BG113505A - ЩАМ Bifidobacterium longum ssp. longum И БИФИДОБАКТЕРИАЛЕН ПРЕПАРАТ С ХИПОЛИПИДЕМИЧЕН ЕФЕКТ, ПРОТИВОВЪЗПАЛИТЕЛЕН ИМУНОМОДУЛИРАЩ ЕФЕКТ И С НАМАЛЯВАЩ ИНСУЛИНОВАТА РЕЗИСТЕНТНОСТ ЕФЕКТ - Google Patents
ЩАМ Bifidobacterium longum ssp. longum И БИФИДОБАКТЕРИАЛЕН ПРЕПАРАТ С ХИПОЛИПИДЕМИЧЕН ЕФЕКТ, ПРОТИВОВЪЗПАЛИТЕЛЕН ИМУНОМОДУЛИРАЩ ЕФЕКТ И С НАМАЛЯВАЩ ИНСУЛИНОВАТА РЕЗИСТЕНТНОСТ ЕФЕКТ Download PDFInfo
- Publication number
- BG113505A BG113505A BG113505A BG11350522A BG113505A BG 113505 A BG113505 A BG 113505A BG 113505 A BG113505 A BG 113505A BG 11350522 A BG11350522 A BG 11350522A BG 113505 A BG113505 A BG 113505A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- longum
- strain
- bifidobacterial
- preparation
- nbimcc
- Prior art date
Links
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 title claims abstract description 73
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 title claims abstract description 73
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 241001655328 Bifidobacteriales Species 0.000 title claims abstract description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims abstract description 15
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims abstract description 13
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 230000000055 hyoplipidemic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 76
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 30
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims description 29
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims description 29
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims description 26
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims description 17
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 claims description 17
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 15
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 13
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 abstract description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008821 health effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 19
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 15
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 15
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 14
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 14
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 13
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 12
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 11
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 11
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 9
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 9
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 9
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 9
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 9
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 9
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 8
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 6
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 6
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 5
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 5
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 5
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 5
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 5
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 5
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 5
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010069201 VLDL Cholesterol Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 4
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 3
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 3
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108010000231 Choloylglycine hydrolase Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010007979 Glycocholic Acid Proteins 0.000 description 2
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 2
- -1 IL-Ιβ Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 2
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 2
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000021472 generally recognized as safe Nutrition 0.000 description 2
- RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N glycocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N 0.000 description 2
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 2
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000009862 primary prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000009863 secondary prevention Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M sodium glycocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 2
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 241000185999 Bifidobacterium longum subsp. longum Species 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014476 Elevated cholesterol Diseases 0.000 description 1
- 206010048554 Endothelial dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022653 Intestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 150000001200 N-acyl ethanolamides Chemical class 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920002582 Polyethylene Glycol 600 Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000003524 antilipemic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003858 bile acid conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 235000021004 dietary regimen Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000002621 endocannabinoid Substances 0.000 description 1
- 230000008694 endothelial dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N fructooligosaccharide Chemical compound OC[C@H]1O[C@@](CO)(OC[C@@]2(OC[C@@]3(OC[C@@]4(OC[C@@]5(OC[C@@]6(OC[C@@]7(OC[C@@]8(OC[C@@]9(OC[C@@]%10(OC[C@@]%11(O[C@H]%12O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]%12O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%11O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%10O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]9O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]8O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]7O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]6O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]5O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]4O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]3O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]2O)[C@@H](O)[C@@H]1O FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N 0.000 description 1
- 229940107187 fructooligosaccharide Drugs 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/51—Bifidobacterium
- A23V2400/533—Longum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
- A61K2035/115—Probiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Настоящото изобретение се отнася до нов щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15, депозиран под номер NВIMCC 9085 в Национална банка за промишлени микроорганизми и клетъчни култури (НБПМКК) на Република България, който притежава комплекс от полезни за здравето свойства: хиполипидемична активност, антиинфламаторна имуномодулираща активност, способност да намалява инсулиновата резистентност, силна адхезия спрямо епителни клетки и висока преживяемост в гастроинтестиналния тракт. Предмет на настоящото изобретение също е бифидобактериален препарат, получен чрез култивиране на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 с клинично доказана съвкупност от функционални ефекти, включваща подобряване на липидните показатели, намаляване на инсулиновата резистентност, повлияване благоприятно на маркерите за инфламаторен статус. Изобретението се отнася и до използването на новия щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 и на бифидобактериалния препарат за профилактика и терапия на атеросклероза, сърдечносъдови и инфламаторни заболявания и за намаляване на диабетния риск.
Description
ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Настоящото изобретение се отнася към областта на биотехнологията и в частност до пробиотичен щам бифидобактерия, който притежава комплекс от полезни за човешкото здраве свойства и неговото използване в пробиотични препарати за профилактика на метаболитни, сърдечно-съдови и инфламаторни заболявания.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Бифидобактериите се считат за пробиотици, тъй като те са живи микроорганизми, които оказват благоприятен ефект върху здравето на човека, когато се приемат в достатъчно количество. Предложено е минимално ниво от приблизително 106-107 жизнеспособни клетки бифидобактерии на грам чревно съдържание. [1]
Бифидобактериите са една от няколкото доминиращи култивируеми бактериални групи, присъстващи в микрофлората на дебелото черво, като играят важна роля за поддържане на балансирана здрава чревна микрофлора. Съществуват убедителни доказателства за взаимната връзка между чревната микрофлора, затлъстяването, ендоканабиноидната система, системното нискостепенно възпаление, липополизахаридите, чревния пермеабилитет, артериалната ригидност.
Пробиотиците, освен да подобряват състава на чревната микрофлора, действат и върху други цели като подобряват имунитета, повлияват благоприятно инфламаторни и метаболитни заболявания, намаляват риска за развитие на атеросклероза. От изключителна важност за проявление на полезните им ефекти са адхезивните свойства на бактериалните клетки, както и тяхната преживяемост и способност за колонизиране в гастроинтестиналния тракт.
Демонстрираните от пробиотиците полезни за здравето свойства са специфични за конкретен щам и дори щамове от един и същ род и вид, проявяват различни свойства и в различна степен.
Доказано е благоприятното въздействие на бифидобактерии спрямо интестинални възпалителни заболявания като улцерозен колит и болест на Крон, като третирането е пробиотични препарати съпътства медикаментозната терапия. Механизмите на това благоприятно повлияване върху интестиналните възпаления са превенция на адхезията на патогени върху интестиналния епител; имуномодулиращ ефект чрез индуциране синтеза на антиинфламаторни цитокини IL-10 (интерлевкин 10) и/или TGF-beta (трансформиращ растежен фактор бета), редукция на синтеза от епителните клетки на проинфламаторния цитокин IL-8 (интерлевкин 8), липса или понижена индукция на TNFa (тумор некрозис фактор алфа), IL-1 (интерлевкин 1) и/или IL-6 (интерлевкин 6); протеолитично разграждане на антигени с проинфламаторни свойства; елиминиране на токсини и др. [2]
Увеличената индукция на проинфламаторните цитокини, особено на TNFa, стимулира епителните клетки да произвеждат интерлевкин IL-8, който стимулира активността на неутрофилните клетки. [3] При трайно усилена активност на неутрофилите може да се образуват язви, да се появи интестинално кървене [4], състояния срещани при инфламаторната болест на дебелото черво.
