BR112020018948A2 - Uso de conjugados de fármaco e anticorpo que compreendem agentes de interrupção de tubulina para tratar tumor sólido - Google Patents

Uso de conjugados de fármaco e anticorpo que compreendem agentes de interrupção de tubulina para tratar tumor sólido Download PDF

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tubulin
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agent
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Anthony Toa Cao
Shyra Jane Gardai
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Seattle Genetics, Inc.
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Abstract

a presente descrição se refere, em geral, a métodos para tratar tumores sólidos que compreendem administrar um conjugado de anticorpo de ligante de fármaco, em que o fármaco é um agente de interrupção de tubulina.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “USO DE
CONJUGADOS DE FÁRMACO E ANTICORPO QUE COMPREENDEM AGENTES DE INTERRUPÇÃO DE TUBULINA PARA TRATAR TUMOR SÓLIDO” Referência Cruzada a Pedidos Relacionados
[001] O presente pedido reivindica o benefício de prioridade ao Pedido de Patente Provisório nº U.S.
62/647.346, depositado em 23 de março de 2018 e Pedido de Patente Provisório nº U.S. 62/658.276, depositado em 16 de abril de 2018, incorporados ao presente documento a título de referência em suas totalidades.
Campo da Descrição
[002] A presente descrição se refere, em geral, aos métodos para tratar um tumor sólido que compreende administrar uma terapia de conjugado de Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo, em que o fármaco é um agente de interrupção de tubulina.
Fundamentos
[003] Os microtúbulos são estruturas heterodiméricas importantes envolvidas em muitos processos celulares, como divisão celular e transporte de célula. A interrupção de microtúbulos induz captura de ciclo celular na fase G2/M. Os inibidores de microtúbulo/tubulina podem ser classificados em duas categorias maiores de acordo com seus mecanismos de ação: agentes que promovem polimerização de tubulina e estabilizam estruturas de microtúbulo (por exemplo,
paclitaxel) e agentes que inibem polimerização de tubulina e desestabilizam estruturas de microtúbulo (como maitansinoide, auristatinas, vinblastina e vincristina) (Chen et al., Molecules 22:1281, 2017).
[004] Os agentes de interrupção de tubulina, como MMAE foram usados em conjugados de fármaco e anticorpo para leucemia. Por exemplo, Brentuximabe vedotina é um conjugado de anticorpo-fármaco composto por um conjugado de anticorpo monoclonal anti-CD30 por um ligante clivável por protease ao agente de interrupção de microtúbulo, monometil auristatina E. Brentuximabe vedotina foi aprovada para o tratamento de pacientes com linfoma de Hodgkin clássico após falha de transplante de célula troca autóloga (ASCT) ou após falha de pelo menos 2 regimes de quimioterapia de múltiplos agentes anteriores em pacientes que não são candidatos a ASCT, e como consolidação pós-ASCT para pacientes com linfoma de Hodgkin em risco aumentado de reincidência/progressão.
Consulte Informações de Prescrição dos EUA de ADCETRIS® (brentuximabe vedotina) e Resumo de Características de Produto da UE de ADCETRIS® (brentuximabe vedotina). O mesmo também foi aprovado para linfoma de célula grande anaplástico sistêmico após falha de pelo menos um regime de quimioterapia de múltiplos agentes anterior. O ADC de MMAE de anti-CD30 não se mostrou eficaz em tumores sólidos.
Sumário
[005] A presente descrição fornece métodos aprimorados para tratar tumores sólidos que compreendem administrar um conjugado de fármaco e anticorpo que compreende um agente de interrupção de tubulina. É descrito no presente documento que agentes de interrupção de tubulina afetam via de proteína de estresse de ER em células de tumor sólido e induzem secreção de ATP e outros fenômenos de estresse de ER que induzem célula imune para migrar para o sítio de tumor e reduzir crescimento de tumor.
[006] É fornecido no presente documento um método para tratar um tumor sólido que compreende administrar a um indivíduo que necessita do mesmo um agente de conjugado de fármaco e anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo (D-LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para tratar o tumor sólido.
[007] Também é fornecido um método para modular liberação de ATP em um tumor sólido que compreende administrar um agente de conjugado de fármaco de anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo (D- LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para induzir apoptose no tumor sólido.
[008] É ainda contemplado pela descrição um método para induzir migração de célula imune para um tumor sólido que compreende administrar a um indivíduo que necessita do mesmo um agente de conjugado de fármaco e anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo (D-LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para induzir infiltração de célula imune no tumor sólido.
[009] Em outro aspecto, a descrição fornece um método para induzir morte de célula imunogênica (ICD) em um tumor sólido que compreende administrar a um indivíduo que necessita do mesmo um agente de conjugado de fármaco e anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante- Anticorpo (D-LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para induzir morte de célula imunogênica no tumor sólido.
[0010] É entendido que o Fármaco-Unidade de Ligante- Anticorpo (D-LU-Ab) também pode ser denominado no presente documento um conjugado de fármaco e anticorpo ou ADC.
[0011] Em diversas modalidades, o anticorpo se liga a um antígeno na superfície de uma célula cancerígena. Em diversas modalidades, o anticorpo é específico para CD30, CD19, CD70, CD71, CD20, CD52, CD133, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR2, PD-1, PDL1, RANKL, CTLA-4, IL-6, SLAMF7, CD3, TNF- alfa, PDGFR-alfa, CD38, GD2, cCLB8, p97, Nectina-4 ou EpCAM.
[0012] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina aumenta via de proteína de estresse de ER, aumenta secreção de ATP e aumenta proteína caixa 2 do grupo de alta mobilidade (HMGB1).
[0013] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é selecionado a partir do grupo que consiste em uma auristatina, uma tubulina, uma colchicina, um alcaloide da vinca, um taxano, uma criptoficina, uma maitansinoide, uma hemiasterlina e outros agentes de interrupção de tubulina. Os agentes de interrupção de tubulina exemplificativos contemplados para uso nos presentes métodos são descritos em maiores detalhes na Descrição Detalhada.
[0014] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é uma auristatina selecionada a partir do grupo que consiste em monometil auristatina E (MMAE) monometil auristatina F (MMAF) e dolostatina-10.
[0015] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é uma tubulina selecionada a partir do grupo que consiste em tubulina D, tubufenilalanina e tubutirosina.
[0016] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é uma colchicina selecionada a partir do grupo que consiste em colchicina e CA-4.
[0017] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é um alcaloide da vinca selecionado a partir do grupo que consiste em Vinblastina (VBL), vinorelbina (VRL), vincristina (VCR) e vindesina (VDS).
[0018] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é um taxano selecionado a partir do grupo que consiste em paclitaxel e docetaxel.
[0019] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é uma criptoficina selecionada a partir do grupo que consiste em criptoficina-1 e criptoficina-52
[0020] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é um maitansinoide selecionado a partir do grupo que consiste em maitansina, maitansinol, análogos de maitansina, DM1, DM3 e DM4, e ansamatocina-2.
[0021] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é uma hemiasterlina selecionada a partir do grupo que consiste em hemiasterlina e HTI-286.
[0022] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina é selecionado a partir do grupo que consiste em taccalonolido A, taccalonolido B, taccalonolido AF, taccalonolido AJ, taccalonolido AI-epóxido, discodermolida, epotilona A, epotilona B e laulimalida.
[0023] Em diversas modalidades, o tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de pulmão, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, cânceres gastrointestinais, câncer de cabeça e pescoço, melanoma, sarcoma, câncer esofangeal, câncer pancreático, câncer pancreático metastático, adenocarcinoma metastático do pâncreas, câncer de bexiga, câncer de estômago, câncer fibrótico, glioma, glioma maligno, glioma de pontina intrínseca difuso, neoplasma de cérebro de infância recorrente, carcinoma de célula renal, carcinoma de célula renal metastático de célula limpa, câncer de rins, câncer de próstata, câncer de próstata metastático resistente à castração, câncer de próstata de estágio IV, melanoma metastático, melanoma, melanoma maligno, melanoma recorrente da pele, metástases de melanoma cerebral, melanoma de pele estágio IIIA; melanoma de pele estágio IIIB, melanoma de pele estágio IIIC; melanoma de pele estágio IV, melanoma maligno de cabeça e pescoço, câncer de pulmão, câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC), câncer de pulmão de célula não pequena de célula escamosa, câncer de mama, câncer de mama metastático recorrente, carcinoma hepatocelular,
síndrome de richter; macroglobulinemia de waldenstrom,
glioblastoma adulto; gliosarcoma adulto, glioblastoma recorrente, rabdomiossarcoma de infância recorrente, sarcoma de ewing recorrente/tumor neuroectodérmico primitivo periférico, neuroblastoma recorrente; osteosarcoma recorrente, câncer colorretal, câncer colorretal positivo de
MSI; câncer colorretal negativo de MSI, carcinoma nasofaríngeo não queratinizante; carcinoma indiferenciado nasofaríngeo recorrente, adenocarcinoma cervical; carcinoma adenoescamoso cervical; carcinoma de célula escamosa cervical; carcinoma cervical recorrente; câncer cervical de estágio IVA; câncer cervical de estágio IVB, carcinoma de célula escamosa de canal anal; carcinoma de canal anal metastático; carcinoma de canal anal recorrente, câncer de cabeça e pescoço recorrente; carcinoma de célula escamosa de cabeça e pescoço (HNSCC), carcinoma ovariano, câncer de colo, câncer gástrico, câncer de GI avançado, adenocarcinoma gástrico; adenocarcinoma de junção gastroesofágico, neoplasmas de osso, sarcoma de tecido mole; sarcoma de osso, carcinoma de tímico, carcinoma urotelial, carcinoma de célula de merkel recorrente; carcinoma de célula de merkel de estágio III; carcinoma de célula de merkel de estágio IV, síndrome mielodisplásica e síndrome de Sézary. Em uma modalidade, o tumor sólido é um tumor sólido não linfoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido pode ser mieloma múltiplo.
[0024] Em diversas modalidades, o conjugado de fármaco e anticorpo/conjugado de Fármaco-Unidade de Ligante- Anticorpo compreende um ligante clivável de protease, um ligante clivável por ácido ou um ligante de dissulfeto.
[0025] Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease compreende um espaçador de tiol reativo e um dipeptídeo. Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease consiste em um espaçador de maleimidocaproil de tiol reativo, um dipeptídeo valina–citrulina e um espaçador de p-amino-benziloxicarbonil.
[0026] Em diversas modalidades, o ligante clivável por ácido é um ligante de hidrazina ou um ligante de amônia quaternária.
[0027] Em diversas modalidades, o método compreende ainda administrar um regime de quimioterapia ao indivíduo.
[0028] Em diversas modalidades, o regime de quimioterapia consiste essencialmente em doxorubicina, vinblastina, e dacarbazina (AVD) como uma terapia de combinação. Em outras modalidades, o regime de quimioterapia consiste essencialmente em ciclofosfamida, vincristina e prednisona (CHP) como uma terapia de combinação.
[0029] Em diversas modalidades, o anticorpo do conjugado de fármaco e anticorpo é um anticorpo monoclonal.
Em diversas modalidades, o anticorpo é um anticorpo humano ou humanizado.
[0030] Em diversas modalidades, o anticorpo é um anticorpo anti-CD30 e o conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 compreende i) uma cadeia pesada CDR1 definida na SEQ ID NO: 4, uma cadeia pesada CDR2 definida na SEQ ID NO: 6, uma cadeia pesada CDR3 definida na SEQ ID NO: 8; e ii) uma cadeia leve CDR1 definida na SEQ ID NO: 12, uma cadeia leve CDR2 definida na SEQ ID NO: 14, e uma cadeia leve CDR13 definida na SEQ ID NO: 16.
[0031] Em determinadas modalidades, o anticorpo é um anticorpo anti-CD30 e o conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 compreende i) uma sequência de aminoácido pelo menos 85% idêntica a uma região variável de cadeia pesada definida na SEQ ID NO: 2, e ii) uma sequência de aminoácido pelo menos 85% idêntica a uma região variável de cadeia leve na SEQ ID NO: 10. É contemplado que a sequência de região variável de aminoácidos pode ser 90%, 95%, 96% 97%, 98% ou 99% idêntica ou à SEQ ID NO: 2 ou à SEQ ID NO: 10.
[0032] Em diversas modalidades, o anticorpo é um anticorpo anti-CD30 e o anticorpo anti-CD30 do conjugado de fármaco e anticorpo é um anticorpo AC10 quimérico.
[0033] Em diversas modalidades, o conjugado de fármaco e anticorpo/conjugado de Fármaco-Unidade de Ligante- Anticorpo compreende monometil auristatina E e um ligante clivável por protease. Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease compreende um espaçador de tiol reativo e um dipeptídeo. Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease consiste em um espaçador de maleimidocaproil de tiol reativo, um dipeptídeo valina–citrulina e um espaçador de p-amino-benziloxicarbonil.
[0034] Em diversas modalidades, o conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 é brentuximabe vedotina. Em diversas modalidades, o conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 é administrado a cada 3 semanas.
[0035] Em diversas modalidades, o anticorpo anti-CD30 do conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 é um anticorpo anti-CD30 monoclonal. Em diversas modalidades, o anticorpo anti-CD30 do conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 é um anticorpo AC10 quimérico.
[0036] Em diversas modalidades, o conjugado de fármaco e anticorpo compreendem monometil auristatina E e um ligante clivável por protease. Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease compreende um espaçador de tiol reativo e um dipeptídeo. Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease consiste em um espaçador de maleimidocaproil de tiol reativo, um dipeptídeo valina–citrulina e um espaçador de p-amino-benziloxicarbonil.
[0037] Em diversas modalidades, o anticorpo é um anticorpo IgG, de preferência, um anticorpo IgG1 ou IgG2.
