BR112021000475A2 - Agentes de depuração-dendrón de n-acetilgalactosamina para radioimunoterapia de pré-direcionamento-dota - Google Patents

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cancer
antigen
tumor
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Ouathek Ouerfelli
Guangbin Yang
Sarah M. Cheal
Steve Larson
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Memorial Sloan Kettering Cancer Center
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Abstract

agentes de depuração-dendrón de nacetilgalactosamina para radioimunoterapia de pré-direcionamento-dota. a presente divulgação fornece composições e métodos para o tratamento do câncer. especificamente, as composições da presente tecnologia incluem novos agentes de depuração que podem ser usados em radioimunoterapia de pré-direcionamento.

Description

“AGENTES DE DEPURAÇÃO-DENDRÓN DE N- ACETILGALACTOSAMINA PARA RADIOIMUNOTERAPIA DE PRÉ- DIRECIONAMENTO-DOTA” REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício e a prioridade do pedido provisório U.S. nº 62/697.956, depositado em 13 de julho de 2018, cada um dos quais é incorporado por referência neste documento em sua totalidade.
CAMPO TÉCNICO
[0002] A presente tecnologia se refere, em geral, a composições incluindo novos agentes de depuração dendrón de N-acetilgalactosamina e métodos de uso dos mesmos em radioimunoterapia de pré-direcionamento.
DECLARAÇÃO DE APOIO GOVERNAMENTAL
[0003] Esta invenção foi feita com o apoio do governo sob CA86438, concedido pelo National Institutes of Health. O governo tem certos direitos sobre a invenção.
ESTADO DA TÉCNICA
[0004] A seguinte descrição do estado da técnica da presente tecnologia é fornecida simplesmente como um auxílio na compreensão da presente tecnologia e não é admitido para descrever ou constituir o estado da técnica à presente tecnologia.
[0005] Os agentes radiomarcados têm sido usados como veículos de distribuição de radiação ionizante para sítios de doenças específicos por mais de 50 anos (Larson SM. Cancer 67: 1253-1260 (1991); Britton KE. Nucl Med Commun. 18: 992–1007 (1997)). Um grande número de moléculas foi considerado para a administração direcionada de radioisótopos, incluindo anticorpos radiomarcados, fragmentos de anticorpos, estruturas alternativas e pequenas moléculas (Tolmachev V, et al. Cancer Res. 67:2773–2782 (2007); Birchler MT, et al., Otolaryngol Head Neck Surg. 136:543–548 (2007); Reubi JC, Maecke HR. J Nucl Med. 49:1735–1738 (2008)). Usar anticorpos para direcionar venenos para tumores, por exemplo, radioimunoterapia (RIT) com anticorpos conjugados diretamente, tem sido um desafio devido em parte à dose tumoral subótima e índice terapêutico (TI). Além disso, por causa da toxicidade do tecido normal, o aumento da dose não é viável e, portanto, tal terapia resulta em efeito antitumoral limitado. Além disso, os anticorpos exibem meias-vidas longas no sangue, resultando em baixas razões tumor-para-fundo. Os fragmentos de anticorpos e outras estruturas de ligação menores exibem uma depuração de sangue mais rápida, mas resultam em alta captação renal e/ou hepática. Ligantes de moléculas pequenas radiomarcadas geralmente exibem depuração de sangue mais rápida e fundo mais baixo em comparação com anticorpos e fragmentos de anticorpos, mas geralmente resultam em especificidade pobre devido a afinidades relativamente baixas para o direcionamento desejado.
[0006] Na radioimunoterapia pré-direcionada (PRIT), um anticorpo bifuncional não radioativo com especificidade quer para um antígeno de tumor e uma pequena molécula de hapteno é administrado e pode ser localizado no (s) tumor (es). Após depuração de sangue suficiente do anticorpo, uma pequena molécula radiomarcada é administrada e capturada pelo anticorpo pré-direcionado. No entanto, muitos pequenos peptídeos e haptenos de metal usados em sistemas PRIT exibem retenção significativa de corpo inteiro, o que resulta em atividade de fundo indesejada que limita as relações sinal-fundo para imagens e contribui para a radiação não específica que limita a dose máxima tolerada para aplicações de terapia (Orcutt et al., Mol Imaging Biol 13: 215-221 (2011)).
[0007] Assim, existe uma necessidade de novas moléculas que permitam (a) radioimunoterapia pré-direcionada eficiente de tumores sólidos in vivo e (b) eliminação rápida de pequenas moléculas radiomarcadas de tecido não tumoral.
RESUMO DA PRESENTE TECNOLOGIA
[0008] Em um aspecto, a presente tecnologia fornece um composto que é
,
,
,
,
ou um sal e/ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, e X20 são, cada um, independentemente H ou um único par de elétrons (isto é,
fornecendo um ânion de oxigênio); Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente O ou S; x é 1, 2 ou 3; e y é 1, 2, 3 ou 4.
[0009] Em qualquer modalidade deste documento, o composto pode ser um agente de depuração que é , ,
,
,
, ou um sal e/ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que M1, M2, M3, M4 e M5 são, cada um, independentemente Lu 3+, Sc3+, Ga3+, Y3+, In3+, La3+, Ce3+, Eu3+, Tb3+, or Gd3+; X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19 e X20 são, cada um, independentemente H ou um único par de elétrons (isto é, fornecendo um ânion oxigênio); Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente O ou S; x é 1, 2 ou 3; e y é 1, 2, 3 ou 4.
[0010] Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que M1, M2, M3, M4 e M5 sejam, cada um, independentemente, não um radionuclídeo. Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que Y 1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente S. Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que x seja 1 ou 2. Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que y seja 2 ou 3.
[0011] Em um aspecto relacionado, é fornecida uma composição que inclui um ou mais de qualquer modalidade de um composto como descrito acima, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0012] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para aumentar a sensibilidade do tumor à terapia por radiação em um indivíduo diagnosticado com câncer, compreendendo (a) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo biespecífico anti-DOTA ao indivíduo, em que o anticorpo biespecífico anti-DOTA é configurado para se localizar em um tumor que expressa um antígeno de tumor alvo; (b) administrar uma quantidade eficaz de um agente de depuração da presente tecnologia ao indivíduo; e (c) administrar uma quantidade eficaz de um hapteno DOTA radiomarcado ao indivíduo, em que o hapteno DOTA é configurado para formar um complexo com o anticorpo biespecífico anti-DOTA.
[0013] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece um método para tratar o câncer em um indivíduo em necessidade, compreendendo (a) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo biespecífico anti-DOTA ao indivíduo, em que o anticorpo biespecífico anti-DOTA é configurado para se localizar em um tumor que expressa um antígeno de tumor alvo; (b) administrar uma quantidade eficaz de um agente de depuração da presente tecnologia ao indivíduo; e (c) administrar uma quantidade eficaz de um hapteno DOTA radiomarcado ao indivíduo, em que o hapteno DOTA é configurado para formar um complexo com o anticorpo biespecífico anti-DOTA. Os métodos para tratar o câncer podem compreender ainda sequencialmente, separadamente ou simultaneamente administrar ao indivíduo pelo menos um agente quimioterapêutico selecionado a partir do grupo que consiste em mostardas de nitrogênio, derivados de etilenimina, alquil sulfonatos, nitrosoureias, gemcitabina, triazenos, análogos de ácido fólico, antraciclinas, taxanos, inibidores de COX-2, análogos de pirimidina, análogos de purina, antibióticos, inibidores de enzimas, epipodofilotoxinas, complexos de coordenação de platina, alcalóides de vinca, ureias substituídas, derivados de metil hidrazina, supressores adrenocorticais, antagonistas de hormônio, endostatina, taxóis, camptotecinas, SN-38, doxorrubicina, análogos da doxorrubicina, antimetabólitos, agentes alquilantes, antimitóticos, agentes anti-angiogênicos, inibidores da tirosina quinase, inibidores da mTOR, inibidores da proteína de choque térmico (HSP90), inibidores do proteossoma, inibidores de HDAC, agentes pró-apoptóticos, metotrexato e CPT-11.
[0014] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o antígeno de tumor alvo é selecionado a partir do grupo que consiste em GPA33, HER2/neu, GD2, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MUM-1, CDK4, N- acetilglucosaminiltransferase, p15, gp75, beta-catenina, ErbB2, antígeno de câncer 125 (CA-125), antígeno carcinoembriônico (CEA), RAGE, MART (antígeno de melanoma), MUC-1, MUC-2, MUC-3, MUC-4, MUC-5ac, MUC-16, MUC-17, tirosinase, Pmel 17 (gp100), sequência de íntron V GnT-V (sequência de íntron V de N-acetilglucoaminiltransferase V), câncer de próstata psm, PRAME (antígeno de melanoma), β-catenina, EBNA (antígeno nuclear do vírus de Epstein-Barr) 1-6, p53, proteína de resistência pulmonar (LRP) Bcl-2, antígeno específico da próstata (PSA), Ki-67, CEACAM6, antígeno específico do cólon-p (CSAp), HLA-DR, CD40, CD74, CD138, EGFR, EGP-1, EGP-2, VEGF, PlGF, fator de crescimento similar à insulina (ILGF), tenascina, fator de crescimento derivado de plaquetas, IL-6, CD20, CD19, PSMA, CD33, CD123,
MET, DLL4, Ang-2, HER3, IGF-1R, CD30, TAG-72, SPEAP, CD45, L1-CAM, antígeno Lewis Y (Ley), E-caderina, V-caderina e EpCAM.
[0015] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o anticorpo biespecífico anti-DOTA, o agente de depuração e/ou o hapteno DOTA radiomarcado é administrado por via intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutâneo, intracerebroventricular, oral ou intranasal.
[0016] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de mama, câncer colorretal, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, carcinoma hepatocelular, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer gástrico ou de estômago, câncer de pâncreas, câncer de tireoide, câncer renal ou renal, câncer de próstata, melanoma, sarcomas, carcinomas, tumor de Wilms, câncer endometrial, glioblastoma, câncer de células escamosas, astrocitomas, carcinoma de glândula salivar, câncer vulvar, carcinoma peniano, e câncer de cabeça e pescoço. O câncer de cérebro pode ser um adenoma pituitário, um meningioma, um neuroblastoma ou um craniofaringioma.
[0017] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o hapteno DOTA radiomarcado compreende um ou mais dentre Proteus-DOTA, ácido S-2-(R- aminobenzil) -1,4,7,10-tetraazaciclododecano tetra-acético (DOTA-Bn),, DOTA - Bn-biotina, BAD (((S)-2-(4-(2-bromo) -acetamido) -benzil)-DOTA), NBD ((S) -2- (4-nitrobenzil)-DOTA), DOTA -RGD, DOTA-PEG-E (c (RGDyK))2, DOTA-8-AOC- BBN, p-NO2 -Bn-DOTA, DOTA-PESINA, DOTA-biotina-sarcosina (DOTA- biotina), ácido mono 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacético (éster de N-hidroxisuccinimida) (DOTA-NHS) ou DOTATyrLysDOTA. O hapteno DOTA radiomarcado pode ser marcado com um radionuclídeo selecionado a partir do 213 211 225 grupo que consiste em Bi, At, Ac, 152Dy, 212 Bi, 223 Ra, 219 Rn, 215 Po, 211 Bi,
Fr, 217At, 255Fm, 86Y, 90Y, 89Sr, 165Dy, 186Re, 188Re, 177Lu, 67Cu, 111In, 67Ga, 51Cr, 58 99m 103m 195m 119 161 189m 192 201 203 68 227 Co, Tc, Rh, Pt, Sb, Ho, Os, Ir, Tl, Pb, Ga, Th, and 64Cu.
[0018] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, os níveis radioativos emitidos pelo complexo de anticorpo biespecífico anti-DOTA-hapteno DOTA radiomarcado são detectados entre 4 a 24 horas após o hapteno DOTA radiomarcado ser administrado. Os níveis radioativos emitidos pelo complexo podem ser expressos como a porcentagem da dose injetada por grama de tecido (% ID/g). O valor de referência pode ser calculado medindo os níveis radioativos presentes em tecidos não tumorais (normais) e computando os níveis radioativos médios presentes em desvio padrão de tecidos não tumorais (normais). Em algumas modalidades, o valor de referência é o valor de absorção padrão (SUV). Ver Thie JA, J Nucl Med. 45 (9): 1431-4 (2004). A eficácia terapêutica de tal complexo pode ser determinada calculando a área sob a curva (AUC) do tumor: Razão de tecido normal AUC. Em algumas modalidades, o complexo tem um tumor AUC: Razão de tecido normal de AUC de cerca de 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1, 65:1, 70:1, 75:1, 80:1, 85:1, 90:1, 95:1 ou 100:1. Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, a razão de níveis radioativos entre um tumor e tecido normal é de cerca de 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1, 65:1, 70:1, 75:1, 80:1, 85:1, 90:1, 95:1 ou 100:1.
[0019] Também são divulgados neste documento kits contendo componentes adequados para o tratamento de câncer em um paciente. Em um aspecto, os kits compreendem um agente de depuração da presente tecnologia e instruções de uso. Os kits da presente tecnologia podem compreender ainda pelo menos um anti-DOTA BsAb e/ou um hapteno DOTA que é opcionalmente marcado com um ou mais radionuclídeos. Exemplos de radionuclídeos adequados incluem, mas não estão limitados a Bi, At, Ac, 152Dy, 212 Bi, 223 219 215 211 221 217 255 86 90 89 165 186 188 Ra, Rn, Po, Bi, Fr, At, Fm, Y, Y, Sr, Dy, Re, Re, 177 67 111 67 51 58 99m 103m 195m 119 161 189m Lu, Cu, In, Ga, Cr, Co, Tc, Rh, Pt, Sb, Ho, Os, 192 Ir, 201Tl, 203Pb, 68Ga, 227Th, and 64Cu. Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades, o pelo menos um anti-DOTA BsAb se liga a um antígeno de tumor alvoselecionado a partir do grupo que consiste em GPA33, HER2/neu, GD2, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MUM-1, CDK4, N- acetilglucosaminiltransferase, p15, gp75, beta-catenina, ErbB2, antígeno de câncer 125 (CA-125), antígeno carcinoembriônico (CEA), RAGE, MART (antígeno de melanoma), MUC-1, MUC-2, MUC-3, MUC-4, MUC-5ac, MUC-16, MUC-17, tirosinase, Pmel 17 (gp100), sequência de íntron V GnT-V (sequência de íntron V de N-acetilglucoaminiltransferase V), câncer de próstata psm, PRAME (antígeno de melanoma), β-catenina, EBNA (antígeno nuclear do vírus de Epstein-Barr) 1-6, p53, proteína de resistência pulmonar (LRP) Bcl-2, antígeno específico da próstata (PSA), Ki-67, CEACAM6, antígeno específico do cólon-p (CSAp), HLA-DR, CD40, CD74, CD138, EGFR, EGP-1, EGP-2, VEGF, PlGF, fator de crescimento similar à insulina (ILGF), tenascina, fator de crescimento derivado de plaquetas, IL-6, CD20, CD19, PSMA, CD33, CD123, MET, DLL4, Ang-2, HER3, IGF-1R, CD30, TAG-72, SPEAP, CD45, L1-CAM, antígeno Lewis Y (Ley), E-caderina, V-caderina e EpCAM.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0020] A Figura 1 mostra o efeito do agente de depuração 131 divulgado neste documento na circulação de I-BsAb in vivo. Camundongos normais atímicos (livres de tumor) foram injetados por via intravenosa a t=0 com 131 I-BsAb (19-21 µCi; 250 µg, 1,19 nmol), seguido por veículo (solução salina) ou agente de depuração de dendrón (25 µg; 2,76 nmol) em t=24 horas. A amostragem de sangue em série foi realizada em vários pontos de tempo de t=1- 28 horas. Os dados são apresentados como média ± erro padrão da média.