Имуномодулаторният ефект е строго щамово-специфичен. Изследвани са щамове лактобацили и бифидобактерии някои от които водят до повишаване нивото на TNFa и IL-6, други до понижаване на TNFa и повишаване на IL-10. [5]
Установено е, че някои щамове бифидобактерии притежават способност да понижават серумния холестерол, чиито високи нива са причина за редица заболявания като хиперлипидемия, атеросклероза, липиден метаболитен синдром. Механизмите за това са чрез директното адсорбиране на холестерола към липопротеинови фракции на клетъчните стени на бактериите или чрез притежаваната от някои пробиотични щамове значителна хидролазна активност спрямо жлъчните соли (BSH активност). Чрез BSH активността си пробиотичните щамове понижават концентрацията на жлъчни соли, което се компенсира чрез синтез на нови количества жлъчни киселини от холестерол и конюгиране на тези жлъчни киселини с таурин или глицин до нови запаси от жлъчни соли, заместващи деконюгираните жлъчни соли. Основното свойство при подбор на бактериални щамове за разработка на пробиотични препарати с благоприятен ефект спрямо метаболизма на холестерола е и наличието на значителна хидролазна активност към жлъчните соли.
Известно е също така, че добрите нива на ензима „хидролаза на жлъчните соли“ в бифидобактерии се асоциират не само с неговата способност за намаляване на холестерола, но и за намаляване на възпалението.
В корейски патент KR102224072B1 [6] е описан щам Bifidobacterium longum ssp. longum, притежаващ комбинация от две основни функционални характеристики: директна редукция на общия серумен холестерол и имунна регулация чрез понижаване на секрецията на проинфламаторни цитокини TNFa и IL-6 и повишаване на секрецията на антиинфламаторния цитокин IL-10. Тези ефекти са потвърдени чрез in vitro функционална оценка на щама и in vivo експеримент с мишки.
Известно е, че сърдечно-съдовите заболявания са водеща причина за заболеваемост и смъртност в световен мащаб, а основна причина за тяхната поява, развитие и настъпващи усложнения е атеросклерозата. Главни рискови фактори, чиято съвкупност води до поява и ускорено развитие на атеросклеротичния процес са хипертонията, дислипидемията, затлъстяването и провъзпалителния статус, захарния диабет или нарушения глюкозен метаболизъм, обездвижването. Често тези фактори се съчетават при един и същи пациент, което рязко увеличава риска от сърдечно-съдово заболяване. Явлението е добре познато при пациенти с метаболитен синдром. Колкото повече от рисковите фактори съществуват при един пациент, толкова по-голяма е вероятността за сърдечно-съдово заболяване, тъй като вредното им въздействие се умножава при тяхната комбинация. Ето защо е важно да се намалява комбинираното влияние на наличните рискови фактори чрез повлияване едновременно на тяхната съвкупност, а не поотделно.
Актуален проблем представлява подбор на пробиотичен щам Bifidobacterium longum ssp. longum, който освен имунна регулация и директно редуциране на холестерола, да проявява и хидролазна активност спрямо жлъчните соли.
Друг актуален проблем е доказване на хиполипидемичните и противовъзпалителни!е имуномодулаторни активности на щам Bifidobacterium longum ssp. longum чрез клинично изпитване на приложението на щама при пациенти с риск за развитие на атеросклероза.
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Предмет на настоящото изобретение е нов щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15, депозиран под номер NBIMCC 9085 на 26 януари 2022 г. в Национална банка за промишлени микроорганизми и клетъчни култури (НБПМКК) на Република България, притежаващ комплекс от полезни за здравето свойства - хиполипидемична активност, антиинфламаторна имуномодулираща активност, способност да намалява инсулиновата резистентност, силна адхезия спрямо епителни клетки и висока преживяемост в гастроинтестиналния тракт.
Предмет на настоящото изобретение също е бифидобактериален препарат, получен от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 и притежаващ клинично доказана съвкупност от здравни ползи: подобряване на липидните показатели, намаляване на инсулиновата резистентност, благоприятно повлияване на маркерите за инфламаторен статус.
Предмет на изобретението също е използването на новия щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 и на бифидобактериалния препарат, получен от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 за благоприятно повлияване едновременно на множество рискови за здравето фактори като профилактика както на конкретно инфламаторно или метаболитно заболяване, но така също и на заболявания, причинявани от тези рискови фактори в тяхната съвкупност, в конкретния случай за превенция на атеросклероза и сърдечно-съдовите заболявания.
Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 е изолиран от фекални проби на здрав доброволец на възраст 28 години, който не е употребявал антибиотици през последната 1 година, както и пробиотици през последните шест месеца. Взетата проба се разрежда серийно в анаеробизирана пептонна вода в анаеробен бокс до разреждане 10'6 и се посява на неселективна среда за анаероби Blood Liver agar с добавена 5,0% дефибринирана конска кръв. Култивирането е анаеробно при температура 37°С в продължение на 72 часа. Колониите, с типична за род Bifidobacterium морфология, се инокулират в MRS бульон с L-cysteine и литиев хлорид и се култивират в анаеробна среда при температура 37°С за 24 часа. За принадлежност към род Bifidobacterium прорасналите грам-позитивни култури с типична пръчковидна форма се изпитват чрез родово-специфичен PCR. Видовата принадлежност и щамовата идентичност на щама са установени с помощта на прецизни ДНК-базирани методи (Фигура 1) като секвениране на 16S rDNA, Пулсова електрофореза. Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 е грам-позитивен, каталазо-негативен, c пръчковидна форма. Микроскопска снимка на щама е представена на Фигура 2.
Изолирането на щама от интестиналния тракт на здрав доброволец доказва неговия GRAS (generally recognised as safe/ общопризнат като безопасен) статус.
Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 е способен да понижава в значителна степен концентрацията на серумния холестерол. Щамът проявява две основни активности, свързани с редуциране на нивото на холестерола - директно понижаване на нивото на холестерола, както и индиректното му редуциране като следствие на хидролазната активност на щама спрямо жлъчните соли (BSH активност). Степента на двете активности на щама са определени in vitro.
