BR112020005777A2 - fertilizante foliar e uso do mesmo - Google Patents
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Abstract
A presente invenção fornece um fertilizante foliar que inclui um extrato de microrganismos metilotróficos obtido a partir de um primeiro processo inicial de fermentação de microrganismos metilotróficos vivos utilizando metanol como única fonte de carbono ou energia, e um segundo processo que inclui as etapas de lise celular por métodos físicos, químicos ou enzimáticos, separação das partes solúveis das insolúveis por centrifugação ou filtração tangencial e, opcionalmente, concentração por filtração ou atomização.
Description
[0001] A presente invenção se refere a um fertilizante foliar.
[0002] Mais especificamente, a invenção fornece um fertilizante foliar de aplicação na parte aérea das plantas, o qual inclui um extrato de microrganismos metilotróficos. O fertilizante foliar da invenção potencializa a capacidade de fixação de nitrogênio pela planta.
[0003] Também, o fertilizante foliar da invenção pode ser empregado como fertilizante único ou em combinação com qualquer outro fertilizante foliar químico ou orgânico, evitando a necessidade de fertilizar diversas vezes, já que a mistura com outros fertilizantes foliares não influencia o efeito de aumento da atividade de fixação de nitrogênio da aplicação do fertilizante da invenção. Da mesma maneira, o fertiizante da invenção não perde sua atividade potenciadora da fixação de nitrogênio ao ser aplicado em combinação com outros produtos agrícolas, por exemplo, outros fertilizantes, pesticidas ou fungicidas.
[0004] O crescimento de todas as plantas é determinado de forma direta ou indireta pela disponibilidade de nutrientes minerais, em especial do nitrogênio. Uma vez atendidas as necessidades de água, o fator limitante mais importante é o nitrogênio. Uma planta com deficiência de nitrogênio sofrerá clorose, manifestando uma coloração amarelada dos caules e folhas, falta de desenvolvimento e fraqueza. Ao contrário, quando a planta tem nitrogênio suficiente, suas folhas e caules crescem rapidamente. Na agricultura, o nitrogênio é o principal nutriente para o crescimento das plantas e, assim, em solos carentes de nitrogênio, os rendimentos dos cultivos são baixos.
[0005] Por outro lado, o nitrogênio é um elemento essencial para o crescimento de todos os microrganismos, estando presente na atmosfera em forma de N2 em uma proporção de aproximadamente 80%. Porém, devido à natureza da ligação entre os dois átomos de nitrogênio, sua reatividade é praticamente nula, fazendo com que não seja assimilável pela maioria dos organismos vivos.
[0006] Existe um grupo de microrganismos capazes de aproveitar esse nitrogênio através do processo conhecido como fixação biológica do nitrogênio, e que, em termos gerais, consiste na conversão do nitrogênio atmosférico em formas metabolizáveis que podem ser assimiladas pelos seres vivos, em particular nas formas de amônia, nitritos e nitratos.
[0007] As necessidades mundiais de nitrogênio na agricultura crescem entre 150 e 200 milhões de toneladas ao ano (“Measuring plant-associated nitrogen fixation in agricultural systems”, Australian Center for International Agricultural research, 2008, Murray Unkovich, et al.). Dessas, 120 milhões de toneladas ao ano são atualmente aplicadas como fertilizante na agricultura; o restante, entre 50 e 70 milhões de toneladas/ano é fornecido pela fixação de nitrogênio dos microrganismos associados às plantas (“Global nitrogen and phosphorus fertilizer use for agriculture production in the past half century: shifted hot spots and nutrient imbalance”, Earth system Science Data, 2017, Chaoqun Lu, et al.).
Até alguns anos atrás, pensava-se que esses microrganismos estavam concentrados principalmente nas raízes das plantas, onde interagem de diferentes maneiras: a. Simbiose estrita: por exemplo, as bactérias do gênero Rhizobium formam nódulos nas raízes das plantas leguminosas.
b. Endófitos não nodulares: penetram nas raízes da planta e vivem nos espaços intercelulares desta, sendo aí onde realizam sua relação simbiótica com a planta fixando o nitrogênio. Pertencem a esse grupo as bactérias dos gêneros Bacillus, Pseudomonas, Novosphingobium ou Ochrobactrum, entre outras.
c. Epífitas: Essas bactérias colonizam a superfície das raízes e é nesse local que realizam a fixação do nitrogênio; pertencem a esse grupo as bactérias dos gêneros Azotobacter ou Azospirillum.
