BR112015023445B1 - Composições de poliamida antimicrobiana e tratamento de mastite - Google Patents
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Abstract
COMPOSIÇÕES DE POLIAMIDA ANTIMICROBIANA E TRATAMENTO DE MASTITE. A presente invenção se refere a composições veterinárias e métodos para o tratamento e / ou prevenção da mastite em mamíferos não-humanos. Mais particularmente, a presente invenção se refere ao tratamento de mastite em vacas. A composição veterinária compreende um polímero de poliamida amina funcional antimicrobiana de atuação local, solúvel em água
Description
[0001] Este pedido reivindica a prioridade do pedido de patente provisório Norte-Americano US 61/790,231, depositado em 15 de março, 2013, o qual é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Todos os documentos citados ou mencionados neste documento ("aqui citados como documentos"), e todos os documentos citados ou referenciados em documentos aqui citados, juntamente com instruções de todo o fabricante, descrições, especificações de produtos e bulas de produto para quaisquer produtos mencionados neste documento ou em qualquer documento incorporado por aqui como referência, são aqui incorporados por referência e podem ser empregados na prática da invenção.
[0002] Esta invenção se refere de uma forma geral, a utilização de poliamidas com funcionalidade amina, antimicrobiana, solúvel em água na produção de composições veterinárias seguras e eficazes. A invenção refere-se ainda à utilização destas composições para prevenir e tratar a mastite em animais, incluindo em gado leiteiro. Prevê-se que as composições da presente invenção podem também ser utilizadas para prevenir e tratar infecções causadas por agentes patogênicos e que tenham entrado nos animais através de membranas mucosasusceptíveis, feridas, ou através de procedimentos pós / intra operatórios.
[0003] A mastite é a doença mais comum do gado leiteiro. Em rebanhos comerciais, o custo devido à qualidade do leite reduzido pode ser extremamente significativo. Este custo pode ser devido à diminuição da produção e a necessidade de reter o leite contaminado a partir do fluxo de processamento. A mastite é uma resposta inflamatória do tecido úbere devido a algum tipo de lesão, sendo infecção bacteriana a mais comum. A resposta inflamatória é constituída por um aumento de proteínas do sangue e células brancas do sangue no tecido mamário e o leite. A contagem de células somáticas, SCC, aumenta de cerca de 200.000 SC / mL de leite (não infectado) para mais de 300.000 SC / mL de leite (inflamação / infecção). O objetivo desta resposta é destruir o agente irritante, reparar o tecido danificado e regresso do úbere à função normal. A inflamação é caracterizada por: (a) inchaço do úbere, onde persistência de inflamação leva a danos nos tecidos e substituição de tecidos secretores dentro do úbere com tecidos conjuntivos não produtivos, (b) coagulação do leite, leucócitos, em que estes coágulos são congelados, as células secretoras e proteína e (c) uma produção de leite inferior.
[0004] Além disso, a contaminação do leite expõe os consumidores humanos a doenças, incluindo a tuberculose, dor de garganta, febre Q, brucelose, leptospirose. etc.
[0005] A mastite começa após as bactérias passarem através do canal da teta e entram na parte da tetina conhecida como o autoclismo. Os agentes patogênicos causadores de mastite significativa incluem, mas não estão limitados a, Staphylococcus spp. (Incluindo S. aureus), Streptococcus spp. (Incluindo S. agalactiae e S. dysgalactiae e S. uberis) e E. coli. Existem dois grandes períodos durante os quais isso pode ocorrer: durante o período de lactação ou durante o período de não lactação (seca). Durante o período de lactação, invasão da teta geralmente ocorre durante a ordenha. Após a ordenha, o canal da teta permanece dilatado por 1 - 2 horas, enquanto o canal de uma tetina danificada pode permanecer parcialmente aberto permanentemente. Isto faz com que seja mais fácil para os organismos a partir do ambiente ou aqueles encontrados na pele lesada de entrar no canal da teta. A adesão das bactérias aos tecidos que revestem cisternas e dutos podem impedir a lavagem-fora durante a ordenha e ajudar a estabelecer infecções. Bactérias, eventualmente, introduzem-se nos tecidos glandulares onde elas afetam as células alveolares. As toxinas produzidas pelas bactérias causam a morte ou dano de células epiteliais secretoras de leite, e estas células produzem substâncias para o fluxo de sangue que aumentam a permeabilidade dos vasos sanguíneos. Isto permite que os leucócitos se movam a partir do sangue para dentro do alvéolo onde funcionam engolindo as bactérias.
[0006] Na conclusão do período de lactação e uma vez a ordenha tenha acabado, a estação do canal da teta é fechado, através da formação de um dilatador da teta queratina natural. Isto acontece normalmente ao longo de um período de 2 - 3 semanas. No entanto, antes da formação da tetina conectar ao canal da teta é aberta e altamente susceptíveis a infecção bacteriana. Ele também pode ser o caso de que, se o dilatador da teta é pouco desenvolvido, há uma oportunidade para infecção em curso. Na verdade leva entre um e nove semanas para a maioria das vacas formar este plug e até 5% das vacas nunca formam um. Tipicamente, 50% dos bicos podem ainda estar "aberto" a 10 dias após a secagem (ver, por exemplo, Williamson JH, Woolford MW, Dia AM. O efeito profilático de um antibiótico de vaca seca contra Streptococcus uberis. Nova Zelândia Veterinary Journal (1995) 43, 228-234).
[0007] Para evitar novos casos de mastite no período seco, muitos agricultores tratam as vacas com um tratamento profilático de um antibiótico intramamário. Este é administrado sob a forma de uma pasta ou gel com infusão de antibiótico. A seringa é usada para inserir o material diretamente para dentro do canal da teta através da abertura na base da teta. Prevenção da mastite é dependente de antibiótico suficiente sendo retida no canal do teta para matar todas as bactérias que podem entrar no canal da teta durante o período seco. No entanto, mais recentemente, tem havido uma preocupação crescente em relação ao uso de antibióticos tradicionais (por exemplo, beta-lactamas, macrolidos, e semelhantes) em vacas leiteiras. Isto é devido a duas razões: (a) o potencial de resíduos de antibióticos no leite, o que pode causar problemas de tratamento de leite na produção de produtos lácteos à base de cultura e (b) o potencial para o desenvolvimento da resistência de cepas bacteriana aos antibióticos que atravessam a partir dos animais aos humanos. Seria, portanto, altamente desejável desenvolver novos agentes antimicrobianos, e métodos e composições para a entrega do mesmo, que não sofrem destas desvantagens, para resolver o problema dispendioso de mastite da vaca leiteira. Tais agentes antimicrobianos melhorados poderiam igualmente muito bem proteger os animais contra uma série de patógenos, incluindo aqueles que entram através de membranas sensíveis (por exemplo, boca, nariz, pulmões, etc.), feridas, e incisões pós-operatórias.
[0008] Para o conhecimento adicional sobre o estado da técnica, consulte US 2010/0143510 Al, pela Merial Limited;US6740322 B2, pela Universidade de Saskatchewan; e WO 2014/001353 Al, pela Bayer Animal Health.
[0009] Em um aspecto, a invenção proporciona composições veterinárias seguras e eficazes compreendendo poliamidas antimicrobianas com funcionalidade de amina, solúvel em água possuindo a estrutura geral tal como foi estabelecido na fórmula IV. Vários métodos de síntese específicos, também são fornecidos, mas agora que o gênero de poliamida antimicrobiana tem sido divulgado, o técnico versado no assunto será capaz de produzir várias outras espécies de poliamida, usando técnicas de rotina.
[0010] Em um outro aspecto, o invenção proporciona métodos de utilização das composições para o tratamento e prevenção de infecções microbianas em um animal que dele necessite. Em uma concretização particular, as composições antimicrobianas que atuam localmente são extraordinariamente bem adaptadas para o tratamento e prevenção da mastite em gado leiteiro.
[0011] Em uma concretização, a poliamida é um composto de Fórmula (I)
(I) em que: i) m é 0, 1, 2, ou 3; ii) n representa 0, 1, 2, ou 3; iii) o é 0, 1, 2, or 3; iv) p representa 0 ou 1; v) r é 0 ou 1; vi) q é um inteiro de 1 a 400; vii) QX é NH, (C1-C10) alquil, (C2-C9), heteroalquil, (C3-C10) cicloalquil, (C2-C9) heterocicloalquil, (C6-C14) aril, (C2 -C9)) heteroaril; viii) QY é NH-RW, NH-CH2-RW, (C1-C10) alquil, ou (C6-C14) aril, em que RW está ausente, ou um (C1-C10) alquil, (C2-C9) heteroalquil, (C6-C14) aril, ou (C2-C9)) heteroaril; ix) R e Ry são cada um, independentemente, um grupo final farmaceuticamente aceitável.
[0012] Em uma concretização, a poliamida tem a estrutura de fórmula (II):
em que: ânion farmaceuticamente aceitável; xi) Y1 e Y2 são cada um independentemente H ou (C1-C10) alquil opcionalmente substituído por um ou mais substituintes seleccionados a partir do grupo constituído por (C1-C10) alquil, (C2-C9) , heteroalquil, (C3-C10) cicloalquil, (C2 -C9) heterocicloalquil, (Cβ-Cu) aril, (C2 -C9) heteroaril, (C1-C10) alquilamina, -S- 0- (C1-C10) alquil, -O (O) C- (C1-C10) alquil, - (C1-C10) alquil-COOH, (C3-C10) cicloalquil-COOH, -(0)CH3, - OH, amida, um grupo hidroxi, representado pelo fórmula (D), 
[0013] em que d é um número inteiro de 0 a 25, ou
[0014] um grupo polietileno-glicol, representado pela fórmula (E)
[0015] em que e é um número inteiro de 1 a 25.
[0016] Em uma outra concretização, a poliamida tem a estrutura de fórmula (III):
em que: i) m é 0, 1, 2, ou 3; ii) n é 0, 1, 2, ou 3; iii) o é 0, 1, 2, ou 3; iv) p é 0 ou 1; v) r é 0 ou 1; vi) q é um inteiro de 1 a 400; vii)QX é NH, (C1-C10) alquil, (C2-C9), heteroalquil, (C3 — C10) cicloalquil, (C2-C9) heterocicloalquil, (Ce -C14) aril, (C2 -C9) heteroaril; viii) QY é NH-RW , NH-CH2-RW , (C1-C10) alquil, ou (C6-C14) aril, em que RW está ausente, ou um (C1-C10) alquil, (C2-C9), heteroalquil, (C6-C14) aril, ou (C2-C9) heteroaril; ix)Rx e Ry são cada um, independentemente, um fim farmaceuticamente aceitável x) X" é um halo ou qualquer anião farmaceuticamente aceitável; xi) Y1 representa H ou alquil (C1-C10) opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo de (C1-C10) alquil, (C2-C9) heteroalquil, (C3-C10) cicloalquil, (C2-C9) heterocicloalquil, (C6-C14) aril, (C2 -C9) heteroaril, (C1-C10) alquilamina, -S- 0- (C1-C10) alquil, -O(O)C-(C1-C10) alquil, - (C1-C10) alquil - COOH, (C3-C10) cicloalquil-COOH, -(0)CH3, -OH, amida, um grupo hidroxi, representado pelo fórmula (D),
em que d é um número inteiro de 0 a 25, ou um grupo polietileno-glicol, representado pela fórmula (E),
em que E é um inteiro de 1 a 400.
