BR112012004731B1

BR112012004731B1 - peptídeo derivado de wnt10 e composição tópica para tratamento ou prevenção de perda de cabelo

Info

Publication number: BR112012004731B1
Application number: BR112012004731-0A
Authority: BR
Inventors: Young Ji Chung; Eun Mi Kim; Sang Su Song; Kyoung Mi Cho
Original assignee: Caregen Co., Ltd.
Priority date: 2009-09-01
Filing date: 2009-11-24
Publication date: 2020-12-01
Also published as: US8497241B2; BR112012004731B8; US20120245086A1; JP2013503856A; JP5507691B2; EP2474555A4; EP2474555B1; EP2474555A1; CN102712685A; WO2011027941A1; KR101198918B1; KR20110023991A; CN102712685B; ES2552020T3; BR112012004731A2

Abstract

PEPTÍDEOS DERIVADOS DE WNT10 E USO DOS MESMOS A presente invenção refere-se a um peptídeo derivado de WNT10, uma composição para melhorar de perda de cabelo e condições da pele usando o mesmo e uma composição para tratamento de um distúrbio relacionado com o curso de transdução de sinal de WNT10 e distúrbio induzido por proteína DKK-1 usando o mesmo. Peptídeo derivado de WNT10 da presente invenção possui atividades idênticas ou similares à WNT10 de ocorrência natural, e tem estabilidade e potência de penetração na pele muito mais alta do que WNT10 de ocorrência natural. Desta maneira, a composição contendo o presente peptídeo não mostra apenas excelentes efeitos sobre melhora de perda de cabelo (por exemplo, promoção de crescimento de cabelo ou produção de cabelo), mas também tem eficácias superiores no tratamento de um distúrbio relacionado com curso de transdução de sinal de WNT10 e um distúrbio induzido por proteína DKK-1. Ainda, a atividade e a estabilidade notáveis do presente peptídeo descrito acima podem ser muito vantajosas na aplicação a composições farmacêuticas, quase fármacos e cosméticos.

Description

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se a um peptídeo derivado de WNT10, uma composição para melhora de perda de cabelo e condições pele usando o mesmo e uma composição para tratamento de um distúrbio relacionado com o curso de transdução de sinal de WNT10 e distúrbio induzido por proteína DKK-1 usando o mesmo.

DESCRIÇÃO DA TÉCNICA RELACIONADA

[0002] Folículo piloso é um órgão da pele peculiar de mamíferos, que é desenvolvido a partir da parte inferior de epiderme primitiva para camada de pele mais interna. O tampão de células conhecido como folículo ou papila dermal existe na base do folículo piloso (Stenn e Paus, Physiol. Rev., 81:449 (2002)), e a papila é essencial em circulação normal do folículo piloso (Oliver, Embryol. Exp. Morph. 15: 331 (1966); Oliver, Embryol. Exp. Morph. 16: 231 (1967)) e no crescimento do pelo. O pelo são células epiteliais em formato de fio que são compostas de filamentos de queratina e proteínas de agregação de filamento firmemente ligadas a elas.

[0003] O cabelo humano segue um ciclo de crescimento com três fases distintas: fases anágena, catágena e telógena. O ciclo de crescimento de cabelo é regulado por hormônios ou muitos outros fatores. Estresse severo ou má nutrição pode avançar as fases catágena e te- lógena, levando à perda de cabelo severa (alopecia) (Vladimir A. Botchkarev, American Journal of Pathology, 162 (3): 709-712 (2003)). Em calvície padrão masculina, os folículos pilosos na parte da frente e na parte detrás do couro cabeludo são sensíveis a androgênio, que faz com que os folículos fiquem pequenos, desta maneira resultando em perda de cabelo. Em suma, secreção excessiva de androgênio ativa 5- α reductase que faz com que a testosterona seja convertida em di- hidrotestosterona (DHT). Subsequentemente, DHT reduz o número de pelos terminais escuros espessos através da diminuição de um período de crescimento de cabelo e diminuindo os folículos pilosos, levando à perda de cabelo. Foi suposto que cerca de 20% das mulheres com perda de cabelo sofram de alguns distúrbios chamados "calvície padrão feminina" onde o cabelo frequentemente fica mais fino no alto do couro cabeludo. Ainda, a perda de cabelo aumenta com a idade. Por exemplo, perda de cabelo severa pode ser causada por diferentes distúrbios tais como alopecia cicatricial ou condições de cicatriz incluindo queimaduras e lesão por compressão. Qualquer que seja a causa, enquanto o poder da mulher na força de trabalho está aumentando e os homens têm cuidado mais de sua aparência, perda de cabelo pode ter impactos psicológico, social e sexual notáveis bem como perda de orgulho e autoestima. Embora vários medicamentos tenham sido usados para tratar perda de cabelo, eles são muito caros ou causam efeitos adversos muito diferentes dentre os indivíduos. Ainda, é necessário tomar esses fármacos de uma maneira constante. Desta maneira, é um dos sérios inconvenientes que perda de cabelo pode ser causada com a parada dos mesmos. Nesse ínterim, outra falta de mérito é que suas eficácias e efeitos colaterais podem ser bastante diferentes entre indivíduos.