Директното елиминиране на холестерола се дължи най-вече на неговата адсорбция върху компоненти от клетъчната стена на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085. При определянето на тази активност се измерва остатъчния холестерол в среда с добавен водоразтворим холестерол. Измерванията са проведени чрез газова хроматография и показват средна стойност 62,7% ± 1,6% директно понижаване на холестерола. (Пример 1.1)
Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 демонстрира висока хидролазна активност спрямо жлъчните соли, чрез която индиректно влияе върху нивото на серумния холестерол. В резултат на деконюгирането на жлъчните соли тяхната концентрация намалява, което се компенсира чрез синтез на нови жлъчни киселини и конюгирането на тези жлъчни киселини до нови жлъчни соли. Участието на серумния холестерол в синтеза на нови жлъчни киселини намалява неговата концентрация.
Определянето на BSH активността на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 е течнохроматографско в обратна фаза (RP-HPLC) с UV детекция при 210 nm. Щамът, култивиран в среда с добавени жлъчни соли натриев таврохолат (ТСА) и натриев гликохолат (GCA), постига 72,0% ± 1,9% деконюгиране на наличните в средата жлъчни соли. (Пример 1.2)
Способността на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 да намалява холестерола се доказва и с понижението на стойностите на липидните показатели при клиничното наблюдение по прилагане на бифидобактериалния препарат, получен от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085. (Пример 3.1)
Едновременно c това щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 притежава противовъзпалителна имуномодулираща активност, която се проявява чрез способността на щама да променя благоприятно индукцията на проинфламаторни и антиинфламаторни цитокини.
Противовъзпалителната имуномодулираща способност на щама е определена in vitro чрез количествено определяне на експресията на сигналните пептиди TNF-α, IL-8, IL-6, TGF-β и IL-10 от комбинирана система от две клетъчни линии: човешката моноцитна клетъчна линия ТНР-1 и епителната клетъчна линия НТ-29, разделени от полупропусклива мембрана. (Пример 1.3)
Резултатите от in vitro оценката на индукцията на сигналните пептиди от щама Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 показват понижаване на експресията на проинфламаторните цитокини IL-8, IL-6, TNF-a, както и повишаване на синтеза на антинфламаторните цитокини TGF-β и IL-10. Демонстрирана е способност за значително понижаване на нивото на интерлевкин IL-8, от 2734 ±149 pg/ml при контролата до 112 ± 13 pg/ml при оценката на щама, което е съществен фактор при профилактиката и терапията на инфламаторните заболявания на интестиналния тракт.
Благоприятно повлияване върху показатели за инфламаторен статус е установено и при клиничното наблюдение с прием на бифидобактериалния препарат, получен от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085: нивата на проинфламаторните цитокини TNFa, IL-Ιβ и IL-6 се понижават, а нивото на антиинфламаторния цитокин TGF-β се повишава. (Пример 3.3)
Едновременно с това щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 проявява силна адхезия спрямо епителни клетки, както и високо ниво на преживяемост в гастроинтестиналния тракт, което засилва въздействието на полезните ефекти на щама върху човешкия организъм.
Способността на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 да адхезира върху епителни клетки е определена in vitro, като са използвани епителните клетъчни линии СаСо-2 и НТ-29. Резултатите показват, че щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 притежава много силна адхезия със среден брой над 15 адхезирали бактериални клетки върху една еукариотна клетка. (Пример 1.4)
Преживяемостта на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 е определена при клиничното наблюдение на приложението на бифидобактериалния препарат от щама. Изследвани са фекални проби от девет доброволци, пациенти в клиничното наблюдение, след 30 дневен прием на бифидобактериалния препарат, и е установен среден брой колонии 2,2x106 CFU/g. (Пример 3.4)
Бифидобактериалният препарат, предмет на настоящото изобретение, се получава чрез култивиране на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085. (Пример 2)
Той може да се прилага в течна или суха (лиофилизирана) форма, като лиофилизираният бифидобактериален препарат може да се прилага както на прах, така също и под формата на капсули.
Течният бифидобактериален препарат съдържа живи клетки на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 най-малко 1x109 CFU/g.
Лиофилизираният бифидобактериален препарат съдържа живи клетки от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 най-малко 5xl09 CFU/g. Остатъчното влагосъдържание е 4% ± 1%.
Бифидобактериалният препарат, лиофилизиран или течен, може да се използва като добавка към продукти в суха и/или течна форма. При добавянето му към млечнокисели продукти, той се влага в количество 0,5% - 2%.
Лиофилизираният бифидобактериалния препарат може да се капсулира. Преди капсулиране към него се добавя антислепващ агент, в конкретен случай микрокристална целулоза. Всяка капсула съдържа не по-малко от 2x109 живи клетки на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085
Върху приложението на бифидобактериалния препарат от специално селектирания щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 e проведено двойно сляпо плацебо контролирано клинично наблюдение. При клиничното наблюдение са оценени хиполипидемичния и антиинфламаторния ефект на бифидобактериалния препарат при пациенти с висок атеросклеротичен съдов риск или атеросклеротично заболяване - всички са с леки и умерени по степен липидни нарушения, с наднормено тегло или затлъстяване, при повече от половината от тях е налице артериална хипертония под терапевтичен контрол, диабет тип 2 под терапия, както и доказана стеатоза на черния дроб. (Пример 3)
При клиничното наблюдение е установена много добра поносимост и липса на нежелани странични ефекти при прием на бифидобактериалния препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085.
Извършените кръвни изследвания на редица биохимични, метаболитни и хормонални показатели доказват статистически значими благоприятни метаболитни ефекти върху липидния метаболизъм след 30 дневен прием на пробиотичния бифидобактериален препарат: понижение на общия серумен холестерол; понижение на LDL холестерола (холестерола в липопротеините с ниска плътност) и на Non HDL холестерола, с което е потвърден хиполипидемичния ефект на бифидобактериалния препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085. (Пример 3.1)
Важна част от проведените клинични изследвания са анализите на нивата на маркерите за съдов риск, респективно цитокини и инфламаторни фактори, чиято патофизиологична роля има голямо значение в светлината на разглеждането на метаболитния синдром и затлъстяването като състояние на нискостепенно възпаление, водещо до ендотелна дисфункция.
Резултатите от клиничното наблюдение показват благоприятна промяна на изследваните цитокини и потвърждават антиинфламаторния имуномодулиращ ефект на бифидобактериалния препарат. (Пример 3.3)
Едновременно с това при клиничното наблюдение е отчетен допълнителен ефект, а именно статистически значимо подобрение в състоянието на инсулинова резистентност при пациентите, получаващи бифидобактериалния препарат. Отчетено е понижение на базалната гликемия и инсулинемия, както и на индекса на инсулинова резистентност, с което се установява нов ефект, намаляващ диабетния риск и подобряващ диабетния контрол. (Пример 3.2)
Резултатите от медицинските изследвания в рамките на проведеното клинично наблюдение показват едновременното благоприятно повлияване на три рискови фактора за развитие на атеросклерозата, а именно липопротеиномията, състоянието на инсулиновата резистентност и инфламаторния статус. Така клиничното наблюдение на ефектите при приложение на бифидобактериалния препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 потвърждава установените in vitro функционални характеристики на щама, а именно хиполипидемични и противовъзпалителни имуностимулиращи свойства, както и установява нов функционален ефект, намаляващ диабетния риск.
