BR112020025502A2

BR112020025502A2 - Anticorpos il-11ra

Info

Publication number: BR112020025502A2
Application number: BR112020025502-5A
Authority: BR
Inventors: Stuart Alexander Cook; Sebastian Schaefer
Original assignee: Singapore Health Services Pte Ltd; National University Of Singapore; Boehringer Ingelheim International Gmbh
Priority date: 2018-06-13
Filing date: 2019-06-13
Publication date: 2021-03-16
Also published as: CN113226471A; PE20211500A1; KR20210031645A; US20190389957A1; AU2019286797A1; US11084878B2; IL279352A; CL2020003218A1; MX2020013468A; ECSP21001499A; JP7437325B2; JP2021527086A; PH12020552229A1; EP3806959A1; US20200377605A9; MA52885A; CO2020015376A2; JOP20200300A1; SG11202011648UA; CR20210010A

Abstract

anticorpos il-11ra. são providas moléculas de ligação ao antígeno capazes de se ligar a il-11ra e métodos de tratamento médico e profilaxia usando as mesmas.

Description

ANTICORPOS DE IL-11RA

[0001] Este pedido reivindica prioridade de GB1809700,6, depositado em 13 de junho de 2018, cujos conteúdo e elementos são incorporados neste documento por referência para todos os fins. Campo da Invenção

[0002] A presente invenção se refere aos campos da biologia molecular, mais especificamente à tecnologia de anticorpos. A presente invenção também se refere a métodos de tratamento médico e profilaxia. Em particular, são providas moléculas de ligação ao antígeno capazes de se ligarem a IL-11Rα. Fundamentos da Invenção

[0003] A sinalização mediada por IL-11 mostrou estimular a hematopoiese, estimular a atividade dos osteoclastos, estimular a neurogênese, inibir a adipogênese, reduzir a expressão de citocinas pró- inflamatórias, modular o metabolismo da matriz extracelular (ECM) e mediar o controle de crescimento normal das células epiteliais gastrointestinais. O papel fisiológico da Interleucina 11 (IL-11) permanece obscuro. A sinalização de IL-11/IL-11R foi mais fortemente vinculada à ativação de células hematopoéticas e à produção de plaquetas, mas também foi sugerido que é pró-inflamatória, bem como anti-inflamatória, pró- angiogênica e importante para a neoplasia. Resumo da Invenção

[0004] Em um primeiro aspecto, a presente invenção provê uma molécula de ligação ao antígeno, opcionalmente isolada, que é capaz de se ligar a IL-11Rα, em que a molécula de ligação ao antígeno compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e

(ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24.

[0005] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24.

[0006] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:20 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22, LC- CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23, LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24.

[0007] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende: uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:7, 8, 9, 10, 11 ou 12; e uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13, 14, 15, 16 ou 17.

[0008] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:70. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:73. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:74. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:70 ou 73, e um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:74.

[0009] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a sinalização mediada por IL-11.

[0010] A presente invenção também provê uma molécula de ligação ao antígeno, opcionalmente isolada, compreendendo (i) uma molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento, e (ii) uma molécula de ligação ao antígeno capaz de se ligar a um antígeno diferente de IL-11Rα.

[0011] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a interação entre IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα e um parceiro de interação para IL-11Rα ou o complexo compreendendo IL-11Rα.

[0012] A presente invenção também provê um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento.

[0013] A presente invenção também provê um ácido nucleico, ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, opcionalmente isolados, que codificam uma molécula de ligação ao antígeno ou um CAR descrito neste documento.

[0014] A presente invenção também provê um vetor de expressão, ou uma pluralidade de vetores de expressão, compreendendo um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos descritos neste documento.

[0015] A presente invenção também provê uma célula compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno, um CAR, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão descritos neste documento.

[0016] A presente invenção também provê um método compreendendo a cultura de uma célula, compreendendo um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, descritos neste documento, sob condições adequadas para a expressão da molécula de ligação ao antígeno ou CAR a partir do(s) ácido(s) nucleico(s) ou vetor(es) de expressão.

[0017] A presente invenção também provê uma composição compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno, um CAR, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, ou uma célula, descritos neste documento.

[0018] A presente invenção também provê uma molécula de ligação ao antígeno, um CAR, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, uma célula, ou uma composição, conforme descritos neste documento para uso em um método de tratamento médico ou profilaxia.

[0019] A presente invenção também provê uma molécula de ligação ao antígeno, um CAR, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, uma célula, ou uma composição conforme descritos neste documento para uso em um método de tratamento ou prevenção de fibrose, uma doença caracterizada por fibrose, um câncer, inflamação, ou uma doença caracterizada por inflamação.

[0020] A presente invenção também provê o uso de uma molécula de ligação ao antígeno, um CAR, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, uma célula, ou uma composição conforme descritos neste documento, na fabricação de um medicamento para uso no tratamento ou prevenção de fibrose, uma doença caracterizada por fibrose, um câncer, inflamação, ou uma doença caracterizada por inflamação.

[0021] A presente invenção também provê um método para tratar ou prevenir uma fibrose, uma doença caracterizada por fibrose, um câncer, inflamação, ou uma doença caracterizada por inflamação, compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade eficaz de maneira terapêutica ou profilática de uma molécula de ligação ao antígeno, um CAR, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, uma célula, ou uma composição conforme descritos neste documento.

[0022] A presente invenção também provê um método de inibição da sinalização mediada por IL-11, compreendendo o contato de células que expressam IL-11Rα com uma molécula de ligação ao antígeno conforme descrito neste documento.

[0023] A presente invenção também provê um complexo in vitro, opcionalmente isolado, compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno, conforme descrito neste documento, ligado a IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

[0024] A presente invenção também provê um método compreendendo o contato com uma amostra contendo, ou suspeita de conter, IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11 Rα com uma molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento, e detecção da formação de um complexo da molécula de ligação ao antígeno com IL- 11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

[0025] A presente invenção também provê um método de seleção ou estratificação de um indivíduo para tratamento com um agente visando a IL-11Rα, o método compreendendo o contato, in vitro, de uma amostra do indivíduo com uma molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento e a detecção da formação de um complexo da molécula de ligação de antígeno com IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-

11Rα.

[0026] A presente invenção também provê o uso de uma molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento como um agente diagnóstico ou prognóstico in vitro ou in vivo. Descrição

[0027] A presente invenção se refere a novas moléculas de ligação a IL-11Rα tendo propriedades melhoradas em comparação com anticorpos anti-IL-11 Rα conhecidos. As moléculas de ligação a IL-11 Rα da presente invenção são providas com as combinações de propriedades biofísicas e funcionais desejáveis em comparação às moléculas de ligação ao antígeno de ligação a IL-11Rα divulgadas no estado da técnica. Interleucina 11 e receptores para IL-11

[0028] A interleucina 11 (IL-11), também conhecida como fator inibidor da adipogênese, é uma citocina pleiotrópica e um membro da família IL-6 de citocinas que inclui IL-6, IL-11, IL-27, IL-31, oncostatina, fator inibidor de leucemia (LIF), cardiotrofina-1 (CT-1), citocina semelhante à cardiotrofina (CLC), fator neurotrófico ciliar (CNTF) e neuropoetina (NP-1).

[0029] A interleucina 11 (IL-11) é expressa em uma variedade de tipos de células mesenquimais. As sequências genômicas da IL-11 foram mapeadas no cromossomo 19 e na região centromérica do cromossomo 71, e é transcrito com um peptídeo sinal canônico que garante a secreção eficiente das células. O complexo de proteína ativadora de IL- 11, cJun/AP-1, localizado dentro de sua sequência promotora é crítico para a regulagem transcricional basal de IL-111 (Du e Williams., Blood 1997, Vol 89:3897-3908). A forma imatura da IL-11 humana é um polipeptídeo de 199 aminoácidos, enquanto a forma madura de IL-11 codifica uma proteína de 178 resíduos de aminoácidos (Garbers e Scheller., Biol. Chem. 2013; 394(9):1145-1161). A sequência de aminoácidos da IL-11 humana está disponível sob o acesso UniProt N.º P20809 (P20809.1 Gl:124294; SEQ ID NO:1). A IL-11 humana recombinante (oprevelcina) também está disponível comercialmente. A IL-11 de outras espécies, incluindo camundongo, rato, porco, vaca, várias espécies de peixes ósseos e primatas, também foram clonadas e sequenciadas.

[0030] Neste relatório descritivo, "IL-11" se refere a uma IL-11 de qualquer espécie e inclui isoformas, fragmentos, variantes ou homólogos de uma IL-11 de qualquer espécie. Como usado neste documento, um "fragmento", uma "variante" ou um "homólogo" de uma proteína podem opcionalmente ser caracterizados como tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para sequência de aminoácidos da proteína da referência. Em algumas modalidades os fragmentos, as variantes, as isoformas e os homólogos de uma proteína da referência podem ser caracterizados pela habilidade de realizar uma função realizada pela proteína da referência.

[0031] Um “fragmento” geralmente se refere a uma fração da proteína da referência. Uma “variante" geralmente se refere a uma proteína tendo uma sequência de aminoácidos compreendendo um ou mais substituições de aminoácidos, inserções, deleções outras modificações com relação à sequência de aminoácidos da proteína da referência, mas retendo um grau considerável de identidade da sequência (por exemplo. pelo menos 60%) para a sequência de aminoácidos da proteína da referência. Uma “isoforma” geralmente se refere a uma variante da proteína da referência expressada pela mesma espécie que a espécie da proteína da referência. Um “homólogo” geralmente se refere a uma variante da proteína da referência produzida por uma espécie diferente em comparação à espécie da proteína da referência. Os homólogos incluem ortólogos. Um "fragmento" pode ser de qualquer comprimento (pelo número de aminoácidos), embora possa opcionalmente ser pelo menos 20% do comprimento da proteína da referência (ou seja, a proteína da qual o fragmento é derivado) e possa ter um comprimento máximo de um dentre

50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% do comprimento da proteína da referência. Um fragmento de IL-11 pode ter um comprimento mínimo de 10 aminoácidos e um comprimento máximo de um dentre 15, 20, 25, 30, 40, 50, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 ou 195 aminoácidos.

[0032] Em algumas modalidades, a IL-11 é IL-11 de um mamífero (por exemplo. uma IL-11 primata (rhesus, cynomolgous, primata humano ou não humano) e/ou um roedor (por exemplo. rato ou murino)). As isoformas, fragmentos, variantes ou homólogos de IL-11 podem ser caracterizados, opcionalmente, como tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de IL-11 imatura ou madura de uma dada espécie, por exemplo, humana. Em algumas modalidades, a IL-11 da presente divulgação compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos com pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para SEQ ID NO:1.

[0033] As isoformas, fragmentos, variantes ou homólogos de uma IL-11 podem ser caracterizados, opcionalmente, pela habilidade de ligar um receptor de IL-11Rα (por exemplo, IL-11Rα, gp130 e/ou um complexo compreendendo IL-11Rα e gp130, preferencialmente da mesma espécie) e estimular a transdução de sinal em células expressando IL-11Rα e gp130 (por exemplo, conforme descrito em Curtis et al. Blood, 1997, 90(11); ou Karpovich et al. Mol. Hum. Reprod. 2003 9(2):75-80).

[0034] A IL-11 sinaliza através de um homodímero da glicoproteína 130 expressada ubiquamente (gp130; também conhecida como glicoproteína 130, IL-6ST, IL-6-beta ou CD130). A gp130 é uma proteína transmembrana que forma uma subunidade do receptor de citocina tipo I com a família de receptor IL-6. A especificidade é obtida através de uma subunidade alfa do receptor de interleucina 11 individual (IL-11Rα), que não participa diretamente na transdução de sinal, embora o evento de ligação de citocina inicial ao receptor α leve à formação do complexo final com gp130.

[0035] A gp130 humana (incluindo o peptídeo sinal de 22 aminoácidos) é uma proteína de 918 aminoácidos e a forma madura é de 866 aminoácidos, compreendendo um domínio extracelular de 597 aminoácidos, um domínio transmembranar de 22 aminoácidos e um domínio intracelular de 277 aminoácidos. O domínio extracelular da proteína compreende o módulo de ligação a citocinas (CBM) de gp130. O CBM de gp130 compreende o domínio D1 semelhante a Ig e os domínios D2 e D3 do tipo fibronectina III de gp130. A sequência de aminoácidos da gp130 humana está disponível sob o acesso UniProt N.º P40189-1 (SEQ ID NO:2).

[0036] A IL-11Rα humana é um polipeptídeo de 422 aminoácidos (UniProt Q14626) e compartilha ~85% de identidade da sequência de nucleotídeos e aminoácidos com a IL-11Rα murina (Du e Williams., Blood Vol, 89, No, 11, 1 de junho,1997). Duas isoformas de IL- 11Rα foram relatadas - HCR1 (SEQ ID NO:3) e HCR2 (SEQ ID NO:4) - que diferem no domínio citoplásmico; os 32 aminoácidos do C-terminal de isoforma HCR1 são ausentes de HCR2 (Du e Williams, supra). A cadeia α do receptor de IL-11 (IL-11Rα) compartilha muitas semelhanças estruturais e funcionais com a cadeia α do receptor de IL-6 (IL-6Rα). O domínio extracelular mostra 24% de identidade de aminoácidos, incluindo a característica conservada no motivo Trp-Ser-X-Trp-Ser (WSXWS). O domínio citoplasmático curto carece as regiões de Caixa 1 e 2 que são exigidas para a ativação da via de sinalização de JAK/STAT.

[0037] Os sítios de ligação ao receptor em IL-11 murino foram mapeados e três sítios - sítios I, II e III - identificados. A ligação à gp130 é reduzida por substituições na região do sítio II e por substituições na região do sítio III. Os mutantes do sítio III não mostram atividade agonista detectável e têm atividade antagonista de IL-11Rα (Cytokine Inhibitors Capítulo 8; editado por Gennaro Ciliberto e Rocco Savino, Marcel Dekker, Inc. 2001).

[0038] Neste relatório descritivo, um receptor de IL-11/receptor para IL-11 (IL-11R) se refere a um polipeptídeo ou complexo de polipeptídeo capaz de ligar a IL-11 e/ou um complexo compreendendo IL-

11. Em algumas modalidades, um receptor de IL-11 é capaz de ligar a IL-11 e/ou um complexo compreendendo IL-11 e induzir a transdução de sinal em células que expressam o receptor de IL-11. Um “complexo compreendendo IL-11” pode ser um complexo não covalente de IL-11 e um polipeptídeo capaz da associação não covalente com IL-11.

[0039] Um receptor IL-11 pode ser de qualquer espécie e inclui isoformas, fragmentos, variantes ou homólogos de um receptor de IL-11 de qualquer espécie. Em modalidades preferenciais, a espécie é humana (Homo sapiens).

[0040] Em algumas modalidades, o receptor de IL-11 (IL-11R) pode ser IL-11Rα. Em algumas modalidades, um receptor para IL-11 pode ser um complexo de polipeptídeo compreendendo IL-11Rα. Em algumas modalidades, um receptor de IL-11 pode ser um complexo de polipeptídeo compreendendo IL-11Rα e gp130. Em algumas modalidades, o receptor de IL-11 pode ser gp130 ou um complexo compreendendo gp130 ao qual IL- 11 se liga.

[0041] Neste relatório descritivo, "IL-11Rα" se refere a uma IL- 11Rα de qualquer espécie e inclui isoformas, fragmentos, variantes ou homólogos de uma IL-11Rα de qualquer espécie. Um fragmento de IL-11Rα pode ter um comprimento mínimo de 10 aminoácidos e um comprimento máximo de um dentre 15, 20, 25, 30, 40, 50, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 400 ou 415 aminoácidos.

[0042] Em algumas modalidades, a IL-11Rα é IL-11Rα de um mamífero (por exemplo. uma IL-11 primata (rhesus, cynomolgous, primata humano ou não humano) e/ou um roedor (por exemplo. rato ou murino)). As isoformas, fragmentos, variantes ou homólogos de uma IL-11Rα podem ser caracterizados, opcionalmente, como tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de IL-11Rα imatura ou madura de uma dada espécie, por exemplo, humana. Em algumas modalidades, a IL-11Rα da presente divulgação compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a SEQ ID NO:3 ou 4

[0043] As isoformas, fragmentos, variantes ou homólogos de uma IL-11Rα podem ser caracterizados, opcionalmente, pela capacidade de ligar IL-11 e/ou um complexo compreendendo IL-11 (preferencialmente da mesma espécie) e estimular a transdução de sinal em células expressando IL-11Rα e gp130 (por exemplo, conforme descrito em Curtis et al. Blood, 1997, 90(11); ou Karpovich et al. Mol. Hum. Reprod. 2003 9(2):75-80). Sinalização de IL-11/IL-11R

[0044] A IL-11 se liga a IL-11Rα com baixa afinidade (Kd ~10 nmol/L), e a interação entre esses parceiros de ligação por si só é insuficiente para transduzir um sinal biológico. A geração de um receptor de alta afinidade (Kd ~400 a 800 pmol/L) capaz de transdução de sinal exige co-expressão da IL-11Rα e gp130 (Curtis et al. (Blood, 1 de dezembro de 1997;90 (11):4403-12; Hilton et al., EMBO J 13:4765, 1994; Nandurkar et al., Oncogene 12:585, 1996). A ligação de IL-11 à IL-11Rα de superfície celular induz heterodimerização, fosforilação de tirosina, ativação de gp130 e sinalização a jusante, predominantemente através da proteína quinase ativada por mitogênio de cascata (MAPK) e a Janus quinase/transdutor de sinal e ativador de transcrição (Jak/STAT) de via (Garbers e Scheller, supra).

[0045] Em princípio, uma IL-11Rα solúvel também pode formar complexos solúveis biologicamente ativos com IL-11 (Pflanz et al., 1999 FEBS Lett, 450, 117-122) levantando a possibilidade de que, semelhante à IL-6, IL-11 pode, em alguns casos, se ligar a IL-11Rα solúvel antes de se ligar a gp130 de superfície celular (Garbers e Scheller, supra). Curtis et al (Blood, 1 de dezembro de 1997; 90(11):4403-12) descreve a expressão de uma cadeia de IL-11Rα murino solúvel (sIL-11R) e examinou a sinalização em células que expressam gp130. Na presença de gp130, mas não a transmembrana IL-11R, a IL-11 mediada por IL-11R é dependente da diferenciação de células leucêmicas M1 e proliferação em células de Ba/F3 e eventos intracelulares precoces incluindo fosforilação de gp130, STAT3 e SHP2 semelhante à sinalização através da transmembrana IL-11R. A ativação de sinalização através de gp130 ligada à célula-membrana por IL- 11 ligada à IL-11Rα solúvel foi recentemente demonstrado (Lokau et al., 2016 Cell Reports 14, 1761-1773). Essa tal sinalização trans de IL-11 pode ser um componente muito importante de sinalização mediada por IL-11, e podendo até ser a forma mais comum de sinalização mediada por IL-11, pois enquanto a expressão de IL-11Rα é restrita a um subconjunto relativamente pequeno de tipos de células, gp130 é expressa em uma grande variedade de tipos de células.

[0046] Conforme utilizado neste documento, "sinalização de IL- 11", "sinalização mediada por IL-11" e "sinalização de IL-11/IL-11R" se referem à sinalização mediada pela ligação de IL-11, um fragmento do mesmo tendo a função da molécula de IL-11 madura, ou um complexo compreendendo IL-11, ou um fragmento da mesma tendo a função da molécula de IL-11 madura, a um receptor para IL -11.

[0047] Conforme usado neste documento, a "sinalização trans de IL-11" é usada para se referir à sinalização que é desencadeada pela ligação de IL-11, ligada à IL-11Rα, à gp130. A IL-11 pode ser ligada à IL- 11Rα como um complexo não covalente. A gp130 é ligada à membrana e expressa pela célula na qual a sinalização ocorre após a ligação do complexo IL-11:IL-11Rα à gp130. Em algumas modalidades, a IL-11Rα pode ser uma IL-11Rα solúvel. Em algumas modalidades, a IL-11Rα solúvel é uma isoforma solúvel (secretada) de IL-11Rα (por exemplo, carecendo um domínio de transmembrana). Em algumas modalidades, a IL-11Rα solúvel é o produto liberado de clivagem proteolítica do domínio extracelular da membrana celular ligada à IL-11Rα. Em algumas modalidades, a IL- 11Rα pode ser ligada à membrana celular, e a sinalização através de gp130 pode ser desencadeada pela ligação de IL-11 ligada a IL-11Rα ligada à membrana celular, denominada "sinalização cis de IL-11".

[0048] A sinalização mediada por IL-11 mostrou estimular a hematopoiese e trombopoiese, estimular a atividade dos osteoclastos, estimular a neurogênese, inibir a adipogênese, reduzir a expressão de citocinas pró-inflamatórias, modular o metabolismo da matriz extracelular (ECM) e mediar o controle de crescimento normal de células epiteliais gastrointestinais (Du e Williams, supra).

[0049] O papel fisiológico da Interleucina 11 (IL-11) permanece obscuro. A IL-11 foi mais fortemente vinculada à ativação de células hematopoéticas e à produção de plaquetas, mas também foi sugerido que é pró-inflamatória, bem como anti-inflamatória, pró-angiogênica e importante para a neoplasia. É conhecido que TGFβ1 ou lesão de tecido pode induzir a expressão de IL-11 (Zhu, M. et al. PLOS ONE 10, (2015); Yashiro, R. et al. J. Clin. Periodontol. 33, 165-71 (2006); Obana, M. et al. Circulation 121, 684-91 (2010); Tang, W et al. J. Biol. Chem. 273, 5506-13 (1998)).

[0050] IL-11 é um modulador pós-transcricional importante de sinalização mediada por TGFβ1. Foi mostrado que o TGFβ1 estimula a região do promotor AP-1 de IL-11 e a secreção induzida por TGFβ1 de IL- 11 mostrou induzir a ativação de ERK p42/44 e p38 MAP quinases em miofibroblastos intestinais (Bamba et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. (2003)(285(3):G529-38). Os inibidores da MAP quinase são capazes de reduzir significativamente a secreção de IL-11 induzida por TGFβ, e a estabilização de mRNA mediada por p38 MAP quinase mostrou ser crítica para a secreção de IL-11 induzida por TGFβ.

[0051] Foi demonstrado recentemente que a sinalização mediada por IL-11 desempenha uma função fundamental nos processos fibróticos em uma grande variedade de tecidos; vide, por exemplo, WO 2017/103108 A1 e Schafer et al. (2017) Nature 552:110-115, ambos os quais são incorporados por meio deste instrumento por referência em sua totalidade.

[0052] WO 2017/103108 A1 (incorporado por meio deste instrumento por referência na sua totalidade) relata uma função pró-fibrótica para a sinalização mediada por IL-11 e estabelece a utilidade terapêutica de antagonistas da sinalização mediada por IL-11 no tratamento/prevenção de fibrose. O Exemplo 2 e as Figuras 7A e 7B do WO 2017/103108 A1 demonstram que a incubação de fibroblastos atriais humanos primários com IL-11 humana recombinante aumenta a deposição de colágeno por fibroblastos, um processo fibrótico bem estabelecido. O tratamento com anticorpo neutralizante anti-IL-11 (mas não com anticorpo de controle de isotipo) mostrou anular a produção de colágeno induzida pela estimulação dos fibroblastos com TGFβ1 (um estímulo pró-fibrótico conhecido). O Exemplo 3 e a Figura 10 de WO 2017/103108 A1 demonstram adicionalmente a capacidade de neutralizar o anticorpo anti-IL-11 para anular o aumento da produção de colágeno por fibroblastos atriais humanos em resposta a vários outros estímulos pró-fibróticos (ANG2, PDGF, ET-1). O Exemplo 5.2 e as Figuras de 20A a 20E de WO 2017/103108 A1 proveem dados adicionais que suportam uma função pró-fibrótica para IL- 11 no tecido cardíaco. Os fibroblastos atriais humanos mostraram exibir produção significativamente aumentada de componentes da matriz extracelular (colágeno, periostina) e expressão aumentada de marcadores pró-fibróticos (αSMA, IL-6, MMP2, TIMP1) em resposta ao tratamento com a proteína IL-11 humana, da mesma forma que a produção desses fatores é aumentada em resposta ao tratamento com o estímulo pró-fibrótico TGFβ1. O Exemplo 5.3.1 e as Figuras 38A a 38D do WO 2017/103108 A1 também mostram um aumento na produção de componentes da matriz extracelular e aumento da expressão de marcadores fibróticos por fibroblastos de fígado primários humano em resposta ao tratamento com IL- 11 humana, e também a capacidade de neutralizar anticorpo anti-IL-11 para anular os efeitos pró-fibróticos da estimulação com TGFβ1. As Figuras 22A a 22F e 23A e 23B de WO 2017/103108 A1 mostram que a fibrose mediada por TGFβ1 pode ser inibida por tratamento com anticorpo neutralizante anti- IL-11, e a Figura 24 mostra que moléculas de receptor chamariz de ligação a IL-11, neutralizando anticorpos anti-IL-11Rα e oligonucleotídeos que codificam siRNA para knockdown antisense de IL-11 e expressão do gene IL-11 RA são semelhantemente capazes de inibir a transição mediada por TGFβ1 de fibroblastos para miofibroblastos (células efetoras de fibrose). Dados adicionais que mostram a inibição da resposta fibrótica mediada por TGFβ1 usando receptor chamariz IL-11 são providos nas Figuras 32A e 32B do documento WO 2017/103108 A1. O Exemplo 5.3.3 e as Figuras 21B e 21C de WO 2017/103108 A1 proveem dados in vivo que demonstram que IL-11 é pró-fibrótica em uma variedade de tecidos.

A injeção de camundongos com IL-11 de camundongo recombinante ocasionou um aumento no peso relativo do coração, rim, pulmão e fígado (Figura 21B), e que isso foi associado ao conteúdo aumentado de colágeno nestes tecidos (Figura 21C). Dados in vivo adicionais que suportam uma função pró- fibrosa para IL-11 são providos nos Exemplos 7.2 e 7.3, e Figuras 27A a 27D e Figura 28 de WO 2017/103108 A1. Esses experimentos mostram que as IL-11RA de camundongos de nocaute estão protegidos da fibrose dos tecidos cardíacos e renais induzidos por estímulos pró-fibrótico,

indicando a sinalização através do receptor de IL-11 como um importante mediador dos processos fibrosos. Além disso, as Figuras 31A e 31B, resumidas na legenda da Figura 31 de WO 2017/103108 A1 relatam que mais fibrose foi detectada em seções oculares obtidas de camundongos selvagens do que IL-11RA de camundongos nocaute aos 7 dias após a trabeculectomia. Deste modo, WO 2017/103108 A1 provê dados abundantes a partir de estudos in vitro e in vivo que comprovam que a sinalização de IL-11/IL-11R é um mediador chave da fibrose em uma grande variedade de tecidos, e demonstra que a inibição da sinalização mediada por IL-11 reduz a fibrose, conforme determinado pela análise de uma variedade de marcadores da resposta fibrosa. Moléculas de ligação ao antígeno capazes de se ligarem a IL-11Rα

[0053] A presente invenção provê moléculas de ligação ao antígeno capazes de se ligarem a IL-11Rα.

[0054] Uma "molécula de ligação ao antígeno" se refere a uma molécula que é capaz de se ligar a um antígeno alvo, e abrange anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos monoespecíficos e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos bisespecíficos) e fragmentos de anticorpos (por exemplo, Fv, scFv, Fab, scFab, F(ab')2, Fab2, diabodies, triabodies, scFv-Fc, minibodies, anticorpos de domínio único (por exemplo, VhH), etc.), desde que exibam ligação à molécula(s) alvo relevante(s). Por "anticorpos" incluímos fragmentos e derivados dos mesmos, incluindo anticorpos e fragmentos sintéticos. Como usado neste documento, um anticorpo é um polipeptídeo capaz de se ligar especificamente à molécula alvo relevante (ou seja, o antígeno para o qual o anticorpo é específico). Anticorpos e moléculas de ligação ao antígeno, de acordo com a presente invenção, podem ser providos de forma isolada.

[0055] Em vista as técnicas atuais em relação à tecnologia de anticorpo monoclonal, os anticorpos podem ser preparados para a maioria dos antígenos. A porção de ligação ao antígeno pode ser uma parte de um anticorpo (por exemplo, um fragmento Fab) ou um fragmento de anticorpo sintético (por exemplo, um fragmento Fv de cadeia única [ScFv]). Anticorpos monoclonais adequados para selecionar antígenos podem ser preparados por técnicas conhecidas, por exemplo, aquelas divulgadas em "Monoclonal Antibodies: A manual of techniques", H Zola (CRC Press, 1988) e em "Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications", J G R Hurrell (CRC Press, 1982). Anticorpos quiméricos são discutidos por Neuberger et al (1988, 8th International Biotechnology Symposium Part 2, 792-799).

[0056] Os anticorpos monoclonais (mAbs) são úteis nos métodos da invenção e são uma população homogênea de anticorpos visando especificamente um único epítopo em um antígeno.

[0057] Os fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos, tais como fragmentos Fab e Fab2, também podem ser usados/providos, assim como podem os anticorpos manipulados geneticamente e fragmentos de anticorpos. Os domínios, pesado variável (VH) e leve variável (VL), do anticorpo estão envolvidos no reconhecimento de antígeno, um fato primeiramente reconhecido pelos experimentos de digestão de protease precoces. Confirmação adicional foi verificada pela "humanização" dos anticorpos de roedores. Domínios variáveis de origem de roedor podem ser fundidos a domínios constantes de origem humana, de tal forma que o anticorpo resultante mantém a especificidade antigênica do anticorpo precursor de roedor (Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sd. EUA 81, 6851-6855).

[0058] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da invenção é um fragmento de anticorpo/anticorpo totalmente humano. Um fragmento de anticorpo/anticorpo totalmente humano é codificado pela(s) sequência(s) de ácidos nucleicos humanas. Os fragmentos de anticorpo/anticorpos totalmente humanos são desprovidos de sequências de aminoácidos não humanas.

[0059] As duas técnicas mais comumente empregadas para a produção de anticorpos totalmente humanos são (i) exibição de fago, na qual genes de anticorpos humanos são expressados em bibliotecas de exibição de fago e (ii) produção de anticorpos em camundongos transgênicos manipulados para ter genes de anticorpos humanos (descritos em Park and Smolen Advances in Protein Chemistry (2001) 56:369-421). Brevemente, na técnica de exibição de fago de genes de anticorpos humanos, os genes que codificam as cadeias VH e VL são gerados pela amplificação e clonagem dos linfócitos humanos "não expostos", e montados em uma biblioteca, a partir da qual podem ser expressados tanto como fragmentos Fab vinculados a dissulfeto quanto como fragmentos Fv de cadeia única (scFv). Os genes que codificam Fab ou scFv são fundidos a uma proteína do revestimento de superfície do bacteriófago filamentoso e Fab ou scFv capaz de se ligar ao alvo do interesse podem então ser identificados pela triagem da biblioteca com antígeno. Os procedimentos de evolução molecular ou maturação de afinidade podem ser empregados para melhorar a afinidade do fragmento Fab/scFv. Na técnica de camundongo transgênico, camundongos nos quais os loci de genes de lg murino endógeno foram substituídos por recombinação homóloga com seus homólogos humanos são imunizados com antígeno, e anticorpo monoclonal é preparado pela tecnologia de hibridoma convencional, para produzir o anticorpo monoclonal totalmente humano.

[0060] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da invenção é um fragmento de anticorpo/anticorpo murino. Em algumas modalidades, o anticorpo/fragmento de anticorpos pode ser preparado por exibição de fago usando uma biblioteca de genes de anticorpo humano não exposto.

[0061] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da invenção é um anticorpo/fragmento de anticorpos quimérico humano/camundongo (por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno compreendendo domínios variáveis murinos e regiões constantes humanas). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é um anticorpo/fragmento de anticorpos humanizado (por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno compreendendo CDRs murinos e estrutura humana e regiões constantes).

[0062] Uma molécula de ligação ao antígeno quimérico de camundongo/humano pode ser preparado a partir de um anticorpo monoclonal de camundongo pelo processo de quimerização, por exemplo, conforme descrito em Human Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, Michael Steinitz (Editor), Methods in Molecular Biology 1060, Springer Protocols, Humana Press (2014), no Capítulo 8 do mesmo, particularmente na seção 3 do Capítulo 8.

[0063] Uma molécula de ligação ao antígeno humanizado pode ser preparado a partir de um anticorpo de camundongo pelo processo de humanização, por exemplo, conforme descrito em Human Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, Michael Steinitz (Editor), Methods in Molecular Biology 1060, Springer Protocols, Humana Press (2014), no Capítulo 7 do mesmo, particularmente na seção 3.1 do Capítulo 7 intitulada "Humanização de Anticorpos" ("Antibody Humanization").

[0064] A molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende uma fração capaz de se ligar a um antígeno(s) alvo. Em algumas modalidades, a fração capaz de se ligar a um antígeno alvo compreende um anticorpo de região variável de cadeia pesada (VH) e um anticorpo de região variável de cadeia de leve (VL) de um anticorpo capaz de ligação específica ao antígeno alvo. Em algumas modalidades, a fração capaz de se ligar a um antígeno alvo compreende ou consiste em um aptâmero capaz de se ligar ao antígeno alvo, por exemplo, um aptâmero de ácido nucleico (revisado, por exemplo, em Zhou e Rossi Nat Rev Drug Discov. 2017 16(3):181-202). Em algumas modalidades, a fração capaz de se ligar a um antígeno alvo compreende ou consiste em um peptídeo/polipeptídeo de ligação ao antígeno, por exemplo, um aptâmero de peptídeo, tiaoredoxina, monocorpo, anticalina, domínio Kunitz, avímero, notina, fynomer, atrímero, DARPin, affibody, nanocorpo (ou seja, um anticorpo de domínio único (sdAb)) afilina, proteína de repetição tatu (ArmRp), OBody ou fibronectina - revisado, por exemplo, em Reverdatto et al., CurrTop Med Chem. 15(12):108-1101, que é por meio deste instrumento incorporado por referência em sua totalidade (vide também, por exemplo, Boersma et al., J Biol Chem (2011) 286:41273-85 e Emanuel et al., Mabs (2011) 3:38-48).

[0065] As moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção geralmente compreendem um domínio de ligação ao antígeno compreendendo uma VH e uma VL de um anticorpo capaz de ligação específica ao antígeno alvo. O domínio de ligação ao antígeno formado por uma VH e uma VL também pode ser dito neste documento como uma região de Fv.

[0066] Uma molécula de ligação ao antígeno pode ser, ou pode compreender, um polipeptídeo de ligação ao antígeno, ou um complexo de polipeptídeo de ligação ao antígeno. Uma molécula de ligação ao antígeno pode compreender mais do que um polipeptídeo que, juntos, formam um domínio de ligação ao antígeno. Os polipeptídeos podem associar-se de maneira covalente ou não-covalente. Em algumas modalidades, os polipeptídeos fazem parte de um polipeptídeo maior compreendendo os polipeptídeos (por exemplo, no caso de scFv compreendendo VH e VL, ou no caso de scFab compreendendo VH-CH1 e VL-CL).

[0067] Uma molécula de ligação ao antígeno pode se referir a um complexo não covalente ou covalente de mais do que um polipeptídeo (por exemplo, 2, 3, 4, 6 ou 8 polipeptídeos), por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno semelhante ao IgG compreendendo dois polipeptídeos de cadeia pesada e dois polipeptídeos de cadeia leve.

[0068] As moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção podem ser projetadas e preparadas usando as sequências de anticorpos monoclonais (mAbs) capazes de se ligar a IL-11Rα. As regiões de ligação ao antígeno de anticorpos, tais como fragmento variável de cadeia única (scFv), fragmentos Fab e F(ab')2 também podem ser usados/providos. Uma "região de ligação ao antígeno" é qualquer fragmento de um anticorpo que é capaz de se ligar ao alvo para o qual o anticorpo dado é específico.

[0069] Os anticorpos geralmente compreendem seis regiões determinantes de complementaridade, CDRs; três na região de variável de cadeia pesada (VH):HC-CDR1, HC-CDR2 e HC-CDR3, e três na região de variável de cadeia leve (VL):LC-CDR1, LC-CDR2 e LC-CDR3. As seis CDRs juntas definem o paratopo do anticorpo, que é a parte do anticorpo que se liga à molécula alvo.

[0070] A região de VH e a região de VL compreendem regiões de estrutura (FRs) de cada lado de cada CDR, que proveem um andaime para as CDRs. A partir do N-terminal ao C-terminal, as regiões de VH compreendem a seguinte estrutura: N term-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC- FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C term; e as regiões de VL compreendem a seguinte estrutura: N term-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC- FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C term.

[0071] Existem várias convenções diferentes para definir CDRs e FRs de anticorpos, tais como as descritas em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987) e VBASE2, conforme descrito em Retter et al., Nucl. Acids Res. (2005) 33 (suppl 1):D671-D674. As CDRs e FRs das regiões de VH e regiões de VL dos clones de anticorpos descritos neste documento foram definidos de acordo com o sistema de Kabat.

[0072] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende as CDRs de uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar a IL-11Rα. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende as FRs de uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar a IL-11Rα. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende as CDRs e as FRs de uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar a IL-11Rα. Ou seja, em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende a região de VH e a região de VL de uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar a IL-11Rα.

[0073] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH e uma região de VL que é, ou que é derivada a partir de, região de VH/VL de um clone de anticorpos de ligação IL-11Rα descrita neste documento (por exemplo, anti-IL-11Rα de clone de anticorpos BSO-9A7 (compreendendo 9A7 VH, 9A7 VH 1, 9A7 VH 2, 9A7 VH 3, 9A7 VH 4 ou 9A7 VH 5 e 9A7 VL, 9A7 VL 1, 9A7 VL 2, 9A7 VL 3 ou 9A7 VL 4)).

[0074] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade da sequência, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, identidade da sequência para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13, 14, 15, 16 ou 17, em que a posição correspondente à posição 91 não é arginina e/ou em que a posição correspondente à posição 105 não é metionina.

[0075] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade da sequência, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, identidade da sequência para a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO:13, 14, 15, 16 ou 17, em que a posição correspondente à posição 91 não é arginina e/ou em que a posição correspondente à posição 105 não é metionina.

[0076] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL tendo menos de 100% de identidade da sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno não compreende uma região de VL compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno não compreende um peptídeo/polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59.

[0077] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende LC-CDR3 tendo menos de 100% de identidade da sequência para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno não compreende LC-CDR3 compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno não compreende um peptídeo/polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60.

[0078] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com um dentre (1) a (3) abaixo: (1) (9A7 VH, 9A7 VH 1, 9A7 VH 2, 9A7 VH 3, 9A7 VH 4, 9A7 VH 5) uma região de VH que incorpora as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-CDR1, HC-CDR2, ou HC-CDR3 são substituídas por outro aminoácido. (2) (9A7 VH, 9A7 VH 1, 9A7 VH 2, 9A7 VH 3, 9A7 VH 4) uma região de VH que incorpora as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC- CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-CDR1, HC-CDR2, ou HC-CDR3 são substituídas por outro aminoácido. (3) (9A7 VH 5) uma região de VH que incorpora as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:20 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-CDR1, HC-CDR2, ou HC-CDR3 são substituídas por outro aminoácido.

[0079] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com um dentre (4) a (9) abaixo: (4) (9A7 VH) uma região de VH que incorpora as seguintes FRs: HC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:25 HC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:29 HC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:33 HC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37, ou uma variante da mesma, na qual um ou dois ou três aminoácidos em um ou mais dentre HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3 ou HC-FR4 são substituídas por outro aminoácido. (5) (9A7 VH 1) uma região de VH que incorpora as seguintes FRs: HC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26

HC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:30 HC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:34 HC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:38, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, ou HC- FR4 são substituídas por outro aminoácido. (6) (9A7 VH 2) uma região de VH que incorpora as seguintes FRs: HC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:27 HC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:30 HC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:35 HC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:38, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, ou HC- FR4 são substituídas por outro aminoácido. (7) (9A7 VH 3) uma região de VH que incorpora as seguintes FRs: HC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28 HC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:31 HC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:35 HC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:38, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, ou HC- FR4 são substituídas por outro aminoácido. (8) (9A7 VH 4) uma região de VH que incorpora as seguintes FRs: HC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28 HC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:31 HC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:36 HC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:38, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, ou HC- FR4 são substituídas por outro aminoácido.

(9) (9A7 VH 5) uma região de VH que incorpora as seguintes FRs: HC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28 HC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32 HC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:36 HC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:38, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, ou HC- FR4 são substituídas por outro aminoácido.

[0080] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH compreendendo as CDRs de acordo com um dentre (1) a (3) acima, e as FRs de acordo com um dentre (4) a (9) acima.

[0081] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com um dentre (10) a (15) abaixo: (10) (9A7 VH) uma região de VH compreendendo as CDRs de acordo com (2) e as FRs de acordo com (4). (11) (9A7 VH 1) a VH region comprising the CDRs according to (2) and the FRs according to (5). (12) (9A7 VH 2) a VH region comprising the CDRs according to (2) and the FRs according to (6). (13) (9A7 VH 3) a VH region comprising the CDRs according to (2) and the FRs according to (7). (14) (9A7 VH 4) a VH region comprising the CDRs according to (2) and the FRs according to (8). (15) (9A7 VH 5) a VH region comprising the CDRs according to (3) and the FRs according to (9).

[0082] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com um dentre (16) a (21) abaixo:

(16) (9A7 VH) uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade da sequência, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, identidade da sequência para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:7. (17) (9A7 VH 1) uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:8. (18) (9A7 VH 2) uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:9. (19) (9A7 VH 3) uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:10. (20) (9A7 VH 4) uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:11. (21) (9A7 VH 5) uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:12.

[0083] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL de acordo com (22) abaixo: (22) (9A7 VL, 9A7 VL 1, 9A7 VL 2, 9A7 VL 3, 9A7 VL 4) uma região de VL que incorpora as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre LC-CDR1, LC-CDR2, ou LC-CDR3 são substituídos por outro aminoácido.

[0084] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL de acordo com um dentre (23) a (27) abaixo: (23) (9A7 VL) uma região de VL que incorpora as seguintes FRs: LC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:39 LC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:41 LC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:45 LC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:50, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, ou LC-FR4 são substituídas por outro aminoácido. (24) (9A7 VL 1) uma região de VL que incorpora as seguintes FRs: LC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 LC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:42 LC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46 LC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:51, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, ou LC-FR4 são substituídas por outro aminoácido.

(25) (9A7 VL 2) uma região de VL que incorpora as seguintes FRs: LC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 LC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:43 LC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:47 LC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:51, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, ou LC-FR4 são substituídas por outro aminoácido. (26) (9A7 VL 3) uma região de VL que incorpora as seguintes FRs: LC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 LC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:44 LC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:48 LC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:51, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, ou LC-FR4 são substituídas por outro aminoácido. (27) (9A7 VL 4) uma região de VL que incorpora as seguintes FRs: LC-FR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 LC-FR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:44 LC-FR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:49 LC-FR4 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:51, ou uma variante das mesmas, na qual um, ou dois ou três aminoácidos em uma ou mais dentre LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, ou LC-FR4 são substituídas por outro aminoácido.

[0085] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL compreendendo as CDRs de acordo com (22) acima, e as FRs de acordo com um dentre (23) a (27) acima.

[0086] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL de acordo com um dentre (28) a

(32) abaixo: (28) (9A7 VL) uma região de VL compreendendo as CDRs de acordo com (22) e as FRs de acordo com (23). (29) (9A7 VL 1) uma região de VL compreendendo as CDRs de acordo com (22) e as FRs de acordo com (24). (30) (9A7 VL 2) uma região de VL compreendendo as CDRs de acordo com (22) e as FRs de acordo com (25). (31) (9A7 VL 3) uma região de VL compreendendo as CDRs de acordo com (22) e as FRs de acordo com (26). (32) (9A7 VL 4) uma região de VL compreendendo as CDRs de acordo com (22) e as FRs de acordo com (27).

[0087] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VL de acordo com um dentre (33) a (37) abaixo: (33) (9A7 VL) uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:13. (34) (9A7 VL 1) uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:14. (35) (9A7 VL 2) uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:15. (36) (9A7 VL 3) uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:16. (37) (9A7 VL 4) uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, mais preferencialmente um dentre pelo menos 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:17.

[0088] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com qualquer um dentre (1) a (21) acima, e uma região de VL de acordo com qualquer um dentre (22) a (37) acima.

[0089] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (10) ou (16) e uma região de VL de acordo com (28) ou (33).

[0090] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (14) ou (20) e uma região de VL de acordo com (32) ou (37). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (14) e uma região de VL de acordo com (32). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (20) e uma região de VL de acordo com (37).

[0091] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (13) ou (19) e uma região de VL de acordo com (30) ou (35). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (13) ou (19) e uma região de VL de acordo com (31) ou (36). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (13) ou (19) e uma região de VL de acordo com (32) ou (37).

[0092] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (14) ou (20) e uma região de VL de acordo com (30) ou (35). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região de VH de acordo com (14) ou (20) e uma região de VL de acordo com (31) ou (36).

[0093] Em modalidades de acordo com a presente invenção na qual um ou mais aminoácidos são substituídos por outro aminoácido, as substituições podem ser substituições conservativas, por exemplo, de acordo com a Tabela a seguir. Em algumas modalidades, os aminoácidos no mesmo bloco na coluna do meio são substituídos.

[0094] Em algumas modalidades, os aminoácidos na mesma linha na coluna mais à direita são substituídos. ALIFÁTICO Não polar GAP

ILV Polar - sem C S T M carga

NQ Polar -D E carregado KR

AROMÁTICO HFWY

[0095] Em algumas modalidades, a(s) substituição(ões) podem ser funcionalmente conservadoras. Ou seja, em algumas modalidades, a substituição pode não afetar (ou pode não afetar substancialmente) uma ou mais propriedades funcionais (por exemplo, ligação ao alvo) da molécula de ligação ao antígeno compreendendo a substituição em comparação com a molécula não substituída equivalente.

[0096] Em algumas modalidades, a(s) substituição(ões) em relação a uma sequência de VH ou de VL de referência pode ser focada em uma região ou regiões particulares da sequência de VH ou de VL. Por exemplo, a variação de uma sequência de VH ou de VL de referência pode ser focada em uma ou mais das regiões estruturais (FR1, FR2, FR3 e/ou FR4).

