BG2482U1

BG2482U1 - Биологично активна хранителна добавка

Info

Publication number: BG2482U1
Application number: BG3605U
Authority: BG
Inventors: Валерий Даниленко; Николаевич Даниленко Валерий; Мария Марсова; Викторовна Марсова Мария
Original assignee: „Биотехфарм“ Оод
Priority date: 2016-10-14
Filing date: 2016-10-14
Publication date: 2017-03-31

Abstract

Биологично активната хранителна добавка намира приложение за профилактика на дисбактериоза, за подобряване на общото състояние на червата и намаляване на възпалителните процеси на чревната лигавица. Тя включва пробиотичната млечнокисела бактерия Lactobacillus rhamnosus 313, ВКПМ В-12236 в лиофилизирана форма със съдържание на активни жизнеспособни клетки от 108 до 109 CFU, лактитол, алфа-липоева киселина, хидролизен лигнин и магнезиев стеарат, в следните количествени съотношения за една капсула в mg: Lactobacillus rhamnosus 313 от 200 до 250, лактитол от 50 до 150, алфа-липоева киселина от 50 до 200, хидролизен лигнин от 50 до 100 и магнезиев стеарат от 2,5 до 3,5. Хранителната добавка поддържа антиоксидантната защита в организма на високо ниво; селекционният пробиотичен щам в състава й е с добра жизнеспособност по време на производство и съхранение, с високо съдържание на активни клетки с висока преживяемост и висока степен на адхезия към чревната мукоза.

Description

Полезният модел се отнася до биологично активна хранителна добавка, по-специално биологично активна хранителна добавка със синбиотични свойства, притежаваща антиоксидантно и противовъзпалително действие, която намира приложение за профилактика на дисбактериоза с различна етиология, за подобряване на общото състояние на червата и намаляване на възпалителните процеси на чревната лигавица.

Предшестващо състояние на техниката

Известно е, че използването на антибактериални препарати, небалансираното хранене, стресът и неблагоприятната екологична обстановка могат да доведат до чревна дисбактериоза, смущения в работата на стомашно-чревния тракт и да провокират възпаление на чревната лигавица. Съгласно съвременните представи, възпалението на чревната лигавица се съпровожда от натрупване на окислени молекули, при което се увреждат клетките, които я изграждат. Установено е, че постоянното присъствие в областта на възпалението на антиоксиданти, намаляващи окислението, защитава епителиоцитите на лигавицата на червата от увреждащи въздействия. Ето защо за снижаване на симптомите на възпаление традиционно се използва антиоксидантна терапия.

Пробиотичните бактерии, естествени синбионти на човека, синтезират биологично активни вещества, в това число и антиоксиданти. Поради това използването на пробиотици е особено перспективен подход за лечение на чревни възпалителни заболявания (неспецифичен колит, мукозит и др.) (Probiotics as potential antioxidants: A Systematic Review //V. Mishra, et al.// Journal of Agricultural and Food Chemistry. 03/2015; 63(14); Health benefits of probiotics: are mixtures more effective than single strains? Chapman, CM.; Gibson, GR.; Rowland, I.// Eur. J. Nutr. 2011, 50, 1-17; Antioxidative potential of lactobacilli isolated from the gut of Indian people. Achuthan, AA.. et al. //Mol. Biol. Rep. 2012,39,788797).

Лактобацилите, като пробиотични микроорганизми, широко се използват за изготвяне на хранителни продукти, биологично активни добавки и лекарствени средства. В последните години за комплексното решаване на проблема с възпаленията и дисбакгериозата е предложено изU1 ползването на щамове Lactobacillus, притежаващи антиоксидантно действие (Antioxidant properties of potentially probiotic bacteria: in vitro and in vivo activities. A. Amaretti, M. di Nunzio, A. Pompei et al. //Appl. Microbiol. Biotechnol. 2013. 97. P. 809-81), a също така проявяващи имуногенни свойства (И. А. Федорова, В. Н. Даниленко.//Успехи соврем. биол. 2014, Т. 134. №2).

