BR112018008330B1 - Compostos 1,3,4-tiadiazol, composição farmacêutica compreendendo o mesmo e seu uso no tratamento de câncer - Google Patents

Abstract

COMPOSTOS 1,3,4-TIADIAZOL E SEU USO NO TRATAMENTO DE CÂNCER . É descrito um composto de Fórmula (I): (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Q pode ser piridazin-3-ila, 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 pode ser H; R2 e R3 podem ser, cada um independentemente, C1-C6 alquila ou R2 e R3 , tomados em conjunto, são -(CH2)3-; ou R1 e R2 , tomados em conjunto, podem ser -(CH2)2- e R3 pode ser -CH3; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou - CN; e n pode ser 0, 1 ou 2. O composto de fórmula (I) pode inibir a glutaminase, por exemplo, GLS1.

Description

CAMPO TÉCNICO

[001] O relatório descritivo se relaciona genericamente com compostos 1,3,4-tiadiazol substituídos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Estes compostos atuam na enzima glutaminase 1 ("GLS1") e, em consequência, o relatório descritivo também se relaciona com o uso de tais compostos e seus sais para tratar ou prevenir doença mediada por GLS1, incluindo câncer. O relatório descritivo se relaciona adicionalmente com composições farmacêuticas compreendendo tais compostos e sais; kits compreendendo tais compostos e sais; métodos de fabricação de tais compostos e sais; intermediários úteis na fabricação de tais compostos e sais, e com métodos de tratamento de doença mediada por GLS1, incluindo câncer, usando tais compostos e sais.

ANTECEDENTES

[002] A glutamina é o aminoácido mais abundante no plasma e está envolvida em muitas vias promotoras do crescimento. Em particular, a glutamina está envolvida na oxidação no ciclo TCA e na manutenção do equilíbrio redox de células e também proporciona nitrogênio para a síntese de nucleotídeos e aminoácidos (Curi et al., Front. Biosci. 2007, 12, 344-57; DeBerardinis e Cheng, Oncogene 2010, 313-324, cada um dos quais é incorporado a título de referência na sua totalidade). Muitas células cancerígenas se baseiam no metabolismo da glutamina em consequência de alterações metabólicas que ocorrem na célula, incluindo o efeito de Warburg no qual piruvato glicolítico é convertido em ácido láctico em vez de ser usado para criar acetil CoA (Koppenol et al., Nature Reviews 2011, 11, 325-337, que é incorporado a título de referência na sua totalidade). Em consequência de se basearem no metabolismo da glutamina, tais células cancerígenas são sensíveis a alterações em níveis de glutamina exógena. Além disso, existem evidências que sugerem que a glutaminólise desempenha um papel-chave em certos tipos de câncer (Hensley et al., J. Clin. Invest. 2013, 123, 3678- 3684, que é incorporado a título de referência na sua totalidade) e está associada a condutores oncogênicos conhecidos, tais como Myc (Dang, Cancer Res. 2010, 70, 859- 863, que é incorporado a título de referência na sua totalidade).

[003] O primeiro passo do catabolismo da glutamina em glutamato é catalisado por glutaminase, que existe como duas isoformas, GLS1 e GLS2, originalmente identificadas como sendo expressas no rim e fígado, respectivamente. É conhecido que a glutaminase do rim (GLS1) é expressa de modo mais ubíquo do que a glutaminase do fígado (GLS2) e tem 2 variantes de encadeamento, KGA e a isoforma mais pequena GAC, ambas as quais estão localizadas na mitocôndria. (Elgadi et al., Physiol. Genomics 1999, 1, 51-62; Cassago et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 2012, 109, 1092-1097, cada um dos quais é incorporado a título de referência na sua totalidade). A expressão de GLS1 está associada a crescimento tumoral e malignidade em alguns tipos de doenças (Wang et al., Cancer Cell 2010, 18, 207-219; van der Heuval et al., Cancer Bio. Ther. 2012, 13, 1185-1194, cada um dos quais é incorporado a título de referência na sua totalidade). Em consequência, é esperado que inibidores de GLS1 sejam úteis no tratamento de câncer, na forma de monoterapia ou em combinação com outros agentes anticancerígenos.

SUMÁRIO

[004] Em um aspecto é proporcionado um composto de Fórmula (I):

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila, 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila ou R2 e R3 tomados em conjunto são -(CH2)3-; ou R1 e R2 tomados em conjunto são -(CH2)2- e R3 é -CH3; R4 é halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 0, 1 ou 2.

[005] Em outro aspecto, uma composição farmacêutica inclui um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos um diluente ou transportador farmaceuticamente aceitável.

[006] Em outro aspecto, um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de câncer.

[007] Em outro aspecto, uso de um composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de câncer.

[008] Em outro aspecto, um método para o tratamento de câncer em um animal de sengue quente necessitado de tal tratamento inclui administrar ao animal de sangue quente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[009] Outros aspectos serão claros a partir do relatório descritivo e das reivindicações.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0010] Muitas modalidades são detalhadas ao longo do relatório descritivo e serão evidentes para um leitor perito na técnica. A invenção não deve ser interpretada como estando limitada a qualquer(quaisquer) modalidade(s) particular(es) da mesma.

[0011] É proporcionado um composto de Fórmula (I):

ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila, 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila ou R2 e R3 tomados em conjunto são -(CH2)3-; ou R1 e R2 tomados em conjunto são -(CH2)2- e R3 é -CH3; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 0, 1 ou 2.

[0012] Os anéis piridazin-3-ila e 6-fluoropiridazin-3-ila têm as seguintes estruturas:

[0013] Em algumas modalidades, quando n é 1, então R4 pode estar na posição 3, isto é:

[0014] Em algumas modalidades, quando n é 1, então R4 pode estar na posição 4, isto é:

[0015] Em algumas modalidades, quando n é 2, então uma ocorrência de R4 pode estar na posição 3 e a outra ocorrência de R4 pode estar na posição 4, isto é:

[0016] O termo “farmaceuticamente aceitável” é usado para especificar que um objeto (por exemplo, um sal, forma de dosagem, diluente ou transportador) é adequado para uso em pacientes. Uma lista exemplificativa de sais farmaceuticamente aceitáveis pode ser encontrada no Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl e C. G. Wermuth, editores, Weinheim/Zurique: Wiley-VCH/VHCA, 2002, que é incorporado a título de referência na sua totalidade. Um sal farmaceuticamente aceitável adequado de um composto da Fórmula (I) é, por exemplo, um sal de adição de ácido. Um sal de adição de ácido de um composto da Fórmula (I) pode ser formado contatando o composto com um ácido inorgânico ou orgânico adequado em condições conhecidas do perito. Um sal de adição de ácido pode ser formado usando, por exemplo, um ácido inorgânico tal como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico. Um sal de adição de ácido também pode ser formado usando, por exemplo, um ácido orgânico tal como ácido trifluoroacético, ácido metanossulfônico ou ácido benzenossulfônico.

[0017] Em consequência, em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o sal farmaceuticamente aceitável é um sal do ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido trifluoroacético, ácido metanossulfônico ou ácido benzenossulfônico.

[0018] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o sal farmaceuticamente aceitável é um sal do ácido clorídrico ou ácido bromídrico.

[0019] Outro sal farmaceuticamente aceitável adequado de um composto de Fórmula (I) é um sal de adição de base. Um sal de adição de base de um composto de Fórmula (I) pode ser formado contatando o composto com uma base inorgânica ou orgânica adequada sob condições conhecidas do perito. Um sal de adição de base pode ser formado usando, por exemplo, uma base inorgânica tal como um hidróxido de metal alcalino (tal como hidróxido de sódio, potássio ou lítio) ou um hidróxido de metal alcalinoterroso (tal como hidróxido de cálcio ou hidróxido de magnésio). Um sal de adição de base também pode ser formado usando, por exemplo, uma base orgânica tal como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2- hidroxietil)amina.

[0020] Em consequência, em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em que o sal farmaceuticamente aceitável é um sal de hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de lítio, hidróxido de cálcio, hidróxido de magnésio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

[0021] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o sal farmaceuticamente aceitável é um sal do ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido trifluoroacético, ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de lítio, hidróxido de cálcio, hidróxido de magnésio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

[0022] Uma outra modalidade proporciona quaisquer das modalidades definidas aqui (por exemplo, a modalidade da reivindicação 1) desde que sejam individualmente rejeitados um ou mais Exemplos específicos (por exemplo, um, dois ou três Exemplos específicos ou, alternativamente, um Exemplo específico) selecionados do grupo consistindo nos Exemplos 1(a), 1(b), 2(a), 2(b), 3(a), 3(b), 4(a), 4(b), 5(a), 5(b), 6(a), 6(b), 7(a), 7(b), 8(a), 8(b), 9, 10, 11(a), 11(b), 12(a), 12(b), 13, 14, 15, 16, 17 e 18.

[0023] Alguns valores dos grupos variáveis na Fórmula (I) são os seguintes. Tais valores podem ser usados em combinação com quaisquer das definições, reivindicações (por exemplo, reivindicação 1) ou modalidades definidas aqui para proporcionar outras modalidades.

[0024] Q pode ser piridazin-3-ila.

[0025] Q pode ser 6-fluoropiridazin-3-ila.

[0026] n pode ser 0.

[0027] n pode ser 1.

[0028] n pode ser 2.

[0029] R1 pode ser H.

[0030] R1 pode ser H, n pode ser 1 e R4 pode estar na posição 3.

[0031] R1 pode ser H, n pode ser 1 e R4 pode ser 3-metila, 3-metóxi, 3-difluorometóxi, 3-trifluorometóxi ou 3-ciano.

[0032] R1 pode ser H, n pode ser 1 e R4 pode estar na posição 4.

[0033] R1 pode ser H, n pode ser 1 e R4 pode ser 4-fluoro ou 4- metila.

[0034] R1 pode ser H, n pode ser 2, uma ocorrência de R4 pode estar na posição 3 e a outra ocorrência de R4 pode estar na posição 4.

[0035] R1 pode ser H, n pode ser 2 e uma ocorrência de R4 é 3- trifluorometóxi e a outra ocorrência de R4 é 4-fluoro.

[0036] R2 e R3 podem ser, cada um independentemente, C1-C6 alquila.

[0037] R2 e R3 podem ser, cada um independentemente, metila.

[0038] R2 e R3, tomados em conjunto, podem ser -(CH2)3-.

[0039] R1 pode ser H.

[0040] R1 e R2, tomados em conjunto, podem ser -(CH2)2- e R3 pode ser -CH3.

[0041] R4 pode ser H.

[0042] R4 pode ser halo.

[0043] R4 pode ser fluoro.

[0044] R4 pode ser -CH3.

[0045] R4 pode ser -OCH3.

[0046] R4 pode ser -OCHF2.

[0047] R4 pode ser -OCF3.

[0048] R4 pode ser -CN.

[0049] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila ou R2 e R3 tomados em conjunto são -(CH2)3-; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 0, 1 ou 2.

[0050] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila ou R2 e R3 tomados em conjunto são -(CH2)3-; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 1.

[0051] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila ou R2 e R3 tomados em conjunto são -(CH2)3-; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 1 quando R4 está na posição 3.

[0052] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 0, 1 ou 2.

[0053] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 1 quando R4 está na posição 3.

[0054] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3, tomados em conjunto, são -(CH2)3-; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 0, 1 ou 2.

[0055] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3, tomados em conjunto, são -(CH2)3-; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 1 quando R4 está na posição 3.

[0056] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila ou 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 e R2, tomados em conjunto, são -(CH2)2- e R3 é -CH3; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 0, 1 ou 2.

[0057] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto é selecionado do grupo consistindo em: (2S)-2-(dimetilamino)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(dimetilamino)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin- 3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin- 3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (1S)-2-metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4- tiadiazol-2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida; (1R)-2-metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4- tiadiazol-2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(p-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(m-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida, e (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.

[0058] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto é selecionado do grupo consistindo em: (2S)-2-(dimetilamino)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin- 3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin- 3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (1S)-2-metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4- tiadiazol-2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(p-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(m-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida, e (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.

[0059] Os compostos e os sais descritos neste relatório descritivo podem existir em formas solvatadas e formas não solvatadas. Por exemplo, uma forma solvatada pode ser uma forma hidratada, tal como um hemi-hidrato, um mono-hidrato, um di-hidrato, um tri-hidrato ou uma quantidade alternativa dos mesmos. A presente invenção abrange a totalidade de tais formas solvatadas e não solvatadas de compostos de Fórmula (I).

[0060] Os átomos dos compostos e dos sais descritos neste relatório descritivo podem existir em diferentes formas isotópicas. A presente invenção abrange todas as formas isotópicas de compostos de Fórmula (I) incluindo um carbono 11C ou 13C e hidrogênio 1H, 2H (deutério) ou 3H (trítio).

[0061] Os compostos e os sais descritos neste relatório descritivo podem existir como uma mistura de tautômeros. "Tautômeros" são isômeros estruturais que existem em equilíbrio resultante da migração de um átomo de hidrogênio. A presente invenção inclui todos os tautômeros de compostos de Fórmula (I).

[0062] Compostos de Fórmula (I) podem ser preparados em diferentes formas diastereoméricas. A presente invenção inclui todas as formas diastereoméricas dos compostos de Fórmula (I).

[0063] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo que é um único diastereômero estando em um excesso diastereomérico (% ed) > 95%, > 98% ou > 99%. Em uma modalidade, o diastereômero único está presente em excesso diastereomérico (% ed) > 99%.

