BR112021010049A2 - combinação de probióticos para tratamento de distúrbios alérgicos - Google Patents

Abstract

COMBINAÇÃO DE PROBIÓTICOS PARA TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS ALÉRGICOS. A presente invenção refere-se a uma combinação probiótica que compreende B longum CNCM I-2618 e B lactis CNCM I-3446 e, opcionalmente, que compreende adicionalmente B. longum ATCC BAA-999 para tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico, ou para tratamento ou prevenção de uma intolerância alimentar.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMBINAÇÃO DE PROBIÓTICOS PARA TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS ALÉRGICOS".

[001] A presente invenção refere-se a uma combinação para tratamento ou profilaxia de distúrbios alérgicos, incluindo alergias alimentares e/ou intolerâncias alimentares, e a composições e métodos que usam a combinação.

[002] As alergias estão entre os problemas de saúde mais comuns afetando a vida de pacientes de todas as idades. As doenças alérgicas são atualmente reconhecidas como uma epidemia pela Organização Mundial da Saúde (OMS). A prevalência de alergias aumentou rapidamente ao longo das últimas décadas. Estima-se que mais de um terço da população mundial seja afetada, a ponto de a alergia ter sido considerada como a nova epidemia dos países industrializados. As razões para o aumento de forma constante das doenças alérgicas não são ainda completamente entendidas. A base genética do hospedeiro é um fator preponderante, e demostrou-se que genes recentemente descobertos estão associados com alergias respiratórias/asma e sintomas de pele. Parece que fatores ambientais, como estilo de vida, poluição, redução do tamanho da família, e redução da estimulação microbiana do sistema imunológico em uma fase inicial da vida em consequência de uma melhoria da situação higiênica, também desempenham um papel importante na alta prevalência e mais alta severidade das manifestações alérgicas.

[003] A sensibilização alérgica na infância, especialmente na primeira infância e especialmente a alérgenos alimentares, é de importância crítica e do mais alto interesse, já que foi demonstrado que o desenvolvimento de um "fenótipo alérgico" ou "atopia" facilita a sensibilização subsequente a outros alérgenos. Portanto, as alergias na infância podem ser o primeiro passo de uma cascata alérgica, levando a múltiplas alergias ao longo da vida, em um processo comumente denominado "marcha atópica". Por exemplo, crianças com hipersensibilidade alimentar persistente no início da vida têm um risco dramaticamente aumentado para desenvolver rinite alérgica (febre do feno) ou asma mais tarde na infância. Crianças com formas mais leves de hipersensibilidade alimentar também têm risco aumentado para o desenvolvimento de alergias respiratórias, mas em menor grau do que as crianças com hipersensibilidade alimentar persistente. Portanto, atenuar a gravidade da hipersensibilidade a alimentos pode ser crucial para retardar a "marcha atópica". Neste contexto, o gerenciamento de episódios alérgicos e a prevenção de alergias são, durante a primeira e a segunda infâncias, da mais alta importância.

[004] O sistema imunológico dos bebês se desenvolve ativamente ao longo dos primeiros anos de vida. A atuação sobre a prevenção, o impedimento, o gerenciamento, a redução ou a modulação de reações alérgicas nestes pacientes jovens pode influenciar seus perfis alérgicos não apenas no curto prazo, mas também no longo prazo ao longo de suas vidas.

[005] A prevenção de alergias pode ser alcançada em diferentes níveis:

[006] A "prevenção primária" é o efeito de evitar ou reduzir o risco de sensibilização de pacientes a alérgenos, caracterizada pela ausência ou por níveis reduzidos de anticorpos IgE alérgeno-específicos. A prevenção ou redução da sensibilização resultará na ausência ou redução de sintomas alérgicos quando da exposição ao mesmo alérgeno. Mediante a modulação da forma como um paciente se torna sensibilizado em relação a um alérgeno ou a um grupo de alérgenos (prevenção primária), a resposta alérgica subsequente pode também ser modulada.

[007] A "prevenção secundária" é o efeito da modulação dos sintomas das alergias, ou seja, a ocorrência ou a intensidade da reação alérgica no paciente já sensibilizado a um ou vários alérgenos, quando o paciente é exposto novamente ao(s) dito(s) alérgeno(s). Mediante a modulação da ocorrência ou intensidade dos sintomas alérgicos (prevenção secundária), a inconveniência associada a alergias é minimizada.

[008] Dados estes conceitos distintos de prevenção da alergia, pode-se levantar a hipótese de que, em virtude de seus mecanismos inerentes de ação, alguns compostos podem agir unicamente em um ou em ambos destes níveis específicos de prevenção. Alguns podem, por exemplo, apenas reduzir a sensibilização a um alérgeno específico (prevenção primária), enquanto outros compostos podem ter unicamente um efeito sobre a prevenção secundária e reduzir a gravidade de reações alérgicas. Outros compostos podem ser capazes de influenciar tanto a sensibilização quanto os sintomas e, portanto, são eficazes em promover a prevenção primária e secundária.

[009] Os alérgenos alimentares estão entre os primeiros alérgenos que os bebês encontram no início de suas vidas: tipicamente, as proteínas do leite de vaca podem ser encontradas por bebês que não recebem amamentação exclusiva. As proteínas do leite estão, de fato, entre as causas mais frequentemente observadas de alergias alimentares na infância, seguidas por proteínas de ovos e trigo. Em geral, as alergias alimentares podem se manifestar em sintomas cutâneos (erupção cutânea, eczema, outros) e sintomas gastrointestinais (cólicas abdominais; dor, especialmente, no abdômen; vômitos) em bebês e crianças pequenas. As alergias alimentares são o mais comum desencadeador de reações alérgicas graves, as quais podem levar à anafilaxia com risco à vida. Sensibilização adicional e episódios alérgicos podem também aparecer quando o bebê ou a criança pequena são expostos a um novo alimento, como cereais, vegetais, frutas, nozes ou peixe, e também a alérgenos transportados pelo ar, como pólen, ácaros da poeira doméstica e caspa de animais. Adultos são afetados, em grande medida, por alergias de contato e respiratórias. Dados recentes da OMS [Clark, M. J. e Million, R. P (2009) Allergic rhinitis: market evolution, Nature Reviews, Drug Discovery, 8, p.271-272] indicam que até 30 a 40% da população mundial sofre de alguma forma de alergia.

[0010] Animais, particularmente animais pequenos, como animais de estimação – e especialmente animais de estimação como cães e gatos, podem também sofrer de alergias alimentares e intolerâncias alimentares, bem como com alérgenos ambientais. Estas tipicamente se manifestam em sintomas similares aos dos seres humanos, por exemplo distúrbios gastrointestinais como diarreia, vômito e desconforto abdominal, e também dermatite ou prurido. Em animais pequenos, particularmente cães, a causa mais frequente de diarreia crônica é enteropatia responsiva a alimentos (enteropatia responsiva à dieta ou diarreia responsiva a alimentos).

[0011] A imunoterapia tem sido usada para o tratamento de asma, rinite alérgica e outras respostas alérgicas. A imunoterapia pode reduzir os sintomas clínicos e induzir tolerância a alérgenos pela modulação de resposta imunológica. Entretanto, imunoterapia, como a terapia de dessensibilização, não é consistentemente eficaz para o tratamento de alergias alimentares, e ainda menos para alergias respiratórias. Além disso, a imunoterapia pode induzir reações sistêmicas graves quando utilizada no tratamento de alergia alimentar, como alergia a castanhas.

[0012] Em animais, dietas de exclusão, dietas de proteínas inovadoras (por exemplo, carne de fontes animais atípicas), dietas hidrolisadas e desafio dietário têm sido utilizados para tratar alergias alimentares, mas tratamentos envolvendo dietas especiais podem não ser práticos, especialmente para uso a longo prazo, e não tratam o problema subjacente. Além disso, o controle da dieta de um gato ao ar livre por eliminação ou outras dietas especiais é difícil, se não impossível. O gerenciamento de um desafio dietário em um animal pode demandar tempo, esforço e supervisão veterinária consideráveis, e pode não ser uma solução prática.

[0013] Portanto, ainda existe uma necessidade de desenvolver novas estratégias para o tratamento ou a prevenção de alergias, reações alérgicas e/ou sintomas em bebês, crianças e adultos, bem como em animais, em particular animais de companhia (animais de estimação), que podem também sofrer de alergias alimentares, presentes no ar ou de contato. Microbiota gastrointestinal, integridade da barreira intestinal e o sistema imunológico

[0014] Micróbios comensais gastrintestinais constituem o mais precoce e mais substancial estímulo para o desenvolvimento do tecido linfoide associado ao intestino e ao sistema imunológico associado.

