BR112018074806B1

BR112018074806B1 - Utilização de cepa de bactéria inativada ou de composição compreendendo a mesma e método para melhorar o desenvolvimento das plantas

Info

Publication number: BR112018074806B1
Application number: BR112018074806-4A
Authority: BR
Inventors: Mike Whiting; Bertrand DELAUNOIS
Original assignee: Danstar Ferment Ag
Priority date: 2016-06-02
Filing date: 2017-06-02
Publication date: 2022-12-06
Also published as: CA3025849A1; EP3462879B1; EP3462879A1; AU2017272860B2; AU2017272860A1; ES2891354T3; FR3052021A1; RU2018146527A3; FR3052021B1; WO2017207752A1; CN109414022A; PL3462879T3; BR112018074806A2; RU2018146527A; MX2018014780A; US20200375195A1; UA127732C2; NZ748668A; CN109414022B

Abstract

A presente invenção refere-se a um processo para aumentar a eficácia bioestimulante de uma cepa de bactéria viva ou de uma composição contendo a mesma, caracterizado em que o processo compreende uma etapa de inativação da cepa de bactéria viva, a cepa de bactéria inativada assim obtida tendo uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma. A presente invenção se refere igualmente a uma cepa de bactéria inativada, bem como a uma composição compreendendo a mesma, para melhorar o desenvolvimento de uma planta.

Description

DOMÍNIO TÉCNICO

[0001] O presente pedido refere-se a novas composições de cepas de bactérias inativadas, seu processo de preparação e sua utilização para melhorar o desenvolvimento das plantas.

DESCRIÇÃO DA TÉCNICA ANTERIOR

[0002] A busca de novas estratégias, visando manter ou aumentar a produtividade dos sistemas agrícolas e, ao mesmo tempo, diminuindo a utilização de insumos químicos, colocaram em evidência a importância crucial dos microrganismos no funcionamento biológico de agrossistemas. Essas pesquisas conduziram ao surgimento da noção de “biofertilizantes” e “bioestimulantes”, que podem ser definidos como produtos contendo, por exemplo, microrganismos vivos, inativados e/ou extratos de microrganismos que, quando aplicados no solo ou às plantas, ocupam a rizosfera, ou seja, colonizam os tecidos vegetais e estimulam o crescimento da planta, aumentando, por exemplo, a assimilação de nutrientes e a produção de fito- hormônios.

[0003] A patente US 5.589.381 descreve o isolamento de um elemento de controle biológico compreendendo uma cepa de Bacillus licheniformis, que controla a mangra das mudas devido a Fusarium no milho.

[0004] A patente US 5.503.652 descreve o isolamento de cepas capazes de promover o alongamento das raízes em plantas.

[0005] A patente US 5.935.839 descreve a utilização de Arthrobacter sp. e de Pseudomonas fluorescens para promover o crescimento das mudas de coníferas, em que as rizobactérias favorecem o crescimento das plantas (Plant Growth Promoting Rhizobacteria PGPR) são selecionadas de acordo com a sua capacidade de crescer em solos ácidos frios típicos de coníferas.

[0006] A patente US 5.503.651 descreve a utilização de cepas PGPR que favorecem o crescimento dos cereais, oleaginosas e de milho em função das capacidades quimiotáticas e pelas cepas colonizando as raízes.

[0007] A patente US 5.496.547 ensina o isolamento de mutantes de Pseudomonas que são agentes de luta biológica eficaz contra Rhizoctonia solani.

[0008] A patente US 4.849.008 ensina a aplicação de Pseudomonas sobre as raízes, as plantas, as sementes, os fragmentos de tubérculos ou solo, culturas de raízes para melhorar o rendimento de culturas de raízes.

[0009] A patente US 4.584.274 descreve cepas de Pseudomonas resistentes aos bacteriófagos úteis para promover o crescimento das culturas de raízes.

[0010] O pedido internacional WO2003057861 descreve o isolamento e a identificação de um certo número de rizobactérias favorecendo o crescimento das plantas (PGPR), que oxidam o enxofre em sulfato útil para promover o crescimento das plantas, tais como RAY12, identificado como Achromobacter piechaudii; RAY28, identificado como Agrobacterium tumefaciens, RAY132, identificado como Stenotrophomonas maltophilia; e RAY209, identificado como Delftia acidovorans.

[0011] A patente US 6.194.193 descreve a utilização de uma formulação para reforçar o crescimento da planta, que compreende uma mistura de cepas de Bacillus e Paenibacillus, que produzem fito-hormônios.

[0012] Um outro exemplo de efeito hormonal conhecido é o de Azospirillum spp (ver, notadamente, Kucey (1988), Plant growth-altering effects of Azospirillum brasilense e Bacillus C-11-25 on two wheat cultivars. Journal of Applied Microbiology, volume 64, Issue 3, páginas 187-196).

[0013] Alguns biofertilizantes são compostos de organismos vivos; eles devem, portanto, ser produzidos, formulados e vendidos de modo que sua viabilidade e sua atividade biológica sejam mantidas. Além disso, o sucesso da inoculação microbiana para a produção agrícola é altamente influenciado pelo número de células viáveis introduzido no solo (Duquenne et al., 1999, FEMS Microbiology Ecology 29: 331-339). A viabilidade do inóculo é um fator importante para o sucesso e a colonização adequada da rizosfera, a fim de alcançar o efeito positivo desejado sobre o crescimento das plantas. Um inconveniente principal da utilização de biofertilizantes é que as condições específicas de solo, temperatura e umidade podem variar muito de um sítio a outro e essas variações podem influenciar a viabilidade microbiana e, como consequência, o rendimento e o crescimento das plantas.

