BR112015022059A2

BR112015022059A2 - produtos de leite humano com alto teor de gordura

Info

Publication number: BR112015022059A2
Application number: BR112015022059A
Authority: BR
Inventors: Fournell Joe; Eaker Scott; Elster Scott
Original assignee: Prolacta Bioscience Inc
Priority date: 2013-03-13
Filing date: 2014-03-05
Publication date: 2020-02-27
Also published as: US20140272027A1; CN114794241A; US11419342B2; JP2016512027A; PT2967094T; EP2967094A4; BR112015022059B1; IL240601B; EP2967094A1; WO2014158911A1; US20190327993A1; CN105246342A; EP2967094B1; AU2018201444A1; JP2020043854A; CA2902990A1; CA2902990C; DK2967094T3; PL2967094T3; HK1220328A1

Abstract

resumo patente de invenção "produtos de leite humano com alto teor de gordura" a revelação apresenta uma composição de nata de leite humano bem como métodos de fabricação de uma composição de nata de leite humano e de uso de uma composição de nata de leite humano. em particular, a revelação abrange um método de uso de uma composição de nata de leite humano para elevar o teor calórico de leite humano.

Description

COMPOSIÇÕES DE NATA DE LEITE HUMANO PASTEURIZADA COM ALTO TEOR DE GORDURA E MÉTODO PARA FABRICAR UMA COMPOSIÇÃO DE NATA DE LEITE HUMANO PASTEURIZADA COM ALTO TEOR DE GORDURA

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [0001] Este pedido reivindica a prioridade sobre o Pedido Provisório de Patente US n° 61/779.781, depositado em 13 de março de 2013, sendo que o conteúdo do mesmo está aqui incorporado em sua totalidade a título de referência.

CAMPO DA INVENÇÃO [0002] A presente revelação refere-se, de modo geral, a produtos de leite humano com alto teor de gordura, como composições de nata de leite humano padronizadas, métodos de produção das composições e métodos de uso das composições.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0003] O leite materno humano é considerado a nutrição recomendada para bebês, inclusive aqueles na unidade de tratamento intensivo neonatal (NICU) (American Academy of Pediatrics, Section on Breastfeeding. Breastfeeding and the Use of Human Milk. Pediatrics, 115:496 a 506, 2005). Tipicamente, o leite humano usado na NICU é da própria mãe do bebê, mas também pode ser proveniente de uma doadora. No caso de bebês com peso de nascimento muito baixo (VLBW), o leite é, com frequência, suplementado com um fortificante de leite humano a fim de fornecer a nutrição extra que esses bebês necessitam.

[0004] Embora o leite humano seja raramente analisado quanto a seu teor nutricional, presume-se, geralmente, que o leite humano contém aproximadamente 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz). Entretanto, Wojcik et al. (J Am Diet Assoc, 109:137 a 140, 2009) mostrou que esse, com frequência, não é o caso de 25% das amostras de uma pesquisa de 415 amostras de doação de leite

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2/27 materno humano que têm menos que 0,585 kcal/ml (17,3 kcal/oz) e 65% das amostras têm menos que 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz). Como resultado, o teor de nutriente e energia esperado não é alcançado em um percentual significativo do tempo. O resultado líquido é que o bebê não obtém o padrão de crescimento desejado, particularmente no que diz respeito ao peso. As soluções atuais para esse problema incluem alimentação intravenosa de bebês através do processo de nutrição parenteral total (TPN). Embora a TPN seja eficaz na entrega do nível necessário de nutrição para bebês com VLBW, ela também está associada a muitos efeitos colaterais negativos incluindo, por exemplo, dano ao fígado.

[0005] Dessa forma, é necessária uma solução para resolver o problema de produção de leite humano com baixo teor calórico que evita os efeitos colaterais nocivos indesejáveis da TPN. A presente invenção resolve o problema mediante o fornecimento de um produto de leite humano com alto teor de gordura e pasteurizado que pode ser administrado de modo enteral e pode aumentar o teor calórico do leite humano, embora não aumente o volume geral alimentado para o bebê.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0006] Esta revelação apresenta produtos de leite humano com alto teor de gordura, por exemplo, composições de nata de leite humano, bem como métodos de fabricação e métodos de uso dos produtos de leite humano com alto teor de gordura.

[0007] Em um aspecto, a revelação apresenta uma composição de nata de leite humano que compreende nata pasteurizada derivada de leite humano, em que a composição compreende cerca de 2,5 kcal/ml. Em uma modalidade, a composição compreende cerca de 25% de gordura. Em uma outra modalidade, a composição de nata de leite humano compreende adicionalmente permeado

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3/27 de leite desnatado humano. Em ainda outra modalidade, a composição de nata de leite humano compreende adicionalmente água desionizada.

[0008] Em uma modalidade, a composição é usada para nutrição enteral. Em uma modalidade particular, a nutrição enteral é para um bebê com baixo peso de nascimento.

[0009] Em um outro aspecto, a revelação abrange um método de fabricação de uma composição de nata de leite humano que compreende as etapas de: obter uma reserva de leite humano, separar a reserva de leite humano em uma porção de nata e uma porção de leite desnatado, formular a porção de nata para obter uma composição de nata que compreende cerca de

2,5 kcal/ml e pasteurizar a composição de nata. Em uma modalidade, a etapa de separação é através de ultracentrifugação.

[0010] Em uma modalidade, o método de fabricação de uma composição de nata de leite humano compreende adicionalmente a ultrafiltração de água da porção de leite desnatado, obtendo assim um permeado de leite desnatado humano. Em uma modalidade relacionada, a etapa de formulação compreende adicionar um volume do permeado de leite desnatado humano à porção de nata. Em uma outra modalidade, a etapa de formulação compreende adicionar um volume de água desionizada à porção de nata.

[0011] Em ainda outra modalidade, o método de fabricação de uma composição de nata de leite humano compreende adicionalmente uma etapa de teste da reserva de leite humano para adulterantes, contaminantes, fármacos e/ou patógenos. Em uma modalidade, a etapa de teste compreende testar com o uso de um painel de micro-organismo. Em uma outra modalidade, a etapa de teste compreende análise por PCR quanto a HIV, HBV e HCV. Em uma modalidade, a etapa de teste detecta proteína bovina. Em ainda outra modalidade, a etapa de teste compreende testar para um ou mais fármacos. Em uma modalidade

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4/27 relacionada, o um ou mais fármacos são selecionados a partir de anfetaminas, benzodiazepina, cocaína, metanfetaminas, opiatos, opióides sintéticos (por exemplo, oxicodona/oximorfona), THC e principais metabolites dos mesmos.

