BR102014017397A2 - síntese e aplicação de um composto binuclear de cobre no tratamento de tumores sólidos - Google Patents

Abstract

síntese e aplicação de um composto binuclear de cobre no tratamento de tumores sólidos. a introdução, a partir de 1978, do composto de coordenação cisplatina, na quimioterapia do câncer, representou um marco na história da química inorgânica medicinal, e constituiu um importante avanço no tratamento de diversos tipos de tumores. desde então, desenvolveu-se uma intensa busca por novos complexos metálicos que também apresentassem atividade antitumoral, mas com baixa toxicidade para o organismo. sendo assim, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, caracterização e avaliação da atividade antineoplásica de compostos de coordenação previamente descritos de cobre. a presente patente de invenção tem por objetivo uma composiçao baseada no efeito sinergético dos compostos 1-[2-piridilmetil)amino]-3-(1- naftiloxi)-2-propanol e cucl2.2h20 para utilização no tratamento de tumores sólidos, relacionada à área da química inorgânica medicinal.

Description

RELATÓRIO DESCRITIVO “SÍNTESE E APLICAÇÃO DE UM COMPOSTO BINUCLEAR DE COBRE NO TRATAMENTO DE TUMORES SÓLIDOS” 1 A presente patente de invenção tem por objetivo uma composição baseada no efeito sinergético dos compostos 1 -{2-piridilmetil)amino]-3-( 1 -naftiioxi)-2-propanol e CuCi2.2H20 para utilização no tratamento de tumores sólidos, relacionada à área da química inorgânica medicinal. 2 O termo câncer é derivado da palavra latina “cancrum” que significa caranquejo, uma analogia á capacidade das células cancerígenas se disseminarem e desenvolver metástase. O câncer se caracteriza como uma neopiasia (novo crescimento) maligna, caracterizada por ser constituído por células indiferenciadas, denominadas de anaplásicas, pouco semelhantes ao tecido de origem e com alta capacidade de disseminação. Os tipos mais comuns de cànceres, como os de mama e de próstata, apresentam uma boa estimativa de cura, em contrapartida, os de pulmão, estômago, fígado, esôfago, pâncreas, melanama e leucemia apresentam elevados índices de mortalidade, o que impulsiona a pesquisa sobre esta patologia e a busca por novas terapias e químsoterápicos.1 3 Sugere-se que o desenvolvimento da malignidade das neopíasias sejam decorrentes de seis alterações fisiológicas fundamentais como a auto-suficiência na sinalização do crescimento, insensibilidade a fatores inibidores de crescimento, evasão do programa de morte celular programada (apoptose), potencial de replicação ilimitado, angíogênse sustentada, invasão tecidual e metástase. Cada uma das caraterísticas fisiológicas adquiridas leva ao desenvolvimento do tumor e dificultam, com êxito, a ação de mecanismos de defesa de células e tecidos. Todos estes fatores levam a perda do controle do cicio celular, principal característica das neopíasias malignas.2 4 Outro fator importante na grande.maioria dos cànceres é o IGF-!, O sistema GH/IGFí “Growth Hormone/ Insulin-Lske Growth Factor*) desempenha papel cruciai na carcinogênese humana, O sistema GH/IGF promove a progressão do ciclo celular (mitose), previne a execução da apoptose, facilita a neoangíogênese tumoral, induz a invasão tumoraf assiste os oncogenes na transformação de células benignas em malignas, dificulta a -diferenciação celular e provoca resistência ao tratamento do câncer com a quimioterapia e a radioterapia. Os íGFs e seus receptores estão envolvidos no desenvolvimento de vários tipos de câncer como : mama, próstata, pulmão, coio-retai, endométrio. osteosarcoma, neurobfastoma. pâncreas, ovário e testículo. Vários estudos epidemiotógicos têm sistematicamente apontado que o.elevado nível de