BR112016027512B1 - Usos combinados de um antagonista de ep4 no tratamento de câncer e geração de uma resposta imune de memória contra um câncer - Google Patents

Abstract

TERAPIAS COMBINADAS PARA O TRATAMENTO DE CÂNCER. A presente invenção fornece métodos e composições para tratar o câncer através da administração de um antagonista de EP4 em combinação com terapia de radiação, terapia com anticorpo e/ou quimioterapia de antibetabólito.

Description

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

[001] O bloqueio de prostaglandina E2 (PGE2) sinalizado através da interação de PGE2 com o receptor de prostaglandina E4 (EP4) por antagonistas foi demonstrado ser eficaz na redução da inflamação (Chen et al. (2010) British J. Pharmacol. 160, 292 a 310). PGE2 também tem sido implicado como um importante constituinte no ambiente imunossupressor criada por muitos tumores sólidos (Whiteside (2010) Expert Opinion in Biological Therapy. 2010.10, 1019 a 1035), e a inibição da sinalização por antagonistas de EP4 foram mostrados para reduzir o crescimento do tumor (Terada et al. (2010) Cancer Res. 70, 1.606 a 1.615) e o tumor em modelos animais de tumores (Yang et ai. (2006) Cancer Res. 66, 9.665 a 9.672). Mesmo com as terapias de câncer mais avançados, continua a haver uma necessidade médica para tratamentos mais eficazes para tumores sólidos, especialmente câncer que sofreu metástase.

RESUMO

[002] As atividades antitumorais de várias combinações de um antagonista de EP4 com: radiação; anticorpos para o antigênico citotóxica de linfócitos T 4 (anti- CTLA4); anticorpos para o ligando de morte programada 1 (anti-PDLl); anticorpos para a proteína de morte celular programada 1 (antiPDL); e antimetabólitos têm sido examinadas. Os resultados desta análise indicaram melhorada e / ou atividades anti- tumoriais sinérgicas por a combinação do antagonista de EP4 com as outras terapias, em comparação com tratamento com agente único sozinho, e em algumas formas de realização isto pode resultar numa resposta imune de memória contra o tumor, assim como contra um câncer diferente.

[003] Assim, em um aspecto da invenção, é proporcionado um método de tratamento de câncer em um sujeito com necessidade, compreendendo a administração de um antagonista de EP4 em combinação com uma terapia selecionada a partir do grupo que consiste em terapia de radiação, terapia de anticorpo e quimioterapia de antimetabólito.

[004] Em um aspecto mais particular da invenção, a terapia de anticorpo é selecionada de entre o grupo que consiste em terapia de anticorpo de CTLA4, a terapia com anticorpos PDL1, e a terapia com anticorpos PD1. Em algumas formas de realização, o câncer é o câncer metastático. Em um outro aspecto da invenção, é proporcionado um método de geração de uma resposta imune de memória em um sujeito necessitado que compreende a administração de uma quantidade de um antagonista de EP4 em combinação com uma terapia selecionada a partir do grupo que consiste em terapia de radiação, terapia de anticorpos e quimioterapia de anti- metabólito. Em outro aspecto mais particular da invenção, a terapia de anticorpo é selecionada de entre o grupo que consiste em terapia de anticorpos de CTLA4, a terapia com anticorpos PDL1 e terapia de anticorpos PD1.

[005] Em ainda um outro aspecto do invento, o câncer tratado é selecionado a partir do grupo constituído por câncer da mama, câncer cervicais, câncer colorre- tais, câncer do endométrio, os glioblastomas, os câncer da cabeça e pescoço, os câncer renais, câncer do fígado, câncer do pulmão, meduloblastoma, câncer do ovário, câncer pancreáticos, câncer da próstata, câncer de pele e câncer do trato urinário.

[006]Em aspectos mais específicos da presente invenção, são fornecidos métodos de tratamento de câncer e/ou a geração de uma resposta imune de memória que compreende a administração de um composto de Fórmula (I): em que: um de R1a e R1b é hidrogênio, e o outro é metil; ou R1a e R1b e são tomados em conjunto para formar um anel ciclopropila; R2 é metil ou fluorometil; R3 é metil; R4 é hidrogênio, halo, metil, fluorometil, metóxi ou fluorometoxi; R5 é hidrogênio, halo, metil, fluorometil, metóxi ou fluorometoxi; R6 é hidrogênio, halo, metil ou metóxi; R7 é hidrogénio, halo, metil ou metóxi; e X é oxigênio; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com a terapia de radiação; em combinação com a terapia anti-CTLA4; em combinação com a terapia anti-PDLl; em combinação com a terapia anti-PDL; e / ou em combinação com a quimioterapia de antimetabólito. É ainda proporcionado o uso de uma combinação de um antagonista de EP4 e uma terapia selecionada a partir do grupo que consiste em terapia de radiação, terapia com anticorpos e / ou quimioterapia de antimetabólito para o tratamento de câncer e / ou a geração de uma resposta imune de memória, tal como aqui divulgado. Também é proporcionada a utilização de um antagonista de EP4 para a preparação de um medicamento para uma terapia de combinação com uma terapia selecionada a partir do grupo que consiste em terapia de radiação, terapia com anticorpos e / ou quimioterapia de antimetabólito para o tratamento de câncer e / ou a geração de uma memória imune resposta, tal como divulgado no presente documento. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Figura 1. Melhorou significativamente a atividade antitumoral de crescimento de radiação ER- 886046 terapia de combinação em comparação com a radiação por si só. Painel A) O tamanho médio do tumor dos ratinhos portadores de tumor CT26 que receberam 9 Gy + ER-886046, 9 Gy de radiação por si só, ou apenas veículo. Painel B) de peso médio corporal do animal dos ratinhos portadores de tumores TC- 26. O tratamento de radiação: dose única 9 Gy no dia 9; ER- 886046 de dosagem: 150 mg / kg, por via oral (PO) a administração diária a partir do dia 9 ao dia 32. A administração de radiação e ER-886046 para os ratinhos com tumores estão indicados pelas setas e barras, respectivamente. N = 10-12 por grupo *, p < 0,05 o animal foi retirado do estudo de acordo com o protocolo. N = 10 por grupo. *, P ) e células T citotóxicas (CD8 ) nos tumores CT26 que receberam 9 Gy apenas, 9 Gy + ER- 886046, ou apenas veículo. Painel B) Quantificação de células supressoras derivadas de mielóides (células MDSC, CDl lb Grl ) nos tumores. A radiação foi administrada uma vez para os tumores no dia da randomização, enquanto que ER-886046 foi administrada PO diariamente administrado a 150 mg / kg e os animais durante 7 dias consecutivos após a randomização. Os tumores foram analisados por citometria de fluxo, um dia após a última dose de ER- 886046. **, p

[007] Figura 2. parcelas do crescimento do tumor do indivíduo CT-26 tumores tratados com radiação / ER-886046 ou radioterapia sozinho. Os animais são da experiência descrita na Figura 1. Painel A) do grupo de tratamento de veículo. Painel B) Radiação. Painel C) de radiação mais ER- 886046. N = 10-12 por grupo. Cure, regressão completa do tumor; Progressão, rápido crescimento do tumor; , Tamanho comparável estável a partir de tumores iniciais antes do tratamento. O tratamento de radiação: dose única 9 Gy no dia 9; ER-886046 de dosagem: 150 mg / kg, por via oral (PO) a administração diária a partir do dia 9 ao dia 32. Cada linha representa um animal individual.

[008] Figura 3. O aumento do crescimento do tumor supressão e animal sobrevivência pela radiação de baixa dose / ER-886046 em comparação com baixa dose de radiação sozinho. Parcelas de status de sobrevivência de animais entre os grupos de tratamento indicados. O tratamento de radiação: 21-11-2016 4 dose única 3 Gy no dia 17; ER-886046 de dosagem: 150 mg / kg, a administração PO diariamente dos dias 17-45. Uma vez que um animal atingiu os 20% de perda de peso em comparação com o seu peso corporal inicial ou teve um volume de tumor igual ou superior a 2000 mm , o animal foi retirado do estudo de acordo com o protocolo. N = 10 por grupo. *, P

[009] Figura 4. efeito duradouro antitumoral com uma resposta imune de memória por tratamento ER- 886046 / radiação. Painel A) O crescimento do tumor nos ratos curados por ER-886046 e tratamento combinado de radiação ou nos ratinhos / c Balb que receberam a injeção de células CT26. Painel B) O crescimento do tumor de secundariamente desafiados CT-26 tumores nos ratos curados ou em camundongos normais. Painel C) Crescimento do 4T1 tumores em camundongos curados ou em camundongos normais. N = 9-10. Note-se a completa rejeição desafiou tumor CT-26 e reduziu o crescimento da desafiados 4T1 tumores nos ratos combinação curado.

