異は、Ｂ２Ｍのエクソン１に存在する。一部の実施形態では、フレームシフト突然変異は、ｐ．Ｌｅｕ１３ｆｓおよび／またはｐ．Ｓｅｒ１４ｆｓを含む。一部の実施形態では、フレームシフト突然変異は、Ｍｉｄｄｈａら（２０１９年）ＪＣＯ Ｐｒｅｃｉｓ Ｏｎｃｏｌ．（ｄｏｉ：１０．１２００／ＰＯ．１８．００３２１）による、Ｖ６９Ｗｆｓ＊３４、Ｌ１５ｆｓ＊４１、Ｌ１３Ｐ、Ｌ１５ｆｓ＊４１、および／またはｐ．Ｓ３１＊を含む。一部の実施形態では、突然変異は、ＪＡＫ１および／またはＪＡＫ２のキナーゼドメインの上流にフレームシフト突然変異および／または欠失（例えば、短縮）突然変異を含む。
一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有しない対象と比較して、低減されたレベルのＢ２Ｍタンパク質を有する。
一部の実施形態では、対象は、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）機能の部分的または完全な喪失を含む。一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ機能の部分的喪失を含む。一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ機能の完全な喪失を含む。Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失は、同じ対象に由来する組織サンプルと比較することにより評価することができる。Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失は、腫瘍に由来する組織サンプルを、腫瘍サンプルが由来したのと同じ組織に由来する組織サンプルと比較することにより評価することができる。
一部の実施形態では、固形腫瘍は全体が（例えば、固形腫瘍から採取された生検で評価して）、固形腫瘍が由来する正常な細胞または組織と比較して、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有する。一部の実施形態では、対象は、Ｂ２Ｍ遺伝子に突然変異（例えば、機能の部分的または完全な喪失がそれからもたらされる）を含む。
一部の実施形態では、腫瘍内のある特定の細胞は、Ｂ２Ｍ機能の喪失を示す。一部の実施形態では、腫瘍内のある特定の細胞は、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を示すが、腫瘍内の他の細胞はそうではない。
一部の実施形態では、対象は、対照と比較して低減されたレベルの表面発現主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（ＭＨＣＩ）を有し、場合により、対照は、同じ対象に由来する非がん性サンプルである。一部の実施形態では、対象は、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを含むがん細胞を有する。一部の実施形態では、がん細胞は、表面発現ＭＨＣ Ｉを有していない。一部の実施形態では、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉは、がん細胞を、同じ対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価され、場合により、非がん細胞は、がん細胞が由来したのと同じ組織に由来する。一部の実施形態では、がん細胞は、正常レベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有するがん細胞を含む固形腫瘍内に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の２５％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の５０％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の７５％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。一部の実施形態では、がん細胞は、がん細胞の９５％またはそれよりも多くが、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する固形腫瘍に存在する。
一部の実施形態では、固形腫瘍は全体が（例えば、固形腫瘍から採取された生検で評価して）、固形腫瘍が由来する正常な細胞または組織と比較して、低減されたレベルの表面発現ＭＨＣ Ｉを有する。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、進行期固形腫瘍がんを治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、切除不能な固形腫瘍がんを治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるサイトカインＲＮＡ混合物は、転移性固形腫瘍がんを治療するための方法で使用される。
一部の実施形態では、サイトカインＲＮＡ混合物は、リンパ節内の１つまたはそれ以上の固形腫瘍がんに注射される。
一部の実施形態では、進行期固形腫瘍がんは、直接腫瘍内注射に好適な腫瘍を含む。一部の実施形態では、進行期固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩのサブセット、ステージＩＶ、またはステージＩＶのサブセットである。一部の実施形態では、がんは、黒色腫である。一部の実施形態では、黒色腫は、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＩＶである。一部の実施形態では、がんは、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）である。一部の実施形態では、がんは、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）である。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、ステージＩＩＩまたはステージＩＶである。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、黒色腫であり、場合により黒色腫はブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫であり；腫瘍内注射に適した表在性転移、皮下転移、および／またはリンパ節転移を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、粘膜部位のみを有するＨＮＳＣＣおよび／または粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ＨＮＳＣＣである。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、ブドウ膜黒色腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、ＲＮＡは、固形腫瘍がんの粘膜部位のみに腫瘍内注射され、固形腫瘍がんは、ＨＮＳＣＣまたは粘膜黒色腫である。
一部の実施形態では、対象は、以前の抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗している。他の実施形態では、対象は、以前に抗ＰＤ－１療法でも抗ＰＤ－Ｌ１療法でも治療されたことがない。一部の実施形態では、対象には、他の治療選択肢がない。
一部の実施形態では、本方法は、腫瘍のサイズを低減すること、または対象におけるがん転移を予防することを含んでいてもよい。
一部の実施形態では、対象は、少なくとも２つの腫瘍病変または少なくとも３つの腫瘍病変を有する。一部の実施形態では、対象は、２つの腫瘍病変を有する。一部の実施形態では、対象は、３つの腫瘍病変を有する。
一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載の通り、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１基準に従って測定可能な疾患を有する。
一部の実施形態では、対象は、直接腫瘍内注射に好適な腫瘍を有する。一部の実施形態では、腫瘍が直接腫瘍内注射に好適であるか否かは、用量容積に基づいてもよい。一部の実施形態では、腫瘍は、最長直径が≧０．５ｃｍの皮膚病変もしくは皮下病変、またはコンフルエントになっており、注射に好適な（つまり、出血性でも浸出性でもない）、≧０．５ｃｍの最長直径（すべての関与する標的病変の直径の合計）を有する複数の注射可能な併合病変を含む場合、サイトカインＲＮＡ混合物の直接腫瘍内注射に好適である。一部の実施形態では、超音波（ＵＳＧ）誘導腫瘍内注射に好適であり、転移性疾患であると確認されている≧１．５ｃｍのリンパ節も好適である。一部の実施形態では、腫瘍は、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫である。一部の実施形態では、腫瘍は、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫であり；腫瘍内注射に適した表在性転移、皮下転移、および／またはリンパ節転移を含む。
一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月よりも長い平均余命を有してもよい。一部の実施形態では、対象は、３カ月よりも長い平均余命を有する。一部の実施形態では、対象は、少なくとも１８歳である。
一部の実施形態では、進行期黒色腫、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を治療するための方法であって、進行期黒色腫を有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態では、（ａ）対象は、少なくとも１８歳であり；（ｂ）対象は、以前の抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に失敗しており；（ｃ）対象は、最低で２つの病変を有し；および（ｄ）黒色腫、ＣＳＣＣ、またはＨＮＳＣＣは、直接腫瘍内注射に好適な腫瘍を含む。
一部の実施形態では、対象は、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１基準に従って測定可能な疾患を有する。一部の実施形態では、対象は、３カ月よりも長い平均余命を有する。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、上皮腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、胃腸管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を有する腫瘍、中皮腫腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、黒色腫腫瘍、小細胞肺腫瘍、神経芽細胞腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、頭頸部がん、または骨肉腫腫瘍である。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、任意のサイズの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、腫瘍厚測定値は、最も近い０．１ｍｍに丸められて報告されている。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが≦１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、または１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが＜０．８ｍｍ（すなわち、０．８ｍｍ未満）であり、潰瘍化を示さない原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが＜０．８ｍｍ（すなわち、０．８ｍｍ未満）であり、潰瘍化を示す原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが０．８～１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが０．８、０．９、または１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが０．８～１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが＞１．０～２．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、または２．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが＞１．０～２．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが＞２．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが＞３．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、または４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが＞２．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが＞４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、厚さが４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、７．０、８．０、９．０、または１０．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、固形腫瘍は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが＞４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、厚さは、腫瘍の最も厚い（つまり、最大の）寸法である。一部の実施形態では、腫瘍は皮膚がん腫瘍であり、厚さは、皮膚表面から腫瘍の最深部までである（例えば、厚さは、腫瘍の横方向の広がりではない）。一部の実施形態では、腫瘍は、皮膚がん以外のがんの皮膚転移であり、腫瘍の厚さは、皮膚表面から腫瘍の最深部までである（例えば、厚さは、腫瘍の横方向の広がりではない）。
一部の実施形態では、固形腫瘍は、黒色腫固形腫瘍である。一部の実施形態では、黒色腫は、任意のサイズの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、腫瘍厚測定値は、最も近い０．１ｍｍに丸められて報告されている。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが≦１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、または１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが＜０．８ｍｍ（すなわち、０．８ｍｍ未満）であり、潰瘍化を示さない原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが＜０．８ｍｍ（すなわち、０．８ｍｍ未満）であり、潰瘍化を示す原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが０．８～１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが０．８、０．９、または１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが０．８～１．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが＞１．０～２．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、または２．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが＞１．０～２．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが＞２．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが＞３．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、または４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが＞２．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが＞４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、厚さが４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、７．０、８．０、９．０、または１０．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、潰瘍化の有無を問わず、厚さが＞４．０ｍｍの原発腫瘍を含む。一部の実施形態では、厚さは、皮膚表面から腫瘍の最深部までである（厚さは、腫瘍の横方向の広がりではない）。
一部の実施形態では、黒色腫は、１つの腫瘍関与領域リンパ節、または腫瘍関与節を有さない任意の数のイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、１つの臨床的に潜在的な腫瘍関与領域リンパ節を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、１つの臨床的に検出可能な腫瘍関与領域リンパ節を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、腫瘍関与節を有さない任意の数のイントランジット転移、衛星転移、および／またはマイクロサテライト転移を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、２つもしくは３つの腫瘍関与領域リンパ節、または腫瘍関与節を有さない任意の数のイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、２つまたは３つの臨床的に潜在的な腫瘍関与領域リンパ節を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、２つまたは３つの腫瘍関与領域リンパ節を含み、そのうちの少なくとも１つは、臨床的に検出可能である。一部の実施形態では、黒色腫は、２つまたは３つの腫瘍関連領域リンパ節を含み、そのうちの１つは、臨床的に潜在的または臨床的に検出可能であり、イントランジット転移、衛星転移、および／またはマイクロサテライト転移の存在を伴う。一部の実施形態では、黒色腫は、１つの腫瘍関与節を有する任意の数のイントランジット転移、衛星転移、および／またはマイクロサテライト転移を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、４つもしくはそれ以上の腫瘍関与領域リンパ節、または２つもしくはそれ以上の腫瘍関与節を有する任意の数のイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移、またはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の有無を問わない任意の数の密集節を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、４つまたはそれ以上の臨床的に潜在的な腫瘍関与領域リンパ節を含む。一部の実施形態では、黒色腫は、４つまたはそれ以上の臨床的に潜在的な腫瘍関与領域リンパ節を含み、そのうちの少なくとも１つは、臨床的に検出可能であるか、または任意の数の密集節の存在を伴う。一部の実施形態では、黒色腫は、２つまたは３つの腫瘍関与領域リンパ節を含み、そのうちの１つは、臨床的に潜在的であるか、または臨床的に検出可能である。一部の実施形態では、黒色腫は、４つもしくはそれ以上の臨床的に潜在的な腫瘍関与領域リンパ節を含み、そのうちの２つもしくはそれ以上は、臨床的に潜在的であるかもしくは臨床的に検出可能であり、ならびに／または任意の数の密集節の存在を伴い、ならびにイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の存在を伴う。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． 任意のサイズの原発腫瘍を含み；
ｂ． １つもしくはそれ以上の腫瘍関与領域リンパ節；または腫瘍関与領域リンパ節を有しないイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移を含み；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、黒色腫は、検出可能な遠隔転移を有する。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． 潰瘍化を示さない厚さが＜０．８ｍｍの原発腫瘍；または厚さが０．８～１．０ｍｍの原発腫瘍および潰瘍化を示す厚さが０．８ｍｍ未満の原発腫瘍；または潰瘍化を示さない厚さが＞１．０～２．０ｍｍの原発腫瘍を含み；
ｂ． １つまたは２つまたは３つの臨床的に潜在的な腫瘍関与領域リンパ節を含み；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． 潰瘍化を示さない厚さが＜０．８ｍｍの原発腫瘍；または厚さが０．８～１．０ｍｍの原発腫瘍および潰瘍化を示す厚さが０．８ｍｍ未満の原発腫瘍；または潰瘍化を示さない厚さが＞１．０～２．０ｍｍの原発腫瘍を含み；
ｂ． １つの臨床的に検出可能な腫瘍関与領域リンパ節を含むか；またはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の存在を伴う腫瘍関与領域リンパ節を含まず；または２つもしくは３つの腫瘍関連領域リンパ節であって、そのうちの少なくとも１つは臨床的に検出可能である腫瘍関連領域リンパ節を含み；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． 潰瘍化を示す厚さが＞１．０～２．０ｍｍの原発腫瘍；または潰瘍化を示さない厚さが＞２．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含み；
ｂ． １つの臨床的に検出可能なもしくは臨床的に潜在的な腫瘍関与領域リンパ節を含むか；またはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移を有する腫瘍関与領域リンパ節を含まないかもしくは１つ含み；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． １つの臨床的に検出可能な腫瘍関与領域リンパ節を含むか；またはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の存在を伴う腫瘍関与領域リンパ節を含まず；
ｂ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、黒色腫は、検出可能な遠隔転移を有さず；
ａ． ２つもしくは３つの腫瘍関与領域リンパ節であって、そのうちの少なくとも１つは臨床的に検出可能である腫瘍関与領域リンパ節；
ｂ． イントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の存在を伴う１つの臨床的に潜在的なもしくは検出可能な腫瘍関与領域リンパ節；
ｃ． ４つもしくはそれ以上の腫瘍関与領域リンパ節であって、そのうちの少なくとも１つは臨床的に検出可能である腫瘍関与領域リンパ節、もしくは１つもしくはそれ以上の密集節の存在；または
