CN117043193A

CN117043193A - 通过施用新辅助pd-1抑制剂治疗癌症的方法

Info

Publication number: CN117043193A
Application number: CN202280019941.2A
Authority: CN
Inventors: 伊丽莎白·米勒; 伊斯雷尔·勒维; 加文·瑟斯顿; 米丽娅姆·梅拉德; 托马斯·马伦; 迈伦·施瓦茨
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2021-02-11
Filing date: 2022-02-10
Publication date: 2023-11-10

Abstract

本公开内容提供了用于治疗肿瘤、降低肿瘤的严重程度、抑制肿瘤生长或诱导肿瘤坏死的方法，其中所述方法包括以下：选择有此需要的患有癌症(例如，肝癌、肺癌、或头颈癌)的患者并向所述患者施用治疗有效量的程序性死亡1(PD‑1)抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)作为新辅助治疗，随后进行手术切除并且任选地施用程序性死亡1(PD‑1)抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)作为手术后辅助治疗。在某些实施方案中，所述肝癌是肝细胞癌(HCC)，所述肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)，或者所述头颈癌是头颈鳞状细胞癌(HNSCC)。

Description

通过施用新辅助PD-1抑制剂治疗癌症的方法

技术领域

本公开内容涉及治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括选择有此需要的患有癌症的患者并向所述患者施用治疗有效量的程序性死亡1(programmed death 1，PD-1)抑制剂(例如，西米普利单抗(cemiplimab)或其生物等同物)作为新辅助治疗，随后进行手术切除。

背景技术

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)、肝癌和头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC)是全世界癌症死亡的一些主要原因。

NSCLC在男性和女性中导致最多的癌症死亡数，并且大多数患者没有从PD-1/PD-L1阻断与化学治疗的组合中获得显著性临床益处。直至最近，约四分之三的肺癌被诊断为4期疾病。计算机断层扫描(computed tomography，CT)筛查提高了检测到的早期阶段、潜在可治愈肿瘤的数目。然而，尽管越来越多地在早期阶段鉴定出NSCLC，但可动手术的1至3期肺癌——其在大多数患者中复发——在治疗方法中几乎未看到显著改善。鉴于高复发率且缺乏有效治疗，因此需要较好的方法。

HNSCC是全世界第六大常见的恶性病，并且自20世纪80年代以来，HNSCC的比率稳步提高，部分是由于口咽中人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染的升高，因此目前，发达国家中出现的HNSCC病例中的约一半归因于HPV感染，而后者在发展中国家中仅占病例的10％至20％(Torre et al.,A Cancer Journal for Clinicians,2015；65(2):87-108；Chaturvedi et al.,Journal of Clinical Oncology:Official Journal of theAmerican Society of Clinical Oncology,2008；26(4):612-619；de Martel et al.,TheLancet Oncology,2012；13(6):607-615)。当与HPV阴性肿瘤相比，不同阶段的患有HPV相关疾病的患者具有改善的存活结局，这通常与烟草和酒精暴露相关(Ang，2010)。早期阶段疾病通常用手术和/或放射进行治疗，并且这些患者具有良好的预后，其中5年总存活(overall survival，OS)为70％至90％，但除局部治疗(手术和/或放射)之外通常接受化学治疗的患有局部晚期疾病的患者具有不佳的30％5年OS，而在患有HPV阴性疾病的患者中更差(Blanchard et al.,Radiother Oncol,2011；100(1):33-40)。因此，需要用于NSCLC的改善的治疗。

肝癌，特别是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，占全世界男性中第二大癌症死亡数(Ferlay et al.,Int J Cancer,2015；136(5):E359-E386)，并且在美国是癌症死亡率的上升最快的原因，并且每年新的病例超过30,000(Siegel et al.,A CancerJournal for Clinicians,2013；63(1):11-30；Torre et al.,A Cancer Journal forClinicians,2015；65(2):87-108)。HCC占原发性肝癌病例的75％至85％，其是2020年全世界癌症死亡的第三主要原因。(Sung et al.,CA Cancer J Clin,2021)。推荐的用于非常早期/早期阶段HCC的一线治疗是手术(其包括肝切除和移植，或在具有保留的肝功能的患者中进行的射频消融(radiofrequency ablation，RFA))，并且随着手术技术和围手术期护理中的进步，结果有所改善。然而，存在术后复发和癌症相关死亡的高发生率。(EuropeanAssociation for the Study of the Liver.J Hepatol.2018；69:182-236；Poon et al.,Ann Surg.2000；232:10-24；Chan et al.,Liver Transpl.2013；19:411-419)。手术切除的时候通常观察到阴性切缘；然而，认为HCC复发是由于在切除之后持续存在的剩余微转移，这突出了新辅助治疗在改善HCC结局中的潜在益处。在新辅助环境下尚无标准的推荐治疗(European Association for the Study of the Liver.J Hepatol.2018；69:182-236；Akateh C et al.World J Gastroenterol 2019；25:3704-3721)。并且没有新辅助或辅助治疗表明在患有HCC的患者中降低复发的风险或经证明的存活益处。虽然免疫治疗组合已改变患有晚期HCC的患者的预后，但大多数患者仍死于该疾病。

HCC通常出现在晚期，此时手术不是选择。因此，HCC通常预后很差，因为只有10％至20％的肝细胞癌可通过手术完全去除。如果癌症不能完全去除，则该疾病通常在三至六个月内致命。另外，PD-1和PD-L1在HCC中通常过表达，并且肿瘤细胞的高PD-L1表达与显著较差的预后相关。

对患有HCC且具有保留的肝功能的患者选择的治疗是手术切除，其中肝切除是早期HCC的公认治疗。然而，手术后肿瘤肝内复发是常见的，并且在约50％的病例中观察到早期(2年内)复发(Franssen et al.,Ann Surg,2014；260(4):650-656；Tabrizian et al.,Ann Surg.,2015；261(5):947-955)。实际上，尽管进行了手术但大多数肿瘤复发，并且围手术期干预未表明存活优势。由于在手术切除的时候通常观察到阴性切缘，因此认为发生HCC复发是由于在切除之后持续存在的微转移。化学治疗通常在HCC的管理中没有作用。靶向药剂(例如索拉非尼(sorafenib))在患有不可切除疾病的患者中显示出一些存活益处，但辅助索拉非尼治疗的大型国际试验未显示出益处(Bruix et al.,The Lancet Oncology,2015；16(13):1344-1354)。因此，仍然显著需要用于治疗肝癌(包括HCC)的安全且有效的治疗。

发明内容

在一个方面中，所公开的技术涉及治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括：(a)选择患有肝癌的患者；(b)向所述患者施用治疗有效量的新辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述新辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(heavy chain variable region，HCVR)中含有的三个重链互补决定区(complementarity determining region，CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(light chain variable region，LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物；以及(c)在步骤(b)之后，手术切除所述肝癌肿瘤。在一些实施方案中，所述肝癌是可切除的。在一些实施方案中，所述肝癌选自肝细胞癌(HCC)、纤维板层癌、胆管癌、血管肉瘤和肝母细胞瘤。在一些实施方案中，所述肝癌是HCC。在一些实施方案中，所述肝癌是复发性的。在一些实施方案中，所述肝癌是转移性的。在一些实施方案中，所述患者患有肝癌，手术的目的是治愈所述肝癌。在一些实施方案中，所述患者患有已用抗病毒治疗进行过治疗和控制的慢性病毒感染，并且其中所述慢性病毒感染包括HIV、HBV、HCV、或其组合。在一些实施方案中，所述患者患有鳞状或非鳞状肝癌。在一些实施方案中，所述患者在≥1％的肝癌细胞中具有PD-L1表达。在一些实施方案中，在步骤(b)之后多于28天进行手术切除。

在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCVR。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的LCVR。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列并且所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体是西米普利单抗。

在一些实施方案中，所施用的新辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR的抗PD-1抗体。在一些实施方案中，所施用的新辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。在一些实施方案中，所施用的新辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR和与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。

在另一个方面中，所公开的方法还包括：(d)在步骤(c)之后，向所述患者施用治疗有效量的辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物。在一些实施方案中，所施用的辅助抗PD-1抗体包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。

在一些实施方案中，所施用的辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCVR。在一些实施方案中，所施用的辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的LCVR。在一些实施方案中，所施用的辅助抗PD-1抗体包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。

在一些实施方案中，所施用的辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，所施用的辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所施用的辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列并且所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所施用的辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR的抗PD-1抗体。在一些实施方案中，所施用的辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。在一些实施方案中，所施用的辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR和与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。

在另一个方面中，所公开的方法在所述患者中导致所切除肿瘤的坏死、促进肿瘤消退、降低肿瘤细胞负荷、降低肿瘤负担和/或阻止肿瘤复发。在一些实施方案中，所述方法导致所切除肿瘤的多于50％坏死。在一些实施方案中，所述方法导致所切除肿瘤的多于70％坏死。

在另一个方面中，所公开的方法还包括向所述患者施用选自以下中的一种或更多种的另外的治疗剂或治疗：抗病毒治疗、光动力学治疗、程序性死亡配体1(PD-L1)抑制剂、淋巴细胞活化基因3(lymphocyte activation gene 3，LAG3)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4，CTLA-4)抑制剂、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factorreceptor，GITR)激动剂、含T细胞免疫球蛋白和黏蛋白-3(T-cell immunoglobulin andmucin containing-3，TIM3)的抑制剂、B和T淋巴细胞弱化子(B-and T-lymphocyteattenuator，BTLA)抑制剂、具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(T-cellimmunoreceptor with Ig and ITIM domain，TIGIT)抑制剂、CD38抑制剂、CD47抑制剂、另外的T细胞共抑制剂或配体的拮抗剂、CD20抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂、CD28激活剂、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)拮抗剂、血管生成素2(angiopoietin-2，Ang2)抑制剂、转化生长因子β(transforming growth factorbeta，TGFβ)抑制剂、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)抑制剂、共刺激受体的激动剂、针对肿瘤特异性抗原的抗体、疫苗、提高抗原呈递的佐剂、溶瘤病毒、细胞毒素、化学治疗剂、基于铂的化学治疗、酪氨酸激酶抑制剂、IL-6R抑制剂、IL-4R抑制剂、IL-10抑制剂、细胞因子、抗体药物缀合物(antibody drug conjugate，ADC)、嵌合抗原受体T细胞、抗炎药物和膳食补充剂。

在一些实施方案中，所述新辅助PD-1抑制剂作为一个或更多个剂量施用，其中每个剂量每两周、每三周、每四周、每五周或每六周施用。在一些实施方案中，所述新辅助PD-1抑制剂作为两个或更多个剂量施用，其中每个剂量每三周施用。在一些实施方案中，所述新辅助PD-1抑制剂以5mg至1000mg的剂量施用。在一些实施方案中，新辅助PD-1抑制剂以200mg、250mg、350mg、400mg、500mg、600mg、750mg、800mg或1000mg的剂量施用。在一些实施方案中，所述新辅助PD-1抑制剂以1mg/kg至20mg/kg患者体重的剂量施用。在一些实施方案中，所述新辅助PD-1抑制剂以1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg患者体重的剂量施用。在一些实施方案中，所述新辅助PD-1抑制剂静脉内或皮下施用。

在一些实施方案中，所述辅助PD-1抑制剂作为一个或更多个剂量施用，其中每个剂量每两周、每三周、每四周、每五周或每六周施用。在一些实施方案中，所述辅助PD-1抑制剂的每个剂量每三周施用。在一些实施方案中，所述辅助PD-1抑制剂以5mg至1000mg的剂量施用。在一些实施方案中，所述辅助PD-1抑制剂以200mg、250mg、350mg、400mg、500mg、600mg、750mg、800mg或1000mg的剂量施用。在一些实施方案中，所述辅助PD-1抑制剂以1mg/kg至20mg/kg患者体重的剂量施用。在一些实施方案中，所述辅助PD-1抑制剂以1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg患者体重的剂量施用。在一些实施方案中，所述辅助PD-1抑制剂静脉内或皮下施用。

在另一个方面中，所公开的技术涉及程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其用于治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括：(a)选择患有肝癌的患者；(b)向所述患者施用治疗有效量的新辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述新辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物；以及(c)在步骤(b)之后，手术切除所述肝癌肿瘤。

在另一个方面中，所公开的技术涉及药盒，其包含程序性死亡1(PD-1)抑制剂与使用治疗有效量的所述PD-1抑制剂用于在患有肝癌的患者中治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的书面说明的组合。

在另一个方面中，所公开的技术涉及治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括：(a)选择患有肺癌的患者；(b)向所述患者施用治疗有效量的新辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述新辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物；以及(c)在步骤(b)之后，手术切除所述肺癌肿瘤。在一些实施方案中，所述肺癌是非小细胞肺癌。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在一些实施方案中，所述方法还包括：(d)在步骤(c)之后，向所述患者施用治疗有效量的辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物。