[010] Figura 5. O efeito antitumoral de ER-886046 / radiação em um modelo de tumor bilateral. Dois CT- 26 tumores de tamanho semelhante foram cultivadas em um hospedeiro através da injeção de células CT26 por via subcutânea em ambos os flancos direito e esquerdo de murganhos Balb / c. A radiação foi aplicada ao tumor no flanco direito ambos com 9 dias e 13 dias, tal como indicado pelas setas no painel A. ER-886046 foi administrado por dia para os animais a uma dose de 150 mg / kg, tal como indicado pelas barras. ER-886046 foi administrado aos animais a partir do dia 9 ao dia 27. Painel A) O tamanho médio do tumor flanco direito que receberam radiação e ER- 886.046. Painel B) de tamanho médio do tumor do flanco esquerdo que não recebeu nenhuma radiação (radiação administrada apenas no tumor do flanco direito). Note-se que a combinação da radiação / ER-886046 administrado ao tumor flanco direito retardou significativamente o crescimento do tumor do flanco esquerdo da mesma origem, que não recebeu tratamento por radiação, o que indica um efeito abscopic. **, p < 0,01 ns, não significante, teste t de estudante.

[011] Figura 6. Atividade de metástase anti pulmonar de ER-886046 / radioterapia no câncer da mama 4T1 modelo de tumor. 4As células Tl-luc2 foram subcutaneamente (SC) inoculadas em ratinhos BALB / c. Quando o tamanho médio dos tumores atingiu 100 mm, os tumores foram irradiados com uma dose de 9 Gy uma vez com ou sem administração oral diária de ER-886046 numa dose de 150 mg / kg. Painel A) No final do estudo no dia 27, a metástase pulmonar dos animais foi analisada e quantificada por expressão de luciferase. Painel B) Imagens representativas de cada grupo são apresentadas. Teste t de estudante foi utilizado para análise estatística.

[012] Figura 7. A radiação e ER-886046 trabalhado em sinergia para modificar a imunidade intratumoral. Painel A) Quantificação de células mielóides (CDllb ) e células T citotóxicas (CD8 ) nos tumores CT26 que receberam 9 Gy apenas, 9 Gy + ER-886046, ou apenas veículo. Painel B) Quantificação de células supressoras derivadas de mielóides (células MDSC, CDl lb Grl) nos tumores. A radiação foi administrada uma vez para os tumores no dia da randomização, enquanto que ER-886046 foi administrada PO diariamente administrado a 150 mg / kg e os animais durante 7 dias consecutivos após a randomização. Os tumores foram analisadas por citometria de fluxo, um dia após a última dose de ER- 886046. **, p < 0,01 ns, não significante, teste t de estudante.

[013] Figura 8. atividade antitumoral sinérgica de ER-886046 com anti- CTLA4 em B16F10 tumores. Painel A) atividades de crescimento antitumoral de anti- CTLA4 e ER-886046 em tumores de melanoma B16F10 que crescem em ratinhos C57BL / 6. Painel B) alterações de peso corporal animal dos grupos de tratamento. dosagem anti-CTLA4: 200 ug para a primeira via intravenosa (iv) de injeção no dia 3 após a transplantação e 100 ug para as outras três IV injeções em dias 6, 9 e 12, como indicado pelas setas. ER-886046 de dosagem: 150 mg / kg, po administração diariamente desde o dia 3 até ao dia 15, como indicado pelas barras. *, P

[014] Figura 9. Melhoradas as atividades antitumorais de anti-PDLl ou anti- PDL por ER-886046 em tumores CT26. Painel A) Atividades de anti-PDLl mais ER- 886046 e anti-PDLl sozinho. AntiPDLl dosagem: 200 ug por injeção IV nos dias 9, 12, implante de células 15 e 18 pós conforme indicado pelas setas; ER-886046 de dosagem: 150 mg / kg, po administração diária a partir do dia 9 para a implantação de células pós 19 dias, tal como indicado pela barra. Painel B) Atividades de anti- PDL mais ER- 886.046 e anti-PDL sozinho. Anti-PDL dosagem: 200 ug por injeção iv nos dias 9, 12, 15, implante de células 18 e 21 pós conforme indicado pelas setas; ER-886046 de dosagem: 150 mg / kg, administração diária a partir do dia 9 para a implantação de células pós 23 dias, tal como indicado pela barra. *, P

[015]Figura 10. A atividade antitumoral melhorada por terapia de combinação de ER-886046 e a quimioterapia de antimetabólito, com radiação em comparação com a quimioterapia de antimetabólito, com radiação sozinha. A atividade antitumoral de gencitabina mais radiação local (RT) administrado a PAN02 tumores pancreáticos, em ratinhos C57BL / 6 com ou sem ER-886046. A gencitabina e RT de dosagem: uma única de 40 mg / kg de dose de gencitabina e uma única dose de 6 Gy de RT, foi administrada na altura da injeção de células de tumor 27 dias após. ER-8806046 foi administrado diariamente em uma quantidade de 150 mg / kg de injeção de células de tumor pós dia 27 até ao final do estudo.

[016]Figura 11. Experiências adicionais com a terapia de combinação de ER- 886046 e a quimioterapia de antimetabólito, com radiação em comparação com a quimioterapia anti-metabolito, com radiação sozinha. Painel A) gencitabina e RT de dosagem: uma única de 40 mg / kg de dose de gencitabina e uma única dose de 6 Gy de RT, foi administrada na altura da injeção de células de tumor 19 dias pós. ER- 8806046 foi administrado diariamente numa quantidade de 150 mg / kg de injeção de células de tumor pós dia 19 até ao final do estudo. Painel B) gencitabina e RT de dosagem: uma única de 40 mg / kg de dose de gencitabina e uma única dose de 6 Gy de RT, foi administrada na altura da injeção de células de tumor de 12 dias pós. ER-8806046 foi administrado diariamente em uma quantidade de 150 mg / kg de injeção de células 12 dias pós tumor até ao final do estudo. Os tamanhos médios do tumor de ratos portadores de tumor pancreático do rato PAN02 que receberam veículos, ER-886046, gencitabina (GEM) mais a radiação (RT), ER-886046, mais de RT, ou de ER-886046 mais gencitabina e RT em dosagens e horários indicados. A e B representam cada estudo independente.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES

[017]“'EP4 antagonista” refere-se a um composto que inibe ou bloqueia a sinalização celular desencadeada pela interação de PGE2 com o receptor EP4. Exemplos de antagonistas de EP4 incluem, mas não estão limitados a, ER-819762, MK-2894, MF 498, ONO-AE3-208, evatanepag, ONO-AE2-227, CJ-042794, EP4A, BGC201531, CJ-023423, ONO -AE3-240, GW 627368 e o AH23848, tal como estão listados na base de dados IUPHAR como antagonistas do receptor EP4. Outros exemplos incluem, mas não estão limitados a, compostos de Fórmula (I), tal como aqui ensinado, incluindo ER-885290, ER-885740, ER-885741, ER-886045, ER- 886046 (E7046), ER-886074, ER- 885290, ER-885740 e ER-885741, que está descrito no documento WO 2012/039972.

[018]"Anticorpo de CTLA4" ou "anti-CTLA4" refere-se a um anticorpo ou anticorpos dirigidos para o antigênio de linfócitos T citotóxicos-4 (CTLA4). Exemplos de anticorpos incluem, mas não estão limitados a, anticorpos que são antagonistas de CTLA4 ou os anticorpos de CTLA4, conforme estabelecido na Patente EUA N ° s. 8.685.394 e 8.709.417. Algumas formas de realização do anticorpo incluem MDX010 (ipilimumab, Bristol-Myers Squibb) e CP-675,206 (tremelimumabe, Pfizer). Em uma forma de realização particular, o anticorpo é ipilimumab.

[019] "Anticorpo PDL1" ou "anti-PDLl" refere-se a um anticorpo dirigido contra o ligando morte programada 1 (PDL1). Exemplos de anticorpos incluem, mas não estão limitados a, os anticorpos apresentados na patente EUA N ° s. 8.217.149, 8.383.796, 8.552.154 e 8.617.546. Em uma forma de realização particular, o anticorpo é MPDL3280A (Roche).

[020]"Anticorpo PDL" ou "anti-PDL" refere-se a um anticorpo dirigido contra proteínas de morte programada 1 (PDL). Exemplos de anticorpos incluem, mas não estão limitados a, os anticorpos apresentados na patente EUA N ° s. 7.029.674, 7.488.802, 7.521.051, 8.008.449, 8.354.509, 8.617.546 e 8.709.417. As concretizações particulares do anticorpo incluem MDX-1106 (nivolumab, Bristol- Myers Squibb), labrolizumab (Merck), e pembrolizumab (KEYTRUDA®, Merck).

[021] "Tratamento", "tratar" e "tratamento" referem-se a aliviar, inibir e / ou revertendo o progresso de um câncer em um sujeito com necessidade do mesmo. O termo "tratamento" é inclusive de quaisquer indícios de sucesso no tratamento ou melhoria do câncer, incluindo qualquer parâmetro objetivo ou subjetivo tal como abatimento; remissão; diminuição dos sintomas ou fazer a lesão, patologia ou condição mais tolerável para o assunto; retardamento ou abrandamento na taxa de progressão, etc. Medição do tratamento ou melhoria pode basear-se em, por exemplo, os resultados de um exame físico, um teste patológico e / ou um teste de diagnóstico, como conhecido na arte.

[022] Tratar pode também referir-se a redução da incidência ou aparecimento de um câncer, ou a repetição do mesmo (tal como um prolongamento do tempo de remissão), em comparação com aquela que ocorreria na ausência da medida tomada.

