BR112020001441A2 - anticorpos anti-cd137 - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a anticorpos que se ligam ao CD137 humano e exibem atividade agonista e podem ser úteis para o tratamento de tumores sólidos e hematológicos sozinhos e em combinação com quimioterapia e radiação ionizante.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICORPOS ANTI-CD137 HUMANOS, SEUS PROCESSOS DE PRODUÇÃO E SEUS USOS, CÉLULAS DE MAMÍFERO, MOLÉCULA DE DNA, E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA".

[0001] A presente invenção é no campo da medicina. A presente invenção refere-se, particularmente, a anticorpos agonísticos direcionados ao CD137 humano, composições compreendendo tais anticorpos agonísticos anti-CD137 humanos e métodos de utilizar tais anticorpos agonísticos anti-CD137 humanos para o tratamento de tumores sólidos e hematológicos sozinhos ou em combinação com quimioterapia e outras terapias contra o câncer.

[0002] Sabe-se agora que estimular a resposta imune antitumoral pode ser um meio eficaz de terapia contra o câncer. A esse aspecto, o CD137, também conhecido como 4-1BB, pertence à família de receptores de TNF e desempenha um papel na ativação das respostas imunes das células T, impulsionando a proliferação e as funções efetoras das células T, promovendo memória imunológica e inibindo a morte celular induzida por ativação. Anticorpos agonísticos direcionados ao CD137 mostraram-se promissores em modelos de tumores murinos como monoterapia (Melero. I. et al., Nat. Med. 3 (6): 682-685 (1997)), no entanto, anticorpos agonistas direcionados ao CD137 humano já não demonstraram respostas suficientes como monoterapia ou terapia de combinação em pacientes humanos. A esse respeito, nem o utomilumab (um mAb IgG2 agonista de CD137 totalmente humano) (Fisher, TM et al., Cancer Immunol. Immunother. (2012) 61: 1721-1733) nem o urelumab (um mAb IgG4 agonista de CD137 humanizado) (Segal, NH Clin. Cancer Res. (2017) 23 (8): 1929-1936) receberam aprovações regulatórias para uso como monoterapia ou mesmo como terapia de combinação. De fato, nenhum anticorpo agonístico direcionado ao CD137 humano foi aprovado para uso terapêutico em humanos.

[0003] Deste modo, há uma necessidade por anticorpos adicionais totalmente humanos que agonizem o receptor de CD137 humano e promovam uma forte resposta imune anticâncer, mas com perfis toxicológicos aceitáveis. Também permanece a necessidade por anticorpos agonísticos anti-CD137 humanos alternativos que possam ser combinados com outras terapêuticas para o tratamento de câncer. Em particular, também permanece a necessidade por anticorpos anti- CD137 humanos que exibam potência suficiente como monoterapia e/ou terapia combinada contra o câncer.

[0004] Sem estar limitado à teoria, acredita-se que o uso de anticorpos agonísticos atuais direcionados ao CD137 como monoterapia e/ou agente de combinação contra o câncer seja dificultado por alguns fatores, tais como a força agonística dos referidos anticorpos e os eventos adversos imunes associados que resultam de seu uso em doses mais altas e potencialmente eficazes. Em particular, os anticorpos atuais são muito potentes, levando a eventos adversos ou exibindo eficácia subótima.

[0005] Os anticorpos agonísticos anti-CD137 humanos aqui descritos são anticorpos nulos efetores mediados pelo receptor de Fcγ totalmente humanos que se ligam ao CD137 humano e CD137 de macaco cinomolgo, estimulam a ativação de células T in vitro, promovem a expressão da superfície celular de CD137 humano, aumentam a atividade de NF-capa B, inibem o crescimento tumoral em modelos tumorais em murinos com câncer de pulmão de células não pequenas como monoterapia, inibem a supressão mediada por células reguladoras T in vitro, ativam assinaturas de genes imunes, aumentam a frequência de células T CD3+ intratumorais, competem com o ligante- CD137 humano pela ligação ao CD137 humano, e ligam-se a resíduos de aminoácidos únicos em CD137 humano.

[0006] A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) compreendendo HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

[0007] A presente descrição fornece um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8, e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9. A presente descrição fornece um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12.

[0008] A presente descrição fornece um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. A presente descrição fornece um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

13.

[0009] A presente descrição fornece uma célula de mamífero capaz de expressar um anticorpo compreendendo HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4 , LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

[0010] A presente descrição fornece uma célula de mamífero capaz de expressar um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0011] A presente descrição fornece um processo para a produção de um anticorpo compreendendo o cultivo de uma célula de mamífero capaz de expressar e recuperar o anticorpo; em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

[0012] A presente descrição fornece um processo para a produção de um anticorpo compreendendo o cultivo de uma célula de mamífero capaz de expressar e recuperar o anticorpo; em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0013] A presente descrição fornece um anticorpo produzido por um processo que compreende o cultivo de uma célula de mamífero capaz de expressar e recuperar o anticorpo; em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7. A presente descrição fornece um anticorpo produzido por um processo que compreende o cultivo de uma célula de mamífero capaz de expressar e recuperar o anticorpo; em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11, ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0014] A presente descrição fornece uma molécula de DNA compreendendo um polinucleotídeo tendo a sequência da SEQ ID NO: 14 e uma das SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 17. A presente descrição fornece uma molécula de DNA compreendendo um polinucleotídeo com a sequência da SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 17. A presente descrição fornece uma célula de mamífero compreendendo uma molécula de DNA compreendendo um polinucleotídeo com a sequência da SEQ ID NO: 14 e uma das SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 17. A presente descrição fornece uma célula de mamífero compreendendo uma molécula de DNA que compreende um polinucleotídeo tendo a sequência da SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 17.

[0015] A presente descrição fornece uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo aqui descrito e um veículo, diluente ou excipiente aceitável. A presente descrição fornece uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo e um veículo, diluente ou excipiente aceitável; em que o anticorpo compreende HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7. A presente descrição fornece uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo e um veículo,

diluente ou excipiente aceitável; em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8, e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9. A presente descrição fornece uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo e um veículo, diluente ou excipiente aceitável; em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12. A presente descrição fornece uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo e um veículo, diluente ou excipiente aceitável; em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. A presente descrição fornece uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo e um veículo, diluente, ou excipiente aceitável; em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0016] A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) compreendendo HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0017] A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) compreendendo HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas,

câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0018] A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) compreendendo HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço.

[0019] A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras, ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço.

[0020] A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) compreendendo HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

[0021] A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) compreendendo HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea,

separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em sua necessidade de uma quantidade eficaz de um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

[0022] A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de bexiga. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de mama. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer do trato biliar. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de cólon. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer endometrial. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de esôfago. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer gástrico. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é um câncer de pulmão de células não pequenas. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de próstata. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer retal. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de tireoide. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma de células renais. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é colangiocarcinoma. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é adenocarcinoma de pulmão. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma de células escamosas do pulmão. A presente descrição fornece um anticorpo aqui descrito para uso no tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma renal de células claras.

[0023] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de bexiga. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de mama. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer do trato biliar. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de cólon.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer endometrial.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de esôfago.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer gástrico.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de cabeça e pescoço.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é um câncer de pulmão de células não pequenas.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de próstata.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer retal.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é câncer de tireoide.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma de células renais.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é colangiocarcinoma.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é adenocarcinoma de pulmão. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma de células escamosas do pulmão. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo aqui descrito para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer; em que o câncer é carcinoma renal de células claras.

[0024] A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) aqui descrito para uso em terapia. A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) aqui descrito para uso em terapia; em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7. A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) aqui descrito para uso em terapia; em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) aqui descrito para uso em terapia; em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0025] A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da

SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0026] A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0027] A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço.

[0028] A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID

NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

[0029] A presente descrição fornece um anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos. A presente descrição fornece um anticorpo para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

[0030] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo anti- CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[0031] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo anti- CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0032] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo anti- CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras, ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras, ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras, ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras, ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o câncer é colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço.

[0033] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo anti- CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

[0034] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo anti-

CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende HCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 e LCDR3 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

A presente descrição fornece o uso de um anticorpo para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13; em que o anticorpo é administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

[0035] A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano em pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, em que o anticorpo entra em contato com pelo menos dois dos resíduos, preferivelmente pelo menos três dos resíduos, mais preferivelmente pelo menos quatro dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos cinco dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos seis dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos sete dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos oito dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos nove dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos dez dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos onze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos doze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos treze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos catorze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos quinze dos resíduos; ou mais preferivelmente todos os resíduos. A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano em pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, em que o anticorpo entra em contato com pelo menos dois dos resíduos, preferivelmente pelo menos três dos resíduos, mais preferivelmente pelo menos quatro dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos cinco dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos seis dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos sete dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos oito dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos nove dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos dez dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos onze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos doze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos treze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos catorze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos quinze dos resíduos; ou mais preferivelmente todos os resíduos; em que o contato é determinado por cristalografia de raios X, e em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo.