在另一个方面中，所公开的技术涉及治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括：(a)选择患有头颈癌的患者；(b)向所述患者施用治疗有效量的新辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述新辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ IDNO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物；以及(c)在步骤(b)之后，手术切除所述头颈癌肿瘤。在一些实施方案中，所述头颈癌是头颈鳞状细胞癌。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。在一些实施方案中，所施用的新辅助抗PD-1抗体包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在一些实施方案中，所述方法还包括：(d)在步骤(c)之后，向所述患者施用治疗有效量的辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物。

附图说明

图1是示出在实施例2中所述的研究中所招募患者中的肿瘤坏死和肿瘤尺寸相对于基线的变化的图。

图2示出了与实施例2中所述的研究相关的在响应者和非响应者中的代表性MRI图像以及相应的苏木精和伊红图像。

图3是示出了与实施例2中所述的研究相关的通过肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte，TIL)变化的病理学坏死变化的图。

图4示出了与实施例2中所述的研究相关的组织分析和多重免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)。

图5A是这样的图：示出了实施例3中所述的研究中所招募患者的如通过标准成像评估的响应(肿瘤尺寸相对于基线的变化)、以及如通过病理检查和成像评估的肿瘤坏死。*表示对MRI禁忌的患者，因此无法进行基于MRI的坏死分析；病理学坏死为0％。

图5B是示出了实施例3中所述的研究中所招募患者的通过MRI限定的估计的坏死与手术时病理学评估的坏死强烈相关的图。

图6提供了这样的图：示出了实施例3中所述的研究中所招募患者的手术病理学、RECIST以及坏死成像的比较响应评估。

图7A示出了与实施例3中所述的研究相关的以下：左图中是病理学家对TLS样丰度进行手动评分的结果；TLS样的特征为肿瘤病变内淋巴细胞的高密度聚集体；并且病理学家的解释揭示了这些聚集体在每个响应者的肿瘤组织中均被识别；以及右图中是基于病理学家的H&E分析的在具有<50％坏死或≥50％坏死的肿瘤病变内的TIL浸润；相对于具有低肿瘤坏死的患者中的21％，具有≥50％坏死的患者中的100％表现出TIL浸润的最高评分；并且具有低肿瘤坏死的患者中的29％不具有TIL浸润。

图7B是示出了八名患者(四名具有<50％肿瘤坏死以及四名具有≥50％肿瘤坏死)的肿瘤病变和邻近组织中的CD45+细胞中CD8+T细胞的百分比的直方图。细胞通过质谱细胞术(CyTOF)进行分析。与实施例3中所述的研究相关，相对于具有低肿瘤坏死的患者，CD8+T细胞在具有高水平坏死的患者的肿瘤中显著富集，而邻近组织中无差异地聚集(populated)。

图7C是这样的图：示出了与实施例3中所述的研究相关，具有≥50％坏死的患者中在基线时和在切除时每个免疫亚群的平均密度。对来自基线或切除肿瘤FFPE样品的切片进行免疫染色，如(D)中所示。免疫亚群限定为T细胞(CD3+、CD8+T细胞(CD3+、CD8+)、CD4conv(CD3+、CD8-、FOXP3-)、Treg(CD3+、FOXP3+)、髓细胞(CD68+)和B细胞(CD20+)。误差棒指示平均值的一个标准误差。

图7D示出了与实施例3中所述的研究相关，11名患者(7名患者在切除时几乎没有坏死至没有坏死[所有均<50％坏死]以及4名患者具有≥50％坏死)的活检核心和肿瘤切除物的大量RNA测序(Bulk RNA sequencing，BulkSeq)。在大量患者样品中对与CD8+T细胞和Treg相关的公开可用的基因特征以及耗竭、细胞毒性和初始程序进行了定量。通过Wilcox符号秩检验限定了统计学显著性。对p值进行了Bonferroni校正以解决多重假设检验。

具体实施方式

应当理解，本公开内容不限于所述的特定方法和实验条件，因为这样的方法和条件可以变化。还应理解，本文中使用的术语仅出于描述特定实施方案，而非旨在限制，并且本公开内容的范围将仅由所附权利要求书限制。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管类似于或等同于本文描述的方法和材料的任何方法和材料都可用于本公开内容的实践或测试中，但是现在描述优选的方法和材料。除非另有说明，否则本文提及的所有出版物均在此通过引用整体并入。

治疗癌症或抑制癌症生长的方法

本公开内容包括用于治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括选择患有肝癌、肺癌或头颈癌的患者，并向有此需要的患者施用PD-1抑制剂(例如西米普利单抗或其生物等同物)，其中PD-1抑制剂在用手术(例如，肝切除)治疗患者之前作为新辅助治疗施用。在某些实施方案中，所公开的方法还包括在完成用于治疗肝癌、肺癌、或头颈癌的手术之后向对象施用PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)作为辅助治疗。在某些实施方案中，所公开的方法包括以下：在用于治疗肝癌、肺癌或头颈癌的所计划手术之前向有此需要的对象施用PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)作为新辅助治疗，并随后向患者施用PD-1抑制剂作为手术后辅助治疗。

如本文所使用的，“肝癌”是指肝的癌症，例如肝细胞癌、纤维板层癌、胆管癌、血管肉瘤和肝母细胞瘤。在一些实施方案中，肝癌是肝细胞癌(HCC)。在一些实施方案中，肝癌是可切除的和复发性的。在一些实施方案中，肝癌是转移性的。在一些实施方案中，患者是用于肝癌肿瘤切除的手术候选者。在一些实施方案中，患者患有肝癌，手术的目的是治愈所述肝癌。

如本文所使用的，“肺癌”是指肺的癌症，例如非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，晚期NSCLC，IIIB期、IIIC期或IV期鳞状或非鳞状NSCLC，腺癌，鳞状细胞癌或大细胞癌)、腺鳞癌和肉瘤样癌。在一些实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌。在一些实施方案中，肺癌是鳞状非小细胞肺癌。在一些实施方案中，肺癌是非鳞状非小细胞肺癌。在一些实施方案中，肺癌是局部晚期、复发性或转移性肺癌。

如本文所使用的，术语“头颈癌”是指口、鼻窦、鼻或喉的癌症——例如头颈鳞状细胞癌(HNSCC)。

如本文所使用的，术语“治疗”及其变型等意指减轻或降低至少一种症状或适应证的严重程度，以暂时或永久性消除症状的起因，以延迟或抑制肿瘤生长，以降低肿瘤细胞负荷或肿瘤负担，以促进肿瘤消退，以引起肿瘤收缩、坏死和/或消失，以阻止肿瘤复发，以阻止或抑制转移，以抑制转移性肿瘤生长，以消除对手术的需要，和/或以提高对象存活的持续时间。在许多实施方案中，术语“肿瘤”、“病变”、“肿瘤病变”、“癌症”和“恶性病”可互换使用并且指一种或更多种癌生长物。

如本文所使用的，术语“复发”是指患者中肝癌、肺癌或头颈癌的频繁或重复诊断，或者个体肿瘤的频繁或重复出现，例如原发性肿瘤和/或可代表先前肿瘤的复发的新的肿瘤。在某些实施方案中，PD-1抑制剂的施用抑制了患者中肝癌、肺癌或头颈癌肿瘤的复发。

如本文所使用的，表述“有此需要的对象”意指表现出肝癌、肺癌或头颈癌的一种或更多种症状或适应证的人或非人哺乳动物，和/或已被诊断患有肝癌、肺癌或头颈癌的人或非人哺乳动物，以及需要肝癌、肺癌或头颈癌的治疗的人或非人哺乳动物。在许多实施方案中，术语“对象”和“患者”可互换使用。该表述包括患有原发性肿瘤、已建立的肿瘤或复发性肿瘤(晚期恶性病)的对象。在一些具体实施方案中，该表述包括患有复发性但非转移性肝癌、肺癌或头颈癌并且/或者需要针对复发性但非转移性肝癌、肺癌或头颈癌的治疗的人对象。在某些实施方案中，该表述包括患有实体瘤的患者，所述实体瘤对先前治疗(例如，手术或用除西米普利单抗或其生物等同物之外的抗癌剂进行的治疗)具有抗性或难治性或者不被先前治疗充分控制。在某些实施方案中，该表述包括患有肝癌、肺癌或头颈癌的作为治愈性手术的候选者的对象。

在某些实施方案中，本公开内容的方法用于治疗患有实体瘤的对象。如本文所使用的，术语“实体瘤”是指通常不含囊肿或液体区域的异常组织块。实体瘤可以是良性的(不是癌症)或恶性的(癌症)。出于本公开内容的目的，术语“实体瘤”意指恶性实体瘤。该术语包括以形成它们的细胞类型命名的不同类型的实体瘤，即肉瘤、癌和母细胞瘤。

在某些实施方案中，所公开的方法包括施用与另外的治疗剂或治疗组合的治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)。可施用另外的治疗剂或治疗以用于提高抗肿瘤效力、降低一种或更多种治疗的毒性作用和/或降低一种或更多种治疗的剂量。在多个实施方案中，另外的治疗剂或治疗可包括以下中的一种或更多种：抗病毒治疗(例如，西多福韦(cidofovir))、光动力学治疗、程序性死亡配体1(PD-L1)抑制剂(例如，如US2015/0203580中公开的抗PD-L1抗体、或阿特珠单抗(atezolizumab))、淋巴细胞活化基因3(LAG3)抑制剂(例如，抗LAG3抗体)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抑制剂(例如，伊匹单抗(ipilimumab))、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)激动剂(例如，抗GITR抗体)、含T细胞免疫球蛋白和黏蛋白-3(TIM3)的抑制剂、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)抑制剂、具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)抑制剂、CD38抑制剂、CD47抑制剂、另外的T细胞共抑制剂或配体的拮抗剂(例如，针对CD-28、2B4、LY108、LAIR1、ICOS、CD160或VISTA的抗体)、CD20抑制剂(例如，抗CD20抗体或双特异性CD3/CD20抗体)、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂、CD28激活剂、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂(例如，“VEGF-Trap”，例如阿柏西普(aflibercept)或如US 7087411中所示的另一些VEGF抑制性融合蛋白，或者抗VEGF抗体或其抗原结合片段(例如，贝伐单抗(bevacizumab)或兰尼单抗(ranibizumab))或VEGF受体的小分子激酶抑制剂(例如，舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、帕唑帕尼(pazopanib)或雷莫芦单抗(ramucirumab)))、血管生成素2(Ang2)抑制剂、转化生长因子β(TGFβ)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂(例如埃罗替尼(erlotinib)、西妥昔单抗(cetuximab))、共刺激受体的激动剂(例如，CD28、4-1BB、或OX40的激动剂)、针对肿瘤特异性抗原(例如，CA9、CA125、黑素瘤相关抗原3(MAGE3)、癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA)、波形蛋白、肿瘤-M2-PK、前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen，PSA)、黏蛋白-1、MART-1和CA19-9)的抗体、疫苗(例如，卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin)或癌症疫苗)、提高抗原呈递的佐剂(例如，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)、溶瘤病毒、细胞毒素、化学治疗剂(例如，培美曲塞(pemetrexed)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、顺铂、卡铂、吉西他滨(gemcitabine)、甲氨蝶呤、米托蒽醌(mitoxantrone)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇、拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、长春瑞滨(vinorelbine)和长春新碱)、基于铂的化学治疗(例如，铂双重化学治疗)、酪氨酸激酶抑制剂(例如，乐伐替尼(lenvatinib)、瑞戈非尼(regorafenib)和卡博替尼(cabozantinib))、IL-6R抑制剂、IL-4R抑制剂、IL-10抑制剂、细胞因子(例如IL-2、IL-7、IL-12、IL-21和IL-15)、抗体药物缀合物(ADC)(例如，抗CD19-DM4ADC和抗DS6-DM4 ADC)、嵌合抗原受体T细胞(例如，CD19靶向T细胞)、抗炎药物(例如皮质类固醇、非甾体抗炎药物(non-steroidal anti-inflammatory drug，NSAID))和膳食补充剂(例如抗氧化剂)。

如本文所使用的，术语“抗病毒治疗”是指用于在宿主对象中治疗、预防或改善病毒感染的任何药剂、药物或治疗，包括但不限于：齐多夫定(zidovudine)、拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韦(abacavir)、利巴韦林(ribavirin)、洛匹那韦(lopinavir)、依法韦仑(efavirenz)、可比司他(cobicistat)、替诺福韦(tenofovir)、利匹韦林(rilpivirine)、镇痛剂、皮质类固醇、及其组合。在本公开内容的上下文中，慢性病毒感染包括由病毒引起的那些，所述病毒包括但不限于：人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus，HIV)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)和丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)。