Въз основа на това, бифидобактериалният препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 се препоръчва за успешно приложение в медицинската практика при първичната и вторична профилактика и терапия на атеросклероза, сърдечно-съдови и инфламаторни заболявания и при диабетен риск.
ПОЯСНЕНИЯ НА ПРИЛОЖЕНИТЕ ФИГУРИ
Фигура 1. Пулсово-електрофоретичен профил на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 c ензима AsnI. M и m-молекулни маркери. Условия на разгъване: начален импулс 2s, краен импулс 15s, напрежение 5V/cm, продължителност 24h. Молекулните маси на ДНК фрагментите на щам Bifidobacterium longum ssp. longum LBB 3/15 NBIMCC 9085 в kbp ca: 199, 136, 112,99, 93,73,61,57,51,47,38.7, 26, 22.2, 20.5, 17, 9, 14.2, 13.5, 11.6,9.0,8.5,8.0, 7.5,6.8.
Фигура 2. Микроскопска снимка на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085
Фигура 3. Изменение на нивото на цитокин TNFa при прием на бифидобактериален препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 в сравнение c плацебо група.
Фигура 4. Изменение на нивото на цитокин IL-Ιβ при прием на бифидобактериален препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 в сравнение c плацебо група.
Фигура 5. Изменение на нивото на цитокин IL-6 при прием на бифидобактериален препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 в сравнение c плацебо група.
Фигура 6. Изменение на нивото на цитокин TGF-βΙ при прием на бифидобактериален препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 в сравнение c плацебо група.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Пример 1. In vitro функционална оценка на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085.
1.1. Оценка на способността за директна редукция на холестерола
Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 се култивира анаеробно при температура 37°С в продължение на 18 часа в MRS бульон с Lcysteine, като в средата се съдържат 0,3% жлъчни соли и 100 pg/ml водоразтворим холестерол (cholesterol-PEG600). Инокулумът е 0,5% и съдържа 1x109 CFU/ml. След инкубирането клетките се утаяват чрез центрофугиране и 0,5 ml от супернатантата се третира с 4 ml 2М КОН в метанол при температура 80°С за 20 минути. Следва екстракция с 5 ml хексан и 4 ml от хексановия слой се прехвърля в епруветки и се изпарява с азотен поток при температура 60°С. Сухият остатък се разтваря в 0,5 ml изопропанол и съдържащото се количество холестерол се определя чрез газова хроматография. Степента на редукция на холестерола се определя на база на неинокулирана контролна среда.
Измерванията се извършват трикратно като резултатите се осредняват. В Таблица 1 са представени резултатите от директната адсорбция на холестерола, изразени в процент на редукция на холестерола.
Таблица 1
| Щам | % понижаване на холестерола |
| Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 | 62,7 ± 1,6 |
1.2. Оценка на хидролазна активност спрямо жлъчните соли (BSH активност)
Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 се култивира анаеробно при 37°С за 18 часа в MRS бульон с L-cysteine, като в средата се добавят двете най-важни жлъчни соли: натриев таврохолат (ТСА) и натриев гликохолат (GCA) в концентрация 1 тМ за всяка от тях. Инокулумът е 0,5% и съдържа 1x109 CFU/ml, а неинокулирана среда се използва като контрола.
Определянето е течнохроматографско в обратна фаза (RP-HPLC) с UV детекция при 210 пш. Свободните и конюгираните жлъчни киселини се детектират при градиентен обратнофазов режим. Солвент А е 65% метанол в 0.03 М натриев ацетат при pH 4,3, нагласено с фосфорна киселина. Солвент В е метанол с HPLC качество. Елуентната програма е изократна стъпка за 8 минути при 15% елуент В и после линеен градиент до 85% за 17 минути. Следва изократна стъпка от 5 минути при 85%. Инжектираното количество е 5 μΐ.
На Таблица 2 са представени резултатите от определяне на BSH активността на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 като процент на хидролиза на наличните в средата жлъчни соли, след трикратно изпитване и осредняване на резултатите.
Таблица 2
| Щам | % деконюгиране на жлъчни соли |
| Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 | 72,0 ± 1,9 |
1.3. Оценка на противовъзпалителна имуномодулираща активност
Противовъзпалителната имуномодулираща активност е оценена чрез количествено определяне на експресията на проинфламаторни и антиинфламаторни сигнални пептиди от комбинирана система от две клетъчни линии: човешката моноцитна клетъчна линия ТНР-1 и епителната клетъчна линия НТ-29, разделени от полупропусклива мембрана. Спретнатата система от двете клетъчни линии е доказано подходяща при оценката на индукцията както на проинфламаторните цитокини TNF-α, IL-8 и IL-6, така и при определяне индукцията на антиинфламаторни цитокини IL-10 и TGF-β. Поддържането на двете клетъчни линии се извършва при температура 37°С и 5% СОг на среда RPMI 1640 за клетъчна линия ТНР-1 и на среда DMEM за клетъчна линия НТ-29. В двете среди са добавени 10% фетален говежди серум, 4,5 g/Ι глюкоза, ЮтМ HEPES, 1тМ натриев пируват, 2шМ L-глутамин, 1,5 g/Ι натриев бикарбонат, 100 U/ml пеницилин, 100 pg/ml стрептомицин. В 48 кладенчова платка за клетъчни линии, в долните кладенци, 1 х 106 за милилитър ТНР-1 клетки (5х103 за кладенец) се диференцират до макрофаги е помощта на 5 pg/ml РМА (phorbol 12-myristate13-acetate), добавен към растежната среда, за 24 часа в СОг инкубатор. Епителните НТ-29 клетки се развиват като монослой в инсъртите с полупропусклива мембрана и зреят 14 дена при ежедневна смяна на средата DMEM. Диференцираните адхезирали макрофаги се промиват двукратно с PBS буфер (Dulbecco’s phosphate-buffered saline) и се инкубират с прясна среда без РМА за 24 часа. Добавя се липополизахарид от Salmonella в концентрация 1 pg/ml в среда RPMI 1640 и инкубирането продължава още 4 часа. След аспириране на средата към диференцираните макрофаги се прибавят 0,5 ml за кладенче бактериални клетки на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 c концентрация lxlO6CFU/ml, суспендирани в среда RPMI 1640. Инкубират се за 24 часа в СОг инкубатор.
Оценката на индукцията на сигналните пептиди TNF-α, IL-8, IL-6, TGF-β и IL-10 от щама Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 се извършва чрез сандвичова ELISA. След финала на инкубирането супернатантата се събира и се центрофугира за елиминиране на бактериалните и човешките клетки. За определяне на сигналните пептиди се използват по 100р1 от получените супернатанти. Оценката на индукцията на всеки цитокин се извършва трикратно. В Таблица 3 са представени осреднените резултати от трикратното изпитване за индукция на петте цитокина.
