BR112020016631B1 - Método para produção de uma embalagem - Google Patents

Abstract

São providas: uma composição farmacêutica compreendendo uma enzima glicolítica liofilizada tendo um título excelente; e uma embalagem que compreende dita composição farmacêutica. Esta composição farmacêutica é uma formulação de dose unitária que compreende uma enzima glicolítica liofilizada tendo um título de pelo menos 0,3 unidade/μg como um ingrediente ativo, e que contém a enzima glicolítica em uma quantidade de 2-8 μg.

Description

Campo Técnico

[001] A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que inclui uma enzima de degradação de sacarídeo como um ingrediente ativo, a uma embalagem compreendendo a composição contida em um recipiente, e a um método para produzir a mesma.

Fundamentos da Técnica

[002] As composições farmacêuticas que compreendem enzimas de degradação de sacarídeo como ingredientes ativos são usadas em vários campos de doenças. Por exemplo, composições farmacêuticas para tratamento de doença lisossomal, tais como Aldurazyme®, Elaprase®, Naglazyme®, Replagal® e Vimizim®, em que os ingredientes ativos são enzimas de degradação de sacarídeo em cerca de 3 mg/frasco pequeno a cerca de 10 mg/frasco pequeno, são comercializadas como preparações líquidas para injeção. Também, Publicação Internacional No. WO 2012/081227, por exemplo, descreve um agente terapêutico para herniação discal contendo uma enzima de degradação de sacarídeo (particularmente condroitinase ABC) como o ingrediente ativo.

Sumário da Invenção

[003] Preparações liofilizadas são superiores às preparações líquidas a partir do ponto de vista de reduzir os custos de distribuição. Por outro lado, títulos de enzima são com frequência reduzidos de modo significativo devido à liofilização, e mesmo mais se a enzima estiver em uma quantidade de traço e, por esta razão, algumas ideias foram introduzidas na produção de preparações liofilizadas de modo a permitir produtos com a atividade da enzima desejada a ser obtida. Por exemplo, os Exemplos de Publicação Internacional No. WO 2012/081227 descrevem um exemplo em que, considerando a redução drástica em título resultante da liofilização, uma preparação liofilizada é obtida por liofilização após a enzima em um grande excesso do número de unidades necessárias para uma dose única ter sido colocada em um recipiente. Como descrito nesta Publicação, uma vez que a preparação liofilizada obtida foi dissolvida e diluída, ela é separada na quantidade requerida para administração para preparar uma solução de dosagem contendo o componente ativo em uma quantidade necessária para uma dose única.

[004] Em um método em que uma preparação liofilizada em uma quantidade excedendo largamente a dose unitária é preparada primeiro e, então, uma porção é separada como uma dose única, uma grande quantidade restante de enzima, que não é usada para a administração, é descartada. Assim, existem casos onde grandes quantidades restantes de enzima cara são desperdiçadas.

[005] Assim, um objetivo de um aspecto da presente invenção é prover uma composição farmacêutica contendo uma enzima de degradação de sacarídeo como um ingrediente ativo, em que redução no título resultante de preparação por liofilização é suprimida.

[006] Como um resultado de muitas pesquisas ardentes pelo presente inventor à luz do problema mencionado acima, foi encontrado um meio para prover uma composição farmacêutica contendo uma enzima de degradação de sacarídeo com redução suprimida no título antes e após a liofilização, e a presente invenção foi assim completada.

[007] Um aspecto da presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que é uma formulação de dose unitária contendo uma enzima de degradação de sacarídeo liofilizada com um título de não menos que 0,3 unidade/μg como um ingrediente ativo, e contendo a enzima em uma quantidade de não menos que 2 μg e não mais que 8 μg.

[008] Outro aspecto da presente invenção refere-se a um método para produzir uma embalagem compreendendo uma composição farmacêutica e um recipiente contendo a composição farmacêutica, em que o método compreende uma etapa de colocar uma solução compreendendo não menos que 2 μg e não mais que 8 μg de uma enzima de degradação de sacarídeo no recipiente, e uma etapa de liofilização da solução de modo que uma dose unitária da composição farmacêutica pode ser provida.

Descrição de Modalidades

[009] De acordo com um aspecto da presente invenção, é possível prover uma composição farmacêutica contendo uma enzima de degradação de sacarídeo liofilizada, em que a redução no título pela liofilização é muito suprimida.

[0010] A presente invenção será agora descrita em detalhes, com a compreensão de que a presente invenção não é limitada pelas modalidades descritas. Como usado aqui, o termo “etapa” refere-se não somente a uma etapa independente, mas também inclui qualquer etapa que não pode ser claramente distinguida das outras etapas, se o objetivo inicial da etapa for alcançado. Quando substâncias múltiplas correspondendo a cada componente estão presentes na composição, o teor de cada componente na composição significa o total das substâncias múltiplas na composição, salvo especificado de outro modo.

(1) Composição farmacêutica e embalagem

[0011] A composição farmacêutica é uma preparação liofilizada contendo uma enzima de degradação de sacarídeo como um ingrediente ativo. A composição farmacêutica é uma formulação de dose unitária contendo uma enzima de degradação de sacarídeo liofilizada com um título de não menos que 0,3 unidade/μg como um ingrediente ativo, e contendo as enzimas de degradação de sacarídeo em uma quantidade de não menos que 2 μg e não mais que 8 μg. Como usado aqui, “dose unitária” significa a quantidade necessária preparada para uma administração única, uma formulação de dose unitária sendo formulada com a composição farmacêutica na dose unitária. A dose unitária pode incluir uma quantidade adicionada necessária para a preparação de uma solução de dosagem única, além da dose eficaz.

[0012] Nesta composição farmacêutica, a redução no título de enzima de degradação de sacarídeo devido à liofilização é muito suprimida. Redução no título devido ao armazenamento é também muito suprimida. Além disso, porque a composição farmacêutica é uma preparação liofilizada que é preparada antecipadamente para cada dose unitária, ela é também superior do ponto de vista de conveniência, higiene, segurança, etc., em um cenário médico.

[0013] A embalagem compreende pelo menos um recipiente e uma composição farmacêutica contida no recipiente, e assim ela tem uma composição farmacêutica contida no recipiente.

