BR112021012141A2 - Preenchimento de tecido biocompatível, método de tratamento de uma condição em um sujeito em necessidade do mesmo e método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo - Google Patents

Preenchimento de tecido biocompatível, método de tratamento de uma condição em um sujeito em necessidade do mesmo e método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo Download PDF

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Rebecca L. Lacouture
Peng Xu
Erlei Jin
Carlos J. Bosques
Patrick Yacono
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Abstract

preenchimento de tecido biocompatível, método de tratamento de uma condição em um sujeito em necessidade do mesmo e método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo. preenchimentos de tecido de ácido hialurônico e fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda e métodos de fabricação e uso dos mesmos são fornecidos neste documento. em algumas formas de realização, a divulgação se refere a um preenchimento de tecido biocompatível compreendendo fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda, ácido hialurônico (ha) e polietileno glicol (peg) e/ ou polipropileno glicol (ppg), em que uma porção do ha é modificada ou reticulada por uma ou mais porções de ligante compreendendo um ou mais de polietileno glicol (peg), polipropileno glicol (ppg) e um álcool secundário, em que as porções de ligante estão ligadas ao ha em uma extremidade do ligante.

Description

“PREENCHIMENTO DE TECIDO BIOCOMPATÍVEL, MÉTODO DE TRATAMENTO DE UMA CONDIÇÃO EM UM SUJEITO EM NECESSIDADE DO MESMO E MÉTODO DE TRATAMENTO COSMÉTICO EM UM SUJEITO EM NECESSIDADE DO MESMO” ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[001] A seda é um polímero natural produzido por uma variedade de insetos e aranhas. A fibroína de bicho da seda compreende uma proteína do núcleo do filamento, fibroína de seda e um revestimento semelhante a cola que consiste em uma proteína não filamentosa, sericina. A seda tem sido historicamente estudada para uso na área médica. O ácido hialurônico (hialuronano) é um glicosaminoglicano que é distribuído por todo o corpo e é encontrado nos tecidos conjuntivos e epiteliais. Devido a sua biocompatibilidade e benefícios estruturais, é um componente útil em dispositivos médicos e materiais implantáveis.
[002] Os tecidos moles do corpo humano devem suas estruturas em parte a uma matriz extracelular que inclui colágeno, elastina e glicosaminoglicano. Podem ocorrer defeitos nos tecidos moles, que distorcem, deformam ou alteram as estruturas dos tecidos moles. Essa estrutura pode ser restaurada através do uso de preenchimentos de tecido que podem ser depositados no local do defeito para remediar o defeito. Por exemplo, os preenchimentos de tecido podem ser colocados no local de uma ruga facial para remediar a ruga.
[003] No entanto, novos preenchimentos de tecidos são necessários no campo que remedia um número de defeitos de tecidos, proporcionando propriedades ajustáveis, o que pode permitir a adaptação do tecido de preenchimento para o defeito do tecido específico.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
[004] Em algumas formas de realização, a divulgação se refere a um preenchimento de tecido biocompatível compreendendo fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda, ácido hialurônico (HA) e polietilenoglicol (PEG) e/ou polipropileno glicol (PPG), em que uma porção do HA é modificada ou reticulada por uma ou mais porções de ligante compreendendo um ou mais de polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol (PPG) e um álcool secundário, em que as porções de ligante estão ligadas ao HA em uma extremidade do ligante.
Em algumas formas de realização, uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda são modificados ou reticulados. Em algumas formas de realização, uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda são reticulados com HA. Em algumas formas de realização, uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda são reticulados a fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda. Em algumas formas de realização, a fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda são substancialmente desprovidos de sericina.
[005] Em algumas formas de realização, uma porção de fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda têm um peso molecular médio ponderado selecionado a partir de cerca de 12 kDa, cerca de 13 kDa, cerca de 14 kDa, cerca de 15 kDa, cerca de 16 kDa, cerca de 48 kDa e cerca de 100 kDa.
Em algumas formas de realização, a fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda têm uma polidispersidade entre 1 e cerca de 5,0. Em algumas formas de realização, a fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda têm uma polidispersidade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em algumas formas de realização, uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda têm baixo peso molecular, médio peso molecular ou alto peso molecular.
[006] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem um grau de modificação (MoD) de cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14% ou cerca de 15%. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando como reticulador um diepoxi-PEG, um poliglicidil-PEG, um diglicidil-PEG, um diepoxi-PPG, um poliglicidil-PPG, um diglicidil-PPG ou quaisquer combinações dos mesmos. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando éter diglicidílico de polietileno glicol com um PM de cerca de 200 Da, cerca de 500 Da, 1000 Da, cerca de 2000 Da ou cerca de 6000 Da. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando éter diglicidílico de polipropileno glicol com um PM de cerca de 380 Da, ou cerca de 640 Da.
[007] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda lidocaína. Em algumas formas de realização, a concentração de lidocaína no preenchimento de tecido é de cerca de 0,3%.
[008] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um gel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um hidrogel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda água. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é monofásico. Em algumas formas de realização, a concentração total de HA e seda no preenchimento de tecido é de cerca de 18 mg/ml, cerca de 19 mg/ml, cerca de 20 mg/ml, cerca de 21 mg/ml, cerca de 22 mg/ml, cerca de 23 mg/ml, cerca de 24 mg/ml, cerca de 25 mg/ml, cerca de 26 mg/ml, cerca de 27 mg/ml, cerca de 28 mg/ml, cerca de 29 mg/ml ou cerca de 30 mg/ml. Em algumas formas de realização, a razão de HA para fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda no preenchimento de tecido é de cerca de 92/8, cerca de 93/7, cerca de 94/6, cerca de 95/5, cerca de 96/4, cerca de 97/3, cerca de 18/12, cerca de 27/3, cerca de 29,4/0,6, cerca de 99/1, cerca de 92,5/7,5 ou cerca de 90/10. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um preenchimento dérmico. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é injetável. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é injetável por meio de agulhas 30 G ou 27 G.
Em algumas formas de realização,
o preenchimento de tecido tem um módulo de armazenamento (G’) de cerca de
5 Pa a cerca de 500 Pa.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 5 Pa, cerca de 6 Pa,
cerca de 7 Pa, cerca de 8 Pa, cerca de 9 Pa, cerca de 10 Pa, cerca de 11 Pa,
cerca de 12 Pa, cerca de 13 Pa, cerca de 14 Pa, cerca de 15 Pa, cerca de 16
Pa, cerca de 17 Pa, cerca de 18 Pa, cerca de 19 Pa , cerca de 20 Pa, cerca de
21 Pa, cerca de 22 Pa, cerca de 23 Pa, cerca de 24 Pa, cerca de 25 Pa, cerca de 26 Pa, cerca de 27 Pa, cerca de 28 Pa, cerca de 29 Pa, cerca de 30 Pa, cerca de 31 Pa, cerca de 32 Pa, cerca de 33 Pa, cerca de 34 Pa, cerca de 35 Pa, cerca de 36 Pa, cerca de 37 Pa, cerca de 38 Pa, cerca de 39 Pa, cerca de 40 Pa, cerca de 41 Pa, cerca de 42 Pa, cerca de 43 Pa, cerca de 44 Pa , cerca de 45 Pa,
cerca de 46 Pa, cerca de 47 Pa, cerca de 48 Pa, cerca de 49 Pa, cerca de 50
Pa, cerca de 51 Pa, cerca de 52 Pa, cerca de 53 Pa, cerca de 54 Pa, cerca de
55 Pa, cerca de 56 Pa, cerca de 57 Pa, cerca de 58 Pa, cerca de 59 Pa, cerca de 60 Pa, cerca de 61 Pa, cerca de 62 Pa, cerca de 63 Pa, cerca de 64 Pa, cerca de 65 Pa, cerca de 66 Pa, cerca de 67 Pa, cerca de 68 Pa, ab fora 69 Pa, cerca de 70 Pa, cerca de 71 Pa, cerca de 72 Pa, cerca de 73 Pa, cerca de 74 Pa, cerca de 75 Pa, cerca de 76 Pa, cerca de 77 Pa, cerca de 78 Pa, cerca de 79 Pa, cerca de 80 Pa, cerca de 81 Pa, cerca de 82 Pa, cerca de 83 Pa, cerca de 84 Pa, cerca de 85 Pa, cerca de 86 Pa, cerca de 87 Pa, cerca de 88 Pa, cerca de 89 Pa, cerca de 90 Pa, cerca de 91 Pa, cerca de 92 Pa, cerca de 93 Pa, cerca de 94 Pa, cerca de 95 Pa, cerca de 96 Pa, cerca de 97 Pa, cerca de 98 Pa, cerca de 99 Pa, cerca de 100 Pa, cerca de 101 Pa, cerca de 102 Pa, cerca de 103 Pa, cerca de 104
Pa, cerca de 105 Pa, cerca de 106 Pa, cerca de 107 Pa, cerca de 108 Pa, cerca de 109 Pa, cerca de 110 Pa, cerca de 111 Pa, cerca de 112 Pa, cerca de 113 Pa, cerca de 114 Pa, cerca de 115 Pa, cerca de 116 Pa, cerca de 117 Pa, cerca de 118 Pa, cerca de 119 Pa, cerca de 120 Pa, cerca de 121 Pa, cerca de 122
Pa, cerca de 123 Pa, cerca de 124 Pa ou cerca de 125 Pa. Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de uma tensão oscilatória de cerca de 1 Hz, cerca de 5 Hz, ou cerca de 10 Hz. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem uma viscosidade complexa de cerca de 1 Pa · s a cerca de 10 Pa · s. Em algumas formas de realização, a viscosidade complexa é medida por meio de uma tensão oscilatória de cerca de 1 Hz, cerca de 5 Hz ou cerca de 10 Hz.
[009] Em algumas formas de realização, a divulgação se refere a um método de tratamento de uma condição em um sujeito em necessidade do mesmo, incluindo a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer preenchimento de tecido aqui descrito, por exemplo, um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda, ácido hialurônico (HA) e polietileno glicol (PEG) e/ou polipropileno glicol (PPG), em que uma porção do HA é modificada ou reticulada por uma ou mais frações ligantes compreendendo um ou mais de polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol (PPG) e um álcool secundário, em que as porções do ligante são ligadas ao HA em uma extremidade do ligante.
Em algumas formas de realização, a condição é uma condição da pele. Em algumas formas de realização, a condição da pele é selecionada a partir do grupo que consiste em desidratação da pele, falta de elasticidade da pele, aspereza da pele, falta de firmeza da pele, uma falta de elasticidade da pele, uma marca de estiramento da pele, palidez da pele, um ponto dérmico, uma bochecha encovada, um lábio fino, um defeito retro-orbital, uma dobra facial e uma ruga.
[0010] Em algumas formas de realização, a divulgação se refere a um método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo, incluindo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de qualquer preenchimento de tecido aqui descrito, por exemplo, um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda, ácido hialurônico (HA) e polietileno glicol (PEG) e/ou polipropileno glicol (PPG), em que uma porção do HA é modificada ou reticulada por uma ou mais porções de ligante compreendendo um ou mais de polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol (PPG), e um álcool secundário, em que as porções do ligante são ligadas ao HA em uma extremidade do ligante.
[0011] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido é administrado em uma região dérmica do sujeito. Em algumas formas de realização, os métodos descritos neste documento incluem um aumento, uma reconstrução, o tratamento de uma doença, o tratamento de um distúrbio, a correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área.
Em algumas formas de realização, os métodos descritos neste documento incluem um aumento facial, uma reconstrução facial, o tratamento de uma doença facial, o tratamento de um distúrbio facial, o tratamento de um defeito facial ou o tratamento de uma imperfeição facial.
[0012] Em algumas formas de realização, os métodos descritos neste documento incluem o uso de preenchimentos de tecido que resistem à biodegradação, bioerosão, bioabsorção e/ou biorresorção, por pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses.
[0013] Em algumas formas de realização, os métodos aqui descritos incluem a administração de preenchimentos de tecido resultando em uma resposta inflamatória reduzida em comparação com a resposta inflamatória induzida por um preenchimento de tecido de controle compreendendo um HA substancialmente semelhante, em que o preenchimento de tecido de controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda. Em algumas formas de realização, a administração do preenchimento de tecido ao sujeito resulta em uma resposta inflamatória reduzida em comparação com a resposta inflamatória induzida por um preenchimento de tecido de controle compreendendo um HA substancialmente semelhante, em que o preenchimento de tecido de controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda e/ou PEG ou PPG. Em algumas formas de realização, a administração de qualquer preenchimento de tecido ao sujeito resulta no aumento da produção de colágeno em comparação com a produção de colágeno induzida por um preenchimento de tecido de controle compreendendo um HA substancialmente semelhante, em que o preenchimento de tecido de controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda, ou em que o preenchimento de tecido de controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda e/ou PEG ou PPG.
[0014] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um material de preenchimento biocompatível compreendendo: um glicosaminoglicano selecionado a partir do grupo que consiste em ácido hialurônico (HA), carboximetil celulose (CMC), amido, alginato, condroitina-4- sulfato, condroitina-6-sulfato, goma xantana, quitosana, pectina, agar, carragenana, e goma guar; e um agente ativo selecionado a partir do grupo que consiste em um inibidor de enzima, um agente anestésico, uma neurotoxina medicinal, um antioxidante, um agente anti-infeccioso, um agente anti- inflamatório, um agente bloqueador de luz ultravioleta (UV), um corante, um hormônio, um imunossupressor e um agente anti-inflamatório; em que uma porção do glicosaminoglicano é reticulada por partes de reticulação compreendendo uma ou mais de uma cadeia alcano ou alquil, um grupo éter e um álcool secundário; e em que a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador. Em algumas formas de realização, o glicosaminoglicano é o ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, a quantidade em % p/ p de HA reticulado em relação à quantidade total de HA é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%,
cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de
9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%,
cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de
25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%,
cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de
41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%,
cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de
57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%,
cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de
73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%,
cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, um cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de
94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99%
ou cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação do
HA reticulado está entre cerca de 1% e cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação do HA reticulado é de cerca de 1%, cerca de
2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%,
cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%,
cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação do HA reticulado está entre cerca de 1% e cerca de 15%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação do HA reticulado é um ou mais de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14% e cerca de 15%.
[0015] Em algumas formas de realização, o HA reticulado compreende uma fração de reticulação compreendendo uma cadeia de polietileno glicol (PEG). Em algumas formas de realização, o agente de reticulação e/ ou o precursor de reticulação compreende um grupo epóxi. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de poliepoxi, um ligante de diepoxi, um poliepoxi-PEG, um diepoxi-PEG, um poliglicidil-PEG, um diglicidid-PEG, um poli acrilato PEG, um diacrilato PEG, 1,4-bis(2,3-epoxipropoxi)butano, 1,4- bisglicidiloxibutano, divinil sulfona (DVS), 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE),
luz UV, glutaraldeído, 1,2-bis(2,3-epoxipropoxi)etileno (EGDGE), 1,2,7,8- diepoxioctano (DEO), biscarbodiimida (BCD I), pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE), dihidrazida adípica (ADH), bis(sulfossuccinimidil)suberato (BS), hexametilenodiamina (HMDA), 1-(2,3-epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, uma carbodiimida e quaisquer combinações dos mesmos. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um composto epóxi polifuncional selecionado a partir do grupo que consiste em 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), etileno glicol diglicidil éter (EGDGE), 1,6-hexanodiol diglicidil éter, polietileno glicol diglicidil éter, polipropileno glicol diglicidil éter, politetrametileno glicol diglicidil éter, neopentil glicol diglicidil éter, poliglicerol poliglicidil éter, diglicerol poliglicidil éter, glicerol poliglicidil éter, tri-metilolpropano poliglicidil éter, pentaeritritol poliglicidil éter, e sorbitol poliglicidil éter. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação e/ ou um precursor de reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em polietileno glicol diglicidil éter, diepoxi PEG, PEG diglicidil éter, polioxietileno bis- glicidil éter, PEGDE e PEGDGE. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida utilizando polietileno glicol diglicidil éter tendo um Mn médio de cerca de 500, cerca de 1000, cerca de 2000, ou cerca de 6000. Em algumas formas de realização, de reticulação é obtida utilizando polietileno glicol diglicidil éter possuindo de 2 a 25 grupos etileno glicol. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação e/ ou um precursor de reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fibroína de seda de poliglicidila, um ligante de fibroína de seda de diglicidila, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliglicidila e um ligante de fragmento de fibroína de seda de diglicidila.
[0016] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um material de preenchimento de tecido que compreende ainda um composto orgânico e/ ou um composto inorgânico.
Em algumas formas de realização, o composto inorgânico compreende hidroxiapatita de cálcio.
Em algumas formas de realização, a hidroxiapatita de cálcio é formulada como partículas tendo um diâmetro entre cerca de 1 µm e cerca de 100 µm, entre cerca de 1 µm e cerca de 10 µm, entre cerca de 2 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 3 µm e cerca de 10 µm, entre cerca de 4 µm e cerca de 15 µm, entre cerca de 8 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 5 µm e cerca de 10 µm, entre cerca de 6 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 7 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 7 µm e cerca de 20 µm, entre cerca de 9 µm e cerca de 18 µm, ou entre cerca de 10 µm e cerca de 25 µm.
Em algumas formas de realização, a concentração de hidroxiapatita de cálcio está entre cerca de 0,001% e cerca de 5%. Em algumas formas de realização, a concentração de hidroxiapatita de cálcio é de cerca de
0,001%, cerca de 0,002%, cerca de 0,003%, cerca de 0,004%, cerca de 0,005%,
cerca de 0,006%, cerca de 0,007%, cerca de 0,008%, cerca de 0,009%, cerca de 0,01%, cerca de 0,011%, cerca de 0,012%, cerca de 0,013%, cerca de
0,014%, cerca de 0,015%, cerca de 0,016%, cerca de 0,017%, cerca de 0,018%,
cerca de 0,019% ou cerca de 0,02%. Em algumas formas de realização, a concentração de hidroxiapatita de cálcio é de cerca de 0,05%, cerca de 0,1%,
cerca de 0,15%, cerca de 0,2%, cerca de 0,25%, cerca de 0,3%, cerca de 0,35%,
cerca de 0,4%, cerca de 0,45%, cerca de 0,5%, cerca de 0,55%, cerca de 0,6%,
cerca de 0,65%, cerca de 0,7%, cerca de 0,75%, cerca de 0,8%, cerca de 0,85%,
cerca de 0,9%, cerca de 0,95%, cerca de 1%, cerca de 1,05%, cerca de 1,1%,
cerca de 1,15%, cerca de 1,2%, cerca de 1,25%, cerca de 1,3%, cerca de 1,35%,
cerca de 1,4%, cerca de 1,45%, cerca de 1,5%, cerca de 1,55%, cerca de 1,6%,
cerca de 1,65%, cerca de 1,7%, cerca de 1,75%, cerca de 1,8%, cerca de 1,85%, cerca de 1,9%, cerca de 1,95% ou cerca de 2%. Em algumas formas de realização, o composto orgânico compreende um aminoácido selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, L-prolina, alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina e valina.
[0017] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido compreendendo HA, em que o HA é obtido a partir de bactérias Streptococcus ou de bactérias Bacillus subtilis.
[0018] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um material de preenchimento de tecido biocompatível compreendendo: um glicosaminoglicano selecionado a partir do grupo que consiste em ácido hialurônico (HA), carboximetil celulose (CMC), amido, alginato, condroitina-4- sulfato, condroitina-6-sulfato, goma xantana, quitosana, pectina, agar, carragenana, e goma guar; e um agente anestésico; em que uma porção do glicosaminoglicano é reticulada por porções de reticulação compreendendo uma ou mais de uma cadeia alcano ou alquila, um grupo éter e um álcool secundário; e em que a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador. Em algumas formas de realização, o agente anestésico é lidocaína. Em algumas formas de realização, a concentração de agente anestésico no material de preenchimento de tecido é de cerca de 0,001% a cerca de 5%. Em algumas formas de realização, a concentração de lidocaína no preenchimento de tecido é de cerca de 0,3%.
[0019] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um material de preenchimento biocompatível compreendendo: um glicosaminoglicano selecionado a partir do grupo que consiste em ácido hialurônico (HA), carboximetil celulose (CMC), amido, alginato, condroitina-4- sulfato, condroitina-6-sulfato, goma xantana, quitosana, pectina, agar, carragenana, e goma guar; e um agente anestésico; em que uma porção do glicosaminoglicano é reticulada por porções de reticulação compreendendo uma ou mais de uma cadeia alcano ou alquila, um grupo éter e um álcool secundário; e em que a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador; o preenchimento de tecido é um gel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um hidrogel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água. Em algumas formas de realização, a concentração total de HA no preenchimento de tecido é de cerca de 10 mg/ ml a cerca de 50 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração total de HA no preenchimento de tecido é de cerca de 15 mg/ ml, cerca de 16 mg/ ml, 17 mg/ ml, cerca de 18 mg/ ml, cerca de 19 mg/ ml, cerca de 20 mg/ ml, cerca de 21 mg/ ml, cerca de 22 mg/ ml, cerca de 23 mg/ ml, cerca de 24 mg/ ml, cerca de 25 mg/ ml, cerca de 26 mg/ ml, cerca de 27 mg/ ml, cerca de 28 mg/ ml, cerca de 29 mg/ ml, ou cerca de 30 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de HA reticulado no preenchimento de tecido é de cerca de 10 mg/ ml a cerca de 50 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de HA reticulado no preenchimento de tecido é de cerca de 15 mg/ ml, cerca de 16 mg/ ml, cerca de 17 mg/ ml, cerca de 18 mg/ ml, cerca de 19 mg/ ml, cerca de 20 mg/ ml, cerca de 21 mg/ ml, cerca de 22 mg/ ml, cerca de 23 mg/ ml, cerca de 24 mg/ ml, cerca de 25 mg/ ml, cerca de 26 mg/ ml, cerca de 27 mg/ ml, cerca de 28 mg/ ml, cerca de 29 mg/ ml, ou cerca de 30 mg/ ml.
[0020] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível compreendendo: um glicosaminoglicano selecionado a partir do grupo que consiste em ácido hialurônico (HA), carboximetil celulose (CMC), amido, alginato, condroitina-4-sulfato, condroitina- 6-sulfato, goma xantana, quitosana, pectina, agar, carragenana, e goma guar; e um agente anestésico; em que uma porção do glicosaminoglicano é reticulada por porções de reticulação compreendendo uma ou mais de uma cadeia alcano ou alquila, um grupo éter e um álcool secundário; e em que a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador; o preenchimento de tecido compreendendo proteína de seda ou fragmentos de proteína de seda (SPF). Em algumas formas de realização, a proteína de seda é fibroína de seda. Em algumas formas de realização, a proteína de seda é fibroína de seda substancialmente desprovida de sericina.
Em algumas formas de realização, os SPF tem um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF tem um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF tem um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF tem um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF tem um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF tem baixo peso molecular. Em algumas formas de realização, os SPF tem peso molecular médio. Em algumas formas de realização, os SPF tem alto peso molecular. Em algumas formas de realização, os fragmentos de proteína de seda (SPF) têm uma polidispersividade compreendida entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em algumas formas de realização, os SPF tem um grau de cristalinidade de até 60%. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada.
Em algumas formas de realização, a quantidade em % em peso/ peso de SPF reticulado em relação à quantidade total de SPF é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de
40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%,
cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de
56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%,
cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de
72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%,
cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de
88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%,
cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação dos SPF reticulado está entre cerca de 1% e cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação dos SPF reticulado é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de
6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de
17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%,
cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de
33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%,
cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de
49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%,
cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de
65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%,
cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação dos SPF reticulados está entre cerca de 1% e cerca de 15%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação dos SPF reticulados é de um ou mais de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14% e cerca de 15%.
[0021] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível compreendendo: um glicosaminoglicano selecionado a partir do grupo que consiste em ácido hialurônico (HA), carboximetil celulose (CMC), amido, alginato, condroitina-4-sulfato, condroitina- 6-sulfato, goma xantana, quitosana, pectina, agar, carragenana, e goma guar; e um agente anestésico; em que uma porção do glicosaminoglicano é reticulada por porções de reticulação compreendendo uma ou mais de uma cadeia alcano ou alquila, um grupo éter e um álcool secundário; e em que a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador; o preenchimento de tecido compreendendo proteína de seda ou fragmentos de proteína de seda (SPF), em que uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, os SPF reticulados compreendem uma fração de reticulação compreendendo uma cadeia alcano ou alquila e/ ou um grupo éter. Em algumas formas de realização, os SPF reticulados compreendem uma fração de reticulação compreendendo uma cadeia de polietileno glicol (PEG). Em algumas formas de realização, os SPF reticulados compreendem uma fração de reticulação compreendendo um álcool secundário.
Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente de ativação. Em algumas formas de realização, o agente de reticulação e/ ou o precursor de reticulação compreende um grupo epóxi. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de poliepoxi, um ligante de diepoxi, um poliepoxi-PEG, um diepoxi-PEG, um poliglicidil-PEG, um diglicidid-PEG, um poli acrilato PEG, um diacrilato PEG, 1,4- bis(2,3-epoxipropoxi)butano, 1,4-bisglicidiloxibutano, divinil sulfona (DVS), 1,4- butanodiol diglicidil éter (BDDE), luz UV, glutaraldeído, 1,2-bis(2,3- epoxipropoxi)etileno (EGDGE), 1,2,7,8-diepoxioctano (DEO), biscarbodiimida (BCDI), pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE), dihidrazida adípica (ADH), bis(sulfossuccinimidil)suberato (BS), hexametilenodiamina (HMDA), 1-(2,3- epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, uma carbodiimida e quaisquer combinações dos mesmos. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um composto epóxi polifuncional selecionado a partir do grupo que consiste em 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), etileno glicol diglicidil éter (EGDGE), 1,6- hexanodiol diglicidil éter, polietileno glicol diglicidil éter, polipropileno glicol diglicidil éter, politetrametileno glicol diglicidil éter, neopentil glicol diglicidil éter, poliglicerol poliglicidil éter, diglicerol poliglicidil éter, glicerol poliglicidil éter, tri- metilolpropano poliglicidil éter, pentaeritritol poliglicidil éter, e sorbitol poliglicidil éter. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação e/ ou um precursor de reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em polietileno glicol diglicidil éter, diepoxi PEG, PEG diglicidil éter, PEG diglicidil éter, polioxietileno bis-glicidil éter, PEGDE e PEGDGE. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida utilizando polietileno glicol diglicidil éter tendo um Mn médio de cerca de 500, cerca de 1000, cerca de 2000,
ou cerca de 6000. Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida utilizando polietileno glicol diglicidil éter possuindo de 2 a 25 grupos etileno glicol.
Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação e/ ou um precursor de reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fibroína de seda de poliglicidila, um ligante de fibroína de seda de diglicidila, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliglicidila e um ligante de fragmento de fibroína de seda de diglicidila. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao HA. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um gel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um hidrogel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água. Em algumas formas de realização, a concentração total de SPF no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml a cerca de 15 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração total de SPF no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml, cerca de 0,5 mg/ ml, cerca de 1 mg/ ml, cerca de 1,5 mg/ ml, cerca de 2 mg/ ml, cerca de 2,5 mg/ ml, cerca de 3 mg/ ml, cerca de 3,5 mg/ ml, cerca de 4 mg/ ml, cerca de 4,5 mg/ ml, cerca de 5 mg/ ml, cerca de 5,5 mg/ ml, cerca de 6 mg/ ml, cerca de 6,5 mg/ ml, cerca de 7 mg/ ml, cerca de 7,5 mg/ ml, cerca de 8 mg/ ml, cerca de 8,5 mg/ ml, cerca de 9 mg/ ml, cerca de 9,5 mg/ ml, cerca de 10 mg/ ml, cerca de 10,5 mg/ ml, cerca de 11 mg/ ml, cerca de 11,5 mg/ ml, cerca de 12 mg/ ml, cerca de 12,5 mg/ ml, cerca de 13 mg/ ml, cerca de 13,5 mg/ ml, cerca de 14 mg/ ml, cerca de 14,5 mg/ ml ou cerca de 15 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de SPF reticulado no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml a cerca de 15 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de SPF reticulado no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml, cerca de 0,5 mg/ ml, cerca de 1 mg/ ml, cerca de 1,5 mg/ ml, cerca de 2 mg/ ml, cerca de 2,5 mg/ ml, cerca de 3 mg/ ml, cerca de 3,5 mg/ ml, cerca de 4 mg/ ml, cerca de 4,5 mg/ ml, cerca de 5 mg/ ml, cerca de 5,5 mg/ ml, cerca de 6 mg/ ml, cerca de 6,5 mg/ ml, cerca de 7 mg/ ml, cerca de 7,5 mg/ ml, cerca de 8 mg/ ml, cerca de 8,5 mg/ ml, cerca de 9 mg/ ml, cerca de 9,5 mg/ ml, cerca de 10 mg/ ml, cerca de 10,5 mg/ ml, cerca de 11 mg/ ml, cerca de 11,5 mg/ ml, cerca de 12 mg/ ml, cerca de 12,5 mg/ ml, cerca de 13 mg/ ml, cerca de 13,5 mg/ ml, cerca de 14 mg/ ml, cerca de 14,5 mg/ ml ou cerca de 15 mg/ ml.
[0022] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível compreendendo: um glicosaminoglicano selecionado a partir do grupo que consiste em ácido hialurônico (HA), carboximetil celulose (CMC), amido, alginato, condroitina-4-sulfato, condroitina- 6-sulfato, goma xantana, quitosana, pectina, agar, carragenana, e goma guar; e um agente anestésico; em que uma porção do glicosaminoglicano é reticulada por porções de reticulação compreendendo uma ou mais de uma cadeia alcano ou alquila, um grupo éter e um álcool secundário; e em que a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador; o preenchimento de tecido opcionalmente compreendendo proteína de seda ou fragmentos de proteína de seda (SPF), em que uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um preenchimento dérmico. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é injetável. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 25 Pa a cerca de 1500 Pa.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 25 Pa, cerca de 26 Pa, cerca de 27 Pa, cerca de 28 Pa, cerca de 29 Pa, cerca de 30 Pa, cerca de 31 Pa, cerca de 32
Pa, cerca de 33 Pa, cerca de 34 Pa, cerca de 35 Pa, cerca de 36 Pa, cerca de
37 Pa, cerca de 38 Pa, cerca de 39 Pa, cerca de 40 Pa, cerca de 41 Pa, cerca de 42 Pa, cerca de 43 Pa, cerca de 44 Pa, cerca de 45 Pa, cerca de 46 Pa, cerca de 47 Pa, cerca de 48 Pa, cerca de 49 Pa, cerca de 50 Pa, cerca de 51 Pa, cerca de 52 Pa, cerca de 53 Pa, cerca de 54 Pa, cerca de 55 Pa, cerca de 56 Pa, cerca de 57 Pa, cerca de 58 Pa, cerca de 59 Pa, cerca de 60 Pa, cerca de 61 Pa, cerca de 62 Pa, cerca de 63 Pa, cerca de 64 Pa, cerca de 65 Pa, cerca de 66 Pa, cerca de 67 Pa, cerca de 68 Pa, cerca de 69 Pa, cerca de 70 Pa, cerca de 71 Pa, cerca de 72 Pa, cerca de 73 Pa, cerca de 74 Pa, cerca de 75 Pa, cerca de 76 Pa, cerca de 77 Pa, cerca de 78 Pa, cerca de 79 Pa, cerca de 80 Pa, cerca de 81 Pa, cerca de 82 Pa, cerca de 83 Pa, cerca de 84 Pa, cerca de 85 Pa, cerca de 86 Pa, cerca de 87 Pa, cerca de 88 Pa, cerca de 89 Pa, cerca de 90 Pa, cerca de 91 Pa, cerca de 92 Pa, cerca de 93 Pa, cerca de 94 Pa, cerca de 95 Pa, cerca de 96 Pa, cerca de 97 Pa, cerca de 98 Pa, cerca de 99 Pa, cerca de 100 Pa, cerca de 101 Pa,
cerca de 102 Pa, cerca de 103 Pa, cerca de 104 Pa, cerca de 105 Pa, cerca de
106 Pa, cerca de 107 Pa, cerca de 108 Pa, cerca de 109 Pa, cerca de 110 Pa,
cerca de 111 Pa, cerca de 112 Pa, cerca de 113 Pa, cerca de 114 Pa, cerca de
115 Pa, cerca de 116 Pa, cerca de 117 Pa, cerca de 118 Pa, cerca de 119 Pa,
cerca de 120 Pa, cerca de 121 Pa, cerca de 122 Pa, cerca de 122 Pa, cerca de
123 Pa, cerca de 124 Pa ou cerca de 125 Pa.
Em algumas formas de realização,
neste documento G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de
0,1 a cerca de 10 Hz.
Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz.
Em algumas formas de realização,
G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 5 Hz.
Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 10 Hz.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem uma viscosidade complexa de cerca de 1 Pa.s a cerca de 10 Pa.s.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem uma viscosidade complexa de cerca de 1 Pa.s, cerca de 1,5 Pa.s, cerca de 2 Pa.s, cerca de 2,5 Pa.s, cerca de 3 Pa.s, cerca de 3,5 Pa.s, cerca de 4 Pa.s, cerca de 4,5 Pa.s, cerca de 5 Pa.s, cerca de 5,5 Pa.s, cerca de 6 Pa.s, cerca de 6,5 Pa.s, cerca de 7 Pa.s, cerca de 7,5 Pa.s, cerca de 8 Pa.s, cerca de 8,5 Pa.s, cerca de 9 Pa.s, cerca de 9,5 Pa.s ou cerca de 10 Pa.s. Em algumas formas de realização, a viscosidade complexa é medida por meio de um estresse oscilatório de cerca de 0,1 a cerca de 10 Hz.
Em algumas formas de realização, a viscosidade complexa é medida por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz. Em algumas formas de realização, a viscosidade complexa é medida por meio de um estresse oscilatório de cerca de 5 Hz.
[0023] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento de uma condição em um sujeito em necessidade do mesmo, e/ ou um método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo, o método compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um preenchimento de tecido biocompatível compreendendo: um glicosaminoglicano selecionado a partir do grupo que consiste em ácido hialurônico (HA), carboximetil celulose (CMC), amido, alginato, condroitina-4-sulfato, condroitina-6-sulfato, goma xantana, quitosana, pectina, ágar, carragenana, e goma guar; e um agente anestésico; em que uma porção do glicosaminoglicano é reticulada por porções de reticulação compreendendo uma ou mais de uma cadeia alcano ou alquila, um grupo éter e um álcool secundário; e em que a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador; o preenchimento de tecido opcionalmente compreendendo proteína de seda ou fragmentos de proteína de seda (SPF), em que uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, a condição é uma condição da pele. Em algumas formas de realização, a condição da pele é selecionada a partir do grupo que consiste em desidratação da pele, falta de elasticidade da pele, aspereza da pele, falta de rigidez da pele, uma linha de estrias da pele, uma marca de estrias da pele, palidez da pele, uma buracos na pele, uma bochecha afundada, um lábio fino, um defeito retro-orbital, uma dobra facial, e uma ruga. Em algumas formas de realização o preenchimento de tecido é administrado em uma região dérmica do sujeito. Em algumas formas de realização, o método é um aumento, uma reconstrução, tratamento de uma doença, tratamento de um distúrbio, correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área. Em algumas formas de realização, o método é um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial. Em algumas formas de realização, o tecido de preenchimento resiste à biodegradação, bioerosão, bioabsorção, e/ ou biossorção, durante pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses.
Em algumas formas de realização, a administração do preenchimento de tecido ao sujeito resulta em uma resposta inflamatória reduzida em comparação com a resposta inflamatória induzida por um preenchimento de tecido controle compreendendo um polissacarídeo e lidocaína, em que o preenchimento de tecido controle não inclui fragmentos de proteína de seda (SPF). Em algumas formas de realização, a administração do preenchimento de tecido ao sujeito resulta em aumento da produção de colágeno em comparação com a produção de colágeno induzida por um preenchimento de tecido controle compreendendo um polissacarídeo e lidocaína, em que o preenchimento de tecido controle não inclui fragmentos de proteína de seda (SPF).
[0024] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em uma forma de realização, a invenção inclui preenchimentos de tecido que podem ser preparados a partir de seda e ácido hialurônico.
[0025] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) com um peso molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa. Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) com um peso molecular médio variando de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular médio que varia de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular médio que varia de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular médio que varia de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular médio que varia de cerca de 80 kDa a cerca de 150 kDa.
[0026] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) que são de cerca de 0% a 100% reticulados com SPF. Em algumas formas de realização, os SPF foram reticulados aos SPF usando agentes de reticulação, como BDDE, ou um dos outros agentes de reticulação aqui descritos. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de até 100%.
[0027] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e ácido hialurônico (HA), em que até cerca de 0% a 100% dos SPF são reticulados aos SPF, e os SPF foram reticulados aos SPF usando um agente de reticulação,
como BDDE, ou um dos outros agentes de reticulação aqui descritos, e o grau de reticulação dos SPF é de até 100%
[0028] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e ácido hialurônico (HA), em que até 100% do HA é reticulado ao HA usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos outros agentes de reticulação aqui descritos. Em algumas formas de realização, até cerca de 100% dos SPF são reticulados aos SPF, em que os SPF foram reticulados aos SPF usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos outros agentes de reticulação aqui descritos, e o grau de reticulação dos SPF é de cerca de 100%.
[0029] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e ácido hialurônico (HA), em que 0% a 100% de HA não é reticulado. Em algumas formas de realização, até cerca de 100% dos SPF são reticulados, em que os SPF foram reticulados usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos outros agentes de reticulação aqui descritos, e o grau de SPF de reticulação é de até 100%. Em algumas formas de realização, todo o HA não é reticulado.
[0030] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) que têm uma polidispersividade compreendida entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e ácido hialurônico (HA), em que 0% a 100% de SPF são reticulados para HA. Em algumas formas de realização, os SPF e o HA foram reticulados usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos agentes de reticulação aqui descritos. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação de SPF-HA é de até 100%. Em algumas formas de realização, até 100% do HA é reticulado ao HA. Em algumas formas de realização, o HA foi reticulado ao HA usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos agentes de reticulação aqui descritos. Em algumas formas de realização, pelo menos 0,1% de HA não é reticulado. Em algumas formas de realização, todo o HA não é reticulado.
[0031] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e ácido hialurônico (HA), em que pelo menos 0,1% de HA não é reticulado. Em algumas formas de realização, até cerca de 100% dos SPF são reticulados, em que os SPF foram reticulados usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos outros agentes de reticulação aqui descritos, e o grau de SPF de reticulação é de até 100%. Em algumas formas de realização, todo o HA não é reticulado.
[0032] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e ácido hialurônico (HA), em que pelo menos 0,1% de SPF está reticulado com HA. Em algumas formas de realização, os SPF e o HA foram reticulados usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos agentes de reticulação aqui descritos. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação de SPF-HA é de até 100%. Em algumas formas de realização, até 100% do HA é reticulado ao HA. Em algumas formas de realização, o HA foi reticulado ao HA usando um agente de reticulação, como BDDE, ou um dos agentes de reticulação aqui descritos. Em algumas formas de realização, pelo menos 0,1% de HA não é reticulado. Em algumas formas de realização, todo o HA não é reticulado.
[0033] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, em que os SPF são substancialmente desprovidos de sericina.
[0034] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido de gel biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo.
[0035] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido de hidrogel biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo.
[0036] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, um polissacarídeo e água.
[0037] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, em que os SPF têm um grau de cristalinidade de cerca de 0% a cerca de 60%.
[0038] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo e incluindo ainda um agente ativo. Em algumas formas de realização, o agente ativo pode ser um inibidor de enzima, um agente anestésico, uma neurotoxina medicinal, um antioxidante, um agente anti- infeccioso, vasodilatadores, um agente reflexivo, um agente anti-inflamatório, um agente de bloqueio de luz ultravioleta (UV), um corante, um hormônio, um imunossupressor ou um agente anti-inflamatório. Em uma forma de realização, o agente anestésico é lidocaína.
[0039] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível injetável, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo.
[0040] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo. Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 0,1 a cerca de 10 Hz. Em uma forma de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz.
[0041] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um método de fabricação de um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) que têm uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, o método incluindo o fornecimento de uma solução de SPF, e adição à solução um intensificador de gelificação, que pode ser qualquer espécie doadora de prótons.
[0042] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um método de fabricação de um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) que têm uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, o método incluindo o fornecimento de uma solução de SPF, e submetendo a solução à excitação mecânica.
[0043] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento de uma condição em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método incluindo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um preenchimento de tecido biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a condição é uma condição da pele. Em algumas formas de realização, a condição da pele pode ser a desidratação da pele, perda de elasticidade da pele, a aspereza da pele, falta de firmeza da pele, uma linha de estria da pele, uma marca de estria da pele, palidez da pele, um buraco dérmico, um afundamento da bochecha, têmpora afundada, um lábio fino, um defeito retro-orbital, uma dobra facial, ou uma ruga.
[0044] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento cosmético em um sujeito que necessite do mesmo, o método incluindo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade compreendida entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo.
[0045] Em algumas formas de realização, os métodos da invenção incluem a administração de um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, em uma região dérmica de um sujeito.
[0046] Em uma forma de realização, um método da invenção incluindo a administração de um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, pode ser um aumento, uma reconstrução, tratamento de uma doença, tratamento de um distúrbio, correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área.
[0047] Em uma forma de realização, um método da invenção incluindo a administração de um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, pode ser um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial.
[0048] Em uma forma de realização, um preenchimento de tecido biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade compreendida entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, administrado de acordo com um método da invenção, resiste à biodegradação, bioabsorção, e/ ou biossorção, pelo menos cerca de 3 dias após a administração.
[0049] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso médio molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo, porções de reticulação derivadas de epóxi. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
[0050] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo peso molecular baixo, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo, porções de reticulação derivadas de epóxi. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
[0051] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso médio molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
[0052] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
[0053] Em algumas formas de realização, a quantidade em % p/ p de SPF reticulado em relação à quantidade total de SPF é de até cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%.
[0054] Em algumas formas de realização, o grau de reticulação de SPF é de até cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99%, ou cerca de 100%.
[0055] Em algumas formas de realização, a quantidade em % p/ p de HA reticulado em relação à quantidade total de HA é de até cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%,
cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%.
[0056] Em algumas formas de realização, o grau de reticulação de HA é de até 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%,
cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%.
[0057] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso médio molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente de ativação. Em algumas formas de realização, o agente de reticulação e/ ou o precursor de reticulação compreendem um grupo epóxi. Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina.
[0058] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente de ativação. Em algumas formas de realização, o agente de reticulação e/ ou o precursor de reticulação compreendem um grupo epóxi. Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina.
[0059] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os
SPF tendo um peso médio molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF.
Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização,
a reticulação inclui reticulação por ligação química.
Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero.
Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática.
Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador selecionado a partir do grupo que consiste em 1,4-bis(2,3-epoxipropoxi)butano, 1,4-bisglicidiloxibutano, divinil sulfona
(DVS), 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), luz UV, glutaraldeído, 1,2-bis(2,3-
epoxipropoxi)etileno (EGDGE), 1,2,7,8-diepoxioctano (DEO), biscarbodiimida
(BCDI), pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE), dihidrazida adípica (ADH),
bis(sulfosuccinimidil)suberato (BS), hexametilenodiamina (HMDA), 1-(2,3-
epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, uma carbodiimida e quaisquer combinações dos mesmos.
Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina.
[0060] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os
SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular, e/ ou elevado peso molecular.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF.
Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização,
a reticulação inclui reticulação por ligação química.
Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero.
Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática.
Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, a reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador selecionado a partir do grupo que consiste em 1,4-bis(2,3-epoxipropoxi)butano, 1,4-bisglicidiloxibutano, divinil sulfona
(DVS), 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), luz UV, glutaraldeído, 1,2-bis(2,3-
epoxipropoxi)etileno (EGDGE), 1,2,7,8-diepoxioctano (DEO), biscarbodiimida
(BCDI), pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE), dihidrazida adípica (ADH),
bis(sulfosuccinimidil)suberato (BS), hexametilenodiamina (HMDA), 1-(2,3-
epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, uma carbodiimida e quaisquer combinações dos mesmos.
Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina.
[0061] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um gel de preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um gel de preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um uma média de peso molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, o gel compreende ainda água.
[0062] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um gel de preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um gel de preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, o gel compreende ainda água.
[0063] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um hidrogel de preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um hidrogel de preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) que têm uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso médio peso molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, o hidrogel compreende ainda água.
[0064] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um hidrogel de preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um hidrogel de preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, o hidrogel compreende ainda água.
[0065] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os
SPF tendo um peso médio molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF.
Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização,
a reticulação inclui reticulação por ligação química.
Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero.
Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática.
Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF têm um grau de cristalinidade de até cerca de 1%, cerca de
2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%,
cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de
24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%,
cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de
40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%,
cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de
56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60% ou mais de
60%.
[0066] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF têm um grau de cristalinidade de até cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%,
cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60% ou mais de 60%.
[0067] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso médio molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda um agente ativo. Em algumas formas de realização, o agente ativo é selecionado a partir do grupo que consiste em um inibidor de enzima, um agente anestésico, uma neurotoxina medicinal, um antioxidante, um agente anti-infeccioso, um agente anti-
inflamatório, um agente bloqueador de luz ultravioleta (UV), um corante, um hormônio, um imunossupressor e um agente anti-inflamatório. Em algumas formas de realização, o agente anestésico é lidocaína.
[0068] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda um agente ativo. Em algumas formas de realização, o agente ativo é selecionado a partir do grupo que consiste em um inibidor de enzima, um agente anestésico, uma neurotoxina medicinal, um antioxidante, um agente anti-infeccioso, um agente anti- inflamatório, um agente bloqueador de luz ultravioleta (UV), um corante, um hormônio, um imunossupressor e um agente anti-inflamatório. Em algumas formas de realização, o agente anestésico é lidocaína.
[0069] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível injetável, por exemplo, um agente de preenchimento dérmico injetável, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso médio peso molecular médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA).
[0070] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido injetável biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico injetável, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA).
[0071] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível com um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 50 Pa a cerca de 1500 Pa, por exemplo, um preenchimento dérmico com um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 50 Pa a cerca de 1500 Pa, o preenchimento incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso molecular ponderal médio variando entre cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, a partir de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 0,1 a cerca de 10 Hz. Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz.
[0072] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível com um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 50 Pa a cerca de 1500 Pa, por exemplo, um preenchimento dérmico com um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 50 Pa a cerca de 1500 Pa, o preenchimento incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular ou alto peso molecular.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, a reticulação inclui reticulação por ligação química. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação de comprimento zero. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 0,1 a cerca de 10 Hz. Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz.
[0073] Em algumas formas de realização, a invenção se refere a um método de fabricação de um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, o método incluindo o fornecimento de um composição compreendendo SPF e um polissacarídeo, e adição à solução de um agente de reticulação, um precursor de reticulação, um agente de ativação, ou um intensificador de gelificação, os SPF tendo um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 1 kDa e cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo, porções de reticulação derivadas de epóxi. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
[0074] Em algumas formas de realização, a invenção se refere a um método de fabricação de um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, o método incluindo o fornecimento de um composição compreendendo SPF e um polissacarídeo, e adição à solução de um agente de reticulação, um precursor de reticulação, um agente de ativação, ou um intensificador de gelificação, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular, e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo, porções de reticulação derivadas de epóxi. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
[0075] Em algumas formas de realização, a invenção se refere a um método de tratamento de uma condição em um indivíduo em necessidade do mesmo, por exemplo, uma condição da pele, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os
SPF tendo um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 1 kDa e cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF.
Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização,
o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo,
porções de reticulação derivadas de epóxi.
Em algumas formas de realização,
uma porção de reticulação é reticulação automática.
Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de
100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico
(HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
Em algumas formas de realização, a condição da pele é selecionada a partir do grupo que consiste em desidratação da pele,
falta de elasticidade da pele, aspereza da pele, falta de rigidez da pele, uma linha de estria da pele, uma marca de estria da pele, palidez da pele, um buraco dérmico, uma bochecha afundada, um lábio fino, um defeito retro-orbital, uma dobra facial, e uma ruga.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é administrado em uma região dérmica do sujeito.
Em algumas formas de realização, o método é um aumento, uma reconstrução, tratamento de uma doença, tratamento de um distúrbio, correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área.
Em algumas formas de realização, o método é um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido resiste à biodegradação, bioerosão, bioabsorção, e/ ou biossorção, durante pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses.
[0076] Em algumas formas de realização, a invenção se refere a um método de tratamento de uma condição em um indivíduo em necessidade do mesmo, por exemplo, uma condição da pele, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um polissacarídeo, os SPF tendo baixo peso molecular, médio peso molecular e/ ou alto peso molecular. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo, porções de reticulação derivadas de epóxi. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água. Em algumas formas de realização, a condição da pele é selecionada a partir do grupo que consiste em desidratação da pele, falta de elasticidade da pele, aspereza da pele, falta de rigidez da pele, uma linha de estria da pele, uma marca de estria da pele, palidez da pele, um buraco dérmico, uma bochecha afundada, um lábio fino, um defeito retro-orbital, uma dobra facial, e uma ruga. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é administrado em uma região dérmica do sujeito. Em algumas formas de realização, o método é um aumento, uma reconstrução, tratamento de uma doença, tratamento de um distúrbio, correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área. Em algumas formas de realização, o método é um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial. Em algumas formas de realização, o tecido de preenchimento resiste à biodegradação, bioerosão, bioabsorção, e/ ou biossorção, durante pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses.
[0077] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo, o método compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os SPF tendo um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 1 kDa e cerca de 250 kDa, de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa ou de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo, porções de reticulação derivadas de epóxi. Em algumas formas de realização, uma porção de reticulação é reticulação automática. Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é administrado em uma região dérmica do sujeito. Em algumas formas de realização, o método é um aumento, uma reconstrução, tratamento de uma doença, tratamento de um distúrbio, correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área. Em algumas formas de realização, o método é um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial. Em algumas formas de realização, o tecido de preenchimento resiste à biodegradação, bioerosão, bioabsorção, e/ ou biossorção, durante pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses.
[0078] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo,
o método compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um preenchimento de tecido biocompatível, por exemplo, um preenchimento dérmico, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um polissacarídeo, os
SPF tendo de baixo peso molecular, médio peso molecular, e/ ou alto peso molecular.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização, uma porção dos SPF é reticulada aos SPF.
Em algumas formas de realização, uma porção do polissacarídeo é reticulada ao polissacarídeo.
Em algumas formas de realização,
o preenchimento de tecido inclui ainda porções de reticulação, por exemplo,
porções de reticulação derivadas de epóxi.
Em algumas formas de realização,
uma porção de reticulação é reticulação automática.
Em algumas formas de realização, a porção de SPF reticulada é de até cerca de 100%. Em algumas formas de realização, a porção de polissacarídeo reticulada é de até cerca de
100%. Em algumas formas de realização, o polissacarídeo é ácido hialurônico
(HA). Em algumas formas de realização, os SPF são substancialmente desprovidos de sericina.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é administrado em uma região dérmica do sujeito.
Em algumas formas de realização, o método é um aumento, uma reconstrução,
tratamento de uma doença, tratamento de um distúrbio, correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área.
Em algumas formas de realização, o método é um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial.
Em algumas formas de realização, o tecido de preenchimento resiste à biodegradação, bioerosão,
bioabsorção, e/ ou biossorção, durante pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses.
[0079] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido biocompatível, compreendendo ácido hialurônico (HA) e um agente anestésico, em que uma porção do HA é modificada por uma ou mais porções de ligação compreendendo uma ou mais de uma cadeia de alcano ou alquila, um grupo éter e um álcool secundário, em que as porções do ligante estão ligadas ao HA em uma extremidade do ligante. Em algumas formas de realização, a modificação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente de ativação. Em algumas formas de realização, o HA no preenchimento de tecido tem um grau de modificação (MoD) de cerca de 10,0%, cerca de 10,1%, cerca de 10,2%, cerca de 10,3%, cerca de 10,4%, cerca de 10,5%, cerca de 10,6%, cerca de 10,7%, cerca de 10,8%, cerca de 10,9%, cerca de 11,0%, cerca de 11,1%, cerca de 11,2%, cerca de 11,3%, cerca de 11,4%, cerca de 11,5%, cerca de 11,6%, cerca de 11,7%, cerca de 11,8%, cerca de 11,9%, cerca de 12,0%, cerca de 12,1%, cerca de 12,2%, cerca de 12,3%, cerca de 12,4%, cerca de 12,5%, cerca de 12,6%, cerca de 12,7%, cerca de 12,8%, cerca de 12,9%, cerca de 13,0%, cerca de 13,1%, cerca de 13,2%, cerca de 13,3%, cerca de 13,4%, cerca de 13,5%, cerca de 13,6%, cerca de 13,7%, cerca de 13,8%, cerca de 13,9%, cerca de 14,0%, cerca de 14,1%, cerca de 14,2%, cerca de 14,3%, cerca de 14,4%, cerca de 14,5%, cerca de 14,6%, cerca de 14,7%, cerca de 14,8%, cerca de 14,9%, cerca de 15,0%, cerca de 15,1%, cerca de 15,2%, cerca de 15,3%, cerca de 15,4%, cerca de 15,5%, cerca de 15,6%, cerca de 15,7%, cerca de 15,8%, cerca de 15,9%, cerca de 16,0%, cerca de 16,1%, cerca de 16,2%, cerca de 16,3%, cerca de 16,4%, cerca de 16,5%, cerca de 16,6%, cerca de 16,7%, cerca de 16,8%, cerca de 16,9%, ut
17,0%, cerca de 17,1%, cerca de 17,2%, cerca de 17,3%, cerca de 17,4%, cerca de 17,5%, cerca de 17,6%, cerca de 17,7%, cerca de 17,8%, cerca de 17,9%,
cerca de 18,0%, cerca de 18,1%, cerca de 18,2%, cerca de 18,3%, cerca de
18,4%, cerca de 18,5%, cerca de 18,6%, cerca de 18,7%, cerca de 18,8%, cerca de 18,9%, cerca de 19,0%, cerca de 19,1%, cerca de 19,2%, cerca de 19,3%,
cerca de 19,4%, cerca de 19,5%, cerca de 19,6%, cerca de 19,7%, cerca de
19,8%, cerca de 19,9% ou cerca de 20,0%. Em algumas formas de realização,
a quantidade em % p/ p de HA modificado em relação à quantidade total de HA no preenchimento de tecido é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%,
cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de
20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%,
cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de
36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%,
cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de
52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%,
cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de
68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%,
cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de
84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%,
cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de
100%.
[0080] Em algumas formas de realização, o HA modificado inclui HA reticulado, em que o grau de reticulação do HA reticulado está entre cerca de 1% e cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação do HA reticulado é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%.
Em algumas formas de realização, o grau de reticulação do HA reticulado está entre cerca de 1% e cerca de 15%.
[0081] Em algumas formas de realização, o HA modificado ou reticulado compreende uma porção de ligação ou reticulação compreendendo uma cadeia de polietileno glicol (PEG). Em algumas formas de realização, o agente de reticulação e/ ou o precursor de reticulação compreende um grupo epóxi.
Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um agente de reticulação, um precursor de reticulação ou um agente ativador selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de poliepoxi,
um ligante de diepoxi, um poliepoxi-PEG, um diepoxi-PEG, um poliglicidil-PEG,
um diglicidil-PEG, um poli acrilato PEG, um diacrilato PEG, 1,4-bis(2,3-
epoxipropoxi)butano, 1,4-bisglicidiloxibutano, divinil sulfona (DVS), 1,4-
butanodiol diglicidil éter (BDDE), luz UV, glutaraldeído, 1,2-bis(2,3-
epoxipropoxi)etileno (EGDGE), 1,2,7,8-diepoxioctano (DEO), biscarbodiimida
(BCDI), pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE), dihidrazida adípica (ADH),
bis(sulfossuccinimidil)suberato (BS), hexametilenodiamina (HMDA), 1-(2,3-
epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, uma carbodiimida e quaisquer combinações dos mesmos.
Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um composto epóxi polifuncional selecionado a partir do grupo que consiste em 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), etileno glicol diglicidil éter
(EGDGE), 1,6-hexanodiol diglicidil éter, polietileno glicol diglicidil éter,
polipropileno glicol diglicidil éter, politetrametileno glicol diglicidil éter, neopentil glicol diglicidil éter, poliglicerol poliglicidil éter, diglicerol poliglicidil éter, glicerol poliglicidil éter, tri-metilolpropano poliglicidil éter, pentaeritritol poliglicidil éter, e sorbitol poliglicidil éter.
Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um agente de reticulação e/ ou um precursor de reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em polietileno glicol diglicidil éter, diepoxi PEG, PEG diglicidil éter, polioxietileno bis-glicidil éter,
PEGDE e PEGDGE.
Em algumas formas de realização, a modificação ou a reticulação é obtida usando polietileno glicol diglicidil éter tendo um Mn médio de cerca de 500, cerca de 1000, cerca de 2000, ou cerca de 6000. Em algumas formas de realização, a modificação ou de reticulação é obtida usando polietileno glicol diglicidil éter com cerca de 2 a cerca de 25 grupos etileno glicol.
Em algumas formas de realização, a modificação ou a reticulação é obtida usando um agente de reticulação e/ ou um precursor de reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fibroína de seda de poliglicidila, um ligante de fibroína de seda de diglicidila, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliglicidila e um ligante de fragmento de fibroína de seda de diglicidila.
[0082] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido inclui ainda um composto orgânico e/ ou um composto inorgânico. Em algumas formas de realização, o composto inorgânico compreende hidroxiapatita de cálcio. Em algumas formas de realização, a hidroxiapatita de cálcio é formulada como partículas com um diâmetro entre cerca de 1 µm e cerca de 100 µm, entre cerca de 1 µm e cerca de 10 µm, entre cerca de 2 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 3 µm e cerca de 10 µm, entre cerca de 4 µm e cerca de 15 µm, entre cerca de 8 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 5 µm e cerca de 10 µm, entre cerca de 6 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 7 µm e cerca de 12 µm, entre cerca de 7 µm e cerca de 20 µm, entre cerca de 9 µm e cerca de 18 µm, ou entre cerca de 10 µm e cerca de 25 µm. Em algumas formas de realização, a concentração de hidroxiapatita de cálcio está entre cerca de 0,001% e cerca de 5%. Em algumas formas de realização, a concentração de hidroxiapatita de cálcio é de cerca de 0,001%, cerca de 0,002%, cerca de 0,003%, cerca de 0,004%, cerca de 0,005%, cerca de 0,006%, cerca de 0,007%, cerca de 0,008%, cerca de 0,009%, cerca de 0,01%, cerca de 0,011%, cerca de 0,012%, cerca de 0,013%, cerca de 0,014%, cerca de 0,015%, cerca de 0,016%, cerca de 0,017%, cerca de 0,018%, cerca de 0,019% ou cerca de 0,02%. Em algumas formas de realização, a concentração de hidroxiapatita de cálcio é de cerca de 0,05%, cerca de 0,1%, cerca de 0,15%, cerca de 0,2%, cerca de 0,25%, cerca de 0,3%, cerca de 0,35%, cerca de 0,4%, cerca de 0,45%, cerca de 0,5%,
cerca de 0,55%, cerca de 0,6%, cerca de 0,65%, cerca de 0,7%, cerca de 0,75%, cerca de 0,8%, cerca de 0,85%, cerca de 0,9%, cerca de 0,95%, cerca de 1%, cerca de 1,05%, cerca de 1,1%, cerca de 1,15%, cerca de 1,2%, cerca de 1,25%, cerca de 1,3%, cerca de 1,35%, cerca de 1,4%, cerca de 1,45%, cerca de 1,5%, cerca de 1,55%, cerca de 1,6%, cerca de 1,65%, cerca de 1,7%, cerca de 1,75%, cerca de 1,8%, cerca de 1,85%, cerca de 1,9%, cerca de 1,95% ou cerca de 2%.
Em algumas formas de realização, o composto orgânico compreende um aminoácido selecionado a partir do grupo que consiste em glicina, L-prolina, alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina e valina.
[0083] Em algumas formas de realização, o HA é obtido a partir da bactéria Streptococcus ou da bactéria Bacillus subtilis. Em algumas formas de realização, o agente ativo é a lidocaína. Em algumas formas de realização, a concentração de agente ativo no preenchimento de tecido é de cerca de 0,001% a cerca de 5%. Em algumas formas de realização, a concentração de lidocaína no preenchimento de tecido é de cerca de 0,3%.
[0084] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido aqui divulgado é um gel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um hidrogel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água. Em algumas formas de realização, a concentração total de HA no preenchimento de tecido é de cerca de 10 mg/ ml a cerca de 50 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração total de HA no preenchimento de tecido é de cerca de 15 mg/ ml, cerca de 16 mg/ ml, 17 mg/ ml, cerca de 18 mg/ ml, cerca de 19 mg/ ml, cerca de 20 mg/ ml, cerca de 21 mg/ ml, cerca de 22 mg/ ml, cerca de 23 mg/ ml, cerca de 24 mg/ ml, cerca de 25 mg/ ml, cerca de 26 mg/ ml, cerca de 27 mg/ ml, cerca de 28 mg/ ml, cerca de 29 mg/ ml, ou cerca de 30 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de HA modificado ou reticulado no preenchimento de tecido é de cerca de 10 mg/ ml a cerca de 50 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de HA modificado ou reticulado no preenchimento de tecido é de cerca de 15 mg/ ml, cerca de 16 mg/ ml, cerca de 17 mg/ ml, cerca de 18 mg/ ml, cerca de 19 mg/ ml, cerca de 20 mg/ ml, cerca de 21 mg/ ml, cerca de 22 mg/ ml, cerca de 23 mg/ ml, cerca de 24 mg/ ml, cerca de 25 mg/ ml, cerca de 26 mg/ ml, cerca de 27 mg/ ml, cerca de 28 mg/ ml, cerca de 29 mg/ ml ou cerca de 30 mg/ ml.
[0085] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido divulgado posteriormente inclui proteína de seda ou fragmentos de proteína de seda (SPF). Em algumas formas de realização, a proteína de seda é fibroína de seda. Em algumas formas de realização, a proteína de seda é fibroína de seda substancialmente desprovida de sericina. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa. Em algumas formas de realização, os SPF têm baixo peso molecular. Em algumas formas de realização, os SPF têm médio peso molecular. Em algumas formas de realização, os SPF têm alto peso molecular. Em algumas formas de realização, os fragmentos de proteína de seda (SPF) têm uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em algumas formas de realização, os SPF têm um grau de cristalinidade de até 60%.
[0086] Em algumas formas de realização, a invenção se refere a um preenchimento de tecido incluindo HA e SPF, em que uma porção dos SPF é modificada ou reticulada.
Em algumas formas de realização, a quantidade em
% p/ p de SPF modificados ou reticulados em relação à quantidade total de SPF é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%,
cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de
22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%,
cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de
38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%,
cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de
54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%,
cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de
70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%,
cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82% cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de
86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%,
cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de modificação ou reticulação do SPF modificado ou reticulado está entre cerca de 1% e cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de modificação ou reticulação do SPF modificado reticulado é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de
17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%, cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100%. Em algumas formas de realização, o grau de modificação ou reticulação do SPF modificado ou reticulado está entre cerca de 1% e cerca de 15%. Em algumas formas de realização, o grau de modificação ou reticulação do SPF modificado ou reticulado é um ou mais de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14% e cerca de 15%.
[0087] Em algumas formas de realização, os SPF modificados ou reticulados compreendem uma porção de ligação ou reticulação compreendendo uma cadeia alcano ou alquila e/ ou um grupo éter, em que a porção de ligação ou reticulação é ligada aos SPF em uma extremidade da porção de ligação ou de reticulação. Em algumas formas de realização, os SPF modificados ou reticulados compreendem uma porção de ligação ou reticulação compreendendo uma cadeia de polietileno glicol (PEG). Em algumas formas de realização, os SPF modificados ou reticulados compreendem uma porção de ligação ou reticulação compreendendo um álcool secundário. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um agente de modificação ou reticulação, um precursor de modificação ou reticulação ou um agente ativador. Em algumas formas de realização, o agente de modificação ou reticulação e/ ou o precursor de modificação ou reticulação compreende um grupo epóxi. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um agente de modificação ou reticulação, um precursor de modificação ou reticulação ou um agente ativador selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de poliepoxi, um ligante de diepoxi, um poliepoxi- PEG, um diepoxi-PEG, um poliglicidil-PEG, um diglicidil-PEG, um poli acrilato PEG, um diacrilato PEG, 1,4-bis(2,3-epoxipropoxi)butano, 1,4- bisglicidiloxibutano, divinil sulfona (DVS), 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), luz UV, glutaraldeído, 1,2-bis(2,3-epoxipropoxi)etileno (EGDGE), 1,2,7,8- diepoxioctano (DEO), biscarbodiimida (BCDI), pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE), dihidrazida adípica (ADH), bis(sulfossuccinimidil)suberato (BS), hexametilenodiamina (HMDA), 1-(2,3-epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, uma carbodiimida e qualquer combinações dos mesmos. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um composto epóxi polifuncional selecionado a partir do grupo que consiste em 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), etileno glicol diglicidil éter (EGDGE), 1,6-hexanodiol diglicidil éter, polietileno glicol diglicidil éter, polipropileno glicol diglicidil éter, politetrametileno glicol diglicidil éter, neopentil glicol diglicidil éter, poliglicerol poliglicidil éter, diglicerol poliglicidil éter, glicerol poliglicidil éter, tri-metilolpropano poliglicidil éter, pentaeritritol poliglicidil éter, e sorbitol poliglicidil éter.
[0088] Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um agente de modificação ou reticulação e/ ou um precursor de modificação ou reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em polietileno glicol diglicidil éter, diepóxi PEG, PEG diglicidil éter, polioxietileno bis-glicidil éter, PEGDE e PEGDGE. Em algumas formas de realização, a modificação ou a reticulação é obtida usando polietileno glicol diglicidil éter tendo um Mn médio de cerca de 500, cerca de 1000, cerca de 2000, ou cerca de 6000. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida utilizando polietileno glicol diglicidil éter com cerca de 2 a cerca de 25 grupos etileno glicol. Em algumas formas de realização, a modificação ou reticulação é obtida usando um agente de modificação ou reticulação e/ ou um precursor de modificação ou reticulação selecionado a partir do grupo que consiste em um ligante de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliepoxi, um ligante de fragmento de fibroína de seda de diepoxi, um ligante de fibroína de seda de poliglicidila, um ligante de fibroína de seda de diglicidila, um ligante de fragmento de fibroína de seda de poliglicidila e um ligante de fragmento de fibroína de seda de diglicidila.
[0089] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido incluindo HA e SPF, em que uma porção de SPF é reticulada ao HA. Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido incluindo HA e SPF, em que uma porção dos SPF é reticulada aos SPF. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um gel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é um hidrogel. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido compreende ainda água. Em algumas formas de realização, a concentração total de SPF no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml a cerca de 15 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração total de SPF no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml, cerca de 0,5 mg/ ml, cerca de 1 mg/ ml, cerca de 1,5 mg/ ml, cerca de 2 mg/ ml, cerca de 2,5 mg/ ml, cerca de 3 mg/ ml, cerca de 3,5 mg/ ml, cerca de 4 mg/ ml, cerca de 4,5 mg/ ml, cerca de 5 mg/ ml, cerca de 5,5 mg/ ml, cerca de 6 mg/ ml, cerca de 6,5 mg/ ml, cerca de 7 mg/ ml, cerca de 7,5 mg/ ml, cerca de 8 mg/ ml, cerca de 8,5 mg/ ml, cerca de 9 mg/ ml, cerca de 9,5 mg/ ml, cerca de 10 mg/ ml, cerca de 10,5 mg/ ml, cerca de 11 mg/ ml, cerca de 11,5 mg/ ml, cerca de 12 mg/ ml, cerca de 12,5 mg/ ml, cerca de 13 mg/ ml, cerca de 13,5 mg/ ml, cerca de 14 mg/ ml, cerca de 14,5 mg/ ml ou cerca de 15 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de SPF modificados ou reticulados no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml a cerca de 15 mg/ ml. Em algumas formas de realização, a concentração de SPF modificados ou reticulados no preenchimento de tecido é de cerca de 0,1 mg/ ml, cerca de 0,5 mg/ ml, cerca de 1 mg/ ml, cerca de 1,5 mg/ ml, cerca de 2 mg/ ml, cerca de 2,5 mg/ ml, cerca de 3 mg/ ml, cerca de 3,5 mg/ ml, cerca de 4 mg/ ml, cerca de 4,5 mg/ ml, cerca de 5 mg/ ml, cerca de 5,5 mg/ ml, cerca de 6 mg/ ml, cerca de 6,5 mg/ ml, cerca de 7 mg/ ml, cerca de 7,5 mg/ ml, cerca de 8 mg/ ml, cerca de 8,5 mg/ ml, cerca de 9 mg/ ml, cerca de 9,5 mg/ ml, cerca de 10 mg/ ml, cerca de 10,5 mg/ ml, cerca de 11 mg/ ml, cerca de 11,5 mg/ ml, cerca de 12 mg/ ml, cerca de 12,5 mg/ ml, cerca de 13 mg/ ml, cerca de 13,5 mg/ ml, cerca de 14 mg/ ml, cerca de 14,5 mg/ ml, ou cerca de 15 mg/ ml.
