BR112018000102B1

BR112018000102B1 - Composições e métodos para modular e/ou estimular respostas imunológicas em seres humanos e/ou animais

Info

Publication number: BR112018000102B1
Application number: BR112018000102-3A
Authority: BR
Inventors: Mathieu CASTEX
Original assignee: Danstar Ferment Ag
Priority date: 2015-07-09
Filing date: 2016-07-11
Publication date: 2021-10-05
Also published as: ES2953462T3; CA2990530A1; AU2016289523A1; AU2016289523B2; EP3319621A1; WO2017005936A1; CN107847536A; PL3319621T3; CL2017003442A1; EP3319621B1; BR112018000102A2; JP7291749B2; HUE063641T2; JP2021183608A; US11338023B2; WO2017005936A9; EP3138573A1; DK3319621T3; US20180207248A1; JP7252758B2

Abstract

composições e métodos para modular e/ou estimular respostas imunológicas em seres humanos e/ou animais. trata-se de uma composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente. a composição pode ser usada na modulação e/ou no estímulo de respostas imunológicas em animal ou ser humano.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] O presente pedido refere-se a composições e métodos para modular e/ou estimular respostas imunológicas em ser humano e/ou animal.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] A levedura e seus derivados têm sido crescentemente usados como um suplemento nutricional para aprimorar a saúde intestinal de animais e seres humanos através da ativação de respostas imunológicas antifúngicas iniciadas na superfície de mucosa intestinal, primariamente através de rotas de Dectina 1 e β-glucano ou por meio de ligação direta a bactérias indesejáveis no trato digestório. Ambos os efeitos são dependentes da especificidade de expressão de antígeno imune na parede celular de levedura e expressão de receptor antígeno nas células epiteliais intestinais. No entanto, deve-se observar que, além da interação de β-glucano/Dectina 1 bem descrita, outras interações de receptores e "aglutinantes de levedura" que mediam a ativação da resposta imunológica, e, mais especificamente, da resposta imunológica antifúngica, podem ter papeis significativos, e são diretamente dependentes da composição e da estrutura da parede celular de levedura. Há, atualmente, opções de mercado que usam produtos à base de levedura inativa não específicos que reivindicam estimular respostas imunológicas através dessas rotas; no entanto, esses produtos carecem de especificidade e consistência em termos de composição e resultado. Seria altamente desejável ser dotado de um produto à base de levedura aprimorado que melhoraria o estímulo de respostas imunológicas de animal ou ser humano.

SUMÁRIO DA REVELAÇÃO

[0003] A presente revelação fornece uma composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente. Surpreendentemente, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida, quando combinados com polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente, resultam em um estímulo melhorado de respostas imunológicas de animal ou ser humano, mesmo em uma baixa taxa de inclusão. Em algumas modalidades, os polissacarídeos parietais da pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 1 a 99 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em modalidades alternativas ou complementares, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 1 a 100 por cento em peso com base no peso total da composição. Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 20 a 80 por cento em peso com base no peso total da composição. Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 30 a 60 por cento em peso com base no peso total da composição. Em uma modalidade, a pelo menos uma espécie Candida é Candida utilis. Em outra modalidade, a pelo menos uma espécie de levedura diferente é Saccharomyces sp, Hanseniaspora sp, Hansenula sp, Kluyveromyces sp, Metschnikowia sp, Pichia sp, Starmerella sp e Torulaspora sp ou mistura dos mesmos. A pelo menos uma espécie de levedura diferente também compreende híbridos entre espécies derivados de qualquer uma dentre essas espécies de levedura.

[0004] A presente revelação também fornece usos, conforme definido nas modalidades precedentes, na modulação e/ou estímulo de respostas imunológicas em animal e/ou em ser humano. Em outra modalidade, o animal é um animal doméstico.

[0005] A presente revelação também fornece um método para modular e/ou estimular respostas imunológicas em animal administrando-se a um animal uma composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente. Em uma modalidade, a combinação está em uma forma de um aditivo de alimento, ração de animal ou produto farmacêutico. Em outra modalidade, o produto farmacêutico pode ser administrado oral ou parentalmente. Em ainda outra modalidade, o aditivo de alimento, a ração de animal pode ser apresentada em formatos que são adicionados a uma dieta completa de animal ou ser humano ou adicionados separadamente como pastilhas, péletes, ou microesferas a serem consumidos diretamente. Em ainda outra modalidade, o animal é um animal doméstico.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0006] Descrevendo-se, de modo geral, a natureza da invenção, será feita referência agora aos desenhos anexos, mostrando, a título de ilustração, uma modalidade preferida da mesma, e na qual:

[0007] A Figura 1 mostra o efeito de inclusão de Laminarina na produção in vitro de espécie reativa de oxigênio (ROS) por monócitos incubados com polissacarídeos parietais de cepas de Saccharomyces cerevisiae diferentes, de acordo com o exemplo 1, ensaio 1;

[0008] A Figura 2 mostra a produção in vitro de ROS por monócitos com concentrações diferentes de uma mescla de polissacarídeos parietais de cepas de Saccharomyces cerevisiae diferentes, de acordo com o exemplo 1, ensaio 2;

[0009] A Figura 3 mostra o efeito comparativo de Laminarina na produção in vitro de ROS por monócitos incubados com polissacarídeos parietais de uma cepa de Candida utilis ou com polissacarídeos parietais de uma cepa de Saccharomyces cerevisiae, de acordo com o exemplo 1, ensaio 3;

[0010] As Figuras 4a e 4b mostram a produção in vitro de ROS por monócitos incubados com concentrações diferentes de polissacarídeos parietais de cepas de Saccharomyces cerevisiae sozinhas ou combinadas com polissacarídeos parietais de uma cepa de Candida utilis (a) sem Laminarina e (b) com 100 μg de Laminarina, de acordo com o exemplo 1, ensaio 4;

[0011] A Figura 5 mostra a função de taxa de sobrevivência de camarão peneídeo infectado com Vibrio parahaemolyticus e tratado com composições diferentes de polissacarídeos parietais, de acordo com o procedimento estatístico de Kaplan Meyer, de acordo com o exemplo 2;

[0012] As Figuras 6a e 6b mostram a densidade de microvilosidade de intestino distal de robalo por microscopia eletrônica após a alimentação em dietas experimentais de acordo com a presente revelação na semana 5 e 10, de acordo com o exemplo 3; e

[0013] A Figura 7 mostra a expressão de dois genes imunes (IL 1β e IL10) no intestino distal após a alimentação em dietas experimentais, de acordo com a presente revelação, na semana 10, de acordo com o exemplo 3.

[0014] A Figura 8 mostra as taxas de sobrevivência de camarões após 14 dias pós-desafio (Meio ± SD), de acordo com o exemplo 6; os meios indicados com a mesma letra maiúscula não diferente entre tratamentos (teste de Fisher, probabilidade de 5%).

[0015] A Figura 9 mostra a direção de deslizamento de espátula para Salmão do Atlântico e Truta-Arco-íris, de acordo com o exemplo 9.

[0016] A Figura 10 mostra os Níveis de Expressão Relativos de gene relacionado ao nível de produção de muco em amostras de pele de Truta-Arco-Íris (O.mykiss) alimentada por 8 semanas com dietas experimentais suplementadas com POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 60 SC e (50 SC/CU PARIETAL POLYSACCHARIDES™) de acordo com o exemplo 9. Os dados apresentados em diagramas de caixa (n = 10/tratamento). *- denota regulação crescente significativa; P < 0,0001

[0017] A Figura 11 mostra o desempenho de crescimento no controle de peixe alimentado e em Truta-Arco-Íris alimentada com as dietas experimentais por 56 dias, de acordo com o exemplo 9.

[0018] A Figura 12 mostra exemplos do intestino de robalo alimentado com controle (A&B), polissacarídeos parietais de 60 SC (C&D), POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (E&F) e por 10 semanas, de acordo com o exemplo 10. As barras de escala são de 10 μm (imagens A, C e E) e de 1 μm (imagens B, D e F).

[0019] A Figura 13 ilustra as medições de densidade de microvilosidade do intestino posterior de robalo alimentado com dietas de controle e experimentais por (13A) 5 semanas e (13B) 10 semanas, de acordo com o exemplo 10. Os asteriscos denotam uma diferença significativa entre peixe alimentado com dieta de controle e peixe alimentado com dieta experimental (P < 0,001).

[0020] A Figura 14 ilustra os dados de expressão genética para amostras intestinais superiores de robalo após 10 semanas de alimentação em dietas experimentais. Os diagramas de caixas mostram dados para HSP70, PCNA, IL-lbeta e IL-10, de acordo com o exemplo 10. Os asteriscos denotam uma regulação crescente ou descendente significativa na expressão genética em comparação ao peixe alimentado com controle (P <0.05).

[0021] A Figura 15 mostra a pontuação de lesão intestinal mediana de frango de corte desafiado por Eimeria acervulina, E. maxima e E. tenella no dia 20 (6 dias após desafio), de acordo com o exemplo 11.

[0022] A Figura 16 mostra a mortalidade acumulada de frango de corte no fim do exame (em %), de acordo com o exemplo 11.

[0023] A Figura 17 mostra a excreção fecal de oocistos (occidia Oocysts por Grama de Material Fecal (OPG)) de frango de corte desafiado por Eimeria acervulina, E. maxima e E. tenella no dia 20 (6 dias após desafio) de acordo com o exemplo 11. DESCRIÇÃO DETALHADA

[0024] As paredes celulares de fungos consistem predominantemente em polissacarídeos parietais que incluem quitina, estrutura à base de manose e beta- glucanos. Os glucanos compõem até 50% da parede celular e são agentes biologicamente ativos que são usados terapeuticamente para modificar as respostas imunológicas. De modo experimental, esses polissacarídeos parietais podem conferir proteção contra uma variedade de desafios que incluem desenvolvimento de tumor e infecções. Recentemente, muitos avanços foram realizados em direção ao entendimento de resposta imunológica de hospedeiro a infecções. Constatou-se que as moléculas de superfícies de célula inovadoras regulam resposta de hospedeiro a micro-organismos. Tais receptores são chamados de Receptores de Reconhecimento de padrão associado a Patógeno (PRR) e são principalmente conhecidos como os receptores semelhantes a Toll, os receptores de lectina tipo C, os receptores sequestrantes e os receptores complementares.

