BR112021010399A2 - Aumento da bioatividade de culturas bioprotetoras contra bactérias patogênicas - Google Patents

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Abstract

AUMENTO DA BIOATIVIDADE DE CULTURAS BIOPROTETORAS CONTRA BACTÉRIAS PATOGÊNICAS. A presente invenção refere-se a um processo de obtenção de uma composição de biomassa de uma cepa de bactéria com atividade bactericida que inibe ou mata várias bactérias patogênicas.

Description

AUMENTO DA BIOATIVIDADE DE CULTURAS BIOPROTETORAS CONTRA BACTÉRIAS PATOGÊNICAS CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a um processo novo e aprimorado para a obtenção de uma composição de biomassa (incluindo células bacterianas únicas ou múltiplas) de uma cepa de bactéria que inibe ou mata, com atividade bactericida, várias bactérias patogênicas. A invenção também se refere à composição obtida e ao uso da composição na fabricação de alimentos em particular.
ANTECEDENTE DA INVENÇÃO
[002] A intoxicação alimentar que envolve diversos patógenos, juntamente com a crescente preocupação com a preservação de alimentos processados, tem gerado uma crescente conscientização sobre a importância da segurança alimentar. Nos últimos anos, tem havido um interesse crescente na atividade antimicrobiana das bactérias, particularmente das bactérias do ácido láctico. Entre as atividades antimicrobianas conhecidas das bactérias estão as bacteriocinas. As bacteriocinas são, de acordo com Ingolf F. Nes, no manual de Peptídeos Biologicamente Ativos (segunda edição), 2013, definidas como proteínas/peptídeos antibacterianos sintetizados ribossomicamente que matam ou inibem o crescimento de bactérias intimamente relacionadas. Essas bacteriocinas são divididas em duas classes principais: Os lantibióticos de Classe I e as bacteriocinas não modificadas de Classe II, sendo estas últimas também chamadas de não lantibióticos. As bacteriocinas Classe II, são divididas em: (a) a antilisteria, bacteriocinas semelhantes à pediocina que têm sequências de aminoácidos muito semelhantes em seu N-terminal, (b) as bacteriocinas de dois peptídeos cuja atividade depende de dois peptídeos diferentes, (c) as bacteriocinas cíclicas, e (d) as bacteriocinas lineares de um peptídeo não semelhante à pediocina (LINPLOP). Além disso, existe um grupo denominado bacteriocinas sem liderança porque são sintetizadas sem um peptídeo líder N-terminal.
[003] O uso de bacteriocinas para conservar produtos alimentícios é conhecido na técnica.
[004] O documento WO 99/67287 refere-se à produção de um pó de bacteriocina lacticina seca por pulverização para uso como ingrediente alimentício. Durante a produção, o pH é ajustado para 6,3 a 6,7.
[005] O documento WO02055672 refere-se à produção de transconjugantes de Lactococcus lactis produtores de bacteriosina que podem ser usados como uma cultura inicial para acelerar a maturação do queijo.
[006] O uso de culturas produtoras de bacteriocinas em alimentos é de considerável vantagem para a segurança alimentar, pois verificou-se que a quantidade de bacteriocinas ativas obtidas após o final da fermentação pode ser perdida durante o pós- processamento. Existe, portanto, o desejo de aumentar a quantidade de bacteriocinas ativas, obtidas do meio de cultura durante e após a fermentação, no produto final
[007] É, portanto, o objetivo da presente invenção fornecer um processo pelo qual a quantidade de bacteriocinas ativas presentes na biomassa após o final da fermentação é aumentada em comparação com processos conhecidos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[008] A presente invenção se refere a um método para obter uma biomassa com inibição do crescimento bacteriano e/ou atividade bactericida. A referida biomassa é um meio para inibir ou evitar o crescimento de bactérias em produtos alimentícios, em particular em carnes processadas cruas ou cozidas e produtos lácteos.
[009] Um primeiro aspecto da presente invenção refere-se a um processo para a obtenção de uma biomassa que iniba o crescimento bacteriano e/ou com atividade bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5 c) Opcionalmente, adição de um floculante,
d) Separação da biomassa do meio de cultura, e) Opcionalmente, adição de um excipiente à biomassa; f) Opcionalmente, ajuste do pH da biomassa a um pH no intervalo de 5,5 a 8,0, g) Opcionalmente, peletização da biomassa, h) Opcionalmente, congelamento e/ou secagem da biomassa antes e/ou após g) e i) Opcionalmente, transformação da biomassa seca em pó.
[010] Um segundo aspecto da presente invenção refere-se a uma composição que pode ser obtida pelo processo do primeiro aspecto.
[011] Um terceiro aspecto da presente invenção refere-se ao uso da composição que pode ser obtida pelo processo do primeiro aspecto para o tratamento de um produto alimentício.
[012] Um quarto aspecto da presente invenção refere-se ao uso da composição que pode ser obtida pelo processo do primeiro aspecto para o tratamento de um produto alimentício fermentado.