[0036] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para o tratamento de câncer ou para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano em pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, em que o anticorpo entra em contato com pelo menos dois dos resíduos, preferivelmente pelo menos três dos resíduos, mais preferivelmente pelo menos quatro dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos cinco dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos seis dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos sete dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos oito dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos nove dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos dez dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos onze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos doze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos treze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos catorze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos quinze dos resíduos; ou mais preferivelmente todos os resíduos. A presente descrição fornece o uso de um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para o tratamento de câncer ou para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano em pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, em que o anticorpo entra em contato com pelo menos dois dos resíduos, preferivelmente pelo menos três dos resíduos, mais preferivelmente pelo menos quatro dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos cinco dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos seis dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos sete dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos oito dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos nove dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos dez dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos onze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos doze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos treze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos catorze dos resíduos; mais preferivelmente pelo menos quinze dos resíduos; ou mais preferivelmente todos os resíduos; em que o contato é determinado por cristalografia de raios X, e em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo.

[0037] A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo entra em contato com o CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive). A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo entra em contato com o CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112- 116 (inclusive); em que o contato é determinado por cristalografia de raios X, e em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6)

Angstrons ou menos do anticorpo.

[0038] A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo entra em contato com o CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide. A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo entra em contato com o CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); em que o contato é determinado por cristalografia de raios X, e em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0039] A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer ou para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112- 116 (inclusive). A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza o CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer ou para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive), e 112- 116 (inclusive); em que o contato é determinado por cristalografia de raios X e em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo.

[0040] A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, ou o uso de um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive), e 112-116 (inclusive); em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide. A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer ou o uso de um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo entra em contato com CD137 humano nos seguintes resíduos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive), e 112-116 (inclusive); em que o contato é determinado por cristalografia de raios X, e em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0041] A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo não se liga ao FcγRI humano, FcγRIIa humano, FcγRIIb humano, FcγRIIIa humano(F), FcγRIIIa humano(V) ou C1q humano. A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer ou para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo não se liga ao FcγRI humano, FcγRIIa humano, FcγRIIb humano, FcγRIIIa(F) humano, FcγRIIIa humano(V) ou C1q humano.

[0042] A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza CD137 humano (SEQ ID NO: 1) ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, em que o anticorpo não se liga ao FcγRI humano, FcγRIIa humano, FcγRIIb humano, FcγRIIIa(F) humano, FcγRIIIa(V) humano ou C1q humano; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide. A presente descrição fornece um anticorpo que agoniza o CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer ou para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo não se liga ao FcγRI humano, FcγRIIa humano, FcγRIIb humano, FcγRIIIa(F) humano, FcγRIIIa(V) humano ou C1q humano; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0043] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103

(inclusive) e 112-116 (inclusive); em que a cadeia leve entra em contato com pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive).

[0044] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive), e 112-116 (inclusive); em que a cadeia leve entra em contato com pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive); em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo, conforme determinado por cristalografia de raios X.

[0045] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive).

[0046] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive); em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo, conforme determinado por cristalografia de raios X.

[0047] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); opcionalmente, em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive).

[0048] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); opcionalmente, em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive); em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo, conforme determinado por cristalografia de raios X.

[0049] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); opcionalmente, em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive); em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo, conforme determinado por cristalografia de raios X.

[0050] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); opcionalmente, em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive); em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo, conforme determinado por cristalografia de raios X.

[0051] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116 (inclusive); opcionalmente, em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive); em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo, conforme determinado por cristalografia de raios X; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0052] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve; em que a cadeia pesada entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) e 112-116

(inclusive); opcionalmente, em que a cadeia leve entra em contato com os seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 e 114-116 (inclusive); em que os resíduos em contato estão dentro de seis (6) Angstrons ou menos do anticorpo, conforme determinado por cristalografia de raios X; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0053] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo se liga a pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97 e 115.

[0054] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo se liga a pelo menos dois dos resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97, 114 e 115.

[0055] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo se liga aos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97, 114 e

115.

[0056] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo se liga a pelo menos um dos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97 e 115; em que a ligação é determinada usando uma proteína CD137 humana mutante que possui uma mutação em um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos: 97, 114 e 115.

[0057] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1), em que o anticorpo se liga a pelo menos dois dos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97, 114 e 115; em que a ligação é determinada usando uma proteína CD137 humana mutante que possui uma mutação em um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos: 97, 114 e 115.

[0058] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo se liga aos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97, 114 e 115; em que a ligação é determinada usando uma proteína CD137 humana mutante que possui uma mutação em um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos: 97, 114 e 115.

[0059] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo se liga aos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97, 114 e 115; em que a ligação é determinada usando uma proteína CD137 humana mutante que possui uma mutação em um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos: 97, 114 e 115.

[0060] A presente descrição fornece um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para uso no tratamento de câncer, em que o anticorpo se liga aos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97, 114 e 115; em que a ligação é determinada usando uma proteína CD137 humana mutante que possui uma mutação em um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos: 97, 114 e 115; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0061] A presente descrição fornece o uso de um anticorpo que é um agonista do CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o anticorpo se liga aos seguintes resíduos de aminoácidos no CD137 humano: 97, 114 e 115; em que a ligação é determinada usando uma proteína CD137 humana mutante que possui uma mutação em um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos: 97, 114 e 115; em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal ou câncer de tireoide.

[0062] A presente descrição fornece um anticorpo agonista de CD137 totalmente humano compreendendo duas ou mais das seguintes características: (a) o anticorpo compete com o Ligante CD137 humano pela ligação ao CD137 humano; (b) o anticorpo não se liga ao FcγRI humano, FcγRIIa humano, FcγRIIb humano, FcγRIIIa(F) humano, FcγRIIIa(V) humano ou C1q humano; (c) o anticorpo se liga ao CD137 de macaco cinomolgo; (d) o anticorpo inibe o crescimento de tumores de pulmão de células não pequenas humanas como monoterapia; e (e) o anticorpo aumenta a frequência das células T CD3+ intratumorais.

[0063] Exemplos não limitativos de agentes quimioterápicos úteis incluem 5-fluorouracil, hidroxiureia, gencitabina, metotrexato, doxorrubicina, etoposido, carboplatina, cisplatina, ciclofosfamida, melfalano, dacarbazina, taxol, camptotecina, FOLFIRI, FOLFOX, docetaxel, daunorrubicina, paclitaxel, oxaliplatina e suas combinações.

[0064] O termo "anticorpo", conforme aqui utilizado, refere-se a um complexo polipeptídico que possui duas cadeias pesadas (HC) e duas cadeias leves (LC), de modo que as cadeias pesadas e cadeias leves sejam interconectadas por ligações dissulfeto; em que o anticorpo é um anticorpo da subclasse IgG.

[0065] Um anticorpo da presente invenção é um complexo polipeptídico projetado, ocorrendo não naturalmente. Uma molécula de

DNA da presente invenção é uma molécula de DNA que compreende uma sequência polinucleotídica ocorrendo não naturalmente que codifica um polipeptídeo que possui a sequência de aminoácidos de pelo menos um dos polipeptídeos em um anticorpo da presente invenção.

[0066] O anticorpo da presente invenção é um anticorpo do tipo IgG e possui cadeias "pesadas" e cadeias "leves" que são reticuladas por meio de ligações dissulfeto intra- e intercadeias. Cada cadeia pesada compreende uma HCVR de terminal-N e uma região constante de cadeia pesada ("HCCR"). Cada cadeia leve compreende uma LCVR e uma região constante da cadeia leve ("LCCR"). Quando expressos em certos sistemas biológicos, os anticorpos com sequências Fc humanas nativos são glicosilados na região Fc. Tipicamente, a glicosilação ocorre na região Fc do anticorpo em um sítio de glicosilação-N altamente conservado. N-glicanos normalmente se ligam à asparagina. Os anticorpos também podem ser glicosilados em outras posições.

[0067] Opcionalmente, os anticorpos anti-CD137 humanos aqui descritos contêm uma porção Fc que é derivada de IgG1 humana. Sabe- se que IgG1 se liga às proteínas da família de receptores Fc-gama (FcγR) bem como de C1q. A interação com esses receptores pode induzir citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Portanto, opcionalmente, os anticorpos anti-CD137 humanos aqui descritos são um anticorpo monoclonal totalmente humano sem função efetora Fc (IgG1, Fc-nulo). Para obter um anticorpo IgG1 Fc nulo, é necessária a mutagênese seletiva de resíduos dentro da região CH2 de sua região IgG1 Fc. As substituições de aminoácidos L234A, L235E e G237A são introduzidas em IgG1 Fc para reduzir a ligação a FcγRI, FcγRIIa e FcγRIII, e as substituições A330S e P331S são introduzidas para reduzir a fixação de complemento mediada por C1q. Para reduzir a indução potencial de uma resposta imune quando dosada em humanos, certos aminoácidos podem requerer mutações reversas para corresponder às sequências da linha germinativa de anticorpos.

[0068] As regiões HCVR e LCVR podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade ("CDRs"), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas Regiões Framework ("FR"). Cada HCVR e LCVR é composta por três CDRs e quatro FRs, dispostas a partir do terminal amino ao terminal carbóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Aqui, as três CDRs da cadeia pesada são referidas como "HCDR1, HCDR2 e HCDR3" e as três CDRs da cadeia leve são referidas como "LCDR1, LCDR2 e LCDR3". As CDRs contêm a maioria dos resíduos que formam interações específicas com o antígeno. Para os fins da presente invenção, são utilizadas as definições North CDR. A definição North CDR (North et al., "A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations", Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011)) baseia-se na propagação de afinidade em agrupamentos com um grande número de estruturas cristalinas.