[0014] Portanto, existe uma necessidade para uma composição permitindo estimular o desenvolvimento das plantas com uma eficácia melhorada sem ter os inconvenientes relacionados com a viabilidade deste tipo de biofertilizantes/ bioestimulantes.

SUMÁRIO

[0015] A presente invenção refere-se a um processo para aumentar a eficácia bioestimulante de uma cepa de bactéria viva ou uma composição contendo a mesma, caracterizado pelo fato de que o processo compreende uma etapa de inativação da cepa de bactéria viva, a cepa de bactéria inativada assim obtida tendo uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma.

[0016] A presente invenção refere-se igualmente a uma cepa de bactéria inativada para melhorar o desenvolvimento das plantas ou uma composição contendo a mesma, caracterizada pelo fato de que a cepa de bactéria inativada permite uma melhora do desenvolvimento das plantas em relação à mesma cepa de bactéria viva ou da composição contendo a mesma.

[0017] A presente invenção refere-se igualmente a uma cepa de bactéria inativada para melhorar o desenvolvimento das plantas ou uma composição contendo a mesma, caracterizada pelo fato de que a cepa de bactéria inativada possui uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma.

[0018] A presente invenção refere-se igualmente a um método de utilização ou ao uso de uma cepa de bactéria inativada, ou uma composição contendo a mesma, para melhorar o desenvolvimento das plantas, caracterizado pelo fato de que a cepa de bactéria inativada permite uma melhora do desenvolvimento das plantas em relação à mesma cepa de bactéria viva ou da composição contendo a mesma.

[0019] A presente invenção refere-se igualmente um método de utilização ou de uso de uma cepa de bactéria inativada, ou uma composição contendo a mesma, para melhorar o desenvolvimento das plantas, caracterizado pelo fato de que a cepa de bactéria inativada possui uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma.

[0020] Com vantagem, a cepa de bactéria inativada ou a composição contendo a mesma, obtida de acordo com o processo da presente invenção, tem uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma.

[0021] Com vantagem, a composição e o método de acordo com a presente invenção permitem melhorar o desenvolvimento das plantas sem precisar considerar a viabilidade de um inóculo bacteriano.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0022] A Figura 1 ilustra a avaliação do crescimento da superfície da folha de Arabidopsis thaliana de acordo com as modalidades seguintes: M é o meio de cultura isolado de Delftia acidovorans RAY209; Água é a água sem bactérias ativas ou inativas ou meio de cultura; B+M é Delftia acidovorans RAY209 em seu meio de cultura; Mp é o meio de cultura isolado de Delftia acidovorans RAY209 pasteurizado; S é uma suspensão de enxofre; B + água é Delftia acidovorans RAY209 na água; IT45 é um testemunho positivo (Bacillus amyloliquefaciens IT45); (B+água)p é uma solução pasteurizada de Delftia acidovorans RAY209 na água de acordo com a invenção.

[0023] A Figura 2 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola {Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com água estéril.

[0024] A Figura 3 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola {Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com o meio de cultura da cepa de Delftia acidovorans RAY209.

[0025] A Figura 4 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola (Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com a cepa de Delftia acidovorans RAY209 inativada por tratamento com a prensa French (alta pressão seguida por uma descompressão rápida).

[0026] A Figura 5 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola {Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com uma cepa de Lactobacillus rhamnosus inativada por tratamento em prensa de French (alta pressão seguida por uma descompressão rápida).

[0027] A Figura 6 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola (Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com a cepa de Delftia acidovorans RAY209 viva.

[0028] A Figura 7 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola {Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com uma cepa de Lactobacillus rhamnosus viva.

[0029] A Figura 8 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola {Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com a cepa de Delftia acidovorans RAY209 inativada por pasteurização.

[0030] A Figura 9 ilustra os pêlos absorventes da raiz das plantas de canola {Brassica napus cultivar 5525CL) 36 dias após o tratamento com uma cepa de Lactobacillus rhamnosus inativada por pasteurização.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0031] O termo «bactérias vivas» ou «cepas de bactérias vivas» corresponde a bactérias ou preparações de bactérias apresentando uma viabilidade superior a 70%.

[0032] O termo «bactéria inativada» ou «cepas de bactérias inativadas» corresponde a bactérias ou preparações de bactérias mortas, por processos físicos, bioquímicos, químicos ou físico-químicos e apresentando uma viabilidade inferior a 50%.

[0033] O termo «biomassa» corresponde ao conjunto da matéria, orgânica e mineral, constituindo um organismo.

[0034] O termo «bioestimulante» corresponde à estimulação do desenvolvimento das plantas. Par exemplo, o desenvolvimento das plantas pode incluir um dos parâmetros seguintes: o enraizamento, a superfície foliar, a floração, a frutificação, a altura de planta, a biomassa, a germinação e o rendimento de colheita.

[0035] O termo «rizobactérias favorecendo o crescimento das plantas» ou «PGPR» corresponde às bactérias da rizosfera benéficas ao crescimento e à saúde das plantas.

[0036] O termo “meio de cultura” corresponde a um suporte contendo os elementos necessários ao crescimento bacteriano, o que permite a cultura de bactérias de acordo com a invenção. De acordo com uma modalidade, o meio de cultura pode conter bactérias de acordo com a invenção durante o seu crescimento ou ser um meio de cultura isento das bactérias da presente invenção, se estas são separadas de seu meio por um processo, empregando, notadamente, mas não exclusivamente, uma etapa de filtração ou uma etapa de centrifugação. De acordo com uma modalidade, o meio de cultura é preferivelmente um meio líquido. Todos estes meios, bem como os processos comuns de fermentação, são bem conhecidos do versado na técnica.