[0012] Em uma modalidade do método, a reserva de leite humano é de uma ou mais doadoras.

[0013] Em um outro aspecto, a revelação abrange um método de aumento do teor calórico de leite humano a um nível de teor calórico desejado, compreendendo as etapas de: obter uma amostra de leite humano, medir o teor calórico do leite humano, determinar um volume de uma composição de nata de leite humano necessário para elevar o teor calórico do leite humano ao nível de teor calórico desejado e adicionar o volume da composição de nata de leite humano ao recipiente de leite humano. Em uma modalidade, o teor calórico desejado é 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz).

[0014] Em uma modalidade do método de aumento do teor calórico de leite humano, a composição de nata de leite humano compreende cerca de

2,5 kcal/ml. Em uma modalidade relacionada, a composição de nata de leite humano compreende cerca de 25% de gordura.

[0015] Em uma outra modalidade do método, o leite humano é para nutrição enteral. Em uma modalidade relacionada, a nutrição enteral é para um bebê com peso baixo no nascimento.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0016] As composições e métodos apresentados na presente invenção se referem a produtos de nata de leite humano. A lógica por trás da suplementação de leite humano (por exemplo, da mãe ou doadora) ocorre da constatação que o leite de mães que dão à luz de modo significativamente prematuro não tem o teor nutricional adequado para atender completamente às necessidades metabólicas e de crescimento aumentadas de seus bebês em

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5/27 relação a um bebê proveniente de gestação completa (Hawthorne et al., Minerva Pediatr, 56:359 a 372, 2004; Lawrence and Lawrence, Breastfeeding: A Guide for the Medical Profession, 6^a edição. Philadelphia: Elsevier Mosby, 2005; e Ziegler, Human Milk for the Preterm Infant, International Congress of the Human Milk Banking Association of North America. Alexandria, VA, 2005). [0017] De forma interessante, o chamado leite de mães de prematuros pode conter níveis maiores de proteína do que uma mãe que deu à luz durante o período gestacional completo (Hawthorne et al., Minerva Pediatr, 56:359 a 372, 2004; Lawrence and Lawrence, Breastfeeding: A Guide for the Medical Profession, 6^aedição. Philadelphia: Elsevier Mosby, 2005; e Ziegler, Human Milk for the Preterm Infant, International Congress of the Human Milk Banking Association of North America. Alexandria, VA, 2005). No entanto, esses níveis ainda são inadequados para assegurar níveis iniciais adequados de crescimento e de desenvolvimento e além, particularmente em bebês de um tamanho destinado a não sobreviver nos dias que antecedem o tratamento intensivo neonatal. Também é o caso que esses níveis elevados de nutrição têm tempo de vida relativamente curto e o leite de mães de prematuros se toma rapidamente indistinguível do leite maduro. Dessa forma, é importante que o teor nutricional da alimentação diária desses bebês atenda a níveis aceitáveis de componentes-chave como calorias e proteína.

[0018] Entretanto, o teor calórico do leite humano suprido a bebês é medido muito raramente. Conforme demonstrado pelo estudo realizado por Wocjik et al. (J Am Diet Assoe, 109:137 a 140, 2009), é provável que o leite humano suprido a bebês com LBW e VLBW não forneça frequentemente uma quantidade suficiente de calorias para atender as necessidades nutricionais de um bebê prematuro. As composições de leite humano com alto teor de gordura descritas na presente invenção fornecem uma solução para esse problema e podem ser usadas, por exemplo, para suplementar leite humano a fim de

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6/27 aumentar o teor calórico até o nível desejado sem aumentar o volume a ser alimentado para o bebê, por exemplo, um bebê com LBW. Isso é particularmente útil quando tudo o que é necessário é o aumento do consumo calórico e não o aumento do teor de proteína. As composições da presente invenção resolvem esse problema aumentando as calorias sem aumentar a proteína e, portanto, fornecem uma solução econômica para o problema.

[0019] A nutrição parenteral total (TPN), um processo de fornecimento de nutrição de maneira intravenosa e desvio do trato gastrointestinal, é frequentemente usada para alimentar bebês com LBW. No entanto, a TPN é associada a diversas complicações em potencial incluindo, por exemplo, hiperglicemia, hipoglicemia, lipogênese, complicações hepáticas (por exemplo, fígado gordo e colestase), sepse e coágulos sanguíneos. Em particular, as necessidades de alto teor de gordura e de alto teor de proteína do bebê com LBW tendem a resultar em disfunção hepática quando a nutrição é recebida parenteralmente. Consequentemente, é desejável fornecer a um bebê nutrição enteral o mais cedo possível ao invés de TPN, a fim de evitar os efeitos negativos associados à TPN. As composições de leite humano com alto teor de gordura aqui descritas podem ser usadas para aumentar o teor calórico e o teor de gordura de leite humano, fornecendo assim meios para entrega enteral de gordura de leite humano. Manter uma dieta totalmente à base de leite humano reduz a incidência de complicações como enterocolite necrosante e, portanto, é contemplado que a alimentação enteral de leite humano suplementado com produtos de leite humano com alto teor de gordura pode ser usada no lugar de TPN.

[0020] Os termos bebês prematuros, nascidos antes do período de gestação completa e com baixo peso de nascimento (LBW) são usados de forma intercambiável e se referem a bebês nascidos antes de 37 semanas de gestação e/ou com pesos de nascimento inferiores a 2.500 g. Em particular, o

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7/27 termo bebê com peso de nascimento muito baixo (VLBW) se refere a um bebê com um peso de nascimento de 1.250 g ou menos. Consequentemente, o termo bebês com LBW inclui bebês com VLBW.

[0021] O termo leite integral se refere ao leite humano do qual não foi removida nenhuma gordura.

[0022] Entende-se por carga microbiana (bioburden) os contaminantes microbiológicos e patógenos (geralmente vivos) que podem estar presentes no leite, por exemplo, vírus, bactérias, bolor, fungo e similares.