[013] Um quinto aspecto da presente invenção refere-se ao uso da composição que pode ser obtida pelo processo do primeiro aspecto para reduzir a concentração de Listeria spp. em um produto alimentício fermentado.
[014] Um sexto aspecto da presente invenção refere-se ao uso da composição que pode ser obtida pelo processo do primeiro aspecto para reduzir a concentração de Listeria spp. em um produto de carne. Definições
[015] No presente contexto, o termo “microrganismo” é usado em seu significado normal. Assim, no significado mais amplo, o termo “microrganismo” abrange algas, protozoários, bactérias e fungos. Os microrganismos preferenciais são bactérias e fungos, em particular bactérias, como bactérias ácido-láticas.
[016] Tal como usado neste documento, o termo “bactéria ácido- lática” designa uma bactéria gram-positiva, microaerofílica ou anaeróbica, que fermenta açúcares com a produção de ácidos incluindo ácido láctico como o ácido predominantemente produzido. As bactérias ácido-láticas industrialmente mais úteis são encontradas na ordem “Lactobacillales” que inclui Lactococcus spp., Streptococcus spp., Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Pseudoleuconostoc spp., Pediococcus spp., Brevibacterium spp. e Enterococcus spp. Estas são frequentemente usadas como culturas de alimentos isoladamente ou em combinação com outras bactérias ácido-láticas.
[017] Bactérias ácido-láticas, incluindo bactérias da espécie Lactobacillus sp. e Streptococcus thermophilus, são normalmente fornecidas como culturas congeladas ou liofilizadas para propagação inicial em massa ou como as chamadas culturas “Direct Vat Set” (DVS), destinadas a inoculação direta em um recipiente de fermentação ou tanque para a produção de um produto alimentício. Essas culturas de bactérias ácido-lácticas são em geral chamadas de “culturas iniciadoras” ou “iniciadoras”. A fusão de aplicações de bactérias ácido-láticas inclui ainda a bioproteção de alimentos consumíveis, por ex., produtos de carne. Aqui, as bactérias são aplicadas ao produto alimentício para prolongar a durabilidade e a qualidade do produto, inibindo as bactérias patogênicas.
[018] As cepas de cultura iniciadora comumente usadas de bactérias ácido-láticas são geralmente divididas em organismos mesofílicos com temperaturas de crescimento ideal em cerca de 30ºC e organismos termofílicos com temperaturas de crescimento ideais no intervalo de cerca de 40 a cerca de 45ºC. Organismos típicos pertencentes ao grupo mesofílico incluem Lactococcus lactis, Lactococcus lactis subsp. cremoris, Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis, Lactobacillus casei subsp. casei e Lactobacillus paracasei subsp. paracasei. As espécies bacterianas ácido-láticas termofílicas incluem como exemplos Streptococcus thermophi-lus, Pediococcus acidilactici, Enterococcus faecium, Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis, Lacto-bacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus e Lactobacillus acidophilus.
[019] Além disso, as bactérias anaeróbias pertencentes ao gênero Bifidobacterium incluindo Bifidobacterium bifidum e Bifidobacterium longum são comumente usadas como culturas iniciadoras e geralmente estão incluídas no grupo de bactérias ácido-láticas. Além disso, espécies de Propionibacterium são usadas como culturas iniciadoras, em particular, na fabricação de queijo. Além disso, organismos pertencentes ao gênero Brevibacterium são comumente usados como culturas iniciadoras alimentícias.
[020] O termo “biomassa” é a quantidade de matéria viva em um determinado habitat, expressa como o peso dos organismos por unidade de área ou como o volume de organismos por unidade de volume do habitat.
[021] O uso dos termos "um" e "uma" e "o/a" e referentes semelhantes no contexto da descrição da invenção (especialmente no contexto das seguintes reivindicações) devem ser interpretados na abordagem tanto no singular quanto no plural, a menos que indicado de outra forma aqui ou claramente contradito pelo contexto. Os termos "compreendendo", "tendo", "incluindo" e "contendo" devem ser interpretados como termos abrangentes (isto é, significando "incluindo, mas não se limitando a"), a menos que indicado de outra forma. A referência aos intervalos de valores neste documento se destina simplesmente a servir como um método abreviado de se referir individualmente a cada valor separado dentro do intervalo, exceto se indicado neste documento de outra forma, e cada valor separado é incorporado na especificação como se fosse individualmente aqui referido. Todos os métodos descritos aqui podem ser executados em qualquer ordem adequada, exceto quando indicado o contrário neste documento ou claramente contradito pelo contexto. O uso de todo e quaisquer exemplos ou linguagem exemplificativa (por exemplo, "tal como") fornecida aqui destina-se apenas a esclarecer melhor a invenção e não representa uma limitação no âmbito da invenção de outro modo reivindicada. Nenhuma linguagem na especificação deve ser interpretada de modo a indicar qualquer elemento não reivindicado como essencial à prática da invenção.