[0097] As regiões de VH e de VL de uma região de ligação ao antígeno de um anticorpo juntas constituem a região Fv. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção compreende, ou consiste em, uma região Fv que se liga a IL- 11Rα. Em algumas modalidades, as regiões de VH e de VL do Fv são providas como polipeptídeo único unido por uma região de conexão, ou seja, um Fv de cadeia única (scFv).

[0098] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende uma ou mais regiões de uma sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina. Em algumas modalidades, a sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina é, ou é derivada a partir da sequência constante de cadeia pesada de uma IgG (por exemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4), IgA (por exemplo, lgA1, lgA2), IgD, IgE ou IgM.

[0099] Em algumas modalidades, a sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina é a constante G 1 de imunoglobulina humana (IGHG1; UniProt: P01857-1, v1; SEQ ID NO:53). As posições de 1 a 98 de SEQ ID NO:53 formam a região CH1 (SEQ ID NO:54). As posições de 99 a 110 da SEQ ID NO:53 formam uma região da dobradiça entre as regiões CH1 e CH2 (SEQ ID NO:55). As posições de 111 a 223 de SEQ ID NO:53 formam a região CH2 (SEQ ID NO:56). As posições de 224 a 330 de SEQ ID NO:53 formam a região CH3 (SEQ ID NO:57).

[00100] Em algumas modalidades, a região CH1 compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:54, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54. Em algumas modalidades, a região da dobradiça CH1-CH2 compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:55, ou um sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%,

90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55.

[00101] Em algumas modalidades, a região CH2 compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:56, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56. Em algumas modalidades, a região CH3 compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:57, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:57.

[00102] Em algumas modalidades, a sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina é a constante G 4 de imunoglobulina humana (IGHG4; UniProt: P01861, v1; SEQ ID NO:61). As posições de 1 a 98 de SEQ ID NO:61 formam a região CH1 (SEQ ID NO:62). As posições de 99 a 110 da SEQ ID NO:61 formam uma região da dobradiça entre as regiões CH1 e CH2 (SEQ ID NO:63). As posições de 111 a 220 de SEQ ID NO:61 formam a região CH2 (SEQ ID NO:64). As posições de 221 a 327 de SEQ ID NO:61 formam a região CH3 (SEQ ID NO:65).

[00103] Em algumas modalidades, a região CH1 compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:62, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62. Em algumas modalidades, uma região da dobradiça CH1-CH2 compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:63, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou

100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:63. Em algumas modalidades, uma região CH2 compreende ou consiste na uma sequência de SEQ ID NO:64, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64. Em algumas modalidades, uma região CH3 compreende ou consiste na uma sequência de SEQ ID NO:65, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:65.

[00104] Em algumas modalidades, a sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina é a constante G4 de imunoglobulina humana (IGHG4; UniProt: P01861, v1) compreendendo substituições de aminoácidos que conferem propriedades melhoradas às moléculas de ligação ao antígeno da invenção. Em algumas modalidades, a sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina é IgG4 humana compreendendo as substituições S241P e/ou L248E. A mutação S241P está se estabilizando em dobradiça, enquanto a mutação L248E reduz adicionalmente a já baixa função efetora ADCC de IgG4 (Davies e Sutton, Immunol Rev. 2015 Nov; 268(1):139-159; Angal et al Mol Immunol. 1993 Jan 1993; 30(1):105-8). A atividade ADCC inferior é vantajosa para a potencial administração subcutânea do anticorpo.

[00105] Em algumas modalidades, a sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina é a constante G4 de imunoglobulina humana (IGHG4; UniProt: P01861, v1) compreendendo a substituição S241P (numerada de acordo com o sistema de Kabat), conforme descrito em SEQ ID NO:66. As posições de 1 a 98 de SEQ ID NO:66 formam a região CH1 (SEQ ID NO:62). As posições de 99 a 110 de SEQ ID NO:66 formam uma região da dobradiça entre as regiões CH1 e CH2 (SEQ ID NO:67) compreendendo a substituição S241P. As posições de 111 a 220 de SEQ ID NO:66 formam a região CH2 (SEQ ID NO:64). As posições de 221 a 327 de SEQ ID NO:66 formam a região CH3 (SEQ ID NO:65).

[00106] Em algumas modalidades, uma região CH1 compreende ou consiste na uma sequência de SEQ ID NO:62, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62. Em algumas modalidades, uma região da dobradiça CH1-CH2 compreende ou consiste na uma sequência de SEQ ID NO:67, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67.

[00107] Em algumas modalidades, uma região CH2 compreende ou consiste na uma sequência de SEQ ID NO:64, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64. Em algumas modalidades, uma região CH3 compreende ou consiste na uma sequência de SEQ ID NO:65, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:65.

[00108] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende uma ou mais regiões de uma sequência constante de cadeia leve de imunoglobulina. Em algumas modalidades, a sequência constante da cadeia leve de imunoglobulina é a constante kappa de imunoglobulina humana (IGKC; CK; UniProt:P01834-1, v2; SEQ ID NO:58). Em algumas modalidades, a sequência constante de cadeia leve de imunoglobulina é uma constante de lambda de imunoglobulina humana (IGLC; CK), por exemplo, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6 ou IGLC7 (SEQ ID NO:75, 76, 77, 78 ou 79. Em algumas modalidades, uma região CL compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:58, ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58. Em algumas modalidades, uma região CL compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO:75, 76, 77, 78, ou 79 ou uma sequência tendo pelo menos 60%, preferencialmente um dentre 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:75, 76, 77, 78, ou 79.

[00109] A VL e a região constante de cadeia leve (CL) e a região de VH e a região constante de cadeia pesada 1 (CH1) de uma região de ligação ao antígeno de um anticorpo em conjunto constituem a região Fab. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região Fab compreendendo uma VH, uma CH1, uma VL e uma CL (por exemplo, CK ou Cλ). Em algumas modalidades, a região Fab compreende um polipeptídeo compreendendo uma VH e uma CH1 (por exemplo, um polipeptídeo de fusão VH-CH1) e um polipeptídeo compreendendo uma VL e uma CL (por exemplo, um polipeptídeo de fusão VL-CL). Em algumas modalidades, a região Fab compreende um polipeptídeo compreendendo uma VH e uma CL (por exemplo, um polipeptídeo de fusão VH-CL) e um polipeptídeo compreendendo uma VL e uma CH (por exemplo, um polipeptídeo de fusão VL-CH1); ou seja, em algumas modalidades, a região Fab é uma região CrossFab. Em algumas modalidades, as regiões VH, CH1, VL e CL do Fab ou CrossFab são providas como polipeptídeo único unido por regiões de conexão, ou seja, como um Fab de cadeia única (scFab) ou um CrossFab de cadeia única (scCrossFab).

[00110] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende, ou consiste em, uma região Fab que se liga a IL-11Rα.

[00111] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento compreende, ou consiste em, uma anticorpo inteiro que se liga a IL-11Rα. Conforme utilizado neste documento, um "anticorpo inteiro" se refere a um anticorpo tendo uma estrutura que é substancialmente semelhante à estrutura de uma imunoglobulina (Ig). Diferentes tipos de imunoglobulinas e suas estruturas são descritas, por exemplo, em Schroeder e Cavacini J Allergy Clin Immunol. (2010) 125(202):S41-S52, que é incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade.

[00112] As imunoglobulinas do tipo G (ou seja, IgG) são ~150 kDa glicoproteínas compreendendo duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. A partir de N- a C-terminal, as cadeias pesadas compreendem uma VH seguida por uma região constante de cadeia pesada compreendendo três domínios constantes (CH1, CH2 e CH3), e semelhantemente a cadeia leve compreende uma VL seguida por uma CL. Dependendo da cadeia pesada, as imunoglobulinas podem ser classificadas como IgG (por exemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4), IgA (por exemplo lgA1, lgA2), IgD, IgE ou IgM. A cadeia leve pode ser kappa (K) ou lambda (λ).

[00113] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento compreende, ou consiste em, uma IgG (por exemplo, IgG 1, lgG2, lgG3, lgG4), IgA (por exemplo, IgA1, lgA2), IgD, IgE ou IgM que se liga a IL-11Rα.

[00114] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção é pelo menos uma ligação monovalente para IL-11Rα. Valência de ligação se refere ao número de sítios de ligação em uma molécula de ligação ao antígeno para um dado determinante antigênico. Por conseguinte, em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende pelo menos um sítio de ligação para IL- 11Rα.

[00115] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende mais do que um sítio de ligação para IL-11Rα, por exemplo,2, 3 ou 4 sítios de ligação. Os sítios de ligação podem ser iguais ou diferentes. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é, por exemplo, bivalente, trivalente ou tetravalente para IL-11Rα.

[00116] Os aspectos da presente invenção se referem a moléculas de ligação ao antígeno multiespecíficas. Por "multiespecífico" entende-se que a molécula de ligação ao antígeno exibe ligação específica a mais do que um alvo. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é uma molécula de ligação ao antígeno biespecífica. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende pelo menos dois domínios de ligação ao antígeno diferentes (ou seja, pelo menos dois domínios de ligação ao antígeno, por exemplo, compreendendo VHs e VLs não idênticas).

[00117] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno se liga a IL-11Rα e a outro alvo (por exemplo, um antígeno diferente de IL-11Rα) e, portanto, é pelo menos biespecífico. O termo "biespecífico" significa que a molécula de ligação ao antígeno é capaz de se ligar especificamente a pelo menos dois determinantes antigênicos distintos.

[00118] Será apreciado que uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção (por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno multiespecífica) pode compreender moléculas de ligação ao antígeno capazes de se ligarem aos alvos para os quais a molécula de ligação ao antígeno é específica. Por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar a IL-11Rα e um antígeno diferente de IL-11Rα pode compreender:(i) uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar a IL-11Rα, e (ii) uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar a um antígeno diferente de IL-11Rα.

[00119] Será apreciado também que uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção (por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno multiespecífica) pode compreender polipeptídeos de ligação ao antígeno ou complexos de polipeptídeos de ligação ao antígeno capazes de se ligarem aos alvos para os quais a molécula de ligação ao antígeno é específica. Por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com a invenção pode compreender, por exemplo, (i) um complexo de polipeptídeo de ligação ao antígeno capaz de se ligar a IL- 11Rα, compreendendo um polipeptídeo de cadeia leve (compreendendo a estrutura VL-CL) e um polipeptídeo de cadeia pesada (compreendendo a estrutura VH-CH1-CH2-CH3), e (ii) um complexo de polipeptídeo de ligação ao antígeno capaz de se ligar a um antígeno diferente de IL-11Rα, compreendendo um polipeptídeo de cadeia leve (compreendendo a estrutura VL-CL) e um polipeptídeo de cadeia (compreendendo a estrutura VH-CH1-CH2-CH3)

[00120] Em algumas modalidades, uma molécula de ligação ao antígeno componente de uma molécula de ligação ao antígeno maior (por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno multiespecífica) pode ser referida, por exemplo, como um "domínio de ligação ao antígeno" ou "região de ligação ao antígeno" da molécula de ligação ao antígeno maior.

[00121] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende uma molécula de ligação ao antígeno capaz de se ligar a IL-11Rα e uma molécula de ligação ao antígeno capaz de se ligar a um antígeno diferente de IL-11Rα. Em algumas modalidades, o antígeno diferente de IL-11Rα é uma molécula de superfície celular imune. Em algumas modalidades, o antígeno diferente de IL-11Rα é um antígeno de células cancerosas. Em algumas modalidades, o antígeno diferente de IL- 11Rα é uma molécula receptora, por exemplo uma receptora de superfície celular. Em algumas modalidades, o antígeno diferente de IL-11Rα é uma molécula de sinalização celular, por exemplo, uma citocina, quimiocina, interferon, interleucina ou linfocina. Em algumas modalidades, o antígeno diferente de IL-11Rα é um fator de crescimento ou um hormônio.

[00122] Um antígeno de célula cancerosa é um antígeno que é expresso ou superexpresso por uma célula cancerosa. Um antígeno de célula cancerosa pode ser qualquer peptídeo/polipeptídeo, glicoproteína, lipoproteína, glicano, glicolipídio, lipídio ou fragmento do mesmo. A expressão de um antígeno de célula cancerosa pode estar associada a um câncer. Um antígeno de célula cancerosa pode ser expresso de maneira anormal por uma célula cancerosa (por exemplo, o antígeno de célula cancerosa pode ser expresso com localização anormal) ou pode ser expresso com uma estrutura anormal por uma célula cancerosa. Um antígeno de célula cancerosa pode ser capaz de induzir uma resposta imune. Em algumas modalidades, o antígeno é expresso na superfície da célula cancerosa (ou seja, o antígeno da célula cancerosa é um antígeno da superfície da célula cancerosa). Em algumas modalidades, a parte do antígeno que é ligada pela molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento é exibida na superfície externa da célula cancerosa (ou seja, é extracelular). O antígeno de células cancerosas pode ser um antígeno associado ao câncer. Em algumas modalidades, o antígeno de células cancerosas é um antígeno cuja expressão está associada ao desenvolvimento, progressão ou gravidade dos sintomas de um câncer. O antígeno associado ao câncer pode estar associado à causa ou patologia do câncer ou pode ser expresso de maneira anormal como consequência do câncer. Em algumas modalidades, o antígeno de células cancerosas é um antígeno cuja expressão é suprarregulada (por exemplo, no nível de

RNA e/ou proteína) por células de um câncer, por exemplo, em comparação com o nível de expressão de células não cancerosas comparáveis (por exemplo, células não cancerosas derivadas do mesmo tecido/tipo de célula). Em algumas modalidades, o antígeno associado ao câncer pode ser expresso preferencialmente por células cancerosas e não expresso por células não cancerosas comparáveis (por exemplo, células não cancerosas derivadas do mesmo tecido/tipo de célula). Em algumas modalidades, o antígeno associado ao câncer pode ser o produto de um oncogene mutado ou gene supressor de tumor mutado. Em algumas modalidades, o antígeno associado ao câncer pode ser o produto de uma proteína celular superexpressada, um antígeno do câncer produzido por um vírus oncogênico, um antígeno oncofetal ou um glicolipídeo ou glicoproteína de superfície celular.

[00123] Uma molécula de superfície celular imune pode ser qualquer peptídeo/polipeptídeo, glicoproteína, lipoproteína, glicano, glicolipídio, lipídio ou fragmento dos mesmos expresso na ou sobre a superfície celular de uma célula imune. Em algumas modalidades, a parte da molécula de superfície celular imune que é ligada pela molécula de ligação ao antígeno da presente invenção está na superfície externa da célula imune (ou seja, é extracelular). A molécula da superfície celular imune pode ser expressa na superfície celular de qualquer célula imune. Em algumas modalidades, a célula imune pode ser uma célula de origem hematopoiética, por exemplo, um neutrófilo, eosinófilo, basófilo, célula dendrítica, linfócito ou monócito. O linfócito pode ser, por exemplo, uma célula T, célula B, célula natural killer (NK), célula NKT ou célula linfoide inata (ILC), ou um precursor da mesma (por exemplo, um timócito ou célula pré-B). Em algumas modalidades, a molécula da superfície celular imune pode ser uma molécula coestimuladora (por exemplo, CD28, 0X40, 4-1BB, ICOS ou CD27) ou um ligante do mesmo. Em algumas modalidades, a molécula da superfície celular imune pode ser um inibidor da via de sinalização (por exemplo, PD-1, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, TIGIT ou BTLA) ou um ligante do mesmo.

[00124] As moléculas de ligação ao antígeno multiespecíficas de acordo com a invenção podem ser providas em qualquer formato adequado, tal como aqueles formatos descritos em Brinkmann e Kontermann MAbs (2017) 9(2):182-212, que é incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade. Os formatos adequados incluem aqueles mostrados na Figura 2 de Brinkmann e Kontermann MAbs (2017) 9(2):182-212: conjugados de anticorpos, por exemplo, IgG2, F(ab')2 ou CovX-Body; IgG ou moléculas semelhantes a IgG, por exemplo, IgG, IgG quimérica, HC comum de corpo xA; Proteínas de fusão CH1/CL, por exemplo, scFv2-CH1/CL, VHH2-CH1/CL; moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas 'somente de domínio variável', por exemplo, tandem scFv (taFV), triplebodies, diabodies (Db), dsDb, Db (kih), DART, scDB, dsFv- dsFv, tandAbs, cabeças triplas, tandem dAb/VHH, tertravalent dAb.VHH; Proteínas de fusão não Ig, por exemplo, scFv2-albumina, scDb-albumina, taFv-albumina, taFv-toxina, minianticorpo, DNL-Fab2, DNL-Fab2-scFv, DNL-Fab2-IgG-citocina2, ImmTAC (TCR-scFv); proteínas de fusão Fc e CH3 modificadas, por exemplo, scFv-Fc (kih), scFv-Fc (pares de carga CH3), scFv-Fc (EW-RVT), scFv-fc (HA-TF), scFv-Fc (SEEDbody), taFv -Fc (kih), scFv-Fc (kih) -Fv, Fab-Fc (kih) -scFv, Fab-scFv- Fc (kih), Fab-scFv-Fc (BEAT), Fab-scFv-Fc (SEEDbody), DART-Fc, scFv-CH3 (kih), TriFabs; Fusões Fc, por exemplo Di-diabody, scDb-Fc, taFv-Fc, scFv-Fc-scFv, HCAb-VHH, Fab-scFv-Fc, scFv4-lg, scFv2-Fcab; Fusões CH3, por exemplo, Dia-diabody, scDb-CH3; Fusões IgE/IgM CH2, por exemplo, scFv- EHD2-scFv, scFvMHD2-scFv; Proteínas de fusão Fab, por exemplo Fab- scFv (bibody), Fab-scFv2 (tribody), Fab-Fv, Fab-dsFv, Fab-VHH, Fab-Fab ortogonal; proteínas de fusão não Ig, por exemplo, DNL-Fab3, DNL-Fab2- scFv, DNL-Fab2-IgG-citocina2; IgG assimétrico ou moléculas semelhantes a IgG, por exemplo, IgG (kih), IgG (kih) LC comum, LC comum ZW1 IgG,

LC comum Biclonics, CrossMab, CrossMab (kih), cFab-lgG(kih), Fab-scFab- lgG(kih), Fab IgG(kih) ortogonal, DuetMab, pares de carga CH3 + pares de carga CH1/CL, pares de carga CH3/dobradiça, SEED-body, Duobody, CrossMab(kih)-quatro-em-um, LC comum LUZ-Y; LUZ-Y scFab-IgG, FcFc*; IgGs modificada por Fc e anexada, por exemplo, lgG(kih)-Fv, IgG HA-TF- Fv, lgG(kih)scFab, scFab-Fc(kih)-scFv2, scFab-Fc(kih)-scFv, meia DVD-lg, DVI-lg (quatro-em-um), CrossMab-Fab; proteínas de fusão CH3 e Fc modificada, por exemplo, Fab-Fc(kih)-scFv, Fab-scFv-Fc(kih), Fab-scFv- Fc(BEAT), Fab- scFv-Fc-SEEDbody, TriFab; fusões HC - IgGs anexadas, por exemplo, IgG-HC, scFv, IgG-dAb, IgG-taFV, IgG- CrossFab, Fab ortogonal IgG, IgG-(CaCp) Fab, scFv-HC-IgG, tandem Fab-IgG (Fab ortogonal) Fab-lgG(CaCp Fab), Fab-lgG(CR3), Fab-dobradiça-lgG(CR3); fusões LC - IgGs anexada, por exemplo, IgG-scFv(LC), scFv(LC)-lgG, dAb- IgG; fusões HC e LC - IgGs anexada, por exemplo, DVD-lg, TVD-lg, CODV- lg, scFv4-lgG, Zybody; fusões Fc, por exemplo, Fab-scFv-Fc, scFv4-lg; fusões F(ab’)2, por exemplo, F(ab’)2-scFv2; proteínas de fusões CH1/CL, por exemplo, scFv2-CH1-dobradiça/CL; IgGs modificadas, por exemplo, DAF (dois-em-um-IgG), DutaMab, Mab2; e fusões não Ig, por exemplo, DNL-Fab4-lgG.

[00125] O versado na técnica é capaz de projetar e preparar moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas. Métodos para a produção de móleculas de ligação ao antígeno biespecíficas incluem reticulação de maneira química de moléculas de ligação ao antígeno ou fragmentos de anticorpos, por exemplo, com dissulfeto redutível ou ligações de tioéter não redutíveis, por exemplo, conforme descrito em Segal e Bast, 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16, que é incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade. Por exemplo, N-succinimidil- 3-(-2-piridilditio)-propionato (SPDP) pode ser usado para reticular de maneira química, por exemplo, fragmentos Fab através de grupos SH de região da dobradiça, para criar heterodímeros F(ab)2 biespecíficos vinculados a dissulfeto.

[00126] Outros métodos para produção de moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas incluem fusão de hidridomas de produção de anticorpos, por exemplo, com polietilenoglicol, para produzir uma célula quadroma capaz de secretar anticorpo biespecífico, por exemplo, conforme descrito em D. M. e Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antigen- binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-

2.13.16.

[00127] As moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas de acordo com a presente invenção também podem ser produzidas de forma recombinante, pela expressão de, por exemplo, um construto de ácido nucleico codificando polipeptídeos para as moléculas de ligação ao antígeno, por exemplo, como descrito em Antibody Engineering:Methods and Protocols, Segunda Edição (Humana Press, 2012), no Capítulo 40:Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Diabodies and Tandem scFv (Hornig e Färber-Schwarz), ou French, How to make bispecific antigen-binding molecules, Methods Mol. Med. 2000; 40:333-339, dos quais todo o conteúdo é incorporado por meio deste instrumento por referência. Por exemplo, um construto de DNA que codifica os domínios variáveis de cadeia leve e pesada para os dois fragmentos de ligação ao antígeno (ou seja, os domínios variáveis da cadeia leve e pesada para o fragmento de ligação ao antígeno capaz de se ligar a IL-11Rα, e os domínios variáveis de cadeia leve e pesada para o fragmento de ligação ao antígeno capaz de se ligar a outra proteína alvo), e incluindo sequências que codificam uma vinculador adequado ou domínio de dimerização entre os fragmentos de ligação ao antígeno podem ser preparados por técnicas de clonagem molecular. O anticorpo biespecífico recombinante pode, posteriormente, ser produzido por expressão (por exemplo, in vitro) do construto em uma célula hospedeira adequada (por exemplo, uma célula hospedeira de mamífero), e o anticorpo biespecífico recombinante expresso pode então ser opcionalmente purificado.

[00128] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção compreendem uma região Fc. Uma região Fc é composta por regiões CH2 e CH3 de um polipeptídeo e regiões CH2 e CH3 de outro polipeptídeo. As regiões CH2 e CH3 a partir dos dois polipeptídeos em conjunto formam a região Fc.

[00129] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende uma região Fc compreendendo a modificação em uma ou o mais das regiões CH2 e CH3 promovendo a associação da região Fc. A coexpressão recombinante de polipeptídeos constituintes de uma molécula de ligação ao antígeno e de uma associação subsequente leva a diversas combinações possíveis. Para melhorar o rendimento das combinações desejadas de polipeptídeos em moléculas de ligação ao antígeno na produção recombinante, é vantajoso introduzir na(s) modificação(ões) das regiões Fc promovendo a associação da combinação desejada de polipeptídeos de cadeia pesada. As modificações podem promover por exemplo. interação hidrofóbica e/ou eletrostática entre as regiões CH2 e/ou CH3 de cadeias de polipeptídeo diferentes. As modificações adequadas são descritas, por exemplo, em Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394, que é incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades o antígeno da molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende uma região Fc compreendendo substituições emparelhadas nas regiões CH3 da região Fc de acordo com um dos seguintes formatos, conforme mostrado na Tabela 1 de Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394: KiH, KiHS-S, HA-TF, ZW1, 7.8.60, DD-KK, EW-RVT, EW-RVTS-S, SEED or A107. Polipeptídeos

[00130] A presente invenção provê também constituintes de polipeptídeo de moléculas de ligação ao antígeno. Os polipeptídeos podem ser providos no formato isolado ou substancialmente purificados.

[00131] A molécula de ligação ao antígeno da presente invenção pode ser, ou pode compreender, um complexo de polipeptídeos.

[00132] No presente relatório descritivo onde um polipeptídeo compreende mais do que um domínio ou região, será apreciado que os domínios/regiões plurais estão preferencialmente presentes na mesma cadeia de polipeptídeo. Ou seja, o polipeptídeo compreende mais do que um domínio ou região são um polipeptídeo de fusão compreendendo os domínios/regiões.

[00133] Em algumas modalidades um polipeptídeo de acordo com a presente invenção compreende, ou consiste em, uma VH conforme descrito neste documento. Em algumas modalidades um polipeptídeo de acordo com a presente invenção compreende, ou consiste em, uma VL conforme descrito neste documento.

[00134] Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende adicionalmente uma ou mais regiões constantes de cadeia pesada (CH) do anticorpo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende adicionalmente uma ou mais regiões constantes de cadeia leve (CL) do anticorpo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma região CH1, CH2 e/ou uma região CH3 de uma imunoglobulina (Ig).

[00135] Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma ou mais regiões de uma sequência constante de cadeia pesada de imunoglobulina. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma região CH1 conforme descrito neste documento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma região CH1-CH2 conforme descrito neste documento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma região CH2 conforme descrito neste documento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma região CH3 conforme descrito neste documento.

[00136] Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma região CH3 compreendendo qualquer uma das substituições/combinações de aminoácidos de substituições de aminoácidos mostradas na Tabela 1 de Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394, incorporado por referência acima.

[00137] Em algumas modalidades, as regiões CH2 e/ou CH3 do polipeptídeo compreendem uma ou mais substituições de aminoácidos para promover a associação do polipeptídeo com outro polipeptídeo compreendendo uma região CH2 e/ou CH3.

[00138] Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma ou mais regiões de uma sequência constante de cadeia leve de imunoglobulina. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma região CL conforme descrito neste documento.

[00139] Em algumas modalidades, o polipeptídeo de acordo com a presente invenção compreende uma estrutura do N para C-terminal de acordo com um dentre os seguintes: (i) VH (ii) VL (iii) VH-CH1 (iv) VL-CL (v) VL-CH1 (vi) VH-CL (vii) VH-CH1-CH2-CH3 (viii) VL-CL-CH2-CH3 (ix) VL-CH1-CH2-CH3 (x) VH-CL-CH2-CH3

[00140] Também são providas pela presente invenção as moléculas de ligação ao antígeno compostas pelos polipeptídeos da presente invenção. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende uma das seguintes combinações de polipeptídeos:

(A) VH + VL (B) VH-CH1 + VL-CL (C) VL-CH1 + VH-CL (D) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL (E) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1 (F) VL-CH1-CH2-CH3 + VH-CL (G) VL-CL-CH2-CH3 + VH-CH1 (H) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL-CH2-CH3 (I) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1-CH2-CH3

[00141] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende mais do que um de um polipeptídeo das combinações mostradas em (A) a (I) acima. A título de exemplo, com referência a (D) acima, em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno compreende dois polipeptídeos compreendendo a estrutura VH- CH1-CH2-CH3, e dois polipeptídeos compreendendo a estrutura VL-CL.

[00142] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende uma dentre as seguintes combinações de polipeptídeos: (J) VH (anti-IL-11Rα) + VL (anti-IL-11Rα) (K) VH (anti-IL-11Rα)-CH1 + VL (anti-IL-11Rα)-CL (L) VL (anti-IL-11Rα)-CH1 + VH (anti-IL-11Rα)-CL (M) VH (anti-IL-11Rα)-CH1-CH2-CH3 + VL (anti-IL-11Rα)-CL (N) VH (anti-IL-11Rα)-CL-CH2-CH3 + VL (anti-IL-11Rα)-CH1 (O) VL (anti-IL-11Rα)-CH1-CH2-CH3 + VH (anti-IL-11Rα)-CL (P) VL (anti-IL-11Rα)-CL-CH2-CH3 + VH (anti-IL-11Rα)-CH1 (Q) VH (anti-IL-11Rα)-CH1-CH2-CH3 + VL (anti-IL-11Rα)-CL-CH2- CH3 (R) VH (anti-IL-11Rα)-CL-CH2-CH3 + VL (anti-IL-11Rα)-CH1-CH2- CH3

[00143] Em que: "VH (anti-IL-11Rα)" se refere ao VH de uma molécula de ligação ao antígeno capaz de se ligar a IL-11Rα conforme descrito neste documento, por exemplo, conforme definido em qualquer um dentre (1) a (21), e "VL (anti-IL-11 Rα) ”se refere ao VL de uma molécula de ligação ao antígeno capaz de se ligar a IL-11Rα conforme descrito neste documento, por exemplo, conforme definido em qualquer um dentre (22) a (37).

[00144] Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos tendo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NOs:7 a 17.

[00145] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:70. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:72. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:73. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção compreende um polipeptídeo compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, preferencialmente um dentre 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:74. Vinculadores e sequências adicionais. Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno e polipeptídeos da presente invenção compreendem uma ou mais sequências de vinculadores entre sequências de aminoácidos. Uma sequência de conector pode ser provida em uma ou ambas as extremidades de um ou mais de uma VH, VL, região de dobradiça CH1-CH2, região CH2 e uma região CH3 da molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno.

[00146] As sequências de vinculadores são conhecidas ao versado na técnica e são descritas, por exemplo, em Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369, que é incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, uma sequência de vinculador pode ser uma sequência de vinculador flexível. As sequências de vinculador flexíveis permitem o movimento relativo das sequências de aminoácidos que estão vinculadas pela sequência de vinculador. Os vinculadores flexíveis são conhecidos ao versado na técnica, e vários são identificados em Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369. As sequências de vinculadores flexíveis geralmente compreendem altas proporções de resíduos de glicina e/ou serina.

[00147] Em algumas modalidades, a sequência de vinculador compreende pelo menos um resíduo de glicina e/ou pelo menos um resíduo de serina. Em algumas modalidades, a sequência de vinculador consiste em resíduos de glicina e serina. Em algumas modalidades, a sequência de vinculador tem um comprimento de 1-2, 1-3, 1-4, 1-5 ou 1-10 aminoácidos.

[00148] As moléculas de ligação ao antígeno e polipeptídeos da presente invenção podem compreender adicionalmente aminoácidos ou sequências de aminoácidos adicionais. Por exemplo, as moléculas de ligação ao antígeno e polipeptídeos podem compreender sequência(s) de aminoácidos para facilitar a expressão, dobramento, tráfego, processamento, purificação ou detecção da molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno. Por exemplo, a molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno pode compreender uma sequência que codifica um His, (por exemplo, 6XHis), Myc, GST, MBP, FLAG, HA, E, ou indicador de Biotina, opcionalmente no N ou C-terminal da molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, a molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno compreende uma fração detectável, por exemplo, um marcador fluorescente, luminescente, imunodetectável, rádio, químico, ácido nucleico ou enzimático.

[00149] As moléculas de ligação ao antígeno e polipeptídeos da presente invenção podem compreender adicionalmente um peptídeo sinal (também conhecido como uma sequência líder ou sequência sinal). Os peptídeos sinal normalmente consistem em uma sequência de 5-30 aminoácidos hidrofóbicos, que formam uma hélice alfa única. Proteínas secretadas e proteínas expressas na superfície celular geralmente compreendem peptídeos sinal.

[00150] O peptídeo sinal pode estar presente no N-terminal da molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno e pode estar presente na molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno sintetizado recentemente. O peptídeo sinal provê tráfego e secreção eficientes da molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno. Os peptídeos sinal são geralmente removidos por clivagem e, deste modo, não estão compreendidos na molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno madura secretada a partir da célula que expressa a molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno.

[00151] Os peptídeos sinal são conhecidos para muitas proteínas, e são gravados nas bases de dados tais como GenBank, UniProt, Swiss-Prot, TrEMBL, Recurso de Informação de Proteína, Banco de Dados de Proteína, Ensembl, e InterPro, e/ou podem ser identificados/previstos, por exemplo. usando as ferramentas da análise de sequência de aminoácidos tais como SignalP (Petersen et al.,2011 Nature Methods 8:785-786) ou Signal-BLAST (Frank e Sippl, 2008 Bioinformatics 24:2172-2176). Marcação e conjugados

[00152] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção compreendem adicionalmente uma fração detectável ou uma fração química.

[00153] Em algumas modalidades, a molécula/polipeptídeo de ligação ao antígeno compreende uma fração detectável, por exemplo, um marcador fluorescente, marcador fosforescente, marcador luminescente, marcador imunodetectável (por exemplo, um indicador epítopo), marcador de rádio, químico, ácido nucleico ou marcador enzimático. A molécula de ligação ao antígeno pode ser marcada de maneira covalente ou não covalente com a fração detectável.

[00154] Os marcadores fluorescentes incluem por exemplo. o fluoresceína, o rodamina, o aloficocianina, o eosina e NDB, a proteína fluorescente verde (GFP) quelatos de terras raras tais como o európio (Eu), o térbio (Tb) e o samário (Sm), a rodamina tetrametil, Texas Red, 4- metilumbeliferona, cumarina de 7-amino-4-metil, Cy3, e Cy5. Os radiomarcadores incluem radioisótopos tais como Iodo123, Iodo125, Iodo126, Iodo131, Iodo133, Bromo77, Tecnécio99m, Índio111, Índio113m, Gálio67, Gálio68,

Rutênio95, Rutênio97, Rutênio103, Rutênio105, Mercúrio207, Mercúrio203, Rênio99m, Rênio101, Rênio105, Escândio47, Telúrio121m, Telúrio122m, Telúrio125m, Túlio165, Túlio167, Túlio168, Cobre67, Flúor18, Ítrio90, Paládio100, Bismuto217 e Antimônio211. Os marcadores luminescentes incluem marcadores radioluminescentes, quimioluminescentes (por exemplo, éster acridino, luminol, isoluminol) e marcadores bioluminescentes. Os marcadores imunodetectáveis incluem haptenos, peptídeos/polipeptídeos, anticorpos, receptores e ligantes como biotina, avidina, estreptavidina ou digoxigenina. Os marcadores de ácido nucleico incluem aptâmeros. Os marcadores enzimáticos incluem, por exemplo, peroxidase, fosfatase alcalina, glicose oxidase, beta-galactosidase e luciferase.

[00155] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são conjugadas a uma fração química. A fração química pode ser uma fração para prover um efeito terapêutico. Os conjugados de anticorpos-drogas são revisados, por exemplo, em Parslow et al., Biomedicines. Setembro de 2016; 4(3): 14. Em algumas modalidades, a fração química pode ser uma fração de droga (por exemplo, um agente citotóxico). Em algumas modalidades, a fração de droga pode ser um agente quimioterápico. Em algumas modalidades, a fração de droga é selecionada a partir de caliqueamicina, DM1, DM4, monometilauristatina E (MMAE), monometilauristatina F (MMAF), SN-38, doxorrubicina, duocarmicina, D6.5 e PBD. Propriedades funcionais das moléculas de ligação ao antígeno

[00156] As moléculas de ligação ao antígeno descritas neste documento podem ser caracterizadas por referência a certas propriedades funcionais. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno descrita neste documento pode possuir uma ou mais das seguintes propriedades: a) Ligação específica a IL-11Rα (por exemplo, IL-11 humano e/ou IL-11Rα de camundongo);

b) Ligação à IL-11Rα (por exemplo, IL-11Rα humano) com uma afinidade de ligação de EC50 = inferior a 1000 ng/ml, por exemplo, conforme determinado por ELISA; c) Inibição de interação entre IL-11Rα e IL-11; d) Inibição de interação entre IL-11Rα e gp130; e) Inibição de interação entre IL-11Rα:gp130 e complexo de receptor e IL-11; f) Inibição da interação entre IL-11:complexo de IL-11Rα e gp130; g) Inibição de IL-11/sinalização de IL-11R; h) Inibição de sinalização mediada por IL-11; i) Inibição de sinalização mediada por ligação de IL-11 ao complexo receptor de IL-11Rα:gp130; j) Inibição de sinalização mediada por ligação de IL-11:complexo de IL-11Rα a gp130 (ou seja, trans-sinalização de IL-11); k) Inibição de proliferação de fibroblastos; l) Inibição de geração de miofibroblasto a partir de fibroblastos; m) Reversão/regressão de geração de miofibroblasto a partir de fibroblastos; n) Inibição de geração de miofibroblastos de células estelares, por exemplo, células estelares hepáticas ou pancreáticas; o) Reversão/regressão de geração de miofibroblastos de células estelares, por exemplo, células estelares hepáticas ou pancreáticas; p) Inibição de comportamento migratório e/ou invasivo (ou seja, inibição de migração e/ou invasão) de fibroblastos, células estelares ou miofibroblastos; q) Inibição da presença de células imunes em um órgão; r) Inibição de um processo patológico mediado por sinalização de IL-11/IL-11R; s) Inibição de fibrose; t) Reversão/regressão de fibrose;

u) Inibição de expressão gênica ou proteica em fibroblastos ou células estelares de um ou mais de colágeno, fibronectina, periostina, IL-6, IL-11, αSMA (ACTA2), TIMP1, MMP2, TNFα, CCL2, por exemplo, seguindo estimulação com um fator profibrótico; v) Inibição de produção de matriz extracelular por fibroblastos ou células estelares; w) Inibição de proliferação e/ou sobrevivência de células de um câncer; x) Inibição de desenvolvimento e/ou progressão de câncer in vivo; y) Inibição de crescimento de tumor; z) Morte de células expressando/compreendendo IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11 Rα.

[00157] Neste documento, "inibição" se refere a uma redução, diminuição ou atenuação relativa a uma condição de controle. Por exemplo, a inibição de um processo por uma molécula de ligação ao antígeno se refere a uma redução, diminuição ou atenuação da extensão/do grau desse processo na ausência da molécula de ligação ao antígeno, e/ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle adequado.

[00158] Neste documento, inibição também pode ser referida como neutralização ou antagonismo. Ou seja, uma molécula de ligação ao antígeno ligando a IL-11Rα que é capaz de inibir uma função ou processo (por exemplo, interação, sinalização ou outra atividade mediada por IL- 11Rα ou um complexo contendo IL-11Rα) pode ser considerada uma molécula de ligação ao antígeno de "neutralização" ou "antagonista" com relação à função ou ao processo relevante. Por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de inibir a sinalização mediada por IL-11 pode ser referida como uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de neutralizar a sinalização mediada por IL-11 ou pode ser referida como um antagonista da sinalização mediada por IL-11.

[00159] O versado na técnica é capaz de identificar uma condição de controle adequada para um dado ensaio. Por exemplo, uma molécula de ligação ao antígeno de controle pode ser uma molécula de ligação ao antígeno direcionada contra uma proteína alvo, que é conhecida por não ter uma função envolvida na propriedade sendo investigada no ensaio. Uma molécula de ligação ao antígeno de controle pode ser do mesmo do isotipo que a molécula de ligação ao antígeno anti-IL-11Rα sendo analisada, e pode, por exemplo, ter as mesmas regiões constantes.

[00160] As moléculas de ligação ao antígeno descritas neste documento, preferencialmente, exibem ligação específica ao IL-11 Rα. Conforme utilizado neste documento, "ligação específica" se refere à ligação que é seletiva para o antígeno, e que pode ser discriminada de ligação não específica ao antígeno não-alvo. Uma molécula de ligação ao antígeno que especificamente se liga a uma molécula-alvo, preferencialmente, se liga ao alvo com maior afinidade e/ou com maior duração do que se liga a outras moléculas não alvo. Em algumas modalidades, os presentes anticorpos/fragmentos podem se ligar com maior afinidade a IL-11Rα do que um ou mais membros da família de receptor de IL-6. Em algumas modalidades, as presentes moléculas de ligação ao antígeno podem se ligar com maior afinidade a IL-11Rα do que um ou mais dentre IL-6Rα, receptor de fator inibidor de leucemia (LIFR), receptor de oncostatina M (OSMR) e o receptor alfa de fator neurotrófico ciliar (CNTFRα).

[00161] Nas modalidades, a inibição da sinalização mediada por IL-11 é alcançada interrompendo a sinalização cis mediada por IL-11, mas não interrompendo a sinalização trans mediada por IL-11, por exemplo, a inibição da sinalização mediada por IL-11 é alcançada pela inibição de complexos cis mediados por gp130 envolvendo IL-11Rα ligado à membrana. Em modalidades, a inibição da sinalização mediada por IL-11 é alcançada interrompendo a sinalização trans mediada por IL-11, mas não interrompendo a sinalização cis mediada por IL-11, ou seja, a inibição da sinalização mediada por IL-11 é alcançada pela inibição de trans mediada por gp130 complexos de sinalização, tais como IL-11 ligada a IL-11Rα solúvel ou IL-6 ligada a IL-6R solúvel. Em modalidades, a inibição da sinalização mediada por IL-11 é alcançada interrompendo a sinalização cis mediada por IL-11 e a sinalização trans mediada por IL-11.

[00162] A capacidade de um dado polipeptídeo de se ligar especificamente a uma dada molécula pode ser determinada pela análise de acordo com métodos conhecidos na técnica, tais como por ELISA, Ressonância de Plasma de Superfície (SPR; vide por exemplo, Hearty et al., Methods Bio Moll (2012) 907:411-442), Bio-Layer Interferometry (ver por exemplo. Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507), citometria de fluxo, ou por um ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado (RIA) ensaio de imunoabsorção de vínculo enzimático. Através de tal análise, a ligação a uma dada molécula pode ser medida e quantificada. Em algumas modalidades, a ligação pode ser a resposta detectada em um dado ensaio.

[00163] Em algumas modalidades, a extensão da ligação da molécula de ligação ao antígeno a uma molécula não alvo é inferior a cerca de 10% da ligação da molécula alvo, conforme medido, por exemplo, por ELISA, SPR, Interferometria de Bio-Camada (BLI) ou por RIA. Alternativamente, a especificidade de ligação pode ser refletida em termos de afinidade de ligação, onde a molécula de ligação ao antígeno se liga a IL-11Rα com uma constante dissociação (KD) que é de pelo menos 0,1 de ordem de magnitude (ou seja, 0,1 x 10n, onde n é um número inteiro que representa a ordem de magnitude) maior do que o KD da molécula de ligação ao antígeno em relação a outra molécula não alvo. Isso pode, opcionalmente, ser uma dentre pelo menos 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5 ou 2,0.

[00164] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno exibe ligação com IL-11Rα humana. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno exibe ligação com IL-11Rα de camundongo. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno exibe ligação com IL-11Rα humana e IL-11Rα de camundongo. Ou seja, em algumas modalidades a molécula de ligação ao antígeno tem reação cruzada para IL-11Rα humana e IL-11Rα de camundongo. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção exibe reação cruzada com IL-11Rα de um primata não humano.

[00165] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção se liga ao IL-11 Rα com um KD de 5 μM ou menos, preferencialmente um dentre ≤1 pM, ≤500 nM, ≤100 nM, ≤75 nM, ≤50 nM, ≤40 nM, ≤30 nM, ≤20 nM, ≤15 nM, ≤12,5 nM, ≤10 nM, ≤9 nM, ≤8 nM, ≤7 nM, ≤6 nM, ≤5 nM, ≤4 nM ≤3 nM, ≤2 nM, ≤1 nM, ≤500 pM.

[00166] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção se liga ao IL-11Rα (por exemplo. IL-11Rα humano) com um KD de ≤20 nM, ≤15 nM, ≤12,5 nM, ≤10 nM, ≤9 nM, ≤8 nM, ≤7 nM ou ≤6 nM, por exemplo, conforme determinado pela análise SPR. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno se liga a IL-11Rα com um KD de ≥1 nM e ≤20 nm, por exemplo, ≥1 nM e ≤15 nm, ou ≥1 nM e ≤10 nM. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno se liga a IL-11Rα com um KD de ≥5 nM e ≤20 nm, por exemplo ≥5 nM e ≤15 nm, ou ≥5 nM e ≤10 nM.

[00167] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno, de acordo com a presente invenção se liga a IL-11Rα com uma afinidade de ligação (por exemplo, conforme determinado por ELISA) de EC50 = 1000 ng/ml ou menos, preferencialmente, um dentre ≤900 ng/ml, ≤800 ng/ml, ≤700 ng/ml, ≤600 ng/ml, ≤500 ng/ml, ≤400 ng/ml, ≤300 ng/ml, ≤200 ng/ml, ≤100 ng/ml, ≤90 ng/ml, ≤80 ng/ml, ≤70 ng/ml, ≤60 ng/ml, ≤50 ng/ml, ≤40 ng/ml, ≤30 ng/ml, ≤20 ng/ml, ≤15 ng/ml, ≤10 ng/ml, ≤7,5 ng/ml, ≤5 ng/ml, ≤2,5 ng/ml ou ≤1 ng/ml.

[00168] A afinidade de ligação a IL-11Rα por uma molécula de ligação ao antígeno pode ser analisada in vitro pelo ensaio ELISA. Ensaios adequados são bem conhecidos na técnica e podem ser realizados pelo versado na técnica, por exemplo, conforme descrito em Antibody Engineering, vol. 1 (2nd Edn), Springer Protocolos, Springer (2010), Parte V, pág. 657-665. Por exemplo, a afinidade de ligação a IL-11Rα por uma molécula de ligação ao antígeno pode ser analisada de acordo com a metodologia descrita neste documento nos exemplos experimentais.

[00169] A capacidade de uma molécula de ligação ao antígeno para inibir a interação entre duas proteínas pode ser determinada, por exemplo, por análise de interação na presença de, ou após a incubação de um ou de ambos os parceiros de interação com a molécula de ligação ao antígeno. Um exemplo de um ensaio adequado para determinar se uma dada molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a interação entre dois parceiros de interação é um ensaio ELISA por competição.

