BR112021001290A2 - composições de partículas terapeuticamente ativas modificadas na superfície por congelamento ultra-rápido - Google Patents

Abstract

Composições farmacêuticas que contêm menos de 10% de um excipiente e são apresentadas como nano-agregadas são descritas neste documento. Estas composições farmacêuticas mostraram exibir propriedades melhoradas, tais como aerossolizabilidade e desempenho aerodinâmico melhorados. Também são fornecidos aqui métodos de preparação das composições farmacêuticas aqui divulgadas e uso das mesmas.

Description

“COMPOSIÇÕES DE PARTÍCULAS TERAPEUTICAMENTE ATIVAS MODIFICADAS NA SUPERFÍCIE POR CONGELAMENTO ULTRA-RÁPIDO”

[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido Provisório dos Estados Unidos de nº 62/702.674, depositado em 24 de julho de 2018, cujo conteúdo inteiro é incorporado por meio deste por referência.

ANTECEDENTES

1. CAMPO

[002] A presente divulgação refere-se geralmente ao campo de produtos farmacêuticos e fabricação de produtos farmacêuticos. Mais particularmente, refe- re-se a composições e métodos para preparar uma composição de fármaco contendo baixas quantidades de excipientes e agentes terapêuticos formulados como nanoa- gregados.

2. DESCRIÇÃO DA TÉCNICA RELACIONADA

[003] Até recentemente, a liberação de fármacos antifúngicos em aerossol para os pulmões era limitada à anfotericina B (Le e Schiller, 2010; Borro et al. 2008).

No entanto, Hilberg et al. 2008 relataram que o voriconazol inalado é mais eficaz para o tratamento da aspergilose pulmonar invasiva (API) do que a anfotericina B inalada, confirmando que a formulação nebulizada de voriconazol, inicialmente relatada por Tolman et al. 2009a, tratou com sucesso pacientes com API que haviam falhado an- teriormente com as formas de dosagem oral ou injetável de voriconazol com ou sem anfotericina B inalada.

[004] Tolman et al. relataram voriconazol inalado liberado aos pulmões por nebulização (Tolman et al. 2009a; Tolman et al. 2009b). No entanto, a concentração de voriconazol no tecido pulmonar diminuiu após 6 horas para níveis abaixo da faixa mínima detectável (Tolman et al. 2009a). Além disso, a potência da formulação ne- bulizada também foi muito baixa, somente 5,9% (p/p) com sulfobutilé- ter-β-ciclodextrina de sódio (SBECD) como um excipiente. A segurança do SBECD liberado por via pulmonar ainda não foi confirmada, e esta grande quantidade de ingrediente inativo pode causar efeitos colaterais graves (Wong 1993). As formula- ções de voriconazol para inalação de pó seco (IPS) foram relatadas usando nano- partículas de poli-lactídeo-co-glicolídeo por Sinha et al. (Sinha et al. 2013) e micro- partículas de poli-lactídeo por Arora et al. (Arora et al. 2015), mas a carga de fármaco foi baixa para essas partículas (31% e 20% p/p, respectivamente). Arora et al. rela- taram outra formulação em pó de voriconazol para IPS usando leucina como um ex- cipiente (Arora et al. 2016). No entanto, todas essas formulações em pó de IPS in- cluem excipientes não GRAS que não foram usados para fármacos inalados apro- vados pelo FDA. Beinbom et al. também desenvolveu formulações amorfas e crista- linas de voriconazol adequadas para inalação de pó seco usando a tecnologia de engenharia de partículas, congelamento de película fina (TFF) (Beinbom et al. 2012a; Beinbom et al. 2012b). No entanto, a formulação amorfa continha 75% (p/p) de exci- piente e, portanto, tinha baixa potência e a eficiência de absorção do fármaco era baixa com depuração rápida com base em dados farmacocinéticos in vivo em um modelo de camundongo. A ASC 0-24h da formulação cristalina foi significativamente maior que a da formulação amorfa em ambos os pulmões (452,6 μgh/g e 232,1 μgh/g, respectivamente) e plasma (38,4 μgh/g e 18,6 μgh/g, respectivamente). No entanto, o desempenho do aerossol da formulação cristalina foi inferior (37,8% de FPF).

[005] Recentemente, foi proposto com base na modelagem que os nanoa- gregados contendo nanopartículas de fármacos são mais vantajosamente distribuídos com cobertura epitelial aumentada nos pulmões em comparação com partículas e nanopartículas discretas de tamanho mícron (Longest e Hindle 2017). Um agregado é uma substância sólida em forma de partículas composta de um conjunto de partículas mantidas juntas por fortes forças coesivas inter ou intramoleculares (Chiou e Rie- gelman 1971). Quando três formas diferentes de partículas de fármaco foram testadas no modelo computacional, incluindo micropartículas convencionais, nanoagregados e um nanoaerossol verdadeiro de budesonida e propionato de fluticasona, a eficiência de absorção total de nanoagregados de propionato de fluticasona se apresentou 57 vezes maior do que a das micropartículas convencionais. Embora os nanoaerossóis verdadeiros tenham alcançado melhor eficiência de absorção, não há dispositivos práticos disponíveis para fornecer nanoaerossóis verdadeiros às pequenas vias aé- reas, portanto, os nanoagregados forneceram a melhor abordagem para direcionar fármacos às pequenas vias aéreas. Os nanoagregados de dissolução lenta foram descritos como tendo melhorado a absorção e distribuição do fármaco com base em Longest et al. (Longest e Hindle 2017).

[006] TFF é uma tecnologia de engenharia de partículas que emprega uma taxa de congelamento ultrarrápida de até 10.000 K/s (Engstrom et al. 2008). Devido ao alto grau de super-resfriamento, TFF foi usado com sucesso para produzir agregados nanoestruturados (Sinswat et al. 2008). A secagem por spray é outra técnica comum para produzir partículas em escala micro ou nano para IPS. No entanto, a formação de partículas durante o processo de secagem de secagem por spray geralmente leva mais tempo (Wisniewski 2015) do que o processo de congelamento TFF, permitindo que as partículas cresçam mais tempo, gerando um tamanho maior de partículas. Por conseguinte, os métodos de secagem por pulverização típicos não terão vantagens de captação e microdosimetria aprimoradas, que os nanoagregados têm, conforme descrito por Longest e Hindle, 2017. Portanto, permanece a necessidade de desen- volver composições farmacêuticas adicionais como um nanoagregado que apresen- tem propriedades melhoradas, tais como aerossolização melhorada.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[007] A presente divulgação fornece composições farmacêuticas que com- preendem agentes e excipientes terapêuticos como nanoagregados, métodos para sua fabricação e métodos para seu uso. Em algumas modalidades, a presente di-

vulgação fornece composições farmacêuticas que compreendem: (A)um agente terapêutico; e (B)um excipiente, em que o excipiente compreende menos do que cerca de 10% em peso da composição farmacêutica; em que a composição farmacêutica é formulada como um nanoagregado compreendendo nanopartículas do agente terapêutico e a superfície das nanopartí- culas do agente terapêutico contém domínios discretos do excipiente e em que os domínios discretos do excipiente reduzem a área de contato entre as nanopartículas do agente terapêutico.

[008] Em algumas modalidades, o agente terapêutico está presente em uma forma cristalina. Em outras modalidades, o agente terapêutico está presente em uma forma amorfa. Em algumas modalidades, o excipiente compreende de cerca de 9% p/p a cerca de 1% p/p da composição farmacêutica, tal como de cerca de 6% p/p a cerca de 2% p/p da composição farmacêutica. Em algumas modalidades, o excipiente compreende cerca de 3% p/p da composição farmacêutica. Em outras modalidades, o excipiente compreende cerca de 5% p/p da composição farmacêutica.

[009] Em algumas modalidades, os domínios discretos do excipiente com- preendem um ou mais domínios não contínuos do excipiente na superfície. Em outras modalidades, os domínios discretos do excipiente compreendem uma camada con- tígua e contínua do excipiente. Em algumas modalidades, o excipiente é solúvel em água. Em algumas modalidades, o excipiente é um sólido à temperatura ambiente.

Em algumas modalidades, o excipiente é um álcool de açúcar, tal como manitol. Em algumas modalidades, o excipiente está presente como um nano-domínio na com- posição farmacêutica. Em algumas modalidades, o nano-domínio do excipiente tem um tamanho de cerca de 50 nm a cerca de 500 nm, tal como de cerca de 100 nm a cerca de 200 nm.

[010] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica tem um diâmetro aerodinâmico médio de massa de cerca de 1,5 a cerca de 7,5 μm, tal como de cerca de 2,5 a cerca de 6,5 μm.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica não inclui um excipiente de cera.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica não inclui um excipiente hidrofóbico.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo que compreende agentes anticâncer, agentes antifún-

gicos, agentes psiquiátricos, tais como analgésicos, agentes de alteração do nível de consciência, tais como agentes anestésicos ou hipnóticos, fármacos anti-inflamatórios não esteróides (NSAIDS), anti-helmínticos, beta agonistas, agentes antiacne, agentes antianginosos, agentes antiarrítmicos, agentes antiasma, agentes antibacterianos,

agentes anti-hipertrofia benigna da próstata, anticoagulantes, antidepressivos, anti-

diabéticos, antieméticos, antiepilépticos, agentes antigota, agentes anti-hipertensivos,

agentes anti-inflamatórios, antimaláricos, agentes anti-enxaqueca, agentes antiobe-

sidade, agentes antiosteoporose, agentes antiparkinsonianos, agentes antiprolifera-

tivos, agentes antiprotozoários, agentes antitireoidianos, agente antitussígeno,

agentes anti-incontinência urinária, agentes antivirais, agentes ansiolíticos, supres-

sores de apetite, beta-bloqueadores, agentes inotrópicos cardíacos, fármacos quimi-

oterápicos, intensificadores da cognição, contraceptivos, inibidores de Cox-2, diuré-

ticos, agentes de melhoria da disfunção erétil, expectorantes, agentes gastrointesti-

nais, antagonistas do receptor de histamina, imunossupressores, queratolíticos,

agentes reguladores de lipídios, inibidores de leucotrieno, macrolídeos, relaxantes musculares, neurolépticos, agentes nutricionais, analgésicos opióides, inibidores de protease e sedativos.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um agente antifúngico, tal como um fármaco antifúngico azol.

Em algumas modalidades, o fár-

maco antifúngico azol é voriconazol.

Em algumas modalidades, a composição far-

macêutica compreende ainda um ou mais excipientes adicionais.

Em algumas mo-

dalidades, a composição farmacêutica compreende ainda um ou mais agentes tera-

pêuticos adicionais.

[011] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formulada para administração: por via oral, intra-adiposal, intra-arterial, intra-articular, intracraniana, intradérmica, intralesional, intramuscular, intranasal, intraocular, intrapericárdica, in- traperitoneal, intrapleural, intraprostática, intrarretal, intratecal, intratraqueal, intratu- moral, intraumbilicamente, intravaginal, intravenosa, intravesicular, intravítrea, lipos- somal, local, mucosa, parenteral, retal, subconjuntival, subcutânea, sublingual, tópica, transdérmica, vaginal, em cremes, em composições lipídicas, por meio de um cateter, via infusão contínua, via infusão, via inalação, via injeção, via liberação local ou via perfusão localizada. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formu- lada para administração por inalação.

[012] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formulada para uso com um inalador, tal como um inalador de combinação de dose fixa, um inalador de pó seco de dose única, um inalador de pó seco de multidose, inalador de pó seco de dose de multiunidade, um inalador de dose calibrada ou um inalador de dose ca- librada pressurizado. Em algumas modalidades, o inalador é um inalador à base de cápsula. Em algumas modalidades, o inalador é um inalador de baixa resistência. Em outras modalidades, o inalador é um inalador de alta resistência. Em algumas moda- lidades, o inalador é usado com uma taxa de fluxo de cerca de 10 L/min a cerca de 150 L/min, tal como de cerca de 20 L/min a cerca de 100 L/min. Em algumas modalidades, o inalador tem um diferencial de pressão de 0,5 kPa a cerca de 5 kPa. Em algumas modalidades, o diferencial de pressão é de 1 kPa, 2 kPa ou 4 kPa. Em algumas modalidades, o inalador tem uma dose carregada de cerca de 0,1 mg a cerca de 50 mg. Em algumas modalidades, o inalador tem uma dose carregada de cerca de 0,1 mg a cerca de 10 mg. Em outras modalidades, o inalador tem uma dose carregada de cerca de 5 mg a cerca de 50 mg, como de cerca de 5 mg a cerca de 25 mg. Em al- gumas modalidades, o inalador é configurado para liberar uma ou uma série de doses de uma ou mais doses unitárias carregadas sequencialmente. Em algumas modali-

dades, o inalador é configurado para liberar uma dose de uma dose unitária. Em ou- tras modalidades, o inalador é configurado para liberar uma série de doses a partir de uma dose unitária. Em outras modalidades, o inalador é configurado para liberar uma dose cada a partir de uma série de cápsulas carregadas sequencialmente. Em outras modalidades, o inalador é configurado para liberar uma série de doses a partir de uma série de cápsulas carregadas sequencialmente.

[013] Em ainda outro aspecto, a presente divulgação fornece métodos para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio em um paciente em necessidade dos mesmos, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica descrita neste documento compreendendo um agente terapêutico eficaz para tratar a doença ou distúrbio. Em algumas modali- dades, a doença ou distúrbio está nos pulmões. Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma infecção, tal como uma infecção de um fungo. Em algumas mo- dalidades, o agente terapêutico é um agente antifúngico, tal como um agente anti- fúngico azol. Em algumas modalidades, o agente terapêutico é voriconazol.

[014] Em ainda outro aspecto, a presente divulgação fornece métodos para preparar uma composição farmacêutica que compreende: (A)misturar um agente terapêutico e um excipiente em que o excipiente está presente em uma quantidade inferior a 10% p/p com um solvente para formar uma solução precursora; (B)depositar a solução precursora sobre uma superfície a uma temperatura adequada para fazer com que o solvente congele; e (C)remover o solvente para obter uma composição farmacêutica.

[015] Em algumas modalidades, o solvente é uma mistura de dois ou mais solventes. Em algumas modalidades, a mistura de solventes compreende água. Em algumas modalidades, o solvente é um solvente orgânico. Em algumas modalidades, o solvente orgânico é acetonitrila. Em outras modalidades, o solvente orgânico é

1,4-dioxano. Em algumas modalidades, o solvente é uma mistura de água e um sol- vente orgânico, tal como uma mistura de água e acetonitrila. Em algumas modali- dades, a mistura de dois ou mais solventes compreende de cerca de 10% v/v a cerca de 90% v/v do solvente orgânico. Em algumas modalidades, a mistura compreende de cerca de 40% v/v a cerca de 60% v/v do solvente orgânico, tal como cerca de 50% v/v do solvente orgânico. Em outras modalidades, a mistura compreende de cerca de 20% v/v a cerca de 40% v/v do solvente orgânico, tal como cerca de 30% v/v do solvente orgânico. Em algumas modalidades, o agente terapêutico e o excipiente compreendem menos que 10% p/v da solução precursora, tal como de cerca de 0,5% a cerca de 5% p/v da solução precursora. Em algumas modalidades, o agente tera- pêutico e o excipiente compreendem cerca de 1% p/v da solução precursora. Em outras modalidades, o agente terapêutico e o excipiente compreendem cerca de 3% p/v da solução precursora.

[016] Em algumas modalidades, a superfície está girando. Em algumas mo- dalidades, a temperatura é de cerca de 0 °C a cerca de -200 °C. Em algumas moda- lidades, a temperatura é de cerca de 0 °C a cerca de -120 °C, tal como de cerca de -50 °C a cerca de -90 °C. Em algumas modalidades, a temperatura é de cerca de -60 °C.

Em outras modalidades, a temperatura é de cerca de -125 °C a cerca de -175 °C, tal como cerca de -150 °C. Em algumas modalidades, o solvente é removido a pressão reduzida. Em algumas modalidades, o solvente é removido por meio de liofilização.

Em algumas modalidades, a liofilização é realizada a uma temperatura de liofilização de cerca de -20 °C a cerca de -100 °C, tal como cerca de -40 °C. Em algumas moda- lidades, a pressão reduzida é menos que 250 mTorr, tal como cerca de 100 mTorr.

[017] Em algumas modalidades, os métodos compreendem ainda aquecer a composição farmacêutica a pressão reduzida. Em algumas modalidades, a compo- sição farmacêutica é aquecida a uma temperatura de cerca de 0 °C a cerca de 30 °C, tal como a cerca da temperatura ambiente ou cerca de 25 °C. Em algumas modali-

dades, a pressão reduzida é menos que 250 mTorr, tal como cerca de 100 mTorr. Em algumas modalidades, a pressão reduzida é a mesma que a pressão reduzida durante a liofilização.

[018] Em ainda outro aspecto, a presente divulgação fornece composições farmacêuticas preparadas de acordo com os métodos descritos neste documento.

[019] Outros objetos, características e vantagens da presente invenção tor- narão-se evidentes a partir da seguinte descrição detalhada. Deve ser entendido, no entanto, que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indiquem certas modalidades da invenção, são dados somente a título de ilustração, uma vez que várias mudanças e modificações dentro do espírito e escopo da invenção se tornarão aparentes para aqueles técnicos no assunto a partir desta descrição deta- lhada.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[020] As seguintes figuras fazem parte do presente relatório descritivo e são incluídas para demonstrar ainda certos aspectos da presente invenção. A invenção pode ser melhor compreendida por referência a uma ou mais dessas figuras em combinação com a descrição detalhada de modalidades específicas apresentadas neste documento.

[021] A Figura 1 mostra XRPD de (a) pó de Voriconazol; (b) TFF-VCZ; (c) TFF-VCZ-MAN 95:5; (d) TFF-VCZ-MAN 70:30; (e) TFF-VCZ-MAN 50:50; (f) TFF-MAN.

[022] A Figura 2 mostra DSC modulado de (a) TFF-MAN; (b) TFF-VCZ; (c) TFF-VCZ-MAN 95:5; (d) TFF-VCZ-MAN 50:50.

[023] As Figuras 3A-3J mostram imagens SEM de TFF-VCZ-MAN: (Figura 3A) TFF-VCZ; (Figura 3B) TFF-VCZ-MAN 95:5; (Figura 3C) TFF-VCZ-MAN 70:30; (Figura 3D) TFF-VCZ-MAN 50:50; (Figura 3E) TFF-VCZ-MAN 25:75; (Figura 3F) TFF-MAN; (Figura 3G) TFF-VCZ-MAN em aerossol 95:5; (Figura 3H) TFF-VCZ-MAN em aerossol 50:50; (Figura 31) TFF-VCZ-MAN 25:75, após 5 min em células de Franz; (Figura 3J) TFF-VCZ-MAN 95:5, após 5 min em células de Franz.

[024] As Figuras 4A-4F mostram imagens SEM de: (Figura 4A) TFF-VCZ; (Figura 4B) TFF-VCZ-MAN 95:5, imagem topográfica 3D de: (Figura 4C) TFF-VCZ; (Figura 4D) TFF-VCZ-MAN 95:5, e ilustração da área de contato e distância entre as partículas de: (Figura 4E) TFF-VCZ; (Figura 4F) TFF-VCZ-MAN 95:5.

[025] A Figura 5 mostra a imagem de topografia AFM de TFF-VCZ-MAN 95:5 em aerossol por insuflador DP4.

[026] A Figura 6 mostra SSA de formulações em pó de TFF-VCZ-MAN (n = 3; média ± SD).

[027] As Figuras 7A-7C mostram dados SEM/EDX de TFF-VCZ-MAN 50:50: (Figura 7A) imagem SEM; (Figura 7B) análise elementar do ponto A; (Figura 7C) análise elementar do ponto B.

[028] As Figuras 8A e 8B mostram FT-IR (Figura 8A, região de 3500 cm-1 a 3100 cm-1; Figura 8B, região de 1290 cm-1 a 1230 cm-1) de (a) pó de voriconazol; (b) TFF-VCZ; (c) TFF-VCZ-MAN 95:5; (d) TFF-VCZ-MAN 70:30; (e) TFF-VCZ-MAN 50:50; (f) TFF-MAN.

[029] As Figuras 9A e 9B mostram o espectro CP-MAS 1D de (Figura 9A) TFF-VCZ; e (Figura 9B) TFF-VCZ-MAN 90:10; espectro de 13C (espectro esquerdo) e espectro de 19F (espectro direito).

[030] As Figuras 10A e 10B mostram espectros HETCOR de 2D 1H-13C de (Figura 10A) TFF-VCZ; e (Figura 10B) TFF-VCZ-MAN 90:10.

[031] A Figura 11 mostra FPF (% de medição) de formulações em pó seco de TFF-VCZ-MAN (n = 3; média ± SD).

[032] A Figura 12 mostra o perfil aerodinâmico da distribuição do tamanho de partícula de TFF-VCZ-MAN 95:5 por tempo cisalhado: em 0 min; em 15 min; em 30 min; em 60 min da esquerda para a direita (n = 3; média ± SD).

[033] As Figuras 13A e 13B mostram propriedades aerodinâmicas de TFF-VCZ-MAN 95:5 por tempo cisalhado: (linha a) FPF,% de liberado; (linha b) FPF,% de medido; (linha c) MMAD; e (linha d) GSD (n = 3; média ± SD).