[0025] Esses receptores imunológicos são ativados por aglutinantes específicos, que são encontrados na superfície de bactérias ou fungos. No caso de fungos, mostrou-se que as unidades de glicose conectadas por aglomerantes glicosídicos B- 1,3 e B-1,6, denominados B-glucanos, e principalmente extraídos de Saccharomyces cerevisiae, induzem atividade antimicrobiana, fungicida e antitumoral. O mecanismo no qual essas moléculas induzem proteção envolvem receptores imunológicos; um dentre esses é Dectina 1, o principal receptor de B-glucanos em monócitos. O mesmo contém um domínio de reconhecimento de polissacarídeo parietal semelhante a lectina tipo C extracelular único com a capacidade para reconhecer células de levedura ou derivados e contribuir com a mobilização da resposta imunológica. Desse modo, a Dectina 1 de receptor de lectina tipo C é descrita (Marakala et al., Mamm Genome (2011) 22: 55 a 65) como ligando beta-glucanos de Saccharomyces cerevisiae e envolvida na indução de várias rotas que resultam notavelmente na fagocitose e eliminação de partículas, tais como o zimosan, um extrato de parede celular de Saccharomyces cerevisiae, e outros derivados de levedura obtidos a partir de cepas de Saccharomyces cerevisiae (exemplos de outros derivados de levedura são, porém, sem limitação, parede celular de levedura, leveduras inativas ou levedura autolisada). Os mecanismos de detecção de ameaça e as respostas imediatas a infecção são amplamente conservadas e as respostas imunológicas são disparadas parcialmente pela ligação desses aglutinantes de patógeno, por exemplo, os beta- glucanos, a PRRs na superfície de células hospedeiras. Dentro de horas, o sistema imunológico inato não específico é ativado, associado a uma inflamação. A inflamação local desempenha um papel importante nessa resposta imediata a infecção. Diversos participantes no sistema imunológico inato, incluindo neutrófilos, monócitos, macrófagos, fatores complementares, citocinas, peptídeos antimicrobianos e proteínas de fase aguda, são mobilizados rapidamente em uma resposta complexa e altamente regulada para fornecer defesa imediata contra infecção. Há, atualmente, opções de mercado para produtos à base de levedura inativos que reivindicam estimular respostas imunológicas através dessas rotas; no entanto, esses produtos carecem de especificidade e consistência em resultado. Seria altamente desejável ser dotado de um produto à base de levedura aprimorado que melhoraria o estímulo de respostas imunológicas de animal ou ser humano.

[0026] A presente revelação fornece uma composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente. No contexto da presente revelação, "polissacarídeos parietais"são quitina, Manan-oligossacarídeos, Beta 1,3 glucanos e Beta 1,6 glucanos. Surpreendentemente, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida, quando combinados com polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente, resultam em um estímulo melhorado de respostas imunológicas de animal ou ser humano, mesmo em uma baixa taxa de inclusão.

[0027] Em algumas modalidades, os polissacarídeos parietais da pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 1 a 99 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 5 a 90 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 5 a 80 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 75 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 60 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 20 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 15 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda uma modalidade adicional, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 11, 12, 13, 14, 15 16, 17, 18, 19 ou 20 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda uma modalidade adicional, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição.

[0028] Em modalidades alternativas ou complementares, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 1 a 99 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 50 a 90 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 70 a 90 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 80 a 90 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda uma modalidade adicional, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 ou 90 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 70, 75, 80, 85 ou 90 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição. Em ainda outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 ou 90 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição.

[0029] Em modalidades alternativas ou complementares, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 1 a 100 por cento em peso com base no peso total da composição. Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 20 a 80 por cento em peso com base no peso total da composição. Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 30 a 60 por cento em peso com base no peso total da composição. Em ainda outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ou 95 por cento em peso com base no peso total da composição. Em ainda uma modalidade adicional, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 20, 23, 25, 27 30, 33, 35, 37, 40, 43 45, 47 50, 53, 55, 57, 60, 63, 65, 67, 70, 73, 75, 77 ou 80 por cento em peso com base no peso total da composição. Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

[0030] Em uma modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 30 a 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

[0031] Em outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade em uma faixa de 30 a 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

[0032] Em ainda outra modalidade, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

[0033] Em ainda uma modalidade adicional, os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente estão em uma quantidade de pelo menos 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

[0034] Em uma modalidade, a pelo menos uma espécie Candida é Candida utilis. Na presente revelação, entende-se que Candida utilis inclui tanto forma sexual (Cyber lindnera jardinii) quanto assexual (Candida utilis). Em outra modalidade, a pelo menos uma espécie de levedura diferente é Saccharomyces sp, Hanseniaspora sp, Hansenula sp, Kluyveromyces sp, Metschnikowia sp, Pichia sp, Starmerella sp e Torulaspora sp ou mistura dos mesmos. A pelo menos uma espécie de levedura diferente também compreende híbridos entre espécies derivados de qualquer outra dentre essas espécies de levedura. Em ainda outra modalidade, a pelo menos uma espécie de levedura diferente é Saccharomyces sp. Em ainda uma modalidade adicional, a pelo menos uma espécie de levedura diferente é Saccharomyces cerevisiae. Saccharomyces cerevisiae também compreende subespécie, tal como, porém, sem limitação, Saccharomyces cerevisiae var. boulardii. Em ainda uma modalidade adicional, a pelo menos uma espécie de levedura diferente é uma mescla de duas ou mais Saccharomyces cerevisiae. Em ainda uma modalidade adicional, a pelo menos uma espécie de levedura diferente é uma mescla de pelo menos uma Saccharomyces cerevisiae e pelo menos uma Saccharomyces cerevisiae var. boulardii.

[0035] Em uma modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada na modulação e/ou no estímulo de respostas imunológicas em animal ou ser humano. O termo "modulação"quando usado no presente documento será entendido como em referência a qualquer aumento ou redução mensurável da resposta imunológica. Em outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada no aprimoramento de saúde e resistência a infecção de animal e ser humano. Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada no aprimoramento de resistência de animal ou humano a micro-organismos patogênicos. Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada na promoção de desempenho de procriação animal. Em uma modalidade, o animal é um animal doméstico. Animal doméstico exemplificativo inclui, porém, sem limitação, peixe, camarão, bezerro ou leitão.

[0036] Em uma modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada na promoção e/ou aprimoramento de saúde intestinal, integridade intestinal e morfologia intestinal de animais. Em outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para estimular uma resposta anti-inflamatória de animais. Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para promover e/ou aprimorar os parâmetros de desempenho de crescimento e conversão de alimentação de animais de fazenda. Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para reduzir a morbidade e, em particular durante os tratamentos com antibiótico e mortalidade de animais de fazenda. Em uma modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para reduzir a mortalidade de animais de fazenda. Em outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para reduzir a diarreia de animais. Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para reduzir a sensibilidade a patógenos intestinais. Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para reduzir a sensibilidade de animais a infestações parasíticas e distúrbios relacionados. Em uma modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, pode ser usada para promover e/ou aprimorar a produção de muco de pele de animais aquáticos ou suas qualidades.

[0037] Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, é útil como um ingrediente em rações de animal convencionais.

[0038] Em ainda outra modalidade, a composição, conforme definido nas modalidades precedentes, é frequentemente apresentada em formatos que são adicionados a uma dieta completa de animal ou ser humano ou adicionadas separadamente como pastilhas, péletes ou microesferas a serem consumidas diretamente.

[0039] A presente revelação fornece um método para modular e/ou estimular respostas imunológicas em animal ou ser humano administrando-se a um animal ou a ser humano uma composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente. Fornece-se também um método para aprimorar a saúde e/ou resistência a infecção de animal ou ser humano administrando-se a um animal ou a ser humano uma composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente. Fornece-se também um método para aprimorar a resistência de animal ou humano a micro-organismos patogênicos administrando-se a um animal ou a ser humano uma composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente. Fornece-se também um método para promover o desempenho de procriação animal administrando-se a um animal ou a ser humano a composição que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de levedura diferente.

[0040] Em uma modalidade, a combinação está em uma forma de um aditivo de alimento, um aditivo de ração, um material/ingrediente de ração, uma ração de animal ou um produto farmacêutico. Em outra modalidade, o produto farmacêutico pode ser administrado oral ou parentalmente. Em ainda outra modalidade, o aditivo de alimento, a ração de animal pode ser apresentada em formatos que são adicionados a uma dieta completa de animal ou ser humano ou adicionados separadamente como pastilhas, péletes, ou microesferas a serem consumidos diretamente. Em ainda outra modalidade, o animal é um animal doméstico. Animal doméstico exemplificativo inclui, porém, sem limitação, peixe, camarão, bezerro ou leitão.

[0041] Os exemplos a seguir servem para descrever e definir adicionalmente a invenção, e não são destinados a limitar a invenção em qualquer forma.

EXEMPLOS Exemplo 1

[0042] A Dectina 1 não é apenas PRR que reconhece polissacarídeos parietais de levedura. A estrutura e a arquitetura da parede celular provavelmente desempenharão um papel importante. Supõe-se aqui que a espécie de levedura diferente, mesmo com uma composição de polissacarídeos parietais semelhante, possa exibir arquiteturas diferentes de sua rede de polissacarídeos parietais, que resulta na ativação de um conjunto diferente de PRR, não necessariamente aglomerados à ativação de Dectina 1. Os ensaios de competição in vitro, conforme mostrado no Exemplo 1 com o uso de Laminarina, um aglutinante solúvel específico com alta afinidade a Dectina 1, foram realizados para avaliar essa suposição.

[0043] Nesse exemplo, o inventor escolheu avaliar o impacto de combinações diferentes de polissacarídeos parietais extraídos de cepas e espécie de levedura diferentes na resposta imunológica inata. O modelo celular usado nesses experimentos foi a cultura principal de monócitos de ser humano. A capacidade dos monócitos para gerar espécie de oxigênio foi avaliada: devido a quimiluminescência, a produção do superóxido de ânion foi estudada. Essa molécula é emitida a partir da NADPH oxidase, um complexo enzimático encontrado na superfície de monócitos. As espécies de oxigênio são envolvidas na morte de bactérias ou fungos vivos em fagocitose por monócitos.

[0044] Material e Métodos

[0045] Cultura celular

[0046] Células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram obtidas a partir de camadas leucoplaquetárias de doador de sangue saudável por um método de gradiente de Ficoll-Hypaque padrão. Os monócitos humanos foram isolados de células mononucleares por aderência a plástico por 2 horas em meio de SFM otimizado para cultura de macrófagos, a 37 °C em uma atmosfera umidificada que contém 5% de CO2. Os mesmos foram semeados em uma placa em cultura de múltiplas cavidades e as células não aderentes foram removidas por lavagens com HBSS sem cálcio ou magnésio. As células aderentes restantes (> 85% de monócitos) foram incubadas em SFM antes do estímulo.

