BRPI1107293A2 - PRODUCTION OF A BIODEGRADABLE BIODETERGENT FROM A BIOFISSURACTANT - Google Patents
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Abstract
"PRODUÇÃO DE UM BIODETERGENTE BIODEGRADÁVEL A PARTIR DE UM BIOSSURFACTANTE". A presente invenção, que em apenas um produto, conjuga as principais propriedades do sabão e do detergente sintético, proporciona uma alternativa ao uso destes últimos, pois, agrega do sabão as características de maior biodegradabilidade e do detergente a vantagem de agir de forma ainda eficiente mesmo quando utilizado em águas duras. Inicialmente produziu-se o biossurfactante denominado de liposan através da fermentação aeróbia, utilizando-se uma cepa da levedura Yarrowia lipolytica, glicose como fonte de carbono preferencialmente a 20 g/L utilizado como fonte de carbono, extrato de levedura preferencialmente 10 g/L e peptona bacteriológica 6,4 g/L utilizados como fonte de nitrogênio. As condições do processo foram de pH preferencialmente 7,0, temperatura preferencialmente 35e agitação preferencialmente 150 rpm. Após a separação e extração do liposan (reagente 1), realizou-se uma reação química estequimétrica com hidróxido de sódio (reagente 2) e formulou-se o biodetergente adicionando-se a dietanolamida de ácido graxo, cloreto de sódio e formol como agente espumante/estabilizante, espessante e conservante, respectivamente. Finalmente completou-se o volume final com água destilada. A eficiência do detergente foi avaliada comparando as viscosidades, através de um reômetro, de uma amostra de óleo bruto com uma emulsão água produzida/óleo. Após análise verificou-se uma redução da viscosidade em torno de 8%. Observou-se também através da análise de DSC que não foi detectada nenhuma interação química entre o biodetergente produzido e os sais presentes na água produzida, mostrando assim uma boa tolerância à força iônica. Em relação à capacidade de produzir espuma e de remover sujidades, o biodetergente produzido apresentou um poder espumante e uma ação detergente semelhante quando comprado ao sintético comercial, podendo desta forma ser utilizado em substituição ao mesmos pelas vantagens apresentadas."PRODUCTION OF A BIODEGRADABLE BIODETERGENT FROM A BIOSAFACTANT". The present invention, which in one product, combines the main properties of soap and synthetic detergent, provides an alternative to the use of the latter, since it adds the most biodegradable characteristics of soap and the detergent has the advantage of still efficient acting. even when used in hard water. Biosurfactant called liposan was initially produced by aerobic fermentation using a strain of Yarrowia lipolytica yeast, glucose as carbon source preferably at 20 g / l used as carbon source, yeast extract preferably 10 g / l and bacteriological peptone 6.4 g / L used as a nitrogen source. The process conditions were preferably pH 7.0, preferably temperature 35 and stirring preferably 150 rpm. After separation and extraction of liposan (reagent 1), a stoichiometric chemical reaction with sodium hydroxide (reagent 2) was performed and the biodetergent was formulated by adding fatty acid diethanolamide, sodium chloride and formaldehyde as a foaming agent. / stabilizer, thickener and preservative, respectively. Finally the final volume was made up with distilled water. Detergent efficiency was evaluated by comparing the viscosities, through a rheometer, of a crude oil sample with a produced water / oil emulsion. After analysis a viscosity reduction of around 8% was found. It was also observed by DSC analysis that no chemical interaction was detected between the produced biodetergent and the salts present in the produced water, thus showing a good tolerance to the ionic strength. Regarding the ability to foam and remove dirt, the produced bio-detergent had a foaming power and a similar detergent action when compared to commercial synthetic, and can therefore be used instead for the advantages presented.
Description
"PRODUÇÃO DE UM BIODETERGENTE BIODEGRADÁVEL A PARTIR DE UM BIOSSURFACTANTE"."PRODUCTION OF A BIODEGRADABLE BIODETERGENT FROM A BIOSAFACTANT".