ｄ． ２つもしくはそれ以上の臨床的に潜在的なもしくは臨床的に検出可能な腫瘍関連領域リンパ節、ならびに／もしくはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の存在を伴う１つもしくはそれ以上の密集節の存在
を含む。
一部の実施形態では、黒色腫は、潰瘍化を示さない厚さが＜０．８ｍｍまたは＞１．０～２．０または＞２．０～４．０ｍｍの原発腫瘍を含み；検出可能な遠隔転移を含まず；
ａ． イントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の存在を伴う１つの臨床的に潜在的なもしくは臨床的に検出可能な腫瘍関与領域リンパ節；または
ｂ． ４つもしくはそれ以上の腫瘍関与領域リンパ節；もしくは２つもしくはそれ以上の腫瘍関与節を有する１つもしくはそれ以上のイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移；もしくはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の有無を問わない１つもしくはそれ以上の密集節
を含む。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． 潰瘍化を示す厚さが＞２．０～４．０ｍｍの原発腫瘍；または潰瘍化を示さない厚さが＞４．０ｍｍの原発腫瘍を含み；
ｂ． １つもしくはそれ以上の腫瘍関与領域リンパ節；または場合により１つもしくはそれ以上の腫瘍関与リンパ節を有する１つもしくはそれ以上のイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移；またはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の有無を問わない１つもしくはそれ以上の密集節を含み；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． 潰瘍化を示さない厚さが＞４．０ｍｍの原発腫瘍を含み；
ｂ． １つもしくは２つもしくは３つの腫瘍関与領域リンパ節；または腫瘍関与領域リンパ節を有しないかもしくは１つ有する１つもしくはそれ以上のイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移を含み；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、黒色腫は、
ａ． 潰瘍化を示す厚さが＞４．０ｍｍの原発腫瘍を含み；
ｂ． ４つもしくはそれ以上の腫瘍関与領域リンパ節；または２つもしくはそれ以上の腫瘍関与領域リンパ節を有する１つもしくはそれ以上のイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移、またはイントランジット転移、衛星転移、および／もしくはマイクロサテライト転移の有無を問わない１つもしくはそれ以上の密集節を含み；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、任意のサイズの腫瘍を含む。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、識別される腫瘍を含まない。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、その最大寸法が２ｃｍまたはそれよりも小さい腫瘍を含む。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、その最大寸法が２ｃｍよりも大きいが４ｃｍよりは大きくない腫瘍を含む。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、最大寸法が４ｃｍよりも大きいか、または骨侵食もしくは神経周囲浸潤もしくは深部浸潤が最小限である腫瘍を含む。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、広範な皮質骨もしくは髄質骨の関与または頭蓋底の浸潤または頭蓋底孔を介した浸潤を有する腫瘍を含む。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、領域リンパ節転移を含まない。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、単一の同側リンパ節に転移を含み、最大寸法が３ｃｍまたはそれよりも小さく、ＥＮＥ陰性である。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、単一の同側リンパ節に、最大寸法が３ｃｍよりも大きいが６ｃｍよりは大きくはなく、ＥＮＥ陰性である転移を含む。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、複数の同側リンパ節に、最大寸法が６ｃｍよりも大きくはない転移を含み、ＥＮＥ陰性である。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、両側または対側リンパ節に最大寸法が６ｃｍよりも大きくない転移を含み、ＥＮＥ陰性である。一部の実施形態では、ＣＳＣＣまたはＨＮＳＣＣは、リンパ節に最大寸法が６ｃｍよりも大きな転移を含み、ＥＮＥ陰性であるか；または任意のリンパ節に転移を含み、ＥＮＥ陰性である。一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ． 最大寸法が４ｃｍよりも大きい腫瘍を含むか、または骨侵食もしくは神経周囲浸潤もしくは深部浸潤が最小限であり；
ｂ．
ｉ． 領域リンパ節転移を含まないか；または
ｉｉ． 単一の同側リンパ節に、最大寸法が３ｃｍもしくはそれよりも小さく、ＥＮＥ陰性である転移を含み；および
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ． 最大寸法が２ｃｍまたはそれよりも小さい腫瘍を含み；
ｂ． 単一の同側リンパ節に、最大寸法が３ｃｍまたはそれよりも小さい転移を含み、ＥＮＥ陰性であり；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ． 最大寸法が２ｃｍよりも大きいが４ｃｍよりは大きくない腫瘍を含み；
ｂ． 単一の同側リンパ節に、最大寸法が３ｃｍまたはそれよりも小さい転移を含み、ＥＮＥ陰性であり；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ．
ｉ． 最大寸法が２ｃｍもしくはそれよりも小さい腫瘍；または
ｉｉ． 最大寸法が２ｃｍよりも大きいが４ｃｍよりは大きくはない腫瘍；または
ｉｉｉ． 最大寸法が４ｃｍよりも大きいか、もしくは骨侵食もしくは神経周囲浸潤もしくは深部浸潤が最小限である腫瘍を含み；および
ｂ．
ｉ． 最大寸法が３ｃｍよりも大きいが６ｃｍよりは大きくない単一の同側リンパ節における転移を含み、リンパ節外進展（ＥＮＥ）陰性であるか；または
ｉｉ． 複数の同側リンパ節に最大寸法が６ｃｍよりも大きくはない転移を含み、ＥＮＥ陰性であるか；または
ｉｉｉ． 両側もしくは対側リンパ節に最大寸法が６ｃｍよりも大きくはない転移を含み、ＥＮＥ陰性であり；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ．
ｉ． 最大寸法が２ｃｍもしくはそれよりも小さい腫瘍；または
ｉｉ． 最大寸法が２ｃｍよりも大きいが４ｃｍよりは大きくない腫瘍；または
ｉｉｉ． 最大寸法が４ｃｍよりも大きいか、もしくは骨侵食もしくは神経周囲浸潤もしくは深部浸潤が最小限である腫瘍；または
ｉｖ． 広範な皮質骨もしくは髄質骨の関与もしくは頭蓋底の浸潤もしくは頭蓋底孔を介した浸潤を有する腫瘍
を含み；および
ｂ． リンパ節に最大寸法が６ｃｍよりも大きい転移を含み、ＥＮＥ陰性であるか；任意のリンパ節に転移を含み、ＥＮＥ陰性であり；
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ． 広範な皮質骨もしくは髄質骨の関与または頭蓋底の浸潤または頭蓋底孔を介した浸潤を有する腫瘍を含み；
ｂ．
ｉ． 領域リンパ節転移を含まないか；または
ｉｉ． 単一の同側リンパ節に、最大寸法が３ｃｍもしくはそれよりも小さくＥＮＥ陰性である転移を含むか；または
ｉｉｉ． 最大寸法が３ｃｍよりも大きいが６ｃｍよりは大きくなく、ＥＮＥ陰性である、単一の同側リンパ節における転移；もしくは最大寸法が６ｃｍよりも大きくはなくＥＮＥ陰性である、複数の同側リンパ節における転移；もしくは最大寸法が６ｃｍよりも大きくはなくＥＮＥ陰性である、両側もしくは対側リンパ節における転移を含むか；または
ｉｖ． 最大寸法が６ｃｍよりも大きくＥＮＥ陰性である、リンパ節における転移；もしくはＥＮＥ陰性である、任意のリンパ節における転移を含み；および
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ． 広範な皮質骨もしくは髄質骨の関与または頭蓋底の浸潤または頭蓋底孔を介した浸潤を有する腫瘍を含み；および
ｂ． 検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、
ａ．
ｉ． 最大寸法が２ｃｍもしくはそれよりも小さい腫瘍；または
ｉｉ． 最大寸法が２ｃｍよりも大きいが４ｃｍよりは大きくない腫瘍；または
ｉｉｉ． 最大寸法が４ｃｍよりも大きいか、もしくは骨侵食もしくは神経周囲浸潤もしくは深部浸潤が最小限である腫瘍；または
ｉｖ． 広範な皮質骨もしくは髄質骨の関与もしくは頭蓋底の浸潤もしくは頭蓋底孔を介した浸潤を有する腫瘍
を含み；
ｂ．
ｉ． 領域リンパ節転移を含まないか；または
ｉｉ． 単一の同側リンパ節に、最大寸法が３ｃｍもしくはそれよりも小さくＥＮＥ陰性である転移を含むか；または
ｉｉｉ． 最大寸法が３ｃｍよりも大きいが６ｃｍよりは大きくなくＥＮＥ陰性である、単一の同側リンパ節における転移；もしくは最大寸法が６ｃｍよりも大きくはなくＥＮＥ陰性である、複数の同側リンパ節における転移；もしくは最大寸法が６ｃｍよりも大きくはなくＥＮＥ陰性である、両側もしくは対側リンパ節における転移を含むか；または
ｉｖ． 最大寸法が６ｃｍよりも大きくＥＮＥ陰性である、リンパ節における転移；もしくはＥＮＥ陰性である、任意のリンパ節における転移を含み；および
ｃ． 検出可能な遠隔転移を含む。
一部の実施形態では、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）または頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、検出可能な遠隔転移を含まない。
一部の実施形態では、治療有効量のＲＮＡは、以下の１つまたはそれ以上をもたらす：（ａ）がんの症状の重症度もしくは継続期間の低減；（ｂ）腫瘍成長の阻害、もしくは腫瘍壊死、腫瘍退縮、および／もしくは腫瘍消失の増加；（ｃ）腫瘍成長および／もしくは発生の遅延；（ｄ）腫瘍転移の阻害もしくは減速もしくは停止；（ｅ）腫瘍成長の再発の予防もしくは遅延；（ｆ）対象の生存率の増加；ならびに／または（ｇ）場合により未治療の対象もしくはＲＮＡ混合物中のＲＮＡの１つ、２つ、もしくは３つのみが投与された対象と比較して、従来の抗がん療法の使用または必要性の低減（例えば、化学療法剤または細胞毒性剤の使用の低減または排除）。
本記載および例示的な実施形態は、限定として解釈されるべきではない。本明細書および添付の特許請求の範囲の目的では、別様の指示がない限り、量、パーセンテージ、または割合を表すすべての数値、ならびに本明細書および特許請求の範囲で使用される他の数値は、それらがすでにそのように修飾されていない限り、すべての場合において「約」という用語により修飾されていると理解されるべきである。「約」は、記載されている主題の特性に実質的に影響を及ぼさない、例えば、１０％、５％、２％、または１％以内の変動の度合いを示す。したがって、矛盾しない限り、以下の仕様および添付の特許請求の範囲に示されている数値パラメータは、得ることが求められている所望の特性に応じて変動し得る近似値である。少なくとも、および均等論の適用を本特許の範囲に限定する試みとしてではなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告されている有効数字に照らして、および通常の丸め技法を適用することにより解釈されるべきである。
なお、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」、ならびに任意の単語の任意の単数形使用は、明示的にかつ疑いの余地なく１つの指示対象に限定されていない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。本明細書で使用される場合、「含む」という用語およびその文法的変化形は、リストにある項目の列挙が非限定的であることが意図されており、リストされている項目を置換またはそれらに追加することができる他の類似項目を除外しない。
以下の実施例は、ある特定の本開示の実施形態を説明するために提供されており、いかなる点においても本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。以下で論じる実施例では、上記で規定のサイトカインＲＮＡ混合物は、「混合物」、「サイトカイン混合物」、「組成物」、または「薬物」と同義的に呼ばれる場合もある。
実施例１ － サイトカインＲＮＡ混合物の用量漸増および用量拡大。
全体的なデザイン：単剤として腫瘍内投与されるサイトカインＲＮＡ混合物の最大耐容量および最大投与量、安全性、耐容性、薬物動態、薬物動力学、ならびに抗腫瘍活性を評価するための、ヒトでの最初の非盲検用量漸増および拡大治験。
参加者数：漸増期中の調査用量レベルに応じて、最大７２人の参加者の登録が計画される。
用量漸増期：用量漸増期では、正式なサンプルサイズの計算はない。サイトカインＲＮＡ混合物を、以前の抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１ベースの治療に失敗している進行固形腫瘍を有する患者、および／または抗ＰＤ－１が常用的に使用されない適応症に対して他の選択肢を有していない患者に投与する。最大３８人の用量制限毒性（ＤＬＴ）評価可能参加者を、予想評価が約８用量レベルである用量漸増期に登録する。実際のサンプルサイズは、観察されたＤＬＴと実際に探求された用量レベルの数に応じて異なる。
用量拡大期：拡大期ではサイモンの２段階デザインを使用し、以前の抗ＰＤ－１療法／抗ＰＤ－Ｌ１療法に失敗した進行黒色腫を有するおよそ３４人の参加者を登録する。最初の１６人の参加者を治療した後で中間分析を行い、少なくとも２人の参加者に応答が観察された場合、３４人の参加者の完全サンプルサイズまで増加を継続する。
介入群および介入継続期間：参加者の治験継続期間は、最大２８日間のスクリーニング期間を含む。スクリーニングが成功したら、参加者は、疾患が進行するまで、許容できないＡＥが生じるまで、参加者が治療中止を決断するまで、または疾患進行が生じない場合は最大１年間にわたって治験介入を受けることができる。サイトカインＲＮＡ混合物の継続は、毒性が合理的であり安全な様式で臨床的利益を明らかに引き出し続けている参加者の場合、１年を超える継続を治験委員会が個別に考慮することになる。治験介入を中止した後、参加者は、最終ＩＭＰ投与のおよそ３０日後、または参加者が別の抗がん療法を受ける前のいずれか早い方で、治療終了時評価のために治験施設に戻る。参加者が進行以外の理由で治験介入を中止した場合、疾患が進行するまで、別の抗がん治療を開始するまで、または死亡するまで（いずれか早い方）３カ月毎に追跡調査来院を実施する。
サイトカインＲＮＡ混合物から利益を得る参加者の予想治療継続期間は、進行日に基づき様々であり得るが；参加者１人当たりの予想治験継続期間中央値は、９カ月間（スクリーニングに１カ月間、治療に５カ月間、治療終了追跡調査に３カ月間）であると推定される。
ＩＭＰは、４週間サイクルで週１回腫瘍内投与される（つまり、２８日毎に４回投薬）。治療の各サイクル後、腫瘍内注射の頻度は、毎週継続してもよい。２回目の腫瘍評価後、投与間隔を、例えば、月１回に変更してもよい。
漸増期中のより高い用量レベルへの進行は、毒性に基づいて行う。また、中間用量を考慮してもよい。安全であると宣言された用量レベルで初期効能シグナルが見られたら、それを拡大して効能を確認してもよい。
治験全体にわたって投薬省略または投薬遅延を行ってもよく；こうした改変の必要性は、用量制限毒性（ＤＬＴ）の発生により決定される。参加者がＤＬＴを経験したら、治療を中止し、グレード≦１または基線へと解消するまで追跡する。２週間を超えない投薬省略から回復した後（つまり、２投薬省略）、参加者は、同じまたはより低い用量レベルでの新しい治療サイクルで治療を再開することができ；より低い用量レベルで再投薬されるそのような参加者の場合、用量の再漸増は許可されない。参加者が同じＡＥを経験し、第２の２週間にわたる投薬省略（つまり、２回の投薬省略）に結び付いた場合、参加者の治験は恒久的に中止してもよい。
投与経路：腫瘍内注射
投与計画：サイトカインＲＮＡ混合物は、割り当てられた投与量レベルで週１回２８日間サイクルで４回注射される。
非治験医薬品：事前に規定された前投薬は投与されない。
治験薬剤への治験後のアクセス：参加者はすべて、１年間にわたってまたは疾患が進行するまでのいずれか早い方で治療される。
統計的考察：
ａ． 一次分析：
用量漸増：用量漸増期では、ＤＬＴは用量レベル毎に要約される。ＤＬＴの詳細は参加者が提供する。治療中に発生したＡＥ／ＳＡＥおよび治療実施期間中の検査異常は、記述統計を使用して用量レベル毎に要約される。
用量拡大：客観的奏功率（ＯＲＲ）は、ＲＥＣＩＳＴ １．１に従って記述統計で要約される。９０％両側信頼区間は、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ法を使用して算出する。統計的推論は、サンプルサイズ計算セクションで規定されている仮説およびアルファレベルに基づく。
ｂ． 二次エンドポイントの分析：
用量漸増：混合物によりコードされたサイトカインの濃度およびＰＫパラメータは、ＰＫが評価されるサイクル中の記述統計と共に要約される。混合物によりコードされたサイトカインに対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）は記述的に要約される。
用量拡大：治療中に発生したＡＥ／ＳＡＥおよび治療実施期間中の検査異常は、記述統計を使用して要約される。ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴによるＤｏＲおよびＰＦＳは、カプランマイヤー法を使用して要約される。ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴによるＤＣＲ、ならびにｉＲＥＣＩＳＴによるＯＲＲについては、ＲＥＣＩＳＴ １．１によるＯＲＲと同様の分析が提供される。サイトカイン混合物によりコードされたサイトカインのＰＫ濃度およびパラメータは、ＰＫが評価されるサイクル中の記述統計と共に要約される。サイトカインＲＮＡ混合物によりコードされたサイトカインに対するＡＤＡは記述的に要約される。
サイトカインＲＮＡ混合物は、ヒトサイトカインＩＬ－１５スシ、ＩＬ－１２ｓｃ、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＩＦＮα２ｂをコードする、１：１：１：１重量比（重量：重量：重量：重量）の合成化学修飾ｍＲＮＡである。選択されたサイトカインの混合物は、個々のサイトカインと比べて優れた抗腫瘍活性を呈することが予想される。
図１Ａは、研究の全体的デザインの説明図を示し、図１Ｂは、患者毎の治療スケジュールの説明図を示す。用量漸増期は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１に失敗している患者に、単独療法として毎週投与されるサイトカインＲＮＡ混合物のＭＴＤまたはＭＡＤを決定することを目的とする。加速漸増期中は、サイクル１で観察された毒性の発生を、１人の参加者で評価する。関連グレード≧２のＡＥまたはＤＬＴが、加速漸増ＤＬのいずれか（ＤＬ１または２のいずれか早い方）で生じた後またはＤＬ３で始まった後、過剰用量対照によるベイジアン漸増を開始し、少なくとも３人の参加者／コホートを評価する。用量漸増期が終了したら、拡大期で評価されるＭＴＤ／ＭＡＤを、安全性に基づいて決定する。拡大期では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１の失敗後のステージＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、またはＩＶの黒色腫を有する患者に毎週投与される固定用量のＭＴＤ／ＭＡＤの試験が計画される。
表２および表３は、治験実施スケジュール（ＳＯＡ）を示し、表２は、治療フローチャートを示し、表３は、用量漸増期および用量拡大期のＰＫおよびＰＤｙフローチャートを示す。
Figure 2022518235000021
Figure 2022518235000022
Figure 2022518235000023
Figure 2022518235000024
Figure 2022518235000025
Figure 2022518235000026
Figure 2022518235000027
Figure 2022518235000028
治療の目的およびエンドポイントを表４に示す。
Figure 2022518235000029
Figure 2022518235000030
Figure 2022518235000031
実施例１．２ － 漸増期および拡大期におけるサイトカインＲＮＡ混合物の用量漸増および用量拡大
サイトカインＲＮＡ混合物の用量漸増および用量拡大治験を、臨床評価、薬物動態［ＰＫ］評価、薬物動力学［ＰＤｙ］評価、およびバイオマーカー評価に基づき、漸増期では進行固形腫瘍および拡大期では進行黒色腫を有する患者で実施して、単独療法として腫瘍内投与した場合のサイトカインＲＮＡ混合物の安全性および予備活性を評価し、単剤としての最適薬物用量を規定する。
参加者がサイトカインＲＮＡ混合物の初回投薬を受け取る前に最大２８日間にわたってスクリーニングを行い、４週間サイクルの１、８、１５、および２２日目に、薬物を腫瘍内投与するスケジュールで評価を行う。疾患が進行するまでまたはＡＥが恒久的な中止に結び付くまで、治療を４週間サイクルとして毎週継続し；それ以外の場合は、最大で１年間の治療を継続する。単一参加者用量漸増を漸増期の最初の２つの用量レベル（ＤＬ）に使用し、続いて合理的デザインを使用してより高い用量へと漸増させる。
実施例１．２Ａ． 用量漸増期
抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく以前の療法に失敗した、腫瘍内注射に適した進行固形腫瘍を有する参加者を登録する。抗ＰＤ－１療法／ＰＤ－Ｌ１療法が常用的に使用されない固形腫瘍（黒色腫を除く）を有する参加者も、他に適切な治療選択肢がない場合、治験責任医師の裁量に基づき適格である。参加者は、単独療法として毎週投与されるサイトカインＲＮＡ混合物の腫瘍内注射で治療される。
開始用量レベル（ＤＬ１）は、サイトカインＲＮＡ混合物によりコードされたサイトカインのＰＫをヒト異種移植モデルにおいて調査し、モデリングおよびシミュレーションを使用してマウスからヒトへとアロメトリー的にスケーリングする種々の前臨床研究の結果から決定される。
実験は、最初の２つのＤＬ（ＤＬ１およびＤＬ２）の加速用量漸増デザインを含み、１人の参加者をＤＬで治療し、ＩＭＰ関連グレード≧２のＡＥまたは用量制限毒性（ＤＬＴ）が観察されるまで、２つの用量レベル間の漸増を適用する。ＩＭＰ関連グレード≧２のＡＥが最初の２つのＤＬのいずれかで観察された場合、２人の追加の参加者を同じＤＬで治療し、アダプティブ合理的デザイン（ａｄａｐｔｉｖｅ ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ）を使用して用量漸増を進行させることになる。
最初の２つのＤＬでＩＭＰ関連グレード≧２のＡＥまたはＤＬＴが生じない場合、アダプティブ用量漸増をＤＬ３から開始する。その後のコホート（ＤＬ３～ＤＬ８）では用量漸増を進行させる。次のＤＬへの登録は、その前のＤＬで治療した少なくとも３人の参加者を、少なくとも１サイクル（つまり２８日間）の継続期間にわたって追跡し、ＤＬＴ評価でＤＬＴが無いと評価可能になるまで進行させない。参加者内での用量漸増は許可されない。同じ用量レベルで治療した第１の参加者と第２の参加者との間には、少なくとも１週間の隔たりが存在する。