[0047] Ensaio quanto a produção de espécie de oxigênio

[0048] As células mononucleares foram colocadas em uma microplaca de 96 cavidades. A produção de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) foi medida por quimiluminescência na presença de 5-amino-2,3-di-hidro-l,4-ftalazinadionea (luminol, Sigma) com o uso de um luminômetro termostaticamente controlado (37 °C) (Wallac 1420 Victor2, Finlândia). A geração de quimiluminescência foi monitorada por 60 minutos após a incubação das células com luminol (66 μM) em condições basais e na presença dos polissacarídeos parietais diferentes a 100 μg/ml sozinhos ou na presença de nível em grau de Laminarina (0, 1, 10 e 100 μg/ml dependendo dos ensaios). O zimosan foi usado como um controle positivo a 100 μg/ml.

[0049] Polissacarídeos de Levedura Parietal usados nesse estudo:

[0050] Polissacarídeos Parietais extraídos das diferentes cepas de levedura: Cepas de Saccharomyces cerevisiae: L60, L62, L 69, L72 Cepa de Candida utilis: L75 (NRRL-900) Níveis de polissacarídeos Parietais testados nos diferentes ensaios: Cepa de Candida utilis: os níveis de polissacarídeo parietal foram padronizados a 30 por cento em peso seco com base no peso total da composição. Cepas de Saccharomyces cerevisiae: os níveis de polissacarídeo parietal foram padronizados a 30, 35, 45 e 60 por cento em peso seco com base no peso total da composição. Combinação de Candida utilis e Saccharomyces cerevisiae: os níveis de polissacarídeo foram padronizados a 30, 35, 40, 45 e 50 por cento em peso seco com base no peso total da composição. Os níveis de polissacarídeos parietais de Candida utilis em tais combinações foram, respectivamente, 15, 15, 10, 15 e 5 por cento em peso seco com base no peso total da composição ou 50, 43, 25, 33 e 10 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição (Figuras 4a, 4b)

[0051] Resultados:

[0052] Ensaio 1: A produção in vitro de ROS por monócitos incubados com polissacarídeos parietais de cepas diferentes de Saccharomyces cerevisiae com concentrações diferentes de Laminarina. Cada fração de polissacarídeos parietais de quatro cepas diferentes de Saccharomyces cerevisiae foi padronizada a 60 por cento em peso seco com base no peso total da fração e testada quanto a sua afinidade a Dectina 1. Conforme mostrado na Figura 1, os polissacarídeos parietais de todas as cepas tiveram a capacidade para induzir a produção de ROS e a Laminarina inibiu essa indução de uma maneira de resposta dose linear.

[0053] Ensaio 2: Resposta à dose de polissacarídeos parietais de Saccharomyces cerevisiae na produção in vitro de ROS por monócitos. Uma mescla de polissacarídeos parietais de duas cepas de Saccharomyces cerevisiae diferentes (L62 e L69) foi preparada e padronizada em 30, 35, 45 e 60 por cento em peso seco com base no peso total da mescla e testada quanto a sua indução da produção de ROS. Conforme mostrado na Figura 2, uma resposta dose linear foi obtida através da faixa de concentrações testadas.

[0054] Ensaio 3: O efeito comparativo de laminatina na produção in vitro de ROS por monócitos incubados com polissacarídeos parietais de uma cepa de Candida utilis ou com polissacarídeos parietais de uma Saccharomyces cerevisiae. A fração de polissacarídeos parietais de uma cepa proprietária de Candida utilis foi padronizada a 30 por cento em peso seco com base no peso total da fração e testada quanto a sua afinidade a Dectina 1. De modo semelhante, a fração de polissacarídeos parietais de uma cepa de Saccharomyces cerevisiae (L62) foi padronizada respectivamente a 30 e 60 por cento em peso seco com base no peso total da fração e testada quanto a sua afinidade a Dectina 1. Conforme mostrado na Figura 3, na ausência de Laminarina, uma fração de polissacarídeos parietais de Candida utilis e as frações de polissacarídeos parietais de Saccharomyces cerevisiae tiveram a capacidade para induzir a produção de ROS. Na Figura 3, um aumento na concentração de Laminarina aumenta a inibição da produção de ROS pelas frações de polissacarídeos parietais de Saccharomyces cerevisiae. No entanto, um aumento na concentração de Laminarina não mostrou inibição da produção de ROS pela fração de polissacarídeos parietais de Candida utilis, mesmo a 100 μg/ml.

[0055] Ensaio 4: A produção in vitro de ROS por monócitos incubados com concentrações diferentes de polissacarídeos parietais de cepas de Saccharomyces cerevisiae sozinhas ou combinadas com polissacarídeos parietais de uma cepa de Candida utilis (a) sem Laminarina e (b) com 100 μg de Laminarina;

[0056] Conforme mostrado nas Figuras 4a e 4b, a presença de polissacarídeos parietais de Candida utilis nas composições diferentes resulta em uma melhoria da produção de ROS por monócitos mesmo em baixa taxa de inclusão (isto é, 5 por cento em peso seco com base no peso total da composição). Conforme mostrado na Figura 4b, as composições que compreendem polissacarídeos parietais de Candida utilis e polissacarídeos parietais de pelo menos uma Saccharomyces cerevisiae não foram afetadas pela inibição efeito de Laminarina ao longo dos polissacarídeos da Saccharomyces cerevisiae sozinha (conforme mostrado nas Figuras 1 e 3), mesmo na taxa de inclusão inferior (isto é, 5 por cento em peso seco com base no peso total da composição ou 10 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição).

Exemplo 2:

[0057] Uma composição que compreende polissacarídeos parietais de uma Candida utilis (CU) e polissacarídeos parietais de uma Saccharomyces cerevisiae (SC) foi testada como uma estratégia de alimentação preventiva para mitigar sensibilidade de camarões peneídeos a vibriose. Os polissacarídeos parietais estiveram em uma quantidade de 50 por cento em peso com base no peso total da composição (50 SC/CU).

[0058] Com o objetivo de avaliar o benefício de polissacarídeos parietais de 50 SC/CU vs. polissacarídeos parietais de SC sozinhos, aplicou-se um desafio de doença in vivo em camarões peneídeos filhotes. O método de infecção foi por imersão e usou- se um Vibrio parahaemolyticus virulento com a capacidade para induzir a síndrome de necrose hepatopancreática aguda.

[0059] Os polissacarídeos parietais testados foram: - polissacarídeos parietais de 50 SC/CU que contém 6 por cento em peso seco de polissacarídeos parietais de Candida utilis NRRL-900 (com base no peso total da composição, ou 12 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição): 3 doses foram testadas: 0,04%; 0,08% e 0,12% na ração - polissacarídeos parietais de 60 SC de uma cepa de S. cerevisiae (CNCM I 1079) testada a 0,12% na ração

[0060] Os exames foram realizados com Litopenaeus vannamei filhote de 2,07±0,05 g que foram alimentados por 21 dias com dietas suplementadas ou não com os Candidatos testados antes de um desafio de imersão com 100 ml de uma cultura de uma cepa de V. parahaemolyticus virulenta com a capacidade para induzir AHPNS a 1,1x 109 CFU/ml (crescimento em TSB + 2% de NaCl (TSB+) a 28 °C por 18 h). As mortalidades foram monitoradas ao longo de 10 dias e a sobrevivência acumulada para cada dieta foi estatisticamente comparada ao controle em cada exame. As curvas de sobrevivência de Kaplan e Meier (Kaplan e Meier, 1958) também foram construídas para cada dieta e as curvas foram comparadas com o uso do teste de classificação logarítmica para determinar as diferenças entre curvas e a possibilidade de as tendências na sobrevivência terem sido diferentes entre as curvas. O nível de significância foi estabelecido a P = 0,05.

[0061] O tratamento de 50 SC/CU mostrou uma resposta dose linear para reduzir a mortalidade induzida pela cepa patogênica (Classificação Logarítmica (Mantel-Cox), p < 0,01). A sobrevivência foi ainda significativamente aprimorada em 0,04% da taxa de inclusão em comparação ao controle positivo (infectado). A 60 SC/CU mostrou apenas um aprimoramento marginal a 0,12%.

[0062] Protocolo:

[0063] Os Penaeus vannamei filhotes foram alimentados com uma dieta para camarão comercialmente preparada que foi misturada com os produtos testados por 21 dias antes da exposição de banho a Vibrio parahaemolyticus (agente que causa doença de necrose hepatopancreática aguda - AHPND) para determinar se o aditivo de ração terá efeitos sobre as taxas de sobrevivência e infecção.

[0064] Aquários e projeto experimental:

[0065] Os animais SPF (isentos de patógeno específico) utilizados nesse exemplo foram verificados quanto a doença infecciosa importante que inclui WSSV (Vírus da Síndrome da Mancha Branca), TSV (Vírus da Síndrome de Taura, JJVINV (Vírus da Mieonecrose Infecciosa), AHPND (Doença de Necrose Hepatopancreática Aguda com o uso tanto de histopatologia quanto de técnicas de PCR. Pós-larvas de 12 dias de idade foram transferidas de incubação para um laboratório molhado e cresceram em biossegurança rígida por outros 45 dias para chegar ao tamanho de 1 a 2 gramas. Um dia antes do início do estudo, SPF P. vannamei de 1 a 2 gramas cada foram transferidos para 27 tanques de 90 l (35 camarões/tanque). Todos os camarões em cada tanque foram pesados em grupo antes do empilhamento para cálculo de taxa de crescimento no término do exame. Todos os animais nesses tanques foram alimentados com suas respetivas dietas de teste por 21 dias (Tabela 1).

[0066] Quatro tanques replicantes por tratamento foram alimentados com a ração preparada que contém os produtos testados. Quatro tanques foram projetados como controles positivos e quatro outros tanques serviram como controles negativos. Os tanques de controle negativo também foram alimentados com uma dieta para camarão em pélete comercial, mas não foram desafiados com o EMS/AHPND que causa Vibrio parahaemolyticus. Todos os tanques receberam suas respectivas dietas em aproximadamente 5% de peso corporal a cada dia.

[0067] Dezesseis tanques de tratamento foram desafiados com Vibrio parahaemolyticus após 21 dias da ração que continha Administração de aditivo de ração. Enquanto isso, os tanques de controle positivo foram alimentados com a mesma dieta para camarão comercial sem qualquer adição e foram desafiados com Vibrio parahaemolyticus no dia 21 do exame. Os camarões desafiados foram mantidos por outros 10 dias para registro de sobrevivência e monitoramento de taxa de crescimento.

