BR112018002897B1 - DETERGENT COMPOSITION WITH GOOD ENZYMATIC STABILITY AND HIGH PERFORMANCE FOR WASHING FABRICS AND SURFACES - Google Patents
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Abstract
composição detergente de boa estabilidade enzimática e alto desempenho para lavagem de tecidos e superfícies. a presente invenção está relacionada a composições detergentes de boa estabilidade enzimática e alto desempenho para lavagem de tecidos e superfícies compreendendo uma combinação de tensoativos e pelo menos uma enzima. para isto, é proposto uma composição que compreende pelo menos um tensoativo selecionado dentre aniônico, anfotérico e não iônico, em que o tensoativo aniônico é pelo menos um dentre lauril éter sulfato de sódio (sles) 10 e sulfonato de alquilbenzeno linear (las) e em que o tensoativo anfotérico é pelo menos um dentre amina óxida (ao) e cocamidopropila betaína (capb), e que o tensoativo não iônico apresenta um grau de etoxilação variando entre 3eo e 10eo além disso, pelo menos uma enzima é selecionada do grupo consistindo de protease, amilase, mananase, lipase, pectina liase e celulase.detergent composition with good enzymatic stability and high performance for washing fabrics and surfaces. the present invention relates to detergent compositions of good enzyme stability and high performance for washing fabrics and surfaces comprising a combination of surfactants and at least one enzyme. for this, a composition is proposed that comprises at least one surfactant selected from anionic, amphoteric and nonionic, wherein the anionic surfactant is at least one of sodium lauryl ether sulfate (sles) 10 and linear alkylbenzene sulfonate (las) and wherein the amphoteric surfactant is at least one of oxidized amine (ao) and cocamidopropyl betaine (capb), and wherein the nonionic surfactant has a degree of ethoxylation ranging from 3eo to 10eo; further, at least one enzyme is selected from the group consisting of protease, amylase, mannanase, lipase, pectin lyase and cellulase.
Description
[1] A presente invenção está relacionada a composições detergentes de boa estabilidade enzimática e alto desempenho para lavagem de tecidos e superfícies compreendendo uma combinação de tensoativos e pelo menos uma enzima.[1] The present invention relates to detergent compositions of good enzyme stability and high performance for washing fabrics and surfaces comprising a combination of surfactants and at least one enzyme.
[2] Os compostos tensoativos são substâncias anfifílicas, ou seja, possuem em sua estrutura molecular grupos com características antagônicas. Em todas as moléculas tensoativas há um grupamento polar que possui afinidade por água (e por outros compostos polares), denominado grupo hidrofílico. Na mesma molécula, há também o chamado grupo hidrofóbico, que por sua natureza apolar, não possui afinidade por água, mas sim por substâncias oleosas (ou, de uma maneira geral, substâncias apolares), sendo chamado muitas vezes de grupamento lipofílico.[2] Surfactant compounds are amphiphilic substances, that is, they have groups with antagonistic characteristics in their molecular structure. In all surface-active molecules there is a polar group that has an affinity for water (and other polar compounds), called a hydrophilic group. In the same molecule, there is also the so-called hydrophobic group, which, due to its nonpolar nature, does not have an affinity for water, but for oily substances (or, in general, nonpolar substances), being often called a lipophilic group.
[3] Em resumo, os tensoativos são substâncias que modificam as tensões superficial e interfacial, do que decorre uma série de propriedades correlatas e aplicações.[3] In summary, surfactants are substances that modify surface and interfacial tensions, resulting in a series of correlated properties and applications.
[4] Os alquil sulfatos, juntamente com os alquil éter sulfatos são os produtos mais utilizados como agentes tensoativos espumógenos em cosméticos capilares, sabonetes líquidos, produtos de higiene oral, entre outras aplicações. Dentre os alquil sulfatos, os mais importantes são os lauril sulfatos que possuem ampla aplicação na indústria cosmética. As principais características dos alquil sulfatos são seu alto poder espumógeno, alta reserva de viscosidade, boa solubilidade em água, odor agradável e completa biodegradabilidade.[4] Alkyl sulfates, along with alkyl ether sulfates, are the most used products as foaming surfactants in hair cosmetics, liquid soaps, oral hygiene products, among other applications. Among the alkyl sulfates, the most important are the lauryl sulfates that have wide application in the cosmetic industry. The main characteristics of alkyl sulfates are their high foaming power, high viscosity reserve, good water solubility, pleasant odor and complete biodegradability.
[5] Os lauril éter sulfatos, por suas propriedades diferenciadas, são mais hidrofílicos que seus correspondentes não etoxilados, possuem baixa irritabilidade aos olhos e à pele, baixo ponto de turvação, fácil controle de viscosidade a partir de adição de eletrólitos e maior resistência à dureza de água.[5] The lauryl ether sulfates, due to their differentiated properties, are more hydrophilic than their non-ethoxylated counterparts, have low eye and skin irritability, low cloud point, easy viscosity control from the addition of electrolytes and greater resistance to water hardness.