[0014] A “enzima de degradação de sacarídeo” não é particularmente limitada, desde que ela seja uma que possa ser usado como um fármaco. Exemplos de enzimas de degradação de sacarídeo podem incluir, por exemplo, enzimas de degradação de glicosaminoglicano; glicosidase; peptídeos: N-glicanoase (PNGaseF, endoglicosidase H, etc. ), α-L- iduronidase, α-galactosidase, β-galactosidase, β-glucuronidase, β- glucocerebrosidase, idursulfase, iduronato-2-sulfatase, N-acetilgalactosamina- 6-sulfatase, N-acetilgalactosamina-4-sulfatase, etc. Exemplos de enzimas de degradação de glicosaminoglicano incluem, por exemplo, queratanases, tais como queratanase I e queratanase II; heparinases, tais como heparinase I, heparinase II e heparinase III; heparitinases, tais como heparitinase IV, heparitinase V, heparitinase T-I, heparitinase T-II, heparitinase T-III e heparitinase T-IV; condroitinases, tais como condroitinase ABC, condroitinase ACI, condroitinase ACII, condroitinase ACIII, condroitinase B e condroitinase C; hialuronidases, tais como hialuronidase derivada de Actinomycetes e hialuronidase derivada de Streptococcus, etc. Exemplos de glicosidases incluem, por exemplo, β-galactosidase microbiana, α- galactosidase, etc.

[0015] Em uma modalidade, uma enzima de degradação de glicosaminoglicano usada como a enzima de degradação de sacarídeo. As enzimas de degradação de glicosaminoglicano incluem hialuronidases, condroitinases, heparinases, queratanases, heparanases, heparitinases, etc. Condroitinases são enzimas de degradação de sacarídeo preferidas, dentre as quais condroitinase ABC, condroitinase B, condroitinase ACI e condroitinase ACII são mais preferidas, e condroitinase ABC é especialmente preferida. Condroitinase ABC também pode ser Condoliase.

[0016] Não existem restrições particulares sobre a fonte da enzima de degradação de sacarídeo. Em uma modalidade preferida, uma enzima microbiana de degradação de sacarídeo é usada. Por exemplo, exemplos não restritivos de micróbios incluem os pertencendo a Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Proteus, Arthrobacter, Streptococcus, Bacteroides, Aspergillus, Elizabethkingia, Streptomyces, etc. Quando a enzima de degradação de sacarídeo é condroitinase ABC, por exemplo, um exemplo pode ser uma derivada de Proteus vulgaris (por exemplo, condroitinase ABC de Proteus vulgaris).

[0017] O método para produzir a enzima de degradação de sacarídeo, etc., não é particularmente limitado. Um método exemplar para produzir a enzima de degradação de sacarídeo inclui uma etapa de obter uma cultura de micróbios ou células de animais que produzem a enzima de degradação de sacarídeo, e uma etapa de coletar a enzima de degradação de sacarídeo a partir de produto cultivado.

[0018] A enzima de degradação de sacarídeo produzida pelos micróbios pode ser o produto original dos micróbios, ou ela pode ser obtida após modificação dos micróbios por um método de engenharia genética, etc., como descrito abaixo, de modo a produzir a enzima alvo. Por exemplo, quando a enzima de degradação de sacarídeo é condroitinase ABC, ela pode ser produzida por cultivo um micróbio tal como Proteus vulgaris, ou ela pode ser produzida por um método de engenharia genética usando codificação de DNA para a condroitinase ABC, etc. A enzima de degradação de sacarídeo pode ter a mesma sequência de aminoácidos como o produto original do organismo, mas alternativamente ela pode ter uma deleção, substituição e/ou adição, etc., de alguns dos aminoácidos, desde que o objetivo desejado do fármaco ainda seja alcançado.

[0019] Exemplos de micróbios podem incluir, por exemplo, micróbios pertencendo a Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Proteus, Arthrobacter, Streptococcus, Bacteroides, Aspergillus, Elizabethkingia e Streptomyces. As condições de crescimento (por exemplo, meio de cultura, condições de cultura, etc.) para o micróbio podem ser definidas, como desejado, por um versado na técnica, sendo apropriadamente selecionadas de acordo com o micróbio usado. Usando um micróbio para produzir a enzima de degradação de sacarídeo, é possível produzir maiores quantidades em custo menor do que por produção da enzima de degradação de sacarídeo usando células de animais.

[0020] O método para produzir a enzima de degradação de sacarídeo pode incluir uma etapa de introduzir um vetor recombinante que expressa um gene codificando para a enzima de degradação de sacarídeo alvo, em um hospedeiro. O vetor usado pode ser, por exemplo, um vetor de expressão apropriado (vetor de fago, vetor de plasmídeo ou similares) (preferivelmente incluindo uma sequência regulatória tal como um promotor), que é capaz de expressar o gene introduzido. O vetor é selecionado como apropriado para as células hospedeiras. Mais especificamente, exemplos destes sistemas hospedeiro-vetor incluem combinações de Escherichia coli (E. coli) com vetores de expressão de células procarióticas, tais como a série pET, pTrcHis, pGEX, pTrc99, pKK233-2, pEZZ18, pBAD, pRSET e pSE420; ou combinações de células de mamífero, tais como células COS-7 ou células HEK293 com vetores de expressão de células de mamíferos, tais como a série pCMV, série pME18S ou pSVL; assim como células de insetos, levedura e células hospedeiras de Bacillus subtilis, etc., e seus vários vetores correspondentes.

[0021] Também, como vetores acima descritos, é possível usar os vetores que são construídos de modo a expressar proteínas de fusão das proteínas codificadas pelos genes transferidos, com peptídeos de marcador ou peptídeos de sinal. Exemplos de tais peptídeos incluem, por exemplo, proteína A, a sequência de sinal de insulina, His, FLAG, CBP (proteína de ligação a calmodulina), GST (glutationa-S-transferase), etc. Qualquer que seja o vetor usado, um método comum pode ser usado para tratamento com enzima de restrição, etc., que permitem a subsequente ligação do inserto de sequência de ácido nucleico e vetor, a ligação ocorre após ficar rombo, ou com extremidades pegajosas, conforme necessário.

[0022] Transformação do hospedeiro com o vetor pode ser realizada por um método comum. Por exemplo, o vetor pode ser introduzido no hospedeiro para transformação, por um método usando um reagente de transfecção comercialmente disponível, ou por um método DEAE-dextrano, método de eletroporação, ou um método usando uma pistola de genes, etc.

[0023] As condições de crescimento (meio de cultura, condições de cultivo, etc.) para os micróbios ou células de animais que produzem a enzima de degradação de sacarídeo são selecionadas como apropriado para os micróbios ou células usados. No caso em que E. coli é usado, por exemplo, um meio de cultura apropriadamente preparado com meio LB, etc., como o componente principal pode ser usado. Também, por exemplo, quando células COS-7 são usadas como as células hospedeiras, o meio DMEM contendo cerca de 2% (v/v) de soro bovino fetal pode ser usado para cultivo sob uma condição de 37°C.

