BR112017005089B1 - Uso de uma associação de um agente antimicrobiano e de um composto, e associação de um agente antimicrobiano e de cineol - Google Patents

Abstract

A invenção tem como objeto um agente antimicrobiano potencializado para sua utilização no tratamento de uma infecção microbiana, distinguido pelo fato de que se utiliza em associação com o agente antimicrobiano um composto que corresponde à seguinte fórmula I: (I) em uma razão mássica, composto de fórmula (I):agente antimicrobiano, que varia de 8:1 a 1: 10 e em que a infecção microbiana é induzida nomeadamente por um patógeno de estirpe A e que, nessa estirpe A, a concentração de composto (I) corresponde à seguinte equação: [C] [CMI] / x, em que [C] é a concentração de acordo com a invenção de composto (I) a ser utilizada na estirpe A, [CMI] é a CMI medida para o composto (I), sozinho, nessa estirpe A, x é superior ou igual a 100, vantajosamente a 1.000, mais vantajosamente x está compreendido entre 2.000 e 10.000, ou superior a 50.000.

Description

[001] A invenção tem como objeto os compostos de fórmula (I), utilizados a uma dose em que os mesmos não apresentam mais propriedades antimicrobianas, para sua utilização como agentes destinados à potencialização dos ativos antimicrobianos com os quais são coadministrados. Em particular, a combinação “potencializador (ou potencializadores) + antimicrobiano (ou antimicrobianos)” tem como objetivo prevenir e/ou tratar as infecções bacterianas e fúngicas no ser humano ou no animal.

[002] A invenção tem igualmente como objeto um processo para potencializar os agentes antimicrobianos no qual coadministra-se com o dito agente antimicrobiano um composto (ou vários) de fórmula (I). Nesse processo, utiliza-se o composto de fórmula (I) a uma dose em que o mesmo é inativo sozinho.

OBJETO DA INVENÇÃO ANTECEDENTES

[003] A invenção tem como objetivo proporcionar soluções para as problemáticas ligadas à queda ou à perda de atividade dos agentes antimicrobianos durante seu período de utilização comercial e médica. A invenção é, portanto, uma solução que se aplica aos agentes antimicrobianos atuais e que se aplicará aos agentes antimicrobianos futuros.

[004] Após o advento dos agentes antimicrobianos nos anos 1940, é rapidamente revelado que os micróbios (bactérias e fungos) têm a capacidade de se adaptar aos agentes antimicrobianos utilizados. A eficácia do mesmo diminui com o passar do tempo e de sua utilização. Existem 2 estratégias para combater a resistência, a constatação de moléculas antimicrobianas inovadoras, por um lado, e, por outro lado, a associação com moléculas destinadas a bloquear seletivamente os mecanismos de resistência.

[005] Há vinte anos, é observada uma queda do número de moléculas antimicrobianas inovadoras que entram no mercado, o que provocou o aumento maior da prevalência mundial de micróbios resistentes. Decorre, então, uma situação complexa para os pacientes que são mais dificilmente tratados de suas infecções microbianas.

DESCRIÇÃO

[006] A invenção descreve a utilização de compostos de fórmulas (I) para potencializar agentes antimicrobianos. De forma inesperada, esses compostos demonstraram sua capacidade de potencialização do efeito dos agentes antimicrobianos a doses baixas (de 0,01 a 100 mg/l) muito distantes daquelas em que esses podem, sozinhos, apresentar propriedades antimicrobianas. Consequentemente, os agentes antimicrobianos com os quais os compostos de fórmulas (I) são coadministrados apresentam, devido à potencialização, uma atividade superior àquela usualmente observada.

[007] A invenção visa potencializar os “agentes antimicrobianos”, utilizáveis no ser humano ou no animal e não o conjunto dos compostos que apresentam “propriedades antimicrobianas”, que não são frequentemente administráveis ao ser humano ou ao animal devido a uma toxicidade muito significativa ou a um limite de atividade antimicrobiana muito elevado que necessita de doses incompatíveis com a saúde.

[008] É importante lembrar que toda molécula apresenta, em termos absolutos, propriedades antimicrobianas. As propriedades antimicrobianas de uma molécula devem, portanto, ser avaliadas frente a concentração mínima que inibe a bactéria.

[009] A invenção se baseia na constatação surpreendente de que os compostos, que apresentam propriedades antimicrobianas a doses muito elevadas (nível incompatível com um uso em medicina para esse efeito) e dos quais a concentração mínima inibidora (CMI) superior a 5.000 mg/l, vantajosamente superior a 10.000 mg/l, apresentam efeitos de potencialização a doses baixas (0,01 a 100 mg/l). A tais doses, torna-se concebível utilizar os compostos (I) no ser humano ou no animal.

[010] De forma ainda também surpreendente, foi constatado que o efeito de potencialização é melhor a dose baixa do composto (I), e que o efeito (para os compostos que apresentam propriedades antimicrobianas a doses muito elevadas) aumenta quando se distancia da dose na qual o composto (I) apresenta sozinho propriedades antimicrobianas.

[011] Por exemplo, foi constatado de forma inesperada que o cineol, que apresenta propriedades antimicrobianas a uma concentração da ordem do g/l (CMI de 25.000 mg/l a 50.000 mg/l ou 2,5 a 5%, de acordo com as estirpes), apresenta efeitos de potencialização dos antibióticos nessas concentrações próximas da CMI (1 a 3 diluições).

[012] Quando se diminui sua concentração abaixo da CMI, o cineol não potencializa mais os antibióticos (consultar exemplos 2 e 6). Então, de maneira muito surpreendente, foi constatado que, diminuindo-se ainda significativamente a concentração de cineol, de 10 a 50 vezes menos que a CMI, o cineol apresenta novamente efeitos de potencialização sobre um número muito grande de antibióticos em um número muito grande de estirpes, dessa vez a doses compatíveis com o uso medicinal.

[013] Uma grande vantagem é que os compostos (I) utilizados a essas doses distantes de seu limite de eficácia são mais frequentemente utilizáveis no ser humano ou no animal sem restrições de toxicidade devido à ausência de toxicidade ou a níveis aceitáveis de toxicidade. Esse não seria o caso se fosse desejado os utilizar a doses elevadas em que os mesmos apresentam propriedades antimicrobianas ou então a doses próximas de sua CMI em que poderiam potencializar os agentes antimicrobianos.

[014] De forma igualmente surpreendente, o efeito de potencialização observado com o composto de acordo com a invenção não é específico de um mecanismo de resistência particular, mas se observa em diversas estirpes, quer as mesmas tenham, ou não tenham, desenvolvido um ou mais mecanismos de resistência distintos.

TÉCNICA ANTERIOR

[015] A técnica anterior descreve em inúmeras publicações as propriedades antimicrobianas de determinados compostos (I). Essas publicações não preveem o efeito de potencialização dos compostos (I) a doses distantes de seu limite de eficácia.

[016] A técnica anterior é considerável sobre os compostos (I) visto que os mesmos pertencem a classes químicas muito estudadas em inúmeros domínios. Os compostos (I) no âmbito da presente invenção apresentam as seguintes características que permitem afastá-los da técnica anterior e que permitem conceber seu uso como potencializador de agentes antimicrobianos administrados ao ser humano e ao animal: A/ Os mesmos são utilizados a doses baixas (0,01 a 100 mg/l), doses distantes de seu limite de propriedades antimicrobianas, seu efeito de potencialização não é específico de mecanismos de ação ou de resistência particulares; B/ Os mesmos foram validados por métodos de triagem adaptada a suas características físico-químicas; C/ Os mesmos apresentam, a doses ou potencializam, uma razão efeito/toxicidade que permite um uso seguro no ser humano ou no animal; D/ Os mesmos constituem uma entidade (ou entidades) química isolada cujas características são reprodutíveis de forma constante infinitamente visto que seu método de obtenção (síntese, semissíntese, extração) o permite; e E/ Os mesmos não têm toxicidade particular que impediria seu uso mesmo a dose baixa (genotoxicidade, cardiotoxicidade,...).

A/ SOBRE OS NÍVEIS DE ATIVIDADES MEDIDOS NA TÉCNICA ANTERIOR

[017] Na técnica anterior, a concentração utilizada para observar uma atividade antimicrobiana não é compatível com uma utilização futura no ser humano ou no animal, em particular no momento de uma aplicação sistêmica. Na maior parte das publicações científicas, o uso medicinal é concebido ao passo que as concentrações eficazes medidas (da ordem de vários mg/ml) são incompatíveis com esse uso. Os efeitos antimicrobianos medidos foram muito frequentemente para teores de óleo essencial, ou de seu composto ativo, da ordem de vários mg/ml. Ora, tal concentração não é adaptada para uma utilização futura no ser humano ou no animal, em particular por via sistêmica. 1 mg/ml corresponde a 1 g/l ou 1 g/kg ou ainda 0,1%. Se a CMI fosse de 1 mg/ml, seria necessário, em função dos parâmetros de farmacocinética, administrar pelo menos 1 g/kg/dia de peso vivo. Por exemplo, a dose eficaz para uma vaca deveria ser pelo menos 500 g/dia e pelo menos 60 g/dia para o ser humano (isso corresponde à dose mínima visto que se supõe aqui que o produto seja totalmente absorvido e distribuído no organismo). Essas doses extremamente consideráveis não são concebíveis para uma utilização segura em terapêutica.