[00170] Uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de inibir uma interação (por exemplo, entre IL-11Rα e IL-11, ou entre IL-11Rα e gp130, ou entre IL-11Rα:gp130 e IL-11, ou entre IL-11:IL-11Rα e gp130) é identificada pela observação de uma redução/diminuição no nível de interação entre os parceiros de interação na presença de - ou após a incubação de um ou ambos os parceiros de interação com - a molécula de ligação ao antígeno, em comparação com o nível de interação na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Análise adequada pode ser realizada in vitro, por exemplo, usando parceiros de interação recombinantes ou usando células que expressam os parceiros de interação. Células que expressam parceiros de interação podem fazê-lo endogenamente, ou podem fazê-lo a partir de ácido nucleico introduzido na célula. Para os fins de tais ensaios, um ou ambos os parceiros de interação e/ou a molécula de ligação ao antígeno podem ser marcados ou usados em conjunto com uma entidade detectável para fins de detecção e/ou medição do nível de interação.

[00171] A capacidade de uma molécula de ligação ao antígeno inibir a interação entre dois parceiros de ligação também pode ser determinada pela análise das consequências funcionais a jusante de tal interação, por exemplo, sinalização de receptor. Por exemplo, consequências funcionais a jusante de interação entre IL-11Rα:gp130 e IL- 11 ou entre IL-11:IL-11Rα e gp130 podem incluir proliferação de fibroblastos, geração de miofibroblasto a partir de fibroblastos ou expressão gênica ou proteica de um ou mais dentre colágeno, fibronectina, periostina, IL-6, IL-11, αSMA, TIMP1, MMP2.

[00172] Os fibroblastos de acordo com a presente divulgação podem ser derivados de qualquer tecido, incluindo fígado, pulmões, rins, coração, vasos sanguíneos, olhos, pele, pâncreas, baço, intestino (por exemplo, intestino grosso ou delgado), cérebro e medula óssea. Em modalidades particulares, para os efeitos de análise da molécula de ligação ao antígeno, os fibroblastos podem ser fibroblastos cardíacos (por exemplo, fibroblastos atriais), fibroblastos da pele, fibroblastos do pulmão, fibroblastos do rim ou fibroblastos do fígado. Os fibroblastos podem ser caracterizados pela expressão gênica ou proteica de um ou mais dentre COL1A, ACTA2, prolil-4-hidroxilase, MAS516 e FSP1.

[00173] A expressão de genes pode ser medida por vários meios conhecidos por aqueles versados na técnica, por exemplo, ao medir os níveis de mRNA por PCR em tempo real quantitativo (qRT-PCR) ou por métodos baseados em relatório. Semelhantemente, a expressão de proteína pode ser medida por vários métodos bem conhecidos na técnica, por exemplo, por métodos baseados em anticorpos, por exemplo, por western blot, imuno-histoquímica, imunocitoquímica, citometria de fluxo, ELISA, ELISPOT ou métodos baseados em relatório.

[00174] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção pode inibir a expressão de proteína de um ou mais marcadores de fibrose, por exemplo, a expressão de proteína de um ou mais dentre colágeno, fibronectina, periostina, IL-6, IL-11, αSMA, TIMP1, MMP2.

[00175] A capacidade de uma molécula de ligação ao antígeno inibir a interação entre IL-11Rα:gp130 e IL-11 pode, por exemplo, ser analisada ao estimular fibroblastos com TGFβ1, incubar as células na presença da molécula de ligação ao antígeno e analisar a proporção de células tendo fenótipo de αSMA-positiva após um período de tempo definido. Em tais exemplos, a inibição da interação entre IL-11Rα:gp130 e IL-11 pode ser identificada pela observação de uma proporção inferior de células tendo um fenótipo positivo de αSMA em comparação com a condição de controle positivo na qual células são tratadas com TGFβ1 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado), ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado.

[00176] Tais ensaios também são adequados para analisar a capacidade de uma molécula de ligação ao antígeno inibir a sinalização mediada por IL-11.

[00177] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a interação entre IL-11Rα e IL-11 a menos de 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos, ou 1% ou menos do nível de interação entre IL-11Rα e IL-11 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a interação entre o IL-11Rα e IL-11 a menos de 1 vez, por exemplo um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de interação entre IL- 11Rα e IL-11 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a interação entre IL-11Rα e gp130 mais menos de 100%, por exemplo um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos, 1% ou menos do nível de interação entre IL-11Rα e gp130 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a interação entre IL-11Rα e gp130 em menos de 1 vez, por exemplo, um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de interação entre IL- 11Rα e gp130 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00178] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a interação entre IL-11Rα:gp130 e IL-11 a menos de 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos, ou 1% ou menos do nível de interação entre IL-11Rα:gp130 e IL-11 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a interação entre IL- 11Rα:gp130 e IL-11 a menos de 1 vez, por exemplo, um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de interação entre IL-11Rα:gp130 e IL-11 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00179] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a interação entre IL-11:complexo de IL-11Rα e gp130 a menos de 100%, por exemplo um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos, 1% ou menos do nível de interação entre IL-11:complexo de IL-11Rα e gp130 na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a interação entre IL- 11:complexo de IL-11Rα e gp130 a menos de 1 vez, por exemplo, um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de interação entre IL-11:complexo de IL-

11Rα e gp130 na ausência da molécula de ligação ao antígeno.

[00180] A inibição da sinalização mediada por IL-11 também pode ser analisada usando a incorporação de 3H-timidina e/ou ensaios de proliferação de células Ba/F3, tais como aqueles descritas em, por exemplo, Curtis et al. Blood, 1997, 90(11) e Karpovich et al. Mol. Hum. Reprod. 2003 9 (2): 75-80. Células Ba/F3 co-expressam IL-11RΑ e gp130. Conforme utilizado neste documento, a sinalização mediada por IL-11 e/ou processos mediados por sinalização mediada por IL-11 inclui a sinalização mediada por fragmentos de IL-11 ou IL-11Rα e de complexos de polipeptídeo compreendendo IL-11, IL-11Rα ou fragmentos dos mesmos. A sinalização mediada por IL-11 pode ser a sinalização mediada por IL-11 ou IL-11Rα humano e/ou IL-11 ou IL-11Rα de camundongo. A sinalização mediada por IL-11 pode ocorrer após a ligação de IL-11 ou um IL-11 contendo complexo para um receptor ao qual IL-11 ou referido complexo se liga.

[00181] Em algumas modalidades, anticorpos e fragmentos de acordo com a presente invenção são capazes de inibir a atividade biológica de IL-11, IL-11Rα ou um complexo contendo IL-11 ou IL-11Rα. Em algumas modalidades, o anticorpo/fragmento se liga a IL-11Rα em uma região que é importante para se ligar a IL-11 ou gp130, e, assim, interrompe a ligação a e/ou sinalização mediada por IL-11.

[00182] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é um antagonista de uma ou mais vias de sinalização que são ativadas por transdução de sinal através de receptores compreendendo IL-11Rα e/ou gp130, por exemplo, IL- 11Rα:gp130. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a sinalização através de um ou mais complexos de receptores imunológicos compreendendo IL-11Rα e/ou gp130, por exemplo, IL-11Rα:gp130.

[00183] Em algumas modalidades, o anticorpo/fragmento de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a sinalização mediada por IL-11 a menos do que 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos ou 1% ou menos do nível de sinalização na ausência do anticorpo/fragmento (ou na presença de um anticorpo/fragmento de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir a sinalização mediada por IL-11 para menos de 1 vez, por exemplo, um de ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de sinalização na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00184] Em algumas modalidades, a sinalização mediada por IL- 11 é sinalização mediada pela ligação de IL-11 a IL-11Rα:receptor gp130. Tal sinalização pode ser analisada, por exemplo, ao tratar células que expressam IL-11Rα e gp130 com IL-11, ou ao estimular a produção de IL- 11 em células que expressam IL-11Rα e gp130.

[00185] O IC50 para molécula de ligação ao antígeno para a inibição de sinalização mediada por IL-11 pode ser determinado, por exemplo, ao cultivar células de Ba/F3 que expressam IL-11Rα e gp130 na presença de IL-11 humano e o agente de ligação a IL-11 e medição de incorporação de 3H-timidina no DNA.

[00186] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção pode exibir um IC50 de 10 μg/ml ou menos, preferencialmente um dentre ≤5 μg/m, ≤4 μg/ml, ≤3,5 μg/ml, ≤3 μg/ml, ≤2 μg/ml, ≤1 μg/ml, ≤0,9 μg/ml, ≤0,8 μg/ml, ≤0,7 μg/ml, ≤0,6 μg/ml ou ≤0,5 μg/ml em tal ensaio.

[00187] Em algumas modalidades, a sinalização mediada por IL- 11 pode ser sinalização mediada pela ligação do complexo de IL-11:IL- 11Rα para gp130. Em algumas modalidades, o complexo de IL-11:IL-11Rα pode ser solúvel, por exemplo, o complexo de domínio extracelular de IL- 11Rα e IL-11, ou complexo de isoforma/fragmento de IL-11Rα solúvel e IL-

11. Em algumas modalidades, a IL-11Rα solúvel é uma isoforma solúvel (secretada) de IL-11Rα ou é o produto liberado de clivagem proteolítica do domínio extracelular da membrana celular ligada a IL-11Rα. A sinalização mediada por IL-11 que é mediada pela ligação de IL-11 ligada à IL-11Rα, para gp130 é referido neste documento como 'sinalização trans de IL-11'.

[00188] Em algumas modalidades, o complexo de IL-11:IL-11Rα pode ser ligado à célula, por exemplo, o complexo de célula-membrana ligada a IL-11Rα e IL-11. A sinalização mediada pela ligação do complexo de IL-11:IL-11Rα para gp130 pode ser analisada tratando células que expressam gp130 com complexo de IL-11:IL-11Rα, por exemplo, proteína de fusão recombinante compreendendo IL-11 unida por um vinculador de peptídeo ao domínio extracelular de IL-11Rα (por exemplo, hiper IL-11 conforme descrito neste documento).

[00189] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno, de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a sinalização mediada pela ligação do complexo de IL-11:IL-11Rα a gp130, e também é capaz de inibir a sinalização mediada pela ligação de IL-11 a IL- 11Rα:receptor de gp130.

[00190] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a proliferação de fibroblastos. A proliferação de fibroblastos pode ser determinada ao analisar a divisão celular ao longo de um período de tempo. A divisão celular para uma dada população de fibroblastos pode ser analisada, por exemplo, por análise in vitro de 3 incorporação de H-timidina ou por ensaio de diluição de CFSE, por exemplo, conforme descrito em Fulcher e Wong, Immunol Cell Biol (1999) 77(6):559-564, incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade. As células em proliferação (por exemplo, fibroblastos em proliferação), também podem ser identificadas pela análise da incorporação de 5-etinil-2'-deoxiuridina (EdU) por um ensaio apropriado, conforme descrito, por exemplo, em Buck et al., Biotechniques. Junho de 2008; 44(7):927-9, e Sali e Mitchison, PNAS EUA, 19 de fevereiro de 2008; 105(7):2415-2420, ambos incorporados por meio deste instrumento por referência em sua totalidade.

[00191] Os fibroblastos de acordo com a presente divulgação podem ser derivados de qualquer tecido, incluindo fígado, pulmões, rins, coração, vasos sanguíneos, olhos, pele, pâncreas, baço, intestino (por exemplo, intestino grosso ou delgado), cérebro e medula óssea. Em modalidades particulares, para os efeitos de análise da molécula de ligação ao antígeno, os fibroblastos podem ser fibroblastos cardíacos (por exemplo, fibroblastos atriais), fibroblastos da pele, fibroblastos do pulmão, fibroblastos do rim ou fibroblastos do fígado.

[00192] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a proliferação de fibroblasto a menos do que 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos ou 1% ou menos do nível de proliferação de fibroblasto na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir a proliferação de fibroblastos para menos de 1 vez, por exemplo, um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes,

≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de proliferação de fibroblastos na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00193] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir um processo patológico mediado pela sinalização de IL-11/IL-11R, por exemplo, após a estimulação com um fator pró-fibrótico (por exemplo, TGFβ1). Os processos patológicos mediados pela sinalização de IL-11/IL-11R incluem fibrose e podem ser avaliados tanto in vitro quanto in vivo.

[00194] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir fibrose. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de reverter ou regredir a fibrose. Em algumas modalidades, a fibrose é fibrose estabelecida ou grave. A inibição ou a inibição de fibrose, conforme utilizada neste documento, se refere à capacidade de uma molécula de ligação ao antígeno reduzir, restringir ou prevenir o desenvolvimento de fibrose. Em algumas modalidades, a inibição de fibrose se refere a, por exemplo, um efeito profilático pelo qual a fibrose é impedida de se desenvolver. Em algumas modalidades, a inibição de fibrose se refere a, por exemplo, um efeito de tratamento pelo qual a fibrose em estágio inicial ou tardio existente é impedida de se desenvolver ou avançar para um estágio mais avançado. Reverter/reversão ou regredir/regressão de fibrose, tal como utilizado neste documento, se refere à capacidade de uma molécula de ligação ao antígeno melhorar o estado fibrótico de um estado mais desenvolvido para um estado menos desenvolvido, ou para diminuir a gravidade da própria fibrose ou seus sintomas. Reverter/reversão de fibrose pode estar associada a uma melhora no estado fibrótico.

[00195] Nos exemplos experimentais neste documento, a inibição, reversão ou regressão de fibrose é analisada, por exemplo, medindo o número ou a porcentagem de células ACTA2+ve usando o sistema de imagem de alto conteúdo Operetta, medindo o conteúdo de colágeno de órgão ou célula pela avaliação do conteúdo de hidroxiprolina, medindo ativação/fosforilação de ERK por western blotting e/ou medição do nível de expressão de marcadores de inflamação, tais como TNFα e CCL2, ou marcadores fibróticos, tais como TGFβ1, αSMA (ACTA2), TIMP1, COL1A1, COL1A2 ou COL3A1 por PCR quantitativo. Em tecidos tal como o fígado, a inibição, reversão ou regressão de fibrose é analisada, por exemplo, determinando o teor de triglicerídeos e os níveis séricos de ALT.

[00196] A fibrose pode ser de um tecido particular ou vários tecidos, por exemplo, fígado, pulmão, rim, coração, vasos sanguíneos, olhos, pele, pâncreas, baço, intestino (por exemplo, intestino grosso ou delgado), cérebro ou medula óssea. A fibrose pode ser medida por meios bem conhecidos pelo versado na técnica, por exemplo, ao analisar a expressão gênica ou proteica de um ou mais marcadores de miofibroblasto e/ou a expressão gênica ou proteica de um ou mais marcadores de fibrose em um dado tecido ou tecidos.

[00197] Os marcadores de miofibroblasto podem incluir um ou mais dentre αSMA, vimentina, paladina, cofilina ou desmina aumentada. Marcadores de fibrose incluem o aumento do nível de colágeno, fibronectina, periostina, IL-6, IL-11, αSMA, TIMP1 e MMP2, componentes de matriz extracelular, número/proporção de miofibroblastos e peso de órgãos.

[00198] Inibição/reversão/regressão de fibrose pode ser medida in vitro ou in vivo. Por exemplo, se uma molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir/reverter/regredir a fibrose em um dado tecido, pode ser analisado in vitro pelo tratamento de fibroblastos derivados desse tecido com um estímulo pró-fibrótico e, então, pela análise de se o anticorpo pode reduzir ou reverter a geração de miofibroblasto a partir de fibroblastos (ou, por exemplo, algum outro marcador de fibrose). Se uma molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir/reverter/regredir a fibrose, pode ser analisada in vivo, por exemplo, pela administração da molécula de ligação ao antígeno a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que foi exposto a um estímulo pró-fibrótico) e analisando o(s) tecido(s) para um ou mais marcadores de fibrose.

[00199] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir/reverter/regredir a fibrose para menos do que 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos ou 1% ou menos do nível de fibrose na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir/reverter/regredir a fibrose para menos de 1 vez, por exemplo, um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de fibrose na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00200] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a geração de miofibroblastos a partir de fibroblastos ou células estelares (por exemplo, células estelares hepáticas ou pancreáticas), por exemplo, após a exposição dos fibroblastos ou células estelares ao fator pró-fibrótico. A geração de miofibroblasto a partir de fibroblastos ou células estelares pode ser investigada pela análise de marcadores de miofibroblasto. Um fator pró- fibrótico de acordo com a presente divulgação pode ser, por exemplo, TGFβ1, IL-11, IL-13, PDGF, ET-1, oncostatina M (OSM) ou ANG2 (AngII). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a ativação de fibroblastos ou células estelares por fator pró-fibrótico.

[00201] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de promover a senescência de células estelares. A senescência pode ser medida detectando a expressão de marcadores de senescência, como P16, P21 e P53.

[00202] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibição da expressão gênica ou proteica em fibroblastos, células estelares, ou células derivadas de fibroblastos/células estelares (por exemplo, miofribroblastos), de um ou mais dentre colágeno, fibronectina, periostina, IL-6, IL-11, αSMA, TIMP1, MMP2, TNFα, CCL2, por exemplo, após estimulação com um fator pró-fibrótico. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibição da expressão gênica ou proteica em fibroblastos, ou células derivadas de fibroblastos (por exemplo, miofribroblastos), de um ou mais componentes de matriz extracelular, por exemplo, após estimulação com um fator pró- fibrótico.

[00203] Nos exemplos experimentais neste documento, a geração de miofibroblasto a partir de fibroblastos ou células estelares é analisada ao medir os níveis de expressão de proteína αSMA usando o Sistema de Imagiologia de Alto Conteúdo Operetta após a estimulação dos fibroblastos com TGFβ1.

[00204] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a geração de miofibroblastos a partir de fibroblastos ou células estelares a menos de 100%, por exemplo, 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45 % ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos, ou 1% ou menos do nível de geração de miofibroblastos a partir de fibroblastos ou células estelares na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriada). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir a geração de miofibroblastos a partir de fibroblastos ou células estelares para menos do que 1 vez, por exemplo, um de ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de geração de miofibroblastos a partir de fibroblastos ou células estelares na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00205] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibição da expressão gênica ou proteica em fibroblastos, células estelares, ou miofribroblastos de um ou mais dentre colágeno, fibronectina, periostina, IL- 6, IL-11, ΑSMA, TIMP1, MMP2, TNFΑ, CCL2, por exemplo, após estimulação com um fator pró-fibrótico (por exemplo, TGFβ1). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a expressão gênica ou proteica para menos do que 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos,

20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos ou 1% ou menos do nível de expressão gênica ou proteica na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, o agente é capaz de reduzir uma sinalização mediada por fator angiogênico para menos de 1 vez, por exemplo, um de ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de sinalização na ausência do agente (ou na presença de um agente de controle apropriado).

[00206] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a produção de matriz extracelular por fibroblastos ou células estelares, por exemplo, após a estimulação com um fator pró-fibrótico (por exemplo, TGFβ1). A produção de matrizes extracelulares pode ser avaliada, por exemplo, pela medição do nível de um componente de matriz extracelular. Os componentes de matriz extracelular de acordo com a presente invenção incluem, por exemplo, proteoglicano, sulfato de heparano, sulfato de condroitina, sulfato de queratano, ácido hialurônico, colágeno, periostina, fibronectina, vitronectina, elastina, fibronectina, laminina, nidogênio, gelatina e agrecano. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a secreção de colágeno de fibroblastos, células estelares e/ou miofibroblastos.

[00207] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a produção de matriz extracelular por fibroblastos ou células estelares a menos de 100%, por exemplo, um de 99% ou menos, 95% ou menos, 90% OU MENOS, 85% OU menos, 80% OU menos, 75% OU menos, 70% OU menos, 65% OU menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% OU menos, 45% OU menos, 40% OU menos, 35% OU menos, 30% OU menos, 25% OU menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10 % o U menos, 5% OU menos, OU 1% OU menos do nível de produção de matriz extracelular por fibroblastos ou células estelares na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir a produção de matriz extracelular por fibroblastos ou células estelares para menos de 1 vez, por exemplo, um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível a produção de matriz extracelular por fibroblastos ou células estelares na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00208] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de aumentar a expressão gênica ou proteica em células hepáticas de um ou mais genes/proteínas envolvidos na lipogênese e/ou β-oxidação. Tais genes/proteínas podem ser, por exemplo, ACOX1 (acil-CoA oxidase 1), SCD1 (estearoil-CoA dessaturase 1), FASN (sintase de ácido graxo) ou SREBF1 (proteína de ligação ao elemento regulador de esterol 1). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de aumentar a expressão gênica ou proteica por mais de 1 vez, por exemplo, um dentre ≥ 1,01 vezes, ≥ 1,05 vezes, ≥ 1,1 vezes, ≥ 1,15 vezes, ≥ 1,2 vezes, ≥ 1,25 vezes, ≥ 1,3 vezes, ≥ 1,35 vezes, ≥ 1,4 vezes, ≥ 1,45 vezes, ≥ 1,5 vezes, ≥ 1,55 vezes, ≥ 1,6 vezes, ≥ 1,65 vezes, ≥ 1,7 vezes, ≥ 1,75 vezes, ≥ 1,8 vezes, ≥ 1,85 vezes, ≥ 1,9 vezes, ≥ 1,95 vezes, ≥ 2 vezes, ≥ 2,5 vezes, ≥ 3 vezes, ≥ 3,5 vezes, ≥ 4 vezes, ≥ 4,5 vezes, ≥ 5 vezes, ≥ 6 vezes, ≥ 7 vezes, ≥ 8 vezes, ≥ 9 vezes ou ≥ 10 vezes o nível de expressão gênica ou proteica na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00209] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir o comportamento migratório e/ou invasivo, ou seja, inibir a migração e/ou invasão de fibroblastos, células estelares ou miofibroblastos. A migração e invasão de tais células podem ser críticas na patologia de fibrose. A migração de células pode ser avaliada usando, por exemplo, membranas de policarbonato e estimulantes invasivos, como TGFβ1 ou CCL2. A invasão de células pode ser medida usando, por exemplo, ensaios de invasão de câmara de Boyden ou matrigel revestido com ECM. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a migração e/ou invasão de fibroblastos, células estelares ou miofibroblastos a menos de 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos, ou 1% ou menos do nível de migração e/ou invasão na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno pode ser capaz de reduzir migração e/ou invasão a menos de 1 vez, por exemplo, um de ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de migração e/ou invasão na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00210] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a presença de células imunes em um órgão. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de reduzir o número de células imunes em um órgão. O órgão pode ser um órgão suscetível a, ou sofrendo de, fibrose, por exemplo, fígado ou rim. As células imunes podem ser células CD45+, por exemplo, células T CD3+CD4+, células T CD3+CD8+, linfócitos B, granulócitos e monócitos. As células imunes podem expressar o marcador de monócito murino LyC6. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de reduzir o número de células imunes em um órgão a menos de 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos, ou 1% ou menos do número de células imunes em um órgão na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir o número de células imunes em um órgão a menos de 1 vez, por exemplo, um de ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o número de células imunes em um órgão na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00211] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a proliferação e/ou a sobrevivência de células de um câncer. O versado na técnica é capaz de determinar se uma molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a proliferação e/ou sobrevivência de células de um câncer,

por exemplo, ao analisar o efeito da molécula de ligação ao antígeno nas células do câncer. Por exemplo, a proliferação de células pode ser medida conforme descrito neste documento, por exemplo, por incorporação de 3H timidina ou de ensaios de diluição de CFSE. A sobrevivência celular pode ser analisada ao medir células para os marcadores de viabilidade celular/morte celular após o tratamento com a molécula de ligação ao antígeno.

[00212] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir a proliferação e/ou sobrevivência de células de um câncer para menos do que 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos ou 1% ou menos do nível de proliferação e/ou sobrevivência de células de um câncer na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir a proliferação e/ou sobrevivência de células de um câncer para menos do que 1 vez, por exemplo, um dentre ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vez o nível de proliferação e/ou sobrevivência de células de um câncer na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00213] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção inibe o desenvolvimento e/ou progressão do câncer in vivo. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno causa a morte de células cancerosas, por exemplo, por células imunes efetoras. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno causa uma redução no número de células cancerosas in vivo, por exemplo, em comparação com uma condição de controle apropriada. Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno inibe o crescimento do tumor, por exemplo, conforme determinado pela medição do tamanho/volume do tumor ao longo do tempo.

[00214] A molécula de ligação ao antígeno da presente invenção pode ser analisada quanto à capacidade de inibir o desenvolvimento e/ou progressão do câncer em um modelo in vivo apropriado. O câncer pode ser um câncer na qual a sinalização mediada por IL-11 e/ou células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα estão patologicamente implicados. Tais cânceres incluem aqueles descritos em Xu et al., Cancer Lett. (2016) 373(2):156-63 e Johnstone et al., Cytokine & Growth Reviews (2015) 26(5):489-498, ambos os quais estão incorporados por meio deste instrumento por referência na sua totalidade.

[00215] Em algumas modalidades, a administração de uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção pode causar um ou mais dentre: inibição do desenvolvimento/progressão do câncer, um retardo/prevenção do início do câncer, uma redução/retardo para/prevenção do crescimento do tumor, uma redução em/retardo em/prevenção de metástases, uma redução na gravidade dos sintomas do câncer, uma redução no número de células cancerosas, uma redução no tamanho/volume do tumor e/ou um aumento na sobrevivência (por exemplo, sobrevivência livre de progressão), por exemplo, conforme determinado em um modelo in vivo apropriado do câncer. Em algumas modalidades, uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção provê um efeito aditivo quando administrada em conjunto, por exemplo, de maneira separada, simultânea ou sequencial, com um agente quimioterápico, em comparação com o agente quimioterápico administrado sozinho. O efeito aditivo pode ser qualquer efeito descrito neste documento, tal como redução de sinalização de IL-11, inibição do desenvolvimento/progressão de um câncer e/ou inibição do crescimento do tumor.

[00216] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção é capaz de inibir o crescimento de tumor para menos do que 100%, por exemplo, um dentre 99% ou menos, 95% ou menos, 90% ou menos, 85% ou menos, 80% ou menos, 75% ou menos, 70% ou menos, 65% ou menos, 60% ou menos, 55% ou menos, 50% ou menos, 45% ou menos, 40% ou menos, 35% ou menos, 30% ou menos, 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 5% ou menos ou 1% ou menos do nível de crescimento de tumor na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado). Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno é capaz de reduzir o crescimento de tumor para menos de 1 vez, por exemplo, um de ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes o nível de crescimento de tumor na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00217] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção é capaz de causar a morte de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα. A morte de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα pode ser aumentada através de uma função efetora da molécula de ligação ao antígeno. Em modalidades em que a molécula de ligação ao antígeno compreende uma região Fc, a molécula de ligação ao antígeno pode causar morte de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα através de um ou mais de citotoxicidade dependente do complemento (CDC), citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC) e fagocitose celular dependente de anticorpos (ADCP).

[00218] Uma molécula de ligação ao antígeno que é capaz de causar a morte de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα pode ser identificada pela observação de um nível de morte de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα na presença de - ou após a incubação das células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα com - a molécula de ligação ao antígeno, em comparação com o nível de morte celular detectado na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado), em um ensaio apropriado. Os ensaios de CDC, ADCC e ADCP são bem conhecidos ao versado na técnica. O nível de morte de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα também pode ser determinado medindo o número/proporção de células viáveis e/ou não viáveis que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL -11Rα após exposição a diferentes condições de tratamento.

[00219] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção é capaz de causar a morte de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα a mais do que 1 vez, por exemplo,≥ 1,01 vezes,≥ 1,02 vezes,≥ 1,03 vezes,≥ 1,04 vezes,≥ 1,05 vezes,≥ 1,1 vezes,≥ 1,2 vezes,≥ 1,3 vezes,≥ 1,4 vezes,≥ 1,5 vezes,≥ 1,6 vezes,≥ 1,7 vezes,≥ 1,8 vezes,≥ 1,9 vezes,≥ 2 vezes,≥ 3 vezes,≥ 4 vezes,≥ 5 vezes,≥ 6 vezes,≥ 7 vezes,≥ 8 vezes,≥ 9 vezes ou≥ 10 vezes o nível de morte observado na ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou no presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado).

[00220] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção é capaz de reduzir o número de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα a menos do que 1 vez, por exemplo, ≤0,99 vezes, ≤0,95 vezes, ≤0,9 vezes, ≤0,85 vezes, ≤0,8 vezes, ≤0,75 vezes, ≤0,7 vezes, ≤0,65 vezes, ≤0,6 vezes, ≤0,55 vezes, ≤0,5 vezes, ≤0,45 vezes, ≤0,4 vezes, ≤0,35 vezes, ≤0,3 vezes, ≤0,25 vezes, ≤0,2 vezes, ≤0,15 vezes, ≤0,1 vezes, ≤0,05 vezes ou ≤0,01 vezes o número de células que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα detectado após a incubação em a ausência da molécula de ligação ao antígeno (ou após incubação na presença de uma molécula de ligação ao antígeno de controle apropriado), em um ensaio comparável. O número de células e as proporções podem ser determinados, por exemplo, por análise de citometria de fluxo usando anticorpos que permitem a detecção de tipos de células.

[00221] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção tem uma ou mais propriedades semelhantes ou melhoradas em comparação com um anticorpo de referência/fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a IL-11Rα.

[00222] Em algumas modalidades, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção exibe uma ou mais das seguintes propriedades em comparação a um anticorpo de referência/fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a IL-11Rα: (i) se liga a IL-11Rα com especificidade semelhante ou superior (ou seja, tem reação cruzada semelhante ou reduzida para proteínas da família de receptores de citocinas IL-6 diferentes de IL-11Rα); (ii) se liga a IL-11Rα (por exemplo, IL-11Rα humana e/ou IL-11Rα de camundongo) com afinidade semelhante ou superior (por exemplo, tem EC50 semelhante ou inferior conforme determinado por ELISA; por exemplo, tem KD semelhante ou inferior conforme determinado por análise SPR); (iii) inibição semelhante ou superior da interação entre IL-11Rα e IL-11Rα; (iv) inibição semelhante ou superior da interação entre IL-11Rα e gp130; (v) inibição semelhante ou superior da interação entre a IL- 11Rα:complexo receptor de gp130 e IL-11; (vi) inibição semelhante ou superior da interação entre IL- 11:complexo de IL-11Rα e gp130; (vii) inibição semelhante ou superior da sinalização de IL-11/IL-11R; (viii) inibição semelhante ou superior da sinalização mediada por IL- 11 (por exemplo, tem IC50 semelhante ou inferior conforme determinado por ELISA em um ensaio adequado); (ix) inibição semelhante ou superior da sinalização mediada por ligação de complexo de IL-11 a IL-11Rα:receptor de gp130; (x) inibição semelhante ou superior da sinalização mediada por ligação de complexo de IL-11:IL-11Rα a gp130 (ou seja, sinalização trans de IL-11); (xi) inibição semelhante ou superior de proliferação de fibroblastos; (xii) inibição semelhante ou superior de geração de miofibroblastos a partir de fibroblastos; (xiii) inibição semelhante ou superior de reversão/regressão da geração de miofibroblastos a partir de fibroblastos; (xiv) inibição semelhante ou superior de geração de miofibroblastos a partir de células estelares, por exemplo, células estelares hepáticas ou pancreáticas; (xv) reversão/regressão semelhante ou superior de geração de miofibroblastos a partir de células estelares, por exemplo, células estelares hepáticas ou pancreáticas;

(xvi) inibição semelhante ou superior de comportamento migratório e/ou invasivo (ou seja, inibição de migração e/ou invasão) de fibroblastos, células estelares ou miofibroblastos; (xvii) inibição semelhante ou superior da presença de células imunes em um órgão; (xviii) inibição semelhante ou superior de um processo patológico mediado por sinalização de IL-11/IL-11R; (xix) inibição semelhante ou superior de fibrose; (xx) reversão/regressão semelhante ou superior de fibrose; (xxi) inibição semelhante ou superior da expressão gênica ou proteica em fibroblastos de um ou mais dentre colágeno, fibronectina, periostina, IL-6, IL-11, αSMA (ACTA2), TIMP1, MMP2, TNFα, CCL2, por exemplo, após estimulação com um fator pró-fibrótico; (xxii) inibição semelhante ou superior de produção de matriz extracelular por fibroblastos ou células estelares; (xxiii) inibição semelhante ou superior de proliferação e/ou sobrevivência de células de um câncer; (xxvi) inibição semelhante ou superior de desenvolvimento e/ou progressão do câncer in vivo; (xxv) inibição semelhante ou superior do crescimento de tumor; (xxiv) morte de células semelhante ou superior que expressam/compreendem IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα.

[00223] Em algumas modalidades, "maior especificidade" ou "maior afinidade" ou "uma maior inibição" ou "maior eliminação" se refere, respectivamente, a um nível de especificidade, afinidade, inibição ou eliminação que é maior do que 1 vez, por exemplo, ≥ 1,01 vezes, ≥ 1,02 vezes, ≥ 1,03 vezes, ≥ 1,04 vezes, ≥ 1,05 vezes, ≥ 1,06 vezes, ≥ 1,07 vezes, ≥ 1,08 vezes, ≥ 1,09 vezes, ≥ 1,1 vezes, ≥ 1,2 vezes, ≥ 1,3 vezes, ≥ 1,4 vezes, ≥ 1,5 vezes, ≥ 1,6 vezes, ≥ 1,7 vezes, ≥ 1,8 vezes, ≥ 1,9 vezes, ≥ 2 vezes, ≥ 2,1 vezes, ≥ 2,2 vezes, ≥ 2,3 vezes, ≥ 2,4 vezes, ≥ 2,5 vezes, ≥

2,6 vezes, ≥ 2,7 vezes, ≥ 2,8 vezes, ≥ 2,9 vezes, ≥ 3 vezes, ≥ 3,5 vezes, ≥ 4 vezes, ≥ 4,5 vezes, ≥ 5 vezes, ≥ 6 vezes, ≥ 7 vezes, ≥ 8 vezes, ≥ 9 vezes, ≥ 10 vezes, ≥ 15 vezes, ≥ 20 vezes, ≥ 25 vezes, ≥ 30 vezes, ≥ 35 vezes, ≥ 40 vezes, ≥ 45 vezes, ≥ 50 vezes, ≥ 60 vezes, ≥ 70 vezes, ≥ 80 vezes, ≥ 90 vezes, ≥ 100 vezes, ≥ 200 vezes, ≥ 300 vezes, ≥ 400 vezes, ≥ 500 vezes, ≥ 600 vezes, ≥ 700 vezes, ≥ 800 vezes, ≥ 900 vezes, ≥ 1000 vezes o nível exibido pelo anticorpo de referência/fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a IL-11Rα, conforme determinado em um ensaio apropriado.

[00224] Em algumas modalidades, "especificidade semelhante" ou "afinidade semelhante" ou "uma inibição semelhante" ou "eliminação semelhante" se refere, respectivamente, a um nível de especificidade, afinidade, inibição ou eliminação que é ≥ 0,2 vezes e ≤ 5 vezes, por exemplo ≥ 0,3 vezes e ≤ 4 vezes, ≥ 0,4 vezes e ≤ 3 vezes, ≥ 0,5 vezes e ≤ 2 vezes, ≥ 0,6 vezes e ≤ 1,75 vezes, ≥ 0,7 vezes e ≤ 1,5 vezes, ≥ 0,75 vezes e ≤ 1,25 vezes, ≥ 0,8 vezes e ≤ 1,2 vezes, ≥ 0,85 vezes e ≤ 1,15 vezes, ≥ 0,9 vezes e ≤ 1,1 vezes, ≥ 0,91 vezes e ≤ 1,09 vezes, ≥ 0,92 vezes e ≤ 1,08 vezes, ≥ 0,93 vezes e ≤ 1,07 vezes, ≥ 0,94 vezes e ≤ 1,06 vezes, ≥ 0,95 vezes e ≤ 1,05 vezes, ≥ 0,96 vezes e ≤ 1,04 vezes, ≥ 0,97 vezes e ≤ 1,03 vezes, ≥ 0,98 vezes e ≤ 1,02 vezes, ou ≥ 0,99 vezes e ≤ 1,01 vezes o nível exibido pelo anticorpo de referência/fragmento de ligação ao antígeno do mesmo capaz de se ligar a IL-11Rα, conforme determinado em um ensaio apropriado.

[00225] Em algumas modalidades, o anticorpo de referência/fragmento de anticorpo capaz de se ligar a IL-11Rα pode compreender as CDRs de clone BSO-9A7 de anticorpo anti-IL-11Rα. Em algumas modalidades, o anticorpo de referência/fragmento de anticorpo capaz de se ligar a IL-11Rα pode compreender ou consistir nas sequências de VH e de VL do clone BSO-9A7 de anticorpo anti-IL-11Rα.

[00226] Em algumas modalidades, o anticorpo de referência/fragmento de anticorpo capaz de se ligar a IL-11Rα pode compreender uma VH compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:7, e uma VL compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59. Receptores de antígenos quiméricos (CARs)

[00227] A presente invenção também provê os Receptor de Antígeno Quimérico (CARs) compreendendo as moléculas ou polipeptídeos de ligação ao antígeno da presente invenção.

[00228] Os CARs são receptores recombinantes que proveem tanto ligação ao antígeno quanto funções de ativação de células T. A estrutura e a manipulação de CAR são revisadas, por exemplo, em Dotti et al., Immunol Rev (2014) 257(1), incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade. Os CARs compreendem uma região de ligação ao antígeno vinculada a uma região de âncora de membrana celular e uma região de sinalização. Uma região da dobradiça opcional pode prover separação entre a região de ligação ao antígeno e a região de âncora da membrana celular e pode atuar como um vinculador flexível.

[00229] O CAR da presente invenção compreende uma região de ligação ao antígeno que compreende ou consiste na molécula de ligação ao antígeno da presente invenção, ou que compreende ou consiste em um polipeptídeo de acordo com a invenção.

[00230] A região de âncora de membrana celular é provida entre a região de ligação ao antígeno e a região de sinalização do CAR e provê a ancoragem do CAR à membrana celular de uma célula que expressa um CAR, com a região de ligação ao antígeno no espaço extracelular e região de sinalização dentro da célula. Em algumas modalidades, o CAR compreende uma região de âncora de membrana celular que compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos que compreende, consiste em, ou é derivada a partir da sequência de aminoácidos da região transmembrana para um de CD3-ζ, CD4, CD8 ou CD28. Tal como utilizado neste documento, uma região que é 'derivada a partir de' uma sequência de aminoácidos de referência compreende uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 60%, por exemplo, um de pelo menos 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência de referência.

[00231] A região de sinalização de um CAR permite a ativação da célula T. As regiões de sinalização CAR podem compreender a sequência de aminoácidos do domínio intracelular de CD3-ζ, que provê motivos de ativação com base em tirosina imunorreceptores (ITAMs) para fosforilação e ativação da célula T expressando CAR. As regiões de sinalização compreendendo sequências de outras proteínas contendo ITAM, tais como FcyRI, também foram empregadas em CARs (Haynes et al., 2001 J Immunol 166(1):182-187). As regiões de sinalização de CARs também podem compreender sequências co-estimulatórias derivadas a partir da região de sinalização de moléculas co-estimuladoras, para facilitar a ativação de células T que expressam CAR mediante a ligação à proteína alvo. As moléculas co-estimuladoras adequadas incluem CD28, 0X40, 4- 1BB, ICOS e CD27. Em alguns casos, os CARs são manipulados para prover co-estimulação de diferentes vias de sinalização intracelular. Por exemplo, a sinalização associada à co-estimulação de CD28 ativa preferencialmente a via da fosfatidilinositol 3-quinase (P13K), enquanto a sinalização mediada por 4-1BB é através de proteínas adaptadoras de fator associado ao receptor de TNF (TRAF). As regiões de sinalização de CARs, portanto, às vezes sequências co-estimulatórias contêm derivadas a partir de regiões de sinalização de mais do que uma molécula co-estimuladora. Em algumas modalidades, o CAR da presente invenção compreende uma ou mais sequências co-estimulatórias compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos que compreende, consiste em, ou é derivada da sequência de aminoácidos do domínio intracelular de um ou mais dentre CD28, 0X40, 4-1 BB, ICOS e CD27.

[00232] Uma região da dobradiça opcional pode prover separação entre o domínio de ligação ao antígeno e o domínio da transmembrana e pode atuar como um vinculador flexível. As regiões da dobradiça podem ser derivadas a partir de IgG1. Em algumas modalidades, o CAR da presente invenção compreende uma região da dobradiça compreendendo ou consistindo em uma sequência de aminoácidos que compreende, consiste em, ou é derivada a partir da sequência de aminoácidos da região da dobradiça de lgG1.

[00233] Também é provida uma célula compreendendo um CAR de acordo com a invenção. O CAR, de acordo com a presente invenção pode ser usado para gerar células imune que expressam CAR, por exemplo, células CAR-T ou CAR-NK. A manipulação de CARs em células imunes pode ser realizada durante a cultura, in vitro.

[00234] A região de ligação ao antígeno do CAR da presente invenção pode ser provida com qualquer formato adequado, por exemplo, scFv, scFab, etc. Ácidos nucléicos e vetores

[00235] A presente invenção provê um ácido nucleico, ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, que codifica uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo ou CAR de acordo com a presente invenção.

[00236] Em algumas modalidades, o ácido nucleico é purificado ou isolado, por exemplo, a partir de outro ácido nucleico ou material biológico de ocorrência natural. Em algumas modalidades, o(s) ácido(s) nucleico(s) compreende(m) ou consiste(m) em DNA e/ou RNA.

[00237] A presente invenção também provê um vetor, ou pluralidade de vetores, compreendendo o ácido nucleico ou pluralidade de ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção.

[00238] A sequência de nucleotídeos pode estar contida em um vetor, por exemplo, um vetor de expressão. Um "vetor", conforme usado neste documento, é uma molécula de ácido nucleico usada como um veículo para transferir o ácido nucleico exógeno para uma célula. O vetor pode ser um vetor para a expressão do ácido nucleico na célula. Tais vetores podem incluir uma sequência promotora vinculada de maneira operacional à sequência de nucleotídeos que codifica a sequência a ser expressa. Um vetor também pode incluir um códon de terminação e intensificadores de expressão. Quaisquer vetores, promotores, intensificadores e códons de terminação adequados conhecidos na técnica podem ser usados para expressar um peptídeo ou polipeptídeo a partir de um vetor de acordo com a invenção.

[00239] O termo "vinculado de maneira operacional" pode incluir a situação na qual uma sequência de ácido nucleico selecionada e uma sequência de ácido nucleico reguladores (por exemplo, promotora e/ou intensificadora) são vinculadas de maneira covalente, de tal modo a colocar a expressão da sequência de ácido nucleico sob influência ou controle da sequência reguladora (formando, desse modo, um cassete de expressão). Deste modo, uma sequência reguladora é vinculada de maneira operacional à sequência de ácido nucleico selecionada caso a sequência reguladora seja capaz de efetuar a transcrição da sequência de ácido nucleico. O(s) transcrito(s) resultante(s) pode então ser traduzido em um(s) peptídeo(s)/polipeptídeo(s) desejado(s).

[00240] Os vetores adequados incluem plasmídeos, vetores binários, vetores de DNA, vetores de mRNA, vetores virais (por exemplo, vetores gammaretrovirais (por exemplo, vetores derivados do vírus da leucemia murina (MLV)), vetores lentivirais, vetores de adenovírus, vetores de vírus associados ao adeno, vetores de vírus vaccinia e vetores de herpesvírus), vetores com base em transposons e cromossomos artificiais (por exemplo, cromossomos artificiais de levedura).

[00241] Em algumas modalidades, o vetor pode ser um vetor eucariótico, por exemplo, um vetor que compreende os elementos necessários para a expressão de proteína do vetor em uma célula eucariótica. Em algumas modalidades, o vetor pode ser um vetor de mamífero, por exemplo, compreendendo um citomegalovírus (CMV) ou promotor de SV40 para conduzir a expressão da proteína.

[00242] Os polipeptídeos constituintes de uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com a presente invenção podem ser codificados por diferentes ácidos nucleicos da pluralidade de ácidos nucleicos, ou por diferentes vetores da pluralidade de vetores. Células compreendendo/expressando as moléculas de ligação ao antígeno e polipeptídeos

[00243] A presente invenção também provê uma célula compreendendo ou expressando uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo ou CAR de acordo com a presente invenção. Também é provida uma célula que compreende ou expressa um ácido nucleico, uma pluralidade de ácidos nucleicos, um vetor ou uma pluralidade de vetores de acordo com a invenção.

[00244] A célula pode ser uma célula eucariótica, por exemplo, uma célula de mamífero. O mamífero pode ser um primata (rhesus, cynomolgous, primata não humano ou humano) ou um mamífero não humano (por exemplo, coelho, porquinho-da-índia, rato, camundongo ou outro roedor (incluindo qualquer animal na ordem Roedores), gato, cachorro, porco, ovelha, cabra, gado (incluindo vacas, por exemplo, vacas leiteiras ou qualquer animal da ordem Bovina), cavalo (incluindo qualquer animal da ordem Equina), burro e primata não humano).

[00245] A presente invenção também provê um método para produzir uma célula compreendendo um(s) ácido(s) nucleico(s) ou vetor(es) de acordo com a presente invenção, compreendendo a introdução de um ácido nucleico, uma pluralidade de ácidos nucleicos, um vetor ou uma pluralidade de vetores de acordo com a presente invenção em uma célula. Em algumas modalidades, a introdução de ácido(s) nucleico(s) ou vetor(es) isolado(s) de acordo com a invenção em uma célula compreende transformação, transfecção, eletroporação ou transdução (por exemplo, transdução retroviral).

[00246] A presente invenção também provê um método para produzir uma célula que expressa/compreende uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo ou CAR de acordo com a presente invenção, compreendendo a introdução de um ácido nucleico, uma pluralidade de ácidos nucleicos, um vetor ou uma pluralidade de vetores de acordo com a presente invenção em uma célula. Em algumas modalidades, os métodos compreendem adicionalmente a cultura da célula sob condições adequadas para a expressão do(s) ácido(s) nucleico(s) ou vetor(es) pela célula. Em algumas modalidades, os métodos são realizados in vitro.

[00247] A presente invenção também provê células obtidas ou passíveis de ser obtidas pelos métodos de acordo com a presente invenção. Produzindo as moléculas de ligação ao antígeno e polipeptídeos

[00248] Moléculas de ligação de antígenos e polipeptídeos de acordo com a invenção podem ser preparados de acordo com métodos para a produção de polipeptídeos conhecidos pelo estado da técnica.

