BR112015019578B1 - composição para uso farmacêutico com atividade antioxidante contra radicais livres, uso cosmético de uma composição, uso nutricional dietético de uma composição e composição cosmética para produzir atividade antioxidante contra radicais livres - Google Patents
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Abstract
COMPOSIÇÃO PARA USO FARMACÊUTICO COM ATIVIDADE ANTIOXIDANTE CONTRA RADICAIS LIVRES, USO COSMÉTICO DE UMA COMPOSIÇÃO PARA PRODUZIR ATIVIDADE ANTIOXIDANTE CONTRA RADICAIS LIVRES E USO NUTRICIONAL DIETÉTICO DE UMA COMPOSIÇÃO PARA PRODUZ IR ATIVIDADE ANTIOXIDANTE CONTRA RADICAIS LIVRES A presente invenção refere-se a uma composição para uso farmacêutico, nutricional ou cosmético, formulada para uso oral ou tópico e possuindo atividade antioxidante contra radicais livres, que compreende: a) um extrato de semente ou semente e folha de vitis vinífera livre contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, ou a) um extrato de semente ou semente e folha vitis vinífera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ou a) uma mistura de extratos de vitis vinífera a) e a), ou a) uma mistura de catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente, juntamente com b) um extrato de folha de oliveira Olea europea L. tendo um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, ou b) hidroxitirosol em uma quantidade igual àquela contida no extrato b).
Description
[001] O objeto da presente invenção é uma composição à base de flavonoides para uso farmacêutico, nutricional ou cosmético tendo ação antioxidante potencializada contra os radicais livres.
[002] Numerosos estudos demonstram que os flavonoides, compostos polifenólicos presentes na natureza como metabólitos secundários em plantas, possuem uma elevada capacidade antioxidante contra os radicais livres de oxigênio (ROS), uma causa bem conhecida de doenças degenerativas. Os flavonoides são, portanto, indicados em várias aplicações no campo médico, para fins terapêuticos, bem como para efeitos de prevenção, por exemplo, no tratamento e prevenção de distúrbios cardiovasculares.
[003] Na patente EP 1.328.268 B1, a mesma Depositante, tendo resumido vários destes estudos como o estado da técnica, descreve uma composição para uso farmacêutico ou dietético que possui atividade antioxidante contendo, como o princípio ativo, uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina, em uma razão molar na faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente. Em particular, esta combinação dos dois flavonoides obtidos a partir de um extrato de uma mistura de partes específicas de Vitis vinifera, a saber, as sementes e as folhas, contendo uma média de aproximadamente 7,5 g de catequina e 1,5 g de quercetina por 100 g de extrato. Entre os usos indicados para esta composição antioxidante, a patente propõe o uso como um inibidor da agregação de plaquetas no tratamento e prevenção de distúrbios cardiovasculares, o tratamento e prevenção de deterioração mental na idade avançada e no tratamento e prevenção do envelhecimento da pele.
[004] O pedido de patente francês FR 2.947.179 descreve uma composição possuindo propriedades antioxidantes compreendendo polifenois obtidos a partir de uma mistura de um extrato de uva rico no flavonoide resveratrol e extrato da pele (epicarpo ou exocarpo) de oliveiras que é rico em ácido maslínico, um triterpenoide C30H48O4, descrito neste como um inibidor da protease; selênio induzido em proteínas da alga spirulina; vitamina E; a enzima superóxido dismutase (SOD).
[005] O presente pedido de patente compara a capacidade antioxidante, ou coeficiente, de ditos polifenois incluídos na composição, considerada como tal, isto é, substancialmente resveratrol e ácido maslínico em mistura um com o outro, e da própria composição, definida neste teste (vide o gráfico na Fig. 1) como um coquetel, ou seja, como uma mistura de todos os ditos ingredientes, e verifica-se que esta capacidade antioxidante aumenta através da adição dos polifenois dos outros ingredientes. De acordo com a presente invenção, verificou-se agora que os extratos de Vitis vinifera contendo polifenois selecionados, tais como um extrato de uma mistura de sementes e folhas contendo uma combinação de catequina e quercetina em uma razão molar dentro de um intervalo definido, tal como descrito no documento EP 1.328.268, são capazes de expressar uma ação antioxidante sinergicamente potencializada se um extrato de folhas da oliveira Olea europaea L. tendo um teor de hidroxitirosol entre 1% e 30% em peso do extrato é combinado com estes extratos.