[0069] Um DNA isolado que codifica uma região HCVR pode ser convertido em um gene de cadeia pesada de comprimento total, ligando operacionalmente o DNA que codifica HCVR a outra molécula de DNA que codifica regiões constantes de cadeia pesada. As sequências de genes humanos, bem como de outros mamíferos, da região constante de cadeia pesada, são conhecidas na técnica. Os fragmentos de DNA que abrangem essas regiões podem ser obtidos, por exemplo, através de amplificação padrão por PCR.

[0070] Um DNA isolado que codifica uma região LCVR pode ser convertido em um gene de cadeia leve de comprimento total, ligando operacionalmente o DNA que codifica LCVR a outra molécula de DNA que codifica uma região constante de cadeia leve. As sequências de genes humanos, bem como de outros mamíferos, da região constante de cadeia leve, são conhecidas na técnica. Os fragmentos de DNA que abrangem essas regiões podem ser obtidos através de amplificação padrão por PCR. A região constante de cadeia leve pode ser uma região constante capa ou lambda. Preferivelmente para anticorpos da presente invenção, a região constante de cadeia leve é uma região constante capa.

[0071] Os polinucleotídeos da presente invenção serão expressos em uma célula hospedeira após as sequências terem sido operacionalmente ligadas a uma sequência de controle de expressão. Os vetores de expressão são tipicamente replicáveis nos organismos hospedeiros como epissomas ou como parte integrante do DNA cromossômico do hospedeiro. Geralmente, os vetores de expressão conterão marcadores de seleção, por exemplo, tetraciclina, neomicina e di-hidrofolato redutase, para permitir a detecção daquelas células transformadas com as sequências de DNA desejadas.

[0072] O anticorpo da presente invenção pode ser facilmente produzido em células de mamíferos, cujos exemplos não limitativos incluem células CHO, NS0, HEK293 ou COS. As células hospedeiras são cultivadas usando-se técnicas bem conhecidas na arte.

[0073] Os vetores contendo as sequências polinucleotídicas de interesse (por exemplo, os polinucleotídeos que codificam os polipeptídeos do anticorpo e as sequências de controle de expressão) podem ser transferidos para a célula hospedeira por métodos bem conhecidos, que variam dependendo do tipo de hospedeiro celular.

[0074] Vários métodos de purificação de proteínas podem ser empregados e tais métodos são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990) e Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 3a Edição, Springer, NY (1994).

[0075] Em outras modalidades da presente invenção, o anticorpo, ou os ácidos nucleicos que codificam o mesmo, é fornecido na forma isolada. Como usado aqui, o termo "isolado" refere-se a uma proteína, peptídeo ou ácido nucleico que está livre ou substancialmente livre de qualquer outra espécie macromolecular encontrada em um ambiente celular. "Substancialmente livre", conforme usado aqui, significa que a proteína, peptídeo ou ácido nucleico de interesse compreende mais de 80% (em uma base molar) das espécies macromoleculares presentes, preferivelmente mais do que 90%, e mais preferivelmente mais do que 95%.

[0076] O anticorpo da presente invenção, ou composições farmacêuticas compreendendo o mesmo, pode ser administrado por vias parentéricas, cujo exemplo não limitativo é a administração intravenosa. Um anticorpo da presente invenção pode ser administrado a um único paciente com veículos, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis em doses únicas ou múltiplas. As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas por métodos bem conhecidos na técnica (por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22ª ed. (2012), A. Loyd et al., Pharmaceutical Press) e compreendem um anticorpo, como descrito aqui, e um ou mais veículos, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0077] Os regimes de dosagem podem ser ajustados para proporcionar a resposta ótima desejada (por exemplo, um efeito terapêutico). As dosagens de tratamento podem ser tituladas para otimizar a segurança e a eficácia. Os esquemas de dosagem, para administração intravenosa (i.v.) ou não intravenosa, localizada ou sistêmica, ou suas combinações, geralmente variam de uma dose única em bolo ou infusão contínua a várias administrações por dia (por exemplo, a cada 4-6 horas), ou como indicado pelo médico tratante e pela condição do paciente. Quantidades e frequências de dosagem podem ser determinadas pelos médicos que tratam o paciente.

[0078] O termo "tratando" (ou "tratar" ou "tratamento") refere-se a retardar, interromper, deter, aliviar, parar, reduzir ou reverter a progressão ou gravidade de um sintoma, distúrbio, condição ou doença existente.

[0079] "Quantidade eficaz" significa a quantidade de um anticorpo da presente invenção ou composição farmacêutica compreendendo um anticorpo da presente invenção que provocará a resposta biológica ou médica ou o efeito terapêutico desejado em um tecido, sistema, animal, mamífero ou ser humano que esteja sendo procurado pelo pesquisador, médico ou outro clínico. Uma quantidade eficaz de anticorpo pode variar de acordo com alguns fatores, tais como o estado da doença, idade, sexo e peso do indivíduo, e a capacidade do anticorpo de provocar uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade eficaz também é aquela em que qualquer efeito tóxico ou prejudicial do anticorpo é superado pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Caracterização, Geração, Expressão e Purificação de Anticorpos

[0080] A produção de anticorpos usando a sequência polinucleotídica de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 14 e a sequência polinucleotídica de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 17 em células de mamíferos, resulta na produção de duas espécies relacionadas ao produto anticorpo: (a) um anticorpo de comprimento total (a seguir referido como "Anticorpo A1") tendo a sequência de aminoácidos de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 10 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve da SEQ ID NO: 11; e (b) uma única forma truncada de aminoácido do anticorpo (a seguir referido como "Anticorpo A2") resultante do recorte da alanina de terminal-n de cadeia leve, o Anticorpo A2 tendo a sequência de aminoácidos de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 10 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 13. Como usado aqui, "Anticorpo A1/2" refere-se ao produto anticorpo que resulta do uso da sequência polinucleotídica de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 17 e inclui uma combinação de Anticorpo A1 (~ 6%) e Anticorpo A2 (~ 94%). O anticorpo A1 pode ser sintetizado sem quantidades significativas de Anticorpo A2, usando a sequência polinucleotídica de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 14 e a sequência polinucleotídica de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 15. O Anticorpo A2 pode ser sintetizado sem quantidades significativas de Anticorpo A1, usando a sequência polinucleotídica de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 14 e a sequência polinucleotídica de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 16.

[0081] Os anticorpos da presente invenção podem ser gerados usando métodos conhecidos, incluindo, porém não se limitando a, exibição de fagos. Adicionalmente, os anticorpos derivados, como descrito acima, podem ser ainda classificados usando os ensaios aqui descritos.

[0082] Os polipeptídeos das regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve e as sequências completas de aminoácidos de cadeia pesada e de cadeia leve dos Anticorpos A1 e A2, e as sequências nucleotídicas que os codificam, estão listados na seção intitulada "Sequências de Aminoácidos e Nucleotídeos". Além disso, as SEQ ID NOs para a cadeia leve, cadeia pesada, região variável de cadeia leve e região variável de cadeia pesada dos Anticorpos A1, A2 e A1/2 são mostradas nas Tabelas 1 & 2. Tabela 1 (Aminoácido) Anticorpo Anticorpo SEQ ID corres-pondente A1 A2 HCDR1 2 2 HCDR2 3 3

(Aminoácido) Anticorpo Anticorpo SEQ ID corres-pondente A1 A2 HCDR3 4 4 LCDR1 5 5 LCDR2 6 6 LCDR3 7 7 HCVR 8 8 LCVR 9 12 Cadeia pesada 10 10 Cadeia leve 11 13 Tabela 2 (DNA) Anticorpo Anticorpo Anticorpo SEQ ID correspondente A1 A2 A1/2 HC 14 14 14 LC 15 16 17

[0083] Os anticorpos da presente invenção, incluindo, porém não se limitando aos Anticorpos A1, A2 e A1/2, podem ser produzidos e purificados essencialmente como a seguir. Uma célula hospedeira apropriada, tal como HEK 293 ou CHO, pode ser transfectada de forma transitória ou estável com um sistema de expressão para secretar anticorpos usando uma ótima predeterminada relação de vetor HC: LC, ou um sistema de vetor único que codifica tanto HC como LC. Meios clarificados, nos quais o anticorpo foi secretado, podem ser purificados usando qualquer uma das muitas técnicas comumente utilizadas. Por exemplo, o meio pode ser convenientemente aplicado a uma coluna MabSelect (GE Healthcare), ou coluna KappaSelect (GE Healthcare), que tenha sido equilibrada com um tampão compatível, tal como solução salina tamponada com fosfato (pH 7,4). A coluna pode ser lavada para remover componentes de ligação não específicos. O anticorpo ligado pode ser eluído, por exemplo, por gradiente de pH (tal como tampão Tris 20 mM pH 7 a tampão citrato de sódio 10 mM pH 3,0, ou solução salina tamponada com fosfato pH 7,4 a tampão de glicina 100 mM pH 3,0). As frações de anticorpos podem ser detectadas, tais como por absorvância UV ou SDS-PAGE, e então podem ser reunidas. Purificação adicional é opcional, dependendo do uso pretendido. O anticorpo pode ser concentrado e/ou filtrado estéril usando-se técnicas comuns. O agregado solúvel e os multímeros podem ser eficazmente removidos por técnicas comuns, incluindo exclusão por tamanho, interação hidrofóbica, troca iônica, cromatografia multimodal ou de hidroxiapatita. O produto pode ser congelado imediatamente a -70 °C ou pode ser liofilizado.