[0004] Matérias-primas utilizadas em produtos cosméticos têm a vantagem de ser econômicas, embora não deem bons resultados uma vez que elas são compostas de componentes derivados de extrato de planta. Para superar as desvantagens em vista de bioestabilidade, eficácia ou custo, foi desenvolvido um método que peptídeos derivados de WNT10 tendo atividades idênticas a uma WNT10 de ocorrência natural podem ser produzidos de uma maneira econômica através de um método de síntese química, e um produto de nanopeptídeo tendo uma eficácia e permeabilidade na pele superiores usando uma tecnologia "nanosome", comparado com uma proteína inteira. O peptídeo permite induzir a proliferação e a diferenciação de célula-tronco presente no folículo piloso na pele para produzir raiz de cabelo, levando a desenvolvimento de folículo piloso novo. Ainda, o peptídeo permite ativação de curso de sinal de WNT-β-catenina para expressar genes induzindo crescimento de cabelo mesmo sob condições que curso de WNT10 é inativado por DKK-1, um gene de perda de cabelo, produzido por DHT. Ainda, o peptídeo facilita com eficácia anágena durante a qual crescimento de cabelo é ativo, e inibe potentemente transição de anágena para catágena em ciclo de folículo piloso causada por vários fatores ambientais, resultando em inibição de perda de cabelo. Ainda, o peptí- deo mostra efeitos benéficos sobre crescimento e saúde de cabelo normal através de fornecimento de nutrientes ao cabelo. É conhecido até agora que dois fármacos comerciais (minoxidil e finasterida) po-dem retardar apenas perda de cabelo adicional. No entanto, quaisquer medicamentos atuais foram úteis para induzir regeneração de folículo piloso novo na prática. Muitos cosméticos para couro cabeludo para prevenção de perda de cabelo estão comercialmente disponíveis no mercado, por exemplo, incluindo: (a) um produto incluindo um extrato de planta derivado de sófora, pimenta vermelha, erva Swertia, Morus alba, folha de amoreira, ginseng, alcaçuz, peônia, dedal, funcho, cornel Japonês, alho e outros; (b) uma composição contendo xantinas e hormônios do crescimento para não apenas melhorar o metabolismo celular suprimido pelo excesso de di-hidrotestosterona (DHT), mas também facilitar o crescimento de cabelo através de inibição da perda de cabelo e regeneração de cabelo induzida por hormônios do crescimento; (c) um produto contendo minerais vitaminas e extratos de chá verde, Rosemary, Artemísia ou alcaçuz, que fornece nutrientes ao cou- ro cabeludo e cabelo para prevenção de perda de cabelo e promoção de perda de cabelo; e (d) um produto para calvície padrão masculina misturando as substâncias tais como vitamina B, vitamina C, vitamina D, vitamina E, ácido nicotínico, ácido pantotênico, biotina, ácido fólico, etc,, com extratos de planta, que inibe 5-α reductases para suprimir a produção de DHT durante metabolismo de androgênio e ajudar o metabolismo do cabelo que foi desenvolvido. No entanto, eles dificilmente têm influência sobre a produção de cabelo novo. Como outro exemplo, um grupo de pesquisa da Jikei University School of Medicine em Tóquio, Japão, desenvolveu o produto usando ácido corosólico conhecido ser eficaz em diabetes, que inibe 5-α reductases e exibe um excelente efeito sobre crescimento de cabelo.

[0005] Muitos fatores estão associados uns com os outros no crescimento e degeneração de cabelo. Para produção de cabelo, os presentes pesquisadores estudaram fatores de crescimento seriais tendo uma atividade para: (a) promoção de proliferação de queratinóci- to que é mais importante para produção de raiz do cabelo; (b) indução de diferenciação de cabelo; (c) fornecimento de nutrientes para a vizinhança do cabelo; e (d) ativação de fatores de crescimento endotelial vascular. Deles, WNT10 derivada de humano afeta especificamente desenvolvimento de cabelo através da transferência de um sinal para uma célula. Curso de transdução de sinal de WNT10 é ativado por uma interação entre proteína WNT10 secretada e proteína Frizzled que é uma receptora dela. Desta maneira, proteínas relacionadas a receptor LDL (LRP5 e PRP6) funcionam como um co-receptor (Clin Cancer Res., 2007; 13 (14) 15 de julho de 2007, WNT Signaling Pathway and Stem Cell Signaling Network). Efeitos a jusante no curso de transdução de sinal de WNT10 incluem participação de complexo β Axin-β-catenina-GSK3 através da ativação de proteína DVL (Disheveled) e Akt (Fukumoto e outros, J. Biol. Chem., 276:17479-17483 (2001)). Em seguida, GSK3 β é inativada por fosforilação, resultando em inibição de fosforilação e degradação de β-catenina. β-Cateninas acumuladas são translocadas para um núcleo e então interagem com fatores de transcrição do fator aumentador de linfoide-fator de célula T (LEF-TCF) (Lymphoid Enhancer Factor-T Cell Factor), permitindo induzir transcrição de genes alvo. As proteínas resultantes podem ser um papel crítico para crescimento e diferenciação de cabelo, e permitem que célula de cabelo nova seja produzida. Ainda, elas diminuem as atividades de DHT produzida por hormônio masculino (androgênio) para suprimir perda de cabelo.

[0006] Em todo o presente pedido, várias patentes e publicações são referidas e citações são providas em parênteses. Os relatórios dessas patentes e publicações em suas totalidades são incorporados a título de referência no presente pedido a fim de descrever mais integralmente a presente invenção e o estado da técnica à qual a presente invenção pertence.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA PRESENTE INVENÇÃO

[0007] Para desenvolvimento de peptídeos tendo ações idênticas à proteína humana de ocorrência natural WNT10 bem como tendo estabilidade e penetração na pele maiores do que a proteína WNT10 de ocorrência natural, os presentes inventores prepararam e avaliaram uma variedade de peptídeos derivados de WNT10 humana. Como resultado, os presentes inventores encontraram peptídeos derivados de WNT10 tendo estabilidade e penetração na pele superiores bem como excelentes atividades fisiológicas (por exemplo, melhora na perda de cabelo, promoção de crescimento celular, facilitação de expressão de fibronectina, etc.) com base na sequência de aminoácido de WNT10 de ocorrência natural, eventualmente terminado a invenção.

[0008] Desta maneira, é um objetivo da presente invenção prover um peptídeo contendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:1.

[0009] É outro objetivo da presente invenção prover uma composi ção para melhora da perda de cabelo.

[00010] É ainda outro objetivo da presente invenção prover uma composição para melhora de condições da pele.

[00011] É outro objetivo da presente invenção prover uma composição para melhorar ou tratar um distúrbio relacionado com curso de transdução de sinal de WNT10.

[00012] É ainda outro aspecto da presente invenção prover uma composição para tratamento de um distúrbio induzido por proteína DKK-1.

[00013] Outros objetivos e vantagens da presente invenção se tornarão aparentes a partir da descrição detalhada junto com as reivindicações apensas e desenhos.

[00014] Para desenvolvimento de peptídeos tendo ações idênticas à proteína WNT10 humana de ocorrência natural bem como tendo estabilidade e penetração na pele maiores do que proteína WNT10 de ocorrência natural, os presentes inventores prepararam e avaliaram uma variedade de peptídeos derivados de WNT10 humana. Como resultado, os presentes inventores encontraram peptídeos derivados de WNT10 tendo estabilidade e penetração na pele superiores bem como excelentes atividades fisiológicas (por exemplo, melhora na perda de cabelo, promoção de crescimento celular, facilitação de expressão de fibronectina, etc.) com base na sequência de aminoácido de WNT10 de ocorrência natural.

[00015] Os presentes inventores desenvolveram novos análogos econômicos através da preparação de peptídeos com ações idênticas à proteína WNT10 humana de ocorrência natural para superar inconvenientes convencionais tais como: (a) processo de redobra que consumia tempo adicional para obter proteína WNT10 ativa apesar das excelentes atividades da proteína WNT10; (b) procedimento de purifi- cação complicado para remover contaminantes derivados de E. coli; (c) permeabilidade problemática para barreira de cabelo por causa da estabilidade e peso molecular alto; e (d) dificuldade em aplicação prática devido a custo alto.

