BR112019027722A2

BR112019027722A2 - mistura antimicrobiana, composição e uso de uma mistura antimicrobiana

Info

Publication number: BR112019027722A2
Application number: BR112019027722-6A
Authority: BR
Inventors: Florence Menard-Szczebara; Sylvie Cupferman; Julien Galvan; Véronique Chevalier
Original assignee: L'oreal
Priority date: 2017-06-30
Filing date: 2018-06-27
Publication date: 2020-07-28
Also published as: BR112019027722B1; RU2730023C1; JP7220680B2; BR112019027722A8; EP3644734A1; US11752079B2; JP2023014168A; JP2020525481A; CN111031795A; ES2873839T3; WO2019002392A1; EP3644734B1; US20210205192A1; CN111031795B

Abstract

A invenção se refere a uma mistura antimicrobiana que contém 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e um composto diol escolhido dentre 1,3-propanodiol, 1,2-octanodiol e 1,2-decanodiol, e também a uma composição cosmética contendo tal mistura. Uso no cuidado, na preparação e na limpeza de materiais de queratina.

Description

“MISTURA ANTIMICROBIANA, COMPOSIÇÃO E USO DE UMA MISTURA ANTIMICROBIANA”

[0001] A matéria da presente invenção é uma mistura antibacteriana contendo 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e um composto diol específico e também uma composição cosmética contendo tal mistura.

[0002] A 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona (composto cetona) é uma substância interessante como agente conservante para composições cosméticas, para proteger as composições contra a contaminação microbiana, conforme descrito no pedido no WO 2011/039445.

[0003] Entretanto, é desejável ter capacidade para incorporar o dito composto cetona em concentração reduzida nas composições, especialmente composições cosméticas ou dermatológicas, enquanto, a mesmo tempo, mantém bom desempenho de conservação antimicrobiana.

Combinações do composto cetona com outros compostos que têm eficácia antimicrobiana são, assim, procuradas para esse propósito.

[0004] Os inventores constataram inesperadamente que a combinação de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona com um composto diol escolhido dentre 1,3-propanodiol, 1,2-octanodiol e 1,2-decanodiol possibilita a obtenção de uma mistura antimicrobiana que tem atividade antimicrobiana sinérgica.

[0005] Os resultados dos exemplos descritos abaixo mostram a atividade antimicrobiana sinérgica obtida com as medições de concentração inibitória mínima (MIC) realizadas com diversas misturas. A atividade antimicrobiana é considerada sinérgica quando a mistura antimicrobiana possibilita a obtenção de uma porcentagem de crescimento de cepa menor ou igual a 20% ou até menor ou igual a 25%.

[0006] A combinação de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona com 1,3-propanodiol em razões de peso específicas possibilita a obtenção de uma mistura antimicrobiana com atividade antimicrobiana sinérgica, em particular, em bolores, em particular, em Aspergillus niger.

[0007] O pedido no FR-A-2973227 descreve uma composição cosmética contendo 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e um solvente hidrofílico específico que inclui 1,3-propanodiol. O dito solvente possibilita a dissolução do composto cetona. Este documento não descreve qualquer propriedade antimicrobiana para a mistura descrita.

[0008] A combinação de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona com 1,2-octanodiol possibilita a obtenção de uma mistura antimicrobiana com atividade antimicrobiana sinérgica, em particular, em leveduras, em particular, em Candida albicans.

[0009] O pedido no FR-A-2962333 descreve uma composição cosmética para o tratamento de pele oleosa que compreende um 2-alcoxi-4- alquil cetona fenol de um óleo essencial. A composição pode compreender um agente ativo adicional para cuidados com a pele oleosa, tal como agente antimicrobianos, entre os quais é feita menção ao caprilil glicol. Este documento não descreve especificamente uma mistura antimicrobiana constituída pela combinação de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona com 1,2-octanodiol, nem sugere que tal mistura tenha atividade antimicrobiana sinérgica em leveduras, em particular, em Candida albicans.