[0023] Todas as patentes, pedidos de patente e referências citadas na presente invenção são incorporadas em suas totalidades a título de referência. Exceto onde definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui usados têm o mesmo significado conforme é comumente compreendido por um profissional versado na técnica.

Composições de nata de leite humano [0024] As composições de leite humano com alto teor de gordura ou as composições de nata de leite humano descritas na presente invenção são produzidas a partir de leite humano integral. Em uma modalidade, a composição de nata de leite humano compreende cerca de 2,0 kcal a cerca de 3,0 kcal ou mais por ml. Em uma modalidade preferencial, a composição de nata de leite humano compreende cerca de 2,5 kcal/ml. Contempla-se que a composição de nata de leite humano pode compreender cerca de 18% a cerca de 30% ou mais de gordura (isto é, lipídeos). Em uma modalidade, a composição de nata de leite humano é de cerca de 25% de gordura.

[0025] Contempla-se que as composições de nata de leite humano descritas na presente invenção podem compreender um ou mais componentes adicionais a fim de alcançar o teor calórico desejado e/ou percentual desejado de gordura. Consequentemente, em uma modalidade, a composição de nata de leite

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8/27 humano compreende permeado de leite desnatado humano adicionado. O permeado de leite desnatado (permeado) é o líquido produzido pela ultrafiltração de leite desnatado humano tradicionalmente considerado um produto residual na fabricação de fortificantes de leite humano. Em outra modalidade, a composição de nata de leite humano compreende água desionizada (Dl) além de leite humano com alto teor de gordura.

[0026] De modo geral, a composição de nata de leite humano é congelada para armazenamento e/ou transporte e é descongelada antes do uso.

Métodos de fabricação de composições de nata de leite humano [0027] As composições de nata de leite humano descritas na presente invenção são produzidas a partir de leite humano integral. O leite humano pode ser obtido da própria mãe de um bebê ou de uma ou mais doadoras. Em certas modalidades, o leite humano é reservado para fornecer uma reserva de leite humano. Por exemplo, uma reserva de leite humano compreende leite de duas ou mais (por exemplo, dez ou mais) doadoras. Como outro exemplo, uma reserva de leite humano compreende duas ou mais doações de uma doadora. Obtenção de leite de doadora [0028] De modo geral, o leite humano é fornecido por doadoras, e as doadoras são pré-selecionadas e aprovadas antes que qualquer porção de leite seja processada. São usadas várias técnicas para identificar e qualificar doadoras adequadas. Uma doadora potencial precisa obter uma liberação de seu médico e do pediatra de seu filho como parte do processo de aprovação. Isso ajuda a assegurar, entre outros, que a doadora não tem nenhuma doença crônica e que seu filho não sofrerá como resultado da(s) doação(ões). São descritos métodos e sistemas para qualificar e monitorar a coleta e a distribuição de leite, por exemplo, no Pedido de Patente US n° 12/728.811

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9/27 (U.S. 2010/0268658), que está aqui integralmente incorporado, por referência. As doadoras podem, ou não, ser compensadas por sua doação.

[0029] Geralmente, a seleção de doadoras inclui um questionário sobre o estilo de vida e histórico médico, que inclui uma avaliação de medicamentos de venda com ou sem receita médica, teste para fármacos de abuso e teste para determinados patógenos. Pode-se procurar na doadora, por exemplo, vírus da imunodeficiência humana Tipo 1 (HIV-1), HIV-2, vírus linfotrópico da célula T humana Tipo 1 (HTLV- I), HTLV-II, vírus da hepatite B (HBV), vírus da hepatite C (HCV) e sífilis.

[0030] As doadoras podem ser periodicamente requalificadas. Por exemplo, é necessário que uma doadora seja submetida à varredura por meio do protocolo usado em sua qualificação inicial a cada quatro meses, caso a doadora deseje continuar a doar. Uma doadora que não se requalifica ou falha na qualificação é deferida até que sejam aprovadas, ou permanentemente deferidas se for justificado pelos resultados da varredura de requalificação. No caso da última situação, todo o leite restante fornecido por essa doadora é removido do estoque e destruído ou usado apenas para propósitos de pesquisa. [0031] Uma doadora pode doar em uma instalação designada (por exemplo, um escritório de banco de leite) ou, em uma modalidade preferencial, tirar o leite em casa. Se a doadora for retirar o leite em casa, ela medirá a temperatura em seu congelador com, por exemplo, um termômetro fornecido, para confirmar que está frio o suficiente para armazenar leite humano a fim de que seja aprovado. Teste de identidade de doadora [0032] Uma vez aprovada a doadora, a compatibilidade de identidade de doadora pode ser realizada em leite humano doado devido ao fato de que o leite pode ser retirado por uma doadora em sua residência e não coletado em uma instalação de banco de leite. Em uma modalidade particular, o leite de cada

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10/27 doadora pode ser amostrado para marcadores genéticos, por exemplo, marcadores de DNA, para garantir que o leite é realmente proveniente da doadora aprovada. Tais técnicas de identificação de indivíduos são conhecidas na técnica (consulte, por exemplo, o Pedido Internacional n° de Série PCT/US2006/36827, que está aqui integralmente incorporado, por referência). O leite pode ser armazenado (por exemplo, a -20°C ou menos) e mantido em quarentena até que sejam recebidos os resultados de teste.

[0033] Por exemplo, os métodos apresentados na presente invenção podem incluir uma etapa para obter uma amostra de referência biológica de uma potencial doadora de leite materno humano. Tal amostra pode ser obtida por meio de métodos conhecidos na técnica como, mas não se limitando a, uma amostra retirada da bochecha ou uma amostra de sangue extraída, leite, saliva, raízes dos cabelos ou outro tecido conveniente. As amostras de ácidos nucleicos de doadora de referência (por exemplo, DNA genômico) podem ser isoladas de qualquer amostra biológica conveniente incluindo, mas não se limitando a, leite, saliva, células bucais, raízes dos cabelos, sangue e qualquer outra amostra de células ou tecido adequada com células de metafase ou núcleos de interfase intactos. A amostra é identificada com um número de referência exclusivo. A amostra pode ser analisada durante ou quase no instante de obtenção da amostra para um ou mais marcadores que podem identificar a potencial doadora. Os resultados da análise podem ser armazenados, por exemplo, em um meio legível por computador. Alternativamente ou adicionalmente, a amostra pode ser armazenada e analisada para identificar marcadores em um instante posterior.