在某些实施方案中，向患有肝癌的对象施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)导致在待治疗的对象中提高了对肿瘤生长的抑制——例如，更大的肿瘤消退。在某些实施方案中，向患有肝癌的对象施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)导致所切除肿瘤的坏死，例如，多于50％坏死、多于60％坏死、多于70％坏死或多于80％坏死。在某些实施方案中，向患有肝癌的对象施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)导致提高了肿瘤消退、肿瘤收缩和/或消失。

在某些实施方案中，施用PD-1抑制剂导致以下中的一种或更多种：(i)延迟手术，例如，在最后一个剂量的新辅助PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的周期结束之后多于28天进行手术；(ii)与未经治疗的对象或仅用手术切除治疗的对象相比，在经治疗的对象中延迟了肿瘤生长和发生，例如，肿瘤生长可延迟约3天、多于3天、约7天、多于7天、多于15天、多于1个月、多于3个月、多于6个月、多于1年、多于2年或多于3年；(iii)与未经治疗的对象或仅用手术切除治疗的对象相比，从手术之日起直至肿瘤复发或死亡，提高了无病存活(disease-free survival，DFS)；以及(iv)与未经治疗的对象或仅用手术切除治疗的对象相比，改善了总响应率、完全响应或部分响应。在某些实施方案中，与未经治疗的对象或仅用手术切除治疗的对象相比，向患有肝癌的对象施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)阻止了肿瘤复发并且/或者提高了对象的存活持续时间，例如，将存活持续时间提高多于15天、多于1个月、多于3个月、多于6个月、多于12个月、多于18个月、多于24个月、多于36个月或多于48个月。在某些实施方案中，与未经治疗的对象或仅用手术切除治疗的对象相比，向患有肺癌或头颈癌的对象施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)阻止了肿瘤复发并且/或者提高了对象的存活持续时间，例如，将存活持续时间提高多于15天、多于1个月、多于3个月、多于6个月、多于12个月、多于18个月、多于24个月、多于36个月或多于48个月。

在某些实施方案中，与仅用手术切除治疗的对象相比，向患有肝癌的对象施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)导致对象的总存活(OS)或无进展存活(progression-free survival，PFS)提高。在某些实施方案中，与仅用手术切除治疗的对象相比，PFS提高至少一个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少1年、至少2年或至少3年。在某些实施方案中，与仅用手术切除治疗的对象相比，OS提高至少一个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少1年、至少2年或至少3年。

在某些实施方案中，与仅用手术切除治疗的对象相比，向患有肺癌或头颈癌的对象施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)导致对象的总存活(OS)或无进展存活(PFS)提高。在某些实施方案中，与仅用手术切除治疗的对象相比，PFS提高至少一个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少1年、至少2年、或至少3年。在某些实施方案中，与仅用手术切除治疗的对象相比，OS提高至少一个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少1年、至少2年、或至少3年。

PD-1抑制剂

本文中公开的方法包括施用治疗有效量的PD-1抑制剂，其中PD-1抑制剂是西米普利单抗(也称为REGN2810；)或其生物等同物。如本文所使用的，术语“生物等同物”是指这样的为药物等同物或药物替代物的抗PD-1抗体或PD-1结合蛋白或其片段：当在类似的实验条件下以相同的摩尔剂量(单剂量或多剂量)施用时，其吸收率和/或吸收程度不显示出与西米普利单抗的吸收率和/或吸收程度的显著差异。在本公开内容的上下文中，术语“生物等同物”包括与PD-1结合并且在安全性、纯度和/或效力方面与西米普利单抗没有临床意义上的差异的抗原结合蛋白。

如本文所使用的术语“抗体”旨在是指由四条多肽链(通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链)构成的免疫球蛋白分子(即，“完整抗体分子”)以及其多聚体(例如IgM)或其抗原结合片段。每条重链由重链可变区(“HCVR”或“VH”)和重链恒定区(由结构域CH1、CH2和CH3构成)构成。每条轻链由轻链可变区(“LCVR”或“VL”)和轻链恒定区(CL)构成。VH和VL区可进一步细分为高变区(称为互补决定区(CDR))，夹杂着更保守的区域(称为框架区(framework region，FR))。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在某些实施方案中，抗体(或其抗原结合片段)的FR可以与人种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。氨基酸共有序列可基于对两个或更多个CDR的并行分析来限定。如本文所使用的术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。

如本文所使用的术语抗体的“抗原结合片段”、抗体的“抗原结合部分”等包括特异性结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、酶法可获得的、合成的或经遗传改造的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可以使用涉及操纵和表达编码抗体可变和任选地恒定结构域的DNA的任何合适的标准技术(例如蛋白水解消化或重组基因工程技术)而来源于例如完整抗体分子。这样的DNA是已知的和/或可容易地从例如商业来源、DNA文库(包括，例如，噬菌体-抗体文库)获得，或可以被合成。可对DNA测序并通过化学方法或通过使用分子生物学技术进行操作，例如，以将一个或更多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型，或者以引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或缺失氨基酸等。

抗原结合片段的一些非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab’)2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(single-chain Fv，scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如，分离的互补决定区(CDR)，例如CDR3肽)，或受约束的FR3-CDR3-FR4肽。其他经改造分子例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小型模块化免疫药物(small modularimmunopharmaceutical，SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域也涵盖在如本文所使用的表述“抗原结合片段”中。

抗体的抗原结合片段通常包含至少一个可变结构域。可变结构域可具有任何大小或氨基酸组成，并且通常包含至少一个CDR，其与一个或更多个框架序列相邻或在框架内。在具有与V_L结构域缔合的V_H结构域的抗原结合片段中，V_H和V_L结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体，并包含V_H-V_H、V_H-V_L或V_L-V_L二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可包含单体V_H或V_L结构域。

在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可包含与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可存在于本公开内容的抗体的抗原结合片段内的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性配置包括：

(i)V_H-C_H1；(ii)V_H-C_H2；(iii)V_H-C_H3；(iv)V_H-C_H1-C_H2；(v)V_H-C_H1-C_H2-C_H3；(vi)V_H-C_H2-C_H3；(vii)VH-C_L；(vii)V_L-C_H1；(ix)V_L-C_H2；(x)V_L-C_H3；(xi)V_L-C_H1-C_H2；(xii)V_L-C_H1-C_H2-C_H3；(xiii)V_L-C_H2-C_H3和(xiv)V_L-C_L。

在可变结构域和恒定结构域的任何构型(包括以上所列的任何示例性构型)中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接，或者可通过全部或部分铰链或接头区连接。铰链区可由至少2个(例如，5、10、15、20、40、60或更多个)氨基酸组成，所述氨基酸引起在单个多肽分子中相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本公开内容的抗体的抗原结合片段可包含彼此和/或与一个或更多个单体V_H或V_L结构域(例如，通过二硫键)非共价缔合的以上所列可变结构域和恒定结构域构型中任一种的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。

本文中公开的方法中使用的抗体可以是人抗体。本文中使用的术语“人抗体”是指具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。尽管如此，本公开内容的人抗体可包含不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，并且特别是在CDR3中。然而，本文中使用的术语“人抗体”不旨在包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。

本文中公开的方法中使用的抗体可以是重组人抗体。本文中使用的术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)，从重组、组合人抗体文库中分离的抗体(下文进一步描述)，从针对人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如，小鼠)中分离的抗体(参见例如，Taylor et al.(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)或者通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。这样的重组人抗体具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，使这样的重组人抗体经受体外诱变(或者，当使用针对人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)，并因此重组抗体的V_H和V_L区的氨基酸序列是这样的序列：虽然来源于人种系V_H和V_L序列并与之相关，但可能不天然存在于体内人抗体种系库中。

根据某些实施方案，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体(例如，西米普利单抗)，其包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的三个重链互补决定区(HCDR)和含有SEQID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的三个轻链互补决定区(LCDR)。根据某些实施方案，抗PD-1抗体(例如，西米普利单抗)包含三种HCDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和三种LCDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中HCDR1包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；HCDR3包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；LCDR1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；以及LCDR3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗PD-1抗体(例如，西米普利单抗)包含含有SEQ ID NO:1的HCVR和含有SEQID NO:2的LCVR。在某些实施方案中，抗PD-1抗体(例如，西米普利单抗)包含含有SEQ IDNO:9的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链。

根据某些实施方案，西米普利单抗的生物等同物是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR的抗PD-1抗体。根据某些实施方案，西米普利单抗的生物等同物是包含与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。根据某些实施方案，西米普利单抗的生物等同物是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR和与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。可通过本领域已知的方法(例如，GAP、BESTFIT和BLAST)测量序列同一性。

根据某些实施方案，西米普利单抗的生物等同物是包含以下的抗PD-1抗体：含有具有不超过5个氨基酸替换的SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCVR。根据某些实施方案，西米普利单抗的生物等同物是包含以下的抗PD-1抗体：含有具有不超过2个氨基酸替换的SEQID NO:2的氨基酸序列的LCVR。根据某些实施方案，西米普利单抗的生物等同物是包含以下的抗PD-1抗体：含有具有不超过5个氨基酸替换的SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCVR和含有具有不超过2个氨基酸替换的SEQ ID NO:2的氨基酸序列的LCVR。

药物组合物和施用

本公开内容提供了包含本文中公开的PD-1抑制剂的治疗性药物组合物。这样的药物组合物可以用合适的可药用载体、赋形剂、缓冲剂和提供合适的转移、递送、耐受性等的其他试剂配制。多种合适的制剂可见于所有药物化学家已知的处方集：Remington’sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,PA。这些制剂包括例如散剂、糊剂、软膏剂、胶冻剂(jelly)、蜡、油、脂质、含脂质(阳离子型或阴离子型)的囊泡剂(例如LIPOFECTIN^TM)、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、乳剂碳蜡(emulsionscarbowax)(多种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶剂、和含有碳蜡的半固体混合物。还参见Powell et al.,“Compendium of excipients for parenteral formulations”PDA,JPharm Sci Technol 52:238-311(1998)。

PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体)的剂量可根据待施用对象的年龄和体型、靶标疾病、病症、施用途径等而变化。当将本公开内容的PD-1抑制剂用于治疗肝癌、肺癌或头颈癌或者抑制肝癌、肺癌或头颈癌生长时，以约0.1至约100mg/kg体重的单剂量施用PD-1抑制剂可以是有利的。根据病症的严重程度，可调整治疗的频率和持续时间。在某些实施方案中，本公开内容的PD-1抑制剂可以以至少约0.1mg至约800mg、约1至约1000mg、约1至约800mg、约5至约500mg、或约10至约400mg的初始剂量施用。在某些实施方案中，在初始剂量之后可以以可近似等于或小于初始剂量的量的量施用PD-1抑制剂的第二或多个后续剂量，其中后续剂量间隔至少1天至3天、至少一周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少12周、或至少14周。

多种递送系统是已知的并且可以用于施用本公开内容的药物组合物，例如，包封于脂质体、微粒、微囊、能够表达突变体病毒的重组细胞、受体介导的内吞作用(参见例如，Wu et al.(1987)J.Biol.Chem.262:4429-4432)。引入方法包括但不限于皮内、经皮、肌内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和经口途径。该组合物可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或推注注射施用、通过经由上皮或黏膜皮肤内衬(mucocutaneous lining)(例如口腔黏膜、直肠和肠黏膜等)吸收施用，并且可以与其他生物活性剂一起施用。药物组合物也可以以囊泡，特别是脂质体(参见例如，Langer(1990)Science 249:1527-1533)递送。

本文中还考虑了使用纳米粒来递送本公开内容的PD-1抑制剂。抗体缀合的纳米粒可用于治疗应用和诊断应用二者。抗体缀合的纳米粒以及制备方法和用途在Arruebo etal.,2009,“Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications,”J.Nanomat.,2009卷,文章ID 439389,24页中进行了详细描述。可以开发纳米粒并将其与药物组合物中包含的抗体缀合以靶向细胞。用于药物递送的纳米粒也已在例如US 8257740或US 8246995中描述。

在某些情况下，药物组合物可以以控制释放体系递送。在一个实施方案中，可以使用泵。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料。在又一个实施方案中，可将控制释放体系置于组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分。