[0064] Compostos de Fórmula (I) podem ser preparados, por exemplo, pela reação de um composto de Fórmula (II):

em que Q é definido acima, com um composto de Fórmula (III):

em que R1, R2, R3 e R4 são definidos acima e X é um grupo lábil, tal como um átomo de halogênio (por exemplo, um átomo de cloro) ou um grupo hidróxi. A reação é convenientemente realizada em um solvente adequado (por exemplo, N,N-dimetilformamida ou N,N- dimetilacetamida) e na presença de uma base (por exemplo, di- isopropiletilamina) a uma temperatura adequada. Temperaturas adequadas incluem mas não se limitam à temperatura ambiente (desde cerca de 20°C até cerca de 30°C), temperatura reduzida (por exemplo, desde cerca de -77°C até cerca de 0°C) ou temperatura elevada, por exemplo, entre cerca de 80°C e 120°C. Quando X é um grupo hidróxi pode ser usado um agente de acoplamento adequado (por exemplo, HATU) para formar a ligação amida.

[0065] Em consequência, compostos de Fórmula (III) e seus sais são úteis como intermediários na preparação dos compostos de Fórmula (I) e proporcionam outra modalidade.

[0066] Compostos de Fórmula (II) e Fórmula (III) podem ser preparados por métodos similares aos mostrados na seção de Exemplos.

[0067] Um sal adequado de um composto de Fórmula (III) é um sal de adição de base. Um sal de adição de base de um composto de Fórmula (III) pode ser formado contatando o composto com uma base inorgânica ou orgânica adequada sob condições conhecidas do perito. Não é necessário que tais bases gerem sais farmaceuticamente aceitáveis. Um sal de adição de base pode ser formado, por exemplo, usando uma base inorgânica tal como um hidróxido de metal alcalino (tal como hidróxido de sódio, potássio ou lítio) ou um hidróxido de metal alcalinoterroso (tal como hidróxido de cálcio ou hidróxido de magnésio). Um sal de adição de base também pode ser formado usando uma base orgânica, tal como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

[0068] Em consequência, em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (III) ou um sal do mesmo, em que o sal é um sal de hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de lítio, hidróxido de cálcio, hidróxido de magnésio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

[0069] É esperado que compostos que se crê inibirem a GLS1, isto é, os compostos de Fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, sejam úteis em terapia, por exemplo, no tratamento de doenças ou estados médicos mediados pelo menos em parte pela GLS1, incluindo câncer.

[0070] Quando se menciona “câncer”, isso inclui tanto câncer não metastático como também câncer metastático, de tal forma que o tratamento de câncer envolve o tratamento tanto de tumores primários como de metástases tumorais.

[0071] Em uma modalidade, o câncer é câncer metastático.

[0072] Em uma modalidade, o câncer é câncer não metastático.

[0073] "Atividade inibidora de GLS1" se relaciona com um decréscimo da atividade de GLS1 como resposta direta ou indireta à presença de um composto de Fórmula (I), ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em relação à atividade de GLS1 na ausência de composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Uma tal diminuição da atividade pode ser devida à interação direta do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo com GLS1, ou devido à interação do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo com um ou mais fatores diferentes que, por sua vez, afetam a atividade da GLS1. Por exemplo, o composto de Fórmula (I) ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode diminuir a GLS1 se ligando diretamente à GLS1; fazendo com que (direta ou indiretamente) um outro fator diminua a atividade da GLS1, ou diminuindo (direta ou indiretamente) a quantidade de GLS1 presente na célula ou no organismo.

[0074] É pretendido que o termo "terapia" tenha o seu significado normal de tratamento de uma doença ou correção ou compensação da patologia subjacente. O termo "terapia" também inclui "profilaxia", salvo se existirem indicações específicas em contrário. Os termos "terapêutico" e "terapeuticamente" devem ser interpretados de modo correspondente.

[0075] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" se relaciona com uma quantidade de um composto de Fórmula (I) como descrito em quaisquer das modalidades aqui que é eficaz para proporcionar terapia a um sujeito. No caso do câncer, a quantidade terapeuticamente eficaz pode provocar qualquer uma das mudanças observáveis ou mensuráveis em um sujeito tais como descritas na definição de "terapia", "tratamento" e "profilaxia" acima. Por exemplo, a quantidade eficaz pode reduzir o número de células cancerígenas ou tumorais; reduzir o tamanho global do tumor; inibir ou travar a infiltração de células tumorais em órgãos periféricos, incluindo, por exemplo, o tecido mole e osso; inibir e travar metástases tumorais; inibir e travar o crescimento tumoral; aliviar, em alguma extensão, um ou mais dos sintomas associados ao câncer; reduzir a morbidez e a mortalidade; melhorar a qualidade de vida, ou uma combinação de tais efeitos. Uma quantidade eficaz pode ser uma quantidade suficiente para diminuir os sintomas de uma doença responsiva à inibição da atividade da GLS1. Para terapia do câncer, a eficácia in vivo pode ser medida, por exemplo, avaliando a duração da sobrevivência, tempo até à progressão da doença (TTP), as taxas de resposta (RR), duração da resposta e/ou qualidade de vida. Tal como reconhecido pelos peritos na técnica, as quantidades eficazes podem variar dependendo da via de administração, uso de excipientes e co-utilização com outros agentes. Por exemplo, quando é usada uma terapia de combinação, a quantidade do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável descrito neste relatório descritivo e a quantidade de outro(s) agente(s) farmaceuticamente ativo(s) são, quando combinadas, eficazes em conjunto para tratar um transtorno- alvo no paciente animal. Neste contexto, as quantidades combinadas estão em uma “quantidade terapeuticamente eficaz” se, quando combinadas, forem suficientes para diminuir os sintomas de uma doença responsiva à inibição da atividade da GLS1 tal como descrito acima. Tipicamente, tais quantidades podem ser determinadas pelo perito na técnica, por exemplo, partindo da gama de dosagens descrita neste relatório descritivo para o composto de Fórmula (I) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e gama(s) de dosagem aprovada(s) ou então publicada(s) do(s) outro(s) composto(s) farmaceuticamente ativo(s). É pretendido que o termo "profilaxia" tenha o seu significado normal e inclui profilaxia primária para prevenir o desenvolvimento da doença e profilaxia secundária em que a doença já se desenvolveu e o paciente é temporária ou permanentemente protegido contra exacerbação ou agravamento da doença.

[0076] O termo “tratamento” é usado como sinônimo de “terapia”. De modo similar, o termo “tratar” pode ser considerado como aplicação de uma terapia em que “terapia” é como definida aqui.

[0077] Em uma modalidade é proporcionada uma composição farmacêutica incluindo o composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos um diluente ou transportador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a composição farmacêutica inclui um composto de Fórmula (I) como uma base livre. Em outra modalidade, a composição farmacêutica inclui um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula (I).

[0078] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em terapia.

[0079] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de câncer.

[0080] Em uma modalidade é proporcionado o uso do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de câncer.

[0081] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de uma doença mediada por GLS1. Em uma modalidade, a doença mediada por GLS1 é câncer. Em algumas modalidades, o câncer pode ser câncer da mama (por exemplo, câncer da mama triplo negativo), câncer do pulmão (por exemplo, câncer de células não pequenas do pulmão), câncer pancreático, câncer renal ou câncer hepatocelular.

[0082] "Câncer da mama triplo negativo" é qualquer câncer da mama que não expresse ou subexpresse os genes para o receptor de estrogênio, receptor de progesterona e Her2/neu.

[0083] Em uma modalidade é proporcionado o uso do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de uma doença mediada por GLS1. Em uma modalidade, a doença mediada por GLS1 é câncer. Em algumas modalidades, o câncer pode ser câncer da mama (por exemplo, câncer da mama triplo negativo), câncer do pulmão (por exemplo, câncer de células não pequenas do pulmão), câncer pancreático, câncer renal ou câncer hepatocelular.

[0084] Em uma modalidade é proporcionado o uso do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de câncer.

[0085] Em uma modalidade é proporcionado um método de inibição de GLS1 que inclui administrar um composto de Fórmula (I).

[0086] Em uma modalidade é proporcionado um método para o tratamento de uma doença na qual a inibição de GLS1 é benéfica em um animal de sangue quente necessitado de tal tratamento, que inclui administrar ao animal de sangue quente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0087] "Animais de sangue quente" incluem, por exemplo, humanos.

[0088] Em uma modalidade é proporcionado um método para o tratamento de câncer em um animal de sangue quente necessitado de tal tratamento, que inclui administrar ao animal de sangue quente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o câncer pode ser câncer da mama (por exemplo, câncer da mama triplo negativo), câncer do pulmão (por exemplo, câncer de células não pequenas do pulmão), câncer pancreático, câncer renal ou câncer hepatocelular.

[0089] O tratamento para câncer descrito neste relatório descritivo pode ser aplicado como terapia única ou pode envolver, para além da administração do composto de Fórmula (I), cirurgia convencional, radioterapia ou quimioterapia, ou uma combinação de tais terapias adicionais. Tal cirurgia convencional, radioterapia ou quimioterapia podem ser administradas simultânea, sequencial ou separadamente para tratamento com o composto de Fórmula (I).

[0090] Por conseguinte, em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos uma substância antitumoral adicional, para uso no tratamento de câncer.

[0091] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos uma substância antitumoral adicional para uso no tratamento simultâneo, separado ou sequencial de câncer.

[0092] Em uma modalidade é proporcionado um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de câncer, em que o composto de Fórmula (I) é administrado simultânea, separada ou sequencialmente com pelo menos uma substância antitumoral adicional.

[0093] Em uma modalidade é proporcionado um método de tratamento de câncer em um animal de sangue quente que está necessitado de tal tratamento, que inclui administrar ao animal de sangue quente um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos uma substância antitumoral adicional, em que as quantidades do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e da substância antitumoral adicional são conjuntamente eficazes na produção de um efeito anticancerígeno.

[0094] Em uma modalidade é proporcionado um método de tratamento de câncer em um animal de sangue quente que está necessitado de tal tratamento, que inclui administrar ao animal de sangue quente um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e administrar simultânea, separada ou sequencialmente ao animal de sangue quente pelo menos uma substância antitumoral adicional, em que as quantidades do composto de Fórmula (I) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e da substância antitumoral adicional são conjuntamente eficazes na produção de um efeito anticancerígeno.

[0095] Em qualquer modalidade, a substância antitumoral adicional é um taxano. Em uma modalidade, o taxano é paclitaxel. Em uma modalidade, o taxano é docetaxel.

[0096] Em qualquer modalidade, a substância antitumoral adicional é uma terapia com platina. Em uma modalidade, a terapia com platina é cisplatina, oxaliplatina ou carboplatina.

[0097] De acordo com uma modalidade adicional é proporcionado um kit compreendendo: a) Um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em uma primeira forma de dosagem unitária; b) Uma segunda substância antitumoral em uma segunda forma de dosagem unitária; c) Um recipiente para conter a primeira e segunda formas de dosagem unitárias, e, opcionalmente, d) Instruções de uso.

[0098] Os compostos de Fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo podem ser administrados como composições farmacêuticas compreendendo um ou mais diluentes ou transportadores farmaceuticamente aceitáveis. Em conformidade, em uma modalidade é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos um diluente ou transportador farmaceuticamente aceitável.

[0099] As composições podem estar em uma forma adequada para uso oral (por exemplo, como comprimidos, pastilhas, cápsulas duras ou moles, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós dispersíveis ou grânulos, xaropes ou elixires), para uso tópico (por exemplo, como cremes, pomadas, géis ou soluções ou suspensões aquosas ou oleosas), para administração por inalação (por exemplo, como um pó finamente dividido ou de um aerossol líquido), para administração por insuflação (por exemplo, como um pó finamente dividido) ou para administração parentérica (por exemplo, como uma solução aquosa ou oleosa esterilizada para dosagem intravenosa, subcutânea, intramuscular) ou como um supositório. As composições podem ser obtidas por procedimentos convencionais usando excipientes farmacêuticos convencionais. Desse modo, composições destinadas a uso oral podem conter, por exemplo, um ou mais agentes corantes, edulcorantes, aromatizantes e/ou conservantes.

[00100] Em uma modalidade é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos um diluente ou transportador farmaceuticamente aceitável, para uso em terapia.

[00101] Em uma modalidade é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos um diluente ou transportador farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de câncer. Em algumas modalidades, o câncer pode ser câncer da mama (por exemplo, câncer da mama triplo negativo), câncer do pulmão (por exemplo, câncer de células não pequenas do pulmão), câncer pancreático, câncer renal ou câncer hepatocelular.

[00102] O composto de Fórmula (I) será normalmente administrado a um animal de sangue quente em uma dose unitária situada no intervalo 5-5000 mg/m2 de área corporal do animal, isto é, aproximadamente 0,1-100 mg/kg, e esta normalmente proporciona uma dose terapeuticamente eficaz. Uma forma de dose unitária tal como um comprimido ou cápsula conterá habitualmente, por exemplo, 1-250 mg de ingrediente ativo. A dose diária irá necessariamente variar dependendo do hospedeiro tratado, da via de administração particular, de quaisquer terapias que estejam sendo coadministradas e da gravidade da doença sendo tratada. Consequentemente, o profissional que está tratando qualquer paciente particular pode determinar a dosagem ótima.

EXEMPLOS

[00103] As várias modalidades são ilustradas pelos Exemplos seguintes. A invenção não deve ser interpretada como estando limitada aos Exemplos.

