BR112020014529A2 - Receptor de células t - Google Patents

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BR112020014529A2
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Yoshihiro Miyahara
Keisuke Fujii
Tatsuro JO
Hiroyuki Kishi
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Abstract

a presente invenção refere-se a uma técnica para a prevenção ou o tratamento de doenças de associadas com htlv-1, tal como atl; um material usado para a dita técnica; e um método para selecionar o dito material. é provido um método de seleção de tcr que inclui um procedimento no qual células de reconhecimento de antígeno derivado de htlv-1 selecionadas de amostras obtidas de pacientes que têm htlv-1 são sujeitadas à análise de repertório de tcr, os tipos de tcr são classificados na ordem de suas contagens de células, e os tcrs altamente classificados são selecionados. é provido um agente para a prevenção ou o tratamento de doenças de associadas com htlv-1, em que o agente contém: um tcr que inclui um a cdr específico que pode ser obtido no dito método de seleção de tcr; e células que expressam o dito tcr.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "RECEPTOR DE CÉLULAS T". Campo Técnico
[001] A presente invenção refere-se a um receptor de células T e a um método para selecionar o receptor de células T. Antecedentes
[002] No Japão, há cerca de 1 milhão de pessoas infectadas com o vírus de leucemia de células T humanas (HTLV-1), e cerca de 2 a 5% desenvolvem a leucemia de células T adultas (ATL) durante a sua vida. Embora a quimioterapia e os tratamentos com múltiplos fármacos tais como o transplante alogeneico de células tronco tenham sido experimentados, é necessário melhorar ainda mais. Além disso, a monoterapia que faz uso de um anticorpo anti-CCR4 recentemente aprovado envolve a exacerbação de GVHD e o relapso inevitável, quando usada em combinação com o transplante. Portanto, o desenvolvimento de um tratamento mais seguro e mais eficaz, especialmente um tratamento que visa a cura, é uma questão urgente.
[003] A Literatura Não Patentária (NPL) 1 ensina que a análise de repertório foi realizada em uma população de células T citotóxicas específicas de antígeno de Tax T (CTL) de HTLV-1 em pacientes de ATL. Lista de Citações Literatura Não Patentária
[004] NPL 1: Tanaka Y. et al. Single-cell analysis of T-cell receptor repertoire of HTLV-1 Tax-specific cytotoxic T cells in allogeneic transplant recipients with adult T-cell leukemia/lymphoma, Cancer Research. 01 de agosto de 2010; 70(15): 6181-92 Sumário da Invenção Problema Técnico
[005] Um objetivo da presente invenção consiste na provisão de uma técnica para a prevenção ou o tratamento de doenças associadas com HTLV-1, tal como ATL, um material para ser usado na técnica, um método para selecionar o material, e outros ainda. Solução Para o Problema
[006] Como resultado da pesquisa intensiva em vista do problema acima, os autores da presente invenção verificaram que um receptor de células T (TCR) com maior afinidade com o antígeno derivado de HTLV-1 pode ser selecionado por um método que compreende as etapas a seguir: as células de reconhecimento de antígeno derivado de HTLV-1 classificadas de células derivadas de pacientes de HTLV-1 são sujeitadas à análise de repertório de receptor de células T (TCR), os tipos de TCR são classificados em ordem descendente do número de células de cada tipo de TCR, e um TCR altamente classificado é selecionado. Os autores da presente invenção também verificaram que o TCR obtido pode ser eficientemente expresso nas células, e que as células que expressam o TCR são citotóxicas contra as células infectadas com HTLV-1. Com base nessas descobertas, os autores da presente invenção também realizaram uma pesquisa intensiva e elaboraram a presente invenção.
[007] Especificamente, a presente invenção inclui as modalidades a seguir.
[008] Item 1. Um receptor de células T que tem qualquer uma das características (A) a (J) a seguir:
[009] (A) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 3 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8;
[0010] (B) compreende uma cadeia À que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 13 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 18;
[0011] (C) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 23 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 28;
[0012] (D) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 33 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 38;
[0013] (E) compreende uma cadeia À que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 43 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 48;
[0014] (F) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 53 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 58;
[0015] (G) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 63 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 68;
[0016] (H) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 73 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 78;
[0017] (1) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 83 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 88; e
[0018] (J) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 93 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 98.
[0019] Item 2. O receptor de células T de acordo com o item 1, no qual
[0020] na característica (A), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia À que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 1 e a CDR2 de cadeia BB compreende a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 2, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 6 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 7;
[0021] na característica (B), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 11 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 1I6 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 17;
[0022] na característica (C), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 21 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 22, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 26 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 27;
[0023] na característica (D), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 31 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 32, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 36 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37;
[0024] na característica (E), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 41 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 42, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 46 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 47;
[0025] na característica (F), a cadeia À compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 51 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 52, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 56 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 57;
[0026] na característica (G), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 61 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 62, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 668 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 67;
[0027] na característica (H), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 71 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 72, e à cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 76 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 77;
[0028] na característica (1), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 81 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 82, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 868 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 87; e
[0029] na característica (J), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 91 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 92, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 96 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 97.
[0030] Item 3. O receptor de células T de acordo com o item 1 ou 2, o qual reconhece o antígeno de Tax.
[0031] Item 4. O receptor de células T de acordo com qualquer um dos itens 1 a 3, o qual tem a característica (1) ou (J).
[0032] Item 5. O receptor de células T de acordo com o item 4, o qual reconhece o antígeno de Tax ligado a HLA-A*24:02.
[0033] Item 6. Um ou mais polinucleotídeos que codificam o receptor de células T de qualquer um dos itens 1 a 6.
[0034] Item 7. Uma célula que compreende um ou mais polinucleotídeos do item 6.
[0035] Item 8. A célula de acordo com o item 7, na qual o receptor de células T de qualquer um dos itens 1 a 6 é expresso em uma membrana da célula.
[0036] Item 9. A célula de acordo com o item 7 ou 8, em que a célula é um linfócito.
[0037] Item 10. A célula de acordo com qualquer um dos itens 7 a 9, em que a célula é uma célula CD8-positiva.
[0038] Item 11. A célula de acordo com qualquer um dos itens 7 a 10, em que a célula é uma célula derivada de um organismo vivo que contém o vírus de leucemia de células T humanas.
[0039] Item 12. Um agente profilático ou terapêutico para uma doença associada com o vírus de leucemia de células T humanas, o qual compreende a célula de qualquer um dos itens 7 a 11.
[0040] Item 13. O agente terapêutico de acordo com o item 12, em que a doença associada com o vírus de leucemia de células T humanas é leucemia de células T adultas.
[0041] Item 14. Um método para selecionar um receptor de células T, o qual compreende as etapas de
[0042] (i) classificação de uma população de células com capacidade de reconhecer o antígeno derivado de vírus de leucemia de células T humanas de células derivadas de um organismo vivo que contém o vírus de leucemia de células T humanas,
[0043] (ii) sujeição da população de células à análise de repertório de receptor de células T para determinar o tipo de receptor de células T de cada célula e o número de células de cada tipo de receptor de células T, e
[0044] (ili) classificação do tipo de receptor de células T em ordem descendente do número de células de cada tipo de receptor de células T, e seleção de pelo menos um receptor de células T altamente classificado.
[0045] Item 15. O método de seleção de acordo com o item 14, no qual, na etapa (iii), pelo menos um receptor de células T é selecionado de um grupo que consiste no primeiro ao quinto receptores de células T classificados. Efeitos Vantajosos da Invenção
[0046] De acordo com a presente invenção, uma técnica para a prevenção ou o tratamento de doenças associadas com HTLV-1, tal como ATL, um material para ser usado na técnica, um método para selecionar o material, e outros ainda, podem ser providos. Breve Descrição dos Desenhos
[0047] A Figura 1 mostra os resultados do tingimento com tetrâmero (Amostra no. 2) no Exemplo de Teste 1. O tetrâmero usado no tingimento é mostrado no alto da Figura 1. O controle mostra o caso sem manchas, e o tetrâmero mostra o caso com manchas. Em cada histograma, a ordenada indica o grau de tingimento com tetrâmero, e a abscissa indica o grau de tingimento com CD8.
[0048] A Figura 2 mostra os resultados do tingimento com tetrâmero (Amostra no. 7) no Exemplo de Teste 1. O tetrâmero usado no tingimento é mostrado no alto da Figura 2. O controle mostra o caso sem manchas e o tetrâmero mostra o caso com manchas. Em cada histograma, a ordenada indica o grau de tingimento com tetrâmero, e a abscissa indica o grau de tingimento com CD8.
[0049] A Figura 3 mostra os resultados da análise de repertório no Exemplo de Teste 1. Cada gráfico de pizza representa o número de células sujeitadas à análise de repertório (número de células na população de células obtido pelo tingimento com tetrâmero no Exemplo de Teste 1). Os setores do gráfico de pizza preenchidos com cada padrão representam o número de células do mesmo tipo de TOR na população. As populações das quais foram obtidos clones de TCR, tais como 1-1, 2-1, 5-1 e 7-1, são indicadas com o número do clone.
