BR112016005601B1

BR112016005601B1 - composto, composição farmacêutica, e usos de um composto

Info

Publication number: BR112016005601B1
Application number: BR112016005601-9A
Authority: BR
Inventors: Karen Annette Duggan
Original assignee: Vectus Biosystems Limited
Priority date: 2013-09-17
Filing date: 2014-09-17
Publication date: 2021-02-02
Also published as: NO3046901T3; CA2924356A1; CN105683152B; US20160221933A1; DK3046901T3; NZ717927A; MX368865B; AP2016009079A0; JP2016532632A; KR20160074471A; RU2635564C2; UA118111C2; EP3046901A4; KR101736416B1; IL244621A; MY172557A; EP3046901B1; US9458093B2; CN105683152A; PL3046901T3

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E USOS DE UM COMPOSTO A presente invenção se relaciona com um novo composto de terfenila e seu uso no tratamento profilático e/ou terapêutico de hipertensão e/ou fibrose.

Description

ÁREA DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se relaciona com novos compostos e seu uso no tratamento profilático e/ou terapêutico de doença cardiovascular, e em particular no tratamento de pré-hipertensão, hipertensão e/ou condições fibróticas.

[002] A invenção foi desenvolvida principalmente para o tratamento profilático e/ou terapêutico de doença cardiovascular e será descrita doravante com referência a esta aplicação. No entanto será apreciado que a invenção não está limitada a esta área de uso particular.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] Qualquer discussão da técnica prévia ao longo da especificação não deve de modo nenhum ser considerada como uma admissão de que tal técnica prévia é amplamente conhecida ou forma parte do conhecimento geral comum na área.

[004] A hipertensão (pressão sanguínea elevada) afeta 26 % da população adulta globalmente com uma incidência de 30-33 % nos países ocidentais. Se espera que a incidência global da alcance 29% em 2025 como consequência da ocidentalização da Índia e China. Os estudos correntes indicam que menos do que 20 % de pacientes com hipertensão atingem o seu alvo recomendado de pressão sanguínea (BP) e que, para alcançar estes alvos, >75 % dos pacientes requerem terapia com múltiplos agentes anti-hipertensivos. A pré- hipertensão (pressão sanguínea ligeiramente elevada) afeta 31 % de adultos nos EUA e pode se desenvolver em hipertensão se não tratada. TODAS AS TERAPIAS CORRENTEMENTE DISPONÍVEIS TÊM EFEITOS SECUNDÁRIOS • Inibidores da Enzima de Conversão da Angiotensina (ACEI) - tosse, edema angioneurótico, hipercalemia; • Bloqueadores de Receptor da Angiotensina (ARBs) - edema angioneurótico, hipercalemia; • Bloqueadores do Canal de Cálcio (CCB) - rubor, edema da perna/tornozelo, prisão de ventre; • Diuréticos de tiazida - diabetes de novo início, gota, hiponatremia; • Bloqueadores Beta (β) - diabetes de novo início, incapacidade de fazer exercício, bradicardia, hipoglicemia mascarada em diabéticos; e • Antagonistas da Aldosterona - ginecomastia, menorragia, hipercalemia.

[005] A necessidade de se usar terapia de combinação aumenta a probabilidade de que os pacientes experienciarão efeitos secundários e como consequência não atingirão o seu alvo de BP.

[006] A hipertensão e a pré-hipertensão são um grande fator no desenvolvimento de danos no coração, rins e vasos sanguíneos, resultando na substituição de tecido funcional normal por tecido cicatricial ou fibrose. Alguns dos agentes anti-hipertensivos correntes - inibidores de ACE, inibidores de renina de ARBs e antagonistas de aldosterona são capazes de retardar a progressão da substituição de tecido funcional por fibrose, não se mostrou que algum revertesse a fibrose existente e restaurasse a arquitetura de tecidos normais. Existe assim uma necessidade de agentes que tenham eficácia na redução da BP significativamente e permitam assim que uma maior proporção de pacientes atinja o alvo de BP com terapia com agente único e/ou reverta a fibrose existente e/ou restaure a arquitetura de tecidos normais.

[007] É um objetivo da presente invenção ultrapassar ou melhorar pelo menos uma das desvantagens da técnica prévia, ou proporcionar uma alternativa útil.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[008] Surpreendentemente, os presentes inventores descobriram que certos novos compostos de terfenila têm efeitos de diminuição da pressão sanguínea e/ou antifibróticos. Estes efeitos podem ser vistos em estudos de dosagem intravenosa e/ou oral.

[009] De acordo com um aspecto, a presente invenção proporciona um composto da fórmula

ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável.

[010] Em uma forma de realização, o composto é

ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável.

[011] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[012] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um método para o tratamento terapêutico de hipertensão ou pré-hipertensão em um sujeito compreendendo administração ao sujeito de um composto de acordo com a presente invenção.

[013] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um método para o tratamento terapêutico de fibrose em um sujeito compreendendo administração ao sujeito de um composto de acordo com a presente invenção.