[6] Ainda, como tensoativos aniônicos tem-se os alquil sulfossuccinatos, de excelente poder umectante.[6] Also, as anionic surfactants there are the alkyl sulfosuccinates, with excellent wetting power.
[7] O estado da técnica apresenta algumas composições utilizadas para limpeza produzidas a partir de combinações de tensoativos.[7] The state of the art presents some compositions used for cleaning produced from combinations of surfactants.
[8] O documento US 7.608.573 se refere ao uso de tensoativos não iônicos e aniônicos e outros (solvente e cadeia sintética curta). A composição de limpeza pode ser usada para lavagem de roupa e superfícies. Esta referência reivindica uma composição de limpeza pesada natural consistindo de lauril sulfato de sódio, amina óxida C12, amina óxida C12-14 em pH de 7 a 13. Além disso, é mencionado o uso opcional de alguns materiais como corantes, alvejantes, espessantes e enzimas.[8] US 7,608,573 refers to the use of non-ionic and anionic and other surfactants (solvent and short synthetic chain). The cleaning composition can be used for washing clothes and surfaces. This reference claims a natural heavy cleaning composition consisting of sodium lauryl sulfate, C12 amine oxide, C12-14 amine oxide at pH 7 to 13. In addition, optional use of some materials such as dyes, bleaches, thickeners and enzymes.
[9] O documento US2010/0184633 menciona o uso de tensoativos sulfoestolide e também seus derivados e sais. A composição é útil para aplicações de remoção de mancha.[9] Document US2010/0184633 mentions the use of sulfoestolide surfactants and also their derivatives and salts. The composition is useful for stain removal applications.
[10] Esta patente reivindica o uso de um tensoativo sulfoestolide com pelo menos um tensoativo adicional. É mencionado que o tensoativo secundário poderia ser selecionado de um grupo de tensoativos, incluindo o lauril éter sulfonato. Sugere-se ainda um grupo de tensoativos para estabilizar espumas, em que é mencionado o uso de lauril cocoamidopropila betaína e lauril dimetil amina óxido.[10] This patent claims the use of a sulfoestolide surfactant with at least one additional surfactant. It is mentioned that the secondary surfactant could be selected from a group of surfactants including lauryl ether sulfonate. A group of surfactants for stabilizing foams is further suggested, in which the use of lauryl cocoamidopropyl betaine and lauryl dimethyl amine oxide is mentioned.
[11] O documento US 2010/0234271 se refere ao uso de tensoativos não iônicos e aniônicos e outros (solvente e cadeia sintética curta). A composição de limpeza pode ser usada para limpeza de roupa, superfícies macias e duras e limpadores.[11] US 2010/0234271 refers to the use of non-ionic and anionic and other surfactants (solvent and short synthetic chain). The cleaning composition can be used for cleaning clothing, soft and hard surfaces and cleaners.
[12] A composição consiste de lauril sulfato de sódio e um tensoativo sintético hidrofóbico selecionado de amina óxida. Ingredientes opcionais como enzimas, corantes, agentes construtores e fragrâncias também são descritos.[12] The composition consists of sodium lauryl sulfate and a hydrophobic synthetic surfactant selected from an amine oxide. Optional ingredients such as enzymes, dyes, building agents and fragrances are also described.
[13] Ainda, é mencionado que a composição não contém algumas moléculas, incluindo sulfatos de éter alquila, sulfonato de alquilbenzeno linear (LAS), ácido de sulfonato de alquilbenzeno linear (HLAS) ou etoxilado de nonilfenol.[13] Further, it is mentioned that the composition does not contain some molecules, including alkyl ether sulfates, linear alkylbenzene sulfonate (LAS), linear alkylbenzene sulfonate (HLAS) acid or nonylphenol ethoxylate.
[14] O documento WO 2003/041667 descreve uma composição compreendendo uma enzima estabilizada com pelo menos 30% de água. Entretanto, esta referência visa buscar benefícios no cuidado com a pele (suavidade da pele, maciez da pele, etc.). É mencionado que a composição fornece um produto de cuidado pessoal contendo enzima, em que a enzima apresenta elevada estabilidade e atividade.[14] WO 2003/041667 describes a composition comprising an enzyme stabilized with at least 30% water. However, this reference aims to seek benefits in skin care (skin smoothness, skin softness, etc.). It is mentioned that the composition provides an enzyme-containing personal care product, wherein the enzyme exhibits high stability and activity.
