BR112016012880B1

BR112016012880B1 - métodos e composições para aprimorar o rendimento de soja

Info

Publication number: BR112016012880B1
Application number: BR112016012880-0A
Authority: BR
Inventors: Marcus Jones; Gregg Bogosian
Original assignee: Newleaf Symbiotics, Inc.
Priority date: 2013-12-04
Filing date: 2014-12-04
Publication date: 2021-01-05
Also published as: WO2015085116A1; US10993443B2; BR112016012880A2; US20210321622A1; CA2932615A1; US20160302423A1

Abstract

MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA APRIMORAR O RENDIMENTO DE SOJA. Trata-se de Methylobacterium sp. de aumento de rendimento isolada, composições que compreendem Methylobacterium sp. de aumento de rendimento, métodos para usar as composições para aumentar o rendimento de plantas de soja, partes de planta e plantas de soja derivadas das mesmas e métodos para produzir as composições. Tais Methylobacterium sp. de aumento de rendimento são, em determinados casos, denominadas no presente documento simplesmente como ?Methylobacterium?. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. de aumento de rendimento pode ser distinguida de outra Methylobacterium de rendimento neutro ou rendimento negativo avaliando-se a Methylobacterium sp. quanto ao rendimento aprimorado em um ambiente controlado (isto é, uma câmara de cultura ou estufa) ou em um teste de campo em comparação a plantas de controle não tratadas.

Description

Referência Cruzada a Pedidos Relacionados

[0001] Este pedido de patente internacional reivindica o benefício do pedido de patente n° U.S. 61/911.698, depositado em 04 de dezembro de 2013.

ANTECEDENTES

[0002] Os compostos orgânicos de um carbono tais como metano e metanol são encontrados extensivamente na natureza e são utilizados como fontes de carbono por bactérias classificadas como metanotróficas e metilotróficas. As bactérias metanotróficas incluem espécies nos gêneros Methylobacter, Methylomonas, Methylomicrobium, Methylococcus, Methylosinus, Methylocystis, Methylosphaera, Methylocaldum e Methylocella (Lidstrom, 2006). Os metanotrofos possuem a enzima metano monooxigenase que incorpora um átomo de oxigênio de O2 em metano, formando metanol. Todos os metanotrofos são utilizadores de um carbono obrigatórios que não têm a capacidade de usar compostos que contêm ligações de carbono-carbono. Metilotrofos, por outro lado, podem também utilizar compostos orgânicos mais complexos, tais como ácidos orgânicos, álcoois superiores, açúcares e similares. Assim, as bactérias metilotróficas são metilotrofos facultativos. As bactérias metilotróficas incluem espécies nos gêneros Methylobacterium, Hyphomicrobium, Methylophilus, Methylobacillus, Methylophaga, Aminobacter, Methylorhabdus, Methylopila, Methylosulfonomonas, Marino sulfonomonas, Paracoccus, Xanthobacter, Ancylobacter (também conhecido como Microcyclus), Thiobacillus, Rhodopseudomonas, Rhodobacter, Acetobacter, Bacillus, Mycobacterium, Arthobacter e Nocardia (Lidstrom, 2006).

[0003] A maioria das bactérias metilotróficas do gênero Methylobacterium é pigmentada de rosa. As mesmas são convencionalmente denominadas como bactérias PPFM, sendo metilotrofos facultativos pigmentados de rosa. Green (2005, 2006) identificou doze espécies validadas no gênero Methylobacterium, especificamente M. aminovorans, M. chloromethanicum, M. dichloromethanicum, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. organophilum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. rhodinum, M. thiocyanatum e M. zatmanii. Entretanto, M. nidulans é uma Methylobacterium de fixação de nitrogênio que não é uma PPFM (Sy et al., 2001). Methylobacterium são ubíquas na natureza, sendo encontradas em solo, poeira, água fresca, sedimentos e superfícies de folha, assim como em ambientes industriais e clínicos (Green, 2006).

SUMÁRIO

[0004] São fornecidos no presente documento Methylobacterium sp. para aumento de rendimento isolada, composições que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento, métodos para usar as composições para aumentar o rendimento de plantas de soja, partes de planta e plantas de soja derivadas das mesmas e métodos para produzir as composições. Tais Methylobacterium sp. para aumento de rendimento são, em determinados casos, denominadas no presente documento simplesmente como “Methylobacterium”. Em determinadas modalidades, Methylobacterium sp. para aumento de rendimento podem ser distinguidas de outras Methylobacterium de rendimento neutro ou de rendimento negativo avaliando-se as Methylobacterium sp. quanto ao rendimento aprimorado em um ambiente controlado (isto é, uma câmara de cultura ou estufa) ou em um teste de campo em comparação às plantas de controle não tratadas ou em comparação às plantas de controle tratadas com Methylobacterium de rendimento neutro ou de rendimento negativo e combinações das mesmas. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento é um isolado de Methylobacterium selecionado a partir do grupo que consiste em ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) e derivados dos mesmos.

[0005] Os métodos para aprimorar o rendimento de planta de soja que compreendem aplicar uma composição que compreende uma Methylobacterium sp. a uma semente de soja ou a uma planta de soja ou parte da mesma uma primeira vez no estágio de desenvolvimento cerca de VE a cerca de V4; e/ou uma segunda vez no estágio de desenvolvimento cerca de V5 a cerca de R6 são fornecidos no presente documento. Em determinadas modalidades, a composição que é aplicada compreende: (a) uma substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma; ou (b) uma emulsão que tem a Methylobacterium cultivada na mesma. São também fornecidos métodos para aprimorar o rendimento de planta de soja que compreendem: (a) aplicar uma composição que compreende uma Methylobacterium sp. a uma semente de soja ou a uma planta de soja ou parte da mesma uma primeira vez no estágio de desenvolvimento cerca de VE a cerca de V4; e/ou uma primeira vez no estágio de desenvolvimento cerca de V5 a cerca de R6; em que a composição compreende: (i) uma substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma; (ii) uma emulsão que tem a Methylobacterium cultivada na mesma; ou (iii) um isolado de Methylobacterium ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos e um adjuvante ou excipiente agricolamente aceitável ou combinações dos mesmos; e, (b) cultivar a planta de soja até a maturidade, aprimorando, assim, o rendimento da planta de soja. Em determinadas modalidades, a substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma é fornecida em um líquido ou uma emulsão. Em determinadas modalidades, os métodos compreendem adicionalmente cultivar a planta de soja até a maturidade. Em determinadas modalidades, a composição é aplicada na primeira vez no estágio de desenvolvimento VE a V2, no estágio de desenvolvimento V2 a V3, estágio de desenvolvimento V3 a V4 ou no estágio de desenvolvimento cerca de V3. Em determinadas modalidades, a composição é aplicada no estágio de desenvolvimento V6 a R1, no estágio de desenvolvimento R1 a R2 ou no estágio de desenvolvimento cerca de R1. Em determinadas modalidades, a composição compreende uma substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma. Em determinadas modalidades, a composição é uma composição sólida que contém a Methylobacterium sp. em um título de cerca de 1x106 CFU/g a cerca de 1x1014 CFU/g. Em determinadas modalidades, a composição é uma composição líquida que contém a substância sólida ou uma emulsão que contém Methylobacterium sp a um título de cerca de 1x106 CFU/ml a cerca de 1x1011 CFU/ml. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é 15009 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades, a composição compreende a substância sólida ou a emulsão e em que a Methylobacterium sp. é ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é um derivado resistente a glifosato ou resistente a glufosinato de ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937) ou ISO10 (NRRL B-50938). Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é selecionada quanto à resistência a glifosato, a planta de soja é uma planta de soja tolerante a glifosato, e uma formulação que contém glifosato é também aplicada no estágio cerca de V2 a cerca de V4 de desenvolvimento de planta de soja. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é ISO09 (NRRL B-50937), 15010 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, a composição aplicada reveste ou reveste parcialmente a semente de soja ou a planta de soja ou uma parte da mesma. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, a composição é aplicada à folhagem da planta de soja. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é selecionada quanto à resistência a glifosato. Em determinadas modalidades, a planta de soja é uma planta de soja tolerante a glifosato, e uma formulação que contém glifosato é também aplicada no estágio cerca de V2 a cerca de V4 do desenvolvimento de planta de soja. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, os métodos podem compreender adicionalmente a etapa de colheita de semente da planta de soja madura. Em determinadas modalidades, o rendimento da semente colhida é aumentado em comparação ao rendimento da semente colhida obtida a partir de uma planta de soja de controle que não recebeu uma aplicação da Methylobacterium sp.

[0006] São também fornecidas plantas de soja ou partes de planta de soja que são revestidas ou parcialmente revestidas com uma composição que compreende uma Methylobacterium sp. Em determinadas modalidades, a planta de soja ou parte de planta de soja é revestida ou parcialmente revestida com uma composição que compreende um isolado de Methylobacterium sp. selecionado a partir do grupo que consiste em ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) e derivados dos mesmos. Em determinadas modalidades, a composição compreende: (i) uma substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma; ou (ii) uma emulsão que tem a Methylobacterium cultivada na mesma. Em determinadas modalidades, a composição compreende a Methylobacterium sp. em um título de cerca de 1x106 CFU/g a cerca de 1x1014 CFU/g para uma composição sólida ou a um título de cerca de 1x106 CFU/ml a cerca de 1x1011 CFU/ml para uma composição líquida que contém a substância sólida ou para a emulsão. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é o isolado de Methylobacterium que é ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades de qualquer uma das composições mencionadas anteriormente, a parte de planta de soja é selecionada a partir do grupo que consiste em uma semente, um caule, uma flor, uma folha, um pecíolo, uma vagem e um broto axilar.

[0007] São fornecidos também métodos para aprimorar o rendimento de planta de soja que compreendem: (i) aplicar uma composição que compreende uma Methylobacterium sp. a uma semente de soja ou a uma planta de soja no estágio cerca de VE a cerca de V5 do desenvolvimento de planta de soja, em que a composição compreende uma substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma ou uma emulsão que tem a Methylobacterium cultivada na mesma; e (ii) cultivar a planta de soja até a maturidade, aprimorando, assim, o rendimento da planta de soja. Em determinadas modalidades, são fornecidos métodos para aprimorar o rendimento de planta de soja que compreendem: (a) aplicar uma composição que compreende uma Methylobacterium sp. a uma semente de soja ou a uma planta de soja no estágio de cerca de VE a cerca de V5 do desenvolvimento da planta de soja, em que a composição compreende: (i) uma substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma; (ii) uma emulsão que tem a Methylobacterium cultivada na mesma; ou (iii) um isolado de Methylobacterium ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado do mesmo e um adjuvante ou excipiente agricolamente aceitável ou combinações dos mesmos; e, (b) cultivar a planta de soja até a maturidade, aprimorando, assim, o rendimento da planta de soja. Em determinadas modalidades, a composição é aplicada no estágio de desenvolvimento cerca de V2 a cerca de V3, no estágio de desenvolvimento cerca de V3 a cerca de V4 ou estágio de desenvolvimento cerca de V3. Em determinadas modalidades, a substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma é fornecida em um líquido ou uma emulsão. Em determinadas modalidades, a composição compreende a Methylobacterium sp. em um título de cerca de 1x106 CFU/g a cerca de 1x1014 CFU/g para uma composição sólida ou a um título de cerca de 1x106 CFU/ml a cerca de 1x1011 CFU/ml para uma composição líquida que contém a substância sólida ou para a emulsão. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B- 50931), ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. é o isolado de Methylobacterium ISO09 (NRRL B-50937), ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades, a composição compreende a substância sólida ou a emulsão e a Methylobacterium sp. é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02 (NRRL B- 50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937, ISO10 (NRRL B-50938) e derivados dos mesmos. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, o derivado do isolado de Methylobacterium é selecionado quanto à resistência a glifosato. Em determinadas modalidades, a planta de soja é uma planta de soja tolerante a glifosato, e uma formulação que contém glifosato é também aplicada no estágio cerca de V2 a cerca de V4 do desenvolvimento de planta de soja. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, o método compreende adicionalmente colher a semente da planta de soja madura. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, o rendimento da semente colhida é aumentado em comparação ao rendimento da semente colhida obtida a partir de uma planta de soja de controle que não recebeu uma aplicação da Methylobacterium sp.

[0008] É também fornecida no presente documento uma cepa de Methylobacterium sp. isolada ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937, ISO10 (NRRL B- 50938) ou derivado das mesmas. Composições que compreendem a cepa de Methylobacterium sp. ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937, ISO10 (NRRL B-50938) ou derivado das mesmas são também fornecidas.

