BR112015009162B1 - Gel de ácido hialurônico reticulado, processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado, composições dermatológicas, kit e uso de um gel de ácido hialurônico reticulado - Google Patents

Abstract

gel de ácido hialurônico reticulado, processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado, composições dermatológicas, kit, uso de um gel de ácido hialurônico reticulado e processo de tratamento cosmético da pele. trata-se de um gel de ácido hialurônico reticulado que deriva da reticulação de ácido hialurônico ou de um sal do mesmo na presença de pelo menos uma quantidade eficaz de pelo menos uma poliamina endógena como um agente reticulante, sendo que a dita reticulação é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s).

Description

[001] A presente invenção refere-se ao campo de composições injetáveis estéreis à base de ácido hialurônico ou em um sal do mesmo e que se destinam ao tratamento de defeitos e imperfeições da pele.

[002] O ácido hialurônico, naturalmente presente na pele, é conhecido por suas propriedades viscoelásticas e também por sua alta predisposição à absorção de água. Suas propriedades contribuem fortemente para a elasticidade da pele.

[003] Dadas suas propriedades e qualidades de biocompatibilidade, tolerância e ausência de toxicidade, beneficia-se desse composto há mais de dez anos em muitas aplicações nos campos médico e cosmético e, em particular, em procedimentos estéticos.

[004] Portanto, o ácido hialurônico é usado para preencher rugas e para reduzir, ou até mesmo eliminar, o enfraquecimento local da estrutura da derme, representado por uma ruga ou uma depressão na pele, geralmente através de uma injeção direta na derme na área pertinente.

[005] O ácido hialurônico não modificado é perfeitamente biocompatível e idêntico ao ácido hialurônico endógeno.

[006] Entretanto, o ácido hialurônico é usado essencialmente na forma de um gel à base de ácido hialurônico reticulado e, portanto, em uma forma modificada, dada a resistência aumentada dessa forma particular à degradação, ao calor e, portanto, à esterilização.

[007] Esses géis de ácido hialurônico reticulado podem ser obtidos através de vários processos de preparação. Geralmente, esses processos necessitam de duas etapas principais, sendo que a primeira consiste em hidratar o ácido hialurônico a fim de convertê-lo em um gel aquoso e a segunda objetiva reticular o dito gel aquoso na presença de um agente com capacidade para induzir a reticulação do mesmo (também chamado de "agente reticulante"). Esse agente normalmente é selecionado dentre epóxido, aldeído, poliaziridila, divinilsulfona (DVS), ou butanodiol diglicidil éter (BDDE) e, portanto, é de natureza sintética.

[008] A título de ilustração desses processos, pode-se mencionar, em particular, aqueles descritos nos documentos nos US 2006/0105022, WO 2006/056204 e US 2007/0036745.

[009] Os géis reticulados atualmente no mercado e obtidos com agentes reticulantes convencionais geralmente apresentam graus de modificação superiores a 4%, ou até mesmo graus de modificação de até 10%.

[010] Para os propósitos da presente invenção, o termo "grau de modificação" destina-se a conotar a razão entre a quantidade de mols de agente reticulante anexada ao ácido hialurônico e a quantidade de mols de ácido hialurônico que forma o dito gel reticulado. A quantidade, em particular, pode ser medida por análise de 1D RMN de 1H do gel reticulado.

[011] A expressão "quantidade de mols de ácido hialurônico" destina-se a significar a quantidade de mols de unidades de dissacarídeos de repetição do ácido hialurônico, sendo que a unidade de dissacarídeos é composta de ácido D-glucurônico e D-N-acetilglicosamina ligados entre si através de ligações glicosídicas alternadas beta-1,4 e beta-1,3.

[012] Entretanto, tendo em vista a maior aproximação possível ao ácido hialurônico endógeno, é desejável a ter géis de ácido hialurônico reticulado com um grau de modificação inferior.

[013] De fato, já foram propostos géis reticulados com graus inferiores de modificação (isto é, entre 1% e 2%). Infelizmente, os mesmos apresentaram uma baixa coesividade e uma baixa resistência a esmagamento. Essas deficiências se manifestam, em particular, em reologia oscilatória em uma faixa restrita de viscoelasticidade (sendo que a faixa de viscoelasticity é representada pela faixa de tensão na qual G’ permanece constante, durante uma medição com varredura de tensão. A extensão dessa faixa de viscoelasticidade, em particular, pode ser determinada medindo-se a tensão cruzada, isto é, a tensão na qual o valor de G’ diminui e se iguala ao valor de G’’).

[014] Esse comportamento, portanto, deve ser melhorado para as aplicações de preenchimento de rugas.

[015] Mais especificamente, permanece uma necessidade para géis de ácido hialurônico reticulado com os menores graus possíveis de modificação, os quais ao mesmo tempo permaneçam satisfatórios em termos de propriedades mecânicas exibidas.

[016] Embora pareça improvável, foi percebido pelos inventores que tal gel pode ser obtido quando a etapa para reticulação é realizada na presença de um tipo específico de composto.

[017] Portanto, de acordo com um primeiro aspecto da invenção, o assunto da mesma é um gel de ácido hialurônico reticulado que deriva da reticulação de ácido hialurônico ou de um sal do mesmo na presença de pelo menos uma quantidade eficaz de pelo menos uma poliamina endógena como agente reticulante, sendo que a dita reticulação é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento covalente do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s).

[018] De fato, já foi proposto o uso de poliaminas, ainda que consideradas distintas daquelas de acordo com a invenção, para a formação de hidrogéis de ácido hialurônico reticulados.

[019] Portanto, as publicações de Xiang Mei Yuan et al. (Journal of biomaterials Applications 0(0) 1 a 9; 27 de fevereiro de 2012) e de Junseok Yeom et al. (Bioconjugate Chem., 1991(2) 232 a 241), e também o Pedido no WO 2012/008722, fornecem hidrogéis de ácido hialurônico (HA) reticulado na presença de hexametilenodiamina (HMDA). Entretanto, a poliamina pertinente, a saber, a hexametilenodiamina (HMDA), é uma diamina sintética e, portanto, não é uma diamina endógena Ainda mais, as quantidades de agente reticulante (HMDA) usadas na técnica anterior variam entre 25% e 72% e resultam em graus muito altos de modificação entre 5% e 35%.

[020] O termo "quantidade de agente reticulante" destina-se a conotar a razão entre a quantidade de mols de poliamina(s) e a quantidade de mols de ácido hialurônico usadas para sintetizar o gel.

[021] Finalmente, como se torna perceptível devido aos exemplos abaixo, os géis HA-HMDA apresentam uma eficácia significativamente menor em termos de propriedades mecânicas do que os obtidos de acordo com a invenção.

[022] A respeito das poliaminas endógenas consideradas de acordo com a invenção, o Pedido no WO 2008/015249 propõe, quanto a isso, o uso das mesmas junto com partículas de ácido hialurônico para uso tópico como um agente ativo antienvelhecimento e como um antioxidante. Por motivos óbvios, tal mistura é muito diferente dos géis considerados de acordo com a invenção.

[023] A Publicação de Di Meo et al. (Biomacromolecules, 2006, 7: páginas 1.253 a 1.260) descreve a formação de hidrogéis através de uma reação Ugi ou, alternativamente, da condensação de ácido hialurônico e espermidina. Portanto, isso envolve um mecanismo diferente daquele considerado na presente invenção. Além disso, os hidrogéis obtidos dessa forma e não dedicados a um uso de acordo com a invenção resultam de um processo que usa grandes quantidades de agente reticulante (entre 5% e 25%).

[024] Portanto, foi percebido pelos inventores que uma poliamina endógena constitui um agente reticulante selecionado para obter um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com as expectativas mencionadas acima, a saber, um grau de modificação reduzido em comparação com aqueles observados com agentes reticulantes normalmente considerados, e propriedades mecânicas e uma resistência à esterilização particularmente satisfatórias.