[0038] É entendido que cada recurso ou modalidade, ou combinação, descritos no presente documento, é um exemplo ilustrativo não limitante de qualquer um dos aspectos da invenção e, dessa maneira, deve ser passível de combinação com qualquer outro recurso ou modalidade, ou combinação, descritos no presente documento. Por exemplo, quando recursos são descritos com linguagem, como “uma modalidade”, “algumas modalidades”, “determinadas modalidades”, “modalidade adicional”, “modalidades exemplificativas específicas” e/ou “outra modalidade”, em que cada um desses tipos de modalidades é um exemplo não limitante de um recurso que se destina a ser combinado com qualquer outro recurso, ou combinação de recursos, descritos no presente documento sem ter que listar cada possível combinação. Tais recursos ou combinações de recursos se aplicam a qualquer um dos aspectos da invenção. Quando exemplos de valores estão dentro de faixas são descritos, qualquer um desses exemplos são contemplados como possíveis pontos finais de uma faixa, quaisquer e todos os valores numéricos entre tais pontos finais são contemplados, e qualquer um e todas as combinações de pontos finais superior e inferior são previstos.
Breve descrição das figuras
[0039] As Figuras 1A-1C mostram níveis de indução de proteína por estresse de ER após tratamento com MMAE. Western blots indicam níveis de proteína e fosforilação (Figura 1A).
A Figura 1B mostra níveis de secreção de ATP e a Figura 1C mostra níveis de liberação de HMGB1 de células.
[0040] As Figuras 2A-2B ilustram níveis de indução por estresse de ER para agentes de interrupção de tubulina MMAE, vincristina e Paclitaxel. A Figura 2A mostra indução por estresse de ER por ensaios de luciferase de CHOP e a Figura 2B mostra indução por estresse de ER em um modelo de xenoenxerto in vivo.
[0041] As Figuras 3A-3E mostram secreção de ATP e outros efeitos em resposta a agentes de interrupção de tubulina MMAE, vincristina e Paclitaxel em células pancreáticas MiaPac2 (Figura 3A, ATP) ou células de tumor de próstata PC- 3 (Figura 3B, ATP). O tratamento de células PC-3 com MMAE suscita estresse de ER (fosforilação de IRE1 e JNK) (Figura
3C), liberação de ATP (Figura 3D) e liberação de HMGB1 (Figura 3E).
[0042] As Figuras 4A-D mostram os efeitos de tratamento em células PC-3 enxertadas e infiltração de célula imune em camundongos atímicos nus. A Figura 4A, células dendríticas; a Figura 4B, infiltração de macrófago; a Figura 4C, apresentação de antígeno de célula dendrítica; a Figura 4D, apresentação de antígeno de macrófago.
[0043] As Figuras 5A-E mostram os efeitos de tratamento em produção de citocina/quimiocina, como medido por ELISA em células PC-3 enxertadas em camundongos atímicos nus. As Figuras 5A-5C, níveis de citocina intratumoral de MIP-1a, IP-10 e IL-1B, respectivamente; Figuras 5D-5F, níveis de citocina de circulação periférica IP-10, GCSF, e IL-6., respectivamente
[0044] A Figura 6 mostra indução por estresse de ER por Western blot de células de câncer de cervical HeLa após tratamento com MMAE, vincristina e Paclitaxel.
[0045] As Figuras 7A e 7B mostram os efeitos de tratamento com MMAE, vincristina e Paclitaxel em linha contínua de tumor de célula de pele em liberação de ATP como grupo (Figura 7A) e repartida por tipo de célula (Figura 7B). A Figura 7C mostra os efeitos de tratamento em liberação de HMGB1 em células de câncer de pele.
[0046] As Figuras 8A-8C mostram tratamento de MMAE de
A2058 (Figura 8A), células de pele SK-MEL-5 (Figuras 8B) e SK-MEL-28 (Figura 8C) levam ao aumento em apresentação de antígeno em 2/3 de linhagens celulares de tumor que foram mais robustas que Paclitaxel.
[0047] As Figuras 9A-9B mostram os efeitos de tratamento de A2058 (Figura 9A) ou células de tumor SK-MEL- 5 (Figura 9B) com MMAE, vincristina, Paclitaxel ou anti-p97- MMAE nas citocinas e quimiocinas testadas.
[0048] As Figuras 10A-10B mostram os efeitos de MMAE, vincristina, e Paclitaxel em aumento em apresentação de antígeno de células BxPC3 (Figura 10A) e HPAFII (Figura 10B).
As Figuras 10C-10D mostram secreção de ATP e liberação de HMGB-1, respectivamente, em células BxPC-3.
[0049] As Figuras 11A-11B mostram os efeitos de tratamento de BxPC3 (Figura 11A) ou células de tumor HPAFII (Figura 11B) com MMAE, vincristina, Paclitaxel ou anti-p97- MMAE nas citocinas e quimiocinas testadas.
[0050] As Figuras 12A-12C mostram os efeitos de MMAE, vincristina, Paclitaxel ou tratamento de p97-MMAE de células Calu-1 (Figura 12A), HT1080 (Figura 12B) e SK-MES-1 (Figura 12C) em níveis de apresentação de antígeno após cocultura com macrófagos. As Figuras 12D-12F mostram liberação de HMGB- 1 para células Calu-1 (Figura 12D), HT-1080 (Figura 12E) e SK-MES-1 (Figura 12F).
[0051] A Figura 13 mostra os níveis de indução de citocina ou quimiocina em células Calu-1 após tratamento com MMAE, vincristina, Paclitaxel ou p97-MMAE.
[0052] As Figuras 14A-14B mostram os efeitos de MMAE, um ADC que contém MMAE (anti-CD71 OKT9), vincristina, e Paclitaxel em apresentação de antígeno de célula MCF7 (Figura 14A) e produção de citocina/quimiocina (Figura 14B).
[0053] As Figuras 15A-C mostram os efeitos de MMAE ou um ADC que contém MMAE (Ladiratuzumabe vedotina, SGN-LIV1A) em indução de estresse de células de câncer de mama MCF-7 (Figura 15A), secreção de ATP (Figura 15B) e liberação de HMGB1 (Figura 15C).
[0054] As Figuras 16A-16B mostram os efeitos de MMAE, eribulina, paclitaxel, docetaxel ou SGN-LIV1A em indução de estresse de células de câncer de mama MCF-7 (Figura 16A) e secreção de ATP (Figura 16B).
[0055] As Figuras 17A-17E mostra os efeitos de SGN- LIVIA de ADC que contém MMAE ou anti-CD71-MMAE em atividade imune em células MCF-7 enxertadas em camundongos atímicos nus: A Figura 17A, infiltração de célula dendrítica; a Figura 17B, apresentação de antígeno de célula dendrítica; a Figura 17C, apresentação de antígeno de macrófago; a Figura 17D, níveis de IP10; Figura 17E, níveis de RANTES.
[0056] A Figura 18 mostra secreção de ATP por células MDA-MB-468 tratadas com MMAE, tapsigargina ou um ADC que contém MMAE (Enfortumabe vedotina, ASG-22ME).
[0057] As Figuras 19A-19G mostram os níveis de secreção de ATP (Figura 19A, JHH7; a Figura 19B, Huh7; a Figura 19C, Hep3b) e coestimulação (como medido por expressão de CD86, JHH7) e apresentação de antígeno (como medido por frequência de células de expressão de MHCII) em Hep3b (Figura 19D), Huh7 (Figura 19E), e JHH7 (Figura 19F-19G) tratada com MMAE, Tubilisina M, vincristina e Paclitaxel.
[0058] As Figuras 20A-20C mostram os efeitos de tratamento de células Hep3b (Figura 20A), Huh7 (Figura 20B) e JHH7 (Figura 20C) com MMAE, Tubilisina M, vincristina ou Paclitaxel em níveis de citocinas e quimiocinas.
[0059] As Figuras 21A-21B mostram os efeitos de MMAE, um ADC que contém MMAE (Enfortumabe vedotina, ASG-22ME), vincristina, e Paclitaxel em secreção de ATP de célula de tumor de bexiga T-24 (Figura 21A), apresentação de antígeno (Figura 21B) e produção de citocina/quimiocina (Figura 21C).
[0060] As Figuras 22A-22B mostra os efeitos de MMAE, MMAE-ADC (SGN-CD48A) e controle em células U-266. A Figura 22A mostra análise de Western blot realizada com o uso de fosfo-JNK Thr183/Tyr185 (pJNK), PARP, ATF4, AT6, fosfo-IRE- 1 Ser274 (pIRE-1); a Figura 22B mostra coloração para marcadores citotóxicos HSP70 e calreticulina.
Descrição Detalhada
[0061] A presente descrição fornece métodos para tratar tumores sólidos que compreendem administrar um conjugado de fármaco e anticorpo que compreende um agente de interrupção de tubulina. É descrito no presente documento que agentes de interrupção de tubulina afetam via de proteína de estresse de ER em células de tumor sólido e induzem secreção de ATP e outros fenômenos de estresse de ER que induzem célula imune para migrar para o sítio de tumor e reduzir crescimento de tumor.
Definições
[0062] A menos que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado que aqueles comumente entendidos por um indivíduo de habilidade comum na técnica, ao qual essa invenção pertence. As referências a seguir fornecem a um indivíduo versado uma definição geral de muitos dos termos usados nesta invenção: Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY (2d ed. 1994); THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY (Walker ed., 1988); THE GLOSSARY OF GENETICS, 5TH ED., R. Rieger et al.
(eds.), Springer Verlag (1991); e Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY (1991).
[0063] Cada publicação, pedido de patente, patente e outra referência citada no presente documento são incorporados a título de referência em sua totalidade à medida que não é inconsistente com a presente descrição.
[0064] Como usado no presente documento e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um/uma”, “e” e “o/a” incluem referentes plurais a menos que o contexto claramente indique de outro modo. Desse modo, por exemplo, referência a “um derivado” inclui uma pluralidade de tais derivados e referência a “um indivíduo” inclui referência a um ou mais indivíduos e assim por diante.
[0065] Deve ser ainda entendido que quando descrições de diversas modalidades usam o termo “que compreende”, aqueles versados na técnica entenderiam que, em alguns casos específicos, uma modalidade pode ser descrita de modo alternativo com o uso de linguagem “que consiste essencialmente em” ou “que consiste em.”
[0066] A menos que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado que aquele comumente entendido por um indivíduo de habilidade comum na técnica à qual esta descrição pertence. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática dos métodos e composições descritos, os métodos, dispositivos e materiais exemplificativos são descritos no presente documento.
[0067] “Quantidade terapeuticamente eficaz” ou “quantidade eficaz para“, como usado no presente documento, se refere àquela quantidade de um agente eficaz para produzir o efeito benéfico pretendido na saúde.
[0068] O termo “tumor sólido” como usado no presente documento se refere a uma massa anormal de tecido que, em geral, não contém cistos ou áreas líquidas. Os tumores sólidos podem ser benignos ou malignos. Os diferentes tipos de tumores sólidos são nomeados para o tipo de células que formam os mesmos. Os tumores sólidos incluem sarcomas e carcinomas. Sarcomas se referem a tumores em um vaso sanguíneo, osso, tecido adiposo, ligamento, vaso linfático, músculo ou tendão. Carcinomas se referem a tumores que se formam em células epiteliais. É contemplado que o tumor sólido é um tumor sólido não linfoma.
[0069] O termo “agente de interrupção de tubulina” se refere a um agente que inibe função de microtúbulo. Os agentes de interrupção de tubulina podem ser classificados em duas categorias maiores de acordo com seus mecanismos de ação: agentes que promovem polimerização de tubulina e estabilizam estruturas de microtúbulo e agentes que inibem polimerização de tubulina e desestabilizam estruturas de microtúbulo. Os agentes de interrupção de tubulina exemplificativos são descritos em maiores detalhes na Descrição Detalhada.
[0070] O termo “migração de célula imune”, como usado no presente documento, se refere ao movimento de células imunes, incluindo células mononucleares de sangue periférico, células T, células B, células exterminadoras naturais, monócitos, macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, granulócitos e similares, a ou de um sítio de tumor.
[0071] Os termos “tratar”, “que trata” ou “tratamento”, a menos que indicado de outro modo pelo contexto, se referem a tratamento terapêutico e medidas profiláticas para prevenir progressão de ou reincidência de doença, em que o objetivo é inibir ou desacelerar (atenuar) uma alteração ou distúrbio fisiológico indesejado, como o desenvolvimento ou espalhamento de câncer. Os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, porém, sem limitação, alívio de sintomas, diminuição de extensão de doença, estado de doença estabilizado (isto é, sem piora), atraso ou desaceleração de progressão de doença, melhoria ou paliação do estado de doença, e remissão (ou parcial ou total), ou detectável ou indetectável. “Tratamento” também pode significar prolongar sobrevivência em comparação com sobrevivência esperada se não receber tratamento. Aqueles que necessitam de tratamento incluem aqueles já com a afecção ou distúrbio, bem como aqueles propensos a ter a afecção ou distúrbio. O termo “tratar” inclui qualquer um ou todos dentre: inibir crescimento de células de tumor, câncer cancerígenas, ou de um tumor; inibir replicação de células de tumor ou câncer cancerígenas, redução de carga tumoral geral ou reduzir o número de células cancerígenas, e melhorar um ou mais sintomas associados à doença.
[0072] Exemplos de um “paciente” ou “indivíduo” incluem, porém, sem limitação, um ser humano, rato, camundongo, porquinho-da-índia, macaco, porco, cabra, vaca, cavalo, cachorro, gato, pássaro e aves. Em uma modalidade exemplificativa, o paciente é um ser humano.
[0073] O termo “farmaceuticamente aceitável” como usado no presente documento se refere a esses compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que estão, dentro do escopo de bom senso médico, adequado para contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outros problemas ou complicações compatíveis com uma razão risco/benefício plausível. O termo “ingrediente farmaceuticamente compatível” se refere a um diluente, adjuvante, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável com o qual um conjugado de anticorpo-fármaco é administrado.
[0074] Os termos “ligação específica” e “se liga especificamente” significa que o anticorpo anti-CD30 reagirá, de uma maneira altamente seletiva, com seu alvo correspondente, CD30, e não com a infinidade de outros antígenos.
[0075] O termo “anticorpo monoclonal” se refere a um anticorpo que é derivado de um único clone de célula, incluindo qualquer clone de célula eucarionte ou procarionte, ou um clone de fago, e não o método pelo qual o mesmo é produzido. Desse modo, o termo “anticorpo monoclonal” como usado no presente documento não é limitado a anticorpos produzidos através de tecnologia de hibridoma.