[0008] J. Prella e colaboradores (“Legumes regulate Rhizobium bacteroid development and persistence by the supply of branched-chain amino acids”, J.
Prella, J. P. Whiteb, A. Bourdesa, S. Bunnewella, R. J. Bongaertsc, and P.S.
Poolea, editado por Sharon R. Long, Stanford University, Stanford, CA, 2009) relatam que, uma vez no interior da planta, as bactérias endofíticas se tornam auxotróficas para os aminoácidos ramificados leucina, isoleucina e valina. Acredita-se que essa é a forma que a planta tem de controlar a relação entre ela e os ditos microrganismos. E. M. Lodwig e colaboradores também relatam que, para que esses microrganismos possam fixar nitrogênio, é muito importante que a planta forneça a eles quantidades razoáveis dos dois aminoácidos implicados diretamente no ciclo de fixação de amônio, a saber, ácido glutâmico e asparagina (“Amino-acid cycling drives nitrogen fixation in the legume—Rhizobium simbiosis”, E.M. Lodwig, et al., Nature, 2003).
[0009] Também é bem conhecida a necessidade de diferentes microelementos e como eles influenciam a capacidade desses microrganismos simbióticos de fixar nitrogênio. Por exemplo, sabe-se que o molibdênio e o ferro fazem parte da nitrogenase, enzima que catalisa a redução de N2. Sabe-se também que o boro é necessário para a nodulação das bactérias do gênero Rhizobium e que o zinco e o manganês fazem parte da superóxido dismutase, uma enzima que protege contra o estresse oxidativo. Por outro lado, o cobre faz parte de um citocromo C especial necessário para respiração sob condições de baixo oxigênio na qual ocorre a fixação de nitrogênio. Por fim, sabe-se que o níquel é cofator da hidrogenase, enzima que processa o hidrogênio gerado na fixação de nitrogênio e o cobalto faz parte da cobalamina, cofator essencial para algumas enzimas implicadas indiretamente na fixação de nitrogênio.
[0010] Atualmente há evidências de que esses microrganismos metilotróficos não apenas habitam a parte da raiz das plantas, mas são capazes de se mover através da planta, colonizar caules e folhas e ali desempenhar as funções de fixação de nitrogênio (“Ascending Migration of Endophytic Rhizobia, from Roots to Leaves, inside Rice Plants and Assessment of Benefits to Rice Growth Physiology”, Applied and Environmental Microbiology, Nov. 2005, Feng Chi, et al.).
[0011] Certos estudos confirmam que a fixação de nitrogênio realizada nas partes aéreas da planta pode representar até 60 % da fixação total, sendo, portanto, o lugar majoritário de fixação (“Activation of Nitrogen-Fixing Endophytes is Associated with the Tuber Growth of Sweet Potato”, Koyo Yonebayasthi, et al., Mass Spectrom (Tokyo). 2014; 3(1): A0032).
[0012] Por outro lado, a partir de Frank Keppler e colaboradores (“Methane emissions from terrestrial plants under aerobic conditions”, Frank Keppler et al., Nature 439, 187-191, 2006) sabe-se que as plantas emitem na atmosfera quantidades não desprezíveis de metano e metanol pelas folhas e, também, sabe-se desde os anos 80 que existem bactérias nas folhas das plantas com a capacidade de degradar esses compostos (Methanol-utilizing bacteria associated with green plants, Dev. Ind. Microbiol. 1982; 23: 483—493. Corpe W.A,, Basile D.V.9).