[00016] O peptídeo da presente invenção inclui uma sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo em sequências de ami- noácido derivadas de WNT10. Preferivelmente, o peptídeo na presente invenção consiste essencialmente na sequência de aminoácido de SEQ ID NO:1. O termo usado aqui "peptídeo" refere-se a uma molécula linear formada por ligação entre resíduos de aminoácido através de ligações de peptídeo.

[00017] Os peptídeos da presente invenção podem ser preparados através de processos de síntese química convencionais conhecidos do versado na técnica, em particular técnicas de síntese de fase sólida (Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85: 2149-54 (1963); Stewart e outros, Solid Phase Peptide Synthesis, 2a. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111 (1984)).

[00018] Os peptídeos da presente invenção podem ser preparados principalmente prevendo uma porção capaz de se ligar a uma proteína receptora através de síntese parcial aleatória de várias porções em proteína WNT10 e então otimização de uma sequência de aminoácido da porção prevista. Em seguida, peptídeos candidatos tendo melhor atividade são avaliados para isolar os peptídeos da presente invenção.

[00019] O peptídeo da SEQ ID NO:1 não tem apenas ações similares à proteína WNT10 de ocorrência natural, mas também mostra atividades de fator de crescimento através de ligação a um receptor.

[00020] De acordo com uma modalidade preferida, o presente pep- tídeo facilita proliferação celular em queratinócitos e fibroblastos. De acordo com uma modalidade preferida, o presente peptídeo promove expressão de fibronectina.

[00021] Ainda, o peptídeo da presente invenção exibe uma atividade para ativação de curso de sinalização de WNT. De acordo com uma modalidade preferida, o peptídeo da presente invenção transfere β-catenina para um núcleo.

[00022] Os peptídeos da presente invenção per se têm estabilidade maior do que a proteína WNT20 de ocorrência natural e sua modificação permite ter estabilidade muito maior.

[00023] Preferivelmente, os peptídeos da presente invenção têm em seu terminal N um grupo de proteção selecionado do grupo consistindo em grupo acetila, grupo fluorenil metóxi carbonila, grupo formila, grupo palmitoíla, grupo miristila, grupo estearila e polietileno glicol (PEG).

[00024] De acordo com uma modalidade preferida, os peptídeos da presente invenção podem ter um grupo de proteção selecionado do grupo consistindo em grupo acetila, grupo fluorenil metóxi carbonila, grupo formila, grupo palmitoíla, grupo miristila, grupo estearila e polieti- leno glicol (PEG). Desta maneira, os grupos de proteção dos presentes peptídeos contribuem para estabilidade muito maior do que a modificação de proteína WNT20 de ocorrência natural.

[00025] As modificações de peptídeos descritas acima aumentam muito a estabilidade dos peptídeos da presente invenção. O termo "estabilidade" usado aqui refere-se à estabilidade in vivo e estabilidade em armazenamento (por exemplo, estabilidade em armazenamento em temperatura ambiente) também. O grupo de proteção descrito acima protege os peptídeos do ataque de protease in vivo.

[00026] Em outro aspecto da presente invenção, é provida uma composição para tratar ou melhorar perda de cabelo contendo como um ingrediente ativo o peptídeo mencionado acima da presente invenção.

[00027] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é provida uma composição para melhorar condições da pele contendo como um ingrediente ativo o peptídeo mencionado acima da presente invenção.

[00028] Uma vez que a presente composição compreende o peptí- deo relacionado a fator de crescimento da presente invenção como ingredientes ativos descritos acima, as descrições comuns entre eles são omitidas a fim de evitar redundância indevida levando à complexi-dade do presente pedido.

[00029] De acordo com uma modalidade preferida, a presente composição inclui ainda o peptídeo tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:2 ou SEQ ID NO:3 ou ambos os peptídeos.

[00030] De acordo com uma modalidade preferida, o tratamento ou melhora de perda de cabelo pelo presente peptídeo é promoção de crescimento de cabelo ou produção de cabelo.

[00031] Conforme demonstrado nos Exemplos abaixo, os peptídeos da presente invenção têm atividade estimuladora para proliferação celular em queratinócitos e fibroblastos e facilitam a sinalização de β- catenina como um curso de sinal representativo de proteína WNT10. Pôde ser verificado que o peptídeo da presente invenção permite que curso de sinal de WNT seja ativo apesar da presença de DKK-1 como um inibidor de WNT. Ainda, expressão de fibronectina como um gene alvo de WNT foi aumentada pelo presente peptídeo. Ainda, pôde ser demonstrado que o peptídeo da presente invenção contribui para expressão de fibronectina aumentada mesmo na presença de DKK-1. De acordo com experimentos animais baseados nos resultados mencionados acima, pôde ser compreendido que o peptídeo da presente in-venção promove significantemente crescimento de cabelo. Desta maneira, a composição da presente invenção tem excelentes efeitos sobre crescimento de cabelo e as melhoras em condições da pele.

[00032] De acordo com uma modalidade preferida, a melhora nas condições da pele pelo presente peptídeo é melhora em ruga ou elas- ticidade da pele, prevenção de envelhecimento da pele, melhora na hidratação da pele, remoção de ferida ou regeneração da pele.

[00033] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é provida uma composição para melhora ou tratamento de um distúrbio relacionado com curso de transdução de sinal de WNT10 contendo como um ingrediente ativo o peptídeo mencionado acima da presente invenção.

[00034] Em outro aspecto adicional da presente invenção, é provida uma composição para tratamento de um distúrbio induzido por proteína DKK-1 contendo como um ingrediente ativo o peptídeo mencionado acima da presente invenção.

[00035] Uma vez que a presente composição compreende o peptí- deo relacionado a fator de crescimento da presente invenção como ingredientes ativos descritos acima, as descrições comuns entre eles são omitidas para evitar redundância indevida levando à complexidade do presente pedido.

[00036] De acordo com uma modalidade preferida, o distúrbio relacionado com curso de transdução de sinal de WNT10 inclui um distúrbio do olho, um distúrbio modulado por lipídeo, um distúrbio ósseo ou um distúrbio de tumor e, mais preferivelmente, um distúrbio ósseo ou um distúrbio de tumor.

[00037] De acordo com uma modalidade preferida, o distúrbio ósseo é selecionado do grupo consistindo em uma doença associada com desenvolvimento ósseo, uma fratura óssea, a perda óssea senil, condrodistrofia, hipercalcemia, hiperostose, osteogênese imperfeita, osteomalácia, osteomielite, osteoporose, doença de Paget de osso, osteoartrite ou raquitismo.

