BR112018013501B1

BR112018013501B1 - USE OF A FERMENTED INGREDIENT AND NON-DIGERABLE OLIGOSACCHARIDE

Info

Publication number: BR112018013501B1
Application number: BR112018013501-1A
Authority: BR
Inventors: Jan Knol; Houkje Bouritius; Akhtar Raish Oozeer; Alma Jildou Nauta
Original assignee: N.V. Nutricia
Priority date: 2015-12-29
Filing date: 2016-12-29
Publication date: 2022-12-20
Also published as: CN108882740A; RU2018127650A; RU2018127650A3; BR112018013501A2; EP3397076A1; RU2724536C2; WO2017114900A1

Abstract

USO DE UM INGREDIENTE FERMENTADO E OLIGOSSACARÍDEO NÃO DIGERÍVEL NA MANUFATURA DE UMA COMPOSIÇÃO NUTRICIONAL, MÉTODO PARA AUMENTO DE SECREÇÃO DE IMUNOGLOBULINA A EM UM INDIVÍDUO HUMANO COM IDADE DE 0 A 36 E MÉTODO PARA MELHORAR A DEFESA IMUNOLÓGICA DA MUCOSA EM UM INDIVÍDUO HUMANO COM IDADE DE 0 A 36 MESES. Uma fórmula fermentada compreendendo oligossacarídeos não digeríveis que estimulam de forma sinérgica IgA secretora em lactentes.USE OF A NON-DIGERIBLE OLIGOSACCHARIDE FERMENTED INGREDIENT IN THE MANUFACTURE OF A NUTRITIONAL COMPOSITION, METHOD FOR ENHANCEMENT OF IMMUNOGLOBULIN A SECRETION IN A HUMAN SUBJECT AGE 0 TO 36, AND METHOD FOR IMPROVING MUCOSAL IMMUNE DEFENSE IN A HUMAN SUBJECT AGE AGE 36 0 TO 36 MONTHS. A fermented formula comprising non-digestible oligosaccharides that synergistically stimulate secretory IgA in infants.

Description

FIELD OF THE INVENTION

[001] A presente invenção se refere à área de nutrição para lactentes e jovens crianças para melhora do Sistema imune.[001] The present invention refers to the area of nutrition for infants and young children to improve the immune system.

BACKGROUND OF THE INVENTION

[002] É universalmente aceito que a nutrição ideal para um lactente recém-nascido é o leite humano. Quando uma mão não pode amamentar seu bebê, ou escolhe não amamentar, uma fórmula para lactentes (IF) com base na composição do leite humano maduro é reconhecida como a melhor alternativa. A pesquisa para melhorar a qualidade das fórmulas para lactentes visa não necessariamente mimetizar a composição exata do leite humano, mas obter os efeitos funcionais além dos aspectos meramente nutricionais observado em bebês amamentados.[002] It is universally accepted that the ideal nutrition for a newborn infant is human milk. When a mother cannot breastfeed her baby, or chooses not to breastfeed, an infant formula (IF) based on the composition of mature human milk is recognized as the best alternative. Research to improve the quality of infant formulas does not necessarily aim to mimic the exact composition of human milk, but to obtain the functional effects beyond the merely nutritional aspects observed in breastfed babies.

[003] O leite humano é rico em IgA secretora (sIgA), que serve como a primeira linha de defesa na proteção da barreira intestinal do bebê de toxinas entéricas e microorganismos patogênicos. SIgA é resistente às enzimas digestivas e promove a liberação de antígenos e microorganismos patogênicos a partir do intestino ao bloquear seu acesso aos receptores epiteliais, aprisionando-os no muco, e facilitando sua remoção através das atividades peristálticas e mucociliar. Além disso, sIgA funciona no sistema de defesa imunológica da mucosa e homeostase intestinal, sem irritar, mas até melhorando, uma resposta inflamatória. Em contraste, a fórmula padrão para lactentes com base em ingredientes do leite de vaca possuem uma concentração muito menor de sIgA e os bebês alimentados com fórmula padrão para lactentes possuem um nível reduzido de sIgA em comparação aos bebês amamentados.[003] Human milk is rich in secretory IgA (sIgA), which serves as the first line of defense in protecting the baby's intestinal barrier from enteric toxins and pathogenic microorganisms. SIgA is resistant to digestive enzymes and promotes the release of antigens and pathogenic microorganisms from the intestine by blocking their access to epithelial receptors, trapping them in mucus, and facilitating their removal through peristaltic and mucociliary activities. Furthermore, sIgA works on the mucosal immune defense system and intestinal homeostasis, without irritating, but even enhancing, an inflammatory response. In contrast, standard infant formula based on cow's milk ingredients has a much lower concentration of sIgA and babies fed standard infant formula have a reduced level of sIgA compared to breastfed babies.

[004] O documento EP 2 318 046 revela uma combinação de probióticos com IgA secretora para tratar ou prevenir inflamação. O documento EP 2 315 595 revela o uso de bactérias probióticas vivas para aumentar a secreção de imunoglobulina em bebês da seção C. No entanto, este documento não revela um ingrediente fermentado nem ácido lático. O documento WO 2014/201037 revela o uso de probióticos, prebióticos, simbióticos e antibióticos para tratar a alterações da microbiota de mamíferos associadas aos tratamentos antibióticos e diversas condições imunológicas. Fukushima et al. (1998, Int J Food Micribiol 42:39-44) estudaram o efeito de uma cepa probiótica de Bifidobacterium lactis sobre a secreção de IgA em uma coorte de crianças mais velhas e encontraram níveis elevados de IgA total e IgA do vírus antipólio. Os probióticos são bactérias vivas que produzem ácido lático, como Lactobacilli vivos ou Bifidobacteria vivos. Normalmente, as fórmulas para lactentes com probióticos são comercializadas na forma de pós com células probióticas desidratadas, nas quais a fermentação não é possível devido a circunstâncias que são desfavoráveis para fermentação, por exemplo, uma atividade de água muito baixa, e nenhum ácido lático é produzido.[004] EP 2 318 046 discloses a combination of probiotics with secretory IgA to treat or prevent inflammation. EP 2 315 595 discloses the use of live probiotic bacteria to increase immunoglobulin secretion in C-section infants. However, this document does not disclose a fermented ingredient or lactic acid. Document WO 2014/201037 discloses the use of probiotics, prebiotics, symbiotics and antibiotics to treat changes in the mammalian microbiota associated with antibiotic treatments and various immunological conditions. Fukushima et al. (1998, Int J Food Micribiol 42:39-44) studied the effect of a probiotic strain of Bifidobacterium lactis on IgA secretion in a cohort of older children and found elevated levels of total IgA and antipoliovirus IgA. Probiotics are live bacteria that produce lactic acid, such as live Lactobacilli or live Bifidobacteria. Typically, infant formulas with probiotics are marketed as powders with dehydrated probiotic cells, in which fermentation is not possible due to circumstances that are unfavorable for fermentation, for example very low water activity, and no lactic acid is present. produced.

[005] Além disso, os oligossacarídeos não digeríveis influenciam a resposta intestinal de sIgA através de seu efeito sobre a composição da microbiota. Scholtens et al. (2008, J Nutr 138:1141-1147), e também Bakker-Zierikzee et al. (2006, Pediatr Allergy Immunol 17:134-140), descobriram níveis de sIgA fecal mais elevados em bebês saudáveis alimentados por uma fórmula complementada com scGOS/lcFOS que em bebês alimentados por uma fórmula padrão, apoiando assim esta hipótese.[005] In addition, nondigestible oligosaccharides influence the intestinal sIgA response through their effect on microbiota composition. Scholtens et al. (2008, J Nutr 138:1141-1147), and also Bakker-Zierikzee et al. (2006, Pediatr Allergy Immunol 17:134-140), found higher fecal sIgA levels in healthy infants fed a formula supplemented with scGOS/lcFOS than in infants fed a standard formula, thus supporting this hypothesis.

[006] Mullié et al. (2004, Ped Res 56:791-795) revelaram que o consumo de fórmula fermentada em recém- nascidos saudáveis foi associado a uma produção potencializada de anticorpos de sIgA intestinal específicos ao vírus da pólio após administração de vacina, mas nenhum efeito sobre os títulos de IgA total.[006] Mullié et al. (2004, Ped Res 56:791-795) revealed that consumption of fermented formula in healthy neonates was associated with enhanced production of poliovirus-specific intestinal sIgA antibodies after vaccine administration, but no effect on poliovirus titers. of total IgA.

[007] O documento WO 2009/151330 revela uma composição que é obtida pela fermentação através de bactérias que produzem ácido lático e oligossacarídeos não digeríveis para uso em bebês nascidos por cesariana. O objetivo é induzir a tolerância para auxiliar a subsequente colonização por bactérias vivas. A secreção de IgA não é mencionada. O documento WO 2009/151331 revela uma composição que estimula o sistema imunológico que compreende oligossacarídeos não digeríveis e um produto obtido após a incubação com Bifidobacteria. Ao estimular a resposta de Th1 e reduzir a resposta de Th2 do Sistema imunológico sistêmico, a resposta da vacinação é elevada e a alergia é reduzida. O documento WO 2009/151329 revela uma composição que compreende oligossacarídeos não digeríveis e um produto obtido pela incubação com Bifidobacteria para reduzir translocação bacteriana e melhora da função de barreira intestinal. Deste modo, o objetivo é evitar infecções sistêmicas. O documento é omisso sobre quaisquer efeitos sobre a defesa imunológica da mucosa e a secreção de IgA.[007] WO 2009/151330 discloses a composition that is obtained by fermentation through bacteria that produce lactic acid and non-digestible oligosaccharides for use in babies born by caesarean section. The goal is to induce tolerance to aid subsequent colonization by live bacteria. IgA secretion is not mentioned. WO 2009/151331 discloses an immune system stimulating composition comprising non-digestible oligosaccharides and a product obtained after incubation with Bifidobacteria. By stimulating the Th1 response and reducing the Th2 response of the Systemic Immune System, the vaccination response is increased and allergy is reduced. WO 2009/151329 discloses a composition comprising non-digestible oligosaccharides and a product obtained by incubation with Bifidobacteria to reduce bacterial translocation and improve intestinal barrier function. Thus, the objective is to avoid systemic infections. The document is silent on any effects on mucosal immune defense and IgA secretion.

SUMMARY OF THE INVENTION

[008] Em estudos clínicos com bebês saudáveis e a termo, descobriu-se que na administração de uma fórmula para lactentes fermentada que compreende oligossacarídeos não digeríveis foi observado um grande aumento de IgA secretora intestinal (sIgA), quando comparada à administração de fórmula controle não fermentada sem oligossacarídeos não digeríveis, uma fórmula fermentada sem oligossacarídeos não digeríveis ou uma fórmula não fermentada que compreende oligossacarídeos não digeríveis. A secreção de sIgA foi elevada de forma sinérgica e mais similar a sIgA no grupo d referência com amamentação. Além disso, isto é indicativo de um aumento sinérgico no sistema de defesa imunológica da mucosa.[008] In clinical studies with healthy, full-term infants, administration of a fermented infant formula comprising non-digestible oligosaccharides was found to have a large increase in intestinal secretory IgA (sIgA) when compared to administration of control formula unfermented formula without nondigestible oligosaccharides, a fermented formula without nondigestible oligosaccharides, or an unfermented formula comprising nondigestible oligosaccharides. Secretion of sIgA was increased synergistically and more similarly to sIgA in the breastfeeding reference group. Furthermore, this is indicative of a synergistic increase in the mucosal immune defense system.

[009] De forma surpreendente, o efeito sinérgico não pode ser explicado por uma interação direta entre os oligossacarídeos não digeríveis e as bactérias que produzem ácido lático na composição fermentada, uma vez que as bactérias foram inativadas, nem por uma atividade microbiana intestinal elevada, uma vez que não houve correlação clara com o pH intestinal.[009] Surprisingly, the synergistic effect cannot be explained by a direct interaction between the non-digestible oligosaccharides and the bacteria that produce lactic acid in the fermented composition, once the bacteria have been inactivated, nor by an increased intestinal microbial activity, since there was no clear correlation with intestinal pH.

DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[010] Portanto, invenção se refere a um método para aumento da secreção de IgA e um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses que compreende a administração ao indivíduo humano de uma composição nutricional compreendendo um ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível, a dita composição nutricional compreendendo 0,02 a 1,5% em peso da soma de ácido lático e lactato com base no peso seco da composição nutricional e compreendendo 2,5 a 15% em peso oligossacarídeo não digerível com base no peso seco da composição nutricional.[010] Therefore, the invention relates to a method for increasing the secretion of IgA in a human subject aged from 0 to 36 months, which comprises administering to the human subject a nutritional composition comprising a fermented ingredient and non-digestible oligosaccharide, said nutritional composition comprising 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on the dry weight of the nutritional composition and comprising 2.5 to 15% by weight of non-digestible oligosaccharide based on the dry weight of the nutritional composition.

[011] Em uma realização, o presente método para aumento de secreção de IgA em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses é um método não terapêutico.[011] In one embodiment, the present method for increasing IgA secretion in a human subject aged 0 to 36 months is a non-therapeutic method.

[012] A invenção também pode ser denominada como o uso de um ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível na manufatura de uma composição nutricional para uso no aumento de secreção de IgA em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses, em que a composição nutricional compreende 0,02 a 1,5% em peso da soma de ácido lático e lactato com base no peso seco da composição nutricional e compreende 2,5 a 15% em peso oligossacarídeo não digerível com base no peso seco da composição nutricional.[012] The invention can also be referred to as the use of a fermented ingredient and non-digestible oligosaccharide in the manufacture of a nutritional composition for use in increasing IgA secretion in a human subject aged 0 to 36 months, wherein the composition The nutritional composition comprises 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on the dry weight of the nutritional composition and comprises 2.5 to 15% by weight of non-digestible oligosaccharide based on the dry weight of the nutritional composition.

[013] A invenção também pode ser denominada como uma composição nutricional que compreende um ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível, em que a composição nutricional compreende 0,02 a 1,5% em peso da soma de ácido lático e lactato com base no peso seco da composição nutricional e compreende 2,5 a 15% em peso oligossacarídeo não digerível com base no peso seco da composição nutricional, para uso no aumento da secreção de IgA em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses.[013] The invention can also be referred to as a nutritional composition comprising a fermented ingredient and non-digestible oligosaccharide, wherein the nutritional composition comprises 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on weight of the nutritional composition and comprises 2.5 to 15% by weight nondigestible oligosaccharide based on the dry weight of the nutritional composition, for use in increasing IgA secretion in a human subject aged 0 to 36 months.