[0068] Métodos de desafio:

[0069] Nesse estudo, os camarões foram submetidos a um desafio de imersão. Caldo de Soja Tríptico +2% (TSB+) de cloreto de sódio inoculados com uma cepa consistentemente virulenta de Vibrio parahaemolyticus, incubada por 18 horas, foi adicionado diretamente em tanques. A suspensão bacteriana foi adicionada em tanque para obter a densidade bacteriana medida por absorbância de densidade óptica (OD600 nm). Durante o período de desafio, os camarões foram mantidos em seus respectivos tratamentos dietéticos por outros 10 dias.

[0070] Resultados

[0071] As taxas de sobrevivência finais no fim do exame após tratamento estatístico são relatadas na Tabela 1. A Figura 5 relata as distribuições da taxa de sobrevivência durante o curso do experimento para o grupo diferente de camarões, de acordo com o procedimento de Kaplan Meyer. Tabela 1: Taxa de sobrevivência final: Sumário do tratamento das observações

[0072] As Tabelas 2 e 3 mostram as diferenças estatísticas entre as distribuições de sobrevivência dos grupos diferentes de camarões.

[0073] Conforme mostrado na Tabela 2, todos os testes aplicados revelaram efeitos de tratamento altamente significativos entre as distribuições de sobrevivência. Tabela 2: Comparação estatística: O teste quanto a igualdade de distribuições de sobrevivência para níveis diferentes de tratamentos.

[0074] Conforme mostrado na Tabela 3, o desafio de bactérias afeta significativamente a sobrevivência do camarão em todos os grupos quando a cinética de mortalidade para cada grupo infectado tiver sido comparada ao controle negativo (grupo não infectado) com o uso do método de Kaplan-Meier e do teste de Classificação Logarítmica (Mantel-Cox). Além disso, esses resultados in vivo confirmam o efeito benéfico da composição que compreende polissacarídeos parietais de Saccharomyces cerevisiae e Candida utilis na modulação e/ou estímulo das defesas naturais e aprimora o desempenho de animal sob condições de desafio (Tabela 3). Tabela 3: Comparação estatística da distribuição com o uso do teste de Classificação Logarítmica (Mantel-Cox): O teste quanto a igualdade de distribuições de sobrevivência entre os tratamentos diferentes.

Exemplo 3

[0075] Os resultados do presente exemplo em robalo mostraram um efeito positivo de « polissacarídeos parietais de 50 SC/CU » vs « polissacarídeos parietais de 60 SC » no desempenho e de peixe e resposta a tensão.

[0076] Dicentrarchus labrax com um peso mediano de 15,4 g foram submetidos a um exame de alimentação de dez semanas com 0,08% de « polissacarídeos parietais de 50 SC/CU » vs 0,2% de « polissacarídeos parietais de 60 SC ».

[0077] A alimentação foi formulada para conter altos níveis de farelo de Soja (40%), conforme mostrado na Tabela 4. Tabela 4: Formulação de dieta

[0078] 3 tanques de 25 peixes por tratamento. Tensão de salinidade aplicada na semana 8. Parâmetros registrados: desempenho de crescimento/morfologia intestinal/microflora intestinal.

[0079] A Tabela 5 mostra o desempenho final na semana 10. Tabela 5: desempenho na semana 10

[0080] Todos os dados são apresentados como média ± desvio padrão (SD). Os dados foram transformados quando necessário e a análise estatística foi conduzida com o uso de estatística SPSS versão 18 para Windows (SPSS Inc., Chicago, II, EUA) e a significância foi aceita no nível P < 0,05. Todos os Dados foram analisados com o uso de um ANOVA de sentido único. As diferenças significativas entre grupos de controle e experimentais foram determinadas com o uso do teste não paramétrico de Mann-Whitney.

[0081] As Figuras 6a e 6b mostram os resultados de microscopia de varredura por elétron da densidade de microvilosidade de intestino distal de robalo após a alimentação em dietas experimentais, respectivamente, na semana 5 e 10. Os dados expressados como média ± S.D (n = 3). As diferenças significativas do controle correspondente são indicadas (*) P < 0,01, e (**) P < 0,001. Os dados foram transformados quando necessário e a análise estatística foi conduzida com o uso de estatística SPSS versão 18 para Windows (SPSS Inc., Chicago, II, EUA) e aceito no nível P < 0,05. Um ANOVA de sentido único foi usado para analisar os dados e as diferenças significativas entre os grupos de controle e experimentais foram determinadas com o uso do teste post hoc de Tukey. Tabela 6: Microscopia de luz na semana 5 e 10

[0082] Todos os Dados são apresentados na Tabela 6 com média ± desvio padrão (SD). Os dados foram transformados quando necessário e a análise estatística foi conduzida com o uso de estatística SPSS versão 18 para Windows (SPSS Inc., Chicago, II, EUA) e a significância foi aceita no nível P < 0,05. Todos os Dados foram analisados com o uso de um ANOVA de sentido único. As diferenças significativas entre grupos de controle e experimentais foram determinadas com o uso de teste HSD post hoc de Tukey.

[0083] A Figura 7 mostra a expressão de dois genes imunes (IL 1β e IL10) no intestino distal de robalo após a alimentação em dietas experimentais, de acordo com a presente revelação, na semana 10.

Exemplo 4:

[0084] Esse exemplo demonstra o efeito da suplementação de leitões desmamados com combinação de polissacarídeos parietais, de acordo com a presente revelação, na ração de 2o fase.

[0085] Configuração de exame

[0086] Duração do exame: 42 dias

[0087] Condições de material de animais e pecuária:

[0088] Leitões desmamados foram alojados em currais de 12 leitões. Em uma construção, 6 currais foram alocados para um dentre os dois tratamentos (Controle e Tratamento). Duas séries de exames foram repetidas ao longo do tempo que resultaram em 12 currais de réplicas por tratamento ao analisar as 2 séries em conjunto.

[0089] Produto de teste: polissacarídeos parietais de 50 SC/CU com 6% de CU Tratamentos: O exame consistiu em 2 tratamentos: T-1 - controle - dietas normais, sem derivados de levedura T-2 - dieta de controle suplementada com polissacarídeos parietais de 50 SC/CU a 0,08%

[0090] Dietas

[0091] Os animais foram alimentados com dietas de refeição de duas fases, conforme mostrado na Tabela 7. Tabela 7: dietas de refeição de duas fases

[0092] Parâmetros zootécnicos medidos: • Peso corporal por curral no início e no fim de cada fase de alimentação, • Consumo de alimentação por curral para a 2o fase de alimentação • Taxa de mortalidade e abatimento

[0093] Análise estatística

[0094] Os resultados são analisados com modelo univariado de GLM (Modelo Linear Generalizado), com o uso de SPSS.

Resultados:

[0095] A. Desempenho de crescimento

[0096] Conforme mostrado na Tabela 8, os efeitos significativos foram detectados no peso corporal final e no ganho diário mediano. Esse efeito é principalmente explicado pelo desempenho significativamente melhor durante a segunda fase com taxa de crescimento diário significativamente superior e razão de conversão de ração no grupo tratado. Tabela 8:

[0097] Outras observações: Apenas um leitão morreu em um dentre o curral tratado vs. três (3) nos currais de controle, todas as mortalidades foram devido à meningite. Foi observado menos mordedura de orelha no grupo de Tratamento. Fezes mais líquidas no grupo de controle.

Exemplo 5:

[0098] Esse exemplo avalia o efeito de uma composição de polissacarídeos parietais de 50 SC/CU quando suplementada através da ração sólida nos desempenhos de zootecnia e saúde de bezerros antes e após o desmame

[0099] Duração do estudo: 6 semanas.

[0100] Materiais e métodos

[0101] Animais envolvidos: Total de animais: 129 animais no início, 125 no fim. Sexo: Masculino Raça: Frísio (origem: diferentes fazendas da França)

[0102] Tratamentos experimentais

[0103] Dois tratamentos dietéticos foram comparados com o uso do farelo suplementado com diferentes produtos: • Como T0: Dieta de controle sem qualquer produto. • T1: mesma dieta suplementada com polissacarídeos parietais de 50 SC/CU o primeiras 2 semanas: 5g/animal/dia= ração inicial de 2,7g/kg o então: 3g/animal/dia= ração inicial de 1,6g kg

[0104] Projeto Experimental

[0105] Mediante a chegada na fazenda, os animais foram alocados aleatoriamente aos currais. Seis dias depois, o exame começou e os animais foram pesados e os currais homogeneizados por peso corporal mediano e desvio padrão mediano de pesos corporais. Todos os currais foram conduzidos simultaneamente. O peso inicial foi de 53,9 ± 4,3 kg, mediano, enquanto a idade mediana no início foi de 27,3 ± 4,4 dias.

[0106] Descrição de local e alimentação

[0107] Todos os animais foram alojados na mesma construção, em currais com cama de palha de 10 a 11 animais. Quatro currais por tratamento estiveram envolvidos: três currais de 11 animais e um curral de 10 animais cada = 43 animais por tratamento. Cada curral tinha um alimentador sem qualquer contato com alimentadores de um curral com o outro. A palha foi compartilhada entre dois currais, mas sem contaminação cruzada entre tratamentos. O leite foi distribuído individualmente duas vezes por dia às 8h00m e às 18h00m. O concentrado de bezerro foi manualmente distribuído uma vez por dia em calhas de alimentação, e a quantidade distribuída foi pesada todos os dias antes da distribuição. Todos os animais tiveram livre acesso à palha.

[0108] Os animais foram alimentados de acordo com o seguinte programa: o Chegada de Ds - 2 semanas: 2 x 1,5 l/dia de uma diluição de colostro (25% de CP e 19,5% de gordura) e, então, substituidor de leite (22% de CP e 18% de gordura) + ração sólida (farelo de farinha) ad lib + palha ad lib + água ad lib o 2 semanas - desmame (34d): 1 x 2l/dia de Substituidor de leite (19% de CP e 15% de gordura) + ração sólida (farelo de farinha) ad lib + palha ad lib + água ad lib o Desmame - Partida: ração sólida (farelo de farinha) ad lib + palha ad lib + água ad lib

[0109] O desmame foi realizado quando os bezerros demonstraram boa condição corporal e começaram a comer mais que 1 kg/dia/animal.

[0110] Parâmetros registrados e métodos aplicados

[0111] Pesos vivos individuais: Os bezerros foram pesados individualmente a cada duas semanas a partir do início até o fim do estudo às 10h00m (total de 4 pesagens). Consumo de ração O consumo de ração (concentrado) foi registrado em uma base semanal de curral = sumário de ração pesada oferecida todos os dias - recusa ponderada no último dia da semana.