Refere-se a presente invenção ao desenvolvimento de um biodetergente, para uso em várias indústrias, como alternativo ao surfactante sintético derivado do petróleo e produzido a partir de um biossurfactante denominado de liposan, obtido em escala de bancada por fermentação aeróbia, usando-se uma cepa da levedura Yarrowia lipolytica. Como fonte de carbono utilizou-se a glicose preferencialmente a 20 g/L utilizado como fonte de carbono, extrato de levedura preferencialmente 10 g/L e peptona bacteriológica 6,4 g/L utilizados como fonte de nitrogênio.The present invention relates to the development of a biodetergent for use in various industries as an alternative to petroleum-derived synthetic surfactant produced from a liposan biosurfactant obtained on a bench scale by aerobic fermentation using a Yarrowia lipolytica yeast strain. As carbon source glucose was preferably used at 20 g / l used as carbon source, yeast extract preferably 10 g / l and bacteriological peptone 6.4 g / l used as nitrogen source.
Atualmente, como a maioria dos surfactantes disponíveis comercialmente é sintetizada a partir de derivados de petróleo, estes representam uma importante fonte de poluição, causando efeitos biológicos adversos a organismos aquáticos. Na indústria de detergentes, apesar das várias marcas disponíveis no mercado serem consideradas biodegradáveis e amparadas pela legislação em vigor, sabe-se que na verdade os componentes ativos são tensoativos obtidos por via química e não bioquímica, ou seja, o que houve foi apenas a mudança do principal componente ativo, o alquil benzeno sulfonato de sódio de cadeia ramificada pelo de cadeia linear, o que de fato facilitou a degradação da molécula por microrganismos, mas não tanto quanto ao comparado com os surfactantes naturais.Currently, as most commercially available surfactants are synthesized from petroleum derivatives, they represent a major source of pollution causing adverse biological effects on aquatic organisms. In the detergent industry, although several brands available on the market are considered biodegradable and supported by the current legislation, it is known that the active components are surfactants obtained chemically and not biochemically, that is, only change of the main active component, straight chain branched-chain alkyl benzene sulfonate sodium, which in fact facilitated the degradation of the molecule by microorganisms, but not as much as compared to natural surfactants.
Com intuito de solucionar tais inconvenientes, é que apresentamos um processo biotecnológico de desenvolvimento de um biodetergente, a partir da reação estequiométrica entre o biossurfactante denominado de liposan e hidróxido de sódio, que atenda ao apelo ambiental e que disponibilize no mercado um novo produto alternativo aos já existentes, utilizando uma nova tecnologia que possa estar inserida na promessa de desenvolvimento industrial sustentável que prima, sobretudo, pelo uso de tecnologias limpas. Para se chegar à composição do biodetergente, inicialmente foi realizado um planejamento experimental com objetivo de encontrar quais as melhores condições de processo para obtenção do biossurfactante. Para avaliar os resultados determinaram-se como variáveis respostas as seguintes análises: índice de emulsificação E24 com tolueno; índice de emulsificação E24 com hexano; tensão superficial final; biomassa produzida; produção de liposan e consumo de glicose. Após a análise do planejamento experimental, concluiu-se que o pH preferencialmente 7,0, a temperatura preferencialmente de 35°C e agitação preferencialmente de 150 rpm, foram os fatores que mais influenciaram na produção do biossurfactante. Assim, foi realizada uma nova fermentação nestas condições para acompanhar o consumo de glicose, a produção de liposan e a concentração micelar crítica durante as 120 horas. A concentração de glicose presente no meio de cultivo foi quantificada pelo método da glicose oxidase utilizando um kit enzimático para análise colorimétrica de glicose (HUMANGmbH-Germany) e o objetivo foi acompanhar o consumo da mesma durante a fermentação. A quantificação indireta de liposan foi realizada pela determinação do teor de proteínas presente no sobrenadante proveniente das reações enzimáticas pelo método de Lowry (1951). Para analisar a biomassa seca, estas foram colocadas para secar em estufa a uma temperatura preferencialmente de IOO0C por 24 horas até massa constante. Assim, pela diferença da massa, expressou-se a média da biomassa seca em termos de concentração em (g/L). Para a avaliação do índice de emulsificação (E24) foi utilizado o método descrito