[014] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para melhorar a defesa imunológica da mucosa em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses que compreende a administração ao indivíduo humano de uma composição nutricional compreendendo um ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível, a dita composição nutricional compreendendo 0,02 a 1,5% em peso da soma de ácido lático e lactato com base no peso seco da composição nutricional e compreendendo 2,5 a 15% em peso oligossacarídeo não digerível com base no peso seco da composição nutricional.[014] In another aspect, the invention relates to a method for improving the immune defense of the mucosa in a human subject aged 0 to 36 months, which comprises administering to the human subject a nutritional composition comprising a fermented ingredient and non-alcoholic oligosaccharide. digestible, said nutritional composition comprising 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on the dry weight of the nutritional composition and comprising 2.5 to 15% by weight indigestible oligosaccharide based on dry weight of the nutritional composition.

[015] Em uma realização, o presente método para melhorar a defesa imunológica da mucosa em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses é um método não terapêutico.[015] In one embodiment, the present method for enhancing mucosal immune defense in a human subject aged 0 to 36 months is a non-therapeutic method.

[016] A invenção também pode ser denominada como o uso de um ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível na manufatura de uma composição nutricional para uso ao melhorar a defesa imunológica da mucosa em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses, em que a composição nutricional compreende 0,02 a 1,5% em peso da soma de ácido lático e lactato com base no peso seco da composição nutricional e compreende 2,5 a 15% em peso oligossacarídeo não digerível com base no peso seco da composição nutricional.[016] The invention can also be referred to as the use of a fermented ingredient and non-digestible oligosaccharide in the manufacture of a nutritional composition for use in improving the immune defense of the mucosa in a human subject aged 0 to 36 months, in which the nutritional composition comprises 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on the dry weight of the nutritional composition and comprises 2.5 to 15% by weight of non-digestible oligosaccharide based on the dry weight of the nutritional composition.

[017] A invenção também pode ser denominada como uma composição nutricional que compreende um ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível, em que a composição nutricional compreende 0,02 a 1,5% em peso da soma de ácido lático e lactato com base no peso seco da composição nutricional e compreende 2,5 a 15% em peso oligossacarídeo não digerível com base no peso seco da composição nutricional, para uso no melhora da defesa imunológica da mucosa em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses.[017] The invention can also be referred to as a nutritional composition comprising a fermented ingredient and non-digestible oligosaccharide, wherein the nutritional composition comprises 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on weight of the nutritional composition and comprises 2.5 to 15% by weight nondigestible oligosaccharide based on the dry weight of the nutritional composition, for use in enhancing mucosal immune defense in a human subject aged 0 to 36 months.

[018] Ingrediente fermentado[018] Fermented ingredient

[019] A composição nutricional nos métodos ou usos, de acordo com a presente invenção, também doravante denominada a presente composição nutricional, compreende um ingrediente fermentado. O ingrediente fermentado é uma composição que é fermentada por bactérias que produzem ácido lático. A fermentação ocorre preferencialmente durante o processo de produção da composição nutricional. Preferencialmente, a composição nutricional não contém quantidades significativas de bactérias viáveis no produto final devido à inativação por calor após a fermentação ou inativação por outros meios. Preferencialmente, o ingrediente fermentado é um produto derivado de leite, que é um substrato lácteo que é fermentado por bactérias que produzem ácido lático, e o dito substrato lácteo compreendendo pelo menos um selecionado dentre o grupo que consiste de leite, soro, proteína do soro, hidrolisado da proteína do soro, caseína, hidrolisado da caseína e lactose, ou misturas destes. De forma adequada, as composições nutricionais que compreendem ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível e a forma de produzi-los são descritos nos documentos WO 2009/151330, WO 2009/151331 e WO 2013/187764.[019] The nutritional composition in the methods or uses, according to the present invention, also hereinafter referred to as the present nutritional composition, comprises a fermented ingredient. The fermented ingredient is a composition that is fermented by bacteria that produce lactic acid. Fermentation preferably occurs during the process of producing the nutritional composition. Preferably, the nutritional composition does not contain significant amounts of viable bacteria in the final product due to heat inactivation after fermentation or inactivation by other means. Preferably, the fermented ingredient is a milk-derived product, which is a dairy substrate that is fermented by bacteria producing lactic acid, and said dairy substrate comprising at least one selected from the group consisting of milk, whey, whey protein , whey protein hydrolyzate, casein, casein hydrolyzate and lactose, or mixtures thereof. Suitably, nutritional compositions comprising fermented ingredient and non-digestible oligosaccharide and the way to produce them are described in WO 2009/151330, WO 2009/151331 and WO 2013/187764.

[020] O ingrediente fermentado compreende preferencialmente fragmentos de células bacterianas como glicoproteínas, glicolipídios, peptidoglicano, ácido lipoteicóico (LTA), lipoproteínas, nucleotídeos e/ou polissacarídeos capsulares. É vantajoso usar o ingrediente fermentado que compreende bactérias inativadas e/ou fragmentos celulares diretamente como uma parte do produto nutricional final, uma vez que isto resultará em uma concentração mais elevada de fragmentos de célula bacteriana. Quando são usadas preparações comerciais, estas geralmente são enxaguadas e o material é separado do meio de crescimento aquoso, compreendendo os fragmentos de célula bacteriana, reduzindo assim ou eliminando a presença de fragmentos de célula bacteriana. Além disso, na fermentação e/ou outras interações de bactérias que produzem ácido lático com o substrato lácteo são formados compostos bioativos adicionais, como peptídeos bioativos e/ou oligossacarídeos, que também estimulam o sistema de defesa imunológica da mucosa. Portanto, o ingrediente fermentado, em particular produto derivado do leite fermentado, acredita-se ter um efeito melhorado em comparação ao produto derivado de leite não fermentado.[020] The fermented ingredient preferably comprises bacterial cell fragments such as glycoproteins, glycolipids, peptidoglycan, lipoteichoic acid (LTA), lipoproteins, nucleotides and/or capsular polysaccharides. It is advantageous to use the fermented ingredient comprising inactivated bacteria and/or cell fragments directly as a part of the final nutritional product, as this will result in a higher concentration of bacterial cell fragments. When commercial preparations are used, these are generally rinsed and the material separated from the aqueous growth medium comprising the bacterial cell fragments, thereby reducing or eliminating the presence of bacterial cell fragments. In addition, in fermentation and/or other interactions of bacteria that produce lactic acid with the dairy substrate, additional bioactive compounds are formed, such as bioactive peptides and/or oligosaccharides, which also stimulate the mucosal immune defense system. Therefore, the fermented ingredient, in particular the fermented milk product, is believed to have an improved effect compared to the unfermented milk product.

[021] Preferencialmente, a composição nutricional compreende 5 a 97,5% em peso do ingrediente fermentado com base no peso seco, mais preferencialmente 10 a 95% em peso, mais preferencialmente 20 a 90% em peso, ainda mais preferencialmente 25 a 60% em peso. Como forma de especificar a extensão da fermentação, o nível da soma de ácido lático e lactato na composição nutricional pode ser tomado, uma vez que este é o produto final metabólico pelas bactérias que produzem ácido lático mediante fermentação. A presente composição nutricional compreende 0,02 a 1,5% em peso da soma de ácido lático e lactato com base no peso seco da composição, mais preferencialmente 0,05 a 1,0% em peso, ainda mais preferencialmente 0,05 a 0,5% em peso. Preferencialmente, pelo menos 50% em peso, ainda mais preferencialmente pelo menos 90% em peso da soma de ácido lático e lactato encontra-se na forma do L(+)-isômero. Assim, em uma realização, a soma do L(+)-ácido lático e L(+)-lactato é superior a 50% em peso, mais preferencialmente superior a 90% em peso com base na soma do ácido lático e lactato totais. Aqui, L(+)-lactato e L(+)-ácido lático também é mencionado como L-lactato e L-ácido lático.[021] Preferably, the nutritional composition comprises 5 to 97.5% by weight of the fermented ingredient based on dry weight, more preferably 10 to 95% by weight, more preferably 20 to 90% by weight, even more preferably 25 to 60 % by weight. As a way of specifying the extent of fermentation, the sum level of lactic acid and lactate in the nutritional composition can be taken, as this is the metabolic end product by the bacteria that produce lactic acid upon fermentation. The present nutritional composition comprises 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on the dry weight of the composition, more preferably 0.05 to 1.0% by weight, even more preferably 0.05 to 0.5% by weight. Preferably at least 50% by weight, even more preferably at least 90% by weight of the sum of lactic acid and lactate is in the form of the L(+)-isomer. Thus, in one embodiment, the sum of the L(+)-lactic acid and L(+)-lactate is greater than 50% by weight, more preferably greater than 90% by weight based on the sum of the total lactic acid and lactate. Here, L(+)-lactate and L(+)-lactic acid is also mentioned as L-lactate and L-lactic acid.

[022] Bactérias que produzem ácido lático usadas para a produção de ingrediente fermentado[022] Bacteria that produce lactic acid used for the production of fermented ingredient

[023] As bactérias que produzem ácido lático usadas para o preparo do ingrediente fermentado, em particular para a fermentação do substrato lácteo são providas preferencialmente como uma monocultura ou cultura mista. As bactérias que produzem ácido lático consistem dos gêneros Bifidobacterium, Lactobacillus, Carnobacterium, Enterococcus, Lactococcus, Leuconostoc, Oenococcus, Pediococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Vagococcus e Weissella. Preferencialmente, as bactérias que produzem ácido lático usadas para fermentação compreendem bactérias do gênero Bifidobacterium e/ou Streptococcus.[023] The bacteria that produce lactic acid used for the preparation of the fermented ingredient, in particular for the fermentation of the dairy substrate are preferably provided as a monoculture or mixed culture. The bacteria that produce lactic acid consist of the genera Bifidobacterium, Lactobacillus, Carnobacterium, Enterococcus, Lactococcus, Leuconostoc, Oenococcus, Pediococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Vagococcus, and Weissella. Preferably, the lactic acid producing bacteria used for fermentation comprise bacteria of the genus Bifidobacterium and/or Streptococcus.

[024] Preferencialmente, o Streptococcus é uma cepa de S. thermophilus. Preferencialmente, o Streptococcus desenvolve atividade beta-galactosidase no decorrer da fermentação do substrato. A seleção de uma cepa adequada de S. thermophilus é descrita no exemplo 2 do documento EP 778885 e no exemplo 1 do documento FR 2723960. Em uma realização preferida adicional de acordo com a presente invenção, a composição nutricional compreende 102 a 105 ufc de bactérias vivas de S. thermophilus por g do peso seco da composição nutricional, preferencialmente, a composição nutricional compreende 102 a 104 de bactérias vivas de S. thermophilus por g do peso seco.[024] Preferably, the Streptococcus is a strain of S. thermophilus. Preferably, Streptococcus develops beta-galactosidase activity in the course of substrate fermentation. Selection of a suitable strain of S. thermophilus is described in example 2 of EP 778885 and example 1 of FR 2723960. In a further preferred embodiment according to the present invention, the nutritional composition comprises 102 to 105 cfu of bacteria S. thermophilus bacteria per g dry weight of the nutritional composition, preferably, the nutritional composition comprises 102 to 104 live S. thermophilus bacteria per g dry weight.

[025] As cepas preferidas de S. thermophilus para preparar o ingrediente fermentado para a finalidade da presente invenção foram depositadas por Compagnie Gervais Danone na Coleção Nacional de Culturas de Microorganismos (CNCM) administrada pelo Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, Paris, França, em 23 de agosto de 1995 sob o número de acesso I-1620 e em 25 de agosto de 1994 sob o número de acesso I-1470.[025] The preferred strains of S. thermophilus to prepare the fermented ingredient for the purpose of the present invention were deposited by Compagnie Gervais Danone in the National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM) managed by the Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, Paris, France, on August 23, 1995 under accession number I-1620 and on August 25, 1994 under accession number I-1470.

[026] Bifidobacteria são bactérias Gram positivas, anaeróbicas em formato de haste. As espécies preferidas de Bifidobacterium para preparar o ingrediente fermentado para a finalidade da presente invenção possuem preferencialmente pelo menos 95% de identidade da sequência 16 S rRNA em comparação a tipo de cepa das respectivas espécies de Bifidobacterium, mais preferencialmente pelo menos 97% de identidade, conforme definido nos manuais sobre este assunto, por exemplo, Sambrook, J., Fritsch, E.F., e Maniatis, T. (1989), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor (N.Y.) Laboratory Press. As Bifodobacteria preferencialmente usadas também são descritas por Scardovi, V. Genus Bifidobacterium. p. 1418 - p. 1434. In: Bergey’s manual of systematic Bacteriology. Vol. 2. Sneath, P.H.A., N.S. Mair, M.E. Sharpe and J.G. Holt (ed.). Baltimore: Williams & Wilkins. 1986. 635 p. Preferencialmente, as bactérias que produzem ácido lático usadas para fermentação compreendem pelo menos uma Bifidobacterium selecionada dentre o grupo que consiste de B. breve, B. infantis, B. bifidum, B. catenulatum, B. adolescentis, B. thermophilum, B. gallicum, B. animalis ou lactis, B. angulatum, B. pseudocatenulatum, B. thermacidophilum e B. longum, mais preferencialmente B. breve, B. infantis, B. bifidum, B. catenulatum, B. longum, mais preferencialmente B. longum e B. breve, ainda mais preferencialmente B. breve, mais preferencialmente B. breve selecionada dentre o grupo que consiste de B. breve Bb-03 (Rhodia/Danisco), B. breve M-16V (Morinaga), B. breve R0070 (Institute Rosell, Lallemand), B. breve BR03 (Probiotical), B. breve BR92 (Cell Biotech) DSM 20091, LMG 11613 e B. breve I-2219 depositado na CNCM, Paris, França. Mais preferencialmente, a B. breve é B. breve M-16V (Morinaga) ou B. breve I-2219, ainda mais preferencialmente B. breve I-2219.[026] Bifidobacteria are Gram positive, anaerobic, rod-shaped bacteria. Preferred Bifidobacterium species for preparing the fermented ingredient for the purpose of the present invention preferably have at least 95% 16S rRNA sequence identity compared to strain type of the respective Bifidobacterium species, more preferably at least 97% identity, as defined in manuals on this subject, e.g., Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T. (1989), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor (N.Y.) Laboratory Press. Preferably used Bifodobacteria are also described by Scardovi, V. Genus Bifidobacterium. P. 1418 - p. 1434. In: Bergey's manual of systematic Bacteriology. Vol. 2. Sneath, P.H.A., N.S. Mair, M.E. Sharpe and J.G. Holt (ed.). Baltimore: Williams & Wilkins. 1986. 635 p. Preferably, the lactic acid producing bacteria used for fermentation comprises at least one Bifidobacterium selected from the group consisting of B. breve, B. infantile, B. bifidum, B. catenulatum, B. adolescentis, B. thermophilum, B. gallicum , B. animalis or lactis, B. angulatum, B. pseudocatenulatum, B. thermacidophilum and B. longum, more preferably B. breve, B. infantile, B. bifidum, B. catenulatum, B. longum, more preferably B. longum and B.brevis, even more preferably B.breve, most preferably B.breve selected from the group consisting of B.breve Bb-03 (Rhodia/Danisco), B.breve M-16V (Morinaga), B.breve R0070 (Rosell Institute, Lallemand), B. breve BR03 (Probiotical), B. breve BR92 (Cell Biotech) DSM 20091, LMG 11613 and B. breve I-2219 deposited at CNCM, Paris, France. More preferably, the B.breviate is B.breve M-16V (Morinaga) or B.breve I-2219, even more preferably B.breve I-2219.