[00249] Os polipeptídeos podem ser preparados por síntese química, por exemplo, síntese de fases sólidas ou líquidas. Por exemplo, peptídeos/polipeptídeos podem sintetizar usando os métodos descritos em, por exemplo, Chandrudu et al., Molecules (2013), 18:4373-4388, que é incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade.

[00250] Alternativamente, as moléculas de ligação ao antígenos e polipeptídeos podem ser produzidas por expressão recombinante. Técnicas de biologia molecular adequadas para a produção de polipeptídeos recombinantes são bem conhecidas na técnica, tais como aquelas estabelecidas em Green e Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual (4º Edição), Cold Spring Harbor Press, 2012, e em Nat Methods. (2008); 5(2):135-146 ambos são incorporados por meio deste instrumento por referência em sua totalidade. Métodos para a produção recombinante de moléculas de ligação ao antígeno também são descritos em Frenzel et al., Front Immunol. (2013); 4:217 e Kunert e Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100:3451-3461, ambos incorporados por meio deste instrumento por referência em sua totalidade.

[00251] Em alguns casos, a molécula de ligação ao antígeno da presente invenção é compreendida por mais do que uma cadeia de polipeptídeos. Em tais casos, a produção das moléculas de ligação ao antígeno pode compreender transcrição e translação de mais do que um polipeptídeo, e associação subsequente das cadeias de polipeptídeos para formar a molécula de ligação ao antígeno.

[00252] Para produção recombinante de acordo com a invenção, qualquer célula adequada para a expressão de polipeptídeos pode ser usada. A célula pode ser uma procarionte ou eucarionte. Em algumas modalidades, a célula é uma célula procariótica, tal como uma célula de arqueia ou bactérias. Em algumas modalidades, a bactéria pode ser bactérias Gram-negativas, tais como bactérias da família Enterobacteriaceae, por exemplo, Escherichia coli. Em algumas modalidades, a célula é uma célula eucariótica, tal como uma célula de levedura, uma célula vegetal, célula de inseto ou uma célula de mamíferos, por exemplo, CHO, HEK (por exemplo, HEK293), HeLa ou células COS. Em algumas modalidades, a célula é uma célula CHO que de maneira transitável ou estável expressa os polipeptídeos. Em alguns casos, a célula não é uma célula procarionte, pois algumas células procariontes não permitem as mesmas modulações ou modificações pós-translacionais conforme as células eucariontes. Além disso, níveis de expressão muito altos são possíveis em eucariontes e proteínas podem ser mais fáceis de purificar a partir de eucariontes usando indicadores apropriados. Também podem ser usados plasmídeos específicos, os quais intensificam a secreção da proteína nos meios.

[00253] Em algumas modalidades, os polipeptídeos podem ser preparados pela síntese de proteínas livres de células (CFPS), por exemplo, de acordo com um sistema descrito em Zemella et al. Chembiochem (2015) 16(17):2420-2431, que é incorporado por meio deste instrumento por referência em sua totalidade.

[00254] A produção pode envolver cultura ou fermentação de uma célula eucariótica modificada para expressar o polipeptídeo(s) de interesse. A cultura ou fermentação pode ser realizada em um biorreator provido com um fornecimento adequado de nutrientes, ar/oxigênio e/ou de fatores de crescimento. As proteínas secretadas podem ser coletadas ao particionar meios de cultura/caldo de fermentação das células, extraindo o conteúdo da proteína e separando proteínas individuais para isolar o(s) polipeptídeo(s) secretado(s). As técnicas de cultura, fermentação e separação são bem conhecidas por aqueles versados na técnica, e são descritas, por exemplo, em Green e Sambrook, Molecular Cloning:A Laboratory Manual (4º Edição; incorporado neste documento por referência acima).

[00255] Biorreatores incluem um ou mais recipientes nos quais as células podem ser cultivadas. A cultura no biorreator pode ocorrer de maneira contínua, com um fluxo contínuo de reagentes para dentro do, e um fluxo contínuo de células cultivadas a partir do, reator. Alternativamente, a cultura pode ocorrer em lotes. Os biorreator monitora e controla as condições ambientais, tais como pH, oxigênio, taxas de fluxo dentro e fora e a agitação dentro do recipiente, de tal modo que as condições ideais sejam providas para as células sendo cultivadas.

[00256] Após a cultura das células que expressam a molécula/polipeptídeo(s) de ligação ao antígeno, o(s) polipeptídeo(s) de interesse pode(m) ser isolado(s). Qualquer método adequado para separação de proteínas das células conhecido na técnica pode ser usado. A fim de isolar o polipeptídeo pode ser necessário separar as células do meio de nutriente. Caso o(s) polipeptídeo(s) seja(m) secretado(s) das células, as células podem ser separadas por centrifugação dos meios de cultura que contém o(s) polipeptídeo(s) de interesse secretado(s). Caso o(s) polipeptídeo(s) de interesse se acumular(em) dentro da célula, o isolamento da proteína pode compreender a centrifugação para separar as células do meio de cultura celular, tratamento do pelete celular com tampão de lise e interrupção celular, por exemplo, por sonificação, congelamento rápido ou lise osmótica.

[00257] Pode ser, então, desejável isolar o(s) polipeptídeo(s) de interesse do sobrenadante ou meio de cultura, o qual pode conter outros componentes proteicos e não proteicos. Uma abordagem comum para separar os componentes proteicos de um sobrenadante ou meio de cultura é por precipitação. As proteínas de diferentes solubilidades são precipitadas em diferentes concentrações do agente precipitante, tais como sulfato de amônio. Por exemplo, em baixas concentrações de agente precipitante, proteínas solúveis em água são extraídas. Deste modo, ao adicionar concentrações crescentes diferentes de agente precipitante, proteínas de diferentes solubilidades podem ser distinguidas. A diálise pode ser usada posteriormente para remover sulfato de amônio das proteínas separadas.

[00258] Outros métodos para distinguir diferentes proteínas são conhecidos na técnica, por exemplo, cromatografia de troca iônica e cromatografia de exclusão por tamanho. Estes podem ser usados como uma alternativa para a precipitação ou podem ser realizados, posteriormente, para a precipitação.

[00259] Uma vez que o(s) polipeptídeo(s) de interesse foi(ram) isolado(s) da cultura, pode ser desejável ou necessário concentrar o(s) polipeptídeo(s). Diversos métodos para concentração de proteínas são conhecidos no estado técnica, tal como ultrafiltração ou liofilização. Composições

[00260] A presente invenção também provê composições que compreendem as moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs, ácidos nucleicos, vetores de expressão e células descritas neste documento.

[00261] As moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs, ácidos nucleicos, vetores de expressão e células descritas neste documento podem ser formuladas como composições farmacêuticas ou medicamentos para uso clínico e podem incluir um carreador, diluente, excipiente ou adjuvante farmacêutico aceitável. A composição pode ser formulada para vias de administração tópica, parenteral, sistêmica, intracavitária, intravenosa, intra-arterial, intramuscular, intratecal, intraocular, intraconjuntiva, intratumoral, subcutânea, intradermal, intratecal, oral ou transdérmica que podem incluir injeção ou perfusão.

[00262] As formulações adequadas podem compreender a molécula de ligação ao antígeno em um meio estéril ou isotônico. Os medicamentos e composições farmacêuticas podem ser formuladas em fluido, incluindo gel, espuma. Formulações fluidas podem ser formuladas para administração por injeção ou perfusão (por exemplo, através de um cateter) em uma região selecionada do corpo humano ou animal.

[00263] Em algumas modalidades, a composição é formulada para injeção ou perfusão, por exemplo, em um vaso sanguíneo ou tumor.

[00264] De acordo com a invenção descrita neste documento, os métodos também são providos para a produção de composições farmaceuticamente úteis, tais métodos de produção podem compreender uma ou mais etapas selecionadas a partir de: produção de uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade do mesmo), vetor de expressão (ou pluralidade do mesmo) ou célula descrita neste documento; isolamento de uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade do mesmo), vetor de expressão (ou pluralidade do mesmo) ou célula descrita neste documento; e/ou mistura de uma molécula de ligação ao antígeno,

polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade do mesmo), vetor de expressão (ou pluralidade do mesmo) ou célula descrita neste documento com um carreador, adjuvante, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[00265] Por exemplo, um aspecto adicional que a invenção descrita neste documento, diz respeito a um método de formulação ou produção de um medicamento ou composição farmacêutica para uso no tratamento de uma doença/condição (por exemplo. um câncer), o método compreendendo a formulação de uma composição farmacêutica ou medicamento misturando uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade do mesmo), vetor de expressão (ou pluralidade do mesmo) ou célula descrita neste documento com um carreador, adjuvante, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável. Aplicações terapêuticas e profiláticas

[00266] As moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs, ácidos nucleicos, vetores de expressão, células e composições descritos neste documento encontram uso em métodos terapêuticos e profiláticos.

[00267] A presente invenção também provê uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade do mesmo), vetor de expressão (ou pluralidade do mesmo), célula, ou composição descritos neste documento para uso em um método de tratamento médico ou profilaxia. Também é provido o uso de uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade do mesmo), vetor de expressão (ou pluralidade do mesmo), célula ou composição, descritos neste documento na fabricação de um medicamento para tratamento ou prevenção de uma doença ou condição. Também é provido um método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição, compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade do mesmo), vetor de expressão (ou pluralidade do mesmo), célula ou composição descritos neste documento.

[00268] Os métodos podem ser eficazes para reduzir o desenvolvimento ou progressão de uma doença/condição, alívio dos sintomas de uma doença/condição ou redução na patologia de uma doença/condição. Os métodos podem ser eficazes para prevenir a progressão da doença/condição, por exemplo, para prevenir o agravamento, ou para diminuir a taxa de desenvolvimento da doença/condição. Em algumas modalidades, os métodos podem levar a uma melhoria na doença/condição, por exemplo, uma redução nos sintomas da doença/condição ou redução em algum outro correlato da gravidade/atividade da doença/condição. Em algumas modalidades, os métodos podem impedir o desenvolvimento da doença/condição em um estágio posterior (por exemplo, um estágio crônico ou metástase). Em algumas modalidades, os métodos podem ser eficazes para reverter ou regredir a doença/condição, por exemplo, a patologia de uma doença/condição pode ser revertida de um estágio de desenvolvimento posterior para um estágio de desenvolvimento anterior. Em algumas modalidades, os métodos podem ser eficazes para reverter ou regredir os sintomas da doença/condição ou algum outro correlato da gravidade/atividade da doença/condição. Em algumas modalidades, os métodos podem ser eficazes para reverter/regredir uma doença/condição a um estado semelhante ao estado observado em um indivíduo sem a doença/condição.

[00269] Será apreciado que os artigos da presente invenção possam ser utilizados para o tratamento/prevenção de qualquer doença/condição que derivasse benefício terapêutico ou profilático de uma redução do nível de (ou seja, inibição ou antagonismo de) sinalização mediada por IL-11, ou uma redução no número e/ou atividade das células expressando IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

[00270] Por exemplo, a doença/condição pode ser uma doença/condição na qual a sinalização mediada por IL-11 é patologicamente implicada, por exemplo, uma doença/condição na qual um aumento do nível de sinalização mediada por IL-11 está positivamente associado ao início, desenvolvimento ou progressão da doença/condição e/ou gravidade de um ou mais sintomas da doença/condição, ou para o qual um nível aumentado de sinalização mediada por IL-11 é um fator de risco para o início, desenvolvimento ou progressão da doença/condição.

[00271] Por exemplo, a doença/condição pode ser uma doença/condição na qual células que expressam IL-11Rα são patologicamente implicadas, por exemplo, uma doença/condição na qual um aumento do número/proporção de células que expressam IL-11Rα está positivamente associado ao início, desenvolvimento ou progressão da doença/condição e/ou gravidade de um ou mais sintomas da doença/condição, ou para o qual um aumento do número/proporção de células que expressam IL-11Rα é um fator de risco para o início, desenvolvimento ou progressão da doença/condição.

[00272] Em algumas modalidades, a doença/condição a ser tratada/prevenida de acordo com a presente invenção é uma doença/condição caracterizada por um aumento no nível de sinalização mediada por IL-11 ou um correlato da mesma (por exemplo, em um órgão/tecido no qual os sintomas da doença/condição se manifestam) em comparação ao nível de sinalização mediada por IL-11/correlato do mesmo na ausência da doença/condição.

[00273] Em algumas modalidades, a doença/condição a ser tratada/prevenida de acordo com a presente invenção é uma doença/condição caracterizada por um aumento no número/proporção/atividade das células que expressam IL-11Rα, por exemplo, em comparação com o número/proporção/atividade das células expressando IL-11Rα na ausência da doença/condição.

[00274] Em algumas modalidades, um indivíduo pode ser selecionado para tratamento/profilaxia conforme descrito neste documento com base na detecção de um aumento no nível de sinalização mediada por IL-11 ou um correlato do mesmo e/ou um aumento no número/proporção/atividade das células que expressam IL-11Rα, por exemplo, na periferia, ou em um órgão/tecido que é afetado pela doença/condição (por exemplo, um órgão/tecido no qual os sintomas da doença/condição se manifestam). A doença/condição pode afetar qualquer tecido ou órgão ou sistema de órgãos. Em algumas modalidades, a doença/condição pode afetar vários tecidos/órgãos/sistemas de órgãos.

[00275] Em algumas modalidades, um indivíduo pode ser selecionado para terapia/profilaxia de acordo com a presente invenção com base na determinação de que o indivíduo tem um aumento no nível de sinalização mediada por IL-11 ou um correlato do mesmo e/ou um aumento no número/proporção/atividade das células que expressam IL-11Rα, por exemplo, na periferia, ou em um órgão/tecido relativo ao nível de sinalização mediada de L-11/correlato do mesmo, ou número/proporção/atividade de células expressando IL-11Rα em um indivíduo saudável.

[00276] As moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são, preferencialmente, capazes de se ligar e inibir a atividade biológica de IL-11Rα e moléculas/complexos contendo IL-11Rα (por exemplo, IL-11:complexo de IL-11Rα). Por conseguinte, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção encontram uso no tratamento ou prevenção de doenças e distúrbios na qual IL-11Rα é implicado na patologia da doença/distúrbio. Ou seja, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção encontram uso no tratamento ou prevenção de doenças e distúrbios associados à sinalização mediada por IL-11.

[00277] Em algumas modalidades, a doença/o distúrbio pode estar associado ao aumento da expressão gênica ou proteica de IL-11, IL- 11Rα e/ou gp130, por exemplo, como em comparação ao estado de controle (ou seja, não doente). Em algumas modalidades, a doença/o distúrbio pode estar associado a um aumento do nível de sinalização mediada por IL-11 (por exemplo, sinalização de IL-11/IL-11R) em comparação ao estado de controle. Em algumas modalidades, a doença/o distúrbio pode estar associado a um aumento do nível de sinalização através de vias ERK e/ou STAT3 em comparação ao estado de controle. Em algumas modalidades, o aumento da expressão/atividade de IL-11, IL- 11Rα e/ou gp130, e/ou o aumento do nível de sinalização mediada por IL- 11, pode ser observado em células efetoras da doença/do distúrbio. Em algumas modalidades, o aumento da expressão/atividade de IL-11, IL-11Rα e/ou gp130, e/ou o aumento do nível de sinalização mediada por IL-11, pode ser observado em células diferentes das células efetoras.

[00278] A sinalização através de ERK pode ser medida, por exemplo, usando um ensaio de fosforilação de ERK, tal como um ensaio descrito em Assay Guidance Manual:Phospho-ERK Assays, Kim E. Garbison, Beverly A. Heinz, Mary E. Lajiness, Jeffrey R. Weidner, e G. Sitta Sittampalam, Eli Lilly & Company, Sittampalam GS, Coussens NP, Nelson H, et al., editors Bethesda (MD):Eli Lilly & Company e o National Center for Advancing Translational Sciences; 2004. A sinalização através de STAT3 pode ser medida, por exemplo, usando um ensaio para fosforilação de STAT3, tal como o Kit de Ensaio Celular (Cisbio Assays) Phospho-STAT3 (Tyr705).

[00279] Em algumas modalidades, o tratamento é de uma doença/distúrbio para o qual uma redução na sinalização mediada por IL-11 é terapêutica. Em algumas modalidades, o tratamento é de uma doença/desordem associada com o excesso de ERK e/ou sinalização de STAT3. Em algumas modalidades, o tratamento é de uma doença/distúrbio associada com o excesso de proliferação ou hiperativação de fibroblastos, ou associado com um excesso de miofibroblastos.

[00280] Em algumas modalidades, pode-se visar o tratamento ao prevenir ou tratar uma doença/um distúrbio ao diminuir o número ou a proporção de miofibroblastos ou fibroblastos de αSMA-positiva.

[00281] Em algumas modalidades, a doença/o distúrbio pode ser fibrose, uma condição fibrótica ou uma doença/um distúrbio caracterizado por fibrose. Como usado neste documento, "fibrose" se refere à formação de excesso de tecido conjuntivo fibroso como resultado do excesso de deposição de componentes de matriz extracelular, por exemplo, colágeno. Tecido conjuntivo fibroso é caracterizado por ter a matriz extracelular (ECM) com um alto teor de colágeno. O colágeno pode ser provido em filamentos ou fibras, que podem ser organizados de forma irregular ou alinhados. O ECM do tecido conjuntivo fibroso pode incluir, igualmente, glicosaminoglicanos.

[00282] Como utilizado neste documento, "excesso de tecido conjuntivo fibroso" se refere a uma quantidade de tecido conjuntivo em um dado local (por exemplo, um dado tecido ou órgão, ou parte de um dado tecido ou órgão) que é maior do que a quantidade de tecido conjuntivo presente naquele local na ausência de fibrose, por exemplo, em condições normais e não patológicas. Como usado neste documento, "excesso de deposição de componentes de matriz extracelular" se refere a um nível de deposição de um ou mais componentes de matriz extracelular que é maior do que o nível de deposição na ausência de fibrose, por exemplo, sob condições normais e não patológicas.

[00283] Os mecanismos celulares e moleculares da fibrose são descritos em Wynn, J. Pathol. (2008) 214 (2):199-210, e Wynn e Ramalingam, Nature Medicine (2012) 18:1028-1040, que são incorporados por meio de referência em sua totalidade. Os principais efetores celulares da fibrose são os miofibroblastos, que produzem uma matriz extracelular rica em colágeno.

[00284] Em resposta a lesões teciduais, células danificadas e leucócitos produzem fatores profibróticos, tais como TGFβ, IL-13 e PDGF, que ativam fibroblastos para miofibroblastos expressando αSMA, e recrutam miofibroblastos para o local da lesão. Os miofibroblastos produzem uma grande quantidade de matriz extracelular, e são mediadores importantes no auxílio a contratura e no fechamento da ferida. No entanto, sob condições de infecção persistente ou durante a inflamação crônica pode haver hiperativação e recrutamento de miofibroblastos, e, assim, a produção excessiva de componentes de matriz extracelular, resultando na formação de excesso de tecido conjuntivo fibroso.

[00285] Em algumas modalidades, a fibrose pode ser desencadeada por condições patológicas, por exemplo, condições, infecções ou estados de doença que levam à produção de fatores profibróticos, tal como TGFβ1. Em algumas modalidades, a fibrose pode ser causada por lesões/estímulos físicos, lesões/estímulos químicos ou lesões/estímulos ambientais. Lesões/estímulos físicos podem ocorrer durante a cirurgia, por exemplo, por causas iatrogênicas. Lesões/estímulos químicos podem incluir fibrose induzida por fármaco, por exemplo, após a administração crônica de fármacos, tais como bleomicina, ciclofosfamida, amiodarona, procainamida, penicilamina, ouro e nitrofurantoína (Daba et al., Saudi Med J 2004 Jun; 25 (6):700-6). Lesões/estímulos ambientais podem incluir a exposição a fibras de amianto ou sílica.

[00286] A fibrose pode ocorrer em muitos tecidos do corpo. Por exemplo, a fibrose pode ocorrer no pulmão, fígado (por exemplo, cirrose), rim, coração, vasos sanguíneos, olhos, pele, pâncreas, baço, intestino (por exemplo, intestino grosso ou delgado), cérebro e medula óssea. A fibrose também pode ocorrer em vários órgãos ao mesmo tempo.

[00287] Nas modalidades neste documento, a fibrose pode envolver um órgão do sistema gastrointestinal, por exemplo, do fígado,

intestino delgado, intestino grosso ou pâncreas. Em algumas modalidades a fibrose pode envolver um órgão do sistema respiratório, por exemplo, os pulmões. Em modalidades, a fibrose pode envolver um órgão do sistema cardiovascular, por exemplo, do coração ou dos vasos sanguíneos. Em algumas modalidades a fibrose pode envolver a pele. Em algumas modalidades a fibrose pode envolver um órgão do sistema nervoso, por exemplo, o cérebro. Em algumas modalidades a fibrose pode envolver um órgão do sistema urinário, por exemplo, os rins. Em algumas modalidades a fibrose pode envolver um órgão do sistema musculoesquelético, por exemplo, o tecido muscular.

[00288] Em algumas modalidades preferenciais, a fibrose é a fibrose cardíaca ou miocárdica, fibrose hepática ou fibrose renal. Em algumas modalidades, a fibrose cardíaca ou miocárdica está associada à disfunção da musculatura ou propriedades elétricas do coração, ou espessamento das paredes ou válvulas do coração. Em algumas modalidades a fibrose é do átrio e/ou dos ventrículos do coração. O tratamento ou a prevenção de fibrose atrial ou ventricular pode ajudar a reduzir o risco ou surgimento de fibrilação atrial, fibrilação ventricular ou infarto do miocárdio.

[00289] Em algumas modalidades preferenciais, a fibrose hepática é associada com a doença de fígado crônica ou a cirrose de fígado. Em algumas modalidades preferenciais, a fibrose renal é associada com a doença de rim crônica.

[00290] Doenças/distúrbios caracterizados por fibrose de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitados a:condições respiratórias, como fibrose pulmonar, fibrose cística, fibrose pulmonar idiopática (IPF), fibrose maciça progressiva, esclerodermia, bronquiolite obliterativa, síndrome de Hermansky-Pudlak, asbestose, silicose, hipertensão pulmonar crônica, hipertensão pulmonar associada à AIDS, sarcoidose, estroma tumoral em doença pulmonar e asma; doença hepática crônica, cirrose biliar primária (PBC), doença hepática esquistossomótica, cirrose hepática, esteato-hepatite, esteato-hepatite não alcoólica (NASH), NASH em estágio inicial, NASH em estágio avançado, esteato-hepatite alcoólica, esteatose; doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD), condições pancreáticas, como pancreatite crônica e fibrose pancreática; condições cardiovasculares, como cardiomiopatia hipertrófica, cardiomiopatia dilatada (DCM), fibrose atrial, fibrilação atrial, fibrose do ventrículo, fibrilação ventricular, fibrose miocárdica, síndrome de Brugada, miocardite, fibrose endomiocárdica, infarto do miocárdio, doença vascular fibrótica, doença cardíaca hipertensiva, cardiomiopatia arritmogénica do ventrículo direito (ARVC), fibrose tubulointersticial e glomerular, aterosclerose, veias varicosas, enfartes cerebrais; condições neurológicas, como gliose e doença de Alzheimer; distrofia muscular, como distrofia muscular de Duchenne (DMD) ou distrofia muscular de Becker (BMD); condições gastrointestinais, como doença de Crohn, colite microscópica e colangite esclerosante primária (PSC); condições de pele, como esclerodermia, fibrose sistêmica nefrogênica e queloide cutis; artrofibrose; Contratura de Dupuytren; fibrose mediastinal; fibrose retroperitoneal; mielofibrose; Doença de Peyronie; Capsulite adesiva; doença renal (por exemplo, fibrose renal, síndrome nefrítica, síndrome de Alport, nefropatia associada ao HIV, doença renal policística, doença de Fabry, nefropatia diabética, glomerulonefrite crônica, nefrite associada a lúpus sistêmico, fibrose intersticial renal (FI)); lesão renal, por exemplo lesão renal aguda/insuficiência renal; nefrotoxicidade; esclerose sistêmica progressiva (PSS); doença do enxerto versus hospedeiro crônica; doenças/distúrbios do olho e processos associados, como oftalmopatia de Grave, fibrose epirretiniana (por exemplo, retinopatia diabética (DR)), glaucoma, fibrose sub-retiniana (por exemplo, associada a degeneração macular (por exemplo, relacionada à idade úmida ou seca degeneração macular (DMRI)), edema macular, formação de drusas, neovascularização coroidal

(CNV), fibrose pós-cirúrgica (por exemplo, da cápsula posterior após cirurgia de catarata ou da bolha após trabeculectomia para glaucoma), fibrose conjuntival, fibrose subconjuntival; artrite; doença fibrótica pré- neoplásica e doença fibrótica neoplásica; e fibrose induzida por insulto químico ou ambiental (por exemplo, quimioterapia contra câncer, pesticidas, radiação/radioterapia contra câncer).

[00291] NASH de estágio inicial refere-se aqui a estágios esteatóticos de doença hepática gordurosa, por exemplo, doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD), que pode fazer a ponte para um estado NASH no qual o fígado ficou inflamado. NASH de estágio tardio refere-se aqui a estados de inflamação persistente do fígado que podem incluir fibrose.

[00292] Será apreciado que muitas das doenças/condições listadas acima estão inter-relacionadas. Por exemplo, a fibrose do ventrículo pode ocorrer após o infarto do miocárdio e está associada à DCM, HCM e miocardite.

[00293] Em modalidades particulares, a doença/distúrbio pode ser uma dentre fibrose pulmonar, fibrilação atrial, fibrilação ventricular, cardiomiopatia hipertrófica (HCM), cardiomiopatia dilatada (DCM), esteato- hepatite não alcoólica (NASH), cirrose, doença renal crônica, esclerodermia, esclerose sistêmica, queloide, fibrose cística, doença de Cron, fibrose pós-cirúrgica ou fibrose retiniana, por exemplo, associada à degeneração macular úmida relacionada à idade (AMD).

[00294] Em algumas modalidades, os métodos podem ser eficazes para reverter ou regredir a fibrose. A fibrose pode ser estabelecida ou fibrose grave e pode estar associada a qualquer uma das doenças/distúrbios descritos neste documento. Em algumas modalidades, os métodos podem ser eficazes para reverter ou regredir qualquer uma das doenças/distúrbios providos neste documento.

[00295] A fibrose pode levar direta ou indiretamente a, e/ou aumentar a suscetibilidade ao desenvolvimento de, doenças/distúrbios. Por exemplo, mais de 80% dos carcinomas hepatocelulares (HCCs) desenvolvem-se em fígados fibróticos ou cirróticos (Affo et al. 2016, Annu Rev Pathol.), sugerindo um papel importante para a fibrose hepática no ambiente pré-maligno (PME) do fígado.

[00296] Consequentemente, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção encontram uso em métodos para o tratamento e prevenção de doenças/distúrbios associados à fibrose e/ou para os quais a fibrose é um fator de risco. Em algumas modalidades, a doença/o distúrbio associado à fibrose, ou para o qual a fibrose é um fator de risco, é um câncer, por exemplo, câncer do fígado (por exemplo, carcinoma hepatocelular).

[00297] A sinalização mediada por IL-11 também está implicada na patologia de outras doenças/distúrbios, e as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção, consequentemente, encontram uso em métodos para tratar, prevenir, aliviar e/ou reverter ou regredir os sintomas dessas doenças/distúrbios também.

[00298] Em algumas modalidades a fibrose pode estar associada à angiogênese, por exemplo, no olho. Em algumas modalidades, métodos de tratamento ou prevenção de fibrose, métodos de determinação da adequação de um indivíduo para tal tratamento/prevenção e métodos de diagnóstico/prognóstico de fibrose como aqui descritos também são aplicáveis ao tratamento/prevenção/diagnóstico/prognóstico de angiogênese e vice-versa. A fibrose do olho pode estar associada à neovascularização coroidal (CNV).

[00299] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são fornecidas para uso em métodos para tratar e/ou prevenir doenças metabólicas. Ou seja, a presente invenção provê o tratamento/prevenção de doenças metabólicas através da inibição da sinalização mediada por IL-11, por exemplo, uma célula,

tecido/órgão/sistema orgânico/indivíduo. Tal como utilizado neste documento, uma “doença metabólica” refere-se a qualquer doença ou condição que é causada por, ou que é caracterizada por, metabolismo anormal. “Metabolismo”, neste contexto, refere-se à conversão/processamento corporal de fontes de energia, por exemplo, substâncias consumidas para fornecer nutrição, em energia e/ou para armazenamento. “Metabolismo normal” pode ser o metabolismo de um indivíduo saudável sem uma doença, por exemplo, sem uma doença metabólica ou não possuindo um sintoma/correlato de uma doença metabólica.

[00300] Um indivíduo com uma doença metabólica pode apresentar metabolismo anormal. Um indivíduo com uma doença metabólica pode ter um sintoma/correlato de metabolismo anormal. Um indivíduo com uma doença metabólica pode ter sido diagnosticado como tendo uma doença metabólica. Um indivíduo pode satisfazer os critérios de diagnóstico para o diagnóstico de uma doença metabólica. Em algumas modalidades, a presente invenção provê o tratamento/prevenção de doenças/condições em um indivíduo para o qual uma doença metabólica fornece um prognóstico ruim.

[00301] Em algumas modalidades, a doença metabólica afeta um ou mais dos seguintes: fígado, pâncreas, sistema cardiovascular, sistema digestivo, sistema excretor, sistema respiratório, sistema renal, sistema reprodutivo, sistema circulatório, sistema muscular, sistema endócrino sistema, o sistema exócrino, o sistema linfático, o sistema imunológico, o sistema nervoso e/ou o sistema esquelético.

[00302] Em algumas modalidades, a doença metabólica é, ou compreende (por exemplo, é caracterizada por), obesidade, diabetes tipo 2 (T2D), diabetes tipo 1 (T1D), pré-diabetes, excesso de peso, síndrome metabólica, hiperglicemia associada à gravidez (ou seja, gestacional diabetes), doença hepática colestática, hiperglicemia, hiperlipidemia,

hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, definhamento, caquexia, perda de peso associada à quimioterapia, insuficiência pancreática, pancreatite, pancreatite aguda, pancreatite crônica, esteatose, doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD), fígado (NAFL), esteatohepatite não alcoólica (NASH), lipodistrofia, lipo-hipertrofia, lipoatrofia, deficiência de insulina, resistência à insulina e hiperglucagonemia. Em algumas modalidades, a doença metabólica é, ou compreende, obesidade. Em algumas modalidades, a doença metabólica é, ou compreende, colestase, ou seja, um fluxo reduzido de bile do fígado para o duodeno. A doença pode ser doença hepática colestática (Jansen et al., Hepatology (2017) 65 (2):722-738 e Pollock e Minuk, J Gastroenterol Hepatol (2017) 32 (7):1303- 1309, ambos aqui incorporado por referência em sua totalidade), incluindo, por exemplo, colangite biliar primária (PBC) e colangite esclerosante primária (PSC).

[00303] Aspectos da presente invenção referem-se ao tratamento e/ou prevenção de função aberrante e/ou insuficiente de células/tecido(s)/órgão(s)/sistemas de órgãos que desempenham um papel no metabolismo. Em particular, o tratamento e/ou prevenção de função aberrante e/ou função insuficiente de células do pâncreas/tecido pancreático/pâncreas é contemplado neste documento, assim como o tratamento e/ou prevenção de função aberrante e/ou função insuficiente de células de o fígado/tecido hepático/o fígado.

[00304] Em algumas modalidades, a doença metabólica é, ou compreende, definhamento. Conforme usado neste documento, o termo "definhamento" refere-se à perda involuntária de peso, que pode ser progressiva e/ou degenerativa. Definhamento pode ser definido como perda de músculo com ou sem perda de massa gorda e normalmente envolve perda significativa, geralmente involuntária, de massa corporal (incluindo músculo esquelético) e pode ou não incluir perda de tecido adiposo. Em alguns casos, a perda de tecido adiposo pode ocorrer isoladamente, como visto em doenças de lipodistrofia. O desperdício pode ser caracterizado por um balanço energético e proteico negativo conduzido por uma combinação variável de ingestão alimentar reduzida e metabolismo anormal (Fearon et al. Lancet Oncol. (2011) 12 (5):489-95). O desgaste pode levar ao comprometimento funcional progressivo, diminuição da qualidade de vida e aumento do risco de morbidade e mortalidade. Em alguns casos, a debilidade leva à astenia (fraqueza física anormal ou falta de energia) e/ou anemia (deficiência de glóbulos vermelhos ou hemoglobina no sangue). Em alguns casos, a debilidade não pode ser totalmente revertida pelo suporte nutricional convencional ou por intervenções terapêuticas que foram testadas até o momento. A morte geralmente ocorre quando a perda de peso atinge 30% do peso corporal estável histórico do paciente (Tisdale, Nature Reviews Cancer, 2, 862-871 (2002)).

[00305] Doenças/condições caracterizadas por definhamento incluem caquexia (perda de massa muscular não relacionada à idade), sarcopenia (perda de massa muscular: por exemplo, relacionada à idade, desuso, viagem espacial ou desnervação), distúrbios anoréxicos (desnutrição energético-proteica), muscular distrofias, lipodistrofias (por exemplo, condição anormal ou degenerativa do tecido adiposo), lipoatrofia (perda relacionada à idade de gordura subcutânea na face e outros tecidos) e miopenia (perda muscular em qualquer doença crônica; proposta por Fearon et al. J Cachexia Sarcopenia Músculo . 2011; 2:1-3). Neste documento, doenças/condições caracterizadas por perda de peso também são referidas como “transtornos debilitantes”. Em algumas modalidades, um distúrbio debilitante de acordo com a presente divulgação é caquexia, pré- quexia, caquexia refratária, sarcopenia, anorexia, lipodistrofia, lipoatrofia e/ou miopenia. Em algumas modalidades, de acordo com os vários aspectos descritos neste documento, o distúrbio debilitante é caquexia, pré- quexia e/ou caquexia refratária.

[00306] Os distúrbios de perda muscular decorrentes de doenças crônicas podem incluir "doença de perda muscular leve" (com ou sem fragilidade), "doença de perda muscular moderada" (com ou sem fragilidade; às vezes conhecida como "pré-caquexia") ou "doença grave de perda muscular” (Às vezes chamado de “caquexia”, frequentemente com fragilidade presente). A caquexia pode ser definida como perda involuntária de peso de >5% do peso estável histórico, um índice de massa corporal (IMC) de <20 kg/m2 (pessoa com menos de 65 anos) ou <22 kg/m2 (pessoa com 65 anos ou mais) com qualquer grau de perda de peso >2% ou um índice de músculo esquelético consistente com sarcopenia com qualquer grau de perda de peso >2%. O indivíduo também pode apresentar <10% de gordura corporal e/ou um nível baixo de albumina no sangue de <35 g/l. Esses critérios também podem ajudar a identificar populações em “risco” de desenvolver um transtorno debilitante (Fearon et al. Lancet Oncol. 2011; 12 (5):489-95).

[00307] Uma classificação de três etapas da caquexia foi proposta, com a gravidade classificada de acordo com o grau de depleção das reservas de energia e proteína corporal (IMC) em combinação com o grau de perda de peso contínua.

1. Pré-caquexia - quando um paciente apresenta perda de peso <5%, mas ainda não desenvolveu complicações graves.

2. Caquexia - onde a síndrome está progredindo, com emagrecimento excedendo os parâmetros citados acima, mas ainda potencialmente passível de tratamento.

3. Caquexia refratária - o ponto em que a doença não responde mais ao tratamento ou quando os benefícios do tratamento são superados pela carga e pelo risco (Fearon et al, supra). Frequentemente, o estágio refratário é ditado pelo estágio geral de uma doença subjacente, descrita abaixo, e pela condição do paciente.

[00308] As doenças metabólicas podem estar presentes em quadros de doenças agudas ou crônicas. Aspectos da presente invenção proporcionam o tratamento/prevenção de doenças/condições associadas a doenças metabólicas. Doenças/condições associadas a doenças metabólicas incluem doenças/condições que estão positivamente associadas ao início de uma doença metabólica. Em algumas modalidades, a doença/condição associada a uma doença metabólica é aquela que pode causar/causa/causou (ou seja, pode levar a, leva a ou levou a) uma doença metabólica.

[00309] Doenças/condições associadas a doenças metabólicas também incluem doenças/condições que são causadas e/ou exacerbadas (agravadas, progredidas e/ou complicadas) por uma doença metabólica. Em algumas modalidades, uma doença/condição associada a uma doença metabólica pode estar positivamente associada ao início de uma doença metabólica e também pode ser exacerbada por uma doença metabólica. Uma doença/condição "associada" pode ser aquela que compreende uma patologia relacionada à doença metabólica.

[00310] Em modalidades da invenção, uma doença metabólica ou uma doença/condição associada a uma doença metabólica pode estar presente ou afetar qualquer órgão/tecido, como coração, fígado, rim, cérebro, pele, sistema muscular, estômago, intestino delgado, intestino grosso, pâncreas, boca, glândulas salivares, faringe, esôfago, vesícula biliar, traqueia, laringe, bexiga, ovário, útero, testículos, glândulas do sistema endócrino, por exemplo, pituitária ou tireoide, o sistema linfático, por exemplo, baço.

[00311] Em modalidades da invenção, uma doença/condição associada a uma doença metabólica pode ser uma ou mais dentre câncer, doença cardíaca, doença renal, doença pulmonar, doença hepática, infecção crônica, doenças degenerativas neurológicas, lesão aguda, lesão traumática/trauma, condições pós-operatórias ou envelhecimento/senescência.

[00312] De acordo com vários aspectos da presente invenção,

um método de tratamento e/ou prevenção de uma doença metabólica de acordo com a presente invenção pode compreender um ou mais dos seguintes: Reduzindo o nível de lipídios no sangue; Reduzindo o nível de glicose no sangue; Aumento da tolerância à glicose (por exemplo, de um indivíduo intolerante à glicose); Aumento da tolerância à insulina (por exemplo, de um indivíduo resistente à insulina); Aumento da função pancreática; Reduzir o peso corporal (por exemplo, de um indivíduo com sobrepeso/obesidade); Reduzindo a massa gorda corporal; Aumento da massa magra; Reduzindo o nível de glicose no sangue em jejum; Reduzindo o nível de triglicérides séricos; Reduzindo o nível de colesterol sérico; Aumento da tolerância à glicose; Aumento da função pancreática (por exemplo, função exócrina e/ou endócrina); Aumentar o crescimento do tecido pancreático; Tecido pancreático em regeneração; Aumento do peso do pâncreas; Reduzindo a hiperplasia das células das ilhotas pancreáticas; Reduzindo a expressão de glucagon; Aumento da expressão de insulina; Aumento do peso corporal (por exemplo, de um indivíduo com uma doença debilitante, por exemplo, caquexia); Reduzindo a expressão da proteína IL-11 no fígado; Reduzindo a ativação de Erk no fígado;

Reduzindo a esteatose, por exemplo, do fígado; Reduzindo o nível de triglicérides do fígado; Reduzindo o nível sérico de ALT; Redução da expressão de um fator pró-inflamatório (por exemplo, TNFα, CCL2, CCL5, IL-6, CXCL5 e/ou CXCL1); Redução da expressão de um fator pró-fibrótico (por exemplo, IL-11, TIMP1, ACTA2, TGFβ1, MMP2, TIMP2, MMP9, COL1A2, COL1A1 e/ou COL3A1); Reduzindo o nível sérico de TGFβ1; Redução da expressão/produção por HSCs de IL-11, ACTA2, MMP2, TGFβ1, PDGF, ANG II, bFGF, CCL2 e/ou H2O2; Inibição da transição de HSC para miofibroblastos por HSCs; Reduzindo o número/proporção de miofibroblastos no fígado; Reduzindo o nível de hidroxiprolina no fígado; Aumento da função hepática; Aumentar a função de um órgão/tecido afetado por uma doença metabólica; Reduzindo danos ao fígado; e Reduzindo o número/proporção de células CD45+ no fígado.

[00313] A sinalização mediada por IL-11 tem sido implicada no desenvolvimento e progressão de vários tipos de câncer. Estudos sugerem que a sinalização mediada por IL-11 é importante para promover a inflamação gástrica crônica e a tumorogênese gástrica, colônica, hepatocelular e de câncer de mama associada através da ativação excessiva de STAT3 (Ernst M, et al. J Clin Invest. (2008);118:1727–1738), que IL-11 pode promover a tumorigênese desencadeando a via de sinalização intracelular JAK-STAT, e pode promover também a metástase pela sinalização através da via PI3K-AKT-mTORC1 (Xu et al.Cancer Letters (2016) 373(2): 156-163). Através de STAT3, IL-11 promove a sobrevivência, proliferação, angiogênese de invasão e metástase, o eixo de sinalização IL-11/GP130/JAK/STAT3 pode ser limitante de taxa para a progressão de tumores gastrointestinais, e a expressão de IL-11 elevada está associada com mau prognóstico de pacientes com câncer de mama (Johnstone et al., Cytokine & Growth Reviews (2015) 26 (5):489-498). A IL- 11 também mostrou influenciar a dinâmica das células-tronco do câncer de mama e a heterogeneidade tumoral (Johnstone et al., Cytokine & Growth Reviews (2015) 26(5):489-498). Recentemente, a sinalização mediada por IL-11 foi implicada na quimiorresistência do adenocarcinoma do pulmão; os fibroblastos associados ao câncer foram encontrados para sobrerregular IL- 11 e conferir quimiorresistência a células pulmonares cancerosas através da ativação da via de sinalização anti-apoptótica IL-11/IL-11R/STAT3 (Tao et al. 2016, Sci Rep. 6;6:38408). A sinalização mediada por IL-11 pode promover a transição fibroblástica para miofibroblástica e a produção de matrizes extracelulares por fibroblastos no ambiente pré-maligno (PME) e no microambiente tumoral (TME).

[00314] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são fornecidas para uso em métodos para tratar/prevenir um câncer. Em algumas modalidades, o câncer pode ser um câncer que leva direta ou indiretamente à inflamação e/ou à fibrose.

[00315] Um câncer pode ser qualquer proliferação celular indesejada (ou qualquer doença que se manifesta pela proliferação celular indesejada), neoplasia ou tumor, ou aumento do risco de ou predisposição para a proliferação celular indesejada, neoplasia ou tumor. O câncer pode ser benigno ou maligno e pode ser primário ou secundário (metastático). Uma neoplasia ou tumor pode ser qualquer crescimento anormal ou proliferação de células e pode estar localizada em qualquer tecido.

[00316] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são fornecidos para uso em métodos para tratar/prevenir um câncer, por exemplo, um câncer de células epiteliais, câncer de mama, câncer gastrointestinal (por exemplo, câncer de esôfago,

câncer de estômago, câncer pancreático, câncer de fígado (por exemplo, HCC), câncer da vesícula biliar, câncer colorretal, câncer anal, tumor carcinoide gastrointestinal) e câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) ou câncer de pulmão de células pequenas (CPNPC))). Em algumas modalidades, o câncer é um câncer para o qual a inflamação aguda e/ou crônica é um fator de risco. Em algumas modalidades, o câncer é um câncer para o qual uma doença/distúrbio caracterizado pela fibrose (por exemplo, como descrito neste documento) é um fator de risco.

[00317] Em algumas modalidades, o câncer pode estar associado ao aumento da expressão gênica ou proteica de IL-11, IL-11Rα e/ou gp130. Por exemplo, as células do câncer podem ter expressão aumentada de IL-11, IL-11Rα e/ou gp130 em comparação com células comparáveis, não cancerosas, ou podem estar associadas com o aumento da expressão de IL-11, IL-11Rα e/ou gp130 por outras células (por exemplo, células não cancerosas) como em comparação com o nível de expressão por células comparáveis na ausência de um câncer (por exemplo, em um indivíduo de controle saudável). Em algumas modalidades, as células do câncer podem ser determinadas para ter um nível aumentado de sinalização através de vias ERK e/ou STAT3 em comparação às células comparáveis não cancerosas.

[00318] Em algumas modalidades, o câncer pode estar associado a uma mutação em IL-11, IL-11Rα e/ou gp130. Em algumas modalidades, tal mutação pode estar associada a um nível elevado de expressão gênica ou proteica, ou pode estar associada a um nível elevado de sinalização de IL-11/IL-11R em relação ao nível de expressão/sinalização observado na ausência da mutação.

[00319] A sinalização de IL-11/IL-11R também tem sido implicada em doenças/distúrbios caracterizados por inflamação. A injeção intra- articular de IL-11 foi mostrada para provocar a inflamação nas articulações

(Wong et al., Cytokine(2005) 29:7276), e a IL-11 foi mostrada para ser pró- inflamatórias nos locais da inflamação tecidual mediada por IL-13 (Chen et al., J Immunol (2005) 174:2305-2313). A expressão de IL-11 tem sido observada também para ser significativamente aumentada em lesões cutâneas crônicas na dermatite atópica, e é conhecida por estar envolvida na inflamação brônquica (Toda et al., J Allergy ClinImmunol (2003) 111:875-881). A sinalização mediada por IL-11 está implicada na doença inflamatória intestinal (DII) e na asma (Putoczkiand Ernst, J Leuko Biol (2010) 88(6)1109-1117). A IL-11 foi identificada também como um fator de risco para a esclerose múltipla; a IL-11 é elevada no líquido cerebrospinal de pacientes com síndrome clínica isolada (CIS) em comparação aos indivíduos de controle, e os níveis de soro de IL-11 são mais elevados durante recaídas para pacientes com esclerose múltipla com recaídas recorrentes, e a IL-11 pode promover diferenciação de células CD4+T para um fenótipo TH17 – células TH17 são células importantes na patogênese de esclerose múltipla (Zhanget al., Oncotarget (2015) 6(32):32297-32298).

[00320] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são providas para uso em métodos para tratar/prevenir uma doença/um distúrbio caracterizado por inflamação. Em algumas modalidades, uma doença ou distúrbio caracterizado por inflamação pode ser uma doença/um distúrbio que leva direta ou indiretamente a um câncer e/ou fibrose. As doenças caracterizadas por inflamação incluem, por exemplo, inflamação alérgica, tal como asma alérgica e inflamação brônquica, dermatite atópica, rinite alérgica e doenças alérgicas oculares, e doenças autoimunes, tais como esclerose múltipla, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, hepatite ativa crônica, diabetes mellitus tipo 1, doença celíaca, doença de Graves, uveíte, pênfigo, psoríase, doença de Crohn, colite ulcerosa, doença inflamatória intestinal, anemia e tireoidite autoimune.