[022] Os termos “inibir” e “estar inibindo” em relação a microrganismos indesejados significam, por exemplo, que o crescimento ou o número ou a concentração de microrganismos indesejados, por exemplo em produtos alimentícios e/ou na superfície de produtos alimentícios que abrangem a composição antimicrobiana, é menor do que em produtos alimentícios e/ou na superfície de produtos alimentícios que não incluem tal composição antimicrobiana.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS FIGURA 1
[023] A Figura 1 divulga uma ilustração de um método para testar a bioatividade de cultura bioprotetora contra bactérias patogênicas, por ex., Listeria. FIGURA 2
[024] A Figura 2 revela as contagens de células de culturas de Lactobacillus curvatus medidas após a produção no novo processo descrito nos exemplos 1 e 2. FIGURA 3
[025] A Figura 3 revela a contagem de células logarítmicas de Listeria inócua sobre a contagem de células logarítmicas de Lactobacillus curvatus. Três curvas de diluição são mostradas para três ajustes de pH diferentes de 4,5, 6,5 e 8,5, respectivamente. FIGURA 4
[026] A Figura 4 divulga as contagens de células de culturas de Lactobacillus curvatus medidas após a produção no novo processo descrito nos exemplos 1 e 5. FIGURA 5
[027] A Figura 5 divulga os valores IC50 calculados. FIGURA 6
[028] A Figura 6 revela a contagem de células logarítmicas de Listeria inócua sobre a contagem de células logarítmicas de Lactobacillus curvatus. Duas curvas de diluição são ilustradas - pH de referência 6,5 e biomassa não ajustada para pH 6,5, respectivamente.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[029] A presente invenção refere-se a um processo novo e aprimorado para a obtenção de uma composição de biomassa (incluindo células bacterianas únicas ou múltiplas) de uma cepa de bactéria que inibe ou mata, com atividade bactericida, várias bactérias patogênicas. A invenção também se refere à composição obtida e ao uso da composição na fabricação de alimentos em particular.
[030] Os produtos bioprotetores atuais para aplicações alimentícias, como carne, são vendidos aos clientes com base na contagem de células. Aqui, as culturas bioprotetoras são adicionadas ao produto do cliente, a fim de preservar o produto alimentício, inibindo bactérias patogênicas (por exemplo, listeria). Acredita-se que esse efeito inibitório seja derivado da produção de bacteriocina da cultura bioprotetora.
[031] A presente invenção descreve um método para aumentar o efeito inibitório da cultura bioprotetora, enquanto diminui o impacto no sabor do produto. Como o crescimento da cultura é indesejado, acredita-se que a produção da bacteriocina já tenha ocorrido durante a produção da cultura bioprotetora, onde a bacteriocina foi liberada para o meio extracelular. Por métodos de produção convencionais, a maior parte da bacteriocina extracelular seria perdida durante a concentração celular (centrifugação, microfiltração, etc.) no eluato. Esta invenção aumenta a quantidade de bacteriocina na biomassa ao diminuir o pH após o fim do cultivo. Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que a bacteriocina se agrega e/ou precipita e, portanto, pode ser aprisionada na biomassa. Após a separação da biomassa, o valor do pH pode ser aumentado novamente, se necessário, para reter a potência da cultura.
[032] O presente meio de cultura é obtido pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento.
[033] As cepas adequadas podem ser quaisquer cepas que produzam bacteriocina. As cepas preferenciais pertencem a bactérias ácido-láticas (LAB), Leuconostoc carnosum, espécies de Lactobacillus, como Lactobacillus curvatus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus Salivarius, Lactobacillus Plantaracticum, espécies de Lactocococcus Lactis e Pediococilus, como Pediococcus pentosaceus e Pediococcus acidilactici. Em particular, a cepa de Lactobacillus curvatus CHCC26906 (DSM 32591) e a cepa de Lactobacillus curvatus CHCC23218 (DSM 32590). No entanto, é observado que outras espécies produtoras de bacteriocina podem fornecer as mesmas características e efeitos vantajosos que aqueles ilustrados neste documento.
[034] O meio de crescimento pode ser qualquer meio de crescimento adequado, isto é, meio MRS.
[035] De acordo com a invenção, o pH do meio de cultura é ajustado para um pH abaixo de 5 após o cultivo finalizado. Em uma representação particular, o pH é ajustado para um pH abaixo de 4,5, como abaixo de 4, como abaixo de 3,5, como abaixo de 3 após o cultivo finalizado. Normalmente o ajuste do pH acontecerá após o final da fermentação/cultivo. O fim do cultivo ocorre quando o parâmetro que determina o fim da fermentação/cultivo é alcançado, por ex., quando todos os açúcares consumíveis se esgotam, uma concentração de um metabolito foi produzida, critérios de tempo, interrupção da adição de base/ácido, critérios de densidade ótica etc.
[036] O ajuste do pH pode ser realizado com qualquer ácido adequado.
[037] Um floculante pode ser adicionado à biomassa obtida.