[027] Mais preferencialmente, a composição nutricional compreende ingrediente fermentado que é fermentado pelas bactérias de ácido lático compreendendo tanto B. breve e S. thermophilus. Em uma realização, a fermentação através de bactérias de ácido lático é a fermentação por Streptococcus thermophilus e Bifidobacterium breve. Em uma realização, a composição nutricional compreende ingrediente fermentado, em que as bactérias de ácido lático são inativadas após fermentação.[027] More preferably, the nutritional composition comprises fermented ingredient which is fermented by lactic acid bacteria comprising both B.breve and S. thermophilus. In one embodiment, the fermentation by lactic acid bacteria is fermentation by Streptococcus thermophilus and Bifidobacterium breve. In one embodiment, the nutritional composition comprises fermented ingredient, wherein lactic acid bacteria are inactivated after fermentation.

[028] Preferencialmente, o ingrediente fermentado não é fermentado por Lactobacillus bulgaricus. Os produtos fermentados por L. bulgaricus são considerados inadequados para bebês, uma vez que em jovens bebês a desidrogenase específica que converte D-lactato em piruvato é muito menos ativa que a desidrogenase que converte L-lactato.[028] Preferably, the fermented ingredient is not fermented by Lactobacillus bulgaricus. Products fermented by L. bulgaricus are considered unsuitable for infants, since in young infants the specific dehydrogenase that converts D-lactate to pyruvate is much less active than the dehydrogenase that converts L-lactate.

[029] Preferencialmente, a presente composição nutricional compreende bactérias inativadas que produzem ácido lático e/ou fragmentos bacterianos derivados das bactérias que produzem ácido lático obtidas de mais de 1 x 104 ufc de bactérias que produzem ácido lático por g com base no peso seco da composição final, mais preferencialmente 1 x 105 ufc, ainda mais preferencialmente 1 x 106 ufc. Preferencialmente, as bactérias inativadas ou fragmentos bacterianos são obtidos de menos de 1 x 1014 ufc de bactérias que produzem ácido lático por g com base no peso seco da composição final, mais preferencialmente 1 x 1013 ufc, ainda mais preferencialmente 1x1012 ufc.[029] Preferably, the present nutritional composition comprises inactivated bacteria that produce lactic acid and/or bacterial fragments derived from bacteria that produce lactic acid obtained from more than 1 x 104 cfu of bacteria that produce lactic acid per g based on the dry weight of final composition, more preferably 1 x 105 cfu, even more preferably 1 x 106 cfu. Preferably, the inactivated bacteria or bacterial fragments are obtained from less than 1x1014 cfu lactic acid producing bacteria per g based on the dry weight of the final composition, more preferably 1x1013 cfu, even more preferably 1x1012 cfu.

[030] Processo de fermentação[030] Fermentation process

[031] O substrato lácteo a ser fermentado está adequadamente presente no meio aquoso. O substrato lácteo a ser fermentado é preferencialmente selecionado dentre o grupo que consiste de leite, soro, proteína do soro, hidrolisado da proteína do soro, caseína, hidrolisado da caseína e lactose, e misturas destes. O leite pode ser leite integral, leite semidesnatado e/ou leite desnatado. Preferencialmente, o substrato lácteo a ser fermentado compreende leite desnatado. O soro pode ser soro doce e/ou soro ácido. Preferencialmente, o soro está presente em uma concentração de 3 a 80 g do peso seco por l de meio aquoso contanto o substrato lácteo, mais preferencialmente 40 a 60 g por l. Preferencialmente, o hidrolisado da proteína do soro está presente em 2 a 80 g do peso seco por l do meio aquoso contendo substrato lácteo, mais preferencialmente 5 a 15 g/l. Preferencialmente, a lactose está presente em 5 a 50 g do peso seco por l do substrato aquoso, mais preferencialmente 1 a 30 g/l. Preferencialmente, o meio aquoso contendo substrato lácteo compreende sais tampão a fim de manter o pH dentro de uma faixa desejada. Preferencialmente, é usado di- hidrogenofosfato de sódio ou potássio como sal tampão, preferencialmente em 0,5 a 5 g/l, mais preferencialmente 1,5 a 3 g por l. Preferencialmente, o meio aquoso contendo substrato lácteo compreende cisteína em quantidade de 0,1 a 0,5 g por l do substrato aquoso, mais preferencialmente 0,2 a 0,4 g/l. A presença de cisteína resulta em baixo potencial de oxirredução do substrato, o que é vantajoso para a atividade de bactérias que produzem ácido lático, particularmente Bifidobacteria. Preferencialmente, o meio aquoso contendo substrato lácteo compreende extrato de levedura em uma quantidade de 0,5 a 5 g/l de meio aquoso contendo substrato lácteo, mais preferencialmente 1,5 a 3 g/l. O extrato de levedura é uma fonte rica de cofatores de enzima e fatores de crescimento para bactérias que produzem ácido lático. A presença de extrato de levedura potencializará a fermentação por bactérias que produzem ácido lático.[031] The dairy substrate to be fermented is adequately present in the aqueous medium. The dairy substrate to be fermented is preferably selected from the group consisting of milk, whey, whey protein, whey protein hydrolyzate, casein, casein hydrolyzate and lactose, and mixtures thereof. The milk can be whole milk, semi-skimmed milk and/or skimmed milk. Preferably, the dairy substrate to be fermented comprises skimmed milk. The whey can be sweet whey and/or acid whey. Preferably, the whey is present at a concentration of 3 to 80 g dry weight per l of aqueous medium containing the dairy substrate, more preferably 40 to 60 g per l. Preferably, the whey protein hydrolyzate is present at 2 to 80 g dry weight per l of the aqueous medium containing dairy substrate, more preferably 5 to 15 g/l. Preferably, lactose is present at 5 to 50 g dry weight per l of aqueous substrate, more preferably 1 to 30 g/l. Preferably, the dairy substrate-containing aqueous medium comprises buffer salts in order to maintain the pH within a desired range. Preferably, sodium or potassium dihydrogen phosphate is used as buffer salt, preferably at 0.5 to 5 g/l, more preferably 1.5 to 3 g per l. Preferably, the aqueous medium containing the dairy substrate comprises cysteine in an amount of 0.1 to 0.5 g per l of the aqueous substrate, more preferably 0.2 to 0.4 g/l. The presence of cysteine results in a low redox potential of the substrate, which is advantageous for the activity of bacteria that produce lactic acid, particularly Bifidobacteria. Preferably, the dairy substrate-containing aqueous medium comprises yeast extract in an amount of 0.5 to 5 g/l of dairy substrate-containing aqueous medium, more preferably 1.5 to 3 g/l. Yeast extract is a rich source of enzyme cofactors and growth factors for bacteria that produce lactic acid. The presence of yeast extract will enhance fermentation by bacteria that produce lactic acid.

[032] Adequadamente, o substrato lácteo, em particular o meio aquoso contendo substrato lácteo, é pasteurizado antes da etapa de fermentação a fim de eliminar a presença de bactérias vivas indesejadas. Adequadamente, o produto é pasteurizado após a fermentação a fim de inativar as enzimas. Adequadamente, a inativação enzimática ocorre a 75oC por 3 minutos. Adequadamente, o meio aquoso contendo substrato lácteo é homogeneizado antes e/ou o produto derivado de leite é homogeneizado após a fermentação. A homogeneização resulta em um substrato e/ou produto fermentado mais estável, especialmente na presença de gorduras.[032] Suitably, the dairy substrate, in particular the aqueous medium containing dairy substrate, is pasteurized before the fermentation step in order to eliminate the presence of unwanted live bacteria. Suitably, the product is pasteurized after fermentation in order to inactivate the enzymes. Suitably, enzymatic inactivation occurs at 75oC for 3 minutes. Suitably, the aqueous medium containing dairy substrate is homogenized before and/or the milk-derived product is homogenized after fermentation. Homogenization results in a more stable substrate and/or fermented product, especially in the presence of fats.

[033] A densidade de inoculação está preferencialmente entre 1 x 102 e 5 x 1010, preferencialmente entre 1 x 104 e 5 x 109 ufc de bactérias que produzem ácido lático/ml do meio aquoso contendo substrato lácteo, mais preferencialmente entre 1 x 107 e 1 x 109 ufc de bactérias que produzem ácido lático/ml do por meio aquoso contendo substrato lácteo. A densidade final de bactérias após a fermentação está preferencialmente entre 1 x 103 e 1 x 1010, mais preferencialmente entre 1 x 104 e 1 x 109 ufc/ml do meio aquoso contendo substrato lácteo.[033] The inoculation density is preferably between 1 x 102 and 5 x 1010, preferably between 1 x 104 and 5 x 109 cfu of bacteria that produce lactic acid/ml of aqueous medium containing dairy substrate, more preferably between 1 x 107 and 1 x 109 cfu of lactic acid producing bacteria/ml of aqueous medium containing dairy substrate. The final density of bacteria after fermentation is preferably between 1 x 103 and 1 x 1010, more preferably between 1 x 104 and 1 x 109 cfu/ml of the aqueous medium containing dairy substrate.

[034] A fermentação realizada preferencialmente a uma temperatura de aproximadamente 20oC a 50oC, mais preferencialmente 30oC a 45oC, ainda mais preferencialmente aproximadamente 37oC a 42oC. A temperatura ideal para crescimento e/ou atividade para as bactérias que produzem ácido lático, mais particularmente Lactobacilli e/ou Bifidobacteria, está entre 37oC e 42oC.[034] The fermentation is preferably carried out at a temperature of approximately 20oC to 50oC, more preferably 30oC to 45oC, even more preferably approximately 37oC to 42oC. The ideal temperature for growth and/or activity for bacteria that produce lactic acid, more particularly Lactobacilli and/or Bifidobacteria, is between 37oC and 42oC.

[035] A incubação é realizada preferencialmente a uma pH de 4 a 8, mais preferencialmente 6 a 7,5. Este pH não induz a precipitação proteica e/ou um sabor adverso, enquanto, ao mesmo tempo, as bactérias que produzem ácido lático, como Lactobacilli e/ou Bifidobacteria são capazes de fermentar o substrato lácteo.[035] The incubation is preferably carried out at a pH of 4 to 8, more preferably 6 to 7.5. This pH does not induce protein precipitation and/or an adverse taste, while at the same time the bacteria that produce lactic acid such as Lactobacilli and/or Bifidobacteria are able to ferment the dairy substrate.

[036] O tempo de incubação varia preferencialmente de 10 minutos a 48 horas, preferencialmente de 2 h a 24 h, mais preferencialmente de 4 h a 12 h. Um tempo longo suficiente possibilita a fermentação e a produção concomitante de fragmentos de células imunogênicas, como glicoproteínas, glicolipídios, peptidoglicano, ácido lipoteicóico (LTA), flagelos, lipoproteínas, DNA e/ou polissacarídeos capsulares, ocorrem em grande medida, ao passo que o tempo de incubação não precisa ser desnecessariamente longo por motivos econômicos.[036] The incubation time preferably ranges from 10 minutes to 48 hours, preferably from 2 h to 24 h, more preferably from 4 h to 12 h. A long enough time allows for fermentation and concomitant production of immunogenic cell fragments such as glycoproteins, glycolipids, peptidoglycan, lipoteichoic acid (LTA), flagella, lipoproteins, DNA, and/or capsular polysaccharides to a large extent, whereas the Incubation time need not be unnecessarily long for economic reasons.

[037] Preferencialmente, um substrato lácteo, preferencialmente leite desnatado, é pasteurizado, resfriado e fermentado com uma ou mais cepas que produzem ácido lático, preferencialmente uma cepa de S. thermophilus, até um determinado grau de acidez, no qual o produto fermentado é resfriado e armazenado. Preferencialmente, um Segundo produto derivado de leite é preparado de forma similar usando uma ou mais espécies de Bifidobacterium para a fermentação. Subsequentemente, os dois produtos fermentados são preferencialmente misturados juntos e misturados a outros componentes que compõem uma fórmula para lactentes, exceto o componente de gordura. Preferencialmente, a mistura é pré- aquecida e subsequentemente a gordura é adicionada em linha, homogeneizada, pasteurizada e desidratada.[037] Preferably, a dairy substrate, preferably skimmed milk, is pasteurized, cooled and fermented with one or more strains that produce lactic acid, preferably a strain of S. thermophilus, to a certain degree of acidity, at which the fermented product is cooled and stored. Preferably, a second milk-derived product is similarly prepared using one or more species of Bifidobacterium for fermentation. Subsequently, the two fermented products are preferably blended together and blended with other components that make up an infant formula, except the fat component. Preferably, the mixture is preheated and subsequently the fat is added in-line, homogenized, pasteurized and dehydrated.

[038] Os procedimentos para preparar ingredientes fermentados adequados para a finalidade da presente invenção são conhecidos por si só. O documento EP 778885, que é pelo presente incorporado por referência, revela, em particular no exemplo 7, um processo adequado para o preparo de um ingrediente fermentado. O documento FR 2723960, que é pelo presente incorporado por referência, revela, em particular no exemplo 6, um processo adequado para preparo de um ingrediente fermentado. De forma resumida, um substrato lácteo, preferencialmente pasteurizado, contendo lactose e opcionalmente outros macronutrientes como gorduras, preferencialmente gorduras vegetais, caseína, proteína do soro, vitaminas e/ou minerais, etc., é concentrado, por exemplo, entre 15 a 50% da matéria seca e então inoculado com S. thermophilus, por exemplo, com 5% de uma cultura contendo 106 a 1010 de bactérias por ml. Preferencialmente, este substrato lácteo compreende peptídeos da proteína do leite. A temperatura e a duração da fermentação são conforme mencionadas acima. Adequadamente, após a fermentação o ingrediente fermentado pode ser pasteurizado ou esterilizado e, por exemplo, desidratado por spray ou liofilizado para prover uma forma adequada a ser formulada no produto final.[038] The procedures for preparing fermented ingredients suitable for the purpose of the present invention are known per se. EP 778885, which is hereby incorporated by reference, discloses, in particular in example 7, a suitable process for preparing a fermented ingredient. FR 2723960, which is hereby incorporated by reference, discloses, in particular in example 6, a suitable process for preparing a fermented ingredient. Briefly, a dairy substrate, preferably pasteurized, containing lactose and optionally other macronutrients such as fats, preferably vegetable fats, casein, whey protein, vitamins and/or minerals, etc., is concentrated, for example, between 15 to 50% of dry matter and then inoculated with S. thermophilus, for example, with 5% of a culture containing 106 to 1010 bacteria per ml. Preferably, this dairy substrate comprises milk protein peptides. The temperature and duration of fermentation are as mentioned above. Suitably, after fermentation the fermented ingredient may be pasteurized or sterilized and, for example, spray-dried or freeze-dried to provide a suitable form to be formulated into the final product.

