BR112019011137A2 - aparelho para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos em testes aquosos - Google Patents

aparelho para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos em testes aquosos Download PDF

Info

Publication number
BR112019011137A2
BR112019011137A2 BR112019011137A BR112019011137A BR112019011137A2 BR 112019011137 A2 BR112019011137 A2 BR 112019011137A2 BR 112019011137 A BR112019011137 A BR 112019011137A BR 112019011137 A BR112019011137 A BR 112019011137A BR 112019011137 A2 BR112019011137 A2 BR 112019011137A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
cell culture
culture plate
light
light source
side face
Prior art date
Application number
BR112019011137A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112019011137B1 (pt
Inventor
Fois Franco
Ochmann Klaus
Harnau Michael
Original Assignee
Bayer Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Ag filed Critical Bayer Ag
Publication of BR112019011137A2 publication Critical patent/BR112019011137A2/pt
Publication of BR112019011137B1 publication Critical patent/BR112019011137B1/pt

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G01N33/5085—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of invertebrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/251—Colorimeters; Construction thereof
    • G01N21/253—Colorimeters; Construction thereof for batch operation, i.e. multisample apparatus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/84—Systems specially adapted for particular applications
    • H—ELECTRICITY
    • H04—ELECTRIC COMMUNICATION TECHNIQUE
    • H04N—PICTORIAL COMMUNICATION, e.g. TELEVISION
    • H04N23/00—Cameras or camera modules comprising electronic image sensors; Control thereof
    • H04N23/56—Cameras or camera modules comprising electronic image sensors; Control thereof provided with illuminating means
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/255—Details, e.g. use of specially adapted sources, lighting or optical systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2201/00—Features of devices classified in G01N21/00
    • G01N2201/06—Illumination; Optics
    • G01N2201/062—LED's
    • G01N2201/0621—Supply
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2201/00—Features of devices classified in G01N21/00
    • G01N2201/06—Illumination; Optics
    • G01N2201/063—Illuminating optical parts
    • G01N2201/0631—Homogeneising elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/43504—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates
    • G01N2333/43526—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms
    • G01N2333/4353—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms from nematodes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Multimedia (AREA)
  • Signal Processing (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

aparelho para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos em testes aquosos. a invenção refere-se a um aparelho (1) para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos em testes aquosos, compreendendo um suporte (40) para receber uma placa de cultura celular (50) com poços (57), nos quais os nematódeos com os ingredientes ativos podem ser preenchidos, em que a placa de cultura celular (50) tem um lado inferior (51), um lado superior (52) e uma pluralidade de faces laterais, que se estendem entre o lado inferior (51) e lado superior (52), uma câmera (20) que serve para registrar imagens de preferência do lado inferior (51) da placa de cultura celular (50) e um dispositivo de iluminação (30) para iluminar a placa de cultura celular (50), em que a iluminação dispositivo (30) compreende uma pluralidade de fontes de luz. de acordo com a invenção, na posição de utilização da placa de cultura celular (50), é previsto que a luz de uma primeira fonte de luz (31) entre na placa de cultura celular (50) a partir de fora por meio de uma primeira face lateral (53), a luz de uma segunda fonte de luz (32) entre na placa de cultura celular (50) a partir de fora por meio de uma segunda face lateral (54), a luz de uma terceira fonte de luz (33) entre na placa de cultura de células (50) a partir de fora por meio de uma terceira face lateral (55) e a luz de uma quarta fonte de luz (34) entre na placa de cultura celular (50) a partir de fora por meio de uma quarta face lateral (56). além disso, a invenção se refere a um método para ajustar as fontes de luz individuais.