[018] Por exemplo, pode-se citar duas publicações que citam o efeito antibacteriano dos terpenoides e sua eventual capacidade de potencialização dos agentes antimicrobianos: - Biointerfacae Vol. 2, Edição 1, 2012, 271 a 276: Marinas et al: Rosmarinus officinalis essential oil as antibiotic potentiator against Staphylococcus aureus. Se essa publicação parece próxima da invenção, é importante notar a dose concebida (p. 274) de eucaliptol que, a 25 μl/ml (ou 25 ml/l ou 25 g/l) se situa muito longe da dose administrável ao ser humano ou ao animal. O teste de sinergia concebido é realizado com a solução de armazenamento (50% de cineol) ou 50 g/l, superior à CMI do cineol na publicação, dosagem incompatível para uma utilização em medicina; e - Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2009) 64, 1.219 a 1.225: Hendry et al: Antimicrobial efficacy of eucalyptus oil and 1,8-cineole alone and in combination with chlorhexidine digluconate against microorganisms grown in planktonic and biofilm cultures.

[019] Ali ainda, é concebido a sinergia com um produto que apresenta propriedades antimicrobianas. A concentração de cineol concebida é de 4 g/l, dose muito próxima da CMI do cineol na publicação (8 a 64 g/l) mas muito significativa para ser concebível em uma administração humana ou animal.

[020] Claramente, a invenção se diferencia dessas duas publicações visto que nas mesmas as doses concebidas são muito elevadas, enquanto a concentração concebida se situa nas proximidades da CMI.

B/ SOBRE A INADAPTAÇÃO DOS MÉTODOS DESCRITOS NA TÉCNICA ANTERIOR

[021] Tendo os autores trabalhado de acordo com abordagens diferentes (produtos ativos sozinhos, produtos naturais,...) sobre as famílias químicas que compreendem os compostos (I), em geral, utilizaram os métodos padrão de medição de efeito antibacteriano sem os adaptar à natureza hidrofóbica e volátil dos terpenoides e fenilpropanoides.

[022] Por exemplo, o documento n° WO 99/66796 (Wisconsin Alumni Research Foudation) descreve um método para sensibilizar as células microbianas frente a compostos antibacterianos que compreende uma etapa de colocação de um composto antibacteriano em contato com um sesquiterpenoide, para melhorar o efeito do composto antibacteriano.

[023] Nesse pedido, as CMI foram determinadas com o método de difusão em ágar, inadaptado à natureza volátil e hidrofóbica dos compostos (I) e das famílias relacionadas. Esse método consiste em depositar discos de papel impregnados de quantidades conhecidas de compostos a serem testados sobre um ágar inoculado com a bactéria a ser estudada. É estabelecido no ágar um gradiente de concentração do composto em torno de cada disco; após 18 horas, mede-se o diâmetro do halo de inibição. Esse método, no entanto, não é confiável para os compostos hidrofóbicos que, em virtude de tensões superficiais e de ângulos de contatos muito diferentes nas superfícies hidrofílicas, interferem com a formação do gradiente de concentração no ágar. Em determinadas zonas, a concentração de compostos a serem testados é bem superior à concentração teórica. Assim, os testes não podem ser quantitativos, quando os mesmos podem ser qualitativos. Ademais, nota-se uma diluição do composto hidrofóbico a ser testado no etanol, sem, no entanto, corrigir o resultado ao passo que o etanol é um composto antibacteriano e volátil.

[024] Deve-se notar que esse pedido ensina que nenhum efeito é obtido com os terpenos que não são os sesquiterpenos.

C/ SOBRE A TOXICIDADE DOS COMPOSTOS DA TÉCNICA ANTERIOR

[025] A propósito dos compostos e composições naturais, há uma confusão entre a origem natural e a ausência de toxicidade. Os óleos essenciais (e seus derivados) são habitualmente descritos como sendo pouco tóxicos, o que é frequentemente verdadeiro em aplicações alimentares ou em perfumaria, mas errado no âmbito de uma administração terapêutica.

[026] A propósito dos compostos químicos isolados, a confusão existe também e se baseia na origem natural (extração) dos compostos.

[027] Por exemplo, o documento n° WO2006/120567 (Advanced Scientific developments) descreve composições farmacêuticas que compreendem pelo menos uma substância terapêutica ativa e descrita como não tóxica, escolhida dentre carveol, timol, eugenol, borneol, carvacrol, alfa-ionona, beta-ionona e seu isômeros, derivados e misturas, e que compreende, a título de segunda substância terapêutica ativa, um antibiótico. O carveol, timol, eugenol, borneol, carvacrol, alfa-ionona ou beta- ionona, utilizados sozinhos, apresentam uma atividade antibacteriana e muitos desses causam, no entanto, igualmente problemas de toxicidade, ignorados nesse pedido.

[028] Por exemplo, o carvacrol apresenta os seguintes dados de toxicidade: a DL 50 (camundongo, intravenoso) é de 80 mg/kg enquanto a dose letal mais baixa em via oral é de 100 mg/kg, em duas espécies mamíferas (gato e rato). Esses dados devem ser comparados à dose de 0,3 mg/ml (ou 300 mg/kg), concebidos no documento.

D/ SOBRE A VARIABILIDADE QUÍMICA DOS COMPOSTOS DESCRITOS NA TÉCNICA ANTERIOR

[029] A utilização de óleo essencial é problemática, na escala industrial, em termos de qualidade e de reprodutibilidade, dado que a composição de um óleo essencial varia de um lote para o outro.

[030] Por exemplo, o documento n° DE 196 31 037 (Boehringer) descreve a utilização do óleo essencial de árvore do chá para potencializar o efeito de antibióticos nas estirpes Staphylococcus aureus. O componente principal do óleo essencial de árvore do chá é o terpinen-1-ol.

[031] Essa variabilidade tem nomeadamente três consequências que limitam a industrialização em vista de uma aplicação no ser humano ou no animal: - é difícil garantir a constância do efeito terapêutico - é difícil garantir a baixa toxicidade dos produtos - o custo relativo ao fornecimento e à gestão da qualidade e da reprodutibilidade dos materiais é importante.

[032] A seguinte tabela resume o ensinamento dessas técnicas anteriores: TABELA 1

[033] O trabalho que sustenta os compostos (I) a doses baixas distantes daquelas nas quais os mesmos apresentam uma atividade antimicrobiana é inovador e a técnica anterior não concebeu, até onde é conhecido, esse uso.

DEFINIÇÕES

[034] Por “micro-organismo”, entende-se qualquer organismo vivo, invisível ao olho nu em virtude de suas pequenas dimensões.

[035] Por “organismo”, entende-se qualquer entidade biológica (ser vivo) animal ou vegetal com capacidade de nascer, de se desenvolver e normalmente de se reproduzir.

[036] Nesta patente, a definição de micróbio assume a definição de micro-organismo, limitada ao campo medicinal ao qual a invenção se refere. Assim, os “micróbios” são os micro-organismos vivos potencialmente patógenos (bactérias, fungos, levedura e micobactérias). O termo exclui, portanto, os patógenos inertes como os vírus e os príons.

[037] Por “antimicrobiano” entende-se qualquer composto destinado a ser administrado ao ser humano ou ao animal com capacidade de matar ou de inibir o crescimento de micróbios. Os sais farmaceuticamente aceitáveis desses agentes antimicrobianos estão igualmente incluídos nessa definição. Isso inclui, por exemplo, os sais de sódio, de potássio, de cálcio, etc. e os sais aminados de procaína, dibenzilamina, etilenodiamina, etanolamina, metilglucamina taurina, etc., bem como os sais de adição ácida tais como os cloridratos e os ácidos aminados básicos. O termo agrupa assim os antibióticos (suas associações com os inibidores de mecanismos de resistência), os antifúngicos destinados a um uso sistêmico ou local.

[038] Por “propriedades antimicrobianas” entende-se as propriedades de qualquer substância com capacidade de destruir ou de inibir o crescimento dos micróbios. Os produtos que apresentam propriedades antimicrobianas compreendem nomeadamente os agentes antimicrobianos e os biocidas.

[039] Em contrapartida ao termo “antimicrobiano” que agrupa os antibacterianos, antifúngicos destinados a ser administrados, o termo “biocida” agrupa os produtos que têm propriedades antimicrobianas destinados a ser aplicados a sistemas inertes (vírus e príons).

[040] Por “propriedades antibacterianas” e “propriedades antifúngicas” entende-se não somente as propriedades bactericidas e fungicidas distinguidas pela destruição das bactérias e dos fungos (e leveduras, micobactérias), mas também as propriedades bacteriostáticas e fungistáticas, distinguidas pela inibição do crescimento das ditas bactérias e dos ditos fungos (e leveduras, micobactérias). Os produtos que apresentam propriedades antibacterianas ou antifúngicas compreendem nomeadamente os agentes antimicrobianos.