[00038] De acordo com uma modalidade preferida, o distúrbio de tumor inclui carcinoma colorretal, carcinoma de mama ou melanoma.

[00039] De acordo com uma modalidade preferida, o distúrbio modulado por lipídeo é selecionado do grupo consistindo em cardiopatia, deficiência em lipoproteína lipase familiar, hiperlipoproteinemia Tipo III, hipercolesterolemia familiar, hipertrigliceridemia familiar, hiperlipopro- teinemia tipo lipoproteína múltipla, aumento de lipídeo por diálise e/ou diabetes e deficiência de apoproteína CII familiar.

[00040] De acordo com uma modalidade preferida, o distúrbio induzido por proteína DKK-1 inclui diabetes ou recuperação e regeneração musculares, e o diabetes é associado com tratamento de resistência à insulina e hipoglicemia.

[00041] De acordo com uma modalidade preferida, a composição é uma composição farmacêutica contendo: (a) uma quantidade farma- ceuticamente eficaz do peptídeo relacionado a fator de crescimento da presente invenção; e (b) um veículo farmaceuticamente aceitável.

[00042] O termo usado aqui "quantidade farmaceuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade suficiente para mostrar e obter eficácias e atividades do peptídeo relacionado a fator de crescimento da presente invenção.

[00043] O veículo farmaceuticamente aceitável contido na composição farmacêutica da presente invenção, que é geralmente usado em formulações farmacêuticas, mas não está limitado a, inclui lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amido, borracha processável, fosfato de potássio, arginato, gelatina, silicato de potássio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xaropes, metilcelu- lose, metilidróxi benzoato, propilidróxi benzoato, talco, estearato de magnésio e óleos minerais. A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode incluir ainda um lubrificante, um hidra- tante, um adoçante, um agente de saborização, um emulsificante, um agente de suspensão e um preservativo. Detalhes de veículos e formulações farmaceuticamente aceitáveis adequados podem ser encontrados em Remington's Pharmaceutical Sciences (19a ed., 1995), que é aqui incorporado a título de referência.

[00044] De acordo com técnicas convencionais conhecidas daqueles versados no campo, a composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode ser formulada com veículo e/ou veículo far- maceuticamente aceitável conforme descrito acima, finalmente provendo várias formas de uma forma de dosagem unitária e uma forma multidose. Exemplos não-limitantes das formulações incluem, mas não estão limitados a, uma solução, uma suspensão ou uma emulsão em meio oleoso ou aquoso, um extrato, um elixir, um pó, um grânulo, um comprimido e uma cápsula, e podem compreender ainda um agente de dispersão ou um estabilizador.

[00045] De acordo com uma modalidade preferida, a composição é uma composição cosmética contendo: (a) uma quantidade cosmetica- mente eficaz do peptídeo relacionado a fator de crescimento da presente invenção; e (b) um veículo cosmeticamente aceitável.

[00046] O termo usado aqui "quantidade cosmeticamente eficaz" refere-se a uma quantidade suficiente para obter eficácias em melhoras em condições da pele descritas acima.

[00047] As composições cosméticas da presente invenção podem ser formuladas em uma ampla variedade de formas, por exemplo, incluindo uma solução, uma suspensão, uma emulsão, uma pasta, um unguento, um gel, um creme, uma loção, um pó, um sabão, um limpador contendo tensoativo, um óleo, uma formulação em pó, uma base de emulsão, uma base de cera e um spray. Especificamente, as composições cosméticas da presente invenção podem ser formuladas na forma de um hidratante para a pele, líquido nutriente, creme nutriente, creme para massagem, essência, creme para o olho, creme para limpeza, espuma para limpeza, água para limpeza, pasta, spray ou pó.

[00048] Onde a composição cosmética está na forma de pasta, creme ou gel, ela pode incluir gorduras animais e vegetais, ceras, parafinas, amido, tragacanto, derivados de celulose, polietileno glicóis, silicones, bentonitas, sílica, talco, óxido de zinco ou misturas dessas substâncias.

[00049] Na formulação de pó ou spray, ela pode incluir lactose, talco, sílica, hidróxido de alumínio, silicato de cálcio, pó de poliamida e misturas dessas substâncias. Spray pode compreender ainda os pro- pelentes comuns, por exemplo, clorofluoridrocarbonos, propa- no/butano ou dimetiléter.

[00050] A formulação de solução e emulsão pode incluir solvente, solubilizante e emulsificante, por exemplo, água, etanol, isopropanol, carbonato de etila, acetato de etila, álcool de benzila, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butilenoglicol, óleos, ésteres graxos de glicerol, polietileno glicol e ésteres do ácido graxo de sorbitano.

[00051] A formulação de suspensão pode conter diluentes líquidos, por exemplo, água, etanol ou propileno glicol, agentes de suspensão, por exemplo, álcoois de isoestearila etoxilados, ésteres de polioxietile- no sorbitol e ésteres de poli oxietileno sorbitano, celulose microcristali- na, metaidróxido de alumínio, bentonita, ágar e tragacanto ou misturas dessas substâncias.

[00052] A formulação de composições de limpeza com tensoativo pode conter sulfato de álcool alifático, éter sulfato de álcool alifático, monoéster de sulfossuccinato, isotianato, derivados de imidazol, metil- taurato, sarcocinato, éter sulfato de amida do ácido graxo, alquil amido betaína, álcool alifático, glicerídeo do ácido graxo, dietanolamida do ácido graxo, óleo vegetal, derivados de lanolina, éster do ácido graxo e glicerol etoxilado e misturas desses ingredientes.

[00053] Ainda, as composições cosméticas da presente invenção podem conter auxiliares bem como peptídeos como ingredientes ativos e veículos. Os exemplos não-limitantes de auxiliares incluem conservantes, antioxidantes, estabilizadores, solubilizadores, vitaminas, corantes, aperfeiçoadores de odor ou misturas dessas substâncias.