[038] Após ajustar o pH abaixo de 5, a biomassa é separada do meio de cultura. O método selecionado para separação pode ser qualquer método adequado conhecido na técnica. Em uma representação particular da presente invenção, a etapa de separação é realizada por centrifugação ou filtração, isto é, microfiltração.
[039] Após a separação, o pH da biomassa pode ser ajustado para um pH acima de 5. Em uma representação particular da presente invenção, o pH é ajustado para um pH acima de 5, como um pH de 5,5 a 9, como um pH de 5,5 a 8.
[040] O processo pode ser realizado a uma temperatura no intervalo de 0 a 50°C, como nos intervalos de 5 a 30°C ou 15 a 25°C. Em uma representação particular da presente invenção, o processo é realizado em temperatura ambiente.
[041] A presente invenção refere-se a um processo para a obtenção de uma biomassa que iniba o crescimento bacteriano e/ou com atividade bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Opcionalmente, adição de um floculante, d) Separação da biomassa do meio de cultura, e) Opcionalmente, adição de um excipiente à biomassa; e/ou opcionalmente, ajuste do pH da biomassa a um pH no intervalo de 5,5 a 8,0, f) Opcionalmente, peletização da biomassa e g) Opcionalmente, congelamento e/ou secagem da biomassa antes e/ou após f.
[042] A separação na etapa c) pode ser realizada por qualquer método adequado conhecido na técnica. Em uma representação particular da presente invenção, a etapa de separação é realizada por centrifugação ou filtração, isto é, microfiltração.
[043] A biomassa é preferencialmente peletizada, granulada ou transformada em pó.
[044] A biomassa é preferencialmente congelada e/ou secada, isto é, por liofilização ou secagem por pulverização por técnicas convencionais conhecidas.
[045] A presente invenção refere-se a um processo para a obtenção de uma biomassa que iniba o crescimento bacteriano e/ou com atividade bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Opcionalmente, adição de um floculante, d) Separação da biomassa do meio de cultura,
e) Opcionalmente, adição de um excipiente à biomassa; e/ou opcionalmente, ajuste do pH da biomassa a um pH no intervalo de 5,5 a 8,0, f) Opcionalmente, peletização da biomassa e g) Opcionalmente, congelamento e/ou secagem da biomassa antes ou após f.
[046] A separação na etapa c) pode ser realizada por qualquer método adequado conhecido na técnica. Em uma representação particular da presente invenção, a etapa de separação é realizada por centrifugação ou filtração, isto é, microfiltração.
[047] Em uma primeira representação, a presente invenção refere- se a um processo para a obtenção de uma biomassa que iniba o crescimento bacteriano e/ou com atividade bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Separação da biomassa do meio de cultura e d) Adição de um excipiente à biomassa.
[048] Excipientes podem ser adicionados a qualquer momento durante o processo. Em uma representação particular da presente invenção, os excipientes são adicionados após a separação. Os excipientes podem ser quaisquer excipientes adequados conhecidos na técnica, isto é, crioprotetores, como monossacarídeos, dissacarídeos, oligossacarídeos, polissacarídeos e antioxidantes. Protetores particulares podem ser hidrolisados de amido (por exemplo, dextrina de amido de milho), glutamato de sódio, poliol (por exemplo, manitol, sorbitol).
[049] Em uma representação particular, a presente invenção refere-se a um processo para obter uma biomassa que iniba a atividade bacteriana e/ou bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Separação da biomassa do meio de cultura e d) Ajuste do pH da biomassa a um pH no intervalo de 5,5 a 8,0.
[050] Em uma primeira representação, a presente invenção refere- se ao processo para a obtenção de uma biomassa que iniba o crescimento bacteriano e/ou com atividade bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Separação da biomassa do meio de cultura e d) Peletização ou granulação da biomassa ou transformação em pó.
[051] Em uma representação particular da presente invenção, a peletização da biomassa é realizada pelo uso de nitrogênio líquido.
[052] A presente invenção refere-se a um processo para a obtenção de uma biomassa que iniba a atividade bacteriana e/ou com atividade bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Separação da biomassa do meio de cultura e d) Congelamento e/ou secagem da biomassa.
[053] A presente invenção refere-se a um processo para a obtenção de uma biomassa que iniba a atividade bacteriana e/ou com atividade bactericida abrangendo as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Separação da biomassa do meio de cultura, d) Opcionalmente, adição de um excipiente à biomassa; e/ou opcionalmente, ajuste do pH da biomassa a um pH no intervalo de 5,5 a 8,0, e) Opcionalmente, peletização da biomassa e f) Opcionalmente, congelamento e/ou secagem da biomassa.
[054] A presente invenção refere-se ainda a uma composição que é obtida ou que pode ser obtida pelo processo da presente invenção.
[055] Em uma representação particular da presente invenção, o efeito inibitório da cultura bioprotetora contra a listeria é aumentado em pelo menos 90%, o que é equivalente a uma inoculação mais baixa de 0,9 unidades LOG da cultura bioprotetora em comparação com o nível de inoculação atual.