[0015] Há evidências sólidas de estudos epidemiológicos, que as condições de vida ocidentais, por exemplo, consumo reduzido de alimentos fermentados, uso substancial de antibióticos e outras drogas e maior higiene, estão associadas ao aumento das doenças alérgicas. Isso se vincula à chamada "hipótese da higiene" que sugere que uma falta de exposição a estímulo microbiano precoce na infância é um fator importante que afeta a prevalência de doenças alérgicas. De fato, estudos epidemiológicos têm demonstrado uma associação entre o desenvolvimento de doenças alérgicas e distúrbios da microbiota gastrointestinal. Os dados epidemiológicos mostram que crianças atópicas têm a flora intestinal diferente em comparação com crianças não atópicas.

[0016] Tais alterações na flora intestinal podem também ter um impacto negativo sobre a integridade da barreira intestinal. A função de barreira prejudicada, denominada "intestino permeável", tem sido considerada há muito tempo um fator predisponente para doenças gastrointestinais (Heyman, M. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 17:1279 a 1285; Odenwald M, . Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology, (2017), (14), 9 a 21). Dessa forma, alterações na integridade/função da barreira intestinal têm múltiplas consequências que facilitam o início de numerosas doenças, dependendo de outras ocorrências e de constelações genéticas e epigenéticas. Pacientes com alergia alimentar frequentemente demonstram com permeabilidade intestinal aumentada, que se correlaciona com a gravidade dos seus sintomas clínicos (Ventura, M.T et al. 2006. Dig. Dis. Sci. 38:732 a 736). Os modelos animais pré- clínicos fornecem adicionalmente evidência corroborativa que sustenta um papel para a disfunção da barreira intestinal e o intestino permeável, a predisposição à sensibilização oral e subsequente desenvolvimento de alergia alimentar. Além disso, as alterações induzidas pela dieta ocidental na permeabilidade intestinal promovem a sensibilização a alérgenos alimentares e sintomas de alergia clínica em camundongos em resposta a antígenos dietários (Hussain M. et al. J. Allergy Clin. Immunol. (2019). Os probióticos representam uma tentativa nutricional para melhorar/reforçar a integridade e/ou a função da barreira intestinal (Ewaschuk JB et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. novembro de 2008; 295(5):G1025-34). O reforço da integridade da barreira intestinal por meio de suplementação probiótica pode, dessa forma, evitar a sensibilização a alérgenos orais em indivíduos em risco. (Tulyeu J, Microorganisms. outubro de 2019 16;7(10).

[0017] Além de um papel estabelecido da função de barreira intestinal na sensibilização a alérgeno, respostas imunológicas descontroladas a antígenos dietários ou ambientais promovem o desenvolvimento de distúrbios alérgicos mediados pelo sistema imune de tipo 2. As culturas probióticas ou misturas de probióticos têm propriedades imunomodulatórias bem conhecidas que podem evitar ou aliviar as respostas alérgicas: por exemplo, o documento

WO2006697949, descreve uma mistura de probióticos que pode diminuir o risco de alergias devido a albumina e globulinas da farinha de trigo (doença celíaca). Papel de citocinas anti-inflamatórias em desordens e intolerâncias alérgicas

[0018] As células T reguladoras (Treg) são de importância crítica para a indução de tolerância. Considera-se que muitas doenças inflamatórias crônicas, como psoríase, alergias e doença inflamatória intestinal, se desenvolvam por meio de um colapso na tolerância. Demonstrou-se que a falha na indução da atividade de Treg leva a respostas aberrantes de Th2 e ao desenvolvimento de doença alérgica. Várias citocinas anti-inflamatórias, como a IL-10, têm sido implicadas na prevenção e resolução de respostas alérgicas. As células Treg medeiam sua atividade supressora, entre outros, através da secreção de citocinas anti-inflamatórias, como a IL-10. A IL-10 é um potente inibidor da função monócito/macrófago, suprimindo a produção de citocina pró- inflamatória por células apresentadoras de antígeno e células T. A IL-10 tem potentes efeitos anti-inflamatórios. A baixa produção de IL-10 por macrófagos alveolares de asmáticos atópicos foi relatada. Além disso, a deficiência de IL-10 foi encontrada em psoríase, dermatite de contato alérgica, doença inflamatória intestinal e outras doenças inflamatórias. Demonstrou-se, também, que a IL-10 inibe a inflamação das vias aéreas induzida por alérgenos em modelos animais de asma, e a baixa produção de IL-10 em asmáticos atópicos foi relatada. Hadis, U., et al (Immunity (2011), 34(2), 237-246) mostraram que os camundongos deficientes no receptor 1 de quimiocina (motivo C-X30C) (CX3CR1), mostraram uma produção substancialmente reduzida de IL-10 em macrófagos intestinais, com os camundongos não mostrando tolerância oral em um modelo de diarreia alérgica.

[0019] Tiemessen, M.M, et al., J. Allergy Clin. Immunol. (2004),

113(5), 932 a 939 encontrou a produção de IL-10 e a ativação de clones de células T específicos para leite de vaca em indivíduos não alérgicos, em comparação com indivíduos intolerantes ao leite de vaca, sugerindo um papel importante para IL-10 na alergia/intolerância ao leite de vaca.

[0020] Os macrófagos são células fagocíticas à base de tecido derivadas de monócitos que desempenham um papel importante na resposta imunológica inata. Eles são ativados por componentes microbianos e, uma vez ativados, eles mesmos podem secretar citocinas tanto pró- quanto anti-inflamatórias. He, F., et al ("Stimulation of the Secretion of Pro-Inflammatory Cytokines by Bifidobacterium Strains" - Microbiol. Immunol. (2002), 46(11), 781-785) investigou a capacidade de diferentes cepas de bifidobactéria de afetar a produção de citocinas derivadas de macrófagos. Eles descobriram que as bifidobactérias "do tipo adulto", como Bifidobacterium adolescentis e Bifidobacterium longum induziram significativamente mais secreção de citoquina pró-inflamatória do que as bifidobactérias "do tipo bebê", como Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve e Bifidobacterium infantis. Além disso, observou-se que B. adolescentis, em particular, não estimularam a produção da citocina anti-inflamatória IL-10. Elas concluíram que as bifidobactérias do tipo adulto podem ser mais potentes para amplificar a resposta inflamatória, mas menos capazes de regulá-la de forma negativa. Entretanto, mais recentemente, tentativas de identificar as cepas probióticas anti-inflamatórias mais promissoras para uso terapêutico indicaram que a classificação taxonômica de um probiótico não é geralmente um preditor confiável, por exemplo, das propriedades anti-inflamatórias de uma cepa probiótica específica.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0021] Os presentes inventores descobriram surpreendentemente que uma combinação de duas cepas probióticas que compreendem uma Bifidobacterium longum e um Bifidobacterium lactis, especificamente, uma Bifidobacterium longum ATCC CNCM I-2618, e uma Bifidobacterium lactis CNCM I-3446, opcionalmente, com Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, pode evitar a permeabilidade da barreira intestinal induzida pela inflamação e provocar um aumento na produção ou expressão de citocinas anti-inflamatórias, como a IL-

10. As combinações de probióticos da presente invenção são, portanto, úteis para fornecer uma terapia eficaz para a prevenção ou o tratamento de distúrbios alérgicos e/ou intolerância alimentar.

[0022] As combinações de probióticos da presente invenção podem ser usadas em composições para o tratamento ou a prevenção de um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar.

[0023] A invenção apresenta:

[0024] Um método para tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar, que compreende a administração de uma combinação probiótica, conforme descrito aqui, a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo que sofre de, ou é suscetível a, tal distúrbio ou intolerância.

[0025] Combinação probiótica para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar, sendo que a combinação probiótica compreende Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-3446.

[0026] A combinação probiótica pode compreender adicionalmente Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

[0027] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, que reforce a integridade da barreira intestinal e da barreira intestinal e, com mais preferência, que impeça a permeabilidade da barreira intestinal induzida por inflamação para limitar a sensibilização a alérgeno.

[0028] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que o distúrbio alérgico ou a intolerância alimentar são modulados por citocinas anti-inflamatórias, de preferência, sendo que o distúrbio alérgico é modulado por IL-10; ou em que o distúrbio alérgico é modulado por células T reguladoras.

[0029] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que o distúrbio alérgico ou a intolerância alimentar são modulados por um desequilíbrio de bactérias benéficas, como bifidobactérias e lactobacilos; ou em que o distúrbio alérgico ou a intolerância alimentar são modulados por estresse oxidativo ou marcadores inflamatórios, como a proteína C-reativa.

[0030] Uma combinação probiótica, conforme descrito aqui, para: diminuir ou suprimir a produção ou a expressão de citocinas Th2 como (mas não se limitando a) IL-4 e IL-5 em um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar; para aumentar a produção ou a expressão de uma citocina anti-inflamatória em um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar, de preferência em que a citocina anti-inflamatória é IL-10 e, com mais preferência, para regular as razões de concentração de citocinas Th1 e Th2 em um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar; para aumentar a população de bactérias benéficas, como bifidobactérias e lactobacilos, no intestino em um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar; para reduzir o estresse oxidativo ou os marcadores inflamatórios, como a proteína C-reativa, em um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar; para sustentar ou promover a cura de tecido ou reforçar a barreira intestinal em um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar; para modular células T reguladoras e/ou células B reguladoras em um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar, de preferência, para promover a ativação de células T reguladoras.