[00054] As características e vantagens da presente invenção serão resumidas como segue: (i) peptídeo derivado de WNT10 da presente invenção possui atividades idênticas ou similares à WNT10 de ocorrência natural; (ii) os peptídeos da presente invenção têm estabilidade e potência de penetração na pele muito maiores do que WNT10 de ocorrência natural; (iii) desta maneira, a composição contendo o presente pep- tídeo não apenas mostra excelentes efeitos sobre melhora em perda de cabelo (por exemplo, promoção de crescimento de cabelo ou produção de cabelo), mas também tem eficácias superiores sobre tratamento de um distúrbio relacionado com curso de transdução de sinal de WNT10 e um distúrbio induzido por DKK-1; e (iv) a atividade e a estabilidade notáveis do presente peptí- deo descrito acima podem ser muito vantajosas em aplicação a composições farmacêuticas, quase-fármacos e cosméticos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[00055] A figura 1 representa os resultados de análise de HPLC (cromatografia líquida de alto desempenho) do peptídeo de SEQ ID NO:1 preparado nos Exemplos de Preparação.

[00056] A figura 2a é um gráfico representando um efeito estimulador sobre o crescimento de queratinócitos tratados com o peptídeo preparado nos Exemplos de Preparação.

[00057] A figura 2b é um gráfico representando um efeito estimulador sobre o crescimento de fibroblastos tratados com o peptídeo preparado nos Exemplos de Preparação.

[00058] A figura 3 é uma imagem de microscópio demonstrando efeitos do peptídeo da presente invenção em promover o crescimento de queratinócitos e fibroblastos.

[00059] A figura 4 mostra uma imagem de imunotingimento repre- sentando que a expressão da proteína Ki-67 (um marcador celular para proliferação) é notadamente aumentada pelo tratamento com o pep- tídeo da presente invenção.

[00060] A figura 5a é um gráfico representando proliferação celular muito maior em queratinócitos tratados com complexo de peptídeo do que naqueles tratados com cada peptídeo preparado nos Exemplos de Preparação.

[00061] A figura 6a mostra um resultado de análise Western blot que mede mudanças de expressão de β-catenina pelo presente peptí- deo. Foi mostrado que a expressão de β-catenina reduzida por DKK-1 (um inibidor de WNT e gene de perda de cabelo) é restaurada e aumentada pela adição do presente peptídeo.

[00062] A figura 6b é uma imagem de imunotingimento representando atividade elevada de β-catenina pelo polipeptídeo da presente invenção.

[00063] A figura 7 é um resultado de análise Western blot representando efeito estimulador ainda significante sobre expressão de β- catenina pelo complexo de peptídeo comparado com cada peptídeo preparado nos Exemplos de Preparação.

[00064] A figura 8 mostra um resultado de Western blot representando que o presente peptídeo induz atividade elevada de β-catenina, e o complexo de peptídeo aumenta altamente significantemente a atividade de β-catenina comparado com cada peptídeo preparado nos Exemplos de Preparação.

[00065] A figura 9a é um gráfico representando que expressão de fibronectina é gradualmente elevada por cada peptídeo preparado nos Exemplos de Preparação com o passar do tempo.

[00066] A figura 9b representa um gráfico medindo mudanças de expressão de fibronectina pelo presente peptídeo. Foi mostrado que a expressão de fibronectina inibida por DKK-1 (um inibidor de WNT e gene de perda de cabelo) foi restaurada e aumentada através da adição do presente peptídeo.

[00067] A figura 10 é um gráfico de análise Western blot representando efeito ainda significantemente aumentado sobre expressão de fibronectina pelo complexo de peptídeo comparado com cada peptídeo preparado nos Exemplos de Preparação.

[00068] A figura 11 representa resultados medindo estabilidade ao calor do peptídeo da presente invenção e proteína WNT10 de ocorrência natural.

[00069] A figura 12 representa que o peptídeo da presente invenção tem uma atividade para promoção de crescimento de pelo em pele nas costas de camundongo.

[00070] A figura 13a mostra uma imagem de imunotingimento representando que em cultura de folículo de pelo de camundongo produção de folículos pilosos é facilitada pelo complexo de peptídeo da presente invenção e folículos pilosos degenerados pela proteína DKK- 1 são restaurados e desenvolvidos por tratamento simultâneo com DKK-1 e o presente complexo de peptídeo.

[00071] A figura 13b é uma imagem de imunotingimento representando que expressão de β-catenina em folículo piloso durante cultura de folículo piloso de camundongo é aumentada pelo complexo de pep- tídeo da presente invenção.

[00072] A figura 13c mostra uma imagem de imunotingimento representando que expressão da proteína WNT em folículo piloso durante cultura de folículo piloso de camundongo é elevada pelo complexo de peptídeo da presente invenção.

[00073] A figura 13d é uma imagem de imunotingimento representando que a expressão da proteína Ki-67 em folículo piloso durante cultura de folículo piloso de camundongo é aumentada pelo complexo de peptídeo da presente invenção.

[00074] A presente invenção será agora descrita em detalhes adicionais pelos exemplos. Seria óbvio àqueles versados na técnica que esses exemplos pretendem ser mais concretamente ilustrativos e o escopo da presente invenção conforme mostrado nas reivindicações apensas não é limitado a ou pelos exemplos.

EXEMPLOS EXEMPLO DE PREPARAÇÃO 1: Síntese de NH2-Gln-Thr-Arg-Val- Gln-Arg-Cys-His-Cys-OH (SEQ ID NO:1)