Description

APARELHO PARA ESTABELECER O EFEITO DE INGREDIENTES ATIVOS EM NEMATÓDEOS E OUTROS ORGANISMOS EM TESTES AQUOSOS [001] A invenção se refere a um aparelho para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos em testes aquosos. Além disso, a invenção se refere a um método para ajustar um dispositivo de iluminação do aparelho.
[002] Muitas espécies de nematódeos (nematelmintos) representam pragas agrícolas, pois podem prejudicar gravemente o metabolismo da planta como resultado de sua penetração nos sistemas da raiz. Várias substâncias químicas, chamadas nematicidas, já foram desenvolvidas contra um ataque pelos nematódeos. Entretanto, há uma grande demanda para identificar os ingredientes ativos que podem controlar os nematódeos de maneira eficaz.
[003] O documento WO 2016/116291 Al divulgou um aparelho para estabelecer o efeito dos ingredientes ativos nos nematódeos, por meio do qual uma multiplicidade de ingredientes ativos pode ser testada em um curto periodo. Aqui, os poços individuais de uma placa de cultura celular, que são preenchidos como nematódeos e diferentes ingredientes ativos, são examinados de maneira simultânea. A placa de cultura celular mantida por um suporte do aparelho tem um lado inferior, um lado superior e quatro faces laterais que se estendem entre o lado inferior e o lado superior da placa de cultura celular. O aparelho compreende uma câmera que serve para registrar imagens no lado inferior da placa de cultura celular e, dessa forma, de todos os poços ao mesmo tempo. Um dispositivo de iluminação do aparelho tem duas fontes de luz opostas que iluminam a placa de cultura celular.
[004] Foi constatado que a aplicação do aparelho em WO 2016/116291 Al atinge seu limite ao examinar os nematelmintos muito pequenos como dirofilaria. Embora a resolução do aparelho possa ser aumentada, em principio, selecionando uma câmera de resolução mais alta de forma correspondente, foi constatado que a falta de homogeneidade na iluminação da placa de cultura celular não pode mais ser corrigida em um grau satisfatório por meio do software no caso de uma resolução relativamente elevada. Consequentemente, um estabelecimento confiável e robusto do
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 35/53
2/14 efeito dos ingredientes ativos não é mais possivel no caso de organismos muito pequenos.
[005] Portanto, a invenção se baseia no objeto de fornecimento de um aparelho para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos, por meio do qual um estabelecimento confiável do efeito dos ingredientes ativos é possivel, mesmo no caso de organismos muito pequenos, como dirofilaria.
[006] O objetivo básico da invenção é alcançado pelo uso de um aparelho de acordo com a reivindicação 1. Representações de exemplo da invenção podem ser reunidas com base nas reivindicações dependentes em relação à reivindicação 1.
[007] De acordo com a invenção, o aparelho é distinguido em virtude de, em cada caso, a luz de uma primeira fonte de luz entrar na placa de cultura celular a partir de fora por meio de uma primeira face lateral, a luz de uma segunda fonte de luz entrar na placa de cultura celular a partir de fora por meio de uma segunda face lateral, a luz de uma terceira fonte de luz entrar na placa de cultura celular a partir de fora por meio de uma terceira face lateral e a luz de uma quarta fonte de luz entrar na placa de cultura celular a partir de fora por meio de uma quarta face lateral. Consequentemente, a luz entra no interior da placa de cultura celular a partir de todas as faces laterais. Em principio, uma iluminação uniforme da placa da cultura celular dentro do sentido da invenção é possivel como resultado dessa média. Consequentemente, o efeito de ingredientes ativos, mesmo em organismos muito pequenos, pode ser examinado nas placas de cultura celular no caso de uma câmera correspondentemente potente. Consequentemente, é possivel obter resultados robustos no caso de uma resolução de 30 pm ou melhor. Em uma representação exemplar, a resolução é melhor do que 20 pm, por exemplo, 15 pm.
[008] Uma intensidade da luz pode ser definida individualmente para a primeira fonte de luz. Isso também se aplica de maneira análoga à segunda fonte de luz, à terceira fonte de luz e à quarta fonte de luz. A titulo de exemplo, é consequentemente
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 36/53
3/14
possível definir a intensidade da luz da primeira fonte de luz
independentemente da intensidade da luz da segunda fonte de luz
ou qualquer outra fonte de luz. Por fim, as quatro fontes de luz
são capazes de emitir a luz na placa de cultura celular com
diferentes intensidades de luz em cada caso. [009] A primeira fonte de luz pode ser disposta lateralmente,
próxima à primeira face lateral e, dessa forma, na posição de uso da placa de cultura celular (a placa de cultura celular se estende em um plano horizontal neste caso), um feixe de luz da primeira fonte de luz alcança de maneira consideravelmente horizontal a placa de cultura celular por meio da primeira face lateral. Consequentemente, os possíveis espelhos defletores ou outras deflexões óticas podem ser dispensados.
[010] As explicações em relação à primeira fonte de luz devem também se aplicar de maneira análoga a outras fontes de luz. Dessa forma, por exemplo, a segunda fonte de luz, também, pode ser organizada lateralmente próxima à segunda face lateral. As características relacionadas à primeira fonte de luz e que são descritas abaixo podem também ser implementadas em uma das únicas fontes de luz remanescentes, em algumas das fontes de luz remanescentes ou em todas as fontes de luz remanescentes.