[0050] A Figura 4 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia À e da cadeia a de TOR1-1. As regiões constantes são encerradas por linhas pautadas, e as sublinhadas indicam a CDR1, a CDR2 e a CDR3 em ordem a partir do lado do terminal N (o mesmo se aplica às Figuras 5 a 13).
[0051] A Figura 5 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia B e da cadeia a de TOR1-2.
[0052] A Figura 6 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia À e da cadeia a de TOR2-1.
[0053] A Figura 7 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia B e da cadeia a de TOR2-2.
[0054] A Figura 8 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia À e da cadeia a de TOR5-1.
[0055] A Figura 9 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia B e da cadeia a de TOR5-2.
[0056] A Figura 10 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia B e da cadeia a de TOR5-3.
[0057] A Figura 11 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia B e da cadeia a de TOR7-1.
[0058] A Figura 12 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia À e da cadeia a de TOR7-2.
[0059] A Figura 13 mostra as sequências de aminoácidos a partir do lado do terminal N da cadeia B e da cadeia a de TOR7-3.
[0060] A Figura 14 mostra os resultados da análise da expressão de TCR ligado a HLA-A*24:02 no Exemplo de Teste 2. Os dois gráficos à esquerda mostram os resultados da análise da expressão pelo tingimento com tetrâmero, e o gráfico à direita mostra os resultados da análise da expressão pela expressão de GFP. A legenda mostra o tetrâmero usado e as células sob análise (CD8-positivas ou CD4-positivas).
[0061] A Figura 15 mostra os resultados da análise da expressão de TCR ligado a HLA-A*02:01 no Exemplo de Teste 2. Os dois gráficos de cima mostram os resultados da análise da expressão pelo tingimento com tetrâmero, e o gráfico de baixo mostra os resultados da análise da expressão pela expressão de GFP. A legenda mostra o tetrâmero usado e as células sob análise (CD8-positivas ou CD4- positivas).
[0062] A Figura 16 mostra os resultados da cultura de expansão de células que expressam TCR (1-1 e 1-2) no Exemplo de Teste 3. Os valores numéricos mostrados fora do gráfico indicam a porcentagem de células tetrâmero-positivas ou de células GFP-positivas.
[0063] A Figura 17 mostra os resultados da cultura de expansão de células que expressam TCR (2-1 e 2-2) no Exemplo de Teste 3. Os valores numéricos mostrados fora do gráfico indicam a porcentagem de células tetrâmero-positivas ou de células GFP-positivas.
[0064] A Figura 18 mostra os resultados da cultura de expansão de células que expressam TCR (5-1) no Exemplo de Teste 3. Os valores numéricos mostrados fora do gráfico indicam a porcentagem de células tetrâmero-positivas ou de células GFP-positivas.
[0065] A Figura 19 mostra os resultados da cultura de expansão de células que expressam TCR (7-2 e 7-3) no Exemplo de Teste 3. Os valores numéricos mostrados fora do gráfico indicam a porcentagem de células tetrâmero-positivas ou de células GFP-positivas.
[0066] A Figura 20 mostra os resultados do ensaio de citotoxicidade no Exemplo de Teste 3. Descrição das Modalidades
[0067] No presente relatório descritivo, os termos "compreende" e "contém" incluem os conceitos de compreender, conter, consistir substancialmente em, e consistir em.
[0068] A "identidade" de sequências de aminoácidos refere-se ao grau de combinação de duas ou mais sequências de aminoácidos comparáveis. Desse modo, quanto mais elevado o grau de combinação entre duas sequências de aminoácidos, mais elevada a identidade ou similaridade dessas sequências. O nível da identidade da sequência de aminoácidos é determinado, por exemplo, ao usar FASTA, uma ferramenta para a análise de sequência, com parâmetros padrão. Alternativamente, o nível da identidade pode ser determinado pelo algoritmo BLAST desenvolvido por Karlin e Altschul (Karlin S, Altschul SF, "Methods for assessing the statistical significance of molecular sequence features by using general scoring schemes," Proc Natl Acad Sci USA, 87: 2264-2268 (1990); Karlin S, Altschul SF, "Applications and statistics for multiple high-scoring segments in molecular sequences", Proc Natl Acad USA, 90: 5873-7 (1993)). Um programa chamado BLASTX baseado nesse algoritmo BLAST foi desenvolvido. As técnicas específicas para estes métodos de análise são conhecidas, e pode ser feita referência ao National Center of Biotechnology Information (NCBI) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). A "identidade" de sequências base também é definida de uma maneira similar a essa acima.
[0069] No presente relatório descritivo, "substituição conservadora" significa que um resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido que tem uma cadeia lateral similar. Os exemplos de substituições conservadoras incluem a substituição entre os resíduos de aminoácidos que têm uma cadeia lateral básica, tal como a lisina, a arginina e a histidina. Outras substituições conservadoras incluem a substituição entre os resíduos de aminoácidos que têm uma cadeia do lado do ácido, tal como o ácido aspártico e o ácido glutâmico; a substituição entre os resíduos de aminoácidos que têm uma cadeia lateral polar não carregada, tal como a glicina, a asparagina, a glutamina, a serina, a treonina, a tirosina e a cisteína; a substituição entre os resíduos de aminoácidos que têm uma cadeia lateral não polar, tal como a alanina, a valina, a leucina, a isoleucina, a prolina, a fenilalanina, a metionina e o triptofano; a substituição entre os resíduos de aminoácidos que têm uma cadeia lateral B-ramificada, tal como a treonina, a valina e a isoleucina; e a substituição entre os resíduos de aminoácidos que têm uma cadeia lateral aromática, tal como a tirosina, a fenilalanina, o triptofano e a histidina.
[0070] No presente relatório descritivo, "CDR" é uma abreviatura para Complementarity Determining Region [Região de Determinação de Complementaridade]l, e também é indicada como "região de determinação da complementaridade". A CDR é uma região que está presente na região variável de TCR, e que está profundamente envolvida na ligação específica dos anticorpos aos antígenos ligados a MHC. A "CDR de cadeia a" refere-se à CDR presente na região variável de cadeia a de TCR, e a "CDR de cadeia 8" refere-se à CDR presente na região variável de cadeia É de TCR.
[0071] No presente relatório descritivo, "região variável" refere-se a uma região que inclui CDRI1 a CDR3 (indicadas a seguir simplesmente como "CDRs 1 a 3") descritas acima. A ordem do arranjo dessas CDRs 1 a 3 não é limitada. De preferência, nesta região, CDR1, CDR2 e CDR3 são arranjadas nesta ordem na direção do terminal N ao terminal C, ou vice-versa, continuamente ou através de outras sequências de aminoácidos chamadas de "regiões de estrutura" (FRs), que são descritas a seguir. A "região variável de cadeia a" é uma região em que as CDRs 1 a 3 de cadeia a são arranjadas, e a "região variável de cadeia B" é uma região em que as CDRs 1 a 3 de cadeia B são arranjadas.
[0072] As regiões de cada região variável com exceção das CDRs 1 a3 acima mencionadas são chamadas de "regiões de estrutura" (FRs), tal como descrito acima. Especificamente, uma região entre o terminal N da região variável e a CDR1 é definida como FR1, uma região entre a CDR1 e a CDR2 é definida como FR2, uma região entre a CDR2 e a CDR3 é definida como FR3, e uma região entre a CDR3 e o terminal C da região variável é definida como FRA4. Receptor de células T
[0073] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um receptor de células T que tem qualquer uma das características (A) a (J) (também indicado no presente documento como "TCR da presente invenção". Isto é descrito a seguir.
[0074] A característica (A) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia BB que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 3 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8. Na característica (A), de preferência, a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 1 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 2, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 6 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 7.
[0075] Na característica (A), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 4 ou uma sequência variante da mesma, e compreende uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 9 ou uma sequência variante da mesma.
[0076] Na característica (A), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha as funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 5 ou uma sequência variante da mesma, e compreende uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 10 ou uma sequência variante da mesma.
[0077] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (A) incluem o TCR1-1 descrito nos exemplos.
[0078] A característica (B) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia BB que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 13 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 18.
[0079] Na característica (B),) de preferência, a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 11 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 16 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 17.
[0080] Na característica (B), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 14 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 19 ou uma sequência variante da mesma.
[0081] Na característica (b), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 15 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 20 ou uma sequência variante da mesma.
[0082] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (B) incluem o TCR1-2 nos exemplos.
[0083] A característica (C) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia BB que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 23 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 28.
[0084] Na característica (C), de preferência, a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 21 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 22, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 26 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 27.
[0085] Na característica (C), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 24 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 29 ou uma sequência variante da mesma.
[0086] Na característica (C), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que as funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expo ar região variável à superfície da célula) sejam exibidas. De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 25 ou uma sequência variante da mesma, e compreende uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 30 ou uma sequência variante da mesma.
[0087] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (C) incluem o TCR2-1 descrito nos exemplos.
[0088] A característica (D) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia B que compreende uma CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 33 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 38.