[0031] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que o distúrbio alérgico é uma alergia alimentar, uma alergia respiratória, uma alergia dermatológica.

[0032] Combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que o distúrbio alérgico é: rinite, asma, dermatite, dermatite atópica, dermatite de contato, eczema, eczema atópico, urticária, psoríase, esofagite eosinofílica ou uma doença gastrointestinal associada a eosinófilos/mastócitos.

[0033] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que o gatilho alergênico no distúrbio alérgico ou intolerância alimentar é selecionado a partir de um ou mais dentre: um alérgeno alimentar, ácaro de poeira, pólen, esporos de mofo ou bolor, pólen de ervas daninhas, pólen de árvore, pólen de gramíneas, pulgas, pelo de animais de estimação, penas ou pelo de animais de estimação.

[0034] Uma combinação probiótica para uso, conforme descrito aqui, sendo que o gatilho alergênico no distúrbio alérgico ou intolerância alimentar é um alérgeno alimentar, de preferência, sendo que o alérgeno alimentar é selecionado dentre: uma castanha, frutos secos, amendoim, peixe, mariscos, moluscos, crustáceos, leite, ovo, soja, glúten, cereais, trigo, aveia, cevada, centeio, aipo, milho, tremoço, sulfitos, gergelim, mostarda, arroz, aves e carne.

[0035] Composição probiótica para uso de acordo conforme descrito aqui, sendo que a composição probiótica aumenta a concentração ou a expressão de uma citocina anti-inflamatória e, com mais preferência, sendo que a citocina anti-inflamatória é a IL-10.

[0036] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que o indivíduo é um mamífero, de preferência um ser humano ou um animal de estimação, de preferência sendo que o indivíduo é um bebê, uma criança, um adolescente ou um ser humano adulto, um cão, um filhote de cachorro, um gato ou um filhote de gato.

[0037] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que cada probiótico na combinação probiótica é administrado a um indivíduo em uma quantidade equivalente a 108 a 1012 ufc por dia.

[0038] Uma combinação probiótica para uso conforme descrito aqui, sendo que cada combinação probiótica é administrada sob a forma de uma composição. A combinação pode ser selecionada do grupo que consiste em: uma formulação farmacêutica, uma formulação veterinária, uma formulação nutricional, uma formulação para alimentação por tubo, um suplemento dietário, um alimento funcional, um produto de bebida e um produto para cuidados de animais de estimação.

[0039] Uma composição, compreendendo uma combinação probiótica, conforme descrito aqui, sendo que a combinação probiótica compreende Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-3446, para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico ou para tratamento ou prevenção de intolerância alimentar. A dita combinação probiótica pode compreender adicionalmente Bifidobacterium longum ATCC BAA-999. A composição pode compreender cada probiótico na combinação probiótica em uma quantidade equivalente a 108 a 1012 ufc por dia. A combinação pode ser selecionada do grupo que consiste em: uma formulação farmacêutica, uma formulação veterinária, uma formulação nutricional, uma formulação para alimentação por tubo, um suplemento dietário, um alimento funcional, um produto de bebida e um produto para cuidados de animais de estimação.

[0040] A combinação probiótica para uso na produção de uma composição para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar, sendo que a dita combinação probiótica compreende Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-3446. A dita combinação probiótica pode compreender adicionalmente Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

[0041] Um método para tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar em um indivíduo que compreende a etapa de administrar ao dito indivíduo uma combinação probiótica, sendo que a combinação probiótica é de Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-3446. A combinação probiótica pode compreender adicionalmente Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0042] Figura 1: Produção de citocina (IL-10) em células mononucleares de sangue periférico estimuladas com diferentes cepas probióticas e combinações

[0043] Figura 2: Prevenção de permeabilidade de barreira induzida por inflamação com diferentes cepas e combinações probióticas

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0044] Os seguintes termos e definições são usados na presente invenção:

[0045] Os termos "compreendendo", "compreende" e "compreendido de", como usados aqui, são sinônimos de "incluindo" ou "inclui"; ou "contendo" ou "contém", e são inclusivos ou não limitados e não excluem membros, elementos ou etapas não citados. Os termos "compreendendo", "compreende" e "compreendido de" incluem também o termo "que consiste em".

[0046] O termo "bebê" refere-se a uma criança de até 12 meses de idade.

[0047] O termo "fórmula para bebês" refere-se a um gênero alimentício destinado à nutrição completa de bebês no contexto da ausência de amamentação durante os primeiros quatro a seis meses de vida ou um gênero alimentício para uso em bebês como um complemento a outros gêneros alimentícios até a idade de 12 meses. Tipicamente, o termo refere-se a gêneros alimentícios destinados à nutrição completa de bebês no contexto da ausência de amamentação durante os primeiros quatro a seis meses de vida.

[0048] O termo "probiótico" refere-se a uma preparação de células microbianas ou componentes de células microbianas com um efeito benéfico sobre a saúde ou o bem-estar do hospedeiro.

[0049] O termo "criança" refere-se a uma pessoa acima da idade de 12 meses, mas abaixo da idade de 10 anos.

[0050] O termo "adolescente" refere-se a uma pessoa entre 10 a 19 anos de idade (com base na definição da Organização Mundial da Saúde (OMS)).

[0051] O termo "adulto" refere-se a uma pessoa com 20 anos ou mais.

[0052] O termo "filhote de cachorro" refere-se a um cão com menos de 12 meses de idade.

[0053] O termo "filhote de gato" refere-se a um gato com menos de 12 meses de idade.

[0054] O termo "ufc" refere-se a unidades de formação de colônia e é medido com base no peso seco, exceto onde indicado em contrário.

[0055] O termo Bifidobacterium longum (B. longum) CNCM I-2618 é usado de forma intercambiável com Bifidobacterium longum (B. longum) NCC2705.

[0056] O termo Bifidobacterium lactis (B. lactis) CNCM I-3446 é usado de forma intercambiável com Bifidobacterium lactis (B. lactis) NCC2818.

[0057] O termo Bifidobacterium longum (B. longum) ATCC BAA- 999 é utilizado de forma intercambiável com Bifidobacterium longum (B. longum) NCC3001.

[0058] A expressão "reforço da barreira intestinal", pode abranger um ou vários dentre os seguintes:

[0059] - Reparo aprimorado de barreira, como (mas não se limitando a) recuperação da integridade da barreira gastrointestinal, como reparo de uma barreira rompida, redução da permeabilidade mediante desafio inflamatório da mucosa gastrointestinal e reparo da mucosa.

[0060] - Maturação de barreira aprimorada, como (mas não se limitando a) maturação e/ou desenvolvimento da barreira de um bebê, criança, adolescente, adulto, cão, filhote, gato ou filhote de gato.

[0061] - Estrutura de barreira aprimorada, como (mas não se limitando a) reforço da barreira gastrointestinal, integridade da barreira gastrointestinal, estrutura de junção justa e integridade de revestimento epitelial intestinal.

[0062] - Função de barreira aprimorada, como aprimoramento da resistência da barreira gastrointestinal, redução da permeabilidade da barreira gastrointestinal, como uma redução na penetração de alérgenos dos sítios luminais para a mucosa, como uma redução na transferência de compostos tóxicos dos sítios luminais para a mucosa e redução da suscetibilidade à doença.

[0063] - Proteção de barreira aprimorada, como (mas não se limitando a) prevenção de disfunção de barreira, prevenção de vazamento de barreira, proteção de estrutura de junção justa, proteção da integridade do revestimento epitelial intestinal.

[0064] Os termos B. longum CNCM I-2618, B. longum CNCM I-2618 e B. longum ATCC BAA-999 destinam-se a incluir a bactéria, partes da bactéria e/ou um meio de crescimento fermentado pela bactéria.

[0065] A B. longum CNCM I-2618, a B. lactis CNCM I-2618 e a B. longum ATCC BAA-999 podem, cada uma, ser utilizadas como bactérias vivas, bem como espécies bacterianas não replicantes inativadas. "Não replicante" significa que nenhuma célula viável e/ou unidades formadoras de colônia podem ser detectadas por métodos de plaqueamento clássicos. Tais métodos de plaqueamento clássicos são sumarizados no livro de microbiologia: James Monroe Jay, Martin J. Loessner, David A. Golden.

2005. Modern food microbiology. 7ª edição, Springer Science, New York,

N. Y. 790 p. Tipicamente, a ausência de células viáveis pode ser mostrada do seguinte modo: nenhuma colônia visível em placas de ágar ou nenhuma turvação em meio de crescimento líquido após a inoculação com diferentes concentrações de preparações bacterianas (amostras "não replicantes") e incubação sob condições adequadas (atmosfera aeróbica e/ou anaeróbica durante ao menos 24 horas).