[0024] A enzima de degradação de sacarídeo pode ser coletada a partir de produto de crescimento por métodos conhecidos para extração e purificação de proteínas, dependendo da forma da enzima de degradação de sacarídeo que é produzida. Por exemplo, quando a enzima de degradação de sacarídeo é produzida em forma solúvel secretada no meio (o sobrenadante de cultura), o meio pode ser colhido e usado diretamente como a enzima de degradação de sacarídeo. Quando a enzima de degradação de sacarídeo é produzida em forma solúvel secretada no citoplasma, ou em uma forma insolúvel (ligada a membrana), ela pode ser extraída por um procedimento de tratamento tal como extração por disruptura celular, tal como um método usando um dispositivo de cavitação de nitrogênio, homogenização, um método de moagem com contas de vidro, sonicação, um método de choque osmótico ou um método de congelamento-descongelamento, ou extração com tensoativo, ou uma combinação dos métodos. A enzima de degradação de sacarídeo também pode ser purificada por processos convencionais e publicamente conhecidos da arte anterior, como salificação, fracionamento de sulfato de amônio, separação centrífuga, diálise, ultrafiltração, cromatografia por adsorção, cromatografia de troca iônica, cromatografia hidrofóbica, cromatografia em fase reversa, cromatografia de permeação em gel, cromatografia de afinidade ou eletroforese, ou uma combinação destes processos, etc.

[0025] A enzima de degradação de sacarídeo pode ser usada sozinha ou como uma combinação de dois ou mais tipos diferentes. A enzima de degradação de sacarídeo também pode ter adição de grupos quimicamente modificados que são publicamente conhecidos na técnica anterior, tal como por acetilação, glicolação de polialquileno (por exemplo, glicolação de polietileno), alquilação, acilação, biotinilação, marcação (por exemplo, marcação com uma substância fluorescente, uma substância luminescente, etc.), fosforilação ou sulfatação.

[0026] A composição farmacêutica pode incluir um veículo farmaceuticamente aceitável. Como usado aqui, um “veículo farmaceuticamente aceitável” é tipicamente um componente normalmente usado em fármacos, tais como um excipiente, ligante, agente tamponante, água para injeção, agente de tonicidade, conservante ou agente calmante comumente usados.

[0027] Exemplos de agentes tamponantes incluem, por exemplo, agentes tamponantes contendo um ou mais selecionados dentre o grupo consistindo em ácido clorídrico, hidróxido de sódio, carbonato de sódio, hidrogenocarbonato de sódio, ácido fosfórico, dihidrogenofosfato de potássio, hidrogenofosfato de dipotássio, dihidrogenofosfato de sódio, hidrogenofosfato de dissódio, ácido aminoacético, benzoato de sódio, ácido cítrico, citrato de sódio, ácido acético, acetato de sódio, ácido tartárico, tartrato de sódio, ácido láctico, lactato de sódio, etanolamina, arginina, etilenodiamina, etc., com dihidrogenofosfato de sódio e hidrogenofosfato de dissódio sendo preferidos.

[0028] Exemplos de agentes de tonicidade incluem cloreto de sódio, cloreto de potássio, glicerina, manitol, sorbitol, ácido bórico, borax, glicose, propileno glicol, etc.

[0029] Por exemplo, exemplos específicos de outros veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem dextranos, sacarose, lactose, maltose, xilose, trehalose, manitol, xilitol, sorbitol, inositol, albumina sérica, gelatina, creatinina, polialquileno glicol, tensoativos não iônicos (por exemplo, éster de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, óleo de mamona hidrogenado de polioxietileno, éster de ácido graxo de sacarose e polioxietileno- polioxipropileno glicol), etc., dentre os quais sacarose e/ou polialquileno glicol são preferidos, e sacarose e/ou polietileno glicol são mais preferidos. Polietileno glicol preferivelmente tem um peso molecular médio de não menos que 200 e não mais que 25000, e mais preferivelmente ele é um sólido em temperatura comum, por exemplo, com um peso molecular médio de não menos que 2000 e não mais que 9000, e mesmo mais preferivelmente não menos que 3000 e não mais que 4000. Exemplos de polietileno glicol podem incluir, por exemplo, polietileno glicol com um peso molecular médio de 3250, 3350 e 4000. Quando uma mistura de polietileno glicol e sacarose é usada com o veículo farmaceuticamente aceitável, eles são preferivelmente misturados de modo que a relação em peso de polietileno glicol/sacarose está geralmente na faixa de 1/10 a 10/1, e mais preferivelmente de modo que a relação em peso de polietileno glicol/sacarose é cerca de 2/1.

[0030] Como usado aqui, o “recipiente “ não é particularmente limitado desde que ele seja capaz de conter a composição farmacêutica. Exemplos de recipientes incluem seringas, frascos pequenos, ampolas, injetores, etc., com frascos pequenos sendo preferidos. O material do recipiente pode ser vidro, plástico, etc., por exemplo, com vidro sendo preferido. Vidro inclui vidro borossilicato, vidro de cal de soda, etc., por exemplo. O recipiente preferivelmente também tem um membro de rolha ou tampa, e mais preferivelmente ele tem uma tampa de borracha. Não existem restrições particulares sobre o tamanho do recipiente, que pode ser não menor que 0,5 mL e não é maior que 100 mL, por exemplo, preferivelmente não é menor que 1 mL e não é maior que 10 mL, mais preferivelmente não é menor que 2 mL e não é maior que 4 mL, e mesmo mais preferivelmente com 3 mL. A embalagem compreendendo a composição farmacêutica contida no recipiente pode encapsular um gás inerte, tal como gás nitrogênio ou gás argônio, ou ela pode ser desaerada.

[0031] O teor de água da preparação liofilizada não pode ser maior que 5% (p/p), por exemplo, preferivelmente não é maior que 3% (p/p), e mais preferivelmente não é maior que 2% (p/p). O “teor de água, “ como usado aqui, é o valor medido por um método de titulação coulométrica.

[0032] A presente invenção é caracterizada em que a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo por dose unitária da composição farmacêutica não é menor que 2 μg e não é maior que 8 μg. Embora uma abundância menor de enzima geralmente corresponda a uma redução mais notável em título antes e após liofilização, os presentes inventores verificaram, de modo surpreendente, que limitando a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo por dose unitária da composição farmacêutica para a faixa de não menos que 2 μg e não mais que 8 μg, é possível suprimir de modo significante a redução de título antes e após a liofilização. Em uma modalidade preferida, do ponto de vista do efeito de suprimir a redução de título antes e após a liofilização, a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo por dose unitária da composição farmacêutica não é menor que 2 μg e não é maior que 7 μg, não é menor que 2 μg e não é maior que 6 μg, ou não é menor que 2,5 μg e não é maior que 6 μg. Em uma modalidade mais preferida, a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo por dose unitária da composição farmacêutica não é menor que 2 μg e não é maior que 5 μg, ou não é menor que 2,5 μg e não é maior que 5 μg. Em uma modalidade particularmente preferida, a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo por dose unitária da composição farmacêutica não é menor que 3 μg e não é maior que 5 μg.