[0090] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um preenchimento de tecido incluindo HA modificado ou reticulado e/ ou SPF modificados ou reticulados, em que o preenchimento de tecido é um preenchimento dérmico. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é biodegradável. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é injetável. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 25 Pa a cerca de 1500 Pa. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 25 Pa, cerca de 26 Pa, cerca de 27 Pa,
cerca de 28 Pa, cerca de 29 Pa, cerca de 30 Pa, cerca de 31 Pa, cerca de 32
Pa, cerca de 33 Pa, cerca de 34 Pa, cerca de 35 Pa, cerca de 36 Pa, cerca de
37 Pa, cerca de 38 Pa, cerca de 39 Pa, cerca de 40 Pa, cerca de 41 Pa, cerca de 42 Pa, cerca de 43 Pa, cerca de 44 Pa, cerca de 45 Pa, cerca de 46 Pa, cerca de 47 Pa, cerca de 48 Pa, cerca de 49 Pa, cerca de 50 Pa, cerca de 51 Pa, cerca de 52 Pa, cerca de 53 Pa, cerca de 54 Pa, cerca de 55 Pa, cerca de 56 Pa, cerca de 57 Pa, cerca de 58 Pa, cerca de 59 Pa, cerca de 60 Pa, cerca de 61 Pa, cerca de 62 Pa, cerca de 63 Pa, cerca de 64 Pa, cerca de 65 Pa, cerca de 66 Pa, cerca de 67 Pa, cerca de 68 Pa, cerca de 69 Pa, cerca de 70 Pa, cerca de 71 Pa, cerca de 72 Pa, cerca de 73 Pa, cerca de 74 Pa, cerca de 75 Pa, cerca de 76 Pa, cerca de 77 Pa, cerca de 78 Pa, cerca de 79 Pa, cerca de 80 Pa, cerca de 81 Pa, cerca de 82 Pa, cerca de 83 Pa, cerca de 84 Pa, cerca de 85 Pa, cerca de 86 Pa, cerca de 87 Pa, cerca de 88 Pa, cerca de 89 Pa, cerca de 90 Pa, cerca de 91 Pa, cerca de 92 Pa, cerca de 93 Pa, cerca de 94 Pa, cerca de 95 Pa, cerca de 96 Pa, cerca de 97 Pa, cerca de 98 Pa, cerca de 99 Pa, cerca de 100 Pa, cerca de 101 Pa,
cerca de 102 Pa, cerca de 103 Pa, cerca de 104 Pa, cerca de 105 Pa, cerca de
106 Pa, cerca de 107 Pa, cerca de 108 Pa, cerca de 109 Pa, cerca de 110 Pa,
cerca de 111 Pa, cerca de 112 Pa, cerca de 113 Pa, cerca de 114 Pa, cerca de
115 Pa, cerca de 116 Pa, cerca de 117 Pa, cerca de 118 Pa, cerca de 119 Pa,
cerca de 120 Pa, cerca de 121 Pa, cerca de 122 Pa, cerca de 123 Pa, cerca de
124 Pa ou cerca de 125 Pa.
Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 0,1 a cerca de 10 Hz.
Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz.
Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 5 Hz.
Em algumas formas de realização, G’ é medido por meio de um estresse oscilatório de cerca de 10 Hz.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem uma viscosidade complexa de cerca de 1 Pa.s a 10 Pa.s.
Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido tem uma viscosidade complexa de cerca de 1 Pa.s, cerca de 1,5 Pa.s, cerca de 2 Pa.s, cerca de 2,5 Pa.s, cerca de 3 Pa.s, cerca de 3,5 Pa.s, cerca de 4 Pa.s, cerca de 4,5 Pa.s, cerca de 5 Pa.s, cerca de 5,5 Pa.s, cerca de 6 Pa.s, cerca de 6,5 Pa.s, cerca de 7 Pa.s, cerca de 7,5 Pa.s, cerca de 8 Pa.s, cerca de 8,5 Pa.s, cerca de 9 Pa.s, cerca de 9,5 Pa.s ou cerca de 10 Pa.s. Em algumas formas de realização, a viscosidade complexa é medida por meio de um estresse oscilatório de cerca de 0,1 a cerca de 10 Hz. Em algumas formas de realização, a viscosidade complexa é medida por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz. Em algumas formas de realização, a viscosidade complexa é medida por meio de um estresse oscilatório de cerca de 5 Hz.
[0091] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento de uma condição em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um preenchimento de tecido incluindo HA modificado ou reticulado e/ ou SPF modificados ou reticulados. Em algumas formas de realização, a condição é uma condição da pele. Em algumas formas de realização, a condição da pele é selecionada a partir do grupo que consiste em desidratação da pele, falta de elasticidade da pele, aspereza da pele, falta de rigidez da pele, uma linha de estria da pele, uma marca de estria da pele, palidez da pele, um buraco dérmico, uma bochecha afundada, lábio fino, defeito retro- orbital, dobra facial e rugas.
[0092] Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento cosmético em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um preenchimento de tecido incluindo HA modificado ou reticulado e/ ou SPF modificados ou reticulados. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido é administrado em uma região dérmica do sujeito. Em algumas formas de realização, o método é um aumento, uma reconstrução, tratamento de uma doença, tratamento de um distúrbio, correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área. Em algumas formas de realização, o método é um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial.
[0093] Em algumas formas de realização dos métodos aqui descritos, o preenchimento de tecido resiste à biodegradação, bioerosão, bioabsorção e/ ou biossorção, por pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses. Em algumas formas de realização dos métodos aqui descritos, a administração do preenchimento de tecido ao sujeito resulta em uma resposta inflamatória reduzida em comparação com a resposta inflamatória induzida por um preenchimento de tecido controle que compreende um polissacarídeo e lidocaína, em que o preenchimento de tecido controle não inclui fragmentos de proteína de seda (SPF).
[0094] Em algumas formas de realização dos métodos aqui descritos, a administração do preenchimento de tecido ao sujeito resulta em aumento da produção de colágeno em comparação com a produção de colágeno induzida por um preenchimento de tecido controle compreendendo um polissacarídeo e lidocaína, em que o preenchimento de tecido controle não inclui proteína de seda fragmentos (SPF).
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0095] As formas de realização presentemente divulgadas serão adicionalmente explicadas com referência aos desenhos anexos. Os desenhos mostrados não estão necessariamente em escala, com ênfase, em vez disso, sendo geralmente colocada na ilustração dos princípios das formas de realização atualmente divulgadas.
[0096] A Figura 1 é um fluxograma que mostra várias formas de realização para a produção de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura (SPFs) da presente divulgação.
[0097] A Figura 2 é um fluxograma mostrando vários parâmetros que podem ser modificados durante o processo de produção de SPFs da presente divulgação durante as etapas de extração e dissolução.
[0098] A Figura 3 é uma tabela que resume a concentração de LiBr e carbonato de sódio (Na2CO3) nas soluções de proteína de seda da presente divulgação.
[0099] A Figura 4 é um quadro que resume a concentração de LiBr e Na2CO3 em soluções de proteína de seda da presente divulgação.
[00100] A Figura 5 é uma tabela que resume os Pesos Moleculares das soluções de proteínas da seda da presente divulgação.
[00101] As Figuras 6 e 7 são gráficos que representam o efeito do volume de extração na% de perda de massa.
[00102] A Figura 8 é uma tabela que resume os Pesos Moleculares da seda dissolvidos a partir de diferentes concentrações de LiBr e de diferentes tamanhos de extração e dissolução.
[00103] A Figura 9 é um gráfico que resume o efeito do Tempo de Extração no Peso Molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, LiBr de 100 °C e dissolução do forno a 100 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00104] A Figura 10 é um gráfico que resume o efeito do Tempo de Extração no Peso Molecular da seda processada sob as condições de 100 °C de Temperatura de Extração, LiBr fervente e Dissolução em Forno a 60 °C (o Tempo de Forno/ Dissolução foi variado).
[00105] A Figura 11 é um gráfico que resume o efeito do Tempo de Extração no Peso Molecular da seda processada nas condições de
Temperatura de Extração de 100 °C, LiBr a 60 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (o Tempo do Forno/ Dissolução foi variado).
[00106] A Figura 12 é um gráfico que resume o efeito do Tempo de Extração no Peso Molecular da seda processada nas condições de Temperatura de Extração de 100 °C, LiBr a 80 °C e Dissolução em Forno a 80 °C (o Tempo do Forno/ Dissolução foi variado).
[00107] A Figura 13 é um gráfico que resume o efeito do Tempo de Extração no Peso Molecular da seda processada sob as condições de Temperatura de Extração de 100 °C, LiBr a 80 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (o Tempo do Forno/ Dissolução foi variado).
[00108] A Figura 14 é um gráfico que resume o efeito do tempo de extração no peso molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, LiBr a 100 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00109] A Figura 15 é um gráfico que resume o efeito do tempo de extração no peso molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, LiBr a 140 °C e Dissolução em Forno a 140 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00110] A Figura 16 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura de Extração no Peso Molecular da seda processada nas condições de Tempo de Extração de 60 minutos, LiBr a 100 °C e Dissolução em Forno a 100 °C (o tempo do Forno/ Dissolução foi variado).
[00111] A Figura 17 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura de LiBr no Peso Molecular da seda processada nas condições de tempo de extração de 60 minutos, temperatura de extração a 100 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00112] A Figura 18 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura de LiBr no Peso Molecular da seda processada nas condições de
30 minutos de tempo de extração, temperatura de extração a 100 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00113] A Figura 19 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, tempo de extração de 30 minutos e brometo de lítio a 100 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00114] A Figura 20 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, tempo de extração de 60 minutos e brometo de lítio a 100 °C. (O tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00115] A Figura 21 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, tempo de extração de 60 minutos e brometo de lítio a 140 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00116] A Figura 22 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, tempo de extração de 30 minutos e brometo de lítio a 140 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00117] A Figura 23 é um gráfico que resume o efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de temperatura de extração a 100 °C, tempo de extração de 60 minutos e brometo de lítio a 80 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
[00118] A Figura 24 é um gráfico que resume os Pesos Moleculares da seda processada sob condições variadas, incluindo Tempo de Extração, Temperatura de Extração, Temperatura de Brometo de Lítio (LiBr), Temperatura de Forno para Dissolução, Tempo de Forno para Dissolução.
[00119] A Figura 25 é um gráfico que resume os Pesos Moleculares da seda processada sob condições em que a temperatura do forno/
dissolução é igual à temperatura de LiBr.
[00120] A Figura 26 é uma foto de formulações de seda/ HA em água ou solução salina tamponada com fosfato (PBS) em várias concentrações, que demonstram que as formulações de seda/ HA resultam em soluções opacas e homogêneas. O primeiro frasco não marcado é um frasco controle (22 mg/ ml de HA em água).
[00121] A Figura 27 é uma foto de formulações aquosas de seda/ HA depositadas em seringas, que demonstram que as formulações de seda/ HA resultam em soluções opacas e homogêneas. O controle é uma solução de 22 mg/ ml de HA em água.
[00122] A Figura 28 é um gráfico que representa o perfil de degradação dos hidrogéis de seda-HA e HA.
[00123] A Figura 29 é uma imagem de uma área intradérmica em porquinho da índica injetado com um preenchimento dérmico controle (enchimento HA disponível comercialmente incluindo lidocaína); o aumento do grau de inflamação é refletido pela extensão das áreas granulomatosas. O preenchimento de tecido disponível comercialmente é anotado como material azul/ cinza. A inflamação granulomatosa associada ao material pode ser observada aos 7 dias.
[00124] A Figura 30 é uma imagem de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com preenchimento dérmico controle (enchimento HA disponível comercialmente, incluindo lidocaína); o produto disponível comercialmente é anotado como material azul/ cinza. Aos 30 dias, pode ser observada inflamação com fibrose.
[00125] A Figura 31 é uma imagem de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (24 mg/ ml de HA, 9,6 mg/ ml de seda, BDDE reticulado); as áreas granulomatosas reduzidas em comparação com a injeção de controle indica resposta inflamatória aguda insignificante, e uma melhor biodegradabilidade do preenchimento de seda-HA em comparação com o controle. Há pouquíssima inflamação aos 7 dias. A inflamação é focal e às vezes difícil de encontrar.
Nenhum material de implante é observado.
[00126] A Figura 32 é uma imagem de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado como preenchimento dérmico seda-HA da invenção (24 mg/ ml de HA, 9,6 mg/ ml de seda, BDDE reticulado); aos 30 dias a inflamação é extremamente difícil de ser encontrada e mínima. Nenhum material de implante é observado.
[00127] A Figura 33 é uma imagem de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado como preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (24 mg/ ml de HA, 0,48 mg/ ml de seda, BDDE reticulado); o preenchimento resulta em inflamação leve focal nos 7 dias. A inflamação é crônica. Essa inflamação exigiu uma avaliação cuidadosa para ser identificada, pois era focal e mínima. Nenhum material de implante é observado.
[00128] A Figura 34 é uma imagem de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (24 mg/ ml de HA, 0,48 mg/ ml de seda, BDDE reticulado); A imagem de 30 dias demonstra ainda menos inflamação. Foi ainda mais difícil identificar em comparação com os implantes de 7 dias. Nenhum material de implante é observado.
[00129] A Figura 35 é um gráfico que representa a medição da turbidez do hidrogel de seda-HA. Curva preta (a): transmitância padrão; Curva vermelha (b): transmitância mais dispersão direta.
[00130] A Figura 36 é um gráfico que representa a medição da turbidez do hidrogel de HA sem seda. Curva preta (a): transmitância padrão; Curva vermelha (b): transmitância mais dispersão direta.
[00131] A Figura 37 é uma imagem de histologia representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico controle.
[00132] A Figura 38 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de HA da invenção (24 mg/ ml de HA, PEGDE reticulado, Amostra C4 – Tabela 25).
[00133] A Figura 39 representa uma imagem de histologia representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (22,8 mg/ ml de HA, 1,2 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, Amostra L – Tabela 25).
[00134] A Figura 40 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (23,76 mg/ ml de HA, 0,24 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, Amostra M – Tabela 25)
[00135] A Figura 41 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (22,8 mg/ ml de HA, 1,2 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, Amostra N – Tabela 25)
[00136] A Figura 42 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (22,8 mg/ ml de HA, 1,2 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, Amostra O – Tabela 25).
[00137] A Figura 43 é um gráfico que mostra resultados histológicos 7 dias após a implantação para a degradação do gel (formulações da Tabela 25 - formulações de BDDE reticulado são principalmente degradados; pontuação: 0 - normal; 1 - mínima; 2 - leve; 3 - moderada; e 4 - grave).
[00138] A Figura 44 é um gráfico que mostra os resultados histológicos de 7 dias após a implantação para a degradação do gel
(formulações da Tabela 25; pontuação: 0 - normal; 1 - mínima; 2 - leve; 3 - moderada; e 4 - grave).
[00139] A Figura 45 é um gráfico que mostra os resultados histológicos de 7 dias após a implantação para inflamação (formulações da Tabela 25 – nenhuma necrose de tecido foi observada, nenhuma coagulação do sangue foi observada, e deposição mínima de colágeno foi observada na formulação controle e algumas das formulações teste; pontuação: 0 - normal; 1 - mínima; 2 - leve; 3 - moderada; e 4 - grave).
[00140] A Figura 46 é um gráfico que mostra os resultados histológicos de 7 dias após o implante para macrófagos (formulações da Tabela 25; pontuação: 0 - normal; 1 - mínima; 2 - leve; 3 - moderada; e 4 - grave).
[00141] As Figuras 47A e 47B mostram o G’ de hidrogéis com várias concentrações de seda antes e depois da diálise. Figura 47A: HA reticulado misturado a 100 g/ ml, e Figura 47B: PM HA reticulado único a 25 mg/ ml.
[00142] As Figuras 48A e 48B mostram a razão de inchaço de hidrogel com várias concentrações de seda durante a diálise. Figura 48A: HA reticulado misturado a 100 m g/ ml, e Figura 48B: PM HA reticulado único a 25 mg/ ml.
[00143] As Figuras 49A e 49B mostram as curvas de calibração para soluções de seda de médio e baixo peso molecular, respectivamente.
[00144] As Figuras 50A e 50B mostram os espectros de absorbância de géis de seda-HA diluídos com concentração de seda desconhecida; a concentração teórica de seda (mg/ ml) é mostrada para cada amostra de gel de seda-HA na Tabela 26.
[00145] Figura 51 mostra a medição da turbidez do hidrogel de HA sem seda (vermelho; maior transmitância em todo o intervalo de comprimento de onda) e com 3 mg/ ml de seda (azul; menor transmitância em todo o intervalo de comprimento de onda); uma maior % de transmitância indica uma amostra menos turva, com menos opacidade óptica.
[00146] A Figura 52 ilustra os íons de assinatura dos fragmentos de fibroína de seda reticulada com PEG (o espectro LC MS/MS mostra os íons de assinatura da seda reticulada com PEG).
[00147] As Figuras 53A-B ilustram a avaliação semi- quantitativa (quanto menor a pontuação, melhor; uma pontuação total de 6,9 para o grupo de controle e uma pontuação total de 3,8 para o grupo de teste); Imagens de histologia de 7 dias: Juvederm® (Figura 53A) e preenchimento dérmico de seda (Figura 53B).
[00148] A Figura 54 mostra um preenchimento dérmico de seda em uma seringa de 1 ml mostrando um hidrogel turvo com fibras de seda finas suspensas.
[00149] As Figuras 55A-C ilustram os resultados dos testes para G’, MoD e força de injeção. O módulo de armazenamento G’ (Figura 55A), o grau de modificação MoD (Figura 55B) e a força de injeção (Figura 55C, agulha de calibre 30) de hidrogéis de seda-HA são representados como uma função da proporção de seda para a quantidade total de seda e HA na formulação (% de seda = 100 * (concentração de seda) / (concentração combinada de seda e HA)).
Concentração de HA = 24,7 mg/ml para todas as formulações e PEG está presente em ~ 30% p/p. A representação gráfica é a média ± desvio padrão de três amostras para a Figura 55A e a Figura 55C. Na Figura 55B, várias amostras de hidrogel foram combinadas para cada medição.
[00150] A Figura 56 ilustra os resultados do teste para o módulo de armazenamento G’ e a força de injeção IF de mais de 100 candidatos a preenchimento dérmico. (Pontos azuis), IF medido com uma agulha 30G x 1/2 (Pontos laranja), IF medido com uma agulha 27G x 1/2. As concentrações totais de HA e seda variam de 15 mg/ml a 26 mg/ml.
[00151] A Figura 57 ilustra os espectros de absorção de hidrogéis HA formulados com (linha sólida) e sem seda (linha pontilhada) e um produto de hidrogel concorrente (Juvéderm® Ultra Plus XC, linha tracejada). O gráfico é a média de três medições para cada hidrogel.
[00152] A Figura 58A ilustra a reversibilidade do hidrogel in vitro para AS-V1 (branco) ou Juvéderm® Ultra Plus XC (preto). Aproximadamente 1 g de cada hidrogel foi digerido com 150 U de hialuronidase a 37 °C por 30 minutos, e o peso dos géis restantes foi medido. Este processo foi repetido mais três vezes para um total de 600 U de hialuronidase ao longo de 120 minutos. O grau de degradação do hidrogel é representado por uma proporção em peso (%) do hidrogel restante para o hidrogel original. O gráfico é a média ± desvio padrão de três amostras em cada ponto de tempo.
[00153] A Figura 58B ilustra a reversibilidade do hidrogel in vivo para AS-V1 (branco) ou Juvéderm® Ultra Plus XC (preto). Aproximadamente 0,1 ml de cada local de hidrogel injetado foi digerido com 0,1 ml de hialuronidase e observado por 30 minutos para determinar a reversão com base no bolo restante. O número de injeções de reversibilidade adicionais é representado pelo número de injeções de hialuronidase adicionais. Em 61% e 47% dos casos, AS- V1 e Juvéderm® Ultra Plus XC exigiram apenas uma injeção de reversibilidade, respectivamente.
[00154] A Figura 59 ilustra os resultados do teste de irritação cutânea Draize para porquinhos da índia injetados com AS-V1 (branco) ou Juvéderm® Ultra Plus XC (preto). Seis animais foram testados em cada ponto de tempo (dias 1-5 após a injeção); cada animal recebeu 3 injeções de 0,1 ml de AS-V1 e 3 de Juvéderm® Ultra Plus XC espaçadas ~ 1 cm na derme dorsal. Os dados plotados são as pontuações médias diárias ± desvio padrão; a pontuação máxima possível é 8.
[00155] As Figuras 60A-D ilustram os resultados do teste para hematomas pós-injeção em porquinhos da índia injetados com AS-V1 (círculo superior, indicado em azul) ou Juvéderm® Ultra Plus XC (círculo inferior, indicado em vermelho). As Figuras 60A e 60B mostram os resultados do teste 3 dias após a injeção. Figuras 60C e 60D mostram os resultados do teste 4 dias após a injeção. Seis animais foram testados em cada momento (dias 3 e 4 após a injeção); cada animal recebeu 3 injeções de 0,1 ml de AS-V1 e 3 de Juvéderm® Ultra Plus XC com espaçamento de 1 cm na derme dorsal. Imagens representativas de hematomas de dois animais (Figura 60A e Figura 60B, ou Figura 60C e Figura 60D) são mostradas.
[00156] As Figuras 61A-D ilustram os resultados dos testes em animais para inflamação (Figura 61A), reversibilidade do hidrogel in vivo (degradação, Figuras 61B e 61D) e migração do hidrogel (Figuras 61C e 61E) após a injeção de AS-V1 (linhas sólidas) ou Juvéderm® Ultra Plus XC (linhas tracejadas). Seis animais foram testados em cada ponto de tempo (7 dias, 30 dias, 3 meses, 6 meses e 12 meses após a injeção); cada animal recebeu 3 injeções de 0,1 ml de AS-V1 e 3 de Juvéderm® Ultra Plus XC espaçadas cerca de 1 cm na derme dorsal. Cortes de tecido da derme dorsal de porquinho da índia foram corados com hematoxilina e eosina e cortes representativos avaliados por um patologista cego. Os dados plotados são as pontuações médias da avaliação ± desvio padrão em cada ponto de tempo. Para inflamação, a pontuação máxima possível é 28, e para degradação e migração de hidrogel as pontuações máximas possíveis são 4. A Figura 61F ilustra os resultados do teste para resposta à inflamação com AS-V1 (linhas sólidas) ou Juvéderm Ultra Plus XC (linhas tracejadas). Seis animais foram testados em cada ponto de tempo (7 dias, 30 dias, 90 dias, 180 dias e 365 dias após a injeção); cada animal recebeu 3 injeções de 0,1 ml de AS-V1 e 3 de Juvéderm Ultra Plus XC espaçadas ~ 1 cm na derme dorsal. Cortes de tecido da derme dorsal de porquinho da índia foram corados com hematoxilina e eosina e cortes representativos avaliados por um patologista cego. Os dados plotados são as pontuações médias da avaliação ± desvio padrão em cada ponto de tempo. Para inflamação, a pontuação máxima possível é 28.
[00157] As Figuras 62A-J ilustram as lâminas de histologia representativas para estudo de porquinho da índia GLP comparando AS-V1 (teste) linha superior (A, C, E, G e I) e linha inferior Juvéderm Ultra Plus XC (controle) (B, D, F , H e J). As amostras A e B representam o teste e o controle em 7 dias, respectivamente, as amostras C e D representam o teste e o controle em 30 dias, respectivamente, as amostras D e F representam o teste e o controle em 90 dias, respectivamente, as amostras G e H representam o teste e o controle em 180 dias, respectivamente, e as amostras I e J representam teste e controle em 365 dias, respectivamente.
[00158] As Figuras 63A-D ilustram a histologia representativa dos tecidos dérmicos aos 3 meses (Figuras 63A, C) ou 6 meses (Figs. 63B, D) após a injeção com AS-V1 (Figuras 63 A, B) ou Juvéderm® Ultra Plus XC (Figuras 63 C, D). Cortes de tecido da derme dorsal da cobaia foram corados com hematoxilina e eosina. Seções representativas foram de seis animais injetados com 0,1 ml de AS-V1 ou Juvéderm® Ultra Plus XC. Ampliação 25x.
[00159] A Figura 64 ilustra os espectros de NMR de um HA exemplificativo usado nos métodos e géis da divulgação, espectro de NMR com marcadores atribuídos; o pico identificado como “a” é atribuído e normalizado como 3 e a integração dos picos de 3,30 a 4,05 é 11.
[00160] A Figura 65 ilustra os espectros de NMR de um gel exemplificativo da divulgação, incluindo o cálculo do MoD do gel com base na integração do pico.
[00161] Embora os desenhos acima identificados apresentem formas de realização presentemente divulgadas, outras formas de realização também são contempladas, como observado na discussão. Esta divulgação apresenta formas de realização ilustrativas a título de representação e não de limitação. Numerosas outras modificações e formas de realização podem ser concebidas por aqueles técnicos no assunto que se enquadram no escopo e espírito dos princípios das formas de realização presentemente divulgadas.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[00162] Os preenchimentos dérmicos revolucionaram o aumento dos tecidos moles, tornando-se cada vez mais populares nos últimos anos para a correção de rugas e dobras cutâneas moderadas a graves devido ao aumento da demanda de uma população idosa dos Estados Unidos (EUA) que deseja procedimentos cosméticos menos invasivos. Na verdade, nos últimos trinta anos, os preenchimentos dérmicos se tornaram uma parte significativa da dermatologia médica e cosmética. Clinicamente, os preenchedores dérmicos são usados para corrigir cicatrizes debilitantes, assimetria morfológica e lipoatrofia facial em pacientes em tratamento para infecção pelo HIV.
Cosmeticamente, os preenchimentos dérmicos são usados para minimizar vincos na pele e levantar cicatrizes em toda a parte superior, média e inferior da face, eliminando linhas finas da testa e pés de galinha. Os preenchimentos dérmicos revertem esses efeitos restaurando o volume e a elevação, corrigindo a descida do coxim adiposo malar e suavizando as dobras nasolabiais. Como o uso de preenchimentos dérmicos aumentou em popularidade, e porque nenhum produto é aplicável para todas as indicações, o número de produtos de preenchimento dérmico disponíveis também aumentou, com a aprovação do FDA de 5 novos produtos para aumento de tecidos moles em apenas nos últimos ~ 5 anos. Inicialmente, tecido autólogo e colágenos derivados de animais estavam disponíveis para uso; agora, as opções de preenchimento dérmico incluem biopolímeros e implantes sintéticos. Os preenchimentos dérmicos se enquadram, sem limitação, em três tipos: temporários (não permanentes), semipermanentes e permanentes. Colágeno, ácido hialurônico (AH) e outros preenchimentos de base biológica e biodegradáveis são temporários, com efeitos que duram de alguns meses a dois anos; os preenchimentos semipermanentes têm efeitos que duram alguns anos e incluem ácido poli-L- láctico biodegradável e produtos à base de hidroxiapatita de cálcio; Os produtos de preenchimento permanentes podem durar cinco ou mais anos e incluem polimetilmetacrilato não biodegradável (PMMA), hidrogel de poliacrilamida e silicone líquido.
[00163] Infelizmente, após décadas de pesquisa e desenvolvimento, ainda existem limitações com os preenchimentos dérmicos atuais. Foram relatadas reações adversas resultantes da injeção de produtos de preenchimento dérmico atualmente disponíveis em alguns pacientes. Estes incluem dor imediata, hipersensibilidade e anafilaxia, inchaço pós-injeção precoce, eritema, infecção, hipercorreção e necrose, ativação tardia de herpes pós-injeção (HSV), descoloração azulada da pele (descrita como o efeito Tyndall), formação de nódulo ou granuloma e cicatrizes permanentes pós- injeção. Em geral, os produtos de preenchimento mais permanentes são responsáveis pelas reações mais graves, enquanto os produtos mais temporários, como os preenchimentos à base de HA, levam a reações menos graves. Enquanto isso, é provável que o público prefira um produto que dê resultados mais duradouros e evite essas complicações, muitas vezes difíceis de resolver. Uma estratégia para atingir esse objetivo é a modificação dos hidrogéis à base de ácido hialurônico (HA) para aumentar sua longevidade. O HA, que é encontrado naturalmente na pele, tem uma alta taxa de renovação no corpo, tornando um desafio usar o HA como preenchimento dérmico de longa duração. Para melhorar sua persistência clínica, a estabilidade do HA em preenchimentos dérmicos pode ser aumentada por meio da reticulação das cadeias de HA. A reticulação restringe o acesso de fatores de degradação, como a enzima hialuronidase e espécies reativas de oxigênio (por exemplo, superóxido), às cadeias individuais de HA, protegendo-as da degradação. Além disso, HA reticulado por meio de um método específico – a tecnologia VyCross™ - foi recentemente associado a um aumento na ocorrência de lesões firmes de início tardio, uma das reações adversas mais graves vistas com preenchimentos dérmicos. Para uso como preenchimento dérmico, é desejável que os materiais de hidrogel exibam viscoelasticidade e resistência à deformação (materiais “mais rígidos” com G’ mais alto), facilidade de fluxo durante a injeção (baixo IF) e longevidade ou resistência à degradação in vivo (normalmente alcançado com um MoD mais alto).
[00164] Por essas razões, outras estratégias para modificar e otimizar hidrogéis à base de HA estão em estudo; espera-se que estes tenham maior potencial para evitar eventos adversos e, ao mesmo tempo, manter a durabilidade. Como o primeiro biomaterial implantável utilizado durante séculos para ligadura de pele, a fibroína de seda possui uma história bem estabelecida de uso e compatibilidade com a pele humana. Além disso, a proteína fibroína da seda induz a produção de colágeno por fibroblastos em cultura e aumenta a densidade de células de fibroblastos. Assim, a integração da fibroína de seda em um preenchimento dérmico tem o potencial de facilitar a produção de colágeno no tecido dérmico tratado, resultando em um produto que tem utilidade regenerativa e cosmética. O uso de proteína de fibroína de seda também possui outras vantagens: com uma estrutura única que lhe confere notável resistência e dureza em comparação com outros biomateriais, e tem uma capacidade inerente de adotar diferentes conformações estruturais, as unidades de fibroína podem se automontar em dezenas de diferentes polímeros de ordem superior sem a necessidade de solventes, plastificantes ou catalisadores que geralmente têm efeitos deletérios sobre os organismos vivos. Olhando além da adição de fibroína de seda aos hidrogéis à base de HA, o uso de polietileno glicol (PEG), um polímero com biocompatibilidade comprovada, oferece benefícios adicionais no controle das propriedades mecânicas dos géis de preenchimento dérmico de seda-HA. Por décadas, o PEG tem sido usado por si só ou como uma modificação para outros veículos/ revestimentos para entregar agentes bioativos, aumentando a biocompatibilidade, hidrofilicidade, estabilidade e biodegradabilidade de nanotransportadores e, muitas vezes, reduzindo efetivamente a toxicidade de bioativos e transportadores. Esta divulgação fornece novas formulações e produtos de preenchimento dérmico à base de seda para fornecer novas opções de tratamento que evitam problemas de eventos adversos vistos recentemente no mercado de preenchimento dérmico.
Os preenchimentos dérmicos contendo seda descritos aqui com diferentes características podem ser feitos que individualmente satisfazem a necessidade de uma série de diferentes indicações estéticas e médicas, mantendo os perfis de biocompatibilidade.
[00165] Embora os compostos de seda-HA tenham sido estudados para vários usos como andaimes em engenharia de tecidos, a exploração de seu uso como agentes de preenchimento dérmico expande os possíveis usos dos hidrogéis de seda-HA e representa a base de uma nova abordagem para a formulação de preenchimentos dérmicos com considerável promessa para o mercado estético. A presente divulgação descreve o estabelecimento de uma nova plataforma - a plataforma de hidrogel de seda ativada - para a formulação de hidrogéis de HA integrados com seda que variam no módulo de armazenamento (G’) – importante para o desenvolvimento de produtos de preenchimento dérmicos para as diferentes indicações - enquanto mantém características que promovem a longevidade do produto (alto MoD). Na verdade, o candidato principal (AS-V1) mostrou desempenho promissor in vitro e in vivo, demonstrando propriedades adequadas para aplicações de preenchimento de tecido intradérmico, com um MoD alto em IF operável e G’ desejável (ver Exemplos 32-35 infra).
[00166] A incorporação de seda em preenchimentos dérmicos à base de HA oferece uma escolha vantajosa em várias frentes. A incorporação da proteína da seda pode ajudar a evitar alguns dos efeitos adversos que ocorrem com os produtos de preenchimento dérmico atuais. Por exemplo, AS-V1 demonstrou maior absorvância de UV para luz visível azul em comparação com um produto disponível comercialmente, indicando que é menos provável que resulte em azulado do tipo Tyndall da pele do paciente e, portanto, pode ser mais aplicável para correções de estética superficial. A formação de lesão/ nódulo foi observada com alguns produtos de preenchimento, potencialmente como resultado de um alto grau de reticulação ou do uso de tamanhos múltiplos (pesos moleculares) de HA, como ocorre nas tecnologias VyCrossTM. Isso pode ser evitado com hidrogéis contendo seda, pois um HA de tamanho único é usado e o MoD pode ser facilmente modulado.
[00167] Além disso, o AS-V1 tem desempenho equivalente ou melhor do que o atual líder de mercado em testes de segurança e eficácia.
Os testes de biocompatibilidade confirmaram as expectativas construídas sobre a segurança demonstrada de todos os três componentes do gel para uso in vivo: (1) HA como um componente natural da matriz extracelular viscoelástica da pele; (2) seda que tem sido usada em diferentes aplicações biomédicas ao longo da história, incluindo para reconstrução de tecido dérmico; e (3) PEG como um polímero biocompatível (Ver Exemplos 32-35 infra). Na verdade, AS-V1 satisfez todos os critérios em estudos de biocompatibilidade ISO 10993 e em estudos in vivo causou irritação e hematomas pós-injeção mínimas e inflamação em níveis semelhantes ou inferiores aos observados com um produto comercial. As características de desempenho do hidrogel in vivo de longevidade, degradação, migração e reversibilidade também foram semelhantes entre AS-V1 e um produto comercial. Em particular, o preenchimento dérmico AS-V1 atende aos critérios de longevidade desejados, com o volume de gel remanescente aos 12 meses após a injeção comparável ao Juvéderm Ultra Plus XC (Figuras 61D-E e Figuras 62A-J infra), um produto comercial conhecido para durar 12 meses como um tratamento do dobra nasolabial. Além disso, o gel de seda-HA incorporado na matriz de colágeno da pele mais suavemente do que o Juvéderm Ultra Plus XC (Fig. 63A- D infra); isso pode ser resultado de diferenças de viscosidade entre os dois géis e/ ou da inclusão da proteína da seda, hipóteses que serão testadas em estudos futuros.
[00168] A estratégia de incorporar seda em preenchimentos dérmicos à base de HA é vantajosa em várias frentes, desde a versatilidade da plataforma de formulação desenvolvida que carrega o potencial de gerar um conjunto de produtos de preenchimento dérmico apropriado para uma variedade de indicações médicas e estéticas, até a biocompatibilidade superior dos géis resultantes.
[00169] As principais vantagens que resultam da incorporação de seda em preenchimentos dérmicos à base de HA são as seguintes: (1) com diferentes aplicações de destino, os produtos de preenchimento dérmico requerem diferentes propriedades mecânicas, longevidade e perfis de reversibilidade. Como a fibroína da seda pode se automontar em dezenas de diferentes polímeros/ conformações estruturais altamente ordenadas e é naturalmente resiliente a mudanças de temperatura, umidade e pH, as propriedades físico-químicas e mecânicas do hidrogel, incluindo sua capacidade de ligar água (potencial para intumescimento), pode ser controlado por meio de concentrações variáveis de seda em combinação com uma única cadeia de HA menor, em vez de misturar diferentes formas de HA ou concentrações variáveis de reticulador. Isso aponta para a capacidade da plataforma aqui descrita de gerar uma variedade de formulações de preenchimento dérmico de seda-HA; (2) Como os hidrogéis de seda-HA têm propriedades que indicam o potencial de evitar o efeito Tyndall, têm um perfil de reversibilidade semelhante aos produtos à base de HA atualmente disponíveis e incorporam proteína de fibroína de seda purificada biocompatível e não tóxica e reticulador PEG, a probabilidade de seu uso causando eventos adversos é relativamente baixo.
[00170] A plataforma de hydrogel de seda ativada aqui descrita utiliza a capacidade única de fibroína de seda de auto-montar em dezenas de diferentes polímeros altamente ordenados/ conformações estruturais e a sua resistência natural às mudanças de temperatura, umidade e pH. Por meio dessa plataforma, as propriedades biofísicas de um hidrogel, incluindo sua capacidade de se ligar à água (potencial de inchaço) e suas interações com a pele, podem ser controladas por meio de concentrações variáveis de seda em combinação com uma única cadeia de HA menor em vez de misturar diferentes formas ou concentrações variáveis de HA de reticulador.
Na verdade, a plataforma de hidrogel de seda ativada já foi aproveitada para gerar uma biblioteca de produtos com uma variedade de características estruturais (Fig. 56 infra) a partir das quais as propriedades do gel de importância crucial para o desempenho em pacientes, como propriedades mecânicas e longevidade, podem ser otimizadas para diferentes aplicações de destino. Com base nas características de bom desempenho do produto AS-V1, esperamos que os preenchimentos dérmicos contendo seda adequados para uma série de diferentes indicações estéticas e médicas estejam disponíveis, fornecendo novas opções de tratamento com baixa probabilidade de causar problemas de eventos adversos evitados.
[00171] São divulgados aqui preenchimentos de tecido que incluem fragmentos de proteína de seda (SPF). Em algumas formas de realização, esta divulgação descreve preenchimentos dérmicos que fornecem resultados mais duradouros, evitando complicações, tendo como foco a modificação de hidrogéis à base de ácido hialurônico. Em algumas formas de realização, esta divulgação descreve uma plataforma de hidrogel de seda ativada na qual a fibroína de seda é integrada com sucesso em hidrogéis à base de ácido hialurônico, permitindo a otimização eficiente das propriedades mecânicas, ópticas e de longevidade do hidrogel. Em algumas formas de realização, esta divulgação descreve o método de produção de hidrogéis de seda-HA usando a plataforma de hidrogel de seda ativada usando misturas de ácido hialurônico, fibroína de seda e polietileno glicol.
[00172] Em algumas formas de realização, esta divulgação descreve um sistema de hidrogel de fibroína de seda/ ácido hialurônico/ polietileno glicol. Em algumas formas de realização, esta divulgação descreve hidrogéis de seda-HA exibindo propriedades físico-químicas (por exemplo, resistência mecânica, elasticidade, teor de água do hidrogel sendo semelhante ao tecido mole) adequadas para aplicação como preenchimento dérmico para uma ampla variedade de indicações cosméticas e médicas.
[00173] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido são preparados a partir de composições aqui descritas que podem incluir SPF e ácido hialurônico (HA). Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser preenchimentos dérmicos.
[00174] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo descrito aqui usando HA com um PM entre cerca de 5 kDa e cerca de 5 MDa, entre cerca de 100 kDa e cerca de 4 MDa, ou entre cerca de 500 kDa e cerca de 3 MDa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo descrito aqui usando HA com um PM de cerca de 5 kDa, cerca de 100 kDa, cerca de 150 kDa, cerca de 200 kDa, cerca de 250 kDa, cerca de 300 kDa, cerca de
350 kDa, cerca de 400 kDa, cerca de 450 kDa, cerca de 500 kDa, cerca de 550 kDa, cerca de 600 kDa, cerca de 650 kDa, cerca de 700 kDa, cerca de 750 kDa, cerca de 800 kDa, cerca de 850 kDa, cerca de 900 kDa, cerca de 950 kDa, cerca de 1000 kDa, cerca de 1050 kDa, cerca de 1100 kDa, cerca de 1150 kDa, cerca de 1200 kDa, cerca de 1250 kDa, cerca de 1300 kDa, cerca de 1350 kDa, cerca de 1400 kDa, cerca de 1450 kDa, cerca de 1500 kDa, cerca de 1550 kDa, cerca de 1600 kDa, cerca de 1650 kDa, cerca de 1700 kDa, cerca de 1750 kDa, cerca de 1800 kDa, cerca de 1850 kDa, cerca de 1900 kDa, cerca de 2000 kDa, cerca de 2050 kDa, cerca de 2100 kDa, cerca de 2150 kDa, cerca de 2200 kDa, cerca de 2250 kDa, cerca de 2300 kDa, cerca de 2350 kDa, cerca de 2400 kDa, cerca de 2450 kDa, cerca de 2500 kDa, cerca de 2550 kDa, cerca de 2600 kDa, cerca de 2650 kDa, cerca de 2700 kDa, cerca de 2750 kDa, cerca de 2800 kDa, cerca de 2850 kDa, cerca de 2900 kDa, cerca de 2950 kDa, cerca de 3000 kDa, cerca de 3050 kDa, cerca de 3100 kDa, cerca de 3150 kDa, cerca de 3200 kDa, cerca de 3250 kDa, cerca de 3300 kDa, cerca de 3350 kDa, cerca de 3400 kDa, cerca de 3450 kDa, cerca de 3500 kDa, cerca de 3550 kDa, cerca de 3600 kDa, cerca de 3650 kDa, cerca de 3700 kDa, cerca de 3750 kDa, cerca de 3800 kDa, cerca de 3850 kDa, cerca de 3900 kDa, cerca de 3950 kDa, ou cerca de 4000 kDa.
Qualquer um dos PM de HA acima pode ser misturado com qualquer outro dos PM de HA acima, em qualquer proporção possível. Em algumas formas de realização, um preenchimento dérmico é feito por mistura de um alto PM de HA que pode ser misturado com um baixo PM de HA, em que o alto PM de HA está em uma proporção de cerca de 0,01%, ou cerca de 0,1%, ou cerca de 0,2%, ou cerca de 0,3%, ou cerca de 0,4%, ou cerca de 0,5%, ou cerca de 0,6%, ou cerca de 0,7%, ou cerca de 0,8%, ou cerca de 0,9%, ou cerca de 1% ou cerca de 2%, ou cerca de 3%, ou cerca de 4%, ou cerca de 5%, ou cerca de 6%, ou cerca de 7%, ou cerca de 8%, ou cerca de 9%, ou cerca de 10%, ou cerca de 11%, ou cerca de 12%, ou cerca de 13%, ou cerca de 14%, ou cerca de 15%, ou cerca de 16%, ou cerca de 17%, ou cerca de 18%, ou cerca de 19%, ou cerca de 20%, ou cerca de 21%, ou cerca de 22%, ou cerca de 23%, ou cerca de 24%, ou cerca de 25%, ou cerca de 26%, ou cerca de 27%, ou cerca de 28%, ou cerca de 29%, ou cerca de 30%, ou cerca de 31%, ou cerca de 32%, ou cerca de 33%, ou cerca de 34%, ou cerca de 35%, ou cerca de 36%, ou cerca de 37%, ou cerca de 38%, ou cerca de 39%, ou cerca de 40%, ou cerca de 41%, ou cerca de 42%, ou cerca de 43%, ou cerca de 44%, ou cerca de 45%, ou cerca de 46%, ou cerca de 47%, ou cerca de 48%, ou cerca de 49%, ou cerca de 50%, ou cerca de 51%, ou cerca de 52%, ou cerca de 53%, ou cerca de 54%, ou cerca de 55%, ou cerca de 56%, ou cerca de 57%, ou cerca de 58%, ou cerca de 59%, ou cerca de 60%, ou cerca de 61%, ou cerca de 62%, ou cerca de 63%, ou cerca de 64%, ou cerca de 65%, ou cerca de 66%, ou cerca de 67%, ou cerca de 68%, ou cerca de 68%, ou cerca de 69%, ou cerca de 70%, ou cerca de 71%, ou cerca de 72%, ou cerca de 73%, ou cerca de 74%, ou cerca de 75%, ou cerca de 76%, ou cerca de 77%, ou cerca de 78%, ou cerca de 79%, ou cerca de 80%, ou cerca de 81%, ou cerca de 82%, ou cerca de 83%, ou cerca de 84%, ou cerca de 85%, ou cerca de 86%, ou cerca de 87%, ou cerca de 88%, ou cerca de 89%, ou cerca de 90%, ou cerca de 91%, ou cerca de 92%, ou cerca de 93%, ou cerca de 94%, ou cerca de 95%, ou cerca de 96%, ou cerca de 97%, ou cerca de 98%, ou cerca de 99%, ou cerca de 99,5%, ou cerca de 99,9%.
[00175] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo aqui descrito, utilizando SPF de seda tendo um PM entre cerca de 5 kDa e cerca de 35 kDa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo aqui descrito, utilizando SPF de seda com um PM de cerca de 5 kDa, ou cerca de 6 kDa, ou cerca de 7 kDa, ou cerca de 8 kDa, ou cerca de 9 kDa, ou cerca de 10 kDa, ou cerca de 11 kDa, ou cerca de 12 kDa, ou cerca de 13 kDa, ou cerca de 14 kDa, ou cerca de 15 kDa, ou cerca de 16 kDa, ou cerca de 17 kDa, ou cerca de 18 kDa, ou cerca de 19 kDa, ou cerca de 20 kDa, ou cerca de 21 kDa, ou cerca de 22 kDa, ou cerca de 23 kDa, ou cerca de 24 kDa, ou cerca de 25 kDa, ou cerca de 26 kDa, ou cerca de 27 kDa, ou cerca de 28 kDa, ou cerca de 29 kDa, 30 kDa.
[00176] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo aqui descrito utilizando uma concentração inicial de HA de cerca de 80 mg/ ml, ou cerca de 81 mg/ ml, ou cerca de 82 mg, ml, ou cerca de 83 mg/ ml, ou cerca de 84 mg/ ml, ou cerca de 85 mg/ ml, ou cerca de 86 mg/ ml, ou cerca de 87 mg/ ml, ou cerca de 88 mg/ ml, ou cerca de 89 mg/ ml, ou cerca de 90 mg/ ml, ou cerca de 91 mg/ ml, ou cerca de 92 mg/ ml, ou cerca de 93 mg/ ml, ou cerca de 94 mg/ ml, ou cerca de 95 mg/ ml, ou cerca de 96 mg/ ml, ou cerca de 97 mg/ ml, ou cerca de 98 mg/ ml, ou cerca de 99 mg/ ml, ou cerca de 100 mg/ ml, ou cerca de 101 mg/ ml, ou cerca de 102 mg/ ml, ou cerca de 103 mg/ ml, ou cerca de 104 mg/ ml, ou cerca de 105 mg/ ml, ou cerca de 106 mg/ ml, ou cerca de 107 mg/ ml, ou cerca de 108 mg/ ml, ou cerca de 109 mg/ ml, ou cerca de 110 mg/ ml, ou cerca de 111 mg/ ml, ou cerca de 112 mg/ ml, ou cerca de 113 mg/ ml, ou cerca de 114 mg/ ml, ou cerca de 115 mg/ ml, ou cerca de 116 mg/ ml, ou cerca de 117 mg/ ml, ou cerca de 118 mg/ ml, ou cerca de 119 mg/ ml, ou cerca de 1 20 mg/ ml, ou superior.
[00177] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos aqui descritos têm uma concentração de SPF de seda de cerca de 0,1%, ou cerca de 0,2%, ou cerca de 0,3%, ou cerca de 0,4%, ou cerca de 0,5%, ou cerca de 0,6%, ou cerca de 0,7%, ou cerca de 0,8%, ou cerca de 0,9%, ou cerca de 1%, ou cerca de 1,1%, ou cerca de 1,2%, ou cerca de 1,3%, ou cerca de 1,4%, ou cerca de 1,5%, ou cerca de 1,6%, ou cerca de 1,7%, ou cerca de 1,8%, ou cerca de 1,9%, ou cerca de 2%, ou cerca de 2,1%, ou cerca de 2,2%, ou cerca de 2,3%, ou cerca de 2,4%, ou cerca de 2,5%, ou cerca de 2,6%, ou cerca de 2,7%, ou cerca de 2,8%, ou cerca de 2,9%, ou cerca de
3%, ou cerca de 3,1%, ou cerca de 3,2%, ou cerca de 3,3%, ou cerca de 3,4%, ou cerca de 3,5%, ou cerca de 3,6%, ou cerca de 3,7%, ou cerca de 3,8%, ou cerca de 3,9%, ou cerca de 4%, ou cerca de 4,1%, ou cerca de 4,2%, ou cerca de 4,3%, ou cerca de 4,4%, ou cerca de 4,5%, ou cerca de 4,6%, ou cerca de 4,7%, ou cerca de 4,8%, ou cerca de 4,9%, ou cerca de 5% do total de HA e SPF de seda.
[00178] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo descrito neste documento usando um PEGDE reticulado com um Mn de cerca de 100, cerca de 200, cerca de 300, cerca de 400, cerca de 500, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900, cerca de 1000, cerca de 1100 ou cerca de 1200.
[00179] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo aqui descrito usando condições de reação incluindo uma etapa de reticulação de cerca de 35 °C, cerca de 36 °C, cerca de 37 °C, cerca de 38 °C, cerca de 39 °C, cerca de 40 °C, cerca de 41 °C, cerca de 42 °C, cerca de 43 °C, cerca de 44 °C, cerca de 45 °C, cerca de 46 °C, cerca de 47 °C, cerca de 48 °C, cerca de 49 °C, cerca de 50 °C, cerca de 51 °C, cerca de 52 °C, cerca de 53 °C, cerca de 54 °C ou cerca de 55 °C. Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos são feitos por um processo descrito aqui usando condições de reação incluindo uma etapa de reticulação de cerca de 15 minutos, cerca de 16 minutos, cerca de 17 minutos, cerca de 18 minutos, cerca de 19 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 21 minutos, cerca de 22 minutos, cerca de 23 minutos, cerca de 24 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 26 minutos, cerca de 27 minutos, cerca de 28 minutos, cerca de 29 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 31 minutos, cerca de 32 minutos, cerca de 33 minutos, cerca de 34 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 36 minutos, cerca de 37 minutos, cerca de 38 minutos, cerca de 39 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 41 minutos, cerca de 42 minutos, cerca de 43 minutos, cerca de 44 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 46 minutos, cerca de 47 minutos, cerca de 48 minutos, cerca de 49 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 51 minutos, cerca de 52 minutos, cerca de 53 minutos, cerca de 54 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 56 minutos, cerca de 57 minutos, cerca de 58 minutos, cerca de 59 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 61 minutos, cerca de 62 minutos, cerca de 63 minutos, cerca de 64 minutos ou cerca de 65 minutos.
[00180] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos incluem HA livre, por exemplo HA não reticulado. Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos incluem cerca de 0,1%, ou cerca de 0,2%, ou cerca de 0,3%, ou cerca de 0,4%, ou cerca de 0,5%, ou cerca de 0,6%, ou cerca de 0,7%, ou cerca de 0,8%, ou cerca de 0,9%, ou cerca de 1%, ou cerca de 1,1%, ou cerca de 1,2%, ou cerca de 1,3%, ou cerca de 1,4%, ou cerca de 1,5%, ou cerca de 1,6%, ou cerca de 1,7%, ou cerca de 1,8%, ou cerca de 1,9%, ou cerca de 2%, ou cerca de 2,1%, ou cerca de 2,2%, ou cerca de 2,3%, ou cerca de 2,4%, ou cerca de 2,5%, ou cerca de 2,6%, ou cerca de 2,7%, ou cerca de 2,8%, ou cerca de 2,9%, ou cerca de 3%, ou cerca de 3,1%, ou cerca de 3,2%, ou cerca de 3,3%, ou cerca de 3,4%, ou cerca de 3,5%, ou cerca de 3,6%, ou cerca de 3,7%, ou cerca de 3,8%, ou cerca de 3,9%, ou cerca de 4%, ou cerca de 4,1%, ou cerca de 4,2%, ou cerca de 4,3%, ou cerca de 4,4%, ou cerca de 4,5%, ou cerca de 4,6%, ou cerca de 4,7%, ou cerca de 4,8%, ou cerca de 4,9%, ou cerca de 5%, cerca de 5,1%, ou cerca de 5,2%, ou cerca de 5,3%, ou cerca de 5,4%, ou cerca de 5,5%, ou cerca de 5,6%, ou cerca de 5,7%, ou cerca de 5,8%, ou cerca de 5,9%, ou cerca de 6%, ou cerca de 6,1%, ou cerca de 6,2%, ou cerca de 6,3%, ou cerca de 6,4%, ou cerca de 6,5%, ou cerca de 6,6%, ou cerca de 6,7%, ou cerca de 6,8%, ou cerca de 6,9%, ou cerca de 7%, ou cerca de 7,1%, ou cerca de 7,2%, ou cerca de 7,3%, ou cerca de 7,4%, ou cerca de 7,5%, ou cerca de 7,6%, ou cerca de 7,7%, ou cerca de 7,8%, ou cerca de 7,9%, ou cerca de 8%, ou cerca de 8,1%, ou cerca de 8,2%, ou cerca de 8,3%, ou cerca de 8,4%, ou cerca de 8,5%, ou cerca de 8,6%, ou cerca de 8,7%, ou cerca de 8,8%, ou cerca de 8,9%, ou cerca de 9%, ou cerca de 9,1%, ou cerca de 9,2%, ou cerca de 9,3%, ou cerca de 9,4%, ou cerca de 9,5%, ou cerca de 9,6%, ou cerca de 9,7%, ou cerca de 9,8%, ou cerca de 9,9%, ou cerca de 10% do total de HA (HA reticulado e HA não reticulado). Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos não incluem HA livre.
[00181] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos incluem HA em cerca de 10 mg/ ml, cerca de 11 mg/ ml, cerca de 12 mg/ ml, cerca de 13 mg/ ml, cerca de 14 mg/ ml, cerca de 15 mg/ ml, cerca de 16 mg/ ml, cerca de 17 mg/ ml, cerca de 18 mg/ ml, cerca de 19 mg/ ml, cerca de 20 mg/ ml, cerca de 21 mg/ ml, cerca de 22 mg/ ml, cerca de 23 mg/ ml, cerca de 24 mg/ ml, cerca de 25 mg/ ml, cerca de 26/ mg/ ml, cerca de 27 mg/ ml, cerca de 28 mg/ ml, cerca de 29 mg/ ml ou cerca de 30 mg/ ml.
[00182] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos têm um MoD de cerca de 10,0%, cerca de 10,1%, cerca de 10,2%, cerca de 10,3%, cerca de 10,4%, cerca de 10,5%, cerca de 10,6%, cerca de 10,7%, cerca de 10,8%, cerca de 10,9%, cerca de 11,0%, cerca de 11,1%, cerca de 11,2%, cerca de 11,3%, cerca de 11,4%, cerca de 11,5%, cerca de 11,6%, cerca de 11,7%, cerca de 11,8%, cerca de 11,9%, cerca de 12,0%, cerca de 12,1%, cerca de 12,2%, cerca de 12,3%, cerca de 12,4%, cerca de 12,5%, cerca de 12,6%, cerca de 12,7%, cerca de 12,8%, cerca de 12,9%, cerca de 13,0%, cerca de 13,1%, cerca de 13,2%, cerca de 13,3%, cerca de 13,4%, cerca de 13,5%, cerca de 13,6%, cerca de 13,7%, cerca de 13,8%, cerca de 13,9%, cerca de 14,0%, cerca de 14,1%, cerca de 14,2%, cerca de 14,3%, cerca de 14,4%, cerca de 14,5%, cerca de 14,6%, cerca de 14,7%, cerca de 14,8%, cerca de 14,9%, cerca de 15,0%, cerca de 15,1%, cerca de 15,2%, cerca de 15,3%, cerca de 15,4%, cerca de 15,5%, cerca de 15,6%, cerca de 15,7%, cerca de 15,8%, cerca de 15,9%, cerca de 16,0%, cerca de 16,1%, cerca de 16,2%, cerca de 16,3%, cerca de 16,4%, cerca de 16,5%, cerca de 16,6%, cerca de 16,7%, cerca de 16,8%, cerca de 16,9%, cerca de 17,0%, cerca de 17,1%, cerca de 17,2%, cerca de 17,3%, cerca de 17,4%, cerca de 17,5%, cerca de 17,6%, cerca de 17,7%, cerca de 17,8%, cerca de 17,9%, cerca de 18,0%, cerca de 18,1%, cerca de 18,2%, cerca de 18,3%, cerca de 18,4%, cerca de 18,5%, cerca de 18,6%, cerca de 18,7%, cerca de 18,8%, cerca de 18,9%, cerca de 19,0%, cerca de 19,1%, cerca de 19,2%, cerca de 19,3%, cerca de 19,4%, cerca de 19,5%, cerca de 19,6%, cerca de 19,7%, cerca de 19,8%, cerca de 19,9%, ou cerca de 20,0%.
[00183] Em algumas formas de realização, os preenchimentos dérmicos têm uma força de injeção de cerca de 5 N, cerca de 6 N, cerca de 7 N, cerca de 8 N, cerca de 9 N, cerca de 10 N, cerca de 11 N, cerca de 12 N, cerca de 13 N, cerca de 14 N, cerca de 15 N, cerca de 16 N, cerca de 17 N, cerca de 18 N, cerca de 19 N, cerca de 20 N, cerca de 21 N, cerca de 22 N, cerca de 23 N, cerca de 24 N ou cerca de 25 N. Em algumas formas de realização, a força de injeção refere-se a injeção através de uma agulha de 30 G.
[00184] Os preenchimentos de tecido aqui fornecidos incluem composições que incluem ainda um ou mais componentes, como SPF, por exemplo SPF reticulados e/ ou SPF não reticulados, ácido hialurônico, por exemplo HA reticulado e/ ou HA não reticulado. Como aqui utilizado, SPF reticulados referem-se a SPF que são reticulados com um SPF idêntico ou não idêntico. Os SPF com reticulação também podem ser chamados de SPF com reticulação homo. Como aqui utilizado, HA reticulado refere-se ao HA que é reticulado com um HA idêntico ou não idêntico. O HA reticulado também pode ser chamado de HA reticulado homo. Os preenchimentos de tecido aqui fornecidos também podem incluir SPF reticulados com HA e/ ou HA reticulado com SPF. Os SPF reticulados com HA e/ ou HA reticulado com SPF, também podem ser chamados de SPF-HA reticulado ou SPF-HA reticulado hetero.
[00185] Em algumas formas de realização, as composições da invenção são monofásicas. Em algumas formas de realização, as composições da invenção são bifásicas ou multifásicas. Em algumas formas de realização, as composições da invenção incluem uma fase polimérica não reticulada, por exemplo, SPF não reticulados e/ ou HA não reticulado. Em algumas formas de realização, as composições da invenção incluem uma fase reticulada, por exemplo, SPF reticulados e/ ou HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições da invenção incluem uma fase líquida, por exemplo água e/ ou uma solução aquosa. Em algumas formas de realização, a solução aquosa pode incluir SPF. Em algumas formas de realização, a fase aquosa pode incluir HA. Em algumas formas de realização, a fase líquida pode incluir um polímero não reticulado, como HA não reticulado e/ ou SPF não reticulados.
[00186] Em algumas formas de realização, uma composição da invenção compreende uma fase de veículo. Como tal, as composições divulgadas podem ser composições monofásicas ou multifásicas. Como usado aqui, o termo “fase de veículo” é sinônimo de “veículo” e refere-se a um material usado para aumentar a fluidez de um hidrogel. Um veículo é vantajosamente um veículo fisiologicamente aceitável e pode incluir um ou mais excipientes convencionais úteis em composições farmacêuticas. Como aqui utilizado, o termo “um veículo fisiologicamente aceitável” refere-se a um veículo de acordo com ou característica do funcionamento normal de um organismo vivo. Como tal, a administração de uma composição compreendendo um hidrogel e um veículo não tem substancialmente efeito prejudicial permanente ou de longo prazo quando administrada a um mamífero. Os presentes preenchimentos de tecido incluem um veículo onde a maior parte do volume é água ou solução salina. No entanto, outros veículos úteis incluem qualquer material fisiologicamente tolerável que melhore após a extrusão ou intrudibilidade do hidrogel através de uma agulha ou em um ambiente hospedeiro alvo. Os veículos potenciais podem incluir, mas não estão limitados a, soluções tampão fisiológicas, soro, outras soluções proteicas, géis compostos por polímeros incluindo proteínas, glicoproteínas, proteoglicanos ou polissacarídeos. Qualquer um dos veículos potenciais indicados pode ser derivado naturalmente, totalmente sintético ou combinações dos mesmos.
[00187] Em uma forma de realização, uma composição aqui fornecida inclui um ou mais de SPF modificados, SPF reticulados, SPF não reticulados, HA modificado, HA reticulado, HA não reticulado, SPF homo reticulados, HA homo reticulado e SPF-HA hetero reticulado.
[00188] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados e SPF não reticulados. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados e HA não reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados e HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados e SPF-HA reticulado.
[00189] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF não reticulados e HA não-reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF não reticulados e HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF não reticulados e SPF-HA reticulado.
[00190] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, SPF não reticulados e HA não reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, SPF não reticulados e HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, SPF não reticulados e SPF-HA reticulado.
[00191] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, HA reticulado e HA não reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, HA reticulado e SPF-HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, HA não reticulado e SPF-HA reticulado.
[00192] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF não reticulados, HA reticulado e HA não reticulado.
Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF não reticulados, HA reticulado e SPF-HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF não reticulados, HA não reticulado e SPF-HA reticulado.
[00193] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, SPF não reticulados, HA reticulado e HA não reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, SPF não reticulados, HA reticulado e SPF- HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, SPF não reticulados, HA não reticulado e SPF-HA reticulado.
[00194] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, HA reticulado, HA não reticulado e SPF-HA reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF não reticulados, HA reticulado, HA não reticulado e SPF- HA reticulado.
[00195] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulados, SPF não reticulados, HA reticulado, HA não reticulado e SPF-HA reticulado.
[00196] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF reticulado. Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas incluem SPF e ácidos hialurônicos (HA). Em um aspecto, as composições à base de SPF/ HA aqui descritas incluem porções reticuladas de HA. Em algumas formas de realização, as composições incluem porções reticuladas de SPF-HA. Em algumas formas de realização, as composições incluem HA não reticulado. Em algumas formas de realização, as composições podem incluir SPF não reticulados. Em algumas formas de realização, as composições podem incluir pelo menos um agente adicional. Em algumas formas de realização, as composições incluem SPF-SPF, SPF-HA e ou HA-HA reticulados, com estabilidade variável, resultando em composições de vários graus de bioabsorbilidade e/ ou biossorbilidade.
[00197] Em algumas formas de realização, o HA é reticulado em uma matriz. Em algumas formas de realização, a matriz de HA encapsula ou semi-encapsula um ou mais SPF. Em algumas formas de realização, o HA é reticulado com um ou mais SPF.
[00198] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido, ou porções dos mesmos, são biocompatíveis, biodegradáveis, bioabsorvíveis, biossorvíveis ou uma combinação dos mesmos.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui fornecidos incluem um componente fluido, por exemplo, um único fluido ou uma solução incluindo substancialmente um ou mais fluidos. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido incluem água ou uma solução aquosa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido são injetáveis, implantáveis ou liberáveis sob a pele por qualquer meio conhecido na técnica, como, por exemplo, após a ressecção cirúrgica do tecido. Em algumas formas de realização, as composições são preenchimentos dérmicos. Em algumas formas de realização, as composições são estéreis.
[00199] Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir cerca de 1% (p/ p) de SPF e cerca de 0,3% (p/ p) de lidocaína.
[00200] São aqui fornecidos métodos de fabricação de composições, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPFs) e ácido hialurônico (HA), métodos de entrega de composições incluindo SPF e HA e métodos de tratamento utilizando composições incluindo SPF e HA.
Definições
[00201] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o mesmo significado que é comumente entendido por um técnico no assunto à qual esta invenção pertence. Todas as patentes e publicações aqui referidas são incorporadas por referência na sua totalidade.
[00202] O símbolo de porcentagem “%” usado neste documento inclui “% em peso %” ou % p/ p ,% v/ v ou % p/ v.
[00203] Conforme usado neste documento, o termo “um”, “uma” ou “o/ a” geralmente é interpretado para abranger as formas singular e plural.
[00204] Conforme usado neste documento, o termo “cerca de” geralmente se refere a um valor numérico particular que está dentro de uma faixa de erro aceitável, conforme determinado por um técnico no assunto, que dependerá em parte de como o valor numérico é medido ou determinado, ou seja, as limitações do sistema de medição. Por exemplo, “cerca de” pode significar uma faixa de ± 20 %, ± 10 % ou ± 5 % de um determinado valor numérico.
[00205] Conforme usado neste documento, o termo “fibroína”
ou “proteína da seda” refere-se a um tipo de proteína estrutural produzida por certas espécies de aranhas e insetos que produzem seda (ver definição fornecida em WIPO Pearl – banco de dados do Portal de Terminologia Multilíngüe da WIPO, https://wipopearl.wipo.int/en/linguistic). A fibroína pode incluir fibroína de proteína da seda de bicho da seda, de inseto ou de aranha (por exemplo, spidroina), proteína de aranha recombinante, proteinas da seda presentes em outros tipos de seda de aranha, por exemplo, proteina da seda tubuliforme (TuSP), proteína de seda flageliforme, proteínas do ampulato menor, proteína da seda aciniforme, proteína da seda piriforme, cola de seda agregada, fibroína do bicho-da-seda produzida pelo bicho-da-seda geneticamente modificado ou fibroína do bicho-da-seda recombinante .
[00206] Tal como aqui utilizado, o termo “fibroína da seda” refere-se a fibroína do bicho da seda, fibroína da seda produzida por bicho da seda geneticamente modificado ou fibroína do bicho da seda recombinante (Ver (1) Narayan Ed., Encyclopedia of Biomedical Engineering, Vol. 2, Elsevier, 2019; (2) Kobayashi et al. Eds, Encyclopedia of Polymeric Nanomaterials, Springer, 2014, https://link.springer.com/referenceworkentry/10.1007%2F978-3-642- 36199-9_323-1). Em uma forma de realização, a fibroína de seda é obtida da Bombyx mori .
[00207] Conforme usado neste documento, os termos “peptídeo de fibroína de seda”, “fragmento à base de proteína de fibroína de seda” e “fragmento de fibroína de seda” são usados indistintamente. O peso molecular ou número de unidades de aminoácidos são definidos quando o tamanho molecular se torna um parâmetro importante.
[00208] Conforme usado neste documento, o termo polímero “polidispersidade (PD)” é geralmente usado como uma medida da amplitude de uma distribuição de peso molecular de um polímero e é definido pela fórmula de polidispersidade PD = Mw / Mn.
[00209] Tal como aqui utilizado, o termo “fragmento baseado em proteína de fibroína de seda de baixo peso molecular” (seda de baixo peso molecular) refere-se a fragmentos de fibroína de seda com um peso molecular ponderal médio (Mw) de cerca de 200 Da a cerca de 25 kDa, ou inferior a cerca de 28 kDa, ou entre cerca de 15 kDa e cerca de 28 kDa.
[00210] Tal como aqui utilizado, o termo “fragmento de fibroína de seda de peso molecular médio” (seda de Med-PM) refere-se a fragmentos de fibroína de seda com um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 25 kDa a cerca de 60 kDa, ou cerca de 39 kDa a cerca de 54 kDa .
[00211] O termo “gelificação”, tal como aqui utilizado, refere- se a um processo envolvendo aumento contínuo na viscosidade acompanhado por aumento gradual das propriedades elásticas. A principal causa da gelificação em sistemas poliméricos é o aumento das interações entre o polímero dissolvido ou seus agregados. Em contraste com a micelização, a gelificação ocorre da solução semi-diluída para a alta concentração da solução de copolímero em bloco e resulta de um arranjo de micelas ordenadas.
[00212] O termo “hidrogel”, tal como aqui utilizado, refere-se a redes tridimensionais feitas de polímeros hidrofílicos ou anfifílicos reticulados que incham em líquido sem se dissolver neles. O hidrogel tem a capacidade de absorver uma grande quantidade de água. Os hidrogéis são redes 3D de fração de baixo volume de moléculas, fibras ou partículas com vazios intermediários, preenchidos com água ou meio aquoso. Os hidrogéis podem ser classificados em duas classes: uma classe é o gel físico resultante da associação física de cadeias poliméricas, e a outra classe são os géis químicos (ou gel irreversível) cuja rede é ligada por ligações covalentes. A inclusão de grupos funcionais como grupos pendentes ou na espinha dorsal da rede 3D permite a síntese de hidrogéis que aumentam de volume em resposta a uma variedade de estímulos, incluindo temperatura, campos eletromagnéticos, produtos químicos e biomoléculas. Em uma forma de realização, as formas físicas do hidrogel de seda-HA aqui descritas podem incluir microgéis (micropartículas de hidrogel) e hidrogéis em massa.
[00213] Conforme usado aqui, os termos “substancialmente livre de sericina” ou “substancialmente desprovido de sericina” se referem a fibras de seda nas quais a maioria da proteína sericina foi removida e/ ou SPF feito de fibras de seda nas quais a maioria da proteína sericina foi removida. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,01% (p/ p) e cerca de 10,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,01% (p/ p) e cerca de 9,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,01% (p/ p) e cerca de 8,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,01% (p/ p) e cerca de 7,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,01% (p/ p) e cerca de 6,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,01% (p/ p) e cerca de 5,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,05% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,1% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 0,5% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 1,0% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 1,5% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 2,0% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF tendo entre cerca de 2,5% (p/ p) e cerca de 4,0% (p/ p) de sericina. Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF com um teor de sericina entre cerca de 0,01% (p/ p) e cerca de 0,1% (p/ p).
Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF com um teor de sericina abaixo de cerca de 0,1% (p/ p). Em uma forma de realização, fibroína de seda e SPF que são substancialmente desprovidos de sericina referem-se a fibroína de seda e SPF com um teor de sericina abaixo de cerca de 0,05% (p/ p).
Em uma forma de realização, quando uma fonte de seda é adicionada a uma solução aquosa de carbonato de sódio em ebulição (100 °C) por um tempo de tratamento entre cerca de 30 minutos a cerca de 60 minutos, uma perda de desengomagem de cerca de 26% em peso a cerca de 31% em peso é obtido.
[00214] Como usado aqui, o termo “substancialmente homogêneo” pode se referir a fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura que são distribuídos em uma distribuição normal em torno de um peso molecular identificado. Como usado aqui, o termo “substancialmente homogêneo” pode se referir a uma distribuição uniforme de um aditivo, por exemplo lidocaína, ao longo de uma composição da presente divulgação.
[00215] Como aqui utilizado, o termo “substancialmente livre de resíduos inorgânicos” significa que a composição exibe resíduos de 0,1% (p/ p) ou menos. Em uma forma de realização, substancialmente livre de resíduos inorgânicos refere-se a uma composição que exibe resíduos de 0,05% (p/ p) ou menos. Em uma forma de realização, substancialmente livre de resíduos inorgânicos refere-se a uma composição que exibe resíduos a 0,01% (p/ p) ou menos. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos inorgânicos está entre 0 ppm (“não detectável” ou “ND”) e 1000 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos inorgânicos é ND a cerca de 500 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos inorgânicos é ND a cerca de 400 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos inorgânicos é ND a cerca de 300 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos inorgânicos é ND a cerca de 200 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos inorgânicos é ND a cerca de 100 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos inorgânicos está entre 10 ppm e 1000 ppm.
[00216] Como usado aqui, o termo “substancialmente livre de resíduos orgânicos” significa que a composição exibe resíduos a 0,1% (p/ p) ou menos. Em uma forma de realização, substancialmente livre de resíduos orgânicos refere-se a uma composição que exibe resíduos a 0,05% (p/ p) ou menos. Em uma forma de realização, substancialmente livre de resíduos orgânicos refere-se a uma composição que exibe resíduos a 0,01% (p/ p) ou menos. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos orgânicos está entre 0 ppm (“não detectável” ou “ND”) e 1000 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos orgânicos é ND a cerca de 500 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos orgânicos é ND a cerca de 400 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos orgânicos é ND a cerca de 300 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos orgânicos é ND a cerca de 200 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos orgânicos é ND a cerca de 100 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos orgânicos está entre 10 ppm e 1000 ppm.