[0013] Também está começando a ser observado que, sob determinadas condições, o consumo de metanol ou metano está associado a uma maior fixação de nitrogênio (“Methanotrophy induces nitrogen fixation during peatland development”, Tuula Larmolaa, et al., editado por Sarah Hobbie, University of Minnesota, Saint Paul, MN, 2013), inclusive foram descritos microrganismos específicos, como o gênero Methylobacterium, que habitam a filosfera e consomem metano e metanol que fixam diretamente nitrogênio atmosférico (“Leaf-residing Methylobacterium species fix nitrogen and promote biomass and seed production in Jatropha curcas”, Munusamy Madhaiyan et al., Biotechnology for Biofuels, 2015 8:222).
[0014] Também, o efeito da aplicação foliar de microrganismos metilotróficos é bem conhecido, existindo uma vasta bibliografia que descreve o aumento da produção em diferentes cultivos obtido com a aplicação de diferentes doses de microrganismos metilotróficos de forma foliar ou sobre a semente. A este respeito, vide, por exemplo, os documentos de patente US 6174837 B1, US 5512069, EP 1173543 A ou os pedidos de patente internacionais WO 2001034777 A1, WO 2013141815 A1.
[0015] A principal desvantagem do uso de microrganismos vivos como fertilizante é a dificuldade de coaplicação com outros fertilizantes devido à sensibilidade dos microrganismos aos diferentes produtos químicos utilizados como fertilizantes, como acontece com os fungicidas ou pesticidas. Assim, o agricultor se vê obrigado a realizar uma fertilização independente adicional se quiser aplicar os microrganismos fertilizantes para que esses não sejam afetados pelos outros componentes do fertilizante ou pesticida.
[0016] O objetivo da presente invenção é solucionar essa desvantagem dos fertilizantes que incluem microrganismos vivos, provendo um fertilizante foliar que inclui um extrato de microrganismos metilotróficos, onde os microrganismos metilotróficos vivos são previamente submetidos a um processo de fermentação utilizando metanol como única fonte de carbono ou energia e, depois, são submetidos a um processo que inclui as etapas de lise celular por métodos físicos, químicos ou enzimáticos, separação das partes solúveis das insolúveis por centrifugação ou filtração tangencial e, opcionalmente, concentração por filtração ou atomização.
[0017] Na presente invenção, o conceito de “extrato de microrganismos metilotróficos” significa o permeado obtido após o processo de fermentação e subsequente lise celular, separação e concentração, conforme indicado anteriormente. Da mesma maneira, “fermentação” significa qualquer tipo de multiplicação do microrganismo sob condições controladas para obtenção de um aumento de biomassa do próprio microrganismo.
[0018] No contexto da invenção, o termo “fertilizante foliar” se refere a qualquer composição orgânica ou inorgânica, natural ou sintética, que forneça às plantas um ou vários dos elementos nutritivos indispensáveis para seu desenvolvimento vegetativo = normal, geralmente macroelementos primários (N, P, K), macroelementos secundários (Ca, Mg, S) bem como microelementos (B, Cl, CO, Cu, Fe, Mn, Mo e Zn). Dessa maneira, o termo “fertiizante” abrange, em particular, fertilizantes minerais simples (contidos em apenas um dos seguintes macroelementos: nitrogênio, fósforo ou potássio) e complexos (contidos em mais de um dos seguintes macroelementos: nitrogênio, fósforo ou potássio), fertiizantes orgânicos, organominerais, etc., tais como, fertiizantes P, fertilizantes K, fertilizantes N, fertilizantes NP, fertilizantes PK, fertilizantes NK ou fertilizantes NPK, e cuja aplicação seja foliar, ou seja, sobre a parte aérea das plantas, seja em dissolução se for um fertilizante sólido ou diretamente ou em diluição se for um fertilizante líquido.
[0019] Esse extrato de microrganismos metilotróficos é capaz de aumentar a atividade da nitrogenase dos microrganismos das folhas, evitando que sua aplicação seja afetada pela coaplicação com outros fertilizantes, fungicidas ou pesticidas ou combinações dos mesmos.
[0020] Assim, a invenção tem como objetivo um fertilizante foliar que inclui um extrato de microrganismos metilotróficos obtido a partir de um primeiro processo inicial de fermentação de microrganismos metilotróficos utilizando metanol como única fonte de carbono ou energia, e um segundo processo que inclui as etapas de lise celular por métodos físicos, químicos ou enzimáticos, separação das partes solúveis das insolúveis por centrifugação ou filtração tangencial e, opcionalmente, concentração por filtração ou atomização.