[0009] São também fornecidos no presente documento métodos para aprimorar o vigor precoce de planta de soja que compreendem: (a) aplicar uma composição que compreende uma Methylobacterium sp. a uma semente de soja ou a uma planta de soja no estágio de cerca de VE a cerca de V3 do desenvolvimento da planta de soja, em que a composição compreende: (i) uma substância sólida com a Methylobacterium cultivada na mesma e aderida à mesma; (ii) uma emulsão que tem a Methylobacterium cultivada na mesma; ou (iii) um isolado de Methylobacterium ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937, ISO10 (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos e um adjuvante ou excipiente agricolamente aceitável ou combinações dos mesmos; e, (b) cultivar uma planta de soja a partir da semente ou da planta de soja ao estágio de desenvolvimento V3 a V6, aprimorando, assim, o vigor precoce da planta de soja. Em determinadas modalidades dos métodos, a composição é aplicada no estágio de desenvolvimento cerca de VE a cerca de V2, no estágio de desenvolvimento cerca de VE a cerca de V1 ou estágio de desenvolvimento VE. Em determinadas modalidades dos métodos, a composição compreende a Methylobacterium sp. em um título de cerca de 1x106 CFU/g a cerca de 1x1014 CFU/g para uma composição sólida ou a um título de cerca de 1x106 CFU/ml a cerca de 1x1011 CFU/ml para uma composição líquida que contém a substância sólida ou para a emulsão. Em determinadas modalidades dos métodos, a composição compreende o sólido ou a emulsão, e a Methylobacterium sp. é o isolado de Methylobacterium ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937, ISO1O (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades dos métodos, a composição compreende o sólido ou a emulsão, e a Methylobacterium sp. é o isolado de Methylobacterium ISO09 (NRRL B-50937, ISO1O (NRRL B-50938) ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades dos métodos, o derivado dos mesmos é selecionado quanto à resistência a um agente bactericida. Em determinadas modalidades dos métodos, o isolado de Methylobacterium é selecionado quanto à resistência a glifosato ou quanto à resistência a glufosinato. Em determinadas modalidades dos métodos, a planta de soja é uma planta de soja tolerante a glifosato, e uma formulação que contém glifosato é também aplicada no estágio cerca de V2 a cerca de V4 do desenvolvimento de planta de soja. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, o vigor da planta de soja na etapa (b) é aumentado em comparação ao vigor de uma planta de soja de controle que não recebeu uma aplicação da Methylobacterium sp. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, o vigor aumentado compreende altura aumentada, área de folha aumentada, teor de clorofila aumentado, diâmetro de talo aumentado, um estágio vegetativo avançado em uma escala de V1 a V6, volume de raiz, comprimento de raiz, número de pontas de raiz e combinações dos mesmos. Em determinadas modalidades dos métodos anteriormente mencionados, a composição aplicada reveste ou reveste parcialmente a semente de soja ou a planta de soja ou uma parte da mesma.

DESCRIÇÃO DEFINIÇÕES

[0010] Conforme usado no presente documento, as frases “aderido ao mesmo” e “aderente” referem-se às Methylobacterium que são associadas a uma substância sólida pela cultura ou que têm sido cultivadas em uma substância sólida.

[0011] Conforme usado no presente documento, a frase “adjuvante agricolamente aceitável” refere-se a uma substância que aumenta o desempenho de um agente ativo em uma composição para o tratamento de plantas e/ou partes de planta. Em determinadas composições, um agente ativo pode compreender uma monocultura ou cocultura de Methylobacterium.

[0012] Conforme usado no presente documento, a frase “excipiente agricolamente aceitável” refere-se a uma substância essencialmente inerte que pode ser usada como um diluente e/ou carreador para um agente ativo em uma composição para o tratamento de plantas e/ou partes de planta. Em determinadas composições, um agente ativo pode compreender uma monocultura ou cocultura de Methylobacterium.

[0013] Conforme usado no presente documento, o termo “Methylobacterium” refere-se a bactérias que são metilotrofos facultativos do gênero Methylobacterium. O termo Methylobacterium, conforme usado no presente documento, não abrange, assim, espécies nos gêneros Methylobacter, Methylomonas, Methylomicrobium, Methylococcus, Methylosinus, Methylocystis, Methylosphaera, Methylocaldum e Methylocella que são metanotrofos obrigatórios.

[0014] Conforme usado no presente documento, a frase “planta de controle” refere-se a uma planta que não recebeu tratamento com um uma Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce ou composição que compreende a mesma na semente ou em qualquer estágio subsequente do desenvolvimento da planta de controle. Em determinadas modalidades, uma planta de controle pode ser uma planta que foi tratada com uma Methylobacterium sp. de rendimento neutro.

[0015] Conforme usado no presente documento, a frase “cocultura de Methylobacterium” refere-se a uma cultura de Methylobacterium que compreende pelo menos duas cepas de Methylobacterium ou pelo menos duas espécies de Methylobacterium.

[0016] Conforme usado no presente documento, a frase “micro-organismo contaminante” refere-se a micro-organismos em uma cultura, caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composição que não foram identificados antes da introdução na cultura, caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composição.

[0017] Conforme usado no presente documento, a frase “derivados do mesmo", quando usada no contexto de um isolado de Methylobacterium, refere-se a qualquer cepa que é obtida a partir do isolado de Methylobacterium. Derivados de um isolado de Methylobacterium incluem, porém, sem limitação, variantes da cepa obtidas por seleção, variantes da cepa selecionadas por mutagênese e seleção e uma cepa geneticamente transformada obtidas a partir do isolado de Methylobacterium.

[0018] Conforme usado no presente documento, a frase “vigor de soja precoce” ou “vigor precoce”, quando usada no contexto de aplicar composições que contêm Methylobacterium a sementes de soja, plantas ou partes de plantas, refere-se a qualquer característica de crescimento de uma planta de soja no estágio de desenvolvimento V3 a V6 que é indicativa do crescimento aprimorado em comparação a uma planta de soja não tratada. Tais características de crescimento podem incluir, porém, sem limitação, altura aumentada, área de folha aumentada, teor de clorofila aumentado, diâmetro de talo aumentado, um estágio vegetativo avançado em uma escala de V1 a V6, volume de raiz aumentado, comprimento de raiz aumentado, número de pontas de raiz aumentado e combinações dos mesmos.

[0019] Conforme usado no presente documento, o termo “emulsão” refere-se a uma mistura coloidal de dois líquidos imiscíveis em que um líquido é a fase contínua e o outro líquido é a fase dispersa. Em determinadas modalidades, a fase contínua é um líquido aquoso, e a fase dispersa é o líquido que não é miscível, ou parcialmente miscível, no líquido aquoso.

[0020] Conforme usado no presente documento, a frase “essencialmente livre e micro-organismos contaminantes” refere-se a uma cultura, caldo de fermentação, produto de fermentação ou composição em que pelo menos cerca de 95% dos micro-organismos presentes por quantidade ou tipo na cultura, caldo de fermentação, produto de fermentação ou composição são a Methylobacterium desejada ou outros micro- organismos desejados de identidade predeterminada.

[0021] Conforme usado no presente documento, a frase “substância sólida inanimada” refere-se a uma substância que é insolúvel ou parcialmente solúvel em água ou soluções aquosas e que é ou não viva ou não é uma parte de um organismo ainda vivo do qual a mesma foi derivada.

[0022] Conforme usado no presente documento, a frase “monocultura de Methylobacterium” refere-se a uma cultura de Methylobacterium que consiste em uma única cepa de Methylobacterium.

[0023] Conforme usado no presente documento, o termo “peptídeo” refere-se a qualquer polipeptídeo de 50 resíduos de aminoácidos ou menos.

[0024] Conforme usado no presente documento, o termo “proteína” refere-se a qualquer polipeptídeo que tem 51 ou mais resíduos de aminoácidos.

[0025] Conforme usado no presente documento, um “pesticida” refere-se a um agente que é inseticida, fungicida, nematocida, bactericida ou qualquer combinação dos mesmos.

[0026] Conforme usado no presente documento, a frase “agente bacteriostático” refere-se a agentes que inibem a cultura de bactérias, mas não exterminam as bactérias.

[0027] Conforme usado no presente documento, a frase “o pesticida não inibe substancialmente a cultura da dita Methylobacterium” refere-se a qualquer pesticida que, quando fornecido em uma composição que compreende um produto de fermentação que compreendem uma substância sólida a qual uma monocultura ou cocultura de Methylobacterium é aderida, resulta em uma inibição não maior do que 50% da cultura de Methylobacterium quando a composição é aplicada a uma planta ou parte de planta em comparação a uma composição que não tem o pesticida. Em determinadas modalidades, o pesticida resulta em uma inibição não maior do que 40%, 20%, 10%, 5% ou 1% da cultura de Methylobacterium quando a composição é aplicada a uma planta ou parte de planta em comparação a uma composição que não tem o pesticida.

[0028] Conforme usado no presente documento, o termo “bactérias PPFM” refere-se, sem limitação, a espécies bacterianas no gênero Methylobacterium em vez de M. nodularis.

[0029] Conforme usado no presente documento, a frase “substância sólida” refere-se a uma substância que é insolúvel ou parcialmente solúvel em água ou soluções aquosas.

[0030] Conforme usado no presente documento, a frase “fase sólida que pode ser suspensa no mesmo” refere-se a uma substância sólida que pode ser distribuída por todo um líquido por agitação.

[0031] Conforme usado no presente documento, o termo “não regenerável” refere-se ou a uma parte de planta ou a um produto de planta processado que não pode ser regenerado em uma planta inteira.

[0032] Conforme usado no presente documento, a frase “substancialmente toda a fase sólida é suspensa na fase líquida” refere-se a meios em que pelo menos 95%, 98% ou 99% da(s) substância(s) sólida(s) que compreende(m) a fase sólida é(são) distribuída(s) por todo o líquido por agitação.

[0033] Conforme usado no presente documento, a frase “substancialmente toda a fase sólida não é suspensa na fase líquida” refere-se a meios em que menos do que 5%, 2% ou 1% do sólido está em uma forma particulada que é distribuída por todo o meio por agitação.

[0034] Na medida em que qualquer uma das definições anteriores for inconsistente com as definições fornecidas em qualquer referência de patente ou não patente incorporada no presente documento a título de referência, qualquer referência de patente ou não patente citada no mesmo ou em qualquer referência de patente ou não patente encontrada em outro lugar, entende-se que a definição anterior será usada no presente documento. METHYLOBACTERIUM PARA AUMENTO DE RENDIMENTO OU VIGOR PRECOCE, COMPOSIÇÕES QUE COMPREENDEM METHYLOBACTERIUM PARA AUMENTO DE RENDIMENTO OU VIGOR PRECOCE, MÉTODOS DE SEU USO E MÉTODOS DE PRODUÇÃO

[0035] Vários isolados Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce, composições que compreendem essas Methylobacterium, métodos para usar as composições para melhorar o rendimento de planta de soja e/ou vigor precoce e métodos para produzir as composições são fornecidos no presente documento. Quantidades das composições que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento suficientes para fornecer o rendimento de planta de soja aumento podem ser determinadas medindo-se quaisquer ou todas as alterações no rendimento em relação a plantas ou partes de planta não tratadas. Em determinadas modalidades, o rendimento pode ser avaliado medindo-se a saída da semente em uma base por unidade de área (isto é, alqueires por acre, quilogramas por hectare e similares), em que as plantas tratadas com Methylobacterium sp para aumento de rendimento ou plantas cultivadas a partir de sementes tratadas com Methylobacterium sp são cultivadas aproximadamente na mesma densidade que as plantas de controle. Em determinadas modalidades, o rendimento pode ser avaliado medindo-se a saída em uma base por planta ou por parte de planta (gramas de semente por planta, gramas de semente por espiga, caroços por planta, caroços por espiga e similares) das plantas tratadas com Methylobacterium sp para aumento de rendimento em comparação a plantas de controle não tratadas.