[0021] A Figura 2 mostra os resultados de pré-direcionamento do tumor obtidos com CCA-16-DOTA-Y3+, um agente de depuração da presente tecnologia.
[0022] A Figura 3 mostra os efeitos dependentes da dose de CCA- 16-DOTA-Y3+ na captação pelo tumor. ** P <0,01 em comparação com grupo de 25g.
[0023] A Figura 4 mostra uma comparação dos resultados de pré- direcionamento de tumor alcançados com uma modalidade de um agente de depuração da presente tecnologia, em comparação com nenhum agente de depuração (veículo), bem como com um agente de depuração conjugado de hapteno DOTA-dextrano 500kD.
[0024] A Figura 5(A) mostra uma comparação da biodistribuição do marcador pré-direcionado [225Ac] Proteus-DOTA (n=3) ou [111In] Proteus- DOTA (n=5) em grupos de camundongos nus atímicos portadores de tumor SW1222 em 24 h de p.i. Após injeções intravenosas (via veia lateral da cauda) de anticorpo huA33-C825 (0,25 mg, 1,19 nmol), agente de depuração e haptenos DOTA radiomarcados, os animais foram sacrificados 24 horas depois para coleta de órgãos e ensaio de radioatividade. *P<0,05,***P<0,001. Os dados são apresentados como média ± SEM.
[0025] A Figura 5 (B) mostra a captação absoluta do tumor de haptenos DOTA radiomarcados pré-direcionados às 24h de p.i., representada graficamente como uma função de moles administrados de marcador; n=1-7 para cada ponto de dados.
[0026] A Figura 6(A) mostra os resultados de pré-direcionamento do tumor obtidos em animais injetados com 172 pmol/1,67 MBq [45 µCi] de [111In] Proteus-DOTA (n=4) ou 790 pmol/7,66 MBq [207 µCi] de [111In] Proteus-DOTA (n=1).
[0027] A Figura 6(B) mostra uma comparação estatística de pré- direcionamento de [225Ac] Proteus-DOTA e [111In] Proteus-DOTA com anti- GPA33-DOTA-PRIT.
[0028] A Figura 7 mostra imagens SPECT/CT de aproximadamente 24h de p.i. de pré-direcionamento [111In] Proteus-DOTA em camundongos nus atímicos portadores de tumor SW1222 com câncer colorretal humano. O xenoenxerto-SW1222 pode ser claramente delineado no flanco. A análise da região de interesse baseada em imagens de tumor, rim (esquerdo), coração e fígado revelaram concentrações de atividade (como média ± 1 SD; porcentagem de dose injetada por grama) de 6,89 ± 4,68, 0,46 ± 0,47, 0,20 ± 0,24, e 0,22 ± 0,27, respectivamente.
[0029] A Figura 8 mostra a estrutura do Proteus-DOTA (fórmula química: C50H80LuN11O19S3-; massa exata: 1345,48;Peso molecular: 1346,28). A porção em caixa da molécula é um hapteno benzil-DOTA (Lu) não radioativo que é reconhecido pelo fragmento variável de cadeia única C825 do anticorpo anti- DOTA-hapteno a um Kd=10 pM. A porção DOTA de três braços vazia da molécula pode acomodar uma variedade de radiometais relevantes para a 225 terapia e/ou imagem, incluindo Ac, 68Ga e 64Cu. 177
[0030] A Figura 9 mostra a atividade de Lu no tumor e vários tecidos normais determinados usando um ensaio de biodistribuição após PRIT com huA33-C825 (0,25 mg/camundongo) e agente de depuração de dendrón 3+ 177 CCA-16-DOTA-Y (25 µg; 2,76 nmol) e 3,7 MBq (20 pmol) de Lu- 177 aminobenzilDOTA ([ Lu] LuDOTA-Bn). n=5 animais/grupo; os dados são apresentados como % ID/g, média ± 1 SD.
[0031] A Figura 10 mostra as curvas de biodistribuição de 177 atividade de Lu com decaimento corrigido para o tumor SW1222, bem como tecidos normais selecionados a partir de 1 a 48 horas após a injeção após huA33- C825 PRIT + [177Lu]LuDOTA-Bn (3,7 MBq, 20 pmol) com agente de depuração- dendrón CCA-16-DOTA-Y3 + (25 µg; 2,76 nmol). Os dados são apresentados como % ID/g, média ± 1 SD.
[0032] A Figura 11 mostra as doses absorvidas para pré- direcionamento de [177Lu]LuDOTA-Bn anti-GPA33-DOTA-PRIT com agente de 3+ depuração-dendrón CCA-16-DOTA-Y em camundongos nus portadores de s.c. Tumores GPA33 (+) SW1222. O índice terapêutico foi definido como a relação de dose estimada de tumor/tecidos normais absorvidos.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0033] Deve ser apreciado que certos aspectos, modos, modalidades, variações e recursos dos presentes métodos são descritos abaixo em vários níveis de detalhes, com o intuito de fornecer uma compreensão substancial da presente tecnologia.
[0034] Na prática dos presentes métodos, muitas técnicas convencionais em biologia molecular, bioquímica de proteínas, biologia celular, microbiologia e DNA recombinante são usadas. Ver, por exemplo, Sambrook e Russell eds. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition; a série de Ausubel et al. eds. (2007) Current Protocols in Molecular Biology; the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); MacPherson et al. (1991) PCR 1: A Practical Approach (IRL Press at Oxford University Press); MacPherson et al. (1995) PCR 2: A Practical Approach; Harlow and Lane eds. (1999) Antibodies, A Laboratory Manual; Freshney (2005) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 5th edition; Gait ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis; U.S. Patent No. 4,683,195; Hames and Higgins eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization; Anderson (1999) Nucleic Acid Hybridization; Hames and Higgins eds. (1984) Transcription and Translation; Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press (1986)); Perbal (1984) A Practical Guide to Molecular Cloning; Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (Cold Spring Harbor Laboratory); Makrides ed. (2003) Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells; Mayer and Walker eds. (1987) Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London); and Herzenberg et al. eds (1996) Weir’s Handbook of Experimental Immunology.
[0035] Agentes de depuração (CA) são uma classe de compostos projetados para remover rapidamente biomoléculas direcionadas a partir da circulação durante o pré-direcionamento de radioisótopos para antígenos de tumor. Os agentes de depuração à base de dextrano são, em geral, usados para radioimunoterapia pré-direcionada à base de DOTA de alto índice terapêutico (DOTA PRIT). Embora altamente eficaz como uma estrutura de agente de depuração, as dextranas apresentam desafios de dosagem devido à sua polidispersidade inerente e cinética de degradação enzimática in vivo.
[0036] A plataforma DOTA-PRIT divulgada neste documento envolve uma estratégia de pré-direcionamento de três etapas, incluindo a administração de (1) um construto de anticorpo biespecífico de fragmento variável de cadeia única-IgG (scFv) (IgG-scFv) compreendendo sequências de anticorpos com alta afinidade para um anticorpo de antígeno antitumor (a porção de IgG) e um fragmento variável de cadeia única anti-DOTA-hapteno scFv (por exemplo, "C825"), (2) um agente de depuração da presente tecnologia para reduzir rapidamente o BsAb circulante após o tempo suficiente ser dado para o BsAb para se acumular em um tumor antígeno-positivo, e (3) uma composição de hapteno DOTA radiomarcada (por exemplo, 177Lu-DOTA-Bn).
[0037] As composições da presente tecnologia incluem novos agentes de depuração dendrón de N-acetilgalactosamina que são úteis em PRIT (por exemplo, radioimunoterapia com partículas alfa). As composições de agente de depuração divulgadas neste documento exibem depuração de sangue aumentada de anticorpo biespecífico radiomarcado com DOTA-PRIT (BsAb) e melhoram o índice terapêutico (TI) durante DOTA-PRIT. Por exemplo, dentro de 5 minutos da administração de uma dose única de um agente de depuração de 131 dendrón em excesso da presente tecnologia (razão molar de I-BsAb injetados 131 para CA de 1: 2,3), a atividade de I caiu no sangue em 64% a partir da linha de base de 6,7% ID/g a 2,4% ID/g. Estudos DOTA-PRIT em um modelo de xenoenxerto de camundongo de câncer colorretal humano mostraram razões de absorção de tumor-para-sangue dependentes da dose de CA de 177Lu-DOTA-Bn
24 horas após a injeção de Lu-atividade (por exemplo, razões médias de tumor para sangue foram 2,9, 26 e 59 para 0µg (veículo), 15 µg, ou 20 µg de dendrón-CA, respectivamente). A dose de 25 μg de dendrón-CA resultou em uma razão média do tumor para sangue de 76, quase idêntico à dosagem otimizada previamente com dextrano-CA (razão média do tumor para sangue de 77). Coletivamente, esses resultados sugerem que o agente de depuração- dendrón da presente tecnologia é adequado para alto TI DOTA-PRIT. Definições
[0038] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento, em geral, têm o mesmo significado como comumente entendido por alguém versado na técnica à qual esta tecnologia pertence. Conforme usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "o,a" incluem referentes plurais, a menos que o conteúdo indique claramente o contrário. Por exemplo, a referência a "uma célula" inclui uma combinação de duas ou mais células e similares. Em geral, a nomenclatura usada neste documento e os procedimentos de laboratório em cultura de células, genética molecular, química orgânica, química analítica e química de ácido nucleico e hibridização descritos abaixo são aqueles bem conhecidos e comumente empregados na técnica.
[0039] Conforme usado neste documento, o termo "cerca de" em referência a um número é geralmente considerado como incluindo números que caem dentro de uma faixa de 1%, 5% ou 10% em qualquer direção (maior ou menor que) do número, a menos que de outra forma declarado ou de outra forma evidente a partir do contexto (exceto quando tal número for menor que 0% ou maior que 100% de um valor possível).
[0040] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos descritos neste documento estão dentro do escopo da presente tecnologia e incluem sais de adição de ácido ou base que retêm a atividade farmacológica desejada e não são biologicamente indesejáveis (por exemplo, o sal não é indevidamente tóxico, alergênico ou irritante, e é biodisponível). Quando o composto da presente tecnologia tem um grupo básico, como, por exemplo, um grupo amino, sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos (tais como ácido clorídrico, ácido hidrobórico, ácido nítrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico), ácidos orgânicos (por exemplo, alginato, ácido fórmico, ácido acético, ácido benzóico, ácido glucônico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido naftalenossulfônico, e ácido p- toluenossulfônico) ou aminoácidos ácidicos (como ácido aspártico e ácido glutâmico). Quando o composto da presente tecnologia tem um grupo ácido, como por exemplo, um grupo de ácido carboxílico, ele pode formar sais com metais, como metais alcalinos e alcalinos terrosos (por exemplo, Na+, Li+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+), amônia ou aminas orgânicas (por exemplo, diciclohexilamina, trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina) ou aminoácidos básicos (por exemplo, arginina, lisina e ornitina). Tais sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação dos compostos ou por reação separada do composto purificado em sua base livre ou forma de ácido livre com um ácido ou base adequada, respectivamente, e isolando o sal assim formado.
[0041] Conforme usado neste documento, a "administração" de um agente ou fármaco a um indivíduo inclui qualquer via de introdução ou administração a um indivíduo de um composto para realizar sua função pretendida. A administração pode ser realizada por qualquer via adequada, incluindo oral, intranasal, parenteral (intravenosa, intramuscular, intraperitoneal ou subcutânea), retal ou tópica. A administração inclui a autoadministração e a administração por outrem.
[0042] Conforme usado neste documento, o termo "anticorpo" refere-se coletivamente a imunoglobulinas ou moléculas similares a imunoglobulinas, incluindo a título de exemplo e sem limitação, IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, combinações das mesmas e moléculas similares produzidas durante uma resposta imune em qualquer vertebrado, por exemplo, em mamíferos como humanos, cabras, coelhos e camundongos, bem como em espécies não mamíferas, como imunoglobulinas de tubarão. Conforme usado neste documento, "anticorpos" (inclui "imunoglobulinas intactas") e "fragmentos de ligação ao antígeno" que se ligam especificamente a uma molécula de interesse (ou um grupo de moléculas de interesse altamente similares) para a exclusão substancial de ligação a outras moléculas (por exemplo, anticorpos e fragmentos de anticorpos que têm uma constante de ligação para a molécula de interesse que é cerca de 103 M-1 vezes maior, cerca de 104 M-1 vezes maior ou cerca de 105 M-1 vezes maior do que uma constante de ligação para outras moléculas em uma amostra biológica). O termo "anticorpo" também inclui formas geneticamente modificadas, como anticorpos quiméricos (por exemplo, anticorpos murinos humanizados), anticorpos heteroconjugados (como anticorpos biespecíficos). Ver também Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997.
[0043] Mais particularmente, anticorpo refere-se a um ligante de polipeptídeo compreendendo pelo menos uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve ou região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que reconhece e se liga especificamente a um epítopo de um antígeno. Os anticorpos são compostos por uma cadeia pesada e uma leve, cada uma das quais tem uma região variável, denominada região variável pesada (V H) e região variável leve (VL). Juntas, a região VH e a região VL são responsáveis pela ligação do antígeno reconhecido pelo anticorpo. Normalmente, uma imunoglobulina tem cadeias pesadas (H) e cadeias leves (L) interconectadas por ligações de dissulfeto. Existem dois tipos de cadeia leve, lambda (λ) e kappa (). Existem cinco classes principais de cadeia pesada (ou isotipos) que determinam a atividade funcional de uma molécula de anticorpo: IgM, IgD, IgG, IgA e IgE. Cada cadeia pesada e leve contém uma região constante e uma região variável (as regiões também são conhecidas como "domínios"). Em combinação, as regiões variáveis da cadeia pesada e leve se ligam especificamente ao antígeno. As regiões variáveis da cadeia leve e pesada contêm uma região de "estrutura" interrompida por três regiões hipervariáveis, também chamadas de "regiões determinantes de complementaridade" ou "CDRs". A extensão da região estrutural e as CDRs foram definidas (ver, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991, que é incorporada por referência neste documento). O banco de dados de Kabat agora é mantido online. As sequências das regiões de estrutura de diferentes cadeias leves ou pesadas são relativamente conservadas dentro de uma espécie. A região de estrutura de um anticorpo, ou seja, as regiões de estrutura combinadas das cadeias leves e pesadas constituintes, adotam amplamente uma conformação de folha β e as CDRs formam loops que se conectam e, em alguns casos, fazem parte da estrutura da folha β. Assim, as regiões de estrutura atuam para formar um estrutura que fornece o posicionamento das CDRs na orientação correta por interações entre cadeias e não covalentes.
