BR112018007366B1

BR112018007366B1 - METHOD FOR CONTROLLING A DISEASE OF A COFFEA PLANT, AND, USE OF LYSINE

Info

Publication number: BR112018007366B1
Application number: BR112018007366-0A
Authority: BR
Inventors: Taito Takeda; Kayano Kuwahara
Original assignee: Ajinomoto Co., Inc
Priority date: 2015-10-15
Filing date: 2016-10-14
Publication date: 2022-12-13
Also published as: JP2018197193A; WO2017065269A1; BR112018007366A2

Abstract

INTENSIFICADOR DE RESISTÊNCIA A UMA DOENÇA PARA UMA PLANTA COFFEA, MÉTODO PARA CONTROLAR UMA DOENÇA DE UMA PLANTA COFFEA, E, COMPOSIÇÃO PARA AGRICULTURA CONTENDO LISINA. Uma doença em uma planta pertencendo ao gênero Coffea pode ser controlada por aplicação de um intensificador de resistência à doença para plantas pertencendo ao gênero Coffea sobre folhas ou partes similares da planta, em que o intensificador de resistência à doença compreende lisina ou compreende lisina e um agente bactericida.DISEASE RESISTANCE ENHANCEMENT FOR A COFFEA PLANT, METHOD FOR CONTROLLING A DISEASE OF A COFFEA PLANT, AND, COMPOSITION FOR AGRICULTURE CONTAINING LYSINE. A disease on a plant belonging to the genus Coffea can be controlled by applying a disease resistance enhancer for plants belonging to the genus Coffea onto leaves or similar parts of the plant, wherein the disease resistance enhancer comprises lysine or comprises lysine and a bactericidal agent.

Description

Technical Field

[001] A presente invenção refere-se a um intensificador de resistência a doenças para uma planta Coffea (cafeeiro) e a um método de controle de doenças utilizando o mesmo.[001] The present invention relates to a disease resistance enhancer for a Coffea plant (coffee plant) and a disease control method using the same.

Fundamentals of Technique

[002] A fim de controlar doenças de plantas de culturas agrícolas, são usados agroquímicos que controlam doenças com uma ação direta de um agente antimicrobiano ou similar sobre os micróbios patogênicos das plantas e composições agrícolas ou hortícolas que controlam doenças de plantas de cultura através da intensificação da resistência a doenças das próprias plantas.[002] In order to control diseases of plants of agricultural crops, agrochemicals are used that control diseases with a direct action of an antimicrobial agent or similar on the pathogenic microbes of plants and agricultural or horticultural compositions that control diseases of crop plants through the enhancement of disease resistance of the plants themselves.

[003] Nos últimos anos, tendo em vista problemas de influência sobre o meio ambiente, custos e outros, aminoácidos e subprodutos de fermentação de aminoácidos são desejados como ingredientes de composições agrícolas ou hortícolas, estes ingredientes sendo baratos e exibindo pouca influência sobre o meio ambiente.[003] In recent years, in view of problems of influence on the environment, costs and others, amino acids and amino acid fermentation by-products are desired as ingredients of agricultural or horticultural compositions, these ingredients being cheap and exhibiting little influence on the environment environment.

[004] Por exemplo, quanto aos aminoácidos, foi relatado um intensificador de resistência a doenças das plantas Cucurbitaceae, que contém um aminoácido selecionado do grupo consistindo em ácido glutâmico, treonina, serina e prolina (documento de patente 1) e um intensificador de resistência a doenças das plantas de arroz, que contém um aminoácido selecionado dentre o grupo consistindo em ácido glutâmico, asparagina, ácido aspártico, treonina, alanina, valina, arginina e serina (documento de patente 2). Também foi relatado que as doenças das plantas de arroz foram controladas pelo tratamento dos arrozais com L-histidina, L-lisina, L- glutamina ou glicina (documento de não patente 1).[004] For example, as for amino acids, a disease resistance enhancer of Cucurbitaceae plants has been reported, which contains an amino acid selected from the group consisting of glutamic acid, threonine, serine and proline (patent document 1) and a resistance enhancer to rice plant diseases, which contains an amino acid selected from the group consisting of glutamic acid, asparagine, aspartic acid, threonine, alanine, valine, arginine and serine (Patent Document 2). It has also been reported that rice plant diseases have been controlled by treating rice fields with L-histidine, L-lysine, L-glutamine or glycine (Non-Patent Document 1).

[005] Quanto aos subprodutos de fermentação de aminoácidos, foi relatado um agente para intensificar o efeito de alelopatia e/ou produção de fitoalexina de plantas, que contém um subproduto de fermentação de aminoácidos (documento de patente 3) e um inibidor de infecção por vírus, que contém um subproduto de fermentação de aminoácidos (documento de patente 4). Como o subproduto de fermentação de aminoácidos, a primeira referência menciona o ácido glutâmico, e a última referência menciona o ácido glutâmico, lisina, treonina, fenilalanina e arginina. O vírus é um vírus Tobamovirus ou um vírus Cucumovirus que infecta uma planta selecionada dentre tabaco, tomate, pimentão verde e pimentão.[005] As for amino acid fermentation by-products, an agent for enhancing the effect of allelopathy and/or phytoalexin production of plants, which contains an amino acid fermentation by-product (patent document 3) and an infection inhibitor by virus, which contains an amino acid fermentation by-product (patent document 4). As the by-product of amino acid fermentation, the first reference mentions glutamic acid, and the last reference mentions glutamic acid, lysine, threonine, phenylalanine and arginine. The virus is a Tobamovirus virus or a Cucumovirus virus that infects a plant selected from among tobacco, tomato, green pepper and bell pepper.

[006] Foi ainda relatado o controle de doenças de plantas usando um caldo de fermentação de lisina ou ácido glutâmico (documento de patente 5). No entanto, esta referência não inclui quaisquer dados, o ingrediente ativo é indefinido, e a ação do mesmo também não é evidente.[006] It has even been reported to control plant diseases using a lysine or glutamic acid fermentation broth (patent document 5). However, this reference does not include any data, the active ingredient is undefined, and its action is also not evident.

[007] Também foi relatado um intensificador de resistência a doenças de plantas, que contém um extrato obtido por tratamento térmico de células microbianas em uma solução ácida (documento de patente 6) e, como o extrato, a referência descreve o obtido por tratamento térmico de resíduos celulares de vários micro-organismos obtidos a partir da fermentação de aminoácidos ou similar ou pelo tratamento térmico de células microbianas contidas em lodo orgânico.[007] A plant disease resistance enhancer has also been reported, which contains an extract obtained by heat treatment of microbial cells in an acidic solution (patent document 6) and, like the extract, the reference describes that obtained by heat treatment from cellular residues of various microorganisms obtained from the fermentation of amino acids or the like or by heat treatment of microbial cells contained in organic sludge.

[008] Como descrito acima, aminoácidos, subprodutos de fermentação de aminoácidos e células microbianas foram usados a fim de controlar doenças de plantas de culturas agrícolas. Também é conhecido que ácido pipecólico, um precursor da lisina, é um fator de resposta de resistência às doenças de plantas (documento de não patente 2) e sabe-se que o ácido pipecólico induzido por micro-organismos patogênicos se acumula em plantas de arroz, batata e soja (Documento de não patente 3). Adicionalmente, influência de aminoácidos sobre a resistência às doenças de plantas de arroz, plantas Cucurbitaceae, plantas Solanaceae ou similares também foi examinada, e foi relatado que a resistência a doenças é induzida por ácido glutâmico, ácido aspártico, serina, asparagina, subproduto de fermentação de ácido glutâmico, ou similar, dependendo dos tipos de plantas (documentos não patentários 4 e 5). No entanto, o efeito notável da lisina não foi reconhecido e não se sabia que lisina ou um subproduto de fermentação de lisina é eficaz para o controle de doenças de uma planta Coffea.[008] As described above, amino acids, amino acid fermentation by-products and microbial cells have been used in order to control plant diseases of agricultural crops. Pipecolic acid, a precursor of lysine, is also known to be a disease resistance response factor in plants (Non-Patent Document 2) and pipecolic acid induced by pathogenic microorganisms is known to accumulate in rice plants , potato and soybean (Non-patent document 3). Additionally, influence of amino acids on disease resistance of rice plants, Cucurbitaceae plants, Solanaceae plants or similar was also examined, and it was reported that disease resistance is induced by glutamic acid, aspartic acid, serine, asparagine, fermentation by-product of glutamic acid, or similar, depending on the types of plants (non-patent documents 4 and 5). However, the remarkable effect of lysine was not recognized and it was not known that lysine or a by-product of lysine fermentation is effective for disease control of a Coffea plant.