[Oil] A invenção assume uma placa de cultura celular retangular, que tem uma forma básica retangular com duas faces laterais paralelas em cada caso. A título de exemplo, a proporção de bordas longas (faces laterais longas) para bordas curtas (faces laterais curtas) pode ser de 3 para 2. Os poços geralmente são dispostos em uma pluralidade de linhas que são dispostas paralelas uma em relação à outra. A título de exemplo, uma placa de cultura celular pode ter 8 linhas com 12 poços em cada caso. Em geral, de acordo com a norma ANSI, as microplacas retangulares com 6, 12, 24, 96 ou 384 poços são usadas.
[012] A invenção é baseada na descoberta de que a boa iluminação de todos os postos da placa de cultura celular, que é exigida ao se examinar organismos muito pequenos, pode ser implementada por meio de um dispositivo de iluminação se a luz entrar na placa de cultura celular de todas as faces laterais. No caso de uma placa
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 37/53
4/14 de cultura celular hexagonal, a forma básica correspondente da qual, entretanto, é atualmente incomum, todas as seis faces laterais teriam que ser irradiadas com luz de acordo com a invenção. No caso de uma placa de cultura celular triangular, o uso de apenas três fontes de luz seria suficiente.
[013] Em geral, as faces laterais se estendem entre o lado superior e o lado inferior da placa de cultura celular, que tem paredes que transmitem a luz.
[014] A primeira fonte de luz geralmente se estende por toda a primeira face lateral, como um resultado da qual uma irradiação uniforme da primeira face lateral é possível.
[015] Em uma representação de exemplo, uma altura vertical em relação à placa de cultura celular, um ângulo de inclinação aproximadamente do próprio eixo longitudinal e/ou uma distância horizontal da qual a primeira face podem ser definidos de modo individual para a primeira fonte de luz com o objetivo de ajustar o dispositivo de iluminação.
[016] A iluminação da placa de cultura celular pode ser otimizada como resultado da configuração flexível e individualmente ajustável de cada fonte de luz. Aqui, vista espacialmente, cada fonte de luz é ajustável em três dimensões (altura, distância horizontal, ângulo de inclinação) . Além disso, uma quarta dimensão pode ser definida, especificamente a intensidade da luz. Foi constatado que a configuração individual precisa da fonte de luz em cada uma das faces laterais é de grande importância para a qualidade das medições, mesmo no caso de uma placa de cultura celular simétrica com uma forma básica retangular.
[017] Preferencialmente, cada fonte de luz é conectada a um controlador. De modo preferencial e particularmente, cada fonte de luz é montada em um suporte, que é conectado ao controlador ou um controlador separado.
[018] Uma altura vertical do feixe de luz que emerge da primeira fonte de luz pode ser de 2 a 6 mm, preferencialmente 3 a 5 mm. No caso de a disposição lateral da primeira fonte de luz, esse feixe de luz sem um ângulo de inclinação entra horizontalmente
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 38/53
5/14 na placa de cultura celular através da primeira face lateral, isto é, o lado superior e o lado inferior.
[019] Preferencialmente, um ângulo de abertura do feixe de luz é muito pequeno, de modo que, por exemplo, um filme de cobertura que cobre os poços individuais da placa de cultura celular não seja iluminado e, consequentemente, incapaz de causar efeitos de interferência. Entretanto, valores maiores para o ângulo de abertura poderão também ser tolerados se, por exemplo, apenas uma porção vertical pequena da placa de cultura celular for representada em foco pela câmera e, portanto, o plano da placa de cultura celular na qual o filme de cobertura está situado não estiver mais em foco. Nesta representação, toda a radiação de entrada é mantida de maneira que a placa de cultura celular seja apenas iluminada de baixo para cima para a profundidade do campo definido pela lente. O filme de cobertura ou de proteção é preferencialmente não iluminado para evitar as reflexões de luz.
[020] Preferencialmente, o controlador é configurado para automaticamente executar um método para ajuste do dispositivo de iluminação.
[021] A primeira fonte de luz pode ter um número de diodos de emissão de luz (LEDs) que sejam dispostos uns próximos aos outros. Para produzir uma luz uniforme por um comprimento efetivo da primeira fonte de luz, a primeira fonte de luz pode ter uma disposição de lente Fresnel. Como resultado dessa disposição de lente Fresnel, a primeira fonte de luz consequentemente emite um feixe de luz cuja intensidade é constante quando vista pela extensão longitudinal da fonte de luz .
[022] O suporte para a placa de cultura celular (também chamado de suporte MTP) pode ter uma pluralidade de cantos receptores, um primeiro canto receptor servindo para receber uma extremidade da primeira face lateral e um segundo canto receptor servindo para receber uma extremidade oposta da primeira face lateral. Aqui, a distância entre o primeiro canto receptor e o segundo canto receptor é preferencialmente maior que um comprimento de uma linha de poços, que se estende ao longo da primeira face
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 39/53
6/14 lateral. A luz da primeira fonte de luz pode consequentemente entrar na placa de cultura celular desimpedida por todo o comprimento da linha de poços. De preferência, o suporte é representado de maneira que nenhum outro obstáculo seja disposto entre a primeira fonte de luz e a primeira face lateral da placa de cultura celular a fim de facilitar uma entrada de luz desimpedida e sem sombra da primeira fonte de luz na placa de cultura celular.