[0037] O termo «suporte de cultura» corresponde a um conjunto de produtos destinados a servir como meio de cultura para certos vegetais. Sua implementação leva à formação de meios possuindo uma porosidade em ar e em água, de forma que ambos sejam capazes de ancorar os órgãos absorventes das plantas e permitir aos mesmos entrar em contato com as soluções necessárias ao seu crescimento. Eles geralmente são compostos de materiais orgânicos e/ou materiais inorgânicos. Eles são geralmente compostos de turfa, outros materiais orgânicos (notadamente, fibras de coco, cascas, fibras de madeira, adubos) e materiais inorgânicos (notadamente, terras, areias, pozolana, argilas, lãs minerais, perlita, vermiculita).

[0038] A presente invenção refere-se a um processo para aumentar a eficácia bioestimulante de uma cepa de bactéria viva ou de uma composição contendo a mesma, caracterizado pelo fato de que o processo compreende uma etapa de inativação da cepa de bactéria viva, a cepa de bactéria inativada assim obtida tendo uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma. Em uma modalidade vantajosa, a etapa de inativação implementada no processo de acordo com a invenção é realizada por processos físicos, bioquímicos, químicos ou físico-químicos. Em uma modalidade mais vantajosa, a cepa de bactéria viva é inativada por tratamento térmico ou por tratamento de alta pressão. Com vantagem, a cepa de bactéria viva é inativada por pasteurização. Ainda com maior vantagem, a cepa de bactéria viva é inativada sem seu meio de cultura.

[0039] Em uma modalidade particularmente vantajosa, a cepa de bactéria utilizada no processo de acordo com a invenção é o gênero Delftia, Achromobacter, Agrobacterium, ou Stenotrophomonas. Com vantagem, a cepa de bactéria é do gênero Delftia. Com maior vantagem, a cepa de bactéria é Delftia acidovorans RAY209 depositada junto ao ATCC em 25 de abril de 2002 sob o número PTA-4249, Achromobacter piechaudii RAY12 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 16 de abril de 2002 sob o número PTA-4231, Agrobacterium tumefaciens RAY28 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 16 de abril de 2002 sob o número PTA-4232, ou Stenotrophomonas maltophilia RAY 132 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 16 de abril de 2002 sob o número PTA-4233. Em uma modalidade ainda mais vantajosa, a cepa de bactéria inativada é a cepa Delftia acidovorans RAY209 depositada junto ao ATCC em 25 de abril de 2002 sob o número PTA- 4249.

[0040] A presente invenção refere-se a uma cepa de bactéria inativada, ou uma composição para melhorar o desenvolvimento das plantas, caracterizada por compreender pelo menos uma cepa de bactéria inativada. Com vantagem, a presente invenção refere-se a uma cepa de bactéria inativada para melhorar o desenvolvimento das plantas, caracterizada em que a cepa de bactéria inativada permite uma melhora do desenvolvimento das plantas com relação à mesma cepa de bactéria viva.

[0041] A presente invenção refere-se a uma cepa de bactéria inativada, ou uma composição para melhorar o desenvolvimento de plantas, caracterizada em que ela compreende pelo menos uma cepa de bactéria inativada. Com vantagem, a presente invenção refere-se a uma cepa de bactéria inativada para melhorar o desenvolvimento das plantas, caracterizada em que a cepa de bactéria inativada possui uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das planta superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma.

[0042] A cepa de bactéria utilizada de acordo com a invenção pode ser proveniente de todas espécies de bactérias, em particular bactérias do gênero Delftia, Achromobacter, Agrobacterium, e Stenotrophomonas. De acordo com uma modalidade vantajosa, as bactérias utilizadas de acordo com a invenção podem ser provenientes da espécie Delftia acidovorans, Achromobacter piechaudii, Agrobacterium tumefaciens, e Stenotrophomonas maltophilia. Com maior vantagem, a cepa de bactéria utilizada é selecionada dentre o grupo consistindo da cepa Achromobacter piechaudii RAY12 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 16 de abril de 2002 sob o número PTA-4231, Agrobacterium tumefaciens RAY28 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 16 de abril de 2002 sob o número PTA-4232, Stenotrophomonas maltophilia RAY 132 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 16 de abril de 2002 sob o número PTA-4233 e/ou Delftia acidovorans RAY209 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 25 de abril de 2002 sob o número PTA- 4249 de acordo como Tratado de Budapeste sobre o reconhecimento internacional do depósito de microrganismos com fins de procedimentos em questão de patentes .

[0043] De acordo com uma modalidade, a cepa de bactéria utilizada na presente invenção é uma rizobactéria favorecendo o desenvolvimento das plantas ou “PGPR”. De acordo com outra modalidade vantajosa, a cepa de bactéria inativada utilizada de acordo com a invenção é do gênero Delftia. Mais particularmente, a cepa de bactéria utilizada de acordo com a invenção é a cepa Delftia acidovorans RAY209 depositada junto ao American Type Culture Collection (ATCC) em 25 de abril de 2002 sob o número PTA-4249 de acordo como Tratado de Budapeste sobre o reconhecimento internacional do depósito de microrganismos com fins de procedimentos em questão de patentes.

[0044] De acordo com uma modalidade vantajosa, as bactérias da invenção são inativadas notadamente por processo físico, químico, bioquímico ou físico-químico. De acordo com uma modalidade, as bactérias da presente invenção são inativadas por tratamento em alta pressão (por exemplo, por meio de uma prensa French ou outros métodos conhecidos na técnica). Em uma outra modalidade, as bactérias do presente pedido são inativadas por tratamento térmico. Com maior vantagem, as bactérias de acordo com a invenção são inativadas por pasteurização. De acordo com uma modalidade particularmente vantajosa, a pasteurização é conduzida aquecendo as bactérias vivas a uma temperatura entre 60°C e 90°C, 62°C e 88°C, 65°C e 85°C, 75°C e 85°C, ou 80°C e 85°C. De acordo com outra modalidade, as bactérias de acordo com a invenção são pasteurizadas sem o seu meio de cultura. De acordo com outra modalidade, as bactérias da presente invenção são inativadas com seu meio de cultura. De acordo com outra modalidade, as bactérias da presente invenção são inativadas sem seu meio de cultura.