[039] Um método preferido para o prepare do ingrediente fermentado da presente invenção é revelado no documento WO 01/01785, mais particularmente nos exemplos 1 e 2. Um método preferido para o prepare do produto fermentado da presente invenção é descrito no documento WO 2004/093899, mais particularmente no exemplo 1.[039] A preferred method for preparing the fermented ingredient of the present invention is disclosed in WO 01/01785, more particularly in examples 1 and 2. A preferred method for preparing the fermented product of the present invention is described in WO 2004 /093899, more particularly in example 1.

[040] Métodos de inativação e/ou remoção física de células vivas[040] Methods of inactivation and/or physical removal of living cells

[041] As células vivas de bactérias que produzem ácido lático no ingrediente fermentado são preferencialmente eliminadas após fermentação, por exemplo, por inativação e/ou remoção física. As células são preferencialmente inativadas. Preferencialmente, as bactérias que produzem ácido lático são exterminadas por calor após a fermentação do substrato lácteo. As formas preferíveis de extermínio por calor são pasteurização (rápida), esterilização, tratamento por temperatura ultraelevada, tratamento por temperatura elevada/por calor em tempo curto, e/ou desidratação por spray em temperaturas cujas bactérias não sobrevivam. Os fragmentos celulares são obtidos preferencialmente através de tratamento por calor. Com este tratamento por calor, preferencialmente pelo menos 90% dos microorganismos vivos são inativados, mais preferencialmente pelo menos 95%, ainda mais preferencialmente pelo menos 99%. Preferencialmente, a composição nutricional fermentada compreende menos de 1 x 105 de unidades formadoras de colônia (ufc) de bactérias vivas do ácido lático por g do peso seco. O tratamento por calor é realizado preferencialmente a uma temperatura que varia de 70 a 180oC, preferencialmente de 80 a 150oC, preferencialmente por aproximadamente 3 minutos a 2 horas, preferencialmente na faixa de 80 a 140oC por 5 minutos a 40 minutos. A inativação das bactérias de ácido lático resulta vantajosamente em menos pós-acidificação e um produto mais seguro. Isto é especialmente vantajoso quando a composição nutricional deve ser administrada a bebês ou jovens crianças. Adequadamente, após a fermentação o ingrediente fermentado pode ser pasteurizado ou esterilizado e, por exemplo, desidratado por spray ou liofilizado para prover uma forma adequada a ser formulada no produto final.[041] The live cells of bacteria that produce lactic acid in the fermented ingredient are preferably eliminated after fermentation, for example, by inactivation and/or physical removal. Cells are preferably inactivated. Preferably, the bacteria that produce lactic acid are killed by heat after fermentation of the dairy substrate. Preferred forms of heat extermination are pasteurization (rapid), sterilization, ultra-high temperature treatment, high temperature/short time heat treatment, and/or spray dehydration at temperatures where bacteria cannot survive. Cell fragments are preferably obtained by heat treatment. With this heat treatment, preferably at least 90% of the living microorganisms are inactivated, more preferably at least 95%, even more preferably at least 99%. Preferably, the fermented nutritional composition comprises less than 1 x 10 5 colony forming units (cfu) of live lactic acid bacteria per g dry weight. The heat treatment is preferably carried out at a temperature ranging from 70 to 180oC, preferably from 80 to 150oC, preferably for approximately 3 minutes to 2 hours, preferably in the range of 80 to 140oC for 5 minutes to 40 minutes. Inactivation of lactic acid bacteria advantageously results in less post-acidification and a safer product. This is especially advantageous when the nutritional composition is to be administered to infants or young children. Suitably, after fermentation the fermented ingredient may be pasteurized or sterilized and, for example, spray-dried or freeze-dried to provide a suitable form to be formulated into the final product.

[042] Oligossacarídeo não digerível[042] Non-digestible oligosaccharide

[043] A presente composição nutricional compreende oligossacarídeo não digerível e compreende preferencialmente pelo menos dois oligossacarídeos não digeríveis diferentes, em particular duas fontes diferentes de oligossacarídeo não digerível. A presença de oligossacarídeo não digerível estimula a secreção de sIgA. A presença de oligossacarídeo não digerível estimula o sistema de defesa imunológico da mucosa. Portanto, a presença tanto de oligossacarídeo não digerível quanto de ingrediente fermentado, em particular o produto derivado do leite obtido pela fermentação com bactérias que produzem ácido lático, resulta de forma sinérgica e vantajosa em uma secreção mais elevada de IgA no intestino. Assim, a presença tanto de oligossacarídeo não digerível quanto de ingrediente fermentado, em particular o produto derivado do leite obtido por fermentação com bactérias que produzem ácido lático, resulta de forma sinérgica e vantajosa em um aumento da defesa imunológica da mucosa.[043] The present nutritional composition comprises non-digestible oligosaccharide and preferably comprises at least two different non-digestible oligosaccharides, in particular two different sources of non-digestible oligosaccharide. The presence of non-digestible oligosaccharide stimulates sIgA secretion. The presence of non-digestible oligosaccharide stimulates the mucosal immune defense system. Therefore, the presence of both the non-digestible oligosaccharide and the fermented ingredient, in particular the milk-derived product obtained by fermentation with bacteria that produce lactic acid, synergistically and advantageously results in a higher secretion of IgA in the gut. Thus, the presence of both the non-digestible oligosaccharide and the fermented ingredient, in particular the product derived from milk obtained by fermentation with bacteria that produce lactic acid, synergistically and advantageously results in an increase in the immune defense of the mucosa.

[044] O termo “oligossacarídeo”, como aqui utilizado, refere-se a sacarídeos com um grau de polimerização (DP) de 2 a 250, preferencialmente um DP de 2 a 100, mais preferencialmente 2 a 60, ainda mais preferencialmente 2 a 10. Se oligossacarídeo com um DP de 2 a 100 é incluído na presente composição nutricional, isto resulta em composições que podem conter oligossacarídeos com um DP de 2 a 5, um DP de 50 a 70 e um DP de 7 a 60. O termo “oligossacarídeo não digerível”, como aqui usado na presente invenção, refere-se a oligossacarídeos que não são digeridos no intestino pela ação de ácidos ou enzimas digestivas presente no trato digestivo alto humano, por exemplo, intestino delgado e estômago, mas que são fermentados preferencialmente pela microbiota intestinal humana. Por exemplo, sacarose, lactose, maltose e maltodextrinas são consideradas digeríveis.[044] The term "oligosaccharide", as used herein, refers to saccharides with a degree of polymerization (DP) of 2 to 250, preferably a DP of 2 to 100, more preferably 2 to 60, even more preferably 2 to 10. If oligosaccharide with a DP of 2 to 100 is included in the present nutritional composition, this results in compositions which may contain oligosaccharides with a DP of 2 to 5, a DP of 50 to 70 and a DP of 7 to 60. "non-digestible oligosaccharide", as used herein in the present invention, refers to oligosaccharides that are not digested in the intestine by the action of digestive acids or enzymes present in the human upper digestive tract, e.g., small intestine and stomach, but which are fermented preferentially by the human intestinal microbiota. For example, sucrose, lactose, maltose and maltodextrins are considered digestible.

[045] Preferencialmente, o presente oligossacarídeo não digerível é solúvel. O termo “solúvel”, como aqui usado, ao ter referência a um polissacarídeo, fibra ou oligossacarídeo, significa que a substância é pelo menos solúvel de acordo com o método descrito por L. Prosky et al., J. Assoc. Off. Anal. Chem. 71, 1017-1023 (1988).[045] Preferably, the present non-digestible oligosaccharide is soluble. The term "soluble", as used herein, when referring to a polysaccharide, fiber or oligosaccharide, means that the substance is at least soluble according to the method described by L. Prosky et al., J. Assoc. Off. Anal. chem. 71, 1017-1023 (1988).

[046] O oligossacarídeo não digerível incluído nas presentes composições nutricionais nos métodos ou usos, de acordo com a presente invenção, incluem preferencialmente uma mistura de oligossacarídeos não digeríveis. O oligossacarídeo não digerível é selecionado preferencialmente dentre o grupo que consiste de fruto-oligossacarídeo, como inulina, dextrinas não digeríveis, galacto-oligossacarídeo, como transgalacto-oligossacarídeo, xilo-oligossacarídeo, arabino-oligossacarídeo, arabinogalacto-oligossacarídeo, gluco-oligossacarídeo, gentio-oligossacarídeo, glucomano- oligossacarídeo, galactomano-oligossacarídeo, manano- oligossacarídeo, isomalto-oligossacarídeo, nigero- oligossacarídeo, glucomano-oligossacarídeo, quito- oligossacarídeo, oligossacarídeo de soja, oligossacarídeo de ácido urônico, sialiloligossacarídeo, como 3-sialilactose (3- SL), 6-sialilactose (6-SL), lactosialiltetrassacarídeos a,b,c (LST), disialilactoNtetraose (DSLNT), sialil-lactoNhexaose (S-LNH), DS-LNH e fuco-oligossacarídeo, como oligossacarídeo fucoidano (não)sulfatado, 2’-fucosilactose (2’-FL), 3- fucosilactose (3-FL), difucosilactose, lacto-N-fucopenatose, (LNFP) I, II, III, V, Lacto-N-neofucopenaose (LNnFP), Lacto- N-difucosil-hexaose (LNDH), e misturas destes, ainda mais preferencialmente selecionado dentre o grupo que consiste de fruto-oligossacarídeo, como inulina, galacto-oligossacarídeo, como transgalacto-oligossacarídeo, e fuco-oligossacarídeo e misturas destes, ainda mais preferencialmente transgalacto- oligossacarídeo, e/ou inulina, mais preferencialmente transgalacto-oligossacarídeo. Em uma realização na composição ou métodos de acordo com a presente invenção, o oligossacarídeo não digerível é selecionado dentre o grupo que consiste de transgalacto-oligossacarídeo, fruto- oligossacarídeo e misturas destes.[046] The nondigestible oligosaccharide included in the present nutritional compositions in the methods or uses according to the present invention preferably include a mixture of nondigestible oligosaccharides. The nondigestible oligosaccharide is preferably selected from the group consisting of fructooligosaccharide, such as inulin, nondigestible dextrins, galactooligosaccharide, such as transgalactooligosaccharide, xylooligosaccharide, arabinooligosaccharide, arabinogalactooligosaccharide, glucooligosaccharide, gentio -oligosaccharide, glucomannan-oligosaccharide, galactomannan-oligosaccharide, mannan-oligosaccharide, isomalto-oligosaccharide, nigeroligosaccharide, glucomannan-oligosaccharide, chito-oligosaccharide, soy oligosaccharide, uronic acid oligosaccharide, sialyloligosaccharide, such as 3-sialylactose (3-SL) ), 6-sialylactose (6-SL), lactosialyltetrasaccharides a,b,c (LST), disialylactoNtetraose (DSLNT), sialyllactoNhexaose (S-LNH), DS-LNH and fucooligosaccharide, such as (un)sulfated fucoidan oligosaccharide , 2'-fucosylactose (2'-FL), 3-fucosylactose (3-FL), difucosylactose, lacto-N-fucopenatose, (LNFP) I, II, III, V, Lacto-N-neofucopenaose (LNnFP), Lacto - n-diff osylhexaose (LNDH), and mixtures thereof, even more preferably selected from the group consisting of fructooligosaccharide, such as inulin, galactooligosaccharide, such as transgalactooligosaccharide, and fucooligosaccharide, and mixtures thereof, even more preferably transgalacto- oligosaccharide, and/or inulin, more preferably transgalactooligosaccharide. In one embodiment in the composition or methods according to the present invention, the non-digestible oligosaccharide is selected from the group consisting of transgalacto-oligosaccharide, fructo-oligosaccharide and mixtures thereof.

[047] O oligossacarídeo não digerível é selecionado preferencialmente dentre o grupo que consiste de β-galacto-oligossacarideo, α-galacto-oligossacarideo e galactano. De acordo com uma realização mais preferida, o oligossacarídeo não digerível é β-galacto-oligossacarideo. Preferencialmente, o oligossacarídeo não digerível compreende galacto-oligossacarídeo com ligações glicosídicas β(1.4), β(1.3) e/ou β(1.6) e uma glicose terminal. Transgalacto- oligossacarídeo está disponível, por exemplo, sob o nome comercial Vivinal®GOS (Domo FrieslandCampina Ingredients), Bi2muno (Clasado), Cup-oligo (Nissin Sugar) e Oligomate55 (Yakult). Estes oligossacarídeos aumentam os níveis de sIgA e reforçam a atividade de defesa imunológica da mucosa em grande medida.[047] The non-digestible oligosaccharide is preferably selected from the group consisting of β-galacto-oligosaccharide, α-galacto-oligosaccharide and galactan. According to a more preferred embodiment, the non-digestible oligosaccharide is β-galacto-oligosaccharide. Preferably, the non-digestible oligosaccharide comprises galacto-oligosaccharide with β(1.4), β(1.3) and/or β(1.6) glycosidic linkages and a terminal glucose. Transgalacto-oligosaccharide is available, for example, under the trade names Vivinal®GOS (Domo FrieslandCampina Ingredients), Bi2muno (Clasado), Cup-oligo (Nissin Sugar) and Oligomate55 (Yakult). These oligosaccharides increase sIgA levels and enhance mucosal immune defense activity to a great extent.

[048] O oligossacarídeo não digerível compreende preferencialmente fruto-oligossacarídeo. Um fruto- oligossacarídeo pode, em outro contexto, ter nomes como frutopolissacarídeo, oligofrutose, polifrutose, polifructano, inulina, levano e frutano e podem se referir a oligossacarídeos que compreendem unidade de frutos ligadas a β, que são ligadas preferencialmente por ligações glicosídicas β(2.1) e/ou β(2.6), e um DP preferível entre 2 e 200. Preferencialmente, o fruto-oligossacarídeo contém uma glicose glicosídica ligada a terminal β(2.1). Preferencialmente, o fruto-oligossacarídeo contém pelo menos 7 unidades de frutose ligadas a β. Em uma realização preferida, é usada inulina. Inulina é um tipo de fruto- oligossacarídeo, em que pelo menos 75% das ligações glicosídicas são ligações β(2.1). Normalmente, inulina possui um comprimento de cadeia médio entre 8 e 60 unidades de monossacarídeo. Um fruto-oligossacarídeo adequado para uso nas composições da presente invenção está comercialmente disponível sob o nome comercial Raftiline®HP (Orafti). Outras fontes adequadas são Raftilose (Orafti), Fibrulose e Fibruline (Cosucra) e Frutafit e Frutalose (Sensus).[048] The non-digestible oligosaccharide preferably comprises fructooligosaccharide. A fructooligosaccharide may, in another context, have names such as fructopolysaccharide, oligofructose, polyfructose, polyfructane, inulin, levane, and fructan and may refer to oligosaccharides comprising β-linked fruit units, which are linked preferentially by β-glycosidic bonds( 2.1) and/or β(2.6), and a preferred SD between 2 and 200. Preferably, the fructooligosaccharide contains a glycosidic glucose linked to the β(2.1) terminus. Preferably, the fructooligosaccharide contains at least 7 β-linked fructose units. In a preferred embodiment, inulin is used. Inulin is a type of fructooligosaccharide, in which at least 75% of the glycosidic linkages are β(2.1) linkages. Normally, inulin has an average chain length of between 8 and 60 monosaccharide units. A suitable fructooligosaccharide for use in the compositions of the present invention is commercially available under the tradename Raftiline®HP (Orafti). Other suitable sources are Raftilose (Orafti), Fibrulose and Fibruline (Cosucra), and Frutafit and Frutalose (Sensus).