[0033] Em uma modalidade preferida, a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo contida por recipiente não é menor que 2 μg e não é maior que 8 μg. Em uma modalidade mais preferida, a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo contida por recipiente não é menor que 2 μg e não é maior que 7 μg, não é menor que 2 μg e não é maior que 6 μg, ou não é menor que 2,5 μg e não é maior que 6 μg. Em uma modalidade ainda mais preferida, a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo contida por recipiente não é menor que 2 μg e não é maior que 5 μg, ou não é menor que 2,5 μg e não é maior que 5 μg. Em uma modalidade particularmente preferida, a quantidade de enzima de degradação de sacarídeo contida por recipiente não é menor que 3 μg e não é maior que 5 μg.

[0034] O termo “título” significa a atividade de enzima (unidades) por 1 μg de enzima de degradação de sacarídeo, e ela é expressa em uma unidade de unidade/μg. Na presente invenção, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,3 (unidade/μg). Em uma modalidade, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,3 (unidade/μg) e não é maior que 1 (unidade/μg). Em outra modalidade, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,32 (unidade/μg) e não é maior que 1 (unidade/μg). Em uma outra modalidade mais preferida, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,34 (unidade/μg) e não é maior que 1 (unidade/μg). Em uma outra modalidade ainda mais preferida, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,36 (unidade/μg) e não é maior que 1 (unidade/μg). Em uma outra modalidade particularmente preferida, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,38 (unidade/μg) e não é maior que 1 (unidade/μg).

[0035] Em uma modalidade, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,3 (unidade/μg) e não é maior que 0,5 (unidade/μg). Em outra modalidade, o título da enzima de degradação de sacarídeo liofilizada não é menor que 0,36 (unidade/μg) e não é maior que 0,5 (unidade/μg)

[0036] A “unidade (U)” indica a atividade da enzima de degradação de sacarídeo, com 1 U sendo a quantidade que libera o equivalente de 1 micromol de produto de decomposição a partir do substrato por tempo unitário, sob condições de temperatura ótima e pH ótimo. Por exemplo, quando a enzima de degradação de sacarídeo é condroitinase ABC, 1 unidade é a quantidade que libera 1 micromol do dissacarídeo insaturado por minuto a partir do sulfato de condroitina de sódio (sulfato de condroitina de sódio em conformidade com o Códex Farmacêutico Japonês 2002), sob condições de pH 8,0, 37°C.

[0037] Em uma modalidade, a atividade da enzima (atividade da enzima de degradação de sacarídeo) por dose unitária não é menor que 4 unidades, por exemplo. Em outra modalidade, a atividade da enzima por dose unitária não é menor que 0,1 unidade e não é maior que 4 unidades, por exemplo. Em uma modalidade preferida, a atividade da enzima por dose unitária não é menor que 0,5 unidades e não é maior que 3 unidades. Em uma modalidade mais preferida, a atividade da enzima por dose unitária não é menor que 0,9 unidades e não é maior que 3 unidades, ou não é menor que 0,9 unidades e não é maior que 2,5 unidades. Em ainda outra modalidade preferida, a atividade da enzima por dose unitária não é menor que 0,9 unidades e não é maior que 2 unidades, não é menor que 1,25 unidades e não é maior que 2 unidades, ou 1,5 unidades.

[0038] Em uma modalidade, a atividade da enzima por recipiente não é maior que 4 unidades, por exemplo. Em outra modalidade, a atividade da enzima por recipiente não é menor que 0,1 unidade e não é maior que 4 unidades, por exemplo. Em uma modalidade preferida, a atividade da enzima por recipiente não é menor que 0,5 unidades e não é maior que 3 unidades. Em uma modalidade mais preferida, a atividade da enzima por recipiente não é menor que 0,9 unidades e não é maior que 3 unidades, ou não é menor que 0,9 unidades e não é maior que 2,5 unidades. Em ainda outra modalidade preferida, a atividade da enzima por recipiente não é menor que 0,9 unidades e não é maior que 2 unidades, ou não é menor que 1,25 unidades e não é maior que 2 unidades (por exemplo, 1,5 unidades).

[0039] De acordo com a presente invenção, uma composição farmacêutica na forma de uma formulação de dose unitária liofilizada contendo uma quantidade pequena de enzima de degradação de sacarídeo (não menor que 2 μg e não maior que 8 μg) em um título alto (não menor que 0,3 unidade/μg) é provida.

[0040] A atividade de enzima da enzima de degradação de sacarídeo contida na composição farmacêutica na forma de uma preparação liofilizada não pode ser, por exemplo, menor que 75%, preferivelmente não é menor que 80%, mais preferivelmente não é menor que 85%, e mesmo mais preferivelmente não é menor que 90%, em que a atividade de enzima antes da liofilização é definida como 100% Um valor de 100% significa que a atividade de enzima é a mesma antes e após a liofilização.

[0041] De acordo com uma modalidade da presente invenção, é possível prover uma composição farmacêutica tendo estabilidade de armazenamento para uma duração de 12 meses ou mais tempo, por exemplo. Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica tem uma estabilidade de armazenamento para uma duração de 24 meses ou mais tempo e, em uma modalidade mais preferida, a composição farmacêutica tem uma estabilidade de armazenamento para uma duração de 36 meses ou mais tempo. Embora o limite superior para a estabilidade de armazenamento não seja particularmente limitado, ele pode ser de 48 meses ou mais curto (tal como 36 meses ou mais curto), por exemplo.