[009] Referências da técnica anterior Documentos de patente Documento de patente 1: EP2524597 Documento de patente 2: WO2012/046758 Documento de patente 3: JP2012-010694A Documento de patente 4: US2014219993 Documento de patente 5: CN1155543C Documento de patente 6: WO2009/088074[009] Prior Art References Patent Documents Patent Document 1: EP2524597 Patent Document 2: WO2012/046758 Patent Document 3: JP2012-010694A Patent Document 4: US2014219993 Patent Document 5: CN1155543C Patent Document 6: WO2009 /088074

[0010] Documentos não patentários Documento de não patente 1: Voleti, S.R. et al., Crop Protection, 2008, 27:1398-1402 Documento de não patente 2: Navarova, H. et al., Plant Cell 24:5123-5141 Documento de não patente 3: Vogel-Adghough, D. et al., Plant Signal Behav., 2013 8(11) :e26366 Documento de não patente 4: Igarashi D. et al., Horticulture Research, Vol. 12, Separate volume 2, página 406, 2013 Documento de não patente 5: Kadotani N. et al., Plant Infection Physiology Discourse Meeting Papers, No. 47, páginas 33-42 Sumário da Invenção Objeto a ser alcançado pela invenção[0010] Non-patent documents Non-patent document 1: Voleti, S.R. et al., Crop Protection, 2008, 27:1398-1402 Non-patent document 2: Navarova, H. et al., Plant Cell 24:5123-5141 Non-patent document 3: Vogel-Adghough, D. et al. , Plant Signal Behav., 2013 8(11):e26366 Non-Patent Document 4: Igarashi D. et al., Horticulture Research, Vol. 12, Separate volume 2, page 406, 2013 Non-patent document 5: Kadotani N. et al., Plant Infection Physiology Discourse Meeting Papers, No. 47, pages 33-42 Summary of the Invention Object to be achieved by the invention

[0011] Um objetivo da presente invenção consiste em fornecer um intensificador de resistência a doenças e um método de controle da doença eficaz para controle de doenças de plantas Coffea.[0011] An object of the present invention is to provide a disease resistance enhancer and an effective disease control method for disease control of Coffea plants.

Means of reaching the object

[0012] A fim de alcançar o objeto, o inventor da presente invenção conduziu várias pesquisas e, como um resultado, descobriu que as expressões de genes envolvidos em resistência a doenças de plantas Coffea são induzidas pela lisina e realizaram a presente invenção.[0012] In order to achieve the object, the inventor of the present invention conducted several researches and, as a result, found that expressions of genes involved in disease resistance of Coffea plants are induced by lysine, and carried out the present invention.

[0013] Isto é, a presente invenção é corporificada como a seguir.[0013] That is, the present invention is embodied as follows.

[0014] (1) Um intensificador de resistência a doenças para uma planta Coffea, que contém lisina.[0014] (1) A disease resistance enhancer for a Coffea plant, which contains lysine.

[0015] (2) O intensificador de resistência a doenças mencionado acima, em que a doença é a doença de ferrugem.[0015] (2) The above-mentioned disease resistance enhancer, wherein the disease is rust disease.

[0016] (3) O intensificador de resistência a doenças mencionado acima, que é aplicado a uma planta Coffea a uma concentração de 0,2 mM a 100 mM de lisina.[0016] (3) The above-mentioned disease resistance enhancer, which is applied to a Coffea plant at a concentration of 0.2 mM to 100 mM lysine.

[0017] (4) O intensificador de resistência a doenças mencionado acima, que contém adicionalmente um tipo de agente antimicrobiano ou dois ou mais tipos de agentes antimicrobianos selecionados dentre os agentes antimicrobianos de tipo estrobilurina, tipo triazol e tipo composto de cobre.[0017] (4) The above-mentioned disease resistance enhancer, which additionally contains one type of antimicrobial agent or two or more types of antimicrobial agents selected from antimicrobial agents of strobilurin type, triazole type and copper compound type.

[0018] (5) O intensificador de resistência a doenças mencionado acima, que é aplicado a uma planta Coffea a uma concentração do agente antimicrobiano correspondendo a 70% ou menos de uma concentração comum.[0018] (5) The above-mentioned disease resistance enhancer, which is applied to a Coffea plant at a concentration of the antimicrobial agent corresponding to 70% or less of an ordinary concentration.

[0019] (6) O intensificador de resistência a doenças mencionado acima, em que a lisina é L-lisina.[0019] (6) The above-mentioned disease resistance enhancer, wherein the lysine is L-lysine.

[0020] (7) O intensificador de resistência a doenças mencionado acima, em que a planta Coffea é selecionada dentre o grupo consistindo em Coffea arabica, Coffea robusta, e Coffea liberica.[0020] (7) The above-mentioned disease resistance enhancer, wherein the Coffea plant is selected from the group consisting of Coffea arabica, Coffea robusta, and Coffea liberica.

[0021] (8) Um método para controlar uma doença de uma planta Coffea, que compreende aplicar lisina à planta Coffea.[0021] (8) A method of controlling a disease of a Coffea plant, comprising applying lysine to the Coffea plant.

[0022] (9) O método mencionado acima, em que a doença é doença de ferrugem.[0022] (9) The method mentioned above, wherein the disease is rust disease.

[0023] (10) O método mencionado acima, em que lisina é aplicada a uma concentração de 0,2 mM a 100 mM.[0023] (10) The method mentioned above, wherein lysine is applied at a concentration of 0.2 mM to 100 mM.

[0024] (11) O método mencionado acima, em que a lisina é aplicada em uma quantidade de 50g/ha a 200 kg/ha.[0024] (11) The method mentioned above, in which lysine is applied in an amount of 50g/ha to 200 kg/ha.

[0025] (12) O método mencionado acima, que compreende adicionalmente aplicar um tipo de agente antimicrobiano ou dois ou mais tipos de agentes antimicrobianos selecionados dentre agentes antimicrobianos de tipo estrobilurina, tipo triazol e tipo composto de cobre para a planta Coffea.[0025] (12) The method mentioned above, which further comprises applying one type of antimicrobial agent or two or more types of antimicrobial agents selected from antimicrobial agents of strobilurin type, triazole type and copper compound type to the Coffea plant.

[0026] (13) O método mencionado acima, em que a concentração do(s) agente(s) antimicrobiano(s) no momento da aplicação é 70% ou menos de uma concentração comum.[0026] (13) The method mentioned above, wherein the concentration of the antimicrobial agent(s) at the time of application is 70% or less of a common concentration.

[0027] (14) O método mencionado acima, em que a lisina é L-lisina.[0027] (14) The method mentioned above, wherein the lysine is L-lysine.

[0028] (15) Uma composição para agricultura contendo lisina, que tem uma ação intensificadora de resistência a doenças em uma planta Coffea. Breve descrição dos desenhos[0028] (15) An agricultural composition containing lysine, which has a disease resistance enhancing action on a Coffea plant. Brief description of the drawings

[0029] [Figura 1] Gráficos mostrando indução da expressão do gene CaWRKY1 por vários aminoácidos. Quantidades de expressão relativa para quantidade de expressão do gene CaGAPDH são mostradas (o mesmo deve se aplicar aos gráficos dos desenhos a seguir até Figura 8). Os círculos indicam desvios padrão (o mesmo deve se aplicar aos gráficos dos desenhos a seguir).[0029] [Figure 1] Graphs showing induction of CaWRKY1 gene expression by various amino acids. Expression amounts relative to expression amounts of the CaGAPDH gene are shown (the same should apply to the graphs in the drawings below through Figure 8). Circles indicate standard deviations (the same should apply to the graphs in the drawings below).

[0030] [Figura 2] Gráficos mostrando indução da expressão do gene CaNDR1 por vários aminoácidos.[0030] [Figure 2] Graphs showing induction of CaNDR1 gene expression by various amino acids.

[0031] [Figura 3] Gráficos mostrando indução da expressão do gene CaRLK por vários aminoácidos.[0031] [Figure 3] Graphs showing induction of CaRLK gene expression by various amino acids.

[0032] [Figura 4] Gráficos mostrando indução da expressão do gene CaLOX13 por vários aminoácidos.[0032] [Figure 4] Graphs showing induction of CaLOX13 gene expression by various amino acids.

[0033] [Figura 5] Gráficos mostrando indução de expressões de genes CaWRKY1 e CaNDR1 por Glu, Arg, Lys, Asp, Asn, e Pro. As barras indicam desvios padrão (o mesmo deve se aplicar aos gráficos dos desenhos a seguir).[0033] [Figure 5] Graphs showing induction of CaWRKY1 and CaNDR1 gene expressions by Glu, Arg, Lys, Asp, Asn, and Pro. Bars indicate standard deviations (the same should apply to the graphs in the drawings below).

[0034] [Figura 6] Gráficos mostrando indução de expressões de genes CaRLK e CaLOX13 por Glu, Arg, Lys, Asp, Asn, e Pro.[0034] [Figure 6] Graphs showing induction of CaRLK and CaLOX13 gene expressions by Glu, Arg, Lys, Asp, Asn, and Pro.

[0035] [Figura 7] Gráficos mostrando indução de expressões de genes CaWRKY1 e CaNDR1 por lisina em várias concentrações.[0035] [Figure 7] Graphs showing induction of CaWRKY1 and CaNDR1 gene expressions by lysine at various concentrations.

[0036] [Figura 8] Gráficos mostrando indução das expressões de genes CaRLK e CaLOX13 por lisina em várias concentrações.[0036] [Figure 8] Graphs showing induction of CaRLK and CaLOX13 gene expressions by lysine at various concentrations.