[023]"Quantidade eficaz" ou "quantidade eficaz-tratamento" refere-se a uma quantidade que é eficaz para o tratamento de um câncer como foi observado por meio de testes clínicos e avaliação, a observação do paciente, e / ou semelhantes. Uma "quantidade eficaz" pode designar mais uma quantidade que causa uma alteração detectável na atividade biológica ou química. As alterações detectáveis, pode ser detectada e / ou quantificada por mais um perito na arte para o mecanismo ou processo relevante. Além disso, uma "quantidade eficaz" pode designar uma quantidade que mantém um estado fisiológico desejado, isto é, reduz ou previne a diminuição significativa e / ou promove a melhoria da condição. Uma "quantidade eficaz" pode ainda referir-se a uma quantidade terapeuticamente eficaz.

[024]"Sujeito", como aqui utilizado refere-se um sujeito mamífero, e em particular um sujeito humano, incluindo um homem ou um indivíduo do sexo feminino, e incluindo um neonatal, infantil, juvenil, adolescente, adulto ou sujeito geriátrica, e ainda é inclusive de várias raças e etnias.

[025]Tal como aqui utilizado, o termo "um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo" refere-se a um sal de ácido relativamente não tóxicos, inorgânicos ou orgânicos de um composto da invenção. Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais dos compostos ou fazendo reagir o composto purificado na sua forma livre separadamente com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e isolando o sal assim formado. sais de ácidos representativos incluem, mas não estão limitados a, acetato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato / carbonato, bissulfato / sulfato, borato, camsilato, citrato, ciclamato, edisilato, esilato, formato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, cloridrato / cloreto, bromidrato / brometo, iodidrato / iodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato / fosfato de hidrogénio / di-hidrogeno fosfato, piroglutamato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tartarato, tosilato, trifluoroacetato e xinafoato de sais. Em uma forma de realização, o sal farmaceuticamente aceitável é um sal de cloridrato / cloreto.

[026]"Câncer", tal como aqui utilizado pode incluir cancros que são o resultado de mutações hereditárias geneticamente. Exemplos de tais cancros incluem, mas não estão limitados a, cancros da mama, cancros que podem ser relacionados com o síndrome de Li-Fraumeni, por exemplo, sarcomas de infância, leucemias e cancros cerebrais, cancros que podem ser relacionados com o síndrome de Lynch, por exemplo, do cólon cancros, cancros do ducto biliar, cancros cerebrais, câncer de endométrio, cancros do rim, ovário, pâncreas, pequenos cânceres intestinais, cancros do estômago e cancros ureter, cancros do pulmão, melanomas, cancros da próstata, retinoblastomas, cancros da tiróide e os cancros uterinos.

[027] Além disso, o câncer pode ser o resultado de mutações adquiridas, por exemplo, mutações resultantes da dieta, do ambiente e / ou de estilo de vida, ou mutações somáticas. Exemplos de tais cancros podem incluir, mas não estão limitados a, câncer supra-renal, câncer do córtex adrenal, câncer da bexiga, câncer do cérebro, câncer cerebral primário, glioma, glioblastoma, câncer da mama, câncer cervical, câncer do cólon (exemplos não-limitativos incluem carcinomas colorrectais exemplos como adenocarcinoma de cólon e Adoma cólon), câncer do endométrio, câncer da epiderme, câncer de esôfago, câncer de vesícula biliar, câncer geniturinário, cabeça ou pescoço, câncer do rim, câncer do fígado, câncer do pulmão (não-limitativos incluem adenocarcinoma, câncer do pulmão de pequenas células e câncer do pulmão de células não pequenas), linfomas (exemplos nãolimitativos incluem o linfoma das células B, linfoma de célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma nãoHodgkin), melanoma, melanoma maligno, carcinoma carcinóide maligno, insulinoma pancreático maligno, mieloma, mieloma múltiplo, câncer do ovário, câncer do pâncreas (tal como carcinoma pancreática exócrina), câncer da próstata, câncer de células renais, câncer da pele, tais como, para além de outros mencionados anteriormente, carcinoma de células escamosas, câncer do estômago, câncer testicular, câncer da tiróide, tiróide câncer folicular, tumor de Wilms, coriocarcinoma, micose fungóide, hipercalcemia maligna, hiperplasia cervical, leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, linfoma das células pilosas, linfoma de Burkett, leucemia mielóide aguda, leucemia mielóide crónica, síndroma mielodisplásica, leucemia promielocítica, crónica leucemia granulocítica, leucemia granulocítica aguda, fibrossarcoma, habdomyosarcoma, astrocitoma, neuroblastoma, rabdomiossarcoma, schwannoma, sarcoma de Kaposi, policitemia vera, trombocitose essencial, doença de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, sarcoma dos tecidos moles, sarcoma osteogénico, macroglobulinemia primária, seminoma, teratocarcinoma , osteossarcoma, xenoderoma pigmentoum, keratoctanthoma e retinoblastoma.

[028]"O câncer metastático" refere-se a um câncer em que células cancerosas de um órgão ou parte do corpo se espalhou (através de "metástase") para outro órgão ou entidade não-adjacente parte,. O câncer no órgão não adjacentes ou parte do corpo ("tumor secundário" ou "tumor metastático") inclui células cancerígenas provenientes do órgão ou parte do corpo a partir do qual o câncer ou as células cancerosas se espalhou. Locais em que pode ocorrer o tumor secundário incluem, mas não estão limitados a, os nódulos linfáticos, pulmões, fígado, cérebro e / ou ossos.

[029]Em algumas formas de realização da invenção, o antagonista de EP4 usados nos métodos e composições aqui descritas é um composto de Fórmula (I): em que: um de R1a e R1b é hidrogênio, e o outro é metil; ou R1a e R1b e são tomados em conjunto para formar um anel ciclopropila; R2 é metil ou fluorometil; R3 é metil; R4 é hidrogênio, halo, metil, fluorometil, metóxi ou fluorometoxi; R5 é hidrogênio, halo, metil, fluorometil, metóxi ou fluorometoxi; R6 é hidrogênio, halo, metil ou metóxi; R7 é hidrogénio, halo, metil ou metóxi; e X é oxigênio; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[030] Os compostos de fórmula (I) são conhecidos e a sua síntese descrita no documento WO 2012/039972, as divulgações das quais são incorporadas por referência no presente documento.

[031] Salvo indicação em contrário, a nomenclatura usada para descrever grupos químicos ou porções, tal como aqui utilizado seguir a convenção em que, lendo o nome da esquerda para a direita, o ponto de ligação ao resto da molécula é no lado da mão direita do nome. Por exemplo, o "metoxi" grupo está ligado ao resto da molécula no final de oxigénio. Outros exemplos incluem metoxietilo, onde o ponto de ligação está na extremidade de etilo.

[032] "Fluorometil" tal como utilizado no presente documento refere-se a um grupo metilo substituído com um ou mais átomos de flúor (por exemplo, monofluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo).

[033] "Fluorometoxi" tal como utilizado no presente documento refere-se a um grupo fluorometilo, como anteriormente definido, ligado à cadeia principal de carbono através de um átomo de oxigênio.

[034]Em algumas formas de realização da fórmula (I), um de R1a e R1b é hidrogénio, e o outro é metilo; R2 é metilo, difluorometilo ou trifluorometilo; R3 é metilo; R4 é cloro, flúor, trif luorometilo, difluorometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi ou; R5 é hidrogênio, cloro, fluoro, metilo, ou metoxilo; e R6 e R7 são hidrogénio. Em algumas concretizações, R5 é hidrogénio. Em algumas concretizações, R4 é selecionado de entre cloro, trifluorometilo, difluorometilo, difluorometoxi e trifluorometoxi.

[035] Em algumas formas de realização da Fórmula (I), R1a e R 1b são tomados em conjunto para formar um anel ciclopropilo; R2 representa um grupo metilo, trifluorometilo ou difluorometilo; R3 é metilo; R4 é trifluorometilo, difluorometilo, cloro, ou fluoro; e R6 e R7 são hidrogénio.

[036]Em algumas formas de realização, o composto de Fórmula (I) é: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[037] Em algumas formas de realização da presente invenção, é proporcionado um método para inibir o crescimento de tumores ou tratamento de câncer, em que um antagonista de EP4 é administrado em combinação com uma terapia adicional ou agente útil para a inibição do crescimento do tumor e / ou tratamento de câncer, i.e., uma terapia de combinação.

[038]Tal como utilizado no presente documento, a administração de dois ou mais agentes / terapias (inclusive de antagonistas de EP4, radioterapia, terapia com anticorpos, a quimioterapia de antimetabólito, ou qualquer combinação dos mesmos) "em combinação" significa que as terapias são administrados suficientemente perto no tempo que a administração de ou na presença de um altera os efeitos biológicos do outro. As terapias podem ser administrados simultaneamente (concorrentemente) ou sequencialmente.

[039] A administração simultânea pode ser realizada, por exemplo, por mistura de dois ou mais agentes antes da administração, ou por administração do agente / terapia no mesmo ponto no tempo, mas em diferentes locais anatómicos ou utilizando diferentes vias de administração, ou administrado em tempos suficientemente perto que os resultados observados são indistinguíveis dos obtidos quando os agentes / terapias são administrados ao mesmo ponto no tempo. Por exemplo, a administração simultânea de um ou mais agentes com radiação pode ser efetuada por administração do agente (s) no mesmo ponto no tempo em que a radiação é aplicada, ou, por vezes, suficientemente perto que os resultados observados são indistinguíveis dos obtidos quando o agente (s) e a radiação são administradas ao mesmo ponto no tempo.