[0042] Aqui, a frase “tem uma estabilidade de armazenamento” significa que o título (%) após armazenamento resistente à luz sob condições prescritas (por exemplo, 12 meses ou mais tempo 5oC+3oC, 6 meses ou mais tempo a 25oC+2oC, ou 3 meses ou mais tempo ou 6 meses ou mais tempo a 40oC+2oC) é mantida a um nível farmaceuticamente aceitável. A “estabilidade de armazenamento” aqui é avaliada como a taxa de retenção do título (%), por exemplo. Por exemplo, a taxa de retenção do título após armazenamento resistente à luz da amostra durante 12 meses ou mais tempo a 5oC+3oC não é, por exemplo, menor que 90%, e preferivelmente não é menor que 95%. A taxa de retenção do título após armazenamento resistente à luz da amostra durante 24 meses ou mais tempo a 5oC+3oC por exemplo, não é menor que 90%, e preferivelmente não é menor que 95%. A taxa de retenção do título após armazenamento resistente à luz da amostra durante 36 meses ou mais tempo a 5oC+3oC não é, por exemplo, menor que 90%, e preferivelmente não menor que 95%. A taxa de retenção do título após armazenamento resistente à luz da amostra durante 6 meses ou mais tempo a 25oC+2oC é, por exemplo, não menor que 90%, e preferivelmente não menor que 95%. A taxa de retenção do título após armazenamento resistente à luz da amostra durante 3 meses ou mais tempo a 40oC+2oC é, por exemplo, não menor que 90%, e preferivelmente não menor que 95%. A taxa de retenção do título após armazenamento da amostra durante 6 meses ou mais tempo a 40oC+2oC é, por exemplo, não menor que 65%, preferivelmente não menor que 70%, e mais preferivelmente não menor que 75%. O termo “% da taxa de retenção de título)” significa o valor do título (%) após armazenamento resistente à luz da composição farmacêutica ou embalagem da presente invenção sob condições oo oo oo com uma tempeiatuia prescrita (5 C+3 C, 25 C+2 C, 40 C+2 C), calculada contra 100% como o título no início do armazenamento. Um valor de 100% significa que a atividade da enzima é a mesma em e após o início do armazenamento.

[0043] De acordo com uma modalidade da presente invenção, é possível prover uma composição farmacêutica tendo uma vida útil na prateleira de 12 meses ou mais tempo. Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica tem uma vida útil na prateleira de 24 meses ou mais tempo e, em uma modalidade mais preferida, a composição farmacêutica tem uma vida útil na prateleira de 36 meses ou mais tempo. Embora o limite superior para a vida útil na prateleira não seja particularmente limitado, ele pode ser de 48 meses ou mais curto (tal como 36 meses ou mais curto), por exemplo.

[0044] como usado aqui, a “vida útil na prateleira” significa o período durante o qual um fármaco pode ser esperado como exibindo a mesma eficácia a partir do momento quando o fármaco foi confirmado como exibindo esta eficácia, após armazenamento subsequente por um método específico de armazenamento (por exemplo, sendo resistente à luz a 5oC+3oC, resistente à luz a 25oC+2oC, ou resistente à luz a 40oC+2oC).

[0045] Referências à composição farmacêutica aqui podem incluir as “composições farmacêuticas contidas no recipiente”. A composição farmacêutica contida no recipiente inclui uma dose unitária da enzima de degradação de sacarídeo.

[0046] O uso da composição farmacêutica como descrito aqui pode ser selecionado dentre vários usos conhecidos para enzimas de degradação de sacarídeo. Por exemplo, exemplos de usos de composições farmacêuticas contendo enzimas de degradação de sacarídeo como ingredientes ativos podem incluir, mas não são particularmente limitados a, tratamento para hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular e lesão da medula espinhal. Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica é usada para tratamento de hérnia. Em uma modalidade mais preferida, ela é usada para tratamento de herniação discal (por exemplo, herniação discal lombar).

[0047] Como usado aqui, “tratamento” inclui não apenas a cura completa, mas também melhora de todos ou alguns dos sintomas de uma doença, e supressão (incluindo manutenção e progressão retardada) de progressão ou prevenção de uma doença. Aqui, prevenção inclui prevenir o início de sintomas associados com uma doença, quando os sintomas não estão sendo exibidos. Prevenção também inclui, por exemplo, prevenção do início de lesões orgânicas ou prevenção do desenvolvimento de sintomas ainda não manifestados, quando sintomas associados com uma doença estão presentes, mesmo se nenhuma lesão orgânica nítida é evidente.

[0048] Os termos “como um ingrediente ativo” e “dose eficaz”, como usados aqui, significam uma quantidade de ingrediente apropriada para uma relação risco/benefício razoável, e suficiente para obter a resposta desejada sem excessivos efeitos colaterais prejudiciais (toxicidade, irritação, etc.). Os termos “como um ingrediente ativo” e “dose eficaz” podem variar dependendo de vários fatores, tais como os sintomas, constituição física, idade e sexo do paciente a ser tratado. No entanto, um versado na técnica pode determinar a dose eficaz com base nos resultados de um ou mais exemplos de teste específicos em combinação com o conhecimento técnico geral comum, sem precisar conduzir um teste separado para cada combinação de vários fatores.

[0049] Como usado aqui, “paciente” significa um animal, e preferivelmente um mamífero (por exemplo, um humano, camundongo, rato, hamster, porquinho-da-índia, coelho, cachorro, gato, cavalo, etc.), e mais preferivelmente um humano.

[0050] Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica contida no recipiente é provida em um estado estéril. Não existem restrições particulares sobre o método de esterilização para a composição farmacêutica, e a esterilização pode ser realizada em qualquer método conhecido na técnica anterior, tal como esterilização com filtração ou esterilização por calor seco.

[0051] A forma de administração da composição farmacêutica também não é particularmente limitada e pode ser selecionada como apropriado para a doença a ser tratada, os sintomas, a severidade, os atributos do paciente (por exemplo, idade, etc. ), etc. A preparação liofilizada pode ser usada como uma solução em qualquer solvente desejado (por exemplo, água para injeção, solução salina fisiológica, etc. ). A forma de administração pode ser qualquer via de administração, por exemplo, tal como injeção intradiscal, injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção hipodérmica ou infusão por gotejamento. A dose da composição farmacêutica também pode ser apropriadamente definida por um versado na técnica de acordo com a doença a ser tratada, os sintomas, a severidade, os atributos do paciente (por exemplo, idade, etc. ), etc.

[0052] Modos específicos preferidos da presente invenção serão agora descritos a título de exemplo, com a compreensão que eles não se destinam a limitar o escopo técnico da presente invenção. A composição farmacêutica para tratamento de herniação discal pode ser explicada como um exemplo, como a seguir. Mas é natural que o uso de composições farmacêuticas não pode ser limitado.