[034] As Figuras 14A e 14B mostram propriedades aerodinâmicas de TFF-VCZ-MAN 95:5 por tempo armazenado a 25 °C/60% de HR: (linha a) FPF,% de liberado; (linha b) FPF,% de medido; (linha c) MMAD; e (linha d) GSD (n = 3; média ± SD).

[035] A Figura 15 mostra a liberação cumulativa de voriconazol (%) de (linha a) TFF-VCZ-PVPK25 25:75 (amorfo); (linha b) TFF-VCZ-MAN 25:75; (linha c) TFF-VCZ-MAN 50:50; (linha d) TFF-VCZ-MAN 95:5 (n = 3; média ± SD).

[036] A Figura 16 mostra imagens do processo de congelamento.

[037] As Figuras 17A-17D mostram imagem de topografia AFM da: (a) for- mulação #2 (escala 5 μm x 5 μm), e (b) formulação #4 (escala 2 μm x 2 μm); e imagem topográfica 3D correspondente da: (c) formulação #2 e (d) formulação #4.

[038] As Figuras 18A-18F mostram imagens SEM de nanoagregados de vo- riconazol: (a) formulação #1, (b) formulação #2, (c) formulação #3, (d) formulação #4, (e) formulação #5 e (f) formulação #6.

[039] As Figuras 19A-19F mostram imagens SEM de nanoagregados de vo- riconazol em aerossol: (a) - (b) formulação #7 e (c) - (f) formulação #6.

[040] A Figura 20 mostra XRPD de (a) pó de voriconazol, (b) TFF-voriconazol, (c) formulação #6 (pequena escala), (d) formulação #6 (grande escala) e (e) TFF-manitol.

DESCRIÇÃO DE MODALIDADES ILUSTRATIVAS

[041] Em alguns aspectos da presente divulgação, as composições farma- cêuticas contêm nanoagregados. Estas composições podem ser preparadas por meio de métodos tais como congelamento de película fina e contêm um agente terapêutico e um excipiente. Em algumas modalidades, essas composições também mostram aerossolização aprimorada ou outras propriedades farmacêuticas são fornecidas.

[042] Também são fornecidos neste documento métodos para preparar e usar essas composições. Os detalhes dessas composições são fornecidos em mais de- talhes abaixo.

I. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

[043] Em alguns aspectos, a presente divulgação fornece composições far- macêuticas contendo um agente terapêutico e um excipiente, em que o excipiente compreende menos que cerca de 10% p/p da composição. Estas composições far- macêuticas podem compreender ainda um ou mais agentes terapêuticos adicionais ou um ou mais excipientes adicionais. Tais composições podem ser preparadas usando métodos como congelamento de película fina. Esses métodos incluem con- gelar uma solução do agente terapêutico e do excipiente em um solvente e, em se- guida, remover esse solvente em pressão reduzida e/ou temperatura reduzida. Mé- todos para preparar composições farmacêuticas usando congelamento de película fina são descritos no Pedido de Patente dos EUA de nº 2010/0221343, Watts, et al., 2013, Engstrom et al. 2008, Wang et al. 2014, Thakkar et el. 2017, O'Donnell et al.

2013, Lang et al. 2014a, Lang et al. 2014b, Carvalho et al. 2014, Beinbom et al. 2012a, Beinborn et al. 2012b, Zhang et al. 2012, Overhoff et al. 2008, Overhoff et al. 2007a, Overhoff et al. 2007b, Watts et al. 2010, Yang et al. 2010, DiNunzio et al. 2008, Yang et al. 2008, Purvis et al. 2007, Liu et al. 2015, Sinswat et al. 2008, e Patente dos EUA de nº 8.968.786, todos incorporados neste documento por referência.

[044] Tais composições farmacêuticas podem estar presentes como um na- noagregado que compreende um conjunto de nanopartículas que são atraídas ou unidas por meio de forças coesivas inter ou intramoleculares. Nas composições far- macêuticas descritas neste documento, os nanoagregados podem compreender uma ou mais partículas do fármaco que é revestido com nano-domínios não contínuos discretos do excipiente. Sem desejar ser limitado por qualquer teoria, acredita-se que os nano-domínios do excipiente podem compreender um tamanho de cerca de 25 nm, 50 nm, 75 nm, 100 nm, 125 nm, 150 nm, 175 nm, 200 nm, 225 nm, 250 nm, 275 nm, 300 nm, 325 nm, 350 nm, 375 nm, 400 nm, 425 nm, 450 nm, 475 nm, 500 nm, 525 nm, 550 nm, 575 nm, 600 nm, 625 nm, ou 650 nm, ou qualquer faixa derivável dos mesmos. O tamanho destes nano-domínios do excipiente compreende um tamanho de cerca de 25 nm a cerca de 750 nm, de cerca de 50 nm a cerca de 500 nm, ou de cerca de 100 nm a cerca de 200 nm. Sem desejar ser limitado por qualquer teoria, acredita-se que esses nano-domínios podem estar presentes como composições discretas pontilhando a superfície de um nanoagregado que compreende o agente terapêutico. As composições farmacêuticas podem compreender ainda um diâmetro aerodinâmico médio de massa de cerca de 2,5 μm a cerca de 7,5 μm, de cerca de 3,0 μm a cerca de 6,0 μm, de cerca de 4,0 μm a cerca de 6,0 μm, ou de cerca de 2,5, 2,75, 3,0, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,25, 4,5, 4,75, 5, 5,25, 5,5, 5,75, 6,0, 6,25, 6,5, 6,75, 7,0, 7,25, a cerca de 7,5 μm ou qualquer faixa derivável dos mesmos.

A. AGENTE TERAPÊUTICO

[045] O "agente terapêutico" usado nos presentes métodos e composições refere-se a qualquer substância, composto, fármaco, medicamento ou outro ingredi- ente ativo primário que fornece um efeito terapêutico ou farmacológico quando ad- ministrado a um ser humano ou animal. Quando um agente terapêutico está presente na composição, o agente terapêutico está presente na composição em um nível entre cerca de 50% a cerca de 99% p/p, entre cerca de 70% a cerca de 99% p/p, entre cerca de 90% a cerca de 97% p/p, ou entre cerca de 95% a cerca de 97% p/p da composição total. Em algumas modalidades, a quantidade do agente terapêutico é de cerca de 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, a cerca de 99% p/p ou qualquer faixa derivável dos mesmos.

[046] Os agentes terapêuticos lipofílicos adequados podem ser quaisquer agentes pouco solúveis em água, biologicamente ativos ou um sal, isômero, éster,

éter ou outro derivado dos mesmos, que incluem, mas não estão limitados a, agentes anticâncer, agentes antifúngicos, agentes psiquiátricos, tais como analgésicos, agentes que alteram o nível de consciência, tais como agentes anestésicos ou hipnóticos, agentes anti-inflamatórios não esteróides (NSAIDS), anti-helmínticos, agentes antiacne, agentes antianginosos, agentes antiarrítmicos, agentes anti-asma, agentes antibacterianos, agentes anti-hipertrofia benigna da próstata, anticoagulan- tes, antidepressivos, antidiabéticos, antieméticos, antiepiléticos, agentes an- ti-inflamatórios, agentes anti-inflamatórios, antimaláricos, agentes antienxaqueca, agentes antimuscarínicos, agentes antineoplásicos, agentes antiobesidade, agentes antiosteoporose, agentes antiparkinsonianos, agentes antiproliferativos, agentes an- tiprotozoários, agentes antitireoidianos, agentes antitussígenos, agentes an- ti-incontinência urinária, agentes antivirais, agentes ansiolíticos, supressores beta de apetite, beta agonistas, beta bloqueadores, agentes inotrópicos cardíacos, fármacos quimioterápicos, intensificadores da cognição, contraceptivos, corticosteroides, ini- bidores de Cox-2, diuréticos,, agentes de melhoria da disfunção erétil, expectorantes, agentes gastrointestinais, antagonistas do receptor de histamina, imunossupressores, queratolíticos, agentes reguladores de lipídios, inibidores de leucotrieno, macrolídeos, relaxantes musculares, neurolépticos, agentes nutricionais, opióides analgésicos, inibidores de protease ou sedativos.

[047] Exemplos não limitantes dos agentes terapêuticos podem incluir 7-Metoxipteridina, 7-Metilpteridina, abacavir, abafungina, abarelix, acebutolol, ace- nafteno, acetaminofeno, acetanilida, acetazolamida, aceto-hexamida, acetretina, acrivastina, adenina, adenosina, alatrofloxacina, albendazol, albuterol, alclofenaco, aldesleucina, alemtuzumabe, alfuzosina, alitretinoina, alobarbital, alopurinol, ácido transretinóico (ATRA), aloxiprina, alprazolam, alprenolol, altretamina, amifostina, amilorida, aminoglutetimida, aminopirina, HCl de amiodarona, amitriptilina, amlodipi- na, amobarbital, amodiaquina, amoxapina, amfetamina, amfotericina, amfotericina B,

ampicilina, amprenavir, amsacrina, amilnitrato, amilobarbitona, anastrozol, anrinona,

antraceno, antraciclinas, aprobarbital, trióxido de arsênico, asparaginase, aspirina,

astemizol, atenolol, atorvastatina, atovaquona, atrazina, atropina, atropina azatiopri-

na, auranofina, azacitidina, azapropazona, azatioprina, azintamida, azitromicina,

aztreonam, baclofeno, barbitona, BCG vivo, beclamida, beclometasona, bendroflu-

metiazida, benezepril, benidipina, benorilato, benperidol, bentazepam, benzamida,

benzantraceno, benzatina penicilina, HCl de benz-hexol, benznidazol, benzodiaze-

pinas, ácido benzóico, hidroxinaftoato de befenio, betametasona, bevacizumabe

(avastin), bexaroteno, bezafibrato, bicalutamida, bifonazol, biperidan, bisacodil, bi-

santreno, bleomicina, bleomicina, bortezomibe, brinzolamida, bromazepam, mesilato de bromocriptina, bromperidol, brotizolam, budesonida, bumetanida, bupropion,

bussulfano, butalbital, butambeno, HCl de butenafina, butobarbitona, butobarbitona

(butetal), butoconazol, nitrato de butoconazol, butilparabeno, cafeína, calcifediol, cal-

ciprotrieno, calcitriol, calusterona, cambendazol, cânfora, camptotecina, análogos de camptotecina, candesartan, capecitabina, capsaicina, captopril, carbamazepina, car-

bimazol, carbofurano, carboplatina, carbromal, carimazol, carmustina, cefamandol,

cefazolina, cefixima, ceftazidima, axetilcefuroxima, celecoxibe, cefradina, cerivasta-

tina, cetrizina, cetuximabe, clorambucil, cloramfenicol, clordiazepoxida, clormetiazol,

cloroquina, clorotiazida, clorfeniramina, HCl de clorproguanil, clorpromazina, clor-

propamida, clorprotixeno, clorpirifos, clortetraciclina, clortalidona, clorzoxazona, co-

lecalciferol, criseno, cilostazol, cimetidina, cinnarizina, cinoxacina, ciprofibrato, HCl de ciprofloxacina, cisaprida, cisplatina, citalopram, cladribina, claritromicina, fumarato de clemastina, clioquinol, clobazam, clofarabina, clofazimina, clofibrato, citrato de clomifeno, clomipramina, clonazepam, clopidogrel, clotiazepam, clotrimazol, clotri-

mazol, cloxacilina, clozapina, cocaína, codeína, colcicina, colistina, estrogênios con-

jugados, corticosterona, cortisona, acetato de cortisona, ciclizina, ciclobarbital, ci-

clobenzaprina, ciclobutane-spirobarbiturato, cicloetane-spirobarbiturato, ci-

clo-cicloetano-espirobarbiturato, ciclo-hexano-espirobarbiturato, ciclopenta-

no-espirobarbiturato, ciclofosfamida, ciclopropano-espirobarbiturato, cicloserina, ci-

cloesporina, cipro-heptadina, HCl de cipro-heptadina, citarabina, citosina, dacarba-

zina, dactinomicina, danazol, dantron, dantrolene sódico, dapsona, darbepoetina alfa,

darodipina, daunorubicina, decoquinato, desidroepiandrosterona, delavirdina, deme-

clociclina, denileucina, deoxicorticosterona, desoximetasona, dexametasona, de-

xamfetamina, dexclorfeniramina, dexfenfluramina, dexrazoxano, dextropropoxifeno,

diamorfina, ácido diatrizóico, diazepam, diazoxida, diclorofeno, diclorprop, diclofe-

naco, dicumarol, didanosina, diflunisal, digitoxina, digoxina, di-hidrocodeína,

di-hidroequilina, mesilato de di-hidroergotamina, di-iodo-hidroxiquinolina, HCl de dil-

tiazem, furoato de diloxamida, dimen-hidrinato, dimorfolamina, dinitolmida, diosge-

nina, HCl de difenoxilato, difenil, dipiridamol, diritromicina, disopiramida, disulfiram,

diuron, docetaxel, domperidona, donapezil, doxazosina, HCl de doxazosina, doxoru-

bicina (neutro), HCl de doxorubicina, doxiciclina, propionato de dromostanolona,

droperidol, difilina, equinocandina, econazol, nitrato de econazol, efavirenz, elipticina,

enalapril, enlimomabe, enoximona, epinafrina, derivados de epipodofilotoxina, epiru-

bicina, epoetinalfa, eposartan, equilenina, equilina, ergocalciferol, tartrato de ergota-

mina, erlotinibe, eritromicina, estradiol, estramustina, estriol, estrona, ácido etacrínico,

etambutol, etinamato, etionamida, HCl de etopropazina, etil-4-aminobenzoato (ben-

zocaína), etilparabeno, etinilestradiol, etodolaco, etomidato, etoposida, etretinato,

exemestano, felbamato, felodipina, fenbendazol, fenbuconazol, fenbufeno, fenclorfos,

fenclofenaco, fenfluramina, fenofibrato, fenoldepam, cálcio de fenoprofeno, fenoxi-

carbe, fenpiclonil, fentanil, fenticonazol, fexofenadina, filgrastim, finasterida, acetato de flecamida, floxuridina, fludarabina, fluconazol, fluconazol, flucitosina, fludioxonil,

fludrocortisona, acetato de fludrocortisona, ácido flufenâmico, flunanisona, HCl de flunarizina, flunisolida, flunitrazepam, fluocortolona, fluometuron, fluoreno, fluorouracil,

HCl de fluoxetina, fluoximesterona, decanoato de flupentixol, decanoato de flufentixol,

flurazepam, flurbiprofeno, propionato de fluticasona, fluvastatina, ácido fólico, fose-

nopril, fosfenitoína sódica, frovatriptan, furosemida, fulvestrant, furazolidona, gaba-

pentina, G-BHC (Lindane), gefitinibe, gemcitabina, gemfibrozil, gemtuzumabe, glafe-

nina, glibenclamida, gliclazida, glimepirida, glipizida, glutetimida, gliburida, Gliceriltri-

nitrato (nitroglicerina), acetato de goserelina, grepafloxacina, griseofulvina, guaifene-

sina, acetato de guanabenzo, guanina, HCl de halofantrina, haloperidol, hidrocloroti-

azida, heptabarbital, heroína, hesperetina, hexaclorobenzeno, hexetal, acetato de histrelina, hidrocortisona, hidroflumetiazida, hidroxiurea, hiosciamina, hipoxantina,

ibritumomabe, ibuprofeno, idarubicina, idobutal, ifosfamida, i-hidroequilenina, mesilato de imatinibe, imipenem, indapamida, indinavir, indometacina, indoprofeno, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, iodamida, ácido iopanoico, iprodiona, irbesartan, irinote-

cano, isavuconazol, isocarboxazida, isoconazol, isoguanina, isoniazida, isopropilbar-

biturato, isoproturon, dinitrato de isosorbida, mononitrato de isosorbida, isradipina,

itraconazol, itraconazol, itraconazol (Itra), ivermectina, cetoconazol, cetoprofeno, ce-

torolac, celina, labetalol, lamivudina, lamotrigina, lanatosida C, lanosprazol, L-DOPA,

leflunomida, lenabdomida, letrozol, leucovorina, acetato de leuprolida, levamisol, le-

vofloxacina, lidocaina, linuron, lisinopril, lomefloxacina, lomustina, loperamida, lora-

tadina, lorazepam, lorefloxacina, lormetazepam, mesilatode losartan, lovastatina,

maleato de lisurida, HCl de maprotilina, mazindol, mebendazol, HCl de meclizina,

ácido meclofenâmico, medazepam, medigoxina, acetato de medroxiprogesterona,

ácido mefenâmico, HCl de mefloquina, acetato de megestrol, melfalan, bromida de mepenzolato, meprobamato, meptazinol, mercaptopurina, mesalazina, mesna, me-

soridazina, mestranol, metadona, metaqualona, metocarbamol, metoina, metotrexato,

metoxsaleno, metsuximida, meticlotiazida, metilfenidato, metilfenobarbitona, me-

til-p-hidroxibenzoato, metilprednisolona, metiltestosterona, metiprilon, metisergida maleato, metoclopramida, metolazona, metoprolol, metronidazol, HCl de mianserina,

miconazol, midazolam, mifepristona, miglitol, minociclina, inoxidil, mitomicina C, mi-

totano, mitoxantrona, mofetilmicofenolato, molindona, montelucaste, morfina, HCl de moxifloxacina, nabumetona, nadolol, nalbufina, ácido nalidíxico, nandrolona, nafta-

ceno, naftaleno, naproxeno, HCl de naratriptano, natamicina, nelarabina, nelfinavir,

nevirapina, HCl de nicardipina, amida de nicotina, ácido nicotinico, nicoumalona, ni-

fedipina, nilutamida, nimodipina, nimorazol, nisoldipina, nitrazepam, nitrofurantoina,

nitrofurazona, nizatidina, nofetumomabe, noretisterona, norfloxacina, norgestrel, HCl de nortriptilina, nistatina, oestradiol, ofloxacina, olanzapina, omeprazol, omoconazol,

HCl de ondansetrona, oprelvecina, omidazol, oxaliplatina, oxamniquina, oxantelem-

bonato, oxaprozina, oxatomida, oxazepam, oxcarbazepina, oxfendazol, oxiconazol,

oxprenolol, oxifenbutazona, HCl de oxifenciclimina, paclitaxel, palifermina, pamidro-

nato, ácido p-aminossalicílico, pantoprazol, parametadiona, HCl de paroxetina, pe-

gademase, pegaspargase, pegfilgrastim, pemetrexede dissódico, penicilamina, te-

tranitrato de pentaeritritol, pentazocina, pentazocina, pentobarbital, pentobarbitona,

pentostatina, pentoxifilina, perfenazina, pimozidade perfenazina, perileno, fena-

cemida, fenacetina, fenantreno, fenindiona, fenobarbital, fenolbarbitona, fenolftaleina,

fenoxibenzamina, HCl de fenoxibenzamina, penicilina de fenoximetila, fensuximida,

fenilbutazona, fenitoina, pindolol, pioglitazona, pipobromano, piroxicam, maleato de pizotifeno, compostos de platina, plicamicina, polienos, polimixina B, porfímero sódico,

posaconazol (Posa), pramipexol, prasterona, pravastatina, praziquantel, prazosina,

HCl de prazosina, prednisolona, prednisona, primidona, probarbital, probenecida,

probucol, procarbazina, proclorperazina, progesterona, HCl de proguanila, prometa-

zina, propofol, propoxur, propranolol, propilparabeno, propiltiouracila, prostaglandina,

pseudoefedrina, pteridina-2-metil-tiol, pteridina-2-tiol, pteridina-4-metil-tiol, pteridi-

na-4-tiol, pteridina-7-meti 1-tiol, pteridina-7-tiol, pirantelembonato, pirazinamida, pi-

reno, piridostigmina, pirimetamina, quetiapina, quinacrina, quinaprila, quinidina, sul-

fato de quinidina, quinina, quininasulfato, rabeprazol sódico, HCl de ranitidina, rasbu-

ricase, ravuconazol, repaglinida, reposal, reserpina, retinóides, rifabutina, rifampicina,

rifapentina, rimexolona, risperidona, ritonavir, rituximab, benzoato de rizatriptan, ro- fecoxib, HCl de ropinirol, rosiglitazona, saccarina, salbutamol, salicilamida, ácido sa- licílico, saquinavir, sargramostim, secbutabarbital, secobarbital, sertaconazol, sertin- dol, HCl de sertralina, simvastatina, sirolimus, sorafenib, sparfloxacina, spiramicina, spironolactona, stanolona, stanozolol, stavudina, stilbestrol, streptozocina, stricnina, sulconazol, nitrato de sulconazol, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfamerazina, sulfa- metazina, sulfametoxazol, sulfanilamida, sulfatiazol, sulindaco, sulfabenzamida, sul- facetamida, sulfadiazina, sulfadoxina, sulfafurazol, sulfamerazina, sulfa-metoxazol, sulfapiridina, sulfasalazina, sulfinpirazona, sulpirida, sultiame, succinato de suma- triptano, maleato de sunitinibe, tacrina, tacrolimus, talbutal, citrato de tamoxifen, ta- mulosina, targretina, taxanos, tazaroteno, telmisartan, temazepam, temozolomida, teniposida, tenoxicam, terazosina, HCl de terazosina, HCl de terbinafina, sulfato de terbutalina, terconazol, terfenadina, testolactona, testosterona, tetraciclina, te- tra-hidrocannabinol, tetroxoprim, talidomida, tebaina, teobromina, teofilina, tiaben- dazol, tiamfenicol, tioguanina, tioridazina, tiotepa, totoina, timina, HCl de tiagabina, tibolona, ticlopidina, tinidazol, tioconazol, tirofibano, HCl de tizanidina, tolazamida, tolbutamida, tolcapona, topiramato, topotecano, toremifeno, tositumomabe, tramadol, trastuzumabe, HCl de trazodona, tretinoina, triamcinolona, triamtereno, triazolam, triazóis, triflupromazina, trimetoprima, maleato de trimipramina, trifenileno, troglita- zona, trometamina, tropicamida, trovafloxacina, tibamato, ubidacarenona (coenzima Q10), ácido undecenóico, uracila, mostarda de uracila,ácido úrico, ácido valpróico, valrubicina, valsartan, vancomicina, HCl de venlafaxina, vigabatrina, vinbarbital, vin- blastina, vincristina, vinorelbina, voriconazol, xantina, zafirlukast, zidovudina, zileuton, zoledronato, ácido zoledrônico, zolmitriptano, zolpidem, e zopiclona.