[00217] Tal como aqui utilizado, o termo “não reticulado” refere-se a uma falta de ligações intermoleculares que unem as moléculas de polímero da matriz individual, macromoléculas, e/ ou cadeias de monômeros.
Como tal, um polímero de matriz não reticulado não está ligado a qualquer outro polímero de matriz por uma ligação intermolecular.
[00218] Os preenchimentos de tecidos, composições ou porções dos mesmos, da presente divulgação exibem “biocompatibilidade” ou são “biocompatíveis”, o que significa que as composições são compatíveis com tecido vivo ou sistema vivo por não serem substancialmente tóxicas, prejudiciais ou reativas fisiologicamente e não causarem rejeição imunológica. O termo “biocompatível” abrange os termos “bioabsorvível”, “biossorvível” e “biodegradável”, que são aqui definidos.
[00219] Os preenchimentos de tecidos, composições ou porções dos mesmos, da presente divulgação podem ser “bioabsorvíveis”, “biossorvíveis,” e/ ou “biodegradáveis”. Tal como aqui utilizado, o termo de “bioabsorvível” referem-se a materiais ou substâncias que dissipam após a implantação dentro de um corpo, independente de quais mecanismos pelos quais a dissipação pode ocorrer, tais como a dissolução, degradação, absorção e excreção. Como usado aqui, o termo “biossorvível” significa capaz de ser absorvido pelo corpo. Tal como aqui utilizado, o termo “biodegradável” refere-se a materiais que podem decompor-se em condições fisiológicas em sub-produtos.
Tais condições fisiológicas incluem, por exemplo, hidrólise (decomposição por clivagem hidrolítica), catálise enzimática (degradação enzimática), interações mecânicas e similares. Como usado aqui, o termo “biodegradável” também abrange o termo “biossorvível”, que descreve um material ou substância que se decompõe em condições fisiológicas para decompor-se em produtos que sofrem biossorção no organismo hospedeiro, ou seja, que se tornam metabólitos dos sistemas bioquímicos do organismo hospedeiro. Conforme usado neste documento, os termos “bioabsorvível” e “biossorção” abrangem processos como degradação mediada por células, degradação enzimática e/ ou degradação hidrolítica do polímero bioabsorvível e/ ou eliminação do polímero bioabsorvível do tecido vivo, como serão apreciados pelo técnico no assunto. Em algumas formas de realização, as composições e materiais de SPF-HA aqui descritos podem ser biocompatíveis, bioabsorvíveis, biossorvíveis e/ ou biodegradáveis.
[00220] Onde os preenchimentos de tecido descritos aqui são biodegradáveis ou biossorvível, eles podem resistir à biodegradação ou biossorção por pelo menos cerca de 1 dia, ou pelo menos cerca de 2 dias, ou pelo menos cerca de 3 dias, ou pelo menos cerca de 4 dias, pelo menos cerca de 5 dias, ou pelo menos cerca de 10 dias, ou pelo menos cerca de 15 dias, ou pelo menos cerca de 20 dias, ou pelo menos cerca de 25 dias, ou pelo menos cerca de 30 dias, ou pelo menos cerca de 35 dias, ou pelo menos cerca de 40 dias, ou pelo menos cerca de 45 dias, ou pelo menos cerca de 50 dias, ou pelo menos cerca de 60 dias, ou pelo menos cerca de 70 dias, ou pelo menos cerca de 80 dias, ou pelo menos cerca de 90 dias, ou pelo menos cerca de 100 dias, ou pelo menos cerca de 110 dias, ou pelo menos cerca de 120 dias, ou pelo menos cerca de 130 dias, ou pelo menos cerca de 140 dias, ou pelo menos cerca de 150 dias, ou pelo menos cerca de 160 dias, ou pelo menos cerca de 170 dias, ou pelo menos cerca de 180 dias, ou pelo menos cerca de 190 dias, ou pelo menos cerca de 200 dias, ou pelo menos cerca de 250 dias, ou pelo menos cerca de 300 dias, ou pelo menos cerca de 1 ano, ou pelo menos cerca de 2 anos, ou eles podem resistir à biodegradação por menos de 5 dias, ou no máximo cerca de 10 dias, ou no máximo cerca de 15 dias, ou no máximo cerca de 20 dias ou no máximo cerca de 25 dias, ou no máximo cerca de 30 dias, ou no máximo cerca de 35 dias, ou no máximo cerca de 40 dias, ou no máximo cerca de 45 dias, ou no máximo cerca de 50 dias, ou no máximo cerca de 60 dias, ou no máximo cerca de 70 dias, ou no máximo cerca de 80 dias ou no máximo cerca de 90 dias ou no máximo cerca de 100 dias ou no máximo cerca de 110 dias ou no máximo cerca de 120 dias ou no máximo cerca de 130 dias ou no máximo cerca de 140 dias, ou no máximo cerca de 150 dias, ou no máximo cerca de 160 dias, ou no máximo cerca de 170 dias, ou no máximo cerca de 180 dias, ou no máximo cerca de 190 dias, ou no máximo cerca de 200 dias, ou no máximo cerca de 250 dias, ou no máximo cerca de 300 dias, ou no máximo cerca de 1 ano ou no máximo cerca de 2 anos.
[00221] Onde os preenchimentos de tecido descritos aqui são bioabsorvíveis, eles podem resistir à bioabsorção por pelo menos cerca de 1 dia, ou pelo menos cerca de 2 dias, ou pelo menos cerca de 3 dias, ou pelo menos cerca de 4 dias, pelo menos cerca de 5 dias, ou pelo menos cerca de 10 dias, ou pelo menos cerca de 15 dias, ou pelo menos cerca de 20 dias, ou pelo menos cerca de 25 dias, ou pelo menos cerca de 30 dias, ou pelo menos cerca de 35 dias, ou pelo menos cerca de 40 dias, ou pelo menos cerca de 45 dias, ou pelo menos cerca de 50 dias, ou pelo menos cerca de 60 dias, ou pelo menos cerca de 70 dias, ou pelo menos cerca de 80 dias, ou pelo menos cerca de 90 dias, ou pelo menos cerca de 100 dias, ou pelo menos cerca de 110 dias, ou pelo menos cerca de 120 dias, ou pelo menos cerca de 130 dias, ou pelo menos cerca de 140 dias, ou pelo menos cerca de 150 dias, ou pelo menos cerca de 160 dias, ou pelo menos cerca de 170 dias, ou pelo menos cerca de 180 dias, ou pelo menos cerca de 190 dias, ou pelo menos cerca de 200 dias, ou pelo menos cerca de 250 dias, ou pelo menos cerca de 300 dias, ou pelo menos cerca de 1 ano,
ou pelo menos cerca de 2 anos ou podem resistir à bioabsorção por menos cerca de 5 dias, ou no máximo cerca de 10 dias, ou no máximo cerca de 15 dias, ou no máximo cerca de 20 dias, ou no máximo cerca de 25 dias, ou no máximo cerca de 30 dias, ou no máximo cerca de 35 dias, ou no máximo cerca de 40 dias, ou no máximo cerca de 45 dias, ou no máximo cerca de 50 dias, ou no máximo cerca de 60 dias, ou no máximo cerca de 70 dias, ou no máximo cerca de 80 dias, ou no máximo cerca de 90 dias, ou no máximo cerca de 100 dias, ou no máximo cerca de 110 dias, ou no máximo cerca de 120 dias, ou no máximo cerca de 130 dias, ou no máximo cerca de 140 dias, ou no máximo no máximo cerca de 150 dias, ou no máximo cerca de 160 dias, ou no máximo cerca de 170 dias, ou no máximo cerca de 180 dias, ou no máximo cerca de 190 dias, ou no máximo cerca de 200 dias, ou no máximo cerca de 250 dias, ou no máximo cerca de 300 dias, ou no máximo cerca de 1 ano, ou no máximo cerca de 2 anos.
[00222] Como aqui descrito, o grau de biodegradação, bioabsorção e biossorção pode ser modificado e/ ou controlado por, por exemplo, adição de um ou mais agentes às composições aqui descritas que retardam a biodegradação, a bioabsorção e/ ou a biossorção. Além disso, o grau de biodegradação, bioabsorção e biossorção pode ser modificado e/ ou controlado aumentando ou diminuindo o grau de reticulação polimérica presente nos materiais poliméricos aqui descritos. Por exemplo, a taxa de biodegradação, bioabsorção e/ ou biossorção das composições descritas aqui pode ser aumentada reduzindo a quantidade de reticulação nos materiais poliméricos aqui descritos. Alternativamente, a taxa de biodegradação, a bioabsorção, e/ ou biossorção dos preenchimentos de tecidos e composições descritos aqui pode ser diminuída por aumento da quantidade de reticulação nos materiais poliméricos aqui descritos.
[00223] Os preenchimentos de tecido e as composições da presente divulgação são “hipoalergênicos”, o que significa que é relativamente improvável que causem uma reação alérgica. Essa hipoalergenicidade pode ser evidenciada pelos participantes aplicando topicamente composições da presente divulgação em sua pele por um período prolongado de tempo. Em uma forma de realização, o período prolongado de tempo é de cerca de 3 dias. Em uma forma de realização, o período prolongado de tempo é de cerca de 7 dias.
Em uma forma de realização, o período prolongado de tempo é de cerca de 14 dias. Em uma forma de realização, o período prolongado de tempo é de cerca de 21 dias. Em uma forma de realização, o período prolongado de tempo é de cerca de 30 dias. Em uma forma de realização, o período prolongado de tempo é selecionado a partir do grupo que consiste em cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses, cerca de 6 meses, cerca de 7 meses, cerca de 8 meses, cerca de 9 meses, cerca de 10 meses, cerca de 11 meses, cerca de 12 meses e indefinidamente.
[00224] Como aqui utilizado, seda de “baixo peso molecular” refere-se a fragmentos de proteína de seda com um peso molecular na faixa de cerca de 5 kDa a cerca de 20 kDa, ou cerca de 200 Da a cerca de 25 kDa , ou inferior a cerca de 28 kDa, ou entre cerca de 15 kDa e cerca de 28 kDa . Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 11 kDa. Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 12 kDa. Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 13 kDa. Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 14 kDa. Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 15 kDa. Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 16 kDa.
[00225] Como aqui utilizado, seda de “médio peso molecular” refere-se a fragmentos de proteína de seda com um peso molecular na faixa de cerca de 20 kDa a cerca de 55 kDa, ou cerca de 25 kDa a cerca de 60 kDa, ou cerca de 39 kDa a cerca de 54 kDa. Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 40 kDa. Em algumas formas de realização, um peso molecular médio alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 48 kDa.
[00226] Como aqui utilizado, seda de “alto peso molecular” refere-se a fragmentos de proteína de seda com um peso molecular na faixa de cerca de 55 kDa a cerca de 150 kDa. Em algumas formas de realização, um baixo peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 100 kDa a cerca de 145 kDa. Em algumas formas de realização, um alto peso molecular alvo para certos fragmentos de proteína de seda pode ser de cerca de 100 kDa.
[00227] Em algumas formas de realização, os pesos moleculares descritos neste documento, por exemplo, SPF de baixo peso molecular, SPF de médio peso molecular, SPF de alto peso molecular, podem ser convertidos no número aproximado de aminoácidos contidos nas respectivas proteínas naturais ou recombinantes, como proteínas naturais ou proteínas de seda recombinantes, como seria entendido por um técnico no assunto. Por exemplo, o peso médio de um aminoácido pode ser de cerca de 110 daltons, isto é, 110 g/ mol. Assim, em algumas formas de realização, dividindo o peso molecular de uma proteína linear por 110 daltons pode ser usado para aproximar o número de resíduos de aminoácidos neles contidos.
[00228] Como usado aqui, o termo “polidispersividade” refere-se a uma medida da distribuição da massa molecular em uma determinada amostra de polímero. A polidispersividade pode ser calculada dividindo o peso molecular ponderal médio (Mw) pelo peso molecular médio numérico (Mn). Como usado aqui, o termo “peso molecular ponderal médio”
(Mw) geralmente se refere a uma medição de peso molecular que depende das contribuições das moléculas de polímero de acordo com seus tamanhos. O peso molecular ponderal médio pode ser definido pela fórmula: 𝛴𝑁𝑖 𝑀𝑖2 𝑀𝑤 = , 𝛴𝑁𝑖 𝑀𝑖 onde Mi é o peso molecular de uma cadeia e Ni é o número de cadeias daquele peso molecular. Como usado aqui, o termo “peso molecular médio numérico” (Mn) geralmente se refere a uma medição de peso molecular que é calculada dividindo o peso total de todas as moléculas de polímero em uma amostra com o número total de moléculas de polímero na amostra. O peso molecular médio numérico pode ser definido pela fórmula: 𝛴𝑁𝑖 𝑀𝑖 𝑀𝑛 = 𝛴𝑁𝑖 onde Mi é o peso molecular de uma cadeia e Ni é o número de cadeias daquele peso molecular. Por exemplo, um polímero monodisperso, onde todas as cadeias poliméricas são iguais, possui uma polidispersividade (Mw/ Mn) de 1. Em geral, as médias de peso molecular podem ser determinadas por cromatografia de permeação em gel (GPC) e cromatografia de exclusão por tamanho (SEC). Quanto maior o índice de polidispersão, maior o peso molecular.
[00229] Como usado aqui, o termo “enchimento de tecido” refere-se amplamente a um material que pode ser fornecido dentro e sobre os tecidos moles para adicionar volume, adicionar suporte ou tratar uma deficiência de tecidos moles. O termo “enchimento de tecido” também abrange preenchimentos dérmicos; no entanto, o termo “enchimento dérmico” não deve ser interpretado como imposição de limitações quanto ao local e tipo de entrega desse preenchimento. No entanto, os preenchimentos dérmicos aqui descritos podem geralmente abranger o uso e a entrega desses preenchimentos dérmicos em vários níveis abaixo da derme. Tal como aqui utilizado, o termo “tecido macio” pode referir-se aos tecidos que conectam, suportam, ou estão no entorno de outras estruturas e órgãos do corpo. Por exemplo, tecidos moles descritos aqui podem incluir, sem limitação, pele, tecidos dérmicos, tecidos subdémicos, tecidos cutâneos, tecidos subcutâneos, tecido intradural, músculos, tendões, ligamentos, tecidos fibrosos, gordura, vasos sanguíneos e artérias, nervos, e tecidos sinoviais (intradérmicos).
[00230] Como usado neste documento, “reticulação automática” refere-se a (a) reticulação entre duas cadeias de polímeros de natureza química semelhante, por exemplo, reticulação entre duas fitas de ácido hialurônico ou reticulação entre duas fitas de SPFs, ou (b) reticulação entre grupos de reticulação nas mesmas fitas de polímeros para criar um éster cíclico (lactona), uma amida cíclica, uma construção cíclica incluindo uma porção de reticulação ou similar, por exemplo, reticulação entre dois grupos na mesma cadeia de ácido hialurônico ou reticulação entre dois grupos na mesma cadeia de SPF.
[00231] Como usado neste documento, “reticulação de comprimento zero” e/ ou “reticulação incluindo uma ligação” e/ ou “reticulação usando um agente ativador”, refere-se à reticulação entre dois grupos em ambas as cadeias poliméricas separadas, ou a mesma fita de polímero, em que os grupos reagem diretamente um com o outro e nenhuma porção de reticulação adicional é inserida entre eles. A reticulação entre um grupo ácido carboxílico e uma amina ou álcool, em que um dos grupos é ativado por um agente ativador, por exemplo uma carbodiimida, é um exemplo de reticulação de comprimento zero.
[00232] Tal como aqui utilizado, o termo “reticulador derivado de epóxi” refere-se a uma ponte molecular entre duas porções nas mesmas cadeias de polímero ou separadas, que é obtida através do emprego de um precursor de reticulação, incluindo um grupo epóxido, por exemplo 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), polietileno glicol diglicidil éter (PEGDE ou PEGDGE) ou um ligante poliepoxi de fibroína de seda ou de fragmento de fibroína de seda. Sem desejar estar vinculado a nenhuma teoria em particular, reagindo com um centro reativo em uma cadeia polimérica, inclusive na cadeia lateral do polímero, o anel epóxido se abre para formar um álcool secundário e uma nova ligação (Esquema 1). Grupos reativos incluem, mas não estão limitados a, grupos nucleofílicos, como grupos carboxílicos, grupos amino ou grupos hidroxila.
Esquema 1 Reticulador e/ ou modificador derivado de PEGDE Reticulador derivado de PEGDE ligando duas porções Reticulador e/ ou modificador Reticulador derivado de BDDE derivado de BDDE ligando duas porções Grupo Reticulador derivado de epóxido BDDE ligando duas porções PEGDE modificando uma porção PEGDE modificando uma porção, PEGDE modificando ou outro grupo epóxi sendo duas porções hidrolisado (fragmento de fibroína de (fragmento de fibroína de seda) seda) Precursor de reticulador de Precursor de reticulador de fibroína de seda de diepoxi fibroína de seda de diglicidila
[00233] Tal como aqui utilizado, o “efeito Tyndall”, e/ ou “tyndalling”, é um evento adverso ocorrendo, em alguns pacientes administrados com agentes de preenchimento de tecido. O efeito Tyndall é caracterizado pelo aparecimento de uma descoloração azul no local da pele em que um preenchimento de tecido foi injetado, o que representa a composição visível do preenchimento dérmico vista através da epiderme translúcida. O efeito Tyndall pode ser visto quando o material particulado de dispersão da luz é disperso em um meio de transmissão de luz, quando a seção transversal de partículas está em um intervalo específico, geralmente um pouco abaixo ou próximo do comprimento de onda da luz visível. Sob o efeito Tyndall, a luz de comprimento de onda mais longo (por exemplo, vermelho) é transmitida em maior grau pelo meio, enquanto a luz de comprimento de onda mais curto (por exemplo, azul) é refletida em maior grau por espalhamento, dando a impressão geral de que o meio é colorido de azul.
Fragmentos de proteína de seda
[00234] Em algumas formas de realização, as composições à base de proteína de seda e fragmentos de proteína de seda, ou métodos de produção dos mesmos, podem incluir os descritos nas Publicação de Pedido de Patente US Nos. 2015/00933340, 2015/0094269, 2016/0193130, 2016/0022560, 2016/ 0022561, 2016/0022562, 2016/0022563 e 2016/0222579, 2016/0281294 e patentes dos EUA nos 9,187,538, 9,522,107, 9,517,191, 9,522,108, 9,511,012 e 9,545,369, as quais são aqui incorporadas por referência.
[00235] Como aqui utilizado, fragmento de proteína de seda (SPFs) referem-se geralmente a uma mistura, composição, ou uma população de peptídeos e/ ou proteínas originárias de seda. Em algumas formas de realização, os SPFs são produzidos como soluções de mistura de SPF substancialmente puras e altamente escaláveis que podem ser usadas em vários setores para uma variedade de aplicações. As soluções são geradas a partir de material de proteína de seda intacta pura em bruto e processadas para remover qualquer sericina e atingir o peso molecular ponderal médio (PM) desejado e a polidispersividade da mistura de fragmentos.
Os parâmetros do método selecionado podem ser alterados para obter características distintas dos fragmentos finais das proteínas da seda, dependendo do uso pretendido.
A solução final do fragmento resultante é fragmentos de proteína de seda pura e água com PPM a níveis não detectáveis de contaminantes do processo, níveis aceitáveis nos mercados farmacêutico, médico e cosmético de consumo.
A concentração, tamanho e polidispersividade dos fragmentos de proteína de seda na solução podem ser alterados ainda mais, dependendo dos requisitos de uso e desempenho desejados.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura na solução são substancialmente desprovidos de sericina, têm um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa e tem uma polidispersividade variando de cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura na solução são substancialmente desprovidos de sericina, têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa e tem uma polidispersividade variando de cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura na solução são substancialmente desprovidos de sericina, têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa e tem uma polidispersividade variando de cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura na solução são substancialmente desprovidos de sericina, têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa e tem uma polidispersividade variando de cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura na solução são substancialmente desprovidos de sericina, têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa e tem uma polidispersividade variando de cerca de 1,5 e cerca de 3,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura na solução são substancialmente desprovidos de sericina, têm um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 80 kDa a cerca de 150 kDa e tem uma polidispersividade variando de cerca de 1,5 e cerca de 3,0.
[00236] Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína de seda aqui descritos podem ser preparados em uma solução ou como um sólido, pelo qual o sólido é suspenso em uma solução fisiológica (por exemplo, água, solução salina e afins) ou um gel de HA, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, os fragmentos de proteína de seda aqui descritos podem ser preparados em lipossomas ou microesferas antes de depositar os mesmos em um gel de HA.
[00237] Em uma forma de realização, as soluções de seda da presente divulgação podem ser usadas para gerar as composições de preenchimento de tecido aqui descritas. Em uma forma de realização, as soluções podem ser usadas para gerar géis que podem ser homogeneizados com HA e agentes adicionais para preparar os preenchimentos de tecido aqui descritos. Dependendo da solução de seda utilizada e dos métodos para moldar os filmes ou géis, são obtidas várias propriedades.
[00238] Em algumas formas de realização, o teor de SPF em porcentagem, em peso, nos preenchimentos de tecido aqui descritos é de pelo menos 0,01%, ou pelo menos 0,1%, ou pelo menos 0,2%, ou pelo menos 0,3%, ou pelo menos 0,4%, ou pelo menos 0,5%, ou pelo menos 0,6%, ou pelo menos 0,7%, ou pelo menos 0,8%, ou pelo menos 0,9%, ou pelo menos 1%, ou pelo menos 2%, ou pelo menos 3%, ou pelo menos 4%, ou pelo menos 5%, ou pelo menos 6%, ou pelo menos 7%, ou pelo menos 8%, ou pelo menos 9%, ou pelo menos 10%, ou pelo menos 11%, ou pelo menos 12%, ou pelo menos 13%, ou pelo menos 14%, ou pelo menos 15%, ou pelo menos 16%, ou pelo menos 17%, ou pelo menos 18%, ou pelo menos 19%, ou pelo menos 20%, ou pelo menos 21%, ou pelo menos 22%, ou pelo menos 23%, ou pelo menos 24%, ou pelo menos 25%, ou pelo menos 26%, ou pelo menos 27%, ou pelo menos 28%, ou pelo menos 29%, ou pelo menos 30%, ou pelo menos 31%, ou pelo menos 32%, ou pelo menos 33%, ou pelo menos 34%, ou pelo menos 35%, ou pelo menos 36%, ou pelo menos 37%, ou pelo menos 38%, ou pelo menos 39%, ou pelo menos 40%, ou pelo menos 41%, ou pelo menos 42%, ou pelo menos 43%, ou pelo menos 44%, ou pelo menos 45%, ou pelo menos 46%, ou pelo menos 47%, ou pelo menos 48%, ou pelo menos 49%, ou pelo menos 50%, ou pelo menos 51%, ou pelo menos 52%, ou pelo menos 53%, ou pelo menos 54%, ou pelo menos 55%, ou pelo menos 56%, ou pelo menos 57%, ou pelo menos 58%, ou pelo menos 59%, ou pelo menos 60%, ou pelo menos 61%, ou pelo menos 62%, ou pelo menos 63%, ou pelo menos 64%, ou pelo menos 65%, ou pelo menos 66%, ou pelo menos 67%, ou pelo menos 68%, ou pelo menos 69%, ou pelo menos 70%, ou pelo menos 71%, ou pelo menos 72%, ou pelo menos 73%, ou pelo menos 74%, ou pelo menos 75%, ou pelo menos 76%, ou pelo menos 77%, ou pelo menos 78%, ou pelo menos 79%, ou pelo menos 80%, ou pelo menos 81%, ou pelo menos 82%, ou pelo menos 83%, ou pelo menos 84%, ou pelo menos 85%, ou pelo menos 86%, ou pelo menos 87%, ou pelo menos 88%, ou pelo menos 89%, ou pelo menos 90%, ou pelo menos 91%, ou pelo menos 92%, ou pelo menos 93%, ou pelo menos 94%, ou pelo menos 95%, ou pelo menos 96%, ou pelo menos 97%, ou pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou pelo menos 99,5%, ou pelo menos 99,9%.
[00239] Em algumas formas de realização, o teor de SPF em porcentagem, em peso, nos preenchimentos de tecido descritos aqui é no máximo 0,01%, ou no máximo 0,1%, ou no máximo 0,2%, ou no máximo 0,3%,
ou no máximo 0,4%, ou no máximo 0,5%, ou no máximo 0,6%, ou no máximo
0,7%, ou no máximo 0,8%, ou no máximo 0,9%, ou no máximo 1%, ou no máximo 2%, ou no máximo 3%, ou no máximo 4%, ou no máximo 5%, ou no máximo 6%, ou no máximo 7%, ou no máximo 8%, ou no máximo 9%, ou no máximo 10%, ou no máximo 11%, ou no máximo 12%, ou no máximo 13%, ou no máximo 14%, ou no máximo 15%, ou no máximo 16%, ou no máximo 17%,
ou no máximo 18%, ou no máximo 19%, ou no máximo 20%, ou no máximo 21%,
ou no máximo 22%, ou no máximo 23%, ou no máximo 24%, ou no máximo 25%,
ou no máximo 26%, ou no máximo 27%, ou no máximo 28%, ou no máximo 29%,
ou no máximo 30%, ou no máximo 31%, ou no máximo 32%, ou no máximo 33%,
ou no máximo 34%, ou no máximo 35%, ou no máximo 36%, ou no máximo 37%,
ou no máximo 38%, ou no máximo 39%, ou no máximo 40%, ou no máximo 41%,
ou no máximo 42%, ou no máximo 43%, ou no máximo 44%, ou no máximo 45%,
ou no máximo 46%, ou no máximo 47%, ou no máximo 48%, ou no máximo 49%,
ou no máximo 50%, ou no máximo 51%, ou no máximo 52%, ou no máximo 53%,
ou no máximo 54%, ou no máximo 55%, ou no máximo 56%, ou no máximo 57%,
ou no máximo 58%, ou no máximo 59%, ou no máximo 60%, ou no máximo 61%,
ou no máximo 62%, ou no máximo 63%, ou no máximo 64%, ou no máximo 65%,
ou no máximo 66%, ou no máximo 67%, ou no máximo 68%, ou no máximo 69%,
ou no máximo 70%, ou no máximo 71%, ou no máximo 72%, ou no máximo 73%,
ou no máximo 74%, ou no máximo 75%, ou no máximo 76%, ou no máximo 77%,
ou no máximo 78%, ou no máximo 79%, ou no máximo 80%, ou no máximo 81%,
ou no máximo 82%, ou no máximo 83%, ou no máximo 84%, ou no máximo 85%,
ou no máximo 86%, ou no máximo 87%, ou no máximo 88%, ou no máximo 89%,
ou no máximo 90%, ou no máximo 91%, ou no máximo 92%, ou no máximo 93%,
ou no máximo 94%, ou no máximo 95%, ou no máximo 96%, ou no máximo 97%, ou no máximo 98%, ou no máximo 99%, ou no máximo 99,5%, ou no máximo
99,9%.
[00240] Em algumas formas de realização, o teor de SPF em porcentagem, em peso, nos preenchimentos de tecido aqui descritos é de cerca de 0,01%, ou cerca de 0,1%, ou cerca de 0,2%, ou cerca de 0,3%, ou cerca de 0,4%, ou cerca de 0,5%, ou cerca de 0,6%, ou cerca de 0,7%, ou cerca de 0,8%, ou cerca de 0,9%, ou cerca de 1%, ou cerca de 2%, ou cerca de 3%, ou cerca de 4%, ou cerca de 5%, ou cerca de 6%, ou cerca de 7%, ou cerca de 8%, ou cerca de 9%, ou cerca de 10%, ou cerca de 11%, ou cerca de 12%, ou cerca de 13%, ou cerca de 14%, ou cerca de 15%, ou cerca de 16%, ou cerca de 17%, ou cerca de 18%, ou cerca de 19%, ou cerca de 20%, ou cerca de 21%, ou cerca de 22%, ou cerca de 23%, ou cerca de 24%, ou cerca de 25%, ou cerca de 26%, ou cerca de 27%, ou cerca de 28%, ou cerca de 29%, ou cerca de 30%, ou cerca de 31%, ou cerca de 32%, ou cerca de 33%, ou cerca de 34%, ou cerca de 35%, ou cerca de 36%, ou cerca de 37%, ou cerca de 38%, ou cerca de 39%, ou cerca de 40%, ou cerca de 41%, ou cerca de 42%, ou cerca de 43%, ou cerca de 44%, ou cerca de 45%, ou cerca de 46%, ou cerca de 47%, ou cerca de 48%, ou cerca de 49%, ou cerca de 50%, ou cerca de 51%, ou cerca de 52%, ou cerca de 53%, ou cerca de 54%, ou cerca de 55%, ou cerca de 56%, ou cerca de 57%, ou cerca de 58%, ou cerca de 59%, ou cerca de 60%, ou cerca de 61%, ou cerca de 62%, ou cerca de 63%, ou cerca de 64%, ou cerca de 65%, ou cerca de 66%, ou cerca de 67%, ou cerca de 68%, ou cerca de 69%, ou cerca de 70%, ou cerca de 71%, ou cerca de 72%, ou cerca de 73%, ou cerca de 74%, ou cerca de 75%, ou cerca de 76%, ou cerca de 77%, ou cerca de 78%, ou cerca de 79%, ou cerca de 80%, ou cerca de 81%, ou cerca de 82%, ou cerca de 83%, ou cerca de 84%, ou cerca de 85%, ou cerca de 86%, ou cerca de 87%, ou cerca de 88%, ou cerca de 89%, ou cerca de 90%, ou cerca de 91%, ou cerca de 92%, ou cerca de 93%, ou cerca de 94%, ou cerca de 95%, ou cerca de 96%, ou cerca de 97%, ou cerca de 98%, ou cerca de 99%, ou cerca de 99,5%, ou cerca de 99,9%.
[00241] Em algumas formas de realização, o teor de SPF em porcentagem, em peso, nos preenchimentos de tecido aqui descritos está entre cerca de 0,01% a cerca de 100%, ou cerca de 0,01% a cerca de 99,9%, ou cerca de 0,01% a cerca de 75%; ou entre cerca de 0,1% a cerca de 95%, ou cerca de
1% a cerca de 95%, ou cerca de 10% a cerca de 95%; ou entre cerca de 0,1% a cerca de 1%, ou cerca de 0,1% a cerca de 2%, ou cerca de 0,1% a cerca de 3%,
ou cerca de 0,1% a cerca de 4%, ou cerca de 0,1% a cerca de 5%, ou cerca de
0,1% a cerca de 6%, ou cerca de 0,1% a cerca de 7%, ou cerca de 0,1% a cerca de 8%, ou cerca de 0,1% a cerca de 9%, ou cerca de 0,1% a cerca de 10%, ou cerca de 0,1% a cerca de 11%, ou cerca de 0,1% a cerca de 12%, ou cerca de
0,1% a cerca de 13%, ou cerca de 0,1% a cerca de 14%, ou cerca de 0,1% a cerca de 15%, ou cerca de 0,1% a cerca de 15%, ou cerca de 0,1% a cerca de
16%, ou cerca de 0,1% a cerca de 17%, ou cerca de 0,1% a cerca de 18%, ou cerca de 0,1% a cerca de 19%, ou cerca de 0,1% a cerca de 20%, ou cerca de
0,1% a cerca de 21%, ou cerca de 0,1% a cerca de 21%, ou cerca de 0,1% a cerca de 22%, ou cerca de 0,1% a cerca de 23%, ou cerca de 0,1% a cerca de
24%, ou cerca de 0,1% a cerca de 25%; ou entre cerca de 1% a cerca de 2%,
ou cerca de 1% a cerca de 3%, ou cerca de 1% a cerca de 4%, ou cerca de 1%
a cerca de 5%, ou cerca de 1% a cerca de 6%, ou cerca de 1% a cerca de 7%,
ou cerca de 1% a cerca de 8%, ou cerca de 1% a cerca de 9%, ou cerca de 1%
a cerca de 10%, ou cerca de 1% a cerca de 11%, ou cerca de 1% a cerca de
12%, ou cerca de 1% a cerca de 13%, ou cerca de 1% a cerca de 14%, ou cerca de 1% a cerca de 15%, ou cerca de 1% a cerca de 16%, ou cerca de 1% a cerca de 17%, ou cerca de 1% a cerca de 18%, ou cerca de 1% a cerca de 19%, ou cerca de 1% a cerca de 20%, ou cerca de 1% a cerca de 21%, ou cerca de 1%
a cerca de 22%, ou cerca de 1% a cerca de 23%, ou cerca de 1% a cerca de
24%, ou cerca de 1% a cerca de 25%; ou entre cerca de 10% a cerca de 20%, ou cerca de 10% a cerca de 25%, ou cerca de 10% a cerca de 30%, ou cerca de
10% a cerca de 35%, ou cerca de 10% a cerca de 40%, ou cerca de 10% a cerca de 45%, ou cerca de 10% a cerca de 50%, ou cerca de 10% a cerca de 55%, ou cerca de 10% a cerca de 60%, ou cerca de 10% a cerca de 65%, ou cerca de 10% a cerca de 70%, ou cerca de 10% a cerca de 75%, ou cerca de 10% a cerca de 80%, ou cerca de 10% a cerca de 85%, ou cerca de 10% a cerca de 90%, ou cerca de 10% a cerca de 100%.
[00242] Os SPF aqui descritos podem ter uma variedade de propriedades mecânicas e físicas, dependendo do grau de cristalinidade dos peptídeos e/ ou proteínas dos SPF. Em uma forma de realização, uma composição de SPF da presente divulgação não é solúvel em uma solução aquosa devido à cristalinidade da proteína. Em uma forma de realização, uma composição de SPF da presente divulgação é solúvel em uma solução aquosa.
Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de cerca de dois terços e uma região amorfa de cerca de um terço. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de cerca de metade e uma região amorfa de cerca de metade. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 99% e uma região amorfa de 1%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 95% e uma região amorfa de 5%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 90% e uma região amorfa de 10%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 85% e uma região amorfa de 15%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 80% e uma região amorfa de 20%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 75% e uma região amorfa de 25%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 70% e uma região amorfa de 30%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 65% e uma região amorfa de 35%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 60% e uma região amorfa de 40%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 50% e uma região amorfa de 50%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 40% e uma região amorfa de 60%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 35% e uma região amorfa de 65%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 30% e uma região amorfa de 70%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 25% e uma região amorfa de 75%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 20% e uma região amorfa de 80%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 15% e uma região amorfa de 85%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 10% e uma região amorfa de 90%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina de 5% e uma região amorfa de 90%. Em uma forma de realização, os SPFs de uma composição da presente divulgação incluem uma porção cristalina a 1% e uma região amorfa a 99%.
[00243] Em algumas formas de realização, as propriedades físicas e mecânicas dos SPF variam com o grau de presença na composição de
SPF das regiões de α-hélice e/ ou espiral aleatória.
Em algumas formas de realização, um hidrogel de SPF aqui divulgado tem uma estrutura de proteína que é substancialmente livre de regiões de α-hélice e hélice aleatória.
Em aspectos destas formas de realização, um hidrogel tem uma estrutura de proteína, incluindo, por exemplo, cerca de 5% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 10% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 15%
de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 20% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 25% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 30% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 35% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 40% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 45% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, ou cerca de
50% de regiões de α-hélice e espiral aleatória.
Em outros aspectos detas formas de realização, um hidrogel tem uma estrutura de proteína, incluindo, por exemplo, no máximo 5% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, no máximo
10% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, no máximo 15% de regiões de α-
hélice e espiral aleatória, no máximo 20% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, no máximo 25% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, no máximo
30% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, no máximo 35% de regiões de α-
hélice e espiral aleatória, no máximo 40% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, no máximo 45% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, ou no máximo 50% de regiões de α-hélice e espiral aleatória.
Em ainda outros aspectos da destas formas de realização, um hidrogel tem uma estrutura de proteínas,
incluindo, por exemplo, cerca de 5% a cerca de 10% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 5% a cerca de 15% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 5% a cerca de 20% de regiões de α-hélice e espiral aleatória,
cerca de 5% a cerca de 25% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 5% a cerca de 30% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 5% a cerca de 40% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 5% a cerca de
50% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 10% a cerca de 20% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 10% a cerca de 30% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, cerca de 15% a cerca de 25% de regiões de α- hélice e espiral aleatória, cerca de 15% a cerca de 30% de regiões de α-hélice e espiral aleatória, ou cerca de 15% a cerca de 35% de regiões de α-hélice e espiral aleatória.
[00244] Em algumas formas de realização, as composições de solução de SPF da presente divulgação têm estabilidade na prateleira, ou seja, elas não gelificam lenta ou espontaneamente quando armazenadas em uma solução aquosa e ali, sem agregação aparente de fragmentos e/ ou aumento do peso molecular ao longo do tempo, a partir de 10 dias a 3 anos, dependendo das condições de armazenamento, porcentagem de seda e número de transportes e condições de transporte. Além disso, o pH pode ser alterado para prolongar a vida útil e/ ou suportar as condições de transporte, impedindo a dobra e agregação prematuras da seda. Em uma forma de realização, uma composição de solução de SPF da presente divulgação tem uma estabilidade na prateleira de até 2 semanas à temperatura ambiente (RT). Em uma forma de realização, uma composição de solução de SPF da presente divulgação tem uma estabilidade de prateleira de até 4 semanas em RT. Em uma forma de realização, uma composição de solução de SPF da presente divulgação tem uma estabilidade na prateleira por até 6 semanas na RT. Em uma forma de realização, uma composição de solução de SPF da presente divulgação tem uma estabilidade de prateleira de até 8 semanas em RT. Em uma forma de realização, uma composição de solução de SPF da presente divulgação tem uma estabilidade na prateleira de até 10 semanas em RT. Em uma forma de realização, uma composição de solução de SPF da presente divulgação tem uma estabilidade de prateleira de até 12 semanas na RT. Em uma forma de realização, uma composição de solução de SPF da presente divulgação tem uma estabilidade na prateleira que varia de cerca de 4 semanas a cerca de 52 semanas em RT. A Tabela 1 abaixo mostra os resultados do teste de estabilidade em prateleira para formas de realização de composições de SPF da presente divulgação.
Tabela 1. Estabilidade de prateleira das composições de SPF da presente divulgação % de Seda Temperatura Tempo para Gelificação 2 RT 4 semanas 2 4 °C > 9 semanas 4 RT 4 semanas 4 4 °C > 9 semanas 6 RT 2 semanas 6 4 °C > 9 semanas
[00245] Um aditivo conhecido como uma vitamina (por exemplo, vitamina C) pode ser adicionado a uma composição de solução de SPF da presente divulgação para criar um gel que é estável de 10 dias a 3 anos à temperatura ambiente (RT). Ambos os exemplos, uma composição de SPF e a mesma com um aditivo, podem ser liofilizados para um controle de armazenamento aprimorado que varia de 10 dias a 10 anos, dependendo das condições de armazenamento e transporte. O pó de seda liofilizado também pode ser usado como ingrediente bruto nos mercados médico, consumidor e eletrônico. Além disso, o pó de seda liofilizado pode ser ressuspenso em água, HFIP ou solução orgânica após o armazenamento para criar soluções de seda com concentrações variadas, incluindo soluções de maior concentração do que as produzidas inicialmente. Em outra forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda são secos usando um evaporador rototérmico ou outros métodos conhecidos na técnica para criar uma forma de proteína seca contendo menos de 10% de água em massa.
[00246] Os SPFs usados nos preenchimentos de tecido e métodos aqui divulgados podem ser manipulados e incorporados de várias maneiras, por exemplo, na forma de uma solução, que pode ser combinada com outros materiais (por exemplo, HA) para preparar as composições de preenchimento de tecido aqui descritas. A seguir, são apresentados exemplos não limitativos de faixas adequadas para vários parâmetros na e para a preparação das soluções de seda da presente divulgação. As soluções de seda da presente divulgação podem incluir um ou mais desses parâmetros, mas não necessariamente todos, e podem ser preparadas usando várias combinações de faixas de tais parâmetros.
[00247] Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 14%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 13%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 12%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 11%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é menor que 0,7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é inferior a 0,1%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 0,9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 3%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que
4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 11%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 12%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 13%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 14%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 17%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução é maior que 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 10%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 6,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 5,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 4,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 3,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 2,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 2,0%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 2,4%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,5% e 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,5% e 4,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,5% e 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,5% e 3,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,5% e 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,5% e 2,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 1 e 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 1 e 3,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 1 e 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 1 e 2,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 1 e 2,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 1 e 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 20% e 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 0,1% e 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 6% e 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 6% e 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 6% e 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 10% e 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 11% e 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 12% e 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 13% e 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na solução está entre 14% e 16%.
[00248] Em uma forma de realização, as composições de seda aqui descritas podem ser combinadas com HA para formar uma composição de preenchimento de tecido. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 19%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 14%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 13%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 12%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 11%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 9%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,8%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,3%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 3%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 8%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 11%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 12%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 13%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 14%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 7%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 6,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 5,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 4,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 3,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 2,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 2,0%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 2,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,5% e 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,5% e 4,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,5% e 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,5% e 3,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,5% e 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,5% e 2,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 1 e 4%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 1 e 3,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 1 e 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 1 e 2,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 1 e 2,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 1 e 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 20% e 30%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 0,1% e 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 6% e 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 6% e 8%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 6% e 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 10% e 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 11% e 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 12% e 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 13% e 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de seda na composição de preenchimento de tecido em peso está entre 14% e 16%.
[00249] Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido não é detectável a 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido não é detectável a 5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido é de 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido é de 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido é de 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido é de 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido é de 5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido é de 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de sericina na solução ou na composição de preenchimento de tecido é de 30%.
[00250] Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 0 a 1 ano. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 0 a 2 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 0 a 3 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 0 a 4 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 0 a 5 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 1 a 2 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de seda LiBr é de 1 a 3 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 1 a 4 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 1 a 5 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 2 a 3 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 2 a 4 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 2 a 5 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 3 a 4 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 3 a 5 anos. Em uma forma de realização, a estabilidade da solução de fragmento de LiBr-seda é de 4 a 5 anos.
[00251] Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteínas à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 10 dias a 6 meses. Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteína à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 6 meses a 12 meses. Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteínas à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 12 meses a 18 meses. Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteína à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 18 meses a 24 meses. Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteína à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 24 meses a 30 meses. Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteína à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 30 meses a 36 meses. Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteínas à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 36 meses a 48 meses.
Em uma forma de realização, a estabilidade de composições de fragmentos de proteína à base de seda-fibroína que podem ser incluídas nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é de 48 meses a 60 meses.
[00252] Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 1 kDa a 250 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 5 kDa a 150 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 1 kDa a 6 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 6 kDa a 17 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 17 kDa a 39 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 39 kDa a 80 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 80 kDa a 150 kDa.
[00253] Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 250 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 240 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 230 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 220 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido descritos aqui têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 210 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 200 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido descritos aqui têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 190 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 180 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 170 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 160 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 150 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 140 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 130 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 120 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 110 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 100 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 90 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 80 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 70 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 60 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 50 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 40 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 30 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 20 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 kDa a 10 kDa.
[00254] Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 1 a 5 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 5 a 10 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 10 a 15 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 15 a 20 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 20 a 25 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 25 a 30 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 30 a 35 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 35 a 40 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 40 a 45 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 45 a 50 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 50 a 55 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 55 a 60 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 60 a 65 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 65 a 70 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 70 a 75 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 75 a 80 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 80 a 85 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 85 a 90 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 90 a 95 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 95 a 100 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 100 a 105 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 105 a 110 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 110 a 115 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 115 a 120 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 120 a 125 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 125 a
130 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 130 a 135 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 135 a 140 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 140 a 145 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 145 a
150 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 150 a 155 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 155 a 160 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 160 a 165 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 165 a
170 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 170 a 175 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 175 a 180 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 180 a 185 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 185 a
190 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 190 a 195 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 195 a 200 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 200 a 205 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 205 a
210 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 210 a 215 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 215 a 220 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 220 a 225 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 225 a
230 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 230 a 235 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 235 a 240 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 240 a 245 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 245 a
250 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 250 a 255 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 255 a 260 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 260 a 265 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 265 a
270 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 270 a 275 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 275 a 280 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 280 a 285 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 285 a
290 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 290 a 295 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 295 a 300 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 300 a 305 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio que varia de 305 a
310 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 310 a 315 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 315 a 320 kDa.
Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 320 a 325 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 325 a 330 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 330 a 335 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 335 a 340 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 340 a 345 kDa. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm um peso molecular ponderal médio variando de 345 a 350 kDa.
[00255] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo uma ou mais de seda de baixo peso molecular, seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular.
[00256] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo uma ou mais de seda de baixo peso molecular, seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular. Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de baixo peso molecular e seda de médio peso molecular. Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de baixo peso molecular e seda de alto peso molecular. Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular. Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de baixo peso molecular, seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular.
[00257] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de baixo peso molecular e seda de médio peso molecular. Em algumas formas de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de médio peso molecular está entre cerca de 99:1 e cerca de 1:99, entre cerca de 95:5 e cerca de 5:95, entre cerca de 90:10 e cerca de 10:90, entre 75:25 e 25:75, entre 65:35 e 35:65 ou entre 55:45 e 45:55. Em algumas formas de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de médio peso molecular está entre cerca de 99:1 a cerca de 55:45, entre cerca de 95:5 a cerca de 45:55, entre cerca de 90:10 a cerca de 35:65, entre 75:25 e 15:85, entre 65:35 e 10:90 ou entre 55:45 e 1:99. Em uma forma de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de médio peso molecular é de cerca de 99:1, cerca de 98:2, cerca de 97:3, cerca de 96:4, cerca de 95:5, cerca de 94:6, cerca de 93:7, cerca de 92:8, cerca de 91:9, cerca de 90:10, cerca de 89:11, cerca de 88:12, cerca de 87:13, cerca de 86:14, cerca de 85:15, cerca de 84:16, cerca de 83:17, cerca de 82:18, cerca de 81:19, cerca de 80:20, cerca de 79:21, cerca de 78:22, cerca de 77:23, cerca de 76:24, cerca de 75:25, cerca de 74:26, cerca de 73:27, cerca de 72:28, cerca de 71:29, cerca de 70:30, cerca de 69:31, cerca de 68:32, cerca de 67:33, cerca de 66:34, cerca de 65:35, cerca de 64:36, cerca de 63:37, cerca de 62:38, cerca de 61:39, cerca de 60:40, cerca de 59:41, cerca de 58:42, cerca de 57:43, cerca de 56:44, cerca de 55:45, cerca de 54:46, cerca de 53:47, cerca de 52:48, cerca de 51:49, cerca de 50:50, cerca de 49:51, cerca de
48:52, cerca de 47:53, cerca de 46:54, cerca de 45:55, cerca de 44:56, cerca de 43:57, cerca de 42:58, cerca de 41:59, cerca de 40:60, cerca de 39:61, cerca de 38:62, cerca de 37:63, cerca de 36:64, cerca de 35:65, cerca de 34:66, cerca de 33:67, cerca de 32:68, cerca de 31:69, cerca de 30:70, cerca de 29:71, cerca de 28:72, cerca de 27:73, cerca de 26:74, cerca de 25:75, cerca de 24:76, cerca de 23:77, cerca de 22:78, cerca de 21:79, cerca de 20:80, cerca de 19:81, cerca de 18:82, cerca de 17:83, cerca de 16:84, cerca de 15:85, cerca de 14:86, cerca de 13:87, cerca de 12:88, cerca de 11:89, cerca de 10:90, cerca de 9:91, cerca de 8:92, cerca de 7:93, cerca de 6:94, cerca de 5:95, cerca de 4:96, cerca de 3:97, cerca de 2:98 ou cerca de 1:99. Em uma forma de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de médio peso molecular é de cerca de 9:1, cerca de 8:1, cerca de 7:1, cerca de 6:1, cerca de 5:1, cerca de 4:1, cerca de 3:1, cerca de 2:1 ou cerca de 1:1. Em uma forma de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de médio peso molecular é de cerca de 1:9, cerca de 1:8, cerca de 1:7, cerca de 1:6, cerca de 1:5, cerca de 1:4, cerca de 1:3, cerca de 1:2 ou cerca de 1:1.
[00258] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de baixo peso molecular e seda de alto peso molecular. Em algumas formas de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de alto peso molecular está entre cerca de 99:1 e cerca de 1:99, entre cerca de 95:5 e cerca de 5:95, entre cerca de 90:10 e cerca de 10:90, entre 75:25 e 25:75, entre 65:35 e 35:65 ou entre 55:45 e 45:55. Em algumas formas de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de alto peso molecular está entre cerca de 99:1 e cerca de 55:45, entre cerca de 95:5 e cerca de 45:55, entre cerca de 90:10 e cerca de 35:65, entre 75:25 e 15:85, entre 65:35 e 10:90 ou entre 55:45 e 1:99. Em uma forma de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular e seda de alto peso molecular é de cerca de 99:1, cerca de 98:2, cerca de 97:3, cerca de 96:4, cerca de 95:5, cerca de 94:6, cerca de 93:7, cerca de 92:8, cerca de 91:9, cerca de 90:10, cerca de 89:11, cerca de 88:12, cerca de 87:13, cerca de 86:14, cerca de 85:15, cerca de 84:16, cerca de 83:17, cerca de 82:18, cerca de 81:19, cerca de 80:20, cerca de 79:21, cerca de 78:22, cerca de 77:23, cerca de 76:24, cerca de 75:25, cerca de 74:26, cerca de 73:27, cerca de 72:28, cerca de 71:29, cerca de 70:30, cerca de 69:31, cerca de 68:32, cerca de 67:33, cerca de 66:34, cerca de 65:35, cerca de 64:36, cerca de 63:37, cerca de 62:38, cerca de 61:39, cerca de 60:40, cerca de 59:41, cerca de 58:42, cerca de 57:43, cerca de 56:44, cerca de 55:45, cerca de 54:46, cerca de 53:47, cerca de 52:48, cerca de 51:49, cerca de 50:50, cerca de 49:51, cerca de 48:52, cerca de 47:53, cerca de 46:54, cerca de 45:55, cerca de 44:56, cerca de 43:57, cerca de 42:58, cerca de 41:59, cerca de 40:60, cerca de 39:61, cerca de 38:62, cerca de 37:63, cerca de 36:64, cerca de 35:65, cerca de 34:66, cerca de 33:67, cerca de 32:68, cerca de 31:69, cerca de 30:70, cerca de 29:71, cerca de 28:72, cerca de 27:73, cerca de 26:74, cerca de 25:75, cerca de 24:76, cerca de 23:77, cerca de 22:78, cerca de 21:79, cerca de 20:80, cerca de 19:81, cerca de 18:82, cerca de 17:83, cerca de 16:84, cerca de 15:85, cerca de 14:86, cerca de 13:87, cerca de 12:88, cerca de 11:89, cerca de 10:90, cerca de 9:91, cerca de 8:92, cerca de 7:93, cerca de 6:94, cerca de 5:95, cerca de 4:96, cerca de 3:97, cerca de 2:98 ou cerca de 1:99.
[00259] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular. Em algumas formas de realização, a razão p/ p entre seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular está entre cerca de 99:1 e cerca de 1:99, entre cerca de 95:5 e cerca de 5:95, entre cerca de 90:10 e cerca de 10:90, entre 75:25 e 25:75, entre 65:35 e 35:65 ou entre 55:45 e 45:55. Em algumas formas de realização, a razão p/ p entre seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular está entre cerca de 99:1 e cerca de 55:45, entre cerca de 95:5 e cerca de 45:55, entre cerca de 90:10 e cerca de 35:65, entre 75:25 e 15:85, entre 65:35 e 10:90 ou entre 55:45 e 1:99. Em uma forma de realização, a razão p/ p entre seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular é de cerca de 99:1, cerca de 98:2, cerca de 97:3, cerca de 96:4, cerca de 95:5, cerca de 94:6, cerca de 93:7, cerca de 92:8, cerca de 91:9, cerca de 90:10, cerca de 89:11, cerca de 88:12, cerca de 87:13, cerca de 86:14, cerca de 85:15, cerca de 84:16, cerca de 83:17, cerca de 82:18, cerca de 81:19, cerca de 80:20, cerca de 79:21, cerca de 78:22, cerca de 77:23, cerca de 76:24, cerca de 75:25, cerca de 74:26, cerca de 73:27, cerca de 72:28, cerca de 71:29, cerca de 70:30, cerca de 69:31, cerca de 68:32, cerca de 67:33, cerca de 66:34, cerca de 65:35, cerca de 64:36, cerca de 63:37, cerca de 62:38, cerca de 61:39, cerca de 60:40, cerca de 59:41, cerca de 58:42, cerca de 57:43, cerca de 56:44, cerca de 55:45, cerca de 54:46, cerca de 53:47, cerca de 52:48, cerca de 51:49, cerca de 50:50, cerca de 49:51, cerca de 48:52, cerca de 47:53, cerca de 46:54, cerca de 45:55, cerca de 44:56, cerca de 43:57, cerca de 42:58, cerca de 41:59, cerca de 40:60, cerca de 39:61, cerca de 38:62, cerca de 37:63, cerca de 36:64, cerca de 35:65, cerca de 34:66, cerca de 33:67, cerca de 32:68, cerca de 31:69, cerca de 30:70, cerca de 29:71, cerca de 28:72, cerca de 27:73, cerca de 26:74, cerca de 25:75, cerca de 24:76, cerca de 23:77, cerca de 22:78, cerca de 21:79, cerca de 20:80, cerca de 19:81, cerca de 18:82, cerca de 17:83, cerca de 16:84, cerca de 15:85, cerca de 14:86, cerca de 13:87, cerca de 12:88, cerca de 11:89, cerca de 10:90, cerca de 9:91, cerca de 8:92, cerca de 7:93, cerca de 6:94, cerca de 5:95, cerca de 4:96, cerca de 3:97, cerca de 2:98 ou cerca de 1:99.
[00260] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir proteína de seda compreendendo seda de baixo peso molecular, seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular. Em uma forma de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular, seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular é de cerca de 1:1:8, 1:2:7, 1:3:6, 1:4:5, 1:5:4, 1:6:3, 1:7:2, 1:8:1, 2:1:7, 2:2:6, 2:3:5, 2:4:4, 2:5:3, 2:6:2, 2:7:1, 3:1:6, 3:2:5, 3:3:4, 3:4:3, 3:5:2, 3:6:1, 4:1:5, 4:2:4, 4:3:3, 4:4:2, 4:5:1, 5:1:4, 5:2:3, 5:3:2, 5:4:1, 6:1:3, 6:2:2, 6:3:1, 7:1:2, 7:2:1, ou 8:1:1.
Em uma forma de realização, a razão p/ p entre seda de baixo peso molecular, seda de médio peso molecular e seda de alto peso molecular é de cerca de 3:0,1:0,9, 3:0,2:0,8, 3:0,3:0,7, 3:0,4:0,6, 3:0,5:0,5, 3:0,6:0,4, 3:0,7:0,3, 3:0,8:0,2 ou 3:0,9:0,1.
[00261] Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm uma polidispersividade que varia de cerca de 1 a cerca de 5,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm uma polidispersividade que varia de cerca de 1,5 a cerca de 3,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm uma polidispersividade que varia de cerca de 1 a cerca de 1,5. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm uma polidispersividade que varia de cerca de 1,5 a cerca de 2,0. Em uma forma de realização, os fragmentos de proteína à base de fibroína de seda incorporados aos preenchimentos de tecido aqui descritos têm uma polidispersividade que varia de cerca de 2,0 a cerca de 2,5. Em uma forma de realização, uma composição da presente divulgação com fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura, tem uma polidispersividade que varia de cerca de 2,0 a 3,0. Em uma forma de realização, uma composição da presente divulgação tendo fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura, tem uma polidispersividade que varia de cerca de 2,5 a cerca de 3,0.
[00262] Em uma forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF tem níveis não detectáveis de resíduos de
LiBr.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF está entre 10 ppm e 1000 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF está entre 10 ppm e 300 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 25 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 50 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 75 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 100 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 200 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 300 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 400 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 500 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 600 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 700 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 800 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 900 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é inferior a 1000 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 500 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 450 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 400 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 350 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 300 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 250 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 200 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 150 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é não detectável a 100 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é de 100 ppm a 200 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é de 200 ppm a 300 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é de 300 ppm a 400 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de LiBr em um preenchimento de tecido aqui descrito que inclui SPF é de 400 ppm a 500 ppm.
[00263] Em uma forma de realização, um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF tendo fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura, tem níveis não detectáveis de resíduos de Na2CO3. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 100 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na 2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 200 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 300 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 400 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 500 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 600 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 700 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 800 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 900 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é inferior a 1000 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 500 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 450 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 400 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 350 ppm.
Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na 2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 300 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 250 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 200 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 150 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é não detectável a 100 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é de 100 ppm a 200 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na 2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é de 200 ppm a 300 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na 2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é de 300 ppm a 400 ppm. Em uma forma de realização, a quantidade de resíduos de Na2CO3 em um preenchimento de tecido descrito neste documento que inclui SPF é de 400 ppm a 500 ppm.
[00264] Em uma forma de realização, a solubilidade em água de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação é de 50 a 100%. Em uma forma de realização, a solubilidade em água de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação é de 60 a 100%. Em uma forma de realização, a solubilidade em água de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação é de 70 a 100%. Em uma forma de realização, a solubilidade em água de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação é de 80 a 100%. Em uma forma de realização, a solubilidade em água é de 90 a 100%. Em uma forma de realização, os fragmentos à base de fibroína de seda da presente divulgação são não solúveis em soluções aquosas.
[00265] Em uma forma de realização, a solubilidade de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação em soluções orgânicas é de 50 a 100%. Em uma forma de realização, a solubilidade de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação em soluções orgânicas é de 60 a 100%. Em uma forma de realização, a solubilidade de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação em soluções orgânicas é de 70 a 100%. Em uma forma de realização, a solubilidade de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação em soluções orgânicas é de 80 a 100%.
Em uma forma de realização, a solubilidade de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura da presente divulgação em soluções orgânicas é de 90 a 100%. Em uma forma de realização, os fragmentos à base de fibroína de seda da presente divulgação são não solúveis em soluções orgânicas.
[00266] Os métodos de produção de fragmentos de proteína de seda usados nas composições da presente divulgação são demonstrados nas Publicações de Pedido de Patente US Nos. 2015/00933340, 2015/0094269, 2016/0193130, 2016/0022560, 2016/0022561, 2016/0022562, 2016/0022563 e 2016/0222579, 2016/0281294 e Patentes US 9,187,538, 9,522,107, 9,517,191, 9,522,108, 9,511,012 e 9,545,369, sendo que a totalidade é aqui incorporada por referência. No entanto, um método exemplar é demonstrado na Figura 1, que é um fluxograma mostrando várias formas de realização para a produção de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura (SPFs) da presente divulgação.
Deve-se entender que nem todas as etapas ilustradas são necessariamente indispensáveis para fabricar todas as soluções de seda da presente divulgação.
Como ilustrado na Figura 1, etapa A, casulos (tratados com ou sem tratamento térmico), fibras de seda, pó de seda ou seda de aranha podem ser usados como fonte de seda.
Se a partir de casulos de seda crua de
Bombyx mori, os casulos podem ser cortados em pedaços pequenos, por exemplo pedaços de tamanho aproximadamente igual, etapa B1. A seda crua é então extraída e lavada para remover qualquer sericina, etapa C1a.
Isso resulta em seda crua substancialmente livre de sericina.
Em uma forma de realização,
a água é aquecida a uma temperatura entre 84 °C e 100 °C (de preferência em ebulição) e, em seguida, Na2CO3 (carbonato de sódio) é adicionado à água em ebulição até que o Na2CO3 esteja completamente dissolvido.
A seda crua é adicionada à água em ebulição/ Na2CO3 (100 °C) e submersa durante cerca de
15 - 90 minutos, onde ferver durante um tempo mais longo resulta em fragmentos de proteína de seda menores.
Em uma forma de realização, o volume de água é igual a cerca de 0,4 x o peso de seda crua e o volume de Na 2CO3 é igual a cerca de 0,848 x o peso de seda crua.
Em uma forma de realização, o volume de água é igual a 0,1 x o peso de seda crua e o volume de Na 2CO3 é mantido a
2,12 g/ L.
Isto é demonstrado na Figura 6 e Figura 7: massa de seda (eixo x) foi variada no mesmo volume da solução de extração (isto é, o mesmo volume de água e a concentração de Na2CO3) obtendo remoção de sericina
(substancialmente sericina livre), como demonstrado por uma perda global de massa de seda de 26 a 31 por cento (eixo y). Subsequentemente, a solução de
Na2CO3 dissolvida em água é drenada e o excesso de água/ Na2CO3 é removido das fibras de fibroína de seda (por exemplo, retirar o extrato de fibroína manualmente, centrifugação utilizando uma máquina, etc.). O extrato de fibroína de seda resultante é lavado com água morna a quente para remover qualquer sericina adsorvida restante ou contaminação, normalmente em uma faixa de temperatura de cerca de 40 °C a cerca de 80 °C, alterando o volume de água pelo menos uma vez (repetido por tantas vezes que for necessário). O extrato de fibroína de seda resultante é uma fibroína de seda substancialmente sem sericina. Em uma forma de realização, o extrato de fibroína de seda resultante é lavado com água a uma temperatura de cerca de 60 °C. Em uma forma de realização, o volume de água de enxágue para cada ciclo é igual a 0,1 L a 0,2 L x o peso de seda bruta. Pode ser vantajoso agitar, virar ou circular a água de enxágue para maximizar o efeito de enxágue. Após o enxágue, o excesso de água é removido das fibras extraídas de fibroína de seda (por exemplo, retirar o extrato de fibroína manualmente ou usando uma máquina). Alternativamente, métodos conhecidos de um técnico no assunto, tais como pressão, temperatura ou outros reagentes ou combinações dos mesmos, podem ser utilizados com a finalidade de extração de sericina. Alternativamente, a glândula de seda (proteína de seda 100% livre de sericina) pode ser removida diretamente de um verme. Isso resultaria em proteína de seda líquida, sem qualquer alteração Na estrutura da proteína, livre de sericina.
[00267] As fibras de fibroína extraídas são então deixadas secar completamente. Depois de seca, a fibroína de seda extraída é dissolvida usando um solvente adicionado à fibroína de seda a uma temperatura entre a temperatura ambiente e a de ebulição, etapa C1b. Em uma forma de realização, o solvente é uma solução de brometo de lítio (LiBr) (a ebulição para LiBr é de 140 °C). Alternativamente, as fibras de fibroína extraídas não são secas, mas úmidas e colocadas no solvente; a concentração de solvente pode então ser variada para atingir concentrações semelhantes às da adição de seda seca ao solvente. A concentração final do solvente de LiBr pode variar de 0,1 M a 9,3 M.
A Figura 8 é uma tabela que resume os Pesos Moleculares da seda dissolvida a partir de diferentes concentrações de Brometo de Lítio (LiBr) e de diferentes tamanhos de extração e dissolução. A dissolução completa das fibras de fibroína extraídas pode ser alcançada variando o tempo e a temperatura do tratamento juntamente com a concentração do solvente de dissolução. Outros solventes podem ser utilizados, incluindo, mas não se limitando a, ácido fosfato fosfórico, nitrato de cálcio, solução de cloreto de cálcio ou outras soluções aquosas concentradas de sais inorgânicos. Para garantir a dissolução completa, as fibras de seda devem ser totalmente imersas na solução de solvente já aquecida e, em seguida, mantidas a uma temperatura variando de cerca de 60 °C a cerca de 140 °C por 1-168 horas. Em uma forma de realização, as fibras de seda devem ser totalmente imersas na solução de solvente e depois colocadas em um forno seco a uma temperatura de cerca de 100 °C por cerca de 1 hora.
[00268] A temperatura na qual o extrato de fibroína de seda é adicionado à solução de LiBr (ou vice-versa) afeta o tempo necessário para dissolver completamente a fibroína e o peso molecular resultante e a polidispersividade da solução final da mistura de SPF. Em uma forma de realização, a concentração da solução de solvente de seda é menor ou igual a 20% p/ v. Além disso, a agitação durante a introdução ou dissolução pode ser usada para facilitar a dissolução a temperaturas e concentrações variáveis. A temperatura da solução de LiBr fornecerá controle sobre o peso molecular e a polidispersidade da mistura de fragmentos de proteína de seda criados. Em uma forma de realização, uma temperatura mais alta dissolverá mais rapidamente a seda, oferecendo maior escalabilidade do processo e produção em massa de solução de seda. Em uma forma de realização, o uso de uma solução de LiBr aquecida a uma temperatura entre 80 °C - 140 °C reduz o tempo necessário em um forno para obter a dissolução completa. O tempo e a temperatura variados, iguais ou superiores a 60 °C do solvente de dissolução, alterarão e controlarão o PM e a polidispersividade das soluções da mistura de SPF formadas a partir do peso molecular original da proteína fibroína de seda nativa.
[00269] Alternativamente, casulos inteiros podem ser colocados diretamente em um solvente, como LiBr, ignorando a extração, etapa B2. Isso requer filtração subsequente de partículas de vermes de seda da solução de seda e solvente e remoção de sericina usando métodos conhecidos na técnica para separar proteínas hidrofóbicas e hidrofílicas, como separação de colunas e/ ou cromatografia, troca iônica, precipitação química com sal e/ ou pH, e ou digestão enzimática e filtração ou extração, todos os métodos são exemplos comuns e, sem limitação, para os métodos padrão de separação de proteínas, etapa C2. Casulos não tratados termicamente com o bicho-da-seda removido podem, alternativamente, ser colocados em um solvente como o LiBr, evitando a extração. Os métodos descritos acima podem ser utilizados para a separação de sericina, com a vantagem de que os casulos não tratados termicamente conterão significativamente menos detritos do verme.
[00270] A diálise pode ser usada para remover o solvente de dissolução da solução de fragmento de proteína de fibroína dissolvida resultante, dializando a solução contra um volume de água, etapa E1. Pré-filtração antes da diálise é útil para remover quaisquer detritos remanescentes (isto é, remanescentes do bicho da seda) a partir da seda e da solução de LiBr, etapa D. Em um exemplo, um filtro de 3 μm ou 5 μm é usado com uma taxa de fluxo de 200-300 ml/ min para filtrar uma solução de 0,1% a 1,0% de seda-LiBr antes da diálise e concentração potencial, se desejado. Um método divulgado neste documento, como descrito acima, é usar o tempo e/ ou temperatura para diminuir a concentração de 9,3 M de LiBr para uma faixa de 0,1 M a 9,3 M para facilitar a filtração e diálise a jusante, particularmente ao considerar a criação de um método de processo escalável. Alternativamente, sem o uso de tempo adicional ou temperatura, uma solução de fragmento de proteína de LiBr-seda de 9,3 M pode ser diluída com água para facilitar a filtração e diálise dos detritos. O resultado da dissolução no tempo e temperatura desejados de filtração é uma solução de LiBr-fragmento de proteína de seda translúcida, estável em prateleira, à temperatura ambiente, livre de partículas, de um PM e polidispersividade conhecidos. É vantajoso trocar a água de diálise regularmente até que o solvente seja removido (por exemplo, troque a água após 1 hora, 4 horas e depois a cada 12 horas para um total de 6 trocas de água). O número total de alterações no volume de água pode variar com base na concentração resultante de solvente usado para dissolução e fragmentação de proteínas da seda. Após a diálise, a solução final de seda pode ser filtrada ainda mais para remover qualquer resíduo restante (ou seja, restos de vermes de seda).
[00271] Alternativamente, a Filtragem de Fluxo Tangencial (TFF), que é um método rápido e eficiente para a separação e purificação de biomoléculas, pode ser usada para remover o solvente da solução de fibroína dissolvida resultante, etapa E2. A TFF oferece uma solução de fragmento de proteína de seda aquosa altamente pura e permite a escalabilidade do processo para produzir grandes volumes da solução de maneira controlada e repetível. A solução de seda e LiBr pode ser diluída antes da TFF (20% a 0,1% de seda em água ou LiBr). A pré-filtração, como descrita acima, antes do processamento de TFF, pode manter a eficiência do filtro e potencialmente evitar a criação de camadas limite de gel de seda na superfície do filtro, como resultado da presença de partículas de detritos. Pré-filtração antes da TFF também é útil para remover quaisquer detritos remanescentes (isto é, restos de bicho da seda) a partir da solução de seda e LiBr que pode provocar a gelificação espontânea ou a longo prazo da única solução resultante de água, etapa D. A TFF, com recirculação ou passagem única, pode ser usada para a criação de soluções de fragmentos de proteína água-seda variando de 0,1% de seda a 30,0% de seda (mais preferencialmente, 0,1% - 6,0% de seda). Podem ser necessárias membranas TFF de tamanho de corte diferentes, com base na concentração desejada, peso molecular e polidispersividade da mistura de fragmentos de proteína de seda em solução. Membranas que variam de 1-100 kDa podem ser necessárias para variar as soluções de seda de peso molecular criadas, por exemplo, pela variação do tempo de ebulição da extração ou do tempo e temperatura no solvente de dissolução (por exemplo, LiBr). Em uma forma de realização, uma membrana de TFF de 5 ou 10 kDa é usada para purificar a solução de mistura de fragmentos de proteína de seda e criar a proporção final desejada de seda para água. Além disso, a TFF de passagem única, a TFF e outros métodos conhecidos na técnica, como um evaporador de filme em queda, podem ser usados para concentrar a solução após a remoção do solvente de dissolução (por exemplo, LiBr) (com a concentração desejada resultante variando de 0,1% a 30% de seda). Isso pode ser usado como uma alternativa aos métodos de concentração padrão de HFIP conhecidos na técnica para criar uma solução à base de água. Uma membrana porosa maior também pode ser utilizada para filtrar pequenos fragmentos de proteína de seda e criar uma solução de seda de maior peso molecular com e/ ou sem valores mais rígidos de polidispersividade.
A Figura 5 é uma tabela que resume Pesos Moleculares para algumas formas de realização de soluções de proteína de seda da presente divulgação. As condições de processamento da solução de proteína de seda foram as seguintes: extração a 100 °C por 20 min, lavagem à temperatura ambiente, LiBr em forno a 60 °C por 4-6 horas. As condições de processamento de TFF para filmes solúveis em água foram as seguintes: extração a 100 °C por 60 min, lavagem a 60 °C, LiBr a 100 °C em forno a 100 °C por 60 min. As Figuras 12-23 demonstram ainda a manipulação do tempo de extração, condições de dissolução de LiBr e processamento de TFF e exemplos de pesos moleculares e polidispersidades resultantes. Estes exemplos não pretendem ser limitativos, mas sim demonstrar o potencial de especificar parâmetros para soluções específicas de fragmentos de seda de peso molecular.