[014] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um método para o tratamento profilático de fibrose em um sujeito compreendendo administração ao sujeito de um composto de acordo com a presente invenção.

[015] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um método para o tratamento terapêutico de hipertensão e fibrose em um sujeito compreendendo administração ao sujeito de um composto de acordo com a presente invenção.

[016] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um método para o tratamento terapêutico de pré-hipertensão e fibrose em um sujeito compreendendo administração ao sujeito de um composto de acordo com a presente invenção.

[017] Em uma forma de realização, a fibrose é fibrose miocárdica ou fibrose renal.

[018] Em outra forma de realização, a fibrose é fibrose miocárdica e fibrose renal.

[019] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um composto da presente invenção para uso no tratamento terapêutico de hipertensão ou pré- hipertensão.

[020] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um composto da presente invenção para uso no tratamento terapêutico de fibrose.

[021] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um composto da presente invenção para uso no tratamento profilático de fibrose.

[022] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um composto da presente invenção para uso no tratamento terapêutico de hipertensão e fibrose.

[023] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com um composto da presente invenção para uso no tratamento terapêutico de pré-hipertensão e fibrose.

[024] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com uso de um composto da presente invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de hipertensão ou pré-hipertensão.

[025] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com uso de um composto da presente invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de fibrose.

[026] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com uso de um composto da presente invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento profilático de fibrose.

[027] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com uso de um composto da presente invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de hipertensão e fibrose.

[028] De acordo com outro aspecto, a presente invenção se relaciona com uso de um composto da presente invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de pré-hipertensão e fibrose.

[029] A não ser que o contexto requeira claramente de outro modo, ao longo da descrição e das reivindicações, as palavras “compreende”, “compreendendo”, e similares são para ser interpretadas em um sentido inclusivo em oposição a um sentido exclusivo ou exaustivo; isto é, no sentido de “incluindo, mas não se limitando a”.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[030] Figura 1: Síntese de VB0004.

[031] Figura 2: Síntese de carbamoílmetilfosfonato de dietila.

[032] Figura 3: Foram observadas respostas de impedância negativa para o composto VB0004 a uma concentração de 62,5 μmol/dm3 (62,5 μM), 125 μmol/dm3 (125 μM) e 250 μmol/dm3 (250 μM) quando incubado com células do músculo liso vascular A10 em um xCELLIgence da Roche.

[033] Figura 4: Pressões sanguíneas sistólicas em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 % após tratamento de 4 semanas com administração oral de VB0004 a 10, 100 e 500 pmol/kg/min.

[034] Figura 5: Foram observadas respostas de impedância negativa para o composto VB0004 a uma concentração de 62,5 μmol/dm3 (62,5 μM), 125 μmol/dm3 (125 μM) e 250 μmol/dm3 (250 μM) quando incubado com células endoteliais aórticas de bovino em um xCELLIgence da Roche.

[035] Figura 6: Pressões sanguíneas sistólicas em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 % após tratamento de 4 semanas com infusão intravenosa de VB0004 a 10 e 20 pmol/kg/min.

[036] Figura 7: Diminuição na pressão sanguínea sistólica média após tratamento de 4 semanas com várias doses de VB0004 variando de 10 a 2.500 pmol/kg/min oralmente em comparação com a pressão sanguínea sistólica de animais de controle.

[037] Figura 8: Diminuição na pressão sanguínea sistólica média em SHR em um regime alimentar com sal a 2,2 % com VB0004 a 2.500 pmol/kg/min oralmente em comparação controles a vários períodos de tempo até 8 semanas.

[038] Figura 9: A fibrose no coração após tratamento de 4 semanas com VB0004 oralmente em SHR com 18 semanas de idade em regime alimentar com sal a 2,2 % a doses de 10 a 500 pmol/kg/min (barras tracejadas) é diminuída em comparação com fibrose em controles de 14 e 18 semanas (barras abertas) em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 %. * p<0,005, ** p<0,0005 vs controle de 18 semanas, # p<0.05 vs controle de 14 semanas.

[039] Figura 10: A fibrose no rim após tratamento de 4 semanas com VB0004 oralmente em SHR com 18 semanas de idade em regime alimentar com sal a 2,2 % a doses de 10 a 500 pmol/kg/min (barras tracejadas) é diminuída em comparação com fibrose em controles de 14 e 18 semanas (barras abertas) em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 %. * p<0,005, ** p<0,0005 vs controle de 18 semanas, # p<0,05, ## p<0,005, ### p<0,0005 vs controle de 14 semanas.

[040] Figura 11: Micrografias de coração de ratos de controle e ratos tratados durante quatro semanas com 500 pmol/kg/min de VB0004. O painel superior mostra seção de coração de controle onde o tecido fibroso aparece cinzento em coloração tricrômica de Masson (ver setas). O painel inferior mostra que virtualmente nenhum tecido fibroso está presente em seções de animais tratados com VB0004.