[048] Em aspectos particulares, os agentes terapêuticos podem ser vorico- nazol ou outros membros da classe geral de compostos azólicos. Azóis antifúngicos exemplares incluem a) imidazóis, tais como miconazol, cetoconazol, clotrimazol,

econazol, omoconazol, bifonazol, butoconazol, fenticonazol, isoconazol, oxiconazol, sertaconazol, sulconazol e tioconazol, b) triazóis, tais como fluconazol, itraconazol, isavuconazol, ravuconazol, posaconazol, voriconazol, terconazol e c) tiazóis, tais como a abafungina. Outras fármacos que podem ser usados com esta abordagem incluem, mas não estão limitadas a, fármacos hipertireoides, tais como carimazol, agentes anticâncer, como agentes citotóxicos, tais como derivados de epipodofiloto- xina, taxanos, bleomicina, antracidinas, bem como compostos de platina e análogos de camptotecina. Os seguintes agentes terapêuticos também podem incluir outros antibióticos antifúngicos, tais como equinocandinas pouco solúveis em água, polienos (por exemplo, anfotericina B e natamicina), bem como agentes antibacterianos (por exemplo, polimixina B e colistina) e fármacos antivirais. Os agentes também podem incluir um agente psiquiátrico, tal como um agente antipsicótico, antidepressivo ou analgésico e/ou tranquilizante, tais como os benzodiazepínicos. Os agentes também podem incluir um agente de alteração do nível de consciência ou um agente anesté- sico, tal como o propofol. As presentes composições e os métodos para prepará-las podem ser usados para preparar composições farmacêuticas com as propriedades farmacocinéticas apropriadas para uso como terapêutica.

[049] Em algumas modalidades, as composições descritas neste documento podem incluir um agonista β de ação prolongada (LABA). Alguns exemplos não limi- tantes de agonista β de ação prolongada incluem formoterol, tal como fumarato de formoterol, salmeterol, tal como xinafoato de salmeterol, bambuterol, clenbuterol, indacaterol, olodaterol, protokylol, abediterol, salmefamol, vilanterol, arformoterol, carmoterol, PF-610355, GSK-159797, GSK-597901, GSK-159802, GSK-642444, GSK-678007 ou outro agonista β de ação prolongada conhecido na técnica.

[050] Em outras modalidades, a composição descrita neste documento pode incluir um antagonista muscarínico de ação prolongada (LAMA). Alguns exemplos não limitantes de antagonista muscarínico de ação prolongada incluem sais de tiotrópio,

aclidínio, dexpirronium, ipratropium, oxitropium, darotropium, glicopirrônio, ou deri- vado de glicopirrolato ou outro antagonista muscarínico de ação prolongada conhe- cido na técnica, tal como aqueles ensinados pelo Pedido de Patente dos EUA de nº 2009/0181935, Pedido de Patente PCT de nº WO 2010/007561 e Pedido de Patente PCT d nº WO 2008/035157, que são incorporados neste documento por referência.

[051] Em outras modalidades, as composições descritas neste documento podem incluir um corticosteroide, especificamente um corticosteroide adequado para inalação. Alguns exemplos não limitantes de corticosteroide incluem dipropionato de beclometasona, budesonida, flunisolida, propionato de fluticasona, furoato de fluti- casona, furoato de mometasona, ciclesonida, palmitato de rofleponida, acetonido de triancinolona ou outro corticosteroide conhecido na técnica.

[052] Em outras modalidades, a composição descrita neste documento pode compreender um ou mais agentes antibióticos. Algumas classes de antibióticos in- cluem penicilinas, cefalosporinas, carbapenêmicos, macrolídeos, aminoglicosídeos, quinolonas (incluindo fluoroquinolonas), sulfonamidas e tetracilcinas. Em algumas modalidades, as composições podem compreender um antibiótico de espectro es- treito que direciona um tipo específico de bactéria. Em alguns exemplos não limitantes de antibióticos bactericidas incluem penicilina, cefalosporina, polimixina, rifamicina, lipiarmicina, quinolonas e sulfonamidas. Em alguns exemplos não limitantes de anti- bióticos bacteriostáticos incluem macrolídeos, lincosamidas ou tetraciclinas. Em al- gumas modalidades, o antibiótico é um aminoglicosídeo, tal como canamicina e es- treptomicina, uma ansamicina, tal como rifaximina e geldanamicina, um carbacefema, tal como loracarbef, um carbapenem, tal como ertapenem, imipenem, uma cefalos- porina, tal como cefalexina, cefixima, cefepima e ceftobiprol, um glicopeptídeo, tal como vancomicina ou teicoplanina, uma lincosamida, tal como lincomicina e clinda- micina, um lipopeptídeo, tal como daptomicina, um macrolídeo, tal como claritromi- cina, espiramicina, azitromicina e telitromicina, um monobactame, tal como aztreo-

nam, um nitrofurano, tal como furazolidona e nitrofurantoína, uma oxazolidonona, tal como linezolida, uma penicilina, tal como amoxicilina, azlocilina, flucloxacilina e pe- nicilina G, um polipeptídeo antibiótico, tal como bacitracina, polimixina B e colistina, uma quinolona, tal como ciprofloxacina, levofloxacina e gatifloxacina, uma sulfona- mida, tal como sulfadiazina de prata, mefenida, sulfadimetoxina ou sulfasalazina, ou uma tetraciclina, tal como demeclociclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina ou tetraciclina. Em algumas modalidades, as composições compreendem um fármaco que atua contra micobactérias, tais como cicloserina, capreomicina, etionamida, ri- fampicina, rifabutina, rifapentina e estreptomicina. Outros antibióticos que são con- templados podem incluir arsfenamina, cloranfenicol, fosfomicina, ácido fusídico, me- tronidazol, mupirocina, platensimicina, quinupristina, dalfopristina, tianfenicol, tigeci- clina, tinidazol ou trimetoprima.

[053] Em algumas modalidades, as composições podem compreender ainda um ou mais agentes antifúngicos, tais como aqueles descritos acima. Alguns agentes antifúngicos incluem, mas não estão limitados a, anfotericina B, um composto anti- fúngico azol, equinocandinas ou flucitosina. Alguns exemplos não limitantes de compostos antifúngicos azólicos incluem a) imidazóis, tais como miconazol, cetoco- nazol, clotrimazol, econazol, omoconazol, bifonazol, butoconazol, fenticonazol, iso- conazol, oxiconazol, sertaconazol, sulconazol e tioconazol, b) triazóis, tais como flu- conazol, itraconazol, isavuconazol, ravuconazol, posaconazol, voriconazol, terconazol e c) tiazóis, tais como abafungina.

[054] Em algumas modalidades, a composição pode compreender ainda um ou mais agentes antivirais, tais como análogos de nucleosídeos, tais como aciclovir, famciclovir, valaciclovir, penciclovir e ganciclovir ou outros agentes antivirais, tais como interferon peguilado, interferon alfa-2b, lamivudina, adefovir, telbivudina, en- tercavir ou tenofovir.

B. EXCIPIENTES

[055] Em alguns aspectos, a presente divulgação compreende um ou mais excipientes formulados em composições farmacêuticas. Em algumas modalidades, os excipientes usados neste documento são excipientes solúveis em água. Esses exci- pientes solúveis em água incluem sacarídeos, tais como dissacarídeos, tais como sacarose, trealose ou lactose, um trissacarídeo, tal como frutose, glicose, glacatose ou rafmose, polissacarídeos, tais como amidos ou celulose, ou um álcool de açúcar, tal como xilitol, sorbitol ou manitol. Em algumas modalidades, esses excipientes são sólidos à temperatura ambiente. Alguns exemplos não limitantes de álcoois de açúcar incluem eritritol, treitol, arabitol, xilitol, ribitol, manitol, sorbitol, galactitol, fucitol, iditol, inositol, volemitol, isomalte, maltitol, lactitol, maltotritol, maltotetraitol ou um poliglicitol.

Em alguns aspectos, as presentes composições farmacêuticas podem excluir ainda um excipiente hidrofóbico ou ceroso, tal como ceras e óleos. Alguns exemplos não limitantes de excipientes hidrofóbicos incluem óleos hidrogenados e óleos parcial- mente hidrogenados, óleo de palma, óleo de soja, óleo de rícino, cera de carnaúba, cera de abelha, cera de palma, cera branca, cera de rícino ou lanolina. Além disso, a presente divulgação pode compreender ainda um ou mais aminoácidos ou um deri- vado de amida ou éster dos mesmos. Em algumas modalidades, os aminoácidos usados podem ser um dos 20 aminoácidos canônicos, tais como glicina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina, triptofano, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico ou ácido glutâmico. Estes aminoácidos podem estar na orientação D ou L ou os aminoácidos podem ser aminoácidos α-, β-, γ- ou δ-. Em outras modali- dades, um dos aminoácidos não canônicos comuns pode ser usado, tal como carni- tina, GABA, ácido carboxiglutâmico, levotiroxina, hidroxiprolina, seleonmetionina, beta alanina, ornitina, citrulina, deidroalanina, ácido δ-aminolevulínico ou ácido 2-aminoisobutírico.

[056] Em alguns aspectos, a quantidade do excipiente na composição far-

macêutica é de cerca de 0,5% a cerca de 10% p/p, de cerca de 1% a cerca de 10% p/p, de cerca de 2% a cerca de 8% p/p, ou de cerca de 2% a cerca de 5% p/p. A quantidade do excipiente na composição farmacêutica compreende cerca de 0,5%, 0,75%, 1%, 1,25%, 1,5%, 1,75%, 2%, 2,5%, 3%, 3,5%, 4%, 4,5%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, a cerca de 10% p/p, ou qualquer faixa derivável dos mesmos, da composição farmacêutica total. Em uma modalidade, a quantidade do excipiente na composição farmacêutica é de 2% a 5% p/p do peso total da composição farmacêutica.

II. MÉTODOS PARA FABRICAÇÃO

[057] Assim, em um aspecto, a presente divulgação fornece composições farmacêuticas que podem ser preparadas usando um processo de congelamento de película fina. Tais métodos são descritos no Pedido de Patente dos EUA de nº 2010/0221343 e Watts, et al., 2013, ambos incorporados neste documento por refe- rência. Em algumas modalidades, esses métodos envolvem a dissolução dos com- ponentes da composição farmacêutica em um solvente para formar uma solução precursora. Os solventes podem ser água ou um solvente orgânico. Alguns exemplos não limitantes de solventes orgânicos que podem ser usados incluem solvente orgâ- nico volátil, tal como 1,4-dioxano, acetonitrila, acetona, metanol, etanol, isopropanol, diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, álcool terc-butílico, dimetilsulfóxido, N,N-dimetilformamida, éter dietílico, acetato de etila, acetato de isopropila, acetato de butila, acetato de propila, tolueno, hexanos, heptano, pentano ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, a solução precursora pode conter menos que 10% p/v do agente terapêutico e excipiente. A solução precursora pode conter menos que 0,5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou 10% p/v, ou qualquer faixa de- rivável dos mesmos.

[058] Esta solução precursora pode ser depositada sobre uma superfície que está a uma temperatura que faz com que a solução precursora congele. Em algumas modalidades, esta temperatura pode estar abaixo do ponto de congelamento da so-

lução à pressão ambiente. Em outras modalidades, uma pressão reduzida pode ser aplicada à superfície fazendo com que a solução congele a uma temperatura abaixo do ponto de congelamento da pressão ambiente. A superfície também pode girar ou se mover em um sistema do tipo transportador móvel, permitindo que a solução de precursor se distribua uniformemente na superfície. Alternativamente, a solução precursora pode ser aplicada à superfície de tal modo a gerar uma superfície uni- forme.

[059] Após a solução precursora ter sido aplicada à superfície, o solvente pode ser removido para se obter uma composição farmacêutica. Qualquer método apropriado de remoção do solvente pode ser aplicado incluindo evaporação sob pressão reduzida ou temperatura elevada ou liofilização. Em algumas modalidades, a liofilização pode compreender uma pressão reduzida e/ou uma temperatura reduzida.

Tal temperatura reduzida pode ser de 25 °C a cerca de -200 °C, de 20 °C a cerca de -175 °C, de cerca de 20 °C a cerca de -150 °C, de 0 °C a cerca de -125 °C, de -20 °C a cerca de -100 °C, de -75 °C a cerca de -175 °C, ou de -100 °C a cerca de -160 °C. A temperatura é de cerca de -20 °C, -30 °C, -35 °C, -40 °C, -45 °C, -50 °C, -55 °C, -60 °C, -70 °C, -80 °C, -90 °C, -100 °C, -110 °C, -120 °C, -130 °C, -140 °C, -150 °C, -160 °C, -170 °C, -180 °C, -190 °C, a cerca de -200 °C, ou qualquer faixa derivável dos mes- mos. Além disso, o solvente pode ser removido a uma pressão reduzida de menos que 500 mTorr, 450 mTorr, 400 mTorr, 375 mTorr, 350 mTorr, 325 mTorr, 300 mTorr, 275 mTorr, 250 mTorr, 225 mTorr, 200 mTorr, 175 mTorr, 150 mTorr, 125 mTorr, 100 mTorr, 75 mTorr, 50 mTorr ou 25 mTorr.

[060] A composição preparada usando estes métodos pode apresentar uma natureza quebradiça de tal modo que a composição seja facilmente cisalhada em partículas menores quando processada através de um dispositivo. Essas composi- ções têm áreas de superfície elevadas, bem como exibem fluidez melhorada da composição. Tal fluidez pode ser medida, por exemplo, pelo índice de Carr ou outras medições semelhantes. Em particular, o índice de Carr pode ser medido comparando a densidade aparente do pó com a densidade compactada do pó. Tais compostos podem exibir um índice de Carr favorável e podem resultar nas partículas sendo melhor cortadas para se obter partículas menores quando a composição é proces- sada através de um dispositivo secundário para liberar o fármaco.

III. DEFINIÇÕES

[061] O uso da palavra "um" ou "uma" quando usado em conjunto com o termo "compreendendo" nas reivindicações e/ou no relatório descritivo pode significar "um", mas também é consistente com o significado de "um ou mais", "pelo menos um" e “um ou mais de um”. Conforme usado neste documento, "outro" pode significar pelo menos um segundo ou mais.

[062] Confirme usado neste documento, os termos "fármaco", "farmacêutico", "agente terapêutico" e "agente terapeuticamente ativo" são usados de forma inter- cambiável para representar um composto que invoca um efeito terapêutico ou far- macológico em um humano ou animal e é usado para tratar um doença, distúrbio ou outra condição. Em algumas modalidades, esses compostos foram submetidos e receberam aprovação regulamentar para administração a uma criatura viva.

[063] O uso do termo "ou" nas reivindicações é usado para significar "e/ou", a menos que explicitamente indicado para se referir a alternativas somente ou as al- ternativas são mutuamente exclusivas. Conforme usado neste documento, "outro" pode significar pelo menos um segundo ou mais.

[064] Conforme usado neste relatório descritivo e reivindicação(ões), as pa- lavras "compreendendo" (e qualquer forma de compreendendo, tal como "compre- ender" e "compreende"), "tendo" (e qualquer forma de tendo, tal como "ter" e "tem"), "incluindo" (e qualquer forma de incluindo, tal como "incluir" e "inclui") ou "contendo" (e qualquer forma de contendo, tal como "conter" e "contém") são inclusivos ou em aberto e não excluem elementos ou etapas de método adicionais não solicitados.

[065] Conforme usado neste relatório descritivo, o termo "significativo" (e qualquer forma de significativo, tal como "significativamente") não se destina a im- plicar diferenças estatísticas entre dois valores, mas somente a implicar a importância ou o escopo da diferença do parâmetro.

[066] Conforme usado neste documento no relatório descritivo e nas reivin- dicações, o termo "cerca de" é usado para indicar que um valor inclui a variação inerente de erro para o dispositivo, o método sendo empregado para determinar o valor ou a variação que existe entre os pacientes do estudo. A menos que outra de- finição seja aplicável, o termo “cerca de” refere-se a ± 10% do valor indicado.

[067] Conforme usado neste documento, "essencialmente livre", em termos de um componente especificado, é usado neste documento para significar que ne- nhum dos componentes especificados foi propositalmente formulado em uma com- posição e/ou está presente somente como contaminante ou em pequenas quanti- dades. A quantidade total de todas as contenções, subprodutos e outros materiais está presente nessa composição em uma quantidade menor que 2%. O termo "mais substancialmente livre de" ou "mais substancialmente livre" é usado para representar que a composição contém menos que 1% do componente específico. O termo "es- sencialmente livre de" ou "essencialmente livre" contém menos que 0,5% do com- ponente específico.

[068] Conforme usado neste documento, o termo "domínio" refere-se a uma área específica da composição que compreende substancialmente um único material distinto em características dos outros componentes da composição. Um “domínio discreto” refere-se a uma área individual da composição que é diferente e separada de cada área da composição. O domínio pode consistir substancialmente em um único elemento da composição. Esses domínios podem ser não contínuos, de tal modo que os domínios discretos estejam presentes como vários domínios que não se tocam.

[069] Conforme usado neste documento, o termo "nanopartícula" tem sua definição usual e comum e refere-se a partículas discretas que se comportam como uma unidade inteira, em vez de moléculas individuais dentro da partícula. Uma na- nopartícula pode ter um tamanho de cerca de 1 a cerca de 10.000 nm com nanopar- tículas ultrafinas tendo um tamanho de 1 nm a 100 nm, partículas finas tendo um tamanho de 100 nm a 2.500 nm e partículas grossas tendo um tamanho de 2.500 nm a 10.000 nm. Em algumas modalidades, os nanoagregados descritos neste docu- mento podem compreender uma composição de múltiplas nanopartículas e ter um tamanho de cerca de 10 nm a cerca de 100 μm.

[070] Apesar de as faixas numéricas e parâmetros que estabelecem o amplo escopo da invenção serem aproximações, os valores numéricos apresentados nos exemplos específicos são relatados tão precisamente quanto possível. Qualquer valor numérico, no entanto, contém inerentemente certos erros necessariamente resul- tantes do desvio padrão encontrado em suas respectivas medições e parâmetros de teste.

[071] Outros objetos, características e vantagens da presente invenção tor- narão-se evidentes a partir da seguinte descrição detalhada. Deve ser entendido, no entanto, que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indiquem certas modalidades da invenção, são dados somente a título de ilustração, uma vez que várias mudanças e modificações dentro do espírito e escopo da invenção se tornarão aparentes para aqueles técnicos no assunto a partir desta descrição deta- lhada.

IV. EXEMPLOS

[072] Para facilitar uma melhor compreensão da presente divulgação, os seguintes exemplos de modalidades específicas são dados. Deve ser apreciado por aqueles técnicos no assunto que as técnicas divulgadas nos exemplos que seguem representam técnicas descobertas pelo inventor para funcionar bem na prática da invenção e, portanto, podem ser consideradas como constituindo modos preferidos para sua prática. No entanto, aqueles técnicos no assunto devem, à luz da presente divulgação, apreciar que muitas alterações podem ser feitas nas modalidades espe- cíficas que são divulgadas e ainda obter um resultado similar ou semelhante sem se afastar do espírito e do escopo da invenção. De forma alguma os exemplos a seguir devem ser lidos para limitar ou definir todo o escopo da divulgação.

EXEMPLO 1 - DISCUSSÃO E RESULTADOS A. PROPRIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE FORMULAÇÕES EM PÓ SECO DE

VORICONAZOL

[073] A tecnologia TFF foi usada para produzir formulações em pó de voriconazol cristalino contendo manitol (vide Tabela 1). XRPD e mDSC foram empregados principalmente para determinar a cristalinidade das formulações. As formulações em pó de TFF-VCZ incluindo manitol foram identificadas como cristalinas, conforme mostrado nas Figuras 1 e 2. As formulações em pó de TFF-VCZ-MAN exibiram picos de voriconazol característicos de XRPD correspondentes ao pó de voriconazol (por exemplo, 12,4 °2θ e 13,6 °2θ) e δ-manitol (por exemplo, 9,5 °2θ e 20,2 °2θ) como mostrado na Figura 1. Estes indicam que as formulações em pó consistem em voriconazol e δ-manitol cristalinos. A intensidade dos picos de δ-manitol diminuiu conforme as quantidades de manitol (% p/p) foram reduzidas nas formulações em pó de TFF-VCZ-MAN, e os picos correspondentes a δ-manitol não foram detectáveis quando as formulações em pó continham 5% (p/p) de manitol. O pó seco de TFF-MAN tinha principalmente a forma δ, enquanto vestígios de formas α e β foram detectados por XRPD (13,5 °2θ e 14,5 °2θ respectivamente).