[0089] Na característica (D), de preferência, a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 31 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 32, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 36 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37.
[0090] Na característica (D), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 34 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 39 ou uma sequência variante da mesma.
[0091] Na característica (D), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 35 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 40 ou uma sequência variante da mesma.
[0092] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (D) incluem o TOCR2-2 descrito nos exemplos.
[0093] A característica (E) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia BB que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 43 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 48.
[0094] Na característica (E), de preferência, a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 41 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 42, e a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 46 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 47.
[0095] Na característica (E), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 44 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 49 ou uma sequência variante da mesma.
[0096] Na característica (E), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 45 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 50 ou uma sequência variante da mesma.
[0097] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (E) incluem o TCR5-1 descrito nos exemplos.
[0098] A característica (F) é uma característica que as células T compreendem uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 53 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 58.
[0099] Na característica (F), de preferência a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 51 e a CDR2 de cadeia que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 52, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 56 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 57.
[00100] Na característica (F), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 54 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 59 ou uma sequência variante da mesma.
[00101] Na característica (F), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 55 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 60 ou uma sequência variante da mesma.
[00102] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (F) incluem o TCR5-2 descrito nos exemplos.
[00103] A característica (G) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia BB que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 63 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 68.
[00104] Na característica (G), de preferência, a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 61 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 62, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 66 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 67.
[00105] Na característica (G), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 64 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou uma sequência variante da mesma.
[00106] Na característica (G), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 65 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 70 ou uma sequência variante da mesma.
[00107] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (G) incluem o TCR5-3 descrito nos exemplos.
[00108] A característica (H) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia BB que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 73 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 78.
[00109] Na característica (H)) de preferência, a cadeia BB compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 71 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 72, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 76 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 77.
[00110] Na característica (H), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 74 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 79 ou uma sequência variante da mesma.
[00111] Na característica (H), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 75 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 80 ou uma sequência variante da mesma.
[00112] Os exemplos específicos do TCR que tem a característica (h) incluem o TCR7-1 descrito nos exemplos.
[00113] A característica (1) é uma característica que o receptor de células T compreende uma cadeia BB que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 83 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 88.
[00114] Nacaracterística (|), de preferência, a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia À que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 81 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 82, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID
NO: 86 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 87.
[00115] Na característica (1), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 84 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 89 ou uma sequência variante da mesma.
[00116] Na característica (|), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 85 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 90 ou uma sequência variante da mesma.
[00117] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (1) incluem o TOR7-2 descrito nos exemplos.
[00118] A característica (J) é uma característica que o receptor da célula de T compreende uma cadeia B que compreende uma CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 93 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 98.
[00119] Na característica (J)) de preferência a cadeia BB compreende a CDR1 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 91 e a CDR2 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 92, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 96 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 97.
[00120] Na característica (J), com mais preferência, o receptor de células T compreende uma região variável de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 94 ou uma sequência variante da mesma, e uma região variável de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 99 ou uma sequência variante da mesma.
[00121] Na característica (J), a sequência de aminoácidos da região constante não é limitada particularmente contanto que tenha funções da região constante (por exemplo, a função de penetrar na membrana da célula e de expor a região variável à superfície da célula). De preferência, o receptor de células T compreende uma região constante de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 95 ou uma sequência variante da mesma, e uma região constante de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 100 ou uma sequência variante da mesma.
[00122] Os exemplos específicos do TOR que tem a característica (J) incluem o TOCR7-3 nos exemplos.
[00123] Na região variável, a sequência variante da sequência de aminoácidos representada pelo número de sequência específico acima tem de preferência 90% ou mais de identidade, com mais preferência 95% ou mais de identidade, ainda com mais preferência 98% ou mais de identidade, com maior preferência ainda 99% ou mais de identidade, em relação à sequência de aminoácidos representada pelo número de sequência específico. O sítio de mutação pode ser qualquer sítio, mas é de preferência um sítio que não as CDRs.
[00124] Na região constante, a sequência variante da sequência de aminoácidos representada pelo número de sequência específico tem de preferência 70% ou mais de identidade, com mais preferência 80% ou mais de identidade, ainda com mais preferência 85% ou mais de identidade, com maior preferência ainda 90% ou mais de identidade, ainda com mais preferência 95% ou mais, com mais preferência ainda 98% ou mais de identidade, em relação à sequência de aminoácidos representada pelo número de sequência específico. O sítio de mutação pode ser qualquer sítio, mas é de preferência um sítio que não a região de penetração da membrana da célula.
[00125] O TCR da presente invenção tem capacidade de reconhecer (de preferência, de reconhecer especificamente) o antígeno de Tax, que é um antígeno derivado de HTLV-1. Em uma modalidade mais específica, um TCR que tem qualquer uma das características (A) a (G) pode reconhecer o antígeno de Tax ligtado a HLA-A*02:01 (mais especificamente, Taxp11-19 (LrFeYPyyv) (sequência número 101)), e um TCR que tem qualquer uma das características (H) a (J) pode reconhecer o antígeno de Tax ligado a HLA-A*24:02 (mais especificamente, Taxp301-309 (seHsLHLF) (sequência número 102)).
[00126] O TCR da presente invenção tem alta afinidade com o antígeno de Tax. O TCR da presente invenção tem uma afinidade até uma extensão tal que IFN-y é produzido a uma concentração do peptídeo de Tax, por exemplo, de 1 nM ou mais, de preferência de 500 PpM ou mais, com mais preferência de 200 pM ou mais, ainda com maior preferência de 100 pM ou mais, e com mais preferência ainda de 50 pM ou mais, e particularmente de preferência de 10 pM ou mais, no teste de afinidade pelo método de diluição de peptídeo em etapas no Exemplo de Teste 3 descrito a seguir.
[00127] Entre as características (A) a (J),) por exemplo, a característica (B), a característica (C), a característica (D), a característica (G), a característica (|) e a característica (J) são as preferíveis; a característica (B), a característica (D), a característica (1) e a característica (J) são mais preferíveis; e a característica (|) e a característica (J) são ainda mais preferíveis.
[00128] O TCR da presente invenção pode ser quimicamente modificado contanto que possa reconhecer o antígeno de Tax. Em cada cadeia de TCR da presente invenção, o terminal C pode ser um grupo carboxila (-COOH), um carboxilato (-COO-), uma amida (CONH;>2), ou um éster (-COOR). O grupo representado por R no éster pode ser, por exemplo, um grupo alquila C1-6, tal como metila, etila, n- propila, isopropila ou n-butila; um grupo cicloalquila C3.6, tal como ciclopentila ou ciclo-hexila; um grupo arila Ce-12, tal como fenila ou a- naftila; um grupo fenil-alguila C1.2, tal como benzila ou fenetila; um grupo aralquila C7-14, tal como um grupo a-naftil-alquila C1-2, por exemplo, a-naftilmetila; um grupo pivaloiloximetila; ou um outro ainda. Em cada cadeia de TCR, um grupo carboxila (ou carboxilato) em uma posição que não o terminal C pode ser amidado ou esterificado. Os exemplos do éster neste caso incluem os ésteres de terminal C acima mencionados. Além disso, a cadeia de TCR da presente invenção inclui aquelas nas quais o amino grupo do resíduo de aminoácido de terminal N é protegido por um grupo de proteção (por exemplo, um grupo acila C1.6 tal como formila, acetila ou como alcanoila C1.6); e aquelas nas quais o resíduo de glutamina de terminal N que pode ser produzido por meio de clivagem in vivo é convertido em ácido piroglutâmico; aquelas nas quais um substituinte (por exemplo, -OH, - SH, um gurpo amino, um grupo imidazol, um grupo indol ou um grupo guanidino) na cadeia lateral de um aminoácido na molécula é protegido por um grupo de proteção apropriado (por exemplo, um grupo acila C1.6 tal como formila, acetila ou como alcanoila C1-6).
[00129] O TCR da presente invenção pode ser aquele com uma etiqueta de proteína conhecida, sequência de sinal, ou como uma proteína ou um peptídeo, ou substância de etiquetação adicionada ao mesmo contanto que tenha capacidade de reconhecer o antígeno de Tax. Os exemplos de etiqueta de proteína incluem a biotina, a etiqueta His, a etiqueta FLAG, a etiqueta Halo, a etiqueta MBP, a etiqueta HA, a etiqueta Myc, a etiqueta V5, a etiqueta PA, e outras ainda. Os exemplos de sequências de sinais incluem sinais de translocação nuclear.
[00130] O TCR da presente invenção pode estar na forma de um sal farmaceuticamente aceitável com um ácido ou uma base. O sal não é particularmente limitado, contanto que seja farmaceuticamente aceitável. O sal pode ser um sal de ácido ou um sal de base. Os exemplos de sais ácidos incluem sais ácidos inorgânicos, tais como o cloridreto, o bromidreto, o sulfato, o nitrato e o fosfato; sais de ácidos orgânicos, tais como o acetato, o propionato, o tartrato, o fumarato, o maleato, o malato, o citrato, o metanosulfonato e o paratoluenosulfonato; sais de aminoácidos, tais como o aspartato e o glutamato; e outros ainda. Os exemplos de sais básicos incluem sais de metais alcalinos, tais como sais de sódio e sais de potássio; sais de metais alcalino terrosos, tais como sais de cálcio e sais de magnésio; e outros ainda.