[0084] Como aqui utilizado, BMS20H4.9 refere-se a um anticorpo possuindo a cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 18 e a cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 19, e foi descrito anteriormente em US7288638. Como aqui utilizado, PF83 refere-se a um anticorpo possuindo a cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 20 e a cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 21, e foi descrito anteriormente em US8337850. Anticorpo A1/2 Liga-se ao CD137 Humano

[0085] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para se ligarem ao CD137 humano pode ser medida por ELISA. Para medir a ligação ao CD137 humano, uma placa de 96 poços (Nunc) é revestida com CD137- Fc humano (R&D Systems) durante a noite a 4°C. Os poços são bloqueados por 2 h com tampão de bloqueio (PBS contendo albumina de soro bovino 0,2% e Tween-20 0,05%). Os poços são lavados três vezes com PBS contendo Tween-20 0,05%. O anticorpo A1/2 ou IgG de controle (100 microlitros) é então adicionado em diferentes concentrações e incubado à temperatura ambiente por 1 h. Após a lavagem, a placa é incubada com 100 microlitros de conjugado de cabra anti-IgG F(ab’)2-HRP humano (Jackson Immuno Research Laboratories) à temperatura ambiente por 45 minutos. As placas são lavadas e depois incubadas com 100 microlitros de 3,3', 5,5'-tetra- metilbenzidina. A absorvância a 650 nm é lida em um leitor de microplacas SpectraMax®. Metade da concentração efetiva máxima (EC50) é calculada usando-se o software GraphPad Prism 7.

[0086] Em experiências realizadas essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1/2 se liga ao CD137 humano com um EC50 de 0,027 nM. Anticorpo A1/2 Liga-se ao CD137 de Macaco Cinomolgo

[0087] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para se ligarem à superfície celular de CD137 de macaco cinomolgo pode ser medida usando um ensaio de citometria de fluxo. As células estáveis que expressam CD137 de macaco Cinomolgo são geradas por transfecção do DNA de plasmídeo receptor de Cyno-CD137 em células 293 humanas (ATCC) usando o reagente Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen™) de acordo com o protocolo do fabricante. As células estáveis são selecionadas usando 0,5 microgramas/mL de puromicina em Meio de Eagle modificado por Dulbecoo contendo soro bovino fetal 10% e GlutaMAX™ 1%. Para citometria de fluxo, as células aderentes confluentes são separadas usando o Tampão de Dissociação Celular Gibco® (Life Technologies), bloqueadas no tampão FACS (solução salina tamponada com fosfato contendo soro bovino fetal 3%) por 1 h a 4 °C e, em seguida, transferidas para uma placa de fundo redondo de 96 poços a uma densidade de 1 x 105 células/poço. São adicionados o anticorpo A1/2, BMS20H4.9, PF83 ou IgG1 humano de controle (diluída em tampão FACS 1:4 partindo de 0,5 microgramas/mL) (100 microlitros) e as células são coradas por 1 h a 4 °C.

[0088] Após lavagem em tampão FACS, o anticorpo secundário anti-IgG humano de cabra conjugado com R-ficoeritrina, anticorpo específico para o fragmento F(ab’)2 (Jackson ImmunoResearch Laboratories) é adicionado a uma diluição de 1:200 e as células são incubadas a 4°C por 30 minutos. As células são lava das e a coloração das células vivas/mortas é realizada usando o kit LIVE/DEAD® Fixable Far Red Dead Cell Stain Color (Life Technologies) de acordo com o protocolo do fabricante. As células são lavadas em tampão FACS e processadas em um sistema de triagem IntelliCyt HTFC®. Os dados da citometria de fluxo são analisados usando o software FlowJo®. A razão da intensidade média da fluorescência (IMF) é calculada como (MFI do Anticorpo Experimental)/( IMF de IgG de controle).

[0089] Nos experimentos realizados essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1/2 em uma concentração de 0,5 microgramas/mL exibe uma razão MFI mais alta, de 153 em comparação com BMS20H4.9 (razão MFI de 0,94) e PF83 (razão MFI de 37). Ligação do Anticorpo A1/2 às Células Humanas Aumenta a Expressão de CD137

[0090] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para modular os níveis da superfície celular de CD137 humano pode ser determinada como a seguir. As células estáveis que expressam CD137 humano são geradas pela transfecção do DNA do plasmídeo de CD137 humano em células 293 humanas (ATCC) usando o reagente Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen™) de acordo com o protocolo do fabricante. As células estáveis são selecionadas usando 0,5 microgramas/mL de puromicina no Meio de Eagle modificado por Dulbecoo, contendo soro bovino fetal 10% e GlutaMAX™ 1%. Os anticorpos CD137 iniciando a 300 nanomolar em média são incubados com as células a 37 °C por 24 horas. As células são lavadas com PBS, separadas usando o Tampão de Dissociação Celular Gibco® e coradas com os mesmos anticorpos CD137 em tampão frio (1x PBS, BSA 1 %, azida sódica 0,09%) por 2 h. Após a lavagem, as células são coradas com anticorpo de detecção anti-IgG humano de cabra conjugado com Alexa Fluor 647 (Jackson ImmunoResearch Laboratories) por 30 minutos. As células são lavadas e rotuladas diferencialmente com Zombie Green Live/Dead (BioLegend) de acordo com o protocolo do fabricante. Todas as células são processadas em Fortessa X-20. A análise é realizada com o Software FlowJo® para gerar Intensidade Média da Fluorescência (IMF) de Alexa Fluor 647 e calibrada para moléculas Alexa Fluor 647 de curva padrão equivalente de fluorocromo solúvel (MESF) (Bangs Laboratories). Os valores MESF são normalizados para controles corados não tratados (100%) e controles corados por isótipo não tratado (0%).

[0091] Em experimentos realizados essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1/2 em uma concentração de 300 nanomolar induz um aumento (21%) nos níveis de CD137 em comparação com PF83 (12%), enquanto BMS20H4.9 reduz CD137 na superfície celular em 56%. Atividade do Ensaio Repórter de NF-capaB Luciferase do Anticorpo A1/2

[0092] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para ativar NF- capaB pode ser medida como a seguir. As células repórter NF-capaB luciferase estáveis duplas/CD137-293 humanas são geradas pela transfecção do DNA do plasmídeo pGL4.32[luc2P/NF-capaB-RE/Hygro] (Promega) em células 293 que expressam CD137 humano usando o reagente Lipofectamine™ 2000 (Life Technologies) de acordo com o protocolo do fabricante. As células estáveis são selecionadas usando 100 microgramas/mL de higromicina e 0,5 microgramas/mL de puromicina no Meio de Eagle modificado por Dulbecoo contendo soro bovino fetal 10% e GlutaMAX™ 1%. As células são disseminadas em placas, em uma placa de 384 poços a uma densidade de 5 x 103 células/poço, usando o Distribuidor de Reagente Thermo MultiDrop Combi (Thermo Fisher Scientific), e cultivadas durante a noite a 37 °C.

O anticorpo A1/2, BMS20H4.9, PF83 ou IgG1 humano de controle, é diluído em solução salina tamponada com fosfato (PBS) usando Hamilton STAR™ (Hamilton Company) em diluições de 10 pontos duas vezes na placa, começando a 9 micromolares ou 1,33 micromolares, e transferido para as células. As células são então incubadas com os anticorpos por 5,5 h a 37 °C em CO 2 5 % e, em seguida, processadas usando o Sistema de Ensaio de Luciferase ONE-Glo™ (Promega™) e o Distribuidor de Reagente Thermo™ Scientifi MultiDrop™ Combi. A luminescência é medida usando um leitor de microplacas SpectraMax® (Molecular Devices) e a análise de dados é realizada usando um Genedata Screener® (Genedata). Os dados são normalizados como a seguir: % de Atividade = [(Valor de Poço-Mediana do Controle Mínimo)/(Mediana do Controle Máximo-Mediana do Controle Mínimo)] x 100%.