[023] A câmera pode ter uma lente telecêntrica para uma medição precisa (por ex. , fabricada pela Sill Optics) para excluir ou pelo menos amplamente excluir uma anormalidade perspectiva da imagem nas bordas da placa de cultura celular.
[024] Em geral, é feito o uso de uma câmera digital com um sensor de imagem. Preferencialmente, o fundo da placa de cultura celular é ajustado em relação à superfície do sensor de imagem (também chamado de inclinação de chip) e a placa de cultura celular é girada em relação ao sensor de imagem de modo que a placa de cultura celular seja ajustada paralelamente ao sensor de imagem (preferencialmente superfície e laterais) com a maior precisão possível. Para fins de ajuste, o suporte MTP geralmente é ajustável de modo preciso em todas as direções, por exemplo, por meio de aperto com uma resistência definida.
[025] Como resultado de aplicação de uma lente telecêntrica em combinação com uma placa de cultura celular ajustável montada em um suporte MTP, foi possível atingir uma distorção de <+/-2%, isto é, um registro de imagem plana sem correção de software. Além disso, uma pequena profundidade de campo pode ser definida com o objetivo de abertura das lentes telecêntricas, como um resultado da qual os efeitos de interferência, causados pelos filmes de cobertura citados acima para os poços, por exemplo, podem ser reduzidos.
[026] O aparelho, de acordo com a invenção, facilita a análise de imagem de superficies de placa completas e é adequado para placas de cultura celular com até 384 poços com pequenos organismos, como dirofilaria (limite de resolução de aproximadamente 15 pm) , por exemplo. Claramente, as imagens de
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 40/53
7/14 toda a área das placas de cultura celular contendo organismos ou partículas suspensas em soluções podem ser registradas, em geral, com a ajuda do aparelho de acordo com a invenção e podem ser processadas por meio de análise de imagem.
[027] Durante a operação do aparelho, a câmera registra uma pluralidade de imagens digitais de todo o lado inferior, por exemplo, uma placa de cultura celular que compreende 96 poços em intervalos de tempo de 1 a 5 segundos, por exemplo. Por meio de uma avaliação dessas imagens na base de uma análise de pixel, para cada poço individual, é possível estabelecer uma determinada característica para a velocidade média com a qual a dirofilaria situada nesse poço se move, por exemplo. Aqui, por uma questão de princípios, a velocidade média em um poço com um ingrediente ativo efetivo é inferior à do poço sem um ingrediente ativo. Consequentemente, a efetividade de um ingrediente ativo pode ser estimada na base de uma velocidade média. Neste contexto, é feito referência a WO 2016/116291 Al, que, em detalhes, descreve um método correspondente para estabelecimento do efeito dos ingredientes ativos, sendo possível operar o aparelho de acordo com a invenção com base no método citado.
[028] No caso de uma placa de cultura celular iluminada uniformemente e completamente e no caso de poços que são preenchidos até o mesmo limite em cada caso (por exemplo, sem um ingrediente ativo em cada caso), a mesma velocidade média para o movimento de dirofilaria deveria teoricamente surgir para cada poço se a variação biológica presente necessária for excluída. Em contraposição, os resultados se desviam de maneira significativa uns dos outros apesar de preencherem se a iluminação dos poços for muito ruim. Portanto, a declaração sobre os ingredientes ativos individuais não seria sólida no caso de uma placa de cultura celular com poços preenchidos com diferentes ingredientes ativos que é iluminada dessa forma. Entretanto, o dispositivo de iluminação do aparelho de acordo com a invenção torna possível manter a influência das diferenças na iluminação, que não pode ser totalmente impedida na prática,
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 41/53
8/14 tão pequeno que uma declaração sólida sobre o efeito de ingredientes ativos é possivel, mesmo no caso de dirofilaria muito pequena (isto é, no caso de uma solução elevada de maneira correspondente).
[029] Além disso, o objetivo consistia em fornecer um método para ajustar o dispositivo de iluminação do aparelho descrito acima em várias representações. Esse objetivo é alcançado pela combinação de características de acordo com a reivindicação 12. Representações de exemplo do método de acordo com a invenção podem ser reunidas com base nas reivindicações dependentes em relação à reivindicação 12.
[030] Para cada uma das fontes de luz, o método de acordo com a invenção proporciona a altura relativa em relação à placa de cultura celular, o ângulo de inclinação, a distância horizontal à face lateral adjacente e a intensidade da luz a ser ajustada individualmente para obter uma iluminação dos poços individuais da placa de cultura celular que seja tão uniforme quanto possivel.
[031] Em um processo sistemático, parâmetros individuais (altura, distância, ângulo de inclinação, intensidade da luz) podem ser definidos iterat ivamente para cada fonte de luz e, usando esses parâmetros definidos, é possivel realizar um estabelecimento acima descrito da velocidade média para cada poço igualmente preenchido em cada caso. Este processo pode ser repetido com a frequência desejada. Quanto menos os resultados estabelecidos para a velocidade média se desviarem um do outro no processo, menor a influência da iluminação não uniforme da placa de cultura celular nos resultados do ensaio. Por fim, se os resultados apenas desviarem um do outro com uma ordem de magnitude que pode ser rastreada até a variância biológica, o método do ajuste poderá ser concluido.