[00131] OTCR da presente invenção pode estar na forma de um solvato. O solvente não é particularmente limitado, contanto que seja farmaceuticamente aceitável. Os exemplos dos solventes incluem a água, o etanol, o glicerol, o ácido acético, e outros ainda.
[00132] O método para a produção do TCR da presente invenção não é particularmente limitado. O TOR da presente invenção pode ser produzido, por exemplo, por um método que compreende a etapa de cultivo de um hospedeiro transformado com um polinucleotídeo que codifica o anticorpo da invenção (também indicados no presente documento como "polinucleotídeos da invenção"), e recuperação de uma fração que contém o TCR da invenção.
[00133] O polinucleotideo da presente invenção não é particularmente limitado, contanto que contenha o TCR da presente invenção em um estado expressível. O polinucleotídeo pode conter outras sequências além da sequência de codificação do TCR da presente invenção. Os exemplos de outras sequências incluem uma sequência de codificação de peptídeo de sinal secretor a ser arranjada adjacente à sequência de codificação do TCR da presente invenção, uma sequência de promotores, uma sequência de intensificadores, uma sequência de repressores, uma sequência de isoladores, uma origem em duplicata, uma sequência de codificação de proteína repórter (por exemplo, uma proteína fluorescente), uma sequência de codificação de gene de resistência a fármacos, e outras ainda. Entre estas, o polinucleotídeo da presente invenção contém de preferência uma sequência de codificação de proteína repórter do ponto de vista que as células que têm o polinucleotídeo da presente invenção introduzido nas mesmas podem ser facilmente detectadas (pela análise FACS, etc), classificadas, concentradas, etc. O polinucleotídeo da presente invenção pode ser um polinucleotídeo linear ou um polinucleotídeo circular (por exemplo, um vetor). O vetor a ser usado é de preferência um vetor viral, e com mais preferência um vetor retroviral. O polinucleotídeo da presente invenção pode estar em um estado de ser incluído em um vírus, tal como um retrovírus.
[00134] Os exemplos específicos do polinucleotídeo da presente invenção incluem (1) um polinucleotíideco que compreende uma sequência base que codifica pelo menos um membro selecionado do grupo que consiste na cadeia B, na região variável de cadeia B e nas
CDRs 1 a 3 de cadeia B do TCR da presente invenção; (Il) um polinucleotídeo que compreende uma sequência base que codifica pelo menos um membro selecionado do grupo que consiste na cadeia a, na região variável de cadeia a, e nas CDRs 1 a 3 de cadeia a do TCR da presente invenção; (Ill) um ácido nucleico que compreende uma sequência base que codifica pelo menos um membro selecionado do grupo que consiste na cadeia B, na região variável de cadeia À, e nas CDRs 1 a 3 de cadeia B do TCR da presente invenção, e um polinucleotídeo que compreende uma sequência base que codifica pelo menos um membro selecionado do grupo que consiste na cadeia a, na região variável de cadeia a, e nas CDRs 1 a 3 de cadeia a do TCR da presente invenção; (iv) uma combinação de dois ou mais de (1) e (Il) acima; e outros ainda.
[00135] No caso de (Ill) acima, a fim de permitir uma expressão mais eficiente do TCR da presente invenção codificado pelo polinucleotídeo da presente invenção, é preferível que a região que codifica a cadeia B ou uma outra e a região que codifica a cadeia a ou uma outra sejam expressas como um único polipeptídeo e que um ligante, que é clivado após a expressão, seja conectado através da região de codificação. Pela mesma razão, o polinucleotídeo da presente invenção é de preferência provido com uma região que codifica um RNA de cordão curto (por exemplo, siRNA, miRNA) que inibe a expressão de TOR endógeno. Estas técnicas são publicamente conhecidas e podem ser usadas de acordo com a informação previamente relatada.
[00136] Os hospedeiros não são particularmente limitados, e os exemplos incluem células de insetos, célula eucarióticas, células de mamíferos, e outros ainda.
[00137] Os métodos para a transformação, a cultura e a recuperação não são particularmente limitados, e métodos conhecidos na produção de TCR podem ser usados.
[00138] Após a recuperação, o TCR da presente invenção pode ser purificado, caso necessário. A purificação pode ser executada por métodos conhecidos na produção de proteínas, tal como a cromatografia e a diálise.
2. Célula
[00139] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a uma célula que contém o polinucleotídeo da presente invenção (também indica no presente documento como "a célula da presente invenção.") Isto é explicado a seguir.
[00140] As células a partir das quais a célula da presente invenção é derivada não são particularmente limitadas. Com a finalidade de usar a célula da presente invenção no método acima para produzir o TOR da presente invenção, por exemplo, as células que podem ser usadas para a expressão da proteína (por exemplo, células de insetos, células eucarióticas, células de mamíferos) podem ser usadas como células de partida. Alternativamente, com a finalidade de usar a célula da presente invenção como um agente profilático ou terapêutico para doenças associadas com HTLV-1 tal como descrito a seguir, os exemplos das células de partida incluem as células mononucleares do sangue periférico, de preferência os linfócitos, e com mais preferência as células T, e ainda com maior preferência as células T CD8- ou CD4- (de preferência CD8-)positivas. Para esta última finalidade, as células de partida são de preferência células derivadas de um organismo vivo que contém HTLV-1, com mais preferência um paciente com uma doença associada com HTLV-1, e ainda com maior preferência um paciente de ALT.
[00141] A célula da presente invenção expressa de preferência o TCR da presente invenção. Em uma modalidade mais específica da célula da presente invenção, o TCR da presente invenção é expresso na membrana da célula, e de preferência expresso em um estado tal que a região variável do TCR fica exposta fora da membrana da célula.
[00142] A célula da presente invenção pode ser obtida ao introduzir o polinucleotídeo da presente invenção nas células. Caso necessário, a célula que contém o polinucleotídeo da presente invenção pode ser concentrada, ou pode ser concentrada ao usar um marcador específico (antígeno de CD, tal como CD8) como um indicador.
3. Agente profilático ou terapêutico para doença associada com o vírus de leucemia de células T humanas
[00143] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um agente profilático ou terapêutico para uma doença associada com HTLV-1 que compreende a célula da presente invenção (também indicado no presente documento como o "agente da presente invenção"). Isto é descrito a seguir.
[00144] A célula para o uso nesta modalidade é a mesma que a célula para o uso na seção "2. Célula "acima para a mesma finalidade que esta modalidade. De preferência, a célula é derivada de um paciente a ser sujeitado a um tratamento ou uma prevenção.
[00145] Os exemplos de doenças associadas com HTLV-1 incluem ATL, HAM (mielopatia associada a HTLV-1),) HAB (bronquite associada a HTLV-1), HAU (uveite associada a HTLV-1), e outras ainda. Entre estas, a ATL é preferível.
[00146] O agente da presente invenção também pode ser usado em combinação com outros agentes profiláticos ou terapêuticos para doenças associadas com HTLV-1. Os exemplos de outros agentes profiláticos ou terapêuticos incluem o anticorpo anti-CCR4 e outros ainda.
[00147] O teor do ingrediente ativo (a célula da presente invenção) no agente da presente invenção pode ser apropriadamente ajustado ao levar em consideração o tipo de doença alvo, os efeitos terapêuticos desejados, o método de administração, o período de tratamento, a idade do paciente, o peso corpóreo do paciente, etc. Por exemplo, o teor de ingrediente ativo no agente da presente invenção pode ser ajustado de cerca de 0,0001 parte em peso a cerca de 100 partes em peso, com base em 100 partes em peso do agente integral da presente invenção.
[00148] A forma de administração do agente da presente invenção não é particularmente limitada, contanto que os efeitos desejados sejam obtidos. O agente da presente invenção é administrado geralmente pela administração parenteral (por exemplo, injeção intravenosa, injeção intramuscular, ou administração subcutânea), e de preferência pela injeção intravenosa. As formas de dosagem e seus métodos de produção são bem conhecidos dos elementos versados na técnica. O agente da presente invenção pode ser produzido de acordo com um método padrão ao misturar o ingrediente ativo com um veículo farmaceuticamente aceitável, etc.
[00149] Os exemplos da forma de dosagem para a administração parenteral incluem preparados injetáveis (por exemplo, infusão intravenosa em gotas, injeção intravenoasa, injeção intramuscular, injeção subcutânea e injeção endodérmica), e outros ainda. Por exemplo, um preparado de injeção pode ser preparado ao dissolver a célula da presente invenção em água destilada para a injeção, e opcionalmente é adicionado um solubilizante, um agente tampão, um ajustador do pH, um agente de isotonificação, um agente suavizante, um conservante, um estabilizante, etc.