[025] De fato, os géis reticulados de acordo com a invenção apresentam um grau de modificação significativamente reduzido, a saber, menor ou igual a 1%, ao mesmo tempo em que permanece satisfatório em termos de propriedades mecânicas.

[026] Um gel reticulado de acordo com a invenção também apresenta a vantagem de consistir em compostos presentes naturalmente na maioria dos organismos vivos e, em particular, em seres humanos.

[027] Do ponto de vista da natureza pseudonatural, o mesmo atende a uma demanda crescente a respeito disso por parte dos consumidores.

[028] Finalmente, é provável que as propriedades intrínsecas às poliaminas endógenas consideradas de acordo com a invenção sejam preservadas no gel de ácido hialurônico reticulado obtido de acordo com a invenção. Coincidentemente, a respeito de um efeito antioxidante ou até mesmo antienvelhecimento, as mesmas são particularmente agradáveis no contexto da presente invenção.

[029] De acordo com outro aspecto da presente invenção, o assunto da mesma é uma composição dermatológica injetável estéril que compreende, em um meio fisiologicamente aceitável, pelo menos um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção.

[030] Para os propósitos da presente invenção, o termo "pele" engloba a pele da face, do pescoço, do colo, das mãos, do couro cabeludo, do abdome e/ou das pernas, mas também os lábios.

[031] O termo "estéril"destina-se a qualificar um ambiente com capacidade para garantir para os compostos considerados na composição de acordo com a invenção e/ou para a dita composição que os contém, a inocuidade necessária para a administração na pele ou através da mesma, em particular as administrações intraepidérmica e/ou intradérmica e/ou subcutânea. Em particular, é essencial que a composição que contém os ditos compostos e a qual precisa ser administrada de acordo com uma técnica de injeção, por exemplo, de acordo com a técnica de mesoterapia, seja livre de quaisquer corpos contaminantes com capacidade para iniciar uma reação colateral adversa no organismo hospedeiro.

[032] Para os propósitos da presente invenção, o termo "injetável"destina-se a conotar uma composição cujas propriedades mecânicas sejam apropriadas para o uso considerado, a saber, sua administração na pele ou através da mesma, em particular para preencher rugas.

[033] Portanto, uma composição de acordo com a invenção é injetável através de uma agulha hipodérmica fina (em particular com um diâmetro inferior a 18 G, ou até mesmo inferior a 27 G) e, vantajosamente, apresenta um módulo elástico (G’) entre 20 e 1.000 Pa, preferencialmente entre 40 Pa e 400 Pa, com um ângulo de fase (δ) inferior a 45°.

[034] Esse módulo elástico (G’) e o ângulo de fase (δ)são medidos através do protocolo definido abaixo.

[035] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, o assunto da mesma é uma composição dermatológica ou cosmética que compreende pelo menos um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção.

[036] Essa realização, que não se limita em termos de via de administração, consequentemente permite a administração da dita composição de maneira tópica.

[037] De acordo com outro aspecto da presente invenção, o assunto da mesma é um kit que compreende: - uma embalagem que contém pelo menos uma dose de um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção ou de uma composição de acordo com a invenção; e - um dispositivo para injeção na pele ou através da mesma ou um dispositivo para a microperfuração da pele, dedicada à administração da dita dose.

[038] De acordo com ainda outro aspecto da invenção, o assunto da mesma é o uso de um gel reticulado, ou de uma composição de acordo com a invenção, para preencher defeitos de volume na pele e em particular para preencher rugas.

[039] De acordo com ainda outro aspecto de a invenção, o assunto da mesma é o uso de um gel reticulado ou de uma composição de acordo com a invenção para evitar e/ou tratar os sinais cutâneos de envelhecimento cronológico e/ou sinais cutâneos induzidos por fatores externos tais como estresse, poluição atmosférica, tabaco ou exposição prolongada à radiação ultravioleta (UV).

[040] De acordo com ainda outro aspecto de a invenção, o assunto da mesma é o uso de um gel reticulado ou de uma composição de acordo com a invenção para evitar e/ou tratar uma modificação da aparência da superfície da pele.

[041] De acordo com ainda outro aspecto de a invenção, o assunto da mesma é o uso de um gel reticulado ou de uma composição de acordo com a invenção para evitar e/ou tratar uma modificação das propriedades viscoelásticas ou biomecânicas da pele.

[042] Para o propósito da presente invenção, o termo "prevenção"destina-se a significar reduzir o risco de ocorrência de um fenômeno.

[043] De acordo com outro aspecto da invenção, o assunto da mesma é um processo de tratamento cosmético da pele, que compreende pelo menos uma etapa para administrar, na pele ou através da mesma, um gel reticulado ou uma composição de acordo com a invenção.

[044] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, esse último caso se refere a um processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado ou um sal do mesmo, que compreende pelo menos as etapas que consistem em: a) fornecer um gel aquoso de ácido hialurônico ou de um sal do mesmo no estado não reticulado, b) colocar o gel obtido na etapa a) em contato com uma quantidade eficaz de pelo menos uma poliamina endógena, c) reticular a dita mistura formada na etapa b), sendo que a dita reticulação é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento covalente do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s), e d) recuperar o dito hidrogel reticulado.

[045] De acordo com uma realização particular, o processo também compreende uma etapa para e) parar a reticulação, que consiste em expor o gel reticulado a condições favoráveis à parada da reticulação do mesmo, sendo que é possível que essa etapa seja realizada antes, conjuntamente ou após a etapa de recuperação d).

GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO RETICULADO

[046] Conforme indicado previamente, um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção deriva da reticulação de pelo menos ácido hialurônico ou um sal do mesmo com, como o agente reticulante, pelo menos uma poliamina endógena, sendo que a dita reticulação é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s).

[047] Os ácidos hialurônicos são polissacarídeos lineares com unidades alternadas de ácido D-glucurônico e N-acetil-D-glicosamina.

[048] Os mesmos estão naturalmente presentes em vários tecidos e são degradados por hialuronidases, as quais estão presentes por todo o corpo, ou através de mecanismos de oxidação.

[049] Para o propósito da presente invenção, o termo "poliamina endógena"destina-se a conotar uma poliamina naturalmente presente em organismos vivos e mais particularmente no corpo humano.

[050] Consequentemente, uma poliamina de acordo com a invenção diverge da hexametilenodiamina (HMDA), a qual é uma poliamina de origem sintética.

[051] A título de representação de poliaminas endógenas, pode-se fazer menção bastante particular, em eucariotas animais, à putrescina (ou 1,4- diaminobutano), espermidina (ou 1,8-diamino-5-azaoctano) e espermina (1,12- diamino-5,9-diazadodecano).

[052] A espermina é uma tetramina e é sintetizada a partir da espermidina.

[053] Vantajosamente, a poliamina endógena usada para obter um gel reticulado de acordo com a invenção pode ser selecionada dentre a espermidina, a espermina e uma mistura das mesmas e, com a maior preferência possível é a espermina.

[054] Essa seleção é ainda mais vantajosa dado que a espermina e a espermidina estão envolvidas em numerosos mecanismos celulares fundamentais, tais como na síntese de DNA e na expressão gênica. Usadas de maneira tópica, os efeitos benéficos das mesmas na melhora da condição da pele e na redução dos sinais de envelhecimento já foram descritos (consulte, em particular, o Pedido WO 2006/048671). Esses compostos também são considerados agentes ativos preferenciais antioxidantes e antienvelhecimento.

[055] A reação de acoplamento considerada na presente invenção para atingir a reação de reticulação entre o ácido hialurônico e a(s) poliamina(s) endógena(s) é realizada através de reação entre uma função amina e um ácido carboxílico, o que portanto gera a formação de uma função amida.

[056] Em outras palavras, a reação de reticulação considerada na presente invenção leva à formação de moléculas de ácido hialurônico reticulado acopladas de maneira covalente a(s) poliamina(s) endógena(s). Não há interações eletrostáticas.