[0093] Em experiências realizadas essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1/2 exibe uma atividade máxima de 78%, que é maior do que a de PF83 (atividade máxima de 12%) e menor do que a de BMS20H4.9 (atividade máxima de 115%). Anticorpo A1/2 Promove a Produção de Interferon-Gama Derivado de Células T

[0094] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para promover a produção de interferon-gama (IFN-gama) derivado de células T pode ser medida como a seguir. Células mononucleares de sangue periférico humano (PBMCs) são isoladas de sangue total ou leukopacs através de centrifugação por gradiente de densidade Ficoll (Ficoll® Paque PLUS; GE Healthcare) e cultivadas no meio Roswell Park Memorial Institute (RPMI) (Life Technologies) com soro fetal de bezerro 10% (HyClone). O clone do anticorpo anti-CD3 humano HIT3a (BD Biosciences) em PBS é revestido sobre uma placa de 96 poços (faixa típica: 2 a 15 nanogramas/poço) e incubado durante a noite a 4°C. Após a aspiração,

os poços são lavados com PBS e as PBMCs humanas são transferidas para uma placa de 96 poços a uma densidade de 1,5 x 105 células/poço. O anticorpo A1/2, BMS20H4.9, PF83 ou IgG1 humano de controle é preparado por diluição 1:4 em RPMI contendo soro bovino fetal 10% a uma concentração inicial de 80 microgramas/mL. O clone CD28.2 (BioLegend) do anticorpo anti-CD28 humano é adicionado à placa (faixa típica de 0,2 a 2 microgramas/mL), seguido pelo anticorpo em teste e incubado por 96 h a 37°C em uma incubadora de CO 2 5% umidificada. Os sobrenadantes são coletados e os níveis de IFN-gama humano são medidos usando um kit R&D Systems® human IFN-gama DuoSet ELISA. Resumidamente, o anticorpo de captura de IFN-gama é revestido sobre uma placa (4 microgramas/mL) durante a noite à temperatura ambiente. Após aspiração e lavagem, a placa é bloqueada por 1 hora à temperatura ambiente. Os sobrenadantes da amostra e o padrão IFN-gama são adicionados e incubados por 2 h à temperatura ambiente. Após a lavagem, 100 microlitros de anticorpo de detecção de IFN-gama são adicionados, incubados por 2 horas à temperatura ambiente, e lavados. A estreptavidina-HRP (100 microlitros de diluição 1:40) é adicionada por 20 minutos à temperatura ambiente. Após a lavagem, as placas são desenvolvidas adicionando-se 100 microlitros de solução de substrato por 20 minutos, seguido por 50 microlitros de solução de parada, e o sinal é medido a 450 nm com o leitor de microplacas SpectraMax®. A análise de dados é realizada usando o software SoftMax Pro e o GraphPad Prism (Software GraphPad). A indução de dobra é calculada como IFN-gama médio da amostra (pg/mL)/IFN-gama médio em hIgG1 de controle (pg/mL).

[0095] Em experimentos realizados essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1/2 aumenta a ativação subótima de PBMCs humanas por coestimulação de CD3/CD28, conforme medido pela produção de citocinas IFN-gama. A este respeito, o tratamento com

Anticorpo A1/2 a 5 microgramas/ml resulta em um aumento de 3,8 vezes na produção de IFN-gama, superior a PF83 (aumento de 1,6 vezes) e inferior a BMS20H4.9 (aumento de 9,4 vezes). Ensaio de Ligação de Fase Sólida do Anticorpo A1/2

[0096] A ligação do anticorpo A1/2 ao C1q humano pode ser medida usando um ensaio ELISA. O anticorpo A1/2 e os anticorpos de controle (IgG1 de controle negativo) são diluídos em série em PBS e revestidos em uma placa ELISA durante a noite a 4°C. O C1q hum ano em tampão de caseína é adicionado a uma concentração de 10 miligramas/mL e incubado por 2 horas. O C1q humano é detectado incubando-se as placas com anti-C1q-HRP humano (AbD Serotec Inc., diluição 1:200) por 1 h, e a placa é desenvolvida usando TMB (KPL, Inc.). A absorvância é medida a 450 nm com o leitor multimodo híbrido Synergy Neo2 (BioTek®).

[0097] A ligação do Anticorpo A1/2 ao FcγRI, FcγRIIa(H), FcγRIIb, FcγRIIIa(F) e FcγRIIIa(V) é determinada usando um ensaio MSD (Meso Scale Diagnostics). Resumidamente, os receptores de Fcγ são revestidos em uma placa Meso Scale durante a noite e os anticorpos em teste diluídos em série são adicionados à placa e incubados por 2 h. O anticorpo A1/2 é detectado usando um anticorpo secundário anti- humano (Meso Scale Diagnostics, D20TF-6) e a placa é desenvolvida com Read Buffer T (Meso Scale Diagnostics, R92TC-1). A luminescência é medida em um SECTOR Imager 2400 (Meso Scale Diagnostics) e os dados são analisados usando o software GraphPad Prism 7.0. Tabela 3 C1q FcγRI FcγRIIa(H) FcγRIIb FcγRIIIa(F) FcγRIIIa(V) Humano Anticorpo (EC50 (EC50 nM) (EC50 nM) (EC50 nM) (EC50 nM) (EC50 nM) nM) Anticorpo A1/2 >5* >134* >134* >134* >134* >330* Controle Positivo IgG1 0,8 93,7 >134* 19 6,2 8,9 (funcionalidade

C1q FcγRI FcγRIIa(H) FcγRIIb FcγRIIIa(F) FcγRIIIa(V) Humano Anticorpo (EC50 (EC50 nM) (EC50 nM) (EC50 nM) (EC50 nM) (EC50 nM) nM) efetora do receptor de Fc intacto) *Indica a concentração máxima do anticorpo testado

[0098] Nos experimentos realizados essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1/2 não se ligou ao FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIIa ou C1q (como mostrado na Tabela 3 acima). Em outras experiências, o Anticorpo A1/2 não exibiu função efetora detectável em ensaios de citotoxicidade celular dependente de anticorpos e de citotoxicidade dependente de complemento baseados em células. Eficácia Antitumoral do Anticorpo A1/2 em um Modelo de Tumor Estabelecido

[0099] A linhagem de células tumorais de câncer de pulmão de células não pequenas (ATCC) HCC827 humana é mantida em seus respectivos meios e colhida para implantação. As células tumorais (1 x 107 células por camundongo) são injetadas por via subcutânea no flanco direito de camundongos fêmeas NOD/SCID Gama (NSG) com 7 semanas de idade (Jackson Laboratories). Quando os tumores atingem aproximadamente 350 mm3 a 450 mm3 de tamanho, os camundongos são randomizados em grupos de 5 a 8. As células T humanas expandidas são geradas por estímulo de PBMCs humanas ingênuas com esferas de CD3/CD28 T-expansoras Dynabeads® Human (Thermo Fisher Scientific) por 9 a 10 dias e depositadas. As PBMCs humanas (Centro de Sangue de NY) são preparadas por centrifugação com Ficoll® Paque PLUS em tubos SepMate (STEMCELL Technologies) e depositadas. As células T expandidas são descongeladas e 1 x 10 6 células são injetadas nos camundongos. Como controle, células tumorais isoladas são implantadas sem células T ou PBMCs em alguns camundongos. O tratamento começa no dia 0 ou no dia 1. Os grupos de tratamento incluem IgG de controle, BMS20H4.9, PF83 e anticorpo A1/2. Os animais são dosados via injeção intraperitoneal a 10 mg/kg de anticorpos uma vez por semana, durante 4 semanas. O peso corporal (PC) é registrado duas vezes por semana e a variação percentual do PC é calculada usando a fórmula: (PC no dia da observação - PC no dia inicial) / PC no dia inicial x 100%. Os volumes tumorais são medidos duas vezes por semana usando calibradores eletrônicos. O volume tumoral é calculado usando a fórmula: Volume tumoral (mm3) = π/6 * Comprimento * Largura2. A % T/C é calculada usando a fórmula 100 × ∆T / ∆C se ∆T > 0 dos valores médios geométricos. ∆T = volume médio do tumor do grupo tratado com fármaco no dia de observação do estudo - volume médio do tumor do grupo tratado com fármaco no dia inicial da dosagem; ∆C = volume médio do tumor do grupo de controle no dia de observação do estudo - volume médio do tumor no grupo de controle no dia inicial da dosagem. A análise estatística dos dados de volume do tumor é realizada por análise de variância bidirecional de medidas repetidas por tempo e tratamento usando os procedimentos MIXED no software SAS (Versão 9.2).

[0100] Em experimentos realizados essencialmente como descrito acima, os camundongos tratados com o Anticorpo A1/2 demonstraram inibição significativa do crescimento tumoral (% T/C = 30,6; P <0,001) em contraste com os camundongos tratados com PF83 (% T/C = 81,2) e BMS20H4.9 (% T/C = 96,9) que não mostraram inibição. Resultados de Cinética/Afinidade para o Anticorpo A1, Anticorpo A2 e Anticorpo A1/2

[0101] Um instrumento Biacore T200 pode ser usado para medir a cinética da ligação de CD137-Fc humana imobilizada ao Anticorpo A1, Anticorpo A2 e Anticorpo A1/2. A proteína CD137-Fc extracelular humana recombinante (R&D Systems) é covalentemente imobilizada em um chip sensor CM5 via acoplamento de amina (GE Healthcare). O teste do anticorpo CD137 é realizado a uma taxa de fluxo de 30 microlitros/min em tampão HBS-EP+. As amostras são injetadas em várias concentrações e medições obtidas a 25 °C. A superfície é regenerada após cada injeção de amostra com 10 milimolares de Glicina-HCl pH 2,0 a uma taxa de fluxo de 30 microlitros/min por 24 segundos e depois estabilizada com tampão por 10 segundos. Os sensorgramas de concentrações variando de 0,123 nanomolar a 30 nanomolar são avaliados usando o software Biacore T200. O cálculo das constantes da taxa de associação (Ka) e de dissociação (Kd) baseia-se no ajuste do modelo de ligação de Langmuir 1:1. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) ou constante de afinidade de ligação é calculada a partir da razão das constantes de taxa cinética Kd/Ka.