[00150] O veículo usado para formular o agente da presente invenção pode conter excipientes, aglutinantes, desintegrantes, lubrificantes, agentes corantes e agentes flavorizantes que são usados geralmente neste campo técnico, e pode conter opcionalmente estabilizantes, emulsificantes, intesificadores de absorção, tensoativos, ajustadores do pH, antissépticos, antioxidantes, extensores, umidificantes, ativadores de superfície, dispersantes, agentes tampão, conservantes, solubilizantes, agentes suavizantes, e outros ainda.
[00151] A dose do agente da presente invenção pode ser determinada pelos médicos clínicos com base em vários fatores, tais como a rota de administração, o tipo de doença, o grau de sintomas, a idade, o sexo e o peso corpóreo do paciente, a gravidade da doença, descobertas farmacológicas, tais como a cinética e características toxicológicas do fármaco, se um sistema de aplicação de fármaco for usado, e se o agente for administrado como parte de uma combinação com outros fármacos. A dose do agente da presente invenção pode ser ajustada, por exemplo, de cerca de 1 ug/kg (peso corpóreo) a cerca de 10 g/kg (peso corpóreo) por dia. A programação da administração do agente da presente invenção também pode ser determinada ao levar em consideração os mesmos fatores que aqueles para a dose. Por exemplo, o agente da presente invenção pode ser administrado à dose diária acima de uma vez ao dia a uma vez ao mês.
4. Método para selecionar o receptor de células T
[00152] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para selecionar um receptor de células T, o qual inclui as etapas (i) a (ili) (também indicado no presente documento como o "método de seleção da presente invenção"). Isto é descrito a seguir. 4-1. Etapa (i)
[00153] A etapa (i)é uma etapa de classificação de uma população de células com capacidade de reconhecer o antígeno derivado de HTLV-1 das células derivadas de um organismo vivo que contém HTLV-1.
[00154] O organismo vivo que contém HTLV1 não é particularmente limitado, mas é de preferência um organismo que é um paciente atual ou anterior de uma doença associada com HTLV-1, com mais preferência um paciente de ATL ou um paciente de ATL anterior, e com mais preferência um paciente de ATL que continua em relaxamento durante um longo período de tempo (por exemplo, 1 ano ou mais, de preferência mais de 3 anos ou mais, com mais preferência 6 anos ou mais, e ainda com maior preferência 10 anos ou mais), ou um paciente de ATL anterior.
[00155] A população de células com capacidade de reconhecer o antígeno derivado de HTLV-1 pode ser parafraseada como uma população de células que se liga a HTLV-1. Esta população de células inclui células que têm um TCR contra o antígeno derivado de HTLV-1.
[00156] O antígeno derivado de HTLV-1 é de preferência um antígeno de Tax. O antígeno é de preferência um antígeno de Tax ligado a HLA-A (por exemplo, HLA-A*24:02, HLA-A*02:01, HLA- A*11:01, HLA-A*40:02, HLA-A*26:01, HLA-A*40:06, HLA-A*02:07, HLA-A*39:01, ou o gosto, com mais preferência HLA-A*24:02, HLA- A*02:01, HLA-A*11:01, HLA-A*40:02, HLA-A*26:01, ou um outro ainda, ainda com mais preferência HLA-A*24:02, HLA-A*02:01, ou um outro ainda, e com maior preferência ainda HLA-A*24:02 ou um outro ainda).
[00157] A população de células pode ser classificada de acordo com um método conhecido. Por exemplo, o método a seguir é o preferido. Uma população de células (por exemplo, PBMCs) que é derivada do organismo vivo acima mencionada e que pode incluir as células que têm TCR contra o antígeno derivado de HTLV-1 é usada como material de partida. Esta população de células é etiquetada com um complexo que compreende uma etiqueta e um antígeno derivado de HTLV-1 (ou um complexo que compreende o antígeno derivado de HTLV-1 e HLA), e as células são isoladas por FACS ao usar a etiqueta como um indicador. De preferência, o antígeno derivado de HTLV-1 (ou um complexo que compreende o antígeno derivado de HTLV-1 e HLA) é multimerizado (por exemplo, tetramerizado) ao usar uma substância de ligação específica (por exemplo, estreptavidina e biotina) e usado.
[00158] A população de células obtida é sujeitada à etapa (ii). 4-2. Etapa (ii)
[00159] A etapa (ii) é uma etapa de execução da análise de repertório de TOR na população de células para determinar o tipo de TCR de cada célula e o número de células de cada tipo.
[00160] A análise de repertório pode ser executada de acordo com um método conhecido. Por exemplo, a análise pode ser executada ao extrair o RNA de cada célula da população de células obtida na etapa (i) e ao determinar a sequência base do gene de TCR.
[00161] Seos resultados da análise de repertório mostrarem que há múltiplas células que têm o mesmo tipo de TCR (isto é, sequência de aminoácidos), o número de células é contado. Se não houver nenhuma célula que tem o mesmo tipo de TCR (isto é, sequência de aminoácidos) entre as células, a seleção é aí interrompida, e a etapa (i) é executada outra vez ao usar outro organismo vivo que contém HTLV-1.
[00162] A informação obtida é usada na etapa (iii). 4-3. Etapa (iii)
[00163] A etapa (ili)é uma etapa de classificação dos tipos de TOR em ordem descendente do número de células de cada tipo e seleção dos TCRs altamente classificados.
[00164] Os tiposde TCR são classificados em ordem descendente do número de células de cada tipo. Isto é, se houver 8 células com TCR do tipo A, 5 células com TCR do tipo B, 4 células com TCR do tipo C, 4 células com TCR do tipo D, 3 células com TCR do tipo E e 2 células com TCR do tipo F, e assim por diante, então a classificação dos tipos de TCR é, a partir do primeiro lugar, tipo A, tipo B, tipo C, tipo D, tipo E e tipo F.
[00165] Após a classificação, as células de um tipo de TOR mais altamente classificado são selecionadas. O termo "altamente classificado" tal como usado no presente documento não é particularmente limitado, mas refere-se de preferência ao primeiro ao quinto classificados, e com mais preferência ao primeiro ao terceiro classificados.
[00166] O tipodeTCR a ser selecionado não tem que ser o tipo de TCR mais altamente classificado, nem tem que ser selecionado em ordem da classificação mais elevada. Por exemplo, se os tipos de TOR tiverem que ser selecionados do primeiro ao terceiro classificados, os tipos de TCR classificados em segundo e terceiro lugar podem ser selecionados, ou aqueles classificados em primeiro e terceiro lugar podem ser selecionados, ou, é claro, todos os tipos de TCR do primeiro ao terceiro classificados podem ser selecionados.
[00167] Na seleção do TCR pelo método de seleção da presente invenção, o TOR com uma maior afinidade com o antígeno HTLV-1 pode ser obtido com maior probabilidade.
[00168] O tipo selecionado de TOR pode ser produzido de acordo com o método descrito acima na seção "1. Receptor de células T". Além disso, o tipo selecionado de TCR também pode ser usado como célula da presente invenção, agente da presente invenção, etc., de acordo com os métodos descritos acima na seção "2. Célula" e na seção 00000" 3. Agente profilático ou terapêutico para a doença associada com o vírus de leucemia de células T humanas". Exemplos
[00169] A presente invenção é descrita em detalhes a seguir com base nos exemplos. No entanto, a presente invenção não é limitada a esses exemplos. Materiais e Métodos
[00170] Os materiais e os métodos usados nos experimentos dos exemplos de teste descritos a seguir foram preparados e executados na maneira a seguir, a menos que esteja especificado de alguma outra maneira. Material e Método 1: Preparação de Linfócito
[00171] Os linfócitos humanos foram obtidos ao isolar PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) do sangue de um doador saudável ao usar Ficoll-Paque (marca registrada) PLUS (17- 1440-03, GE Healtcare). A coleta e a análise dos espécimes que contêm o sangue periférico humano ou algo do gênero usado nesse estudo e análise foram feitas de acordo com a declaração de Helsinque, com base no protocolo que foi aprovado pelo Research Ethics Committee of Mie University School of Medicine, com o consentimento por escrito dos indivíduos. As amostras coletadas foram armazenadas em um refrigerador anti-roubo ou tanque de nitrogênio líquido que foi cifrado de modo a não permitir a identificação dos indivíduos. A informação pessoal de cada indivíduo foi mantida no anonimato, e precauções e medidas estritas foram tomadas para assegurar essa privacidade pessoal e que os resultados da análise genética não seriam vazados ao mundo exterior. Material e Método 2: Transferência de Genes às Células
[00172] Um vetor retroviral foi usado para a transferência de genes de TCR a linfócitos humanos. Os vetores de expressão de gene de TCR humano foram transfectados com genes para TCRs específicos de Tax ligados a HLA-A*02:01 ou HLA-A“*24:02 obtido ex vivo por meio da classificação de células individuais de células T tetrâmero-positivas e CD8-positivas do sangue periférico do paciente. A estrutura obtida compreende o gene de cadeia a e o gene de cadeia B do TCR incorporado entre as LTRs (repetições de terminais longos) em ambas as extremidades, incluindo intensificadores e promotores.