por Cooper & Goldenberg (1987), segundo o qual é adicionado o mosto livre das células e compostos hidrofóbicos (tolueno e hexano) na proporção de 4:6 a tubos de ensaio. As medidas de tensão superficial foram realizadas no sobrenadante, livre das células, utilizando-se um tensiômetro de anel e placa ou um tensiômetro de volume de gota. A Concentração Micelar Crítica foi calculada diluindo o meio de cultura isento de células com igual volume de água destilada, segundo técnica descrita por Sheppard & Mulligan (1987).In order to solve these drawbacks, we present a biotechnological process of developing a biodetergent, based on the stoichiometric reaction between the biosurfactant called liposan and sodium hydroxide, which meets the environmental appeal and makes available on the market a new alternative product to existing technologies, using a new technology that may be part of the promise of sustainable industrial development that strives above all for the use of clean technologies. In order to arrive at the composition of the biodetergent, initially an experimental planning was carried out aiming to find the best process conditions to obtain the biosurfactant. To evaluate the results, the following analyzes were determined as response variables: emulsification index E24 with toluene; emulsification index E24 with hexane; final surface tension; biomass produced; liposan production and glucose consumption. After analysis of the experimental design, it was concluded that pH preferably 7.0, temperature preferably 35 ° C and agitation preferably 150 rpm, were the factors that most influenced biosurfactant production. Thus, a new fermentation was performed under these conditions to monitor glucose consumption, liposan production and critical micellar concentration during 120 hours. The glucose concentration present in the culture medium was quantified by the glucose oxidase method using an enzymatic kit for glucose colorimetric analysis (HUMANGmbH-Germany) and the objective was to monitor its consumption during fermentation. Indirect quantification of liposan was performed by determining the protein content present in the supernatant from the enzymatic reactions by the method of Lowry (1951). To analyze the dry biomass, they were placed to dry in an oven preferably at a temperature of 100 ° C for 24 hours to constant mass. Thus, by mass difference, the mean dry biomass was expressed in terms of concentration in (g / L). For the emulsification index (E24) evaluation, the method described by Cooper & Goldenberg (1987) was used, according to which the free must of the cells and hydrophobic compounds (toluene and hexane) in a 4: 6 ratio is added to tubes. test. Surface tension measurements were performed on the cell-free supernatant using a ring and plate tensiometer or a drop volume tensiometer. Critical Micellar Concentration was calculated by diluting cell-free culture medium with equal volume of distilled water according to the technique described by Sheppard & Mulligan (1987).
De acordo com Cirigliano & Carmam (1985) um volume de 200 mL do mosto foi centrifugado a 8000 rpm por 30 minutos para a remoção da biomassa.According to Cirigliano & Carmam (1985) a 200 mL volume of the must was centrifuged at 8000 rpm for 30 minutes to remove the biomass.
O sobrenadante, livre das células, foi filtrado a vácuo com papel de filtro quantitativo faixa azul (8 μηι) para remover células excedentes. O filtrado foi transferido para um funil de separação, ao qual foi adicionada uma mistura de 600 mL de clorofórmio/metanol numa proporção de 2:1 (v/v), sendo a proporção de solvente orgânico utilizado em relação ao volume de sobrenadante de 3:1 (v/v). Adicionou-se ao sobrenadante uma solução de KCl 15% (m/v), para auxiliar na quebra da emulsão que se formou ao misturar o sobrenadante contendo o biossurfactante e os solventes orgânicos. Após a extração, a mistura de solventes orgânicos foi evaporada em um rotaevaporador e seca em estufa a 45°C até peso constante, obtendo-se ao final uma mistura bruta contendo o biossurfactante de coloração branca amarelada. Após a produção e separação do biossurfactante nas melhores condições de processo, partiu-se para a síntese e formulação do biodetergente. Inicialmente fez-se uma reação estequiométrica do biossurfactante liposan produzido com hidróxido de sódio e adicionou-se alguns ingredientes para melhorar a ação de detergência, o poder espumante, aumentar a viscosidade e melhorar a consistência do biodetergente. Assim, partiu-se da base de cálculo de uma concentração preferencialmente de 2% do biossurfactante ramnolipídeo, em relação