[0021] Entende-se que os microrganismos metilotróficos da presente invenção são bactérias ou leveduras metilotróficas, tais como bactérias Methylobacterium, Methylobacillus, Methylophilus, Methylovorus, Methylomonas, Sphingomonas, Curtobacterium, Pseudomonas, Bacillus, Enterobacter ou leveduras, tais como Pichia pastoris.
[0022] Em uma modalidade preferencial, os microrganismos metilotróficos são selecionados entre Methylobacterium e Bacillus, em particular entre Methylobacterium radiotoleran e Bacillus methylotrophicus.
[0023] Em relação ao processo inicial de fermentação de microrganismos metilotróficos utilizando metanol como única fonte de carbono ou energia, as condições de fermentação dependem essencialmente de cada organismo selecionado, embora, em linhas gerais, poderiam ser aplicadas, por exemplo para Methylobacterium, as seguintes condições: meio de cultura Choi (Choi J, Kim J, Daniel M, Lebeault J (1989) “Optimization of growth medium and poly-B- hydroxybutyric acid production from methanol in Methylobacterium organophilum”, Kor J Appl Microbiol Bioeng 17: 392-396.) com uma concentração de metanol de 1%, concentração que se mantém constante mediante um sistema de sonda-bomba; pH 6,75, temperatura 30ºC, 80 horas; agitação a 800 rpm sob corrente contínua de ar. Para esse microrganismo específico e essas condições, obtém-se entre 80 e 115 g de biomassa por litro de caldo de fermentação.
[0024] Quanto ao método de lise celular por métodos físicos, químicos ou enzimáticos, é preferível o uso de métodos químicos, em particular a extração química mediante detergentes não iônicos, tais como IGEPALO ou TWEEN 206, aplicados a 0,1%, seguida de uma sonicação a 4 kW a um fluxo entre 100 e 800 L/h.
[0025] A separação das partes solúveis das insolúveis ocorre por centrifugação ou filtração tangencial, preferivelmente por filtração tangencial utilizando filtros cerâmicos com um tamanho de poro entre 400 e 750 nm.
[0026] O extrato de microrganismos metilotróficos assim obtido é rico em antioxidantes essenciais para o uso do metanol, como ergotionina, glutationa e micotióis, bem como em cofatores enzimáticos específicos imprescindíveis para o processamento enzimático do metanol, como pirroloquinolinquinonas (PQQ) e tetrahidrometanopterinas (H4MPT).
[0027] É também objeto da invenção o uso do fertilizante foliar descrito, o que inclui um extrato de microrganismos metilotróficos obtido a partir de um primeiro processo inicial de fermentação de microrganismos metilotróficos utilizando metanol como única fonte de carbono ou energia, e um segundo processo que inclui as etapas de lise celular por métodos físicos, químicos ou enzimáticos, separação das partes solúveis das insolúveis por centrifugação ou filtração tangencial e, opcionalmente, concentração por filtração ou atomização, sobre as partes aéreas de uma planta, em separado ou em combinação com outros fertilizantes, pesticidas ou fungicidas.
[0028] Em uma modalidade, o fertilizante da invenção é usado com cipermetrina a 25% como pesticida na razão de 100 cm?/Ha e/ou com tebuconazol a 43% como fungicida na razão de 400 cmº?/Ha.
[0029] Embora a quantidade a ser aplicada do fertilizante foliar da invenção dependa essencialmente do tipo de cultivo ou planta na qual é aplicada, essa é preferivelmente aplicada de modo a ter um conteúdo de extrato de microrganismos, conforme descrito acima, de 500 a 1.000 gramas por hectare.
[0030] Em uma modalidade, a aplicação do fertilizante da invenção é realizada associada a outro fertilizante que inclui aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em isoleucina, leucina, valina, ácido glutâmico ou asparagina, com o objetivo de favorecer os metilotróficos próprios das folhas das plantas e fornecer aminoácidos que estão diretamente implicados no ciclo do nitrogênio.