[0017] Em concretização, a poliamida tem a estrutura de fórmula (IV):
em que: i) L é 0, 1, 2, ou 3; ii) v é 0, 1, 2, ou 3; iii) q é um inteiro de 1 a 400; iv) QX é NH, (C1-C10) alquil, (C2-C9), heteroalquil, (C3-C10) cicloalquil, (C2-C9) heterocicloalquil, (C6-C14) aril, (C2- C9) heteroaril; v) QY é NH-RW, NH-CH2-RW, (C1-C10) alquil, ou (C6-C14) aril, em que RW está ausente, ou um (C1-C10) alquil, (C2-C9), heteroalquil, (C6-C14) aril, ou (C2-C9) heteroaril; vi) Rx e Ry são cada um, independentemente, um grupo final f armaceuticamente aceitável.
[0018] Em outra concretização, a poliamida tem a estrutura de fórmula (V):
i) u é 0, 1, 2, ou 3; ii) v é 0, 1, 2, ou 3; iii) q é um inteiro de 1 a 400; iv) QX é NH, (C1-C10) alquil, (C2-C9), heteroalquil, (C3-C6) cicloalquil, (C2-C9) heterocicloalquil, (C6-C14) aril, (C2-C9)) heteroaril; v) QY é NH-RW, NH-CH2- W, (C1-C10) alquil, ou (C6-C14) aril, em que RW está ausente, ou um (C1-C10) alquil, (C2-C9) heteroalquil, (C6-C14) aril, ou (C2-C9) heteroaril; vi) Rx e Ry são cada um, independentemente, um grupo final farmaceuticamente aceitável; vii) X" é independentemente um halo ou qualquer anião farmaceuticamente aceitável, Y1 e Y2 representam independentemente H ou (C1-C10) alquil opcionalmente substituído por um ou mais substituintes seleccionados a partir do grupo constituído por (C1-C10) alquil, (C2 -C9), heteroalquil, (C3-C10) cicloalquil, (C2-C9) heterocicloalquil, (C6-C14) aril, (C2-C9) heteroaril, (C1C10) alquilamina, -S- 0- (C1-C10) alquil, -O (O) C- (C1-C10) alquil, - (C1-C10) alquil-COOH,(C3-Cio) cicloalquil-COOH, - (0) CH3, -OH, amida, um grupo hidroxi, representado pelo fórmula (D),
em que d é um número inteiro de 0 a 25, ou um grupo polietileno-glicol, representado pela fórmula (E)
em que E é um inteiro de 1 a 400.
[0019] É um objetivo da invenção consistit em não incluir no escopo da invenção qualquer produto previamente conhecido, processo de fabricação do produto, ou método de utilização do produto, de tal modo que os requerentes reservam-se o direito e por este meio divulgar um aviso de qualquer produto previamente conhecido, processo, ou método. É ainda de notar que a invenção não tem a intenção de englobar no escopo da invenção de qualquer produto, o processo, ou a tomada do produto ou método de utilização do produto, que não satisfaz os requisitos descritivos e capacitação escrita do USPTO (35 USC § 112, primeiro parágrafo) ou a EPO (artigo 83 da EPC), de tal forma que os requerentess se reservam o direito e por este meio divulgar um aviso de qualquer produto descrito anteriormente, o processo de tornar o produto ou método de uso do produto.
[0020] Estas e outras concretizações são reveladas ou são óbvias a partir de e abrangidas pela seguinte descrição detalhada.
[0021] Esta divulgação não contém figuras ou desenhos.
[0022] Em um aspecto da invenção, composições veterinárias são fornecidas, as quais compreendem poliamidas antimicrobianas funcionais de amina, solúvel em água e que são úteis para o tratamento e prevenção de mastite. A poliamida antimicrobiana pode ser qualquer poliamida representada pela Fórmula I, II, III, IV ou V. Em uma concretização particular, a poliamida é selecionada a partir de um dos vinte e cinco polímeros (Ay) listados na Tabela 1. Além das espécies de poliamida antimicrobiana particularmente eficaz aqui apresentadas, um técnico versado no assunto pode identificar os membros ativos adicionais de gênero descrito com a aplicação da experimentação de rotina.
[0023] Tal como ilustrado nos Exemplos a seguir, poliamidas B e C são particularmente eficazes contra uma vasta gama de agentes patogênicos que causam a mastite, em níveis tão baixos como 0,25 mcg / mL. Poliamidas L e W são especialmente eficazes contra Mycoplasma bovis (provoca infecções intratáveis respiratórias, otite média, artrite, mastite, e uma série de outras doenças em bovinos), e poliamidas BD e G são especialmente eficazes contra Moraxella bovis (provoca ceratoconjuntivite bovina ou "olho rosa").
[0024] Mais importante, os valores para "PM" na Tabela 1 indica o "peso molecular médio", determinada por cromatografia de exclusão de tamanho (SEC), que é a versão de GPC aquosa. Como tal, tal como aqui utilizado, por exemplo, "polímero B" destina-se a abranger composições que contêm o polímero B, tendo um PM médio em peso de cerca de 7,76 kDa. Além disso, "MW" destina-se a significar "peso molecular médio", a menos que expressamente indicado de outra forma.
[0025] Tal como indicado na Tabela 1, os polímeros B, C, e D, cada um tem a mesma estrutura de reanimal domésticoição (aqui definido como o poli (4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-diaminopropano)), mas um peso molecular médio de peso diferente. Além disso, os dados mostram que os polímeros MIC B, C e D tendem a ser comparativamente eficaz contra o painel de patógenos. Assim, a requerente demonstrou uma vasta gama de poli (4,4- trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-diaminopropano) graus, Mw, são agentes antimicrobianos ativos (isto é, graus MW de pelo menos cerca de 2,5 g / mol e, pelo menos, cerca de 10,6 g / ml).
[0026] Tal como aqui utilizado, os polímeros contêm unidades reanimal domésticoidas as seguintes: a [4,4- trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-4,4'- dipiperidina]; BD [4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-diaminopropano]; [Ácido penta-bispropanóico 2,2'- diamina bipirrolidina] E; L [4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-diaminopropano]; H [4,4-trimetileno- dipiperidina ácido N bispropaníico (2-aminoetil) - diaminoethane]; I [4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-N (3-aminopropil) l, 3-propano diamina]; J [4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido 3,3'- diamino-N-metil-dipropilamina; K [4,4 'dipiperidina ácido 2,2'-diamino-bispropanóico dietilamina]; G [4,4'-dipiperidina bispropanóico ácido 2,2'-diamino-N-metil dietilamina]; M [4,4'-dipiperidina ácido 3,3'-diamino-dipropilamina bispropanóico]; N [4,4'-dipiperidina ácido 3,3'-diamino-N- metil-dipropilamina bispropanóico]; O [4,4'-trimetileno dipiperidine- l, 3-diamninopropane-N, N'-di-3-propiónico]; P [4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico a ácido N, N '- dimetil- 1,3- diaminopropano]; R [4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-4,4'-dipiperidina]; S [4,4- trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-diaminopropano]; e T [4,4'-dipiperidina trimetileno bispropanóico ácido-N- glicidol dietileno triamina].
[0027] A presente invenção proporciona, assim, composições de poliamida antimicrobianas novas e não óbvias, e métodos de utilização mesmo para tratar e prevenir a mastite em animais não-humanos. Os métodos geralmente compreendem a administração a um animal infectado de uma quantidade eficaz da composição veterinária para eliminar ou curar, completamente ou substancialmente, agente patogênico (s) causadores de mastite. Conforme detalhado a seguir, os compostos de poliamida também são altamente ativos contra uma ampla gama de outros agentes patogênicos significativo humanos e animais. Além disso, as poliamidas têm demonstrado ser bem tolerada em camundongos e ratos. Por exemplo, a dose máxima tolerada para 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico ácido-co-l, 3-diamino propano era cerca de 5 mg / kg (IP) e 40 mg / kg (IV).Tabela 1. Vinte e cinco poliamidas antimicrobianas funcionais como amina. "MW" pesos moleculares médios = peso
[0028] As composições veterinárias da presente invenção podem ser na forma de solução com maior espessura (viscosidade ou modificados), géis, unguentos, suspensões, pastas, ou qualquer outra forma de dosagem adequada. Por exemplo, a formulação pode ser um gel, o qual é seguro e fácil de administrar as tetas de uma vaca leiteira. A viscosidade de tal gel, pode ser ajustada por quaçquer modificador de viscosidade/ reológico eficaz e segura veterinariamente e farmaceuticamente. Em uma concretização, o gel veterinário pode ser tixotrópico, na medida em que a sua viscosidade diminui quando a força de corte é aplicada (por exemplo, apertando um tubo de pasta de dentes permite que o pasta flua). Assim, em uma concretização, as composições podem ser de afinamento por cisalhamento.
[0029] Em outras concretizações, as composições da invenção podem incluir um ou mais agentes ativo(s). Por exemplo, nos casos em que a composição é administrada a vacas leiteiras no fim da lactação (isto é, o início do período seco), pode ser desejável incluir um agente que estimula a formação de camada de queratina. Nos casos em que o músculo do esfíncter da teta da vaca é composto, as composições de viscosidades um pouco mais elevadas podem ser usadas para melhorar a retenção na glândula mamária. Os polímeros antimicrobianos podem também ser adicionados a outros atualmente conhecidos ou ainda a serem desenvolvidas composições de pasta ou gel de período seco. A viscosidade das composições pode ser medida, por exemplo, usando um viscosímetro digital Brookfield LV-E; velocidades de medição diferentes podem ser utilizadas.
[0030] A composição deve, idealmente, ser esterilizada para garantir uma boa estabilidade de armazenamento. Em uma concretização, a viscosidade da composição de pré-esterilização é maior do que a da composição de pós-esterilização, para compensar as perdas na viscosidade que possam ocorrer durante a esterilização. Em uma outra concretização, a viscosidade da composição de pré- esterilização é mais baixa para acomodar aumentos de viscosidade mediada por esterilização.
[0031] Em uma concretização, a viscosidade da composição é responsiva ou "ajustável" em resposta às condições intramamárias, incluindo a temperatura, o pH, ou ambos. Em uma concretização particular, a composição de viscosidade aumenta após a exposição a um pH típico de leite no interior da glândula mamária. Em uma outra concretização, a composição é, de uma composição termo-reversível à base de água, que é altamente fluida antes da administração, mas por géis rapidamente o efeito da temperatura do úbere do animal. Tal situação da viscosidade ou dependente do ambiente pode ser conseguida por inclusão na composição de uma variedade de polímeros de força-iónica, termo- ou -ajustadores de pH. Exemplos não exaustivos de agentes modificadores da reologia de microgel de pH-responsive incluem polímeros Carbopol em pó e polímeros de emulsão alcalina-dilatável (ASE) que contêm uma parte de ácido carboxílico. Uma característica principal destes materiais é o grande aumento no diâmetro das partículas do polímero reticulado individual quando o pH é aumentado acima do pKa do grupo ácido. Outros modificadores de reologia podem compreender copolímeros anfifílicos reticulados de acrilatos de alquil e ésteres de hidroxialquil que são ativados por vários surfactantes.