[0044] As CDRs são principalmente responsáveis pela ligação a um epítopo de um antígeno. As CDRs de cada cadeia são tipicamente referidas como CDR1, CDR2 e CDR3, numeradas sequencialmente a partir do terminal N, e também são tipicamente identificados pela cadeia em que a CDR particular está localizada. Assim, um VH de CDR3 está localizada no domínio variável da cadeia pesada do anticorpo no qual é encontrado, enquanto uma V L de CDR1 é a CDR1 do domínio variável da cadeia leve do anticorpo no qual é encontrado. Um anticorpo que se liga a uma proteína direcionada (por exemplo, GPA33) ou molécula (por exemplo, DOTA ou um hapteno DOTA) terá uma região V H específica e uma sequência de região VL e, portanto, sequências CDR específicas. Anticorpos com diferentes especificidades (ou seja, diferentes locais de combinação para diferentes antígenos) têm diferentes CDRs. Embora sejam as CDRs que variam de anticorpo para anticorpo, apenas um número limitado de posições de aminoácidos dentro das CDRs está diretamente envolvido na ligação ao antígeno. Essas posições dentro das CDRs são chamadas de resíduos determinantes de especificidade (SDRs). Exemplos de anticorpos incluem anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, anticorpos recombinantes, anticorpos multiespecíficos, anticorpos biespecíficos e fragmentos de anticorpos. Um anticorpo se liga especificamente a um antígeno.
[0045] Um "anticorpo biespecífico" é um anticorpo que pode se ligar simultaneamente a dois antígenos diferentes. Anticorpos biespecíficos (BsAb) e fragmentos de anticorpos biespecíficos (BsFab) podem ter pelo menos um braço que se liga especificamente a, por exemplo, um antígeno associado a tumor (por exemplo, GPA33) e pelo menos um outro braço que se liga especificamente a um conjugado direcionado que contém um agente terapêutico ou de diagnóstico (por exemplo, um hapteno DOTA associado a um radionuclídeo). Uma variedade de diferentes estruturas de anticorpos biespecíficos são conhecidos no estado da técnica. Em algumas modalidades, cada fração de ligação em um anticorpo biespecífico compreende uma região de VH e/ou VL de diferentes anticorpos monoclonais. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende uma molécula de imunoglobulina com regiões de VH e/ou V L que contêm CDRs de um primeiro anticorpo monoclonal e um fragmento de anticorpo (por exemplo, Fab, F(ab'), F(ab')2, Fd, Fv, dAB, scFv, etc.) tendo regiões de VH e/ou VL que contêm CDRs de um segundo anticorpo monoclonal.
[0046] Conforme usado neste documento, o termo "diacorpos" refere-se a pequenos fragmentos de anticorpo com dois sítios de ligação ao antígeno, cujos fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (V L) no mesmo polipeptídeo corrente (VH VL). Ao usar um ligante que é muito curto para permitir o emparelhamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a emparelhar com os domínios complementares de outra cadeia e criar dois sítios de ligação ao antígeno. Diacorpos são descritos mais detalhadamente em, por exemplo, EP 404,097; WO 93/11161; and 30 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993).
[0047] Conforme usado neste documento, os termos "anticorpos de cadeia única" ou "Fv de cadeia única (scFv)" referem-se a uma molécula de fusão de anticorpo dos dois domínios do fragmento Fv, VL e VH. As moléculas de anticorpo de cadeia única podem compreender um polímero com uma série de moléculas individuais, por exemplo, dímero, trímero ou outros polímeros. Além disso, embora os dois domínios do fragmento F v, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite que sejam feitos como uma única cadeia de proteína em em que as regiões de VL e VH emparelham para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia única (scFv)). Bird et al. (1988) Science 242:423-426 and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad Sci. USA 85:5879-5883. Esses anticorpos de cadeia única podem ser preparados por técnicas recombinantes ou clivagem enzimática ou química de anticorpos intactos.
[0048] Conforme usado neste documento, os termos "anticorpo intacto" ou "imunoglobulina intacta" significam um anticorpo ou imunoglobulina que tem pelo menos dois polipeptídeos de cadeia pesada (H) e dois polipeptídeos de cadeia leve (L) interligados por ligações de dissulfeto. Cada cadeia pesada é composta por uma região variável da cadeia pesada (abreviada neste documento como HCVR ou VH) e uma região constante da cadeia pesada. A região constante da cadeia pesada é composta por três domínios, CH 1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é composta por uma região variável da cadeia leve (abreviada neste documento como LCVR ou VL) e uma região constante da cadeia leve. A região constante da cadeia leve é composta por um domínio, C L. As regiões de VH e VL podem ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de estrutura (FR). Cada VH e VL é composto por três CDRs e quatro FRs, arranjados do terminal amino ao terminal carboxila na seguinte ordem: FR 1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesadas e leves contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina aos tecidos ou fatores do hospedeiro, incluindo várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema complemento clássico.
[0049] Conforme usado neste documento, um "antígeno" se refere a uma molécula à qual um anticorpo pode se ligar seletivamente. O antígeno direcionado pode ser uma proteína (por exemplo, um peptídeo antigênico), carboidrato, ácido nucleico, lipídeo, hapteno ou outro composto de ocorrência natural ou sintético. Um antígeno também pode ser administrado a um indivíduo animal para gerar uma resposta imunológica no indivíduo.
[0050] Conforme usado neste documento, o termo "fragmento de ligação ao antígeno" refere-se a um fragmento de uma estrutura de imunoglobulina inteira que possui uma parte de um polipeptídeo responsável pela ligação a um antígeno. Exemplos do fragmento de ligação ao antígeno útil na presente tecnologia incluem scFv, (scFv) 2, scFvFc, Fab, Fab′ e F(ab′)2, diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpos de cadeia única; e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.
[0051] Por "afinidade de ligação" entende-se a força das interações não covalentes totais entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A afinidade de uma molécula X por seu parceiro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (K d). A afinidade pode ser medida por métodos padrão conhecidos no estado da técnica, incluindo aqueles descritos neste documento. Um complexo de baixa afinidade contém um anticorpo que geralmente tende a se dissociar prontamente do antígeno, enquanto um complexo de alta afinidade contém um anticorpo que geralmente tende a permanecer ligado ao antígeno por um período mais longo.
[0052] Conforme usado neste documento, um "agente de depuração" é um agente que se liga ao excesso de anticorpo bifuncional que está presente no compartimento de sangue de um indivíduo para facilitar a depuração rápida via rins. O uso do agente de depuração antes da administração de um radioterapêutico baseado em DOTA facilita melhores razões tumor-para- fundo em sistemas PRIT.
[0053] Conforme usado neste documento, um "controle" é uma amostra alternativa usada em um experimento para fins de comparação. Um controle pode ser "positivo" ou "negativo". Por exemplo, onde o objetivo do experimento é determinar uma correlação da eficácia de um agente terapêutico para o tratamento de um tipo específico de doença ou condição, um controle positivo (um composto ou composição conhecida por exibir o efeito terapêutico desejado) e um controle negativo (um indivíduo ou uma amostra que não recebe a terapia ou recebe um placebo) são normalmente empregados.
[0054] Conforme usado neste documento, o termo "quantidade eficaz" de uma composição é uma quantidade suficiente para atingir um efeito profilático ou terapêutico desejado, por exemplo, uma quantidade que resulta na diminuição dos sintomas associados a uma doença que está sendo tratada, por exemplo, as doenças ou condições médicas associadas a um polipeptídeo direcionado (por exemplo, câncer de mama, câncer colorretal, câncer de cérebro, etc.). A quantidade de uma composição da presente tecnologia administrada ao indivíduo dependerá do grau, tipo e gravidade da doença e das características do indivíduo, como saúde geral, idade, sexo, peso corporal e tolerância a fármacos. O versado na técnica será capaz de determinar as dosagens apropriadas dependendo destes e de outros fatores. As composições da presente tecnologia também podem ser administradas em combinação com um ou mais compostos terapêuticos adicionais.
[0055] Conforme usado neste documento, o termo "epítopo" significa um determinante antigênico capaz de ligação específica a um anticorpo. Os epítopos geralmente consistem em agrupamentos de moléculas de superfície quimicamente ativos e geralmente têm características estruturais tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas.
[0056] Conforme usado neste documento, o termo "amostra" se refere a amostras clínicas obtidas de um indivíduo ou microrganismos isolados. Em certas modalidades, uma amostra é obtida de uma fonte biológica (ou seja, uma "amostra biológica"), como tecido, fluido corporal ou microrganismos coletados de um indivíduo. As fontes de amostra incluem, mas não estão limitadas a, muco, escarro, lavagem brônquica alveolar (BAL), lavagem brônquica (BW), sangue total, fluidos corporais, líquido cefalorraquidiano (CSF), urina, plasma, soro ou tecido.
[0057] Conforme usado neste documento, o termo uso terapêutico "separado" refere-se a uma administração de pelo menos dois ingredientes ativos ao mesmo tempo ou substancialmente ao mesmo tempo por vias diferentes.
[0058] Conforme usado neste documento, o termo uso terapêutico "sequencial" refere-se à administração de pelo menos dois ingredientes ativos em momentos diferentes, a via de administração sendo idêntica ou diferente. Mais particularmente, o uso sequencial refere-se a toda a administração de um dos ingredientes ativos antes do início da administração do outro ou de outros. Assim, é possível administrar um dos ingredientes ativos durante vários minutos, horas ou dias antes de administrar o outro ingrediente ou ingredientes ativos. Não há tratamento simultâneo neste caso.
[0059] Conforme usado neste documento, o termo uso terapêutico "simultâneo" refere-se à administração de pelo menos dois ingredientes ativos pela mesma via e ao mesmo tempo ou substancialmente ao mesmo tempo.
[0060] Conforme usado neste documento, "liga-se especificamente" refere-se a uma molécula (por exemplo, um anticorpo) que reconhece e se liga a outra molécula (por exemplo, um antígeno), mas não reconhece e se liga substancialmente a outras moléculas. Os termos "ligação específica", "liga-se especificamente a" ou é "específico para" uma molécula particular (por exemplo, um antígeno ou um epítopo em um antígeno), como utilizados neste documento, podem ser exibidos, por exemplo, por um molécula com um Kd para a molécula à qual se liga a cerca de 10 −4 M, 10−5 M, 10−6 M, 10−7 M, 10−8 M, 10−9 M, 10−10 M, 10−11 M, ou 10−12 M.
[0061] Conforme usado neste documento, os termos "indivíduo", "sujeito" ou "paciente" são usados indistintamente e se referem a um organismo individual, um vertebrado, um mamífero ou um humano. Em certas modalidades, o indivíduo, paciente ou sujeito é um humano.
[0062] Conforme usado neste documento, o termo "agente terapêutico" se destina a significar um composto que, quando presente em uma quantidade eficaz, produz um efeito terapêutico desejado em um indivíduo em necessidade.
[0063] "Tratar" ou "tratamento", conforme usado neste documento, cobre o tratamento de uma doença ou distúrbio descrito neste documento, em um indivíduo, como um ser humano, e inclui: (i) inibir uma doença ou distúrbio, ou seja, interromper seu desenvolvimento; (ii) aliviar uma doença ou distúrbio, ou seja, causar a regressão do distúrbio; (iii) retardar a progressão da doença; e/ou (iv) inibir, aliviar ou retardar a progressão de um ou mais sintomas da doença ou distúrbio. Por "tratar um câncer" significa que os sintomas associados ao câncer são, por exemplo, aliviados, reduzidos, curados ou colocados em um estado de remissão.
[0064] Também deve ser apreciado que os vários modos de tratamento de doenças, conforme descrito neste documento, pretendem significar "substancial", que inclui o tratamento total, mas também menor que o total, e em que algum resultado biologicamente ou clinicamente relevante é alcançado. O tratamento pode ser um tratamento contínuo e prolongado para uma doença crônica ou uma única, ou administrações de poucas vezes para o tratamento de uma condição aguda.
Uso de agentes de depuração em radioimunoterapia pré- direcionada (PRIT)
[0065] O índice terapêutico (TI) de radioimunoterapia (RIT) deve ser maximizado para o tratamento eficaz de tumores sólidos (Larson SM et al., Nature Reviews Cancer 15: 347-60 (2015)). RIT com anticorpos IgG radiomarcados sofre de baixo TI devido à farmacocinética lenta do veículo de IgG e, portanto, são frequentemente ineficazes em doses toleráveis.
[0066] Uma alternativa é usar uma abordagem de pré- direcionamento para RIT (PRIT). Durante o PRIT, a etapa lenta de direcionamento ao tumor mediada por anticorpos é separada da administração da radioatividade. O pré-direcionamento é um processo de várias etapas que resolve a lenta depuração do sangue de anticorpos direcionados ao tumor, o que contribui para a toxicidade indesejável em tecidos normais, como a medula óssea. No pré-direcionamento, um radionuclídeo ou outro agente de diagnóstico ou terapêutico é ligado a um veículo que tem uma farmacocinética mais favorável (por exemplo, um composto de baixo peso molecular com depuração renal rápida e absorção de tecido normal baixa e depuração de corpo total (Orcutt KD et al., Molecular imaging and biology 13: 215-21 (2011), como um hapteno DOTA), e a dose para o tecido normal é minimizada ao direcionar o tumor. Para direcionar a radioatividade para tumores, o agente terapêutico circulante (por exemplo, hapteno DOTA) é capturado por BsAb localizado intratumoralmente ou é eliminado de forma eficiente por meio da via renal.
[0067] Os agentes de depuração podem diminuir rapidamente a concentração de biomolécula circulante, formando grandes complexos na circulação que são reconhecidos pelo sistema reticuloendotelial (RES) ou, usando os glicohaptenos apropriados, os receptores de asialoglicoproteína hepática direcionados (ASPGR) (Rossin R et al., Journal Nuclear Medicine 54:1989-95 (2013)). O TI de DOTA-PRIT é altamente variável com base na dosagem do agente de depuração, pois o BsAb circulante retém a capacidade de se ligar a um hapteno DOTA radiomarcado. Para maximizar o direcionamento do tumor do hapteno DOTA radiomarcado, uma dose saturante de BsAb é geralmente usada de modo a assegurar a maior concentração de domínios de anticorpo anti-DOTA para ligação ao hapteno DOTA radiomarcado administrado subsequentemente. Esta etapa apresenta o desafio de remover o excesso de BsAb circulante não ligado antes da administração de hapteno DOTA radiomarcado citotóxico, a fim de maximizar o TI. Embora longos intervalos de tempo possam ser usados para permitir a depuração endógena do BsAb, isso pode impactar a capacidade de ligação do BsAb para o radiohapteno no tumor, uma vez que o BsAb pode ser degradado e/ou internalizado, dependendo da farmacologia molecular do Complexo BsAb-antígeno.