[049] Preferencialmente, a presente composição nutricional compreende uma mistura de galacto-oligossacarídeo e fruto-oligossacarídeo. Preferencialmente, a mistura de galacto-oligossacarídeo e fruto-oligossacarídeo está presente em uma proporção de peso de 1/99 a 99/1, mais preferencialmente de 1/19 a 19/1, mais preferencialmente de 1/1 a 19/1, mais preferencialmente de 2/1 a 15/1, mais preferencialmente de 5/1 a 12/1, ainda mais preferencialmente de 8/1 a 10/1, ainda mais preferencialmente em uma proporção de aproximadamente 9/1. Esta proporção de peso é particularmente vantajosa quando galacto-oligossacarídeo possui um baixo DP médio e fruto-oligossacarídeo possui um DP relativamente elevado. Mais preferida é uma mistura de galacto-oligossacarídeo com um DP médio abaixo de 10, preferencialmente abaixo de 6 e um fruto-oligossacarídeo com DP médio acima de 7, preferencialmente acima de 11, ainda mais preferencialmente acima de 20. Tal mistura aumenta de forma sinérgica os níveis de sIgA e intensifica a atividade de defesa imunológica da mucosa.[049] Preferably, the present nutritional composition comprises a mixture of galacto-oligosaccharide and fructo-oligosaccharide. Preferably, the mixture of galactooligosaccharide and fructooligosaccharide is present in a weight ratio from 1/99 to 99/1, more preferably from 1/19 to 19/1, most preferably from 1/1 to 19/1, more preferably from 2/1 to 15/1, more preferably from 5/1 to 12/1, even more preferably from 8/1 to 10/1, even more preferably in a ratio of approximately 9/1. This weight ratio is particularly advantageous when galactooligosaccharide has a low average DP and fructooligosaccharide has a relatively high DP. More preferred is a mixture of galactooligosaccharide with an average DP below 10, preferably below 6 and a fructooligosaccharide with an average DP above 7, preferably above 11, even more preferably above 20. synergizes sIgA levels and enhances mucosal immune defense activity.

[050] Preferencialmente, a presente composição nutricional compreende uma mistura de fruto-oligossacarídeo de cadeia cura e fruto-oligossacarídeo de cadeia longa. Preferencialmente, a mistura de fruto-oligossacarídeo de cadeia curta e fruto-oligossacarídeo de cadeia longa está presente em uma proporção de peso de 1/99 a 99/1, mais preferencialmente de 1/19 a 19/1, ainda mais preferencialmente de 1/10 a 19/1, mais preferencialmente de 1/5 a 15/1, mais preferencialmente de 1/1 a 10/1. Prefere-se uma mistura de fruto-oligossacarídeo de cadeia curta com um DP médio abaixo de 10, preferencialmente abaixo de 6 e um fruto-oligossacarídeo com um DP médio acima de 7, preferencialmente acima de 11, ainda mais preferencialmente acima de 20.[050] Preferably, the present nutritional composition comprises a mixture of curing chain fructooligosaccharide and long chain fructooligosaccharide. Preferably, the mixture of short-chain fructo-oligosaccharide and long-chain fructo-oligosaccharide is present in a weight ratio of 1/99 to 99/1, more preferably 1/19 to 19/1, even more preferably 1 /10 to 19/1, more preferably from 1/5 to 15/1, most preferably from 1/1 to 10/1. A mixture of short chain fructooligosaccharide with an average DP below 10, preferably below 6 and a fructooligosaccharide with an average DP above 7, preferably above 11, even more preferably above 20.

[051] A presente composição nutricional compreende 2,5 a 20% em peso total de oligossacarídeo não digerível, mais preferencialmente 2,5 a 15% em peso, ainda mais preferencialmente 3,0 a 10% em peso, mais preferencialmente 5,0 a 7,5% em peso, com base no peso seco da composição nutricional. Com base em 100 ml, a presente composição nutricional preferencialmente compreende 0,35 a 2,5% em peso total de oligossacarídeo não digerível, mais preferencialmente 0,35 a 2,0% em peso, ainda mais preferencialmente 0,4 a 1,5% em peso, com base em 100 ml da composição nutricional. Uma quantidade menor de oligossacarídeo não digerível será menos eficaz na estimulação de formação de sIgA ou defesa imunológica da mucosa, ao passo que uma quantidade muito elevada resultará em efeitos colaterais de inchaço e desconforto abdominal.[051] The present nutritional composition comprises 2.5 to 20% by total weight of non-digestible oligosaccharide, more preferably 2.5 to 15% by weight, even more preferably 3.0 to 10% by weight, most preferably 5.0 to 7.5% by weight, based on the dry weight of the nutritional composition. Based on 100 ml, the present nutritional composition preferably comprises 0.35 to 2.5% by total weight of non-digestible oligosaccharide, more preferably 0.35 to 2.0% by weight, even more preferably 0.4 to 1. 5% by weight, based on 100 ml of nutritional composition. A lower amount of non-digestible oligosaccharide will be less effective in stimulating sIgA formation or mucosal immune defense, whereas too high an amount will result in side effects of bloating and abdominal discomfort.

[052] Composição nutricional[052] Nutritional composition

[053] A composição nutricional usada de acordo com a presente invenção também pode ser considerada uma composição farmacêutica, é preferencialmente adequada para administração a bebês. A presente composição nutricional é administrada preferencialmente via enteral, mais preferencialmente via oral.[053] The nutritional composition used according to the present invention can also be considered a pharmaceutical composition, it is preferably suitable for administration to babies. The present nutritional composition is preferably administered enterally, more preferably orally.

[054] A presente composição nutricional é preferencialmente uma fórmula para lactentes, fórmula de transição ou um leite de crescimento. A presente composição nutricional pode ser aplicada vantajosamente como uma nutrição completa para bebês. Preferencialmente, a presente composição nutricional é uma fórmula para lactentes. Uma fórmula para lactentes é definida como uma fórmula para uso em bebês e pode, por exemplo, ser uma fórmula inicial, pretendia para bebês de 0 a 6 ou de 0 a 4 meses de idade. Uma fórmula de transição é pretendida para bebês de 4 ou 6 meses a 12 meses de idade. Um leite de crescimento é pretendido para crianças de 12 a 36 meses de idade. A presente composição compreende preferencialmente um componente lipídico, componente proteico e componente de carboidrato e é administrada preferencialmente na forma líquida. A presente composição nutricional também pode ser na forma de um alimento desidratado, preferencialmente na forma de um pó que é acompanhado por instruções sobre como misturar o dito alimento desidratado, preferencialmente pó, com um líquido adequado, preferencialmente água. A composição nutricional usada de acordo com a invenção compreende preferencialmente outras frações, como vitaminas, minerais, oligoelementos e outros micronutrientes a fim de torná-la uma composição nutricional completa. Preferencialmente, as fórmulas para lactentes compreendem vitaminas, minerais, oligoelementos e outros micronutrientes de acordo com diretrizes internacionais.[054] The present nutritional composition is preferably an infant formula, follow-on formula or a growth milk. The present nutritional composition can advantageously be applied as a complete nutrition for babies. Preferably, the present nutritional composition is an infant formula. An infant formula is defined as a formula for use in infants and may, for example, be a starter formula, intended for infants 0-6 or 0-4 months old. A follow-on formula is intended for babies 4 or 6 months to 12 months old. A growth milk is intended for children aged 12 to 36 months. The present composition preferably comprises a lipid component, protein component and carbohydrate component and is preferably administered in liquid form. The present nutritional composition can also be in the form of a dried food, preferably in the form of a powder, which is accompanied by instructions on how to mix said dried food, preferably powder, with a suitable liquid, preferably water. The nutritional composition used according to the invention preferably comprises other fractions such as vitamins, minerals, trace elements and other micronutrients in order to make it a complete nutritional composition. Preferably, infant formulas comprise vitamins, minerals, trace elements and other micronutrients in accordance with international guidelines.

[055] A presente composição nutricional compreende preferencialmente lipídio, proteína e carboidrato digerível da invenção, em que o lipídio provê 5 a 50% das calorias totais, a proteína provê 5 a 50% das calorias totais, e o carboidrato digerível provê 15 a 90% das calorias totais. Preferencialmente, na presente composição nutricional, o lipídio prove 35 a 50% das calorias totais, a proteína provê 7,5 a 12,5% das calorias totais, e o carboidrato digerível provê 40 a 55% das calorias totais. Para o cálculo da % das calorias totais para a proteína, o total de energia provida pelas proteínas, peptídeo e aminoácidos precisa ser levado em consideração. Preferencialmente, o lipídio provê 3 a 7 g de lipídio por 100 kcal, preferencialmente 4 a 6 g por 100 kcal, a proteína provê 1,6 a 4 g por 100 kcal, preferencialmente 1,75 a 2,5 g por 100 kcal e o carboidrato digerível provê 5 a 20 g por 100 kcal, preferencialmente 8 a 15 g por 100 kcal da composição nutricional. Preferencialmente, a presente composição nutricional compreende lipídio que provê 4 a 6 g por 100 kcal, proteína que provê 1,6 a 1,9 g por 100 kcal, mais preferencialmente 1,75 a 1,85 g por 100 kcal e carboidrato digerível que provê 8 a 15 g por 100 kcal da composição nutricional. Em uma realização, o lipídio provê 3 a 7 g de lipídio por 100 kcal, preferencialmente 4 a 6 g por 100 kcal, a proteína provê 1,6 a 2,1 g por 100 kcal, preferencialmente 1,6 a 2,0 g por 100 kcal e o carboidrato digerível provê 5 a 20 g por 100 kcal, preferencialmente 8 a 15 g por 100 kcal da composição nutricional e em que preferencialmente o componente carboidrato digerível compreende pelo menos 60% em peso de lactose com base no carboidrato digerível total, mais preferencialmente pelo menos 75% em peso, ainda mais preferencialmente pelo menos 90% em peso de lactose com base no carboidrato digerível total. A quantidade de calorias totais é determinada pela soma de calorias derivadas de proteína, lipídios, carboidratos digeríveis e oligossacarídeo não digerível.[055] The present nutritional composition preferably comprises lipid, protein and digestible carbohydrate of the invention, in which the lipid provides 5 to 50% of the total calories, the protein provides 5 to 50% of the total calories, and the digestible carbohydrate provides 15 to 90 % of total calories. Preferably, in the present nutritional composition, the lipid provides 35 to 50% of the total calories, the protein provides 7.5 to 12.5% of the total calories, and the digestible carbohydrate provides 40 to 55% of the total calories. For the calculation of the % of total calories for protein, the total energy provided by proteins, peptides and amino acids needs to be taken into account. Preferably, lipid provides 3 to 7 g of lipid per 100 kcal, preferably 4 to 6 g per 100 kcal, protein provides 1.6 to 4 g per 100 kcal, preferably 1.75 to 2.5 g per 100 kcal, and digestible carbohydrate provides 5 to 20 g per 100 kcal, preferably 8 to 15 g per 100 kcal of nutritional composition. Preferably, the present nutritional composition comprises lipid which provides 4 to 6 g per 100 kcal, protein which provides 1.6 to 1.9 g per 100 kcal, more preferably 1.75 to 1.85 g per 100 kcal and digestible carbohydrate which provides 8 to 15 g per 100 kcal of nutritional composition. In one embodiment, the lipid provides 3 to 7 g of lipid per 100 kcal, preferably 4 to 6 g per 100 kcal, the protein provides 1.6 to 2.1 g per 100 kcal, preferably 1.6 to 2.0 g per 100 kcal and the digestible carbohydrate provides 5 to 20 g per 100 kcal, preferably 8 to 15 g per 100 kcal of the nutritional composition and wherein preferably the digestible carbohydrate component comprises at least 60% by weight of lactose based on total digestible carbohydrate , more preferably at least 75% by weight, even more preferably at least 90% by weight of lactose based on total digestible carbohydrate. The amount of total calories is determined by the sum of calories derived from protein, lipids, digestible carbohydrates and non-digestible oligosaccharides.

[056] A presente composição nutricional compreende preferencialmente um componente de carboidrato digerível. Os componentes de carboidrato digerível preferidos são lactose, glicose, sacarose, frutose, galactose, maltose, amido e maltodextrina. A lactose é o principal carboidrato digerível presente no leite humano. A presente composição nutricional compreende preferencialmente lactose. Como a presente composição nutricional compreende um ingrediente fermentado obtido pela fermentação por bactérias que produzem ácido lático, a quantidade de lactose é reduzida em comparação à sua fonte devido à fermentação por meio da qual a lactose é convertida em lactato e/ou ácido lático. Portanto, na preparação da presente composição nutricional, a lactose é preferencialmente adicionada. Preferencialmente, a presente composição nutricional não compreende grandes quantidades de carboidratos além da lactose. Em comparação aos carboidratos digeríveis, como maltodextrina, sacarose, glicose, maltose e demais carboidratos digeríveis com um alto índice glicêmico, lactose possui um índice glicêmico mais baixo e, portanto, é preferida. A presente composição nutricional compreende preferencialmente carboidrato digerível, em que pelo menos 35% em peso, mais preferencialmente pelo menos 50% em peso, mais preferencialmente pelo menos 60% em peso, mais preferencialmente pelo menos 75% em peso, ainda preferencialmente pelo menos 90% em peso, mais preferencialmente pelo menos 95% em peso do carboidrato digerível é lactose. Com base no peso seco, a presente composição nutricional compreende preferencialmente pelo menos 25% em peso de lactose, preferencialmente pelo menos 40% em peso, mais preferencialmente pelo menos 50% em peso de lactose.[056] The present nutritional composition preferably comprises a digestible carbohydrate component. Preferred digestible carbohydrate components are lactose, glucose, sucrose, fructose, galactose, maltose, starch and maltodextrin. Lactose is the main digestible carbohydrate present in human milk. The present nutritional composition preferably comprises lactose. As the present nutritional composition comprises a fermented ingredient obtained by fermentation by lactic acid producing bacteria, the amount of lactose is reduced compared to its source due to fermentation whereby lactose is converted into lactate and/or lactic acid. Therefore, in preparing the present nutritional composition, lactose is preferably added. Preferably, the present nutritional composition does not comprise large amounts of carbohydrates other than lactose. Compared to digestible carbohydrates such as maltodextrin, sucrose, glucose, maltose and other digestible carbohydrates with a high glycemic index, lactose has a lower glycemic index and is therefore preferred. The present nutritional composition preferably comprises digestible carbohydrate, wherein at least 35% by weight, more preferably at least 50% by weight, more preferably at least 60% by weight, most preferably at least 75% by weight, most preferably at least 90% % by weight, more preferably at least 95% by weight of the digestible carbohydrate is lactose. On a dry weight basis, the present nutritional composition preferably comprises at least 25% by weight of lactose, preferably at least 40% by weight, most preferably at least 50% by weight of lactose.