[0036] Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce isoladas são fornecidas no presente documento. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium é selecionada a partir do grupo que consiste em M. aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodularis, M. phyllosphaerae, M. thiocyanatum e M. oryzae. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium não é M. radiotolerans ou M. oryzae. Em determinadas modalidades, o isolado de Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é selecionado a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO09, ISO10 e derivados dos mesmos. Em determinadas modalidades, o isolado de Methylobacterium para aumento de rendimento pode aumentar o rendimento quando aplicado antes ou durante os estágios reprodutivos do desenvolvimento de soja e é um selecionado a partir do grupo que consiste em ISO09, ISO10 e derivados dos mesmos. Em determinadas modalidades, o isolado de Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce pode aumentar o rendimento ou vigor precoce quando aplicado a uma semente de soja ou em estágios vegetativos do desenvolvimento de soja e é selecionado a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO10 e derivados dos mesmos. Em determinadas modalidades, o Methylobacterium para aumento de rendimento fornece aumentos de pelo menos cerca de 2%, pelo menos cerca de 5%, pelo menos cerca de 10% ou pelo menos cerca de 15% no rendimento de uma planta tratada ou uma planta que surge de uma semente tratada em comparação a plantas de controle não tratadas ou plantas cultivadas a partir de sementes não tratadas. Em determinadas modalidades, o Methylobacterium para aumento de rendimento fornece aumentos de pelo menos cerca de 2% ou pelo menos cerca de 5% a pelo menos cerca de 10% ou pelo menos cerca de 20% no rendimento de uma planta tratada ou uma planta cultivada a partir de uma semente tratada em comparação a plantas de controle não tratadas ou plantas que surgem de sementes não tratadas.

[0037] Em determinadas modalidades, a Methylobacterium não é M. radiotolerans ou M. oryzae. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce fornece aumentos no rendimento ou vigor precoce aprimorado quando aplicada a uma semente. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium para aumento de rendimento fornece aumentos no rendimento quando aplicada logo antes ou durante os estágios reprodutivos do desenvolvimento de soja. Em determinadas modalidades de qualquer uma das composições mencionadas anteriormente, a composição compreende uma substância sólida em que uma monocultura ou cocultura de Methylobacterium é adicionada à mesma. Em determinadas modalidades em que a Methylobacterium é aderida a uma substância sólida, a composição compreende um coloide formado pela substância sólida em que uma monocultura ou cocultura de Methylobacterium é aderida à mesma e um líquido. Em determinadas modalidades, o coloide é um gel. Em determinadas modalidades de determinadas composições mencionadas anteriormente, a composição é uma emulsão que não contém uma substância sólida. Em determinadas modalidades de qualquer uma das composições mencionadas anteriormente, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO09, ISO10 e derivados das mesmas.

[0038] Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce isolada pode ser identificada tratando-se uma planta, uma semente, o solo no qual a planta ou uma planta que surge de uma semente é cultivada, ou outro meio de crescimento de planta no qual a planta ou uma planta que surge da semente é cultivada e avaliando o rendimento aumentado ou vigor precoce aprimorado.

[0039] Em determinadas modalidades, semente de soja ou sojas nos estágios vegetativos de desenvolvimento são tratados com a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce. Os estágios vegetativos da soja são conforme segue: VE (emergência), VC (estágio de cotilédone), V1 (primeira folha trifoliada), V2 (segunda folha trifoliada), V3 (terceira folha trifoliada), V4 (quarta folha trifoliada), até V(n) (n-ésima folha trifoliada, em que o número final de folhas trifoliadas depende da variedade de soja e das condições ambientais). Uma descrição dos estágios vegetativos de soja pode ser encontrada na rede mundial de computadores (internet) em extension.agron.iastate.edu/soybean/production_growthstages .html e em “Soybean Growth and Development”, Pedersen, P., Iowa State University Extension e Publicação de difusão PM 1945, dezembro de 2009). Em determinadas modalidades, as Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce são aplicadas no estágio de desenvolvimento cerca de VE a cerca de V4, V5, V6, ou Vn, em que n é o número de folhas trifoliadas presentes imediatamente antes da entrada nos estágios reprodutivos de desenvolvimento. Em determinadas modalidades, as Methylobacterium sp. para aumento de rendimento são aplicadas no estágio de desenvolvimento cerca de VC, V1, V2 ou V3 a cerca de V4, V5, V6 ou Vn, em que n é o número de folhas trifoliadas presentes imediatamente antes da entrada nos estágios reprodutivos de desenvolvimento. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce que é aplicada à semente ou durante o estágio vegetativo é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO10 e derivados dos mesmos.

[0040] Em determinadas modalidades, as Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce são aplicadas antes, durante ou após a aplicação de glifosato a uma planta de soja transgênica que é tolerante a glifosato. As formulações de glifosato comercialmente disponíveis que podem ser usadas incluem, porém, sem limitação, Roundup Original MAX®, Roundup PowerMAX®, Roundup UltraMax® ou RoundUp WeatherMAX® (Monsanto Co., St. Louis, MO., EUA); Touchdown IQ® ou Touchdown Total® (Syngenta, Wilmington, Delaware, EUA); Glyphomax®, Glyphomax Plus®, ou Glyphomax XRT® (Dow Agrosciences LLC, Indianapolis, IN, EUA). As plantas de soja são tipicamente aspergidas com glifosato no estágio vegetativo de desenvolvimento cerca de V3 a V4. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce que é aplicada antes, durante ou após a aplicação de glifosato é uma Methylobacterium que é selecionada quanto à resistência a glifosato. As seleções para bactérias resistentes a glifosato que foram descritas (Comai et al., Science 221(4608):370 e 371) podem ser adaptadas para a seleção de Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce que são resistentes a glifosato. A seleção e o uso de Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce resistente a glifosato de populações mutagenizadas ou outras de Methylobacterium tais como ISO02, ISO03, ISO09 e ISO10 são fornecidos no presente documento.

[0041] Em determinadas modalidades, a semente de soja ou sojas nos estágios vegetativos finais a estágios reprodutivos do desenvolvimento são tratados com a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento. Os estágios vegetativos finais da soja são os estágios V5 ou V6 a V(n) (n-ésima folha triofoliada, em que o número final de folhas triofoliadas depende da variedade de soja e das condições ambientais). Os estágios reprodutivos do desenvolvimento de soja são: R1 (começando a florescer-pelo menos uma flor em qualquer nó); R2 (florescimento total- uma flor aberta em um dos nós superiores); R3 (começando a formar vagens - as vagens têm 5 mm em um dos quatro nós superiores); R4 (vagem completa- vagens em 2 cm em um dos quatro nós superiores); R5 (Começando a semear- a semente tem 3 mm de comprimento na vagem em um dos quatro nós superiores no caule principal); R6 (semente completa- a vagem que contém uma semente verde que preenche a capacidade de vagem em um dos quatro nós superiores no caule principal); R7 (começando a maturidade- uma vagem normal no caule principal alcançou sua cor de vagem madura); e R8 (maturidade completa- 95% das vagens alcançaram sua cor completamente madura. Uma descrição dos estágios reprodutivos e vegetativos da soja pode ser encontrada na rede mundial de computadores (internet) em extension.agron.iastate.edu/soybean/production_growthstages .html e in “Soybean Growth and Development”, Pedersen, P., Iowa State University Extension e Publicação de divulgação PM 1945, dezembro de 2009). Em determinadas modalidades, as Methylobacterium sp. para aumento de rendimento são aplicadas no estágio de desenvolvimento cerca de V5, V6 ou Vn, em que n é o número de folhas trifoliadas presentes imediatamente antes da entrada nos estágios reprodutivos de desenvolvimento, ao estágio de desenvolvimento cerca de R2, R3, R4, R5 ou R6. Em determinadas modalidades, as Methylobacterium sp. para aumento de rendimento são aplicadas no estágio de desenvolvimento cerca de V5, V6 ou Vn ao estágio de desenvolvimento cerca de R2, R3 ou R4. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium para aumento de rendimento que é aplicada ao estágio vegetativo ou reprodutivo final é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO09 e ISO10.

[0042] Vários isolados de Methylobacterium sp. fornecidos no presente documento são revelados na Tabela 1. TABELA 1. ISOLADOS DE Methylobacterium sp.

[0043] 1Número de depósito para a cepa depositada com AGRICULTURAL RESEARCH SERVICE CULTURE COLLECTION (NRRL) do Centro Nacional para Pesquisa de Utilização Agrícola, Serviço de Pesquisa Agrícola, Departamento de Agricultura dos EUA, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 E.U.A. sob os termos do Tratado de Budapeste no Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para os Propósitos do Procedimento de Patente. Submetido a 37 CFR § 1.808(b), todas as restrições impostas pelo depositante sobre a disponibilidade ao público do material depositado serão irrevogavelmente removidas mediante a concessão de qualquer patente a partir deste pedido de patente.

[0044] Os pedidos de patente codesignados que revelam usos específicos adicionais das cepas de Methylobacterium da Tabela 1 tais como: (1) aumentar o rendimento de milho (US 61/911780, depositado em 4/12/2013; e Pedido Internacional que reivindica o benefício do mesmo depositado em 4/12/2014); (2) melhorar o cultivo de alface (Pedido de Patente Internacional PCT/US 14/68558 depositado em 4/12/2014); e (3) melhorar o crescimento de tomate (Pedido de Patente Internacional PCT/US14/68611 depositado em 4/12/2014) e são incorporados no presente documento a título de referência em suas totalidades. São especificamente incorporadas no presente documento a título de referência em suas totalidades as sequências de ácidos nucleicos genômicos e aminoácidos da Methylobacterium sp. NLS017, NLS020, NLS037, NLS042, NLS065 e NLS066 que são reveladas no Pedido de Patente Internacional PCT/US 14/68558 depositado em 12/4/2014. São também especificamente incorporadas no presente documento a título de referência em suas totalidades as sequências de ácidos nucleicos genômicos e aminoácidos de NLS017 e NLS066 reveladas no Pedido de Patente Internacional PCT/US 14/68611, depositado em 12/4/2014. Tais sequências de ácidos nucleicos genômicos e aminoácidos podem ser usadas para identificar as composições, partes de planta, sementes de planta ou produtos de planta processados fornecidos no presente documento que compreendem s Methylobacterium sp. NLS017 ou NLS020.

[0045] São também fornecidos no presente documento métodos para aprimorar o rendimento e/ou vigor precoce de soja que compreendem aplicar qualquer uma das composições mencionadas anteriormente fornecidas no presente documento a uma planta ou uma parte de planta em uma quantidade que fornece rendimento de soja aumentado na planta, parte de planta ou uma planta obtida a partir da mesma em relação à infecção de uma planta de controle, parte de planta ou planta obtida a partir da mesma que não recebeu uma aplicação da composição. Em determinadas modalidades, a aplicação da composição fornece pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 85% ou pelo menos cerca de 95% de rendimento de soja aumentado na planta, parte de planta ou uma planta derivada da mesma em relação à infecção da planta de controle, parte de planta ou uma planta obtida a partir da mesma. Em determinadas modalidades, a parte de planta é selecionada a partir do grupo que consiste em uma folha, um caule, uma flor, uma raiz, um tubérculo e uma semente. Em determinadas modalidades, o método compreende adicionalmente a etapa de colher pelo menos uma parte de planta selecionada a partir do grupo que consiste em uma folha, um caule, uma flor, uma raiz, uma vagem ou uma semente da planta ou parte de planta. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, os métodos compreendem adicionalmente obter um alimento processado ou composição alimentar a partir da planta ou parte de planta. Em determinadas modalidades, o alimento processado ou composição alimentar é uma ração ou uma pasta. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos mencionados anteriormente, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO09, ISO10 e derivados das mesmas. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada antes ou durante os estágios reprodutivos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento é ISO09, ISO10 ou um derivado das mesmas. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada à semente ou durante os estágios vegetativos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é ISO02, ISO03, ISO10 ou um derivado das mesmas.

[0046] São também fornecidos métodos para produzir as composições úteis para aprimorar o rendimento de soja que compreendem combinar uma Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce com um excipiente agricolamente aceitável e/ou com um adjuvante agricolamente aceitável. Em determinadas modalidades dos métodos, a Methylobacterium sp. é selecionada a partir do grupo que consiste em aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodularis, M. phyllosphaerae, M thiocyanatum e M. oryzae. Em determinadas modalidades dos métodos, a Methylobacterium não é M. radiotolerans ou M. oryzae. Em determinadas modalidades dos métodos, a Methylobacterium é aderida a uma substância sólida. Em determinadas modalidades dos métodos, a Methylobacterium é aderida à substância sólida é combinada com um líquido para formar uma composição que é um coloide. Em determinadas modalidades dos métodos, o coloide é um gel. Em determinadas modalidades dos métodos, a Methylobacterium aderida à substância sólida é fornecida cultivando-se a Methylobacterium na presença da substância sólida. Em determinadas modalidades dos métodos, uma composição compreende uma emulsão. Em determinadas modalidades dos métodos, a Methylobacterium é fornecida cultivando-se a Methylobacterium em uma emulsão. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos mencionados anteriormente, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO09 e ISO10. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada antes ou durante os estágios reprodutivos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO09 e ISO10. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada à semente ou durante os estágios vegetativos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é ISO02, ISO03 e ISO10.

