BR112021011340A2 - Ligantes de peptídeo bicíclico específicos para mt1-mmp - Google Patents

Abstract

ligantes de peptídeo bicíclico específicos para mt1-mmp. a presente invenção refere-se a polipeptídeos que são covalentemente ligados a estruturas moleculares de modo que duas ou mais alças de peptídeo sejam subtendidas entre os pontos de ligação à estrutura. em particular, a invenção descreve peptídeos que são ligantes de alta afinidade de metaloprotease de membrana tipo 1 (mt1-mmp). a invenção da mesma forma descreve conjugados de fármacos compreendendo os referidos peptídeos, conjugados com um ou mais grupos efetores e/ou funcionais que têm utilidade em imagiologia e terapia de câncer alvejada.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "LIGAN- TES DE PEPTÍDEO BICÍCLICO ESPECÍFICOS PARA MT1-MMP".

CAMPO DE INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a polipeptídeos que são co- valentemente ligados a estruturas moleculares de modo que duas ou mais alças de peptídeo sejam subtendidas entre os pontos de ligação à estrutura. Em particular, a invenção descreve peptídeos que são li- gantes de alta afinidade de metaloprotease de membrana tipo 1 (MT1- MMP). A invenção da mesma forma descreve conjugados de fármacos compreendendo os referidos peptídeos, conjugados com um ou mais grupos efetores e/ou funcionais que têm utilidade em imagens e tera- pia de câncer alvejada.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Os peptídeos cíclicos são capazes de se ligar com alta afi- nidade e especificidade alvo a alvos proteicos e, portanto, são uma classe de molécula atraente para o desenvolvimento de terapêuticos. Na verdade, vários peptídeos cíclicos já são usados com sucesso na clínica, como por exemplo o peptídeo antibacteriano vancomicina, o fármaco imunossupressor ciclosporina ou o fármaco anticâncer octreo- tida (Driggers e outro (2008), Nat Rev Drug Discov 7 (7), 608-24). Bo- as propriedades de ligação resultam de uma superfície de interação relativamente grande formada entre o peptídeo e o alvo, bem como a flexibilidade conformacional reduzida das estruturas cíclicas. Normal- mente, os macrociclos se ligam a superfícies de várias centenas de angstrom quadrados, como por exemplo o peptídeo cíclico CXCR4 antagonista CVX15 (400 Å2; Wu e outro (2007), Science 330, 1066- 71), um peptídeo cíclico com a ligação de motivo Arg-Gly-A-Asp à in- tegrina αVb3 (355 Å2) (Xiong e outro (2002), Science 296 (5565), 151- 5) ou a ligação do inibidor de peptídeo cíclico upain-1 ao ativador de plasminogênio do tipo uroquinase (603 Å2; Zhao e outro (2007), J

Struct Biol 160 (1), 1-10).

[003] Devido à sua configuração cíclica, os macrociclos de peptí- deo são menos flexíveis do que os peptídeos lineares, levando a uma menor perda de entropia após a ligação aos alvos e resultando em uma afinidade de ligação mais alta. A flexibilidade reduzida da mesma forma leva ao bloqueio de conformações específicas do alvo, aumen- tando a especificidade de ligação em comparação com os peptídeos lineares. Este efeito foi exemplificado por um inibidor potente e seletivo da metaloproteinase 8 de matriz (MMP-8) que perdeu sua seletividade sobre outras MMPs quando seu anel foi aberto (Cherney e outro (1998), J Med Chem 41 (11), 1749 -51). As propriedades de ligação favoráveis alcançadas através da macrociclização são ainda mais pro- nunciadas em peptídeos multicíclicos tendo mais do que um anel de peptídeo como por exemplo na vancomicina, nisina e actinomicina.

[004] Diferentes equipes de pesquisa previamente amarraram polipeptídeos com resíduos de cisteína a uma estrutura molecular sin- tética (Kemp e McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmerman e outro (2005), ChemBioChem). Meloen e colegas de trabalho usaram tris(bromometil)benzeno e moléculas relacionadas para a ciclização rápida e quantitativa de múltiplas alças de peptídeos em estruturas sintéticas para mimetismo estrutural de superfícies de proteínas (Tim- merman e outro (2005), ChemBioChem). Os métodos para a geração de compostos de fármacos candidatos em que os referidos compostos são gerados ligando polipeptídeos contendo cisteína a uma estrutura molecular como, por exemplo, tris(bromometil)benzeno são descritos em WO 2004/077062 e WO 2006/078161. Outros exemplos adequa- dos de estruturas moleculares incluem as estruturas não aromáticas descritos em Heinis e outro (2014) Angewandte Chemie, International Edition 53 (6) 1602-1606.

[005] Abordagens combinatórias com base em exibição de fago foram desenvolvidas para gerar e rastrear grandes bibliotecas de pep- tídeos bicíclicos para alvos de interesse (Heinis e outro (2009), Nat Chem Biol 5 (7), 502-7 e WO 2009/098450). Resumidamente, bibliote- cas combinatórias de peptídeos lineares contendo três resíduos de cisteína e duas regiões de seis aminoácidos aleatórios (Cys-(Xaa)6- Cys-(Xaa)6-Cys) foram exibidas no fago e ciclizadas por ligação cova- lente das cadeias laterais de cisteína a uma pequena estrutura de mo- lécula.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[006] De acordo com um primeiro aspecto da invenção, é forne- cido um ligante de peptídeo específico para MT1-MMP compreenden- do um polipeptídeo compreendendo pelo menos três resíduos de ciste- ína, separados por pelo menos duas sequências de alça, e uma estru- tura molecular que forma ligações covalentes com os resíduos de cis- teína do polipeptídeo de modo que pelo menos duas alças de polipep- tídeo sejam formadas na estrutura molecular, caracterizada pelo fato de que a referida estrutura molecular é 1,1’,1’’-(1,3,5-triazinano-1,3,5- triil)triprop-2-en-1-ona (TATA).

[007] De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecido um conjugado de fármaco que compreende um ligante de peptídeo, como definido aqui, conjugado a um ou mais grupos efetores e/ou fun- cionais.

[008] De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo um ligante de peptídeo ou um conjugado de fármaco como aqui definido em combinação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[009] De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecido um ligante de peptídeo ou conjugado de fármaco, como definido aqui, para uso na prevenção, supressão ou tratamento de uma doença ou distúrbio mediado por MT 1-MMP.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0010] Figura 1: Alterações de peso corporal e rastreamento do volume do tumor após a administração de BT17BDC58 em camun- dongos nus BALB/c fêmeas com xenoenxerto HT1080. Os pontos de dados representam o peso corporal médio do grupo. As barras de erro representam o erro padrão da média (SEM).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0011] Em uma modalidade, as referidas sequências de alça com- preendem 2, 3, 5, 6, 7 ou 9 aminoácidos. Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem 3 ou 7 aminoácidos.

[0012] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 7 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 2 aminoácidos, tais como: CEESFYPECDHC (SEQ ID NO: 1); em particular: A-(SEQ ID NO: 1)-A (aqui referido como 17-108-02).

[0013] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 3 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 6 aminoácidos, tais como: CPDLCLDLFPNC (SEQ ID NO: 2); e CPELCVDLYPHC (SEQ ID NO: 3); em particular: A-(SEQ ID NO: 2)-A (aqui referido como 17-111-01). A-(SEQ ID NO: 3)-A (aqui referido como 17-111-02).

[0014] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 6 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 3 aminoácidos, tais como:

CHPEWVSCEFHC (SEQ ID NO: 4); em particular: A-(SEQ ID NO: 4)-A (aqui referido como 17-116-01).

[0015] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 3 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 7 aminoácidos, tal como CSHECALLFPKTC (SEQ ID NO: 5); CFDECQLLFPKTC (SEQ ID NO: 6); CLDECKLLFPKTC (SEQ ID NO: 7); CREECMLLFPKTC (SEQ ID NO: 8); CETECALLFPRSC (SEQ ID NO: 9); CADECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 10); CDVECRLLFPRSC (SEQ ID NO: 11); CIDECRLLFPRSC (SEQ ID NO: 12); CVRECALLFPKTC (SEQ ID NO: 13); CV [HArg] ECALLFPKTC (SEQ ID NO: 14); CVRECALLFPRTC (SEQ ID NO: 15); CVRECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 16); CV [HArg] ECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 17); CV [HArg] ECALLFPATC (SEQ ID NO: 18); CVAECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 19); CVTECQLLFPKTC (SEQ ID NO: 20); CRHECELLFPKTC (SEQ ID NO: 21); CQRECALLFPKTC (SEQ ID NO: 22); CVRECTLLFPKTC (SEQ ID NO: 23); CTIECALLFPKTC (SEQ ID NO: 24); CARECALLFPKTC (SEQ ID NO: 25); CINECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 26); CYTECSLLFPKTC (SEQ ID NO: 27);

CHEECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 28); CLEECKLLFPKTC (SEQ ID NO: 29); CIDECALLFPRTC (SEQ ID NO: 30); CYEECRLLFPRTC (SEQ ID NO: 31); CVRECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 32); CHIECALLFPKTC (SEQ ID NO: 33); CKRECMLLFPKTC (SEQ ID NO: 34); CYRECALLFPKTC (SEQ ID NO: 35); CLTECALLFPKTC (SEQ ID NO: 36); CEVECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 37); CEAECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 38); CVQECALLFPKTC (SEQ ID NO: 39); CIRECSLLFPKTC (SEQ ID NO: 40); CVTECALLFPKTC (SEQ ID NO: 41); CVAECKLLFPKTC (SEQ ID NO: 42); CVGECALLFPKTC (SEQ ID NO: 43); CVVECALLFPKTC (SEQ ID NO: 44); CVFECALLFPKTC (SEQ ID NO: 45); CA [HArg] ECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 46); CV [HArg] ECALLFA [HArg] TC (SEQ ID NO: 47); CV [HArg] ECALLFP [HArg] AC (SEQ ID NO: 48); CV [HArg] ECALL [1Nal] P [HArg] TC (SEQ ID NO: 49); CV [HArg] ECALL [Cha] P [HArg] TC (SEQ ID NO: 50); CV [HArg] ECALLF [Pip] [HArg] TC (SEQ ID NO: 51); CV [HArg] ECALLFP [HArg] SC (SEQ ID NO: 52); CV [HArg] ECALLFP [HArg] [HSer] C (SEQ ID NO: 53); CV [HArg] ECALLF [HyP] [HArg] TC (SEQ ID NO: 54); CV [HArg] EC [Aib] LLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 55); CV [HArg] ECAL [Nle] FP [HArg] TC (SEQ ID NO: 56); CV [HArg] ECA [tBuAla] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 57);

CV [HArg] ECA [Nle] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 58); CV [Aad2] ECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 59); CP [HArg] ECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 60); CV [HArg] ECALL [4FlPhe] P [HArg] TC (SEQ NO: 61); CV [HArg] ECAL [tBuGly] FP [HArg] TC (SEQ ID NO: 62); CV [HArg] ECAL [Cha] FP [HArg] TC (SEQ ID NO: 63); CV [HArg] ECALL [2Nal] P [HArg] TC (SEQ ID NO: 64); CV [HArg] ECALLFP [HArg] [HyV] C (SEQ ID NO: 65); C [tBuGly] [HArg] ECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 66); CVEECALLFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 67); CV [HArg] ECA [Cpa] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 68); CV [HArg] ECA [Cba] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 69); CV [HArg] ECA [C5A] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 70); CV [HArg] ECA [Cha] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 71); CV [HArg] ECA [tBuGly] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 72); CV [HArg] ECALLF [cis-HyP] [HArg] TC (SEQ ID NO: 73); CV [HArg] ECAL [Cpa] FP [HArg] TC (SEQ ID NO: 74); CV [HArg] ECAL [C5A] FP [HArg] TC (SEQ ID NO: 75); CV [HArg] ECA [tBuAla] LF [HyP] [HArg] TC (SEQ ID NO: 76); CV [HArg] ECA [tBuAla] [tBuGly] F [HyP] [HArg] TC (SEQ ID NO: 77); e C [tBuGly] [HArg] ECA [tBuAla] LFP [HArg] TC (SEQ ID NO: 78); em que Aad representa ácido alfa-L-aminoadípico, Aib representa áci- do aminoisobutírico, C5a representa beta-ciclopentil-L-alanina, Cba representa β-ciclobutilalanina, Cha representa 3-cicloexil-L-alanina, Cpa representa beta-ciclopropil-L-alanina, 4FlPhe representa 4-fluoro- L-fenilalanina, HArg representa homoarginina, HyP representa hidroxi- prolina, HyV representa 3-hidroxi-L-valina, HSer representa homoseri- na, 1Nal representa 1-naftilalanina, 2Nal representa 2-naftilalanina, Nle representa norleucina, Pip representa ácido pipecólico, tBuAla repre-

senta t-butil-alanina, tBuGly representa t-butil-glicina; em particular: A-(SEQ ID NO: 5)-A (aqui referido como 17-120-00); A-(SEQ ID NO: 6)-A (aqui referido como 17-120-01); A-(SEQ ID NO: 7)-A (aqui referido como 17-120-02); A-(SEQ ID NO: 8)-A (aqui referido como 17-120-03); A-(SEQ ID NO: 9)-A (aqui referido como 17-120-04); A-(SEQ ID NO: 10)-A (aqui referido como 17-120-05); A-(SEQ ID NO: 11)-A (aqui referido como 17-120-07); A-(SEQ ID NO: 12)-A (aqui referido como 17-120-08); APPP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T01); QISP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T02); ALPP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T03 e BCY1124); Ac-ALPP- (SEQ ID NO: 13) (aqui referido como Ac- (17-120-09-T03) e BCY1125); Sar3-ALPP- (SEQ ID NO: 13) (aqui referido como Sar3-A- (17-120-09- T03)); GPPP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T04); SPPP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T05); NPPP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T06); EPPP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T07); HPPP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T08); APNP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T09); APDP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T10); APLP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T11); APAP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T12); APHP- (SEQ ID NO: 13)-A (aqui referido como 17-120-09-T13); Sar3-ALPP- (SEQ ID NO: 14) (aqui referido como Sar3-A-(17-120-09- T03) HArg2);

Sar3-ALPP- (SEQ ID NO: 15) (aqui referido como Sar3-A-(17-120-09- T03) Arg9); Sar3-ALPP- (SEQ ID NO: 16) (aqui referido como Sar3-A-(17-120-09- T03) HArg9); (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como (B-Ala)- Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 HArg9); Ac- (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como Ac- (B- Ala)-Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 HArg9); ALPP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY3959); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY9933); [Ac] APP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY9934); [Ac]LAP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY9935); [Ac]LPA-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY9936); [Ac]-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY9968); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY11147); [Ac]LPY-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY11148); [Ac][dA]PP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY11165); [Ac]L[dA]P-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY11166); [Ac]LP[dA]-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como BCY11167); ALPP-(SEQ ID NO: 17)-A (aqui referido como BCY10288). (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 18) (aqui referido como (B-Ala)- Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 Ala9); (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 19) (aqui referido como (B-Ala)- Sar10-A-(17-120-09-T03) Ala2 HArg9); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 19) (aqui referido como BCY9938); APMP-(SEQ ID NO: 20)-A (aqui referido como 17-120-10-T01); APSP-(SEQ ID NO: 21)-A (aqui referido como 17-120-11-T01); AALP-(SEQ ID NO: 22)-A (aqui referido como 17-120-12-T01); ALDP-(SEQ ID NO: 23)-A (aqui referido como 17-120-13-T01); ADRP-(SEQ ID NO: 24)-A (aqui referido como 17-120-14-T01);

ATQP-(SEQ ID NO: 25)-A (aqui referido como 17-120-15-T01); SPPP-(SEQ ID NO: 25)-A (aqui referido como 17-120-15-T02); ARHP-(SEQ ID NO: 26)-A (aqui referido como 17-120-16-T01); ALPP-(SEQ ID NO: 27)-A (aqui referido como 17-120-17-T01); A-(SEQ ID NO: 28)-A (aqui referido como 17-120-18); A-(SEQ ID NO: 29)-A (aqui referido como 17-120-19); A-(SEQ ID NO: 30)-A (aqui referido como 17-120-20); A-(SEQ ID NO: 31)-A (aqui referido como 17-120-21); APPP-(SEQ ID NO: 31)-A (aqui referido como 17-120-21-T01); APSP-(SEQ ID NO: 32)-A (aqui referido como 17-120-22-T01); PLPP-(SEQ ID NO: 32)-A (aqui referido como 17-120-22-T02); APAP-(SEQ ID NO: 33)-A (aqui referido como 17-120-23-T01); AVEP-(SEQ ID NO: 34)-A (aqui referido como 17-120-24-T01); AEPA-(SEQ ID NO: 35)-A (aqui referido como 17-120-25-T01); ASPP-(SEQ ID NO: 36)-A (aqui referido como 17-120-26-T01); AAPP-(SEQ ID NO: 37)-A (aqui referido como 17-120-27-T01); APPP-(SEQ ID NO: 38)-A (aqui referido como 17-120-28-T01); AVPP-(SEQ ID NO: 39)-A (aqui referido como 17-120-29-T01); SPPP-(SEQ ID NO: 40)-A (aqui referido como 17-120-30-T01); HLPP-(SEQ ID NO: 41)-A (aqui referido como 17-120-31-T01); RLPP-(SEQ ID NO: 41)-A (aqui referido como 17-120-31-T02); APPP-(SEQ ID NO: 41)-A (aqui referido como 17-120-31-T03); MPPP-(SEQ ID NO: 42)-A (aqui referido como 17-120-32-T01); SPPP-(SEQ ID NO: 43)-A (aqui referido como 17-120-33-T01); APPP-(SEQ ID NO: 44)-A (aqui referido como 17-120-34-T01); APPP-(SEQ ID NO: 45)-A (aqui referido como 17-120-35-T01); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 46) (aqui referido como BCY9937); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 47) (aqui referido como BCY9943); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 48) (aqui referido como BCY9945); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 49) (aqui referido como BCY9946);

[Ac]LPP-(SEQ ID NO: 50) (aqui referido como BCY9949); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 51) (aqui referido como BCY9951); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 52) (aqui referido como BCY9952); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 53) (aqui referido como BCY9953); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 54) (aqui referido como BCY9954); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 55) (aqui referido como BCY9955); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 56) (aqui referido como BCY9957); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 57) (aqui referido como BCY9959); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 57) (aqui referido como BCY12401); [Ac] EYP-(SEQ ID NO: 57) (aqui referido como BCY12405); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 58) (aqui referido como BCY9960); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 59) (aqui referido como BCY9961); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 60) (aqui referido como BCY9963); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 61) (aqui referido como BCY9964); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 62) (aqui referido como BCY9965); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 63) (aqui referido como BCY9966); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 64) (aqui referido como BCY10223); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 65) (aqui referido como BCY10224); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 66) (aqui referido como BCY11149); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 67) (aqui referido como BCY11150); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 68) (aqui referido como BCY11151); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 69) (aqui referido como BCY11152); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 70) (aqui referido como BCY11153); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 71) (aqui referido como BCY11154); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 72) (aqui referido como BCY11155); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 73) (aqui referido como BCY11163); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 74) (aqui referido como BCY11158); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 75) (aqui referido como BCY11160); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 76) (aqui referido como BCY12402); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 77) (aqui referido como BCY12403); e

[Ac]LYP-(SEQ ID NO: 78) (aqui referido como BCY12404).