IGF-! está associado com maior risco de desenvolvimento do câncer coio-retat, próstata, mama e pulmão.3 5 O câncer de pulmão é responsável por aproximadamente 13% do totaí de casos de neopíasias malignas e por cerca de 1.4 milhões de mortes por ano em todo mundo. Esta neoplasía apresenta-se sob dois principais subtipos: câncer de pulmão de células pequenas (CRPC) e câncer de pulmão de células não-pequenas (CPNPC), Cerca de 85% dos casos de câncer de pulmão são do tipo CPNPC. Os sinais e sintomas são secundários ao crescimento do tumor primário, ao comprometimento lobo-regional, à disseminação à distância, ou são secundários às síndromes paraneoplásicas. Essas características refletem diretamente sobre as taxas de mortalidade; de cada 100 novos casos, 80 são inoperáveis e a maioria morre dentro de 3 anos, Isso significa que, apesar dos diversos avanços no diagnóstico e tratamento, o prognóstico do câncer de pulmão permanece sendo extremamente ruim, com sobrevida média de 10 meses, e cumulativa total em 5 anos de aproximadamente 12%. É o mais comum de todos os tumores malignos, apresentando aumento de 2% por ano na sua incidência mundial. Em 90%. dos casos diagnosticados, o câncer de pulmão está associado ao consumo de derivados de tabaco. No Brasil, foi responsável por 20,622 mortes em 2008, sendo o tipo que mais fez vítimas. Altamente letal, a sobrevida média cumulativa tola! em cinco anos varia entre 13 e 21% em países desenvolvidos e entre 7 e 10% nos países em desenvolvimento., .No fim do século XX, o câncer de pulmão se tornou uma das principais causas de morte evitáveís. Estimativas de novos casos: 27.330, sendo 16.400 homens e 10.930, mulheres (2014); Número de mortes: 22.424, sendo 13.698 homens e 8.726 mulheres {2011}.4 O tratamento é feito com medicamentos como cisplatína, carbopiatina, doxorrubícina, miíomicina, vincristina, vírnbiastina e podofilotoxinas,5 6 O câncer colorretal abrange tumores que acometem um segmento do intestino grosso (o cólon) e o reto. É tratável e, na maioria dos casos, curável, ao ser detectado precocemente., quando ainda não se espalhou para outros órgãos. Grande parte desses tumores se inicia a partir de pólipos, lesões benignas que podem crescer na parede interna do intestino grosso, Uma maneira de prevenir o aparecimento dos tumores seria a detecção e a remoção dos pólipos antes de eles se tomarem malignos. Estimativa de novos casos: 32.600, sendo 15.070 homens e 17.530 mulheres (2014 - INCA) Número de mortes: 14.016: sendo 6.818 homens e 7.198 mulheres (2011}6 Câncer colorretal avançado é definido como o câncer que se espalhou para outras partes do corpo e não pode ser retirado por cirurgia. Quimioterapia primária é o tratamento para esse estágio de câncer colorretal Esses medicamentos podem ser administrados sozinhos ou em combinação com as seguintes drogas: Fluorouracil (5-FU) Capecitabina Tegafur e Uracii (Uftoral) Foifiri - combinação de 5-FU, Ieucovorina, irinotecano e ácido foísnico Irinotecano Oxaiiplatina Folfox - combinação de Ieucovorina, 5-FU e Oxaiiplatina,7 De acordo com a U.S. National Ubrary of Medicine, os três quimioterápicos mais usados no câncer colorretal são Irinotecano, Oxaiiplatina e Fluorouracil Em alguns casos, o médico também pode prescrever o que é chamado de droga-alvo, que é um medicamento que inibe a proliferação de certos tipos de células cancerígenas, Drogas-alvo podem ser administradas junto com a quimio ou sozinhas. Para câncer colorretal avançado, as medicações podem incluir: Avastin, Erbítux e Vectíbix, Adícionalmente, quimioterapia e radiação (eliminação, do câncer através de radiação) são combinadas às vezes para tratar certos tipos de câncer de cólon.8 7 As neoplasias