[0102] Em experimentos realizados essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1, Anticorpo A2 e Anticorpo A1/2 se ligam ao CD137 humano com as constantes de cinética e afinidade ilustradas na Tabela 4. Tabela 4 2 Anticorpo Kon (1/Ms) Koff (1/s) KD (M) Rmax Chi Anticorpo A2 1,33E+06 7,13E-03 5,36E-09 23,10 0,247 Anticorpo A1 1,61E+06 5,36E-03 3,33E-09 22,76 0,355 Anticorpo 1,52E+06 7,11E-03 4,67E-09 20,86 0,303 A1/2 Ensaio Repórter de NF-capaB Luciferase Comparando o Anticorpo A1, o Anticorpo A2 e o Anticorpo A1/2

[0103] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para ativar o NF- capaB pode ser medida, conforme descrito anteriormente aqui, com a modificação na qual as diluições de anticorpos são preparadas em PBS, e são feitas diluições de 10 pontos 2 vezes dentro da placa iniciando a 9 micromolares.

[0104] Nos experimentos realizados essencialmente como descrito acima, o Anticorpo A1/2 (atividade máxima de 70,5%) exibiu uma atividade máxima semelhante em comparação com o Anticorpo A1 (atividade máxima de 63,4%) e o Anticorpo A2 (atividade máxima de 72,3%). Anticorpo A1 e Anticorpo A2 Promovem a Produção de Interferon- Gama Derivado de Células T

[0105] A capacidade dos anticorpos aqui descritos, para promover a produção de interferon-gama derivado de células T (IFN-gama), pode ser medida conforme descrito anteriormente aqui. Em experimentos realizados essencialmente como descrito aqui, o Anticorpo A1, Anticorpo A2 e Anticorpo A1/2 aumentam a ativação subótima das PBMCs humanas por coestimulação de CD3/CD28, conforme medido pela produção de citocinas IFN-gama. A este respeito, o tratamento com o Anticorpo A1/2 a 5 microgramas/mL resulta em um aumento de 3,1 vezes na produção de IFN-gama, que foi comparável ao Anticorpo A1 (aumento de 3,5 vezes) e Anticorpo A2 (aumento de 3,5 vezes). Eficácia Antitumoral do Anticorpo A1 e Anticorpo A2 em um Modelo de Tumor Estabelecido

[0106] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para inibir o crescimento de tumores em camundongos pode ser medida conforme descrito anteriormente aqui.

[0107] Em experimentos realizados como essencialmente descrito acima, o Anticorpo A1, Anticorpo A2 e Anticorpo A1/2 inibem o crescimento do tumor no modelo tumoral estabelecido HCC827. O tratamento com o Anticorpo A1/2 (% T/C = 47,1 %; P <0,001) mostra uma redução similar no crescimento do tumor, assim como com o Anticorpo A1 (% T/C = 56,0 %; P <0,001) e Anticorpo A2 (% T/C = 48,7 %; P <0,001). Epítopo de Anticorpo A1 como Determinado Via Cristalografia de raios X

[0108] O anticorpo A1-Fab é purificado a partir de um sobrenadante de células 293HEK, usando uma Matriz de Afinidade CaptureSelect IgG- CH1 de 12 mL. SDS-PAGE e cromatografia da exclusão do tamanho analítica (SEC) são utilizados para abordar a pureza e a qualidade do Anticorpo A1-Fab purificado. O material eluído desta matriz é tampão trocado por solução salina tamponada com 1X Tris (TBS). O hCD137* (*(aminoácidos CD137 humanos 22-161, ∆C121S)-AAA-6His) é purificado a partir de um sobrenadante 293HEK em três etapas que utilizam colunas Ni Sepharose® Excel, colunas Ni-NTA e colunas SEC. Resumidamente, dois litros de sobrenadante são carregados diretamente, sem qualquer troca de tampão, em uma coluna Ni Sepharose Excel. O eluente desta etapa é tampão trocado por PBS e posteriormente purificado usando uma coluna de fluxo gravitacional Ni- NTA. O eluente desta etapa é ainda purificado e o tampão trocado por 1X TBS usando uma coluna SEC preparatória. O fluxo através da primeira etapa de Ni Sepharose Excel contém quantidades significativas de hCD137*. Em seguida, é recarregado em uma coluna Ni Sepharose Excel, depois pelas colunas Ni-NTA e SEC preparatória. SDS-PAGE é usado para agrupar as frações de hCD137* com base em sua pureza. A concentração de hCD137* é de 14,5 miligramas/mL e a do Anticorpo A1-Fab é de 7,5 miligramas/mL.

[0109] Os complexos de Anticorpo A1-Fab:CD137* são combinados em uma relação molar de 1:1 e, em seguida, submetidos a uma coluna de filtração em gel, pré-equilibrados em Tris 20 milimolares pH 8,0, cloreto de sódio 100 milimolares. O complexo resultante é concentrado a 12,5 miligramas/mL. Após a filtração, o complexo Anticorpo A1- Fab:CD137 é ajustado a uma relação de 1:1 com condições de triagem de cristal de matriz esparsa em placas de queda em assentamento usando um manipulador de líquido Phoenix, a 21 ˚C e 8˚C. Cristais grandes semelhantes a prisma crescem em uma condição única em 4 dias em Citrato de Sódio Tri 1 molar, pH 6,5 a 21 °C. Os cristais são coletados e crio-protegidos em glicerol 20% e condições de reservatório, fixados e congelados instantaneamente em nitrogênio líquido e, em seguida, utilizando uma Fonte Fotográfica Avançada, Argonne National Laboratory, as amostras são examinadas por raios X e os dados são coletados. Os dados do Anticorpo A1-Fab/hCD137* são processados a 2,4 Å usando o conjunto de programas CCP4 (Winn, M.D. et al. Acta. Cryst. 2011: D67, 235-242). O cristal pertence ao Grupo Espacial P3121, com os parâmetros celulares a=b=124,9 Å, b=112,7 Å, α=β=90° e γ=120°. A estrutura é determinada por Substituição M olecular com o programa Phaser (McCoy, A.J. et al. J. Appl. Cryst. 2007 40: 658-674), usando uma estrutura Fab interna como modelo de pesquisa. A solução de substituição molecular para Fab é refinada usando Refmac (Winn, MD et al. Acta. Cryst. 2011: D67, 235-242; Murshudov, GN Act. Cryst. 2011: D67, 355-367) e Buster (Bricogne, G. et al. 2016; Buster Versão

2.11.6. Cambridge, Reino Unido: Global Phasing Let.). Os mapas do refinamento são usados para construir manualmente o modelo para CD137 usando o programa COOT (Emsley, P. Acta Cryst. 2010: D66, 486-501). Os fatores R refinados são R=17,8 %, Rfree=20,5 %.

[0110] Em experimentos realizados essencialmente conforme descrito neste ensaio, o complexo Anticorpo A1-Fab:hCD137* é resolvido e o epítopo/parátopo é ilustrado na Tabela 5 abaixo. A Tabela 5 lista os resíduos no Anticorpo A1-Fab que estão dentro de 6Å dos resíduos listados em hCD137*. A cadeia pesada do Anticorpo A1-Fab possui 57 contatos (corte 6 Å) com hCD137*, enquanto a cadeia leve tem 18 contatos (corte 6 Å). Tabela 5 CD137 Humano Cadeia Pesada do Anticorpo Cadeia leve do Anticorpo A1 (Epítopo) A1 (Parátopo) (Parátopo) S55 Q62 -- Q59 Q62 --

CD137 Humano Cadeia Pesada do Anticorpo Cadeia leve do Anticorpo A1 (Epítopo) A1 (Parátopo) (Parátopo) D63 Q62 -- R66 F55 -- F72 F55 -- H93 T103 -- C94 T102, T103, A104, P105 -- L95 M101, T102, T103, P105, -- G106, T107 G96 L100, M101, T102, T103, G92, N93 P105, G106, T107 A97 M101, T102, P105, G106, G92, N93, S94, F95, L97 T107 G98 P105 G92, N93, S94, F95 C99 P105 -- S100 I52, F55, N59, M101, P105, F95 T107 M101 S31, I52, I54, F55, M101 -- C102 F55 -- E103 T103 -- L112 T103 -- T113 T103 -- K114 M101, T102, T103, A104 D51, D54 K115 L100, M101, T102, T103, F50, E56, T57 D110 G116 M101, T102, T103 F50 Anticorpo A1/2 Bloqueia Completamente as Interações CD137/Ligante-CD137

[0111] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para bloquear as interações de CD137 e Ligante-CD137 humanos (a seguir, CD137L) pode ser medida com um ensaio ELISA. Primeiro, é utilizado um ensaio ELISA para quantificar a EC50 de ligação de hCD137** (aminoácidos CD137 humanos 22-164, ∆C121S)-AAA-FLAG a hCD137L* e Anticorpo