[006] Como uma alternativa, a presente invenção fornece o uso de misturas análogas dos polifenois catequina, quercetina e hidroxitirosol como presentes nestes extratos, de acordo com as mesmas quantidades.
[007] O objeto da presente invenção é, portanto, uma composição para uso farmacêutico, nutricional ou cosmético, possuindo atividade antioxidante contra radicais livres compreendendo: a) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar na faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, ou a’) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar na faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ou a”) uma mistura de extratos de Vitis vinifera a) e a’), ou a”’) uma mistura de catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente, juntamente com b) um extrato de folha de oliveira Olea europaea L. tendo um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, ou b’) hidroxitirosol em uma quantidade igual àquela contida no extrato b).
[008] Portanto, as realizações preferidas da presente invenção são as composições a seguir, com referência aos ditos extratos a), a’) a”’) de Vitis vinifera e b) de oliveira, Olea europaea L.: a) + b) a’) + b) a”) + b), ou as composições a seguir, com referência aos ingredientes a”’) e b’): a”’) + b) a) + b’) a’) + b’) a”) + b’) a”’) + b’)
[009] Na realização que prevê a”): uma mistura de extratos de Vitis vinifera a) e a’), catequina e quercetina estão preferencialmente presentes na composição em uma razão molar geralmente dentro de uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente.
[0010] De acordo com uma realização diferente da presente invenção, a composição também compreende: c) selênio, preferencialmente em forma de levedura enriquecida com selênio.
[0011] Outras realizações da presente invenção podem compreender outros compostos conhecidos com atividade antioxidante, por exemplo, zeaxantina, rutina, ácido ascórbico, vitamina E, zinco, cobre.
[0012] O dito extrato de folha de oliveira, Olea europaea L., b) tem um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, preferencialmente entre 5% e 30%, ainda mais preferencialmente pelo menos 10%.
[0013] Como uma referência bibliográfica para caracterizar o extrato de folha de oliveira, Olea europaea L., b) de acordo com a composição da presente invenção, pode-se citar Benavente-Garcia et al., Antioxidant activity of phenolics extracted from Olea europaea L., Food Chemistry, vol. 68, no 4, pág. 457-462, 2000, em que é descrita uma mistura dos seguintes flavonoides com teor percentual absoluto relacionado em base seca (% b.s.):
[0014] O extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera a) contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar de catequina/quercetina em uma faixa de 6:1 a 3:1 é preferencialmente um extrato seco com um teor de polifenol total maior do que 60%, e 15-20% proantocianidinas oligoméricas (OPC), obtidos utilizando etanol/água como solvente de extração.
[0015] O extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera a’) contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar de catequina/quercetina em uma faixa de 7:1 a 4:1 é preferencialmente um extrato seco com um teor de polifenol total maior do que 60%, e proantocianidinas oligoméricas (OPC) maiores do que 30%, solvente de extração etanol/água.
[0016] Um extrato preferido de acordo com a) e a’) é feito a partir de sementes e folhas de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar igual à cerca de 5:1, respectivamente.
[0017] No que se segue, uma série de exemplos não limitativos da composição de acordo com a presente invenção, formulada para uso oral ou tópico, são descritos.
[0018] O uso tópico fornece uma aplicação da composição sobre a pele ou sobre o cabelo.
[0019] Nos exemplos que se seguem, cada extrato de ingrediente ativo de acordo com a presente invenção é identificado pelos símbolos a), a’), b) e c), tais como definidos acima, mais em geral.