[057] A presente composição nutricional compreende preferencialmente pelo menos um lipídio selecionado dentre o grupo que consiste de lipídio animal (excluindo os lipídios humanos) e lipídios vegetais. Preferencialmente, a presente composição compreende uma combinação de lipídios vegetais e pelo menos um óleo selecionado dentre o grupo que consiste de óleo de peixe, óleo animal, óleo de alga, óleo fúngico e óleo bacteriano. O lipídio da presente composição nutricional provê preferencialmente 3 a 7 g por 100 kcal da composição nutricional, preferencialmente o lipídio provê 4 a 6 g por 100 kcal. Quando na forma líquida, por exemplo, como um líquido pronto para alimentação, a composição nutricional compreende preferencialmente 2,1 a 6,5 g de lipídio por 100 ml, mais preferencialmente 3,0 a 4,0 g por 100 ml. Com base no peso seco, a presente composição nutricional compreende preferencialmente 12,5 a 40% em peso de lipídio, mais preferencialmente 19 a 30% em peso. Preferencialmente, o lipídio compreende ácidos graxos essenciais como ácido alfalinoleico (ALA), ácido linoleico (LA) e/ou ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa (LC-PUFA). Os LC-PUFA, LA e/ou ALA podem ser providos como ácidos graxos livres, na forma de triglicerídeos, na forma de diglicerídeo, na forma de monoglicerídeo, na forma de fosfolipídio, ou como uma mistura de um ou mais dos acima. Preferencialmente, a presente composição nutricional compreende pelo menos uma, preferencialmente pelo menos duas fontes de lipídio selecionadas dentre o grupo que consiste de óleo de colza (como óleo de colza, óleo de colza com baixo teor de ácido erúcico e óleo de canola), óleo de girassol rico em oleico, óleo de cártamo rico em oleico, azeite de oliva, óleos marinhos, óleos microbianos, óleo de coco, óleo de palmiste e gordura do leite. A presente composição nutricional não é leite humano.[057] The present nutritional composition preferably comprises at least one lipid selected from the group consisting of animal lipid (excluding human lipids) and vegetable lipids. Preferably, the present composition comprises a combination of vegetable lipids and at least one oil selected from the group consisting of fish oil, animal oil, algal oil, fungal oil and bacterial oil. The lipid of the present nutritional composition preferably provides 3 to 7 g per 100 kcal of the nutritional composition, the lipid preferably provides 4 to 6 g per 100 kcal. When in liquid form, for example as a ready-to-feed liquid, the nutritional composition preferably comprises 2.1 to 6.5 g of lipid per 100 ml, more preferably 3.0 to 4.0 g per 100 ml. On a dry weight basis, the present nutritional composition preferably comprises 12.5 to 40% by weight of lipid, more preferably 19 to 30% by weight. Preferably, the lipid comprises essential fatty acids such as alpha-linoleic acid (ALA), linoleic acid (LA) and/or long-chain polyunsaturated fatty acids (LC-PUFA). The LC-PUFA, LA and/or ALA may be provided as free fatty acids, in triglyceride form, in diglyceride form, in monoglyceride form, in phospholipid form, or as a mixture of one or more of the above. Preferably, the present nutritional composition comprises at least one, preferably at least two sources of lipid selected from the group consisting of rapeseed oil (such as rapeseed oil, rapeseed oil low in erucic acid and canola oil), high-oleic sunflower oil, high-oleic safflower oil, olive oil, marine oils, microbial oils, coconut oil, palm kernel oil and milk fat. The present nutritional composition is not human milk.

[058] A presente composição nutricional compreende preferencialmente proteína. A proteína usada na composição nutricional é selecionada preferencialmente dentre o grupo que consiste de proteínas animais não humanas, preferencialmente proteínas do leite, proteínas vegetais, como preferencialmente proteína da soja e/ou proteína do arroz, e misturas destes. A presente composição nutricional contém preferencialmente caseína e/ou proteína do soro, mais preferencialmente proteínas do soro bovino e/ou caseína bovina. Portanto, em uma realização, a proteína na presente composição nutricional compreende proteína selecionada dentre o grupo que consiste de proteína do soro e caseína, preferencialmente proteína do soro e caseína, preferencialmente a proteína do soro e/ou caseína é derivada do leite de vaca. Preferencialmente, a proteína compreende menos de 5% em peso com base na proteína total a aminoácidos livres, dipeptídeos, tripeptídeos ou proteína hidrolisada. A presente composição nutricional compreende preferencialmente caseína e proteínas do soro em uma proporção de peso de caseína : proteína do soro de 10 : 90 a 90 : 10, mais preferencialmente 20 : 80 a 80 : 20, ainda mais preferencialmente 35 : 65 a 55 : 45.[058] The present nutritional composition preferably comprises protein. The protein used in the nutritional composition is preferably selected from the group consisting of non-human animal proteins, preferably milk proteins, vegetable proteins, such as preferably soy protein and/or rice protein, and mixtures thereof. The present nutritional composition preferably contains casein and/or whey protein, more preferably bovine whey proteins and/or bovine casein. Therefore, in one embodiment, the protein in the present nutritional composition comprises protein selected from the group consisting of whey protein and casein, preferably whey protein and casein, preferably the whey protein and/or casein is derived from cow's milk. Preferably, the protein comprises less than 5% by weight based on total protein to free amino acids, dipeptides, tripeptides or hydrolyzed protein. The present nutritional composition preferably comprises casein and whey proteins in a weight ratio of casein : whey protein of 10 : 90 to 90 : 10, more preferably 20 : 80 to 80 : 20, even more preferably 35 : 65 to 55 : 45.

[059] A % em peso de proteína com base no peso seco da presente composição nutricional é calculada de acordo com o método de Kjeldahl ao medir o nitrogênio total e usando um fator de conversão de 6,38 no caso de caseína, ou um fator de conversão de 6,25 para outras proteínas além de caseína. O termo ‘proteína’ ou ‘componente proteico’, como usado na presente invenção, refere-se à soma de proteínas, peptídeos e aminoácidos livres.[059] The % by weight of protein based on the dry weight of the present nutritional composition is calculated according to the Kjeldahl method when measuring the total nitrogen and using a conversion factor of 6.38 in the case of casein, or a factor conversion rate of 6.25 for proteins other than casein. The term 'protein' or 'protein component', as used in the present invention, refers to the sum of proteins, peptides and free amino acids.

[060] A presente composição nutricional compreende preferencialmente proteína que provê 1,6 a 4,0 g de proteína por 100 kcal da composição nutricional, provê preferencialmente 1,6 a 3,5 g, ainda mais preferencialmente 1,75 a 2,5 g por 100 kcal da composição nutricional. Em uma realização, a presente composição nutricional compreende proteína que provê 1,6 a 2,1 g de proteína por 100 kcal da composição nutricional, provê preferencialmente 1,6 a 2,0 g, mais preferencialmente 1,75 a 2,1 g, ainda mais preferencialmente 1,75 a 2,0 g por 100 kcal da composição nutricional. Em uma realização, a presente composição nutricional compreende proteína em uma quantidade de menos de 2,0 g por 100 kcal, provê preferencialmente 1,6 a 1,9 g, ainda mais preferencialmente 1,75 a 1,85 g por 100 kcal da composição nutricional. Um teor muito baixo de proteína com base nas calorias totais resultará em crescimento menos adequado e desenvolvimento em bebês e jovens crianças. Quando na forma líquida, por exemplo, como um líquido pronto para alimentação, a composição nutricional compreende preferencialmente 0,5 a 6,0 g, mais preferencialmente 1,0 a 3,0 g, ainda mais preferencialmente 1,0 a 1,5 g de proteína por 100 ml, mais preferencialmente 1,0 a 1,3 g de proteína por 100 ml. Com base no peso seco, a presente composição nutricional compreende preferencialmente 5 a 20% em peso de proteína, preferencialmente pelo menos 8% em peso de proteína com base no peso seco da composição nutricional total, mais preferencialmente 8 a 14% em peso, ainda mais preferencialmente 8 a 9,5% em peso de proteína com base no peso seco da composição nutricional total.[060] The present nutritional composition preferably comprises protein that provides 1.6 to 4.0 g of protein per 100 kcal of the nutritional composition, preferably provides 1.6 to 3.5 g, even more preferably 1.75 to 2.5 g per 100 kcal of nutritional composition. In one embodiment, the present nutritional composition comprises protein that provides 1.6 to 2.1 g of protein per 100 kcal of nutritional composition, preferably provides 1.6 to 2.0 g, more preferably 1.75 to 2.1 g , even more preferably 1.75 to 2.0 g per 100 kcal of nutritional composition. In one embodiment, the present nutritional composition comprises protein in an amount of less than 2.0 g per 100 kcal, preferably provides 1.6 to 1.9 g, even more preferably 1.75 to 1.85 g per 100 kcal of nutritional composition. Too low a protein content based on total calories will result in less than adequate growth and development in infants and young children. When in liquid form, for example as a ready-to-feed liquid, the nutritional composition preferably comprises 0.5 to 6.0 g, more preferably 1.0 to 3.0 g, even more preferably 1.0 to 1.5 g protein per 100 ml, more preferably 1.0 to 1.3 g protein per 100 ml. Based on dry weight, the present nutritional composition preferably comprises 5 to 20% by weight of protein, preferably at least 8% by weight of protein based on the dry weight of the total nutritional composition, more preferably 8 to 14% by weight, further more preferably 8 to 9.5% by weight of protein based on the dry weight of the total nutritional composition.

[061] Para atender às exigências calóricas de um bebê ou jovem criança, a composição nutricional compreende preferencialmente 45 a 200 kcal/100 ml do líquido. Para bebês, a composição nutricional possui mais preferencialmente 60 a 90 kcal/100 ml do líquido, ainda mais preferencialmente 65 a 75 kcal/100 ml do líquido. Esta densidade calórica garante uma proporção ideal entre a água e o consumo calórico. Para jovens crianças, os indivíduos humanos com idade entre 12 e 36 meses, a composição nutricional possui mais preferencialmente uma densidade calórica entre 45 e 65, ainda mais preferencialmente entre 50 e 60 kcal/100 ml. A osmolaridade da presente composição está preferencialmente entre 150 e 420 mOsmol/l, mais preferencialmente 260 a 320 mOsmol/l. A baixa osmolaridade visa reduzir ainda a angústia gastrointestinal.[061] To meet the caloric requirements of a baby or young child, the nutritional composition preferably comprises 45 to 200 kcal/100 ml of liquid. For infants, the nutritional composition more preferably has 60 to 90 kcal/100 ml of liquid, even more preferably 65 to 75 kcal/100 ml of liquid. This caloric density ensures an ideal ratio between water and caloric intake. For young children, human subjects aged between 12 and 36 months, the nutritional composition most preferably has a caloric density between 45 and 65, even more preferably between 50 and 60 kcal/100 ml. The osmolarity of the present composition is preferably between 150 and 420 mOsmol/l, more preferably 260 to 320 mOsmol/l. The low osmolarity is intended to further reduce gastrointestinal distress.

[062] Quando a composição nutricional está na forma líquida, o volume preferido administrado diariamente está na faixa de aproximadamente 80 a 2500 ml, mais preferencialmente aproximadamente 200 a 1200 ml por dia. Preferencialmente, o número de alimentações por dia está entre 1 e 10, preferencialmente entre 3 e 8. Em uma realização, a composição nutricional é administrada diariamente por um período de pelo menos 2 dias, preferencialmente por um período de pelo menos 4 semanas, preferencialmente por um período de pelo menos 8 semanas, mais preferencialmente por um período de pelo menos 12 semanas, em uma forma líquida e que o volume total administrado diariamente está entre 200 ml e 1200 ml e em que o número de alimentações por dia está entre 1 e 10.[062] When the nutritional composition is in liquid form, the preferred volume administered daily is in the range of approximately 80 to 2500 ml, more preferably approximately 200 to 1200 ml per day. Preferably, the number of feedings per day is between 1 and 10, preferably between 3 and 8. In one embodiment, the nutritional composition is administered daily for a period of at least 2 days, preferably for a period of at least 4 weeks, preferably for a period of at least 8 weeks, more preferably for a period of at least 12 weeks, in a liquid form and where the total volume administered daily is between 200 ml and 1200 ml and where the number of feedings per day is between 1 and 10.

[063] A presente composição nutricional, quando na forma líquida, possui preferencialmente uma viscosidade entre 1 e 60 mPa.s, preferencialmente entre 1 e 20 mPa.s, mais preferencialmente entre 1 e 10 mPa.s, mais preferencialmente entre 1 e 6 mPa.s. A baixa viscosidade garante uma administração adequada do líquido, por exemplo, uma passagem adequada através de todo o bico. Além disso, esta viscosidade se assemelha muito à viscosidade do leite humano. Além disso, uma baixa viscosidade resulta em esvaziamento gástrico normal e melhor captação de energia, o que é essencial para bebês que precisam de energia para o crescimento e desenvolvimento ideais. A presente composição é preparada preferencialmente ao misturar uma composição em pó com água. Normalmente, a fórmula para lactentes é preparada desta forma. Assim, a presente invenção também se refere a uma composição em pó embalada, em que a dita embalagem é provida com instruções sobre a mistura do pó com uma quantidade adequada de líquido, resultando assim em uma composição líquida com uma viscosidade entre 1 e 60 mPa.s. A viscosidade do líquido é determinado usando um Reômetro Físico MCR 300 (Physica Messtechnik GmbH, Ostfilden, Alemanha) e uma taxa de cisalhamento de 95 s-1 a 20 °C.[063] The present nutritional composition, when in liquid form, preferably has a viscosity between 1 and 60 mPa.s, preferably between 1 and 20 mPa.s, more preferably between 1 and 10 mPa.s, most preferably between 1 and 6 mPa.s. The low viscosity ensures proper delivery of the liquid, for example, proper passage through the entire spout. Furthermore, this viscosity closely resembles the viscosity of human milk. Furthermore, a low viscosity results in normal gastric emptying and better energy uptake, which is essential for babies who need energy for optimal growth and development. The present composition is preferably prepared by mixing a powder composition with water. Typically, infant formula is prepared this way. Thus, the present invention also relates to a packaged powder composition, wherein said package is provided with instructions on mixing the powder with an adequate amount of liquid, thus resulting in a liquid composition with a viscosity between 1 and 60 mPa .s. The viscosity of the liquid is determined using an MCR 300 Physical Rheometer (Physica Messtechnik GmbH, Ostfilden, Germany) and a shear rate of 95 s-1 at 20 °C.