Известен е пробиотичен щам от вида Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103, описан в Европейски патент ЕР 0199535. Щамът е бил обстойно проучен в редица клинични изследвания. Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103 е включен в състава на млечни продукти, а също така и на хранителни добавки под формата на капсули и ентеросолвентни таблетки, таблетки за дъвчене и др., които намират приложение за предотвратяване развитието на вредни бактерии в стомаха и червата.

Много хранителни добавки, съдържащи щам Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103 включваги други активни съставки, включително и други пробиотични бактерии, пребиотици, минерали, витамини и ORS соли /WO 2009118243; WO 2013104783; WO 2014166960/.

Известна е биологично активна хранителна добавка под формата на капсули, предлагаща се на пазара под търговско име Culturella, която съдържа пробиотичната млечнокисела бактерия Lactobacillus rhamnosus GGATCC 5310, пребиотика инулин и помощни вещества. Този продукт се прилага за ефективно възстановяване на естествения баланс на добрите бактерии в храносмилателния тракт.

Задача на настоящия полезен модел е създаване на биологично активна хранителна добавка за профилактика на дисбактериоза с различна етиология, подобряване на общото състояние на червата и намаляване на възпалителните процеси на чревната лигавица, съдържаща селекционен щам пробиотична млечнокисела бактерия от вида Lactobacillus rhamnosus, чрез която да се поддържа ефективно антиоксидантна защита на високо ниво, при добра жизнеспособност на щама по време на производство и съхранение, с високо съдържание на активни клетки с висока преживяемост, устойчив на стомашен сок и с висока степен на адхезия към чревната му коза.

Техническа същност на полезния модел

Биологично активната хранителна добавка, съгласно полезния модел, включва пробио

2482 UI тичната млечнокисела бактерия Lactobacillus rhamnosus 313, ВКПМ В-12236 в лиофилизирана форма със съдържание на активни жизнеспособни клетки от 10⁸ до 10⁹CFU, пребиотик лактитол, алфа-липоева киселина, хидролизен лигнин и магнезиев стеарат, поместени в чревно-разтворима капсула. Компонентите на биологично активната хранителна добавка са в следните количествени съотношения в mg за една капсула: от 200 до 250 Lactobacillus rhamnosus 313, от 50 до 150 лактитол, от 50 до 200 алфа-липоева киселина, от 50 до 100 хидролизен лигнин и от 2,5 до 3,5 магнезиев стеарат.

Щамът Lactobacillus rhamnosus 313, ВКПМ В-12236 е пробиотичен селекционен щам, отделен от стомашно-чревния тракт на възрастен здрав човек. Той има високо ниво на продуктивност на антиоксиданти, а основното вещество, обезпечаващо лечебния му ефект е глутатионът, ендогенен антиоксидант, който играе важна роля в клетката и участва в много процеси, като антиоксидантна защита, имуностимулация и активиране на клетъчна детоксикация. Чистата култура Lactobacillus rhamnosus 313 запазва активността си до една година. Тя е безопасна за употреба и е устойчива при стойности на pH = 2 в течение на 60 min, при което количеството на жизнеспособните й клетки се снижава незначително. Lactobacillus rhamnosus 313 репродуцира в храносмилателния тракт.

Пребиотикът лактитол, трудно смилаем дизахарид, осигурява хранителна среда за развитие на пробиотика Lactobacillus rhamnosus 313 в организма и избирателно стимулира ръста на полезната микрофлора. Алфа-липоевата киселина е включена в състава в качеството си на универсален физиологичен антиоксидант. Тя има синергетично влияние върху оксидативните нива на селекционния пробиотичен щам Lactobacillus rhamnosus 313 и спомага за неговото усвояване и рециклиране. Положително на микрофлората на дебелото черво и на неспецифичния имунитет влияе и хидролизният лигнин, който се отнася към групата на диетичните фибри.

Дозирането на биологично активната хранителна добавка в чревно-разтворими капсули, позволява да се изключи агресивното въздействие на стомашния сок и жлъчката върху компонентите на разработения състав и повишава нейната ефективност.