[00173] Células transgênicas humanas foram preparadas ao estimular PBMCs isoladas do sangue periférico ao usar Ficoll com 5 ug/ml do anticorpo Anti-CD3 (OKT-3, eBioscience) e 25 ug/ml de RetroNectin (marca registrada) por 4 dias. Um fluido de vírus do vetor de retrovírus foi adicionado a 1 ml/poço a múltiplas placas para as células flutuantes, que tinham sido revestidas com 20 ul/ml de RetroNectin (marca registrada) em solução de ACD-A (TERUMO (marca registrada)) a 500 ml/poço (16 horas a 4ºC ou 2 horas a 25ºC), e a pré-carga foi executada por meio de centrifugação (2.000 x g, 2 horas, 32ºC). Subsequentemente, isto foi lavado duas vezes com 1 ml de PBS contendo 1,5% de HSA, em que os linfócitos humanos foram semeados a 3,8 x 10º ou menos/0,95 ml/poço, e as célula eram sedimentadas por meio de centrifugação (1.000 x g, 10 minutos, 32ºC). Após o exame microscópico, as células foram cultivadas por 1 dia em uma incubadora de CO? a 5% a 37ºC na presença de IL-2 em 600 IU/ml. Depois de 24 horas, as células foram diluídas 4/3 vezes e uma segunda transferência de gene foi executada da mesma maneira que a primeira vez ao usar o volume total. As células foram então cultivadas. Depois de 4 horas, as células foram diluídas com 6,8 ml do meio e cultivadas outra vez em CO? a 5% e a 37ºC. Para o experimento, as células foram usadas pelo menos 6 dias após a transferência de gene. GT-T551 (KB503, Takara Bio) ajustado para conter IL-2 a 600 IU/ml, 0,2% de albumina, e 0,6% de plasma derivado de um doador saudável foi preparado e usado como meio. As células não transgênicas foram preparadas através de estimulação com o anticorpo anti-CD3 e RetroNectin (marca registrada) por pelo 4 dias, e então a incubação na presença de IL-2 em 600 IU/ml por 6 dias ou mais, da mesma maneira que para as células transgênicas.
[00174] O experimento para introduzir um TCR específico de antígeno de tumor nas célula mononucleares do sangue periférico humano ao usar um retrovírus foi aprovado pelo Recombinant DNA Experiment Safety Committee of Mie University and the Research Ethics Committee of Mie University Shcool of Medicine. Esses experimentos foram realizados em um laboratório de nível P2 aprovado pela Mie University. Material e Método 3: Citometria de Fluxo e Classificação de Células
[00175] As células manchadas foram analisadas por um Citômetro de Fluxo BD FACS Canto 'Y || (Becton Dickinson). O Classificador de Células BD FACSAria 'M (Becton Dickinson) foi usado para a classificação de células. Material e Método 4: Método de Tingimento com Tetrâmero
[00176] PBMCs estimuladas in vitro foram infectadas com retrovírus, e as células, depois de 8 a 11 dias de cultura em que o gene de TCR desejado foi expresso, foram lavadas duas vezes com FCS-PBS a 2%. O tetrâmero de Tax diluído 50 vezes em FCS-PBS a 2% foi então adicionado às células e uma reação pôde prosseguir no escuro a 37ºC por 15 minutos. As células foram então manchadas com o anticorpo Anti-CD8 humano conjugado com FITC (Becton Dickinson) (4ºC, 15 minutos, com sombra), lavadas duas vezes com FCS-PBS a 2%, e analisadas com um Citômetro de Fluxo BD FACS Canto "Y, Material e Método 5: Ensaio de liberação de “ºC
[00177] As células alvo foram suspensas em FCS a 100% a 1 x 10º células/100 ul, e SC foi adicionado às mesmas. Após o cultivo em uma incubadora de CO, por 1 hora, as células foram lavadas com um meio (FCS a 10% em RPMI1640). As células foram suspensas a 1 x10º/ml em um meio (FCS a 10% em RPMI1640), e semeadas a 1 x 104/100 ul/poço. Células efetoras suspensas em 2 x 10%/100 ul no meio (FCS a 10% em RPMI1640) foram misturadas em uma quantidade de 100 ul com as células alvo, e cultivadas em uma incubadora de CO, por 4 horas. Depois que a reação foi completada, o sobrenadante da mistura de células foi secado durante toda a noite, e a quantidade de SC liberado das células alvo foi medida por um contador de cintilação. Material e Método 6: Amostras de Pacientes Usadas
[00178] PBMCs dos pacientes fornecidas pelo Japanese Red Cross Society Nagasaki Atomic Bomb Hospital foram usadas. Após o início de ATL, os sintomas dos pacientes foram estabilizados por meio de quimioterapia e os pacientes continuaram em relaxamento por um longo período. A tabela a seguir resume a informação sobre as amostras de pacientes. Tabela 1 Amostra nº — nº 1 nº 2 nº 3 nº4 HLA HLA- HLA- HLA- HLA- A*02:01 A*02:01 A*02:01 A*24:02 Material e Método 7: Nomeação dos TCRs Específicos de Tax Adquiridos
[00179] Dez tipos de TCRs foram obtidos dos 4 pacientes acima. Para fins de conveniência, os genes de TCR da amostra nº. 5 foram denominados 5-1, 5-2 e 5-3. Similarmente, os genes de TCR da amostra no. 1 foram denominados 1-1 e 1-2; Os genes de TCR da amostra no. 2 foram denominados 2-1 e 2-2; e os genes de TCR da amostra no. 7 foram denominados 7-1, 7-2, e 7-3. Material e Método 8: Método de PCR em Tempo Real
[00180] Amostragem de Células
[00181] As células foram lavadas com PBS(-) e a seguir tampão de RLT foi adicionado para criar uma suspensão de células. A suspensão de células foi armazenada em um freezer profundo a -80ºC até que a extração do RNA fosse executada. O RNA foi extraído ao usar um kit
Rneasy Mini e um Conjunto DNase livre de Rnse. (2) Reação de Transcrição Reversa (Transcrição Reversa; RT)
[00182] A amostra RT foi preparada ao adicionar transcriptase reversa a cada amostra e ao executar uma reação de RT. Um tubo preparado (ao misturar a amostra com a solução de reação de primer de Oligo dT, RNA modelo, e mistura de dNTP (10 mM) foi ajustada em um alternador térmico, incubada a 65ºC por 10 minutos, e então esfriada em gelo. Uma reação de transcrição reversa foi executada ao adicionar os reagentes 5 X de inibidor de rNase de tampão Primescript, Primescript RTase, e dH20 livre de rNase à solução desnaturada e recozida. (3) Reação de PCR
[00183] A PCR foi executada ao misturar a mistura 10 X de dNTP de tampão de PCR, primer a montante, primer a jusante, água esterilizada, a solução da reação de transcrição reversa de (2) e água estéril. Material e Método 9: Análise de repertório de TOR
[001841] O RNA extraído das células T CD8-positivas isoladas individuais foi convertido em cDNA. Após a amplificação das regiões Va e Vb, a análise da sequência foi executada. O tipo de repertório de TCR possuído pela população de células tetrâmero-positivas foi determinado a partir dos dados obtidos. Material e Método 10: Método de Montagem de Gibson
[00185] O método de montagem de Gibson refere-se a um método de execução de três reações enzimáticas diferentes em um único tampão, por meio do que múltiplos fragmentos de DNA podem ser conectados entre si, independentemente da configuração do tamanho ou do terminal dos fragmentos de DNA. Cada um dos fragmentos de DNA que compreende uma sequência homóloga de 15 bases em uma extremidade é misturado com a mistura mestre de Montagem de
Gibson e incubado por 160 minutos. Exonuclease criou uma saliência 3' de um só cordão para permitir que um cordão se anelasse a outro cordão complementar (o sítio de sobreposição), polimerase preencheu a abertura entre cada fragmento recozido, e ligase do DNA conectou os entalhes uns aos outros para conectar os fragmentos de DNA. Material e Método 11: Vetor Retroviral
[00186] Foi usado o vetor retroviral pMXs-IRES-GFP (Cosmo Bio Inc.). O vetor preparado pelo tratamento com enzima de restrição e os genes Va, VB, Ca, CB de TCR amplificados por PCR foram conectados pelo método Gibson. Material e Método 12: ELISA
[00187] Um kit da eBioscience foi usado. Como tampão de revestimento, 10 X de tampão de revestimento foram preparados por uma diluição 10 vezes com DW. 48 ul do anticorpo primário foram adicionados a 12 ml do tampão de revestimento, e a mistura resultante foi adicionada a uma placa de fundo plano de 96 poços a 100 ul/poço, e colocada em repouso durante toda a noite a 4ºC. A placa foi lavada 5 vezes com 0,05% de PBS-T. Como diluentes do ensaio, 5 X de diluentes de ensaio foram preparados por uma diluição 5 vezes com DW. Os diluentes de ensaio foram adicionados a 200 ul/poço. O bloqueio foi executado à temperatura ambiente por 1 hora. A placa foi lavada 5 vezes com 0,05% de PBS-T. Para preparar as amostras de referência, a mais elevada concentração de Ifn-y foi ajustada em 1.000 pg/ml, e diluída em 7 estágios ao repetir a diluição de 2 vezes. Cada amostra e a amostra de referência foram colocadas na placa. A reação pôde prosseguir à temperatura ambiente por 2 horas. A placa foi lavada com 0,05% de PBS-T 5 vezes. 48 ul do anticorpo secundário foram adicionados a 12 ml dos diluentes de ensaio, e 100 ul da mistura resultante foram adicionados a cada poço. A reação pôde prosseguir à temperatura ambiente por 1 hora. A placa foi lavada com 0,05% de
PBS-T 5 vezes. 48 ul de Estreptavidina-HRP foram adicionados a 12 ml de diluentes de ensaio, e a mistura resultante foi adicionada a 100 ul/poço. A reação pôde prosseguir à temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. Os poços foram lavados com 0,05% de PBS-T 7 vezes. A solução do substrato de TMB foi adicionada a 100 ul/poço. A reação pôde prosseguir à temperatura ambiente no escuro por 15 minutos, e H2SO, a 0,18 M foi adicionado a 50 ul/poço para interromper a reação. A medição foi executada imediatamente a um comprimento de onda de 450 nm ao usar uma leitora de microplaca modelo 680 (Bio-Rad). Materiais e Métodos 13: Isolamento de Células T Tetrâmero-Positivas