[0031] Em outra modalidade, a aplicação do fertilizante da invenção é realizada juntamente com outro fertilizante que inclui microelementos selecionados a partir do grupo que consiste em boro, níquel, zinco, manganês, molibdênio, cobalto, ferro e cobre, melhorando a capacidade dos microrganismos metilotróficos da própria planta de fixar nitrogênio.
[0032] Em outra modalidade, a aplicação do fertilizante da invenção é realizada juntamente com um antioxidante selecionado a partir do grupo que consiste em ácido ascórbico ou ácido cafeico. A aplicação do fertilizante da invenção com antioxidantes permite favorecer o processo de fixação de nitrogênio, que é muito sensível ao oxigênio, bem como proteger os próprios microrganismos das folhas, já que, ao estarem expostos diretamente à luz solar, podem sofrer estresse oxidativo. Em uma modalidade preferencial, a proporção de antioxidante a ser empregada em relação ao fertilizante é inferior a 2% em peso.
[0033] Da mesma maneira, em outra modalidade, a aplicação do fertilizante da invenção é realizada com um agente umectante com a finalidade de melhorar a molhabilidade, facilitar a penetração do fertilizante da invenção nos tecidos vegetais tratados e conferir maior resistência à lavagem pelas chuvas. Preferivelmente, a proporção de agente umectante a ser empregada em relação ao fertilizante varia entre 0,5 e 20% em peso. Em uma modalidade preferencial, glicerina é utilizada como agente umectante.
Exemplos
[0034] A invenção será agora explicada com base em exemplos de modalidades ilustrativos e não limitativos da mesma.
Exemplo 1
[0035] São obtidos diferentes produtos fertilizantes que incluem Methylobacterium radiotoleran, como indicado na Tabela 1 abaixo (a, b, c, d, e, f, g, h, i, j). Água é utilizada como controle. Esses produtos são aplicados de forma foliar sobre um cultivo de trigo. Após 7 dias, a massa foliar de cada um dos cultivos é coletada e a atividade da nitrogenase é medida por testes de redução de acetileno.
[0036] Foi demonstrado que a enzima nitrogenase não é muito específica, ou seja, não apenas é capaz de reduzir o N2 a NHa, mas também reduz de maneira não específica outros compostos químicos, tais como 2H+ a H2; N20 a Na; HO e CN a CHs e NH3, e finalmente também é capaz de reduzir o CoH2 a CoHa (Burris, 1991).
[0037] Para os testes de redução de acetileno, as folhas da planta são coletadas na última hora do dia para que estejam cheias de fotossintatos e a velocidade é medida em umol/hora, em que x gramas de folha são capazes de reduzir o CaH2 a CoHa como medida indireta da atividade da enzima nitrogenase. Por fim, a medição da velocidade de reação se refere a gramas de folhas em matéria seca. O teste deve ser realizado dentro dos 60 minutos após a coleta para evitar a subavaliação da atividade. a) Tratamento de controle (água). b) Methylobacterium radiotoleran (vivo) aplicado a 110º? UFC/Ha de forma foliar.
c) Extrato de Methylobacterium radiotoleran produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha de forma foliar.
d) Extrato de Methylobacterium radiotoleran produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha de forma foliar.
e) Methylobacterium radiotoleran aplicado a 1-101? UFC/Ha + fungicida (Tebuconazol a 43%) 400 cm?/Ha de forma foliar.
f) Extrato de Methylobacterium radiotoleran produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + fungicida (Tebuconazol a 43%) 400 cm?/Ha de forma foliar.
g) Extrato de Methylobacterium radiotoleran produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + fungicida (Tebuconazol a 43%) 400 cm?/Ha de forma foliar.
h) Methylobacterium radiotoleran (vivo) aplicado a 1-10*5 UFC/Ha + pesticida (Cipermetrina a 25%) 100 cm?/Ha de forma foliar.
i) Extrato de Methylobacterium radiotoleran produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + pesticida (Cipermetrina a 25%) 100 cm?/Ha de forma foliar.
j) Extrato de Methylobacterium radiotoleran produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + pesticida (Cipermetrina a 25%) 100 cm?/Ha de forma foliar.