[057] Contra todas as expectativas, os géis reticulados resultantes, tendo em vista os graus de modificação considerados bastante reduzidos, apresentam propriedades mecânicas bastante satisfatórias ou, até mesmo, inatingíveis por meio de processos convencionais conforme mencionado previamente.

[058] Portanto, de acordo com uma realização particular, um gel reticulado de acordo com a invenção vantajosamente apresenta um grau de modificação inferior ou igual a 1%, preferencialmente entre 0,1% e 1% e, ainda melhor, entre 0,4% e 0,8%.

[059] Conforme indicado previamente, o "grau de modificação"corresponde à razão entre a quantidade de mols de poliamina endógena anexada ao ácido hialurônico e a quantidade de mols de ácido hialurônico que forma o dito gel reticulado. A quantidade, em particular, pode ser medida por análise de 1D RMN de 1H do gel reticulado.

[060] É importante lembrar que a expressão "quantidade de mols de ácido hialurônico"destina-se a significar a quantidade de mols de unidades de dissacarídeos de repetição do ácido hialurônico, sendo que a unidade de dissacarídeos é composta de ácido D-glucurônico e D-N-acetilglicosamina ligados entre si através de ligações glicosídicas alternadas beta-1,4 e beta-1,3.

[061] De acordo com uma realização particular, um gel reticulado de acordo com a invenção é tal que o mesmo pode compreender entre 0,5% e 40% em peso de ácido hialurônico não submetido à reação de reticulação em relação à total quantidade de ácido hialurônico.

[062] De acordo com outra realização particular, um gel reticulado de acordo com a invenção pode ter uma concentração de ácido hialurônico entre 5 e 30 mg/g.

[063] De acordo com ainda outra realização particular, um gel reticulado de acordo com a invenção pode ter um módulo elástico (G’) entre 20 e 1.000 Pa, preferencialmente entre 40 Pa e 400 Pa.

[064] De acordo com uma realização particular, um gel reticulado de acordo com a invenção pode estar na forma de um hidrogel viscoelástico predominantemente elástico com um ângulo de fase (δ) inferior a 45°.

[065] De acordo com uma realização preferencial, um gel reticulado de acordo com a invenção pode ter um módulo elástico (G’) entre 20 e 1.000 Pa, preferencialmente entre 40 Pa e 400 Pa, combinado com um ângulo de fase (δ) inferior a 45°.

[066] Em particular, um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção pode ser injetável através de uma agulha hipodérmica com um diâmetro entre 34 G e 18 G.

[067] De acordo com ainda outra realização particular, um gel reticulado de acordo com a invenção é altamente coeso. Essa característica se manifesta, em particular, através de uma varredura de tensão cruzada de alta tensão, superior a 100 Pa.

[068] O módulo elástico (G’, em Pa) e o ângulo de fase (δ, em °) podem ser medidos de acordo com o seguinte protocolo:

[069] As medições são realizadas a 25 °C a uma frequência de 1 Hz, com uma varredura de tensão com o uso do reômetro Thermo Haake RS3000 com uma geometria de placa cônica de 1°/35 mm de diâmetro. G’ e δ são gravados com relação a uma tensão de deformação aplicada de 5 Pa, isto é, na faixa de viscoelasticidade em que G’ e δ permanecem estáveis. O valor da tensão cruzada (quando G’ diminui e se iguala ao módulo viscoso G’’) então também é gravado.

[070] Para um gel coeso de acordo com a invenção, essa tensão cruzada, portanto, é superior a 100 Pa.

[071] Finalmente, de acordo com uma realização particular, um gel reticulado de acordo com a invenção pode ter uma alta resistência à esterilização (a perda de G’ causada pela esterilização é inferior a 50%).

[072] A esterilização pode ser realizada em uma autoclave (calor úmido) a T° > 121 °C, de forma a obter F0 > 15 (valor de esterilização).

[073] Conforme indicado previamente, a reação de reticulação para obter um gel reticulado de acordo com a invenção é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento covalente do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s).

[074] Para o propósito da presente invenção, o termo "condições favoráveis" destina-se a significar um elemento que inicia o dito acoplamento.

[075] A escolha desse elemento iniciador está claramente entre as habilidades daqueles versados na técnica.

[076] Geralmente, esse acoplamento é realizado através de pelo menos um composto "ativador", combinado, quando apropriado, a pelo menos um "agente de acoplamento auxiliar".

[077] Por exemplo, tal ativador pode ter a função de tornar o carbono do grupo carboxila do ácido hialurônico mais eletrofílico e, portanto, desse modo, estimular sua reatividade a respeito de um dos grupos amina da poliamina endógena.

[078] O ativador pode vantajosamente ser um agente de condensação, por exemplo, um sal piridínio, por exemplo, 2-cloro-1-metilpiridíneo, conforme descrito no documento Magnani, umi. et al. (Polymers for Advanced Technologies 11, páginas 488 a 495 (2000)), uma carbodimida, conforme descrito no documento Bulpitt, P. & Aeschlimann (J. de Biomed. Materials Res. 47, páginas 152 a 169 (1999)) ou um derivado de triazina, conforme descrito no documento Bergman et al. (Biomacromolecules 8, páginas 2190 a 2195 (2007)).

[079] Preferencialmente, tal ativador pode ser selecionado dentre carbodimidas solúveis em água, tais como 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodimida (EDC), 1-etil-3-(3- trimetilaminopropil)carbodimida (ETC), 1-cicloexil-3-(2-morfilinoetil)carbodimida (CMC) e também sais das mesmas e misturas dos mesmos, e é preferencialmente representada por EDC.

[080] Preferencialmente, um agente de acoplamento auxiliar, quando presente, pode ser selecionado dentre N-hidroxisuccinimida (NHS), N- hidroxibenzotriazol (HOBt), 3,4-diidro-3-hidróxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazol (HOOBt), 1-hidróxi-7-azabenzotriazol (HAt), N-hidroxisulfosuccinimida (sulfo NHS) e misturas dos mesmos, e é preferencialmente representado por HOBt.

[081] Ainda mais preferencialmente, tal ativador pode ser selecionado dentre EDC, quando apropriado, em combinação com HOBt como o agente de acoplamento auxiliar.

[082] A EDC possibilita ativar o ácido carboxílico formando-se um intermediário com o carboxilado. A adição de HOBt ao meio de reação possibilita, em particular, evitar a epimerização e promover a reação.

PROCESSO PARA PREPARAR UM GEL RETICULADO

[083] Conforme indicado acima, a presente invenção também se refere a um processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado ou um sal do mesmo, que compreende pelo menos as etapas que consistem em: e) fornecer um gel aquoso de ácido hialurônico ou de um sal do mesmo no estado não reticulado, f) colocar o gel obtido na etapa a) em contato com uma quantidade eficaz de pelo menos uma poliamina endógena, g) reticular a dita mistura formada na etapa b), sendo que a dita reticulação é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento covalente do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s), e h) recuperar o dito hidrogel reticulado.

[084] De acordo com uma realização particular, o processo também compreende uma etapa para e) parar a reticulação, que consistem em expor o gel reticulado a condições favoráveis à parada da reticulação do mesmo, sendo que é possível que essa etapa seja realizada antes, conjuntamente ou após a etapa de recuperação d).

[085] De acordo com uma realização particular, a etapa para reticulação c) pode ser realizada na presença de pelo menos um ativador, opcionalmente combinado com pelo menos um agente de acoplamento auxiliar, isto é, compostos que estimulam a reatividade de pelo menos um dentre os dois compostos a serem acoplados, preferencialmente selecionado dentre aqueles mencionados previamente.

[086] Essa etapa para adicionar o ativador e opcionalmente o agente de acoplamento auxiliar pode, portanto, vantajosamente, ser realizada juntamente com a etapa para reticulação c).