[15] Primeiro, esta anterioridade revela uma enzima estabilizada composta por um osmo-protetor selecionado do grupo compreendendo amina óxida. É descrito o uso da protease como enzima e o uso do inibidor de enzima, selecionado do grupo de derivados do ácido aril borônico.[15] First, this prior art reveals a stabilized enzyme composed of an osmo-protector selected from the group comprising amine oxide. The use of the protease as an enzyme and the use of the enzyme inhibitor, selected from the group of derivatives of aryl boronic acid, are described.
[16] É descrito que a composição compreende um tensoativo do grupo de tensoativo aniônico, não iônico, anfotérico zwiterionico e catiônico. Os tipos de tensoativos são restritos a sulfatos de éter alquila, amidopropilbetaínas alquila, alquilbetaínas e outros, incluindo misturas do mesmo.[16] It is described that the composition comprises a surfactant from the group of anionic, nonionic, amphoteric zwitterionic and cationic surfactant. The types of surfactants are restricted to alkyl ether sulfates, alkyl amidopropyl betaines, alkyl betaines and others, including mixtures thereof.
[17] O documento ainda revela um produto de cuidado pessoal contendo uma enzima, em que dita enzima é estável no armazenamento e é ativa na pele.[17] The document further discloses a personal care product containing an enzyme, wherein said enzyme is storage stable and active on the skin.
[18] Entretanto, a técnica ainda necessita de um desenvolvimento de um sistema eficiente de tensoativo para composições de limpeza, especialmente detergente líquido para lavagem de tecidos e superfícies, que, em combinação com enzimas, possa fornecer desempenho superior e estabilidade física e enzimática em relação às composições detergentes usuais encontradas no mercado e descritas no estado da técnica.[18] However, the technique still requires the development of an efficient surfactant system for cleaning compositions, especially liquid detergent for washing fabrics and surfaces, which, in combination with enzymes, can provide superior performance and physical and enzymatic stability in compared to the usual detergent compositions found on the market and described in the state of the art.
[19] De um modo amplo, a invenção propõe uma composição detergente que compreende uma combinação de tensoativos para ser utilizada na lavagem de tecidos e superfícies. A combinação de tensoativos compreende pelo menos um tensoativo aniônico, um tensoativo anfotérico, um tensoativo não iônico e pelo menos uma enzima. Esta combinação garante uma boa estabilidade enzimática e um melhor desempenho, permitindo a utilização de um teor de ativos menor do que o habitualmente utilizado no mercado.[19] Broadly, the invention proposes a detergent composition comprising a combination of surfactants for use in washing fabrics and surfaces. The combination of surfactants comprises at least one anionic surfactant, an amphoteric surfactant, a nonionic surfactant and at least one enzyme. This combination guarantees good enzymatic stability and better performance, allowing the use of a lower content of actives than is commonly used on the market.
[20] A vantagem acima e outras adicionais ficarão mais claras para os versados na técnica a partir da descrição abaixo e das figuras anexas:[20] The above and additional advantages will become clearer to those skilled in the art from the description below and the accompanying figures:
[21] A Figura 1 mostra um gráfico resultante do teste de estabilidade enzimática a 30°C referente às combinações de tensoativos 1, 2 e 3 definidas a seguir.[21] Figure 1 shows a graph resulting from the enzymatic stability test at 30°C for the
[22] A Figura 2 mostra um gráfico resultante do teste de estabilidade enzimática a 37°C referente às combinações de tensoativos 1, 2 e 3.[22] Figure 2 shows a graph resulting from the enzyme stability test at 37°C for
[23] A Figura 3 apresenta um gráfico resultante do teste de desempenho em manchas de óleo e gordura das composições contendo combinações de tensoativos 1 e 2, preparadas de acordo com a presente invenção, e composições 5 e 6 compatíveis com o estado da técnica.[23] Figure 3 shows a graph resulting from the oil and grease stain performance test of compositions containing combinations of
[24] A Figura 4 apresenta um gráfico resultante do teste de desempenho em proteínas das combinações de tensoativos 1 e 2, preparadas de acordo com a presente invenção, e composições 5 e 6 do estado da técnica.[24] Figure 4 presents a graph resulting from the protein performance test of
[25] A Figura 5 apresenta um gráfico resultante do teste de desempenho em amido das combinações de tensoativos 1 e 2, preparadas de acordo com a presente invenção, e composições 5 e 6 do estado da técnica.[25] Figure 5 shows a graph resulting from the starch performance test of
[26] A Figura 6 apresenta um gráfico resultante do teste de desempenho em manchas complexas das combinações de tensoativos 1 e 2, preparadas de acordo com a presente invenção, e composições 5 e 6 do estado da técnica.[26] Figure 6 shows a graph resulting from the complex spot performance test of
[27] A Figura 7 apresenta um gráfico resultante do teste de desempenho em manchas particuladas das combinações de tensoativos 1 e 2, preparadas de acordo com a presente invenção, e composições 5 e 6 do estado da técnica.[27] Figure 7 shows a graph resulting from the particulate stain performance test of
[28] A Figura 8 apresenta um gráfico resultante do teste de desempenho em manchas de pectina das combinações de tensoativos 1 e 2, preparadas de acordo com a presente invenção e, composições 5 e 6 do estado da técnica.[28] Figure 8 presents a graph resulting from the pectin stain performance test of
[29] A presente invenção refere-se a uma composição detergente que compreende uma combinação de tensoativos e pelo menos uma enzima para lavagem de tecidos e superfícies.[29] The present invention relates to a detergent composition comprising a combination of surfactants and at least one enzyme for washing fabrics and surfaces.