[0010] A combinação de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona com 1,2-decanodiol possibilita a obtenção de uma mistura antimicrobiana que tem atividade antimicrobiana sinérgica, em particular, em bolores, em particular, em Aspergillus niger, e em leveduras, em particular, em Candida albicans.

[0011] Mais especificamente, uma matéria da invenção é uma mistura antimicrobiana que compreende ou é constituída por 4-(3-etoxi-4- hidroxifenil)butan-2-ona e um composto diol escolhido dentre 1,3-propanodiol, 1,2-octanodiol e 1,2-decanodiol e, quando o diol for 1,3-propanodiol, este último está presente em uma razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2- ona/1,3-propanodiol na faixa de 0,02 a 0,15.

[0012] Uma matéria da invenção é também uma composição, especialmente uma composição cosmética ou dermatológica, que compreende, em um meio fisiologicamente aceitável, a dita mistura descrita anteriormente.

[0013] Uma matéria adicional da invenção é um processo para o tratamento cosmético não terapêutico de materiais de queratina que compreende a aplicação de uma composição, conforme descrita anteriormente, aos materiais de queratina. O processo pode ser um processo cosmético para o cuidado, a preparação ou a limpeza de materiais de queratina.

[0014] Uma matéria da invenção é também um processo para conservar uma composição que compreende um meio fisiologicamente aceitável, em particular, uma composição cosmética ou dermatológica, caracterizada por consistir na incorporação, na dita composição, de uma mistura antimicrobiana conforme descrito anteriormente.

[0015] Uma matéria da invenção é também o uso da mistura antimicrobiana descrita anteriormente para a conservação de uma composição que compreende um meio fisiologicamente aceitável.

[0016] A 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona é um composto de fórmula:

HO O O

[0017] De acordo com uma primeira realização, uma matéria da invenção é uma mistura antimicrobiana que compreende ou é constituída por 4- (3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,3-propanodiol presentes em quantidades tais que a razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,3- propanodiol varia de 0,02 a 0,15.

[0018] Vantajosamente, 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,3-propanodiol

[0019] estão presentes na dita mistura em um teor de modo que a razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,3-propanodiol varie de 0,02 a 0,07.

[0020] De acordo com uma segunda realização, uma matéria da invenção é uma mistura antimicrobiana que compreende ou é constituída por 4- (3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,2-octanodiol.

[0021] 1,2-Octanodiol corresponde ao composto caprilil glicol (no CAS: 1117-86-8).

[0022] Vantajosamente, 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,2-octanodiol estão presentes na dita mistura em um teor de modo que a razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,2-octanodiol varie de 0,1 a 1,5, preferivelmente, varie de 0,2 a 1,1.

[0023] De acordo com uma terceira realização, uma matéria da invenção é uma mistura antimicrobiana que compreende ou é constituída por 4- (3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,2-decanodiol.

[0024] Vantajosamente, 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,2-decanodiol estão presentes na dita mistura em um teor de modo que a razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,2-decanodiol varie de 1,6 a 12, preferivelmente, varia de 1,6 a 10 e, preferivelmente, varia de 2,8 a 9.

[0025] A mistura antimicrobiana pode ter uma razão em peso de 4- (3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,2-decanodiol na faixa de 1,6 a 6,4, preferivelmente, na faixa de 1,6 a 4,8, preferivelmente, na faixa de 2,8 a 6,4 e, mais preferivelmente, na faixa de 2,8 a 4,8. Tal mistura tem boa atividade antimicrobiana em bolores, especialmente em Aspergillus niger.

[0026] A mistura antimicrobiana pode ter uma razão em peso de 4- (3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,2-decanodiol na faixa de 2,8 a 12, preferivelmente, na faixa de 3,2 a 10, em particular, na faixa de 3,5 a 9, preferivelmente, na faixa de 6 a 12, mais preferivelmente, na faixa de 6 a 10, em particular, na faixa de 6 a 9. Tal mistura tem boa atividade antimicrobiana em leveduras, em particular, em Candida albicans.