[0045] De acordo com uma modalidade, a melhora no desenvolvimento e/ou do crescimento e da produtividade das plantas e/ou o aumento da eficácia bioestimulante no desenvolvimento das plantas inclui, notadamente, mas não exclusivamente, a melhora de um dos seguintes parâmetros: o enraizamento, a superfície foliar, o desenvolvimento da raiz, a floração, a frutificação, altura das plantas, a biomassa, a germinação, o rendimento da colheita, notadamente em quantidade, qualidade ou precocidade. De acordo com uma modalidade, o aumento da eficácia bioestimulante no desenvolvimento da planta inclui a superfície foliar, o número de pêlos absorventes da raiz e/ou a altura da planta.

[0046] De acordo com uma modalidade, a presente invenção é aplicável a todos os tipos de plantas, notadamente, mas não exclusivamente, às culturas de cereais (trigo, cevada, aveia, centeio, triticale), plantas enraizadas (beterraba açucareira, batata inglesa, milho), às leguminosas (alfafa, trevo, sanfeno), às culturas forrageiras (azevém, festuca, capim-dátilo, festulolium, alfafa, ervilhaca, nabo forrageiro), oleaginosas (soja, canola, colza, ervilha, fava, tremoço branco, girassol), às culturas de legumes e verduras, à arboricultura frutífera, à viticultura e as culturas ornamentais (produção de flores, gramados, viveiros de mudinhas).

[0047] De acordo com uma modalidade vantajosa, a presente invenção refere-se a uma composição para melhorar o desenvolvimento das plantas, caracterizada em que ela compreende, pelo menos, uma cepa de bactéria inativada, a cepa de bactéria inativada tendo uma eficácia bioestimulante sobre o desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva.

[0048] De acordo com uma modalidade vantajosa, a composição de acordo com a invenção compreende 104 CFU/ml a 1012 CFU/ml, 105 CFU/ml a 1012 CFU/ml, 106 CFU/ml a 1012 CFU/ml, 107 CFU/ml a 1012 CFU/ml, 106 CFU/ml a 1011 CFU/ml, 106 CFU/ml a 1010 CFU/ml, 106 CFU/ml a 109 CFU/ml, ou 106 CFU/ml a 108 CFU/ml de bactérias antes da inativação.

[0049] De acordo com uma modalidade, a composição de acordo com a invenção compreende, pelo menos, uma cepa de bactéria inativada a 100%, a 99 % (com 1 % de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 98% (com 2% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 97% (com 3% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 96% (com 4% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 95% (com 5% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 94% (com 6% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 93% (com 7% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 92% (com 8% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), a 91 % (com 9% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), entre 90% e 85% (com entre 10 e 15% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), entre 85% e 80% (com entre 15 e 20% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), entre 80% e 75% (com entre 20 e 25% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), entre 75% e 70% (com entre 25 e 30% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), entre 70% e 65% (com entre 30 e 35% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), entre 65% e 60% (com entre 35% e 40% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa), entre 60% e 55% (com entre 40 e 45% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa) ou entre 55% e 50 % (com entre 45% e 50% de pelo menos uma cepa de bactéria ativa).

[0050] De acordo com uma modalidade particularmente vantajosa, a composição de acordo com a invenção compreende pelo menos uma cepa de bactéria inativada e um veículo compatível para agricultura. Mais particularmente, o veículo compatível para agricultura é apropriado para a administração da bactéria inativada na planta e/ou no solo. De acordo com uma modalidade, o veículo está sob forma sólida e/ou líquida. De acordo com outra modalidade, o veículo é água. De acordo com outra modalidade, o veículo é uma mistura água-herbicida. De acordo com outra modalidade, o veículo é uma mistura de água-fertilizante. De acordo com outra modalidade, o veículo é um meio de cultura.

[0051] De acordo com uma modalidade particularmente vantajosa, a composição de acordo com a invenção compreende uma cepa de bactéria inativada isolada de seu meio de cultura.

[0052] De acordo com uma modalidade vantajosa, a composição compreendendo pelo menos uma cepa de bactéria inativada pode se apresentar sob a forma de pó, grânulos, micro grânulos, tratamentos de lotes de sementes, formulações líquidas, de encapsulação de bactérias ou suspensões líquidas. Mais particularmente, a composição de acordo com a invenção está na forma líquida.

[0053] De acordo com uma modalidade vantajosa, a composição de acordo com a invenção está em combinação com uma formulação apropriada compreendendo pós, notadamente pós umectáveis, grânulos, micro grânulos, tratamentos de lotes de sementes, encapsulações de bactérias, formulações líquidas, notadamente, mas não exclusivamente, suspensões, na água, em um solvente ou em um meio de cultura.

[0054] De acordo com uma modalidade vantajosa, a composição de acordo com a invenção está sob uma forma apropriada para o tratamento do solo, tratamento da parte da raiz da planta, tratamento foliar da planta, tratamento da parte floral da planta, tratamento da planta frutífera da planta e/ou o tratamento da semente. De acordo com outra modalidade vantajosa, a composição de acordo com a invenção é administrada simultaneamente ou sucessivamente, por aplicação ao solo, por embebimento da raiz, por tratamento de lotes de sementes ou por incorporação e/ou revestimento em um suporte das culturas, envoltório com película de produtos fitossanitários ou de fertilizantes ou qualquer outro veículo ou por qualquer outro meio permitindo o contato imediato ou futuro da composição com as sementes ou as plantas a inocular. Mais particularmente, a aplicação ao solo é realizada notadamente, mas não exclusivamente, por pulverização, espalhamento, aguada, tratamento do solo, ferti- irrigação, gotejamento, no sulco das plântulas ou ao ar livre.