Таблица 3
| Контрола / Щам | IL-10 pg/ml | TNF-a pg/ml | TGF-β pg/ml | IL-6 pg/ml | IL-8 pg/ml |
| контрола (спретната система от | 121 | 477 | 1242 | 2238 | 2734 |
| ТНР-1 и НТ-29) | ±14 | ±31 | ±79 | ±135 | ±149 |
| Bifidobacterium longum ssp. | 237 | 281 | 1655 | 1846 | 112 |
| longum 3/15 NBIMCC 9085 | ±25 | ±23 | ±84 | ±117 | ±13 |
1.4. Оценка на адхезията спрямо епителни клетки
За определяне на адхезията на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 към епителни клетки се използват епителните клетъчни линии СаСо-2 и НТ-29, които се култивират като монослой от зрели епителни клетки в среда DMEM (Dilbecco’s modified Eagle’s medium), обезпечена c 10% фетален говежди серум. Инкубирането е при температурата 37°С във водонаситена атмосфера, съдържаща 5% СО2. При около 90% изграден монослой клетките се пасажират чрез инкубиране с 0,25% трипсин и 10 mM EDTA разтвор при температура 37°С за 10 минути. Еукариотните клетки се посяват в 6-кладенчови кластери при концентрация 2x105 клетки/ml. Средата се сменя на всеки 2 дена в продължение общо на 14 дни. В този период се изгражда монослоя (за около 3-4 дена) и протича зреене на клетъчните рецептори. Следва двукратно промиване на монослоевете с PBS буфер и към тях се добавя бактериалната култура на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 c концентрация IxlO8 CFU/ml в 2 ml DMEM без антибиотици. Бактериалните и еукариотните клетки се инкубират съвместно в продължение на 60 минути при температура 37°С във водонаситена атмосфера, съдържаща 5% СО2. Следва петкратно промиване на кладенците с PBS, фиксиране с метанол за 3 минути, оцветяване по Gram и микроскопско оценяване на адхезията. Определя се броя на адхезиралите бактериални клетки за 20 епителни клетки като се отчитат 10 микроскопски полета. Опитът за оценка на адхезията се извършва трикратно както върху клетъчна линия Сасо-2, така и върху линия НТ-29, като резултатите се осредняват.
Резултатите от определянето на адхезията на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15, NBIMCC 9085, изразени като среден брой адхезирали бактериални клетки върху една еукариотна клетка, са представени в Таблица 4.
Таблица 4
| Щам | среден брой адхезирали бактерии върху Сасо-2 еукариотна клетка | среден брой адхезирали бактерии върху НТ-29 еукариотна клетка |
| Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 | 16 | 19 |
Пример 2. Получаване на бифидобактериален препарат
Бифидобактериалният препарат се получава чрез култивиране на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085.
За получаване на майчина закваска щамът се култивира в среда от MRSбульон, съдържащ литиев хлорид и L-цистеин, в анаеробни условия при температура 37°С в продължение на 18-24 h. С получената майчина култура, съдържаща биомаса от около 1x109 CFU/ml, се инокулира специално приготвена среда в промишлен ферментор за осъществяване на ферментационния процес на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085. Средата включва 8% сухо мляко, 2% суха суроватка, 2% лактоза, 0,5% дрождев екстракт, 0,5 % пептон казеин и 2% фруктоолигозахарид. Коригира се pH на средата до pH 6,8 и се стерилизира във ферментор при 120 °C за 15 минути. Охлажда се до температура 37°С и се инокулира с 5% майчина култура. Ферментацията се извършва при температура 37°С за 14-16 часа при непрекъснато продухване с въглероден диоксид. След достигане на pH 4,9-5,0 процесът на ферментация се преустановява чрез охлаждане с ледена вода и последващо коригиране на pH до pH 5,8-6,2.
Получената биомаса представлява течен бифидобактериален препарат, съдържащ не по-малко от 1x109 CFU/g живи клетки на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085.
За получаване на лиофилизиран бифидобактериален препарат, към ферментиралата среда, в съотношение 1:10, се добавя криопротектиращата среда с 10% захароза и 0,5% пектин и се дозира в промишлен лиофилизатор.
Сублимационното сушене протича при температура минус 28°С до минус 30°С при дебелина на слоя не повече от 1,2 cm. Вторичното сушене е при температура ЗО°С. След завършване на процеса вакуумът в сублимационната камера се компенсира с азот. Лиофилизираният бифидобактериален препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 се пакетира в инертна (азотна) атмосфера. Готовият продукт съдържа най-малко 5x109 CFU/g живи клетки на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 а водното му съдържание е 4% ± 1%.
Лиофилизираният бифидобактериален препарат може да се капсулира на машина за капсулиране, като преди това към него се добавя антислепващ агент, например микрокристална целулоза. Всяка капсула съдържа не по-малко от 2x109 CFU/g живи клетки на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085.
Пример 3. Клинично наблюдение на ефектите при приложение на бифидобактериален препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 като пробиотик
Цел на клиничното наблюдение е оценка на хиполипидемичния и антиинфламаторния имуномодулиращ ефект на бифидобактериалния препарат при пациенти с дислипопротеинемия и висок атеросклеротичен съдов риск или атеросклеротично заболяване, и изграждане на препоръки за приложението му при първична и вторична профилактика на сърдечно съдовите заболявания.
Клиничните изследвания са извършени в условията на двойно сляпо, плацебо контролирано клинично наблюдение при група от 60 пациенти, 42 жени и 18 мъже, с лека до умерена по степен дислипопротеинемия, респективно с повишени холестерол, липопротеини с ниска плътност и/или триглицериди. По време на клиничното наблюдение пациентите не приемат хиполипидемични медикаменти или други хранителни добавки, оказващи метаболитни ефекти. Възрастта на пациентите е между 18 и 75 години. Те са разпределени в две групигрупа от 30 пациенти, които приемат пробиотичния бифидобактериален препарат, условно наречена „пробиотик група“, и група от 30 пациенти, които приемат плацебо продукт, условно наречена „плацебо група“.
Клинично наблюдаваният продукт е бифидобактериален препарат от пробиотичен щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085, c количество на живи клетки не по-малко от 5х109 CFU/g. Бифидобактериалният препарат се приема под формата на капсули, всяка от които съдържа не по-малко от 2x109 живи клетки на пробиотичния щам.
Плацебо продуктът представлява капсула, която съдържа сухо мляко без бактериални клетки на пробиотичния щам Bifidobacterium, longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085.