可注射制剂可包括用于静脉内、皮下、颅内和肌内注射、滴注等的剂型。这些可注射制剂可以通过公知的方法制备。

本公开内容的药物组合物可以用标准针和注射器皮下或静脉内递送。此外，关于皮下递送，笔式递送装置易于应用于递送本公开内容的药物组合物。这样的笔式递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔式递送装置通常使用包含药物组合物的可更换药筒。一旦药筒内的所有药物组合物都已被施用并且药筒是空的，则可容易地丢弃空的药筒并且用包含药物组合物的新药筒替换。然后可以重复使用笔式递送装置。在一次性笔式递送装置中，没有可更换的药筒。相反，一次性笔式递送装置预填充有容纳在装置内的储存器中的药物组合物。一旦储存器的药物组合物被排空，则整个装置就被丢弃。

有利地，将上述用于经口或肠胃外使用的药物组合物制备成适合于适合活性成分的剂量的单位剂量的剂型。这样的单位剂量的剂型包括，例如，片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂(安瓿)、栓剂等。所包含抗体的量通常为每单位剂量的剂型约5至约1000mg，例如约5至约600mg、约5至约350mg、或约10至约300mg。

在某些实施方案中，本公开内容提供了包含治疗量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)和可药用载体的药物组合物或制剂。可用于本公开内容的上下文中的包含本文中提供的抗PD-1抗体的药物组合物的一些非限制性实例在US2019/0040137中公开。

本公开内容还提供了包含如本文中所述的用于治疗用途的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的药盒。药盒通常包含指示药盒内容物的预期用途和使用说明的标签。如本文所使用的，术语“标签”包括药盒上、药盒中或与药盒一起提供的或者以其他方式随药盒提供的任何书写或记录的材料。因此，本公开内容提供了用于治疗患有肝癌、肺癌或头颈癌的患者的药盒，所述药盒包含：(a)治疗有效剂量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)；和(b)在本文中公开的任何方法中使用PD-1抑制剂的说明。

施用方案

在某些实施方案中，本文中公开的方法包括以多剂量向有此需要的对象的肿瘤施用治疗有效量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)，例如，作为特定治疗性给药方案的一部分。例如，治疗性给药方案可包括以以下频率向对象施用一个或更多个剂量的PD-1抑制剂：约一天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次、每十二周一次、一个月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、一天两次、每两天两次、每三天两次、每四天两次、每五天两次、每六天两次、一周两次、每两周两次、每三周两次、每四周两次、每五周两次、每六周两次、每八周两次、每十二周两次、一个月两次、每两个月两次、每三个月两次、每四个月两次、一天三次、每两天三次、每三天三次、每四天三次、每五天三次、每六天三次、一周三次、每两周三次、每三周三次、每四周三次、每五周三次、每六周三次、每八周三次、每十二周三次、一个月三次、每两个月三次、每三个月三次、每四个月三次或更低频率地，或者根据需要，只要实现治疗性响应即可。在一个实施方案中，将一个或更多个剂量的PD-1抑制剂作为新辅助每三周一次进行施用。在一个实施方案中，将一个或更多个剂量的PD-1抑制剂作为手术后辅助每三周一次进行施用。

在某些实施方案中，一个或更多个剂量在至少一个治疗周期(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个治疗周期)中施用。根据该方面，该方法包括向有此需要的对象施用至少一个新辅助治疗周期，以及任选地至少一个辅助治疗周期，每个治疗周期包括施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个剂量的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)。在某些实施方案中，每个剂量的PD-1抑制剂包含0.1、1、0.3、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg患者体重。在某些实施方案中，每个剂量包含5至1000mg的PD-1抑制剂，例如5、10、15、20、25、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950mg或更多的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，PD-1抑制剂在2个新辅助治疗周期中施用。在一些实施方案中，PD-1抑制剂还在8个手术后辅助治疗周期中施用。在一些实施方案中，新辅助治疗包含2个治疗周期，每个周期包含1剂量(例如，350mg Q3W)的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，辅助治疗包含8个治疗周期，每个周期包含1剂量(例如，350mg Q3W)的PD-1抑制剂。

剂量

一般而言，根据本文中公开的方法向对象施用的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的量是治疗有效量。如本文所使用的，术语“治疗有效量”意指在用于治疗肝癌、肺癌或头颈癌的所计划手术之前施用作为新辅助的PD-1抑制剂的量，其导致以下中的一种或更多种：(a)抑制肿瘤生长，或提高肿瘤坏死、肿瘤收缩和/或肿瘤消失；(b)降低癌症的症状或适应证(例如肿瘤病变)的严重程度或持续时间；(c)延迟肿瘤生长和发生；(d)抑制肿瘤转移；(e)阻止肿瘤生长复发；(f)提高患有癌症的对象的存活；和/或(g)延迟手术，每个与未经治疗的对象或仅用手术切除治疗的对象相比。

在某些实施方案中，PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的治疗有效量可以是约0.05mg至约1000mg、约1mg至约800mg、约5mg至约600mg、约10mg至约550mg、约50mg至约400mg、约75mg至约350mg、或约100mg至约300mg的抗体。例如，在多个实施方案中，PD-1抑制剂的量为约0.05mg、约0.1mg、约1.0mg、约1.5mg、约2.0mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg、约660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg、约760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg、约860mg、约870mg、约880mg、约890mg、约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg、约960mg、约970mg、约980mg、约990mg或约1000mg。

单个剂量中包含的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的量可用每千克对象体重的抗体毫克数(即，mg/kg)来表示。在某些实施方案中，在本文中公开的方法中使用的PD-1抑制剂可以以约0.0001至约100mg/kg对象体重的剂量施用于对象。在某些实施方案中，抗PD-1抗体可以以约0.1mg/kg至约20mg/kg患者体重的剂量施用。在某些实施方案中，本公开内容的方法包括以约1mg/kg至3mg/kg、1mg/kg至5mg/kg、1mg/kg至10mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、或10mg/kg患者体重的剂量施用PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体)。

在某些实施方案中，向患者施用的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的单个剂量可小于治疗有效量，即亚治疗剂量。例如，如果PD-1抑制剂的治疗有效量包含3mg/kg，则亚治疗剂量包含小于3mg/kg，例如2mg/kg、1.5mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg或0.3mg/kg的量。如本文所限定的，“亚治疗剂量”是指通过自身不会导致治疗作用的PD-1抑制剂的量。然而，在某些实施方案中，施用PD-1抑制剂的多个亚治疗剂量以在对象中共同实现治疗作用。

在某些实施方案中，基于对象体重，每个剂量包含0.1至10mg/kg(例如，0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg)的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)。在某些其他实施方案中，每个剂量包含5至600mg的PD-1抑制剂，例如5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、40mg、45mg、50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg或1000mg的PD-1抑制剂。

在一个实施方案中，在用于肝癌、肺癌或头颈癌的所计划手术之前作为新辅助治疗静脉内施用的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的治疗有效量为350mg。在一些实施方案中，在手术之后，作为辅助治疗静脉内施用的另外的PD-1抑制剂(例如，西米普利单抗或其生物等同物)的治疗有效量为350mg。

实施例

提出以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本公开内容的方法和组合物的完整公开内容和描述，并且不旨在限制发明人视为其发明的范围。同样，本公开内容不限于本文中描述的任何特定的优选实施方案。实际上，在阅读本说明书时，本实施方案的修改和变化对本领域技术人员而言可以是明显的，并且可以在不脱离其精神和范围的情况下进行修改和变化。已经努力确保关于所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但应当考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数为按重量计份数，分子量为平均分子量，温度以摄氏度计，室温为约25℃，并且压力为大气压或接近大气压。

实施例1：新辅助西米普利单抗用于治疗可切除的NSCLC、HCC和HNSCC的临床试验

本研究是新辅助西米普利单抗用于治疗可切除的非小细胞肺癌(NSCLC)、肝细胞癌(HCC)和头颈鳞状细胞癌(HNSCC)的，以及新辅助西米普利单抗与化学治疗或不与化学治疗一起用于NSCLC的2a期、多组群研究。西米普利单抗是完整的人单克隆抗PD-1抗体，其包含如本文中所述的以下：具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链；含有SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对；以及含有SEQ ID NO:3至8的重链CDR序列和轻链CDR序列。还参见US 9987500。该研究包括以下组群：A1、A2、A3(患有可切除NSCLC的患者)、B(患有可切除HCC的患者)以及C(患有可切除HNSCC的患者)。

研究目的：本研究的一个目的是评价新辅助西米普利单抗治疗在患有可切除NSCLC、HCC和HNSCC病变的患者中的临床活性，如通过对所切除肿瘤的病理评价而测量的。对于组群A1、A2、A3(NSCLC)，主要目的是评价主要病理响应(major pathologicalresponse，MPR)。对于组群B(HCC)，主要目的是评价显著性肿瘤坏死(significant tumornecrosis，STN)。对于组群C(HNSCC)，主要目的是评价主要治疗作用(major treatmenteffect，MTE)。本研究的另外的目的包括：评估如由多个标准限定的新辅助和辅助西米普利单抗治疗的抗肿瘤活性、确定新辅助和辅助西米普利单抗治疗(包括延迟手术)的安全性和耐受性、以及评估肿瘤浸润CD8 T细胞密度的变化并探究与对治疗的病理响应的相关性。

原理：虽然每个组群的生物学不同，但存在针对该试验的设计中包含的多种组织学实体瘤类型的重要原理。其一，存在针对该研究聚焦的三种恶性病的限定的致癌物(在NSCLC方面为吸烟；在HCC方面为病毒[HBV，HCV]感染、酒精和脂肪性肝病；以及在HNSCC方面为病毒[HPV]感染、吸烟和酒精)，这将允许比较性未来研究作为当前研究的结果。除了潜在的病毒抗原之外，这些肿瘤类型还携带中度至高度的突变负担(Alexandrov et al.，Nature，2013；500(7463)：415-421)并因此应具有合理数目的可被适应性免疫系统识别的新抗原。还存在与这些癌症的较高发生率相关的高流行的风险因素，例如吸烟。PD-1阻断已在所有三种肿瘤类型的转移性环境中获得批准，并且安全谱远优于标准化学治疗方法，表明它们可对免疫治疗有响应，即使一些70％至85％的患者仍未经历临床益处，这限定为PR或更好

(Antonia et al.，NEngl J Med2017；377：1919-1929；El-Khoueiry et al.，Lancet.2017；389(10088)：2492-2502；Bauml et al.，Journal of Clinical Oncology：Official Journal of the American Society of Clinical Oncology.2017：Jco2016701524；Borghaei et al.，NEngl J Med.2015；373(17)：1627-1639；Fehrenbacheret al.，Lancet.2016；387(10030)：1837-1846；Garon et al.，NEngl J Med.2015；372(21)：2018-2028)。

由于筛查，癌症越来越多地在早期时间点被检测到，此时患者仍然是手术切除的候选者。然而，鉴于局部或远端复发的高比率(可能是由于对细胞毒性治疗不敏感的微转移性疾病)，因此存在对这些癌症的新的治疗的显著性临床需求。新辅助和辅助化学治疗、或靶向治疗从未在HCC中表现出临床益处，而患有局部晚期NSCLC和HNSCC的患者通常接受化学治疗和/或放射治疗(radiation therapy，RT)，但是存活益处不太大且毒性显著，特别是在NSCLC中，其中新辅助或辅助化学治疗的存活益处为仅5％。因此，仍然存在严重的临床需求。

如与几乎所有癌症治疗一样，免疫治疗最初在转移性环境中进行评价；然而，据推测，由于免疫适应性更强、肿瘤异质性降低和局部疾病更多，因此患有局部/可切除疾病的患者可比患有转移性疾病的患者受益甚至更多。

为当前研究选择的病理响应变量和阈值是基于在利用化学治疗和/或其他治疗模式的新辅助研究中经验证的病理响应评估(Hellman et al.,The Lancet Oncology.2014；15(1):e42-50；Pataer et al.,J Thorac Oncol.2012；7(5):825-832；Allard et al.,JHepatol.2015；63(1):83-92)。在免疫治疗的背景下，关于将这些标准转化至新辅助环境的了解较少。存在这样的可能性：另外的或不同的变量或阈值可能在理解免疫治疗在新辅助环境中的影响和益处方面更相关，这将在本研究过程中进行探究。

研究终点：本研究的主要终点是新辅助治疗在患有可切除NSCLC、HCC和HNSCC病变的患者中的效力，限定如下：被限定为手术时切除物内≤10％的有生存力肿瘤的MPR是NSCLC组群A1、A2和A3的主要终点；被限定为手术时基于总肿瘤切除物的病理分析的肿瘤坏死>70％的STN是HCC组群B的主要终点；以及被限定为手术时在>70％的治疗前肿瘤区域中的肿瘤坏死和/或巨细胞/组织细胞对角质碎片的反应的MTE是HNSCC组群C的主要终点。