[0112] Resultados

[0113] Peso Corporal (BW) e Ganho Diário Mediano (ADG)

[0114] Conforme mostrado na Tabela 9, o peso corporal mediano (BW) de animais alimentados com T1 tendem a ser melhor que de animais alimentados com T0. Nenhuma interação entre o tratamento e o período foi constatada. O BW inicial e final (BW0 e BW42 resp.) foram numericamente superiores para T1. Tabela 9: Pesos Corporais durante o exame

[0115] Conforme mostrado na Tabela 10, os ganhos Diários medianos não foram diferentes entre tratamentos, embora os animais de T1 tenham obtido um ganho numericamente melhor que aqueles de T0. Tabela 10: Ganhos Diários medianos durante o exame

[0116] Desvios Padrão no curral fornecem uma boa indicação de heterogeneidade de pesos e ganhos, quando os fazendeiros buscam por melhor heterogeneidade como consequência de ainda mais ingestões. Os Desvios Padrão de T1 são significativamente inferiores a T0, o que significa que os animais de Controle têm maior heterogeneidade de pesos corporais que os animais tratados (Tabela 11). Observando-se a heterogeneidade de crescimento, nenhuma significância estática foi observada, mas, numericamente, os animais de Controle têm mais crescimento heterogêneo que animais de grupo tratado. Tabela 11: Desvios Padrão de BW e ADG (nos currais) durante o exame

[0117] Ingestão de Concentrado e Eficácia de Ração (FE) e Razão de Conversão de Ração (FCR)

[0118] A análises estatística de ingestão de concentrado total (soma de ingestão em período/número total de animais por curral) por semana não mostrou qualquer diferença. A análise de razão de Conversão de Ração não mostrou qualquer diferença significativa entre os tratamentos.

[0119] Diarreia e morbidade

[0120] Conforme mostrado na Tabela 12, os animais de T1 mostraram um número inferior de dias com diarreias e um número inferior de tratamentos com antibiótico em comparação ao controle T0. Tabela 12: Número de dias com Diarreia e número de tratamentos com antibiótico

[0121] Um teste de Mann-Whitney aplicado na porcentagem de animais tratados pelo menos uma vez para diarreia mostrou uma redução significativa em T1 em comparação a T0, e uma tendência de redução para a porcentagem de animais tratados pelo menos uma vez com antibióticos.

[0122] A porcentagem de animais tratados pelo menos uma vez com antibióticos e quanto a diarreia.

Exemplo 6:

[0123] Filhotes de Penaeus vannamei foram alimentados com dietas de camarão comercialmente preparadas que foram misturadas com um produto de aditivo de ração fornecido por LALLEMAND por 14 dias antes de um desafio de 14 dias com Enterocytozoon hepatopenaei, um parasita microsporidiano, para determinar se qualquer dosagem dos aditivos de ração tem efeitos positivos na taxa de sobrevivência, reduz a taxa de infecção e a carga de parasita.

Materiais e métodos

[0124] Filhotes de camarão SPF (livre de patógeno específico) foram utilizados nesse estudo. Tais camarões foram verificados quanto a doenças infecciosas importantes, incluindo WSSV (Vírus da Síndrome da Mancha Branca), TSV (Vírus da Síndrome de Taura), IMNV (Vírus de Mionecrose Infecciosa), EMS/AHPND (síndrome de mortalidade precoce/ síndrome de necrose hepatopancreática aguda) e EHP (Enterocytozoon hepatopenaei). Um dia antes do início do estudo, Penaeus vannamei SPF em 1,50 ± 0,09 grama por cada um foram transferidos para tanques de 120 l (com 30 camarões.tanque- 1) que contém 90 l de água em salinidade de 20 ppt. Cada tanque foi equipado com um filtro biológico submerso que contém coral ativo.

Projeto Experimental

[0125] O experimento foi configurado como um projeto completamente aleatorizado no qual cada tratamento foi projetado aleatoriamente com os diferentes tanques. Comprimento total do exame: 29 dias, incluindo o 1o dia de aclimatização, 14 dias de administração de aditivo de ração, seguidos por 14 dias desafio de EHP sob os mesmos tratamentos de alimentação, de acordo com a tabela 13. Os camarões em todos os tanques receberam suas respectivas dietas em saciedade de quatro vezes por dia durante o exame (Tabela 14). Cinco tanques foram alimentados com a ração preparada que contém o aditivo de Ração. Cinco tanques foram projetados como controles positivos para um desafio de coabitação e cinco tanques serviram como controles negativos. Tabela 13: Temporização do experiment

Tabela 14

[0126] Definição de todos os aquários de 120 l utilizados no estudo de EHP

[0127] Fabricação de dietas de camarão

[0128] Os aditivos de ração foram misturados com a refeição de ração e adicionados com aglutinante (CMC -carboxitilcelulose) e umidificados antes de serem extrudados por um moedor de carne pressurizado. A ração foi, então, seca a 50 graus Celsius por 6 horas. A ração foi esmagada ao tamanho esperado (1,5 a 2 mm de comprimento) usado para o estudo.

[0129] Método de desafio

[0130] Um método de desafio de Coabitação padronizado foi usado para desafiar camarão filhote pequeno com o Enterocytozoon hepatopenaei que causa EHP - uma doença de parasita microsporidiano que simula as rotas naturais de infecção.

[0131] Os camarões SPF e afetados foram separados por um divisor por rede que permite a troca livre de água. O método de desafio de Coabitação é projetado conforme o seguinte: em cada tanque plástico de 120 litros, é encaixada uma rede retangular de 50 litros cúbicos. Durante o desafio, 20 camarões infectados com EHP foram empilhados dentro da rede suspensa, e 30 camarões SPF foram empilhados fora. Tanto os camarões infectados com EHP quanto camarões SPF foram alimentados com dietas de teste de cada respectivo tratamento por outros 14 dias. O controle negativo (F) também foi tratado com o mesmo método de desafio. No entanto, os 20 camarões SPF em vez de 20 camarões afetados por EHP foram empilhados dentro a rede suspensa. Durante o período de desafio, tanto o camarão dentro da rede quanto o camarão fora da rede de controle negativo foram alimentados com uma dieta para camarão comercial.

[0132] A densidade de carga de parasita de camarão afetado por EHP foi de 5,05E+06 CFU/g de Enterocytozoon hepatopenaei no início do desafio.

[0133] Amostragem e observação

[0134] O teste por qPCR para EHP foi realizado em 5 camarões/tanque/ponto no tempo em 3 pontos no tempo: dia 14 (logo após o desafio) para confirmar o estado livre de EHP do camarão SPF, dia 15 (24 horas após o desafio), e dia 18 (96 horas após o desafio) para quantificar quanto a carga de parasita. Na terminação do estudo de desafio, todos os animais vivos foram contados como sobreviventes.

[0135] Análise estatística

[0136] A comparação dos meios de sete tratamentos foi realizada com ANOVA com o uso de um teste LSD de Fisher e as diferenças significativas foram consideradas quando P < 0,05.

[0137] Resultados

[0138] Parâmetro de desempenho de camarão

[0139] Os parâmetros de produção médios ao longo de 28 dias do período experimental são dados na tabela 15. Os valores representam os meios de cinco réplicas. Tabela 15

[0140] Taxas de sobrevivência de exame de desafio

[0141] Taxas de sobrevivência dos tratamentos após 14 dias pós-desafio

[0142] As taxas de sobrevivência de camarões após 14 dias pós-desafio são dadas na Figura 8 (Meio ± SD) dos tratamentos; os meios indicados com a mesma letra maiúscula não diferem

entre tratamentos (teste de Fisher, probabilidade de 5%).

[0143] O resultado do teste de qPCR em carga de parasita EHP é dado na tabela 16. No início do experimento de desafio (logo antes do desafio), há um estado livre de EHP nos tratamentos. Após 48 horas pós-desafio, os camarões de experimento no Tratamento A e no Controle positivo (G) são afetados com a doença, ao passo que os mesmos estavam em um estado livre de EHP no Controle negativo (F). Desse modo, isso indica que a configuração de exame foi aceita e nenhuma contaminação cruzada ocorreu ao Controle negativo. A carga de parasita EHP no Tratamento A e G foi semelhante após 48 horas. No entanto, após 120 horas pós-desafio, a carga de parasita EHP no tratamento A estava abaixo do limite de detecção em 4 tanques dentre os 5, ao passo que todos os tanques do controle negativo foram positivos quanto a EHP (5/5).

Exemplo 7

[0144] Avaliação do efeito de polissacarídeos parietais de 50 SC/CU na resistência de frangos a tensão térmica

[0145] A tensão térmica é um dentre os fatores de tensão ambiental mais importantes que desafiam a produção de carne de aves no mundo. A tensão térmica impacta negativamente o desempenho de carne de aves, redução de crescimento e segurança de produto. Durante períodos de tensão térmica o frango de corte passa por grandes adaptações de regulação térmica a fim de prevenir morte devido à exaustão por calor e isso tem um efeito prejudicial no desempenho.

[0146] Projeto Experimental

[0147] Localização: Fazenda de Experimento Privada (França)

[0148] Projeto Experimental: 2 grupos:

[0149] Controle (C): nenhuma suplementação; POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (Y): POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU a 800 g/tonelada e 400 g/tonelada em períodos inicial e de crescimento, respectivamente. Nenhuma suplementação de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU durante o período de finalização (800-400-0).

[0150] Dietas:

[0151] 3 fases (início, crescimento e finalização). As três fases de alimentação foram: 0 a 10, 11 a 25, 26 a 35 dias.

[0152] Animais:

[0153] O exame foi executado em frangos de corte de Ross PM3 alocadas por raça aleatoriamente na chegada em 13 currais para alcançar uma densidade de 20 pássaros/curral (C: 6 currais, Y: 7 currais).

[0154] Desafio de tensão térmica:

[0155] O desafio de tensão térmica foi realizado em D20: na noite entre D19 e D20, a temperatura foi aumentada até 31 °C na sala.

[0156] Medições: Número e datas de mortalidade por curral.

[0157] Análise estatística:

[0158] A diferença na mortalidade entre os 2 grupos durante o exame (e, em particular, a resistência de pássaros a tensão térmica) foi analisada por teste de Kaplan-Meier. As diferenças entre os grupos foram consideradas como significativas para valor de p, p < 0,1. De outro modo, as análises estatísticas parecem não significativas (NS).