Всички пациенти приемат 3 пъти дневно по 1 капсула, съответно с бифидобактериален препарат или плацебо продукт, в продължение на 30 дни като добавка към препоръчан хиполипидемичен диетичен режим при спазване на условията на двойно сляпо плацебо контролирано наблюдение. На всички пациенти е извършен клиничен преглед преди и след завършване на наблюдението. Двукратно, преди и след клиничното наблюдение, е взета венозна кръв на гладно за изследване на хематологични, биохимични, метаболитни, включително липидни и хормонални показатели, както и специфични маркери за оценка на съдов риск, вкл. цитокини. Наблюдаваните и оценявани параметри са пълен липиден профил, серумни нива на маркери за съдово възпаление (Среактивен протеин, цитокини TNFa, IL-Ιβ, IL-6, TGF- β), както и серумно ниво на инсулин на гладно и инсулиновата резистентност чрез HOMA-IR индекс.
Получените резултати са обработени статистически с методите на дескриптивна статистика, Wilcoxon Signed Ranks Test и параметричен Т-тест.
Анализът на групите пациенти показва сходно разпределение по пол и възраст. Пациенти в „пробиотик групата“ са 23 жени и 7 мъже, на възраст от 21 до 70 години, със средна възраст 54,37 ± 11,91 г. Пациенти в „плацебо групата“ са 19 жени и 11 мъже, на възраст от 22 до 75 години, със средна възраст 49,60 ± 13,79 г. Всички пациенти са с леки и умерени по степен липидни нарушения повишения в нивата на общия и LDL холестерола, понижение на HDL холестерола, повишение на триглицеридите. При всички е налице метаболитен синдром, наднормено тегло или затлъстяване, при две трети е налице артериална хипертония под терапевтичен контрол, при 35 пациенти е налице диабет тип 2 под терапия, при 29 пациенти има доказана стеатоза на черния дроб.
Всички пациенти приемат с много добър толеранс прилаганите капсули и нито един от тях не съобщава за нежелани ефекти. По време на клиничното наблюдение не са установени нежелани странични реакции.
3.1. Оценка на липидни показатели
На таблица 5 са представени в динамика промените в липидните показатели на пациентите в „пробиотик групата“.
Таблица 5
| Показател | Преди клинично наблюдение | След клинично наблюдение | р * |
| Общ холестерол, mM/L | 5,803 ±0,941 | 5,587 ± 0,973 | <0,05 |
| LDL холестерол, mM/L | 3,429 ±0,810 | 3,203 ± 1,000 | <0,05 |
| HDL холестерол, mM/L | 1,426 ±0,306 | 1,380 ±0,318 | н.с. |
| VLDL холестерол, mM/L | 0,950 ± 0,286 | 0,968 ± 0,284 | н.с. |
| Non HDL холестерол, mM/L | 4,375 ± 0,882 | 4,206 ± 0,923 | <0,05 |
| Триглицериди, mM/L | 1,560 ±0,653 | 1,600 ±0,672 | н.с. |
* статистическа достоверност
На таблица 6 са представени в динамика промените в липидните показатели на пациентите в „плацебо групата“.
Таблица 6
| Показател | Преди клинично наблюдение | След клинично наблюдение | Р |
| Общ холестерол, mM/L | 5,442 ± 0,900 | 5,543 ±0,834 | <0,05 |
| LDL холестерол, mM/L | 3,080 ±0,710 | 3,238 ±0,651 | <0,05 |
| HDL холестерол, mM/L | 1,316 ±0,362 | 1,297 ±0,347 | н.с. |
| VLDL холестерол, mM/L | 1,010 ±0,495 | 1,177 ±0,465 | <0,05 |
| Non HDL холестерол, mM/L | 4,076 ± 1,175 | 4,066 ± 1,012 | н.с. |
| Триглицериди, mM/L | 2,102 ±0,653 | 1,900 ± 1,001 | н.с. |
Обобщените резултати от изследване на липидните показатели показват, че в „пробиотик групата“, в сравнение с „плацебо групата“, се установява значимо благоприятно намаляване на общия холестерол с 5,57%, на LDL холестерола с 11,71%, а на Non HDL холестерола с 3,86%. VLDL холестеролът при „плацебо групата“ се увеличава с 0,167 mM/L, докато при „пробиотик групата“ увеличението е едва с 0,018 mM/L. Средните нива на HDL холестерола и на триглицеридите преди клиничното наблюдение са в таргетни нива и не търпят значима промяна след едномесечния прием на бифидобактериалния препарат.
Анализът на индивидуалните промени в липидните показатели на пациентите в „пробиотик групата“ показва, че при над половината от тях има благоприятни промени - общият холестерол намалява при 53,33% от тях, LDL холестеролът се понижава при 50% от пациентите, VLDL холестеролът намалява при 56,66% от пациентите и при 26,66% от пациентите се повишава HDL холестерола.
3.2. Оценка на други биохимични и метаболитни показатели
На таблица 7 са представени резултатите от други изследвани биохимични и метаболитни показатели при пациентите в „пробиотик групата“.
Таблица 7
| Показател | Преди клинично наблюдение | След клинично наблюдение | р * |
| Пикочна киселина, μΜ/L | 349,759 ± 114,510 | 337,690 ± 99,549 | <0,05 |
| Глюкоза, mM/L | 6,24 ±3,15 | 5,84 ± 1,78 | <0,05 |
| Инсулин, mE/L | 14,04 ±8,38 | 12,66 ±6,81 | <0,05 |
| HOMA-IR | 3,67 ± 2,47 | 3,43 ± 2,03 | <0,05 |
| AC AT, mE/L | 18,69 ±4,52 | 19,06 ±6,38 | н.с. |
| АЛАТ, mE/L | 26,34 ± 14,24 | 28,58 ± 15,18 | н.с. |
| ГГТП, mE/L | 33,25 ± 16,48 | 33,41 ± 15,94 | н.с. |
| CRP, mg/dL | 0,33 ± 0,39 | 0,35 ± 0,41 | н.с. |
* статистическа достоверност
На таблица 8 са представени резултатите от други изследвани биохимични и метаболитни показатели при пациенти в „плацебо групата“.