Tabela 1 [Br e— ir radiotoleran TE o e radiotoleran + Tebuconazol radiotoleran + Cipermetrina
[0038] Como se observa na tabela acima, fica evidente que a mistura de Methylobacterium radiotoleran vivo com os diferentes compostos fungicidas e pesticidas elimina o efeito positivo da aplicação do mesmo. Porém, esse efeito não é gerado com a aplicação do extrato de Methylobacterium radiotoleran. Os resultados também demonstram que a aplicação de um extrato de Methylobacterium radiotoleran, produzido utilizando uma fonte de carbono que não o metanol, não tem o mesmo efeito que o extrato proveniente de um cultivo do mesmo microrganismo produzido tendo o metanol como fonte de carbono.
Exemplo 2
[0039] São obtidos diferentes produtos fertilizantes que incluem Bacillus methylotrophicus, como indicado na Tabela 2 abaixo (a, b, c, dj e, f g, h, i, j). Água é utilizada como controle. Esses produtos são aplicados de forma foliar sobre um cultivo de trigo. Após 7 dias, a massa foliar de cada um dos cultivos é coletada e a atividade da nitrogenase é medida por testes de redução de acetileno. a) Tratamento de controle (água).
b) Bacillus methylotrophicus (vivo) aplicado a 110º? UFC/Ha de forma foliar. c) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha de forma foliar.
d) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha de forma foliar.
e) Bacillus methylotrophicus (vivo) aplicado a 1:10"? UFC/Ha + ureia (fertilizante) a 31 kg/Ha de forma foliar.
f) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + ureia (fertilizante) a 31 kg/Ha de forma foliar.
g) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + ureia (fertilizante) a 31 kg/Ha de forma foliar.
h) Bacillus methylotrophicus (vivo) aplicado a 110º? UFC/Ha + ferro quelado por (orto,orto)-EDDHA (fertilizante) a 3,5 % na dose de 165 gramas/cm e diluindo o produto em água até 0,1%.
i) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + ferro quelado por (orto,orto)- EDDHA (fertilizante) a 3,5% na dose de 165 gramas/cm e diluindo o produto em água até 0,1%.
j) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + ferro quelado por (orto,orto)- EDDHA (fertilizante) a 3,5% na dose de 165 gramas/cm e diluindo o produto em água até 0,1%.
Tabela 2 [come neçano [E
EEE methylotrophicus TERES a ns | ee | methylotrophicus + ureia methylotrophicus + Fe-=EDDHA
[0040] Como se observa na tabela acima, fica evidente que a mistura de Bacillus methylotrophicus vivo com os diferentes fertilizantes reduz de forma significativa o efeito positivo da aplicação do mesmo. Porém, esse efeito não é gerado com a aplicação do extrato de Bacillus methylotrophicus. Os resultados também demonstram que a aplicação de um extrato de Bacillus methylotrophicus, produzido utilizando uma fonte de carbono que não o metanol, não tem o mesmo efeito que o extrato proveniente de um cultivo de Bacillus methylotrophicus produzido tendo o metanol como fonte de carbono.
Exemplo 3
[0041] São obtidos diferentes produtos fertilizantes que incluem Bacillus methylotrophicus, como indicado na Tabela 3 abaixo (a, b, c, dj e, f 9, h, i, j).
Água é utilizada como controle. Esses produtos são aplicados de forma foliar sobre um cultivo de tomate. Após 7 dias, a massa foliar de cada um dos cultivos é coletada e a atividade da nitrogenase é medida por testes de redução de acetileno.
a) Tratamento de controle (água).
b) Bacillus methylotrophicus aplicado a 1:10*5 UFC/Ha de forma foliar.
c) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha de forma foliar.
d) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha de forma foliar.
e) Bacillus methylotrophicus (vivo) aplicado a 110º? UFC/Ha + ácido bórico (micronutriente) a 0,2% na razão de 1.000 I/Ha de forma foliar.
f) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + ácido bórico (micronutriente) a 0,2% na razão de 1.000 I/Ha de forma foliar.
g) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + ácido bórico (micronutriente) a 0,2% na razão de 1.000 |/Ha de forma foliar.
h) Bacillus methylotrophicus (vivo) aplicado a 110º? UFC/Ha + sulfato de manganês (micronutriente) a 0,6% na razão de 100 I/Ha de forma foliar.
i) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo a glicose como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + sulfato de manganês (micronutriente) a 0,6% na razão de 100 |/Ha de forma foliar.
j) Extrato de Bacillus methylotrophicus produzido em um meio de cultura tendo o metanol como fonte de carbono e aplicado a 500 g/Ha + sulfato de manganês (micronutriente) a 0,6% na razão de 100 I/Ha de forma foliar.