[00104] Durante a preparação dos Exemplos, geralmente: a) As operações foram realizadas à temperatura ambiente, isto é, no intervalo de cerca de 17 a 30 °C, e sob uma atmosfera de um gás inerte tal como nitrogênio, salvo indicação em contrário; b) As evaporações foram realizadas por evaporação rotativa ou usando um equipamento Genevac in vacuo e os procedimentos de manipulação foram realizados após remoção de sólidos residuais por filtração; c) Foram realizadas purificações por cromatografia Flash em um Isco Combiflash Companion automatizado usando colunas de sílica pré-empacotadas Grace Resolve e Isco Combiflash Rf (Flash de fase reversa) usando colunas RediSep Gold C18; d) Os rendimentos, quando presentes, não são necessariamente o máximo alcançável; e) As estruturas dos produtos finais de Fórmula (I) foram confirmadas por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN), com os valores dos desvios químicos de RMN medidos na escala delta. Os espectros de ressonância magnética de prótons foram determinados usando um instrumento Bruker Avance 700 (700 MHz), Bruker Avance 500 (500 MHz), Bruker 400 (400 MHz) ou Bruker 300 (300 MHz); as 19F RMN foram determinadas a 282 MHz ou a 376 MHz; as 13C RMN foram determinadas a 75 MHz ou a 100 MHz; as medições foram efetuadas a cerca de 20-30 °C, salvo indicação em contrário; foram usadas as seguintes abreviaturas: s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; dd, dupleto de dupletos; ddd, dupleto de dupletos de dupletos; dt, dupleto de tripletos; bs, sinal largo; f) Os produtos finais de Fórmula (I) também foram caracterizados por espectroscopia de massa após cromatografia líquida (LCMS), usando um sistema HPLC baseado em um sistema LC Waters 2790/95 com um PDA 2996 e um espectrômetro de massa de quadripolo único ZQ de 2000 u.m.a. Os solventes usados foram A= Água, B= Acetonitrila, C= acetonitrila:água 50:50 ácido fórmico 0,1% e D= acetonitrila:água 50:50 hidróxido de amônio 0,1%. A uma taxa de fluxo de 1,1 mL/min, 5 μL de amostra foram injetados em uma coluna Phenomenex Gemini NX 5 μm 50 x 2,1. O gradiente percorreu de 95% de A até 95% de B durante 4,0 mins com uma infusão de 5% constante de C (para análise de ácidos, D é usado para análise de bases). O fluxo foi mantido a 95% de B durante 0,5 mins antes de regressar às condições de partida. Os Dados foram adquiridos desde 150 até 850 u.m.a. no modo positivo e negativo no Espectrômetro de Massa e 220 - 320 nm no PDA. LCMS também foi realizado em um sistema UPLC usando uma bomba Binária Acquity da Waters com gerenciador de amostras, PDA Acquity e um Espectrômetro de massa SQD. Os solventes usados foram A1= ácido fórmico (aq) 0,1%, B1 ácido fórmico 0,1% em acetonitrila, A2 = hidróxido de amônio (aq) 0,1% e B2 hidróxido de amônio 0,1% em acetonitrila. A uma taxa de fluxo de 1 mL/min, 1 μL de amostra foi injetado em uma coluna BEH da Waters 1,7 um 50 x 2,1 (a 40°C). O gradiente percorreu de 97% de A1 até 97% de B1 ao longo de 1,30 mins antes de ser mantido durante 0,2 min e regressar às condições de partida (substituir A1 e B1 por A2 e B2 para análise de bases). Os dados foram adquiridos desde 150 - 1000 u.m.a. em modo de íons positivos e negativos no espectrômetro de massa e 245 -320 u.m.a. no PDA; g) Os intermediários não foram em geral completamente caracterizados e a pureza foi avaliada por análise cromatográfica em camada fina, espectral de massa, HPLC e/ou RMN; h) Foram usadas as seguintes abreviaturas: h = hora(s); t.a. = temperatura ambiente (~17-30 °C); conc. = concentrado; FCC = cromatografia em coluna Flash usando sílica; AIBN = azobisisobutironitrila; DCM = diclorometano; DIPEA = di- isopropiletilamina; DMA = N,N-dimetilacetamida; DMF = N,N- dimetilformamida; DMSO = dimetilsulfóxido; EDC = 1-Etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida; Et2O = éter de dietila; EtOAc = acetato de etila; EtOH = etanol; HATU = hexafluorofosfato de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazol[4,5-b]piridínio 3-óxido; HOBT = hidroxibenzotriazol; K2CO3 = carbonato de potássio; MeOH = metanol; MeCN = acetonitrila; MgSO4 = sulfato de magnésio anidro; Na2SO4 = sulfato de sódio anidro; NBS = N-bromossuccinimida; TFA = ácido trifluoroacético; THF = tetra-hidrofurano; sat. = solução aquosa saturada.

[00105] Em alguns dos exemplos abaixo é descrito um par de compostos diastereoméricos. Por exemplo, os compostos do Exemplo 1(a) e Exemplo 1(b) representam um par de compostos diastereoméricos, formados como uma mistura no produto de uma única reação e subsequentemente separados. Em tais exemplos, qualquer atribuição da estereoquímica não é absoluta. A título ilustrativo, os Exemplos 1(a) e 1(b) se relacionam com os diastereômeros (2S,3R) e (2R,3R) do composto designado; no entanto, não é pretendido afirmar que ao Exemplo 1(a) é definitivamente atribuído o diastereômero (2S,3R) e ao Exemplo 1(b) o diastereômero (2R,3R). Exemplos 1(a) e 1(b) (2S)-2-(Dimetilamino)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida e (2R)-2-(dimetilamino)-2- fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol- 2-il]acetamida

[00106] HATU (866 mg, 2,28 mmol) foi adicionado a cloridrato do ácido 2-(dimetilamino)-2-fenil-acético (410 mg, 1,90 mmol), N'-[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 500 mg, 1,90 mmol) e DIPEA (0,992 mL, 5,70 mmol), DMF (6 mL) a 0°C. A solução resultante foi então agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com metanol (5 mL) e passada por um cartucho SCX de 20 g eluindo com metanol, para remover impurezas não básicas, seguido de uma solução 3,5 N de amônia em metanol, para separar o produto. As lavagens metanólicas/amônia contendo produto foram evaporadas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 9% (7 N de NH3/metanol) em diclorometano). As frações contendo produto foram evaporadas para originar material bruto. O resíduo foi submetido a partição entre 2-metiltetra-hidrofurano e salmoura aquosa, a camada orgânica foi lavada com salmoura aquosa duas vezes antes de ser seca (MgSO4), filtrada e evaporada sob pressão reduzida, dando origem a produto (350 mg, 43,4%) na forma de uma goma e mistura de diastereoisômeros.

[00107] A mistura foi separada por HPLC quiral (coluna C4, sílica de 20 mícrones, 4,6 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, heptano/EtOH-MeOH 60/40). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a: Exemplo 1(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 128 mg, 37%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 27°C) δ 1,99 - 2,09 (1H, m), 2,13 (6H, s), 2,21 - 2,33 (1H, m), 3,44 - 3,6 (3H, m), 3,73 (1H, dd), 4,06 (1H, s), 4,31 - 4,4 (1H, m), 6,85 (1H, dd), 7,25 - 7,38 (4H, m), 7,45 (2H, dd), 7,64 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,13 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 425. Exemplo 1(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 137 mg, 39%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 27°C) δ 2 - 2,1 (1H, m), 2,13 (6H, s), 2,22 - 2,32 (1H, m), 3,43 - 3,6 (3H, m), 3,73 (1H, dd), 4,06 (1H, s), 4,31 - 4,41 (1H, m), 6,84 (1H, dd), 7,27 - 7,38 (4H, m), 7,45 (2H, d), 7,64 (1H, d), 8,46 (1H, dd), 12,14 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 425. Exemplos 2(a) e 2(b) (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida e (2R)-2- (dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin- 3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida

[00108] HATU (433 mg, 1,14 mmol) foi adicionado a cloridrato do ácido 2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)acético (222 mg, 0,95 mmol), N'- [(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 250 mg, 0,95 mmol) e DIPEA (0,496 mL, 2,85 mmol) em DMF (3 mL) a 0°C. A solução resultante foi então agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com metanol (5 mL) e passada por um cartucho SCX de 20 g eluindo com metanol, para remover impurezas não básicas, seguido de uma solução 3,5 N de amônia em metanol, para separar o produto. As lavagens metanólicas/amônia contendo produto foram evaporadas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia Flash em sílica, gradiente de eluição 0 até 9% (7 N de NH3/metanol) em diclorometano. As frações contendo produto foram evaporadas, dando origem a produto. O resíduo foi submetido a partição entre 2-metiltetra- hidrofurano e salmoura aquosa, a camada orgânica foi lavada duas vezes com salmoura aquosa antes de ser seca (MgSO4), filtrada e evaporada sob pressão reduzida, dando origem ao produto bruto como uma mistura de diastereoisômeros.

[00109] A mistura foi separada por HPLC quiral (Agilent 1100, coluna IB, sílica de 20 mícrones μm, 4,6 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, Heptano/EtOH-MeOH, 60/40 como eluente). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a: Exemplo 2(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 98 mg, 33%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 27°C) δ 2,01 - 2,1 (1H, m), 2,12 (6H, s), 2,21 - 2,34 (1H, m), 3,47 (1H, dd), 3,52 - 3,59 (2H, m), 3,73 (1H, dd), 4,07 (1H, s), 4,37 (1H, dq), 6,85 (1H, dd), 7,14 - 7,23 (2H, m), 7,31 (1H, dd), 7,44 - 7,51 (2H, m), 7,66 (1H, d), 8,46 (1H, dd), 12,18 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 443. Exemplo 2(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 100 mg, 33%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 27°C) δ 2 - 2,1 (1H, m), 2,12 (6H, s), 2,21 - 2,33 (1H, m), 3,46 - 3,58 (3H, m), 3,74 (1H, dd), 4,07 (1H, s), 4,31 - 4,41 (1H, m), 6,85 (1H, dd), 7,15 - 7,22 (2H, m), 7,32 (1H, dd), 7,48 (2H, ddd), 7,66 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,17 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 443. Exemplos 3(a) e 3(b) (2S)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida e (2R)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida

[00110] HATU (416 mg, 1,09 mmol) foi adicionado a N'-[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 240 mg, 0,91 mmol), ácido 2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2- (dimetilamino)acético (Intermediário 9, 246 mg, 1,00 mmol) e DIPEA (0,159 mL, 0,91 mmol) em DMF (8 mL) a 21 °C sob nitrogênio. A solução resultante foi agitada a 21 °C ao longo de 1 hora. O produto bruto foi purificado por cromatografia de troca iônica, usando uma coluna SCX. O produto desejado eluiu da coluna usando 1 M de NH3/MeOH e as frações puras foram adsorvidas em sílica.

[00111] O produto bruto foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 7% de MeOH em DCM). As frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem ao produto na forma de uma goma amarela e mistura de diastereoisômeros.

[00112] A mistura foi separada por HPLC (Agilent 1100, coluna OJ, sílica de 20 mícrones μm, 50 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, MeCN/MeOH, 90/10 como eluente). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a: Exemplo 3(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 50 mg, 11%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,08 (1H, m), 2,27 (1H, m), 2,49 (6H, s), 3,39 - 3,61 (3H, m), 3,75 (1H, m), 4,37 (1H, m), 6,95 (1H, d), 7,137,22 (1H, d), 7,29 (1H, s), 7,33 - 7,42 (4H, m), 7,48 (1H, d), 7,77 (1H, m), 8,48 (1H, d), 12,20 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 491. Exemplo 3(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 57 mg, 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,08 (1H, m), 2,27 (1H, m), 2,49 (6H, s), 3,39 - 3,61 (3H, m), 3,75 (1H, m), 4,37 (1H, m), 6,95 (1H, d), 7,13-7,22 (1H, d), 7,29 (1H, s), 7,33 - 7,42 (4H, m), 7,48 (1H, d), 7,77 (1H, m), 8,48 (1H, d), 12,19 (s, 1H); m/z: ES+ [M+H]+ 491. Exemplos 4(a) e 4(b) (2S)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida e (2R)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida

[00113] HATU (3,00 g, 7,88 mmol) foi adicionado a N'-[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 1,73 g, 6,57 mmol), ácido 2-(dimetilamino)-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acético (Intermediário 11, 2,248 g, 8,54 mmol), DIPEA (3,43 mL, 19,71 mmol) em DMF (30 mL) a 21 °C sob nitrogênio. A solução resultante foi agitada a 60°C ao longo de 1 hora. O produto bruto foi purificado por cromatografia de troca iônica, usando uma coluna SCX. O produto desejado eluiu da coluna usando 1 M de NH3/MeOH e as frações puras foram adsorvidas em sílica. O produto bruto foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 10% 1 M de NH3/MeOH em DCM). As frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem a um sólido marrom como uma mistura de diastereoisômeros.