[0055] De acordo com uma modalidade vantajosa, a composição de acordo com a invenção compreende a cepa de bactéria inativada em combinação com outros microrganismos vivos, inativados ou em extratos, tais como as bactérias, os fungos e/ou as leveduras. Mais particularmente, a composição de acordo com a invenção compreende a cepa de bactéria inativada em combinação com outras cepas de bactérias inativadas, as ditas bactérias favorecendo o desenvolvimento, a nutrição e a proteção das plantas.

[0056] De acordo com uma modalidade vantajosa, a composição de acordo com a invenção também compreende fertilizantes, herbicidas, inseticidas, fungicidas, bactericidas, soluções minerais e/ou suportes de cultura. De acordo com outra modalidade vantajosa, a composição de acordo com a invenção comporta ainda um substrato. Mais particularmente, o substrato compreende material orgânico, notadamente, mas não exclusivamente, turfa, materiais inorgânicos, notadamente mas não exclusivamente terra e/ou areia e/ou argila e/ou outros componentes do solo e/ou substâncias sintéticas. Mais particularmente, a substância sintética pode ser um material absorvente, como, por exemplo, um material granulado.

[0057] De acordo com uma modalidade, a composição contendo uma cepa de bactéria inativada ou a cepa de bactéria inativada da presente invenção permite uma melhora no desenvolvimento da planta superior à obtida com a mesma composição contendo a mesma cepa de bactéria viva ou a mesma cepa de bactéria viva.

[0058] De acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se à utilização de uma cepa de bactéria inativada ou de uma composição compreendendo a mesma para melhorar o desenvolvimento de uma planta. De acordo com uma modalidade, a utilização de uma composição ou de uma cepa de bactéria inativada da presente invenção permite uma melhora do desenvolvimento das plantas superior à obtida com a mesma cepa de bactéria viva ou com uma composição contendo a mesma.

[0059] De acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para melhorar o desenvolvimento de uma planta compreendendo a administração de uma composição ou de uma cepa de bactéria inativada de acordo com a invenção. De acordo com uma modalidade, o método compreendendo a administração de uma composição ou de uma cepa de bactéria inativada de acordo com a invenção permite uma melhora do desenvolvimento das plantas superior à da mesma composição contendo a mesma cepa de bactéria viva ou da mesma cepa de bactéria viva.

[0060] De acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma planta obtida utilizando a composição de acordo com a invenção ou a cepa de bactéria inativada de acordo com a invenção para melhorar o desenvolvimento de uma planta.

[0061] De acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma planta obtida utilizando um método para melhorar o desenvolvimento de uma planta compreendendo a administração de uma composição ou de uma cepa de bactéria inativada de acordo com a invenção.

EXEMPLOS

[0062] O presente pedido será melhor compreendido com a leitura dos seguintes exemplos que são dados para ilustrar o pedido e não para limitar o escopo.

[0063] Ensaios foram efetuados para verificar o impacto de algumas cepas e essencialmente de Delftia acidovorans, vivos ou mortos, em presença ou não de seu meio de cultura, sobre o desenvolvimento de uma planta modelo.

Exemplo 1 1-1/ Preparação dos inóculos da cepa bacteriana: Delftia acidovorans

[0064] A concentração bacteriana desejada em cada inóculo foi estimada a um equivalente de 4.1011 CFU/m3 com uma cepa comercial de Delftia acidovorans, de referência LPC8. Os vasos utilizados quando dos ensaios tendo um volume de 0,0003 m3, foi determinado que era necessário introduzir 1.2.108 CFU por vaso.

1-2/ Técnica de contagem das suspensões bacterianas:

[0065] A cepa bacteriana Delftia acidovorans RAY209 é comercializada em uma fórmula líquida contendo a suspensão de bactérias em seu meio de cultura (BioBoost Liquid ou BBL). Para conhecer a concentração bacteriana de BBL, uma contagem das bactérias no produto foi efetuada. À suspensão de bactérias (BBL) de Bag-in-Box ™ inicial, foi retirado1 ml da solução para ser colocado em um tubo de ensaio. Água peptonada (9 mL) foi adicionada ao tubo de ensaio contendo 1 ml de suspensão bacteriana para fazer uma diluição de 10-1. Uma segunda amostra de 1 ml desta diluição foi colocada em um tubo de ensaio e ao qual foi adicionado 9 ml de água peptonada para obter uma diluição de 10-2. O processo foi então repetido de forma idêntica até obter uma diluição de 10-4 e 10-5. De cada uma destas diluições 10-4 e 105 foram retirados 100 μl a fim de inocular a superfície de uma placa de Petri (meio TSA: tripto-caseína soja). Um total de 6 placas de Petri foram inoculadas por diluição e a incubação foi realizada por 48 horas a 30°C (ATCC, 2015; Larcher, 2015). As colônias na superfície das placas foram contadas e a concentração no BBL (produto comercial) foi estimada em 2.107 CFU/m.

1-3/ Técnica de contagem das suspensões bacterianas:

[0066] A cepa bacteriana Delftia acidovorans RAY209 é comercializada em uma fórmula líquida contendo a suspensão de bactérias em seu meio de cultura.

[0067] Preparação do inóculo bacteriano no meio de cultura: “bactéria + sobrenadante” (B + M):

[0068] A suspensão bacteriana BBL foi utilizada como tal para a modalidade “bactéria + sobrenadante” (B + M).