[0027] O composto 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona pode estar presente na composição de acordo com a invenção em uma quantidade na faixa de 0,01% a 5% em peso em relação ao peso total da composição, preferivelmente, na faixa de 0,01% a 3% em peso, preferivelmente, na faixa de 0,01% a 2,5% em peso e, mais preferivelmente, na faixa de 0,01% a 2% em peso.

[0028] Uma matéria da invenção é também uma composição que compreende, em um meio fisiologicamente aceitável, a mistura antimicrobiana descrita anteriormente.

[0029] O termo “meio fisiologicamente aceitável” se destina a significar um meio que é compatível com materiais de queratina humana, tais como a pele, o couro cabeludo, os cabelos e as unhas. O dito meio pode compreender um ou mais ingredientes adicionais diferentes do composto cetona e do diol descritos anteriormente.

[0030] A composição pode compreender pelo menos um ingrediente adicional escolhido dentre água, óleos, polióis contendo de 2 a 10 átomos de carbono, agentes gelificantes, tensoativos, polímeros formadores de filme, corantes, fragrâncias, cargas, agentes protetores contra UV, extratos vegetais, agentes ativos cosméticos e dermatológicos e sais.

[0031] A composição de acordo com a invenção pode compreender uma fase aquosa.

[0032] A composição pode compreender água, a qual pode estar presente em um teor na faixa de 5% a 90% em peso em relação ao peso total da composição e, preferivelmente, na faixa de 35% a 75% em peso.

[0033] A composição também pode compreender um poliol que é miscível em água à temperatura ambiente (25 °C) especialmente escolhido dentre polióis contendo especialmente de 2 a 10 átomos de carbono, preferivelmente, contendo de 2 a 6 átomos de carbono, tais como glicerol, propilenoglicol, 1,3-propanodiol, butilenoglicol, pentilenoglicol, hexilenoglicol, dipropilenoglicol, dietilenoglicol ou diglicerol.

[0034] As composições de acordo com a invenção podem estar sob a forma de emulsões de óleo em água (O/A), emulsões de água em óleo (A/O) ou emulsões múltiplas (tripla: A/O/A ou O/A/O), soluções oleosas, géis oleosos, soluções aquosas, géis aquosos, composições sólidas. Essas composições são preparadas de acordo com os métodos usuais.

[0035] As composições de acordo com a invenção podem ser mais ou menos fluídas e podem ter a aparência de um creme branco ou colorido, um unguento, um leite, uma loção, um soro, uma pasta ou uma espuma. As mesmas podem ser opcionalmente aplicadas à pele em forma de aerossol. As mesmas também podem estar na forma sólida, por exemplo, na forma de um “bastão” ou de um pó compacto.

[0036] A composição de acordo com a invenção pode estar especialmente sob a forma de: - um produto de maquiagem, especialmente para maquiar a pele do rosto, do corpo, dos lábios ou dos cílios; - um gel ou loção pós-barba; um produto de barbear; - um desodorante (em bastão, com aplicador de esfera ou aerossol); - um creme para depilação; - uma composição de higiene corporal, tal como um gel de banho ou um xampu;

- uma composição farmacêutica; - uma composição sólida, tal como um sabão ou uma barra de limpeza; - uma composição de aerossol compreendendo também um propulsor pressurizado; - uma loção para pentear os cabelos, um creme ou gel para modelagem de cabelos, uma composição de tingimento, uma composição de ondulação permanente, uma loção ou um gel para combater a queda de cabelos ou um condicionador para cabelos; - uma composição para cuidar ou limpar a pele.

[0037] Uma matéria da invenção é também um processo para preparar uma composição, especialmente uma composição cosmética ou dermatológica, que compreende uma etapa de misturar 4-(3-etoxi-4- hidroxifenil)butan-2-ona, o diol descrito anteriormente e um ou mais ingredientes adicionais, especialmente ingredientes cosméticos ou dermatológicos, tais como aqueles descritos anteriormente.