[0032] Assim, para conseguir as propriedades de reologia e viscosidade desejada, a composição pode ainda compreender um agente de espessamento ou de modificador de reologia (TRM) veterinariamente aceitável. TRM incluem, não exclusivamente: derivado de celulose, metilcelulose (MC), etilcelulose (EC), EC N50, hidroximetilcelulose (HMC), hidroxipropilcelulose (HPC), hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), hidroxietilcelulose (HEC), polietilenoglicóis (PEG), os poloxâmeros, copolímeros em bloco, polímeros reticulados à base de ácido acrílico, carbômeros, Polímeros CARBOPOL®, emulsão de polímeros (ASE) alcalino-inchável, polissacarídeos, polissacarídeos modificados, amidos modificados, amido parcialmente ou pré-gelatinizado, estearato de alumínio, 12-hidroxiestearina, THIXCIN®, cera de abelha, as ceras emulsionantes, óleo de amendoim hidrogenado, óleo de rícino, óleo de rícino hidrogenado, parafina dura / mole, os sais de metal de ácidos graxos, mucoadesivos, metossulfato alquil triamônio, octanoato ceteraril, álcool polivinílico, glicerol, quitosano, derivados de quitosano, quitosano trimetilada, goma de xantana, goma de guar, ácido hialurônico, agentes termo-gelificantes, agentes de pseudoplasticidade, agentes de cisalhamento-gelificantes, policarbofil, óxido de polietileno, sílica, sílica fumada, qualquer óxido de metal fumado, sais de metais pesado não tóxico, óleos hidrogenados, óleo de rícino hidrogenado e combinações dos mesmos.
[0033] Para os TRMs à base de celulose (HPMC, HEC, HPC, e semelhantes), o efeito de gelificação ou de espessamento é determinado por, pelo menos, 1) o número de grupos hidroxila disponíveis para formar ligações de H; e 2) o PM do polímero. Tipicamente, os TRMs à base de celulose de grau de PM muito elevado formam soluções de viscosidade significativamente mais elevadas, relativamente aos seus homólogos de grau de PM inferior (dado o mesmo p / v por cento em solução). O técnico versado no assunto está ciente dessas características, e entende como "afinar" a viscosidade da composição para gel em qualquer temperatura razoável. Assim, em uma concretização, a composição é, então, "sintonizada" em gel à temperatura do úbere de um animal em lactação.
[0034] Em uma outra concretização, a presença do TRM à base de celulose na composição é associada com uma ligeira diminuição da viscosidade (dentro da mesma ordem de grandeza) quando a composição é movida a partir de uma temperatura de cerca de 20 ° C a cerca de 33 ° C. Em tal concretização, a composição é ainda muito bem retida em um úbere, no entanto, ao mesmo tempo, devido à sua miscibilidade melhorada fluido úbere (devido à sua viscosidade reduzida), o API pode ser liberado relativamente mais rapidamente. Os inventores visionaram que todos os tipos de ajustes térmico, pressão / cisalhamento e / ou pH da viscosidade da composição rotineiramente praticado pode ser empregado para atingir o perfil de viscosidade desejado.
[0035] A composição pode também ser espessada até ao ponto em que é considerado uma "pasta". A consistência pastosa pode ser conseguida por adição de uma quantidade suficiente de sílica ou outro material de espessamento adequado. Mucoadesivos e agentes formadores de pasta podem facilitar vezes úbere-de retenção mais longos, em particular, para a aplicação na "vaca seca". Em uma concretização particular, o agente muco-adesivo pode ser um acrílico reticulado com base em ácido do polímero, policarbofil, quitosano (ou seus derivados, tais como quitosano trimetilada), óxido de polietileno ou combinações dos mesmos.
[0036] Em uma concretização, a composição da pasta pode compreender, pelo menos, um sal de metal pesado não tóxico, incluindo subnitrato de bismuto. Uma pasta veterinariamente adequada pode também compreender uma base de gel (que compreende parafina líquida), estearato de alumínio e dióxido de silício. A sílica pirogenada, tais como AEROSIL®, é um TRM particularmente útil e agente tixotrópico. No entanto, qualquer óxido de metal coloidal pirogenado veterinariamente aceitável pode ser usado na prática da invenção.
[0037] As composições veterinárias podem ainda compreender um ou mais antioxidante selecionado a partir de alfa-tocoferol, ácido ascórbico, palmitato de ascorbilo, ácido fumárico, ácido málico, ascorbato de sódio, metabissulfato de sódio, galato de n-propilo, BHA, BHT e monotioglicerol. As composições podem também compreender um ou mais conservantes, selecionados entre os parabenos, cloreto de benzalcónio, cloreto de benzetónio, ácido benzóico, álcool benzílico, bronopol, cetrimida, clorexidina, clorobutanol, clorocresol, cresol, imidureia, fenol, fenoxietanol, álcool feniletílico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico, nitrato de fenilmercúrico, sorbato de potássio, benzoato de sódio, propionato de sódio, ácido sórbico, e timerosal.
[0038] Em uma concretização particular, o modificador de reologia pode ser selecionado a partir de 12- hidroxiestearina (THIXCIN®), estearato de alumínio, derivados de celulose (por exemplo, hidroxipropil celulose (HPC); hidroxipropil metil celulose (HPMC); hidroxietil celulose (HEC); etilcelulose (CE N50 )), cera de abelha, óleo hidrogenado de amendoim, óleo de rícino, duro / mole de parafina, os sais de metal de ácidos graxos, e suas combinações. Tal como aqui utilizado, "em peso" significa uma percentagem por peso da composição total.Tabela 2. As composições representativas compreendendo HEC
[0039] Em uma concretização particular, a composição veterinária compreende hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) com uma viscosidade de cerca de 200 cP a cerca de 8000 cP. Em uma concretização particular, a viscosidade é entre cerca de 4000 cP a cerca de 6000 cP, ou cerca de 5600 cP. Um técnico versado no assunto na modificação de reologia sabe bem que várias viscosidades da composição pode ser conseguida variando um (ou ambos) do peso molecular do polímero (PM) ou a sua concentração. Um HPC particularmente útil é aquele que possui o número CAS 9004-65-3, embora qualquer outra celulose ou amido modificada veterinariamente aceitável podem ser usados na prática da presente invenção. Celuloses modificadas em tudo PM variando o grau (ou suas combinações) podem ser utilizados para entregar a viscosidade a formulação e liberação do perfil API requerido. Por exemplo, agentes gelificante iônico podem ser utilizados para modificar API de libertação, e celuloses modificadas extensivamente reticulados podem ser usadas para aumentar a retenção do úbere.Tabela 3. A temperatura e a taxa de efeito de corte na viscosidade de soluções de HPMC. PM é de cerca de 86 kDa; Número CAS é 9004-65-3.
[0040] As soluções aquosas espessadas de hidroxipropil celulose (HPC / KLUCEL) foram avaliadas como modificadores de viscosidade de soluções aquosas. Como indicado na Tabela 4, a viscosidade da solução pode ser modulada pela concentração e grau (isto é, PM) do polímero. Tabela 4. A viscosidade (em cP) de soluções aquosas KLUCEL®, medida a 25 ou 33° C
[0041] Em uma outra concretização, a composição veterinária compreende ainda um poloxâmero, que é um copolímero de tribloco de óxido de polietileno, óxido de polipropilenob-óxido de polietilenoa [PEOa-PPOb-PEOa]. Vários membros desta classe de polímeros, por exemplo, poloxâmero 188 e poloxamer 407, mostra termossensibilidade inversa dentro do intervalo de temperatura fisiológica. Assim, estes polímeros são solúveis em soluções aquosas, a baixa temperatura, mas de gel a temperaturas mais elevadas.Poloxamero 407 é um copolímero em bloco de etileno- polioxipropileno poloxy biocompatível tendo um peso molecular médio de cerca de 12.500 e uma fração de polioxipropileno de cerca de 30%. Tais sistemas gelificantes reversivelmente são úteis sempre que é desejável para lidar com um material em estado fluido, mas o desempenho é, de preferência, em um gelificado ou estado mais viscoso.
[0042] Em uma outra concretização, a composição veterinária compreende um óleo mineral ou ésteres de ácidos graxos de origem natural veterinariamente aceitável, ou uma mistura destes, que são adequados para a realização da poliamida antimicrobiana, e que são inteiramente aceitáveis para infusão intramamária.
[0043] Os óleos minerais são misturas de hidrocarbonetos líquidos conhecidas na medicina como parafina líquida, parafina líquida leve ou animal domésticoróleo, por exemplo, os da Farmacopeia dos Estados Unidos (USP) ou British Pharmacopoeia (BP). Especialmente bons resultados foram alcançados com parafina líquida. Parafina líquida (óleo mineral) é uma mistura de hidrocarbonetos saturados líquidos de animal domésticoróleo.
[0044] Ésteres de ácidos graxos provenientes de origem natural são convenientemente preparados por os ácidos graxos seguida de esterificação destes ácidos com um dado álcool. Óleo vegetal fracionado possuindo as composições desejadas está comercialmente disponíveis. Por exemplo, MIGLYOL® 812 (cáprico / caprílico triglicéridos) e MIGLYOL® 840 (dicaprilato de propilenoglicol / caprato).
[0045] Em uma concretização, a composição veterinária compreende cera microcristalina, polioxilglicerídeo oleoílo, e óleo de algodão. Em ainda outra concretização, a composição compreende o óleo de amendoim hidrogenado, monoestearato de alumínio, e óleo de amendoim. Quando uma emulsão é desejada (por exemplo, para incorporar um componente oleoso), tensioativos incluindo oleoil de polioxilo 6-glicerídeos pode ser adicionado à composição. Assim, em uma concretização, a composição pode ser uma emulsão, em que o polímero antimicrobiano API é dissolvido na fase aquosa.
[0046] Além disso, as formulações podem conter outros ingredientes não-API, tais como modificadores de pH, antioxidantes, conservantes, e corantes. Estes compostos são bem conhecidos na arte da formulação. Antioxidante tais como alfa-tocoferol, ácido ascórbico, palmitato de ascorbilo, ácido fumárico, ácido málico, ascorbato de sódio, metabissulfato de sódio, n-propil galato, BHA (hidroxianisole butilado), BHT (hidroxi tolueno butilado), monotioglicerol e semelhantes, podem ser adicionados à presente formulação. Os antioxidantes são geralmente adicionados à formulação em quantidades de cerca de 0,01% a cerca de 2,0%, com base no peso total da formulao, com cerca de 0,05%) a cerca de 1,0% a ser especialmente preferido. Conservantes, tais como os parabenos (metilparabeno e / ou propilparabeno) são adequadamente usados na formulação em quantidades variando de cerca de 0,01% a cerca de 2,0%, com cerca de 0,05% a cerca de 1,0% a ser especialmente preferido. Outros conservantes incluem o cloreto de benzalcónio, cloreto de benzetónio, ácido benzóico, álcool benzílico, bronopol, butilparabeno, cetrimida, clorexidina, clorobutanol, clorocresol, cresol, etilparabeno, imidureia, metilparabeno, fenol, fenoxietanol, álcool feniletílico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico, nitrato fenilmercúrico, sorbato de potássio, benzoato de sódio, propionato de sódio, ácido sórbico, timerosal, e outros semelhantes. As faixas para estes compostos incluem desde cerca de 0,01% a cerca de 5% (p / p) da composição final. Os corantes também podem ser adicionados para facilitar a aplicação completa da formulação e visualização de retenção no úbere, ou a marcação do quarto infectado. As gamas preferidas incluem de cerca de 0,5% a cerca de 25% (p / p).