另一些终点包括：延迟手术，其被限定为在新辅助时期中西米普利单抗(用于组群A3的化学治疗)的最后一次剂量的周期结束之后>28天的手术；无病存活(DFS)，其被限定为从手术日期起直至在成功手术和恢复之后肿瘤复发或因任何原因而死亡的时间；总响应率(overall response rate，ORR)，其被限定为具有完全响应(complete response，CR；100％肿瘤坏死)或部分响应(partial response，PR；肿瘤尺寸减少≥30％)的患者的百分比(不可评价响应的患者将被视为非响应者)；总存活(OS)，其被限定为从首次给药西米普利单抗(组群A3的化学治疗)起至因任何原因而死亡的日期的时间；在12个月、18、24、36、48和60个月的OS率；以下的发生率：治疗突发性不良事件(treatment-emergent adverse event，TEAE)(包括围手术期并发症)、免疫相关不良事件(immune-related adverse event，irAE)、严重不良事件(serious adverse event，SAE)、死亡、实验室异常(根据不良事件通用术语标准为3级或更高)；肿瘤浸润CD8 T细胞密度的变化，其被限定为从基线至手术时间的变化。

研究变量：基线特征将包括每个患者的标准人口统计学(例如年龄、种族、重量、高度等)、包括病史的疾病特征以及用药史。效力变量包括所切除肿瘤的病理评价。对于NSCLC：MPR被限定为切除物内≤10％的有生存力的肿瘤。MPR是用先前的NSCLC、新辅助化学治疗研究来开发并验证的临床益处的替代(Hellman et al.,The Lancet Oncology.2014；15(1):e42-50；Pataer et al.,J Thorac Oncol.2012；7(5):825-832)。对于HCC：STN被限定为基于总肿瘤切除物的病理分析，>70％的肿瘤坏死。肿瘤的>70％的肿瘤坏死已在HCC中显示出与临床结局相关(Allard et al.,J Hepatol.2015；63(1):83-92)。对于HNSCC：MTE被限定为在>70％的治疗前肿瘤区域中肿瘤坏死和/或巨细胞/组织细胞对角质碎片的反应。另一些效力变量包括：DFS、ORR、OS、肿瘤浸润CD8 T细胞密度的变化。

研究设计：具有已知诊断为可切除NSCLC、HCC、或HNSCC的符合条件的患者将被招募在以下组群中：

·组群A1：组群A1将招募约21名NSCLC患者以在新辅助环境中接受350mg西米普利单抗，350mg每3周(Q3W)×2个周期，随后是用8个周期的西米普利单抗治疗以及4个周期的标准铂双重化学治疗的辅助治疗。

·组群A2：组群A2将招募约21名NSCLC患者以接受2个周期的新辅助西米普利单抗350mg IV Q3W和2个周期的辅助铂双重化学治疗，随后是8个另外的周期的辅助西米普利单抗350mg IV Q3W单一治疗加2个周期的铂双重化学治疗。所有患者将接受总共4个周期的分开的标准铂双重化学治疗，2个在新辅助环境中并且2个在手术之后。

·组群A3：组群A3将招募约10名NSCLC患者以在手术之前接受2个周期的新辅助铂双重化学治疗，2个另外的周期的辅助铂双重化学治疗随后是8个另外的周期的辅助西米普利单抗350mg IV Q3W。所有患者将接受总共4个周期的分开的标准铂双重化学治疗，2个在新辅助环境中并且2个在手术之后。

·组群B：组群B将招募约21名HCC患者以在手术之前接受新辅助西米普利单抗350mg IV Q3W，持续2个周期。在辅助环境中，将向患者施用8个周期的西米普利单抗350mgIV Q3W。

·组群C：组群C将招募约21名HNSCC患者以在手术之前接受新辅助西米普利单抗350mg IV Q3W，持续2个周期。在手术之后，患者将接受标准辅助化学治疗和/或放射。在标准辅助治疗之后，患者将接受8个周期的辅助西米普利单抗治疗Q3W。

新辅助治疗：组群A1、A2、B和C中招募的患者将在手术之前接受2个剂量的西米普利单抗350mg IV Q3W。在施用西米普利单抗之后将对患者进行1小时的观察，并在输注开始时和输注完成时监测生命体征。靶标施用为2个剂量，在手术时间之前间隔21天给药。组群A2中的患者将在施用西米普利单抗的同一天接受铂双重化学治疗。探索性组群A3中的患者将在无新辅助西米普利单抗的Q3W给药方案上接受标准铂双重。在癌症基因组图谱(TheCancer Genome Atlas，TCGA)中对鳞状和非鳞状肝癌肿瘤的PD-L1 mRNA表达进行了绘制。使用OmicSoft ArrayStudio软件10.0.1.50版本来绘制肝肿瘤的每百万转录物(Transcripts per Million，TPM)。PD-L1 mRNA表达结果整体基于TCGA研究网(TCGAResearch Network)(https://www.cancer.gov/tcga)产生的数据。

用于NSCLC组群的新辅助治疗：招募到该试验中的患有NSCLC的患者将以2:2:1的随机方式被招募到组群A1、A2和A3中。组群A3将仅招募约10名患者以允许探索性终点的比较；该组群在新辅助时期期间接受标准治疗。该组群中的患者接受4个周期的基于铂的化学治疗，通常由与培美曲塞(用于非鳞状肿瘤)或紫杉醇(用于鳞状细胞癌)组合的顺铂或卡铂组成。招募到组群A2或组群A3中的所有患者将接受总共4个周期的分开的标准化学治疗，2个在新辅助环境中并且2个在手术之后。组群A2将接受2个周期的新辅助和2个周期的辅助组合化学免疫治疗，随后是6个另外的周期的西米普利单抗单一治疗。组群A3将仅接受新辅助化学治疗，但该组将在手术之后接受2个另外的周期的辅助化学治疗以及8个周期的辅助西米普利单抗(以确保所有试验患者的潜在益处超过标准护理)。

在新辅助治疗之后的手术：本研究设计要求在新辅助时期期间间隔21天施用2个剂量的西米普利单抗和/或铂双重化学治疗。手术通常应安排在第一剂量的新辅助治疗之后的4至6周。如果患者的肿瘤发病率不允许将手术延迟足够长的时间以接受其第二剂量的西米普利单抗，则他们可于早在其第一剂量的西米普利单抗之后14天进行手术(适用于组群A3的化学治疗)。对于接受2个周期的计划的西米普利单抗的患者，手术应在第二剂量的西米普利单抗之后至少1天进行，以及对于接受化学治疗的患者，应在从最近周期的化学治疗中恢复血细胞计数之后进行。鉴于在患有NSCLC的患者中仅来源于新辅助/辅助化学治疗的相对小的益处，以及在这些患者中和在将不接受化学治疗或放射的HCC患者中复发的高可能性，因此所有NSCLC和HCC患者将在从手术恢复之后被给予8个另外的周期的西米普利单抗，Q3W。所有HNSCC患者在有或没有化学治疗的情况下完成标准护理放射之后将接受相同的8个另外的周期的西米普利单抗。

辅助治疗：组群A1、A2、A3和B中的患者在从手术恢复之后将接受8个周期的辅助西米普利单抗350mg IV Q3W。组群C中的患者在有或没有化学治疗的情况下完成标准护理辅助放射之后将接受8个周期的辅助西米普利单抗，Q3W。无论患者接受标准辅助治疗还是实验性辅助治疗，随后都将对他们进行定期监测。具有不完全手术切除的患者将不接受用西米普利单抗的辅助治疗，但将根据他们的剩余疾病的标准护理进行管理。在辅助治疗阶段期间具有肿瘤复发的患者将进一步停止西米普利单抗，并将根据他们的复发疾病的标准护理进行管理。

用于NSCLC组群的辅助治疗：所有NSCLC患者在从手术恢复之后将在辅助环境中接受8个另外的周期的西米普利单抗。组群A1将接受4个周期的标准铂双重化学治疗以及8个另外的周期的西米普利单抗中的前4个。组群A2和A3将接受2个另外的周期的铂双重化学治疗以及这些8个另外的周期的西米普利单抗中的前2个。化学治疗和西米普利单抗的组合的第一剂量将被安排在手术之后8周内进行，并且辅助治疗将按照标准Q3W方案给予；然而，在治疗医师的判断下允许改变方案安排。

用于HCC组群的辅助治疗：鉴于针对HCC患者的辅助或新辅助选择的缺乏以及高的复发可能性，因此将向所有患者给予8个另外的周期的西米普利单抗，输注Q3W。第一剂量将被安排在手术之后8周内进行。

用于HNSCC组群的辅助治疗：在手术之后，患者将如根据标准护理(standard ofcare，SOC)在有或没有化学治疗的情况下接受标准辅助放射。鉴于在HNSCC患者中化学治疗或放射治疗与PD-1阻断组合的数据的缺乏，因此在SOC辅助治疗期间将不给予西米普利单抗；然而，这些患者在完成标准辅助治疗之后将接受8个周期的辅助西米普利单抗。西米普利单抗的第一剂量将在SOC辅助治疗之后8周内施用。

随访：在手术后时期期间，将每4周在手术随访中对患者进行评价，直至开始辅助治疗以评估不良事件。应对所有患者在其西米普利单抗的最终剂量之后90天内进行不良事件评价。在手术后时期中的成像应从手术起的前2年中每12周进行，并且此后在手术之后长至5年根据标准护理进行。在这5年时期期间，将从手术起每12周评估患者的疾病状态，并且在疾病复发时，将从复发的日期起每12周对患者的存活进行监测。如果患者在手术后时期期间的任何时间都未报道亲自研究访视，则应从最后一次接触日期起每12周继续通过图表审查或通过电话对其进行存活跟踪，直至死亡、撤销同意或研究结束(以较早发生者为准)。

研究群体：将招募约94名患有已知诊断的可切除NSCLC、HCC或HNSCC的患者。

纳入标准：患者必须符合以下标准中的所有才有资格纳入本研究：(1)年龄≥18岁的男性和女性；(2)患者必须患有已知诊断的NSCLC、HCC或HNSCC；需要对NSCLC和HNSCC进行组织学诊断；如果成像清楚地支持所需的诊断(例如，HCC)，则可同时进行治疗前和诊断活检；(a)NSCLC：患者将患有结节受累或≥4cm原发性肿瘤；(b)HCC：HCC的初步诊断可使用射线照相参数进行；然而，治疗前，芯针活检对于所有组群都是强制性的；(c)HNSCC：患者将具有口腔、口咽、喉或下咽的原发肿瘤部位；(3)患者必须愿意并能够在指示的时间点提供血液样品(在某些访视时多至120mL)；(4)患者必须愿意并能够在开始西米普利单抗(用于组群A3的化学治疗)之前对肿瘤进行切除或芯针活检(目标是多至4次活检，最终数目将由进行同样安全的程序的外科医生和放射科医生确定)。接受抗凝血或抗血小板治疗的患者必须是在活检之前安全中断该治疗的候选者，并且凝血参数(aPTT/INR)必须在活检时归一化至≤1.5ULN。对于HCC病变，活检必须在成像指导下进行，并且穿刺活检必须首先穿过正常肝实质至少1cm以减轻潜在的出血并发症；(5)东部合作肿瘤学组(Eastern CooperativeOncology Group，ECOG)表现状态为0或1。例外情况将是患有长期残疾(例如脑性瘫痪)的患者，其中残疾既不是急性的也不是进行性的，并且不太可能显著影响他们对治疗的响应；(6)患者被确定为用于切除其肿瘤的手术候选者；(7)患者能够理解并愿意按照卫生局和机构指南的规定签署书面知情同意书；(8)充足的器官和骨髓功能；以及(9)愿意并能够遵守门诊访视和研究相关的程序和要求。