(Composição farmacêutica 1)

[0053] Ingrediente ativo: Condroitinase ABC Quantidade de enzima por dose unitária: não menos que 2 μg e não mais que 7 μg Título de enzima: não menos que 0,36 (unidade/μg) e não mais que 1 (unidade/μg) Atividade da enzima por dose unitária: não menos que 0,9 unidades e não mais que 3 unidades Aplicação: Herniação discal

(Composição farmacêutica 2)

[0054] Ingrediente ativo: Condroitinase ABC Quantidade de enzima por dose unitária: não menos que 2 μg e não mais que 5 μg Título de enzima: não menos que 0,36 (unidade/μg) e não mais que 0,5 (unidade/μg) Atividade da enzima por dose unitária: não menos que 0,9 unidades e não mais que 2,5 unidades Aplicação: Herniação discal

(Composição farmacêutica 3)

[0055] Ingrediente ativo: Condroitinase ABC Quantidade de enzima por dose unitária: não menos que 2 μg e não mais que 5 μg Título de enzima: não menos que 0,36 (unidade/μg) e não mais que 0,5 (unidade/μg) Atividade da enzima por dose unitária: não menos que 0,9 unidades e não mais que 2 unidades Aplicação: Herniação discal

(Composição farmacêutica 4)

[0056] Ingrediente ativo: Condroitinase ABC Quantidade de enzima por dose unitária: não menos que 2 μg e não mais que 5 μg Título de enzima: não menos que 0,36 (unidade/μg) e não mais que 0,5 (unidade/μg) Atividade da enzima por dose unitária: não menos que 1,25 unidades e não mais que 2 unidades Aplicação: Herniação discal

(Composição farmacêutica 5)

[0057] Ingrediente ativo: Condroitinase ABC Quantidade de enzima por dose unitária: não menos que 3 μg e não mais que 5 μg Título de enzima: não menos que 0,36 (unidade/μg) e não mais que 0,5 (unidade/μg) Atividade da enzima por dose unitária: 1,5 unidades Aplicação: Herniação discal (2) Kit

[0058] Em uma modalidade, é provido um kit contendo uma embalagem compreendendo a composição farmacêutica contida em um recipiente, e um encarte ou rótulo de embalagem explicando o uso da composição farmacêutica para tratamento de hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal.

[0059] É suficiente que o kit contenha uma embalagem compreendendo a composição farmacêutica contida em um recipiente, e um encarte ou rótulo de embalagem explicando o uso da composição farmacêutica para tratamento de hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal. Em outras palavras, ele também pode conter outros componentes constituintes.

(3) Método de produção

[0060] Um aspecto da presente invenção refere-se a um método para produzir uma embalagem compreendendo uma composição farmacêutica contida em um recipiente, o método de produção incluindo uma primeira etapa de colocar uma solução contendo não menos que 2 μg e não mais que 8 μg de uma enzima de degradação de sacarídeo em um recipiente, e uma segunda etapa de liofilização da solução para obter uma composição farmacêutica de uma dose unitária.

[0061] Na primeira etapa, embora o solvente usado para a preparação da solução contendo a enzima de degradação de sacarídeo não seja particularmente limitado, por exemplo, uma solução tampão, tal como água, solução salina fisiológica ou tampão fosfato pode ser usada. A solução também pode incluir um veículo farmaceuticamente aceitável como mencionado acima. Embora o pH da solução contendo a enzima de degradação de sacarídeo contida no recipiente não seja particularmente limitado, ele está preferivelmente na faixa de 6,5 ou maior e 7,5 ou menor.

[0062] Em uma modalidade preferida, a solução contendo a enzima de degradação de sacarídeo está contida no recipiente na primeira etapa, de modo que a atividade da enzima por recipiente não é maior que 4 unidades. Em uma modalidade mais preferida, a solução está contida no recipiente de tal modo que a atividade da enzima por recipiente não é menor que 0,5 unidades e não é maior que 4 unidades. Em uma modalidade ainda mais preferida, a solução está contida no recipiente de tal modo que a atividade da enzima por recipiente não é menor que 1 unidade e não é maior que 3 unidades. Em uma modalidade particularmente preferida, a solução está contida no recipiente de modo que a atividade da enzima por recipiente não é menor que 1,25 unidades e não é maior que 2,5 unidades.

[0063] A segunda etapa inclui uma etapa de liofilização em que a solução contendo a enzima de degradação de sacarídeo é congelada e a umidade é removida por sublimação enquanto em um estado congelado para secagem. Na segunda etapa, a secagem é realizada até o teor de água da composição farmacêutica após liofilização não se tornar maior que 5% (p/p), por exemplo. A secagem na segunda etapa é preferivelmente realizada até o teor de água da composição farmacêutica após liofilização não se tornar maior que 3% (p/p), e mais preferivelmente a secagem é realizada até o teor de água não se tornar maior que 2% (p/p).

[0064] O método de produção de acordo com a presente invenção pode empregar diretamente as descrições, exemplos, faixas preferidas, etc., para a “(1) composição e embalagem “ acima descrita ou o “(2) kit” acima descrito.

[0065] Como outro modo, a presente invenção também inclui o uso de uma formulação de dose unitária na produção de uma composição farmacêutica a ser usada para tratamento de hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal, que é o uso de uma formulação de dose unitária contendo uma enzima de degradação de sacarídeo liofilizada com um título de não menos que 0,3 unidade/μg como um ingrediente ativo, e contendo a enzima de degradação de sacarídeo em uma quantidade de não menos que 2 μg e não mais que 8 μg. Também, como outro modo, a presente invenção. também inclui o uso da formulação de dose unitária para tratamento de hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal, que é o uso de uma formulação de dose unitária contendo uma enzima de degradação de sacarídeo liofilizada com um título de não menos que 0,3 unidade/μg como um ingrediente ativo, e contendo a enzima de degradação de sacarídeo em uma quantidade de não menos que 2 μg e não mais que 8 μg. Adicionalmente, como outro modo, a presente invenção também inclui uma formulação de dose unitária a ser usada para tratamento de hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal, que é a formulação de dose unitária contendo uma enzima de degradação de sacarídeo liofilizada com um título de não menos que 0,3 unidade/μg como um ingrediente ativo, e contendo a enzima de degradação de sacarídeo em uma quantidade de não menos que 2 μg e não mais que 8 μg.

[0066] As modalidades exemplares da presente invenção serão agora descritas, com a compreensão que a presente invenção não é limitada pelas modalidades.

[0067] <l> Uma composição farmacêutica compreendendo uma enzima de degradação de sacarídeo liofilizada tendo um título de não menos que 0,3 unidade/μg como um ingrediente ativo, e a composição farmacêutica sendo uma formulação de dose unitária em que uma quantidade da enzima de degradação de sacarídeo não é menor que 2 μg e não é maior que 8 μg.

[0068] <2> A composição farmacêutica de acordo com <1>, em que a atividade da enzima não é maior que 4 unidades.

[0069] <3> A composição farmacêutica de acordo com <1> ou <2>, em que a atividade de enzima da enzima de degradação de sacarídeo não é menor que 75%, em que 100% é definido como o valor antes da liofilização.

[0070] <4> A composição farmacêutica de acordo com qualquer um de <1> a <3>, em que a composição tem uma estabilidade de armazenamento pela duração de não menos que 12 meses a 5oC+3oC.

[0071] <5> A composição farmacêutica de acordo com qualquer um de <1> a <4>, em que a enzima de degradação de sacarídeo é uma enzima de degradação de glicosaminoglicano.