[0038] A invenção é ilustrada com mais detalhes no exemplo que se segue. As quantidades dos ingredientes são expressas como percentagens em peso.

EXEMPLO 1: DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA SINÉRGICA COMO MIC

[0039] A demonstração de um efeito da atividade antimicrobiana sinérgica com uma mistura de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona (denominada substância A) e de um diol (denominado substância B) é realizada calculando- se o índice de sinergia (ou índice FIC) de acordo com a seguinte fórmula: Índice FIC = (MICa com B/MICa) + (MICb com A/MICb) com: - MICa com B: concentração mínima do produto A na combinação A + B que possibilita a obtenção de um efeito inibitório - MICb com A: concentração mínima do produto B na combinação A + B que possibilita a obtenção de um efeito inibitório.

- MICa: concentração inibitória mínima do produto A isoladamente.

- MICb: concentração inibitória mínima do produto B isoladamente.

[0040] Essa fórmula foi descrita pela primeira vez no artigo de F.C. Kull, P.C. Eisman, H.D. Sylwestrowka e R.L. Mayer, Applied Microbiology 9:538 a 541, 1961.

[0041] Para cada composto testado isoladamente, a MIC é considerada como a primeira concentração que possibilita a obtenção de uma porcentagem de crescimento microbiano menor ou igual a 20%.

[0042] No que diz respeito ás combinações testadas, MICa com b e MICb com a sãs as respectivas concentrações de A e de B nas combinações que possibilitam a obtenção de uma porcentagem de crescimento microbiano menor ou igual a 20%.

INTERPRETAÇÃO DO ÍNDICE FIC:

[0043] Quando o valor do índice FIC for menor ou igual 1, considera-se que a combinação dos compostos de teste tem um efeito sinérgico.

[0044] Os resultados obtidos são resumidos nas tabelas a seguir.

[0045] A combinação dos compostos A e B foi testada nas seguintes cepas: Aspergillus niger e/ou Candida albicans.

[0046] Foram usados a cepa microbiana Aspergillus niger ATCC 6275 e um meio de cultura líquido em caldo Sabouraud de concentração dupla suplementado com monopalmitato de sorbitano polioxietilenado (20 OE) (Tween 40 da Croda) e Phytagel© BioReagent (isto é, uma mistura de 5 g de Phytagel + 0,6 g e Tween 40 + 60 g de caldo Sabouraud).

[0047] Foram usados a cepa microbiana Candida albicans ATCC 10231 e um meio de cultura líquido em caldo Sabouraud de concentração dupla.

[0048] Uma microplaca de 96 poços e um tempo de incubação a 32,5 °C são usados.

[0049] O tempo de incubação da microplaca é: - de 18 a 24 h sob condições aeróbicas para Candida albicans ATCC 10231; - de 24 a 30 h sob condições aeróbicas para Aspergillus niger ATCC 6275.

TESTE

[0050] Para cada composto: A = composto 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)-2-butanona B = composto diol.

[0051] Uma solução de estoque a 10% (peso/volume) foi preparada misturando-se 1 g do composto em 9 ml de solução aquosa de ágar a 1%. Diluições sucessivas foram realizadas com a solução de ágar a 1%.

● Teste dos compostos A e B isoladamente 50 µl de cada uma das soluções derivadas obtidas que contêm o composto A ou B são adicionados aos poços da microplaca. 100 µl do caldo nutritivo líquido Sabouraud inoculado com a cepa Aspergillus niger e 50 µl de solução aquosa de ágar a 1% também são adicionados.

● Teste dos compostos A e B como uma mistura 50 µl de cada uma das soluções derivadas obtidas que contêm o composto A e 50 µl de cada uma das soluções derivadas obtidas que contêm o composto B são adicionados aos poços da microplaca. 100 µl do caldo nutritivo líquido Sabouraud inoculado a uma concentração dupla com a cepa Aspergillus niger também são adicionados.