[041] Figura 12: Micrografias de rim de ratos de controle e ratos tratados durante quatro semanas com 500 pmol/kg/min de VB0004. O painel superior mostra seção de rim de controle onde o tecido fibroso aparece cinzento em coloração tricrômica de Masson (ver setas). O painel inferior mostra que virtualmente nenhum tecido fibroso está presente em seções de animais tratados com VB0004.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[042] A presente invenção se relaciona com certos novos compostos de terfenila que mostram efeitos de diminuição da pressão sanguínea e antifibróticos em estudos de dosagem intravenosa e/ou oral em um modelo animal experimental. No que diz respeito à atividade antifibrótica, os compostos da presente invenção são eficazes na prevenção de fibrose, retardamento da progressão de fibrose estabelecida e/ou redução do grau (reversão) de fibrose estabelecida. Estas são descobertas importantes no que diz respeito à gama e gravidade de condições que podem ser tratadas com os compostos da presente invenção.

[043] Os compostos da presente invenção são representados pela fórmula:

[044] O seguinte composto é um exemplo específico, mas não limitante, dos compostos da presente invenção:

[045] O composto pode ser também representado pelo seguinte nome:

[046] 2 ‘- [3-hidroxi-(1,1':4',1"- terfenil)]propanamida.

[047] Os compostos da presente invenção podem existir em formas geométricas ou estereoisoméricas particulares. A presente invenção contempla todos tais compostos, incluindo isômeros cis e trans, enantiômeros (R) e (S), diastereômeros, isômeros (d), isômeros (l), as suas misturas racêmicas, e outras suas misturas, como estando dentro do escopo da invenção. Todos tais isômeros, bem como suas misturas, se destinam a estar incluídos em esta invenção.

[048] Se, por exemplo, for desejado um enantiômero particular de um composto da presente invenção, ele pode ser preparado por síntese assimétrica, ou por derivatização com um auxiliar quiral, onde a mistura diastereomérica resultante é separada e o grupo auxiliar clivado para proporcionar os enantiômeros desejados puros. Alternativamente podem ser formados sais diastereoméricos com um ácido ou base oticamente ativo apropriado, seguido por resolução dos diastereômeros assim formados por cristalização fracionada ou meios cromatográficos bem conhecidos, e recuperação subsequente dos enantiômeros puros.

[049] Em geral, os compostos da presente invenção podem ser preparados pelos métodos ilustrados nos esquemas de reação gerais como, por exemplo, descrito em baixo, ou por suas modificações, usando materiais de início prontamente disponíveis, reagentes e procedimentos de síntese convencionais. Em estas reações é também possível fazer uso de variantes que são elas próprias conhecidas, mas não são mencionadas aqui.

[050] A presente invenção contempla também sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos. O termo “sal farmaceuticamente aceitável” inclui sais de adição tanto ácida como básica e se refere a sais que retêm a eficácia e propriedades biológicas das bases ou ácidos livres, e que não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são formados com ácidos ou bases inorgânicos ou orgânicos, e podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais dos compostos, ou por reação separada de um composto purificado na sua forma de base ou ácido livre com um ácido ou base orgânico ou inorgânico adequado, e isolamento do sal assim formado.

[051] O termo “fibrose” como usado no contexto da presente invenção inclui, mas não está limitado a, fibrose miocárdica e/ou fibrose renal.

[052] Adicionalmente ao tratamento de fibrose estabelecida, os compostos da presente invenção podem ser usados profilaticamente em sujeitos em risco de desenvolver fibrose. Como exemplo de sujeitos na categoria de risco para desenvolvimento de fibrose são aqueles tendo hipertensão, diabetes, miocardite, doença cardíaca isquêmica, Síndrome de Conn, feocromocitoma, predisposição genética, regime alimentar com muito sal e/ou recebendo fármacos usados em quimioterapia de câncer (tais como daunorrubicina). O termo “profilático” como usado no contexto da presente invenção se destina inter alia a englobar tratamentos usados para prevenir ou retardar o desenvolvimento de fibrose no grupo em risco. Os sujeitos a que pode ser dado tratamento profilático podem já ter sinais de insuficiência cardíaca precoce na ecocardiografia.

[053] O termo “hipertensão” como usado no contexto da presente invenção indica uma pressão sanguínea em adultos de acima de cerca de 139 mmHg sistólica e/ou acima de cerca de 89 mmHg diastólica.

[054] O termo “pré-hipertensão” como usado no contexto da presente invenção indica uma pressão sanguínea em adultos na gama de cerca de 120-139 mmHg sistólica e/ou cerca de 80-89 mmHg diastólica.