[0037] [Figura 9] Um gráfico mostrando efeitos de vários aminoácidos para controlar a doença de brusone do arroz.[0037] [Figure 9] A graph showing effects of various amino acids to control rice blast disease.

[0038] [Figura 10] Um gráfico mostrando efeitos de vários aminoácidos na atividade da enzima relacionada com resistência a doenças (quitinase) de pepino.[0038] [Figure 10] A graph showing effects of various amino acids on the activity of the disease resistance-related enzyme (chitinase) of cucumber.

[0039] [Figura 11] Um gráfico mostrando efeitos de vários aminoácidos (Glu, Ala, Lys) na indução do gene de resistência a doenças do tabaco.[0039] [Figure 11] A graph showing effects of various amino acids (Glu, Ala, Lys) on tobacco disease resistance gene induction.

[0040] [Figura 12] Um gráfico mostrando o grau de doença de ferrugem de plantas Coffea (março).[0040] [Figure 12] A graph showing the degree of rust disease of Coffea plants (March).

[0041] [Figura 13] Um gráfico mostrando o grau de doença de ferrugem de plantas Coffea (abril).[0041] [Figure 13] A graph showing the degree of rust disease of Coffea plants (April).

Odalities for Carrying Out the Invention

[0042] A seguir, a presente invenção será explicada em detalhes.[0042] In the following, the present invention will be explained in detail.

[0043] A presente invenção refere-se a um intensificador de resistência a doenças para uma planta Coffea (cafeeiro) contendo lisina. O intensificador de resistência a doenças também pode ser um agente de controle da doença. O assunto da presente invenção não é limitado a um agroquímico, mas também pode ser uma composição para agricultura contendo lisina para intensificação de resistência a doenças ou controle de doenças de uma planta Coffea, ou uma composição para agricultura tendo uma atividade intensificadora da resistência a doenças de uma planta Coffea.[0043] The present invention relates to a disease resistance enhancer for a Coffea plant (coffee plant) containing lysine. The disease resistance enhancer can also be a disease control agent. The subject of the present invention is not limited to an agrochemical, but can also be an agricultural composition containing lysine for enhancing disease resistance or disease control of a Coffea plant, or an agricultural composition having a disease resistance enhancing activity. of a Coffea plant.

[0044] Outro aspecto da presente invenção é um método para controlar uma doença de uma planta Coffea, que compreende a aplicação de lisina à planta Coffea. O método da presente invenção também pode ser um método para intensificar a resistência a doenças de uma planta Coffea.[0044] Another aspect of the present invention is a method of controlling a disease of a Coffea plant, comprising applying lysine to the Coffea plant. The method of the present invention can also be a method of enhancing the disease resistance of a Coffea plant.

[0045] Uma planta Coffea é uma planta pertencendo ao gênero Coffea da família Rubiaceae. Na presente invenção, a planta Coffea não é particularmente limitada, e exemplos de espécies da mesma incluem, por exemplo, Coffea arabica, Coffea robusta (sin. Coffea canephora), e Coffea liberica. A planta Coffea à qual a presente invenção é aplicada pode consistir de um tipo de planta Coffea, ou dois ou mais tipos de plantas Coffea.[0045] A Coffea plant is a plant belonging to the Coffea genus of the Rubiaceae family. In the present invention, the Coffea plant is not particularly limited, and examples of species thereof include, for example, Coffea arabica, Coffea robusta (syn. Coffea canephora), and Coffea liberica. The Coffea plant to which the present invention is applied may consist of one type of Coffea plant, or two or more types of Coffea plants.

[0046] Embora lisina possa ser L-lisina, D-lisina, ou uma mistura das mesmas, L-lisina é preferida. Lisina pode estar na forma de sal como cloridrato e carbonato. Lisina pode ser purificada ou grosseiramente purificada, e pode ser um líquido obtido durante o processo de purificação de fermentação de lisina, caldo de cultura (caldo de fermentação) ou subproduto de fermentação contendo lisina, ou produto de fracionamento dos mesmos contendo lisina, desde que o efeito da presente invenção não seja degradado. A propriedade da lisina usada para fabricação do intensificador de resistência a doenças não é particularmente limitada, e pode estar em qualquer forma de cristal, pó, partícula, pasta fluida, líquido (como uma solução aquosa) e assim por diante.[0046] Although lysine can be L-lysine, D-lysine, or a mixture thereof, L-lysine is preferred. Lysine can be in salt form as hydrochloride and carbonate. Lysine may be purified or grossly purified, and may be a liquid obtained during the purification process of lysine fermentation, culture broth (fermentation broth) or fermentation by-product containing lysine, or fractionation product thereof containing lysine, provided that the effect of the present invention is not degraded. The property of the lysine used for manufacturing the disease resistance enhancer is not particularly limited, and it can be in any form of crystal, powder, particle, slurry, liquid (such as an aqueous solution) and so on.

[0047] Como mostrado nos exemplos, lisina induz ou intensifica a expressão de genes envolvidos em resistência a doenças de plantas Coffea. Portanto, aplicando a lisina a uma planta Coffea, a resistência a doenças é intensificada e a doença pode ser controlada. Exemplos de genes incluem WRKY1, NDR1, RLK e LOX13. O termo “controle de doença” inclui prevenção, atenuação e tratamento de doença. O intensificador de resistência a doenças da presente invenção também pode ser uma composição para agricultura para induzir ou intensificar a expressão de um gene que está envolvido em resistência a doenças de uma planta Coffea. O método da presente invenção também pode ser um método para induzir ou intensificar a expressão de um gene que está envolvido em resistência a doenças de uma planta Coffea.[0047] As shown in the examples, lysine induces or enhances the expression of genes involved in disease resistance of Coffea plants. Therefore, by applying lysine to a Coffea plant, disease resistance is enhanced and disease can be controlled. Examples of genes include WRKY1, NDR1, RLK and LOX13. The term "disease control" includes prevention, alleviation and treatment of disease. The disease resistance enhancer of the present invention can also be an agricultural composition for inducing or enhancing the expression of a gene which is involved in disease resistance of a Coffea plant. The method of the present invention can also be a method of inducing or enhancing the expression of a gene that is involved in disease resistance of a Coffea plant.

[0048] A doença a ser controlada pelo intensificador de resistência a doenças da presente invenção não é particularmente limitada desde que seja uma doença que possa ser controlada por intensificação da expressão de um gene de resistência a doenças, e exemplos das mesmas incluem, por exemplo, doença de ferrugem (Hemileia vastatrix), mancha parda (Cercospora cofeicola), antracnose do café (Colletotrichum Cofeanum), murcha de muda (Fusarium stilboides Wollenw), murcha vascular do cafeeiro. (Fusarium xylarioides), doença da mancha aureolada do cafeeiro (Psedomonas syringae pv. Garcae), e assim por diante.[0048] The disease to be controlled by the disease resistance enhancer of the present invention is not particularly limited as long as it is a disease that can be controlled by enhancing the expression of a disease resistance gene, and examples thereof include, for example , rust disease (Hemileia vastatrix), brown spot (Cercospora cofeicola), coffee anthracnose (Colletotrichum Cofeanum), seedling wilt (Fusarium stilboides Wollenw), coffee vascular wilt. (Fusarium xylarioides), coffee halo spot disease (Psedomonas syringae pv. Garcae), and so on.

[0049] O intensificador de resistência a doenças da presente invenção pode conter um ingrediente arbitrário além da lisina como ingrediente ativo, desde que o efeito da presente invenção não seja degradado. Exemplos de tal ingrediente incluem estabilizadores, carreadores, ajustadores de pH, ingredientes de fertilizantes, como minerais para intensificar o efeito do fertilizante, ingredientes agroquímicos, aglutinantes, cargas, agentes de espalhamento, tensoativos e similares. Como esses ingredientes, os ingredientes geralmente usados para agroquímicos, fertilizantes, etc., podem ser usados, desde que o efeito da presente invenção não seja degradado. Uma modalidade do intensificador de resistência a doenças da presente invenção é uma composição para agricultura contendo lisina e pelo menos um tipo de ingrediente selecionado dentre estabilizadores, carreadores, ajustadores de pH, ingredientes de fertilizantes, ingredientes agroquímicos, ligantes, cargas, agentes de espalhamento e tensoativos.[0049] The disease resistance enhancer of the present invention may contain an arbitrary ingredient other than lysine as an active ingredient, as long as the effect of the present invention is not degraded. Examples of such an ingredient include stabilizers, carriers, pH adjusters, fertilizer ingredients such as minerals to enhance the effect of the fertilizer, agrochemical ingredients, binders, fillers, spreading agents, surfactants and the like. As such ingredients, ingredients commonly used for agrochemicals, fertilizers, etc., can be used as long as the effect of the present invention is not degraded. One embodiment of the disease resistance enhancer of the present invention is an agricultural composition containing lysine and at least one type of ingredient selected from stabilizers, carriers, pH adjusters, fertilizer ingredients, agrochemical ingredients, binders, fillers, spreading agents and surfactants.