[0047] Os métodos em que as Methylobacterium são cultivadas em meios bifásicos que compreendem uma fase líquida e uma substância sólida revelaram aumentar significativamente o rendimento resultante das Methylobacterium em relação aos métodos em que as Methylobacterium são cultivadas em meios líquidos sozinhas. Em determinadas modalidades, os métodos podem compreender cultivar as Methylobacterium em meios líquidos com uma substância sólida particulada que pode ser suspensa no líquido por agitação sob condições que fornecem a cultura de Methylobacterium. Em determinadas modalidades em que as substâncias sólidas particuladas são usadas, pelo menos substancialmente toda a fase sólida pode ser, assim, suspensa na fase líquida mediante agitação. Tais substâncias sólidas particuladas podem compreender materiais que têm cerca de 1 milímetro ou menos de comprimento ou diâmetro. Em determinadas modalidades, o grau de agitação é suficiente para fornecer a distribuição uniforme da substância sólida particulada na fase líquida e/ou níveis ideais de aeração de cultura. Entretanto, em outras modalidades fornecidas no presente documento, pelo menos substancialmente toda a fase sólida não é suspensa na fase líquida ou porções da fase sólida são suspensas na fase líquida e porções da fase sólida não são suspensas na fase líquida. As substâncias sólidas não particuladas podem ser usadas em determinados meios bifásicos em que a fase sólida não é suspensa na fase líquida. Tais substância sólidas não particuladas incluem, porém, sem limitação, materiais que são maiores do que cerca de 1 milímetro de comprimento ou diâmetro. Tais substância sólidas particuladas e não particuladas também incluem, porém, sem limitação, materiais que são porosos, fibrosos ou configurados de outro modo para fornecer áreas superficiais aumentadas para a cultura aderente da Methylobacterium. Os meios bifásicos em que porções da fase sólida são suspensas na fase líquida e porções da fase sólida não são suspensas na fase líquida podem compreender uma mistura de substância sólidas particuladas e não particuladas. Tais substância sólidas particuladas e não particuladas usadas em qualquer um dos meios bifásicos mencionados anteriormente podem incluir, porém, sem limitação, materiais que são porosos, fibrosos ou configurados de outro modo para fornecer áreas superficiais aumentadas para a cultura aderente da Methylobacterium. Em determinadas modalidades, o meio compreende um coloide formado por uma fase sólida e uma líquida. Um coloide que compreende um sólido e um líquido pode ser pré-formado e adicionado ao meio líquido ou pode ser formado no meio que contém um sólido e um líquido. Os coloides que compreendem um sólido e um líquido podem ser formados submetendo-se determinadas substâncias sólidas a uma alteração química e/ou térmica. Em determinadas modalidades, o coloide é um gel. Em determinadas modalidades, a fase líquida do meio é uma emulsão. Em determinadas modalidades, a emulsão compreende um líquido aquoso e um líquido que não é miscível ou apenas parcialmente miscível no líquido aquoso. Os líquidos que não são miscíveis ou apenas parcialmente miscíveis em água incluem, porém, sem limitação, qualquer um dos seguintes: (1) líquidos que tem uma miscibilidade em água que é igual ou menor do que esta do pentanol, hexanol ou heptanol a 25 graus C; (2) líquidos que compreendem um álcool, um aldeído, uma cetona, um ácido graxo, um fosfolipídio ou qualquer combinação dos mesmos; (3) álcoois selecionados a partir do grupo que consiste em álcoois alifáticos que contêm pelo menos 5 carbonos e esteróis; (4) um óleo animal, óleo microbiano, óleo sintético, óleo vegetal ou combinação dos mesmos; e/ou (5) um óleo vegetal é selecionado a partir do grupo que consiste em soja, soja, algodão, amendoim, girassol, oliva, linhaça, coco, palma, colza, semente de gergelim, açafrão e combinações dos mesmos. Em determinadas modalidades, o líquido imiscível ou parcialmente imiscível pode compreender pelo menos cerca de 0,02% a cerca de 20% da fase líquida em massa. Em determinadas modalidades, os métodos podem compreender obter um meio de cultura bifásico que compreende o líquido, o sólido e Methylobacterium e incubar a cultura sob condições que fornecem a cultura da Methylobacterium. Os meios de cultura bifásicos que compreendem o líquido, o sólido e a Methylobacterium podem ser obtidos por uma variedade de métodos que incluem, porém, sem limitação, qualquer um dentre: (a) inocular um meio bifásico que compreende o líquido e a substância sólida com Methylobacterium; (b) inocular a substância sólida com Methylobacterium e, então, introduzir a substância sólida que compreende a Methylobacterium no meio líquido; (c) inocular a substância sólida com Methylobacterium, incubar a Methylobacterium na substância sólida e, então, introduzir a substância sólida que compreende a Methylobacterium no meio líquido; ou (d) qualquer combinação de (a), (b) ou (c). Os métodos e as composições para cultivar a Methylobacterium em meio bifásico que compreende um líquido e um sólido são revelados no Pedido de Patente codesignado n° US 13/907.161, depositado em 31 de maio de 2013, que é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade, e no Pedido de Patente Internacional codesignado PCT/US 13/43722, depositado em 31 de maio de 2013, que é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.

[0048] Os métodos em que as Methylobacterium são cultivadas no meio que compreende uma emulsão também revelaram aumentar significativamente o rendimento resultante das Methylobacterium em relação a métodos em que as Methylobacterium são cultivadas em meio líquido apenas. Em determinadas modalidades, os métodos para produzir as composições fornecidos no presente documento podem compreender cultivar o agente de Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor em uma emulsão sob condições que fornecem a cultura de Methylobacterium. Os meios que compreendem a emulsão e a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce podem ser obtidos por uma variedade de métodos que incluem, porém, sem limitação, qualquer um dentre: (a) inocular um meio que compreende a emulsão com Methylobacterium; (b) inocular o líquido aquoso com a Methylobacterium, introduzir o líquido não aquoso e misturar para formar uma emulsão; (c) inocular o líquido aquoso com a Methylobacterium, introduzir o líquido não aquoso e misturar para formar uma emulsão; ou (d) qualquer combinação de (a), (b) ou (c). Em determinadas modalidades, a emulsão compreende um líquido aquoso e um líquido que não é miscível ou apenas parcialmente miscível no líquido aquoso. Os líquidos não aquosos que não são miscíveis ou apenas parcialmente miscíveis em água incluem, porém, sem limitação, qualquer um dos seguintes: (1) líquidos que têm uma miscibilidade em água que é igual ou menor do que aquela do n-pentanol, n-hexanol ou n-heptanol a 25 graus C; (2) líquidos que compreendem um álcool, um aldeído, uma cetona, um ácido graxo, um fosfolipídio ou qualquer combinação dos mesmos; (3) álcoois selecionados a partir do grupo que consiste em álcoois alifáticos que contêm pelo menos 5, 6 ou 7 carbonos e esteróis; (4) um óleo animal, óleo microbiano, óleo sintético, óleo vegetal ou combinação dos mesmos; e/ou (5) um óleo vegetal é selecionado a partir do grupo que consiste em soja, soja, algodão, amendoim, girassol, oliva, linhaça, coco, palma, colza, semente de gergelim, açafrão e combinações dos mesmos. Em determinadas modalidades, o líquido não aquoso imiscível ou parcialmente imiscível pode compreender pelo menos cerca de 0,02% a cerca de 20% da emulsão em massa. Em determinadas modalidades, o líquido não aquoso imiscível ou parcialmente imiscível pode compreender pelo menos cerca de qualquer um dentre cerca de 0,05%, 0,1 %, 0,5% ou 1% a cerca de 3%, 5%, 10% ou 20% da emulsão em massa. Os métodos e as composições para cultivar a Methylobacterium em meio que compreende uma emulsão são revelados no Pedido de Patente Internacional codesignado PCT/US2014/040218, depositado em 30 de maio de 2014, que é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.

[0049] Em determinadas modalidades, o caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composições que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce podem compreender adicionalmente um ou mais micro-organismos de identidade predeterminada diferente da Methylobacterium. Outros micro-organismos que podem ser adicionados incluem, porém, sem limitação, micro- organismos que são biopesticidas ou fornecem algum outro benefício quando aplicados a uma planta ou parte de planta. Os biopesticidas micro-organismos benéficos de outo modo incluem assim, porém, sem limitação, vários biopesticidas de Bacillus sp., Pseudomonas sp., Coniothyrium sp., Pantoea sp., Streptomyces sp. e Trichoderma sp. Microbial que podem ser uma bactéria, fungo, vírus ou protozoário. Os micro- organismos biopesticidas particularmente úteis incluem várias cepas de Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus pumilis, Pseudomonas syringae, Trichoderma harzianum, Trichoderma virens e Streptomyces lydicus. Outros micro-organismos que são adicionados podem ser isolados geneticamente modificados ou de ocorrência natural que estão disponíveis como culturas puras. Em determinadas modalidades, antecipa-se que o micro-organismo bacteriano ou fúngico pode ser fornecido no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composição na forma de um esporo.

[0050] Em determinadas modalidades, o meio de cultura líquido é preparado a partir de componentes não custosos e prontamente disponíveis, incluindo, porém, sem limitação, sais inorgânicos tais como fosfato de potássio, sulfato de magnésio e similares, fontes de carbono tais como glicerol, metanol, ácido glutâmico, ácido aspártico, ácido succínico e similares e mesclas de aminoácidos tais como peptona, triptona e similares. Os meios líquidos exemplificativos que podem ser usados incluem, porém, sem limitação, meio de sais minerais de amônio (AMS) (Whittenbury et al., 1970), meio de cultura mínima de Vogel-Bonner (VB) (Vogel e Bonner, 1956) e caldo LB (“Caldo de Luria - Bertani”).

[0051] Geralmente, a substância sólida usada nos métodos e composições que fornecem cultura suficiente da Methylobacterium pode ser qualquer substância sólida adequada que é insolúvel ou apenas parcialmente solúvel em água ou soluções aquosas. Tais substâncias sólidas adequadas são também não bactericidas ou não bacterioestáticas em relação à Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce quando as substâncias sólidas são fornecidas no meio de cultura líquido. Em determinadas modalidades, tais substâncias sólidas adequadas são também substâncias sólidas que são prontamente obtidas em forma estéril ou tornadas estéreis. As substâncias sólidas usadas no presente documento podem ser esterilizadas por qualquer método que fornece a remoção de micro-organismos contaminantes e, assim, incluem, porém, sem limitação, métodos tais como autoclavagem, irradiação, tratamento químico e qualquer combinação dos mesmos. Essas substâncias sólidas incluem substâncias naturais de origem animal, vegetal, microbiana, fúngica ou mineral, substâncias artificiais ou combinações de substâncias naturais e artificiais. Em determinadas modalidades, as substâncias sólidas são substâncias sólidas inanimadas. As substâncias sólidas inanimadas de origem animal, vegetal, microbiana ou fúngica podem ser obtidas a partir de animais, plantas, micróbios ou fungos que são inviáveis (isto é, não mais vivos) ou que foram tornados inviáveis. Os invólucros de diatomáceas são, assim, substâncias sólidas inanimadas quando algas diatomáceas anteriormente associadas foram removidas ou tornadas inviáveis de outro modo. Já que os invólucros de diatomáceas são substâncias sólidas inanimadas, os mesmos são considerados organismos fotossintéticos ou micro-organismos fotossintéticos. Em determinadas modalidades, as substâncias sólidas incluem, porém, sem limitação, areia, lodo, solo, argila, cinzas, carvão, terra diatomácea e outros minerais similares, esferas de vidro ou vidro triturado, materiais cerâmicos triturados, esferas cerâmicas, bentonita, caulim, talco, perlita, mica, vermiculita, sílicas, quartzo em pó, montmorilonita e combinações dos mesmos. Em determinadas modalidades, a substância sólida pode ser um polímero ou esferas poliméricas. Os polímeros que podem ser usados como uma substância sólida incluem, porém, sem limitação, vários polissacarídeos tais como polímeros celulósicos e polímeros quitinosos que são insolúveis ou apenas parcialmente solúveis em água ou soluções aquosas, ágar (isto é, galactanas) e combinações dos mesmos. Em determinadas modalidades, a substância sólida pode ser um cristal de sal insolúvel ou apenas parcialmente solúvel. Os cristais de sal que podem ser usados incluem, porém, sem limitação, carbonatos insolúveis ou apenas parcialmente solúveis, cromatos, sulfitos, fosfatos, hidróxidos, óxidos e sulfetos. Em determinadas modalidades, a substância sólida pode ser uma célula microbiana, célula fúngica, esporo microbiano ou esporo fúngico. Em determinadas modalidades, a substância sólida pode ser uma célula microbiana ou esporo microbiano em que a célula microbiana ou esporo microbiano não é um micro-organismo fotossintético. Em determinadas modalidades, a célula microbiana ou esporo microbiano não é um micro- organismo fotossintético, em que o micro-organismo fotossintético é selecionado a partir do grupo que consiste em algas, cianobactérias, diatomáceas, Botryococcus braunii, Chlorella, Dunaliella tertiolecta, Gracilaria, Pleurochrysis carterae, Sargassum e Ulva. Em ainda outras modalidades, a substância sólida pode ser uma célula microbiana inativada (isto é, inviável), célula fúngica, esporo microbiano ou esporo fúngico. Em ainda outras modalidades, a substância sólida pode ser uma célula microbiana quiescente (isto é, viável, mas não se dividindo ativamente), célula fúngica, esporo microbiano ou esporo fúngico. Em ainda outras modalidades, a substância sólida pode ser detrito celular de origem microbiana. Em ainda outras modalidades, a substância sólida pode ser matéria particulada de qualquer parte de uma planta. As partes de planta que podem ser usadas para obter a substância sólida incluem, porém, sem limitação, espigas, cascas, cascos, folhas, raízes, flores, caules, cortiças, sementes e combinações dos mesmos. Os produtos obtidos a partir das partes de planta processadas que incluem, porém, sem limitação, bagaço, farelo de trigo, grãos de soja, torta de semente esmagada, palha e similares podem também ser usados. Tais partes de planta, plantas processadas e/ou partes de planta processadas podem ser moídas para obter o material sólido em uma forma particulada que pode ser usada. Em determinadas modalidades, madeira ou um produto de madeira incluindo, porém, sem limitação, polpa de madeira, serragem, apares e similares, pode ser usado. Em determinadas modalidades, a substância sólida pode ser uma matéria particulada de um animal(is), incluindo, porém, sem limitação, farinha de osso, gelatina, conchas trituradas ou em pó, pelo, pele macerada e similares.