[0068] Um conjugado de hapteno DOTA-dextrano de 500kD (Orcutt KD et al., Molecular Cancer Therapeutics 11: 1365-72 (2012)) foi usado anteriormente para pré-direcionamento baseado em DOTA de antígeno carcinoembrionário. O dextrano-CA foi projetado para se ligar aos domínios anti- DOTA(M)-scFv do BsAb circulante por meio de uma fração DOTA (Y) exibida na estrutura de dextrano e remover o BsAb não ligado do sangue via reconhecimento e catabolismo pelo sistema retículoendotelial (RES). Devido ao seu grande tamanho, a ligação do dextrano-CA ao BsAb associado ao tumor é restrita devido ao extravasamento intratumoral deficiente
[0069] Embora altamente eficaz, o uso de um dextrano-CA tem desvantagens. Como um polímero de glicose de ocorrência natural, a estrutura de dextrano é inerentemente polidispersa, apresentando, assim, desafios relacionados à fabricação de lote a lote reproduzível e uso in vivo. Além disso, a degradação enzimática por RES dextrano-1,6-glucosidase pode levar à introdução de fragmentos de hapteno deste dentro da circulação, que podem competir com o radiohapteno pela ligação BsAb ao tumor. Problemas similares também foram observados com CA à base de albumina durante PRIT de estreptavidina-biotina clínica (Knox SJ et al., Clinical Cancer Research 6: 406-14 (2000); Breitz HB et al., Journal Nuclear Medicine 41: 131-40 (2000)).
Composições da Presente Tecnologia
[0070] Em um aspecto, a presente tecnologia fornece um composto que é , ,
,
,
ou um sal e/ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, e X20 são, cada um, independentemente H ou um único par de elétrons (isto é,
fornecendo um ânion de oxigênio); Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente O ou S; x é 1, 2 ou 3; e y é 1, 2, 3 ou 4.
[0071] Em qualquer modalidade neste documento, o composto pode ser um agente de depuração (também referido neste documento como um "agente de depuração-dendrón" da presente tecnologia, um "dendrón CA" da presente tecnologia, ou similar) que é , ,
,
,
, ou um sal e/ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que M1, M2, M3, M4 e M5 são, cada um, independentemente Lu3+, Sc3+, Ga3+, Y3+, In3+, La3+, Ce3+, Eu3+, Tb3+, or Gd3+; X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19 e X20 são, cada um, independentemente H ou um único par de elétrons (isto é, fornecendo um ânion oxigênio); Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente O ou S; x é 1, 2 ou 3; e y é 1, 2, 3 ou 4.
[0072] Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que M1, M2, M3, M4 e M5 sejam, cada um, independentemente, não um radionuclídeo. Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que Y 1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente S. Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que x seja 1 ou 2. Em qualquer modalidade deste documento, pode ser que y seja 2 ou 3.
[0073] Em um aspecto relacionado, é fornecida uma composição que inclui uma ou mais de qualquer modalidade de um composto como descrito acima, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável (coletivamente, tais veículos, excipientes, prenchimentos, etc., serão referidos como "veículos farmaceuticamente aceitáveis”, a menos que um termo mais específico seja usado). As composições podem ser usadas nos métodos e imagens descrito neste documentos. A presente tecnologia também fornece composições farmacêuticas e medicamentos que incluem um ou mais de qualquer modalidade de um composto como descrito acima e um veículo farmaceuticamente aceitável. Essas composições farmacêuticas podem ser embaladas na forma de dosagem unitária. As composições farmacêuticas e medicamentos podem ser preparados pela mistura de um ou mais compostos da presente tecnologia, sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos e/ou solvatos dos mesmos, com veículos, excipientes, ligantes, diluentes ou similares farmaceuticamente aceitáveis. Essas composições podem estar na forma de, por exemplo, grânulos, pós, comprimidos, cápsulas, xarope, supositórios, injeções, emulsões, elixires, suspensões ou soluções. As presentes composições podem ser formuladas para várias vias de administração, por exemplo, por administração oral, parenteral ou retal. A administração parenteral ou sistêmica inclui, mas não está limitada a, injeções subcutâneas, intravenosas, intraperitoneais e intramusculares. As seguintes formas de dosagem são fornecidas a título de exemplo e não devem ser interpretadas como limitativas da presente tecnologia.
[0074] Para administração oral, bucal e sublingual, pós, suspensões, grânulos, comprimidos, pílulas, cápsulas, cápsulas de gel e comprimidos ovais são aceitáveis como formas de dosagem sólidas. Estes podem ser preparados, por exemplo, misturando um ou mais compostos da presente tecnologia, ou sais ou tautômeros farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, com pelo menos um aditivo, como um amido ou outro aditivo. Os aditivos adequados são sacarose, lactose, açúcar de celulose, manitol, maltitol, dextrano, amido, ágar, alginatos, quitinas, quitosanas, pectinas, goma tragacanta, goma arábica, gelatinas, colágenos, caseína, albumina, polímeros ou glicerídeos sintéticos ou semissintéticos. Opcionalmente, as formas de dosagem oral podem conter outros ingredientes para auxiliar na administração, como um diluente inativo, ou lubrificantes, como estearato de magnésio, ou conservantes, como parabeno ou ácido sórbico, ou antioxidantes, como ácido ascórbico, tocoferol ou cisteína, um agente desintegrante, aglutinantes, espessantes, tampões, adoçantes, agentes aromatizantes ou agentes perfumantes. Comprimidos e pílulas podem ser posteriormente tratados com materiais de revestimento adequados conhecidos no estado da técnica.
[0075] As formas de dosagem líquidas para administração oral podem estar na forma de emulsões, xaropes, elixires, suspensões e soluções farmaceuticamente aceitáveis, que podem conter um diluente inativo, como água. As formulações farmacêuticas e medicamentos podem ser preparados como suspensões líquidas ou soluções usando um líquido estéril, tal como, mas não limitado a, um óleo, água, um álcool e combinações dos mesmos. Surfactantes farmaceuticamente adequados, agentes de suspensão, agentes emulsionantes, podem ser adicionados para administração oral ou parenteral.
[0076] Como observado acima, as suspensões podem incluir óleos. Esses óleos incluem, mas não estão limitados a, óleo de amendoim, óleo de gergelim, óleo de semente de algodão, óleo de milho e azeite. A preparação da suspensão também pode conter ésteres de ácidos graxos, tais como oleato de etila, miristato de isopropila, glicerídeos de ácidos graxos e glicerídeos de ácidos graxos acetilados. As formulações de suspensão podem incluir álcoois, tais como, mas não limitados a, etanol, álcool isopropílico, álcool hexadecílico, glicerol e propilenoglicol. Éteres, tais como, mas não se limitando a, poli (etilenoglicol), hidrocarbonetos de petróleo, tais como óleo mineral e petrolato; e água também pode ser usada em formulações de suspensão.
[0077] As formas de dosagem injetáveis geralmente incluem suspensões aquosas ou suspensões oleosas que podem ser preparadas usando um dispersante ou agente umectante adequado e um agente de suspensão. As formas injetáveis podem estar em fase de solução ou na forma de uma suspensão, que é preparada com um solvente ou diluente. Os solventes ou veículos aceitáveis incluem água esterilizada, solução de Ringer ou uma solução salina aquosa isotônica. Uma solução isotônica será entendida como isotônica com o indivíduo. Alternativamente, óleos estéreis podem ser empregados como solventes ou agentes de suspensão. Normalmente, o óleo ou ácido graxo é não volátil, incluindo óleos naturais ou sintéticos, ácidos graxos, mono-, di- ou tri- glicerídeos.
[0078] Para injeção, a formulação farmacêutica e/ou medicamento pode ser um pó adequado para reconstituição com uma solução apropriada como descrito acima. Exemplos destes incluem, mas não estão limitados a, liofilizados, secos por rotação ou pós secos por pulverização, pós amorfos, grânulos, precipitados ou partículas. Para injeção, as formulações podem conter opcionalmente estabilizadores, modificadores de pH, surfactantes, modificadores de biodisponibilidade e combinações dos mesmos.
[0079] Além das formas de dosagem representativas descritas acima, os excipientes e veículoes farmaceuticamente aceitáveis são geralmente conhecidos dos versados na técnica e são assim incluídos na presente tecnologia. Tais excipientes e veículos são descritos, por exemplo, em "Remingtons Pharmaceutical Sciences" Mack Pub. Co., New Jersey (1991), que é incorporada por referência neste documento.
[0080] As formulações da presente tecnologia podem ser projetadas para ser de ação curta, liberação rápida, ação prolongada e liberação sustentada, conforme descrito abaixo. Assim, as formulações farmacêuticas também podem ser formuladas para liberação controlada ou para liberação lenta.
[0081] As presentes composições também podem compreender, por exemplo, micelas ou lipossomas, ou alguma outra forma encapsulada, ou podem ser administradas em uma forma de liberação prolongada para fornecer um armazenamento prolongado e/ou efeito de administração. Portanto, as formulações farmacêuticas e medicamentos podem ser comprimidos em peletes ou cilindros e implantados intramuscularmente ou subcutaneamente como injeções de depósito ou como implantes, tais como stents. Tais implantes podem empregar materiais inertes conhecidos, como silicones e polímeros biodegradáveis.
[0082] As dosagens específicas podem ser ajustadas dependendo das condições da doença, idade, peso corporal, condições gerais de saúde, sexo e dieta do indivíduo, intervalos de dosagem, vias de administração, taxa de excreção e combinações de fármacos. Qualquer uma das formas de dosagem acima contendo quantidades eficazes está bem dentro dos limites da experimentação de rotina e, portanto, bem dentro do escopo da presente tecnologia. Métodos terapêuticos da presente tecnologia
[0083] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para aumentar a sensibilidade do tumor à terapia por radiação em um indivíduo diagnosticado com câncer, compreendendo (a) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo biespecífico anti-DOTA ao indivíduo, em que o anticorpo biespecífico anti-DOTA é configurado para se localizar em um tumor que expressa um antígeno de tumor alvo; (b) administrar uma quantidade eficaz de um agente de depuração da presente tecnologia ao indivíduo; e (c) administrar uma quantidade eficaz de um hapteno DOTA radiomarcado ao indivíduo, em que o hapteno DOTA é configurado para formar um complexo com o anticorpo biespecífico anti-DOTA.
[0084] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece um método para tratar o câncer em um indivíduo em necessidade, compreendendo (a) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo biespecífico anti-DOTA ao indivíduo, em que o anticorpo biespecífico anti-DOTA é configurado para se localizar em um tumor que expressa um antígeno de tumor alvo; (b) administrar uma quantidade eficaz de um agente de depuração da presente tecnologia ao indivíduo; e (c) administrar uma quantidade eficaz de um hapteno DOTA radiomarcado ao indivíduo, em que o hapteno DOTA é configurado para formar um complexo com o anticorpo biespecífico anti-DOTA. Os métodos para tratar o câncer podem compreender ainda sequencialmente, separadamente ou simultaneamente administrar ao indivíduo pelo menos um agente quimioterapêutico selecionado a partir do grupo que consiste em mostardas de nitrogênio, derivados de etilenimina, alquil sulfonatos, nitrosoureias, gemcitabina, triazenos, análogos de ácido fólico, antraciclinas, taxanos, inibidores de COX-2, análogos de pirimidina, análogos de purina, antibióticos, inibidores de enzimas, epipodofilotoxinas, complexos de coordenação de platina, alcalóides de vinca, ureias substituídas, derivados de metil hidrazina, supressores adrenocorticais, antagonistas de hormônio, endostatina, taxóis, camptotecinas, SN-38, doxorrubicina, análogos da doxorrubicina, antimetabólitos, agentes alquilantes, antimitóticos, agentes anti-angiogênicos, inibidores da tirosina quinase, inibidores da mTOR, inibidores da proteína de choque térmico (HSP90), inibidores do proteossoma, inibidores de HDAC, agentes pró-apoptóticos, metotrexato e CPT-11.
[0085] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, os níveis radioativos emitidos pelo complexo de anticorpo biespecífico anti-DOTA-hapteno DOTA radiomarcado são detectados entre 4 a 24 horas após o hapteno DOTA radiomarcado ser administrado. Os níveis radioativos emitidos pelo complexo podem ser expressos como a porcentagem da dose injetada por grama de tecido (% ID/g). O valor de referência pode ser calculado medindo os níveis radioativos presentes em tecidos não tumorais (normais) e computando os níveis radioativos médios presentes em desvio padrão de tecidos não tumorais (normais). Em algumas modalidades, o valor de referência é o valor de absorção padrão (SUV). Ver Thie JA, J Nucl Med. 45 (9): 1431-4 (2004). A eficácia terapêutica de tal complexo pode ser determinada calculando a área sob a curva (AUC) do tumor: Razão de tecido normal AUC. Em algumas modalidades, o complexo tem um tumor AUC: Razão de tecido normal de AUC de cerca de 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1, 65:1, 70:1, 75:1, 80:1, 85:1, 90:1, 95:1 ou 100:1. Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, a razão de níveis radioativos entre um tumor e tecido normal é de cerca de 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1, 65:1, 70:1, 75:1, 80:1, 85:1, 90:1, 95:1 ou 100:1.
[0086] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o antígeno de tumor alvo é selecionado a partir do grupo que consiste em GPA33, HER2/neu, GD2, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MUM-1, CDK4, N- acetilglucosaminiltransferase, p15, gp75, beta-catenina, ErbB2, antígeno de câncer 125 (CA-125), antígeno carcinoembriônico (CEA), RAGE, MART (antígeno de melanoma), MUC-1, MUC-2, MUC-3, MUC-4, MUC-5ac, MUC-16, MUC-17, tirosinase, Pmel 17 (gp100), sequência de íntron V GnT-V (sequência de íntron V de N-acetilglucoaminiltransferase V), câncer de próstata psm, PRAME (antígeno de melanoma), β-catenina, EBNA (antígeno nuclear do vírus de Epstein-Barr) 1-6, p53, proteína de resistência pulmonar (LRP) Bcl-2, antígeno específico da próstata (PSA), Ki-67, CEACAM6, antígeno específico do cólon-p (CSAp), HLA-DR, CD40, CD74, CD138, EGFR, EGP-1, EGP-2, VEGF, PlGF, fator de crescimento similar à insulina (ILGF), tenascina, fator de crescimento derivado de plaquetas, IL-6, CD20, CD19, PSMA, CD33, CD123, MET, DLL4, Ang-2, HER3, IGF-1R, CD30, TAG-72, SPEAP, CD45, L1-CAM, antígeno Lewis Y (Ley), E-caderina, V-caderina e EpCAM.
[0087] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o anticorpo biespecífico anti-DOTA, o agente de depuração e/ou o hapteno DOTA radiomarcado é administrado por via intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutâneo, intracerebroventricular, oral ou intranasal.