[041] Por “bactéria resistente” aos antibióticos entende-se, no sentido da presente invenção, uma bactéria resistente a pelo menos um, nomeadamente pelo menos dois, em particular pelo menos três, ou pelo menos quatro, antibiótico (ou antibióticos) ou família (ou famílias) de antibiótico, classicamente utilizado.

[042] Por “bactéria multirresistente” entende-se, no sentido da presente invenção, uma bactéria resistente a vários antibióticos, em particular aos quais a estirpe deveria ser sensível, ou a priori sensível, particularmente uma bactéria que apresenta pelo menos duas resistências não naturais.

[043] São distinguidas as “resistências naturais” das “resistências adquiridas”. Determinados antibióticos nunca foram eficazes, a doses não tóxicas, contra determinadas estirpes ou espécies bacterianas. Trata-se de uma resistência natural. Quando os antibióticos normalmente eficazes se revelam ineficazes ou pouco eficazes frente a uma bactéria, essa bactéria desenvolveu uma resistência adquiria.

[044] Uma “infecção microbiana” no sentido da presente invenção designa uma infecção provocada por uma ou mais estirpes microbianas e inclui as fases que vão da colonização do hospedeiro às fases patológicas. A expressão “infecção microbiana” engloba, portanto, qualquer efeito nocivo, sinal clínico, sintoma ou qualquer doença que ocorra no ser humano ou no animal em seguida à colonização pelo micróbio.

[045] Por “terpenoide” entende-se, de acordo com a invenção, qualquer composto que compreende um esqueleto próximo ao de um terpeno. Um “terpeno” designa um derivado do isopreno que é obtido por via biológica pela condensação de unidades em C5, o que leva, por exemplo, aos monoterpenos, sesquiterpenos. Por “próximo” entende-se que o esqueleto é similar a um terpeno ou diferente pelo fato de que pelo menos um substituinte alquila, normalmente presente, pode estar ausente ou ligado a outro átomo. O esqueleto pode ser adicionalmente substituído com radicais variados, tais como radicais alifáticos, saturados ou insaturados, lineares ou cíclicos (alquilas, alquenilas, alquilenos), óxi, aldeídos, ésteres, álcoois, éteres e seus equivalentes sulfurados ou nitrogenados. O terpenoide pode vantajosamente ser de origem natural.

[046] Por “fenilpropanoide” entende-se, de acordo com a invenção, qualquer composto que compreende um esqueleto próximo de um fenilpropano. Um “fenilpropano” designa um derivado obtido por síntese biológica a partir do fenilpropano e que leva a derivados em C6 (aromático) a C3 (alifático) ou em C6 (aromático) a C1 (alifático) e às lactonas correspondentes. Por “próximo” entende-se que o esqueleto é similar a um fenilpropano, em particular, encontra-se o padrão fenila, ou diferente pelo fato de que pelo menos um substituinte alquila, normalmente presente, pode estar ausente ou ligado a outro átomo. O esqueleto pode ser adicionalmente substituído com radicais variados, tais como radicais alifáticos, saturados ou insaturados, lineares ou cíclicos (alquilas, alquenilas, alquilenos), óxi, aldeídos, ésteres, álcoois, éteres e seus equivalentes sulfurados ou nitrogenados. O fenilpropanoide pode vantajosamente ser de origem natural.

[047] O termo “profilaxia” ou “prevenir uma infecção”, tal como utilizado no presente pedido, designa qualquer grau de atraso no momento de aparecimento de sinais clínicos ou de sintomas da infecção, assim como qualquer grau de inibição da gravidade dos sinais clínicos ou sintomas da infecção, incluindo, mas sem limitação, a prevenção total da dita infecção. Isso necessita que o agente antimicrobiano e o composto de acordo com a invenção sejam coadministrados ao ser humano ou ao animal suscetível de ser colonizado por uma estirpe microbiana a título de prevenção, por exemplo, em seguida a um ato de cirurgia, de implantação de um dispositivo medicinal, um ato medicinal invasivo. Essa administração profilática pode acontecer antes, durante ou após o ato suscetível de provocar uma infecção (em particular uma infecção nosocomial) com o objetivo de impedir, melhorar e/ou reduzir a gravidade de qualquer infecção subsequente.

[048] O termo “tratamento”, no sentido do presente pedido, implica que o agente antimicrobiano e o composto de acordo com a invenção sejam coadministrados a um indivíduo (humano ou animal) no momento da colonização ou após a contaminação ou a suspeita de contaminação por uma estirpe microbiana suscetível de provocar uma infecção tal como uma infecção nosocomial. O termo “tratamento” ou “tratar uma infecção” inclui, portanto: - qualquer efeito curativo (inibição do crescimento ou destruição do micróbio) obtido devido à coadministração de agente antimicrobiano + composto de acordo com a invenção, assim como a melhora dos sinais clínicos ou dos sintomas observados bem como a melhora do estado do indivíduo; - a desaceleração, a interrupção, assim como a parada da progressão da infecção. A coadministração de agente antimicrobiano-composto de acordo com a invenção pode, de fato, igualmente permitir retardar a progressão de um micróbio e/ou impedir completa ou parcialmente uma infecção microbiana de se espalhar pelos tecidos circundantes e para além; - a inibição, a atenuação ou a prevenção das consequências nocivas da infecção, tais como os danos celulares ou fisiológicos provocados pelas toxinas produzidas por determinados micróbios ao nível dos tecidos infectados ou vizinhos.

[049] O termo “coadministrados” significa que o agente antimicrobiano (ou a mistura antimicrobiana) e o composto de acordo com a invenção (ou a mistura de compostos de acordo com a invenção) são administrados de forma combinada ou justaposta ao indivíduo (ser humano ou animal). A combinação inclui qualquer associação medicamentosa, qualquer composição farmacêutica, qualquer kit farmacêutico e qualquer medicamento que compreenda (i) pelo menos um agente antimicrobiano e (ii) pelo menos um composto de acordo com a invenção. Os compostos (i) e (ii) podem estar presentes na forma de uma mistura ou na forma de formulações ou composições distintas na dita combinação. A combinação pode igualmente compreender vários agentes antimicrobianos, por exemplo, 2, 3 ou 4 agentes antimicrobianos ou mais, e/ou vários compostos de acordo com a invenção, em particular 2 ou 3 ou mais compostos de acordo com a invenção. Esses constituintes formam uma unidade funcional devido a uma indicação comum, que é a implantação de um tratamento antimicrobiano. Essa terapia combinada é mais especificamente destinada à profilaxia e/ou ao tratamento de infecções e de doenças de origem microbiana, em particular infecções nosocomiais.

[050] A coadministração pode ser simultânea ou espaçada no tempo.

[051] O termo “simultâneo” significa que o agente antimicrobiano (ou a mistura antimicrobiana) e o composto de acordo com a invenção (ou a mistura de compostos de acordo com a invenção) são administrados ao mesmo tempo, no mesmo momento, a um indivíduo (ser humano ou animal). Esses compostos podem ser administrados na forma de uma mistura ou, simultaneamente, mas separadamente, na forma de composições distintas.

[052] A expressão “administração sequencial” significa que o agente antimicrobiano (ou a mistura antimicrobiana) e o composto de acordo com a invenção (ou a mistura de compostos de acordo com a invenção) são administrados não simultaneamente, mas separadamente no tempo, um após o outro.

[053] A expressão “potencializar” um agente antimicrobiano significa que a utilização de um composto de acordo com a invenção permite obter um efeito profilático ou terapêutico superior ao efeito profilático ou terapêutico obtido utilizando-se o ou os ditos agentes antimicrobianos sozinhos. Isso pode ser expresso de diferentes maneiras, alternativas ou cumulativas: aumento do efeito do agente antimicrobiano, diminuição da dose de agente antimicrobiano com efeito constante de agente antimicrobiano, redução da CMI. Ademais, a potencialização permite reduzir, ou anular, o aparecimento de resistência.

[054] A expressão aumentar o efeito de um agente antimicrobiano significa: a ampliação do espectro microbiano da atividade do agente antimicrobiano, o aumento da velocidade de ação do agente antimicrobiano, a melhora do sucesso clínico (taxa de cura, “cure rate”) ou da velocidade da obtenção do sucesso clínico (tempo até a cura, “time to cure”) do agente antimicrobiano, à dose constante de agente antimicrobiano.

[055] A expressão “diminuir a quantidade de agente antimicrobiano utilizada” significa que a utilização de composto de acordo com a invenção permite utilizar uma quantidade de agente antimicrobiano inferior à quantidade de agente antimicrobiano normalmente necessária para obter um efeito terapêutico ou profilático dado quando o agente antimicrobiano é administrado sozinho. A diminuição da quantidade de agente antimicrobiano utilizada pode ser mais ou menos importante; essa é, de preferência, de pelo menos 10%, e mais preferencialmente de pelo menos 20%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 40%, ou 50% ou mais, em relação à quantidade normalmente necessária para obter um efeito terapêutico ou profilático dado.