[032] O método para ajustar o dispositivo de iluminação pode permitir que a câmara seja utilizada para criar uma imagem de uma folha monocromática que está situada em um plano acima de uma placa de cultura celular (por exemplo, a folha pode ser disposta em uma placa de cultura celular não preenchida situada
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 42/53
9/14 no suporte com a interposição de uma outra placa de cultura celular vazia) e para que o ajuste seja implementado ou refinado com base em uma avaliação da imagem. A titulo de exemplo, um histograma da intensidade da luz pode ser produzido a partir da imagem e o ajuste pode ser implementado com base nesse histograma. A iluminação uniforme da folha será fornecida se o histograma associado em cada caso tiver a mesma intensidade de luz para todas as sub-regiões (estes também podem ser os pixels individuais da imagem digital), o que significaria que o histograma consiste em apenas uma barra com essa intensidade de luz .
[033] Em uma representação de exemplo, o dispositivo de iluminação é ajustado, primeiramente, por meio dos resultados de uma placa de cultura celular com poços igualmente cheios e, adicionalmente, por meio da folha acima descrita. O ajuste (primeiro) com base na placa de cultura celular igualmente cheia e o (pós) ajuste pela folha podem ser implementados várias vezes em sucessão e/ou na ordem inversa.
[034] Além disso, a intensidade de luz das fontes de luz individuais pode ser reduzida no final de um ajuste, em cada caso pela mesma magnitude ou de maneira proporcional, de tal forma que um valor predeterminado emerge para a intensidade de luz média da imagem da folha de papel monocromática (por exemplo, um valor médio de 128 se a intensidade da luz pode assumir valores de 0 a 256) . Então, durante o funcionamento do aparelho de acordo com a invenção, cada poço da placa de cultura celular é atribuido a uma região correspondente na folha de papel. Os valores da intensidade da luz para os pixels do poço, estabelecidos pela câmera, podem então ser normalizados com base na intensidade de luz da região correspondente na folha de papel. A titulo de exemplo, se uma região mais brilhante da folha de papel foi estabelecida para um poço, os valores para a intensidade de luz estabelecida para este poço são reduzidos pela normalização.
[035] O invento deve ser explicado em maior detalhe com base em uma representação de exemplo ilustrada nas figuras. Nas figuras:
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 43/53
10/14 [036] A figura 1 mostra esquematicamente a estrutura de um aparelho de acordo com a invenção;
[037] A figura 2 mostra esquematicamente uma placa de cultura celular e um dispositivo de iluminação com quatro fontes de luz; e [038] A figura 3 mostra uma seção ao longo da linha III-III na figura 2.
[039] A figura 1 mostra esquematicamente um aparelho para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em dirofilaria e outros organismos em testes aquosos. O aparelho, que é representado por 1 na sua totalidade, compreende um alojamento 10 com uma placa de separação superior 11 e uma placa de separação intermediária 12. As placas de separação 11, 12 dividem um interior rodeado pelo alojamento 10 por uma região superior 13, uma região intermediária 14 e uma região inferior 15. Uma câmara 20 é montada na região inferior 15. A câmara 20 tem uma lente telecêntrica 21, a extremidade 22 da qual está virada para o lado oposto da câmara 20 sobressai na zona intermédia 14 do alojamento 10. A placa de separação intermediária 12 tem uma abertura circular 16, através da qual a lente 21 passa. Aqui, uma porção 23 em forma cilíndrica da lente 21 é suportada na borda circular da abertura 16.
[040] Um dispositivo de iluminação 30 e um suporte 40 para uma placa de cultura celular 50 estão alojados na região superior 13 do alojamento 10. O dispositivo de iluminação 30, o suporte 40 e a placa de cultura celular 50 serão ainda descritos em maior detalhe abaixo com base nas Figuras 2 e 3.
[041] Além da câmara 20, a região inferior 15 do alojamento 10 também comporta um controlador 60 para a câmara 20 e o dispositivo de iluminação 30. Aqui, o controlador 60 pode consistir em unidades de controle separadas para a câmara 20 e o dispositivo de iluminação 30. O controlador 60 pode ser conectado a um computador.
[042] Utilizando o aparelho 1 de acordo com a invenção, é possível produzir imagens de um lado inferior 51 da placa de
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 44/53
11/14 cultura celular 50. Portanto, um painel de vidro 17 é incorporado na placa de separação 11.
[043] A figura 2 mostra o dispositivo de iluminação 30 de cima, o referido dispositivo de iluminação tendo uma primeira fonte de luz 31, uma segunda fonte de luz 32, uma terceira fonte de luz e uma quarta fonte de luz 34. A primeira fonte de luz 31 compreende uma pluralidade de diodos emissores de luz (não ilustrados), que estão dispostos um ao lado do outro em uma fila e emitem um feixe de luz em forma de faixa 35 sobre praticamente todo o comprimento da primeira fonte de luz 31. O feixe de luz é ilustrado pelas setas paralelas 35. Ao longo de praticamente todo o seu comprimento, as fontes de luz remanescentes 32, 33, emitem também um feixe de luz em forma de faixa na direção da placa de cultura celular 50. No entanto, as setas correspondentes para marcar os respectivos feixes de luz não estão ilustradas na Figura 2 por razões de clareza.
[044] Além do lado inferior 51 já mencionado acima, a placa de cultura celular 50 tem um lado superior 52 e uma primeira face lateral 53, uma segunda face lateral 54, uma terceira face lateral 55 e uma quarta face lateral 56. Devido à forma básica retangular da placa de cultura celular 50, as faces laterais opostas 53, 54 prolongam-se perpendicularmente ao outro par de faces laterais 55, 56 que se prolongam em paralelo.