[087] De acordo com uma realização particular, o ácido hialurônico usado para obter um gel de acordo com a invenção pode estar na forma de sal.

[088] Preferencialmente, um sal de ácido hialurônico pode ser selecionado dentre o sal de sódio, o sal de potássio, o sal de zinco, o sal de prata e uma mistura dos mesmos, preferencialmente o sal de sódio.

[089] Vantajosamente, o ácido hialurônico usado para obter um gel de acordo com a invenção pode ter um peso molecular ponderado que varia entre 50.000 de 10.000.000 de dáltons, preferencialmente entre 500.000 de 4.000.000 de dáltons.

[090] O ajuste da quantidade de ácido hialurônico para desempenhar a reação de reticulação certamente está dentro das habilidades daqueles versados na técnica.

[091] Vantajosamente, o ácido hialurônico ou um sal do mesmo pode ser usado em um processo para preparar um gel reticulado de acordo com a invenção em um teor entre 0,5% e 12% em peso, preferencialmente entre 1% e 4% em peso, em relação ao peso total da mistura obtida no fim da etapa b), isto é, antes de desempenhar-se a etapa para reticulação c).

[092] O ajuste da quantidade de poliamina(s) endógena(s) para desempenhar a reação de reticulação certamente está dentro das habilidades daqueles versados na técnica.

[093] A quantidade de agente reticulante corresponde à razão entre a quantidade de mols de poliamina(s) e a quantidade de mols de ácido hialurônico usado para sintetizar o gel.

[094] Vantajosamente, poliamina(s) endógena(s) podem ser usadas em um processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção em um teor entre 0,1% e 3%, preferencialmente entre 0,5% e 1,5% em quantidade de mols de poliamina(s) em relação à quantidade de mols de ácido hialurônico presentes no meio de reação, isto é, a mistura da etapa b).

[095] Vantajosamente, o(s) ativador(es), combinados quando apropriado com um ou mais agentes de acoplamento auxiliar, podem ser usados em um processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção em um teor tal que a quantidade de mols de ativador(es) e, quando apropriado, de agente(s) de acoplamento auxiliar, em relação à quantidade de mols de ácido hialurônico do meio de reação (n ativador/n HA), esteja entre 0,1 e 2, preferencialmente entre 0,5 e 1,5.

[096] O gel de ácido hialurônico reticulado é obtido considerando-se a presença de pelo menos uma poliamina endógena.

[097] Consequentemente, a reticulação pode ser realizada com o uso somente desse tipo de agente reticulante. Entretanto, essa reticulação pode também ser realizada considerando-se a presença simultânea de pelo menos um agente reticulante suplementar, particularmente um convencional.

[098] Vantajosamente, esse agente reticulante suplementar pode então ser levado em consideração em uma quantidade significativamente reduzida em comparação com aqueles retidos convencionalmente quando o mesmo é usado como o único agente reticulante.

[099] Esse agente reticulante suplementar pode ser selecionado dentre epóxido, aldeído, poliaziridila, poliaminas distintas das poliaminas endógenas, polifosfatos, divinilsulfona (DVS) e misturas dos mesmos, preferencialmente dentre agentes reticulantes de epóxido, os quais são preferencialmente bifuncionais ou multifuncionais.

[100] Preferencialmente, o agente reticulante suplementar pode ser selecionado dentre epóxido, mais particularmente dentre 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), diepoxioctano ou 1,2-bis(2,3-epoxipropil)-2,3-etileno, 1,4-bis(2,3- epoxipropoxy)butano, 1,4-bisglicidiloxibutano, 1,2-bis(2,3-epoxipropoxi)etileno, 1- (2,3-epoxipropil)-2,3-epoxicicloexano e misturas dos mesmos e, com a maior preferência possível é 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE).

[101] Além disso, a presença de um sal inorgânico de um halogeneto de metal alcalino também pode ser considerado durante a reação de reticulação.

[102] De fato, embora surpreendente, os inventores perceberam que a presença de um sal inorgânico de um halogeneto alcalino ao desempenhar a reação de reticulação possibilita melhorar adicionalmente as propriedades reológicas do gel reticulado quanto ao mesmo grau de reticulação.

[103] Para o propósito da presente invenção, o termo "sal de um halogeneto alcalino" destina-se a conotar um composto formado de um cátion alcalino e de um ânion que necessariamente representa um átomo de halogênio.

[104] Vantajosamente, o átomo de halogênio pode ser selecionado dentre flúor, cloro, bromo e iodo, e é preferencialmente representado por cloro.

[105] Preferencialmente, um sal inorgânico de um halogeneto alcalino de acordo com a invenção pode ser selecionado dentre os sais de sódio, potássio e césio e, com a maior preferência é representado por um sal sódio.

[106] Ainda mais preferencialmente, um sal inorgânico de um halogeneto alcalino de acordo com a invenção pode ser NaCl.

[107] De fato, o NaCl tem a vantagem de ser fisiologicamente aceitável e ser um dos constituintes de um dos materiais brutos que são parte da composição dos géis de ácido hialurônico reticulado.

[108] Vantajosamente, o sal inorgânico(s) de um halogeneto alcalino pode ser usado em um processo de acordo com a invenção em um teor entre 0,5% e 20% em peso, preferencialmente entre 1% e 10% em peso, em relação ao peso total da mistura obtida no final da etapa b).

[109] Em vista do que foi mencionado anteriormente, um processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção necessita, primeiramente, fornecer um gel aquoso que compreenda pelo menos ácido hialurônico em uma forma não reticulada, combinado com pelo menos uma poliamina endógena como um agente reticulante.

[110] Para o propósito da presente invenção, o termo "não reticulado" destina-se a conotar um gel aquoso de ácido hialurônico que não é reticulado ou não é transformado, isto é, uma solução de ácido hialurônico cujas cadeias do polímero não são conectadas entre si por fortes ligações covalentes.

[111] Mais especificamente, o gel aquoso considerado na etapa a) pode ser obtido anteriormente juntando-se, em um receptáculo apropriado: (i) um meio aquoso; (ii) pelo menos um ácido hialurônico, ou um sal do mesmo, em uma forma não reticulada; e (iii) quando apropriado, pelo menos uma poliamina endógena; e homogeneizando-se a mistura resultante, sendo que a ordem de adição dos compostos (i), (ii) e (iii) ao receptáculo não é importante.

[112] Em outras palavras, caso o gel aquoso da etapa a) leve em consideração a presença de pelo menos uma poliamina endógena, as etapas a) e b) o processo de acordo com a invenção então são realizada concomitantemente.

[113] De acordo com uma primeira variante de realização, esse gel aquoso pode ser formado pela introdução do meio aquoso e do ácido hialurônico no receptáculo, com uma homogeneização simultânea e/ou consecutiva da mistura assim formada e, então, quando apropriado, pela adição do agente reticulante com uma homogeneização simultânea e/ou consecutiva.

[114] De acordo com uma segunda variante de realização, esse gel aquoso pode ser obtido pela introdução do meio aquoso, do ácido hialurônico e do agente reticulante no receptáculo, com uma homogeneização simultânea e/ou consecutiva da mistura assim formada.

[115] Essa segunda variante de realização é vantajosa pelo fato de que uma única etapa de homogeneização é realizada.

[116] Vantajosamente, essa etapa para formar o gel aquoso pode ser realizada em uma temperatura abaixo de 35 °C, preferencialmente em uma temperatura que varia entre 15 a 25 °C e, ainda melhor, em temperatura ambiente.

[117] O gel aquoso considerado na etapa a) é vantajosamente homogêneo.

[118] Essa qualidade é garantida por uma operação em que o gel aquoso é homogeneizado, sendo que a dita operação possivelmente constitui uma etapa preliminar à etapa a).

[119] O propósito dessa operação, opcionalmente realizada na presença do agente reticulante, é mais particularmente homogeneizar completamente e hidratar o ácido hialurônico no meio aquoso e, quando apropriado, o agente reticulante e, assim, contribuir para o aperfeiçoamento das qualidades do gel reticulado esperado.