[0034] Contempla-se que a amostra de referência biológica pode ser do tipo DNA com o uso de métodos conhecidos na técnica como análise por STR de loci de STR, análise por HLA de loci de HLA ou análise de múltiplos genes de

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11/27 genes/alelos individuais. O perfil do tipo de DNA da amostra de referência é registrado e armazenado, por exemplo, em um meio legível por computador.

[0035] É adicionalmente contemplado que a amostra de referência biológica pode ser testada para autoantígenos com o uso de anticorpos conhecidos na técnica ou outros métodos para determinar um perfil de autoantígeno. O perfil de antígeno (ou outro peptídeo) pode ser registrado e armazenado, por exemplo, em um meio legível por computador.

[0036] Uma amostra de teste de leite humano é retirada para identificação de um ou mais marcadores de identidade. A amostra do leite humano doado é analisada para o mesmo marcador ou marcadores que a amostra de referência da doadora. Os perfis de marcador da amostra biológica de referência e do leite doado são comparados. A compatibilidade entre os marcadores (e a ausência de qualquer marcador não compatível adicional) indicaria que o leite doado é proveniente do mesmo indivíduo que aquele doado pela amostra de referência. A ausência de uma compatibilidade (ou presença de marcadores não compatíveis adicionais) indicaria que o leite doado ou é proveniente de uma doadora não testada ou foi contaminado com fluido de uma doadora não testada.

[0037] A amostra de leite humano doado e a amostra biológica de referência doada podem ser testadas para mais de um marcador. Por exemplo, cada amostra pode ser testada para múltiplos marcadores de DNA e/ou marcadores de peptídeo. Ambas as amostras, contudo, precisam ser testadas para pelo menos alguns dos mesmos marcadores a fim de comparar os marcadores de cada amostra.

[0038] Dessa forma, a amostra de referência e a amostra de leite humano doado podem ser testadas para a presença de diferentes perfis de marcador de identidade. Se não houver perfis de marcador de identidade diferentes do perfil de marcador de identidade do indivíduo esperado, isso geralmente indica que não há fluido (por exemplo, leite) de outros seres humanos ou animais

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12/27 contaminando o leite humano doado. Se houver sinais além daquele sinal esperado para aquele indivíduo, os resultados são indicativos de contaminação. Tal contaminação resultará na reprovação do leite no teste.

[0039] O teste da amostra de referência e do leite humano doado pode ser executado na instalação de doação e/ou na instalação de processamento de leite. Os resultados dos testes de amostra de referência podem ser armazenados e comparados a qualquer doadora futura pela mesma doadora. Teste para contaminantes [0040] O leite é, então, testado para patógenos. O leite pode ser geneticamente testado, por exemplo, por meio de sistema de reação em cadeia de polimerase (PCR), para identificar, por exemplo, vírus, como HIV-1, HBV e HCV. Um painel de micro-organismo que executa a varredura para várias espécies bacterianas, de fungos e de bolor através de cultura, também pode ser usado para detectar contaminantes. Por exemplo, um painel de microorganismo pode testar para contagem aeróbica, Bacillius cereus, Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas, coliformes, Staphylococcus aureus, levedura e bolor. Em particular, B. cereus é uma bactéria patogênica que não pode ser removida através de pasteurização. A varredura de patógeno pode ser realizada antes ou depois da pasteurização.

[0041] Além da varredura para patógenos, o leite de doadora também pode ser testado para fármacos de abuso (por exemplo, cocaína, opiatos, opióides sintéticos (por exemplo, oxicodona/oximorfona) metanfetaminas, benzodiazepina, anfetaminas e THC) e/ou adulterantes como proteínas não humanas. Por exemplo, pode ser usado ELISA para testar o leite para uma proteína não humana, como proteínas bovinas, para assegurar, por exemplo, que o leite de vaca ou a fórmula para bebê de leite de vaca não foi adicionada

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13/27 ao leite humano, por exemplo, para aumentar o volume de doação no caso em que as doadoras são compensadas por doações.

Processamento de leite humano [0042] Uma vez varrido o leite humano, ele é processado para produzir um produto com alto teor de gordura, por exemplo, uma composição de nata de leite humano. A instalação de doação e a instalação de processamento de leite podem ser instalações iguais ou diferentes. O processamento de leite pode ser executado com grandes volumes de leite humano, por exemplo, cerca de 75 litros/lote a cerca de 2.000 litros/lote de material de partida.

[0043] Os métodos de obtenção de composições que incluem lipídios de leite humano para fornecer nutrição a pacientes são descritos no Pedido PCT/US07/86973, depositado em 10 de dezembro de 2007 (WO 2008/073888), sendo que seu conteúdo está aqui incorporado em sua totalidade.

[0044] Após o leite humano ser cuidadosamente analisado para propósitos de identificação e para evitar a contaminação conforme descrito acima, o leite é, então, submetido à filtração, por exemplo, através de um filtro de cerca de 200 microns e ao tratamento térmico. Por exemplo, a composição pode ser tratada a cerca de 63°C ou mais por cerca de 30 minutos ou mais. Posteriormente, o leite é transferido para um separador, por exemplo, uma centrífuga, para separar a nata (isto é, a porção de gordura) da parte magra. A parte magra pode ser transferida para um segundo tanque de processamento, onde permanece a cerca de 2 a 8°C até uma etapa de filtração. Opcionalmente, a nata separada da parte magra pode ser novamente submetida à separação para remover mais parte magra.

[0045] Após a separação da nata e da parte magra, a porção de parte magra é submetida à filtração adicional, por exemplo, ultrafiltração. Esse processo concentra os nutrientes no leite desnatado mediante a remoção de água por filtração. A água

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14/27 obtida durante a concentração é chamada de permeado. A porção de parte magra resultante pode ser adicionalmente processada para produzir fortificantes de leite humano e/ou formulações de leite humano padronizadas.