[045] A placa de cultura celular 50 tem uma multiplicidade de poços 57, os quais estão dispostos em 8 linhas com 12 poços em cada caso. Como pode ser obtido a partir da Figura 3, cada poço individual 57 tem um formato de U na seção longitudinal. Aqui, cada poço 57 pode ser preenchido com uma solução aquosa a partir de cima, isto é, a partir do lado superior 52, estando a dirofilaria e um ingrediente ativo situados na referida solução aquosa. Quando o enchimento estiver completo, os poços poderão ser cobertos por um filme de cobertura.
[046] Como fica claro a partir da visão geral das Figuras 2 e 3, as fontes de luz individuais 31, 32, 33, 34 emitem luz para a placa de cultura celular 50 através das faces laterais 53, 54, 55, 56. Assim, a luz da primeira fonte de luz passa para a placa
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 45/53
12/14 de cultura celular 50 a partir do exterior através da primeira face lateral 53. O mesmo se aplica analogamente às fontes de luz 32, 33, 34. De modo a conseguir a melhor iluminação possivel dos poços individuais 57 da placa de cultura celular 50, a posição da fonte de luz 31 pode ser modificada em relação à placa de cultura celular 50.
[047] A seta de duas pontas 36 indica que a distância entre a primeira fonte de luz 31 e a primeira face lateral 53 da placa de cultura celular 50 pode ser aumentada ou reduzida. A seta de duas pontas 37 (ver Figura 3) indica que a primeira fonte de luz 31 pode ser movida para cima ou para baixo em relação à placa de cultura celular 50. Além disso, a primeira fonte de luz 31 pode ser inclinada em torno de um eixo longitudinal 38, que se estende paralelamente à primeira face lateral 53 da placa de cultura celular 50. O ajuste correspondente em torno do eixo longitudinal 38 ou em torno de um eixo que se estende paralelamente ao mesmo é indicado pela seta dobrada 39. Além disso, a intensidade da luz da primeira fonte de luz 31 pode ser ajustada por meio do controlador 60. A distância horizontal da face lateral respectiva, a posição vertical, o ângulo de inclinação e a intensidade da luz da respectiva fonte de luz podem ser ajustados individualmente pelos parâmetros de ajuste correspondentes das fontes de luz restantes 32, 33, 34.
Consequentemente, é possivel, por exemplo, ajustar o dispositivo de iluminação de tal modo que a intensidade de luz da primeira fonte de luz 31 desvia-se não apenas das intensidades de luz das fontes de luz 33, 34 dispostas transversalmente a esta, mas também da intensidade de luz da fonte de luz oposta 32.
[048] O suporte 40 tem um primeiro canto receptor 41, um segundo canto receptor 42, um terceiro canto receptor 43 e um quarto canto receptor 44. De preferência, três dos quatro cantos receptores 41, 42, 43, 44 são incorporados como obstáculos estacionários, enquanto o quarto canto receptor remanescente é representado como um obstáculo de recuo. Uma distância entre o primeiro canto receptor e o segundo canto receptor, por exemplo, é dimensionada de tal modo que o feixe de luz 35 da primeira
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 46/53
13/14 fonte de luz 31 pode atingir desimpedido a região da primeira face lateral na qual os poços 57 se situam. Expressado de maneira diferente, uma distância entre os cantos receptores 41, 42 é maior que um comprimento da primeira coluna de poços, que se estende ao longo da primeira face lateral 53.
[049] Devido aos diferentes comprimentos das faces laterais mais compridas 55, 56 e das faces laterais mais curtas 53, 54, as fontes de luz 33, 34 por um lado e as fontes de luz 31, 32 por outro lado têm diferentes comprimentos. Aqui, a largura de um feixe de luz de uma fonte de luz é sempre maior que o comprimento da região da face lateral associada na qual os poços estão situados.
[050] Todas as regiões das faces laterais da placa de cultura de células 50 nas quais os poços 57 estão situados são impingidas pela luz das fontes de luz como resultado do dispositivo de iluminação 30 e a disposição especial dos cantos receptores individuais do suporte 40. Como resultado da capacidade de ajuste individual das fontes de luz individuais, o dispositivo de iluminação 30 pode ser ajustado de modo que seja obtida uma iluminação quase ideal dos poços 57. Um critério de monitoramento preferido para a iluminação que é tão ideal quanto possivel já foi descrito acima. Uma iluminação ideal pode ser assumida quando os resultados bem específicos em uma placa de cultura celular cujos poços individuais foram preenchidos com o mesmo ingrediente ativo em cada caso não se desviam um do outro em relação à eficácia do mesmo ingrediente ativo em cada caso ou têm um desvio padrão que corresponde aproximadamente ao desvio padrão estimado por conta dos organismos biológicos.
Lista de sinais de referência
1 Aparelho
10 Alojamento
11 Placa de separação superior
12 Placa de separação intermediária
13 Região superior
14 Região intermediária
15 Região inferior
Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 47/53
14/14
Abertura Placa de vidro Câmera Lente Extremidade Região em forma cilíndrica Dispositivo de iluminação Primeira fonte de luz Segunda fonte de luz Terceira fonte de luz Quarta fonte de luz Seta (feixe de luz) Seta de duas pontas Seta de duas pontas Seta Suporte Primeiro canto receptor Segundo canto receptor Terceiro canto receptor Quarto canto receptor Placa de cultura celular Lado inferior Lado superior Primeira face lateral Segunda face lateral Terceira face lateral Quarta face lateral Poço Controlador