[00321] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são providas para uso em métodos para tratar/prevenir hepatotoxicidade e doenças/distúrbios caracterizados por hepatotoxicidade. Tal como utilizado neste documento, hepatotoxicidade refere-se a danos e/ou morte de células/tecidos do fígado. A hepatotoxicidade pode se referir a um estado de dano tóxico ao fígado, especificamente com a morte das células do hepatócito no fígado. A hepatotoxicidade pode ser determinada/diagnosticada pela detecção de um ou mais correlatos de hepatotoxicidade conforme descrito abaixo. A hepatotoxicidade pode surgir como consequência de um insulto hepatotóxico. Como usado neste documento, "insulto hepatotóxico" refere- se a qualquer tratamento, evento ou condições que dão origem à hepatotoxicidade. Por exemplo, o insulto hepatotóxico pode ser causado por um tratamento/experiência química/física ou condições gasosas. Em algumas modalidades, o insulto hepatotóxico é químico, por exemplo, no caso de lesão hepática induzida por drogas, por exemplo, hepatotoxicidade induzida por APAP. Em algumas modalidades, o insulto hepatotóxico é físico, por exemplo, no caso de hepatotoxicidade decorrente de dano cirúrgico ao tecido hepático, que pode ocorrer, por exemplo, cirurgia para tratar uma doença e/ou para transplante de fígado (por exemplo, a hepatotoxicidade pode ter causas iatrogênicas). Em algumas modalidades, o insulto hepatotóxico surge de hipóxia, por exemplo, como consequência de isquemia, ou pode resultar de reperfusão (por exemplo, o insulto hepatotóxico pode surgir de IRI).

[00322] A hepatotoxicidade pode ser dano ao fígado causado por produtos químicos, por exemplo dano ou lesão causada por um medicamento, produto químico, isquemia, reperfusão, sepse ou suplementos fitoterápicos ou dietéticos. Em algumas modalidades, a hepatotoxicidade se refere a lesão hepática induzida por drogas (DILI). Em algumas modalidades, a hepatotoxicidade se refere a lesão hepática causada por uma hepatotoxina. Uma hepatotoxina pode ser álcool. A hepatotoxicidade também pode ser denominada hepatite tóxica. A hepatotoxicidade pode referir-se à hepatotoxicidade aguda e/ou crônica.

[00323] A hepatotoxicidade pode ser causada, direta ou indiretamente, pela ingestão de álcool, por exemplo, consumo crônico de álcool. A hepatotoxicidade referida neste documento pode ser causada, direta ou indiretamente, por jejum, desnutrição, infecção por um agente infeccioso (por exemplo, um vírus da hepatite (por exemplo, hepatite A, B, C, D ou E), HIV), câncer ou interações medicamentosas.

[00324] A hepatotoxicidade pode estar presente em associação com outros distúrbios, doenças e condições. Distúrbios, doenças ou condições associadas à hepatotoxicidade incluem lesão hepática aguda (LPA), insuficiência hepática aguda, doença hepática aguda, doença hepática crônica, lesão hepática, hepatite, por exemplo, hepatite viral, hepatite alcoólica, lesão de reperfusão de isquemia hepática (IRI), por exemplo, 'quente' isquemia-reperfusão (WIR), doença hepática induzida por radiação (RILD), lesão hepática induzida por drogas (DILI), lesão hepática autoimune, doença hepática colestática, HIV e câncer.

[00325] A lesão hepática induzida por drogas (DILI) inclui hepatotoxicidade intrínseca e idiossincrática, e a DILI idiossincrática inclui ainda reação alérgica e não alérgica. O mecanismo intrínseco está relacionado à hepatotoxicidade dependente da dose, enquanto a hepatotoxicidade idiossincrática não é dependente da dose e pode ocorrer de forma imprevisível. A hepatotoxicidade idiossincrática alérgica é ainda caracterizada pela presença de sintomas e sinais típicos de uma reação do sistema imunológico adaptativo, incluindo febre, reações cutâneas, eosinofilia, formação de autoanticorpos e um curto tempo de latência, particularmente após a reexposição (Khoury et al., J Clin Transl Hepatol. 28 de junho de 2015; 3 (2): 99-108).

[00326] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção podem ser utilizadas para o diagnóstico,

tratamento e profilaxia de hepatotoxicidade induzida por acetaminofeno (APAP). O acetaminofeno também é conhecido como N-acetil-p-aminofenol ou paracetamol, ou pelos nomes comerciais Tylenol e Panadol. A intoxicação por paracetamol resulta em hepatotoxicidade associada ao aumento das concentrações séricas de enzimas de vazamento hepatocelular, como aspartato aminotransferase, lactato desidrogenase e alanina aminotransferase, degeneração centrolobular e necrose e ativação de células de Kupffer (Trepicchio WL et al., 2001; 29 Pathol., Toxicol. 2): 242-9).

[00327] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são providas para uso em métodos para tratar/prevenir lesão renal, por exemplo, lesão renal aguda (AKI; insuficiência renal aguda) ou uma doença/distúrbio associado a lesão renal. A lesão renal pode ser caracterizada por danos às células epiteliais tubulares (TECs) e/ou a transição de TECs para um fenótipo semelhante a células epiteliais a mesenquimais (isto é, EMT). A transição de TECs para um fenótipo semelhante a uma célula mesenquimal pode ser caracterizada, por exemplo, por expressão reduzida de E-caderina, expressão aumentada de SNAIL e/ou expressão aumentada de ACTA2. A lesão renal pode ter qualquer causa, os exemplos incluem lesão renal resultante de lesão ou dano mecânico (ou seja, físico), dano químico ou lesão, isquemia ou predisposição genética. A causa ou dano normalmente resultará em insuficiência renal, que pode levar à insuficiência renal. Danos ou lesões mecânicas podem incluir lesão física ao indivíduo, ao rim, aos TECs ou aos podócitos. Também pode incluir obstrução/bloqueio tubular, por exemplo, do trato urinário. Em algumas modalidades, a lesão renal é lesão renal induzida por drogas ou lesão renal aguda induzida por drogas.

[00328] O dano isquêmico pode surgir de uma diminuição no fluxo sanguíneo para o rim, que pode ser causado por uma série de fatores, como pressão arterial baixa, por exemplo, devido a sepse, perda de sangue ou cirurgia, ou o efeito de um agente químico, por exemplo, um medicamento ou droga, administrado ao indivíduo para tratar outra doença, distúrbio ou condição. Lesão renal causada por isquemia pode ser lesão renal induzida por isquemia ou lesão renal aguda induzida por isquemia. Lesão renal causada por lesão por esmagamento pode ser lesão renal induzida por isquemia com vasoconstrição ou pode ser causada por fatores mecânicos de molde tubular ou efeitos tóxicos de fatores circulantes, por exemplo, mioglobina.

[00329] Em algumas modalidades, a lesão renal, que pode ser AKI, é caracterizada por danos, que podem em alguns casos incluir ou levar à morte de células epiteliais tubulares (TECs) do rim, ou seja, células epiteliais tubulares renais. Os TECs podem ser proximais ou distais, podendo ambos estar danificados na IRA, assim como os podócitos no glomérulo renal. Danos aos TECs também podem ser qualquer tipo de dano, lesão ou insulto, por exemplo, conforme descrito acima, pode ser dano mecânico, químico ou isquêmico. Danos aos TECs são um fator causal comum de lesão renal, particularmente IRA. A proliferação de TECs fornece um mecanismo para recuperação e restauração da função renal, enquanto a falha de proliferação de TECs pode levar ao desenvolvimento e progressão da doença, por exemplo, doença renal crônica e insuficiência renal. A proliferação de precursores de podócitos para restaurar a função do glomérulo também pode ocorrer, mas não é tão bem descrita como a proliferação de TEC. Danos mecânicos podem incluir, por exemplo, obstrução ureteral unilateral (UUO).

[00330] Em algumas modalidades, a lesão renal é nefrotoxicidade, referindo-se à toxicidade dos rins. A nefrotoxicidade pode surgir como resultado de efeitos tóxicos de certas substâncias na função renal e, portanto, pode ser vista como uma consequência de danos químicos ou lesões. Tal como acontece com o dano químico ou lesão, a nefrotoxicidade pode ser um efeito colateral da administração de um agente para tratar uma doença ou condição que não ocorre no rim, ou que ocorre tanto no rim quanto em um ou mais outros tecidos. Em algumas modalidades, a nefrotoxicidade pode ser um efeito colateral da administração de um agente quimioterápico administrado ao indivíduo a fim de prevenir ou tratar o câncer. Como tal, a nefrotoxicidade pode ser uma forma de lesão renal induzida por drogas ou lesão renal aguda induzida por drogas. Em algumas modalidades, a lesão renal pode ser induzida por ácido fólico, ou seja, a lesão renal induzida por folato.

[00331] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno são fornecidas para uso no diagnóstico, tratamento e/ou profilaxia de lesão renal induzida por cisplatina. Isso pode incluir lesão renal aguda induzida por cisplatina ou nefrotoxicidade induzida por cisplatina. Cisplatina (diclorodiamino platina; SP-4-2) -diamminodicloroplatina (II)) é um agente quimioterápico amplamente utilizado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo câncer de cabeça e pescoço, mama, pulmão, testículo, ovário, cérebro e bexiga e é amplamente conhecido por causar lesão renal e disfunção envolvendo dano tubular e necrose (por exemplo, Oh et al., Electrolyte Blood Press 2014 dez; 12 (2):55-65; PA Arunkumar et al., Asiático Pac J Trop Biomed 2012 agosto 2 (8):640-644). Outros agentes quimioterápicos à base de platina também causam danos aos rins.

[00332] É reconhecido que um indivíduo com lesão renal também pode apresentar fibrose do rim, seja como uma condição de doença com uma etiologia separável ou como um efeito secundário da lesão renal. Em algumas modalidades, a lesão renal sendo diagnosticada, tratada ou evitada não é fibrose do rim, por exemplo, fibrose renal. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem fibrose. Em algumas modalidades, o dano ao TEC ocorre na ausência de fibrose. Em algumas modalidades, a fibrose surge separadamente (por exemplo, secundariamente a) AKI, por exemplo, devido à regeneração incompleta de TECs. Em algumas modalidades, os TECs danificados no indivíduo não são TECs pró-

fibróticos. Em algumas modalidades, a fibrose não surge.

[00333] Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção são providas para uso em métodos para tratar/prevenir uma doença/um distúrbio associado à infecção, particularmente onde a infecção leva direta ou indiretamente à fibrose, câncer ou inflamação. Uma doença associada à infecção pode ser uma doença que é causada ou exacerbada pela infecção com o agente infeccioso relevante, ou pode ser uma doença para a qual a infecção com o agente infeccioso relevante é um fator de risco.

[00334] Uma infecção pode ser qualquer infecção ou doença infecciosa, por exemplo, infecção bacteriana, viral, fúngica ou parasitária. Em modalidades particulares, a doença/o distúrbio pode ser associado a uma infecção viral. Em algumas modalidades, pode ser particularmente desejável tratar infecções crônicas/persistentes, por exemplo, quando tais infecções são associadas com inflamação, câncer e/ou fibrose.

[00335] A infecção pode ser crônica, persistente, latente ou lenta, e pode ser o resultado de infecção bacteriana, viral, fúngica ou parasitária. Como tal, o tratamento pode ser provido aos pacientes que têm uma infecção bacteriana, viral ou fúngica. Exemplos de infecções bacterianas incluem infecção por Helicobacter pylori e infecção por Mycobacterium tuberculosis do pulmão. Exemplos de infecções virais incluem infecção por EBV, HPV, HIV, hepatite B ou hepatite C.

[00336] O tratamento pode envolver a melhoria, tratamento ou prevenção de qualquer doença/distúrbio/condição associada à sinalização de IL-11, e/ou descrito neste documento, inibindo a atividade biológica de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα. O tratamento pode envolver a reversão ou regressão da doença/distúrbio por meio da inibição da atividade biológica de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα. Tais métodos podem incluir a administração dos anticorpos/fragmentos/composições de acordo com a presente invenção para se ligar e inibir a atividade biológica de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα. Neste documento, a inibição da atividade biológica de IL-11Rα ou de um complexo que compreende IL-11Rα pode ser referida como "neutralizante".

[00337] Os métodos de tratamento podem incluir, opcionalmente, a coadministração de adjuvantes biológicos (por exemplo, interleucinas, citocinas, Bacillus Comette-Guerin, monofosforil lipídico A, etc.) em combinação com terapias convencionais para o tratamento de câncer, tais como tratamento com um agente para tratamento de câncer (por exemplo, quimioterapia), radioterapia ou cirurgia. Os métodos de tratamento médico podem envolver também imunoterapias in vivo, ex vivo e adotivas, incluindo aquelas que utilizam células autólogas e/ou heterólogas ou linhagens celulares imortalizadas.

[00338] O tratamento pode ser destinado à prevenção de uma doença/distúrbio associada à sinalização mediada por IL-11 hiperativa/elevada. Como tal, os anticorpos, fragmentos de ligação do antígeno e polipeptídeos podem ser usados para formular composições farmacêuticas ou medicamentos e os indivíduos podem ser tratados profilaticamente contra o desenvolvimento de um estado de doença. Isso pode ocorrer antes do início dos sintomas do estado da doença, e/ou pode ser administrado a indivíduos considerados com maior risco de doença ou distúrbios.

[00339] A administração dos agentes de acordo com a presente divulgação é preferencialmente em uma quantidade "terapeuticamente eficaz" ou "profilaticamente eficaz", sendo isso suficiente para mostrar benefício ao indivíduo. A quantidade real administrada e a taxa e o tempo de administração dependerão da natureza e gravidade da doença/condição e da natureza do agente. A prescrição de tratamento, por exemplo, decisões sobre dosagem, etc., estão dentro da responsabilidade dos clínicos gerais e outros médicos e, normalmente, leva em consideração a doença/condição a ser tratada, a condição do indivíduo individualmente, o local de entrega, o método de administração e outros fatores conhecido pelos praticantes. Exemplos das técnicas e protocolos mencionados acima podem ser encontrados em Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20ª Edição, 2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins.

[00340] As moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs, ácidos nucleicos, vetores de expressão, células e composições aqui descritos são preferencialmente formulados como um medicamento ou produto farmacêutico juntamente com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos pelos versados na técnica, incluindo, mas não limitado a, transportadores farmaceuticamente aceitáveis, adjuvantes, excipientes, diluentes, enchimentos, tampões, conservantes, antioxidantes, lubrificantes, estabilizantes, solubilizantes, surfactantes (por exemplo, agentes umectantes), agentes de mascaramento, agentes corantes, agentes aromatizantes e edulcorantes agentes. O termo "farmaceuticamente aceitável", tal como utilizado neste documento, se refere a compostos, ingredientes, materiais, composições, formas de dosagem, etc., que são, dentro do escopo do bom julgamento médico, adequados para uso em contato com os tecidos do indivíduo em questão (por exemplo, humano) sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, compatível com uma relação risco/benefício razoável. Cada veículo, adjuvante, excipiente, etc. também deve ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação. Transportadores, adjuvantes, excipientes, etc. adequados podem ser encontrados em textos farmacêuticos padrão, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª edição, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990; e Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2ª edição, 1994.

[00341] As formulações podem ser preparadas para administração conforme adequado para a doença/condição a ser tratada.

Por exemplo, as formulações podem ser formuladas para vias tópica, parenteral, sistêmica, intravenosa, intra-arterial, intramuscular, intratecal, intraocular, ocular local (por exemplo, subconjuntival, intravítrea, retrobulbar, intracameral), intra-conjuntival, subcutânea, oral ou transdérmica de administração, que pode incluir injeção. Os agentes da presente divulgação podem ser formulados na forma fluida ou sólida. Formulações fluidas podem ser formuladas para administração por injeção ou infusão em uma região selecionada do corpo humano ou animal. As formulações injetáveis podem compreender o agente selecionado em um meio estéril ou isotônico.

[00342] As formulações podem ser preparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Tais métodos incluem a etapa de associar o composto ativo a um transportador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas associando uniformemente e intimamente o composto ativo com os veículos (por exemplo, veículos líquidos, veículos sólidos finamente divididos, etc.) e, em seguida, moldando o produto, se necessário.

[00343] De acordo com a presente invenção, métodos também são providos para a produção de composições farmaceuticamente úteis, tais métodos de produção podem compreender uma ou mais etapas selecionadas dentre: isolar um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, conforme descrito neste documento; e/ou misturar um anticorpo isolado ou fragmento de ligação ao antígeno, conforme descrito neste documento, com um veículo, adjuvante, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável. Por exemplo, um aspecto adicional da presente invenção diz respeito a um método para formular ou produzir um medicamento ou composição farmacêutica para uso em um método de tratamento médico, o método compreendendo formular uma composição farmacêutica ou medicamento ao misturar um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, conforme descrito neste documento, com um veículo,

adjuvante, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[00344] Múltiplas doses da molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade dos mesmos), vetor de expressão (ou pluralidade dos mesmos), célula ou composição podem ser fornecidas. Uma ou mais, ou cada uma, das doses podem ser acompanhadas por administração simultânea ou sequencial de outro agente terapêutico.

[00345] Múltiplas doses podem ser separadas por um intervalo de tempo predeterminado, que pode ser selecionado para ser um dentre 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ou 31 dias, ou 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 meses. A título de exemplo, doses podem ser fornecidas uma vez a cada 7, 14, 21 ou 28 dias (mais ou menos 3, 2 ou 1 dia).

[00346] As moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs, ácidos nucleicos, vetores de expressão, células e composições aqui descritos podem ser administrados isoladamente ou em combinação com outra intervenção terapêutica ou profilática. Essa outra intervenção terapêutica ou profilática pode ocorrer antes, durante e/ou após as terapias abrangidas pela divulgação e as entregas das outras intervenções terapêuticas ou profiláticas podem ocorrer através das mesmas ou diferentes vias de administração que as terapias da divulgação.

[00347] Em algumas modalidades, a administração das moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs, ácidos nucleicos, vetores de expressão, células e composições aqui descritos pode ser acompanhada por um agente para tratar ou prevenir infecção (por exemplo, um antibiótico, antiviral, antifúngico ou agente antiparasitário). Em alguns modalidades, o tratamento com um anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno ou composição da presente invenção podem ser acompanhados por um agente para tratar ou impedir a inflamação (por exemplo um fármaco anti-inflamatório não esteroide (NSAID). Em algumas modalidades,

o tratamento com um anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno ou a composição da presente invenção podem ser acompanhados por radioterapia (ou seja, tratamento com radiação ionizante, por exemplo, raios-X ou raios-γ) e/ou um agente para tratar ou impedir o câncer (por exemplo um agente quimioterapêutico). Em algumas modalidades, o agente quimioterápico é um agente alquilante, por exemplo, cisplatina. Em algumas modalidades, os anticorpos, fragmentos de ligação ao antígeno e composições da presente invenção podem ser administrados como parte de um tratamento de combinação com uma imunoterapia.

[00348] A administração simultânea se refere à administração dos agentes em conjunto, por exemplo, como uma composição farmacêutica contendo os agentes (isto é, uma preparação combinada), ou imediatamente após o outro e, opcionalmente, pela mesma via de administração, por exemplo, para a mesma artéria, veia ou outro vaso sanguíneo. Em certas modalidades, mediante administração simultânea, os dois ou mais dos agentes podem ser administrados por meio de diferentes vias de administração. Em algumas modalidades, a administração simultânea se refere à administração ao mesmo tempo, ou dentro de, por exemplo, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas ou 48 horas.

[00349] A administração sequencial se refere à administração de um ou mais dos agentes seguida após um determinado intervalo de tempo por administração separada de outro dos agentes. Não é necessário que os dois agentes sejam administrados pela mesma via, embora este seja o caso em algumas modalidades. O intervalo de tempo pode ser qualquer intervalo de tempo, incluindo horas, dias, semanas, meses ou anos. Em algumas modalidades, a administração sequencial se refere a administrações separadas por um intervalo de tempo de pelo menos 10 min, 30 min, 1 hr, 6 hrs, 8 hrs, 12 hrs, 24 hrs, 36 hrs, 48 hrs, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mês, 6 semanas, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses ou 6 meses. Métodos de detecção

[00350] A invenção também provê os artigos da presente invenção para uso em métodos de detecção, localização ou imagiologia de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα, ou células expressando/compreendendo IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα. As moléculas de ligação ao antígeno descritas neste documento podem ser usadas em métodos que envolvem a ligação da molécula de ligação ao antígeno a IL-11Rα ou complexo compreendendo IL-11Rα. Tais métodos podem envolver a detecção do complexo ligado da molécula de ligação ao antígeno e IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

[00351] A detecção de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα pode ser útil em métodos de diagnóstico/prognóstico de uma doença/condição em que a sinalização mediada por IL-11 e/ou células expressando/compreendendo IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα estão patologicamente implicados, identificando indivíduos em risco de desenvolver tais doenças/condições, e/ou podem ser úteis em métodos de prever a resposta de um indivíduo a uma intervenção terapêutica.

[00352] Como tal, um método é provido, compreendendo o contato de uma amostra contendo, ou suspeita de conter, IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα ou células expressando/compreendendo IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα com um molécula de ligação ao antígeno como descrito neste documento, e detectar a formação de um complexo da molécula de ligação ao antígeno e IL-11Rα/um complexo compreendendo IL-11Rα. Também é provido um método que compreende o contato de uma amostra contendo, ou suspeita de conter, uma célula que expressa/compreendendo IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα com uma molécula de ligação ao antígeno como descrito neste documento e detectando a formação de um complexo do molécula de ligação ao antígeno e uma célula que expressa/compreendendo IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα.

[00353] Formatos de método adequados são bem conhecidos na técnica, incluindo imunoensaios, tais como ensaios tipo sanduíche, por exemplo, ELISA. Os métodos podem envolver a marcação da molécula de ligação ao antígeno, ou alvo(s), ou ambos, com uma fração detectável, por exemplo, um marcador fluorescente, marcador fosforescente, marcador luminescente, marcador imunodetectável, marcador radioativo, químico, ácido nucleico ou marcador enzimático. A expressão de IL-11Rα pode ser medida por imuno-histoquímica (IHC), por exemplo, de uma amostra de tecido obtida por biópsia. Em algumas modalidades, a marcação pode ser selecionada a partir de:um radionucleotídeo, radionuclídeo emissor de pósitron (por exemplo, para tomografia por emissão de pósitrons (PET)), agente de contraste ou marcação fluorescente de MRI.

[00354] As técnicas de detecção são bem conhecidas dos versados na técnica e podem ser selecionadas para corresponder ao agente de marcação. A análise in vitro ou in vivo dos processos mediados por sinalização IL-11/IL-11R podem envolver a análise por tomografia por emissão de pósitrons (PET), geração de imagens por ressonância magnética (MRI) ou por geração de imagens por fluorescência, por exemplo, pela detecção de espécies rotuladas adequadamente.

[00355] Os métodos deste tipo podem prover a base de um método de diagnóstico de uma doença ou condição que requer a detecção e/ou quantificação de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα. Tais métodos podem ser realizados in vitro em uma amostra de indivíduo, ou após o processamento de uma amostra de indivíduo. Uma vez que a amostra é coletada, não é necessário que o indivíduo esteja presente para o método de diagnóstico in vitro ser realizado e, portanto, o método pode ser um que não é praticado no corpo humano ou animal. Em algumas modalidades, as moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs,

ácidos nucleicos, vetores de expressão, células ou composições de acordo com a presente divulgação são fornecidos para uso em qualquer método de diagnóstico, detecção ou quantificação descrito neste documento.

[00356] Tais métodos podem envolver a detecção ou quantificação de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα, ou células que expressam IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα, por exemplo, em uma amostra de paciente. Quando o método compreende quantificar o fator relevante, o método pode compreender ainda comparar a quantidade determinada contra um valor padrão ou de referência como parte da avaliação diagnóstica ou prognóstica. Outros testes de diagnóstico/prognóstico podem ser usados em conjunto com aqueles descritos aqui para melhorar a precisão do diagnóstico ou prognóstico, ou para confirmar um resultado obtido ao usar os testes descritos neste documento.

[00357] A detecção em uma amostra de IL-11Rα ou complexo compreendendo IL-11Rα pode ser usada para a finalidade do diagnóstico de uma doença infecciosa, distúrbio auto-imune ou de uma condição cancerosa no indivíduo, diagnóstico de uma predisposição a uma doença infecciosa, distúrbio auto-imune ou uma condição cancerígena ou para fornecer um prognóstico de uma doença infecciosa, distúrbio auto-imune ou uma condição cancerígena. O diagnóstico ou o prognóstico podem se relacionar a uma doença/distúrbio infeccioso, inflamatório ou auto-imune existente (diagnosticada previamente) ou a uma condição cancerígena.

[00358] Quando um nível aumentado de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα é detectado, ou onde a presença ou um número/proporção aumentado de - células expressando/compreendendo IL- 11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα é detectado em uma amostra obtido de um indivíduo, o indivíduo pode ser diagnosticado como tendo uma doença/condição, uma doença/condição de acordo com a presente divulgação, ou estando em risco de desenvolver tal doença/condição. Em tais métodos, um nível "aumentado" de expressão ou número/proporção de células se refere a um nível/número/proporção que é maior do que o nível/número/proporção determinado para uma condição de controle apropriada, como o nível/número/proporção detectado em uma amostra comparável (por exemplo, uma amostra do mesmo tipo, por exemplo, obtida do mesmo fluido, tecido, órgão etc.), por exemplo, obtida de um indivíduo saudável.

[00359] Quando um nível aumentado de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα é detectado, ou onde a presença ou um número/proporção aumentado de - células expressando/compreendendo IL- 11 ou um complexo compreendendo IL-11Rα é detectado em uma amostra obtido de um indivíduo, o indivíduo pode ser determinado como tendo um pior prognóstico em comparação com um indivíduo determinado como tendo um nível inferior de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα, ou um número/proporção reduzida de células expressando/compreendendo IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα em uma amostra comparável (por exemplo, uma amostra do mesmo tipo, por exemplo, obtida do mesmo fluido, tecido, órgão, etc.).

[00360] Assim, a presente invenção fornece métodos para selecionar/estratificar um indivíduo para tratamento com as moléculas de ligação ao antígeno, polipeptídeos, CARs, ácidos nucleicos, vetores de expressão, células ou composições de acordo com a presente invenção. Em algumas modalidades, um indivíduo é selecionado para tratamento/prevenção de acordo com a invenção, ou é identificado como um indivíduo que se beneficiaria de tal tratamento/prevenção, com base na detecção/quantificação de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα, ou células que expressam IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα, por exemplo, em uma amostra obtida do indivíduo. O nível de IL- 11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα presente em uma amostra de indivíduo pode ser indicativo de que um indivíduo pode responder ao tratamento com uma molécula de ligação ao antígeno ou composição de acordo com a presente invenção. A presença de um alto nível de IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα em uma amostra pode ser usada para selecionar um indivíduo para tratamento como aqui descrito. As moléculas de ligação ao antígeno da presente invenção podem, portanto, ser usadas para selecionar um indivíduo para tratamento com terapia direcionada a IL-11Rα.

[00361] Uma amostra pode ser tomada a partir de qualquer tecido ou fluido corporal. A amostra pode compreender ou pode ser derivada de: uma quantidade de sangue; a quantidade de soro derivado do sangue do indivíduo, que pode compreender a porção fluida do sangue obtido após a remoção do coágulo de fibrina e células sanguíneas; uma amostra de tecido ou biópsia; fluido pleural; fluido cérebro-espinhal ou células isoladas a partir de dito indivíduo. Em algumas modalidades, a amostra pode ser obtida ou derivada de um tecido ou tecidos que são afetados pela doença/distúrbio (por exemplo, tecido ou tecidos nos quais os sintomas da doença se manifestam, ou que estão envolvidos na patogênese da doença/distúrbio).

[00362] Os métodos de diagnóstico ou prognóstico de acordo com a presente invenção podem ser realizados in vitro em uma amostra obtida de um indivíduo, ou após o processamento de uma amostra obtida de um indivíduo. Uma vez que a amostra é coletada, não é necessário que o paciente esteja presente para o método de diagnóstico ou prognóstico in vitro ser realizado e, portanto, o método pode ser um que não é praticado no corpo humano ou animal. O termo "in vitro" se destina a abranger experimentos com células em cultura, considerando que o termo "in vivo" se destina a abranger experimentos com e/ou tratamento de organismos multicelulares intactos.

[00363] Os métodos de diagnóstico e prognóstico da presente invenção podem ser realizados em amostras obtidas de um indivíduo em vários pontos de tempo ao longo do curso da doença e/ou tratamento e podem ser usados para monitorar o desenvolvimento da doença/condição ao longo do tempo, por exemplo, em resposta ao tratamento administrado ao indivíduo. Os resultados da caracterização de acordo com os métodos podem ser usados para informar as decisões clínicas sobre quando e qual tipo de terapia administrar a um indivíduo. Indivíduos

[00364] O indivíduo de acordo com os aspectos da invenção descritos neste documento pode ser qualquer animal ou humano. O indivíduo é, preferencialmente, mamífero, mais preferencialmente humano. O indivíduo pode ser um mamífero não humano, mas é mais preferencialmente humano. O indivíduo pode ser masculino ou feminino. O indivíduo pode ser um paciente. Um indivíduo pode ter sido diagnosticado com uma doença ou condição que requer tratamento (por exemplo, um câncer), pode ser suspeito de ter tal doença/condição ou pode estar em risco de desenvolver/contrair tal doença/condição.

[00365] O indivíduo/paciente pode ter uma doença/distúrbio que derivaria benefício terapêutico ou profilático de uma redução no nível de (isto é, inibição ou antagonismo de) sinalização mediada por IL-11, ou uma redução no número e/ou atividade de células que expressam IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα. O indivíduo/paciente pode ter uma doença/condição conforme descrito neste documento. O indivíduo/paciente pode ter sido diagnosticado com uma doença/distúrbio conforme descrito neste documento, exigindo tratamento, pode ser suspeito de ter tal doença/distúrbio, ou pode estar em risco de desenvolver tal doença/distúrbio.

[00366] Nas modalidades de acordo com a presente invenção, o indivíduo é preferencialmente um indivíduo humano. Em algumas modalidades, o indivíduo a ser tratado de acordo com um método terapêutico ou profilático da invenção deste documento é um indivíduo que tem, ou está em risco de desenvolver, um câncer. Em modalidades de acordo com a presente invenção, um indivíduo pode ser selecionado para tratamento de acordo com os métodos com base na caracterização de certos marcadores de tal doença/condição. Kits

[00367] Em alguns aspectos da presente invenção descritos neste documento um kit de partes é provido. Em algumas modalidades, o kit pode ter pelo menos um recipiente com uma quantidade predeterminada de uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade dos mesmos), vetor de expressão (ou pluralidade dos mesmos), célula ou composição descrita neste documento.

[00368] Em algumas modalidades, o kit pode compreender materiais para a produção de uma molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou sua pluralidade), vetor de expressão (ou sua pluralidade), célula ou composição descrita neste documento.

[00369] O kit pode fornecer a molécula de ligação ao antígeno, polipeptídeo, CAR, ácido nucleico (ou pluralidade dos mesmos), vetor de expressão (ou pluralidade dos mesmos), célula ou composição juntamente com instruções para administração a um paciente a fim de tratar uma doença/condição especificada.

[00370] Em algumas modalidades, o kit pode compreender, adicionalmente, pelo menos um recipiente com uma quantidade predeterminada de outro agente terapêutico (por exemplo, agente anti- infeccioso ou agente quimioterápico). Em tais modalidades, o kit também pode compreender um segundo medicamento ou composição farmacêutica de tal forma que os dois medicamentos ou composições farmacêuticas possam ser administrados simultânea ou separadamente, de modo que provejam um tratamento combinado para a doença ou condição específica. O agente terapêutico também pode ser formulado de modo a ser adequado para injeção ou infusão a um tumor ou ao sangue.

Identidade de Sequência

[00371] Tal como utilizado neste documento, "identidade de sequência" refere-se à porcentagem de nucleotídeos/resíduos de aminoácidos em uma sequência em questão que são idênticos aos nucleotídeos/resíduos de aminoácidos em uma sequência de referência, após alinhar as sequências e, se necessário, introduzir lacunas, para atingir a percentagem máxima de identidade de sequência entre as sequências. O alinhamento de sequências em pares e múltiplas para fins de determinação de identidade de sequência percentual entre dois ou mais aminoácidos ou sequências de ácido nucleico pode ser alcançado de várias maneiras conhecidas por um versado na técnica, por exemplo, usando software de computador disponível publicamente, como ClustalOmega (Soding, J. 2005, Bioinformatics 21,951-960), T-coffee (Notredame et al. 2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205217), Kalign (Lassmann e Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6 (298)) e MAFFT (Katoh e WO 2019/238884 PCT/EP2019/065600

[00372] Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, software 30 (4) 772-780. Ao usar tal software, os parâmetros padrão, por exemplo, para penalidade de lacunas e penalidade de extensão, são preferencialmente usados. Sequências SEQ ID NO: DESCRIÇÃO SEQUÊNCIA

MNCVCRLVLVVLSLWPDTAVAPGPPPGPPRVSPDPRAELDSTVLLTR

SLLADTRQLAAQLRDKFPADGDHNLDSLPTLAMSAGALGALQLPGVL IL-11 Humana 1 TRLRADLLSYLRHVQWLRRAGGSSLKTLEPELGTLQARLDRLLRRLQ (UniProt:P20809)

LLMSRLALPQPPPDPPAPPLAPPSSAWGGIRAAHAILGGLHLTLDWAV RGLLLLKTRL MLTLQTWLVQALFIFLTTESTGELLDPCGYISPESPVVQLHSNFTAVCV

LKEKCMDYFHVNANYIVWKTNHFTIPKEQYTIINRTASSVTFTDIASLNI gp130 Humana QLTCNILTFGQLEQNVYGITIISGLPPEKPKNLSCIVNEGKKMRCEWDG 2 (UniProt P40189- GRETHLETNFTLKSEWATHKFADCKAKRDTPTSCTVDYSTVYFVNIEV 1) WVEAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNLSVINSEELSSILKLTW

TNPSIKSVIILKYNIQYRTKDASTWSQIPPEDTASTRSSFTVQDLKPFTE YVFRIRCMKEDGKGYWSDWSEEASGITYEDRPSKAPSFWYKIDPSHT QGYRTVQLVWKTLPPFEANGKILDYEVTLTRWKSHLQNYTVNATKLT VNLTNDRYLATLTVRNLVGKSDAAVLTIPACDFQATHPVMDLKAFPKD NMLWVEWTTPRESVKKYILEWCVLSDKAPCITDWQQEDGTVHRTYL RGNLAESKCYLITVTPVYADGPGSPESIKAYLKQAPPSKGPTVRTKKV GKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTIIGNETAVNVDSSHTEYTL SSLTSDTLYMVRMAAYTDEGGKDGPEFTFTTPKFAQGEIEAIVVPVCL AFLLTTLLGVLFCFNKRDLIKKHIWPNVPDPSKSHIAQWSPHTPPRHN FNSKDQMYSDGNFTDVSVVEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEG HSSGIGGSSCMSSSRPSISSSDENESSQNTSSTVQYSTVVHSGYRHQ VPSVQVFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQYFKQ NCSQHESSPDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQ MKMFQEVSAADAFGPGTEGQVERFETVGMEAATDEGMPKSYLPQT VRQGGYMPQ MSSSCSGLSRVLVAVATALVSASSPCPQAWGPPGVQYGQPGRSVKL CCPGVTAGDPVSWFRDGEPKLLQGPDSGLGHELVLAQADSTDEGTY ICQTLDGALGGTVTLQLGYPPARPVVSCQAADYENFSCTWSPSQISG

LPTRYLTSYRKKTVLGADSQRRSPSTGPWPCPQDPLGAARCVVHGA IL-11RA Humana

EFWSQYRINVTEVNPLGASTRLLDVSLQSILRPDPPQGLRVESVPGYP 3 (isoforma HCR1,

RRLRASWTYPASWPCQPHFLLKFRLQYRPAQHPAWSTVEPAGLEEV UniProt Q14626-1)

ITDAVAGLPHAVRVSARDFLDAGTWSTWSPEAWGTPSTGTIPKEIPA WGQLHTQPEVEPQVDSPAPPRPSLQPHPRLLDHRDSVEQVAVLASL GILSFLGLVAGALALGLWLRLRRGGKDGSPKPGFLASVIPVDRRPGAP NL MSSSCSGLSRVLVAVATALVSASSPCPQAWGPPGVQYGQPGRSVKL CCPGVTAGDPVSWF RDGEPKLLQGPDSGLGHELVLAQADSTDEGTYICQTLDGALGGTVTL QLGYPPARPVVSC

QAADYENFSCTWSPSQISGLPTRYLTSYRKKTVLGADSQRRSPSTGP IL-11RA Humana WPCPQDPLGAARC 4 (isoforma HCR2, VVHGAEFWSQYRINVTEVNPLGASTRLLDVSLQSILRPDPPQGLRVES UniProt Q14626-2) VPGYPRRLRASW

TYPASWPCQPHFLLKFRLQYRPAQHPAWSTVEPAGLEEVITDAVAGL PHAVRVSARDFLD AGTWSTWSPEAWGTPSTGTIPKEIPAWGQLHTQPEVEPQVDSPAPP RPSLQPHPRLLDHR DSVEQVAVLASLGILSFLGLVAGALALGLW MGWSCIILFLVATATGVHSPQAWGPPGVQYGQPGRSVKLCCPGVTA GDPVSWFRDGEPKLLQGPDSGLGHELVLAQADSTDEGTYICQTLDG

ALGGTVTLQLGYPPARPVVSCQAADYENFSCTWSPSQISGLPTRYLT proteína de fusão SYRKKTVLGADSQRRSPSTGPWPCPQDPLGAARCVVHGAEFWSQY 5 de IL-11:IL-11Rα RINVTEVNPLGASTRLLDVSLQSILRPDPPQGLRVESVPGYPRRLRAS

WTYPASWPCQPHFLLKFRLQYRPAQHPAWSTVEPAGLEEVITDAVA GLPHAVRVSARDFLDAGTWSTWSPEAWGTPSTGGPAGQSGGGGG SGGGSGGGSVPGPPPGPPRVSPDPRAELDSTVLLTRSLLADTRQLA AQLRDKFPADGDHNLDSLPTLAMSAGALGALQLPGVLTRLRADLLSY LRHVQWLRRAGGSSLKTLEPELGTLQARLDRLLRRLQLLMSRLALPQ PPPDPPAPPLAPPSSAWGGIRAAHAILGGLHLTLDWAVRGLLLLKTRL HHHHHH GAATTCCCGCCGCCACCATGGGCTGGTCCTGCATCATCCTGTTTC TGGTGGCCACAGCCACCGGCGTGCACTCTCCACAGGCTTGGGGA CCTCCAGGCGTGCAGTATGGCCAGCCTGGCAGATCCGTGAAGCT GTGCTGTCCTGGCGTGACAGCTGGCGACCCTGTGTCCTGGTTCAG AGATGGCGAGCCCAAGCTGCTGCAGGGCCCAGATTCTGGACTGG GCCACGAACTGGTGCTGGCCCAGGCCGATTCTACCGACGAGGGC ACCTACATCTGCCAGACCCTGGATGGCGCCCTGGGCGGAACAGT GACACTGCAGCTGGGCTACCCTCCCGCCAGACCTGTGGTGTCTTG TCAGGCCGCCGACTACGAGAACTTCAGCTGCACATGGTCCCCCAG CCAGATCAGCGGCCTGCCCACCAGATACCTGACCAGCTACCGGAA GAAAACCGTGCTGGGCGCCGACAGCCAGAGAAGAAGCCCTTCTA CAGGCCCCTGGCCCTGCCCTCAGGATCCTCTGGGAGCTGCCAGA TGTGTGGTGCACGGCGCCGAGTTCTGGTCCCAGTACCGGATCAAC GTGACCGAAGTGAACCCCCTGGGCGCCTCCACAAGACTGCTGGA TGTGTCCCTGCAGAGCATCCTGCGGCCCGATCCTCCACAGGGCCT

GAGAGTGGAAAGCGTGCCCGGCTACCCCAGAAGGCTGAGAGCCA Codificação de

GCTGGACATACCCCGCCTCTTGGCCTTGCCAGCCCCACTTCCTGC sequência de

TGAAGTTTCGGCTGCAGTACCGGCCAGCCCAGCACCCTGCTTGGA 6 nucleotídeos de

GCACAGTGGAACCTGCCGGCCTGGAAGAAGTGATCACAGACGCC proteína de fusão

GTGGCCGGACTGCCTCATGCTGTGCGGGTGTCCGCCAGAGACTT de IL-11:IL-11Rα

TCTGGATGCCGGCACCTGGTCTACCTGGTCCCCAGAAGCCTGGG GCACACCTTCTACTGGCGGACCTGCTGGACAGTCTGGCGGAGGC GGAGGAAGTGGCGGAGGATCAGGGGGAGGATCTGTGCCTGGACC TCCTCCAGGACCCCCTAGAGTGTCCCCAGATCCTAGGGCCGAGCT GGACTCTACCGTGCTGCTGACCAGATCCCTGCTGGCCGACACAAG GCAGCTGGCTGCCCAGCTGAGAGACAAGTTCCCCGCCGACGGCG ACCACAACCTGGATAGCCTGCCTACCCTGGCCATGTCTGCTGGCG CACTGGGGGCTCTGCAGCTGCCTGGGGTGCTGACTAGACTGAGA GCCGACCTGCTGAGCTACCTGCGGCATGTGCAGTGGCTGAGAAG GGCTGGCGGCAGCAGCCTGAAAACCCTGGAACCTGAGCTGGGCA CACTGCAGGCCAGACTGGACAGACTGCTGCGCAGACTGCAGCTG CTGATGAGCAGACTGGCTCTGCCCCAGCCTCCTCCTGACCCTCCT GCTCCTCCACTGGCTCCTCCAAGCTCTGCTTGGGGCGGAATTAGA GCCGCCCACGCCATTCTGGGAGGCCTGCACCTGACACTGGATTG GGCAGTGCGGGGCCTGCTGCTGCTGAAAACCAGACTGCACCACC ACCATCACCACTGATAAGCTT

QVQLQQPGAELVRPGSSVKLSCKASGYTFTNYWMHWLKQRPVQGL 7 9A7 VH EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSA

VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSA 8 9A7 VH 1 QVQLVQSGAELKKPGASVKLSCKASGYTFTNYWMHWLKQRPGQGL

EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRATLTVDKSTSTAYMQLNSLTSEDSA VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSS

QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTNYWMHWLKQRPGQGL 9 9A7 VH 2 EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAV

YYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSS

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWLRQRPGQGL 10 9A7 VH 3 EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAV

YYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSS

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWLRQRPGQGL 11 9A7 VH 4 EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRVTMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSS

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGL 12 9A7 VH 5 EWIGNIGPSDSKTHYNQKFQDRVTMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSS

DIVLTQSPATLSMTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPRLLI 13 9A7 VL KYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSFNSVETEDFGVYFCQQSYSWP

LTFGAGTKLELK

DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISNNLHWYQQKSHEAPRLLI 14 9A7 VL 1 KYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLSFSSLETEDFAVYFCQQSYSWPL

TFGQGTKLEIK

DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISNNLHWYQQKSGQAPRLLI 15 9A7 VL 2 KYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLETEDFAVYFCQQSYSWPL

TFGQGTKLEIK

DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISNNLHWYQQKPGQAPRLLI 16 9A7 VL 3 KYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFCQQSYSWPL

TFGQGTKLEIK

DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISNNLHWYQQKPGQAPRLLI 17 9A7 VL 4 KYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSYSWPL

TFGQGTKLEIK 9A7 VH, 9A7 VH 1, 9A7 VH 2, 18 9A7 VH 3, NYWMH 9A7 VH 4, 9A7 VH 5 HC-CDR1 9A7 VH, 9A7 VH 1, 9A7 VH 2, 19 NIGPSDSKTHYNQKFKD 9A7 VH 3, 9A7 VH 4 HC-CDR2 20 9A7 VH 5 NIGPSDSKTHYNQKFQD

HC-CDR2 9A7 VH, 9A7 VH 1, 9A7 VH 2, 21 9A7 VH 3, GDYVLFTY 9A7 VH 4, 9A7 VH 5 HC-CDR3 9A7 VL, 9A7 VL 1, 9A7 VL 2, 22 RASQSISNNLH 9A7 VL 3, 9A7 VL 4 LC-CDR1 9A7 VL, 9A7 VL 1, 9A7 VL 2, 23 YASQSIS 9A7 VL 3, 9A7 VL 4 LC-CDR2 9A7 VL, 9A7 VL 1, 9A7 VL 2, 24 QQSYSWPLT 9A7 VL 3, 9A7 VL 4 LC-CDR3 9A7 VH 25 QVQLQQPGAELVRPGSSVKLSCKASGYTFT HC-FR1 9A7 VH 1 26 QVQLVQSGAELKKPGASVKLSCKASGYTFT HC-FR1 9A7 VH 2 27 QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFT HC-FR1 9A7 VH 3, 9A7 VH 4, 28 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT 9A7 VH 5 HC-FR1 9A7 VH 29 WLKQRPVQGLEWIG HC-FR2 9A7 VH 1, 30 9A7 VH 2 WLKQRPGQGLEWIG HC-FR2 9A7 VH 3, 31 WLRQRPGQGLEWIG 9A7 VH 4

HC-FR2 9A7 VH 5 32 WVRQAPGQGLEWIG HC-FR2 9A7 VH 33 KATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCAR HC-FR3 9A7 VH 1 34 RATLTVDKSTSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCAR HC-FR3 9A7 VH 2, 35 9A7 VH 3 RATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR HC-FR3 9A7 VH 4, 36 9A7 VH 5 RVTMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR HC-FR3 9A7 VH 37 WGQGTLVTVSA HC-FR4 9A7 VH 1, 9A7 VH 2, 9A7 VH 3, 38 WGQGTLVTVSS 9A7 VH 4, 9A7 VH 5 HC-FR4 9A7 VL 39 DIVLTQSPATLSMTPGDSVSLSC LC-FR1 9A7 VL 1, 9A7 VL 2, 40 9A7 VL 3, DIVLTQSPATLSLSPGERATLSC 9A7 VL 4 LC-FR1 9A7 VL 41 WYQQKSHESPRLLIK LC-FR2 9A7 VL 1 42 WYQQKSHEAPRLLIK LC-FR2 9A7 VL 2 43 WYQQKSGQAPRLLIK LC-FR2 9A7 VL 3, 44 9A7 VL 4 WYQQKPGQAPRLLIK LC-FR2 9A7 VL 45 GIPSRFSGSGSGTDFTLSFNSVETEDFGVYFC LC-FR3 9A7 VL 1 46 GIPARFSGSGSGTDFTLSFSSLETEDFAVYFC LC-FR3 9A7 VL 2 47 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLETEDFAVYFC LC-FR3

9A7 VL 3 48 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC LC-FR3 9A7 VL 4 49 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC LC-FR3 9A7 VL 50 FGAGTKLELK LC-FR4 9A7 VL 1, 9A7 VL 2, 51 9A7 VL 3, FGQGTKLEIK 9A7 VL 4 LC-FR4 9A7 VH NIGPSDSKTHYNQKFX1D 52 HC-CDR2 X1 = K or Q consensus

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT

SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD Região constante

KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT de IgG1 Humana 53 CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVL (IGHG1; UniProt:

TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS P01857-1, v1)

RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD

GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CH1 IgG1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT 54 (posições 1-98 de SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD P01857-1, v1) KKV Dobradiça IgG1 55 (posições 99-110 EPKSCDKTHTCP de P01857-1, v1) CH2 IgG1 PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF 56 (posições 111-223 NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC de P01857-1, v1) KVSNKALPAPIEKTISKAK CH3 IgG1 GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP 57 (posições 224-330 ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH de P01857-1, v1) NHYTQKSLSLSPGK Cκ CL (IGCK; RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL 58 UniProt: P01834- QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL 1, v2) SSPVTKSFNRGEC

DIVLTQSPATLSMTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPRLLI 59 9A7O VL KYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSFNSVETEDFGVYFCQQRYSWP

LTFGAGTKLEMK 9A7O VL LC- 60 QQRYSWPLT CDR3 Região constante ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT 61 de IgG4 Humana SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV

(IGHG4; UniProt: DKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV P01861, v1) VVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTV

LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQ EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK CH1 IgG4 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT 62 (posições 1-98 de SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV P01861, v1) DKRV Dobradiça IgG4 63 (posições 99-110 ESKYGPPCPSCP de P01861, v1) CH2 IgG4 APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNW 64 (posições 111-220 YVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV de P01861, v1) SNKGLPSSIEKTISKAK

GQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ CH3 IgG4

PENNYKTTPPVLDS 65 (posições 221-327

DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG de P01861, v1)

K

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT Região constante SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV de IgG4 Humana DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV 66 (IGHG4; UniProt: VVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTV P01861, v1; LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQ S241P) EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG

SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Dobradiça IgG4 (posições 99-110 67 ESKYGPPCPPCP de P01861, v1; S241P)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT Região constante SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV de IgG4 Humana DKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC 68 (IGHG4; UniProt: VVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT P01861, v1; VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS S241P e L248E) QEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD

GSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK CH2 IgG4

APEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNW (posições 111-220 69 YVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV de P01861, v1;

SNKGLPSSIEKTISKAK L248E) 9A7 VH4 – região QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWLRQRPGQGL 70 constante de IgG1 EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRVTMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTA Humana (IGHG1; VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGT

UniProt: P01857- AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV 1, v1) TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE

LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWLRQRPGQGL EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRVTMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST 9A7 VH4 - região

AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV constante de IgG4

TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLG 71 Humana (IGHG4;

GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE UniProt: P01861,

VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP v1)

SSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWLRQRPGQGL EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRVTMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST 9A7 VH4 - região

AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV constante de IgG4

TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG 72 Humana (IGHG4;

GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE UniProt: P01861,

VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP v1; S241P)

SSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWLRQRPGQGL

EWIGNIGPSDSKTHYNQKFKDRVTMTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTA 9A7 VH4 – região VYYCARGDYVLFTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST constante de IgG4 AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV Humana (IGHG4; TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEG 73 UniProt: P01861, GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE v1; S241P e VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP L248E) SSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI

AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF

SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 9A7 VL4 - VL-Cκ DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISNNLHWYQQKPGQAPRLLI

CL KYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSYSWPL 74 (IGCK; UniProt: TFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA P01834-1, v2) KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHK

VYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 75 CL CL (IGLC1; GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGS

UniProt: P0CG04, PVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEG v1) STVEKTVAPTECS CL CL (IGLC2; GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP 76 UniProt: P0DOY2, VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGS v1) TVEKTVAPTECS CL CL (IGLC3; GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP 77 UniProt: P0DOY3, VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGS v1) TVEKTVAPTECS CL CL (IGLC6; GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVKVAWKADGS 78 UniProt: P0CF74, PVNTGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEG v1) STVEKTVAPAECS CL CL (IGLC7; GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFNPGAVTVAWKADGS 79 UniProt: A0M8Q6, PVKVGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEG v3) STVEKTVAPAECS Parágrafos numerados (paras) relacionados a aspectos e modalidades da invenção:

1. Uma molécula de ligação ao antígeno ou anticorpo, opcionalmente isolado, capaz de ligação a IL-11, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ligação ao antígeno ou anticorpo compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 C-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24.