[056] A composição da presente invenção abrange uma biomassa que inclui uma cepa viável produtora de bacteriocina.
[057] A presente invenção refere-se ainda ao uso da composição que é obtida ou que pode ser obtida pelo processo da presente invenção para o tratamento de um produto alimentício.
[058] Os alimentos mais frequentemente associados à contaminação por Listeria monocytogenes são produtos à base de leite, como queijos à base de leite, sorvetes e requeijão, vegetais processados, produtos alimentícios defumados, carnes e produtos à base de carnes. Alimentos que são manipulados por máquinas e não são tratados termicamente na embalagem final são particularmente vulneráveis. Carnes, como bovina, suína ou de frango, podem ser contaminadas durante ou após o abate. Os peixes também podem ser contaminados no processamento.
[059] Em uma representação particular da presente invenção, a presente invenção refere-se ao uso da composição obtida ou que pode ser obtida pelo processo do primeiro aspecto para tratamento de um produto alimentício fermentado.
[060] Em uma representação particular da presente invenção, a invenção refere-se ao uso da composição obtida pelo processo da presente invenção para reduzir a concentração de um organismo patogênico, como Listeria spp. em um produto alimentício fermentado.
[061] Em uma representação particular da presente invenção, a invenção refere-se ao uso da composição obtida ou que pode ser obtida pelo processo da presente invenção para reduzir a concentração de um organismo patogênico, como Listeria spp. em um produto de carne.
[062] Em uma representação particular da presente invenção, a presente invenção refere-se ao uso da composição obtida ou que pode ser obtida pelo processo da presente invenção em produtos probióticos.
[063] No presente contexto, a expressão “redução da concentração” refere-se a uma redução na quantidade de um organismo patogênico. Uma redução pode ser obtida matando, inativando ou inibindo a atividade do organismo patogênico. Em uma representação da presente invenção, 100% do organismo patogênico são mortos, inativados ou inibidos, como pelo menos 90%, por ex., pelo menos 75%, como pelo menos 50%, por ex., pelo menos 40%, como pelo menos 30%, por ex., pelo menos 25%, como pelo menos 20%, por ex., pelo menos 10%, como pelo menos 5%, por ex., pelo menos 1%.
[064] Em certas aplicações, uma inibição dos organismos patogênicos que podem estar presentes no alimento será suficiente para tornar o alimento seguro. Assim, a cultura garante que os organismos patogênicos presentes nos alimentos não aumentem sua quantidade.
[065] Em uma representação particular, a presente invenção refere-se a um método que inclui as etapas de: a) fornecimento de um material alimentício, b) mistura do material alimentício com a composição da presente invenção.
[066] Em mais detalhes, a presente invenção está relacionada aos seguintes aspectos:
[067] Aspecto 1. Processo para a obtenção de uma biomassa que inibe o crescimento bacteriano e/ou fúngico e/ou com atividade bactericida e/ou fungicida, que abrange as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 6, c) Opcionalmente, adição de um floculante, d) Separação da biomassa do meio de cultura, e) Opcionalmente, adição de um excipiente à biomassa f) Opcionalmente, ajuste do pH da biomassa a um pH no intervalo de 6 a 9,0, g) Opcionalmente, peletização da biomassa, h) Opcionalmente, congelamento e/ou secagem da biomassa antes ou após g) e i) Opcionalmente, transformação da biomassa seca em pó.
[068] Aspecto 2. Processo do aspecto 1, em que b) é realizado após a finalização do cultivo.
[069] Aspecto 3. Processo de acordo com o aspecto anterior, em que o pH é mantido abaixo de 6 por pelo menos 1 hora.
[070] Aspecto 4. Processo de acordo com o aspecto 1, em que o pH do meio de cultura em b) é ajustado abaixo de 5,5.
[071] Aspecto 5. Processo de acordo com o aspecto 1, em que o pH do meio de cultura em b) é ajustado abaixo de 5.
[072] Aspecto 6. Processo de acordo com o aspecto anterior, em que o pH é mantido abaixo de 5 por pelo menos 1 hora.
[073] Aspecto 7. Processo de acordo com o aspecto 1, em que o pH do meio de cultura em b) é ajustado abaixo de 4,8.
[074] Aspecto 8. Processo de acordo com o aspecto 1, em que o pH do meio de cultura em b) é ajustado entre 2,0 e 5,0.
[075] Aspecto 9. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que a separação em c) é realizada por centrifugação e/ou filtração.
[076] Aspecto 10. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que a cepa bacteriana pertence a uma espécie de Lactobacillus ou de Pediococcus.
[077] Aspecto 11. Processo de acordo com o aspecto 10, em que a cepa bacteriana é selecionada a partir do grupo que consiste em Leuconostoc carnosum, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus Salivarius, Lactobacillus Plantarum, Lactococcus Lactis, Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidilactici.
[078] Aspecto 12. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que um floculante é adicionado após ajustar o pH do meio de cultura para menos de 6.