Таблица 8
| Показател | Преди клинично наблюдение | След клинично наблюдение | р * |
| Пикочна киселина, μΜ/L | 342,929 ± 90,25 | 338,864 ± 119,75 | н.с. |
| Глюкоза, mM/L | 5,540 ± 1,45 | 5,52 ±0,98 | н.с. |
| Инсулин, mE/L | 16,180 ± 17,59 | 13,06 ±8,36 | н.с. |
| HOMA-IR | 4,07 ± 4,42 | 4,44 ± 5,43 | н.с. |
| АСАТ, mE/L | 19,89 ± 6,42 | 18,89 ± 5,18 | н.с. |
| АЛАТ, mE/L | 27,25 ± 16,75 | 28,78 ± 14,60 | н.с. |
| ГГТП, mE/L | 35,18 ± 15,39 | 33,66 ± 14,47 | н.с. |
| CRP, mg/dL | 0,35 ±0,38 | 0,43 ±0,431 | н.с. |
* статистическа достоверност
Анализът показва, че в „пробиотик групата“ се постига статистически значимо намаление на състоянието на инсулинова резистентност, съпровождащо метаболитния синдром, като кръвната глюкоза намалява с 6,41%, базалната инсулинемия с 9,81% и HOMA-IR индекса с 6,53%, докато промените на тези показатели в „плацебо групата“ не са статистически значими. Тези резултати добавят много съществен благоприятен ефект от приложението на бифидобактериалния препарат, касаещ подобряване на състоянието на инсулинова резистентност. Подобни са промените при серумната пикочна киселина, като нейните стойности спадат значимо с 3,45% при пациентите от „пробиотик групата“, докато пациентите на „плацебо групата“ имат незначими промени в нивото на пикочната киселина. Проследените нива на серумните трансаминази, ГГТП и CRP са в референтни стойности и в двете групи и остават без съществени промени.
Нивата на С-реактивния протеин (CRP) изходно и в двете групи са в референтни граници и остават в такива, като не търпят значима промяна след 30 дневното приложение на бифидобактериалния препарат и плацебо продукта, (таблица 7 и таблица 8)
3.3. Оценка на нивата на цитокини и инфламаторни фактори
Резултатите от изследваните цитокини са представени на фигура 3, фигура 4, фигура 5 и фигура 6. Постигнатите промени в нивата им са статистически значими за „пробиотик групата“, като след 30 дневния прием на бифидобактериалния препарат се установява понижение на нивото на проинфламаторните цитокини TNFa с 6,56% (Фигура 3), IL-Ιβ с 3,34% (Фигура 4) и IL-6 със 7,60% (Фигура 5), както и повишение на антиинфламаторния цитокин TGF-βί с 14,87% (Фигура 6). Тези данни насочват към благоприятно повлияване на бифидобактериалния препарат върху проинфламаторния статус при метаболитен синдром чрез модулиране на цитокиновия профил.
Резултатите от проведеното клинично изпитване потвърждават категорично антиинфламаторния имуномодулиращ ефект на бифидобактериалния препарат - понижаване на TNFa, IL-Ιβ, IL-6 и умерено повишаване на ΤϋΡβΙ.
3.4. Оценка на преживяемостта на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 в гастроинтестиналния тракт
След клиничното наблюдение са взети фекални проби от 9 доброволци, пациенти от „пробиотик групата“, и са обработени по описаната процедура за изолиране на щама Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085. Колониите от род Bifidobacterium във фекалните проби, които показват щамовоспецифичния ДНК профил на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085, получен чрез метода на Пулсова електрофореза (Фигура 1), са средно 2,2x106 CFU/g.
Резултатите, представени в Таблица 9, показват високо ниво на преживяемост на щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 в гастроинтестиналния тракт.
Таблица 9
| Щам | среден брой колонии във фекални проби на доброволци, CFU/g, п=9 | минимален брой колонии във фекални проби на доброволци, CFU/g, п=9 | максимален брой колонии във фекални проби на доброволци, CFU/g, п=9 |
| Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 | 2,2x106 | 6,8х105 | 6,4x106 |
ПРИЛОЖЕНИЕ (ИЗПОЛЗВАНЕ) НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 и бифидобактериалния препарат от щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 притежават уникална комбинация от пробиотични свойства, подходяща за профилактика на атеросклероза и сърдечно-съдови заболявания, на възпалителни заболявания, както и за намаляване на диабетния риск.
РЕФЕРЕНЦИИ
1. Paineau D, Carcano D, Leyer G, Darquy S, Alyanakian M, Simoneau G,
Bergmann J, Brassart D, Bomet F & Ouwehand A (2008) Effects of seven potential probiotic strains on specific immune responses in healthy adults: a double-blind, randomized, controlled trial. FEMS Immunol Med Microbiol 53: 107-113
2. Hedin, M. Mullard, E. Sharratt et al., (2010). Probiotic and prebiotic use in patients with inflammatory bowel disease: a case-control study. Inflammatory Bowel Diseases, vol. 16, no. 12, pp. 2099-2108
3. Papadopoulos, J., Karpouzis, A., Tentes, J., Kouskoukis, C. (2014). Assessment of Interleukins IL-4, IL-6, IL-8, IL-10 in Acute Urticaria. J Clin Med Res. 6(2): 133-137
4. Belkaid Y, and Hand T. (2014) Role of the microbiota in immunity and inflammation. Cell, vol. 157, no. 1, pp. 121-141
5. O’Flaherty S. & Klaenhammer T. R., (2010) The role and potential of probiotic bacteria in the gut, and the communication between gut microflora and gut/host, Int. D. J. 20: 262 - 268
6. Patent KR102224072B1. Bifidobacterium longum subsp. longum having both abilities of reducing total cholesterol in serum and immune regulation and its application.
Claims (10)
- ПРЕТЕНЦИИ1. Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15, депозиран в НБПМКК под номер NBIMCC 9085 с щамово-специфичен ДНК профил с молекулни маси на ДНК фрагментите му в kbp: 199, 136, 112, 99, 93, 73, 61, 57, 51, 47, 38.7, 26, 22.2, 20.5, 17, 9, 14.2, 13.5, 11.6, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 6.8.
- 2. Щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085, съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че притежава едновременно хиполипидемична активност чрез директно редуциране на холестерола и чрез хидролиза на жлъчните соли, противовъзпалителна имуномодулираща активност, способност да намалява инсулиновата резистентност, висока адхезия спрямо епителни клетки и високо ниво на преживяемост в гастроинтестиналния тракт.
- 3. Бифидобактериален препарат, характеризиращ се с това, че съдържа щам Bifidobacterium longum ssp. longum 3/15 NBIMCC 9085 c брой живи клетки най-малко 1x109 CFU/g.
- 4. Бифидобактериален препарат, съгласно претенция 3, характеризиращ се с това, че проявява едновременно хиполипидемичен ефект, противовъзпалитен имуномодулиращ ефект и намаляващ инсулиновата резистентност ефект.
- 5. Бифидобактериален препарат, съгласно претенция 3, характеризиращ се с това че е под формата на лиофилизат или течна култура.
- 6. Използване на бифидобактералния препарат, съгласно Претенция 3, като пробиотик.
- 7. Използване на бифидобактерален препарат, съгласно Претенция 6, като хранителна добавка и/или в каквато и да е форма в храни за хора и животни.
- 8. Използване на бифидобактералния препарат, съгласно Претенция 6, като добавка към стартерна култура за производство на храни.
- 9. Използване на бифидобактералния препарат, съгласно Претенция 6, в състава на функционални продукти и/или фармацевтични препарати, предназначен за повлияване на здравословни показатели на хора или животни.