[0076] Os termos “idêntico” ou “porcentagem de identidade”, no contexto de duas ou mais sequências de polipeptídeos ou ácidos nucleicos, se referem a duas ou mais sequências ou subsequências que são as mesmas ou têm uma porcentagem especificada de nucleotídeos ou resíduos de aminoácido que são os mesmos, em comparação com e alinhados para correspondência máxima. Para determinar a porcentagem de identidade, as sequências são alinhadas para propósitos de comparação ideal (por exemplo, lacunas podem ser introduzidas na sequência de uma primeira sequência de aminoácidos ou ácidos nucleicos para alinhamento ideal com uma segunda sequência de aminoácidos ou ácidos nucleicos).
Os resíduos de aminoácido ou nucleotídeos em posições de aminoácido correspondentes ou posições de nucleotídeo são, então, comparados. Quando uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou nucleotídeo como a posição correspondente na segunda sequência, então, as moléculas são idênticas naquela posição. A porcentagem de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências (isto é, % de identidade=# de posições idênticas/total # de posições (por exemplo, posições sobrepostas)x100). Em determinadas modalidades, as duas sequências têm o mesmo comprimento.
[0077] O termo “substancialmente idêntico”, no contexto de dois ácidos nucleicos ou polipeptídeos, se refere a duas ou mais sequências ou subsequências que têm pelo menos 70% ou pelo menos 75% de identidade; mais tipicamente pelo menos 80% ou pelo menos 85% de identidade; e ainda mais tipicamente pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98% de identidade (por exemplo, como determinado com o uso de um dos métodos apresentados abaixo).
[0078] A determinação de porcentagem de identidade entre duas sequências pode ser alcançada com o uso de um algoritmo matemático. Um exemplo não limitante preferencial de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de duas sequências é o algoritmo de Karlin e Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268, modificado como em Karlin e Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5.873 a 5.877. Tal algoritmo é incorporado aos programas NBLAST e XBLAST de Altschul, et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410.
As pesquisas por nucleotídeo de BLAST podem ser realizadas com o programa NBLAST, pontuação=100, comprimento de palavra=12 para obter sequências de nucleotídeos homólogas a um ácido nucleico que codifica uma proteína de interesse.
As pesquisas por proteína de BLAST podem ser realizadas com o programa XBLAST, pontuação=50, comprimento de palavra=3 para obter sequências de aminoácidos homólogas à proteína de interesse. Para obter alinhamentos com lacunas para propósitos de comparação, BLAST com Lacunas pode ser utilizado, como descrito em Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. De modo alternativo, PSI-Blast pode ser usado para realizar uma pesquisa inteirada que detecta relações distantes entre moléculas (Id.). Outro exemplo não limitante preferencial de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de sequências é o algoritmo de Myers e Miller, CABIOS (1989). Tal algoritmo é incorporado ao programa ALIGN (versão 2.0) que é parte do pacote de software de alinhamento de sequência de GCG. Algoritmos adicionais para análise de sequência são conhecidos na técnica e incluem ADVANCE e ADAM, como descrito em Torellis e Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5; e FASTA descrito em Pearson e Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. 85:2444-8. De modo alternativo, alinhamento de sequência de proteínas pode ser realizado com o uso do algoritmo CLUSTAL W, como descrito por Higgins et al., 1996, Mehtods Enzymol. 266:383-402.
[0079] A abreviação “MMAE” se refere a monometil auristatina E.
[0080] As abreviações “vc” e “val-cit” se referem ao dipeptídeo valina-citrulina.
[0081] A abreviação “PAB” se refere ao espaçador autoimolativo:
[0082] A abreviação “MC” se refere ao maleimidocaproil de maca: cAC10-MC-vc-PAB-MMAE se refere a um anticorpo AC10 quimérico conjugado para o fármaco MMAE através de um ligante MC-vc-PAB.
[0083] Um conjugado de anticorpo-fármaco anti-CD30 vc- PAB-MMAE se refere a um anticorpo anti-CD30 conjugado para o fármaco MMAE por meio de um ligante que compreende o dipeptídeo valina citrulina e o espaçador autoimolativo PAB, como mostrado na Fórmula (I) de Patente nº U.S. 9.211.319.
Anticorpos
[0084] Os anticorpos da descrição são, de preferência, monoclonais e podem ser anticorpos humanizados ou quiméricos, multiespecíficos, de ser humano, anticorpos de cadeia única, fragmentos de Fab, fragmentos de F(ab’),
fragmentos produzidos por uma biblioteca de expressão de Fab e fragmentos de ligação de antígeno de qualquer um dos acima.
O termo “anticorpo,” como usado no presente documento, se refere a moléculas de imunoglobulina e porções imunologicamente ativas de moléculas de imunoglobulina, isto é, moléculas que contêm um sítio de ligação de antígeno que se liga imunoespecificamente a CD30. As moléculas de imunoglobulina da descrição podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse de molécula de imunoglobulina.
[0085] Em determinadas modalidades da descrição, os anticorpos são fragmentos de anticorpo de ligação de antígeno de ser humano da presente descrição e incluem, porém, sem limitação, Fab, Fab’ e F(ab’)2, Fd, Fvs de cadeia única (scFv), anticorpos de cadeia única, Fvs ligados por dissulfeto (sdFv) e fragmentos que compreendem ou um domínio VL ou VH. Os fragmentos de anticorpo de ligação de antígeno, incluindo anticorpos de cadeia única, podem compreender a região (ou regiões) variável sozinha ou em combinação com a totalidade ou uma porção do seguinte: região de dobradiça, domínios CH1, CH2, CH3 e CL. Também são incluídos na descrição fragmentos de ligação de antígeno que também compreendem qualquer combinação de região (ou regiões0 variável com uma região de dobradiça, domínios CH1, CH2, CH3 e CL. De preferência, os anticorpos são de ser humano, murina (por exemplo, camundongo e rato), jumento, ovelha, coelho, cabra, porquinho-da-índia, camelídeos, cavalo, ou galinha.
Como usado no presente documento, anticorpos de “ser humano” incluem anticorpos que têm a sequência de aminoácido de uma imunoglobulina de ser humano e incluem anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulina de ser humano, de células B de ser humano, ou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulinas de ser humano, como descrito infra e, por exemplo, na Pat. nº U.S. 5.939.598 por Kucherlapati et al.
[0086] Os anticorpos da presente descrição podem ser monoespecífico, biespecífico, triespecífico ou de múltiplas especificidades maiores. Os anticorpos multiespecíficos podem ser específicos para diferentes epítopos de CD30 ou podem ser específicos tanto para CD30, bem como para uma proteína heteróloga. Consulte, por exemplo, pedidos PCT WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91/00360; WO 92/05793; Tutt, et al., 1991, J. Immunol. 147:60 69; Pat. nº U.S. 4.474.893;
4.714.681; 4.925.648; 5.573.920; 5.601.819; Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547 1553.
[0087] Os anticorpos da presente descrição podem ser descritos ou especificados em termos dos CDRs particulares que os mesmos compreendem. A descrição abrange um anticorpo ou derivado do mesmo que compreende um domínio variável de cadeia leve ou pesada, em que o dito domínio variável compreende (a) um conjunto de três CDRs, nos quais o dito conjunto de CDRs são de um anticorpo monoclonal desejado, e (b) um conjunto de quatro regiões de estrutura, nas quais o dito conjunto de regiões de estrutura difere do conjunto de regiões de estrutura no anticorpo monoclonal desejado, e no qual o dito anticorpo ou derivado do mesmo se liga de modo imunoespecífico ao antígeno alvo.
[0088] Em diversas modalidades, o anticorpo se liga a um antígeno na superfície de uma célula cancerígena. Em diversas modalidades, o anticorpo é específico para CD30, CD19, CD70, CD71, CD20, CD52, CD133, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR2, PD-1, PDL1, RANKL, CTLA-4, IL-6, SLAMF7, CD3, TNF- alfa, PDGFR-alfa, CD38, GD2, cCLB8, p97, Nectina-4 ou EpCAM.
[0089] Os anticorpos anti-CD19 contemplados para uso no presente documento são descritos, por exemplo, na Patente nº U.S. 9.073.993. Os anticorpos anti-CD70 contemplados para uso no presente documento são descritos na, por exemplo, Patente nº U.S. 9.345.785. Outros anticorpos que se ligam a antígenos relevantes para câncer são conhecidos na técnica, incluindo, porém, sem limitação, rituximabe, adalimumabe, alemtuzumabe, trastuzumabe, alemtuzumabe, ibritumomabe tiuxetana, cetuximabe, bevacizumabe, panitumumabe, ofatumumabe, ipilimumabe, brentuximabe vedotina, pertuzumabe, ado-trastuzumabe emtansina, obinutuzumabe, ramucirumabe, pembrolizumabe, tositumomabe, nivolumabe dinutuximabe, daratumumabe, necitumumabe, elotuzumabe e atezolizumabe.
[0090] Os mAbs anti-CD30 de murina conhecidos na técnica foram gerados por imunização de camundongo com linhagens celulares com doença de Hodgkin (HD) ou antígeno CD30 purificado. AC10, originalmente denominado C10 (Bowen et al., 1993, J. Immunol. 151:5896 5906), é distinto uma vez que esse mAb anti-CD30 que foi preparado em relação a uma linhagem celular similar a NK, YT (Bowen et al., 1993, J.
Immunol. 151:5896 5906). Inicialmente, a atividade de sinalização desse mAb foi evidenciada pela regulação decrescente da expressão de superfície celular de moléculas CD28 e CD45, a regulação crescente de expressão de CD25 de superfície celular e a indução de adesão homotípica após ligação de C10 a células YT. As sequências do anticorpo AC10 são definidas na SEQ ID NO: 1 a 16 e na Tabela A abaixo.
Consulte também a Patente nº U.S. 7.090.843, incorporada ao presente documento a título de referência, que descreve um anticorpo AC10 quimérico.
[0091] Em um aspecto, anticorpos da descrição se ligam de modo imunoespecífico a CD30 e exercem efeitos citostáticos e citotóxicos em células malignas. Em determinadas modalidades, os anticorpos da descrição compreendem um ou mais CDRs de AC10.
[0092] Em uma modalidade específica, a descrição abrange um anticorpo anti-CD30 ou derivado do mesm0o que compreende uma cadeia pesada domínio variável, em que o dito domínio variável compreende (a) um conjunto de três CDRs, no qual o dito conjunto de CDRs compreende SEQ ID NO:4, 6, ou 8 e (b) um conjunto de quatro regiões de estrutura, no qual o dito conjunto de regiões de estrutura difere do conjunto de regiões de estrutura em anticorpo monoclonal AC10, e no qual o dito anticorpo ou derivado do mesmo se liga de modo imunoespecífico a CD30.
[0093] Em diversas modalidades, a invenção abrange um anticorpo ou derivado do mesmo que compreende uma cadeia leve domínio variável, em que o dito domínio variável compreende (a) um conjunto de três CDRs, no qual o dito conjunto de CDRs compreende SEQ ID NO:12, 14 ou 16, e (b) um conjunto de quatro regiões de estrutura, no qual o dito conjunto de regiões de estrutura difere do conjunto de regiões de estrutura em anticorpo monoclonal AC10, e no qual o dito anticorpo ou derivado do mesmo se liga de modo imunoespecífico a CD30.
[0094] Adicionalmente, anticorpos da presente descrição também podem ser descritos ou especificados em termos de suas estruturas primárias. Os anticorpos que têm pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% e, com a maior preferência,
pelo menos 98% de identidade (como calculado com o uso de métodos conhecidos na técnica e descritos no presente documento) para as regiões variáveis de um anticorpo conhecido, por exemplo, AC10, também são incluídos nos presentes métodos. Os anticorpos da presente descrição também podem ser descritos ou especificados em termos de sua afinidade de ligação ao antígeno alvo. As afinidades de ligação preferenciais incluem aquelas com uma constante de dissociação ou Kd menor que 5 x10 2 M, 10-2 M, 5x10-3 M, 10-3 M, 5x10-4 M, 10-4 M, 5x10-5 M, 10-5 M, 5x10-6 M, 10-6 M, 5x10-7 M, 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8M, 5x10-9 M, 10-9 M, 5x10-10 M, 10-10 M, 5x10-11 M, 10-11 M, 5x10-12 M, 10-12 M, 5x10-13 M, 10-13 M, 5x10- 14 M, 10-14 M, 5x10-15 M, ou 10-15 M.
[0095] Os anticorpos também incluem derivados que são modificados, isto é, pela fixação covalente de qualquer tipo de molécula ao anticorpo de modo que a fixação covalente não impeça o anticorpo de ligação ao antígeno alvo. Por exemplo, mas não a título de limitação, os derivados de anticorpo incluem anticorpos que foram modificados, por exemplo, por glicolisação, acetilação, PEGilação, fosforilação, amidação, derivatização por grupos de proteção/bloqueio conhecidos, clivagem proteolítica, ligação a um aglutinante celular ou outra proteína, etc. Qualquer uma das diversas modificações químicas pode ser realizada por técnicas conhecidas, incluindo, porém, sem limitação clivagem química específica,
acetilação, formilação, síntese metabólica de tunicamicina, etc. Adicionalmente, o derivado pode conter um ou mais aminoácidos não clássicos.
[0096] Os anticorpos contemplados para uso na presente invenção podem ser gerados por qualquer método adequado conhecido na técnica.
[0097] A descrição fornece ainda ácidos nucleicos que compreendem uma sequência de nucleotídeos que codifica uma proteína, incluindo porém, sem limitação, uma proteína da descrição e fragmentos da mesma. Os ácidos nucleicos contemplados no presente documento, de preferência, codificam um ou mais CDRs de anticorpos que se ligam a CD30 e exercem efeitos citotóxicos ou citostáticos em células HD.
Os ácidos nucleicos exemplificativos da invenção compreendem SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, ou SEQ ID NO:15. Os ácidos nucleicos de região variável da invenção compreendem SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:9.
(Consulte a Tabela A).
Tabela A
NUCLEOTÍDEO OU MOLÉCULA SEQ ID NO:
AMINOÁCIDO Região Variável de Cadeia Nucleotídeo 1 Pesada AC 10 Região Variável de Cadeia Aminoácido 2 Pesada AC 10 CDR1 de Cadeia Pesada AC 10 Nucleotídeo 3 (H1) CDR1 de Cadeia Pesada AC 10 Aminoácido 4
(H1) CDR2 de Cadeia Pesada AC 10 Nucleotídeo 5 (H2) CDR2 de Cadeia Pesada AC 10 Aminoácido 6 (H2) CDR3 de Cadeia Pesada AC 10 Nucleotídeo 7 (H3) CDR3 de Cadeia Pesada AC 10 Aminoácido 8 (H3) Região Variável de Cadeia Nucleotídeo 9 Leve AC 10 Região Variável de Cadeia Aminoácido 10 Leve AC 10 CDR1 de Cadeia Leve AC 10 Nucleotídeo 11 (L1) CDR1 de Cadeia Leve AC 10 Aminoácido 12 (L1) CDR2 de Cadeia Leve AC 10 Nucleotídeo 13 (L2) CDR2 de Cadeia Leve AC 10 Aminoácido 14 (L2) CDR3 de Cadeia Leve AC 10 Nucleotídeo 15 (L3) CDR3 de Cadeia Leve AC 10 Aminoácido 16 (L3)
[0098] Em diversas modalidades, o anticorpo é um anticorpo IgG, por exemplo, um anticorpo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4, de preferência, um anticorpo IgG1.
Conjugados de Anticorpo-Fármaco
[0099] É contemplado no presente documento o uso de conjugados de Fármaco-Unidade de Ligante-anticorpo, ou conjugados de fármaco e anticorpo, que compreendem agentes de interrupção de tubulina para tratar tumores sólidos.
[00100] As diversas categorias diferentes de agente de interrupção de tubulina são conhecidas no campo, incluindo, auristatinas, tubulisinas, colchicina, alcaloides da vinca, taxanos, criptoficinas, maitansinoide, hemiasterlinas e outros agentes de interrupção de tubulina.
[00101] Auristatinas são derivadas da dolastatina de produto natural. As auristatinas exemplificativas incluem dolostatina-10, MMAE (N-metilvalina-valina-dolaisoleuina- dolaproina-norefedrina) e MMAF (N-metilvalina-valina- dolaisoleuina-dolaproina-fenilalanina) e AFP. O documento WO 2015/057699 descreve auristatinas PEGiladas, incluindo MMAE.
Os derivados de dolostatina adicionais contemplados para uso são descritos na Patente nº U.S. 9.345.785, incorporada ao presente documento a título de referência.
[00102] As tubulisinas incluem, porém, sem limitação, tubulina D, tubulina M, tubufenilalanina e tubutirosina. Os documentos WO 2017-096311 e WO 2016-040684 descrevem análogos de tubulina, incluindo tubulina M.
[00103] Colchicinas incluem, porém, sem limitação, colchicina e CA-4.
[00104] Os alcaloides da vinca incluem, porém, sem limitação, Vinblastina (VBL), vinorelbina (VRL), vincristina (VCR) e vindesina (VDS).
[00105] Taxanos incluem, porém, sem limitação, paclitaxel e docetaxel.
[00106] Criptoficinas incluem porém, sem limitação criptoficina-1 e criptoficina-52.
[00107] Maitansidoies incluem, porém, sem limitação, maitansina, maitansinol, análogos de maitansina, DM1, DM3 e DM4, e ansamatocina-2. As porções químicas de fármaco de maitansinoide exemplificativas incluem aquelas que têm um anel aromático modificado, como: C-19-decloro (Pat. nº U.S.
4.256.746) (preparado por redução de hidreto de alumínio de lítio de ansamitocina P2); C-20-hidróxi (ou C-20-demetil) +/-C-19-decloro (Pat. nº U.S. 4.361.650 e 4.307.016) (preparado por desmetilação com o uso de Streptomyces ou Actinomyces ou descloração com o uso de LAH); e C-20- demetóxi, C-20-acilóxi (--OCOR), +/-decloro (Pat. nº U.S.
4.294.757) (preparado por acilação com o uso de cloretos de acila), e aqueles que têm modificações em outras posições.
[00108] As porções químicas de fármaco de maitansinoide também incluem aqueles que têm modificações como: C-9-SH (Pat. nº U.S. 4.424.219) (preparado pela reação de maitansinol com H.sub.25 ou P.sub.2S.sub.5); C-14- alcoximetil(demetóxi/CH.sub.2OR) (Pat. nº U.S. 4.331.598); C-14-hidroximetil ou aciloximetil (CH.sub.2OH ou CH.sub.2OAc) (Pat. nº U.S. 4.450.254) (preparado junto à Nocardia); C-15-hidróxi/acilóxi (Pat. nº U.S. 4.364,866) (preparado pela conversão de maitansinol por Streptomyces); C-15-metóxi (Pat. nº U.S. 4.313.946 e 4.315.929) (isolado de
Trewia nudlflora); C-18-N-demetil (Pat. nº U.S. 4.362.663 e
4.322,348) (preparado pela desmetilação de maitansinol por Streptomyces); e 4,5-deóxi (Pat. nº U.S. 4.371.533) (preparados pela redução de LAH/tricloreto de titânio de maitansinol). A citotoxicidade do conjugado TA.1- mautansonoide que se liga a HER-2 (Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992) foi testada in vitro na linhagem celular de câncer de mama de ser humano SK-BR-3. O conjugado de fármaco alcançou um grau de citotoxicidade similar ao fármaco de maitansinoide livre, que poderia ser aumentado aumentando-se o número de moléculas de maitansinoide por molécula de anticorpo.
[00109] As hemiasterlinas incluem porém, sem limitação, hemiasterlina e HTI-286.
[00110] Outros agentes de interrupção de tubulina incluem taccalonolido A, taccalonolido B, taccalonolido AF, taccalonolido AJ, taccalonolido AI-epóxido, discodermolida, epotilona A, epotilona B, e laulimalida.
[00111] Os conjugados de Fármaco-Unidade de Ligante- Anticorpo, ou conjugados de fármaco e anticorpo, contemplados para uso nos métodos no presente documento compreendem unidades de ligante. Tipicamente, o derivado de ADC ou ADC compreende uma região de ligante entre o agente terapêutico e o anticorpo ou derivado do mesmo. O ligante pode ser um ligante clivável de protease, um ligante clivável por ácido, um ligante de dissulfeto, um ligante autoestabilizante. Em diversas modalidades, o ligante é clivável mediante condições intracelulares, de modo que a clivagem do ligante libere o agente terapêutico do anticorpo no ambiente intracelular.
[00112] Por exemplo, em algumas modalidades, o ligante é clivável por um agente de clivagem que está presente no ambiente intracelular (por exemplo, dentro de um lisossomo ou endossomo ou caveolas). O ligante pode ser, por exemplo, um ligante de peptidil que é clivado por uma enzima de peptidase ou protease intracelular, incluindo, porém, sem limitação, uma protease lisossomal ou endossomal.
Tipicamente, o ligante de peptidil tem pelo menos dois aminoácidos de comprimento ou pelo menos três aminoácidos de comprimento. Os agentes de clivagem podem incluir catepsinas B e D e plasmina, todos os quais são conhecidos por hidrolisar derivados de fármaco de dipeptídeo, resultando na liberação de fármaco ativo dentro de células alvo (consulte, por exemplo, Dubowchik e Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123). Mais típicos são ligantes de peptidil que são cliváveis por enzimas que estão presentes em células de expressão de antígeno. Por exemplo, um ligante de peptidil que é clivável pela catepsina-B de protease dependente de tiol, que é altamente expressados em tecido cancerígeno, pode ser usado (por exemplo, um ligante Phe-Leu ou um ligante
Gly-Phe-Leu-Gly). Outros tais ligantes são descritos, por exemplo, na Pat. nº U.S. 6.214.345. Em modalidades específicas, o ligante de peptidil clivável por uma protease intracelular é um ligante Val-Cit ou um ligante Phe-Lys (consulte, por exemplo, Pat. nº U.S. 6.214,345, que descreve a síntese de doxorubicina com o ligante val-cit). Uma vantagem de com o uso de liberação preteolítica intracelular do agente terapêutico é que o agente é tipicamente atenuado quando conjugado e as estabilidades de soro dos conjugados são tipicamente altas. Consulte também Patente nº U.S.
9.345.785.
[00113] Os termos “clivado de modo intracelular” e “clivagem intracelular” se referem a um processo metabólico ou reação dentro de uma célula em um conjugado de fármaco e anticorpo, em que a fixação covalente, por exemplo, o Ligante, entre a porção química de Fármaco (D) e a unidade de Anticorpo é quebrado, resultando no Fármaco livre, ou outro metabólito do conjugado dissociado do anticorpo dentro da célula. As porções químicas clivadas do conjugado Fármaco- Unidade de Ligante-Ab são, desse modo, metabólitos intracelulares.
[00114] Em diversas modalidades, o ligante clivável é sensível a pH, isto é, sensível à hidrólise em determinados valores de pH. Tipicamente, o ligante sensível a pH hidrolisável mediante condições ácidas. Por exemplo, um ligante lábil por ácido que é hidrolisável no lisossomo (por exemplo, uma hidrazona, semicarbazona, tiossemicarbazona, amido cis-aconítico, ortoéster, acetal, cetal, ou similares) pode ser usado. (Consulte, por exemplo, Pat. nº U.S.
5.122.368; 5.824.805; 5.622.929; Dubowchik e Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol.
Chem. 264:14653-14661.) Tais ligantes são relativamente estáveis mediante condições de pH neutro, como aqueles no sangue, mas são instáveis abaixo de pH 5,5 ou 5,0, o pH aproximado do lisossomo. Em determinadas modalidades, o ligante hidrolisável é um ligante tioéter (como, por exemplo, um tioéter fixado ao agente terapêutico por meio de uma ligação de acil-hidrazona (consulte, por exemplo, Pat. nº U.S. 5.622.929)).
[00115] Em diversas modalidades, o ligante é clivável mediante condições de redução (por exemplo, um ligante de dissulfeto). Uma variedade de ligantes de dissulfeto são conhecidos, incluindo, por exemplo, aqueles que podem ser formados com o uso de SATA (N-succinimidil-5- acetiltioacetato), SPDP (N-succinimidil-3-(2- piridilditio)propionato), SPDB (N-succinimidil-3-(2- piridilditio)butirato) e SMPT (N-succinimidil-oxicarbonil- alfa-metil-alfa-(2-piridil-ditio)tolueno)- , SPDB e SMPT (Consulte, por exemplo, Thorpe et al., 1987, Cancer Res.
47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates:
Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987. Consulte também Pat. nº U.S. 4.880.935.)
[00116] Em diversas modalidades, o ligante é um ligante de malonato (Johnson et al., 1995, Anticancer Res.
15:1387-93), um ligante de maleimiodobenzoila (Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304), ou um análogo de 3’-N-amida (Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305- 12).
[00117] Em algumas modalidades, a unidade de ligante não é clivável e o fármaco é liberado por degradação de anticorpo. (Consulte nº U.S. 2005/0238649).
[00118] Em diversas modalidades, o ligante não é substancialmente sensível ao ambiente extracelular. Como usado no presente documento, “não substancialmente sensível ao ambiente extracelular,” no contexto de um ligante, significa que não mais de cerca de 20%, tipicamente não mais de cerca de 15%, mais tipicamente não mais de cerca de 10%, e, ainda mais tipicamente, não mais de cerca de 5%, não mais de cerca de 3%, ou não mais de cerca de 1% dos ligantes, em uma amostra de derivado de ADC ou ADC, são clivados quando o derivado de ADC ou ADC presente em um ambiente extracelular (por exemplo, em plasma). Se um ligante não for substancialmente sensível ao ambiente extracelular pode ser determinado, por exemplo, incubando-se independentemente com plasma tanto (a) o derivado de ADC ou ADC (a amostra de “ADC” ) quanto (b) uma quantidade molar igual de anticorpo ou agente terapêutico não conjugado (a “amostra de controle” ) por um período de tempo predeterminado (por exemplo, 2, 4, 8, 16, ou 24 horas) e, então, comparar a quantidade de anticorpo ou agente terapêutico não conjugado presente na amostra de ADC com aquela presente na amostra de controle, como medido, por exemplo, por cromatografia líquida de alto desempenho.
[00119] Em diversas modalidades, o ligante promove internalização celular. Em determinadas modalidades, o ligante promove internalização celular quando conjugado com o agente terapêutico (isto é, no meio da porção química de ligante-agente terapêutico do derivado de ADC ou ADC, como descrito no presente documento). Em ainda outras modalidades, o ligante promove internalização celular quando conjugado tanto para o fármaco quanto para o anticorpo específico de antígeno ou derivado do mesmo (isto é, no meio do derivado de ADC ou ADC, como descrito no presente documento).
[00120] Uma variedade de ligantes que podem ser usados com as presentes composições e métodos são descritos no documento WO 2004010957 intitulado “Drug Conjugates and Their Use for Treating Cancer, An Autoimmune Disease or an Infectious Disease” depositado em 31 de julho de 2003.
[00121] Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease compreende um espaçador de tiol reativo e um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o ligante clivável de protease consiste em um espaçador de maleimidocaproil de tiol reativo, um dipeptídeo valina–citrulina e um espaçador de p-amino-benziloxicarbonil.
[00122] Em diversas modalidades, o ligante clivável por ácido é um ligante de hidrazina ou um ligante de amônia quaternária.
[00123] Os ligantes autoestabilizantes que compreendem um grupo maleimida são descritos na Patente nº U.S. 9.504.756, no presente documento incorporada a título de referência.
[00124] Em diversas modalidades, o agente de interrupção de tubulina, como auristatina, é conjugado para um ligante por um grupo carboxila terminal C que forma uma ligação de amida com a Unidade de Ligante, como descrito na Patente nº U.S. 9.463.252, incorporada no presente documento a título de referência. Em diversas modalidades, a Unidade de Ligante compreende pelo menos um aminoácido. Os conjugados de Ligante-fármaco (ADCs) de N,N-dialquilauristatinas são descritos na Patente nº U.S. 8.992.932.
[00125] Em diversas modalidades, o ligante também compreende uma unidade de maca e/ou uma unidade de aminoácido. As unidades de maca exemplificativas e unidades de aminoácido são descritas na Patente nº U.S. 9.345.785 e na Patente nº U.S. 9.078.931, cada uma das quais é incorporada ao presente documento a título de referência.
[00126] Em diversas modalidades, é fornecido no presente documento o uso de conjugados de fármaco e anticorpo que compreendem um anticorpo anti-CD30, ligado de modo covalente a MMAE através de um ligante vc-PAB. Os conjugados de fármaco e anticorpo são entregues ao indivíduo como uma composição farmacêutica. Os conjugados de fármaco e anticorpo CD30 são descritos na Patente nº U.S. 9.211.319, incorporada ao presente documento a título de referência.
[00127] Em diversas modalidades, os conjugados de Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo/anticorpo-fármaco da presente invenção têm a seguinte fórmula:
[00128] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que: mAb é um anticorpo monoclonal, como anticorpo anti-CD30 ou anti-CD19, S é um átomo de enxofre do anticorpo A- é uma unidade de maca, p é de cerca de 3 a cerca e 5.
[00129] O carregamento de fármaco é representado por p, o número médio de moléculas de fármaco por anticorpo em uma composição farmacêutica. Por exemplo, se p for cerca de 4, o carregamento médio de fármaco levando em consideração todo o anticorpo presente na composição farmacêutica é cerca de 4. faixas P de cerca de 3 a cerca de 5, mais preferencialmente, de cerca de 3,6 a cerca de 4,4, ainda mais preferencialmente, de cerca de 3,8 a cerca de 4,2. P pode ser cerca de 3, cerca de 4, ou cerca de 5. O número médio de fármacos por anticorpo na preparação de reações de conjugação pode ser caracterizado por meios convencionais como espectroscopia de massa, ensaio ELISA, e HPLC. A distribuição quantitativa de conjugados de anticorpo-fármaco em termos de p também pode ser determinada. Em alguns exemplos, separação, purificação e caracterização de conjugados de anticorpo-fármaco homogêneos, em que p é um determinado valor de conjugados de anticorpo-fármaco com outros carregamentos de fármaco pode ser alcançado por meios, como HPLC de fase reversa ou eletroforese.
[00130] A unidade de maca (A), tem capacidade de ligar uma unidade de anticorpo à unidade de aminoácido de valina- citrulina por meio de um grupo sulfidrilo do anticorpo. Os grupos sulfidrila podem ser gerados, por exemplo, por redução das ligações de dissulfeto intercadeia de um anticorpo específico de antígeno. Por exemplo, a unidade de maca pode ser ligada ao anticorpo por meio dos átomos de enxofre gerados a partir da redução das ligações de dissulfeto intercadeia do anticorpo. Em algumas modalidades, as unidades de maca são ligadas ao anticorpo unicamente por meio dos átomos de enxofre gerados a partir da redução das ligações de dissulfeto intercadeia do anticorpo. Em algumas modalidades, os grupos sulfidrila podem ser gerados por reação de um grupo amino de uma porção química de lisina de um anticorpo com 2-iminotiolano (reagente de Traut) ou outros reagentes de geração de sulfidrila. Em determinadas modalidades, o anticorpo é um anticorpo recombinante e é geneticamente modificado para transportar uma ou mais lisinas. Em determinadas outras modalidades, o anticorpo recombinante é geneticamente modificado para transportar grupos sulfidrila adicionais, por exemplo, cisteínas adicionais.
[00131] A síntese e a estrutura de MMAE é descrita na Pat. nº U.S. 6.884.869 incorporada a título de referência ao presente documento em sua totalidade e para todos os propósitos. A síntese e a estrutura de unidades de maca e métodos exemplificativos para produzir conjugados de fármaco e anticorpo são descritas em, por exemplo, Pedido nº U.S.
2006/0074008 e 2009/0010945, em que cada um é incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00132] As unidades de maca representativas são descritas dentro dos colchetes de Fórmulas IIIa e IIIb de
Patente nº U.S. 9.211.319, e incorporadas ao presente documento a título de referência.
[00133] Em diversas modalidades, o conjugado de fármaco e anticorpo compreendem monometil auristatina E e um ligante clivável por protease. É contemplado que o ligante clivável de protease compreende um espaçador de tiol reativo e um dipeptídeo. Em diversas modalidades, o ligante clivável de protease consiste em um espaçador de maleimidocaproil de tiol reativo, um dipeptídeo valina–citrulina e um espaçador de p-amino-benziloxicarbonil.
[00134] Em uma modalidade preferencial, o conjugado de fármaco e anticorpo é brentuximabe vedotina, um conjugado de anticorpo-fármaco que tem a estrutura:
[00135] Brentuximabe vedotina é um conjugado de anticorpo-fármaco direcionado por CD30 que consiste em três componentes: (i) o anticorpo IgG1 quimérico cAC10, específico para CD30 humano, (ii) o agente de interrupção de microtúbulo MMAE, e (iii) um ligante clivável por protease que fixa de modo covalente MMAE a cAC10. A razão entre fármaco e anticorpo ou carregamento de fármaco é representada por “p” na estrutura de brentuximabe vedotina e faixas em valores inteiros de 1 a 8. O carregamento médio de fármaco de brentuximabe vedotina em uma composição farmacêutica é cerca de 4.
Métodos de Uso
[00136] São fornecidos no presente documento métodos para tratar um tumor sólido que compreendem administrar um conjugado de anticorpo-fármaco que compreende um agente de interrupção de tubulina para tratar um tumor sólido. Em diversas modalidades, é contemplado que os métodos da presente descrição tratam tumores sólidos induzindo-se vias de estresse de ER após interrupção de função de microtúbulo.
Em diversas modalidades, o agente de conjugado de fármaco e anticorpo que compreendem um agente de interrupção de tubulina que induz apoptose no tumor sólido.
[00137] Em diversas modalidades, o agente de conjugado de fármaco e anticorpo que compreendem um agente de interrupção de tubulina aumenta migração de célula imune para um tumor sólido.
[00138] Nos Exemplos, é demonstrado que agentes de interrupção de tubulina aumentam via de proteína de estresse de ER, como aumentam secreção de ATP e aumentam níveis de proteína caixa 2 do grupo de alta mobilidade (HMGB1), o que resulta em apoptose aumentada de células, que podem, por sua vez, extrair células imunes para o sítio de apoptose e estresse de célula.
[00139] É contemplado que os métodos no presente documento reduzem tamanho de tumor ou carga tumoral no indivíduo, e/ou reduzem metástase no indivíduo. Em diversas modalidades, o tamanho de tumor no indivíduo é reduzido em cerca de 25-50%, cerca de 40-70% ou cerca de 50-90% ou mais.
Em diversas modalidades, os métodos reduzem o tamanho de tumor em 10%, 20%, 30% ou mais. Em diversas modalidades, os métodos reduzem o tamanho de tumor em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100%.
[00140] É contemplado que os métodos no presente documento reduzem carga tumoral, e também reduzem ou previnem a recorrência de tumores uma vez que o câncer entrou em remissão.
[00141] Os tumores sólidos exemplificativos contemplados no presente documento incluem câncer de pulmão, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, cânceres gastrointestinais, câncer de cabeça e pescoço, melanoma, sarcoma, câncer esofangeal, câncer pancreático, câncer pancreático metastático, adenocarcinoma metastático do pâncreas, câncer de bexiga, câncer de estômago, câncer fibrótico, glioma, glioma maligno, glioma de pontina intrínseca difuso, neoplasma de cérebro de infância recorrente, carcinoma de célula renal, carcinoma de célula renal metastático de célula limpa, câncer de rins, câncer de próstata, câncer de próstata metastático resistente à castração, câncer de próstata de estágio IV, melanoma metastático, melanoma, melanoma maligno, melanoma recorrente da pele, metástases de melanoma cerebral, melanoma de pele estágio IIIA; melanoma de pele estágio IIIB, melanoma de pele estágio IIIC; melanoma de pele estágio IV, melanoma maligno de cabeça e pescoço, câncer de pulmão, câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC), câncer de pulmão de célula não pequena de célula escamosa, câncer de mama, câncer de mama metastático recorrente, carcinoma hepatocelular,
síndrome de richter; macroglobulinemia de waldenstrom,
glioblastoma adulto; gliosarcoma adulto, glioblastoma recorrente, rabdomiossarcoma de infância recorrente, sarcoma de ewing recorrente/ tumor neuroectodérmico primitivo periférico, neuroblastoma recorrente; osteosarcoma recorrente, câncer colorretal, câncer colorretal positivo de
MSI; câncer colorretal negativo de MSI, carcinoma nasofaríngeo não queratinizante; carcinoma indiferenciado nasofaríngeo recorrente, adenocarcinoma cervical; carcinoma adenoescamoso cervical; carcinoma de célula escamosa cervical; carcinoma cervical recorrente; câncer cervical de estágio IVA; câncer cervical de estágio IVB, carcinoma de célula escamosa de canal anal; carcinoma de canal anal metastático; carcinoma de canal anal recorrente, câncer de cabeça e pescoço recorrente; carcinoma de célula escamosa de cabeça e pescoço (HNSCC), carcinoma ovariano, câncer de colo, câncer gástrico, câncer de GI avançado, adenocarcinoma gástrico; adenocarcinoma de junção gastroesofágico, neoplasmas de osso, sarcoma de tecido mole; sarcoma de osso, carcinoma de tímico, carcinoma urotelial, carcinoma de célula de merkel recorrente; carcinoma de célula de merkel de estágio III; carcinoma de célula de merkel de estágio IV, síndrome mielodisplásica e síndrome de Sézary. Em uma modalidade, o tumor sólido é um tumor sólido não linfoma. Em algumas modalidades, o tumor sólido pode ser mieloma múltiplo.
[00142] Em diversas modalidades, o ADC pode ser administrado com um ou mais agentes quimioterapêuticos. Os agentes quimioterapêuticos exemplificativos são descritos na tabela a seguir e podem ser usados sozinhos ou em combinação com um ou mais agentes quimioterapêuticos adicionais, que, por sua vez, também podem ser administrados em combinação com um conjugado de fármaco e anticorpo.
Agentes Quimioterapêuticos Agentes Alquilantes Produtos naturais Mostardas de nitrogênio Fármacos antimitóticos mecloretamina Taxanos ciclofosfamida paclitaxel ifosfamida alcaloides da vinca melfalano vinblastina (VLB) clorambucila vincristina Nitrosoureias vindesina carmustina (BCNU) vinorelbina lomustina (CCNU) Taxotere® (docetaxel) semustina (metil-CCNU) estramustina Etilenimina/Metil-melamina fosfato de estramustina trietilenemelamina (TEM) Epipodofilotoxinas trietileno tiofosforamida etoposido (tiotepa) teniposido hexametilmelamina Antibióticos (HMM, altretamina) actimomicina D Alquil sulfonatos daunomicina (rubido-micina) bussulfano doxorubicina (adria-micina) Triazinas mitoxantrona dacarbazina (DTIC) idarubicina Antimetabólitos epirubicina Análogos de Ácido Fólico valrubicina Metotrexato bleomicina Trimetrexato esplicamicina (mitramicina) Pemetrexede mitomicinaC (Antifolato de múltiplos dactinomicina alvos) afidicolina Análogos de pirimidina Enzimas 5-fluorouracil L-asparaginase fluorodeoxiuridina L-arginase gemcitabina Radiossensibilizadores Arabinoside de citocina metronidazol (AraC, citarabina) misonidazol 5-azacitidina desmetilmisonidazol 2,2´- difluorodeoxi-citidina pimonidazol Análogos de purina etanidazol 6-mercaptopurina nimorazol 6-tioguanina RSU 1069 azatioprina EO9 2’-deoxicoformicina RB 6145 (pentostatina) SR4233 Eritro- nicotinamida hidroxinoniladenina-adenina 5-bromodeoziuridina (EHNA) 5-iododeoxiuridina fosfato de fludarabina bromodeoxicitidina 2-clorodeoxiadenosina Agentes diversos (cladribina, 2-CdA) bisfosfonatos Inibidores de Topoisomerase Unibidor de RANKL Tipo I denosumabe camptotecina Complexos de coordenação de topotecano Platina irinotecano cisplatina Modificadores de resposta carboplatina biológica oxaliplatina G-CSF antracenediona
GM-CSF mitoxantrona Agentes de Diferenciação Ureia substituída Derivados de ácido retinoico Hidroxiuréia Hormônios e antagonistas Derivados de metil- Adrenocorticosteroides/antagon hidrazina istas N-metil-hidrazina (MIH) calcitonina procarbazina prednisona e equiv-alentes Inibidor Adrenocortical dexametasona Mitotano (o,p´- DDD) ainoglutetimida ainoglutetimida Progestinas Citocinas Caproato de Interferão (α, β, γ) hidroxiprogesterona interleucina-2 Acetato de medroxiprogesterona Fotossensibilizantes acetato de megestrol Derivados de Estrogênios hematoporfirina dietilstilbestrol Photofrin® etinil estradiol/ equivalentes derivados de benzoporfirina Antiestrogênio Npe6 tamoxifeno Estioporfirina de estanho Andrógenos (SnET2) Propionato de testosterona feoborida-a fluoximesterona/equivalentes bacterioclorofil-a Antiandrógenos naftalocianinas flutamida ftalocianinas Liberação de gonadotropina- Ftalocianinas de zinco Análogos de hormônio Radiação leuprorrelina Raios X Antiandrógenos não esteroidais Luz ultravioleta flutamida Radição gama Inibidores de Histona Luz visível Deacetilase Radiação infravermelha Vorinostat Radiação de micro-onda Romidepsina
[00143] Em diversas modalidades, terapia é administrada em uma base de período, por exemplo, duas vezes por semana, semanalmente, a cada 2 semanas, a cada 3 semanas, mensalmente, uma vez a cada dois meses ou em um intervalo mais longo. Em uma modalidade relacionada, em tratamentos exemplificativos, um conjugado de fármaco e anticorpo é administrado em uma faixa de dose de 0,1 a 15 mg/kg.
[00144] Em um aspecto, métodos da presente descrição incluem uma etapa de administrar uma composição farmacêutica. Em determinadas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição estéril.
[00145] Métodos da presente descrição são realizados com o uso de quaisquer meios medicamente aceitáveis para introduzir agentes terapêuticos direta ou indiretamente em um indivíduo mamífero, incluindo porém, sem limitação, administração de injeções, ingestão oral, intranasal, tópica, transdérmica, parenteral, aspersão por inalação, vaginal, ou retal. O termo parenteral, como usado no presente documento, inclui injeções subcutâneas, intravenosas, intramusculares e intracisternal, bem como cateter ou técnicas de infusão. A administração por, injeção intradérmica, intramamária, intraperitoneal, intratecal, retrobulbar, intrapulmonar e ou implantação cirúrgica em um sítio particular também é contemplada.
[00146] Em uma modalidade, a administração é realizada no sítio de um câncer ou tecido afetado que necessita de tratamento por injeção direta no sítio ou por meio de uma entrega sustentada ou mecanismo de liberação sustentada, que pode entregar a formulação internamente. Por exemplo, microesferas biodegradáveis ou cápsulas ou outras configurações de polímero biodegradável com capacidade de entrega sustentada de uma composição (por exemplo, um polipeptídeo solúvel, anticorpo, ou molécula pequena) podem ser incluídas nas formulações da descrição implantadas próximas ou no sítio do câncer.
[00147] As composições terapêuticas também podem ser entregues ao paciente em múltiplos sítios. As múltiplas administrações podem ser prestadas simultaneamente ou podem ser administradas em um período de tempo. Em determinados casos, é benéfico fornecer um fluxo contínuo da composição terapêutica.
[00148] Também é contemplada na presente descrição a administração de múltiplos agentes, como as composições de anticorpo em combinação com outro agente, como descrito no presente documento, incluindo porém, sem limitação um agente quimioterapêutico.
[00149] As quantidades de composição de conjugado de fármaco e anticorpo em uma determinada dosagem pode variar de acordo com o tamanho do indivíduo ao qual a terapia está sendo administrada, bem como as características do distúrbio que é tratado. Em tratamentos exemplificativos, pode ser necessário administrar cerca de 1 mg/dia, 5 mg/dia, 10 mg/dia, 20 mg/dia, 50 mg/dia, 75 mg/dia, 100 mg/dia, 150 mg/dia, 200 mg/dia, 250 mg/dia, 500 mg/dia ou 1.000 mg/dia.
Essas concentrações podem ser administradas como uma forma de dosagem única ou como múltiplas doses. Os estudos de resposta à dose padrão, primeiro, em modelos animais e, então, em testes clínicos, descrevem dosagens ideais para estados de doença particulares e populações de paciente.
[00150] Também é contemplada uma composição que compreende qualquer dos conjugados de fármaco e anticorpo anteriores, ou uso dos mesmos em preparação de um medicamento, para tratamento de um tumor sólido. As seringas, por exemplo, seringas pré-carregadas ou de uso único, recipientes vedados estéreis, por exemplo, frascos, garrafa, vaso e/ou kits ou embalagens que compreendem qualquer um dos anticorpos ou composições anteriores, opcionalmente com instruções adequadas para uso, também são contempladas.
Formulações
[00151] Diversos sistemas de entrega podem ser usados para administrar o conjugado de Fármaco-Unidade de Ligante- Anticorpo/conjugados de anticorpo-fármaco. Em determinadas modalidades da descrição, a administração do composto de conjugado de anticorpo-fármaco é por infusão intravenosa ou por injeção subcutânea. Em algumas modalidades, a administração é por 30 minutos, 1 hora ou duas horas de infusão intravenosa.
[00152] O composto de conjugado de anticorpo-fármaco pode ser administrado como uma composição farmacêutica que compreende um ou mais ingredientes farmaceuticamente compatíveis. Por exemplo, a composição farmacêutica tipicamente inclui um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, carreadores à base de água (por exemplo, líquidos estéreis). A água é um carreador mais típico quando a composição farmacêutica é administrada de modo intravenoso.
[00153] A composição, se desejado, também pode conter, por exemplo, sais salinos, tampões, sais, detergentes não iônicos e/ou açúcares. Exemplos de carreadores farmacêuticos adequados são descritos em “Remington’s Pharmaceutical Sciences” por E. W. Martin. As formulações correspondem ao modo de administração.
[00154] A presente descrição fornece, por exemplo, composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz do conjugado de anticorpo-fármaco, um agente de tamponamento, opcionalmente, um crioprotetor, opcionalmente, um agente de volume, opcionalmente, um sal e, opcionalmente, um tensoativo. Os agentes adicionais podem ser adicionados à composição. Um único agente pode servir múltiplas funções. Por exemplo, um açúcar, como trealose, pode atuar tanto como um crioprotetor quanto um agente de volume. Quaisquer agentes de tamponamento farmaceuticamente aceitáveis adequados, tensoativos, ciroprotetores e agentes de volume podem ser usados de acordo com a presente invenção.
[00155] Além de fornecer métodos para tratar um câncer hematológico, a presente invenção fornece formulações de conjugado de fármaco e anticorpo, incluindo formulações de conjugado de fármaco que foram submetidas à liofilização, ou outros métodos de conservação de proteína, bem como formulações de fármaco de anticorpo que não foram submetidas à liofilização.
[00156] Em algumas modalidades, o conjugado de fármaco e anticorpo formulação compreende (i) cerca de 1-25 mg/ml, cerca de 3 a cerca de 10 mg/ml de um conjugado de anticorpo-fármaco, ou cerca de 5 mg/ml (por exemplo, um conjugado de anticorpo-fármaco de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo), (ii) cerca de 5-50 mM, de preferência, cerca de 10 mM a cerca de 25 mM de um tampão selecionado a partir de um tampão de citrato, fosfato ou histidina ou combinações dos mesmos, de preferência, citrato de sódio, fosfato de potássio, histidina, cloridrato de histidina, ou combinações dos mesmos, (iii) cerca de 3% a cerca de 10% de sacarose ou trealose ou combinações dos mesmos, (iv) opcionalmente, cerca de 0,05 a 2 mg/ml de um tensoativo selecionado a partir de polissorbato 20 ou polissorbato 80 ou combinações dos mesmos; e (v) água, em que o pH da composição é cerca de 5,3 a cerca de 7, de preferência, cerca de 6.6.
[00157] Em algumas modalidades, um conjugado de fármaco e anticorpo formulação compreenderá cerca de 1-25 mg/ml, cerca de 3 a cerca de 10 mg/ml, de preferência, cerca de 5 mg/ml de um conjugado de anticorpo-fármaco, (ii) cerca de 10 mM a cerca de 25 mM de um tampão selecionado a partir de citrato de sódio, fosfato de potássio, histidina, cloridrato de histidina ou combinações dos mesmos, (iii) cerca de 3% a cerca de 7% de trealose ou sacarose ou combinações dos mesmos, opcionalmente, (iv) cerca de 0,05 a cerca de 1 mg/ml de um tensoativo selecionado a partir de polissorbato 20 ou polissorbato 80, e (v) água, em que o pH da composição é de cerca de 5,3 a cerca de 7, de preferência, cerca de 6,6.
[00158] Em algumas modalidades, um conjugado de fármaco e anticorpo formulação compreenderá cerca de 5 mg/ml de um conjugado de anticorpo-fármaco, (ii) cerca de 10 mM a cerca de 25 mM de um tampão selecionado a partir de citrato de sódio, fosfato de potássio, histidina, cloridrato de histidina ou combinações dos mesmos, (iii) cerca de 3% a cerca de 7% de trealose, opcionalmente (iv) cerca de 0,05 a cerca de 1 mg/ml de um tensoativo selecionado a partir de polissorbato 20 ou polissorbato 80, e (v) água, em que o pH da composição é de cerca de 5,3 a cerca de 7, de preferência, cerca de 6,6.
[00159] Qualquer uma das formulações descritas acima pode ser armazenada em uma forma líquida ou congelada e pode ser opcionalmente submetida a um processo de conservação. Em algumas modalidades, as formulações descritas acima são liofilizadas, isto é, as mesmas são submetidas à liofilização. Em algumas modalidades, as formulações descritas acima são submetidas a um processo de conservação, por exemplo, liofilização e são, de modo subsequente, reconstituídas com um líquido adequado, por exemplo, água.
Liofilizada significa que a composição foi seca por congelamento sob um vácuo. A liofilização tipicamente é alcançada congelando-se uma formulação particular de modo que os solutos sejam separados do solvente (ou solventes).
O solvente é, então, removido por sublimação (isto é, secagem primária) e a seguir por dessorção (isto é, secagem secundária).
[00160] As formulações da presente invenção podem ser usadas com os métodos descritos no presente documento ou com outros métodos para tratar doença. As formulações de conjugado de fármaco e anticorpo podem ser ainda diluídas antes de administração a um indivíduo. Em algumas modalidades, as formulações serão diluídas com solução salina e mantidas em bolsas IV ou seringas antes da administração a um indivíduo. Consequentemente, em algumas modalidades, os métodos para tratar um câncer hematológico em um indivíduo compreenderá administrar a um indivíduo que necessita do mesmo semanalmente uma dose de uma composição farmacêutica que compreende conjugados de anticorpo-fármaco que têm fórmula I, em que a dose administrada de conjugados de anticorpo-fármaco é de cerca de 1,8 mg/kg ou 1,2 mg/kg do peso corporal do indivíduo para 0,9 mg/kg do peso corporal do indivíduo e a composição farmacêutica é administrada por pelo menos três semanas, e em que os conjugados de fármaco e anticorpo, antes da administração a um indivíduo, estavam presentes em uma formulação que compreende (i) cerca de 1- 25 mg/ml, de preferência, cerca de 3 a cerca de 10 mg/ml do conjugado de anticorpo-fármaco, (ii) cerca de 5-50 mM, de preferência, cerca de 10 mM a cerca de 25 mM de um tampão selecionado a partir de citrato de sódio, fosfato de potássio, histidina, cloridrato de histidina, ou combinações dos mesmos, (iii) cerca de 3% a cerca de 10% de sacarose ou trealose ou combinações dos mesmos, (iv) opcionalmente cerca de 0,05 a 2 mg/ml de um tensoativo selecionado a partir de polissorbato 20 ou polissorbato 80 ou combinações dos mesmos; e (v) água, em que o pH da composição é de cerca de 5,3 a cerca de 7, de preferência, cerca de 6,6.
[00161] As formulações de agentes quimioterapêuticos podem ser contempladas para uso no presente documento, incluindo doxorubicina, vinblastina, dacarbazina, ciclofosfamida, vincristina, ou prednisona são fornecidas como tipicamente usadas no tratamento de cânceres. Por exemplo, doxorubicina, vinblastina, dacarbazina ciclofosfamida, vincristina, e prednisona estão comercialmente disponíveis e aprovadas pela FDA dos Estados
Unidos e outras agências reguladoras para uso em tratamento de pacientes com múltiplos tipos de câncer.
[00162] A presente invenção também fornece kits para o tratamento de um tumor sólido. O kit pode compreender (a) um recipiente que contém o conjugado de anticorpo-fármaco e, opcionalmente, recipientes que compreendem um ou mais agentes quimioterapêuticos. Tais kits podem incluir ainda, se desejado, um ou mais de diversos componentes de kit farmacêutico convencionais, como, por exemplo, recipientes com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis, recipientes adicionais, etc., como será prontamente evidente para aqueles versados na técnica. As instruções impressas, ou como inserções ou como tabelas, que indicam quantidades dos componentes a serem administrados, orientações para administração, e/ou orientações para misturar os componentes, também podem ser incluídas no kit.
Exemplos Exemplo 1- efeitos de agentes de interrupção de tubulina em tumor sólido
[00163] Os efeitos de agentes de interrupção de tubulina em linhagens celulares de tumor sólido foram avaliados. As células cancerígenas foram tratadas com MMAE e avaliadas para as seguintes características de morte de célula imunogênica (ICD); estresse de ER, secreção de ATP e níveis de HMGB1 extracelular.
[00164] As células MCF7 de câncer de mama foram tratadas com 100 nM de MMAE por 16 horas e coletadas em tampão RIPA para análise western blot. O tratamento com MMAE ativou todas as 3 vias da resposta de estresse de ER, como indicado por fosforilação de IRE1 e eIF2a (Figura 1A), bem como clivagem de comprimento completo de ATF6. Estresse severo de ER é um pré-requisito para a exposição de sinais pró-fagocíticos na superfície de células de tumor, e é elicitado por MMAE como indicado por ativação de sinalização de JNK por IRE1 fosforilado, e expressão de CHOP.
[00165] A indução de ICD é também caracterizada pela secreção de ATP e HMGB1. ATP extracelular serve como um sinal quimiotático forte, que promove migração de célula imune para o sítio de tumor. Na chegada, sinais de HMGB1 extracelular através de diversos receptores pró- inflamatórios (TLR2, TLR4, RAGE) para ativar células que apresentam antígeno, promovendo, dessa maneira, atividade imune dentro do tumor. O tratamento de células MCF7 com MMAE leva à secreção aumentada de ATP e HMGB1 (Figuras 1B, 1C).
[00166] O estresse severo de ER leva a regulação crescente de CHOP, e inicia apoptose mitocondrial. As células pancreáticas MiaPaca2 de tumor foram geneticamente modificadas para expressar um sistema de repórter de luciferase acionada por CHOP (comprado junto à Signosis, Inc.) que permite monitoramento quantificável de estresse severo de ER. Células de MiaPaca-CHOP-luciferase foram tratadas com MMAE, vincristina, e Paclitaxel, e testadas para expressão de luciferase após 16 horas. O tratamento com MMAE e vincristina exibiu aumento dependente de dose em sinal de luciferase como um indicador de indução por estresse severo de ER, enquanto Paclitaxel induziu um sinal modesto de luciferase nas doses de pico da Figura 2A).
[00167] As células MiaPaca-CHOP-luciferase foram enxertadas subcutaneamente em camundongo deficiente de NOD/SCID/cadeia gama. Os tumores subcutâneos foram tratados de modo intratumoral com MMAE (0,36 mg/kg), vincristina (1,0 mg/kg), e Paclitaxel (10 mg/kg) e sinal de luciferase tumoral foi monitorado ao longo do tempo. Como evidenciado, tratamento com MMAE e vincristina elicitou rapidamente estresse severo de ER em tumores enxertados, enquanto que Paclitaxel não induz estresse de ER (Figura 2B).
[00168] Células MiaPaca2 foram tratadas com MMAE, Vincristina ou Paclitaxel. O sobrenadante foi coletado após 16 horas de tratamento, e analisado para secreção de ATP. O tratamento com MMAE elicitou secreção robusta de ATP, enquanto tratamento com Paclitaxel resultou em secreção de ATP modesta (Figura 3A).
[00169] As células de tumor de próstata PC-3 foram também tratadas com MMAE, Vincristina ou Paclitaxel. O sobrenadante foi coletado após 16 horas de tratamento, e analisado para secreção de ATP. O tratamento com MMAE e vincristina elicitou secreção de ATP robusta, enquanto tratamento com Paclitaxel resultou em secreção de ATP modesta (Figura 3B). As células PC-3 foram tratadas por 24 horas com um ADC que contém MMAE (SGN-LIV1A) ou MMAE e coletadas em tampão RIPA para análise western blot (Figura 3C). O tratamento com MMAE suscita estresse de ER (fosforilação de IRE1 e JNK) e liberação de ATP e HMGB1, resultando na indução de morte de célula imunogênica (Figura 3D-3E).
[00170] Os camundongos atímicos nus foram enxertados de modo subcutâneo com células PC-3. Ao alcançar 200 milímetros cúbicos, o camundongo recebeu uma única dose intraperitoneal de um ADC que contém MMAE (SGN-LIV1A ou anti- CD71-MMAE). 8 dias pós-tratamento com ADC, tumores foram excisados e avaliados para infiltração de célula imune e composição por citometria de fluxo. Os tumores tratados com MMAE-ADCs exibiram infiltração aumentada de células imunes que mostram ainda ativação aperfeiçoada (Figuras 4A-D).
[00171] Em outro estudo, camundongos atímicos nus foram enxertados de modo subcutâneo com células PC-3. Ao alcançar 200 milímetros cúbicos, o camundongo recebeu uma única dose intraperitoneal de um ADC que contém MMAE (SGN- LIV1A ou anti-CD71-MMAE). 8 dias pós-tratamento com ADC, tumores foram excisados e homogeneizados em tampão RIPA e produção de citocina/quimiocina foi medida por ELISA. Os níveis de citocina periféricos foram também medidos no soro por ELISA. Além de células imunes aumentadas dentro do tumor, há atividade imune aperfeiçoada, como evidenciado por produção de citocina e quimiocina elevada dessas células imunes (Figura 5A-F).
[00172] As células de câncer de cervical HeLa foram tratadas com 1.000 nM ou 100 nM de MMAE, Vincristina, ou Paclitaxel por 16 horas e coletadas para análise western blot. Cada tratamento ativou estresse de ER responses, como indicado por fosforilação de IRE1. No entanto, MMAE elicitou uma resposta de estresse mais severo de ER que foi sustentada com doses decrescentes, como evidenciado por fosforilação adicional de JNK. A fosforilação de JNK robusta não foi observada com doses menores de Paclitaxel (Figura 6).
[00173] As linhagens celulares tumorais de pele A2058, SK-MEL-5 e SK-MEL-28, Calu-1 (pulmão), HT-1080 (fibrosarcoma), SK-MES-1 (pulmão) e BXPC3 (pâncreas) foram tratadas com MMAE, vincristina e Paclitaxel. O sobrenadante foi coletado após 17 horas de tratamento, e analisado para secreção de ATP. O tratamento com MMAE e vincristina elicitou secreção de ATP na maior parte das linhagens celulares testadas (6/7), e teve capacidade de induzir uma resposta mais robusta que Paclitaxel em todas as linhagens celulares testadas (Figura 7A). O tratamento com MMAE elicitou secreção potente de ATP de todas as linhagens celulares 3 A2058, SK-
MEL-5, SK-MEL-28 (pele), enquanto Paclitaxel elicitou secreção de ATP de apenas 1 de 3 linhagens celulares (Figura 7B).
[00174] As células A2058, SK-MEL-5, SK-MEL-28 (pele), Calu-1, HT-1080, SK-MES-1 (pulmão), e BXPC3 e HPAFII (pâncreas) foram tratadas com um ADC que contém MMAE (por exemplo, anti-p97-MMAE ou anti-CD71-MMAE) ou Paclitaxel. O sobrenadante foi coletado após uma noite de tratamento, e analisado para liberação de HMGB1 por ELISA. O tratamento com ADC que contém MMAE ou Paclitaxel elicitou liberação de HMGB1 na maior parte das linhagens celulares testadas (5/7), e teve capacidade de induzir uma resposta mais robusta que Paclitaxel em todas as linhagens celulares testadas. O tratamento com anti-CD71-MMAE elicitou liberação potente de HMGB1 de 2 de 3 linhagens celulares de pele. Consulte, por exemplo, a Figura 7C e descrição adicional abaixo.
[00175] Em experimentos adicionais, linhagens celulares tratadas com MMAE serão cocultivadas ou “fornecidas” a células imunes derivadas de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de doadores saudáveis e os efeitos das células tratadas em função de célula imune avaliada.
Exemplo 2-Análise de Agentes de Interrupção de Tubulina em Ativação de Célula Imune
[00176] A fim de determinar os efeitos de agentes de interrupção de tubulina na capacidade de células de tumor de induzir ativação de célula imune, as células tratadas com agentes de interrupção de tubulina e no processo de submeter a estresse de ER e morte potencial de célula foram fornecidos a células que apresentam antígeno e efeitos em indução de APC medida.
[00177] Os macrófagos foram enriquecidos a partir de PBMCs de 2 doadores saudáveis por aderência de PBMCs ao plástico de classificação de cultura celular. As células não aderentes foram removidas 24 horas depois, deixando uma população de células enriquecidas para macrófagos.
[00178] as células A2058, SK-MEL-5, e SK-MEL-28 (pele) foram tratadas com MMAE, vincristina, e Paclitaxel por 24 horas. As células foram lavadas e coletadas, e cocultivadas de modo subsequente com os macrófagos enriquecidos preparados acima. Os macrófagos foram coletados 4 dias após a cocultura e testados para ativação imune por citometria de fluxo. O nível de apresentação de antígeno (como medido por frequência de células de expressão de MHCII) foi quantificado e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de MMAE de células de tumor levou ao aumento em apresentação de antígeno em 2/3 linhagens celulares de tumor que foi mais robusta que Paclitaxel (Figuras 8A-8C).
[00179] O sobrenadante da cocultura de macrófagos e coloração de células de tumor A2058 e SK-MEL-5 foi coletado 24 horas depois e testado para níveis de produção de citocina e quimiocina por ELISA e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de células de tumor com MMAE ou um ADC que contém MMAE (anti-p97-MMAE) levou ao aumento das citocinas e quimiocinas indicadas que foi mais robusto que tratamento com Paclitaxel (Figura 9A-9B). As células A2058 mostraram um aumento em GM-CSF, IFNg, MCP-3, IL-1RA, IL-7, MIP-1a, MIP- 1b em comparação com células sem tratamento, enquanto as células SK-MEL-5 mostraram um aumento em GM-CSF, INFa2, IFNg, MCP-3, IL-12p70, IL-17A, IL-1a, IL-1b, MCP-1, MIP-1a, MIP- 1b).
Exemplo 3 - Análise Adicional de Apresentação de Antígeno após Tratamento com Agentes de Interrupção de Tubulina
[00180] Os macrófagos foram enriquecidos a partir de PBMCs de 2 doadores saudáveis por aderência de PBMCs ao plástico de classificação de cultura celular. As células não aderentes foram removidas 24 horas depois, deixando uma população de células enriquecidas para macrófagos.
[00181] As células BxPC3 e HPAFII (pâncreas) foram tratadas com MMAE, vincristina, e Paclitaxel por 24 horas.
As células foram lavadas e coletadas, e cocultivadas de modo subsequente com os macrófagos enriquecidos preparados acima.
Os macrófagos foram coletados 4 dias após a cocultura e testados para ativação imune por citometria de fluxo. O nível de apresentação de antígeno (como medido por frequência de células de expressão de MHCII) foi quantificado e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento com MMAE e vincristina de células de tumor levou ao aumento em apresentação de antígeno em 1/2 linhagens celulares de tumor, enquanto o tratamento com Paclitaxel não levou a alterações em apresentação de antígeno de macrófago (Figuras 10A-10B). As células BxPC-3 foram tratadas com MMAE, vincristina, ou paclitaxel por 17 horas e analisadas para secreção de ATP. O tratamento com todos os 3 agentes de ligação de tubulina teve capacidade de elicitar níveis equivalentes de secreção de ATP (Figura 10C).
[00182] Após 24 horas de tratamento com paclitaxel ou um ADC que contém MMAE (anti-p97-MMAE), liberação de HMGB1 de células BxPC-3 foi avaliada por ELISA. A morte celular acionada por MMAE levou à liberação modestamente aumentada de HMGB1 em comparação com tratamento com Paclitaxel (Figura 10D).
[00183] O sobrenadante da cocultura de macrófagos e coloração de células de tumor foi coletado 24 horas depois e testado para níveis de produção de citocina e quimiocina por ELISA e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de células de tumor com MMAE anti-p97-MMAE levou ao aumento das citocinas e quimiocinas indicadas que foi mais robusto que tratamento com Paclitaxel (Figuras 11A- 11B).
[00184] As linhagens celulares adicionais [Calu-1 (pulmão), HT1080 (fibrosarcoma) e SK-MES-1 (pele)] foram testadas para níveis de apresentação de antígeno após cocultura com macrófagos como acima. Os níveis de coestimulação (como medido por frequência de macrófagos que expressam CD-86, Calu-1) ou apresentação de antígeno (como medido por frequência de macrófagos que expressam MHCII, HT1080 e SK-MES-1) foram quantificados e normalizados para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de MMAE de células de tumor levou ao aumento em ativação imune em 3/3 linhagens celulares de tumor que foi mais robusto que tratamento com Paclitaxel (Figuras 12A-12C). As células Calu-1, HT-1080, e SK-MES-1 foram tratadas com um ADC que contém MMAE (anti-p97-MMAE), vincristina, ou paclitaxel por 24 horas e analisadas para liberação de HMGB1 por ELISA. O tratamento com anti-p97-MMAE elicitou liberação potente de HMGB1 de 2 de 3 linhagens celulares (Figuras 12D-12F).
[00185] O sobrenadante da cocultura de macrófagos e coloração de células de tumor foi coletado 24 horas depois e testado para níveis de produção de citocina e quimiocina por ELISA e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento, como descrito acima. O tratamento de células Calu-1 com MMAE ou um ADC que contém MMAE levou ao aumento das citocinas e quimiocinas indicadas que foram mais robustos que o tratamento com Paclitaxel (Figura 13).
[00186] As células MCF7 (Câncer de Mama Triplo Negativo) foram tratadas com MMAE, um ADC que contém MMAE (anti-CD71 OKT9-1006), vincristina, e Paclitaxel por 24 horas. As células foram lavadas e coletadas, e cocultivadas de modo subsequente com os macrófagos enriquecidos preparados acima. Os macrófagos foram coletados 4 dias após a cocultura e testados para ativação imune por citometria de fluxo. O tratamento de células de tumor com MMAE ou um ADC que contém MMAE levou ao aumento em apresentação de antígeno de macrófago, como medido por frequência de macrófagos que expressam MHCII, que foi mais robusto que o tratamento com Paclitaxel (Figura 14A). O sobrenadante da cocultura de macrófagos e coloração de células MCF7 foi coletado 24 horas depois e testado para níveis de produção de citocina e quimiocina por ELISA e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de células MCF7 com MMAE ou um ADC que contém MMAE levou ao aumento das citocinas e quimiocinas indicadas que foram mais robustos que o tratamento com Paclitaxel (Figura 14B).
[00187] As células MCF7 foram tratadas com MMAE ou um ADC que contém MMAE (SGN-LIV1A) por 16 horas e cultivadas em tampão RIPA para análise western blot. O tratamento com MMAE ativou todas as 3 vias da resposta de estresse de ER, como indicado por fosforilação de IRE1 e eIF2a, bem como clivagem de comprimento completo de ATF6. Estresse severo de ER é um pré-requisito para a exposição de sinais pró-fagocíticos na superfície de células de tumor, e é elicitado por MMAE como indicado por ativação de sinalização de JNK por IRE1 fosforilado, e expressão de CHOP (Figura 15). A indução de ICD é também caracterizada pela secreção de ATP e HMGB1. ATP extracelular serve como um sinal quimiotático forte, que promove migração de célula imune para o sítio de tumor. Na chegada, sinais de HMGB1 extracelular através de diversos receptores pró-inflamatórios (TLR2, TLR4, RAGE) para ativar células que apresentam antígeno, promovendo, dessa maneira, atividade imune dentro do tumor. O tratamento de células MCF7 com MMAE e SGN-LIV1A leva a secreção aumentada de ATP e HMGB1 (Figuras 15B-15C).
[00188] O tratamento de MCF7 com SGN-LIV1A ou eribulina suscita estresse severo de ER (fosforilação de IRE1 e JNK), enquanto Paclitaxel e Docetaxel não elicita fosforilação de JNK. A secreção aumentada de ATP foi também evidente após 48 horas de tratamento com SGN-LIV1A, ou eribulina, indicando indução de IDC potente como resultado de interrupção microtúbulo, enquanto nem Paclitaxel nem Docetaxel elicitaram secreção de ATP (Figuras 16A-16B).
[00189] Os camundongos SCID foram enxertados de modo subcutâneo com células MCF7. Ao alcançar 200 milímetros cúbicos, o camundongo recebeu uma única dose intraperitoneal de um ADC que contém MMAE (SGN-LIV1A ou anti-CD71-MMAE). 8 dias pós-tratamento com ADC, tumores foram excisados e avaliados para composição de célula imune por citometria de fluxo. Como resultado de morte celular acionada por MMAE e imunogenicidade, tumores tratados com MMAE-ADC mostraram nível aumentado de ativação imune por células imunes de infiltração de tumor (Figuras 17A-17E).
[00190] As células MDA-MB-468 foram tratadas com MMAE ou um ADC que contém MMAE (ASG-22ME). O sobrenadante foi coletado após 48 horas de tratamento, e analisado para secreção de ATP. O tratamento com MMAE ou ASG-22ME elicitou secreção robusta de ATP que foi comparável a tapsigargina, um estresse de ER conhecido e indutor de autofagia (Figura 18).
[00191] As células Hep3b, Huh7 e JHH7 de linhagens tumorais de fígado foram tratadas com MMAE, Tubilisina M, vincristina, e Paclitaxel por 24 horas e analisadas para secreção de ATP. O tratamento com MMAE ou Tubilisina M elicitou secreção potente de ATP de 3 de 3 linhagens celulares avaliadas (Figuras 19A-C). As células foram lavadas e coletadas, e cocultivadas de modo subsequente com macrófagos enriquecidos preparados como acima. Os macrófagos foram coletados 4 dias após a cocultura e testados para ativação imune por citometria de fluxo. Os níveis de coestimulação (como medido por expressão de CD86, JHH7) e apresentação de antígeno (como medido por frequência de células de expressão de MHCII, Hep3b, Huh7 e JHH7) foram quantificados e normalizados para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor tratadas com Paclitaxel.
O tratamento de MMAE de células de tumor levou ao aumento em ativação imune em 3/3 linhagens celulares de tumor que foi mais robusto que Paclitaxel (Figura 19D-19G). O sobrenadante da cocultura de macrófagos e coloração de células de tumor de fígado foi coletado 24 horas depois e testado para níveis de produção de citocina e quimiocina por ELISA e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de células Hep3b, Huh7 e JHH7 com MMAE ou Tubilisina M levou ao aumento das citocinas e quimiocinas indicadas que foi mais robusto que o tratamento com Paclitaxel (Figura 20A-20C).
[00192] As células T-24 (bexiga) foram tratadas com MMAE ou um ADC que contém MMAE (ASG-22ME) por 48 horas e analisadas para secreção de ATP. O tratamento com MMAE ou ASG-22ME elicitou secreção potente de ATP (Figura 21A). As células T-24 foram também tratadas com MMAE, um ADC que contém MMAE (ASG22ME, Enfortumabe vedotina), vincristina, e Paclitaxel por 24 horas. As células foram lavadas e coletadas, e cocultivadas de modo subsequente com os macrófagos enriquecidos como acima. Os macrófagos foram coletados 4 dias após a cocultura e testados para ativação imune por citometria de fluxo. O nível de apresentação de antígeno (como medido por frequência de macrófagos de expressão de MHCII) foi quantificado e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de células T-24 com MMAE ou um ADC que contém MMAE levou ao aumento em apresentação de antígeno de macrófago que foi mais robusto que o tratamento com Paclitaxel (Figura 21B). O sobrenadante da cocultura de macrófagos e coloração de células T-24 de tumor foi coletado após 24 horas e testado para níveis de produção de citocina e quimiocina por ELISA e normalizado para macrófagos que foram cocultivados com células de tumor sem tratamento. O tratamento de células T-24 com MMAE ou um ADC que contém MMAE levou ao aumento das citocinas e quimiocinas indicadas que foram mais robustos que o tratamento com Paclitaxel (Figura 21C).
[00193] As células U-266 de mieloma múltiplo foram tratadas com MMAE livre (492 nM), um ADC que contém MMAE (SGN-CD48A, 10 ng/ml), e um MMAE-ADC de não ligação (10 ng/ml) por 24 e 48 horas. As células foram coletadas em cada ponto no tempo e todos os lisados de célula foram preparados.
Os lisados para cada amostra foram executados em um SDS-Page e transferidos para uma membrana de nitrocelulose. A análise de Western blot foi realizada com o uso de fosfo-JNK Thr183/Tyr185 (pJNK), PARP, ATF4, AT6, fosfo-IRE-1 Ser274 (pIRE-1). β-actina serve como um controle de carregamento.
As células de mieloma múltiplo, como U-266, exibem altos níveis de estresse endógeno de ER indicado por detecção de pJNK basal e coloração pIRE-1 (Figura 22A). No entanto, tratamento com MMAE e SGN-CD48A, aumentou adicionalmente a resposta de estresse de ER, como indicado pela elevação em expressão de ATF4, bem como fosforilação de JNK. A clivagem de PARP (banda de peso molecular inferior) é um indicador de células submetidas à apoptose. De modo importante, a indução de estresse de ER por MMAE em células U-266 foi suficiente para elicitar marcadores de ICD.
[00194] As células U-266 foram tratadas por 48 horas com MMAE livre (492nM), i, ADC que contém MMAE (SGN-CD48A, 10 ng/ml), e um MMAE-ADC de não ligação (10 ng/ml) por 48 horas. As células foram coletadas, lavadas em tampão de fluxo e manchadas de modo subsequente tanto para AnnexinV, um marcador para apoptose quanto HSP70. As células foram também manchadas tanto com AnnexinV quanto com calreticulina. Em ambas as condições, células que foram negativas para AnnexinV foram selecionadas e a porcentagem de população que foi positiva para HSP70 ou calreticulina foi determinada. Um aumento na porcentagem de marcadores de ICD é evidente na superfície celular mediante tratamento com SGN-CD48A e MMAE livre antes da morte (Figura 22B), fornecendo sinais pró- fagocíticos potentes para aperfeiçoar imunidade antitumoral.
[00195] Diversas modificações e variações da invenção, como apresentado nos exemplos ilustrativos acima são previstas de ocorrer para aqueles versados na técnica.
Consequentemente, apenas tais limitações, como aparecem nas reivindicações anexas, devem ser colocadas na invenção.

Claims (33)

REIVINDICAÇÕES
1. Método para tratar um tumor sólido caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo que necessita do mesmo um agente de conjugado de fármaco e anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante- Anticorpo (D-LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para tratar o tumor sólido.
2. Método para modular liberação de ATP em um tumor sólido caracterizado pelo fato de que compreende administrar um agente de conjugado de fármaco e anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo (D-LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para induzir apoptose no tumor sólido.
3. Método para induzir migração de célula imune para um tumor sólido caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo que necessita do mesmo um agente de conjugado de fármaco e anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo (D-LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para induzir infiltração de célula imune no tumor sólido.
4. Método para induzir morte de célula imunogênica (ICD) em um tumor sólido caracterizado pelo fato de que compreende administrar, a um indivíduo que necessita do mesmo, um agente de conjugado de fármaco e anticorpo que tem a fórmula Fármaco-Unidade de Ligante-Anticorpo (D-LU-Ab), em que D é um agente de interrupção de tubulina, em uma quantidade eficaz para induzir morte de célula imunogênica no tumor sólido.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é específico para CD30, CD19, CD70, CD71, CD20, CD52, CD133, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR2, PD-1, PDL1, RANKL, CTLA-4, IL-6, SLAMF7, CD3, TNF-alfa, PDGFR-alfa, CD38, GD2, cCLB8, p97, Nectin-4 ou EpCAM.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina aumenta via de proteína de estresse de ER, aumenta secreção de ATP e aumenta proteína caixa 1 do grupo de alta mobilidade (HMGB1).
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é selecionado a partir do grupo que consiste em uma auristatina, uma tubulina, uma colchicina, um alcaloide da vinca, um taxano, uma criptoficina, um maitansinoide, uma hemiasterlina e outros agentes de interrupção de tubulina.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é uma auristatina selecionada a partir do grupo que consiste em monometil auristatina E (MMAE) monometil auristatina F (MMAF) e dolostatina-10.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é uma tubulina selecionada a partir do grupo que consiste em tubulina D, tubufenilalanina e tubutirosina.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é uma colchicina selecionada a partir do grupo que consiste em colchicina e CA-4.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é um alcaloide da vinca selecionado a partir do grupo que consiste em Vinblastina (VBL), vinorelbina (VRL), vincristina (VCR) e vindesina (VDS).
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é um taxano selecionado a partir do grupo que consiste em paclitaxel e docetaxel.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é uma criptoficina selecionada a partir do grupo que consiste em criptoficina-1 e criptoficina-52.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é um maitansinoide selecionado a partir do grupo que consiste em maitansina, maitansinol, análogos de maitansina, DM1, DM3 e DM4, e ansamatocina-2.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é uma hemiasterlina selecionada a partir do grupo que consiste em hemiasterlina e HTI-286.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o agente de interrupção de tubulina é selecionado a partir do grupo que consiste em taccalonolido A, taccalonolido B, taccalonolido AF, taccalonolido AJ, epóxido de Ai de taccalonolido, discodermolida, epotilona A, epotilona B e laulimalida.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de pulmão, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, cânceres gastrointestinais, câncer de cabeça e pescoço, melanoma, sarcoma, câncer esofangeal, câncer pancreático, câncer pancreático metastático, adenocarcinoma metastático do pâncreas, câncer de bexiga, câncer de estômago, câncer fibrótico, glioma, glioma maligno, glioma de pontina intrínseca difuso, neoplasma de cérebro de infância recorrente, carcinoma de célula renal, carcinoma de célula renal metastático de célula limpa, câncer de rins, câncer de próstata, câncer de próstata metastático resistente à castração, câncer de próstata de estágio IV, melanoma metastático, melanoma, melanoma maligno, melanoma recorrente da pele, metástases de melanoma cerebral, melanoma de pele estágio IIIA; melanoma de pele estágio IIIB, melanoma de pele estágio IIIC; melanoma de pele estágio IV, melanoma maligno de cabeça e pescoço, câncer de pulmão, câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC), câncer de pulmão de célula não pequena de célula escamosa, câncer de mama, câncer de mama metastático recorrente, carcinoma hepatocelular,
síndrome de richter; macroglobulinemia de waldenstrom,
glioblastoma adulto; gliosarcoma adulto, glioblastoma recorrente, rabdomiossarcoma de infância recorrente, sarcoma de ewing recorrente/tumor neuroectodérmico primitivo periférico, neuroblastoma recorrente; osteosarcoma recorrente, câncer colorretal, câncer colorretal positivo de
MSI; câncer colorretal negativo de MSI, carcinoma nasofaríngeo não queratinizante; carcinoma indiferenciado nasofaríngeo recorrente, adenocarcinoma cervical; carcinoma adenoescamoso cervical; carcinoma de célula escamosa cervical; carcinoma cervical recorrente; câncer cervical de estágio IVA; câncer cervical de estágio IVB, carcinoma de célula escamosa de canal anal; carcinoma de canal anal metastático; carcinoma de canal anal recorrente, câncer de cabeça e pescoço recorrente; carcinoma de célula escamosa de cabeça e pescoço (HNSCC), carcinoma ovariano, câncer de colo, câncer gástrico, câncer de GI avançado, adenocarcinoma gástrico; adenocarcinoma de junção gastroesofágico, neoplasmas de osso, sarcoma de tecido mole; sarcoma de osso, carcinoma de tímico, carcinoma urotelial, carcinoma de célula de merkel recorrente; carcinoma de célula de merkel de estágio III; carcinoma de célula de merkel de estágio IV, síndrome mielodisplásica e síndrome de Sézary.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o conjugado de fármaco e anticorpo compreende um ligante clivável de protease, um ligante clivável por ácido ou um ligante de dissulfeto.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o ligante clivável de protease compreende um espaçador de tiol reativo e um dipeptídeo.
20. Método, de acordo com a reivindicação 18 ou 19, caracterizado pelo fato de que o ligante clivável de protease consiste em um espaçador de maleimidocaproil de tiol reativo, um dipeptídeo de valina-citrulina e um espaçador de p-amino- benziloxicarbonil.
21. Método, de acordo com a reivindicação 18,
caracterizado pelo fato de que o ligante clivável por ácido é um ligante de hidrazina ou um ligante de amônia quaternária.
22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar um regime de quimioterapia.
23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o regime de quimioterapia consiste essencialmente em doxorubicina, vinblastina e dacarbazina (AVD) como uma terapia de combinação.
24. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o regime de quimioterapia consiste essencialmente em ciclofosfamida, vincristina e prednisona (CHP) como uma terapia de combinação.
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que o anticorpo do conjugado de fármaco e anticorpo é um anticorpo monoclonal.
26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo anti-CD30 e o conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 compreende i) uma cadeia pesada CDR1 definida na SEQ ID NO: 4, uma cadeia pesada CDR2 definida na SEQ ID NO: 6, uma cadeia pesada CDR3 definida na SEQ ID NO: 8; e ii) uma cadeia leve CDR1 definida na SEQ ID NO: 12, uma cadeia leve CDR2 definida na SEQ ID NO: 14, e uma cadeia leve CDR13 definida na SEQ ID NO: 16.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo anti-CD30 e o conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 compreende i) uma sequência de aminoácido pelo menos 85% idêntica a uma região variável de cadeia pesada definida na SEQ ID NO: 2 e ii) uma sequência de aminoácido pelo menos 85% idêntica a uma região variável de cadeia leve na SEQ ID NO: 10.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo anti-CD30 e o anticorpo anti-CD30 do conjugado de fármaco e anticorpo é um anticorpo AC10 quimérico.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o conjugado de fármaco e anticorpo compreende monometil auristatina E e um ligante clivável por protease.
30. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o ligante clivável de protease compreende um espaçador de tiol reativo e um dipeptídeo.
31. Método, de acordo com a reivindicação 29 ou 30,
caracterizado pelo fato de que o ligante clivável de protease consiste em um espaçador de maleimidocaproil de tiol reativo, um dipeptídeo de valina-citrulina e um espaçador de p-amino- benziloxicarbonil.
32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de que o conjugado de fármaco e anticorpo anti-CD30 é brentuximabe vedotina.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que o conjugado de fármaco e anticorpo induz migração de célula imune para o sítio do tumor.
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