[00272] Um ensaio para a detecção de LiBr e Na2CO3 foi realizada utilizando um sistema de HPLC equipado com detector evaporativo de espalhamento de luz (ELSD). O cálculo foi realizado por regressão linear das áreas de pico resultantes para o analito plotado em relação à concentração. Mais de uma amostra de várias formulações da presente divulgação foi usada para preparação e análise de amostras. Geralmente, quatro amostras de diferentes formulações foram pesadas diretamente em um balão volumétrico de 10 ml. As amostras foram suspensas em 5 ml de formato de amônio a 20 mM (pH 3,0) e mantidas a 2-8 °C por 2 horas com agitação ocasional para extrair os analitos do filme. Após 2 horas a solução foi diluída com formato de amônio a 20 mM (pH 3,0). A solução da amostra do balão volumétrico foi transferida para frascos de HPLC e injetada no sistema HPLC-ELSD para a estimativa de carbonato de sódio e brometo de lítio.
[00273] O método analítico desenvolvido para a quantificação de Na2CO3 e LiBr em formulações de proteínas da seda mostrou-se linear na faixa de 10 - 165 μg/ ml, com RSD para precisão de injeção de 2% e 1% para área e 0,38% e 0,19% para o tempo de retenção de carbonato de sódio e brometo de lítio, respectivamente. O método analítico pode ser aplicado para a determinação quantitativa de carbonato de sódio e brometo de lítio em formulações de proteínas da seda.
[00274] A solução de fragmento de proteína de seda final é de fragmentos de proteína de seda puras e água com PPM em níveis não detectáveis de detritos em partículas e/ ou contaminantes de processo, incluindo LiBr e Na2CO3. A Figura 3 e Figura 4 são tabelas resumindo as concentrações de LiBr e Na2CO3 em soluções da presente divulgação. na Figura 3, as condições do processamento incluem extração a 100 ° C durante 60 min, enxágue 60 °C, LiBr a 100 °C no forno de 100 °C durante 60 minutos. As condições de TFF, incluindo o diferencial de pressão e o número de volumes de dia-filtração, variaram. Na Figura 4, as condições de processamento incluíram fervura de 100 °C por 60 min, enxágue a 60 °C, LiBr a 60 °C por 4-6 horas.
[00275] As soluções de fragmento de seda-água, a mistura de fragmentos de proteína de seda liofilizada ou quaisquer outras composições incluindo SPFs podem ser esterilizadas seguindo métodos padrão na técnica, não limitados a filtração, calor, radiação ou feixe eletrônico. Prevê-se que a mistura de fragmentos de proteínas de seda, devido ao seu menor comprimento de polímero de proteínas, resista melhor à esterilização do que as soluções de proteínas de seda intactas descritas na técnica. Além disso, os artigos de seda criados a partir das misturas de SPF aqui descritas podem ser esterilizados conforme apropriado à aplicação. Por exemplo, em um preenchimento dérmico de SPF carregado com uma molécula para ser usado em aplicações médicas com uma ferida/ incisão aberta, podem ser usados métodos padrão de esterilização, como por radiação ou feixe eletrônico.
[00276] A Figura 2 é um fluxograma mostrando vários parâmetros que podem ser modificados durante o processo de produção de uma solução de fragmento de proteína de seda da presente divulgação durante as etapas de extração e dissolução. Os parâmetros do método de seleção podem ser alterados para alcançar características distintas da solução final, dependendo do uso pretendido, por exemplo, peso molecular e polidispersividade. Deve-se entender que nem todas as etapas ilustradas são necessariamente necessárias para fabricar todas as soluções de seda da presente divulgação.
[00277] Em uma forma de realização, um processo para produzir uma solução de fragmento de proteína de seda da presente divulgação inclui a formação de pedaços de casulos de seda a partir do bicho-da-seda Bombyx mori; extrair os pedaços a cerca de 100 °C em uma solução de água e Na2CO3 por cerca de 60 minutos, em que um volume de água é igual a cerca de
0,4 x o peso da seda bruta e a quantidade de Na 2CO3 é de cerca de 0,848 x o peso das peças para formar um extrato de fibroína de seda; enxágue triplo do extrato de fibroína de seda a cerca de 60 °C por cerca de 20 minutos por lavagem em um volume de água de lavagem, em que a água de lavagem para cada ciclo é igual a cerca de 0,2 L x o peso das peças; remover o excesso de água do extrato de fibroína de seda; secagem do extrato de fibroína de seda; dissolver o extrato de fibroína de seda seca em uma solução de LiBr, em que a solução de LiBr é primeiro aquecida a cerca de 100 °C para criar uma solução de seda e LiBr e mantida; colocar a solução de seda e LiBr em um forno seco a cerca de 100 °C por cerca de 60 minutos para alcançar a dissolução completa e fragmentação adicional da estrutura da proteína de seda nativa em mistura com o peso molecular desejado e polidispersividade; filtrar a solução para remover quaisquer detritos restantes do bicho-da-seda; diluir a solução com água para resultar em uma solução de seda a 1%; e remover o solvente da solução usando a filtragem de fluxo tangencial (TFF). Em uma forma de realização, é utilizada uma membrana de 10 kDa para purificar a solução de seda e criar a proporção final de seda/ água desejada. A TFF pode então ser usada para concentrar ainda mais a solução de seda pura até uma concentração de 2% de seda em água.
[00278] Cada etapa do processo, desde casulos crus até diálise, é escalável para aumentar a eficiência da fabricação. Atualmente, os casulos inteiros são comprados como matéria-prima, mas os casulos pré-limpos ou os não tratados termicamente, onde a remoção de vermes deixa detritos mínimos, também foram usados. Cortar e limpar os casulos é um processo manual, no entanto, para escalabilidade, esse processo pode ser menos trabalhoso, por exemplo, usando uma máquina automatizada em combinação com ar comprimido para remover o verme e quaisquer partículas ou um moinho de corte para cortar os casulos em pedaços menores. A etapa de extração, atualmente executada em pequenos lotes, pode ser concluída em um recipiente maior, por exemplo, uma máquina de lavar industrial onde as temperaturas podem ser mantidas entre 60 °C e 100 °C. A etapa de lavagem também pode ser concluída na máquina de lavar industrial, eliminando os ciclos de lavagem manual. A dissolução da seda em solução de LiBr pode ocorrer em um recipiente que não seja um forno de convecção, por exemplo, um reator de tanque agitado.
A dialização da seda através de uma série de trocas de água é um processo manual e demorado, que pode ser acelerado alterando determinados parâmetros, por exemplo, diluindo a solução de seda antes da diálise. O processo de diálise pode ser escalado para fabricação usando equipamento semi-automático, por exemplo, um sistema de filtragem de fluxo tangencial.
[00279] A variação dos parâmetros de extração (tempo e temperatura), LiBr (temperatura da solução de LiBr quando adicionada ao extrato de fibroína de seda ou vice-versa) e dissolução (tempo e temperatura) resultam em soluções de solvente e seda com diferentes viscosidades, homogeneidades e cores. Aumentar a temperatura para extração, prolongar o tempo de extração, usar uma solução de LiBr de temperatura mais alta na emersão e ao longo do tempo ao dissolver a seda e aumentar o tempo na temperatura (por exemplo, em um forno como mostrado aqui ou em uma fonte de calor alternativa) resultou em soluções de seda e solvente menos viscosas e mais homogêneas. Embora quase todos os parâmetros tenham resultado em uma solução viável de seda, os métodos que permitem a completa dissolução em menos de 4 a 6 horas são os preferidos para a escalabilidade do processo.
[00280] O peso molecular dos fragmentos de proteína de seda pode ser controlado com base nos parâmetros específicos utilizados durante a etapa de extração, incluindo tempo e temperatura de extração; parâmetros específicos utilizados durante a etapa de dissolução, incluindo a temperatura de LiBr no momento da submersão da seda no brometo de lítio e o tempo em que a solução é mantida a temperaturas específicas; e parâmetros específicos utilizados durante a etapa de filtração. Ao controlar os parâmetros do processo usando os métodos divulgados, é possível criar soluções de mistura de SPF com polidispersividade igual ou inferior a 2,5 em uma variedade de diferentes pesos moleculares que variam de 1 kDa a 250 kDa, 5 kDa a 200 kDa, 5 kDa a 150 kDa, 10 kDa a 150 kD a ou 10 kDa a 80 kDa. Ao alterar os parâmetros do processo para obter soluções de seda com diferentes pesos moleculares, uma variedade de produtos finais da mistura de fragmentos, com polidispersividade desejada igual ou inferior a 2,5, pode ser direcionada com base nos requisitos de desempenho desejados. Por exemplo, um filme de seda de menor peso molecular contendo um medicamento pode ter uma taxa de liberação mais rápida em comparação com uma preparação de SPF de maior peso molecular. Além disso, soluções de mistura de SPF tendo uma polidispersividade superior a 2,5 podem ser obtidas. Além disso, duas soluções com diferentes pesos moleculares médios e polidispersidades podem ser misturadas para criar soluções combinadas. Alternativamente, uma glândula de seda líquida (proteína de seda 100% livre de sericina) que foi removida diretamente de um verme pode ser usada em combinação com qualquer uma das soluções de mistura de SPF da presente divulgação. O peso molecular da composição do fragmento de proteína à base de fibroína de seda pura foi determinado usando cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) com um detector de índice de refração (RID). A polidispersividade foi calculada usando o Software Cirrus GPC Online GPC/ SEC Versão 3.3 (Agilent).
[00281] Os parâmetros foram variados durante o processamento de casulos de seda crua em solução de seda. A variação desses parâmetros afetou o PM da solução de seda resultante. Os parâmetros manipulados incluíram (i) tempo e temperatura de extração, (ii) temperatura de LiBr, (iii) temperatura do forno de dissolução e (iv) tempo de dissolução. O peso molecular foi determinado com a especificação de massa, como mostrado nas
Figuras 9-25.
[00282] Foram realizados experimentos para determinar o efeito da variação do tempo de extração. As Figuras 9 a 15 são gráficos que mostram esses resultados e as Tabelas 2 a 8 resumem os resultados. Abaixo está um resumo: - Um tempo de extração de sericina de 30 minutos resultou em PM maior do que um tempo de extração de sericina de 60 minutos; - PM diminui com o tempo no forno; - LiBr a 140 °C e forno resultaram na extremidade baixa do intervalo de confiança abaixo de um PM de 9500 Da; - 30 min de extração nos pontos de 1 e 4 horas têm seda não digerida; - 30 min de extração no período de 1 hora resultaram em um peso molecular significativamente alto, com o limite inferior do intervalo de confiança sendo 35.000 Da; - A faixa de PM alcançada para o limite máximo do intervalo de confiança foi de 18000 a 216000 Da (importante para oferecer soluções com limite superior especificado).
Tabela 2. O efeito do tempo de extração (30 min vs 60 min) no peso molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) a 100 °C e Dissolução em Forno a 100 °C (tempo do forno/ dissolução foi variado). Tempo de Tempo de Desvio Mw médio Intervalo de confiança PD fervura Forno Padrão 30 1 57247 12780 35093 93387 1,63 60 1 31520 1387 11633 85407 2,71 30 4 40973 2632 14268 117658 2,87 60 4 25082 1248 10520 59803 2,38 30 6 25604 1405 10252 63943 2,50
Tempo de Tempo de Desvio Mw médio Intervalo de confiança PD fervura Forno Padrão 60 6 20980 1262 10073 43695 2,08 Tabela 3. O efeito do tempo de extração (30 min vs 60 min) no peso molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) em ebulição e dissolução no forno a 60 °C por 4 horas.
Tempo de Amostra Mw médio Desvio Padrão Intervalo de confiança PD fervura 30 min, 4 h 30 49656 4580 17306 142478 2,87 60 min, 4 h 60 30042 1536 11183 80705 2,69 Tabela 4. O efeito do tempo de extração (30 min vs 60 min) no peso molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) a 60 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (tempo do forno/ dissolução foi variado). Tempo de Tempo de Desvio Amostra Mw médio Intervalo de confiança PD fervura forno Padrão 30 min, 1 h 30 1 58436 22201 153809 2,63 60 min, 1 h 60 1 31700 11931 84224 2,66 30 min, 4 h 30 4 61956,5 13337 21463 178847 2,89 60 min, 4 h 60 4 25578,5 2446 9979 65564 2,56 Tabela 5. O efeito do tempo de extração (30 min vs 60 min) no peso molecular da seda processada sob as condições de 100 °C de temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) a 80 °C e Dissolução em Forno a 80 °C por 6 horas.
Tempo de Desvio Amostra Mw médio Intervalo de confiança PD fervura Padrão 30 min, 6 h 30 63510 18693 215775 3,40 60 min, 6 h 60 25164 238 9637 65706 2,61 Tabela 6. O efeito do tempo de extração (30 min vs 60 min) no peso molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) a 80 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (tempo do forno/
dissolução foi variado).
Tempo de Tempo Desvio Intervalo de Amostra Mw médio PD fervura de forno Padrão confiança 30 min, 4 h 30 4 59202 14028 19073 183760 3,10 60 min, 4 h 60 4 26312,5 637 10266 67442 2,56 30 min, 6 h 30 6 46824 18076 121293 2,59 60 min, 6 h 60 6 26353 10168 68302 2,59 Tabela 7. O efeito do tempo de extração (30 min vs 60 min) no peso molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) a 100 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (tempo do forno/ dissolução foi variado). Tempo de Tempo Mw Desvio Intervalo de Amostra PD fervura de forno médio Padrão confiança 30 min, 4 h 30 4 47853 19758 115900 2,42 60 min, 4 h 60 4 25082 1248 10520 59804 2,38 30 min, 6 h 30 6 55421 8992 19153 160366 2,89 60 min, 6 h 60 6 20980 1262 10073 43694 2,08 Tabela 8. O efeito do tempo de extração (30 min vs 60 min) no peso molecular da seda processada nas condições de 100 °C Temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) a 140 °C e Dissolução em Forno a 140 °C (tempo do forno/ dissolução foi variado). Tempo de Tempo de Desvio Intervalo de Amostra Mw médio PD fervura forno Padrão confiança 30 min, 4 h 30 4 9024,5 1102 4493 18127 2,00865 60 min, 4 h 60 4 15548 6954 34762 2,2358 30 min, 6 h 30 6 13021 5987 28319 2,1749 60 min, 6 h 60 6 10888 5364 22100 2,0298
[00283] Foram realizados experimentos para determinar o efeito da variação da temperatura de extração. A Figura 16 é um gráfico que mostra esses resultados e a Tabela 9 resume os resultados. Abaixo está um resumo:
- A extração de sericina a 90 °C resultou em maior PM do que a extração de sericina a 100 °C; - Tanto 90 °C como 100 °C mostram PM decrescentes ao longo do tempo no forno.
Tabela 9. O efeito da temperatura de extração (90 °C vs. 100 °C) no peso molecular da seda processada nas condições de 60 min. Temperatura de extração, brometo de lítio (LiBr) a 100 °C e Dissolução em Forno a 100 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
Tempo de Tempo de Desvio Amostra Mw médio Intervalo de confiança PD fervura forno padrão 90 °C, 4 h 60 4 37308 4204 13368 104119 2,79 100 °C, 4 h 60 4 25082 1248 10520 59804 2,38 90 °C, 6 h 60 6 34224 1135 12717 92100 2,69 100 °C, 6 h 60 6 20980 1262 10073 43694 2,08
[00284] Foram realizados experimentos para determinar o efeito da variação da temperatura do brometo de lítio (LiBr) quando adicionado à seda. As Figuras 17 a 18 são gráficos que mostram esses resultados e as Tabelas 10 e 11 resumem os resultados. Abaixo está um resumo: - Nenhum impacto sobre o PM ou no intervalo de confiança (todos os CI ~ 10500-6500 Da) - Estudos ilustraram que a temperatura da dissolução do LiBr- seda, à medida que o LiBr é adicionado e começa a se dissolver, cai rapidamente abaixo da temperatura original do LiBr, devido à maioria da massa ser seda à temperatura ambiente.
Tabela 10. O efeito da temperatura do brometo de lítio (LiBr) no peso molecular da seda processada nas condições de 60 min. Tempo de extração, temperatura de extração a 100 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
Temp. de Tempo de Desvio Amostra LiBr Mw médio Intervalo de confiança PD forno Padrão (°C) LiBr a 60 °C, 60 1 31700 11931 84223 2,66 1h LiBr a 100 100 1 27907 200 10735 72552 2,60 °C, 1 h LiBr a RT, RT 4 29217 1082 10789 79119 2,71 4h LiBr a 60 °C, 60 4 25578 2445 9978 65564 2,56 4h LiBr a 80 °C, 80 4 26312 637 10265 67441 2,56 4h LiBr a 100 100 4 27681 1729 11279 67931 2,45 °C, 4 horas LiBr fervente, Ferver 4 30042 1535 11183 80704 2,69 4h LiBr a RT, RT 6 26543 1893 10783 65332 2,46 6h LiBr a 80 °C, 80 6 26353 10167 68301 2,59 6h LiBr a 100 100 6 27150 916 11020 66889 2,46 °C, 6 h Tabela 11. O efeito da temperatura do brometo de lítio (LiBr) na massa molecular de seda processada sob as condições de 30 min. Tempo de extração, temperatura de extração a 100 °C e Dissolução em Forno a 60 °C (o tempo do forno/ dissolução foi variado). Temp. de Tempo de Desvio Amostra LiBr Mw médio Intervalo de confiança PD forno padrão (°C) LiBr a 60 °C, 60 4 61956 13336 21463 178847 2,89 4h LiBr a 80 °C, 80 4 59202 14027 19073 183760 3,10 4h LiBr a 100 °C, 100 4 47853 19757 115899 2,42 4h LiBr a 80 °C, 80 6 46824 18075 121292 2,59 6h LiBr a 100 °C, 100 6 55421 8991 19152 160366 2,89 6h
[00285] Foram realizados experimentos para determinar o efeito da temperatura do forno/ dissolução. As Figuras 19 a 23 são gráficos que mostram esses resultados e as Tabelas 12 a 16 resumem os resultados. Abaixo está um resumo: - A temperatura do forno tem menos efeito em 60 min de seda extraída do que em 30 min de seda extraída. Sem querer ser limitado pela teoria, acredita-se que a seda de 30 minutos seja menos degradada durante a extração e, portanto, a temperatura do forno tem mais efeito sobre o maior PM, menos porção degradada da seda; - Para forno a 60 °C vs. 140 °C, a seda extraída por 30 min mostrou um efeito muito significativo de PM mais baixo em temperaturas mais altas de forno, enquanto a seda extraída por 60 min teve um efeito, mas muito menor; - O forno a 140 °C resultou em uma extremidade baixa no intervalo de confiança a ~ 6000 Da.
Tabela 12. O efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, 30 min. Tempo de extração e brometo de lítio a 100 °C (LiBr) (o tempo de forno/ dissolução foi variado). Temp. do Tempo de Tempo de Desvio forno Mw médio Intervalo de confiança PD fervura forno padrão (°C) 30 60 4 47853 19758 115900 2,42 30 100 4 40973 2632 14268 117658 2,87 30 60 6 55421 8992 19153 160366 2,89 30 100 6 25604 1405 10252 63943 2,50 Tabela 13. O efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada sob as condições de 100 °C de Temperatura de extração, 60 min. Tempo de extração e brometo de lítio a 100 °C (LiBr) (o tempo de forno/ dissolução foi variado). Temp do Tempo de Tempo de Média Desvio forno Intervalo de confiança PD fervura forno Mw padrão (°C) 60 60 1 27908 200 10735 72552 2,60 60 100 1 31520 1387 11633 85407 2,71
Temp do Tempo de Tempo de Média Desvio forno Intervalo de confiança PD fervura forno Mw padrão (°C) 60 60 4 27681 1730 11279 72552 2,62 60 100 4 25082 1248 10520 59803 2,38 60 60 6 27150 916 11020 66889 2,46 60 100 6 20980 1262 10073 43695 2,08 Tabela 14. O efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, 60 min. Tempo de extração e brometo de lítio a 140 °C (LiBr) (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
Tempo de Temp do Tempo Desvio Mw médio Intervalo de confiança PD fervura forno (°C) de forno padrão 60 60 4 30042 1536 11183 80705 2,69 60 140 4 15548 7255 33322 2,14 Tabela 15. O efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, 30 min. Tempo de extração e brometo de lítio a 140 °C (LiBr) (o tempo do forno/ dissolução foi variado). Temp do Tempo de Tempo Desvio forno Mw médio Intervalo de confiança PD fervura de forno padrão (°C) 30 60 4 49656 4580 17306 142478 2,87 30 140 4 9025 1102 4493 18127 2,01 30 60 6 59383 11640 17641 199889 3,37 30 140 6 13021 5987 28319 2,17 Tabela 16. O efeito da Temperatura do Forno/ Dissolução no Peso Molecular da seda processada nas condições de 100 °C de temperatura de extração, 60 min. Tempo de extração e brometo de lítio a 80 °C (LiBr) (o tempo do forno/ dissolução foi variado).
Temp do Tempo de Tempo Desvio forno Mw médio Intervalo de confiança PD fervura de forno padrão (°C) 60 60 4 26313 637 10266 67442 2,56 60 80 4 30308 4293 12279 74806 2,47 60 60 6 26353 10168 68302 2,59 60 80 6 25164 238 9637 65706 2,61
[00286] Em uma forma de realização, os métodos aqui divulgados resultam em uma solução com características que podem ser controladas durante a fabricação, incluindo, mas não se limitando a: PM – pode variar pela alteração do tempo e temperatura de extração e/ ou dissolução (por exemplo, temperatura de LiBr), pressão e filtração (por exemplo, cromatografia de exclusão de tamanho); Estrutura – remoção ou clivagem da cadeia pesada ou leve do polímero da proteína fibroína; Pureza – temperatura de enxágue em água quente para remoção aprimorada de sericina ou capacidade de filtro para remoção aprimorada de partículas que afeta adversamente a estabilidade na prateleira da solução de mistura de proteínas para fragmentos de seda; cor – a cor da solução pode ser controlada com, por exemplo, temperatura e tempo de LiBr; Viscosidade; Clareza; e estabilidade da solução. O pH resultante da solução é tipicamente cerca de 7 e pode ser alterado usando um ácido ou base conforme apropriado para os requisitos de armazenamento.
[00287] As soluções de mistura de SPF acima descritas podem ser utilizadas para produzir preenchimentos de tecido contendo SPF, como aqui descritos.
[00288] Um método para preparar uma solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura com um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa inclui as etapas de: desengomar uma fonte de seda adicionando a fonte de seda à solução aquosa de carbonato de sódio em ebulição (100 °C) durante um tempo de tratamento entre cerca de 30 minutos e cerca de 60 minutos; remover sericina da solução para produzir um extrato de fibroína de seda compreendendo níveis não detectáveis de sericina; drenar a solução do extrato de fibroína de seda;
dissolver o extrato de fibroína de seda em uma solução de brometo de lítio com uma temperatura inicial após a colocação do extrato de fibroína de seda na solução de brometo de lítio que varia de cerca de 60 °C a cerca de 140 °C;
manter a solução de brometo de lítio-fibroína de seda em um forno com uma temperatura de cerca de 140 °C por um período de pelo menos 1 hora; remover o brometo de lítio do extrato de fibroína de seda; e produzir uma solução aquosa de fragmentos de proteína de seda, a solução aquosa compreendendo:
fragmentos tendo um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, e em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura compreende uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0. O método pode ainda compreender a secagem do extrato de fibroína de seda antes da etapa de dissolução.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de brometo de lítio inferiores a 300 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e brometo de lítio.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de carbonato de sódio inferiores a 100 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e carbonato de sódio.
O método pode ainda compreender a adição de um agente terapêutico à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma molécula selecionada a partir de um de um antioxidante ou uma enzima à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma vitamina à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
A vitamina pode ser vitamina C ou um derivado da mesma. A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode ser liofilizada. O método pode ainda compreender a adição de um alfa-hidroxi ácido à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O alfa hidroxiácido pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em ácido glicólico, ácido lático, ácido tartárico e ácido cítrico. O método pode ainda compreender a adição de ácido hialurônico ou sua forma de sal a uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 10,0% à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O método pode ainda compreender adicionar pelo menos um de óxido de zinco ou dióxido de titânio. Um filme pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura produzidos por este método. O filme pode compreender cerca de 1,0% em peso a cerca de 50,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O filme pode ter um teor de água variando entre cerca de 2,0% em peso a cerca de 20,0% em peso. O filme pode compreender cerca de 30,0% em peso a cerca de 99,5% em peso de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. Um gel pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibra de seda pura produzidos por este método. O gel pode compreender de cerca de 0,5% em peso a cerca de 20,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O gel pode ter um teor de seda de pelo menos 2% e um teor de vitaminas de pelo menos 20%.
[00289] Um método para preparar uma solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura com um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa inclui as etapas de: desengomar uma fonte de seda adicionando a fonte de seda à solução aquosa de carbonato de sódio em ebulição (100 °C) durante um tempo de tratamento entre cerca de 30 minutos e cerca de 60 minutos; remover sericina da solução para produzir um extrato de fibroína de seda compreendendo níveis não detectáveis de sericina; drenar a solução do extrato de fibroína de seda;
dissolver o extrato de fibroína de seda em uma solução de brometo de lítio com uma temperatura inicial após a colocação do extrato de fibroína de seda na solução de brometo de lítio que varia de cerca de 60 °C a cerca de 140 °C;
manter a solução de brometo de lítio e fibroína de seda em um forno com uma temperatura de cerca de 140 °C por um período de pelo menos 1 hora; remover o brometo de lítio do extrato de fibroína de seda; e produzir uma solução aquosa de fragmentos de proteína de seda, a solução aquosa compreendendo:
fragmentos tendo um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, e em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura compreende uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0. O método pode ainda compreender a secagem do extrato de fibroína de seda antes da etapa de dissolução.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de brometo de lítio inferiores a 300 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e brometo de lítio.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de carbonato de sódio inferiores a 100 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e carbonato de sódio.
O método pode ainda compreender a adição de um agente terapêutico à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma molécula selecionada a partir de um de um antioxidante ou uma enzima à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma vitamina à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
A vitamina pode ser vitamina C ou um derivado da mesma.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode ser liofilizada.
O método pode ainda compreender a adição de um alfa-hidroxi ácido à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O alfa hidroxi ácido pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em ácido glicólico, ácido lático, ácido tartárico e ácido cítrico. O método pode ainda compreender a adição de ácido hialurônico ou sua forma de sal a uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 10,0% à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O método pode ainda compreender adicionar pelo menos um de óxido de zinco ou dióxido de titânio. Um filme pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura produzidos por este método. O filme pode compreender cerca de 1,0% em peso a cerca de 50,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O filme pode ter um teor de água variando entre cerca de 2,0% em peso a cerca de 20,0% em peso. O filme pode compreender cerca de 30,0% em peso a cerca de 99,5% em peso de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. Um gel pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibra de seda pura produzidos por este método. O gel pode compreender cerca de 0,5% em peso a cerca de 20,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O gel pode ter um teor de seda de pelo menos 2% e um teor de vitaminas de pelo menos 20%.
[00290] Um método para preparar uma solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura com um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa inclui as etapas de: desengomar uma fonte de seda adicionando a fonte de seda à solução aquosa de carbonato de sódio em ebulição (100 °C) durante um tempo de tratamento entre cerca de 30 minutos e cerca de 60 minutos; remover sericina da solução para produzir um extrato de fibroína de seda compreendendo níveis não detectáveis de sericina; drenar a solução do extrato de fibroína de seda; dissolver o extrato de fibroína de seda em uma solução de brometo de lítio com uma temperatura inicial após a colocação do extrato de fibroína de seda na solução de brometo de lítio que varia de cerca de 60 °C a cerca de 140 °C;
manter a solução de brometo de lítio e fibroína de seda em um forno com uma temperatura de cerca de 140 °C por um período de pelo menos 1 hora; remover o brometo de lítio do extrato de fibroína de seda; e produzir uma solução aquosa de fragmentos de proteína de seda, a solução aquosa compreendendo:
fragmentos tendo um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, e em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura compreende uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0. O método pode ainda compreender a secagem do extrato de fibroína de seda antes da etapa de dissolução.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de brometo de lítio inferiores a 300 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e brometo de lítio.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de carbonato de sódio inferiores a 100 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e carbonato de sódio.
O método pode ainda compreender a adição de um agente terapêutico à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma molécula selecionada a partir de um de um antioxidante ou uma enzima à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma vitamina à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
A vitamina pode ser vitamina C ou um derivado da mesma.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode ser liofilizada.
O método pode ainda compreender a adição de um alfa hidroxi ácido à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O alfa hidroxi ácido pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em ácido glicólico, ácido lático, ácido tartárico e ácido cítrico. O método pode ainda compreender a adição de ácido hialurônico ou sua forma de sal a uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 10,0% à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O método pode ainda compreender adicionar pelo menos um de óxido de zinco ou dióxido de titânio. Um filme pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura produzidos por este método. O filme pode compreender cerca de 1,0% em peso a cerca de 50,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O filme pode ter um teor de água variando entre cerca de 2,0% em peso a cerca de 20,0% em peso O filme pode compreender cerca de 30,0% em peso a cerca de 99,5% em peso de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. Um gel pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibra de seda pura produzidos por este método. O gel pode compreender cerca de 0,5% em peso a cerca de 20,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O gel pode ter um teor de seda de pelo menos 2% e um teor de vitaminas de pelo menos 20%.
[00291] Um método para preparar uma solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura com um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa inclui as etapas de: adição de uma fonte de seda a uma solução aquosa fervente (100 °C) de carbonato de sódio durante um tempo de tratamento entre cerca de 30 minutos e cerca de 60 minutos, de modo a resultar em degomagem; remover sericina da solução para produzir um extrato de fibroína de seda compreendendo níveis não detectáveis de sericina; drenar a solução do extrato de fibroína de seda; dissolver o extrato de fibroína de seda em uma solução de brometo de lítio tendo uma temperatura inicial após a colocação do extrato de fibroína de seda na solução de brometo de lítio que varia de cerca de 80 °C a cerca de 140 °C;
manter a solução de brometo de lítio e fibroína de seda em um forno seco com uma temperatura na faixa entre cerca de 60 °C a cerca de 100 °C por um período de pelo menos 1 hora; remover o brometo de lítio do extrato de fibroína de seda;
e produzir uma solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura, em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura compreende resíduos de brometo de lítio entre cerca de
10 ppm e cerca de 300 ppm, em que a solução aquosa de fragmentos de proteína de seda compreende resíduos de carbonato de sódio entre cerca de 10 ppm e cerca de 100 ppm, em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura compreende fragmentos tendo um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa, e em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda puros compreendem uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de
3,0. O método pode ainda compreender a secagem do extrato de fibroína de seda antes da etapa de dissolução.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de brometo de lítio inferiores a 300 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e brometo de lítio.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de carbonato de sódio inferiores a 100 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e carbonato de sódio.
O método pode ainda compreender a adição de um agente terapêutico à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma molécula selecionada a partir de um de um antioxidante ou uma enzima à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma vitamina à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
A vitamina pode ser vitamina C ou um derivado da mesma.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode ser liofilizada. O método pode ainda compreender a adição de um alfa hidroxi ácido à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O alfa hidroxi ácido pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em ácido glicólico, ácido lático, ácido tartárico e ácido cítrico. O método pode ainda compreender a adição de ácido hialurônico ou sua forma de sal a uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 10,0% à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O método pode ainda compreender adicionar pelo menos um de óxido de zinco ou dióxido de titânio.
[00292] Um gel pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibra de seda pura produzidos por este método. O gel pode compreender cerca de 0,5% em peso a cerca de 20,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O gel pode ter um teor de seda de pelo menos 2% e um teor de vitaminas de pelo menos 20%.
[00293] De acordo com os aspectos aqui ilustrados, é divulgado um método para preparar uma solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura, com um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa, o método incluindo as etapas de: adicionar um fonte de seda a uma solução aquosa de carbonato de sódio em ebulição (100 °C) por um tempo de tratamento de cerca de 30 minutos, de modo a resultar em degomagem; remover sericina da solução para produzir um extrato de fibroína de seda compreendendo níveis não detectáveis de sericina; drenar a solução do extrato de fibroína de seda; dissolver o extrato de fibroína de seda em uma solução de brometo de lítio tendo uma temperatura inicial após a colocação do extrato de fibroína de seda na solução de brometo de lítio que varia de cerca de 80 °C a cerca de 140 °C; manter a solução de brometo de lítio e fibroína de seda em um forno seco com uma temperatura na faixa entre cerca de 60 °C a cerca de 100 °C por um período de pelo menos 1 hora; remover o brometo de lítio do extrato de fibroína de seda; e produzir uma solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura, em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura compreende resíduos de brometo de lítio entre cerca de 10 ppm e cerca de 300 ppm, resíduos de carbonato de sódio entre cerca de 10 ppm e cerca de 100 ppm,
fragmentos tendo um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 40 kDa a cerca de 65 kDa, e em que a solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura compreende uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0. O método pode ainda compreender a secagem do extrato de fibroína de seda antes da etapa de dissolução.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de brometo de lítio inferiores a 300 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e brometo de lítio.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode compreender resíduos de carbonato de sódio inferiores a 100 ppm, conforme medido utilizando um ensaio de cromatografia líquida de alta eficiência e carbonato de sódio.
O método pode ainda compreender a adição de um agente terapêutico à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma molécula selecionada a partir de um de um antioxidante ou uma enzima à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O método pode ainda compreender a adição de uma vitamina à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
A vitamina pode ser vitamina C ou um derivado da mesma.
A solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura pode ser liofilizada.
O método pode ainda compreender a adição de um alfa hidroxi ácido à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura.
O alfa hidroxi ácido pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em ácido glicólico, ácido lático, ácido tartárico e ácido cítrico. O método pode ainda compreender a adição de ácido hialurônico ou sua forma de sal a uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 10,0% à solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibroína de seda pura. O método pode ainda compreender adicionar pelo menos um de óxido de zinco ou dióxido de titânio.
[00294] Um gel pode ser fabricado a partir da solução aquosa de fragmentos de proteína à base de fibra de seda pura produzidos por este método. O gel pode compreender cerca de 0,5% em peso a cerca de 20,0% em peso de vitamina C ou um derivado da mesma. O gel pode ter um teor de seda de pelo menos 2% e um teor de vitaminas de pelo menos 20%.
Ácido Hialurônico e Géis de Ácido Hialurônico
[00295] Um componente polimérico biodegradável da presente invenção é o hialuronato, também conhecido como ácido hialurônico (HA). O HA consiste em resíduos alternados de ácido D-glucurônico e N-acetil- D-glucosamina. Esse polímero solúvel em água é encontrado naturalmente em quase todos os tecidos, especialmente na matriz extracelular, nos olhos e no líquido sinovial das articulações. O HA está disponível comercialmente na forma pura. Pequenos preenchimentos de partículas de gel de HA podem ser usados para estimular a produção natural de colágeno, que se presume ser induzida por alongamento mecânico da derme e ativação de fibroblastos dérmicos.
[00296] A concentração de HA nos preenchimentos dérmicos resultantes da invenção contribui para a rigidez e longevidade do preenchimento dérmico. Em algumas formas de realização, uma concentração aumentada de HA nos preenchimentos dérmicos resultantes aqui descritos pode aumentar a rigidez e/ ou longevidade do preenchimento dérmico resultante em comparação com um preenchimento dérmico com uma concentração comparativamente menor de HA.
[00297] Em algumas formas de realização, o HA incorporado nos preenchimentos de tecido aqui descritos tem um peso molecular de 100.000 daltons ou mais, 150.000 daltons ou mais, 1 milhão de daltons ou mais, ou 2 milhões de daltons ou mais. Em algumas formas de realização, o HA incorporado nos preenchimentos de tecido aqui descritos tem um peso molecular de 100.000 daltons ou menos, 150.000 daltons ou menos, 1 milhão de daltons ou menos, ou 2 milhões de daltons ou menos. Em algumas formas de realização, o HA incorporado nos preenchimentos de tecido aqui descritos tem um alto peso molecular (por exemplo, um peso molecular de HA de cerca de 1 MDa a cerca de 4 MDa). Em algumas formas de realização, o HA incorporado nos preenchimentos de tecido aqui descritos tem um baixo peso molecular (por exemplo, um peso molecular de HA inferior a cerca de 1 MDa).
[00298] Em algumas formas de realização, a fonte de HA pode ser um sal de hialuronato, como, por exemplo, hialuronato de sódio. Em algumas formas de realização, o HA é reticulado. O HA reticulado pode ser formulado em uma variedade de formas, como membranas, géis, semi-géis, esponjas ou microesferas. Em algumas formas de realização, o HA reticulado está na forma de gel fluido, isto é, assume a forma de seu recipiente. A viscosidade de um gel ou semi-gel de HA pode ser alterada pela adição de HA e/ ou hialuronato não conjugado. A viscosidade também pode ser ajustada variando o grau de reticulação de SPF-SPF, SPF-HA e/ ou HA-HA, conforme descrito aqui. Em alguma forma de realização, cerca de 4% a cerca de 12% do HA podem ser reticulados como HA-HA ou HA-SPF.
[00299] Em uma forma de realização, as composições de SPF aqui descritas podem ser combinadas com HA para formar uma composição de preenchimento de tecido. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição
[00300] de preenchimento de tecido em peso é inferior a 99%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 98%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 97%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 96%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 95%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 94%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 93%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 92%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 91%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 90%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 85%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 80%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 75%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 70%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 65%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 60%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 55%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 50%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 45%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 40%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 35%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 30%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 17%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 14%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 13%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 12%. Em uma forma de realização,
a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 11%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,4%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é inferior a 0,1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,2%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,7%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 0,9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 11%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 12%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 13%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 14%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 18%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 35%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 40%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 45%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 50%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 55%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 60%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 65%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 70%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 75%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 80%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 85%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 90%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 91%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 92%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 93%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 94%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 95%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 96%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 97%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é superior a 98%.
[00301] Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de
HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,4%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,7%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 0,9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 2%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 3%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 4%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 6%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 10%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 11%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 12%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 13%. Em uma forma de realização, a porcentagem de
HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 14%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de
HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de
HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 25%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de
HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 35%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 40%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 45%. Em uma forma de realização, a porcentagem de
HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 50%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 55%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 60%. Em uma forma de realização, a porcentagem de
HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 65%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 70%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 75%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 80%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 85%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 90%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 91%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 92%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 93%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 94%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 95%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 96%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 97%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso é de cerca de 98%.
[00302] Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 0,1% e cerca de 1%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 0,5% e cerca de 1,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 1% e cerca de 5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 1,5% e cerca de 5,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 2% e cerca de 6%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 2,5% e cerca de 6,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 3% e cerca de 7%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 3,5% a cerca de 7,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 4% e cerca de 8%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 4,5% e cerca de 8,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 5% e cerca de 9%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 5,5% e cerca de 9,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 6% e cerca de 10%. Em uma forma de realização, a percentagem de HA na composição de agente de preenchimento de tecido, em peso, é entre cerca de 6,5% a cerca de 10,5%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 7% e cerca de 11%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 7,5% e cerca de 11,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 8% e cerca de 12%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 8,5% e cerca de 12,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 9% e cerca de 13%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 9,5% e cerca de 13,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 10% e cerca de 14%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 10,5% e cerca de 14,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 11% e cerca de 15%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 11,5% e cerca de 15,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 12% e cerca de 16%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 12,5% e cerca de 16,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 13% e cerca de 17%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 13,5% e cerca de 17,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 14% e cerca de 18%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 14,5% e cerca de 18,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 15% e cerca de 19%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 15,5% e cerca de 19,5%.
Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 16% e cerca de 20%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 20% e cerca de 30%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 30% e cerca de 40%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 40% e cerca de 50%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 50% e cerca de 60%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 60% a cerca de 70%. Em uma forma de realização, a porcentagem de HA na composição de preenchimento de tecido em peso está entre cerca de 80% e cerca de 90%.
[00303] Em algumas formas de realização, a porcentagem de HA, em peso, nas composições de preenchimento de tecido descritas aqui é de cerca de 1% a cerca de 2%, ou cerca de 1% a cerca de 3%, ou cerca de 1% a cerca de 4%, ou cerca de 1% a cerca de 5%, ou cerca de 1% a cerca de 6%, ou cerca de 1% a cerca de 7%, ou cerca de 1% a cerca de 8%, ou cerca de 1% a cerca de 9%, ou cerca de 1% a cerca de 10%, ou cerca de 1% a cerca de 11%, ou cerca de 1% a cerca de 12%, ou cerca de 1% a cerca de 13%, ou cerca de 1% a cerca de 14%, ou cerca de 1% a cerca de 15%, ou cerca de 1% a cerca de 16%, ou cerca de 1% a cerca de 17%, ou cerca de 1% a cerca de 18%, ou cerca de 1% a cerca de 19%, ou cerca de 1% a cerca de 20%, ou cerca de 1% a cerca de 21%, ou cerca de 1% a cerca de 22%, ou cerca de 1% a cerca de 23%, ou cerca de 1% a cerca de 24%, ou cerca de 1% a cerca de 25%, ou cerca de 1% a cerca de 30%, ou cerca de 1% a cerca de 40%, ou cerca de 1% a cerca de 50%, ou cerca de 1% a cerca de 60%, ou cerca de 1% a cerca de 70%, ou cerca de 1% a cerca de 80%, ou cerca de 1% a cerca de 95%; ou cerca de 10% a cerca de 20%, ou cerca de 10% a cerca de 25%, ou cerca de 10% a cerca de 30%, ou cerca de 10% a cerca de 35%, ou cerca de 10% a cerca de 40%, ou cerca de 10% a cerca de 45%, ou cerca de 10% a cerca de 50%, ou cerca de 10% a cerca de 55%, ou cerca de 10% a cerca de 60%, ou cerca de 10% a cerca de 65%, ou cerca de 10% a cerca de 70%, ou cerca de 10% a cerca de 75%, ou cerca de 10% a cerca de 80%, ou cerca de 10% a cerca de 85%, ou cerca de 10% a cerca de 90%, ou cerca de 10% a cerca de 95%.
[00304] Em algumas formas de realização, o HA aqui descrito pode ser adquirido de fontes comerciais ou pode ser produzido pela bactéria Streptococcus equi.
[00305] Os preenchimentos de tecido aqui descritos que incluem HA podem ser caracterizados por suas atividades biológicas in vitro e atividades biológicas in vivo. Por exemplo, ensaios in vitro podem ser realizados em uma porção dos preenchimentos de tecido aqui descritos para toxicidade celular, resistência à degradação enzimática, capacidade de seringagem (por exemplo, viscosidade da solução, taxa de fluxo de injeção, diâmetro da seringa/ agulha) e/ ou análise de morfologia de partículas. Ver, por exemplo, Park et al., J. Eur. Acad. Dermatol. Venerol. (2014) 28: 565-568. Ensaios in vivo podem ser realizados para determinar padrões morfológicos iniciais, presença total de carga restante, avaliações histológicas e podem incluir o exame da formação de granuloma ou reações adversas cutâneas. Ver, por exemplo, Park et al., J. Eur.
Acad. Dermatol. Venerol. (2014) 28: 565-568; e Ramot, et al., Toxicology Pathology (2015) 43: 267-271.
Gelificação
[00306] Em uma forma de realização, os géis de silicone podem ser fornecidos com um auxiliar de gelificação. Em algumas formas de realização, o auxiliar de gelificação pode ser um ácido, eletricidade, mistura e/ ou sonicação.
[00307] Em uma forma de realização, ao produzir um gel de seda, um ácido pode ser adicionado a uma solução de seda aqui descrita para ajudar a facilitar a gelificação. Em uma forma de realização, ao produzir um gel de seda que inclui uma molécula neutra ou básica e/ ou agente terapêutico, um ácido pode ser adicionado para facilitar a gelificação. Em uma forma de realização, ao produzir um gel de seda, aumentar o pH (tornando o gel mais básico) aumenta a estabilidade em prateleira do gel. Em uma forma de realização, ao produzir um gel de seda, aumentar o pH (tornando o gel mais básico) permite que uma quantidade maior de uma molécula ácida seja carregada no gel.
[00308] Em uma forma de realização, ao produzir um gel de seda, a eletricidade pode ser passada através de uma solução de seda aqui descrita para ajudar a facilitar a gelificação.
[00309] Em uma forma de realização, ao produzir um gel de seda, a mistura de uma solução de seda aqui descrita pode ser usada para ajudar a facilitar a gelificação.
[00310] Em uma forma de realização, ao produzir um gel de seda, a sonicação de uma solução de seda aqui descrita pode ser usada para ajudar a facilitar a gelificação.
[00311] Em uma forma de realização, aditivos naturais podem ser adicionados ao gel de seda para estabilizar ainda mais os aditivos.
Por exemplo, oligoelementos como selênio ou magnésio ou L-metionina podem ser usados. Além disso, recipientes de blocos leves podem ser adicionados para aumentar ainda mais a estabilidade.
[00312] Em algumas formas de realização, os intensificadores de gelificação podem ser usados para acelerar a gelificação de SPF. Em algumas formas de realização, uma solução de SPF pode ser misturada com álcool puro ou solução de álcool aquoso em proporções variadas em volume acompanhadas de mistura, seja por mistura, agitação ou qualquer outra forma de agitação. Em algumas formas de realização, esse potenciador de solução de álcool pode então ter uma quantidade de um peptídeo anfifílico adicionado como um potenciador adicional do resultado final do gel. A extensão da aceleração pode ser aumentada ou diminuída conforme apropriado, adicionando um componente intensificador maior ou menor ao sistema.
[00313] Em algumas formas de realização, a taxa de gelificação pode ser aumentada aumentando a concentração de SPF em uma solução usada para fazer um gel. Vários métodos podem ser usados para esse fim, incluindo, mas não se limitando a: diálise da solução intermediária de SPF contra um tampão que incorpora uma espécie higroscópica como polietileno glicol, uma etapa de liofilização e/ ou uma etapa de evaporação. O aumento da temperatura também pode ser usado como um intensificador do processo de gelificação. Além disso, a manipulação do pH da solução intermediária de seda por métodos incluindo, mas não limitados a, titulação direta e troca de gases pode ser usada para aprimorar o processo de gelificação. A introdução de espécies iônicas selecionadas, incluindo cálcio e potássio, em particular, também pode ser usada para acelerar a taxa de gelificação.
[00314] Em algumas formas de realização, a gelificação pode ser ajudada pelo uso de agentes de nucleação, incluindo espécies orgânicas e inorgânicas, tanto solúveis quanto insolúveis em um intermediário de SPF. Os agentes de nucleação podem incluir, mas não estão limitados a, sequências peptídicas que ligam moléculas de seda, seda previamente gelificada e estruturas ricas em folhas β pouco solúveis. Em algumas formas de realização,
um outro meio de acelerar o processo de gelificação é através da introdução de excitação mecânica, que pode ser transmitida através de um dispositivo de cisalhamento, dispositivo de ultrassom ou mistura mecânica.
[00315] O tempo necessário para a gelificação completa da solução de seda pode variar de segundos a horas ou dias, dependendo dos valores dos parâmetros acima mencionados, bem como do estado inicial de agregação e organização encontrado na solução de SPF. A porção em volume do intensificador adicionado pode variar de cerca de 0% a cerca de 99% do volume total do sistema (ou seja, um componente pode ser adicionado em um grande excesso do outro ou em qualquer concentração relativa dentro do intervalo). A concentração da solução de SPF utilizada pode variar de cerca de 1% (p/ v), a cerca de 20% (p/ v) e qualquer outra faixa apropriada. O intensificador pode ser adicionado à solução de SPF ou a solução de SPF pode ser adicionada ao intensificador. O hidrogel de SPF formado pode ser ainda reticulado quimicamente ou fisicamente para obter propriedades mecânicas alteradas.
[00316] Em algumas formas de realização, uma solução intensificadora é adicionada a uma solução de SPF, ou vice-versa, a solução de SPF tendo uma concentração de SPF de cerca de 1% (p/ v), cerca de 2% (p/ v), cerca de 3% (p/ v), cerca de 4% (p/ v), cerca de 5% (p/ v), cerca de 6% (p/ v), cerca de 7% (p/ v), cerca de 8% (p/ v), cerca de 9% (p/ v), cerca de 10% (p/ v), cerca de 12% (p/ v), cerca de 15% (p/ v), cerca de 18% (p/ v), cerca de 20% (p/ v), cerca de 25% (p/ v) ou cerca de 30% (p/ v). Em algumas formas de realização, uma solução intensificadora é adicionada a uma solução de SPF, ou vice-versa, a solução de SPF tendo uma concentração de SPF de pelo menos 1% (p/ v), pelo menos 2% (p/ v), pelo menos 3% (p/ v), pelo menos 4% (p/ v), pelo menos 5% (p/ v), pelo menos 6% (p/ v), pelo menos 7% (p/ v), pelo menos 8% (p/ v), pelo menos 9% (p/ v), pelo menos 10% (p/ v), pelo menos 12% (p/ v), pelo menos
15% (p/ v), pelo menos 18% (p/ v), pelo menos 20% (p/ v), pelo menos 25% (p/ v) ou pelo menos 30% (p/ v). Em algumas formas de realização, uma solução intensificadora é adicionada a uma solução de SPF, ou vice-versa, a solução de SPF tendo uma concentração de SPF de cerca de 1% (p/ v) a cerca de 5% (p/ v), cerca de 1% (p/ v) a cerca de 10% (p/ v), cerca de 1% (p/ v) a cerca de 15% (p/ v), cerca de 1% (p/ v) a cerca de 20% (p/ v), cerca de 1% (p/ v) a cerca de 25% (p/ v), cerca de 1% (p/ v) a cerca de 30% (p/ v), cerca de 5% (p/ v) a cerca de 10% (p/ v), cerca de 5% (p/ v) a cerca de 15% (p/ v), cerca de 5% (p/ v) a cerca de 20% (p/ v), cerca de 5% (p/ v) a cerca de 25% (p/ v), cerca de 5% (p/ v) a cerca de 30% (p/ v), cerca de 10% (p/ v) a cerca de 15% (p/ v), cerca de 10% (p/ v) a cerca de 20% (p/ v), cerca de 10% (p/ v) a cerca de 25% (p/ v) ou cerca de 10% (p/ v) a cerca de 30% (p/ v).
Géis e Hidrogéis – Modificação e Reticulação
[00317] Em algumas formas de realização, a invenção fornece composições que compreendem um ou mais hidrogéis compreendendo um ou mais polímeros de matriz reticulados. Tal como aqui utilizado, o termo “reticulado” refere-se às ligações intermoleculares que unem as moléculas de polímero individuais, macromoléculas, e/ ou cadeias de monômero, para uma estrutura mais estável, como um gel. como tal, um polímero de matriz reticulado tem pelo menos uma ligação intermolecular unindo pelo menos uma molécula de polímero individual a outra, em que a primeira molécula de polímero individual pode ser de natureza química semelhante ou diferente em relação à outra.
Polímeros de matriz aqui descritos podem ser reticulados utilizando agentes de reticulação de dialdeídos e dissulfuretos incluindo, sem limitação, agentes de reticulação à base de PEG multifuncional, sulfonas de divinila, éteres diglicidílicos, e bis-epóxidos. Exemplos não limitativos de SPF, e/ ou HA, agentes de reticulação incluem divinil sulfona (DVS), 1,4-butanediol diglicidil éter (BDDE), luz UV, glutaraldeído, 1,2-bis(2,3-epoxipropoxi)etileno (EGDGE), 1,2,7,8-
diepoxioctano (DEO), biscarbodiimide (BCD), pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE), dihidrazida adípica (ADH), bis(sulfossuccinimidil)suberato (BS), hexametilenodiamina (HMDA), 1-(2,3-epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, ou combinações dos mesmos. Em algumas formas de realização, o agente de reticulação de HA pode incluir BDDE ou DVS. Em algumas formas de realização, o agente de reticulação HA e/ ou SPF pode ser BDDE, DVS, luz UV, glutaraldeído ou uma carbodiimida, conforme descrito aqui.
[00318] Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido aqui descritos podem conter agente de reticulação residual. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem conter apenas quantidades vestigiais do agente de reticulação, como, por exemplo, não maior do que cerca de 2 ppm, ou não maior do que cerca de 1,9 ppm, ou não maior do que cerca de 1,8 ppm, ou não maior do que cerca de 1,7 ppm, ou não maior do que cerca de 1,6 ppm, ou não maior do que cerca de 1,5 ppm, ou não maior do que cerca de 1,4 p pm, ou não maior do que cerca de 1,3 ppm, ou não maior do que cerca de 1,2 ppm, ou não maior do que cerca de 1,1 ppm ou não maior do que cerca de 1,0 ppm, não maior do que cerca de 0,9 ppm, não maior do que cerca de 0,8 ppm, não maior do que cerca de 0,7 ppm, não maior do que cerca de 0,6 ppm, não maior do que cerca de 0,5 ppm, ou não maior do que cerca de 0,4 ppm, ou não maior do que cerca de 0,3 ppm, ou não maior do que cerca de 0,2 ppm, ou não maior do que cerca de 0,1 ppm.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem conter quantidades vestigiais de BDDE, mas a uma concentração não maior do que cerca de 2 ppm, não maior do que cerca de 1,9 ppm, não maior do que cerca de 1,8 ppm, ou não maior do que cerca de 1,7 ppm, ou não maior do que cerca de 1,6 ppm, ou não maior do que cerca de 1,5 ppm, ou não maior do que cerca de 1,4 ppm, ou não maior do que cerca de 1,3 ppm, ou não maior do que cerca de 1,2 ppm, ou não maior do que cerca de 1,1 ppm, ou não maior do que cerca de 1,1 ppm, ou não maior do que cerca de 1,0 ppm, ou não maior do que cerca de 0,9 ppm, ou não maior do que cerca de 0,8 ppm, ou não maior do que cerca de 0,7 ppm, ou não maior do que cerca de 0,6 ppm, ou não maior do que cerca de 0,5 ppm, ou não maior do que cerca de 0,4 ppm, ou não maior do que cerca de 0,3 ppm, ou não maior do que cerca de 0,2 ppm ou não maior do que cerca de 0,1 ppm. Como entendido por um técnico no assunto, a quantidade de agente de reticulação residual presente em uma amostra de preenchimento de tecido particular pode ser determinada por cromatografia gasosa - espectrometria de massa.
[00319] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir uma matriz que pode incluir uma porção da matriz de SPF e uma porção da matriz de HA, em que a porção da matriz de SPF inclui uma mistura de SPF reticulados e não reticulados e a porção da matriz de HA inclui uma mistura de HA reticulado e não reticulado.
[00320] Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido da invenção incluem HA modificador de ligante. Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido da invenção incluem SPF modificado com ligante. Os reticuladores bifuncionais podem reagir nas duas extremidades para conectar duas moléculas de HA diferentes, duas moléculas de SPF diferentes ou uma molécula de HA com uma molécula de SPF. Em algumas formas de realização, os reticuladores se ligam a uma molécula de HA apenas em uma extremidade, deixando a outra extremidade pendente. Em algumas formas de realização, os reticuladores se ligam a uma molécula de SPF apenas em uma extremidade, deixando a outra extremidade pendente.
[00321] Conforme usado aqui, o grau de modificação (MoD) pode ser definido como (ver, por exemplo, J. Kablik et al., Dermatol Surg, 2009 (35): 302-312):
% de Grau de modificação Total =% de Reticulação +% Pendente
[00322] Para determinar o MoD, ele também pode ser definido como (ver, por exemplo, L. Kenne et al., Carbohydrate Polymers, 2013 (91): 410–418): 𝑛𝑟𝑒𝑡𝑖𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜𝑟𝑒𝑠 𝑙𝑖𝑔𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑀𝑜𝐷 = 𝑛𝑑𝑖𝑠𝑠𝑎𝑐𝑎𝑟í𝑑𝑒𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝐻𝐴 + 𝑛𝑢𝑛𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒𝑠 𝑟𝑒𝑝𝑒𝑡𝑖𝑡𝑖𝑣𝑎𝑠 𝑑𝑒 𝑆𝑃𝐹 onde nreticuladores ligados é o número de moléculas reticuladas vinculadas, ndissacarídeos de HA é o número ou dissacarídeos em HA e nunidades repetitivas de SPF é o número de unidades repetidas em SPF. Estes números podem ser determinados por RMN usando desvios químicos característicos do reticulador, HA e SPF (Ver “Chemical Characterization of Hydrogels Crosslinked with Polyethylene Glycol for Soft Tissue Augmentation,” Monticelli et al., Acesso liberado Maced J Med Sci. 2019 Apr 15; 7(7):1077-1081).
Caracterização química de hidrogéis reticulados com polietileno glicol para aumento de tecidos moles Damiano Monticelli1, V
[00323] Em algumas formas de realização, o MoD está entre cerca de 1% e 25%, entre cerca de 2% e cerca de 20%, ou entre cerca de 3,5% e cerca de 17,5%. Em algumas formas de realização, o MoD é de cerca de 1,1%, cerca de 1,2%, cerca de 1,3%, cerca de 1,4%, cerca de 1,5%, cerca de 1,6%, cerca de 1,7%, cerca de 1,8%, cerca de 1,8%, cerca de 1,9%, cerca de 2,0%, cerca de 2,1%, cerca de 2,2%, cerca de 2,3%, cerca de 2,4%, cerca de 2,5%, cerca de 2,6%, cerca de 2,7%, cerca de 2,8%, cerca de 2,9%, cerca de 3,0%, cerca de 3,1%, cerca de 3,2%, cerca de 3,3%, cerca de 3,4%, cerca de 3,5%, cerca de 3,6%, cerca de 3,7%, cerca de 3,8%, cerca de 3,9%, cerca de 4,0%, cerca de 4,1%, cerca de 4,2%, cerca de 4,3%, cerca de 4,4%, cerca de 4,5%, cerca de 4,6%, cerca de 4,7%, cerca de 4,8%, cerca de 4,9%, cerca de 5,0%, cerca de 5,1%, cerca de 5,2%, cerca de 5,3%, cerca de 5,4%, cerca de 5,5%, cerca de 5,6%, cerca de 5,7%, cerca de 5,8%, cerca de 5,9%, cerca de 6,0%,
cerca de 6,1%, cerca de 6,2%, cerca de 6,3%, cerca de 6,4%, cerca de 6,5%,
cerca de 6,6%, cerca de 6,7%, cerca de 6,8%, cerca de 6,9%, cerca de 7,0%,
cerca de 7,1%, cerca de 7,2%, cerca de 7,3%, cerca de 7,4%, cerca de 7,5%,
cerca de 7,6%, cerca de 7,7%, cerca de 7,8%, cerca de 7,9%, cerca de 8,0%,
cerca de 8,1%, cerca de 8,2%, cerca de 8,3%, cerca de 8,4%, cerca de 8,5%,
cerca de 8,6%, cerca de 8,7%, cerca de 8,8%, cerca de 8,9%, cerca de 9,0%,
cerca de 9,1%, cerca de 9,2%, cerca de 9,3%, cerca de 9,4%, cerca de 9,5%,
cerca de 9,6%, cerca de 9,7%, cerca de 9,8%, cerca de 9,9%, cerca de 10,0%,
cerca de 10,1%, cerca de 10,2%, cerca de 10,3%, cerca de 10,4%, cerca de
10,5%, cerca de 10,6%, cerca de 10,7%, cerca de 10,8%, cerca de 10,9%, cerca de 11,0%, cerca de 11,1%, cerca de 11,2%, cerca de 11,3%, cerca de 11,4%,
cerca de 11,5%, cerca de 11,6%, cerca de 11,7%, cerca de 11,8%, cerca de
11,9%, cerca de 12,0%, cerca de 12,1%, cerca de 12,2%, cerca de 12,3%, cerca de 12,4%, cerca de 12,5%, cerca de 12,6%, cerca de 12,7%, cerca de 12,8%,
cerca de 12,9%, cerca de 13,0%, cerca de 13,1%, cerca de 13,2%, cerca de
13,3%, cerca de 13,4%, cerca de 13,5%, cerca de 13,6%, cerca de 13,7%, cerca de 13,8%, cerca de 13,9%, cerca de 14,0%, cerca de 14,1%, cerca de 14,2%,
cerca de 14,3%, cerca de 14,4%, cerca de 14,5%, cerca de 14,6%, cerca de
14,7%, cerca de 14,8%, cerca de 14,9%, cerca de 15,0%, cerca de 15,1%, cerca de 15,2%, cerca de 15,3%, cerca de 15,4%, cerca de 15,5%, cerca de 15,6%,
cerca de 15,7%, cerca de 15,8%, cerca de 15,9%, cerca de 16,0%, cerca de
16,1%, cerca de 16,2%, cerca de 16,3%, cerca de 16,4%, cerca de 16,5%, cerca de 16,6%, cerca de 16,7%, cerca de 16,8%, ut 16,9%, cerca de 17,0%, cerca de
17,1%, cerca de 17,2%, cerca de 17,3%, cerca de 17,4%, cerca de 17,5%, cerca de 17,6%, cerca de 17,7%, cerca de 17,8%, cerca de 17,9%, cerca de 18,0%,
cerca de 18,1%, cerca de 18,2%, cerca de 18,3%, cerca de 18,4%, cerca de 18,5%, cerca de 18,6%, cerca de 18,7%, cerca de 18,8%, cerca de 18,9%, cerca de 19,0%, cerca de 19,1%, cerca de 19,2%, cerca de 19,3%, cerca de 19,4%,
cerca de 19,5%, cerca de 19,6%, cerca de 19,7%, cerca de 19,8%, cerca de 19,9%, ou cerca de 20,0%.
[00324] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção incluem SPF reticulado. Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido da invenção incluem HA reticulado. Um fragmento de SPF pode ser reticulado com outro fragmento de SPF ou com HA. Espécies reticuladas de SPF-SPF, SPF-HA, e HA-HA podem ser obtidas usando agentes de reticulação de vários comprimentos, incluindo comprimento zero.
[00325] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser fornecidos na forma de um hidrogel com HA reticulado e/ ou SPF reticulados. O HA reticulado e/ ou SPF reticulados (ou espécies reticuladas de SPF-HA) podem ter um grau mensurável de reticulação. como usado aqui, o termo “grau de reticulação” refere-se ao número de unidades de reticulação (ou moléculas ou resíduos) em relação ao número de unidades monoméricas na macromolécula de polímero, que foi reticulada. Em algumas formas de realização, as unidades monoméricas são os aminoácidos nos SPF. Em algumas formas de realização, as unidades monoméricas são as unidades monômero dissacarídicos de HA. Assim, uma composição que tem um polímero de matriz reticulado com um grau de 4% de reticulação significa que, em média, existem quatro moléculas de reticulação para cada 100 unidades monoméricas. Todos os outros parâmetros sendo iguais, maior o grau de reticulação, mais duro o gel se torna. Sem se limitar a qualquer teoria da invenção, o grau de reticulação em HA e/ ou SPF pode resultar em materiais ou composições resultantes mais rígidos preparados a partir daí. Por exemplo, quanto maior o grau de reticulação, maior a probabilidade desses materiais persistirem no corpo. De fato, sem se limitar a qualquer teoria, os materiais biocompatíveis que incluem materiais reticulados terão taxas variadas de biossorção, bioabsorção e/ ou biodegradação, dependendo do grau de reticulação onde o grau de reticulação é inversamente proporcional à taxa de biossorção, bioabsorção e/ ou biodegradação. Além disso, uma maior reticulação nos preenchimentos de tecido aqui descritos a hidrofilia e a capacidade de elevação desses preenchimentos de tecido podem ser reduzidas.
[00326] Em um exemplo não limitativo, um SPF reticulado tem um grau de reticulação de cerca de 5%, possui cerca de 5 porções de reticulação para cada 100 unidades monoméricas, por exemplo, aminoácidos, nos SPF reticulados.
[00327] Exemplos não limitativos de um grau de reticulação incluem cerca de 1% a cerca de 15%, ou cerca de 2% a cerca de 14%, ou cerca de 1% a cerca de 2%, cerca de 1,5% a cerca de 2,5%, ou cerca de 2% a cerca de 3%, ou cerca de 2,5% a cerca de 3,5%, ou cerca de 3% a cerca de 4%, ou cerca de 3,5% a cerca de 4,5%, ou cerca de 4% a cerca de 5%, ou cerca de 4,5% a cerca de 5,5%, ou cerca de 5% a cerca de 6%, ou cerca de 5,5% a cerca de 6,5%, ou cerca de 6% a cerca de 7%, ou cerca de 6,5%, ou cerca de 7,5%, ou cerca de 7% a cerca de 8%, ou cerca de 7,5% a ou cerca de 8,5%, ou cerca de 8% a cerca de 9%, ou cerca de 8,5% a cerca de 9,5%, ou cerca de 9% a cerca de 10%, ou cerca de 9,5% a cerca de 10,5%, ou cerca de 10% a cerca de 11%, ou cerca de 10,5% a cerca de 11,5%, ou cerca de 11% a cerca de 12%, ou cerca de 11,5% a cerca de 12,5%, ou cerca de 12% a cerca de 13%, ou cerca de 12,5% a cerca de 13,5%, ou cerca de 13% a cerca de 14%, ou cerca de 13,5% a cerca de 14,5%, ou cerca de 14% a cerca de 15%.
[00328] Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 1%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 2%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 3%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 4%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 5%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 6%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 7%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 8%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 9%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 10%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 11%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 12%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 13%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 14%. Em algumas formas de realização, o grau de reticulação é de pelo menos 15%.
[00329] Em algumas formas de realização, uma composição da invenção compreende SPF reticulados, onde o grau de reticulação é de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, ou pelo menos 15%. Em algumas formas de realização, uma composição compreende SPF reticulados, onde o grau de reticulação é no máximo de 1%, no máximo de 2%, no máximo de 3%, no máximo de 4%, no máximo de 5%, no máximo de 6%, no máximo de 7%, no máximo de 8%, no máximo de 9%, no máximo de 10%, no máximo de 11%, no máximo de 12%, no máximo de 13%, no máximo de 14%, ou no máximo de 15%. Em algumas formas de realização, uma composição compreende SPF reticulados, onde o grau de reticulação é cerca de 1% a cerca de 15%, cerca de 2% a cerca de 11%, cerca de 3% a cerca de 10%, cerca de 1% a cerca de 5%, cerca de 10% a cerca de 15%, cerca de 11% a cerca de 15%, cerca de 6% a cerca de 10%, ou cerca de 6% a cerca de 8%, ou cerca de 1% a cerca de 2%, cerca de 1,5% a cerca de 2,5%, ou cerca de
2% a cerca de 3%, ou cerca de 2,5% a cerca de 3,5%, ou cerca de 3% a cerca de 4%, ou cerca de 3,5% a cerca de 4,5%, ou cerca de 4% a cerca de 5%, ou cerca de 4,5% a cerca de 5,5%, ou cerca de 5% a cerca de 6%, ou cerca de 5,5% a cerca de 6,5%, ou cerca de 6% a cerca de 7%, ou cerca de 6,5% ou cerca de 7,5%, ou cerca de 7% a cerca de 8%, ou cerca de 7,5% ou cerca de 8,5%, ou cerca de 8% a cerca de 9%, ou cerca de 8,5% a cerca de 9,5%, ou cerca de 9% a cerca de 10%, ou cerca de 9,5% a cerca de 10,5%, ou cerca de 10% a cerca de 11%, ou cerca de 10,5% a cerca de 11,5%, ou cerca de 11% a cerca de 12%, ou cerca de 11,5% a cerca de 12,5%, ou cerca de 12% a cerca de 13%, ou cerca de 12,5% a cerca de 13,5%, ou cerca de 13% a cerca de 14%, ou cerca de 13,5% a cerca de 14,5%, ou cerca de 14% a cerca de 15%.
[00330] Em algumas formas de realização, uma composição da invenção compreende HA reticulado, onde o grau de reticulação é de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, ou pelo menos 15%. Em algumas formas de realização, uma composição compreende HA reticulado, onde o grau de reticulação é no máximo de 1%, no máximo de 2%, no máximo de 3%, no máximo de 4%, no máximo de 5%, no máximo de 6%, no máximo de 7%, no máximo de 8%, no máximo de 9%, no máximo de 10%, no máximo de 11%, no máximo de 12%, no máximo de 13%, no máximo de 14%, ou no máximo de 15%. Em algumas formas de realização, uma composição compreende HA reticulado, onde o grau de reticulação é de cerca de 1% a cerca de 15%, cerca de 2% a cerca de 11%, cerca de 3% a cerca de 10%, cerca de 1% a cerca de 5%, cerca de 10% a cerca de 15%, cerca de 11% a cerca de 15%, cerca de 6% a cerca de 10%, ou cerca de 6% a cerca de 8%, ou cerca de 1% a cerca de 2%, cerca de 1,5% a cerca de 2,5%, ou cerca de 2% a cerca de 3%, ou cerca de 2,5% a cerca de 3,5%, ou cerca de 3% a cerca de 4%, ou cerca de 3,5% a cerca de 4,5%, ou cerca de 4% a cerca de 5%, ou cerca de 4,5% a cerca de 5,5%, ou cerca de 5% a cerca de 6%, ou cerca de 5,5% a cerca de 6,5%, ou cerca de 6% a cerca de 7%, ou cerca de 6,5% ou cerca de 7,5%, ou cerca de 7% a cerca de 8%, ou cerca de 7,5% ou cerca de 8,5%, ou cerca de 8% a cerca de 9%, ou cerca de 8,5% a cerca de 9,5%, ou cerca de 9% a cerca de 10%, ou cerca de 9,5% a cerca de 10,5%, ou cerca de 10% a cerca de 11%, ou cerca de 10,5% a cerca de 11,5%, ou cerca de 11% a cerca de 12%, ou cerca de 11,5% a cerca de 12,5%, ou cerca de 12% a cerca de 13%, ou cerca de 12,5% a cerca de 13,5%, ou cerca de 13% a cerca de 14%, ou cerca de 13,5% a cerca de 14,5%, ou cerca de 14% a cerca de 15%.