[0020] A atividade antioxidante foi mensurada como a ORAC (capacidade de absorção de radical de oxigênio) de acordo com o seguinte teste.
[0021] O teste ORAC foi realizado de acordo com o método descrito por Ou, Hampsch-Woodill e Prior, “Development and validation of an improved oxygen radical absorbance capacity assay using fluorescein as the fluorescente probe", J Agric Food Chem 49 (10): 4619-26, (2001), com algumas modificações conforme descrito por Duais, Müller et al. (2009). A sonda fluorescente utilizada foi fluoresceína diluída em PBS (solução salina tamponada com fosfato) (75 mmol/L, pH 7,4). Uma solução de trabalho equivalente 1,2 μm/L, preparação recente a partir de uma solução estoque a 120 μm/L armazenada no frigorífico, foi usada para as análises. Os filtros usados no leitor de microplacas foram um filtro de 485 nm (excitação) e um filtro de 520 nm (emissão). A reação foi realizada em PBS 75 mmol/L (pH 7,4).
[0022] Os seguintes foram pipetados para cada poço da microplaca: 10 μL de amostra aquosa diluída tal como descrito abaixo, 100 μL de PBS e 25 μL da solução de fluoresceína (10,2 μmol/L) e pré-aquecido durante 10 minutos a 37°C. A água foi utilizada como um branco e controle experimental. No entanto, para a curva de calibração, Trolox (0,1-2,5 mmol/L) foi utilizado como um padrão. A reação inicia-se com a adição de uma solução a 129 mmol/L de AAPH (dicloridrato de 2,2’-azobis(2-amidino-propano)) em PBS, recentemente preparada e refrigerada em gelo, e subsequente medição da fluoresceína durante 2h a 37°C. Para verificar se a fotoestabilidade da fluoresceína, o mesmo volume de PBS foi adicionado a alguns dos poços.
[0023] Para calcular o valor ORAC, os dados de fluorescência relativa a cada minuto foram gerados com base na intensidade de fluorescência das amostras, do branco e do controle. A área sob a curva (ASC) foi então calculada para cada amostra, equação (1):em que f0 representa a fluorescência relativa a 0 minutos e fi a fluorescência relativa no tempo i. A ASClíquida foi calculada subtraindo-se o valor da ASC do branco daquele da amostra ou do padrão, equação (2):
[0024] O valor ORAC final, obtido a partir do valor da ASClíquida e a concentração de Trolox com o uso de uma equação de regressão é, portanto, expressa como equivalentes de
[0025]Trolox® (ET) em mmol/100 g.
[0026] O valor obtido é então, subsequentemente, convertido em unidades de ORAC (1 unidade ORAC = 1 μM de equivalentes de Trolox).
[0027] Usando o ensaio descrito no presente a título de exemplo, as amostras submetidas à medição ORAC foram os extratos a) e b) como definidos acima, ambos individualmente como tal para fins de comparação e na forma de composições de acordo com a presente invenção, tal como especificado no que se segue.
[0028] Em particular, o extrato a) passando por medição no presente é um extrato seco de folhas e sementes de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar de catequina/quercetina igual a 5,2:1, respectivamente; total de polifenois > 60% (UV), catequina 3,0% (HPLC), quercetina 0,6% (HPLC); extração de solvente etanol/água.
[0029] A referência selecionada para fins de comparação foi um extrato seco de pele da uva Vitis vinifera titulada em resveratrol, com um teor de polifenois totais maior do que 70%, de proantocianidinas oligoméricas maior do que 15%, de resveratrol maior do que 100 ppm, extração de solvente etanol/água. Este extrato de comparação é definido no presente pelo símbolo Ref.).