[00114] A mistura foi separada por HPLC (coluna Chiral Technologies OD, sílica de 20 μm, 100 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, mistura 50/50 de Heptano/EtOH como eluentes, taxa de fluxo 450 mL/ min). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a: Exemplo 4(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 250 mg, 7%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,78 - 1,87 (1H, m), 1,91 (6H, s), 2 - 2,13 (1H, m), 3,14 - 3,41 (3H, m), 3,51 (1H, m), 3,91 (1H, s), 4,12 (2H, m), 6,62 (1H, dd), 7,09 (2H, dd), 7,17 - 7,35 (3H, m), 7,40 (1H, d), 8,24 (1H, dd); m/z: ES+ [M+H]+ 509. Exemplo 4(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 285 mg, 9%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,08 (1H, m), 2,27 (1H, m), 2,49 (6H, s), 3,39 - 3,61 (3H, m), 3,75 (1H, m), 4,37 (1H, m), 6,95 (1H, d), 7,137,22 (1H, d), 7,29 (1H, s), 7,33 - 7,42 (4H, m), 7,48 (1H, d), 7,77 (1H, m), 8,48 (1H, d); m/z: ES+ [M+H]+ 509. Exemplos 5(a) e 5(b) (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida e (2R)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida

[00115] HATU (279 mg, 0,73 mmol) foi adicionado a ácido 2- (azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]acético (Intermediário 13, 145 mg, 0,56 mmol), N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol- 2,5-diamina (Intermediário 1, 148 mg, 0,56 mmol) e DIPEA (0,295 mL, 1,69 mmol) em N-metil-2-pirrolidinona (15 mL) à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. Esta solução foi diluída com metanol (15 mL) e passada por um cartucho SCX-2 de 20 g, enxaguando com metanol para remover impurezas, seguido de uma solução 1 N de amônia em metanol para separar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a produto bruto. O produto bruto foi dissolvido em metanol/diclorometano e evaporado para sílica gel. O resíduo foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 6% de metanol em diclorometano). As frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem ao produto na forma de uma goma e mistura de diastereoisômeros.

[00116] A mistura foi separada por HPLC (coluna Phenomenex Lux IA, sílica de 20 μm, 50 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, MeCN/MeOH 95/05 a 120 mL/min). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a: Exemplo 5(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 91 mg, 37%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,97 - 2,08 (3H, m), 2,23 - 2,31 (1H, m), 3,07 - 3,19 (4H, m), 3,46 - 3,6 (3H, m), 3,75 (1H, dd), 4,23 (1H, s), 4,37 (1H, dt), 6,86 (1H, dd), 7,03 - 7,44 (6H, m), 7,63 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,00 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 503. Exemplo 5(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 43 mg, 17%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,97 - 2,11 (3H, m), 2,28 (1H, dt), 3,07 - 3,19 (4H, m), 3,48 (1H, dd), 3,52 - 3,6 (2H, m), 3,75 (1H, dd), 4,23 (1H, s), 4,34 - 4,42 (1H, m), 6,85 (1H, dd), 7,02 - 7,43 (6H, m), 7,63 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 11,98 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 503. Exemplos 6(a) e 6(b) (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida e (2R)-2- (azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin- 3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida

[00117] HATU (413 mg, 1,09 mmol) foi adicionado a ácido 2- (azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)acético (Intermediário 17, 185 mg, 0,84 mmol), N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 220 mg, 0,84 mmol) e DIPEA (0,438 mL, 2,51 mmol) em N-metil-2-pirrolidinona (15 mL) à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. Esta solução foi diluída com metanol (15 mL) e passada por um cartucho SCX-2 de 20 g, enxaguando com metanol para remover impurezas, seguido de uma solução 1 N de amônia em metanol para separar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a produto bruto. O produto bruto foi dissolvido em metanol/diclorometano e evaporado para sílica gel. O resíduo foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 12% de metanol em diclorometano). As frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem ao produto na forma de um sólido e mistura de diastereoisômeros

[00118] A mistura foi separada por HPLC (coluna Phenomenex Lux IE, sílica de 20 μm, 50 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, eluente EtOH a 120 mL/min). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a: Exemplo 6(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 137 mg, 39%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,95 - 2,11 (3H, m), 2,22 - 2,32 (1H, m), 3,11 (4H, dq), 3,44 - 3,59 (3H, m), 3,71 - 3,77 (4H, m), 4,14 (1H, s), 4,36 (1H, dt), 6,82 - 6,88 (2H, m), 7,03 (1H, d), 7,06 (1H, d), 7,24 (1H, t), 7,31 (1H, dd), 7,61 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 11,86 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 467. Exemplo 6(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 67 mg, 19%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,95 - 2,09 (3H, m), 2,22 - 2,31 (1H, m), 3,04 - 3,17 (4H, m), 3,45 - 3,59 (3H, m), 3,71 - 3,78 (4H, m), 4,14 (1H, s), 4,33 - 4,4 (1H, m), 6,83 - 6,88 (2H, m), 7,03 (1H, d), 7,06 (1H, s), 7,25 (1H, t), 7,31 (1H, dd), 7,61 (1H, d), 8,47 (1H, d), 11,88 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 467. Exemplos 7(a) e 7(b) (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida e (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida

[00119] HATU (225 mg, 0,59 mmol) foi adicionado a ácido 2- (azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético (Intermediário 20, 125 mg, 0,46 mmol), N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol- 2,5-diamina (Intermediário 1, 120 mg, 0,46 mmol) e DIPEA (0,239 mL, 1,37 mmol) em N-metil-2-pirrolidinona (4 mL) à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. Esta solução foi diluída com metanol (15 mL) e passada por um cartucho SCX-2 de 20 g, enxaguando com metanol para remover impurezas, seguido de uma solução 1 N de amônia em metanol para separar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a produto bruto. O produto bruto foi dissolvido em metanol/diclorometano e evaporado para sílica gel. O resíduo foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 7% de metanol em diclorometano). As frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem ao produto na forma de uma goma e a mistura de diastereoisômeros.

[00120] A mistura foi separada por HPLC (coluna Chiral Technologies IA, sílica de 20 μm, 50 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, usando uma mistura 90/10 de MeCN/MeOH como eluentes, taxa de fluxo 120 mL/min). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a: Exemplo 7(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 72 mg, 38%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,95 - 2,09 (3H, m), 2,26 (1H, dt), 3,11 (4H, dq), 3,48 (1H, dd), 3,51 - 3,58 (2H, m), 3,74 (1H, dd), 4,26 (1H, s), 4,36 (1H, dt), 6,85 (1H, dd), 7,28 - 7,34 (2H, m), 7,45 - 7,51 (3H, m), 7,64 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,09 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 521. Exemplo 7(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 79 mg, 42%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,96 - 2,11 (3H, m), 2,23 - 2,32 (1H, m), 3,05 - 3,16 (4H, m), 3,47 (1H, dd), 3,51 - 3,59 (2H, m), 3,73 (1H, dd), 4,26 (1H, s), 4,36 (1H, dq), 6,84 (1H, dd), 7,27 - 7,33 (2H, m), 7,44 - 7,5 (3H, m), 7,63 (1H, d), 8,46 (1H, dd), 12,07 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 521. Exemplos 8(a) e 8(b) (1S)-2-metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4- tiadiazol-2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida e (1R)-2- metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol- 2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida

[00121] HATU (238 mg, 0,63 mmol) foi adicionado a ácido 2-metil- 3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxílico, HCl (Intermediário 24, 110 mg, 0,48 mmol), N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol- 2,5-diamina (Intermediário 1, 127 mg, 0,48 mmol) e DIPEA (0,295 mL, 1,69 mmol) em N-metil-2-pirrolidinona (2 mL) e DMF (3 mL) à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. Esta solução foi diluída com metanol (15 mL) e passada por um cartucho SCX-2 de 20 g, enxaguando com metanol para remover impurezas, seguido de uma solução 1 N de amônia em metanol para separar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 6% de metanol em diclorometano). As frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem ao produto na forma de uma goma e mistura de diastereoisômeros.

[00122] A mistura foi separada por HPLC (coluna Phenomonex Lux C2, sílica de 20 μm, 50 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento, usando EtOH como eluentes à taxa de fluxo de 120 mL/min). As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a:

[00123] Exemplo 8(a) como primeiro isômero a eluir (sólido, 49 mg, 43%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,02 - 2,11 (1H, m), 2,23 - 2,31 (1H, m), 2,37 (3H, s), 2,54 - 2,61 (1H, m), 2,78 (1H, dt), 2,95 (1H, dt), 3,18 - 3,25 (1H, m), 3,47 - 3,59 (3H, m), 3,75 (1H, dd), 4,35 (1H, s), 4,36 - 4,42 (1H, m), 6,85 (1H, dd), 7,11 - 7,19 (4H, m), 7,32 (1H, dd), 7,65 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 11,95 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 437.

[00124] Exemplo 8(b) como segundo isômero a eluir (sólido, 52 mg, 46%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,03 - 2,11 (1H, m), 2,23 - 2,32 (1H, m), 2,37 (3H, s), 2,54 - 2,62 (1H, m), 2,79 (1H, dt), 2,94 (1H, dt), 3,18 - 3,26 (1H, m), 3,42 - 3,59 (3H, m), 3,74 (1H, dd), 4,35 (1H, s), 4,37 - 4,42 (1H, m), 6,85 (1H, dd), 7,11 - 7,19 (4H, m), 7,31 (1H, dd), 7,65 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 11,97 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 437. Exemplo 9 (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-metilfenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida

[00125] HATU (347 mg, 0,91 mmol) foi adicionado a ácido (2S)-2- (dimetilamino)-2-(p-tolil)acético (Intermediário 26, 161 mg, 0,84 mmol), N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 200 mg, 0,76 mmol) e DIPEA (0,133 mL, 0,76 mmol) em DMA (7 mL) a 21°C sob nitrogênio. A solução resultante foi agitada a 0°C durante 45 minutos. O produto bruto foi purificado por cromatografia de troca iônica, usando uma coluna SCX. O produto desejado eluiu da coluna usando 1 M de NH3/MeOH e as frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem a produto bruto na forma de uma goma. O produto bruto foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 10% de MeOH em DCM). As frações puras foram evaporadas até à secura, trituradas com DCM/éter e filtradas, dando origem a (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-metilfenil)-N-[5- [[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (109 mg, 33%) na forma de um sólido creme; 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,25 (1H, m), 2,08 (1H, dt), 2,19 (6H, s), 2,24 - 2,36 (4H, m), 3,48 (1H, dd), 3,54 - 3,65 (2H, m), 3,75 (1H, dd), 4,34 - 4,5 (1H, m), 6,86 (1H, dd), 7,18 (2H, d), 7,28 - 7,44 (3H, m), 7,66 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,12 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 439. Exemplo 10 (2S)-2-(dimetilamino)-2-(3-metilfenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida

[00126] HATU (416 mg, 1,09 mmol) foi adicionado a ácido (2S)-2- (dimetilamino)-2-(m-tolil)acético (Intermediário 27, 194 mg, 1,00 mmol), N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 240 mg, 0,91 mmol), DIPEA (0,159 mL, 0,91 mmol) em DMF (12 mL) a 21 °C sob nitrogênio. A solução resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos. O produto bruto foi purificado por cromatografia de troca iônica, usando uma coluna SCX. O produto desejado eluiu da coluna usando 1 M de NH3/MeOH e as frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem a uma goma. O produto bruto foi purificado por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0 até 10% de metanol em DCM). As frações puras foram evaporadas até à secura, trituradas com DCM/éter e filtradas, dando origem a (2S)-2-(dimetilamino)-2-(m-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (91 mg, 23%) na forma de um sólido creme; 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1,25 (1H, m), 2,08 (1H, dq), 2,19 - 2,42 (10H, m), 3,49 (1H, dd), 3,57 (2H, td), 3,75 (1H, dd), 4,29 - 4,46 (1H, m), 6,88 (1H, dd), 7,19 (1H, s), 7,26 - 7,41 (4H, m), 7,71 (1H, s), 8,48 (1H, dd), 12,30 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 439. Exemplos 11(a) e 11(b) (2S)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)- 1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida e (2R)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N-[5- [[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2- il]acetamida

[00127] N2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5- diamina (Intermediário 28, 0,09 g, 0,30 mmol) foi dissolvido em DMF (2 mL) sob N2 à t.a. Foi adicionado [2-(azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3- (trifluorometóxi)fenil]acetil]oxilítio (Intermediário 1, 0,09 g, 0,307 mmol), seguido de DIPEA (0,08 mL, 0,46 mmol). A mistura foi agitada durante 5 min antes da adição de HATU (139,9 mg, 0,36 mmol) e então durante 2 h à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH (1 mL) e passada por um cartucho SCX de 5 g, foi lavada com MeOH, então eluiu com 2 M de NH3 em MeOH. A fração básica foi evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (coluna SunFire C18, 5 μm, 50 mm x 19 mm, taxa de fluxo 25 mL/min). Razões decrescentemente polares de água e MeCN contendo ácido fórmico 0,1% foram usadas como fase móvel. As frações puras foram combinadas, evaporadas e absorvidas em um cartucho SCX de 1 g que foi lavado com MeOH, então eluiu com 2 M de NH3 em MeOH, dando origem a 2-(azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)- 1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida na forma de um sólido quase branco (88 mg, 53%). Os diastereômeros foram separados por HPLC preparativa quiral (coluna ChiralPak IA, sílica de 20 μm, 50 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento), MeCN/MeOH 90/10 a 120 mL/min. As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a:

[00128] Exemplo 11(a) como primeiro isômero a eluir (35,4 mg, 21%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) 1,97 - 2,1 (3H, m), 2,23 - 2,32 (1H, m), 3,06 - 3,17 (4H, m), 3,49 (1H, dd), 3,53 - 3,59 (2H, m), 3,75 (1H, dd), 4,26 (1H, s), 4,34 - 4,42 (1H, m), 6,86 (1H, d), 7,32 (1H, dd), 7,47 - 7,58 (2H, m), 7,64 (2H, dd), 8,48 (1H, d); m/z: ES+ [M+H]+ 539.