TABELA 1: DESCRIÇÃO RESUMIDA DAS FORMULAÇÕES EM PÓ SECO DE VORICONAZOL INVESTIGADAS USANDO A TECNOLOGIA DE CONGELAMENTO DE PELÍCULA FINA (TFF). Fármaco: Razão Sólidos dis- Amostra de excipiente Composições de solvente solvidos (p/p) TFF-VCZ Sem excipiente 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 99:1 99:1 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 98:2 98:2 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v)

Fármaco: Razão Sólidos dis- Amostra de excipiente Composições de solvente solvidos (p/p) TFF-VCZ-MAN 97:3 97:3 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 95:5 95:5 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 93:7 93:7 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 90:10 90:10 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 85:15 85:15 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 80:20 80:20 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 70:30 70:30 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 50:50 50:50 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-MAN 25:75 25:75 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-MAN Sem fármaco 1,0% (p/v) Água:acetonitrila 50:50 (v/v) TFF-VCZ-PVPK 25 25:75 1,0% (p/v) 1,4-dioxano

[074] mDSC também confirmou a cristalinidade das formulações em pó de TFF-VCZ-MAN. A Figura 2 mostra nenhuma transição vítrea detectada no TFF-VCZ-MAN 95:5 e TFF-VCZ-MAN 50:50, mas apenas picos endotérmicos cor- respondentes à fusão de voriconazol e manitol. TFF-VCZ teve um pico de endotermia de fusão a 130,86 °C com um calor de fusão de 105,3 J/g. Quando os aquecimentos esperados de fusões para voriconazol em pós de TFF-VCZ-MAN são calculados pela % da fração (p/p), os aquecimentos de fusões para voriconazol em TFF-VCZ-MAN 95:5 e TFF-VCZ-MAN 50:50 foram 100,0 J/g e 52,6 J/g respectivamente. Os calores de fusão medidos para o voriconazol foram 95,1 J/g para TFF-VCZ-MAN 95:5 e 33,7 J/g para TFF-VCZ-MAN 50:50, e estes foram 95,1% e 64,0% dos valores esperados.

TFF-MAN teve um pico de endotermia de fusão a 167,31 °C com um calor de fusão de 187,5 J/g. Os calores esperados de fusões para manitol em TFF-VCZ-MAN 95:5 e TFF-VCZ-MAN 50:50 foram de 9,38 J/g e 93,8 J/g, respectivamente. Os calores de fusão medidos para o manitol foram 2,63 J/g e 63,2 J/g, respectivamente, e esses foram 28,0% e 67,4% dos valores esperados. A Tabela 2 apresenta as razões de composição de voriconazol para manitol (voriconazol:manitol p/p) nas duas formula- ções testadas por mDSC. As razões foram calculadas por integração de picos de prótons usando 1H-NMR. A razão teórica de um próton para TFF-VCZ-MAN 95:5 é 1:0,1009, e a razão experimental foi calculada como 1:0,0992 que representou 98,3%

do manitol esperado encontrado em TFF-VCZ-MAN 95:5. No caso de TFF-VCZ-MAN 50:50, 100% do manitol esperado foi detectado por 1H-NMR. TABELA 2: COMPARAÇÃO QUANTITATIVA DE VORICONAZOL E MANITOL EM TFF-VCZ-MAN 95:5 E TFF-VCZ-MAN 50:50 POR 1H-NMR. Voriconazol Manitol Razão Razão de de inte- Altera- Nú- Altera- Nú- integra- gração ção mero Inte- ção mero Integra- ção teóri- experi- química de gração química de ção ca de 1H mental (ppm) próton (ppm) próton (VCZ:MA de 1H N) (VCZ:M AN) TFF-VCZ- 1:0,099 MAN 3,91 1 10,13 4,10 2 2,01 1:0,1009 2 (95:5) TFF-VCZ- MAN 3,91 1 1,02 4,10 2 3,91 1:1,917 1:1,917 (50:50)

[075] A morfologia das partículas de pós de TFF-VCZ-MAN é apresentada na Figura 3. Aglomeração de partículas de tamanho mícron foi observada nos pós de TFF-VCZ, e essas partículas também foram encontradas em outras formulações em pó de TFF-VCZ-MAN. Matriz mais porosa foi observada com pós de TFF-VCZ-MAN contendo maiores quantidades de manitol. Topografia 3D e ilustração dos pós de TFF-VCZ e TFF-VCZ-MAN 95:5 mostrados na Figura 4 confirmam que a textura da superfície dos pós de TFF-VCZ-MAN 95:5 é áspera, enquanto que a dos pós de TFF-VCZ é lisa. A topografia de alta resolução dos pós de TFF-VCZ-MAN 95:5 na Figura 5 indica que os pós de TFF-VCZ-MAN 95:5 são nanoagregados que consistem em cerca de 150 - 500 nm nanopartículas. SSAs desses pós de TFF-VCZ-MAN são mostrados na Figura 6. Os pós de TFF-VCZ indicaram o SSA mais baixo (8,36 m2/g), e a matriz porosa do pó seco de TFF-MAN exibiu o maior SSA (17,11 m2/g). O SSA aumentou à medida que mais manitol foi adicionado às formulações em pó de TFF-VCZ-MAN. Por SEM/EDX mostrado na Figura 7, as partículas de tamanho mí- cron foram identificadas como sendo compostas de nanoagregados de voriconazol com detecção de nitrogênio, oxigênio e flúor. A matriz porosa foi identificada como manitol pela detecção de oxigênio sem nitrogênio e flúor.

[076] O padrão de pico FT-IR do pó de TFF-VCZ foi combinado com o do pó de voriconazol, e o mesmo padrão de pico também foi encontrado com pós de TFF-VCZ-MAN contendo diferentes quantidades de manitol. O padrão de pico de TFF-MAN também foi encontrado em pós de TFF-VCZ-MAN. Portanto, os picos cor- respondendo apenas a TFF-VCZ e TFF-MAN foram observados em pós de TFF-VCZ-MAN e nenhum novo pico foi encontrado no espectro FT-IR de pós de TFF-VCZ-MAN, como mostrado na Figura 8. Os espectros CP-MAS de 1D, 13C e 19F por ssNMR são mostrados na Figura 9. O voriconazol não tem sobreposição espectral de picos de 13C com manitol e possui todas as ressonâncias nos espectros de 19F. Ele mostra espectros idênticos em TFF-VCZ e TFF-VCZ-MAN. Além disso, os picos agudos de 13C e 19F nos espectros de TFF-VCZ-MAN 90:10 confirmam a cristalinidade do voriconazol e do manitol. O espectro HETCOR de 2D 1H- 13 C de TFF-VCZ-MAN 90:10 foi comparado com o espectro de TFF-VCZ na Figura 10. Não foram obser- vados picos cruzados intermoleculares entre o voriconazol e o manitol de TFF-VCZ-MAN 90:10.

B. DESEMPENHO E ESTABILIDADE DO AEROSSOL IN VITRO

[077] A distribuição aerodinâmica do tamanho de partícula de formulações em pó de TFF-VCZ-MAN foi determinada por um NGI, e o FPF (% de medição) é apre- sentado na Figura 11. Com base nos dados de FPF (% da dose medida), as formu- lações em pó de TFF-VCZ-MAN consistindo em 90 a 97% (p/p) de voriconazol exi- biram a maior aerossolização. FPF (% da dose medida) de TFF-VCZ-MAN 97:3 foi significativamente maior (p <0,05) do que a de TFF-VCZ com 66% de melhora em FPF (% da dose medida). O desempenho do aerossol de pós de TFF-VCZ-MAN contendo 90 a 97% (p/p) de voriconazol não foi significativamente diferente (p> 0,05).

O desempenho do aerossol de formulações em pó de TFF-VCZ-MAN diminuiu quando mais que 10% (p/p) de manitol foi incluído na composição.

[078] A influência da força física no desempenho do aerossol da formulação em pó de TFF-VCZ-MAN 95:5 também foi investigada medindo FPF usando o NGF.

Conforme mostrado nas Figuras 12 e 13, a distribuição do tamanho de partícula e as mudanças de desempenho do aerossol por diferentes tempos de força de cisalha- mento foram monitoradas. Aos 15, 30 e 60 min, FPFs (% da dose medida) eram 44,3, 47,5 e 42,4%, respectivamente, e FPFs (% da dose liberada) eram 68,7, 73,6 e 69,5%, respectivamente. O valor inicial antes da aplicação da força de cisalhamento foi de 40,0% para FPF (% da dose medida) e 58,8% para FPF (% da dose liberada). Embora uma alteração no MMAD também tenha sido observada de 3,7 µm no tempo inicial para 3,2, 3,0 e 3,1 µm em 15, 30 e 60 min, respectivamente, nenhuma mudança sig- nificativa foi encontrada para o GSD.

[079] Um estudo de estabilidade foi realizado a 25 °C/60% de HR, e as mu- danças de pureza e desempenho do aerossol da formulação em pó de TFF-VCZ-MAN 95:5 foram monitoradas por 13 meses, como mostrado na Figura 14. A pureza do voriconazol em TFF-VCZ-MAN 95:5 foi mantida e nenhum degradante foi detectado durante o período de tempo de teste. Para comparar o desempenho do aerossol ao longo do estudo de estabilidade, FPF (% de medido), FPF (% de liberado), MMAD e GSD foram comparados em cada ponto de tempo. Não houve diferença estatistica- mente significativa em FPF (% de medido) por 13 meses, bem como no FPF (% de liberado) (ambos p> 0,05). Enquanto o GSD após 1 mês diminuiu do valor inicial (p < 0,05), o MMAD não apresentou diferenças por 13 meses (p > 0,05).

C. DISSOLUÇÃO DE FORMULAÇÕES EM PÓ SECO DE VORICONAZOL

[080] Para o teste de dissolução de formulações em pó de TFF-VCZ-MAN, PBS de pH 7,4 foi usado como meio receptor e o topo da câmara doadora das células de Franz foi coberto com parafilme para evitar a perda de meio de dissolução por evaporação. A taxa de dissolução de TFF-VCZ-MAN 95:5 cristalino foi comparada com TFF-VCZ-PVPK25 25:75 amorfo, e o pó seco cristalino mostrou liberação cu- mulativa de fármaco significativamente mais lenta durante o período de tempo de teste (p <0,05), como mostrado em Figura 15. A liberação cumulativa de voriconazol em 3 horas para TFF-VCZ-PVPK25 amorfo foi de 63,2%, enquanto que para TFF-VCZ-MAN 95:5 cristalino foi de apenas 22,8%. O voriconazol cumulativo liberado em 3 horas para TFF-VCZ-MAN 25:75 e TFF-VCZ-MAN 50:50 foi de 46,3 e 35,3%, respectivamente.

D. CARACTERIZAÇÕES DE FORMULAÇÕES EM PÓ SECO DE VORICONAZOL

[081] Voriconazol (Beinborn et al. 2012b; Ramos e Diogo 2016) e manitol (Yu et al. 1998) têm uma tendência elevada de cristalização e temperaturas de transição vítrea abaixo da temperatura ambiente. Portanto, o TFF-VCZ-MAN foi hipotetizado como cristalino, a menos que haja fortes interações intermoleculares entre o vorico- nazol e o manitol para prevenir a cristalização. As formulações em pó de TFF-VCZ-MAN eram cristalinas com base nos dados de XRPD e na nitidez dos es- pectros CP-MAS de 1D, indicando que não há interações suficientemente fortes entre voriconazol e manitol.

[082] Embora o XRPD seja útil para caracterizar a cristalinidade de pós, ele pode não ser capaz de detectar baixas quantidades de amorficidade nas formulações.

Portanto, o mDSC foi conduzido em pós de TFF-VCZ-MAN, e foi mostrado que os pós secos de TFF-VCZ-MAN eram cristalinos, uma vez que apenas dois picos de fusão endotérmicos de voriconazol e manitol foram detectados. No entanto, depressão do ponto de fusão foi observada para o manitol, especialmente no TFF-VCZ-MAN 95:5. O baixo calor de fusão do manitol em TFF-VCZ-MAN 95:5 pode ter ocorrido por causa de uma quantidade relativamente baixa de manitol dissolvido em voriconazol derretido antes que a temperatura alcance o ponto de fusão do manitol. Além disso, as partí- culas de manitol em TFF-VCZ-MAN 95:5 são normalmente de 100-200 nm, e essas partículas em nanoescala podem diminuir o calor de fusão. Para confirmar a potência do manitol em pós de TFF-VCZ-MAN que mostraram depressão do ponto de fusão, a razão molecular entre voriconazol e manitol foi determinada por 1H-NMR. Enquanto NMR é comumente usado para análise qualitativa, a análise quantitativa de NMR também é aplicável (Espina et al. 2009; Pauli et al. 2012). As razões moleculares experimentais entre voriconazol e manitol combinaram bem com os valores teóricos em ambos TFF-VCZ-MAN 95:5 e TFF-VCZ-MAN 50:50. Além disso, ssNMR de 13C e 19 F têm sido frequentemente usados para confirmar o polimorfismo cristalino e identi- ficar baixos níveis de substância de fármaco amorfa em formas de dosagem sólidas (Correa-Soto et al. 2017; Offerdahl et al. 2005). As posições de pico idênticas e lar- guras de linha de ressonâncias de voriconazol em espectros CP-MAS de 13C e 19F de TFF-VCZ e TFF-VCZ-MAN 90:10 confirmam a cristalinidade e não sugerem nenhum conteúdo amorfo quantificável.

[083] O FTIR foi usado para estudar as interações químicas entre o vorico- nazol e o manitol. O grupo hidroxila do voriconazol está relacionado à sua via de de- gradação (Shaikh e Patil 2012) e pode ser o sítio mais ativo se houver alguma inte- ração intermolecular. Se isso ocorresse, isso mudaria os picos de FT-IR de vorico- nazol variando entre 3100 cm-1 e 3500 cm-1 (Silverstein et al. 2005). Existem dois picos correspondentes ao voriconazol nesta faixa, e eles estão em 3118,9 cm-1 e 3198,4 cm-1. Esses dois picos são observados em todas as formulações em pó de TFF-VCZ-MAN e TFF-VCZ, e nenhum deslocamento desses picos foi descoberto. No caso do manitol nesta faixa, foi observado um pico em 3276,6 cm-1, e nenhum des- locamento foi observado. Se existem interações entre manitol e aminas secundárias aromáticas de voriconazol, alterações de pico podem ser observadas entre 1230 cm-1 e 1300 cm-1 (Silverstein et al. 2005). Quatro picos de voriconazol em 1241,5 cm-1, 1248,8 cm-1, 1268,5 cm-1 e 1277,6 cm-1 foram detectados nesta faixa, mas nenhum deslocamento de pico significativo foi encontrado quando o manitol foi incluído nas formulações em pó de voriconazol. Portanto, estes dados de FT-IR suportam que não há interações ou interações muito fracas entre voriconazol e manitol em formulações em pó de TFF-VCZ-MAN.

[084] Enquanto FT-IR é normalmente usado para identificar conformação e interações intermoleculares, ssNMR pode fornecer informações de nível atômico mais aprofundadas para investigação estrutural (Tian et al. 2017). Nesta pesquisa, 13 19 CP-MAS de 1D Ce F foram usados para investigar mudanças conformacionais.

Todos os picos de voriconazol não mostraram diferença nas alterações químicas entre TFF-VCZ e TFF-VCZ-MAN 90:10. Além disso, espectros HETCOR de 2D 13 C- 1 H foram adquiridos para investigar perturbações estruturais em uma resolução me- 13 lhor. Este resultado confirma nenhuma mudança de alteração química de C na di- mensão direta. Com a resolução dada, as alterações químicas de todos os prótons alifáticos e aromáticos na dimensão indireta também não exibem alterações obser- váveis. Além disso, HETCOR de 2D 13C-1 H tem sido usado para detectar interações substância de fármaco-excipiente. Não foram observados picos cruzados in- ter-moleculares, ou seja, interações, entre o voriconazol e o manitol na intensidade espectral dada.

[085] Duas formas diferentes de partículas foram observadas em formulações em pó de TFF-VCZ-MAN, e inicialmente pensou-se que as partículas de tamanho mícron eram voriconazol, e as matrizes porosas eram manitol, com base nas morfo- logias de partículas observadas de TFF-VCZ e TFF-MAN. Para confirmar isso, as composições químicas dessas partículas foram confirmadas por SEM/EDX. No en- tanto, os locais que detectaram oxigênio, flúor e nitrogênio se sobrepuseram durante a execução inicial de SEM/EDX, apresentando partículas que consistiam em vorico- nazol e manitol. A causa foi identificada posteriormente. Uma vez que a profundidade de medição de EDX é em escala de mícron, o feixe de detecção passou por toda a profundidade de partícula dos pós de TFF-VCZ-MAN 50:50 testados. Para superar esse problema, o pó foi amplamente disperso em fita de carbono em um suporte de amostra, e uma análise de ponto foi realizada para determinar as composições quí- micas de duas morfologias diferentes de partículas. Por análise pontual, a partícula de tamanho mícron foi identificada como nanoagregados de voriconazol com base nas composições químicas de oxigênio, nitrogênio e flúor, enquanto a matriz porosa foi identificada como manitol, mostrando a composição química do oxigênio sem nitro- gênio e flúor. Portanto, concluiu-se que o manitol cristalino foi separado por fase do voriconazol cristalino durante o processo de TFF.

[086] Embora a imagem AFM na Figura 5 mostre que os pós de TFF-VCZ-MAN são nanoagregados, os dados BET também dão suporte para a for- mação de nanoagregados de voriconazol. Quando as imagens SEM mostram que as partículas de TFF-VCZ são muito maiores do que a matriz de alta porosidade de TFF-MAN, a área de superfície específica de TFF-MAN é apenas cerca de duas vezes maior do que a de TFF-VCZ. Isso pode ser porque as partículas de voriconazol são nanoagregados com área de superfície mais específica do que visualmente visto na imagem SEM.

E. O NÍVEL DE MANITOL AFETA O DESEMPENHO DO AEROSSOL E A TAXA DE DISSOLUÇÃO

[087] A quantidade de manitol nos pós de TFF-VCZ-MAN afetou sua morfo- logia. Quando uma baixa quantidade de manitol foi incluída, partículas submicrônicas de manitol foram formadas pela prevenção do crescimento de partículas como re- sultado de alto super-resfriamento durante o processo de TFF (Engstrom et al. 2008).

Essas partículas existiam na superfície dos nanoagregados de voriconazol e modifi- caram sua textura superficial. Essas partículas de manitol submicrônicas não foram retiradas da superfície dos nanoagregados de voriconazol durante a aerossolização.

Isso pode ser devido ao fato de que era difícil remover partículas de tamanho nano- métrico da superfície. Enquanto as forças coesivas e de adesão são proporcionais ao diâmetro das partículas, as forças de remoção são proporcionais ao cubo do diâmetro para as forças gravitacionais, vibracionais e centrífugas (Hinds, 1999). Portanto, as partículas submicrônicas de manitol foram difíceis de separar dos nanoagregados de voriconazol, e a textura áspera da superfície dos nanoagregados de voriconazol foi mantida durante a aerossolização, resultando em maior aerossolização. Conforme a quantidade de manitol em pós de TFF-VCZ-MAN aumentou, grandes matrizes de manitol porosas foram produzidas. Eles não existiam apenas na superfície das par- tículas de nanoagregado de voriconazol, mas também as cercavam. Vários nanoa- gregados de voriconazol foram reunidos à medida que a grande matriz porosa de manitol os fazia permanecer juntos. Essas estruturas agregadas permaneceram du- rante a aerossolização. Como resultado, essas grandes partículas agregadas dimi- nuíram o desempenho do aerossol das formulações em pó de TFF-VCZ-MAN que continham mais de 10% (p/p) de manitol.

[088] O desempenho do aerossol de formulações para IPS depende signifi- cativamente das forças coesiva e adesiva das partículas. Essas forças incluem van der Waals, tensão superficial de filmes líquidos adsorvidos e forças eletrostáticas (Hickey et al. 1994). Todos esses são influenciados pelo formato e tamanho da par- tícula, rugosidade/textura da superfície, umidade relativa, temperatura, duração e velocidade de contato da partícula (Hinds, 1999; Beach et al. 2002; Tan et al. 2016; Price et al. 2002). Entre essas forças, as forças de van der Waals são as mais im- portantes (Hinds, 1999). Como as forças de van der Waals são forças atrativas indu- zidas por dipolos entre as moléculas, elas diminuem muito quando a distância entre as superfícies das partículas atinge a distância de separação (Hinds, 1999). Portanto, superfícies mais ásperas reduzem as forças de van der Waals de forma crítica, mantendo distâncias médias adicionais das partículas. A rugosidade da superfície afeta não apenas as forças de van der Waals, mas também a tensão superficial, que é induzida pela umidade da superfície. Uma superfície lisa de partículas e alta umidade relativa levam a uma tensão superficial mais forte. A força eletrostática, entretanto,

depende do tamanho da partícula. Partículas maiores que 0,1 µm podem gerar força eletrostática (Hinds, 1999). Essa força eletrostática atrativa é mais forte com partí- culas maiores e também está relacionada com a umidade relativa; a baixa umidade retém as cargas nas partículas por mais tempo. Ainda assim, a força eletrostática é normalmente considerada menor do que as forças de van der Waals e de tensão superficial (Hinds, 1999). Portanto, a rugosidade da superfície e a textura das partí- culas desempenham um papel significativo no desempenho do aerossol de formula- ções para IPS.