[0016] Em outra modalidade, o ligante de peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos que é (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) (aqui referido como (B-Ala)-Sar10-A-(17- 120-09-T03) HArg2 HArg9).

[0017] Os dados são apresentados aqui na Figura 1 e nas Tabelas 4 e 5 que é um conjugado de fármaco de peptídeo bicíclico contendo este ligante de peptídeo (BT17BDC58) produziu atividade antitumoral dependente de dose.

[0018] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 7 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 3 aminoácidos, tais como: CSSWDKLMCHPYC (SEQ ID NO: 79); em particular: A-(SEQ ID NO: 79)-A (aqui referido como 17-121-00).

[0019] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 3 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 9 aminoácidos, tais como: CPEECFYLPPHPMSC (SEQ ID NO: 80); CPQECFYLPGHSLYC (SEQ ID NO: 81); CPGECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 82); CPGECFYPTNHPLYC (SEQ ID NO: 83); CPQECFYPIGHPLAC (SEQ ID NO: 84); CPEECFYPPGHKLHC (SEQ ID NO: 85); CPQECFYPPGHRLRC (SEQ ID NO: 86); CPQECFYPPGHPYHC (SEQ ID NO: 87); CPQECFYPSTHPLYC (SEQ ID NO: 88); CPGECFYPSNHRLYC (SEQ ID NO: 89);

CPDECFYPPEHPLAC (SEQ ID NO: 90); CPGECFYPPGHHLSC (SEQ ID NO: 91); CPGECFYPPGHHLGC (SEQ ID NO: 92); CPEECFYPPNHPLYC (SEQ ID NO: 93); CPGECFYPPDHPLYC (SEQ ID NO: 94); CPGECFYPPGHPLYC (SEQ ID NO: 95); CPGECFYPPNHPFYC (SEQ ID NO: 96); CPGECFYPPNHPLYC (SEQ ID NO: 97); CPEECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 98); CWMECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 99); CFEECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 100); CPGECFYPPGHPLRC (SEQ ID NO: 101); CPGECFYPPGHPREC (SEQ ID NO: 102); CPGECFYPPGHRFHC (SEQ ID NO: 103); e CPGECFYPPGHRLYC (SEQ ID NO: 104); em particular: A-(SEQ ID NO: 80)-A (aqui referido como 17-127-01); A-(SEQ ID NO: 81)-A (aqui referido como 17-129-00); SQT-(SEQ ID NO: 82)-A (aqui referido como 17-129-01-T01); SMT-(SEQ ID NO: 82)-A (aqui referido como 17-129-01-T02); SLV-(SEQ ID NO: 82)-A (aqui referido como 17-129-01-T03); ISSYG-(SEQ ID NO: 82)-A (aqui referido como 17-129-01-T04); ENITT-(SEQ ID NO: 82)-A (aqui referido como 17-129-01-T05); A-(SEQ ID NO: 83)-A (aqui referido como 17-129-02); A-(SEQ ID NO: 84)-A (aqui referido como 17-129-03); A-(SEQ ID NO: 85)-A (aqui referido como 17-129-04); A-(SEQ ID NO: 86)-A (aqui referido como 17-129-05); A-(SEQ ID NO: 87)-A (aqui referido como 17-129-06); A-(SEQ ID NO: 88)-A (aqui referido como 17-129-07); A-(SEQ ID NO: 89)-A (aqui referido como 17-129-08);

A-(SEQ ID NO: 90)-A (aqui referido como 17-129-09); A-(SEQ ID NO: 91)-A (aqui referido como 17-129-10); A-(SEQ ID NO: 92)-A (aqui referido como 17-129-11); L-(SEQ ID NO: 93)-HA (aqui referido como 17-129-12-T01); T-(SEQ ID NO: 94) -NA (aqui referido como 17-129-13-T01); Q-(SEQ ID NO: 95) -NA (aqui referido como 17-129-14-T01); A-(SEQ ID NO: 95) -NVI (aqui referido como 17-129-14-T02); N -(SEQ ID NO: 96) -NA (aqui referido como 17-129-15-T01); D-(SEQ ID NO: 97)-RA (aqui referido como 17-129-16-T01); SRM-(SEQ ID NO: 98)-A (aqui referido como 17-129-17-T01); SRS-(SEQ ID NO: 98)-A (aqui referido como 17-129-17-T02); RYMTR-(SEQ ID NO: 98)-A (aqui referido como 17-129-17-T03); REE-(SEQ ID NO: 99)-A (aqui referido como 17-129-18-T01); DNM-(SEQ ID NO: 99)-A (aqui referido como 17-129-18-T02); QES-(SEQ ID NO: 99)-A (aqui referido como 17-129-18-T03); ADY-(SEQ ID NO: 99)-A (aqui referido como 17-129-18-T04); MAN-(SEQ ID NO: 100)-A (aqui referido como 17-129-19-T01); SQN-(SEQ ID NO: 100)-A (aqui referido como 17-129-19-T02); A-(SEQ ID NO: 101) -TVL (aqui referido como 17-129-20-T01); A-(SEQ ID NO: 102) -SWL (aqui referido como 17-129-21-T01); A-(SEQ ID NO: 103) -LTE (aqui referido como 17-129-22-T01); A-(SEQ ID NO: 104) -YSE (aqui referido como 17-129-23-T01); e Ac-(SEQ ID NO: 104) -YSE (aqui referido como Ac (17-129-23-T01)).

[0020] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 6 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 6 aminoácidos, tal como CEEEFYPCGHPLYVC (SEQ ID NO: 105); CEEQFYPCTHALYTC (SEQ ID NO: 106); CVEEFYPCDHPLYSC (SEQ ID NO: 107);

CEEEFYPCGHPMHPC (SEQ ID NO: 108); CDEQFYPCHHRLYSC (SEQ ID NO: 109); CEEEFYPCGHPFHPC (SEQ ID NO: 110); CLEQFYPCEHPLFSC (SEQ ID NO: 111); CVEQFYPCGHRHYIC (SEQ ID NO: 112); CEEQFYPCSHPLYTC (SEQ ID NO: 113); CEEQFYPCNHPLNVC (SEQ ID NO: 114); CEEEFYPCSHPLNPC (SEQ ID NO: 115); CEEQFYPCGHKLSPC (SEQ ID NO: 116); CPEQFYPCDHRLYIC (SEQ ID NO: 117); CQEQFYPCNHPLSPC (SEQ ID NO: 118); CDEQFYPCNHRLNTC (SEQ ID NO: 119); CEEAFYPCHHPLYRC (SEQ ID NO: 120); CDEDFYPCGHYLNQC (SEQ ID NO: 121); CEEQFYPCTHPLYVC (SEQ ID NO: 122); CPEQFYPCTHRLYQC (SEQ ID NO: 123); CEEQFYPCSHPLYRC (SEQ ID NO: 124); CAEQFYPCDHPLYRC (SEQ ID NO: 125); CAEEFYPCDHPLYRC (SEQ ID NO: 126); CEEAFYPCNHPLYTC (SEQ ID NO: 127); CAEAFYPCDHPLYVC (SEQ ID NO: 128); CEEAFYPCSHPLFIC (SEQ ID NO: 129); CEEAFYPCSHPLHPC (SEQ ID NO: 130); CEEAFYPCSHPLFVC (SEQ ID NO: 131); CEEQFYPCSHPLYSC (SEQ ID NO: 132); CEEAFYPCEHPLYMC (SEQ ID NO: 133); e CEEQFYPCNHPLYMC (SEQ ID NO: 134); em particular: A-(SEQ ID NO: 105)-A (aqui referido como 17-126-01); A-(SEQ ID NO: 106)-A (aqui referido como 17-126-02);

A-(SEQ ID NO: 107)-A (aqui referido como 17-126-03); A-(SEQ ID NO: 108)-A (aqui referido como 17-126-06); A-(SEQ ID NO: 109)-A (aqui referido como 17-126-07); A-(SEQ ID NO: 110)-A (aqui referido como 17-126-08); A-(SEQ ID NO: 111)-A (aqui referido como 17-126-09); A-(SEQ ID NO: 112)-A (aqui referido como 17-126-10); A-(SEQ ID NO: 113)-A (aqui referido como 17-126-18); A-(SEQ ID NO: 114)-A (aqui referido como 17-126-19); A-(SEQ ID NO: 115)-A (aqui referido como 17-126-20); A-(SEQ ID NO: 116)-A (aqui referido como 17-126-21); A-(SEQ ID NO: 117)-A (aqui referido como 17-126-22); A-(SEQ ID NO: 118)-A (aqui referido como 17-126-23); A-(SEQ ID NO: 119)-A (aqui referido como 17-126-24); A-(SEQ ID NO: 120)-A (aqui referido como 17-126-25); Ac-A-(SEQ ID NO: 120)-A (aqui referido como Ac- (17-126-25)); A-(SEQ ID NO: 121)-A (aqui referido como 17-126-26); A-(SEQ ID NO: 122)-A (aqui referido como 17-126-27); A-(SEQ ID NO: 123)-A (aqui referido como 17-126-28); HSP-(SEQ ID NO: 124)-A (aqui referido como 17-126-30-T01); GPH-(SEQ ID NO: 125)-A (aqui referido como 17-126-31-T01); IHS-(SEQ ID NO: 126)-A (aqui referido como 17-126-32-T01); WSP-(SEQ ID NO: 127)-A (aqui referido como 17-126-33-T01); SHS-(SEQ ID NO: 127)-A (aqui referido como 17-126-33-T02); DLH-(SEQ ID NO: 128)-A (aqui referido como 17-126-35-T01); ANE-(SEQ ID NO: 129)-A (aqui referido como 17-126-36-T01); AVW-(SEQ ID NO: 130)-A (aqui referido como 17-126-37-T01); KVQ-(SEQ ID NO: 131)-A (aqui referido como 17-126-38-T01); A-(SEQ ID NO: 132) -PDVA (aqui referido como 17-126-39-T01); A-(SEQ ID NO: 133)-HQAA (aqui referido como 17-126-40-T01); e A-(SEQ ID NO: 134)-RENA (aqui referido como 17-126-41-T01).

[0021] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 6 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 5 aminoácidos, tais como: CLEQFYPCGDPRLC (SEQ ID NO: 135); e CEEQFYPCGHHLLC (SEQ ID NO: 136); em particular: A-(SEQ ID NO: 135)-A (aqui referido como 17-126-11); e A-(SEQ ID NO: 136)-A (aqui referido como 17-126-12).

[0022] Em uma outra modalidade, as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 5 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 5 aminoácidos, tais como: CLEPDECFYPMEC (SEQ ID NO: 137); CKEPQECFYPLKC (SEQ ID NO: 138); e CDSPEECFYPLEC (SEQ ID NO: 139); em particular: A-(SEQ ID NO: 137)-A (aqui referido como 17-122-02); A-(SEQ ID NO: 138)-A (aqui referido como 17-122-03); e A-(SEQ ID NO: 139)-A (aqui referido como 17-122-04).

[0023] Em uma modalidade, o ligante de peptídeo é selecionado a partir de qualquer um dos ligantes de peptídeo listados na Tabela 2 ou Tabela 3.

[0024] A menos que de outra maneira definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como ge- ralmente entendido por aqueles versados na técnica, tal como nas técnicas de química de peptídeo, cultura de células e exibição de fa- gos, química de ácido nucleico e bioquímica. Técnicas padrão são usadas para biologia molecular, métodos genéticos e bioquímicos (ve- ja Sambrook e outro, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3ª ed.,

2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel e outro, Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4ª ed., John Wiley & Sons, Inc.), que estão incorporados aqui por referência. Nomenclatura Numeração

[0025] Quando se referem às posições dos resíduos de aminoáci- dos dentro dos ligantes de peptídeo da invenção, os resíduos de ciste- ína (Ci, Cii e Ciii) são omitidos da numeração, pois são invariantes, por- tanto, a numeração de resíduos de aminoácidos dentro dos ligantes de peptídeo da invenção é referida como abaixo: Ci-E1-E2-S3-F4-Y5-P6-E7-Cii-D8-H9-Ciii (SEQ ID NO: 1).

[0026] Para o propósito desta descrição, todos os peptídeos bicí- clicos são considerados ciclizados com 1,1’,1’’-(1,3,5-triazinano-1,3,5- triil)tripropan-1-ona (TATA) e produzindo uma estrutura trissubstituída. A ciclização com TATA ocorre em Ci, Cii e Ciii. TATA é um exemplo de uma estrutura molecular contendo  carbonila insaturada (Ange- wandte Chemie, International Edition (2014), 53 (6), 1602-1606). Formato Molecular

[0027] As extensões dos terminais N ou C à sequência de núcleo do biciclo são adicionadas ao lado esquerdo ou direito da sequência, separadas por um hífen. Por exemplo, uma cauda βAla-Sar10-Ala N- terminal seria denotada como: βAla-Sar10-A-(SEQ ID NO: X). Sequências de Peptídeo Inversas

[0028] À luz da descrição em Nair e outro (2003) J Immunol 170 (3), 1362-1373, prevê-se que as sequências de peptídeos descritas aqui da mesma forma encontrariam utilidade na sua forma retro- inverso. Por exemplo, a sequência é invertida (isto é, o terminal N tor- na-se terminal C e vice-versa) e sua estereoquímica é igualmente in- vertida (isto é, os D-aminoácidos tornam-se L-aminoácidos e vice-

versa). Ligantes de peptídeo

[0029] Um ligante de peptídeo, como referido aqui, refere-se a um peptídeo covalentemente ligado a uma estrutura molecular. Normal- mente, esses peptídeos compreendem dois ou mais grupos reativos (ou seja, resíduos de cisteína) que são capazes de formar ligações covalentes à estrutura, e uma sequência subtendida entre os referidos grupos reativos que é referida como a sequência de alça, uma vez que forma uma alça quando o peptídeo está ligado à estrutura. No presen- te caso, os peptídeos compreendem pelo menos três resíduos de cis- teína (referidos aqui como Ci, Cii e Ciii) e formam pelo menos duas al- ças na estrutura. Vantagens dos Ligantes de Peptídeo

[0030] Certos peptídeos bicíclicos da presente invenção têm um número de propriedades vantajosas que permitem que sejam conside- rados como moléculas semelhantes a fármacos adequadas para inje- ção, inalação, administração nasal, ocular, oral ou tópica. Essas pro- priedades vantajosas incluem: - Reatividade cruzada de espécies. Certos ligantes de- monstram reatividade cruzada entre PBPs de diferentes espécies bac- terianas e, portanto, são capazes de tratar infecções causadas por vá- rias espécies de bactérias. Outros ligantes podem ser altamente espe- cíficos para as PBPs de certas espécies bacterianas, o que pode ser vantajoso para o tratamento de uma infecção sem danos colaterais à flora benéfica do paciente; - Estabilidade de protease. Os ligantes de peptídeo bicícli- cos devem, idealmente, demonstrar estabilidade a proteases plasmáti- cas, proteases epiteliais ("ancoradas à membrana"), proteases gástri- cas e intestinais, proteases de superfície pulmonar, proteases intrace- lulares e similar. A estabilidade da protease deve ser mantida entre espécies diferentes de modo que um candidato a chumbo biciclo pos- sa ser desenvolvido em modelos animais, bem como administrado com confiança em humanos; - Perfil de solubilidade desejável. Esta é uma função da proporção de resíduos carregados e hidrofílicos versus hidrofóbicos e ligação H intra/inter-molecular, que é importante para propósitos de formulação e absorção; - Uma meia-vida plasmática ideal na circulação. Dependen- do da indicação clínica e do regime de tratamento, pode ser necessá- rio desenvolver um peptídeo bicíclico para exposição curta em um ce- nário de gerenciamento de doença aguda ou desenvolver um peptídeo bicíclico com retenção aumentada na circulação e, portanto, é ideal para o gerenciamento de estados de doenças mais crônicas. Outros fatores que impulsionam a meia-vida plasmática desejável são os re- quisitos de exposição prolongada para eficiência terapêutica máxima versus a toxicologia associada devido à exposição prolongada do agente; e - Seletividade. Certos ligantes de peptídeo da invenção demonstram seletividade para MT1-MMP, porém não apresentam rea- ção cruzada com isoformas de MMP, tais como MMP-1, MMP-2, MMP- 15 e MMP-16. Sais Farmaceuticamente Aceitáveis

[0031] Será apreciado que as formas de sal estão dentro do âmbi- to desta invenção e as referências a ligantes de peptídeo incluem as formas de sal dos referidos ligantes.