CONTROLE DE CRESCIMENTO MICROBIANO

[0052] Um controle de crescimento microbiano positivo também foi preparado. O controle de crescimento microbiano positivo corresponde a uma mistura de 100 µl de solução aquosa de ágar a 1% com 100 µl de caldo nutritivo líquido Sabouraud inoculado a uma concentração dupla com a cepa Aspergillus niger na ausência dos compostos A e B.

CONTROLE DE ABSORVÂNCIA DOS COMPOSTOS A E B ISOLADAMENTE

[0053] Um controle de absorvância foi realizado em paralelo nos compostos A e B isoladamente. Esse controle corresponde a 100 µl de caldo nutritivo líquido Sabouraud estéril a concentração dupla + 100 µl de composto A ou B a concentração dupla.

[0054] Nos três casos (controle de absorvância, controle de crescimento e teste), o volume final presente em cada um dos poços da microplaca é de 200 µl.

[0055] Nos dois casos (teste e controle), o inóculo representa a concentração da cepa Aspergillus niger presente no volume final dos poços (200 µl) e está entre 2 e 6×105 cfu/ml de Aspergillus niger.

[0056] A concentração inibitória mínima (MIC) de cada composto A e B isoladamente e em combinação foi determinada por meio de medições de densidade óptica a um comprimento de onda de 620 nm.

[0057] O teste conforme descrito acima (testes, controle de absorvância e controle de crescimento) foi realizado novamente para testar a combinação A e B na cepa Candida albicans.

[0058] Os seguintes resultados foram obtidos com o composto B1 = 1,3-propanodiol:

ASPERGILLUS NIGER concentrações 0A 0,025 A 0,05 A 0,1 A testadas (em % em peso) 0 B1 42 25 10 0,125 B1 77 37 24 6 0,25 B1 62 27 12 6 (FIC 0,63)

concentrações 0A 0,025 A 0,05 A 0,1 A testadas (em % em peso) 0,5 B1 50 25 10 9 (FIC 0,75) 1 B1 36 6 5 8 (FIC 0,75) (FIC 1) 2 B1 11 10 -8 5 % de MIC de A % de MIC de MIC do composto Índice FIC isoladamente B1 cada um como uma isoladamente mistura % de A % de B1 0,1 2 0,025 1 0,75 Razão A/B1 = Sinergia 2

[0059] Os resultados obtidos mostram atividade inibitória sinérgica para as misturas: i) 0,025% de A e 1% de B1, isto é, razão A/B1 = 0,025 ii) 0,05% de A e 1% de B1, isto é, razão A/B1 = 0,05 iii) 0,05% de A e 0,5% de B1, isto é, razão A/B1 = 0,1 iv) 0,05% de A e 0,25% de B1, isto é, razão A/B1 = 0,2 EXEMPLO 2: DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA SINÉRGICA EM MIC NA

CEPA MICROBIANA CANDIDA ALBICANS

[0060] A demonstração de um efeito da atividade antimicrobiana sinérgica com uma mistura de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenilbutan-2-ona (denominada substância A) e de 1,2-octanodiol (denominado substância B2) é realizada, de acordo com o protocolo no Exemplo 1, na cepa Candida albicans.