[0072] <6> A composição farmacêutica de acordo com <5>, em que a enzima de degradação de glicosaminoglicano é uma condroitinase.

[0073] <7> A composição farmacêutica de acordo com <6>, em que a condroitinase é condroitinase ABC.

[0074] <8> A composição farmacêutica de acordo com qualquer um de <1> a <7>, em que a composição farmacêutica inclui um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0075] <9> A composição farmacêutica de acordo com <8>, em que o veículo inclui pelo menos um dentre polialquileno glicol e sacarose.

[0076] <10> A composição farmacêutica de acordo com qualquer um de <1> a <9>, em que a composição farmacêutica é para tratamento de herniação, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal

[0077] <11> Uma embalagem compreendendo a composição farmacêutica de acordo com qualquer um de <1> a <10> contida em um recipiente.

[0078] <12> A embalagem de acordo com <11>, em que o recipiente é um frasco pequeno, seringa ou ampola.

[0079] <13> Um kit contendo uma embalagem compreendendo a composição farmacêutica de acordo com qualquer um de <1> a <10> contida em um recipiente, e um encarte ou rótulo de embalagem explicando o uso da composição farmacêutica para tratamento de hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal

[0080] <14> Um método para produzir uma embalagem compreendendo um recipiente contendo uma composição farmacêutica, o método compreendendo: uma etapa de colocar uma solução compreendendo não menos que 2 μg e não mais que 8 μg de uma enzima de degradação de sacarídeo no recipiente, e uma etapa de liofilização da solução de modo que uma dose unitária da composição farmacêutica pode ser provida.

[0081] <15> O método de produção de acordo com <14>, em que a composição farmacêutica compreende a enzima de degradação de sacarídeo tendo um título de não menos que 0,3 unidade/μg.

[0082] <16> O método de produção de acordo com <14> ou <15>, em que uma atividade de enzima da solução contida no recipiente não é maior que 4 unidades.

[0083] <17> O método de produção de acordo com qualquer um de < 14> a <16>, em que a atividade de enzima da enzima de degradação de sacarídeo após liofilização não é menor que 75%, em que 100% é definido como a atividade da enzima antes da liofilização.

[0084] <18> O método de produção de acordo com qualquer um de < 14> a <17>, em que a enzima de degradação de sacarídeo é uma enzima de degradação de glicosaminoglicano.

[0085] <19> O método de produção de produção de acordo com < 18>, em que a enzima de degradação de glicosaminoglicano é uma condroitinase.

[0086] <20> O método de produção de acordo com <19>, em que a condroitinase é condroitinase ABC

[0087] <21> O método de produção de acordo com qualquer um de < 14> a <20>, em que a composição farmacêutica inclui um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0088] <22> O método de produção de acordo com <21>, em que o veículo inclui pelo menos um dentre polialquileno glicol e sacarose.

[0089] <23> O método de produção de acordo com qualquer um de < 14> a <22>, em que a composição farmacêutica é para tratamento de hérnia, doença lisossomal, quelóides, cicatrizes hipertróficas, distrofia muscular ou lesão da medula espinhal.

[0090] <24> O método de produção de acordo com qualquer um de < 14> a <23>, em que o recipiente é um frasco pequeno, seringa ou ampola.

Exemplos

[0091] A presente invenção será agora descrita em maiores detalhes. No entanto, esta descrição não é destinada a limitar o escopo técnico da presente invenção.

<Exemplo de Preparação> 1) Preparação de condroitinase ABC

[0092] Condroitinase ABC foi preparada de acordo com o método descrito em Pedido de Patente JP Não Examinado Publicado No. H6-153947. Isto é, ela foi produzida por purificação de um sobrenadante de cultura de Proteus vulgaris. O título da condroitinase ABC obtida foi 0,4 U/μg.

2) Medição da atividade de enzima e medição da concentração de condroitinase ABC

[0093] A atividade de enzima da condroitinase ABC foi medida pelo seguinte método.

[0094] A amostra de enzima (condroitinase ABC) foi diluída 4000 vezes com 0,01% (p/v) reagente de caseína (20 mM tampão fosfato). A 100 μL da amostra de enzima diluída, 400 μL da solução de substrato (3 mg/ml de sulfato de condroitina de sódio (Códex Farmacêutico Japonês), 50 mM 2- amino-2-hidroximetil-1, 3-propanodiol, 50 mM de acetato de sódio, pH 8) foram adicionados e misturador. Após reagir a solução a 37°C durante 20 minutos, ela foi aquecida durante 1 minuto em um banho de água a 100°C. A mistura de reação foi resfriada em temperatura ambiente, e 5,0 mL de 0,05 M ácido clorídrico foram adicionados para preparar uma solução de amostra. A condroitinase ABC padrão foi diluída 400 vezes com reagente de caseína a 0,01% (p/v). O mesmo procedimento para preparação da solução de amostra foi realizado com 100 μL da solução de condroitinase ABC padrão diluída, para preparar uma solução padrão. O mesmo procedimento para preparação da solução de amostra foi também realizado para 100 μL de reagente de caseína a 0,01% (p/v) para preparar uma solução de controle. As absorbâncias AT, As e AB a um comprimento de onda de 232 nm foram medidas para a solução de amostra, solução padrão e solução de controle, usando espectrofotometria visível em ultravioleta, e a atividade da solução de enzima (U/mL) de cada foi determinada pela seguinte fórmula. Aqui, a atividade da solução de enzima é a atividade da enzima por volume de líquido unitário: Atividade da solução de enzima (U/mL) = (U/mL) = (AT- AB)/(A-As) x4000/400xUs AT: Absorbância de amostra solução AB: Absorbância da solução de controle As:. Absorbância da solução padrão Us: Atividade da solução de enzima de condroitinase ABC padrão (U/mL)

[0095] 1 U (unidade) foi definida como o valor de atividade de enzima que catalisa a reação para liberar 1 micromol de dissacarídeo insaturado em 1 minuto, sob as condições de reação especificadas acima. Os valores para a atividade da enzima usados aqui foram determinados com base na atividade de solução de enzima.

[0096] A quantidade de enzima condroitinase ABC (proteína, μg) foi medida pelo método Lowry seguinte. Isto é, 2,5 mL de reagente de cobre alcalino foram adicionados a e misturados com 0,5 mL da amostra de enzima (condroitinase ABC) diluída 50 vezes com água pura, e a mistura foi deixada permanecer durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C ou maior e 25°C ou menor). A seguir, 0,25 mL de 1 mol/L reagente de fenol foi adicionado ao líquido e deixado permanecer durante 30 minutos a temperatura ambiente para preparar uma solução de amostra. Albumina de soro bovino foi dissolvida em água para preparar uma solução a uma concentração de 30 μg/mL, 40 μg/mL, 50 μg/mL, 60 μg/mL ou 70 μg/mL, e o mesmo procedimento para a amostra de enzima diluída 50 vezes foi realizado para 0,5 mL de cada solução para preparar uma solução padrão. O mesmo procedimento para a amostra de enzima diluída 50 vezes foi também realizado para 0,5 mL de água, para preparar uma solução de controle. A absorbância de cada solução a um comprimento de onda de 750 nm foi medida. A absorbância e concentração de proteína da solução padrão foi traçada em gráfica por um método de regressão linear para determinar uma curva padrão se aproximando o mais perto de cada ponto. A quantidade de proteína em cada solução de amostra foi determinada a partir de curva padrão obtida e da absorbância da solução de amostra.