[00129] Exemplo 11(b) como segundo isômero a eluir (26,9 mg, 16%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) 1,96 - 2,11 (3H, m), 2,23 - 2,34 (1H, m), 3,07 - 3,17 (4H, m), 3,48 (1H, dd), 3,53 - 3,6 (2H, m), 3,75 (1H, dd), 4,26 (1H, s), 4,33 - 4,42 (1H, m), 6,85 (1H, dd), 7,32 (1H, dd), 7,47 - 7,57 (2H, m), 7,64 (2H, dd), 8,48 (1H, dd); m/z: ES+ [M+H]+ 539. Exemplos 12(a) e 12(b) (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida e (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida

[00130] N2-[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4- tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 6, 0,11 g, 0,38 mmol) e [2- (azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetil]oxilítio (Intermediário 21, 0,13 g, 0,46 mmol) foram dissolvidos em DMF (2 mL) à t.a. sob N2. A mistura foi agitada durante 5 mins antes da adição de DIPEA (0,34 mL, 1,943 mmol) e HATU (0,4 mL, 0,389 mmol), então à t.a. durante 2 h. A mistura bruta foi absorvida em uma coluna SCX de 5 g que foi lavada com MeOH, então eluiu com 2 M de NH3 em MeOH. A fração básica foi evaporada, dando origem a uma goma laranja. A fração básica foi evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (coluna SunFire C18, 5 μm, 50 mm x 19 mm, taxa de fluxo 25 mL/min). Razões decrescentemente polares de água e MeCN contendo ácido fórmico 0,1% foram usadas como fase móvel. As frações puras foram combinadas, evaporadas e absorvidas em um cartucho SCX de 1 g que foi lavado com MeOH, então eluiu com 2 M de NH3 em MeOH, dando origem a 2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida na forma de um sólido quase branco. Os diastereômeros foram separados por HPLC preparativa quiral (coluna Chiralpak IC, sílica de 20 μm, 50 mm de diâmetro, 250 mm de comprimento), heptano/EtOAc 20/80 (+ TEA 0,2%) a 120 mL/min. As frações contendo os compostos desejados foram evaporadas até à secura, dando origem a:

[00131] Exemplo 12(a) como primeiro isômero a eluir (28,60 mg, 13%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) 2,04 - 2,18 (3H, m), 2,34 (1H, dt), 3,20 (4H, dq), 3,54 (1H, dd), 3,58 - 3,67 (2H, m), 3,81 (1H, dd), 4,35 (1H, s), 4,4 - 4,48 (1H, m), 7,23 (1H, dd), 7,35 - 7,4 (1H, m), 7,42 (1H, dd), 7,53 - 7,55 (1H, m), 7,57 (2H, d), 7,71 (1H, d), 12,07 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 539.

[00132] Exemplo 12(b) como segundo isômero a eluir (13,5 mg, 6%). 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) 1,96 - 2,1 (3H, m), 2,28 (1H, dt), 3,13 (4H, dq), 3,46 (1H, dd), 3,51 - 3,59 (2H, m), 3,74 (1H, dd), 4,28 (1H, s), 4,34 - 4,41 (1H, m), 7,16 (1H, dd), 7,29 - 7,32 (1H, m), 7,34 (1H, dd), 7,47 - 7,49 (1H, m), 7,50 (2H, d), 7,64 (1H, d), 12,00 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 539. Exemplo 13 (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida

[00133] N2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5- diamina (Intermediário 1, 0,09 g, 0,30 mmol) foi dissolvido em DMF (2 mL) sob N2 à t.a. Foi adicionado ácido (2S)-2-(3-cianofenil)-2- (dimetilamino)acético (Intermediário 32, 0,06 g, 0,307 mmol), seguido de DIPEA (0,08 mL, 0,46 mmol). A mistura foi agitada durante 5 min antes da adição de HATU (139,9 mg, 0,368 mmol) e então foi deixada agitar à t.a. durante 90 min. A mistura reacional foi diluída com MeOH (1 mL) e passada por um cartucho SCX de 5 g, foi lavada com MeOH, então eluiu com 2 M de NH3 em MeOH. A fração básica foi evaporada e purificada por HPLC preparativa (coluna XBridge OBD C18, 5 μm, 50 mm x 19 mm, taxa de fluxo 25 mL/min, razões decrescentemente polares de água e MeCN contendo 0,3 mL/L de NH4OH foram usadas como fase móvel. As frações puras foram combinadas e evaporadas, dando origem a (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida na forma de um sólido bege (43 mg, 31%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 2,09 - 2,02 (1H, m), 2,14 (6H, d), 2,32 - 2,24 (1H, m), 3,60 - 3,43 (3H, m), 3,74 (1H, dd), 4,17 (1H, s), 4,38 (1H, q), 6,87 (1H, ddd), 7,33 (1H, ddd), 7,60 (1H, td), 7,71 (1H, d), 7,80 (2H, ddq), 7,87 (1H, t), 8,48 (1H, dt), 12,30 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 450. Exemplo 14 (2R)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida

[00134] DIPEA (0,199 mL, 1,14 mmol) foi adicionado a N2-[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 150 mg, 0,57 mmol), ácido (2R)-2-(dimetilamino)-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acético (Intermediário 38,150 mg, 0,57 mmol), EDC (218 mg, 1,14 mmol) e HOBT (87 mg, 0,57 mmol) em DMF (4 mL) a 25 °C. A mistura resultante foi agitada a 25°C durante 16 horas. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (coluna Waters XBridge Prep C18 OBD, sílica de 5 μm, 50 mm de diâmetro, 150 mm de comprimento), usando misturas decrescentemente polares de água e MeCN como eluentes. As frações contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura, dando origem a (2R)-2-(dimetilamino)-N-[5- [[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acetamida (15 mg, 5%) na forma de um sólido marrom. 1H RMN (300 MHz, CD3OD, 30°C) δ 2,27-2,35 (m, 1H), 2,442,56 (m, 1H), 2,88 (s, 6H), 3,72-3,84 (m, 3H), 3,97-4,03 (m, 1H), 4,544,59 (m, 1H), 5,16 (s, 1H), 7,50-7,73 (m, 5H), 7,84-7,88 (m, 1H), 8,53 (s, 1H); m/z: ES- [M-H]- 507. Exemplo 18 (2S)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida

[00135] DIPEA (0,199 mL, 1,14 mmol) foi adicionado a N2-[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermediário 1, 150 mg, 0,57 mmol), ácido (2S)-2-(dimetilamino)-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acético (Intermediário 39, 150 mg, 0,57 mmol), EDC (218 mg, 1,14 mmol) e HOBT (87 mg, 0,57 mmol) em DMF (4 mL) a 25 °C. A mistura resultante foi agitada a 25°C durante 16 horas. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (coluna Waters XBridge Prep C18 OBD, sílica de 5 μm, 50 mm de diâmetro, 150 mm de comprimento), usando misturas decrescentemente polares de água e MeCN como eluentes. As frações contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura, dando origem a (2S)-2-(dimetilamino)-N-[5- [[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acetamida (15 mg, 5%) na forma de um sólido marrom. 1H RMN (300 MHz, CD3OD, 30°C) δ 2,28-2,35 (m, 1H), 2,452,59 (m, 1H), 2,86 (s, 6H), 3,69-3,77 (m, 1H), 3,77-3,84 (m, 2H), 3,95- 4,01(m, 1H), 4,56-4,58 (m, 1H), 5,12 (s, 1H), 7,49-7,69 (m, 5H), 7,797,84 (m, 1H), 8,51 (d, 1H); m/z: ES- [M-H]- 507. Exemplos Adicionais Os compostos dos Exemplos seguintes foram preparados de um modo similar aos Exemplos acima.

Intermediário 1 N'-[(3R)-1-Piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina

[00136] Em um balão de fundo redondo de 1 L foi colocada uma solução de dicloridrato de (3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina (Intermediário 2, 10,5 g, 44,29 mmol) em DMF (400 mL), 5-bromo- 1,3,4-tiadiazol-2-amina (7,94 g, 44,10 mmol) e DIPEA (17,07 g, 132,08 mmol). A solução foi agitada durante 4 h a 80°C. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O produto bruto foi purificado por recristalização a partir de etanol/EtOAc, dando origem a N'-[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina na forma de um sólido amarelo claro (11 g, 94%). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2,04 (1H, td), 2,22 - 2,31 (1H, m), 3,43 - 3,62 (3H, m), 3,72 (1H, dd), 4,28 (1H, dq), 6,27 (2H, s), 6,86 (1H, dd), 7,07 (1H, d), 7,33 (1H, dd), 8,48 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 264,28.

[00137] O Intermediário 1 também foi preparado em larga escala de acordo com o seguinte procedimento alternativo: (R)-1-(Piridazin-3-il)pirrolidin-3-amina (Intermediário 3, forma de base livre, 25,5 g, 150,63 mmol) e 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (29,8 g, 165,70 mmol) com DIPEA (39,4 mL, 225,95 mmol) foram agitados como uma pasta em MeOH (200 mL) a 45°C. A pasta foi esfriada para 20°C e o sólido foi isolado por filtração a vácuo. 50 mL de MeOH foram usados como lavagem de deslocamento do bolo de filtração que então foi seco durante a noite no forno de vácuo a 40°C. O Intermediário 1 (32,9 g, 83%) foi obtido como um pó bege de fluxo livre. Intermediário 2 Dicloridrato de (3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina

[00138] Em um balão de fundo redondo de 1 L foi colocada uma solução de N-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (Intermediário 4, 20 g, 75,66 mmol) em dioxano (200 mL) e HCl concentrado (100 mL). A solução foi agitada durante 30 mins à t.a. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O produto bruto foi recristalizado a partir de MeOH/EtOAc na razão 1:2. Tal originou dicloridrato de (3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina na forma de um sólido quase branco (13,4 g, 75%). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 26°C) δ 2,25 - 2,43 (2H, m), 3,66 - 3,74 (1H, m), 3,78 - 3,90 (3H, m), 4,02 - 4,10 (1H, m), 7,75 (1H, d), 7,94 (1H, dd), 8,66 (1H, d), 8,77-8,98 (3H, m l). m/z: ES+ [M+H]+165.

[00139] O Intermediário 3 (forma de base livre) também foi preparado de acordo com o procedimento seguinte: N-[(3R)-1-(6-Cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (Intermediário 5, 20 g, 107,38 mmol) em piridina (400 mL) foi misturado com hidróxido de paládio em carbono (Catalisador de Pearlman, 27,5 g, 25,84 mmol) e 1-metil-1,4-ciclo-hexadieno (31,0 ml, 276,13 mmol) em MeOH (1375 mL). A mistura reacional foi então aquecida para 65 °C durante 90 minutos. Com conversão completa observada, a reação foi esfriada de novo para a temperatura ambiente e o catalisador foi removido por filtração. HCl 3 M em MeOH (184 mL, 552,27 mmol) foi então carregado na mistura reacional e a solução foi aquecida para 65°C durante 1 h. Com conversão completa observada, a solução reacional foi esfriada de novo para a temperatura ambiente e passada por colunas SCX 10 x 50 g que haviam pré-eluído com MeOH. O composto foi liberado do SCX usando NH3 1 M em MeOH. A solução resultante foi diluída com tolueno (1 L) e concentrada até à secura via evaporação rotativa, dando origem a um sólido de fluxo livre. (3R)-1- Piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina foi isolada a uma potência de 97% p/p na forma da base livre.

[00140] Intermediário 4 N-[(3R)-1-Piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila

[00141] Em um balão de fundo redondo de 2 L foi colocada uma solução de N-[(3R)-1-(6-cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (Intermediário 5, 23 g, 76,98 mmol) em MeOH (800 mL) e Paládio em carbono (2 g). O sistema foi purgado e mantido com Hidrogênio gasoso. A solução resultante foi agitada durante 4 h à t.a. Os sólidos foram separados por filtração. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo, dando origem a N-[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (20 g, 84%) na forma de um sólido amarelo. 1H RMN (300 MHz, CDCl3, 24°C) δ 1,44 (9H, s), 2,25 - 2,35 (2H, m), 3,48 - 3,56 (1H, m), 3,70 - 4,10 (3H, m), 4,35 - 4,42 (1H, m), 7,26 - 7,32 (1H, m), 7,70 - 7,75 (1H, m), 8,53 - 8,55 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 265. Intermediário 5 N-[(3R)-1-(6-Cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc- butila

[00142] Em um balão de fundo redondo de 1 L foi colocada uma solução de N-[(3R)-pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (20 g, 107,38 mmol) em piridina (400 mL) e 3,6-dicloropiridazina (16 g, 107,40 mmol). A solução resultante foi aquecida para o refluxo durante a noite. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O produto bruto foi purificado por recristalização a partir de etanol/Et2O na razão 1:3, dando origem a N-[(3R)-1-(6-cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (23 g, 72%) na forma de um sólido amarelo.