[30] Mais especificamente, a composição detergente da presente invenção compreende uma combinação de tensoativos compreendendo pelo menos um tensoativo selecionado dentre aniônico, anfotérico e não iônico, associada a pelo menos uma enzima.[30] More specifically, the detergent composition of the present invention comprises a combination of surfactants comprising at least one surfactant selected from anionic, amphoteric and nonionic, associated with at least one enzyme.
[31] O tensoativo aniônico é pelo menos um dentre lauril éter sulfato de sódio (SLES) e sulfonato de alquilbenzeno linear (LAS) e o tensoativo anfotérico é pelo menos um dentre amina óxida (AO) e cocamidopropila betaína (CAPB).[31] The anionic surfactant is at least one of sodium lauryl ether sulfate (SLES) and linear alkylbenzene sulfonate (LAS) and the amphoteric surfactant is at least one of amine oxide (AO) and cocamidopropyl betaine (CAPB).
[32] Além disso, o tensoativo não iônico utilizado na composição detergente preparada de acordo com a presente invenção apresenta um grau de etoxilação variando dentre 3EO e 10EO.[32] In addition, the non-ionic surfactant used in the detergent composition prepared according to the present invention has a degree of ethoxylation ranging from 3EO to 10EO.
[33] Preferencialmente, a pelo menos uma enzima é selecionada do grupo compreendendo protease, amilase, mananase, lipase, pectina liase e celulase.[33] Preferably, the at least one enzyme is selected from the group comprising protease, amylase, mannanase, lipase, pectin lyase and cellulase.
[34] Mais preferencialmente, a enzima protease é savinase ou liquanase e está presente na composição em uma proporção variando de 0,1% a 1%.[34] More preferably, the protease enzyme is savinase or liquanase and is present in the composition in a proportion ranging from 0.1% to 1%.
[35] Ainda, adicionalmente, as enzimas compreendem uma mistura multienzimática consistindo de amilase, mananase, lipase e pectina liase, em que esta mistura multienzimática está presente na composição em uma proporção variando dentre 0,2% a 0,6%.[35] Still further, the enzymes comprise a multienzyme mixture consisting of amylase, mannanase, lipase and pectin lyase, wherein this multienzyme mixture is present in the composition in a proportion ranging from 0.2% to 0.6%.
[36] O teor total da combinação de tensoativos presente na composição detergente da presente invenção varia de 6% a 20% em peso, valores significativamente menores do que os teores das composições usualmente comercializadas.[36] The total content of the combination of surfactants present in the detergent composition of the present invention varies from 6% to 20% by weight, values significantly lower than the contents of the compositions usually commercialized.
[37] A composição detergente produzida de acordo com a presente invenção apresenta uma faixa de pH variando de 7 a 10.[37] The detergent composition produced in accordance with the present invention has a pH range ranging from 7 to 10.
[38] Para comprovar a inventividade da combinação de tensoativos da presente invenção, foram realizados testes de estabilidade enzimática e desempenho, que são apresentados abaixo.[38] To prove the inventiveness of the surfactant combination of the present invention, enzyme stability and performance tests were performed, which are presented below.
[39] Para o teste de estabilidade enzimática, cinco tensoativos foram preparados com proporções fixas de mistura: Tensoativo 1: SLES; Tensoativo 2: CAPB; Tensoativo 3: LAS (30%) / 7EO (70%); Tensoativo 4: AO (30%) / 10EO (70%); Tensoativo 5: SLES (30%) / 7EO (70%).[39] For the enzyme stability test, five surfactants were prepared with fixed mixing ratios: Surfactant 1: SLES; Surfactant 2: CAPB; Surfactant 3: LAS (30%) / 7EO (70%); Surfactant 4: AO (30%) / 10EO (70%); Surfactant 5: SLES (30%) / 7EO (70%).
[40] Estes tensoativos foram associados com as seguintes enzimas: protease, amilase, mananase, lipase e pectina liase, cada qual testada individualmente.[40] These surfactants were associated with the following enzymes: protease, amylase, mannanase, lipase and pectin lyase, each tested individually.