[055] A presente invenção contempla também composições farmacêuticas que incluem os compostos da presente invenção, em conjunção com excipientes farmaceuticamente aceitáveis. O termo “excipiente farmaceuticamente aceitável” como usado no contexto da presente invenção significa qualquer componente inativo farmaceuticamente aceitável da composição. Como é bem conhecido na técnica, os excipientes incluem diluentes, tampões, ligantes, lubrificantes, desintegrantes, corantes, antioxidantes/conservantes, ajustadores do pH, etc. Os excipientes são selecionados com base nas aspectos físicos desejados da forma final: p.ex., obtenção de um comprimido com dureza e friabilidade desejadas sendo rapidamente dispersível e facilmente engolido, etc. A taxa de liberação desejada da substância ativa a partir da composição após a sua ingestão desempenha também um papel na escolha de excipientes. As composições farmacêuticas podem incluir qualquer tipo de forma de dosagem tal como comprimidos, cápsulas, pós, formulações líquidas, liberação retardada ou sustentada, emplastros, fungadelas, pulverizações nasais e similares. A forma física e conteúdo das composições farmacêuticas contemplados são preparações convencionais que podem ser formuladas por aqueles peritos na área de formulação farmacêutica e são baseados em princípios bem estabelecidos e composições descritos em, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a Edição, 1995; Farmacopeia Britânica 2000 e textos de formulações e manuais similares.

[056] Por exemplo, onde os compostos ou composições são para ser administrados oralmente, eles podem ser formulados como comprimidos, cápsulas, grânulos, pós ou xaropes; ou para administração parenteral, eles podem ser formulados como injeções (intravenosas, intramusculares ou subcutâneas), preparações de infusão por gotas ou supositórios. Para aplicação pela rota da membrana mucosa oftálmica, eles podem ser formulados como colírios ou pomadas para os olhos. Estas formulações podem ser preparadas por meios convencionais, e, se desejado, o ingrediente ativo pode ser misturado com qualquer aditivo convencional, tal como um excipiente, um ligante, um agente desintegrante, um lubrificante, um corretivo, um agente solubilizante, um auxiliar da suspensão, um agente emulsificante ou um agente de revestimento.

[057] Quando o(s) composto(s) da presente invenção é(são) administrado(s) como farmacêuticos, a humanos e animais, eles podem ser dados per se ou como uma composição farmacêutica contendo, por exemplo, 0,1 a 99,5 % (mais preferencialmente, 0,5 a 90 %) de ingrediente ativo em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável.

[058] A dosagem de um composto e frequência de administração que devem ser usadas podem ser também facilmente determinadas pelo médico praticante de modo a se produzir a resposta desejada.

[059] Embora a dosagem variará dependendo dos sintomas, idade e peso corporal do paciente, da natureza e gravidade do distúrbio a ser tratado ou prevenido, da rota de administração e da forma do fármaco, em geral, uma dosagem diária de 0,0001 mg a 200 mg do composto da presente invenção pode ser uma quantidade eficaz adequado para um paciente humano adulto, e esta pode ser administrada em uma única dose ou em doses divididas.

[060] Um “paciente” ou “sujeito” a ser tratado pelo presente método pode ser um sujeito humano ou não humano.

[061] Uma “quantidade eficaz” de um presente composto, no que diz respeito a um método de tratamento, se refere a uma quantidade do terapêutico em uma preparação que, quando aplicada como parte de um regime de dosagem desejado, proporciona um benefício de acordo com padrões clinicamente aceitáveis para o tratamento ou profilaxia de um distúrbio particular.

[062] A presente invenção será agora descrita em mais detalhe com referência a exemplos específicos mas não limitantes descrevendo composições e métodos de uso específicos. É para ser entendido, no entanto, que a descrição detalhada de procedimentos, composições e métodos específicos é incluída unicamente para o propósito de exemplificação da presente invenção. Não deve ser entendida de qualquer modo como uma restrição na descrição ampla do conceito inventivo como apresentado acima. EXEMPLOS EXEMPLO 1 - SÍNTESE DO COMPOSTO RESUMO DA SÍNTESE

[063] A rota sintética usada para preparar VB0004 é mostrada na Figura 1. Brevemente, 5-fenilsalicilaldeído (10) foi preparado por uma reação de acoplamento de Suzuki entre 5-bromossalicilaldeído e ácido fenilborônico. Este fenol foi depois convertido no triflato de arila correspondente (11) (usando N-feniltriflimida e irradiação de micro-ondas), que sofreu outra reação de Suzuki com ácido 3-(benziloxi)fenilborônico para formar aldeído de terfenila (12). Uma reação de Horner-Wadsworth-Emmons entre o aldeído (12) e fosfonato (F) originou amida insaturada em α,β (13), que foi subsequentemente reduzida para formar VB0004.