[0047] Em uma outra concretização, a composição de poliamida é eficaz contra a otite em animais de companhia, incluindo caninos. As composições veterinárias que compreendem qualquer um dos polímeros B a D mostram uma boa eficácia contra Staphylococcus spp., que são normalmente encontrados nas orelhas de caninos. Os polímeros são solúveis em água e podem ser facilmente formulados em veículos com adesivo ou em propriedades de gelificação in situ (por exemplo, polímeros termo-ajustáveis). Assim, uma concretização particular da invenção fornece uma pomada (ou outra composição de poliamida adesiva adequadamente), que pode gel em contato com o canal auditivo, para o tratamento da otite de canino ou felino.
[0048] Em uma concretização, a composição pode ser formulada como um spray ou uma tira adesiva, para o olho-de- rosa e de outras indicações que requerem aplicação externa. O pulverizador pode compreender um agente muco-adesivo, um modificador de viscosidade, um componente de solvente de evaporação rápida, ou combinações dos mesmos. A pulverização pode ser formulada para gel depois de evaporação do solvente. Em uma concretização, uma tira adesiva (por exemplo, um reservatório ou matriz) pode ser aplicada perto e / ou acima da área de destino (por exemplo, o olho, no olho-de-rosa), para permitir que o API seja liberada de forma controlada e / ou prolongada.
[0049] O termo "substituído" significa que a substituição de um átomo de carbono em grupos alquil, aril ou heterocíclico com um ou mais substituintes não-carbono. Os substituintes não-carbono são selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre.
[0050] O termo "não substituído" significa que o grupo é composto de apenas hidrogênio e carbono.
[0051] O termo "polímero" significa uma molécula constituída por unidades de reanimal domésticoição. O termo "unidade de reanimal domésticoição" ou "monômero" significa um grupo em um polímero que se reanimal domésticoe ou aparece várias vezes em um polímero. Um polímero pode ser um copolímero, se as unidades reanimal domésticoidas ou "comonómeros” são diferente quimicamente e estruturalmente uma da uma outra.
[0052] O termo "ânion farmaceuticamente aceitável" significa um ânion que é adequado para uso farmacêutico. Os ânions farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não se limitam a haletos, carbonato, bicarbonato, sulfato, bissulfato, hidróxido, nitrato, persulfato, sulfito, acetato, ascorbato, benzoato, citrato, citrato dihidrogenofosfato, citrato de hidrogênio, oxalato, succinato, tartarato, taurocolato, glicocolato e colato.
[0053] O termo "grupo final farmaceuticamente aceitável" significa um grupo terminal que é adequado para uso farmacêutico. Exemplos de grupos terminais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a H, (C1-C10) alquil, (C2-C9) heteroalquil, cicloalquil (C3-C10) cicloalquil, (C2-C9) heterocicloalquil, (C6-C14) aril, (C2-C9) heteroaril, (C1-C10) alquilamina, -O(O)C-(C1-C10) alquil, (C1- C10) alquil-COOH, (C3-C10) cicloalquil COOH, -(0)CH3, -OH, amida, um grupo guanidino, um grupo cloreto de guanidínio, um grupo guanidinobenzene, um grupo hidrox, e um grupo polietilenoglicol.
[0054] O termo "quantidade eficaz" de uma poliamidas funcionais de amina divulgada é uma quantidade suficiente para conseguir um efeito terapêutico e / ou profilático da condição particular a ser tratada, tal como uma quantidade que resulta na prevenção ou uma diminuição nos sintomas associados com a mastite. A quantidade exacta das poliamidas funcionais de amina revelados que é administrada irá depender do tipo e gravidade da mastite ou infecção a ser tratada e das características do animal, tais como o estado geral de saúde, idade, peso corporal e tolerância a fármacos.
[0055] A presente invenção é, portanto, em uma concretização em particular, em referência a composições de poliamida veterinárias, e a utilização destas composições para prevenir ou tratar a mastite em um mamífero produtor de leite não-humano. As composições veterinárias que são bem adequadas para a administração (IMM) intra-mamária, durante o período seco ou lactante. As composições são, especialmente, bem adequadas para aplicação IMM porque as poliamidas antimicrobianas são substancialmente incapazes de atravessar a "barreira de sangue do leite" (devido à sua carga e peso molecular relativamente grande). Por exemplo, o peso molecular médio do polímero de poliamida "b" é maior do que 10 vezes mais elevada do que a do ceftiofur, que é um conhecido, antibiótico de atuação sistêmica. Fármacos que se movem através da barreira de leite de sangue normalmente os fazem, através de difusão passiva. No leite, o pH é de cerca de 6,4 a cerca de 6,8, os grupos terminais dos polímeros antimicrobianos devem permanecer carregado, excluindo-os, assim, a partir da circulação sistêmica.
[0056] Em uma concretização do método, uma quantidade eficaz da composição de poliamida é administrada IMM a um animal infectado para produzir no animal um nível de exposição poliamida não sistêmica / local que é suficiente para eliminar ou curar a infecção causadora de mastite. Em uma concretização particular, os níveis de exposição local (por exemplo, do canal do teta) são suficientes para eliminar completamente ou curar as infecções microbianas. Em uma concretização mais particular, a poliamida permanece suficientemente não-sistêmica, tal modo que apenas um tempo mínimo de leite retirada é necessário. Em uma concretização ainda mais particular, o leite só precisa ser retirado por menos do que cerca de vinte e quatro horas. Idealmente, cerca de zero hora da retirada do leite é necessária após o tratamento de canais das tetas com as composições de poliamida de ação local.
[0057] De acordo com um outro aspecto da presente invenção, um método para o tratamento da mastite é fornecido, que compreende a administração a um mamífero com mastite não- humano de uma quantidade eficaz de uma composição veterinária que compreende um polímero de poliamida funcional de amina.
[0058] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, um método para prevenir a mastite é fornecido, que compreende a administração a um mamífero não humano de uma quantidade eficaz de uma composição veterinária que compreende um polímero de poliamida antimicrobiana funcional de amina.
[0059] De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é proporcionada uma utilização de uma composição veterinária que compreende uma poliamida antimicrobiana funcional de amina para o tratamento ou prevenção da mastite em um mamífero não-humano.
[0060] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionada uma utilização de uma poliamida funcional de amina, para a fabricação de uma composição veterinária intramamária para o tratamento ou prevenção da mastite em um mamífero não-humano.
[0061] De acordo com uma concretização particular da utilização para a fabricação de, uma composição, preferivelmente, uma composição veterinária, compreendendo uma poliamida antimicrobiana funcional de amina.
[0062] Tal como utilizado aqui, "completamente curado" significa que um dado regime de tratamento resultou em uma redução substancial do agente patogênico (s) infectante, e que os sinais clínicos, devido ao agente patogênico (s) não retornam. Por exemplo, um bovino "completamente curado" das bactérias (que causaram a mastite) irá recuperar a ter menor do que 300,000 SC / mL de leite. Uma vez que a SCC é indicativo da própria resposta imune do animal contra o agente patogênico, espera-se que a SCC permaneça no "níveis de pico" da mastite por algum período de tempo após a composição tenha curada a infecção. Assim, quando as concentrações de SCC pós-tratamento são aqui recitados, presume-se que um período de tempo suficiente tenha decorrido para o bovino retornar a um pré-infecção, a concentração de linha de base de leite SCC. A linha de base SCC pode variar entre raças, e entre os membros de uma mesma raça, mas o técnico versado no assunto será capaz de avaliar se um dado SCC pós-tratamento é consistente com um infectado, versus um bovino não-infectado.
[0063] Em uma concretização particular, um bovino completamente curado que tem menos de 250.000 SC / mL. Em uma concretização ainda mais particular, depois de uma quantidade adequada de tempo de recuperação (pós-tratamento), um bovino completamente curado não tem mais do que cerca de 200.000 SC / mL de leite. Em qualquer caso, um pós-tratamento de bovino terá aproximadamente o mesmo SC / mL como seus cortes não infectados (por exemplo, vacas leiteiras co-alojado de cerca da mesma raça e aproximadamente da mesma idade). Composições farmacêuticas
[0064] De acordo com a presente invenção, a composição veterinária utilizada neste tratamento compreende um polímero de poliamida antimicrobiana solúvel em água. Particularmente poliamidas eficazes incluem polímeros B, C, D, U e T.
[0065] A composição veterinária destina-se a ser um produto de ação localmente, intra-mamária.
[0066] Poliamidas antimicrobianos intra-mamária preferidas não entram na circulação sistêmica, ou fazem apenas a uma infimamente pequena extensão. Em uma concretização, a composição é um produto veterinário intra- mamário que é administrado através do orifício da teta para tratar ou prevenir a mastite de um mamífero produtor de leite não-humano.
[0067] Tal como aqui utilizado, o termo "quantidade eficaz veterinariamente" refere-se a uma dose suficiente para, quer impedir ou tratar a mastite em um animal ao qual a composição é administrada. A dose depende do ingrediente ativo (s), o animal a ser tratado, o estado da doença, e da gravidade das condições. A determinação destes factores está bem dentro do nível de um especialista na técnica. A presente invenção é preferencialmente preparada como um unguento intra-mamária, suspensão, solução ou gel.
[0068] A composição veterinária da presente invenção pode ser utilizada na prevenção ou para o tratamento da mastite em um animal. A mastite pode ser associada com vários agentes patogênicos, incluindo E. coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Salmonella spp., Citrobacter spp., Serratia spp., Shigella spp., Edwardsiella spp., Hafnia spp., Morganella spp., Providencia spp ., Yersinia spp., Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp., Pseudomonas spp., Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus spp., Enterococcus, Corynebacterium spp., Arcanobacterium spp., Actinomyces spp., Mycobacterium spp., Prototheca spp., Mycoplasma spp., Erwinia spp., Lactobacillus spp., entre outros.
[0069] A composição também pode ser utilizada na prevenção ou para o tratamento de infecções causadas por outros agentes patogênicos, em outros animais.
[0070] A composição veterinária pode ser utilizada para diversas aplicações com o regime de dosagem e via de aplicação ditada pela frequência de ordenha e / ou a condição da glândula mamária do animal.
[0071] A composição veterinária pode ser aplicada a todos os mamíferos não-humanos produtores de leite de que necessitam de tratamento ou prevenção da mastite, tais como gado, camelo, búfalo, cabra ou ovelha, no entanto, é especialmente, importante nos ruminantes que são utilizados para a produção de leite para consumo humano, tais como bovinos, bubalinos, ovinos e caprinos.