[0032] Os sais da presente invenção podem ser sintetizados a par- tir do composto original que contém uma porção básica ou ácida por métodos químicos convencionais, tais como métodos descritos em Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardco-

ver, 388 páginas, agosto de 2002. Geralmente, tais sais podem ser preparados reagindo-se as formas de ácido ou base livres desses compostos com a base ou ácido apropriado em água ou em um sol- vente orgânico, ou em uma mistura dos dois.

[0033] Os sais de adição de ácido (mono ou di-sais) podem ser formados com uma ampla variedade de ácidos, tanto inorgânicos quanto orgânicos. Exemplos de sais de adição de ácido incluem mono- ou di-sais formados com um ácido selecionado a partir do grupo con- sistindo em acético, 2,2-dicloroacético, adípico, algínico, ascórbico (por exemplo, L-ascórbico), L-aspártico, benzenossulfônico, benzóico, 4- acetamidobenzoico, butanóico, (+) canfórico, canforossulfônico, (+)- (1S)-canfor-10-sulfônico, cáprico, capróico, caprílico, cinâmico, cítrico, ciclâmico, dodecilsulfúrico, etano-1,2-dissulfônico, etanossulfônico, 2- hidroxietanossulfônico, fórmico, fumárico, galactárico, gentísico, gluco- heptônico, D-glucônico, glucurônico (por exemplo, D-glucurônico), glu- tâmico (por exemplo, L-glutâmico), α-oxoglutárico, glicólico, hipúrico, ácido hidroálico (por exemplo, ácido bromídrico, clorídrico, hidriódico), isetionico, láctico (por exemplo (+)-L-láctico, (±)-DL-láctico), lactobiôni- co, maleico, málico, (-)-L-málico, malônico, (±)-DL-mandélico, meta- nossulfônico, naftaleno-2-sulfônico, naftaleno-1,5-dissulfônico, 1- hidroxi-2-naftóico, nicotínico, nítrico, oleico, orótico, oxálico, palmítico, pamóico, fosfórico, propiônico, pirúvico, L-piroglutâmico, ácidos salicí- lico, 4-amino-salicílico, sebácico, esteárico, sucínico, sulfúrico, tânico, (+)-L-tartárico, tiociânico, p-toluenossulfônico, undecilênico e valérico, bem como aminoácidos acilados e resinas de troca catiônica.

[0034] Um grupo particular de sais consiste em sais formados de acético, clorídrico, iodídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, cítrico, láctico, sucínico, maleico, málico, isetionico, fumárico, benzenossulfônico, to- luenossulfônico, sulfúrico, metanossulfônico (mesilato), etanossulfôni- co, naftalenossulfônico, ácido valérico, propanóico, butanóico, malôni-

co, glucurônico e lactobiônico. Um sal particular é o sal de cloridrato. Outro sal particular é o sal de acetato.

[0035] Se o composto for aniônico ou tiver um grupo funcional que pode ser aniônico (por exemplo, -COOH pode ser -COO-), em seguida um sal pode ser formado com uma base orgânica ou inorgânica, ge- rando um cátion adequado. Exemplos de cátions inorgânicos adequa- dos incluem, porém não são limitados a, íons de metal alcalino, tal como Li+, Na+ e K+, cátions de metal alcalino terroso, tal como Ca2+ e Mg2+, e outros cátions, tal como Al3+ ou Zn+. Exemplos de cátions or- gânicos adequados incluem, porém não são limitados a íon de amônio (isto é, NH4+) e íons de amônio substituídos (por exemplo, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+). Exemplos de alguns íons de amônio substituí- dos adequados são aqueles derivados de: metilamina, etilamina, dieti- lamina, propilamina, dicicloexilamina, trietilamina, butilamina, etilenodi- amina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilben- zilamina, colina, meglumina e trometamina, bem como aminoácidos, como lisina e arginina. Um exemplo de íon amônio quaternário comum é N(CH3)4+.

[0036] Quando os peptídeos da invenção contêm uma função de amina, estes podem formar sais de amónio quaternário, por exemplo, por reação com um agente de alquilação de acordo com métodos bem conhecidos do especialista. Tais compostos de amônio quaternário estão dentro do escopo dos peptídeos da invenção. Derivados Modificados

[0037] Será apreciado que os derivados modificados dos ligantes de peptídeo como aqui definidos estão dentro do âmbito da presente invenção. Exemplos de tais derivados modificados adequados incluem uma ou mais modificações selecionadas a partir de: modificações N- terminal e/ou C-terminal; substituição de um ou mais resíduos de ami- noácidos por um ou mais resíduos de aminoácidos não naturais (tal como a substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos polares por um ou mais aminoácidos isostéricos ou isoeletrônicos; substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos não polares com outros ami- noácidos isostéricos ou isoeletrônicos não naturais); adição de um grupo espaçador; substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos sensíveis à oxidação por um ou mais resíduos de aminoácidos resis- tentes à oxidação; substituição de um ou mais resíduos de aminoáci- dos por uma alanina, substituição de um ou mais resíduos de L- aminoácidos por um ou mais resíduos de D-aminoácidos; N-alquilação de uma ou mais ligações de amida dentro do ligante de peptídeo bicí- clico; substituição de uma ou mais ligações peptídicas por uma ligação substituta; modificação do comprimento da cadeia principal do peptí- deo; substituição do hidrogênio no carbono alfa de um ou mais resí- duos de aminoácidos por um outro grupo químico, modificação de aminoácidos, tal como cisteína, lisina, glutamato/aspartato e tirosina com amina, tiol, ácido carboxílico e reagentes reativos com fenol ade- quados, de modo a funcionalizar os referidos aminoácidos, e introdu- ção ou substituição de aminoácidos que introduzem reatividades orto- gonais que são adequadas para funcionalização, por exemplo, amino- ácidos contendo azida ou grupo alcino que permitem funcionalização com porções de alcino ou contendo azida, respectivamente.

[0038] Em uma modalidade, o derivado modificado compreende uma modificação N-terminal e/ou C-terminal. Em uma outra modalida- de, em que o derivado modificado compreende uma modificação N- terminal usando química amino-reativa adequada e/ou modificação C- terminal usando química carboxi-reativa adequada. Em uma outra mo- dalidade, a referida modificação N-terminal ou C-terminal compreende a adição de um grupo efetor, incluindo, porém não limitado a, um agente citotóxico, um radiocelador ou um cromóforo.

[0039] Em uma outra modalidade, o derivado modificado compre-

ende uma modificação N-terminal. Em outra modalidade, a modifica- ção N-terminal compreende um grupo acetila N-terminal. Nesta moda- lidade, o grupo cisteína N-terminal (o grupo aqui referido como Ci) é tampado com anidrido acético ou outros reagentes apropriados duran- te a síntese de peptídeo levando a uma molécula que é N-terminal acetilada. Esta modalidade fornece a vantagem de remover um ponto de reconhecimento potencial para aminopeptidases e evita o potencial de degradação do peptídeo bicíclico.

[0040] Em uma modalidade alternativa, a modificação N-terminal compreende a adição de um grupo espaçador molecular que facilita a conjugação de grupos efetores e retenção da potência do peptídeo bicíclico ao seu alvo.

[0041] Em uma outra modalidade, o derivado modificado compre- ende uma modificação C-terminal. Em uma outra modalidade, a modi- ficação C-terminal compreende um grupo amida. Nesta modalidade, o grupo cisteína C-terminal (o grupo aqui referido como Ciii) é sintetizado como uma amida durante a síntese de peptídeo levando a uma molé- cula que é C-terminalmente amidada. Esta modalidade fornece a van- tagem de remover um ponto de reconhecimento potencial para carbo- xipeptidase e reduz o potencial de degradação proteolítica do peptídeo bicíclico.

[0042] Em uma modalidade, o derivado modificado compreende a substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos por um ou mais resíduos de aminoácidos não naturais. Nesta modalidade, aminoáci- dos não naturais podem ser selecionados possuindo cadeias laterais isostéricas/isoeletrônicas que não são reconhecidas por proteases de- gradativas nem têm qualquer efeito adverso sobre a potência alvo.

[0043] Alternativamente, aminoácidos não naturais podem ser usados possuindo cadeias laterais de aminoácidos restritas, de modo que a hidrólise proteolítica da ligação peptídica próxima seja confor-

macionalmente e estericamente impedida. Em particular, estes dizem respeito a análogos de prolina, cadeias laterais volumosas, derivados C-dissubstituídos (por exemplo, ácido aminoisobutírico, Aib) e ciclo- aminoácidos, um derivado simples sendo o ácido amino- ciclopropilcarboxílico.

[0044] Em uma modalidade, o derivado modificado compreende a adição de um grupo espaçador. Em uma outra modalidade, o derivado modificado compreende a adição de um grupo espaçador à cisteína N- terminal (Ci) e/ou à cisteína C-terminal (Ciii).

[0045] Em uma modalidade, o derivado modificado compreende a substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos sensíveis à oxi- dação por um ou mais resíduos de aminoácidos resistentes à oxida- ção.

[0046] Em uma modalidade, o derivado modificado compreende a substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos carregados por um ou mais resíduos de aminoácidos hidrofóbicos. Em uma modalida- de alternativa, o derivado modificado compreende a substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos hidrofóbicos por um ou mais re- síduos de aminoácidos carregados. O equilíbrio correto de resíduos de aminoácidos carregados versus hidrofóbicos é uma característica im- portante dos ligantes de peptídeo bicíclicos. Por exemplo, os resíduos de aminoácidos hidrofóbicos influenciam o grau de ligação às proteí- nas de plasma e desse modo a concentração da fração disponível livre no plasma, enquanto os resíduos de aminoácidos carregados (em par- ticular a arginina) podem influenciar a interação do peptídeo com as membranas fosfolipídicas nas superfícies celulares. Os dois em com- binação podem influenciar a meia-vida, o volume de distribuição e a exposição do fármaco peptídico e podem ser ajustados de acordo com o desfecho clínico. Além disso, a combinação correta e o número de resíduos de aminoácidos carregados versus hidrofóbicos podem redu-

zir a irritação no sítio da injeção (se o fármaco peptídico tiver sido ad- ministrado subcutaneamente).

[0047] Em uma modalidade, o derivado modificado compreende a substituição de um ou mais resíduos de L-aminoácido por um ou mais resíduos de D-aminoácido. Acredita-se que esta modalidade aumenta a estabilidade proteolítica por impedimento estérico e por uma propen- são de D-aminoácidos para estabilizar conformações de volta  (Tugyi e outro (2005) PNAS, 10 2 (2), 413-418).

[0048] Em uma modalidade, o derivado modificado compreende a remoção de quaisquer resíduos de aminoácidos e substituição por alaninas. Esta modalidade fornece a vantagem de remover o(s) sítio(s) de ataque proteolítico potencial.

[0049] Deveria ser notado que cada uma das modificações menci- onadas acima serve para melhorar deliberadamente a potência ou es- tabilidade do peptídeo. Outras melhorias de potência com base em modificações podem ser alcançadas por meio dos seguintes meca- nismos: - Incorporar frações hidrofóbicas que exploram o efeito hi- drofóbico e levam a taxas de desativação mais baixas, de modo que afinidades mais altas sejam alcançadas; - Incorporar grupos carregados que exploram interações iônicas de longo alcance, levando a taxas mais rápidas e a afinidades mais altas (veja por exemplo Schreiber e outro, Rapid, electrostatically assisted association of proteins (1996), Nature Struct. Biol. 3, 427-31 ); e - Incorporar restrição adicional no peptídeo, por exemplo, restringindo as cadeias laterais de aminoácidos corretamente de modo que a perda de entropia seja mínima após a ligação ao alvo, restrin- gindo os ângulos de torção da estrutura de modo que a perda de en- tropia seja mínima após a ligação ao alvo e introduzindo ciclizações adicionais na molécula por razões idênticas. (para revisões, veja Gentilucci e outro, Curr. Pharmaceutical Design, (2010), 16, 3185-203, e Nestor e outro, Curr. Medicinal Chem (2009), 16, 4399-418). Variações isotópicas

[0050] A presente invenção inclui todos os ligantes de peptídeo rotulados com (radio)isótopos farmaceuticamente aceitáveis da inven- ção, em que um ou mais átomos são substituídos por átomos com o mesmo número atômico, porém uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa geralmente encontrados na natureza e ligantes de peptídeo da invenção, em que grupos quelantes de metal são anexados (denominados "efetores") que são capazes de conter (radio)isótopos relevantes e ligantes de peptídeo da invenção, em que certos grupos funcionais são covalen- temente substituídos por (radio)isótopos ou grupos funcionais isotopi- camente rotulados.

[0051] Exemplos de isótopos adequados para inclusão nos ligan- tes de peptídeo da invenção compreendem isótopos de hidrogênio, tal como 2H (D) e 3H (T), carbono, como 11 C, 13 Ce 14 C, cloro, como 36 Cl, 18 123 125 131 flúor, tal como F, iodo, tal como I, Ie I, nitrogênio, tal como 13 15 15 17 18 32 Ne N, oxigênio, tal como O, Oe O, fósforo, tal como P, en- 35 64 67 68 xofre, tal como S, cobre, tal como Cu, gálio, tal como Ga ou Ga, ítrio, tal como 90Y e lutécio, tal como 177Lu, e bismuto, tal como 213Bi.

[0052] Certos ligantes de peptídeo isotopicamente rotulados da invenção, por exemplo, aqueles que incorporam um isótopo radioativo, são úteis em estudos de distribuição de fármacos e/ou substrato em tecidos. Os ligantes de peptídeo da invenção podem ainda ter proprie- dades diagnósticas valiosas em que podem ser usados para detectar ou identificar a formação de um complexo entre um composto rotulado e outras moléculas, peptídeos, proteínas, enzimas ou receptores. Os métodos de detecção ou identificação podem usar compostos que são rotulados com agentes de rotulagem, tal como radioisótopos, enzimas, substâncias fluorescentes, substâncias luminosas (por exemplo, lumi- nol, derivados de luminol, luciferina, equorina e luciferase), etc. Os isó- topos radioativos trítio, ou seja, 3H (T), e carbono-14, isto é, 14 C, são particularmente úteis para este propósito em vista de sua facilidade de incorporação e meios de detecção rápidos.

[0053] A substituição com isótopos mais pesados, tal como deuté- rio, isto é, 2H (D), pode proporcionar certas vantagens terapêuticas re- sultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou requisitos de dosagem reduzidos e, portanto, pode ser preferida em algumas circunstâncias.

[0054] A substituição com isótopos de emissão de pósitrons, tal 11 18 15 13 como C, F, O e N, pode ser útil em estudos de Topografia de Emissão de Pósitrons (PET) para examinar a ocupação alvo.

[0055] Os compostos isotopicamente rotulados de ligantes de pep- tídeo da invenção podem geralmente ser preparados por técnicas con- vencionais conhecidas por aqueles versados na técnica ou por pro- cessos análogos aos descritos nos Exemplos acompanhantes usando um reagente isotopicamente rotulado apropriado no lugar do reagente não rotulado previamente empregado. Grupos Efetores e Funcionais

[0056] De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecido um conjugado de fármaco que compreende um ligante de peptídeo, como definido aqui, conjugado a um ou mais grupos efetores e/ou fun- cionais.

[0057] Os grupos efetores e/ou funcionais podem ser ligados, por exemplo, aos terminais N e/ou C do polipeptídeo, a um aminoácido dentro do polipeptídeo ou à estrutura molecular.