[00143] 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 1,45 (9H, s), 2,02 (1H, dq), 2,31 (1H, td), 3,41 (1H, dd), 3,54 - 3,70 (2H, m), 3,78 (1H, dd), 4,37 (1H, s), 4,76 (1H, s), 6,61 (1H, d), 7,17 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 299. Intermediário 6 N2-[(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5- diamina

[00144] DIPEA (3,48 mL, 19,96 mmol) foi adicionado a 5-bromo- 1,3,4-tiadiazol-2-amina (1,797 g, 9,98 mmol) e (3R)-1-(6-fluoropiridazin- 3-il)pirrolidin-3-amina (Intermediário 7, 2 g, 10,98 mmol) em DMF anidro (40 mL) à t.a. A solução resultante foi agitada a 80°C durante 4 h. O produto bruto foi purificado por cromatografia de troca iônica, usando uma coluna SCX. O produto desejado eluiu da coluna usando NH3 1 M em MeOH e as frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem a N2-[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4- tiadiazol-2,5-diamina (2,9 g, 103%) na forma de um sólido marrom. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 1,90 - 2,12 (1H, m), 2,23 (1H, dtd), 3,42 (1H, dd), 3,47 - 3,61 (2H, m), 3,69 (1H, dd), 4,25 (1H, dq), 6,25 (2H, s), 7,04 (1H, d), 7,14 (1H, dd), 7,33 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 282. Intermediário 7 (3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina

[00145] N-[(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (Intermediário 8, 6 g, 21,25 mmol) foi adicionado a DCM (70 mL) e TFA (14,00 mL) a 25 °C. A solução resultante foi agitada a 25 °C durante 4 h. O produto bruto foi purificado por cromatografia de troca iônica, usando uma coluna SCX. O produto desejado eluiu da coluna usando NH3 1 M em MeOH e as frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem a (3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina (2,0 g, 52%) na forma de um sólido gomoso amarelo pálido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 1,55 - 1,83 (1H, m), 1,98 - 2,13 (1H, m), 2,89 - 3,14 (1H, m), 3,29 - 3,43 (1H, m), 3,54 (3H, ddt), 7,06 (1H, dd), 7,30 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 183. Intermediário 8 N-[(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc- butila

[00146] Uma mistura de 3,6-difluoropiridazina (6,06 g, 52,21 mmol), N-[(3R)-pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butila (9,72 g, 52,21 mmol), DIPEA (22,80 mL, 130,53 mmol) e n-butanol (140 mL) foi agitada a 130 °C durante 10 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (750 mL) e lavada duas vezes com água (150 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada, dando origem a produto bruto. Este foi então dissolvido em DCM e o produto bruto foi purificado por FCC (SiO2, 30 - 65% de EtOAc em heptanos). As frações puras foram evaporadas até à secura, dando origem a N-[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin- 3-il]carbamato de terc-butila (15 g, 102%) na forma de um sólido creme. 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 1,46 (9H, s), 1,91 - 2,13 (1H, m), 2,32 (1H, dq), 3,40 (1H, dd), 3,56 - 3,72 (2H, m), 3,78 (1H, dd), 4,37 (1H, s), 4,70 (1H, s), 6,78 (1H, dd), 6,98 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 283. Intermediário 9 Ácido 2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)acético

[00147] Dimetilamina 2 M em THF (0,623 mL, 1,25 mmol) foi adicionado a ácido 2-bromo-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acético (Intermediário 10, 350 mg, 1,25 mmol) e DIPEA (0,665 mL, 3,74 mmol) em MeCN (8 mL) a 21 °C sob nitrogênio. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A reação foi então evaporada, dando origem a ácido 2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)acético bruto na forma de uma goma marrom que foi usada bruta para passos subsequentes; m/z: ES+ [M+H]+ 246. Intermediário 10 Ácido 2-bromo-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acético

[00148] Ácido 2-(3-(difluorometóxi)fenil)acético (263 mg, 1,30 mmol) e NBS (255 mg, 1,43 mmol) foram dissolvidos em clorofórmio (10 mL) e aquecidos a 80°C. A este sistema foi adicionado (E)-2,2'-(diazeno-1,2- di-il)bis(2-metilpropanonitrila) (10,68 mg, 0,07 mmol) e a reação foi agitada a 80 °C durante 3 horas. Mais NBS foi então adicionado (120 mg) e a reação foi deixada refluir durante mais 1,5 horas. A reação foi então deixada à temperatura ambiente durante a noite. Mais NBS foi adicionado (60 mg) e a reação foi aquecida a 80 °C durante mais 1 hora. A reação foi esfriada para a t.a. e o clorofórmio foi removido sob pressão reduzida, restando ácido 2-bromo-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acético bruto que foi usado bruto em reações subsequentes. m/z: ES- [M-H]- 279. Intermediário 11 Ácido 2-(dimetilamino)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético

[00149] Dimetilamina 2 M em THF (7,94 mL, 15,88 mmol) foi adicionado a ácido 2-bromo-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético (Intermediário 12, 4,75 g, 15,88 mmol) e DIPEA (8,48 mL, 47,65 mmol) em MeCN (75 mL) a 21°C, dando origem a uma ligeira exotermia. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A reação foi então evaporada, dando origem a ácido 2-(dimetilamino)- 2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético na forma de uma goma marrom que foi usada bruta no passo seguinte. m/z: ES+ [M+H]+ 264. Intermediário 12 Ácido 2-bromo-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético

[00150] Ácido 2-(3-(trifluorometóxi)fenil)acético (3,5 g, 15,90 mmol) e NBS (3,11 g, 17,49 mmol) foram dissolvidos em clorofórmio (100 mL) e aquecidos a 80°C. A este sistema foi adicionado (E)-2,2'-(diazeno-1,2- di-il)bis(2-metilpropanonitrila) (0,131 g, 0,79 mmol) e a reação foi agitada a 80°C durante 6 horas. A reação foi então deixada à temperatura ambiente durante o fim de semana. O solvente foi então evaporado, dando origem a ácido 2-bromo-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acético bruto que foi usado sem qualquer purificação adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 297. Intermediário 13 Ácido 2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]acético

[00151] Uma solução de hidróxido de lítio mono-hidratado (96 mg, 2,29 mmol) em água (3 mL) foi adicionada a uma solução de 2-(azetidin- 1-il)-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila (Intermediário 14, 310 mg, 1,14 mmol) em metanol (6 mL) e a mistura foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi então ajustada para pH 4 por adição de HCl aquoso 2 M. A solução foi passada por um cartucho SCX-2 de 20 g, eluindo com metanol seguido de uma solução de amônia 1 N em metanol para separar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a ácido 2-(azetidin-1- il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]acético (290 mg, 99%) na forma de uma goma; 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,18 (2H, p), 3,56 (2H, q), 3,75 (2H, q), 4,44 (1H, s), 7,12 (1H, dd), 7,17 (1H, s), 7,20 (1H, t), 7,23 (1H, d), 7,38 - 7,43 (1H, m); m/z: ES+ [M+H]+ 258. Intermediário 14 2-(Azetidin-1-il)-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila

[00152] Uma solução de trietilamina (263 μL, 1,89 mmol) e azetidina (98 mg, 1,72 mmol) em MeCN (2 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução a 0°C de 2-bromo-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila (Intermediário 15, 507 mg, 1,72 mmol) em MeCN (5 mL). A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido a partição entre salmoura aquosa e acetato de etila, a camada orgânica foi seca (MgSO4), filtrada e evaporada sob pressão reduzida, dando origem a 2- (azetidin-1-il)-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila (310 mg, 67%) na forma de um líquido; 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 2,12 (2H, p), 3,17 (2H, q), 3,28 (2H, q), 3,68 (3H, s), 4,02 (1H, s), 6,52 (1H, t), 7,04 - 7,08 (1H, m), 7,20 (1H, d), 7,25 - 7,28 (1H, m), 7,33 (1H, t); m/z: ES+ [M+H]+ 272. Intermediário 15 2-Bromo-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila

[00153] Uma mistura de 2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila (Intermediário 16, 1,1 g, 5,09 mmol) e NBS (0,951 g, 5,34 mmol) e (E)- 2,2'-(diazeno-1,2-di-il)bis(2-metilpropanonitrila) (0,042 g, 0,25 mmol) em tetracloreto de carbono (20 mL) foi aquecida para o refluxo durante 4 horas e então foi esfriada para a temperatura ambiente. O sólido foi separado por filtração e descartado e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. A purificação foi efetuada por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0-5% de acetato de etila em heptano). As frações contendo produto foram evaporadas sob pressão reduzida, dando origem a 2-bromo-2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila (0,830 g, 55%) na forma de um líquido. 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 3,80 (3H, s), 5,32 (1H, s), 6,52 (1H, t), 7,11 (1H, dt), 7,32 - 7,4 (3H, m). m/z: GC EI M+ 293,9701.

[00154] Intermediário 16 2-(3-(Difluorometóxi)fenil)acetato de metila

[00155] Uma solução de ácido 2-(3-(difluorometóxi)fenil)acético (1 g, 4,95 mmol) e ácido sulfúrico (10,87 μL, 0,20 mmol) em metanol (30 mL) refluiu durante 2 horas e então foi esfriada para a temperatura ambiente. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi submetido a partição entre acetato de etila e bicarbonato de sódio aquoso. A camada orgânica foi seca (MgSO4), filtrada e evaporada sob pressão reduzida, dando origem a 2-(3-(difluorometóxi)fenil)acetato de metila (1,1 g, 103%) na forma de um óleo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 3,63 (2H, s), 3,70 (3H, s), 6,50 (1H, t), 7,01 - 7,07 (2H, m), 7,11 - 7,15 (1H, m), 7,31 (1H, t). m/z: GC EI M+ 216,0593. Intermediário 17 Ácido 2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)acético

[00156] Uma solução de hidróxido de lítio (64,1 mg, 2,68 mmol) em água (3 mL) foi adicionada a uma solução de 2-(azetidin-1-il)-2-(3- metoxifenil)acetato de metila (Intermediário 18, 420 mg, 1,79 mmol) em metanol (6 mL) e a mistura foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi então ajustada para pH 4 por adição de HCl aquoso 2 M. A solução foi passada por um cartucho SCX-2 de 20 g, eluindo com metanol seguido de uma solução de amônia 1 N em metanol para separar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a ácido 2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)acético (380 mg, 96%) na forma de um sólido; 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,14 - 2,24 (2H, m), 3,58 (2H, q), 3,74 (3H, s), 3,79 (2H, q), 4,40 (1H, s), 6,85 - 6,89 (1H, m), 6,91 - 6,95 (2H, m), 7,25 (1H, t); m/z: ES+ [M+H]+ 222. Intermediário 18 2-(Azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)acetato de metila

[00157] Uma solução de trietilamina (284 μL, 2,04 mmol) e azetidina (106 mg, 1,85 mmol) em acetonitrila (2 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução a 0°C de 2-bromo-2-(3-metoxifenil)acetato de metila (Intermediário 19, 480 mg, 1,85 mmol) em MeCN (5 mL). A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido a partição entre salmoura aquosa e acetato de etila, a camada orgânica foi seca (MgSO4), filtrada e evaporada sob pressão reduzida, dando origem a 2- (azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)acetato de metila (420 mg, 96%) na forma de um líquido; 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 2,11 (2H, p), 3,16 (2H, q), 3,30 (2H, q), 3,67 (3H, s), 3,81 (3H, s), 3,99 (1H, s), 6,82 - 6,86 (1H, m), 6,96 - 7 (2H, m), 7,23 (1H, t); m/z: ES+ [M+H]+ 236. Intermediário 19 2-Bromo-2-(3-metoxifenil)acetato de metila

[00158] Uma mistura de 2-(3-metoxifenil)acetato de metila (550 mg, 3,05 mmol) e NBS (570 mg, 3,20 mmol) e (E)-2,2'-(diazeno-1,2-di- il)bis(2-metilpropanonitrila) (25,06 mg, 0,15 mmol) em tetracloreto de carbono (15 mL) foi aquecida para o refluxo durante 4 horas e então foi esfriada para a temperatura ambiente. O sólido foi separado por filtração e descartado e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. A purificação foi efetuada por cromatografia Flash em sílica (gradiente de eluição 0-10% de acetato de etila em heptano). As frações contendo produto foram evaporadas sob pressão reduzida, dando origem a 2- bromo-2-(3-metoxifenil)acetato de metila (490 mg, 62%) na forma de um líquido. 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 3,79 (3H, s), 3,82 (3H, s), 5,33 (1H, s), 6,88 (1H, ddd), 7,07 - 7,12 (2H, m), 7,23 - 7,29 (1H, m). m/z: GC EI M+ 257,9882. Intermediário 20 Ácido 2-(azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético

[00159] Uma solução de hidróxido de lítio mono-hidratado (116 mg, 2,77 mmol) em água (3 mL) foi adicionada a uma solução de 2-(azetidin- 1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila (Intermediário 22, 400 mg, 1,38 mmol) em metanol (6 mL) e a mistura foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi então ajustada para pH 4 por adição de HCl aquoso 2 M. A solução foi passada por um cartucho SCX-2 de 20 g, eluindo com metanol seguido de uma solução de amônia 1 N em metanol para separar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida para se obter ácido 2-(azetidin-1-il)-2- [3-(trifluorometóxi)fenil]acético (380 mg, 100%) na forma de uma goma. 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,19 (2H, p), 3,5 - 3,6 (2H, m), 3,75 (2H, q), 4,49 (1H, s), 7,31 (1H, d), 7,35 (1H, s), 7,39 (1H, d), 7,50 (1H, t); m/z: ES+ [M+H]+ 276. Intermediário 21 [2-(Azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetil]oxilítio

[00160] 2-(Azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila (Intermediário 22, 0,94 g, 3,25 mmol) e hidróxido de lítio mono- hidratado (0,27 g, 6,5 mmol) foram dissolvidos em uma mistura de metanol (10 mL) e água (5 mL). A reação foi agitada durante 3 h à t.a. A mistura reacional foi evaporada e seca in vacuo, dando origem a [2- (azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetil]oxilítio na forma de um sólido amarelo pálido (944 mg, 103%).