[0052] Em determinadas modalidades, a substância sólida é fornecida em forma particulada que fornece a distribuição da substância sólida no meio de cultura. Em determinadas modalidades, a substância sólida é compreendida de partícula de cerca de 2 micra a cerca de 1.000 micra em comprimento médio ou diâmetro médio. Em determinadas modalidades, a substância sólida é compreendida de partícula de cerca de 1 micra a cerca de 1.000 micra em comprimento médio ou diâmetro médio. Em determinadas modalidades, a substância sólida é uma partícula de cerca de 1, 2, 4, 10, 20 ou 40 micra a qualquer um de cerca de 100, 200, 500, 750 ou 1.000 micra de comprimento médio ou diâmetro médio. As características desejáveis das partículas usadas nos métodos e composições fornecidos no presente documento incluem umectabilidade adequada de modo que as partículas possam ser suspensas por todo o meio mediante agitação.

[0053] Em determinadas modalidades, a substância sólida é fornecida no meio como um coloide em que a fase contínua é um líquido e a fase dispersa é o sólido. Os sólidos adequados que podem ser usados para formar os coloides no meio líquido usado para cultivar Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce incluem, porém, sem limitação, vários sólidos que são denominados como hidrocoloides. Tais hidrocoloides usados nos meios, métodos e composições fornecidos no presente documento podem ser polímeros hidrofílicos, de origem vegetal, animal, microbiana ou sintética. Os polímeros hidrocoloides usados nos métodos podem conter muitos grupos hidroxila e/ou podem ser polieletrólitos. Os polímeros hidrocoloides usados nas composições e métodos fornecidos no presente documento incluem, porém, sem limitação, ágar, alginato, arabinoxilano, carragena, carboximetilcelulose, celulose, curdlana, gelatina, gelano, β-glucano, gorma guar, gorma arábica, goma de alfarroba, pectina, amido, goma xatana e misturas dos mesmos. Em determinadas modalidades, o coloide usado nos meios, métodos e composições fornecidos no presente documento pode compreender um polímero de hidrocoloide e uma ou mais proteínas.

[0054] Em determinadas modalidades, a substância sólida pode ser uma substância sólida que fornece a cultura aderente das Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce na substância sólida. As Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce que são aderidas a uma substância sólida são Methylobacterium que não podem ser substancialmente removidas lavando-se simplesmente a substância sólida com as Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderentes com meio de cultura enquanto que as Methylobacterium aderentes podem ser substancialmente removidas lavando-se a substância sólida com meio de cultura líquido. Nesse contexto, “substancialmente removidas” significa que pelo menos cerca de 30%, 40%, 50%, 60%, 70% ou 80% das Methylobacterium presentes são removidas quando a substância sólida é lavada com três volumes de meio de cultura líquido. Tal lavagem pode ser efetuada por uma variedade de métodos incluindo, porém, sem limitação, decantar o líquido de uma fase sólida lavada ou passar o líquido através de uma fase sólida em um filtro que permite o fluxo através das bactérias no líquido. Em determinadas modalidades, as Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderentes que são associadas ao sólido podem incluir Methylobacterium que são diretamente fixadas ao sólido e/ou Methylobacterium que são indiretamente fixadas à substância sólida. As Methylobacterium que são indiretamente fixadas à substância sólida incluem, porém, sem limitação, Methylobacterium que são fixadas a outra Methylobacterium ou a outro micro- organismo que é fixado à substância sólida, Methylobacterium que são fixadas à substância sólida sendo fixadas a outra substância que é fixada à substância sólida e similares. Em determinadas modalidades, pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5% ou 99,9% das Methylobacterium no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composições são Methylobacterium que são aderidas à substância sólida. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderente pode estar presente na superfície da substância sólida no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composição a uma densidade de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/20 micrômetros quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetros quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetros quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/5 micrômetros quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/2 micrômetros quadrados ou de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderente pode estar presente na superfície da substância sólida no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composição a uma densidade de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/20 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/5 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado ou de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderente pode estar presente na superfície da substância sólida no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composição a uma densidade de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/20 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/ micrômetros quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/1 micrômetros quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/2 micrômetros quadrados ou de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/5 micrômetros quadrados a cerca de 1 Methylobacterium/ micrômetros quadrados. Os caldos de fermentação bifásicos fornecidos no presente documento podem compreender uma fase líquida que contém Methylobacterium não aderentes. Em determinadas modalidades, os títulos das Methylobacterium aderentes na fase líquida podem ser menores do que cerca de 100.000, 10.000 ou 1.000 CFU/ml. Em determinadas modalidades de qualquer uma das composições mencionadas anteriormente, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO09, ISO10 e derivados das mesmas. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada antes ou durante os estágios reprodutivos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO09, ISO10 e derivados das mesmas. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada à semente ou durante os estágios vegetativos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é ISO02, ISO03, ISO10 ou um derivado das mesmas.

[0055] Os métodos de cultura bifásicos fornecidos podem render caldos de fermentação com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce a um título maior que cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro, a um título maior que cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro, a um título maior que cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro, a um título de pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em determinadas modalidades, os caldos de fermentação fornecidos no presente documento podem compreender Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce a um título de pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 4x1010 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em determinadas modalidades, os caldos de fermentação fornecidos no presente documento podem compreender Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce a um título de pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em determinadas modalidades, os caldos de fermentação fornecidos no presente documento compreenderão Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce a um título de pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em determinadas modalidades, os caldos de fermentação fornecidos no presente documento compreenderão Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce a um título de pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em determinadas modalidades de qualquer uma das composições mencionadas anteriormente, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO09, ISO10 e derivados dos mesmos. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada antes ou durante os estágios reprodutivos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO09, ISO10 ou um derivado dos mesmos. Em determinadas modalidades em que a composição é aplicada à semente ou durante os estágios vegetativos do desenvolvimento de soja, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é ISO02, ISO03, ISO10 e derivados dos mesmos.

[0056] As substâncias sólidas com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderente podem ser obtidas como produtos de fermentação que podem ser usados para produzir várias composições úteis para tratar plantas ou partes de planta para aprimorar o rendimento de soja. Alternativamente, as composições fornecidas no presente documento que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento, substâncias sólidas com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento cultivada nas mesmas ou que compreendem emulsões com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento cultivada nas mesmas podem ser usadas para tratar plantas ou partes de planta. As plantas, partes de planta e, em particular, sementes de planta que foram pelo menos parcialmente revestidas ou revestidas com os produtos de caldo de fermentação ou composições que compreendem a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento são, assim, fornecidas. O revestimento parcial de uma planta, uma parte de planta ou uma semente inclui, porém, sem limitação, o revestimento de pelo menos cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ou cerca de 99,5% da área superficial da planta, parte de planta ou semente de planta. São também fornecidos produtos de planta processados que contêm produtos de caldo de fermentação ou composições com a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce ou Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderente. Substâncias sólidas com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderente podem ser usadas para produzir várias composições que são particularmente úteis para tratar sementes de planta. As sementes que foram pelo menos parcialmente revestidas com os produtos de caldo de fermentação ou composições são, assim, fornecidas. O revestimento parcial de uma semente inclui, porém, sem limitação, o revestimento de pelo menos cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ou cerca de 99,5% da área superficial da semente. São também fornecidos produtos de semente processados, incluindo, porém, sem limitação, farelo, farinha, ração e flocos, que contêm os produtos de caldo de fermentação ou composições fornecidos no presente documento. Em determinadas modalidades, o produto de planta processado será não regenerável (isto é, não terá capacidade de desenvolver-se em uma planta). Em determinadas modalidades, a substância sólida usada no produto de fermentação ou composição que reveste pelo menos parcialmente a planta, parte de planta ou semente de planta ou que está contida na planta, parte de planta ou produto de semente processado compreende uma substância sólida e Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce associada ou aderente que pode ser facilmente identificada comparando-se uma planta, parte de planta, semente de planta ou produto processado da mesma tratado e não tratado. Em determinadas modalidades, a Methylobacterium para aumento de rendimento ou vigor precoce é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02, ISO03, ISO09, ISO10 e derivados dos mesmos.

[0057] As composições úteis para tratar plantas ou partes de plantas que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce, uma substância sólida com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderente ou que compreendem emulsões com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce cultivada nas mesmas podem também compreende, ainda, um adjuvante agricolamente aceitável ou um excipiente agricolamente aceitável. Um adjuvante agricolamente aceitável ou um excipiente agricolamente aceitável é tipicamente um ingrediente que não causa fitotoxicidade indevida ou outros efeitos adversos quando exposto a uma planta ou parte de planta. Em determinadas modalidades, a própria substância sólida pode ser um adjuvante agricolamente aceitável ou um excipiente agricolamente aceitável contanto que não seja bactericida ou bacteriostático à Methylobacterium. Em outras modalidades, a composição compreende, ainda, pelo menos um dentre um adjuvante agricolamente aceitável ou um excipiente agricolamente aceitável. Qualquer uma das composições mencionadas anteriormente pode também compreender, ainda, um pesticida. Os pesticidas usados na composição incluem, porém, sem limitação, um inseticida, um fungicida, um nematicida e um bactericida. Em determinadas modalidades, o pesticida usado na composição é um pesticida que não inibe substancialmente a cultura da Methylobacterium. Como as Methylobacterium são bactérias gram-positivas, os bactericidas adequados usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, bactericidas que exibem atividade contra bactérias gram-positivas, mas não bactérias gram- negativas. As composições fornecidas no presente documento podem também compreender um agente bacteriostático que não inibe substancialmente a cultura da Methylobacterium. Os agentes bacteriostáticos adequados para uso nas composições fornecidas no presente documento incluem, porém, sem limitação, aqueles que exibem atividade contra bactérias gram-positivas, mas não bactérias gram-negativas. Qualquer uma das composições mencionadas anteriormente podem ser também um produto essencialmente seco (isto é, que tem cerca de 5% ou menos teor de água), uma mistura da composição com uma emulsão ou uma suspensão.