malignas que se desenvolvem através de transformações de melanócitos são chamadas de melanoma. É considerado o tipo de câncer de pele mais perigoso e um dos tumores malignos mais agressivos que acomete a espécie humana. Origina-se a partir dos melanócitos da epiderme, células responsáveis pela síntese do pigmento natural, a melanina. Esta neoplasia acomete principalmente a pele (melanoma cutâneo), mas pode também ocorrer no olho (melanoma ocular ou intra-ocuiar) e em outras regiões onde há melanócitos como o tubo digestivo e as menínges.9 Apenas 4% de todos os tumores dermatológicos correspondem a melanoma cutâneo. Apesar de ser o menos frequente é o mais agressivo, sendo responsável por 80% dos casos de morte por câncer de pele.10 A incidência desta neoplasia tem aumentado consideravelmente em todo o mundo; nos Estados Unidos foi a doença com aumento mais expressivo, tendo o numero de casos dobrado nas últimas três décadas. Pacientes com melanoma em estágio avançado, com disseminação para outros órgãos, têm expectativa de vida de somente 6-9 meses, sendo que para apenas 10-15% dos pacientes, esta expectativa é de 3 anos.9 Os mecanismos moleculares que levam ‘a desregulação da homeosíase que envolve os melanócitos são ainda desconhecidos. Porém, sabe-se que a transformação de melanócitos em melanomas ocorre devido a mutações gênicas em aproximadamente 30% dos casos. Por exemplo, 25 a 40% dos membros de uma família com propensão à melanoma tem mutações em um inibidor de kinases dependente de ciclinas (CDKN2A), um gene supressor de tumor.11 8 0 melanoma apresenta uma das piores taxas de reposta à quimioterapia. Esta se baseia na combinação de quimioterápicos (dacarbazina, temozoiomida) ou combinação de quimioterápicos com interferon (fFN) e ínterieuquína-2 (ft-2),11 Nos Estados Unidos, o tratamento com altas doses de IL-2 foi aprovado pelo PDA ("Food and Drug Administration”) com base nos resultados obtidos para 277 pacientes em fase II da doença, sendo que para 7% dos pacientes, nenhum benefício foi observado.110 cotequel de Dartmoutb (dacarbazina, cisplatina, carmustina e tamoxiden) é ativo contra melanoma maligno, sendo empregado no Chang Gung Memorial Hospital, em Taiwan. Este coquetel foi empregado no tratamento de melanoma cutâneo, sendo obtido, para 43 pacientes acometidos de melanoma estágio IV, sobrevivência de 12,7 meses. Cerca de 50% dos pacientes apresentaram efeitos colaterais, como hípotensão. 12 O tratamento com agentes quimioterápicos leva a resistência das células neoplàsicas às drogas e o mecanismo de resistência permite que as células tumorais reparem as lesões provocadas pelas drogas no DNA, evitando assim o processo de morte celular, O prognóstico desse tipo de câncer pode ser considerado bom, se detectado nos estádios iniciais. Nos últimos anos, houve uma grande melhora na sobrevida dos pacientes com melanoma, príncípalmente devido à detecção precoce do tumor. Estimativa de novos casos: 8.230, sendo 3.170 homens e 3.060 mulheres (2012). Número de mortes: 1.507, sendo 842 homens e 665 mulheres (2010). Conforme Figura 1, 9 Compostos de coordenação são instrumentos na química inorgânica medicinal, a qual busca explorar as propriedades únicas de ions metálicos para a concepção de novos fàrmacos. No desenvolvimento de meíalofármacos, as moléculas orgânicas (ligantes) apresentam papel importante, uma vez que podem limitar os efeitos tóxicos dos metais e potencializar suas propriedades terapêuticas.13-14 10 Compostos de coordenação candidatos a metalofármacos devem apresentar algumas importantes características, como carga neutra, baixo peso molecular, estabilidade hidrolítica e termodinâmica, biodisponibilidade oral e, se