[040] A administração sequencial pode ser efetuada por administração dos agentes / terapias em diferentes pontos no tempo, por exemplo, administração de um agente / terapia em algum ponto no tempo antes ou após a administração de um ou mais de outros agentes / terapias, de tal modo que a administração do agentes / terapias em combinação aumenta o efeito terapêutico do tratamento do câncer. Em algumas concretizações, um antagonista de EP4 é administrado em algum ponto no tempo antes da administração inicial de terapia de radiação, terapia com anticorpos e / ou quimioterapia de antimetabólito. Em alternativa, a terapia de radiação, terapia com anticorpos e / ou quimioterapia de anti-metabólito pode ser administrado em algum ponto no tempo antes da administração do antagonista de EP4, e, opcionalmente, administrados novamente em algum ponto no tempo após a administração do antagonista de EP4.

[041] Em algumas formas de realização, a administração do antagonista de EP4 em combinação com a terapia de radiação, terapia com anticorpos e / ou resultados de quimioterapia de antimetabólito, um aumento da referida terapia de radiação, terapia com anticorpos e / ou quimioterapia antimetabólito, tais que, por exemplo, uma menor dosagem da radiação, a terapia com anticorpos e / ou anti - metabolite quimioterapia pode ser eficaz para o tratamento.

[042] Em algumas formas de realização da invenção, o tratamento de câncer pode compreender um efeito abscopal e / ou proporcionar uma resposta imune de memória.

[043] Um efeito "abscopal" é um fenómeno no tratamento de um câncer metastático em que se localizou o tratamento de um tumor em particular ou do câncer com, por exemplo, terapia de radiação, resulta em encolhimento e desaparecimento da doença não localizada, tumores ou câncer, tais como as que resultam de metástases, que são distantes do local de tratamento localizado, conduzindo assim ao desaparecimento da doença, tumores ou câncer em todo o sujeito ou paciente. Um efeito abscopal difere de efeitos que podem ocorrer em tecidos adjacentes para o tratamento localizado, tais como, por exemplo, os efeitos espectador que podem resultar da terapia de radiação.

[044] Uma "memória de resposta imunitária" resulta quando o tratamento previsto câncer facilita a adaptação do sistema imunológico e a resposta imunológica do sujeito ou paciente na sua capacidade para retardar, reduzir ou prevenir o retorno ou a recidiva, por exemplo, aumentando o tempo de remissão, da doença, tumor ou câncer a ser tratado no sujeito ou paciente. Em algumas formas de realização, a resposta imune de memória pode retardar, reduzir ou prevenir o desenvolvimento de tumores ou de cancros que são diferentes do que o câncer a ser tratado, por exemplo, por meio de espalhamento epitopo.

[045]O antagonista de EP4, anticorpo e / ou anti-metabolito, tal como aqui utilizado pode ser formulado para administração em um veículo farmacêutico de acordo com técnicas conhecidas. Ver, por exemplo, Remington, The Science and Practice of Pharmacy (9a Ed., 1995). No fabrico de uma formulação farmacêutica de acordo com a invenção, o composto ativo (incluindo os seus sais fisiologicamente aceitáveis) é tipicamente misturados com, inter alia, um veículo aceitável. O veículo deve, é claro, ser aceitável no sentido de ser compatível com quaisquer outros ingredientes na formulação e não deve ser prejudicial para o paciente. O veículo pode ser um sólido ou um líquido, ou ambos, e é preferencialmente formulado com o composto como uma formulação de dose unitária, por exemplo, um comprimido, que pode conter de 0,01 ou 0,5% a 95% ou 99% em peso de o composto ativo. Um ou mais compostos ativos podem ser incorporados nas formulações da presente invenção, que podem ser preparadas por qualquer das técnicas bem conhecidas em farmácia, compreendendo a mistura dos componentes, opcionalmente incluindo um ou mais ingredientes acessórios e / ou excipientes. Em algumas formas de realização, a composição de qualquer (s), portador (s), ingrediente acessório (s) excipiente (s) e / ou a formulação (s) do invento compreendem os ingredientes que são naturais ou de não- fontes naturais. Em outras formas de realização, todo o componente da composição (s), portador (s), ingrediente acessório (s), excipiente (s) e / ou a formulação (ões) da invenção pode ser fornecida numa forma estéril. Exemplos não-limitativos de um portador estéril incluem a água livre de endotoxina ou água livre de pirogénio.

[046] O antagonista de EP4, anticorpo e / ou anti-metabolito pode ser administrada a indivíduos por qualquer via adequada, incluindo por via oral (incluindo a administração através da cavidade oral e que inclui ainda a administração através de um tubo de alimentação orogástrico), intraperitonealmente, parentericamente, por pulverização de inalação, topicamente (por exemplo, a pele e as superfícies mucosas, incluindo superfícies das vias respiratórias), transdermicamente, por via rectal, por via nasal (incluindo um tubo de alimentação nasogástrica), sublingualmente, bucalmente, vaginalmente ou por via de um reservatório implantado. O termo "parentérica" tal como aqui utilizado inclui injecção subcutânea, intramuscular, intradérmica, intravenosa, intraarticular, intra-sinovial, intra-esternal, intratecal, intra-hepática, intralesional e intracraniana ou técnicas de infusão. Numa forma de realização particular, o antagonista de EP4, anticorpo e / ou anti-metabolito é administrado por via oral. Numa outra forma de realização particular, o antagonista de EP4, anticorpo e / ou anti-metabolito é administrado por via intravenosa.

[047]Em algumas formas de realização, a quantidade do EP4 antagonista, anticorpos e / ou antimetabolito que pode ser combinada com os materiais excipientes para produzir uma composição numa única forma de dosagem irá variar dependendo do hospedeiro tratado e da via particular de administração.

[048] Em algumas concretizações, o antagonista de EP4, anticorpo e / ou anti-metabolito é fornecido como parte de uma composição / formulação estéril compreendendo o antagonista, anticorpo EP4 e / ou anti-metabolito e um veículo aceitável e / ou excipiente.

[049]Em algumas concretizações, o antagonista de EP4 é administrado ao sujeito numa quantidade eficaz. Uma quantidade eficaz é em geral de 0,01 mg / kg a 500 mg / kg de peso corporal por dia. Em algumas formas de realização, as composições farmaceuticamente aceitáveis podem ser formuladas de modo a que uma dosagem de desde 0,01 mg / kg a 200 mg / kg ou de 0,01 mg / kg a 100 mg / kg de peso corporal por dia do composto pode ser administrado a um paciente recebendo estas composições (por exemplo, com base em um humano de 75 kg, uma dosagem de desde 0,75 mg a 7,5 g ou 15 g).

[050]Em certas formas de realização, as composições da presente invenção são formuladas para proporcionar uma dosagem de desde 0,01 mg / kg a 70 mg / kg (por exemplo, com base em um 75 kg humano, uma dosagem de desde 0,75 mg até 5,25 g). Em algumas formas de realização, a dose eficaz do antagonista de EP4 é de cerca de 0,5 a cerca de 250 mg / kg, 1 a cerca de 250 mg / kg, desde cerca de 2 a cerca de 200 mg / kg, desde cerca de 3 até cerca de 120 mg / kg, desde cerca de 5 a cerca de 250 mg / kg, desde cerca de 10 a cerca de 200 mg / kg, ou desde cerca de 20 a cerca de 120 mg / kg. Em algumas formas de realização, as dosagens eficazes incluem cerca de 0,5 mg / kg, 1 mg / kg, 2 mg / kg, 3 mg / kg, 4 mg / kg, 5 mg / kg, 6 mg / kg, 8 mg / kg, 10 mg / kg, 20 mg / kg, 25 mg / kg, 40 mg / kg, 50 mg / kg, 60 mg / kg, 75 mg / kg, 100 mg / kg, 120 mg / kg, 150 mg / kg, 175 mg / kg, 200 mg / kg, 225 mg / kg, 250 mg / kg, e 300 mg / kg. As formas de dosagem pode estar na forma, por exemplo, de comprimidos ou cápsulas, e a dose eficaz pode ser fornecida em um ou mais comprimidos, cápsulas ou semelhantes, e ser fornecida uma vez por dia ou durante todo o dia, a intervalos, por exemplo, de quatro , 8 ou 12 horas. Os comprimidos ou cápsulas, por exemplo, poderia conter, por exemplo, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, ou 1.250 mg de composto. Por exemplo, a administração a um indivíduo humano do que o antagonista de EP4 em algumas formas de realização pode compreender uma dosagem diária do antagonista de EP4 na gama de 100-1,250, 150-1,000, 200-800, ou 250-750 mg, a qual dose diária pode ser administradas quer uma vez por dia na sua totalidade ou de fracções que são administradas ao longo do dia em intervalos. As formulações liquidas também podem ser preparadas de modo a que qualquer dosagem podem ser prontamente e convenientemente ser dispensado.

[051]O anticorpo, por exemplo, anti-CTLA4, anti-PDLl ou anti-PDL, irá geralmente ser misturados, antes da administração, com um não-tóxico, substância transportadora farmaceuticamente aceitável (por exemplo, solução salina normal ou solução salina tamponada com fosfato), e pode ser administrada utilizando qualquer procedimento médico adequado, por exemplo, incluindo, mas não se limitando a, administração intravenosa ou intra-arterial, injeção e no fluido cerebrospinal. Em certos casos, intradérmica intraperitoneal, intracavidade, intratecal ou a administração direta a um tumor ou para uma artéria que fornece o tumor pode ser vantajoso.

[052] Em algumas formas de realização, a dose eficaz do anticorpo é de cerca de 5 a cerca de 250 mg / kg, desde cerca de 10 a cerca de 200 mg / kg, ou desde cerca de 20 até cerca de 120 mg / kg. Em algumas formas de realização, as dosagens eficazes incluem 5 mg / kg, 10 mg / kg, 20 mg / kg, 25 mg / kg, 40 mg / kg, 50 mg / kg, 60 mg / kg, 75 mg / kg, 100 mg / kg , 120 mg / kg, 150 mg / kg, 175 mg / kg, 200 mg / kg, 225 mg / kg, 250 mg / kg, e 300 mg / kg. As formas de dosagem pode estar na forma, por exemplo, de comprimidos ou cápsulas, e a dose eficaz pode ser fornecida em um ou mais comprimidos, cápsulas ou semelhantes, e ser fornecida uma vez por dia ou durante todo o dia, a intervalos, por exemplo, de quatro , 8 ou 12 horas. Os comprimidos ou cápsulas, por exemplo, poderia conter, por exemplo, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, ou 1.000 mg de anticorpo. As formulações liquidas também podem ser preparadas de modo a que qualquer dosagem podem ser prontamente e convenientemente ser dispensado.

[053] Em algumas formas de realização, o anticorpo é administrado ao sujeito numa quantidade eficaz. Uma quantidade eficaz é em geral de 0,01 mg / kg a 500 mg / kg de peso corporal por dia. Em algumas formas de realização, as composições farmaceuticamente aceitáveis podem ser formuladas de modo a que uma dosagem de desde 0,01 mg / kg a 200 mg / kg ou de 0,01 mg / kg a 100 mg / kg de peso corporal por dia do composto pode ser administrado a um paciente recebendo estas composições (por exemplo, com base em um humano de 75 kg, uma dosagem de desde 0,75 mg a 7,5 g ou 15 g). Em certas formas de realização, as composições da presente invenção são formuladas para proporcionar uma dosagem de desde 0,01 mg / kg a 70 mg / kg (por exemplo, com base em um 75 kg humano, uma dosagem de desde 0,75 mg até 5,25 g).

[054] Uma quantidade eficaz do anticorpo pode ser, por exemplo, de 0,05 mg / kg, 0,1 mg / kg, 1 mg / kg, 2 mg / kg, 3 mg / kg, 4 mg / kg, 5 mg / kg, 6 mg / kg , 7 mg / kg ou 8 mg / kg por dose (por exemplo, com base em um humano de 75 kg, uma dose de desde 3,75 mg a 600 mg).

[055] A dosagem do anticorpo pode ser administrado uma vez, duas vezes, três vezes, quatro vezes, cinco vezes ou mais por semana, uma vez por semana, uma vez cada duas semanas, ou mesmo uma vez cada três semanas, durante o curso do tratamento. O momento da dosagem diária pode ser, uma vez de dois em dois dias, uma vez de três em três dias, uma vez a cada quatro dias, de cinco em cinco dias, semanalmente, de duas em duas semanas ou uma vez a cada três semanas. As formulações que compreendem o anticorpo pode ser preparado de modo a que qualquer dosagem podem ser prontamente e convenientemente ser dispensado.

[056] "Terapia de radiação" refere-se à utilização médica de radiação ionizante, em particular para o tratamento do câncer. De preferência, o uso médico de radiação ionizante no tratamento do câncer resulta na redução e / ou morte de células de câncer no sujeito.

[057] A terapia de radiação pode ser administrada por qualquer forma que possa ser entendido por um perito na arte. Exemplos de radiação utilizada em radioterapia incluem, mas não estão limitados a, fotão, radiação ionizante ou de partículas carregadas, tais como raios-x ou protões. Exemplos de terapia de radiação incluem, mas não estão limitados a: a terapia de radiação com feixe externo ou teleterapia; braquiterapia ou terapia fonte de feixe selado; e terapia de radioisótopos sistêmica ou radioterapia fonte sem lacre.

[058] A dose de radiação administrada pode variar, dependendo do alvo do câncer ou tumor. Em algumas modalidades, doses de radiação pode ser de 80 grays (Gy), 60 Gy, 40 Gy, 20 Gy, 12 Gy, 10 Gy, 9 Gy, 8 Gy, 7 Gy, 6 Gy, 5 Gy, 4 Gy, 3 Gy , 2 Gy ou 1 Gy, incluindo qualquer quantidade entre os indicados, e / ou faixas da mesma. Em algumas formas de realização, a dosagem é de 12 Gy, 9 Gy, 6 Gy ou 3 Gy. A dose de radiação pode ser administrada uma vez, duas vezes, três vezes, quatro vezes, cinco vezes ou mais por semana, para uma, duas, três, quatro ou cinco semanas ou mais, durante o curso do tratamento.

[059] Em algumas formas de realização, o anti-metabolito é administrado ao sujeito em uma quantidade eficaz. Uma quantidade eficaz é em geral de 0,01 mg / kg a 500 mg / kg de peso corporal por dia. Em algumas formas de realização, as composições farmaceuticamente aceitáveis podem ser formuladas de modo a que uma dosagem de desde 0,01 mg / kg a 200 mg / kg ou de 0,01 mg / kg a 100 mg / kg de peso corporal podem ser administradas a um paciente que recebe estas composições (por exemplo, , com base em um humano de 75 kg, uma dosagem de desde 0,75 mg a 7,5 g ou 15 g). Em certas formas de realização, as composições da presente invenção são formuladas para proporcionar uma dosagem de desde 0,01 mg / kg a 70 mg / kg (por exemplo, com base em um 75 kg humano, uma dosagem de desde 0,75 mg até 5,25 g).

[060] Em algumas formas de realização, a dose eficaz de anti-metabolito é desde cerca de 0,5 a cerca de 250 mg / kg, 1 a cerca de 200 mg / kg, desde cerca de 2 a cerca de 175 mg / kg, desde cerca de 3 até cerca de 150 mg / kg , desde cerca de 5 até cerca de 125 mg / kg, desde cerca de 10 a cerca de 100 mg / kg, ou desde cerca de 20 até cerca de 80 mg / kg. Em algumas formas de realização, as dosagens eficazes incluem cerca de 0,5 mg / kg, 1 mg / kg, 2 mg kg, 3 mg / kg, 4 mg / kg, 5 mg / kg, 6 mg / kg, 8 mg / kg, 10 mg / kg, 20 mg / kg, 25 mg kg, 40 mg / kg, 50 mg / kg, 60 mg / kg, 75 mg / kg, 100 mg / kg, 120 mg / kg, 150 mg / kg, 175 mg / kg, 200 mg / kg, 225 mg / kg, 250 mg / kg, e 300 mg / kg. As dosagens podem ser fornecidos, por exemplo, numa forma líquida adequada para administração parentérica (por exemplo, intravenosa) ou numa forma adequada para administração oral, por exemplo, comprimidos ou cápsulas, e a dose eficaz pode ser fornecida em um ou mais comprimidos, cápsulas ou semelhantes. Em algumas formas de realização, o anti-metabolito é administrado simultaneamente com a radiação.

[061] Os termos "anticorpo" e "anticorpos" como usados no presente docu ment são inclusivos de todos os tipos de imunoglobulinas, incluindo IgG, IgM, IgA, IgD, e IgE, ou os seus fragmentos, que podem ser apropriados para as utilizações médicas aqui descritas. Os anticorpos podem ser monoclonais ou policlonais e podem ser de qualquer espécie de origem, incluindo, por exemplo, ratinho, rato, coelho, cavalo, ou humano. Os fragmentos de anticorpo que retêm a ligação específica para a proteína ou o epítopo, por exemplo, CTLA4, ou PDLl PDL, ligadas pelo anticorpo utilizado no presente invento estão incluídas dentro do âmbito do termo anticorpo ". "Tais fragmentos podem ser produzidos por técnicas conhecidas. Os anticorpos podem ser quiméricos ou humanizados, particularmente quando eles são utilizados para fins terapêuticos. O anticorpo pode ser obtido ou preparado utilizando métodos conhecidos na arte.

[062] "Terapia de anticorpo" refere-se à utilização médica dos anticorpos que se ligam a uma célula ou proteína alvo para o tratamento do câncer e / ou estimular uma resposta imunitária em um sujeito que resulta no reconhecimento, ataque e / ou a destruição de células cancerosas no sujeito, e em algumas formas de realização da invenção, para ativar ou estimular uma resposta imune de memória em um indivíduo que resulta no reconhecimento subsequente, ataque e / ou a destruição de células cancerosas no sujeito.