[0058] Os adjuvantes agricolamente aceitáveis usados nas composições que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce incluem, porém, sem limitação, componentes que aumentam a eficácia do produto e/ou produtos que aumentam a facilidade de aplicação do produto. Adjuvantes que aumentam a eficácia do produto podem incluir vários umedecedores/difusores que promovem a adesão a e difusão da composição em partes de planta, adesivos que promovem a adesão à parte de planta, penetrantes que podem promover o contato do agente ativo com tecidos internos, extensores que aumentam a meia-vida do agente ativo por inibição de degradação ambiental e umectantes que aumentam a densidade ou o tempo de secagem de composições aspergidas. Os umedecedores/difusores usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, tensoativos não iônicos, tensoativos aniônicos, tensoativos catiônicos, tensoativos anfotéricos, tensoativos de organossilicato e/ou tensoativos acidificados. Os adesivos usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, substâncias à base de látex, terpeno/pinoleno e substâncias à base de pirrolidona. Os penetrantes podem incluir óleo mineral, óleo vegetal, óleo vegetal esterificado, tensoativos de organossilicato e tensoativos acidificados. Os extensores usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, sulfato de amônio, ou substâncias à base de menteno. Os umectantes usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, glicerol, propileno glicol e dietil glicol. Os adjuvantes que aprimoram a facilidade de aplicações do produto incluem, porém, sem limitação, agentes de acidificação/tamponamento, agentes antiespumantes/desespumantes, agentes de compatibilidade, agentes de redução de desvio, corantes e condicionadores de água. Os agentes antiespumantes/desespumantes usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, dimetopolissiloxana. Os agentes de compatibilidade usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, sulfato de amônio. Os agentes de redução de desvio usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, poliacrilamidas e polissacarídeos. Os condicionadores de água usados nas composições podem incluir, porém, sem limitação, sulfato de amônio.

[0059] São também fornecidos no presente documento métodos para tratar plantas e/ou partes de planta com os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação e composições que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce. As plantas tratadas e as partes de planta tratadas das mesmas incluem, porém, sem limitação, soja. Conforme usado no presente documento, o termo soja inclui, porém, sem limitação, todas as variedades, subespécies e cultivares de Glycine max. As subespécies de soja incluem, porém, sem limitação, Glycine max L. ssp. max e Glycine max ssp. Formosana. As partes de planta que são tratadas incluem, porém, sem limitação, folhas, caules, flores, sementes, vagens e similares. As sementes e outros propágulos de qualquer uma das plantas mencionadas anteriormente podem ser tratados com os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação e/ou composições fornecidas no presente documento.

[0060] Em determinadas modalidades, as plantas e/ou as partes de planta são tratadas aplicando-se os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação e composições que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce como uma aspersão. Tais aplicações de aspersão incluem, porém, sem limitação, tratamentos de uma parte de planta única ou qualquer combinação de partes de planta. A aspersão pode ser atingida com qualquer dispositivo que distribuirá os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação e composições à planta e/ou parte(s) de planta. Os dispositivos de aspersão úteis incluem um aspersor de barra, um aspersor de mão ou costal, pulverizadores de safra (isto é, aspersão aérea) e similares. Dispositivos de aspersão e/ou métodos que fornecem a aplicação dos caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação e composições a qualquer uma ou ambas a superfície adaxial e/ou a superfície abaxial podem ser também usados. Plantas e/ou partes de planta que são pelo menos parcialmente revestidas com qualquer um dentre um caldo de fermentação bifásico, um produto de caldo de fermentação, um produto de fermentação ou composições que compreendem uma substância sólida com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderida à mesma são também fornecidas no presente documento. O revestimento parcial de uma planta, uma parte de planta ou uma semente inclui, porém, sem limitação, o revestimento de pelo menos cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ou cerca de 99,5% da área superficial da planta, parte de planta ou semente de planta. São também fornecidos no presente documento produtos de planta processados que compreendem uma substância sólida com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderida à mesma.

[0061] Em determinadas modalidades, as sementes são tratadas por exposição das sementes aos caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação e composições que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce. As sementes podem ser tratadas com os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação e composições fornecidas no presente documento por métodos que incluem, porém, sem limitação, embebição, revestimento, aspersão e similares. Os tratamentos de semente podem ser efetuados com tratadores de semente tanto contínuos e/ou a batelada. Em determinadas modalidades, as sementes revestidas podem ser preparadas por formação de pasta fluida das sementes com uma composição de revestimento que contém um caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composições que compreendem a substância sólida com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce e secagem a ar do produto resultante. A secagem a ar pode ser realizada em qualquer temperatura que não seja deletéria à semente ou à Methylobacterium, mas não será tipicamente maior que 30 graus Centígrados. A proporção de revestimento que compreende uma substância sólida e Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce inclui, porém, sem limitação, uma faixa de 0,1 a 25% em peso da semente, 0,5 a 5% em peso da semente e 0,5 a 2,5% em peso da semente. Em determinadas modalidades, uma substância sólida usada no revestimento ou tratamento de semente terá Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderida à mesma. Em determinadas modalidades, uma substância sólida usada no revestimento ou tratamento de semente estará associada a Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce e será um caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação ou composição obtida pelos métodos fornecidos no presente documento. Várias composições de tratamento de semente e métodos para tratamento de semente revelados nas Patentes n° US 5.106.648, 5.512.069 e 8.181.388 são incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade e podem ser adaptadas para uso com um agente ativo que compreende os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação ou composições fornecidas no presente documento. Em determinadas modalidades, a composição usada para tratar a semente pode conter excipientes agricolamente aceitáveis que incluem, porém, sem limitação, farinhas de madeira, argilas, carvão ativado, terra diatomácea, sólidos inorgânicos de grão fino, carbonato de cálcio e similares. Argilas e sólidos inorgânicos que podem ser usados com os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação ou composições fornecidos no presente documento incluem, porém, sem limitação, bentonita de cálcio, caulim, argila chinesa, talco, perlita, mica, vermiculita, sílicas, quartzo em pó, montmorilonita e misturas dos mesmos. Os adjuvantes agricolamente aceitáveis que promovem aderência à semente que podem ser usados incluem, porém, sem limitação, acetatos de polivinila, copolímeros de acetato de polivinila, acetatos de polivinila hidrolisados, copolímero de polivinilpirrolidona-acetato de vinila, álcoois polivinílicos, copolímeros de álcool polivinílico, éster polivinil metílico, copolímero de éter polivinil metílico- anidrido maleico, ceras, polímeros de látex, celuloses incluindo etilceluloses e metilceluloses, hidróxi metilceluloses, hidroxipropilcelulose, hidroximetilpropilceluloses, polivinil pirrolidonas, alginatos, dextrinas, maltodextrinas, polissacarídeos, gorduras, óleos, proteínas, goma karaya, goma jaguar, goma tragacanto, gomas de polissacarídeo, mucilagem, goma árabe, gomas laca, polímeros e copolímeros de cloreto de vinilideno, polímeros e copolímeros de proteína à base de soja, lignossulfonatos, copolímeros acrílicos, amidos, polivinilacrilatos, zeínas, gelatina, carboximetilcelulose, quitosano, óxido de polietileno, polímeros e copolímeros de acrilamida, acrilato de poli-hidroxietila, monômeros de metilacrilamida, alginato, etilcelulose, policloropreno e xaropes ou misturas dos mesmos. Outros adjuvantes agricolamente aceitáveis úteis que podem promover o revestimento incluem, porém, sem limitação, polímeros e copolímeros de acetato de vinila, copolímero de polivinilpirrolidona-acetato de vinila e ceras solúveis em água. Vários tensoativos, dispersantes, agentes antiformação de torta, agentes de controle de espuma e corantes revelados no presente documento na Patente n° US 8.181.388 podem ser adaptados para uso com um agente ativo que compreende os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação ou composições fornecidas no presente documento.

[0062] São fornecidas no presente documento composições que compreende Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce que fornecem aumento de rendimento ou vigor precoce aprimorado de plantas de soja em relação a plantas, partes de planta e plantas obtidas a partir das mesmas não tratadas que foram expostas às composições. Em determinadas modalidades, as partes de planta, incluindo, porém, sem limitação, uma semente, uma folha, uma fruta, um caule, uma raiz, um tubérculo ou um coleóptilo, podem ser tratadas com as composições fornecidas no presente documento para aumentar o rendimento de planta de soja. Os tratamentos ou aplicações podem incluir, porém, sem limitação, aspersão, revestimento, revestimento parcial, imersão e/ou embebição da planta ou partes de planta com as composições fornecidas no presente documento. O revestimento parcial de uma planta, uma parte de planta ou uma semente inclui, porém, sem limitação, o revestimento de pelo menos cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ou cerca de 99,5% da área superficial da planta, parte de planta ou semente de planta. Em determinadas modalidades, uma semente, uma folha, uma fruta, um caule, uma raiz, um tubérculo ou um coleóptilo pode ser imerso e/ou embebido com um líquido, semilíquido, emulsão ou pasta fluida de uma composição fornecida no presente documento. Tal imersão ou embebição de semente pode ser suficiente para fornecer rendimento aumentado em uma planta de soja tratada ou planta de soja cultivada a partir de uma semente tratada em comparação a uma planta de soja não tratada ou planta de soja cultivada a partir de uma semente não tratada. Em determinadas modalidades, as sementes de planta podem ser imersas e/ou embebidas por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 horas. Tal imersão e/ou embebição pode, em determinadas modalidades, ser conduzida em temperaturas que não são deletérias para a semente de planta ou a Methylobacterium. Em determinadas modalidades, as sementes podem ser tratadas a cerca de 15 a cerca de 30 graus centígrados ou a cerca de 20 a cerca de 25 graus centígrados. Em determinadas modalidades, a embebição e/ou imersão de semente pode ser realizada com agitação suave. Em determinadas modalidades, a semente de soja ou planta de soja em estágio VE é exposta à composição fornecendo-se a composição em sulco. Fornece a composição em sulco representa um de diversos métodos fornecidos no presente documento para aplicar uma composição a uma semente de soja ou a uma planta de soja no estágio cerca de VE do desenvolvimento da planta de soja.

[0063] Espera-se, portanto, que as composições fornecidas no presente documento que compreendem Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce e métodos relacionados sejam úteis no aprimoramento de rendimento ou vigor precoce em uma ampla variedade de plantas de soja, incluindo, porém, sem limitação, todas as variedades, subespécies e cultivares de Glycine max.

[0064] Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento ou vigor precoce de soja aumentado pode ser uma composição com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce a um título de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento ou vigor precoce de soja aumentado a uma planta ou parte de planta pode ser uma composição com Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce a um título de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro de um líquido ou uma emulsão. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado pode ser um produto de caldo de fermentação com uma título de Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce de uma fase sólida desse produto que é pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por mililitro, ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por grama a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama da fase sólida. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento ou vigor precoce de soja aumentado pode ser uma composição com um título de Methylobacterium de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por grama ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por grama a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama de partículas na composição que contém as partículas que compreendem uma substância sólida, em que uma monocultura ou cocultura de Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce é aderida a mesma. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado a uma planta ou parte de planta pode ser uma composição com um título de Methylobacterium de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por ml ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por ml a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por ml em uma composição que compreende uma emulsão, em que uma monocultura ou cocultura de uma Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce aderida a uma substância sólida é fornecida na mesma ou cultivada na mesma. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado a uma planta ou parte de planta pode ser uma composição com um título de Methylobacterium de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por ml ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por ml a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por ml em uma composição que compreende uma emulsão, em que uma monocultura ou cocultura de uma Methylobacterium sp. para aumento de rendimento ou vigor precoce é fornecida na mesma ou cultivada na mesma. Em determinadas modalidades de qualquer uma das composições mencionadas anteriormente, a Methylobacterium sp. é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02 (NRRL B- 50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937, ISO10 (NRRL B-50938) e derivados dos mesmos.

[0065] Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado pode ser uma composição com uma Methylobacterium sp. a um título de pelo menos cerca de 1 x 104 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 105 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 106unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5x108 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x1 09 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado pode ser uma composição com Methylobacterium sp. a um título de pelo menos cerca de 1 x 104 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 105 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por mililitro ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro de um líquido ou uma emulsão. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado pode ser um produto de caldo de fermentação com um título de Methylobacterium sp. de uma fase sólida desse produto que é pelo menos cerca de 1 x 104 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 1 x 105 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por grama ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por grama a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama, pelo menos cerca de 1 x 1011unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama, pelo menos cerca de 1 x 1012 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama, pelo menos cerca de 1 x 1013 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama ou pelo menos cerca de 5 x 1013 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama da fase sólida. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado pode ser uma composição com um título de Methylobacterium de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por grama, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por grama ou pelo menos cerca de 5 x 108unidades formadoras de colônia por grama a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama, pelo menos cerca de 1 x 1011 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama, pelo menos cerca de 1 x 1012 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama, pelo menos cerca de 1 x 1013 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama ou pelo menos cerca de 5 x 1013 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama de partículas na composição que contém as partículas que compreendem uma substância sólida, em que uma monocultura ou cocultura de Methylobacterium sp. é aderida à mesma. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado pode ser uma composição com um título de Methylobacterium de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por ml ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por ml a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por ml em uma composição que compreende uma emulsão, em que uma monocultura ou cocultura de uma Methylobacterium sp. aderida a uma substância sólida é fornecida na mesma ou cultivada na mesma. Em determinadas modalidades, uma quantidade de uma composição fornecida no presente documento que é suficiente para fornecer rendimento de soja aumentado pode ser uma composição com um título de Methylobacterium de pelo menos cerca de 1 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 5 x 106 unidades formadoras de colônia por ml, pelo menos cerca de 1 x 107 unidades formadoras de colônia por ml ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por ml a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por ml em uma composição que compreende uma emulsão, em que uma monocultura ou cocultura de uma Methylobacterium sp. é fornecida na mesma ou cultivada na mesma. Em determinadas modalidades de qualquer uma das composições mencionadas anteriormente, a Methylobacterium sp. é selecionada a partir do grupo que consiste em ISO02 (NRRL B-50930), ISO03 (NRRL B-50931), ISO09 (NRRL B-50937, ISO10 (NRRL B-50938) e derivados dos mesmos.