ao volume final preferencialmente de 50 mL do biodetergente a ser produzido, ou seja, preferencialmente 1 g do biossurfactante liposan foi usado na reação como reagente 1. Em seguida procedeu-se com base na estequiometria, a formulação preferencialmente conforme o seguinte procedimento experimental:The cell free supernatant was vacuum filtered with blue strip quantitative filter paper (8 μηι) to remove surplus cells. The filtrate was transferred to a separatory funnel, to which a 600 mL chloroform / methanol mixture was added in a 2: 1 (v / v) ratio, with the ratio of organic solvent used to supernatant volume being 3 : 1 (v / v). A 15% (w / v) KCl solution was added to the supernatant to aid in breaking down the emulsion formed by mixing the biosurfactant-containing supernatant and organic solvents. After extraction, the organic solvent mixture was evaporated on a rotary evaporator and oven-dried at 45 ° C to constant weight to give a crude mixture containing the yellowish white biosurfactant. After biosurfactant production and separation under the best process conditions, we proceeded to the synthesis and formulation of the biodetergent. Initially a stoichiometric reaction of the liposan biosurfactant produced with sodium hydroxide was made and some ingredients were added to improve the detergent action, the foaming power, increase the viscosity and improve the consistency of the biodetergent. Thus, it was based on the calculation basis that a concentration of preferably 2% of the ramnolipid biosurfactant, relative to the final volume preferably of 50 ml of the biodetergent to be produced, ie preferably 1 g of the liposan biosurfactant was used in the reaction as reagent. 1. Next, proceeding based on stoichiometry, the formulation preferably according to the following experimental procedure:
1) Adicionou-se 5 mL de água destilada e dissolveu-se 0,20 g de hidróxido de sódio p.a. como reagente 2 e completou-se o volume até 15 mL sempre agitando; 2) Deixou-se o sistema em repouso por 6 horas para que se completasse a reação; 3) Adicionou-se 1,0 g de dietanolamida de ácido graxo mais 10 mL de água sempre agitando; 4) Acrescentou-se 1,0 g de cloreto de sódio; 5) Dissolveu-se 0,1 mL de formol; 6) Completou-se o volume para 50 mL e agitou-se; 7) Deixou-se em repouso durante 24 horas.1) Distilled water (5 mL) was added and sodium hydroxide (0.20 g) was dissolved as reagent 2 and the volume was added to stirring (15 mL); 2) The system was allowed to stand for 6 hours to complete the reaction; 3) 1.0 g of fatty acid diethanolamide plus 10 ml of stirring water was added; 4) 1.0 g of sodium chloride were added; 5) 0.1 mL of formaldehyde was dissolved; 6) The volume was made up to 50 mL and stirred; 7) Let stand for 24 hours.
A eficiência do detergente foi avaliada comparando as viscosidades, através de um reômetro, de uma amostra de 360 g de óleo bruto com uma emulsão água produzida/óleo preparada adicionando-se 2,0 g do biodetergente em 15 mL de água produzida e transferindo-se para um becker e adicionando-se óleo bruto até completar uma massa total de 360 g. Após agitação de 1000 ± 50 rpm durante 8 minutos, verificou-se uma redução da viscosidade em torno de 8%. Observou-se também através da análise de DSC que o biodetergente desenvolvido não apresentou transformações físico-químicas quando dissolvido em amostra de água destilada e comparada com água produzida, o que nos permitiu concluir que ele apresentou boa estabilidade térmica e que não foi detectada nenhuma interação química, na faixa de temperatura estudada, entre o biodetergente produzido e os sais presentes em grande quantidade na água produzida, mostrando assim também uma boa tolerância à força iônica.The efficiency of the detergent was evaluated by comparing the viscosities, through a rheometer, of a 360 g sample of crude oil with a produced water / prepared oil emulsion by adding 2.0 g of the biodetergent in 15 mL of produced water and transferring for a becker and adding crude oil to a total mass of 360 g. After stirring at 1000 ± 50 rpm for 8 minutes, a viscosity reduction of around 8% was found. It was also observed by DSC analysis that the developed biodetergent did not present physicochemical transformations when dissolved in distilled water sample and compared with produced water, which allowed us to conclude that it presented good thermal stability and that no interaction was detected. chemistry, in the studied temperature range, between the produced bio-detergent and the salts present in large quantity in the produced water, thus also showing a good tolerance to the ionic strength.