[0072] O tratamento da mastite é a cura ou melhoria de um animal que tenha contraído mastite, ou seja, reduzir pelo menos um sintoma da mastite. Mastite refere-se à inflamação da glândula mamária. As alterações físicas, químicas e bacteriológicas no leite geralmente caracteriza-se por alterações patológicas no tecido glandular. As alterações glandulares resultam frequentemente em um certo número de condições sintomáticas tais como, descoloração do leite, presença de coágulos e presença de um grande número de leucócitos. Clinicamente, a mastite é vista como inchaço, calor, dor e endurecimento da glândula mamaria em muitas vezes resultando na deformação do úbere. Um úbere inflamado pode ser visivelmente visto ou determinada através da palpação das glândulas mamárias. Em muitos casos o diagnóstico de infecções subclínicas tem vindo a depender em grande parte em testes indirectos os quais dependem do teor de leucócitos no leite (flocos, formação de coágulos, ou leite serosa), pelo menos uma bactéria é detectada em, pelo menos, 100 mL de leite a partir da úbere, contagem celular somática elevada (SCC), geralmente maior do que 300.000 células / mL e / ou a condutividade eléctrica do leite é maior do normal. A prevenção da mastite significa a prevenção da ocorrência da infecção. A prevenção também inclui o tratamento de vacas que não apresentam quaisquer sinais de mastite, mas são, na presença de outras vacas que têm, pelo menos, um sinal de mastite para minimizar ou evitar a transmissão ou a transmissão potencial da mastite de uma vaca para outra.
[0073] A eficácia da composição veterinária no tratamento da mastite de um animal é quantificada como a percentagem de glândulas mamárias apagadas (ou seja, o leite de uma tetina seja livre de todas as bactérias). Em uma concretização, a composição veterinária limpa, pelo menos, 50% das glândulas mamárias dos animais. Em uma outra concretização, a composição veterinária limpa a partir de cerca de 50% a cerca de 100% das glândulas mamárias dos animais. Em ainda outra concretização, a composição veterinária limpa a partir de cerca de 75% a cerca de 100% das glândulas mamárias de um animal.
[0074] A composição veterinária pode ser administrada intramamariamente (IMM), através do orifício da teta para dentro da cavidade interior da glândula mamaria e do seu sistema ductal associado. A composição veterinária pode estar na forma de um unguento, suspensão, solução ou gel.
[0075] A dose da poliamida para o tratamento de um quarto do úbere pode conter desde cerca de 20 a cerca de 3000 mg da poliamida; a partir de cerca de 100 a cerca de 2000 mg; a partir de cerca de 200 a cerca de 1500 mg; a partir de cerca de 250 a cerca de 1000 mg; desde cerca de 300 a cerca de 500 mg; ou cerca de 300 mg.
[0076] A dose de tratamento ou prevenção pode ser administrada reanimal domésticoidamente ao longo de um período de um a oito dias. Em uma concretização, a dose é administrada uma vez ou duas vezes por dia durante um período de dois a oito dias. Em uma outra concretização, a dose é administrada uma vez ou duas vezes por dia durante um período de quatro a seis dias. Acredita-se que a combinação precisa de dosagem e posologia será sujeita a uma ampla gama de variação e que em umerosas combinações eficazes no tratamento ou prevenção de uma doença pode ser facilmente estabelecido por aqueles peritos na arte tendo em vista a presente descrição.
[0077] Em vista do acima exposto, será visto que os diversos objetivos da invenção são conseguidos e outros resultados vantajosos atingidos. Como várias mudanças podem ser feitas nas formulações, nos produtos e nos processos acima referidos sem se afastar do escopo da invenção, pretende-se que toda a matéria contida na descrição acima e ilustrada nas tabelas que acompanham devem ser interpretada como ilustrativa e não em um limitativo.
[0078] Quando se introduzem os elementos da presente invenção ou nas concretizações preferidas (s) do mesmo, os artigos "um", "uma", "o" e "dito" pretendem significar que existem um ou mais dos elementos. Os termos "compreendendo", "incluindo" e "tendo" destinam-se a ser inclusivos e significam que pode haver outros do que os elementos listados elementos adicionais. Além disso, o termo "consistindo essencialmente em” se pretende significar que pode haver outros do que os elementos listados elementos adicionais, mas não aqueles que seriam considerados “ingredientes ativos" (por exemplo, excipientes não-ativos). Por fim, o termo "consistindo de” pretende significar que apenas os elementos listados estão incluídos.
[0079] Salvo disposição ao contrário, os termos técnicos são utilizados de acordo com o uso convencional.
[0080] As definições dos termos comuns em biologia molecular podem ser encontradas em Benjamin Lewin, Genes V. publicado pela Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, publicado pela Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); e Robert A. Meyers (ed.), Biologia Molecular e Biotecnologia: a Comprehensive Desk Reference, publicado por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-5698).
[0081] Os exemplos seguintes são simplesmente destinados a ilustrar adicionalmente e explicar a presente invenção. Os exemplos, portanto, não deve ser considerado como limitando o escopo da invenção ou o modo em que possa ser praticada.
[0082] EXEMPLOS
[0083] A eficácia antimicrobiana de vinte e cinco polímeros antimicrobianos (e eritromicina) foi avaliada utilizando um ensaio de MIC. Para cada estudo, uma concentração de duplicação da diluição de cada polímero antimicrobiano foi preparada a 2X a faixa de concentração final (0,12-16 μg / mL), e 100 μl da formulação de API-nula foi dispensado para os poços de controle negativo. Em geral, as composições contendo polímeros antimicrobianos tiveram um desempenho bem comparável, ou melhor, contra os agentes patogênicos, em comparação, com eritromicina (ERY).Tabela 5A. Descrição de bactérias, meios e condições de incubação para testes de CIM
MHB = caldo de Mueller Hinton, LHB = caldo de Mueller Hinton com 3% sangue de cavalo lisado, VFM = média de fastídios veterinários, HBAN = caldo de Hayflick modificado com Alamar Blue® e β-NAD Tabela 5B. Detalhes bacteriaanos adicionais
Tabela 6-1. MIC (μg/mL) de 26 compostos contra bactéria selecionada
Tabela 6-2. MIC contra Actinobacillus pleuropneumoniae
Tabela 6-3. MIC contra Bordetella bronchiseptica
Tabela 6-4. MIC contra Enterobacter species
Tabela 6-5. MIC contra Escherichia coli
Tabela 6-6. MIC contra espécies Klebsiella
Tabela 6-7. MIC contra Histophilus somni
Tabela 6-8. MIC contra Mycoplasma bovis
Tabela 6-9. MIC contra Mannheimia haemolytica
Tabela 6-10. MIC contra Moraxella bovis
Tabela 6-11. MIC contra Proteus mirabilis
Tabela 6-12. MIC contra Pasteurella multocida
Tabela 6-13. MIC contra Pseudomonas aeruginosa
Tabela 6-14. MIC contra Staphylococcus aureus including MRSA
Tabela 6-15. MIC contra Streptococcus agalactiae
Tabela 6-16. MIC contra Staphylococcus pseudintermedius (+MRSP)
Tabela 6-17. MIC contra Serratia marcescens
Tabela 6-18. MIC contra Streptococcus canis
Tabela 6-19. MIC contra coagulase negative Staphylococcus species
Tabela 6-20. MIC contra Streptococcus uberis
Tabela 6-21. MIC contra Streptococcus dysgalactiae
[0084] O estudo foi realizado como descrito no Exemplo 1, exceto leite UHT foi usado no lugar de caldo. "MIC" é definido como a menor concentração antimicrobiana que não permitem um aumento significativo da concentração de bactérias, em comparação com as concentrações inoculadas (menos do que 1 log de aumento em relação ao inoculo). "MBC" é definido como a concentração mais baixa para a qual uma diminuição de pelo menos 3 logs, em comparação com a concentração inoculados foi observada,. Uma vez que a MIC no leite era esperado para ser> a MIC em caldo, concentrações entre 0,12-32 μg / ml foram testados. Os isolados que foram identificados como típico foram testados para a susceptibilidade-três compostos (B, T, U). Em geral, as composições foram activa e estável no leite. Em particular, duas concentrações do melhor desempenho API (polímero B) mantiveram a sua actividade antimicrobiana após ter sido esterilizada por filtração.Tabela 7. Descrição de bactérias, meios e condições de incubação para testes de CIM
[0085] Três vacas adultas saudáveis Holstein, cerca de 32 a 54 meses de idade, foram estudadas para avaliar a aceitação e retenção de várias formulações de veículos para infusão intra-mamária (versus solução salina). No Dia 0, três quartos da glândula mamária de cada um dos três vacas leiteiras foram atribuídas a um dos três tratamentos: Grupo 1 (LFQ) = 8 mL de solução salina; Grupo 2 (PDO) = 8 mL A0202- 93A; Grupo 3 (LRQ) = 8 Nil A0202-93B. A0202-93A é um 2% p / p solução aquosa de HPMC contendo cerca de 300 mg por Polímero A 8 ml; e A0202-93B é de 1,5% p / p solução contendo HPMC a cerca de 300 mg de polímero B por 8 ml. Os tratamentos foram administrados uma vez intramamariamente (IMM) para cada trimestre por animal para todos os grupos de tratamento, usando seringas descartáveis. Observações diárias de saúde foram realizadas começando no dia 0.
[0086] Facilidade de administração e infusão de retenção foi determinada no momento da administração do tratamento. retenção de infusão e reacções adversas ao tratamento foi determinado em cerca de 30 minutos pós- tratamento. A Tabela 8 lista os Dados do Animal, Facilidade de Tratamento em pontuações ministrada e de retenção de infusão. A Tabela 9 lista a infusão de retenção e reações adversas, a 30 minutos após o tratamento.
[0087] Todos os grupos de tratamento receberam facilidade de administração Dezenas de 1 (Aceitável; fácil de administrar) para todos os animais. pontuações de retenção de infusão para todos os grupos de tratamento e todos os animais no momento da administração do tratamento e cerca de 30 minutos de administração pós-tratamento, foi de 1 (Retenção). Nenhuma reação adversa devido à administração do tratamento foram observadas a 30 minutos após o tratamento.Tabela 8. Dados do Animal, Facilidade do Tratamento de Administração e Retenção de infusão
1LF = Parte dianteira esquerda (Trim), RF = Parte dianteira direita, LR parte traseira esquerda =, RR = parte traseira direira; 2Grupo 1 = 8 mL / Trim solução salina; Grupo 2 = 8 mL / Trim A0202-93A; Grupo 3 = 8 ml / qtr A0202-93B 31 = Aceitável (fácil de administrar); 2 = Inaceitável (difícil de administrar) 41 = Retido; 2 = perda de droga Minimal; 3 = perda de droga moderada; 4 = droga não foi aceita Tabela 9. Retenção de infusão e Reações Adversas a 30 minutos após o tratamento.
[0088] Cinco vacas leiteiras em lactação, tendo cada uma pelo menos uma parte afetada pela mastite aguda foram adquiridas e inscritas neste estudo. Nos Dias 0-2, as vacas foram administradas com 8 mL da formulação (polímero "B") na parte da glândula mamária. A formulação continha 3,75% p / v de polímero B, em uma solução aquosa de HPMC 1,75%. A formulação foi avaliada em termos de eficácia, segurança, facilidade de administração e de retenção.