2. A molécula de ligação ao antígeno de acordo com o parágrafo 1, em que a molécula de ligação ao antígeno compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19

HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24.

3. A molécula de ligação ao antígeno de acordo com o parágrafo 1, em que a molécula de ligação ao antígeno compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:20 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando os seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:24

4. A molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 3, em que a molécula de ligação ao antígeno compreende: uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:7, 8, 9, 10, 11 ou 12; e uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13, 14, 15, 16 ou 17.

5. A molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 4, em que a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a sinalização mediada por IL-11.

6. Uma molécula de ligação ao antígeno, opcionalmente isolada, compreendendo (i) uma molécula de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer um dos parágrafos de 1 a 5, e (ii) uma molécula de ligação ao antígeno capaz de se ligar a um antígeno diferente de IL-11Rα.

7. A molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 6, em que a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a interação entre IL-11RΑ ou um complexo compreendendo IL-11Rα e um parceiro de interação para IL-11Rα ou o complexo compreendendo IL- 11Rα.

8. O receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer um dos parágrafos de 1 a 7.

9. Um ácido nucleico, ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, opcionalmente isolado, que codifica uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 7 ou um CAR de acordo com o parágrafo 8.

10. Um vetor de expressão, ou uma pluralidade de vetores de expressão, compreendendo um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos de acordo com o parágrafo 9.

11. Uma célula compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer um dos parágrafos de 1 a 7, um CAR conforme o parágrafo 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme o parágrafo 9, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, conforme o parágrafo 10.

12. Um método compreendendo a cultura de uma célula que compreende um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos de acordo com o parágrafo 9, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão de acordo com o parágrafo 10, sob condições adequadas para a expressão da molécula de ligação ao antígeno ou CAR de o(s) ácido(s) nucleico(s) ou vetor(es) de expressão.

13. Uma composição compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer um dos parágrafos de 1 a 7, um CAR, conforme o parágrafo 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme o parágrafo 9, um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, conforme o parágrafo 10, ou uma célula, conforme o parágrafo 11.

14. Uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer um dos parágrafos de 1 a 7, um CAR, conforme o parágrafo 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme o parágrafo 9, um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, conforme o parágrafo 10, uma célula, conforme o parágrafo 11, ou uma composição, conforme o parágrafo 13, para uso em um método de tratamento médico ou profilaxia.

15. Uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 7, um CAR de acordo com o parágrafo 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos de acordo com o parágrafo 9, um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão de acordo com o parágrafo 10, uma célula de acordo com o parágrafo 11, ou uma composição de acordo com o parágrafo 13, para uso em um método de tratamento ou prevenção de fibrose, uma doença caracterizada por fibrose, um câncer, inflamação ou uma doença caracterizada por inflamação.

16. Uso de uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 7, um CAR de acordo com o parágrafo 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos de acordo com o parágrafo 9, um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão de acordo com o parágrafo 10, uma célula de acordo com o parágrafo 11, ou uma composição de acordo com o parágrafo 13, na fabricação de um medicamento para uso em um método de tratamento ou prevenção de fibrose, uma doença caracterizada por fibrose, um câncer,

inflamação ou uma doença caracterizada por inflamação.

18. Um método de tratamento ou prevenção de fibrose, uma doença caracterizada por fibrose, um câncer, inflamação ou uma doença caracterizada por inflamação, caracterizado pelo fato de que compreende a administração a um indivíduo de uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos paras 1 a 7, um CAR de acordo com o parágrafo 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos de acordo com o parágrafo 9, um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão de acordo com o parágrafo 10, uma célula de acordo com o parágrafo 11 ou uma composição de acordo com parágrafo 13.

19. Um método de inibição da sinalização mediada por IL-11 compreendendo o contato de células que expressam IL-11Rα com uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parasitas 1 a 7.

20. Um complexo in vitro, opcionalmente isolado, compreendendo uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 7 ligada a IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11Rα.

21. Um método compreendendo o contato de uma amostra contendo, ou suspeita de conter, IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα com uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 7, e a detecção da formação de um complexo do antígeno molécula de ligação com IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

22. Um método de seleção ou estratificação de um indivíduo para tratamento com um agente direcionado a IL-11Rα, o método compreendendo o contato, in vitro, de uma amostra do indivíduo com uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos paras 1 a 7 e detectar a formação de um complexo da molécula de ligação ao antígeno com IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

23. Uso de uma molécula de ligação ao antígeno de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 7 como um agente de prognóstico ou diagnóstico in vivo ou in vitro. ***

[00373] A invenção inclui combinar aspectos e características preferenciais descritas, exceto quando tal combinação é claramente inadmissível ou expressamente evitada.

[00374] Os títulos de seção utilizados neste documento são para fins meramente organizacionais e não devem ser interpretados como limitantes do assunto descrito.

[00375] Aspectos e modalidades da presente invenção serão ilustrados agora, a título de exemplo, com referência às figuras anexas. Aspectos e modalidades adicionais serão evidentes àqueles versados na técnica. Todos os documentos mencionados neste texto são incorporados neste documento como referência.

[00376] Ao longo deste relatório descritivo, incluindo as reivindicações que seguem, a menos que o contexto exija de outra forma, a palavra "compreender" e variações, tais como "compreende" e "compreendendo", será entendido como implicando a inclusão de um número inteiro, etapa, grupo de números inteiros ou etapas determinados, mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro, etapa, um grupo de números inteiros ou etapas.

[00377] Deve-se notar que, como usado no relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "a/o" incluem referências plurais, a menos que o contexto claramente imponha de outra forma. Intervalos podem ser expressos neste documento como de "cerca de" um determinado valor, e/ou a "cerca de" outro determinado valor. Quando tal intervalo é expresso, outra modalidade inclui de um determinado valor e/ou ao outro determinado valor. Da mesma forma,

quando valores são expressos como aproximações, pelo uso do antecedente "cerca de", entender-se-á que o determinado valor forma outra modalidade. Quando uma sequência de ácido nucleico é divulgada neste documento, o seu complemento reverso também é expressamente contemplado.

[00378] Os métodos descritos neste documento podem preferencialmente ser realizados in vitro. O termo "in vitro" se destina a abranger procedimentos realizados com células em cultura, enquanto o termo "in vivo" se destina a abranger procedimentos com/em organismos multicelulares intactos. Breve Descrição das Figuras

[00379] Modalidades e experimentos ilustrando os princípios da invenção serão agora discutidos com referência às figuras anexas.

[00380] Figura 1. Tabela que resume os 17 clones de anticorpo anti-IL-11Rα humano.

[00381] Figura 2. Gráfico de barras mostrando a inibição pelos anticorpos anti-IL-11Rα da sinalização mediada por IL-11 in vitro em fibroblastos atriais humanos, conforme determinado pela alteração na porcentagem de células positivas αSMA em comparação com fibroblastos de controle (não estimulados), após estimulação com TGFβ1, na presença de anticorpos anti-IL-11Rα.

[00382] Figura 3. Gráfico de barras mostrando inibição pelos anticorpos anti-IL-11Rα de camundongo de sinalização mediada por IL-11 in vitro em fibroblastos atriais de camundongo, conforme determinado por modulação na percentagem de células positivas para αSMA em comparação a fibroblastos de controle (não estimulados), após estimulação com TGFβ1, na presença de anticorpos anti-IL-11Rα de camundongo.

[00383] Figura 4. Gráfico de barras mostrando a inibição pelos anticorpos anti-IL-11Rα da sinalização trans de IL-11 mediada por hiper IL- 11 in vitro em fibroblastos atriais humanos, conforme determinado pela alteração na quantidade de MMP2 no sobrenadante de cultura de células em comparação com o controle fibroblastos (não estimulados), após estimulação com hiper IL-11, na presença de anticorpos anti-IL-11Rα.

[00384] Figura 5. Tabela resumindo os dados de modulação das Figuras de 2 a 4 para os 16 anticorpos anti-IL-11Rα de camundongo. Os candidatos a anticorpos numerados de 1 a 17 correspondem às designações de clone, conforme indicado na Figura 1. “Padrão da Indústria” é anti-IL-11 IgG2A monoclonal de camundongo; Clone # 22626; Catálogo No. MAB218; R&D Systems, MN, EUA.

[00385] Figuras 6A e 6B. Gráficos mostrando a ativação de fibroblasto em resposta a hiper IL-11. As células foram estimuladas com a quantidade indicada (em ng/ml) de hiper IL-11 ou IL-11 recombinante e a ativação de fibroblastos foi medida por análise do percentual de células positivas para α-SMA. (6A) e (6B) apresentam os resultados de dois experimentos diferentes.

[00386] Figura 7. Gráfico mostrando indução da secreção de IL- 11 em fibroblastos primários por hiper IL-11. As células foram estimuladas com hiper IL-11 e RNA IL-11 e os níveis proteicos de IL-11 nativo foram medidos no sobrenadante de cultura celular por ELISA nos momentos indicados.

[00387] Figuras 8A a 8H. 8A e 8B: Tabela e gráfico de barras mostrando a ligação de anticorpos anti-IL-11Rα de camundongo a IL-11Rα humana, conforme determinado por análise iQue (8A) Tabela resumindo os resultados das experiências. (8B) Gráfico de barras mostrando a força de ligação em relação ao anticorpo anti-FLAG de controle positivo (100%); os números correspondem aos clones conforme indicado na Figura 1. 8C e 8D: Gráficos que mostram a capacidade dos anticorpos que se ligam especificamente ao IL-11Rα de neutralizar a ativação de fibroblastos humanos (8C) e de camundongo (8D). 100% de inibição indica níveis de fibroblastos não estimulados e 0% para fibroblastos totalmente ativados. 8E e 8F: Gráficos que mostram a capacidade dos anticorpos anti-IL-11Rα 5E5, 9A7 e 13B10 de se ligar a IL-11Rα, bloquear a IL-11 produzida endogenamente de interagir e inibir a produção de proteínas fibrogênicas MMP2 e TIMP1 em fibroblastos atriais humanos (8E). (8F) confirma que os anticorpos neutralizam sinalização trans IL-11. (8G) mostra que 9A7 bloqueia IL-11 exógena ou endógena ou hiper IL-11, neutraliza a sinalização de IL-11 cis e trans em fibroblastos cardíacos de camundongo e inibe a produção de proteína fibrogênica. (8H) mostra a capacidade de 9A7 para inibir a produção de proteína fibrogênica (MMP2) em células estreladas hepáticas humanas induzidas por IL-11 endógeno (topo) ou IL- 11 exógeno (fundo).

[00388] Figuras 9A e 9B. Imagens e gráfico mostrando os resultados da análise histológica de seções renais provenientes de camundongos submetidos a tratamentos diferentes em um modelo de camundongo de fibrose renal. A fibrose renal foi induzida por injeção intraperitoneal (IP) de ácido fólico (FA, 180 mg/kg) em camundongos veículos (0,3 M NaHCCh); camundongos de controle foram administrados com apenas veículo. Os camundongos foram administrados com isotipo de controle IgG2 (20 mg/kg, 3 x por semana, intraperitoneal), anticorpo anti-IL- 11Rα (20 mg/kg, 3 x por semana, intraperitonealmente) a partir do dia 1 após a lesão por ácido fólico e durante o experimento. Os animais foram sacrificados 28 dias após dano renal induzido por ácido fólico e analisados histologicamente para fibrose usando a coloração tricrômica de Masson. (9A) Imagens de seções renal de coloração tricrômica de Masson. As áreas fibróticas contendo o colágeno têm aparência mais escura em comparação às áreas saudáveis com aparência mais clara. (9B) Gráficos mostrando análise semiquantitativa da área de colágeno expressa como uma percentagem (%) da área renal total (gráfico). ***, P<0,001 em comparação a FA+IgG, ANOVA.

[00389] Figuras 10A e 10B. (10A) Gráfico mostrando a proporção de creatina/albumina urinária em camundongos submetidos em modelos de camundongo de fibrose renal. A fibrose renal foi induzida por injeção intraperitoneal (IP) de ácido fólico (FA, 180 mg/kg) em camundongos veículos (0,3 M NaHCCs); camundongos de controle foram administrados com apenas veículo. Os camundongos FA foram administrados com controle isótipo IgG2 (20mg/kg, 3 x por semana, intraperitoneal) ou anticorpo anti-IL-11Rα (20mg/kg, 3 x por semana, intraperitonealmente) a partir do dia 1 após lesão de ácido fólico e durante o período de experimento. Os camundongos foram colocados em gaiolas metabólicas e creatinina e albumina urinária foram medidas usando ensaios comerciais (Abcam) de acordo com as instruções do fabricante. ***, P<0,001 em comparação a FA+IgG, ANOVA. (10B) Gráfico que mostra os efeitos dependentes da dose do anticorpo anti-IL-11Rα no conteúdo de colágeno renal em fibrose renal induzida por ácido fólico em um modelo de camundongo.

[00390] Figuras 11A e 11B. Imagens e gráfico mostrando os resultados da análise histológica de seções renais provenientes de camundongos submetidos a tratamentos diferentes em um modelo de camundongo de lesão renal aguda. (11A) Camundongos foram tratados por operação simulada ou obstrução ureteral de um ureter. Os camundongos receberam IgG, anticorpo anti-IL-11Rα (20mg/kg nos dias cirúrgicos -1, 1, 3, 5) e os rins lesionados (UUO IgG, IL-11Rα) ou rins contralaterais (Con) não lesionados (Con IgG, IL-11) foram coletados no 7º dia pós-operatório. (11B) A avaliação semiquantitativa da lesão tubular foi determinada por análise histológica de moldes, atrofia tubular ou dilatação tubular cega às condições experimentais (Classificação de lesão tubular: 0, nenhuma; 1, mínima; 2, leve; 3, moderada; 4, severa). *, P<0,05 em comparação a UUO IgG, ANOVA.

[00391] Figuras 12A e 12B. Imagens e gráfico de barras mostrando os resultados da análise histológica de fibrose cardíaca em camundongos submetidos a diferentes tratamentos em um modelo de camundongo de fibrose cardíaca. Camundongos (C57Bl6, macho, 8 a 12 semanas de idade) foram submetidos a operações de constrição aórtica transversal (TAC) indutoras de fibrose ou operações simuladas. Os animais tratados com TAC receberam anticorpo de controle (20mg/kg, 3x/semana, intraperitoneal) ou anticorpo anti-IL-11Rα neutralizante (20mg/kg, 3x/semana, intraperitoneal). Após duas semanas, os corações foram coletados e avaliados para extensão da fibrose usando coloração tricrômica de Masson (12A). (12B) mostra a quantidade de colágeno total no coração conforme determinado pela detecção colorimétrica de hidroxiprolina usando um kit de ensaio Quickzyme Total Collagen (Quickzyme Biosciences). **, P<0,01; ns, não significativo vs SHAM. #, P<0,05, controle TAC+IgG vs TAC+anti-IL11RA. Ab, anticorpo.

[00392] Figuras 13A a 13H. Gráficos mostrando a relação entre HSCs e IL-11. (13A) expressão IL-11 em células estreladas hepáticas (HSCs) estimuladas com TGFβ1; FC: mudança de dobra. (13B) expressão IL6R, gp130, e IL11RA em HSCs; TPM: transcrições por milhão. (13C) Gráfico mostrando densitometria da expressão de IL-11 detectada por Western blotting de amostras de fígado humano de indivíduos saudáveis e pacientes que sofrem de NASH. (13D, E) Gráficos mostrando a quantificação automática de fluorescência para células (13D) ACTA2+ve células e (13E) imunocoloração de colágeno I após incubação de HSCs sem estímulo (-), ou com TGFβ1, PDGF ou IL-11. (13F) Gráfico mostrando sobrenadantes da secreção de colágeno de HSCs estimulados com TGFβ1, PDGF ou IL-11 (ensaio vermelho Sirius). (13G) Invasão de matrigel dependente da dose de HSCs induzida por IL-11. (13H) Gráficos mostrando o conteúdo relativo de hidroxiprolina do fígado, expressão de mRNA de marcadores pró-fibróticos e níveis séricos de ALT de camundongos administrados diariamente com IL-11 por 21 dias. FC: mudança de dobra.

[00393] Figuras 14A a 14D. Gráficos mostrando o efeito do anticorpo anti-IL-11Rα na ativação de HSC para miofibroblastos e capacidade de invasão de HSC (AD) e em modelos de camundongo de NASH em estágio inicial (EF). (14A) ACTA2+ve números de células em culturas de HSC estimuladas com TGFβ1 e tratadas com anticorpo anti-IL- 11Rα ou controle de IgG. (14B) ACTA2+ve números de células em culturas de HSC estimuladas com PDGF (20 ng/mL), CCL2 (5 ng/ml), angiotensina II (100 nM), bFGF (10 ng/ml) ou H2O2 (0,2 mM) e tratado com anticorpo anti-IL-11Rα ou controle IgG. (14C) Efeito do controle de anticorpos e IgG na invasão de HSC induzida por PDGF e CCL2. (14D) Efeito do anticorpo anti-IL-11Rα na produção de Colágeno I por culturas de HSC estimuladas. (14E e 14F) Efeito do anticorpo anti-IL-11Rα sobre os níveis de ALT e produção de colágeno em estágio inicial NASH induzido em camundongos por dieta HFMCD.

[00394] Figuras 15A a 15D. Efeito terapêutico do anticorpo anti- IL-11Rα em modelos de camundongo de NASH avançado. (AC) NASH foi estimulado por uma dieta com alto teor de gordura em metionina/colina deficiente (HFMCD) por 6 semanas, depois tratado com 4 semanas de tratamento quinzenal com anticorpo anti-IL-11Rα. IgG usado como um controle. (15A) Western blots do status de ativação de ERK hepático de camundongo. (15B) Conteúdo relativo de hidroxiprolina do fígado. (15C) Níveis de ALT no soro. (15D) NASH foi estimulado por uma única injeção subcutânea de estreptozotocina e os camundongos foram alimentados com uma dieta alimentar normal por 4 semanas, em seguida, dieta HFMCD por 7 semanas junto com anticorpo anti-IL-11Rα ou controle IgG. O gráfico mostra a expressão de RNA de genes de fibrose e inflamação após 7 semanas.

[00395] Figura 16. O efeito reverso da terapia anti-IL-11Rα na fibrose hepática. A fibrose hepática grave foi estabelecida em camundongos com dieta HFMCD por 10 semanas, então os camundongos foram tratados com dieta + anticorpo anti-IL-11Rα ou IgG (20 mg/kg) duas vezes por semana por seis semanas enquanto ainda estavam na dieta HFMCD. (16A) Conteúdo total de hidroxiprolina do fígado.

[00396] Figuras 17A a 17E. O efeito da terapia anti-IL-11Rα em HSCs transformados estimulados por TGFβ1 ou PDGF por 72 horas, em seguida, tratados com anticorpo anti-IL-11Rα ou controle de IgG por 24 horas na presença de estimulação contínua de TGFβ1 ou PDGF. (17A) Esquema de tratamento e quantificação da porcentagem de células ACTA2+ve após o tratamento com TGFβ1 e depois com anticorpos. (17B) Esquema de tratamento e quantificação da porcentagem de células ACTA2+ve após o tratamento com PDGF e depois com anticorpos (cronograma de tratamento como em 17A) (17C) Quantidade de colágeno secretado após o tratamento com TGFβ1 e depois com anticorpos. (17D) Quantidade de colágeno secretado após o tratamento com TGFβ1 e depois com anticorpos. (17E) Atividade ERK após o tratamento com TGFβ1 e depois com anticorpos. (A-D) Os dados são mostrados como caixa e linhas horizontais com mediana (linha média), percentis 25-75 (caixa) e percentis mínimo-máximo (linhas horizontais).

[00397] Figuras 18A a 18K. O efeito da terapia anti-IL-11Rα no estágio inicial de NASH, estabelecido em camundongos com dieta HFMCD por 1 semana, depois dieta + anticorpo anti-IL-11Rα ou IgG por cinco semanas. (18A) Imagens grosseiras representativas do fígado e imagens representativas do tricrômico de Masson de fígados após cinco semanas de tratamentos com IgG ou anti-IL-11Rα. (18B) Níveis de triglicerídeos hepáticos após cinco semanas de tratamento. (18C) Níveis de ALT no soro. (18D) Efeito dose-dependente da terapia anti-IL-11Rα de 3 semanas na reversão dos níveis séricos de ALT. (18E) Conteúdo de hidroxiprolina do fígado. (18F) Efeitos dose-dependentes da terapia anti-IL-11Rα no conteúdo total de hidroxiprolina. (18G) Fosforilação de ERK hepático após cinco semanas de tratamento. (18H) Mapa térmico de expressão diferencial de escores Z de genes pró-fibróticos e pró-inflamatórios em camundongos em dieta normal e em camundongos em dieta HFMCD após tratamento com anticorpo anti-IL-11Rα ou controle de IgG. (181) Expressão de RNA de genes pró-inflamatórios. (18J) Expressão de RNA de genes pró-fibróticos. (18K) Mapa térmico de expressão diferencial de genes de lipogênese e p- oxidação mostrando que o anticorpo anti-IL-11Rα melhorou o metabolismo lipídico hepático em comparação com IgG.

[00398] Figuras 19A a 19C. O efeito da terapia anti-IL-11Rα no modelo NASH de estágio inicial nas populações de células inflamatórias do fígado. (19A) Fígado CD45+ve números de células imunes. (19B) Ly6C+ve TGFβ1+ve células nas populações totais de CD45+ve. (19C) Níveis de TGFβ1 no soro (n≥ 5/grupo). Os dados são mostrados como caixa e bigode com mediana (linha do meio), percentis 25-75 (caixa) e percentis mínimo- máximo (bigodes). (AB) teste t de Student bicaudal; (C) teste t de Student corrigido de Tukey, bicaudal.

[00399] Figura 20. Sensorgramas e tabela que mostram os resultados da análise da cinética de múltiplos ciclos da afinidade de ligação do anticorpo anti-IL-11Rα ao IL-11Rα humano. Os resultados de duas análises separadas são mostrados.

[00400] Figura 21. Curva dose-resposta e valor IC50 do clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 na inibição da secreção de MMP2 por HSCs estimulados com 5 ng/ml de TGFβ1.

[00401] Figuras 22A e 22B. Gráficos mostrando meia-vida (22A) e absorção pelo fígado (22B) de clone de anticorpo anti-IL-11Rα marcado radioativamente 125I-9A7.

[00402] Figuras 23A e 23B. Gráficos que mostram os efeitos do tratamento com anticorpo anti-IL-11Rα (9A7) no peso corporal (A) e consumo alimentar (B) em um modelo de perda de peso relacionada ao emagrecimento. Os camundongos alimentados com uma dieta HFMCD foram tratados 2x/semana com 0,5, 1,5 ou 10 mg/kg de anticorpo anti-IL- 11Rα. Os camundongos de controle foram alimentados com ração normal

(NC) ou com dieta HFMCD e tratados com o controle do isotipo IgG.

[00403] Figura 24. Gráficos mostrando a capacidade dos anticorpos anti-IL-11Rα 9A7 e seis clones humanizados 9A7 para neutralizar a sinalização de IL-11. Fibroblastos atriais humanos primários foram estimulados com TGFβ1 e produção de proteína MMP2 fibrogênica medida em concentrações variáveis de anticorpos. Os valores IC50 são indicados.

[00404] Figura 25. Gráficos que mostram a capacidade dos anticorpos VH3/VL3 e VH4/VL4 de anti-IL-11Rα humanizados para neutralizar a sinalização de IL-11. As células estreladas hepáticas humanas foram estimuladas com TGFβ1 e a produção de proteína fibrogênica MMP2 medida em concentrações variáveis de anticorpos. Os valores IC50 são indicados.

[00405] Figura 26. Gráficos mostrando a capacidade de 9A7 e anticorpos anti-IL-11Rα humanizados VH3/VL3 e VH4/VL4 de neutralizar a sinalização de IL-11. Fibroblastos de pulmão humano foram estimulados com TGFβ1 e produção de proteína fibrogênica TIMP1 medida em concentrações variáveis de anticorpos. Os valores IC50 são indicados.

[00406] Figuras 27A a 27J. Resultados de estudos sobre os efeitos do anticorpo anti-IL-11Rα em camundongos com doenças metabólicas. (27A e 27B) Gráfico e box plot mostrando mudança no peso corporal para camundongos alimentados com ração normal (NC) ou uma dieta ocidental com frutose (WDF) e tratados com anticorpo anti-IL-11Rα ou controle IgG. (27A) mostra a mudança percentual no peso corporal ao longo do tempo (semanas). (27B) mostra diferença percentual entre a massa gorda corporal total e a massa magra. *P<0,05. (27C e 27D). Gráfico, esquemático e gráfico de barras mostrando a tolerância à glicose para camundongos alimentados com uma dieta ocidental com frutose (WDF) e tratados com anticorpo anti-IL-11RA ou controle IgG, conforme determinado pelo teste de tolerância à glicose intra-peritoneal (ipGTT). (27C) mostra mudanças no nível de glicose (mM) do ponto de tempo de 1 min. (27D) mostra a área sob a curva. *P<0.05, ** P<0.01. (27E) Box plot mostrando o peso do pâncreas para camundongos alimentados com ração normal (NCD) ou uma dieta ocidental com frutose (WDF), e tratados em diferentes pontos de tempo com anticorpo anti-IL-11RA ou controle de IgG. ****P<0.0001. (27F a 27H) Boxplots mostrando (27F) níveis de colesterol sérico (mg/dl), níveis de triglicerídeos séricos (27G) (mg/g) e (27H) níveis de glicose no sangue em jejum (mM) para camundongos alimentados com ração normal (NCD) ou uma dieta ocidental com frutose (WDF) e anticorpo anti-IL-11RA tratado ou controle de IgG, nos pontos de tempo indicados. (27I e 27J) Imagens mostrando os resultados da análise imunohistoquímica do conteúdo de glucagon (27I) e do conteúdo de insulina (27J) de seções de tecido pancreático obtidas na semana 24 de camundongos alimentados com ração normal (NCD), ou camundongos alimentados com uma dieta ocidental com frutose (WDF) e tratado com anticorpo anti-IL-11RA ou controle IgG a partir de 16 semanas.

[00407] Figuras 28A a 28G. Os anticorpos neutralizantes anti-IL- 11Rα inibem as patologias NASH induzidas por HFMCD e WDF. Os camundongos foram alimentados com WDF por 16 semanas para induzir NASH e, em seguida, tratados com (10 mg/kg) anticorpo anti-IL-11Rαou IgG por 8 semanas enquanto estavam em alimentação WDF contínua. (A) Western blots de p-Erk e Erk nos fígados de camundongos em NC ou WDF por 24 semanas. (B) Conteúdo total de hidroxiprolina do fígado, os níveis de (C) triglicerídeos do fígado, (D) ALT sérica, (E), glicose no sangue em jejum, (F) triglicerídeos séricos e (G) colesterol sérico em camundongos em WDF tratado com NC e IgG- e anti-IL-11Rα (n≥ 5/grupo). (B-G) Os dados são apresentados como caixa e bigode com mediana (linha média), percentis 25-75 (caixa) e percentis mínimo-máximo (bigodes); (B) Teste t de Student bicaudal (CG) teste t de Student corrigido de Tukey, bicaudal. FC:mudança de dobra; NC:ração normal; WDF:Dieta ocidental+15% (p/v)

de frutose.

[00408] Figura 29A e 29B. Reversão de fibrose hepática grave por anticorpo anti-IL-11Rα em 1,3, ou 6 semanas após o estabelecimento de fibrose em 10 semanas em HFMCD. (A) Esquema mostrando o experimento de reversão em que a fibrose foi estabelecida alimentando camundongos com HFMCD por 10 semanas e, em seguida, substituindo-o por NC e iniciando a terapia com anticorpos. Os camundongos foram sacrificados nos pontos de tempo indicados. (B) Coloração de Tricrômio de Masson quantificada do conteúdo de colágeno do fígado de camundongos tratados com IgG ou anticorpo anti-IL-11Rα por 6 semanas.

[00409] Figuras 30A a 30F. (AC) O efeito da IL-11 nos hepatócitos. (30A) Hepatócitos humanos primários expressam o receptor IL-11Rα. (30B) Aumento dependente da dose nos níveis de ALT no sobrenadante após tratamento com IL-11 (0,019 - 10 ng/ml). (30C) Expressão de IL-11 induzida por H2O2. (D-F) O efeito da terapia com anticorpo anti-IL-11Rα na hepatotoxicidade em um modelo de camundongo de lesão hepática induzida por APAP. O anticorpo IgG foi usado como controle. (30D) Níveis de ALT mostrando extensão do dano ao fígado. (30E) Extensão da perda de massa hepática induzida por APAP. (30F) Coloração com hematoxilina e eosina (H&E) mostrando a extensão da necrose centrolobular no tecido do fígado de camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα ou controle IgG.

[00410] Figuras 31A e 31B. (31 A) Gráfico de dispersão mostrando que o anticorpo anti-IL-11Rα previne a morte de hepatócitos mediada por APAP. Hepatócitos humanos foram tratados com APAP (20 mM) na presença ou ausência (BL) de anti-lL-11Rα (2 μg/ml) ou anticorpo de controle IgG. As células foram subsequentemente coradas com Anexina V e PI, e a morte celular foi analisada por citometria de fluxo. BL = linha de base. (31B) Imagem de um western blot mostrando que o anticorpo anti-IL- 11Rα impede a ativação mediada por APAP de Erk e Jnk. Hepatócitos humanos foram tratados com APAP (10 mM) na presença ou ausência (BL) de anti-IL-11Rα (2 μg/ml) ou anticorpo de controle IgG. Extratos celulares foram preparados e Western blots foram realizados para avaliar o status de ativação (fosforilação) das quinases Erk e Jnk. BL = linha de base.

[00411] Figuras 32A e 32B. Box plot e imagens mostrando que a terapia anti-IL-11Rα administrada 16 horas antes da overdose de APAP evita lesão hepática aguda. Uma overdose grave de APAP (400 mg/kg) foi administrada a camundongos 16 horas após a administração IP de anticorpo anti-IL-11Rα 20 mg/kg ou anticorpo de controle IgG. Após 24 horas os camundongos foram sacrificados. (32A) A alanina aminotransferase (ALT) sérica foi medida como um marcador de dano hepático agudo e morte celular de hepatócitos. (32B) Fígados foram colhidos, fixados em 10% de formalina tamponada com neutro, desidratados, incluídos em blocos de parafina, seccionados e então corados com hematoxilina e eosina para visualizar a necrose de hepatócitos centrolobular característica observada em overdose de APAP.

[00412] Figuras 33A a 33C. (AB) Imagem e gráfico de caixa mostrando que a terapia anti-lL-11RA administrada 10 horas após a overdose de APAP trata lesão hepática aguda. Uma overdose severa de APAP (400 mg/kg) foi administrada a camundongos, e 10 horas depois camundongos foram administrados IP com 20 mg/kg de anticorpo anti-IL- 11Rα ou anticorpo de controle IgG. (33A) Os fígados foram colhidos nos pontos de tempo indicados fixados em formalina tamponada com neutro a 10% e a morfologia bruta e a aparência foram documentadas. (33B) A alanina aminotransferase (ALT) sérica foi medida como um marcador de dano hepático agudo e morte celular de hepatócitos nos pontos de tempo indicados. (33C) Imagem de um western blot mostrando que a terapia anti- lL11RA administrada 10 horas após a overdose de APAP inibe a ativação de Jnk e ERK. Uma overdose severa de APAP (400 mg/kg) foi administrada a camundongos, e 10 horas depois camundongos foram administrados IP com 20 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα ou anticorpo de controle IgG. Os fígados foram colhidos nos pontos de tempo indicados e Western blots foram realizados para avaliar o status de ativação (fosforilação) das quinases Erk e Jnk.

[00413] Figuras 34A a 34C. Gráfico, imagens e box plot mostrando que a terapia anti-IL-11Rα administrada 10 horas após a overdose de APAP previne a morte devido a lesão hepática aguda e restaura a função hepática. Uma overdose de APAP letal (550 mg/kg) foi administrada a camundongos, e 10 horas depois camundongos foram administrados IP com 20 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα ou anticorpo de controle IgG. (34A) Gráfico que mostra a mortalidade ao longo dos 8 dias após a sobredosagem nos dois grupos de tratamento. (34B) Os fígados foram colhidos nos pontos de tempo indicados fixados em formalina tamponada com neutro a 10% e a morfologia bruta e a aparência foram documentadas. (34C) A alanina aminotransferase (ALT) sérica foi medida como um marcador de lesão hepática e morte celular de hepatócitos 8 dias após a sobredosagem em camundongos tratados com anticorpo anti- IL11Rα e comparada com os níveis em camundongos de controle normais. Exemplos

[00414] Nos seguintes exemplos, os inventores descrevem a geração de anticorpos anti-IL-11Rα e a caracterização funcional dos anticorpos. Exemplo 1: Anticorpos anti-IL-11Rα humana

[00415] Anticorpos monoclonais de camundongo direcionados contra proteína IL-11Rα humana também foram gerados, como se segue.

[00416] O cDNA que codifica o amino-ácido para IL-11Rα humano foi clonado em plasmídeos de expressão (Aldevron GmbH, Freiburg, Alemanha)

[00417] Os camundongos foram imunizados por aplicação intradérmica de partículas de outro revestidas com DNA usando um dispositivo portátil para bombardeio de partícula ("pistola de genes"). As amostras de soro foram coletadas a partir de camundongos após uma série de imunizações e testadas em citometria de fluxo em células HEK, as quais haviam sido transfectadas transientemente com plasmídeos de expressão de IL-11Rα humanos (expressão de superfície celular do IL-11Rα humano por transfectação transiente de células HEK foi confirmada com anticorpos anti-marcador que reconhecem um marcador adicionado ao N-terminal da proteína IL-11Rα).

[00418] As células de produção de anticorpo foram isoladas dos camundongos e fundidas com células de mieloma de camundongo (Ag8) de acordo com procedimentos padrão.

[00419] Os hibridomas que produzem anticorpos específicos para IL-11Rα foram identificados ao testar a habilidade de ligação a células HEK expressantes de IL-11Rα por citometria de fluxo.

[00420] Os peletes celulares de células de hibridomas positivas foram preparadas usando um agente de proteção de RNA (RNAlater, cat. #AM7020 por ThermoFisher científico) e processadas adicionalmente para sequenciamento dos domínios variáveis dos anticorpos.

[00421] O sequenciamento foi realizado usando o kit BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing (Life Technologies®) de acordo com as instruções do fabricante. Todos os dados foram coletados por meio do sistema 3730x1 DNA Analyzer e do software Unified Data Collection (Life Technologies®). A montagem da sequência foi realizada usando CodonCode Aligner (CodonCode Corporation). As chamadas de base mista foram resolvidas atribuindo-se automaticamente a chamada de base mais comum às chamadas de base mista. A prevalência foi determinada pela frequência de uma chamada de base e pela qualidade individual das chamadas de base.

[00422] No total, foram gerados 17 clones de anticorpo monoclonal de camundongo anti-IL-11Rα humano (Figura 1); clones BSO-

1E3, BSO-2C1, BSO-2E5, BSO-4G3, BSO-5E5, BSO-7G9, BSO-9A7, BSO- 10D11, BSO-13B10, BSW-1D3, BSW-1F6, BSW-4G5, BSW -6H3, BSW- 7E9, BSW-7G8, BSW-7H8 e BSW-8B7.

[00423] As sequências de domínio VL e VH foram determinadas para os clones de anticorpo BSO-1E3, BSO-2E5, BSO-4G3, BSO-5E5, BSO-7G9, BSO-9A7, BSO-10D11 e BSO-13B10. As sequências VH e VL determinadas para o clone BSO-9A7 são mostradas em SEQ ID NOs:7 e

13. Exemplo 2:Caracterização funcional de anticorpos IL-11Rα humanos anti-humanos

2.1 Capacidade de inibir a sinalização mediada por IL-11/IL-11R humano

[00424] Para investigar a capacidade dos anticorpos anti-IL-11Rα de neutralizar a sinalização mediada por IL-11/IL-11R humano, fibroblastos humanos atriais cardíacos foram cultivados em poços de placas de 96 poços na presença de TGFβ1 (5 ng/ml) por 24 horas, na presença ou ausência dos anticorpos anti-IL-11Rα. Este estímulo pró-fibrótico promove a expressão de IL-11, que por sua vez conduz a transição de fibroblastos quiescentes para fibroblastos ativados, αSMA positivos. Foi anteriormente demonstrado que a neutralização de IL-11 evita a transição induzida por TGFβ1 para fibroblastos ativados e positivos para αSMA.

[00425] Anticorpos anti-IL-11Rα (2 μg/ml) foram adicionados às culturas de fibroblastos estimuladas com TGFβ1 e, no final do período de cultura de 24 horas, determinou-se o percentual de fibroblastos positivos de αSMA. As porcentagens foram normalizadas com base no percentual de fibroblastos positivos de αSMA observados em culturas de fibroblastos que não haviam sido estimulados com TGFβ1.

[00426] A expressão de αSMA foi analisada com o Operetta High-Content Imaging System de maneira automatizada e de alta taxa de transferência.

[00427] Os resultados são mostrados nas Figuras 2 e 5. A estimulação com TGFβ1 resultou em um aumento de 1,58 vezes no número de fibroblastos ativados positivos para αSMA no final do período de cultura de 24 horas na ausência de anticorpos anti-IL-11Rα.

[00428] Um anticorpo monoclonal de camundongo anti-IL-11 comercial (Monoclonal Mouse IgG2A; Clone # 22626; Catálogo No. MAB218; R&D Systems, MN, EUA) foi incluído como um controle. Verificou- se que este anticorpo é capaz de reduzir a porcentagem de fibroblastos ativados para 0,89 vezes a porcentagem de fibroblastos ativados em culturas não estimuladas (ou seja, na ausência de estimulação com TGFβ1).

[00429] Verificou-se que os anticorpos anti-IL-11Rα são capazes de inibir a sinalização de IL-11/IL-11R em fibroblastos humanos, e vários foram capazes de inibir a sinalização de IL-11/IL-11R em maior extensão do que o monoclonal anticorpo anti-IL-11 de camundongo:BSO-1E3, BSO-5E5 e BSO-13B10.

2.2 Capacidade de inibir a sinalização mediada por IL-11 de camundongo

[00430] A capacidade dos anticorpos anti-IL-11Rα de inibir a sinalização mediada por IL-11 de camundongo também foi investigada, seguindo o mesmo procedimento descrito na seção 2.1 acima, mas usando fibroblastos atriais de camundongo em vez de fibroblastos atriais humanos.

[00431] Os resultados são mostrados nas Figuras 3 e 5. A estimulação com TGFβ1 resultou em um aumento de 2,24 vezes no número de fibroblastos ativados positivos para αSMA no final do período de cultura de 24 horas na ausência de anticorpos anti-IL-11Rα.

[00432] O anticorpo monoclonal de camundongo anti-IL-11 comercial (Monoclonal Mouse IgG2A; Clone # 22626; Catálogo Nº. MAB218; R&D Systems, MN, EUA) foi incluído como um controle. Verificou- se que este anticorpo é capaz de reduzir a porcentagem de fibroblastos ativados para 1,44 vezes a porcentagem de fibroblastos ativados em culturas não estimuladas (ou seja, na ausência de estimulação com TGFβ1).

[00433] Verificou-se que os anticorpos anti-IL-11Rα são capazes de inibir a sinalização de IL-11/IL-11R em fibroblastos humanos, e vários foram capazes de inibir a sinalização de IL-11/IL-11R em maior extensão do que o monoclonal anticorpo anti-IL-11 de camundongo:BSO-1E3, BSO- 2C1, BSO-5E5, BSO-9A7 e BSO-13B10.

2.3 Capacidade de inibir trans sinalização de IL-11, por IL-11 em complexo com IL-11Rα

[00434] A sinalização trans é reconhecida como um aspecto importante da sinalização IL-6, em que um complexo de IL-6 e IL-6Rα solúvel pode ativar células que expressam gp130, mas carecem do receptor IL-6 (Hunter e Jones, 2015 Nature Immunology 16, 448–457).

[00435] Tem sido sugerido recentemente que a trans sinalização por um complexo de IL-11 e IL-11Rα solúvel também é importante para a biologia de IL-11 (Lokau et al.Cell Reports (2016) 14, 1761–1773). Usando uma proteína de fusão recombinante de IL-11 e IL-11Rα (conforme descrito em Pflanz et al., Febs Lett (1999) 450:117-122), anticorpos anti-IL-11 foram testados para a capacidade de inibir a sinalização trans mediada pelo complexo IL-11:IL-11Rα.

[00436] Importantemente, os anticorpos capazes de inibir tanto a sinalização mediada por IL-11 clássica e a sinalização trans de IL-11 por complexo IL-11:IL-11Rα são capazes de inibir todos os modos conhecidos de sinalização de IL-11/IL-11R.