[0088] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de mama, câncer colorretal, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, carcinoma hepatocelular, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer gástrico ou de estômago, câncer de pâncreas, câncer de tireoide, câncer renal ou renal, câncer de próstata, melanoma, sarcomas, carcinomas, tumor de Wilms, câncer endometrial, glioblastoma, câncer de células escamosas, astrocitomas, carcinoma de glândula salivar, câncer vulvar, carcinoma peniano, e câncer de cabeça e pescoço. O câncer de cérebro pode ser um adenoma pituitário, um meningioma, um neuroblastoma ou um craniofaringioma.
[0089] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o hapteno DOTA radiomarcado compreende um ou mais dentre Proteus-DOTA, ácido S-2-(R- aminobenzil) -1,4,7,10-tetraazaciclododecano tetra-acético (DOTA-Bn), DOTA - Bn-biotina, BAD (((S)-2-(4-(2-bromo) -acetamido) -benzil)-DOTA), NBD ((S) -2- (4-nitrobenzil)-DOTA), DOTA -RGD, DOTA-PEG-E (c (RGDyK))2, DOTA-8-AOC- BBN, p-NO2 -Bn-DOTA, DOTA-PESINA, DOTA-biotina-sarcosina (DOTA- biotina), ácido mono 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacético (éster de N-hidroxisuccinimida) (DOTA-NHS) ou DOTATyrLysDOTA. Alternativamente, qualquer hapteno DOTA radiomarcado conhecido na técnica pode ser empregado nos métodos divulgados neste documento. O hapteno DOTA radiomarcado pode ser marcado com um radionuclídeo selecionado a partir do 213 211 225 grupo que consiste em Bi, At, Ac, 152Dy, 212 Bi, 223 Ra, 219 Rn, 215 Po, 211 Bi, 221 Fr, 217At, 255Fm, 86Y, 90Y, 89Sr, 165Dy, 186Re, 188Re, 177Lu, 67Cu, 111In, 67Ga, 51Cr, 58 99m 103m 195m 119 161 189m 192 201 203 68 227 Co, Tc, Rh, Pt, Sb, Ho, Os, Ir, Tl, Pb, Ga, Th, and 64Cu.
[0090] Em qualquer uma das modalidades anteriores dos métodos divulgados neste documento, o indivíduo é humano. O anticorpo biespecífico anti-DOTA é administrado sob condições e por um período de tempo (por exemplo, de acordo com um regime de dosagem) suficiente para saturar as células tumorais e qualquer anticorpo biespecífico anti-DOTA não ligado é removido da corrente sanguínea após a administração de o anticorpo biespecífico anti-DOTA. Em algumas modalidades, o hapteno DOTA radiomarcado é administrado após um período de tempo que pode ser suficiente para permitir a depuração do anticorpo biespecífico anticorpo biespecífico anti- DOTA não ligado.
[0091] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o agente de depuração e o hapteno DOTA radiomarcado são administrados sem administração adicional do anticorpo biespecífico anti-DOTA. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico anti-DOTA é administrado de acordo com um regime que inclui pelo menos um ciclo de: (i) administração de um anticorpo biespecífico anti-DOTA (opcionalmente de modo que as células de tumor relevantes sejam saturadas); (ii) administração de um agente de depuração da presente tecnologia e um hapteno DOTA radiomarcado e; (iii) administração adicional opcional do hapteno DOTA radiomarcado e/ou o agente de depuração, sem administração adicional do anticorpo biespecífico anti-DOTA. Em algumas modalidades, o método pode compreender vários desses ciclos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais ciclos).
[0092] O hapteno DOTA radiomarcado pode ser administrado a qualquer momento entre 1 minuto a 4 ou mais dias após a administração do anticorpo biespecífico anti-DOTA. Por exemplo, em algumas modalidades, o hapteno DOTA radiomarcado é administrado a 1 minuto, 2 minutos, 3 minutos, 4 minutos, 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos, 25 minutos, 30 minutos, 35 minutos, 40 minutos, 45 minutos, 50 minutos, 55 minutos, 1 hora, 1,25 horas, 1,5 horas, 1,75 horas, 2 horas, 2,5 horas, 3 horas, 3,5 horas, 4 horas, 4,5 horas, 5 horas, 5,5 horas, 6 horas, 6,5 horas, 7 horas, 7,5 horas, 8 horas, 8,5 horas, 9 horas, 9,5 horas, 10 horas, 11 horas, 12 horas, 13 horas, 14 horas, 15 horas, 16 horas, 17 horas, 18 horas, 19 horas, 20 horas, 21 horas, 22 horas, 23 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, ou qualquer faixa, após a administração do anticorpo biespecífico anti-DOTA. Alternativamente, o hapteno DOTA radiomarcado pode ser administrado a qualquer momento após 4 ou mais dias após a administração do anticorpo biespecífico anti-DOTA.
[0093] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos métodos divulgados neste documento, o hapteno DOTA radiomarcado pode ser administrado a qualquer momento entre 1 minuto a 4 ou mais dias após a administração do agente de depuração. Por exemplo, em algumas modalidades, o hapteno DOTA radiomarcado é administrado a 1 minuto, 2 minutos, 3 minutos, 4 minutos, 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos, 25 minutos, 30 minutos, 35 minutos, 40 minutos, 45 minutos, 50 minutos, 55 minutos, 1 hora, 1,25 horas, 1,5 horas, 1,75 horas, 2 horas, 2,5 horas, 3 horas, 3,5 horas, 4 horas, 4,5 horas, 5 horas, 5,5 horas, 6 horas, 6,5 horas, 7 horas, 7,5 horas, 8 horas, 8,5 horas, 9 horas, 9,5 horas, 10 horas, 11 horas, 12 horas, 13 horas, 14 horas, 15 horas, 16 horas, 17 horas, 18 horas, 19 horas, 20 horas, 21 horas, 22 horas, 23 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, ou qualquer faixa, após a administração do agente de depuração. Alternativamente, o hapteno DOTA radiomarcado pode ser administrado a qualquer momento após 4 ou mais dias após a administração do agente de depuração.
Kits
[0094] A presente tecnologia fornece kits contendo componentes adequados para o tratamento de câncer em um paciente. Em um aspecto, os kits compreendem um agente de depuração da presente tecnologia e instruções de uso. Os kits podem ainda compreender pelo menos um anti-DOTA BsAb. Em algumas modalidades, o pelo menos um anti-DOTA BsAb se liga a um antígeno de tumor alvoselecionado a partir do grupo que consiste em GPA33, HER2/neu, GD2, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MUM-1, CDK4, N- acetilglucosaminiltransferase, p15, gp75, beta-catenina, ErbB2, antígeno de câncer 125 (CA-125), antígeno carcinoembriônico (CEA), RAGE, MART (antígeno de melanoma), MUC-1, MUC-2, MUC-3, MUC-4, MUC-5ac, MUC-16, MUC-17, tirosinase, Pmel 17 (gp100), sequência de íntron V GnT-V (sequência de íntron V de N-acetilglucoaminiltransferase V), câncer de próstata psm, PRAME (antígeno de melanoma), β-catenina, EBNA (antígeno nuclear do vírus de Epstein-Barr) 1-6, p53, proteína de resistência pulmonar (LRP) Bcl-2, antígeno específico da próstata (PSA) e Ki-67. Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades, o pelo menos um anti-DOTA BsAb se liga a um antígeno de tumor direcionado selecionado a partir do grupo que consiste em CEACAM6, antígeno específico do cólon-p (CSAp), HLA-DR, CD40, CD74, CD138, EGFR, EGP-1, EGP-2, VEGF, PlGF, fator de crescimento similar à insulina (ILGF), tenascina, fator de crescimento derivado de plaquetas, IL-6, CD20, CD19, PSMA, CD33, CD123, MET, DLL4, Ang-67, HER3, IGF-1R, CD30, TAG-72, SPEAP, CD45, L1-CAM, antígeno Lewis Y (Ley), E-caderina, V- caderina e EpCAM.. O pelo menos um anti-DOTA BsAb pode ser fornecido na forma de uma seringa preenchida ou caneta de autoinjeção contendo uma formulação líquida estéril ou preparação liofilizada do anticorpo (por exemplo, Kivitz et al., Clin. Ther. 28:1619-29 (2006)).
[0095] Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades, os kits compreendem ainda um hapteno DOTA que é opcionalmente marcado com um ou mais radionuclídeos. Exemplos de haptenos
DOTA incluem, mas não estão limitados a Proteus-DOTA, ácido S-2- (R- aminobenzil) -1,4,7,10-tetraazaciclododecano tetra-acético (DOTA-Bn),, DOTA - Bn-biotina, BAD (((S) -2- (4- (2-bromo) -acetamido) -benzil) -DOTA), NBD ((S) - 2- (4-nitrobenzil) -DOTA), DOTA -RGD, DOTA-PEG-E (c (RGDyK)) 2, DOTA-8- AOC-BBN, p-NO 2 -Bn-DOTA, DOTA-PESINA, DOTA-biotina-sarcosina (DOTA- biotina), ácido mono 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacético (éster de N-hidroxisuccinimida) (DOTA-NHS) ou DOTATyrLysDOTA. Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades dos kits da presente tecnologia, 213 211 225 o um ou mais radionuclídeos são selecionados dentre Bi, At, Ac, 152Dy, 212 223 219 215 211 221 217 255 Bi, Ra, Rn, Po, Bi, Fr, At e Fm. Adicionalmente ou alternativamente, em certas modalidades, um ou mais radionuclídeos são selecionados a partir do grupo que consiste em 86Y, 90Y, 89Sr, 165Dy, 186Re, 188Re, 177 67 111 67 51 58 99m 103m 195m 119 161 189m Lu, Cu, In, Ga, Cr, Co, Tc, Rh, Pt, Sb, Ho, Os, 192 Ir, 201Tl, 203Pb, 68Ga, 227Th e 64Cu.
[0096] Se os componentes do kit não forem formulados para administração oral, um dispositivo capaz de administrar os componentes do kit por alguma outra via pode ser incluído. Exemplos de tais dispositivos incluem seringas (para administração parenteral) ou dispositivos de inalação.
[0097] Os componentes do kit podem ser embalados juntos ou separados em dois ou mais recipientes. Em algumas modalidades, os recipientes podem ser frascos que contêm formulações estéreis e liofilizadas de um agente de depuração divulgado neste documento, um hapteno DOTA e/ou uma composição anti-DOTA BsAb que são adequados para reconstituição. Um kit também pode conter um ou mais tampões adequados para reconstituição e/ou diluição de outros reagentes. Outros recipientes que podem ser usados incluem, mas não estão limitados a, uma bolsa, bandeja, caixa, tubo ou similares. Os componentes do kit podem ser embalados e mantidos esterilmente dentro dos recipientes.
EXEMPLOS Exemplo 1: Síntese exemplar de compostos da presente tecnologia
[0098] Geral. O DOTA-Bn-isotiocianato (p-SCN-Bn-DOTA) foi adquirido na Macrocyclics, Inc. (Plano, TX) e a Amina-PEG4-DOTA foi adquirida na CheMatech (Dijon, França). O ácido clorídrico de qualidade Optima ™ foi adquirido na Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA). A resina Chelex-100, malha 200-400 foi adquirida a Bio-Rad Laboratories (Hercules, CA). As colunas de exclusão de tamanho de filtração em gel PD-10 (contendo 8,3 mL de
TM resina/coluna Sephadex G-25) foram adquiridas de GE Healthcare Life Sciences (Pittsburgh, PA). Todos os outros reagentes e produtos químicos de grau de síntese foram adquiridos da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) e usados sem purificação adicional. Todos os solventes usados para análise por HPLC (grau de HPLC) e purificação do composto também foram adquiridos na Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA). Todos os tampões e soluções foram preparados com água ultrapura (resistividade de 18 MΩ-cm).
[0099] Todos os dados de espectrometria de massa de cromatografia líquida (LC/MS) foram obtidos usando um sistema Waters Autopure (Milford, MA) compreendendo a seguinte instrumentação: 2767 Sample Manager, 2545 Binary Gradient Module, System Fluidics Organizer, 2424 Evaporative Light Scattering Detector, 2998 Photodiode Array Detector, 3100 Mass Detector. Solventes de HPLC (solvente A, 0,05% de TFA em água; solvente B, 0,05% de TFA em acetonitrila) foram filtrados antes do uso. O método analítico foi 5-25% de solvente B em 10 min, taxa de fluxo de 1,2 mL/min. Colunas analíticas: Waters XBridge BEH300 (Milford, MA), C4, 3,5 µm, 4,6 x 50 mm e C18, 4 µm, 4,6 x 50 mm. Método preparativo: 5-25% de solvente B em 30 min, taxa de fluxo de 20 mL/min. Coluna preparativa: Waters XBridge Prep (Milford, MA) C18, 4 µm, Densidade de leito ideal, 19 x 150 mm.
[00100] Todos os dados de NMR foram obtidos com instrumentos Bruker AV500 ou AV600 (Bruker, Billerica, MA) à temperatura ambiente. As seguintes abreviaturas foram usadas: singleto(s), singleto largo (bs), dupleto (d), tripleto (t), quarteto (q), penteto (p), dupleto de um dupleto (dd), multipleto (m).
[00101] Todos os experimentos envolvendo moléculas com alta capacidade de complexação de metais, como DOTA, foram conduzidos em vidraria que foi pré-lavada com HCl isento de metal, enxaguada com água de alta pureza (por exemplo, água destilada com vidro) e seca em estufa. A cromatografia foi realizada em colunas de vidro empacotadas manualmente para evitar o carregamento do agente complexante com metal lixiviado ou extraído das paredes da coluna de metal. As purificações de fase reversa foram realizadas em colunas de vidro sem metal, limpas, que foram embaladas manualmente com sílica gel C-18 solta. O conteúdo de água nos complexos finais não foi medido.
[00102] CCA-16-metil éster – NHBoc (ilustrado abaixo) e 5-((tert- butoxicarbonil) amino) pentil-2-acetamido-2-desoxi-1-tio-3,4,6-tri-O-acetil-α-D- galactopiranosídeo ("Mono-peracetil-açúcar-NHBoc") foram preparados de acordo com métodos e protocolos similares, conforme descrito em Yoo, B. et al. “N-Acetylgalactosamino Dendrons as Clearing Agents to Enhance Liver Targeting of Model Antibody-Fusion Protein,” Bioconjugate Chem. 2013, 24, 2088-2103 (e as Informações de Apoio que as acompanham) e em Cheal, SM et al. “Evaluation of Glycodendron and Synthetically Modified Dextran Clearing Agents for Multistep Targeting of Radioisotopes for Molecular Imaging and Radioimmunotherapy,” Mol. Pharmaceutics 2014, 11, 400-16 (e as Informações de Apoio que a acompanham), cada uma das quais é incorporada por referência neste documento. Dados de caracterização relevantes para CCA-16-metil éster– NHBoc e Mono-peracetil-açúcar-NHBoc são fornecidos abaixo.