[0050] Exemplos de ingredientes agroquímicos incluem, por exemplo, agentes antimicrobianos. Exemplos de agentes antimicrobianos incluem agentes antimicrobianos de tipo estrobilurina, tipo triazol e tipo composto de cobre. Exemplos de tipos de estrobilurina incluem piraclostrobina, azoxistrobina e similares, exemplos de tipos de triazol incluem epóxi-conazol, ciproconazol, hexaconazol, triadimefônio e similares, e exemplos de tipos de compostos de cobre incluem o óxido de cobre e similares. O agente antimicrobiano contido no intensificador de resistência a doenças pode consistir em um tipo de agente antimicrobiano ou dois ou mais tipos de agentes antimicrobianos.[0050] Examples of agrochemical ingredients include, for example, antimicrobial agents. Examples of antimicrobial agents include strobilurin type, triazole type and copper compound type antimicrobial agents. Examples of types of strobilurin include pyraclostrobin, azoxystrobin and the like, examples of types of triazoles include epoxyconazole, cyproconazole, hexaconazole, triadimephonium and the like, and examples of types of copper compounds include copper oxide and the like. The antimicrobial agent contained in the disease resistance enhancer may consist of one type of antimicrobial agent or two or more types of antimicrobial agents.

[0051] Nesta descrição, o intensificador de resistência a doenças contendo tal agente antimicrobiano, como mencionado acima, além da lisina, também pode ser um agente de controle de doenças de uma planta Coffea, uma composição para cultura de uma planta Coffea ou uma composição para controle de doenças de uma planta Coffea.[0051] In this description, the disease resistance enhancer containing such an antimicrobial agent as mentioned above, in addition to lysine, can also be a disease controlling agent of a Coffea plant, a composition for growing a Coffea plant or a composition for disease control of a Coffea plant.

[0052] O intensificador de resistência a doenças também pode conter um aminoácido diferente da lisina. No entanto, como esses outros aminoácidos incluem um(ns) que reduz(em) a expressão de um gene envolvido na resistência a doenças de uma planta Coffea, é preferido que a quantidade contida de tal(is) aminoácido(s) no intensificador de resistência a doenças seja baixa, sendo mais preferido que esse(s) aminoácido(s) esteja(m)/não esteja(m) contido(s). Por exemplo, a quantidade contida de tais outros aminoácidos é preferivelmente de 10 mM ou menor, mais preferencialmente de 1 mM ou menor, em termos da concentração no momento da aplicação do intensificador de resistência a doenças a uma planta Coffea. Por outro lado, ácido glutâmico, arginina, ácido aspártico, asparagina e prolina têm uma ação de intensificar a expressão de um gene de resistência a doenças de uma planta Coffea, como a lisina, e o intensificador de resistência a doenças pode conter um tipo, dois ou mais tipos desses aminoácidos junto com a lisina. As quantidades contidas preferidas destes aminoácidos são similares à quantidade contida de lisina mencionada a seguir. Estes aminoácidos podem ser L-aminoácidos, D-aminoácidos, ou uma mistura dos mesmos, mas os L-aminoácidos são preferidos. Uma modalidade do intensificador de resistência a doenças da presente invenção é uma composição para agricultura contendo lisina e pelo menos um tipo de aminoácido selecionado dente ácido glutâmico, arginina, ácido aspártico, asparagina e prolina.[0052] The disease resistance enhancer may also contain an amino acid other than lysine. However, as these other amino acids include one(s) which reduces the expression of a gene involved in disease resistance of a Coffea plant, it is preferred that the amount of such amino acid(s) contained in the disease resistance is low, it being more preferred that such amino acid(s) is/are not contained. For example, the contained amount of such other amino acids is preferably 10 mM or less, more preferably 1 mM or less, in terms of the concentration at the time of application of the disease resistance enhancer to a Coffea plant. On the other hand, glutamic acid, arginine, aspartic acid, asparagine and proline have an action of enhancing the expression of a disease resistance gene of a Coffea plant, such as lysine, and the disease resistance enhancer may contain a type, two or more types of these amino acids along with lysine. Preferred contained amounts of these amino acids are similar to the contained amount of lysine mentioned below. These amino acids can be L-amino acids, D-amino acids, or a mixture thereof, but L-amino acids are preferred. One embodiment of the disease resistance enhancer of the present invention is an agricultural composition containing lysine and at least one type of amino acid selected from glutamic acid, arginine, aspartic acid, asparagine and proline.

[0053] A forma do intensificador de resistência a doenças não é particularmente limitada desde que uma solução do mesmo aplicável a uma planta Coffea possa ser preparada no momento do uso, e possa estar em qualquer forma de uso como líquido, pó, grânulo, emulsão e similares.[0053] The form of the disease resistance enhancer is not particularly limited as long as a solution thereof applicable to a Coffea plant can be prepared at the time of use, and can be in any use form such as liquid, powder, granule, emulsion and the like.

[0054] Como descrito abaixo, quando o intensificador de resistência a doenças da presente invenção é borrifado numa planta Coffea, ele é preferivelmente borrifado sobre as superfícies das folhas e/ou frutos. Um agente de espalhamento pode ser adicionado para melhorar a força de espalhamento do intensificador de resistência a doenças sobre superfícies das folhas ou frutos, e um tal ingrediente, como um agente tensoativo, pode ser adicionado de modo a melhorar a propriedade de penetração da lisina nas plantas. Exemplos do agente de espalhamento incluem, por exemplo, Applauch BITM (Kao), Mix PowerTM (Syngenta Japan), SquashTM (MARUWA Biochemical), e similares. Como o tensoativo, podem ser usados quaisquer tensoativos não iônicos, tensoativos aniônicos, tensoativos catiônicos e tensoativos anfolíticos. Exemplos incluem alquil éteres de polioxietileno, alquil aril éteres de polioxietileno, ésteres de ácido graxo de polioxietileno, ésteres de ácido graxo de sorbitano, ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, polímeros de oxietileno, polímeros de oxipropileno, ésteres de ácido polioxietileno alquil fosfórico, sais de ácidos graxos, sais de éster de ácido alquilsulfúrico, sais de ácido alquilsulfônico, sais de ácido alquilaril sulfônico, sais de ácido alquilfosfórico, sais de éster de ácido alquilfosfórico, ésteres de ácido polioxietileno alquilsulfúrico, sais de amônio quaternário, oxialquilaminas, lecitina, saponina, e similares. Além disso, gelatina, caseina, amido, agar, álcool polivinílico, alginato de sódio e similares podem ser usados como um auxiliar, como necessário.[0054] As described below, when the disease resistance enhancer of the present invention is sprayed onto a Coffea plant, it is preferably sprayed onto the surfaces of leaves and/or fruits. A spreading agent can be added to improve the spreading force of the disease resistance enhancer on leaf or fruit surfaces, and such an ingredient as a surfactant can be added in order to improve the penetrating property of lysine into plants. Examples of the spreading agent include, for example, Applauch BITM (Kao), Mix PowerTM (Syngenta Japan), SquashTM (MARUWA Biochemical), and the like. As the surfactant, any non-ionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants and ampholytic surfactants can be used. Examples include polyoxyethylene alkyl ethers, polyoxyethylene alkyl aryl ethers, polyoxyethylene fatty acid esters, sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, oxyethylene polymers, oxypropylene polymers, polyoxyethylene alkyl phosphoric acid esters, fatty acid salts, alkylsulfuric acid ester salts, alkylsulfonic acid salts, alkylarylsulfonic acid salts, alkylphosphoric acid salts, alkylphosphoric acid ester salts, polyoxyethylene alkylsulfuric acid esters, quaternary ammonium salts, oxyalkylamines, lecithin, saponin, and the like. Furthermore, gelatin, casein, starch, agar, polyvinyl alcohol, sodium alginate and the like can be used as an auxiliary as needed.

[0055] No momento do uso do intensificador de resistência a doenças, o intensificador de resistência a doenças sob a forma de sólido ou pó pode ser dissolvido ou disperso em um solvente, como água e álcool. O intensificador de resistência a doenças na forma de líquido pode ser diluído com um solvente como água e álcool. Exemplos de álcool incluem etanol, metanol, álcool isopropílico e assim por diante.[0055] At the time of using the disease resistance enhancer, the disease resistance enhancer in the form of solid or powder can be dissolved or dispersed in a solvent such as water and alcohol. The disease resistance enhancer in liquid form can be diluted with a solvent such as water and alcohol. Examples of alcohol include ethanol, methanol, isopropyl alcohol and so on.

[0056] A concentração de lisina no momento do uso do intensificador de resistência a doenças é geralmente de 0,2 mM a 100 mM, preferivelmente 0,5 mM a 20 mM, mais preferencialmente 1 mM a 10 mM.[0056] The lysine concentration at the time of using the disease resistance enhancer is generally 0.2 mM to 100 mM, preferably 0.5 mM to 20 mM, more preferably 1 mM to 10 mM.