[0058] Os grupos efetores apropriados incluem anticorpos e partes ou fragmentos dos mesmos. Por exemplo, um grupo efetor pode incluir uma região constante de cadeia leve de anticorpo (CL), um domínio de cadeia pesada de anticorpo CH1, um domínio de cadeia pesada de anticorpo CH2, um domínio de cadeia pesada de anticorpo CH3 ou qualquer combinação dos mesmos, além de um ou mais domínios de região constantes. Um grupo efetor pode da mesma forma compreen- der uma região de articulação de um anticorpo (tal região normalmente encontrada entre os domínios CH1 e CH2 de uma molécula de IgG).

[0059] Em uma outra modalidade deste aspecto da invenção, um grupo efetor de acordo com a presente invenção é uma região Fc de uma molécula de IgG. Vantajosamente, um grupo ligante-efetor de peptídeo de acordo com a presente invenção compreende ou consiste em uma fusão Fc de ligante de peptídeo tendo uma meia-vida de um dia ou mais, dois dias ou mais, 3 dias ou mais, 4 dias ou mais, 5 dias ou mais, 6 dias ou mais ou 7 dias ou mais. Mais vantajosamente, o ligante de peptídeo de acordo com a presente invenção compreende ou consiste em uma fusão Fc de ligante de peptídeo tendo uma meia- vida t de um dia ou mais.

[0060] Os grupos funcionais incluem, em geral, grupos de ligação, fármacos, grupos reativos para a ligação de outras entidades, grupos funcionais que auxiliam a absorção dos peptídeos macrocíclicos nas células e similar.

[0061] A capacidade dos peptídeos de penetrar nas células permi- tirá que os peptídeos contra alvos intracelulares sejam eficazes. Os alvos que podem ser acessados por peptídeos com a capacidade de penetrar nas células incluem fatores de transcrição, moléculas de sina- lização intracelular, tal como tirosina quinases e moléculas envolvidas na trilha apoptótica. Os grupos funcionais que permitem a penetração nas células incluem peptídeos ou grupos químicos que foram adicio- nados ao peptídeo ou ao esqueleto molecular. Peptídeos, tais como aqueles derivados de tais como VP22, HIV-Tat, uma proteína homeo- box de Drosophila (Antennapedia), por exemplo como descrito em Chen e Harrison, Biochemical Society Transactions (2007) Volume 35, parte 4, p821; Gupta e outro em Advanced Drug Discovery Reviews (2004) Volume 57 9637. Exemplos de peptídeos curtos que se mostra- ram eficientes na translocação através das membranas plasmáticas incluem o peptídeo penetratina de 16 aminoácidos da proteína Droso- phila Antennapedia (Derossi e outro (1994) J Biol. Chem. Volume 269 p10444), o 'peptídeo anfipático modelo' de 18 aminoácidos (Oehlke e outro (1998) Biochim Biophys Acts Volume 1414 p127) e regiões ricas em arginina da proteína HIV TAT. Abordagens não peptídicas incluem o uso de mimetizadores de moléculas pequenas ou SMOCs que po- dem ser facilmente anexados a biomoléculas (Okuyama e outro (2007) Nature Methods Volume 4 p153). Outras estratégias químicas para adicionar grupos guanidínio às moléculas da mesma forma aumentam a penetração celular (Elson-Scwab e outro (2007) J Biol Chem Volume 282 p13585). Moléculas de baixo peso molecular, tal como esteróides, podem ser adicionadas ao estrutura molecular para aumentar a absor- ção nas células.

[0062] Uma classe de grupos funcionais que podem ser ligados a ligantes de peptídeo inclui anticorpos e fragmentos de ligação dos mesmos, tais como fragmentos de Fab, Fv ou domínio único. Em par- ticular, anticorpos que podem se ligar a proteínas capazes de aumen- tar a meia vida do ligante de peptídeo in vivo.

[0063] Em uma modalidade, um grupo efetor de ligante de peptí- deo de acordo com a invenção tem uma meia-vida selecionada a partir do grupo que consiste em: 12 horas ou mais, 24 horas ou mais, 2 dias ou mais, 3 dias ou mais, 4 dias ou mais, 5 dias ou mais, 6 dias ou mais, 7 dias ou mais, 8 dias ou mais, 9 dias ou mais, 10 dias ou mais, 11 dias ou mais, 12 dias ou mais, 13 dias ou mais, 14 dias ou mais, 15 dias ou mais ou 20 dias ou mais. Vantajosamente, um grupo ou com- posição de ligante de peptídeo efetor de acordo com a invenção terá uma meia-vida t na faixa de 12 a 60 horas. Em uma outra modalida- de, terá uma meia-vida t de um dia ou mais. Ainda em uma outra mo- dalidade, estará na faixa de 12 a 26 horas.

[0064] Em uma modalidade particular da invenção, o grupo funcio- nal é selecionado a partir de um quelante de metal, que é adequado para complexar radioisótopos de metal de relevância medicinal.

[0065] Possíveis grupos efetores da mesma forma incluem enzi- mas, por exemplo, tais como carboxipeptidase G2 para uso em terapia enzimática/profármaco, em que o ligante de peptídeo substitui anticor- pos em ADEPT.

[0066] Em uma modalidade particular da invenção, o grupo funcio- nal é selecionado a partir de um fármaco, tal como um agente citotóxi- co para a terapia do câncer. Os exemplos adequados incluem: agen- tes de alquilação, tais como cisplatina e carboplatina, bem como oxali- platina, mecloretamina, ciclofosfamida, clorambucila, ifosfamida; Anti- metabólitos incluindo análogos de purina azatioprina e mercaptopurina ou análogos de pirimidina; alcalóides e terpenóides vegetais, incluindo alcalóides de vinca, tais como Vincristina, Vinblastina, Vinorelbina e Vindesina; Podofilotoxina e seus derivados etoposídeo e teniposídeo; Taxanos, incluindo paclitaxel, originalmente conhecido como Taxol; inibidores da topoisomerase incluindo camptotecinas: irinotecano e topotecano, e inibidores do tipo II incluindo ansacrina, etoposídeo, fos- fato de etoposídeo e teniposídeo. Outros agentes podem incluir anti- bióticos antitumorais que incluem o imunossupressor dactinomicina (que é usado em transplantes renais), doxorrubicina, epirrubicina, ble- omicina, caliqueamicinas e outros.

[0067] Em uma outra modalidade particular da invenção, o agente citotóxico é selecionado a partir de maitansinoides (como DM1) ou monometil auristatinas (tal como MMAE).

[0068] DM1 é um agente citotóxico que é um derivado de maitan- sina contendo tiol e tem a seguinte estrutura:

[0069] Monometil auristatina E (MMAE) é um agente antineoplási- co sintético e tem a seguinte estrutura:

NH O HN O N N O O O O HN HO

[0070] Em ainda outra modalidade particular da invenção, o agen-

te citotóxico é selecionado a partir de monometil auristatina E (MMAE). Os dados são apresentados aqui na Figura 1 e nas Tabelas 4 e 5 que demonstram os efeitos dos ligantes de peptídeo conjugados a uma toxina contendo MMAE.

[0071] Em uma modalidade, o agente citotóxico está ligado ao peptídeo bicíclico por uma ligação clivável, tal como uma ligação de dissulfeto ou uma ligação sensível à protease. Em uma outra modali- dade, os grupos adjacentes à ligação de dissulfeto são modificados para controlar o impedimento da ligação de dissulfeto e, por isso, a taxa de clivagem e liberação concomitante do agente citotóxico.

[0072] Trabalhos publicados estabeleceram o potencial para modi- ficar a suscetibilidade da ligação de dissulfeto à redução através da introdução de impedimento estérico em ambos os lados da ligação de dissulfeto (Kellogg e outro (2011) Bioconjugate Chemistry, 22, 717). Um maior grau de impedimento estérico reduz a taxa de redução pela glutationa intracelular e da mesma forma por agentes redutores extra- celulares (sistêmicos), consequentemente reduzindo a facilidade com que a toxina é liberada, tanto dentro quanto fora da célula. Desse mo- do, a seleção do ideal em estabilidade de dissulfeto na circulação (o que minimiza os efeitos colaterais indesejáveis da toxina) versus a li- beração eficiente no meio intracelular (que maximiza o efeito terapêu- tico) pode ser alcançada por meio da seleção cuidadosa do grau de impedimento em ambos os lados da ligação de dissulfeto.

[0073] O obstáculo em ambos os lados da ligação de dissulfeto é modulado através da introdução de um ou mais grupos metila na enti- dade de direcionamento (aqui, o peptídeo bicíclico) ou no lado da toxi- na da construção molecular.

[0074] Em uma modalidade, o agente citotóxico e o ligante são selecionados a partir de quaisquer combinações daqueles descritos em WO 2016/067035 (os agentes citotóxicos e ligantes dos mesmos estão aqui incorporados por referência).

[0075] Em uma modalidade, o ligante entre o referido agente cito- tóxico e o referido peptídeo bicíclico compreende um ou mais resíduos de aminoácidos. Exemplos de resíduos de aminoácidos adequados como ligantes adequados incluem Ala, Cit, Lys, Trp e Val.

[0076] Em uma modalidade, o agente citotóxico é selecionado a partir de MMAE e o referido conjugado de fármaco compreende adici- onalmente um ligante selecionado a partir de: -PABC-Cit-Val-Glutaril- ou -PABC-ciclobutil-Ala-Cit-βAla-, em que PABC representa p- aminobenzilcarbamato . Detalhes completos do ligante contendo ciclo- butila podem ser encontrados em Wei e outro (2018) J. Med. Chem. 61, 989-1000. Em uma outra modalidade, o agente citotóxico é seleci- onado a partir de MMAE e o ligante é -PABC-Cit-Val-Glutaril-.

[0077] Em uma modalidade, o agente citotóxico é MMAE, o peptí- deo bicíclico é selecionado a partir de (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) e o ligante é selecionado a partir de -PABC-Cit-Val-Glutaril-. Este BDC é conhecido aqui como BT17BDC58, que é representado esquematicamente como: (em que BICYCLE-N007 representa (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) da mesma forma conhecido como (B-Ala)-Sar10-A-(17-120-09- T03) HArg2 HArg9).

[0078] Os dados são apresentados aqui na Figura 1 e nas Tabelas 4 e 5, que demonstram a atividade antitumoral dependente de dose. Síntese

[0079] Os peptídeos da presente invenção podem ser fabricados sinteticamente por técnicas padrão seguidas por reação com uma es-

trutura molecular in vitro. Quando isso é realizado, a química padrão pode ser usada. Isso permite a preparação rápida em grande escala de material solúvel para outros experimentos ou validação posteriores. Tais métodos podem ser realizados usando química convencional, tal como a descrita em Timmerman e outro (supra).

[0080] Desse modo, a invenção da mesma forma refere-se à fabri- cação de polipeptídeos selecionados como estabelecido aqui, em que a fabricação compreende outras etapas opcionais como explicado abaixo. Em uma modalidade, essas etapas são realizadas no polipep- tídeo do produto final feito por síntese química.

[0081] Os peptídeos podem da mesma forma ser estendidos, para incorporar, por exemplo, outra alça e, portanto, introduzir especificida- des múltiplas.

[0082] Para estender o peptídeo, ele pode simplesmente ser es- tendido quimicamente em seu terminal N ou terminal C ou dentro das alças usando lisinas protegidas ortogonalmente (e análogos) usando fase sólida padrão ou química de fase de solução. Técnicas de (bio)conjugação padrão podem ser usadas para introduzir um terminal N ou C ativado ou ativável. Alternativamente, as adições podem ser feitas por condensação de fragmentos ou ligação química nativa, por exemplo como descrito em (Dawson e outro 1994. Synthesis of Pro- teins by Native Chemical Ligation. Science 266: 776-779), ou por en- zimas, por exemplo usando subtiligase como descrito em (Chang e outro Proc Natl Acad Sci USA. 20 de dezembro de 1994; 91 (26): 12544-8 ou em Hikari e outro Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters Volume 18, número 22, 15 de novembro de 2008, páginas 6000-6003).

[0083] Alternativamente, os peptídeos podem ser estendidos ou modificados por conjugação adicional através de ligações dissulfeto. Isto tem a vantagem adicional de permitir que o primeiro e o segundo peptídeos se dissociem um do outro uma vez dentro do ambiente re-

dutor da célula. Neste caso, a estrutura molecular (por exemplo, TA- TA) pode ser adicionada durante a síntese química do primeiro peptí- deo de modo a reagir com os três grupos de cisteína; uma cisteína ou tiol adicional poderia então ser anexado ao terminal N ou C do primeiro peptídeo, de modo que esta cisteína ou tiol apenas reagisse com uma cisteína ou tiol livre do segundo peptídeo, formando um conjugado peptídeo-peptídeo bicíclico ligado por dissulfeto.

[0084] Técnicas similares aplicam-se igualmente à sínte- se/acoplamento de dois macrociclos bicíclicos e biespecíficos, criando potencialmente uma molécula tetraespecífica.

[0085] Além disso, a adição de outros grupos funcionais ou grupos efetores pode ser realizada da mesma maneira, usando química apro- priada, acoplamento nos terminais N ou C ou por meio de cadeias late- rais. Em uma modalidade, o acoplamento é conduzido de tal maneira que não bloqueia a atividade de nenhuma das entidades. Composições Farmacêuticas

[0086] De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo um ligante de peptídeo como aqui definido em combinação com um ou mais excipientes far- maceuticamente aceitáveis.

[0087] Geralmente, os presentes ligantes de peptídeo serão utili- zados na forma purificada juntamente com excipientes ou veículos farmacologicamente apropriados. Normalmente, estes excipientes ou transportadores incluem soluções, emulsões ou suspensões aquosas ou alcoólicas/aquosas, incluindo solução salina e/ou meio tamponado. Os veículos parenterais incluem solução de cloreto de sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio e Ringer com lactato. Adjuvan- tes fisiologicamente aceitáveis adequados, se necessário para manter um complexo polipeptídico em suspensão, podem ser escolhidos de espessantes tais como carboximetilcelulose, polivinilpirrolidona, gelati-

na e alginatos.

[0088] Os veículos intravenosos incluem reforçadores de fluidos e nutrientes e reforçadores de eletrólitos, tal como aqueles com base na dextrose de Ringer. Preservativos e outros aditivos, tais como antimi- crobianos, antioxidantes, agentes quelantes e gases inertes podem da mesma forma estar presentes (Mack (1982) Remington's Pharmaceu- tical Sciences, 16ª Edição).

[0089] Os compostos da invenção podem ser usados sozinhos ou em combinação com outro agente ou agentes. O outro agente para uso em combinação pode ser, por exemplo, outro antibiótico, ou um antibiótico "adjuvante", tal como um agente para melhorar a permeabi- lidade em bactérias Gram-negativas, um inibidor de determinantes de resistência ou um inibidor de mecanismos de virulência.

[0090] Antibióticos adequados para uso em combinação com os compostos da invenção incluem, porém não são limitados a: Beta lactams, tal como penicilinas, cefalosporinas, carba- penêmicos ou monobactams. Penicilinas adequadas incluem oxacilina, meticilina, ampicilina, cloxacilina, carbenicilina, piperacilina, tricarcilina, flucloxacilina e nafcilina; cefalosporinas adequadas incluem cefazolina, cefalexina, cefalotina, ceftazidima, cefepima, ceftobiprol, ceftarolina, ceftolozano e cefiderocol; carbapenemos adequados incluem merope- nem, doripenem, imipenem, ertapenem, biapenem e tebipenem; mo- nobactams adequados incluem aztreonam; Lincosamidas, tais como clindamicina e lincomicina; Macrolídeos, tais como azitromicina, claritromicina, eritro- micina, telitromicina e solitromicina; Tetraciclinas, tais como tigeciclina, omadaciclina, eravaci- clina, doxiciclina e minociclina; Quinolonas, tais como ciprofloxacina, levofloxacina, moxi- floxacina e delafloxacina;

Rifamicinas, tais como rifampicina, rifabutina, rifalazila, rifa- pentina e rifaximina; Aminoglicosídeos, tais como gentamicina, estreptomicina, tobramicina, amicacina e plazomicina; Glicopeptídeos, tal como vancomicina, teicoplanina, tela- vancina, dalbavancina e oritavancina, Pleuromutilinas tal como a lefamulina Oxazolidinonas tal como linezolida ou tedizolida Polimixinas, tais como polimixina B ou colistina; Trimetoprim, iclaprim, sulfametoxazol; Metronidazol; Fidaxomicina: Mupirocina; Ácido fusídico; Daptomicina; Murepavidina; Fosfomicina; e Nitrofurantoína.

[0091] Antibióticos "adjuvantes" adequados incluem, porém não são limitados a: agentes conhecidos por melhorar a absorção em bactérias, tais como permeabilizadores da membrana externa ou inibidores da bomba de efluxo; permeabilizadores da membrana externa podem in- cluir nonapeptídeo de polimixina B ou outros análogos de polimixina, ou edetato de sódio; inibidores de mecanismos de resistência, tal como inibido- res de beta-lactamase; inibidores de beta-lactamase adequados inclu- em ácido clavulânico, tazobactam, sulbactam, avibactam, relebactam e nacubactam; e inibidores de mecanismos de virulência, tal como toxinas e sistemas de secreção, incluindo anticorpos.