За приготвяне на биологично активната хранителна добавка, пробиотичният селекционен щам Lactobacillus rhamnosus 313 ВКПМ В-12236 се култивира на стандартна хранителна среда MRS в стандартни условия до съдържание на живи микроорганизми в количество 10⁸-10⁹CFU/ml, пренася се на защитна среда за сушене, съставена от 1% желатин и 10% захароза и се лиофилизира. Лиофилизираният пробиотичен селекционен щам се смесва с пребиотика лактитол, с алфа-липоевата киселина, хидролизния лигнин и магнезиевия стеарат. Получената смес се разфасова при стерилни условия в чревноразтворими капсули.

Предимство на биологично активната хранителна добавка е ефективността й при профилактика на дисбактериоза, подобряване на общото състояние на червата и намаляване на възпалителните процеси на чревната лигавица, поради добрите й антиоксидативни свойства и способността й да поддържа антиоксидантната защита в организма на високо ниво; селекционният пробиотичен щам в състава й е с добра жизнеспособност по време на производство и съхранение, устойчив е на стомашен сок и притежава висока степен на адхезия към чревната му коза.

Примери за изпълнение на полезния модел

Полезният модел се илюстрира със следните примерни изпълнения.

Пример 1. За изготвяне на биологично активната хранителна добавка се използва лиофилизирана жизнеспособна селекционна култура Lactobacillus rhamnosus 313 ВКПМ В-12236, получена след култивиране при анаеробни условия в стандартна среда MRS при температура 37°С за време 48 h до съдържание на живи микроорганизми в количество 10М0⁹ CFU/ml, която се пренася на защитна среда за сушене, съдържаща 1% желатин и 10% захароза, след което се лиофилизира.

Лиофилизираният жизнеспособен селекционен щам Lactobacillus rhamnosus 313 ВКПМ В-12236 се използва за изготвяне на биологично активна хранителна добавка със следния състав:

2482 UI

Лиофилизирана жизнеспособна култура L.rhamnosus 313	200 mg
α-липоева киселина	100 mg
Лактитол	100 mg
Хидролизен лигнин	50 mg
Магнезиев стеарат	2,5 mg

Компонентите на биологично активната хранителна добавка се дозират в смесител, смесват се, след което получената смес се разфасова при стерилни условия в чревно-разтворими капсули от 500 mg.

Жизнеспособността на щама се запазва непроменена в течение на година.

Пример 2. Изследване на специфичната активност на биологично активната хранителна добавка, съгласно полезния модел

Изследването се проведе по модела на експериментална ентеропатия, предизвикана от 5-флуороурацил в червата на плъхове Вистар. Изучено бе изменението в микробиота на червата, морфо-функционалните характеристики на червата и състоянието на имунитета при животните, получаващи биологично активната хранителна добавка, описана в Пример 1, в сравнение с контролна група и групи, получаващи препарати Бифиформ (Дания) и Линекс (Словения). Отбелязана бе бърза нормализация на микробиота (изчезване на признаците на прекомерен растеж на клебсиел, протея, стафилококи и други условно-патогенни бактерии и гъби), увеличаване на съдържанието на продуцирания бутират Faecalibacterium prausnitzii; стимулация на синтеза на противовъзпалителните цитокини IL-10 и ТОРбета, тенденция към редукция на синтеза на провъзпалителните цитокини МСР-1; увеличение на фагоцитозната активност на левкоцитите; удебеляване на слоя слуз, отделящ се върху микробиота на червата от повърхността на епитела; увеличение на производството на алкална фосфатаза от клетките на слизестия слой на тънките черва; бърза компенсация след токсичното действие на антимикробните препарати установено по биохимичните показатели на кръвния серум; възстановяване активността на хранителните ферменти на чревната лигавица и химуса. По получените данни изследваната биологично активна хранителна добавка, описана в Пример 1, не отстъпва на използваните за

Ю сравнение препарати Бифиформ и Линекс, а по редица параметри даже ги превъзхожда.