[0066] É preferencial que ao menos parte da B. longum CNCM I-2618, da B. lactis CNCM I-2618 e (quando presente) da B. longum ATCC BAA- 999, estejam vivas na combinação ou composição e, de preferência, cheguem vivas no intestino. Dessa forma, elas podem persistir no intestino, e ser metabolicamente ativas. Isso pode aumentar sua eficácia. Eles podem também ser eficazes pela interação com bactérias comensais e/ou com o hospedeiro. Para produtos alimentícios ou medicamentos estéreis especiais, por exemplo, pode ser preferencial que B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-2618 e (quando presente) B. longum ATCC BAA-999 estejam presentes sob uma forma não replicante na combinação ou composição. Portanto, em uma modalidade da presente invenção, ao menos uma parte da B. longum CNCM I-2618, da B. longum CNCM I-2618 e (quando presente) da B. longum ATCC BAA-999, são não replicantes na combinação ou composição.

[0067] Em uma modalidade, a presente invenção fornece uma combinação probiótica para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar, sendo que a combinação probiótica compreende Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-3446. Opcionalmente, a combinação de probióticos pode compreender adicionalmente Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

[0068] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma combinação probiótica compreendendo B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e opcionalmente compreendendo ainda B.

longum ATCC BAA-999, para uso no aumento da produção ou expressão de uma citocina anti-inflamatória (de preferência IL-10) ou na regulação das razões de concentração sérica de uma citocina anti- inflamatória, por exemplo a IL-10.

[0069] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma combinação probiótica que compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que compreende opcionalmente ainda B. longum ATCC BAA-999, para uso na modulação de células T reguladoras.

[0070] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma combinação probiótica que compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que compreende opcionalmente ainda B. longum ATCC BAA-999, para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar, mediante o aumento da população de bactérias benéficas, como as bifidobactérias e os lactobacilos, no intestino.

[0071] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma combinação probiótica compreendendo B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e opcionalmente compreendendo ainda B. longum ATCC BAA-999, para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar mediante a redução do estresse oxidativo ou de marcadores inflamatórios como a proteína C- reativa.

[0072] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma combinação probiótica compreendendo B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e opcionalmente compreendendo ainda B. longum ATCC BAA-999, para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar, suportando ou promovendo a cura dos tecidos ou reforçando a integridade e/ou a função da barreira intestinal.

[0073] A combinação probiótica que compreende B. longum CNCM

I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que, opcionalmente, compreende adicionalmente B. longum ATCC BAA-999 é, de preferência, para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar, de preferência, o distúrbio alérgico ou a intolerância alimentar são modulados por citocinas anti-inflamatórias, por exemplo, a IL-10. O distúrbio alérgico ou a intolerância alimentar pode ser um distúrbio que pode ser modulado pela IL-10 e/ou pela diferenciação de células T reguladoras.

[0074] Em qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção, o distúrbio alérgico e/ou a intolerância alimentar podem ser modulados por um desequilíbrio de bactérias benéficas, como as bifidobactérias e os lactobacilos, e/ou podem ser modulados por estresse oxidativo ou marcadores inflamatórios, como a proteína C-reativa.

[0075] A presente invenção fornece adicionalmente uma combinação probiótica que compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que compreende opcionalmente, ainda, B. longum ATCC BAA-999, para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou de uma intolerância alimentar. Um distúrbio alérgico pode ser uma alergia alimentar, uma alergia respiratória ou uma alergia dermatológica. Exemplos de distúrbios alérgicos específicos podem ser rinite, asma, dermatite, dermatite atópica, dermatite de contato, eczema, eczema atópico, urticária, psoríase, esofagite eosinofílica ou uma doença gastrointestinal associada a eosinófilos/mastócitos.

[0076] A combinação probiótica de qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção pode ser para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico, sendo que o gatilho alergênico é um alérgeno ambiental, de preferência, selecionado a partir de um ou mais dentre: ácaro de poeira, pólen, esporos de mofo ou bolor, pólen de ervas daninhas, pólen de árvores, pólen de gramíneas, pulgas, pelos de animais de estimação, penas ou pelos de animais de estimação.

[0077] De preferência, o tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar com o uso da combinação probiótica da invenção compreende o aumento da produção ou expressão de uma citocina anti-inflamatória (de preferência, IL-10).

[0078] O indivíduo a ser tratado é, de preferência, um mamífero, de preferência, um ser humano ou um animal de estimação (animal de estimação), de preferência, sendo que o indivíduo é uma criança, um bebê, um adolescente ou um ser humano adulto, um cão, um filhote de cachorro, um gato ou um filhote de gato.

[0079] Em uma outra modalidade, a combinação probiótica é para uso no tratamento ou prevenção de uma alergia alimentar e/ou uma intolerância alimentar, sendo que o gatilho alergênico no distúrbio alérgico ou intolerância alimentar é, de preferência, selecionado dentre: uma castanha, fruto seco, amendoim, peixe, mariscos, moluscos, crustáceos, leite, ovo, soja, glúten, cereais, trigo, aveia, cevada, centeio, aipo, milho, tremoço, sulfitos, gergelim, mostarda, arroz, aves e carne. Nesta modalidade, o tratamento ou prevenção de uma alergia alimentar ou uma intolerância alimentar é, de preferência, em seres humanos.

[0080] Alternativamente, a combinação probiótica para uso de acordo com qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção é para uso no tratamento ou prevenção de alergia alimentar e/ou intolerância alimentar em animais de companhia (animais de estimação), de preferência, um cão ou um gato, e com mais preferência, um cão, sendo que o gatilho alergênico no distúrbio alérgico ou intolerância alimentar é selecionado dentre carne como de cordeiro, bovina, de aves, suína; peixe; crustáceos; milho, arroz; trigo; batata; leite e ovos.

[0081] Dessa forma, a presente invenção fornece adicionalmente uma combinação probiótica que compreende B. longum CNCM I-2618 e B.

lactis CNCM I-3446, e que compreende opcionalmente adicionalmente B. longum ATCC BAA-999 para o tratamento de uma alergia alimentar e/ou intolerância alimentar felinas ou caninas. A combinação de probióticos está, de preferência, sob a forma de uma composição, com mais preferência um alimento para animais de estimação (particularmente um alimento seco para animais de estimação) ou um suplemento nutricional para animais de estimação ou uma composição veterinária (particularmente um tablete, uma cápsula ou um pó seco).

[0082] Em uma outra modalidade, o indivíduo a ser tratado é um cão, filhote de cachorro, gato ou filhote de gato. Dessa forma, a presente invenção fornece adicionalmente uma combinação probiótica que compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que compreende opcionalmente adicionalmente B. longum ATCC BAA-999, para tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou de uma intolerância alimentar em um animal de estimação, de preferência um cachorro ou um gato. A combinação de probióticos está, de preferência, sob a forma de uma composição, com mais preferência um alimento para animais de estimação, um suplemento nutricional para animais de estimação ou uma composição veterinária.

[0083] Em ainda outra modalidade, o indivíduo a ser tratado em uma criança, um bebê, um adolescente ou um ser humano adulto. Dessa forma, a presente invenção fornece adicionalmente uma combinação probiótica que compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que compreende opcionalmente, ainda, B. longum ATCC BAA-999 para o tratamento ou prevenção de uma alergia alimentar ou de uma intolerância alimentar nestes indivíduos. A combinação de probióticos está, de preferência, sob a forma de uma composição, com mais preferência um alimento, um suplemento nutricional ou uma composição farmacêutica (particularmente um comprimido, uma cápsula, grânulos ou um pó seco).

[0084] Em qualquer modalidade da presente invenção, a combinação probiótica pode conter B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446 como a única bactéria probiótica. A combinação de probióticos está, de preferência, sob a forma de uma composição, com mais preferência um alimento, um suplemento nutricional ou uma composição farmacêutica ou veterinária.

[0085] Em qualquer modalidade da presente invenção, a combinação probiótica compreende B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e B. longum ATCC BAA-999. Alternativamente, a combinação de probióticos, de acordo com qualquer modalidade da presente invenção, pode compreender B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e B. longum ATCC BAA-999 como a única bactéria probiótica. A combinação de probióticos está, de preferência, sob a forma de uma composição, com mais preferência um alimento, um suplemento nutricional ou uma composição farmacêutica ou veterinária.

[0086] A combinação de probióticos pode estar sob a forma de uma composição, conforme descrito em qualquer modalidade, sendo que a composição contém B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446 como, a única bactéria probiótica. A composição probiótica está, de preferência, sob a forma de um alimento, um suplemento nutricional ou uma composição farmacêutica ou veterinária.