1-4/ Preparação do inóculo: “bactéria + água”:

[0069] 1400 ml de suspensão bacteriana BBL foram centrifugados a 8500 rpm (13000 g) durante 15 minutos. O caldo bacteriano foi dissolvido em 700 ml de água e centrifugado novamente. Esta etapa foi repetida 3 vezes para eliminar qualquer resto de sobrenadante de cultura. O caldo foi então recolocado em suspensão em água da torneira (cerca de 700 ml). A concentração bacteriana foi medida novamente nesta solução de acordo com o protocolo descrito no Exemplo 1-2. Após a contagem das colônias na superfície das placas, a concentração de bactérias foi estimada em 4.107 CFU/ml. Esta suspensão, como tal, corresponde à modalidade “bactéria + água”;

1-5/ Preparação da modalidade "bactéria + água, pasteurizada" ((B + água)p):

[0070] Cerca de 200 ml da suspensão “bactéria + água” descrita no Exemplo 1-2 foram aquecidos em banho-maria durante 20 minutos a 80°C a fim de obter a suspensão “bactéria + água, pasteurizada” ((B + água)p).

1-6/ Preparação da “sobrenadante da cultura” (M):

[0071] A suspensão bacteriana de BBL foi centrifugada a 8500 rpm (13000 g) durante 15 minutos e cerca de 600 ml de sobrenadante foram retirados para inoculação das plantas. Esta amostra corresponde à modalidade “meio de cultura” (M).

1-7/ Preparação da modalidade “sobrenadante de cultura pasteurizado” (Mp):

[0072] A suspensão bacteriana BBL foi centrifugada e 200 mL de sobrenadante de cultura foram recuperados após a centrifugação a fim de serem aquecidos em banho-maria durante 20 minutos a 80oC. A solução resultante corresponde à modalidade “sobrenadante de cultura pasteurizado” (Mp).

1-8/ Preparação da modalidade “enxofre” (S):

[0073] Em um recipiente, foi misturado 1 g de enxofre em 100 mL de água para obter a modalidade “enxofre” (S).

1-9/ Preparação da modalidade de testemunho positivo Bacillus amyloliquefaciens IT45 (IT45):

[0074] Uma preparação microbiana atomizada de Bacillus amyloliquefaciens_IT45, sob forma de pó e concentrada a 2,1010 CFU/g, foi recolocada em suspensão em água para obter a concentração alvo de 4,107 CFU/ml.

Exemplo 2 2-1/ Preparação de plantas (Arabidopsis thaliana)

[0075] O crescimento das plantas foi realizado em meio sólido sob condições não estéreis a fim de aproximar as condições naturais do campo de acordo com as seguintes repetições:

[0076] Repetição biológica = 8 modalidades x 3 repetições x 6 iterações = 144 plantas

2-2/ Preparação de mudas

[0077] As sementes foram armazenadas a 4°C a fim de garantir sua conservação, bem como uma germinação correta e sincronizada (ABRC, 2015). Cerca de 300-400 sementes foram esparsamente colocadas em 3 placas de Petri (14 cm de diâmetro) sobre papel de germinação. O equivalente a 5 ml de água foi adicionado de modo a simplesmente embeber o papel de germinação. As placas de Petri foram colocadas por 3 dias na geladeira (4°C) para garantir a estratificação das sementes.

2-3/ Preparação de micro estufas e vasos

[0078] O crescimento das plantas foi realizado em vasos (6 x 6 x 7 cm) colocados em 6 micro estufas (22 x 16 x 18 cm). Os vasos foram cheios com 150 g de uma mistura de terra-areia (2/3 de solo fértil e 1/3 de areia, m/m).

[0079] As micro estufas foram cobertas com tapetes de irrigação no interior para manter um ambiente úmido para as plantas.

[0080] As sementes foram então removidas das placas de Petri e colocadas em vasos de terra (5-6 sementes por vaso) com a ajuda de uma pinça. Um único broto por vaso foi guardado assim que as sementes germinaram.

2-4/ Inoculação e crescimento das plantas

[0081] Cada plântula foi inoculada no momento da semeadura com soluções/ suspensões descritas no Exemplo 1 e como a seguir. As plântulas foram submetidas a um ciclo diurno/noturno de 16 h de dia a 23°C seguido de 8 h de noite a 18°C. Os vasos foram regados uma ou duas vezes por dia durante a parte diurna do ciclo. A higrometria não foi regulada e foi de cerca de 70-80%. Cada modalidade foi inoculado de acordo com as seguintes doses: - A) Delftia acidovorans RAY209 em meio de cultura (B+M): 6 ml/vaso (18 vasos) - B) “bactéria + água” (B+água): 3 ml/vaso (18 vasos) - C) “(bactéria + água) pasteurizado” (B+água)p: 3 ml/vaso (18 vasos) - D) “sobrenadante de cultura pasteurizado (Mp): 6 ml/vaso (18 vasos) - E) água: 3 ml/vaso (18 vasos) - F) “sobrenadante de cultura” (M): 6 ml/vaso (18 vasos) - G) Suspensão de Bacillus amyloliquefaciens IT45: 1 ml/vaso (18 vasos) - H) enxofre (S): 0.01 g/vaso (18 vasos) (1 ml por planta de uma solução a 1% (m/v).

[0082] Os diferentes lotes de vasos foram randomizados de modo que os ensaios fossem distribuídos de modo mais homogêneo na área utilizada para eliminar, ao máximo, as disparidades das variáveis (temperatura, luminosidade, aeração, umidade, etc.) presentes na estufa e na câmara de cultura. 3 blocos de 8 mini estufas foram colocados na câmara de cultura, com uma rotação intra-blocos.

2-5/ Medições e análises

[0083] O crescimento das plantas foi avaliado pelo desenvolvimento da superfície das folhas ao longo do tempo. As plantas foram fotografadas de cima a cada 2 dias e cada foto foi analisada usando o software Fiji afim de poder calcular a superfície foliar de cada planta ao longo de todo o ciclo.