[0089] As infusões intra-mamárias foram administradas após a ordenha de tarde e avaliadas para facilidade de administração, bem como a retenção imediatamente após a administração. Aos 30 minutos após o tratamento (+ 15 minutos), a retenção e qualquer reação adversa ao tratamento foram avaliados. A avaliação clínica dos animais foi feita uma vez por dia (na manhã da ordenha) durante o estudo, incluindo a avaliação da glândula mamária e no leite (pré - leitação). As partes da extremidade da glândula mamária da vaca foram colhidas (na ordenha AM) no Dia 0 (pré-tratamento) e nos dias 3, 5 e 7. As vacas foram ordenhadas, assim, duas vezes por dia durante o estudo.
[0090] Antes da administração do tratamento, as partes da glândula mamária para cada animal foram avaliadas individualmente. Somente partes das glândulas mamárias determinado a ter mastite aguda foram usadas para administração (um parte por vaca). Oito ml de formulação (contendo 300 mg de API) foram administrados por via IMM. Um esfregaço de cada parte foi cultivado no dia 0 (pré-infusão) e nos dias 3, 5, e 7. De igual modo, uma amostra de leite foi coletada em agar de sangue tanto (5% de sangue de ovelha) suplementado com esculina, quanto agar micoplasma. As placas de agar foram incubadas a cerca de 37 ° C (C02 foi adicionado às culturas de micoplasma). O agar de sangue foi examinado a 24 e 48 horas, e o agar micoplasma foi examinado em 4 e 10 dias após a inoculação. Os animais foram avaliados como descrito na Tabela 10.
[0091] Tabela 10. Sistema de pontuação para avaliação dos animais.
[0092] Os resultados parciais de pontuação de leite s foram fornecidos (inchaço, dor e leite). Uma vaca melhorada a partir de (3 inchaço; dor 1; leite 1) a todos em "0" no dia 7. Cerca de metade das vacas tratadas demonstraram uma melhoria, assim, os níveis mais elevados de API e / ou dias adicionais de tratamento podem ser úteis no completamente eliminando as infecções causadoras de mastite. Os bem tolerados, poliamidas antimicrobianas altamente solúveis são bem adaptados a esse nível API maior e mais longo prazo regimes de tratamento.
[0093] Para 5,0 g de 4,4'-trimetileno dipiperidina em 20 ml de solução de metanol (20 mL), foi adicionado gota a gota 4,6 g de acrilato de metila. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um sistema solvente gradiente de composto de 100% de hexano para 100% de acetato de etila. A remoção do solvente sob pressão reduzida deu 7 g do produto desejado como um sólido branco.
[0094] A 10,0 g de 4,4'-dipiperidina HC1 dissolvido em 80 ml de metanol foi adicionado 12,6 g de carbonato de potássio. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas, altura em que 8,03 g de acrilato de metila foi adicionado lentamente. A solução de reação resultante foi então agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi evaporado até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi tratado com 300 ml de acetato de etila. A suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, seguido por filtração. O filtrado foi evaporado até à secura sob pressão reduzida. A massa resultante foi seca à temperatura ambiente sob vácuo para dar 11,34 g do produto desejado como um sólido esbranquiçado.
[0095] A 10 g de piperazina hexahidratada dissolvida em 40 ml de metanol foi adicionado 9,97 g de acrilato de metila, de um modo gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. Ao fim deste tempo, a mistura reacional foi evaporada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi recristalizado a partir de hexano / cloreto de metileno (1: 1 v / v). Após filtração e secagem à temperatura ambiente sob pressão reduzida, 12,2 g do produto desejado foi obtido como um sólido branco.
[0096] Para 3,8 g de cloreto de acriloíla dissolvido em 50 mL de diclorometano foi adicionada uma solução de 4,0 g de 4, 4-dipiperidina trimetileno dissolvido em 20 mL de diclorometano de uma maneira gota a gota a 0 ° C. A esta solução foi adicionado 4,23 g de trietilamina lentamente com uma seringa. A mistura de reação resultante foi agitada durante 18 horas e foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi recolhido. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi tratado com 100 mL de acetato de etilo. A solução foi extraída com HC1 1M (1 x 100 mL), solução saturada de NaHC03 (2 x 100 mL), e finalmente com salmoura (2 x 100 mL). A camada orgânica foi recolhida e seca sobre Na2SO4. Depois da filtração, o filtrado foi evaporado até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um sistema solvente de gradiente desde 100% hexano até 100% de acetato de etila. Após a remoção do solvente, 3 g do produto desejado foi obtido como um óleo viscoso.
[0097] A uma solução de 5 g de 2,2'-bipirrolidina em 20 ml de metanol foi adicionado 6,9 g de acrilato de metila (6,9 g, 80 mmol) de um modo gota a gota. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reação foi evaporada até à secura dando origem a 10 g do produto desejado na forma de óleo viscoso.
[0098] A mistura reacional consistindo em 1 g de acetato de 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóicoo (Exemplo 5-1) e 0,387 g de 1,3-diamino propano foi aquecida a 100° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e foi vertida para 50 ml de acetato de etilo. Após remoção por filtração do solvente, o resíduo foi dissolvido em 20 ml de água desionizada (Dl). O pH da solução foi levado para 2 por adição de HC1. A solução resultante foi dialisada contra água desionizada durante 24 horas, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente no saco de diálise foi seca por liofilização obtendo-se 90 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[0099] A mistura de reação que contém 0,5 g de etanoato de 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóicoo (Exemplo 5-1) e 0,157 g de diamino etano foi agitada a 100° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 50 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00100] A mistura de reação que contém 0,5 g de etanoato de 4, 4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,23 g de 1, 4-diamino butano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de CH2Cl2 e em seguida precipita-se em 50 mL de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 60 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00101] A mistura de reação que contém 0,5 g de etanoato de 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóicoo e 0,26 g de 1, 2-bis (2-aminoetoxi) etano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água DI. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 60 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00102] A mistura de reação que contém 0,5 g de etanoato de 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,7 g de 1,4-bis (aminometil) benzeno (0,7 g, 5,1 mmol) foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 40 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00103] A mistura de reação que contém 0,5 g de etanoato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,35 g de dietilamina 2,2'diamino foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 63 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00104] A mistura de reação contendo 1 g de etanoato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,61 g de dietilamina N-metil-2,2'diamino (0,61 g, 5,2 mmol) foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 130 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00105] A mistura de reação contendo 1 g de etanoato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,68 g de N- (3-aminopropil)-l,3-propano-diamina (0,68 g, 5,2 mmol) foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 180 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00106] A mistura de reação contendo 1 g de etanoato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,76 g de dipropilamina 3,3'-diamino-N-metil foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 110 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00107] A mistura de reação contendo 1 g de etanoato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,47 g de l, 3-diamino-2-propanol (0,47 g, 5,2 mmol) foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 60 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00108] Sal de 4- (4-amino-butoxilo)-butilamina HC1 (1 g) foi dissolvido em 20 mL de metanol. A esta solução 0,72 g de solução de hidróxido de sódio aquoso (50% p / p)) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Após filtração dos sólidos, o filtrado foi evaporado até à secura. O resíduo foi tratado com 20 ml de etanol. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi evaporado até à secura obtendo-se 0,55 g de um sólido esbranquiçado. Este sólido foi combinado com 0,75 g de etanoato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e a mistura de reação resultante foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 90 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00109] A mistura de reação contendo 1 g de etanoato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,31 g de 3,5-diamino-l,2,4-triazol foi tratado com 1 mL de DMSO. A mistura de reação resultante foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etila. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 10 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00110] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 0,47 g de diamino etano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 10 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00111] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 0,5 g de 1,3- diamino-propano Agitou-se a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 30 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00112] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 0,6 g de 1,4-diamino butano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 60 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00113] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 1,15 g de 1,2-bis (2-aminoetoxi) etano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 30 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00114] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 0,8 g de dietilamina 2,2'-diamino foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 60 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00115] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 0,9 g de N-metil- 2,2'-diamino dietilamina foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 50 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00116] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 1,02 g de N- (3- aminopropil) -l, 3-propano diamina foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 90 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00117] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de piperazina bispropanóico (Exemplo 5-3) e 1,12 g de dipropilamina 3,3'-diamino-N-metil foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 120 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00118] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4'-dipiperidina bispropanóico (Exemplo 5-2) e 0,31 g de diamino etano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 90 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00119] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4'-dipiperidina bispropanóico (Exemplo 5-2) e 0,38 g de 1,3-diamino propano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 60 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00120] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4'-dipiperidina bispropanóico (Exemplo 5-2) e 0,45 g de 1,4-diamino butano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 90 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00121] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4'-dipiperidina bispropanóico (Exemplo 5-2) e 0,76 g de 1,2-bis (2-aminoetoxi) etano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 100 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00122] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4’-dipiperidina bispropanóico e 0,45 g de dietilamina 2,2'diamino foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 310 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00123] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4’-dipiperidina bispropanóico e 0,52 g de dietilamina N- metil-2,2'diamino foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 480 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00124] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4’-dipiperidina bispropanóico e 0,58 g de N- (3- aminopropil)-1,3-propano diamina foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu- se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 540 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00125] A mistura de reação contendo 1 g de acetato de 4,4’-dipiperidina bispropanóico e 0,64 g de dipropilamina 3,3'-diamino-N-metil foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 420 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00126] A mistura de reação contendo 1 g de l,l'- diacril-4,4-trimetileno-dipiperidina, 0,35 g de propano 1,3- diamino e 1 mL de metanol foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 640 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00127] A mistura de reação contendo 1 g de l, l'dipiperidina-diacril-4,4-trimetileno, 0,36 g de N,N' - dimetil- 1,3 -propanediamina e 1 mL de metanol foi agitada a 60 ° C durante 24 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em 20 ml de água Dl. O pH da solução foi ajustado para 2 por adição de HCl. A solução de polímero dialisadas contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 180 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00128] Exemplo 5-36: Síntese de poli (l,l' diacril - 4,4'-trimetileno dipiperidina-CO-4,4-trimetileno dipiperidina
[00129] A mistura de reação contendo 1 g de l,l'- diacril-4,4-trimetileno dipiperidina, 0,99 g de 4,4'- trimetileno dipiperidina, 1 mL de metanol foi agitada a 60 ° C durante 12 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etila. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 220 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00130] A mistura de reação contendo 1 g de l,l'- diacril-4,4-trimetileno-dipiperidina, 0,91 g de piperazina hexahidratada e 1 ml de metanol foi agitada a 60 ° C durante 12 horas. O produto resultante foi dissolvido em 5 mL de diclorometano e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 80 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00131] Uma solução contendo 1,14 g de 4,4'- dipiperidina HCl e 5 ml de metanol foi tratada com 1,14 g de carbonato de potássio. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi combinado com lg de l, l '-diacril- 4,4-trimetileno dipiperidina dissolvido em 3 mL de metanol. A mistura de reação resultante foi agitada a 60 ° C durante 15 horas. O produto resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etila. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 140 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00132] A mistura de reação contendo 1 g de l,l'- diacril4,4-trimetileno dipiperidina, 0,5 g de histamina e 1 mL de metanol foi agitada a 60 ° C durante 18 horas. O produto resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 120 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00133] A mistura de reação contendo 1 g de l,l '- diacril -4,4-trimetileno dipiperidina, 0,53 g de 3 - (dimetilamino) -l-propilamina e 1 mL de metanol foi agitada a 50 ° C durante 10 horas. O produto resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 1 g do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00134] A mistura de reação contendo 0,64 g de l,l'- diacril-4,4-trimetileno-dipiperidina, 0,35 g de propilamina, e 1 mL de metanol foi agitada a 60 ° C durante 20 horas. O produto resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 740 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00135] A mistura de reação que contém 0,5 g de l,l'- diacril-4,4-trimetileno dipiperidina, 0,35 g de 1-aminobutil- 3-carbamoil piridínio, e 3 mL de metanol foi agitada a 50 ° C durante 20 horas. O produto resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 20 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00136] A mistura de reação contendo 1,0 g de l,l'- diacril-4,4-trimetileno dipiperidina, 0,36 g de l-aminobutil- 3-carbamoil piridínio, 0,27 g de mono N-Boc-l,3- diaminopropano, e três ml de metanol foi agitada a 50 ° C durante 20 horas. A mistura de reação foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração. O resíduo foi lavado com acetato de etilo (3 x 50 mL) e secouse sob pressão reduzida.