[0087] A combinação de probióticos pode estar sob a forma de uma composição, conforme descrito em qualquer modalidade, sendo que a composição compreende B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I- 3446 e B. longum ATCC BAA-999. Alternativamente, a combinação de probióticos pode estar sob a forma de uma composição, conforme descrito em qualquer modalidade, sendo que a composição contém B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e B. longum ATCC BAA- 999 como a única bactéria probiótica. A composição probiótica está, de preferência, sob a forma de um alimento, um suplemento nutricional ou uma composição farmacêutica ou veterinária.

[0088] Qualquer dose adequada da combinação de probióticos pode ser usada. De preferência, em qualquer modalidade da invenção, a combinação probiótica compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e, opcionalmente, compreende, ainda, B. longum ATCC BAA-999, sendo que cada probiótico é administrado a um indivíduo em uma quantidade equivalente a 107 a 1012 ufc por dia.

[0089] Embora os componentes probióticos da combinação possam ser usados sem processamento adicional, a combinação de probióticos de acordo com qualquer modalidade da invenção é, de preferência, administrada sob a forma de uma composição. As composições adequadas compreendem B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I- 3446 e, opcionalmente, compreendem ainda B. longum ATCC BAA-999 sob a forma de uma formulação farmacêutica ou veterinária que compreende um ou mais excipientes farmaceuticamente ou veterinários aceitáveis, uma formulação nutricional (por exemplo, incluindo um suplemento nutricional), uma formulação para alimentação por tubo, um suplemento dietário, um alimento funcional, um produto de bebida e um produto para cuidados de animais de estimação (por exemplo, um alimento para animais de estimação, ou um suplemento nutricional para animais de estimação).

[0090] A formulação farmacêutica ou veterinária pode estar sob a forma de um comprimido, uma cápsula, grânulos ou um pó.

[0091] De acordo com qualquer modalidade da presente invenção, a composição pode compreender uma quantidade de cada probiótico equivalente a 10 7 a 1012 ufc por dia. Essa quantidade pode ser como uma dose única ou dividida em múltiplas doses.

[0092] Também é fornecida uma combinação probiótica que compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que compreende, opcionalmente, ainda, B. longum ATCC BAA-999, para uso na fabricação de uma composição para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico, por exemplo, uma alergia alimentar e/ou uma intolerância alimentar.

[0093] A invenção fornece adicionalmente um método de tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico, por exemplo, uma alergia alimentar e/ou uma intolerância alimentar em um indivíduo compreendendo a etapa de administrar ao dito indivíduo uma combinação probiótica, sendo que a combinação probiótica compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e, opcionalmente, compreende adicionalmente B. longum ATCC BAA-999.

[0094] A combinação de probióticos da presente invenção que compreende B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, e que compreende, opcionalmente, adicionalmente, B. longum ATCC BAA-999, pode ser fornecida para administração simultânea ou sequencial de cada um dos probióticos. Alternativamente, a combinação de probióticos pode ser formulação como uma única composição.

[0095] A combinação probiótica que compreende Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-2446 e que compreende, opcionalmente, ainda, B. longum ATCC BAA-999, pode ser administrada como uma composição (por exemplo, uma cápsula, um comprimido, grânulos ou um pó) contendo, por exemplo, 107 a 1012 unidades de formação de colônia (ufc) de cada componente probiótico, ou pode ser incorporada em uma composição nutricional, como uma fórmula nutricionalmente completa (por exemplo, uma fórmula para bebês ou um produto de nutrição clínica), um produto lácteo, uma bebida em pó, uma sopa desidratada, um suplemento dietário, uma substituição de refeição, uma barra nutricional, um cereal, um produto de confeitaria ou um alimento seco para animais de estimação.

[0096] Em uma modalidade, a combinação pode estar sob a forma de uma cápsula única que compreende tanto B. longum CNCM I-2618 quanto B. lactis CNCM I-2446, ou uma cápsula única que compreende B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-2446 e B. longum ATCC BAA-999.

[0097] Alternativamente, a combinação pode ser fornecida como cápsulas separadas, que compreendem B. longum CNCM I-2618 em uma cápsula e B. lactis CNCM I-2446 em uma outra cápsula, para administração simultânea ou sequencial; ou a combinação pode ser fornecida como cápsulas separadas que compreendem B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-2446 e B. longum ATCC BAA-999 como cápsulas separadas para administração simultânea ou sequencial.

[0098] Quando incorporadas em uma composição nutricional, B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446 e, opcionalmente, B. longum ATCC BAA-999 podem, cada uma, estar presentes na composição em uma quantidade equivalente a entre 5 x 104 e 1019 ufc/g (peso seco). Essas expressões de quantidade incluem as possibilidades de que as bactérias estejam vivas, inativadas ou mortas ou ainda presentes como fragmentos, como materiais de DNA ou de parede celular ou como metabólitos. Em outras palavras, as quantidades de bactérias são expressas em termos da capacidade de formação de colônias dessa quantidade de bactérias como se todas as bactérias estivessem vivas independentemente de elas estarem, de fato, vivas, inativadas ou mortas, fragmentadas ou uma mistura de qualquer um ou todos esses estados. De preferência, cada uma dentre a B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e B. longum ATCC BAA-999 (quando presente) está presente em uma quantidade equivalente a entre 5 x 104 e 109, com mais preferência, 107 e 109 ufc/g de composição seca.

[0099] Em modalidades da presente invenção em que a combinação probiótica compreende adicionalmente B. longum ATCC

BAA-999, a B. longum ATCC BAA-999 pode estar presente na mesma composição ou em uma composição separada para administração simultânea ou sequencial. Por exemplo, nas cápsulas descritas acima, a B. longum ATCC BAA-999 pode ser envolvida em cápsulas com a B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446, sendo que cada cápsula contém 107 a 109 unidades de formação de colônia (ufc). De modo semelhante, a composição que compreende B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e B. longum ATCC BAA-999 pode ser incorporada em uma composição nutricional como uma fórmula nutricionalmente completa (por exemplo, uma fórmula para bebês ou um produto de nutrição clínica), um produto lácteo, uma bebida em pó, uma sopa desidratada, um suplemento dietário, uma substituição de refeição, uma barra nutricional, um cereal, um produto de confeitaria ou um alimento seco para animais de estimação.

[00100] B. longum CNCM I-2618 e B. lactis CNCM I-3446 podem ser cultivadas de acordo com qualquer método adequado e preparadas para encapsulação ou adição a uma composição nutricional por liofilização ou secagem por atomização, por exemplo. Alternativamente, elas podem ser adquiridas já preparadas em uma forma adequada para adição a produtos alimentícios.

[00101] ATCC BAA-999 está disponível comercialmente e pode ser obtida junto à Morinaga Milk Industry Co. Ltd. do Japão sob a marca comercial BB536. Podem ser cultivadas de acordo com qualquer método adequado e preparadas para encapsulação ou adição a uma composição nutricional por liofilização ou secagem por atomização, por exemplo. Alternativamente, pode ser adquirida já preparada em uma forma adequada para adição a produtos alimentícios.

[00102] Uma fórmula nutricionalmente completa para uso na presente invenção pode compreender uma fonte de proteína, de preferência, uma proteína dietária como uma proteína animal (por exemplo, leite, carne ou proteína de ovo), uma proteína vegetal (por exemplo, proteína de soja, trigo, arroz ou ervilha); misturas de aminoácidos livres; ou combinações das mesmas. São particularmente preferenciais as proteínas de leite, como caseína e proteína de soro de leite e as proteínas de soja. A composição pode conter também uma fonte de carboidratos e uma fonte de gordura.

[00103] Se a fórmula incluir uma fonte de gordura, a gordura fornece, de preferência, de 5% a 55% da energia da fórmula; por exemplo, de 20% a 50% da energia. Os lipídios que compõem a fonte de gordura podem ser qualquer gordura ou mistura de gorduras adequada. Gorduras vegetais como óleo de soja, óleo de babaçu, óleo de coco, óleo de açafrão, óleo de girassol, óleo de milho, óleo de canola e lecitinas são particularmente adequadas. Também podem ser adicionadas gorduras de origem animal, como gordura de leite, se for desejado.

[00104] Se a fórmula incluir uma fonte de carboidrato, este fornece de preferência de 40% a 80% da energia da fórmula. Qualquer carboidrato adequado pode ser utilizado, por exemplo, sacarose, lactose, glicose, frutose, sólidos de xarope de milho, maltodextrina ou uma mistura dos mesmos. Fibras dietárias podem também ser adicionadas, se for desejado. A fibra dietária pode ser de qualquer origem adequada incluindo, por exemplo, soja, ervilha, aveia, pectina, goma guar, goma arábica, fruto-oligossacarídeos, galacto- oligossacarídeos, sialil-lactose e oligossacarídeos derivados de leites animais. Vitaminas e minerais adequados podem ser incluídos na fórmula nutricional em uma quantidade para cumprir as diretrizes adequadas.

[00105] As composições da presente invenção podem ainda incluir um prebiótico. Prebióticos são, geralmente, não digestíveis no sentido de que eles não são decompostos e absorvidos no estômago ou intestino delgado e permanecem, portanto, intactos quando passam para o cólon onde eles são seletivamente fermentados pelas bactérias benéficas. Exemplos de prebióticos incluem certos oligossacarídeos, como fruto- oligossacarídeos (FOS), inulina, xilo-oligossacarídeos (XOS), polidextrose ou qualquer mistura dos mesmos. Em uma modalidade específica, os prebióticos podem ser fruto-oligosacarídeos e/ou inulina. Um exemplo é uma combinação de 70% de fruto-oligossacarídeos de cadeia curta e 30% de inulina, que é registrado pela Nestlé sob a marca registrada "Prebio 1".

[00106] Um ou mais emulsificantes de grau alimentício podem ser incluídos na fórmula nutricional se for desejado; por exemplo, ésteres de ácido diacetiltartárico de monoglicerídeos e diglicerídeos, lecitina e monoglicerídeos ou diglicerídeos. De modo similar, podem ser incluídos sais e estabilizantes adequados.

[00107] A fórmula nutricional completa pode ser preparada de qualquer maneira adequada. Por exemplo, a fonte de proteína, a fonte de carboidrato e a fonte de gordura podem ser misturadas em proporções adequadas. Se usados, os emulsificantes podem ser incluídos na mistura. As vitaminas e os minerais podem ser adicionados neste ponto, mas em geral são adicionados posteriormente para evitar degradação térmica. Quaisquer vitaminas e emulsificantes lipofílicos, e similares, podem ser dissolvidos na fonte de gordura antes da mistura. Água, de preferência, água que foi submetida à osmose reversa, pode, então, ser misturada para formar uma mistura líquida.

[00108] A mistura líquida pode, então, ser tratada termicamente para reduzir a carga bacteriana. Por exemplo, a mistura líquida pode ser rapidamente aquecida para uma temperatura na faixa de cerca de 80°C a cerca de 110°C durante cerca de 3 segundos a cerca de 5 minutos. Isso pode ser executado por injeção de vapor ou por trocador de calor; por exemplo, um trocador de calor a placas ou um trocador de calor tubular.

[00109] A mistura líquida pode, então, ser resfriada a uma temperatura na faixa de cerca de 60°C até cerca de 85°C; por exemplo, por resfriamento rápido. A mistura líquida pode, então, ser homogeneizada; por exemplo, em dois estágios, de cerca de 10 MPa a cerca de 30 MPa no primeiro estágio e cerca de 2 MPa a cerca de 10 MPa no segundo estágio. A mistura homogeneizada pode, então, ser resfriada adicionalmente para a adição de quaisquer componentes sensíveis ao calor; como vitaminas e minerais. O pH e o teor de sólidos da mistura homogeneizada são convenientemente padronizados nesse ponto.

[00110] A mistura homogeneizada pode, então, ser transferida para um aparelho de secagem adequado, como um secador por atomização ou secador por congelamento, e convertida em pó. O pó dever ter um teor de umidade menor que cerca 5% em peso. A B. longum CNCM I- 2618 e/ou B. lactis CNCM I-3446 e/ou B. longum ATCC BAA-999 podem ser adicionadas ao pó na quantidade desejada por misturação a seco.

[00111] Um alimento seco para animais de estimação para uso na presente invenção pode incluir qualquer um ou mais dentre uma fonte de carboidrato, uma fonte de proteína e uma fonte de lipídio.

[00112] Pode-se usar qualquer fonte de carboidrato adequada. De preferência, a fonte de carboidrato é fornecida sob a forma de grãos, farinhas ou amidos. Por exemplo, a fonte de carboidrato pode ser arroz, cevada, sorgo, painço, aveia, farelo de milho ou farinha de trigo. Açúcares simples como sacarose, glicose e xaropes de milho também podem ser usados. A quantidade de carboidrato fornecida pela fonte de carboidrato pode ser selecionada conforme desejado. Por exemplo, o alimento para animais de estimação pode conter até cerca de 60%, em peso, de carboidrato.

[00113] Fontes de proteína adequadas podem ser selecionadas dentre qualquer fonte de proteína animal ou vegetal adequada; por exemplo, carne muscular ou esquelética, farinha de carne e ossos, farinha de aves, farinha de peixe, proteínas de leite, glúten de milho, glúten de trigo, farinha de soja, concentrados de proteína de soja, isolados de proteína de soja, proteínas de ovo, soro de leite, caseína, glúten e similares. Para animais idosos, é preferencial que a fonte de proteína contenha uma proteína animal de alta qualidade. A quantidade de proteína fornecida pela fonte de proteína pode ser selecionada conforme desejado. Por exemplo, o alimento para animais de estimação pode conter cerca de 12% a cerca de 70%, em peso, de proteína em uma base seca.

[00114] O alimento para animais de estimação pode conter uma fonte de gordura. Pode-se usar qualquer fonte de gordura adequada. De preferência, a fonte de gordura é uma fonte de gordura de origem animal, como sebo. Podem ser usados óleos vegetais, como óleo de milho, óleo de girassol, óleo de cártamo, óleo de semente de colza, óleo de soja, óleo de oliva e outros óleos ricos em ácidos graxos monoinsaturados e poli-insaturados. Além dos ácidos graxos essenciais (ácido linoleico e ácido alfa-linoleico), a fonte de gordura pode incluir ácidos graxos de cadeia longa. Os ácidos graxos de cadeia longa adequados incluem ácido gama-linoléico, ácido estearidônico, ácido araquidônico, ácido eicosapentanóico e ácido docosaexanóico. Os óleos de peixe são uma fonte adequada de ácidos eicosapentanóicos e ácido docosaexanóico. Óleo de borragem, óleo de semente de groselha negra e óleo de prímula são fontes adequadas de ácido gama-linoleico. Óleo de semente de colza, óleo de soja, óleo de linhaça e óleo de noz são fontes adequadas de ácido alfa-linolênico. Óleo de cártamo, óleo de girassol, óleo de milho e óleo de soja são fontes adequadas de ácido linoleico. Óleo de oliva, óleo de semente de colza (canola), óleo de girassol com alto teor oleico, óleo de cártamo, óleo de amendoim e óleo de farelo de arroz são fontes adequadas de ácidos graxos monoinsaturados. A quantidade de gordura fornecida pela fonte de gordura pode ser selecionada conforme desejado. Por exemplo, o alimento para animais de estimação pode conter cerca de 5% a cerca de 40%, em peso, de gordura em uma base seca. De preferência, o alimento para animais de estimação tem uma quantidade relativamente reduzida de gordura.

[00115] A escolha das fontes de carboidrato, proteína e lipídio não é de importância crítica e será selecionada com base nas necessidades nutricionais do animal, considerações de palatabilidade e no tipo de produto produzido. Adicionalmente, vários outros ingredientes, por exemplo, açúcar, sal, especiarias, temperos, vitaminas, minerais, agentes flavorizantes, gomas e micro-organismos probióticos podem também ser incorporados ao alimento para animais de estimação, conforme desejado.

[00116] Para animais de estimação idosos, o alimento para animais de estimação contém, de preferência, proporcionalmente menos gordura que os alimentos para animais de estimação para animais de estimação mais jovens. Adicionalmente, as fontes de amido podem incluir um ou mais dentre aveia, arroz, cevada, trigo e milho.

[00117] O alimento para animais de estimação pode ser produzido por cozimento por extrusão, embora assamento e outros processos adequados possam ser usados. Quando cozido por extrusão, o alimento para animais de estimação é geralmente fornecido sob a forma de um pélete de ração. Os componentes probióticos podem, de preferência, ser aplicados como revestimento sobre ou colocados no alimento seco para animais de estimação. Um processo adequado é descrito no pedido de patente europeia N° 0862863.

[00118] A combinação probiótica da presente invenção e as composições da mesma podem ser utilizadas para tratar, gerenciar ou evitar um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar em indivíduos que têm um distúrbio alérgico ou intolerância alimentar, ou indivíduos que são suscetíveis a um distúrbio alérgico ou intolerância alimentar (por exemplo, indivíduos que têm um histórico atópico).

[00119] Tipicamente, a composição pode ser selecionada do grupo que consiste em uma composição alimentícia, uma composição alimentícia para animais de estimação, um suplemento dietário, um nutracêutico, uma fórmula nutricional, uma bebida e/ou uma composição médica.

[00120] Exemplos de composições alimentícias que são aplicáveis à presente invenção são iogurtes, leite, leite aromatizado, sorvete, sobremesas prontas para o consumo, pós para reconstituição com, por exemplo, leite ou água, bebidas de leite e chocolate, bebidas de malte, pratos prontos para o consumo, pratos ou bebidas instantâneas para humanos ou composições alimentícias que representam uma dieta completa ou uma dieta parcial destinada a animais de estimação ou animais de agropecuária. Consequentemente, em uma modalidade, a composição de acordo com a presente invenção é um produto alimentício destinado a seres humanos, animais de estimação ou gado e, de preferência, seres humanos e animais de estimação. Em uma modalidade preferencial, a composição é um produto alimentício ou um suplemento dietário destinado a seres humanos (bebês, crianças, adolescentes ou adultos) ou animais de estimação (animais de estimação) (de preferência cães, filhotes de cachorro, gatos ou filhote de gato).