[00103] CCA-16-metil éster-NHBoc:
H NMR (600 MHz, D2O) : 3,68, 3,66 (2s, 48 H, OCH 3), 3,30-3,26 (m, 32 H), 3,22-3,19 (m, 32 H), 2,83 (bs, NCH 3), 2,35-2,25 (m, 64 H), 1,69-1,51 (m, 128 H), 1,44 (s, 9 H, C(CH3)3), 1,34-1,29 (m, 64 H). 13C NMR (125 MHz, D2O) : 174,10, 173,87, 172,10, 51,57, 51,48, 47,86, 47,79, 45,78, 45,70, 33,95, 33,84, 33,83, 33,05, 32,89, 29,21, 28,90, 28,90, 27,70, 27,48, 27,46, 26,99, 26,84, 26,55, 26,42, 25,23, 25,13, 24,68, 24,64.
[00104] Mono-peracetil-açúcar-NHBoc (5-((terc-butoxicarbonil) amino) pentil-2-acetamido-2-desoxi-1-tio-3,4,6-tri-O-acetil-α-D- galactopiranosídeo) : 1H NMR (600 MHz, D2O) : 5,57 (d, 1 H, J=7,4 Hz), 5,49 (d, 1 H, J=4,4 Hz), 5,38 (d, 1 H, J=2,4 Hz), 5,05 (dd, 1 H, J=2,4 Hz), J=7,4 Hz), 4,80-4,74 (m, 1 H), 4,58 (bs, 1H), 4,54 (t, 1 H, J=5,4 Hz), 4,13 (dd, 1 H, J=9,6 Hz, J=5,4 Hz), 4,09 (dd, 1 H, J=9,6 Hz, J=5,4 Hz), 3,14-3,08 (m, 2 H), 2,66-2,55 (m, 2 H), 2,16, 2,05, 2,01, 1,98 (4s, 12 H, COCH3), 1,67-1,61 (m, 2 H), 1,44 (s, 9 H, C(CH3)3), 1,41-1,38 (m, 2 H). C NMR (125 MHz, D2O) : 171,00, 170,39, 13 170,28, 170,15, 155,98, 84,93, 68,54, 67,34, 67,24, 61,83, 48,33, 40,38, 30,97, 29,62, 29,28, 28,43, 25,94, 23,34, 20,75, 20,71.
[00105] Síntese exemplar
[00106] CCA-16-ácido:
CCA-16-metil éster-NHBoc (2,1 g, 0,54 mmol) em MeOH (60 mL) foi adicionado NaOH (10 N, 16 mL) e água (16 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1h.
O pH foi então ajustado para 5,0 com HCl 2,0 N e a solução foi carregada em um funil de separação.
Extração com DCM/t- Butanol (3/1, v/v), 150 mL x 5, e as camadas orgânicas combinadas foram secas brevemente sobre Na2SO4. Após filtração sobre um leito de celite, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi posteriormente seco em alto vácuo durante 2h para fornecer 2,0 g de um óleo espesso incolor.
O produto era de pureza suficiente para ser diretamente submetido à próxima etapa.
[00107] CCA-16-açúcar-NHBoc:
CCA-16-ácido (2,0 g, 0,54 mmol) foi diluído em DMF (80 mL) antes do tratamento com HATU (4,0 g, 10,5 mmol) e 5-amino-1-pentil-α-tio tetraacetilgalactosamina (5,6 g, 9,9 mmol)) A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 min, antes de DIPEA (8,0 mL) ser adicionado.
Após 1h, foi adicionado DCM (200 mL) e a mistura de reação foi lavada com água (2 x 100 mL). A camada orgânica foi então seca brevemente sobre Na 2SO4, filtrou-se sobre um leito de celite, e o filtrado foi concentrado sob vácuo.
A purificação por cromatografia em coluna flash usando o gradiente de 0% a 15% de MeOH em DCM (v/v) forneceu CCA-16-açúcar-NHBoc, 4,9 g, 85% de rendimento. 1H NMR (600 MHz, D2O) : 7,95 (bs, 12 H, NH), 5,64-5,61 (m, 16 H), 5,47-5,46 (d, 16 H, J=2,8 Hz), 5,06 (dd, 16 H, J=11,8 Hz), 4,64- 4,60 (m, 32 H), 4,18-4,12 (m, 32 H), 3,35 (m, 32 H), 3,21-3,19 (m, 36 H), 3,02, 2,88 (2s, 3 H, NCH 3), 2,86 -2,84 (bs, 4 H), 2,70-2,61 (m, 32H), 2,41-2,38 (m, 36 H), 2,24 (m, 32 H), 2,21, 2,06, 1,98, 1,97 (4s, 192 H, COCH 3), 1,69-1,64 (m, 128 H, 1,59-1,53 (m, 70 H), 1,48 (s, 9 H, OC (CH 3), 1,48-1,46 (m, 32), 1,40-1,33 (m, 70 H). 13C NMR (125 MHz, D2O) : 174,60, 174,38, 174,30, 173,41, 172,23, 172,14, 170,66, 170,34, 84,07, 68,23, 67,23, 66,80, 61,78, 53,46, 45,67, 39,01, 38,88, 35,73, 35,63, 35,58, 32,59, 32,51, 30,03, 29,06, 28,66, 28,66, 28,66, 28,54, 27,57, 27,08, 26,37, 26,28, 26,22, 26,10, 25,83, 25,45, 25,36, 25,18, 25,10, 21,26, 21,22, 19,44, 19,37, 19,24.
[00108] CCA-16-peracetil-α-tiogalactosamina-NH2·TFA:
20 mg de CCA-16-peracetil-α-tiogalactosamina-NHBoc (1,9 µmol) em 0,8 mL de TFA a 20% em diclorometano (v/v) foi agitado à temperatura ambiente por 60 min, em seguida, a mistura foi evaporada sob pressão reduzida para remover TFA e DCM.
A evolução da reação foi monitorada por LCMS, foi executada em um Sistema Autopure (Waters) usando C4 (Xbridge, Waters, 4,6 X 50 mm) usando o gradiente 5-95% (v/v) de acetonitrila em água contendo 0,05% de TFA ao longo de 10 min.
A detecção foi assegurada por detecções concomitantes de Especificação de Massa, Matriz de Diodo e Espalhamento de Luz Evaporativa.
O resíduo (20 mg) foi ainda seco durante a noite sob alto vácuo e foi usado diretamente na próxima etapa.
[00109] CCA-16-peracetil-α-tiogalactosamina-NHCSNMe-Bn- DOTA:
O sal de amônio bruto (CCA-16-peracetil-α-tiogalactosamina-NH2 TFA) e P- SCN-Bn-DOTA (2,5 mg, 3,8 µmol, 2 eq) foi dissolvido em DMF (0,3 mL) e Et 3N (6 µmL) foi adicionado.
A mistura homogênea resultante foi agitada à temperatura ambiente por 4h, e os voláteis foram removidos sob alto vácuo à temperatura ambiente para dar uma espuma de pureza suficiente para uso na próxima etapa. A avaliação de LCMS foi executada no mesmo sistema conforme descrito na etapa anterior, mas em vez disso usando uma coluna XBridge C18 (4,6 X 150 mm) e usando o gradiente de 40-95% (v/v) de acetonitrila em água contendo 0,05% de TFA.
[00110] CCA-16- α -tio-peracetil galactosamina-DOTA-Y3+:
O material bruto da etapa anterior; CCA-16-peracetil-α -tiogalactosamina- NHCSNMe-Bn-DOTA foi adicionado a uma solução de YCl3· 6H2O (6 mg) em 0,05 M de HCl (0,2 mL) e 0,5 M de NH4OAc (0,2 mL). A mistura foi agitada durante 4 h.
As tentativas de purificação por HPLC nesta fase não foram bem sucedidas.
No entanto, o monitoramento analítico mostrou que a reação estava completa com pureza razoável.
LCMS foi executado em uma coluna XBridge C18 usando o sistema de gradiente 5-95% (v/v) acetonitrila em água (ambos contendo 0,05% de TFA) ao longo de 10 min.
O resíduo foi submetido à próxima e última etapa.
ESI-MS (m/z): [M+6H]6+ calc. 1.847,55, obs. 1.847,86.
[00111] CCA-16-DOTA-Y3+:
O CCA-16-α-tio-peracetil galactosamina-DOTA-Y3+ bruto foi dissolvido em MeOH (0,5 mL) e um NaOH desgaseificado (0,2 N, 400 µL) foi adicionado à solução.
Após 30 min, a mistura de reação foi evaporada à secura e retomada em um mínimo de água e carregada em HPLC (XBridge C18, gradiente de 20-70% (v/v) de acetonitrila em água (ambos contendo 0,05% de TFA), 10 min). As frações apropriadas foram reunidas e liofilizadas para fornecer um total de 22 mg do composto alvo como uma espuma branca, com um rendimento geral de 64% a partir de CCA-16-metil éster-NHBoc. 1H NMR (600 MHz, D2O) : 7,21-7,24 (m, 4 H, Ph), 5,43 (d, 16 H, J=5,2 Hz, Haçúcar-1), 4,27 (dd, 16 H, J=5,2 Hz, J=11,2 Hz, Haçúcar-2), 4,17-4,14 (m, 16 H, Haçúcar-5), 3,96 (d, 16 H, J=2,7 Hz, Haçúcar-4), 3,75 (dd, 16 H, J=2,7 Hz, J=11,2 Hz, Haçúcar-3), 3,68 (d, 32 H, J=6,0 Hz, Haçúcar-6), 3,23 (bs, 64 H), 3,15-3,08 (m, 36 H), 3,00 e 2,85 (2s, 3 H, NCH 3), 2,58-2,47 (m, 34 H), 2,30 (bs, 32 H), 2,16-2,13 (m, 34 H), 1,96 (s, 13 48 H, NHCOCH3), 1,55-1,30 (m, 198 H), 1,23-1,15 (m, 102 H). C NMR (125 MHz, D2O) : 175,94, 174,24, 163,04, 162,81, 117,31, 115,38, 83,84, 71,62, 68,46, 67,77, 61,07, 50,29, 48,22, 45,86, 39,19, 35,78, 32,74, 30,26, 28,77, 28,24, 27,13, 26,90, 26,22, 25,86, 25,80, 25,80, 25,51, 25,39, 22,09. ESI-MS (m/z): [M+5H]5+ calc. 1.812,2, obs. 1.813,1; [M+6H]6+ calc. 1.510,3, obs. 1.511,2. Exemplo 2: Materiais e métodos experimentais exemplares para estudos biológicos
[00112] Materiais O anti-GPA33 DOTA-PRIT BsAb (huA33-C825) foi preparado como descrito anteriormente em WO2016/130539. A linha celular de câncer colorretal humano GPA33 (+) SW1222 foi obtida do Ludwig Institute for Cancer Immunotherapy (New York, NY) e foi mantida em meio essencial mínimo suplementado com 10% de soro fetal de bezerro inativado pelo calor, glutamina 2,0 mM, 100 unidades/mL de penicilina e 100 µg/mL de estreptomicina. 131
[00113] Radioiodação de BsAb. I foi recebido de Nordion (Ottowa, ON, Canadá). Tubos de iodogênio pré-revestidos foram obtidos de Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA). Colunas Sephadex G-25 pré- empocatadas (colunas PD10) foram obtidas de GE Healthcare Life Sciences (Pittsburgh, PA). Alíquotas do anti-GPA33 BsAb foram radioiodinadas de acordo com o método IODO-GEN (Salacinski PR et al., Analytical biohemistry 117: 136- 46 (1981); Harlow E, Lane D. USING ANTIBODIES : A LABORATORY MANUAL. Cold Spring Harbor, N.Y. (1999)) seguido por purificação por filtração em gel usando colunas PD10 pré-empacotadas comerciais (consistindo em resina Sephadex G-25). A pureza radioquímica foi determinada como> 98% usando cromatografia líquida de alta pressão com exclusão de tamanho acoplada com 131 radiodetecção. Resumidamente, para preparar I-huA33-C825, 100 µg foram misturados com 80 µL de fosfato de sódio 0,2 M pH 7,4 em um tubo de iodogênio pré-revestido. Em seguida, 400 µCi de 131I foram adicionados. Após 5 minutos à temperatura ambiente, a reação foi transferida para um novo tubo contendo 50 µL de tampão de interrupção de iodogênio [10 mg/mL de tirosina (saturado), glicerol a 10%, cilanol de xileno a 0,1% em PBS] e purificado usando um coluna PD10 que foi pré-equilibrada e eluída com solução salina + 1% (p/v) de BSA adicionado.
[00114] Modelos animais. Camundongos nus atímicos fêmeas (6-8 semanas de idade) foram obtidos de Harlan (Indianapolis, IN) ou Envigo (Huntingdon, Reino Unido). Os camundongos foram deixados para se aclimatar por um período mínimo de 1 semana. Para determinar o efeito do agente de 3+ 131 depuração-dendrón CCA-16-DOTA-Y na eliminação do sangue de I-BsAb, foram usados camundongos normais (não tumores). Para experimentos de biodistribuição DOTA-PRIT, grupos de camundongos portadores de subcutâneo (sc) Foram usados xenoenxertos de câncer colorretal humano SW1222. Para estabelecer os tumores SW1222, os camundongos foram inoculados com 5.0 106 células em 200µL de uma suspensão de células de uma mistura 1: 1 de meios de comunicação com membrana basal reconstituída (BD Matrigel, Collaborative Biomedical Products Inc., Bedford, MA) no flanco menor quetravés de injecção subcutânea, e tumores estabelecidos (100-300 mm3) foram observados dentro de 7-10 dias. 131
[00115] Depuração de sangue de I-BsAb. O marcador de 131 anticorpo foi preparado para injeção por mistura de I-BsAb com anticorpo de veículo adicional para atingir 250 µg (1,19 nmol) por dose. Todas as amostras de sangue e injeções foram realizadas através da veia da cauda. Camundongos normais (n=15) foram administrados por via intravenosa em t=0 com 250 µg (1,19 131 nmol) I-BsAb e com: veículo (solução salina; n=3) ou 25 µg de agente de depuração (formulado em 250 µL de solução salina; n=12) em t=24 h. Para o veículo, o sangue foi coletado (30-40 µL; n=3/ponto) em t=1, 2, 3, 4, 24, 25, 26, 27 e 28 h. Para o agente de depuração, o sangue foi coletado (30-40 µL; n=3/ponto) em t=1, 2, 3, 4, 24, 24,1 (5 min pi CA), 24,3 (15 min p.i. CA), 24,5, 25, 26, 27 e 28 h. As concentrações de radiotividade foram determinadas para cada amostra por contagem em um contador gama (PerkinElmer Life Sciences Wallac Wizard 3). As taxas de contagem foram corrigidas de fundo e decaimento, convertidas em atividades usando um fator de calibração do sistema específico para o isótopo, normalizadas para a atividade administrada e expressas como porcentagem de dose injetada/g (ID/g). As alterações percentuais na atividade de sangue da linha de base (ou seja, logo antes da injeção do agente de depuração; y1) em intervalos de tempo após a injeção do agente de depuração (y2) foram calculadas usando a fórmula ((y2-y1)/y1)*100.