[063] "Terapia de anticorpos de CTLA4" refere-se à utilização de anticorpos dirigidos contra antigénio de linfócitos citotóxicos T-4 (anti-CTLA4) na modulação de uma resposta imunitária em um indivíduo. Em algumas formas de realização, os anticorpos CTLA4 inibe ou bloqueia a ação de CTLA4 de sinalização que resulta na inibição da ativação de células T no ataque e destruição das células cancerosas. Os anticorpos adequados para esta utilização incluem, mas não estão limitados a, anticorpos que são antagonistas de CTLA4 ou os anticorpos de CTLA4, conforme estabelecido na Patente EUA N ° s. 8.685.394 e 8.709.417. Algumas formas de realização do anticorpo incluem MDX-010 (ipilimumab, Bristol-Myers Squibb) e CP- 675,206 (tremelimumabe, Pfizer). Em uma forma de realização particular, o anticorpo é ipilimumab.

[064] "Terapia de anticorpo PDLl" refere-se à utilização de anticorpos dirigidos contra o ligando morte programada 1 (anti-PDLl) na modulação de uma resposta imunitária em um indivíduo. Em algumas formas de realização, o anticorpo PDLl inibe ou bloqueia a interação de PDLl com a proteína de morte celular programada 1 (PDL), em que o bloqueio da interação entre PDLl e PDL inibe a regulação negativa da ativação de células T por PDL para atacar e destruir o câncer células. Os anticorpos adequados para esta utilização incluem, mas não estão limitados a, os anticorpos apresentados na patente EUA N ° s. 8.217.149, 8.383.796, 8.552.154 e 8.617.546. Numa forma de realização particular, o anticorpo é MPDL3280A (Roche).

[065] "Terapia de anticorpo PDL" refere-se à utilização de anticorpos dirigidos contra a proteína de morte celular programada um PDL (anti-PDL) na modulação de uma resposta imunitária em um indivíduo. Em algumas formas de realização, o anticorpo PDL inibe ou bloqueia a interação de PDL com PDLl, em que a inibição ou bloqueio da interação entre PDLl PDL e inibe a regulação negativa da ativação de células T por PDL para atacar e destruir as células cancerosas. Os anticorpos adequados para esta utilização incluem, mas não estão limitados a, os anticorpos apresentados na patente EUA de N°s. 7.029.674, 7.488.802, 7.521.051, 8.008.449, 8.354.509, 8.617.546 e 8.709.417. As concretizações particulares do anticorpo incluem MDX-1106 (nivolumab, Bristol-Myers Squibb), labrolizumab (Merck), e pembrolizumab (KEYTRUDA®, Merck).

[066] "Quimioterapia de antimetabólito" refere-se à utilização de um quimioterapêutico anti-metabolito para o tratamento de um sujeito. "Antimetabolito" refere-se a um grupo de moléculas que impedem a síntese de ADN e ARN. Exemplos de anti-metabolitos incluem, mas não estão limitados a, anti-folatos, fluoropirimidinas, análogos desoxinucleósidos e tiopurinas. Anti-folatos incluem metotrexato e pemetrexed. Fluoropirimidinas incluem fluorouracilo e capecitabina. Análogos de desoxinucleósidos incluem citarabina, gemcitabina, decitabina, 5- azacitidina (VIDAZA), fludarabina, nelarabina, cladribina, clofarabina e pentostatina. Tiopurinas incluem tioguanina e mercaptopurina. Numa forma de realização, o anti- metabolito gemcitabina é. Em uma outra forma de realização, o anti-metabolito é capecitebine.

[067]A fim de que a invenção aqui descrita possa ser mais completamente compreendida, os seguintes exemplos são apresentados. Deve ser entendido que estes exemplos são apenas para fins ilustrativos e não são para ser interpretados como limitativos desta invenção em qualquer forma.

EXEMPLOS EXEMPLO 1: TERAPIA DE COMBINAÇÃO DE ER-886046 COM RADIAÇÃO OU ANTICORPOS MATERIAIS E MÉTODOS

[068] Reagentes e Instrumentos: ER-886046 foi gerado pela Eisai Inc. (Andover, MA). O anticorpo pronto in vivo contra CTLA4 (clone 9H10) e o seu controlo de isótopo foram obtidos a partir de BioXCell (Wester Lebanon, NH); o anticorpo contra PDLl (clone 10f.9G2) e o seu controlo (clone LTF-2) foram obtidos a partir de Tonbo Bioscience (San Diego, CA); e o anticorpo contra o rato PD1 (clone RMP1-14) e o seu controlo de isotipo foram obtidos a partir de BioXcell (Wester Lebanon, NH). O metil celulose e a colagenase I foi adquirido a Sigma. anticorpos marcados com fluorescência para CD45 de murganho (clone 30-F11), CD8 (clone 53-6,7), GDI lb (clone Ml / 70), Grl (RB6-8C5 clone) foram obtidos a partir de eBioscience (San Diego, CA). A irradiador biológica X-RAD 320 da Precision X-Ray foi utilizado para a radiação tumor animal. análise de citometria de fluxo foi realizada utilizando um 6 cores BD Canto- máquina de citometria de fluxo de 1 (BD Biosciences) equipados com software FlowJo versão 7.6. O espectro IVIS foi adquirida da Perkin Elmer equipado com software de imagem viva versão 4.3.1.

[069] Linhas de células: células CT26 mouse cólon (CRL-2638), células de melanoma B16F10 (CRL- 6475) e 4T1 células da mama (CRL-2539) foram adquiridas da Tissue Culture Collection americano. Luciferase-expressando células 4T1 (4TL-luc2) foram obtidos de Perkin Elmer. Todas as células foram cultivadas em meio RPMI-1640 suplementado com soro de bovino fetal a 10% numa incubadora humidificada a 37 ° C numa atmosfera de dióxido de carbono a 5% e subcultivadas duas vezes por semana, até se obter a quantidade necessária de células para inoculação de ratinhos.

[070] Animais: ratinhos BALB / c e ratos fêmea C57BL / 6 em 4-6 semanas de idade foram adquiridos a Charles River Laboratories. Os animais foram alojados em gaiolas microisolator, até cinco por gaiola, com um ciclo de 12 h de luz / escuro. Gaiolas foram alteradas duas vezes por semana. Os animais foram observados diariamente e os sinais clínicos foram notados. Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelos laboratórios animais de Eisai Inc., ou de Southern Research Institute, que são cada AAALAC credenciados.

[071] Estudos em animais: In vitro células cancerígenas em cultura foram colhidas e suspensas em 100 μl de salino tamponado com fosfato a uma concentração celular de 1,0 x 10 células / ml e por via subcutânea (SC) injetado nos ratos, utilizando uma seringa de 26 g no dia 0. No implante de células dias pós, tal como indicado nas figuras, os ratinhos foram em blocos ao acaso com base no tamanho do tumor seguida de tratamentos com radiação a 3 ou 9 dose de Gy por tratamento, anti-PDLl a 200 ug / ratinho por injeção intraperitoneal (ip), ou anti- CTLA4 em 200 ou 100 ug / ratinho por injeção IP com ou sem administração oral de ER-886046 numa dose de 150 mg / kg. Os animais que foram atribuídos aos grupos de tratamento em estudo individual tinha significa perto pesos dos tumores em todos os grupos. Os tamanhos dos tumores foram medidos duas vezes por semana por um compasso de calibre digital (Mitutoyo Corp.), e o volume foi calculado utilizando a fórmula (1 XW 2) / 2 = mm3, onde 1 e W se referem às dimensões perpendiculares maiores e menores recolhidas em cada medição. Gráficos de tamanhos dos tumores do grupo (média ± SEM) e os pesos corporais (média ± SEM) versus tempo foram representadas graficamente utilizando o software GraphPad Prism 6 (Lake Forest, CA). teste t de Student e teste de Gehan-Breslow-Wilcoxon foram utilizados para análise estatística.

[072] No caso de reexposição do tumor de ratinhos livres de tumor após os tratamentos, as células CT26 e 4T1 células foram individualmente SC injetado nos diferentes flancos do mesmo rato, e o crescimento de cada tumor foi medida e representada graficamente como descrito acima. camundongos normais que receberam nem a injeção nem drogas tratamento de células cancerígenas foram incluídos como controles. No modelo de metástase pulmonar luc2 4T1-, as células foram inoculadas e os ratinhos portadores de tumor foram em blocos ao acaso em dia- 10 com base no tamanho dos tumores primários. No final do estudo no dia 27, os ratinhos em todos os grupos de tratamento foram administrados por via intranasal luciferina e os pulmões foram ressecados e analisadas quanto à expressão de luciferase usando instrumento IVIS. Quantificação da atividade da luciferase nos pulmões foi conseguida por software de imagem viva.

[073] Citometria de fluxo: tumores CT26 com ou sem tratamentos recebidos foram cirurgicamente ressecado e picados pela pressão física, seguindo-se a digestão com a colagenase I a 1 mg / ml a 37 ° C durante 1 h. As misturas de células individuais a partir da digestão foram marcadas por incubação com anticorpos fluorescentes contra antigénios de células imunitárias e analisadas por citometria de fluxo. cálculo população de células foi realizada pelo software Fluxo Jo 7.6.