[00121] A composição da presente invenção pode conter, ainda, hidrocoloides protetores (como gomas, proteínas, amidos modificados), ligantes, agentes formadores de filme, agentes/materiais de encapsulação, materiais de cápsula/carcaça, compostos de matriz, revestimentos, emulsificantes, agentes ativos de superfície, agentes solubilizantes (óleos, gorduras, ceras, lecitinas etc.), adsorventes, carreadores, cargas, compostos concomitantes, agentes dispersantes, agentes umectantes, auxiliares de processamento (solventes), agentes de fluxo, agentes mascaradores de sabor, agentes de peso, agentes gelificantes, agentes formadores de gel, antioxidantes e antimicrobianos. A composição pode conter também aditivos e adjuvantes farmacêuticos convencionais, excipientes e diluentes, incluindo, mas não se limitando a, água, gelatina de qualquer origem, gomas vegetais, lignina-sulfonato, talco, açúcares, amido, goma arábica, óleos vegetais, poli(glicois alquilênicos), agentes flavorizantes, conservantes, estabilizantes, agentes emulsificantes, agentes tamponantes, lubrificantes, corantes, agentes umectantes, cargas e similares. Em todos os casos, tais componentes serão selecionados levando-se em consideração a sua adequação ao receptor pretendido.

[00122] A composição pode ser uma fórmula nutricionalmente completa. A composição de acordo com a invenção pode compreender uma fonte de proteína.

[00123] Qualquer proteína dietária adequada pode ser utilizada, por exemplo, proteínas animais (como proteínas do leite, proteínas da carne e proteínas do ovo); proteínas vegetais (como proteína de soja, proteína de trigo, proteína de arroz e proteína de ervilha); misturas de aminoácidos livres; ou combinações das mesmas.

[00124] As proteínas podem ser intactas ou hidrolisadas, ou podem ser uma mistura de proteínas intactas ou hidrolisadas. Pode ser desejável suplementar com proteínas parcialmente hidrolisadas (grau de hidrólise entre 2 e 20%), por exemplo, para pacientes humanos e/ou animais com risco de desenvolver alergia ao leite de vaca.

[00125] Além disso, fontes de proteína pré-hidrolisada são, de modo geral, mais facilmente digeridas e absorvidas por um trato gastrointestinal deficiente.

[00126] Se houver necessidade de proteínas hidrolisadas, o processo de hidrólise pode ser executado conforme desejado e conforme é conhecido na técnica. Pode ser desejável fornecer proteínas parcialmente hidrolisadas (grau de hidrólise entre 2 e 20%).

[00127] Por exemplo, um hidrolisado de proteína de soro de leite pode ser preparado por hidrólise enzimática da fração de soro de leite em uma ou mais etapas. Descobriu-se que, no caso da fração de soro de leite usada como o material de partida ser substancialmente isenta de lactose, a proteína sofre menor bloqueio de lisina durante o processo de hidrólise. Isso possibilita que a extensão do bloqueio de lisina seja reduzida de cerca de 15%, em peso, do total de lisina para menos de cerca de 10%, em peso, de lisina; por exemplo, cerca de 7%, em peso, de lisina, o que melhora muito a qualidade nutricional da fonte de proteína.

[00128] A composição pode conter também uma fonte de carboidratos e uma fonte de gordura. Se a composição incluir uma fonte de gordura, a fonte de gordura fornece, de preferência, de 5% a 40% da energia da composição; por exemplo, de 20% a 30% da energia. Um perfil de gordura adequado pode ser obtido usando-se uma mistura de óleo de canola, óleo de milho e óleo de girassol com alto teor de ácido oleico.

[00129] Uma fonte adicional de carboidrato pode ser acrescentada à composição.

[00130] A fonte de carboidratos fornece, de preferência, de 40% a 80% da energia da composição. Qualquer carboidrato adequado pode ser utilizado, por exemplo, sacarose, lactose, glicose, frutose, sólidos de xarope de milho, maltodextrina ou uma mistura dos mesmos. Fibras dietárias podem também ser adicionadas, se for desejado. A fibra dietária passa através do intestino delgado sem ser digerida por enzimas, e funciona como um agente avolumador e laxativo natural. A fibra dietária pode ser solúvel ou insolúvel e, em geral, é preferencial uma mistura dos dois tipos. As fontes adequadas de fibras dietárias incluem soja, ervilha, aveia, pectina, goma guar, goma guar parcialmente hidrolisada, goma arábica, fruto-oligossacarídeos, oligossacarídeos ácidos, galacto- oligossacarídeos, sialil-lactose e oligossacarídeos derivados de leites animais. Uma mistura preferencial de fibras é uma mistura de inulina com fruto-oligossacarídeos de cadeia curta. De preferência, se fibra estiver presente, o teor de fibra fica entre 2 e 40 g/L da composição quando consumida, com mais preferência, entre 4 e 10 g/L.

[00131] A composição pode também compreender minerais e micronutrientes, como elementos-traço e vitaminas, de acordo com as recomendações de órgãos governamentais como o USRDA. Por exemplo, a composição pode conter, por dose diária, um ou mais dos seguintes micronutrientes nas faixas mostradas: 300 a 500 mg de cálcio, 50 a 100 mg de magnésio, 150 a 250 mg de fósforo, 5 a 20 mg de ferro, 1 a 7 mg de zinco, 0,1 a 0,3 mg de cobre, 50 a 200 µg de iodo, 5 a 15 µg de selênio, 1.000 a 3.000 µg de betacaroteno, 10 a 80 mg de vitamina C, 1 a 2 mg de vitamina B1, 0,5 a 1,5 mg de vitamina B6, 0,5 a 2 mg de vitamina B2, 5 a 18 mg de niacina, 0,5 a 2,0 µg de vitamina B12, 100 a 800 µg de ácido fólico, 30 a 70 µg de biotina, 1 a 5 µg de vitamina D, 3 a 10 µg de vitamina E.

[00132] Um ou mais emulsificantes de grau alimentício podem ser incluídos na composição se for desejado; por exemplo, ésteres de ácido diacetiltartárico de monoglicerídeos e diglicerídeos, lecitina e monoglicerídeos ou diglicerídeos. De modo similar, podem ser incluídos sais e estabilizantes adequados.

[00133] A composição pode ser administrada por via oral e/ou enteral; por exemplo, na forma de um pó para reconstituição com leite ou água.

[00134] As composições são administradas em uma quantidade suficiente para tratar ao menos parcialmente ou interromper os sintomas do distúrbio alérgico ou da intolerância alimentar e suas complicações. Uma quantidade adequada para tanto é definida como "uma dose terapeuticamente eficaz". Quantidades eficazes para esse propósito dependerão de vários fatores conhecidos das pessoas versadas na técnica, como a gravidade da doença e o peso e o estado geral do paciente.

[00135] Em aplicações profiláticas, as composições de acordo com a invenção são administradas a um paciente suscetível a, ou de outro modo em risco de, ter uma doença, em particular, em uma quantidade que é suficiente para reduzir ao menos parcialmente o risco de desenvolver uma doença. Uma tal quantidade é definida como sendo "uma dose profilática eficaz". Novamente, as quantidades precisas dependem de vários fatores específicos do como o estado de saúde e o peso do paciente.

[00136] De modo geral, a B. longum CNCM I-2618, a B. lactis CNCM I- 3446 e (quando presente) a B. longum ATCC BAA-999, serão, cada uma, administradas em uma dose terapeuticamente eficaz e/ou em uma dose profilática eficaz.

[00137] Se a B. longum CNCM I-2618, a B. lactis CNCM I-3446 e (quando presente) a B. longum ATCC BAA-999 estiverem presentes sob uma forma viável, é teoricamente eficaz em qualquer concentração considerando o fato de que essas bactérias podem colonizar o intestino e se multiplicar. Para as composições da presente invenção, é geralmente preferencial que uma dose diária da composição compreenda entre 104 e 1012 UFC de cada um dos agentes probióticos. Uma dose diária adequada particular de cada um dos probióticos é de 108 a 1012 UFC.

[00138] No caso de B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e (quando presente) B. longum ATCC BAA-999, inativadas e/ou não replicantes, é de modo geral preferencial que a composição da presente invenção compreenda entre 102 e 1012 células não replicantes de

Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, por grama do peso seco da composição. Uma dose adequada específica de cada um dos probióticos é de 103 a 1012 células não replicantes, com mais preferência de 105 a 108 células não replicantes por grama do peso seco da composição.

[00139] Obviamente, micro-organismos não replicantes não formam colônias, consequentemente, o termo "células" deve ser compreendido como a quantidade de micro-organismos não replicantes que é obtida a partir da quantidade especificada de células bacterianas replicantes. Isso inclui micro-organismos que são inativados, não viáveis ou mortos ou presentes na forma de fragmentos, como DNA ou materiais da parede celular.