[064] Aplicação[064] Application

[065] No contexto da presente invenção, ‘prevenção’ de uma doença ou determinado distúrbio também significa ‘redução do risco’ de uma doença ou determinado distúrbio e também significa ‘tratamento de uma pessoa em risco’ da dita doença ou dito determinado distúrbio.[065] In the context of the present invention, 'prevention' of a disease or disorder also means 'reducing the risk' of a disease or disorder and also means 'treatment of a person at risk' of said disease or disorder.

[066] Os inventores descobriram que no consumo da composição nutricional da presente invenção, o nível de sIgA é elevado de forma sinérgica. Isto é indicativo de uma melhora do Sistema imunológico da mucosa.[066] The inventors have found that upon consumption of the nutritional composition of the present invention, the level of sIgA is synergistically elevated. This is indicative of an improved mucosal immune system.

[067] Os efeitos aqui descritos, ou seja, o aumento em sIgA e/ou a melhora do sistema imunológico da mucosa, são observados para a situação em comparação à administração de uma composição nutricional não compreendendo a combinação do produto fermentado e o oligossacarídeo não digerível. Descobriu-se que estes efeitos observados também se aproximam dos níveis observados em bebês alimentados com leite humano em comparação a bebês alimentados com a fórmula padrão para lactentes.[067] The effects described here, that is, the increase in sIgA and/or the improvement of the mucosal immune system, are observed for the situation in comparison to the administration of a nutritional composition not comprising the combination of the fermented product and the unprocessed oligosaccharide digestible. These observed effects were also found to approximate the levels seen in infants fed human milk compared to infants fed standard infant formula.

[068] Supreendentemente, o efeito sinérgico não pode ser explicado por uma interação direta entre o oligossacarídeo não digerível e as bactérias que produzem ácido lático na composição fermentada, uma vez que as bactérias foram inativadas, nem por um aumento da atividade microbiana intestinal, já que não há correlação clara com o pH intestinal.[068] Surprisingly, the synergistic effect cannot be explained by a direct interaction between the non-digestible oligosaccharide and the bacteria that produce lactic acid in the fermented composition, since the bacteria have been inactivated, nor by an increase in intestinal microbial activity, since that there is no clear correlation with intestinal pH.

[069] Em uma realização, a presente composição nutricional é usada para aumento da secreção de IgA em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses. Em uma realização, a presente composição nutricional é usada para aumento da secreção de IgA em um indivíduo humano de 0 a 18 meses, ainda mais preferencialmente um bebê com idade de 12 meses ou menos, ainda mais preferencialmente um bebê com idade de 0 a 6 meses. Em uma realização, a presente composição nutricional é usada para aumento da secreção de IgA em uma jovem criança de 12 a 36 meses, mais preferencialmente uma jovem criança com idade de 18 a 30, ou 24 meses. Preferencialmente, a presente composição nutricional é usada ainda para prover nutrição ao dito indivíduo humano. A presente composição nutricional é administrada preferencialmente via enteral, mais preferencialmente via oral.[069] In one embodiment, the present nutritional composition is used for increasing IgA secretion in a human subject aged 0 to 36 months. In one embodiment, the present nutritional composition is used for increasing IgA secretion in a human subject aged 0 to 18 months, even more preferably an infant aged 12 months or less, even more preferably an infant aged 0 to 6 months. In one embodiment, the present nutritional composition is used for increasing IgA secretion in a young child aged 12 to 36 months, more preferably a young child aged 18 to 30, or 24 months. Preferably, the present nutritional composition is further used to provide nutrition to said human subject. The present nutritional composition is preferably administered enterally, more preferably orally.

[070] Em uma realização, a presente composição nutricional é usada para melhorar a defesa imunológica da mucosa em um indivíduo humano com idade de 0 a 36 meses. Em uma realização, a presente composição nutricional é usada para melhorar a defesa imunológica da mucosa em um indivíduo humano de 0 a 18 meses, ainda mais preferencialmente um bebê com idade de 12 meses ou menos, ainda mais preferencialmente um bebê de 0 a 6 meses. Em uma realização, a presente composição nutricional é usada para melhorar a defesa imunológica da mucosa em uma jovem criança de 12 a 36 meses, mais preferencialmente uma jovem criança com idade de 18 a 30, ou 24 meses. Preferencialmente, a presente composição nutricional é usada ainda para prover nutrição ao dito indivíduo humano. A presente composição nutricional é administrada preferencialmente via enteral, mais preferencialmente via oral.[070] In one embodiment, the present nutritional composition is used to improve mucosal immune defense in a human subject aged 0 to 36 months. In one embodiment, the present nutritional composition is used to enhance mucosal immune defense in a human subject from 0 to 18 months, even more preferably an infant aged 12 months or less, even more preferably an infant from 0 to 6 months . In one embodiment, the present nutritional composition is used to improve mucosal immune defense in a young child aged 12 to 36 months, more preferably a young child aged 18 to 30, or 24 months. Preferably, the present nutritional composition is further used to provide nutrition to said human subject. The present nutritional composition is preferably administered enterally, more preferably orally.

[071] Em uma realização preferida, os métodos ou usos, de acordo com a presente invenção, são para bebês nascidos via vagina.[071] In a preferred embodiment, the methods or uses, according to the present invention, are for babies born via the vagina.

[072] Em uma realização preferida, os métodos ou usos, de acordo com a presente invenção, são para bebês a termo, preferencialmente para bebês saudáveis a termo.[072] In a preferred embodiment, the methods or uses, according to the present invention, are for full-term babies, preferably for healthy full-term babies.

[073] Neste documento e em suas reivindicações, o verbo “compreender” e suas conjugações é usado no seu sentido não limitante para significar que os itens após o termo são incluídos, mas itens não especificamente mencionados não são excluídos. Além disso, a referência a um elemento pelo artigo indefinido “um” ou “uma” não exclui a possibilidade que mais de um elemento está presente, salvo se o contexto exigir claramente que haja um e apenas um dos elementos. Portanto, o artigo indefinido “um” ou “uma” geralmente significa “pelo menos um”. % em peso significa porcentagem em peso.[073] In this document and its claims, the verb “comprehend” and its conjugations is used in its non-limiting sense to mean that items following the term are included, but items not specifically mentioned are not excluded. Furthermore, reference to an element by the indefinite article "an" or "an" does not exclude the possibility that more than one element is present, unless the context clearly requires that there be one and only one of the elements. Therefore, the indefinite article "a" or "an" usually means "at least one". % by weight means percentage by weight.

[074] EXEMPLOS[074] EXAMPLES

[075] Exemplo 1: Efeito sinérgico da fórmula para lactentes fermentada e oligossacarídeos não digeríveis nos níveis secretores de IgA em bebês[075] Example 1: Synergistic effect of fermented infant formula and non-digestible oligosaccharides on IgA secretory levels in infants

[076] Em um estudo randomizado, duplo-cego, controlado, de grupos paralelos, prospectivo, multicêntrico, multipaíses, e de intervenção, os indivíduos foram randomizados igualmente em quatro grupos de tratamento. Além disso, os bebês que foram amamentados exclusivamente desde o nascimento (nunca receberam qualquer fórmula para lactentes) e suas mães tinham a intenção de continuar a amamentação exclusiva até a idade do bebês de pelo menos 4 meses foram incluídos no grupo de referência amamentação. No total, 350 indivíduos foram admitidos, dos quais 280 indivíduos foram randomizados para quaisquer dos produtos teste e 70 indivíduos foram incluídos no grupo de referência de amamentação.[076] In a randomized, double-blind, controlled, parallel-group, prospective, multicenter, multicountry, intervention study, subjects were randomized equally into four treatment groups. In addition, babies who were exclusively breastfed from birth (never given any infant formula) and their mothers intended to continue exclusive breastfeeding until the baby was at least 4 months old were included in the breastfeeding reference group. In total, 350 subjects were enrolled, of which 280 subjects were randomized to any of the test products and 70 subjects were included in the breastfeeding reference group.

[077] Grupo teste 1: A fórmula para lactentes 1 é uma fórmula para lactentes baseada em leite de vaca modificado para bebês alimentados por mamadeira na idade de 0 a 6 meses (Nutrilon 1, comercializado pela Nutricia, Holanda). A fórmula contém oligossacarídeos não digeríveis (NDO), uma mistura de galacto-oligossacarídeos, Vivinal® GOS da FrieslandCampina Domo, com um grau médio de polimerização abaixo de 6, e fruto-oligossacarídeos, RaftilinHP da Orafti, com um grau médio de polimerização acima de 20 em uma proporção de peso/peso de aproximadamente 9:1 e em quantidade de aproximadamente 0,8 g por 100 ml. A fórmula não contém uma composição fermentada.[077] Test group 1: Infant formula 1 is a modified cow's milk-based infant formula for bottle-fed infants aged 0 to 6 months (Nutrilon 1, marketed by Nutricia, Netherlands). The formula contains non-digestible oligosaccharides (NDO), a mixture of galacto-oligosaccharides, Vivinal® GOS by FrieslandCampina Domo, with an average degree of polymerization below 6, and fructo-oligosaccharides, RaftilinHP by Orafti, with an average degree of polymerization above of 20 in a weight/weight ratio of approximately 9:1 and in amounts of approximately 0.8 g per 100 ml. The formula does not contain a fermented composition.

[078] Grupo teste 2: A fórmula para lactentes 2 é uma fórmula para lactentes baseada em leite de vaca modificado para bebês alimentados por mamadeira na idade de 0 a 6 meses e é uma fórmula fermentada para lactentes da Calisma® (comercializada por Gallia, França), que compreende as cepas B. breve CNCM 1-2219 e S. thermophilus CNCM 1-1620, extermínio de calor após um processo de fermentação, metabólitos da fermentação bacteriana como L-(+) lactato. A quantidade de L-lactato está acima de 0,05% em peso com base no peso seco da composição. Nenhum NDO é adicionado. No processo de fermentação, uma quantidade de aproximadamente 2% em peso com base no peso seco galacto-oligossacarídeos é produzida por S. thermophilus.[078] Test group 2: Infant formula 2 is a modified cow's milk-based infant formula for bottle-fed infants aged 0 to 6 months and is a fermented infant formula from Calisma® (marketed by Gallia, France), which comprises the strains B. breve CNCM 1-2219 and S. thermophilus CNCM 1-1620, heat killing after a fermentation process, bacterial fermentation metabolites such as L-(+) lactate. The amount of L-lactate is above 0.05% by weight based on the dry weight of the composition. No NDO is added. In the fermentation process, an amount of approximately 2% by weight on a dry weight basis of galacto-oligosaccharides is produced by S. thermophilus.

[079] Grupo teste 3: A fórmula para lactentes 3 é a fórmula de teste experimental e é uma fórmula para lactentes baseada em leite de vaca modificado para bebês alimentados por mamadeira na idade de 0 a 6 meses. A fórmula contém oligossacarídeos não digeríveis (uma mistura de galacto-oligossacarídeos com um grau médio de polimerização abaixo de 6, e fruto-oligossacarídeos, RaftilinHP da Orafti, com um grau médio de polimerização acima de 20) em uma quantidade de aproximadamente 0,9 g por 100 ml e que compreende fórmula para lactentes fermentada Calisma® (comercializada por Gallia, França), como em IF 2 do grupo teste 2. A quantidade de galacto-oligossacarídeos adicionados leva em consideração a quantidade de galacto-oligossacarídeos presentes devido à ação de S. thermophilus.[079] Test group 3: Infant formula 3 is the experimental test formula and is an infant formula based on modified cow's milk for bottle-fed infants aged 0 to 6 months. The formula contains non-digestible oligosaccharides (a mixture of galacto-oligosaccharides with an average degree of polymerization below 6, and fructo-oligosaccharides, RaftilinHP by Orafti, with an average degree of polymerization above 20) in an amount of approximately 0.9 g per 100 ml and comprising Calisma® fermented infant formula (marketed by Gallia, France), as in IF 2 of test group 2. The amount of galacto-oligosaccharides added takes into account the amount of galacto-oligosaccharides present due to the action from S. thermophilus.

[080] Grupo controle: A fórmula para lactentes 4 é a fórmula controle: uma fórmula para lactentes à base de leite de vaca modificado para bebês alimentados por mamadeira na idade de 0 a 6 meses, não compreendendo oligossacarídeos não digeríveis e que não é fermentada.[080] Control group: Infant formula 4 is the control formula: a modified cow's milk-based infant formula for bottle-fed infants aged 0 to 6 months, not comprising non-digestible oligosaccharides and which is not fermented .

[081] Todas as quatro fórmulas de teste continham nucleotídeos e mistura de gordura, que continha ácidos graxos de cadeia longa. As fórmulas foram similares no teor calórico, teor proteico, mistura de gordura e apresentaram quantidade similar de carboidrato digeríveis. O número de bactérias vivas no produto teste 2 e 3 estava abaixo de 103 ufc/g. As fórmulas compreenderam ainda vitaminas, minerais, oligoelementos e demais micronutrientes, de acordo com a diretriz internacional 2006/141/EC para fórmula para lactentes.[081] All four test formulas contained nucleotides and fat mixture, which contained long-chain fatty acids. The formulas were similar in calorie content, protein content, fat mix and had a similar amount of digestible carbohydrate. The number of live bacteria in test product 2 and 3 was below 103 cfu/g. The formulas also included vitamins, minerals, trace elements and other micronutrients, in accordance with international guideline 2006/141/EC for infant formula.

[082] No término do estudo, 198 dos indivíduos randomizados concluíram o estudo, ao passo que 82 dos indivíduos randomizados se retiraram prematuramente do estudo. Não houve diferenças estatisticamente significativas em número e natureza de retiradas precoces em comparação aos grupos de produto teste ativo com o grupo controle. Os indivíduos estavam bem equilibrados quanto aos grupos do estudo em relação aos dados demográficos e características basais.[082] At study completion, 198 of the randomized subjects completed the study, whereas 82 of the randomized subjects withdrew prematurely from the study. There were no statistically significant differences in the number and nature of early withdrawals compared between the active test product groups and the control group. Subjects were well balanced across study groups with respect to demographics and baseline characteristics.