[0046] O processamento de leite humano para obter fortificantes de leite humano (por exemplo, Fortificantes de Leite Humano PROLACTPLUS™, por exemplo, PROLACT+4™, PROLACT+6™, PROLACT+8™ e/ou PROLACT+10™, que são produzidos a partir de leite humano e contêm várias concentrações de componentes nutricionais) e as composições dos fortificantes são descritos no pedido de patente n° de série US 11/947.580, depositado em 29 de novembro de 2007, (US 2008/0124430), sendo que seu conteúdo está aqui incorporado em sua totalidade. Esses fortificantes podem ser adicionados ao leite de uma mãe em período de amamentação para melhorar o teor nutricional do leite para, por exemplo, um bebê prematuro.

[0047] Os métodos de obtenção de formulações de leite humano padronizadas (exemplificado por PROLACT20™, NEO20™ e/ou PROLACT24) e as próprias formulações também são discutidos no pedido de patente n° de série US 11/947.580, depositado em 29 de novembro de 2007 (US 2008/0124430), sendo que seu conteúdo está aqui incorporado em sua totalidade. Essas formulações de leite humano padronizadas podem ser usadas para alimentar, por exemplo, bebês prematuros. Elas fornecem uma formulação nutricional de origem humana e podem substituir o leite materno. Formulação de composições de nata de leite humano [0048] Uma vez que a porção de nata foi separada da porção de parte magra, é medido o teor calórico da porção de nata. Em uma modalidade preferencial, se o teor calórico ou o percentual de gordura da porção de nata estiver acima de um nível desejado, um volume do permeado da ultrafiltração da porção de parte magra pode ser adicionado à porção de nata, fornecendo assim uma composição

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15/27 de nata de leite humano formulada que tem o teor calórico desejado. Alternativamente, em outra modalidade preferencial, a água desionizada pode ser adicionada à porção de nata a fim de fornecer a composição de nata de leite humano formulada. Por exemplo, o teor calórico desejado da composição de nata de leite humano é de cerca de 2,0 kcal a cerca de 3,0 kcal ou mais por ml. Em uma modalidade preferencial, o teor calórico desejado é de cerca de 2,5 kcal/ml. Em outro exemplo, o percentual de gordura desejado da composição de nata de leite humano é de cerca de 20% a cerca de 30% ou mais lipídeos. Em certas modalidades, o percentual de gordura desejado é de cerca de 25% lipídios. Embalagem e pasteurização [0049] Após adicionar, opcionalmente, o permeado ou a água desionizada à nata, a composição de nata é submetida à pasteurização. Por exemplo, a composição pode ser colocada em um tanque de processo que é conectado ao pasteurizador de alta temperatura e tempo curto (HTST) através de tubagem de silástico curada à platina. Após a pasteurização, a composição de nata pode ser coletada em um segundo tanque de processo e resfriada. Outros métodos de pasteurização conhecidos na técnica podem ser usados. Por exemplo, na pasteurização vat, a composição de nata no tanque é aquecida a um mínimo de 63°C e mantida nessa temperatura por um período mínimo de trinta minutos. O ar acima da composição de nata é aquecido por vapor a pelo menos três graus Celsius acima da temperatura de composição de nata. Em uma modalidade, a temperatura de produto é de cerca de 66°C ou mais, a temperatura do ar acima do produto é de cerca de 69°C ou mais e o produto é pasteurizado por cerca de 30 minutos ou mais. Em outra modalidade, são realizados HTST e pasteurização vat.

[0050] A composição de nata pasteurizada é geralmente processada de maneira asséptica. Após o resfriamento a cerca de 2 a 8°C, o produto é

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16/27 carregado em recipientes de volumes desejados e várias amostras da composição de nata são retiradas para análise nutricional e de carga biológica. A análise nutricional assegura teor de gordura e caloria apropriado da composição de nata. Uma etiqueta que reflete a análise nutricional é gerada para cada recipiente. A análise de carga biológica testa para a presença de contaminantes, por exemplo, contagem aeróbica total, B. cereus, E. coll, Coliforme, Pseudomonas, Salmonella, Staphylococcus, levedura e/ou bolor. O teste de carga biológica pode ser teste genético. O produto é embalado e enviado, uma vez concluída a análise e obtidos os resultados desejados.

[0051] Em uma modalidade, a composição de nata de leite humano resultante compreende cerca de 2,0 kcal a cerca de 3,0 kcal ou mais por ml. Em uma modalidade preferencial, a composição de nata de leite humano compreende cerca de 2,5 kcal/ml. Contempla-se que a composição de nata de leite humano resultante compreende cerca de 20% a cerca de 30% ou mais de gordura. Em uma modalidade, a composição de nata de leite humano é de cerca de 25% de gordura. Uso de composições de nata de leite humano [0052] As composições de nata de leite humano descritas na presente invenção podem ser usadas como nutrição suplementar. Consequentemente, as composições de nata de leite humano descritas na presente invenção podem ser administradas de maneira enteral ou oral (por exemplo, mamadeira). O uso de lipídios humanos para nutrição parenteral, uma prática de alimentação intravenosa (por exemplo, nutrição parenteral total), para um paciente que necessita dos mesmos é descrito no Pedido PCT/US07/86973, depositado em 10 de dezembro de 2007 (WO 2008/073888), sendo que o conteúdo do mesmo está aqui incorporado em sua totalidade.

[0053] As composições de nata de leite humano reveladas são particularmente úteis para suplementar leite humano para bebês, especialmente bebês com LBW, a

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17/27 fim de elevar o teor calórico do leite humano a um nível desejado. O leite humano é frequentemente administrado de maneira enteral em bebês prematuros no NICU. A nutrição enteral é uma prática na alimentação por tubo, por exemplo, nasogástrica, transpilórica e percutânea. O leite humano (por exemplo, da própria mãe ou de doadora) frequentemente não atende às necessidades calóricas de um bebê com LBW (Wocjik et al. J Am Diet Assoc, 109:137 a 140, 2009). Portanto, em uma modalidade, a composição de nata de leite humano da presente invenção é adicionada ao leite humano, aumentando assim o teor calórico enquanto também mantém uma dieta totalmente de leite humano do bebê e evita as complicações associadas à TPN. Em uma modalidade, a nutrição enteral que compreende a composição de nata de leite humano é para um bebê prematuro ou com LBW.