[0092] Os compostos da invenção podem da mesma forma ser usados em combinação com terapias biológicas, tais como terapias com base em ácido nucleico, anticorpos, bacteriófago ou lisinas de fago.

[0093] A rotina de administração de composições farmacêuticas está de acordo acordo com a invenção pode ser qualquer um daqueles comumente conhecidos por aqueles versados na técnica. Para terapia, os ligantes de peptídeo da invenção podem ser administrados a qual- quer paciente de acordo com técnicas padrão. As rotinas de adminis- tração incluem, porém não estão limitadas a, oral (por exemplo, por ingestão); bucal; sublingual; transdérmica (incluindo, por exemplo, por um emplastro, gesso, etc.); transmucosal (incluindo, por exemplo, por um emplastro, gesso, etc.); intranasal (por exemplo, por spray nasal); ocular (por exemplo, por colírios); pulmonar (por exemplo, por inalação ou terapia de insuflação usando, por exemplo, por meio de um aeros- sol, por exemplo, através da boca ou nariz); retal (por exemplo, por supositório ou enema); vaginal (por exemplo, por pessário); parenteral, por exemplo, por injeção, incluindo subcutânea, intradérmica, intra- muscular, intravenosa, intra-arterial, intracardíaca, intratecal, intraespi- nhal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratra- queal, subcuticular, intraarticular, subaracnóide e intraesternal; por im- plante de um depósito ou reservatório, por exemplo, subcutaneamente ou intramuscular. De preferência, as composições farmacêuticas de acordo com a invenção serão administradas por parenteralmente. A dosagem e frequência de administração dependerão da idade, sexo e condição do paciente, administração concomitante de outros medica- mentos, contra-indicações e outros parâmetros a serem levados em consideração pelo médico.

[0094] Os ligantes de peptídeo desta invenção podem ser liofiliza-

dos para armazenamento e reconstituídos em um transportador ade- quado antes da utilização. Esta técnica demonstrou ser eficaz e técni- cas de liofilização e reconstituição conhecidas na técnica podem ser empregadas. Será apreciado por aqueles versados na técnica que a liofilização e reconstituição podem levar a vários graus de perda de atividade e que os níveis podem ter que ser ajustados para cima para compensar.

[0095] As composições contendo os presentes ligantes de peptí- deo ou um coquetel dos mesmos podem ser administradas para tra- tamentos terapêuticos. Em certas aplicações terapêuticas, uma quan- tidade adequada para realizar a inibição, supressão, modulação, elimi- nação ou algum outro parâmetro mensurável de uma população de células selecionadas é definida como uma "dose terapeuticamente efi- caz". As quantidades necessárias para atingir esta dosagem depende- rão da gravidade da doença e do estado geral do sistema imunológico do próprio paciente, porém geralmente variam de 10 µg a 250 mg de ligante de peptídeo selecionado por quilograma de peso corporal, com doses entre 100 µg a 25 mg/kg/dose sendo o mais comumente usado.

[0096] Uma composição contendo um ligante de peptídeo de acordo com a presente invenção pode ser utilizada em configurações terapêuticas para tratar uma infecção microbiana ou para fornecer pro- filaxia a um indivíduo em risco de infecção, por exemplo, submetido a cirurgia, quimioterapia, ventilação artificial ou outra condição ou inter- venção planejada. Além disso, os ligantes de peptídeo descritos aqui podem ser usados extracorporealmente ou in vitro seletivamente para matar, esgotar ou de outra forma remover efetivamente uma popula- ção de células alvo de uma coleção heterogênea de células. O sangue de um mamífero pode ser combinado extracorporalmente com os li- gantes de peptídeo selecionados, pelo que as células indesejadas são mortas ou removidas do sangue para retornar ao mamífero de acordo com técnicas padrão. Usos Terapêuticos

[0097] Os peptídeos bicíclicos da invenção têm utilidade específica como ligantes de alta afinidade de metaloprotease de membrana tipo 1 (MT1-MMP, da mesma forma conhecido como MMP14). A MT1-MMP é uma metaloprotease de transmembrana que desempenha um papel importante na remodelação da matriz extracelular, diretamente pela degradação de vários de seus componentes e indiretamente pela ati- vação da pró-MMP2. MT1-MMP é crucial para a angiogênese tumoral (Sounni e outro (2002) FASEB J. 16 (6), 555-564) e é superexpressa em uma variedade de tumores sólidos, portanto, os conjugados de fármacos compreendendo peptídeos bicíclicos de ligação a MT1-MMP da presente invenção têm utilidade particular no tratamento alvejado de câncer, em particular tumores sólidos, tais como carcinomas de pulmão de células não pequenas. Em uma modalidade, o peptídeo bicíclico da invenção é específico para MT1-MMP humano. Em uma outra modalidade, o peptídeo bicíclico da invenção é específico para MT1-MMP de camundongo. Em ainda uma outra modalidade, o peptí- deo bicíclico da invenção é específico para MT1-MMP humano e de camundongo. Em ainda outra modalidade, o peptídeo bicíclico da in- venção é específico para MT1-MMP humano, camundongo e cachorro.

[0098] Os ligantes de peptídeo da invenção podem ser utilizados em aplicações terapêuticas e profiláticas in vivo, aplicações de diag- nóstico in vitro e in vivo, ensaios in vitro e aplicações de reagentes e similares. Ligantes com níveis selecionados de especificidade são úteis em aplicações que envolvem testes em animais não humanos, onde a reatividade cruzada é desejável, ou em aplicações de diagnós- tico, onde a reatividade cruzada com homólogos ou parálogos necessi- ta ser cuidadosamente controlada. Em algumas aplicações, tais como aplicações de vacinas, a capacidade de provocar uma resposta imune em faixas predeterminadas de antígenos pode ser explorada para adaptar uma vacina para doenças e patógenos específicos.

[0099] Ligantes de peptídeo substancialmente puros com pelo menos 90 a 95% de homogeneidade são preferidos para administra- ção a um mamífero, e 98 a 99% ou mais homogeneidade é mais prefe- rido para utilizações farmacêuticas, especialmente quando o mamífero é um humano. Uma vez purificados, parcialmente ou até a homoge- neidade como desejado, os polipeptídeos selecionados podem ser usados em diagnóstico ou terapeuticamente (incluindo extracorporal- mente) ou no desenvolvimento e realização de procedimentos de en- saio, colorações imunofluorescentes e similares (Lefkovite e Pernis, (1979 e 1981) Immunological Methods, Volumes I e II, Academic Press, NY).

[00100] Os conjugados dos ligantes de peptídeo da presente inven- ção encontrarão, tipicamente, utilização na prevenção, supressão ou tratamento do câncer, em particular tumores sólidos, tais como carci- nomas de pulmão de células não pequenas.

[00101] Desse modo, de acordo com um outro aspecto da inven- ção, são fornecidos conjugados de fármacos do ligante de peptídeo como aqui definido para uso na prevenção, supressão ou tratamento de câncer, em particular tumores sólidos, tais como carcinomas de pulmão de células não pequenas.

[00102] De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecido um método de prevenção, supressão ou tratamento de câncer, em particular tumores sólidos, tais como carcinomas de pulmão de células não pequenas, que compreende a administração a um paciente em necessidade de um conjugado de fármaco do ligante de peptídeo con- forme definido aqui.

[00103] Exemplos de cânceres (e suas contrapartes benignas) que podem ser tratados (ou inibidos) incluem, porém não são limitados a tumores de origem epitelial (adenomas e carcinomas de vários tipos, incluindo adenocarcinomas, carcinomas escamosos, carcinomas de células transicionais e outros carcinomas), tais como carcinomas da bexiga e trato urinário, mama, trato gastrointestinal (incluindo esôfago, estômago (gástrico), intestino delgado, cólon, reto e ânus), fígado (carcinoma hepatocelular), vesícula biliar e sistema biliar, pâncreas exócrino, rim, pulmão (por exemplo, adenocarcinomas, carcinomas de pulmão de células pequenas, carcinomas de pulmão de células não pequenas, carcinomas bronquioalveolares e mesoteliomas), cabeça e pescoço (por exemplo, cânceres de língua, cavidade bucal, laringe, faringe, nasofaringe, amígdala, glândulas salivares, cavidade nasal e seios paranasais), ovário, trompas de Falópio, peritônio, vagina, vulva, pênis, colo do útero, miométrio, endométrio, tireoide (por exemplo, carcinoma folicular da tireoide), adrenal, próstata, pele e anexos (por exemplo melanoma, carcinoma de células basais, carcinoma de célu- las escamosas, ceratoacantoma, nevo displásico); malignidades he- matológicas (isto é, leucemias, linfomas) e distúrbios hematológicos pré-malignos e distúrbios de malignidade limítrofe, incluindo maligni- dades hematológicas e condições relacionadas de linhagem linfóide (por exemplo, leucemia linfocítica aguda [LLA], leucemia linfocítica crônica [CLL], linfomas de células B difusos linfoma de células B gran- des [DLBCL], linfoma folicular, linfoma de Burkitt, linfoma de células de revestimento, linfomas de células T e leucemias, linfomas de células exterminadoras naturais [NK], linfomas de Hodgkin, leucemia de célu- las pilosas, gamopatia monoclonal de significado incerto, plasmocito- ma múltiplo, mieloma e distúrbios linfoproliferativos pós-transplante), e malignidades hematológicas e condições relacionadas de linhagem mieloide (por exemplo, leucemia mielogênica aguda [LMA], leucemia mielogênica crônica [CML], mielomonocitiducemia crônica [CMML], síndrome verossinofílica policial, distúrbios mieloproliferativos, trombo-

citemia essencial e mielofibrose primária, síndrome mieloproliferativa, síndrome mielodisplásica e promielocitucemia); tumores de origem mesenquimal, por exemplo sarcomas de tecido mole, osso ou cartila- gem, tais como osteossarcomas, fibrossarcomas, condrossarcomas, rabdomiossarcomas, leiomiossarcomas, lipossarcomas, angiossarco- mas, sarcoma de Kaposi, sarcoma de Ewing, sarcoma sinoval, sarco- ma epiteloide, tomores estromais gastrointestinais, histiocitomas be- nigno e maligno e dermatofibrossarcomaprotuberans; tumores do sis- tema nervoso central ou periférico (por exemplo astrocitomas, gliomas e glioblastomas, meningiomas, ependimomas, tumores pineais e schwannomas); tumores endócrinos (por exemplo, tumores pituitários, tumores adrenais, tumores de células das ilhotas, tumores da parati- reóide, tumores carcinóides e carcinoma medular da tiróide); tumores oculares e anexiais (por exemplo retinoblastoma); células germinativas e tumores trofoblásticos (por exemplo teratomas, seminomas, disger- minomas, manchas hidatiformes e coriocarcinomas); e tumores pediá- tricos e embrionários (por exemplo meduloblastoma, neuroblastoma, tumor de Wilms e tumores neuroectodérmicos primitivos); ou síndro- mes, congênitas ou não, que deixam o paciente suscetível à maligni- dade (por exemplo, Xeroderma Pigmentosum).

[00104] As referências aqui feitas ao termo "prevenção" envolvem a administração da composição protetora antes da indução da doença. "Supressão" refere-se à administração da composição após um evento indutivo, porém antes do aparecimento clínico da doença. "Tratamen- to" envolve a administração da composição protetora após os sinto- mas da doença se manifestarem.

[00105] Estão disponíveis sistemas de modelo animal que podem ser usados para rastrear a eficácia dos conjugados de fármacos na proteção ou tratamento da doença. A utilização de sistemas de mode- los animais é facilitada pela presente invenção, que permite o desen-

volvimento de ligantes de peptídeo que podem reagir de forma cruza- da com alvos humanos e animais, para permitir a utilização de mode- los animais.

[00106] A invenção é também descrita abaixo com referência aos seguintes exemplos. Exemplos Materiais e Métodos Síntese de Peptídeos

[00107] A síntese de peptídeos foi baseada na química Fmoc, usando um sintetizador de peptídeos Symphony fabricado pela Pepti- de Instruments e um sintetizador Syro II pela MultiSynTech. Fmoc pa- drão-aminoácidos padrão (Sigma, Merck), com grupos de proteção de cadeia lateral apropriados: onde aplicáveis, condições de acoplamento padrão foram usadas em cada caso, seguido por desprotecção usando metodologia padrão.

[00108] Alternativamente, os peptídeos foram purificados usando HPLC e após o isolamento foram modificados com 1,3,5- triacriloilexaidro-1,3,5-triazina (TATA, Sigma). Para isso, o peptídeo linear foi diluído com 50:50 MeCN:H2O até ~ 35 mL, ~ 500 µL de 100 mM de TATA em acetonitrila foi adicionado e a reação foi iniciada com 5 mL de NH4HCO3 1 M em H2O. A reação foi deixada prosseguir por ~ 30 -60 minutos em temperatura ambiente, e liofilizada uma vez que a reação foi concluída (avaliada por MALDI). Uma vez concluído, 1ml de monoidrato de cloridrato de L-cisteína 1M (Sigma) em H2O foi adicio- nado à reação por ~ 60 min em temperatura ambiente para extinguir qualquer excesso de TATA.

[00109] Após a liofilização, o peptídeo modificado foi purificado co- mo acima, substituindo o Luna C8 por uma coluna Gemini C18 (Phe- nomenex) e alterando o ácido para 0,1% de ácido trifluoroacético. As frações puras contendo o material modificado com TATA correto foram reunidas, liofilizadas e mantidas a -20ºC para armazenamento.

[00110] Todos os aminoácidos, a menos que de outra maneira no- tado, foram usados nas configurações L-.

[00111] Em alguns casos, os peptídeos são convertidos em dissul- fetos ativados antes do acoplamento com o grupo tiol livre de uma to- xina usando o seguinte método; uma solução de 4-metil(sucinimidil4- (2-piridiltio)pentanoato) (100 mM) em DMSO seco (1,25 equiv molar) foi adicionada a uma solução de peptídeo (20 mM) em DMSO seco (1 equiv molar). A reação foi bem misturada e DIPEA (20 equiv molar) foi adicionado. A reação foi monitorada por LC/MS até a conclusão. Preparação de Conjugado de Fármaco Bicíclico BT17BDC58

[00112] Um frasco de base redonda de 50 mL que continha BI- CYCLE-NH2 ((B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17), da mesma forma conhecido como (B-Ala)-Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 HArg9) (66 mg, 22,4 µmol, 1,00 eq) em DMA (5 mL) foi purgado usando balão de nitrogênio. DIEA (2,91 mg, 112,4 µmol, 19,6 uL, 5 eq) foi em seguida adicionado com agitação a 25°C. Composto 8 (que pode ser prepara- do de acordo com o método descrito para o Composto 8 em WO 2018/127699) (30,00 mg, 22,48 µmol, 1,00 eq) foi em seguida adicio- nado e a reação foi agitada sob uma atmosfera de nitrogênio positiva a 25°C durante 16 horas. LC-MS mostrou que o Composto 8 foi consu- mido completamente e um pico principal com MS desejado foi detec-

tado. A mistura reacional resultante foi purificada por HPLC preparati- va (condição de TFA). O composto BT17BDC58 (20,2 mg, 4,85 µmol, rendimento de 21,56%) foi obtido como um sólido branco.

DADOS BIOLÓGICOS Ensaio de Ligação de Competição de Polarização de Fluorescên- cia de MT1-MMP

[00113] Devido às suas altas afinidades com o domínio de hemope- xina de MT1-MMP (PEX), os derivados fluoresceinados de 17-69-07 e 17-69-12 (denotados como 17-69-07-N040, 17-69-07-N041 e 17-69- 12-N004) pode ser usado para experiências de competição (usando FP para detecção)

[00114] Aqui, um complexo pré-formado de PEX com o marcador de ligação a PEX fluorescente é titulado com peptídeo bicíclico livre não fluorescente. Visto que todos os peptídeos baseados em 17-69 se liguem no mesmo local, o titulante irá deslocar o marcador fluorescen- te de PEX. A dissociação do complexo pode ser medida quantitativa- mente e o Kd do competidor (titulante) para a proteína alvo determina- do. A vantagem do método de competição é que as afinidades de pep- tídeos bicíclicos não fluorescentes podem ser determinadas com pre- cisão e rapidamente.

[00115] As concentrações do marcador estão geralmente no Kd ou abaixo (aqui, 1 nM), e a proteína de ligação (aqui, hemopexina de MT1-MMP) está em um excesso de 15 vezes, de modo que> 90% do marcador está ligado. Posteriormente, o peptídeo bicíclico competidor não fluorescente (geralmente apenas a sequência de núcleo biciclo) é titulado, de modo que desloca o marcador fluorescente da proteína alvo. O deslocamento do marcador é medido e associado a uma que- da na polarização da fluorescência. A queda na polarização da fluo- rescência é proporcional à fração da proteína alvo ligada ao titulante não fluorescente e desse modo é uma medida da afinidade do titulante para a proteína alvo.

[00116] Em certas experiências, marcadores de ligação de coláge- no (isto é, 17-88-N006 e 17-88-226-N002) foram usados de uma ma- neira análoga aos marcadores de ligação à hemopexina.