[00140] A composição da presente invenção pode ser fornecida na forma de pó, tendo uma atividade de água menor que 0,2, por exemplo, na faixa de 0,19 a 0,05, de preferência menor que 0,15.

[00141] A composição pode ser um pó estável durante o armazenamento. A baixa atividade de água fornece essa estabilidade durante o armazenamento e garante que os micro-organismos probióticos permanecerão viáveis mesmo após longos períodos de armazenamento.

[00142] A atividade da água ou a w é uma medida do estado de energia da água em um sistema. É definida como a pressão de vapor da água dividida pela pressão de vapor da água pura na mesma temperatura; portanto, a água destilada pura tem uma atividade de água de exatamente um.

[00143] Adicional ou alternativamente, o micro-organismo probiótico B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e (quando presente) B. longum ATCC BAA-999 pode ser fornecido sob uma forma encapsulada.

[00144] Descobriu-se que a encapsulação das bactérias tem vantagens técnicas e terapêuticas. A encapsulação aumenta a sobrevivência das bactérias e, portanto, o número de bactérias vivas que chegam ao intestino. Além disso, as bactérias são gradualmente liberadas, permitindo uma ação prolongada das bactérias sobre a saúde do indivíduo. As bactérias podem ser microencapsuladas, por exemplo, conforme descrito pela patente n° FR2443247 (Société des Produits Nestlé), aqui incorporada a título de referência. Sumarizando, as bactérias podem ser secas por congelamento ou por atomização e incorporadas em um gel.

[00145] A invenção será agora adicionalmente descrita com referência ao exemplo a seguir. Exemplo Preparação de bactérias:

[00146] No dia anterior ao ensaio, três cepas bacterianas selecionadas da coleção de culturas Nestlé NCC 3001, 2818 e 2705 foram cultivadas em 10 mL de MRS + cisteína e cultivadas durante 16 horas a 37 °C em condições anaeróbicas.

[00147] As culturas bacterianas foram centrifugadas a 5000 rpm por 5 min (temperatura ambiente). Os péletes bacterianos foram suspensos em solução salina tamponada com fosfato fria (PBS) (10 mL). A densidade óptica de cada cultura bacteriana foi medida a 600 nm. Preparações bacterianas ajustadas em meio de cultura RPMI foram ajustadas para ter 5 x 106 UFC/ml e 1 x 107 UFC/ml de acordo com o pré-teste de unidade formadora de colônia bacteriana contando em meio de ágar seletivo que validou a correspondência entre OD e CFU. Preparação de célula mononuclear de sangue periférico (CMSP):

[00148] CMSP isoladas de três doadores saudáveis foram lavadas uma vez em PBS. Após centrifugação a 500 g durante 5 minutos, o pélete celular foi suspenso em 2 mL de RPMI + 10% de soro fetal de bezerro (FCS). As células foram contadas e preparações adaptadas para terem 2 x 106 células/mL. Estimulação de CMSP com bactérias:

[00149] As CMSPs foram semeadas em placa de cultura de 12 poços (500 µL) e, então, preparações bacterianas foram adicionadas (500 µL). As culturas concomitantes foram incubadas durante 24 horas a 37°C com 10% de CO2.

[00150] Para as análises de citocina, os sobrenadantes foram centrifugados durante 5 minutos a 500 g e transferidos em um novo tubo. As amostras foram armazenadas a -20°C até a avaliação. A citocina IL-10 foi medida por ELISA (IL-10 ELISA, R&D Systems, MN, EUA). Avaliação da permeabilidade da barreira intestinal

[00151] Células Caco-2 e HT-29-MTX foram cultivadas concomitantes em placas de cultura de 12 poços em elementos de inserção de filtro de poliestireno a uma razão de 3:1. Após a diferenciação (14 dias), as culturas concomitantes foram pré- incubadas com preparações de bactérias (5x106) durante 24 h antes do estímulo basolateral com TNFα (0,6 ng/mL) e IFNγ (2,5 ng/mL) para alterar a integridade da barreira (controle). A resistência elétrica transepitelial (TEER) foi medida após 16 horas para quantificar as alterações induzidas por inflamação na permeabilidade da barreira ilustradas como aumento percentual na TEER em relação aos controles tratados com TNFα/IFNγ.

[00152] Os resultados são mostrados nas Figuras 1 e 2. Conforme claramente mostrado na Figura 1, uma combinação de B. longum CNCM I-2618 e B. lactis de acordo com a presente invenção é surpreendentemente eficaz no aumento da produção da citocina anti- inflamatória IL-10 (Figura 1).

[00153] A Figura 1 demonstra adicionalmente um efeito sinérgico surpreendente sobre o aumento na produção da citocina anti-

inflamatória IL-10 quando uma combinação tripla de B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e B. longum ATCC BAA-999 da invenção é usada.

[00154] Conforme claramente mostrado na Figura 2 e de acordo com a presente invenção, a B. longum CNCM I-2618 e a B. lactis CNCM I- 3446 são surpreendentemente eficazes em evitar a permeabilidade de barreira induzida por inflamação em comparação com cepas únicas ou combinações de outras cepas. A combinação tripla de B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 e B. longum ATCC BAA-999, de acordo com um aspecto da presente invenção, mostra, também, a prevenção de ruptura da barreira induzida por inflamação (Figura 2), embora em menor escala.

Claims (17)

REIVINDICAÇÕES

1. Combinação probiótica para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou intolerância alimentar, caracterizada pelo fato de que compreende Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-3446.

2. Combinação probiótica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda a Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

3. Combinação probiótica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada por o distúrbio alérgico e/ou a intolerância alimentar serem modulados por citocinas anti-inflamatórias, de preferência, sendo que o distúrbio alérgico ou a intolerância alimentar são modulados por IL-10; ou sendo que o distúrbio alérgico ou a intolerância alimentar são modulados por células T reguladoras.

4. Combinação probiótica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o distúrbio alérgico e/ou a intolerância alimentar são modulados por um desequilíbrio de bactérias benéficas, como as bifidobactérias e os lactobacilos, e/ou em que o distúrbio alérgico é modulado por estresse oxidativo ou marcadores inflamatórios, como a proteína C-reativa.

5. Combinação probiótica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o distúrbio alérgico ser uma alergia alimentar, uma alergia respiratória ou uma alergia dermatológica.

6. Combinação probiótica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio alérgico é: rinite, asma, dermatite, dermatite atópica, dermatite de contato, eczema, eczema atópico, urticária, psoríase, esofagite eosinofílica ou uma doença gastrointestinal associada a eosinófilos.

7. Composição probiótica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada por a composição probiótica aumentar a concentração ou a expressão de uma citocina anti- inflamatória e, com mais preferência, em que a citocina anti-inflamatória é a IL-10.

8. Combinação probiótica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada por reforçar a barreira intestinal e a integridade da barreira intestinal do indivíduo que consome a combinação, por exemplo, evitando-se a permeabilidade da barreira intestinal induzida por inflamação do indivíduo assumindo a combinação para limitar a sensibilização do alérgeno.

9. Combinação para uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada por o reforço da barreira intestinal ser selecionado do grupo que consiste em: prevenção da disfunção da barreira intestinal induzida por inflamação, redução da permeabilidade intestinal, aprimoramento da função da barreira, reforço/proteção da barreira intestinal e combinações dos mesmos.

10. Combinação probiótica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada por o indivíduo ser um mamífero, de preferência um ser humano ou um animal de estimação, de preferência em que o indivíduo é um bebê, uma criança, um adolescente ou um ser humano adulto, um cão, um filhote de cachorro, um gato ou um filhote de gato.

11. Combinação de probióticos para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada por cada probiótico na combinação de probióticos ser administrado a um indivíduo em uma quantidade equivalente a 108 a 1012 UFC por dia.

12. Combinação de probióticos para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada por a combinação de probióticos ser administrada sob a forma de uma composição.

13. Combinação probiótica para uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por a composição ser selecionada do grupo que consiste em: uma formulação farmacêutica, uma formulação veterinária, uma formulação nutricional, uma formulação para alimentação por tubo, um suplemento dietário, um alimento funcional, um produto de bebida e um produto para cuidados de animais de estimação.

14. Combinação probiótica para uso na fabricação de uma composição para uso no tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou um intolerância alimentar, caracterizada por compreender Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-

3446.

15. Combinação probiótica para uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada por a dita combinação probiótica compreender ainda Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

16. Método para tratamento ou prevenção de um distúrbio alérgico e/ou uma intolerância alimentar em um indivíduo, caracterizado por compreender a etapa de administrar ao dito indivíduo uma combinação probiótica, em que a combinação probiótica é de Bifidobacterium longum CNCM I-2618 e Bifidobacterium lactis CNCM I-3446.

17. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por a combinação probiótica compreender ainda a Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.