排除标准：符合以下标准中任一项的患者将被排除在研究之外：(1)在进入研究之前6个月内，已对其当前肿瘤或不同原发性肿瘤进行过任何全身抗癌治疗或放射治疗的患者；(2)其肿瘤负担或肿瘤生长的速度将不允许通过2个剂量的新辅助西米普利单抗(用于组群A3的化学治疗)来延迟手术的患者；(3)在研究治疗的4周内或5个半衰期内(以较长者为准)已参与过研究性药剂或研究性装置的研究的患者；(4)在开始新辅助治疗之前14天内已进行过大手术的患者；(5)患有转移性疾病、手术的目的不是治愈其的患者；(6)不受控制的并发疾病，包括但不限于：需要抗生素的持续或活动性感染(例外情况是待在开始治疗之前完成的短暂(≤10天)抗生素疗程)、症状性充血性心力衰竭、不稳定型心绞痛、或者将限制遵守研究要求的精神疾病/社会状况；(7)在研究治疗的第一剂量之前7天内正在接受全身类固醇治疗或任何其他形式的免疫抑制治疗。在长期的相当于≤10泼尼松(prednisone)的类固醇(在稳定剂量下多于4周)中的患者将不被排除；(8)在过去的1年中患有需要全身治疗(即，使用疾病改良剂、皮质类固醇或免疫抑制药物)的活动性自身免疫病。替代治疗(例如，甲状腺素，胰岛素，或针对肾上腺或垂体功能不全的生理性、皮质类固醇替代治疗等)是可接受的；(9)患有进行性和/或需要积极治疗的已知的另外的恶性病。例外情况包括患有以下的患者：已经经历过潜在治愈性治疗的皮肤基底细胞癌或皮肤鳞状细胞癌；原位宫颈癌或肛门癌；在不升高PSA的情况下进行稳定剂量的激素治疗的前列腺癌；已在治愈目的下进行过治疗的乳腺癌，其可能在进行激素治疗；(10)在知情同意之前的年中的脑炎、脑膜炎或不受控制的癫痫发作；(11)需要免疫抑制剂量的糖皮质激素以辅助管理的间质性肺病(例如，特发性肺纤维化、机化性肺炎)或活动性、非感染性肺炎的病史。允许在辐射场中的放射性肺炎的病史，只要肺炎在研究治疗之前≥6个月消退即可；(12)不受控制地被人免疫缺陷病毒(HIV)、HBV或丙型肝炎感染(HCV)感染；或者免疫缺陷的诊断；(a)在筛查时将对患者进行丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)测试；(b)允许感染得到控制(未检测到病毒载荷(HIV RNAPCR)且CD4计数高于350，无论是自发的还是在稳定的抗病毒方案中)的患有已知HIV感染的患者。对于患有受控制的HIV感染的患者，将根据当地标准进行监测；(c)允许感染得到控制(血清HBV DNAPCR<100IU/ml且正在接受针对乙型肝炎的抗病毒治疗)的患有乙型肝炎(HepBsAg+)的患者。感染得到控制的患者必须经受HBV DNA的定期监测。患者必须在最后一个剂量的研究性研究药物之后保持抗病毒治疗至少6个月；(d)允许感染得到控制(通过PCR未检测到HCV RNA，无论是自发的还是响应于先前成功的抗HCV治疗疗程)的丙型肝炎病毒抗体呈阳性(HCV Ab+)的患者；(13)在研究药物的计划开始的28天内接受活疫苗；(14)先前具有同种异体干细胞移植或自体干细胞移植；(15)器官移植的接受者；(16)由于高安全性风险和/或影响研究结果的解释的可能性而使患者不适合于参加临床试验的任何医学共病、体检发现或代谢功能障碍或临床实验室异常；(17)临床现场研究团队的成员或其直系亲属；(18)记录的对任何蛋白质治疗剂(例如，西米普利单抗的赋形剂、重组蛋白质、疫苗、IV免疫球蛋白、单克隆抗体、受体陷阱)的变态或超敏响应；(19)干扰满足本研究要求的已知精神或物质滥用障碍；(20)在筛查/基线访视时血清hCG妊娠测试呈阳性的女性。如果为阳性，则患者必须通过超声排除妊娠以符合资格；(21)排除哺乳女性；(22)其在初始剂量/开始第一次治疗之前、研究期间以及在最后一个剂量之后至少6个月不愿意实施高效避孕的有生育潜力的女性(women of childbearing potential，WOCBP)或伴侣为WOCBP的性活跃的男性。

研究治疗：组群A1、A2、B和C中招募的患者将在手术之前IV接受2个剂量的西米普利单抗(350mg Q3W)。靶施用为2个剂量，在手术时间之前间隔21天给药。组群A2中的患者将在施用西米普利单抗的同一天接受铂双重化学治疗。组群A3中的患者将按照Q3W给药时间表接受标准铂双重，并且没有新辅助西米普利单抗。组群C中的患者可在接受西米普利单抗之前在有或没有化学治疗的情况下接受标准护理放射治疗。治疗和剂量信息在下表1中总结：

表1：方案描述

伴随用药和程序：从知情同意的时间直至在最后一次研究治疗之后90天进行的任何程序或者处方药物或非处方制剂二者的治疗施用将被认为是伴随治疗。这包括自签署知情同意书(informed consent form，ICF)后和在研究的第一个剂量之前开始施用并将在研究期间继续的药物和其他治疗，以及在随访期开始以治疗与研究药物相关的不良事件(adverse event，AE)的任何治疗。

禁止药物和程序：在参与本研究时，根据本研究指定的给药方案，患者不可以接受除本文所概括的那些之外的对肿瘤的任何治疗。在研究期间，患者不得接受活疫苗。被认为是患者福利所必须的并且预期不干扰研究药物的评估的任何其他药物可酌情给予。使用免疫抑制剂量(>10mg/天的泼尼松或同等物)的全身性皮质类固醇(除皮质类固醇替代物之外)的患者将不符合本研究的资格。

允许的药物和程序：对于所有接受化学治疗的患者都将使用标准止吐剂和制备的药物。允许全身性皮质类固醇的生理替代剂量，即使>10mg/天的泼尼松当量也是如此。允许用于预防(例如，造影剂变态反应)或用于治疗非自身免疫性病症(例如，通过接触变应原引起的迟发型超敏反应)的皮质类固醇的短期疗程。

统计学方法：对于连续变量，描述性统计将包括以下信息：计算中所反映的患者数目(n)、平均值、中位数、标准偏差、最小值和最大值。对于分类或顺序数据，将显示每个类别的频率和百分比。对于时间与事件数据，将提供Kaplan-Meier曲线和估计、以及在关键界标(landmark)时间点时的中位存活率和95％置信区间(confidence interval，CI)。主要效力分析包括响应率，其将使用描述性统计以及针对每个组群计算的双侧Clooper-Pearson95％ CI进行总结。效力的次要分析包括DFS、OS、ORR，如通过修改的RECIST 1.1(即，无需确定响应[PR/CR]的RECIST 1.1(Eisenhauer,2009)，如下表2和表3中总结的)测得。

表2：根据修改的RECIST 1.1在患有靶病变和非靶病变的患者中的响应

靶病变	非靶病变	新的病变	总响应*
				CR	CR	否	CR
CR	非CR/非PD	否	PR
				CR	未评价	否	PR
PR	非CR/非PD/未全部评价	否	PR
				SD	非CR/非PD/未全部评价	否	SD
未全部评价	非PD	否	NE
				PD	任意	是或否	PD
任意	PD*	是或否	PD
				任意	任意	是	PD

CR＝完全响应；PD＝进行性疾病；PR＝部分响应；SD＝稳定的疾病；NE＝不可评价。*在例外情况下，非靶病变中的明确进展可被接受为PD。

表3：根据修改的RECIST 1.1仅在患有非靶病变的患者中的响应

非靶病变	新的病变	总响应
			CR	否	CR
非CR/非PD	否	非CR/非PD
			未全部评价	否	NE
明确的PD	是或否	PD
			任意	是	PD

实施例2：新辅助西米普利单抗用于治疗可切除HCC(组群B)的临床试验的结果

本实施例提供了来自如实施例1中所述的围手术期西米普利单抗(抗PD-1)用于可切除HCC(NCT03916627，组群B)的临床试验的结果。在该组群中，招募了总共21名患者(表4)。

表4：患者人口统计、基线特征和处置

在初始成像和活检之后，患者接受2个周期的新辅助西米普利单抗(350mg Q3W)，随后进一步成像，之后患者在开始治疗之后23天立刻经受手术肿瘤切除和邻近组织取样，并随后是另外的8个辅助西米普利单抗周期(350mg Q3W)。在治疗之前，患者经受了使用磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)的3D成像及其肿瘤的芯针活检。在整个围手术期筛查期以及在开始新辅助治疗之前收集血液以用于分析，并且患者在手术切除之前立即经受重复的3D MRI成像。

主要终点是显著的肿瘤坏死，其被限定为基于在手术时总肿瘤切除物的病理分析，所切除肿瘤的>70％坏死。次要终点包括手术延迟、无病存活、根据修改的RECIST 1.1的总响应率、总存活、不良事件(AE)以及淋巴细胞浸润的变化。患者在整个治疗中经受治疗前活检和定期血液收集以使得能够进行探索性分析，包括多重IHC和单细胞蛋白质组和转录组分析。如本文所讨论的，用西米普利单抗的新辅助治疗出人意料地在HCC中导致可测量的病理响应。在18个月的过程中，所有21名患者都接受了2个周期的术前西米普利单抗，并且除1名患者之外的所有患者都经受了成功切除；在手术时发现1名患者患有转移性疾病并且终止了切除。在每位患者中评估了使用RECIST标准的肿瘤尺寸相对于基线的变化以及通过MRI上灌注分析的肿瘤坏死的测量结果(图1)。

图2示出了响应者和非响应者中的代表性MRI图像，其中相应的苏木精和伊红图像表明了免疫细胞的浸润，如通过肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)评分来定量的。3D MRI在筛查访视、手术访视、和手术后时期前2年中每12周进行，然后长至手术后5年根据标准护理进行。

在新辅助治疗之后，在治疗前活检和所切除肿瘤样品中进行坏死和肿瘤浸润CD8T细胞密度相对于基线的变化的病理学评估。对所切除肿瘤样品进行以下处理：肿瘤DNA、多重离子束成像、免疫组织化学测定、突变分析和单细胞生物标志物分析。初始病理学评估表明免疫细胞浸润与肿瘤坏死之间存在关联(图3)。如图3中示出的，在具有提高的TIL(TIL+2至+3)的患者相对于具有轻度变化的TIL(TIL变化为-1至1)的患者之间的响应(病理学坏死变化)存在标称上显著性差异(p＝0.026)。

持续进行组织分析。描述了基线时和西米普利单抗治疗之后的髓细胞和淋巴浸润模式的多重IHC在图4中示出。

治疗耐受性良好：19名(90.5％)患者经历了至少一次任意级别的治疗突发AE(treatment-emergent AE，TEAE)，无论归因如何(表5)。最常见的任意级别的TEAE是天冬氨酸转氨酶提高(n＝6，28.6％)、丙氨酸转氨酶提高、血液肌酸磷酸激酶提高、便秘和疲劳(各自n＝3，14.3％)。TEAE与HCC相关但与研究治疗无关。6名(28.6％)患者发生了无论归因如何的级别≥3的TEAE。两名患者(9.5％)发生了血液肌酸磷酸激酶升高，并且无需治疗即可消退。6名(28.6％)患者发生了任意级别的治疗相关的TEAE。一名患者在新辅助治疗期间经历了3级肺炎并且根据方案所限定的手术窗将手术延迟了2周。西米普利单抗治疗没有变化。事件解决之后进行了成功的手术切除。

表5：新辅助TEAE(≥2名患者中的任意级别)的总结

20名具有所切除肿瘤的患者中的7名(35％)具有≥50％肿瘤坏死，并且4名(20％)满足显著>70％肿瘤坏死的预定义的终点。4名具有>70％肿瘤坏死的患者中的3名(15％)具有病理完全响应。在基线时和免疫治疗完成之后，在病理学评估和3D MRI上观察到类似的坏死程度变化模式。初始病理学评估表明了预先存在的肿瘤浸润淋巴细胞的存在与响应之间的相关性。这是迄今为止报道的HCC中新辅助PD-1靶向单一治疗的最大试验。

在新辅助环境中，西米普利单抗在患有可切除HCC的患者中表现出可接受的安全性风险谱。病理响应数据支持较大的试验以确定与存活改善相关的最佳临床终点，并建立围手术期PD-1阻断在患有可切除HCC的患者中的实用性和安全性。

实施例3：新辅助西米普利单抗在HCC中表现出完全病理响应

本实施例提供了来自如实施例1中所述的围手术期西米普利单抗(抗PD-1)用于可切除HCC(NCT03916627，组群B)的临床试验的进一步结果。本研究是单中心、开放标签、单组2期试验，其中在根治性(definitive)手术之前和之后施用西米普利单抗单一治疗；招募了21名患有早期阶段HCC的患者，并且所有患者均经受了手术(表6)。

表6：患者人口统计、基线特征和处置

ALD，酒精性肝病(alcoholic liver disease)；ECOG，欧洲合作肿瘤学组(European Cooperative Oncology Group)；HBV，乙型肝炎病毒；HCC，肝细胞癌；HCV，丙型肝炎病毒；NAFLD，非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease)，NASH，非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis)。

患者必须为18岁或更年长并且确定患有可切除HCC(对成像和/或活检证实的疾病进行的肝成像报道和数据系统[Liver Imaging Reporting and Data System，LIRADS]评分为5)、ECOG表现状态为0或1、以及有足够的肝功能。无论HCC的潜在病因如何，患者均被招募；如果病毒清除已发生或者在HBV定向治疗中循环病毒被抑制，则允许有HCV或HBV病史的患者。允许通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)未检测到病毒载荷并且CD4+T细胞计数>350个细胞/μL的患有HIV的患者。