[00161] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,79 (p, J = 6,9 Hz, 2H) 2,87 (2H, q), 3,01 (2H, q), 3,52 (1H, s), 7,02 (1H, ddt), 7,30 - 7,20 (3H, m). m/z: ES- [M+H]- 275. Intermediário 22 2-(Azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila

[00162] Uma solução de azetidina fresca (0,22 mL, 3,19 mmol) e trietilamina (0,49 mL, 3,51 mmol) em MeCN (4 mL) foi adicionada gota a gota a 2-bromo-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila (Intermediário 23, 1,0 g, 3,19 mmol) em MeCN (10 mL) esfriado em um banho de gelo sob N2. A mistura foi deixada aquecer para a t.a. e foi agitada durante 5 h. A mistura reacional foi evaporada até à secura e o resíduo foi submetido a partição entre EtOAc e salmoura (75 mL de cada). As camadas orgânicas foram secas (MgSO4) e evaporadas, dando origem a 2-(azetidin-1-il)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila na forma de um óleo laranja (940 mg, 101%). 1H RMN (400 MHz, CDCh) δ 2,13 (2H, q), 3,17 (2H, td), 3,34 - 3,24 (2H, m), 3,69 (3H, s), 4,04 (1H, s), 7,16 (1H, m), 7,31 (1H, dq), 7,40 - 7,33 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 290. Intermediário 23 2-Bromo-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila

[00163] Uma mistura de 2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila (3,6 g, 15,37 mmol), N-bromossuccinimida (2,87 g, 16,14 mmol) e AIBN (0,13 g, 0,76 mmol) em tetracloreto de carbono (50 mL) foi aquecida para o refluxo durante 3 h. Foi deixada esfriar para a temperatura ambiente e o precipitado foi removido por filtração em Celite. O filtrado foi evaporado em sílica e purificado por cromatografia em coluna Flash (SiO2, eluição com gradiente 100% de ciclo-hexano aumentando gradualmente para 10% de acetato de etila em ciclo-hexano). As frações puras foram evaporadas, dando origem a 2-bromo-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acetato de metila na forma de um óleo amarelo pálido (3,97 g, 82%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 3,81 (3H, s), 5,33 (1H, s), 7,22 (1H, ddq), 7,51 - 7,37 (3H, m). Intermediário 24 Ácido 2-metil-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxílico, HCl

[00164] A uma suspensão de ácido 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-1- carboxílico (Intermediário 25, 2,63 g, 14,84 mmol) em MeOH (150 mL) foi adicionado ácido acético (20 mL), ácido clorídrico 6 N (2,474 mL, 14,84 mmol), seguido de paládio em carbono 10% (350 mg, 3,29 mmol) e formaldeído (1,506 g, 18,55 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera (balão) de hidrogênio durante 18 horas. O catalisador foi separado por filtração e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a ácido 2-metil-1,2,3,4- tetra-hidroisoquinolina-1-carboxílico (3,15 g, 93%) na forma de um sal cloridrato sólido; 1H RMN (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2,89 (3H, s), 3,13 (2H, t), 3,42 - 3,49 (1H, m), 3,76 - 3,85 (1H, m), 5,33 (1H, s), 7,27 - 7,38 (3H, m), 7,41 - 7,45 (1H, m); m/z: ES+ [M+H]+ 192. Intermediário 25 Ácido 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-1-carboxílico

[00165] Uma bomba de aço de 300 mL foi carregada com ácido isoquinolina-1-carboxílico (3 g, 17,32 mmol), ácido acético (100 mL) e óxido de platina(IV) (0,2 g, 0,88 mmol). A mistura resultante foi hidrogenada a 7 Bar de pressão durante 18 horas com agitação mecânica. Foi diluída com MeOH (80 mL), filtrada em Celite e enxaguada com MeOH e ácido acético. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a um sólido cinzento claro. Trituração com MeOH originou ácido 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-1-carboxílico (2,63 g, 86%) na forma de um sólido cinzento claro que foi usado sem qualquer purificação adicional. Intermediário 26 Ácido (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-metilfenil)acético

[00166] Em um balão de fundo redondo de 1 L purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio foi colocado ácido 2-amino-2- (p-tolil)acético (36 g, 217,93 mmol, 1,00 equiv), cloreto de hidrogênio (120 mL, 1 N, 3,95 mol, 18,10 equiv), metanol (120 mL, 2,96 mol, 13,60 equiv), Paraformaldeído (37% em H2O, 120 mL) e paládio em carbono (36 g, 338,28 mmol, 1,60 equiv). A solução resultante foi agitada durante 48 h à temperatura ambiente sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). Os sólidos foram separados por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo. A solução resultante foi diluída com 1500 mL de metanol. O valor do pH da solução foi ajustado para 6 com MeONa. Os sólidos foram separados por filtração e o filtrado resultante foi concentrado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por SFC preparativa (coluna, CHIRALPAK AD-H SFC, 5 x 25 cm, 5 μm; fase móvel, CO2 (55%), MEOH (DEA 0,2%) (45%); Detector, UV 220 nm. Tal originou ácido (2S)-2-(dimetilamino)-2- (p-tolil)acético (10 g, 24%) na forma de um sólido branco; 1H RMN (300 MHz, CD3OD, 25°C) δ 2,32 (3H, s), 2,60 (6H, s), 7,19 - 7,21 (2H, d), 4,22 (1H, s), 7,37 - 7,40 (2H, d); m/z: ES+ [M+H]+ 194. Intermediário 27 Ácido (2S)-2-(dimetilamino)-2-(3-metilfenil)acético

[00167] Em um balão de fundo redondo de 1 L purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio foi colocado ácido 2-amino-2- (4-metilfenil)acético (36 g, 217,93 mmol, 1,00 equiv), cloreto de hidrogênio (120 mL, 1 N, 2,60 mol, 12,00 equiv), metanol (120 mL, 2,96 mol, 13,60 equiv), Paraformaldeído (37% em H2O, 120 mL) e paládio em carbono (36 g, 338,28 mmol, 1,60 equiv). A solução resultante foi agitada durante 48 h à temperatura ambiente sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). Os sólidos foram separados por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo. A solução resultante foi diluída com metanol (1500 mL). O valor do pH da solução foi ajustado para 6 com MeONa. Os sólidos foram separados por filtração e o filtrado resultante foi concentrado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por SFC preparativa (coluna, CHIRALPAK AD-H SFC, 5 x 25 cm, 5 μm); fase móvel, CO2 (60%), MEOH (DEA 0,2%) (40%); detector, UV 220 nm. Tal originou ácido (2S)-2-(dimetilamino)-2-(3-metilfenil)acético (10 g, 24%) na forma de um sólido branco; 1H RMN (300MHz, CD3OD, 27 °C) δ 2,37 (3H, s), 2,62 (6H, s), 4,20 (1H, s), 7,21 - 7,38 (4H, m); m/z: ES+ [M+H]+ 194. Intermediário 28 [2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetil]oxilítio

[00168] 2-(Azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)acetato de metila (Intermediário 29, 0,76 g, 3,25 mmol) e hidróxido de lítio mono- hidratado (0,1 g, 2,49 mmol) foram dissolvidos em uma mistura de metanol (5 mL) e água (2 mL). A reação foi agitada durante 2 h à t.a., então foi evaporada sob pressão reduzida e seca in vacuo durante o fim de semana, dando origem a [2-(azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3- (trifluorometóxi)fenil]acetil]oxilítio na forma de um sólido amarelo pálido (0,48 g, 97%).

[00169] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,72 (2H, p) 2,80 (2H, q), 2,93 (2H, q), 3,44 (1H, s), 7,16 (1H, dd), 7,24 (1H, ddd), 7,34 (1H, dt). m/z: ES- [M-H]- 294. Intermediário 29 2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila

[00170] Uma solução de azetidina fresca (0,12 mL, 1,81 mmol) e trietilamina (0,28 mL, 1,99 mmol) em MeCN (5 mL) foi adicionada gota a gota a 2-bromo-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila (Intermediário 30, 0,6 g, 1,812 mmol) em MeCN (12 mL) esfriado em um banho de gelo sob N2. A mistura foi deixada aquecer para a t.a. e foi agitada durante 2 h. A mistura reacional foi evaporada até à secura e o resíduo foi submetido a partição entre EtOAc e salmoura (100 mL de cada). As camadas orgânicas foram secas (MgSO4) e evaporadas, dando origem a 2-(azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3- (trifluorometóxi)fenil]acetato de metila na forma de uma goma amarela (0,51 g, 93%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2,14 (2H, q) 3,17 (2H, td), 3,27 (2H, td), 3,69 (3H, s), 4,00 (1H, s), 7,20 - 7,14 (1H, m), 7,35 (1H, dddd), 7,43 (1H, ddd). m/z: ES+ [M+H]+ 308. Intermediário 30 2-Bromo-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila

[00171] 2-[4-Fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila (Intermediário 31, 0,65 g, 2,578 mmol) e N-bromossuccinimida (4,08 g, 22,919 mmol) foram pesados em um balão de fundo redondo e foi adicionado 2,2-azobis(2-metilpropionitrila) (AIBN, 0,02 g, 0,129 mmol) em tetracloreto de carbono (6 mL). A reação foi aquecida para o refluxo durante 4 horas e deixada esfriar para a temperatura ambiente. O precipitado foi separado por filtração e a solução foi tratada com sílica e evaporada sob pressão reduzida e foi purificada por cromatografia em coluna Flash eluindo com 100% de ciclo-hexano gradualmente aumentando para 30% de EtOAc em ciclo-hexano. As frações apropriadas foram evaporadas sob pressão reduzida, dando origem a 2-bromo-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila na forma de um óleo amarelo pálido (1,1 g, 129%).

[00172] 1H RMN (400 MHz, CDCl3, 25°C) δ 3,81 (3H, s), 5,29 (1H, s), 7,17 - 7,24 (1H, m,), 7,46 - 7,52 (1H, m), 7,53 - 7,59 (1H, m). Intermediário 31 2-[4-Fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila

[00173] Ácido 4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenilacético (1,0 g, 4,199 mmol) foi suspenso em metanol (10 mL) e tratado com ácido sulfúrico (0,07 mL, 0,84 mmol) e aquecido a 45°C durante 2 horas. A mistura reacional foi deixada esfriar para a temperatura ambiente e o metanol foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com salmoura (20 mL) e então extraído com EtOAc (3 x 20 mL). Os extratos de EtOAc combinados foram lavados com salmoura (30 mL), secos em MgSO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida, dando origem a 2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]acetato de metila (0,65 g, 61%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,63 (3H, s), 3,78 (2H, s), 7,33 - 7,39 (1H, m), 7,42 - 7,53 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 253. Intermediário 32 Ácido (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)acético

[00174] Em um balão de fundo redondo de 3 tubuladuras de 500 mL foi colocada uma solução de (2S)-2-(3-cianofenil)-2- (dimetilamino)acetato de etila (Intermediário 33, 18 g, 77,49 mmol, 1,00 equiv) em tetra-hidrofurano (200 mL) e uma solução de LiOH (3,56 g, 148,66 mmol, 2,00 equiv) em água (100 mL). A solução resultante foi agitada durante 3 h a 25°C. A solução resultante foi extraída com 2x100 mL de diclorometano e as camadas orgânicas foram combinadas. O valor de pH da solução foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogênio aquoso (1 mol/L). A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. A mistura resultante foi lavada com 2x100 mL de acetona. Tal originou 15 g (95%) de ácido (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)acético na forma de um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 2,46 (6H, s), 4,28 (1H, s), 7,61-7,58 (1H, t), 7,77-7,75 (1H, d), 7,86-7,81 (2H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 205. Intermediário 33 (2S)-2-(3-Cianofenil)-2-(dimetilamino)acetato de etila

[00175] Em um balão de fundo redondo de 3 tubuladuras de 1000 mL foi colocada uma solução de (2S)-2-amino-2-(3-cianofenil)acetato de etila (Intermediário 34, 20 g, 97,93 mmol, 1,00 equiv) em metanol (200 mL), uma solução de formaldeído (44,1 g, 1,47 mol, 6,00 equiv) em água e NaBH3CN (18,2 g, 289,62 mmol, 3,00 equiv). A solução resultante foi agitada durante a noite a 25°C. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com acetato de etila/éter de petróleo (1/1). Tal originou 18 g (79%) de (2S)-2-(3- cianofenil)-2-(dimetilamino)acetato de etila na forma de um sólido branco. Intermediário 34 (2S)-2-Amino-2-(3-cianofenil)acetato de etila

[00176] Em um balão de fundo redondo de 3 tubuladuras de 1000 mL foi colocada uma solução de (2S)-2-(3-cianofenil)-2-[(2-metilpropano-2- sulfinil)amino]acetato de etila (Intermediário 35, 40,00 g, 129,70 mmol, 1,00 equiv) em 1,4-dioxano (100 mL) e uma solução de cloreto de hidrogênio (g) em 1,4-dioxano (200 mL). A solução resultante foi agitada durante a noite a 25 °C. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. A mistura resultante foi lavada com 1x100 mL de MTBE. Tal originou 20 g (76%) de (2S)-2-amino-2-(3-cianofenil)acetato de etila na forma de um sólido amarelo claro. Intermediário 35 (2S)-2-(3-Cianofenil)-2-[(2-metilpropano-2-sulfinil)amino]acetato