Tabela 3 Atividade da Nitrogenase (umol de CaH4/g MS seca-h) Controle Negativo a
CT E Tratamento com Bacits — | 8 =| e | a | methylotrophicus 185 +27 97+9 | 195414 methylotrophicus + ácido bórico (micronutriente) 83 +11 91 +17 158+8 methylotrophicus + sulfato de manganês (micronutriente) 145+19 93 + 12 184 +9
[0042] Como se observa na tabela acima, fica evidente que a mistura de Bacillus methylotrophicus vivo com os diferentes micronutrientes reduz de forma significativa o efeito positivo da aplicação do mesmo. Porém, esse efeito não é gerado com a aplicação do extrato de Bacillus methylotrophicus. Os resultados também demonstram que a aplicação de um extrato de Bacillus methylotrophicus, produzido utilizando uma fonte de carbono que não o metanol, não tem o mesmo efeito que o extrato proveniente de um cultivo de Bacillus methylotrophicus produzido tendo o metanol como fonte de carbono.
Claims (16)
1. FERTILIZANTE FOLIAR, caracterizado por incluir um extrato de microrganismos metilotróficos obtido a partir de um primeiro processo inicial de fermentação de microrganismos metilotróficos vivos utilizando metanol como única fonte de carbono ou energia, e um segundo processo que inclui as etapas de lise celular por métodos físicos, químicos ou enzimáticos, separação das partes solúveis das insolúveis por centrifugação ou filtração tangencial e, opcionalmente, concentração por filtração ou atomização.
2. FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por os microrganismos metilotróficos serem selecionados entre Methylobacterium e Bacillus.
3. FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por os microrganismos metilotróficos serem selecionados entre Methylobacterium radiotoleran e Bacillus methylotrophicus.
4. FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o método de lise celular ser a extração química mediante detergentes não iônicos aplicados a 0,1% seguida de sonicação a 4 kW a um fluxo entre 100 e 800 L/h.
5. FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a separação das partes solúveis das insolúveis ocorrer por filtração tangencial utilizando filtros cerâmicos com um tamanho de poro entre 400 e 750 nm.
6. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, conforme definido nas reivindicações 1 a 5, caracterizado por ser em separado ou em combinação com outros fertilizantes, pesticidas e/ou fungicidas.
7. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por ser juntamente com outro fertilizante que inclui aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em isoleucina, leucina, valina, ácido glutâmico ou asparagina.
8. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com as reivindicações 6 ou 7, caracterizado por ser juntamente com outro fertilizante que inclui microelementos selecionados a partir do grupo que consiste em boro, níquel, zinco, manganês,
molibdênio, cobalto, ferro e cobre.
9. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por ser juntamente com cipermetrina como pesticida.
10. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com as reivindicações 6 ou 9, caracterizado por ser juntamente com tebuconazol como fungicida.
11. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com as reivindicações 6 a 10, caracterizado por ser juntamente com um antioxidante.
12. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por o antioxidante ser selecionado a partir do grupo que consiste em ácido ascórbico ou ácido cafeico.
13. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com as reivindicações 11 ou 12, caracterizado por a proporção de antioxidante a ser empregada em relação ao fertilizante ser inferior a 2% em peso.
14. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com as reivindicações 6 a 13, caracterizado por ser juntamente com um agente umectante.
15. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por o agente umectante ser glicerina.
16. USO DO FERTILIZANTE FOLIAR, de acordo com as reivindicações 14 ou 15, caracterizado por a proporção de agente umectante em relação ao fertilizante variar entre 0,5 e 20% em peso.
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