[41] Mais especificamente, nas combinações 1, 2, 3 e 4, a protease utilizada foi a Savinase, enquanto que na combinação 5 a protease utilizada foi a Liquanase.[41] More specifically, in
[42] Para o teste de estabilidade enzimática, todas as corridas propostas foram preparadas sob condições de estabilidade como se segue: - Temperatura (°C): 30 e 37 - Período em tempo (semanas): Início, 4 e 8[42] For the enzyme stability test, all proposed runs were prepared under stability conditions as follows: - Temperature (°C): 30 and 37 - Time period (weeks): Start, 4 and 8
[43] O critério de aprovação após 8 semanas foi: - Desempenho “excelente” (faixa verde) se os resultados estão acima 70% a 100%; - Desempenho “satisfatório” (faixa amarela) se os resultados estão entre 50% e 70%; - Desempenho “inaceitável” (faixa vermelha) se os resultados estão abaixo de 50%.[43] The passing criteria after 8 weeks were: - “Excellent” performance (green band) if results are above 70% to 100%; - “Satisfactory” performance (yellow band) if the results are between 50% and 70%; - “Unacceptable” performance (red band) if results are below 50%.
[44] O método para análise de atividade da enzima protease foi realizado com auxílio do equipamento Konelab 30 Analyzer nos tempos 0, 4 e 8 semanas e os resultados foram fornecidos em KNPU(S) SX.[44] The method for analyzing protease enzyme activity was performed using the
[45] Primeiramente, o composto dimetil caseína presente na solução padrão preparada para o teste é hidrolisado pela enzima proteolítica em pequenos peptídeos como mostrados abaixo: [45] First, the dimethyl casein compound present in the standard solution prepared for the test is hydrolyzed by the proteolytic enzyme into small peptides as shown below:
[46] Os grupos amino primários formados neste processo reagem com ácido trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) formando um complexo colorido como mostrado abaixo: [46] The primary amino groups formed in this process react with trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) forming a colored complex as shown below:
[47] O desenvolvimento desta cor é monitorado pelo Konelab, para que a mudança na absorção por unidade de tempo possa ser calculada. Este aumento na absorção é proporcional à taxa de reação e, logo, à atividade da enzima.[47] The development of this color is monitored by Konelab, so that the change in absorption per unit time can be calculated. This increase in absorption is proportional to the rate of reaction and thus to the activity of the enzyme.
[48] Para a realização do teste, foram preparados os seguintes reagentes/substratos: - Solução de polioxietileno de dodecanol (Brij 35), 15% p/v - Solução de ácido 2,4,6-trinitrobenzeno sulfônico 0,2% p/v. - Solução de carga de sulfito de sódio, NaSO3 20% p/v (1,59 M NaSO3). - Tampão de borato 0,05 M, pH 9,0. - N, N-Dimetil caseína 0,32%, pH 8,0 (DMC 0,32%). - DMC 0,32% com SO3, (0,064 M NaSO3), DMC-SX.[48] To carry out the test, the following reagents/substrates were prepared: - Polyoxyethylene dodecanol solution (Brij 35), 15% w/v - 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid solution 0.2% p /v. - Sodium sulfite filler solution, 20% w/v NaSO3 (1.59 M NaSO3). - 0.05 M borate buffer, pH 9.0. - N,N-Dimethyl casein 0.32%, pH 8.0 (DMC 0.32%). - DMC 0.32% with SO3, (0.064 M NaSO3), DMC-SX.
[49] Para preparar a solução padrão, procedeu-se com as seguintes etapas: a) Pesar uma quantidade de enzima padrão correspondente a 2,40 unidades de KNUP(S) SX; b) Dissolver no tampão de borato 0,05 M e pH 9,0 em um balão volumétrico de 500 mL; c) Agitar em um agitador magnético por 30 minutos; d) A curva padrão é uma curva de 7 pontos com um fator 4 entre os pontos padrão mais baixo e mais alto. O volume total recomendado de diluição é 1200 μL. As soluções padrão são preparadas pela diluição da solução de carga com tampão de borato 0,05 M e pH 9,0 em um diluidor diretamente em copos de amostra, de acordo com a tabela abaixo: [49] To prepare the standard solution, proceed with the following steps: a) Weigh an amount of standard enzyme corresponding to 2.40 units of KNUP(S) SX; b) Dissolve in 0.05 M borate buffer and pH 9.0 in a 500 mL volumetric flask; c) Stir in a magnetic stirrer for 30 minutes; d) The standard curve is a 7-point curve with a factor of 4 between the lowest and highest standard points. The recommended total volume of dilution is 1200 μL. Standard solutions are prepared by diluting the loading solution with borate buffer 0.05M and pH 9.0 in a dilutor directly into sample cups, according to the table below:
[50] Para preparação da amostra a ser testada, utilizou-se um teor de enzima conhecido e procedeu-se como descrito abaixo: a) Pesar aproximadamente 0,5 - 1,0 g de amostra e dissolver em um balão volumétrico com tampão de borato 0,5 M e pH9,0; b) Agitar em um agitador magnético por 15 a 45 minutos; c) As amostras são ainda diluídas com tampão de borato 0,5 M e pH 9,0 para atingir uma atividade de aproximadamente 0,30 mKNPU(S) SX/ml; d) Adicionar a combinação de tensoativos de acordo com a presente invenção.[50] For the preparation of the sample to be tested, a known enzyme content was used and proceeded as described below: a) Weigh approximately 0.5 - 1.0 g of sample and dissolve in a volumetric flask with buffer of borate 0.5M and pH9.0; b) Shake on a magnetic stirrer for 15 to 45 minutes; c) The samples are further diluted with borate buffer 0.5 M and pH 9.0 to reach an activity of approximately 0.30 mKNPU(S) SX/ml; d) Adding the surfactant combination according to the present invention.