[0030] Os extratos a seguir foram testados individualmente: - Extrato de sementes e folhas de Vitis vinifera a), 60 mg em quantidade - Extrato de pele de uva Ref.), 60 mg em quantidade - Extrato de folha de oliveira b), 30 mg em quantidade, símbolo b)30 - Extrato de folha de oliveira b), 10 mg em quantidade, símbolo b)10
[0031] As seguintes composições foram testadas: a) + b) de acordo com a presente invenção e Ref.) + b) como a referência para fins de comparação: - a) + b), em que a):b) estão em uma razão em peso igual a 6:3, respectivamente. - a) + b), em que a):b) = 6:1. - Ref.) + b), em que Ref.):b) = 6:3. - Ref.) + b), em que Ref.):b) = 6:1.
[0032] Os dados obtidos são apresentados na tabela abaixo, em que ORAC é medida em micromoles de equivalente de Trolox (ET) para o peso da amostra, expresso em mg.
[0033] Os dados mostrados em forma de tabela também são apresentados graficamente nas Figuras 1 e 2 dos desenhos anexos, que mostram as ordenadas dos valores ORAC medidos em micromoles de equivalente de Trolox (ET) para os ingredientes individuais e para as respectivas composições como definidas no presente.
[0034] A Fig. 1 refere-se à comparação entre os extratos individuais a) de sementes e folhas de Vitis vinifera, b)30 e b)10 de folhas de oliveira como mencionado acima, em comparação com as respectivas composições a) + b)30 e a) + b)10, em ordem.
[0035] A Fig. 2 refere-se à comparação entre extratos de Ref.) individuais de pele de uva Vitis vinifera, b)30 e b)10 de folhas de oliveira como mencionado acima, em comparação com as respectivas composições Ref.) + b)30 e Ref.) + b)10, em ordem.
[0036] Para as composições de acordo com a presente invenção a) + b)30 e a) + b)10, a Fig. 1 mostra um aumento na ORAC de 72% e 63%, respectivamente, em relação à soma algébrica de ORAC dos ingredientes individuais, extratos a) e b), portanto, um aumento de tipo sinérgico.
[0037] Em contrapartida, para ambas as composições de comparação Ref.) + b)30 e Ref.) + b)10 realmente verificou-se uma redução (cerca de -10% e -30%, respectivamente) em relação à soma algébrica da ORAC dos ingredientes individuais, extratos Ref. e b).
[0038] Estes resultados experimentais demonstram, por um lado, a importância de selecionar extratos de Vitis vinifera, tais como a), e de forma semelhante a’) ou a”), ou de seu análogo sintético a”’) de acordo com a presente invenção, isto é, contendo os polifenois catequina e quercetina em uma razão molar dentro de uma faixa específica, em comparação com outros extratos de Vitis vinifera, tais como Ref., que é um extrato da pele da uva Vitis vinifera titulada em resveratrol, um polifenol diferente.
[0039] Por outro lado, de acordo com a presente invenção, deve ser considerada totalmente surpreendente que a atividade antioxidante conhecida dos extratos de Vitis vinifera em questão pode ser sinergicamente potenciada pela adição de um extrato de oliveira b), ou de um análogo sintético do mesmo b’) que, como tal, tem uma atividade antioxidante inferior quando comparada com cada um dos extratos de Vitis vinifera discutidos no presente, quer sejam do tipo a) ou semelhante de acordo com a invenção, ou Ref.), que não faz parte da presente invenção.
Claims (22)
1. Composição para uso farmacêutico com atividade antioxidante contra radicais livres, caracterizada por compreender: a) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação de flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, ou a’) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação de flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ou a”) uma mistura de extratos de Vitis vinifera a) e a’), ou a”’) uma mistura de catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente, juntamente com b) um extrato de folha de oliveira Olea europaea L. tendo um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, ou b’) hidroxitirosol em uma quantidade igual àquela contida no extrato b).
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ser selecionada a partir do seguinte: a) + b) a’) + b) a”) + b) a”’) + b) a) + b’) a’) + b’) a”) + b’) a”’) + b’)
3. Composição, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por ser a”) + b) ou a”) + b’), em que a catequina e quercetina estão presentes em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente.
4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o dito extrato de folha de oliveira Olea europaea L. b) ter um teor de hidroxitirosol de pelo menos 10%.