Em relação ao poder espumante, neste trabalho avaliou-se o poder espumante de duas formas: 1) Avaliou-se o mesmo comparando a produção de espuma em uma esponja contendo uma quantidade de 0,5 g do biodetergente em 50 mL de água destilada e em outra esponja contendo 0,5 g do biodetergente em 50 mL de água com dureza de 60 ppm de cálcio e magnésio expressa como CaCO3. Para se ter um parâmetro, fez-se o mesmo teste com um detergente sintético comercial e avaliou-se em qual situação houve maior produção de espuma. Após o ensaio observou-se que não houve diferença significativa na produção de espuma entre o tipo de água utilizada, mostrando que o biodetergente produzido, assim como o detergente comercial, não perde facilmente o poder espumante como acontece com os sabões. Comparando a produção de espuma entre o biodetergente produzido e o detergente sintético comercial, também não houve diferença visual entre eles; 2) Comparando a altura da espuma formada pela agitação de 150 rpm em mesa agitadora de erlenmeyers de 125 mL de capacidade contendo os seguintes produtos: no primeiro 25 mL de água destilada mais 0,5 mL de corante; no segundo 25 mL de água destilada mais 0,5 mL de corante mais 2 mL de um detergente sintético comercial; no terceiro 25 mL de água destilada mais 0,5 mL de corante mais 2 mL do biodetergente. Ao fim de 30 minutos foi verificado qual erlenmeyer apresentou uma maior altura de espuma. Após ensaio para avaliar a produção de espuma, pode-se observar que não houve formação de espuma no erlenmeyer contendo apenas água e corante. Observou-se que a altura das espumas foram praticamente iguais entre os erlenmeyers contendo o detergente e o biodetergente.Regarding the sparkling power, this work evaluated the sparkling power in two ways: 1) It was evaluated by comparing the foam production in a sponge containing 0.5 g of the biodetergent in 50 ml of distilled water and in another sponge containing 0.5 g of the biodetergent in 50 mL of water with a hardness of 60 ppm calcium and magnesium expressed as CaCO3. To have a parameter, the same test was done with a commercial synthetic detergent and evaluated in which situation there was higher foam production. After the test it was observed that there was no significant difference in foam production between the type of water used, showing that the produced biodetergent, as well as the commercial detergent, does not easily lose the foaming power as with soaps. Comparing foam production between the produced biodetergent and the commercial synthetic detergent, there was no visual difference between them either; 2) Comparing the height of the foam formed by stirring 150 rpm on a 125 mL capacity erlenmeyer shaker table containing the following products: in the first 25 mL of distilled water plus 0.5 mL of dye; in the second 25 mL of distilled water plus 0.5 mL of dye plus 2 mL of a commercial synthetic detergent; in the third 25 mL of distilled water plus 0.5 mL of dye plus 2 mL of the biodetergent. After 30 minutes it was verified which erlenmeyer had the highest foam height. After testing for foam production, it can be seen that there was no foam formation in the conical flask containing only water and dye. It was observed that the height of the foams were practically the same between the erlenmeyers containing the detergent and the biodetergent.