[0057] Quando o intensificador de resistência a doenças contém um agente antimicrobiano, a concentração do agente antimicrobiano no momento do uso do intensificador de resistência a doenças não é particularmente limitada. No entanto, ela é preferivelmente de 70% ou menos, mais preferencialmente 50% ou menos, da concentração comum do agente antimicrobiano. O termo “concentração comum” refere-se a uma concentração em que o agente antimicrobiano é comumente usado quando o intensificador de resistência a doenças contendo lisina não é usado. Embora a concentração comum possa mudar de acordo com a terra e a estação onde ou quando as plantas de Coffea são cultivadas, os exemplos incluem, por exemplo, uma concentração recomendada especificada em um produto do agente antimicrobiano. A concentração comum pode variar de acordo com o tipo de agente antimicrobiano e, por exemplo, no caso da OPERA (marca registrada) produzida pela BASF A.G, o seu uso a uma concentração de 0,55 g/L é recomendado.[0057] When the disease resistance enhancer contains an antimicrobial agent, the concentration of the antimicrobial agent at the time of using the disease resistance enhancer is not particularly limited. However, it is preferably 70% or less, more preferably 50% or less, of the common concentration of the antimicrobial agent. The term "common concentration" refers to a concentration at which the antimicrobial agent is commonly used when the lysine-containing disease resistance enhancer is not used. Although the common concentration may change according to the land and season where or when Coffea plants are grown, examples include, for example, a specified recommended concentration in a product of the antimicrobial agent. The common concentration may vary according to the type of antimicrobial agent and, for example, in the case of OPERA (trademark) produced by BASF A.G, its use at a concentration of 0.55 g/L is recommended.

[0058] O intensificador de resistência a doenças é preferivelmente aplicado a uma superfície de folha, tronco, caule ou fruto, ou rizosfera de uma planta Coffea. O intensificador de resistência a doenças também pode ser aplicado a duas ou mais dessas partes. O intensificador de resistência a doenças pode ser aplicado ao toda ou uma parte de qualquer uma dessas partes. Por exemplo, quando o intensificador de resistência a doenças é aplicado a uma folha, ele pode ser aplicado somente a uma das superfícies da frente e de trás da folha, ou ele pode ser aplicado às duas superfícies. No caso de um fruto, ele pode ser aplicado a toda a superfície do fruto, ou a uma parte da superfície do fruto. Aplicação do intensificador de resistência a doenças ao solo também está incluída no escopo de “aplicação a uma planta Coffea”, desde que os ingredientes do intensificador de resistência a doenças, especialmente lisina, alcancem pelo menos a rizosfera. Exemplos do método de aplicação incluem borrifar sobre a superfície do solo, irrigar o solo, arar o solo, borrifar ou espalhar sobre uma superfície das folhas ou frutos de uma planta Coffea, além de uma solução hidropônica e assim por diante. Entre estes, a borrifação sobre uma superfície das folhas ou frutos é preferida. A frase “borrifar sobre uma superfície de folha” significa que a borrifação sobre, pelo menos, uma superfície das folhas é suficiente, e o intensificador de resistência a doenças também pode ser borrifado sobre outra parte além da superfície das folhas. O mesmo deve se aplicar a um fruto.[0058] The disease resistance enhancer is preferably applied to a leaf, trunk, stem or fruit surface, or rhizosphere of a Coffea plant. The disease resistance booster can also be applied to two or more of these parts. The disease resistance booster can be applied to all or part of any of these parts. For example, when the disease resistance enhancer is applied to a leaf, it can be applied to only one of the front and back surfaces of the leaf, or it can be applied to both surfaces. In the case of a fruit, it can be applied to the entire surface of the fruit, or to a part of the surface of the fruit. Application of the disease resistance enhancer to soil is also included within the scope of “application to a Coffea plant”, provided that the disease resistance enhancer ingredients, especially lysine, reach at least the rhizosphere. Examples of the application method include spraying onto the surface of the soil, irrigating the soil, plowing the soil, spraying or spreading onto a surface the leaves or berries of a Coffea plant, plus a hydroponic solution, and so on. Among these, spraying on a leaf or fruit surface is preferred. The phrase "spraying onto a leaf surface" means that spraying onto at least one surface of the leaves is sufficient, and the disease resistance enhancer may also be sprayed onto a part other than the surface of the leaves. The same should apply to a fruit.

[0059] A quantidade contida de lisina no intensificador de resistência a doenças não é particularmente limitada desde que a lisina possa ser aplicada como uma solução de tal concentração prescrita, como descrito acima, no momento do uso. No entanto, ela é, por exemplo, 1% em peso ou maior, preferivelmente 50% em peso ou maior, mais preferencialmente 70% em peso ou maior, em termos de peso seco, e uma quantidade contida em uma tal faixa é preferida tendo em vista a evasão de obstáculos causados por impurezas, como danos de sal, e atualização do efeito desejado. Embora o intensificador de resistência a doenças possa ser distribuído na forma de sólido ou solução, quando ele é distribuído na forma de solução, a concentração do mesmo é preferivelmente de 0,5 mM até concentração de saturação.[0059] The contained amount of lysine in the disease resistance enhancer is not particularly limited as long as the lysine can be applied as a solution of such prescribed concentration as described above at the time of use. However, it is, for example, 1% by weight or greater, preferably 50% by weight or greater, more preferably 70% by weight or greater, in terms of dry weight, and an amount contained in such a range is preferred having in view of evading obstacles caused by impurities such as salt damage, and updating the desired effect. Although the disease resistance enhancer can be delivered in solid or solution form, when it is delivered in solution form, the concentration thereof is preferably from 0.5 mM to saturation concentration.

[0060] Quando o intensificador de resistência a doenças contém um agente antimicrobiano, a quantidade contida do agente antimicrobiano no intensificador de resistência a doenças não é particularmente limitada, desde que o agente antimicrobiano possa ser aplicado como uma solução de tal concentração prescrita descrita acima no momento de uso.[0060] When the disease resistance enhancer contains an antimicrobial agent, the contained amount of the antimicrobial agent in the disease resistance enhancer is not particularly limited, provided that the antimicrobial agent can be applied as a solution of such prescribed concentration described above in time of use.

[0061] Embora a quantidade de borrifação do intensificador de resistência a doenças não seja particularmente limitada, ela é geralmente de 50 g a 200 kg/ha, preferivelmente 125 g a 40 kg/ha, mais preferencialmente 250 g a 20 kg/ha, em termos da quantidade de lisina. Quando o intensificador de resistência a doenças contém um agente antimicrobiano, a quantidade de borrifação do intensificador de resistência a doenças é preferivelmente 75% ou menor, mais preferivelmente 50% ou menor, da quantidade comum de borrifação, em termos da quantidade de agente antimicrobiano. O termo “quantidade de borrifação comum” significa uma quantidade em que o agente antimicrobiano é geralmente usado quando o intensificador de resistência a doenças contendo lisina não é usado. Embora a quantidade comum de borrifação possa variar dependendo da terra e da estação, em que ou quando as plantas de Coffea são cultivadas, exemplos incluem, por exemplo, uma concentração recomendada especificada em um produto do agente antimicrobiano. A quantidade comum de borrifação pode mudar dependendo do tipo de agente antimicrobiano e, por exemplo, no caso da OPERA produzida por BASF A.G, a borrifação do mesmo em uma quantidade de 274 g/ha é recomendada. Quando se deseja diminuir a quantidade de borrifação do agente antimicrobiano a partir da quantidade comum, pelo menos uma concentração, volume de borrifação e frequência de borrifação do agente antimicrobiano podem ser tornados menores do que os usados comumente. Por exemplo, quando se deseja reduzir à metade a quantidade de borrifação de um agente antimicrobiano, uma solução de uma meia concentração do agente antimicrobiano pode ser borrifada em um volume comumente usado, uma solução de uma concentração comumente usada pode ser borrifada em metade do volume, ou uma solução pode ser borrifada na metade da frequência. Se o intensificador de resistência a doenças contendo lisina for usado, uma doença pode ser controlada com uma quantidade menor de um agente antimicrobiano em comparação com a quantidade requerida quando o agente antimicrobiano é usado sozinho e, portanto, a quantidade do agente antimicrobiano a ser usado pode ser reduzida. Além disso, um efeito de controle da doença maior pode ser obtido com um agente antimicrobiano da quantidade comum. O volume de borrifação do intensificador de resistência a doenças pode ser apropriadamente ajustado de acordo com as concentrações de lisina e/ou do agente antimicrobiano de modo que os pesos da borrifação dos mesmos estejam nas faixas preferidas.[0061] Although the spraying amount of the disease resistance enhancer is not particularly limited, it is generally 50 g to 200 kg/ha, preferably 125 g to 40 kg/ha, more preferably 250 g to 20 kg/ha, in terms of the amount of lysine. When the disease resistance enhancer contains an antimicrobial agent, the spray amount of the disease resistance enhancer is preferably 75% or less, more preferably 50% or less, of the common spray amount, in terms of the amount of antimicrobial agent. The term "ordinary spray amount" means an amount in which the antimicrobial agent is generally used when the lysine-containing disease resistance enhancer is not used. While the common spray amount can vary depending on the land and the season in which or when Coffea plants are grown, examples include, for example, a specified recommended concentration in a product of the antimicrobial agent. The common spraying amount can change depending on the type of antimicrobial agent and, for example, in the case of OPERA produced by BASF A.G, spraying it in an amount of 274 g/ha is recommended. When it is desired to decrease the spray amount of the antimicrobial agent from the common amount, at least one concentration, spray volume and spray frequency of the antimicrobial agent can be made smaller than commonly used. For example, when it is desired to halve the amount of spraying of an antimicrobial agent, a solution of a half concentration of the antimicrobial agent can be sprayed in a commonly used volume, a solution of a commonly used concentration can be sprayed in half the volume , or a solution can be sprayed at half the frequency. If the lysine-containing disease resistance enhancer is used, a disease can be controlled with a smaller amount of an antimicrobial agent compared to the amount required when the antimicrobial agent is used alone, and therefore the amount of the antimicrobial agent to be used can be reduced. Furthermore, a greater disease controlling effect can be obtained with an antimicrobial agent of the common amount. The disease resistance enhancer spray volume can be appropriately adjusted according to the lysine and/or antimicrobial agent concentrations so that the spray weights thereof are within preferred ranges.