3) Preparação de tampão para solução de enzima

[0097] Um tampão para solução de enzima foi preparado de modo a ter a seguinte composição. (Composição ; por 1 L de água destilada para injeção ) Hidrogenofosfato de sódio hidratado (di-hidrogenofosfato de sódio): 1,125 mg Di-hidrogenofosfato de sódio: 0,3 mg Sacarose: 5 mg Polietileno glicol 3350: 10 mg pH: 6,5 ou maior e 7,5 ou menor

< Exemplo de teste 1>

[0098] A solução de condroitinase ABC preparada usando o tampão para a solução de enzima foi cheia em frascos pequenos de vidro de 3 ml (produto de Schott AG), nas seguintes quantidades de enzima. Amostra 1: 1,3 μg/frasco pequeno (0,5 U/frasco pequeno) Amostra 2: 2,5 μg/frasco pequeno (1,00 U/frasco pequeno) Amostra 3: 5,0 μg/frasco pequeno (2,00 U/frasco pequeno) Amostra 4: 9,1 μg /Frasco pequeno (3. 63 U/frasco pequeno)

[0099] A solução de enzima contida em cada frasco pequeno foi liofilizada (a um teor de água de não mais que 2% (p/p)) sob as seguintes condições. Após liofilização, a pressão dentro do frasco pequeno foi recuperada com gás nitrogênio e vedado com uma tampa de borracha para obter uma formulação de dose unitária.

(Condições de liofilização)

[00100] Etapa 1: A temperatura foi resfriada da temperatura ambiente a menos de 35°C sob pressão comum para congelar a amostra.

[00101] Etapa 2: O estado de menos 35°C temperatura, pressão comum foi mantido durante 30 minutos.

[00102] Etapa 3: O estado de menos 35°C temperatura, um vácuo de 13,3 Pa foi mantido durante 5 horas.

[00103] Etapa 4: Enquanto mantendo um vácuo de 13,3 Pa, a temperatura foi elevada de menos 35°C a 25°C.

[00104] Etapa 5: O estado de temperatura de 25°C, vácuo de 13,3 Pa foi mantido durante 5 horas.

[00105] Cada frasco pequeno foi medido para atividade de enzima (U/dose unitária) após a liofilização. O título (U/μg) e a atividade de enzima relativa (a atividade da enzima após liofilização, em que 100% foi definido como a atividade da enzima antes da liofilização (%) também foram calculados. Os resultados são mostrados Tabela 1. [Tabela 1]

[00106] Os resultados em Tabela 1 demonstram que, por limitação da quantidade de enzima de degradação de sacarídeo por dose unitária em uma faixa específica (não menos que 2,0 μg e não mais que 8,0 μg), foi possível prover uma preparação liofilizada com um título muito elevado.

< Exemplo de teste 2>

[00107] O tampão para solução de enzima foi usado para preparar uma solução de condroitinase ABC. A solução de enzima preparada foi colocada em um frasco pequeno de vidro do mesmo modo que no Exemplo de teste 1, de modo que a quantidade de enzima foi 1,5 U/frasco pequeno, e liofilizada (a um teor de água de não mais que 2% (p/p)). Após liofilização, a pressão dentro do frasco pequeno foi recuperada com gás nitrogênio e vedado com uma tampa de borracha para obter uma formulação de dose unitária.

[00108] Cada formulação de dose unitária obtida foi medida para atividade de enzima (U/frasco pequeno) após liofilização. Como um resultado, atividade de enzima de 1,5 U/frasco pequeno foi mantida mesmo após a liofilização.

< Exemplo de teste 3>

[00109] Uma formulação de dose unitária (1,5 U/frasco pequeno) foi obtida de acordo com o método de Exemplo de teste 1. A formulação de dose unitária obtida foi armazenada sob as seguintes condições 1 ou 2. O título da enzima após cada período de armazenamento foi determinado. Condições 1): 25o+2oC, resistente à luz Condições 2): 5o+3oC, resistente à luz

[00110] Como um resultado, sob condições 1, a taxa de retenção do título para 1 mês, 3 meses e 6 meses após o início de armazenamento não foi menor que 95% com relação a 100% como o título no início do armazenamento. Sob condições 2, a taxa de retenção do título durante 3 meses, 6 meses, 12 meses, 24 meses e 36 meses após o início do armazenamento foi não menos que 95% com relação a 100% como o título no ínicio de armazenamento.

[00111] Embora a presente invenção tenha sido descrita com relação a exemplos e várias modalidades específicos, será prontamente entendido por um versado na técnica que numerosas modificações e aplicações das modalidades descritas aqui são possíveis sem sair do espírito e escopo da presente invenção.

[00112] O presente pedido reivindica a prioridade para Pedido de Patente JP No. 2018-35884 que foi depositado no Escritório de Patentes do Japão em 28 de fevereiro de 2018, e a totalidade de seu conteúdo é incorporada no presente pedido por referência. Todas as literaturas, pedidos de patentes e padrões técnicos descritos aqui são incorporados por referência na mesma extensão como se literaturas, pedidos de patentes e padrões técnicos individuais fossem especificamente e individualmente indicados para serem incorporados por referência.

Claims (4)

1. Método para produção de uma embalagem, compreendendo uma composição farmacêutica, o método caracterizado pelo fato de que compreende: colocar uma solução compreendendo não menos que 2,5 μg e não mais que 5 μg de uma enzima de degradação de sacarídeo em um recipiente, e liofilizar a solução de modo que uma dose unitária da composição farmacêutica pode ser provida, em que a enzima de degradação de sacarídeo é condroitinase ABC, e em que a composição farmacêutica compreende a enzima de degradação de sacarídeo tendo um título de não menos que 0,36 unidade/μg.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que uma atividade de enzima da solução a ser colocada no recipiente não é menor que 1 unidade e não é maior que 2 unidades.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreende pelo menos um selecionado do grupo consistindo de sacarose e polietileno glicol.

4. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreende pelo menos um selecionado do grupo consistindo de sacarose e polietileno glicol.