[00437] A proteína de fusão Il-11:IL-11Rα (doravante denominada hiper IL-11) consiste no domínio extracelular do receptor alfa IL-11 (IL-11Rα) vinculado à IL-11. A proteína de fusão IL-11:IL-11Rα usada no presente Exemplo tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:5.

[00438] Hiper IL-11 foi verificado como sendo um ativador mais potente de fibroblastos humanos que proteína IL-11 recombinante. Resumidamente, em dois experimentos separados, os fibroblastos humanos foram cultivados sem estimulação (linha de base), na presença de diferentes quantidades de hiper IL-11 (0,008 ng/ml, 0,04 ng/ml, 0,2 ng/ml, 1 ng/ml e 5 ng/ml), ou 5 ng/ml de IL-11 recombinante humano obtido a partir de um a fonte comercial, e a ativação do fibroblasto foi analisada ao determinar a porcentagem de pilhas de αSMA-positivas conforme descrito neste documento. Os resultados são mostrados nas (Figuras 6A e 6B). Os fibroblastos ativados por hiper-IL-11 em uma forma dependente de dose e eram um ativador mais potente que o IL-11.

[00439] A proteína de fusão IL-11:IL-11Rα foi preparada da seguinte maneira: • DNA que codifica IL-11:proteína de fusão IL-11Rα (ou seja, SEQ ID NO:98) foi clonado no vetor pTT5 e transfectado em células 293-6E em cultura em meio de expressão Freestyle™ 293 sem soro (Thermo Fisher Scientific). foram mantidos em frascos Erlenmeyer (Corning Inc.) a 37 °C com 5% de CO2 em um agitador orbital (VWR Scientific). • Os sobrenadantes de cultura celular foram coletados no 6º dia foram usados para purificação. • O sobrenadante de cultura celular foi carregado em uma coluna de purificação por afinidade. • Após lavagem e eluição com tampão apropriado, as frações eluída foram agrupadas e tampão trocado ao amortecedor final da formulação. • A proteína de fusão IL-11:IL-11Rα purificada foi analisada por SDS-PAGE, Western blot para confirmar o peso molecular e pureza.

[00440] Os fibroblastos cultivados in vitro e estimulados com hiper IL-11 demonstraram suprarregulação da expressão proteica de IL-11, conforme determinado por ELISA (Figura 7). Interessantemente, um aumento no nível de RNA IL-11 não foi detectado em resposta à estimulação com hiper IL-11. Ao contrário de TGFβ1, que aumenta a expressão de IL-11 em tanto o nível de RNA e nível proteico, hiper IL-11 parece suprarregular a expressão de IL-11 apenas de maneira transcriptional no nível proteico.

[00441] A capacidade dos anticorpos anti-IL-11Rα humanos de inibir a sinalização mediada por hiper IL-11 foi investigada.

[00442] Fibroblastos atriais humanos foram incubados durante 24h com hiper IL-11 (0,2 ng/ml) na presença de anticorpo anti-IL-11Rα (2 µg/ml) ou de anticorpos de controle isótipos. Após a incubação, o sobrenadante da cultura celular foi analisado para MMP2. A estimulação com hiper IL-11 resulta em um aumento da secreção de MMP2 em relação às culturas não estimuladas.

[00443] Os resultados dos experimentos são mostrados nas Figuras 4 e 5. Os anticorpos anti-IL-11Rα de camundongo foi verificado como capaz de neutralizar a sinalização mediada pelo hiper IL-11 (isto é, trans sinalização IL-11) e vários foram verificados como capazes de inibir sinalização trans em maior medida do que o anticorpo anti-IL-11 de camundongo monoclonal comercial (Camundongo Monoclonal IgG2A; Clone #22626; Nº. de Catálogo MAB218; R&D Systems, MN, EUA):BSO- 1E3 (RA1), BSO-2E5 (RA3), BSO-5E5 (RA5), BSO-9A7 (RA7), BSO-13B10 (RA9) e BSW-1F6 (RA11).

[00444] Os clones BSO-1E3 (RA1), BSO-5E5 (RA5), BSO-9A7 (RA7), BSO-13B10 (RA9) foram identificados como candidatos promissores para desenvolvimento posterior (destacados na Figura 5), mostrando boa capacidade de inibir tanto humanos e sinalização de IL-11/IL-11R de camundongo e boa inibição de sinalização trans de IL-11.

2.4 Triagem para capacidade de ligar IL-11Rα

[00445] Os hibridomas de camundongo que produzem anticorpos anti-IL-11Rα humano foram subclonados e o sobrenadante da cultura de células dos hibridomas subclonados foi analisado por ensaio iQue "misturar e medir" para (i) capacidade de se ligar a IL-11Rα humano, e (ii) reatividade cruzada para antígeno diferente de IL-11Rα.

[00446] Brevemente, as células de controle rotuladas (não expressando IL-11Rα na superfície celular) e células alvo não rotuladas expressando IL-11Rα humano em sua superfície (após transfecção transitória com um IL-11Rα humano marcado com FLAG que codifica plasmídeo) foram misturados em conjunto com a sobrenadante da cultura celular (contendo anticorpos camundongo-anti-IL-11Rα) e anticorpos de detecção secundários (anticorpo IgG anti-camundongo rotulado de maneira fluorescente).

[00447] Em seguida, as células foram analisadas usando o Sistema de Triagem HTFC (iQue) para os dois rótulos (isto é, o rótulo celular e o rótulo no anticorpo secundário). A detecção do anticorpo secundário no IL-11Rα não rotulado expressando células indicou a capacidade dos anticorpos do camundongo-anti-IL-11Rα de ligação a IL- 11Rα. A detecção do anticorpo secundário nas células rotuladas de controle indicou a reatividade cruzada dos anticorpos camundongo-anti-IL- 11Rα para os alvos além de IL-11Rα.

[00448] Como uma condição de controle positivo, as células rotuladas e não rótulas foram incubados com um anticorpo de rótulo anti- FLAG de camundongo como o anticorpo primário.

[00449] Os resultados são mostrados nas Figuras 8A e 8B. A maioria dos hibridomas subclonados expressaram o anticorpo capaz de ligação ao IL-11Rα humano e que reconheceu este alvo com alta especificidade. O anticorpo produzido pelo subclone BSO-1E3 não se ligou a IL-11Rα humano.

[00450] Os anticorpos BSO-2C1 e BSO-9A7 exibiram um sinal mais forte para a ligação a IL-11Rα do que o sinal para o anticorpo anti- marcador de controle positivo para o marcador, indicando que esses anticorpos se ligam a IL-11Rα com afinidade muito alta.

2.5 Análise da afinidade de anticorpos para IL-11Rα humano

[00451] Os anticorpos IL-11Rα humanos anti-humanos foram analisados por sua afinidade de ligação a IL-11Rα humano pelo ensaio ELISA.

[00452] A IL-11Rα humano recombinante é obtido a partir do anticorpo IgG (específico de Fc) anti-humano conjugado por peroxidase de rábano (HRP) de Genscript é obtido da Sigma. As placas de titulação de 96 poços Corning ELISA são obtidas a partir da Sigma. O kit de substrato de Pierce 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina (TMB) ELISA é obtido a partir da Life Technologies (0,4 g/mL de solução TMB, peróxido de hidrogênio 0,02% em tampão de ácido cítrico). A albumina sérica bovina e o ácido sulfúrico são obtidos a partir da Sigma. Tampão de lavagem composto por Tween-20 0,05% em salina tamponada por fosfato (PBS-T). Os controles de IgG humano e de camundongo purificados são comprados da Life Technologies. Tecan Infinite 200 PRO NanoQuant é usado para medir absorvância.

[00453] A análise de diluição seriada em ponto cruzado foi realizada conforme descrito por Hornbeck et al., (2015) Curr Protoc Immunol 110, 2.1.1-23) para determinar a concentração ideal de anticorpos primários e secundários e antígeno de revestimento.

[00454] Um ELISA indireto é realizado para avaliar a afinidade de ligação dos anticorpos anti-IL-11Rα de camundongo a 50% da concentração eficaz (EC50), conforme descrito anteriormente (Unverdorben et al., (2016) MAbs 8, 120-128.). As placas ELISA são revestidas com 1 μg/mL de IL-11Rα humano recombinante durante a noite a 4 °C e os sítios de ligação remanescentes são bloqueados com 2% de BSA em PBS. Os anticorpos são diluídos em BSA 1% em PBS, titulados para se obter concentrações de trabalho de 800, 200, 50, 12,5, 3,125, 0,78, 0,195 e 0,049 ng/mL, e incubados em duplicatas durante 2 horas à temperatura ambiente. A detecção da ligação antígeno-anticorpo é realizada com 15,625 ng/mL de anticorpo IgG anti-camundongo conjugado com HRP. Após 2 horas de incubação com o anticorpo de detecção, 100 μl de substrato TMB são adicionados por 15 minutos e a reação cromogênica é interrompida com 100 μl de H2SO4 2 M. A leitura de absorbância é medida a 450 nm com correção de comprimento de onda de referência a 570 nm. Os dados são ajustados com o software GraphPad Prism com transformação de log de concentrações de anticorpos seguidas por análise de regressão não linear com a curva de dose-resposta de logística assimétrica (cinco parâmetros) para determinar os valores de EC50 individuais.

2.5.1 Triagem de fibrose bloqueando a produção de IL-11 endógena em fibroblastos humanos e de camundongo

[00455] Os fibroblastos foram estimulados com uma dose máxima de TGFβ1, o estimulador mais forte da expressão de IL-11 em fibroblastos atriais, o que geralmente resulta em uma concentração de IL-11 entre 500 μg ml-1 a 1 ng ml-1 no sobrenadante após 24h. Esta abordagem assegura a inibição de IL-11 produzida endogenamente e enrolada corretamente em níveis máximos de produção fisiologicamente relevantes. A atividade autócrina relevante para fibrose da IL-11 diretamente nos fibroblastos é neutralizada neste ensaio.

[00456] O TGFβ1 estimula a expressão de IL-11, que posteriormente conduz a transição de fibroblastos guiescentes para miofibroblastos ativados (ACTA2-positivos). Os anticorpos neutralizantes de IL11RA devem inibir essa transição. Assim, os anticorpos que diminuem a porcentagem de fibroblastos ativados após a estimulação com TGFβ1 podem ser considerados neutralizadores e agentes antifibróticos.

[00457] Os fibroblastos foram semeados em placas CellCarrier de 96 poços a uma densidade de 1X104/cm e estimulados com citocina profibrótica TGFβ1 (5 ng/ml) e anticorpos monoclonais de camundongo anti-IL11RA (6 μg/ml) por 24h. Seguindo as condições experimentais, as células foram enxaguadas em solução salina tamponada com fosfato

(PBS), fixadas em paraformaldeído a 4% e permeabilizadas com Triton X- 100 0,1% em PBS. Os sites não específicos foram bloqueados com solução de bloqueio (0,5% BSA e 0,1% Tween-20 em PBS). As células foram incubadas durante a noite a 4 °C com actina de músculo liso monoclonal de camundongo foi diluída 1:500 em solução de bloqueio, depois lavada (0,25% de BSA e 0,1% de Tween-20 em PBS) e incubada com Alexa Fluor 488 anti-camundongo de cabra IgG (1:1000) por 1h em temperatura ambiente no escuro. As células foram contra-coradas com rodamina- faloidina (1:1000) e DAPI (1 μg/ml) em solução de bloqueio. As placas foram digitalizadas e as imagens foram coletadas com um sistema de imagem de alto conteúdo Operetta. A fração de células ACTA2+ve foi estimada usando o software Harmony versão 4.1 (PerkinElmer).

[00458] A Figura 8C mostra que vários anticorpos que se ligam especificamente a IL11RA foram capazes de neutralizar a ativação de fibroblastos humanos. 100% de inibição indica níveis de fibroblastos não estimulados e 0% para fibroblastos totalmente ativados.

[00459] A experiência acima foi repetida com fibroblastos dérmicos de camundongos primários para investigar as capacidades de neutralização de espécies cruzadas. A Figura 8D mostra que vários anticorpos que se ligam especificamente a IL11RA foram capazes de neutralizar a ativação de fibroblastos humanos. 100% de inibição indica níveis de fibroblastos não estimulados e 0% para fibroblastos totalmente ativados.

2.5.2 Desempenho In vitro de anticorpos anti-IL-11Rα

[00460] Os ensaios de neutralização foram realizados usando diluições em série dos clones 5E5, 9A7 e 13B10. Fibroblastos atriais humanos isolados de biópsias do apêndice atrial direito foram semeados em placas CellCarrier de 96 poços a uma densidade de 1X104/cm. As células foram estimuladas com citocina pró-fibrótica TGFβ1 (5 ng/ml) e incubadas com 5E5, 9A7 ou 13B10 em concentrações variáveis por 24h. O meio foi coletado e um ELISA de MMP2 e TIMP1 foi realizado de acordo com o protocolo. A secreção de MMP2 e TIMP1 no sobrenadante por fibroblastos foi avaliada para estimar a% de inibição. Um anticorpo anti-IL- 11 disponível comercialmente em uma concentração elevada (2 μg/ml) foi usado como um controle positivo e considerado 100% neutralizante. Os níveis de proteína de células estimuladas incubadas com um controle IgG indicam 0% de neutralização.

[00461] A Figura 8E mostra que os anticorpos se ligam a IL-11Rα e bloqueiam a IL-11 produzida endogenamente de interagir com o receptor. A sinalização da IL-11 é neutralizada, inibindo a produção das proteínas fibrogênicas MMP2 e TIMP1.

[00462] O experimento foi repetido usando IL-11:IL11RA (0,2 ng/ml) e concentrações variáveis de 5E5, 9A7 e 13B10 para confirmar o bloqueio de eventos de sinalização trans.

[00463] A Figura 8F mostra que os anticorpos neutralizam a sinalização de trans IL-11 nos fibroblastos e inibem a produção de proteína fibrogênica. A secreção das proteínas MMP2 e TIMP1 no sobrenadante por fibroblastos foi avaliada para estimar a % de inibição.

[00464] As experiências acima foram repetidas usando fibroblastos cardíacos primários de camundongo. Neutralização da resposta fibrótica in vitro avaliada pelo monitoramento dos níveis de MMP2. Fibroblastos cardíacos primários de camundongo foram incubados com TGFβ1 (5 ng/ml), IL-11 (2 ng/ml) ou IL-11:IL11RA (0,2 ng/ml) e concentrações variáveis de 9A7. A secreção de MMP2 no sobrenadante por fibroblastos humanos foi avaliada para estimar a % de inibição.

[00465] A Figura 8G mostra que o anticorpo 9A7 anti-IL-11Rα bloqueia IL-11 exógena ou endógena ou hiper IL-11, neutraliza a sinalização de IL-11 nos fibroblastos e inibe a produção de proteína fibrogênica.

[00466] A reatividade entre espécies foi confirmada para 9A7 em fibroblastos de pele de macaco estimulados com IL-11 de macaco recombinante (5 ng/ml) por 24h na presença de controle IgG ou anticorpo 9A7 a 2 μg/ml. Células de colágeno, ACTA2+ve e EdU+ve foram quantificadas usando a plataforma de imagem de alto conteúdo Operetta. O colágeno secretado foi quantificado usando o ensaio calorimétrico de colágeno Sirius Red. 9A7 foi encontrado para reduzir os níveis de cada marcador fibrótico comparável com um controle não tratado com IL-11.

2.6 Capacidade de inibir a sinalização de IL-11/IL-11R humana em uma variedade de tecidos

[00467] Investiga-se a capacidade dos anticorpos de neutralizar a sinalização e trans sinalização mediada por IL-11, em fibroblastos obtidos a partir de uma variedade de diferentes tecidos, essencialmente conforme descrito nas seções 2.1 e 2.3, exceto que, em vez de fibroblastos humanos, usam-se fibroblastos humanos derivados a partir de fígado, pulmão, rim, olho, pele, pâncreas, baço, intestino, cérebro e medula óssea para os experimentos.

[00468] Anticorpos anti-IL-11Rα demonstraram ser capazes de neutralizar a sinalização de IL-11/IL-11R em fibroblastos derivados de vários tecidos diferentes, conforme determinado pela observação de uma diminuição relativa na proporção de fibroblastos positivos para αSMA no final do período de cultura de 24 h na presença dos anticorpos anti-IL-11Rα em comparação com a cultura na ausência dos anticorpos. Exemplo 3:Versões quiméricas e humanizadas dos anticorpos IL-11 anti-humano de camundongo

[00469] Versões humanizadas e de camundongo/humano quiméricas dos anticorpos IL-11Rα humanos anti-monoclonais de camundongo do Exemplo 1 são preparados de acordo com métodos padrão.

3.1 Anticorpos quiméricos de camundongo/humano

[00470] Os anticorpos quiméricos de camundongo/humanos são preparados a partir dos anticorpos IL-11Rα anti-humanos monoclonais de camundongo conforme descrito em Human Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols, Michael Steinitz (Editor), Methods in Molecular Biology 1060, Springer Protocols, Humana Press (2014), no Capítulo 8 deste.

[00471] Brevemente, determinam-se as sequências de DNA que codificam VH e VL de hibridomas produzindo os anticorpos IL-11Rα anti- humanos de camundongo e estas são combinadas com a sequências de DNA que codifica regiões constantes de imunoglobulina humana para produzir uma sequência de anticorpo quimérico de camundongo/humano, a partir da qual um anticorpo de camundongo/humano quimérico é expresso em células de mamíferos.

3.2 Anticorpos humanizados

[00472] Versões humanizadas de sequências VH e VL de BSO- 9A7 também foram projetadas, e estas são mostradas nas SEQ ID NOs:8 a 12 e 14 a 17.

[00473] Anticorpos humanizados são preparados a partir dos anticorpos IL-11Rα anti-humanos monoclonais de camundongo conforme descrito em Human Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols, Michael Steinitz (Editor), Methods in Molecular Biology 1060, Springer Protocols, Humana Press (2014), no Capítulo 7 deste, particularmente na seção 3,1 do Capítulo 7 intitulada "Humanização de Anticorpos".

[00474] Brevemente, determinam-se as sequências de DNA que codificam VH e VL de hibridomas produzindo os anticorpos IL-11Rα anti- humanos de camundongo e estas são inseriras em sequências de DNA que codifica regiões constantes de imunoglobulina humana e regiões de framework de região variável para produzir uma sequência de anticorpo humanizado, a partir da qual um anticorpo humanizado é expresso em células de mamíferos.

[00475] A caracterização de anticorpos humanizados é descrita no Exemplo 14.

Exemplo 4: Análise bioquímica adicional de anticorpos anti-IL-11Rα

[00476] Os anticorpos descritos acima são submetidos a análise bioquímica adicional.

[00477] Os anticorpos são analisados por BIAcore, Biolayer interferometry (BLI) e análise MicroScale Thermophoresis (MST) para determinar a afinidade de ligação ao IL-11Rα humano.

[00478] A determinação por BIAcore de afinidade de anticorpo por análise ressonância plasmônica de superfície (SPR) é realizada conforme descrito em Rich et al., Anal Biochem. 2008 Fev 1; 373(1):112-20.

[00479] A análise por interferometria de biocamada da afinidade de anticorpo é realizada conforme descrita em Concepcion et al., Comb Chem High Throughput Screen. 2009 Set; 12(8):791-800.

[00480] A análise por Termoforese em MicroEscala da afinidade de anticorpo é realizada conforme descrita em Jerabek-Willemsen et al.Assay Drug Dev Technol. 2011 Ago; 9(4):342–353.

[00481] A agregação dos anticorpos é analisada por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC), conforme descrito em Iacob et al., J Pharm Sci. 2013 Dez; 102(12):4315–4329.

[00482] A hidofobicidade dos anticorpos é analisada por cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), conforme descrito em Haverick et al., MAbs. 2014 Jul-Ago;6(4):852-8.

[00483] A temperatura de fusão dos anticorpos é analisada por Fluorimetria de varredura diferencial (DSF), conforme descrito em Menzen and Friess, J Pharm Sci. 2013 Fev;102(2):415-28. Exemplo 5:Inibição da fibrose in vivo usando anticorpos anti-IL-11rα

[00484] A utilidade terapêutica dos anticorpos anti-humanos IL- 11Rα é demonstrada em modelos de camundongo de fibrose in vivo para vários tecidos diferentes. Os camundongos usados nos experimentos são camundongos tipo selvagem (isto é, camundongos IL-11RA+/+).

5.1 Fibrose cardíaca

[00485] Implanta-se uma bomba e os camundongos são tratados com AngII (2mg/kg/dia) durante 28 dias.

[00486] Anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes ou anticorpos de controle são administrados a grupos diferentes de camundongos por injeção intravenosa. Ao final do experimento, o teor de colágeno é avaliado nos átrios dos camundongos por meio de um kit de ensaio calorimétrico baseado em hidroxiprolina e o nível de expressão de RNA dos marcadores ou fibrose Col1A2, αSMA (ACTA2) e fibronectina (Fn1) foram analisados por qPCR.

[00487] Camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes têm uma resposta fibrótica reduzida em tecido cardíaco em comparação a camundongos tratados com anticorpos de controle, conforme evidenciado pela redução da expressão de marcadores de fibrose.

5.2 Fibrose renal

[00488] Estabelece-se um modelo de camundongo para fibrose renal, em que a fibrose é induzida por injeção intraperitoneal de ácido fólico (180mg/kg) em veículo (0,3M NaHCCh); camundongos de controle foram administrados apenas veículo.

[00489] Anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes ou anticorpos de controle são administrados a grupos diferentes de camundongos por injeção intravenosa. Os rins são removidos no 28º dia, pesados e fixados em formalina com tampão neutro 10% para coloração tricrômica de Masson e de Sirius ou congelados imediatamente para ensaio de colágeno, RNA e estudos proteicos.

[00490] O RNA total é extraído a partir do rim congelado imediatamente usando o reagente de Trizol (Invitrogen) e o método de Qiagen TissueLyzer seguido por purificação da coluna de RNeasy (Qiagen). O cDNA é preparado usando o kit de síntese de cDNA iScriptTM, em que cada reação continha 1μg de RNA total, conforme as instruções do fabricante.

[00491] A análise quantitativa da expressão gênica de RT-PCR é realizada em amostras triplicadas com TaqMan (Biosystems aplicado) ou a tecnologia verde SYBR rápida (Qiagen) usando StepOnePlusTM (Biosystem aplicado) em 40 ciclos. Os dados de expressão são normalizados para o nível de expressão de mRNA GAPDH e usou-se o método 2-∆∆Ct para calcular a modulação. Os rins congelados imediatamente são submetidos à hidrólise ácida ao aquecer em 6M HCl em uma concentração de 50 mg/ml (95 °C, 20 horas). A quantidade de colágeno total no hidrolisado é quantificada com base na detecção colorimétrica de hidroxiprolina usando o kit de ensaio Quickzyme Total Collagen (Quickzyme Biosciences) seguindo as instruções do fabricante.

[00492] Camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes têm uma resposta fibrótica reduzida em tecido renal em comparação a camundongos tratados com anticorpos de controle, conforme evidenciado pela redução da expressão de marcadores de fibrose.

5.3 Fibrose pulmonar

[00493] Os camundongos são tratados por administração intratraqueal de bleomicina no dia 0 a fim de estabelecer uma resposta fibrótica no pulmão (fibrose pulmonar).

[00494] Anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes ou anticorpos de controle são administrados a grupos diferentes de camundongos por injeção intravenosa. Os camundongos são sacrificados no 21º dia e analisados quanto as diferenças nos marcadores de fibrose.

[00495] Camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes têm uma resposta fibrótica reduzida em tecido pulmonar em comparação a camundongos tratados com anticorpos de controle, conforme evidenciado pela redução da expressão de marcadores de fibrose.

5.4 Fibrose da pele

[00496] Camundongos são tratados por administração subcutânea de bleomicina no dia 0 a fim de estabelecer uma resposta fibrótica na pele.

[00497] Anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes ou anticorpos de controle são administrados a grupos diferentes de camundongos por injeção intravenosa. Os camundongos são sacrificados no 21º dia e analisados quanto as diferenças nos marcadores de fibrose.

[00498] Camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes têm uma resposta fibrótica reduzida em tecido dérmico em comparação a camundongos tratados com anticorpos de controle, conforme evidenciado pela redução da expressão de marcadores de fibrose.

5.5 Fibrose ocular

[00499] Para analisar a fibrose no olho, os camundongos IL- 11RA-/-e IL-11RA +/+ são submetidos a trabeculectomia (cirurgia de filtração) no dia 0 para iniciar uma resposta de cicatrização de feridas no olho. Este modelo de camundongo de cirurgia de filtração de glaucoma demonstrou-se como um modelo eficiente para avaliar a resposta de cicatrização de ferida no olho (Khaw et al. 2001, Curr OpinOphthalmol 12, 143–148; Seet et al. 2011, Mol. Med. 17, 557–567) e demonstrou com sucesso o efeito benéfico de moduladores fibróticos in vivo (Mead et al. 2003, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 3394–3401; Wong et al. 2003 Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1097–1103; Wong et al. 2005, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 46, 2018–2022).

[00500] Brevemente, a conjuntiva é dissecada para expor a esclera subjacente, depois disso, é feita uma incisão através da esclera dentro da câmara anterior do olho usando uma agulha de 30 calibres. A fístula criada permite que o humor aquoso saísse para dentro e abaixo da conjuntiva. A conjuntiva dissecada é, então, fixada e envolta no limbo por uma sutura escleral de nylon de monofilamento preto Ethilon 10-0 (0,2 métrico). Uma pomada fucitálmica é instilada no final do procedimento. A cirurgia é realizada sob anestesia por injeção intraperitoneal de uma mistura de 0,1 ml de cetamina/xilazina, assim como aplicação tópica de uma gota por olho de xillocaína 1%. A pomada fucithalmic é instilada após a cirurgia para impedir infecção. A cirurgia é realizada com tesoura cirúrgica e fórceps esterilizados com álcool propílico 70% e agulhas estéreis.

[00501] O líquido acumulado sob a conjuntiva suturada é observado como uma bolha conjuntiva. Os camundongos são eutanasiados no 7º dia pós-operatório para análise. Para análises imuno-histológicas qualitativas, os olhos dos camundongos são coletados por enucleação e, em seguida, seccionados. A maturação das fibras colágenas é avaliada com o uso da técnica de luz de polarização/vermelha de picro-sirius (Szendröi et al. 1984, Acta Morphol Hung 32, 47 – 55); laranja-vermelho indicava colágeno maduro e amarelo/verde indicava colágeno imaturo recém formado.

[00502] Anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes ou anticorpos de controle são administrados a diferentes grupos de camundongos por injeção intravenosa, e a fibrose é monitorada no tecido ocular.

[00503] Camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes têm uma resposta fibrótica reduzida em tecido ocular em comparação a camundongos tratados com anticorpos de controle, conforme evidenciado pela redução da expressão de marcadores de fibrose.

5.6 Outros tecidos

[00504] O efeito de anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes na fibrose também é analisado em modelos de camundongo de fibrose para outros tecidos, tais como o fígado, rim, intestino e também é analisado em um modelo relevante para a fibrose de múltiplos órgãos (isto é, sistêmica).

[00505] A resposta fibrótica é medida e comparada entre camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes e camundongos tratados com anticorpos de controle. Camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes têm uma resposta fibrótica reduzida em comparação a camundongos tratados com anticorpos de controle, conforme evidenciado pela redução da expressão de marcadores de fibrose.

[00506] O desempenho de neutralização do anticorpo anti-IL- 11Rα 9A7 foi determinado em células estreladas hepáticas humanas primárias (fígado) medindo a concentração de MMP2, seguindo o protocolo no Exemplo 2.5.2. HSCs humanos primários foram incubados com TGFβ1 (5 ng/ml; IL-11 endógeno) ou IL-11 exógeno (2 ng/ml) e concentrações variáveis de 9A7. A secreção de MMP2 no sobrenadante por fibroblastos humanos foi avaliada para estimar a % de inibição.

[00507] A Figura 8H mostra que o anticorpo anti-IL-11Rα 9A7 inibe a produção de proteína fibrogênica induzida por IL-11 endógena (parte superior) ou IL-11 exógena (parte inferior), demonstrando assim a neutralização da resposta fibrótica. Exemplo 6: Inibição de câncer in vivo usando anticorpos anti-IL-11Rα

[00508] O efeito de tratamento com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes em câncer é analisado em modelos de camundongo de câncer.

[00509] Modelos de câncer de mama, pulmão e gastrointestinal são estabelecidos em camundongos, os camundongos são tratados por administração de anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes ou anticorpos de controle e o desenvolvimento/progressão do câncer é monitorado.

[00510] Um efeito anticancerígeno é observado para os anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes, conforme evidenciado por sintomas reduzidos de câncer e/ou aumento de sobrevida em comparação a camundongos tratados com anticorpos de controle.

[00511] O efeito da neutralização de anticorpos anti-IL-11Rα em combinação com agentes quimioterápicos, por exemplo, cisplatina, também é investigado.

[00512] Um efeito aditivo é observado na inibição do crescimento do tumor ao usar anticorpos anti-IL-11Rα em combinação com um agente quimioterápico.

Exemplo 7: Inibição de AMD usando anticorpos anti-IL-11Rα

[00513] O efeito de tratamento com anticorpos anti-IL-11Rα neutralizantes é investigado na degeneração macular relacionada à idade úmida (AMD).

[00514] O anticorpo anti-IL-11Rα neutralizante é administrado a indivíduos com AMD úmido. Em algumas condições de tratamento, administra-se aos indivíduos terapia antagonista do VEGF (por exemplo, ranibizumabe, bevacizumabe, pegaptanibe, brolucizumabe ou aflibercepte), terapia antagonista de PDGF (por exemplo, pegpleraniba) ou são tratados por terapia de coagulação a laser em adição ao tratamento com anticorpos anti-IL-11Rα.

[00515] Uma redução na patologia de AMD úmido e/ou na melhoria nos sintomas de AMD úmido é observada em indivíduos tratados com o anticorpo anti-IL-11Rα em comparação aos indivíduos não tratados com anticorpo anti-IL-11Rα. Exemplo 8: Inibição de fibrose renal ou lesão renal usando anticorpos anti-IL-11Rα

[00516] Camundongos da mesma ninhada com 10 a 12 semanas de idade com peso semelhantes tinham fibrose renal induzida por injeção intraperitoneal (i.p.) de ácido fólico (180 mg kg–1) em veículos (0,3 M NaHCO3); camundongos de controle foram administrados com apenas veículo.

[00517] O clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 (VH = SEQ ID NO:7, VL = SEQ ID NO:13) foi administrado um dia após o tratamento com ácido fólico e, em seguida, 3 vezes por semana a uma dose de 20 mg/kg. Os camundongos foram eutanasiados 28 dias após a injeção.

[00518] Os níveis plasmáticos de ureia e creatinina dos camundongos foram quantificados usando kit de ensaio de ureia (ab83362, Abcam) e do kit de ensaio de creatinina (ab65340, Abcam), respectivamente, de acordo com as instruções do fabricante. A quantidade de colágeno total no rim foi quantificada com base na detecção colorimétrica de hidroxiprolina usando um kit de ensaio Quickzyme Total Collagen (Quickzyme Biosciences). Todos os ensaios colorimétricos foram realizados de acordo com as instruções do fabricante.

[00519] Os tecidos foram embebidos em parafina e os rins foram seccionados a 3 μm. Para as seções de parafina, os tecidos foram fixados durante 24h, à temperatura ambiente, em formalina de tampão neutro 10% (Sigma-Aldrich), desidratados e embutidos em parafina. Para crioseções, os órgãos recém dissecados foram embutidos com composto de temperatura de corte ideal Tissue-Tek (VWR International). Os crio-moldes foram então congelados em um béquer de metal com isopentano resfriado em nitrogênio líquido e as seções foram armazenadas a -80 °C. O colágeno total foi corado com o kit de coloração para tricrômio de Masson (HT15, Sigma- Aldrich) de acordo com as instruções do fabricante. As imagens das seções foram capturadas e as áreas fibróticas manchadas em azul foram determinadas semiquantitativamente com software ImageJ (versão 1,49). Para imunohistoquímica, as seções de tecido foram incubadas com anticorpo ACTA2 (ab5694, Abcam). A coloração de anticorpo preliminar foi visualizada usando um kit de Detecção de Polímero IgG ImmPRESS HRP Anti-Rabbit (Vector Laboratories) com Substrato de Peroxidase ImmPACT DAB (Vector Laboratories) como o chromogênio. Em seguida, as seções foram contracoloradas com a hematoxilina de Mayer (Merck).

[00520] As Figuras 9A e 9B mostram que camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα foram verificados como tendo uma redução significativa na coloração quanto ao colágeno, indicando que o tratamento com anticorpos anti-IL-11Rα inibiu fibrose renal.

[00521] A Figura 10A mostra que a razão de creatina/albumina urinária foi significativamente reduzida pelo tratamento com anticorpo anti- IL11, indicando um nível reduzido de dano renal em camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα.

[00522] O clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 foi avaliado quanto à sua capacidade de reduzir a fibrose renal induzida por ácido fólico em diferentes concentrações (0,5, 1, 5 e 10 mg/kg). IgG (10 mg/kg) foi usado como um controle. As injeções de anticorpos foram iniciadas um dia antes do tratamento com folato e realizadas quinzenalmente. Os animais foram sacrificados três semanas após a lesão induzida por folato para avaliar o conteúdo de colágeno renal usando o ensaio HPA.

[00523] A Figura 10B mostra que a terapia anti-IL-11Rα demonstrou reduzir o conteúdo de colágeno renal na fibrose renal induzida por ácido fólico de um modo dependente da dose.

[00524] Em outro experimento, um modelo de camundongo de ferimento renal agudo foi induzido por obstrução ureteral unilateral (UUO). Brevemente, camundongos foram tratados por operação simulada ou obstrução ureteral de um ureter. Os camundongos receberam IgG, clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 (20 mg/kg; nos dias cirúrgicos -1, 13,5) e rins lesionados ('UUO') ou rins não lesionados contralaterais (Con) foram colhidos no dia 7 pós operatório.

[00525] A avaliação semiquantitativa da lesão tubular foi realizada por análise histológica de moldes, atrofia tubular ou dilatação tubular cega às condições experimentais (Classificação de lesão tubular:0, nenhuma; 1, mínima; 2, leve; 3, moderada; 4, severa).

[00526] As Figuras 11A e 11B mostram que o tratamento com anticorpo anti-IL-11Rα reduziu o dano tubular em um modelo de camundongo de lesão renal aguda. Exemplo 9: Inibição da fibrose cardíaca usando anticorpos anti-IL- 11Rα

[00527] O efeito antifibrótico do tratamento com anticorpo anti-IL- 11Rα foi analisado em um modelo de camundongo de fibrose cardíaca.

[00528] Brevemente, a constrição aórtica transversal (TAC) foi realizada nos camundongos machos conforme descritos previamente

(Tarnavski, O. et al. Mouse cardiac surgery:comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies. Physiol. Genomics 16, 349–360 (2004)). Os camundongos idade combinada foram submetidos a um procedimento cirúrgico simulado sem TAC. O ecocardiograma bidimensional trans-torácico de Doppler foi usado para confirmar gradientes de pressão aumentados (≥ ;40 mm Hg), indicativo de um TAC bem-sucedido.

[00529] Camundongos foram eutanasiados na 2ª semana após o TAC para avaliação histológica e molecular. O clone de anticorpo anti-IL- 11Rα BSO-9A7 (VH = SEQ ID NO:7, VL = SEQ ID NO:13) ou anticorpo IgG de controle foram administrados intraperitonealmente 3 vezes por semana a uma dose de 20 mg/kg. Após duas semanas, os corações foram coletados e avaliados quanto à extensão de fibrose usando o kit de coloração tricrômica de Masson (HT15, Sigma-Aldrich), de acordo com as instruções do fabricante. A quantidade de colágeno total no coração foi quantificada com base na detecção colorimétrica de hidroxiprolina usando um kit de ensaio Quickzyme Total Collagen (Quickzyme Biosciences).

[00530] Os resultados da análise são mostrados nas Figuras 12A e 12B. Os camundongos tratados com anticorpo neutralizante anti-IL-11Rα apresentaram níveis reduzidos de colágeno no coração em comparação com camundongos tratados com anticorpo de controle IgG (Figura 12A) e nível reduzido de fibrose no epicárdio, endocárdio e nas regiões perivasculares como em comparação com camundongos tratados com anticorpo de controle IgG (Figura 12B). Exemplo 10: Inibição e reversão de fibrose hepática usando anticorpos anti-IL-11Rα

[00531] A esteato-hepatite não alcoólica (NASH) é uma doença hepática comum caracterizada pela progressão de inflamação para fibrose e, eventualmente, insuficiência hepática. As células estreladas hepáticas (HSCs) desempenham um papel importante na patogênese da NASH.

Estímulos pró-fibróticos, por exemplo, TGFβ1, PDGF e fatores pró- inflamatórios podem ativar e transformar HSCs em miofibroblastos hepáticos que compartilham características com miofibroblastos derivados de fibroblastos. NASH foi usado como um exemplo de fibrose hepática.

10.1 IL-11 e fibrose hepática

[00532] A expressão de IL-11 em HSCs estimulados com TGFβ1 foi detectada por qPCR. O RNA total foi extraído do lisado de HSCs usando trizol (Invitrogen) seguido de purificação em coluna RNeasy (Qiagen). Os cDNAs foram sintetizados com o kit de síntese de cDNA iScriptTM (Bio- Rad) de acordo com as instruções do fabricante. A análise de expressão gênica foi realizada em amostras duplicadas com TaqMan (Applied Biosystems) ou tecnologia fast SYBR green (Qiagen) usando StepOnePlusTM (Applied Biosystem) ao longo de 40 ciclos. Os dados de expressão foram normalizados para a expressão de mRNA de GAPDH e a alteração de dobra (FC) foi calculada usando o método 2-ΔΔCt. Os níveis de expressão em HSCs de IL6R, gp130 e IL-11Rα também foram detectados por qPCR.

[00533] Os níveis de IL-11 em amostras de fígado de pacientes foram detectados a partir de fatias de fígado cortadas com precisão humana que foram cortadas e incubadas com TGFβ1 por 24 h. Western blots foram realizados e densitometria dos blots plotados em comparação com os níveis de referência de GAPDH.

[00534] Os resultados são mostrados nas Figuras de 13A a 13C. IL-11 foi encontrado para ser regulado positivamente em HSCs estimulados com TGFβ1 (13A). HSCs expressam níveis elevados da subunidade alfa do receptor de IL-11 (IL-11Rα) (13B). Os níveis de IL-11 em amostras de fígado de pacientes com NASH estavam aumentados em comparação com indivíduos saudáveis (13C).

[00535] As células foram estimuladas com IL-11, TGFβ1 ou PDGF para investigar o efeito de IL-11 na ativação e invasão de HSCs.

[00536] HSCs foram semeados em placas CellCarrier pretas de 96 poços (PerkinElmer) a uma densidade de 5x103 células por poço. Seguindo as condições experimentais, as células foram fixadas em paraformaldeído a 4% (PFA, 28908, Thermo Fisher Scientific), permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% (Sigma) e locais não específicos foram bloqueados com BSA a 0,5% e Tween-20 a 0,1% em PBS. As células foram incubadas durante a noite (4 °C) com anticorpos primários (1:500), seguido por incubação com os anticorpos secundários AlexaFluor 488 apropriados (1:1000). EdU-Alexa Fluor 488 foi incorporado usando um kit Click-iT EdU Labeling (C10350, Thermo Fisher Scientific) de acordo com o protocolo do fabricante. As células foram contrastadas com 1 μg ml-1 DAPI (D1306, Thermo Fisher Scientific) em solução de bloqueio. Cada condição foi fotografada a partir de poços duplicados e um mínimo de 7 campos por poço usando o sistema de imagem de alto conteúdo Operetta 1483 (PerkinElmer). A quantificação de células ACTA2+ve, indicando o número de miofibroblastos, foi medida usando Harmony v3.5.2 (PerkinElmer). A medição da intensidade de fluorescência por área de Colágeno I (normalizada para o número de células) foi realizada com Columbus 2.7.1 (PerkinElmer). O colágeno total secretado no sobrenadante da cultura celular foi quantificado usando o kit de detecção de colágeno Sirius red (9062, Chondrex).

[00537] O comportamento invasivo de HSCs humanos foi testado usando ensaios de invasão de câmara Boyden de 24 poços (Cell Biolabs Inc.). Números iguais de HSCs em meio HSC sem soro foram semeados em triplicado no matrigel revestido com ECM e foram autorizados a invadir em meio HSC contendo 0,2% de FBS. Após 48 h de incubação com estímulos, o meio foi aspirado e as células não invasivas foram removidas usando cotonetes. As células que invadiram em direção à câmara inferior foram coradas com solução de coloração de células (Cell Biolabs Inc.) e células invasivas de 5 campos não sobrepostos de cada membrana foram fotografadas e contadas com ampliação de 40x.

[00538] Os resultados são mostrados nas Figuras de 13D a 13G. Foi descoberto que IL-11 ativa HSCs em uma extensão semelhante a TGFβ1 ou PDGF, transformando HSCs quiescentes em ACTA2+ve miofibroblastos (13D) que produzem (13E) e secretam colágeno (13F). IL- 11 também promoveu a invasão da matriz de HSC dependente da dose (13G; a invasão é um aspecto importante da patobiologia de HSC em NASH).

[00539] In vivo, camundongo recombinante II-11 (rmll-11; 100 μg/kg) foi administrado por via subcutânea a camundongos diariamente durante 21 dias. O conteúdo total de hidroxiprolina nos fígados foi medido usando o kit de ensaio Quickzyme Total Collagen (Quickzyme Biosciences). Os níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT) de camundongo foram medidos usando o kit Alanine Transaminase Activity Assay (ab105134, abeam). A expressão de RNA de marcadores pró-fibróticos Acta2, Col1a1, Col1a2 e Col1a3 foi medida por qPCR, como antes.

[00540] Os resultados são mostrados na Figura 13H. A administração de IL-11 aumentou o conteúdo de colágeno hepático, o mRNA do marcador de fibrose e os níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT).

[00541] Esses dados mostram que os HSCs são uma fonte e um alvo proeminente da IL-11 no fígado humano e que a IL-11 está elevada na NASH. IL-11 induz ativação de células estreladas hepáticas e fibrose hepática.

10.2 Tratamento de NASH usando terapias anti-IL-11Rα

[00542] O clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 foi avaliado quanto à sua capacidade de tratar fibrose em NASH.

[00543] HSCs foram tratados com fatores promotores de NASH na presença ou ausência de anticorpo anti-IL-11Rα para investigar a transformação de HSCs em miofibroblastos. As culturas de HSC foram estimuladas com 5 ng/ml de TGFβ1 durante 24 horas na presença de anticorpos IgG ou anti-IL-11Rα (6 μg/ml). ACTA2+ve números de células (miofibroblastos ativados) foram medidos na plataforma Operetta conforme descrito acima. Culturas de HSC foram estimuladas separadamente por 24 horas com estímulos NASH PDGF (20 ng/ml), CCL2 (5 ng/ml), angiotensina II (100 nM), bFGF (10 ng/ml) ou estresse oxidativo (H2O2; 0,2 mM) na presença de anticorpo IgG ou anti-IL-11Rα (2 μg/ml). As proporções de células ACTA2+ve e a invasão de HSCs foram medidas como antes. O colágeno 1 produzido por cada cultura de HSC foi imunomarcado e a fluorescência quantificada. O anticorpo IgG foi usado como controle.

[00544] Os resultados são mostrados nas Figuras de 14A a 14D. O anticorpo anti-IL-11Rα foi encontrado para reduzir o número de células ACTA2+ve em culturas de HSC estimuladas com TGFβ1 (14A), bem como HSCs estimuladas com PDGF, CCL2, angiotensina II, bFGF ou estresse oxidativo (14B), ou seja, tratamento com anticorpos bloqueou a transição conduzida por estímulos de HSCs em miofibroblastos. O anticorpo anti-IL- 11Rα também reduziu a invasão de HSC induzida por PDGF ou CCL2 (14C). A produção de colágeno 1 foi reduzida após o tratamento com anticorpo anti-IL-11Rα (14D).

[00545] Assim, a inibição da sinalização IL-11 por terapias anti- IL-11Rα previne a ativação das células estreladas hepáticas e a fibrose hepática.

[00546] Um estudo de prevenção de doença hepática no início da NASH foi realizado para verificar a atividade antifibrótica e protetora do fígado de 9A7 in vivo. Camundongos C57BI/6Ntac foram alimentados com uma dieta deficiente em metionina/colina (MCD) indutora de NASH suplementada com 60 kcal% de gordura (A06071302, Dietas de pesquisa) (dieta HFMCD) para induzir danos ao fígado e fibrose. Após uma semana de dieta NASH (quando os níveis de ALT são ~800u/L (aumento de ~40 vezes em comparação com a ração normal), e no momento em que há uma esteato-hepatite robusta estabelecida), os animais foram iniciados com controle de IgG ou anticorpo anti-IL-11Rα duas vezes por semana por um período de quatro semanas. Após 4 semanas, os animais foram submetidos à eutanásia e amostras coletadas para análise. Os dados são média + - DP; cada ponto indica uma réplica biológica; Teste de Dunnett de tratamento 9A7 vs controle de IgG; *P<0,05; **P<0,01; ****P<0,0001.

[00547] As Figuras 14E e 14F mostram que mesmo o tratamento com 0,5 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα teve um efeito significativo nos níveis séricos de ALT no modelo de camundongo. Descobriu-se que dosagem mais alta reverte quase completamente (≥ 90%) o dano hepático estabelecido e previne fortemente a fibrose hepática neste modelo extremo.

[00548] Experimentos in vivo foram realizados para determinar o efeito do anticorpo anti-IL-11Rα em NASH de estágio avançado.