- 10. Бифидобактериален препарат, съгласно Претенция 3, за използване за профилактика и/или терапия на инфламаторни заболявания и/или атеросклероза и/или сърдечно-съдови заболявания и/или за намаляване на диабетния риск.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG113505A BG113505A (bg) | 2022-03-18 | 2022-03-18 | ЩАМ Bifidobacterium longum ssp. longum И БИФИДОБАКТЕРИАЛЕН ПРЕПАРАТ С ХИПОЛИПИДЕМИЧЕН ЕФЕКТ, ПРОТИВОВЪЗПАЛИТЕЛЕН ИМУНОМОДУЛИРАЩ ЕФЕКТ И С НАМАЛЯВАЩ ИНСУЛИНОВАТА РЕЗИСТЕНТНОСТ ЕФЕКТ |
| PCT/BG2023/000009 WO2023173181A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-03-16 | Bifidobacterium longum ssp. longum strain and a bifidobacterial preparation having hypolipidemic, anti-inflammatory immunomodulating and insulin resistance decreasing effects |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG113505A BG113505A (bg) | 2022-03-18 | 2022-03-18 | ЩАМ Bifidobacterium longum ssp. longum И БИФИДОБАКТЕРИАЛЕН ПРЕПАРАТ С ХИПОЛИПИДЕМИЧЕН ЕФЕКТ, ПРОТИВОВЪЗПАЛИТЕЛЕН ИМУНОМОДУЛИРАЩ ЕФЕКТ И С НАМАЛЯВАЩ ИНСУЛИНОВАТА РЕЗИСТЕНТНОСТ ЕФЕКТ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG113505A true BG113505A (bg) | 2023-09-29 |
Family
ID=86271756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG113505A BG113505A (bg) | 2022-03-18 | 2022-03-18 | ЩАМ Bifidobacterium longum ssp. longum И БИФИДОБАКТЕРИАЛЕН ПРЕПАРАТ С ХИПОЛИПИДЕМИЧЕН ЕФЕКТ, ПРОТИВОВЪЗПАЛИТЕЛЕН ИМУНОМОДУЛИРАЩ ЕФЕКТ И С НАМАЛЯВАЩ ИНСУЛИНОВАТА РЕЗИСТЕНТНОСТ ЕФЕКТ |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| BG (1) | BG113505A (bg) |
| WO (1) | WO2023173181A1 (bg) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3386523B1 (en) * | 2015-12-11 | 2019-10-09 | Alimentary Health Limited | Bifidobacterium longum for treating obesity and associated metabolic disorders |
| EP3673044A1 (en) * | 2017-08-25 | 2020-07-01 | University College Cork-National University of Ireland, Cork | Bifidobacterium longum for treating obesity and weight management |
| KR102224072B1 (ko) * | 2019-08-19 | 2021-03-10 | 주식회사 빙그레 | 면역 조절능력과 혈중콜레스테롤 감소 능력이 모두 뛰어난 비피도박테리엄 롱검 아종 균주 및 이의 용도 |
-
2022
- 2022-03-18 BG BG113505A patent/BG113505A/bg unknown
-
2023
- 2023-03-16 WO PCT/BG2023/000009 patent/WO2023173181A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023173181A1 (en) | 2023-09-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7390519B2 (en) | Probiotic Lactobacillus salivarius strains | |
| KR100406344B1 (ko) | 면역을 향상시키는 젖산균 | |
| KR101950187B1 (ko) | 건강상의 이익을 갖는 다중 박테리아 제조물: 항산화 효과, 콜레스테롤 농도의 감소, 항염증 면역조절 효과 및 안지오텐신-전환 효소를 저해하는 생물활성 펩타이드의 방출 | |
| US20030113306A1 (en) | Probiotic lactobacillus casei strains | |
| US20080311080A1 (en) | Bifidobacterium in the treatment of inflammatory disease | |
| US20060121015A1 (en) | Probiotic bifidobacterium strains | |
| CN116676225B (zh) | 一株具有安神助眠功效的鼠李糖乳杆菌lr-28菌株、发酵产物、嘉眠菌群组合剂及应用 | |
| CN111925961A (zh) | 一株植物乳杆菌Lp2及其应用 | |
| CN114642686B (zh) | 一种复合益生菌及其延缓衰老和抗氧化的作用 | |
| CN115927045B (zh) | 具有降胆固醇、缓解由高脂血症引起肝损伤功能的唾液乳杆菌069及其应用 | |
| CN116396890B (zh) | 用于防治结肠癌的植物乳杆菌zjuids15及其应用 | |
| CN108018248B (zh) | 一种具有调节抗生素引起的菌群结构紊乱的干酪乳杆菌 | |
| KR20230154400A (ko) | 락토바실러스 플란타럼 hom3201 균주 및 이의 생균 제제, 제조 방법 및 용도 | |
| CN114686405B (zh) | 一株具有减少脂肪和缓解高血糖，调节肠道免疫力的两歧双歧杆菌及其应用 | |
| CN114381395A (zh) | 一种植物乳杆菌zjufn1及其应用 | |
| CN112029676B (zh) | 一种有利于提高免疫力的益生菌组合及其应用 | |
| CN116747245B (zh) | 动物双歧杆菌乳亚种bx-245在抑菌和/或生产功能活性物质中的应用 | |
| CN116769654B (zh) | 一株动物双歧杆菌乳亚种及其应用 | |
| CN117286045B (zh) | 一株长双歧杆菌长亚种ks2及其在制备抗衰老药品中的应用 | |
| CN117448198A (zh) | 一种动物双歧杆菌乳亚种vb301及其应用 | |
| CN114736818B (zh) | 一种干酪乳杆菌lc-12发酵溶胞产物的制备方法及其应用 | |
| BG113505A (bg) | ЩАМ Bifidobacterium longum ssp. longum И БИФИДОБАКТЕРИАЛЕН ПРЕПАРАТ С ХИПОЛИПИДЕМИЧЕН ЕФЕКТ, ПРОТИВОВЪЗПАЛИТЕЛЕН ИМУНОМОДУЛИРАЩ ЕФЕКТ И С НАМАЛЯВАЩ ИНСУЛИНОВАТА РЕЗИСТЕНТНОСТ ЕФЕКТ | |
| RU2506308C1 (ru) | КОНСОРЦИУМ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ Lactobacillus rhamnosus И Lactobacillus plantarum ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА И ЗАКВАСКИ ПРЯМОГО ВНЕСЕНИЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ФЕРМЕНТИРОВАННОГО МОЛОКА И ФЕРМЕНТИРОВАННОГО СВЕКОЛЬНОГО СОКА | |
| KR102495246B1 (ko) | 체지방 감소 활성을 갖는 락토바실러스 헬베티쿠스 bcc-lh-04 및 이를 포함하는 조성물 | |
| CN117070425B (zh) | 提高益生菌在机体内代谢稳定性的工艺方法及益生菌冻干粉 |