[056] “CMI” significa “concentração mínima inibidora”, que é a concentração mais baixa de substância na qual não se observa mais crescimento microbiano após 18 a 24 h de contato em condições favoráveis ao crescimento microbiano.

[057] Os testes de medição de concentração mínima inibidora são realizados em meio sólido de ágar de acordo com as normas internacionais em vigor (normas CLSI M7-A9, janeiro 12): dispersão dos compostos a serem testados em um ágar Mueller Hinton. Uma adaptação relativa à hidrofobicidade dos compostos e das composições é, no entanto, necessária para os dispersar no meio: diluição dos compostos em um solvente. Os compostos e composições incorporados no ágar podem ser previamente diluídos em um ou mais solventes (Tween® 80 diluído na água, tween® 80 diluído no propileno, DMSO diluído na água). As estirpes são depositadas sobre a superfície do ágar com um aparelho de guia (steers). Nos exemplos, diferentes métodos de dissolução dos produtos são testados em paralelo para contornar as problemáticas de coeficiente de distribuição água/solvente das moléculas (agente antimicrobiano e potencializador) enquanto as bactérias crescem na única fase aquosa. A restrição técnica não irá ocorrer nos testes in vivo. Os mesmos métodos de diluições podem ser implantados em meio líquido (microplacas e tubos). A mesma metodologia é implantada com os fungos.

[058] As CMI 50 e CMI 90 representam respectivamente as concentrações que inibem 50% e 90% em número das estirpes de um mesmo gênero.

[059] Por “átomo de halogênio”, entende-se, no sentido da presente invenção, os átomos de flúor, de cloro, de bromo e de iodo.

[060] Por “heteroátomo”, entende-se, no sentido da presente invenção, N, O ou S, vantajosamente O.

[061] Por grupamento “alquila(C1-C6)”, entende-se, no sentido da presente invenção, uma cadeia de hidrocarboneto monovalente saturada, linear ou ramificada, que inclui 1 a 6, de preferência 1 a 4, átomos de carbono. A título de exemplo, pode-se citar os grupos metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila ou ainda hexila.

[062] Por grupamento “alquenila(C2-C6)”, entende-se, no sentido da presente invenção, uma cadeia de hidrocarboneto monovalente, linear ou ramificada, que inclui pelo menos uma ligação dupla e que inclui 2 a 6 átomos de carbono. A título de exemplo, pode-se citar os grupos etenila ou alila.

[063] Por “halogenoalquila(C1-C6)”, entende-se, no sentido da presente invenção, um grupo alquila(C1-C6), conforme definido acima, para o qual um ou mais átomos de hidrogênio foram substituídos com um átomo de halogênio conforme definido acima. Pode se tratar, em particular, de um grupo CF3.

[064] Por grupamento “alcóxi(C1-C6)”, entende-se, no sentido da presente invenção, um grupo alquila(C1-C6) conforme definido acima, ligado ao restante da molécula por intermédio de um átomo de oxigênio. A título de exemplo, pode-se citar os grupos metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi ou ainda terc-butóxi.

[065] Por grupamento “alquenóxi(C2-C6)”, entende-se, no sentido da presente invenção, um grupo alquenila(C2-C6), conforme definido acima, ligado ao restante da molécula por intermédio de um átomo de oxigênio. A título de exemplo, pode-se citar o grupo -OCH2CH=CH2.

[066] Por grupamento “alquileno(C1-C6)” ou “alcanodiila(C1-C6)”, entende-se, no sentido da presente invenção, uma cadeia de hidrocarboneto bivalente, linear ou ramificada, que compreende 1 a 6 átomos de carbono, como, por exemplo, um grupamento metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno ou ainda hexileno.

[067] Por grupamento “alquenileno(C2-C6)” ou “alcenodiila(C2- C6)”, entende-se, no sentido da presente invenção, uma cadeia de hidrocarboneto bivalente, linear ou ramificada, que compreende 2 a 6 átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla, como, por exemplo, um grupamento vinileno (etenileno) ou propenileno.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[068] A invenção tem como objetivo um agente antimicrobiano potencializado por um composto de fórmula I para sua utilização no tratamento de uma infecção microbiana. Esta tem também como objeto uma associação de um agente antimicrobiano e de um composto que corresponde à seguinte fórmula I:

na qual R1, R2, R3 representam, cada um, independentemente um do outro, H, OH, um grupo alquila(C1-C6), alquenila(C2-C6), halogenoalquila(C1- C6), alcóxi(C1-C6), alquenóxi(C2-C6), halogenoalcóxi(C1-C6), -O-CO-alquila(C1- C6).

[069] A representa um heteroátomo ou um grupo R-(Het)-R’ ou - (Het)-R em que R, R’, representam, cada um, independentemente um do outro, um grupo alcanodiila(C1-C4) eventualmente substituído com radicais alquilas em C1-C4 e Het representa um heteroátomo, A representa vantajosamente um grupo -(Het)-R em uma razão mássica, composto de fórmula (I):agente antimicrobiano, que varia de 8:1 a 1:10, e em que o agente antimicrobiano não é um terpenoide ou um fenilpropanoide.

[070] O agente antimicrobiano é vantajosamente um ativo da medicina convencional ocidental, tal como será descrito em seguida. Em particular, o agente antimicrobiano não é um terpenoide ou um fenilpropanoide, tal como um extrato de óleo essencial ou um componente de óleo essencial.

[071] A razão mássica composto de fórmula (I):agente antimicrobiano varia mais vantajosamente de 4:1 a 1:10, mais vantajosamente de 1:1 a 1:10, ainda mais vantajosamente de 1:1 a 1:5.

[072] Isso significa que a dose administrada de composto de fórmula (I) é da mesma ordem de grandeza que aquela do agente antimicrobiano.

[073] A razão mássica corresponde à razão entre as doses em mg/kg do composto e do agente antimicrobiano a serem administrados ao ser humano ou ao animal.

[074] De uma maneira surpreendente, foi constatado que o efeito de potencialização diminui quando a dose de composto de acordo com a invenção (ou mistura de compostos de acordo com a invenção) aumenta. Esse efeito de potencialização pode ressurgir na CMI do composto sozinho, mas esse não é o objeto da invenção.

[075] No âmbito da presente invenção, in vitro, a concentração de composto inativo, na qual observa-se um efeito de potencialização, é muito distante do limite das propriedades antimicrobianas (CMI), quando as propriedades antimicrobianas são observadas. Por muito distante, entende-se que a concentração in vitro é pelo menos 10 vezes, vantajosamente pelo menos 20 vezes, mais vantajosamente pelo menos 50 vezes, ainda mais vantajosamente pelo menos 100 vezes inferior à CMI.

[076] Em particular, em uma estirpe A, patógeno que induz nomeadamente a infecção microbiana considerada, a concentração de composto (I) corresponde vantajosamente à seguinte equação: [C] < [CMI] / x.

[077] Em que [C] é a concentração de acordo com a invenção de composto (I) a ser utilizada na estirpe A.

[078] [CMI] é a CMI medida para o composto (I), sozinho, nessa estirpe A.

[079] x é superior ou igual a 100, vantajosamente a 1.000, mais vantajosamente x está compreendido entre 2.000 e 10.000, ou superior a 50.000.

[080] In vitro, as doses de composto (I) são inferiores a 100 mg/l, vantajosamente inferiores a 64 mg/l, mais vantajosamente compreendidas entre 0,01 e 25 mg/l, ainda mais vantajosamente compreendidas entre 1 e 16 mg/l.

[081] Nas composições administradas, a concentração, por unidade de dose por quilo, de composto de fórmula (I) é vantajosamente inferior a 100 mg, mais vantajosamente inferior a 64 mg.

[082] Os compostos (I) podem ser utilizados a uma concentração baixa (in vitro, a concentrações da ordem do μg/ml) para potencializar os agentes antimicrobianos, o que é totalmente compatível com uma utilização futura no ser humano ou no animal (em particular, se uma administração sistêmica for buscada).

[083] Isso permite conceber dosagens no ser humano ou no animal inferiores a 64 mg/kg, vantajosamente compreendidas entre 0,01 e 64 mg/kg, mais vantajosamente compreendidas entre 0,5 e 40 mg/kg, ainda mais vantajosamente compreendidas entre 5 e 30 mg/kg.

[084] O composto potencializador de acordo com a invenção é vantajosamente administrado a uma concentração tal que sua concentração sérica máxima seja inferior a 250 mg/l, vantajosamente inferior a 150 mg/l, mais vantajosamente compreendida entre 10 e 150 mg/l após administração.

[085] Evidentemente, nessas concentrações, o composto pode ser administrado ao ser humano e ao animal, incluindo por via sistêmica, e não apresenta efeitos indesejados principais, em particular de carcinogenicidade ou de genotoxicidade.

[086] A razão mássica composto de acordo com a invenção (ou mistura de compostos de acordo com a invenção):antimicrobiano depende, a cada vez, do agente antimicrobiano utilizado e será adaptada caso por caso.

[087] Por exemplo, para a amoxicilina, nos casos em que a mesma é usualmente administrada a uma dose de 1.000 mg por tomada, a dose de composto de fórmula (I) poderá variar entre 300 e 850 mg por tomada, ou menos. Em contrapartida, para a colistina, que é usualmente administrada a uma dose de 1 MUI por via pulmonar, a dose de composto de fórmula (I) poderá variar entre 0,1 e 0,8 MUI, ou menos.

[088] Formulada de outro modo, a invenção tem como objeto um processo para potencializar a atividade antimicrobiana de um agente antimicrobiano de forma independente do mecanismo de resistência que compreende as seguintes etapas: 1. Escolher um composto de fórmula (I) que seja terapeuticamente inativo (visado como anti-infeccioso) sozinho na dose concebida, 2. Preparar uma composição que compreende o composto escolhido na etapa a) com o agente antimicrobiano.

[089] A invenção tem igualmente como objeto um método para tratar e/ou prevenir uma infecção microbiana em um indivíduo, que compreende a coadministração no indivíduo que sofre da dita infecção microbiana de um agente antimicrobiano e de um composto de fórmula (I).

[090] O composto e o agente antimicrobiano são adaptados para uma administração simultânea, separada ou espaçada no tempo ao ser humano ou ao animal.

[091] O agente antimicrobiano é, de preferência, um antibiótico. Esse pode também ser um antifúngico.

[092] De uma maneira surpreendente, foi constatado que os compostos de fórmula (I), utilizados nessa baixa concentração, têm capacidade de potencializar a atividade dos agentes antimicrobianos. Assim, a utilização desses potencializadores permite vantajosamente utilizar o dito agente antimicrobiano a uma concentração mais baixa e/ou, na concentração usual ao mesmo tempo que tem uma atividade superior que o agente antimicrobiano sozinho na mesma dose (aumento da intensidade do efeito ou da cinética do efeito).

[093] De modo concreto, a invenção permite nomeadamente: A/ diminuir as doses a efeito constante: diminuição da quantidade necessária de um agente antimicrobiano para inibir/destruir os micróbios habitualmente sensíveis B/ aumentar o efeito a dose constante: aumento da capacidade de um agente antimicrobiano inibir/destruir os germes sensíveis (melhora da cinética do efeito, da intensidade do efeito e ampliação do espectro de atividade de um agente antimicrobiano para os germes que sejam inconstantemente sensíveis ou resistentes ao agente antimicrobiano).

[094] Reduzir a dose administrada (A/) de um agente antimicrobiano apresenta um interesse não somente do ponto de vista do tratamento das infecções microbianas no ser humano ou no animal, nomeadamente a redução dos efeitos colaterais, mas também, e isso não é negligenciável, de um ponto de vista ambiental (diminuição do aparecimento de resistências aos agentes antimicrobianos). A utilização dos agentes antimicrobianos conhecidos a doses mais baixas pode auxiliar no combate ao aparecimento de novos mecanismos de resistência. Em particular, o agente antimicrobiano pode ser utilizado a uma dose reduzida, na qual a dose administrada de agente antimicrobiano corresponde de 1/50 a 3/4 da dose necessária de agente antimicrobiano em ausência da coadministração de um composto de acordo com a invenção para uma administração a um indivíduo (ser humano, animal) para tratar as infecções microbianas. A diminuição da dose de agente antimicrobiano a efeito constante permite limitar a toxicidade do dito agente antimicrobiano. Em aplicação no animal de produção, isso permite diminuir os tempos de latência antes do abate.

[095] A redução da dose permite igualmente conceber a reutilização de determinados agentes antimicrobianos, que, até então, não podiam mais ser administrados visto que apresentam em suas doses eficazes efeitos colaterais que são significativos, e podem novamente ser administrados de forma eficaz no ser humano ou no animal com poucos efeitos colaterais.

[096] Aumentar o efeito de um agente antimicrobiano a dose constante (B/) apresenta um interesse clínico determinado tanto do ponto de vista quantitativo, ao melhorar a cinética de um efeito antimicrobiano, quanto qualitativo, ao tornar possível tratar um paciente (humano ou animal) que sofre de uma infecção microbiana com um agente antimicrobiano ao qual a estirpe é sensível ou inconstantemente sensível na ausência de potencialização. O aumento da velocidade do efeito do agente antimicrobiano permite diminuir o tempo decorrido no estado “infectante” pelo paciente ou pelo animal, reduzindo assim a epidemiologia da doença, assim como o aparecimento e a difusão das resistências.

[097] Devido à presença dos compostos de acordo com a invenção, é possível aumentar a velocidade de ação bactericida do agente antimicrobiano a dose constante de agente antimicrobiano. Assim, a velocidade de ação de um agente antimicrobiano potencializado pode ser aumentada. Isso é particularmente verdadeiro para agentes antimicrobianos dependentes da concentração.

[098] Devido à presença dos compostos de acordo com a invenção, o espectro do agente antimicrobiano pode ser ampliado, nomeadamente à dose constante de agente antimicrobiano. Assim, um agente antimicrobiano potencializado pelos compostos de acordo com a invenção pode ser utilizado nas estirpes nas quais não é mais sensível na ausência de potencialização (nomeadamente em virtude do aparecimento de resistências).

[099] Em um modo de realização, o composto de fórmula (I) é suficiente para potencializar o agente antimicrobiano, em que, consequentemente, a utilização de um composto de fórmula (I) sozinho é suficiente para potencializar o agente antimicrobiano. No entanto, em determinados casos, uma utilização combinada de compostos inativos pode ser concebida. Isso é particularmente verdadeiro quando uma atividade de amplo espectro é buscada. Em particular, para potencializar um antibiótico nas bactérias Gram + e Gram -, pode ser útil coadministrar um composto de acordo com a invenção particularmente potencializador nas bactérias Gram + e um composto de acordo com a invenção particularmente potencializador nas bactérias Gram -.

[0100] Na fórmula (I), R2 e R3 representam, cada um, H, R1 representa um grupo alquila(C1-C6), e A representa o heteroátomo O ou um grupo R-O-R’ ou -O-R’, em que R, R’, representam, cada um, independentemente um do outro, um grupo alcanodiila(C1-C2), eventualmente substituído com radicais alquilas em C1-C4.

[0101] Vantajosamente, o composto de fórmula (I) é o cineol.

[0102] No âmbito da presente invenção, a infecção microbiana é vantajosamente uma infecção induzida por um patógeno escolhido dentre os seguintes gêneros potencialmente patógenos: Acetobacter, Acetobacterium, Acinetobacter, Citrobacter, Enterobacter, Enterococcus, Escherichia, Helicobacter, Klebsiella, Proteus, Providencia, Pseudomonas, Salmonella, Serratia, Staphylococcus, Streptococcus, Actinobacillus, Neisseria, Mannheima, Pasteurella, Candida, Aspergillus, Cryptococcus, Trichosporon, Malassezia e Mycobacterium.

[0103] A estirpe ou espécie bacteriana é vantajosamente escolhida no grupo constituído por: Acetobacter, Acetobacterium, Acinetobacter, Actinobacillus, Citrobacter, Enterobacter, Enterococcus, Escherichia, Helicobacter, Klebsiella, Mannheima, Pasteurella, Proteus, Providencia, Pseudomonas, Salmonella, Serratia, Staphylococcus e Streptococcus. Mais particularmente, a estirpe ou espécie bacteriana é vantajosamente escolhida no grupo constituído por Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Providencia stuartii, Salmonella sp, Serratia marcescens, Acinetobacter baumannii, Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcaceae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecium e Enterococcus sp. Assim, a bactéria pode ser indiferentemente uma bactéria gram - ou uma bactéria gram +.

[0104] A bactéria é mais vantajosamente escolhida no grupo constituído por Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae e Staphylococcus aureus.

[0105] O fungo é vantajosamente escolhido no grupo constituído por: Candida, Aspergillus, Cryptococcus, Trichosporus. O fungo é mais vantajosamente candida albicans.

[0106] A micobactéria é vantajosamente a Mycobactérium tuberculosis.

[0107] O agente antimicrobiano pode ser um antibiótico e/ou um agente antifúngico. Em uma variante preferencial, o composto de fórmula (I) e o agente antimicrobiano não pertencem à mesma família de compostos químicos. Assim, se o composto de fórmula (I) for derivado de um terpenoide, o agente antimicrobiano não é um terpenoide, ou ainda, não é um extrato de óleo essencial ou um fenilpropanoide.