実施例１．２Ｂ． 注射しようとする病変
すべての用量レベル（ＤＬ１～ＤＬ８）は、表５に提供されている病変サイズに関する指針に従う。参加者は、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ１．１）基準（選択基準Ｉ ０５を参照）による標的病変として最低で１つの測定可能な病変を有し、注射および腫瘍生検のための最低で１つまたはそれ以上の皮膚病変／皮下病変を有する。参加者は、基線時の１つの病変の生検、ならびに初回投与の５週目～８週目の治療中評価としての１つの病変の生検を考慮して、その所与の用量レベル（表５）の注射容積に十分でなければならない腫瘍病変のサイズに基づいて選択する。
漸増期においてのみ、非標的病変が応答評価のシグナルを可能にする場合、測定可能な病変を有していない参加者を、治験委員会の同意を得て個別に適格性について評価してもよい。注射のために粘膜部位のみを有する患者の登録は、気道閉塞のリスクを最小限に抑えるために、サイトカインＲＮＡ混合物による、表在性転移、皮下転移、および／またはリンパ節転移の著しい炎症が観察されていない用量レベルでのみ行われる。
実施例１．２Ｃ． 治療
最初の治療では、３つの最小病変のうち、１つの測定可能な病変（皮膚、内臓、またはリンパ節）を、ＲＥＣＩＳＴ１．１基準に従って測定するためにそのまま残し、１つの病変を生検に使用する。注射しようとする病変が、生検での使用に十分な大きさであり、計画用量レベルでの用量投与に影響を及ぼさない場合、適格性のためには２つの病変で十分である。最低で１つの病変が、サイトカインＲＮＡ混合物の投与の対象である（病変のサイズは、参加者の適格性について用量レベル毎に評価されるべきである）。まず最も大きな病変にサイトカインＲＮＡ混合物を注射する。残りの病変については、注射の順位は、最大注射容積が使用されるまで、病変のサイズに基づく（以下の表５を参照）。
Figure 2022518235000032
すべてのその後の治療（毎週）では、病変の注射は、最大注射容積が使用されるまで、またはすべての注射可能な病変が治療されるまで、病変サイズに基づいて順位付られる。
注射しようとする容積は病変のサイズに基づき、各治療来院での最大注射容積は、すべての注射した病変を一緒にした、そのＤＬに割り当てられた容積を超えるべきではない。ＤＬ８で許容される最大注射容積は４ｍＬである。
病変は、一緒にクラスター化されている場合、上記の表および指針に従って単一病変として注射される。
表５の病変の容積およびサイズ比に基づき、１回の治療当たり１つの病変のみに注射することが好ましい。１つの病変のみに注射することが可能でない場合、容積／用量を複数の病変に分割する。各来院時に、注射するための病変は、まず最も大きな病変から開始して、サイズに基づき優先順位をつける。最も大きな病変には、病変サイズおよび用量レベルに基づき最も大きな注射容積を注射する。容積のすべてが使用されていない場合、次の病変には、病変サイズに許容される最も大きな注射容積を投与する。投与容積が全部投与されるまで、最も大きなものから最も小さなものまで投与を継続する。
各治療来院時にまたは治療の全過程にわたってすべての病変に注射することが可能でない場合、その後の治療来院時に、以前に注射したおよび／または注射していない病変に注射する。病変毎の投与の詳細は、電子症例報告フォーム（ｅＣＲＦ）に収集される。
実施例１．２Ｄ． 用量漸増判断
漸増の判断には、臨床安全性の結果を考慮する。ＤＬＴ観察期間は、治療の最初の４週間である（サイクル１）。参加者は、最初の２８日間の治療（つまり、ＤＬＴ期間）で、各々のコホートの計画用量の少なくとも７０％を受けた場合、ＤＬＴ評価が評価可能であるとみなされ、２８日間にわたって評価されるか、またはより初期にＤＬＴが発生した場合、ＤＬＴ評価が評価可能であるとみなされる。用量漸増期にてＤＬＴ評価が評価可能でない参加者（例えば、サイクル１の２８日目前の早期進行性疾患；任意のＤＬＴ評価パラメータの欠落）は入れ換える。
最初の２つのＤＬの漸増の場合、２番目のＤＬは、最初の参加者のＤＬＴ観察期間がＩＭＰ関連ＡＥグレード≧２またはＤＬＴを伴わずに完了した後に始める。ＩＭＰ関連ＡＥグレード≧２または任意のＤＬＴが最初の２つのＤＬのいずれかで観察された場合、２人の追加の参加者を同じＤＬで治療し、アダプティブデザインを使用して用量漸増を進行させる。ＩＭＰ関連ＡＥグレード≧２が最初の２つのＤＬで生じない場合、アダプティブベイジアンＥＷＯＣをＤＬ３から開始する。治験の単独療法部分のＤＬ２またはＤＬ３への登録は、ＤＬ１またはＤＬ２に登録された患者が２８日間追跡されるまで進行させなくてもよく、ＩＭＰ関連ＡＥグレード２を伴わないＡＥ評価が評価可能である。
ＭＴＤが決定されたら直ちに用量漸増を停止させる。ＭＴＤが決定されない場合、ＭＡＤが達成されるまで用量漸増を継続する。
実施例１．２Ｅ． 用量拡大期
ＭＴＤ／ＭＡＤ、全体的な安全性、活性、およびＰＫ／ＰＤｙデータに基づき、拡大期の推奨用量を決定する。
抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく以前の治療に失敗している進行黒色腫を有する最大３４人の参加者をＭＡＤまたはＭＴＤに登録し、安全性（特にあらゆる累積毒性）、抗腫瘍活性、ＰＤｙ、およびＰＫ活性をさらに評価する。
実施例１．２Ｆ． 治験期間の継続期間
各参加者の継続期間には、最大２８日間のスクリーニング期間が含まれる。サイクル継続期間は、２８日間である。最初のサイクルの完了後、この投薬レジメンが安全であるとみなされ、参加者が臨床的利益を達成しつつある場合、参加者は、同じＤＬのサイトカインＲＮＡ混合物の追加投与を毎週受け続けることができる。サイトカインＲＮＡ混合物から利益を得る参加者の予想治療期間は、進行日に基づき様々であってもよい。
介入中止後、参加者は、最終ＩＭＰ投与の３０日後（治療終了時［ＥＯＴ］評価のため）および９０日後（ＡＤＡサンプルのため）または別の抗がん療法の開始前のいずれか早い方で戻ってくる。
ＥＯＴ来院後、すべての進行中の関連ＡＥおよび新しい関連ＡＥを、解消または安定化するまで（つまり、事象の進行に少なくとも３カ月間にわたっていかなる変化もない）モニターするために、追加の追跡調査来院が必要となる場合がある。ＥＯＴ後、安全性追跡調査期間中に、報告、モニター、および解消または安定化するまで追跡調査が行われる事象は以下の通りである：関係性に関わらず、すべての進行中のＡＥ、ＳＡＥ、または特に注目すべき事象、および関連事象による死亡を含む、関連すると見なされるすべての新しいＡＥ、ＳＡＥ、または特に注目すべき事象。
加えて、参加者が進行以外の理由で介入を中止した場合、疾患進行を記録するために、進行するまで、別の抗がん治療を開始するまで、または死亡するまで（いずれか早い方）３カ月毎の追跡調査来院を実施する。
登録の合計推定継続期間中央値は、およそ２４カ月である。サイトカインＲＮＡ混合物から利益を得る参加者の予想治療継続期間は、進行日に基づき様々であり得るが；参加者１人当たりの予想治験継続期間中央値は、９カ月間（スクリーニングに１カ月間、治療に５カ月間、ＥＯＴおよび最初の追跡調査来院に３カ月間）であると推定される。
停止規則：治療の３０日以内のあらゆる死亡（進行性疾患（ＰＤ）に関連する死亡以外）、またはある特定の用量レベルに登録された患者の３分の１よりも多く（例えば、３人の患者のうち２人）がグレード４のＴＥＡＥである場合、治験委員会により死亡の原因および毒性の適切な評価が行われ、修正計画が確立されるまで、治験登録を一時停止することになる。
実施例１．２Ｇ． 開始用量の選択
抗がん化合物の開始用量は、一般に、げっ歯動物種および非げっ歯動物種における毒性研究の結果に基づいて確立される。サイトカインＲＮＡ混合物は腫瘍内注射により投与され、その生物学的活性は、投与されるｍＲＮＡの取込みおよび翻訳に依存する。前臨床毒性試験は、腫瘍を有していないげっ歯動物種および非げっ歯動物種で実施した。代用投与経路は、腫瘍内投与経路を正確に反映しない可能性がある。そのため、げっ歯動物において動物の１０％に重篤な毒性を発現する用量（ＳＴＤ１０）１／１０の医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）Ｓ９推奨に基づくヒトに初めて投与する開始用量および無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を決定するための従来の手順は、局所投与される腫瘍内ｍＲＮＡ剤には適切ではない。
ヒトでの開始用量を決定するために、ヒトＡ３７５黒色腫異種移植片を有する免疫無防備状態マウスでｉｎ ｖｉｖｏ実験を実施する。Ａ３７５異種移植片におけるサイトカインＲＮＡ混合物の腫瘍内投与は、サイトカインＲＮＡ混合物のサイトカイン成分の各々の翻訳に結び付く。サイトカイン混合物は腫瘍内で局所的に発現されるが、コードされたサイトカインは分泌されて循環へと進入し、サイトカインの全身性曝露に結び付く。サイトカインＲＮＡ混合物によりコードされたサイトカインのＰＫパラメータを評価する。Ａ３７５異種移植片における、サイトカインＲＮＡ混合物によりコードされたサイトカインの血清ＰＫパラメータは、用量依存的発現関係性を示した。
サイトカインＲＮＡ混合物によりコードされたサイトカインの腫瘍発現能力がマウスとヒトとの間で同等であると仮定して、マウスでの個々のＰＫモデルをアロメトリーを使用してヒトへとスケーリングし、シミュレーションを実施して、様々な用量レベルのサイトカインＲＮＡ混合物でのヒト全身性サイトカイン曝露を予測する。ヒト対動物の薬理学的活性の不確実性およびサイトカインに関連する種間差異のため、広い安全域を適用し、ヒト用量を選択する。
実施例１．２Ｈ － 治験終了の定義
参加者は、最大１年間（治療終了を含む）までの治験介入のすべての期を完了した場合、または別の理由で治療が中止された場合、および参加者が進行性疾患までの追跡調査来院を終了した場合、治験は終了したとみなされる。
治験には２つの締切日がある：
第１の治験締切日は、すべての参加者のＭＴＤ／ＭＡＤを決定するための評価可能なＤＬＴデータを得るために、用量漸増期で治療した最後の参加者の２８日間の終了時である。
第２の締切日は、拡大期治療の最終参加者が、腫瘍応答を評価するために、２回の基線後腫瘍評価を受けることになる際または治療終了時評価を受けることになる際のいずれか早い方である。
用量漸増期または拡大期のいずれかで治療された参加者が、第２の治験締切後も治療から利益を受け続ける場合、参加者は、治験介入を継続することができ（最大で１年間の治療）、ＩＭＰ関連のＡＥ、ＳＡＥ、および該当する場合は免疫原性をアッセイするための血液サンプルの評価を受けることになる。
治験終了は、治験の最終参加者の最終来院の日であると規定される。
実施例１．３ － 治験集団
実施例１．３Ａ － 選択基準
参加者は、表６に示されている通り、以下の基準のすべてが該当する場合にのみ、治験への参加に適格である。
Figure 2022518235000033
Figure 2022518235000034
Figure 2022518235000035
実施例１．３Ｂ － 除外基準
参加者は、表７に示されている通り、以下の基準のいずれかが該当する場合、治験から除外される。
Figure 2022518235000036
Figure 2022518235000037
Figure 2022518235000038
実施例１．４ － 研究介入
研究介入は、研究プロトコールに従って研究参加者に投与されるように意図される治験介入、市販の製品、プラセボまたは医学デバイスとして定義される。
実施例１．４Ａ － 投与される研究介入
Figure 2022518235000039
サイトカインＲＮＡ混合物は、治験医薬製品であり、ヒトサイトカインＩＬ－１５スシ、ＩＬ－１２ｓｃ、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＦＮα２ｂをコードする合成化学改変ｍＲＮＡの１：１：１：１重量比である。
サイトカインＲＮＡ混合物は、４週間周期で週に１回（すなわち、２８日毎に４用量）腫瘍内に投与される。治療の各サイクル後に、腫瘍内注射の頻度が毎週続く。しかし、研究の実施中、腫瘍量減少に基づいて用量投与頻度がより少ない頻度の投与に低減される場合があり、これは、意図される用量の投与に干渉される。
投与の経路が腫瘍内注射であるので、急性アレルギー反応は予測されず、そのため、すべての参加者に予め定義された事前医薬品が投与されるわけではないが、一部の参加者には事前医薬品が推奨される場合がある。事前医薬品として使用されるすべての薬物は、併用医薬品ページに入力される。
実施例１．４Ａ１ － 潜在的腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）の管理のためのガイドライン
ＴＬＳの場合には、研究治療（サイトカインｍＲＮＡ混合物）は、すべての血液生化学検査が解明されるまで維持されなければならない。正常な水分補給を確実にするために、検査の異常、水分過負荷、電解質または酸－塩基の逸脱を補正する。管理は、ローカルサイトガイドラインに従って行わなければならない。阻害剤（例えば、アロプリノール）または尿酸オキシダーゼ（例えば、ラスブリカーゼ）の使用は、許可されている。腎機能を含むＴＬＳ合併症はモニタリングされなければならず、研究治療は、解明後に総量で再開される。
通常ＴＬＳに関連する検査の異常およびＴＬＳに関連する可能性ある臨床症状が、表９に提示されている。
Figure 2022518235000040
実施例１．４Ｂ － 併用療法（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ Ｔｈｅｒａｐｙ）
参加者が登録時に受け取っているか、または研究の間に受け取る任意の医薬品（一般用または処方医薬、ビタミンおよび／またはハーブサプリメントを含む）は、使用理由ならびに開始および終了日時を含む投与の日付とともに記録されなければならない。
併用医薬品は、研究薬物の最初の用量の１４日前から研究薬物の最後の投与の３０日後まで、進行中の研究薬物が関連する有害事象の解消または別の抗がん療法が受けられる場合にｅＣＲＦに記録される。
併用医薬品は、以下のガイドラインに従ってケースバイケースで考慮される：
・全身性ステロイドおよびＴＮＦ－αアンタゴニストは、ＩＭＰの潜在的利益を減弱するが、緊急事態の状況では、治療を行っている治験責任医師はこれらの薬物を適用することが許可されている。それにもかかわらず、これはできるだけ早くスポンサーに伝えられなければならず、参加者が研究参加を進めることができるかどうか、およびどのように進めるかの共通の決定。
・実現可能である場合には、副腎皮質ステロイドの代替物が常に考慮されるべきである。副腎皮質ステロイドまたは代替ステロイドの生理学的用量は、スポンサーとの相談後に許可される。吸入ステロイドおよび経口ミネラルコルチコイド（例えば、起立性低血圧症または副腎皮質機能不全を有する参加者のためのフルドロコルチゾン）の使用が許可されている。
－参加者は、緊急事態、アレルギー反応または同様のもののために副腎皮質ステロイドを急性的に受け取る場合がある；参加者は、研究の間にプレドニゾロン＞７．５ｍｇ／日（ＰＯまたはＩＶ）または等価物を用いる維持療法を受けない場合がある。副腎不全症のために与えられる副腎皮質ステロイドの同等に生理学的な用量が許可されている。
・骨髄抑制性化学療法との併用治療は、治療相ならびに治療開始前３週間または５半減期のいずれか短い方の間すべての参加者について禁止される。
・解熱剤との併用治療（例えば、参加者が発熱≧３８．５℃を発生した場合に、１ｇのアセトアミノフェン／パラセタモール）は許可されている。
・対症目的のために疼痛の制御のために対症放射線療法が与えられてもよい。スポンサーは、対症放射線療法が考慮されている場合には治療の前に、および研究で療法を再開する前に事前の承認を得るために通知されなければならない。照射される領域はできる限り小さくあるべきであり、任意の所与の３週間において決して骨髄の２０％より多くを含んではならない。すべてのこのような場合において、腫瘍進行の可能性は、腫瘍の物理的および放射線学的評価によって除外されるべきである。評価可能な病変のみが照射されるべきである場合には、参加者は研究介入を停止する。照射される領域を応答評価のパラメータとして使用することはできない。
・呼吸困難、低血圧症、喘鳴音、気管支痙攣、頻脈、酸素飽和の低減または呼吸促迫によって現れる重篤事象は、臨床的に示されるように（例えば、追加の酸素およびβ２アドレナリン作動性アゴニスト）支持療法を用いて管理されなければならない。
・がん以外の併発疾病のために参加者によって取られる任意の背景療法（例えば、ホルモン置換療法、スタチン、抗高血圧薬医薬品）は、安定用量で継続されることが許可されている。
・選択参加者において事前医薬品が必要である場合もある。
実施例１．４Ｃ － 事前療法
この研究の開始前に参加者が受けた任意の以前の抗がん療法（医薬品および放射線療法を含む療法）は、ｅＣＲＦに入力されなければならない。
任意の以前の治療は、以下のタイムラインに従って終了しているべきである：
・化学療法、ホルモン療法および／または放射線療法を含む、治験のものまたは承認されたものに関わらない任意の以前の抗がん療法は、研究介入の開始の少なくとも３週間前に終了されなくてはならない。
・参加者がこの研究に入る前に治験療法を受けていた場合には、この研究に入る前に少なくとも３週間または５半減期が経過してなければならない。
・任意のハーブ療法は、ＩＭＰの投与の少なくとも１週間前に終了されなくてはならない。
・ＩＭＰの計画された最初の投与の最後の用量の間で少なくとも４週間または薬物の５半減期のいずれか短い方が経過しているという条件で、サイトカインを用いる以前の治療は許可されている。
・療法の開始までに４週間または５半減期（いずれか短い方）が経過しているという条件で、免疫チェックポイント阻害剤、免疫調節性モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、および／またはｍＡｂ由来療法を用いる以前の治療は許可されている。
参加者が副腎皮質ステロイドを用いる維持療法を受ける場合には、参加者は、用量をＩＭＰの最初の投与の２週間前までに＜７．５ｍｇ／日に漸減できる場合にのみ適格であり、参加者は、研究介入期間を通じて用量増大のリスクを有さないはずである。
実施例１．４Ｄ － 事前医薬品
投与の経路が腫瘍内注射であるので、急性アレルギー反応は予測されず、そのため、すべての患者に予め定義された事前医薬品が投与されるわけではない。しかしながら、第２のサイクル時におよびその後に事前医薬品は、参加者が最初の投与後に炎症反応を経験したか否かに応じて推奨され得る。
参加者が、薬物誘導性関連アレルギー反応（すなわち、ＩＭＰ投与の２４時間以内に生じた軽度そう痒から中程度の症状）を以前に経験した場合には、ヒスタミンＨ１アンタゴニスト（サイトカインＲＮＡ混合物の投与のおよそ３０～６０分前に与えられる、ジフェンヒドラミン５０ｍｇ経口または等価物［例えば、デクスクロルフェニラミン］）を用いる事前医薬品が、サイトカインＲＮＡ混合物の投与の前に考慮される。参加者が、過敏症またはＣＲＳを含むグレード２事象を有していた場合には、事前医薬品はまた将来の投与のために経口ステロイド（デキサメタゾン２０ｍｇまたは等価物）を含むことができる。副腎皮質ステロイド使用は、重症薬物誘導性アレルギー反応または命を脅かす状態の治療に制限されるべきである。
解熱剤を用いる事前医薬品は、ＩＭＰの第１の投与後に炎症症状、例えば、発熱および震えを発生した参加者のために許可されている。局所麻酔は、注射されるべき病変の位置に基づいて使用される。
実施例１．４Ｅ － 禁止された療法
以下の療法の使用は、研究の間禁止されている：
・対症放射線療法を除く、がんの治療のために意図される併用療法（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ Ｔｈｅｒａｐｙ）（例えば、化学療法または免疫療法）は治験の間許可されない。
－参加者が別の方法で利益を導き出している場合には、放射線療法が症状緩和（例えば、有痛性骨転移、閉塞性肺病変の治療）のために考慮される。
・減弱生ワクチンは、研究介入の開始前４週間以内、治療の間およびＩＭＰの最後の用量後３カ月間禁止されている。すべての他のワクチンは、これらが参加者の状態にとって最良の解決策ではない場合には避けられるべきである。
・ＩＦＮを用いる併用治療は、研究の参加の間すべての参加者にとって禁止されている。
・全身性免疫賦活剤（それだけには限らないが、ＩＦＮおよびＩＬ－２を含む）は、相互作用を排除できず、参加者のリスクの増大が結果として生じるかもしれないので、介入の開始前の４週間または薬物の５半減期（いずれか長い方である）内および介入の間は禁止されている。
・それだけには限らないが、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサートおよびサリドマイドを含む免疫抑制医薬品。これらの薬剤は、活性を潜在的に変更する可能性がある。
・プレドニゾロン＞７．５ｍｇ／日（ＰＯまたはＩＶ）または等価物を用いる維持療法が禁止されている。
・全身性顆粒球コロニー刺激因子（例えば、顆粒球コロニー刺激因子、ＧＭ－ＣＳＦおよび／またはペグフィルグラスチム）、これはＩＭＰの活性を変更する可能性があるため。
・この研究における参加者は、任意の他のＩＭＰを同時に受けることは許可されていない。
実施例１．４Ｆ － 用量改変
サイトカインＲＮＡ混合物の用量改変
必要な場合またはＩＭＰ関連グレード≧２のＡＥの場合には、サイトカインＲＮＡ混合物の開始を、任意の週で治療の予測日を超えて最大３日まで遅延でき、２または３日の遅延は用量遅延と考えられる。次の用量は、用量間の７日間隔を尊重するために最後の用量の７日後に計画されなければならない。
サイトカインＲＮＡ混合物用量が、毎週用量について、治療の予測日を≧４日越えて遅延される必要がある場合には、用量はスキップされる必要があり、したがって、用量省略と考えられる。参加者は、ＩＭＰ関連グレード≧２のＡＥが許容される期間内にグレード≦１（または置換療法を用いて管理される場合にはグレード２）に解消される場合に、サイトカインＲＮＡ混合物を再開できる。２回の連続用量省略の場合には、ＡＥが命を脅かすものでなく、治療の継続が患者の状態にとって最良と考えられる場合には、患者をサイトカインＲＮＡ混合物を用いて再治療できる。２回よりも多い連続用量省略の場合には、サイトカインＲＮＡ混合物は決定的に終結される。
研究の単独療法用量漸増部分においてＤＬＴを起こす参加者は、その研究介入を停止し、毒性が解消されるまで追跡される。
・ＤＬＴがサイトカインＲＮＡ混合物の開始から最初の２８日の間に起こる場合には（漸増相におけるＤＬＴ観察期間）、サイトカインＲＮＡ混合物は決定的に終結される。
・サイトカインＲＮＡ混合物の開始から２８日後（ＤＬＴ観察期間）にＤＬＴ定義を満たすＡＥが生じる場合には、サイトカインＲＮＡ混合物は、以下の基準が満たされることを確実にした後、スポンサーとの議論および研究委員会による潜在的推奨後に再開できる：
・ＡＥがグレード≦１（または置換療法を用いて管理される場合にはグレード２）に解消した
・治験責任医師が、研究介入を再開することが患者の最良の利益であると考えている。
用量漸増にのみ適用可能であり（拡大相ではない）、参加者は、スポンサーとの同意に基づいて、予防的治療と同一用量レベルのサイトカインＲＮＡ混合物での（利用可能である場合）、またはより低い用量レベルでの新規周期の治療を用いる療法を再開する。用量再漸増は許可されていない。
その再発が必ずしも命を脅かすものではない（すなわち、ＣＲＳと関連しない皮疹、内分泌疾患、例えば、甲状腺機能低下症、発熱、疲労、関節筋痛、頭痛）、またＣＴＣＡＥグレード≦１への回復またはベースライン値が迅速に生じるサイトカインＲＮＡ混合物に起因するＤＬＴの事象では、状況はケースバイケースで評価され、同一用量レベルで、またはより低い用量レベルで再開することが安全であるか否か、および参加者の利益／リスクバランスに従っているか否かが決定される。それどころか、その再発が潜在的に命を脅かすものであり得るＤＬＴの事象（すなわち、サイトカイン放出症候群、間質性肺炎）では、参加者はさらなる治療から除外され、置き換えられない。
実施例１．４Ｇ － 研究介入および参加者の中断