[00116] Agente de depuração Dendrón CCA-16-DOTA-Y 3+ durante dose de otimização de DOTA-PRIT. Grupos de camundongos com tumor (n=4/grupo) foram injetados com BsAb (250 µg, 1,19 nmol; t=-28 h) seguido por quantidades variáveis de CCA-16-DOTA-Y3+ (0-25 µg; 0 -2,76 nmol; t=-4 h). Um grupo adicional de animais com tumores recebeu agente de depuração de dextrano (62,5 µg; 0,125 nmol; 7,625 nmol (Y) DOTA) no lugar do agente de depuração de dendrón CCA-16-DOTA-Y3+ para comparação. Quatro horas após a administração do agente de depuração, os camundongos foram injetados com 177 Lu-DOTA-Bn (150-167 µCi; 30-33 pmol). Os camundongos foram sacrificados 177 48h após a injeção de atividade de Lu, os órgãos foram removidos para o ensaio das concentrações de radioatividade conforme descrito acima. Esses órgãos incluem sangue, tumor, coração, fígado, baço, estômago, intestino delgado, intestino grosso, rim, músculo, osso e cauda (local da injeção). As razões tumor-para-não-tumor da porcentagem da dose injetada/g também foram calculadas.
[00117] Preparação de [111In] Proteus-DOTA. A Figura 8 mostra a estrutura do Proteus-DOTA (fórmula química: C50H80LuN11O19S3-; massa exata: 1345,48;Peso molecular: 1346,28). Veja também Int'l Appl. No. PCT/US18/40911 depositado em 5 de julho de 2018, incorporada por referência neste documento. Para estudos DOTA-PRIT, [111In] Proteus-DOTA foi preparado a partir de [111In] cloreto de índio (153 MBq [4,14 mCi]) e 1 µL de 10 mg/mL Proteus-DOTA (10µg; 7,42 nmols). O rendimento de [111In] Proteus-DOTA foi de 44% e a atividade específica (SA) final foi de 7178 GBq/g [194 Ci/g] ou 9,67 E6 GBq/mol [2,61 E5 Ci/mol]. Antes da administração em camundongos, o [ 111In] Proteus-DOTA foi purificado usando um cartucho Strata™-X (33 µm Polymeric ® Reversed Phase C-18 30 mg/1 mL # 8B-S100-TAK, Phenomenex Inc., Torrance, CA, EUA) e a pureza radioquímica foi verificada como> 98% usando um ensaio de ligação in vitro com excesso de BsAb ou por HPLC analítico de fase reversa acoplado com radiodetecção.
[00118] Análise estatística. As diferenças entre as médias foram determinadas usando os testes t de Student não pareados.
[00119] Imagens SPECT/CT. Para imagens SPECT/CT e estudos de biodistribuição após direcionamento in vivo com anti-GPA33-DOTA-PRIT + [111In] Proteus-DOTA, camundongos com tumor SW1222 que receberam injeções de huA33-C825 BsAb e CCA-16-DOTA- Y3+; 25μg; 2,76 nmol) foram injetados com 172 pmol/1,67 MBq [45μCi] de [111In]1 (n=4) ou 790 pmol/7,66 MBq [207 μ Ci] de [111In]1 (n=1). No dia seguinte, o único camundongo que recebeu a maior atividade administrada de [111In] Proteus-DOTA foi fotografado por SPECT/CT em 20h de p.i., e todos os animais foram sacrificados em 24h de p.i. para biodistribuição. Exemplo 3: Os agentes de depuração da tecnologia atual aumentam a depuração do sangue de anticorpo biespecífico radiomarcado (BsAb) in vivo 131
[00120] Avaliação da depuração do sangue de I-BsAb (131I- huA33-C825). Os experimentos in vivo foram conduzidos usando camundongos nus normais (sem tumor) para avaliar o efeito de uma dose única de excesso de 131 dendrón-CA da presente tecnologia na depuração sanguínea de I-BsAb.
[00121] Inicialmente, grupos de animais foram injetados com 250µg 131 de I-BsAb, dose de BsAb previamente otimizada para DOTA-PRIT. Vinte e quatro horas depois, os camundongos foram injetados com o dendrón-CA da presente tecnologia (25 µg, 2,76 nmol) ou controle de veículo. A coleta de sangue em série foi realizada em vários momentos até 4horas após a injeção de CA (ou 131 131 28 horas após a injeção de I-BsAb), e a concentração de atividade de I foi determinada em cada amostra por ensaio em contador gama.
[00122] Conforme mostrado abaixo na Figura 1, inicialmente não 131 houve diferenças significativas na atividade do I no sangue na linha de base (24 horas após a injeção) entre os grupos CA e veículo. O CA foi eficaz na 131 redução do I-BsAb circulante, pois a concentração média de atividade de sangue caiu significativamente em 64%, 5 minutos após a injeção de 6,7% ID/g para 2,4% ID/g. Em 1 hora após a injeção de CA ou veículo, a atividade média de sangue foi de 5,8 (-13%) ou 1,3% ID/g (-81%), respectivamente.
[00123] Estes resultados demonstram que os agentes de depuração da presente tecnologia são úteis em métodos para aumentar a sensibilidade do tumor à radioterapia e/ou tratar o câncer em um indivíduo com necessidade. Exemplo 4: Os agentes de depuração da presente tecnologia são úteis para métodos DOTA PRIT
[00124] Os resultados de pré-direcionamento do tumor alcançados com diferentes doses de CCA-16-DOTA-Y3+ são mostrados na Figura 2. Uma 177 dose de 5-25 µg de dendrón-CA levou ao tumor Lu-DOTA-Bn médio de 27- 177 41% ID/g 24h após a injeção de atividade de Lu, que eram comparáveis ao 177 tumor Lu-DOTA-Bn observadas com o dextrano CA e grupos de veículo (~ 35% ID/g). Uma dose de 25 µg de dendrón-CA (CCA-16-DOTA-Y3+) levou a uma taxa de captação tumoral: sangue que foi comparável à observada com uma dose de 62,5µg de dextrano CA. Os efeitos do agentes de depuração dendrón de N-acetilgalactosamina CCA-16-DOTA-Y3+ na captação do tumor foram dependentes da dose. Veja a Figura 3. Além disso, a Figura 4 mostra uma comparação dos resultados de pré-direcionamento do tumor obtidos com o agente de eliminação da presente tecnologia em comparação com nenhum agente de eliminação (veículo), bem como o agente de eliminação de conjugado de hapteno DOTA 500kD (isto é, o dextrano-CA). A captação de tumor: as razões de tecido normal alcançadas com CCA-16-DOTA-Y 3+ foram comparáveis às observadas com dextrano CA.
[00125] A fim de demonstrar que [225Ac] Proteus-DOTA poderia ser usado em combinação com DOTA-PRIT para o direcionamento eficiente de tumor in vivo, um grupo de camundongos nus portando xenoenxertos SW1222 expressando GPA33 foi injetado via i.v. com o BsAb huA33-C825 (250µg; 1,19 nmol) 28 h antes e via i.v. com um agente de depuração (62,5µg; 0,125 nmol dextrano; 7,625 nmol (Y) DOTA) 4 h antes da administração de [225Ac] Proteus- DOTA (182 pmol, 1,85 kBq [50 nCi]). Esses camundongos foram sacrificados 24h de p.i. de [225Ac] Proteus-DOTA para ensaio de biodistribuição. Este estudo 111 também foi repetido com In] Proteus-DOTA (172 pmol/1,67 MBq [45 µCi] de [ 111 In] Proteus-DOTA (n=4) ou 790 pmol/7,66 MBq [207 µ Ci] de [ 111 Na] Proteus- DOTA (n=1) usando CCA-16-DOTA-Y3+ (25 μ g; 2,76 nmol)). No dia seguinte, o único camundongo que recebeu a maior atividade administrada de [ 111In] Proteus-DOTA foi fotografado por SPECT/CT em 20h de p.i., e todos os animais foram sacrificados em 24h de p.i. para biodistribuição.
[00126] Conforme mostrado na Figura 5 (A), para os animais 225 submetidos à radioimunoterapia pré-direcionada com [ Ac] Proteus-DOTA, a absorção de sangue, tumor e rim (como porcentagem de atividade injetada por grama de tecido;% IA/g) em 24h de p.i. foram 0,94 ± 0,26, 16,71 ± 2,95 e 1,08 ± 0,55, respectivamente, correspondendo a razões de atividade tumor-para-órgão de cerca de 18: 1 e 16: 1 para sangue e rim, respectivamente. Para [111In] Proteus-DOTA, a captação de sangue, tumor e rim em 24h de p.i. foi de 0,76 ± 0,09, 13,18 ± 0,97 e 1,02 ± 0,06, respectivamente, correspondendo a razões de atividade tumor-para-órgão de cerca de 17: 1 e 13: 1 para sangue e rim, respectivamente. Nenhuma diferença significativa foi observada entre o [ 225Ac] Proteus-DOTA e o [111In] Proteus-DOTA, com exceção do fígado, que foi cerca de 3 vezes maior para o [225Ac] Proteus-DOTA (1,40 ± 0,47 versus 0,46 ± 0,05 para [225Ac] Proteus-DOTA ou [111In] Proteus-DOTA, respectivamente; P <0,05) e para o osso, que foi maior para [ 111In] Proteus-DOTA (não detectável versus 225 0,15 ± 0,01 para [ Ac] Proteus -DOTA ou [111In] Proteus-DOTA, respectivamente; P <0,001). Estas razões de atividade tumor-para-órgão são similares aos estudos de biodistribuição anteriores realizados com anti-GPA33- 177 86 DOTA-PRIT usando o traçador Lu-DOTA-Bn ou Y-DOTA-Bn no mesmo modelo animal, em que a média de captação de tumor ambos DOTA-haptenos eram ~ 8% ID/g ((1,85-8,8 MBq; 10-50 pmol para haptenos M-DOTA-Bn) às 24 h pi (ver Cheal, SM et al. Eur J Nucl Med Mol Imaging 43: 925-937 (2016)), sugerindo que a afinidade de C825 para [225Ac] Proteus-DOTA era similar. Veja a Figura 5 (B).
[00127] A Figura 6(A) mostra os resultados de pré-direcionamento do tumor obtidos em animais injetados com 172 pmol/1,67 MBq [45 µCi] de [111In] Proteus-DOTA (n=4) ou 790 pmol/7,66 MBq [207 µCi] de [111In] Proteus-DOTA (n=1). As razões de absorção de tumor para tecido normal foram geralmente 111 mais altas no animal que recebeu a dose mais alta de [ In] Proteus-DOTA. Consulte a Figura 6 (A) e a Figura 7.
[00128] Conforme mostrado na Figura 6(B), os resultados anti- GPA33-DOTA-PRIT alcançados com [225Ac] Proteus-DOTA (usado em combinação com Dextran-CA) e [111In] Proteus-DOTA (usado em combinação com CCA -16-DOTA-Y3+) eram comparáveis.
[00129] Estes resultados demonstram que os agentes de depuração da presente tecnologia são úteis em métodos para aumentar a sensibilidade do tumor à radioterapia e/ou tratar o câncer em um indivíduo com necessidade.
Exemplo 5: Uso de agentes de depuração dendrón de N- acetilgalactosamina para radioimunoterapia pré-direcionada por DOTA 177
[00130] A principal hipótese de que o anti-GPA33 PRIT + Lu- aminobenzilDOTA ([177 Lu] LuDOTA-Bn) incluindo dendrón-CA CCA-16-DOTA- Y3+ pode ser usado para alcançar os altos índices terapêuticos (TIs) no lugar de dextrano-CA foi testado. O índice terapêutico é definido neste documento como a relação de dose estimada de tumor/tecidos normais absorvidos.
[00131] Estimativas de dose absorvida para PRIT + [177Lu]LuDOTA-Bn incluindo dendrón-CA CCA-16-DOTA-Y3+: Com o propósito de calcular as doses absorvidas para PRIT + [ 177Lu] LuDOTA-Bn incluindo dendrón-CA (o agente de depuração da presente tecnologia), grupos de camundongos nus portando xenoenxertos SW1222 expressando GPA33 (n=5/grupo) foram injetados por i.v. com o BsAb huA33-C825 (250 µg; 1,19 nmol) 28h antes e i.v. com o agente de depuração de dendrón CCA-16-DOTA-Y3+ (25 µg; 2,76 nmol) 4 h antes da administração de [ 177Lu] LuDOTA-Bn (20 pmol, 3,7 MBq [100 µCi]). Esses camundongos foram sacrificados em 1, 4, 24 ou 48h de p.i. de [177Lu]LuDOTA-Bn para ensaio de biodistribuição. Para cada tecido, os dados de concentração de atividade de tempo sem correção de decaimento foram ajustados usando Excel para uma função exponencial de 1 componente, 2 componente ou mais complexa, conforme apropriado, e analiticamente integrados para produzir a concentração de atividade acumulada por unidade de atividade administrada (MBq-h/g per MBq). A constante de dose de equilíbrio de 177 Lu para radiações não penetrantes (8,49 g-cGy/MBq-h) foi usada para estimar o tumor a tumor e selecionar doses autoabsorvidas de órgão a órgão, assumindo 177 a absorção local completa do Lu raios beta apenas, e ignorando as contribuições de raios gama e doses não próprias. Os resultados obtidos a partir desses estudos são mostrados na Figura 9.
[00132] A atividade de tempo corrigida para decaimento curvou até 48h após a injeção de [177Lu] LuDOTA-Bn para tumor, sangue, fígado, baço, rim e músculo são mostrados na Figura 10. A Figura 11 mostra as doses absorvidas
(cGy/MBq) e os índices terapêuticos para vários tecidos. Conforme mostrado na Figura 11, as doses absorvidas estimadas de [ 177Lu] LuDOTA-Bn para sangue, tumor, fígado, baço e rins foram 11,7, 468,4, 9,97, 5,49 e 13,3 cGy/MBq, respectivamente. A razão das estimativas de dose absorvida para tumor em relação àquelas para tecidos normais selecionados (isto é, TI) variou de cerca de 40 (por exemplo, para sangue e rim) a cerca de 550 para músculo (Figura 11).
[00133] Para PRIT + [177Lu]LuDOTA-Bn otimizada incluindo dextrano-CA, as doses absorvidas estimadas (cGy/MBq) para tumor, sangue, fígado, baço e rim para PRIT de ciclo único foram 65,8, 0,9 (TI 73), 6,3 (TI 10), 6,6 (TI 10) e 5,3 (TI 12), respectivamente. Ver Cheal et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 43: 925 (2016). Foi demonstrado que o tratamento eficaz sem toxicidade relacionada ao tratamento importante observada (por exemplo, 111,0 MBq administrados em uma estratégia de dose fracionada produz CR com 100% de frequência, incluindo sobrevivência além de 140 dias em dois de nove camundongos; doses absorvidas de 7304, 100 e 588 cGy para tumor, sangue e rim). Cheal et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 43: 925 (2016).