[0054] Em uma modalidade, é fornecido um método de aumento do teor calórico de leite humano até um nível de teor calórico desejado. O método compreende as etapas de obtenção de uma amostra de leite humano (por exemplo, da própria mãe ou doadora ou reserva de leite derivado da mãe e/ou doadoras), medir o teor calórico do leite humano, determinar um volume de uma composição de nata de leite humano necessário para elevar o teor calórico do leite humano até o nível de teor calórico desejado e adicionar o volume da composição de nata de leite humano ao recipiente de leite humano. Por exemplo, o teor calórico desejado é 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz) ou mais. Em outra modalidade, o teor-alvo de caloria desejado é 0,81 kcal/ml (24 kcal/oz) ou mais. Em outra modalidade, o teoralvo de caloria desejado é 0,88 kcal/ml (26 kcal/oz) ou mais. A composição de nata de leite humano usada para aumentar o teor calórico do leite humano pode compreender, por exemplo, cerca de 2,5 kcal/ml e/ou cerca de 25% de gordura.

[0055] Em alguns casos, pode ser desejável reduzir a quantidade de leite humano em que a composição de nata de leite humano é adicionada a fim de manter igual o volume total administrado ou alimentado ao bebê. Por exemplo,

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18/27 um volume igual de leite humano pode ser removido antes da adição da composição de nata.

[0056] Todos os documentos citados na presente invenção são expressamente incorporados por referência em suas totalidades para todos os propósitos.

Exemplos [0057] Os exemplos a seguir se destinam a ilustrar, mas sem limitar a invenção.

Exemplo 1

Produto de nata de leite humano padronizado [0058] A fim de fornecer um suplemento nutricional que pode adicionar as quantidades desejadas de calorias ao leite da própria mãe ou de doadora sem adicionar uma quantidade significativa de volume, foi produzida uma composição de nata de leite humano que pode ser fornecido de modo enteral, evitando assim os efeitos negativos associados à TPN. O leite humano de doadoras anteriormente submetidas à varredura e aprovadas foi unido por mistura para gerar uma reserva de leite de doadora. Em um ambiente limpo, a reserva de leite de doadora foi adicionalmente testada quanto a patógenos específicos e proteínas bovinas. Especificamente, foi usado teste por PCR para realizar a varredura quanto à presença de HIV-1, HBV e HCV no leite. Também foi realizado um painel microbiológico que testa quanto a, por exemplo, contagem aeróbica, Bacillius cereus, Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas, coliformes, Staphylococcus aureus, levedura e bolor.

[0059] A reserva de leite de doadora foi ultracentrifugada para gerar uma porção de nata e uma porção de leite desnatado. A porção de nata foi, então, formulada para atender a especificações de gordura e caloria mediante a adição de uma quantidade de água ultrafiltrada da porção de parte magra, o permeado

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19/27 de ultrafiltração de leite desnatado humano. Especificamente, a porção de nata foi padronizada em 25% de lipídios e continha cerca de 2,5 kcal/ml.

[0060] A composição de nata padronizada foi, então, pasteurizada após orientações definidas pela Regulamentação da FDA para Leite Pasteurizado. Após a pasteurização, a composição de nata padronizada foi, então, carregada em garrafas de polietileno de alta densidade e congelada. As garrafas foram pesadas para assegurar que o volume pretendido foi carregado na garrafa. A composição de nata engarrafada foi, então, mantida em quarentena até que todos os dados do painel microbiológico fossem analisados e que fosse realizada uma análise nutricional completa.

[0061] A composição de nata engarrafada foi etiquetada com um número de lote específico de produto e data de validade de uso. O produto de nata foi, então, enviado para o destino, por exemplo, hospital, em um refrigerador isolado abastecido com gelo seco.

Exemplo 2

Administração enteral de produto de nata de leite humano para bebês com VLBW [0062] A fim de avaliar o efeito a curto prazo do uso de uma composição de nata de leite humano, Prolact CR™, para suplementar leite humano com baixo teor calórico para todos os neonatos com peso de nascimento muito baixo (VLBW), o leite humano que compreende menos que 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz) foi suplementado com a nata de leite humano além de um fortificante de leite humano (Prolact+ H²MF®)(isto é, o braço de leite ajustado de nata ou braço de tratamento) ou com o fortificante de leite humano sem um suplemento de nata de leite humano (isto é, o braço de leite não ajustado ou grupo de controle).

[0063] Setenta e oito bebês prematuros foram randomizados no grupo de suplemento de nata ou no grupo de controle que não recebeu o suplemento de nata de leite humano. Cada grupo de estudo usou o fortificante à base de leite

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20/27 humano Prolact+ H²MF® de acordo com o padrão praticado. Tipicamente, a fortificação começa quando o bebê recebe até cerca de 100 ml/kg/dia de nutrição enteral. O leite para o grupo de teste de nata foi suplementado com a composição de nata de leite humano após a fortificação começar e foi determinado como tolerado, geralmente um dia depois.

[0064] As quantidades diárias reais de alimentação durante o estudo não foram controladas, exceto a composição de nata de leite humano que foi dada em uma quantidade para alcançar um nível calórico de leite materno/de doadora de 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz) quando for necessário. O uso do fortificante, da temporização de iniciação e do protocolo gradual, foi determinado de acordo com o padrão local de cuidados.

[0065] Esse estudo foi projetado para avaliar uma hipótese nula de resultados inferiores em relação à taxa de ganho de peso entre os dois grupos de estudo com o uso das seguintes fórmulas, em que μ é a taxa média de ganho de peso no respectivo grupo de estudo:

Ho: Pnata^- Psem nata — ^-3 g/kg/dia Q Ηθ: Pnata ~ Psem nata -* ^-3 g/kg/dia.

Também foram coletados dados sobre a taxa de alteração da circunferência de crânio e estatura corporal. No entanto, eles foram testados sob o paradigma de superioridade usual. A taxa de ganho de peso para todos os bebês que não concluíram o período de estudo completo foi calculada ao longo do período no qual o bebê permaneceu no estudo.

[0066] Os participantes do estudo foram acompanhados até o primeiro dos seguintes períodos: 36 semanas de idade gestacional corrigida ou tirados da fortificação, ou o que veio primeiro; alta; transferência da instituição médica; ou

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21/27 morte. A idade gestacional corrigida foi calculada como idade gestacional no nascimento + idade cronológica.