中断／撤回。ＩＭＰが中止される場合には、この中断が一時的であるか（すなわち、用量省略または周期遅延）、１年の治療期間の最後に到達しない限り、疾患進行の前の永久的ＩＭＰ中断が最後の手段であるかどうかが決定される。任意のＩＭＰ中断は、ｅＣＲＦに十分に文書化されなくてはならない。いずれの場合も、参加者は進行性疾患の文書化まで研究中のままでなくてはならない。
研究介入の決定的な中断：永久的な介入中断は、研究の間の任意の時間で参加者をＩＭＰに対して再曝露しないための治験責任医師からの、またはいかなる理由であろうとＩＭＰに対して再曝露しないための参加者からの決定的な決定と関連する任意の介入中断である。
治験責任医師の意見において、以下の場合のいずれかにおけるように研究介入の継続が参加者の幸福にとって有害である場合には、研究介入は中止される：
１．許容されない有害事象。
２．確認された疾患進行。
３．研究プロトコールへの不十分なコンプライアンス。
４．１年の治療期間の完了。
５．研究介入のさらなる投与を妨げる併発疾病などの他の条件。
参加者が臨床上安定であり、最小の毒性しか伴わずに臨床利益を導き出する場合には、それらは、進行性疾患まで、または１年の最大治療のためのいずれか最初に来る方で治療中で維持される。
異常な肝臓機能についての研究介入の中断は、増大が基礎疾患と関連しない場合に、および治験責任医師が参加者の安全性の最良の利益にあると考える場合に治験責任医師によって考慮される。
参加者は、いつでも理由に関わらず、そうすると決定する場合にＩＭＰを用いる治療から離脱できる、またはこれは治験責任医師の裁量で行うことができる。ＩＭＰを用いる治療は、以下の場合のいずれにおいても中止されるべきである：参加者の要求時には、いつでも理由に関わらず（同意の撤回）、または法的に許可された代表者の要求時に。
「法的に許可された代表者」は、調査に関与する手順への参加者の参加に、参加予定者に代わって同意することを適用法の下で認可された個人または司法またはその他の機関と考えられる。治療のための同意の撤回は、フォローアップ訪問のための同意の撤回とは、および非参加者接触フォローアップ、例えば、医学記録チェックのための同意の撤回とは区別される。
撤回を要求する参加者は、フォローアップのための同意の撤回は、研究の公衆衛生の価値を危険にさらす可能性があると告げられる。撤回する参加者は、ＡＥの可能性の、同意を撤回するその決定への寄与について明確に尋ねられ、引き出されたあらゆるＡＥ情報が文書化される。好ましくは、参加者は書面で同意を撤回し、参加者または参加者の代表者が拒絶するか、または身体的に利用可能ではない場合には、サイトが参加者の書面で同意を引き出すことができなかった理由を文書化し、署名する。
参加者は、このプロトコールに明記された研究手順に従って、このプロトコールに明記されたように研究完了の予定された日まで、またはフォローアップされるべき任意のＡＥの回復もしくは安定化までのいずれか最後に来る方でフォローアップされる。
可能であれば、介入の永久的中断後、参加者は、適切な場合、薬物動態学サンプルを含むＩＭＰを用いて最後の投薬日のために正常に計画された手順を使用して評価される。
永久的介入中断のすべての場合が、確認されたと考えられた時点でｅＣＲＦの適切なページに治験責任医師によって記録される。
実施例１．４Ｈ － フォローアップの喪失
参加者は、予定された訪問のために反復して戻ることができず、研究サイトによって接触されることができない場合にフォローアップを喪失したと考えられる。
参加者が要求される研究訪問のためにクリニックに戻ることができない場合、以下の措置がとられる：
・サイトは、参加者に接触し、できる限り早く失われた訪問を再度予定し、参加者に割り当てられた訪問スケジュールを維持することの重要性に関して助言し、参加者が研究の継続を望むか否か、および／または研究の継続をすべきか否かを確認しようとする。
・参加者がフォローアップを失ったとみなされる前に、治験責任医師または被指名人は、参加者との接点を取り戻すためのあらゆる試みを行う（可能であれば、３回の電話および必要に応じて、参加者の最後の既知郵送先住所への公証書簡または地方の同等の方法）。これらの接触の試みは、参加者の医学記録に文書化される。
・継続が到達不可能である参加者は、研究から離脱したと考えられる。
実施例１．４Ｉ － 研究評価および手順
参加者の日常的な臨床的管理の一部（例えば、血球数）として実施され、ＩＣＦの署名前に得られた手順は、プロトコールに明記された基準を満たすという条件でスクリーニングまたはベースライン目的で利用することができ、ＳｏＡにおいて定義される時間枠内で実施される。
安全性の理由のために、またはサンプルを用いる場合の技術的問題のために、反復または予定されないサンプルが採取される場合がある。
実施例１．５ － 有効性評価
漸増相では、ＲＥＣＩＳＴ １．１に基づいて測定可能な無傷の病変がある場合に、ＲＥＣＩＳＴ １．１に基づいて客観的応答情報が得られる。
拡大相では、サイトカインＲＮＡ混合物に対する応答の評価が主目的である。拡大相で治療されたすべての参加者は、組み入れのために少なくとも１つの測定可能な無傷の病変を有さなくてはならない（上記の組み入れ基準Ｉ ０５を参照されたい）。腫瘍評価は、表２および３における活動のスケジュール（ＳＯＡ）に記載されるような固定された間隔で実施され、評価窓は、用量遅延または用量省略によって影響を受けない。
すべての腫瘍評価データは、ＲＥＣＩＳＴ １．１基準に基づいて関連ｅＣＲＦページに記録される。療法に対する確認された応答として文書化されるためには、ＲＥＣＩＳＴ １．１基準の必要条件として、少なくとも４週間間隔で行われた第２の検査で部分または完全奏功が確認されなくてはならない。免疫療法のためのＲＥＣＩＳＴ（ｉＲＥＣＩＳＴ）に基づいて、進行性疾患はまた、臨床的に進行性ではない疾患の場合に偽進行を除外するために、少なくとも４週間間隔で行われた第２の検査で確認されなくてはならない。
腫瘍応答の評価のためにはＲＥＣＩＳＴ １．１基準に従い、二次／探索的エンドポイントとして応答基準を報告するためにはｉＲＥＣＩＳＴ基準にも従う。進行性疾患の場合には、第２の評価で確認され、最初の評価に基づいて進行の日付が記録される。疾患進行が確認されない場合には、参加者は治療を継続し、未確定の進行性疾患（ｉＵＰＤ）が記録される。
すべての測定可能な病変（ＲＥＣＩＳＴ １．１に基づく測定可能性の閾値未満のものでさえ）が研究介入の最適化のために測定される。ＯＲＲの点での有効性評価の一部としての探索的分析は、非標的病変の大きさを考慮して総腫瘍体積の評価によって実施され、注射された病変対注射されない病変の分析は、この探索的評価の一部となる。測定手順およびｅＣＲＦにおける文書化は、ＳＲＭにおいて詳述され、統計解析計画はＳＡＰにおいて詳述される。
二次的有効性変数として、疾患制御率、応答の持続期間および無増悪生存期間が挙げられる。すべてのこれらのパラメータは、ＳＡＰにいて詳述される。
実施例１．５Ａ － リンパ腫患者のＦＤＧ－ＰＥＴ－ＣＴおよび／または造影ＣＴ
ＯＲＲは、Ｌｕｇａｎｏ分類２０１４（Ｃｈｅｓｏｎ ＢＤら （２０１４） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃ ３２（２７）：３０５９～６８頁）のように５段階評価を使用して評価されたような応答に基づいて、ＣＲおよびＰＲを有する参加者の割合として定義される。
腫瘍評価は、ＦＤＧ－ａｖｉｄリンパ腫の場合のＦＤＧ－ＰＥＴ－ＣＴスキャンおよび非ＦＤＧ ａｖｉｄリンパ腫の場合の造影ＣＴを含む。腫瘍評価は、ＳｏＡに記載されるような固定間隔で実施され、評価窓は、用量遅延または用量省略によって影響を受けない。
スクリーニング時のＣＴおよび／またはＰＥＴスキャンが頸部における疾患の関与について陰性である場合、その後のＣＴスキャンは、頸部領域を含まない場合がある。スクリーニング時のＰＥＴおよび／またはＣＴスキャンが頸部における疾患の関与について陽性である場合、その後のＣＴスキャンは頸部領域を含まなくてはならない。腫瘍応答評価は、スクリーニング時（第１のＩＭＰの２８日前［－７日］以内）およびその後１２週毎（±７日）に行うべきである。画像診断のタイミングは暦日に従うべきであり、周期中の遅延のために調整されてはならない。ＰＤ以外の理由のために中止した参加者については、評価は、参加者がＰＤを文書化するか、または新規抗がん療法を開始するまで継続するべきである。治験責任医師の意見において参加者が臨床的に進行している場合には、第１の評価は１２週より早く実施される。
参加者がＰＲまたはＣＲを有する場合には、確認のために４週間間隔の反復スキャンが必要であり、患者は１２週毎の評価スケジュールで継続しなくてはならない。参加者が臨床的に安定であるが、画像診断が１２週でのＰＤを示す状況では、研究薬物は、次の疾患応答評価まで治験責任医師の裁量で継続できる。しかし、進行の臨床的疑いがある場合には画像診断は任意の時点で行うべきである。
リンパ腫Ｂ症状の評価は、各疾患応答評価を用いて行うべきである。
１２週でＰＤを有し、１２週を越えて研究療法を継続する参加者では、治療中断の時点で放射線学的評価が実施される。これまでのスキャンが、中断日の４週間前以内に得られた場合には、治療中断時の反復スキャンは必須ではない。
実施例１．５Ｂ － リンパ腫患者の骨髄生検＆吸引物
すべての参加者が、Ｌｕｇａｎｏ ２０１４基準（Ｃｈｅｓｏｎ ＢＤら（２０１４））のとおりに臨床的に示されたように実施された骨髄生検／吸引物を有することができる。ＦＤＧ－ＰＥＴ－ＣＴは、骨髄関与の決定にとって適切であり、骨髄の関与を高度に示唆すると考慮される。骨髄生検確認は、ベースラインで必要である場合（ＦＤＧ－ＰＥＴ－ＣＴが骨髄部位で陰性であり、次いで関与を同定するために生検／吸引物が実施される場合）に考慮される。その後の骨髄評価は、ベースラインで骨髄関与を有する参加者においてのみ実施される。
実施例１．５Ｃ － 安全性評価
このＦＩＨ研究の主目的は、ＤＬＴに基づいて、毎週の腫瘍内注射として投与される場合のサイトカインＲＮＡ混合物の生物学的に最適な用量を確立することである。したがって、安全性は主な研究エンドポイントであり、継続的に評価される。安全性プロファイルは、身体検査（好ましくは、同一医師による）および臨床検査の所見から評価され、発生率、重症度（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０によってグレード付けされるような）およびＡＥの累積性質に基づく。すべての安全性評価の計画された時点がＳＯＡで提供される。
実施例１．５Ｄ － 身体検査
完全身体検査は、最小で、中枢神経系および心血管系、呼吸器系、胃腸管系、造血系（肝腫大、脾腫大、リンパ節腫大）および皮膚科系の評価を含む。身長（ベースラインでのみ）および体重（各周期の投与前時）が測定され、ｅＣＲＦに記録される。
ＥＣＯＧ実施状態は、各ＩＭＰ投与の前に評価され、ｅＣＲＦに記録される。治験責任医師は、これまでの重篤疾病に関連する臨床徴候ならびに皮膚病変の進行に注意を払う。任意の新規所見またはこれまでの所見の悪化は、新規有害事象として報告される。身体検査のスケジュールは、ＳＯＡに記載されている。
実施例１．５Ｅ － バイタルサイン
治療相の間、ＩＭＰの注入の開始直前および注射の終了時にバイタルサインがモニタリングされる。モニタリングはまた、臨床的に指示されるときに実施される。体温、脈拍数、呼吸速度および血圧が評価される。血圧および脈拍測定には、気を散らすもの（例えば、テレビ、携帯電話）のない静かな状況で参加者が少なくとも５分休息することが先行されるべきである。
実施例１．５Ｆ － 心電図、心エコー図およびＭＵＧＡスキャン
単一１２リードＥＣＧが、ＳＯＡに概説されるように得られる。臨床的に重大な異常は、ＩＣＦの署名後に発生したＡＥとして報告されなければならない。既存の状態は、参加者の病歴に記録されるべきである。心エコー図またはＭＵＧＡスキャンは、研究の組合せ部分において患者のスクリーニング時にのみ、ＳｏＡにおいて概説されるように（本明細書を参照されたい）得られる。
実施例１．５Ｇ － 肺機能検査
ＤＬＣＯは、ブレオマイシンを用いてこれまでに治療されたリンパ腫を有する参加者についてベースラインで実施される。
実施例１．５Ｈ － 臨床安全性検査室評価
治験責任医師は、検査報告書を概説し、この概説を文書化する。この検査報告書は原文書とともに提出される。検査異常は、以下の事象においてのみＡＥとして報告される：
－治験医薬製品中断、治療または用量改変につながる。
－重篤なまたは特に興味深いＡＥ（ＡＥＳＩ）の定義を満たす（注記：残りの臨床検査は、ｅＣＲＦ検査室のページで報告される）。
－これまでのｍＲＮＡおよびインターロイキントリガー試験が、血液学的パラメータの一時的な変化を示している；作用様式の一部としてのこれらの一時的な変化は、デフォルトでＡＥとして登録されるべきではない。しかし、臨床治験責任医師は、特定の場合には、検査室の変化が臨床的に重大なものとしておよび／またはＡＥとして報告されるべきか否かを決定する。
－研究における参加の間に、または研究介入の最後の用量の３０日後以内に（すなわち、ＥＯＴ評価）値が臨床的に重大な異常と考えられるすべての臨床検査は、値が、正常もしくはベースラインに戻るまで、または治験責任医師もしくは医療用モニターによってもはや臨床的に重大と考えられなくなるまで反復される。
－このような値が、治験責任医師によって合理的と判断される期間内に正常／ベースラインに戻らない場合、病因が同定され、スポンサーに通知される。
すべてのプロトコールによって必要とされる検査室評価は、検査室マニュアルおよびＳｏＡに従って実施される。
施設の地方の検査室で実施されたプロトコールによって指定されない検査室の評価から得た検査室の値が、参加者の管理の変更を必要とする、または治験責任医師によって臨床的に重大と考えられる（例えば、ＳＡＥまたはＡＥまたは用量改変）場合は、結果はｅＣＲＦに記録される。安全性フォローアップのために、またはＡＥのさらなる調査のために実施されたすべての計画されない臨床検査は、ｅＣＲＦで報告される。
実施例１．５Ｉ － 用量制限毒性（ＤＬＴ）
ＤＬＴは、反対の明確な証拠がない場合で、研究委員会による検証後、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０を使用してグレード付けする疾患進行に関連しない場合、ＩＭＰに関連する以下のＡＥのいずれかとして定義される。ＤＬＴ観察期間の期間は、事象がＤＬＴであるか否かを決定するために期間は評価されなければならない、治療関連ＡＥのために周期２の開始を遅延する参加者についてより長い。ＡＥの重症度を評価するためにＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０が使用される。
血液学的毒性：
・グレード≧３の発熱性好中球減少症またはグレード≧３の感染が実証されている好中球減少症。
・グレード≧３の＞７２時間持続する血液学的毒性。
・グレード４の血小板減少症または出血を伴う、もしくは輸血を必要とするグレード３。
非血液学的毒性：
・任意のグレード≧３の免疫関連ＡＥ、グレード３の皮膚反応を除く。
－ｉｒＡＥは、第１の用量後短時間で、または治療の最後の用量後数カ月で生じる可能性がある。潜在的免疫病因を決定するために、薬物曝露に関連する未知病因のすべてのＡＥが評価される。ｉｒＡＥが疑われる場合には、新生物性、感染性、代謝的、毒素また他の病因的原因を除外するための試みが行われ、その後、ＡＥをｉｒＡＥとして分類する。
・任意の他のグレード≧３の非血液学的毒性：
－適切な止痢療法を用いて管理され、４８時間以内にグレード≦１に解消される場合には、グレード３の悪心、嘔吐および下痢を排除する。
－既知肝臓転移を有する参加者が、ベースラインでグレード２のＡＳＴまたはＡＬＴ異常を有すると登録された場合には、ＡＳＴまたはＡＬＴの増大が、増大がベースラインの＞３倍であり、上昇が≧５日後に確認された場合にのみＤＬＴと考えられる。
－ジルベール症候群を有する参加者が、ベースラインでグレード２のビリルビン異常を有すると登録された場合には、ビリルビンの増大が、増大がベースラインの＞３倍であり、上昇が≧５日後に確認された場合にのみＤＬＴと考えられる。
・グレード≧２のブドウ膜炎
他の「グレード付け可能ではない」毒性：
・研究委員会の意見ではさらなる用量漸増が参加者を許容されないリスクに曝すような潜在的に臨床的に重大なものである治療によって出現する有害事象。
・ベースラインまたはグレード≦１への回復がない場合の、１より多い用量省略につながるＩＭＰに関連する毒性（脱毛症、白斑、疲労および甲状腺機能低下症を除く）。
漸増相のための治療の第１の２８日の間のＤＬＴの発生は、ＭＴＤまたはＭＡＤを規定するために使用される。周期１では、およびその後の周期では、ＤＬＴの発生によって、用量省略または低減の必要性が決定される（ＤＬＴがＤＬＴ観察期間の間に生じる場合、研究介入は決定的に終結される；ＤＬＴ観察期間を超えて）。
ＤＬＴを経験する参加者は、サイトカインＲＮＡ混合物が停止した療法を有することとなり、彼らは、この毒性がＣＴＣＡＥグレード≦１に、またはより高い場合には参加者のベースライン値に解消されるまで追跡される。最大２回の用量省略を用いる問題の毒性からの回復および研究委員会の同意後、治験責任医師がサイトカインＲＮＡ混合物を用いる療法を再開することが参加者の最良の利益であると考えている場合に、参加者は、スポンサーとの同一に基づいて、同一用量レベルでの、またはより低い用量レベルでの新規周期の治療を用いる療法を再開できる。このような再投薬される参加者には用量再漸増は許可されていない。
実施例１．５Ｊ － 全身反応
関連用量改変とともに過敏症およびアナフィラキシー反応の管理が以下に詳述されている。
全身性炎症反応
サイトカインＲＮＡ混合物投与を用いた場合に、炎症反応による全身反応が生じる可能性がある。抗原特異的Ｔリンパ球応答、ＴＬＲ媒介性シグナル伝達および炎症性サイトカインの一時的な放出は、全身性炎症反応を引き起こす可能性がある。全身性炎症反応の通常の臨床症状には、頻脈、血圧の低減、呼吸困難、震え、嘔吐、めまいおよび発熱が含まれる。
全身性炎症反応の場合の可能性ある行動として以下がある：
・生体機能（ＢＰ、ＨＲ、呼吸、体温）の評価
・パラセタモールおよび／または非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を用いる治療
・ＩＬ－６、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、ＩＬ－５、ＣＲＰおよびフェリチンのための血液サンプル収集
・治験責任医師の裁量で回復まで入院が必要である場合があり、例えば、以下を伴う：
・生体機能（ＢＰ、ＨＲ、呼吸、体温）の入念なモニタリング
・ＮＳＡＩＤの投与
・単回の高用量の静脈内コルチゾン
・単回用量のトシリズマブ８ｍｇ／ｋｇ注入（回復しない場合）
サイトカイン放出症候群
サイトカイン関連毒性はＣＲＳとしても知られ、強力な免疫活性化の結果として生じる非抗原特異的毒性である。ＣＲＳは、多数のリンパ球（Ｂ細胞、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞）および／または骨髄系細胞（マクロファージ、樹状細胞および単球）が活性化になり、炎症性サイトカインを放出する場合に臨床的に現れる。ＣＲＳは、治療的モノクローナル抗体注入と古典的には関連しており、これらの状況では、症状発生は通常、注入開始後数分～数時間以内に生じる。サイトカインＲＮＡ混合物を用いる腫瘍内注射後の血清サイトカインレベルは、組換えサイトカインの直接注射後に参加者によって観察されたレベルに近づくことは予測されないが、臨床的利益を提供する持続された腫瘍内サイトカインレベルの過程で、参加者が、有害作用を引き起こす可能性がある持続されたレベルの全身サイトカインレベルを有する可能性がある。したがって、サイトカインＲＮＡ混合物の腫瘍内注射を受け取っている参加者は、サイトカイン関連毒性の徴候について入念にモニタリングされる。ＣＲＳのグレード２またはそれより高い徴候および症状を発生する患者の場合には、入院することを必要とする。ＣＲＳグレード≧２が発生する場合には、バイタルサインモニタリングは継続的に行われなくてはならない。参加者は、血行動態または呼吸器の障害を発生する場合には集中治療室（ＩＣＵ）に移されなければならない。ＩＣＵには、ＣＲＳの治療で経験を有する集中治療医を配置していなくてはならない。さらに、ＩＣＵは、ＣＲＳグレード≧２を有する参加者がＩＣＵに入れられる前に、その緊急治療およびモニタリングを開始するための必要な装備を備えなくてはならない。
ＣＲＳと関連する臨床徴候および症状については、以下を参照されたい。
症状発生のタイミングおよびＣＲＳ重症度は、作用因子および免疫細胞活性化の規模に応じて変わる。症候群の発生率および重症度はまた、患者が大きな腫瘍量を有する場合には、おそらくは、これがより高いレベルのＴ細胞活性化につながるのでより大きく現れる。モノクローナル抗体療法と関連するＣＲＳと同様に、養子Ｔ細胞療法と関連するＣＲＳは、ＩＦＮγ、ＩＬ－６およびＴＮＦαレベルの上昇と関連しており、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、ＩＬ－５およびフラクタルカイン（ｆｒａｃｋｔａｌｋｉｎｅ）の増加も報告されている。新たに出現した証拠は、ＩＬ－６をＣＲＳにおける毒性の中心的なメディエーターとして意味づけ、ＩＬ－６は、抗炎症および炎症促進特性を有する多面的サイトカインである。しかし、サイトカインの広いパネルのリアルタイム分析は、現時点でのＣＲＳを有する個々の患者の管理に大幅に影響を及ぼさず、治療決定は通常、臨床パラメータに基づいている。
血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）およびフェリチンのアッセイが実施される。ＩＬ－６およびＩＦＮγを含むサイトカインの血漿レベルが集められ、ＣＲＳグレード≧２症状の発生の場合にのみ遡及的に分析される。サンプリングは、ＣＲＳの徴候について評価するために最初の用量後に、および各用量増大後に、およびＣＲＳグレード≧２症状の発生の場合に実施される。ＣＲＰは、大部分は、ＩＬ－６に応じて肝臓によって生成される急性相反応物である。血清ＣＲＰレベルは、ＩＬ－６生物活性の増大の代替物として働く。ＣＲＳの間、血清ＣＲＰレベルは、数ログ増大する。血清ＣＲＰアッセイは、迅速で、高価でなく、ほとんどの病院で容易に利用可能である。いくつかのシリーズでは、ピークＣＲＰレベルおよびＣＲＰの変化倍数によって重症ＣＲＳのリスクにある患者が同定されてきた。しかし、ＣＲＰレベルは感染の際にも上昇し、感染によって引き起こされた炎症とＣＲＳと関連する炎症の間を区別するためには使用できないことを強調することは重要である。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞注入後にＣＲＳを有する多数の患者において血清フェリチンの極端な上昇が観察されており、これは、ＣＲＳおよびマクロファージ活性化症候群／血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）の間の類似点を支持する。
個々の参加者におけるＣＲＳの重症度を評価するために、２０１４ ＮＣＩコンセンサスガイドラインに基づくＣＲＳのグレード付けシステムおよび緩和戦略が使用される。このグレード付けシステムは、誘発物質に関わらず軽度、中程度、重症および命を脅かすＣＲＳを定義するように、また副腎皮質ステロイドおよび／または抗ヒトＩＬ－６モノクローナル抗体、例えば、トシリズマブを用いる治療推奨を導くように改変された。
実施例１．６ － 有害事象および重篤有害事象
特に興味深い有害事象
ＡＥＳＩは、スポンサーの製品またはプログラムに対して特異的な化学的および医学的懸念のあるＡＥ（重篤または非重篤）であり、これに対して進行中のモニタリングおよびスポンサーへの治験責任医師による即時通知が必要である。このような事象は、それらを特性決定し、理解するためにさらなる調査を必要する場合がある。プロトコール修正によって研究の間に特に興味深い有害事象が付加、改変または除去される場合がある。
・研究に参加した女性の対象の妊娠ならびにＩＭＰを用いる研究に参加した男性対象の女性のパートナーに生じている妊娠は、重篤度基準のうちの１つを満たす場合にのみＳＡＥと認定される（以下を参照されたい）。
－女性参加者における妊娠の事象では、ＩＭＰは中止される。女性参加者における、または男性参加者の女性パートナーにおける妊娠のフォローアップは、アウトカムが決定されるまで必須である。
・ＩＭＰ／非治験医薬製品（ＮＩＭＰ）を用いる症候性過剰投与（重篤または非重篤）