如果患者患有转移性疾病、如果预期手术不能治愈、或者如果患者患有已知的需要积极治疗的另外的恶性病，则将患者排除在招募之外。除了用激素替代治疗的患有内分泌病的患者之外，患者在过去一年中不能接受慢性全身免疫抑制或者患有需要全身治疗的活动性自身免疫病。排除妊娠女性和移植患者，同样排除任何有中枢神经系统或肺炎性病症病史的患者。

招募被认为是手术切除候选者的患者，在计算机断层扫描(CT)指导下对其肿瘤进行芯针活检(根据方案)，并且随后每3周(Q3W)接受两个剂量的新辅助西米普利单抗，静脉内(intravenous，IV)350mg。在第二剂量西米普利单抗之后，患者经受手术切除。钆塞酸增强的磁共振成像(MRI)在开始治疗之前进行并在手术切除之前10天内再次进行，除非有禁忌，在这种情况下患者经受了CT扫描。以固定的时间间隔收集血液并冷冻保存以用于之后的分析。从手术中恢复之后，患者接受了另外八个周期的西米普利单抗IV 350mg Q3W。

通过视觉估计所切除肿瘤床内所见的坏死的百分比来评估病理检查中的肿瘤坏死，所述肿瘤床如通过正常肝细胞和治疗前活检中描绘的肿瘤包膜内的区域来限定。基于所分析的全核估计活检中的坏死；为了测量坏死肿瘤的百分比，大体上检查整个肿瘤床的坏死，然后对肿瘤的代表性样品(至少一个切片/cm最大尺寸)进行检查以确定评估；完整的病理响应被限定为在所分析的所有切片中均不存在有生存力的肿瘤。还在这些治疗前和治疗后试样中对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和三级淋巴结构(tertiary lymphoid structure，TLS)样聚集体进行定量。术前MRI上的肿瘤坏死程度被限定为在门静脉期期间获得的造影后减影(subtracted postcontrast)T1加权图像上的非增强组织；先前已显示出该坏死定量与HCC的组织病理学评估上的肿瘤坏死程度密切相关(Gordic et al.,J Hepatol 2017；67(6):1213-21)。

在整个试验中连续监测安全性：在手术之前、术后辅助治疗期间、以及停止西米普利单抗之后90天(持续辅助期中的监测)。本文报道了通过手术切除的新辅助治疗的安全性和耐受性。使用不良事件通用术语标准(Common Terminology Criteria for AdverseEvent，CTCAE，版本5.0)来评估AE。

主要终点是显著性肿瘤坏死(significant tumor necrosis，STN)，其被限定为所切除肿瘤的>70％坏死(Allard et al.,J Hepatol 2015；63(1600-0641Electronic):83-92)。次要终点包括：手术延迟，其被限定为在西米普利单抗的第二周期之后>28天的手术；总响应率(ORR)(根据RECIST 1.1)，其被限定为根据RECIST1.1标准通过研究者记录的具有完全响应(CR；100％肿瘤坏死)或部分响应(PR；肿瘤尺寸减小≥30％)的患者的百分比。还记录了在所切除肿瘤病理检查上具有≥50％肿瘤坏死的患者的百分比；治疗突发AE(TEAE)，其被限定为在基线时不存在的AE或者代表在治疗时期期间预先存在病症的恶化的AE；免疫相关AE(immune-related AE，IRAE)，其被限定为符合方案所限定的免疫相关标准的AE；以及肿瘤浸润CD8+T细胞密度的变化，其被限定为从基线至手术时间的变化。

组织分析：将治疗前活检进行福尔马林固定和石蜡包埋(formalin fixed andparaffin embedded，FFPE)以用于多重免疫组织化学(immunohistochemistry，mIHC)和免疫荧光分析，并且将另外的活检保存在RNA-later中以用于大量RNA测序(BulkSeq)分析(Remark et al.,Sci Immunol,2016；1(1):aaf6925)。在Ventana Discovery ULTRA平台(Ventana Medical Systems，Tucson，AZ，USA)上进行全自动mIHC测定(Zhang et al.,LabInvestig 2017；97(7):873-85)。将治疗之后获得的手术肿瘤切除物类似地进行保存以用于分析。在FFPE的治疗前活检和治疗后的肿瘤切除物上对肿瘤坏死程度以及TIL和TLS样结构的存在进行定量。在病理评估之后，对所切除肿瘤进行取样以允许在治疗后组织上进行配对BulkSeq；在具有剩余组织的患者中，将肿瘤和邻近组织解离成单细胞悬液，并且通过质谱细胞术使用先前使用的方法和建立的组来分析该亚类。

对储存在RNA-later中的治疗前活检和切除样品进行BulkSeq。如先前所述进行测序和分析。为了鉴定在BulkSeq数据内的细胞类型，使用了先前所述的CD8+T细胞的基因特征(Lei et al.,Clinical Cancer Research2021)，初始、细胞毒性或活化/功能障碍的淋巴细胞的基因特征(Van der Leun et al.,Nat Rev Cancer,2020；20(4):218-32)，或者B细胞和T调节细胞的基因特征(Szabo et al.,Nat Commun 2019；10(1):1-16)来对治疗前和治疗后的肿瘤试样内的淋巴细胞群进行定量；使用包括CSF1R、CSF3R、CD163、CD68、C1QA、CD14、TFEC的基因特征来限定单核细胞来源的巨噬细胞群。然后通过取得包含该特征的所有基因的总转录物计数的对数来产生评分。

统计学分析：主要效力结局是基于完成手术的患者测量的，次要效力结局是在完整分析集中测量的，并且安全性结局是根据安全性分析集评估的。STN率是使用频率和百分比进行总结的，并且双侧95％置信区间是使用Clopper-Pearson方法进行计算的。次要效力终点ORR是通过RECIST 1·1标准进行测量的；由于随后去除了肿瘤，因此确定CR或PR是不可行的。本研究中报道的所有AE均使用监管活动医学词典(Medical Dictionary forRegulatory Activities，MedDRA)的当前可用版本来编码。射线照相和病理估计的坏死与射线照相肿瘤收缩之间的相关性是通过Spearman相关性来评价的，并且报道了标称p值和相关系数。对于使用BulkSeq数据中的基因特征鉴定的细胞亚群，使用Wilcoxon符号秩检验来评估这些评分在患者组之间的显著性。

结果：试验中招募的所有21名患者都经受了活检，并随后接受了两个剂量的西米普利单抗。大多数患者是亚洲人(52％)，并且最常见的潜在病因是HBV感染(表6)。20名患者处于AJCC UICC第8版中的Ib-II期，并且由于分支门静脉侵入，1名患者放射照相上处于IIIb期。从开始西米普利单抗至手术切除的中位时间为29天，其中1名患者在开始免疫治疗之后22天立刻经受了手术。在手术探查时发现1名患者患有转移性疾病并且中止了切除。

西米普利单抗表现出可接受的风险益处谱。二十名(95％)患者在新辅助治疗期期间经历了任意级别的AE(表7)。存在经历了3级或更高级AE的七名(33％)患者；两名具有升高的血液肌酸磷酸激酶，其无需治疗即可消退且病因不清楚。未观察到4级或5级AE。六名(29％)患者发生了任意级别的TRAE，其中两名(10％)为3级。一名患者在新辅助治疗期间经历了3级斑丘疹，并且另一名患者在新辅助治疗期间经历了3级肺炎(表8)；该肺炎需要用类固醇治疗并且根据方案限定的标准导致手术延迟了13天。在事件解决之后，进行了成功的手术切除。

表7：新辅助TEAE(≥2名患者中的任意级别)的总结

表8：新辅助TRAE的总结

在其肿瘤可用于主要终点的评估的20名患者中，四名(20％)患有STN，包括在组织病理学中具有完全肿瘤坏死(100％)的三名(15％)。值得注意的是，20名经切除的患者中的7名(35％)具有≥50％的肿瘤坏死，≥50％的肿瘤坏死是其他研究用于确定具有显著性治疗后坏死的患者的标准(表9)。

表9：切除物中的病理性肿瘤坏死(n＝20)

在治疗中在开始西米普利单抗之后中位数24天，对20名患者进行手术前MRI，并且一名患者经受了手术前CT。根据RECIST 1.1，三名患者在射线照相上实现了PR，其ORR为15％，并且所有其他患者维持稳定的疾病。

MRI能够实现基于造影后减影图像来估计有生存力的肿瘤，并且该技术在切除之前进行的成像上鉴定出具有显著坏死的患者，而无论射线照相的肿瘤收缩如何。这在图5A中进行了说明，其是使用标准RECIST测量根据提高的响应所排序的患者中响应的瀑布图(虚线与肿瘤尺寸的30％减少相关)。同时，如由两名专业的肝病理学家评估的坏死程度的病理学评估(基于坏死的绝对变化)，以及治疗之后、手术之前进行的MRI上的坏死程度(虚线与70％坏死相关，以实现STN的主要终点)。

由MRI限定的坏死估计与手术时坏死的病理学评估强烈相关，如图5B中所示(r＝0·71至0.72，p<0.0001)，其提供了通过MRI和根据病理分析的坏死测量结果的比较分析。回归线显示为虚线。ρ是相关系数。相反，坏死评估(病理学或射线照相)与通过标准RECIST1.1测量的肿瘤响应之间仅存在中等相关性，并且这未达到统计学显著性(图6)。

聚焦于具有明显治疗后坏死的患者，来自7名实现≥50％坏死的患者中的5名的标准和病理图像突出了射线照相和病理学坏死的实例，如表10中总结的。三名患者在MRI和病理学评估二者中均经历了STN(患者16、17和18)，然而，这些患者中仅一名实现了通过RECIST 1.1的PR(-30％)(患者18)，而根据标准响应其他患者的病变被认为是稳定的疾病。5名在手术时出现坏死的患者的代表性治疗前和治疗后成像和病理试样突出了组织和射线照相结果的异质性。在这些患者中的每名中都观察到了肿瘤床的显著收缩。病理学家的TIL评分评估所有取样的肿瘤区域为0(无TIL)、1(1至2个病灶)、2(≥3个病灶)或3(弥漫的片状TIL)。类似地，三级淋巴聚集体评分为0(无)、1(看到1个)、2(看到2个)和3(存在≥3个)。在切除中也具有显著坏死的患者2在治疗前活检中甚至具有较高的基线坏死，并且患者20在治疗前活检中不具有肿瘤细胞。

表10：代表性的组织分析和mIHC

对于探索性组织分析，在七名具有≥50％组织病理学坏死的患者与剩余13名已经经受过切除且发现在其所切除肿瘤中几乎没有坏死至没有坏死(全部为30％或更少)的患者之间进行了比较(表11)。使用该探索性截止值鉴定的七名患者中的六名具有在其基线活检中看到的坏死的提高，表明有治疗作用(表11)。这七名患者中的一名(患者2)在基线时患有高度坏死的肿瘤，并且在治疗之后在MRI或病理检查上坏死水平没有明显的变化，并且肿瘤尺寸在治疗中稍微提高。在本试验中7名具有≥50％坏死的患者中，三名具有HBV病史，两名患有非酒精性脂肪性肝炎/非酒精性脂肪性肝病(NASH/NAFLD)，一名患有HCV相关肝硬化，以及一名患有酒精性肝硬化(表11)。

表11：关于HCC的响应和潜在病因的个体患者数据

ALD，酒精性肝病；HBV，乙型肝炎病毒；HCC，肝细胞癌；HCV，丙型肝炎病毒；MRI，磁共振成像；NAFLD，非酒精性脂肪性肝病；NASH，非酒精性脂肪性肝炎；n/a，不可用；RECIST(Response Evaluation Criteria in Solid Tumor)，实体瘤响应评价标准。

治疗之后病变的免疫组织化学分析示出了，与几乎没有坏死或没有坏死的患者相比，具有≥50％坏死的患者中的免疫浸润的密度提高并且TLS样结构和TIL增强(图7A)。在治疗之后的手术试样上，与具有<50％坏死的患者中仅有21％相比，所有具有≥50％坏死的患者都具有最高的TIL浸润评分和高水平的TIL；并且具有<50％坏死的患者中的29％缺乏任何TIL浸润。在具有足够肿瘤用于质谱细胞术分析的患者亚类中，与四名几乎没有坏死至没有坏死的患者相比，四名具有≥50％坏死的患者(三名患者具有100％坏死并且一名患者具有50％坏死)具有显著更高的肿瘤中CD8+T细胞浸润；该发现对于肿瘤是独特的，因为在被切除的非受累(noninvolved)邻近切缘中看到了类似数目的T细胞(图7B)。