5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por uma composição compreendendo b’) ter um teor de hidroxitirosol de pelo menos 10%.
6. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o dito extrato de folha de oliveira b) conter os seguintes flavonoides, com teor percentual absoluto relacionado em base seca (% b.s.): hidroxitirosol 1,46 tirosol 0,71 catequinas 0,04 ácido cafeico 0,34 ácido vanílico 0,63 vanilina 0,05 rutina 0,05 luteolina-7-glicosídeo 1,38 verbascosídeo 1,11 apigenin-7-glicosídeo 1,37 diosmetin-7-glicosídeo 0,54 oleuropeína 24,54 luteolina 0,21 diosmetina 0,05
7. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o dito extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera a) conter uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, um teor de polifenol total maior do que 60% e proantocianidinas oligoméricas (OPC) entre 15 e 20%, obtida por extração com solvente etanol/água.
8. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o dito extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera a’) contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ser um extrato seco tendo um teor de polifenol total maior do que 95% e proantocianidinas oligoméricas (OPC) maior do que 30%, em extração com solvente etanol/água.
9. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por nos ditos a), a’), a”), a”’), uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina estar presente em uma razão molar igual a 5:1, respectivamente.
10. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender selênio.
11. Composição, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por compreender selênio sob a forma de levedura enriquecida com selênio.
12. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender pelo menos um antioxidante selecionado a partir de zeaxantina, rutina, ácido ascórbico, vitamina E, zinco e cobre.
13. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ser formulada para uso oral.
14. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ser formulada para uso tópico.
15. Composição, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada por ser formulada para uso tópico sobre a pele.
16. Composição, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada por ser formulada para uso tópico no cabelo.
17. Uso cosmético de uma composição para produzir atividade antioxidante contra radicais livres, caracterizado por a composição compreender: a) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, ou a’) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ou a”) uma mistura de extratos de Vitis vinifera a) e a’), ou a”’) uma mistura de catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente, juntamente com b) um extrato de folha de oliveira Olea europaea L. tendo um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, ou b’) hidroxitirosol em uma quantidade igual àquela contida no extrato b).
18. Uso nutricional dietético de uma composição para produzir atividade antioxidante contra radicais livres, caracterizado por a composição compreender: a) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, ou a’) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ou a”) uma mistura de extratos de Vitis vinifera a) e a’), ou a”’) uma mistura de catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente, juntamente com b) um extrato de folha de oliveira Olea europaea L. tendo um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, ou b’) hidroxitirosol em uma quantidade igual àquela contida no extrato b).
19. Uso, de acordo com as reivindicações 17 e 18, caracterizado por a composição ser formulada para uso oral.
20. Uso, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por a composição ser formulada para uso tópico.
21. Composição cosmética para produzir atividade antioxidante contra radicais livres, caracterizada por a composição compreender: a) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação de flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, ou a’) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ou a”) uma mistura de extratos de Vitis vinifera a) e a’), ou a”’) uma mistura de catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente, juntamente com b) um extrato de folha de oliveira Olea europaea L. tendo um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, ou b’) hidroxitirosol em uma quantidade igual àquela contida no extrato b); a composição sendo formulada para uso tópico sobre a pele.
22. Composição cosmética para produzir atividade antioxidante contra radicais livres, caracterizada por a composição compreender: a) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação de flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 6:1 a 3:1, respectivamente, ou a’) um extrato de semente ou semente e folha de Vitis vinifera contendo uma combinação dos flavonoides catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 4:1, respectivamente, ou a”) uma mistura de extratos de Vitis vinifera a) e a’), ou a”’) uma mistura de catequina e quercetina em uma razão molar em uma faixa de 7:1 a 3:1, respectivamente, juntamente com b) um extrato de folha de oliveira Olea europaea L. tendo um teor de hidroxitirosol em uma faixa de 1% a 30% em peso do extrato, ou c) ) hidroxitirosol em uma quantidade igual àquela contida no extrato b); a composição sendo formulada para uso tópico no cabelo.
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