[089] As alterações morfológicas das formulações em pó causadas por dife- rentes quantidades de manitol afetaram notavelmente o desempenho do aerossol das formulações em pó de TFF-VCZ-MAN. O desempenho do aerossol foi alterado pela mudança das forças coesiva e adesiva das partículas, e a redução dessas forças está relacionada com as áreas de contato reduzidas entre as partículas (Beach et al. 2002), além de maior distância entre as partículas (Hinds, 1999). Ao incluir baixas quanti- dades de partículas de manitol submicrônicas, as áreas de contato dos nanoagre- gados TFF-VCZ-MAN foram significativamente reduzidas e a distância entre as par- tículas de voriconazol foram mais separadas, como mostrado nas ilustrações na Fi- gura 4. Em comparação ao pó de TFF-VCZ, o pó de TFF-VCZ-MAN 99:1 mostrou uma melhoria significativa no FPF (% da dose medida) (p <0,05). Esta melhoria pela adição de manitol continuou até 3% (p/p) de manitol que foi adicionado na formulação. Um aumento de cerca de 5% em FPF (% da dose medida) foi alcançado pela adição de 1% (p/p) de manitol a formulações contendo 97% a 100% (p/p) de voriconazol. Além disso, os pós de TFF-VCZ-MAN 95:5 exibiram uma dose emitida cerca de 30% maior em comparação aos pós de TFF-VCZ (68% vs. 36% respectivamente, dados não mostrados). Esta dose emitida aumentada foi alcançada como resultado de forças de adesão reduzidas das partículas ao dispositivo. Uma vez que a TFF produz pós de TFF-VCZ-MAN que contêm quantidades muito pequenas de umidade (menos que

0,1% p/p, dados não mostrados) e voriconazol e manitol não são higroscópicos, es- pera-se que as forças de tensão superficial sejam relativamente baixas nessas par- tículas. Armazenar pós em ambiente de baixa umidade pode gerar forças eletrostá- ticas, mas essas forças são consideradas muito menores do que as forças de Van der Waals e de tensão superficial (Hinds, 1999). Consequentemente, a redução das áreas de contato das partículas e o aumento da distância das partículas modificando as texturas da superfície estavam principalmente envolvidas na redução das forças co- esivas e adesivas das formulações em pó de TFF-VCZ-MAN que levaram à melhoria do desempenho do aerossol. Young et al. descreveram de forma semelhante a re- lação entre o desempenho do aerossol e a energia de separação entre as partículas (Young et al. 2002) que corresponde bem aos resultados desta divulgação.

[090] Diferentes quantidades de manitol nos pós de TFF-VCZ-MAN não afe- taram apenas o desempenho do aerossol, mas também a taxa de dissolução. Os pós de TFF-VCZ-MAN contendo maior quantidade de manitol exibiram taxas de dissolu- ção aumentadas e isso pode ser explicado pela umectação mais rápida dos pós pelo manitol. Para os pós de TFF-VCZ-MAN incluindo grande quantidade de manitol, as partículas de manitol circundantes, que continham o voriconazol, foram umedecidas e dissolvidas muito rapidamente. Portanto, os nanoagregados de voriconazol foram envolvidos pelo meio de dissolução em um curto espaço de tempo, e a taxa de dis- solução tornou-se mais rápida. A imagem SEM dos pós de TFF-VCZ-MAN 25:75 apresentou que a maioria das partículas de manitol se dissolveu em menos de 5 min nas células de Franz, enquanto as partículas de manitol submicrônicas ainda foram observadas na superfície de nanoagregados de voriconazol de pós de TFF-VCZ-MAN 95:5. Isso representou que os nanoagregados de voriconazol não se umedeceram rapidamente quando apenas uma pequena quantidade de manitol foi incluída nas formulações em pó.

F. BENEFÍCIOS DO PROCESSO TFF

[091] Nanoagregados de alta potência de formulações em pó de voriconazol foram feitos por TFF. Embora as formulações de IPS sem transportadores tenham sido relatadas anteriormente (Yazdi e Smyth, 2016a; Yazdi e Smyth, 2016b), os transportadores são comumente incluídos nas formulações de IPS. No entanto, as formulações de IPS baseadas em transportadores são geralmente de baixa potência de fármaco. Além disso, muitos fatores, tais como tamanho de partícula (Du et al.

2014), distribuição de tamanho (Steckel e Muller, 1997) e morfologia de superfície (Du et al. 2014; Flament et al. 2004) de partículas de transportadores, influenciam o de- sempenho do aerossol em pó durante a aerossolização, e tais fatores têm efeitos negativos na uniformidade da dose depositada (Du et al. 2017). Usando TFF, o de- sempenho máximo de aerossol de nanoagregados de TFF-VCZ-MAN foi alcançado com um mínimo de 3% (p/p) de manitol; portanto, a potência da formulação otimizada em pó de TFF-VCZ-MAN pode ser de até 97% (p/p). Esta alta potência do fármaco com um nível muito baixo de excipiente requer menos pó para ser liberado, e os problemas, como baixa potência e não uniformidade da dose depositada, geralmente causados por transportadores, podem ser eliminados.

[092] As formulações de IPS de alta potência também podem ser feitas por outras técnicas, tais como moagem, por exemplo. Embora o tamanho das partículas produzidas por moagem e adequadas para liberação pulmonar seja de alguns mí- crons, tais partículas são consideradas como partículas de tamanho mícron discreto único. Como nanoagregados, as formulações de voriconazol de IPS feitas por TFF podem ter eficiência de absorção pulmonar total significativamente e uniformidade de distribuição de dose maiores com base no estudo por (Longest e Hindle, 2017). Es- pera-se que esses nanoagregados de voriconazol permitam uma melhor cobertura epitelial onde as colônias de fungos estão presentes. O TFF foi capaz de produzir nanoagregados, porque a nucleação rápida com uma taxa de congelamento de até

10.000 K/s permitiu uma distribuição de tamanho de partícula mais estreita e menor amadurecimento de Ostwald, produzindo um número maior de núcleos e impedindo o crescimento de partículas durante o processo de congelamento (Engstrom et al 2008; Overhoff et al. 2009). O pequeno tamanho dos canais não congelados e o rápido aumento da viscosidade da solução não congelada (Engstrom et al. 2008) fez ta- manho semelhante de nanoagregados de voriconazol.

[093] A modificação da superfície das partículas também pode ser realizada por TFF. Begat et al. modificação da superfície de partículas relatada anteriormente usando materiais hidrofóbicos, tais como lecitina, leucina e estearato de magnésio.

Enquanto as partículas processadas por processos de fusão mecânica a seco, como a mecanofusão, apresentaram melhor desempenho do aerossol com ou sem trans- portadores, diminuindo a energia livre de superfície (Begat et al. 2005; Begat et al.

2009), esse processo foi baseado na mistura de substâncias de fármacos com agentes controladores de força, como lecitina, leucina e estearato de magnésio. O processo de mecanofusão requer aporte de energia mecânica para a formulação e pode causar instabilidade química do fármaco. Além disso, a modificação da super- fície por mistura pode ser aplicável apenas a partículas de tamanho mícron discretas, não nanoagregados devido à possível desagregação de agregados por mistura.

Kawashima et al. também relataram modificação da superfície de partículas por vários métodos, tais como mistura por cisalhamento mecânico, congelamento ou secagem por spray (Kawashima et al. 1998). Com um aditivo hidrofílico, tal como o ácido silícico anidro leve (AEROSIL), a superfície das partículas hidrofóbicas convertidas em hi- drofílicas e as partículas modificadas da superfície apresentaram comportamento inalatório melhorado in vitro. No entanto, este método usa partículas de fármaco dis- cretas de tamanho mícron e não pode ser usado para nanoagregados. Portanto, essas partículas discretas de tamanho mícron processadas por outros métodos não podem atingir a captação e microdosimetria aprimoradas desses nanoagregados descritos por Longest e Hindle 2017. Por TFF, no entanto, a entrada de energia não foi necessária para modificar as superfícies das partículas. A modificação da superfície dos nanoagregados de voriconazol por partículas de manitol submicrônicas separa- das por fase, que existiam individualmente na superfície dos nanoagregados da fármaco, foi realizada devido à rápida taxa de congelamento que impede o cresci- mento das partículas.

[094] Nanoagregados de alta potência (até 97% p/p) de formulações em pó de voriconazol cristalino destinadas à inalação de pó seco foram desenvolvidos com sucesso usando a tecnologia TFF. Uma pequena quantidade de manitol, usada como um único excipiente, melhorou favoravelmente o desempenho do aerossol de nano- agregados de voriconazol pelo manitol cristalino submicrônico separado por fase que atua como um agente modificador de textura de superfície. O pó seco de voriconazol para inalação feito por TFF é uma opção de tratamento local viável para aspergilose pulmonar invasiva com alta eficiência de aerossolização e carga de fármaco, en- quanto oferece os benefícios potenciais associados à deposição de nanoagregados nas vias aéreas.

EXEMPLO 2 - MATERIAIS E MÉTODOS GERAIS A. MATERIAIS

[095] Os seguintes materiais foram adquiridos: Voriconazol (Carbosynth, San Diego, CA); Kollidon® 25 (D-Basf, Ludwigshafen, Alemanha); acetonitrila (grau de HPLC, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA); ácido trifluoroacético (TFA) (grau de HPLC, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA); filtro de membrana Tuffryn (25 mm, 0,45 µm, Pall Corporation, Port Washington, NY). Água filtrada (Evoqua, Warrendale, PA) foi usada, e manitol livre de pirogênio, Pearlitol® PF, foi generosamente doado pela Roquette America Inc. (Genebra, IL).

B. PREPARAÇÃO DE PÓ PARA INALAÇÃO DE PÓ SECO USANDO TFF

[096] Os pós de manitol e voriconazol (30 a 100% p/p) foram dissolvidos em uma mistura de acetonitrila e água (50:50 v/v), e o teor de sólidos na solução foi mantido como 1% p/v. Aproximadamente 15 µL de cada solução foram jogados de uma altura de 10 cm em um recipiente rotativo de aço inoxidável resfriado criogeni- camente (-60 °C). As amostras congeladas foram coletadas em um recipiente de aço inoxidável cheio de nitrogênio líquido e transferidas para um freezer a -80 °C até se- rem transferidas para um liofilizador. Um liofilizador VirTis Advantage (VirTis Company Inc., Gardiner, NY) foi usado para remover o solvente. As amostras foram mantidas a -40 °C por 21 horas, e a temperatura foi lentamente aumentada para 25 °C ao longo de 21 horas, e então mantidas a 25 °C por mais 21 horas para secar. A pressão foi mantida a 100 mTorr durante o processo de secagem.

C. DIFRAÇÃO DE PÓ DE RAIOS-X (XRPD)

[097] A cristalinidade das amostras de pó foi determinada por difração de raios-X (MiniFlex 600, Rigaku Co., Tóquio, Japão) medindo de 5 a 35 °2θ (etapa de 0,02 °, 3 °/min, 40 kV, 15 mA).

D. MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA (SEM)

[098] SEM (Zeiss Supra 40V SEM, Carl Zeiss, Heidenheim an der Brenz, Alemanha) foi usada para identificar a morfologia da superfície das amostras. Uma alíquota de pó foi colocada em fita de carbono e pulverizada com 60/40 Pd/Au por 20 min antes de capturar as imagens.

E. CALORIMETRIA DE VARREDURA DIFERENCIAL MODULADA (MDSC)

[099] A análise térmica das amostras de pó foi estudada por calorimetria de varredura diferencial modelo Q20 (TA Instruments, New Castle, DE) equipado com um sistema de resfriamento refrigerado (RCS40, TA Instruments, New Castle, DE). O DSC modulado foi realizado com período de modulação de 50 seg, amplitude mo- dulada de 1 °C e taxa média de aquecimento de 5 °C/min. O prato Tzero e a tampa hermética Tzero fabricados pela TA Instruments foram usados para segurar as amostras durante o teste, e um orifício foi feito na tampa com uma agulha de seringa 20G antes de colocar o prato no porta-amostra.

F. ESPECTROSCOPIA DE RAIOS-X DISPERSIVA POR MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA (SEM/EDX)

[0100] SEM/EDX (Hitachi S5500 SEM/STEM, Hitachi America, Tarrytown, NY) foi usada para identificar os elementos dos pós produzidos por TFF.

G. MICROSCOPIA DE FORÇA ATÔMICA (AFM)

[0101] Dois tipos diferentes de microscopia de força atômica foram usados durante este estudo. Imagens de topografia de superfície tridimensional (3D) de par- tículas geradas por TFF foram obtidas por Asylum MFP-3D AFM (Oxford Instruments, Oxfordshire, Reino Unido), equipado com um cantilever MikroMasch HQ:NSC15 re- vestido de alumínio (NanoWorld AG, Neuchâtel, Suíça), que tem uma frequência de ressonância de 325 kHz, constante de força de 40 N/m e raio de ponta típico de 8 nm.

Os pós foram afixados a um disco AFM com fita de carbono e gás nitrogênio com- primido foi usado para soprar as partículas que não aderiram à fita de carbono com firmeza. A topografia foi realizada com modo tapping a uma taxa de varredura de 1,00 Hz, ponto de ajuste de 1,08 V e ganho integral de 20,0. O filtro de feedback, a am- plitude do drive e a frequência do drive foram otimizados para cada amostra, e todas as imagens foram coletadas com resolução de 512 x 512. O software Gwyddion (Necas e Klapetek 2012) (Windows 64 bits versão 2.50) foi usado para gerar imagens topográficas 3D.

[0102] Para obter a imagem dos nanoagregados, foi usado Park XE-100 AFM (Park systems, Suwon, Coreia), equipado com um cantilever PPP-NCHR Nanosen- sores revestido com alumínio (NanoWorld AG, Neuchâtel, Suíça), que tem frequência de ressonância de 330 kHz, constante de força de 42 N/m e raio da ponta de menos de 7 nm. Wafer de silício do tipo P polido de lado único de 380 µm foi revestido com Tween® 20 (VWR, Radnor, PA) antes de carregar as amostras de pó para AFM.

Tween® 20 (1,5% p/v) foi previamente dissolvida em metanol de grau de HPLC (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). A solução foi gotejada sobre o wafer de silício usando uma pipeta de transferência, e a solução foi removida por gás nitrogênio comprimido. O pó foi colocado em um insuflador DP4 (Penn-Century Inc., Wyndmoor, PA) e aerossoli- zado sobre o wafer de silício usando uma seringa de 3 mL. Depois que o pó aeros- solizado foi carregado no wafer de silício, nitrogênio gasoso comprimido foi usado para remover os sólidos em pó que não estavam fortemente aderidos ao wafer de silício. O modo de toque foi aplicado para coletar imagens de resolução de 512 x 512 com uma taxa de varredura de 0,30 Hz. Outros valores para AFM foram otimizados para cada amostra. A imagem da topografia foi processada pelo software Gwyddion (Necas e Klapetek 2012) (Windows 64 bits versão 2.50).

H. ANÁLISE DE DISTRIBUIÇÃO DE TAMANHO DE PARTÍCULA AERODINÂMICA

[0103] O tamanho da partícula aerodinâmica foi determinado por um Impactor Farmacêutico de Próxima Geração (NGI) (MSP Co. Shoreview, MN), conectado com uma Bomba de Alta Capacidade (modelo HCP5, Copley Scientific, Nottingham, Reino Unido) e Critical Flow Controller (modelo TPK 2000, Copley Scientific, Nottingham, Reino Unido). Uma cápsula de HPMC #3 (VCaps plus, Capsugel, Morristown, NJ), contendo pó de TFF (aproximadamente 5 a 10 mg), foi colocada em um inalador de pó seco RS01 de alta resistência (Plastiape, Osnago, Itália), e dispersa no NGI através da porta de indução USP na taxa de fluxo de 60 L/min por 4 segundos para cada acionamento. O pré-separador não foi usado em todo o teste. As placas de coleta de NGI foram revestidas com 2% p/v de polissorbato 20 em metanol e deixadas secar por 20 min antes do uso. Após a aerossolização, o pó foi extraído com a mistura de água e acetonitrila (50:50 v/v), e o conteúdo de voriconazol analisado por HPLC. Diâmetro aerodinâmico médio de massa (MMAD), desvio padrão geométrico (GSD) e fração de partículas finas (FPF) foram calculadas com base na dose depositada no dispositivo, porta de indução, estágios 1 a 7 e coletor de micro-orifício (MOC) usando o software Copley Inhaler Testing Data Analysis Software (CITAS) versão 3.10 (Copley Scientific, Nottingham, Reino Unido).

I. CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA (HPLC)

[0104] Um sistema de HPLC Dionex Ultimate 3000 (Sunnyvale, CA) e um degaseificador Shimadzu DGU 14A (Shimadzu, Kyoto, Japão) foram usados para medir a quantidade do conteúdo de voriconazol. Foi usada uma coluna Waters Xbridge C18 (4,6 x 150 mm, 3,5 µm) (Milford, MA). Os detalhes do método são os seguintes: um método isocrático para propriedades aerodinâmicas usando uma fase móvel de 40/60 (v/v) água/acetonitrila contendo 0,1% (v/v) de TFA e uma taxa de fluxo de 0,8 mL/min por 4 min; e um método gradiente para degradantes químicos durante o estudo de estabilidade. Para o método gradiente, acetonitrila contendo 0,1% (v/v) de TFA foi gradualmente aumentada de 25 para 95% (v/v) por 14 min, misturado com água contendo 0,1% (v/v) de TFA, e uma taxa de fluxo foi 0,8 mL/min. Para ambos os métodos, as amostras foram analisadas em um comprimento de onda de detecção de 254 nm a 25 °C. A linearidade foi realizada entre 50 ng/mL e 100 Ug/mL com o uso de um volume de injeção de 15 µL.

J. RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR EM SOLUÇÃO (NMR EM SOLUÇÃO)

[0105] 1H NMR foi realizado para calcular a razão em peso entre voriconazol e manitol dos pós de TFF-VCZ-MAN. Todos os espectros de 1H NMR foram registrados em dimetilsulfóxido- d6 (DMSO-d6) a 600 MHz em um espectrômetro VNMR 600 (Va- rian, Palo Alto, CA) a 25 °C. As alterações químicas foram registradas em relação a 2,47 ppm de DMSO-d6.

K. RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR EM ESTADO SÓLIDO (SSNMR)

[0106] Os experimentos ssNMR foram realizados em um espectrômetro Bruker Avance III HD 400 MHz (Bruker, Billerica, MA) a 25 °C, com uma frequência de rotação de ângulo mágico (MAS) de 12 kHz. A sonda de ressonância tripla HFX Bruker de 4 mm foi usada nos modos de ressonância dupla sintonizada nas fre- quências de 1H/13C ou 1H/19F. Todas as amostras foram embaladas em condições ambientais em rotores ZrO2 de 4 mm (Wilmad-LabGlass, PA). O experimento MAS unidimensional (1D) de polarização cruzada (CP) de Ce F foi conduzido com um nível de potência com rampa linear de 80-100 kHz durante um período de contato de 2 ms no canal de 1H para intensificar a eficiência da CP. O desacoplamento de prótons SPINAL64 de alta potência foi usado em uma intensidade de campo de 80 kHz. Os mesmos parâmetros de potência, tempo de contato e frequência de MAS foram em- pregados para experimentos bidimensionais (2D) de correlação heteronuclear de 13 C-1H de CP (HETCOR). Adamantina foi usada como um padrão externo para cali- 13 de brar a alteração química de C, com o pico de 13 C etila referenciado em 38,48 ppm.

L. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER (FT-IR)

[0107] Nicolet™ iS™ 50 FT-IR equipado com Smart OMNI-Sampler™ (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) foi usado para estudar a atividade intermo- lecular entre voriconazol e manitol de pós de TFF-VCZ-MAN. A medição foi realizada com a amostra como um pó seco, e uma faixa espectral de 4000 a 700 cm-1 foi re- gistrada na abertura de 150, resolução de 4 e número de varredura de 32.

M. ANÁLISE DA ÁREA DE SUPERFÍCIE ESPECÍFICA (SSA) DE BRUNAUER-EMMETT-TELLER (BET)

[0108] O analisador da área de superfície rápida Monosorb™ modelo MS-21 (Quantachrome Instruments, Boynton Beach, FL) foi usado para medir SSA de pós de TFF-VCZ-MAN pelo método BET de ponto único. As amostras foram liberadas com gás nitrogênio a 20 psi à temperatura ambiente por 24 horas para remover as impu- rezas da superfície. Uma mistura de nitrogênio/hélio (30:70 v/v) foi usada como o gás adsorvato.

N. TESTE DE RESISTÊNCIA À FORÇA DE CISALHAMENTO

[0109] Para testar a resistência à força de cisalhamento de pós de TFF-VCZ-MAN 95:5, os pós foram colocados em um recipiente de aço inoxidável (diâmetro interno de 27/8 polegadas, altura de 4 ¼ polegada) e pré-cisalhado rolando o recipiente a 85 rpm. A amostra de pó foi coletada aos 15, 30 e 60 min, e a propri- edade aerodinâmica foi comparada com a condição inicial.