[0067] Os participantes do estudo foram selecionados com base em uma série de critérios de inclusão e exclusão. Todos os participantes do estudo atenderam a todos os critérios de inclusão e a nenhum dos critérios de exclusão mencionados abaixo. Os cinco critérios de inclusão são os seguintes:

1. Peso no nascimento entre 750 e 1.250 g

2. Ter uma expectativa razoável de sobrevivência pela duração máxima do estudo (ao longo de 36 semanas de idade gestacional corrigida ou tirado da fortificação, o que vier primeiro)

3. Deve ser capaz de aderir a um protocolo de alimentação que envolve o leite da própria mãe/doadora que irá incluir a fortificação com o uso de Prolact+ H²MF® e, potencialmente, nata de leite humano

4. A alimentação enteral precisa começar antes do 21 ° dia de vida

5. Consentimento informado obtido junto aos pais ou guardião legal.

[0068] Os oito critérios de exclusão são os seguintes:

1. Expectativa de sobrevivência inferior ao razoável para a idade gestacional particular do bebê ao longo do período de estudo

2. Envolvido em qualquer outro estudo clínico que afeta o gerenciamento nutricional durante o período de estudo

3. Decidir não iniciar alimentação enteral mínima antes do 21° dia de vida

4. Incapaz de obter consentimento informado junto aos pais ou guardião legal antes do início da alimentação enteral

5. Presença de doença cardíaca congênita clinicamente significativa

6. Presença de quaisquer malformações congênitas principais

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7. Potencial razoável para transferência precoce para instituição fora do estudo

8. Incapaz de participar por qualquer motivo com base na decisão do investigador do estudo.

[0069] Após a elegibilidade do bebê ser determinada e o consentimento informado ser obtido junto aos pais ou guardião legal, os bebês foram randomizados com o uso de esquema de bloco estratificado (por sítio de estudo) no grupo de teste que recebeu o suplemento de nata de leite humano ou no grupo de controle que não recebeu o suplemento de nata de leite humano. Todas as outras formas de nutrição (por exemplo, leite humano e Prolact+ H²MF®) foram fornecidas da mesma forma e de acordo com a prática padrão institucional para ambos os grupos de estudo.

[0070] A randomização foi realizada em blocos de 4 sem o uso de variáveis de estratificação, exceto pelo sítio de estudo devido ao pequeno tamanho de estudo O tamanho de bloco foi mantido em ocultação. Embora a ocultação de grupos de estudo seja sempre desejada em estudos randomizados, devido à natureza das intervenções, por exemplo, a necessidade de teste do leite humano em apenas um grupo e os métodos através dos quais a nutrição foi preparada e entregue, isso não foi possível para esse estudo.

[0071] O número de bebês incluídos nesse estudo foi baseado, em primeiro lugar, no ponto final primário da taxa de ganho de peso ao longo do período da iniciação de alimentação enteral ao longo das 36 semanas de idade gestacional corrigida ou quando o bebê enfraqueceu da fortificação, o que veio primeiro. Um estudo de leite humano e Prolact+ H²MF® por Sullivan et al. (J Pediatrics, 156:562 a 567, 2010) demonstrou um desvio padrão de ganho de peso de 4 g/kg/dia. O objetivo do experimento era mostrar a ausência de inferioridade no ganho médio de peso para o grupo de teste de nata em comparação ao grupo de

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23/27 controle. A ausência de inferioridade foi definida como uma diferença de ganho de peso inferior a 3 g/kg/dia. Com um nível de significância de 5% unilateral e potência de 90%, o estudo exigiu 31 participantes por grupo (62 no total) a fim de demonstrar a ausência de hipótese de inferioridade. No entanto, antecipou-se que, para alguns bebês no grupo de nata, seu leite humano (por exemplo, materno ou de doadora) pode nunca cair abaixo de 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz) com base em dados de Wojcik et al. (J Am Diet Assoc, 109:137 a 140, 2009) que demonstrou que isso pode ocorrer em 25% do tempo. Como resultado, o tamanho de amostra para o grupo de teste de nata foi aumentado em cerca de 25% em 39 indivíduos e o grupo de controle também foi aumentado para manter o estudo equilibrado. O tamanho de amostra total resultante foi de 78 indivíduos. O grupo de teste de nata era um grupo de intenção para tratar (ITT), apesar do fato de que parte dos bebês pode não receber o suplemento de nata.

[0072] Uma vez iniciada a fortificação de leite humano e estabelecida a tolerância com base em observação clínica, o leite humano foi testado toda vez em que um novo recipiente de leite humano foi usado para preparar alimentações. O teor calórico do leite humano foi medido com o uso de um dispositivo disponível para comercialização (o espectrômetro quase infravermelho da Unity SpectraStar) fornecido para esse propósito. Toda vez que o teor calórico do leite humano para um bebê no grupo de teste de nata cair abaixo de 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz), o volume da composição de nata de leite humano necessário para aproximar o teor calórico o máximo possível de 0,7 kcal/ml (20 kcal/oz) foi determinado. A quantidade a ser adicionada foi calculada ao ml mais próximo arredondando para baixo para 0,1 a 0,4 ml e arredondando para cima para 0,5 a 0,9 ml a fim de evitar imprecisão devido ao dispositivo de medição de caloria usado na área de preparação de nutrição. Antes da adição do volume calculado da composição de nata, um volume igual de leite humano foi removido do recipiente, mantendo

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24/27 assim o mesmo volume total. O leite humano de caloria ajustada, se for necessário, e subsequente Prolact+ H²MF® foi, então, fornecido de acordo com o cuidado padrão institucional. Foi fornecido aos bebês randomizados no grupo de controle leite humano e Prolact+ H²MF® de acordo com o padrão institucional de cuidado sem nenhum uso da análise de leite, como é típico para a grande maioria de unidades de tratamento intensivo neonatal.

[0073] O algoritmo nutricional continuou até que o bebê alcançasse 36 semanas de idade gestacional corrigida ou fosse tirado do fortificante, o que viesse primeiro, ou foi removido do estudo por outro motivo (por exemplo, devido à transferência para uma instituição fora do estudo, remoção do estudo ou morte). Os resultados são mencionados abaixo na Tabela 1.