[064] Carbamoílmetilfosfonato de dietila (F) foi gerado a partir de uma reação de Arbuzov entre 2- cloroacetamida e fosfito de trietila (preparado como mostrado na Figura 2). SÍNTESE DE 2-HIDROXI-5-FENILBENZALDEÍDO (10)

[065] 5-Bromossalicilaldeído (2,49 g, 12,4 mmol), ácido borônico de fenila (1,51 g, 12,4 mmol), acetato de paládio (II) (14 mg, 0,5 % por mol) e carbonato de potássio (5,14 g, 37,2 mmol) foram agitados em água desgaseificada (75 cm3 (75 mL)) à temperatura ambiente durante 2 h, sob uma atmosfera de árgon. A reação foi monitorizada por TLC (diclorometano/pentano 1:1). Foi adicionada água (75 cm3 (75 mL)) e a mistura reacional acidificada (pH 6) com HCl a 10 %, depois extraída com acetato de etila (3x). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, depois secos e concentrados. O material em bruto foi passado através de uma pequena coluna de sílica, eluindo com diclorometano/pentano 1:1, depois recristalizado a partir de acetato de etila/pentano para originar 2-hidroxi- 5-fenilbenzaldeído (1,89 g, 77 %) como cristais amarelo- escuros (pode ser triturado com pentano em vez de recristalizado se desejado); mp 373,15-374,15 K (100-101 °C). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10,99 (s, 1H); 9,97 (s, 1H); 7,787,73 (m, 2H); 7,56-7,52 (m, 2H); 7,47-7,41 (m, 2H); 7,37-7,32 (m, 1H); 7,09-7,04 (m, 1H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 196,9, 161,2, 139,6, 136,0, 133,6, 132,1, 129,2, 127,6, 126,8, 121,0, 118,4. EIMS: m/z 198 [M]+. HRMS calcd para C13H10O2 198,0675, encontrada 198,0677. SÍNTESE DE 3-FORMILBIFENIL-4-IL- TRIFLUOROMETANOSSULFONATO (11)

[066] 2-Hidroxi-5-fenilbenzaldeído (100 mg, 0,50 mmol), N-feniltriflimida (180,0 mg, 0,51 mmol) e carbonato de potássio (209 mg, 1,51 mmol) foram agitados em THF seco em um tubo selado, e aquecidos a 393,15 K (120 °C) durante 6 min, usando irradiação de micro-ondas. O solvente foi removido sob pressão reduzida; água e diclorometano foram adicionados e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída adicionalmente com diclorometano (2x). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (1x), depois secos e concentrados. Purificados por cromatografia radial, eluindo com diclorometano/pentano 1:1, para originar 3- formilbifenil-4-il-trifluorometanossulfonato (143 mg, 86 %) como um óleo incolor, límpido. 1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 10,32 (s, 1H); 8,17 (d, 1H, J=2,4 Hz); 7,89 (dd, 1H, J=8,6, 2,5 Hz); 7,63-7,36 (m, 6H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 186,5, 149,1, 142,3, 138,0, 134,1, 129,2, 129,1, 128,8, 128,6, 127,2, 122,9, 118,7 (q, JCF=320,9 Hz). 19F NMR (188 MHz, CDCl3) δ -73.2. EIMS: m/z 330 [M]+. HRMS calcd para C14H9F3O2S 330,0168, encontrada 330,0163. SÍNTESE DE 2 ‘ - [3-BENZILOXI- (1,1‘:4,,1,>- TERFENIL)]CARBALDEÍDO (12)

[067] 3-Formilbifenil-4-il- trifluorometanossulfonato (153 mg, 0,463 mmol), ácido 3-benziloxifenilborônico (116 mg, 0,51 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (13 mg, 2,5 % por mol) e fosfato de potássio anidro (147 mg, 0,695 mmol) foram colocados em um frasco de Schlenk, sob uma atmosfera de árgon. 1,4-Dioxano desgaseificado (2 cm3 (2 mL)) foi adicionado e a mistura purgada com árgon. A mistura reacional foi aquecida a 358,15 K (85 °C) até ter sido observada conversão completa (monitorizada por GCMS); requereu geralmente tempo de reação durante a noite. A mistura reacional foi diluída com benzeno (4 cm3 (4 mL)) e tratada com peróxido de hidrogênio aquoso a 30 % (10 cm3 (10 mL)). O produto foi extraído com éter de dietila (3X); os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, depois secos e concentrados. Purificados por cromatografia radial, eluindo com diclorometano/pentano 1:1, para originar 2‘-[3-benziloxi- (1,1‘:4‘,1‘‘-terfenil)]carbaldeído (122 mg, 72 %) como um óleo viscoso, incolor, límpido. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10,02 (s, 1H); 8,24 (dd, 1H, J=2,1, 0,3 Hz); 7,86 (dd, 1H, J=8,0, 2,1 Hz); 7,68-7,64 (m, 2H); 7,56-7,30 (m, 10H); 7,087,02 (m, 2H); 7,01-6,97 (m, 1H); 5,11 (s, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 192,6, 159,0, 144,8, 141,0, 139,7, 139,1, 136,9, 134,2, 132,2, 131,4, 129,8, 129,2, 128,9, 128,4, 128,2, 127,8, 127,3, 126,1, 123,2, 116,9, 114,9, 70,4. EIMS: m/z 364 [M]+. HRMS calcd para C26H20O2 364,1458, encontrada 364,1450. SÍNTESE DE 2 ‘ - [3-BENZILOXI- (1,1‘:4,,1,>- TERFENIL)]ACRILAMIDA (13)