possível, capacidade bi-funcional.15 Um bom candidato a agente terapêutico deve ser capaz de cruzar membranas biológicas tanto no processo de absorção inicial quanto no processo de captação intracelular. A capacidade dos compostos metálicos serem transportados através da membrana celular está diretamente relacionada á sua toxidez. Essa capacidade depende de diversos fatores, entre os quais se destacam a hidrossolubilidade e a iipossolubilidade. volatilidade, oeso molecular e a existência de mecanismos específicos de transporte.16 São poucos os ions metálicos que possuem um mecanismo inerente de transporte ativo ou facilitado, exceto alguns íons metálicos essenciais, tais como cobre, zinco e ferro.17 A maioria dos outros ions metálicos não essenciais pode atravessar membranas celulares por difusão passiva, o que requer que o complexo metálico tenha baixo peso molecular e possua carga neutra, além de um grau aceitável de resistência à hidrôlise. Como as membranas biológicas possuem uma grande quantidade de iipídios, complexos lipofíficos podem cruzar a membrana muito mais rapidamente do que os compostos hidrofílicos.18 11 Compostos de oobre(íl) têm sido considerados como alternativas promissoras a medicamentos antitumorais convencionais como cispiatina, este fato é suportado pelo considerável número de publicações descrevendo a síntese, ligação a molécula do DNA, e descrição da atividade citotõxica de uma grande variedade de compostos de coordenação de cobre(l!).19~26 Contudo, evidências do mecanismos de ação e estudos in vivo são raros. Recentemente, Z, Guo e colaboradores relataram potente atividade citotóxica de um composto de cobrefll}, o qual foi ativo frente as linhagens MCF-7 (carcinoma humano de mama), Hela (cervical humana), Skov-3 (ovarianas humanas), A549 (adenocarcinoma de pulmão) e A549R (adenocarcinoma de pulmão resistente à cispiatina). Neste estudo foi demonstrado que o mecanismo de ação è múltiplo, incluindo modificação na conformação do DNA, geração de espécies reativas de oxigênio (EROS), cisão do DNA e dissipação do potencial de membrana mitocondrial.27 Em 2013, publicamos a atividade citotóxica de um composto de coordenação de ferro [Ci(HPCINOL)Fe(lll}(p-0)Fe{lll)(HPCÍNOL)CI]CÍ2. 2H20,28 Com base nos estudos mecanísticos, foi proposto que o efeito ocorre via mitocondria e via receptores de morte, indicando que ambos os caminhos (intrínsico e extrínsico) estão envolvidos no processo de morte celular por apoptose. 12 Em 2012 foi defendida a tese de doutorado intutulada “Síntese, caracterização e avaliação da atividade antineoplásica de compostos orgânicos e de coordenação de cobre: influência do naftol e da cumarina na atividade biológica".29 Nesta tese foi relatada a síntese e caracterização físico- química, realizada por ressonância magnética nuclear de hidrogênio e de carbono e espectroscopia no infravermelho de um novo iígante, denominado de ligante 11. Nos Esquemas 1 e 2 são apresentadas as rotas sintéticas para a obtenção do mesmo, o qual foi obtido pela reação entre o precursor 2-(1-nafiilometíi)oxirano e (2-hidroxibenzil)(2-piridilmetil)amina, como descrito a seguir: o precursor Pt (Esquema 1) foi sintetizado a partir da reação de condensação entre 2-(aminorneíil)piridina (3,0 ml; 28,5 mmol; A) e salicilaídeído (3,0 ml; 28,5 mmoi; B), em 40 ml de metanol, utilizando-se a rota sintética previamente descrita na literatura.30 Rendimento: 5,0 g (83%). Figura 2 13 O precursor P3 {Esquema 2) foi sintetizado segundo Corrêa.31 Em um baião de fundo redondo de 500 mL foi adicionado 200 ml de álcool etílico, 10,Og de a-nafto! (0,07 moi; D) e 4,0 g de KOH. Após 10 minutos sob agitação magnética à temperatura ambiente, foi adicionado