[0159] Resultados

[0160] Mortalidade e resistência de pássaros a desafio de tensão térmica: os resultados são dados na tabela 17 Tabela 17

[0161] 40 pássaros morreram durante o desafio de tensão térmica: 9 pássaros no grupo de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU e 31 pássaros no grupo de controle. O número geral de pássaros mortos foi de 17 no grupo de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU e 38 no grupo de controle. A análise de Kaplan-Meier (teste estatístico que compara o tempo de sobrevivência médio nos 2 grupos) foi fortemente significativa (p < 0,001) e gerou a seguinte estimativa: tempo de sobrevivência médio de 29,6 e 32,9 dias para grupos C e Y, respectivamente. O grupo de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU foi, portanto, mais resistente a desafio de tensão térmica agudo que o grupo de controle.

[0162] Concluindo-se, a alimentação com POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU resultou em uma melhor resistência a tensão térmica.

Exemplo 8

[0163] Introdução e objetivo

[0164] O objetivo do exame atual foi testar o efeito de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU no desempenho de leitões pós-desmame, morbidade e incidência de diarreia, após a remoção de medicamentos.

[0165] Projeto Experimental

[0166] Animais e Alojamento

[0167] No total, 480 leitões recém-desmamados (linha de fêmea: Large White x Landrace; linhagem de macho: Danbred Duroc) de 4 lotes subsequentes foram distribuídos em 8 enfermarias de 4 currais cada, em grupos de 20 leitões/curral. Os mesmos foram distribuídos de modo que o peso corporal inicial fosse tão homogêneo quanto possível dentro de um curral e entre os tratamentos, e foram colocados 10 marrãs e 10 machos em cada curral.

[0168] Os leitões foram vacinados contra Micoplasma com 7 e 21 dias de idade, e contra Circovírus com 21 dias de idade.

[0169] Período

[0170] O exame ocorreu a partir do desmame com 19 dias de idade em média, e durou por 55 dias.

[0171] Tratamentos

[0172] Os leitões foram alimentados em um programa de alimentação de duas fases, e tiveram livre acesso a ração e água durante o período experimental completo

[0173] Houve 2 tratamentos (tabela 18): Controle (C) e EXAME 1 (T1).

[0174] A estratégia de antibiótico atualmente usada na fazenda é: Pré-inicial: 120 ppm de colistina + 300 ppm de amoxicilina + 2.400 ppm de ZnO; Inicial: 1.600 ppm de ZnO.

[0175] Para o exame, com o objetivo de desafiar os leitões, a medicação se tornou: Pré-inicial: 2.400 ppm de ZnO; Inicial: ração bruta. Tabela 18 Tratamentos

[0176] Configuração experimental e observações - Peso corporal: individual. No início e no fim do experimento, e na alteração de dieta. - Ingestão de ração: por curral. Na alteração de dieta, como a diferença entre ração fornecida e as sobras no dia de alteração. - Morbidade: intervenção de cuidados com a saúde individual e de grupo, incluindo profilaxia regular de rebanho. - Mortalidade: data, peso e motivo aparente. - Diarreia: por curral. Verificação diária de incidência de diarreia.

[0177] Estatística

[0178] Análise de variância com o modelo linear Geral em SPSS 22,0 (IBM), de acordo com o modelo:

[0179] em que:

[0180] Y = peso corporal final (FBW), ganho diário mediano (ADG), ingestão de ração diária mediana (ADFI), razão de conversão de ração (FCR), mortalidade; IBW = peso corporal inicial usado como uma covariante; lote = efeito fixo causado por lote (j = 1,2,3,4); tratamento = efeito fixo causado por tratamento (k = C,T1); lote*tratamento = interação entre tratamento e lote experimentais; e = erro. A unidade experimental foi o curral. A significância foi declarada como a partir de P < 0,05.

[0181] Nenhuma interação foi constatada entre o tratamento e o lote. Como consequência, a mesma foi removida do modelo.

[0182] Resultados

[0183] Desempenho

[0184] Houve diferenças significativas em FBW (P < 0,01), de início e de crescimento geral (P<0.05), e no FCR inicial (P < 0,05), em que os leitões em T1 são aqueles com um BW superior, crescimento mais rápido e FCR inferior. Ademais, os leitões T1 tendem a crescer mais rápido no início (P < 0,1) e a comer mais no início (P < 0,1). Os resultados de desempenho são mostrados na tabela 19. Tabela 19 Resultados de desempenho por período e gerais de leitões nos tratamentos C e T1

[0185] O fato de que as diferenças são mais fortes no início que no período pré- inicial provavelmente se deve ao fato de que a fazenda teve um bom estado de saúde, e no período inicial os leitões foram mais desafiados com uma dieta bruta que durante a fase pré-inicial.

[0186] A mortalidade foi baixa durante o período experimental, e não houve diferenças entre tratamentos. Em média, ao longo de todo o período, essa foi de 1,8 %. No total, 13 leitões morreram durante o exame.

[0187] Conclusões:

[0188] As conclusões principais desse exame são: - Adição de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU nas dietas pós-desmame aprimoram o peso corporal final, ganho diário mediano geral e a razão de conversão de ração numericamente geral, com relação a uma dieta de controle com medicação limitada. - O impacto parece ser mais forte no período de inicial que no período pré- inicial, provavelmente dependendo do estado de saúde da fazenda. - POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU podem ser um bom ZnO potencial e/ou substituidor de antibióticos durante a fase inicial.

[0189] Recomenda-se testar o potencial de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU para substituir antibióticos, comparando-se um tratamento com POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU a um controle positivo, e o possível efeito complementar da adição de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU sobre antibióticos.

Exemplo 9

[0190] Instalações, Descrições de Amostra e dietas Experimentais

[0191] O experimento foi realizado com alevinos de Truta-Arco-íris (Oncorhynchus mykiss). Após quatro semanas de aclimatização, 480 peixes (23,07 ± 0,2 g) foram aleatoriamente distribuídos em 16 x 150-1 tanques de fibra de vidro (30 peixes por tanque) que contêm água fresca recirculada arejada. Os peixes foram alimentados com dietas em um regime fixo de 3% de peso corporal por dia distribuídas ao longo de três vezes de alimentação (09:00, 13:00 e 17:00 horas) por 56 dias. Os peixes foram pesados em lote em uma base de duas vezes por semana após um período de jejum de 24 horas e criados a 14,5 ± 0,5 °C com um fotoperíodo de luz:escuridão de 12:12 horas. O pH da água foi mantido entre 6,8 a 7,5, oxigênio dissolvido entre 7,5 a 8 mg/ 1, amônia entre 0,04 a 0,08 mg/ 1, nitrito entre 0,02 a 0,06 mg/ 1 e nitrato entre 54 a 58 mg/ 1. As Trutas-Arco-íris foram alimentadas com um dentre os quatro regimes dietéticos com tanques quádruplos para cada tratamento: 1] controle, 2] POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 60 SC, 3] POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU alimentados continuamente, e 4] POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU pulsados por 56 dias (consultar a Tabela 21 quanto a composição das dietas). Tabela 21. Formulação de dietas experimentais para o experimento de Plymouth. Cada componente de ingrediente é expresso como g/ kg por dieta.

[0192] Metodologia

[0193] Coleta de muco

[0194] Os peixes devem ser selecionados aleatoriamente e mortos sem crueldade, de acordo com os protocolos de estação de exame. MS222 é a escolha preferida de anestésico. Deve-se tomar cuidado com a coleta peixes em rede que é feita o mais rápido possível com a menor perturbação às superfícies de mucosa do peixe. Imediatamente após a morte, o muco deve ser coletado raspando-se um lado do peixe com o uso de uma espátula pequena a partir da borda do opérculo ao ânus (Figura 9: Direção de deslizamento de espátula para Salmão do Atlântico e Truta- Arco-íris). O muco acumulado na extremidade de cauda do peixe deve ser transferido para uma seringa pré-pesada de 1 ml. O muco é armazenado em tubos do tipo eppendorf de 1 ml e imediatamente congelado a -80 °C, em espera de análise.

[0195] Coleta de amostra de qPCR em tempo real

[0196] As amostras de pele (< 100 mg) foram coletadas a partir de Truta-Arco-Íris, transferidas para uma solução de RNAlater de 1 ml (Applied Biosystems, Warrington, RU) e armazenadas a 4 °C por 24 horas e, então, a -80 °C até a extração de RNA. Após a extração de RNA, uma qPCR foi aplicada para observar a expressão de um biomarcador específico de produção de muco.

[0197] Cálculos de desempenho de crescimento

[0198] O crescimento foi avaliado por ganho de peso (WG), taxa de crescimento específico (SGR), razão de conversão de ração (FCR), razão de eficácia de proteína (PER), fator de condição (K). Os cálculos foram realizados com o uso das seguintes fórmulas: NWG (g) = FW-IW; SGR (%BW/dia) = 100((lnFW-lnIW)/T); FCR (g/ g) = FI /WG; PER = WG/PI; K = FW/(FL3). Em que FW = peso final (g), IW = peso inicial (g), T = duração de alimentação (dias), WG = ganho de peso úmido (g), FI = ingestão de ração (g), PI = proteína ingerida (g) e FL = comprimento final (cm).

[0199] Resultados

[0200] Análise de amostra de muco

[0201] Os dados para produção de muco são apresentados na Tabela 22. A produção de muco foi aumentada em peixe alimentado com 60 SC e 50 SC/CU vs. controle, com uma vantagem numérica em favor de 50 SC/CU. Tabela 22. Produção de muco de pele de peixe (mg/cm) após 28 e 56 dias de alimentação em dietas experimentais. Os dados são apresentados como média ± SD.

[0202] Análise de qPCR em tempo real

[0203] A análise de expressão genética das amostras de pele da Truta-Arco-Íris revelou uma regulação crescente significativa da expressão de um biomarcador específico de produção de muco em peixe alimentado com dieta de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU continuamente (2,31 ± 1,26 NEL; P = 0,0003) e pulsado (2,09 ± 0,58 NEL; P < 0,0001), em comparação a peixe alimentado com controle (1,16 ± 0,48 NEL). Os dados são apresentados na Figura 10 que mostra a Expressão Relativa desse gene em amostras de pele de Truta-Arco-Íris (O.mykiss) alimentada por 8 semanas em dietas experimentais suplementadas com POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 60 SC e (50 SC/CU PARIETAL POLYSACCHARIDES™). Os dados apresentados em diagramas de caixa (n = 10/tratamento). *- denota regulação crescente significativa; P < 0,0001

[0204] Desempenho de crescimento

[0205] Em comparação a peixe alimentado com controle, a Truta-Arco-Íris alimentada com dietas experimentais por 56 dias não revelou diferenças significativas no desempenho de crescimento. Os dados são apresentados na Figura 11 que mostra o desempenho de crescimento de Truta-Arco-Íris alimentada com dietas experimentais por 56 dias.