[0084] Os dados das medições foram digitados em um arquivo Excel (superfície foliar, massa seca, massa fresca) e esses dados foram analisados graças ao software XLSTAT. O teste de Tukey (teste post-hoc de comparações múltiplas) foi utilizado a fim de concluir sobre as diferenças significativas entre as médias das modalidades (ver Figura 1). Tabela 1. Médias das superfícies foliares para cada modalidade e por dia

a, b e c correspondem a grupos homogêneos das plantas tratadas, utilizados para a realização do teste estatístico de Tukey. Pr> F: valor limiar para o grau de significância

[0085] As diferenças constatadas nas medidas das superfícies foliares de cada modalidade são significativas (ver Tabela 1). Uma diferença significativa entre o testemunho de controle positivo (Bacillus amyloliquefaciens IT45) e o de controle negativo (água) foi observada. Além disso, a modalidade (B + água)p mostrou os melhores resultados em termos de superfície foliar das plantas (superior ao controle positivo) em comparação das outras modalidades. O sobrenadante de cultura M apresentou, ele mesmo, o menor crescimento foliar.

Exemplo 3

[0086] Estudo sobre o efeito da inativação das cepas de Delftia e Lactobacillus sobre os parâmetros de crescimento de plântulas de canola

[0087] O objetivo deste estudo é determinar o efeito de um tratamento de pasteurização das cepas de Delftia acidovorans e Lactobacillus rhamnosus sobre o crescimento de plântulas de canola (Brassica napus cultivar 5525CL). Mais particularmente, este estudo visa comparar o efeito da pasteurização e da não pasteurização (isto é, de uma cultura bacteriana viva) de uma cepa bacteriana sobre os parâmetros de crescimento de plântulas de canola.

3-1/ Cultivar de canola

[0088] Sementes de canola Brassica napus pertencendo ao cultivar 5525CL (Brett Young) foram desinfetadas de acordo com o protocolo descrito em Asaduzzaman e al. (“Metabolomics Differentiation of Canola Genotypes: Toward an Understanding of Canola Allelochemicals.” Frontiers in Plant Science, vol. 5, 2015.doi:10.3389/fpls.2014.00765). Após a secagem, os grãos foram deixados germinar em placas de Petri contendo ágar (15 g/l). O grãos germinados foram transferidas para sacos de germinação (Mega International) à razão de 2 sementes/saco, contendo uma mistura de terreno fértil suplementado com uma meia dose de uma solução de Hoagland No. 2 (Sigma, H2395). 3-2/ Modalidades em estudo Tabela 2. Descrição das diferentes modalidades estudadas neste exemplo.

3-3 Preparação de inoculantes não pasteurizados

[0089] As cepas bacterianas utilizadas para a inoculação de sementes de canola são Delftia acidovorans RAY 209 (BBL) e Lactobacillus rhamnosus R0011 (Institut Rosell-Lallemand. Montréal, Qc, Canada). As concentrações das soluções-mães de bactérias são, respectivamente, de 3,71E+08 cfu/ml e 2.21E+11 cfu/ml.

[0090] As soluções mães (1 ml) são centrifugadas a 8500 rpm por 15 minutos. O sedimento é recolocado em suspensão em 1 ml de água destilada estéril. Esta etapa de lavagem de células de bactérias é repetida duas vezes. Após a primeira centrifugação da solução-mãe de Delftia acidovorans RAY 209, o sobrenadante é conservado para o tratamento futuro de plântulas de canola (modalidade 3). Suspensões de bactérias em água destilada estéril são mantidas para a inoculação das sementes de canola germinadas (modalidades 1 e 4).

3-4/ Preparação de inoculantes inativados Duas técnicas de inativação foram testadas: (1) pasteurização ou tratamento térmico e (2) tratamento com prensa de French (alta pressão seguida de uma descompressão rápida). (1) Tratamento por calor

[0091] Para cada uma das duas cepas bacterianas estudadas, 1 ml de suspensão bacteriana a uma concentração de 3,71E+08 cfu/ml em água destilada estéril é transferido para um tubo Eppendorf (de 1,5 ml) e incubado a 80°C em um banho-maria durante 20 minutos. minutos. As suspensões bacterianas pasteurizadas são mantidas para a inoculação de sementes de canola germinadas (modalidades 2 e 5).

(2) Tratamento na prensa de French (alta pressão seguida de uma descompressão rápida)

[0092] Para cada uma das duas cepas bacterianas estudadas, 5 ml de suspensão de bactéria a uma concentração de 2,21E+11 cfu/ml em água destilada estéril são submetidos a uma passagem na prensa de French (American Instrument CO Inc.) à pressão de 18000 psi a 4°C, seguido de uma despressurização instantânea. As células bacterianas lisadas são recuperadas para a inoculação de sementes de canola germinadas (modalidades 3 e 6).

3-5/ Inoculação bacteriana de sementes de canola

[0093] A inoculação das sementes de canola germinadas foi efetuada com a ajuda de uma pipeta e 10 μl das preparações obtidas (ver Tabela 2 para a descrição das 8 modalidades estudadas) foram aplicados em cada semente de canola. A Tabela 3 mostra as concentrações bacterianas aplicadas sobre as sementes de canola.

[0094] As sementes tratadas foram mantidas sob atmosfera controlada em câmara de crescimento com 16 h de luz a 22°C e 8 h de escuridão a 18°C.