[00117] Os dados brutos são ajustados à solução analítica da equação cúbica que descreve o equilíbrio entre o marcador fluorescen- te, o titulante e a proteína de ligação. O ajuste requer o valor da afini- dade do traçador fluorescente para a proteína alvo, que pode ser de- terminado separadamente por experiências de FP de ligação direta (veja seção anterior). O ajuste da curva foi realizado usando Sigmaplot

12.0 e usou uma versão adaptada da equação descrita por Zhi-Xin Wang (FEBS Letters 360 (1995) 111-114). Tabela 1: Dados de Caracterização para Marcadores Usados no Ensaio de Competição de Polarização de Fluorescência Nome Sequência Estrutu- Kd (nM) Sítio de ra (Liga- Ligação ção Di- reta) 17-69- ACYNEFGCEDFYDI- TBMB 0,52 Hemope- 07-N040 CA[Sar]6[KFl] ((SEQ ID NO: xina 140)-[Sar]6[KFl]) 17-69- [Fl]G[Sar]5ACMNQFGCEDF TBMB 1,0 Hemope- 12-N004 YDICA ([Fl]G[Sar]5-(SEQ ID xina NO: 141)) 17-69- [Fl]G[Sar]5ACYNEFACEDFY TBMB 3,4 Hemope- 07-N041 DICA ([Fl]G[Sar]5-(SEQ ID xina NO: 142)) 17-88- ACPYSWETCLF- TBMB 14 Colágeno N006 GDYRCA[Sar]6[KFl] ((SEQ ID NO: 143)-[Sar]6[KFl]) 17-88- ACPYDWATCLF- TBMB 50 Colágeno 226- GDYRCA[Sar]6[KFl] ((SEQ N002 ID NO: 144)-[Sar]6[KFl])

[00118] Certos ligantes de peptídeo da invenção foram testados no ensaio de ligação mencionado acima e os resultados são mostrados na Tabela 2: Tabela 2: Dados de Ligação de Competição para Ligantes de Pep- tídeo Selecionados da invenção Nome Biciclo Marcador Kd (nM ± 95% Cl) 17-108-02 17-88-N006 4488,4 ± 545,85 17-111-01 17-69-07-N041 1800 n=1 17-111-02 17-69-07-N041 2300 n=1 17-116-01 17-69-07-N040 352 n=1 17-120-00 17-88-N006 923 ± 287,43 17-120-01 17-88-N006 310,33 ± 30,89 17-120-02 17-88-N006 190,2 ± 37,57 17-120-03 17-88-N006 603,56 ± 35 17-120-04 17-88-N006 224,5 n=1 17-120-05 17-69-07-N040 > 279,5 ± 69,3 17-120-07 17-88-N006 273 ± 119,56 17-120-08 17-88-N006 258 ± 101,92 17-120-09-T01 17-88-N006 53,83 ± 13,33 17-120-09-T02 17-88-N006 55,2 n=1 17-120-09-T03 (BCY1124) 17-88-N006 35,6 n=1 17-120-09-T03 (BCY1124) 17-88-226-N002 32 ± 20,24 Ac-(17-120-09-T03) (BCY1125) 17-88-226-N002 18,65 ± 6,96 Sar3-A-(17-120-09-T03) 17-88-226-N002 16,33 ± 5,73 Sar3-A-(17-120-09-T03) HArg2 17-88-226-N002 26,63 ± 9,31 Sar3-A-(17-120-09-T03) Arg9 17-88-226-N002 8,28 ± 3,53 Sar3-A-(17-120-09-T03) HArg9 17-88-226-N002 30,9 ± 10 (B-Ala)-Sar10-A-(17-120-09- 17-88-226-N002 39,5± 16,43 T03) HArg2 HArg9 (B-Ala)-Sar10-A-(17-120-09- 17-88-226-N002 189,55 ± 32,24 T03) HArg2 Ala9 (B-Ala)-Sar10-A-(17-120-09- 17-88-226-N002 89,55 ± 10,09 T03) Ala2 HArg9

Nome Biciclo Marcador Kd (nM ± 95% Cl) Ac-(B-Ala)-Sar10-A-(17-120- 17-88-226-N002 43,9 ± 15,48 09-T03) HArg2 HArg9 17-120-09-T04 17-88-N006 34,15 ± 10,2 17-120-09-T05 17-88-N006 32,3 ± 6,81 17-120-09-T06 17-88-N006 49,8 n=1 17-120-09-T07 17-88-N006 48,1 n=1 17-120-09-T08 17-88-N006 37,5 n=1 17-120-09-T09 17-88-N006 77,2 n=1 17-120-09-T10 17-88-N006 38,5 n=1 17-120-09-T11 17-88-N006 44,2 n=1 17-120-09-T12 17-88-N006 62,2 n=1 17-120-09-T13 17-88-N006 69,3 n=1 17-120-10-T01 17-88-N006 132,3 ± 103,29 17-120-11-T01 17-88-N006 612 ± 760,47 17-120-12-T01 17-88-N006 183 n=1 17-120-13-T01 17-88-N006 189 ± 123,48 17-120-14-T01 17-88-N006 148 n=1 17-120-15-T01 17-88-N006 178 n=1 17-120-15-T02 17-88-N006 76,67 ± 72,87 17-120-16-T01 17-88-N006 74,4 ± 17,64 17-120-17-T01 17-88-N006 157 n=1 17-120-18 17-88-N006 252 ± 92,12 17-120-19 17-88-N006 303 ± 258,72 17-120-20 17-88-N006 248,5 ± 14,7 17-120-21 17-88-N006 >82,75 ± 4,61 17-120-21-T01 17-88-N006 113 n=1 17-120-22-T01 17-88-N006 62,35 ± 30,48 17-120-22-T02 17-88-N006 46,1 ± 26,5 17-120-23-T01 17-88-N006 127 ± 7,84 17-120-24-T01 17-88-N006 126 ± 35,28 17-120-25-T01 17-88-N006 194,5 ± 161,7

Nome Biciclo Marcador Kd (nM ± 95% Cl) 17-120-26-T01 17-88-N006 598 n=1 17-120-27-T01 17-88-N006 394 n=1 17-120-28-T01 17-88-N006 191,5 ± 4,9 17-120-29-T01 17-88-N006 162 ± 68,6 17-120-30-T01 17-88-N006 78,7 n=1 17-120-31-T01 17-88-N006 50,2 n=1 17-120-31-T02 17-88-N006 68,3 n=1 17-120-31-T03 17-88-N006 41,47 ± 5,32 17-120-32-T01 17-88-N006 63,8 ± 26,49 17-120-33-T01 17-88-N006 77,6 n=1 17-120-34-T01 17-88-N006 59,87 ± 8,58 17-120-35-T01 17-88-N006 23,33 ± 9,48 17-121-00 17-69-07-N040 678 n=1 17-122-02 17-69-07-N040 > 929 n=3 17-122-03 17-69-07-N040 >378 n=3 17-122-04 17-69-07-N040 >2100 17-126-01 17-69-07-N041 >316 ± 9,8 17-126-02 17-69-07-N041 >282 ± 172,48 17-126-03 17-69-07-N041 >430 ± 11,76 17-126-06 17-69-07-N040 675 ± 192,08 17-126-07 17-69-07-N040 197,5 ± 85,26 17-126-08 17-69-07-N040 711 n=1 17-126-09 17-69-07-N040 165 n=1 17-126-10 17-69-07-N040 737 n=1 17-126-11 17-69-07-N040 971 n=1 17-126-12 17-69-07-N040 2900 n=1 17-126-18 17-69-07-N040 147 n=1 17-126-19 17-69-07-N040 199 n=1 17-126-20 17-69-07-N040 246 n=1 17-126-21 17-69-07-N040 131 n=1 17-126-22 17-69-07-N040 295 n=1

Nome Biciclo Marcador Kd (nM ± 95% Cl) 17-126-23 17-69-07-N040 409 n=1 17-126-24 17-69-07-N040 200 n=1 17-126-25 17-69-07-N040 >138,76 Ac-(17-126-25) 17-69-12-N004 60,5 n=1 17-126-26 17-69-07-N040 1200 n=1 17-126-27 17-69-07-N040 143 n=1 17-126-28 17-69-07-N040 250 n=1 17-126-30-T01 17-69-07-N040 239 n=1 17-126-31-T01 17-69-07-N040 295 n=1 17-126-32-T01 17-69-07-N040 390 n=1 17-126-33-T01 17-69-07-N040 244 n=1 17-126-33-T02 17-69-07-N040 296 n=1 17-126-35-T01 17-69-07-N040 263 n=1 17-126-36-T01 17-69-07-N040 149 n=1 17-126-37-T01 17-69-07-N040 155 n=1 17-126-38-T01 17-69-07-N040 162 n=1 17-126-39-T01 17-69-07-N040 187 n=1 17-126-40-T01 17-69-07-N040 310 n=1 17-126-41-T01 17-69-07-N040 202 n=1 17-127-01 17-69-07-N040 2200 n=1 17-129-00 17-69-07-N040 446,0 17-129-01-T01 17-69-07-N040 499 n=1 17-129-01-T02 17-69-07-N040 525 n=1 17-129-01-T03 17-69-07-N040 598 n=1 17-129-01-T04 17-69-07-N040 705 n=1 17-129-01-T05 17-69-07-N040 324 n=1 17-129-02 17-69-07-N040 877 ± 650,71 17-129-03 17-69-07-N040 536,5 ± 126,42 17-129-04 17-69-07-N040 595 ± 372,39 17-129-05 17-69-07-N040 136,17 ± 22,27 17-129-06 17-69-07-N040 566 n=1

Nome Biciclo Marcador Kd (nM ± 95% Cl) 17-129-07 17-69-07-N040 582 n=1 17-129-08 17-69-07-N040 516 n=1 17-129-09 17-69-07-N040 1092 n=1 17-129-10 17-69-07-N040 781 n=1 17-129-11 17-69-07-N040 912 n=1 17-129-12-T01 17-69-07-N040 187 ± 86,24 17-129-13-T01 17-69-07-N040 248 n=1 17-129-14-T01 17-69-07-N040 245,5 ± 46,06 17-129-14-T02 17-69-07-N040 318 ± 27,44 17-129-15-T01 17-69-07-N040 278 n=1 17-129-16-T01 17-69-07-N040 263 n=1 17-129-17-T01 17-69-07-N040 418 n=1 17-129-17-T02 17-69-07-N040 369 n=1 17-129-17-T03 17-69-07-N040 312 n=1 17-129-18-T01 17-69-07-N040 138,33 ± 43,96 17-129-18-T02 17-69-07-N040 334 n=1 17-129-18-T03 17-69-07-N040 202 ± 92,96 17-129-18-T04 17-69-07-N040 171,5 ± 53,9 17-129-19-T01 17-69-07-N040 754 n=1 17-129-19-T02 17-69-07-N040 458 n=1 17-129-20-T01 17-69-07-N040 213 n=1 17-129-21-T01 17-69-07-N040 110,8 ± 33,71 17-129-22-T01 17-69-07-N040 53,7 17-129-23-T01 17-69-07-N040 54,8 Ac-(17-129-23-T01) 17-69-12-N004 8,9 n=1 Dados de Ligação de SPR

[00119] Experiências de Biacore foram realizadas para determinar os valores de KD (nM) de peptídeos monoméricos que se ligam à pro- teína MT1 MMP14 humana, domínio de hemopexina (obtido da Merck Millipore).

[00120] A proteína foi aleatoriamente biotinilada em PBS usando o reagente de EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotina (Thermo Fisher) de acordo com o protocolo sugerido pelo fabricante. A proteína foi exten- sivamente dessalinizada para remover a biotina desacoplada usando colunas de rotação em PBS.

[00121] Para a análise de ligação do peptídeo, um instrumento Bia- core 3000 foi usado utilizando um chip CM5 (GE Healthcare). A estrep- tavidina foi imobilizada no chip usando química de acoplamento de amina padrão a 25°C com HBS-N (HEPES 10 mM, NaCl 0,15 M, pH 7,4) como tampão fluente. Resumidamente, a superfície de carboxime- til dextrano foi ativada com uma injeção de 7 minutos de uma propor- ção de 1:1 de 0,4 M de cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) car- bodiimida (EDC)/0,1 M de N-hidroxi sucinimida (NHS) em um taxa de fluxo de 10 μl/min. Para a captura da estreptavidina, a proteína foi dilu- ída para 0,2 mg/ml em acetato de sódio 10 mM (pH 4,5) e capturada por injeção de 120 µl de estreptavidina na superfície do chip ativado. Grupos ativados residuais foram bloqueados com uma injeção de 7 minutos de 1 M de etanolamina (pH 8,5) e MT1 MMP14 biotinilado capturado em um nível de 1.200-1.800 RU. O tampão foi alterado para PBS/0,05% de Tween 20 e uma série de diluições dos peptídeos foi preparada neste tampão com uma concentração de DMSO final de 0,5%. A concentração de peptídeo superior foi de 100 nM com 6 ou- tras diluições de 2 vezes. A análise de SPR foi conduzida a 25°C em uma taxa de fluxo de 50 µl/min com 60 segundos de associação e dis- sociação entre 400 e 1.200 segundos, dependendo do peptídeo indivi- dual. Os dados foram corrigidos para efeitos de volume excluídos de DMSO. Todos os dados foram duplamente referenciados para injeções em branco e superfície de referência usando procedimentos de pro- cessamento padrão e processamento de dados e ajuste cinético foram realizados usando software Scrubber, versão 2.0c (Software BioLogic). Os dados foram ajustados usando um modelo de ligação de 1:1 sim-

ples, permitindo efeitos de transporte de massa quando apropriado.

[00122] Certos ligantes de peptídeo da invenção foram testados no SPR mencionado acima e nos ensaios de ligação de competição e os resultados são mostrados na Tabela 3: Tabela 3: Dados de Ligação de SPR e Competição para Ligantes de Peptídeo Selecionados da Invenção Placa 1 Placa 2 Nome biciclo KD (SPR)/nM Ki (FP-comp)/nM Ki (FP-comp)/nM BCY1124 14,8 78 107 BCY1125 15,1 ~ ~ BCY3959 27,7 ~ ~ BCY9933 30,7 ~ ~ BCY9934 36,9 ~ ~ BCY9935 39,2 ~ ~ BCY9936 38 ~ ~ BCY9937 77,8 ~ ~ BCY9938 80,9 ~ ~ BCY9943 299 ~ ~ BCY9945 1360 ~ ~ BCY9946 372 ~ ~ BCY9949 190 ~ ~ BCY9951 364 ~ ~ BCY9952 870 ~ ~ BCY9953 296 ~ ~ BCY9954 28,3 ~ ~ BCY9955 73,5 ~ ~ BCY9957 304,2 ~ ~ BCY9959 5,87 ~ ~ BCY9960 72,7 ~ ~ BCY9961 13000 ~ ~ BCY9963 7100 ~ ~ BCY9964 35 ~ ~

Placa 1 Placa 2 Nome biciclo KD (SPR)/nM Ki (FP-comp)/nM Ki (FP-comp)/nM BCY9965 77,6 ~ ~ BCY9966 240 ~ ~ BCY9968 163 ~ ~ BCY10223 400 ~ ~ BCY10224 97,8 ~ ~ BCY9965 ~ 76 ~ BCY11147 ~ 53 ~ BCY11148 ~ 45 ~ BCY11149 ~ 80 ~ BCY11150 ~ 396 ~ BCY11151 ~ 35 ~ BCY11152 ~ 68 ~ BCY11153 ~ 43 ~ BCY11154 ~ 129 ~ BCY11155 ~ 459 ~ BCY11163 ~ 54 ~ BCY11158 ~ 124 ~ BCY11160 ~ ~ 289 BCY11165 ~ ~ 72 BCY11166 ~ ~ 92 BCY11167 ~ ~ 135 BCY10288 52,5 ~ ~ BCY12401 10,834 BCY12402 8,9004 BCY12403 56,125 BCY12404 27,44 BCY12405 14,7

[00123] Teste de eficácia in vivo de BT17BDC58 no tratamento de xenoenxerto HT1080 em camundongos nus BALB/c

1. Objetivo do estudo

[00124] O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia antitumoral in vivo de BT17BDC58 no tratamento do modelo de xenoenxerto HT1080 em camundongos nus BALB/c.

2. Design Experimental Gr Tratamento Dosa- n Volume de Rotina Horário gem Dosagem de Do- (mg/kg) (ml/g) sagem 1 Veículo - 3 10 i.v. biw*2 semanas 2 BT17BDC58 1 3 10 i.v. biw*2 semanas 3 BT17BDC58 3 3 10 i.v. biw*2 semanas 4 BT17BDC58 10 3 10 i.v. biw*2 semanas Nota: n: número do animal; Volume de dosagem: ajustar o volume de dosagem com base no peso corporal de 10 µl/g.

3. Materiais

3.1. Animais e Condições de Alojamento

3.1.1. Animais Espécie: Mus Musculus Cepa: Balb/c nus Idade: 6-8 semanas Sexo: feminino Peso corporal: 18-22 g Número de animais: 21 ratos mais sobressalentes Fornecedor de animais: Shanghai LC Laboratory Animal Co., LTD.

3.1.2. Condição de Alojamento

[00125] Os camundongos foram mantidos em gaiolas de ventilação individuais com temperatura e umidade constantes com 3 animais em cada gaiola.  Temperatura: 20 ~ 26°C.  Umidade 40-70%.