[0062] Quanto ao momento de aplicação do intensificador de resistência a doenças em uma planta Coffea, o intensificador de resistência a doenças é preferivelmente usado antes da estação quando uma doença se desenvolve. No entanto, mesmo a doença ter se desenvolvido, um efeito da supressão da expansão da doença ou atenuação da doença pode ser esperado. O número de vezes da aplicação não é particularmente limitado e o intensificador de resistência a doenças pode ser aplicado uma vez, duas ou mais vezes.[0062] As for the timing of application of the disease resistance enhancer on a Coffea plant, the disease resistance enhancer is preferably used before the season when a disease develops. However, even if the disease has developed, a suppression effect of disease expansion or disease attenuation can be expected. The number of times of application is not particularly limited, and the disease resistance enhancer can be applied once, twice or more times.

[0063] Quando o intensificador de resistência a doenças é borrifado, o método de borrifação não é particularmente limitado e, por exemplo, ele pode ser borrifado em uma parte terrestre completa de uma planta, incluindo hastes, folhas e frutos, ou pode ser borrifado no solo na circunferência incluindo a planta. Quando o intensificador de resistência a doenças é borrifado em toda a parte terrestre de uma planta, incluindo hastes, folhas e frutos, ele é preferivelmente borrifado de modo que se espalhe sobre superfícies de folhas e/ou frutos. Quando o intensificador de resistência a doenças é borrifado manualmente, a operação é realizada desejavelmente de modo que o bico de pulverização para o intensificador de resistência a doenças fique virado para as superfícies da frente ou superfícies de trás das folhas. Quando um pulverizador de lança é usado, o volume de borrifação do intensificador de resistência a doenças é desejavelmente de 100 L ou maior, preferivelmente 200 L a 4000 L, mais preferencialmente 300 L a 3000 L, por ha. Também pode ser usada uma assim chamada máquina de pulverização eletrostática ou bico de pulverização eletrostática, que promove a adesão do líquido pulverizado aos corpos da planta usando eletricidade estática.[0063] When the disease resistance enhancer is sprayed, the spraying method is not particularly limited, and, for example, it can be sprayed on a complete ground part of a plant, including stems, leaves and fruits, or it can be sprayed in the soil around the circumference including the plant. When the disease resistance enhancer is sprayed onto the entire ground part of a plant, including stems, leaves and fruit, it is preferably sprayed so that it spreads over leaf and/or fruit surfaces. When the disease resistance enhancer is sprayed by hand, the operation is desirably performed so that the spray nozzle for the disease resistance enhancer faces the front surfaces or the back surfaces of the leaves. When a boom sprayer is used, the spray volume of the disease resistance enhancer is desirably 100 L or greater, preferably 200 L to 4000 L, more preferably 300 L to 3000 L, per ha. A so-called electrostatic spraying machine or electrostatic spraying nozzle can also be used, which promotes the adhesion of the sprayed liquid to the plant bodies using static electricity.

[0064] Quando o intensificador de resistência a doenças é borrifado em superfícies foliares e/ou frutos, ele pode ser misturado com um fertilizante, agroquímico ou similar, para aplicação foliar comumente usada para agricultura, desde que o efeito da presente invenção não seja degradado. Em uma modalidade do método para controlar uma doença de uma planta Coffea, de acordo com a presente invenção, um agente antimicrobiano do tipo estrobilurina, tipo triazol, ou tipo de componente de cobre é aplicado à planta Coffea, além de lisina. Lisina e o agente antimicrobiano podem ser aplicados simultaneamente, ou podem ser aplicados separadamente.[0064] When the disease resistance enhancer is sprayed on foliar surfaces and/or fruits, it can be mixed with a fertilizer, agrochemical or similar, for foliar application commonly used for agriculture, provided that the effect of the present invention is not degraded . In one embodiment of the method for controlling a disease of a Coffea plant, according to the present invention, an antimicrobial agent of the strobilurin type, triazole type, or copper component type is applied to the Coffea plant in addition to lysine. Lysine and the antimicrobial agent can be applied simultaneously, or they can be applied separately.

[0065] Um fertilizante basal e um fertilizante adicional, a serem aplicados ao solo em que as plantas Coffea são cultivadas, podem ser usados de acordo com a quantidade de aplicação e o método de aplicação geralmente usados na área correspondente.[0065] A basal fertilizer and an additional fertilizer, to be applied to the soil in which Coffea plants are grown, can be used according to the application amount and the application method generally used in the corresponding area.

EXAMPLES

[0066] A seguir, a presente invenção será mais especificamente explicada com referência aos exemplos. Os aminoácidos referidos nos seguintes exemplos são L-aminoácidos.[0066] In the following, the present invention will be more specifically explained with reference to examples. The amino acids referred to in the following examples are L-amino acids.

[Example 1] Effect of lysine to induce disease resistance gene of Coffea plant 1. Preparation of cDNA from the leaf of the Coffea plant treated with amino acid

[0067] Ao usar discos de folha de tamanho quadrado de 1 cm, preparados a partir de uma folha completamente expandida de uma planta Coffea, a influência de 20 tipos de aminoácidos sobre as quantidades de expressão de genes de resistência a doenças foi investigada.[0067] By using 1 cm square-sized leaf disks prepared from a fully expanded leaf of a Coffea plant, the influence of 20 types of amino acids on the expression amounts of disease resistance genes was investigated.

[0068] Soluções de tratamento contendo, cada, um tampão fosfato de 20 mM (pH 6,0) e 10 mM do aminoácido correspondente e uma solução de tratamento consistindo apenas do tampão fosfato de 20 mM, como uma simulação foram colocadas em cavidades de placas de 6 cavidades em um volume de 5 mL/cavidade e um disco de folha foi flutuado na solução em cada cavidade com a superfície abaxial (superfície de trás da folha) voltada para baixo e deixada durante 24 horas. Então, RNA foi isolado do disco de folha usando um kit de purificação de ácido nucleico (Maxwell (marca registrada) 16 LEV simplyRNA Tissue Kit, Promega). Então, o cDNA foi sintetizado usando um reagente de síntese de cDNA para PCR em tempo real (ReverTra Ace (marca registrada) qPCR RT Master Mix, Toyobo).[0068] Treatment solutions containing, each, a 20 mM phosphate buffer (pH 6.0) and 10 mM of the corresponding amino acid and a treatment solution consisting only of the 20 mM phosphate buffer, as a simulation were placed in wells of 6-well plates in a volume of 5 ml/well and a leaf disc was floated in the solution in each well with the abaxial surface (back surface of the leaf) facing downwards and left for 24 hours. Then, RNA was isolated from the leaf disc using a nucleic acid purification kit (Maxwell (trademark) 16 LEV simplyRNA Tissue Kit, Promega). Then, cDNA was synthesized using a cDNA synthesis reagent for real-time PCR (ReverTra Ace (trademark) qPCR RT Master Mix, Toyobo).

2. Expression analysis of genes related to resistance to rust diseases in the Coffea plant

[0069] Quanto aos genes para os quais foi relatado que as expressões dos mesmos são induzidas no momento da infecção pelo fungo da doença de ferrugem (Ganesh, D. et al., Plant Science 170:1045-1051 (2006); Diola, V. et al., Eur. J. Plant Pathol., 133:141-157 (2013); Diniz, I. et al., Eur. J. Plant Pathol., 133:141-157 (2012)), indução do mesmo por aminoácidos foi analisada. PCR em tempo real foi realizada usando o cDNA mencionado acima como o gabarito e os iniciadores mostrados na Tabela 1. CaWRKY1 é um gene de um fator de transcrição, CaNDR1 é um gene de uma resistência a doenças não específica da variedade NDR1 homóloga à de Arabidopsis, CaRLK é um gene de cinase tipo receptor, CaLOX13 é um gene de lipoxigenase, e CaGAPDH é um gene de gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase. As letras “Ca” no início dos nomes dos genes significam que os genes são genes de Coffea arabica.[0069] As for the genes for which it has been reported that their expressions are induced at the time of infection by the rust disease fungus (Ganesh, D. et al., Plant Science 170:1045-1051 (2006); Diola, V. et al., Eur. J. Plant Pathol., 133:141-157 (2013); Diniz, I. et al., Eur. J. Plant Pathol., 133:141-157 (2012)), induction of the same for amino acids was analyzed. Real-time PCR was performed using the cDNA mentioned above as the template and the primers shown in Table 1. CaWRKY1 is a gene for a transcription factor, CaNDR1 is a gene for a non-specific disease resistance of the NDR1 variety homologous to Arabidopsis , CaRLK is a receptor-like kinase gene, CaLOX13 is a lipoxygenase gene, and CaGAPDH is a glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase gene. The letters “Ca” at the beginning of the gene names mean that the genes are Coffea arabica genes.