[0074] Os formulários de coleta de dados foram fornecidos a fim de capturar as informações relevantes indicadas abaixo. Conforme indicado acima, a medida primária de eficácia para esse estudo foi a taxa de mudança de peso do início de alimentação enteral ao longo das 36 semanas de idade gestacional corrigida ou retirada do fortificante, o que vier primeiro. Com base no paradigma de ITT definido acima, a taxa de mudança de peso foi determinada para o período de tempo no estudo para qualquer indivíduo que não concluiu o período de estudo por qualquer motivo. A fim de fornecer uma comparação válida entre os participantes do estudo, a taxa de ganho de peso foi relatada como g/kg/dia. Qualquer indivíduo que falhou quanto à conclusão do período de estudo foi removido de todos os cálculos que dizem respeito a esse ponto final primário.

[0075] Na entrada de estudo, as seguintes variáveis foram registradas: peso no nascimento, idade gestacional, sexo, escore Apgar em 5 minutos, uso de ventilação mecânica, uso de esteróides pré-natais ou pós-natais e a idade em dias em que foi iniciada a alimentação enteral. Além disso, a presença de qualquer uma das condições clínicas no momento de entrada de estudo ou que

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25/27 ocorrem durante o curso do estudo foi apontada: taquipneia transitória de neonato (TTN), hemorragia intraventricular (IVH) e persistência do canal arterial (PDA).

[0076] O incremento de circunferência do crânio para o período de estudo e o incremento de comprimento para o período de estudo foram determinados. O comprimento e a circunferência do crânio foram medidos semanalmente durante o período de estudo e registrados como cm/semana. O uso de medicamentos que influenciam no crescimento e no desenvolvimento, incluindo esteróides pós-natal por exemplo, hidrocortisona e dexametasona), cafeína e outras preparações de metilxantina também foi registrado.

[0077] A quantidade diária de toda a nutrição enteral foi registrada em unidades de ml. Essa quantidade foi subdividida nos vários tipos de nutrição usados, isto é, leite materno, leite de doadora, suplemento de nata, Prolact+ H²MF® e qualquer outro suporte nutricional. No caso de intolerância à alimentação ou descontinuação de alimentação enteral e de o bebê retornar à nutrição parenteral total (TPN), a causa presumida foi identificada. Além disso, o número total de dias de TPN foi registrado para o período de estudo.

[0078] Embora não seja um foco desse estudo, foram registradas as ocorrências de sepse, enterocolite necrosante (NEC) e outros resultados infecciosos relacionados. Além disso, as informações médicas e demográficas básicas sobre cada indivíduo foram coletadas e registradas. Essas variáveis incluem idade gestacional, peso no nascimento (incluindo se o peso no nascimento era apropriado para a idade gestacional (AGA) ou baixo para a idade gestacional (SGA) com base em critérios padrão), sexo e grupo racial.

[0079] Os resultados do estudo indicaram que os bebês no grupo de teste de nata cresceram em um ritmo mais rápido em relação ao peso e à estatura em comparação ao grupo de controle, demonstrando evidentemente a eficácia superior dos produtos reivindicados comparados aos protocolos de alimentação atuais.

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26/27 [0080] A Tabela 1 é um sumário das velocidades de parâmetro de crescimento definidas ao longo do período de estudo para os 78 pacientes no estudo. Não houve diferenças nos demográficos de linha de base, exceto raça (p=0,02). Não houve casos de NEC e não houve diferenças nas taxas de sepse entre os grupos de estudo. O limite inferior de 95% unilateral do intervalo de confiança para a diferença na velocidade média (controle de nata) em termos de g/kg/dia foi 0,38. Isso estava muito acima do valor de -3 indicado como uma definição de ausência de inferioridade.

Tabela 1

Parâmetro	Grupo de nata (N=39)	Grupo de Controle (p=39)	valor p (Teste t de duas amostras com permissão para variâncias desiguais)
Velocidade de ganho de estatura (cm/semana)	1,03 ±0,33	0,83 ± 0,41	0,02
Velocidade de aumento de circunferência de crânio (cm/semana)	0,90 ±0,19	0,84 ± 0,22	0,21
Velocidade de ganho de peso (g/dia)	19,8 ±5,1	17,1 ±6,4	0,045
Velocidade de ganho de peso (g/kg/dia)	14,0 ±2,5	12,4 ±3,9	0,03

A Tabela 2 mostra as velocidades de crescimento definidas do nascimento e do tempo para ganhar novamente o peso no nascimento

Parâmetro	Grupo de nata (n=39)	Grupo de controle (n=39)	valor p (Teste de soma de classificação Wilcoxon)
Velocidade de ganho	0,95 ± 0,34	0,76 ±0,29	0,01

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de estatura a partir do nascimento (cm/semana)
Velocidade de aumento de circunferência de crânio a partir do nascimento (cm/semana)	0,64 ±0,19	0,62 ±0,21	0,58
Velocidade de ganho de peso do nascimento (g/dia)	16,5 ±4,6	14,6 ±5,7	0,19
Velocidade de ganho de peso do nascimento (g/kg/dia)	11,4 ± 2,1	10,3 ±3,4	0,11
Velocidade de ganho de peso calculada do momento em que o bebê ganhou novamente o peso no nascimento (g/dia)	21,8 ±5,4	18,6 ±6,4	0,02
Velocidade de ganho de peso calculada do momento em que o bebê ganhou novamente o peso no nascimento (g/kg/dia)	15,7 ±2,5	13,7 ±4,0	0,02

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição de nata de leite humano pasteurizada, caracterizada pelo fato de que compreende nata derivada de leite humano, em que a composição compreende 2,5 kcal/ml e 25% gordura.
2. Composição de nata de leite humano pasteurizada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente permeado de leite desnatado humano.
3. Composição de nata de leite humano pasteurizada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é usada para nutrição enteral.
4. Composição de nata de leite humano pasteurizada, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a nutrição enteral é para um bebê com baixo peso de nascimento.
5. Método para fabricar uma composição de nata de leite humano pasteurizada, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

(a) separar leite humano reservado em uma porção de nata e uma porção de leite desnatado, (b) formular a porção de nata por meio da adição de um volume de permeado de leite desnatado humano para obter uma composição de nata compreendendo 2,5 kcal/ml e 25% gordura, e (c) pasteurizar a composição de nata, dessa forma preparando uma composição de nata de leite humano pasteurizada.
6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o leite humano reservado é de uma ou mais doadoras.

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7. Composição de nata de leite humano pasteurizada, caracterizada pelo fato de que é preparada pelo método como definido na reivindicação 5.