EXEMPLOS

[0066] Os seguintes exemplos são incluídos para demonstrar modalidades preferidas da invenção. Será percebido por aqueles versados na técnica que os conjuntos de procedimentos revelados nos seguintes exemplos representam conjuntos de procedimentos constatados pelas Requerentes para funcionar bem na prática da invenção e, desse modo, podem ser considerados como que constituem modos preferidos para essa prática. Entretanto, aqueles versados na técnica deveriam, à luz da presente revelação, apreciar que muitas mudanças podem ser feitas nas modalidades específicas das quais são reveladas enquanto ainda obtêm resultados semelhantes ou similares sem se afastar do escopo da invenção. EXEMPLO 1. AUMENTOS EM RENDIMENTO DE SOJA POR APLICAÇÃO DE COMPOSIÇÕES DE METHYLOBACTERIUM TESTES DE CAMPO FOLIAR DE SOJA

[0067] Os testes de campo de soja foram estabelecidos em seis locais em Illinois, EUA para o propósito de avaliação de 14 isolados de PPFM (metilótrofos facultativos pigmentados de rosa da espécie Methylobacterium) aplicados como uma aspersão foliar às plantas de soja em um estágio vegetativo precoce (V3) e também em um estágio reprodutivo (R1). Os locais foram estabelecidos em Cropsey, Dana, Homer, Farmer City, Farmington e Pesotum, todos em Illinois.

PROJETO EXPERIMENTAL

[0068] O teste foi conduzido como um projeto de parcelas subdivididas que consistiu em quatro fileiras de 76,20 centímetros (30 polegadas) e com 6,10 metros (20 pés) de comprimento. As duas fileiras do meio foram as fileiras de tratamento, as duas fileiras externas foram usadas como fileiras de borda não tratadas. Houve oito replicações de cada um dos 14 tratamentos com PPFM para aplicação nos estágios de cultura V3 e R1. Os 14 tratamentos com PPFM mais o controle (sem PPFM, também denominado como “verificação”) compreenderam toda a parcela, e o estágio de cultura V3 e R1 compreendeu a parcela subdividida. Há um controle de V3 e R1 incluído em cada uma das 8 replicações.

MÉTODOS

[0069] Na preparação para os testes de campo, as culturas de PPFM foram cultivadas em meio de AMS + glicerol + peptona + terra diatomácea a 30° C por 6 dias. O meio de sais minerais de amônio (AMS) contém, por litro, 700 miligramas de fosfato de potássio dibásico anidro, 540 miligramas de fosfato de potássio monobásico anidro, um grama de sulfato de magnésio hepta-hidratado, 500 miligramas de cloreto de amônio anidro e 200 miligramas de cloreto de cálcio di-hidratado.

[0070] O meio básico de AMS foi preparado a partir de três soluções estoque, listadas abaixo: Solução estoque I: para um litro a concentração 50X fosfato de potássio dibásico, anidro 35 gramas fosfato de potássio monobásico, anidro 27 gramas Solução estoque II: para um litro a concentração 50X sulfato de magnésio hepta-hidrato 50 gramas cloreto de amônio, anidro 25 gramas Solução estoque III: para um litro a concentração 50X cloreto de cálcio di-hidratado 10 gramas

[0071] As soluções estoque I, II e III foram autoclavadas separadamente.

[0072] Para preparar um litro de meio de AMS líquido com glicerol, peptona e terra diatomácea, os seguintes foram adicionados a 920 ml de água destilada: 20 ml de solução estoque I 20 ml de solução estoque II 20 ml de solução estoque III 20 ml de uma solução estoque de glicerol a 50% 10 gramas de peptona 2 gramas de terra diatomácea

[0073] A solução resultante com terra diatomácea suspensa foi esterilizada por autoclavagem. As culturas foram, então, recolhidas por centrifugação a 5.000 rpm por 15 minutos e, então, ressuspensas em AMS + gicerol + peptona com 20% de glicerol como um crioprotetor em concentração 10X. As culturas foram aliquotadas e congeladas a -80 até serem descongeladas para uso. As preparações líquidas de PPFM foram aplicadas às plantas de soja nos estágios V3 ou R1 a uma taxa de 56,78 L (15 gal) por acre com o uso de um aspersor costal químico. Os títulos dos PPFMs aplicados nos vários locais para ambas as aplicações de PPFM em R1 e V3 PPFM são fornecidos nas Tabelas 5 e 6, respectivamente. Os testes foram estabelecidos dentro dos sítios de campo de fazendeiro existentes e foram gerenciados com métodos agronômicos locais que o fazendeiro pratica por toda a estação de cultura. Todas as variedades de soja usadas foram variantes Roundup Ready™, e os testes foram aspergidos com glifosato no estágio V4 de cultura. Os testes foram recolhidos para rendimento em maturidade fisiológica com uma colheitadeira combinada comercial. A Tabela 2 indica a variedade plantada, a data de plantio e a data de colheita nos sítios foliares de soja. TABELA 2. VARIEDADE PLANTADA, DATA DE PLANTIO E DATA DE COLHEITA NOS SEIS SÍTIOS FOLIARES DE SOJA EM ILLINOIS

RESULTADOS

[0074] A análise de variância (ANOVA) foi conduzida com a rotina Analyze - Fit Model em JMP versão 11.0 (SAS Institute). Após o parâmetro, as estimativas foram obtidas a partir dos modelos, plotagens de resíduos e tabelas de resíduos estudentizados foram examinados quanto à conformidade com as suposições de normalidade e variância constante. Comparações de isolados com a verificação dentro de algum estágio de cultura na aplicação foram realizadas com testes t bicaudais aplicados às diferenças pareadas entre médias de quadrados mínimos estimadas a partir do modelo ANOVA, sob a hipótese nula de que a diferença em média fosse zero.

[0075] O seguinte modelo foi aplicado ao projeto de parcela subdividida nos seis locais individuais: [1] Yljk = M + Ii + Sj + ISij + Rk + IRik+ eijk,

[0076] em que Yijk é o rendimento de isolado i no estágio j em réplica k, M representa a média geral, Ii é o efeito fixo de isolado i, Sj é o efeito fixo de estágio j, ISij é o efeito fixo da interação de isolado i e estágio j, Rk é o efeito aleatório de réplica k, IRik é o efeito aleatório da interação de isolado i e réplica k, e eijk é o erro aleatório.

[0077] Análises de locais cruzados para os seis locais foram conduzidas de acordo com o seguinte modelo: [2] Yhljk = M + Ii, + Sj + ISij + + R(L)k(h) + LIhi + IR(L)lk(h) + LShj + LIShij + ehijk, em que Yhijk é o rendimento em local h de isolado i em estágio j em réplica k, M representa a média geral, Ii é o efeito fixo de isolado i, Sj é o efeito fixo de estágio j, ISij é o efeito fixo da interação de isolado i e estágio j, L é o efeito aleatório de local h, R(L)k(h) é o efeito aleatório de réplica k alojada dentro do local h, LIhi é o efeito aleatório da interação de local h e isolado i, IR(L)ik(h) é o efeito aleatório da iteração de isolado i e réplica k alojada dentro do local h, LShj é o efeito aleatório da interação de local h e estágio j, LIShij é o efeito aleatório da interação de três vias de local h com isolado i e estágio j, e ehijk é o erro aleatório.

[0078] Sete dos 14 isolados de PPFM mostraram uma resposta de rendimento significativa (p= 0,25) vs a verificação V3 ou R1 a qual foram comparados em pelo menos um local (Tabela 3). Um isolado mostrou um aumento significativo vs a verificação através dos seis locais em ambos os estágios de aplicação (Tabela 4)

[0079] Cinco dos 6 locais tiveram pelo menos uma resposta de PPFM significativa. TABELA 3. RENDIMENTO MÉDIO, CLASSIFICAÇÃO DE RENDIMENTO E VALORES P DE ISOLADOS DE PPFM EM CADA UM DOS SEIS LOCAIS FOLIARES DE SOJA POR ESTÁGIO DE CULTURA

TABELA 4. RENDIMENTO MÉDIO, CLASSIFICAÇÃO DE RENDIMENTO E VALORES P DE ISOLADOS DE PPFM ATRAVÉS DE SEIS LOCAIS FOLIARES DE SOJA COMBINADOS POR ESTÁGIO DE CULTURA

TABELA 5. TÍTULOS DE PPFMs APLICADOS AO ESTÁGIO R1 EM VÁRIOS LOCAIS (EM CFU/ml)

ND1: Não determinado. TABELA 6. TÍTULOS DEPPFMs APLICADOS NO ESTÁGIO V3 EM VÁRIOS LOCAIS (EM CFU/ml)

ND1: Não determinado. EXEMPLO 2. RESULTADO DE TESTES DE CAMPO DE 2014

[0080] Cepas para uso nos testes de campo de 2014 foram selecionadas com base nos resultados de 1) testes de campo anteriores conduzidos no verão de 2013 e 2) ensaios em laboratório e ambiente controlado. Todas as três cepas usadas em testes de campo de soja de 2014 demonstraram um efeito positivo sobre o rendimento de soja nos testes de campo de 2013 e efeitos benéficos sobre vários traços agronômicos em ensaios em laboratório e ambiente controlado.

[0081] Na primavera de 2014, testes de campo projetados para avaliar o efeito das três cepas de PPFM selecionadas sobre o rendimento de soja foram estabelecidos em sítios por toda a área de cultura de soja de Midwest. Esses incluíram sítios em Iowa, Illinois, Nebraska, Missouri, Ohio e Wisconsin. Em cada sítio, o experimento foi configurado como um Projeto de Bloco Completo Randomizado com seis replicações. Os tamanhos de parcela mínimos foram quatro fileiras de 50,80 centímetros (20 polegadas) cada. Todas as observações foram feitas a partir das duas fileiras centrais de cada parcela, e amostras destrutivas foram coletadas apenas das fileiras de borda da parcela. O espaçamento de fileira e a manutenção de parcela estavam em conformidade com as práticas padrão de produtor em cada sítio.

[0082] Um total de 13 tratamentos foi aplicado a cada sítio (Tabela 7). Cada cepa de PPFM foi aplicada de suas maneiras diferentes (em sulco e foliar) a uma taxa alta e baixa, o que diferenciou entre os dois métodos de aplicação. Os tratamentos em suco foram aplicados no momento de plantio por aplicação de aspersão sobre o sulco de emente aberto. As aplicações foliares foram aplicadas no estágio V3 com o uso de uma barra convencional. Todas as aplicações foram realizadas com ventilador plano ou bocais de jato em cone.

[0083] O vigor de planta precoce foi classificado 20 e 60 dias após a emergência. As classificações de vigor foram dadas em uma escala de 1 a 5 com base em avaliação visual, com 1 sendo insuficiente e 5 sendo excelente. Vários parâmetros, incluindo altura da planta, área da folha, cor e fechamento de dossel percentual, foram incorporados na avaliação visual do vigor da planta. A colheita foi realizada por práticas padrão de produtor, e os rendimento de parcela foram determinados com o uso de colheitadeiras combinadas calibradas convencionais. Pesos de teste de parcela foram usados para calcular estimativas de rendimento em bu/acre para cada parcela. TABELA 7. TRATAMENTOS USADOS EM TESTES DE CAMPO EM 2014

1"Taxa" indica o número de ml de produto concentrado aplicado por acre; essa quantidade foi diluída em um mínimo de 18,93 L (5 gal)/acre de volume total para aplicações em sulco e 56,78 L (15 gal)/acre para aplicações foliares. 2 "Faixa de título" fornece os títulos mais baixo e mais alto para concentrados de PPFM no momento de envio para os sítios de teste.