lentamente 33,6 mL de 1-cloro-2,3-epoxipropano (£), A solução foi mantida sob agitação magnética à temperatura ambiente por 48h e a reação for acompanhada por TLC, empregando hexano e acetato de etila como eluentes na proporção de 9:1 A seguir, a solução foi concentrada no evaporador rotatório à 50°C, dissolvida em 30 mL de água, transferida para um funil de separação e extraída 4 vezes com 20 mL de éter etílico gelado. Em seguida, a fase etérea foi seca com sulfato de sódio anidro e posteriormente filtrada. A solução foi concentrada no evaporador rotatório à 50°C, sendo obtido um óleo castanho-avermeíhado. Rendimento: 7,Gg (49,73%). Figura 3, 14 O composto orgânico, denominado de iígante L1 foi sintetizado conforme a rota sintética mostrada no Esquema 3. Em um balão de fundo redondo de 250 mL contendo 100 mL de etanol foram adicionados 5g (0,025 mol) do precursor 2-(1-nafttk>ximeíil)oxirano (P3) e 5,35g (0,025 mol) do precursor {2-hidroxibenzil)(2-pírídilmetiI)amína (P1). A solução foi mantida sob agitação magnética a 75°C por 5 dias e a reação foi acompanhada por cromatografia em camada delgada, empregando-se hexano e acetato de etila como eluentes, na proporção de 6:4. Em seguida, concentrou-se a solução no evaporador rotatório à 50° C obtendo-se um óleo castanho-escuro. Este foi dissolvido em clorofórmio e sucessivas extrações foram realizadas empregando-se solução “bríne" (solução aquosa saturada de cloreto de sódio com uma pequena quantidade de bícarbonato de sódio). À fase orgânica adicionou-se MgSC>4 anidro e após 20 minutos a mesma foi filtrada e concentrada no evaporador rotatório a 50° C até a secura. Obteve-se um óleo castanho-avermeíhado. Rendimento: 7,0g (67%). Figura 4. 15 0 iigante obtido, após completa caracterização foi compiexado com o sal inorgânico cloreto de cobne(ll), resultando no composto de cobre(lf), denominado de composto 1. Para a obtenção do composto 1 reagiu-se uma solução de 1Q,0mL de acetato de eia e metanol, na proporção de 3:2, contendo 0,414g (1,0 mnnol) do Iigante 1-[2-hidroxibenzil{2-piridílmetil)amino]-3-( 1 -naftiloxi)-2-propanol (L1) e 0,17G5g (1,0 mmol) de CUCÍ2.2H2O. A solução de coloração verde foi mantida em repouso à temperatura ambiente. Após três dias foi obtido um sólido mícrocristalíno verde. Rendimento: 0,524 g (90%). Ponto de fusão: 140°C. Figura 5. 16 O composto de cobre(ll) foi caracterizado por técnicas espectroscópicas como espectroscopia no infravermelho e eletrônica, análise elementar de C, H e N, medidas de condutividade e eletroquimica, caracterização por espectrometria de massas com ionização por electrospray (ESI(+)-MS e ESI(+)-MS/MS) e determinação do ponto de fusão, concluindo-se que se tratava de um novo complexo mononuclear de cobre(ll), denominado composto C1. Com base nos resultados obtidos foi proposta a estrutura mostrada no Esquema 4, evidenciando a formação de um composto contendo um centro de cobre(H), coordenado a um nitrogênio amínico, um nitrogênio piridínico, um oxigênio do feno!, um oxigênio do álcool e a um ãnion cloro, resultando em um composto de cobre(ll) pentacoordenado. 17 Após a completa caracterização o mesmo foi empregado no tratamento antitumoral in vitro, empregando-se o método de metabolização do MTT. Os resultados frente às linhagens Colo205, NC1-H460 e SKMEL-5 são apresentados na Tabela 1, sendo o valor de IC50 a média do resultado obtido de dois experimentos isolados, sendo cada um realizado em triplicata. Com o objetivo se se avaliar a toxicidade frente a células normais, avaliou-se a atividade destes compostos frente a células do sangue periférico humano (PBMC), Os dados são apresentados na Tabela 1 e indicam que o composto é seletivo às células tu morais.

Tabela 1. Valores de IC5G (pmol L·1) dos compostos sintetizados frente as linhagens Colo205, NCI-H460, SKMEL-5 e PBMC. ND- não determinado. 18 Após a obtenção de resultados promissores in vitro e evidências que o processo de morte celular se dá via apoptose, iniciaram-se os estudos in vivo. Inicialmente foi feita a determinação da DL50. Para a determinação da DL50 em camundongos, a um grupo de 48 camundongos C578L/6 ou BALB/c nude foram administrados uma única dose do complexo de cobreiII) C1 diluído em agua destilada estéril, por via mtraperitoneai de acordo com a metodologia previamente descrita por Costa et af, 2012 Os dados de sobrevida foram aplicados ao software GraphPad Prism V5.0 e determinou que a DL50 é de 48,98 mg/Kg para animais BALB/c (Figura 4-B} nude e 54,95 mg/Kg para camundongos C57BL/6 (Figura 1-A), As moríalidades ocorreram até o 3o dia após a administração do complexo 1, Determinação da DL50 do complexo Cl Um grupo de 48 animais BALB/c nude (A) e C57BL/6 (B) foram ínocufados com concentrações variadas do complexo C1 e avaliados por 15 dias quanto à mortalidade. Os dados obtidos foram tratados com o software GraphPad Prism Versão 5.0 utilizando o teste de curva de regressão não-línear. Colaboração: Dr, Franz Viana Borges. Figura 6. 19 Os animais BALB/c Nude inoeulados com as células NC1-H46Q de câncer de pulmão desenvolveram lesões subcutâneas de acordo com as metodologias adotadas. Na Figura 2 estão apresentadas as fotografias dos animais apôs 30 dias de inocuiação das células WCI-H460. Os animais 1 e 2 foram inoculados com 1x106 e os animais 3 e 4 com 5x105 células. Após o 5° dia de inoculo celular as lesões já se mostravam aparentes e com 30 dias as lesões obtidas foram bem evidentes e com diâmetros médios de 829,61 mm3 e 1703,42mm3 respectivamente para as concentrações celulares de 1x106 e 5x106 células por animai, Indução de tumores subcutâneos de células NC1-H46Q. Animais nude foram inoculados com as células NCI-H460 e avaliados quanto ao desenvolvimento e diâmetro tumoraí. Os animais 1 e 2 foram inoculados com 1x106eos animais 3 e 4 com 5x106 células. Figura 7. 20 Com base nos dados obtidos da DL50 e após a padronização do modelo murino de câncer de células NCI-H48Q foram conduzidos experimentos para verificar o efeito antineoplásico do composto Cl Para tanto, um grupo de 24 animais BALB/c nude fêmeas de 4 semanas foram inoculados subcutaneamente com 5x106 células veiculadas em 10Ομ! de PBS. Após o 5o dia de inóculo, os animais foram avaliados quanto ao desenvolvimento das lesões tu morais, sendo reservados 18 animais com lesões homogêneas, sendo distribuídos em 3 grupos de 6 animais cada, sendo um grupo controle tratado com P8S, um grupo tratado com cispiatína na concentração de 3,3 mg/Kg/dose e um grupo tratado com A DL50 do composto C1 (25,0 mg/Kg/dose). O volume administrado em cada tratamento foi de 300μί por via íntraperitoneaf. A evolução do tratamento foi avaliado a cada 3-4 dias, recebendo os animais um novo tratamento após 7 e 14 dias do início do tratamento. No 18° dia após o inicio do tratamento os animais foram sacrificados e as lesões removidas pesadas e preservadas em formo! tamponado a 4% para as análises imunohistoquímicas. Os dados do acompanhamento das lesões indicam acentuada atividade antineoplásica do composto C1 no modelo murino de câncer de células NCI-H460 {Figura 8), apresentando os animais do grupo tratado com o composto C1 tesões com desenvolvimento semelhante ao obtido para o grupo tratado com cisplatina, fármaco utilizado para quimioterapia do câncer pulmonar. Após a administração da terceira dose do composto 1, os volumes tumoraís apresentaram discreta redução, indicando uma involução das lesões (Figura 8). No 18° dia, os tumores do grupo tratado com o composto C1 apresentavam volumes médios 2,22 vezes menores, com valores de 1229,69mm3, enquanto que os do grupo controle de cisplatina 1084,86mm3 e o grupo não tratado 2729,93mm3. As massas tumoraís foram extraídas no 18° dia após o início do tratamento e os valores obtidos apontam que no caso de animais sem tratamento a massa tumoraí média é 1,94 vezes maior que o grupo tratado com composto Cl (Figura 8). Os dados fotográficos dos animais encontram-se na Figura 3, onde se observa as lesões tumoraís dos animais. 