[083] Para cada visita, foi coletada uma amostra de fezes pelos pais em recipientes de fezes providos pela Nutricia Research. As amostras foram congeladas a -20 °C logo após a coleta pelos pais e mantidas nesta temperatura até manipulação das amostras pela equipe de investigação. Neste local, as amostras foram armazenadas a -80 °C para análise posterior. Em cada coleta, 2 tubos precisavam ser preenchidos pela metade. Se necessário devido a questões práticas no centro do estudo, outros meios de transporte e armazenamento poderiam ser organizados. Os níveis IgA secretor fecal foram determinados com técnicas laboratoriais padrão. Como a distribuição de medições de sIgA mostrou uma potencial assimetria, para a análise estatística foi implementada transformação logarítmica antes do teste quanto as diferenças entre os grupos do estudo usando ANOVA. Os níveis de sIgA foram estatisticamente analisados com base nos meios geométricos (dimensão do efeito = diferença de grupo expressa como proporção de média geométrica devido à transformação logarítmica).[083] For each visit, a stool sample was collected by the parents in stool containers provided by Nutricia Research. The samples were frozen at -20 °C right after collection by the parents and kept at this temperature until the samples were manipulated by the research team. Here, samples were stored at -80 °C for later analysis. In each collection, 2 tubes needed to be half filled. If necessary due to practical issues at the study site, other means of transport and storage could be arranged. Fecal secretory IgA levels were determined with standard laboratory techniques. As the distribution of sIgA measurements showed a potential asymmetry, for the statistical analysis a pre-test logarithmic transformation was implemented for differences between study groups using ANOVA. Levels of sIgA were statistically analyzed on the basis of geometric means (effect size = group difference expressed as geometric mean ratio due to logarithmic transformation).

[084] Os resultados são mostrados na Tabela 1. Para a análise dos dados primários, a análise de intenção de tratamento (ITT) foi considerada a análise principal para o estudo. Aos 4 meses, um período em que os bebês ainda são totalmente alimentados com a fórmula para lactentes, há uma diferença estatisticamente significativa (p<0,05) entre os níveis de sIgA fecal no grupo de IF 3 (a fórmula experimental que compreende a fórmula fermentada e oligossacarídeos não digeríveis) e o grupo controle de IF 4 ou o grupo de IF 2 (Calisma). Ao comparar com o grupo de IF 1 (Nutrilon), há uma tendência (p=0,07). Não há diferenças estatisticamente significativas ao comparar IF 1 com IF 2, IF 1 com IF 4, ou ao comparar IF 2 com IF 4. Tabela 1: Concentração de slgA fecal (μg/g) por visita - População ITT

* Comparada a IF 3 p< 0,05 # Comparada a IF teste 3: p=0,07[084] The results are shown in Table 1. For the primary data analysis, the intent-to-treat analysis (ITT) was considered the primary analysis for the study. At 4 months, a period when infants are still fully fed infant formula, there is a statistically significant difference (p<0.05) between fecal sIgA levels in the IF 3 group (the experimental formula comprising the fermented formula and non-digestible oligosaccharides) and the IF 4 control group or the IF 2 group (Calisma). When comparing with the IF 1 group (Nutrilon), there is a tendency (p=0.07). There are no statistically significant differences when comparing IF 1 with IF 2, IF 1 with IF 4, or when comparing IF 2 with IF 4. Table 1: Fecal slgA concentration (μg/g) per visit - ITT population

* Compared to IF 3 p< 0.05 # Compared to IF test 3: p=0.07

[085] Não foram fornecidas estatísticas ao comparar com o grupo referência de amamentação, uma vez que o grupo referência não é randomizado e não deve, portanto, ser usado em uma comparação direta com os grupos do estudo randomizado. Não é realizada análise estatística para a mediana, mas observou um padrão similar.[085] No statistics were provided when comparing with the breastfeeding reference group, as the reference group is not randomized and should therefore not be used in a direct comparison with randomized study groups. No statistical analysis is performed for the median, but a similar pattern is observed.

[086] A diferença na produção de sIgA entre o grupo teste 3 e 4 pode ser expressa como dimensões de efeito, com base nas médias geométricas, que é igual a 1,65. Pode-se interpretar que o uso da fórmula experimental, IF 3, na idade de 4 meses resulta em aproximadamente 65% de incremento na concentração de sIgA ao comparar o uso do grupo controle com IF 4. Similar, a dimensão de efeito do grupo teste 3 versus grupo teste 1 foi 1,53 e do grupo teste 3 versus grupo teste 2 foi 2,06.[086] The difference in sIgA production between test group 3 and 4 can be expressed as effect dimensions, based on geometric means, which equals 1.65. It can be interpreted that the use of the experimental formula, IF 3, at the age of 4 months results in approximately 65% increment in the sIgA concentration when comparing the use of the control group with IF 4. Similar, the dimension of effect of the test group 3 versus test group 1 was 1.53 and test group 3 versus test group 2 was 2.06.

[087] A concentração de sIgA no grupo que consome IF 3 é sinergicamente maior que o esperado, com base nos resultados do grupo que consome IF 1 e 2 e o IF 4 controle, e beneficamente mais similar aos níveis observados no grupo de referência de amamentação. Isto é indicativo para um efeito sinergicamente elevado sobre a defesa imunológica da mucosa.[087] The concentration of sIgA in the group consuming IF 3 is synergistically higher than expected, based on the results of the group consuming IF 1 and 2 and the control IF 4, and beneficially more similar to the levels observed in the reference group of breast-feeding. This is indicative of a synergistically high effect on the mucosal immune defense.

[088] Como as bactérias presentes em IF 3 (e 2) foram inativadas por calor, este efeito não pode ser explicado por uma quantidade elevada de bactérias intestinais que produzem ácido lático resultantes da fórmula nem um aumento da fermentação intestinal dos oligossacarídeos não digeríveis adicionados por estas bactérias que produzem ácido lático decorrentes da fórmula.[088] As the bacteria present in IF 3 (and 2) were inactivated by heat, this effect cannot be explained by a high amount of intestinal bacteria that produce lactic acid resulting from the formula nor an increase in intestinal fermentation of the added non-digestible oligosaccharides by these bacteria that produce lactic acid arising from the formula.

[089] Exemplo 2: Consumo de fórmula fermentada para lactentes com oligossacarídeos não digeríveis aumenta os níveis de sIgA intestinal[089] Example 2: Consumption of fermented infant formula with non-digestible oligosaccharides increases intestinal sIgA levels

[090] Em um estudo clínico randomizado, multicêntrico, duplo-cego, prospectivo, os bebês foram admitidos antes dos 28 dias de idade e designados para receber até 17 semanas de idade uma das três fórmulas:[090] In a randomized, multicentre, double-blind, prospective clinical trial, infants were admitted before 28 days of age and assigned to receive up to 17 weeks of age one of three formulas:

[091] Grupo teste 1: Fórmula para lactentes 1 que compreende por 100 ml 66 kcal, 1,35 g proteína (proteína de soro/caseína bovina em proporção de peso de 1/1), 8,2 g de carboidrato digerível (dos quais 5,6 g de lactose e 2,1 g de maltodextrina), 3,0 g de gordura (principalmente gordura vegetável), 0,8 g de oligossacarídeos não digeríveis compreendendo scGOS (fonte Vivinal® GOS) e lcFOS (fonte RaftilinHP®) em uma proporção de peso de 9:1. Desta fórmula para lactentes, aproximadamente 50% com base no peso seco é derivada de LactofidusTM, uma fórmula para lactentes comercialmente disponível comercializada sob o nome comercial Gallia. LactofidusTM é uma composição derivada de leite fermentado e é produzida pela fermentação com S. thermophilus e compreende B. breve. Empregou-se tratamento por aquecimento leve para inativar as bactérias de ácido lático. A fórmula para lactentes compreende aproximadamente 0,55% em peso de ácido lático + lactato com base no peso seco, dos quais pelo menos 95% é L(+)- ácido lático/lactato. A composição compreende ainda vitaminas, minerais, oligoelementos e outros micronutrientes, de acordo com a diretriz internacional 2006/141/EC para fórmula para lactentes.[091] Test group 1: Infant formula 1 comprising 66 kcal per 100 ml, 1.35 g protein (whey protein/bovine casein in a 1/1 weight ratio), 8.2 g digestible carbohydrate (from which 5.6 g lactose and 2.1 g maltodextrin), 3.0 g fat (mainly vegetable fat), 0.8 g non-digestible oligosaccharides comprising scGOS (source Vivinal® GOS) and lcFOS (source RaftilinHP® ) in a weight ratio of 9:1. Of this infant formula, approximately 50% on a dry weight basis is derived from LactofidusTM, a commercially available infant formula marketed under the trade name Gallia. LactofidusTM is a composition derived from fermented milk and is produced by fermentation with S. thermophilus and comprises B. breve. Mild heat treatment was employed to inactivate lactic acid bacteria. The infant formula comprises approximately 0.55% by weight lactic acid + lactate on a dry weight basis, of which at least 95% is L(+)-lactic acid/lactate. The composition further comprises vitamins, minerals, trace elements and other micronutrients, in accordance with the international guideline 2006/141/EC for infant formula.

[092] Grupo teste 2: Fórmula para lactentes 2, similar à fórmula para lactentes 1, mas sem os oligossacarídeos não digeríveis scGOS e lcFOS.[092] Test group 2: Infant formula 2, similar to infant formula 1, but without the non-digestible oligosaccharides scGOS and lcFOS.

[093] Grupo teste 3: Fórmula para lactentes 3, uma fórmula não fermentada para lactentes com 0,8 g de oligossacarídeos não digeríveis compreendendo scGOS (fonte Vivinal® GOS) e lcFOS (fonte RaftilinHP®) em uma proporção de peso de 9:1, e para o restante similar na composição como a fórmula para lactentes 1.[093] Test group 3: Infant formula 3, an unfermented infant formula with 0.8 g of non-digestible oligosaccharides comprising scGOS (source Vivinal® GOS) and lcFOS (source RaftilinHP®) in a weight ratio of 9: 1, and for the remainder similar in composition as infant formula 1.

[094] As amostras de fezes foram coletadas na visita basal e após 17 semanas de intervenção para análise fisiológica e microbiológica, de forma similar à descrita no exemplo 1. Apenas amostras de um subgrupo de indivíduos foram analisadas que apresentaram um conjunto complete de amostras fecais (ambas as visitas) com quantidade suficiente para todas as análises. Além disso, foram excluídas as amostras de bebês que usaram quaisquer antibióticos sistêmicos a qualquer momento após o nascimento ou que usaram espessantes adicionados à fórmula durante o estudo formula.[094] Stool samples were collected at the baseline visit and after 17 weeks of intervention for physiological and microbiological analysis, similarly to that described in example 1. Only samples from a subgroup of individuals were analyzed who presented a complete set of fecal samples (both visits) with sufficient quantity for all analyses. In addition, samples from infants who used any systemic antibiotics at any time after birth or who used thickeners added to formula during the formula study were excluded.

[095] No conjunto selecionado de amostras fecais, o impacto das fórmulas para lactentes usadas foi avaliado sobre a imunoglobulina A secretora (sIgA) e os resultados são mostrados na Tabela 2. Tabela 2. Concentração de slgA fecal (μg/g) por visita

Para a análise dos testes de soma de classificação de Wilcoxon (W) foi usada devido à violação de presunção d normalidade e/ou presença de valores atípicos. *Valores diferentes significativos (p<0,05) entre grupos para a comparação testada de interesse: IF 1 versus IF 3. # Valores diferentes significativos (p<0,05) entre os grupos para a comparação testada de interesse: IF 1 versus IF 2.[095] In the selected set of fecal samples, the impact of the infant formula used was evaluated on secretory immunoglobulin A (sIgA) and the results are shown in Table 2. Table 2. Fecal slgA concentration (μg/g) per visit

For the analysis of the Wilcoxon rank sum tests (W) was used due to violation of presumption of normality and/or presence of outliers. * Significant different values (p<0.05) between groups for the tested comparison of interest: IF 1 versus IF 3. # Significant different values (p<0.05) between groups for the tested comparison of interest: IF 1 versus IF 2.

[096] Novamente, as concentrações de sIgA no grupo que consome a fórmula experimental para lactentes 1 são maiores que as concentrações do grupo que consome fórmula para lactentes 2 ou 3, muito similar aos resultados no exemplo 1. Isto é indicativo de um aumento de efeito sobre a defesa imunológica da mucosa.[096] Again, the sIgA concentrations in the group consuming experimental infant formula 1 are higher than the concentrations in the group consuming infant formula 2 or 3, very similar to the results in example 1. This is indicative of an increase in effect on the mucosal immune defense.

[097] De forma interessante, o efeito dos níveis de sIgA fecal não correspondeu ao efeito sobre o pH fecal. O pH foi mais baixo no grupo que consome fórmula para lactentes 2 e intermediário no grupo que consome a fórmula experimental para lactentes 1. O pH reflete a atividade da microbiota intestinal. O pH fecal mais baixo do grupo teste 1 e 2 se deve à fermentação dos oligossacarídeos não digeríveis presentes na fórmula de teste para lactentes, e a fermentação é mais elevada no grupo teste 2, ao passo que os níveis de SIgA são mais elevados no grupo teste 1.[097] Interestingly, the effect on fecal sIgA levels did not match the effect on fecal pH. The pH was lower in the group consuming infant formula 2 and intermediate in the group consuming experimental infant formula 1. The pH reflects the activity of the intestinal microbiota. The lower fecal pH of test group 1 and 2 is due to fermentation of the non-digestible oligosaccharides present in the test infant formula, and fermentation is higher in test group 2, whereas SIgA levels are higher in group test 1.

Claims

1. USE OF A FERMENTED INGREDIENT AND NON-DIGERABLE OLIGOSACCHARIDE, characterized in that it is in the manufacture of a nutritional composition for increasing IgA secretion in a human subject with an age of 0 to 36 months, in which the fermented ingredient is a dairy substrate which is fermented by lactic acid producing bacteria comprising Bifidobacterium breve and/or Streptococcus thermophilus, and wherein the nutritional composition comprises 0.02 to 1.5% by weight of the sum of lactic acid and lactate based on the dry weight of the nutritional composition and comprises 2.5 to 15% by weight of nondigestible oligosaccharide based on the dry weight of the nutritional composition and the nondigestible oligosaccharide comprises galactooligosaccharide and/or fructooligosaccharide.

2. USE, according to claim 1, characterized in that the dairy substrate comprises at least one selected from the group consisting of milk, whey, whey protein, whey protein hydrolyzate, casein, casein hydrolyzate and lactose or mixtures thereof .

3. USE, according to any one of claims 1 to 2, characterized in that the nutritional composition is an infant formula, a transitional formula or a growth milk.

4. USE according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the non-digestible oligosaccharide comprises galacto-oligosaccharide and fructo-oligosaccharide.

5. USE according to any one of claims 1 to 4, characterized in that at least 90% by weight of the sum of lactic acid and lactate is L(+)-lactic acid and/or L(+)-lactate.

6. USE according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the nutritional composition comprises Bifidobacterium breve and/or Streptococcus thermophilus.

7. USE according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the bacteria that produce lactic acid are inactivated at a level below 105, more preferably below 103 cfu/g of the dry weight of the nutritional composition.

8. USE, according to any one of claims 1 to 7, characterized by the nutritional composition comprising protein, digestible carbohydrate and lipid and in which the protein provides 1.6 to 4 g per 100 kcal, the digestible carbohydrates provide 5 to 20 g per 100 kcal and lipids provide 3 to 7 g of lipids per 100 kcal of nutritional composition.