RESULTADOS

[0084] Os dados de rendimento e vigor precoce foram analisados com o uso do pacote de software de análise estatística JMP (Versão 9.0). O modelo completo com todos os efeitos aleatórios foi ajustado primeiro e, então, reduzido até o melhor modelo de ajuste com base em valores de critério de informações de Akaike (AIC). Através dos locais, comparações médias foram conduzidas com o uso do teste LSD protegido de Fisher com α=0,05, 0,10 e 0.20 (Tabela 8; Tabela 9). TABELA 8. AUMEXTO DE RENDIMENTO ATRAVÉS DOS LOCAIS

TABELA 9. AUMENTO DE VIGOR (20 DIAS APÓS A EMERGÊNCIA) ATRAVÉS DOS LOCAIS

[0085] O rendimento de tratamento relativo à verificação para locais individuais foi analisado da mesma maneira que os dados através de locais (Tabela 4). Na tabela abaixo, rendimentos significativamente maiores que a verificação a α=0,05, 0,10 e 0,20 são representados por "XXX", "XX" e "X", respectivamente. TABELA 10. AUMENTO DE RENDIMENTO SOBRE VERIFICAÇÃO POR LOCAL

[0086] Em muitos locais, as parcelas tratadas com PPFM tiveram rendimentos maiores que a verificação, mas não em um nível estatisticamente significativo. Devido à variabilidade inerente da pesquisa de campo, esses aumentos de rendimento poderiam ainda indicar efeitos biológicos significativos por PPFMs. Os aumentos de rendimento facilitados por aplicação de PPFM poderiam também resultar em ganhos financeiros significativos através de grandes áreas cultivadas. Consequentemente, os valores de rendimento para cada sítio são relatados abaixo, e rendimentos de tratamento numericamente maiores que a verificação foram destacados (negrito e sublinhado) para demonstrar tendências positivas através dos locais (Tabela 11). TABELA 11. RENDIMENTOS MÉDIOS EM BU/ACRE POR LOCAL

CONCLUSÕES

[0087] Três isolados de PPFM de elite foram avaliados quanto à sua capacidade de aumentar o rendimento de soja em teste de campo em 2014. Nesses testes, todos os tratamentos aumentaram significativamente o rendimento em relação a uma verificação em um mínimo de um local. Através dos locais, as altas taxas de todos os isolados aplicados como um tratamento em sulco ou foliar, com a exceção de NLS0020 em sulco, aumentaram significativamente os rendimentos de soja a α=0,20. A alta taxa de ambos os tratamentos NLS0017 foliar e em sulco e NLS0064 foliar aumentou o rendimento em relação à verificação em todos os locais quando um nível mais rigoroso de α foi aplicado. A alta taxa de NLS0017 em sulco foi o único tratamento a aumentar significativamente o vigor em 20 dias após a emergência nesses experimentos.

[0088] Os resultados desses testes de campo indicam que todas as cepas usadas nesse teste têm um efeito geral positivo sobre os rendimentos de soja, mas que esse efeito é mais pronunciado com NLS0017 aplicado como um tratamento foliar ou em sulco. Taxas de aplicação de PPFM mais altas, de modo geral, resultaram em aumentos de rendimento maiores. Essa tendência suporta, ainda, o efeito benéfico de bactérias PPFM sobre os rendimentos de soja e sugere que populações de PPFM maiores aumentam esse efeito.

[0089] Dados de local individual indicam que PPFMs, de modo geral, têm um efeito benéfico sobre o rendimento de soja. RFR, o único sítio em que PPFMs não influenciaram positivamente o rendimento de soja, teve rendimentos gerais particularmente altos. Isso poderia indicar que RFR teve um ambiente de rendimento "ideal" e sugere que os tratamentos com PPFM usados nesses experimentos ofereceram proteção de rendimento e rendimento aumentado na presença de vários fatores de estresse bióticos e/ou abióticos em outros locais, mas não afetaram significativamente o rendimento sob condições de cultura ideais em RFR. REFERÊNCIAS 1. Abanda-Nkpwatt, D., M. Musch, J. Tschiersch, M. Boettner e W. Schwab. 2006. Molecular interaction between Methylobacterium extorquens and seedlings: growth promotion, methanol consumption, and localization of the methanol emission site. J. Exp. Bot. 57: 4.025 a 4.032. 2. Broekaert WF, Terras FR, Cammue BP, Vanderleyden J (1990) An automated quantitative assay for fungal growth inhibition. FEMS Microbiology Letters 69: 55 a 60. 3. Cao, Y-R, Wang, Q., Jin, R-X., Tang, S-K., He, W-X., Lai, H-X, Xu, L-H. e C-L Jiang. 2011. Methylobacterium soli sp. nov. a methanol-utilizing bacterium isolated from the forest soil. Antonie van Leeuwenhoek (2011) 99:629 a 634. 4. Corpe, W.A. e D.V. Basile. 1982. Methanol-utilizing bacteria associated with green plants. Devel. Industr. Microbiol. 23: 483 a 493. 5. Corpe, W.A. e S. Rheem. 1989. Ecology of the methylotrophic bacteria on living leaf surfaces. FEMS Microbiol. Ecol. 62: 243 a 250. 6. Green, P.N. 2005. Methylobacterium. Em Brenner, D.J., N.R. Krieg e J.T. Staley (eds.). “Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Volume two, The Proteobacteria. Part C, The alpha-, beta-, delta-, and epsilonproteobacteria.” Segunda Edição. Springer, New York. Páginas 567 a 571. 7. Green, P.N. 2006. Methylobacterium. Em Dworkin, M., S. Falkow, E. Rosenberg, K.-H. Schleifer e E. Stackebrandt (eds.). “The Prokaryotes. A Handbook on the Biology of Bacteria. Volume 5. Proteobacteria: Alpha and Beta Subclasses.” Terceira edição. Springer, New York. Páginas 257 a 265. 8. Holland, M.A. 1997. Methylobacterium and plants. Recent. Res. Devel. in Plant Physiol. 1: 207 a 213. 9. Holland, M.A. e J.C. Polacco. 1994. PPFMs and other covert contaminants: Is there more to plant physiology than just plant? Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 45: 197 a 209. 10. Kutschera, U. 2007. Plant-associated methylobacteria as co-evolved phytosymbionts. A hypothesis. Plant Signal Behav. 2: 74 a 78. 11. Lidstrom, M.E. 2006. Aerobic methylotrophic prokaryotes. Em Dworkin, M., S. Falkow, E. Rosenberg, K.-H. Schleifer e E. Stackebrandt (eds.). “The Prokaryotes. A Handbook on the Biology of Bacteria. Volume 2. Ecophysiology and biochemistry.” Terceira edição. Springer, New York. Páginas 618 a 634. 12. Madhaiyan, M., S. Poonguzhali, H.S. Lee, K. Hari, S.P. Sundaram e T.M. Sa. 2005. Pink-pigmented facultative methylotrophic bacteria accelerate germination, growth and yield of sugarcane clone Co86032 (Saccharum officinarum L.) Biol. Fertil. Soils 41: 350 a 358. 13. Madhaiyan, M., S. Poonguzhali, M. Senthilkumar, S. Seshadri, H. Chung, J. Yang, S. Sundaram e T. Sa. 2004. Growth promotion and induction of systemic resistance in rice cultivar CO-47 (Oryza sativa L.) by Methylobacterium spp. Bot. Bull. Acad. Sin. 45: 315 a 324. 14. Madhaiyan, M., S. Poonguzhali e T. Sa. 2007. Influence of plant species and environmental conditions on epiphytic and endophytic pink-pigmented facultative methylotrophic bacterial populations associated with field- grown rice cultivars. J Microbiol Biotechnol. Outubro de 2007;17(10): 1.645 a 1.654. 15. Stanier, R.Y., N.J. Palleroni e M. Doudoroff. 1966. The aerobic pseudomonads: A taxonomic study. J. Gen. Microbiol. 43: 159 a 271. 16. Sy, A., Giraud, E., Jourand, P., Garcia, N., Willems, A., De Lajudie,P., Prin, Y., Neyra, M., Gillis, M., Boivin-Masson,C e Dreyfus, B. 2001. Methylotrophic Methylobacterium Bacteria Nodulate and Fix Nitrogen in Symbiosis with Legumes. Jour. Bacteriol. 183;1:214 a 220.) 17. Sy, A., A.C.J. Timmers, C. Knief e J.A. Vorholt. 2005. Methylotrophic metabolism is advantageous for Methylobacterium extorquens during colonization of Medicago truncatula under competitive conditions. Appl. Environ. Microbiol. 71: 7.245 a 7.252,18. Vogel, H.J. e D.M. Bonner. 1956. Acetylornithinase of Escherichia coli: Partial purification and some properties. J. Biol. Chem. 218: 97 a 106. 18. Vogel, H. J. 1956. A convenient growth medium for Neurospora (Medium N). Microbial Genet Bull 13: 42 a 43 19. Whittenbury, R., S.L. Davies e J.F. Wilkinson. 1970. Enrichment, isolation and some properties of methane- utilizing bacteria. J. Gen. Microbiol. 61: 205 a 218.

[0090] Tendo-se ilustrados e descritos os princípios da presente invenção, deve ser percebido pelas pessoas versadas na técnica que a invenção pode ser modificada em disposição e detalhes sem afastamento de tais princípios.

[0091] Embora os materiais e métodos desta invenção tenham sido descritos em termos de várias modalidades e exemplos ilustrativos, será percebido por aqueles versados na técnica que variações podem ser aplicadas aos materiais e métodos descritos no presente documento sem afastamento do conceito, do espírito e do escopo da invenção. Todos tais substitutos e modificações percebidos por aqueles versados na técnica são considerados como estando dentro do espírito, do escopo e do conceito da invenção, conforme definido pelas reivindicações anexas.

Claims

1. Método para aprimorar o rendimento de planta de soja caracterizado pelo fato de que compreende: (a) aplicar uma composição que compreende uma Methylobacterium sp. a uma semente de soja, a uma planta de soja ou parte da mesma no estágio de desenvolvimento de cerca de VE a cerca de V4; ou no estágio de desenvolvimento de cerca de V5 a cerca de R6; em que a composição compreende: (i) uma cepa de Methylobacterium NLS0020 (depositada como NRRL B-50930), NLS0017 (depositada como NRRL B-50931), NLS0062 (depositada como NRRL B-50937), NLS0064 (depositada como NRRL B-50938), e um adjuvante agricolamente aceitável, excipiente ou combinação dos mesmos; e, (b) cultivar a planta de soja até a maturidade, aprimorando, assim, o rendimento da planta de soja.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição é aplicada à referida planta de soja no estágio de desenvolvimento VE a V2, no estágio de desenvolvimento V2 a V3, no estágio de desenvolvimento V3 a V4, ou no estágio de desenvolvimento cerca de V3; e/ou em que a composição é aplicada no estágio de desenvolvimento V5 a R6.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a composição é fornecida em sulco ou como um tratamento de sementes.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a composição é uma composição sólida que compreende a Methylobacterium sp. em um título de cerca de 1x106 CFU/g a cerca de 1x1014 CFU/g.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a composição aplicada reveste ou reveste parcialmente a semente de soja ou a planta de soja ou parte da mesma.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição é aplicada à folhagem da planta de soja.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que compreende, ainda, a etapa de colher a semente da planta de soja madura.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o rendimento de semente colhida é aumentado em comparação ao rendimento de semente colhida obtido a partir de uma planta de soja de controle que não recebeu uma aplicação da Methylobacterium sp.

9. Uso de uma composição compreendendo cepa de Methylobacterium NLS0020(NRRL B-50930), NLS0017 (NRRL B- 50931), NLS0062 (NRRL B-50937), NLS0064 (NRRL B-50938), e um adjuvante agricolamente aceitável, excipiente ou combinação dos mesmos caracterizado pelo fato de que é para aumentar o rendimento de uma planta de soja.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um inseticida, um fungicida, um nematocida ou um bactericida.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um biopesticida ou microrganismo benéfico de outra forma, exceto Methylobacterium.

12. Uso de um Methylobacterium isolado selecionado do grupo que consiste de NLS0020 depositado como NRRL B-50930, NLS0017 depositado como NRRL B-50931, NLS0062 depositado como NRRL B-50937, NLS0064 depositado como NRRL B-50938, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição para o tratamento de uma planta de soja, parte de uma planta de soja ou propágulo de uma planta de soja.