[00075] 700 mg de resina de cloreto de cloro tritila (resina CTL, No. Cat. Nova Biochem 01-64-0021) foram introduzidos em um reator, ao qual 10 ml de cloreto de metileno (MC) (Methylene chloride) foram adicionados, seguido por agitação por 3 minutos. Após remoção da solução, 10 ml de dimetilformamida (DMF) foram adicionados ao resultante e a agitação foi realizada por 3 minutos, após o que o solvente foi removido. 10 ml de solução de diclorometano foram adicionados ao reator e 200 mmoles de Fmoc-Cys(trt)-OH (Bachem, Swiss) e 400 mmoles de DIEA (N,N’-diisopropil etilamina) foram então adicionados ao reator, após o que a mistura foi dissolvida através de agitação e a reação então sofreu agitação por 1 hora. Após lavagem, metanol e DIEA (2:1) dissolvidos em DCM (diclorometano) foram reagidos com a resi-na por 10 minutos, e então o resultante foi lavado usando DCM/DMF em excesso (1:1). Após remoção da solução, 10 ml de DMF foram adicionados ao resultante e a agitação foi realizada por 3 minutos, seguido por remoção do solvente. 10 ml de uma solução de desproteção (piperidina 20%/DMF) foram adicionados ao reator e agitados por 10 minutos em temperatura ambiente, seguido por remoção da solução. Após adição do mesmo volume da solução de desproteção, a reação sofreu agitação por 10 minutos e solução foi removida, seguido por lavagem sequencialmente com DMF (3 vezes), MC (1 vez) e DMF (1 vez) para dar resinas Cys(trt)-CTL. 10 ml de solução de DMF foram adicionados a um novo reator e então 200 mmoles de Fmoc-His(trt)- OH (Bachem, Suíça), 200 mmoles de HoBt e 200 mmoles de Bop foram adicionados, seguido por agitação para solubilização. 400 mmoles de DIEA foram adicionados ao reator duas vezes como uma fração e agitação foi realizada por pelo menos 5 minutos para dissolver todos os teores de sólido. A solução de aminoácidos dissolvidos foi introduzida no reator contendo a resina desprotegida e a reação sofreu agitação por 1 hora em temperatura ambiente. Seguindo a remoção da solução de reação, o resultante foi agitado três vezes (cada uma por 5 minutos) com solução de DMF para remover resíduos não-reagidos. Uma pequena quantidade da resina reagida foi obtida para avaliar o grau de reações através do teste de Ninidrina. Usando a solução de desproteção, a desproteção foi realizada duas vezes da mesma maneira que aquela descrita acima para dar resina His(trt)-Cys(trt)-TTL. Após lavagem com DMF e MC, teste com Ninidrina adicional foi realizado e as ligações sequenciais de aminoácidos abaixo foram realizadas conforme descrito acima. Com base na sequência de aminoácido projetada pelos presentes inventores, Fmoc-Cys(trt), Fmoc-Arg, Fmoc- Gln(trt), Fmoc-Val, Fmoc-Arg, Fmoc-Thr, Fmoc-Gln(trt) e Fmoc- Arg(pbf) foram sequencialmente ligados às resinas. Grupo de proteção Fmoc foi removido incubando totalmente com a solução de desproteção duas vezes por 10 minutos. Para acetilação, anidrido acético, DI- EA e HoBt foram incubados com resinas peptidila por 1 hora. As resinas de peptidila preparadas foram lavadas três vezes com DMF, MC e metanol, respectivamente, e gradualmente secas sob atmosfera de nitrogênio, após o que elas foram completamente secas a vácuo sob P2O5. As resinas secas foram reagidas com 30 ml de uma solução de separação [contendo ácido trifluoracético 95% (TFA), água destilada 2,5%, tioanisol 2,5%) por 2 horas em temperatura ambiente sob agitação intermitente. A resina foi filtrada e lavada com um volume pequeno de solução de TFA, após o que o filtrado foi combinado com o licor mãe. Após destilação sob pressão reduzida para reduzir o volume total por dois, a precipitação foi induzida usando 50 ml de éter frio e os precipitados formados foram coletados através de centrifugação, seguido por lavagem duas vezes com éter frio. Após remoção do licor mãe, o resultante foi completamente seco sob atmosfera de nitrogênio para dar 0,65 g de peptídeo não-purificado 1, NH2-Arg-Gln-Thr-Arg-Val-Gln- Arg-Cys-His-Cys-OH (taxa de rendimento; 92,6%). O peso molecular do produto final foi determinado como 1287,1 MW teórico: 1286,5) usando um analisador de massa.

EXEMPLO DE PREPARAÇÃO 2: Síntese de Outros Peptídeos

[00076] Os peptídeos de SEQ ID NO:2 e SEQ ID NO:3 foram sintetizados da mesma maneira que processos descritos no Exemplo de Preparação 1. A sequência de aminoácido dos peptídeos mencionados acima é como segue: SEQ ID NO:2, Ac-Tyr-Lys-Ser-Lys-Lys-Gly- Gly-Trp-Thr-His (Ac-YKSKKGGWTH); e SEQ ID NO:3, Glu-Leu-Ile- Glu-His-ligante-Arg-Pro-Ala-Asp (ELIEH-ligante-RPAD; ligante, Gly- Gly-Gly). TABELA 1

EXEMPLO EXPERIMENTAL 1: Influência de Peptídeos sobre Crescimento Celular

[00077] A fim de avaliar três peptídeos preparados nos Exemplos de Preparação 1-2 se eles têm atividades similares de fator de crescimento, ensaio colorimétrico SRB (Sulforhodamine B; Sigma Aldrich) foi realizado usando queratinócitos HaCaT (Korean Cell Line Bank) e fi- broblastos NIH3T3 (Korean Cell Line Bank) de acordo com o método de Rizzino e outros (Rizzino e outros, Cancer Res., 48:4266 (1988)).

[00078] Queratinócitos HaCat e fibroblastos NIH3T3 foram cultura- dos em frascos de 250 ml contendo EMEM (Meio Essencial Mínimo da Eagle; Gibco, USA) suplementado com FBS 10% (soro bovino fetal; sigma). As células culturadas foram tratadas com solução de tripsina 1% para separar células do fundo dos frascos de cultura e centrifugadas para coletar peletes de célula. Após as células serem suspensas em EMEM não contendo FBS, sua alíquota (3 x 103 células) foi adicionada a cada cavidade de placas de 96 cavidades e culturada sob CO2 5% por 24 horas a 37° C. Após cultura por 24 horas, o meio foi mudado com um meio fresco sem soro e as células foram incubadas com amostra vazia (para normalização), três peptídeos sintetizados (1 ng/ml, 10 ng/ml, 100 ng/ml, 1 μg/ml e 10 μg/ml) e complexo de peptí- deo (1 μg/ml) assepticamente dissolvido em DMSO 10% por 72 horas sob as mesmas condições que as descritas acima. Após remoção de sobrenadantes, as células foram fixadas com etanol e então lavadas três vezes usando PBS (solução salina tamponada com fosfato), seguido por incubação com solução de SRB. As células foram suficientemente lavadas com ácido acético 1% e observadas sob um microscópio para encontrar condição de célula viva. Ainda, absorbância a 590 nm foi medida para analisar viabilidade celular. Nesse ínterim, após cultura sob as mesmas condições, o tecido foi imunotingido através de um ensaio imunoistoquímico com anticorpo ki-67 (SantaCruz, USA) e a quantidade de proteína ki-67 como um marcador de proliferação celular foi observada.

[00079] A figura 2 demonstra que o peptídeo da presente invenção aumenta notadamente o crescimento de queratinócitos (figura 2a) e fibroblastos (figura 2b).

[00080] A figura 3 é um resultado representando que mudança do formato de célula é observada sob um microscópio após as células terem sido tratadas com o presente peptídeo por 72 horas. Poderia ser compreendido que o peptídeo da presente invenção promove proliferação de queratinócitos e fibroblastos, e mudanças em seus formatos morfológicos.

[00081] A figura 4 mostra que a expressão de proteína Ki-67 (um marcador celular para proliferação) é notadamente aumentada em queratinócitos através do tratamento com o peptídeo da presente invenção.

[00082] A figura 5 avalia crescimento de queratinócitos (figura 5a) e fibroblastos (figura 5b) após tratamento com peptídeo. Conforme mostrado na figura 5a e na figura 5b, poderia ser demonstrado que proliferação celular em queratinócitos e fibroblastos tratados com complexo de peptídeo era muito mais alta do que aqueles tratados com cada peptídeo.

Exemplo Experimental 2: Influência de Peptídeos sobre Quantidade Elevada de β-Catenina

[00083] Queratinócitos HaCaT culturados por 48 horas foram incubados com os peptídeos sintetizados no Exemplo de preparação 1 por 5 horas. O nível de expressão de β-catenina foi examinado, a qual é uma molécula de sinal essencial para promover crescimento de cabelo como uma sinalização representativa de proteína WNT. A quantidade de β-catenina foi medida através de análise Western blot usando um anticorpo contra β-catenina (Santa Cruz, USA). Ainda, foi observado através de um ensaio imunoistoquímico usando a mesma se β- catenina é translocada para um núcleo. O peptídeo da presente invenção elevou significantemente o nível de expressão de β-catenina em queratinócitos. Primeiro de tudo, foi mostrado que atividade de β- catenina é observada pelo tratamento com o peptídeo da presente in- venção apesar da presença de DKK-1 como um inibidor de WNT e um inibidor de sinalização de β-catenina (figura 6a). No ensaio imuno- histoquímico para avaliar se o peptídeo funciona para transferir β- catenina para o núcleo, seria demonstrado que o presente peptídeo contribui para translocamento de β-catenina do citosol para o núcleo. Além disso, atividades de β-catenina foram também observadas em citosol uma vez que β-catenina está ainda presente no citosol (figura 6b).

[00084] A figura 6a representa aumento de expressão de β-catenina através da adição do presente peptídeo e mostra novo aumento da expressão de β-catenina mesmo no tratamento com ambos a proteína DKK-1 e o presente peptídeo.

[00085] A figura 6b é um resultado observado usando um ensaio imuno-histoquímico, representando translocação de β-catenina para um núcleo.

[00086] Conforme mostrado nas figuras 7 e 8, expressão de β- catenina pelo complexo de peptídeo foi elevada muito mais do que aquela por cada peptídeo.

[00087] Tomados juntos os resultados dos Exemplos experimentais 1 e 2, poderia ser compreendido que os peptídeos da presente invenção exercem excelentes efeitos sobre promoção de crescimento de cabelo e inibição de perda de cabelo, e também têm uma atividade antienvelhecimento.

EXEMPLO EXPERIMENTAL 3: Influência de Peptídeos sobre Produção de Fibronectina

[00088] Para verificar se os peptídeos sintetizados no Exemplo de preparação 1 aumentam a expressão de fibronectina como uma proteína-alvo WNT, fibroblastos NIH3T3 (4x103 células) foram adicionados a cada cavidade de placas de 96 cavidades e culturados sob CO2 5% por 24 horas a 37° C. Após cultura por 24 horas, o meio foi mudado com um meio fresco sem soro e as células foram tratadas com amostra vazia (para normalização), três peptídeos sintetizados (1 μg/ml) e complexo de peptídeo (1 μg/ml) assepticamente dissolvidos em DMSO 100% por 3 horas, 10 horas, 24 horas ou 48 horas sob as mesmas condições que as descritas acima. Após 72 horas de incubação, a cultura celular foi coletada e o nível de expressão de fibronectina foi medido usando o estojo Fibronectin ELISA (R&D systems, USA).

[00089] Conforme demonstrado na figura 9a, os peptídeos da presente invenção foram revelados elevar o nível de fibronectina em fi- broblastos com o passar do tempo. Ainda, após a proteína DKK-1 ter sido tratada e culturada sob as mesmas condições, o nível de expressão de fibronectina foi examinado. Conforme mostrado na figura 9b, o nível de expressão de fibronectina foi restaurado e aumentou menos em tratamento com ambas a proteína DKK-1 e o presente peptídeo.

[00090] A figura 9a é um gráfico medindo a expressão de fibronec- tina através de tratamento com o peptídeo da presente invenção por tempo determinado, demonstrando que expressão de fibronectina foi gradualmente elevada por cada peptídeo com o passar do tempo.

[00091] A figura 9b mostra que a expressão de fibronectina inibida por DKK-1 (um inibidor de WNT e gene de perda de cabelo) é recuperada através da adição do presente peptídeo. Consequentemente, redução de expressão de fibronectina foi restaurada com tratamento do peptídeo da presente invenção sob as mesmas condições que as descritas na figura 9a.

[00092] Conforme ilustrado na figura 10, o nível de expressão de fibronectina por tratamento por 72 horas com peptídeos foi elevado comparado com grupo controle, respectivamente, e a expressão de fibronectina mais elevada foi observada no grupo tratado com o complexo de peptídeo.

[00093] Tomados juntos, esses resultados demonstram que os pep- tídeos da presente invenção induzem curso de sinalização de WNT-β- catenina apesar da presença de proteína DKK-1 conhecida para um inibidor de WNT e gene de perda de cabelo, contribuindo para promoção de crescimento de cabelo, inibição de perda de cabelo e antienve- lhecimento.

EXEMPLO EXPERIMENTAL 4: Avaliação de Estabilidade ao Calor dos Peptídeos Preparados

[00094] Cada peptídeo preparado no Exemplo de preparação 1 e um produto padrão de fator de crescimento (WNT10; NIBSC, RU) foram dissolvidos em um tampão de fosfato para uma concentração de 0,1 mg/ml. As soluções preparadas (1 ml) foram introduzidas em frascos de vidro e deixadas descansar a 37° C. Em seguida, as soluções foram pegas nos dias 0, 5, 10, 20, 30, 40 e 70 e centrifugadas para remoção de peptídeos ou proteínas desnaturados, seguido por quantificação usando HPLC (figura 11).

EXEMPLO EXPERIMENTAL 5: Análise de Efeitos de Peptídeos sobre Crescimento de Pelo de Camundongo

[00095] O peptídeo sintetizado no Exemplo de preparação 1 foi formulado em "nanosome". Em seguida, as costas de camundongo C57BL/6 foram parcialmente removidas e então a pele foi topicamente administrada com o "nanosome duas" vezes todos os dias por 15 dias. Em 9 dias de tratamento, pelo em crescimento foi observado na pele das costas do camundongo, e a quantidade de pelo na pele das costas do camundongo foi aumentada muito significantemente em 15 dias de tratamento comparado com um grupo controle (figura 12).