－ＩＭＰ／ＮＩＭＰを用いる過剰投与（偶発的または意図的）は、治験責任医師によって疑われる、または参加者によって自発的に気づかれ、意図された投与用量を少なくとも３０％を上回ると定義された事象である。
－注目すべきことに、無症候性過剰投与は標準ＡＥとして報告される。
・他のプロジェクト特有のＡＥＳＩ
－すべてのプロトコールによって定義される潜在的またはＩＭＰ関連ＤＬＴは、発生の周期にかかわらず（すなわち、漸増および拡大相の両方における最初の２８日の治療後）ＡＥＳＩと考えられる、
－サイトカイン放出症候群（任意のグレード）
ＡＥは、参加者によって（または適当な場合には、介護者、代理人または参加者の法的に許可された代表者によって）報告される。
治験責任医師および任意の認定された被指名人は、ＡＥまたはＳＡＥの定義を満たす事象を検出、文書化および記録することの責任を負い、重篤であり、研究介入もしくは研究手順と関連すると考えられる、または参加者にサイトカインＲＮＡ混合物を中止させたＡＥをフォローアップする責任を引き続き負う。
有害事象（ＡＥ）
ＡＥは、研究介入と関連すると考えられるか否かに関わらず、研究介入の使用と時間的に関連する、参加者または臨床研究参加者における任意の都合の悪い医学的発生である。したがってＡＥは、研究介入の使用と時間的に関連している、任意の好ましくないおよび意図されない徴候（異常な検査所見を含む）、症状または疾患（新規のまたは悪化した）である。
重篤有害事象（ＳＡＥ）
ＳＡＥは、任意の用量で以下である任意の都合の悪い医学的発生である：
－死亡をもたらす、
－命を脅かすものである（注記：用語「命を脅かす」とは、参加者が事象／反応の時点で死亡のリスクにあった事象／反応を指す、仮定的に、より重症であったなら死亡を引き起こしたかもしれない事象／反応は指さない）、
－入院患者の入院を必要とするか、または既存の入院の延長をもたらす、
－持続的なまたは重大な身体障害／無能力、正常な生活機能を実施する能力の永久的または重大な（一時的な場合）および実質的な混乱をもたらす。身体障害は、相対的に小さい重要性の経験、例えば、頭痛、悪心、嘔吐または偶発的な小さい外傷を含むように意図されない、
－先天性異常／出生時欠損、胎児乳児の異常または胎児消失をもたらす任意の異常である、
－医学的に重要な事象または反応である。他の状況が重篤と考えられるべきであるか否かを決定することにおいて医学的および科学的判断が下されなければならない、例えば、直ちに命を脅かすものではない、または死亡もしくは入院をもたらすものではない可能性があるが、参加者を危険にさらす可能性がある、または上記の定義において列挙される他のアウトカムのうちの１つを防ぐために介入を必要とする可能性がある重要な医学的事象。治験責任医師は、医学的に重要なＡＥを重篤ＡＥ（ＳＡＥ）として評価する責任を負う。例：アレルギー性気管支痙攣のための救急治療室における、または家での集中治療、入院を伴わない血液悪液質、入院を伴わない１０×ＵＬＮを上回る無症候性ＡＬＴ増加）
治療によって出現する有害事象（ＴＥＡＥ）は、研究介入の最後の用量の３０日後までの治療期間中の間に報告されるＡＥとして定義される。
関連有害事象：治験責任医師が後援する研究（ＩＳＳ）によると、製品が事象を引き起こした可能性があるという合理的な可能性がある。ＳＡＥの因果関係（すなわち、研究介入とのその関連性）は、ＣＲＦを完成している医師によって評価される。規制報告目的のために、関連性が未知であるか、または記載されていない場合には、それは有害薬物反応の定義を満たす（疑わしい関連－ＡＤＲ）。
免疫関連有害事象（ｉｒ－ＡＥ）：治療関連有害事象のサブセットは、免疫ベースの療法（例えば、免疫チェックポイント阻害剤曝露）と関連している、未知病因論の、免疫媒介性機構と一致する任意の臓器の臨床的に重大な有害事象として定義される。
特に興味深い有害事象（ＡＥＳＩ）：スポンサーの製品またはプログラムに特有の科学的および医学的に懸念される有害事象（重篤または非重篤）、そのためには、進行中のモニタリングおよび治験責任医師によるスポンサーへの迅速な伝達が適切である。このような事象は、それらを特性決定し、理解するためのさらなる調査を必要とする場合がある。ＡＥＳＩは、プロトコール修正によって研究の間に付加または除去される場合がある。
新規安全性所見：報告可能な個別の症例安全性報告（ＩＣＳＲ）または製品の公知のリスクベネフィットバランスもしくは安全性プロファイルに影響を及ぼす可能性がある安全性の問題以外の任意の所見。
予測されたＡＥ／ＳＡＥ：製品の承認された適応症およびレジメン下での予測可能の決定は、地域の表示（利用可能な場合）または欧州製品情報概要（ＥＵ Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ）（ＳｍＰＣ）に基づいて決定されるべきである。製品が任意の承認されていない組合せ／レジメンで、または承認されていない適応症／集団のために、または承認されていない投薬のために投与される場合には、予測可能の決定は、ＩＢに基づくべきである（研究プロトコールにおいて定義されたような参照文書に基づいて、組合せ内の指定の市販の薬物各々の表示を考慮すること）。
予期せぬ重篤な有害反応の疑い（ＳＵＳＡＲ）：因果関係、重篤度および予測可能は、独立基準である。保健機関への迅速な報告を定義する組合せである。
ＡＥ定義を満たす事象：
・治験責任医師の医学的および科学的判断において臨床的に重大と考えられる（すなわち、基礎疾患の進行と関連しない）ベースラインから悪化したものを含む、任意の異常な臨床検査結果（例えば、血液学、臨床化学または尿検査）または他の安全性評価（例えば、ＥＣＧ、放射線学的スキャン、バイタルサイン測定）。
・状態の頻度および／または強度の増大のいずれかを含む、慢性のまたは断続的な既存の状態の増悪。
・研究の開始前に存在していた可能性があるとしても、研究介入投与後に検出または診断される新規状態。
・薬物－薬物相互作用の疑いの徴候、症状または臨床的後遺症。
・研究介入または併用投薬のいずれかの過剰投与の疑いの徴候、症状または臨床的後遺症。
ＡＥ定義を満たさない事象：
・参加者の状態について予測されるものよりも重症でない限り、研究されている疾患／障害または研究されている疾患／障害の予測される進行、徴候もしくは症状。
・医学的または外科的手順（例えば、内視鏡検査、虫垂切除術）：手順につながる状態がＡＥである。
・都合の悪い医学的発生が生じなかった状況（社会的なおよび／または便利な入院）。
・悪化しない、研究の開始時に存在したまたは検出された既存の疾患または状態の予想される日々の変動。
事象が上記の定義によってＡＥではない場合には、重篤条件が満たされる場合（例えば、研究下の疾患の徴候／症状のための入院、疾患の進行による死亡）であってもＳＡＥではない。
ＡＥおよび／またはＳＡＥの記録およびフォローアップ
ＡＥおよびＳＡＥの記録
ＡＥ／ＳＡＥが生じる場合、事象に関連するすべての文書（例えば、病院の進捗記録、検査報告書および診断報告書）が再調査され、すべての関連ＡＥ／ＳＡＥ情報がｅＣＲＦに記録される。ある特定の場合の医学的記録のコピーがスポンサーによって要求される場合がある。この場合には、スポンサーへの提出の前に、参加者番号を除くすべての参加者の識別子が医学的記録のコピーに編集される。治験責任医師は、徴候、症状および／または他の臨床情報に基づいて事象の診断を確立しようとする。可能な限り常に、診断（個々の徴候／症状ではない）は、ＡＥ／ＳＡＥとして文書化される。
強度の評価
ＡＥ／ＳＡＥの強度は、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０に基づいて評価される。
因果関係の評価
治験責任医師は、研究介入と各ＡＥ／ＳＡＥの各発生の間の関連性を評価する義務がある。関連性の「合理的な可能性」は、除外することができない関連性というよりも原因となる関連性を示唆する事実、証拠および／または議論があることを伝える。治験責任医師は、関連性を決定するために臨床的判断を使用する。基礎疾患、併用療法（ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ）および他のリスク因子ならびに研究介入投与に対する事象の時間的関連性などの代替原因が考慮され、調査される。治験責任医師はまた、その評価において、治験薬概要書（ＩＢ）および／または市販の製品の製品情報も参考にする。
各ＡＥ／ＳＡＥについて、治験責任医師は、ＡＥ／ＳＡＥを再調査し、因果関係の評価を提供したという医学的記録に文書化しなくてはならない。ＳＡＥが生じており、治験責任医師が、スポンサーへの最初の報告書に含めるための最小の情報しか有さない状況がある。しかし、スポンサーへのＳＡＥデータの最初の伝達の前に治験責任医師があらゆる事象の因果関係を常に評価することは極めて重要である。治験責任医師は、フォローアップ情報を考慮して因果関係の意見を変更し、更新された因果関係評価を有するＳＡＥフォローアップ報告書を送る場合がある。
ＡＥおよびＳＡＥのフォローアップ
治験責任医師は、ＡＥまたはＳＡＥの性質および／または因果関係をできる限り完全に解明するために、医学的に指示されるように、またはモニタリングチームの代表者によって要求されるように追加の測定および／または評価の実施を実行または手配する義務がある。これは、追加の臨床検査または調査、病理組織学的検査または他の医療専門家との相談を含む可能性がある。新規または更新された情報が、最初に完成されたｅＣＲＦに記録される。
ＳＡＥの報告
電子データ収集ツールによるスポンサーへのＳＡＥ報告。スポンサーへＳＡＥを報告する主な機構は、電子データ収集ツールである。電子システムが２４時間をこえて利用可能ではない場合には、サイトは紙のＳＡＥデータ収集ツール（本明細書を参照されたい）を使用する。サイトは、ＳＡＥデータを電子システムが利用可能になればすぐに電子システムに入力する。所与のサイトで研究が完了した後、電子データ収集ツールは、既存のデータへの新規データまたは変更の入力を防ぐためにオフラインにされる。電子データ収集ツールがオフラインにされた後に、サイトが研究参加者から新規ＳＡＥの報告書を受け取るか、またはこれまでに報告されたＳＡＥで更新されたデータを受け取る場合には、サイトはこの情報を紙のＳＡＥ形式（本明細書を参照されたい）で、またはファクシミリによってスポンサーもしくは代表者に報告できる。
紙ＣＲＦによってスポンサーに報告するＳＡＥ
ＳＡＥ紙ＣＲＦのファクシミリ伝達は、この情報をスポンサーまたは代表者に伝達するための好ましい方法である。稀な状況では、およびファクシミリ装置の不在下では、電話による通知は、翌日配達便または国際宅配便によって送られたＳＡＥデータ収集ツールのコピーとともに受け入れられる。電話による最初の通知は、治験責任医師が指定された報告時間枠内にＳＡＥ ＣＲＦページを完了し、署名する必要性と置き換わるものではない。
実施例１．６Ａ － ＡＥおよびＳＡＥ情報を収集する期間および頻度
すべてのＡＥ（ＳＡＥを含む）は、ＳＯＡにおいて指定された時点でＩＣＦの署名からＥＯＴまで収集される。ＥＯＴ後は、ＩＭＰ関連または予測されない事象（ＩＭＰとの関連性が明確ではないものを含む）のみが報告される。
以下に示されるように、すべてのＳＡＥおよびＡＥＳＩが記録され、２４時間以内にスポンサーまたは被指名人に報告される。治験責任医師は、入手可能になった２４時間以内に任意の更新されたＳＡＥデータをスポンサーに提出する。
治験責任医師は、研究参加の結論後にＡＥまたはＳＡＥを積極的に探す義務はない。しかし、治験責任医師が、参加者が研究から離脱した後の任意の時点での死亡を含む任意のＳＡＥを知り、事象が研究介入または研究参加と合理的に関連していると考える場合には、治験責任医師は、迅速にスポンサーに通知しなくてはならない。
ＡＥおよびＳＡＥの因果関係を記録し、評価し（ｅｖａｌｕａｉｎｇ）、評価する（ａｓｓｅｓｓｉｎｇ）方法ならびにＳＡＥ報告書を完了し、伝達する手順が以下に提供される。
実施例１．６Ｂ － ＡＥおよびＳＡＥを検出する方法
ＡＥおよび／またはＳＡＥを検出するときにバイアスを導入しないように注意すること。ＡＥ発生について尋ねるには、参加者の自由な、主要でない口頭での質問が好ましい方法である。
実施例１．６Ｃ － ＡＥおよびＳＡＥのフォローアップ
最初のＡＥ／ＳＡＥ報告書の後、治験責任医師は、その後の訪問で各参加者を積極的に追跡する必要がある。ＥＯＴ後、安全フォローアップ期間の間、解消または安定化のために報告、モニタリングおよびフォローアップされるべき事象は、以下のとおりである：
・関連性に関わらず、すべての進行中のＡＥ、ＳＡＥまたは特に興味深い事象
・関連事象による死亡を含む、関連していると考えられる、すべての新規ＡＥ、ＳＡＥまたは特に興味深い事象
フォローアップ手順に関するさらなる情報は以下に示されている。
実施例１．６Ｄ － ＡＥまたはＳＡＥとして適格ではない疾患関連事象および／または疾患関連アウトカム
以下の疾患関連事象（ＤＲＥ）は、がんを有する参加者において一般的であり、重篤なもの／命を脅かすものである可能性がある：
・エンドポイントであるような、基礎疾患の進行。
・最後のＩＭＰ投与の３０日後に生じる場合には基礎疾患の進行による死亡。最後の研究介入の３０日以内に生じるすべての死亡は、ＳＡＥとして報告されなければならない。
これらの事象は通常、研究下の疾患と関連しているので、事象がＳＡＥの定義を満たす可能性があっても、ＳＡＥの迅速な報告のための標準プロセスに従ってそれらは報告されない。これらの事象は、適切な時間枠内に参加者のｅＣＲＦの対応するページに記録される。
しかし、以下の条件のうちいずれかが当てはまる場合には、事象はＳＡＥとして（ＤＲＥの代わりに）記録および報告されなければならない：事象が、治験責任医師の意見では、個々の参加者について予測されるものよりも大きな強度、頻度または期間である；または治験責任医師が、事象が研究介入と関連していたという合理的な可能性があると考える。
妊娠：
女性参加者および示される場合には男性参加者の女性のパートナーにおけるすべての妊娠の詳細が、研究介入の開始後および研究介入の最後の用量後少なくとも６カ月収集される。
妊娠が報告される場合には、治験責任医師は、妊娠を知った２４時間以内にスポンサーに通知する。異常妊娠アウトカム（例えば、自然流産、胎児死亡、死産、先天性異常、異所性妊娠）は、ＳＡＥと考えられる。妊娠フォローアップには、任意の自発的または自然終結、誕生の詳細、任意の先天性異常の有無、出生時欠損、母体または新生児合併症および研究薬物との推定される関係を含む妊娠のアウトカムが記載される。
実施例１．７ － 薬物動態
実施例１．７Ａ － サンプリング時間
血漿中のサイトカインＲＮＡ混合物によってコードされるサイトカインの濃度を測定するために、およびＰＫ分析を実施するために以下の血液収集時間点が定義される：
血液収集のためのサンプリング時間は、ＰＫ／ＰＤｙ１フローチャート（表３）に見出すことができる。指定の時間に、仕様に従ってすべての血液サンプルを収集することが最大に重要である。
任意の理由のために欠損したまたは消失したサンプルは記録される。血液収集の実際の時間がｅＣＲＦに記録される。サンプリングおよび薬物投与の日付および時間も正確に記録される。
実施例１．７Ｂ － 生物分析法
生物分析法は表１０にまとめられている。手短には、血漿中のサイトカインＲＮＡ混合物から翻訳された４種の標的サイトカイン（ＩＬ－１２ｓｃ、ＩＬ－１５スシ、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＦＮα２ｂ）の全身レベルが、各参加者コホートにおいて遡及的にモニタリングされる。これらのサイトカインアッセイ（ＩＬ－１２ｓｃ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮαおよびＩＬ－１５スシ）は、検出感度の必要性に基づいてＭＳＤまたはＱｕａｎｔｅｒｉｘ ＳＩＭＯＡプラットフォームのいずれかで実施される。
Figure 2022518235000041
実施例１．７Ｃ － ＰＫパラメータ
サイトカインＲＮＡ混合物によってコードされるサイトカインの集中的にサンプリングされた血漿濃度から得られる薬物動態パラメータは、非コンパートメント法を使用してＰＫＤＭＳソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ）を用いて算出される。パラメーターとして、それだけには限らないが、以下のものが挙げられる：
Figure 2022518235000042
サイトカインＲＮＡ混合物によってコードされるサイトカインのために集団ＰＫアプローチが使用される。行われた場合には、生成されたデータはスタンドアロン報告書で報告される。
実施例１．８ － 薬動力学
サイトカインＲＮＡ混合物の標的管理、ＰＤｙおよび安全性バイオマーカーは、用量漸増およびＰｏＣ治験成功にとって重要である。定量的または半定量的バイオマーカーは、用量レベルの、標的発現、ＰＤｙおよびＰＫパラメータとの相関を確立するのに役立ち、ＭＴＤ／ＭＡＤの決定を補助できる。サイトカインＲＮＡ混合物プログラムのバイオマーカーは、循環標的発現、ＰＤｙ／安全性マーカーおよび組織由来ＰＤｙマーカーに広く分類される。
可能であれば、ＰＤｙサンプル収集は、予定されたＰＫサンプリングと同時に行う。
実施例１．８Ａ － 循環標的管理および安全性バイオマーカーモニタリングプラン
サイトカインＲＮＡ混合物から翻訳された４種の標的サイトカイン（ＩＬ－１２ｓｃ、ＩＬ－１５スシ、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＦＮα２ｂ）およびその下流の血漿中のＰＤｙ標的（ＩＦＮγおよびＩＦＮγ誘導性タンパク質１０［ＩＰ１０］）の全身レベルは、各参加者コホートにおいて遡及的にモニタリングされる。
臨床ＡＥの同定を補助するために、安全性バイオマーカーＣＲＰおよびフェリチンは、臨床パラメータ（例えば、発熱、悪心、疲労、頭痛、筋肉痛、倦怠、低酸素症、低血圧症）とともに使用される。続発的ＣＲＳのモニタリングのためにプラズマサンプルが収集される。６種のサイトカイン（ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０およびＴＮＦα）のパネルは、ＣＲＳグレード≧２症状の発生の場合においてのみ研究の実施の間に遡及的に評価される。
実施例１．８Ｂ － 免疫評価のための腫瘍生検
第１のＩＭＰ投与の前、５週と８週の間および周期６または疾患進行時（いずれか最初に生じる方）に必須腫瘍生検が収集される。治療中生検サンプルについて（すなわち、５週～８週のものおよび他の周期６のものまたは疾患進行時のもの）、注射されたおよび注射されていない病変の両方から生検サンプルを得ることが必要である。好ましくは、治療中の生検されるべき病変のものは、ベースラインで生検されているものであるべきである。これが実現可能ではない場合には、別の注射された病変から得た組織サンプルが考慮される。生検されるべき病変の制限がある場合、同一部位から得た別のサンプルがこれまでに収集されているか、またはサンプリング時点の後に収集される場合には、注射されていない病変のみの生検が考慮される。
すべての参加者の生検がヘマトキシリンおよびエオシン染色を受け、ＣＤ３、ＣＤ８および腫瘍細胞の標準ＩＨＣが、調べられた腫瘍種に対して、ＳＯＸ１０マーカー（黒色腫のため）またはパンサイトケラチン（ｐａｎｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ）（上皮性腫瘍ＨＮＳＣＣおよびＣＳＣＣを有する患者のための［ＣＫ］）およびリンパ腫マーカーによって決定され、参加者生検（応答者および非応答者の両方から得た）のサブセットは、１２種のマーカーのマルチプレックスＩＨＣを受け、マルチプレックスＩＨＣは、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３８、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＦｏｘＰ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１およびＳＯＸ１０またはＰａｎＣＫまたはリンパ腫マーカーからなる。治療前または治療後生検でのＩＨＣが収集され、腫瘍微小環境の変化を評価する、具体的には、腫瘍および間質中の浸潤Ｔ細胞の頻度および密度を評価するために使用される。前および後生検の間のＴ細胞の増加は、機構の証明を定義するのに役立つように使用される正の免疫相関物である。
単独療法の拡大の間のみの黒色腫患者について、５～８週の間に実施された単回腫瘍コア生検がＴＩＬ単離に充てられる。これは、制限された数（例えば、１０人以下のＴＩＬ単離に成功した患者）の選択された黒色腫患者に適用される。これは追加の生検ではないが、代わりに、ゲノム評価に充てられたサンプルがＴＩＬ単離のために使用される（特別の条件下で取り扱われる－ホルマリン固定されない）。この種のサンプルおよび試験は、治療を行っている治験責任医師によって決定されるような治療に対する応答の臨床徴候（腫瘍サイズ低減および／または腫瘍部位での発赤）を有する患者に適用される。
腫瘍トランスクリプトミクス（ＲＮＡシーケンシング）ゲノミクスおよびネオ抗原もサンプル利用可能性に応じて分析される。
実施例１．９ － ゲノミクス
治療との関連でゲノミクスを分析するために、ＰＢＭＣでの体細胞突然変異およびＨＬＡタイピング、腫瘍でのＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡｓｅｑ）を含むいくつかの分析が実施される。さらに、遺伝子シグネチャー、腫瘍内のネオ抗原、ＴＭＢおよびＴＣＲ多様性を決定するために、腫瘍ＲＮＡｓｅｑデータ（バイオマーカー分析の一部としても計画される）が必要である。ＨＬＡタイピングは、血液中で実施される。適切なサンプル材料が利用可能である場合には、これらの分析における参加は必須である。
黒色腫参加者においてのみネオ抗原が評価される。
ＤＮＡまたはＲＮＡ抽出失敗の事象では、代替サンプル（腫瘍または血液）が参加者に要求される。元のコンセントに含まれない限り、代替サンプルを得るためには署名されたインフォームドコンセントが必要である。サンプル取り扱いおよび発送に関して実現可能性の制約の場合には、関連臨床部位から得たサンプルはこれらの（またはこれらの一部の）分析のために評価されない。
実施例１．９Ａ － 免疫原性評価
サイトカインＲＮＡ混合物によってコードされるサイトカインに対する抗体は、ＳＯＡに従ってすべての参加者から収集された血漿サンプルにおいて評価される。さらに、血漿サンプルはまた、研究介入を中止したか、または研究から離脱した参加者から最後の訪問時に収集される。これらのサンプルは、スポンサーまたはスポンサーの被指名人によって試験される。
血漿サンプルは、４種のサイトカインＲＮＡ混合物から発現されたサイトカイン各々に結合する抗体についてスクリーニングされ、確認された陽性サンプルの力価が報告される。サイトカインＲＮＡ混合物の免疫原性をさらに特性決定するために他の分析が実施される。
スポンサーの監視下で検証されたアッセイ法を使用してサイトカインＲＮＡ混合物に対する抗体の検出および特性決定が実施される。抗体は、研究介入の活性を中和するその能力についてさらに特性決定および／または評価される。サンプルは、サイトカインＲＮＡ混合物に対する免疫応答のさらなる分析を可能にするためにスポンサーによって選択された施設での研究のための参加者の最後の訪問後最大５年（または地方の規制に従って）保管される。
実施例１．９Ｂ － ＲＮＡトランスクリプトーム調査
探索的トランスクリプトーム研究は、マイクロアレイおよび／または各組織生検サンプルのトランスクリプトームプロファイルをもたらす数千のＲＮＡ種の関連存在量の同時測定を容易にする代替等価技術を使用して実施される。ＩＨＣ後に残存する腫瘍組織は、特に、炎症促進性および／またはＩＦＮγ遺伝子シグネチャーの発生を探しながら、腫瘍環境内での全体的な遺伝子発現変化を分析するために、ＲＮＡシーケンシング分析に付される。これによって、サイトカインＲＮＡ混合物の作用に関連する適応免疫応答と相関するトランスクリプトームプロファイルの変化の評価が可能となる。
同一サンプルがまた、代替技術の適用による知見を確認するために使用される。
実施例１．１０ － 統計的考察
実施例１．１０Ａ － 統計的仮説
用量漸増
この研究の用量漸増部分に正式な統計的仮説はない。この研究は、観察されたＤＬＴに従ってサイトカインＲＮＡ混合物のＭＴＤまたはＭＡＤを確立することを目的とする。用量漸増は、最初の２つのＤＬの単一参加者用量漸増と、それに続く合理的設計を使用して進行する。
用量拡大