[0108] Os antibióticos que podem ser utilizados na presente invenção são vantajosamente escolhidos dentre: 3. Os antibióticos ativos nas membranas, em particular as beta- lactaminas, as penicilinas, as cefalosporinas, os glicopeptídeos, a fosfomicina, as polimixinas, a bacitracina, a ciclosserina; 4. Os antibióticos que inibem a síntese das proteínas, em particular os aminoglicosídeos, as tetraciclinas, o ácido fusídico, o cloranfenicol e seus derivados, os macrolídeos, as lincosamidas, as estreptograminas, as sinergistinas e oxazolidinonas; 5. Os antibióticos que inibem a síntese dos ácidos nucleicos, em particular as quinolonas, os nitrofuranos, as ansamicinas e o ácido fucídico; 6. Os antibióticos que inibem a síntese dos folatos, em particular as sulfamidas e associações de sulfamidas; 7. Os antibióticos que inibem a síntese dos ácidos micólicos, em particular a isoniazida, a protionamida, a etionamuida, a pirazinamida 8. Qualquer um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, e 9. Qualquer uma de suas combinações.

[0109] De preferência, o antibiótico é escolhido dentre: os antibióticos que inibem a síntese do peptidoglicano, os antibióticos que inibem a síntese dos ácidos nucleicos, os antibióticos que inibem a síntese dos folatos, os antibióticos que inibem a síntese dos ácidos micólicos, qualquer um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis e qualquer uma de suas combinações. A classe de antibiótico particularmente vantajosa é aquela dos antibióticos que inibem a síntese do peptidoglicano.

[0110] Em particular, o antibiótico é escolhido dentre: amoxicilina, amoxicilina /ácido clavulânico, imipenem, vancomicina, eritromicina, azitromicina, gentamicina, amicacina, colistina, clindamicina, ciprofloxacina, tigeciclina.

[0111] Em uma variante da invenção, a infecção microbiana é uma infecção bacteriana induzida por uma estirpe bacteriana, de tipo cocos ou bacilos gram positivos, e o agente antimicrobiano é a amoxicilina.

[0112] Em uma variante da invenção, a amoxicilina é dosada a 1.000 mg/tomada e o cineol é dosado a 1.000 mg/tomada, vantajosamente 500 mg/tomada, ainda mais vantajosamente a 250 mg/tomada.

[0113] Em outra variante da invenção, a infecção microbiana é uma infecção bacteriana induzida por uma estirpe bacteriana de tipo E. coli ou S. aureus resistente à meticilina e o agente antimicrobiano é uma mistura amoxicilina/ácido clavulânico.

[0114] Em outra variante da invenção a razão mistura amoxicilina/ácido clavulânico:cineol é de 10:1, 1:1 ou 1:5.

[0115] Em outra variante da invenção, a infecção microbiana é uma infecção bacteriana induzida por uma estirpe de tipo enterobactéria, Pseudomonas ou S. aureus e o agente antimicrobiano é a ciprofloxacina.

[0116] Os antifúngicos que podem ser utilizados na presente invenção são vantajosamente escolhidos dentre: 10. Os antifúngicos que atuam na membrana, em particular os poliênicos, os azólicos, as alilaminas e tiocarbamatos, as equinocandinas; 11. Os antifúngicos que atuam na síntese dos ácidos nucleicos, em particular a griseofulvina, a fluorocitosina; e 12. Os antifúngicos que atuam nos microtúbulos, em particular a griseofulvina.

[0117] O antifúngico é vantajosamente escolhido dentre os poliênicos, os azólicos, as alilaminas, os tiocarbamatos, as equinocandinas, a griseofulvina e a fluorocitosina.

[0118] Em outra variante da invenção, a infecção microbiana é uma micose vaginal e o antibiótico é o sertaconozol.

[0119] Os compostos de acordo com a invenção são vantajosamente administrados por via sistêmica. Os mesmos são assim adaptados para uma administração por via sistêmica.

[0120] Os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados em qualquer composição farmacêutica formulada de forma a facilitar sua administração. A composição farmacêutica pode compreender todos os excipientes farmaceuticamente aceitáveis habitualmente utilizados, tais como veículo (ou veículos) ou diluente (ou diluentes).

[0121] A composição farmacêutica pode ser administrada por via oral, enteral, parenteral (intravenosa, intramuscular ou subcutânea, intraperitoneal), transcutânea (ou transdérmica ou percutânea), cutânea, mucosal (em particular transmucosa-bucal, nasal, oftálmica, otológica, vaginal, retal), ou ainda as vias intragástrica, intracardíaca, intraperitoneal, intrapulmonar ou intratraqueal.

[0122] A composição farmacêutica pode se apresentar de forma seca, forma seca a ser reconstituída no momento da utilização (pó, liofilizado, etc.), sólida (em particular tablete, pó, cápsula, pílula, grânulo, supositório, comprimido e, mais precisamente, comprimido de liberação acelerada, comprimido gastrorresistente ou comprimido de liberação prolongada), pastosa (em particular gel, pomada, creme ou óvulo), líquida (em particular xarope, solução injetável, infusível ou bebível ou colírio), da forma de um aerossol (pulverização, vapor ou gás), na forma de um adesivo, de forma injetável (em uma solução aquosa, não aquosa ou isotônica).

[0123] Além disso, a composição farmacêutica pode ser condicionada para uma administração na forma de uma dose única (monodose) ou múltipla (multidose).

[0124] O antimicrobiano (ou antimicrobianos) e o composto (ou compostos) de acordo com a invenção podem ser administrados em uma mesma composição farmacêutica ou em composições farmacêuticas distintas, de maneira simultânea, sequencial ou espaçada no tempo. Em caso de administração separada, as formas das composições farmacêuticas podem ser similares ou distintas; sendo que as vias de administração podem ser idênticas ou distintas.

[0125] O esquema de administração será adaptado pelo médico em função dos casos. As vias de administração e as posologias variam em função de uma variedade de parâmetros, por exemplo, em função do estado do paciente, do tipo de infecção e da gravidade da infecção a ser tratada ou do agente antimicrobiano utilizado.

[0126] O animal é, de preferência, um mamífero, em particular o ser humano, os animais de estimação, os animais de produção.

[0127] Os exemplos que seguem ilustram a invenção.

[0128] Medição de CMI: Os testes de medição de concentração mínima inibidora são realizados em meio sólido de ágar de acordo com as normas internacionais em vigor (normas CLSI), de acordo com o protocolo definido anteriormente. Os compostos e as composições incorporados no ágar podem ser previamente diluídos em um ou mais solventes (Tween® 80 diluído na água -3,4 ml de Tween para 9,6 ml de água-, tween® 80 diluído no propileno 10 - 3,4 ml de Tween para 9,6 ml de propileno-, ou o DMSO diluído na água).

[0129] O aporte do intensificador (booster) comparado à CMI do antibiótico sozinho é expresso em razão (CMI ATB)/(CMI ATB + intensificador). Define-se assim os ganhos: Ganho CMI 50= (CMI50 do antibiótico sozinho) / (CMI50 (antibiótico+intensificador)); e Ganho CMI 90= (CMI90 do antibiótico sozinho) / (CMI90 (antibiótico+intensificador)).

[0130] O intensificador é um termo genérico para designar os compostos potencializadores da invenção, de fórmula (I).

[0131] Salvo indicação contrária, as razões indicadas nas tabelas são razões mássicas.

[0132] Razões Mássicas Utilizadas: - 64/500 corresponde a 1 para 8, aproximadamente (denotado 1 para 8 nas tabelas). - 64/100 corresponde a 1 para 1,5, aproximadamente (denotado 1 para 1,5 nas tabelas). - 64/50 corresponde a 1 para 0,75, aproximadamente (denotado 1 para 0,75 nas tabelas). - 64/10 corresponde a 1 para 0,15, aproximadamente (denotado 1 para 0,15 nas tabelas).

DESCRIÇÃO DOS PROTOCOLOS DE TESTE / ESTIRPES DE TESTE - ESTIRPES BACTERIANAS

[0133] As estirpes testadas são isoladas de diversas amostras humanas (sangue, urinas, aspirações pulmonares, etc.). As estirpes estudadas nos seguintes exemplos são escolhidas dentre as estirpes da seguinte tabela: TABELA 2

[0134] As estirpes de leveduras testadas (n=33) pertencem às espécies Candidas albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida glabrata.

EXEMPLO 1: MEDIÇÃO DAS CONCENTRAÇÕES MÍNIMAS INIBIDORAS

[0135] CMI DO CINEOL SOZINHO (TODOS OS SOLVENTES). TABELA 3

[0136] Os produtos são testados em diluição sucessiva de 1% a 0,00375%. O valor >1% indica que nenhuma inibição bacteriana foi observada nas concentrações testadas. Um valor igual a 1,00% corresponde a 10.000 mg/l (ou 10 g/l).

1/ TESTE AERÓBIO CONTRA ANAERÓBIO EM DMSO E TWEEN® 80

[0137] Foi testado o efeito de potencialização da Augmentin® com o cineol sobre diferentes estirpes em condições aeróbia/anaeróbia. A razão mássica Augmentin®/cineol é de 64 para 100 (1 para 1,5). Mede-se as CMI sobre diferentes estirpes. Em seguida, calcula-se nas estirpes pertencentes ao mesmo gênero o ganho em CMI.