此外，对多个代表性目的区域中的免疫浸润进行了定量的治疗前和治疗后试样的mIHC示出了在基线时免疫浸润增强，所述免疫浸润在具有≥50％坏死的患者中在治疗之后进一步提高。在治疗之后有极少坏死至没有坏死的患者中，这些相对未变化，尽管考虑到患者间的可变性但该发现未达到统计学显著(图7C)。使用mIHC组(CD3-CD8-FOXP3-CD68-CD20)以进行定量图像分析并测量图7C中示出的每个免疫亚群的密度。

在来自配对的治疗前和治疗后试样的RNA的BulkSeq分析中，CD8+T细胞、活化/功能障碍的(耗竭的)细胞、细胞毒性细胞、单核细胞来源的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，Mono/Mac)和B细胞的已发表的特征全部在随后发现在切除之后具有≥50％坏死的患者中在基线时富集，并且在这些患者中在治疗之后除了B细胞特征之外的所有均提高，而在几乎没有坏死至没有坏死的患者中这些特征中任一者的表达水平未见变化(<50％)(图7D)。另外，观察到了代表11名患者(7名患者在切除时几乎没有坏死至没有坏死[所有均<50％坏死]并且4名患者具有≥50％坏死)的活检核心和肿瘤切除物的大量RNA测序(BulkSeq)的热图。

在图7A至7D中，*p<0·05；**p＜0·01；Conv，常规的；DAPI，4’,6-二脒基-2-苯基吲哚；FFPE，福尔马林固定和石蜡包埋；FOXP，叉头框蛋白(Forkhead box protein)；H&E，苏木精和伊红；HCC，肝细胞癌；MICSSS，单载片上多重免疫组织化学连续染色；mIHC，多重免疫组织化学；ns，不显著；TIL，肿瘤浸润淋巴细胞；TLS，三级淋巴结构；Treg，调节性T细胞。

结论：本研究表明，短疗程的新辅助西米普利单抗在患有可切除HCC的患者中导致病理响应。西米普利单抗的安全性谱是可接受的。在最初的病理学评估中并且基于来自治疗前和治疗后组织的测序，在肿瘤免疫活性的分子特征与病理学坏死之间存在正相关，以及在免疫浸润响应相对于基线的提高与较大的病理学坏死之间存在相关性。另外，虽然标准成像响应标准(RECIST 1.1)无法鉴定大多数患者在短暂的治疗疗程之后的病理响应，但已表明造影增强的MRI是评估肿瘤坏死对治疗的响应的准确非侵入性方法，并且应与RECIST 1.1结合使用以对治疗之后有生存力的肿瘤的总变化进行定量。

在被认为是HCC的围手术期PD-1靶向单一治疗的迄今为止最大试验的该试验中，西米普利单抗在具有未满足的临床需求的患者群体中表现出临床活性。此外，观察到STN率为20％，并且患者中总共35％在手术时具有≥50％肿瘤坏死，以及围手术期3级TRAE的比率为10％。在其中手术是治愈性目的的治疗的HCC患者群体中，与需要在手术之前进行较长时间的诱导治疗的其他治疗相比，西米普利单抗新辅助治疗提供了显著优势，所述其他治疗可提高围手术期毒性的可能性并且还可延迟或阻碍手术。

在该试验中具有≥50％坏死的7名患者中，所有病因均被代表；三名具有HBV病史，两名患有NASH/NAFLD，一名患有HCV相关肝硬化以及一名患有酒精性肝硬化(表11)。鉴于以下发现，在两名患有NASH/NAFLD的患者中看到的病理响应是值得注意的：患有NASH相关HCC的患者的表现与患有来自其他病因的HCC的患者相比显著更差(Pfister et al.,Nature,2021；592(7854):450-56)。对于一名患有确认诊断的NASH的患者(患者17)，在治疗前活检中没有记录到TIL或TLS样结构，而在切除的肿瘤上看到了稳健的免疫浸润，表明NASH相关HCC可以对免疫治疗有响应，至少在早期阶段环境中可以对免疫治疗有响应。

在用西米普利单抗治疗之后在手术样品上，在其肿瘤具有≥50％坏死的患者中的免疫浸润比几乎没有坏死或没有坏死的患者中的更稳健。另外，基于BulkSeq数据，治疗前活检中免疫浸润的密度与治疗之后这种较高的坏死相关，这通过从mIHC观察到的趋势进行了补充，表明对其肿瘤具有潜在免疫识别的患者更可能对PD-1阻断单一治疗有响应。

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本公开内容的范围不受本文中所述的具体实施方案限制。实际上，根据前面的描述和附图，除本文中所述的那些之外，本发明的多种改变对于本领域技术人员来说将变得明显。这样的改变旨在落入所附权利要求书的范围内。

序列表

<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.

<120> 通过施用新辅助PD-1抑制剂治疗癌症的方法

<130> 179227.02402; 10911WO01

<160> 10

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCVR

<400> 1

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe

20 25 30

Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCVR

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Ser Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Ser Ile Asn Thr Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Thr Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Val Val Asp Phe Arg

100 105

<210> 3

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR1

<400> 3

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Gly

1 5

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR2

<400> 4

Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr

1 5

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR3

<400> 5

Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR1

<400> 6

Leu Ser Ile Asn Thr Phe

1 5

<210> 7

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR2

<400> 7

Ala Ala Ser

1

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR3

<400> 8

Gln Gln Ser Ser Asn Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 9

<211> 444

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HC

<400> 9

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe

20 25 30

Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 10

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LC

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Ser Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Ser Ile Asn Thr Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Thr Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Val Val Asp Phe Arg Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

Claims

1.治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括：

(a)选择患有肝癌的患者；

(b)向所述患者施用治疗有效量的新辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述新辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物；以及

(c)在步骤(b)之后，手术切除所述肝癌肿瘤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述肝癌是可切除的。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肝癌选自肝细胞癌(HCC)、纤维板层癌、胆管癌、血管肉瘤和肝母细胞瘤。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肝癌是HCC。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述肝癌是复发性的。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述肝癌是转移性的。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述患者患有肝癌，手术的目的是治愈所述肝癌。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述患者患有已用抗病毒治疗进行过治疗和控制的慢性病毒感染，并且其中所述慢性病毒感染包括HIV、HBV、HCV、或其组合。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述患者患有鳞状或非鳞状肝癌。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述患者在≥1％的肝癌细胞中具有PD-L1表达。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中在步骤(b)之后多于28天进行手术切除。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCVR。

14.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的LCVR。

15.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。

17.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

18.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列并且所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体是西米普利单抗。

20.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR的抗PD-1抗体。

21.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。

22.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR和与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其还包括：

(d)在步骤(c)之后，向所述患者施用治疗有效量的辅助程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其中所述辅助PD-1抑制剂是这样的抗体：与PD-1特异性结合，并且包含SEQ ID NO:1的重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，或其生物等同物。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所施用的辅助抗PD-1抗体包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。

25.根据权利要求23至24中任一项所述的方法，其中所施用的辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCVR。

26.根据权利要求23至24中任一项所述的方法，其中所施用的辅助抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的LCVR。

27.根据权利要求23至24中任一项所述的方法，其中所施用的辅助抗PD-1抗体包含SEQID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。

28.根据权利要求23至27中任一项所述的方法，其中所施用的辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。

29.根据权利要求23至27中任一项所述的方法，其中所施用的辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

30.根据权利要求23至27中任一项所述的方法，其中所施用的辅助抗PD-1抗体包含重链和轻链，其中所述重链具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列并且所述轻链具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

31.根据权利要求23所述的方法，其中所施用的辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR的抗PD-1抗体。

32.根据权利要求23所述的方法，其中所施用的辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。

33.根据权利要求23所述的方法，其中所施用的辅助PD-1抑制剂是包含与SEQ ID NO:1具有90％、95％、97％或98％序列同一性的HCVR和与SEQ ID NO:2具有90％、95％、97％或98％序列同一性的LCVR的抗PD-1抗体。

34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述方法在所述患者中导致所切除肿瘤的坏死、促进肿瘤消退、降低肿瘤细胞负荷、降低肿瘤负担和/或阻止肿瘤复发。

35.根据权利要求1至34中任一项所述的方法，其中所述方法导致所切除肿瘤的多于50％坏死。

36.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述方法导致所切除肿瘤的多于70％坏死。

37.根据权利要求1至36中任一项所述的方法，其还包括向所述患者施用选自以下中的一种或更多种的另外的治疗剂或治疗：抗病毒治疗、光动力学治疗、程序性死亡配体1(PD-L1)抑制剂、淋巴细胞活化基因3(LAG3)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抑制剂、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)激动剂、含T细胞免疫球蛋白和黏蛋白-3(TIM3)的抑制剂、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)抑制剂、具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)抑制剂、CD38抑制剂、CD47抑制剂、另外的T细胞共抑制剂或配体的拮抗剂、CD20抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂、CD28激活剂、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、血管生成素2(Ang2)抑制剂、转化生长因子β(TGFβ)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、共刺激受体的激动剂、针对肿瘤特异性抗原的抗体、疫苗、提高抗原呈递的佐剂、溶瘤病毒、细胞毒素、化学治疗剂、基于铂的化学治疗、酪氨酸激酶抑制剂、IL-6R抑制剂、IL-4R抑制剂、IL-10抑制剂、细胞因子、抗体药物缀合物(ADC)、嵌合抗原受体T细胞、抗炎药物和膳食补充剂。

38.权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述新辅助PD-1抑制剂作为一个或更多个剂量施用，其中每个剂量每两周、每三周、每四周、每五周或每六周施用。

39.权利要求1至38中任一项所述的方法，其中所述新辅助PD-1抑制剂作为两个或更多个剂量施用，其中每个剂量每三周施用。

40.权利要求1至39中任一项所述的方法，其中所述新辅助PD-1抑制剂以5mg至1000mg的剂量施用。

41.权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述新辅助PD-1抑制剂以200mg、250mg、350mg、400mg、500mg、600mg、750mg、800mg或1000mg的剂量施用。

42.权利要求1至39中任一项所述的方法，其中所述新辅助PD-1抑制剂以1mg/kg至20mg/kg患者体重的剂量施用。

43.权利要求1至39中任一项所述的方法，其中所述新辅助PD-1抑制剂以1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg患者体重的剂量施用。

44.根据权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述新辅助PD-1抑制剂静脉内或皮下施用。

45.权利要求23至44中任一项所述的方法，其中所述辅助PD-1抑制剂作为一个或更多个剂量施用，其中每个剂量每两周、每三周、每四周、每五周或每六周施用。

46.权利要求23至46中任一项所述的方法，其中所述辅助PD-1抑制剂的每个剂量每三周施用。

47.权利要求23至46中任一项所述的方法，其中所述辅助PD-1抑制剂以5mg至1000mg的剂量施用。

48.权利要求23至47中任一项所述的方法，其中所述辅助PD-1抑制剂以200mg、250mg、350mg、400mg、500mg、600mg、750mg、800mg或1000mg的剂量施用。

49.权利要求23至46中任一项所述的方法，其中所述辅助PD-1抑制剂以1mg/kg至20mg/kg患者体重的剂量施用。

50.权利要求23至46中任一项所述的方法，其中所述辅助PD-1抑制剂以1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg患者体重的剂量施用。

51.权利要求23至50中任一项所述的方法，其中所述辅助PD-1抑制剂静脉内或皮下施用。

52.程序性死亡1(PD-1)抑制剂，其用于治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括：

(a)选择患有肝癌的患者；

(c)在步骤(b)之后，手术切除所述肝癌肿瘤。

53.药盒，其包含程序性死亡1(PD-1)抑制剂与使用治疗有效量的所述PD-1抑制剂用于在患有肝癌的患者中治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的书面说明的组合。

54.治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括：

(a)选择患有肺癌的患者；

(c)在步骤(b)之后，手术切除所述肺癌肿瘤。

55.根据权利要求54所述的方法，其中所述肺癌是非小细胞肺癌。

56.根据权利要求54或55所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含具有SEQID NO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。

57.根据权利要求54至56中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。

58.根据权利要求54至57中任一项所述的方法，其还包括：

59.治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括：

(a)选择患有头颈癌的患者；

(c)在步骤(b)之后，手术切除所述头颈癌肿瘤。

60.根据权利要求59所述的方法，其中所述头颈癌是头颈鳞状细胞癌。

61.根据权利要求59或60所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含具有SEQID NO:3的氨基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR2；具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCDR3；具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR2；以及具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的LCDR3。

62.根据权利要求59至61中任一项所述的方法，其中所施用的新辅助抗PD-1抗体包含SEQ ID NO:1/2的HCVR/LCVR氨基酸序列对。

63.根据权利要求59至62中任一项所述的方法，其还包括：