[0061] Foram obtidos os seguintes resultados: concentrações 0A 0,025 A 0,05 A 0,1 A 0,2 A testadas (em % em peso) 0 B2 81 60 27 4 0,025 B2 79 72 46 16 2 (FIC 0,63) 0,05 B2 60 41 24 8 2 (FIC 0,5) (FIC 0,75) 0,1 B2 23 10 6 1 0 (FIC 0,63) (FIC 0,75) (FIC 1) 0,2 B2 0 0 0 0 0 % de MIC MIC de B2 MIC do composto Índice FIC de A cada um como uma mistura % de A % de B2 0,2 0,2 0,025 0,1 0,63 Razão A/B2 = 0,25

[0062] Os resultados obtidos mostram atividade inibitória sinérgica para as misturas: i) 0,025% de A e 0,1% de B2, isto é, razão A/B2 = 0,25 ii) 0,05% de A e 0,1% de B2, isto é, razão A/B2 = 0,5 iii) 0,1% de A e 0,1% de B2, isto é, razão A/B2 = 1 iv) 0,05% de A e 0,05% de B2, isto é, razão A/B2 = 1 v) 0,1% de A e 0,05% de B2, isto é, razão A/B2 = 2 vi) 0,1% de A e 0,025% de B2, isto é, razão A/B2 = 4 EXEMPLO 3: DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DA MISTURA

ANTIMICROBIANA

[0063] A eficácia antimicrobiana da mistura antimicrobiana de 4- (3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona + 1,2-octanodiol (respectiva razão em peso de 0,1) foi avaliada pelo de método de teste de desafio.

PROTOCOLO

[0064] O método do teste de desafio é constituído por uma contaminação artificial da amostra com cepas microbianas provenientes da coleta (bactérias, leveduras e bolores) e de uma avaliação do número de micro- organismos revivíveis sete dias após a inoculação.

[0065] A fim de demonstrar o efeito da mistura antimicrobiana, a atividade antimicrobiana de uma fórmula cosmética contendo 0,05% de 4-(3- etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 0,5% de 1,2-octanodiol foi comparada com a mesma fórmula isoladamente (controle), após inoculação com cerca de 106 CFU (unidades formadoras de colônia)/grama da formulação cosmética.

FÓRMULA COSMÉTICA

[0066] Uma emulsão de óleo em água para cuidados faciais que tem a seguinte composição foi preparada (teores em porcentagem em peso): Triestearato de sorbitano (Span 65 V da Croda) 0,9% Mistura de mono/diestearato de glicerila (36/64)/estearato de potássio (Tegin Pellets da Goldschmidt) 3% Estearato de polietilenoglicol (40 unidades de óxido de etileno) 2% 4-(3-Etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona 0,05% 1,2-Octanodiol 0,2% 1,3-Propanodiol 2% Óleo mineral, cera microcristalina e parafina (Vaseline Blanche Codex 236 da Aiglon) 4% Fração líquida de manteiga de carité (Shea Olein da Olvea) 1% Ciclopentadimetilsiloxano 5%

Álcool cetílico 4% Óleo da semente de damasco 0,3% Poli-isobuteno hidrogenado (Parleam da NOF Corporation) 7,2% Miristato de miristila 2% Ácido esteárico 1,2% Cafeína 0,1% Ácido cítrico 0,2% Glicerol 3% Hidróxido de sódio 0,05% Água q.s. 100% CULTURAS DE MICRO-ORGANISMOS Foram usadas 5 culturas puras de micro-organismos.

MICRO-ORGANISMOS Meio de subcultura T° ATCC Escherichia coli (Ec) Tripto-caseína de soja 35 °C 8739 Enterococcus faecalis (Ef) Tripto-caseína de soja 35 °C 33186 Pseudomonas aeruginosa (Pa) Tripto-caseína de soja 35 °C 19429 Candida albicans (Ca) Sabouraud 35 °C 10231 Aspergillus niger (An) Malte 35 °C 6275 ATCC = American Type Culture Collection

[0067] As cepas de bactérias gram-negativas (Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa), bactéria gram-positiva (Enterococcus faecalis), levedura (Candida albicans) e bolor (Aspergillus niger) são inoculadas em meio de subcultura, respectivamente, no dia anterior à inoculação para as bactérias e a levedura e 5 dias antes da inoculação para o bolor.