[0138] O ganho em CMI exprime a seguinte razão: CMI (50 ou 90) com potencializador / CMI (50 ou 90) sem potencializador. Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 4

[0139] Esse teste mostra que o cineol permite potencializar o efeito da Augmentin® sobre grandes séries de estirpes. O efeito de potencialização se exprime em condições aeróbia ou anaeróbia e pode ser influenciado pelo solvente envolvido na dispersão dos produtos.

2/ TESTE COM DILUIÇÃO DIRETA NA ÁGUA, EM AERÓBIO

[0140] As mesmas medições e cálculos são realizados na água, com a Augmentin® ou a amoxicilina sozinha.

[0141] Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 5

[0142] Esse teste mostra que o cineol testado in vitro em outro solvente mostra efeitos de potencialização ligeiramente diferentes. Aqui, a sinergia não é mais aparente sobre E coli com uma diluição direta na água ao passo que é claramente visível em outro solvente (Ex1-1). Assim, um resultado neutro em um solvente não prenuncia um resultado neutro em outro solvente.

[0143] Esse teste mostra também que o efeito é dependente da razão.

3/TESTES AMOXICILINA (AMX) E AUGMENTIN® (AUG) EM TWEEN®80/ÁGUA CONTRA DMSO

[0144] As razões mássicas são: Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 6

[0145] Aqui ainda, as potencializações parecem desaparecer de acordo com o tipo bacteriano e de acordo com o solvente. O tween associado à água permite um realce claro da potencialização da amoxicilina pelo cineol.

[0146] Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 7

[0147] A diluição da Augmentin® na água e no tween permite a evidenciação do efeito de potencialização a doses baixas (até 0,025 mg/l de cineol) já que a CMI da Augmentin® sozinha sobre essas estirpes pode ser de 0,25 mg/l sobre determinados estafilococos.

4 /TESTES dp (CIPROFLOXACINA) EM TWEEN® 80 / ÁGUA, CONTRA DMSO

[0148] Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 8

TABELA 8

[0149] O teste mostra que o cineol potencializa também a ciprofloxacina a doses baixas de cineol (as sinergias são observadas a doses de 0,125 mg de cineol). O solvente e a razão têm, todos os dois, uma influência sobre o resultado.

5/TESTES TETRACICLINA (TE) EM ÁGUA, TWEEN, TE, T/P

[0150] Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 9

[0151] O teste demonstra a capacidade do cineol de potencializar a tetraciclina, nomeadamente no DMSO e na mistura Tween-água.

6/TESTES GEN (GENTAMICINA) EM ÁGUA / TWEEN®80+ÁGUA / TWEEN®80 + PROPILENOGLICOL

[0152] Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 10

[0153] O teste demonstra a capacidade do cineol de potencializar a gentamicina, nomeadamente na mistura tween + propileno.

7 / SERTACONAZOL NO DMSO

[0154] O efeito de potencialização do cineol sobre as leveduras (candida albicans é igualmente testado. Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 11

[0155] Esse teste demonstra que o cineol é capaz de potencializar o sertaconazol.

EXEMPLO 2: TESTE DE DUPLA DILUIÇÃO

[0156] O teste de dupla diluição é um teste de medição de CMI realizado em diluições sucessíveis dos 2 produtos da composição. Assim, 12 diluições do intensificador (cineol) são testadas com 12 diluições do antibiótico (Amoxicilina). A tabela resumida exprime, para cada estirpe e para cada diluição do intensificador, a CMI medida do antibiótico.

[0157] O código de cores que permite interpretar os resultados é o seguinte: nenhuma cor se a CMI for equivalente com e sem intensificador, cinza se o valor for inferior com intensificador. Constata-se que o cineol tem capacidade de potencializar (fenômenos aditivos) a amoxicilina a concentrações muito elevadas (CMI 50.000 mg/l). Quando a concentração de cineol diminui, não há mais fenômenos de potencialização. De uma maneira surpreendente, essa potencialização ressurge quando a dose de cineol é muito baixa.

[0158] Os ensaios foram igualmente realizados com a augmentin® (amoxicilina/ácido clavulânico), em que se observa os mesmos resultados. Um isobolograma que estabelece a curva da CMI de amoxicilina observada em função da concentração (diluição) de cineol (estirpe: SA8238) é reportado na Figura 1. Constata-se uma sinergia a doses de cineol altas e baixas, com um discontinuum inesperado.

EXEMPLO 3: ETEST

[0159] Os testes correspondentes são efetuados na base do teste de CMI usual: a tira etest® (Biomérieux) é depositada na superfície de um ágar inoculado no qual o intensificador foi incorporado. Esse teste permite minimizar os riscos de efeito solvente, a saber, uma eventual interação com o solvente utilizado in vitro.

[0160] Mede-se a CMI do antibiótico sozinho (testemunha Tween água ou testemunha DMSO), ou em associação com o cineol a três concentrações diferentes (1 mg/l, 4 mg/l, 16 mg/l) em diferentes solventes (Tween® 80 ou DMSO).

[0161] A testemunha corresponde ao teste realizado sem cineol. Uma testemunha é feita em cada solvente testado: Água destilada, Tween/água e DMSO.

[0162]Testemunha ED = Antibiótico sozinho em Água destilada.

[0163] Testemunha DMSO = antibiótico sozinho em DMSO.

[0164] Testemunha TE = antibiótico sozinho em Tween® 80.

[0165] Nessas estirpes, utilizado sozinho, o cineol tem uma CMI50 superior a 10.000 mg/l.

[0166] Nas tabelas, o código de cores que permite interpretar os resultados é o seguinte: nenhuma cor se a CMI for equivalente com e sem intensificador, cinza se o valor for inferior com intensificador. TABELA 13

[0167] Outros e-testes são igualmente realizados em DMSO com a amoxicilina em presença ou não de cineol (ausência de cineol = testemunha). Os testes são reportados na seguinte tabela: TABELA 14

[0168] Uma potencialização é observada em todas as estirpes.

[0169] Outros e-testes são igualmente realizados com a amoxicilina/ácido clavulânico (Augmentin®) em presença ou não de cineol (testemunha: sem cineol, CIN16: cineol a 16 mg/l, CIN4: cineol a 4 mg/l) DMSO. Os testes são reportados na seguinte tabela: TABELA 15

[0170] Outros e-testes são igualmente realizados em Pasteurellas. Os resultados são relatados nas seguintes tabelas: TABELA 16

TABELA 17

TABELA 18

EXEMPLO 4: TESTE DE CRESCIMENTO / TESTE DE AÇÃO BACTERICIDA 1 TESTE DE CRESCIMENTO NA ESTIRPE 10168

[0171] Os testes de crescimento são feitos em meio líquido com uma dispersão do intensificador dos antibióticos previamente em um solvente adaptado.

[0172] Mede-se a cinética de crescimento das bactérias em presença de Augmentin®, de Augmentin® intensificada com cineol ou de cineol.

[0173] Os resultados são reportados na Figura 2 (estirpe 10168, gênero Staphylococcus), cuja legenda é:

[0174] Quadrado: testemunha (bactéria sozinha).

[0175] Triângulo: Augmentin® diluída em uma mistura Tween®80/água a uma concentração de 4 vezes sua CMI.

[0176] Cruz (x): Augmentin® e o cineol, diluídos em uma mistura Tween®80/água, a Augmentin® está a uma concentração de 4 vezes sua CMI, razão mássica Augmentin®/cineol de 64/100.

[0177] Estrela (*): cineol sozinho diluído em uma mistura Tween®80/água.

[0178] Constata-se que a presença de cineol, a uma dose muito baixa, permite acelerar a velocidade de ação bactericida da Augmentin®.

2 EFEITO PÓS ANTIBIÓTICO SOBRE A ESTIRPE 08150 (CMI DA AUGMENTIN®= 4 MG/L)

[0179] Conta-se o número de bactérias após 16 h de contato em presença de augmentin® (AC) e/ou de cineol, depois de várias horas após o fim da colocação em contato. A Augmentin® é utilizada à sua CMI. Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 19

[0180] Testemunha = Ausência de cineol e de Augmentin®.

[0181] Constata-se que o acréscimo de cineol permite reduzir significativamente o número de bactérias, incluindo após a colocação em contato.

3 EFEITO PÓS ANTIBIÓTICO SOBRE A ESTIRPE 08152 (CMI DA AUGMENTIN®= 0,5 MG/L)

[0182] Conta-se o número de bactérias após 16 h de contato em presença de augmentin® (AC) e/ou de cineol, depois de várias horas após o fim da colocação em contato. A Augmentin® é utilizada a uma concentração de 4 vezes sua CMI. 4XCMI significa que a concentração de antibiótico é 4 vezes superior à sua CMI, medida quando o mesmo é utilizado sozinho na estirpe considerada. Os resultados são reportados na seguinte tabela: TABELA 20

[0183] Testemunha = ausência de cineol e de Augmentin®.

[0184] Constata-se que o acréscimo de cineol permite reduzir significativamente o número de bactérias, incluindo após a colocação em contato.