Claims (14)

  1. Reivindicações
    1. Aparelho (1) para registro de imagens de área total de uma placa de cultura celular com um ou mais poços caracterizado por compreender um suporte (40) para receber a placa de cultura celular (50) com poços (57), em que a placa de cultura celular (50) tem um lado inferior (51), um lado superior (52) e uma pluralidade de faces laterais, que se estendem entre o lado inferior (51) e o lado superior (52), uma câmera (20) que serve para gravar imagens do lado inferior (51) da placa de cultura celular (50) dentro de uma profundidade de campo predefinida, um dispositivo de iluminação (30) para iluminar a placa de cultura celular (50), em que o dispositivo de iluminação (30) compreende uma pluralidade de fontes de luz para produzir feixes de luz, caracterizado por, na posição de utilização da placa de cultura celular (50), a luz de uma primeira fonte de luz (31) entrar na placa de cultura celular (50) do lado de fora por todo o comprimento de uma primeira face lateral (53) , a luz de uma segunda fonte de luz (32) entra na placa de cultura celular (50) do lado de fora por todo o comprimento de uma segunda face lateral (54), a luz de uma terceira fonte de luz (33) entra na placa de cultura celular (50) do lado de fora por todo o comprimento de uma terceira face lateral (55), e a luz de uma quarta fonte de luz (34) entrar na placa de cultura celular (50) do lado de fora por todo o comprimento de uma quarta face lateral (56), em que a intensidade dos feixes de luz produzidos, a altura vertical dos feixes de luz produzidos em relação à placa de cultura celular, a distância horizontal das fontes de luz da face lateral respectiva e o ângulo de inclinação dos feixes de luz produzidos em torno de um eixo longitudinal (38) são ajustáveis individualmente para cada fonte
    Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 49/53
  2. 2/3 de luz (31-34) com o objetivo de ajustar o dispositivo de iluminação (30) .
    2. Aparelho (1) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela primeira fonte de luz (31) ter uma disposição de lente de Fresnel para produzir uma luz uniforme ao longo do comprimento efetivo da primeira fonte de luz (31).
  3. 3. Aparelho (1) de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por toda fonte de luz e/ou um suporte para fixar a fonte de luz estar ligada a um ou mais controladores para ajustar o dispositivo de iluminação (30).
  4. 4. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo controlador para ajustar o dispositivo de iluminação (30) ser configurado para realizar um método para ajustar o dispositivo de iluminação.
  5. 5. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por a primeira fonte de luz (31) estar disposta lateralmente junto da primeira face lateral (53) .
  6. 6. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pela intensidade dos feixes de luz produzidos, a altura vertical dos feixes de luz produzidos em relação placa de cultura celular, a distância horizontal das fontes de luz da face lateral respectiva e o ângulo de inclinação dos feixes de luz produzidos em torno de um eixo longitudinal (38) serem ajustados para cada fonte de luz (31-34) de forma que a placa de cultura celular seja iluminada do fundo até a profundidade de campo predefinida.
  7. 7. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pela altura vertical de um feixe de luz que emerge da primeira fonte de luz (31) ser de 2 a 6 mm.
  8. 8. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo suporte (40) ter uma pluralidade de cantos receptores, em que um primeiro canto receptor (41) serve para receber uma extremidade da primeira face lateral (53) e um segundo canto receptor (42) serve para receber uma extremidade oposta da primeira face lateral (53) , e em que uma distância entre o primeiro canto receptor (41) e o segundo canto receptor
    Petição 870190050695, de 30/05/2019, pág. 50/53
    3/3 (42) é maior que um comprimento de um linha ou coluna de poços (57), que se estende ao longo da primeira face lateral (53).
  9. 9. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por a câmera (20) compreender uma lente telecêntrica (21).
  10. 10. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado por a câmera compreender um sensor de imagem e a placa de cultura celular (50) e/ou o sensor de imagem serem ajustáveis em relação um ao outro em todas as direções a placa de cultura celular ser ajustada em todas as direções paralelas ao sensor de imagem.
  11. 11. Aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado por, para fins de estabelecimento do efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos em testes aquosos, os poços da placa de cultura celular serem preenchidos com nematódeos e outros organismos em soluções aquosas com e sem ingredientes ativos.
  12. 12. Método para ajustar o dispositivo de iluminação (30) do aparelho (1) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por, em relação à placa de cultura celular, a altura relativa de cada fonte de luz, o ângulo de inclinação de cada fonte de luz e uma intensidade de luz de cada fonte de luz serem ajustadas individualmente para obter uma boa iluminação dos poços individuais (57) da placa de cultura celular (50) e uma iluminação uniforme da placa de cultura celular.
  13. 13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por a câmera (20) ser utilizada para criar uma imagem de uma folha monocromática situada em plano acima da placa de cultura celular iluminada (50) e por o ajustamento ser implementado com base em uma avaliação da imagem.
  14. 14. Método de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por um histograma da intensidade luminosa ser produzido a partir da imagem e o ajuste com o objetivo de controlar os meios para ajustar o dispositivo de iluminação (30) ser implementado com base neste histograma até que o histograma tenha uma largura minima.
BR112019011137-9A 2016-11-30 2017-11-22 Aparelho para registro de imagens e método automatizado para ajustar o dispositivo de iluminação BR112019011137B1 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16201303.1 2016-11-30
EP16201303.1A EP3330697A1 (de) 2016-11-30 2016-11-30 Vorrichtung zur ermittlung der wirkung von wirkstoffen an nematoden und anderen organismen in wässrigen tests
PCT/EP2017/080017 WO2018099778A1 (de) 2016-11-30 2017-11-22 Vorrichtung zur aufnahme vollflächiger bilder einer zellkulturplatte mit einer oder mehreren kavitäten