[120] De fato, por motivos óbvios, a homogeneidade do gel reticulado está intimamente ligada à natureza homogênea do gel antes da reticulação.

[121] A homogenização é considerada satisfatória quando a solução obtida tem uma coloração homogênea, sem aglomerados, e uma viscosidade uniforme. A mesma vantajosamente pode ser realizada sob condições operacionais brandas a fim de evitar a degradação das cadeias de ácido hialurônico.

[122] Essa etapa é a mais importante entre todas quando o ácido hialurônico tem um peso molecular alto. A hidratação de tal composto então, de fato, apresenta uma tendência a gerar a formação de uma solução de alta viscosidade na qual o surgimento de aglomerados é comumente observado.

[123] Conforme perceptível a partir do que foi mencionado anteriormente, a mistura formada na etapa b), ou até mesmo, quando apropriado, o gel aquoso da etapa a) quando levada em consideração a presença do agente reticulante, é subsequentemente submetida a uma reação de reticulação, ilustrada pela etapa c) do processo para preparar um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção.

[124] Conforme indicado previamente, essa reticulação é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s).

[125] As condições favoráveis a serem retidas a fim de induzir esse acoplamento e, portanto, a reação de reticulação, pode depender do peso molecular do ácido hialurônico, do meio aquoso e da natureza do agente reticulante, o qual nesse caso é parcial ou completamente formado por uma poliamina endógena.

[126] Essas condições favoráveis, em particular, podem ser refletidas pela presença de pelo menos um ativador, combinado quando apropriado com pelo menos um agente de acoplamento auxiliar, conforme indicado acima.

[127] Conforme indicado previamente, a etapa de adicionar o ativador e, quando apropriado, o agente de acoplamento auxiliar, pode preferencialmente ser realizada conjuntamente com a etapa para reticulação c).

[128] Entretanto, de acordo com uma realização particular, o ativador e, quando apropriado, o agente de acoplamento auxiliar é (são) adicionado(s) antes da etapa para reticulação c) e, mais particularmente, antes da etapa para adicionar pelo menos uma poliamina endógena.

[129] De acordo com outra realização, essa etapa de adicionar o ativador e, quando apropriado, o agente de acoplamento auxiliar, é realizada conjuntamente com a etapa b), caso no qual a etapa b) é então realizada conjuntamente com a etapa para reticulação c).

[130] Além disso, o grau de reticulação também depende da duração da etapa para reticulação aplicada à mistura obtida no final da etapa b). Quanto mais longo esse tempo, mais alto é o grau de reticulação, com a condição de um ideal que não deve ser excedido, caso contrário, há o risco de degradar o ácido hialurônico.

[131] Portanto, quando a reticulação do ácido hialurônico é realizada na presença de EDC e de HOBt, a etapa para reticulação c) pode ser realizada por um período que varia entre 30 minutos e 72 horas, preferencialmente entre 3 e 24 horas.

[132] Conforme descrito previamente, a parada da reticulação (etapa e) pode ocorrer antes, conjuntamente ou após a etapa d) para recuperar o gel.

[133] Tal etapa e) pode necessitar que se exponha o gel reticulado ou o gel sob reticulação, ou até mesmo o receptáculo que o contém, a condições favoráveis à parada da dita reticulação, ou alternativamente a condições com capacidade para parar a formação de ligações entre as várias cadeiras de polissacarídeos.

[134] Essa etapa pode ser iniciada naturalmente se todos os reagentes forem consumidos durante a etapa c) ou promovida por uma etapa de purificação que coloque o gel de volta em seu pH fisiológico e elimine os reagentes residuais não reagidos.

[135] De acordo com uma realização preferencial variante, a etapa e) é realizada antes da etapa d).

[136] De acordo com uma realização particularmente preferencial, o processo de acordo com a invenção usa (i) hialuronato de sódio, (ii) espermina como o agente reticulante e (iii) EDC como o ativador, em combinação com HOBt como o agente de acoplamento auxiliar.

[137] Por motivos óbvios, o gel reticulado obtido ao final do processo da invenção não é, de forma geral, diretamente injetável, devido ao fato de que a formulação aquosa correspondente pode não ser compatível com condições fisiológicas, nem ter um pH adequado.

[138] Portanto, uma ou mais etapas adicionais, conhecidas às pessoas versadas na técnica, podem ser realizadas.

[139] Mais particularmente, uma etapa para purificar o gel de acordo com a invenção possibilita colocar esse gel de volta em pH fisiológico e eliminar os reagentes residuais não reagidos.

[140] Essa etapa de purificação pode em particular ser representada por uma etapa de diálise. Além disso, as etapas subsequentes de homogenização, de incorporação de ácido hialurônico não reticulado e, opcionalmente, de fracionamento, também podem ser realizadas a fim de melhorar adicionalmente as qualidades do implante, de acordo com o conhecimento das pessoas versadas na técnica. O gel deve ser formulado fisiologicamente através da presença de sais em quantidades equivalentes àquelas do meio injetado.

[141] Finalmente, o hidrogel resultante pode ser embalado em seringas mediante condições atmosféricas controladas, sendo que é possível que as ditas seringas então sejam submetidas a uma etapa de esterilização, preferencialmente uma esterilização a calor.

COMPOSIÇÃO

[142] De acordo com outro aspecto da presente invenção, conforme indicado acima, a mesma também se refere a uma composição dermatológica injetável estéril que compreende, em um meio fisiologicamente aceitável, pelo menos um gel de ácido hialurônico reticulado conforme definido acima.

[143] Devido à sua natureza injetável, uma composição de acordo com a invenção portanto necessariamente compreende um meio fisiologicamente aceitável.

[144] O termo "meio fisiologicamente aceitável" destina-se a significar um meio livre de toxicidade e compatível com a injeção e/ou a aplicação da composição em materiais de queratina ou através dos mesmos.

[145] A composição pode compreender um solvente fisiologicamente aceitável ou uma mistura de solventes fisiologicamente aceitáveis.

[146] A composição pode compreender um meio aquoso fisiologicamente aceitável.

[147] Quanto ao meio aquoso adequado para a invenção, pode-se mencionar, por exemplo, a água.

[148] Quanto a agentes isotônicos adequados para a preparação de uma composição adequada para a invenção, pode-se mencionar açúcares e cloreto de sódio.

[149] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, conforme indicado acima, a mesma se refere a uma composição dermatológica ou cosmética que compreende pelo menos um gel de ácido hialurônico reticulado de acordo com a invenção.

[150] Essa realização, que não se limita em termos de via de administração, consequentemente permite a administração da dita composição de maneira tópica.

AGENTES ATIVOS ADICIONAIS

[151] Uma composição de acordo com a invenção pode também compreender pelo menos um agente ativo adicional compatível com o uso no campo das composições injetáveis estéreis.

[152] Entre os agentes ativos adicionais utilizáveis na presente invenção, pode-se mencionar antioxidantes, aminoácidos, vitaminas, minerais, ácidos nucleicos, coenzimas, derivados que contenham adrenalina e misturas dos mesmos.

[153] Quanto a antioxidantes, pode-se mencionar particularmente glutationa, ácido elágico, espermina, resveratrol, retinol, L-carnitina, polióis, polifenóis, flavonóides, teaflavinas, catequinas, cafeína, ubiquinol, ubiquinona e uma mistura dos mesmos.

[154] Quanto a aminoácidos, pode-se mencionar particularmente arginina, isoleucina, leucina, lisina, glicina, valina, treonina, prolina, metionina, histidina, fenilalanina, triptofano e uma mistura dos mesmos.

[155] Quanto a vitaminas ou derivados das mesmas, pode-se mencionar particularmente vitaminas E, A, C e B, mais particularmente vitaminas B6, B8, B4, B5, B9, B7 e B12 e, ainda melhor, piridoxina.