[068] 2 ‘- [3-Benziloxi-(1,1':4',1"- terfenil)]carbaldeído (201 mg, 0,552 mmol) e dietil(carbamoílmetil)fosfonato (108 mg, 0,55 mmol) foram dissolvidos em THF seco (7 cm3 (7 mL)), e adicionados lentamente a uma suspensão vigorosamente agitada de hidróxido de potássio pulverulento (62 mg, 1,10 mmol) em THF (2 cm3 (2 mL)). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, sob uma atmosfera de árgon, monitorização por TLC (diclorometano/pentano 1:1). O THF foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo absorvido em água e extraído com diclorometano (3x). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (1x), depois secos e concentrados. A recristalização a partir de acetato de etila/pentano originou 2‘-[3-benziloxi-(1,1‘:4‘,1‘‘-terfenil)]acrilamida (137 mg, 61 %) como cristais amarelo-pálidos; mp 448,15-449,15 K (175-176 °C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,95 (d, 1H, J=2,0 Hz); 7,78-7,22 (m, 3H); 7,55-7,31 (m, 12H); 7,17-7,07 (m, 2H); 6,99 (m, 1H); 6,92 (m, 1H); 6,79 (d, J=15,8 Hz, 1H); 5,16 (s, 2H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 166,5, 158,3, 140,8, 140,7, 139,8, 139,4, 137,5, 137,0, 133,2, 130,9, 129,5, 129,1, 128,5, 127,9, 127,8, 127,8, 127,6, 126,8, 124,5, 123,8, 122,2, 115,9, 114,0, 69,4. EIMS: m/z 405 [M]+. HRMS calcd para C28H23NO2 405,1723, encontrada 405,1714. SÍNTESE DE 2 ‘ - [3-HIDROXI- (1,1‘:4,,1"- TERFENIL)]PROPANAMIDA (VB0004)

[069] 2 ‘- [3-Benziloxi-(1,1':4',1"- terfenil)]acrilamida (740 mg, 1,82 mmol) e catalisador de paládio a 10 % em carbono (100 mg) foram agitados à temperatura ambiente durante 20 h, sob uma atmosfera de hidrogênio. O catalisador foi removido por filtração em papel de filtro de vidro seguido por filtração em Celite, depois concentrado. Purificado por cromatografia radial, eluindo com diclorometano/pentano 1:1, seguido por recristalização a partir de acetato de etila/pentano para originar 2‘-[3- hidroxi-(1,1‘:4‘,1‘‘-terfenil)]propanamida (224 mg, 39 %) como cristais incolores; mp 436,35-438,05 K (167,2-168,9 °C). 1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 9,52 (s, 1H); 7,77-7,15 (m, 10H); 6,87-6,65 (m, 4H); 2,84 (m, 2H); 2,31 (m, 2H). C NMR (50 MHz, DMSO-d6) δ 173,4, 157,1, 142,1, 140,6, 140,0, 139,1, 139,1, 130,2, 129,2, 128,9, 127,4, 127,2, 126,6, 124,1, 119,6, 115,8, 114,0, 36,2, 28,2. EIMS: m/z 317 [M]+. HRMS calcd para C21H19NO2 317,1410, encontrada 317,1411.

SÍNTESE DE CARBAMOÍLMETILFOSFONATO DE DIETILA (F)

[070] 2-Cloroacetamida (5,01 g, 53,6 mmol) e fosfita de trietila (9,19 cm3 (9,19 mL), 53,6 mmol) foram aquecidos ao refluxo em o-xileno (14 cm3 (14 mL)) durante 3,5 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida para originar um resíduo tipo alcatrão marrom-escuro. O resíduo foi absorvido em diclorometano e filtrado através de uma pequena coluna de sílica. O filtrado foi concentrado e o sólido recristalizado a partir de acetato de etila/pentano para originar carbamoílmetilfosfonato de dietila (3,42 g, 33 %) como cristais marrom-claros. 1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 7,35 (br s, 1H); 7,02 (br s, 1H); 4,02 (dq, 4H, J=7,1 Hz, 3JPH=1,1 Hz); 2,80 (d, 2H, 2JPH =21,4 Hz); 1,23 (t, 6H, J=7,0 Hz). 13C NMR (50 MHz, DMSO-d6) δ 166,0 (d, 2JCP=5,1 Hz); 61,5 (d, 2JCP=6,0 Hz); 34,5 (d, 1JCP=131,6 Hz); 16,2 (d, 3JCP=6,0 Hz). 31P NMR (81 MHz, DMSO-d6) 23,8. ESIMS: m/z 218 [M+Na]+. HRMS calcd para C6H14NO4P 195,0655, encontrada 195,0653. EXEMPLO 2 - RASTREIO IN VITRO

[071] O sistema xCELLigence SP (Roche) foi usado para medir mudanças na impedância celular (índice celular) após o tratamento de células embriônicas do músculo liso vascular A10 (ATCC, CRL-1476) com VB0004. Este ensaio in vitro foi correlacionado com dados de pressão sanguínea obtidos no modelo animal descrito em baixo no Exemplo 3, tal que possa ser usado para rastreio mais rápido de maior número de compostos. Em este sistema experimental à base de células in vitro, um perfil de impedância negativa se correlaciona com redução da pressão sanguínea em ratos - uma diminuição na impedância está associada a vasodilatação e um aumento na impedância está associado a vasoconstrição (Stallaert W, Dorn JF, van der Westhuizen E, Audet M & Bouvier M. Impedance responses reveal β-adrenergic signaling pluridensitometry and allow classification of ligands with distinct signalling profiles PLoS ONE 2012; 7(1):e29420, doi:10.1371/journal.pone.0029420).

[072] Brevemente, 50 mm3 (50 μL) de meio de cultura de células (DMEM pouca glucose suplementado com soro de bovino fetal a 10 % a 310,15 K (37 °C) foram adicionados a cada poço de uma E-Plate 96 (Roche), e a impedância de fundo em cada poço foi medida. 50 mm3 (50 μL) de suspensão de células A-10 (10.000 células/poço) foram depois adicionados aos poços apropriados da E-Plate 96. O índice celular foi monitorizado para cada poço da E-Plate 96 em RTCA SP Station dentro do incubador da cultura de células. Após incubação durante a noite durante 16-20 horas a CO2 a 5 % e umidade a 95 %, 100 mm3 (100 μL) de solução de VB0004 (VB0004 foi preparado em DMSO e diluído com meio de cultura de células até uma concentração final de DMSO de 0,25 %) foram adicionados aos poços apropriados da E-Plate 96 e os valores do índice celular foram medidos imediatamente após tratamento com composto a cada 20 segundos durante 3 horas. O valor do índice celular é corrigido pela linha de base por subtração do índice celular de células tratadas com veículo e normalizadas por divisão pelo índice celular no momento imediatamente antes da adição de composto. O índice celular normalizado pela linha de base como uma função do tempo é representado graficamente usando software RTCA da Roche.

[073] Os compostos podem alcançar reduções na pressão sanguínea por interação com células do músculo liso vascular fazendo com que estas células relaxem resultando em vasodilatação e uma redução na pressão sanguínea. Estes são denominados vasodilatadores diretos. A resposta de impedância negativa observada para células do músculo liso vascular A10 tratadas com VB0004 a concentrações de 62,5, 125 e 250 μmol/dm3 (μM) (Figura 3) demonstra que VB0004 é um vasodilatador direto. Estes resultados se correlacionam bem com pressão sanguínea sistólica média em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 % após tratamento de 4 semanas com 10, 100 e 500 pmol/kg/min de VB0004 oralmente (ver Figura 4 e em baixo).

[074] O sistema xCELLigence SP (Roche) foi também usado para medir mudanças na impedância celular (índice celular) após o tratamento de células endoteliais aórticas de bovino (European Collection of Cell Cultures) com composto de teste. O método empregue é o mesmo para as células embriônicas do músculo liso vascular A10 descritas acima mas com o meio de cultura de células suplementado com soro de bovino fetal a 15 % em vez de 10 %.

[075] Os compostos podem interagir com células endoteliais vasculares causando a liberação de substâncias tais como óxido nítrico e fator hiperpolarizante derivado do endotélio, que por seu turno atuam nas células do músculo liso vascular causando vasodilatação e diminuindo a pressão reduzida. Tais compostos são denominados vasodilatadores indiretos. A resposta de impedância negativa observada para células endoteliais aórticas de bovino tratadas com VB0004 a concentrações de 62,5, 125 e 250 μmol/dm3 (μM) (Figura 5) demonstra que VB0004 é também um vasodilatador indireto. EXEMPLO 3 - RASTREIO IN VIVO ESTUDOS ORAIS

[076] SHR com catorze semanas de idade (em um regime alimentar com sal a 2,2 %; Glen Forrest Stockfeeders) foram aleatoriamente atribuídos a controle de tempo zero, tratamento com VB0004 (10, 100, 500, 1.000 e 2.500 pmol/kg/min) na solução de bebida ou solução de bebida de controle (etanol a 5 % em água destilada desionizada) (n = 5 cada grupo). Os ratos atribuídos ao grupo de controle de tempo zero foram anestesiados e seu coração e rins foram coletados enquanto os ratos atribuídos ao controle e tratamento com VB0004 foram pesados duas vezes semanalmente e sua toma de solução de bebida foi monitorizada para permitir ajuste da concentração de VB0004 na solução de bebida para manter uma dose constante ao longo dos períodos de estudo de 4, 6 ou 8 semanas. A pressão sanguínea foi medida duas vezes semanalmente por pletismografia de cauda (PowerLab, ADInstruments, Castle Hill, NSW, Austrália). Após 4, 6 ou 8 semanas, os ratos foram anestesiados, e seu coração e rins coletados para quantificação da fibrose.