O. TESTE DE DISSOLUÇÃO

[0110] Um método de dissolução in vitro foi usado para quantificar a disso- lução de voriconazol a partir de pós processados pela tecnologia TFF. O aparelho de células de Franz foi usado para permitir a diferenciação da liberação de voriconazol a partir de pós produzidos por TFF. Um Impactor Farmacêutico de Próxima Geração (NGI) (MSP Co. Shoreview, MN), conectado com Bomba de Alta Capacidade (modelo HCP5, Copley Scientific, Nottingham, Reino Unido) e Controlador de Fluxo Crítico (Modelo TPK 2000, Copley Scientific, Nottingham, Reino Unido) foi usado para car- regar pós aerossolizados em um filtro de membrana Tuffryn (25 mm, 0,45 µm, Pall Corporation, Port Washington, NY). Cinco bicos no estágio 2 na tampa de NGI foram bloqueados com fita de laboratório, e apenas 1 bocal foi deixado aberto. Um filtro de membrana Tuffryn foi colocado e fixado com fita de laboratório no copo de coleta sob o bocal aberto no estágio 2. Uma cápsula de HPMC #3 (VCaps plus, Capsugel, Mor- ristown, NJ), contendo pó de TFF (aproximadamente 5 a 10 mg), foi colocada em um inalador de pó seco RS01 de alta resistência (Plastiape, Osnago, Itália), e dispersa no NGI através da porta de indução USP na taxa de fluxo de 60 L/min por 4 segundos para cada acionamento. Um pré-separador não foi usado. Após a aerossolização, o filtro de membrana carregado com pó (aproximadamente 0,5 a 1 mg) foi cuidadosa- mente removido do copo de coleta e colocado no topo de uma câmara receptora da célula de Franz que foi previamente preenchida com solução salina tamponada com fosfato (PBS) a 10 mM desgaseificada, pH 7,4 (5 mL). Uma câmara doadora foi co- locada no filtro de membrana, e o filtro de membrana foi preso entre as câmaras re- ceptoras e doadoras com uma pinça de aperto. Parafilme foi usado para cobrir o topo da câmara doadora. O teste de dissolução foi conduzido em condições de dissipação a 37 °C enquanto as barras magnéticas eram agitadas nas câmaras receptoras. O meio de dissolução (150 µL) foi retirado em intervalos de tempo de 0, 20, 40, 60, 120 e 180 min para análise por HPLC sem diluição. O meio de dissolução fresco foi subs- tituído após cada amostragem.

P. COLETA DE PARTÍCULAS AEROSSOLIZADAS E PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS SEM DURANTE A DISSOLUÇÃO

[0111] O Fast Screening Impactor (FSI) (Copley Scientific, Nottingham, UK) conectado com a Bomba de Alta Capacidade (modelo HCP5, Copley Scientific, Not- tingham, UK) e o Critical Flow Controller (modelo TPK 2000, Copley Scientific, Not- tingham, UK) foi usado para registrar imagens SEM de pós aerossolizados de TFF-VCZ-MAN antes e durante o teste de dissolução. Uma cápsula de HPMC #3 (VCaps plus, Capsugel, Morristown, NJ), contendo o pó de TFF (aproximadamente 5 a 10 mg), foi colocada em um dispositivo inalador de pó seco RS01 de alta resistência (Plastiape, Osnago, Itália) e dispersa em um filtro de fibra de vidro (MSP Co. Shore- view, MN) definido no FSI para coletar partículas de tamanho aerodinâmico de 5 µm ou menos. Uma vez que as partículas foram coletadas no filtro, elas foram transferidas para fita de carbono, previamente fixada na amostra SEM, colando a fita de carbono no filtro, e a imagem SEM foi gravada.

[0112] Para registrar as imagens SEM durante o teste de dissolução, um filtro de fibra de vidro carregado com pós do FSI foi cortado redondo (25 mm de diâmetro).

O filtro de fibra de vidro foi então colocado entre uma câmara doadora e uma câmara receptora da célula de Franz, previamente preenchida com PBS, pH 7,4, a 37 °C. O filtro foi deixado na célula de Franz por 5 min, e colocado em um freezer de - 80 °C por 1 hora. Um liofilizador VirTis Advantage (VirTis Company Inc., Gardiner, NY) foi usado para remover o solvente a 25 °C durante 5 horas. Fita de carbono, previamente fixada na amostra SEM, foi colada no filtro de fibra de vidro para transferir os pós de TFF-VCZ-MAN, e a imagem SEM foi gravada conforme descrito anteriormente.

Q. ESTUDO DE ESTABILIDADE

[0113] Pós secos de TFF-VCZ-MAN 95:5 foram pré-cisalhados em uma gar- rafa de vidro, conforme descrito no teste de resistência à força de cisalhamento. Entre 7,6 mg e 8,4 mg do pó pré-cortado foi colocado em uma cápsula de HPMC de ta- manho #3 (Capsugel, Morristown, NJ). 14 cápsulas cheias com pós foram transferidas para um frasco de cintilação e o frasco foi purgado com gás nitrogênio por 20 se- gundos antes de fechar com uma tampa. O frasco foi selado em uma folha de alumínio (13 x 15 cm), previamente purgado com nitrogênio gasoso por 30 segundos, e as folhas de alumínio foram mantidas a 25 °C/60% de HR. O desempenho de pureza e aerossol foi realizado em cada ponto de tempo de 1, 3, 6 e 13 meses.

R. ANÁLISE ESTATÍSTICA

[0114] O desempenho aerodinâmico e a liberação cumulativa do fármaco foram comparados para análise estatística pelo teste t de Student. O valor p < 0,05 foi considerado significativamente diferente. JMP® 10.0.0 foi usado para comparar a significância dos dados.

EXEMPLO 3: PRODUÇÃO AMPLIADA DA COMPOSIÇÃO DE VORICONAZOL E TESTE DE

INALADOR

1. RESULTADOS A. MONITORANDO O PROCESSO DE RESFRIAMENTO A -60 °C E -150 °C

[0115] A Tabela 3 mostra as diferentes formulações e condições de proces- samento. A Figura 16 mostra imagens do processo de congelamento em duas tem- peraturas diferentes. As soluções contendo voriconazol e manitol (95:5 p/p) em água/ACN (50:50 v/v) foram usadas na carga sólida com 1% e 3% (p/v) (formulações # 2, 4, 6 e 7 na Tabela 3). A -60 °C, ambas as soluções em diferentes cargas de só- lidos mostraram que o processo de congelamento foi concluído e o equilíbrio térmico foi alcançado em 200 ms ou menos. A nucleação foi observada na borda do disco de amostra em cerca de 1/30 ms, mas o congelamento progrediu do centro do disco para sua borda a -60 °C. Em contraste, a nucleação foi iniciada em 1/60 ms ou menos para soluções com cargas sólidas de 1% e 3% (p/v) a -150 °C, e o resfriamento progrediu homogeneamente em todo o disco de amostra. No entanto, o equilíbrio térmico não foi alcançado em 200 ms.

TABELA 3: LISTA DE FORMULAÇÕES E PARÂMETROS DE PROCESSAMENTO Razão de vori- Carga Temperatura de Razão de Número da conazol manitol sólida (% processamento água:acetonitrila formulação (p/p) p/v) de TFF (°C) (v/v) 1 95:5 1 -60 30:70 2 95:5 1 -60 50:50 3 95:5 1 -60 70:30 4 95:5 1 -150 50:50 5 95:5 2 -150 50:50 6 95:5 3 -150 50:50 7 95:5 3 -60 50:50 B. PROPRIEDADES FÍSICAS DOS NANOAGREGADOS DE VORICONAZOL PRODUZIDOS

POR TFF

[0116] A Figura 17 apresenta a topografia de alta resolução de nanoagrega- dos de voriconazol processados em duas temperaturas diferentes. Isso indica que os nanoagregados de voriconazol formados a uma temperatura mais baixa (-150 °C) (formulação # 4) consistem em nanopartículas menores. Quando processado a -150 °C, nanopartículas tão pequenas quanto 200 nm foram observadas, enquanto na- nopartículas de cerca de 500 nm foram descobertas a -60 °C (formulação # 2).

[0117] A Figura 18 compara as morfologias das partículas de nanoagregados de voriconazol formados usando diferentes parâmetros de processamento. Quando água/ACN (30:70 v/v) (formulação # 1) foi usada como um sistema solvente, manitol estruturado poroso foi observado com um tamanho de partícula de mais de 20 µm. Os nanoagregados de voriconazol produzidos com os outros sistemas de solventes mostraram modificação da textura da superfície das partículas de voriconazol por nanopartículas de manitol. A temperatura de processamento mais baixa resultou em partículas menores dentro da faixa de carga sólida testada (1 ~ 3% p/v).

[0118] A Figura 19 mostra imagens SEM de nanoagregados de voriconazol em aerossol produzidos a -60 °C e -150 °C (formulações # 7 e 6, respectivamente).

Isso mostra que os nanoagregados consistem em nanopartículas tão pequenas quanto 200 nm. Enquanto os nanoagregados de voriconazol permaneceram princi- palmente como nanoagregados micro-dimensionados, foram observados nanoagre- gados de forma irregular que não foram completamente desagregados após a ae- rossolização. A superfície dessas nanopartículas manteve a textura modificada após aerossolização pelo insuflador DP4.

C. COMPARAÇÃO DE PROPRIEDADES FÍSICAS E AERODINÂMICAS COM AUMENTO DE ESCALA

[0119] A Tabela 4 mostra as propriedades aerodinâmicas e o teor de umidade dos nanoagregados de voriconazol produzidos em pequenas (200 mg) e grandes escalas (90 g). Além disso, a Figura 20 compara a cristalinidade das várias formula- ções em pó. Quando a grande escala é comparada à pequena escala, FPF (% da dose medida, 35,6% vs. 37,0%), FPF (% da dose liberada, 49,5% vs. 48,5%) e MMAD (3,69 µm vs. 3,52 µm) não foram significativamente diferentes (p > 0,05) quando testados com um dispositivo Plastiape® RS00 de baixa resistência a uma taxa de fluxo de 60 L/min. Além disso, o teor de umidade de ambos os lotes era inferior a 0,1% (p/p) por TGA. Os espectros de XRPD de nanoagregados de voriconazol não mos- traram nenhuma diferença de padrão entre as escalas pequena e grande.

TABELA 4: COMPARAÇÃO DE PROPRIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS E AERODINÂMICAS

POR ESCALA Formulação Formulação de nanoagregados de voriconazol # 6 IPS de teste Plastiape de baixa resistência RS-00

Taxa de fluxo (L/min) 60 Escala em lote 90 g 200 mg MMAD (µm) 3,69 ± 0,16 3,52 ± 0,06 GSD (µm) 1,82 ± 0,03 N/A

FPF (% da dose medida) 35,6 ± 1,9 37,0 ± 1,0

FPF (% da dose liberada) 49,5 ± 2,3 48,5 ± 1,7 SSA (m2/g) 10,77 ± 0,62 8,65 ± 0,21 Teor de umidade (% p/p) <0,1 <0,1 D. DESEMPENHO DO AEROSSOL IN VITRO I. POR COSOLVENTE, TEMPERATURA DE PROCESSAMENTO E CARGA SÓLIDA

[0120] NGI foi usado para avaliar os efeitos do cosolvente, da temperatura de processamento e da carga sólida nas propriedades do aerossol de nanoagregados de voriconazol sem condicionamento. Os resultados são apresentados na Tabela 5. Uma proporção diferente de água e acetonitrila no cosolvente alterou as propriedades do aerossol dos nanoagregados de voriconazol quando a carga sólida (1%) e a tempe- ratura de processamento (-60 °C) foram fixadas (formulações # 1~3). Conforme a razão de água aumentou de 30% (v/v) para 50% (v/v) e 70% (v/v), o FPF (% da dose medida) aumentou de 34,3% para 37,9%, e 45,6%. Além disso, o FPF (% da dose liberada) aumentou (53,1%, 61,2% e 69,9%, respectivamente), enquanto o MMAD diminuiu (3,41, 3,31 e 3,09 µm, respectivamente).

TABELA 5: PROPRIEDADES DO AEROSSOL POR SISTEMA DE SOLVENTE,

TEMPERATURA DE PROCESSAMENTO E CARGA SÓLIDA FPF, medido Formulação (%) FPF, liberado (%) MMAD (µm) GSD (µm) ED (%) 1 34,3 ± 1,7 53,1 ± 2,0 3,41 ± 0,25 1,80 ± 0,01 64,6 ± 2,4 2 37,9 ± 3,4 61,2 ± 5,0 3,31 ± 0,38 1,87 ± 0,05 62,2 ± 7,8

FPF, medido Formulação (%) FPF, liberado (%) MMAD (µm) GSD (µm) ED (%) 3 45,6 ± 2,9 69,9 ± 3,4 3,09 ± 0,17 1,76 ± 0,06 65,3 ± 3,6 4 46,7 ± 1,4 67,5 ± 2,0 3,27 ± 0,06 N/A 69,1 ± 2,0 5 41,3 ± 2,1 60,9 ± 5,3 3,24 ± 0,12 N/A 68,0 ± 2,6 6 37,0 ± 1,0 48,5 ± 1,7 3,52 ± 0,06 N/A 76,3 ± 0,8 Dispositivo Plastiape RS-00 de baixa resistência a 60 L/min (n = 3; média ± SD) Pó não condicionado

[0121] A influência da temperatura de processamento também foi confirmada.

Quando a temperatura de processamento foi diminuída de -60 °C para -150 °C, en- quanto a carga sólida (1%) e o cosolvente (água/ACN 50:50 v/v) foram fixados (for- mulações # 2 e 4), o FPF (% da dose medida) aumentou significativamente de 37,9% para 46,7% (p <0,05). No entanto, o FPF (% da dose liberada) e MMAD não se alte- raram significativamente (61,2% vs. 67,5% e 3,31 vs. 3,27 µm, respectivamente) (p > 0,05).

[0122] A carga sólida também afeta as propriedades do aerossol. Conforme mostrado na Tabela 5, maior carga sólida resulta em menores propriedades de ae- rossol. À medida que a carga sólida aumenta de 1% para 2% e 3% (formulações # 4 ~ 6), o FPF (% da dose medida) diminuiu de 46,7% para 41,3% e 37,0% quando o pó não foi condicionado. O FPF (% da dose liberada) também diminuiu de 67,5% para 60,9% e 48,5%. Enquanto o MMAD de 1% e 2% (formulações # 4 e 5) não foi signi- ficativamente diferente (3,27 vs. 3,24 µm, p > 0,05), 3% (formulação # 6) resultou em MMAD significativamente maior (3,52 µm. p < 0,05). II. POR DISPOSITIVO

[0123] O desempenho do aerossol de nanoagregados de voriconazol (for- mulação # 6) foi avaliado usando quatro tipos diferentes de dispositivos Plastiape: RS00 de baixa e alta resistência e RS01 de baixa e alta resistência. A Tabela 6 mostra a avaliação da influência de diferentes taxas de fluxo no desempenho do aerossol.

Com uma taxa de fluxo de 90, 60 e 30 L/min, o dispositivo RS00 de baixa resistência mostrou um FPF (% da dose medida) de 48,6%, 45,8% e 27,0% e um FPF (% da dose liberada ) de 63,7 %, 63,9% e 48,9%, respectivamente. O MMAD foi aumentado de 3,22 para 3,36 e 4,32 µm conforme a taxa de fluxo diminuiu de 90 para 60 e 30 L/min.

O dispositivo RS00 de alta resistência mostrou um FPF (% da dose medida) de 34,7% a 60 L/min e 30,7% a 30 L/min. O MMAD do dispositivo RS00 de alta resistência foi 3,76 µm a 60 L/min e 3,83 µm a 30 L/min. O FPF (% da dose medida) do dispositivo RS01 de baixa resistência a uma taxa de fluxo de 90, 60 e 30 L/min foi de 40,1%, 35,8% e 27,0%, respectivamente, e o MMAD foi de 4,28, 4,37 e 5,34 µm, respecti- vamente. O RS01 de alta resistência apresentou um FPF (% da dose medida) de 31,7% a 60 L/min e 20,2% a 30 L/min, enquanto o MMAD foi de 4,48 e 5,06 µm, respectivamente. Em geral, o dispositivo de baixa resistência apresentou maior de- sempenho aerodinâmico na mesma taxa de fluxo, e o dispositivo RS00 resultou em melhor desempenho em relação ao RS01 durante o teste de desempenho do aerossol in situ.

TABELA 6: PROPRIEDADES DO AEROSSOL POR DISPOSITIVOS Taxa de FPF, li- FPF, me- MMAD Dispositivo Resistência fluxo berado GSD (µm) ED (%) dido (%) (µm) (L/min) (%) 3,22 ± 76,3 ± 90 48,6 ± 2,2 63,7 ± 2,0 N/A 0,12 2,0 3,36 ± 71,7 ± Baixa 60 45,8 ± 0,8 63,9 ± 0,8 N/A 0,02 1,4 4,32 ± 55,2 ± RS00 30 27,0 ±2,8 48,9 ± 1,0 N/A 0,05 5,8 3,76 ± 1,69 ± 63,3 ± 60 34,7 ± 2,3 55,0 ± 5,7 0,20 0,06 3,8 Alta 3,83 ± 1,52 ± 49,5 ± 30 30,7 ± 2,8 61,9 ± 3,4 0,11 0,02 3,0 4,28 ± 81,7 ± 90 40,1 ± 2,0 49,0 ± 1,6 N/A 0,12 1,6 4,37 ± 72,5 ± Baixa 60 35,8 ± 2,6 49,5 ± 4,8 N/A 0,30 2,2

Taxa de FPF, li- FPF, me- MMAD Dispositivo Resistência fluxo berado GSD (µm) ED (%) dido (%) (µm) (L/min) (%) 5,34 ± 1,87 ± 76,4 ± RS01 30 27,0 ± 3,6 35,3 ± 4,1 0,28 0,07 2,2 4,48 ± 1,65 ± 65,5 ± 60 31,7 ± 0,7 48,5 ± 1,5 0,10 0,02 0,9 Alta 5,06 ± 1,72 ± 50,6 ± 30 20,2 ± 0,8 40,1 ± 2,8 0,11 0,02 2,7 III. POR DOSE

[0124] O efeito de diferentes cargas de dosagem no desempenho do aerossol usando dispositivos RS00 de alta resistência e RS01 de alta resistência foram tes- tados. Os resultados são apresentados na Tabela 7. Quando a dose de carga au- menta de 10 mg para 15 mg e 20 mg, as propriedades do aerossol de FPF (% da dose medida) (34,7%, 33,8% e 31,8%, respectivamente), FPF (% da dose liberada) (55,0 %, 55,5% e 51,5%, respectivamente) e MMAD (3,76, 3,77 e 3,84 µm, respectiva- mente) não foram alteradas significativamente (p > 0,05) usando o dispositivo RS00 de alta resistência a 60 L/min. No entanto, o dispositivo RS01 de alta resistência a 60 L/min mostrou uma diferença significativa (p <0,05) entre uma dose de carga de 10 mg e 20 mg com um FPF (% da dose medida) (31,7% vs. 25,3%), FPF (% da dose libe- rada) (48,5% vs. 37,4%) e MMAD (4,48 vs. 5,21 µm).

TABELA 7: PROPRIEDADES DO AEROSSOL POR DOSE Taxa Dose de FPF, me- FPF, libe- MMAD Dispositivo de fluxo carga GSD (µm) ED (%) dido (%) rado (%) (µm) (L/min) (mg) 10 34,7 ± 2,3 55,0 ±5,7 3,76 ± 0,20 1,69 ± 0,06 63,3 ± 3,8 RS-00 de alta resis- 60 15 33,8 ± 1,9 55,5 ±2,9 3,77 ± 0,12 1,69 ± 0,02 60,9 ± 0,2 tência 20 31,8 ± 5,6 51,5 ±9,6 3,84 ± 0,37 1,81 ± 0,15 61,6 ± 0,6 10 31,7 ± 0,7 48,5 ± 1,5 4,48 ± 0,10 1,65 ± 0,02 65,5 ± 0,9 RS-01 de alta resis- 60 15 28,4 ± 2,2 43,2 ± 5,0 4,78 ± 0,35 1,72 ± 0,05 65,9 ± 2,5 tência 20 25,3 ±2,5 37,4 ± 4,3 5,21 ±0,31 1,76 ± 0,05 67,6 ± 2,3

TABELA 8: PROPRIEDADES DO AEROSSOL POR DISPOSITIVO COM BASE NA QUEDA DE

PRESSÃO Queda Taxa FPF, li- % no dis- de de FPF, me- MMAD Dispositivo Resistência berado positivo, pressão fluxo dido (%) (µm) (%) medida (kPa) (L/min) 4,12 ± 4 58 32,8 ± 1,7 49,1 ±4,1 33,1 ± 3,3 0,22 4,31 ± RS00 Alta 2 39 31,2 ± 4,5 51,5 ± 5,8 39,6 ± 2,0 0,19 4,20 ± 1 27 30,0 ± 2,2 55,0 ± 6,1 45,3 ± 2,9 0,31 4 68 29,8 ± 1,4 41,2 ± 3,2 4,86 ±0,22 27,6 ± 2,6 Alta 2 45 27,4 ± 5,4 45,7 ± 9,5 4,70 ±0,46 39,9 ± 0,6 1 32 24,7 ± 0,7 42,0 ± 0,1 4,97 ±0,01 41,2 ± 1,6 4 87 32,6 ±2,9 41,4 ± 4,2 4,81 ±0,30 21,2 ± 1,4 RS01 Média 2 60 32,7 ± 2,1 44,2 ± 2,1 4,82 ±0,13 25,9 ± 1,6 4,73 ± 1 40 31,7 ± 3,3 46,3 ± 4,8 31,6 ± 2,3 0,27 Alta (com- primido por 4 68 31,6 ± 3,3 48,9 ± 6,3 4,45 ±0,31 35,1 ±2,2 RS00)  n=3  Carga: 15,0 mg/cápsula (fixo)

2. DISCUSSÃO A. ESPAÇO DO PROJETO DO PROCESSAMENTO DE NANOAGREGADOS DE

VORICONAZOL FEITOS POR TFF

[0125] Os parâmetros de processamento dentro do espaço do projeto do processo de congelamento usado em TFF devem ser considerados e seu impacto compreendido durante o desenvolvimento e subsequente aumento de escala inclui: o sistema de solvente, temperatura de processamento, carga sólida e tamanho do lote.