RESULTADOS

[074] Atividade antitumoral melhorada por terapia de combinação de ER- 886046 e de radiação em comparação com a radiação por si só. Para investigar se o tratamento com ER-886046 aumenta o efeito antitumoral de radiação, tumores CT26 que foram crescidos subcutaneamente em ratinhos foram tratados com radiação local, numa dose de 9 Gy no dia-9 após implantação do tumor, seguido de uma administração oral diária de ER-886046, por um período de 4 semanas. A Figura 1, painel A mostra os tamanhos médios do tumor dos grupos de tratamento. A radiação sozinha mostraram inibição do crescimento tumoral significativa no período de 9-32 dias, seguido de um novo crescimento tumoral rápido em comparação com o grupo de controlo. Em contraste, o tratamento com ER-886046 e radiação produziu uma inibição do crescimento do tumor prolongada até ao final do estudo no dia 49, onde há um crescimento significativo do tumor foi observada em comparação com o tamanho do tumor antes dos tratamentos. A atividade antitumoral da combinação grupo foi estatisticamente significativamente melhorada em comparação com a radiação por si só. A adição de ER-886046 para o regime de tratamento não teve impacto na saúde e animal peso bruto do corpo, em comparação com a radiação sozinha (Figura 1, Painel B).

[075] Ao comparar as curvas de crescimento dos tumores individuais dos grupos de tratamento (Figura 2, Painéis AC), verificou-se que a combinação de ER- 886046 e a radiação resultou em cura em 9 de 12 ratinhos, e apenas 1 de 12 tumores teve rápido progressão. Em contraste, apenas cinco dos 11 ratos foram livres de tumor no final do estudo por tratamento com radiação por si só. Além disso, a combinação de uma dose baixa de radiação único em 3 Gy com ER-886046 aumentou significativamente a sobrevivência do animal em comparação com o tratamento quer veículo ou tratamento com radiação sozinha (Figura 3). Tomando estes resultados em conjunto, além da administração oral de ER-886046 para o tratamento de radiação aumentaram significativamente a atividade antitumoral de radiação em ambas as doses altas e baixas no modelo animal pré-clínico.

[076] Camundongos curados após o tratamento combinado com ER-886046 e radiação teve uma resposta immune antitumoral de memória. Os ratos 9 livre de tumor a partir do estudo acima foram seguidos por mais 2 meses, altura em que ainda não havia recorrência do tumor. Para testar se estes ratinhos livres de tumor a partir do tratamento de combinação tiveram uma resposta imune de memória para os tumores que foram rejeitadas, a mesma linha de células CT26 foi injetada em um outro local dos murganhos e o crescimento do tumor foi monitorizado para os 1,5 meses seguintes. Surpreendentemente, todos os ratinhos que receberam o desafio não crescer os tumores em todos os. Em contraste, a injeção da mesma quantidade de células CT26 nos animais da mesma idade produziu tumores de crescimento rápido (Figura 4, painel A). Além disso, segundo desafio de células CT26 1,5 meses após o primeiro desafio, mais uma vez, não produzem tumores detectáveis nos ratinhos curados (Figura 4, painel B). Curiosamente, a injecção de uma outra, linha de células de tumor diferente, 4T1, para os ratinhos curados mostrou nenhuma rejeição do tumor, mas a taxa de crescimento foi significativamente reduzido em comparação com o grupo de controlo (Figura 4, painel C). Estes resultados indicam claramente que os ratinhos curados por o tratamento de combinação de ER-886046 e radiação tinham gerado um antigênio tumoral de memória específico a resposta imune. A inibição do crescimento de tumores de 4T1 nos ratinhos curados indica a existência de um efeito de espalhamento epitopo nos ratinhos curados, o que é um efeito muito favorável para os pacientes tumorais.

[077] Efeito abscopal do tratamento de combinação de ER-886046 e radiação em um modelo de animal. A indução da resposta imunitária antitumoral pode ser sistémica e, portanto, altamente valiosa para o tratamento de câncer metastático, que tem múltiplas lesões em um hospedeiro. Para imitar as grandes lesões metastáticas em camundongos, nós crescemos simultaneamente tumores CT26 em ambos os lados de um ratinho individual por células cancerosas injeção subcutânea. Os tumores no lado direito dos ratos foram tratados com radiação e tanto ER- 886046. Os tumores do lado esquerdo dos ratinhos recebeu apenas ER-886046. As medições dos tumores no lado direito dos ratinhos que recebeu tanto a radiação e ER-886046 mostrou uma melhor supressão do crescimento do tumor em comparação com aqueles que receberam radiação isoladamente ou ER-886046 sozinha (Figura 5, painel A). Além disso, os tumores do lado esquerdo dos ratinhos, que recebeu nenhuma radiação e apenas ER-886046, mostrou uma taxa de crescimento de tumores significativamente reduzido em comparação com aqueles que receberam nenhum tratamento de ER-886046 (Figura 5, painel B). Estes resultados demonstraram que a combinação da radiação local e a administração sistémica de ER-886046 inibiu o crescimento de um tumor que não foi irradiado, e portanto, indicando um efeito abscopal sobre o crescimento de tumores metastáticos.

[078] Efeito metastásico anti espontâneo de ER-886046 terapia e terapia de combinação de radiação. Para testar se a combinação de ER-886046 e da radiação tem um efeito anti-metástases, de mama de rato que expressam luciferase tumores 4TL-luc2 foram crescidos subcutaneamente em ratinhos Balb / c. Os tumores primários foram tratados com veículo, ER-886046, radiação única às 9 Gy, e combinação de ER-886046 e radiação. Tratamento sobre a radiação foi administrada no dia-9, e ER-886046 foi administrado por via oral diária de 9-27 dias. No dia 27, os ratinhos em todos os grupos de tratamento foram administrados por via intranasal luciferina e os pulmões foram ressecados e analisadas quanto à expressão de luciferase. Quantificação da expressão de luciferase mostraram uma redução significativa no tratamento de combinação única (Figura 6, Painel A, Painel B), indicando de uma metástase do pulmão espontânea reduzida.

[079] Infiltração celular alterada intratumoral imune por tratamento de combinação de ER-886046 e radiação. Para investigar o impacto do tratamento de combinação de ER-886046 e radiação na imunidade intratumoral, as células imunitárias nos tumores CT26 que receberam o tratamento de combinação ou a radiação sozinha foram analisadas por citometria de fluxo. A radiação sozinha aumentou significativamente a frequência de infiltração tumoral, tanto de CD8 células T e CDI lb células mielóides, e adição de ER-886046 a radiações não teve efeito significativo na frequência adicional de ambos os tipos de células. Por outro lado, apenas o tratamento de combinação reduziu a proporção de Grl células entre CD45 CDl lb células, indicando uma frequência reduzida de células supressoras mielóides derivadas por um tratamento combinado de ER-886046 e radiação em comparação com os de veículo ou a radiação sozinha.

[080] Atividade antitumoral sinérgica de ER-886046 e anti-CTLA4 em um modelo pré-clínico. Anti-CTLA4 (ipilimumab) é agora uma terapia imune aprovado para melanoma metastático, que a sinalização de blocos de CTLA4 em células imunitárias, em especial as células T. Para investigar se o tratamento com ER- 886046 influencia a atividade antitumoral de anti-CTLA4, testámos os efeitos da terapia de combinação de ER-886046 e anti-CTLA4 em um modelo de melanoma de ratinho B16F10. Como mostrado na Figura 8, Painel A, ER-886046 sozinho tinha uma atividade mínima neste modelo, e anti-CTLA4 sozinho mostrou alguma atividade, mas não estatisticamente significativa. No entanto, a combinação de ER- 886046 e tratamento anti-CTLA4 mostrou uma atividade altamente significativa antitumoral. Sem perda de peso corporal do animal foi observado para os tratamentos de terapia de combinação. Os resultados indicaram uma atividade antitumoral sinérgica para a combinação de ER-886046 e terapia anti-CTLA4 no modelo pré-clínico.

[081]Reforçada eficácia de ER-886046 do anti-PDL e PDLl anti-câncer terapias imunológicas em um modelo pré-clínico. Anti-PDL e anti-PDLl estão atualmente em ensaios clínicos para o câncer de potencial uso terapêutico imunológico. Para explorar o potencial efeito da combinação de ER- 886046, com um ou outro agente, foi testada a terapias de combinação em TC-26 de modelo de tumor. Anti-PDLl mas mostrou alguma atividade antitumoral de crescimento não significativo (Figura 9, Painel A), enquanto que o anti-PDL exibida uma atividade significativa por si só (Figura 9, Painel B). Em ambas as situações, a adição de uma melhor atividade antitumoral produzido ER-886046 em comparação com anti-PDL ou anti-PDLl sozinho indica um benefício de ter a combinação de ER-886046 e estas terapias imunológicas à base de anticorpos para tratamento do câncer.

CONCLUSÃO

[082]Combinação de ER-886046 com a radiação, anti-CTLA4, anti-PDLl, ou anti-PDL tinha atividade antitumoral significativa em modelos animais pré-clínicos. Inclusão de ER-886046 nos tratamentos de combinação melhorada a supressão do crescimento do tumor e ainda a rejeição de tumor em comparação com um único agente ou método sozinho e, portanto, podem ter utilização terapêutica em clínica para o tratamento de doentes com câncer.

EXEMPLO 2: TERAPIA DE COMBINAÇÃO DE ER-886046 COM RADIAÇÃO E QUIMIOTERAPIA DE ANTIBETABÓLITO MATERIAIS E MÉTODOS

[083] Reagentes e Instrumentos: ER-886046 (. Chen et al britânica J Pharmacol, (2010) 160, 292-310), uma prostaglandina E2 específica do receptor de 4 antagonista, foi gerado pela Eisai Inc. (Andover, MA). O cloridrato de gencitabina e metilcelulose foram adquiridos a Sigma (St. Louis, MO). A irradiador biológica X-RAD 320 da Precision X-Ray foi utilizado para a radiação tumor animal.