[51] Após a preparação da amostra e reagentes, são postos os reagentes DMC 0,32% com SO3 e TNBS 0,2% no Konelab, juntamente com a solução padrão e a amostra.[51] After preparation of the sample and reagents, the reagents DMC 0.32% with SO3 and TNBS 0.2% are placed in the Konelab, along with the standard solution and the sample.
[52] A atividade das enzimas das amostras é determinada com relação a uma curva padrão. Com base nos resultados em abs/min para as enzimas padrão, um padrão com as atividades das soluções padrão em mKNPU(S) SX/mL é desenhado no eixo x do gráfico, enquanto os valores de abs/min das soluções padrão é desenhado no eixo y. Para plotar o gráfico, um algoritmo logit/log4 é utilizado.[52] The enzyme activity of the samples is determined with respect to a standard curve. Based on the results in abs/min for the standard enzymes, a pattern with the activities of the standard solutions in mKNPU(S) SX/mL is drawn on the x-axis of the graph, while the abs/min values of the standard solutions are drawn on the y axis. To plot the graph, a logit/log4 algorithm is used.
[53] Os valores da atividade da enzima das amostras diluídas são retiradas da curva padrão. A atividade das amostras é calculada usando a seguinte fórmula: S = leitura da curva padrão em mKNPU(S)SX/ml; V = Volume do balão volumétrico usado em mL; F = Fator de diluição para segunda diluição; W = Peso da amostra em g; e 1000 = Fator de conversão de mKNPU(S)SX para KNPU(S)SX.[53] Enzyme activity values of diluted samples are taken from the standard curve. The activity of the samples is calculated using the following formula: S = standard curve reading in mKNPU(S)SX/ml; V = Volume of the volumetric flask used in mL; F = Dilution factor for second dilution; W = Sample weight in g; and 1000 = Conversion factor from mKNPU(S)SX to KNPU(S)SX.
[54] O método para análise de atividade das enzimas amilase, mananase, lipase e pectina liase também é realizado pelo equipamento Konelab 30 Analyzer nos tempos 0, 4 e 8 semanas e os resultados são fornecidos em SNUX.[54] The method for analyzing the activity of amylase, mannanase, lipase and pectin lyase enzymes is also performed by the
[55] Por este método, o 1,4-alfa-D-glucanohidrolase nas amostras e a enzima alfa-glucosidase nos reagente hidrolisam o substrato (4,6- etilideno(G7)- q-nitrofenil(G1)-alfa-D-maltoeptaoside(etilideno-G7PNP)) à glicose e ao q- nitrofenol de cor amarelada.[55] By this method, the 1,4-alpha-D-glucanohydrolase in the samples and the alpha-glucosidase enzyme in the reagents hydrolyze the substrate (4,6-ethylidene(G7)-q-nitrophenyl(G1)-alpha-D -maltoeptaoside(ethylidene-G7PNP)) to glucose and yellowish q-nitrophenol.
[56] A taxa de formação do q-nitrofenol pode ser observada pelo Konelab 30. Com a expressão da taxa de reação, é possível verificar a atividade enzimática.