[00331] Em algumas formas de realização, uma composição da invenção compreende SPF-HA reticulados em que o grau de reticulação é de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, ou pelo menos 15%. Em algumas formas de realização, uma composição compreende SPF-HA reticulados em que o grau de reticulação é no máximo de 1%, no máximo 2%, no mimo 3%, no máximo 4%, no máximo, 5%, no máximo, 6%, em no máximo 7%, no máximo 8%, no máximo 9%, no máximo 10%, no máximo 11%, no máximo 12%, no máximo 13%, no máximo 14%, ou no máximo 15%. Em algumas formas de realização, uma composição compreende SPF-HA reticulados em que o grau de reticulação é cerca de 1% a cerca de 15%, cerca de 2% a cerca de 11%, cerca de 3% a cerca de 10%, cerca de 1% a cerca de 5%, cerca de 10% a cerca de 15%, cerca de 11% a cerca de 15%, cerca de 6% a cerca de 10%, ou cerca de 6% a cerca de 8%, ou cerca de 1% a cerca de 2%, cerca de 1,5% a cerca de 2,5%, ou cerca de 2% a cerca de 3%, ou cerca de 2,5% a cerca de 3,5%, ou cerca de 3% a cerca de 4%, ou cerca de 3,5% a cerca de 4,5%, ou cerca de 4% a cerca de 5%, ou cerca de 4,5% a cerca de 5,5%, ou cerca de 5% a cerca de 6%, ou cerca de 5,5% a cerca de 6,5%, ou cerca de 6% a cerca de 7%, ou cerca de 6,5% ou cerca de 7,5%, ou cerca de 7% a cerca de 8%, ou cerca de 7,5% ou cerca de 8,5%, ou cerca de 8% a cerca de 9%, ou cerca de 8,5% a cerca de 9,5%, ou cerca de 9% a cerca de 10%, ou cerca de 9,5% a cerca de 10,5%, ou cerca de 10% a cerca de 11%, ou cerca de 10,5% a cerca de 11,5%, ou cerca de 11% a cerca de 12%, ou cerca de 11,5% a cerca de 12,5%, ou cerca de 12% a cerca de 13%, ou cerca de 12,5% a cerca de 13,5%, ou cerca de 13% a cerca de 14%, ou cerca de 13,5% a cerca de 14,5%, ou cerca de 14% a cerca de 15%.
[00332] Por exemplo, 1 mole de SPF para 1 mole de HA pode ser reticulado, em que o mole de HA pode ter um peso molecular de cerca de 1 kDa a cerca de 2 M kDa. Em algumas formas de realização, 1 mole de SPF para 1 milhão de moles de HA, ou vice-versa, em que os SPF pode ser de 100 Da a 350 kDa, pelo qual qualquer porcentagem de cada mole pode ser reticulada ou livre. Um método de reticular os SPF a outros SPF pode incluir uma ou mais etapas. Em uma primeira etapa, o epóxido, como o BDDE, é adicionado a uma solução de SPF em excesso e a reação é permitida. Os epóxidos podem reagir com vários grupos na macromolécula dos SPF, como carboxil, amina, álcool, tiol e similares, resultando em ligações como ésteres, aminas secundárias ou terciárias, éteres, tioéteres e semelhantes. Onde ambos os epóxidos de BDDE reagiram com os grupos funcionais em uma ou mais macromoléculas de SPF, os SPF se tornam reticulados. Em uma forma de realização, a reticulação de HA pode ser realizada por meio de uma reação com BDDE sob condições alcalinas para produzir uma ligação covalente entre HA e o reticulador, conforme descrito em Schanté et al., Carbohydrate Polymers (2011) 85: 469-489. O grau de modificação ou reticulação pode ser determinado por RMN de acordo com métodos conhecidos na técnica (por exemplo, Edsman et al., Dermatol. Surg.
(2012) 38: 1170-1179).
[00333] Os métodos de ligação de peptídeos são conhecidos na técnica. A ligação dos SPF isolados individuais em peptídeos de SPF oligoméricos e/ ou reticulados, conforme estabelecido neste documento, pode ser efetuada por procedimentos de conjugação química bem conhecidos na técnica, como criando ligações de peptídeos, uso de agentes de condensação e empregando reagentes de reticulação bifuncional bem conhecidos. A conjugação pode ser direta, o que inclui ligações que não envolvem nenhum grupo interveniente, por exemplo, ligações peptídicas diretas ou indiretas, em que a ligação contém uma porção interveniente, como uma proteína ou peptídeo, por exemplo, albumina plasmática ou outra molécula espaçadora. Por exemplo, a ligação pode ser via um reticulador heterobifuncional ou homobifuncional, por exemplo, carbodiimida, glutaraldeído, N-succinimidil 3-(2-piridilditio)propionato (SPDP) e derivados, bis-maleimida, 4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1- carboxilato e similares.
[00334] A reticulação também pode ser realizada sem reticuladores exógenos utilizando grupos reativos nas moléculas que estão sendo conjugadas. Os métodos para reticulação química de moléculas peptídicas são geralmente conhecidos na técnica, e vários agentes hetero- e homobifuncionais são descritos em, por exemplo, Pat. U.S. 4,355,023, 4,657,853, 4,676,980, 4,925,921 e 4,970,156, e Immuno Technology Catalog and Handbook, Pierce Chemical Co. (1989), cada um dos quais é incorporado aqui por referência. Essa conjugação, incluindo reticulação, deve ser realizada de modo a não afetar substancialmente a função desejada do oligômero peptídico ou entidade a ele conjugada, incluindo agentes terapêuticos e porções capazes de se ligar a substâncias de interesse.
[00335] Será entendido por um técnico no assunto que os ligantes alternativos podem ser utilizados para ligar peptídeos de SPF, por exemplo, a utilização de reticuladores de proteína química. Por exemplo um reticulador homobifuncional tal como dissuccinimidil-suberimidato-dihidrocloreto; dimetil-adipimidato-dicloridrato; 1,5,-2,4 dinitrobenzeno ou reticuladores heterobifuncionais, tais como N-hidroxisuccinimidil 2,3-dibromopropionato; cloridrato de 1-etil-3-[3-dimetilaminopropil]carbodiimida; e succinimidil-4-[n- maleimidometil]-ciclohexano-1-carboxilato.
[00336] A presente invenção também fornece composições incluindo SPF reticulados ao HA. A reticulação de SPF ao HA pode ser alcançada por vários métodos, por exemplo, pelos métodos de epóxido, métodos de periodato e/ ou métodos cloreto de tresila. Em algumas formas de realização, os SPF são reticulados ao HA usando um epóxido, por exemplo, um epóxido multifuncional. Por exemplo, um epóxido bifuncional, como 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), pode ser usado. Outros epóxidos multifuncionais incluem, mas não estão limitados a, poliglicerolpoliglicidil éter (PGPGE), pentaeritriolpoliglicidil éter (PEPGE) e diglicerolpoliglicidil éter (DGPGE). A reticulação de comprimento zero entre SPF e HA também é fornecida usando um agente ativador.
[00337] Um método de reticulação de SPF a outras macromoléculas, por exemplo HA, pode incluir uma ou mais etapas. Em uma primeira etapa, o epóxido, como o BDDE, é adicionado a uma solução de SPF em excesso e a reação é permitida. Os epóxidos podem reagir com vários grupos na macromolécula dos SPF, como carboxil, amina, álcool, tiol e similares, resultando em ligações como ésteres, aminas secundárias ou terciárias, éteres, tioéteres e semelhantes. Onde apenas um epóxido reagiu com o SPF, resta um epóxido livre anexado ao SPF disponível para reticulação com outro SPF, ou uma macromolécula diferente, por exemplo, HA ou similar. A ordem de adição dos reagentes pode variar. Por exemplo, o BDDE pode ser adicionado ao HA primeiro e, em seguida, os SPF são adicionados para formar o SPF-HA reticulado. Em algumas formas de realização, SPF e HA podem ser misturados primeiro e, em seguida, BDDE é adicionado à mistura. Em algumas formas de realização, adicionar BDDE a uma mistura de SPF e HA resulta em uma composição incluindo SPF reticulados a SPF, HA reticulado a HA e SPF reticulados a HA.
[00338] Em algumas formas de realização, o SPF-HA reticulado pode ser preparado usando o método de cloreto de tresila, incluindo uma ou mais etapas. Em uma etapa, o HA reticulado e/ ou o HA não reticulado pode ser ativado com cloreto de tresila, isto é, cloreto de 2,2,2- trifluoroetanossulfonila ou qualquer outro cloreto ácido adequado. É adicionado, por exemplo, gota a gota cloreto de tresila a uma solução de base/ solvente, por exemplo, solução de piridina/ acetona, contendo HA reticulado e/ ou não reticulado. Em algumas formas de realização, o cloreto de tresila é reativo com todos os quatro dos grupos hidroxila nos anéis de açúcar do HA reticulado e/ ou não-reticulado. Em uma etapa opcional, o HA-tresilato resultante é lavado. Em uma etapa, são adicionados fragmentos de SPF que reagirão com o HA-tresilato.
[00339] Em algumas formas de realização, o método de cloreto de tresila pode ser usado para conectar um SPF diretamente ao HA reticulado e/ ou não reticulado. Em outras formas de realização, o método de cloreto de tresila pode ser usado para conectar um SPF a HA reticulado e/ ou não reticulado por meio de um espaçador, por exemplo 6-amino-1-hexanol. Em algumas formas de realização, o espaçador pode primeiro ser acoplado ao HA reticulado ou não reticulado via ativação e acoplamento a tresila. Para acoplar um SPF ao espaçador, a ativação e o acoplamento a tresila são posteriormente repetidos. Qualquer espaçador adequado pode ser utilizado, ou seja, os espaçadores tendo, pelo menos algumas características semelhantes a 6- amino-1-hexanol, ou seja, uma amina primária para o acoplamento ao HA- tresilato, e um grupo reativo, por exemplo um grupo hidroxila, para ativação e acoplamento dos SPF.
[00340] Em algumas formas de realização, o cloreto de tresila não reticula o HA. A matriz de HA usada no método de cloreto de tresila pode, no entanto, ser reticulada para estabilidade adicional. A reticulação pode ser efetuada, por exemplo, usando um epóxido multifuncional, tal como BDDE, como descrito acima. A reticulação pode ser feita antes ou depois do acoplamento peptídico.
[00341] O método de cloreto de tresila tem vantagens em relação a outros métodos de imobilização, incluindo acoplamento eficiente sob condições muito brandas, sem reações colaterais durante a ativação e o acoplamento, e os peptídeos RGD podem ser ligados diretamente aos átomos de carbono do suporte de HA.
[00342] Em várias formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir géis e hidrogéis que são baseados em HA.
Baseado em HA, como aqui utilizado, refere-se a composições ou materiais incluindo HA reticulado e composições incluindo HA reticulado mais um ou mais outros polímeros reticulados. Além disso, o HA pode se referir ao ácido hialurônico e a qualquer um de seus sais de hialuronato, incluindo, mas não limitado a, hialuronato de sódio (NaHA), hialuronato de potássio, hialuronato de magnésio, hialuronato de cálcio e combinações dos mesmos. O uso de mais de um polímero biocompatível não está especificamente excluído da presente descrição. Os preenchimentos de tecido aqui descritos, que podem estar na forma de géis e hidrogéis, podem incluir mais de um polímero biocompatível, como, por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais polímeros biocompatíveis além de HA e/ ou SPF. Polímeros biocompatíveis adequados incluem polissacarídeos (por exemplo, HA, quitosana, sulfato de condroitina, alginato, carboximetil celulose), poli(etilenoglicol), poli(ácido lático), poli(hidroxietilmetacrilato), poli(metilmetacrilato), proteínas diferentes de SPF (por exemplo, elastina e colágeno).
[00343] O HA aqui descrito pode ser reticulado intermolecularmente. Em algumas formas de realização, a reticulação estabiliza as propriedades físicas do HA. Em algumas formas de realização, a presente invenção fornece a formação de HA reticulado estável usando epóxidos multifuncionais. Tal como aqui utilizado, o termo epóxido “multifuncional” significa um reagente químico tendo dois ou mais epóxidos presentes, tais como epóxidos alifáticos inferiores ou os suas epihalohidrinas correspondentes.
Exemplos de epóxidos multifuncionais incluem, mas não estão limitados ao, diepóxido 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), poliglicerolpoliglicidil éter (PGPGE), pentaeritriolpoliglicidil éter (PEPGE) e diglicerolpoliglicidil éter (DGPGE). Em uma forma de realização preferida, o diepóxido BDDE é usado como agente de reticulação. As porções de açúcar do HA se reticulam através dos dois epóxidos BDDE. Em outras formas de realização, os agentes de reticulação incluem corpos de alquildiepoxi, como 1,3-butadieno diepóxido, 1,2,7,8-diepoxioctano, 1,5-hexadieno diepóxido e similares, corpos de diglicidil éter, como etileno glicol diglicidil éter, 1,4-butanodiol diglicidil éter, bisfenol A diglicidil éter e similares, divinil sulfona e epicloridrina. Entre eles, particularmente, divinil sulfona, 1,4-butanodiol diglicidil éter e etileno glicol diglicidil éter podem ser adequadamente utilizados. Na presente invenção, dois ou mais tipos de agentes de reticulação podem ser utilizados combinando-os adequadamente.
[00344] Em algumas formas de realização, o HA é reticulado ao HA. Um método de reticulação de HA ao HA pode incluir uma ou mais etapas.
Em uma primeira etapa, um epóxido, como o BDDE, é adicionado a uma solução de HA em excesso e a reação é permitida. Os epóxidos podem reagir com um a quatro dos grupos hidroxila nos anéis de açúcar do HA para formar uma a quatro ligações éter. Alternativamente, ou além de reagir com os grupos hidroxila, o epóxido pode reagir com o ácido carboxílico do polissacarídeo para formar uma ligação éster. Onde ambos os epóxidos do BDDE reagiram com os grupos funcionais nos anéis de açúcar de uma ou mais macromoléculas de HA, o HA torna-se reticulado.
[00345] Em algumas formas de realização, o agente de reticulação pode ser um agente de reticulação de comprimento zero, como uma ligação química obtida empregando um agente ativador, como 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) ou BCDI. Em algumas formas de realização, o agente ativador de reticulação de comprimento zero é reagido com o HA na presença de N-hidroxissuccinimida (NHS), sulfo-NHS (ou sulfonil-NHS) ou 4-dimetilaminopiridina (DMAP). Em algumas formas de realização, os géis e hidrogéis aqui descritos são formados pela reação de pelo menos um polímero biocompatível reticulável, como HA e/ ou uma proteína, por exemplo, uma proteína SPF ou qualquer outra proteína adicional, com pelo menos uma ativação de agente reticulação.
[00346] Em algumas formas de realização, SPF-SPF reticulado, SPF-HA reticulado e/ ou HA-HA reticulado, podem ter tempos de permanência variáveis após a aplicação, por exemplo, após serem injetados como um intra-dérmico, subdérmico ou geralmente, como preenchimento dérmico. Em algumas formas de realização, os tempos de permanência podem ser afetados no método de periodato de sódio, dependendo do número de grupos reativos nos SPF que estão disponíveis para ligação a outra macromolécula de SPF ou HA. Um exemplo de um grupo reativo nos SPF que pode se ligar ao HA é uma amina primária. Um SPF contendo dois grupos reativos, como duas aminas primárias, pode ele próprio reticular o HA no método de periodato, criando assim um conjugado mais estável. Em outras formas de realização, em que apenas um grupo reativo está presente nos SPF, como apenas uma amina primária, por exemplo, no terminal amino, a SPF-HA reticulação é reduzida, resultando em uma matriz mais biodegradável.
[00347] Em algumas formas de realização, o HA reticulado do BDDE pode ter um tempo de permanência variável após a aplicação, por exemplo, após ser injetado como um preenchimento intra-dérmico, subdérmico ou geralmente dérmico. Em algumas formas de realização, o HA reticulado de BDDE pode persistir no tecido dérmico em qualquer lugar de um a pelo menos trinta dias, dependendo da quantidade de reticulação. O tempo de residência variável do HA reticulado pode ser ajustado introduzindo ligações hidrolizáveis durante a reticulação do epóxido. Em algumas formas de realização, os materiais reticulados com epóxido a um pH mais baixo têm uma quantidade maior de formação de ligação éster e, portanto, são mais rapidamente hidrolisáveis.
[00348] Em uma forma de realização, o agente de reticulação é um agente ativador de reticulação de comprimento zero. Geralmente, os agentes ativadores de reticulação de comprimento zero acoplam polímeros sem adicionar quaisquer átomos de braço espaçador adicionais e, portanto, os agentes ativadores de reticulação de comprimento zero não são incorporados na matriz polimérica reticulada. Agentes de reticulação de comprimento zero adequados incluem carbodiimidas, como, por exemplo, 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) e BCDI. As carbodiimidas não solúveis em água incluem diciclohexilcarbodiimida (DCC) e diisopropilcarbodiimida (DIC), que também podem ser adequadas.
[00349] O acoplamento mediado por carbodiimida entre carboxilatos e grupos funcionais de álcool ou amina procede prontamente à temperatura ambiente, pH neutro e sob condições aquosas. O pH neutro pode estar, por exemplo, entre cerca de 6,0 e cerca de 8,0, como entre cerca de 6,5 e cerca de 7,5, como cerca de 7,0. Tipicamente em água, o cloridrato de 1-etil-3- (3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) pode ser utilizado para mediar a esterificação entre carboxilatos e álcoois ou a amidação entre carboxilatos e aminas. Assim, o HA reticulado é formado através da exploração de grupos reativos presentes no HA (por ex., carboxilato e álcool). Além disso, aproveitando a alta reatividade de grupos amina em proteínas, por exemplo proteínas de SPF, é alcançada a amidação entre cadeias laterais de lisina de proteínas com grupos carboxilato de HA para formar hidrogéis reticulados de proteína de HA. Agentes de reticulação e polímeros que não reagiram podem ser removidos por diálise.
[00350] Em algumas formas de realização, o EDC é usado em conjunto com N-hidroxissuccinimida (NHS) ou sulfonil-NHS (sulfo-NHS), coletivamente referido aqui como “NHS”. O NHS estabiliza intermediários reativos formados por EDC; assim, a adição de NHS pode aumentar a eficiência de acoplamento do EDC. Alternativamente, a 4-dimetilaminopiridina (DMAP) pode ser usada para catalisar a reação de acoplamento.
[00351] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido à base de HA da invenção incluem composições à base de HA reticulado e pelo menos composições à base de HA reticulado parcialmente. O HA reticulado, conforme aqui utilizado, refere-se a cadeias de HA verdadeiramente reticuladas (por exemplo, “livres”), bem como a cadeias levemente reticuladas e seus fragmentos que geralmente estão na forma líquida solúvel.
[00352] Em algumas formas de realização, as composições de hidrogel da invenção incluem pelo menos alguma reticulação entre HA e SPF.
FORMAS DE REALIZAÇÃO EXEMPLIFICATIVAS NÃO LIMITATIVAS
[00353] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio que varia de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada,
a reticulação ocorre entre um ou mais SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00354] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00355] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00356] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00357] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00358] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de baixo peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00359] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de médio peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00360] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de baixo peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação ocorrendo como resultado do uso de um reticulador derivado de epóxi, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%; em que a razão p/ p entre o SPF de baixo peso molecular e o SPF de peso molecular médio é de cerca de 3: 1.
[00361] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de alto peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,5% e cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BDDE, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00362] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 1 kDa a cerca de 250 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00363] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 5 kDa a cerca de 150 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00364] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 6 kDa a cerca de 17 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada,
a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00365] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0 e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 17 kDa a cerca de 39 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00366] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, e um peso molecular ponderal médio variando de cerca de 39 kDa a cerca de 80 kDa, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00367] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de baixo peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00368] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de médio peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00369] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de baixo peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, fragmentos de proteína de seda de médio peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%; em que a razão p/ p entre os SPF de baixo peso molecular e os SPF de médio peso molecular é de cerca de 3: 1.
[00370] Em uma forma de realização, a invenção refere-se a um preenchimento dérmico biocompatível, incluindo fragmentos de proteína de seda de alto peso molecular (SPF) tendo uma polidispersividade de entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0, ácido hialurônico (HA), água e entre cerca de 0,05% a cerca de 0,5% de lidocaína, por exemplo, cerca de 0,3% de lidocaína; em que uma porção de até 100% p/ p de SPF é reticulada e uma porção de até 100% p/ p de HA é reticulada, a reticulação ocorre entre um ou mais de SPF a SPF, SPF a HA e HA a HA; a reticulação incluindo a reticulação de comprimento zero que ocorre como resultado do uso de um agente ativador, por exemplo, BCDI, e com um grau de reticulação de até 15%.
[00371] Em uma forma de realização, a invenção se refere a formulações de preenchimento dérmico biocompatíveis descritas na Tabela 16- B.
Tabela 16-B Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
13 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
15 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
16 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
48 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
100 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGD E cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3 cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de 26; cerca de 13%;
cerca de 27; cerca de 14%;
cerca de 28; Cerca de 15% cerca de 29;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
Cerca de 30
APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
12 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
13 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
14 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
15 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 90/10 Cerca de 30
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
16 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
48 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
100 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%; 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
MPM HA cerca de 75 cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
0 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
12 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%; 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
13 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
14 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
15 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
48 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
100 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
12 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 92,5/7,5; cerca de 29;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
13 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
14 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
15 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
k Da PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
16 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
48 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 90/10 Cerca de 30
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
100 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%; 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
12 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
13 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
14 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%; 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
15 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
16 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
48 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 100 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
MM W HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
de 92,5/7,5; cerca de 29;
cerca de 90/10 Cerca de 30
APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
PEGDE cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
de 500 Da cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de cerca de 26; cerca de 13%; 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 13 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 15 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 48 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 100 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da BPM HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; um de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% ataque 3.0 de 92,5/7,5; cerca de 29; MDa; e cerca cerca de 90/10 Cerca de 30 de 3,1 MDA
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PEGDE cerca de 500 Da MPM HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; abo ut cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da APM HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE cerca de 500 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 13 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 15 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw 48 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 100 kDa 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; P EGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 700 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 13 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 15 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 48 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 100 kDa 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 750 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; P PGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da, e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 13 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 15 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA acima de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 48 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 100 kDa 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da, e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; D a; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 800 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 13 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 15 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 48 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 100 kDa 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 850 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 13 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 15 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 48 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 100 kDa 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da BPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da MPM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da APM HA cerca de cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw 950 kDa cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; PEGDE um ou cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; mais de cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 200 Da, cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1000 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; Da, cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%;
2.000 Da e cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 6000 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; Da; e/ou 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; PPGDE um ou de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% mais de cerca de 92,5/7,5; cerca de 29; de 380 Da e cerca de 90/10 Cerca de 30 cerca de 640 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 12 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 13 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 14 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 15 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; ab out cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%;
1.0 MDa; cerca cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; de 1,2 MDa; cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; cerca de 1,5 cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; MDa; cerca de cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; 2,2 MDa; cerca cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; de 2,8 MDa; cerca de cerca de 26; cerca de 13%; cerca de 2,9 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; MDa; cerca de de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 16 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15%
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; 48 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3 .1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640 Da cerca de HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw 100 kDa de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw de 380 Da e cerca de 640 Da BPM HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; dentre cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais dentre cerca de 380 Da e cerca de 640 Da MPM HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%; MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MDA
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640 Da APM HA um ou mais cerca de 92/8; cerca de 18; cerca de 5%; de cerca de cerca de 93/7; cerca de 19; cerca de 6%; 550 kDa; cerca cerca de 94/6; cerca de 20; cerca de 7%; de 1,0 MDa; cerca de 95/5; cerca de 21; cerca de 8%; cerca de 1,2 cerca de 96/4; cerca de 22; cerca de 9%; MDa; cerca de cerca de 97/3; cerca de 23; cerca de 10%; 1,5 MDa; cerca cerca de 18/12; cerca de 24; cerca de 11%; de 2,2 MDa; cerca de 27/3; cerca de 25; cerca de 12%; cerca de 2,8 cerca de cerca de 26; cerca de 13%;
Peso PM de HA ponderal Total PM de PEGDE Razão HA/ médio Seda + HA MoD (e/ ou PM de seda da seda (mg/ml) PPGDE) Mw MDa; cerca de 29,4/0,6; cerca cerca de 27; cerca de 14%; 2,9 MDa; cerca de 99/1; cerca cerca de 28; Cerca de 15% de 3,0 MDa; e de 92,5/7,5; cerca de 29; cerca de 3,1 cerca de 90/10 Cerca de 30
MD A PEGDE um ou mais de cerca de 200 Da, cerca de 1000 Da, cerca de
2.000 Da e cerca de 6000 Da; e/ou PPGDE um ou mais de cerca de 380 Da e cerca de 640 Da Agentes adicionais
[00372] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos incluem um agente ativo, como um medicamento. Em algumas formas de realização, o agente ativo pode ser um ou mais inibidores de enzimas, agentes anestésicos, neurotoxinas medicinais,
antioxidantes, agentes anti-infecciosos, agentes anti-inflamatórios, vasodilatadores, agentes de bloqueio da luz ultravioleta (UV), corantes (por exemplo, corante de tatuagem, tinta ou pigmento), um agente reflexivo, hormônios, imunossupressores e combinações dos mesmos. Os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir um agente ativo selecionado a partir do grupo que consiste em inibidores de enzimas, agentes anestésicos, neurotoxinas medicinais (por exemplo, toxina botulínica e toxina de clostrídio), antioxidantes, agentes anti-infecciosos (por exemplo, antibióticos), vasodilatadores, corantes (por exemplo, tinta ou pigmento para tatuagem), agentes refletores, anti-inflamatórios, bloqueadores de luz ultravioleta (UV), corantes, hormônios, imunossupressores e combinações dos mesmos.
[00373] Em algumas formas de realização, o imunossupressor é rapamicina, ou composto semelhante à rapamicina.
[00374] Em algumas formas de realização, o agente ativo pode ser um antibiótico selecionado a partir do grupo que consiste de uma penicilina (por exemplo, penicilina V, amoxicilina), uma eritromicina (por exemplo, eritromicina estearato), uma lincosamida (por exemplo, clindamicina), e uma cefalosporina (por exemplo, cefalexina) e uma combinação dos mesmos.
[00375] Em algumas formas de realização, o agente ativo pode ser um vasodilatador selecionado a partir do grupo que consiste em nitroglicerina, labetalol, trazida, dinitrato de isossorbida, tetranitrato de pentaeritritol, digitalis, hidralazina, diazóxido, amrinona, L-arginina, sulfato de bametano, fumarato de benciclano, himisuccinato de benfurodila, nicotinato de benzila, cloridrato de buflomedila, cloridrato de bufenina, cloridrato de butalamina, citrato de cetiedila, ciclonicato, maleato de cinepazida, ciclandelato, dicloroacetato de di-isopropilamônio, nicotinato de etila, hepronicato, nicotinato de etila, tartrato de ifenprodila, nicotinato de inositol, cloreto de isoxsuprina, kalidinofenase, nicotinato de metila, oxalato de naftidrofurila, citrato de nicametato, niceritrol, nicoboxil, nicofuranose, álcool nicotinílico, tartarato de álcool nicotinílico, óxido nítrico, nonivamida, oxpentifilina, papaverina, papaverolina, pentifilina, peroxinitrito, pinacidil, pipratecol, propentofiltina, raubasina, suloctidil, teasuprina, cloreto de timoxamina, hidralazina, minoxidil e nitroprussiato de sódio e uma combinação dos mesmos.
[00376] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir um agente ativo em uma concentração, em peso, de pelo menos 0,01%, ou pelo menos 0,02%, ou pelo menos 0,03%, ou pelo menos 0,04%, ou pelo menos 0,05%, ou pelo menos 0,06%, ou pelo menos 0,07%, ou pelo menos 0,08%, ou pelo menos 0,09%, ou pelo menos 0,1%, ou pelo menos 0,2%, ou pelo menos 0,3%, ou pelo menos 0,4%, ou pelo menos 0,5%, ou pelo menos 0,6%, ou pelo menos 0,7%, ou pelo menos 0,8%, ou pelo menos 0,9%, ou pelo menos 1,0%, ou pelo menos 1,5%, ou pelo menos 2,0%, ou pelo menos 2,5%, ou pelo menos 3,0%, ou pelo menos 3,5%, ou pelo menos 4,0%, ou pelo menos 4,5%, ou pelo menos 5,0%, ou pelo menos 5,5%, ou pelo menos 6,0%, ou pelo menos 6,5%, ou pelo menos 7,0%, ou pelo menos 7,5%, ou pelo menos 8,0%, ou pelo menos 8,5%, ou pelo menos 9,0%, ou pelo menos 9,5%, ou pelo menos 10%, ou pelo menos 15%, ou pelo menos 20%, ou pelo menos 25%, ou pelo menos 30%, ou pelo menos 35%, ou pelo menos 40%, ou pelo menos 45%, ou pelo menos 50%.
[00377] Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir um agente ativo em uma concentração, em peso, no máximo de 0,01%, ou no máximo 0,02%, ou no máximo 0,03%, ou no máximo 0,04%, ou no máximo 0,05%, ou no máximo 0,06%, ou no máximo 0,07%, ou no máximo 0,08%, ou no máximo 0,09%, ou no máximo 0,1%, ou no máximo 0,2%, ou no máximo 0,3%, ou no máximo 0,4%, ou no máximo 0,5%, ou no máximo 0,6%, ou no máximo 0,7%, ou no máximo 0,8%, ou no máximo 0,9%, ou no máximo 1,0%, ou no máximo 1,5%, ou no máximo 2,0%, ou no máximo 2,5%, ou no máximo 3,0%, ou no máximo 3,5%, ou no máximo 4,0%, ou no máximo 4,5%, ou no máximo 5,0%, ou no máximo 5,5%, ou no máximo 6,0%, ou no máximo 6,5%, ou no máximo 7,0%, ou no máximo 7,5%, ou no máximo 8,0%, ou no máximo 8,5%, ou no máximo 9,0%, ou no máximo 9,5%, ou no máximo 10%, ou no máximo 15%, ou no máximo 20%, ou no máximo 25%, ou no máximo 30%, ou no máximo 35%, ou no máximo 40%, ou no máximo 45%, ou no máximo 50%.
[00378] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir um agente ativo em uma concentração, em peso, de cerca de 0,01% a cerca de 0,1%, ou cerca de 0,05% a cerca de 0,15%, ou cerca de 0,1% a cerca de 0,2%, ou cerca de 0,15% a cerca de 0,25%, ou cerca de 0,2% a cerca de 0,3%, ou cerca de 0,25% a cerca de 0,35%, ou cerca de 0,3% a cerca de 0,4%, ou cerca de 0,35% a cerca de 0,45%, ou cerca de 0,4% a cerca de 0,5%, ou cerca de 0,45% a cerca de 0,55%, ou cerca de 0,5% a cerca de 0,6%, ou cerca de 0,55% a cerca de 0,65%, ou cerca de 0,6% a cerca de 0,7%, ou cerca de 0,65% a cerca de 0,75%, ou cerca de 0,7% a cerca de 0,8%, ou cerca de 0,75% a cerca de 0,85%, ou cerca de 0,8% a cerca de 0,9%, ou cerca de 0,85% a cerca de 0,95%, ou cerca de 1% a cerca de 2%, ou cerca de 1,5% a cerca de 2,5%, ou cerca de 2% a cerca de 3%, ou cerca de 2,5% a cerca de 3,5%, ou cerca de 3% a cerca de 4%, ou cerca de 3,5% a cerca de 4,5%, ou cerca de 4% a cerca de 5%, ou cerca de 4,5% a cerca de 5,5%, ou cerca de 5% a cerca de 6%, ou cerca de 5,5% a cerca de 6,5%, ou cerca de 6% a cerca de 7%, ou cerca de 6,5% a cerca de 7,5%, ou cerca de 7% a cerca de 8%, ou cerca de 7,5% a cerca de 8,5%, ou cerca de 8% a cerca de 9%, ou cerca de 8,5% a cerca de 9,5%, ou cerca de 9% a cerca de 10%, ou cerca de 10% a cerca de 15%, ou cerca de 15% a cerca de 20%, ou cerca de 20% a cerca de 25%, ou cerca de 25% a cerca de 30%, ou cerca de 30% a cerca de 35%, ou cerca de 35% a cerca de 40%, ou cerca de 40% a cerca de 45%, ou cerca de 45% a cerca de 50%.
[00379] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir um agente ativo em uma concentração, em peso, de cerca de 0,01%, ou cerca de 0,02%, ou cerca de 0,03%, ou cerca de 0,04%, ou cerca de 0,05%, ou cerca de 0,06%, ou cerca de 0,07%, ou cerca de 0,08%, ou cerca de 0,09%, ou cerca de 0,1%, ou cerca de 0,2%, ou cerca de 0,3%, ou cerca de 0,4%, ou cerca de 0,5%, ou cerca de 0,6%, ou cerca de 0,7%, ou cerca de 0,8%, ou cerca de 0,9%, ou cerca de 1,0%, ou cerca de 1,5%, ou cerca de 2,0%, ou cerca de 2,5%, ou cerca de 3,0%, ou cerca de 3,5%, ou cerca de 4,0%, ou cerca de 4,5%, ou cerca de 5,0%, ou cerca de 5,5%, ou cerca de 6,0%, ou cerca de 6,5%, ou cerca de 7,0%, ou cerca de 7,5%, ou cerca de 8,0%, ou cerca de 8,5%, ou cerca de 9,0%, ou cerca de 9,5%, ou cerca de 10%, ou cerca de 11%, ou cerca de 12%, ou cerca de 13%, ou cerca de 14%, ou cerca de 15%, ou cerca de 16%, ou cerca de 17%, ou cerca de 18%, ou cerca de 19%, ou cerca de 20%, ou cerca de 21%, ou cerca de 22%, ou cerca de 23%, ou cerca de 24%, ou cerca de 25%, ou cerca de 26%, ou cerca de 27%, ou cerca de 28%, ou cerca de 29%, ou cerca de 30%, ou cerca de 31%, ou cerca de 32%, ou cerca de 33%, ou cerca de 34%, ou cerca de 35%, ou cerca de 36%, ou cerca de 37%, ou cerca de 38%, ou cerca de 39%, ou cerca de 40%, ou cerca de 41%, ou cerca de 42%, ou cerca de 43%, ou cerca de 44%, ou cerca de 45%, ou cerca de 46%, ou cerca de 47%, ou cerca de 48%, ou cerca de 49%, ou cerca de 50%.
[00380] Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido aqui descritos incluem um agente inibidor de fibrose.
Em algumas formas de realização, as preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir ainda um composto que age para ter um efeito inibitório em processos patológicos no ou ao redor do local de tratamento. Em certos aspectos, o agente ativo pode ser selecionado a partir de uma das seguintes classes de compostos: agentes anti-inflamatórios (por exemplo, dexametasona, cortisona, fludrocortisona, prednisona, prednisolona, 6α-metilprednisolona, triamcinolona, betametasona e aspirina).
[00381] Em algumas formas de realização, o agente ativo pode, mas não está limitado a, antioxidantes e enzimas. Em uma forma de realização, o agente ativo pode incluir, mas é não se limitando a, selênio, derivados de ubiquinona, antioxidantes à base de tiol, antioxidantes contendo sacarídeos, polifenóis, extratos botânicos, ácido cafeico, apigenina, picnogenol, resveratrol, ácido fólico, vitamina B12, vitamina B6, vitamina B3, vitamina E, vitamina C e seus derivados, vitamina D, vitamina A, astaxatina, luteína, licopeno, ácidos graxos essenciais (ômegas 3 e 6), ferro, zinco, magnésio, flavonóides (soja, curcumina, silimarina, picnongeol), fatores de crescimento, aloe, ácido hialurônico, proteínas da matriz extracelular, células, ácidos nucléicos, biomarcadores, reagentes biológicos, óxido de zinco, peróxido de benzoíla, retinóides, titânio, alérgenos em uma dose conhecida (para tratamento de sensibilização), óleos essenciais, incluindo, entre outros, óleo de capim-limão ou alecrim e fragrâncias. Considerando os agentes ativos de maneira mais ampla, os agentes ativos podem incluir agentes terapêuticos, como pequenas moléculas, drogas, proteínas, peptídeos e ácidos nucleicos.
[00382] Em certas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir um ou mais agentes anestésicos em uma quantidade eficaz para melhorar ou mitigar a dor ou desconforto no local de injeção do preenchimento de tecido. O anestésico local pode ser selecionado a partir do grupo de ambucaína, amolanona, amilocalna, benoxinato, benzocaína, betoxicaína, bifenamina, bupivacaína, butacaína, butamben, butanilicaína, butetamina, butoxicaína, carticaína, cloroprocaína, cocaetileno, cocaína, ciclometicaína, dibucaína, dimetisoquina, dimetocaína, diperodon, diciclomina, ecgonidina, ecgonina, cloreto de etila, etidocaína, beta-eucaina, euprocina,
fenalcomina, formocaína, hexilcaína, hidroxitetracaína, isobutil p- aminobenzoato, mesilato de leucinocaína, levoxadrol, lidocaína, mepivacaína, meprilcaína, metabutoxicaína, cloridrato de metila, mirtecaína, naepaína, octacaína, ortocaína, oxetazina, paretoxicinaína, fenacaína, fenol, piperocaína, piridocaína, polidocanol, pramoxina, prilocalne, procaína, propanocaína, proparacaína, propipocaína, propoxicaína, pseudococaína, pirrocaína, ropivacaína, álcool salicílico, tetracaína, tolicaína, trimecaína, zolamina, e sais dos mesmos.
[00383] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir lidocaína ou outro anestésico citado acima em uma concentração, em peso, de pelo menos 0,01%, ou pelo menos 0,02%, ou pelo menos 0,03%, ou pelo menos 0,04%, ou em pelo menos 0,05%, ou pelo menos 0,06%, ou pelo menos 0,07%, ou pelo menos 0,08%, ou pelo menos 0,09%, ou pelo menos 0,1%, ou pelo menos 0,2%, ou pelo menos 0,3%, ou pelo menos 0,4%, ou pelo menos 0,5%, ou pelo menos 0,6%, ou pelo menos 0,7%, ou pelo menos 0,8%, ou pelo menos 0,9%, ou pelo menos 1,0%, ou pelo menos 1,5%, ou pelo menos 2,0%, ou pelo menos 2,5%, ou pelo menos 3,0%, ou pelo menos 3,5%, ou pelo menos 4,0%, ou pelo menos 4,5%, ou pelo menos 5,0%, ou pelo menos 5,5%, ou pelo menos 6,0%, ou pelo menos 6,5%, ou pelo menos 7,0%, ou pelo menos 7,5%, ou pelo menos 8,0%, ou pelo menos 8,5%, ou pelo menos 9,0%, ou pelo menos 9,5%, ou pelo menos 10%.
[00384] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir lidocaína ou outro anestésico citado acima em uma concentração, em peso, de no máximo 0,01%, ou no máximo 0,02%, ou no máximo 0,03%, ou no máximo 0,04%, ou no máximo 0,05%, ou no máximo 0,06%, ou no máximo 0,07%, ou no máximo 0,08%, ou no máximo 0,09%, ou no máximo 0,1%, ou no máximo 0,2%, ou no máximo 0,3%,
ou no máximo 0,4%, ou no máximo 0,5%, ou no máximo 0,6%, ou no máximo 0,7%, ou no máximo 0,8%, ou no máximo 0,9%, ou no máximo 1,0%, ou no máximo 1,5%, ou no máximo 2,0%, ou no máximo 2,5%, ou no máximo 3,0%, ou no máximo 3,5%, ou no máximo 4,0%, ou no máximo 4,5%, ou no máximo 5,0%, ou no máximo 5,5%, ou no máximo 6,0%, ou no máximo no máximo 6,5%, ou no máximo 7,0%, ou no máximo 7,5%, ou no máximo 8,0%, ou no máximo 8,5%, ou no máximo 9,0%, ou no máximo 9,5%, ou no máximo 10%.
[00385] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir lidocaína ou outro anestésico citado acima em uma concentração, em peso, de cerca de 0,01%, ou cerca de 0,02%, ou cerca de 0,03%, ou cerca de 0,04%, ou cerca de 0,05%, ou cerca de 0,06%, ou cerca de 0,07%, ou cerca de 0,08%, ou cerca de 0,09%, ou cerca de 0,1%, ou cerca de 0,2%, ou cerca de 0,3%, ou cerca de 0,4%, ou cerca de 0,5%, ou cerca de 0,6%, ou cerca de 0,7%, ou cerca de 0,8%, ou cerca de 0,9%, ou cerca de 1,0%, ou cerca de 1,5%, ou cerca de 2,0%, ou cerca de 2,5%, ou cerca de 3,0%, ou cerca de 3,5%, ou cerca de 4,0%, ou cerca de 4,5%, ou cerca de 5,0%, ou cerca de 5,5%, ou cerca de 6,0%, ou cerca de 6,5%, ou cerca de 7,0%, ou cerca de 7,5%, ou cerca de 8,0%, ou cerca de 8,5%, ou cerca de 9,0%, ou cerca de 9,5%, ou cerca de 10%.
[00386] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir lidocaína ou outro anestésico citado acima em uma concentração, em peso, de cerca de 0,01% a cerca de 0,02%, ou cerca de 0,03% a cerca de 0,04%, ou cerca de 0,05% a cerca de 0,06% a cerca de 0,07%, ou cerca de 0,08% a cerca de 0,09%, ou cerca de 0,1% a cerca de 0,2%, ou cerca de 0,3% a cerca de 0,4%, ou cerca de 0,5% a cerca de 0,6%, ou cerca de 0,7% a cerca de 0,8%, ou cerca de 0,9% a cerca de 1,0%, ou cerca de 1% a cerca de 1,5%, ou cerca de 1,5% a cerca de 2,0%, ou cerca de 2,0% a cerca de 2,5%, ou cerca de 2,5% a cerca de 3,0%, ou cerca de
3,0% a cerca de 3,5%, ou cerca de 3,5% a cerca de 4,0%, ou cerca de 4,0% a cerca de 4,5%, ou cerca de 4,5% a cerca de 5,0%, ou cerca de 5,0% a cerca de 5,5%, ou cerca de 5,5% a cerca de 6,0%, ou cerca de 6,0% a cerca de 6,5%, ou cerca de 6,5% a cerca de 7,0%, ou cerca de 7,5% a cerca de 8,0%, ou cerca de 8,0% a cerca de 8,5%, ou cerca de 8,5% a cerca de 9,0%, ou cerca de 9,5% a cerca de 10%.
[00387] Em uma forma de realização, o agente anestésico é a lidocaína, como na forma de lidocaína HCl. Os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ter uma lidocaína ou outro anestésico em uma concentração entre cerca de 0,1% e cerca de 5% em peso da composição, por exemplo, cerca de 0,2% a cerca de 1,0% em peso do preenchimento de tecido. Em uma forma de realização, o preenchimento de tecido tem uma concentração de lidocaína de cerca de 0,3% em peso (% p/ p) do preenchimento de tecido. A concentração de lidocaína nos preenchimentos de tecido aqui descritos pode ser terapeuticamente eficaz, o que significa que a concentração é adequada para fornecer um benefício terapêutico, como, por exemplo, melhorar ou mitigar a dor ou desconforto no local de injeção do preenchimento de tecido.
Propriedades ópticas
[00388] Quando a luz encontra um material, ela pode interagir com ele de várias maneiras. Essas interações dependem da natureza da luz, isto é, do seu comprimento de onda, frequência, energia, etc., e da natureza do material. A luz interage com um objeto por uma combinação de reflexão, e transmitância com refração. Um material opticamente transparente permite que grande parte da luz que cai sobre ele seja transmitida, com pouca luz sendo refletida. Materiais que não permitem a transmissão de luz são chamados opticamente opacos, ou simplesmente opacos.
[00389] Em algumas formas de realização, a invenção fornece um preenchimento de tecido aqui descrito tendo transparência e/ ou translucidez. Transparência (também chamada de pelucidez ou diafanidade) é a propriedade física de permitir que a luz passe através de um material, enquanto a translucidez (também chamada de translucência ou translucidez) apenas permite que a luz passe difusamente. A propriedade oposta é a opacidade. Os materiais transparentes são transparentes, enquanto os translúcidos não se pode visualizar claramente através dele. Os preenchimentos de tecido aqui divulgados podem, ou não, exibir propriedades ópticas como transparência e/ ou translucidez. Em algumas formas de realização, incluindo métodos para preenchimento superficial de linhas, seria uma vantagem ter um hidrogel opaco.
Os fatores utilizados para controlar as propriedades ópticas de um preenchimento de tecido incluem, sem limitação, concentração de SPF, grau de cristalinidade e/ ou homogeneidade de hidrogel.
[00390] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos são opacos.
[00391] Em uma forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito é opticamente transparente. Em aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito transmite, por exemplo, cerca de 75% da luz, cerca de 80% da luz, cerca de 85% da luz, cerca de 90% da luz, cerca de 95% da luz, ou cerca de 100% da luz. Em outros aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito, por exemplo, pelo menos 75% da luz, pelo menos 80% da luz, pelo menos 85% da luz, pelo menos 90% da luz ou pelo menos 95% da luz. Em ainda outros aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito transmite, por exemplo, cerca de 75% a cerca de 100% da luz, cerca de 80% a cerca de 100% da luz, cerca de 85% a cerca de 100% da luz, cerca de 90% a cerca de 100% da luz, ou cerca de 95% a cerca de 100% da luz.
[00392] Em outra forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito é opticamente opaco. Em aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito transmite, por exemplo,
cerca de 0,1% da luz, cerca de 1% da luz, cerca de 10% da luz, cerca de 15%
da luz, cerca de 20% da luz, cerca de 25% da luz, cerca de 30% da luz, cerca de 35% da luz, cerca de 40% da luz, cerca de 45% da luz, cerca de 50% da luz,
cerca de 55% da luz, cerca de 60% da luz, cerca de 65% da luz, cerca de 70%
da luz, cerca de 75% da luz, cerca de 80% da luz, cerca de 85% da luz, cerca de 90% da luz, cerca de 95% da luz ou cerca de 100% da luz.
Em outros aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito transmite, por exemplo, no máximo 0,1% da luz, no máximo 1% da luz, no máximo 10% da luz, no máximo 15% da luz, no máximo 20% da luz, no máximo
25% da luz, no máximo 30% da luz, no máximo 35% da luz, no máximo 40% da luz, no máximo 45% da luz, no máximo 50% da luz, no máximo 55% da luz, no máximo 60% da luz, no máximo 65% da luz, no máximo 70% da luz ou no máximo 75% da luz.
Em outros aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito transmite, por exemplo, pelo menos 0,1%
da luz, pelo menos 1% da luz, pelo menos 10% da luz, pelo menos 15% da luz,
pelo menos 20% da luz, pelo menos 25% da luz, pelo menos 30% da luz, pelo menos 35% da luz, pelo menos 40% da luz, pelo menos 45% da luz, pelo menos
50% da luz, pelo menos 55% da luz, pelo menos 60% da luz, pelo menos 65%
da luz, pelo menos 70% da luz ou pelo menos 75% da luz.
Em outros aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito transmite,
por exemplo, cerca de 0,1% a cerca de 15%, cerca de 0,1% a cerca de 20%,
cerca de 0,1% a cerca de 25%, cerca de 0,1% a cerca de 30%, cerca de 0,1% a cerca de 35%, cerca de 0,1% a cerca de 40%, cerca de 0,1% a cerca de 45%,
cerca de 0,1% a cerca de 50%, cerca de 0,1% a cerca de 55%, cerca de 0,1% a cerca de 60%, cerca de 0,1% a cerca de 65%, cerca de 0,1% a cerca de 70%, cerca de 0,1% a cerca de 75%, cerca de 1% a cerca de 15%, cerca de 1% a cerca de 20%, cerca de 1% a cerca de 25%, cerca de 1% a cerca de 30%, cerca de 1% a cerca de 35%, cerca de 1% a cerca de 40%, cerca de 1% a cerca de 45%, cerca de 1% a cerca de 50%, cerca de 1% a cerca de 55%, cerca de 1% a cerca de 60%, cerca de 1% a cerca de 65%, cerca de 1% a cerca de 70%, cerca de 1% a cerca de 75%, cerca de 10% a cerca de 20%, cerca de 10% a cerca de 25%, cerca de 10% a cerca de 30%, cerca de 10% a cerca de 35%, cerca de 10% a cerca de 40%, cerca de 10% a cerca de 45%, cerca de 10% a cerca de 50%, cerca de 10% a cerca de 55%, cerca de 10% a cerca de 60%, cerca de 10% a cerca de 65%, cerca de 10% a cerca de 70%, cerca de 10% a cerca de 75%, cerca de 25% a cerca de 35%, cerca de 25% a cerca de 40%, cerca de 25% a cerca de 45%, cerca de 25% a cerca de 50%, cerca de 25% a cerca de 55%, cerca de 25% a cerca de 60%, cerca de 25% a cerca de 65%, cerca de 25% a cerca de 70%, ou cerca de 25% a cerca de 75% da luz.
[00393] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito é opticamente translúcido. Em aspectos desta formas de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito transmite difusamente, por exemplo, cerca de 75% da luz, cerca de 80% da luz, cerca de 85% da luz, cerca de 90% da luz, cerca de 95% da luz, ou cerca de 100% da luz.
Em outros aspectos destas formas de realização, um tecido de preenchimento transmite de forma difusa, por exemplo, pelo menos 0,1% da luz, pelo menos 1% da luz, pelo menos 5% da luz, pelo menos 10% da luz, em pelo menos 15% da luz, pelo menos 20% da luz, pelo menos 25% da luz, pelo menos 30% da luz, pelo menos 35% da luz, pelo menos 40% da luz, pelo menos 45% da luz, pelo menos 50% da luz, pelo menos 55% da luz, pelo menos 60% da luz, pelo menos 65% da luz, pelo menos 70% da luz, pelo menos 75% da luz, pelo menos 80% da luz, pelo menos 85% da luz, pelo menos 90% da luz ou pelo menos 95% da luz. Em outros aspectos destas formas de realização, um tecido de preenchimento transmite de forma difusa, por exemplo, no máximo de 0,1% da luz, no máximo, 1% da luz, no máximo 5% da luz, no máximo 10% da luz, em no máximo 15% da luz, no máximo 20% da luz, no máximo 25% da luz, no máximo 30% da luz, no máximo 35% da luz, no máximo 40% da luz, no máximo 45% da luz, no máximo 50% da luz, no máximo 55% da luz, no máximo 60% da luz, no máximo 65% da luz, no máximo 70% da luz, no máximo 75% da luz, no máximo 80% da luz, no máximo 85% da luz, no máximo 90% da luz, no máximo 95% da luz ou no máximo 100% da luz. Em ainda outros aspectos destas formas de realização, um preenchimento de tecido transmite de forma difusa, por exemplo, cerca de 0,1% a cerca de 100% da luz, cerca de 1% a cerca de 100% da luz, cerca de 5% a cerca de 100% de a luz, cerca de 10% a cerca de 100% da luz, cerca de 15% a cerca de 100% da luz, cerca de 20% a cerca de 100% da luz, cerca de 25% a cerca de 100% da luz, cerca de 30% a cerca de 100% da luz, cerca de 35% a cerca de 100% da luz, cerca de 45% a cerca de 100% da luz, cerca de 50% a cerca de 100% da luz, cerca de 55% a cerca de 100% da luz luz, cerca de 60% a cerca de 100% da luz, cerca de 65% a cerca de 100% da luz, cerca de 70% a cerca de 100% da luz, cerca de 75% a cerca de 100% da luz, cerca de 80% a cerca de 100% da luz, cerca de 85% a cerca de 100% da luz, cerca de 90% a cerca de 100% da luz, ou cerca de 95% a cerca de 100% da luz.
[00394] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido aqui descrito pode ser descrito por seu coeficiente de atenuação, que é definido como uma descrição da capacidade do material de dispersar ou absorver luz.
[00395] As propriedades de preenchimento de tecido e pele podem influenciar a manifestação do evento adverso do efeito de Tyndall na pele após a entrega de certos materiais de preenchimento de tecido conhecidos na técnica. Os preenchimentos com alta rigidez e elasticidade podem ser usados para corrigir áreas do rosto, como dobras nasolabiais, bochechas e queixo, sem medo de descoloração facial, pois os materiais são injetados nas regiões da derme média e profunda. No entanto, quando os preenchimentos são usados para aplicações mais superficiais, por exemplo, para corrigir rugas de linhas finas, ou aplicados erroneamente de maneira superficial demais nas regiões superiores da derme, geralmente é observada uma descoloração azulada da pele. Esse fenômeno, que se acredita ser o resultado do efeito Tyndall, deixa uma descoloração semi-permanente dos locais de aplicação. Em algumas formas de realização, o efeito desaparece após a administração de enzimas, por exemplo, hialuronidase, a fim de degradar o preenchimento de tecido.
Consequentemente, o efeito Tyndall é mais comum em pacientes tratados por terem rugas superficiais de linhas finas. A manifestação prolongada do efeito Tyndall, normalmente enquanto o preenchimento dura na pele, é um efeito colateral indesejado e motivo de preocupação para os pacientes.
[00396] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos mitigam o efeito Tyndall devido à sua homogeneidade e opacidade resultante.
[00397] Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido aqui descritos que não resultam em efeito Tyndall, ou não resultam em qualquer descoloração azul visualmente perceptível, resultante do efeito Tyndall. Em algumas formas de realização, a invenção refere-se a agentes de preenchimento de tecido e métodos para melhorar a aparência estética, compreendendo a administração, a uma região dérmica de um paciente, de uma composição de preenchimento dérmico substancialmente opticamente transparente que não apresenta nenhum ou insignificante efeito Tyndall. O aparecimento de uma descoloração azul no local da pele onde um preenchimento de tecido foi injetado (efeito Tyndall) é um evento adverso significativo experimentado por alguns pacientes com preenchimento dérmico. O efeito Tyndall é mais comum em pacientes tratados por rugas superficiais de linhas finas. Formas de realização da presente invenção foram desenvolvidas que proporcionam preenchimentos translúcidas de longa duração que podem ser injetados superficialmente para tratar linhas finas e rugas, mesmo em regiões de pele relativamente fina, sem qualquer descoloração azul resultante do efeito Tyndall. Linhas finas ou rugas superficiais são geralmente entendidas como aquelas rugas ou dobras na pele que são normalmente encontradas nas regiões da face (testa, canto lateral, borda vermelha/ linhas periorais) onde a pele é mais fina, ou seja, a pele tem uma espessura da derme inferior a 1 mm. Na testa, a espessura dérmica média é de cerca de 0,95 mm para a pele normal e cerca de 0,81 mm para a pele enrugada. A derme ao redor do canto lateral é ainda mais fina (por exemplo, cerca de 0,61 mm para a pele normal e cerca de 0,41 mm para a pele enrugada). O diâmetro externo médio de uma agulha de calibre 30 ou 32 (agulhas que são normalmente usadas para aplicação em gel de linha fina) é de cerca de 0,30 e cerca de 0,24 mm.
[00398] Em uma forma de realização, um preenchimento de tecido aqui divulgado é opticamente opaco. Em aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento transmite, por exemplo, cerca de 5% da luz, cerca de 10% da luz, cerca de 15% da luz, cerca de 20% da luz, cerca de 25% da luz, cerca de 30% da luz, cerca de 35% da luz, cerca de 40% da luz, cerca de 45% da luz, cerca de 50% da luz, cerca de 55% da luz, cerca de 60% da luz, cerca de 65% da luz, ou cerca de 70% da luz. Em outros aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento transmite, por exemplo, no máximo 5% da luz, no máximo 10% da luz, no máximo 15% da luz, no máximo 20% da luz, no máximo 25% da luz, no máximo 30% da luz, no máximo 35% da luz, no máximo 40% da luz, no máximo 45% da luz, no máximo 50% da luz, no máximo 55% da luz, no máximo 60% da luz, no máximo 65% da luz, no máximo 70% da luz ou no máximo 75% da luz. Em outros aspectos desta forma de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento transmite, por exemplo,
cerca de 5% a cerca de 15%, cerca de 5% a cerca de 20%, cerca de 5% a cerca de 25%, cerca de 5% a cerca de 30%, cerca de 5% a cerca de 35%, cerca de 5% a cerca de 40%, cerca de 5% a cerca de 45%, cerca de 5% a cerca de 50%, cerca de 5% a cerca de 55%, cerca de 5% a cerca de 60%, cerca de 5% a cerca de 65%, cerca de 5% a cerca de 70%, cerca de 5% a cerca de 75%, cerca de 15% a cerca de 20%, cerca de 15% a cerca de 25%, cerca de 15% a cerca de 30%, cerca de 15% a cerca de 35%, cerca de 15% a cerca de 40%, cerca de 15% a cerca de 45%, cerca de 15% a cerca de 50%, cerca de 15% a cerca de 55%, cerca de 15% a cerca de 60%, cerca de 15% a cerca de 65%, cerca de 15% a cerca de 70%, cerca de 15% a cerca de 75%, cerca de 25% a cerca de 35%, cerca de 25% a cerca de 40%, cerca de 25% a cerca de 45%, cerca de 25% a cerca de 50%, cerca de 25% a cerca de 55%, cerca de 25% a cerca de 60%, cerca de 25% a cerca de 65%, cerca de 25% a cerca de 70%, ou cerca de 25% a cerca de 75% da luz.
[00399] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento exibe, por exemplo, cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 100% de redução na tindalização (tyndalling). Em outros aspectos dessas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento exibe, por exemplo, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% de redução na tindalização. Em outros aspectos dessas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento exibe, por exemplo, cerca de 20% a cerca de 100%, cerca de 50% a cerca de 100%, cerca de 70% a cerca de 100%, cerca de 15% a cerca de 35%, cerca de 20% a cerca de 40%, cerca de 25% a cerca de 45%, cerca de 30% a cerca de 50%, cerca de 35% a cerca de 55%, cerca de 40% a cerca de 60%, cerca de 45% a cerca de 65%, cerca de 50% a cerca de 70%, cerca de 55% a cerca de 75%, cerca de 60% a cerca de 80%, cerca de 65% a cerca de 85%, cerca de 70% a cerca de 90%, cerca de 75% a cerca de 95%, ou cerca de 80% a cerca de 100%, de redução na tindalização.
Teor de água
[00400] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem incluir água. Por exemplo, alguns preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser géis, como hidrogéis, e podem incluir água absorvida, aprisionada ou de outra forma disposta nela.
[00401] Em algumas formas de realização, o hidrogel de seda-HA reticulado é um hidrogel de baixo intumescimento. Em algumas formas de realização, o hidrogel de seda-HA reticulado é um hidrogel de alto intumescimento. Em algumas formas de realização, o grau de intumescimento para as formulações de hidrogel da presente divulgação pode ser modulado controlando o grau de reticulação ou variando os teores de HA. Quanto maior o grau de reticulação está presente no hidrogel, menor será o grau de intumescimento do hidrogel devido a estrutura de hidrogel mais apertada.
Quanto mais o teor de HA estiver presente no hidrogel, maior será o grau de intumescimento devido à presença de mais grupos hidroxila (-OH) na estrutura de HA.
[00402] Em uma forma de realização, o teor de água em porcentagem, em peso, nos preenchimentos de tecido da presente divulgação é 1% a 95%. Em uma forma de realização, o percentual de teor de água, em peso, nos preenchimentos de tecido aqui descritos é de pelo menos 1%, ou pelo menos
2%, ou pelo menos 3%, ou pelo menos 4%, ou pelo menos 5%, ou pelo menos 6%, ou pelo menos 7%, ou pelo menos 8%, ou pelo menos 9%, ou pelo menos 10%, ou pelo menos 11%, ou pelo menos 12%, ou pelo menos 13%, ou pelo menos 14%, ou pelo menos 15%, ou pelo menos 16%, ou pelo menos 17%, ou pelo menos 18%, ou pelo menos 19%, ou pelo menos 20%, ou pelo menos 21%, ou pelo menos 22%, ou pelo menos 23%, ou pelo menos 24%, ou pelo menos 25%, ou pelo menos 26%, ou pelo menos 27%, ou pelo menos 28%, ou pelo menos 29%, ou pelo menos 30%, ou pelo menos 31%, ou pelo menos 32%, ou pelo menos 33%, ou pelo menos 34%, ou pelo menos 35%, ou pelo menos 36%, ou pelo menos 37%, ou pelo menos 38%, ou pelo menos 39%, ou pelo menos 40%, ou pelo menos 41%, ou pelo menos 42%, ou pelo menos 43%, ou pelo menos 44%, ou pelo menos 45%, ou pelo menos 46%, ou pelo menos 47%, ou pelo menos 48%, ou pelo menos 49%, ou pelo menos 50%, ou pelo menos 51%, ou pelo menos 52%, ou pelo menos 53%, ou pelo menos 54%, ou pelo menos 55%, ou pelo menos 56%, ou pelo menos 57%, ou pelo menos 58%, ou pelo menos 59%, ou pelo menos 60%, ou pelo menos 61%, ou pelo menos 62%, ou pelo menos 63%, ou pelo menos 64%, ou pelo menos 65%, ou pelo menos 66%, ou pelo menos 67%, ou pelo menos 68%, ou pelo menos 69%, ou pelo menos 70%, ou pelo menos 71%, ou pelo menos 72%, ou pelo menos 73%, ou pelo menos 74%, ou pelo menos 75%, ou pelo menos 76%, ou pelo menos 77%, ou pelo menos 78%, ou pelo menos 79%, ou pelo menos 80%, ou pelo menos 81%, ou pelo menos 82%, ou pelo menos 83%, ou pelo menos 84%, ou pelo menos 85%, ou pelo menos 86%, ou pelo menos 87%, ou pelo menos 88%, ou pelo menos 89%, ou pelo menos 90%, ou pelo menos 91%, ou pelo menos 92%, ou pelo menos 93%, ou pelo menos 93%, ou pelo menos 94%, ou pelo menos 95%.
[00403] Em uma forma de realização, o percentual de teor de água, em peso, nos preenchimentos de tecido aqui descritos é no máximo de 1%, ou no máximo 2%, ou no máximo 3%, ou no máximo 4%, ou no máximo 5%, ou no máximo 6%, ou no máximo 7%, ou no máximo 8%, ou no máximo 9%, ou no máximo 10%, ou no máximo 11%, ou no máximo 12%, ou no máximo 13%, ou no máximo 14%, ou no máximo 15%, ou no máximo 16%, ou no máximo 17%, ou no máximo 18%, ou no máximo 19%, ou no máximo 20%, ou no máximo 21%, ou no máximo 22%, no máximo 23%, ou no máximo 24%, ou no máximo 25%, ou no máximo 26%, ou no máximo 27%, ou no máximo 28%, ou no máximo 29%, ou no máximo 30%, ou no máximo 31%, ou no máximo 32%, ou no máximo 33%, ou no máximo 34%, ou no máximo 35%, ou no máximo 36%, ou no máximo 37%, ou no máximo 38%, ou no máximo 39%, ou no máximo 40%, ou no máximo 41%, ou no máximo 42%, ou no máximo 43%, ou no máximo 44%, ou no máximo 45%, ou no máximo 46%, ou no máximo 47%, ou no máximo 48%, ou no máximo 49%, ou no máximo 50%, ou no máximo 51%, ou no máximo 52%, ou no máximo 53%, ou no máximo 54%, ou no máximo 55%, ou no máximo 56%, ou no máximo 57%, ou no máximo 58%, ou no máximo 59%, ou no máximo 60%, ou no máximo 61%, ou no máximo 62%, ou no máximo 63%, ou no máximo 64%, ou no máximo 65%, ou no máximo 66%, ou no máximo 67%, ou no máximo 68%, ou no máximo 69%, ou no máximo 70%, ou no máximo 71%, ou no máximo 72%, ou no máximo 73%, ou no máximo 74%, ou no máximo 75%, ou no máximo 76%, ou no máximo 77%, ou no máximo 78%, ou no máximo 79%, ou no máximo 80%, ou no máximo 81%, ou no máximo 82%, ou no máximo 83%, ou no máximo 84%, ou no máximo 85%, ou no máximo 86%, ou no máximo 87%, ou no máximo 88%, ou no máximo 89%, ou no máximo 90%, ou no máximo 91%, ou no máximo 92%, ou no máximo 93%, ou no máximo 94%, ou no máximo 95%.
[00404] Em uma forma de realização, o percentual de teor de água, em peso, nos preenchimentos de tecidos aqui descritos é de 1% a 2%, ou 2% a 3%, ou 3% a 4%, ou 4% a 5%, ou 5% a 6%, ou 6% a 7%, ou 7% a 8%, ou 8% a 9%, ou 9% a 10%, ou 10% a 11%, ou 11% a 12%, ou 12% a 13%, ou 13% a 14%, ou 14% a 15%, ou 15% a 16%, ou 16% ou 17%, ou 17% a 18%, ou 18% a 19%, ou
19% a 20%, ou 20% a 21%, ou 21% a 22%, ou 22% a 23%, ou 23% a 24%, ou 24% a 25%, ou 25% a 26%, ou 26% a 27%, ou 27% a 28%, ou 28% a 29%, ou 30% a 31%, ou 31% a 32%, ou 32% a 33%, ou 33% a 34%, ou 34% a 35%, ou 35% a 36%, ou 36% a 37%, ou 37% a 38%, ou 38% a 39%, ou 39% a 40%, ou 40% a 41%, ou 41% a 42%, ou 42% a 43%, ou 43% a 44%, ou 44% a 45%, ou 45% a 46%, ou 46% a 47%, ou 47% a 48%, ou 48% a 49%, ou 49% a 50%, ou 50% a 51%, ou 51% a 52%, ou 52% a 53%, ou 53% a 54%, ou 54% a 55%, ou 55% a 56%, ou 56% a 57%, ou 57% a 58%, ou 58% a 59%, ou 59% a 60%, ou 60% a 61%, ou 61% a 62%, ou 62% a 63%, ou 63% a 64%, ou 64% a 65%, ou 65% a 66%, ou 66% a 67%, ou 67% a 68%, ou 68% a 69%, ou 69% a 70%, ou 70% a 71%, ou 71% a 72%, ou 72% a 73%, ou 73% a 74%, ou 74% a 75%, ou 75% a 76%, ou 76% a 77%, ou 77% a 78%, ou 78% a 79%, ou 79% a 80%, ou 80% a 81%, ou 81% a 82%, ou 82% a 83%, ou 82% a 83%, ou 83% a 84%, ou 84% a 85%, ou 85% a 86%, ou 86% a 87%, ou 87% a 88%, ou 88% a 89%, ou 89% a 90%, ou 89% a 90%, ou 90% a 91%, ou 91% a 92%, ou 92% a 93%, ou 93% a 94%, ou 94% a 95%, ou 95% a 96%, ou 96% a 97%, ou 97% a 98%.
[00405] Em uma forma de realização, o percentual de teor de água, em peso, nos preenchimentos de tecido aqui descritos é de cerca de 1%, ou cerca de 2%, ou cerca de 3%, ou cerca de 4%, ou cerca de 5%, ou cerca de 6%, ou cerca de 7%, ou cerca de 8%, ou cerca de 9%, ou cerca de 10%, ou cerca de 11%, ou cerca de 12%, ou cerca de 13%, ou cerca de 14%, ou cerca de 15%, ou cerca de 16%, ou cerca de 17%, ou cerca de 18%, ou cerca de 19%, ou cerca de 20%, ou cerca de 21%, ou cerca de 22%, ou cerca de 23%, ou cerca de 24%, ou cerca de 25%, ou cerca de 26%, ou cerca de 27%, ou cerca de 28%, ou cerca de 29%, ou cerca de 30%, ou cerca de 31%, ou cerca de 32%, ou cerca de 33%, ou cerca de 34%, ou cerca de 35%, ou cerca de 36%, ou cerca de 37%, ou cerca de 38%, ou cerca de 39%, ou cerca de 40%, ou cerca de 41%, ou cerca de 42%, ou cerca de 43%, ou cerca de 44%, ou cerca de 45%, ou cerca de 46%, ou cerca de 47%, ou cerca de 48%, ou cerca de 49%, ou cerca de 50%, ou cerca de 51%, ou cerca de 52%, ou cerca de 53%, ou cerca de 54%, ou cerca de 55%, ou cerca de 56%, ou cerca de 57%, ou cerca de 58%, ou cerca de 59%, ou cerca de 60%, ou cerca de 61%, ou cerca de 62%, ou cerca de 63%, ou cerca de 64%, ou cerca de 65%, ou cerca de 66%%, ou cerca de 67%%, ou cerca de 68%%, ou cerca de 69%%, ou cerca de 70%%, ou cerca de 71%%, ou cerca de 72%%, ou cerca de 73%%, ou cerca de 74%%, ou cerca de 75%, ou cerca de 76%, ou cerca de 77%, ou cerca de 78%, ou cerca de 79%, ou cerca de 80%, ou cerca de 81%, ou cerca de 82%, ou cerca de 83%, ou cerca de 84%, ou cerca de 85%, ou cerca de 86%, ou cerca de 87%, ou cerca de 88%, ou cerca de 89%, ou cerca de 90%, ou cerca de 91%, ou cerca de 92%, ou cerca de 93%, ou cerca de 94%, ou cerca de 95%.
Propriedades mecânicas
[00406] Os preenchimentos de tecido aqui descritos, ou componentes dos mesmos, podem ser fornecidos em vários estados físicos, dependendo da terapia e do modo de entrega selecionados. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção são fluidos, por exemplo líquidos. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção são fluidos viscosos. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção são sólidos. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção são sólidos elásticos.
[00407] Uma série de propriedades reológicas pode ser avaliada ao examinar os preenchimentos de tecido aqui descritos, como mostrado na Tabela 17: Tabela 17 Termos de reologia usados para descrever preenchimentos de tecidos Elasticidade Capacidade de preenchimento de tecido para retornar à sua forma original após a deformação Módulo Elástico Medida da energia armazenada no material viscoelástico representado pelo símbolo G’ Viscosidade Características de fluxo do preenchimento de tecido (espessura do gel) Módulo viscoso Medida de energia dissipada em material viscoelástico representado por G”
Termos de reologia usados para descrever preenchimentos de tecidos Elasticidade Capacidade de preenchimento de tecido para retornar à sua forma original após a deformação Módulo complexo Resistência total à deformação do preenchimento de tecido determinada pela soma vetorial de G’ e G” (G*) Viscosidade Viscosidade calculada a partir da varredura de frequência representada complexa por n* Viscoelástico Descreve preenchimentos de tecido que possuem propriedades elásticas e viscosas Força de Força externa aplicada paralelamente ao preenchimento de tecido, cisalhamento colocando-se entre duas placas que torcem em direções opostas Afinamento por Diminuição da viscosidade do preenchimento de tecido com aumento cisalhamento da taxa de deformação
[00408] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção são materiais viscoelásticos, que exibem propriedades mecânicas de materiais elásticos e viscosos. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção podem ser descritos como géis. Os métodos para avaliar as propriedades mecânicas ou reológicas (por exemplo, propriedades visco-elásticas) de um material são conhecidos na técnica, tais como por exemplo, descrito na Publicação do Pedido de Patente US N° 2006/0105022 e Stocks et al., J. Drugs. Dermatol. (2011) 10: 974-980, cuja totalidade é aqui incorporada por referência. A viscoelasticidade de um material pode ser caracterizada usando análise mecânica dinâmica, por exemplo, aplicando um estresse oscilatório a uma amostra e medindo a tensão resultante.