[079] Aspecto 13. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que um floculante é adicionado após ajustar o pH do meio de cultura para menos de 5.
[080] Aspecto 14. Processo, de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que um excipiente é adicionado à biomassa após ela ter sido separada do meio de cultura.
[081] Aspecto 15. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que o pH da biomassa é ajustado entre 5,5 e 8,0.
[082] Aspecto 16. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que o pH da biomassa é ajustado entre 6,5 e 9,0.
[083] Aspecto 17. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que o pH da biomassa é ajustado entre 6,5 e 8,0.
[084] Aspecto 18. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que a biomassa é peletizada em pelotas, granulada em grânulos ou transformada em pó.
[085] Aspecto 19. Processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, em que as pelotas, grânulos ou pó do aspecto 18 são congelados e/ou secadas.
[086] Aspecto 20. Uma composição que pode ser obtida por um processo de acordo com qualquer um dos aspectos anteriores, abrangendo uma cepa produtora de bacteriocina e uma bacteriocina.
[087] Aspecto 21. Uso da composição do aspecto 20 para tratamento de um produto alimentício.
[088] Aspecto 22. Uso do aspecto 21, em que o produto alimentício é um produto lácteo ou um produto à base de carne.
DEPÓSITO E SOLUÇÃO DO PERITO
[089] O requerente solicita que uma amostra dos microrganismos depositados abaixo indicados só seja disponibilizada a um perito, até à data da concessão da patente.
[090] A cepa de Lactobacillus curvatus CHCC26906 foi depositada em 16 de agosto de 2017 na Coleção Alemã de Microrganismos e Culturas de Células Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und
Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig e com número de acesso: DSM 32591.
[091] A cepa de Lactobacillus curvatus CHCC23218 foi depositada em 16 de agosto de 2017 na Coleção Alemã de Microorganismos e Culturas de Células Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig e com número de acesso: DSM 32590.
EXEMPLOS Exemplo 1. Obtenção da biomassa de lactobacillus curvatus
[092] A cultura de Lactobacillus curvatus foi realizada em um meio de crescimento típico que inclui, em porcentagens w/v, 1,0% de peptona de caseína, 1,0% de extrato de carne, 0,4% de extrato de levedura, 2,0% de glicose, 0,5% de acetato de sódio tri- hidratado, 0,1% de polissorbato 80, 0,2% de hidrogenofosfato dipotássico, 0,2% de citrato de tri-amônio, 0,02% de hepta- hidrato de sulfato de magnésio e 0,005% de tetra-hidrato sulfato de manganês. A fermentação foi realizada em escala de 350L em temperatura ambiente, velocidade de agitação de 300rpm e pH 6,5. Exemplo 2. Coleta de biomassa altamente ativa da cultura de lactobacilos com ajuste de pH para 4,5
[093] No final da fermentação, 2L de meio de cultura foram transferidos para béqueres de vidro. O pH do meio de cultura foi ajustado de 6,5 pH (exemplo 1) para pH 4,5 com uma solução de ácido fosfórico. A cultura foi mantida durante 1 hora em temperatura ambiente com agitação lenta a 50 rpm. Após 1 hora de tempo de espera, a biomassa foi separada do meio de cultura por centrifugação a 4200 rpm por 20 min. Após a centrifugação, o concentrado de biomassa foi coletado em um béquer de vidro de tamanho adequado e o pH foi ajustado de 4,5 para 6,5 com uma solução de hidróxido de sódio durante agitação lenta de 50 rpm. Solução crioprotetora (que consistia em sacarose (15%), maltodextrina (10%) e água (75%)) foi adicionada (420 g a 1000 g de concentrado de células) ao concentrado. Finalmente, o concentrado de biomassa foi peletizado em nitrogênio fluido e liofilizado.
Exemplo 3. Coleta de biomassa altamente ativa da cultura de lactobacilos com ajuste de pH para 5,0
[094] No final da fermentação, 2L de meio de cultura foram transferidos para béqueres de vidro. O pH do meio de cultura foi ajustado de 6,5 pH (exemplo 1) para pH 5,0 com uma solução de ácido fosfórico. A cultura foi mantida durante 1 hora em temperatura ambiente com agitação lenta a 50 rpm. Após 1 hora de tempo de espera, a biomassa foi separada do meio de cultura por centrifugação a 4200 rpm por 20 min. Após a centrifugação, o concentrado de biomassa foi coletado em um béquer de vidro de tamanho adequado e o pH foi ajustado de 5,0 para 6,5 com uma solução de hidróxido de sódio durante agitação lenta de 50 rpm. Solução crioprotetora (que consistia em sacarose (15%), maltodextrina (10%) e água (75%)) foi adicionada (420 g a 1000 g de concentrado de células) ao concentrado. Finalmente, o concentrado de biomassa foi peletizado em nitrogênio fluido e liofilizado. Exemplo 4. Coleta de biomassa altamente ativa da cultura de lactobacilos com ajuste de pH para 3,5
[095] No final da fermentação, 2L de meio de cultura foram transferidos para béqueres de vidro. O pH do meio de cultura foi ajustado de 6,5 pH (exemplo 1) para pH 3,5 com uma solução de ácido fosfórico. A cultura foi mantida durante 1 hora em temperatura ambiente com agitação lenta a 50 rpm. Após 1 hora de tempo de espera, a biomassa foi separada do meio de cultura por centrifugação a 4200 rpm por 20 min. Após a centrifugação, o concentrado de biomassa foi coletado em um béquer de vidro de tamanho adequado e o pH foi ajustado de 3,5 para 6,5 com uma solução de hidróxido de sódio durante agitação lenta de 50 rpm. Solução crioprotetora (que consistia em sacarose (15%), maltodextrina (10%) e água (75%)) foi adicionada (420 g a 1000 g de concentrado de células) ao concentrado. Finalmente, o concentrado de biomassa foi peletizado em nitrogênio fluido e liofilizado.