EXEMPLO EXPERIMENTAL 6: Análise de Efeitos de Complexo de Peptídeo sobre Expressão de Proteína em Folículo Piloso Durante Cultura do Folículo Piloso

[00096] Folículo piloso de pelo de camundongo Balb/c foi dissecado com um tratamento cirúrgico e lavado com etanol, seguido por lava- gem adicional com solução de cultura de PBS e DMEM. Em seguida, folículos pilosos foram incubados com 5 μg/ml de cada complexo de peptídeo dissolvidos em solução de cultura de DMEM e culturados sob CO2 5% por 5 dias a 37° C. Após cultura de 5 dias, os folículos pilosos foram preparados como um bloco de parafina e cada tecido tratado com controle, complexo de peptídeo, DKK-1 e DKK-1 e complexo de peptídeo foi tingido e comparado usando tingimento H&E (Figuras 13a- 13d).

[00097] A figura 13a representa que degeneração induzida por DKK-1 de folículos pilosos foi suprimida com o complexo de peptídeo da presente invenção. Foi possível confirmar que folículos pilosos em controle são degenerados por DKK-1, enquanto folículos pilosos tratados com ambos a DKK-1 e os presente complexo de peptídeo não são degenerados, mas produzidos.

[00098] A figura 13b mostra que inibição de β-catenina induzida por DKK-1 foi recuperada através de tratamento com o complexo de pep- tídeo da presente invenção. Foi possível confirmar que a expressão de β-catenina em controle é inibida por DKK-1, enquanto a expressão de β-catenina simultaneamente tratada com DKK-1 e o presente complexo de peptídeo não é suprimida, mas acentuadamente elevada.

[00099] Conforme mostrado na figura 13c, a expressão da proteína WNT foi inibida através de tratamento de DKK-1 para controle. No entanto, a expressão de proteína WNT foi aumentada através de tratamento simultâneo com DKK-1 e o presente complexo de peptídeo. Esses resultados sugerem que o complexo de peptídeo da presente invenção facilita eficientemente não apenas proliferação de células vizinhas ao cabelo, mas também produção de folículos pilosos.

[000100] Conforme ilustrado na figura 13d, expressão da proteína Ki- 67 em folículo piloso foi suprimida através de tratamento de DKK-1 para controle. Nesse ínterim, a expressão da proteína Ki-67 foi elevada por tratamento simultâneo com DKK-1 e o presente complexo de pep- tídeo.

[000101] Tomados juntos, esses resultados representam que DKK-1 inibe crescimento celular em folículos pilosos e ainda causa morte celular para induzir degeneração de folículo piloso. Desta maneira, a degeneração de folículo piloso induzida por DKK-1 pode ser superada pelo complexo de peptídeo da presente invenção. Consequentemente, foi possível compreender que o presente complexo de peptídeo pode promover proliferação e produção de células de folículo piloso.

EXEMPLO 1: Preparação de Nanopeptídeos

[000102] 50 mg de cada peptídeo sintetizado nos Exemplos de pre paração foram dissolvidos em 500 ml de água destilada através de agitação suficiente. A solução de peptídeo foi misturada com 5 g de lecitina, 0,3 ml de oleato de sódio, 50 ml de etanol e uma pequena quantidade de óleos, e seu volume foi ajustado com água destilada apara 1L. A solução resultante foi submetida a um microfluidizador sob pressão alta para emulsificação, desta maneira provendo "nanosomes" tendo tamanho de cerca de 100 nm. Os "nanosomes" foram preparados para ter uma concentração final de cerca de 50 ppm e usados como ingredientes para cosméticos.

EXEMPLO DE FORMULAÇÃO 1: Hidratante para Pele

[000103] Um hidratante para pele compreendendo "nanosomes" contendo peptídeo preparados no Exemplo 1 foi formulado de acordo com a composição que segue: TABELA 2

EXEMPLO DE FORMULAÇÃO 1: Creme Nutriente

[000104] Um creme nutriente compreendendo "nanosomes" contendo peptídeo preparados no Exemplo 1 foi formulado de acordo com a composição que segue: TABELA 3

EXEMPLO DE FORMULAÇÃO 3: Líquido Nutriente

[000105] Um líquido nutriente compreendendo "nanosomes" contendo peptídeo preparados no Exemplo 1 foi formulado de acordo com a composição que segue: TABELA 4

EXEMPLO DE FORMULAÇÃO 4: Essência

[000106] Uma essência compreendendo "nanosomes" contendo pep- tídeo preparado no Exemplo 1 foi formulada de acordo com a composição que segue: TABELA 5

EXEMPLO DE FORMULAÇÃO 5: Soro para Cabelo

[000107] Um soro para cabelo compreendendo "nanosomes" contendo peptídeo preparado no Exemplo 1 foi formulado de acordo com a composição que segue: TABELA 6

EXEMPLO DE FORMULAÇÃO 6: Corante para o Cabelo

[000108] Um corante para o cabelo compreendendo "nanosomes" contendo peptídeo preparado no Exemplo 1 foi formulado de acordo com a composição que segue: TABELA 6

[000109] Tendo descrito uma modalidade preferida da presente in- venção, é compreendido que suas variantes e modificações se encaixando no espírito da invenção podem ser aparentes àqueles versados na técnica, e o escopo da presente invenção é determinado por reivindicações apensas e seus equivalentes.

Claims

1. Peptídeo, caracterizado pelo fato de que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:1.

2. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peptídeo facilita proliferação celular em queratinóci- tos e fibroblastos.

3. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peptídeo transfere β-catenina para um núcleo.

4. Composição tópica para tratamento ou prevenção de perda de cabelo, caracterizada pelo fato de que compreende o peptí- deo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 como um ingrediente ativo.

5. Composição tópica de acordo com a reivindicação 4, ca-racterizada pelo fato de que a composição compreende ainda o peptí- deo tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:2 ou SEQ ID NO:3 ou ambos os peptídeos.

6. Composição tópica de acordo com a reivindicação 4, ca-racterizada pelo fato de que o tratamento ou prevenção de perda de cabelo é promoção de crescimento de cabelo ou produção de cabelo.

7. Composição tópica para melhora de condições da pele, caracterizada pelo fato de que compreende o peptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 como um ingrediente ativo.

8. Composição tópica de acordo com a reivindicação 7, ca-racterizada pelo fato de que a composição compreende ainda o peptí- deo tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:2 ou SEQ ID NO:3 ou ambos os peptídeos.

9. Composição tópica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a melhora nas condições da pele é melhora em ruga ou elasticidade da pele, prevenção de envelhecimento da pele, melhora na hidratação da pele, remoção de ferida e regeneração da pele.