[00549] Camundongos C57BL/6N machos de cinco semanas de idade foram alimentados com dieta deficiente em metionina/colina (MCD) indutora de NASH suplementada com 60 kcal% de gordura (A06071302, Dietas de Pesquisa) (dieta HFMCD). Os ratos de controlo foram alimentados com ração normal (NC, Speciality Feeds). Após 6 semanas na dieta HFMCD, quando a IL-11 está fortemente regulada positivamente e o colágeno se acumulou, o anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 (10 mg/kg) foi administrado duas vezes por semana durante 4 semanas. Fígados e soro foram coletados na semana 10 e analisados para ativação de ERK, conteúdo de hidroxiprolina no fígado e níveis séricos de ALT. Os níveis de ERK total e fosforilado em fígados foram detectados por Western blot, o teor de hidroxiprolina total nos fígados foi medido usando o kit de ensaio Quickzyme Total Collagen (Quickzyme Biosciences), os níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT) foram medidos usando o Kit de Ensaio de Atividade de Alanina Transaminase (ab105134, travessão).

[00550] Os resultados são mostrados nas Figuras de 15A a 15C. Verificou-se que a terapia anti-IL-11Rα aboliu a ativação de ERK (15A) e inibiu a progressão da fibrose hepática (15B) e os níveis séricos de ALT (15C), enquanto a esteatose permaneceu inalterada.

[00551] A terapia com anti-IL-11Rα foi investigada em outro modelo de NASH avançado. Camundongos C57BL/6 com 2 dias de idade foram administrados com uma única injeção subcutânea de 200 μg de estreptozotocina e alimentados com uma dieta alimentar normal por 4 semanas. Os camundongos foram então trocados por uma dieta HFMCD por 7 semanas e, em seguida, tratados junto com a dieta HFMCD com 10 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 ou controle de IgG 3x por semana por 7 semanas subsequentes. A expressão de RNA foi medida para os genes de fibrose e inflamação Collal, Col1a2, Col1a3, Timpl, Tgfβ, Mmp2, Tnfα, Ccl2 e Cc/5.

[00552] Os resultados são mostrados na Figura 15D. Verificou-se que a terapia anti-IL-11Rα inibe fortemente a expressão de genes indicativos de fibrose e inflamação.

10.3 A neutralização da sinalização de IL-11 reverte a fibrose hepática

[00553] A fibrose hepática grave foi estabelecida alimentando camundongos com dieta NASH MCD por 10 semanas. A alimentação foi então trocada para ração normal (NC) e os camundongos foram tratados com anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 (20 mg/kg) duas vezes por semana durante seis semanas. Camundongos alimentados com dieta NC durante o experimento e anticorpos IgG foram usados como controles. O colágeno total foi medido pela detecção do conteúdo de hidroxiprolina no fígado, conforme descrito acima. A expressão de mRNA foi medida por qPCR conforme descrito acima.

[00554] Os resultados são mostrados na Figura 16. O conteúdo de colágeno hepático foi significativamente revertido após três semanas de tratamento com anticorpo anti-IL-11Rα e uma reversão ainda maior foi observada em seis semanas (16A). Notavelmente, o conteúdo de colágeno hepático permaneceu inalterado em animais tratados com controle de IgG durante o experimento. Os gráficos mostram o número total de semanas após a adição do anticorpo na semana 10.

[00555] A reversão da fibrose hepática é favorecida quando os HSCs transformados passam por senescência ou reversão para um estado celular ACTA2-ve inativo. Verificou-se que a terapia com anticorpo anti-IL- 11Rα diminui a expressão de Acta2, Mmp2 e Timp1 e aumenta os marcadores de senescência p21, p16 e p53.

[00556] Para verificar diretamente se a sinalização de IL-11 é necessária para manter HSCs em um estado transformado, HSCs foram estimulados com TGFβ1 (5 ng/ml) ou PDGF (20 ng/ml) por 72 horas e, em seguida, tratados com anti-IL-11Rα anticorpo BSO-9A7 ou controle de IgG (2 μg/ml) por mais 24 horas na presença de estimulação contínua de TGFβ1 ou PDGF. HSCs não estimulados foram usados como um controle não fibrótico. As células ACTA2+ve e o colágeno secretado foram detectados por imunocoloração e a fluorescência foi quantificada. A atividade ERK foi detectada por Western blotting.

[00557] Os resultados são mostrados nas Figuras de 17A a 17E. Foi descoberto que o tratamento anti-IL-11Rα reverteu a porcentagem de células ACTA2+ve (17A, B) e a quantidade de colágeno secretado (17C, D) para níveis próximos da linha de base em 24 horas da inibição de sinalização de IL-11. A atividade de ERK também foi amplamente diminuída em 24 horas, apesar da estimulação contínua de TGFβ1/PDGF (17E).

[00558] Portanto, a inibição da transformação de HSC dependente de IL-11 por terapias anti-IL-11Rα causa senescência e reversão de HSC levando à regressão de fibrose.

[00559] O efeito da terapia anti-IL-11 na fase inicial de NASH foi investigado. No modelo de dieta HFMCD de NASH, a inflamação atinge o pico em seis semanas e é seguida por uma fase de fibrose grave. Os camundongos foram alimentados com dieta HFMCD por uma semana e,

em seguida, tratados duas vezes por semana por mais cinco semanas na dieta com 10 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 ou controle de IgG. A dieta normal (NC) foi usada como um controle. O conteúdo de hidroxiprolina hepática e os níveis séricos de ALT também foram detectados usando 0,5, 1 e 5 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα. A fosforilação de ERK, o conteúdo de hidroxiprolina no fígado e os níveis séricos de ALT foram avaliados como antes. As medições de triglicerídeos hepáticos (TG) foram realizadas usando o kit de ensaio colorimétrico de triglicerídeos (10010303, Cayman). Os tecidos hepáticos foram fixados por 48 horas à TA em 10% de formalina tamponada com neutro (NBF), desidratados, incluídos em blocos de parafina e seccionados às 19 horas. As secções coradas com Tricrômio de Masson foram examinadas por microscopia óptica, barras de escala 100 μm.

[00560] Os resultados são mostrados nas Figuras de 18A a 18G. A inibição de sinalização de IL-11 durante a esteato-hepatite precoce usando terapia anti-IL-11Rα foi encontrada para resultar em camundongos com fígados que eram notavelmente menos esteatóticos e com uma redução significativa em ambas as gotículas de lipídeos (18A) e no conteúdo de triglicerídeos (18B). A dieta de HFMCD induz esteato-hepatite acentuada e dano hepático após uma semana (ALT≥ 700 U L-1), que foi revertido de maneira dependente da dose para quase normal após três semanas de terapia anti-IL-11Rα (18C, 18D). O conteúdo de hidroxiprolina (colágeno) do fígado (18E) e a fosforilação ERK (18G) não aumentaram ao longo das seis semanas, demonstrando que os camundongos tratados com anti-IL-11Rα não desenvolveram fibrose durante o experimento e reafirmando os fortes efeitos antifibróticos associados à inibição de sinalização de IL-11. Verificou-se que a terapia anti-IL-11Rα tem um efeito dependente da dose no conteúdo de hidroxiprolina (colágeno) hepático (18F).

[00561] O efeito do tratamento com anti-IL-11Rα na expressão de genes pró-fibróticos e pró-inflamatórios no modelo de camundongo NASH foi avaliado usando RNA-seq e qPCR, realizados como antes. A expressão de genes envolvidos no metabolismo lipídico (ACOX1, SCD1, FASN e SREBF1) também foi avaliada.

[00562] Os resultados são mostrados nas Figuras de 18H a 18K. A regulação positiva de genes pró-fibróticos e pró-inflamatórios foi abolida após a terapia com anti-IL-11Rα. O mapa de calor de expressão diferencial de escores Z de genes pró-fibróticos e pró-inflamatórios (transcrições por milhão de leituras mapeadas, TPM) mostra que o tratamento anti-IL-11Rα produziu expressão semelhante de genes pró-fibróticos e pró-inflamatórios observados em camundongos em uma dieta de controle NC (não NASH) (18G). Nem os marcadores de inflamação Tnfα e Ccl2 (181) nem os marcadores pró-fibróticos Tgfβ1, Acta2, Timp1, COl1a1, Col 1a2 ou Col3a1 (18J) foram regulados positivamente em camundongos tratados com anti- IL-11Ra terapia. A expressão do gene do metabolismo lipídico também foi restabelecida pela terapia anti-IL-11Rα (18K).

[00563] Assim, a neutralização da sinalização de IL-11 reverte o dano hepático no estágio inicial de NASH.

[00564] Macrófagos residentes e monócitos infiltrantes são importantes para a patogênese de NASH e uma importante fonte de TGFβ1 durante a progressão da doença. As populações de células inflamatórias hepáticas no modelo NASH inicial foram examinadas quanto à presença de células imunes (CD45+) em geral e a presença de células Ly6C+veTGFβ1+ve em particular.

[00565] As células imunes foram isoladas do fígado como descrito anteriormente (Sheng, J., Ruedl, C. & Karjalainen, K. Most Tissue- Resident Macrophages Except Microglia Are Derived from Fetal Hematopoietic Stem Cells. Immunity 43, 382-393 (2015)). Os tecidos do fígado foram picados e digeridos com 100 μg/ml de Colagenase IV e 20 U/ml de DNase I, a 37 °C durante 1 hora. Após a digestão, as células foram passadas por um filtro para obter uma suspensão de células únicas e submetidas a centrifugação em gradiente de percoll para isolamento de células imunes. A coloração por CyTOF (citometria de massa por tempo de voo) foi realizada conforme descrito anteriormente (Chew, V. et al. Delineation of an immunosuppressive gradient in hepatocellular carcinoma using high-dimensional proteomic and transcriptomic analyses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 114, E5900-E5909 (2017)). As células foram descongeladas e coradas com cisplatina (Fluidigm) para identificar células vivas, seguido de coloração com anticorpo CD45 conjugado a metal, para fins de código de barras. Após o código de barras, as células foram coradas com anticorpo de superfície celular conjugado a metal (Ly6C). As células foram então fixadas com PFA a 1,6%, permeabilizadas com metanol 100% e submetidas a coloração de anticorpo intracelular (TGFβ1). As células foram finalmente marcadas com intercalador de DNA antes da aquisição no citômetro de massa Helios (Fluidigm). Para análise, as primeiras células únicas vivas foram identificadas, seguidas de descodificação para identificar amostras individuais. A comutação manual foi realizada usando o software Flowjo (Flowjo, LLC, EUA).

[00566] Os resultados são mostrados nas Figuras de 19A a 19C. Verificou-se que a terapia com anticorpo anti-IL-11Ra reduz o número de células CD45+ (19A) em fígados tratados e causou uma redução específica nas células Ly6C+veTGFβ1+ve (19B). Os níveis circulantes de TGFβ1 foram elevados pela dieta com HFMCD, mas reduzidos pela terapia com anticorpos, o que mostra que a terapia anti-lL11Rα modifica a doença (19C).

[00567] Em resumo, a IL-11 é necessária para a ativação e transformação de HSC e tem um papel central na patobiologia de HSC. Os anticorpos neutralizantes de IL-11 mostram impacto terapêutico modificador da doença, além dos efeitos antifibróticos isolados. Os anticorpos IL-11Rα podem reverter a ativação das células estreladas hepáticas (HSC) a jusante de TGFβ1 ou PDGF. A inibição da sinalização da IL-11 previne a inflamação e a esteatose e pode reverter a fibrose hepática e os danos aos hepatócitos durante os estágios finais da doença. Quando administrada mais cedo, durante a esteato-hepatite, a terapia anti-IL-11 bloqueia os sinais inflamatórios das HSCs, evita o dano aos hepatócitos e melhora a função metabólica por meio da inibição das interações HSCs-macrófagos. Os inventores identificaram um papel não apreciado e central para IL-11 na patobiologia do fígado. O direcionamento da sinalização de IL-11 com anticorpos neutralizantes reverte a fibrose, esteatose, morte de hepatócitos e inflamação em todo o espectro de NASH. Exemplo 11: Análise de afinidade de ligação de 9A7 a IL-11Rα

[00568] O clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 (VH = SEQ ID NO:7, VL = SEQ ID NO:13) foi analisado quanto à afinidade de ligação a IL-11Rα humano por análise de cinética multiciclo usando um BIAcore T200.

[00569] Resumidamente, IL-11Rα humano recombinante (Sino Biological Cat. No. 10252-H08H) foi imobilizado em um chip, e as associações foram realizadas fluindo diferentes concentrações de anticorpo em formato de IgG 1 sobre o chip a uma taxa de fluxo de 40 μl/min em tampão de corrida (tampão HBS-P + contendo 0,5% de BSA e 150 mM de NaCl). O tempo de associação foi de 240 segundos e o tempo de dissociação foi de 400 segundos. A superfície foi regenerada usando glicina pH 1,7.

[00570] Duas análises separadas foram realizadas: • Um primeiro ((1) na Figura 20) usou as seguintes concentrações de BSO-9A7:100 nM, 50 nM, 25 nM, 12,5 nM, 6,25 nM, 3,125 nM e 1,56 nM. • O segundo ((2) na Figura 20) usando as seguintes concentrações de BSO-9A7:50 nM, 25 nM, 12,5 nM, 6,25 nM, 3,125 nM e 1,56 nM.

[00571] A análise dos dados brutos obtidos foi realizada usando o software de avaliação BIAcore T200 V2.0.1, ajustando os dados subtraídos do fundo a um modelo de interação 1:1.

[00572] Os resultados das duas análises são mostrados na Figura 20. Verificou-se que BSO-9A7 se ligava a I L-11Rα humano com afinidade nanomolar. Exemplo 12: Análise bioquímica de 9A7

[00573] O clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 foi analisado quanto à sua capacidade de inibir a sinalização de IL-11.

[00574] HSCs foram estimulados com TGFβ1 (5 ng/ml, 24 h) na presença de IgG (4 μg/ml) e concentrações variáveis de 9A7 (4 μg/ml a 61 pg/ml; diluições de 4 vezes). Os sobrenadantes foram coletados e analisados quanto à quantidade de MMP2 secretada. As curvas de dose- resposta foram geradas traçando o logaritmo da concentração testada de 9A7 (pM) versus os valores de inibição percentuais correspondentes usando o ajuste de mínimos quadrados (ordinário). O valor IC50 foi calculado usando log (inibidor) versus equação de declive variável de resposta normalizada.

[00575] Os resultados são mostrados na Figura 21. BSO-9A7 bloqueou a secreção de proteína fibrogênica de HSCs com um IC50 de 5,4pM.

[00576] O clone de anticorpo anti-IL-11Rα BSO-9A7 foi usado em estudos farmacocinéticos. Camundongos C57BL/6J (10-12 semanas de idade) foram injetados retro-orbitalmente (nalisados e edth 100 μl de recentemente radiomarcado 125 I-9A7 (5pCi, 2,5 μg) em PBS. Os camundongos foram anestesiados com isoflurano a 2% e o sangue foi coletado em vários momentos (2, 5, 10, 15, 30 m, 1, 175 2, 4, 6, 8 h, 1,2, 3, 7, 14 e 21 dias) após a injeção por meio de sangramento submandibular. Para estudos de biodistribuição, o sangue foi coletado por punção cardíaca e os tecidos foram coletados nos seguintes pontos de tempo:1,4 h, 1, 3, 7,

14, 21 dias após a injeção. O conteúdo de radioatividade foi medido usando um contador gama (2480 Wizard2, Perkin Elmer) com correção de decaimento (diluição 100x de dose de 100 μl). A radioatividade medida foi normalizada para % da dose injetada/g de tecido.

[00577] Os resultados são mostrados nas Figuras 22A e 22B. 125 Estudos farmacocinéticos usando I-9A7 revelaram uma meia-vida in vivo de mais de 18 dias (22A) e forte captação no fígado (22B). Exemplo 13: Efeito de anticorpos anti-IL-11Rα em doenças debilitantes

[00578] Animais com dieta HFMCD perdem peso e ficam muito doentes, veja também o Exemplo 10.2. A inibição da sinalização de IL-11 melhora a perda de peso induzida por HFMCD e o anticorpo 9A7 mostrou um efeito dependente da dose no ganho de peso.

[00579] Camundongos machos de cinco semanas foram alimentados com HFMCD ou dieta normal (NC) como antes por uma semana para induzir o desperdício, resultando em uma perda de -15% no peso corporal em camundongos MCD. Após a semana inicial, os camundongos foram injetados intraperitonealmente duas vezes por semana com 0,5, 1, 5 ou 10 mg/kg de anticorpo anti-IL-11RA 9A7, 10 mg/kg de anticorpo do isotipo IgG foi usado como controle. O peso corporal e o consumo alimentar foram medidos semanalmente. Para o consumo de alimentos, a ingestão média de alimentos foi medida (g/camundongo/semana) em alimentadores de gaiolas (n = 3 camundongos por gaiola).

[00580] Os resultados são mostrados nas Figuras 23A e 23B. A terapia anti-IL-11Rα foi encontrada para fornecer um ganho dependente da dose no peso corporal (23A) e consumo de alimentos (23B), indicando reversão da perda de peso. As doses mais altas mostraram o maior efeito de reversão do desgaste. Os camundongos alimentados com uma dieta NC ganharam peso de forma constante, enquanto os camundongos alimentados com a dieta HFMCD e tratados com controle de IgG perderam -30% do peso corporal ao longo do tratamento. As doses mais altas tiveram o maior efeito sobre o consumo de alimentos, enquanto os camundongos tratados com controle IgG mostraram uma ligeira redução no consumo de alimentos.

[00581] Doença aguda, por exemplo, trauma ou sepse, também pode estar associada à perda de peso, por exemplo, anorexia e caquexia. Foram estudados os efeitos do antagonismo da sinalização mediada por IL- 11 na anorexia e caquexia em modelos de camundongo de lesão renal aguda. A lesão renal foi induzida por injeção IP de ácido fólico (180 mg/kg) em veículo (NaHCO3 0,3 M) em camundongos machos de 10 semanas de idade; camundongos de controle foram administrados apenas com veículo. Os animais foram sacrificados 28 dias após a injeção. Os camundongos foram injetados intraperitonealmente a cada 3 dias com 20 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα ou concentração idêntica de controle de isotipo IgG começando 1 hora antes da administração de ácido fólico até que os camundongos fossem sacrificados.

[00582] Verificou-se que a lesão renal induzida por folato resultou em rápida perda de peso associada à anorexia/caquexia associada à fase aguda de lesão renal grave e bilateral. Camundongos (n = 7/grupo) recebendo anticorpo anti-IL-11Rα no momento da lesão, e durante a lesão, recuperaram peso mais rapidamente em comparação com o controle de IgG e voltaram ao peso normal, ou quase normal, por 3 semanas depois.

[00583] Separadamente, a lesão renal é induzida como antes pela injeção IP de ácido fólico. Os camundongos são tratados apenas com anticorpo anti-IL-11Rα ou controle IgG a partir de 21 dias após a lesão renal. O peso do animal é avaliado antes e após o tratamento com anticorpos. Camundongos saudáveis que não receberam ácido fólico foram usados como controle. Os animais tratados com anticorpo anti-IL-11Rα começam a recuperar o peso após o início do tratamento, mostrando que a perda de peso associada ao emagrecimento pode ser melhorada na doença em estágio avançado. Exemplo 14: Caracterização de variantes humanizadas de BSO-9A7

[00584] Versões humanizadas de sequências VH e VL de BSO- 9A7 foram projetadas, como mostrado em SEQ ID NOs:8 a 12 e 14 a 17.

14.1 Análise de ligação

[00585] Combinações das 5 cadeias pesadas humanizadas e 4 cadeias leves humanizadas foram geradas e testadas quanto à ligação a IL- 11Rα. A ligação de 20 variantes humanizadas a IL-11R foi testada por análise cinética de ciclo único: • VH1/VL1; VH1/VL2; VH1/VL3; VH1/VL4; • VH2/VL1; VH2/VL2; VH2/VL3; VH2/VL4; • VH3/VL1; VH3/VL2; VH3/VL3; VH3/VL4; • VH4/VL1; VH4/VL2; VH4/VL3; VH4/VL4; • VH5/VL1; VH5/VL2; VH5/VL3; VH5/VL4.

[00586] A partir desta análise, seis anticorpos foram identificados para avaliação posterior:VH3/VL2; VH3/VL3; VH3/VL4; VH4/VL2; VH4/VL3 e; VH4/VL4. Nome Cadeia pesada Cadeia leve VH3/VL2 SEQ ID NO:10 SEQ ID NO:15 VH3/VL3 SEQ ID NO:10 SEQ ID NO:16 VH3/VL4 SEQ ID NO:10 SEQ ID NO:17 VH4/VL2 SEQ ID NO:11 SEQ ID NO:15 VH4/VL3 SEQ ID NO:11 SEQ ID NO:16 VH4/VL4 SEQ ID NO:11 SEQ ID NO:17

[00587] Os seis anticorpos foram avaliados por análise cinética de múltiplos ciclos a uma concentração final de 1 μg/ml, executado a 25 °C com tampão de corrida HBS-P + (pH 7,4) contendo BSA a 0,1% usando um instrumento Biacore T200.

[00588] Os parâmetros cinéticos são mostrados na tabela abaixo. O relativo KD foi calculado dividindo o Ko da variante humanizada pelo do anticorpo 9A7 testado no mesmo experimento. Todos os seis anticorpos humanizados ligaram-se a IL-11R duas vezes antes de 9A7 (SEQ ID NO:7 e 13). Analito ka (1/Ms) kd (1/s) 9A7 VH/VL 2,16 x105 9,26 x10-4 4,29 *10 9 1,00 0,0515 5 4 9 VH3/VL2 2,21 xio 8,01 xW 3,63 x10- 0,85 0,0267 VH3/VL3 2,08 x105 7,51 x104 3,61 xW9 0,84 0,0541 5 4 9 VH3/VL4 2,01 xio 7,47 x10- 3,71 xW 0,86 0,0251 VH4/VL2 1,64 xio5 9,32 x10-4 5,67 x10-9 1,32 0,034 5 4 9 VH4/VL3 1,78 x10 9,92 x10- 5,57 x10- 1,30 0,0279 5 4 9 VH4/VL4 1,41 x1Q 7,81 x10 5,55 *10 1,29 0,0963

14.2 Desempenho In vitro de anticorpos anti-IL-11Rα humanizados

[00589] Os seis anticorpos foram testados quanto à capacidade de neutralizar IL-11 endógeno segregado de fibroblastos atriais humanos primários em resposta a TGFβ1. 9A7 foi incluído como um controle positivo. O ensaio foi realizado como descrito no Exemplo 2.5.2. A secreção de MMP2 no sobrenadante por fibroblastos humanos foi avaliada para estimar a % de inibição.

[00590] Os resultados são mostrados na Figura 24. Todos os anticorpos se ligam a IL-11Rα e bloqueiam a IL-11 produzida endogenamente de interagir com o receptor. A sinalização da IL-11 é neutralizada, o que inibe a produção da proteína fibrogênica MMP2.

[00591] O desempenho de clones humanizados selecionados foi ainda testado em células estreladas hepáticas humanas. Como antes, as células foram incubadas com 5ng/ml de TGFβ1 e concentrações variáveis de VH3/VL3 ou VH4/VH4. A neutralização da resposta fibrótica in vitro foi avaliada monitorando a secreção de MMP2 no sobrenadante para estimar a % de inibição.

[00592] A Figura 25 mostra que os anticorpos anti-IL-11Rα bloqueiam a sinalização endógena de IL-11 e inibem a produção da proteína fibrogênica MMP2.

[00593] Um ensaio semelhante foi realizado em fibroblastos de pulmão humano. Fibroblastos de pulmão humano primários foram incubados com TGFβ1 (5ng/ml) e concentrações variáveis de 9A7, VH3/VL3 ou VH4/VH4. A neutralização da resposta fibrótica in vitro foi avaliada monitorando a secreção de TIMP1 no sobrenadante para estimar a % de inibição.

[00594] A Figura 26 mostra que os anticorpos anti-IL-11Rα bloqueiam a sinalização endógena de IL-11 e inibem a produção da proteína fibrogênica TIMP1.

14.3 Desempenho in vitro de anticorpos anti-IL-11Rα humanizados

[00595] A utilidade terapêutica dos anticorpos humanizados anti- IL-11Rα humano é demonstrada in vivo em modelos de camundongo de fibrose para vários tecidos diferentes, por exemplo, como realizado nos Exemplos 5, 6, 10 e 12.

[00596] Os camundongos tratados com anticorpos anti-IL-11Rα humanizados neutralizantes têm uma resposta fibrótica reduzida. Exemplo 15:Efeito de anticorpos anti-IL-11Rα em distúrbios metabólicas

[00597] O efeito do anticorpo VH4/VL4 anti-IL-11Rα humanizado foi investigado em camundongos com doenças metabólicas, como obesidade e diabetes tipo II. A dieta ocidental juntamente com a frutose (WDF) foi usada para estabelecer distúrbios metabólicos que se assemelham aos de humanos durante a obesidade, diabetes tipo II e doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD) (Baena etal., Sci Rep (2016) 6:26149, Machado et al., PLoS One (2015) 10:e0127991). Os camundongos foram alimentados com dieta ocidental (D12079B, Dietas de Pesquisa), suplementada com 15% peso/volume de frutose em água potável (WDF) por 16 semanas, a partir das 12 semanas de idade. Os indivíduos de controle foram alimentados com ração normal (NC, Speciality Feeds) e água potável. O anticorpo IgG foi usado como controle.

[00598] As Figuras 27A e 27B mostram que camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα alimentados com WDF mostraram redução significativa no peso corporal (A) e massa gorda (B) quando comparados com camundongos tratados com qualquer pessoa com IgG alimentados com WDF. Um aumento na massa magra também foi observado em camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα em comparação com camundongos tratados com controle de IgG, sugerindo que a inibição da sinalização de IL-11 durante a patogênese metabólica induzida por WDF recuperou a massa muscular. Além disso, os resultados do teste de tolerância à glicose intraperitoneal (ipGTT) mostraram, juntamente com a glicose em jejum, melhora significativa na tolerância à glicose em camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα (Figuras 27C e 27D).

[00599] A análise foi estendida aos efeitos no pâncreas. Os camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα alimentados com WDF foram inesperadamente encontrados para exibir proteção notável contra a perda de pâncreas induzida por WDF (Figura 27E), quer tratados de 8 a 16 semanas (para proteção contra efeitos associados com doença metabólica) ou tratados de 16 a 24 semanas (para reverter os efeitos associados à doença metabólica) quando comparados a camundongos tratados com IgG controle.

[00600] A Figura 27F mostra que camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα alimentados com WDF tinham níveis de colesterol sérico significativamente mais baixos em comparação com camundongos tratados com qualquer pessoa com IgG alimentados com WDF, e a Figura 27G mostra que camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα alimentados com WDF teve níveis de triglicérides séricos significativamente mais baixos em comparação com o controle IgG de camundongos tratados com qualquer pessoa alimentados com WDF. A Figura 27H mostra que camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα alimentados com WDF tiveram níveis de glicose no sangue em jejum significativamente mais baixos em comparação com camundongos tratados com qualquer pessoa com IgG controle alimentados com WDF.

[00601] Além disso, a histologia imunológica do pâncreas também revelou aumento na coloração de glucagon e insulina em ilhotas pancreáticas, juntamente com hiperplasia de ilhotas em camundongos alimentados com WDF tratados com IgG (Figuras 27I e 27J), que são características clássicas de diabetes tipo II (Bonner-Weir e O'Brien Diabetes (2008) 57:2899-2904). O tratamento com anticorpo anti-IL-11Rα em camundongos alimentados com WDF de 16 a 24 semanas reduziu notavelmente a hiperplasia das ilhotas e a coloração com glucagon, bem como melhorando a expressão da insulina nas ilhotas de camundongos alimentados com WDF, sugerindo que o antagonismo da sinalização mediada por IL-11 é útil para melhorar e reverter doenças metabólicas causadas por uma dieta do tipo ocidental.

[00602] O modelo HFMCD apresenta hepatite esteatótica de início precoce seguida de fibrose. No entanto, este modelo não é obeso ou resistente à insulina. Um modelo de NASH induzido por WDF foi usado para testar os efeitos da terapia anti-IL-11R no contexto da obesidade, resistência à insulina e diabetes. Os camundongos foram alimentados com WDF por 16 semanas, quando já eram obesos e resistentes à insulina com esteatose hepática, inflamação e fibrose. O tratamento com anticorpo anti- IL11Rα foi então iniciado. A ativação hepática de Erk foi inibida em fígados NASH quando a sinalização de IL-11 foi direcionada (Figura 28A). Apesar do ganho de peso semelhante, foi observada reversão da fibrose hepática, esteatose, inflamação e redução dos níveis séricos de ALT em camundongos em terapia anti-IL11Rα. Isso foi acompanhado por uma redução nos níveis de glicose sérica, triglicerídeos e colesterol (Figura 28B- 28G). Assim, a terapia anti-IL11Rα neutralizante reverte as patologias NASH induzidas por WDF.

[00603] Assim, os dados mostram que a terapia anti-IL-11 reverteu a fibrose, mas não avaliou se esse efeito era sustentado ou progressivo. Além disso, as terapias de combinação podem ser benéficas para reverter a fibrose em NASH. Para abordar esses pontos, a fibrose hepática grave foi estabelecida usando HFMCD por 10 semanas, então os camundongos foram convertidos para ração normal, mimetizando uma intervenção metabólica robusta, e iniciaram o tratamento com anticorpo anti-IL-11Rα em paralelo (Figura 29A). Após a remoção do estímulo metabólico, a ativação de Erk regrediu lentamente, o que foi acelerado pelo tratamento com anticorpos. A fibrose permaneceu inalterada em animais tratados com IgG durante o experimento, sugerindo que a correção metabólica completa por si só não reverte a fibrose, ou reverte a fibrose muito lentamente. Em contraste, o conteúdo de colágeno hepático foi significativamente revertido (24%) após três semanas de tratamento com anticorpo com reversão adicional (46%) em seis semanas, mostrando um efeito progressivo e sustentado (Figura 29B).

[00604] A regressão da fibrose está associada a menores níveis de TIMP e maiores de MMP, o que promove uma remodelação da matriz favorável. Consistente com isso, os camundongos tratados com anticorpo anti-IL11Rα com fibrose grave foram encontrados para regular positivamente Mmp2 e regular negativamente Timp1. A reversão da fibrose hepática é favorecida quando os HSCs transformados sofrem apoptose, senescência e/ou revertem para um estado ACTA2-ve inativo. Para verificar se a IL-11 é necessária para manter os HSCs em um estado transformado, os HSCs foram estimulados com TGFβ1 ou PDGF seguido pela inibição da sinalização de IL-11. Dentro de 24 horas de inibição de IL-11, a porcentagem de células ACTA2+ve e a quantidade de colágeno secretado foram revertidos para níveis próximos ao da linha de base, e a atividade de ERK foi amplamente diminuída apesar da estimulação contínua de TGFβ1/PDGF. Exemplo 16: Efeito da inibição da sinalização de IL-11 na hepatotoxicidade

16.1 Efeito da terapia anti-IL-11 na hepatotoxicidade

[00605] A IL-11 causa diretamente a morte celular dos hepatócitos e conduz os hepatócitos ao estado de transição celular epitelial- mesenquimal parcial disfuncional (EMT) que é conhecido por limitar a capacidade regenerativa do fígado (Grant Rowe et al. Molecular and Cellular Biology 2011; 31 (12) :2392-2403). Verificou-se que hepatócitos humanos primários expressam altamente o receptor de IL-11Rα, estimulação de IL-11 induziu morte celular de hepatócitos dependente da dose, conforme evidenciado por um aumento progressivo na alanina aminotransferase (ALT) ao longo da faixa de dose fisiologicamente relevante e estimulação de hepatócitos humanos com H2O2 resulta em regulação positiva de IL-11 em 10 vezes no sobrenadante (Figuras 30A a 30C).

[00606] Um modelo de camundongo de lesão hepática induzida por paracetamol (APAP) foi empregado para investigar o efeito da terapia anti-IL-11 na hepatotoxicidade. Camundongos machos de 12 a 14 semanas de idade foram submetidos à fome e injetados intraperitonealmente (IP) com 10 mg/kg de anticorpo anti-IL-11Rα ou controle de isotipo IgG 16 horas antes da injeção de APAP (A3035, Sigma) (IP, 400 mg/kg). Os camundongos foram sacrificados 24 horas após a administração de APAP. Os níveis de IL-11 no soro de camundongo e sobrenadante de hepatócitos foram quantificados usando Mouse IL-11 DuoSet (DY418 e DY008, R&D Systems) e IL-11 Quantikine ELISA kit D1100, R&D Systems), respectivamente, de acordo com o protocolo do fabricante. As amostras de fígado foram excisadas e fixadas por 48 horas à temperatura ambiente em formalina tamponada neutra a 10% (NBF), desidratadas, incluídas em blocos de parafina e seccionadas às 19 horas. As secções foram coradas com Hematoxilina e Eosina (H&E) de acordo com o protocolo padrão e examinadas por microscopia óptica.

[00607] As Figuras 30D a 30F mostram que os camundongos que receberam uma dose única de terapia de anticorpo anti-IL-11Rα apresentaram níveis de ALT significativamente mais baixos (55% mais baixos em comparação com o controle de IgG; 30D), ou seja, reduziram significativamente a extensão dos danos ao fígado. A terapia anti-IL-11 também evitou a perda de massa hepática induzida por APAP, que reflete a destruição das células hepáticas, em comparação com a perda de massa hepática de 24% com anticorpo de controle IgG (índice hepático; 30E). A histologia hepática por coloração com Hematoxilina e Eosina (H&E) mostrou necrose centrolobular severa em camundongos tratados com IgG, uma característica histológica típica de toxicidade por APAP, que foi encontrada para ser reduzida com terapia anti-IL11Rα (30F).

[00608] A mobilidade e a atividade dos camundongos tratados com controle de IgG ou anticorpo anti-IL-11Rα foram observadas 24 horas após o tratamento com APAP. Os ratos tratados com IgG de controle estavam estáticos/moribundos com características visíveis de problemas de saúde (por exemplo, piloereção, postura arqueada), enquanto os camundongos tratados com anticorpo anti-IL-11Rα tinham mobilidade e atividade normais.

[00609] Portanto, a inibição da sinalização de IL-11 pelo bloqueio de IL-11Rα evita a hepatotoxicidade no modelo translacional aceito de lesão hepática induzida por APAP (lesão hepática induzida por medicamento; DILI).

16.2 Antagonismo da sinalização mediada por IL-11 protege os hepatócitos contra a morte celular induzida por drogas

[00610] Os efeitos do antagonismo da sinalização mediada por IL-11 na viabilidade dos hepatócitos foram analisados in vitro.

[00611] Hepatócitos humanos foram tratados com APAP (A3035, Sigma) em uma concentração final de 20 mM por 24 horas, na ausência (linha de base, BL) ou na presença de anticorpo antagonista anti-lL11Rα (2 μg/ml) ou IgG compatível com o isótipo anticorpo controle (IgG, 2 μg/ml).

[00612] Os hepatócitos foram então corados usando o FITC Annexin V/Dead Cell Apoptosis Kit (V13242, Thermo Fisher) de acordo com as instruções do fabricante, e as células coradas com Anexina V-FITC/PI foram analisadas por citometria de fluxo usando um citômetro de fluxo BD LSRFortessa (BD Bioscience) 10.000 células foram analisadas por amostra. Os dados foram analisados usando o software FlowJo versão 7.

[00613] A Figura 31A mostra que o tratamento dos hepatócitos com inibidor de anticorpo antagonista de sinalização mediada por IL-11 mostrou reduzir substancialmente a proporção de hepatócitos mortos.

[00614] Em um experimento separado, os hepatócitos foram tratados com APAP (A3035, Sigma) em uma concentração final de 10 mM por 24 horas, na ausência (linha de base, BL) ou na presença de anticorpo de antagonista anti-IL11Rα (2 μg/ml) ou isotipo-anticorpo de controle IgG compatível (IgG, 2 μg/ml). Extratos de proteína foram preparados a partir dos hepatócitos usando tampão de ensaio de radioimunoprecipitação (RIPA) contendo inibidores de protease e fosfatase (Thermo Scientifics), seguido por centrifugação para limpar o lisado. As concentrações de proteína foram determinadas pelo ensaio de Bradford (Bio-Rad). Quantidades iguais de lisados de proteína foram separados por SDS- PAGE, transferidos para membrana de PVDF e submetidos a análise de imunotransferência para os anticorpos primários indicados (ERK, pERK, pJNK). As proteínas foram visualizadas usando o sistema de detecção ECL (Pierce) com os anticorpos secundários apropriados.

[00615] A Figura 31B mostra que o tratamento de hepatócitos com APAP revelou aumentar significativamente os níveis de pERK e pJNK (cf. BL vs. IgG). O tratamento de hepatócitos com inibidor de anticorpo antagonista de sinalização mediada por IL-11 foi encontrado para reduzir substancialmente os níveis de p-ERK e pJNK (cf. IgG vs. anticorpo anti-IL- 11Rα).

16.3 O antagonismo de sinalização mediada por IL-11 protege contra lesão hepática induzida por drogas

[00616] Uma overdose grave de APAP (400 mg/kg) ou um volume equivalente de solução salina foi administrada a camundongos machos de 12 a 14 semanas de idade por injeção IP, 16 horas após a administração IP de 20 mg/kg de anticorpo antagonista anti-IL11Rα ou anticorpo de controle IgG de isotipo compatível.

[00617] 24 horas após a administração de APAP, os camundongos foram sacrificados. Os níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT) foram medidos usando ALT Activity Assay Kit (ab105134, Abeam) de acordo com as instruções do fabricante, e os fígados foram colhidos, fixados por 48h em temperatura ambiente em 10% de formalina tamponada com neutro (NBF), desidratado, incorporado em blocos de parafina e seccionado às 19h. As secções foram coradas com Hematoxilina e Eosina (H&E) de acordo com o protocolo padrão e examinadas por microscopia óptica.

[00618] Os resultados são mostrados nas Figuras 32A e 32B. O pré-tratamento com inibidor de anticorpo antagonista da sinalização mediada por IL-11 mostrou proteger significativamente os camundongos da inibição da função hepática associada a DILI, conforme determinado por uma redução substancial nos níveis séricos de ALT (Figura 32A). Os fígados de camundongos pré-tratados com inibidor de anticorpo antagonista de sinalização mediada por IL-11 também exibiram substancialmente menos necrose de hepatócitos em comparação com fígados de controles tratados com IgG (Figura 32B).

16.4 Antagonismo de sinalização mediado por IL-11 após lesão hepática induzida por drogas reverte os sintomas de lesão hepática e restaura a função hepática

[00619] Uma overdose grave de APAP (400 mg/kg) ou um volume equivalente de solução salina foi administrada a camundongos machos de 12 a 14 semanas de idade por injeção IP, e 10 horas depois os camundongos foram administrados IP com 20 mg/kg de anticorpo antagonista anti-IL11Rα, anticorpo de controle IgG de isotipo compatível ou não tratado. Os camundongos foram sacrificados em 24, 36 e 48 horas. Os níveis séricos de ALT foram analisados conforme descrito no Exemplo 16.3. Os fígados foram colhidos e fixados conforme descrito no Exemplo 16.3, e foram tiradas fotografias digitais.

[00620] Os resultados são mostrados nas Figuras 33A e 33B. Anticorpo antagonista inibidor de sinalização mediada por IL-11 administrado 10 horas após severa sobredosagem de APAP mostrou restaurar a morfologia grosseira do fígado para os camundongos que não foram tratados com APAP (Figura 33A). Anticorpo antagonista inibidor de sinalização mediada por IL-11 administrado 10 horas após severa sobredosagem de APAP foi, além disso, demonstrado resgatar camundongos da inibição da função hepática associada a DILI, conforme determinado por redução substancial nos níveis de ALT no soro (Figura 33B).

[00621] Western blots também foram realizados em extratos de proteínas preparados a partir de fígados de camundongos. O tecido hepático foi homogeneizado em tampão de ensaio de radioimunoprecipitação (RIPA) contendo inibidores de protease e fosfatase (Thermo Scientifics), e os lisados foram subsequentemente separados por SDS-PAGE e analisados por Western blot. A Figura 33C mostra que a overdose de APAP aumentou significativamente os níveis de p-ERK, pJNK1 e pJNK2 (cf. Controle vs. 10h), enquanto o tratamento subsequente com anticorpo antagonista inibidor de sinalização mediada por IL-11 reduziu substancialmente os níveis de p-ERK, pJNK1 e pJNK2 (cf. IgG vs. anti-IL- 11Rα).

[00622] Em outros experimentos, uma overdose letal de APAP (550 mg/kg) ou um volume equivalente de solução salina foi administrada a camundongos machos de 12 a 14 semanas de idade por injeção IP, e 10 horas mais tarde camundongos foram administrados IP com 20 mg/kg de anticorpo antagonista anti-lL11Rα, anticorpo de controle IgG de isotipo compatível ou não tratado.

[00623] A sobrevivência dos camundongos foi monitorada por 8 dias após a administração de APAP/solução salina, e os resultados são mostrados na Figura 34A. O tratamento com inibidor de anticorpo antagonista da sinalização mediada por IL-11 melhorou significativamente a sobrevivência de camundongos administrados com uma dose letal de APAP em relação aos controles tratados com IgG.

[00624] Os camundongos foram sacrificados em 24 horas e 192 horas (8 dias). Os níveis séricos de ALT foram analisados conforme descrito no Exemplo 16.3. Os fígados foram colhidos e fixados conforme descrito no Exemplo 16.3, e foram tiradas fotografias digitais.

[00625] Os resultados são mostrados nas Figuras 34B e 34C. Anticorpo antagonista inibidor de sinalização mediada por IL-11 administrado 10 horas após overdose letal de APAP mostrou restaurar a morfologia hepática grosseira para os camundongos que não foram tratados com APAP após 8 dias (Figura 34B). O inibidor de anticorpo antagonista da sinalização mediada por IL-11 administrado 10 horas após a sobredosagem de APAP letal foi, além disso, demonstrado para resgatar camundongos da inibição da função hepática associada a DILI; Os níveis séricos de ALT não foram significativamente diferentes dos níveis de camundongos de controle normais (solução salina administrada) após 8 dias (Figura 34C).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Molécula de ligação ao antígeno, opcionalmente isolada, que é capaz de se ligar a IL-11Rα, caracterizada pelo fato de que a molécula de ligação ao antígeno compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24.

2. Molécula de ligação ao antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a molécula de ligação ao antígeno compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) incorporando as seguintes CDRs: HC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 HC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 HC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) incorporando as seguintes CDRs: LC-CDR1 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 LC-CDR2 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 LC-CDR3 tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24.

3. Molécula de ligação ao antígeno, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a molécula de ligação ao antígeno compreende:

uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:7, 8, 9, 10, 11 ou 12; e uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13, 14, 15, 16 ou 17.

4. Molécula de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a molécula de ligação ao antígeno compreende: uma região de VH compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:11; e uma região de VL compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:17.

5. Molécula de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a sinalização mediada por IL-11.

6. Molécula de ligação ao antígeno, opcionalmente isolada, caracterizada pelo fato de que compreende (i) uma molécula de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, e (ii) uma molécula de ligação ao antígeno capaz de se ligar a um antígeno diferente de IL-11Rα.

7. Molécula de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a molécula de ligação ao antígeno é capaz de inibir a interação entre IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα e um parceiro de interação para IL- 11Rα ou o complexo compreendendo IL-11Rα.

8. Receptor de antígeno quimérico (CAR), caracterizado pelo fato de que compreende uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7.

9. Ácido nucleico, ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, opcionalmente isolados, caracterizado pelo fato de que codifica uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, ou um CAR, conforme a reivindicação 8.

10. Vetor de expressão, ou uma pluralidade de vetores de expressão, caracterizado pelo fato de que compreende um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme a reivindicação 9.

11. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, um CAR conforme a reivindicação 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme a reivindicação 9, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, conforme a reivindicação 10.

12. Método, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar uma célula compreendendo um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme a reivindicação 9, ou um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, conforme a reivindicação 10, sob condições adequadas para a expressão da molécula de ligação ao antígeno ou CAR do(s) ácido(s) nucleico(s) ou vetor(es) de expressão.

13. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, um CAR, conforme a reivindicação 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme a reivindicação 9, um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, conforme a reivindicação 10, ou uma célula, conforme a reivindicação 11.

14. Molécula de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, CAR, de acordo com a reivindicação 8, ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, de acordo com a reivindicação 9, vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, de acordo com a reivindicação 10, célula, de acordo com a reivindicação 11, ou composição, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que é para uso em um método de tratamento médico ou profilaxia.

15. Molécula de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, CAR, de acordo com a reivindicação 8, ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, de acordo com a reivindicação 9, vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, de acordo com a reivindicação 10, célula, de acordo com a reivindicação 11, ou composição, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que é para uso em um método de tratamento ou prevenção de fibrose, uma doença caracterizada por fibrose, um câncer, inflamação, uma doença caracterizada por inflamação, hepatotoxicidade, uma doença caracterizada por hepatotoxicidade, uma doença metabólica, um distúrbio debilitante, lesão renal, nefrotoxicidade ou uma doença caracterizada por hepatotoxicidade.

16. Método de inibição da sinalização mediada por IL-11, caracterizado pelo fato de que compreende contatar células que expressam IL-11Rα com uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7.

17. Complexo in vitro, opcionalmente isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, ligada a IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

18. Método, caracterizado pelo fato de que compreende contatar uma amostra contendo, ou suspeita de conter IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα com uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, e detectar a formação de um complexo da molécula de ligação ao antígeno com IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL-11Rα.

19. Método de seleção ou estratificação de um indivíduo para tratamento com um agente direcionado a IL-11Rα, o método caracterizado pelo fato de que compreende contatar, in vitro, uma amostra do indivíduo com uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, e detectar a formação de um complexo da molécula de ligação ao antígeno com IL-11Rα ou um complexo compreendendo IL- 11 Rα.

20. Uso de uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizado pelo fato de que é como um agente de diagnóstico ou prognóstico in vitro ou in vivo.

21. Kit de partes, caracterizado pelo fato de que compreende uma quantidade predeterminada de: uma molécula de ligação ao antígeno, conforme qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, um CAR, conforme a reivindicação 8, um ácido nucleico ou uma pluralidade de ácidos nucleicos, conforme a reivindicação 9, um vetor de expressão ou uma pluralidade de vetores de expressão, conforme a reivindicação 10, uma célula, conforme a reivindicação 11 ou uma composição, conforme a reivindicação 13.