[156] Quanto a minerais, pode-se mencionar particularmente os sais de zinco, os sais de magnésio, os sais de cálcio, os sais de potássio, os sais de manganês, os sais de sódio e uma mistura dos mesmos.

[157] Quanto a ácidos nucleicos, pode-se mencionar particularmente derivados de adenosina, de citidina, de guanosina, de timidina, de citodina e uma mistura dos mesmos.

[158] Quanto a coenzimas, pode-se mencionar particularmente as coenzimas Q10, CoA, NAD, NADP e uma mistura das mesmas.

[159] Quanto a derivados que contêm adrenalina, pode-se mencionar particularmente aqueles de adrenalina e noradrenalina.

[160] Além disso, uma composição de acordo com a invenção pode também compreender qualquer excipiente normalmente usado no campo técnico considerado, tal como, por exemplo, monoidrato e/ou di-hidrato de fosfato de diidrogênio sódico, e cloreto de sódio em teores fisiologicamente aceitáveis.

[161] As quantidades de agentes ativos adicionais e/ou excipientes dependem certamente da natureza do composto considerado, do efeito desejado e do destino da composição de acordo com a invenção.

[162] Esses parâmetros estão entre as habilidades gerais das pessoas versadas na técnica.

[163] Vantajosamente, uma composição de acordo com a invenção pode compreender entre 2 ppm e 10.000 ppm, preferencialmente entre 5 e 1.000 ppm e, ainda melhor, entre 50 e 500 ppm de agentes ativos adicionais e/ou excipientes em relação ao peso total da dita composição.

[164] Além disso, é sabido que a injeção de uma composição dedicada a preencher rugas comumente causa uma sensação dolorosa ao paciente.

[165] Portanto, de acordo com uma realização particular, uma composição de acordo com a invenção pode também compreender pelo menos um agente anestésico.

[166] Um agente anestésico apresenta precisamente a vantagem de reduzir, ou até mesmo eliminar, a sensação dolorosa sentida pelo paciente no momento da administração de uma composição de acordo com a invenção e/ou logo em seguida ao mesmo.

[167] Além disso, foi percebido, pelos inventores, que presença de tal composto não gera o risco de incompatibilidade com outros compostos usados em uma composição de acordo com a invenção, e em particular com o ácido hialurônico.

[168] Um anestésico utilizável na presente invenção pode ser selecionado dentre ambucaína, amolanona, amilocaína, articaína, benoxinato, benzocaína, betoxicaína, bifenamina, bupivacaína, butacaína, butambeno, butanilicaína, butetamina, butoxicaína, carticaína, cloroprocaína, cocaetileno, cocaína, ciclometicaína, dibucaína, dimetisoquina, dimetocaína, diperodona, diciclonina, ecgonidina, ecgonina, cloreto de etila, etidocaína, beta-eucaína, euprocina, fenalcomina, formocaína, hexilcaína, hidroxitetracaína, p-aminobenzoato de isobutila, mesilato de leucinocaína, levoxadrol, lidocaína, mepivacaína, meprilcaína, metabutoxicaína, cloreto de metila, mirtecaína, naepaina, octacaína, ortocaína, oxetazaina, paretoxicaína, fenacaína, fenol, piperocaína, piridocaína, polidocanol, pramoxina, prilocaína, procaína, propanocaína, proparacaína, propipocaína, propoxicaína, pseudococaína, pirrocaína, ropivacaína, álcool salicílico, tetracaína, tolicaína, trimecaína, zolamina, ou um sal dos mesmos.

[169] Mais particularmente, um anestésico utilizável na presente invenção pode ser selecionado dentre articaína, benzocaína, bupivacaína, cloroprocaína, lidocaína, mepivacaína, prilocaína, procaína, ropivacaína, e tetracaína.

[170] Preferencialmente, o anestésico pode ser lidocaína e, ainda melhor, cloridrato de lidocaína.

[171] Uma composição de acordo com a invenção pode vantajosamente compreender entre 0,01% e 1% em peso, preferencialmente entre 0,1% e 0,5% em peso de anestésico(s) em relação ao peso total de a dita composição.

[172] De acordo com uma realização particular, um gel ou uma composição de acordo com a invenção, além do ácido hialurônico em uma forma reticulada, também podem compreender o ácido hialurônico em uma forma não reticulada.

[173] Tal combinação de ácido hialurônico nas formas livre e reticulada resulta imediatamente na hidratação e manutenção do volume da pele. Ademais, o mesmo induz uma potencialização dos fibroblastos dérmicos, principalmente devido à presença de ácido hialurônico livre, e essa potencialização de fibroblastos é prolongada através do tempo conforme o ácido hialurônico reticulado é degradado in vivo. De um ponto de vista funcional, a presença de ácido hialurônico não reticulado possibilita melhorar significativamente as forças de extrusão do gel através de uma agulha, o que facilita assim a força a ser aplicada pelo profissional na injeção do produto.

ADMINISTRAÇÃO DO GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO RETICULADO INJETÁVEL ESTÉRIL OU COMPOSIÇÃO DERMATOLÓGICA ESTÉRIL

[174] Um gel de ácido hialurônico reticulado ou uma composição de acordo com a invenção podem ser injetados com o uso qualquer um dos modos conhecidos por pessoas versadas na técnica.

[175] Em particular, um gel ou uma composição de acordo com a invenção podem ser administrados por meio de um dispositivo de injeção adequado a uma injeção intraepidérmica e/ou intradérmica e/ou subcutânea.

[176] O dispositivo de injeção pode ser selecionado dentre uma seringa, um conjunto de microsseringas, um dispositivo a laser hidráulico, uma pistola de injeção, um dispositivo de injeção sem agulhas, ou um rolo de micro agulhas.

[177] Preferencialmente, o dispositivo de injeção pode ser selecionado dentre uma seringa ou um conjunto de microsseringas.

[178] Preferencialmente, tal meio pode ser uma agulha hipodérmica ou uma cânula.

[179] Uma agulha ou cânula de acordo com a invenção pode ter um diâmetro que varia entre 18 e 34 G, preferencialmente entre 25 e 32 G, e um comprimento que varia entre 4 e 70 mm, preferencialmente entre 4 e 25 mm.

[180] A agulha ou cânula é vantajosamente descartável.

[181] Vantajosamente, a agulha ou cânula é combinada com uma seringa ou com qualquer outro dispositivo para entregar a dita composição injetável através da agulha ou da cânula. De acordo com uma variante de realização, um catéter pode ser inserido entre a agulha/cânula e a seringa.

[182] De maneira conhecida, a seringa pode ser operada manualmente pelo profissional ou alternativamente por meio de uma sustentação de seringa, tais como pistolas.

KIT

[183] De acordo com outro aspecto da presente invenção, a mesma se refere a um kit que compreende: - uma embalagem que contém pelo menos uma dose de um gel de ácido hialurônico reticulado ou de uma composição de acordo com a invenção; e - um dispositivo para injeção na pele ou através da mesma ou um dispositivo para a microperfuração da pele, dedicada à administração da dita dose.

[184] A embalagem é adequada para o armazenamento de pelo menos uma dose do gel ou da composição de acordo com a invenção.

[185] A embalagem pode ser disposta de forma a possibilitar, além disso, que o dito gel ou a dita composição sejam amostrados.

[186] Portanto, de acordo com uma primeira realização, a dita embalagem apresenta incisões de forma a possibilitar que o dito gel ou a dita composição sejam amostrados.

[187] Por exemplo, o mesmo pode estar na forma de uma ampola, uma garrafa ou uma cápsula, em particular na forma de uma cápsula macia.

[188] Preferencialmente, a embalagem pode ser de dose única e/ou apresentar uma incisão na extremidade.

[189] De acordo com uma segunda realização, a dita embalagem tem uma tampa que possibilita a vedação hermética durante o armazenamento e que pode ser perfurada por uma agulha ou cânula no momento da utilização.