Um dispositivo RS00 de baixa resistência a uma taxa de fluxo de 60 L/min foi usado para determinar o espaço do projeto de processamento, uma vez que a aerossoli-

zação pelo dispositivo RS00 de baixa resistência era mais dependente da taxa de fluxo de inalação e das características das formulações. A dependência foi capaz de distinguir a aerossolização de formulações feitas por diferentes parâmetros do projeto do processamento.

B. SISTEMA DE SOLVENTE

[0126] As propriedades físico-químicas das dispersões sólidas amorfas de danazol feitas com TFF não foram afetadas pelos dois solventes diferentes (terc- butanol e acetonitrila (Overhoff et al., 2007) que foram usados; no entanto, a cristali- nidade, morfologia e desempenho do aerossol de voriconazol com PVP K12 ou PVP K30 produzidos usando TFF foram diferentes, dependendo das composições do solvente, que incluíam água e 1,4-dioxano (Beinbom al., 2012). O sistema de cosol- vente de água e acetonitrila usado durante esta pesquisa foi adotado para desen- volver formulações de tacrolimus e formulações de voriconazol feitas usando TFF (Watts el al., 2013; Moon et al., 2019).

[0127] Enquanto uma diferença na cristalinidade não foi observada, uma disparidade na morfologia foi encontrada em diferentes composições de solventes.

Além disso, uma tendência significativa nas propriedades aerodinâmicas foi obser- vada quando a composição do solvente mudou. Sem o condicionamento do pó, a composição do solvente contendo maior porção de água apresentou aerossolização intensificada. Este resultado pode estar relacionado a dois fatores: viscosidade e separação de fase criogênica do sistema de cosolvente.

[0128] Na água e no sistema de cosolvente de acetonitrila, a viscosidade aumenta com uma porção maior de água (Thompson et al., 2006; Cunningham el al., 1967). Durante o processo de congelamento, a alta viscosidade pode impedir o mo- vimento das moléculas. Portanto, as moléculas são distribuídas de forma mais ho- mogênea no estado congelado, e a concentração de soluto nos canais não conge- lados pode não aumentar significativamente. A baixa viscosidade do solvente permite mais movimento das moléculas durante o processo de congelamento, podendo ocorrer aglomeração molecular. Como resultado, a concentração de soluto nos canais não congelados aumenta. Como os pós de voriconazol produzidos por TFF são na- noagregados cristalinos, a maior concentração de soluto pode induzir a produção de nanopartículas maiores devido à menor distância entre as moléculas.

[0129] Embora o TFF envolva super-resfriamento ultrarrápido, o processo de congelamento do sistema de água/solvente de ACN requer até 200 ms a -60 °C. As- sim, durante esse tempo de congelamento de 200 ms, há uma chance de um maior grau de aglomeração molecular com um solvente de baixa viscosidade que resulta em menor desempenho do aerossol. Essa tendência também foi observada no estudo anterior de Beinborn et al. sobre o voriconazol feito com TFF (Beinborn al., 2012).

Quando pós de voriconazol cristalino contendo PVP K12 ou PVP K30 foram produ- zidos com água e um sistema de solvente binário de 1,4-dioxano, maior aerossoli- zação foi obtida com partículas de TFF feitas com 1,4-dioxano/água (20:80 v/v) em comparação a partículas feitas com 1,4-dioxano/água (50:50 v/v). Embora a visco- sidade de 1,4-dioxano seja maior que a da água, a viscosidade de 1,4-dioxano/água (20:80 v/v) é superior a 1,4-dioxano/água (50:50 v/v) (Besbes et al., 2009). Portanto, a viscosidade do sistema de cosolvente é um dos fatores que influenciam o desem- penho do aerossol após a liofilização.

[0130] A prevenção da separação crio-fase é a segunda possibilidade de melhor desempenho do aerossol por meio de um sistema de cosolvente com uma porção maior de água. O sistema de cosolvente consiste em água e acetonitrila, e é bem conhecido por sua separação de fases durante o processo de congelamento quando 35-88% (v/v) de acetonitrila é incluído (Gu et al., 1994; Zarzycki et al., 2006).

Uma vez que a separação de fases ocorre abaixo de -1,32 °C (Zarzycki et al., 2006), o solvente não congelado é separado em uma fase de acetonitrila de 88% (v/v) e uma fase aquosa de 65% (v/v), e os solutos podem se mover para a fase em que os solutos têm maior solubilidade (Gu et al., 1994).

[0131] Esta separação crio-fase ocorreu na formulação #1, que foi proces- sada com água/ACN (30:70 v/v) a -60 °C. O manitol a 5% (p/p) nos nanoagregados de voriconazol atua como um agente modificador de textura da superfície (Moon et al., 2019). Portanto, o manitol é observado na superfície de nanoagregados de vorico- nazol cristalinos como nanopartículas, conforme mostrado em imagens SEM das outras formulações na Figura 18. Porém, em torno de 20 µm, foram observadas par- tículas porosas de manitol, que possuem a mesma morfologia do manitol de TFF (Moon et al., 2019). Com partículas de manitol deste tamanho geradas na formulação #1, o efeito da modificação da textura da superfície pelo manitol é diminuído, porque menos quantidade de manitol está disponível para atuar na modificação da textura da superfície, causando assim uma aerossolização pobre.

[0132] Embora o super-resfriamento de TFF possa minimizar a separação de fases e gerar canais de gelo muito pequenos (Moon et al., 2016) devido ao conge- lamento ultrarrápido, a temperatura de processamento de -60 °C permite a separação de fases de baixo nível da água/ACN (30:70 v/v), que induz aglomeração e aumento da concentração de manitol durante o tempo de processamento de congelamento (até 200 ms). No entanto, água/ACN (70:30 v/v) não se separa de fases durante o con- gelamento (Gu et al., 1994; Zarzycki et al., 2006). Portanto, o aumento da aglome- ração e da concentração induzido pela separação da crio-fase é improvável.

C. TEMPERATURA DE PROCESSAMENTO

[0133] Além das composições de solvente, a temperatura de processamento também influencia o desempenho do aerossol de nanoagregados de voriconazol cristalinos feitos usando TFF. A menor temperatura de processamento leva a um maior grau de super-resfriamento, gerando canais de gelo menores e evitando o crescimento de partículas (Overhoff et al., 2009; Engstrom et al., 2008). Uma tem- peratura de -150 °C nesta pesquisa mostrou nucleação muito mais rápida com su-

per-resfriamento ultrarrápido. Este super-resfriamento a -150 °C gerou nanopartículas menores nos nanoagregados de voriconazol, consistindo em nanopartículas tão pe- quenas quanto 200 nm, observadas usando AFM e SEM para prevenir o crescimento de partículas. Em contraste, quando processado a -60 °C, um tamanho de partícula de cerca de 500 nm foi observado usando AFM. Quando os nanoagregados de vorico- nazol consistem em nanopartículas menores, é mais provável que eles se desagre- guem em partículas menores durante a inalação, levando a um melhor desempenho do aerossol.

[0134] Curiosamente, o nível aprimorado de desempenho do aerossol indu- zido por super-resfriamento mais alto a -150 °C é equivalente ao desempenho mais alto induzido pelo sistema de co-solvente de água/ACN (70:30 v/v) com su- per-resfriamento mais baixo a -60 °C. FPF (% da dose medida) e MMAD não são significativamente diferentes (p > 0,05) sob essas duas condições de processamento (formulações #3 e #4).

D. CARGA SÓLIDA

[0135] O aumento da carga sólida é uma das formas de reduzir o tempo de processamento na fabricação de formulações em pó usando TFF. No entanto, a carga sólida mais alta normalmente prejudica o desempenho do aerossol. A densidade a granel de nanoagregados de voriconazol produzidos com 1% (p/v) de carga sólida é cerca de 30 mg/cm 3 com nenhum condicionamento ou cisalhamento físico. Portanto, na tentativa de acelerar o processo de fabricação, a carga sólida foi aumentada para 3% (p/v), o que corresponde a uma densidade aparente de 30 mg/cm3. Dois parâ- metros de processamento otimizados foram inicialmente aplicados quando a carga sólida foi aumentada para 3% (p/v): um sistema de solvente de água/ACN (70/30 v/v) e uma temperatura de processamento de -150 °C. No entanto, devido à baixa solubi- lidade do voriconazol em água/ACN (70/30 v/v), uma carga sólida de 3% (p/v) não foi aplicável. Portanto, água/ACN (50/50 v/v) foram escolhidas.

[0136] Enquanto uma densidade aparente com carga sólida de 3% (p/v) in- duziu uma densidade aparente semelhante de 1% (p/v) após a liofilização, o resultado foi um desempenho do aerossol inferior antes do condicionamento do pó. O desem- penho, no entanto, foi aprimorado com o condicionamento adequado comparável aos nanoagregados de voriconazol feitos a 1% (p/v) de carga sólida com parâmetros de processamento otimizados (formulação #4). Consequentemente, os testes de ae- rossolização foram conduzidos com a formulação #6 com condicionamento de pó.

E. TAMANHO DO LOTE

[0137] Até recentemente, o processo TFF era aplicado usando uma seringa ou um funil de separação para alimentar as soluções gota a gota. O resultado é que as soluções exigiam mais tempo para congelarem. Este foi um grande obstáculo à am- pliação do processo TFF. Para acelerar o processo de congelamento, uma bomba peristáltica de 2 canais foi aplicada para produzir meloxicam amorfo usando o pro- cesso TFF (Jermain et al., 2019). Durante esta pesquisa com voriconazol, entretanto, o número de canais aumentou para oito e a taxa de alimentação das soluções foi otimizada para 25 mL/min. Simultaneamente, a taxa de rotação do recipiente criogê- nico foi aumentada de 10 rpm para 20 rpm para evitar que os discos de amostra congelada se sobreponham na taxa de alimentação mais alta.

[0138] O aumento na taxa de rotação encurtou o tempo em que as amostras congeladas permaneceram no recipiente criogênico. Este tempo diminuiu de 4 s para 2 s antes de serem coletadas em uma bandeja contendo nitrogênio líquido. No en- tanto, devido ao congelamento ultrarrápido de TFF, o processo de congelamento normalmente requer menos do que algumas centenas de milissegundos (Overhoff et al., 2007) e não foi esperado que o aumento da taxa de rotação do recipiente crio- gênico influenciasse o processo de congelamento. Para a formulação #6 nesta pes- quisa, a nucleação ocorreu em menos de 1/60 s (na Figura 18), e o equilíbrio térmico da amostra congelada foi alcançado em menos de 2 s antes de serem coletadas na bandeja.

[0139] O super-resfriamento ultrarrápido a -150 °C acelera a taxa de nucle- ação e aumenta o número de cristais de gelo formados (Rambhatla et al., 2004; Overhoff et al., 2009). Assim, nucleação homogênea foi observada em toda a amostra congelada. Além disso, uma vez que o tamanho das gotas é semelhante, indepen- dentemente da escala, o processo de congelamento é independente de escalas di- ferentes e os resultados das amostras congeladas não diferem significativamente.

Com um processo de congelamento similar em geral, as propriedades físico-químicas e aerodinâmicas em pequena escala eram comparáveis a escalas maiores.

[0140] Depois de decidir usar uma bomba peristáltica no aumento de escala do processo TFF, a capacidade do liofilizador também foi testada. Os dados na Tabela 4 também confirmam que a liofilização de 90 g dos nanoagregados de voriconazol pelo liofilizador AdVantage Pro de 3 prateleiras não diferiu dos 200 mg de nanoa- gregados de voriconazol liofilizados pelo liofilizador AdVantage 2.0 de 1 prateleira.

Portanto, um aumento de escala do processo TFF usando uma bomba peristáltica em uma taxa de fluxo de solução de alimentação de 25 mL/min é adequado ao usar um liofilizador AdVantage Pro de 3 prateleiras.

F. INTERAÇÃO DE DISPOSITIVOS COM NANOAGREGADOS DE VORICONAZOL POR DIFERENTES DISPOSITIVOS E TAXAS DE FLUXO

[0141] Durante o desenvolvimento de produtos farmacêuticos fornecidos pelo IPS, o projeto ou seleção do dispositivo é tão importante quanto o desenvolvimento da formulação em termos de desempenho do aerossol. A mesma formulação em pó pode ser aerossolizada de maneira diferente com diferentes dispositivos IPS (Parumasivam et al., 2017). Nesta pesquisa, os dispositivos Plastiape RS01 e RS00 disponíveis comercialmente, que são aplicados a muitos produtos IPS no mercado ou em de- senvolvimento, foram testados (Armer et al., 2016; Elkins et al., 2014; Roscigno et al., 2017). Os dispositivos RS01 e RS00 adotam a mesma tecnologia de liberação: Uma cápsula é retirada de seu alojamento e gira em alta velocidade (Inalador de Pó Seco RS01: Como usar: Plastiape; [Disponível em: plastia- pe.com/en/content/1635/dry--powder-inhaler--rs01--how--use). No entanto, os pós no dispositivo RS01 evacuam a cápsula através de dois orifícios, enquanto o dispositivo RS00 descarrega o pó através de oito orifícios menores da cápsula com bocal mais longo. Em comparação, as propriedades gerais do aerossol de nanoagregados de voriconazol usando o dispositivo RS00 são superiores quando comparadas usando a mesma taxa de fluxo com o mesmo tipo de resistência.

[0142] Este desempenho superior obtido com o dispositivo RS00 pode ser devido aos orifícios menores criados pelo sistema de perfuração do dispositivo RS00.

Quando os nanoagregados de voriconazol deixam a cápsula, os orifícios menores podem auxiliar na desagregação de grandes nanoagregados de voriconazol, e seu tamanho menor resulta em um MMAD menor e um FPF mais alto. Esta pode ser uma característica única dos nanoagregados de voriconazol para IPS, porque eles são compostos de nanoagregados quebradiços. Outras formulações em pó para IPS feitas usando secagem por pulverização ou moagem podem não ser consideradas nanoa- gregados. Portanto, o tamanho dos orifícios quando os pós evacuam a cápsula pode não afetar significativamente o desempenho geral.

[0143] Comparando a resistência baixa e alta dos dispositivos RS01 e RS00, ambos os dispositivos de baixa resistência geralmente tiveram um desempenho melhor do que os dispositivos de alta resistência nas taxas de fluxo de 60 e 30 L/min.

Além disso, os dispositivos de baixa resistência apresentaram maior ED em relação aos dispositivos de alta resistência. No entanto, a desagregação e microdispersão do pó com um dispositivo de baixa resistência depende da taxa de fluxo de inalação do paciente (Dal Negro RW, 2015) causando variações na aerossolização em diferentes taxas de fluxo de inalação. Isso também foi observado em ambos os dispositivos de baixa resistência desta pesquisa. Embora uma taxa de fluxo de 90 L/min tenha al-

cançado a aerossolização máxima com dispositivo RS00 de baixa resistência, uma diminuição significativa (18,8%) de FPF (% da dose medida) foi observada em 30 L/min. Foi observada uma tendência semelhante ao usar o dispositivo RS01 de baixa resistência. A diminuição em FPFs (% da dose medida) de uma taxa de fluxo de 60 a 30 L/min também foi significativa (8,8%) quando se usou RS01 de baixa resistência.

No entanto, o FPF (% da dose medida) usando o dispositivo RS00 de alta resistência diferiu em apenas 4,0% entre as taxas de fluxo de 60 e 30 L/min, e os MMADs não foram significativos (p > 0,05), embora uma diferença notável em ED foi observado. O dispositivo RS00 de alta resistência mostrou independência da taxa de fluxo de ina- lação entre 60 e 30 L/min que é causada por um regime suficiente de turbulência (Dal Negro RW, 2015). Portanto, embora o dispositivo RS00 de baixa resistência tenha um desempenho melhor do ponto de vista das propriedades do aerossol, essas propri- edades podem variar significativamente entre os pacientes individuais, induzindo, assim, a variações de eficiência. No caso do dispositivo RS01 de alta resistência, entretanto, não foi observada independência da taxa de fluxo entre 60 e 30 L/min, confirmando que os orifícios menores no dispositivo RS00 contribuem para a aeros- solização de nanoagregados de voriconazol.

G. POR CARGA DE DOSAGEM DIFERENTE

[0144] A densidade a granel de nanoagregados de voriconazol antes do acondicionamento é normalmente cerca de 30 mg/cm3, independentemente da carga sólida (1 a 3% p/v) das soluções antes do congelamento usando TFF. No entanto, a densidade aparente aumenta gradualmente até 100 mg/cm3 com condicionamento ou tensão de cisalhamento física aplicada externamente. Os nanoagregados de vori- conazol foram condicionados para terem uma densidade aparente em torno de 60 mg/cm3, e a influência do nível de preenchimento do pó foi avaliada com uma cápsula de HPMC de tamanho #3. Uma vez que o volume de capacidade de uma cápsula nº 3 é de 0,3 mL, a quantidade máxima de nanoagregados de voriconazol que podem ser inseridos em uma cápsula é de aproximadamente 20 mg após o condicionamento.

Portanto, o desempenho do aerossol de nanoagregados de voriconazol foi avaliado com uma faixa de dose de 10–20 mg por cápsula. Os dispositivos RS00 e RS01 de alta resistência foram usados a uma taxa de fluxo de 60 L/min, e o teste Tukey-Kramer HSD foi realizado para comparar os resultados entre diferentes níveis de pó.

[0145] Enquanto o dispositivo RS00 de alta resistência não mostrou uma di- ferença significativa (p > 0,05) em FPF (% da dose medida), FPF (% da dose liberada) e MMAD, o desempenho entre 10 mg e 20 mg usando o dispositivo RS01 de alta resistência era diferente (p <0,05). A consistência do desempenho do aerossol usando o dispositivo RS00 de alta resistência pode ser o resultado de orifícios me- nores que podem ajudar a aerossolizar as partículas em uma distribuição estreita no caso de nanoagregados de voriconazol.

3. MATERIAIS E MÉTODOS A. MATERIAIS

[0146] O voriconazol USP foi adquirido da Aurobino Pharma Ltd. (Hyderabad, Índia). O grau de HPLC de acetonitrila (ACN), metanol e ácido trifluoroacético (TFA) foram adquiridos da Fisher Scientific (Pittsburgh, PA). Água filtrada interna (Evoqua, Warrendale, PA) foi usada, e manitol livre de pirogênio, Pearlitol® PF, foi doado pela Roquette America Inc. (Genebra, IL).

B. PREPARAÇÃO DE FORMULAÇÕES EM PÓ

[0147] Voriconazol (95% p/p) e manitol (5% p/p) foram dissolvidos em uma mistura de acetonitrila e água (30:70, 50:50 ou 70:30 v/v) com conteúdo sólido na solução de 1–3% (p/v). A solução foi sonicada até uma solução límpida ser obtida. A solução foi então lançada de uma altura de aproximadamente 10 cm em um recipiente rotativo de aço inoxidável resfriado criogenicamente (-60 °C ou -150 °C). Para a pe- quena escala, uma seringa de 10 mL com uma agulha de seringa (calibre 18) foi usada para alimentar a solução no recipiente. Para o processo em grande escala, uma bomba peristáltica Masterflex® L/S® (Cole-Parmer, Vernon Hills, IL) equipada com tubo de bomba de silicone curado com precisão de platina de alto desempenho Masterflex® L/S® (size 16, Cole- Parmer, Vernon Hills, IL) foi usada para liberar a solução no recipiente a uma taxa de fluxo de 25 mL/min. Durante o processo de congelamento, as amostras congeladas foram coletadas em uma bandeja de liofili- zador de aço inoxidável cheia de nitrogênio líquido e transferidas para um freezer a -80 °C para remover o excesso de nitrogênio líquido antes de transferir a amostra para um liofilizador. Um liofilizador de prateleira VirTis Advantage 2.0 ou VirTis Advantage Pro (VirTis Company Inc., Gardiner, NY) foi usado para sublimar os solventes e secar as amostras. Durante o processo de secagem primária, as prateleiras foram mantidas a -40 °C por 20 h, e a temperatura das prateleiras foi aumentada linearmente para 25 °C ao longo de 20 h, em seguida, mantida a 25 °C por 20 h. A secagem secundária foi realizada a 25 °C por 20 h. A pressão foi mantida a 100 mTorr durante o processo de liofilização.