[00137] O produto acima foi dissolvido em 5 mL de metanol e misturado com 0,5 g de ácido 4,4'-trimetileno bispropanóico dipiperidina e 0,25 mL de HC1 concentrado. A mistura de reação resultante foi agitada a 50 ° C durante 6 horas. O produto resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 210 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00138] A mistura de reação que contém 1,0 g de acetato de 2,2'-bipirrolidine bispropanóico e 0,38 g diamino etano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 20 horas. O produto resultante foi dissolvido em 3 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etila. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 10 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00139] Exemplo 5-45: Síntese de poli (ácido 2,2'- bipirrolidine bispropanóico -co-l,3-diamino propano)
[00140] A mistura de reação que contém 1,0 g de acetato 2,2'-bipirrolidina bispropanóico e 0,47 g de 1,3- diamino propano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 20 horas. O produto resultante foi dissolvido em 3 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 540 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00141] A mistura de reação que contém 1,0 g de acetato de 2,2'-bipirrolidina bispropanóico e 0,56 g de 1,4- diamino butano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 20 horas. O produto resultante foi dissolvido em 3 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 380 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00142] Exemplo 5-47: Síntese de poli (ácido 2,2’- bipirrolidina bispropanóico-co-l, 5-diamino pentano)
[00143] A mistura de reação que contém 1,0 g de acetato de 2,2’-bipirrolidina bispropanóico e 0,65 g de 1, 5- diamino pentano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 20 horas. O produto resultante foi dissolvido em 3 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 10 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00144] A mistura de reação que contém 1,0 g de acetato de 2,2'-bipirrolidina bispropanóico e 0,74 g de 1,6- diamino hexano foi agitada a 100 ° C sob atmosfera de nitrogênio durante 20 horas. O produto resultante foi dissolvido em 3 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 10 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00145] Exemplo 5-49 (A): Síntese de 4- (l,2-diol) -l, 4,7-triazaheptano
[00146] Em 5 mL de etanol 1 g de l,7-bis-Boc-l,4,7- triaza e 0,3 g de glicidol adicionaram-se a mistura reaccional foi submetida a refluxo durante 15 horas. O produto resultante foi purificado por cromatografia em coluna utilizando gradiente de sistema de solvente na gama de 100% de hexano até 100% de rendimento 0,4 g de 1,7-bis-Boc-4-(l, 2-diol)-l,4,7- triazheptano. Para 0,4 g de 1,7-bis-Boc-4- (l,2-diol)-l,4,7-triazaheptano dissolvido em 2 mL de metanol foi adicionado 0,3 mL de HC1 concentrado. A mistura de reação foi agitada a 50 ° C durante 24 horas. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em 10 mL de metanol: água (1:1 v / v). A esta solução foi adicionado 5,0 g de resina Amberlyst 26 OH. Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 3 horas, a resina foi removida por filtração. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O óleo resultante foi liofilizada para secar para dar 0,15 g do produto desejado como um líquido viscoso.
[00147] Exemplo 5-49 (b): Síntese de poli (ácido 4,4’- trimetileno dipiperidina bispropanóico-co- 4-(1,2-diol) - 1, 4, 7-triazaheptano)
[00148] A mistura de reação contendo 0,288 g de acetato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,15 g de 4- -l (l, 2-diol), 4,7-triazaheptano (Exemplo 5-49 (a)) agitada a 100 ° C durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 3 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 160 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00149] A mistura de reação contendo 0,25 g de acetato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico, 0,09 g de 4- (l,2-diol) -l,4,7-triazaheptano (Exemplo 5-49 (a)) e 0,05 g de 1,3-diamino propano agitada a 100 ° C durante 18 horas. O produto resultante foi dissolvido em 3 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etila. O precipitado foi isolado por filtração e foi dissolvido em 20 ml de água Dl. Depois de ajustar o pH da solução a 2, que foi dialisada contra água desionizada, utilizando uma membrana de diálise com um peso molecular de corte de 1000 Da. A solução remanescente na membrana de diálise foi liofilizada até à secura obtendo-se 150 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00150] Exemplo 5-51 (A): Síntese de 5- (l, 2-diol) - l,5, 9-triazanonano
[00151] A mistura de reação contendo 1,5 g de l,9-bis- BOC-l, 5,9-triazanonano, 0,34 g de glicidol, e l0 mL de etanol foi submetida a refluxo durante 15 horas. Após a remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um sistema solvente de gradiente variando desde 100% de hexano para 100% de acetato de etila) obtendo-se 0,7 g de 1,9-bis-Boc-5- (l,2-diol) -l, 5,9-triazanonana. Para 0,7 g de 1, 9-bis-Boc-5- (l, 2-diol) - l, 5,9-triazanonana dissolvido em 2 mL de metanol foi adicionado 0,25 mL de HC1 concentrado e a mistura de reação agitada a 50 ° C durante 24 horas. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em lOmL de metanol / água (1:1) mistura e 5 g de resina Amberlyst 26 OH foi adicionado. Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 3 horas, a resina foi removida por filtração. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi liofilizado até à secura rendendo 0,28 g do produto desejado como um óleo amarelo claro.
[00152] Exemplo 5-51 (b): Síntese de poli (ácido 4,4- trimetileno dipiperidina bispropanóico-co- 5-(1,2-diol) - 1, 5, 9-triazanonana)
[00153] A mistura de reação contendo 0,23 g de acetate de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico e 0,15 g de 5- (l,2-diol)-l,5,9-triazanonano foi agitada a 100 ° C durante 18 horas. A mistura de reação resultante foi dissolvido em 5 mL de metanol e verteu-se em 50 ml de acetato de etilo. Após remoção por filtração do solvente, o resíduo foi dissolvido em 20 ml de água Dl. O pH da solução foi ajustado para 2 por adição de HC1 diluído e a solução foi submetida a centrifugação com filtro de membrana utilizando Microsep com um peso molecular de corte de 1000 Da. A fracção com peso molecular mais elevado do que 1000 Da foi recolhido e liofilizado até à secura obtendo-se 100 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00154] A mistura de reação contendo 0,125 g de acetato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico (Exemplo 5-1), 0,05 g de 5-(l,2-diol)1,5,9-triazanonano (Exemplo 5-51 (a)), e 0,3 g de 1,3-diamino-propano agitou-se a 100 ° C durante 18 horas. A mistura de reação resultante foi dissolvido em 5 ml de metanol vertida em 50 mL de acetato de etilo. Após remoção por filtração do solvente, o resíduo foi dissolvido em 20 ml de água Dl. O pH da solução foi ajustado para 2 por adição de HC1 diluído e a solução foi submetida a centrifugação com filtro de membrana utilizando Microsep com um peso molecular de corte de 1000 Da. A fracção com peso molecular mais elevado do que 1000 Da foi recolhido e liofilizado até à secura obtendo-se 90 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00155] Para 0,26 g de poli (ácido 4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico -co-l,3-diamino propano) (Exemplo 5-6) dissolvido em 2 mL de etanol adicionou-se 16,5 mg de glicidol. A mistura de reação a 140 ° C durante 30 minutos utilizando um reactor de microondas. A mistura reaccional resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etila. Após filtração, o resíduo foi lavado com acetato de etila (3 x 50 mL). Subsequentemente, foi dissolvido em 10 ml de água Dl e foi submetido a centrifugação com filtro de membrana utilizando Microsep com um peso molecular de corte de 1000 Da. A fracção com peso molecular mais elevado do que 1000 Da foi recolhido e liofilizado até à secura obtendo-se 126 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00156] Para 0,3 g de poli (ácido 4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico -co-l, 3-diamino propano) (Exemplo 5-6) dissolvido em 2 mL de metanol adicionou-se 0,1 g de lH- pirazole-1-carboxamidina e 0,11 g de N,N'- diisopropiletilamina. A mistura de reação foi agitada a 60 ° C durante 8 horas. A mistura reaccional resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. Após filtração, o resíduo foi lavado com acetato de etilo (3 x 50 mL). O sólido resultante foi dissolvido em 2 ml de água Dl e foi passada através de uma coluna PD-10 Sephadex. As fracções desejadas foram recolhidas, liofilizadas até à secura obtendo-se 0,19 g do polímero como um sólido amarelo claro.
[00157] Para 0,128 g de poli (ácido 4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico -co-l, 3-diamino propano) (Exemplo 5-6) dissolvido em 5 mL de solução de metanol foi adicionado 0,2 mL de trietilamina seguido por 0,075 g de éster de m- dPEG4-NHS. A solução de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 22 horas. A mistura reaccional resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etila. Após filtração, o resíduo foi lavado com acetato de etila (5 x 50 mL). O resíduo foi subsequentemente dissolvido em 2 mL de água desionizada e o pH da solução resultante foi ajustado a 2 usando HC1 diluído foi submetido a centrifugação utilizando um filtro de membrana Microsep com um peso molecular de corte de 1000 Da. A fração com peso molecular mais elevado do que 1000 Da foi recolhido e liofilizado até à secura obtendo-se 50 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00158] Para 0,1 g de poli (ácido 4,4'-trimetileno- dipiperidina bispropanóico -co-l, 3-diamino propano) (Exemplo 5-6) dissolveu-se 5 mL de metanol foi adicionado 0,2 mL de trietilamina seguido por 0,12 g de éster m-dPEG12-NHS. A solução de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 22 horas. A mistura reaccional resultante foi vertida em 50 ml de acetato de etilo. Após filtração, o resíduo foi lavado com acetato de etilo (5 x 50 mL). O resíduo foi subsequentemente dissolvido em 2 ml de água desionizada e o pH da solução resultante foi ajustado para 2 utilizando HCl diluído. foi submetida a centrifugação com filtro de membrana utilizando Microsep com um peso molecular de corte de 1000 Da. A fracção com peso molecular mais elevado do que 1000 Da foi recolhido e liofilizado até à secura obtendo-se 60 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro.