[190] Quanto ao dispositivo de injeção, o mesmo pode ser conforme definido previamente e preferencialmente ser descartável.

[191] Preferencialmente, o dispositivo de injeção é adequado para uma injeção intraepidérmica e/ou intradermal e/ou subcutânea.

[192] Preferencialmente, o dito dispositivo é adequado para a técnica de mesoterapia.

USO

[193] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, a mesma se refere ao uso de um gel de ácido hialurônico reticulado ou de uma composição de acordo com a invenção, para evitar e/ou tratar os sinais cutâneos de envelhecimento cronológico e/ou os sinais cutâneos induzidos por fatores externos tais como estresse, tabaco e/ou exposição prolongada à radiação UV.

[194] Um gel de ácido hialurônico reticulado ou uma composição de acordo com a invenção também são vantajosos devido ao fato de poderem ser usados para evitar e/ou tratar uma modificação da aparência da superfície da pele, uma modificação das propriedades viscoelásticas ou biomecânicas da pele, uma diminuição do metabolismo celular ou uma desidratação da pele.

[195] Um gel de ácido hialurônico reticulado ou uma composição de acordo com a invenção são, novamente, vantajosos, pelo fato de poderem ser usados para preencher defeitos de volume na pele, em particular rugas, e/ou recuperar o brilho da pele.

PROCESSO DE TRATAMENTO

[196] De acordo com outro aspecto da presente invenção, a mesma se refere a um processo de tratamento cosmético da pele, que compreende pelo menos uma etapa para administrar, na pele ou através da mesma, um gel de ácido hialurônico reticulado ou uma composição de acordo com a invenção.

[197] De acordo com uma realização particular, a etapa de administração pode ser repetida em toda ou em parte da superfície a ser tratada. A repetição das injeções possibilita criar um revestimento tal que a composição de acordo com a invenção seja distribuída de forma homogênea na região da pele a ser tratada.

[198] De acordo com uma realização particular, as regiões da pele vantajosamente tratadas por meio de um processo da invenção podem ser da pele e dos lábios, e em particular da pele da face, do pescoço, do colo, das mãos, do couro cabeludo, do abdome e/ou das pernas.

[199] Um gel ou uma composição de acordo com a invenção podem vantajosamente ser injetados no nível de rugas e de linhas finas.

[200] Existem várias técnicas de injeção.

[201] Quanto a técnicas utilizáveis, pode-se mencionar a técnica de “múltiplos bolos”, que consiste em efetivar injeções na derme superficial de uma média de 0,05 ml de uma composição de acordo com a invenção, o que é chamado de bolos, sendo que os ditos bolos estão a 1 cm de distância entre si. Essa técnica é particularmente recomendada para a face e a linha do pescoço.

[202] Pode-se mencionar também a técnica de “retrocesso”, que consiste em efetivar injeções lineares de rastreamento na derme superficial, introduzir a agulha com um ângulo de 45° ao longo da depressão da pele e, então, depositar a composição de acordo com a invenção na derme superficial enquanto recolhe-se gentilmente a agulha.

[203] Finalmente, pode-se mencionar a técnica de “multipunção”, que consiste em efetivar um grupo de múltiplas injeções de pequenas quantidades da composição de acordo com a invenção na epiderme. A pontas de injeção são bem próximas entre si, por exemplo, a aproximadamente 3 mm, e são distribuídas de maneira uniforme pela superfície a ser tratada ou formando-se uma linha ao longo da ruga. Essa técnica é particularmente recomendada para unificar a aparência facial.

[204] O processo de acordo com a invenção também se caracteriza vantajoso para evitar e/ou tratar os sinais cutâneos de envelhecimento ou fotoenvelhecimento, em particular selecionados dentre a pele enrugada, a pele que exibe uma modificação de suas propriedades viscoelásticas ou bioquímicas, a pele que exibe uma modificação na coesão de seus tecidos, pele excessivamente fina, a pele que exibe uma modificação de sua aparência da superfície, e uma pele afrouxada.

[205] O processo de tratamento de acordo com a presente invenção também se caracteriza vantajoso para evitar e/ou tratar uma diminuição no metabolismo energético celular ou uma desidratação da pele.

[206] O processo de tratamento de acordo com a presente invenção também se caracteriza vantajoso para preencher defeitos de volume na pele, em particular rugas, e/ou recuperar o brilho da pele.

[207] O processo de tratamento de acordo com a presente invenção pode preferencialmente ser realizada em uma região da epiderme, dermo- epidermérmica e/ou da derme, ou até mesmo subcutânea.

[208] No decorrer do presente Pedido a expressão “que compreende” é sinônima de “que compreende pelo menos um” e “entre ... e ...” e “que varia entre ... e...” devem ser compreendidas incluindo seus limites.

[209] Os exemplos a seguir são dados a título ilustrativo não limitante da presente invenção.

EXEMPLOS EXEMPLO 1: PROTOCOLO PARA PREPARAR UM GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO RETICULADO COM ESPERMINA COMO O AGENTE RETICULANTE

[210] O ácido hialurônico é dissolvido em uma concentração de 3% (em peso) em água. Após a obtenção de uma solução homogênea, uma solução que contém espermina (aquela que apresenta > 96%, vendida pela empresa Sigma-Aldrich sob o nome de Sigma), EDC como o ativador ( cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N‘-etilcarbodimida > 98,0%, vendida pela empresa Sigma-Aldrich sob o nome Fluka) e HOBt como o agente de acoplamento auxiliar (hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, > 97%, vendido pela empresa Sigma-Aldrich sob o nome Aldrich) são adicionados à solução de ácido hialurônico. O volume dessa solução é definido de forma a obter uma mistura geral que contenha 2,3% de ácido hialurônico.

[211] O pH dessa solução é ajustado de forma a obter um pH da mistura geral entre 5,5 e 6,5 antes da reação, através do uso uma solucão diluída de HCl ou de NaOH.

[212] As quantidades de reagentes são ajustadas de acordo com o grau de modificação desejado.

[213] O mesmo varia entre 5x10-3 e 2x10’2 mol/mol de unidades em repetição de ácido hialurônico para a poliamina, e entre 0,5 e 1 mol/mol de unidades de repetição de ácido hialurônico para o ativador e o agente de acoplamento auxiliar envolvidos na reação de acoplamento. As estequiometrias usadas são indicadas nos exemplos dados.

[214] Para a reticulação, o gel aquoso é exposto por 7 a 24 h a 25°C.

[215] Após a reticulação, o gel obtido é purificado por meio de vários banhos de diálise em um período entre 2 e 3 dias e, caso necessário, ajustado ao pH fisiológico.

[216] O gel aquoso obtido após a lavagem compreende uma concentração de ácido hialurônico próxima a 20 mg/g.

[217] A fim de facilitar as forças de extrusão para passar o gel através de uma agulha, o ácido hialurônico não reticulado é então incorporado e homogeneizado no gel obtido acima.

[218] A esterilização é realizada em uma autoclave (calor úmido) a T° > 121 °C, de forma a obter F0 > 15 (valor de esterilização).

EXEMPLO2: PREPARAÇÃO DE GÉIS DE ÁCIDO HIALURÔNICO RETICULADO DE ACORDO COM A INVENÇÃO (COM ESPERMINA) E COMPARATIVOS (COM HMDA)

[219] Três géis de ácido hialurônico reticulado são preparados com base no protocolo definido no Exemplo 1 acima.

[220] Para esses três géis, n HOBt = n EDC = n HA.

[221] Esses três géis divergem entre si a título da natureza da poliamina sob consideração e/ou da razão “poliamina/ácido hialurônico”, conforme ilustrado na Tabela 1 abaixo. A última coluna [HA] indica a concentração de ácido hialurônico nos géis obtidos. TABELA1

1) CARACTERIZAÇÃO DO GRAU DE MODIFICAÇÃO DOS GÉIS A, B E C PROTOCOLO DE PREPARAÇÃO DE AMOSTRA

[222] Os géis A, B e C são lavados/precipitados com isopropanol.