A1/2, BMS20H4.9 e PF83. Os poços de uma placa Immulon® 4HBX ELISA de 96 poços são revestidos durante a noite com 50 nanogramas de hCD137** em 100 microlitros de PBS, pH 7,2 com agitação suave a 4 °C. Após o bloqueio com BSA 5% em PBST e lavagem, uma série de cinco diluições (392 nanomolar - 0,005 nanomolar) de CD137L humano recombinante marcado com His (a seguir denominado hCD137L*) (R&D Systems), (53-0,00068 nanomolar) de BMS20H4.9, (107-0,0014 nanomolar) de PF83 ou (53-0,00068 nanomolar) de Anticorpo A1/2, são adicionadas a cada diluição conduzida em duplicata e incubadas com agitação suave por 1 h à temperatura ambiente. Os poços tratados com os anticorpos anti-CD137 são então lavados e uma diluição de 1:10000 de anticorpo anti-Fab de cabra conjugado com HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories) é adicionada e incubada à temperatura ambiente seguindo-se o protocolo padrão. Os poços tratados com hCD137L* são então lavados e uma diluição de 1:5000 de anticorpo anti-His de camundongo conjugado com HRP (Sigma-Aldrich®) é adicionada, e as placas são incubadas à temperatura ambiente seguindo-se o protocolo padrão. O substrato cromogênico da TMB peroxidase e a solução de parada são usados de acordo com as instruções do fabricante para visualização e detecção de sinais. As leituras de absorvância são plotadas no GraphPad Prism Software Versão 6. Os valores de EC50 são calculados por análise de ajuste de curva de regressão não linear da função de Ligação Específica a um Sítio do software. Em experimentos realizados conforme descrito, as afinidades de ligação (EC50) a hCD137** são determinadas como 0,6 nanomolar para hCD137L, 1,4 nanomolar para Anticorpo 1/2, 0,43 nanomolar para BMS20H4.9 e maior que 10 nanomolar para PF83.

[0112] A capacidade de hCD137L* para competir com BMS20H4.9, PF83 e Anticorpo A1/2 pela ligação ao hCD137** pode ser determinada como a seguir. Uma placa Immulon 4HBX ELISA de 96 poços é revestida durante a noite com 50 nanogramas de hCD137** em 100 microlitros de PBS, pH 7,2 com agitação suave a 4 °C. Após o bloqueio (com BSA 5% em PBST) e lavagem, uma diluição de cinco vezes (196 a 0,0025 nanomolar) de hCD137L* é misturada com quantidades saturantes do anticorpo designado: Anticorpo A1/2 (200 nanogramas/poço), BMS20H4.9 (3 nanogramas/poço) ou PF83 (1000 nanogramas/poço). As misturas são, em seguida, adicionadas aos poços em duplicatas e incubadas com agitação suave à temperatura ambiente por 1 h. Após a lavagem, a placa é incubada com anticorpo anti-Fab de cabra conjugado com HRP (diluições 1:1000, Jackson ImmunoResearch Laboratories) à temperatura ambiente, seguindo-se o protocolo-padrão. O substrato cromogênico da TMB peroxidase e a solução de parada são usados de acordo com as instruções do fabricante para visualização e detecção de sinais.

[0113] A porcentagem de mAb que permanece ligada ao CD137 é plotada e os valores de IC50 são calculados por análise de ajuste de curva de regressão não linear usando o software GraphPad Prism. Em experiências realizadas essencialmente como descrito acima, o hCD137L* bloqueia completamente a ligação do Anticorpo A1/2 ao hCD137** com uma IC50 de 0,401 nanomolar. O hCD137L* também bloqueia a ligação do PF83 ao hCD137** com uma IC50 de 1,037 nanomolar (30% do sinal de ligação permanece sobre a superfície). Não há efeito mensurável de hCD137L* na ligação de BMS20H4.9 ao hCD137**. Anticorpo A1/2 Liga CD137 Humano a Resíduos de Aminoácidos Específicos que são Distintos de BMS20H4.9 e PF83

[0114] As mutações pontuais de CD137 humano são introduzidas para determinar os resíduos de aminoácidos em que o Anticorpo A1/2, BMS20H4.9 e PF83 se ligam ao CD137 humano. Os mutantes CD137- Fc são gerados usando-se o protocolo padrão de um kit de mutagênese dirigida ao sítio comercialmente disponível (kit Quickchange II, Qiagen). As proteínas CD137-Fc do tipo selvagem e mutantes são expressas e purificadas. Todos os mutantes aqui relatados têm um perfil de exclusão de tamanho semelhante ao da CD137-Fc do tipo selvagem (isto é, as mutações introduzidas não comprometem a integridade estrutural da proteína). Para determinar o impacto de uma mutação sobre a ligação dos anticorpos, é utilizado um ensaio ELISA pontual contra o tipo selvagem e mutantes de CD137-Fc. Os poços de uma placa Immulon 4HBX ELISA de 96 poços são revestidos durante a noite com 50 nanogramas de CD137-ECD-C121S-Fc humano ou seus mutantes em 100 microlitros de PBS, pH 7,2 com agitação suave a 4 °C. Após o bloqueio (com BSA 5% em PBST) e lavagem, uma série de oito pontos de diluição por cinco vezes (100 - 0,00128 nanomolar) do anticorpo designado é adicionada e incubada com agitação suave à temperatura ambiente por 1 h. Os poços são lavados e um anticorpo secundário conjugado com HRP (diluição 1:10000 de anticorpo anti-Fab de cabra conjugado com HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories)) é adicionado e incubado à temperatura ambiente seguindo-se o protocolo padrão. O substrato cromogênico da TMB peroxidase e a solução de parada são usados de acordo com as instruções do fabricante para visualização e detecção de sinais. As leituras de absorvância para cada ponto de concentração são normalizadas pela absorvância da interação do tipo selvagem. Para cada mutante, é determinada a média da razão normalizada para as oito concentrações.

[0115] Foram introduzidas mutações individualmente no CD137 humano (SEQ ID NO: 1) nas posições: P27, N42, D63, Q67, A97, G98, S100, M101, Q104, K114, K115, R130, I132, R134. A Tabela 6 exibe os perfis de ligação de BMS20H4.9 e Anticorpo A1/2 para os mutantes mostrados do CD137 humano. A Tabela 7 demonstra os perfis de ligação de PF83 e Anticorpo A1/2 para os mutantes mostrados do

CD137 humano. Coletivamente, as Tabelas 6 e 7 mostram que o Anticorpo A1/2 se liga a resíduos de aminoácidos distintos no CD137 humano em comparação com BMS20H4.9 e PF-83. Tabela 6 BMS20H4.9 Anticorpo A1/2 (% de ligação relativa ao (% de ligação relativa ao hCD137 hCD137 do tipo selvagem) do tipo selvagem) P27L* 85 100 N42S* 0 100 D63N 100 100 Q67R 100 100 Q67V 100 100 A97P 100 15 G98K 100 85 G98Q 100 100 S100T 100 100 M101R 100 100 Q104K 100 100 K114E 100 20 K115Q 100 25 *Indica posições que estão fora do epítopo do Anticorpo A1/2, conforme determinado via Cristalografia de Raios X a 6Å Tabela 7 Anticorpo A1/2 PF83 (% de ligação relativa ao hCD137 (% de ligação relativa ao do tipo selvagem) hCD137 do tipo selvagem) K115Q 25 100 R130A* 100 100 R130H* 100 100 I132V* 100 100 R134Q* 100 25 *Indica posições que estão fora do epítopo do Anticorpo A1/2, conforme determinado via Cristalografia de Raios X a 6Å Expressão do Gene CD137 em Tumores Humanos

[0116] O perfil de expressão do gene CD137 em infiltrados imunes a tumores humanos pode ser analisado usando o banco de dados The Cancer Genome Atlas (TCGA) e metodologias computacionais. Resumidamente, as relações de expressão de CD137/CD3e são geradas a partir dos resultados de TCGA RNASeq curados da Omicsoft. Para comparar as relações de expressão de CD137/CD3e em amostras de tumor e adjacentes normais do mesmo tecido é realizado um teste t e o d de Cohen é calculado para cada tipo de tumor. Os tipos de tumores que têm um valor P <0,05, no teste t da relação de expressão de tumor versus o normal, e um tamanho de efeito grande de d de Cohen >0,8 são estatisticamente significativos. A diferença na relação de expressão de CD137/CD3e no tumor versus tecido normal é calculada como a alteração de dobra em log (logFC).

[0117] Em experimentos realizados conforme descrito, uma relação CD137/CD3 de tumor aumentada é observada através de diferentes tipos de câncer, incluindo, porém não se limitando ao câncer de mama, cólon, endometrial, bexiga, e cabeça e pescoço (Tabela 8). Os tumores enriquecidos com linfócitos CD137+ são candidatos à terapia com anticorpos CD137 usando o Anticorpo A1, Anticorpo A2 ou Anticorpo A1/2. Tabela 8 Câncer Relação de Valor P Expressão de Bexiga 1,92 3,85E-03 Mama 2,46 3,56E-39 Colangiocarcinoma 1,78 4,81E-06 Cólon 2,36 1,23E-19 Endometrial 2,14 4,01E-15 Esofageal 1,07 1,71E-04 Gástrico 1,68 9,27E-10 Cabeça & Pescoço 1,90 8,06E-15 Adenocarcinoma de pulmão 1,37 2,63E-13 Carcinoma de células escamosas de pulmão 1,63 2,37E-13

Próstata 1,04 2,73E-04 Retal 1,62 1,40E-05 Tireoide 1,24 2,29E-06 Anticorpo A1/2 Aumenta a Infiltração Tumoral em Células T CD3+ In Vivo

[0118] A capacidade dos anticorpos aqui descritos para alterar a infiltração tumoral de células T em modelos de camundongos humanizados pode ser determinada por imuno-histoquímica (IHC). Resumidamente, as células L55 de câncer de pulmão de células não pequenas humanas (L55-CBG-2A-GFP, Universidade da Pensilvânia) são implantadas em camundongos NSG. Quando os tumores atingem o tamanho de 250 a 300 mm3, as PBMCs humanas (8 x 106 células) são injetadas e os anticorpos são dosados a 10 miligramas/kg uma vez por semana, durante 4 semanas. No final do estudo, os tumores são coletados em formalina, processados em parafina, seccionados e corados com um anticorpo anti-CD3 (Cell Signaling Technology). As imagens são obtidas com uma ampliação de 200X usando um Aperio XT ScanScope® e analisadas semiquantitativamente. A porcentagem de células CD3 positivas para o total de células tumorais é calculada usando-se o software Aperio ImageScope. Os resultados são comparados por One Way ANOVA, seguido pelo método Holm-Sidak para comparações múltiplas (Sigma Plot 12.5, Systat Software).

[0119] Em experimentos realizados como descrito acima, o Anticorpo A1/2 induz a infiltração tumoral de células T CD3+ em tumores estabelecidos em L55. A porcentagem de células T CD3+ em resposta ao Anticorpo A1/2 (60%) é maior em comparação com os tratamentos com BMS20H4.9 (18%) ou IgG humano (27%). Sequências de Aminoácidos e Nucleotídeos SEQ ID NO: 1 (CD137 humano)

MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRSLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPP NSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAG CSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKS VLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALT STALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFP

EEEEGGCEL SEQ ID NO: 2 (HCDR1)

KASGGTFSSYAIS SEQ ID NO: 3 (HCDR2)

GIIPIFGTANYAQKFQG SEQ ID NO: 4 (HCDR3)

ARDLMTTAPGTYFDL SEQ ID NO: 5 (LCDR1)

QASQDIGNSLG SEQ ID NO: 6 (LCDR2)

FDASDLET SEQ ID NO: 7 (LCDR3)

QQGNSFPLT SEQ ID NO: 8 (HCVR)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWM GGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARD

LMTTAPGTYFDLWGRGTLVTV SEQ ID NO: 9 (LCVR do Anticorpo A1)

AIRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFD ASDLETGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPLTFG

QGTRLEIK SEQ ID NO: 10 (HC)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWM GGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARD LMTTAPGTYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL GTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ

KSLSLSPGK SEQ ID NO: 11 (LC do Anticorpo A1)

AIRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFD ASDLETGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPLTFG QGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWK VDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTH

QGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 12 (LCVR do Anticorpo A2)

IRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFDA SDLETGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPLTFGQ

GTRLEIK SEQ ID NO: 13 (LC do Anticorpo A2)

IRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFDA SDLETGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPLTFGQ GTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ

GLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 14 (DNA de HC)

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGT CCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGC TATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTG GATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGA AGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACA GCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTA TTACTGTGCGAGAGATCTGATGACTACGGCCCCTGGGACGTACTTCG ATCTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACTGTCTCCTCAGCTAGCACC AAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCACTGACCAGCGGCG TGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCA GCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTA CATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGA GAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGC CCAGCACCTGAAGCCGAGGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACAT GCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAA CTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGC GGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCAC CGTCCTGCACCAAGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGG TCTCCAACAAAGCCCTCCCATCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAG CCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATC CCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAAGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCA AAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGG GCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCC GACGGCTCCTTCTTCCTCTATTCCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAG GTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTC TGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA

TGA SEQ ID NO: 15 (DNA de LC do Anticorpo A1)

ATGAGGCTGCTGCCTCTGCTGGCCCTCCTGGCCCTGTGGGGCCCAG ACCCAGCCAGAGCCGCCATCCGGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTG TCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCA GGACATTGGCAACTCTTTAGGTTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAG CCCCTAAACTCGTGATCTTCGATGCATCAGATCTGGAAACAGGGGTC CCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCAGTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACA GGGTAACAGTTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGA TTAAACGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCA GAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGT AACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTA CAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCC GTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID NO: 16 (DNA de LC do Anticorpo A2)

ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCC AGGCTCCACCGGCATCCGGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTGTCTG CATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGAC ATTGGCAACTCTTTAGGTTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCT AAACTCGTGATCTTCGATGCATCAGATCTGGAAACAGGGGTCCCATCA AGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCAGTCTCACCATCAG CAGCCTGCAGCCTGAGGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGTAA CAGTTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAAC GAACTGTGGCCGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGC AGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT ATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAA TCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACA GCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTAC GAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG

CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG SEQ ID NO: 17 (DNA de LC do Anticorpo A1/2)

ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCC AGGCTCCACCGGCGCCATCCGGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTGT CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAG GACATTGGCAACTCTTTAGGTTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGC CCCTAAACTCGTGATCTTCGATGCATCAGATCTGGAAACAGGGGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCAGTCTCACCA TCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGG GTAACAGTTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATT AAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGAT GAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAAC TTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCT CCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAG GACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGA CTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCC

TGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG SEQ ID NO: 18 (HC de BMS20H4.9)

QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQSPEKGLEWI GEINHGGYVTYNPSLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARD YGPGNYDWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAAL GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS

LSLSLGK SEQ ID NO: 19 (LC de BMS20H4.9)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPALTF GGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQW KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT

HQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 20 (HC de PF83)

EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWM GKIYPGDSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAR GYGIFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQT YTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST FRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE METDTLLLWVLLLWVPGSTGAIRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIG NSLGWYQQKPGKAPKLVIFDASDLETGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQP EDFATYYCQQGNSFPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTA SVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECNNYKTTPPMLDSDG

SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 21 (LC de PF83)

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVLVIYQ DKNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVF GGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA WKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV THEGSTVEKTVAPTECS

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Anticorpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1), caracterizado pelo fato de que compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6, e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

   2. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende: (i). uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; (ii). uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12; (iii). uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11; ou (iv). uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

   13.

   3. Célula de mamífero, caracterizada pelo fato de que é capaz de expressar um anticorpo que compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6, e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

   4. Célula de mamífero, caracterizada pelo fato de que é capaz de expressar um anticorpo que compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10, e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

   5. Processo para produzir um anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar uma célula de mamífero capaz de expressar o anticorpo e recuperar o anticorpo; em que o anticorpo compreende HCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, HCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, HCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, LCDR1 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, LCDR2 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6, e LCDR3 tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

   6. Processo para produzir um anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar uma célula de mamífero capaz de expressar o anticorpo e recuperar o anticorpo; em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10, e uma cadeia leve tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

   7. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que é produzido pelo processo como definido em qualquer uma das reivindicações 8 a

   9.

   8. Molécula de DNA, caracterizada pelo fato de que compreende um polinucleotídeo tendo a sequência da SEQ ID NO: 14 e uma dentre as SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 17.

   9. Molécula de DNA, caracterizada pelo fato de que compreende um polinucleotídeo tendo a sequência da SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 17.

   10. Célula de mamífero, caracterizada pelo fato de que compreende a molécula de DNA como definida na reivindicação 11 ou

   12.

   11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo como definido em uma das reivindicações 1 a 5 e 10 e um veículo, diluente ou excipiente aceitável.

   12. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 e 10, caracterizado pelo fato de que é para uso em terapia.

   13. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 e 10, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de câncer.

   14. Anticorpo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o câncer é: (i). câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal, ou câncer de tireoide; (ii). colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras, ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço; ou

   (iii). câncer de bexiga, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, ou carcinoma de células renais.

   15. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 14, caracterizado pelo fato de que é para ser administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

   16. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 15, caracterizado pelo fato de que é para ser administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

   17. Uso do anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1-5 e 10, caracterizado pelo fato de que é para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer.

   18. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o câncer é: (i). câncer de bexiga, câncer de mama, câncer do trato biliar, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de próstata, câncer retal, ou câncer de tireoide; (ii). colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, adenocarcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de pulmão, carcinoma renal de células claras, ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço; ou (iii). câncer de bexiga, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, ou carcinoma de células renais.

   19. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 18, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é para ser administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com radiação ionizante.

   20. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 19, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é para ser administrado em combinação simultânea, separada ou sequencial com um ou mais agentes quimioterápicos.

   21. Invenção, caracterizada em quaisquer formas de suas concretizações ou em qualquer categoria aplicável de reivindicação, por exemplo, de produto ou de processo ou uso ou qualquer outro tipo de reivindicação englobada pela matéria inicialmente descrita, revelada ou ilustrada no pedido de patente.