Já em relação à análise da ação de detergência a mesma foi avaliada de duas formas: 1) Pela lavagem de pratos em água corrente, colocando-se 2,5 mL de detergente e 25 mL de água na esponja e 10 mL de água em cada prato sujo com 2 g de uma pasta preparada pela mistura de 80g de feijão; 160g de arroz cozido, 40g de óleo de soja e 300g de água. Foi medido a número de pratos lavados até o final da espuma na esponja. Os pratos deveriam estar visualmente limpos após o enxágue. Os resultados mostraram que durante a lavagem através da persistência da espuma na esponja e do número de pratos lavados efetivamente limpos, não houve diferença entre o detergente sintético comercial e o biodetergente produzido avaliado, pois em todos os testes o número de pratos lavados e limpos foi o mesmo e igual a sete; 2) Pela lavagem de tecidos de algodão branco cortados com medidas de 15 χ 15 cm, dobrado duas vezes e impregnados com as seguintes sujidades: três tecidos com 1 g de iogurte achocolatado; três tecidos com 1 g de molho de tomate e três tecidos com 0,5 g de café solúvel, todos diluídos em 1 mL de água. Após a impregnação com as sujidades, os tecidos foram dobrados mais uma vez e colocados dentro de erlenmeyers de 125 mL de capacidade contendo os seguintes produtos: na primeira coluna três erlenmeyers contendo 25 mL de água; na segunda coluna três erlenmeyers contendo 25 mL de água mais 2 mL de um detergente sintético comercial; na terceira coluna três erlenmeyers contendo 25 mL de água mais 2 mL do biodetergente produzido. Os 09 erlenmeyers foram colocados sobre agitação de 150 rpm em mesa agitadora durante 90 minutos e após este tempo os tecidos foram retirados e colocados para secar à temperatura ambiente. Após a secagem a eficiência da remoção das sujidades foi comparada visualmente e a ação detergente avaliada. Após a secagem, a eficiência da remoção das sujidades dos erlenmeyers contendo o biodetergente foi comparada com os erlenmeyers contendo apenas água e com os erlenmeyers contendo o detergente sintético comercial. Os resultados mostraram que os tecidos lavados com o biodetergente apresentaram capacidade de remoção de sujidades igual ou superior ao detergente sintético comercial, mostrando assim um excelente poder de detergência, considerando que não houve fricção dos tecidos nem enxague com água corrente.Regarding the analysis of detergent action, it was evaluated in two ways: 1) By washing dishes in running water, placing 2.5 mL of detergent and 25 mL of water in the sponge and 10 mL of water in each dirty dish with 2 g of a paste prepared by mixing 80g of beans; 160g cooked rice, 40g soybean oil and 300g water. The number of dishes washed to the end of the foam on the sponge was measured. The dishes should be visually clean after rinsing. The results showed that during washing through the persistence of the foam in the sponge and the number of effectively cleaned washed dishes, there was no difference between the commercial synthetic detergent and the produced biodetergent evaluated, since in all tests the number of washed and cleaned dishes was the same and equal to seven; (2) by washing white cotton fabrics cut to size 15 cm x 15 cm, folded twice and impregnated with the following soils: three fabrics containing 1 g chocolate milk yogurt; three tissues with 1 g of tomato sauce and three tissues with 0.5 g of soluble coffee, all diluted in 1 mL of water. Following impregnation with the soils, the tissues were folded once again and placed into 125 ml capacity conical flasks containing the following products: in the first column three conical flasks containing 25 ml water; in the second column three conical flasks containing 25 mL of water plus 2 mL of a commercial synthetic detergent; in the third column three conical flasks containing 25 mL of water plus 2 mL of the produced bio-detergent. The flasks were placed under agitation at 150 rpm on a shaker table for 90 minutes and after this time the tissues were removed and placed to dry at room temperature. After drying the dirt removal efficiency was visually compared and the detergent action evaluated. After drying, the dirt removal efficiency of the bioetergent-containing erlenmeyers was compared to the water-only and the synthetic synthetic detergent-erlenmeyers. The results showed that the fabrics washed with the biodetergent presented dirt removal capacity equal or superior to the commercial synthetic detergent, thus showing an excellent detergency power, considering that there was no tissue friction or rinse with running water.
Em relação à capacidade de produzir espuma e de remover sujidades, o biodetergente produzido apresentou resultados semelhantes quando comparado ao sintético comercial. Desta forma, pode-se concluir que o biodetergente produzido apresentou boa capacidade tensoativa e de emulsificação comparado ao surfactante químico sintético, podendo ser utilizado em substituição ao mesmo pelas vantagens apresentadas.Regarding the ability to foam and remove dirt, the produced bio-detergent showed similar results when compared to commercial synthetic. Thus, it can be concluded that the biodetergent produced showed good surfactant and emulsification capacity compared to synthetic chemical surfactant, and can be used instead of the advantages presented.
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