C. DIFRAÇÃO DE PÓ DE RAIOS-X (XRPD)

[0148] A cristalinidade do pó foi identificada usando difração de raios-X (Mi- niFlex 600, Rigaku Co., Tóquio, Japão) medindo de 5-40 °2θ (etapa de 0,02 °, 2 °/min, 40 kV, 15 mA).

D. MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA (SEM)

[0149] SEM (Zeiss Supra 40V SEM, Carl Zeiss, Heidenheim an der Brenz, Alemanha) foi usado para determinar a morfologia da superfície das amostras de pó e para identificar nanopartículas após aerossolização. Para identificação da morfologia da superfície, uma alíquota do pó foi colocada sobre fita de carbono e pulverizada revestida com 60/40 Pd/Au com espessura de 20 nm antes da captura das imagens.

Para a determinação de nanopartículas, 1-2 mg de pó foi colocado em um insuflador DP4 (Penn-Century Inc., Wyndmoor, PA) e aerossolizado no wafer de silício do tipo P polido de lado único de 380 μm usando uma seringa de 3 mL e pulverizador catódico revestido com 60/40 Pd/Au com uma espessura de 5 nm antes de capturar as ima- gens.

E. MICROSCOPIA DE FORÇA ATÔMICA (AFM)

[0150] Para obter as imagens de nanoagregados, foi usado Asylum MFP-3D AFM (Oxford Instruments, Oxfordshire, Reino Unido), que foi equipado com um can- tilever MikroMasch Hi'Res-C15/Cr-Au revestido com ouro (nanoWorld AG, Neuchatel, Suíça), que tem uma frequência de ressonância de 325 kHz, uma constante de força de 40 N/m e um raio de ponta típico de 1 nm. Um insuflador DP4 (Penn-Century Inc., Wyndmoor, PA) foi usado para fixar pós no wafer de silício. 1-2 mg de pó foram co- locados no insuflador e o pó foi aerossolizado sobre o wafer de silício do tipo P polido de lado único de 380 μm usando uma seringa de 3 mL. Depois que o pó foi carregado, o excesso de pó que não aderiu fortemente ao wafer foi expelido por gás nitrogênio comprimido. A topografia foi realizada em modo tapping a uma taxa de varredura de 1,00 Hz. Outros valores para AFM foram otimizados para cada amostra. As imagens foram coletadas usando uma resolução de 512 x 512 e processadas pelo software Gwyddion (Windows 64 bits versão 2.50) (Necas e Klapetek, 2012).

F. CONDICIONAMENTO DE PÓ

[0151] 1,3 g de pó foram adicionados a um frasco Pyrex de 60 mL. O frasco foi lançado a 60 rpm por 30 min para cisalhar os pós e foi armazenado em um dessecante à temperatura ambiente.

G. ANÁLISE DE DISTRIBUIÇÃO DE TAMANHO DE PARTÍCULA AERODINÂMICA

[0152] As propriedades aerodinâmicas do pó foram medidas por um Impactor Farmacêutico de Próxima Geração (NGI) (MSP Corporation, Shoreview, MN) equi- pado com um Controlador de Fluxo Crítico (modelo TPK, MSP Corporation. Shore- view, MN) e uma Bomba de Alta Capacidade (modelo HCP5, MSP Corporation, Shoreview, MN). Aproximadamente 5-20 mg da formulação em pó foram inseridos em uma cápsula de HPMC #3 (Vcaps® plus, Capsugel®, Morristown, NJ) e dispersos por um Plastiape RS01 ou RS00 IPS no NGI através da porta de indução USP com um volume total de 4 L de fluxo de ar. O pré-separador não foi empregado. Polissorbato 20 a 1,5% (p/v) em metanol foi aplicado às placas de coleta de NGI para revesti-las e secá-las por 20 minutos antes do uso. Após a dispersão, o pó foi extraído usando a mistura de água e acetonitrila (50:50 v/v) contendo 0,1% (v/v) de TFA para analisar o conteúdo de voriconazol usando HPLC. O MMAD, o desvio padrão geométrico (GSD) e a fração de partículas finas (FPF) foram calculados usando o software Copley Inhaler Testing Data Analysis Software (CITDAS) versão 3.10 (Copley Scientific, Nottingham, Reino Unido).

H. CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA (HPLC)

[0153] Para a análise quantitativa do conteúdo de voriconazol, um sistema de HPLC Dionex Ultimate 3000 (Sunnyvale, CA) foi usado conectado a um desgaseifi- cador Shimadzu DGU 14A (Shimadzu, Kyoto, Japão) e uma coluna Waters Xbridge C18 (4,6 x 150 mm, 3,5 μm) (Milford, MA). Foi usado um método isocrático com uma fase móvel de 40/60 (v/v) de água/acetonitrila contendo 0,1% (v/v) de TFA a uma taxa de fluxo de 0,8 mL/min por 4 min a 25 °C. A concentração da amostra foi determinada usando um comprimento de onda de 254 nm. Um estudo de linearidade da curva padrão entre as concentrações de voriconazol de 62,5 ng/mL e 500 µg/mL foi reali- zado com um volume de injeção de 7 µL.

I. ANÁLISE DA ÁREA DE SUPERFÍCIE ESPECÍFICA (SSA) DE BRUNAUER-EMMETT-TELLER (BET)

[0154] Para medir SSA, foi usado um analisador rápido de área de superfície Monosorb™ modelo MS-21 (Quantachrome Instruments, Boynton Beach, FL). As amostras de formulação em pó foram liberadas com gás nitrogênio a 20 psi à tem- peratura ambiente por mais de 24 h. Uma mistura de nitrogênio e hélio (30:70 v/v) foi usada como gás adsorvido.

J. ANÁLISE TERMOGRAVIMÉTRICA (TGA)

[0155] A TGA foi realizada para medir o teor de umidade das formulações em pó. Foi usado um Analisador Termogravimétrico Mettler, Modelo TGA/DSC 1 (Co- lumbus, OH). Aproximadamente 2-5 mg da amostra foram colocados em um cadinho de alumina (Mettler-Toledo, Columbus, OH) e coberto com uma tampa de cadinho. O cadinho foi aquecido de 25 °C a 150 °C a uma taxa de aumento de 5 °C/min. O teor de umidade da amostra foi calculado comparando a redução no peso da amostra entre 25 °C e 125 °C.

K. FOTOGRAFIAS DE CONGELAMENTO SOB DIFERENTES TEMPERATURAS

[0156] Para monitorar as diferenças da taxa de congelamento entre as dife- rentes temperaturas de processamento por TFF, o processo de congelamento foi capturado pela câmera Canon DSLR, modelo EOS Rebel SL1 (Canon USA, Melville, NY) equipada com lente IS STM de 18-55 mm (Canon USA, Melville, NY) a uma taxa de quadros de 60 quadros por segundo, com resolução de 1280 x 720. As imagens capturadas foram cortadas em aproximadamente 200 x 200 para apresentar apenas as amostras.

L. ANÁLISE ESTATÍSTICA

[0157] Um teste t de Student foi aplicado para determinar se as propriedades aerodinâmicas eram estatisticamente diferentes. Um valor de p <0,05 foi considerado significativamente diferente. O JMP® 10.0.0 foi aplicado para calcular o valor p dos dados.

[0158] Todos os métodos divulgados e reivindicados neste documento podem ser feitos e executados sem experimentação indevida à luz da presente divulgação.

Embora as composições e métodos desta invenção tenham sido descritos em termos de modalidades preferidas, será evidente para aqueles técnicos no assunto que va- riações podem ser aplicadas aos métodos e nas etapas ou na sequência das etapas do método descrito neste documento, sem se afastar do conceito, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será evidente que certos agentes que são quimi-

camente e fisiologicamente relacionados podem ser substituídos pelos agentes des- critos neste documento, enquanto os mesmos resultados ou resultados semelhantes seriam alcançados. Todos esses substitutos e modificações semelhantes evidentes para os técnicos no assunto são considerados como estando dentro do espírito, es- copo e conceito da invenção conforme definido pelas reivindicações anexas.

REFERÊNCIAS

[0159] As referências a seguir, na medida em que fornecem procedimentos exemplares ou outros detalhes complementares aos aqui estabelecidos, são especi- ficamente incorporadas neste documento por referência.

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Claims (89)

REIVINDICAÇÕES

1.composição farmacêutica, CARACTERIZADA por compreender: (A)um agente terapêutico; e (B)um excipiente, em que o excipiente compreende menos do que cerca de 10% em peso da composição farmacêutica; em que a composição farmacêutica é formulada como um nanoagregado compreendendo nanopartículas do agente terapêutico e a superfície das nanopartícu- las do agente terapêutico contém domínios discretos do excipiente e em que os do- mínios discretos do excipiente reduzem a área de contato entre as nanopartículas do agente terapêutico.

2.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo agente terapêutico estar presente em uma forma cristalina.

3.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo agente terapêutico estar presente em uma forma amorfa.

4.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADA pelo excipiente compreender de cerca de 9% p/p a cerca de 1% p/p da composição farmacêutica.

5.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADA pelo excipiente compreender de cerca de 6% p/p a cerca de 2% p/p da composição farmacêutica.

6.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADA pelo excipiente compreender cerca de 3% p/p da composição far- macêutica.

7.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADA pelo excipiente compreender cerca de 5% p/p da composição far- macêutica.

8.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 7, CARACTERIZADA pelos domínios discretos do excipiente compreenderem um ou mais domínios não contínuos do excipiente na superfície.

9.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, CARACTERIZADA pelos domínios discretos do excipiente compreenderem uma camada contígua e contínua do excipiente.

10.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, CARACTERIZADA pelo excipiente ser solúvel em água.

11.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADA pelo excipiente ser um álcool de açúcar.

12.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADA pelo excipiente ser manitol.

13.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, CARACTERIZADA pelo excipiente estar presente como um nano-domínio na composição farmacêutica.

14.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADA pelo nano-domínio do excipiente ter um tamanho de cerca de 50 nm a cerca de 500 nm.

15.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADA pelo tamanho do nano-domínio do excipiente ser de cerca de 100 nm a cerca de 200 nm.

16.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica ter um diâmetro aerodinâ- mico médio de massa de cerca de 1,5 a cerca de 7,5 µm.

17.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADA pelo diâmetro aerodinâmico médio de massa ser de cerca de 2,5 a cerca de 6,5 µm.

18.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 17, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica não incluir um excipiente de cera.

19.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica não incluir um excipiente hidrofó- bico.

20.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, CARACTERIZADA pelo agente terapêutico ser selecionado a partir do grupo que compreende agentes anticâncer, agentes antifúngicos, agentes psiquiátricos tais como analgésicos, agentes de alteração do nível de consciência tais como agentes anestésicos ou hipnóticos, fármacos anti-inflamatórios não esteróides (NSAIDS), anti- helmínticos, beta-agonistas, agentes antiacne, agentes antianginosos, agentes anti- arrítmicos, agentes antiasma, agentes antibacterianos, agentes anti-hipertrofia be- nigna da próstata, anticoagulantes, antidepressivos, antidiabéticos, antieméticos, an- tiepilépticos, agentes antigota, agentes anti-hipertensivos, agentes anti-inflamatórios, antimaláricos, agentes antienxaqueca, agentes antimuscarínicos, agentes antineoplá- sicos, agentes antiobesidade, agentes antiosteoporose, agentes antiparkinsonianos, agentes antiproliferativos, agentes antiprotozoários, agentes antitireoidianos, agente antitússico, agentes antiurinários para incontinência urinária, agentes antivirais, agen- tes anxiolíticos, supressores de apetite, beta-bloqueadores, agentes inotrópicos car- díacos, fármacos quimioterápicos, potenciadores de cognição, contraceptivos, corti- costeroides, inibidores de Cox-2, diuréticos, agentes de melhoria de disfunção erétil, expectorantes, agentes gastrointestinais, antagonistas do receptor de histamina, imu- nossupressores, queratolíticos, agentes reguladores de lipídios, inibidores de leuco- trieno, macrolídeos, relaxantes musculares, neurolépticos, agentes nutricionais, anal- gésicos opióides, inibidores de protease e sedativos.

21.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADA pelo agente terapêutico ser um agente antifúngico.

22.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo agente antifúngico ser um fármaco antifúngico azol.

23.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADA pelo fármaco antifúngico azol ser voriconazol.

24.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica compreender ainda um ou mais excipientes adicionais.

25.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica compreender ainda um ou mais agentes terapêuticos adicionais.

26.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica ser formulada para admi- nistração: por via oral, intra-adiposal, intra-arterial, intra-articular, intracraniana, intra- dérmica, intralesional, intramuscular, intranasal, intraocular, intrapericárdica, intrape- ritoneal, intrapleural, intraprostática, intrarectal, intratecal, intratraqueal, intratumoral, intraumbilical, intravaginal, intravenosa, intravesicular, intravitreal, lipossomal, local, mucosal, parenteral, retal, subconjuntival, subcutânea, sublingual, tópica, transdér- mica, vaginal, em cremes, em composições de lipídios, via catéter, via lavagem, via infusão contínua, via infusão, via inalação, via injeção, via distribuição local ou via perfusão localizada.

27.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica ser formulada para administração via inalação.

28.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, CARACTERIZADA pela composição farmacêutica ser formulada para uso com um inalador.

29.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 28,

CARACTERIZADA pelo inalador ser um inalador de combinação de dose fixa, um inalador de pó seco de dose única, um inalador de pó seco multi-dose, inalador de pó seco multi-unitário, um inalador de dose medida ou um inalador de dose medida pres- surizada.

30.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADA pelo inalador ser um inalador à base de cápsula.

31.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 30, CARACTERIZADA pelo inalador ser um inalador de baixa resistência.

32.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 30, CARACTERIZADA pelo inalador ser um inalador de alta resistência.

33.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 32, CARACTERIZADA pelo inalador ser usado com uma taxa de fluxo de cerca de 10 L/min a cerca de 150 L/min.

34.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADA pela taxa de fluxo ser de cerca de 20 L/min a cerca de 100 L/min.

35.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 34, CARACTERIZADA pelo inalador ter um diferencial de pressão de 0,5 kPa a cerca de 5 kPa.

36.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo diferencial de pressão ser 1 kPa, 2 kPa ou 4 kPa.

37.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 36, CARACTERIZADA pelo inalador ter uma dose carregada de cerca de 0,1 mg a cerca de 50 mg.

38.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 37, CARACTERIZADA pelo inalador ter uma dose carregada de cerca de 0,1 mg a cerca de 10 mg.

39.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 37,

CARACTERIZADA pelo inalador tem uma dose carregada de cerca de 5 mg a cerca de 50 mg.

40.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 39, CARACTERIZADA pela dose carregada ser de cerca de 5 mg a cerca de 25 mg.

41.composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, CARACTERIZADA pelo inalador ser configurado para fornecer uma ou uma série de doses de uma ou mais doses unitárias carregadas sequencialmente.

42.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADA pelo inalador ser configurado para fornecer uma dose de uma dose unitária.

43.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADA pelo inalador ser configurado para fornecer uma série de doses a partir de uma dose unitária.

44.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADA pelo inalador ser configurado para fornecer uma dose cada a par- tir de uma série de cápsulas carregadas sequencialmente.

45.composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADA pelo inalador ser configurado para fornecer uma série de doses a partir de uma série de cápsulas carregadas sequencialmente.

46.método de tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio em um paciente em necessidade do mesmo, CARACTERIZADO por compreender adminis- trar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farma- cêutica, conforme definida qualquer uma das reivindicações 1 a 45, compreendendo um agente terapêutico eficaz para tratar a doença ou distúrbio.

47.Método, de acordo com a reivindicação 46, CARACTERIZADO pela do- ença ou distúrbio estar nos pulmões.

48.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 47,

CARACTERIZADO pela doença ou distúrbio ser uma infecção.

49.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 48, CARACTERIZADO pela infecção ser por um fungo.

50.Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo agente terapêutico ser um agente antifúngico.

51.Método, de acordo com a reivindicação 50, CARACTERIZADO pelo agente terapêutico ser um agente antifúngico azol.

52.Método, de acordo com a reivindicação 51, CARACTERIZADO pelo agente terapêutico ser voriconazol.

53.Método de preparação de uma composição farmacêutica, CARACTERIZADO por compreender: (A)misturar um agente terapêutico e um excipiente em que o excipiente está presente em uma quantidade inferior a 10% p/p com um solvente para formar uma solução precursora; (B)depositar a solução precursora sobre uma superfície a uma temperatura adequada para fazer com que o solvente congele; e (C)remover o solvente para obter uma composição farmacêutica.

54.Método, de acordo com a reivindicação 53, CARACTERIZADO pelo sol- vente ser uma mistura de dois ou mais solventes.

55.Método, de acordo com a reivindicação 54, CARACTERIZADO pela mis- tura de solventes compreender água.

56.Método, de acordo com a reivindicação 55, CARACTERIZADO pelo sol- vente ser um solvente orgânico.

57.Método, de acordo com a reivindicação 56, CARACTERIZADO pelo sol- vente orgânico ser acetonitrila.

58.Método, de acordo com a reivindicação 56, CARACTERIZADO pelo sol- vente orgânico ser 1,4-dioxano.

59.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 57, CARACTERIZADO pelo solvente ser uma mistura de água e um solvente orgânico.

60.Método, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADO pelo sol- vente ser uma mistura de água e acetonitrila.

61.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 60, CARACTERIZADO pela mistura de dois ou mais solventes compreender de cerca de 10% v/v a cerca de 90% v/v do solvente orgânico.

62.Método, de acordo com a reivindicação 61, CARACTERIZADO pela mis- tura compreender de cerca de 40% v/v a cerca de 60% v/v do solvente orgânico.

63.Método, de acordo com a reivindicação 62, CARACTERIZADO pela mis- tura compreender cerca de 50% v/v do solvente orgânico.

64.Método, de acordo com a reivindicação 61, CARACTERIZADO pela mis- tura compreender de cerca de 20% v/v a cerca de 40% v/v do solvente orgânico.

65.Método, de acordo com a reivindicação 64, CARACTERIZADO pela mis- tura compreender cerca de 30% v/v do solvente orgânico.

66.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 65, CARACTERIZADO pelo agente terapêutico e excipiente compreender menos de 10% p/v da solução precursora.

67.Método, de acordo com a reivindicação 66, CARACTERIZADO pelo agente terapêutico e excipiente compreender de cerca de 0,5% a cerca de 5% p/v da solução precursora.

68.Método, de acordo com a reivindicação 67, CARACTERIZADO pelo agente terapêutico e excipiente compreender cerca de 1% p/v da solução precursora.

69.Método, de acordo com a reivindicação 67, CARACTERIZADO pelo agente terapêutico e excipiente compreender cerca de 3% p/v da solução precursora.

70.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 69, CARACTERIZADO pela superfície estar girando.

71.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 70, CARACTERIZADO pela temperatura ser de cerca de 0 °C a cerca de –200 °C.

72.Método, de acordo com a reivindicação 71, CARACTERIZADO pela tem- peratura ser de cerca de 0 °C a cerca de –120 °C.

73.Método, de acordo com a reivindicação 72, CARACTERIZADO pela tem- peratura ser de cerca de –50 °C a cerca de –90 °C.

74.Método, de acordo com a reivindicação 73, CARACTERIZADO pela tem- peratura ser cerca de –60 °C.

75.Método, de acordo com a reivindicação 72, CARACTERIZADO pela tem- peratura ser de cerca de –125 °C a cerca de –175 °C.

76.Método, de acordo com a reivindicação 73, CARACTERIZADO pela tem- peratura ser cerca de –150 °C.

77.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 76, CARACTERIZADO pelo solvente ser removido à pressão reduzida.

78.Método, de acordo com a reivindicação 77, CARACTERIZADO pelo sol- vente ser removido por meio de liofilização.

79.Método, de acordo com a reivindicação 78, CARACTERIZADO pela liofili- zação ser realizada a uma temperatura de liofilização de cerca de –20 °C a cerca de –100 °C.

80.Método, de acordo com a reivindicação 79, CARACTERIZADO pela tem- peratura de liofilização ser cerca de –40 °C.

81.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 80, CARACTERIZADO pela pressão reduzida ser inferior a 250 mTorr.

82.Método, de acordo com a reivindicação 81, CARACTERIZADO pela pres- são reduzida ser cerca de 100 mTorr.

83.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 82, CARACTERIZADO pelo método compreender ainda o aquecimento da composição farmacêutica à pressão reduzida.

84.Método, de acordo com a reivindicação 83, CARACTERIZADO pela composição farmacêutica ser aquecida a uma temperatura de cerca de 0 °C a cerca de 30 °C.

85.Método, de acordo com a reivindicação 84, CARACTERIZADO pela temperatura ser cerca da temperatura ambiente ou cerca de 25 °C.

86.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83 a 85, CARACTERIZADO pela pressão reduzida ser inferior a 250 mTorr.

87.Método, de acordo com a reivindicação 86, CARACTERIZADO pela pressão reduzida ser cerca de 100 mTorr.

88.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83 a 87, CARACTERIZADO pela pressão reduzida ser a mesma que a pressão reduzida durante a liofilização.

89.Composição farmacêutica preparada de acordo com os métodos, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 53 a 88.