[00134] Com base em estimativas de tolerância à dose de radiação em tecido normal humano derivadas de observações clínicas (Marks, et al., Int J Radiat Oncol Biol Phys. 76: S10–9 (2010)) as doses máximas toleradas (MTDs) são 250 cGy para medula óssea, 1.500 cGy para pulmão, 3.000 cGy para fígado e 2.000 cGy para rim. Portanto, para PRIT + [177Lu]LuDOTA-Bn otimizada incluindo dextrano-CA, a atividade pré-direcionada máxima tolerada [177Lu] LuDOTA-Bn é de 278 MBq, com a medula óssea como órgão limitador da dose. Nessa atividade, a dose absorvida estimada administrada ao tumor seria de
18.292 cGy (183 Gy), com 250 cGy para o sangue (medula) e 1.473 cGy para o rim.
[00135] Para o exemplo acima de PRIT + [177Lu]LuDOTA-Bn incluindo dendrón-CA CCA-16-DOTA-Y3+, a atividade pré-direcionada máxima 177 tolerada [ Lu] LuDOTA-Bn foi de 21 MBq, com a medula óssea como órgão limitador da dose. Nessa atividade, a dose absorvida estimada administrada ao tumor seria de 9836 cGy (98 Gy), com 246 cGy para o sangue (medula) e 280 cGy para o rim. Portanto, a terapia de CRC eficaz e segura é prevista em xenoenxertos em camundongos, devido à dose absorvida pelo tumor de ~ 73 Gy, que poderia ser alcançada com uma atividade administrada de 15,6 MBq (com 183 cGy para o sangue (medula) e 207 cGy para rim).
[00136] Em última análise, esses dados demonstram que dendrón- CA pode ser usado para alcançar curas (por exemplo, 70 Gy para tumor) em 177 modelos de camundongo de CRC humano com menos atividade de Lu administrada em comparação com dextrano-CA, com diferenças na dosimetria para tecidos críticos (por exemplo, diminuir a dose no rim).
[00137] Estes resultados demonstram que os agentes de depuração da presente tecnologia são úteis em métodos para aumentar a sensibilidade do tumor à radioterapia e/ou tratar o câncer em um indivíduo com necessidade.
EQUIVALENTES
[00138] A presente tecnologia não deve ser limitada em termos das modalidades particulares descritas neste pedido, que se destinam como ilustrações únicas de aspectos individuais da presente tecnologia. Muitas modificações e variações desta tecnologia presente podem ser feitas sem se afastar de seu âmbito e escopo, como será evidente para aqueles versados na técnica. Métodos e aparelhos funcionalmente equivalentes dentro do escopo da presente tecnologia, além daqueles enumerados neste documento, serão evidentes para aqueles versados na técnica a partir das descrições anteriores. Tais modificações e variações destinam-se a cair dentro do escopo da presente tecnologia. Deve ser entendido que esta tecnologia presente não está limitada a métodos, reagentes, composições de compostos ou sistemas biológicos particulares, que podem, é claro, variar. Também deve ser entendido que a terminologia usada neste documento tem a finalidade de descrever modalidades particulares apenas e não se destina a ser limitante.
[00139] Além disso, onde as características ou aspectos da divulgação são descritos em termos de grupos Markush, aqueles versados na técnica reconhecerão que a divulgação também é assim descrita em termos de qualquer membro individual ou subgrupo de membros do grupo Markush.
[00140] Como será entendido por um versado na técnica, para todos e quaisquer fins, particularmente em termos de fornecer uma descrição escrita, todas as faixas divulgadas neste documento também abrangem todas e quaisquer subfaixas possíveis e combinações de subfaixas dos mesmos. Qualquer faixa listada pode ser facilmente reconhecida como descrevendo suficientemente e permitindo que a mesma faixa seja dividida em pelo menos metades iguais, terços, quartos, quintos, décimos, etc. Como um exemplo não limitativo, cada faixa discutida neste documento pode ser facilmente dividida em um terço inferior, terço médio e terço superior, etc. Como também será entendido por um versado na técnica, todas as linguagens, como "até", "pelo menos", "maior que", "menor que" e similares, incluem o número citado e referem-se a faixas que podem ser subsequentemente divididos em subfaixas como discutido acima. Finalmente, como será entendido por um versado na técnica, uma faixa inclui cada membro individual. Assim, por exemplo, um grupo com 1-3 células refere-se a grupos com 1, 2 ou 3 células. Da mesma forma, um grupo com 1-5 células refere-se a grupos com 1, 2, 3, 4 ou 5 células e assim por diante.
[00141] Todas as patentes, pedidos de patentes, pedidos provisórios e publicações mencionados ou citados neste documento são incorporados por referência em sua totalidade, incluindo todas as figuras e tabelas, na medida em que não sejam inconsistentes com os ensinamentos explícitos desta especificação.

Claims (25)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto caracterizado pelo fato de que é , ,
,
,
ou um sal e/ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que
X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19 e X20 são, cada um, independentemente H ou um único par de elétrons (isto é, fornecendo um ânion oxigênio); Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente O ou S; x é 1, 2 ou 3; e y é 1, 2, 3 ou 4.
2. Composto de agente de depuração caracterizado pelo fato de que é , ,
,
,
, ou um sal e/ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que M1 , M2, M3, M4, e M5 são, cada um, independentemente Lu 3+, Sc3+, Ga3+, Y3+, In3+, La3+, Ce3+, Eu3+, Tb3+, ou Gd3+;
X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19 e X20 são, cada um, independentemente H ou um único par de elétrons (isto é, fornecendo um ânion oxigênio); Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente O ou S; x é 1, 2 ou 3; e y é 1, 2, 3 ou 4.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que M1 , M2, M3, M4 e M5 são, cada um, independentemente, não um radionuclídeo.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3, caracterizado pelo fato de que Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente S.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizado pelo fato de que x é 1 ou 2.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que y é 2 ou 3.
7. Composição caracterizada pelo fato de que compreende o composto definido de acordo com de qualquer uma das reivindicações 1-6 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
8. Método para aumentar a sensibilidade do tumor à terapia por radiação em um indivíduo diagnosticado com câncer, o método caracterizado pelo fato de que compreende (a) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo biespecífico anti-DOTA ao indivíduo, em que o anticorpo biespecífico anti-DOTA é configurado para se localizar em um tumor que expressa um antígeno de tumor alvo; (b) administrar uma quantidade eficaz do agente de depuração, definido de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 7, ao indivíduo; e
(c) administrar uma quantidade eficaz de um hapteno DOTA radiomarcado ao indivíduo, em que o hapteno DOTA é configurado para formar um complexo com o anticorpo biespecífico anti-DOTA.
9. Método de tratamento de câncer em um sujeito em necessidade, o método caracterizado pelo fato de que compreende (a) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo biespecífico anti-DOTA ao indivíduo, em que o anticorpo biespecífico anti-DOTA é configurado para se localizar em um tumor que expressa um antígeno de tumor alvo; (b) administrar uma quantidade eficaz do agente de depuração, definido de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 7, ao indivíduo; e (c) administrar uma quantidade eficaz de um hapteno DOTA radiomarcado ao indivíduo, em que o hapteno DOTA é configurado para formar um complexo com o anticorpo biespecífico anti-DOTA.
10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que compreende ainda sequencialmente, separadamente ou simultaneamente administrar ao indivíduo pelo menos um agente quimioterapêutico selecionado a partir do grupo que consiste em mostardas de nitrogênio, derivados de etilenimina, alquil sulfonatos, nitrosoureias, gemcitabina, triazenos, análogos de ácido fólico, antraciclinas, taxanos, inibidores de COX-2, análogos de pirimidina, análogos de purina, antibióticos, inibidores de enzimas, epipodofilotoxinas, complexos de coordenação de platina, alcalóides de vinca, ureias substituídas, derivados de metil hidrazina, supressores adrenocorticais, antagonistas de hormônio, endostatina, taxóis, camptotecinas, SN-38, doxorrubicina, análogos da doxorrubicina, antimetabólitos, agentes alquilantes, antimitóticos, agentes anti-angiogênicos, inibidores da tirosina quinase, inibidores da mTOR, inibidores da proteína de choque térmico (HSP90), inibidores do proteossoma, inibidores de HDAC, agentes pró-apoptóticos, metotrexato e CPT-11.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8-10, caracterizado pelo fato de que o antígeno de tumor alvo é selecionado a partir do grupo que consiste em GPA33, HER2/neu, GD2, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MUM-1, CDK4, N-acetilglucosaminiltransferase, p15, gp75, beta-catenina, ErbB2, antígeno de câncer 125 (CA-125), antígeno carcinoembriônico (CEA), RAGE, MART (antígeno de melanoma), MUC-1, MUC- 2, MUC-3, MUC-4, MUC-5ac, MUC-16, MUC-17, tirosinase, Pmel 17 (gp100), sequência de íntron V GnT-V (sequência de íntron V de N- acetilglucoaminiltransferase V), câncer de próstata psm, PRAME ( antígeno de melanoma), β-catenina, EBNA (antígeno nuclear do vírus de Epstein-Barr) 1-6, p53, proteína de resistência pulmonar (LRP) Bcl-2, antígeno específico da próstata (PSA), Ki-67, CEACAM6, antígeno específico do cólon-p (CSAp), HLA- DR, CD40, CD74, CD138, EGFR, EGP-1, EGP-2, VEGF, PlGF, fator de crescimento similar à insulina (ILGF), tenascina, fator de crescimento derivado de plaquetas, IL-6 , CD20, CD19, PSMA, CD33, CD123, MET, DLL4, Ang-2, HER3, IGF-1R, CD30, TAG-72, SPEAP, CD45, L1-CAM, antígeno Lewis Y (Ley), E-caderina, V-caderina e EpCAM.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8-11, caracterizado pelo fato de que o anticorpo biespecífico anti-DOTA é administrado por via intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, intracerebroventricular, oral ou intranasal.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8-12, caracterizado pelo fato de que o hapteno DOTA radiomarcado é administrado por via intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, intracerebroventricular, oral ou intranasal.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8-13, caracterizado pelo fato de que o agente de depuração radiomarcado é administrado por via intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal,
intracapsular, intraorbital, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, intracerebroventricular, oral ou intranasal.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 14, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de mama, câncer colorretal, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, carcinoma hepatocelular, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer gástrico ou de estômago, câncer de pâncreas, câncer de tireoide, câncer renal ou renal, câncer de próstata, melanoma, sarcomas, carcinomas, tumor de Wilms, câncer endometrial, glioblastoma, câncer de células escamosas, astrocitomas, carcinoma de glândula salivar, câncer vulvar, carcinoma peniano, e câncer de cabeça e pescoço.
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o câncer de cérebro é um adenoma pituitário, um meningioma, um neuroblastoma ou um craniofaringioma.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 16, caracterizado pelo fato de que o complexo emite níveis radioativos que são expressos como porcentagem da dose injetada por grama de tecido (% ID/g).
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 17, caracterizado pelo fato de que o indivíduo exibe uma razão de absorção de tumor para tecido normal de cerca de 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1, 65:1, 70:1, 75:1, 80:1, 85:1, 90:1, 95:1 ou 100:1.
19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 18, caracterizado pelo fato de que o hapteno DOTA radiomarcado é marcado com 213 211 um radionuclídeo selecionado a partir do grupo que consiste em Bi, At, 225 Ac, 152Dy, 212 Bi, 223 Ra, 219 Rn, 215 Po, 211 Bi, 221 Fr, 217 At, 255 Fm, 86 Y, 90 Y, 89 Sr, 165 186 188 177 67 111 67 51 58 99m 103m 195m Dy, Re, Re, Lu, Cu, In, Ga, Cr, Co, Tc, Rh, Pt, 119 Sb, 161Ho, 189mOs, 192Ir, 201Tl, 203Pb, 68Ga, 227Th, and 64Cu.
20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o hapteno DOTA radiomarcado compreende um ou mais dentre Proteus- DOTA , ácido S-2- (R-aminobenzil) -1,4,7,10-tetraazaciclododecano tetra-acético (DOTA-Bn),, DOTA -Bn-biotina, BAD ((( S ) -2- (4- (2-bromo) -acetamido) -benzil) -DOTA), NBD((S)-2- (4-nitrobenzil) -DOTA), DOTA -RGD, DOTA-PEG-E (c (RGDyK))2, DOTA-8-AOC-BBN, p-NO 2 -Bn-DOTA, DOTA-PESINA, DOTA- biotina-sarcosina (DOTA-biotina), ácido mono 1,4,7,10-tetraazaciclododecano- 1,4,7,10-tetraacético (éster de N-hidroxisuccinimida) (DOTA-NHS) ou DOTATyrLysDOTA.
21. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende um composto, definido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, e instruções de uso.
22. Kit, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que compreende ainda pelo menos um anti-DOTA BsAb.
23. Kit, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que pelo menos um anti-DOTA BsAb se liga a um antígeno de tumor alvoselecionado a partir do grupo que consiste em GPA33, HER2/neu, GD2, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MUM-1, CDK4, N- acetilglucosaminiltransferase, p15, gp75, beta-catenina, ErbB2, antígeno de câncer 125 (CA-125), antígeno carcinoembriônico (CEA), RAGE, MART (antígeno de melanoma), MUC-1, MUC-2, MUC-3, MUC-4, MUC-5ac, MUC-16, MUC-17, tirosinase, Pmel 17 (gp100), sequência de íntron V GnT-V (sequência de íntron V de N-acetilglucoaminiltransferase V), câncer de próstata psm, PRAME ( antígeno de melanoma), β-catenina, EBNA (antígeno nuclear do vírus de Epstein-Barr) 1-6, p53, proteína de resistência pulmonar (LRP) Bcl-2, antígeno específico da próstata (PSA), Ki-67, CEACAM6, antígeno específico do cólon-p (CSAp), HLA-DR, CD40, CD74, CD138, EGFR, EGP-1, EGP-2, VEGF, PlGF, fator de crescimento similar à insulina (ILGF), tenascina, fator de crescimento derivado de plaquetas, IL-6 , CD20, CD19, PSMA, CD33, CD123,
MET, DLL4, Ang-2, HER3, IGF-1R, CD30, TAG-72, SPEAP, CD45, L1-CAM, antígeno Lewis Y (Ley), E-caderina, V-caderina e EpCAM.
24. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 a 23, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um hapteno DOTA que é opcionalmente marcado com um ou mais radionuclídeos.
25. Kit, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que um ou mais radionuclídeos são selecionados a partir do grupo que consiste 213 211 225 em Bi, At, Ac, 152Dy, 212 Bi, 223 Ra, 219 Rn, 215 Po, 211 Bi, 221 Fr, 217 At, 255 Fm, 86 90 89 165 186 188 177 67 111 67 51 58 99m Y, Y, Sr, Dy, Re, Re, Lu, Cu, In, Ga, Cr, Co, Tc, 103m 195m Rh, Pt, 119Sb, 161 Ho, 189mOs, 192Ir, 201Tl, 203Pb, 68Ga, 227Th, and 64Cu.
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