Exemplo 5. Coleta de biomassa altamente ativa da cultura de lactobacilos mantendo o pH da biomassa em PH 4,5
[096] No final da fermentação, 2L de meio de cultura foram transferidos para béqueres de vidro. O pH do meio de cultura foi ajustado de 6,5 pH (exemplo 1) para pH 4,5 com uma solução de ácido fosfórico. A cultura foi mantida durante 1 hora em temperatura ambiente com agitação lenta a 50 rpm. Após 1 hora de tempo de espera, a biomassa foi separada do meio de cultura por centrifugação a 4200 rpm por 20 min. Após a centrifugação, o concentrado de biomassa foi coletado em um béquer de vidro de tamanho adequado. Solução crioprotetora (que consistia em sacarose (15%), maltodextrina (10%) e água (75%)) foi adicionada (420 g a 1000 g de concentrado de células) ao concentrado. Finalmente, o concentrado de biomassa foi peletizado em nitrogênio fluido e liofilizado. Exemplo 6. Atividade de teste contra listeria innocua
[097] A atividade das culturas de Lactobacillus foi testada contra Listeria em um método de cocultivo. Listeria foi cultivada em uma cultura durante a noite em líquido Palcom a 30 graus Celsius e, em seguida, transferida para um meio de imitação de carne (meio de pH de carne, MPH) a 30 graus Celsius por 18 horas. Em seguida, a cultura de Listeria e a cultura de Lactobacillus foram cocultivadas em um meio de imitação de carne a 7 graus Celsius por 11 dias. As culturas de Lcurvatusisteria e Lactobacillus foram inoculadas em uma contagem fixa de células CFU/g. Por fim, a Listeria foi analisada para contagem de células CFU/g. O método está resumido na figura 1. Exemplo 7. Coleta de biomassa altamente ativa da cultura de lactobacilos
[098] Uma amostra foi obtida de acordo com os procedimentos descritos nos exemplos 1 e 2, respectivamente. Essa amostra foi testada em combinação com uma amostra sem ajuste de pH (pH 6,5) após o final da fermentação e uma amostra ajustada para pH 8,5 (com uma solução de hidróxido de sódio) no final da fermentação e, em seguida, continuamente processada como no exemplo 2.
[099] As contagens de células CFU/g das amostras liofilizadas foram analisadas. Os resultados podem ser encontrados na figura
2.
[100] As amostras foram testadas com o método descrito no exemplo 6. Isso resultou nos dados ilustrados na figura 3. Aqui, uma curva de diluição foi preparada testando 7 níveis de diluição diferentes da cultura bioativa contra Listeria para cada uma das 3 amostras (pH 4,5, pH 6,5, pH 8,5). A seguir, o CFU de Listeria foi medido. A partir da figura 3, é possível ver que em uma determinada concentração nenhuma célula de Listeria foi contada no método CFU. Além disso, pode ser visto que para a amostra tratada com pH 4,5 (Exemplo 2) as células de Listeria são inibidas em uma concentração mais baixa do que o pH 6,5 (amostras do Exemplo e 8,5). EXEMPLO 8. TESTE DO EFEITO DO REAJUSTE DE pH DE 4,5 PARA 6,5.
[101] Em outro caso, uma amostra foi obtida de acordo com o procedimento descrito no exemplo 1 (pH 4,5) e Exemplo 5 (ph 4,5 sem ajuste de pH para pH 6,5). Novamente, essa amostra foi testada em combinação com uma amostra sem ajuste de pH (pH 6,5) após o final da fermentação.