帰無仮設は、ＲＥＣＩＳＴ １．１あたりの真のＯＲＲが≦１０％であるということであり、対立仮説は、ＲＥＣＩＳＴ １．１あたりの真のＯＲＲが≧２６％であるということである。
実施例１．１０Ｂ － サンプルサイズ決定
用量漸増相
療法用量漸増相には正式なサンプルサイズ算出はない。およそ３８人のＤＬＴ評価可能参加者が、約８のＤＬの評価を有する用量漸増相に登録される。実際のサンプルサイズは、観察されたＤＬＴおよび実際に調査された用量レベルの数に応じて変わる。
用量拡大相
用量拡大相では合理的設計が使用される。真の奏効率が１０％であるという帰無仮設が、片側対立に対して試験される。第１の段階では、１６人の参加者が集められる。これら１６人の参加者においてＲＥＣＩＳＴ １．１基準に従って１またはそれより小さい応答がある場合には、研究は停止される。そうではなければ、１８人の追加の参加者が集められ、合計３４人とされる。抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１に基づく以前の療法が失敗している進行型黒色腫を有する３４人の参加者において７またはそれより多い応答が観察される場合には、帰無仮設は棄却される。この設計は、真の奏効率が２６％である場合に５％の片側第一種過誤および８０％の検出力をもたらす。
実施例１．１０Ｃ － 分析のための集団
表１２に示されるように、分析目的で、以下の集団が定義される：
Figure 2022518235000043
実施例１．１０Ｄ － 統計分析
有効性分析
注射されたおよび注射されていない病変を含む事前選択された病変に基づく、ＲＥＣＩＳＴ １．１あたりの客観的奏効率（ＯＲＲ）が、記述統計学を用いてまとめられている。９０％の両側信頼区間は、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ法を使用してコンピュータで計算される。統計的推定は、サンプルサイズ算出の節で定義される仮説およびアルファレベルに基づいている。同様の分析は、ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴあたりのＤＣＲ およびｉＲＥＣＩＳＴあたりのＯＲＲについて提供される。さらに、腫瘍量変化のまとめは、支持的分析として注射されたおよび注射されていない病変について別個に提供されている。ＤｏＲおよびＰＦＳは、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を使用してまとめられている。
Figure 2022518235000044
安全性分析
すべての安全性分析は、すべての治療された集団で実施される。
Figure 2022518235000045
用量制限毒性
用量漸増像では、ＤＬＴは、用量レベルによってまとめられている。ＤＬＴの詳細は、参加者によって提供される。ＤＬＴは、上記のように、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０を使用して定義される。
有害事象の分析
観察期間は、３つのセグメントにわけられる：スクリーニング、ＴＥＡＥおよび治療後。スクリーニング期間は、研究介入の第１の用量の投与までのインフォームドコンセントが署名される時間として定義される。治療によって出現する有害事象（ＴＥＡＥ）期間は、研究介入の第１の用量から研究介入の最後の用量後最大３０の日期間として定義される。治療後期間は、研究介入の最後の用量後３１日から始まり研究閉鎖または死亡のいずれか早い方までとして定義される。
治療前ＡＥは、スクリーニング期間の間の任意のＡＥとして定義される。治療によって出現するＡＥは、ＴＥＡＥ期間の間に発生し、悪化し（治験責任医師の意見に従って）または重篤になるＡＥとして定義される。治療後ＡＥは、治療後期間の間に報告されるＡＥとして定義される。ＡＥ報告の主な焦点はＴＥＡＥにある。治療前および治療後ＡＥは別個に記載される。
ＴＥＡＥは、国際医薬用語集（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）（ＭｅｄＤＲＡ）に従ってコード化される。ＡＥは、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０に従ってグレード付けされる。グレードは、まとめで考慮される。同じ基本語（ＰＴ）が複数回発生する参加者については、最大グレードが使用される。
ＴＥＡＥの全体的なまとめを提供する。以下のうちいずれかを経験した参加者の数およびパーセンテージが提供されている：
・ＴＥＡＥ。
・グレード≧３のＴＥＡＥ。
・グレード３または４のＴＥＡＥ。
・グレード５のＴＥＡＥ（治療期間の間に致死性アウトカムを有する任意のＴＥＡＥ）。
・重篤なＴＥＡＥ。
・重篤な治療関連ＴＥＡＥ。
・治療中断につながるＴＥＡＥ。
・ＡＥＳＩ。
・治療関連ＴＥＡＥ。
・グレード≧３の治療関連ＴＥＡＥ。
主要器官別大分類（ＳＯＣ）およびＰＴによるＴＥＡＥを経験している参加者の数およびパーセンテージが、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレード（すべてのグレードおよびグレード≧３）によってまとめられている。同様の表が、治療関連ＴＥＡＥ、ＡＥＳＩ、治療中断につながるＴＥＡＥ、用量改変につながるＴＥＡＥ、重篤ＴＥＡＥ、致死性アウトカムを有するＴＥＡＥおよび治療後投薬器官の間に生じるＡＥ／ＳＡＥについて用意されている。
臨床検査評価
臨床検査結果は、利用可能な場合にはＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０に従ってグレード付けされる。ＴＥＡＥ期間の間の最悪のグレードを使用して検査の異常を有する（すなわち、すべてのグレードおよびグレード≧３）参加者の数（％）が、すべて治療される集団に提供される。
上記で説明したように、行動様式に基づく臨床検査値のすべてではない一時的な変化は、ＴＥＡＥとして文書化されるわけではない；治験責任医師は、ＴＥＡＥとして文書化するために検査の変化が臨床的に関連しているか否かを評価する。
ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０スケールが適用可能ではない場合には、正常検査範囲から外れた検査の異常を有する参加者の数が示される。
実施例１．１１ － 臨床検査試験
実施された表１４および１５に詳述された試験および結果が、ｅＣＲＦに入力される。参加者を組み入れるまたは除外するためのプロトコール特異的必要条件は、プロトコールに詳述されている。追加の試験は、治験責任医師によって必要と決定されるような、または地域の規制によって必要とされるような研究の間の任意の時間で実施される。治験責任医師は、各実験室安全性報告書の概説を文書化しなくてはならない。
Figure 2022518235000046
Figure 2022518235000047
実施例１．１２ － 避妊指針および妊娠情報の収集
妊娠の可能性のある女性（ＷＯＣＢＰ）：妊娠の可能性のある女性とは、以下の女性である：
１．ある時点で初潮に達した、
２．子宮摘出術もしくは両側卵巣摘出術を受けていない、または
３．少なくとも連続２４カ月（すなわち、先行する連続２４カ月中の任意の時間に月経を有していた）自然閉経後ではない（がん療法後の無月経は、妊娠の可能性を除外しない）。
避妊ガイダンス
・男性参加者
・妊娠の可能性のある女性パートナーを有する男性参加者は、介入期間の間および研究介入の最後の用量後６カ月間に以下のうち１つに同意する場合に、参加するのに適格である：
・彼らの通常の好ましいライフスタイルとしての陰茎－膣性交を控える（長期で、持続的に控える）、控えたままでいることに同意する
・現在妊娠していない妊娠可能な女性との陰茎－膣性交を行う場合には、男性用コンドームを使用することおよび以下に記載されるような年あたり＜１％の失敗率の避妊法のパートナーの使用に同意すること
・さらに、男性参加者は、研究の期間および研究介入の最後の用量後６カ月間、精子提供を控えなければならない。
・妊娠中または授乳中のパートナーを有する男性参加者は、介入期間の間および研究介入の最後の用量後６カ月間、陰茎膣性交を控えたままでいるか、または陰茎の浸透の各エピソードの間男性用コンドームを使用すると同意しなくてはならない。
・女性参加者
・妊娠の可能性のある女性参加者は、以下に記載されるような高度に効果的な避妊方法を一貫して正しく使用することに同意する場合に、参加するのに適格である：
ユーザー依存的である高度に有効な避妊法：一貫して正しく使用される場合の年あたり＜１％の失敗率。
ｉ）排卵の阻害と関連する組み合わされた（エストロゲンおよびプロゲストゲン含有）ホルモン性避妊：経口、膣内または経皮
ｉｉ）排卵の阻害と関連するプロゲストゲンのみのホルモン性避妊：経口または注射用
ユーザー独立的である高度に有効な方法：
ｉｉｉ）排卵の阻害と関連する埋め込み可能なプロゲストゲンのみのホルモン性避妊：子宮内デバイス（ＩＵＤ）、子宮内ホルモン放出システム（ＩＵＳ）または両側卵管閉塞術
精管切除されたパートナー：精管切除されたパートナーは、パートナーがＷＯＣＢＰの唯一の男性の性的パートナーであり、精子が存在しないことが確認されている限り、高度に有効な避妊法である。そうではない場合には、追加の高度に有効な避妊の方法が使用される。
性的禁欲：性的禁欲は、研究介入と関連するリスクの全期間の間、異性性交を控えることと定義される場合にのみ高度に有効な方法と考えられる。性的禁欲の信頼性は、研究期間および参加者の好ましい普通のライフスタイルに関連して評価される。
注記：通常使用の失敗率は、一貫して正しく使用された場合のものと異なる場合がある。使用は、臨床研究に参加する参加者の避妊法の使用に関する地域の規制と一致しなくてはならない。ホルモン性避妊は、研究介入との相互作用に感受性である場合があり、これが、避妊法の有効性を低減する場合がある。この場合には、２つの高度に有効な避妊の方法が、介入期間の間および研究介入の最後の用量後少なくとも６カ月間利用される。経口ホルモン性避妊は、研究介入との相互作用に感受性である場合があり、これが、避妊法の有効性を低減する場合がある。この場合には、経口避妊薬を、異なる投与経路を有する別の高度に有効な避妊の方法と置き換えることができない場合には、ホルモン性避妊法は、研究期間の間および研究介入の最後の用量後少なくとも６カ月間、男性用コンドーム（パートナーのための）で補完されなければならない。
妊娠検査：ＷＯＣＢＰは、確認された月経期間および陰性の高感度血清妊娠検査の後にのみ組み入れられる。追加の妊娠検査は、介入期間の間の各治療周期の開始時およびＥＯＴ時に実施される。妊娠検査は、月経周期が欠損している場合にはいつでも、またはそうではなく妊娠が疑われる場合に実施される。妊娠検査は、地域の検査室手順に従って実施される。研究に参加しながら妊娠中になった任意の女性参加者は、研究介入を中止し、研究から離脱するものとする。
妊娠情報の収集：
妊娠中になったパートナーを有する男性参加者－治験責任医師は、男性参加者がこの研究にありながら妊娠中になった任意の男性参加者の女性のパートナーに関する妊娠情報を収集しようとする。これは、サイトカインＲＮＡ混合物を受け取る男性参加者にのみ当てはまる。妊娠中の女性パートナーから直接、必要な署名されたインフォームドコンセントを得た後、治験責任医師は、適切な形式で妊娠情報を記録し、パートナーの妊娠を知った２４時間以内にそれをスポンサーに提出する。女性パートナーはまた、妊娠のアウトカムを決定するために追跡される。母体および子供の状態に関する情報はスポンサーに送付される。一般に、フォローアップは、出産予定日後６～８週間よりも長くならない。胎児の状態（異常の有無）または手順の適応症に関わらず、妊娠のあらゆる終結が報告される。
妊娠中になった女性参加者－治験責任医師は、研究に参加しながら妊娠中になった任意の女性参加者に関する妊娠情報を収集する。情報は適切な形式で記録され、参加者の妊娠を知った２４時間以内にスポンサーに提出される。参加者は、妊娠のアウトカムを決定するために追跡される。治験責任医師は、参加者および新生児に関するフォローアップ情報を収集し、情報はスポンサーに送付される。一般に、フォローアップは、出産予定日を超えて６～８週間よりも長く必要ではない。胎児の状態（異常の有無）または手順の適応症に関わらず、妊娠のあらゆる終結が報告される。あらゆる妊娠合併症または妊娠の選択的中絶が、ＡＥまたはＳＡＥとして報告される。自然流産は、ＳＡＥであると常に考えられ、そのようなものとして報告される。治験責任医師によって研究介入と関連すると合理的に考えられる任意の研究後妊娠関連ＳＡＥが、スポンサーに報告される。治験責任医師は、前者の研究参加者においてこの情報を積極的に探す義務はないが、自発的な報告によってＳＡＥを知る場合がある。
研究に参加しながら妊娠中になった任意の女性参加者は、研究介入を中止し、研究から離脱する。
実施例１．１３ － 薬物関連の有害事象に対する推奨される支持療法または用量改変ガイドライン
Figure 2022518235000048
Figure 2022518235000049
ＣＲＳの症状、グレード付けおよび管理
ＣＲＳと関連する臨床徴候および症状
・心血管：頻脈、脈圧拡大、低血圧、心拍出量の増大（初期）、心拍出量の潜在的減少（後期）
・凝固：Ｄ二量体の上昇、低フィブリノゲン血症±出血
・胃腸管：悪心、嘔吐、下痢
・全身：発熱±悪寒（ｒｉｇｏｒ）、倦怠、疲労、拒食症、筋肉痛、関節痛、頭痛
・肝臓：高トランスアミナーゼ血症、高ビリルビン血症
・神経学的：頭痛、精神状態変化、錯乱、せん妄、喚語困難または明らかな失語症、幻覚、振戦、測定障害、歩行運動の変化、てんかん発作
・腎臓：高窒素血症
・呼吸器：頻呼吸、低酸素血症
・皮疹
ＣＲＳのグレード付けおよび管理は表１８に提供されている。
Figure 2022518235000050
他のＡＥのガイダンス
表１９Ａは、ブドウ膜炎管理のガイドラインを提供する；すべての試みは、転移性疾患、感染または他の眼の疾患（例えば、緑内障または白内障）などの他の原因を除外するために行われることに留意すること。
表１９Ｂは、サイトカインＲＮＡ混合物に起因する有害事象の管理のためのガイダンスおよび支持療法戦略を提供する。
Figure 2022518235000051
Figure 2022518235000052
Figure 2022518235000053
Figure 2022518235000054
Figure 2022518235000055
Figure 2022518235000056
実施例１．１４ － 固形腫瘍バージョン１．１における応答評価基準
ベースラインでの腫瘍の測定可能性
ベースラインで、腫瘍病変／リンパ節は、以下のとおりに測定可能または測定不可能に分類される。
測定可能病変は、少なくとも１つの寸法（記録されるべき測定面での最長直径）で正確に測定され、以下の最小サイズを有する：
・ＣＴスキャンによる１０ｍｍ（ＣＴスキャン切片厚が５ｍｍ以下である）。
・臨床検査による１０ｍｍノギス測定（ノギスで正確に測定できない病変は、測定不可能と記録されなければならない）。
・胸部Ｘ線による２０ｍｍ。
悪性リンパ節：リンパ節は、病理学的に拡大した、測定可能であると考えられるには、ＣＴスキャンによって評価される場合に短軸で≧１５ｍｍでなくてはならない（ＣＴスキャン切片厚は５ｍｍ以下であることが推奨される）。ベースラインで、およびフォローアップでは、短軸のみが測定され、追跡される。
測定不可能な病変は、小さい病変（最長直径＜１０ｍｍまたは≧１０～＜１５ｍｍの短軸を有する病理学的リンパ節）ならびに測定不可能な病変を含むすべての他の病変である。測定不可能と考えられる病変として、再現性のあるイメージング技術によって測定可能ではない理学的検査によって同定される軟髄膜疾患、腹水、胸腔または心膜滲出液、炎症性胸部疾患、皮膚または肺のリンパ管性関与、腹部腫瘤／腹部臓器肥大が挙げられる。
病変測定可能性に関する特別な考慮事項：
骨の病変：
・骨スキャン、陽電子放射型断層撮影スキャンまたはプレーンフィルムは、骨病変を測定するための適切なイメージング技術とは考えられない。しかし、これらの技術は、骨病変の存在または消失を確認するために使用できる。
・同定可能な軟部組織構成成分を有する、断面イメージング技術、例えば、ＣＴまたはＭＲＩによって評価できる溶解性骨病変または混合溶解性－芽細胞性病変は、軟部組織構成成分が上記の測定可能性の定義を満たす場合には測定可能な病変と考えることができる。
・芽細胞性骨病変は測定不可能である。
嚢胞性病変：
・Ｘ線検査で規定される単純性嚢胞の基準を満たす病変は、定義によって単純性嚢胞であるので悪性病変と考えられない（測定可能でも測定不可能でもない）。
・嚢胞性転移を表すと考えられる「嚢胞性病変」は、上記の測定可能性の定義を満たす場合、測定可能病変と考えることができる。しかし、同一患者において非嚢胞性病変が存在する場合には、これらは標的病変として選択にとって好ましい。
以前の局所治療を受けた病変：
・依然に照射された領域中に、または他の局所領域的療法に付された領域中に位置する腫瘍病変は、病変の進行が実証されない限り、普通は測定可能と考えられない。
評価の方法
すべての測定値は、臨床的に評価される場合にはノギスを使用してメートル表記法で記録される。すべてのベースライン評価は、治療開始にできる近くに、治療の開始前４週を決して超えずに実施される。
ベースラインで、およびフォローアップの間に各々同定され、報告された病変を特性決定するために、同一評価方法および同一技術が使用される。追跡されている病変をイメージングできないが、臨床検査によって評価可能である場合を除いて、臨床検査ではなくイメージングに基づく評価が常に実施される。
臨床病変：臨床病変は、表面上にあり、ノギスを使用して評価されるように≧１０ｍｍ直径である場合にのみ測定可能と考えられる。皮膚病変の場合についでは、病変のサイズを推定するために定規を含めるカラー写真撮影による文書化が提案されている。上記のように、病変を臨床検査およびイメージングの両方によって評価できる場合には、イメージングはより客観的であり、研究の最後で再調査されるのでイメージング評価が行われる。
胸部Ｘ線：ＣＴは、特に新規病変の同定においてＸ線よりも感度が高いので、特に進行が重要なエンドポイントである場合には、胸部Ｘ線を上回って胸部ＣＴが好ましい。しかし、胸部Ｘ線での病変は、それらが明確に定義され、通気された肺によって囲まれている場合には測定可能と考えられる。
ＣＴ、ＭＲＩ：ＣＴは、応答評価について選択された病変を測定するための最良の現在利用可能な、再現性のある方法である。ＣＴスキャンでの病変の測定可能性は、ＣＴ切片厚は５ｍｍ以下であるという仮定に基づいている。ＣＴスキャンが５ｍｍより大きい切片厚を有する場合には、測定可能な病変の最小サイズは切片厚の２倍でなくてはならない。
超音波：超音波は、病変サイズの評価では有用ではなく、測定の方法として使用されてはならない。新規病変が、研究の過程で超音波によって同定される場合には、ＣＴまたはＭＲＩによる確認が勧められる。
内視鏡検査、腹腔鏡検査：客観的腫瘍評価のためのこれらの技術の利用は勧められない。
腫瘍マーカー：腫瘍マーカー単独を、客観的腫瘍応答を評価するために使用できない。
細胞学、組織学：これらの技術を使用して、プロトコールによって必要とされる稀な場合にＰＲとＣＲの間を識別できる。
ＦＤＧ ＰＥＴ－ＣＴ／ＣＴスキャン：ＣＲまたはＰＤを確認するためにおよそ１２週毎にリンパ腫患者において実施される。
「標的」および「非標的」病変のベースライン文書化
ベースラインで１つより多い測定可能な病変が存在する場合には、すべての関与する臓器を代表する最大で合計５つの病変までのすべての病変（臓器あたり最大２つの病変）が、標的病変として同定されなければならず、記録され、ベースラインで測定される。
標的病変は、そのサイズに基づいて選択され（最長の直径を有する病変）、すべての関与する臓器を代表し、再現性のある反復測定に役立つ。
リンパ節は、腫瘍によって含まれなくてもイメージングによって可視化される正常な解剖学的構造であるので特筆に値する。測定可能と定義され、標的病変として同定される病理学的リンパ節は、ＣＴスキャンによる≧１５ｍｍの短軸という基準を満たさなければならない。これらのリンパ節の短軸のみがベースライン合計に寄与する。すべての他の病理学的リンパ節（≧１０ｍｍであるが＜１５ｍｍの短軸を有するもの）を非標的病変と考えてはならない。＜１０ｍｍの短軸を有するリンパ節は、非病理学的と考えられ、記録され、追跡されるべきではない。
すべての標的病変の直径の合計（非リンパ節性病変の最長、リンパ節性病変の短軸）が算出され、ベースライン合計直径として報告される。ベースライン合計直径は、疾患の測定可能な寸法で任意の客観的腫瘍退縮をさらに特性決定するための参照として使用される。
病理学的リンパ節を含むすべての他の病変（または疾患の部位）は、非標的病変として同定され、ベースラインで同様に記録される。測定は必要ではなく、これらの病変は、「存在する」、「存在しない」または「明確な進行」として追跡される。さらに、この症例の単一項目と同一の臓器に関与する複数の非標的病変（例えば、「複数の拡大された骨盤リンパ節」または「複数の肝臓転移」）を記録することが可能である。
応答基準が表２０に記載されている。
Figure 2022518235000057
標的病変の評価に関する特記事項
標的病変と同定されるリンパ節は、実際の短軸測定が常に記録され、リンパ節が研究時に１０ｍｍ未満に後退する場合であってもベースライン検査と同一の解剖学的面で測定される。これは、リンパ節が標的病変として含まれる場合には、ＣＲ基準が満たされる場合であっても、正常リンパ節は＜１０ｍｍの短軸を有すると定義されるので、病変の「合計」はゼロではない可能性があるということを意味する。ＰＲ、ＳＤおよびＰＤについては、リンパ節の実際の短軸測定は、標的病変の合計に含まれるべきである。
「測定するには小さすぎる」ようになった標的病変：ベースラインで記録されたすべての病変（リンパ節性および非リンパ節性）はその実際の測定が、極めて小さい（例えば、２ｍｍ）場合であってもその後の評価各々で記録される。しかし、ベースラインで標的病変として記録される病変またはリンパ節が、ＣＴスキャンで極めて薄くなり、その結果、放射線科医が正確な測定値を割り当てることに抵抗を感じることがあり、「測定するには小さすぎる」と報告する場合がある。これが生じる場合には、値がＣＲＦに記録されることが重要である。放射線科医の意見が、病変が消失した可能性があるである場合、測定値は０ｍｍと記録される。病変が存在し、薄く見えるが、測定するには小さすぎると考えられる場合には、５ｍｍのデフォルト値が割り当てられる。
非リンパ節性病変「断片」の場合には、標的病変合計を算出するために断片化された部分の最長直径が一緒に加えられる。同様に、病変が癒合するときは、個々の病変各々の最大直径測定値を得ることを補助するそれらの間の面が維持される。病変が、それらがもはや分けることができないように真に癒合された場合には、この場合の最長直径のベクトルは、「癒合した病変」の最大最長直径である。
非標的病変の評価
一部の非標的病変が測定可能であるが、それらは測定される必要はなく、代わりに、プロトコールで指定された時点で定性的にのみ評価される。
ＣＲ：すべての非標的病変の消失および腫瘍マーカーレベルの正規化。すべてのリンパ節が、サイズが非病理学的でなくてはならない（＜１０ｍｍ短軸）。
非ＣＲ／非ＰＤ：１つまたはそれより多い非標的病変の持続および／または正常限界を上回る腫瘍マーカーレベルの維持。
進行性疾患：既存の非標的病変の明確な進行。（注記：１つまたはそれより多い新規病変の出現も進行と考えられる）。
非標的疾患の進行という概念は、以下のとおりのさらなる説明を必要とする：
参加者が測定可能な疾患も有する場合、この設定では、非標的疾患に基づいて「明確な進行」を達成するために、標的疾患におけるＳＤまたはＰＲの存在下でさえ、全体的な腫瘍量が療法の中断に値するほど十分に増大するように、非標的疾患において全体的なレベルの実質的な悪化がなくてはならない。１つまたはそれより多い非標的病変のサイズの中程度の「増大」は、明確な進行状態の資格を得るほど普通十分ではない。