Exemplo 10:

[0206] Peixe, projeto experimental e formulação de dieta

[0207] Após 4 semanas aclimatização, 225 robalos (15,45 ± 0,1 g) foram distribuídos aleatoriamente em 9 x 110-1 tanques de fibra de vidro (25 peixes por tanque). Os robalos foram alimentados em uma taxa fixa de 2,0% de peso corporal por dia distribuída ao longo de 3 vezes de alimentação, 9:00, 13:00 e 16:30 horas, por 10 semanas. Os peixes foram pesados em lote semanalmente após um período de jejum de 24 horas e criados a 24,14±0,85 °C, salinidade de 26,58± 4,32 com um fotoperíodo de luz:escuridão de 12:12 horas. O pH da água foi mantido entre 6,8 a 7,5, oxigênio dissolvido entre 7,5 a 8 mg/ 1, amônia entre 0,04 a 0,08 mg/ 1, nitrito entre 0,02 a 0,06 mg/ 1 e nitrato entre 54 a 58 mg/ 1.

[0208] As dietas foram formuladas para conter um alto nível de inclusão de farelo de Soja (40% de inclusão), a formulação dietética é mostrada na Tabela 23. Tabela 23. Formulação de dietas experimentais. Cada componente de ingrediente é expressado (% de nível de inclusão).

[0209] Metodologia

[0210] Análise de microscopia de luz (LM)

[0211] O intestino distal de peixe foi removido, fixado em formalina marinha de 10% e mantido a 4 °C por 48 horas, e, subsequentemente, transferido para etanol de 70% para armazenamento. Antes da análise, as amostras intestinais foram desidratadas (Leica TP 1020) e incorporadas em cera de parafina, de acordo com Dimitriglou et al (Journal of animal science, 2009, 87, 3.226 a 3.234.)

[0212] As amostras foram seccionadas em espessura de 5 μm (micrótomo RM2235 Leica), secas em um forno de um dia para o outro e, após isso, automanchados com hematoxilina e eosina (HE) (Automanchador XL Leica). As lâminas foram montadas com carreiras de cobertura com o uso de DPX e deixadas para secar. As fotografias de amostras manchadas foram, então, capturadas (microscópio DMIRB Leica e câmera SLR digital E410 Olympus). A análise de imagem foi conduzida com o uso de software Image J 1.47v (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, EUA). As imagens de LM foram usadas para calcular comprimento de dobra (FL) e espessura de lâmina própria (LP-W), além de célula calciforme (GC), e medidas através de 200 μm. Para razões por perímetro (PR), o limiar de imagem foi ajustado, seguindo a conversão em 8-bit. O perímetro interno foi dividido pelo perímetro externo para calcular a razão. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (SD) e a análise estatística foi conduzida com o uso de estatística SPSS versão 15 para Windows (SPSS Inc., II, EUA) e aceita a P < 0,05. Os dados histológicos foram analisados com o uso de ANOVA de sentido único. As diferenças significativas entre grupos de controle e tratamento foram determinadas com o uso de teste HSD post-hoc de Tukey.

[0213] Microscopia eletrônica de varredura (SEM)

[0214] As amostras foram fixadas em glutaraldeído de 2,5% com 0,1 M de tampão de cacodilato de sódio (1:1 volume, pH de 7,2). As amostras foram, então, desidratadas em uma série de etanóis graduados (álcool de 30%, 50%, 70%, 90% e 100% x2) por 15 minutos em cada etapa e ponto crítico seco (K850 Emitech) com etanol como o fluido intermediário e CO2 como fluido de transição. As amostras foram, então, revestidas por bombeador de íons (K550 Emitech) com ouro e observadas com um microscópio eletrônico de varredura JSM 6610 LV. Para cada amostra, múltiplas imagens foram capturadas em ampliações em uma faixa de x 500 a x 20.000 para avaliar a integridade intestinal geral. As medições de densidade de microvilosidade foram conduzidas com o uso de Image J (VI.45) com o uso de imagens em ampliação de x 20.000 (Figura 13). Os dados de SEM foram analisados com o uso de ANOVA de sentido único. As diferenças significativas entre grupos de controle e tratamento foram determinadas com o uso de teste HSD post-hoc de Tukey.

[0215] Coleta de amostra de qPCR em tempo real

[0216] As amostras intestinais posteriores (< 100 mg) foram coletadas a partir de robalo europeu, transferidas para solução de RNAlater de 1 ml (Applied Biosystems, Warrington, RU) e armazenadas a 4 °C por 24 horas e, então, a -80 °C até a extração de RNA.

[0217] Extração de RNA e síntese de cDNA

[0218] O RNA total foi extraído com o uso de reagente TRI (Ambion, Life technologies, RU), de acordo com as instruções do fabricante, com algumas modificações. Brevemente, amostras intestinais de 50 a 100 mg foram removidas da solução de RNAlater e a solução excessiva foi removida pressionando-se a amostra entre tecido estéril. As amostras (< 100 mg) foram transferidas para um tubo que contém 1 ml de reagente TRI e homogeizadas por 10 minutos. Após esses 200 μl de clorofórmio terem sido adicionados e após a mistura, as amostras foram centrifugadas a 12.000 x g por 15 minutos. A fase aquosa superior foi transferida para um tubo que contém um volume igual de isopropanol. As misturas foram vórtice e centrifugadas a 14.000 x g por 15 minutos. Os sobrenadantes foram descartados e os péletes de RNA precipitado foram lavados com o uso de 1 ml de etanol de 75%. O RNA total foi dissolvido em dietilpirocarbonato (DEPC) e para remover qualquer DNA genômico contaminante foram purificados com o uso de Mini Kit RNeasy Plus, de acordo com as instruções, do fabricante (Qiagen, RU). A concentração e a qualidade de RNA em cada amostra foram determinadas medindo-se razões de absorbância de 260/280 e 260/230 nm (NanoDrop Technologies, Wilmigton, EUA). A integridade de RNA foi confirmada passando-se as amostras no Bioanalisador, os números de integridade de RNA (RIN) estiveram em uma faixa de 8,0 a 9,5 (Agilent technologies, RU), as amostras foram armazenadas a -80 °C. Uma quantidade total de 1 μg de RNA foi usada para a síntese de cDNA, que emprega kit de síntese de cDNA iScript (Bio-Rad, RU). A reação foi colocada a 25 °C por 5 minutos, então, 42 °C por 30 minutos e inativada a 85 °C por 5 minutos. O kit de síntese de cDNA iScript contém uma combinação de oligo dTs e hexâmeros aleatórios para funcionar com uma ampla variedade de alvos.

[0219] Ensaio de PCR em tempo real

[0220] As reações de PCR foram realizadas com método de SYBR green com o uso de um ciclador térmico de PCR em Tempo Real StepOne Plus™ (Applied Biosystems). As reações de PCR em duplicada foram realizadas para cada amostra analisada. Cada reação de PCR foi estabelecida em uma placa de 384 cavidades misturando-se 2 μl de cDNA diluente (1/10) com 5,5 μl de iQ™ SYBR Green Supermix 2 x concentrado (Bio-Rad), que contém SYBR Green como um agente de intercalação fluorescente, 0,3 μM de iniciador dianteiro e 0,3 μM de iniciador reverso. O iniciador usado e suas sequências são apresentados na Tabela 1. O perfil térmico para todas as reações foi de 10 minutos a 95 °C e, então, de 40 ciclos de 15 segundos a 95 °C, 60 segundos a 59 °C. O monitoramento de fluorescência ocorreu no fim de cada ciclo. A análise de curva de dissociação adicional foi realizada e mostrou em todos os casos um único pico, β-actina e GAPDH foram usadas como genes de referência em cada amostra a fim de padronizar os resultados eliminando-se a variação em quantidade e qualidade de mRNA e cDNA (Bustin et al., 2009). De fato, a estabilidade e a adequabilidade de GAPDH e β-actina como genes de referência foram confirmadas de acordo com os algoritmos usados pelo software geNorm™ (Vandesompele et al., Genome biology, 2002, 3(7), pesquisa 0034).

[0221] Um valor "M" de estabilidade de expressão foi gerado para cada gene de referência. Nenhum produto de amplificação foi observado nos controles negativos e nenhuma formação de dímero iniciador foi observada nos moldes de controle. A modificação de expressão genética é representada com relação aos controles que são amostrados no mesmo momento que o tratamento.

[0222] O ciclo de limiar (Ct), definido como o ponto no qual a fluorescência aumenta de modo observável acima da fluorescência de fundo, foi determinada manualmente para cada execução. As eficácias de PCR para cada conjunto de iniciadores foram determinadas com o uso de diluições em série de cDNA (n = 3) e plotagens resultantes de Ct versus entrada de cDNA logarítmica, com o uso da equação E (eficácia de PCR) = 10(-l/inclinação). O nível de expressão normalizado (NEL) de genes-alvo foi calculado com base no desvio de Ct (ΔCt) da amostra desconhecida versus uma amostra de controle, e expressado em comparação aos genes de referência GAPDH e β-actina de acordo com os cálculos destacados pelo manual de geNorm™ (http://medgen.ugent.be/~jvdesomp/genorm/) e Vandesompele et al. (Genome biology, 2002, 3(7), pesquisa 0034.

[0223] Todas as estatísticas para dados de RT-qPCR foram realizadas com o uso de teste de permutação em R.

[0224] Cálculos de desempenho de crescimento

[0225] O crescimento foi avaliado por ganho de peso (WG), taxa de crescimento específico (SGR), razão de conversão de ração (FCR), razão de eficácia de proteína (PER), fator de condição (K). Os cálculos foram realizados com o uso das seguintes fórmulas: NWG (g) = FW-IW; SGR (%BW/dia) = 100((lnFW-lnIW)/T); FCR (g/ g) = FI /WG; PER = WG/PI; K = FW/(FL3). Em que FW = peso final (g), IW = peso inicial (g), T = duração de alimentação (dias), WG = ganho de peso úmido (g), FI = ingestão de ração (g), PI = proteína ingerida (g) e FL = comprimento final (cm).