[00188] O sangue periférico de cada paciente foi descongelado e então lavado com FCS-PBS a 2% duas vezes. Ao usar um tubo, o tetrâmero HLA-A*02:01/Taxp11-19 (LuFeiPvivy (SEQ ID NO: 101) ou HLA- A*24:02/Taxp301-3090 (SFHSLHLLF) (SEQ ID NO: 102) etiquetado com PE foi adicionado, e uma reação pôde prosseguir no escuro a 37ºC por minutos. O anticorpo CD8 anti-humano etiquetado com FITC foi adicionado então e uma reação pôde prosseguir a 4ºC no escuro por 15 minutos. Após a lavagem com FCS-PBS a 2% duas vezes, as células T tetrâmero-positivas e CD8-positivas foram isoladas com um classificador de Células BD FACS Aria "M (Beckton Dickinson). As células foram suspensas em uma solução de PBS (-) a 1 célula/poço em uma placa de 96 poços. Material e Método 14: Aquisição de sequências de Genes de Cadeia a e de Cadeia B de TCR de Células T Isoladas
[00189] As sequências de genes a e B de TCR de células T isoladas foram obtidas ao usar um método relatado previamente (WO2014017533). As sequências bases foram determinadas pela análise de sequência dos produtos de PCR. O seu repertório de TOR foi analisado ao usar uma ferramenta IMGT/V-Quest
(http://www.imgt.org/). Exemplo de Teste 1: Análise de Repertório de TOR da População de Células T CD8-positivas Específicas de Tax
[00190] Os sangues periféricos de pacientes de ATL (4 casos) que tinham desenvolvido ATL e estavam em relaxamento por um longo período após a quimioterapia foram tingidos com tetrâmeros por meio de citometria de fluxo (Figuras | e 2). Como tetrâmeros, HLA- A*02:01/Taxp11-19 (LiFGIPvVIvy E HLA-A*24:02/Taxp301-309 (sFHsLHLLF) foram preparados e usados. Em todos os quatro casos, a taxa de tetrâmero- positiva nas células T CD8-positivas ficou na faixa de 0,1% a 1%. Em seguida, o gene de TCR foi obtido a partir de células T tetrâmero- positivas e CD8-positivas detectadas por manchas de tetrâmero. À análise de repertório das células T foi executada ao usar células tetrâmero-positivas isoladas de cada paciente. O tipo de TOR de cada célula e o número de células de cada tipo de TCR foram determinados, e os tipos de TCR classificados em ordem descendente do número de células de cada tipo de TCR. Os resultados mostraram que, em cada paciente, as células T tetrâmero-positivas e CD8- positivas tiveram um tipo polarizado de TCR, indicando uma população de células oligoclonal (Figura 3). Os TOCRs altamente classificados em termos do número de célula de cada tipo de TCR foram selecionados. Dois clones de TCR (1-1 e 1-2; e 2-1 e 2-2) foram obtidos da amostra no. 1 e da amostra no. 2 (HLA-A*02:01), respectivamente, e três clones de TCR (5-1, 5-2, e 5-3; e 7-1, 7-2, e 7-3) foram obtidos da amostra no. 5 (HLA-A*02:01) e da amostra no. 7 (HLA-A*24:02), respectivamente (Figura 3).
[00191] As Figuras 4 a 13 mostram as sequências de aminoácidos (terminal N ao terminal C) de cada um dos 10 tipos de TCR obtidos dos 4 casos. Em cada figura, a região constante é incluída por linhas pautadas, e a outra região mostra a região variável. As linhas sublinhadas indicam CDR1, CDR2 e CDR3 em ordem a partir do lado do terminal N, o número de sequências da CDR1 de cadeia B na Figura 4 foi denominado SEQ ID NO: 1. A seguir, a CDR1 de cadeia É, a CDR2 de cadeia B, a CDR3 de cadeia B, a região variável de cadeia B, a região constante de cadeia B, a CDR1 de cadeia a, a CDR2 de cadeia a, a CDR3 de cadeia a, a região variável de cadeia a, e a região constante de cadeia a foram numeradas sequencialmente nessa ordem. Mais especificamente, o número de sequência da sequência de aminoácidos em cada região é tal como segue.
[00192] TCR1-1 (Figura 4): o número de sequência da CDR1 de cadeia É é SEQ ID NO: 1, o número de sequência da CDR2 de cadeia B é SEQ ID NO: 2, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 3, o número de sequência da região variável de cadeia B é SEQ |D NO: 4, o número de sequência da região constante de cadeia É é SEQ ID NO: 5, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 6, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 7, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 8, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 9 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 10.
[00193] TCR1-2 (Figura 5): o número de sequência da SEQ ID NO: da CDR1 de cadeia B é SEQ ID NO: 11, o número de sequência da CDR?2 de cadeia B é SEQ ID NO: 12, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 13, o número de sequência da região variável de cadeia É é SEQ ID NO: 14, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 15, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 16, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 17, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 18, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 19 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 20.
[00194] TCR2-1 (Figura 6): o número de sequência da CDR1 de cadeia É é SEQ ID NO: 21, o número de sequência da CDR2 de cadeia É é SEQ ID NO: 22, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 23, o número de sequência da região variável de cadeia É é SEQ ID NO: 24, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 25, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 26, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 27, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 28, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 29 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 30.
[00195] TCR2-2 (Figura 7): o número de sequência da CDR1 de cadeia B é SEQ ID NO: 31, o número de sequência da CDR2 de cadeia À é SEQ ID NO: 32, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 33, o número de sequência da região variável de cadeia B é SEQ ID NO: 34, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 35, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 36, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 37, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 38, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 39 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 40.
[00196] TCR5-1 (Figura 8): o número de sequência da CDR1 de cadeia B é SEQ ID NO: 41, o número de sequência da CDR2 de cadeia É é SEQ ID NO: 42, o número de sequência da CDR3 de cadeia B é SEQ ID NO: 43, o número de sequência da região variável de cadeia É é SEQ ID NO: 44, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 45, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 46, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 47, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 48, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 49 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 50.
[00197] TCR5-2 (Figura 9): o número de sequência da CDR1 de cadeia B é SEQ ID NO: 51, o número de sequência da CDR2 de cadeia B é SEQ ID NO: 52, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 53, o número de sequência da região variável de cadeia É é SEQ ID NO: 54, o número de sequência da região constante de cadeia É é SEQ ID NO: 55, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 56, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 57, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 58, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 59 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 60.
[00198] TCR5-3 (Figura 10): o número de sequência da CDR1 de cadeia É é SEQ ID NO: 61, o número de sequência da CDR2 de cadeia É é SEQ ID NO: 62, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 63, o número de sequência da região variável de cadeia É é SEQ ID NO: 64, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 65, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 66, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 67, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 68, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 69 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 70.
[00199] TCR7-1 (Figura 11): o número de sequência da CDR1 de cadeia B é SEQ ID NO: 71, o número de sequência da CDR2 de cadeia B é SEQ ID NO: 72, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 73, o número de sequência da região variável de cadeia É é SEQ ID NO: 74, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 75, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 76, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 77, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 78, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 79 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 80.
[00200] TCR7-2 (Figura 12): o número de sequência da CDR1 de cadeia B é SEQ ID NO: 81, o número de sequência da CDR2 de cadeia B é SEQ ID NO: 82, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 83, o número de sequência da região variável de cadeia BB é SEQ ID NO: 84, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 85, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 86, o número de sequência da CDR2 de cadeia a é SEQ ID NO: 87, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 88, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 89 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 90.
[00201] TCR7-3 (Figura 13): o número de sequência da CDR1 de cadeia B é SEQ ID NO: 91, o número de sequência da CDR2 de cadeia B é SEQ ID NO: 92, o número de sequência da CDR3 de cadeia É é SEQ ID NO: 93, o número de sequência da região variável de cadeia É é SEQ ID NO: 94, o número de sequência da região constante de cadeia B é SEQ ID NO: 95, o número de sequência da CDR1 de cadeia a é SEQ ID NO: 96. e o número de sequência da CDR?2 de cadeia a são SEQ ID NO: 97, o número de sequência da CDR3 de cadeia a é SEQ ID NO: 98, o número de sequência da região variável de cadeia a é SEQ ID NO: 99 e o número de sequência da região constante de cadeia a é SEQ ID NO: 100.
Exemplo de Teste 2: Preparação de Células Transgênicas de TCR e
Confirmação da Resposta Específica de Antígeno
[00202] Para preparar as células transgênicas humanas, foram usadas PBMCs isoladas do sangue ao usar Ficoll. As células foram estimuladas com o anticorpo anti-CD3 e retronectina, e a seguir transfectadas com o gene de TCR específico de Tax 4 dias após a estimulação, e analisadas por meio de citometria de fluxo 8 a 11 dias após a estimulação.
[00203] Uma vez que o vetor retroviral usado neste teste coexpressa GFP, a expressão de GFP foi usada como um indicador para examinar a eficiência da transfecção. As Figuras 14 e 15 mostram os resultados. Quando as células foram transfectadas com o gene de TCR específico de Tax ligado a HLA-A2Z, as células GFP- positivas e CD8-positivas foram detectadas em 20% ou mais das células transfectadas, e as células GFP-positivas e CD4-positivas foram detectadas em 15% ou mais das células transfectadas. Quando as células foram transfectadas com o gene de TCR específico de Tax ligado a HLA-A2A4, as células GFP-positivas e CD8-positivas foram detectadas em 25% ou mais das células transfectadas, e as célula GFP-positivas e CD4-positivas foram detectadas em 15% ou mais das células transfectadas.
[00204] Em seguida, foi examinado se o gene de TCR introduzido nas células foi ou não, ao usar manchas de tetrâmero. As Figuras 14 e mostram os resultados. As células T TCR-positivas e CD8-positivas ligadas a HLA-A2 foram detectadas em cerca de 10% ou mais das células transfectadas, e as células TCR-positivas e CD4-positivas foram detectadas em cerca de 5% ou mais das células transfectadas. Similarmente, as células TCR-positivas e CD8-positivas restringidas por HLA-A24 foram detectadas em cerca de 15% das células transfectadas, e as célula TCR-positivas e CD4-positivas foram detectadas em cerca de 1% das células transfectadas.
[00205] Estes resultados indicam que o gene de TCR alvo pode ser introduzido e expresso ao usar um vetor retroviral.
Exemplo de Teste 3: Análise Funcional de Células T Transfectadas Com Gene de TCR Específico de Tax
[00206] Para preparar uma população de células com uma taxa de tetrâmero-positivas mais elevada e para executar a análise funcional de células transgênicas de T específicas de Tax, as células tetrâmero- positivas foram classificadas ao usar um classificador de Células BD FACSAria 'M (Becton Dickinson), e a cultura de expansão foi executada. Depois de 8 dias da cultura, o tingimento com tetrâmero foi executado. Após o isolamento da cultura e a expansão das células, uma população de células de células T CD8-positivas específicas de Tax com uma taxa de tetrâmero-positivas elevada e uma taxa elevada de expressão de GFP foi obtida. As Figuras 16 a 19 mostram alguns dos resultados.
[00207] “Depois de 9 a 11 dias da cultura, a análise funcional foi executada para determinar a afinidade de TOR com o peptídeo de Tax. LCLs foram usados como células alvo, e os peptídeos diluídos em série foram adicionados. Os LCLs foram cocultivados com as células transgênicas descritas acima por 18 horas e examinados então ao usar de Ifn-y de ELISA (Ensaio de Imunoabsorção por Ligação de Enzima). A Tabela 2 mostra os resultados da medição da concentração de Ifn-y. Na Tabela 2, a fileira de cima indica o número de clones de TCR, e a coluna mais à esquerda indica a concentração de peptídeo.
Tabela 2 11 12 21 2-2 ES 5-2 5-3 72 73 31343 20572 24783 24804 31384 20224 23112 32544 32638 uM 1 30725 24794 24521 24623 30733 20076 23042 32043 32489 uM
1H 12 21 2-2 51 5-2 5-3 72 73 100 30667 24494 23803 24542 30872 16011 22519 3216 32452 uM 23062 1852 10701 18993 27923 728 13754 32395 32381 uM 1 6208 8521 686 8568 8248 2886 5755 31434 31486 uM 100 252 5194 3757 5318 34 1559 — 3944 14798 15527 uM O 2976 3143 2486 3524 378 1644 — 240 2336 1476 uM
[00208] A Tabela 2 mostra que cada TOCR é um TCR de alta afinidade com capacidade de reconhecer uma concentração muito baixa de peptídeos.
[00209] Em seguida, depois de 9 a 11 dias da cultura, um ensaio de citotoxicidade ao usar “ºC foi realizado para determinar se a citotoxicidade específica foi exibida. ºC foi adicionado às células alvo e células efetoras também foram adicionadas. Depois que a mistura resultante foi cultivada por 4 horas, a quantidade de “C no sobrenadante foi medida ao usar um contador de cintilação. ILTH37 (linhagem de células HTLV-1-positivas, HLA-A0O201-positivas) e ILTHHod (linhagem de células HTLV-1-positivas, HLA-A2402-positivas) foram usadas como células alvo, e as células transgênicas descritas acima foram usadas como células efetoras. A Figura 20 mostra os resultados.
[00210] Tal como mostrado na Figura 20, foi verificado que o TOR ligado a HLA-A2 e o TCR ligado a HLA-A24 têm capacidade de reconhecer e de ferir células HTLV-1-positivas.

Claims (15)

UT REIVINDICAÇÕES
1. Receptor de células T, caracterizado pelo fato de que tem qualquer uma das características (A) a (J) a seguir: (A) compreende uma cadeia À que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 3 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8; (B) compreende uma cadeia À que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 13 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 18; (C) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 23 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 28; (D) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 33 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 38; (E) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 43 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 48; (F) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 53 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 58; (G) compreende uma cadeia À que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 63 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 68; (h) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 73 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 78; (1) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 83 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 88; e (J) compreende uma cadeia B que compreende a CDR3 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 93 e uma cadeia a que compreende a CDR3 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 98.
2. Receptor de células T de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que na característica (A), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 1 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 2, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 6 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 7;
na característica (B), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 1 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 16 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 17;
na característica (C), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 21 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 22, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 26 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 27;
na característica (D), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 31 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 32, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 36 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37;
na característica (E), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 41 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 42, e à cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 46 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 47;
na característica (F), a cadeia É compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 51 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 52, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 56 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 57;
na característica (G), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 61 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 62, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 66 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 67;
na característica (H), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 71 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 72, e à cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 76 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 77;
na característica (|), a cadeia À compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 81 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 82, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 868 e a CDR2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 87; e na característica (J), a cadeia B compreende a CDR1 de cadeia B que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 91 e a CDR2 de cadeia BB que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 92, e a cadeia a compreende a CDR1 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 96 e a CDR?2 de cadeia a que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 97.
3. Receptor de células T de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que reconhece o antígeno de Tax.
4. Receptor de células T de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 3, caracterizado pelo fato de que tem a característica (1) ou (J).
5. Receptor de células T de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que reconhece o antígeno de Tax ligado a HLA-A*24:02.
6. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende um ou mais polinucleotídeos que codificam o receptor de células T como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5.
7. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais polinucleotídeos como definido na reivindicação 6.
8. Célula de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o receptor de células T como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 é expresso em uma membrana da célula.
9. Célula de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de que a célula é um linfócito.
10. Célula de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 9, caracterizada pelo fato de que a célula é uma célula CD8- positiva.
11. Célula de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 10, caracterizada pelo fato de que a célula é uma célula derivada de um organismo vivo que contém um vírus de leucemia de células T humanas.
12. Agente profilático ou terapêutico para uma doença associada com o vírus de leucemia de células T humanas, caracterizado pelo fato de que compreende a célula como definida em qualquer uma das reivindicações 7 a 11.
13. Agente terapêutico de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a doença associada com o vírus de leucemia de células T humanas é a leucemia de células T adultas.
14. Método para selecionar um receptor de células T, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de (i) classificar uma população de células com capacidade de reconhecer o antígeno derivado do vírus de leucemia de células T humanas de células derivadas de um organismo vivo que contém o vírus de leucemia de células T humanas, (ii) sujeitar a população de células à análise de repertório de receptor de células T para determinar o tipo de receptor de células T de cada célula e o número de células de cada tipo de receptor de células T, e (iii) classificar os tipos de receptor de células T em ordem descendente do número de células de cada tipo do receptor de células
7I7 T, e selecionar pelo menos um receptor de células T altamente classificado.
15. Método de seleção de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que, na etapa (ili), pelo menos um receptor de células T é selecionado de um grupo que consiste do primeiro ao quinto receptores de células T classificados.
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