[56] The rate of q-nitrophenol formation can be observed by
[57] Para a realização do reagentes/substratos: - Solução de Brij 35, 15% p/v; - Estabilizador de cloreto de cálcio 3M com solução de carga de Brij 0,25%; - Estabilizador de 1% (cloreto de cálcio 0,03M com Brij 0,0025%);[57] To perform the reagents/substrates: -
[58] Para preparar a solução padrão, deve-se proceder as seguintes etapas: a) Pesar uma quantidade de enzima padrão correspondente a 26,6 unidades de SNUX; b) Transferir o padrão a um balão volumétrico de 250 ml contendo aproximadamente 200 ml de água desmineralizada; c) Adicionar 2,5 ml de estabilizador de cloreto de cálcio 3M com solução de carga de Brij 0,25% e preencher até 250 ml com água desmineralizada (106,5 SNUX/ml); d) Agitar em um agitador magnético por pelo menos 5 minutos; e) A partir da solução de carga as seguintes soluções padrão são preparadas por meio de diluição. O volume total é de 1200 μL. O estabilizador de 1% (cloreto de cálcio 0,03M com Brij 0,0025%) é usado como o diluente para todas as diluições subsequentes. A curva padrão é uma curva de 7 pontos com um fator 3 entre os pontos padrão mais baixo e mais alto. [58] To prepare the standard solution, proceed as follows: a) Weigh an amount of standard enzyme corresponding to 26.6 units of SNUX; b) Transfer the standard to a 250 ml volumetric flask containing approximately 200 ml of demineralized water; c) Add 2.5 ml of 3M calcium chloride stabilizer with 0.25% Brij loading solution and fill up to 250 ml with demineralized water (106.5 SNUX/ml); d) Shake on a magnetic stirrer for at least 5 minutes; e) From the loading solution the following standard solutions are prepared by dilution. The total volume is 1200 μL. The 1% stabilizer (0.03M calcium chloride with 0.0025% Brij) is used as the diluent for all subsequent dilutions. The standard curve is a 7-point curve with a factor of 3 between the lowest and highest standard points.
[59] As amostras a serem testadas devem ser diluídas, pelo menos, 50 vezes e preparadas como descrito abaixo: a) Pesar aproximadamente 1,0 g de amostra e dissolver em um balão volumétrico com água desmineralizada; b) Adicionar água desmineralizada em quantidade equivalente a cerca de três quartos do volume do balão volumétrico; c) Adicionar estabilizador de cloreto de cálcio 3 M com solução de carga de Brij 0,25% equivalente a 1% do volume total do balão e preencher com água desmineralizada; d) Agitar por aproximadamente 15 minutos em um agitador magnético; e) As amostras são ainda diluídas com estabilizador 1% (cloreto de cálcio 3 M com solução de carga de Brij 0,25%) no diluidor. A diluição no diluidor é feita diretamente no frasco da amostra; f) Adicionar a combinação de tensoativos de acordo com a presente invenção; g) Cada pesagem é analisada uma vez no Konelab analyzer.[59] The samples to be tested must be diluted at least 50 times and prepared as described below: a) Weigh approximately 1.0 g of sample and dissolve in a volumetric flask with demineralized water; b) Add demineralized water in an amount equivalent to about three quarters of the volume of the volumetric flask; c) Add 3 M calcium chloride stabilizer with 0.25% Brij loading solution equivalent to 1% of the total volume of the flask and fill with demineralized water; d) Stir for approximately 15 minutes on a magnetic stirrer; e) The samples are further diluted with 1% stabilizer (3M calcium chloride with 0.25% Brij loading solution) in the extender. Dilution in the diluter is done directly in the sample vial; f) Adding the surfactant combination according to the present invention; g) Each weighing is analyzed once in the Konelab analyzer.
[60] A análise das amostras compreende as seguintes etapas: a) Pipetar 200 μl de alfa-glucosidase nas cubetas; b) Pipetar 16 μl de solução padrão ou de amostra nas cubetas; c) O alfa-glucosidase e a solução de enzima são incubadas por 300 segundos; d) 20 μl de substrato é pipetado nas cubetas. A mistura glucosidase/amilase/substrato é incubada por 180 segundos; e) A absorção é medida a cada 18 segundos. Um total de sete medições de absorção são realizadas em cada amostra.[60] The analysis of the samples comprises the following steps: a) Pipette 200 μl of alpha-glucosidase into the cuvettes; b) Pipette 16 μl of standard solution or sample into the cuvettes; c) The alpha-glucosidase and the enzyme solution are incubated for 300 seconds; d) 20 μl of substrate is pipetted into the cuvettes. The glucosidase/amylase/substrate mixture is incubated for 180 seconds; e) Absorption is measured every 18 seconds. A total of seven absorption measurements are performed on each sample.
[61] A atividade das amostras de enzimas é determinada com relação a uma curva padrão. Um gráfico da concentração conhecida do padrão no eixo x versus a resposta do equipamento Konelab 30 analyzer no eixo y é estabelecido pelo programa Analytical Administration usando um algoritmo logit/log4.[61] The activity of enzyme samples is determined against a standard curve. A plot of the known concentration of the standard on the x-axis versus the response of the Konelab 30 analyzer on the y-axis is established by the Analytical Administration program using a logit/log4 algorithm.