[00177] Em um balão de fundo redondo de 4 tubuladuras de 2000 mL foi colocada uma solução de (2Z)-2-(3-cianofenil)-2-[[(S)-2- metilpropano-2-sulfinil]imino]acetato de etila (Intermediário 36, 50 g, 163,20 mmol, 1,00 equiv) em tetra-hidrofurano (1000 mL). Tal foi seguido da adição de L-Selectrida (196 mL, 917,61 mmol, 1,20 equiv) gota a gota com agitação a -78°C. A solução resultante foi agitada durante 5 h a -78°C. A reação foi então extinta pela adição de 500 mL de NH4Cl aquoso. A solução resultante foi extraída com 3x350 mL de acetato de etila e as camadas orgânicas foram combinadas. A mistura resultante foi lavada com 1x200 mL de salmoura. A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. Tal originou 40 g (79%) de (2S)-2-(3-cianofenil)-2-[(2-metilpropano-2- sulfinil)amino]acetato de etila na forma de um óleo amarelo. Intermediário 36 (2Z)-2-(3-Cianofenil)-2-[[(S)-2-metilpropano-2-sulfinil]imino]acetato de etila

[00178] Em um balão de fundo redondo de 4 tubuladuras de 3000 mL foi colocada uma solução de 2-(3-cianofenil)-2-oxoacetato de etila (Intermediário 37, 80 g, 393,71 mmol, 1,00 equiv) em tetra-hidrofurano (800 mL), (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida (52,5 g, 433,16 mmol, 1,10 equiv) e tetraetoxititânio (134,7 g, 590,51 mmol, 1,50 equiv). A solução resultante foi agitada durante a noite a 65°C. A reação foi então extinta pela adição de 200 mL de NaCl aq. Os sólidos foram separados por filtração. A solução resultante foi extraída com 3x250 mL de acetato de etila e as camadas orgânicas foram combinadas. A mistura resultante foi lavada com 1x200 mL de salmoura. A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel e eluiu com acetato de etila/éter de petróleo (1/2). Tal originou 50 g (41%) de (2Z)-2-(3-cianofenil)-2-[[(S)-2-metilpropano- 2-sulfinil]imino]acetato de etila na forma de um óleo amarelo. Intermediário 37 2-(3-Cianofenil)-2-oxoacetato de etila

[00179] Em um balão de fundo redondo de 4 tubuladuras de 5000 mL purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio foi colocada uma solução de 3-bromobenzonitrila (200 g, 1,10 mol, 1,00 equiv) em tetra-hidrofurano (1000 mL). Tal foi seguido da adição de i-PrMgCl (663 mL, 5,38 mol, 1,20 equiv) gota a gota com agitação a 0°C. A solução resultante foi agitada durante 2 h a 0°C. A este sistema foi adicionado oxalato de dietila (193,6 g, 1,32 mol, 1,20 equiv) gota a gota com agitação a -40°C. A solução resultante foi agitada durante 1 h a -40°C. A reação foi então extinta pela adição de 800 mL de HCl. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O valor de pH da solução foi ajustado para 8-9 com bicarbonato de sódio. A solução resultante foi extraída com 3x500 mL de acetato de etila e as camadas orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel eluindo com acetato de etila/éter de petróleo (1/1). Tal originou 80 g (36%) de 2-(3-cianofenil)-2-oxoacetato de etila na forma de um óleo amarelo. Intermediário 38 Ácido (2R)-2-(dimetilamino)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético

[00180] Ácido (2R)-2-amino-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético (1 g, 4,25 mmol), formaldeído (1,277 g, 42,52 mmol) e Pd-C (0,045 g, 0,43 mmol) em MeOH (30 mL) e ácido clorídrico (1 N) (2 mL) foram agitados sob uma atmosfera de hidrogênio a pressão e 40°C durante 16 horas. A mistura reacional foi filtrada em Celite. O sólido foi lavado com MeOH (20 mL). O filtrado foi combinado e evaporado, dando origem a ácido (2S)-2-(dimetilamino)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético (1 g, 89%) na forma de um sólido branco; m/z: ES+ [M+H]+ 264. Intermediário 39 Ácido (2S)-2-(dimetilamino)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético

[00181] Ácido (2S)-2-amino-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético (1 g, 4,25 mmol), formaldeído (1,277 g, 42,52 mmol) e Pd-C (0,045 g, 0,43 mmol) em MeOH (30 mL) e ácido clorídrico (1 N) (2 mL) foram agitados sob uma atmosfera de hidrogênio a pressão e 40 °C durante 16 horas. A mistura reacional foi filtrada em Celite. O sólido foi lavado com MeOH (20 mL). O filtrado foi combinado e evaporado, dando origem a ácido (2R)-2-(dimetilamino)-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acético (1 g, 89%) na forma de um sólido branco; m/z: ES+ [M+H]+ 264.

Ensaios Biológicos

[00182] Os ensaios seguintes foram usados para medir os efeitos dos compostos descritos aqui: a) Ensaio de Potência com Enzima GLS; b) Ensaio de Potência em Células com GLS; c) Ensaio de Proliferação Celular com GLS. Durante a descrição dos ensaios, geralmente: i. Foram usadas as seguintes abreviaturas: CO2 = Dióxido de carbono; DMEM = Meio de Eagle Modificado de Dulbecco; DMSO = Dimetilsulfóxido; EDTA = Ácido etilenodiaminotetra-acético; EGTA = Ácido etilenoglicoltetra-acético; FCS = Soro fetal de vitelo; h = Hora(s); NBS = Superfície não ligante; SDS = Dodecilsulfato de sódio; TRIS = Tris(Hidroximetil)aminometano. ii. Os valores IC50 foram calculados usando um modelo de ajuste inteligente na Genedata. O valor IC50 foi a concentração do composto de teste que inibiu 50% da atividade biológica.

[00183] Ensaio a): Ensaio de Potência com Enzima GLS

[00184] Um ensaio acoplado de Glutamato Oxidase/AmplexRed foi usado para medir a capacidade de compostos se ligarem e inibirem a atividade de GLS1 in vitro. Proteína GLS com cauda 6His (aminoácidos 63-669) expressa em E. Coli foi purificada e armazenada a -80 °C em alíquotas. A GLS1 foi diluída para 2 x concentração de trabalho e incubada à temperatura ambiente para permitir que as formas tetramérica/dimérica alcançassem o estado estacionário. As medições do ensaio foram realizadas em tampão compreendendo TRIS 50 mM pH 7,8, NaPO4 100 mM, pH 7,8, Tween20 0,001% v/v. A proteína GLS1 recombinante purificada foi diluída em tampão de ensaio para 12 nM e pré-incubada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Os compostos de teste foram preparados por diluição em DMSO 100%, dando origem ao intervalo correto de doses para resposta à concentração de 12 pontos e um volume apropriado (2,5-60 nL) distribuído em placas de microensaio de 384 poços (código do produto Greiner 784900) usando um distribuidor acústico Labcyte Echo 555. A concentração de DMSO foi mantida a 2% por retroenchimento com solução de DMSO. 3 μL de proteína GLS1 diluída (12 nM) foram então distribuídos em cada poço usando um distribuidor automatizado BioRaptr (Beckman-Coulter) e o sistema foi incubado durante15 minutos à temperatura ambiente. 3 μL de glutamina 100 mM diluída em tampão de ensaio foram então adicionados e a reação foi incubada à temperatura ambiente durante 60 minutos. A reação foi então terminada por adição de 6-(2-bromoetinil)-2,3-dimetil-quinazolin-4-ona 45 μM, Amplex Red 75 μM, 0,375 unidades/mL de Peroxidase de Rábano Picante, 0,12 unidades/mL de Glutamato Oxidase em TRIS 100 mM pH 7,5. Após 30 minutos à temperatura ambiente no escuro, as placas foram lidas em um Perkin Elmer EnVision usando filtros ópticos de 535/590 nm e os dados brutos foram analisados usando Genedata para gerar valores IC50. Uma versão de artefato do ensaio na qual a proteína GLS com cauda 6His e glutamina foram substituídas por tampão de ensaio também foi usada para excluir efeitos inespecíficos nos componentes do ensaio.

[00185] Ensaio b): Ensaio de Potência em Células com GLS

[00186] Os compostos foram avaliados quanto ao seu potencial de inibir a atividade de GLS celular por uso de um ensaio acoplado de PC3 medindo a depleção de glutamato celular. Os compostos de teste foram preparados por diluição em DMSO 100%, dando origem ao intervalo correto de doses para resposta à concentração de 12 pontos e um volume apropriado (5-120 nL) distribuído em placas de microensaio de 384 poços (código do produto Corning 3712) usando um distribuidor acústico Labcyte Echo 555. A concentração de DMSO foi mantida a 0,3% por retroenchimento com solução de DMSO. Células PC3 foram cultivadas em DMEM desprovido de fenol, FCS dialisado 10%, glutamina 2 mM e, após dispersão por tripsinação, foram plaqueadas a 5,6 x103 células por poço em 40 μL de meio de crescimento diretamente nas placas de ensaio de 384 poços contendo composto distribuído. Após incubação durante 6 h a 37 °C, 5% de CO2, o meio de crescimento foi aspirado e as células foram submetidas a lise em 15 μL de tampão contendo TRIS 10 mM pH 7,4, NaCl 100 mM, EDTA 1 mM, EGTA 1 mM, NaF 1 mM, Na4P2O7 20 mM, Na3VO4 2 mM, Triton X-100 1%, glicerol 10%, SDS 0,1% e desoxicolato 0,5%. 4 μL de lisado celular foram então transferidos para uma placa NBS de 384 poços (código do produto Corning 3575) e foram adicionados 35 μL de Amplex Red 27,5 μM, 0,1375 U/mL de Peroxidase de Rábano Picante, 0,044 U/mL de glutamato oxidase, TRIS 100 mM pH 7,5. Após 30 minutos à temperatura ambiente no escuro, as placas foram lidas em um Perkin Elmer EnVision usando filtros ópticos de 535/590 nm e os dados brutos foram analisados usando software registrado para gerar valores IC50.

[00187] Ensaio c): Ensaio de Proliferação Celular com GLS

[00188] A capacidade de compostos para inibir o crescimento celular foi medida usando um ensaio de proliferação de células NCI-H1703 em placas de 384 poços. Células NCI-H1703 foram cultivadas em RPMI1640 desprovido de vermelho de fenol, FCS 10% e glutamina 2 mM e semeadas a uma densidade de 750 células por poço em 40 μL de meio de crescimento em placas de ensaio de 384 poços de fundo transparente (código do produto Corning 3712) e incubadas durante 24 h a 37°C, 5% de CO2. Os compostos de teste foram preparados por diluição em DMSO 100%, dando origem ao intervalo correto de doses para resposta à concentração de 12 pontos e um volume apropriado (5120 nL) distribuído diretamente nas placas de ensaio contendo células plaqueadas. A concentração de DMSO foi mantida a 0,3% por retroenchimento com solução de DMSO. As placas foram incubadas durante 5 dias a 37°C, 5% de CO2, foram adicionados Verde Sytox e Saponina para uma concentração final de 2 μM e 0,25%, respectivamente, e o sistema foi incubado durante 6 h antes da análise. As placas foram lidas em um Acumen eX3 (TTP Labtech) usando excitação a 488 nm e conjunto de filtros FITC (500-530 nm) para a emissão. Os valores IC50 foram calculados por ajustamento da curva a inibição máxima de crescimento no dia zero usando análise com software GeneData.

[00189] Os resultados dos ensaios a) - c) estão apresentados na Tabela 1. Tabela 1. Dados dos ensaios

Claims (15)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I):

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Q é piridazin-3-ila, 6-fluoropiridazin-3-ila; R1 é H; R2 e R3 são, cada um independentemente, C1-C6 alquila ou R2 e R3 tomados em conjunto são -(CH2)3-; ou R1 e R2 tomados em conjunto são -(CH2)2- e R3 é -CH3; R4 halo, -CH3, -OCH3, -OCHF2, -OCF3 ou -CN, e n é 0, 1 ou 2.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que Q é piridazin-3-ila.

3. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que n é 0.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que n é 1 e R4 é metila, metóxi, difluorometóxi, trifluorometóxi ou ciano e R4 está na posição 3.

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que n é 1 e R4 é selecionado do grupo consistindo em fluoro e metila e R4 está na posição 4.

6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que n é 2, uma ocorrência de R4 é trifluorometóxi e está na posição 3 e a outra ocorrência de R4 é fluoro e está na posição 4.

7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 e R3 são, cada um independentemente, metila.

8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 e R3, tomados em conjunto, são - (CH2)3-.

9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é H.

10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 e R2, tomados em conjunto, são - (CH2)2- e R3 é -CH3.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado do grupo consistindo em: (2S)-2-(dimetilamino)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(dimetilamino)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)- 1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)- 1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (1S)-2-metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida; (1R)-2-metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(p-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(m-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N- [5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2- il]acetamida; (2R)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N- [5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2- il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3- il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3- il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acetamida, e (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado do grupo consistindo em: (2S)-2-(dimetilamino)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)- 1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)- 1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-[3-(difluorometóxi)fenil]-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-2-(3-metoxifenil)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3- il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometóxi)fenil]acetamida; (1S)-2-metil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]- 1,3,4-tiadiazol-2-il]-3,4-di-hidro-1H-isoquinolina-1-carboxamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(p-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(dimetilamino)-2-(m-tolil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3- ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2S)-2-(Azetidin-1-il)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil]-N- [5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2- il]acetamida; (2S)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3- il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acetamida; (2R)-2-(azetidin-1-il)-N-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3- il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3- (trifluorometóxi)fenil]acetamida, e (2S)-2-(3-cianofenil)-2-(dimetilamino)-N-[5-[[(3R)-1- piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.

13. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos um diluente ou transportador farmaceuticamente aceitável.

14. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer da mama, câncer do pulmão, câncer pancreático, câncer renal ou câncer hepatocelular.