21 Conforme figura 8, volumes tumoraís médios dos tratamentos de tumores induzidos em camundongos BALS/c nude com células NCI-H46G. As lesões tumoraís foram induzidas com ínoculo de 5x106 células por animal. Cada grupo foi formado por 6 animais BALB/c nude fêmeas com idades entre 4 e 6 semanas. Após 5 dias de inoculo as lesões mostraram-se aparentes e os animais foram tratados com 3,3mg/kg/dose de cisplatina, 25mg/Kg/dose do composto 1. Um grupo controle foi conduzido, tratando os animais com salina fisiológica. O tratamento foi repetido após sete dias e os valores representam as médias aritméticas dos volumes tumoraís calculados segundo a fórmula: V=d2xD, onde V=Volume tumoral, d=díâmentro menor e D=diâmetro maior. A-Volumes tumoraís médios, B-Massas tumoraís médias obtidas no 18° dia após o inicio do tratamento, C-Fotografias dos animais e lesões tumoraís obtidas do 18° dia após o inicio do tratamento. 22 Paralelamente à realização dos ensaios in vivo, tentativas de obtenção de material cristalino para elucidação da estrutura por difração de raios X de monocristal tiveram êxito. A metodologia para a obtenção do material cristalino difere da empregada e relatada por Lopes, em sua tese de doutorado. A reação entre o lígante L1 e o sal inorgâncio, foi realizada, empregando-se etanol como solvente, sendo descrita a seguir: a uma solução etanólica (10,0rot) do lígante 1-(2-hidroxibenzil(2-pÍrídilmetíl)amino]-3-(1-naftiloxi)-2-propanol (L1) (0,414g (1,0 mmol) foi adicionada 0,1705g (1,0 mmoi) do sal CUCI2.2H2O. A solução foi colocada em refluxo per 10b. A solução resultante de coloração verde foi mantida em repouso à temperatura ambiente. Após dois dias foram obtidos cristais verdes adequados para a realização das análises cristaiográficas. Rendimento: 0,5 g (90%), Ponto de fusão; 150°C. A estrutura cristalina para este composto é apresentada na Figura 9 e os dados cristalográficos nas Tabelas 2.

Tabie 2. Comprimentos de ligação selecionados [Â] e ânguos [°] para o composto de cobre, Symmetry code: 23 Como evidenciado na estrutura de raios X, trata-se de um composto binuclear de cobre(il), onde tem-se a dimerização de dois compostos mononucleares, via ànions cloreto em ponte, A estrutura de raios X indica que a estrutura relatada anteriormente por Lopes não corresponde à realidade, pois na época não haviam sido obtido material cristalino adequado para a elucidação estrutural, pois a obtenção de material cristalino ocorre apenas quando a reação é realizada em etanol e Lopes relatou a síntese do composto de cobre em metanol/acetato de etila.

REIVINDICAÇÃO “SÍNTESE E APLICAÇÃO DE UM COMPOSTO BINUCLEAR DE COBRE NO TRATAMENTO DE TUMORES SÓLIDOS”

Claims (2)

1. Síntese e aplicação de um composto binuclear de cobre no tratamento de tumores sólidos, composto, caracterizado por ter a fórmula estrutural cristalina

2, Processo para preparar um composto de fórmula caracterizado pelo fato de que a uma solução etanólica de tO.OmL do ligante 1-[2-hidroxibenzil(2-piridilmetil)amino]-3-(1-nafti}oxi)-2-propanof (0,414g) (1,0 mmo!) é adicionada 0,1705g (1,0 mmol) do sal CuCI2,2H20, ficando a solução em refluxo por 10h, resultando em uma solução de coloração verde que é mantida em repouso à temperatura ambiente por 2 dias para a obtenção de cristais verdes.