[0068] No dia da inoculação: - é preparada uma suspensão em diluente de sal de triptona, respectivamente, para as bactérias e a levedura, de modo a obter, por espectrofotômetro, uma suspensão com uma densidade óptica entre 35% e 45% de luz transmitida a 544 nm; - para o bolor, os esporos são coletados lavando-se o ágar com 6 a 7 ml de solução de coleta, e a suspensão é recuperada em um tubo ou frasco estéril.

[0069] Após a homogeneização da suspensão microbiana, 0,2 ml de inóculo é introduzido em cada frasco de comprimidos (as suspensões são usadas puras: entre 1×108 e 3×108 CFU por ml), e a suspensão microbiana nos 20 g de produto (= formulação cosmética) é cuidadosamente homogeneizada com o uso de uma espátula.

[0070] O teor de micro-organismos presentes no produto corresponde, após a homogeneização, a uma concentração de 10 6 micro- organismos por grama de produto, isto é, inoculação a 1% de um inóculo contendo 108 micro-organismos por ml.

[0071] Após 7 dias de tempo de contato entre os micro-organismos e o produto a 22 °C  2 °C e no escuro, são realizadas diluições de 10 vezes e o número de micro-organismos revivíveis restantes no produto é contado.

RESULTADOS No de CFU/grama de produto em T7 dias E.coli P. E. faecalis C. albicans A. niger aeruginosa Fórmula <200 <200 <200 <200 8,4 E4 cosmética <200 CFU: limite de sensibilidade do método EXEMPLO 4: DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA SINÉRGICA COMO MIC

[0072] A demonstração de um efeito da atividade antimicrobiana sinérgica com uma mistura de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona (denominada substância A) e de 1,2-decanodiol (denominado substância B3) é realizada de acordo com o protocolo descrito no Exemplo 1, com o uso das cepas Aspergillus niger e Candida albicans.

[0073] Foram obtidos os seguintes resultados:

ASPERGILLUS NIGER Concentrações 0A 0,025 A 0,05 A 0,1 A testadas (em % em peso) 0 B3 39 32 12 0,0125 B3 42 17 14 11 (FIC 0,75) (FIC 1) 0,025 B3 10 3 4 6 % de MIC de % de MIC de MIC de cada Índice FIC Razão A B3 composto como uma A/B3 isoladamente isoladamente mistura % de A % de B3 0,1 0,025 0,025 0,0125 0,75 2

[0074] Os resultados obtidos mostram atividade inibitória sinérgica para a mistura: i) 0,025% de A e 0,0125% de B3, isto é, razão A/B3 = 2 ii) 0,05% de A e 0,0125% de B3, isto é, razão A/B3 = 4

CANDIDA ALBICANS Concentrações 0A 0,025 A 0,05 A 0,1 A 0,2 A testadas (em % em peso) 0 B3 78 61 25 3 0,0125 B3 45 34 18 6 1

Concentrações 0A 0,025 A 0,05 A 0,1 A 0,2 A testadas (em % em peso) (FIC 0,75) (FIC 1) 0,025 B3 3 0 1 0 0 % de MIC de % de MIC de MIC de cada Índice FIC Razão A B3 composto como uma A/B3 isoladamente isoladamente mistura % de A % de B3 0,2 0,025 0,05 0,0125 0,75 4

[0075] Os resultados obtidos mostram atividade inibitória sinérgica para as misturas: i) 0,05% de A e 0,0125% de B3, isto é, razão A/B3 = 4 ii) 0,1% de A e 0,0125% de B3, isto é, razão A/B3 = 8 EXEMPLO 5: DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DA MISTURA

ANTIMICROBIANA

[0076] A eficácia antimicrobiana da mistura antimicrobiana de 4- (3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona + 1,3-propanodiol (composto B1) (respectiva razão em peso de 0,16) foi avaliada pelo método de teste de desafio conforme descrito no exemplo 3.