Пример 3. Изследване на токсичността на биологично активната хранителна добавка

Определянето на острата токсичност се ¹³ проведе при прилагане на различни дози върху безпородни бели мишки (с 10⁷-10¹⁰ CFU), плъхове линия Вистар (с 1 ОМ0 CFU) и зайци порода шиншила (с 10М0¹² CFU). Еднократно2Q то въвеждане в стомаха на трите вида животни на максимални дози не доведе до смърт на животните и до проява на интоксикация. При интраперитонеално въвеждане ЛД50 е 10¹⁰ CFU за мишки (при средно тегло 20 g) и 10 CFU за 25 плъхове (при средно тегло 70 g). Терапевтичните дози на пробиотици за хора при средно тегло 50 kg са 10М0¹⁰ CFU, т.е. получената на мишки и плъхове LD50 при отчитане на съотношението 2Q на човешкото тегло и теглото на гризачите превъзхожда терапевтичната доза.

Изследване на подострата токсичност на биологично активната хранителна добавка върху мишки при вътрешно стомашно въвеждане 35 не показа значими отклонения в динамиката на натрупване на телесна маса. Посявка нафекалии не показа признаци на дисбиоза в червата на мишките. Изследването на хронична токсичност на два вида животни /зайци и плъхове/ при вътрестомашно въвеждане не показа значими отклонения в динамиката на натрупване на телесна маса, консумацията на храна и вода, хематологичните и биохимични показатели, морфологията на вътрешните органи на животните и не доведе до повишаване на температурата на тялото.

Получените резултати позволяват да се отнесе биологично активната хранителна добавка, описана в Пример 1, включваща селекционния пробиотичен щам L. rhamnosus 313 ВКПМ В-12236, алфа-липоева киселина, лактитол, 50 хидролизен лигнин и магнезиев стеарат, при използването й в терапевтични дози, към неток4

2482 UI сичните лекарствени състави.

Пример 4. Изследване на специфични видове токсичност на биологично активната хранителна добавка, съгласно полезния модел

При изучаване на имунотоксичността получените резултати позволяват да се направи извод за това, че в диапазона на изследване на дозите (10⁷ и 10⁸ CFU/мишка) биологично активната хранителна добавка, описана в Пример 1, не оказва имунотоксично действие, а проявява умерено имуностимулиращо (фагоцитоза) и супресиращо действие(реакция на хиперчувствителност от забавен вид) и не отменя образуването на антитела, инициирано от протеинов антиген.

При изучаване на мутагенността установихме, че биологично активният продукт в доза 10¹⁰ CFU при перорално въвеждане и 24-часова експозиция, както и петкратно въвеждане в доза 10⁸ CFU не предизвиква статистически достоверно увеличение на количеството на клетките с хромозомни аберации в костния мозък на мишки линии СВА. Следователно биологично активният продукт не притежава мутагенна активност по отношение на соматични клетки на топлокръвни животни.

При изследване натератогенността налинии на биологично активния продукт върху плъхове линии Вистар /препаратите са въвеждани на бременни самки вътре в стомаха/, анализа на ембрио/фето/леталното действие на биологично активната добавка показва, че не се превишава нивото на до- и след-плантационното загиване на плода и сумарния ембрио/фето/летален ефект в сравнение с показателите на контролата. Също така в нито една от опитните групи не се прояви 10 макропатологии в плода.

Claims

1. Биологично активна хранителна добавка, включваща пробиотична млечнокисела бактерия 15 от вида Lactobacillus rhamnosus, пребиотик и помощни вещества, поместени в чревно-разтворима капсула, характеризираща се с това, че пробиотичната млечнокисела бактерия е Lactobacillus rhamnosus 313, ВКПМ В-12236 в лиофилизирана 20 форма със съдържание на активни жизнеспособни клетки от 10⁸ до 10⁹ CFU, пребиотикът е лактитол, като хранителната добавка съдържа и алфа-липоева киселина, хидролизен лигнин и 25 магнезиев стеарат, а компонентите й са в следните количествени съотношения за една капсула в mg: Lactobacillus rhamnosus 313 от 200 до 250, лактитол от 50 до 150, алфа-липоева киселина от 50 до 200, хидролизен лигнин от 50 до 100 и 30 магнезиев стеарат от 2,5 до 3,5.