[0226] Resultados

[0227] Microscopia de luz

[0228] A microscopia de luz revelou que robalo alimentado com as dietas de controle e experimentais mostrou uma barreira epitelial intacta e uma disposição de mucosa de dobras de mucosa semelhantes a vilosidade organizados. A mucosa intestinal consistiu em um epitélio simples e lâmina própria (LP) que compreendem um IELs espalhado (consultar a Figura 12A). A razão de perímetro em comparação a peixe alimentado com dieta de controle (uma razão de perímetro superior indica uma superfície intestinal absortiva superior realizada por dobras de mucosa mais numerosas e/ou mais compridas), foi significativamente elevada peixe alimentado com dietas de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU tanto na semana 5 quanto na semana 10 do período experimental (consultar a Tabela 24A e B). Por outro lado, em comparação a peixe alimentado com controle, o peixe alimentado com o regime dietético PARIETAL POLYSACCHARIDES DE 60 SC mostrou uma elevação significativa em PR apenas após 10 semanas de alimentação (consultar a Tabela 24B). Tabela 24A. Dados de microscopia de luz após 5 semanas de alimentação com dietas experimentais. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (n = 6/ tratamento). a b Sobrescritos denotam a diferença significativa com o uso de teste HSD post- hoc de Tukey

Tabela 24 B. Microscopia de luz < dados após 10 semanas de alimentação com dietas experimentais. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (n = 18/ tratamento). a b Sobrescritos denotam a diferença significativa com o uso de teste HSD post- hoc de Tukey

[0229] Análise de SEM

[0230] As superfícies epiteliais de todos os peixes pareceram estar saudáveis com formações de enterócito uniforme e microvilosidade densamente empacotada sem sinais de interrupção ou necrose de microvilosidade. As imagens representativas de peixe em cada tratamento são apresentadas na Figura 12 e as análises de medição de densidade de microvilosidade são apresentadas nas Figuras 13A e 13B. Após 5 semanas de alimentação com dietas experimentais (consultar a Figura 13A), em comparação a peixe alimentado com controle (1,58 ± 0,5 a.u.), o peixe alimentado com polissacarídeos parietais de 60 SC (2,90 ± 1,0 a.u.) e POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (4,81 ± 1,0 a.u.) revelou uma elevação significativa na densidade de microvilosidade (P < 0,001). De modo semelhante, após 10 semanas de alimentação com as dietas experimentais (consultar a Figura 13B), o peixe alimentado com polissacarídeos parietais de 60 SC (3,51 ± 0,4 a.u.) e POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (3,48 ± 0,7 a.u.) exibiu uma elevação significativa (P <0,001) na densidade de microvilosidade em comparação a peixe alimentado com a dieta de controle (1,66 ± 0,2).

[0231] qPCR em tempo real

[0232] Os dados de expressão genética revelaram que em comparação a peixe alimentado com controle (0,48 ± 0,15 NEL), o peixe alimentado com dietas de polissacarídeos parietais de 60 SC (0,17 ± 0,07 NEL) e POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (0,11 ± 0,08 NEL) exibiu uma regulação decrescente significativa (P = 0,03) para proteína do choque térmico 70 (HSP70). De modo semelhante, para proliferar a expressão genética de antígeno nuclear de célula (PCNA), o peixe alimentado com polissacarídeos parietais de 60 SC (0,14 ± 0,1 NEL) e POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (0,12 ± 0,04 NEL) exibiu uma regulação decrescente significativa (P = 0,03) em comparação a peixe alimentado com a dieta de controle (0,47 ± 0,14 NEL). Por outro lado, os dados de expressão genética para interleucina-lbeta de citocina efetora inflamatória (IL-lbeta) revelaram que o peixe alimentado com dieta de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (1,74 ± 0,4 NEL) exibiram uma regulação crescente significativa (P = 0,03) em comparação a peixe alimentado com dieta de controle (0,51 ± 0,4 NEL). De modo semelhante, os dados de expressão genética para interleucina-10 de citocina efetora anti-inflamatória (IL-10) revelaram que o peixe alimentado com a dieta de POLISSACARÍDEOS PARIETAIS DE 50 SC/CU (2,79 ± 2,0 NEL) exibiram uma regulação ascendente significativa (P = 0,05) em comparação a peixe alimentado com dieta de controle (0,36 ± 0,2 NEL). Todos os dados são apresentados na Figura 14.

Exemplo 11: Eficácia Anticoccidiana de polissacarídeos parietais de 50 SC/CU em frangos de corte comerciais expostas a um desafio misturado de Eimeria acervulina, E. maxima e E. tenella

[0233] Objetivo

[0234] O objetivo do estudo foi medir a eficácia/sensibilidade anticoccidiana de polissacarídeos parietais de 50 SC/CU contra uma mistura de Eimeria acervulina, E. maxima e E. tenella.

[0235] Projeto Experimental

[0236] O estudo consistiu em 45 jaulas que começaram com 10 pintos cada. Os oito tratamentos foram replicados nove vezes. Tratamentos Projeto Experimental

[0237] Animais

[0238] O dia de choca de pintos de frango de corte machos (cepa Ross 708) foi usado para esse exame. Na incubadora, os pássaros foram sexuados e receberam vacinações de rotina. Apenas os pintos que pareceram saudáveis foram usados no estudo. O estudo começou quando os pássaros foram colocados (Dia 0), em tal momento os mesmos foram alocados às jaulas de experimento. Nenhum pássaro foi substituído durante o curso do estudo. Os pássaros foram pesados por jaula nos Dias 0, 14, 20 e 28.

[0239] Alojamento

[0240] Mediante a chegada, os pintos foram colocados em jaulas em bateria. O espaço do chão por animal foi de 0,04 m2/pássaro (0,51 sq. ft/pássaro). A fornalha/o ar condicionado termostaticamente controlado por gás manteve a temperatura uniforme. Ademais, a iluminação contínua foi fornecida por lâmpadas fluorescentes verticalmente suspensas ao longo da parede. Ração e água foram fornecidas ad libitum.

[0241] Agente de Organismo

[0242] O inóculo coccidiano consistiu em uma cultura misturada de três espécies de Eimeria. As espécies foram E. acervulina, E. maxima e E. tenella. O inóculo coccidiano foi administrado por gavagem oral aos pássaros nos tratamentos infectados.

[0243] No Dia 14 do estudo cada pássaro no tratamento não infectado recebeu 1 ml de água destilada por pipeta oral (p.o.). Os pássaros nos tratamentos infectados receberam o inóculo coccidiano diluído a uma titulação de volume de 1 ml (p.o.) em uma contagem de oocistos mediana de 75.000, 25.000 e 50.000 para E. acervulina, E. maxima e E. tenella, respectivamente.

[0244] Marcação de Lesão

[0245] No Dia 20, cinco (5) pássaros por jaula foram eutanasiados sem crueldade, e o grupo foi pesado. Os pássaros foram marcados por lesão de coccídiose de acordo com a região infectada (ou regiões infectadas) do intestino.

[0246] Programação de desafio ■ D14: desafio de coccídiose = 75.000, 25.000 e 50.000 para E. acervulina, E. maxima e E. tenella, respectivamente ■ D20: contagem de oocistos em material fecal (misturado por jaula) marcação de lesão intestinal (5 pássaros/jaula)

Resultados

[0247] Esses são fornecidos nas Figuras 15 a 17

[0248] Conforme mostrado na Figura 15, os animais alimentados com 50SC/CU polissacarídeos parietais mostraram lesões específicas inferiores associadas à infecção por Eimeria acervulina, E. maxima e E. tenella. Esse efeito resultou em uma marcação de lesão mediana significativamente inferior.

[0249] De modo interessante, a mortalidade de frango de corte infectado por Eimeria sp. ao longo do curso do experimento também foi numericamente reduzida de uma maneira dependente de dose, conforme mostrado na Figura 16.

[0250] A excreção fecal de oocistos de patógenos no dia 20 (6 dias após a infecção) foi significativamente reduzida em pássaros alimentados com polissacarídeos parietais de 50 SC/CU de uma maneira dependente de dose, conforme mostrado na Figura 17.

[0251] Esses resultados suportam o fato de que a alimentação de frango de corte com 50 SC/CH polissacarídeos parietais pode mitigar os efeitos negativos associados a uma infecção com Eimeria sp.

[0252] Embora a invenção tenha sido descrita em conexão a modalidades específicas da mesma, deve-se entender que a mesma tem a capacidade para sofrer modificações adicionais e este pedido se destina a abranger quaisquer variações, usos ou adaptações da invenção seguindo, de modo geral, os princípios da invenção e incluindo tais afastamentos da presente revelação que possam ser de prática conhecida ou costumeira na técnica à qual a invenção pertence e conforme pode ser aplicado aos recursos essenciais estabelecidos anteriormente no presente documento, e conforme segue no escopo das reivindicações anexas.

Claims

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces, em que os ditos polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces são quitina, Manan- oligossacarídeos, Beta 1,3 glucanos e Beta 1,6 glucanos, em uma quantidade variando de 20 a 80 por cento em peso com base no peso total da composição.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 15 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição.

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces estão em uma quantidade em uma faixa de 30 a 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces estão em uma quantidade de pelo menos 20, 23, 25, 27, 30, 33, 35, 37, 40, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 60, 63, 65, 67, 70, 73, 75, 77 ou 80 por cento em peso com base no peso total da composição.

8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces estão em uma quantidade de pelo menos 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces estão em uma quantidade em uma faixa de 30 a 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

10. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces estão em uma quantidade em uma faixa de 30 a 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade em uma faixa de 10 a 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomycesestão em uma quantidade de pelo menos 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

12. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida estão em uma quantidade de pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 por cento em peso seco com base no peso total de polissacarídeos parietais na composição; e os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Candida e polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie de Saccharomyces estão em uma quantidade de pelo menos 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 por cento em peso com base no peso total da composição.

13. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a pelo menos uma espécie Candida é Candida utilis.

14. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizada pelo fato de que os polissacarídeos parietais de pelo menos uma espécie Saccharomyces são Saccharomyces cerevisiae sp.

15. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso na modulação e/ou estímulo de respostas imunológicas em animal.

16. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso no aprimoramento de saúde intestinal, integridade intestinal e morfologia intestinal de animais

17. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso no estímulo de uma resposta anti- inflamatória de animais.

18. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso no aprimoramento de parâmetros de desempenho de crescimento e conversão de alimentação de animais de fazenda.

19. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso na redução de morbidade e, em particular, tratamentos com antibiótico, e mortalidade de animais de fazenda.

20. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso na redução da mortalidade de animais de fazenda

21. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso na redução de diarreia de animais

22. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso na redução de sensibilidade a patógenos intestinais.

23. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso na redução da sensibilidade de animais a infestações parasíticas e distúrbios relacionados.

24. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que serve para o uso no aprimoramento da produção de muco de pele de animais aquáticos.