[62] Os resultados são calculados automaticamente no programa Analytical Administration e a atividade da enzima da amostra, em SNUX/g, é calculada usando a seguinte fórmula: S-V-F S = leitura da curva padrão em mSNUX/ml; V = Volume do balão volumétrico em mL; F = Fator de diluição para segunda diluição; W = Peso da amostra em g; e 1000 = Fator de conversão de mSNUX para SNUX.[62] The results are automatically calculated in the Analytical Administration program and the enzyme activity of the sample, in SNUX/g, is calculated using the following formula: SVF S = standard curve reading in mSNUX/ml; V = Volume of the volumetric flask in mL; F = Dilution factor for second dilution; W = Sample weight in g; and 1000 = Conversion factor from mSNUX to SNUX.
[63] Os resultados dos testes a 30°C são apresentados no gráfico da Figura 1. Pode-se verificar que a combinação de tensoativos 1, 2, 3 e 5 associados as enzimas apresentam resultados ótimos e a combinação de tensoativo 4 apresenta resultado satisfatório.[63] The test results at 30°C are shown in the graph of Figure 1. It can be seen that the combination of
[64] A Figura 2 apresenta resultados para o teste de estabilidade enzimática a 37°C, evidenciado boa estabilidade das combinações de tensoativos da presente invenção, mesmo em condição severa de temperatura e tempo.[64] Figure 2 presents results for the enzyme stability test at 37°C, showing good stability of the surfactant combinations of the present invention, even under severe temperature and time conditions.
[65] Para o teste de desempenho, foram preparadas duas combinações de tensoativos com proporções fixas de mistura de acordo com a presente invenção e duas amostras com tensoativos conhecidos do estado da técnica.[65] For the performance test, two combinations of surfactants with fixed mixing ratios according to the present invention and two samples with known surfactants from the state of the art were prepared.
[66] As combinações de tensoativos preparadas de acordo com a presente invenção são apresentadas abaixo: 1) SLES / Amina Óxida; 2) SLES / Cocamidopropila betaína / Amina Óxida. Os tensoativos conhecidos da técnica e utilizados no teste para efeito comparativo são: 5) Linear Alquilbenzeno Sulfonato de Sódio / Alquil Éter Sulfato de Sódio / Alquilpolietóxilado; 6) Linear Alquilbenzeno sulfonato de sódio / Alquil Éter Sulfato de Sódio / Polialquiletoxilado tensoativo não-iônico.[66] The surfactant combinations prepared in accordance with the present invention are shown below: 1) SLES / Amine Oxide; 2) SLES / Cocamidopropyl Betaine / Amine Oxide. The surfactants known in the art and used in the test for comparative effect are: 5) Linear Sodium Alkylbenzene Sulfonate / Sodium Alkyl Ether Sulfate / Polyethoxylated Alkylbenzene; 6) Linear Sodium Alkylbenzene Sulfonate / Sodium Alkyl Ether Sulfate / Polyalkylethoxylated non-ionic surfactant.
[67] O teste foi realizado para comparar o desempenho dos tensoativos em relação à limpeza de manchas que são mais comuns aos consumidores. As manchas foram agrupadas para equilibrar a carga de mancha, evitando concentração excessiva de sujidade no mesmo grupo. A lista de manchas utilizadas no teste é apresentada abaixo: [67] The test was carried out to compare the performance of surfactants in terms of cleaning stains that are more common to consumers. The stains were grouped to balance the stain load, avoiding excessive concentration of soil in the same group. The list of stains used in the test is presented below:
[68] É importante ressaltar que as mesmas enzimas foram empregadas no teste, de modo a ser possível a realização da comparação.[68] It is important to note that the same enzymes were used in the test, in order to make the comparison possible.
[69] A Figura 3 apresenta o resultado de desempenho no grupo de óleo e gordura através do gráfico de boxplot. Observa-se que o desempenho das combinações de tensoativos 1 e 2 apresentam uma clara superioridade aos tensoativos 5 e 6 conhecidos da técnica.[69] Figure 3 presents the performance result in the oil and fat group through the boxplot plot. It is observed that the performance of combinations of
[70] A mesma conclusão pode ser verificada nos gráficos das Figuras 4 a 8.[70] The same conclusion can be seen in the graphs in Figures 4 to 8.
[71] A partir dos resultados dos testes demonstrados, é possível concluir que as combinações de tensoativos preparadas de acordo com a presente invenção apresentam desempenho superior aos tensoativos conhecidos da técnica com relação a diversos tipos de manchas e sujidades presentes no tecido e superfície.[71] From the results of the tests demonstrated, it is possible to conclude that the combinations of surfactants prepared according to the present invention present superior performance to the surfactants known in the art with respect to various types of stains and dirt present on the fabric and surface.
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