[223] Os sólidos obtidos são secados e então solubilizados em D2O e tratados na presença de hialuronidase (tipo VI-S, Sigma, 3kU) em 1 ml de D2O para a degradação do gel, a fim de obter uma matriz líquida para análise.

[224] A mistura homogênea obtida é então analisada por RMN de 1H.

MEDIÇÃO DO GRAU DE MODIFICAÇÃO

[225] A caracterização dos graus respectivos de modificação dos géis A, B e C é realizada por espectroscopia de RMN.

[226] Para as poliaminas, os picos de próton 1H para HMDA em 1,34 ppm e para espermina em 1,73 ppm são mantidos como referências.

[227] O grau de modificação de cada um dos três géis de ácido hialurônico reticulado é, então, caracterizado com o uso da integral desses picos de referência de acordo com a seguinte Fórmula:

[228] X: quantidade de prótons do pico mantido para medição, isto é, 4 para espermina e HMDA.

[229] δ-Acetamida: deslocamento correspondente ao pico de acetamida de HA que, portanto, compreende 3 prótons.

[230] A análise de RMN é realizada em um espectrômetro Bruker Avance 1 operando a 400 MHz (1H).

[231] Os vários resultados e observações são resumidos na Tabela 2 a seguir: TABELA 2

[232] É perceptível a partir da Tabela 2 acima que os graus de modificação dos géis reticulados B e C de acordo com a invenção são, em comparação com aqueles do gel A de controle, significativamente reduzidos.

[233] O ácido hialurônico reticulado com espermina é, portanto, menos modificado do que aquele resultante da reticulação com HMDA. 2) CARACTERIZAÇÃO DAS PROPRIEDADES MECÂNICAS a) As propriedades viscoelásticas dos géis A, B e C são caracterizadas através da medição de seu módulo elástico G’ (em Pa) e de seu ângulo de fase δ (°), medidos a 1 Hz para uma tensão de 5 Pa.

[234] A Tabela 3 abaixo representa os valores medidos. TABELA 3

[235] O gel A de controle, embora reticulado com uma poliamina (HMDA), não é suficiente dado que, embora o grau de modificação do ácido hialurônico seja alto, suas propriedades mecânicas são fracas.

[236] Apesar de um grau de modificação reduzido, os géis B e C exibem, por outro lado, um comportamento reológico significativamente melhorado em comparação com o gel A comparativo. b) A resistência à esterilização dos géis A, B e C é determinada através da caracterização da perda do módulo elástico G’ (em Pa) desses géis após a exposição a uma esterilização realizada em uma autoclave (em calor úmido) a T° > 121 °C, de forma a obter um F0 > 15 (valor de esterilização).

[237] A Tabela 4 abaixo representa os valores medidos. TABELA4

[238] O gel A de controle novamente é insatisfatório dado que o mesmo exibe uma resistência pobre à esterilização em comparação com os géis B e C.

Claims (15)

1. GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO RETICULADO, caracterizado por derivar da reticulação de ácido hialurônico ou de um sal do mesmo na presença de pelo menos uma quantidade eficaz de pelo menos uma poliamina endógena como um agente reticulante, em que a poliamina endógena é selecionada dentre espermidina, espermina, e uma mistura das mesmas, sendo que a dita reticulação é realizada em condições favoráveis ao acoplamento covalente do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s), dito gel apresentando um grau de modificação inferior ou igual a 1%, o grau de modificação sendo a razão entre a quantidade de mols de poliamina endógena anexada ao ácido hialurônico e a quantidade de mols de ácido hialurônico formando o dito gel reticulado.

2. GEL, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela poliamina endógena ser espermina.

3. GEL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo acoplamento ser realizado na presença de pelo menos um ativador e, quando apropriado, combinado com pelo menos um agente de acoplamento auxiliar, dito ativador sendo preferivelmente selecionado dentre carbodimidas solúveis em água, tais como 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodimida (EDC), 1- etil-3-(3- trimetilaminopropil)carbodimida (ETC), 1-cicloexil-3-(2- morfilinoetil)carbodimida (CMC), e também sais das mesmas e misturas das mesmas, e preferivelmente é representado por EDC, e dito agente de acoplamento auxiliar, quando presente, sendo preferivelmente selecionado dentre N-hidroxisuccinimida (NHS), N- hidroxibenzotriazol (HOBt), 3,4-diidro-3-hidróxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazol (HOOBt), 1-hidróxi-7-azabenzotriazol (HAt), N-hidroxisulfosuccinimida (sulfo NHS) e misturas dos mesmos, e preferivelmente é representado por HOBt.

4. GEL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por dito gel apresentar um grau de modificação entre 0,1% e 1% e, ainda melhor, entre 0,4% e 0,8%.

5. GEL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por dito gel apresentar um módulo elástico (G’) entre 20 e 1000 Pa, preferivelmente entre 40 Pa e 400 Pa, combinado com um ângulo de fase (δ) inferior a 45°.

6. GEL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por dito gel apresentar uma varredura de tensão cruzada superior a 100 Pa.

7. PROCESSO PARA PREPARAR UM GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO RETICULADO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado por compreender pelo menos as etapas que consistem em: a) fornecer um gel aquoso de ácido hialurônico ou de um sal do mesmo no estado não reticulado; b) colocar o gel obtido na etapa a) em contato com uma quantidade eficaz de pelo menos uma poliamina endógena, em que a poliamina endógena é selecionada dentre espermidina, espermina, e uma mistura das mesmas, e opcionalmente na presença de um agente reticulante suplementar; c) reticular dita mistura formada na etapa b), dita reticulação é realizada sob condições favoráveis ao acoplamento covalente do dito ácido hialurônico e da(s) dita(s) poliamina(s) endógena(s); d) recuperar dito hidrogel reticulado; e opcionalmente e) parar a reticulação, que consiste em expor o gel reticulado a condições favoráveis à parada da reticulação do mesmo, esta etapa opcional e) sendo realizada antes, em conjunto com ou após a etapa de recuperação da etapa d).

8. PROCESSO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pela(s) poliamina(s) endógena(s) ser(serem) espermina.

9. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 8 caracterizado pela(s) poliamina(s) endógena(s) ser(serem) usada(s) em um teor entre 0,1% e 3%, preferivelmente entre 0,5% e 1,5%, em quantidade de mols de poliamina(s) em relação à quantidade de mols de ácido hialurônico que estão presentes na mistura da etapa b).

10. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 9, caracterizado pelo ácido hialurônico ou um sal do mesmo ser usado em um teor entre 0,5% e 12% em peso, preferivelmente entre 1% e 4% em peso, em relação ao peso total da mistura obtida ao final da etapa b).

11. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 10, caracterizado por usar (i) hialuronato de sódio, (ii) espermina como agente reticulante e (iii) EDC em combinação com HOBt, respectivamente, como ativador e agente de acoplamento auxiliar.

12. COMPOSIÇÃO DERMATOLÓGICA injetável estéril, caracterizada por compreender, em um meio fisiologicamente aceitável, pelo menos um gel de ácido hialurônico reticulado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.

13. COMPOSIÇÃO DERMATOLÓGICA ou cosmética, caracterizada por compreender pelo menos um gel de ácido hialurônico reticulado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.

14. KIT, caracterizado por compreender: - uma embalagem que contém pelo menos uma dose de um gel de ácido hialurônico reticulado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou uma dose de uma composição, conforme definida na reivindicação 12; e - um dispositivo para injeção na pele ou através da mesma ou um dispositivo para microperfuração da pele, dedicado à administração da dita dose.

15. USO DE UM GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO RETICULADO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou de uma composição, conforme definida na reivindicação 12, caracterizado por ser para preencher defeitos de volume na pele e, em particular, para preencher rugas.