[00159] Exemplo 5-57 (a): Síntese do ácido 4,4'- dipiperidina trimetileno bispropanóico -1,3-diamino propano
[00160] A mistura de reação contendo 3 g de acetato de 4,4’-trimetileno dipiperidina bispropanóico (Exemplo 5-2) e 4,1 g de mono N-Boc-l,3-diamino propano foi agitada a 100 ° C durante 18 horas. A mistura de reação resultante foi purificado por cromatografia em coluna utilizando uma amina modificada coluna de sílica e o sistema de solvente gradiente que varia desde 100% hexano até acetato de etilo / hexano (50/50)). A fração apropriada foi recolhida e a remoção do solvente sob pressão reduzida produziu 2,6 g de ácido 4,4'- trimetileno dipiperidina bispropanóico-bis-BOC-1,3-diamino propano.
[00161] Para 0,55 g do ácido 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico bis-BOC-l,3-diamino propano dissolvidos em 5 mL de metanol foi adicionado 0,5 mL de HCl concentrado e a mistura reacional foi agitada a 50 ° C durante 10 horas . Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em 10 mL de metanol / água (1: 1) e foi tratado com 5 g de resina Amberlyst 26 OH. Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 3 horas, a resina foi removida por filtração. O filtrado foi evaporado à secura e o resíduo foi liofilizado dando origem a 0,5 g do produto como um sólido branco.
[00162] Exemplo 5-57 (b): Síntese do l-BOC- ácido 4,4'-trimetileno-l' propanóico
[00163] A 2 g do éster do l-BOC- ácido 4,4- trimetileno-l' propanoico, 0,9 g de solução a 50% em peso de hidróxido de sódio aquoso foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 60 ° C durante 15 horas. A esta mistura reaccional adicionou-se HCl concentrado até pH da reação ter atingido 7,5. A mistura de reação foi evaporada até à secura e o resíduo foi liofilizado de modo a completar a secagem. A este resíduo seco adicionaram-se 10 ml de diclorometano e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após filtração as partículas insolúveis, o filtrado foi evaporado até à secura para dar 0,7 g de um produto sólido branco.
[00164] Exemplo 5-57 (c) : Síntese do pentâmero bis- BOC-ácido 4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico -1,3- diamino propano
[00165] A 90 mg de L-Boc-ácido 4,4-trimetileno-l'- propanóico (Exemplo 5-57 (b)) dissolvido em 2 mL de diclorometano / DMF (1:1 v / v) foi adicionado 38 mg de diimidazole 1,1-carbonil. Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 1 hora, 0,05 g de 4,4-trimetileno- dipiperidina bispropanóico ácido l, 3-diamino-propano trímero (Exemplo 5-57 (a)) foi adicionado à mistura de reação. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna usando uma coluna de sílica amina modificada usando um sistema solvente de gradiente variando desde 100% de acetato de etilo até acetato de etilo / metanol (95/5)) obtendo-se 80 mg do produto na forma de um óleo incolor. Este óleo foi dissolvido 2 ml de metanol, seguido pela adição de 0,5 mL de HCl concentrado. A mistura de reação foi agitada a 50 ° C durante 10 horas. O solvente foi evaporado removido sob pressão reduzida e o resíduo foi liofilizado para secar, para se obter 60 mg do produto desejado como um óleo viscoso amarelo.
[00166] Exemplo 5-57 (d): Síntese do heptâmero poli (ácido 4,4’-trimetileno-dipiperidina bispropanóico 1,3- diamino-propano)
[00167] Para 35 mg do pentâmero do ácido 4,4'- trimetileno dipiperidina bispropanóico -l,3-diamino-propano (Exemplo 5-57 (c)) dissolvido em 1 mL de metanol adicionou-se 0,08 mL de trietilamina e 24 mg de boc-(3-acrilamido) propil amina. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi vertida em 10 ml de acetato de etilo. O resíduo foi isolado por filtração e foi lavado com acetato de etilo (3 x 10 mL). O resíduo foi seco à temperatura ambiente sob pressão reduzida obtendo-se 40 mg de um sólido branco. A este resíduo sólido foi adicionado 2 ml de metanol e 0,5 mL de HCl concentrado. A reação resultante mistura foi adicionado agitada a 50 ° C durante 10 horas. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por HPLC preparativa obtendo-se 10 mg do produto desejado na forma de óleo viscoso de cor amarela clara.
[00168] Tendo assim descrito em detalhe as concretizações preferidas da presente invenção, é para ser entendido que a invenção definida pelas exemplos acima não é para ser limitada aos detalhes específicos estabelecidos na descrição acima de como muitas variações evidentes da mesma são possíveis sem se afastar do espírito ou escopo da presente invenção.
Claims (15)
1. Composição veterinária para tratar ou prevenir infecções em animais não humanos caracterizada pelo fato de que compreende um veículo veterinário adequado e pelo menos uma poliamida antimicrobiana; e em que a poliamida está presente em uma quantidade eficaz bactericidicamente, de tal modo que a composição é eficaz no tratamento ou prevenção de infecções ou estados de doença causados por, pelo menos, um dos seguintes agentes patogênicos: Staphylococcus spp, Streptococcus spp, Mycoplasma bovis e E. coli, em que a poliamida é selecionada de: (i) [ácido 4,4-trimetileno-dipiperidina bispropanóico -4,4'-dipiperidina], [ácido 4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico-diaminopropano], [ácido 2,2'-bipirrolidina bispropanóico-pentadiamina], [ácido 4,4- trimetileno dipiperidina bispropanóico -diaminopropano], [ácido 4,4- trimetileno dipiperidina bispropanóico-(2-aminoetil) - diaminoetano], [ácido 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico -N (3-aminopropil) l,3-propano diamina], [ácido 4,4'-trimetileno-dipiperidina bispropanóico -3,3'- diamino-N-metil-dipropilamina, [ácido 4,4'-dipiperidina bispropanóico-2,2’-diamino- dietilamina], [ácido 4,4'- dipiperidina bispropanóico 2,2'-diamino-N-metil dietilamina], [ácido 4,4'-dipiperidina bispropanóico - 3,3'- diamino-dipropilamina], [ácido 4,4'-dipiperidina bispropanóico -3, 3'-N-metil-diamino-dipropilamina], [ácido 4,4'-trimetileno dipiperidina-l,3-diamninopropano-N,N'-di- 3-propiônico], [ácido 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico - N, N'-dimetil-l,3- diaminopropano], [ácido 4,4-trimetileno-dipiperidina bispropanóico - 4,4'- dipiperidina], [ácido 4,4-trimetileno dipiperidina bispropanóico -diaminopropano], e [ácido 4,4'-trimetileno dipiperidina bispropanóico -N-glicidol dietilenotriamina] e as suas combinações; ou
e suas combinações.
2. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a poliamida tem a seguinte estrutura:
e em que o peso molecular médio em peso (WAMW) é de 1,0 kDa a 15,0 kDa, 2,0 kDa a 10 kDa, 2,5 KDa a cerca de 7,76 kDa, ou tem um WAMW de cerca de 7,76 kDa, como medido por cromatografia de exclusão de tamanho.
3. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que uma dose da composição para o tratamento de um quarto do úbere, contém 20 a 3000 mg, de 100 a 2000 mg, de 200 a 1500 mg, 250 a 1000 mg, de 300 a a 500 mg ou cerca de 300 mg da poliamida.
4. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a dose contém de 300 a 500 mg de poliamida.
5. Composição veterinária, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o transportador veterinariamente aceitável compreende um agente espessante ou modificador de reologia (TRM), e em que o TRM é selecionado a partir de qualquer derivado de celulose aceitável, metilcelulose (MC), etilcelulose (EC), EC N50, hidroximetilcelulose (HMC), hidroxipropilcelulose (HPC), hidroxipropil-metil-celulose (HPMC), hidroxietil celulose (HEC), polietileno-glicóis (PEG), os poloxâmeros, copolímeros em bloco, polímeros reticulados à base de ácido acrílico, carbômeros, polímeros CARBOPOL®, polímeros de emulsão alcalina-dilatável (ASE), polissacarídeos, polissacarídeos modificados, amidos modificados, amido pré ou parcialmente gelatinizados, estearato de alumínio, 12- hidroxiestearina, THIXCIN®, cera de abelha, ceras emulsionantes, óleo de amendoim hidrogenado, óleo de rícino, óleo de rícino hidrogenado, parafina dura / macia, sais metálicos de ácidos graxos, mucoadesivos, alquil metossulfato de triamônio, octanoato ceteraril, álcool polivinílico, quitosano, derivados de quitosano, quitosano trimetilada, goma de xantana, goma de guar, ácido hialurônico, agentes termo-gelificantes, agentes de pseudoplasticidade, agentes de cisalhamento-gelificantes, policarbofil, óxido de polietileno, sílica, sílica fumada, qualquer óxido de metal coloidal pirogenada, sais de metais pesados não tóxicos, óleos hidrogenados, óleo de rícino hidrogenado e combinações dos mesmos.
6. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o TRM é um derivado de celulose selecionado de entre metil-celulose (MC), etilcelulose (EC), EC N50, hidroximetilcelulose (HMC), hidroxipropilcelulose (HPC), hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), hidroxietilcelulose (HEC) e suas combinações, e em que a composição tem uma viscosidade (medida a 20 ° C) de 200 cP a 8.000 cP ou de 4000 cP a 6000 cP; e em que a viscosidade é medida usando um viscosímetro spindle.
7. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o TRM é HPMC com uma WAMW de cerca de 86 kDa, um teor em metoxil de 28 a 30% e um conteúdo de hidroxipropoxil de 7 a 12% de HPMC; e em que a HPMC tem o número CAS 9004-65-3.
8. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a viscosidade diminui com o aumento da temperatura de 20 ° C até 33 ° C, ou a cerca da temperatura do úbere de um animal em lactação, e em que a viscosidade é de 4.000 a 5.000 cP (a 20 ° C); de 3000 a 4000 (a 25 ° C); e de 2,000 a 3000 (a 33 ° C).
9. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a viscosidade é de 1300 a 1500 (a 20 ° C); de 900 a 1200 (a 25 ° C); e de 600 a 800 (a 33 ° C).
10. Composição veterinária, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o TRM é aquele que faz com que a composição aumente a viscosidade quando a temperatura é aumentada de 20 ° C a 33 ° C, ou a cerca da temperatura do úbere de um animal em lactação.
11. Composição veterinária, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a composição é uma pasta que compreende poliamida antimicrobiana, uma base de gel, e um sal de metal pesado não-tóxico, em que a base de gel inclui parafina líquida e o sal de metal pesado compreende subnitrato de bismuto.
12. Composição veterinária, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que compreende um antioxidante selecionado a partir de alfa- tocoferol, ácido ascórbico, palmitato de ascorbil, ácido fumárico, ácido málico, ascorbato de sódio, metabissulfato de sódio, galato de n-propil, BHA, BHT e monotioglicerol.
13. Composição veterinária, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que compreende um conservante selecionado de parabenos, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, ácido benzóico, álcool benzílico, bronopol, cetrimida, clorexidina, clorobutanol, clorocresol, cresol, imidureia, fenol, fenoxietanol, álcool feniletílico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico, nitrato de fenilmercúrico, sorbato de potássio, benzoato de sódio, propionato de sódio, ácido sórbico e timerosal.
14. Uso da composição veterinária conforme definida por qualquer uma das reivindicações 1 a 13 caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para tratar ou prevenir mastite em um animal não humano.
15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o animal não-humano é lactante.
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