FÓRMULA COSMÉTICA

[0077] Uma emulsão de óleo em água para cuidados faciais que tem a seguinte composição foi preparada (teores em porcentagem em peso): Triestearato de sorbitano (Span 65 V da Croda) 0,9% Mistura de mono/diestearato de glicerila (36/64)/estearato de potássio

(Tegin Pellets da Goldschmidt) 3% Estearato de polietilenoglicol (40 unidades de óxido de etileno) 2% 4-(3-Etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona 0,5% 1,3-Propanodiol 5% Propano-1,3-diol 2% Mistura de óleo mineral, cera microcristalina e parafina (Vaseline Blanche Codex 236 da Aiglon) 4% Fração líquida de manteiga de carité (Shea Olein da Olvea) 1% Ciclopentadimetilsiloxano 5% Álcool cetílico 4% Óleo da semente de damasco 0,3% Poli-isobuteno hidrogenado (Parleam da NOF Corporation) 7,2% Miristato de miristila 2% Ácido esteárico 1,2% Cafeína 0,1% Glicerol 3% Hidróxido de sódio 0,05% Água qs 100%

RESULTADOS No de CFU/grama de produto em T7 dias E.coli P. E. faecalis C. albicans A. niger aeruginosa Mistura <200 <200 <200 <200 < 200 antimicrobiana <200 CFU: limite de sensibilidade do método

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. MISTURA ANTIMICROBIANA, caracterizada por compreender 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e um composto diol escolhido dentre 1,3- propanodiol, 1,2-octanodiol e 1,2-decanodiol e, quando o diol for 1,3- propanodiol, em que o mesmo está presente em uma razão em peso de 4-(3- etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,3-propanodiol na faixa de 0,02 a 0,15.

2. MISTURA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo composto diol ser 1,3-propanodiol.

3. MISTURA, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pela dita razão em peso variar de 0,02 a 0,07.

4. MISTURA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo composto diol ser 1,2-octanodiol.

5. MISTURA, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,2-octanodiol estarem presentes em quantidades tais que a razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2- ona/1,2-octanodiol varia de 0,1 a 1,5, preferivelmente, varia de 0,2 a 1,1.

6. MISTURA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo composto diol ser 1,2-decanodiol.

7. MISTURA, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por compreender 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona e 1,2-decanodiol em quantidades tais que a razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2- ona/1,2-decanodiol varia de 1,6 a 12, preferivelmente, varia de 1,6 a 10 e, preferivelmente, de 2,8 a 9.

8. MISTURA, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por ter uma razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,2-decanodiol na faixa de 1,6 a 6,4, preferivelmente, na faixa de 1,6 a 4,8, preferivelmente, na faixa de 2,8 a 6,4 e, mais preferivelmente, na faixa de 2,8 a 4,8.

9. MISTURA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ter uma razão em peso de 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona/1,2-decanodiol na faixa de 2,8 a 12, preferivelmente, na faixa de 3,2 a 10, em particular, na faixa de 3,5 a 9, preferivelmente, na faixa de 6 a 12, mais preferivelmente, na faixa de 6 a 10, em particular, na faixa de 6 a 9.

10. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender, em um meio fisiologicamente aceitável, uma mistura antimicrobiana, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.

11. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por compreender pelo menos um ingrediente adicional escolhido dentre água, óleos, polióis contendo de 2 a 10 átomos de carbono, agentes gelificantes, tensoativos, polímeros formadores de filme, corantes, fragrâncias, cargas, agentes protetores contra UV, extratos vegetais, agentes ativos cosméticos e dermatológicos, e sais.

12. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 11, caracterizada por 4-(3-etoxi-4-hidroxifenil)butan-2-ona estar presente em um teor na faixa de 0,01% a 5% em peso em relação ao peso total da composição, preferivelmente, na faixa de 0,01% a 3% em peso e, preferivelmente, na faixa de 0,01% a 2,5% em peso.

13. USO DE UMA MISTURA ANTIMICROBIANA, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1a 9, caracterizado por se destinar à conservação de uma composição que compreende um meio fisiologicamente aceitável.