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BR112019011137A2 true BR112019011137A2 (pt) 2019-12-03
BR112019011137B1 BR112019011137B1 (pt) 2023-12-19

Family

ID=57539005

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112019011137-9A BR112019011137B1 (pt) 2016-11-30 2017-11-22 Aparelho para registro de imagens e método automatizado para ajustar o dispositivo de iluminação

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20210109087A1 (pt)
EP (2) EP3330697A1 (pt)
JP (1) JP2020501138A (pt)
KR (1) KR20190088970A (pt)
CN (1) CN109997027A (pt)
BR (1) BR112019011137B1 (pt)
WO (1) WO2018099778A1 (pt)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110487788B (zh) * 2019-07-12 2021-08-20 中国科学院金属研究所 一种单晶高温合金小角度晶界形成倾向性的评定方法
CN111275630B (zh) * 2020-01-07 2022-07-26 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 一种细胞图像调整方法、装置及电子显微镜

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1137931A (ja) * 1997-07-14 1999-02-12 Tokimec Inc 吸光光度計
US6449827B1 (en) * 1999-10-22 2002-09-17 Merck & Co., Inc Apparatus for gripping microplates
WO2004051283A2 (en) * 2002-11-27 2004-06-17 3M Innovative Properties Company Biological growth plate scanner
WO2004063731A1 (ja) * 2003-01-16 2004-07-29 Olympus Corporation 光検出装置
JP4476033B2 (ja) * 2004-06-11 2010-06-09 Ｈｏｙａ株式会社 電子内視鏡用プロセッサ
US20060166305A1 (en) * 2005-01-27 2006-07-27 Genetix Limited Animal cell confluence detection method and apparatus
US7599055B2 (en) * 2007-02-27 2009-10-06 Corning Incorporated Swept wavelength imaging optical interrogation system and method for using same
GB0705652D0 (en) * 2007-03-23 2007-05-02 Trek Diagnostics Systems Ltd Test plate reader
US20100184616A1 (en) * 2009-01-20 2010-07-22 Bio-Rad Laboratories, Inc. Spatially controlled illumination of biological sample array through wedge-shaped support
JP5366584B2 (ja) * 2009-02-16 2013-12-11 キヤノン株式会社 撮像装置、画像処理方法およびプログラム
JP5219899B2 (ja) * 2009-03-26 2013-06-26 浜松ホトニクス株式会社 光照射装置及び光測定装置
CN103398947B (zh) * 2009-03-26 2016-03-23 浜松光子学株式会社 光照射装置及光测定装置
JP2013068457A (ja) * 2011-09-21 2013-04-18 Jsv Co Ltd Ｒｇｂ動植物肌色解析装置
TWI479142B (zh) * 2012-10-17 2015-04-01 Wistron Corp 生物晶片檢測裝置及其光源的檢測方法
JP6449591B2 (ja) * 2013-09-02 2019-01-09 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 生物学的液体の光測定装置
JP6195373B2 (ja) * 2013-12-19 2017-09-13 株式会社Ｓｃｒｅｅｎホールディングス 撮像装置および撮像方法
US10514375B2 (en) 2015-01-23 2019-12-24 Bayer Aktiengesellschaft Device and method for determining the action of active ingredients on nematodes and other organisms in aqueous tests
JP2018511815A (ja) * 2015-01-26 2018-04-26 カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー アレイレベルのフーリエ・タイコグラフィ撮像

Also Published As

Publication number Publication date
EP3330697A1 (de) 2018-06-06
KR20190088970A (ko) 2019-07-29
CN109997027A (zh) 2019-07-09
BR112019011137B1 (pt) 2023-12-19
WO2018099778A1 (de) 2018-06-07
EP3548871B1 (de) 2022-03-30
EP3548871A1 (de) 2019-10-09
US20210109087A1 (en) 2021-04-15
JP2020501138A (ja) 2020-01-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2248548T3 (es) Platina rotativa para formar imagenes de una muestra.
CN105378537B (zh) 用于光片显微技术的设备
KR101095549B1 (ko) 마스크리스 노광 장치와 이를 이용한 스티칭 노광 방법
TWI518404B (zh) 液晶面板檢查裝置
TW201234134A (en) Surface inspection apparatus, method for inspecting surface, exposure system, and method for producing semiconductor device
EA034246B1 (ru) Устройство и способ для измерения пороков, вызывающих искажение, в произведенной полосе флоат-стекла
EP3551054B1 (en) Trans-illumination imaging with an array of light sources
US11740447B2 (en) Illumination display as illumination source for microscopy
BR112019011137A2 (pt) aparelho para estabelecer o efeito de ingredientes ativos em nematódeos e outros organismos em testes aquosos
BRPI0905491A2 (pt) aparelho de inspeção para examinar opticamente garrafas
CN111492295A (zh) 用于对样本成像的显微镜和用于这种显微镜的样本保持器
JP2020046670A (ja) 調整可能な角度付照明を備えたハイスループット光シート顕微鏡
US20220276125A1 (en) Optical imaging performance test system and method
KR20140122943A (ko) 결정화 시료 검사 장치
KR101880994B1 (ko) 블랙박스 검사장치
KR20190052516A (ko) 표면 검사 장치
ES2915663T3 (es) Dispositivo de observación de células, dispositivo de estimulación eléctrica y método de observación de células
TWI539246B (zh) 描繪裝置
ES2630733B1 (es) Dispositivo automático de cambio de objetivo para microscopio de haz láser plano
KR101897084B1 (ko) 검사장비용 동축 조명장치
KR101808218B1 (ko) 이미지 생성장치 및 이를 이용한 생체 이미지 분석장치
ES2808801T3 (es) Calibración de imágenes digitales o vídeo digital obtenidos como escaneos de películas
CN106152954B (zh) 测量装置
KR20170003249U (ko) 광학적 처리 시스템을 위한 광학 헤드 및 섀시
ES2911099B2 (es) Instrumento y método para calibrar la uniformidad de la iluminación con aplicación en medida de reflectancia con imágenes multiespectrales o hiperespectrales

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B06W Patent application suspended after preliminary examination (for patents with searches from other patent authorities) chapter 6.23 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 22/11/2017, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS