BR102020003766A2 - Processo de obtenção de monoacilglicerídeos produzidos por lipase imobilizada em híbridos e composição cosmética obtida para tratamento de xerose - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a uma composição cosmética a partir da aplicação dos monoacilglicerídeos obtido a partir da reação de transesterificação do óleo de coco bruto via aquecimento por micro-ondas, utilizando a lipase de Burkholderia cepacia imobilizada no suporte híbrido (PHBV e sílica), através do método de ligação covalente. A presente invenção refere-se ainda a um processo para preparar monoacilglicerídeos a partir da lipase imobilizada em híbridos na reação de transesterificação a fim de incorporar em uma composição cosmética e aplicar no tratamento da xerose, visando combater o envelhecimento da pele, linhas, rugas, descontinuidades visíveis e / ou táteis da pele, perda de firmeza, elasticidade e tônus e a deformabilidade do tecido da pele.

Description

PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS PRODUZIDOS POR LIPASE IMOBILIZADA EM HÍBRIDOS E COMPOSIÇÃO COSMÉTICA OBTIDA PARA TRATAMENTO DE XEROSE CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a uma composição cosmética a partir da aplicação dos monoacilglicerídeos obtido a partir da reação de transesterificação do óleo de coco bruto via aquecimento por micro-ondas, utilizando a lipase de Burkholderia cepacia imobilizada no suporte híbrido (PHBV e silica), através do método de ligação covalente. A presente invenção refere-se ainda a um processo para preparar monoacilglicerídeos a partir da lipase imobilizada em híbridos na reação de transesterificação a fim de incorporar em uma composição cosmética e aplicar no tratamento da xerose, visando combater o envelhecimento da pele, linhas, rugas, descontinuidades visíveis e / ou táteis da pele, perda de firmeza, elasticidade e tônus e a deformabilidade do tecido da pele.

ESTADO DA TÉCNICA

[002] Enzimas imobilizadas são utilizadas frequentemente na indústria, especialmente para a síntese de produtos químicos finos, farmacêuticos, entre outros. Os avanços na tecnologia demanda de novos materiais ou melhorias dos materiais existentes e tradicionais para sua utilização como suportes na imobilização de enzimas. Um exemplo de uma abordagem que leva a novos materiais é a síntese de materiais híbridos (JEON et al., 2009; ARAKAWA et al., 2006).

[003] Materiais híbridos são constituídos pela combinação dos componentes orgânicos e inorgânicos, e atraíram atenção considerável por apresentarem propriedades complementares a fim de produzir um material diferenciado em relação aos que lhe deram origem. Esses materiais constituem uma alternativa para a produção de novos materiais multifuncionais, levando a aplicações promissoras em diferentes campos, como engenharia de tecidos, produção verde, tecnologia de biossensores e biocatálise (ONBAS et al., 2019; JOSE et al., 2005).

[004] Os suportes inorgânicos, como a sílica (SiO2), é um dos materiais inorgânicos mais descritos na literatura, e se destaca por possuir elevado potencial de aplicação para imobilização de enzimas devido apresentar uma série de características, tais como a possibilidade de modificação da superfície, estabilidade térmica, estabilidade mecânica e segurança toxicológica (BENVENUTTI et al., 2009). A obtenção de materiais multifuncionais de sílica combinada com polímeros naturais para a imobilização de enzimas tem sido descrita com sucesso, conforme apresentado por MARTINS et al. (2016) e NOWACKA et al. (2013). O uso de suportes orgânicos, dentre eles, o polímero poli (3-hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) tem se destacado devido as características específicas, tais como biodegradabilidade, biocompatibilidade e agente encapsulante (CABRERA-PADILLA et al., 2011).

[005] Com o avanço das técnicas de imobilização, o interesse industrial de biocatalisadores imobilizados é cada vez mais alto, que propiciam biocatalisadores mais eficientes e possíveis de catalisar diversas reações como a transesterificação. A reação de transesterificação é o método mais empregado para a produção de monoacilglicerídeos que ocorre na presença de óleo vegetal ou gordura animal e um álcool de cadeia curta na presença de um catalisador enzimático e são surfactantes não iônicos amplamente utilizados nas indústrias farmacêutica e de cosméticos (SANDOVAL et al., 2017).

[006] A síntese de monoacilglicerídeos via transesterificação enzimática apresenta alguns fatores cruciais que afetam a produtividade, tendo como destaque a escolha adequada da matéria-prima. O óleo de coco bruto surge como uma alternativa promissora para a síntese dos monoacilglicerídeos, uma vez que apresenta um elevado porcentual de ácido láurico, que corresponde cerca de 50 % da sua composição (NITBANI et al., 2016). O ácido láurico possui propriedade anti-inflamatória e auxilia no tratamento de pele, sendo uma alternativa natural e livre de alguns compostos químicos que podem ser nocivos à saúde e à pele humana, como os parabenos, que estão presentes em muitos dos produtos cosméticos (RELE et al., 2003).

[007] Com o intuito de eliminar as baixas taxas de conversão e longos tempos de reação nas reações de transesterificação, métodos mais eficientes têm sido pesquisados. De acordo com a literatura, reações químicas podem ser aceleradas por meio do uso de aquecimento não convencional (micro-ondas).

[008] As micro-ondas permitem aquecimento rápido e seletivo de materiais, além de possibilitar processos limpos e de baixo custo. O aquecimento por microondas baseia-se na interação da matéria com o campo elétrico da irradiação incidente, originando a movimentação de íons e de dipolos das moléculas, promovendo a redução nos tempos de reação, melhoras nas taxas de conversões e bons rendimentos de reação (DILL et al., 2018; FORTUNY et al., 2008 REJASSE et al., 2007). Sua utilização como uma fonte de energia alternativa para o aquecimento apresenta vantagens em comparação ao uso de fontes convencionais, devido ao aquecimento rápido por meio da absorção direcionada de energia pelo objeto a ser aquecido (YADAV et al., 2015). A literatura relata diversos estudos que envolve o efeito da irradiação de microondas nos bio-sistemas apresentando aumento da taxa de conversão na formação de bioprodutos (REJASSE et al., 2006; YADAV et al., 2012; DILL et al., 2018). A irradiação com micro-ondas também ajuda a melhorar a estabilidade térmica da enzima em função da hidratação enzimática o que aumenta a seletividade e leva a um melhor processo (SONTAKKE et al, 2011; YADAV et al., 2012; YADAV et al., 2015).

[009] Nesse sentido, a presente invenção tem como principal objetivo produzir monoacilglicerídeos a partir da lipase imobilizada em híbridos na reação de transesterificação a fim de incorporar em uma composição cosmética e aplicar no tratamento da xerose, visando combater o envelhecimento da pele, linhas, rugas, descontinuidades visíveis e / ou táteis da pele, perda de firmeza, elasticidade e tônus e a deformabilidade do tecido da pele. A xerose é uma condição comum da pele caracterizada por pele seca, áspera, escamosa e com coceira, associada a um defeito na função obstrução da pele e pode ser causada por banhos longos e quentes, desidratação, deficiência de vitaminas A e D, queimaduras, exposição prolongada ao sol, incluindo efeito colateral de diversos medicamentos. Dentro deste contexto, o desenvolvimento desta invenção é uma alternativa para promover um tratamento terapêutico mais efetivo, tendo em vista que até o momento ainda não foi utilizado monoacilglicerídeos obtidos a partir de lipase imobilizada em híbridos em composições cosméticas e dermofarmacêuticas para o tratamento da xerose.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0010] A literatura técnica especializada revela alguns documentos de patentes que fazem referência a preparações/composições para tratamento de deformidade do tecido da pele. Assim, e, para embasar o critério de novidade e atividade inventiva foi realizada uma pesquisa na base de patentes do Instituto Nacional de Propriedade Industrial (INPI) que compila o acervo de patentes depositadas do Brasil, e na base europeia de Patentes (Espacenet) que compila o acervo de patentes depositadas em mais de 90 países. Na pesquisa realizada não foi identificada nenhum documento de patente que faz referência ao processo de obtenção de monoacilglicerídeos produzidos por lipase imobilizada em híbridos, bem como a composição cosmética empregada nesta invenção.

[0011] O documento WO 2019/020679 Al refere-se a uma nova composição de medicamentos compreendendo uma enzima imobilizada em uma matriz a base de polímero, que pode ser preparada a partir de vários polímeros, dentre eles o PHBV. A presente invenção tem por objetivo fornecer uma composição de administração de drogas, em que a referida composição compreende uma matriz à base de polímero, pelo menos um medicamento e pelo menos um polímero degradante enzima, e em que o referido medicamento e a referida enzima estão incluídos e, mais preferencialmente incorporado na referida matriz à base de polímero. A presente invenção também se refere a um dispositivo de administração de medicamentos, de preferência um dispositivo médico fabricado com, ou formado a partir da referida composição de entrega de medicamento

[0012] O documento WO 2014 089650 Al refere-se a nanofibras com substância ativa para aplicação cosmética contendo compostos orgânicos nitrogenados do grupo xantinas (cafeína), nanofibras estas obtidas por eletrofiação utilizando soluções poliméricas na presença do ativo visando sua encapsulação para posterior liberação controlada na região da derme, preferencialmente para combater celulite (hidrolipodistrofia ginoide - HLDG). As matérias-primas normalmente usadas na produção industrial de fibras convencionais, tecidos e não tecidos, são os polímeros de origem natural, em primeiro lugar e, em segundo lugar, os polímeros sintéticos, dentre eles o PHBV.

[0013] O documento PI 0306829-3 A2 provê um método de encapsulação da enzima lipase de Cândida rugosa e lipase pancreática em silica, utilizando o precursor tetraetilortossilicato (TEOS), na ausência ou presença de Polietileno glicol-PM1450. Os biocatalisadores imobilizados obtidos são adequados para a utilização em biotransformações, podendo ser aplicados para agregar valor às matérias-primas da agroindústria nacional (óleos de soja, milho, canola, babaçu) visando a produção de aromas, emulsificantes, ácidos graxos, biodiesel e de outros compostos que tenham gorduras na sua composição.

[0014] O documento US 20070009644 A1 refere-se a um método para a produção enzimática de emulsificantes contendo mono- e diacilglicerídeos. A lecitina de soja bruta e os óleos vegetais e / ou animais, que reagem em conjunto com uma mistura de lipase e / ou fosfolipase como componente enzimático, são particularmente adequados como componentes. O referido método, que não requer os solventes orgânicos usuais, polióis ou aditivos iônicos e que requer apenas uma pequena quantidade de água, permite a produção de emulsificantes, cuja composição de lisofosfolipídios e mono-diacilglicerídeos pode ser ajustada de maneira direcionada. Os referidos emulsificantes, que também podem ser obtidos na forma líquida, são utilizados nas indústrias de alimentos e cosméticos.

[0015] O documento PI 0707367-4 A2, refere-se a uma composição farmacêutica para aplicação tópica que compreende um derivado de ácido fusídico utilizando um ou mais monoglicerídeos de um ácido graxo cuja a composição pode ser usada no tratamento de uma doença ou condição da pele ou mucosa, em particular infecções da pele.

[0016] Até o presente momento existe estudos utilizando formulações cuja composição é aplicada por via química ou óleos sem tratamentos como constituintes dos cremes.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0017] Figura 1. Perfil de conversão mono, di e triglicedídeos na reação de transesterificação de óleo de coco bruto a 40 °C, razão molar óleo:etanol 1:14 no tempo de 8 horas sob aquecimento sob aquecimento por meio de microondas.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0018] A presente invenção tem como principal objetivo produzir monoacilglicerídeos a partir da lipase imobilizada em híbridos na reação de transesterificação a fim de incorporar em uma composição cosmética e aplicar no tratamento da xerose, visando combater o envelhecimento da pele, linhas, rugas, descontinuidades visíveis e / ou táteis da pele, perda de firmeza, elasticidade e tônus e a deformabilidade do tecido da pele.

[0019] O uso dessa composição cosmética pode promover um recurso terapêutico mais efetivo no tratamento da xerose, sendo uma alternativa natural e livre de alguns compostos químicos que podem ser nocivos à saúde e à pele humana, como os parabenos, que estão presentes em muitos dos produtos cosméticos. Assim, a composição cosmética contendo os monoacilglicerídeos é um produto considerados de química verde obtidos por rotas ambientalmente sustentáveis que permitam aumentar a coesão dermo-epidérmica, a fim de combater o envelhecimento da pele, linhas, rugas, descontinuidades visíveis e / ou táteis da pele, perda de firmeza, elasticidade e tônus e combater a deformabilidade do tecido da pele se tornando uma alternativa aos produtos convencionais existentes no mercado e uma atraente alternativa para uso com fins cosmetológicos e farmacológicos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0020] A presente invenção refere-se a uma composição cosmética a partir da aplicação dos monoacilglicerídeos obtido a partir da reação de transesterificação do óleo de coco bruto via aquecimento por micro-ondas, utilizando a lipase de Burkholderia cepacia imobilizada no suporte híbrido (PHBV e silica), através do método de ligação covalente com finalidade cosmética e dermofarmacêuticas, no intuito de oferecer uma alternativa para promover um tratamento terapêutico mais efetivo no tratamento da xerose.

[0021] A composição cosmética utilizando o monoacilglicerídeos obtido a partir da reação de transesterificação do óleo de coco bruto utilizando a lipase de Burkholderia cepacia imobilizada no suporte híbrido (PHBV e sílica) e reagentes utilizados na formulação de creme estão descritos na tabela 1. Tabela 1. Composição cosmética.

[0022] Para desenvolvimento do dito processo de obtenção de monoacilglicerídeos produzidos por lipase imobilizada em híbridos, bem como a composição cosmética obtida para tratamento de xerose, as seguintes etapas de 1 a 4 devem ser consideradas:

Etapa 1 →Preparação do suporte híbrido

[0023] Para a formação da sílica foi preparada uma solução etanólica dissolvendo de 20 a 50 mL de tetraetiltrosilicato (TEOS), preferencialmente 30 mL de tetraetiltrosilicato em uma faixa de 30 à 40 mL de etanol absoluto, preferencialmente 36 mL de etanol (99%) em atmosfera inerte de nitrogênio. A solução etanólica foi mantida sob agitação durante cerca de 3 a 10 min, preferencialmente 5 min, à temperatura ambiente. Adicionou-se lentamente de 0,15 a 0,55 mL de ácido clorídrico (36%), preferencialmente 0,22 de ácido clorídrico (36%), diluído de 3 à 7 mL de água ultrapura (solução pré-hidrolisante), preferencialmente 5 mL de água ultrapura , quando a temperatura foi mantida a uma faixa de 25 à 40 ºC, preferencialmente 35 ºC, sob agitação de 60 à 120 min, preferencialmente 90 min. Após esse período, adicionou-se cerca de 2 à 5 g de PHBV, preferencialmente 3 g e aguardou-se de 5 à 15 min, preferencialmente 10 min. Em seguida, foi adicionado de 1 à 3 mL de hidróxido de amônio, preferencialmente 0,5 mL de hidróxido de amônio dissolvido em uma faixa de 2 à 5 mL de etanol, preferencialmente 3 mL de etanol (solução hidrolisante), obtendo-se uma solução homogênea, que foi mantida em repouso à temperatura de 25 à 40 °C, preferencialmente 35ºC durante um período de 30 à 90 min, preferencialmente 60 min. O material foi lacrado no balão e mantido sob condições estáticas e gelação durante uma faixa de 18 à 35 h, preferencialmente 24h para completar a policondensação. Após este período, o gel foi retirado do balão de três bocas e lavado com hexano. Após a lavagem o material foi mantido em dessecador de 48 a 120 h, preferencialmente 72h.

Etapa 2 →Imobilização do biocatalisador por ligação covalente

[0024] A lipase de Burkholderia cepacia foi imobilizada em suporte híbrido, seguindo a técnica de ligação covalente conforme a metodologia de PAULA et al. (2007). O suporte foi ativado com epicloridrina 2,5% (v/v) numa solução de tampão fosfato de potássio (0,1 M e pH 7,5) na proporção de 0,5 à 3 g de suporte, preferencialmente 1 g (suporte) para de 5 a 20 mL de solução, preferencialmente 10 mL (solução). Após a homogeneização, a mistura foi mantida sob agitação durante uma faixa de 1 à 3 h, preferencialmente 2 h e em seguida submetida a filtração à vácuo. Durante a filtração, o suporte foi lavado exaustivamente com água destilada e solução de tampão fosfato e logo após foi levado para a estufa (50-80 ºC) por um período de 20 à 36 h, preferencialmente 24 h a fim de eliminar o excesso de umidade. O suporte ativado foi imerso em hexano numa proporção de 1:10 (sólido: líquido) e se manteve sob agitação durante uma faixa de 1 à 3 h, preferencialmente 2 h. Em seguida, para cada grama de suporte adicionou-se de 0,15 à 0,5 de LBC, preferencialmente 0,25 g (LBC) e 100 μL de solução aquosa contendo 5 mg/mL de polietilenoglicol (PEG-1500). A suspensão contendo a enzima, suporte e PEG-1500 foi homogeneizada por agitação suave com haste de vidro seguida de contato estático e levada a gelação por uma faixa de 10 à 24h, preferencialmente 18 horas, à temperatura de 2 à 5 C, preferencialmente 4 ºC. A recuperação do biocatalisador foi feita por filtração à vácuo, seguida de lavagens repetidas com hexano e mantidas em dessecador à temperatura ambiente durante um período de 20 à 36 h. Foram quantificados os teores de água do biocatalisador e atividade enzimática.

Etapa 3 →Reações de transesterificação sob aquecimento por meio de micro-ondas

[0025] As reações de transesterificação enzimática foram realizadas em um reator de micro-ondas (modelo Discover University-Wave, Cem Corporation), constituído por uma câmara interna cilíndrica de 75 mm de diâmetro e 100 mm de altura). A irradiação homogênea do volume de trabalho é garantida pela concepção cilíndrica disposta no equipamento. A potência máxima de operação foi de 100 à 350 W, preferencialmente 300 W. Foi utilizado um agitador magnético para atingir o liquido de mistura qualitativamente classificado como alto. As temperaturas foram controladas com ar comprimido soprado para dentro da câmara. Esse ar de refrigeração foi concebido para operar em diferentes níveis de pressão e, ou em modo de fluxo contínuo ou intermitente. As temperaturas da reação foram monitoradas por um sensor de infravermelho localizado na parte inferior da câmara. O volume oferecido no meio reacional para o reator de vidro foi de 2 à 5 gramas de substrato que consiste em óleo de coco e etanol anidro com diferentes razões molares. As reações foram catalisadas pelos biocatalisadores imobilizados produzidos numa proporção fixa de 15 à 25 %, preferencialmente 20 % em relação ao peso total de reagentes envolvidos na reação. A fase orgânica foi tratada com Na2SO4 anidro. A determinação dos monoacilglicedídeos foram realizadas por cromatografia líquida (HPLC).

Etapa 4 → Preparo do creme

[0026] Em um recipiente foi adicionado de 2 à 5 g do Brij 72, de 2 à 4 g do Brij 721, de 1,5 à 3,5 g do monoacilglicerídeos obtido a partir da reação de transesterificação do óleo de coco bruto utilizando a lipase de Burkholderia cepacia imobilizada no suporte híbrido (PHBV e sílica), de 1,3 à 3,5 g de Monoestearato de glicerila, de 3,5 à 7,5 g de BHT, de 1,5 à 4,5 g de óleo de coco e aquecido até a temperatura na faixa de 60 à 80 °C, preferencialmente 75 °C.

[0027] Em outro recipiente foi adicionado de 3,0 à 5,0 g de Glicerina e de 1,5 à 3,0 g da Goma xantana, com agitação. Logo após foi adicionado a mistura de 80 à 150 ml de água deionizada e pulverizado de 20 à 50 g de Carbopol 940 sobre a água, mantendo a agitação até completa homogeneização do Carbopol 940 (não haver grumos). Em seguida foi adicionado de 0,010 à 0,015 g do Nipagin, de 0,03 à 0,05 g do Nipazol, de 0,03 à 0,07 g do Edta dissódico e aquecido até de 50 à 80 °C.

[0028] Com as duas fases na mesma temperatura (de 50 à 80 °C), a fase 2 foi adicionado sobre a Fase 1, sob agitação, mantendo a agitação e a temperatura de 50 à 80 °C, durante um período de 10 à 20 minutos. Em seguida foi iniciado o resfriamento do produto sob agitação lenta e constante. Quando a temperatura baixou para uma faixa de 30 à 45°C, foi adicionado sob agitação de 0,10 à 0,25 g de Trietanolamina e homogeneizado. Logo após foi adicionado a mistura de 2 à 5 g do Silicone DC 9040 sob agitação e de 0,5 à 2,5 g do Silicone DC245 com agitação até homogeneização do creme com óleo de coco.

[0029] O estudo da quantificação dos monoacilglicerídeos foi determinado por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) com o método de gradiente ternário. Foram escolhidas as melhores condições de temperatura e razão molar óleo:etanol, com variação no tempo de 5 à 10 h. Foi utilizado o cromatógrafo Shimadzu LC-20AD, com coluna Allcrom 5uC18(2)100ª (250 x 4,60 mm) e detector UV-VIS a 205 nm. A vazão de fluxo do solvente ternário (água, solvente A, metanol, solvente B e isso-propanol / n-hexano, 5:4 (v/v), solvente c) de 1,2 mL/min. A condição inicial foi de 5% de A + 95% de B, 100% de B em 10 min, 60% de B + 40% de C em uma faixa de 20 à 40 min. Nos últimos 7 min foi retornado o gradiente inicial para restabelecer as condições iniciais de operação da coluna. Os ácidos graxos foram identificados pelo tempo de retenção dos padrões internos. O rendimento da reação de transesterificação foi calculado comparando a soma das áreas dos picos dos componentes do cromatograma cujo os resultados estão descritos na Figura 1.

[0030] O produto foi sintetizado a partir de compostos de origem biológica (lipase, ácidos graxos de óleo vegetal, monoacilglicerídeos e etanol), sendo assim considerado um produto de química verde, totalmente ecológico e obtidos por rotas ambientalmente sustentáveis. A hidratação da pele é regulada de várias maneiras, e cada uma delas é influenciada por muitos fatores diferentes. Para tratar eficazmente a xerose, é preciso abordar cada um dos fatores envolvidos na modulação e manutenção da hidratação da pele.

[0031] Baseando nesta invenção, a presente invenção tem a forma de realização da correntemente favorecida, com a composição baseada em monoglicerídeos obtidos via processo biocatalítico (química verde), no qual também compreende como um agente de estabilização que serve para evitar a separação de fase de uma fase aquosa e uma fase lipídica em uma composição em temperaturas elevadas, por exemplo, a temperatura ambiente. Portanto subentende-se na teoria cosmética, correntemente que o agente de estabilização (monoglicerídeos obtido nesta invenção por via enzimática) tem propriedades bioadesivas da formulação do creme que podem promover o contato melhorado ou prolongado à pele que resulta nos tempos de retenção aumentados para a derme e na epiderme.

Atividade lipolítica

[0032] A atividade hidrolítica da lipase livre e imobilizada foi determinada pelo método descrito por SOARES et al. (1999). O substrato foi preparado pela emulsão de 50 mL de azeite de oliva e 50 mL tampão fosfato de sódio (0,1 M, pH 7,0) e 3,5 g de goma arábica. A reação enzimática foi formada por 5 mL de substrato, 2 mL de solução tampão fosfato de sódio e 1 mL de água Milli-Q para o branco e 0,1 g do biocatalisador imobilizado. A temperatura da reação foi mantida a 37 ºC em agitação constante (50 rpm) por 5 e 10 min para o branco e a enzima imobilizada, respectivamente. A reação foi interrompida pela adição de 2 mL de uma solução acetanólica, etanol e água (1:1:1). Os ácidos graxos liberados foram titulados com solução padronizada de KOH ± 0,04 N, utilizando fenolftaleína como indicador

[0033] Uma unidade de atividade foi definida como a quantidade de enzima que libera em 1 μmol de ácido graxo por min de reação, nas condições do ensaio. As atividades foram expressas em (1 U/g = 1 μ mol/g.min) e calculadas por meio da Equação 1.

[0034] Onde Va é o volume da amostra titulada (mL), Vb é o volume do branco titulado (mL), M é a molaridade da solução de KOH (mol/L), t é o tempo de reação em minutos e m é a massa da amostra utilizada na reação (g).

Espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier

[0035] As amostras do suporte híbrido, da lipase de Burkholderia cepacia e lipase imobilizada em suporte híbrido foram analisados no equipamento de análise FTIR (IR Prestige 21, Shimadzu). Os espectros foram obtidos na faixa de comprimento de onda de 600 a 2000 cm-1 para o acompanhamento dos procedimentos de imobilização.

Quantificação dos monoacilglicerídeos, diacilglicerídeos e triacilglicerídeos

[0036] O estudo da quantificação dos monoacilglicerídeos, diacilglicerídeos e triacilglicerídeos foi determinado por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) com o método de gradiente ternário, conforme descrito em JEGANNATHAN et al., (2010), com modificações. As análises foram realizadas para as amostras que apresentaram maior taxa de conversão. Foram escolhidas as melhores condições de temperatura (40 °C) e razão molar óleo:etanol (1:14) em estudos preliminares, com variação no tempo de 8 h. Foi utilizado o cromatógrafo Shimadzu LC-20AD, com coluna Allcrom 5uC18(2)100ª (250 x 4,60 mm) e detector UV-VIS a 205 nm. A vazão de fluxo do solvente ternário (água, solvente A, metanol, solvente B e isso-propanol / n-hexano, 5:4 (v/v), solvente c) de 1,2 mL/min. A condição inicial foi de 5% de A + 95% de B, 100% de B em 10 min, 60% de B + 40% de C em 40 min. Nos últimos 7 min foi retornado o gradiente inicial para restabelecer as condições iniciais de operação da coluna. A coluna foi mantida a temperatura de 40 °C e injeção de 10µL. Os ácidos graxos foram identificados pelo tempo de retenção dos padrões internos. O rendimento da reação de transesterificação foi calculado comparando a soma das áreas dos picos dos componentes do cromatograma e os resultados descritos na Figura 1.

Estabilidade operacional dos monoacilglicerídeos, diacilglicerídeos e triacilglicerídeos

[0037] A estabilidade operacional do sistema imobilizado foi determinada para a reação de transesterificação sob aquecimento por meio de micro-ondas em regime de bateladas consecutivas com reutilização do sistema imobilizado. Nesse estudo foi empregada, em todas as bateladas, a mesma massa de biocatalisador imobilizado lavado com hexano após cada ciclo.

Claims (13)

1. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS PRODUZIDOS POR LIPASE IMOBILIZADA EM HÍBRIDOS E COMPOSIÇÃO COSMÉTICA OBTIDA PARA TRATAMENTO DE XEROSE, caracterizado por obter monoacilglicerídeos a partir da lipase imobilizada em híbridos na reação de transesterificação do óleo de coco bruto via aquecimento por micro-ondas, utilizando a lipase de Burkholderia cepacia, preferencialmente desenvolvida por meio das etapas (1), (2), (3) e (4);
2. COMPOSIÇÃO COSMÉTICA OBTIDA, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO POR a composição cosmética da invenção compreender: de 2 a 5g Brij 72, 2 a 4g Brij 721, 1,5 a 3,5g Monoacilglicerídeos, 1,5 a 3,5g Monoestearato de glicerila, 3,5 a 7,5g BHT, 1,5 a 4,5g de Óleo de coco, 1,5 a 3,0g de Goma xantana, 3,0 a 5,0g Glicerina, 20 a 50g Carbopol, 0,010 a 0,015g Nipagin, 0,03 a 0,05g Nipazol 0,03 a 0,07g EDTA, 0,10 a 0,25g Trietanolamina, 2 a 5g Silicone DC 9040, 0,5 a 2,5g Silicone DC 245, água q.s.p.
3. COMPOSIÇÃO COSMÉTICA de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 2, caracterizada pelo fato de que a composição ser em gel ou creme.
4. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a etapa 1 dissolver 20 a 50 mL de tetraetiltrosilicato (TEOS), preferencialmente 30 mL de tetraetiltrosilicato em 30 à 40 mL de etanol absoluto, preferencialmente 36 mL de etanol (99%) em atmosfera inerte de nitrogênio mantida sob agitação durante cerca de 3 a 10 min, preferencialmente 5 min, à temperatura ambiente.
5. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por adicionar à solução etanólica de 0,15 a 0,55 mL de ácido clorídrico (36%), preferencialmente 0,22 de ácido clorídrico (36%), diluído de 3 à 7 mL de solução pré-hidrolisante, preferencialmente 5 mL de água ultrapura em 25 à 40 ºC, preferencialmente 35 ºC, sob agitação de por 90 min.
6. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com as reivindicações de 4 a 5, caracterizado por adicionar de 2 à 5 g de PHBV, preferencialmente 3 g, em seguida, foi adicionado de 1 à 3 mL de hidróxido de amônio, preferencialmente 0,5 mL de hidróxido de amônio dissolvido em 2 à 5 mL de etanol, preferencialmente 3 mL de etanol (solução hidrolisante) mantida em repouso à temperatura de 25 à 40 °C, preferencialmente 35ºC durante 30 à 90 min, preferencialmente 60 min, posteriormente, o material foi lacrado no balão e mantido sob condições estáticas e gelação durante uma faixa de 18 à 35 h, preferencialmente 24h para completar a policondensação.
7. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 1 a 6, caracterizado por a etapa 2 ativar o suporte com epicloridrina 2,5% (v/v) numa solução de tampão fosfato de potássio (0,1 M e pH 7,5) na proporção de 0,5 à 3 g de suporte para de 5 a 20 mL de solução, após a homogeneização, a mistura foi mantida sob agitação durante 1 à 3 h e em seguida submetida a filtração à vácuo, logo após o suporte foi lavado exaustivamente com água destilada e solução de tampão fosfato e logo após foi levado para a estufa a 50-80 ºC por 20 à 36 h.
8. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por o suporte ativado ser imerso em hexano numa proporção de 1:10 (sólido: líquido) em agitação por 1 à 3 h, em seguida, para cada grama de suporte adiciona-se de 0,15 à 0,5 de LBC e 100 μL de solução aquosa contendo 5 mg/mL de polietilenoglicol (PEG-1500), posteriormente é homogeneizada por agitação suave com haste de vidro seguida de contato estático e levada a gelação por uma faixa de 10 à 4 ºC.
9. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 7 e 8, caracterizado por a recuperação do biocatalisador ser feita por filtração à vácuo, seguida de lavagens repetidas com hexano e mantidas em dessecador à temperatura ambiente durante um período de 20 à 36 h.
10. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 1 a 9, caracterizado por a etapa 3 envolver no reator de micro-ondas de 2 à 5 gramas de substrato que consiste em óleo de coco e etanol anidro com diferentes razões molares as reações são catalisadas pelos biocatalisadores imobilizados, preferencialmente lipase de Burkholderia cepacia imobilizada no suporte híbrido (PHBV e sílica), produzidos numa proporção fixa de 15 à 25 %, preferencialmente 20 % em relação ao peso total de reagentes envolvidos na reação, em que a fase orgânica foi tratada com Na2SO4 anidro EM potência máxima de operação foi de 100 à 350 W, preferencialmente 300 W.
11. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 1 a 10, caracterizado por na etapa 4, adicionar 2 à 5 g do Brij 72, de 2 à 4 g do Brij 721, de 1,5 à 3,5 g do monoacilglicerídeos, 1,3 à 3,5 g de Monoestearato de glicerila, de 3,5 à 7,5 g de BHT e 1,5 à 4,5 g de óleo de coco e aquecido entre 60 à 80 °C, em outro recipiente foi adicionado de 3,0 à 5,0 g de Glicerina e de 1,5 à 3,0 g da Goma xantana, com agitação, misturado em 80 à 150 ml de água deionizada e pulverizado de 20 à 50 g de Carbopol 940 sobre a água, mantendo a agitação até completa homogeneização do Carbopol 940 (não haver grumos), posteriormente foi adicionado de 0,010 à 0,015 g do Nipagin, de 0,03 à 0,05 g do Nipazol, de 0,03 à 0,07 g do Edta dissódico e aquecido até de 50 à 80 °C.
12. PROCESSO DE OBTENÇÃO DE MONOACILGLICERÍDEOS, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por a fase 2 ser adicionado sobre a Fase 1, sob agitação a 50 à 80 °C por 10 à 20 minutos, logo após, é iniciado iniciado o resfriamento do produto sob agitação lenta e constante até a temperatura baixar para 30 à 45°C, posteriormente foi adicionado sob agitação de 0,10 à 0,25 g de Trietanolamina, 2 à 5 g do Silicone DC 9040, 0,5 à 2,5 g do Silicone DC245 com agitação até homogeneização do creme com óleo de coco
13. COMPOSIÇÃO COSMÉTICA como definido em qualquer uma das reivindicações de l a 12, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de uma doença ou condição da pele, preferencialmente xerose.

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