[0095] O dispositivo experimental incluiu, para cada uma das modalidades, 10 repetições de 2 sementes germinadas/saco de germinação. Um total de 20 sementes germinadas foi, portanto, tratado por modalidade. Tabela 3. Cálculos das concentrações bacterianas aplicadas por semente de canola

3-6/ Notação dos resultados

[0096] A tomada dos dados foi efetuada após 8 dias, 22 dias e 36 dias da inoculação das sementes de canola. Após 8 dias de incubação, as raízes laterais foram contadas. Após 22 dias de incubação, 10 plântulas por modalidade foram colhidas. Dez plântulas por modalidade foram assim colhidas após 36 dias de incubação. Após a colheita das plântulas de canola, a altura dos brotos foi medida a partir do colo até a folha mais alta. As raízes foram separadas do solo e medidas. A biomassa vegetal assim como a biomassa das raízes (parte aérea e raízes separadamente) também foram medidas com a ajuda de um balança de precisão. Os pesos secos da parte aérea e das raízes foram determinados após secagem a 35°C durante 48 horas.

[0097] Além disso, para cada uma das modalidades, as observações ao microscópio dos pêlos absorventes da raiz foram efetuadas a fim de avaliar sua presença nas raízes das plântulas de canola. Para fazer isso, para cada uma das modalidades, 1 cm de raiz primária foi colocado em uma placa de Petri. A raiz foi imersa em água para que os pêlos absorventes da raiz estivessem em suspensão. As observações microscópicas foram realizadas com uma ampliação de 100X. Os pêlos das raízes foram contados em uma superfície de 0,75 mm2. As figuras 2 a 9 mostram as imagens das observações microscópicas dos pêlos absorventes da raiz de acordo com as modalidades.

[0098] Análises de variância (ANOVA) de uma via foram realizadas, bem como os testes de comparação de variância de Bartlett a fim de concluir quais modalidades apresentam uma variância diferente das demais na altura da parte aérea (com a ajuda do software KyPlot). O resultado da análise sobre a altura dos brotos é apresentada na Tabela 4.

[0099] Os resultados apresentados mostram que a cepa de Delftia acidovorans pode estimular o desenvolvimento da parte das raízes das plantas, aumentando o número de pêlos absorventes da raiz. Isto terá, entre outras coisas, o efeito de melhorar a assimilação de nutrientes pelas plantas. Tabela 4. Comparação da altura dos brotos de canola 36 dias após tratamento

[0100] Os símbolos representam a significância dos resultados provenientes da comparação dos tratamentos indicados na coluna em relação aos tratamentos indicados na linha (teste estatístico de análise de variância ANOVA). Legenda Símbolo significando "+" sem diferença positiva significante "-" sem diferença negativa significante "=" sem diferenças "++" diferença positiva significante a P=0,1 "--" diferença negativa significante a P=0,1 "+++" diferença positiva significante a P=0,05 "---" diferença negativa significante a P=0,05 Embora a presente invenção tenha sido descrita com a ajuda de implementações específicas, deve ser entendido que várias variações e modificações podem ser adicionadas às ditas implementações, e o presente pedido visa cobrir tais modificações, usos ou adaptações do presente pedido seguindo, em geral, os princípios da invenção e incluindo qualquer variação da presente descrição que se tornará conhecida ou convencional no campo de atividade em que o presente pedido se encontra, e que pode ser aplicada aos elementos essenciais acima mencionados, de acordo com o alcance das reivindicações.

Claims

1. Utilização de uma cepa de bactéria inativada ou de uma composição compreendendo a dita cepa de bactéria inativada, para melhorar o desenvolvimento de uma planta, em que a dita cepa de bactéria inativada corresponde a bactérias ou preparações de bactérias, mortas por processos físicos, bioquímicos, químicos ou físico-químicos e tendo uma viabilidade inferior a 50%, as ditas bactérias sendo caracterizadas pelo fato de que: - apresenta uma eficácia bioestimulante no desenvolvimento de plantas que é superior aquela da mesma cepa de bactéria viva, e - a dita bactéria é do gênero Delftia.

2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita bactéria inativada é da espécie Delftia acidovorans.

3. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita bactéria inativada é Delftia acidovorans RAY209 depositada na ATCC em 25 de abril de 2002 sob o n°. PTA-4249.

4. Método para melhorar o desenvolvimento de plantas, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma cepa bacteriana inativada do gênero Delftia, ou de uma composição compreendendo a dita cepa bacteriana inativada, a dita cepa bacteriana inativada correspondendo a bactérias ou preparações de bactérias mortas por processos físicos, bioquímicos, químicos ou físico-químicos, e tendo uma viabilidade inferior a 50%, ou uma composição compreendendo a dita cepa de bactérias inativadas.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a dita bactéria inativada é da espécie Delftia acidovorans.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que a dita bactéria inativada é Delftia acidovorans RAY209 depositada na ATCC em 25 de abril de 2002 sob o no. PTA-4249.

7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 6, caracterizado pelo fato de que a cepa de bactérias vivas é inativada por tratamento térmico.

8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7, caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos uma cepa de bactérias inativadas e um veículo compatível para agricultura.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 8, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma composição compreendendo pelo menos a dita cepa de bactérias vivas inativadas isolada de seu meio de cultura.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma composição compreendendo a dita cepa de bactérias inativadas em combinação com outros microrganismos vivos, inativados ou em extratos, tais como bactérias, fungos e/ou leveduras.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma composição compreendendo a dita cepa de bactérias inativadas em combinação com outras cepas de bactérias inativadas.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma composição compreendendo a dita cepa de bactérias inativadas e fertilizantes, herbicidas, inseticidas, fungicidas, soluções minerais e/ou meios de cultivo.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que está presente de forma adequada para tratamento do solo, tratamento da parte radicular da planta, tratamento da parte foliar da planta, tratamento das partes de floração, tratamento das partes de frutificação e/ou tratamento da semente.

14. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que está presente na forma de pó, grânulos, microgrânulos, tratamentos de sementes, formulações líquidas, encapsulamentos de bactérias ou suspensões líquidas.