[102] As contagens de células CFU/g das amostras liofilizadas foram analisadas. Os resultados podem ser encontrados na figura
4. Os resultados confirmam que os tratamentos resultam em níveis de CFU comparáveis.
[103] As amostras foram testadas com o método descrito no exemplo 6. Isso resultou nos dados ilustrados nas figuras 5 e 6. Aqui, uma curva de diluição foi preparada testando 7 níveis de diluição diferentes da cultura bioativa contra Listeria para cada uma das 2 amostras (pH 4,5, em que a biomassa não foi ajustada de volta para pH 6,5 e referência de pH 6,5). A seguir, o CFU de Listeria foi medido. Com base nas figuras 5 e 6, fica evidente que para a amostra não ajustada ao pH, as células de Listeria são inibidas a uma concentração mais baixa do que as amostras de referência igual a uma redução no valor de IC 50 de 0,6 unidades de registro.

Claims (16)

Reivindicações
1. Processo para a obtenção de uma biomassa que inibe o crescimento bacteriano e/ou fúngico e/ou com atividade bactericida e/ou fungicida, caracterizado por abranger as etapas de a) Obtenção de um meio de cultura pelo cultivo de uma cepa produtora de bacteriocina em um meio de crescimento, b) Ajuste do pH do meio de cultura para menos de 5, c) Opcionalmente, adição de um floculante, d) Separação da biomassa do meio de cultura, e) Opcionalmente, adição de um excipiente à biomassa f) Opcionalmente, ajuste do pH da biomassa a um pH no intervalo de 5,5 a 8,0, g) Opcionalmente peletização ou granulação da biomassa ou sua transformação em um pó e h) Opcionalmente, congelamento e/ou secagem da biomassa antes e/ou após f) e i) Opcionalmente, transformação da biomassa seca em pó.
2. Processo da reivindicação 1, caracterizado por b) ser realizado após a finalização do cultivo.
3. Processo, de acordo com a reivindicação anterior, caracterizado pelo fato de o pH ser mantido abaixo de 5 por pelo menos 1 hora.
4. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de o pH do meio de cultura em b) ser ajustado abaixo de 4,8.
5. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de o pH do meio de cultura em b) ser ajustado entre 2,0 e 5,0.
6. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de a separação em c) ser realizada por centrifugação e/ou filtração.
7. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de a cepa bacteriana pertencer a uma espécie de Lactobacillus ou de Pediococcus.
8. Processo de acordo com o aspecto 7, caracterizado pelo fato de a cepa bacteriana ser selecionada a partir do grupo que consiste em Leuconostoc carnosum, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus Salivarius, Lactobacillus Plantarum, Lactococcus Lactis, Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidilactici.
9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de um floculante ser adicionado após ajustar o pH do meio de cultura para menos de 5.
10. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de um excipiente ser adicionado à biomassa após ter ela sido separada do meio de cultura.
11. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de o pH da biomassa ser ajustado entre 5,5 e 8,0, como, por ex., pH 6,5.
12. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de a biomassa ser peletizada em pelotas, granulada em grânulos ou transformada em pó.
13. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de as pelotas, grânulos ou pó da reivindicação 12 serem congelados e/ou secados.
14. Uma composição que pode ser obtida por um processo de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por abranger uma cepa produtora de bacteriocina e uma bacteriocina.
15. Uso da composição da reivindicação 14 caracterizado por ser para tratamento de um produto alimentício.
16. Uso da reivindicação 15, caracterizado pelo produto alimentício ser um produto lácteo ou um produto à base de carne.
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Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1090035B1 (en) 1998-06-22 2008-02-13 Teagasc, The Agriculture And Food Development Authority A spray-dried bacteriocin powder with anti-microbial activity
ES2170723B1 (es) 2001-01-15 2003-12-16 Consejo Superior Investigacion Lactococcus lactis productor de bacteriocina utilizable como cultivo iniciador para acelerar la maduracion de queso.
EP1686185A4 (en) * 2003-11-07 2007-03-07 Ajinomoto Kk PROCESS FOR PRODUCING A CULTURE OF LACTIC ACID BACTERIAL CONTAINING BACTERIOCIN AND METHOD FOR PRESERVING FOOD USING THE SAME
US8697422B2 (en) * 2007-03-19 2014-04-15 Chr. Hansen A/S Lactic acid bacteria strain and its use for the protection of food products
US20110236359A1 (en) * 2007-09-05 2011-09-29 Institut National De La Recherche Scientifique Antimicrobial Activity of Bacteriocin-Producing Lactic Acid Bacteria
CN102174437B (zh) * 2011-01-25 2012-10-24 北京农学院 一种德氏乳杆菌乳酸亚种及其抗单增李斯特菌细菌素的制备方法
SI24570A (sl) * 2013-12-23 2015-06-30 Medis D.O.O. Novi sevi rodu Lactobacillus in njihova uporaba
CN104531562B (zh) * 2014-12-09 2018-09-14 北京农学院 一种植物乳杆菌植物亚种及其抗单增李斯特菌细菌素的制备方法
CN106591174B (zh) * 2016-11-10 2019-09-03 江南大学 一株产细菌素的弯曲乳杆菌及其应用
CN108441533A (zh) * 2018-03-23 2018-08-24 北京中特养生物技术研究所有限公司 从乳酸菌中提取细菌素的方法

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Swetwiwathana et al. VIII1-P-060

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