EXEMPLO 5: RESISTÊNCIA

[0185] Cem μl de uma cultura em caldo Mueller Hinton da estirpe a ser estudada (inóculo grande >1010 UFC/ml) são espalhados em uma caixa de Mueller Hinton que contém uma concentração de óleo igual a 4 vezes a CMI do produto a ser testado. Após 48 h de incubação, observa-se a presença ou não de colônias suscetíveis de serem mutantes resistentes. Constatou-se que a utilização de cineol permitiu igualmente diminuir o aparecimento de bactérias resistente. Os resultados são reportados nas seguintes tabelas: TABELA 21 - ESTIRPE 10168 / MRSA

[0186] Enquanto a ciprofloxacina sozinha sobre o S. aureus resistente à meticiclina (MRSA) causa o aparecimento de incontáveis mutantes, o acréscimo de cineol à ciprofloxacina não causa mais o aparecimento dos mutantes. TABELA 22 - ESTIRPE 9003 / BLSE

[0187] Ali ainda, o cineol causa a diminuição do aparecimento de mutantes em uma estirpe gram negativa resistente.

EXEMPLO 6: MODELO DE SEPSE

[0188] 200 μl de uma solução bacteriana (MRSA) ajustada a 5.108 CFU/ml são injetados por via intravenosa (via retro-orbital) em camundongos CDl. O tratamento é iniciado 1 h após a injeção bacteriana por via subcutânea.

[0189] A 24 h, os camundongos são eutanasiados e um contagem bacteriana é efetuada no rim. Teste Vivo 1: injeção de amoxicilina:ácido clavulânico (AMC) a dose variável (0,25 mg/kg, 2 mg/kg, 16 mg/kg e 128 mg/kg)+ cineol (B) a dose constante (30 mg/kg), injetados 2 vezes por 24 (H+1 e H+4). Testemunhas: grupo não tratado e grupo que recebe 30 mg/kg de cineol sem antibiótico. Número de bactérias log10 CFU/g rim.

[0190] Os resultados são reportados na Figura 3.

[0191] Teste vivo 2: Injeção de amoxicilina:clavulânico (AMC) a dose constante (8 mg/kg) + cineol (B) a dose variável (4 mg/kg, 64 mg/kg, 128 mg/kg, 256 mg/kg, 512 mg/kg) injetados 2 vezes por dia. Testemunhas: grupo não tratado, grupo que recebe 32 mg/kg de cineol sem antibiótico (CIN), grupo que recebe 8 mg/kg de antibiótico sem cineol (AMC8).

[0192] (*) p<0,05 contra controle, AMC 8 e CIN.

[0193] (£) p<0,05 contra controle e CIN.

[0194] ($) p<0,05 contra controle, AMC 8, CIN, AMC+CIN 128, AMC+CIN 256.

[0195] Os resultados são reportados na Figura 4 e igualmente na seguinte tabela: TABELA 23

[0196] Constata-se novamente uma potencialização a dose baixa ou a dose alta, sem potencialização no intervalo. O que está de acordo com os resultados in vitro que demonstram de forma surpreendente que a sinergia com o cineol surge a dose baixa (e compatível com o uso médico) e a doses muito elevadas (incompatível com o uso medicinal). Entre esses extremos de dose, e como foi no caso in vitro, surge de forma surpreendente uma faixa de concentrações na qual o efeito de potencialização é ausente.

EXEMPLO 7: EFICÁCIA ANTIBACTERIANA DO PLASMA

[0197] Injeta-se (sc.), em camundongos Balb/c, o produto antimicrobiano ou a mistura antimicrobiano + intensificador. As doses administradas são as seguintes: Grupo 1: Gentamicina (GE) 6 mg/kg; Grupo 2: Gentamicina 6 mg/kg + cineol 30 mg/kg; Grupo 3: amoxicilina (AMX) 30 mg/kg; Grupo 4: Amoxicilina 30 mg/ kg + 30 mg/kg cineol; Grupo 5: Augmentin® (AMC) 30 mg/kg; e Grupo 6: Augmentin® 30 mg/kg + 30 mg/kg cineol.

[0198] A diferentes tempos pós-injeção, os camundongos são eutanasiados, e o sangue retirado, heparinizado e centrifugado para extrair o plasma.

[0199] Uma série de diluições sucessivas (1/3) do plasma é realizada e uma gota dessas diferentes concentrações de plasma é depositada sobre um meio Baird Parker inoculado (MSSA 8238 para os grupos GE e AMX, MRSA 10168 para o grupo AMC). Os efeitos antibacterianos são medidos após 24 de incubação. As diluições sucessivas permitem determinar o efeito antimicrobiano e o relacionar à CMI. A razão concentração eficaz/CMI é assim determinada.

[0200] Os resultados são reportados nas seguintes tabelas: TABELA 24

TABELA 25

[0201] A relação da concentração plasmática relacionada à CMI é obtida pelas diluições sucessivas do plasma. Embora esse método seja semiquantitativo, esse permite, entretanto, mostrar que o efeito é mais intenso quando o cineol está presente (AUC superior). Do mesmo modo e de forma inequívoca, o acréscimo de cineol permite prolongar o tempo decorrido acima da CMI.

[0202] Esse resultado está de acordo com a curva da Figura 2, realizada in vitro. LISTA DE ABREVIACOES

Claims (8)

1. USO DE UMA ASSOCIAÇÃO DE UM AGENTE ANTIMICROBIANO E DE UM COMPOSTO, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma infecção microbiana, dito composto sendo cineol; em que a associação está em uma razão mássica, cineol:agente antimicrobiano, que varia de 8:1 a 1:10, e o agente antimicrobiano não é um terpenoide ou um fenilpropanoide, e a infecção microbiana é induzida nomeadamente por um patógeno escolhido dentre os seguintes gêneros potencialmente patógenos: Acetobacter, Acetobacterium, Acinetobacter, Citrobacter, Enterobacter, Enterococcus, Escherichia, Helicobacter, Klebsiella, Proteus, Providencia, Pseudomonas, Salmonella, Serratia, Staphylococcus, Streptococcus, Actinobacillus, Neisseria, Mannheima, Pasteurella, Candida, Aspergillus, Cryptococcus Trichosporon, Malassezia e Mycobacterium e que, na estirpe do patógeno, a concentração do cineol corresponde à seguinte equação: [C] < [CMI] / x em que [C] é a concentração de cineol a ser utilizada na dita estirpe do patógeno, [CMI] é a CMI medida para o cineol, sozinho, na dita estirpe do patógeno, x é superior ou igual a 100, vantajosamente a 1.000, mais vantajosamente x está compreendido entre 2.000 e 10.000, ou superior a 50.000, em que o cineol é adaptado para uma administração por via sistêmica.

2. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo dito agente antimicrobiano ser um antibiótico, em particular um antibiótico escolhido dentre: os antibióticos que inibem a síntese do peptidoglicano, os antibióticos que inibem a síntese dos ácidos nucleicos, os antibióticos que inibem a síntese dos folatos, os antibióticos que inibem a síntese dos ácidos micólicos, qualquer um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis e qualquer uma de suas combinações.

3. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo agente antimicrobiano ser um antifúngico, em particular um antifúngico escolhido dentre: os poliênicos, os azólicos, as alilaminas, os tiocarbamatos, as equinocandinas, a griseofulvina e a fluorocitosina.

4. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela razão mássica cineol:agente antimicrobiano variar de 4:1 a 1:10, vantajosamente de 1:1 a 1:10, mais vantajosamente de 1:1 a 1:5.

5. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo agente antimicrobiano ser amoxicilina.

6. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo agente antimicrobiano ser uma mistura amoxicilina/ácido clavulânico.

7. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo agente antimicrobiano ser sertaconazol.

8. ASSOCIAÇÃO DE UM AGENTE ANTIMICROBIANO E DE CINEOL, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada por ser para uso no tratamento de infecções microbianas, em uma razão mássica de cineol:agente antimicrobiano que varia de 8:1 a 1:10, em que o agente antimicrobiano não é um terpenoide ou um fenilpropanoide, e em que a infecção microbiana é induzida nomeadamente por um patógeno escolhido dentre os seguintes gêneros potencialmente patógenos: Acetobacter, Acetobacterium, Acinetobacter, Citrobacter, Enterobacter, Enterococcus, Escherichia, Helicobacter, Klebsiella, Proteus, Providencia, Pseudomonas, Salmonella, Serratia, Staphylococcus, Streptococcus, Actinobacillus, Neisseria, Mannheima, Pasteurella, Candida, Aspergillus, Cryptococcus Trichosporon, Malassezia e Mycobacterium e que, na dita estirpe do patógeno, a concentração de cineol corresponde à seguinte equação: [C] < [CMI] / x em que [C] é a concentração de cineol a ser utilizada na estirpe do patógeno, [CMI] é a CMI medida para o cineol, sozinho, na dita estirpe do patógeno, x é superior ou igual a 100, vantajosamente a 1.000, mais vantajosamente x está compreendido entre 2.000 e 10.000, ou superior a 50.000.

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