[0070] As quantidades de expressão dos genes foram representadas como quantidades de expressão relativa às do gene CaGAPDH usado como um padrão interno. Os 20 tipos de aminoácidos foram divididos em grupos de dez tipos, e avaliação foi realizada com duas vezes o teste (n=2). Os resultados são mostrados nas Figuras 1 a 4.[0070] Expression amounts of the genes were represented as expression amounts relative to those of the CaGAPDH gene used as an internal standard. The 20 types of amino acids were divided into groups of ten types, and the evaluation was carried out with the test twice (n=2). The results are shown in Figures 1 to 4.

[0071] Foi confirmada uma tendência de que ácido glutâmico (Glu), arginina (Arg), lisina (Lys), ácido aspártico (Asp), asparagina (Asn) e prolina (Pro) mostram uma maior atividade para induzir as expressões dos genes relacionadas com a resistência a doenças de ferrugem em comparação com a simulação. Tabela 1: Iniciadores para PCR em tempo real

[0071] A trend was confirmed that glutamic acid (Glu), arginine (Arg), lysine (Lys), aspartic acid (Asp), asparagine (Asn) and proline (Pro) show greater activity to induce gene expressions related to rust disease resistance compared to the simulation. Table 1: Real-time PCR primers

[0072] Então, um teste foi realizado do mesmo modo como descrito acima para comparar as atividades dos seis tipos de aminoácidos (Glu, Arg, Lys, Asp, Asn e Pro) para os quais uma atividade para induzir as expressões dos genes relacionadas com a resistência a doenças de planta Coffea foi observada. Avaliação foi realizada com três vezes o teste (n=3). Os resultados são mostrados nas Figuras 5 e 6. Foi demonstrado que Lys tem uma atividade marcadamente elevada para induzir as expressões dos genes de resistência a doenças da planta Coffea. [Exemplo 2] Exame da concentração de tratamento com lisina[0072] Then, a test was performed in the same manner as described above to compare the activities of the six types of amino acids (Glu, Arg, Lys, Asp, Asn and Pro) for which an activity to induce the expressions of genes related to Coffea plant disease resistance has been observed. Evaluation was performed with three times the test (n=3). The results are shown in Figures 5 and 6. Lys has been shown to have markedly increased activity to induce expressions of disease resistance genes in the Coffea plant. [Example 2] Examination of lysine treatment concentration

[0073] A fim de confirmar a dependência da concentração do efeito de Lys sobre a indução da expressão dos genes de resistência a doenças da planta Coffea, discos de folhas de uma planta Coffea foram tratados com 0,1 mM, 1 mM, 2 mM, 4 mM, 10 mM e 20 mM de Lys, do mesmo modo que no Exemplo 1, e as expressões dos genes foram analisadas após 24 horas. Avaliação foi realizada com três vezes o teste (n=3). Os resultados são mostrados nas Figuras 7 e 8.[0073] In order to confirm the concentration dependence of the effect of Lys on the induction of expression of disease resistance genes of the Coffea plant, leaf discs of a Coffea plant were treated with 0.1 mM, 1 mM, 2 mM , 4 mM, 10 mM and 20 mM Lys, in the same manner as in Example 1, and gene expressions were analyzed after 24 hours. Evaluation was performed with three times the test (n=3). The results are shown in Figures 7 and 8.

[0074] Para todos os genes, a atividade de indução da expressão de genes não foi observada a 0,1 mM, mas a atividade foi definitivamente observada a 1 mM ou maior. As expressões de genes foram aumentadas em um modo dependente da concentração de Lys e, geralmente, atingiram um limiar de 4 mM ou 10 mM. [Exemplo de Referência] Efeito da lisina em outras plantas[0074] For all genes, gene expression inducing activity was not observed at 0.1 mM, but activity was definitely observed at 1 mM or greater. Gene expressions were increased in a Lys concentration dependent manner and generally reached a baseline of 4 mM or 10 mM. [Reference Example] Effect of Lysine on Other Plants

1. Effects of various amino acids to control rice blast disease

[0075] Efeitos de vários aminoácidos em infecção pelo fungo da doença de brusone de arroz foram investigados.[0075] Effects of various amino acids on rice blast disease fungal infection were investigated.

[0076] Tecidos de raízes de uma planta de arroz cultivada durante duas semanas após semeadura foram imersos em soluções aquosas de 10 mM de vários aminoácidos durante 48 horas e, então, o fungo patogênico (Magnaporthe oryzae) foi inoculado pulverizando uma suspensão de conídios (1 x 105 conídios/mL) do fungo patogênico sobre as superfícies foliares. Então, as plantas foram deixadas em uma câmara úmida escura durante 24 horas para permitir infecção pelo fungo patogênico. Para o controle negativo, água foi aplicada. O número de lesões geradas sobre as folhas das plantas de arroz tratadas com os respectivos aminoácidos foi contado após 4 dias a partir da inoculação, e suas razões para o número de lesões observadas para o controle negativo são mostrados na Figura 9. Como resultado, o efeito de indução de resistência de lisina não foi elevado, enquanto que os efeitos de indução da resistência de ácido glutâmico, ácido aspártico, asparagina e similares foram elevados (consultar Kadotani, N. et al., Plant Infection Physiology Discourse Meeting Papers, No. 47, páginas 33-42).[0076] Root tissues of a rice plant cultivated for two weeks after sowing were immersed in 10 mM aqueous solutions of various amino acids for 48 hours, and then the pathogenic fungus (Magnaporthe oryzae) was inoculated by spraying a suspension of conidia ( 1 x 105 conidia/mL) of the pathogenic fungus on leaf surfaces. Then, the plants were left in a dark humid chamber for 24 hours to allow infection by the pathogenic fungus. For the negative control, water was applied. The number of lesions generated on the leaves of rice plants treated with the respective amino acids was counted after 4 days from inoculation, and their ratios to the number of lesions observed for the negative control are shown in Figure 9. As a result, the The resistance-inducing effect of lysine was not high, whereas the resistance-inducing effects of glutamic acid, aspartic acid, asparagine, and the like were high (see Kadotani, N. et al., Plant Infection Physiology Discourse Meeting Papers, No. 47, pages 33-42).

2. Effects of various amino acids on cucumber chitinase activity

[0077] Efeitos de vários aminoácidos sobre a atividade da quitinase de pepino, que é uma enzima relacionada com resistência a doenças, foram investigados (consultar Igarashi, D. et al., Horticulture Research, Vol. 12, Volume separado 2, página 406, 2013).[0077] Effects of various amino acids on the activity of cucumber chitinase, which is an enzyme related to disease resistance, were investigated (see Igarashi, D. et al., Horticulture Research, Vol. 12, Separate Volume 2, page 406 , 2013).

[0078] Soluções de vários aminoácidos foram borrifadas sobre cotilédones ou folhas de folhagem de pepino (Suyo) cultivado em uma câmara climática artificial e a resposta da resistência a doenças foi investigada com base na atividade de quitinase após 48 horas, como um índice. Os resultados são mostrados na Figura 10. Efeito para aumentar a atividade de quitinase foi observado para alguns aminoácidos como ácido glutâmico, ácido aspártico e serina. No entanto, o efeito de lisina foi comparável ao observado para o controle.[0078] Solutions of various amino acids were sprayed onto cotyledons or foliage leaves of cucumber (Suyo) grown in an artificial climate chamber and disease resistance response was investigated based on chitinase activity after 48 hours as an index. The results are shown in Figure 10. Effect to increase chitinase activity was observed for some amino acids like glutamic acid, aspartic acid and serine. However, the effect of lysine was comparable to that seen for the control.

3. Effect of amino acids on tobacco disease resistance gene induction

[0079] Os corpos completos de plantas de tabaco (Nicotiana tabacum cv. Samsun) cultivados durante 20 dias após a semeadura foram borrifados com 2 mM, 5 mM ou 10 mM de ácido glutâmico, alanina ou lisina, e as plantas foram cultivadas. Após 24 horas da borrifação, 200 mg de amostra de tecido foram coletados a partir da 4a folha de folhagem, extração de RNA, síntese de cDNA e análise de expressão de gene NtWRKY por PCR em tempo real foram realizadas do mesmo modo como realizadas no Exemplo 1. As sequências dos iniciadores usados são mostradas na Tabela 2. Para o controle negativo, a água foi borrifada.[0079] Whole bodies of tobacco plants (Nicotiana tabacum cv. Samsun) grown for 20 days after sowing were sprayed with 2 mM, 5 mM or 10 mM glutamic acid, alanine or lysine, and the plants were cultivated. After 24 hours of spraying, 200 mg of tissue sample was collected from the 4th foliage leaf, RNA extraction, cDNA synthesis and analysis of NtWRKY gene expression by real-time PCR were performed in the same manner as performed in Example 1. The sequences of the primers used are shown in Table 2. For the negative control, water was sprayed.