ADMINISTRAÇÃO INTRAVENOSA

[077] SHR com catorze semanas de idade (em um regime alimentar com sal a 2,2 %; Glen Forrest Stockfeeders) foram aleatoriamente atribuídos a controle de tempo zero, infusão de VB0004 (10 e 20 pmol/kg/min,) ou infusão de veículo (DMSO a 20 % em salino normal, Baxter Healthcare, Sidney NSW Austrália) (n=5 cada grupo). Os ratos foram anestesiados e o coração e rins dos ratos atribuídos ao grupo de controle de tempo zero foram coletados enquanto uma cânula foi inserida na veia ilíaca que estava conectada com uma minibomba osmótica Alzet (Durect Corporation, Cupertino, CA, EUA) contendo VB0004 ou veículo em ratos atribuídos à infusão de VB0004 ou veículo. A pressão sanguínea foi medida duas vezes semanalmente por pletismografia de cauda (PowerLab, ADInstruments, Castle Hill, NSW, Austrália). Após 4 semanas, os ratos foram novamente anestesiados, seu coração e rins coletados para quantificação da fibrose.

QUANTIFICAÇÃO DA FIBROSE

[078] Para quantificar a fibrose, pedaços de tecido com espessura < 3 mm foram fixos em formalina tamponada a 10 % durante 24 horas, processados e embebidos em parafina. Seções transversais de três mícrons foram coradas usando coloração tricrômica de Masson. Um mínimo de 20 campos aleatórios com ampliação x20 de seções transversais (5 em cada um de 2 níveis) foi digitalizado e o grau de fibrose determinado como uma percentagem de área de campo de cada imagem digitalizada usando Image-Pro Plus V.5 (Media Cybernetics, Bethesda, MD, EUA), depois foi calculada a média para se determinar o nível de fibrose para tecido para cada rato.

RESULTADOS

[079] A pressão sanguínea sistólica média em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 % após tratamento de 4 semanas com 10, 100 e 500 pmol/kg/min de VB0004 oralmente mostrou pressão sanguínea diminuída em comparação com controles (Figura 4).

[080] A administração intravenosa de VB0004 a 10 e 20 pmol/kg/min durante 4 semanas diminuiu a SBP em 20 mmHg em comparação com controle de veículo (Figura 6).

[081] A pressão sanguínea sistólica média em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 % tratados com VB0004 a 10 a 2.500 pmol/kg/min dados oralmente durante 4 semanas mostrou pressão sanguínea diminuída com dose aumentada em comparação com controles (Figura 7). À medida que a pressão sanguínea sistólica continua a diminuir com dose crescente sem alcançar patamar, nenhuma dose máxima foi ainda delineada.

[082] A pressão sanguínea sistólica média em SHR em um regime alimentar com sal a 2,2 % tratados com VB0004 a 2.500 pmol/kg/min dados oralmente continuou a diminuir com o tempo indicando que o efeito máximo para esta dose não havia sido ainda alcançado após terapia de 8 semanas (Figura 8).

[083] A fibrose no coração após tratamento de 4 semanas com VB0004 oralmente em SHR com 18 semanas de idade em regime alimentar com sal a 2,2 % a doses de 10 a 500 pmol/kg/min (barras tracejadas) diminuiu em comparação com fibrose em controles de 14 e 18 semanas (barras abertas) em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 % (Figura 9).

[084] A fibrose no rim após tratamento de 4 semanas com VB0004 oralmente em SHR com 18 semanas de idade em regime alimentar com sal a 2,2 % a doses de 10 a 500 pmol/kg/min (barras tracejadas) diminuiu em comparação com fibrose em controles de 14 e 18 semanas (barras abertas) em SHR em regime alimentar com sal a 2,2 % (Figura 10).

[085] O coração de animais de controle (SHR com 18 semanas de idade em regime alimentar com sal a 2,2 %) mostrou tecido fibroso extenso (aparece cinzento na coloração tricrômica de Masson) enquanto o coração de animais tratados com VB0004 não teve virtualmente nenhum tecido fibroso presente (Figura 11).

[086] O rim de animais de controle (SHR com 18 semanas de idade em regime alimentar com sal a 2,2 %) mostrou tecido fibroso extenso (aparece cinzento na coloração tricrômica de Masson) enquanto o rim de animais tratados com VB0004 não teve virtualmente nenhum tecido fibroso presente (Figura 12).

Claims

1. COMPOSTO, caracterizado por ser de fórmula

ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável.

2. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo composto ser de fórmula

ou um seu estereoisômero ou sal aceitável.

3. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender um composto, ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

4. USO DE UM COMPOSTO, ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de hipertensão ou pré-hipertensão.

5. USO DE UM COMPOSTO, ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento profilático de fibrose.

6. USO DE UM COMPOSTO, ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de fibrose.

7. USO DE UM COMPOSTO, ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de hipertensão e fibrose.

8. USO DE UM COMPOSTO, ou um seu estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico de pré-hipertensão e fibrose.

9. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, caracterizado pela fibrose ser fibrose miocárdica ou fibrose renal.

10. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, caracterizado pela fibrose ser fibrose miocárdica e fibrose renal.