参加者が測定不可能な疾患のみを有する場合、非標的疾患に基づいて「明確な進行」を達成するために、全体的な腫瘍量が療法の中断に値するほど十分に増大するように、全体的なレベルの実質的な悪化がなくてはならない。１つまたはそれより多い非標的病変のサイズの中程度の「増大」は、明確な進行状態の資格を得るほど普通十分ではない。非標的疾患における悪化は容易に認定されないので（定義によって：すべての病変が真に測定不可能である場合）、明確な進行について患者を評価する場合に適用される有用な試験は、測定不可能な疾患の変化に基づく全体的な疾患の負荷の増大が、測定可能な疾患のＰＤを宣言するに必要とされる増大：すなわち、「体積」でのさらなる７３％の増大を表す腫瘍量の増大（測定可能な病変における２０％増大の直径と同等である）に規模で匹敵するか否かを考慮することである。例として、胸腔滲出液の「微量」から「多い」までの増加、リンパ管性疾患の限局性から広汎性への増加が挙げられ、または「療法の変化を必要とするほど十分」としてプロトコールに記載される。「明確な進行」が見られる場合には、患者はその時点で全体的なＰＤを有すると考えられる。
新規病変
新規悪性病変の出現は、疾患進行を表す。新規病変の所見は、明確でなくてはならない：すなわち、スキャン技術の相違、イメージングモダリティの変更または腫瘍以外の何かを表すと考えられる所見（例えば、幾分か「新しい」骨病変は、単純に治癒または既存の病変の発赤である可能性がある）に起因しない。これは、参加者のベースライン病変がＰＲまたはＣＲを示す場合には特に重要である。例えば、肝臓病変の壊死は、ＣＴスキャン報告書で「新規」嚢胞性病変として報告される場合があるが、そうではない。
ベースラインでスキャンされなかった解剖学的位置においてフォローアップ研究で同定された病変は新規病変と考えられ、疾患進行を示す。この例として、研究で転移を明らかにするＣＴまたはＭＲＩ脳をオーダーした、ベースラインで内臓疾患を有する患者がある。参加者の脳転移は、ベースラインで脳イメージングを有していなかったとしてもＰＤを構成すると考えられる。
新規病変が、例えば、その小さいサイズのために曖昧である場合には、継続療法およびフォローアップ評価によって、それが新規疾患を表すか否かが明らかとなる。反復スキャンによって、新規病変があることが確認される場合には、最初のスキャンの日付を使用して進行が宣言される。
フルオロデオキシグルコース－陽電子放射型断層撮影（ＦＤＧ－ＰＥＴ）応答評価は、追加の研究を必要とするが、進行（特に、可能性がある「新規」疾患）の評価においてＣＴスキャニングを補完するためにＦＤＧ－ＰＥＴスキャニングの使用を組み込むことが合理的であることがある。以下のアルゴリズムに従って、ＦＤＧ－ＰＥＴイメージングに基づいて新規病変が同定される：
Ａ．ベースラインで陰性ＦＤＧ－ＰＥＴおよびフォローアップで陽性ＦＤＧ－ＰＥＴは、新規病変に基づくＰＤの徴候である。
Ｂ．ベースラインでＦＤＧ－ＰＥＴなしおよびフォローアップで陽性ＦＤＧ－ＰＥＴ：
フォローアップで陽性ＦＤＧ－ＰＥＴが、ＣＴによって確認された疾患の新規部位に対応する場合には、これはＰＤである。
フォローアップで陽性ＦＤＧ－ＰＥＴが、ＣＴで疾患の新規部位として確認されない場合には、真にその部位で発生している進行があるか否かを決定するために追加のフォローアップＣＴスキャンが必要である（その場合には、ＰＤの日付は、最初の異常なＦＤＧ－ＰＥＴスキャンの日付となる）。フォローアップで陽性ＦＤＧ－ＰＥＴが、解剖学的画像に基づいて進行していないＣＴでの既存の疾患の部位に対応する場合には、これはＰＤではない。
最良の全体的な応答の評価
時点の応答：各プロトコールによって指定される時点で、応答評価を行わなくてはならない。表２１は、ベースラインで測定可能な疾患を有する患者の各時点での全体的な応答状態算出の概要を提供する。
Figure 2022518235000058
患者が測定不可能な（従って、非標的）疾患のみを有する場合には、表２２が使用されるべきである。
Figure 2022518235000059
欠損している評価および評価不能指定：イメージング／測定を特定の時点ですべてで行わない場合には、患者は、その時点で評価可能な（ＮＥ）ではない。
評価時に病変測定のサブセットのみが行われる場合には、普通、その症例は、個々の欠損している病変の寄与は、割り当てられた時点の応答を変更しないという確信的な議論を行うことができない限り、その時点でＮＥと考えられる。これは、ＰＤの症例において起こる可能性が高い。イメージング／測定が、特定の時点ですべてで行われない場合患者はその時点でＮＥである。
評価時に病変測定のサブセットのみが行われる場合には、普通、その症例はまた、個々の欠損している病変の寄与は、割り当てられた時点の応答を変更しないという確信的な議論を行うことができない限り、その時点でＮＥと考えられる。これは、ＰＤの症例において起こる可能性が高い。
応答評価に関する特記事項
リンパ節性疾患が標的病変の合計に含まれ、リンパ節が「正常な」サイズ（＜１０ｍｍ）に減少する場合には、それらは、依然としてスキャンで報告された測定値を有する場合がある。この測定値は、リンパ節のサイズの増大に基づいている場合、進行を誇張しないようにリンパ節が正常であっても記録される。前記のように、これは、ＣＲを有する患者がＣＲＦで「ゼロ」の総合計を有さない場合があることを意味する。
応答の確認が必要である治験では、反復された「ＮＥ」時点評価は、最良の応答決定を複雑にする場合がある。治験の分析プランは、欠損しているデータ／評価が、応答および進行の決定において対応される方法に対応しなくてはならない。例えば、ほとんどの治験では、ＰＲ－ＮＥ－ＰＲの時点の応答を有する患者を、確認された応答と考えることは合理的である。
その時間で疾患進行の客観的証拠なしで治療の中断を必要とする健康状態の全体的な悪化を有する患者は、「症候性悪化」として報告される。治療の中断後でさえ客観的進行を文書化するためにあらゆる努力が行われなければならない。症候性悪化は、客観的応答の記述子ではない：それは研究療法を停止する理由である。
このような患者の客観的応答状態は、標的および非標的疾患の評価によって決定される。進行の曖昧な所見（例えば、極めて小さいおよび不確かな新規病変；嚢胞性変化または既存の病変における壊死）については、治療は次の予定された評価まで継続できる。次の予定された評価で、進行が確認される場合には、進行の日付は、進行が疑われたより早い日付である。
応答の持続期間
全体的な応答の持続期間は、ＣＲ／ＰＲの測定値基準が最初に満たされた時間（どちらか最初に記録される方）から再発性またはＰＤが客観的に文書化される最初の日付まで測定される（ＰＤの参照として研究で記録された最小測定値をとって）。
全体的なＣＲの持続期間は、ＣＲの基準が最初に満たされた時間から再発性疾患が客観的に文書化される最初の日付まで測定される。
安定疾患は、参照として研究での最小の合計をとりながら治療の開始から進行の基準が満たされるまで測定される（ベースライン合計が最小である場合には、これはＰＤの算出のための参照である）。
ＲＥＣＩＳＴガイドラインに関する限定されない説明が、その全開示内容が参照によって本明細書に組み入れられる、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡ、Ｔｈｅｒａｓｓｅ Ｐ、Ｂｏｇａｅｒｔｓ Ｊら Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：Ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）． Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２００９年；４５巻：２２８～４７頁に提供されている。
実施例１．１５ － 免疫ベースの治療薬の、固形腫瘍における改変された応答基準
詳細は、Ｓｅｙｍｏｕｒ Ｌ、Ｂｏｇａｅｒｔｓ Ｊ、Ｐｅｒｒｏｎｅ Ａ、Ｆｏｒｄ Ｒ、Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＬＨ、Ｍａｎｄｒｅｋａｒ ＳらｉＲＥＣＩＳＴ：ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ ｔｒｉａｌｓ ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ． Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ． ２０１７年３月；１８巻（３号）：ｅ１４３～５２頁に提供されている。
Figure 2022518235000060
Figure 2022518235000061
Figure 2022518235000062
Figure 2022518235000063
Figure 2022518235000064
Figure 2022518235000065
Figure 2022518235000066
疾患応答は、Ｌｕｇａｎｏ分類２０１４（Ｃｈｅｓｏｎ ＢＤら（２０１４年）Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３２巻（２７号）３０５９～３０６８頁）を使用して評価される。応答評価は、スクリーニング時および１２週毎（±７日）に行う。
Figure 2022518235000067
Figure 2022518235000068
Figure 2022518235000069
イメージングのタイミングは、暦日に従うべきであり、サイクル中の遅延のため調整されてはならない。ＰＤ以外の理由のために中止した参加者については、評価は、参加者がＰＤを文書化するまで継続するべきである。治験責任医師の意見において参加者が臨床的に進行している場合には、第１の評価は１２週より早く実施され得る。
Figure 2022518235000070
実施例２ － 抗ＰＤ１抵抗性腫瘍を獲得したマウスにおける抗腫瘍活性
抗ＰＤ１療法に対する後天的抵抗性のマウスモデル
抗ＰＤ－１抗体治療に対して後天的抵抗性を示すマウス腫瘍モデルを、本質的に以下のとおりに生成した。Ｄｕｎｎら（２００２年） Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３巻：９９１～９９８；およびＷａｎｇ Ｘら（２０１７年） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７７巻（４号）：８３９～８５０頁も参照されたい。ＭＣ３８腫瘍を有する雌のＣ５７ＢＬ６／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ、ＵＳＡ）を、抗ＰＤ－１抗体（クローンＲＭＰ１－１４；方法でＹａｍａｚａｋｉら（２００５年）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７５巻（３号）：１５８６～１５９２頁に記載されるような）を用いて治療し、増殖する腫瘍を切り出し、細胞を１０％ ＦＢＳを補給したＬ－グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を有するＲＰＭＩ－１６４０中でｅｘ ｖｉｖｏで培養した。６～８週齢の雌のＣ５７ＢＬ６／Ｊマウスを１２時間明周期で温度管理された環境に収容し、食物および滅菌水を自由に利用させた。すべてのマウスを実験の前に少なくとも３日間順化させた。測定される場合には、体重および腫瘍体積を実験のエンドポイントまで週に２回測定した。腫瘍体積は、以下の式を使用して垂直直径の積として表される：ａ２＊ｂ／２、ここでａ＜ｂ。
図２Ａ～３について、１００万個のＭＣ３８またはＭＣ３８抵抗性細胞を２００μｌのＤＰＢＳに懸濁し、各マウスの右側腹部に皮下注射した。
ｉｎ ｖｉｖｏ薬物投与
４用量のマウスサイトカインｍＲＮＡ混合物またはルシフェラーゼをコードする対照ｍＲＮＡ（Ｌｕｃ ｍＲＮＡ）を、腫瘍が平均６０ｍｍ３に到達した時点で出発して腫瘍あたり５０μｌ中の４０μｇで腫瘍内（ＩＴ）注射によって４日毎（Ｑ４Ｄ）に投与した。マウス体重および腫瘍体積を実験のエンドポイントまで週に２回測定した。腫瘍体積は、以下の式を使用して垂直直径の積として表された：ａ２＊ｂ／２、ここでａ＜ｂ。すべての手順は、施設内動物管理使用委員会によって承認され、実験動物の世話と使用のためのＮＩＨガイドに従って実施した。
ｍＲＮＡの調製
目的の遺伝子をコードする合成ＤＮＡ断片を、合計で１１０ヌクレオチドの５’－非翻訳領域（ＵＴＲ）および３’ＵＴＲ、３’ＵＴＲおよびポリ（Ａ）テールを含む一般的な出発ベクターにクローニングした。プラスミドＤＮＡの線形化を、ｃｌａｓｓＩＩＳ制限酵素を用いてポリ（ｄＡ：ｄＴ）の下流で実施して、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）を超えるさらなるヌクレオチドのない鋳型を生成した（例えば、Ｈｏｌｔｋａｍｐら（２００６年） Ｂｌｏｏｄ１２月１５日；１０８巻（１３号）：４００９～１７頁を参照されたい）。線形化されたプラスミドＤＮＡを、７．５ｍＭ ＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰおよびＮ１－メチル－シュードウリジントリホスフェートの存在下で、Ｇｒｕｄｚｉｅｎ－Ｎｏｇａｌｓｋａら（２０１３年） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏ． ９６９巻：５５～７２頁に記載されるようにＴ７ ＲＮＡポリメラーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、ウォルサム、米国マサチューセッツ州）を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ転写に付した。ＲＮＡを磁性粒子（Ｂｅｒｅｎｓｍｅｉｅｒ Ｓ．（２００６年） Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７３巻（３号）：４９５～５０４頁）を使用して精製し、その後、ワクシニアキャッピングシステム（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、イプスウィッチ、米国マサチューセッツ州）およびｍＲＮＡキャップの２’－Ｏ－メチル化を使用してＣａｐ１構造を導入した。セルロースベースのクロマトグラフィーを使用してＲＮＡをさらに精製して、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）不純物を除去した（Ｄａｙ ＰＲら（１９７７） Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ６７巻：１３９３頁；Ｍｏｒｒｉｓ ＴＪら（１９７９年）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ６９巻：８５４～８５８頁；およびＣａｓｔｉｌｌｏ Ａら（２０１１年） Ｖｉｒｏｌ Ｊ． ８巻：３８頁を参照されたい）。分光光度法およびキャピラリーゲル電気泳動システムを使用してＲＮＡ濃度および品質を評価した。ｄｓＲＮＡの存在は、Ｋａｒｉｋｏら（２０１１年） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． Ｎｏｖ；３９巻（２１号）：ｅ１４２によって記載されたようなｄｓＲＮＡ特異的Ｊ２ ｍＡｂ（Ｅｎｇｌｉｓｈ ＆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ、ＫＦｔ．ジロック（Ｓｚｉｒａｋ）、ハンガリー）を使用するノースウェスタンドットブロットアッセイで評価した。
結果
チェックポイント遮断に対する先天的および後天的抵抗性のいくつかの機序が定義されており、ＭＨＣ ＩおよびＩＦＮγシグナル伝達経路の突然変異を含む。例えば、Ｓｈａｒｍａら（２０１７年） Ｃｅｌｌ １６８巻（４号）：７０７～７２３頁；Ｓａｄｅ－Ｆｅｌｄｍａｎ Ｍら（２０１７年） Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ８巻（１号）：１１３６頁；Ｚａｒｅｔｓｋｙ ＪＭら（２０１６年）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３７５巻（９号）：８１９～２９頁；Ｇｅｔｔｉｎｇｅｒ Ｓ．ら（２０１７年）７巻（１２号）：１４２０～１４３５頁；Ｒｏｄｉｇ ＳＪら（２０１８年）Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ １０巻（４５０）を参照されたい。しかし、このような突然変異は、低頻度の患者において生じており、追加の機序はまだ定義されていない。チェックポイント遮断に対する後天的抵抗性をより良好に理解しようとして、本発明者らは、抗ＰＤ－１抗体治療に対してｉｎ ｖｉｖｏ抵抗性を示すマウス腫瘍モデルを生成した。ＭＣ３８腫瘍は、一連のｉｎ ｖｉｖｏ継代後にＰＤ－１遮断に対する抵抗性を獲得した（図２Ａ、Ｂ）。ＰＤ－１遮断に対する感受性の欠如は、ＰＤ－Ｌ１またはＢ２Ｍ発現の調節不全に起因するものではなかったが、これは、両方とも、親および抵抗性細胞において同様のレベルで発現されたからである（図２Ｃ）。同様に、ＩＦＮγシグナル伝達および抗原プロセシングおよび提示経路は、親および抵抗性細胞株の両方において機能的であった（図２Ｄ、２Ｅ）。偏りのない遺伝子発現分析を使用して、潜在的な抵抗性機序をさらに特性決定した。ＲＮＡシーケンシングによって、親のＭＣ３８腫瘍に対して免疫関連遺伝子の発現の著しい低減を示すＰＤ－１抵抗性腫瘍を用いるグローバルな遺伝子発現において大幅な相違が示された（図２Ｆ、２Ｇ）。実際、ＰＤ－１抵抗性腫瘍は、ＴおよびＮＫ細胞を含む複数の細胞種にわたって免疫浸潤の低減を示す（図２Ｈ、２Ｉ）。
モデルのさらなる検証を実施し、結果が図３～５に示されている。手短には、ＭＣ３８抵抗性細胞は、ＰＤ－Ｌ２を発現しないことが示され、発現は、ＩＦＮγ治療後に誘導されなかった（図３）。免疫組織化学的染色によって、抵抗性腫瘍における免疫細胞の頻度の低減が示された（図４Ａ）。パラフィン包埋されたＭＣ３８およびＭＣ３８抵抗性腫瘍を、ＣＤ４５＋細胞の浸潤（暗色）について免疫組織化学的染色によって分析した。結果は、２回の独立実験の代表である；群あたりｎ＝１０腫瘍。図４Ａは、代表的な画像を示す。図４Ｂは、定量化を示す。図５Ａ～５Ｂは、抵抗性腫瘍の免疫原性の低減を示す。手短には、５個体の、ＰＤ－１遮断に応じて完全退縮を示した親のＭＣ３８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ６マウスから、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）培養物を生成した。ＣＴＬをＭＣ３８および抵抗性腫瘍細胞と同時培養し、死滅させ（図５Ａ）、ＩＦＮγ放出（図５Ｂ）を測定した。
この検証されたモデルを使用して、サイトカインＲＮＡ混合物を、単独療法として腫瘍内に投与した。マウスサイトカインＲＮＡ混合物を用いる単独療法は、対照と比較してＭＣ３８およびＭＣ３８抵抗性腫瘍両方の成長を示した。図６Ａ～６Ｄを参照されたい。マウスサイトカインＲＮＡ混合物を用いる単独療法はまた、ＭＣ３８およびＭＣ３８抵抗性腫瘍を有するマウスの生存を大幅に延長した。図７を参照されたい。８個体のうち５個体（６２．５％）のＭＣ３８腫瘍を有するマウス（図６Ｂ）および８個体のうち３個体（３７．５％）のＭＣ３８抵抗性腫瘍を有するマウス（図６Ｄ）が完全腫瘍緩解を示し、実験の最後には腫瘍を有さなかった図７も参照されたい。
実施例３ － 抗ＰＤ１抵抗性腫瘍を有するマウスにおける抗腫瘍活性
抗ＰＤ１療法に対する抵抗性についてのマウスモデル
ＭＣ３８細胞、Ｄｒ．Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（米国国立衛生研究所、ベセスダ、米国メリーランド州）、からの寄贈されたものを、１０％ ＦＢＳを補給したＬ－グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を有するＲＰＭＩ－１６４０中で培養した。一般に、単一側腹部腫瘍モデルのためには、ＭＣ３８細胞をＤＰＢＳに懸濁し、２００μｌ中の１×１０６個細胞をＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの右側腹部中にＳＣ移植した。一般に、二重側腹部腫瘍ＭＣ３８モデルのためには、０日目に１×１０６個の細胞を右側に、および０．５×１０６個の細胞を左側にＳＣ移植した。
抗ＰＤ－１療法に対する抵抗性のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍モデルを生成するために、ｓｇＲＮＡ ５’－ＧＧＣＧＴＡＴＧＴＡＴＣＡＧＴＣＴＣＡＧ－３’（配列番号３１）を使用するＣＲＩＳＰＲを使用してＭＣ３８－Ｂ２Ｍ－ノックアウト細胞を生成した。ＭＣ３８細胞を、事前に複合化されたＣａｓ９およびｓｇＲＮＡ（ＧｅｎｅＡｒｔ（商標）Ｐｌａｔｉｎｕｍ（商標）Ｃａｓ９ヌクレアーゼＶ．２；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、製造業者の使用説明書に従って用いて一過性にトランスフェクトした（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＲＩＳＰＲＭＡＸ（商標）；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、米国マサチューセッツ州）。Ｂ２Ｍ－／－細胞を、ＭＡＣＳ技術（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、ベルギッシュ・グラートバッハ、ドイツ）を使用して濃縮し、次いで、単一細胞コロニーを単離し、フローサイトメトリーによってノックアウトを確認した。
ｉｎ ｖｉｖｏ薬物投与
サイトカインＲＮＡ混合物を腫瘍内注射によって投与した。イソフランを用いてマウスに麻酔し、特に明記しない限り、生理食塩水溶液中の５０μｌ中の８０μｇのｍＲＮＡを、合計４用量の間４日毎に右腫瘍中に腫瘍内に（ＩＴ）注射した。抗体は、別に記載されない限りＢｉｏＸＣｅｌｌ（ウエストレバノン、米国ニューハンプシャー州）から入手し、ＩＰ注射によって投与した。対照（ＭＯＰＣ－２１）および抗ＰＤ－１（ＲＭＰ１－１４）は、３日毎（Ｑ３Ｄ）に５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。
結果
チェックポイント抵抗性設定においてサイトカインｍＲＮＡ治療の治療効力を調べるために ＭＣ３８細胞においてＢ２Ｍを遺伝的に欠失させ（図８）、抗ＰＤ－１治療に対するｉｎ ｖｉｖｏ抵抗性につながった（図９Ｃ）が、一方で、親の腫瘍を有するマウスは、抗ＰＤ－１治療に対して依然として部分的に応答した（図９Ｂ）。サイトカインＲＮＡ混合物治療単独は、Ｂ２Ｍノックアウト腫瘍を有する動物において生存の延長を与えたが、サイトカインｍＲＮＡを抗ＰＤ－１チェックポイント遮断と組み合わせることによって生存のさらなる増大は観察されなかった（図９Ｃ）。
ヒト悪性腫瘍においてよく観察される腫瘍内不均一性をモデル化するために、片側でＭＣ３８－Ｂ２Ｍノックアウトを、対側性側腹部でＭＣ３８－ＷＴ腫瘍を用いて二重側腹部設定を確立した（図９Ｄ）。ＭＣ３８－Ｂ２Ｍノックアウト腫瘍をサイトカインＲＮＡ混合物とともに注射し、一方で、対側性ＭＣ３８－ＷＴ腫瘍は未処置のままとした。抗ＰＤ－１療法単独を用いる治療は、腫瘍を有するマウスの生存に対して効果がなかったが、サイトカインＲＮＡ混合物単独は生存を延長したものの、すべてのマウスは最終的には腫瘍量に屈した（図９Ｄ）。組合せ治療は、この設定で全生存をさらに増大し、サイトカインＲＮＡ混合物および抗ＰＤ－１抗体を用いる組合せ治療が、治療された病変がＭＨＣ Ｉ発現の欠如のためにＴ細胞媒介性死滅に対して抵抗性である場合であっても、アブスコパル効果を有することを示した（図９Ｄ）。
実施例４ － 追加のマウスモデルにおける抗腫瘍活性
材料および方法
１２の同質遺伝子的細胞株を、異なる培地（以下に示される）を用い、大気中５％ ＣＯ２の雰囲気中３７℃でｉｎ ｖｉｔｒｏで維持した。腫瘍細胞は、週に２回日常的に継代される。腫瘍接種のために指数増殖期の細胞を回収し、計数した。腫瘍発生のために、各マウスに０．１ｍＬのＰＢＳ中の腫瘍細胞を用いて皮下接種した。腫瘍細胞接種後、動物を罹病率および死亡率について毎日チェックした。日常的なモニタリングの間に、可動性、食物および水の消費、体重増加／減少（体重は、ランダム化後週に２回測定される）、眼／毛の艶消しおよび任意の他の異常のような挙動に対する腫瘍成長および治療の何らかの作用について動物をチェックした。死亡率および観察された臨床徴候を、個々の動物について詳細に記録した。ランダム化後、ノギスを使用して２つの寸法で腫瘍体積を週に２回測定し、体積を以下の式を使用してｍｍ３表した：Ｖ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２、ここで、Ｖは腫瘍体積であり、Ｌは腫瘍の長さであり（最長腫瘍寸法）、Ｗは腫瘍幅である（Ｌに対して垂直な最長腫瘍寸法）。投薬ならびに腫瘍および体重測定をＬａｍｉｎａｒフローキャビネット中で実施した。体重および腫瘍体積は、ＳｔｕｄｙＤｉｒｅｃｔｏｒＴＭソフトウェア（バージョン３．１．３９９．１９）を使用して測定した。
Figure 2022518235000071
Figure 2022518235000072
結果
腫瘍不均一性の影響をさらに理解するために、１２個体のマウスモデルをサイトカインｍＲＮＡ混合物または抗ＰＤ－１抗体とのコンビナトリアル治療に対する感受性について試験した。抗ＰＤ１抗体単独とは対照的に、ほとんどの腫瘍種は、単剤ｍＲＮＡ療法に対して感受性があった。さらに、すべてのモデルが、サイトカインｍＲＮＡおよび抗ＰＤ１を用いる組み合わされた治療の際に腫瘍成長減速を示し（図１０）、サイトカインをコードする局所ｍＲＮＡ療法の多用途性をさらに強調した。

Claims (96)

  1. 固形腫瘍がんを有する対象を治療するための方法であって、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量のＲＮＡを投与することを含み、対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、前記方法。
  2. 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、請求項１に記載の方法。
  3. 対象は、抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている、請求項１に記載の方法。
  4. 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗している、請求項１に記載の方法。
  5. 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に不耐容になっている、請求項１に記載の方法。
  6. 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に抵抗性になっている、請求項１に記載の方法。
  7. 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に不応性になっている、請求項１に記載の方法。
  8. 対象は、抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１抵抗性固形腫瘍がんを有する、請求項１に記載の方法。
  9. 対象は、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して後天的抵抗性を有する固形腫瘍がんを有する、請求項１に記載の方法。
  10. 対象は、抗ＰＤ－１療法および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して先天的抵抗性を有する固形腫瘍がんを有する、請求項１に記載の方法。
  11. 対象は、進行期、切除不能、または転移性固形腫瘍がんを有する、請求項１に記載の方法。
  12. 不応性または抵抗性がんは、指定の治療に応答しないがんである、請求項１に記載の方法。
  13. 不応性は、治療のまさに最初から生じる、請求項１に記載の方法。
  14. 不応性は、治療中に生じる、請求項１に記載の方法。
  15. がんは、治療が始まる前に抵抗性である、請求項１に記載の方法。
  16. 対象は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法および／または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に応答しないがんを有する、請求項１に記載の方法。
  17. 対象は、指定の治療に不応性または抵抗性になりつつあるがんを有する、請求項１に記載の方法。
  18. 指定の治療は、抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法としてである、請求項１７に記載の方法。
  19. 対象は、療法を最初に受けて以来、該療法に対する応答性が低下している、請求項１に記載の方法。
  20. 対象は、療法を受けたことがないが、典型的には該療法に応答しないタイプのがんを有する、請求項１に記載の方法。
  21. 抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）療法または抗プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法に失敗しているか、または不耐容になっているか、抵抗性になっているか、もしくは不応性になっている対象を選択することをさらに含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
  22. 対象はヒトである、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
  23. 対象は、転移性固形腫瘍を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 対象は、切除不能な固形腫瘍を有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 対象は、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）機能の部分的または完全な喪失を含むがん細胞を有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. がん細胞は、Ｂ２Ｍ機能の部分的喪失を有する、請求項２５に記載の方法。
  27. がん細胞は、Ｂ２Ｍ機能の完全な喪失を有する、請求項２５に記載の方法。
  28. Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失は、がん細胞を、同じ対象に由来する非がん細胞と比較することにより評価され、場合により、該非がん細胞は、該がん細胞が由来したのと同じ組織に由来する、請求項２５～２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. 対象は、Ｂ２Ｍ遺伝子に突然変異を含む細胞を含む、請求項２５～２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 突然変異は、置換、挿入、または欠失である、請求項２９に記載の方法。
  31. Ｂ２Ｍ遺伝子は、ヘテロ接合性の喪失（ＬＯＨ）を含む、請求項２５～３０のいずれか１つに記載の方法。
  32. 突然変異は、フレームシフト突然変異である、請求項２９または３０に記載の方法。
  33. フレームシフト突然変異は、Ｂ２Ｍのエクソン１に存在する、請求項３２に記載の方法。
  34. フレームシフト突然変異は、ｐ．Ｌｅｕ１３ｆｓおよび／またはｐ．Ｓｅｒ１４ｆｓを含む、請求項３２または請求項３３に記載の方法。
  35. 対象は、Ｂ２Ｍ機能の部分的または完全な喪失を有しない対象と比較して、低減されたレベルのＢ２Ｍタンパク質を有する、請求項２５～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 対象は、対照と比較して低減されたレベルの表面発現主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）を有し、場合により、該対照は、同じ対象に由来する非がん性サンプルである、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 固形腫瘍がんは、上皮腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、腎細胞腫瘍、胃腸管腫瘍、肝腫瘍、結腸直腸腫瘍、脈管構造を有する腫瘍、中皮腫腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、肉腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、黒色腫腫瘍、小細胞肺腫瘍、非小細胞肺がん、神経芽細胞腫腫瘍、精巣腫瘍、癌腫腫瘍、腺癌腫瘍、精上皮腫腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚扁平上皮癌（ＣＳＣＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、頭頸部がん、骨肉腫腫瘍、腎臓腫瘍、甲状腺腫瘍、未分化甲状腺がん（ＡＴＣ）、肝臓腫瘍、結腸腫瘍、または腫瘍内注射に適した他の固形腫瘍である、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 固形腫瘍がんは、リンパ腫である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  39. リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である、請求項３８に記載の方法。
  40. 固形腫瘍がんは、ホジキンリンパ腫である、請求項３８に記載の方法。
  41. 固形腫瘍がんは、黒色腫である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  42. 固形腫瘍がんは、黒色腫であり、該黒色腫は、ブドウ膜黒色腫または粘膜黒色腫である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  43. 固形腫瘍がんは、腫瘍内注射に適した表在性転移、皮下転移、および／またはリンパ節転移を含む黒色腫である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  44. 固形腫瘍がんは、ＨＮＳＣＣおよび／または粘膜部位のみを有する粘膜黒色腫である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  45. 固形腫瘍がんは、黒色腫である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  46. 固形腫瘍がんは、黒色腫ではない、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  47. ＲＮＡは、単独療法として投与される、請求項１～４６のいずれか１項に記載の方法。
  48. 対象は、１つよりも多くの固形腫瘍を有する、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 少なくとも１つの腫瘍は、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に抵抗性であるか、不応性であるか、または不耐容であり、少なくとも１つの腫瘍はそうではない、請求項４８に記載の方法。
  50. 抵抗性腫瘍および非抵抗性腫瘍の治療が両方とも成功する、請求項４９に記載の方法。
  51. 固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩのサブセット、ステージＩＶ、またはステージＩＶのサブセットである、請求項１～５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 固形腫瘍がんは、進行期であり切除不能である、請求項１～５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. 固形腫瘍がんは、その発生源から対象の別の部位に広がっている、請求項１～５２のいずれか１項に記載の方法。
  54. 固形腫瘍がんは、１つまたはそれ以上の皮膚病変または皮下病変を有し、場合により、該がんは皮膚がんではない、請求項１～５３のいずれか１項に記載の方法。
  55. 固形腫瘍がんは、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＩＶの黒色腫である、請求項１～４５および４７～５４のいずれか１項に記載の方法。
  56. 対象は、以前に抗ＰＤ－１療法でも抗ＰＤ－Ｌ１療法でも治療されたことがない、請求項１～５５のいずれか１項に記載の方法。
  57. 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法も抗ＰＤ－Ｌ１療法も常用的に使用されない固形腫瘍がんである、請求項１～５６のいずれか１項に記載の方法。
  58. 固形腫瘍がんは、黒色腫でもなく、非小細胞肺がんでもなく、腎臓がんでもなく、頭頸部がんでもなく、乳がんでもなく、ＣＳＣＣでもない、請求項５７に記載の方法。
  59. 対象は、他の治療選択肢を有してない、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. ｉ． 固形腫瘍がんは、黒色腫でもなく、ＣＳＣＣでもなく、ＨＮＳＣＣでもなく；
    ｉｉ． 抗ＰＤ－１療法も抗ＰＤ－Ｌ１療法も常用的に使用されず；
    ｉｉｉ． 他の好適な治療選択肢がない、請求項１～４０、４６～５４、および５６～５８のいずれか１項に記載の方法。
  61. 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法が常用的に使用される固形腫瘍がんであるが、該療法でまだ治療されていない、請求項１～６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 固形腫瘍がんは、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して抵抗性および／または不応性の、ステージＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、または切除不能なステージＩＶの黒色腫である、請求項１～６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 固形腫瘍がんは、表在性または皮下の病変および／または転移を含む、請求項１～６２のいずれか１項に記載の方法。
  64. 対象は、２つまたは３つの腫瘍病変を有する、請求項１～６３のいずれか１項に記載の方法。
  65. 対象は、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１基準に従って測定可能な疾患を有する、請求項１～６４のいずれか１項に記載の方法。
  66. 対象は、３カ月よりも長い平均余命を有する、請求項１～６５のいずれか１項に記載の方法。
  67. 対象は、少なくとも１８歳である、請求項１～６６のいずれか１項に記載の方法。
  68. 進行期黒色腫を治療するための方法であって、進行期黒色腫を有する対象に、ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡ、ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡ、およびＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡを含む有効量のＲＮＡを投与することを含み、
    ｉ． 対象は、少なくとも１８歳であり；
    ｉｉ． 対象は、以前の抗ＰＤ１療法または抗ＰＤ－Ｌ１療法に失敗しており；
    ｉｉｉ． 対象は、最低で２つの病変を有し；および
    ｉｖ． 黒色腫は、直接腫瘍内注射に適した腫瘍を含む、前記方法。
  69. ｉ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列、もしくは配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
    ｉｉ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列、もしくは配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／または
    ｉｉｉ． ＩＬ－１２ｓｃタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１２ｓｃのｐ４０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１～９８４）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性、およびＩＬ－１２ｓｃのｐ３０部分（配列番号１７もしくは１８のヌクレオチド１０２７～１６２３）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、該ｐ４０部分と該ｐ３５部分との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む、請求項１～６８のいずれか１項に記載の方法。
  70. ｉ． ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２６のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み；ならびに／または
    ｉｉ． ＩＬ－１５スシタンパク質は、配列番号２４のアミノ酸配列、もしくは配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含み；ならびに／または
    ｉｉｉ． ＩＬ－１５スシタンパク質をコードするＲＮＡは、ＩＬ－１５受容体アルファのスシドメイン（配列番号２６のヌクレオチド１～３２１）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性、および成熟ＩＬ－１５（配列番号２６のヌクレオチド３８２～７２９）と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、場合により、該ＩＬ－１５のスシドメインと該成熟ＩＬ－１５との間に、リンカーポリペプチドをコードするヌクレオチドをさらに含む、請求項１～６９のいずれか１項に記載の方法。
  71. ｉ． ＩＦＮαタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２２もしくは２３のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または
    ｉｉ． ＩＦＮαタンパク質は、配列番号１９のアミノ酸配列、もしくは配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。
  72. ｉ． ＧＭ－ＣＳＦタンパク質をコードするＲＮＡは、配列番号２９のヌクレオチド配列、もしくは配列番号２９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または
    ｉｉ． ＧＭ－ＣＳＦタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列、もしくは配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～７１のいずれか１項に記載の方法。
  73. 少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、請求項１～７２のいずれか１項に記載の方法。
  74. 少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、請求項１～７３のいずれか１項に記載の方法。
  75. 各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、請求項１～７４のいずれか１項に記載の方法。
  76. 各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む、請求項１～７５のいずれか１項に記載の方法。
  77. 修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される、請求項７３～７６のいずれか１項に記載の方法。
  78. 少なくとも１つのＲＮＡは、１つよりも多くのタイプの修飾ヌクレオシドを含み、該修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）、および５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される、請求項１～７７のいずれか１項に記載の方法。
  79. 修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）である、請求項７８に記載の方法。
  80. 少なくとも１つのＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む、請求項１～７９のいずれか１項に記載の方法。
  81. 各ＲＮＡは、５’キャップｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む、請求項１～８０のいずれか１項に記載の方法。
  82. 少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、請求項１～８１のいずれか１項に記載の方法。
  83. 各ＲＮＡは、配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、請求項１～８２のいずれか１項に記載の方法。
  84. 少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項１～８３のいずれか１項に記載の方法。
  85. 各ＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項１～８４のいずれか１項に記載の方法。
  86. 少なくとも１つのＲＮＡは、ポリＡテールを含む、請求項１～８５のいずれか１項に記載の方法。
  87. 各ＲＮＡは、ポリＡテールを含む、請求項１～８６のいずれか１項に記載の方法。
  88. ポリＡテールは、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む、請求項８６または８７に記載の方法。
  89. ポリＡテールは、配列番号３０に示されているポリＡテールを含むかまたはからなる、請求項８６～８８のいずれか１項に記載の方法。
  90. １つまたはそれ以上のＲＮＡは、
    ｉ． ｍ２ ７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２’－Ｏ）ＡｐＧまたは３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含む５’キャップ；
    ｉｉ． （ｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号４および６からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲ；
    ｉｉｉ． （ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％同一性を有するヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲ；ならびに
    ｉｖ． 少なくとも１００個のヌクレオチドを含むポリＡテール
    を含む、請求項１～８９のいずれか１項に記載の方法。
  91. ポリＡテールは、配列番号３０を含むかまたはからなる、請求項９０に記載の方法。
  92. 固形腫瘍がんの治療は、対象において、腫瘍のサイズを低減することまたはがん転移を予防することを含む、請求項１～９１のいずれか１項に記載の方法。
  93. ＲＮＡは、同時に投与される、請求項１～９２のいずれか１項に記載の方法。
  94. ＲＮＡは、注射により投与される、請求項１～９３のいずれか１項に記載の方法。
  95. ＲＮＡは、注射前に液体溶液中で一緒に混合される、請求項９３または９４に記載の方法。
  96. ＲＮＡは、ネオアジュバント設定で投与される、請求項１～９５のいずれか１項に記載の方法。
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