[084] Linhas celulares e animais: células CT26 mouse cólon e células pancreáticas PAN02 foram adquiridos de Tissue Culture Collection americano e Instituto do Câncer DCTD Repositório Nacional, respectivamente. As células foram cultivadas em meio RPMI-1640 suplementado com soro fetal bovino a 10% numa incubadora umidificada a 37 ° C numa atmosfera de dióxido de carbono a 5% e sub- cultivadas duas vezes por semana, até se obter a quantidade necessária de células para inoculação de ratinhos. Balb / c e ratinhos fêmea C57BL / 6 de 4-6 semanas de idade foram adquiridos a Charles River Laboratories. Os animais foram alojados em gaiolas microisolator, até cinco por gaiola, com um ciclo de 12 h de luz / escuro. Gaiolas foram alteradas duas vezes por semana. Os animais foram observados diariamente e os sinais clínicos foram notados. Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê Cuidado e Uso Institucional animal de Eisai Inc. Os laboratórios animais são AAALAC credenciados.

[085] Estudos em animais: em células de câncer cultivadas in vitro foram colhidas e suspensas em 100 μl de tampão HBSS frio a concentrações de células de 1,0 x 10 células / ml (CT-26 células) ou de 1,0 x 10 células / ml ( células PAN02) e subcutaneamente (SC) injectado nos ratos, utilizando uma seringa de 26 g no dia 0. Nas datas como indicado nas figuras, os ratinhos foram distribuídos aleatoriamente com base no tamanho do tumor seguida de tratamentos com radiação local sozinho, gencitabina sozinha (administração intravenosa), ER-886046 sozinha (administração oral), ou combinações destes tratamentos. Os animais que foram atribuídos aos grupos de tratamento em estudo individual tinha significa perto pesos dos tumores em todos os grupos. Os tamanhos dos tumores foram medidos duas vezes por semana por um calibre digitais (Mitutoyo Corp.), e o volume foi calculado utilizando a fórmula (1 XW ) A = MM , onde 1 e w se referem à maior e menor perpendicular dimensões coletados em cada medição. Gráficos de tamanhos dos tumores do grupo (média ± SEM) versus tempo foram representadas graficamente utilizando o software GraphPad Prism 6 (Lake Forest, CA). ANOVA foi utilizado para cálculo estatístico entre os grupos. N = 8-10 em cada grupo de tratamento.

[086] No caso da comparação sobrevivência do animal, um animal portador de tumor cujo tumor cresceu a 10 maior do que o tamanho do tumor original antes do tratamento foi considerada ter atingido o ponto final e, assim, removido do estudo. Gráficos de percentil de sobrevivência dos animais em função do tempo foram plotados usando GraphPad Prism 6, e Logrank foi utilizado para cálculo estatístico.

RESULTADOS

[087]Atividade antitumoral superior por terapia de combinação de ER- 886046 e a quimioterapia de antimetabólito com radiação em comparação com a terapia de antimetabólito com radiação por si só. Para avaliar se a adição de ER- 886046 para a quimioterapia de antimetabólito, com radiação iria melhorar a atividade anticâncer em um modelo animal pré-clínicos, vários estudos foram realizados utilizando os tumores PAN02 pancreáticos de murino que cresceram subcutaneamente em ratinhos C57BL / 6 que receberam tratamento com RT, e gencitabina mais RT, tanto com ou sem ER-886046. No primeiro estudo, a RT e a gencitabina foi administrada uma vez no dia 27 após a inoculação de células tumorais, enquanto que ER-886046 foi administrado diariamente a partir do dia 27 até ao final do estudo. A Figura 10 mostra os tamanhos médios do tumor de grupos de tratamento deste estudo. RT mais gencitabina exibiu uma atividade de retardamento do crescimento tumoral fraco mas estatisticamente significativo. ER- 886046 sozinha foi mais eficaz do que a RT mais gencitabina. Uma combinação tripla de ER-886046, RT e gencitabina produziu a melhor atividade antitumoral entre os grupos de tratamento, e a atividade foi significativamente melhor do que a de RT mais gencitabina sozinha. Mais importante, não houve diferença significativa na atividade antitumoral entre o grupo de combinação tripla e ER-886046 acrescido grupo de RT, indicando que a maioria da atividade antitumoral da combinação tripla veio de ER-886046 e RT.

[088] Nos segundo e terceiro estudos utilizando o mesmo modelo de câncer pancreático PAN02, atividade antitumoral superior, semelhante da combinação tripla de ER-886046, RT e gencitabina foi observada em comparação com qualquer um dos tratamentos de agente único ou uma combinação de gencitabina mais RT, como mostrado na figura 11, Painéis a e B. RT e gencitabina foi administrada uma vez no dia 19 (Figura 11, painel a) ou no dia 12 (Figura 11, painel B), enquanto que ER- 886046 foi administrado diariamente a partir do dia 19 (Figura 11, painel a) ou no dia 12 (Figura 11, painel B) até ao final de cada estudo. Notavelmente, cinco de oito animais portadores de tumores foram curados por o tratamento de combinação tripla no dia 36 após a inoculação de células tumorais, ao passo que outros regimes de tratamento não produziu cura (Figura 11, painel B). Estes resultados em conjunto revelou uma sinergia entre ER- 886046 e gencitabina mais RT na contenção e / ou rejeitar tumores estabelecidos em um modelo pré-clínico.

[089] Todos os tratamentos nestes três estudos foram bem toleradas sem quaisquer mortes ou perda de peso corporal significativa.

CONCLUSÃO

[090] Os dados fornecem evidência de que a combinação de ER-886046 e a quimioterapia de antimetabólito, com radiação tinham atividade significativa de crescimento antitumoral em modelos de câncer em animais imunocompetentes. O tratamento de combinação de ER-886046 mais quimioterapia de antimetabólito por radiação aumentaram significativamente a atividade antitumoral em comparação com o tratamento com quimioterapia de antimetabólito com radiação sozinha, e, portanto, podem ter utilização terapêutica na clínica para o tratamento de câncer.

Claims (21)

1. Uso de um antagonista de EP4 em combinação com uma terapia CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de uma composição para o tratamento de câncer, em que o câncer é selecionado dentre o grupo que consiste em câncer de mama, câncer cervical, câncer colorretal, câncer de endométrio, glioblastomas, câncer de cabeça e pescoço, câncer renal, câncer de fígado, câncer de pulmão, medu- loblastoma, câncer de ovário, cânceres de pâncreas, cânceres de próstata, câncer de pele e câncer de trato urinário, em que a terapia é terapia de radiação e/ou uma terapia com anticorpos, e em que o antagonista de EP4 é ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia é terapia de radiação.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito tratamento compreende um efeito abscopal.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia é terapia com anticorpos.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia com anticorpos é selecionada dentre o grupo que consiste em: terapia com anticorpo CTLA4, terapia com anticorpo PDL1 e terapia com anticorpo PD1.

6. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é câncer metastático.

7. Uso de um antagonista de EP4 em combinação com uma terapia CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de uma composição para a geração de uma resposta imune de memória contra um câncer, em que o câncer é selecionado dentre o grupo que consiste em câncer de mama, câncer cervical, câncer colorretal, câncer de endométrio, glioblastomas, câncer de cabeça e pescoço, câncer renal, câncer de fígado, câncer de pulmão, medu- loblastoma, câncer de ovário, cânceres de pâncreas, cânceres de próstata, câncer de pele e câncer de trato urinário, em que a terapia é terapia de radiação e/ou uma terapia com anticorpos, e em que o dito antagonista de EP4 é: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia é uma terapia de radiação.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que a dita geração de resposta imune de memória compreende um efeito abscopal.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia é terapia com anticorpos.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia com anticorpos é selecionada dentre o grupo que consiste em: terapia com anticorpo CTLA4, terapia com anticorpo PDL1 e terapia com anticorpo PD1.

12. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é câncer metastático.

13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 12, CARACTERIZADO pelo fato de que a resposta imune de memória compreende propagação de epítopo.

14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda uma quimioterapia de anti- metabólito.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o antimetabólito é um análogo de desoxinucleosídeo.

16. Uso, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o análogo de desoxinucleosídeo é gemcitabina.

17. Uso, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o análogo de desoxinucleosídeo é capecitabina.

18. Uso de um antagonista de EP4 em combinação com uma quimioterapia de antimetabólito CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de uma composição para o tratamento de câncer, em que o câncer é selecionado dentre o grupo que consiste em câncer de mama, câncer cervical, câncer colorretal, câncer de endométrio, glioblastoma, câncer de cabeça e pescoço, câncer renal, câncer de fígado, câncer de pulmão, medu- loblastoma, câncer de ovário, cânceres de pâncreas, cânceres de próstata, câncer de pele e câncer de trato urinário, e em que o antagonista de EP4 é ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato de que o antimetabólito é um análogo de desoxinucleosídeo.

20. Uso, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o análogo de desoxinucleosídeo é gemcitabina.

21. Uso, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o análogo de desoxinucleosídeo é capecitabina.