Os materiais elásticos normalmente exibem estresse e tensão em fase, ou seja, a aplicação de estresse resulta em tensão imediata. Em materiais viscosos, a tensão é reduzida da aplicação do estresse em 90 graus. Nos materiais viscoelásticos, a diferença de fase entre tensão e estresse é maior que 0, mas menor que 90 graus. Em algumas formas de realização, a viscoelasticidade de materiais de SPF, da invenção pode ser caracterizado por meio do módulo dinâmico complexo G, que inclui o módulo de armazenamento G’ (também referido como o módulo de elasticidade), e o módulo de perda G” (também referido como módulo viscoso): G = G’+ iG”
𝜎0 𝜎0 onde i2 =-1, 𝐺 ′ = 𝑐𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑠 𝛿, e 𝐺” = 𝑠𝑖𝑛 𝑠𝑖𝑛 𝛿, 𝜀0 𝜀0 σ 0 representa a amplitude do stress, ε0 representa a amplitude da tensão, e δ é a mudança de fase.
[00409] O módulo elástico G’ e o módulo de perda G” são medidos submetendo uma amostra de gel de SPF a um estresse oscilatório em um reômetro de rotação ou cisalhamento. A amostra é colocada entre duas placas, uma fixa e outra capaz de girar ou oscilar com uma determinada frequência. Os valores do módulo elástico G’ e do módulo de perda G” são dependentes da frequência. As faixas de frequência usadas na medição do módulo elástico G’ e do módulo de perda G” estão tipicamente entre, mas não limitadas a, 0,1 a 10 Hz. Em algumas formas de realização, o módulo de elasticidade G’ e o módulo de perda G” são medidos a uma frequência oscilatória de 1 Hz.
[00410] Em algumas formas de realização, as propriedades reológicas dos preenchimentos de tecido aqui descritos, por exemplo, G’ e G”, podem ser medidas com um reômetro de placa paralela oilatória. Uma placa de vários diâmetros, por exemplo, 25 mm pode ser usada a uma altura de espaço entre placas de várias distâncias, por exemplo, 1 mm. As medições podem ser realizadas em várias temperaturas. Em algumas formas de realização, as medições são realizadas a uma temperatura constante de 25 °C. Em algumas formas de realização, uma medição inclui uma varredura de frequência entre dois valores de frequência, por exemplo, de 1 a 10 Hz, em um valor de tensão específico, por exemplo, em uma tensão constante de 2%. Em algumas formas de realização, as medições incluem um aumento logarítmico de frequência, seguido de uma varredura de tensão que pode ser, por exemplo, entre 1 a 300% a uma frequência constante, por exemplo, 5 Hz com um aumento logarítmico de tensão. Em algumas formas de realização, o módulo de armazenamento G’ e o módulo de perda G” podem ser obtidos a partir de uma varredura de tensão a um valor percentual de tensão específico, por exemplo, a 1% de tensão.
[00411] Em algumas formas de realização, o módulo complexo (isto é, a soma de G’ e i G”) fornece uma medida abrangente da resistência total à tensão de um preenchimento de tecido específico aqui descrito. O módulo complexo pode ser testado usando um reômetro, em que um preenchimento de tecido específico (por exemplo, um gel) pode ser espremido entre duas placas circulares paralelas e a tensão rotacional variável é fornecida girando uma placa em frequências variadas.
[00412] Em algumas formas de realização, as características de um preenchimento de tecido específico podem ser examinadas por meio da elasticidade percentual do preenchimento de tecido, em que a porcentagem de elasticidade é igual a 100 × G’/(G’ + G”).
[00413] Em algumas formas de realização, as características de um preenchimento de tecido específico podem ser examinadas por meio do coeficiente de recuperação desse preenchimento de tecido: 𝐶𝑜𝑒𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑅𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎çã𝑜 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑎 𝑣𝑖𝑠𝑐𝑜𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 𝑜𝑏𝑡𝑖𝑑𝑜 𝑑𝑢𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑜 𝑎𝑢𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑎 𝑓𝑟𝑒𝑞𝑢ê𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑣𝑎𝑟𝑟𝑒𝑑𝑢𝑟𝑎 = 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑎 𝑣𝑖𝑠𝑐𝑜𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 𝑜𝑏𝑡𝑖𝑑𝑜 𝑑𝑢𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑎 𝑑𝑖𝑚𝑖𝑛𝑢𝑖çã𝑜 𝑑𝑎 𝑓𝑟𝑒𝑞𝑢ê𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑣𝑎𝑟𝑟𝑒𝑑𝑢𝑟𝑎 onde: um coeficiente de recuperação de cerca de 1 significa que o preenchimento de tecido específico (por exemplo, um gel) reteve sua estrutura apesar das forças aplicadas; um coeficiente de recuperação maior que 1 significa que o preenchimento de tecido específico (por exemplo, um gel) sofreu uma quebra estrutural; e um coeficiente de recuperação inferior a 1 gel apresentou um desempenho estrutural aumentado.
[00414] Sem se limitar a qualquer teoria da invenção, o aumento de G’ resulta em um aumento relativo na capacidade de um material de resistir melhor a alterações de forma e o material pode ser descrito como mais firme, mais duro ou mais elástico que um material (por exemplo, preenchimento de tecido de gel) com um G’ mais baixo. Por conseguinte, o aumento de G’ pode resultar em um aumento correspondente na capacidade de um material de fornecer suporte estrutural e/ ou volumização.
[00415] Sem se limitar a qualquer teoria da invenção, o aumento de G” resulta em um material mais viscoso (por exemplo, gel) em comparação com um material com um G” menor. Além disso, há uma maior perda de energia como calor dissipado para materiais com maior G”. Em algumas formas de realização, G’ aumenta com um grau crescente de reticulação. Em algumas formas de realização, G” aumenta com um grau crescente de reticulação. Em algumas formas de realização, G’ e G” aumentam com um grau crescente de reticulação. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de cerca de menos de 50 Pa, a cerca de mais de 15000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 50 Pa a cerca de
500.000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 100 Pa a cerca de 500.000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 75 Pa a cerca de 150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 100 Pa a cerca de 250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido de a invenção tem um G’ de cerca de 150 Pa a cerca de 275 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 150 Pa a cerca de 500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 250 Pa a cerca de 750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 375 Pa a cerca de 675 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 425 Pa a cerca de 850 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 500 Pa a cerca de 1000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 650 Pa a cerca de 1050 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 750 Pa a cerca de 1250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 950 Pa a cerca de 1500 Pa.
[00416] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 50 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 225 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos de 250 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 275 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção possui um G’ de pelo menos 300 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 325 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 350 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 375 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção tem um G’ de pelo menos 400 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 425 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 450 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 475 Pa. Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 500 Pa.
[00417] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 525 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 550 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção tem um G’ de pelo menos 575 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de cerca de pelo menos 600 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 625 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 650 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 675 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 700 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 725 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 775 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 800 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 825 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 850 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 875 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 900 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 925 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 950 Pa. Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 975 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1000 Pa.
[00418] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1050 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1300 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1350 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1400 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1450 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 1500 Pa.
[00419] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 50 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 225 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 275 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 300 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 325 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 350 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 375 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 400 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 425 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecidos da invenção têm um G’ de no máximo 450 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 475 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de no máximo de 500 Pa.
[00420] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 525 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 550 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 575 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 600 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 625 Pa. Em alguns formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 650 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 675 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ G’ de no máximo 700 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 725 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 775 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção possuem e um G’ de no máximo de 800 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 825 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de no máximo de 850 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 875 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 900 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 925 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de no máximo de 950 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 975 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1000 Pa.
[00421] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1050 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1300 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1350 Pa. Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1400 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1450 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 1500 Pa.
[00422] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 50 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 225 Pa. Em algumas formas de realização, a preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 275 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 300 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 325 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 350 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 375 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 400 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 425 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 450 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 475 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 500 Pa.
[00423] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 525 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de cerca de 550 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 575 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 600
Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 625 Pa.
Em algumas formas de realização, a os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 650 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de cerca de 675 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 700 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 725
Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 750 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 775 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de cerca de 800 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 825 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 850
Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção tem um G’ de cerca de 875 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 900 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de cerca de 925 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 950 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 975 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1000 Pa.
[00424] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1050 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1300 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1350 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1400 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1450 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1500 Pa.
[00425] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 2000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 2250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 2500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 2750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 3000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 3250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 3500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 3750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 4000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 4250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 4500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 4750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecidos da invenção têm um G’ de pelo menos 5000 Pa.
[00426] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 5250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 5500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 5750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de pelo menos 6000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 6250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 6500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 6750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 7000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 7250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 7500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 7750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 8000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 8250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de pelo menos 8500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 8750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 9000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 9250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 9500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção tem um G’ de pelo menos 9750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 10000 Pa.
[00427] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 10500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 11000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 11500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 12000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 12500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 13000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 13500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 14000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 14500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de pelo menos 15000 Pa.
[00428] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 2000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 2250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 2500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 2750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 3000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 3250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 3500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 3750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 4000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção tem um G’ de no máximo 4250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 4500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 4750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecidos da invenção têm um G’ de no máximo 5000 Pa.
[00429] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 5250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 5500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 5750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 6000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 6250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 6500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 6750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 7000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 7250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 7500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 7750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 8000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 8250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 8500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 8750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 9000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 9250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 9500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 9750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 10000 Pa.
[00430] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 10500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 11000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 11500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 12000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 12500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 13000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 13500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 14000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 14500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de no máximo 15000 Pa.
[00431] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 2000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 2250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 2500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 2750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 3000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 3250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 3500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 3750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 4000 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 4250 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 4500 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 4750 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 5000 Pa.
[00432] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 5250 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de cerca de 5500 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 5750 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de
6000 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 6250 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 6500 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de cerca de 6750 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 7000 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de
7250 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 7500 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 7750 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G’ de cerca de 8000 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 8250 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de
8500 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 8750 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 9000 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção tem um
G’ de cerca de 9250 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 9500 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 9750 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 10000 Pa.
[00433] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1050 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1250 Pa. Em algumas formas de realização, a preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1300 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1350 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1400 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1450 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G’ de cerca de 1500 Pa.
[00434] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de menos de 5 Pa a cerca de 200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 5 Pa a cerca de 200 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 5 Pa a cerca de 25 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 15 Pa a cerca de 35 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 10 Pa a cerca de 50 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 15 Pa a cerca de 75 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 20 Pa a cerca de 85 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de cerca de 25 Pa a cerca de 100 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 35 Pa a cerca de 125 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 45 Pa a cerca de 115 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 75 Pa a cerca de 150 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 100 Pa a cerca de 175 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 115 Pa a cerca de 200 Pa.
[00435] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 5 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 10 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 15 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 20 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 25 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 30 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 35 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 40 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 45 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 50 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 55 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 60 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 65 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos
70 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 75 Pa.
Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 80 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de pelo menos 85 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 90 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos
95 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 100 Pa.
Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 105 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de pelo menos 110 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 115 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos
120 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 125 Pa.
Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 130 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de pelo menos 135 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 140 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos
145 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 150 Pa.
Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 155 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 160 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 165 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 170 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 175 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 180 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 185 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 190 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 195 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de pelo menos 200 Pa.
[00436] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 5 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 10 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 15 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 20 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 25 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 30 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 35 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 40 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 45 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 50 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 55 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 60 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 65 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo
70 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 75 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 80 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de no máximo 85 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 90 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo
95 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 100 Pa.
Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 105 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de no máximo 110 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 115 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo
120 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 125 Pa.
Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 130 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de no máximo 135 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 140 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo
145 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 150 Pa.
Em algumas formas de realização,
os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 155 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de no máximo 160 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 165 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 170 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 175 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 180 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 185 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 190 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 195 Pa. Em algumas formas de realização, a os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de no máximo 200 Pa.
[00437] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 5 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 10 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 15 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 20 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 25 Pa. Em algumas formas de realização, a preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 30 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 35 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 40 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 45 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 50 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 55 Pa. Em algumas formas de realização, os agentes de preenchimento de tecido da presente invenção tem um G” de cerca de 60 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 65 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 70
Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção tem um G” de cerca de 75 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 80 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de cerca de 85 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 90 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 95
Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 100 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 105 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de cerca de 110 Pa.
Em algumas formas de realização, a preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 115 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 120
Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 125 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 130 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de cerca de 135 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 140 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 145
Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 150 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 155 Pa.
Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um
G” de cerca de 160 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 165 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 170 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 175 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 180 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 185 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 190 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 195 Pa. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido da invenção têm um G” de cerca de 200 Pa.
[00438] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido aqui divulgado exibe viscosidade dinâmica.
Viscosidade é a resistência de um fluido ao cisalhamento ou fluxo causado por tensão de cisalhamento ou estresse de tensão. A viscosidade descreve a resistência interna de um fluido ao fluxo causada pelo atrito intermolecular exercido quando as camadas de fluido tentam deslizar uma pela outra e podem ser consideradas uma medida de atrito do fluido. Quanto menos viscoso o fluido, maior a sua facilidade de movimento (fluidez).
[00439] A viscosidade pode ser definida de duas maneiras; viscosidade dinâmica (μ; η é às vezes usada) ou viscosidade cinemática (v).
Viscosidade dinâmica, também conhecida como viscosidade absoluta ou complexa, é a força tangencial por unidade de área necessária para mover um plano horizontal em relação ao outro na velocidade da unidade, quando mantida uma distância unitária separada pelo fluido. A unidade física SI de viscosidade dinâmica é o Pascal x segundo (Pas), que é idêntico a Nm −2 s. A viscosidade dinâmica pode ser expressa como τ = μ dvx/ dz, onde τ = tensão de cisalhamento, μ = viscosidade dinâmica e dvx/ dz é o gradiente de velocidade ao longo do tempo. Por exemplo, se um fluido com uma viscosidade de um Pa.s for colocado entre duas placas e uma placa for empurrada para o lado com uma tensão de cisalhamento de um Pascal, ela se moverá a uma distância igual à espessura da camada entre as placas em um segundo. Viscosidade cinemática (v) é a razão entre viscosidade dinâmica e densidade, uma quantidade na qual nenhuma força está envolvida e é definida da seguinte forma: v = μ/ ρ, em que μ é a viscosidade dinâmica e ρ é a densidade (kg/ m3) A viscosidade cinemática é geralmente medida por um viscosímetro capilar de vidro, pois possui uma unidade SI de m2/ s. A viscosidade de um fluido é dependente de temperatura, e deste modo viscosidade dinâmica e cinemática são relatadas com referência à temperatura.
[00440] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento exibe uma viscosidade dinâmica de, por exemplo, pelo menos 10 Pa.s, pelo menos 20 Pa.s, pelo menos 30 Pa.s, pelo menos 40 Pa.s, pelo menos 50 Pa.s, pelo menos 60 Pa.s, pelo menos 70 Pa.s, pelo menos 80 Pa.s, pelo menos 90 Pa.s, pelo menos 100 Pa.s, pelo menos 125 Pa.s, pelo menos 150 Pa.s, pelo menos 175 Pa.s, pelo menos 200 Pas, pelo menos 225 Pa.s, pelo menos 250 Pa.s, pelo menos 275 Pa.s, pelo menos 300 Pa.s, pelo menos 400 Pa.s, em pelo menos 500 Pa.s, pelo menos 600 Pa.s, pelo menos 700 Pa.s, pelo menos 750 Pa.s, pelo menos 800 Pa.s, pelo menos 900 Pa.s, pelo menos 1.000 Pa.s, pelo menos 1.100 Pa.s, ou pelo menos 1.200 Pa.s. Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento exibe uma viscosidade dinâmica de, por exemplo, no máximo 10 Pa.s, no máximo 20 Pa.s, no máximo 30 Pa.s, no máximo 30 Pa.s, no máximo 40 Pa.s, no máximo 50 Pa.s, no máximo 60 Pa.s, no máximo 70 Pa.s, no máximo 80 Pa.s, no máximo 90 Pa.s, no máximo 100 Pa.s, no máximo 125 Pa.s, no máximo 150 Pa.s, no máximo 175 Pa.s, no máximo 200 Pa.s, no máximo 225 Pa.s, no máximo 250 Pa.s, no máximo, 275 Pa.s, no máximo, 300 Pa.s, no máximo, 400 Pa.s s, no máximo 500 Pa.s, no máximo 600 Pa.s, no máximo 700 Pa.s, no máximo 750 Pa.s, no máximo 800 Pa.s, no máximo 900 Pa.s, no máximo 1000 Pa.s s. Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento exibe uma viscosidade dinâmica de, por exemplo, cerca de 10 Pa.s a cerca de 100 Pa.s, cerca de 10 Pa.s a cerca de 150 Pa.s, cerca de 10 Pa.s a cerca de 250 Pa.s, cerca de 50 Pa.s a cerca de 100 Pa.s, cerca de 50 Pa.s a cerca de 150 Pa.s, cerca de 50 Pa.s a cerca de 250 Pa.s, cerca de 100 Pa.s a cerca de 500 Pa.s s, cerca de 100 Pa.s a cerca de 750 Pa.s, cerca de 100 Pa.s a cerca de 1.000 Pa.s, cerca de 100 Pa.s a cerca de 1.200 Pa.s, cerca de 300 Pa.s a cerca de 500 Pa.s, cerca de 300 Pa a cerca de 750 Pa, cerca de 300 Pa a cerca de 1.000 Pa ou cerca de 300 Pa a cerca de 1.200 Pa.
[00441] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente seus G’ e/ ou G” in vivo por pelo menos 1 dia, ou pelo menos 2 dias, ou pelo menos 3 dias, ou pelo menos 4 dias, ou pelo menos 5 dias, ou pelo menos 6 dias, ou pelo menos 1 semana, ou pelo menos 2 semanas, ou pelo menos 3 semanas, ou pelo menos 1 mês, ou pelo menos 2 meses, ou pelo menos 3 meses, ou pelo menos 4 meses, ou pelo menos 5 meses ou pelo menos 6 meses ou pelo menos 7 meses ou pelo menos 8 meses ou pelo menos 9 meses ou pelo menos 10 meses ou pelo menos 11 meses ou pelo menos 1 ano.
[00442] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente seus G’ e/ ou G” in vivo por no máximo 1 dia, ou no máximo 2 dias, ou no máximo 3 dias, ou no máximo 4 dias, ou no máximo 5 dias, ou no máximo 6 dias, ou no máximo 1 semana, ou no máximo 2 semanas, ou no máximo 3 semanas, ou no máximo 1 mês, ou no máximo 2 meses, ou no máximo 3 meses, ou no máximo 4 meses, ou no máximo
5 meses, ou no máximo 6 meses, ou no máximo 7 meses, ou no máximo 8 meses, ou no máximo 9 meses, ou no máximo 10 meses, ou no máximo 11 meses, ou no máximo 1 ano.
[00443] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente seus G’ e/ ou G” in vivo por cerca de 1 dia, ou cerca de 2 dias, ou cerca de 3 dias, ou cerca de 4 dias, ou cerca de 5 dias, ou cerca de 6 dias, ou cerca de 1 semana, ou cerca de 2 semanas, ou cerca de 3 semanas, ou cerca de 1 mês, ou cerca de 2 meses, ou cerca de 3 meses, ou cerca de 4 meses, ou cerca de 5 meses, ou cerca de 6 meses, ou cerca de 7 meses, ou cerca de 8 meses, ou cerca de 9 meses, ou cerca de 10 meses, ou cerca de 11 meses, ou cerca de 1 ano.
[00444] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente sua elasticidade in vivo por pelo menos 1 dia, ou pelo menos 2 dias, ou pelo menos 3 dias, ou pelo menos 4 dias, ou pelo menos 5 dias, ou pelo menos 6 dias, ou pelo menos 1 semana ou pelo menos 2 semanas ou pelo menos 3 semanas ou pelo menos 1 mês ou pelo menos 2 meses ou pelo menos 3 meses ou pelo menos 4 meses ou pelo menos 5 meses, ou pelo menos 6 meses ou pelo menos 7 meses ou pelo menos 8 meses ou pelo menos 9 meses ou pelo menos 10 meses ou pelo menos 11 meses ou pelo menos 1 ano.
[00445] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente sua elasticidade in vivo por no máximo 1 dia, ou no máximo 2 dias, ou no máximo 3 dias, ou no máximo 4 dias, ou no máximo 5 dias, ou no máximo 6 dias, ou no máximo 1 semana, ou no máximo 2 semanas, ou no máximo 3 semanas, ou no máximo 1 mês, ou no máximo 2 meses, ou no máximo 3 meses, ou no máximo 4 meses, ou no máximo 5 meses, ou no máximo 6 meses, ou no máximo 7 meses, ou no máximo 8 meses, ou no máximo 9 meses, ou no máximo 10 meses, ou no máximo 11 meses, ou no máximo 1 ano.
[00446] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente sua elasticidade in vivo por cerca de 1 dia, ou cerca de 2 dias, ou cerca de 3 dias, ou cerca de 4 dias, ou cerca de 5 dias, ou cerca de 6 dias, ou cerca de 1 semana, ou cerca de 2 semanas, ou cerca de 3 semanas, ou cerca de 1 mês, ou cerca de 2 meses, ou cerca de 3 meses, ou cerca de 4 meses, ou cerca de 5 meses, ou cerca de 6 meses, ou cerca de 7 meses, ou cerca de 8 meses, ou cerca de 9 meses, ou cerca de 10 meses, ou cerca de 11 meses, ou cerca de 1 ano.
[00447] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente sua viscosidade in vivo por pelo menos 1 dia, ou pelo menos 2 dias, ou pelo menos 3 dias, ou pelo menos 4 dias, ou pelo menos 5 dias, ou pelo menos 6 dias, ou pelo menos 1 semana, ou pelo menos 2 semanas, ou pelo menos 3 semanas, ou pelo menos 1 mês, ou pelo menos 2 meses, ou pelo menos 3 meses, ou pelo menos 4 meses, ou pelo menos 5 meses, ou pelo menos 6 meses, ou pelo menos 7 meses, ou pelo menos 8 meses, ou pelo menos 9 meses, ou pelo menos 10 meses, ou pelo menos 11 meses, ou pelo menos 1 ano.
[00448] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente sua viscosidade in vivo por no máximo 1 dia, ou no máximo 2 dias, ou no máximo 3 dias, ou no máximo 4 dias, ou no máximo 5 dias, ou no máximo 6 dias, ou no máximo 1 semana, ou no máximo 2 semanas, ou no máximo 3 semanas, ou no máximo 1 mês, ou no máximo 2 meses, ou no máximo 3 meses, ou no máximo 4 meses, ou no máximo 5 meses, ou no máximo 6 meses, ou no máximo 7 meses, ou no máximo 8 meses, ou no máximo 9 meses, ou no máximo 10 meses, ou no máximo 11 meses, ou no máximo 1 ano.
[00449] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente sua viscosidade in vivo por cerca de 1 dia, ou cerca de 2 dias, ou cerca de 3 dias, ou cerca de 4 dias, ou cerca de 5 dias, ou cerca de 6 dias, ou cerca de 1 semana, ou cerca de 2 semanas, ou cerca de 3 semanas, ou cerca de 1 mês, ou cerca de 2 meses, ou cerca de 3 meses, ou cerca de 4 meses, ou cerca de 5 meses, ou cerca de 6 meses, ou cerca de 7 meses, ou cerca de 8 meses, ou cerca de 9 meses, ou cerca de 10 meses, ou cerca de 11 meses, ou cerca de 1 ano.
[00450] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente seu volume in vivo por pelo menos 1 dia, ou pelo menos 2 dias, ou pelo menos 3 dias, ou pelo menos 4 dias, ou pelo menos 5 dias, ou pelo menos 6 dias, ou pelo menos 1 semana ou pelo menos 2 semanas ou pelo menos 3 semanas ou pelo menos 1 mês, ou pelo menos 2 meses, ou pelo menos 3 meses, ou pelo menos 4 meses, ou pelo menos 5 meses, ou pelo menos 6 meses, ou pelo menos 7 meses, ou pelo menos 8 meses, ou pelo menos 9 meses, ou pelo menos 10 meses, ou pelo menos 11 meses, ou pelo menos 1 ano.
[00451] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente seu volume in vivo por no máximo 1 dia, ou no máximo 2 dias, ou no máximo 3 dias, ou no máximo 4 dias, ou no máximo 5 dias, ou no máximo 6 dias, ou no máximo 1 semana, ou no máximo 2 semanas, ou no máximo 3 semanas, ou no máximo 1 mês, ou no máximo 2 meses, ou no máximo 3 meses, ou no máximo 4 meses, ou no máximo 5 meses, ou no máximo 6 meses, ou no máximo 7 meses, ou no máximo 8 meses, ou no máximo 9 meses, ou no máximo 10 meses, ou no máximo 11 meses, ou no máximo 1 ano.
[00452] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem manter substancialmente seu volume in vivo por cerca de 1 dia, ou cerca de 2 dias, ou cerca de 3 dias, ou cerca de 4 dias, ou cerca de 5 dias, ou cerca de 6 dias, ou cerca de 1 semana, ou cerca de 2 semanas, ou cerca de 3 semanas, ou cerca de 1 mês, ou cerca de 2 meses, ou cerca de 3 meses, ou cerca de 4 meses, ou cerca de 5 meses, ou cerca de 6 meses, ou cerca de 7 meses, ou cerca de 8 meses, ou cerca de 9 meses, ou cerca de 10 meses, ou cerca de 11 meses, ou cerca de 1 ano.
Métodos de Fabricação
[00453] Os preenchimentos de tecido aqui fornecidos podem ser preparados combinando um componente baseado em SPF com um componente baseado em HA com ou sem agentes adicionais. Em certas formas de realização, um ou ambos os SPF e HA podem ser reticulados antes da combinação. Em algumas formas de realização, os SPF e o HA podem ser combinados e, em seguida, reticulados com um agente de reticulação, conforme descrito aqui. Em algumas formas de realização, os SPF podem ser reticulados com um agente de reticulação e depois adicionado a um HA, que pode ou não ser reticulado, e então a combinação dos mesmos pode estar sujeita a reticulação adicional. Em algumas formas de realização, o HA pode ser reticulado com um agente de reticulação e depois adicionado a um SPF, que pode ou não ser reticulado, e então a combinação dos mesmos pode estar sujeita a reticulação adicional.
[00454] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser preparadas combinando um componente baseado em SPF e um componente baseado em HA e um agente adicional, como descrito acima. Em tais formas de realização, um ou ambos os SPF e HA podem ser reticulados antes da combinação. Em algumas formas de realização, os SPF e o HA podem ser combinados com o agente adicional e, em seguida, reticulados com um agente de reticulação, conforme descrito aqui. Em algumas formas de realização, o agente adicional pode ser adicionado após a combinação de SPF e HA.
[00455] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido aqui descrito pode incluir SPF e HA em uma razão de peso (SPF: HA) de 0,1:1 a 0,1:10 ou 0,1:1 a 0,1:100 ou 0,1:1000; 1:1 a 1:10, ou 1:1 a 1:100 ou 1:1 a 1:1000.
[00456] Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido aqui descrito pode incluir SPF e HA em uma razão de peso (HA:SPF) de 0,1:1 a 0,1:10 ou 0,1:1 a 0,1:100 ou 0,1:1000; 1:1 a 1:10, ou 1:1 a 1:100 ou 1:1 a 1:1000.
[00457] Em algumas formas de realização, uma combinação de HA/ SPF resultante (reticulada ou não reticulada) pode ser homogeneizada, tal como por meio de mistura mecânica de HA e/ ou SPF inicialmente reticulado.
[00458] Em algumas formas de realização, uma solução de SPF pode ser fornecida e reticulada com um agente de reticulação para produzir um SPF reticulado, ao qual o HA pode ser adicionado em sua forma reticulada, forma não reticulada ou uma mistura dos mesmos. A mistura resultante pode então ser homogeneizada e quaisquer agentes adicionais (por exemplo, lidocaína podem ser adicionados).
[00459] Em algumas formas de realização, uma solução de SPF pode ser fornecida e reticulada com um agente de reticulação na presença de HA para produzir uma composição de SPF-HA reticulado, à qual HA pode, ou não, ser adicionado em sua forma não reticulada. A mistura resultante pode então ser homogeneizada e quaisquer agentes adicionais (por exemplo, lidocaína) podem ser adicionados.
[00460] Em algumas formas de realização, as formulações específicas de SPF aqui fornecidas podem ser combinadas com HA, ou podem utilizar os procedimentos de reticulação, usando as preparações estabelecidas nas Patentes US Nos. 8,288,347 ou 8,450,475, ou a Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos Nos. 2006/0105022, 2016/0376382 ou
2017/0315828, cuja totalidade é aqui incorporada por referência.
[00461] Em algumas formas de realização, os métodos aqui descritos podem incluir uma etapa de esterilização em que o preenchimento de tecido ou uma porção dele é exposto, por exemplo, a temperaturas de 120 °C a cerca de 130 °C e pressões de cerca de 12 a cerca de 20 libras por polegada quadrada por um tempo de cerca de 1 a cerca de 15 minutos.
[00462] Em algumas formas de realização, os métodos aqui descritos podem incluir uma etapa de remoção de gases em que as soluções de SPF, HA ou SPF/ HA aqui descritas que são usadas na preparação dos preenchimentos de tecido resultantes são desgasificadas.
[00463] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser preparados de acordo com os métodos gerais descritos nos Exemplos 5 a 20. Nos métodos descritos aqui, a seda pode ser preparada em uma solução aquosa, uma solução aquosa/ álcool, em que o álcool pode ser etanol ou metanol, por exemplo. Nos métodos aqui descritos, qualquer um dos agentes de reticulação aqui descritos pode ser usado como aplicável para reticular SPF a SPF, SPF a HA ou HA a HA, como seria entendido por um técnico no assunto.
Métodos de Tratamento
[00464] Em uma forma de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser fornecidos em métodos de tratamento de uma ou mais condições em um paciente com necessidade do mesmo. Em algumas formas de realização, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um preenchimento de tecido pode ser entregue em um tecido de um paciente com necessidade do mesmo para tratar uma condição ou outra deficiência de tecido.
[00465] Como usado aqui, o termo “tratando”, “tratar” ou “tratamento” refere-se à redução ou eliminação em um paciente de um sintoma cosmético ou clínico de uma condição, como uma condição de tecido mole, ou atraso ou prevenção em um indivíduo o início de um sintoma cosmético ou clínico de uma condição.
[00466] Em algumas formas de realização, a condição tratada pelos preenchimentos de tecido aqui descritos pode incluir uma condição de tecido mole. As condições dos tecidos moles incluem, sem limitação, aumentos, reconstruções, doenças, distúrbios, defeitos ou imperfeições de uma parte do corpo, região ou área. Em um aspecto, uma condição de tecido mole tratada pelos preenchimentos de tecido divulgados inclui, sem limitação, um aumento facial, uma reconstrução facial, uma doença facial, um distúrbio facial, um defeito facial ou uma imperfeição facial. Em algumas formas de realização, uma condição de tecido mole tratada pelos preenchimentos de tecido aqui descritos inclui, sem limitação, desidratação da pele, falta de elasticidade da pele, rugosidade da pele, falta de rigidez da pele, uma linha ou marca de estria da pele, palidez da pele, um buraco dérmica, uma bochecha afundada, uma têmpora afundada, um lábio fino, um defeito na uretra, um defeito na pele, um defeito no seio, um defeito retro-orbital, uma dobra facial ou uma ruga. Em algumas formas de realização, uma condição de tecido mole tratada pelos preenchimentos de tecido aqui descritos inclui, sem limitação, imperfeição da mama, defeito, doença e/ ou distúrbio, como, por exemplo, um aumento da mama, uma reconstrução da mama, mastopexia, micromastia, hipoplasia torácica, síndrome da Polônia, defeitos devido a complicações nos implantes, como contração capsular e/ ou ruptura; uma imperfeição facial, defeito, doença ou desordem, tal como, por exemplo, um aumento facial, uma reconstrução facial, síndrome de Parry-Romberg, lúpus eritematoso profundo, buracos dérmicos, bochechas afundadas, têmpora afundada, lábios finos, imperfeições nasais ou defeitos, imperfeições ou defeitos retro-orbitais, uma dobra facial, linha e/ ou rugas como uma linha glabelar, uma linha nasolabial, uma linha perioral e/ ou uma linha de marionete e/ ou outras deformidades ou imperfeições de contorno da face; uma imperfeição, defeito, doença ou distúrbio no pescoço; uma imperfeição, defeito, doença e/ ou distúrbio da pele; outras imperfeições, defeitos, doenças e/ ou distúrbios dos tecidos moles, como, por exemplo, um aumento ou uma reconstrução do braço, ante-braço, mão, ombro, costas, tronco incluindo abdômen, nádegas, parte superior da perna, parte inferior da perna, incluindo panturrilhas, pé incluindo almofada de gordura plantar, olho, genitais ou outra parte do corpo, região ou área, ou uma doença ou distúrbio que afeta essas partes, regiões ou áreas do corpo; incontinência urinária, incontinência fecal, outras formas de incontinência; e doença do refluxo gastroesofágico (DRGE).
[00467] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser entregues a tecidos moles, incluindo, sem limitação, pele, tecidos dérmicos, tecidos subdérmicos, tecidos cutâneos, tecidos subcutâneos, tecido intradural, músculos, tendões, ligamentos, tecidos fibrosos, gordura, vasos sanguíneos e artérias, nervos e tecidos sinoviais (intradérmicos).
[00468] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser colocados diretamente em uma ferida para ajudar na cicatrização, fornecendo uma matriz biodegradável artificial juntamente com sinais de ligação celular, migração e proliferação. Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser revestidos em uma malha biodegradável ou outro material implantado, ou ele próprio pode ser formado em folhas ou outras estruturas, ou pode ser mantido em uma forma hidratada.
[00469] Em algumas formas de realização, a quantidade de uma composição usada com qualquer um dos métodos aqui divulgados será determinada com base na alteração e/ ou melhoria desejada, na redução e/ ou na eliminação de um sintoma da condição desejada, no efeito clínico e/ ou cosmético desejado pelo indivíduo e/ ou médico e pela parte ou região do corpo que está sendo tratada. A eficácia da administração da composição pode ser manifestada por uma ou mais das seguintes medidas clínicas e/ ou cosméticas: formato dos tecidos moles alterado e/ ou melhorado, tamanho do tecido mole alterado e/ ou melhorado, contorno do tecido mole alterado e/ ou melhorado, função tecidual alterada e/ ou melhorada, suporte ao crescimento do tecido e/ ou nova deposição de colágeno, enxerto sustentado do preenchimento de tecido, melhora da satisfação do paciente e/ ou qualidade de vida e diminuição do uso de material estranho implantável. Por exemplo, para procedimentos de aumento de mama, a eficácia das composições e métodos pode ser manifestada por uma ou mais das seguintes medidas clínicas e/ ou cosméticas: aumento do tamanho da mama, forma da mama alterada, contorno da mama alterado, enxerto sustentado, redução do risco contração capsular, menor taxa de formação de cistos liponecróticos, maior satisfação do paciente e/ ou qualidade de vida e menor uso de implante mamário.
[00470] Em algumas formas de realização, a eficácia dos preenchimentos de tecido e métodos no tratamento de um tecido mole facial pode ser manifestada por uma ou mais das seguintes medidas clínicas e/ ou cosméticas: tamanho, forma e/ ou contorno das características faciais aumentados, como tamanho, forma e/ ou contorno aumentado dos lábios, bochecha, têmpora ou região dos olhos; tamanho, forma e/ ou contorno alterados da característica facial, como tamanho, forma e/ ou contorno alterados do lábio, bochecha, têmpora ou região dos olhos; redução ou eliminação de rugas, dobras ou linhas na pele; resistência a rugas, dobras ou linhas na pele; reidratação da pele; elasticidade aumentada da pele; redução ou eliminação da aspereza da pele; aumento e/ ou melhora da firmeza da pele; redução ou eliminação de estrias ou marcas; aumento e/ ou melhoria do tom de pele, brilho, brilho e/ ou vivacidade; aumento e/ ou melhoria da cor da pele, redução ou eliminação da palidez da pele; enxerto sustentado da composição; efeitos colaterais diminuídos; maior satisfação do paciente e/ ou qualidade de vida.
[00471] Em algumas formas de realização, a invenção fornece preenchimentos de tecidos e métodos de tratamento envolvendo uma região dérmica. Como usado aqui, o termo “região dérmica” refere-se à região da pele que compreende a junção epidérmico-dérmica e a derme, incluindo a derme superficial (região papilar) e a derme profunda (região reticular). A pele é composta por três camadas primárias: a epiderme, que fornece impermeabilização e serve como barreira à infecção; a derme, que serve como local para os apêndices da pele; e a hipoderme (camada adiposa subcutânea).
A epiderme não contém vasos sanguíneos e é nutrida pela difusão da derme. O principal tipo de células que compõem a epiderme são queratinócitos, melanócitos, células de Langerhans, e células de Merkel.
[00472] A derme é a camada de pele abaixo da epiderme que consiste em tecido conjuntivo e protege o corpo do estresse e da tensão. A derme está firmemente conectada à epiderme por uma membrana basal.
Também abriga muitas terminações neuroceceptoras/ nervosas que fornecem a sensação de toque e calor. Ela contém folículos capilares, glândulas sudoríparas, glândulas sebáceas, glândulas apócrinas, vasos linfáticos e vasos sanguíneos. Os vasos sanguíneos da derme fornecem nutrição e remoção de resíduos de suas próprias células, bem como do estrato basal da epiderme. A derme é estruturalmente dividida em duas áreas: uma área superficial adjacente à epiderme, chamada região papilar, e uma área mais espessa e profunda conhecida como região reticular.
[00473] A região papilar é composta por tecido conjuntivo areolar solto. É nomeado por suas projeções em forma de dedo chamadas papilas que se estendem em direção à epiderme. As papilas fornecem à derme uma superfície “irregular” que interdigita com a epiderme, fortalecendo a conexão entre as duas camadas da pele. A região reticular encontra-se profundamente na região papilar e geralmente é muito mais espessa. É composta de tecido conjuntivo irregular denso e recebe seu nome da concentração densa de fibras colágenas, elásticas e reticulares que se entrelaçam. Essas fibras proteicas conferem à derme suas propriedades de resistência, extensibilidade e elasticidade. Também estão localizadas na região reticular as raízes do cabelo, glândulas sebáceas, glândulas sudoríparas, receptores, unhas e vasos sanguíneos. As marcas de estrias da gravidez estão, por exemplo, localizadas na derme.
[00474] A hipoderme encontra-se abaixo da derme. Seu objetivo é anexar a região dérmica da pele aos ossos e músculos subjacentes, além de suprir vasos sanguíneos e nervos. Ela consiste em tecido conjuntivo frouxo e elastina. Os principais tipos celulares são fibroblastos, macrófagos e adipócitos (a hipoderme contém 50% de gordura corporal). A gordura serve como preenchimento e isolamento para o corpo.
[00475] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento é administrado a uma região da pele de um indivíduo por injeção em uma região dérmica ou uma região hipodérmica. Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido aqui divulgado é administrado a uma região dérmica de um indivíduo por injeção em, por exemplo, uma região de junção epidérmica-dérmica, uma região papilar, uma região reticular ou qualquer combinação das mesmas.
[00476] Em algumas formas de realização, a invenção fornece métodos de tratamento de uma condição de tecido mole de um indivíduo, incluindo a administração de um ou mais preenchimentos de tecido aqui divulgados em um local da condição de tecido mole do indivíduo, em que a administração da composição melhora o tecido mole, tratando assim a condição dos tecidos moles. Em algumas formas de realização, uma condição de tecido mole é uma condição de tecido mamário, uma condição de tecido facial, uma condição de pescoço, uma condição de pele, uma condição de ante-braço, uma condição de parte inferior do braço, uma condição de mão, uma condição de ombro, uma condição de costas, uma condição de torso, uma condição abdominal, uma condição de nádega, uma condição de perna, uma condição de perna incluindo panturrilha, uma condição de pé incluindo condição da almofada plantar de gordura, uma condição de olho, uma condição genital ou uma condição que afeta outra parte do corpo, região ou área.
[00477] Em algumas formas de realização, a invenção fornece métodos de tratamento de uma condição da pele, incluindo a administração a um indivíduo que sofre de uma condição de pele de um ou mais preenchimentos de tecido divulgados aqui, em que a administração do preenchimento de tecido melhora a condição da pele, tratando assim a condição da pele. Em algumas formas de realização, uma condição da pele inclui desidratação da pele, e o método de tratamento inclui administrar a um indivíduo que sofre de desidratação da pele um ou mais preenchimentos de tecido divulgados aqui, em que a administração do preenchimento de tecido reidrata a pele, tratando assim a desidratação da pele. Em um outro aspecto destas formas de realização, um método de tratamento de uma falta de elasticidade da pele inclui a administração a um indivíduo que sofre de uma falta de elasticidade da pele de um preenchimento de tecido aqui descrito, em que a administração do preenchimento de tecido aumenta a elasticidade da pele, tratando assim a falta de elasticidade da pele. Em ainda outro aspecto destas formas de realização, um método de tratamento de aspereza da pele inclui a administração a um indivíduo que sofre de aspereza da pele de uma composição aqui descrita, em que a administração da composição diminui a aspereza da pele, desse modo tratando a aspereza da pele. Em algumas formas de realização, um método de tratamento de uma falta de rigidez cutânea inclui a administração a um indivíduo que sofre de uma falta de rigidez cutânea de um preenchimento de tecido divulgado aqui, em que a administração do preenchimento de tecido torna a pele mais rígida, tratando assim a falta de pele firmeza.
[00478] Em algumas formas de realização, a invenção fornece métodos de tratamento de uma linha ou marca de estria da pele, incluindo a administração a um indivíduo que sofre de uma linha ou marca de estria da pele de um ou mais preenchimentos de tecido divulgados aqui, em que a administração de um ou mais preenchimentos de tecido reduz ou elimina a linha ou marca de estria da pele, tratando assim uma linha ou marca de estria da pele. Em algumas formas de realização, um método de tratamento da palidez da pele inclui a administração a um indivíduo que sofre de palidez da pele de um preenchimento de tecido divulgado aqui, em que a administração do preenchimento de tecido aumenta o tom ou a luminosidade da pele, tratando desse modo a palidez da pele. Em algumas formas de realização, um método de tratamento de rugas da pele inclui a administração a um indivíduo que sofre de rugas da pele de um preenchimento de tecido divulgado aqui, em que a administração do preenchimento de tecido reduz ou elimina as rugas da pele, tratando assim as rugas da pele. Em ainda outro aspecto destas formas de realização, um método de tratamento de rugas da pele inclui a administração a um indivíduo de um preenchimento de tecido aqui descrito, em que a administração do preenchimento de tecido faz com que a pele se torne resistente a rugas da pele, desse modo tratando as rugas da pele.
[00479] Em algumas formas de realização, a invenção fornece administração de uma composição aqui divulgada, em que essa administração promove nova deposição ou formação de colágeno. Os preenchimentos de tecido aqui descritos podem suportar o crescimento de tecidos e nova deposição ou formação de colágeno.
[00480] Sem se limitar a qualquer teoria da invenção, o peso molecular dos SPFs usados na preparação dos preenchimentos de tecidos aqui descritos pode ser ajustado para fornecer uma resposta inflamatória leve em um tecido selecionado, a fim de desencadear a deposição ou formação de colágeno através da proliferação de tecido resultante e respostas de maturação que seguem a resposta inflamatória inicial. De fato, SPFs de maior peso molecular podem resultar em uma resposta inflamatória aumentada, enquanto SPFs de menor peso molecular podem resultar em pouca ou nenhuma resposta inflamatória.
[00481] Sem se limitar a qualquer teoria da invenção, os preenchimentos de tecido descritos neste documento fornecem o atributo inesperado de que uma resposta inflamatória resultante e, assim, a formação de colágeno através da resposta do tecido de proliferação e maturação, podem ser ajustadas porque as soluções de SPF aqui utilizadas têm polidispersidades bastante estreitas em vez de amplas. Em uma forma de realização, a administração de um preenchimento de tecido divulgado neste documento aumenta a nova deposição de colágeno.
[00482] Em algumas formas de realização, a administração de um tecido divulgado neste documento aumenta a deposição ou formação de colágeno em cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14%, cerca de 15%, cerca de 16%, cerca de 17%, cerca de 18%, cerca de 19%, cerca de 20%, cerca de 21%, cerca de 22%, cerca de 23%, cerca de 24%, cerca de 25%, cerca de 26%, cerca de 27%, cerca de 28%, cerca de 29%, cerca de 30%, cerca de 31%, cerca de 32%, cerca de 33%, cerca de 34%, cerca de 35%, cerca de 36%, cerca de 37%, cerca de 38%, cerca de 39%, cerca de 40%, cerca de 41%, cerca de 42%, cerca de 43%, cerca de 44%, cerca de 45%, cerca de 46%, cerca de 47%, cerca de 48%, cerca de 49%, cerca de 50%, cerca de 51%, cerca de 52%, cerca de 53%,
cerca de 54%, cerca de 55%, cerca de 56%, cerca de 57%, cerca de 58%, cerca de 59%, cerca de 60%, cerca de 61%, cerca de 62%, cerca de 63%, cerca de 64%, cerca de 65%, cerca de 66%, cerca de 67%, cerca de 68%, cerca de 69%, cerca de 70%, cerca de 71%, cerca de 72%, cerca de 73%, cerca de 74%, cerca de 75%, cerca de 76%, cerca de 77%, cerca de 78%, cerca de 79%, cerca de 80%, cerca de 81%, uma cerca de 82%, cerca de 83%, cerca de 84%, cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99%, ou cerca de 100%, em relação ao preenchimento de tecido igual ou semelhante compreendendo HA, mas sem SPF.
[00483] Em algumas formas de realização, a administração de um preenchimento de tecido aqui divulgada aumenta a nova deposição ou formação de colágeno em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 21%, pelo menos 22%, pelo menos 23%, pelo menos 24%, pelo menos 25%, pelo menos 26%, pelo menos 27%, pelo menos 28%, pelo menos 29%, pelo menos 30%, pelo menos 31%, pelo menos 32%, pelo menos 33%, pelo menos 34%, pelo menos 35%, pelo menos 36%, pelo menos 37%, pelo menos 38%, pelo menos 39%, pelo menos 40%, pelo menos 41%, pelo menos 42%, pelo menos 43%, pelo menos 44%, pelo menos 45%, pelo menos 46%, pelo menos 47%, pelo menos 48%, pelo menos 49%, pelo menos 50%, pelo menos 51%, pelo menos 52%, pelo menos 53%, pelo menos 54%, pelo menos 55%, pelo menos 56%, pelo menos 57%, pelo menos 58%, pelo menos 59%, pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, em pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, em pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, em pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 100%, pelo menos 125%, pelo menos 150%, pelo menos 175%, em pelo menos 200%, pelo menos 225%, pelo menos 250%, pelo menos 275%, ou pelo menos 300%, em relação ao preenchimento de tecido igual ou semelhante compreendendo HA, mas sem SPF.
[00484] Em algumas formas de realização, a administração de um preenchimento de tecido aqui divulgada aumenta a nova deposição ou formação de colágeno em no máximo 1%, no máximo 2%, no máximo 3%, no máximo 4%, no máximo 5%, no máximo 6%, no máximo 7%, no máximo 8%, no máximo 9%, no máximo 10%, no máximo 11%, no máximo 12%, no máximo 13%, no máximo 14%, no máximo 15%, no máximo 16%, no máximo 17%, no máximo 18%, no máximo 19%, no máximo 20%, no máximo 21%, no máximo 22%, no máximo 23%, no máximo 24%, no máximo 25%, no máximo 26%, no máximo 27%, no máximo 28%, no máximo 29%, no máximo 30%, no máximo 31%, no máximo 32%, no máximo 33%, no máximo 34%, no máximo 35%, no máximo 36%, no máximo 37%, no máximo 38%, no máximo 39%, no máximo 40%, no máximo 41%, no máximo 42%, no máximo 43%, no máximo 44%, no máximo 45%, no máximo 46%, no máximo 47%, no máximo 48%, no máximo 49%, no máximo 50%, no máximo 51%, no máximo 52%, no máximo 53%, no máximo 54%, no máximo 55%, no máximo 56%, no máximo 57%, no máximo 58%, no máximo 59%, no máximo 60%, no máximo 61%, no máximo 62%, no máximo 63%, no máximo 64%, no máximo 65%, no máximo 66%, no máximo 67%, no máximo 68%, no máximo 69%, no máximo 70%, no máximo 71%, no máximo 72%, no máximo 73%, no máximo 74%, no máximo 75%, no máximo 76%, no máximo 77%, no máximo 78%, no máximo 79%, no máximo 80%, no máximo 81%, no máximo 82%, no máximo 83%, no máximo 84%, no máximo 85%, no máximo 86%, no máximo 87%, no máximo 88%, no máximo 89%, no máximo 90%, no máximo 91%, no máximo 92%, no máximo 93%, no máximo 94%, no máximo 95%, no máximo 96%, no máximo 97%, no máximo 98%, no máximo 99%, no máximo 100%, no máximo 125%, no máximo 150%, no máximo 175%, no máximo 200%, no máximo 225%, no máximo 250%, no máximo 275%, ou no máximo 300%, em relação ao preenchimento de tecido igual ou semelhante, compreendendo HA, mas sem SPF.
[00485] Em algumas formas de realização, a administração de um preenchimento de tecido divulgada aqui aumenta a nova deposição ou formação de colágeno em cerca de 1% a cerca de 10%, cerca de 10% a cerca de 50%, cerca de 10% a cerca de 100%, cerca de 50% a cerca de 150%, cerca de 100% a cerca de 200%, cerca de 150% a cerca de 250%, cerca de 200% a cerca de 300%, cerca de 350% a cerca de 450%, cerca de 400% a cerca de 500%, cerca de 550% a cerca de 650%, cerca de 600% a cerca de 700%, em relação ao preenchimento de tecido igual ou semelhante compreendendo HA, mas sem SPF.
[00486] Em algumas formas de realização, a quantidade de um preenchimento de tecido usada com qualquer um dos métodos aqui divulgados será tipicamente uma quantidade terapeuticamente eficaz. Tal como aqui utilizado, o termo “quantidade terapeuticamente eficaz” é sinônimo de “quantidade eficaz”, “dose terapeuticamente eficaz” e/ ou “dose eficaz, “ e refere- se à quantidade de preenchimento de tecido que vai provocar a resposta biológica, cosmética, ou clínica esperada em um paciente em necessidade do mesmo. Como um exemplo não limitativo, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para atingir uma ou mais das medidas clínicas e/ ou cosméticas divulgadas neste documento. A quantidade eficaz apropriada a ser administrada para uma aplicação específica dos métodos divulgados pode ser determinada por aqueles versados na técnica, usando as orientações aqui fornecidas. Por exemplo, uma quantidade eficaz pode ser extrapolada de todo e qualquer ensaio in vitro e in vivo, como aqui descrito. Um técnico no assunto reconhecerá que a condição do indivíduo pode ser monitorada ao longo do curso da terapia e que a quantidade eficaz de uma composição aqui divulgada que é administrada pode ser ajustada em conformidade.
[00487] Em algumas formas de realização, a quantidade de um preenchimento de tecido administrada é de pelo menos 0,001 g, ou pelo menos 0,002 g, ou pelo menos 0,003 g, ou pelo menos 0,004 g, ou pelo menos 0,005 g, ou pelo menos 0,006 g, ou pelo menos 0,007 g, ou pelo menos 0,008 g, ou pelo menos 0,009 g, ou pelo menos 0,01 g, ou pelo menos 0,02 g, ou pelo menos 0,03 g, ou pelo menos 0,04 g, ou pelo menos 0,05 g, ou pelo menos 0,06 g, ou pelo menos 0,07 g, ou pelo menos 0,08 g, ou pelo menos 0,09 g, ou pelo menos 0,1 g, ou pelo menos 0,2 g, ou pelo menos 0,3 g, ou pelo menos 0,4 g, ou pelo menos 0,5 g, ou pelo menos 0,6 g, ou pelo menos 0,7 g, ou pelo menos 0,8 g, ou pelo menos 0,9 g, ou pelo menos 1 g, ou pelo menos 2 g, ou pelo menos 3 g, ou pelo menos 4 g, ou pelo menos 5 g, ou pelo menos 6 g, ou pelo menos 7 g, ou pelo menos 8 g, ou pelo menos 9 g, ou pelo menos 10 g, ou pelo menos 11 g, ou pelo menos 12 g, ou pelo menos 13 g, ou pelo menos 14 g, ou pelo menos 15 g, ou pelo menos 20 g, ou pelo menos 25 g, ou pelo menos 30 g, ou pelo menos 35 g, ou pelo menos 40 g, ou pelo menos 45 g, ou pelo menos 50 g, ou pelo menos 55 g, ou pelo menos 60 g, ou pelo menos 65 g, ou pelo menos 70 g, ou pelo menos 75 g, ou pelo menos 80 g, ou pelo menos 85 g, ou pelo menos 90 g, ou pelo menos 95 g, ou pelo menos 100 g.
[00488] Em algumas formas de realização, a quantidade de preenchimento de tecido administrada é no máximo 0,001 g, ou no máximo 0,002 g, ou no máximo 0,003 g, ou no máximo 0,004 g, ou no máximo 0,005 g, ou no máximo 0,006 g, ou no máximo 0,007 g, ou no máximo 0,008 g, ou no máximo 0,009 g, ou no máximo 0,01 g, ou no máximo 0,02 g, ou no máximo 0,03 g, ou no máximo 0,04 g, ou no máximo 0,05 g, ou no máximo 0,06 g, ou no máximo 0,07 g, ou no máximo 0,08 g, ou no máximo 0,09 g, ou no máximo 0,1 g, ou no máximo 0,2 g, ou no máximo 0,3 g, ou no máximo 0,4 g, ou no máximo 0,5 g, ou no máximo 0,6 g, ou no máximo 0,7 g, ou no máximo 0,8 g, ou no máximo 0,9 g, ou no máximo 1 g, ou no máximo 2 g, ou no máximo 3 g, ou no máximo 4 g, ou no máximo 5 g, ou no máximo 6 g, ou no máximo 7 g, ou no máximo 8 g, ou no máximo 9 g, ou no máximo 10 g, ou no máximo 11 g, ou no máximo 12 g, ou no máximo 13 g, ou no máximo 14 g, ou no máximo 15 g, ou no máximo 20 g, ou no máximo 25 g, ou no máximo 30 g, ou no máximo 35 g, ou no máximo 40 g, ou no máximo 45 g, ou no máximo 50 g, ou no máximo 55 g, ou no máximo 60 g, ou no máximo 65 g, ou no máximo 70 g, ou no máximo 75 g, ou no máximo 80 g, ou no máximo 85 g, ou no máximo 90 g, ou no máximo 95 g, ou no máximo 100 g.
[00489] Em algumas formas de realização, a quantidade de um preenchimento de tecido administrada é de cerca de 0,001 g, ou cerca de 0,002 g, ou cerca de 0,003 g, ou cerca de 0,004 g, ou cerca de 0,005 g, ou cerca de 0,006 g, ou cerca de 0,007 g, ou cerca de 0,008 g, ou cerca de 0,009 g, ou cerca de 0,01 g, ou cerca de 0,02 g, ou cerca de 0,03 g, ou cerca de 0,04 g, ou cerca de 0,05 g, ou cerca de 0,06 g, ou cerca de 0,07 g, ou cerca de 0,08 g, ou cerca de 0,09 g, ou cerca de 0,1 g, ou cerca de 0,2 g, ou cerca de 0,3 g, ou cerca de 0,4 g, ou cerca de 0,5 g, ou cerca de 0,6 g, ou cerca de 0,7 g, ou cerca de 0,8 g, ou cerca de 0,9 g, ou cerca de 1 g, ou cerca de 2 g, ou cerca de 3 g, ou cerca de 4 g, ou cerca de 5 g, ou cerca de 6 g, ou cerca de 7 g, ou cerca de 8 g, ou cerca de 9 g, ou cerca de 10 g, ou cerca de 11 g, ou cerca de 12 g, ou cerca de 13 g, ou cerca de 14 g, ou cerca de 15 g, ou cerca de 20 g, ou cerca de 25 g, ou cerca de 30 g, ou cerca de 35 g, ou cerca de 40 g, ou cerca de 45 g, ou cerca de 50 g, ou cerca de 55 g, ou cerca de 60 g, ou cerca de 65 g, ou cerca de 70 g, ou cerca de 75 g, ou cerca de 80 g, ou cerca de 85 g, ou cerca de 90 g, ou cerca de 95 g, ou cerca de 100 g.
[00490] Em algumas formas de realização, a quantidade de preenchimento de tecido administrada é de 0,001 g a 0,01 g, ou 0,01 g a 0,1 g, ou 0,1 g a 1 g, ou 1 g a 10 g, ou 10 g a 20 g, ou 20 g a 30 g, ou 30 g a 40 g, ou 40 g a 50 g, ou 50 g a 60 g, ou 60 g a 70 g, ou 70 g a 80 g, ou 80 g a 90 g, ou 90 g a 100 g.
[00491] Em algumas formas de realização, o volume de um preenchimento de tecido administrado é de pelo menos 0,01 ml, ou pelo menos 0,02 ml, ou pelo menos 0,03 ml, ou pelo menos 0,04 ml, ou pelo menos 0,05 ml, ou pelo menos 0,06 ml, ou pelo menos 0,07 ml, ou pelo menos 0,08 ml, ou pelo menos 0,09 ml, ou pelo menos 0,10 ml, ou pelo menos 0,15 ml, ou pelo menos 0,20 ml, ou pelo menos 0,25 ml, ou pelo menos 0,30 ml, ou pelo menos 0,35 ml, ou pelo menos 0,40 ml, ou pelo menos 0,45 ml, ou pelo menos 0,50 ml, ou pelo menos 0,55 ml, ou pelo menos 0,60 ml, ou pelo menos 0,65 ml, ou pelo menos 0,70 ml, ou pelo menos 0,75 ml, ou pelo menos 0,80 ml, ou pelo menos 0,85 ml, ou pelo menos 0,90 ml, ou pelo menos 0,95 ml, ou pelo menos 1 ml, ou pelo menos 2 ml, ou pelo menos 3 ml, ou pelo menos 4 ml, ou pelo menos 5 ml, ou pelo menos 6 ml, ou pelo menos 7 ml, ou pelo menos 8 ml, ou pelo menos 9 ml, ou pelo menos 10 ml, ou pelo menos 15 ml, ou pelo menos 20 ml, ou pelo menos 25 ml, ou pelo menos 30 ml, ou pelo menos 35 ml, ou pelo menos 40 ml, ou pelo menos 45 ml, ou pelo menos 50 ml, ou pelo menos 55 ml, ou pelo menos 60 ml ml, ou pelo menos 65 ml, ou pelo menos 70 ml, ou pelo menos 75 ml, ou pelo menos 80 ml, ou pelo menos 85 ml, ou pelo menos 90 ml, ou pelo menos 95 ml,
ou pelo menos 100 ml, ou pelo menos 110 ml, ou pelo menos 120 ml, ou pelo menos 130 ml, ou pelo menos 140 ml, ou pelo menos 150 ml, ou pelo menos 160 ml, ou pelo menos 170 ml, ou pelo menos 180 ml, ou pelo menos 190 ml, ou pelo menos 200 ml, ou pelo menos 210 ml, ou pelo menos 220 ml, ou pelo menos 230 ml, ou pelo menos 240 ml, ou pelo menos 250 ml, ou pelo menos 260 ml, ou pelo menos 270 ml, ou pelo menos 280 ml, ou pelo menos 290 ml, ou pelo menos 300 ml, ou pelo menos 325, ou pelo menos 350 ml, ou pelo menos 375 ml, ou pelo menos 400 ml, ou pelo menos 425 ml, ou pelo menos 450 ml, ou pelo menos 475 ml, ou pelo menos 500 ml, ou pelo menos 525 ml, ou pelo menos 550 ml, ou pelo menos 575 ml, ou pelo menos 600 ml, ou pelo menos 625 ml, ou pelo menos 650 ml, ou pelo menos 675 ml, ou pelo menos 700 ml, ou pelo menos 725 ml, ou pelo menos 750 ml, ou pelo menos 775 ml, ou pelo menos 800 ml, ou pelo menos 825 ml, ou pelo menos 850 ml, ou pelo menos 875 ml, ou pelo menos 900 ml, ou pelo menos 925 ml, ou pelo menos 950 ml, ou pelo menos 975 ml, ou pelo menos 1000 ml.
[00492] Em algumas formas de realização, o volume de um preenchimento de tecido administrada é de no máximo 0,01 ml, ou no máximo 0,02 ml, ou no máximo 0,03 ml, ou no máximo 0,04 ml, ou no máximo 0,05 ml, ou no máximo 0,06 ml, ou no máximo 0,07 ml ou no máximo 0,08 ml ou no máximo 0,09 ml ou no máximo 0,10 ml ou no máximo 0,15 ml ou no máximo 0,20 ml, ou no máximo 0,25 ml, ou no máximo 0,30 ml, ou no máximo 0,35 ml, ou no máximo 0,40 ml, ou no máximo 0,45 ml, ou no máximo 0,50 ml, ou no máximo 0,55 ml, ou no máximo 0,60 ml, ou no máximo 0,65 ml, ou no máximo 0,70 ml, ou no máximo 0,75 ml, ou no máximo 0,80 ml, ou no máximo 0,85 ml, ou no máximo 0,90 ml, ou no máximo 0,95 ml, ou no máximo 1 ml, ou no máximo 2 ml, ou no máximo 3 ml, ou no máximo 4 ml, ou no máximo 5 ml, ou no máximo 6 ml, ou no máximo 7 ml, ou no máximo 8 ml, ou no máximo 9 ml, ou no máximo 10 ml, ou no máximo 15 ml, ou no máximo 20 ml, ou no máximo 25 ml, ou no máximo
30 ml, ou no máximo 35 ml, ou no máximo 40 ml, ou no máximo 45 ml, ou no máximo 50 ml, ou no máximo 55 ml, ou no máximo 60 ml, ou no máximo 65 ml, ou no máximo 70 ml, ou no máximo 75 ml, ou no máximo 80 ml, ou no máximo 85 ml, ou no máximo 90 ml, ou no máximo 95 ml, ou no máximo 100 ml, ou no máximo 110 ml, ou no máximo 120 ml, ou no máximo 130 ml, ou no máximo 140 ml, ou no máximo 150 ml, ou no máximo 160 ml, ou no máximo 170 ml, ou no máximo 180 ml, ou no máximo 190 ml, ou no máximo 200 ml, ou no máximo 210 ml, ou no máximo 220 ml, ou no máximo 230 ml, ou no máximo 240 ml, ou no máximo 250 ml, ou no máximo 260 ml, ou no máximo 270 ml, ou no máximo 280 ml, ou no máximo 290 ml, ou no máximo 300 ml, no máximo 325 ml, ou no máximo 375 ml, ou no máximo 400 ml, ou no máximo 425 ml, ou no máximo 450 ml, ou no máximo 475 ml, ou no máximo 500 ml, ou no máximo 525 ml, ou no máximo 550 ml, ou no máximo 575 ml, ou no máximo 600 ml, ou no máximo 625 ml, ou no máximo 650 ml, ou no máximo 675 ml, ou no máximo 700 ml, ou no máximo 725 ml, ou no máximo 750 ml, ou no máximo 775 ml, ou no máximo 800 ml, ou no máximo 825 ml, ou no máximo 850 ml, ou no máximo 875 ml, ou no máximo 900 ml, ou no máximo 925 ml, ou no máximo 950 ml, ou no máximo 975 ml, ou no máximo 1000 ml.
[00493] Em algumas formas de realização, o volume de um preenchimento de tecido administrado é de cerca de 0,01 ml, ou cerca de 0,02 ml, ou cerca de 0,03 ml, ou cerca de 0,04 ml, ou cerca de 0,05 ml, ou cerca de 0,06 ml, ou cerca de 0,07 ml, ou cerca de 0,08 ml, ou cerca de 0,09 ml, ou cerca de 0,10 ml, ou cerca de 0,15 ml, ou cerca de 0,20 ml, ou cerca de 0,25 ml, ou cerca de 0,30 ml, ou cerca de 0,35 ml, ou cerca de 0,40 ml, ou cerca de 0,45 ml, ou cerca de 0,50 ml, ou cerca de 0,55 ml, ou cerca de 0,60 ml, ou cerca de 0,65 ml, ou cerca de 0,70 ml, ou cerca de 0,75 ml, ou cerca de 0,80 ml, ou cerca de 0,85 ml, ou cerca de 0,90 ml, ou cerca de 0,95 ml, ou cerca de 1 ml, ou cerca de 2 ml, ou cerca de 3 ml, ou cerca de 4 ml, ou cerca de 5 ml, ou cerca de 6 ml, ou cerca de 7 ml, ou cerca de 8 ml, ou cerca de 9 ml, ou cerca de 10 ml, ou cerca de 11 ml, ou cerca de 12 ml, ou cerca de 13 ml, ou cerca de 14 ml, ou cerca de
15 ml, ou cerca de 16 ml, ou cerca de 17 ml, ou cerca de 18 ml, ou cerca de 19 ml, ou cerca de 20 ml, ou cerca de 21 ml, ou cerca de 22 ml, ou cerca de 23 ml,
ou cerca de 24 ml, ou cerca de 25 ml, ou cerca de 26 ml, ou cerca de 27 ml, ou cerca de 28 ml, ou cerca de 30 ml, ou cerca de 35 ml, ou cerca de 36 ml, ou cerca de 37 ml, ou cerca de 38 ml, ou cerca de 39 ml, ou cerca de 40 ml, ou cerca de 41 ml, ou cerca de 42 ml, ou cerca de 43 ml, ou cerca de 44 ml, ou cerca de 45 ml, ou cerca de 46 ml, ou cerca de 47 ml, ou cerca de 48 ml, ou cerca de 49 ml, ou cerca de 50 ml, ou cerca de 51 ml, ou cerca de 52 ml, ou cerca de 53 ml, ou cerca de 54 ml, ou cerca de 55 ml, ou cerca de 56 ml, ou cerca de 57 ml, ou cerca de 58 ml, ou cerca de 59 ml, ou cerca de 60 ml, ou cerca de 61 ml, ou cerca de 62 ml, ou cerca de 63 ml, ou cerca de 64 ml, ou cerca de 65 ml, ou cerca de 66 ml, ou cerca de 67 ml, ou cerca de 68 ml, ou cerca de 69 ml, ou cerca de 70 ml, ou cerca de 71 ml, ou cerca de 72 ml, ou cerca de 73 ml, ou cerca de 74 ml, ou cerca de 75 ml, ou cerca de 76 ml, ou cerca de 77 ml, ou cerca de 78 ml, ou cerca de 79 ml, ou cerca de 80 ml, ou cerca de 81 ml, ou cerca de 82 ml, ou cerca de 83 ml, ou cerca de 84 ml, ou cerca de 85 ml, ou cerca de 86 ml, ou cerca de 87 ml, ou cerca de 88 ml, ou cerca de 89 ml, ou cerca de 90 ml, ou cerca de 91 ml, ou cerca de 92 ml, ou cerca de 93 ml, ou cerca de 94 ml, ou cerca de 95 ml, ou cerca de 96 ml, ou cerca de 97 ml, ou cerca de 98 ml, ou cerca de 99 ml, ou cerca de 100 ml, ou cerca de 110 ml, ou cerca de 120 ml, ou cerca de 130 ml, ou cerca de 140 ml,
ou cerca de 150 ml, ou cerca de 160 ml, ou cerca de 170 ml, ou cerca de 180 ml,
ou cerca de 190 ml, ou cerca de 200 ml, ou cerca de 210 ml, ou cerca de 220 ml,
ou cerca de 230 ml, ou cerca de 240 ml, ou cerca de 250 ml, ou cerca de 260 ml, ou cerca de cerca de 270 ml, ou cerca de 280 ml, ou cerca de 290 ml, ou cerca de 300 ml, ou cerca de 310 ml, ou cerca de 320 ml, ou cerca de 330 ml, ou cerca de 340 ml, ou cerca de 350 ml, ou cerca de 360 ml, ou cerca de 370 ml, ou cerca de 380 ml, ou cerca de 390 ml, ou cerca de 400 ml, ou cerca de 410 ml, ou cerca de 420 ml, ou cerca de 430 ml, ou cerca de 440 ml, ou cerca de 450 ml, ou cerca de 460 ml, ou cerca de 470 ml, ou cerca de 480 ml, ou cerca de 490 ml, ou cerca de 500 ml, ou cerca de 510 ml, ou cerca de 520 ml, ou cerca de 530 ml, ou cerca de 540 ml, ou cerca de 550 ml, ou cerca de 560 ml, ou cerca de 570 ml, ou cerca de 580 ml, ou cerca de 590 ml, ou cerca de 600 ml, ou cerca de 610 ml, ou cerca de 620 ml, ou cerca de 630 ml, ou cerca de 640 ml, ou cerca de 650 ml, ou cerca de 660 ml, ou cerca de 670 ml, ou cerca de 680 ml, ou cerca de 690 ml, ou cerca de 700 ml, ou cerca de 710 ml, ou cerca de 720 ml, ou cerca de 730 ml, ou cerca de 740 ml, ou cerca de 750 ml, ou cerca de 760 ml, ou cerca de 770 ml, ou cerca de 780 ml, ou cerca de 790 ml, ou cerca de 800 ml, ou cerca de 810 ml, ou cerca de 820 ml, ou cerca de 830 ml, ou cerca de 840 ml, ou cerca de 850 ml, ou cerca de 860 ml, ou cerca de 870 ml, ou cerca de 880 ml, ou cerca de 890 ml, ou cerca de 900 ml, ou cerca de 910 ml, ou cerca de 920 ml, ou cerca de 930 ml, ou cerca de 940 ml, ou cerca de 950 ml, ou cerca de 960 ml, ou cerca de 970 ml, ou cerca de 980 ml, ou cerca de 990 ml, ou cerca de 1000 ml.
[00494] Em algumas formas de realização, o volume de um preenchimento de tecido administrado é de 0,01 ml a 0,10 ml, ou 0,10 ml a 1 ml, ou 1 ml a 10 ml, ou 10 ml a 100 ml, ou 50 ml a 100 ml, ou 50 ml a 100 ml, ou 100 ml a 150 ml, ou 150 ml a 200 ml, ou 200 ml a 250 ml, ou 250 ml a 300 ml, ou 300 ml a 350 ml, ou 350 ml a 400 ml, ou 400 ml a 450 ml, ou 450 ml a 500 ml, ou 450 ml a 500 ml, ou 500 ml a 550 ml, ou 550 ml a 600 ml, ou 600 ml a 650 ml, ou 650 ml a 700 ml, ou 700 ml a 750 ml, ou 700 ml a 750 ml, ou 750 ml a 800 ml, ou 800 ml a 850 ml, ou 850 ml a 900 ml, ou 900 ml a 950 ml, ou 950 ml a 1000 ml, ou 1 ml a 25 ml, ou 1 ml a 50 ml, ou 1 ml a 75 ml, ou 1 ml a 100 ml, ou 10 ml a 25 ml, ou 10 ml a 50 ml, ou 10 ml a 75 ml, ou 100 ml a 250 ml, ou 100 ml a 500 ml, ou 100 ml a 750 ml, ou 100 ml a 750 ml, ou 100 ml a 1000 ml.
[00495] Em algumas formas de realização, a invenção fornece a administração de um preenchimento de tecido aqui divulgado. Como usado aqui, o termo “administração” significa qualquer mecanismo de entrega que forneça um preenchimento de tecido aqui divulgado a um indivíduo que potencialmente resulte em um resultado clínico, terapeuticamente ou experimentalmente benéfico. O mecanismo de entrega real usado para administrar um preenchimento de tecido a um indivíduo pode ser determinado por técnico no assunto levando em consideração fatores, incluindo, sem limitação, o tipo de condição, a localização da condição, a causa da a condição, a gravidade da condição, o grau de alívio desejado, a duração do alívio desejado, o preenchimento de tecido específico usado, a taxa de biodegradabilidade, a bioabsorvibilidade, a biossorvibilidade e similares, do preenchimento de tecido específico usado, a natureza dos componentes incluídos no preenchimento de tecido específico usado, a via de administração específica, as características particulares, histórico e fatores de risco do paciente, tais como, por exemplo, idade, peso, estado geral de saúde e similares, ou qualquer combinação dos mesmos. Em um aspecto desta forma de realização, um preenchimento de tecido aqui divulgado é administrado a uma região de um paciente por injeção, em que a região pode estar na pele, tecidos dérmicos, tecidos subdérmicos, tecidos cutâneos, tecidos subcutâneos, tecido intradural, músculos, tendões, ligamentos, tecidos fibrosos, gordura, vasos sanguíneos e artérias, nervos ou tecidos sinoviais (intradérmicos).
[00496] Em algumas formas de realização, a via de administração de um preenchimento de tecido administrada a um paciente será determinada com base no efeito cosmético e/ ou clínico desejado pelo paciente e/ ou médico e pela parte ou região do corpo a ser tratada. Um preenchimento de tecido aqui divulgado pode ser administrado por qualquer meio conhecido dos técnicos no assunto, incluindo, sem limitação, seringa com agulha, cateter, topicamente ou por implantação cirúrgica direta. O preenchimento de tecido aqui divulgado pode ser administrado em uma região da pele, como, por exemplo, uma região dérmica ou uma região hipodérmica. Além disso, um preenchimento de tecido aqui divulgado pode ser administrado uma vez, duas vezes, três vezes ou várias vezes, conforme exigido pela terapia específica.
[00497] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento é injetável. Como usado aqui, o termo “injetável” refere-se a um material de tecido com as propriedades necessárias para administrar o preenchimento de tecido em uma região da pele de um indivíduo usando um dispositivo de injeção com uma agulha como, por exemplo, uma agulha fina. Conforme usado aqui, o termo “agulha fina” refere-se a uma agulha com calibre de 27 ou menor. Em algumas formas de realização, uma agulha fina pode ser uma agulha de calibre de 27 a 30. A injetabilidade de um preenchimento de tecido divulgado neste documento pode ser realizada variando certos parâmetros dos preenchimentos de tecido aqui divulgados, ajustando, por exemplo, o grau de reticulação, variando os parâmetros G’ e/ ou G”, adicionando polímeros não reticulados (por exemplo, SPF ou HA) e similares.
[00498] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento é injetável através de uma agulha fina. Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento é injetável através de uma agulha de, por exemplo, calibre 20 ou, calibre 21, ou calibre 22, ou calibre 23, ou calibre 24, ou calibre 25, ou calibre 26, ou calibre 27, ou calibre 28, ou calibre 29, ou calibre 30, ou calibre 31, ou calibre 32, ou calibre 33, ou calibre 34. Em algumas formas de realização, o preenchimento de tecido aqui descrito é injetável através de uma agulha de calibre 20, calibre 21, calibre 22 ou calibre 23, calibre 24, calibre 25,
calibre 26, calibre 27, ou calibre 28, ou calibre 29 ou calibre 30.
[00499] Em algumas formas de realização, um preenchimento de tecido divulgado neste documento é injetável com uma seringa com um volume de cerca de 0,8 a cerca de 1,0 ml.
[00500] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser entregues a espaços vazios em ou sobre tecidos moles com a finalidade de, por exemplo, aumento de tecido (por exemplo, aumento de mama ou nádega). Ao distribuir os preenchimentos de tecido aqui descritos para esses espaços vazios, podem ser utilizados anéis e agulhas maiores (por exemplo, agulhas com calibre de 27 ou maior).
[00501] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser aplicados a uma ferida sem o uso de uma agulha, a fim de revestir a ferida ou um dispositivo médico próximo à ferida.
[00502] Em algumas formas de realização, os preenchimentos de tecido aqui descritos podem ser aplicados a uma superfície de um dispositivo médico.
[00503] Os exemplos a seguir são apresentados de modo a fornecer aos técnicos no assunto uma revelação e descrição completas de como fazer e usar as formas de realização descritas e não se destinam a limitar o escopo daquilo que os inventores consideram sua invenção nem eles pretendem representar que os experimentos abaixo são todos ou os únicos experimentos realizados. Esforços foram feitos para garantir a precisão em relação aos números utilizados (por exemplo, quantidades, temperatura etc.), mas alguns erros e desvios experimentais devem ser considerados. Salvo indicação em contrário, as partes são partes em peso, o peso molecular é o peso ponderal molecular médio, a temperatura é em graus centígrados e a pressão é na ou próxima da atmosférica
EXEMPLO MATERIAL E MÉTODO MATERIAIS
[00504] O sal de sódio de ácido hialurônico (HA) (peso molecular 750 kDa - 1000 k Da) foi adquirido da Lifecore Biomedical (Chaska, MN). O gel de HA injetável vendido sob a marca registrada Juvéderm ® Ultra Plus XC (um gel de ácido hialurônico incolor que contém uma pequena quantidade de anestésico local (lidocaína)) foi adquirido da Allergan (Irvine, CA). A fibroína de seda foi processada no local (Medford, MA). Éter diglicidílico de poli(etilenoglicol) (PEGDE) e hialuronidase (Hylenex™) foram adquiridos da Sigma-Aldrich (St Louis, MO). O cloridrato de lidocaína foi adquirido da Spectrum Chemical (New Brunswick, NJ). Soluções de seda de várias concentrações foram preparadas de acordo com os métodos descritos acima. Todos os outros produtos químicos e reagentes foram adquiridos da VWR (Radnor, PA) e usados conforme recebidos.
MÉTODO GERAL PARA PREPARAÇÃO DE HIDROGEL DE SEDA-HA
[00505] O ácido hialurônico foi dissolvido em solução de hidróxido de sódio a 0,1 N contendo fragmentos à base de proteína de fibroína de seda e agente de reticulação em quantidades que variaram para diferentes formulações de hidrogel. As misturas foram mantidas a 55 °C por 75 minutos para permitir que as reações de reticulação fossem completadas. Os hidrogéis resultantes foram então resfriados à temperatura ambiente, ajustados para pH 7,4 com ácido clorídrico concentrado e, em seguida, neutralizados e diluídos durante a noite com 1x PBS. Os hidrogéis foram então dialisados contra 1x PBS durante 3 dias para remover o reticulador livre residual. O cloridrato de lidocaína foi adicionado aos hidrogéis purificados a 0,3% p/ p. A concentração total final de fragmentos à base de proteína de fibroína de seda e HA foi ajustada com 1x PBS a 26 mg/ ml para cada hidrogel. Os hidrogéis de seda-HA preparados foram alíquotas em seringas de 1 ml, prontas para esterilização e caracterização.
Exemplo 1: Avaliação Tyndall de géis
[00506] A fim de apoiar ainda mais as observações visuais e realizar análises comparativas de desempenho de preenchimentos dérmicos, é realizada uma análise quantitativa do efeito Tyndall. Com base no entendimento científico existente sobre dispersão da luz e interação da luz com a pele, duas abordagens distintas baseadas em (a) colorimetria e (b) espectroscopia são empregadas para quantificar o efeito Tyndall na pele. Com base nessas técnicas, três parâmetros quantitativos distintos (descritos abaixo) são definidos para medir o efeito Tyndall in vivo.
Pontuação visual do efeito Tyndall:
[00507] A escala tem uma faixa de 1 a 5, com incrementos de 0,5. Uma pontuação de 1 é dado a locais de injeção com o tom de pele normal e nenhuma descoloração azul. Uma pontuação máxima de 5 é atribuída à descoloração azul grossa e pronunciada. Três observadores independentes são treinados na balança antes de serem cegados para pontuar as amostras dos testes.
[00508] Componente azul de pele cor – “b”: um cromâmetro é usado para quantificar o componente de cor azul da luz remitido dos locais da pele injetados com os vários agentes de preenchimento. Este é obtido utilizando o componente “b” da escala de cor L-a-b.
[00509] “% de Luz Azul” remitido da pele: um espectrofotômetro portátil é utilizada para quantificar a% de luz azul remetida da pele na faixa de luz visível total. Isto é conseguido por integração da área sob o espectro de luz visível entre 400-490 nm e normalizando-o pela área total sob o espectro (400-700 nm).
[00510] Os géis da presente divulgação e comercialmente disponíveis são injetados intradermicamente através de uma agulha apropriada utilizando técnica linear de costura dentro das coxas de ratos de dois meses de idade sem pêlo. Os géis são implantados superficialmente com procedimentos clínicos que imitam linha fina. Os testes para Tyndall são realizados 48 horas após a implantação do gel. Antes de realizar os testes de Tyndall, os animais são sacrificados humanamente para melhorar o contraste do efeito Tyndall.
[00511] Uma pontuação visual de 1-5 com incrementos de 0,5, é usada para marcar os locais de injeção. Os locais de injeção com pontuação 1 não mostram descoloração da pele, enquanto os locais de injeção com pontuação 5 mostram descoloração azul intensa da pele. A análise espectroscópica também é realizada nos locais de injeção com o auxílio de um cromatômetro. O componente azul da cor da pele de “b”, e a% de luz azul remetida da pele (400-700 nm), são medidos independentemente.
Exemplo 2: Teste de preenchimento de tecido in vivo
[00512] Os preenchimentos de tecido preparados de acordo com a descrição anterior podem ser testados após implantação intradérmica, implantação muscular e injeção subcutânea.
[00513] Por exemplo, uma dose de um preenchimento de tecido pode ser carregada em uma seringa e injetada por via intradérmica, intramuscular ou subcutânea, usando uma seringa de tamanho adequado que permite o fluxo através da agulha do preenchimento de tecido para o local da injeção.
[00514] Após a injeção inicial versus um controle (por exemplo, água e/ ou um preenchimento de tecido à base de HA comercializado, como Juvederm), os locais de injeção podem ser monitorados em intervalos de 1 ou 2 semanas, nos quais os pacientes são observados por questões de biocompatibilidade, incluindo citotoxicidade, pirogenicidade, formação de endotoxinas, toxicidade aguda do sistema, toxicidade subcrônica, reatividade intradérmica, genotoxicidade e sensibilização da pele.
[00515] Além disso, os atributos físicos do preenchimento de tecido podem ser monitorados examinando a presença de Tyndalling ou perda de volume, elasticidade ou firmeza no local da injeção.
Exemplo 3: Exame da reologia do preenchimento de tecido
[00516] Um reômetro de placa paralela oscilatória (Anton Paar Physica MCR 301) pode ser usado para medir as propriedades reológicas dos preenchimentos de tecido aqui descritos. Um diâmetro de placa de 25 mm pode ser usado a uma altura de espaço de 1 mm. As medições podem ser realizadas a uma temperatura constante de 25 °C. Cada medição consistiria em uma varredura de frequência de 1 a 10 Hz a uma tensão constante de 2% e um aumento logarítmico de frequência seguido de uma varredura de tensão de 1 a 300% a uma frequência constante de 5 Hz com um aumento logarítmico na tensão. Os resultados de tais análises forneceriam o Módulo de Armazenamento G’ e o Módulo de Perda G’ de cada preenchimento de tecido testado.
Exemplo 4: Exame da opacidade da solução de Seda/ HA
[00517] As soluções de HA e seda foram preparadas em água ou solução salina tamponada com fosfato de acordo com a Tabela 18.
Tabela 18 Amostra Descrição 1 PM de seda: “Médio” Concentração de Seda: 0,3 mg/ ml Concentração de HA: 22 mg/ ml Solvente: Água 2 PM de seda: “Médio” Concentração de Seda: 0,6 mg/ ml Concentração de HA: 22 mg/ ml Solvente: Água
3 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 3,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
4 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 6,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
5 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 15,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
6 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 30,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
7 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 45,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
8 PM de seda: “baixo”
Concentração de Seda: 0,6 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
9 PM de seda: “baixo” Concentração de Seda: 15,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
10 PM de seda: “baixo”
Concentração de Seda: 30,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
11 PM de seda: “baixo”
Concentração de Seda: 45,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: Água
12 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 0,6 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: PBS
13 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 15,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml Solvente: PBS
14 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 30,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: PBS
15 PM de seda: “Médio”
Concentração de Seda: 45,0 mg/ ml
Concentração de HA: 22 mg/ ml
Solvente: PBS
PM baixo = pesos moleculares de seda entre acima de 0 e cerca de 25 kDa, ou como definido de outra forma aqui; PM médio = pesos moleculares de seda de cerca de 25 kDa a cerca de 60 kDa , ou como definido de outra forma aqui;
[00518] Os resultados das soluções descritas na tabela acima são mostrados nas Figuras 26 e 27. O controle nas Figuras 26 e 27 (balão não marcado na Figura 26 e seringa controle na Figura 27) era uma solução de HA (22 mg/ ml) em água. Como ilustrado as Figuras 26 e 27, as soluções de seda/ HA eram homogêneas e visivelmente opacas em comparação com a HA sozinha.
Exemplo 5: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00519] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O ácido hialurônico pode ser dissolvido em solução de NaOH e adicionado a uma solução de seda como aqui descrito; Etapa b: Adicionar o BDDE dissolvido em NaOH à solução Seda/ HA/ NaOH; Etapa c: Reticular, misturando com calor; Etapa d: Passar por uma malha de metal e deixar inchar na água; Etapa e: Precipitar gel inchado em etanol; Etapa f: Lavar com etanol, água e solução de NaOH; Etapa g: Finalizar a reticulação em solução de etanol/ NaOH por cerca de 2 horas com aquecimento (50 °C); Etapa h: Neutralizar o pH da solução para 7; Etapa i: O precipitado é lavado e seco; Etapa j: Pó seco resultante deixado inchar em um gel em solução tamponada de NaCl a 0,9%; e Etapa k: O gel é colocado em uma seringa e autoclavado fornecendo o preenchimento de tecido resultante.
Exemplo 6: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00520] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O ácido hialurônico pode ser dissolvido em solução de NaOH; Etapa b: Adicionar seda em solução de NaOH a uma solução de seda e, em seguida, adicionar BDDE dissolvido em NaOH à solução de seda/ HA/ NaOH; Etapa c: Reticular, misturando com calor; Etapa d: Passar por uma malha de metal e deixar inchar na água; Etapa e: Precipitar gel inchado em etanol; Etapa f: Lavar com etanol, água e solução de NaOH; Etapa g: Finalizar a reticulação em solução de etanol/ NaOH por cerca de 2 horas com aquecimento (50 °C); Etapa h: Neutralizar o pH da solução para 7; Etapa i: O precipitado é lavado e seco; Etapa j: Pó seco resultante deixado inchar em um gel em solução tamponada de NaCl a 0,9%; e Etapa k: O gel é colocado em uma seringa e autoclavado fornecendo o preenchimento de tecido resultante.
Exemplo 7: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00521] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O ácido hialurônico pode ser dissolvido em solução de NaOH; Etapa b: Adicionar o BDDE dissolvido em NaOH à solução de HA/ NaOH; Etapa c: Adicionar a solução de seda à solução da Etapa b e reticular misturando com calor; Etapa d: Passar por uma malha de metal e deixar inchar na água; Etapa e: Precipitar gel inchado em etanol; Etapa f: Lavar com etanol, água e solução de NaOH; Etapa g: Finalizar a reticulação em solução de etanol/ NaOH por cerca de 2 horas com aquecimento (50 °C); Etapa h: Neutralizar o pH da solução para 7; Etapa i: O precipitado é lavado e seco; Etapa j: Pó seco resultante deixado inchar em um gel em solução tamponada de NaCl a 0,9%; e Etapa k: O gel é colocado em uma seringa e autoclavado fornecendo o preenchimento de tecido resultante.
Exemplo 8: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00522] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O ácido hialurônico pode ser dissolvido em solução de NaOH; Etapa b: Adicionar o BDDE dissolvido em NaOH à solução de HA/ NaOH; Etapa c: Reticular, misturando com calor; Etapa d: Adicionar a solução de seda à solução de HA/ NaOH reticulada e passar por uma malha de metal e deixar inchar na água; Etapa e: Precipitar gel inchado em etanol; Etapa f: Lavar com etanol, água e solução de NaOH; Etapa g: Finalizar a reticulação em solução de etanol/ NaOH por cerca de 2 horas com aquecimento (50 °C); Etapa h: Neutralizar o pH da solução para 7; Etapa i: O precipitado é lavado e seco;
Etapa j: Pó seco resultante deixado inchar em um gel em solução tamponada de NaCl a 0,9%; e Etapa k: Gel é carregado em uma seringa e autoclavado fornecendo tecido de preenchimento resultante.
Exemplo 9: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00523] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O ácido hialurônico pode ser dissolvido em solução de NaOH; Etapa b: Adicionar o BDDE dissolvido em NaOH à solução de HA/ NaOH; Etapa c: Reticular, misturando com calor; Etapa d: Passar por uma malha de metal e deixar inchar na água; Etapa e: Precipitar gel inchado em etanol; Etapa f: Lavar com etanol, água e solução de NaOH; Etapa g: Adicionar solução de seda ao material preparado na Etapa f e finalizar a reticulação em solução de etanol/ NaOH por cerca de 2 horas com aquecimento (50 °C); Etapa h: Neutralizar o pH da solução para 7; Etapa i: O precipitado é lavado e seco; Etapa j: Pó seco resultante deixado inchar em um gel em solução tamponada de NaCl a 0,9%; Etapa k: Gel é carregado em uma seringa e autoclavado fornecendo tecido de preenchimento resultante.
Exemplo 10: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00524] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O hialuronato de sódio pode ser misturado com solução de NaOH e uma solução de seda, como aqui descrito; Etapa b: o BDDE pode ser adicionado à solução da Etapa a; Etapa c: O produto da Etapa b pode reagir; Etapa d: Amônia é adicionada à mistura dialisada da Etapa c e a mistura é vertida em uma placa de Petri; Etapa e: O produto da Etapa d é deixado secar em um filme; Etapa f: O filme da Etapa e é dividido em partículas e inchado em solução salina; Etapa g; O produto do Etapa f é adicionado a uma seringa e autoclavado; Etapa h (opcional): O produto da Etapa f pode ser submetido a um segundo procedimento final de reticulação com uma solução de BDDE ou outro agente de reticulação aqui descrito e lavado.
Exemplo 11: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00525] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: Hialuronato de sódio pode ser misturado com solução de NaOH; Etapa b: Uma solução de seda pode ser adicionada à solução da Etapa a e pode ser adicionado BDDE; Etapa c: O produto da Etapa b pode reagir; Etapa d: Amônia é adicionada à mistura dialisada da Etapa c e a mistura é vertida em uma placa de Petri; Etapa e: O produto da Etapa d é deixado secar em um filme; Etapa f: O filme da Etapa e é dividido em partículas e inchado em solução salina; Etapa g; O produto do Etapa f é adicionado a uma seringa e autoclavado;
Etapa h (opcional): O produto da Etapa f pode ser submetido a um segundo procedimento final de reticulação com uma solução de BDDE ou outro agente de reticulação aqui descrito e lavado.
Exemplo 12: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00526] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: Hialuronato de sódio pode ser misturado com solução de NaOH; Etapa b: O BDDE pode ser adicionado à solução da Etapa a; Etapa c: O produto da Etapa b é adicionado a uma solução de seda e deixado reagir; Etapa d: Amônia é adicionada à mistura dialisada da Etapa c e a mistura é vertida em uma placa de Petri; Etapa e: O produto da Etapa d é deixado secar em um filme; Etapa f: O filme da Etapa e é dividido em partículas e inchado em solução salina; Etapa g; O produto do etapa f é adicionado a uma seringa e autoclavado; Etapa h (opcional): O produto da Etapa f pode ser submetido a um segundo procedimento final de reticulação com uma solução de BDDE ou outro agente de reticulação aqui descrito e lavado.
Exemplo 13: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00527] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: Hialuronato de sódio pode ser misturado com solução de NaOH; Etapa b: O BDDE pode ser adicionado à solução da Etapa a; Etapa c: O produto da Etapa b pode reagir;
Etapa d: O produto do Etapa c é adicionado a uma solução de seda e, em seguida, amônia é adicionada à mistura dialisada do mesmo e a mistura é vertida em uma placa de petri; Etapa e: O produto da Etapa d é deixado secar em um filme; Etapa f: O filme da Etapa e é dividido em partículas e inchado em solução salina; Etapa g; O produto da Etapa f é adicionado a uma seringa e autoclavado; Etapa h (opcional): O produto da Etapa f pode ser submetido a um segundo procedimento final de reticulação com uma solução de BDDE ou outro agente de reticulação aqui descrito e lavado.
Exemplo 14: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00528] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: Uma solução de seda pode ser preparada como descrito aqui, ao qual o BDDE pode ser adicionado em água; Etapa b: HA pode ser adicionado à solução da Etapa a; Etapa c: A mistura da Etapa b pode ser agitada (por exemplo, 5 minutos) e deixada repousar por cerca de 1 dia; Etapa d: O gel resultante da Etapa c pode ser deixada em repouso em solução salina durante 1 semana para fornecer o preenchimento de tecido resultante.
Exemplo 15: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00529] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: BDDE pode ser adicionado à água; Etapa b: Uma solução de seda pode ser adicionada à solução da Etapa A, a qual HA pode, em seguida, ser adicionado;
Etapa c: A mistura da Etapa b pode ser agitada (por exemplo, 5 minutos) e deixada repousar por cerca de 1 dia; Etapa d: O gel resultante da Etapa c pode ser deixada em repouso em solução salina durante 1 semana para fornecer o tecido de preenchimento resultante.
Exemplo 16: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00530] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: BDDE pode ser adicionado à água; Etapa b: HA pode ser adicionado à solução da Etapa a; Etapa c: Uma solução de seda pode ser adicionada à mistura da Etapa b e a mistura resultante pode ser agitada (por exemplo, 5 minutos) e deixou-se repousar durante cerca de um dia; Etapa d: O gel resultante da Etapa c pode ser deixado em repouso em solução salina durante 1 semana para fornecer o tecido de preenchimento resultante.
Exemplo 17: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00531] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: A uma solução de seda como aqui descrita pode ser adicionado HA dissolvido (misturado por cerca de 12 horas a 400 rpm) em solução de NaOH; Etapa b: A solução da Etapa a pode ser desgaseificada; Etapa c: A solução da Etapa b pode ser misturada com um agente de reticulação aqui descrito (por exemplo, BDDE) a 50 °C por cerca de 10 a 20 minutos; Etapa d: O gel reticulado é misturado com lidocaína HCl; Etapa e: A diálise da solução reticulada ajustada pode ser realizada por 3 dias, depois 2 dias com PBS, depois 1 dia com água; Etapa f: O produto resultante filtrado é então liofilizado para obter sólidos; Etapa g: Os sólidos são dissolvidos em PBS e depois incubados; Etapa h (Opcional): O HA livre pode ser adicionado ao produto da Etapa g; Etapa i: O produto resultante da Etapa g ou h pode ser esterilizado por autoclave a vapor.
Exemplo 18: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00532] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O HA pode ser dissolvido (misturado por cerca de 12 horas a 400 rpm) em solução de NaOH; Etapa b: Uma solução de seda pode ser adicionada à solução da Etapa a e a mistura resultante pode ser desgaseificada; Etapa c: A solução da Etapa b pode ser misturada com um agente de reticulação aqui descrito (por exemplo, BDDE) a 50 °C por cerca de 10 a 20 minutos; Etapa d: O gel reticulado é misturado com lidocaína HCl; Etapa e: A diálise da solução reticulada ajustada pode ser realizada por 3 dias, depois 2 dias com PBS, depois 1 dia com água; Etapa f: O produto resultante filtrado é então liofilizado para obter sólidos; Etapa g: Os sólidos são dissolvidos em PBS e depois incubados; Etapa h (Opcional): HA livre pode ser adicionado ao produto da Etapa g; Etapa i: O produto resultante da Etapa g ou h pode ser esterilizado por autoclave a vapor.
Exemplo 19: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00533] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O HA pode ser dissolvido (misturado por cerca de 12 horas a 400 rpm) em solução de NaOH; Etapa b: A solução da Etapa a pode ser desgaseificada; Etapa c: Uma solução de seda pode ser adicionada à solução da Etapa b e a mistura resultante pode ser misturada com um agente de reticulação aqui descrito (por exemplo, BDDE) a 50 °C por cerca de 10 a 20 minutos; Etapa d: O gel reticulado é misturado com lidocaína HCl; Etapa e: A diálise da solução reticulada ajustada pode ser realizada por 3 dias, depois 2 dias com PBS, depois 1 dia com água; Etapa f: O produto resultante filtrado é então liofilizado para obter sólidos; Etapa g: Os sólidos são dissolvidos em PBS e depois incubados; Etapa h (Opcional): HA livre pode ser adicionado ao produto da Etapa g; Etapa i: O produto resultante da Etapa g ou h pode ser esterilizado por autoclave a vapor.
Exemplo 20: Método de preparação de preenchimento de tecido
[00534] Um preenchimento de tecido de seda/ HA, conforme descrito aqui, pode ser preparado de acordo com o seguinte método geral: Etapa a: O HA pode ser dissolvido (misturado por cerca de 12 horas a 400 rpm) em solução de NaOH; Etapa b: A solução da Etapa a pode ser desgaseificada;
Etapa c: A solução da Etapa b pode ser misturada com um agente de reticulação aqui descrito (por exemplo, BDDE) a 50 °C por cerca de 10 a 20 minutos; Etapa d: Uma solução de seda pode ser adicionada ao produto da Etapa c e a mistura pode ser misturada com lidocaína HCl; Etapa e: A diálise da solução reticulada ajustada pode ser realizada por 3 dias, depois 2 dias com PBS, depois 1 dia com água; Etapa f: O produto resultante filtrado é então liofilizado para obter sólidos; Etapa g: Os sólidos são dissolvidos em PBS e depois incubados; Etapa h (Opcional): O HA livre pode ser adicionado ao produto da Etapa g; Etapa i: O produto resultante da Etapa g ou h pode ser esterilizado por autoclave a vapor.
Exemplo 21: Formulações dérmicas de preenchimento compostas de seda e ácido hialurônico reticuladas com BDDE
[00535] Materiais: 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE; Sigma-Aldrich); hialuronato de sódio (HA; Lifecore); seda, solução a 6% (Silk Therapeutics); hidróxido de sódio, solução a 0,1 N (BDH); ácido clorídrico, 5 N (Ricca Chemical); solução salina tamponada de fosfato (PBS; 20x; VWR Life Science).
[00536] Variáveis de formulação: Peso Molecular da Seda: Solução de seda de médio e baixo PM (6%); Peso Molecular de HA: 1,5 MDa e 2,2 MDa; Concentração de seda: 1% v/ v (0,6 mg/ ml), 2% v/ v (6 mg/ ml) 5% v/ v (3 mg/ ml) e 20% v/ v (12 mg/ ml).
[00537] Reticulação de hidrogel: (a) adicionar uma solução de 6% de seda ao hidróxido de sódio 0,1 N; (b) adicionar gradualmente pó de HA à solução acima preparada sob agitação overhead à velocidade de 200-400 rpm, dependendo do teor de seda; agitar suavemente para evitar a geração de muitas bolhas de ar; manter agitando até HA estar completamente dissolvido; (c) um adicionar 1% p/ p de BDDE à solução acima; (d) Aquecer a 50 °C e manter a agitação a 100-200 rpm durante 30 minutos; (e) deixar o gel reticulado arrefecer abaixo de 30 °C; (f) adicionar ácido clorídrico a 5N para ajustar o pH para 7,0-7,4.
[00538] Diálise com hidrogel: (a) hidratar o cassete de diálise por 2 minutos; limpar o excesso de água e medir a massa total da cassete vazia; (b) adicionar aproximadamente 18 g de formulação de hidrogel dentro do cassete de diálise; medir a massa total do cassete depois de ser carregada com gel; (c) suspender o cassete de diálise em 2 L de 1x tampão de PBS e ajustar a agitação magnética a 200 rpm; registrar a hora que a diálise iniciar e mudar o tampão PBS ao fim de 4 horas, 24 horas, e 48 horas de diálise; coletar o gel depois de 72 horas.
[00539] Caracterização: módulo de armazenamento de cisalhamento (G’) e viscosidade; degradação enzimática; BDDE residual; densidade de reticulação; estudo de 30 dias com animais; citotoxicidade; endotoxina bacteriana; turbidez.
[00540] Propriedades viscoelásticas: Um reômetro híbrido Discovery HR-1 (TA Instruments) foi usado para determinar o módulo de armazenamento (G’) e a viscosidade complexa (η) das formulações dérmicas de preenchimento. As amostras foram testadas passando a frequência de oscilação de 0,1 Hz a 10 Hz com 10 pontos de dados por intervalo de dez. Os dados foram registrados e comparados a uma taxa de cisalhamento de 5 Hz. Os dados de G’ e γ para as formulações de hidrogel (após diálise), com concentração de HA constante e concentração variável de seda são mostrados na Tabela 19. Neste lote, foi utilizado HA de peso molecular de 1,5 MDa.
Tabela 19: Propriedades viscoelásticas de hidrogéis com concentração constante de HA Concentração Concentração G’ a 5 Hz η a 5 Hz Amostra de HA* de Seda* PM da Seda (Pa) (Pa) (mg/ ml) (mg/ ml) C2 24 0 N/ D 46,9 2,88 A 24 9,6 Médio 105,5 4,93 B 24 0,48 Baixo 69,7 3,62 C 24 4,8 Médio 102,7 4,82 D 24 0,48 Médio 66,4 3,59 E 24 2,4 Baixo 41,4 2,56 F 24 0,96 Baixo 42,7 2,67 *: O tampão de PBS absorveu o hidrogel após a diálise, resultando em aumento de volume. As concentrações de HA e seda foram recalculadas com base no fator de diluição.
[00541] Os dados de G’ e γ para as formulações de hidrogel (após diálise) com a concentração total constante de 30 mg/ ml de HA e de seda estão resumidos na Tabela 20.
Tabela 20: Propriedades viscoelásticas de hidrogéis com concentração total constante Concentração HA Concentração G’ a 5 ηa5 PM da % de Amostra de HA* PM de Seda* Hz Hz Seda Seda (mg/ ml) (MDa) (mg/ ml) (Pa) (Pa) XHA15M01 23,52 1,5 0,48 Baixo 1% 94,1 4,52 SL17122002 XHA15M05 21,60 1,5 2,4 Baixo 5% 29,5 2,06 SL17112002 XHA15M20 14,40 1,5 9,6 Baixo 20% 31,7 1,63 SL17122102 XHA15M01 23,52 1,5 0,48 Médio 1% 118,1 5,55 SM17121802 XHA15M05 21,60 1,5 2,4 Médio 5% 38,4 2,35 SM17111602 XHA15M20 14,40 1,5 9,6 Médio 2 0% 15,6 1,06 SM17112702 XHA2M01 23,52 2,2 0,48 Baixo 1% 176,3 7,50 SL171121902 XHA2M05 21,60 2,2 2,4 Baixo 5% 85,1 4,03 SL17122002 XHA2M20 14,40 2,2 9,6 Baixo 20% 36,0 1,76 SL17122002 XHA2M01 23,52 2,2 0,48 Médio 1% 158,1 6,69 SM17121902 XHA2M05 21,60 2,2 2,4 Médio 5% 106,7 4,76
Concentração HA Concentração G’ a 5 ηa5 PM da % de Amostra de HA* PM de Seda* Hz Hz Seda Seda (mg/ ml) (MDa) (mg/ ml) (Pa) (Pa) SM17122002 XHA2M20 14,40 2,2 9,6 Médio 2 0% 11,5 0,86 SM17111302 *: O hidrogel absorveu o tampão de PBS após a diálise, resultando em aumento de volume. As concentrações de HA e seda foram recalculadas com base no fator de diluição.
[00542] Reversibilidade do hidrogel: Hidrogéis com e sem proteína de seda foram preparados e dialisados. As composições finais foram 33,3 mg/ ml de HA + 8 mg/ ml de seda para hidrogel de seda-HA e 33,3 mg/ ml de HA para hidrogel de HA, respectivamente. 1 g ± 100 g de hidrogéis acima preparados foram adicionados em frasco de vidro de 20 ml, seguido de 3 ml de 16 U/ ml de hialuronidase em PBS 1x. As amostras foram incubadas a 37 °C durante 3 dias. As amostras controle também foram preparadas usando hidrogel de HA sem adição de hialuronidase. O perfil de degradação é mostrado na Figura
28. As amostras controle sem hialuronidase não foram degradadas durante os 3 dias de incubação. Nas primeiras 6 horas de incubação, os hidrogéis absorveram o tampão e incharam, resultando no aumento da porcentagem de massa. O hidrogel de seda-HA e o hidrogel de HA foram completamente degradados após 3 dias de incubação. Na presença de seda, o hidrogel foi digerido mais rapidamente que o hidrogel de HA puro. Após 12 horas de incubação, cerca de 90% do hidrogel de seda-HA foi digerido por enzima.
[00543] Resíduo de reticulador (BDDE): As amostras listadas na Tabela 19 foram testadas quanto a resíduos de BDDE usando GC-FID da Millennium Research Laboratories, Inc. (MRL). O relatório de teste MRL MRL18JAN06 indicou que o BDDE residual em todas as amostras não era detectável, atendendo aos critérios de aceitação iguais ou inferiores a 2 ppm.
[00544] Densidade de reticulação: As amostras listadas na
Tabela 19 foram ainda completamente digeridas por hialuronidase e analisadas usando RMN para determinar a densidade de reticulação em termos de modificação percentual. Os resultados do teste estão listados na Tabela 21 (relatório de teste MRL MRL18JAN07).
Tabela 21: Grau de modificação percentual (densidade de reticulação) para várias formulações ID da amostra MoD (%) XHA15M00SX17110202 (C2) 2,87 XHA15M20SM17103002 (A) 4,68 XHA15M01SL17103002 (B) 2,58 XHA15M10SM17103002 (C) 3,02 XHA15M01SM17103002 (D) 2,54 XHA15M05SL17110202 (E) 3,76
[00545] Estudo em animais: Um estudo de 30 dias com animais usando o modelo de porquinho da índia foi realizado em WuXi AppTec Minneapolis, instalação MN para tratar de questões de segurança do produto.
Haviam 2 pontos de tempo de terminação neste estudo, 7 dias e 30 dias, para avaliar a resposta do tecido. O estudo foi resumido no relatório D28195 do WuXi AppTec (Projeto C19879). Duas amostras controle (Juvederm Ultra Plus e Amostra C2 na Tabela 19) e 6 formulações (Amostra A – F na Tabela 19) foram utilizadas para injeção intradérmica. As amostras A – F e a amostra controle C2 foram esterilizadas a vapor (protocolo 201707289) no Nelson Laboratories, LLC antes da injeção. O procedimento do estudo em resumo: vinte e quatro animais, doze por duração, foram utilizados neste estudo. Cada animal recebeu seis injeções intradérmicas dorsais usando a técnica de enfiar (injetando uma linha em vez de um bolus): um local de controle em um lado da coluna vertebral, o segundo local de controle no lado contralateral (com lados alternadamente designados por animal) e quatro locais teste com não mais de uma injeção de um determinado artigo de teste (com os lados direito e esquerdo alternadamente designados entre os animais). Os animais foram observados diariamente durante todo o estudo para avaliar a saúde geral. Os animais foram sacrificados humanamente nas datas de término programadas. Os locais do implante e o tecido circundante de todos os animais foram excisados, colocados em formalina e processados em blocos de parafina, seguidos de avaliação histopatológica. As imagens histológicas representativas e os achados patológicos foram resumidos na Tabela 22. No geral, não houve sugestão de sepse ou resposta imunológica em nenhum dos locais do implante.
Tabela 22: Resumo das avaliações histopatológicas Amostras 7 dias 30 dias Figura 29 Figura 30 O produto comercial é observado O produto comercial é observado Controle nas duas imagens como material nas duas imagens como material comercial azul/ cinza. Há leve inflamação azul/ cinza. Aos 30 dias, há uma granulomatosa associada ao quantidade mínima de inflamação material aos 7 dias. com fibrose muito leve. Produto A: Figura 31 Figura 32 24 mg/ ml de Há pouquíssima inflamação aos 7 Aos 30 dias, a inflamação é HA dias. A inflamação era focal e às extremamente difícil de encontrar e 9,6 mg/ ml de vezes difícil de encontrar. Nenhum mínima. Nenhum material de seda material de implante é observado. implante é observado. Figura 33 Figura 34 Produto B: O produto B demonstra inflamação A imagem de 30 dias demonstra 24 mg/ ml de leve focal nos 7 dias. A inflamação é ainda menos inflamação. Foi ainda HA crônica. Essa inflamação exigiu uma mais difícil identificar em 0,48 mg/ ml de avaliação cuidadosa para identificar, comparação com os implantes de 7 seda pois era focal e mínima. Nenhum dias. Nenhum material de implante é material de implante é observado. observado. No geral, não houve sugestão de sepse ou resposta imunológica em nenhum dos locais do implante.
[00546] Endotoxina bacteriana: Três amostras pós- esterilização (Amostra A, Amostra E e Amostra C2) foram selecionadas dentre 7 formulações usadas em estudos com animais (listados na Tabela 19) para teste de endotoxina bacteriana. O método turbidimétrico cinético foi utilizado para determinar o nível de endotoxina. Os resultados dos testes estão listados na Tabela 23 e estão abaixo dos critérios de aceitação de 20 EU/ ml (relatório do estudo Nelson Labs 1006775-S01).
Tabela 23: Resultados do teste de endotoxina ID da amostra Endotoxina detectada XHA15M20SM17103002 (A) 0,498 (UE/ ml) XHA15M00SX17110202 (C2) <0,400 (UE/ ml) XHA15M05SL17110202 (E) 1,56 (UE/ ml)
[00547] Biocompatibilidade – Citotoxicidade: Quatro amostras pós-esterilização (Amostra A, Amostra B, Amostra D e Amostra E) foram selecionadas dentre 7 formulações usadas em estudos com animais (listados na Tabela 19) para o teste de citotoxicidade ISO-10993-5 (ISO MEM Elution usando células L-929 de fibroblastos de rato). Estas amostras representaram o maior e o menor teor de seda de seda de médio peso molecular e seda de baixo peso molecular nas formulações de preenchimentos dérmicos testados. Os relatórios de teste indicaram que todas as amostras de teste obtiveram nota 0, o que significa não citotóxico (relatórios Wuxi AppTec D28287- 1, D28287-2, D28287-3, D28287-4).
[00548] Turbidez: O hidrogel puro de HA é transparente sob luz natural. Quando o HA foi reticulado com a proteína de seda, o hidrogel se torna levemente turvo (turvo) e a turbidez depende da concentração total de seda na formulação. A turbidez foi medida pelo espectrofotômetro Lambda X50S UV- Vis (PerkinElmer) equipado com a esfera de integração InGaAs, que tem a capacidade de coletar luz dispersa direta, além da luz transmitida padrão. A medição da turbidez do hidrogel de seda-HA é mostrada na Figura 35. A curva preta é a transmitância padrão e a curva vermelha foi coletada pela esfera, mostrando uma dispersão direta significativa. O hidrogel de HA puro sem seda foi usado como amostra de controle. As curvas na Figura 36 são quase idênticas, indicando muito pouca dispersão do gel de HA puro. A medição da turbidez sugeriu que o hidrogel de seda-HA tem a capacidade de espalhar luzes que poderiam eliminar o efeito Tyndall quando usado como preenchimento dérmico.
[00549] Conclusões: As formulações de preenchimento dérmico foram desenvolvidas com base na concentração constante de HA com vários teores de seda e concentração total constante. Tais formulações forneceram uma ampla faixa de módulo de armazenamento, viscosidade e densidade de reticulação, que podem levar a várias aplicações. O hidrogel de seda-HA era enzimaticamente reversível. O reticulador residual após diálise das formulações de hidrogel atendeu aos critérios de aceitação. O teste de citotoxicidade indicou que os hidrogéis de seda-HA com teor de seda variando de 0,48 mg/ ml a 9,6 mg/ ml não eram citotóxicos e biocompatíveis. O estudo em animais de 30 dias demonstrou que todas as formulações com teor de seda de até 9,6 mg/ ml não causavam sepse e não tinham resposta imunológica.
Exemplo 22: Formulações de preenchimento dérmico compostas de seda e ácido hialurônico reticulados com PEGDE (PEGDGE)
[00550] Reticulador: poli(etileno glicol) diglicidil éter (PEGDE), peso molecular médio Mn = 500. Condições de reação: o mesmo que a reticulação de BDDE (Exemplo 21). A quantidade total de PEGDE foi equivalente ao BDDE em moles.
Tabela 24: Formulação de reticulação de PEGDE e resultados dos testes PM G’ ηa % Concentraçã de Concentraçã PM a5 5 de Reticulad Amostra o de HA* HA o de Seda* da Hz Hz Sed or (mg/ ml) (MDa (mg/ ml) Seda (Pa (Pa a ) ) ) XHA15M05 Médi 38, 2,3 21,60 1,5 2,4 10% BDDE SM17111602 o 4 5 XHA15M05 Médi 67, 3,1 SM18020802 20,45 1,5 2,27 10% PEG-x o 5 0
P XHA15M05 Médi 73, 3,4 SM18020902 19,28 1,5 2,14 10% PEG-x o 5 0
P *: O hidrogel absorveu o tampão de PBS após a diálise, resultando em aumento de volume. As concentrações de HA e seda foram recalculadas com base no fator de diluição.
Exemplo 23: Estudo com animais C20419
[00551] As formulações e caracterização de amostras para o estudo em animais C20419 são mostradas na Tabela 25: For G’ η ça PM a a de Concent Concent PM Mo de 5 5 inje Amostr Reticu ração ração da D Identidade HA H H ção a lador de HA. de Seda Se (% (D z z a (mg/ ml) (mg/ ml) da ) a) (P (P 30 a) a) G (N) 70 C XHA700K3M00 N/ 0, 0, 7.4 4,8 24 0 0K/ 3 SX180510 D 2 1 1 7 3M 70 XHA700K3M05 Mé 3, 0, 8.1 4.5 G 22,8 1,2 0K/ SM180510 dio 8 2 7 4 3M Gru 70 po XHA700K3M01 BDDE Bai 0, 6,9 5,4 H 23,76 0,24 0K/ 0 1 SL180510 xo 1 5 2 3M 70 XHA700K3M05 Bai 0, 0, 7,9 6.2 I 22,8 1,2 0K/ SL180510 xo 5 1 6 3 3M XHA26M05SM1 2,6 Mé 0, 0, 8.4 2.5 K 22,8 1,2 80510 M dio 1 1 8 1 70 C PXHA700K3M0 n/ 52 2. 16. 15. 24 0 0K/ 4 0SX180514 D ,3 4 19 14 3M 70 PXHA700K3M0 Mé 31 1. 12, 10, L 22,8 1,2 0K/ 5SM180514 dio ,8 6 96 97 3M Gru PEGD 70 po PXHA700K3M0 Bai 32 1. 15, 11. M E 23,76 0,24 0K/ 2 1SL180514 xo ,2 5 96 02 3M 70 PXHA700K3M0 Bai 51 2. 17, 11, N 22,8 1,2 0K/ 5SL180514 xo ,9 1 82 23 3M PXHA26M05SM 2,6 Mé 18 1. 10, 17, O 22,8 1,2 180514 M dio ,9 1 56 23 70 C n/ 63 2, 19, 8,0 0K/ 5 D ,0 8 02 2 3M 70 Mé 28 1, 11, 9,7 P 0K/ Gru dio ,3 4 22 1 3M po Grupo 2 + livre de HA 70 3 Bai 42 1, 16, Q 0K/ 10 xo ,7 9 80 3M 70 Bai 83 3, 20, 10, R 0K/ xo ,9 2 90 12 3M
For G’ η ça PM a a de Concent Concent PM Mo de 5 5 inje Amostr Reticu ração ração da D Identidade HA H H ção a lador de HA. de Seda Se (% (D z z a (mg/ ml) (mg/ ml) da ) a) (P (P 30 a) a) G (N) 2,6 Mé 75 3, 12, 11,
S M dio ,8 4 78 92 Tabela 25: Formulações e caracterização de amostras para estudo em animais C20419
[00553] As Figuras 37 - 46 mostram os resultados do estudo.
A Figura 37 é uma imagem de histologia representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico controle. A Figura 38 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de HA da invenção (24 mg/ ml de HA, PEGDE reticulado, Amostra C4 – Tabela 25). A Figura 39 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (22,8 mg/ ml de HA, 1,2 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, Amostra L – Tabela 25). A Figura 40 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (23,76 mg/ ml de HA, 0,24 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, Amostra M – Tabela 25). A Figura 41 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (22,8 mg/ ml de HA, 1,2 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, Amostra N – Tabela 25). A Figura 42 é uma imagem histológica representativa de uma área intradérmica em um porquinho-da-índia injetado com um preenchimento dérmico de seda-HA da invenção (22,8 mg/ ml de HA, 1,2 mg/ ml de seda, PEGDE reticulado, amostra O – Tabela 25)
[00554] As Figuras 43 – 46 são representações gráficas dos resultados histológicos para as formulações da Tabela 25, 7 dias após o implante (pontuação: 0 - normal; 1 - mínima; 2 - leve; 3 - moderada; e 4 - grave). A Figura 43 é um gráfico que mostra os resultados histológicos de 7 dias após a implantação para degradação do gel; formulações de BDDE reticulados são em sua maioria degradadas. A Figura 44 é um gráfico que mostra os resultados histológicos de 7 dias após a implantação para a migração do gel. A Figura 45 é um gráfico que mostra os resultados histológicos de 7 dias após a implantação para inflamação; nnehuma necrose de tecidos foi observada, nenhuma coagulação do sangue foi observada, e foi observada deposição mínima de colágeno na formulação controle e em alguns formulações testes. A Figura 46 é um gráfico que mostra os resultados histológicos de 7 dias após o implante para as idades de macrófagos.
Exemplo 24: Propriedades de hidrogéis de seda-HA com PEGDE reticulado: 1) módulo de armazenamento de cisalhamento (G’), e 2) razão de inchaço durante a diálise
[00555] Preparação de preenchimento dérmico, Materiais: poli(etileno glicol) diglicidil éter (PEGDE), Mn = 500, Sigma-Aldrich; Hialuronato de sódio (HA), Lifecore; Seda, solução a 6%, Silk Inc.; Hidróxido de sódio, solução a 0,1 N, BDH; Ácido clorídrico, 5 N, Ricca Chemical; Solução salina tamponada com fosfato (PBS), 20x, VWR Life Science.
[00556] Variáveis de Formulação de Enchimento Dérmico: Peso Molecular da Seda: Solução de seda de médio e baixo PM (6%); Peso molecular de HA: 700 KDa e 1,5 MDa; Concentração de seda (inicial): 0 – 1 5 mg/ ml.
[00557] Reticulação de hidrogel em alta concentração: adicionar uma solução de 6% de seda no hidróxido de sódio a 0,1 N; adicionar gradualmente 100 mg/ ml de HA de peso molecular misturado (700 KDa/ 1,5
MDa = 90/10) à solução acima preparada sob agiação suave até HA estar completamente dissolvido; adicionar PEGDE à solução acima; aquecer em banho maria a 40 °C e manter a reticulação no banho maria por 45 minutos; permitir que o gel reticulado resfrie abaixo de 30 °C; adicionar ácido clorídrico a 5N ao PBS 1x, diluir o gel para 40 mg/ ml e ajustar o pH final para 7,0-7,4.
[00558] Reticulação de hidrogel em baixa concentração: adicionar solução de 6% de seda ao hidróxido de sódio 0,1 N; adicionar gradualmente 25 mg/ ml de HA de 1,5 MDa à solução acima preparada sob agitação suave até que o HA esteja completamente dissolvido; adicionar PEGDE à solução acima; aquecer em banho maria a 40 °C e manter a reticulação no banho maria por 45 minutos; permitir que o gel reticulado resfrie abaixo de 30 °C; adicionar ácido clorídrico a 5N ao gel reticulado e ajustar o pH final a 7,0-7,4.
[00559] Diálise de hidrogel: hidratar o cassete de diálise (20 KDa PMCO) por 2 minutos; limpar o excesso de água e medir a massa total do cassete vazio; adicionar cerca de 18 g de hidrogel em cassete de diálise; medir a massa total do cassete depois de carregado com gel; suspender o cassete de diálise em 2 L de 1x tampão PBS e definir agitação magnética a 200 rpm; coletar o gel após 72 horas de diálise.
Propriedades viscoelásticas
[00560] Um reômetro híbrido Discovery HR-1 (TA Instruments) foi usado para determinar o módulo de armazenamento (G’) das formulações de hidrogel. As amostras foram testadas passando a frequência de oscilação de 0,1 Hz a 10 Hz com 10 pontos de dados por intervalo de dez. Os dados foram registrados e comparados a uma taxa de cisalhamento de 5 Hz. O G’ das formulações de hidrogel antes e após a diálise com concentração constante de HA e concentração variável de seda são mostrados nas Figuras 47A e 47B. Para o hidrogel reticulado por PEGDE em elevada concentração inicial de HA, o impacto da concentração de seda para o G’ é mínima, devido à relativamente baixa proporção de seda para HA total. Também pode ser contribuído ao HA misturado contendo 90% de baixo peso molecular (700 KDa) que não é sensível às mudanças na concentração de seda. Para o hidrogel reticulado por PEGDE a baixa concentração inicial de HA, o G’ aumentou à medida que mais de seda foi adicionado à formulação. As mudanças na concentração de seda tiveram mais impacto em G’ quando a concentração inicial de HA era baixa e também tiveram mais impacto no HA de alto peso molecular (1,5 MDa). Não foi observado impacto substancial do peso molecular da seda no G’ para ambos os procedimentos de reticulação.
[00561] Proporção de inchaço durante a diálise: não houve nenhuma tendência clara que mostra que a quantidade de seda adicionada à formulação de hidrogel teve qualquer impacto no inchaço do gel durante a diálise para ambos os procedimentos de reticulação e nenhuma diferença substancial entre o médio peso molecular e baixo peso molecular de seda (Figuras 48A e 48B).
[00562] A concentração de seda nas formulações de hidrogel teve um impacto mínimo em G’ se o HA misturado fosse reticulado por PEGDE em alta concentração inicial de HA, mas era proporcional a G’ se o HA de alto PM único fosse reticulado em baixa concentração inicial de HA. O peso molecular da seda nas formulações em gel não teve diferença substancial ao comparar a contribuição ao G’ e ao inchaço se o HA foi reticulado pelo PEGDE.
Exemplo 25: Concentração de seda em formulações de preenchimento dérmico de seda-HA
[00563] Materiais: seda, solução de 6%, Seda, Inc.; solução salina tamponada com fosfato (PBS), 20x, VWR Life Science; gel de ácido hialurônico (HA) reticulado.
[00564] Equipamento: analisador de umidade HE53, Mettler Toledo; Espectrofotômetro Cary 100 UV/ Vis.
[00565] Curva Padrão de Calibração: medir o teor de matéria seca para ambas soluções de seda a 6% de médio e baixo peso molecular e meio para determinar o teor seco efetivo (mg/ ml), das soluções de seda; criar uma série de soluções de seda padrão diluindo a solução de seda a 6% usando 1X PBS (por exemplo, 1 mg/ ml de seda, 0,75 mg/ ml de seda, 0,5 mg/ ml de seda, 0,5 mg/ ml de seda, 0,25 mg/ ml de seda e 0 mg/ ml de seda); medir a absorbância de cada solução padrão a 275 nm em uma cubeta de quartzo – medições de absorbância podem ser realizadas com uma varredura 200-800 nm, intervalo de dados de 5 nm, e uma média de coleta de 0,1 segundos; traçar a absorbância a 275 nm contra a concentração de seda (mg/ ml) para criar uma curva padrão.
[00566] Medição da Concentração de Seda: diluir amostras de gel de HA com 1X PBS de tal modo que a absorbância a 275 nm esteja entre 0 e 1,0 (por exemplo, as amostras podem ser diluídas com uma razão de 1:12 de gel para 1X PBS, ou seja, 1200% de diluição); realizar uma varredura para absorbância para a amostra de gel de seda-HA contra uma referência de 1X PBS entre 200 nm – 800 nm, medir o pico de absorbância a 275 nm para cada amostra de gel; os sinais de absorção para as amostras de gel são corrigidos pela diferença entre o sinal de absorção para a amostra sem seda e a interceptação da curva de calibração, configurar a amostra sem seda para ter uma concentração de seda de 0 mg/ ml; a concentração de seda nas amostras de gel de seda-HA pode ser calculada a partir da curva de calibração e do fator de diluição.
[00567] As curvas de calibração foram criadas medindo a absorção a 275 nm para uma série de amostras padrão com diferentes concentrações de seda variando de 0 mg/ ml a 1 mg/ ml. As curvas de calibração para as soluções de seda de médio e baixo peso molecular são mostradas nas Figuras 49A e 49B. Os valores de R2 de 0,99947 para seda de médio peso molecular e 0,99949 para seda de baixo peso molecular demonstram que as curvas de calibração são lineares dentro da faixa de trabalho de 0-1 mg/ ml de concentração de seda. Essas curvas podem ser usadas para determinar as concentrações de seda em amostras de gel.
[00568] Determinação de concentração de seda de hidrogéis de seda-HA: a absorção a 275 nm dos hidrogéis de seda-HA diluídos foi medida para cada amostra como mostrado nas Figuras 50A e 50B. A concentração de seda de cada amostra foi calculada com a curva de calibração e o fator de diluição, resumidos na Tabela 26.
Tabela 26 - Concentrações de seda calculadas para géis de seda-HA com uma concentração de seda desconhecida da curva de calibração Concentração teórica da Concentração de seda Amostra de gel seda (mg/ ml) calculada (mg/ ml) XHA15M00SX17110201 0 0 XHA15M01SL17103001 0,6 0,49 XHA15M02SL17110201 1,2 1,26 XHA15M05SL17110201 3 3,08 XHA15M01SM17103001 0,6 0,57 XHA15M10SM17103001 6 6,21 XHA15M20SM17103001 12 13,83 Exemplo 26: Formulações de preenchimento dérmico de seda-HA: Opacidade do Gel
[00569] Materiais: gel de ácido hialurônico (HA) reticulado; solução salina tamponada com fosfato (PBS), 20x, VWR Life Science.
[00570] Equipamento: Espectrofotômetro Cary 100 UV/ Vis.
[00571] Preparação de Amostra: injetar cerca de 2 ml de gel de HA em uma cubeta de quartzo limpo de forma que exista uma quantidade mínima de bolhas de ar na amostra; a injeção usando uma agulha de 18 G pode ajudar a reduzir a quantidade de bolhas na amostra; uma amostra de referência em branco de 1X PBS pode ser adicionada a uma segunda cubeta de quartzo limpa (Nota: para medições de opacidade, pode ser usada uma cubeta de plástico, uma vez que a cubeta de plástico não tem absorção na faixa visível, 400 nm-800 nm).
[00572] Medição da opacidade do gel: definir a faixa de varredura X de 200 nm a 800 nm com um intervalo de dados de 5 nm e tempo médio de 0,1 segundos; selecionar o modo Y como % de T para a medição da luz transmitida (Nota: a absorção também pode ser medida e a % de T pode ser calculada a partir dos valores de absorção); realizar uma varredura na amostra de gel em relação ao padrão de referência de 1X PBS; os dados podem ser salvos como um arquivo CSV e o espectro pode ser plotado.
[00573] A opacidade do gel pode ser medida usando o espectrofotômetro UV/ Vis para a luz transmitida padrão. Uma amostra opticamente transparente transmitirá 100% da luz, enquanto uma amostra ligeiramente turva ou turva pode transmitir apenas uma parte dessa luz. A Figura 51 mostra a medição da turbidez de um hidrogel de HA com e sem seda. A curva azul mostra a % da transmitância para a luz transmitida para uma amostra de gel de seda-HA com 3 mg de seda/ ml e 26 mg/ ml de HA. A curva vermelha mostra a luz transmitida para uma amostra sem seda e 20 mg/ ml de HA e mostra mais transmissão de luz do que a amostra com seda. As medições de turbidez sugerem que o gel de seda-HA tem a capacidade de espalhar a luz visível mais do que o gel HA sem seda.
Exemplo 27: Grau de modificação (MoD) do hidrogel de HA determinado por
RMN
[00574] Grau de modificação (MoD) é definido como a razão estequiométrica de todas as moléculas de reticulador ligadas aos moles de unidades de repetição de HA. Os ligantes com mono-ligados e reticulados estão incluídos no MoD. MoD é determinado a partir de espectro de RMN 1H, integrando o sinal a partir do grupo N-acetila em HA a 2,1 ppm e o reticulador BDDE a 1,7 ppm, ou o reticulador PEGDE a 3,0-4,5 ppm.
[00575] Antes da degradação enzimática, o hidrogel de HA foi primeiro dializado novamente com solução de PBS (1X, 2 L x 5) para remover o reticulador livre. Um cassete de diálise Slide-A-Lyzer (PMCO de 3,5K, Thermo Scientific, Rockford, IL) foi utilizado, e a solução de PBS foi agitada a RT durante 72 h. Após a diálise, 1 ml da solução de hidrogel de HA foi retirado e liofilizado com um liofilizador Labconco FreeZone (2,5 L) para obter o pó seco.
[00576] Para preparar a amostra de RMN, 10 mg do pó seco foram colocados no tubo de RMN (5 mm, Wilmad-LabGlass) e 0,6 ml de solução de hialuronidase (MP Biomedicals, Solon, OH) em óxido de deutério (D 2O, Alfa Aesar, Ward Hill, MA) foi adicionado. A quantidade de hialuronidase foi de 5 U por 1 mg de HA. O tubo de RMN foi incubado a 37 °C durante a noite para degradar todo o HA. Os espectros de RMN foram registrados em um sistema de RMN automatizado Varian MR 400 MHz. O tempo de atraso do relaxamento é de 1 s e o número de varreduras é de 256. Todos os dados foram processados usando o software MestReNova (Edição 12.0.2).
Exemplo 28: processo de reticulação em duas etapas de seda-HA
[00577] Um hidrogel de seda-HA pode ser formado em um processo de reticulação em duas etapas para melhorar a eficiência da ligação da seda ao HA. Para uma determinada formulação, na primeira etapa, toda a proteína de seda e uma pequena porção de baixo peso molecular de HA são adicionados a uma solução de NaOH a pH 10, e, em seguida, reagido com uma porção de agente de reticulação. Sem desejar estar ligado por qualquer teoria em particular, acredita-se que, durante esta etapa, a maior parte da seda possível reage com o agente reticulador. Na segunda etapa, uma solução de NaOH é adicionada para diluir o produto da etapa 1 e aumenta o pH para 13. O
HA de baixo peso molecular restante, todo o HA de alto peso molecular, e o reticulador restante são então adicionados à solução, e a reação de reticulação está concluída.
Exemplo 29: Síntese de hidrogel de HA
[00578] O hidrogel de HA foi sintetizado usando HA de diferentes pesos moleculares, reticulador, tempo de reação, temperatura de reação, concentração de HA, razão de reticulador, processo de mistura e método de agitação. As Tabelas 27 e 28 mostram as várias condições de reação empregues, e os diferentes hidrogéis obtidos.
Tabela 27 PM de HA 700 K, 1,5 M, 2,2 M, 3 M, ou mistura com PM diferente em qualquer proporção Reticulador PEG500DE, e BDDE Tempo de reação 30 min, 60 min, 90 min, 120 min, ou 240 min Temperatura de 40 °C ou 50 °C reação Concentração de 30 mg/ ml, 90 mg/ ml, 100 mg/ ml, e 140 mg/ ml
HA Razão de 7% em peso ou 10% em peso reticulador Processo de mistura Pré-misture de HA e reticulador juntos ou adicionando reticulador na solução de HA Agitação Com ou sem agitação mecânica Tabela 28 HA / Tem G’ Razão po de Concent de Te (Ap reticul ração de Agita reaç MoD Amostra Reticul Mistura mp. ós ador HA (mg/ ção ão (%) ador °C diáli (% em ml) peso) (mi se) n) PXHA2M0 2,2 M / uma 0SX PEG50 10 30 porção Y 30 40 163 13,02 18042541 0DE por vez PXHA2M0 2,2 M / uma 0SX PEG50 10 30 porção Y 60 40 106 9,55 18042543 0DE por vez PXHA2M0 2,2 M / uma 0SX PEG50 10 30 porção Y 120 40 95 11,73 18042545 0DE por vez PXHA2M0 2,2 M / uma 0SX PEG50 10 30 porção Y 240 40 10,6 15,6 18042547 0DE por vez PXHA2M0 2,2 M / 10 30 Um pote N 30 40 148, 5,3
0SX PEG50 67 18051041 0DE PXHA2M0 2,2 M / 134, 0SX PEG50 10 30 Um pote N 60 40 7,88 61 18051043 0DE PXHA2M0 2,2 M / 46,5 0SX PEG50 10 30 Um pote N 120 40 9,44 3 18051045 0DE PXHA2M0 2,2 M / 0SX PEG50 10 30 Um pote N 240 40 28,9 11,2 18051047 0DE BXHA700 700K / gota a K00SX 10 30 Y 30 40 42 0 BDDE gota 18050141 BXHA700 700K / gota a K00SX 10 30 Y 60 40 38 0 BDDE gota 18050143 BXHA700 700K / gota a K00SX 10 30 Y 120 40 15 0,54 BDDE gota 18050145 PXHA2M0 2,2 M / Um pote/ 182, 0SX PEG50 10 30 durante a N 30 40 4,62 91 18051641 0DE noite PXHA2M0 2,2 M / Um pote/ 129, 0SX PEG50 10 30 durante a N 60 40 8,87 76 18051643 0DE noite BXHA700 uma 700K / 17,9 K00SX 10 30 porção N 30 40 0 BDDE 9 18052941 por vez BXHA700 uma 700K / 33,7 K00SX 10 30 porção N 60 40 0,48 BDDE 6 18052943 por vez BXHA2M0 uma 2,2 M / 295, 0SX 10 30 porção N 30 40 0,52 BDDE 6 18052941 por vez BXHA2M0 uma 2,2 M / 222, 0SX 10 30 porção N 60 40 0,66 BDDE 28 18052943 por vez BXHA15M Misturado
1.5M / 261, 00SX 10 90 separada N 30 50 3,26 BDDE 76 18060851 mente BXHA15M Misturado
1.5M / 196, 00SX 10 90 separada N 60 50 3,4, BDDE 8 18060853 mente BXHA15M Misturado
1.5M / 00SX 10 90 separada N 90 50 93,6 4,84
BDDE 18060855 mente BXHA15M Misturado
1.5M / 72,9 00SX 10 90 separada N 120 50 4,51 BDDE 8 18060857 mente PXHA15M 1.5M / Misturado em 151, 00SX PEGD 10 90 separada N 30 50 proce 65 18061351 E mente sso PXHA15M 1.5M / Misturado em z71, 00SX PEGD 10 90 separada N 60 50 proce 87 18061351 E mente sso
BXHA15M
1.5M / 234, 00SX 10 100 Um pote N 30 50 4,6 BDDE 69 18061551 BXHA15M
1.5M / 219, 00SX 10 100 Um pote N 60 6,1 BDDE 43 18061553 BXHA3M0 em 3M / 268, 0SX 10 100 Um pote N 60 50 proce BDDE 41 18061951 sso BXHA3M0 em 3M / 189, 0SX 7 100 Um pote N 60 50 proce BDDE 13 18061953 sso Exemplo 29: Síntese de hidrogel de seda/ HA
[00579] O preenchimento dérmico de seda é composto de ácido hialurônico reticulado (HA) com fragmentos de fibroína de seda covalentemente ligados a HA. O reticulador é poli(etilenoglicol) funcionalizado biocompatível e bioreabsorvível (PEG). O reticulador se conecta entre as moléculas de HA e a fibroína de seda às moléculas de HA para formar o hidrogel injetável. A lidocaína também é adicionada à formulação para reduzir o desconforto durante a injeção. O preenchimento dérmico é carregado em seringas de 1 ml, esterilizáveis e capazes de serem injetadas por meio de agulhas 30 G ou 27 G em estudos clínicos.
[00580] O HA induz resposta mínima local do tecido, o que não promove a deposição de colágeno. As proteínas da seda podem induzir respostas inflamatórias transitórias e leves como resultado da implantação, levando ao recrutamento e ativação de macrófagos e fibroblastos ao redor do implante local. Em última análise, esses eventos transitórios levam à deposição de colágeno e novo tecido endógeno. Em preenchimentos dérmicos, este processo tem o potencial para melhorar o contorno da pele e reduzir depressões na pele devido a cicatrizes, lesão ou linhas.
[00581] Fragmentos de fibroína de seda podem afetar o efeito Tyndall. O efeito Tyndall refere-se ao espalhamento da luz por partículas finas em um colóide ou suspensão. A intensidade da luz espalhada é inversamente proporcional à quarta potência do comprimento de onda. Como a luz azul tem comprimento de onda mais curto, é espalhada com maior intensidade e, portanto, a luz espalhada parece ser azul. O efeito Tyndall é às vezes observado em humanos após a aplicação de alguns preenchimentos dérmicos. O efeito Tyndall é ainda mais significativo quando injetado na pele superficial ou quando a cor da pele é pálida. As suspensões de partículas de hidrogel de HA tem nenhuma absorção no UV e no visível. O preenchimento dérmico de seda contém fragmentos de fibroína de seda e fibras de seda que têm banda de absorção de UV em torno de 275 nm e uma ampla absorção na faixa visível. Isso pode ajudar a mitigar ou, eventualmente, eliminar o efeito Tyndall.
[00582] Sem desejar ser limitado por qualquer teoria em particular, acredita-se que as propriedades viscoelásticas do preenchimento dérmico da seda também podem ser controladas por fragmentos de fibroína de seda ligados covalentemente. Os HA produtos de preenchimento dérmico existentes têm métodos limitados para controlar as propriedades visco-elásticas (módulo de armazenamento e de módulo de perda), por exemplo, mudando a concentração de HA reticulado. Adicionar HA livre pode reduzir o forçado durante a injeção, mas não ajuda a controlar a viscoelasticidade, pois o HA livre se degradará rapidamente in vivo. O preenchimento dérmico de seda contém fragmentos de fibroína de seda covalentemente ligados ao HA. Os fragmentos de fibroína de seda conjugados formam uma estrutura mais complexa que altera a rede 3D de HA reticulada regular. Ele pode ser controlado por reticulação de fragmentos de fibroína de seda com diferentes pesos moleculares (comprimento da cadeia molecular) ou diferentes percentagens de fragmentos de fibroína de seda.
[00583] A viscoelasticidade e longevidade in vivo do material de preenchimento dérmico de seda também pode ser controlada alterando os pesos moleculares (unidades de repetição) do agente de reticulação. Produtos de preenchimento dérmico existentes usam éter diglicidílico de 1,4-butanodiol
(BDDE) como reticulador. O BDDE é um pequeno diepoxi molecular sem flexibilidade para controlar a viscoelasticidade dos preenchimentos dérmicos, bem como o grau de modificação (MoD) que rege a longevidade dos preenchimentos dérmicos in vivo. O preenchimento dérmico de seda usa um éter diglicidílico de poli(etilenoglicol) biocompatível (PEGDE) como agente de reticulação. O PEGDE é um oligômero linear funcionalizado com diepoxi. Ele tem uma cadeia molecular mais longa do que o BDDE e pode ser ajustado alterando o número de unidades de repetição EO, que fornece a flexibilidade para controlar a estrutura do hidrogel, alterando a distância entre as moléculas de HA e HA para fragmentos de fibroína de seda. O número diferente de unidades de repetição de óxido de etileno (EO) altera a capacidade dos grupos de epóxi de acessar e reagir com HA e fragmentos de fibroína de seda, o que permite controlar o MoD.
[00584] O preenchimento dérmico de seda é um hidrogel injetável. É composto de HA e fragmentos de fibroína de seda em uma proporção de massa constante de 95: 5. O peso molecular do HA é de cerca de 850 KDa e o peso molecular do fragmento de fibroína de seda é de cerca de 14 kDa. O hidrogel é reticulado por PEGDE. O peso molecular do PEGDE é de cerca de 500 Da. O produto final contém cerca de 26 mg/ ml de HA total e fragmentos de fibroína de seda, e 0,3% de lidocaína em PBS 1x.
[00585] Na formulação de preenchimento dérmico de seda, as moléculas de HA são reticuladas e os fragmentos de fibroína de seda também são covalentemente ligados às moléculas de HA em seus grupos hidroxila por meio de pontes de PEG. A conjugação covalente de fragmentos de fibroína de seda à ponte PEGDE é demonstrada por métodos LC MS/ MS. Por exemplo, a composição dos preenchimentos dérmicos aqui descritos foi analisada para determinar a presença de seda reticulada no gel. O HA no gel foi primeiro digerido usando hialuronidase seguido por uma combinação de proteases
(Tripsina/ Lys-C, Quimotripsina, Glu-C). A mistura foi então analisada usando uma coluna de fase reversa (RP) C18 em um sistema de HPLC Ultimate3000 com análise MS/ MS realizada em um espectrômetro de massa Q Exactive.
[00586] Como mostrado na Figura 52, o reticulador PEG tem íons primários com m/ z de 89,06, 133,08 e 177,11, enquanto os íons primários de fragmentos de seda são 136,07 e 182,08. Sem desejar estar limitado por qualquer teoria particular, acredita-se que, pelo menos em algumas formas de realização, o espectro de LC não pode mostrar claramente fragmentos de PEG livres e/ ou fragmentos de fibroína de seda livres. Além disso, sem desejar estar limitado por qualquer teoria em particular, acredita-se que, pelo menos em algumas formas de realização, a seda no gel pode ser conjugada covalentemente com PEG. Também sem desejar ser limitado por qualquer teoria particular, acredita-se que, pelo menos em algumas formas de realização, o espectro MS/ MS do pico no tempo de retenção de 23,22 min (m/ z 435,64, destacado) mostra sinais fortes de ambos os PEG e fragmentos de fibroína de seda, o que prova ainda que a seda é reticulada com PEG.
[00587] Um hidrogel preparado como aqui descrito, foi carregado em seringas de 1 ml, esterilizadas por água sobreaquecida, e caracteriza-se pelas suas propriedades mecânicas. O módulo de armazenamento (G’) foi medido usando um Reômetro TA Instruments Discovery HR-1 equipado com geometria de placa cônica. Cerca de 0,8 ml de amostra de hidrogel foram carregados para cobrir toda a placa de amostra. O G’ medido na frequência de oscilação de 5 Hz é de cerca de 150 Pa. O MoD é definido como a porcentagem do número de moléculas de reticulação ligadas sobre o número total de unidades de dissacarídeo HA. Pode ser determinado por NMR usando deslocamentos químicos característicos do reticulador e HA. O MoD do hidrogel preparado acima é de cerca de 9%. A força de injeção (IF) foi medida usando Brookfield Engineering Texture Analyzer. O cilindro da seringa de amostra foi montado em um acessório. A haste do êmbolo foi acionada por um pistão para extrudar o hidrogel através de uma agulha de 30 G na velocidade de 0,2 mm/ s para uma distância de percurso de 10 mm. A força aplicada ao pistão foi continuamente registrada. A força de injeção média do hidrogel preparado acima é de cerca de 39 N.
[00588] Um estudo animal de 12 meses usando um modelo de porquinho da Índia é realizado (WuXi AppTec, Minneapolis, MN) para abordar a preocupação com a segurança do produto. Existem 5 pontos de tempo de terminação neste estudo, 7 dias, 30 dias, 90 dias, 180 dias, e 365 dias para avaliar a resposta do tecido ao preenchimento dérmico de seda preparado acima. Juvederm Ultra Plus XC foi usado como controle. O procedimento do estudo em resumo: quatro animais por duração foram usados neste estudo.
Cada animal recebeu seis injeções intradérmicas dorsais usando a técnica de enfiamento (injetar uma linha em vez de um bolo): três locais de controle em um lado da coluna vertebral e três locais de amostra de teste no lado contralateral.
Os animais foram observados diariamente ao longo do estudo para avaliar a saúde geral. Os animais foram sacrificados humanamente nas datas de encerramento programadas. Os locais de implante e o tecido circundante de todos os animais foram excisados, colocados em formalina e processados em blocos de parafina, seguido de avaliação histopatológica. Os dados histopatológicos de 7 dias são descritos neste documento (imagens histológicas na Figura 53A). A avaliação semiquantitativa (quanto menor a pontuação, melhor) apresentou uma pontuação total de 6,9 para o grupo de controle e uma pontuação total de 3,8 para o grupo de teste.
[00589] Os resultados da patologia indicaram no dia 7 após o implante, o material de implante teste demonstrou menos reação do que o implante controle. Isso incluiu ulceração e migração difusa através da camada muscular com o material de controle que não foi observado no material de teste.
Em 2 - 3 locais no material de teste, houve migração mínima para dentro ou através da camada muscular, em uma extensão significativamente menor em comparação com o controle. Úlceras não foram identificadas com o material de teste. A resposta do macrófago de corpo estranho e a separação do colágeno foram semelhantes entre os implantes de controle e teste, onde a ulceração não estava presente.
[00590] Em algumas formas de realização, o hidrogel de HA puro é transparente sob luz natural. Em algumas formas de realização, quando HA é reticulado com fragmentos de fibroína de seda, o gel exibe uma cor amarelada muito fraca e as fibras de proteína de seda podem ser observadas visualmente (ver Figura 54A). O gel exibe uma ampla absorbância na faixa visível e uma dispersão distinta. Isso é medido por um espectrofotômetro Lambda X50S UV-Vis (PerkinElmer) equipado com esfera integradora InGaAs que tem a capacidade de coletar luz dispersa para frente, além da luz transmitida padrão.
As medições de turbidez sugerem que o hidrogel Silk-HA tem a capacidade de espalhar luzes, o que poderia potencialmente eliminar o efeito Tyndall, uma vez usado como preenchimento dérmico.
[00591] Para entender o impacto do peso molecular da seda nas propriedades viscoelásticas (módulo de armazenamento G’ e viscosidade complexa ) do hidrogel, duas amostras foram preparadas com vários pesos moleculares de fragmento de fibroína de seda. As amostras foram preparadas a uma concentração total de 24 mg/ ml de HA e seda, e a uma razão HA/ seda constante de 95: 5. Seda de médio peso molecular de cerca de 48 kDa foi adicionada a uma amostra e seda de baixo peso molecular de cerca de 14 kDa foi adicionada à amostra B. Ambas as amostras foram reticuladas a 50 C durante 30 minutos, seguido por diálise contra PBS 1x, durante 72 horas. As amostras foram analisadas após a diálise. Os dados são mostrados na Tabela
29. A amostra A reticulada com seda de peso molecular médio tinha G’ e  mais baixos, sugerindo, sem desejar estar limitado por qualquer teoria particular, que o fragmento de fibroína de seda mais longo tinha mais impacto na estrutura de gel de HA. O impacto da porcentagem de fragmentos de fibroína de seda na formulação também foi avaliado. Três amostras com vários teores de seda foram preparadas. A concentração total de HA e seda permaneceu em 30 mg/ ml. As amostras foram reticuladas a 50 °C durante 30 minutos, seguido por diálise contra PBS 1x, durante 72 horas. As amostras foram analisadas para G’ e  após a diálise (Tabela 30). Os resultados exibiram uma diminuição de G’ e  com o aumento da concentração de seda no hidrogel. Portanto, sem desejar ser limitado por qualquer teoria particular, acredita-se que as propriedades viscoelásticas do hidrogel podem ser controladas variando o peso molecular e a porcentagem do fragmento de fibroína de seda na formulação durante o processo de reticulação.
Tabela 29: Propriedades viscoelásticas de hidrogéis com diferentes pesos moleculares de seda Conc. Conc. Conc. G’ a 5 PM de  a 5 Hz Amostra Total de HA de Seda Hz Seda (Pa · s) (mg/ ml) (mg/ ml) (mg/ ml) (Pa) A 24 22,8 1,2 Médio 96,1 3,6 B 24 22,8 1,2 Baixo 126,2 4,4 Tabela 30: Propriedades viscoelásticas de hidrogéis com diferentes teores de seda na formulação Conc. Conc. de Conc. de PM de G’ a 5 Hz  a 5 Hz Amostra Total HA Seda Seda (Pa) (Pa · s) (mg/ ml) (mg/ ml) (mg/ ml) C 30 29,4 0,6 Baixo 176,3 7,5 D 30 27 3 Baixo 85,1 4,0
E 30 18 12 Baixo 36,0 1,8 F 26 24,7 1,3 Baixo 204,2 7,2 G 26 24,96 1.04 Baixo 151,5 5,4 H 26 25,28 0,72 Baixo 173,8 6,2
[00592] Os preenchimentos dérmicos de seda podem ser preparados pelos seguintes procedimentos.
(1) Para um tamanho de lote de 10 ml, adicione 1,167 ml de solução de seda de baixo peso molecular a 6% e 385 mg de PEGDE em um béquer contendo 8,833 ml de solução de hidróxido de sódio a 0,1 N. Adicionar 1330 mg de HA porção por porção na solução preparada acima em 40 minutos. Agite suavemente usando uma espátula enquanto adiciona HA para facilitar a hidratação e dissolução do HA. Colocar o béquer em banho maria a 55 °C durante 75 minutos para permitir a reticulação. Deixe o hidrogel reticulado esfriar até < 28 °C. Adicione 145 l de ácido clorídrico 6 N em 5 ml de 1x PBS. Despeje a solução de PBS no hidrogel, sele o béquer e coloque em um refrigerador a 4 °C para permitir a neutralização e diluição do hidrogel durante a noite. Após a absorção total do PBS por hidrogel, adicionar mais 10 ml de 1x PBS para o hidrogel diluído e colocar em refrigerador a 4 °C durante a noite para permitir a sua diluição. Preencher hidrogel diluído em tubo de diálise de PMCO de 20 kDa e dialisar contra 1x PBS (4 L) à temperatura ambiente ao longo de 72 horas.
Mude o PBS às 6 horas, 24 horas e 48 horas. Após a diálise, adicione lidocaína e 1x PBS adicional para ajustar a concentração final para 26 mg/ ml com lidocaína a 0,3%. O hidrogel é carregado em seringas de 1 ml e esterilizado com água superaquecida. Alternativamente, 0,15 solução de hidróxido de sódio pode ser usado em vez de hidróxido de sódio a 0,1 N no processo de fabricação.
Alternativamente, uma solução 0,25 N de hidróxido de sódio pode ser usada em vez de hidróxido de sódio 0,1 N no processo de fabricação.
(2) Para um tamanho de lote de 10 ml, adicione 1,167 ml de solução de seda de baixo peso molecular a 6% e 96 mg de PEGDE em um béquer contendo 8,833 ml de solução de hidróxido de sódio 0,1 N. Adicione 266 mg de HA na solução preparada acima. Mexa suavemente com uma espátula até que o HA esteja totalmente dissolvido. Colocar o béquer em banho maria a 55 °C durante 60 minutos para permitir a primeira etapa de reticulação. Deixe o béquer esfriar até a temperatura ambiente. Adicione 289 mg de PEGDE no béquer e mexa até dissolver completamente. Em seguida, adicione 1064 mg de HA porção por porção em 30 minutos. Agite suavemente usando uma espátula enquanto adiciona HA para facilitar a hidratação e dissolução do HA. Colocar o béquer em banho maria a 55 °C durante 60 minutos para permitir a segunda etapa de reticulação. Adicionar 145 µL de ácido clorídrico a 6 N em 5 ml de 1x PBS. Verter a solução de PBS em hidrogel, selar o recipiente e colocar em refrigerador a 4 °C para permitir a neutralização e diluição do hidrogel durante a noite. Após o PBS ser totalmente absorvido pelo hidrogel, adicionar outros 10 ml de 1x PBS para o hidrogel diluído e colocar em refrigerador a 4 °C durante a noite para permitir a sua diluição. Preencher hidrogel diluído em tubo de diálise de PMCO de 20 kDa e dialisar contra 1x PBS (4 L) à temperatura ambiente ao longo de 72 horas. Mude o PBS às 6 horas, 24 horas e 48 horas. Após a diálise, adicione lidocaína e 1x PBS adicional para ajustar a concentração final para 26 mg/ ml com lidocaína a 0,3%. O hidrogel é carregado em seringas de 1 ml e esterilizado com água superaquecida. Alternativamente, 0,15 N de solução de hidróxido de sódio pode ser usado em vez de hidróxido de sódio a 0,1 N no processo de fabricação. Alternativamente, uma solução de hidróxido de sódio a 0,25 N pode ser usado em vez de hidróxido de sódio a 0,1 N no processo de fabricação.
[00593] Todas as patentes, pedidos de patentes e referências publicadas citadas neste documento são incorporadas por meio deste por referência em sua totalidade. Embora os métodos da presente divulgação tenham sido descritos em conexão com as formas de realização específicas dos mesmos, será entendido que é capaz de modificações adicionais. Além disso, este pedido se destina a cobrir quaisquer variações, usos ou adaptações dos métodos da presente divulgação, incluindo tais desvios da presente divulgação conforme vêm dentro da prática conhecida ou habitual na técnica à qual os métodos da presente divulgação se referem.
Exemplo 30. Métodos para a caracterização de propriedades físico- químicas G’, IF e MoD da seda-HA Hidrogel s
[00594] A incorporação de fibroína de seda em hidrogéis de ácido hialurônico, em conjunto com o uso de reticulador de polietileno glicol, representa uma nova plataforma para a formulação de preenchimentos dérmicos. Variando a concentração de HA, a porcentagem de seda e a razão PEGDE:HA, bem como as condições de reação da formulação, mais de cem candidatos a preenchimento dérmico foram preparados para triagem através desta plataforma. Os testes das propriedades físico-químicas e mecânicas dos hidrogéis de seda-HA gerados se concentraram na determinação do módulo de armazenamento (G’), grau de reticulação ou modificação (MoD), força de injeção (IF) e absorção espectral de cada hidrogel, uma vez que essas propriedades são de particular importância na geração de produtos de preenchimento dérmico com características desejáveis.
Exemplo 30a. Modulo de armazenamento
[00595] O módulo de armazenamento (G’) de cada hidrogel foi determinado usando um Reômetro Discovery HR-1 (TA Instruments, New Castle, DE). As medições (três por formulação de hidrogel) foram realizadas usando uma geometria de placa cônica na frequência de oscilação de 5 Hz.
Exemplo 30b. Grau de Modificação Procedimento Operacional do Sistema NMR
[00596] Equipamento: Varian INOVA 500 MHz NMR; Pipetas,
1000 µl, 200 µl e 20 µl (Eppendorf, Research Plus); Controlador de pipeta (VWR, Powerpette Plus, 613-4442); Tubo de RMN (Wilmad, WG-1235-7); Tampas de tubo de NMR (Kimble, 897095-0081); Incubadora de banho maria (Benchmark Scientific, B2000-4); Frasco de vidro de 20 ml (VWR, VW74515-20); Barco de pesagem (VWR Cat # 10770-440); Forno (Quincy Lab, 12-140AE); Liofilizador (LabConco, Cat # 700201000); Kimwipes (Kimberly-Clark Professional); Parafilm M (Bemis, PM 996); Balança analítica (Mettler Toledo, XS204 DeltaRange).
[00597] Materiais: Água de deutério (Alfa Aesar, 14764); Clorofórmio-D (Alfa Aesar, 41389); Seda, solução a 6% (Silk Medical Aesthetics, Inc.); Éter diglicidílico de poli(etilenoglicol), (SinoPEG, grau técnico/ médico); Hialuronato de sódio, 850 KDa (HTL Biotecnologia, qualidade farmacêutica); Hialuronidase (MP Biomedicals, Cat # 100740); PBS 20 x (VWR, E703-1L); Água (RICCA, Cat # 9150-5); Lidocaína HCl (Espectro, LI103)
[00598] Métodos: Para determinar o MoD de cada hidrogel, 600 - 800 mg de hidrogel foram misturados com 0,8 ml de cerca de 275 IU/ ml ou cerca de 340 IU/ ml de hialuronidase em 1x PBS. As misturas foram incubadas a 37 °C durante 16 horas a 24 horas para permitir a digestão completa dos hidrogéis reticulados. Uma amostra de 600 µl da solução de hidrogel digerida foi seca ao ar a 50 °C por 2 h a 4 h, e 10 mg da amostra seca foi dissolvida em 600 µl de água deuterada em um tubo de NMR e o espectro de NMR de próton foi gravada em um instrumento Varian INOVA 500 MHz NMR (Palo Alto, CA).
Preparação das amostras de NMR
[00599] Preparação da amostra PEGDE: Retire a amostra PEGDE do freezer e deixe a amostra em temperatura ambiente por aproximadamente 30 minutos a 1 hora. O PEGDE derreterá e se tornará líquido.
Use uma pipeta para medir 5 µl do PEGDE e adicione a um tubo de NMR. Adicione 600 µl de água de deutério ou clorofórmio-D ao tubo de NMR. A amostra deve ser escaneada por NMR dentro de 2 horas.
[00600] Preparação da amostra de HA: Retire a amostra de HA do freezer e deixe-a em temperatura ambiente por aproximadamente 30 minutos a 1 hora. Pesar 20 mg de HA em um frasco de vidro de 20 ml. Diluir 20x PBS em 1x PBS adicionando 1 porção de 20x PBS em 19 porções de água.
Pesar 340 UI de hialuronidase em um frasco de vidro de 20 ml separado.
Adicione 1,1 ml de 1x PBS ao frasco para dissolver a hialuronidase. Certifique- se de que a hialuronidase está dissolvida antes de continuar. Adicione 1 ml da solução de hialuronidase/ PBS ao frasco de HA. Coloque o frasco de HA em uma incubadora de banho-maria a 37 °C e incube por 16-24 horas. Use uma pipeta para medir 600 µl da solução de PBS HA e coloque em um barco de pesagem.
Coloque o barco de pesagem em um forno a 50 °C por 2-4 horas. Assim que o solvente secar, a amostra torna-se uma folha branca e adere ao fundo do barco de pesagem. Pesar 10 mg da amostra de HA seca e colocar a amostra em um tubo de NMR. Adicione 600 µl de água de deutério ao tubo de NMR. Armazene o tubo de NMR em temperatura ambiente. A amostra deve ser escaneada por NMR dentro de 1 semana.
[00601] Preparação da amostra de seda: Use uma pipeta para medir 1 ml de solução de seda e adicione a um frasco de vidro de 20 ml.
Cubra o frasco de vidro com um pedaço de Kimwipe e sele o Kimwipe com Parafilm. Certifique-se de que a parte superior do frasco de vidro não seja coberta por Parafilm. Coloque o frasco no congelador por 4-6 horas. Retire o frasco do congelador e coloque na câmara do liofilizador. Liofilize a amostra por 24-48 horas. Retire a amostra seca do liofilizador e pese 10 mg de seda seca.
Coloque os 10 mg de seda seca em um tubo de NMR. Adicione 600 µl de água de deutério ao tubo de NMR. Armazene o tubo de NMR em temperatura ambiente. A amostra deve ser escaneada por NMR dentro de 1 semana.
[00602] Preparação da amostra de lidocaína: Pesar 5 mg de amostra de lidocaína HCl e adicionar em um tubo de NMR. Adicione 600 µl de água de deutério ao tubo de NMR. Armazene o tubo de NMR em temperatura ambiente. A amostra deve ser escaneada por NMR dentro de 1 semana.
[00603] Preparação da amostra de gel: Pesar 600-800 mg de gel em um frasco de vidro de 20 ml. Diluir 20x PBS em 1x PBS adicionando 1 porção de 20x PBS em 19 porções de água. Pesar 340 UI de hialuronidase em um frasco de vidro de 20 ml. Adicione 1 ml de 1x PBS ao frasco para dissolver a hialuronidase. Certifique-se de que a hialuronidase está dissolvida antes de continuar. Adicione 0,8 ml de solução de hialuronidase/ PBS ao frasco de gel.
Coloque o frasco de gel em uma incubadora de banho-maria a 37 °C e incube por 16-24 horas. Use uma pipeta para medir 600 µl da solução de gel/ PBS e coloque em um barco de pesagem. Coloque o barco de pesagem em um forno a 50 °C por 2-4 horas. Assim que o solvente secar, a amostra torna-se uma folha branca e adere ao fundo do barco de pesagem. Pesar 10 mg da amostra de HA seca e colocar a amostra em um tubo de NMR. Adicione 600 µl de água de deutério ao tubo de NMR. Armazene o tubo de NMR em temperatura ambiente.
A amostra deve ser escaneada por NMR dentro de 1 semana.
[00604] Execução do teste de RMN: executar o teste de prótons de RMN na amostra dada e selecionar o número de varreduras. Para lidocaína e PEGDE, escolha 64 exames. Para todas as outras amostras, escolha 256 varreduras. Certifique-se de que o tipo correto de solvente seja considerado.
Repita conforme necessário para vários testes de amostra.
[00605] Processamento de dados de RMN: software MestReNova ou um software de RMN equivalente é utilizado para carregar e processar arquivos .fid. As seguintes correções são realizadas para cada amostra: Correção da linha de base: para corrigir a linha de base, um valor de ordem de polinomial de 3 é aplicado. Correção de fase: Para a correção de fase, todos os picos devem ser simétricos. Correção do pico do solvente: para corrigir o deslocamento químico do pico do solvente, a água de deutério é 4,79 ppm e o clorofórmio-d é 7,27 ppm. Integração: Após as correções anteriores, as seguintes integrações são realizadas para cada produto químico: Para PEGDE, os picos nos desvios químicos: 2,77-2,81 ppm, 2,96-2,99 ppm, 3,33-3,38 ppm, 3,38-3,44 ppm, 3,68-3,80 ppm e 3,95-3,40 ppm, são integrados. Para a lidocaína, os picos nos desvios químicos: 1,35-1,46 ppm, 2,21-2,27 ppm, 3,34- 3,48 ppm, 4,32-4,39 ppm e 7,21-7,33 ppm, estão integrados. Para a seda, os picos nas desvios químicos: 1,32-1,5 ppm e 3,77-4,09 ppm, são integrados. Para HA, os picos nas desvios químicos: 2,0-2,1 ppm e 3,30-4,05 ppm, são integrados. Para o gel final, os picos nos desvios químicos: 1,20-1,28 ppm, 1,35- 1,48 ppm, 2,0-2,1 ppm e 3,30-4,05 ppm, são integrados. Cada pico deve mostrar a faixa de desvios químicos. O valor de integração deve estar abaixo desta linha.
[00606] Normalização de integração: Os valores de integração de cada espectro precisam ser normalizados para calcular o MoD.
Para normalizar o valor de integração do pico: Para PEGDE, normalize a integração de 2,77-2,81 ppm como 2. Para lidocaína, normalize a integração de 1,35-1,46 ppm como 6. Para seda, normalize a integração de 1,32-1,5 ppm como
2. Para HA, normalize a integração de 2,0-2,1 ppm como 3. Para o gel final, normalize a integração de 2,0-2,1 ppm como 3.
[00607] O grau de modificação (MoD) de um hidrogel é definido como qualquer um de: nreticulados ligados MoD = ndissacarídeos de HA ou 𝑛reticulados ligados 𝑀𝑜𝐷 = 𝑛dissacarídeos de HA + 𝑛𝑢𝑛𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑝𝑒𝑡𝑖çã𝑜 𝑑𝑒 𝑆𝑃𝐹 dependendo de várias variáveis, como concentração de SPF e/ ou reticulador usado durante a síntese de hidrogel, onde n é o número de moléculas, que pode ser determinado por NMR usando deslocamentos químicos característicos de reticulador, HA, SPF e/ ou qualquer outro componente opcional como um anestésico local.
[00608] A MoD de amostras de hidrogel foi calculada a partir da espectros de RMN (ver, por exemplo, Figuras 64 e 65) com a seguinte equação (ver também “Chemical Characterization of Hydrogels Crosslinked with Polyethylene Glycol for Soft Tissue Augmentation,” Monticelli et al., Acesso liberado Maced J Med Sci. 2019 Apr 15; 1 7(7):1077-1081): 𝛿3.30-4.05 − (𝛿1.20-1.28 × ) − (𝛿1.35-1.48 × 1.25) − 11 3 MoD% = × 100% NPEG-H
[00609] O número médio de prótons (NPEG-H) em cada cadeia de PEG a partir do espectro de RMN foi calculado usando a equação: NPEG-H = (3,68-3,80 x % de substituição) + 10, onde 3,68-3,80 é o valor de integração após normalizar a integração de 2,77-2,81 ppm como 2; “% de Substituição” é uma medida do número médio de grupos glicidila por ligante PEGDE ligante, por exemplo, um meio 100% de substituição que cada ligante PEGDE tem dois grupos glicidila terminais, enquanto que um número de menos do que 100% significa que, em média, nem todo ligante PEGDE na amostra é totalmente substituído com dois grupos glicidila; e “10” é adicionado para os prótons em dois grupos glicídicos.
[00610] Sem desejar estar limitado por qualquer teoria particular, acredita-se que os seguintes deslocamentos químicos nos espectros de NMR de gel correspondem aos seguintes prótons respectivos:
[00611] 3,30-4,05: mistura de prótons de resíduos de HA, ligantes PEG, seda (SPF) e lidocaína;
[00612] 1,20-1,28: dois grupos metil terminais na lidocaína; e
[00613] 1,35-1,48: mistura de prótons em fragmentos de proteína de fibroína de seda (SPF).
[00614] O valor “11” no numerador da equação MoD representa a integração dos prótons HA na região 3,30-4,05 dos espectros. Exemplo 30c. Força de injeção (IF)
[00615] A força de injeção necessária para difundir cada hidrogel de uma seringa de 1 ml equipada com agulha 30G foi medida usando um Brookfield CT3 10K Texture Analyzer (AMETEK Brookfield, Middleboro, MA).
Cada seringa de amostra foi fixada em um acessório. O êmbolo da seringa foi comprimido por um pistão na velocidade de 0,2 mm/ s por uma distância total de viagem de 1 cm. A força aplicada ao pistão foi registrada a cada 0,05 segundo (ou 0,01 mm). A força média e a força de pico para cada amostra foram registradas e a média geral de 3 amostras foi relatada.
[00616] Os resultados para a caracterização das propriedades físico-químicas e o impacto da concentração de seda em G’, IF e MoD para os hidrogéis de seda-HA são resumidos a seguir. O G’, IF e MoD de vários hidrogéis formulados com a mesma concentração de HA e razão de reticulante PEG para HA (cerca de 30% p/ p), mas diferentes concentrações de proteína de fibroína, foram medidos. Os resultados demonstraram que tanto o G’ quanto o IF dos hidrogéis diminuíram conforme a concentração de seda nas formulações aumentou, enquanto o MoD permaneceu relativamente inalterado (Figuras 55A-C). É importante ressaltar que esses resultados indicam que G’ pode ser modulado sem alteração para MoD, variando a concentração de seda, permitindo a otimização dessas duas características cruciais do gel. Ou seja, a plataforma de formulação de gel de seda-HA permite a geração de hidrogéis que variam no módulo de armazenamento (G’) - importante para o desenvolvimento de produtos para diferentes indicações - enquanto mantém características que promovem a longevidade do produto (alto MoD) e usabilidade (operável IF).
[00617] Com base nas diferentes propriedades mecânicas das várias formulações de hidrogel de seda-HA avaliadas, uma formulação de gel de seda-HA usando 5,0% de fragmentos à base de proteína de fibroína de seda e reticulador PEG foi selecionada como um potencial candidato a preenchimento dérmico e foi avaliada em estudos posteriores, incluindo testes de biocompatibilidade ISO 10993. A formulação de hidrogel selecionada como candidata principal, AS-V1, exibiu um MoD alto (8,9 ± 0,2%) em um G’ (144 ± 24 Pa), IF operável (39,2 ± 3,4 N) usando uma agulha de calibre 30 e osmolalidade fisiológica (264 mOsmol/ kg). É composta de ácido hialurônico e fibroína de seda em uma razão em peso de 95: 5 (26 mg/ ml) com reticulador de PEG em cerca de 30% p/ p e 0,3% p/ p de lidocaína pelo peso total do hidrogel de seda-HA.
Utilizou-se seda de baixo peso molecular (< 28 kDa) e HA de 850 kDa.
[00618] Em tais produtos, materiais de gel que exibem viscoelasticidade e resistência à deformação apropriadas (materiais “mais rígidos” com G’ mais alto), facilidade de fluxo durante a injeção (baixo IF) e longevidade ou resistência à degradação in vivo (normalmente alcançada com um MoD mais alto)), são usados para selecionar candidatos a produtos de hidrogel. As concentrações finais dos candidatos a hidrogel variam de 15 mg/ ml a 26 mg/ ml (seda mais HA). Os candidatos a hidrogel exibem propriedades mecânicas incluído G’ que varia 40-700 Pa e IF variando de 10 N a > 100 N (Figura 56). O MoD desses hidrogéis foram todos semelhantes ou superiores aos preenchimentos dérmicos à base de HA comerciais.
Exemplo 31. Propriedades Óticas
[00619] As propriedades ópticas dos hidrogéis de seda-HA foram caracterizadas usando um Cary 7000 UV-vis-NIR (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) equipado com uma esfera integradora UMS. Três amostras de cada hidrogel foram medidas.
[00620] Sabe-se que a injeção com produtos de preenchimento dérmico comercialmente disponíveis dá origem a um azulado na pele, descrito como um efeito Tyndall, em alguns pacientes. Os efeitos da fibroína de seda nas propriedades ópticas dos hidrogéis à base de HA e seu potencial para compensar o efeito Tyndall foram medidos de duas maneiras.
[00621] Primeiro, os índices de refração dos hidrogéis à base de HA gerados com e sem seda foram comparados entre si e com os de um produto de preenchimento dérmico disponível comercialmente (Juvéderm® Ultra Plus XC). Todas as formulações de hidrogel testadas apresentaram índices de refração de 1,34, indicando uma propagação de luz semelhante à medida que ela interage com os vários géis e suas superfícies.
[00622] Em segundo lugar, a absorbância do candidato a preenchimento dérmico integrado com seda (AS-V1) foi avaliada e comparada a um hidrogel à base de HA (sem seda), bem como a um preenchimento dérmico comercial. AS-V1 demonstrou maior absorbância de UV e comprimentos de onda azul da luz visível do que o hidrogel sem seda e o preenchimento dérmico comercial (Figura 57).
[00623] O aumento da absorbância de UV para luz azul demonstrada por AS-V1 sugere uma probabilidade menor de causar o efeito azulado em pacientes e, portanto, sua utilidade potencial em correções estéticas relativamente superficiais em peles claras.
Exemplo 32. Teste de biocompatibilidade GLP em animais sob ISO 10993
[00624] Os estudos de GLP em animais baseados na ISO 10993 para avaliação da resposta local do tecido foram realizados usando porquinhos da índia.
[00625] Porquinhos-da-índia albinos (Cavia porcellus), cepa Hartley (livre de patógenos específicos), foram usados nesses estudos. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Uso e Cuidado de Animais. Os animais foram tratados de acordo com as diretrizes do NIH, conforme relatado no “Guia para o cuidado e uso de animais de laboratório”.
[00626] A formulação de hidrogel selecionada para desenvolvimento posterior como um produto de preenchimento dérmico potencial (Activated Silk Hydrogel-V1, AS-V1) foi testada para biocompatibilidade de acordo com os padrões ISO 10993 estabelecidos pela Organização Internacional de Padronização para avaliação biológica de dispositivos médicos,
e de acordo com as orientações do FDA, na categoria de dispositivos médicos classe III para implante permanente, contato com tecido/ osso. O candidato a hidrogel líder de formulação AS-V1 demonstrou excelentes características em testes de biocompatibilidade, o que pode levar a riscos baixos de preocupações de segurança e baixas taxas de ocorrência de evento adverso em populações de pacientes.
[00627] Os resultados do teste de biocompatibilidade confirmaram as expectativas construídas sobre a segurança demonstrada de todos os três componentes do gel para uso in vivo: (1) HA como um componente natural da matriz intracelular viscoelástica da pele; (2) seda que foi usada em muitas aplicações biomédicas diferentes ao longo da história, incluindo para reconstrução de tecido dérmico; e (3) PEG como um polímero biocompatível. Os ensaios de biocompatibilidade ISO 10993 em AS-V1 atenderam a todos os critérios de aceitação.
Exemplo 33. Teste de reversibilidade in vitro e in vivo Exemplo 33a. Testes de degradação in vitro de hidrogéis de seda-HA
[00628] Aproximadamente 1 g de cada hidrogel (AS-V1 ou Juvéderm® Ultra Plus XC) foi colocado em cada um dos três frascos junto com 1 ml de PBS (0,2 M, pH 6,2) contendo 150 U/ ml de hialuronidase e incubado a 37 °C por 30 minutos. Após a incubação, o sobrenadante foi completamente removido e o peso remanescente dos géis medido. Este processo foi repetido mais três vezes para um total de 4 ml (600 U) de hialuronidase ao longo de 120 min. O grau de degradação do hidrogel foi representado por uma razão em peso (%) do hidrogel remanescente para o hidrogel original.
Exemplo 33b. Teste de reversibilidade in vivo
[00629] Doze animais foram usados neste estudo. Cada animal recebeu seis injeções intradérmicas dorsalmente, com três locais em cada lado da coluna vertebral, conforme descrito acima. Dentro de 60 ± 30 minutos após a injeção de hidrogel de seda-HA (artigo de teste) ou Juvéderm® Ultra Plus XC (artigo controle), a reversão dos materiais de teste e controle foi tentada por degradação enzimática com hialuronidase sob a direção de um cirurgião plástico. Começando com 15 unidades, a hialuronidase (Hylenex TM, 150 U/ ml) foi injetada intradermicamente e/ ou subcutaneamente em pequenas quantidades em vários locais ao longo de cada teste ou faixa de material de controle e massageada suavemente no local. Até 0,4 ml de hialuronidase foram injetados em cada local de teste ou controle em intervalos de aproximadamente 30 minutos. A dissolução/ degradação do material de teste ou controle foi avaliada por observação macroscópica e palpação.
[00630] Os animais foram observados diariamente durante um mês para avaliar a saúde geral e a presença ou ausência de material residual. Três animais foram sacrificados em cada um dos quatro momentos após o último tratamento enzimático: 65 ± 5 minutos, 24 ± 2 horas, 7 ± 0,5 dias e 30 ± 1 dias após o último tratamento enzimático. Os locais do implante e o tecido circundante foram excisados, fixados em formalina e embebidos em parafina, seccionados e corados com hematoxilina e eosina. As lâminas foram avaliadas por um patologista cego quanto à presença de células polimorfonucleares, linfócitos, células plasmáticas, macrófagos, células gigantes, necrose de tecido, inflamação geral, neovascularização, fibrose, infiltrado gorduroso, coagulação sanguínea, deposição de colágeno e degradação e migração do gel.
Exemplo 33c. Teste de reversibilidade in vivo
[00631] Três repetições de ~ 1 g de cada hidrogel (AS-V1 ou Juvéderm Ultra Plus XC) foram digeridas com 150 U de hialuronidase a 37 °C por 30 min. Após a incubação, o peso remanescente dos géis foi medido. Este processo foi repetido mais três vezes para um total de 600 U de hialuronidase ao longo de 120 min. O grau de degradação do hidrogel in vitro foi representado como uma proporção em peso (%) do hidrogel restante para o hidrogel original.
[00632] Para o teste de reversibilidade in vivo, cada um dos doze animais recebeu seis injeções intradérmicas dorsalmente, com três locais em cada lado da coluna vertebral, conforme descrito acima. Dentro de uma hora após a injeção de hidrogéis, a reversão dos materiais de teste e controle foi tentada por degradação enzimática com hialuronidase sob a direção de um cirurgião plástico. Começando com 15 unidades, até 60 U de hialuronidase foram injetados por via intradérmica e/ ou subcutânea ao longo de cada teste ou trilha de material de controle e massageados suavemente no local em intervalos de ~ 30 minutos. A dissolução/ degradação do material de teste ou controle foi avaliada por observação macroscópica e palpação.
[00633] Os animais foram observados diariamente durante um mês para avaliar a saúde geral, e três animais foram sacrificados em 65 ± 5 minutos, 24 ± 2 horas, 7 ± 0,5 dias e 30 ± 1 dias após o último tratamento enzimático. Os locais do implante e o tecido circundante foram excisados, fixados em formalina e embebidos em parafina, seccionados e corados com hematoxilina e eosina. As lâminas foram avaliadas por um patologista cego quanto à presença de células polimorfonucleares, linfócitos, células plasmáticas, macrófagos, células gigantes, necrose tecidual, inflamação geral, neovascularização, fibrose, infiltrado gorduroso, coagulação sanguínea, deposição de colágeno e degradação e migração do gel.
[00634] A capacidade de AS-V1 ser degradada por hialuronidase de uma forma semelhante ao observado com outros géis comerciais à base de HA foi avaliada. A capacidade dos géis à base de HA de serem degradados pela hialuronidase é uma vantagem crítica para os produtos de preenchimento dérmico à base de HA, permitindo aos cirurgiões plásticos reverter rapidamente as injeções em casos de resultados ruins ou eventos adversos. Os testes in vitro e in vivo demonstraram que a capacidade da hialuronidase de degradar enzimaticamente AS-V1 não foi prejudicada. Assim, a capacidade de “reverter” a injeção cutânea de AS-V1, se necessário, é mantida na presença de seda. Os testes in vitro mostraram que, embora o AS-V1 tenha sido menos degradado do que o gel Juvéderm ® Ultra Plus XC após uma única incubação de 30 min com hialuronidase, o AS-V1 foi degradado de forma equivalente após a incubação com enzima por 60 min ou mais (Figura 58 A).
[00635] Para o teste in vivo, as seções de tecido retiradas dos locais de injeção de hialuronidase mostraram degradação quase completa (“reversão”) do material de hidrogel após uma única injeção de volume 1: 1 de hialuronidase uma hora após a injeção para 61% de AS-V1 e 47% de locais de injeção Juvéderm Ultra Plus XC (Figura 58B). Além disso, o AS-V1 exigiu menos injeções de hialuronidase para atingir a reversão total em comparação com Juvéderm Ultra Plus XC (Figura 58B). Assim, os testes in vitro e in vivo demonstraram que a capacidade da hialuronidase de “reverter” a injeção dérmica de AS-V1, se necessário, é mantida na presença de seda.
[00636] Os resultados in vitro foram bem correlacionados com os dados obtidos no estudo de reversibilidade in vivo. Aqui, três animais foram tratados como antes, cada um recebendo 3 injeções intradérmicas de 0,1 ml de AS-V1 e 3 injeções de Juvéderm® Ultra Plus XC espaçadas 1 cm na derme dorsal. Em seções de tecido retiradas de locais de injeção de hialuronidase, a degradação quase completa (“reversão”) do material de hidrogel foi confirmada após uma única injeção de volume 1: 1 de hialuronidase 60 ± 30 minutos após a injeção com AS-V1 e Juvéderm® Ultra Plus XC (dados não mostrados); no entanto, alguns locais exigiram até três injeções reversas adicionais para alcançar a remoção completa do hidrogel. No geral, AS-V1 tem um perfil de reversibilidade semelhante ao Juvéderm® Ultra Plus XC, conforme demonstrado em estudos in vivo com porquinhos da Índia e configurações de testes in vitro.
[00637] A formulação de hidrogel de seda-HA AS-V1 demonstrou excelentes características de (1) ensaio de durabilidade, o que poderá conduzir a tratamentos mais duradouros; e (2) teste de reversibilidade, que deve fornecer segurança durante o uso para provedores e pacientes.
[00638] Os resultados descritos neste exemplo para avaliação in vivo de degradação, migração e reversibilidade do hidrogel também foram semelhantes ao comparar a formulação de hidrogel AS-V1 com o produto comercial, indicando que o candidato a preenchimento dérmico de hidrogel de seda-HA AS-V1 tem longevidade e características de desempenho semelhantes às dos produtos comercializados e exibe capacidade semelhante para reversibilidade total in vivo, quando necessário.
Exemplo 34. Avaliação de respostas de tecidos locais de curto prazo para AS-V1
[00639] Para explorar a segurança e a resposta local do tecido à formulação de hidrogel AS-V1 em condições diretamente relevantes para o seu potencial como um produto de preenchimento dérmico injetável, uma ampla gama de testes demonstrando a segurança e eficácia do hidrogel AS-V1 após a injeção intradérmica foram realizados.
[00640] A resposta do tecido local aos preenchimentos dérmicos após injeção intradérmica dorsal (implante) em porquinhos da Índia foi avaliada em pontos de tempo que se estendem até seis meses após a injeção, de acordo com os requisitos da ISO 10993-6. Seis animais foram avaliados em cada momento. O pelo do dorso (lado dorsal) de cada animal foi removido, o animal foi anestesiado e os locais de injeção foram preparados assepticamente.
Cada animal recebeu seis injeções intradérmicas (implantes): três do hidrogel de seda-HA AS-V1 em um lado da coluna e três de Juvéderm® Ultra Plus XC no lado contralateral. Cada injeção distribuiu um volume de 0,1 ml por local com pelo menos 1 cm entre cada local de injeção. Os locais de injeção foram identificados com uma caneta marcadora cutânea cirúrgica. Os locais de injeção foram avaliados para eritema e edema antes da injeção; os animais foram observados diariamente durante 7 dias após a injeção para pontuação de Draize (irritação dérmica) e nos dias 3 e 4 após a injeção para hematomas. Os animais foram humanamente eutanasiados aos dias 7, 30, 90 ± 1, e 180 ± 2 e 365 ± 3 pós-injeção para exames de tecido. Os locais do implante e o tecido circundante foram excisados, fixados em formalina e embebidos em parafina, seccionados e corados com hematoxilina e eosina. Um patologista cego em relação às condições do estudo avaliou as lâminas quanto a evidências de reações locais do tecido, incluindo respostas inflamatórias, degradação do gel, migração do gel e deposição de colágeno.
[00641] Todos os ensaios foram realizados após a injeção de 0,1 ml de AS-V1 na derme dorsal de porquinhos da Índia, e os resultados foram comparados com os obtidos após a injeção com Juvéderm ® Ultra Plus XC, um preenchimento dérmico aprovado pela FDA composto por gel de HA reticulado com 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE). AS-V1 teve desempenho semelhante ou melhor do que Juvéderm® Ultra Plus XC em todos os testes, em pontos de tempo que variam de 1 dia a 6 meses após a injeção.
[00642] O teste de irritação cutânea de Draize (irritação aguda) foi realizado no dia 1 ao dia 5 após a injeção. Foi observada irritação insignificante, com pontuações de 3 ou menos (de um total de 8) observadas em todos os pontos de tempo para AS-V1 (artigo de teste) e Juvéderm® Ultra Plus XC (comparador aprovado pela FDA) (Figuras 60A-D), indicando resposta mínima indesejada do tecido após a injeção. Na verdade, o hidrogel de seda-HA teve pontuação semelhante no teste de Draize como o Juvéderm ® Ultra Plus XC, indicando que a irritação imediata que ele causa por até 5 dias após a injeção no modelo de porquinho da Índia é semelhante à observada em um produto aprovado pela FDA que não contém componentes de seda. Além disso, apoiando a conclusão de que AS-V1 causa menos irritação do que Juvéderm®
Ultra Plus XC é o hematoma mínimo pós-injeção visto com AS-V1; este hematoma é menor ou equivalente ao observado nos mesmos animais com Juvéderm® Ultra Plus XC 3 e 4 dias após a injeção (Figuras 60A-B).
[00643] Os resultados do teste neste exemplo demonstraram que o hidro gel AS-V1 causou irritação pós-injeção imediata e de médio prazo, hematomas e inflamação em níveis semelhantes ou inferiores aos observados com o produto comercial Juvéderm® Ultra Plus XC.
[00644] Além disso, uma avaliação toxicológica resumida de AS-V1 foi conduzida por um toxicologista certificado independente.
Exemplo 35. Avaliação da inflamação de longo prazo e desempenho do gel
[00645] Avaliações histológicas adicionais em porquinhos da Índia estenderam o suporte para a biocompatibilidade e o desempenho do AS- V1 até 12 meses após a injeção. Essas avaliações examinaram as respostas inflamatórias, bem como a degradação e migração dos géis in situ após a injeção intradérmica.
[00646] Foi observada inflamação mínima, com pontuações de aproximadamente 4 ou menos (de 28 possíveis) observadas em todos os pontos de tempo para ambos os géis AS-V1 e comparador (Juvéderm® Ultra Plus XC), indicando resposta mínima prejudicial do tecido aos produtos pós-injeção (Figura 61A). Perfis semelhantes foram também observados para AS-V1 e Juvéderm® Plus Ultra XC para tanto a degradação do hidrogel (Figuras 61B e 61D) quanto migração (Figuras 61C e 61 E) em matrizes de tecido da pele. Aqui, pontuações mais altas (máximo de 4) indicam mais degradação ou migração do gel; ambos são indesejáveis para preenchimentos dérmicos. Para degradação, as pontuações de AS-V1 permaneceram abaixo de 1,5, indicando níveis baixos desejáveis de degradação e um bom perfil de longevidade do gel no tecido. Para a migração, as pontuações de AS-V1 permaneceram abaixo de 2, indicando níveis baixos desejáveis de migração do gel e um bom perfil de colocação/ estabilidade de localização no tecido. Além disso, esses resultados demonstram que AS-V1 está tendo um desempenho semelhante ao Juvéderm® Ultra Plus XC em estudos intradérmicos em porquinhos da índia, tanto da migração/ degradação do gel quanto em relação às perspectivas de resposta do tecido.
[00647] Dados os perfis de desempenho de curto prazo comparáveis para AS-V1 e Juvéderm Ultra Plus XC, os perfis de longo prazo foram avaliados. Essas avaliações examinaram a durabilidade, as respostas inflamatórias e a degradação e migração dos géis in situ após a injeção intradérmica. Com relação à durabilidade, o gel (cor azul claro/ cinza) é claramente observado como ainda integrado ao redor da matriz de colágeno (rosa) 12 meses após a injeção (Figuras 62A-J), confirmando a durabilidade do AS-V1 e do Juvéderm Ultra Plus XC por até um ano no modelo de porquinhos da Índia.
[00648] Aos 3 e 6 meses após a injeção, o exame histológico indicou a integração desejada do gel de preenchimento em seções de tecido dérmico dorsal representativas. Na verdade, o produto AS-V1 é suavemente incorporado às matrizes de colágeno da pele em ambos os momentos, em contraste com os aglomerados de implante que parecem menos bem incorporados à estrutura de colágeno observada em tecidos injetados com Juvéderm® Ultra Plus XC (Figuras 63A-D). A falta de inflamação observada ou outras patologias de resposta tecidual indesejáveis indica a biocompatibilidade favorável e a capacidade de estimular a integração do colágeno por AS-V1.
Desempenho semelhante ou melhor de AS-V1 em comparação com Juvéderm® Ultra Plus XC nessas avaliações apoia o desenvolvimento de AS-V1 como um produto de preenchimento dérmico promissor.
[00649] Além disso, perfis semelhantes para a degradação do gel (Figura 61D) e migração (Figura 61E) em matrizes de tecido da pele foram observados para AS-V1 e Juvéderm Ultra Plus XC ao longo do estudo de um ano. Para degradação, as pontuações de AS-V1 permaneceram baixas, indicando um bom perfil de longevidade do gel no tecido. Para a migração, as pontuações de AS-V1 permaneceram em linha com Juvéderm Ultra Plus XC, indicando baixos níveis desejáveis de migração de gel e um bom perfil de estabilidade de localização/ colocação no tecido. Aos 3, 6 e 12 meses após a injeção, o exame histológico indicou a integração desejada do gel de preenchimento em seções de tecido dermal dorsal representativas (Figuras 63A- D).
[00650] Na verdade, o produto AS-V1 foi suavemente incorporado às matrizes de colágeno da pele em todos os três momentos, em contraste com os aglomerados de implante menos bem incorporados observados em tecidos injetados com Juvéderm Ultra Plus XC (Figuras 63A-D).
Finalmente, a ausência de patologias de resposta inflamatória ou indesejável do tecido observada indica a biocompatibilidade favorável e a capacidade de integração com o colágeno de AS-V1 (Figuras 62A-J e Figuras 63A-D).
[00651] Isso é confirmado na Figura 61F, que mostra que a inflamação mínima foi observada em todos os pontos de tempo para ambos os géis AS-V1 e comparador (Juvéderm Ultra Plus XC), indicando resposta prejudicial mínima do tecido aos produtos pós-injeção (Figura 61F).
[00652] Com relação a certos efeitos adversos comumente observados, existem várias áreas para as quais a inclusão de fibroína de seda em preenchimentos dérmicos à base de HA pode resultar em um melhor desempenho do produto do que os produtos de preenchimento atualmente disponíveis no mercado. Espera-se que os baixos níveis de irritação, hematomas e inflamação demonstrados pelo hidrogel AS-V1 se correlacionem com os baixos níveis de efeitos adversos pós-injeção imediata e precoce, como dor, hipersensibilidade, inchaço, eritema e necrose. Além disso, a formação de lesão/
nódulo foi observada com alguns produtos de preenchimento, potencialmente como resultado de um alto grau de reticulação ou do uso de tamanhos múltiplos (pesos moleculares) de HA, como ocorre nas tecnologias VyCross™. Isso pode ser potencialmente evitado com os hidrogéis contendo seda descritos neste documento, pois um HA de tamanho único é usado e o MoD pode ser facilmente modulado. Finalmente, os resultados indicam que a incorporação da proteína da seda no preenchimento dérmico também pode ajudar a evitar o efeito Tyndall indesejado que ocorre frequentemente com outros produtos de preenchimento dérmico.
[00653] AS-V1 demonstrou um bom perfil em todos os testes ISO 10993 e não demonstrou citotoxicidade, sensibilização, irritação, pirogenicidade, genotoxicidade (Ames e MLA), respostas inflamatórias locais de tecido de prazo intermediário ou toxicidade sistêmica aguda ou subcrônica foi observada com este produto.
[00654] O teste ISO 10993 e outros resultados de segurança e eficácia mostraram que o AS-V1 tem um desempenho equivalente ou melhor do que o atual líder de mercado, Juvéderm ® Ultra Plus XC, para todos os aspectos testados até o momento. Além disso, os testes descritos acima demonstraram que o gel de seda-HA se incorporou à matriz de colágeno da pele de maneira mais suave do que o Juvéderm® Ultra Plus XC. No momento, esses resultados foram confirmados com dados 6 meses após a injeção usando o modelo de porquinho da Índia.
Exemplo 35. Exemplos de Preenchimentos de Tecido de Seda-Ácido Hialurônico
[00655] HA e seda foram misturados com PEGDE na concentração inicial de 90-140 mg/ ml de HA total e seda na proporção de HA para seda de 95: 5 em solução de hidróxido de sódio a 0,1-1,0 N. O peso molecular do HA é 850 kDa. O peso molecular da seda é de baixo PM (PM < 28 kDa). Para o Produto 1, a reação de reticulação foi realizada a 55 °C durante 75 minutos. Para os Produtos 2 e 3, a reação de reticulação foi realizada à temperatura ambiente (20 °C) durante 8-24 horas. Após a reticulação, o hidrogel foi neutralizado e diluído para 40-56 mg/ ml e dialisado contra 1x PBS por 3-4 dias. Foi adicionado cloridrato de lidocaína a 0,3% p/ p ao hidrogel dialisado. A concentração final de HA total e seda no produto foi posteriormente diluída para 15-28 mg/ ml (Tabela 31). Mais especificamente, a tabela a seguir mostra as configurações nominais atuais para o Produto 1 e Produto 2 e 3 (não congelamento de design) Tabela 31 Conc.
Inicial Conc.
de Conc. de Temp. Final de Razão Tempo Produto de Formulação Seda + NaOH na De Seda + de seda de Formulação # HA reticulação reação HA para HA Reação Total (N) (°C) Total (mg/ (mg/ ml) ml) Produto 3 S02- 140 0,25 5:95 20 8 horas 24 (Profundo) 011019-01 Produto 2 S02- 90 0,25 5:95 20 15 horas 20 (superficial) 011019-03 Produto 1 75 n/ D 140 0,10 5:95 55 26 (NLF) minutos
[00656] Em algumas formas de realização, um produto profundo é indicado para injeção profunda (subcutânea e/ ou supraperiosteal) para aumento da bochecha. Em algumas formas de realização, a área de injeção mantém uma aparência melhorada ao longo da linha de base ao longo de um período de 12 meses. Em algumas formas de realização, o produto é um produto reversível e o produto pode ser dissolvido com hialuronidase.
[00657] Em algumas formas de realização, um produto superficial é indicado para aumento labial e implantação dérmica para correção de rítides periorais (rugas ao redor dos lábios). Em algumas formas de realização, a área de injeção mantém uma aparência melhorada ao longo da linha de base ao longo de um período de 12 meses. Em algumas formas de realização, o produto é um produto reversível e o produto pode ser dissolvido com hialuronidase.
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Claims (53)

REIVINDICAÇÕES
1. PREENCHIMENTO DE TECIDO BIOCOMPATÍVEL, caracterizado por compreender fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda, ácido hialurónico (HA), e polietileno glicol (PEG) e/ ou polipropileno glicol (PPG), em que uma porção do HA é modificado ou reticulado por uma ou mais porções de ligação que compreendem um ou mais de polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol (PPG), e um álcool secundário, em que as porções de ligação estão ligadas ao HA em uma extremidade do ligante.
2. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda serem modificados ou reticulados.
3. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado por uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda serem reticulados com HA.
4. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda serem reticulados com fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda.
5. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pela fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda serem substancialmente desprovidos de sericina.
6. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por uma porção de fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda terem um peso molecular ponderal médio selecionado a partir de cerca de 12 kDa, cerca de 13 kDa, cerca de 14 kDa, cerca de 15 kDa, cerca de 16 kDa, cerca de 48 kDa e cerca de 100 kDa.
7. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por uma porção de fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda terem um peso molecular ponderal médio inferior a 28 kDa.
8. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por uma porção da fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda têm baixo peso molecular, médio peso molecular ou alto peso molecular.
9. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pela fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda terem uma polidispersidade entre 1 e cerca de 5,0.
10. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pela fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda terem uma polidispersidade entre cerca de 1,5 e cerca de 3,0.
11. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo preenchimento de tecido terem um grau de modificação (MoD) de cerca de 5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de 11%, cerca de 12%, cerca de 13%, cerca de 14% ou cerca de 15%.
12. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pela modificação ou a reticulação ser obtida usando como reticulador um monoepoxi- ou diepoxi-PEG, um monoglicidil-, diglicidil-, ou de poliglicidil-PEG, um monoglicidil- ou diglicidil-PEG, um monoepoxi- ou diepoxi-PPG, um monoglicidil-, diglicidil-, ou de poliglicidil- PPG, um monoglicidil- ou diglicidil-PPG, ou quaisquer combinações dos mesmos.
13. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pela modificação ou pela reticulação ser obtida utilizando polietileno glicol diglicidil éter tendo um PM de cerca de 200 Da, a cerca de 500 Da, 1000 Da, cerca de 2000 Da, ou cerca de 6000 Da.
14. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pela modificação ou reticulação ser obtida usando polipropileno glicol diglicidil éter tendo um PM de cerca de 380 Da, ou cerca de 640 Da.
15. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado por compreender ainda lidocaína.
16. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pela concentração de lidocaína no preenchimento de tecido ser de cerca de 0,3%.
17. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser um gel.
18. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser um hidrogel.
19. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo preenchimento de tecido compreender ainda água.
20. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser monofásico.
21. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pela concentração total de HA e fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda no preenchimento de tecido ser de cerca de 15 mg/ ml, cerca de 16 mg/ ml, cerca de 17 mg/ ml, cerca de 18 mg/ ml, cerca de 19 mg/ ml, cerca de 20 mg/ ml, cerca de 21 mg/ ml, cerca de 22 mg/ ml, cerca de 23 mg/ ml, cerca de 24 mg/ ml, cerca de 25 mg/ ml, cerca de 26 mg/ ml, cerca de 27 mg/ ml, cerca de 28 mg/ ml, cerca de 29 mg/ ml, cerca de 30 mg/ ml, cerca de 31 mg/ ml, cerca de 32 mg/ ml, cerca de 33 mg/ ml, cerca de 34 mg/ ml, cerca de 35 mg/ ml, cerca de 36 mg/ ml, cerca de 37 mg/ ml, cerca de 38 mg/ ml, cerca de 39 mg/ ml ou cerca de 40 mg/ ml.
22. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pela proporção de HA a fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda no material de preenchimento de tecido ser de cerca de 91/9, cerca de 92/8, cerca de 93/7, cerca de 94/6, cerca de 95/5, cerca de 96/4, cerca de 97/3, cerca de 18/12, cerca de 27/3, cerca de 29,4/0,6, cerca de 99/1, cerca de 92,5/7,5 ou cerca de 90/10.
23. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser um preenchimento dérmico.
24. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser biodegradável.
25. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser injetável.
26. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser injetável através de agulhas de 30 G ou 27 G.
27. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo preenchimento de tecido ter um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 5 Pa a cerca de 500 Pa.
28. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo preenchimento de tecido ter um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 15 Pa a cerca de 50 Pa.
29. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo preenchimento de tecido ter um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 50 Pa a cerca de 100 Pa.
30. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo preenchimento de tecido ter um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 100 Pa a cerca de 200 Pa.
31. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo preenchimento de tecido ter um módulo de armazenamento (G’) de cerca de 200 Pa a cerca de 300 Pa.
32. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 31, caracterizado por G’ ser medido por meio de uma tensão oscilatória de cerca de 1 Hz, cerca de 5 Hz ou cerca de 10 Hz.
33. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo preenchimento de tecido ter uma viscosidade complexa de cerca de 1 Pa · s a cerca de 10 Pa · s.
34. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pela viscosidade complexa ser medida por meio de um estresse oscilatório de cerca de 1 Hz, cerca de 5 Hz ou cerca de 10 Hz.
35. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser um preenchimento de tecido profundo.
36. PREENCHIMENTO DE TECIDO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser um preenchimento de tecido superficial.
37. MÉTODO DE TRATAMENTO DE UMA CONDIÇÃO EM UM SUJEITO EM NECESSIDADE DO MESMO, caracterizado por compreender a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um preenchimento de tecido, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36.
38. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pela condição ser uma condição da pele.
39. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pela condição da pele ser selecionada a partir do grupo que consiste em desidratação da pele, falta de elasticidade da pele, aspereza da pele, falta de firmeza da pele, uma linha de estiramento da pele, uma marca de estiramento da pele, palidez da pele, um ponto cutâneo, uma bochecha encovada, um lábio fino, um defeito retro-orbital, uma dobra facial e uma ruga.
40. MÉTODO DE TRATAMENTO COSMÉTICO EM UM SUJEITO EM NECESSIDADE DO MESMO, caracterizado por compreender a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um preenchimento de tecido, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36.
41. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo preenchimento de tecido ser administrado em uma região dérmica do sujeito.
42. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método ser um aumento, uma reconstrução, o tratamento de uma doença, o tratamento de um distúrbio, a correção de um defeito ou imperfeição de uma parte do corpo, região ou área.
43. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método ser um aumento facial, uma reconstrução facial, tratamento de uma doença facial, tratamento de um distúrbio facial, tratamento de um defeito facial ou tratamento de uma imperfeição facial.
44. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método compreender a administração subcutânea profunda e/ ou supraperiosteal profunda.
45. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método compreender o aumento da bochecha.
46. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método compreender o aumento dos lábios.
47. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método compreender implantação dérmica.
48. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método compreender a correção de rítides periorais.
49. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizado pelo método compreender a correção da dobra nasolabial.
50. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 49, caracterizado pelo preenchimento de tecido resistir à biodegradação, bioerosão, bioabsorção e/ ou biorresorção, por pelo menos cerca de 3 dias, cerca de 7 dias, cerca de 14 dias, cerca de 21 dias, cerca de 28 dias, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses ou cerca de 6 meses.
51. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 4 9, caracterizado pela administração do preenchimento de tecido ao sujeito resultar em uma resposta inflamatória reduzida em comparação com a resposta inflamatória induzida por um preenchimento de tecido controle compreendendo um HA substancialmente semelhante, em que o preenchimento de tecido controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda.
52. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 49, caracterizado pela administração do preenchimento de tecido ao sujeito resultar em uma resposta inflamatória reduzida em comparação com a resposta inflamatória induzida por um preenchimento de tecido controle compreendendo um HA substancialmente semelhante, em que o preenchimento de tecido controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda e/ ou PEG ou PPG.
53. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 49, caracterizado pela administração do preenchimento de tecido ao sujeito resultar em um aumento ou diminuição da produção de colágeno em comparação com a produção de colágeno induzida por um preenchimento de tecido controle compreendendo um HA substancialmente semelhante, em que o preenchimento de tecido controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda, ou em que o preenchimento de tecido controle não inclui fibroína de seda ou fragmentos de fibroína de seda e/ ou PEG ou PPG.
Começar com uma fonte de seda, por exemplo casulos de B mori
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 894/977 Picar casulos de B mori
Extrair sericina (tempo e temperatura) enxaguando Dissolver o casulo completo (faixa de com água quente (para remover sericina e Na2CO3) temperatura e tempo)
Dissolver a seda em LiBr (temperatura constante na imersão e ao Usar coluna para remover sericina longo do tempo, temperatura e faixa de tempo) (adsorção, pH, iônico) 1/83
Detritos pré-enchimento e diluir (em LiBr ou H2O) (em
Figura 1 qualquer ordem)
Figura 1 Diálise (variar corte de MW, tubo, TFF (variar corte de MW, cassete) parâmetros de operação)
Diluir ou concentrar a solução com TFF ou evaporador
Casulos de B. mori
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 895/977 Cortar casulos
Extrair sericina (variando temperatura e tempo) 2/83
Enxágue com água quente a 60 °C (para remover sericina e Na2CO3)
Figura 2 Adicionar LiBr à seda (variando a temperatura)
Colocar em forno a 60 °C por 1 h, 4h, 6h, 24 h, 48 h, 168 h, ou 80 °C, 100 °C e 120 °C por 1 h, 4 h, ou 6 h
Concentração de Brometo de Lítio e Carbonato
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 896/977 de Sódio em Solução de Proteína de Seda Identificação da Descrição da Amostra Concentração média de Na2CO3 Concentração média de Amostra (ppm) LiBr (ppm) 3/83
Figura 3 Método: Extração a 100C por 60 minutos, enxágue a 60C, LiBr a 100C em forno de 100 °C por 60 minutos.
Notar que TFF pode estar executando em taxas de fluxo mais longa e/ ou diferente (como variado entre A-C e D-F) para alterar ppm de Na2CO3 e LiBr.
Teor de Brometo de Lítio e Carbonato de Sódio em Solução
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 897/977 de Proteína de Seda
Identificação Equivalente de Volume de Concentração da Amostra Solução para (X) Filmes Peso da Amostra (mg) 4/83
Figura 4 Limpo
*ND = Não Detectado
Método: 100 °C de fervura por 60 minutos, enxágue a 60C, LiBr em forno de 60 °C por 4 a 6 horas
Pesos Moleculares de Solução de Proteína de Seda
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 898/977 Identificação da Descrição da Polidispersividade Amostra Amostra (PD) (Mw/Mn) 5/83
Figura 5 Solução de proteína de seda em água
Método: TFF: Extração a 100 °C por 60 minutos, enxágue a 60 °C, LiBr em forno a 100 °C por 60 minutos.
Proteina de Seda: Extração a 100 °C por 20 minutos, enxágue a RT, LiBr em forno a 60 °C por 4-6 horas.
Volume de Extração (g)
massa % de perda de
Figura 6
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 900/977 Volume de Extração x % de Perda de Massa 7/83 massa
Figura 7 % de perda de Volume de Extração (g)
Amostra PM médio
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 901/977 8/83
Figura 8 média
*TFF-10-0019 de extração de 225 g / dissolução de 35 g
*TFF-10-0034 de extração de 100 g / dissolução de 17 a 35 g
*TFF-10-0033 de extração de 100 g / dissolução de 100 g
30 min x 60 min: Fervura a 100 °C, LiBr a 100 °C, forno a 100 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 902/977 9/83
Figura 9 1h 1h 4h 4h 6h 6h
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 903/977 30 min x 60 min: Fervura a 100 °C, LiBr em fervura, forno a 60 °C 10/83
Figura 10 4h 4h
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 904/977 30 min x 60 min: Fervura a 100 °C, LiBr a 60 °C, forno a 60 °C 11/83
Figura 11 1h 1h 4h 4h
30 min x 60 min: Fervura a 100 °C, LiBr a 80 °C, forno a 80 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 905/977 12/83
Figura 12 6h 6h
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 906/977 30 min x 60 min: Fervura a 100 °C, LiBr a 80 °C, forno a 60 °C 13/83
Figura 13 4h 4h 6h 6h
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 907/977 30 min x 60 min: Fervura a 100 °C, LiBr a 100 °C, forno a 60 °C 14/83
Figura 14 4h 4h 6h 6h
30 min x 60 min: Fervura a 100 °C, LiBr a 140 °C, forno a 140 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 908/977 15/83
Figura 15 4h 4h 6h 6h
Extração a 90 °C x 100 °C: 60 min, LiBr a 100 °C, forno a 100 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 909/977 16/83
Figura 16 4h 4h 6h 6h
Temperatura de LiBr: Fervura a 100 °C, 60 min, forno a 60 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 910/977 17/83
Figura 17 LiBr a 60 °C, 1 h LiBr a 100 °C, 1 h LiBr a RT, 4 h LiBr a 60 °C, 4 h LiBr a 80 °C, 4 h LiBr a 100 °C, 4 h LiBr em fervura, 4 h LiBr a RT, 6 h LiBr a 80 °C, 6 h LiBr a 100 °C, 6 h
Temperatura de LiBr: Fervura a 100 °C, 30 min, forno a 60 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 911/977 18/83
Figura 18 LiBr a 60 °C, 4 h LiBr a 80 °C, 4 h LiBr a 100 °C, 4 h LiBr a 80 °C, 6 h LiBr a 100 °C, 6 h
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 912/977 Temperatura do forno: Fervura a 100 °C, 30 min, LiBr a 100 °C 19/83
Figura 19 Forno a 60 °C, 4 h Forno a 100 °C, 4 h Forno a 60 °C, 6 h Forno a 100 °C, 6 h
Temperatura do forno: Fervura a 100 °C, 60 min, LiBr a 100 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 913/977 20/83
Figura 20 Forno a 60 °C, 1 h Forno a 100 °C, 1 h Forno a 60 °C, 4 h Forno a 100 °C, 4 h Forno a 60 °C, 6 h Forno a 100 °C, 6 h
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 914/977 Temperatura do forno: Fervura a 100 °C, 60 min, LiBr a 140 °C 21/83
Figura 21 Forno a 60 °C, 4 h Forno a 140 °C, 4 h
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 915/977 Temperatura do forno: Fervura a 100 °C, 30 min, LiBr a 140 °C 22/83
Figura 22 Forno a 60 °C, 4 h Forno a 140 °C, 4 h Forno a 60 °C, 6 h Forno a 140 °C, 6 h
Temperatura do forno: Fervura a 100 °C, 60 min, LiBr a 80 °C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 916/977 23/83
Figura 23 Forno a 60 °C, 4 h Forno a 80 °C, 4 h Forno a 60 °C, 6 h Forno a 80 °C, 6 h
Todos os dados 100C de fervura, 30 min, LiBr a 100C, Forno a 100C
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 917/977 100C de fervura, 60 min, LiBr a 100C, Forno a 100C
100C de fervura, 30 min, LiBr a 140C, Forno a 60C
100C de fervura, 60 min, LiBr a 80C, Forno a 80C
100C de fervura, 60 min, LiBr a 100C, Forno a 60C
100C de fervura, 60 min, LiBr a 140C, Forno a 60C
100C de fervura, 60 min, LiBr a RT, Forno a 60C
90C de fervura, 60 min, LiBr a 100C, Forno a 100C
100C de fervura, 30 min, LiBr a 60C, Forno a 60C 24/83
100C de fervura, 30 min, LiBr a 80C, Forno a 80C
Figura 24 100C de fervura, 30 min, LiBr a 80C, Forno a 60C
100C de fervura, 30 min, LiBr a 100C, Forno a 60C
100C de fervura, 30 min, LiBr a 140C, Forno a 140C
Peso Molecular Médio (Da) 100C de fervura, 60 min, LiBr a 60C, Forno a 60C
100C de fervura, 60 min, LiBr a 80C, Forno a 60C
Forno a 100C, 60 min, LiBr a 140C, Forno a 140C
Tempo de forno (h)
Temp. de Forno = Temp. de LiBr: Rodada 2
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 918/977 Dados de Peso Molecular: Temp. de Forno = Temp. de LiBr 25/83
Figura 25 Peso Molecular (Da) Tempo (h)
Figura 26
CONTROLE
Figura 27
Perfil de Degradação Enzimática
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 921/977 28/83
Figura 28 Porcentagem de Mudança de Massa Tempo de Incubação (h) Hidrogel de Seda-HA Hidrogel de HA
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 922/977 Inflamação (granulomatosa)
Material de implante 29/83
Figura 29 Inflamação (granulomatosa)
Músculo
Inflamação Material de implante
Figura 30
Fibras musculares
Inflamação (granulomatosa) Adipócito
Figura 31
Músculo Adipócitos
Inflamação Tecido Conjuntivo
Figura 32
Fibras musculares
Inflamação (granulomatosa) Adipócito
Figura 33
Adipócitos
Inflamação Tecido Conjuntivo
Músculo Vaso sanguíneo
Figura 34
% de T
Figura 35
% de T
Figura 36
Músculo Célula adiposa
Tecido conjuntivo fibroso Implante
Figura 37
Célula adiposa Tecido conjuntivo fibroso Implante
Figura 38
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 932/977 Músculo Implante e penetração em músculo com inflamação 39/83
Figura 39 Implante
Célula adiposa
Tecido conjuntivo fibroso
Músculo
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 933/977 Implante
Célula adiposa
Macrófagos 40/83
Figura 40 Implante
Tecido conjuntivo fibroso
Músculo
Célula adiposa Implante
Macrófagos
Implante
Figura 41
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 935/977 Implante Músculo
Fibrose e degeneração 42/83 através do músculo
Figura 42 Tecido conjuntivo fibroso
Células adiposas
Figura 43
Figura 44
Figura 45
Figura 46
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 940/977 90 + 10 mg/ml (700K+1,5M) de HA + seda, diluída para 40 mg/ ml de HA: G’ a 5 Hz 47/83
Figura 47A Mg/ ml de seda presente durante reticulação
Seda de baixo MW pré-dial Seda de médio MW pré-dial
Seda de baixo MW pós-dial Seda de médio MW pós-dial
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 941/977 25 mg/ml 1,5MDa de HA + seda: G’ a 5 Hz 48/83
Figura 47B mg/ ml de seda adicionada
Seda de baixo MW pré-dial Seda de médio MW pré-dial
Seda de baixo MW pós-dial Seda de médio MW pós-dial
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 942/977 90 + 10 mg/ml (700K+1,5M) de HA + seda, diluída para 40 mg/ ml de HA: inchaço durante diálise 49/83
Figura 48A Razão de inchaço na diálise Mg/ ml de seda presente durante reticulação
Seda de baixo MW Seda de médio MW
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 943/977 25 mg/ml 1,5MDa de HA + seda: inchaço durante diálise 50/83
Figura 48B Razão de inchaço na diálise mg/ ml de seda
Seda de baixo MW Seda de médio MW
Concentração de Seda (mg/ml) Absorbância
Figura 49A
Concentração de Seda (mg/ml)
Absorbância
Figura 49B
Amostras de Seda de Baixo MW
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 946/977 Absorbância 53/83
Figura 50A Comprimento de onda (nm) 0 mg/ml de seda 0,6 mg/ml de seda
1,2 mg/ml de seda 5 mg/ml de seda
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 947/977 Amostras de Seda de Médio MW 54/83
Absorbância
Figura 50B Comprimento de onda (nm) 0 mg/ml de seda 0,6 mg/ml de seda
6 mg/ml de seda 12 mg/ml de seda
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 948/977 % de Transmitância de Seda x Sem Seda 55/83
Figura 51 % de Transmitância Comprimento de onda (nm)
3 mg/ml de seda 0 mg/ml de seda
Petição 870210055263, de 18/06/2021, pág. 949/977 56/83 íons de assinatura de PEG
Figura 52 íons de assinatura de seda íons de assinatura de seda íons de assinatura de seda
Absorbância relativa
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