[00126] Gaiolas: Feitas de policarbonato. O tamanho é 300 mm x 180 mm x 150 mm. O material do leito é o sabugo de milho, que é tro- cado duas vezes por semana.

[00127] Dieta: Os animais tiveram livre acesso a alimentos granula- dos secos esterilizados por irradiação durante todo o período do estu- do.

[00128] Água: os animais tiveram livre acesso a água potável esteri- lizada.

[00129] Identificação da gaiola: As etiquetas de identificação de ca- da gaiola continham as seguintes informações: número de animais, sexo, cepa, data de recebimento, tratamento, número do estudo, nú- mero do grupo e data de início do tratamento.

[00130] Identificação dos animais: os animais foram marcados por um código de orelha.

3.2 Artigos de Teste e Controle Positivo Identificação do produto: BT17BDC58 Fabricante: Bicycle Therapeutics Número do lote: 1 Descrição física: pó liofilizado Peso molecular: 7,6 mg Pureza: 98,36% Embalagem e condição de armazenamento: armazenado a -80°C

4. Métodos e Procedimentos Experimentais

4.1 Cultura de Células

[00131] As células tumorais HT1080 foram mantidas in vitro como cultura em monocamada em meio suplementado com 10% de soro bovino fetal inativado pelo calor a 37ºC em atmosfera de 5% de CO2 em ar. As células tumorais foram rotineiramente subcultivadas duas vezes por semana por tratamento com tripsina-EDTA. As células que crescem em uma fase de crescimento exponencial foram colhidas e contadas para inoculação do tumor.

4.2 Inoculação de tumor

[00132] Cada camundongo foi inoculado subcutaneamente no flan-

co direito com células tumorais HT1080 (5 x 106) em 0,2 ml de PBS para o desenvolvimento do tumor. 21 animais foram aleatorizados quando o volume do tumor médio atingiu 174 mm3. A administração do artigo de teste e o número de animais em cada grupo foram mostrados na tabela do projeto experimental.

4.3 Preparação da formulação do artigo de teste Tratamento Dose Formulação (mg/ml) Veículo -- 25 mM de Histidina pH 7,0, 10% de Sacaro- se (sem DMSO) BT17BDC58 1 Dissolver 7,6 mg BT17BDC58 em 7,475 ml de tampão de formulação BT17BDC58 0,3 Diluir 240 µl 1 mg/ml BT17BDC58 em 560 µl de tampão de formulação BT17BDC58 0,1 Diluir 80 µl 1 mg/ml BT17BDC58 em 720 µl tampão de formulação

4.4 Observações

[00133] Todos os procedimentos relacionados ao manuseio, cuida- dos e tratamento dos animais no estudo foram realizados de acordo com as diretrizes aprovadas pelo Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de WuXi AppTec, seguindo as orientações da As- sociation for Assessment and Accreditation of Laboratory Care (AAA- LAC). No momento do monitoramento de rotina, os animais foram veri- ficados diariamente quanto a quaisquer efeitos do crescimento do tu- mor e tratamentos sobre o comportamento normal, tal como mobilida- de, consumo de comida e água (olhando apenas), ganho/perda de pe- so corporal, emaranhado de olhos/cabelo e qualquer outro efeito anormal como estabelecido no protocolo. A morte e os sinais clínicos observados foram registrados com base no número de animais em cada subconjunto.

4.5 Medições de tumor e os pontos finais

[00134] O principal objetivo era ver se o crescimento do tumor po-

deria ser atrasado ou se os ratos poderiam ser curados. O volume do tumor foi medido três vezes por semana em duas dimensões usando um paquímetro, e o volume foi expresso em mm3 usando a fórmula: V = 0,5 a x b2 onde a e b são os diâmetros longo e curto do tumor, res- pectivamente. O tamanho do tumor foi em seguida usado para cálcu- los do valor T/C. O valor T/C (em porcentagem) é uma indicação da eficácia antitumoral; T e C são os volumes médios dos grupos tratado e controle, respectivamente, em um determinado dia.

[00135] O TGI foi calculado para cada grupo usando a fórmula: TGI (%) = [1- (Ti-T0)/(Vi-V0)] × 100; Ti é o volume do tumor médio de um grupo de tratamento em um determinado dia, T0 é o volume do tumor médio do grupo de tratamento no dia do início do tratamento, Vi é o volume do tumor médio do grupo de controle do veículo no mesmo dia com Ti, e V0 é o volume do tumor médio do grupo do veículo no dia do início do tratamento.

4.6 Coleta de Amostras

[00136] No final do estudo, o plasma foi coletado em 5 min, 15 min, 30 min, 60 min e 120 min após a dosagem.

4.7 Análise Estatística

[00137] As estatísticas de resumo, incluindo a média e o erro pa- drão da média (SEM), são fornecidas para o volume do tumor de cada grupo em cada ponto de tempo.

[00138] A análise estatística da diferença no volume do tumor entre os grupos foi realizada com base nos dados obtidos no melhor ponto de tempo terapêutico após a dose final.

[00139] Uma ANOVA unilateral foi realizada para comparar o volu- me do tumor entre os grupos, e quando uma estatística F significativa (uma relação da variância do tratamento para a variância do erro) foi obtida, as comparações entre os grupos foram realizadas com o teste Games-Howell. Todos os dados foram analisados usando Prism. P

<0,05 foi considerado estatisticamente significante.

5. Resultados

5.1 Alteração do peso corporal e curva de crescimento do tumor

[00140] O peso corporal e o crescimento do tumor são mostrados na Figura 1.

5.2 Rastreamento do Volume do Tumor

[00141] O volume do tumor médio ao longo do tempo em camun- dongos nus Balb/c fêmeas com xenoenxerto HT1080 é mostrado na Tabela 4. Tabela 4: Rastreamento do volume do tumor ao longo do tempo Gr. Tratamento Dias após o início do tratamento 0 2 4 7 9 11 14 1 Veículo, biw 174±18318±30473±31688±87 859± 975± 1075± 148 167 164 2 BT17BDC58, 174±22265±46351±69488±75577±62676±79785±58 1 mpk, biw 3 BT17BDC58, 174±25151±16 73±19 42±11 50±4 67±9 128±16 3 mpk, biw 4 BT17BDC58, 173±25153±29 58±20 27±1 18±4 10±1 2±2 10 mpk, biw

5.3 Análise de Inibição de Crescimento de Tumor

[00142] A taxa de inibição do crescimento do tumor para BT17BDC58 no modelo de xenoenxerto HT1080 foi calculada com ba- se nas medições do volume do tumor no dia 14 após o início do trata- mento. Tabela 5: Análise de inibição de crescimento tumoral Gr Tratamento Volume de Tu- T/Cb (%) TGI (%) Valor de mor (mm3)a P 1 Veículo, biw 1075±164 -- -- -- 2 BT17BDC58, 785±58 73 32 p>0,05 1 mpk, biw

Gr Tratamento Volume de Tu- T/Cb (%) TGI (%) Valor de mor (mm3)a P 3 BT17BDC58, 128±16 12 105 p<0,001 3 mpk, biw 4 BT17BDC58, 2±2 0,2 119 p<0,001 10 mpk, biw a. Média ± SEM. b. A inibição do crescimento do tumor é calculada dividindo o volume tumoral médio do grupo pelo grupo tratado pelo volume tumoral médio do grupo para o grupo de controle (T/C).

6. Resumo e discussão dos resultados

[00143] Neste estudo, a eficácia terapêutica de BT17BDC58 no modelo de xenoenxerto HT1080 foi avaliada. Os pesos corporais me- didos e os volumes de tumor de todos os grupos de tratamento em vários pontos de tempo são mostrados na Figura 1 e nas Tabelas 4 e

5.

[00144] O tamanho do tumor médio de camundongos tratados com veículo atingiu 1075 mm3 no dia 14. BT17BDC58 a 1 mg/kg (TV = 785 mm3, TGI = 32,2%, p> 0,05), 3 mg/kg (TV = 128 mm3, TGI = 105,1%, p <0,001) e 10 mg/kg (TV = 2 mm3, TGI = 84,3%, p <0,001) produziu atividade antitumoral depen- dente de dose. Entre eles, o BT17BDC58 a 10 mg/kg causou remissão completa de 2/3 tumores e regrediu 1/3 do tumor para 7 mm3 no dia

14.

Claims (23)

REIVINDICAÇÕES

1. Ligante de peptídeo específico para MT1-MMP, caracte- rizado pelo fato de que compreende um polipeptídeo compreendendo pelo menos três resíduos de cisteína, separados por pelo menos duas sequências de alça, e uma estrutura molecular que forma ligações co- valentes com os resíduos de cisteína do polipeptídeo de modo que pelo menos duas alças de polipeptídeo são formados na estrutura mo- lecular, em que a referida estrutura molecular é 1,1’,1’’-(1,3,5- triazinano-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-ona (TATA).

2. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça com- preendem 2, 3, 5, 6, 7 ou 9 aminoácidos, tais como 3 ou 7 aminoáci- dos.

3. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequências de alça, uma primeira alça que consiste em 7 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 2 aminoácidos, tais como: CEESFYPECDHC (SEQ ID NO: 1); em particular: A-(SEQ ID NO: 1)-A (referido aqui como 17-108-02).

4. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 3 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 6 aminoácidos, tais como: CPDLCLDLFPNC (SEQ ID NO: 2); e CPELCVDLYPHC (SEQ ID NO: 3); em particular: A-(SEQ ID NO: 2)-A (referido aqui como 17-111-01).

A-(SEQ ID NO: 3)-A (referido aqui como 17-111-02).

5. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 6 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 3 aminoácidos, tais como: CHPEWVSCEFHC (SEQ ID NO: 4); em particular: A-(SEQ ID NO: 4)-A (referido aqui como 17-116-01).

6. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 3 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 7 aminoácidos, tal como CSHECALLFPKTC (SEQ ID NO: 5); CFDECQLLFPKTC (SEQ ID NO: 6); CLDECKLLFPKTC (SEQ ID NO: 7); CREECMLLFPKTC (SEQ ID NO: 8); CETECALLFPRSC (SEQ ID NO: 9); CADECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 10); CDVECRLLFPRSC (SEQ ID NO: 11); CIDECRLLFPRSC (SEQ ID NO: 12); CVRECALLFPKTC (SEQ ID NO: 13); CV[HArg]ECALLFPKTC (SEQ ID NO: 14); CVRECALLFPRTC (SEQ ID NO: 15); CVRECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 16); CV[HArg]ECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 17); CV[HArg]ECALLFPATC (SEQ ID NO: 18); CVAECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 19); CVTECQLLFPKTC (SEQ ID NO: 20);

CRHECELLFPKTC (SEQ ID NO: 21); CQRECALLFPKTC (SEQ ID NO: 22); CVRECTLLFPKTC (SEQ ID NO: 23); CTIECALLFPKTC (SEQ ID NO: 24); CARECALLFPKTC (SEQ ID NO: 25); CINECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 26); CYTECSLLFPKTC (SEQ ID NO: 27); CHEECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 28); CLEECKLLFPKTC (SEQ ID NO: 29); CIDECALLFPRTC (SEQ ID NO: 30); CYEECRLLFPRTC (SEQ ID NO: 31); CVRECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 32); CHIECALLFPKTC (SEQ ID NO: 33); CKRECMLLFPKTC (SEQ ID NO: 34); CYRECALLFPKTC (SEQ ID NO: 35); CLTECALLFPKTC (SEQ ID NO: 36); CEVECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 37); CEAECRLLFPKTC (SEQ ID NO: 38); CVQECALLFPKTC (SEQ ID NO: 39); CIRECSLLFPKTC (SEQ ID NO: 40); CVTECALLFPKTC (SEQ ID NO: 41); CVAECKLLFPKTC (SEQ ID NO: 42); CVGECALLFPKTC (SEQ ID NO: 43); CVVECALLFPKTC (SEQ ID NO: 44); CVFECALLFPKTC (SEQ ID NO: 45); CA[HArg]ECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 46); CV[HArg]ECALLFA[HArg]TC (SEQ ID NO: 47); CV[HArg]ECALLFP[HArg]AC (SEQ ID NO: 48); CV[HArg]ECALL[1Nal]P[HArg]TC (SEQ ID NO: 49); CV[HArg]ECALL[Cha]P[HArg]TC (SEQ ID NO: 50);

CV[HArg]ECALLF[Pip][HArg]TC (SEQ ID NO: 51); CV[HArg]ECALLFP[HArg]SC (SEQ ID NO: 52); CV[HArg]ECALLFP[HArg][HSer]C (SEQ ID NO: 53); CV[HArg]ECALLF[HyP][HArg]TC (SEQ ID NO: 54); CV[HArg]EC[Aib]LLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 55); CV[HArg]ECAL[Nle]FP[HArg]TC (SEQ ID NO: 56); CV[HArg]ECA[tBuAla]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 57); CV[HArg]ECA[Nle]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 58); CV[Aad2]ECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 59); CP[HArg]ECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 60); CV[HArg]ECALL[4FlPhe]P[HArg]TC (SEQ NO: 61); CV[HArg]ECAL[tBuGly]FP[HArg]TC (SEQ ID NO: 62); CV[HArg]ECAL[Cha]FP[HArg]TC (SEQ ID NO: 63); CV[HArg]ECALL[2Nal]P[HArg]TC (SEQ ID NO: 64); CV[HArg]ECALLFP[HArg][HyV]C (SEQ ID NO: 65); C[tBuGly][HArg]ECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 66); CVEECALLFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 67); CV[HArg]ECA[Cpa]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 68); CV[HArg]ECA[Cba]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 69); CV[HArg]ECA[C5A]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 70); CV[HArg]ECA[Cha]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 71); CV[HArg]ECA[tBuGly]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 72); CV[HArg]ECALLF[Cis-HyP][HArg]TC (SEQ ID NO: 73); CV[HArg]ECAL[Cpa]FP[HArg]TC (SEQ ID NO: 74); CV[HArg]ECAL[C5A]FP[HArg]TC (SEQ ID NO: 75); CV[HArg]ECA[tBuAla]LF[HyP][HArg]TC (SEQ ID NO: 76); CV[HArg]ECA[tBuAla][tBuGly]F[HyP][HArg]TC (SEQ ID NO: 77); e C[tBuGly][HArg]ECA[tBuAla]LFP[HArg]TC (SEQ ID NO: 78); em que Aad representa ácido alfa-L-aminoadípico, Aib representa áci- do aminoisobutírico, C5a representa beta-ciclopentil-L-alanina, Cba representa β-ciclobutilalanina, Cha representa 3-cicloexil-L-alanina, Cpa representa beta-ciclopropil-L-alanina, 4FlPhe representa 4-fluoro- L-fenilalanina, HArg representa homoarginina, HyP representa hidroxi- prolina, HyV representa 3-hidroxi-L-valina, HSer representa homoseri- na, 1Nal representa 1-naftilalanina, 2Nal representa 2-naftilalanina, Nle representa norleucina, Pip representa ácido pipecólico, tBuAla repre- senta t-butil-alanina, tBuGly representa t-butil-glicina; em particular: A-(SEQ ID NO: 5)-A (referido aqui como 17-120-00); A-(SEQ ID NO: 6)-A (referido aqui como 17-120-01); A-(SEQ ID NO: 7)-A (referido aqui como 17-120-02); A-(SEQ ID NO: 8)-A (referido aqui como 17-120-03); A-(SEQ ID NO: 9)-A (referido aqui como 17-120-04); A-(SEQ ID NO: 10)-A (referido aqui como 17-120-05); A-(SEQ ID NO: 11)-A (referido aqui como 17-120-07); A-(SEQ ID NO: 12)-A (referido aqui como 17-120-08); APPP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T01); QISP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T02); ALPP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T03 e BCY1124); Ac-ALPP-(SEQ ID NO: 13) (referido aqui como Ac-(17-120-09-T03) e BCY1125); Sar3-ALPP-(SEQ ID NO: 13) (referido aqui como Sar3-A-(17-120-09- T03)); GPPP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T04); SPPP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T05); NPPP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T06); EPPP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T07); HPPP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T08); APNP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T09);

APDP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T10); APLP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T11); APAP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T12); APHP-(SEQ ID NO: 13)-A (referido aqui como 17-120-09-T13); Sar3-ALPP-(SEQ ID NO: 14) (referido aqui como Sar3-A-(17-120-09- T03) HArg2); Sar3-ALPP-(SEQ ID NO: 15) (referido aqui como Sar3-A-(17-120-09- T03) Arg9); Sar3-ALPP-(SEQ ID NO: 16) (referido aqui como Sar3-A-(17-120-09- T03) HArg9); (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como (B-Ala)- Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 HArg9); Ac-(B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como Ac-(B- Ala)-Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 HArg9); ALPP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY3959); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY9933); [Ac]APP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY9934); [Ac]LAP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY9935); [Ac]LPA-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY9936); [Ac]-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY9968); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY11147); [Ac]LPY-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY11148); [Ac][dA]PP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY11165); [Ac]L[dA]P-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY11166); [Ac]LP[dA]-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como BCY11167); ALPP-(SEQ ID NO: 17)-A (referido aqui como BCY10288). (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 18) (referido aqui como (B-Ala)- Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 Ala9); (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 19) (referido aqui como (B-Ala)- Sar10-A-(17-120-09-T03) Ala2 HArg9);

[Ac]LPP-(SEQ ID NO: 19) (referido aqui como BCY9938); APMP-(SEQ ID NO: 20)-A (referido aqui como 17-120-10-T01); APSP-(SEQ ID NO: 21)-A (referido aqui como 17-120-11-T01); AALP-(SEQ ID NO: 22)-A (referido aqui como 17-120-12-T01); ALDP-(SEQ ID NO: 23)-A (referido aqui como 17-120-13-T01); ADRP-(SEQ ID NO: 24)-A (referido aqui como 17-120-14-T01); ATQP-(SEQ ID NO: 25)-A (referido aqui como 17-120-15-T01); SPPP-(SEQ ID NO: 25)-A (referido aqui como 17-120-15-T02); ARHP-(SEQ ID NO: 26)-A (referido aqui como 17-120-16-T01); ALPP-(SEQ ID NO: 27)-A (referido aqui como 17-120-17-T01); A-(SEQ ID NO: 28)-A (referido aqui como 17-120-18); A-(SEQ ID NO: 29)-A (referido aqui como 17-120-19); A-(SEQ ID NO: 30)-A (referido aqui como 17-120-20); A-(SEQ ID NO: 31)-A (referido aqui como 17-120-21); APPP-(SEQ ID NO: 31)-A (referido aqui como 17-120-21-T01); APSP-(SEQ ID NO: 32)-A (referido aqui como 17-120-22-T01); PLPP-(SEQ ID NO: 32)-A (referido aqui como 17-120-22-T02); APAP-(SEQ ID NO: 33)-A (referido aqui como 17-120-23-T01); AVEP-(SEQ ID NO: 34)-A (referido aqui como 17-120-24-T01); AEPA-(SEQ ID NO: 35)-A (referido aqui como 17-120-25-T01); ASPP-(SEQ ID NO: 36)-A (referido aqui como 17-120-26-T01); AAPP-(SEQ ID NO: 37)-A (referido aqui como 17-120-27-T01); APPP-(SEQ ID NO: 38)-A (referido aqui como 17-120-28-T01); AVPP-(SEQ ID NO: 39)-A (referido aqui como 17-120-29-T01); SPPP-(SEQ ID NO: 40)-A (referido aqui como 17-120-30-T01); HLPP-(SEQ ID NO: 41)-A (referido aqui como 17-120-31-T01); RLPP-(SEQ ID NO: 41)-A (referido aqui como 17-120-31-T02); APPP-(SEQ ID NO: 41)-A (referido aqui como 17-120-31-T03); MPPP-(SEQ ID NO: 42)-A (referido aqui como 17-120-32-T01); SPPP-(SEQ ID NO: 43)-A (referido aqui como 17-120-33-T01);

APPP-(SEQ ID NO: 44)-A (referido aqui como 17-120-34-T01); APPP-(SEQ ID NO: 45)-A (referido aqui como17-120-35-T01); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 46) (referido aqui como BCY9937); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 47) (referido aqui como BCY9943); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 48) (referido aqui como BCY9945); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 49) (referido aqui como BCY9946); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 50) (referido aqui como BCY9949); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 51) (referido aqui como BCY9951); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 52) (referido aqui como BCY9952); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 53) (referido aqui como BCY9953); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 54) (referido aqui como BCY9954); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 55) (referido aqui como BCY9955); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 56) (referido aqui como BCY9957); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 57) (referido aqui como BCY9959); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 57) (referido aqui como BCY12401); [Ac]EYP-(SEQ ID NO: 57) (referido aqui como BCY12405); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 58) (referido aqui como BCY9960); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 59) (referido aqui como BCY9961); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 60) (referido aqui como BCY9963); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 61) (referido aqui como BCY9964); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 62) (referido aqui como BCY9965); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 63) (referido aqui como BCY9966); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 64) (referido aqui como BCY10223); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 65) (referido aqui como BCY10224); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 66) (referido aqui como BCY11149); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 67) (referido aqui como BCY11150); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 68) (referido aqui como BCY11151); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 69) (referido aqui como BCY11152); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 70) (referido aqui como BCY11153); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 71) (referido aqui como BCY11154);

[Ac]LPP-(SEQ ID NO: 72) (referido aqui como BCY11155); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 73) (referido aqui como BCY11163); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 74) (referido aqui como BCY11158); [Ac]LPP-(SEQ ID NO: 75) (referido aqui como BCY11160); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 76) (referido aqui como BCY12402); [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 77) (referido aqui como BCY12403); e [Ac]LYP-(SEQ ID NO: 78) (referido aqui como BCY12404).

7. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o ligante de peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos que é (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) (referido aqui como (B-Ala)-Sar10-A-(17-120-09-T03) HArg2 HArg9).

8. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 7 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 3 aminoácidos, tais como: CSSWDKLMCHPYC (SEQ ID NO: 79); em particular: A-(SEQ ID NO: 79)-A (referido aqui como 17-121-00).

9. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 3 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 9 aminoácidos, tais como: CPEECFYLPPHPMSC (SEQ ID NO: 80); CPQECFYLPGHSLYC (SEQ ID NO: 81); CPGECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 82); CPGECFYPTNHPLYC (SEQ ID NO: 83); CPQECFYPIGHPLAC (SEQ ID NO: 84);

CPEECFYPPGHKLHC (SEQ ID NO: 85); CPQECFYPPGHRLRC (SEQ ID NO: 86); CPQECFYPPGHPYHC (SEQ ID NO: 87); CPQECFYPSTHPLYC (SEQ ID NO: 88); CPGECFYPSNHRLYC (SEQ ID NO: 89); CPDECFYPPEHPLAC (SEQ ID NO: 90); CPGECFYPPGHHLSC (SEQ ID NO: 91); CPGECFYPPGHHLGC (SEQ ID NO: 92); CPEECFYPPNHPLYC (SEQ ID NO: 93); CPGECFYPPDHPLYC (SEQ ID NO: 94); CPGECFYPPGHPLYC (SEQ ID NO: 95); CPGECFYPPNHPFYC (SEQ ID NO: 96); CPGECFYPPNHPLYC (SEQ ID NO: 97); CPEECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 98); CWMECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 99); CFEECFYPPGHPLAC (SEQ ID NO: 100); CPGECFYPPGHPLRC (SEQ ID NO: 101); CPGECFYPPGHPREC (SEQ ID NO: 102); CPGECFYPPGHRFHC (SEQ ID NO: 103); e CPGECFYPPGHRLYC (SEQ ID NO: 104); em particular: A-(SEQ ID NO: 80)-A (referido aqui como 17-127-01); A-(SEQ ID NO: 81)-A (referido aqui como 17-129-00); SQT-(SEQ ID NO: 82)-A (referido aqui como 17-129-01-T01); SMT-(SEQ ID NO: 82)-A (referido aqui como 17-129-01-T02); SLV-(SEQ ID NO: 82)-A (referido aqui como 17-129-01-T03); ISSYG-(SEQ ID NO: 82)-A (referido aqui como 17-129-01-T04); ENITT-(SEQ ID NO: 82)-A (referido aqui como 17-129-01-T05); A-(SEQ ID NO: 83)-A (referido aqui como 17-129-02); A-(SEQ ID NO: 84)-A (referido aqui como 17-129-03);

A-(SEQ ID NO: 85)-A (referido aqui como 17-129-04); A-(SEQ ID NO: 86)-A (referido aqui como 17-129-05); A-(SEQ ID NO: 87)-A (referido aqui como 17-129-06); A-(SEQ ID NO: 88)-A (referido aqui como 17-129-07); A-(SEQ ID NO: 89)-A (referido aqui como 17-129-08); A-(SEQ ID NO: 90)-A (referido aqui como 17-129-09); A-(SEQ ID NO: 91)-A (referido aqui como 17-129-10); A-(SEQ ID NO: 92)-A (referido aqui como 17-129-11); L-(SEQ ID NO: 93)-HA (referido aqui como 17-129-12-T01); T-(SEQ ID NO: 94)-NA (referido aqui como 17-129-13-T01); Q-(SEQ ID NO: 95)-NA (referido aqui como 17-129-14-T01); A-(SEQ ID NO: 95)-NVI (referido aqui como 17-129-14-T02); N-(SEQ ID NO: 96)-NA (referido aqui como 17-129-15-T01); D-(SEQ ID NO: 97)-RA (referido aqui como 17-129-16-T01); SRM-(SEQ ID NO: 98)-A (referido aqui como 17-129-17-T01); SRS-(SEQ ID NO: 98)-A (referido aqui como 17-129-17-T02); RYMTR-(SEQ ID NO: 98)-A (referido aqui como 17-129-17-T03); REE-(SEQ ID NO: 99)-A (referido aqui como 17-129-18-T01); DNM-(SEQ ID NO: 99)-A (referido aqui como 17-129-18-T02); QES-(SEQ ID NO: 99)-A (referido aqui como 17-129-18-T03); ADY-(SEQ ID NO: 99)-A (referido aqui como 17-129-18-T04); MAN-(SEQ ID NO: 100)-A (referido aqui como 17-129-19-T01); SQN-(SEQ ID NO: 100)-A (referido aqui como 17-129-19-T02); A-(SEQ ID NO: 101)-TVL (referido aqui como 17-129-20-T01); A-(SEQ ID NO: 102)-SWL (referido aqui como 17-129-21-T01); A-(SEQ ID NO: 103)-LTE (referido aqui como 17-129-22-T01); A-(SEQ ID NO: 104)-YSE (referido aqui como 17-129-23-T01); e Ac-(SEQ ID NO: 104)-YSE (referido aqui como Ac(17-129-23-T01)).

10. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 6 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 6 aminoácidos, tal como CEEEFYPCGHPLYVC (SEQ ID NO: 105); CEEQFYPCTHALYTC (SEQ ID NO: 106); CVEEFYPCDHPLYSC (SEQ ID NO: 107); CEEEFYPCGHPMHPC (SEQ ID NO: 108); CDEQFYPCHHRLYSC (SEQ ID NO: 109); CEEEFYPCGHPFHPC (SEQ ID NO: 110); CLEQFYPCEHPLFSC (SEQ ID NO: 111); CVEQFYPCGHRHYIC (SEQ ID NO: 112); CEEQFYPCSHPLYTC (SEQ ID NO: 113); CEEQFYPCNHPLNVC (SEQ ID NO: 114); CEEEFYPCSHPLNPC (SEQ ID NO: 115); CEEQFYPCGHKLSPC (SEQ ID NO: 116); CPEQFYPCDHRLYIC (SEQ ID NO: 117); CQEQFYPCNHPLSPC (SEQ ID NO: 118); CDEQFYPCNHRLNTC (SEQ ID NO: 119); CEEAFYPCHHPLYRC (SEQ ID NO: 120); CDEDFYPCGHYLNQC (SEQ ID NO: 121); CEEQFYPCTHPLYVC (SEQ ID NO: 122); CPEQFYPCTHRLYQC (SEQ ID NO: 123); CEEQFYPCSHPLYRC (SEQ ID NO: 124); CAEQFYPCDHPLYRC (SEQ ID NO: 125); CAEEFYPCDHPLYRC (SEQ ID NO: 126); CEEAFYPCNHPLYTC (SEQ ID NO: 127); CAEAFYPCDHPLYVC (SEQ ID NO: 128); CEEAFYPCSHPLFIC (SEQ ID NO: 129); CEEAFYPCSHPLHPC (SEQ ID NO: 130); CEEAFYPCSHPLFVC (SEQ ID NO: 131);

CEEQFYPCSHPLYSC (SEQ ID NO: 132); CEEAFYPCEHPLYMC (SEQ ID NO: 133); e CEEQFYPCNHPLYMC (SEQ ID NO: 134); em particular: A-(SEQ ID NO: 105)-A (referido aqui como 17-126-01); A-(SEQ ID NO: 106)-A (referido aqui como 17-126-02); A-(SEQ ID NO: 107)-A (referido aqui como 17-126-03); A-(SEQ ID NO: 108)-A (referido aqui como 17-126-06); A-(SEQ ID NO: 109)-A (referido aqui como 17-126-07); A-(SEQ ID NO: 110)-A (referido aqui como 17-126-08); A-(SEQ ID NO: 111)-A (referido aqui como 17-126-09); A-(SEQ ID NO: 112)-A (referido aqui como 17-126-10); A-(SEQ ID NO: 113)-A (referido aqui como 17-126-18); A-(SEQ ID NO: 114)-A (referido aqui como 17-126-19); A-(SEQ ID NO: 115)-A (referido aqui como 17-126-20); A-(SEQ ID NO: 116)-A (referido aqui como 17-126-21); A-(SEQ ID NO: 117)-A (referido aqui como 17-126-22); A-(SEQ ID NO: 118)-A (referido aqui como 17-126-23); A-(SEQ ID NO: 119)-A (referido aqui como 17-126-24); A-(SEQ ID NO: 120)-A (referido aqui como 17-126-25); Ac-A-(SEQ ID NO: 120)-A (referido aqui como Ac-(17-126-25)); A-(SEQ ID NO: 121)-A (referido aqui como 17-126-26); A-(SEQ ID NO: 122)-A (referido aqui como 17-126-27); A-(SEQ ID NO: 123)-A (referido aqui como 17-126-28); HSP-(SEQ ID NO: 124)-A (referido aqui como 17-126-30-T01); GPH-(SEQ ID NO: 125)-A (referido aqui como 17-126-31-T01); IHS-(SEQ ID NO: 126)-A (referido aqui como 17-126-32-T01); WSP-(SEQ ID NO: 127)-A (referido aqui como 17-126-33-T01); SHS-(SEQ ID NO: 127)-A (referido aqui como 17-126-33-T02); DLH-(SEQ ID NO: 128)-A (referido aqui como 17-126-35-T01);

ANE-(SEQ ID NO: 129)-A (referido aqui como 17-126-36-T01); AVW-(SEQ ID NO: 130)-A (referido aqui como 17-126-37-T01); KVQ-(SEQ ID NO: 131)-A (referido aqui como 17-126-38-T01); A-(SEQ ID NO: 132)-PDVA (referido aqui como 17-126-39-T01); A-(SEQ ID NO: 133)-HQAA (referido aqui como 17-126-40-T01); e A-(SEQ ID NO: 134)-RENA (referido aqui como 17-126-41-T01).

11. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça uma primeira alça que consiste em 6 aminoácidos e a se- gunda alça que consiste em 5 aminoácidos, tais como: CLEQFYPCGDPRLC (SEQ ID NO: 135); e CEEQFYPCGHHLLC (SEQ ID NO: 136); em particular: A-(SEQ ID NO: 135)-A (referido aqui como 17-126-11); e A-(SEQ ID NO: 136)-A (referido aqui como 17-126-12).

12. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as referidas sequências de alça compreendem três resíduos de cisteína separados por duas sequên- cias de alça, uma primeira alça que consiste em 5 aminoácidos e uma segunda alça que consiste em 5 aminoácidos, tais como: CLEPDECFYPMEC (SEQ ID NO: 137); CKEPQECFYPLKC (SEQ ID NO: 138); e CDSPEECFYPLEC (SEQ ID NO: 139); em particular: A-(SEQ ID NO: 137)-A (referido aqui como 17-122-02); A-(SEQ ID NO: 138)-A (referido aqui como 17-122-03); e A-(SEQ ID NO: 139)-A (referido aqui como 17-122-04).

13. Ligante de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de qualquer um dos ligantes de peptídeo listados na Tabela 2 ou Tabela 3.

14. Ligante de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o sal farmaceuti- camente aceitável é selecionado a partir do ácido livre ou do sal de sódio, potássio, cálcio, amônio.

15. Ligante de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que MT1-MMP é MT1-MMP humano.

16. Conjugado de fármaco, caracterizado pelo fato de que compreende um ligante de peptídeo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, conjugado a um ou mais grupos efetores e/ou funcionais.

17. Conjugado de fármaco, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que é conjugado a um ou mais agentes citotóxicos.

18. Conjugado de fármaco, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o referido agente citotóxico é sele- cionado a partir de MMAE ou DM1.

19. Conjugado de fármaco, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o agente citotóxico é MMAE e o re- ferido conjugado compreende adicionalmente um ligante selecionado a partir de: -PABC-Cit-Val-Glutaril- ou -PABC-ciclobutil-Ala-Cit-βAla-, tal como -PABC-Cit-Val-Glutaril-, em que PABC representa p- aminobenzilcarbamato.

20. Conjugado de fármaco, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que é BT17BDC58:

em que BICYCLE-N007 representa (B-Ala)-Sar10-ALPP-(SEQ ID NO: 17) da mesma forma conhecido como (B-Ala)-Sar10-A-(17-120-09- T03) HArg2 HArg9.

21. Composição farmacêutica que compreende o ligante de peptídeo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou o conjugado de fármaco, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 16 a 20, caracterizada pelo fato de que é em combinação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

22. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 21, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um ou mais agentes terapêuticos.

23. Conjugado de fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 20, caracterizado pelo fato de que é para uso na prevenção, supressão ou tratamento de uma doença ou distúrbio mediado por MT1-MMP.