[0080] Os resultados da avaliação realizada com três vezes os testes (n=3) são mostrados na Figura 11. As quantidades de expressão do gene são representadas com quantidades de expressão relativa ao gene NtActin. Como resultado, em comparação com o controle, uma atividade de indução de expressão do gene foi definitivamente confirmada para ácido glutâmico e alanina, mas a atividade não foi confirmada para lisina. Tabela 2: Iniciadores para PCR em tempo real

[0080] The results of the evaluation performed with three times the tests (n=3) are shown in Figure 11. The gene expression amounts are represented with expression amounts relative to the NtActin gene. As a result, compared to the control, a gene expression inducing activity was definitely confirmed for glutamic acid and alanine, but the activity was not confirmed for lysine. Table 2: Real-time PCR primers

[Example 3] Effect of Lysine to Control Coffea Plant Rust Disease

[0081] Para verificar o efeito da lisina para o controle da doença de ferrugem em um campo real, um teste de campo foi realizado em um campo de teste de café no estado de Minas Gerais, Brasil. O teste de campo foi realizado sob restrições na entrada de pessoas estranhas.[0081] To verify the effect of lysine for the control of rust disease in a real field, a field test was carried out in a coffee test field in the state of Minas Gerais, Brazil. The field test was carried out under restrictions on the entry of outsiders.

[0082] As árvores de uma planta Coffea foram divididas em um grupo de controle (grupo controle, sem tratamento), um grupo de tratamento com lisina apenas (sem fungicida), um grupo de uso concomitante de lisina e fungicida (fungicida a 50%) e um grupo de tratamento com fungicida apenas (100 % de fungicida). Foram usadas dez árvores para cada grupo, e o teste foi realizado em quadruplicata (40 árvores no total para cada grupo). Para o grupo de tratamento isolado de lisina, soluções aquosas de 2, 4 e 8 mM de lisina foram borrifadas nas superfícies de folhas das árvores de Coffea arabica. A borrifação foi realizada cinco vezes no total em outubro, novembro, janeiro, fevereiro e abril. Para o grupo de uso concomitante de lisina e fungicida, um fungicida (Opera (marca registrada), BASF A.G.) foi borrifado em superfícies de folhas em um volume de 0,5 L/ha (cerca de 50% da concentração comum) junto com a solução aquosa de lisina. Para o grupo de tratamento com fungicida apenas, o fungicida (Opera) foi borrifado sobre superfícies de folhas em um volume de 1 L/ha (cerca de 100% da concentração comum) em vez da solução aquosa de lisina. Opera é uma mistura de piraclostrobina e epóxiconazol. O volume da solução aquosa de lisina borrifada foi de 2500 L/há, tanto para o grupo de tratamento com lisina apenas, como para o grupo de uso concomitante. As concentrações de lisina de 2 mM, 4 mM e 8 mM correspondem a pesos de lisina borrifados de 0,73 kg/ha, 1,5 kg/ha e 2,9 kg/ha, respectivamente. A concentração dos fungicidas borrifados contidos em Opera corresponde a cerca de 0,7g/L.[0082] The trees of a Coffea plant were divided into a control group (control group, no treatment), a lysine only treatment group (no fungicide), a lysine and fungicide concomitant use group (50% fungicide ) and a fungicide-only treatment group (100% fungicide). Ten trees were used for each group, and the test was performed in quadruplicate (40 trees in total for each group). For the isolated lysine treatment group, aqueous solutions of 2, 4, and 8 mM lysine were sprayed onto leaf surfaces of Coffea arabica trees. Spraying was carried out five times in total in October, November, January, February and April. For the concomitant lysine and fungicide use group, a fungicide (Opera (trademark), BASF A.G.) was sprayed onto leaf surfaces in a volume of 0.5 L/ha (about 50% of the usual concentration) along with the aqueous lysine solution. For the fungicide-only treatment group, the fungicide (Opera) was sprayed onto leaf surfaces in a volume of 1 L/ha (about 100% of the usual concentration) instead of the aqueous lysine solution. Opera is a mixture of pyraclostrobin and epoxyconazole. The volume of sprayed lysine aqueous solution was 2500 L/ha, both for the lysine-only treatment group and for the concomitant use group. Lysine concentrations of 2 mM, 4 mM, and 8 mM correspond to sprayed lysine weights of 0.73 kg/ha, 1.5 kg/ha, and 2.9 kg/ha, respectively. The concentration of sprayed fungicides contained in Opera corresponds to approximately 0.7g/L.

[0083] O efeito de controle da doença de ferrugem foi avaliado em março e abril. Os resultados são mostrados nas Figuras 12 e 13. Nos gráficos, os eixos verticais indicam o grau de doença de ferrugem (intensidade da ferrugem) com base na severidade de que a infecção foi confirmada para as 50 folhas coletadas aleatoriamente de dez árvores, que é considerado como 100%. No grupo de tratamento com lisina apenas, o efeito de controle da doença de ferrugem pela lisina foi observado para todos os grupos de concentrações de 2 mM, 4 mM e 8 mM. Para o grupo de uso concomitante de lisina e fungicida, foi observada uma tendência de que o efeito de controle da ferrugem foi aumentado em março em comparação com o uso de lisina apenas, e o efeito foi notável em abril. Estes resultados demonstraram que a quantidade de produtos agroquímicos, como o agente antimicrobiano, pode ser reduzida pelo uso de lisina.[0083] The rust disease control effect was evaluated in March and April. The results are shown in Figures 12 and 13. In the graphs, the vertical axes indicate the degree of rust disease (rust intensity) based on the severity that infection was confirmed for the 50 leaves randomly collected from ten trees, which is considered as 100%. In the lysine-only treatment group, the rust disease control effect of lysine was observed for all 2 mM, 4 mM, and 8 mM concentration groups. For the concurrent use of lysine and fungicide group, a trend was observed that the rust control effect was increased in March compared to the use of lysine alone, and the effect was notable in April. These results demonstrated that the amount of agrochemicals, such as the antimicrobial agent, can be reduced by the use of lysine.

Industrial Applicability

[0084] Resistência a doenças de uma planta Coffea pode ser intensificada com o intensificador de resistência a doenças da presente invenção, sendo eficaz para o controle da doença. Lisina ou um subproduto de fermentação de lisina, como ingrediente do intensificador de resistência a doenças, mostra pouca influência sobre o meio ambiente e é altamente segura. Ao intensificar a resistência a doenças com lisina, uma doença de uma planta Coffea pode ser efetivamente evitada com uma quantidade menor de agente antimicrobiano em comparação com a quantidade comumente usada.[0084] Disease resistance of a Coffea plant can be enhanced with the disease resistance enhancer of the present invention, being effective for disease control. Lysine or a by-product of lysine fermentation, as a disease resistance enhancer ingredient, shows little influence on the environment and is highly safe. By enhancing disease resistance with lysine, a disease of a Coffea plant can be effectively prevented with a smaller amount of antimicrobial agent compared to the commonly used amount.

Claims

1. Method for controlling a disease of a Coffea plant, characterized in that it comprises applying lysine to the Coffea plant, wherein the disease is rust disease, wherein lysine is applied at a concentration of 2 mM to 8 mM.

2. Method according to claim 1, characterized in that lysine is applied in an amount of 50 g/ha to 200 kg/ha.

3. Method according to claim 1 or 2, characterized in that it additionally comprises the application of one type of antimicrobial agent or two or more types of antimicrobial agents selected from antimicrobial agents of the strobilurin type, triazole type and copper compound type to the Coffea plant.

4. Method according to claim 3, characterized by the fact that the concentration of the antimicrobial agent(s) at the time of application is 70% or less of a common concentration.

5. Method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the lysine is L-lysine.

6. Use of lysine, characterized in that it is in the manufacture of a disease controlling agent for a Coffea plant, wherein the disease is rust disease, wherein the disease controlling agent is applied to a Coffea plant at a lysine concentration of 2 mM to 8 mM.

7. Use according to claim 6, characterized in that the disease control agent also contains one type of antimicrobial agent or two or more types of microbial agents selected from antimicrobial agents of the strobilurin type, triazole type, compound type of copper.

8. Use according to claim 7, characterized in that the disease control agent is applied to a Coffea plant at a concentration of antimicrobial agent(s) corresponding to 70% or less of a common concentration.

9. Use according to any one of claims 6 to 8, characterized in that the lysine is L-lysine.

10. Use according to any one of claims 6 to 9, characterized in that the Coffea plant is selected from the group consisting of Coffea arabica, Coffea robusta, and Coffea liberica.