BG107364A - Crf2 лиганди в комбинирана терапия - Google Patents

Crf2 лиганди в комбинирана терапия Download PDF

Info

Publication number
BG107364A
BG107364A BG107364A BG10736402A BG107364A BG 107364 A BG107364 A BG 107364A BG 107364 A BG107364 A BG 107364A BG 10736402 A BG10736402 A BG 10736402A BG 107364 A BG107364 A BG 107364A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
crf
receptor
receptor ligand
crfi
disorder
Prior art date
Application number
BG107364A
Other languages
English (en)
Inventor
Siew HO
Original Assignee
Bristol-Myers Squibb Pharma Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol-Myers Squibb Pharma Company filed Critical Bristol-Myers Squibb Pharma Company
Publication of BG107364A publication Critical patent/BG107364A/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/345—Spatial arrangement of the modifications having at least two different backbone modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications

Abstract

Изобретението се отнася до антисенз олигонуклеотиди, насочени срещу мРНК на кортикотропин релизинг фактор, подтип 2 (CRF2) рецептор, които значително намаляват експресията на CRF2 рецептори в мозъкана гризачи, до употребата им при in vivo проучвания на генната функция в централната нервна системаи при широк диапазон от психични нарушения, включително страхови, маниакално-натрапчиви, панически,посттравматичен стрес, фобии и депресия.

Description

ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Изобретението се отнася за фармацевтичен състав, съдържащ CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства; и за метод за лечение на нарушения свързани с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRF рецепторни лиганди на това изобретение са агонисти или антагонисти на CRF рецепторите. В допълнение на фармацевтичното прицелно място на изобретението, бидейки CRF рецепторите, настоящето изобретение е насочено също към фармацевтични агенти, които са прицелно насочени към CRF-f и CRF2 рецепторна мРНК.
ПРЕДШЕСТВУВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Усилени проучвания са установили важността на картикотропин релизинг фактор (CRF) за контролиране хипофизоадренокортикалната система и медииране поведенческите, автономните и имунни отговори спрямо стрес. Така, счита се, че този пептид участвува в патофизиологията на ефективните нарушения. Понастоящем са идентифицирани два 7-трансмембранни рецептори, CRFi и CRF2, които медиират ефектите на CRF. Двата рецептора са широко експресирани в мозъка, въпреки че има малко значимо припокриване между областите с най-висока експресия и двата рецепторни под-типове. Съобщено е, че трансгенни мишки, които свръхекспресират CRF, проявяват повишение на анксиогенното (страх-предизвикващо) поведение (Stenzel-Poore et al., Overproduction of corticotropin-releasing factor in transgenic mice: A genetic model of anxiogenic behavior. J.Neuroscience 14, 2579-2584, 1995). От особено значение е въпросът дали тези анксиогенни отговори са медиирани с CRF действие върху CRFj рецептори, CFR2 рецептори или и върху двата.
Кортикотропин-релизинг фактор (CRF) антагонисти са споменати в U.S.Pat. Nos. 4,605,642, 5,874,227, 5,962,479, 5,063,245, 5,861, 398 и 6,083,948, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост. Няколко публикувани патентни заявки също представят съединения антагонисти на кортикотропин релизинг фактор, измежду такива са DuPont Merck РСТ заявка US94/11050, Pfizer WO 95/33750, Pfizer WO 95/34563, Pfizer WO 95/33727 и U.S.Pat. No. 5,424,311. Заболявания, които са разглеждани като лечими с CRF антагонисти, са обсъдени в U.S. Pat. No. 5,063,245 и Pharm.Rev., 43:425-473 (1991).
Постулирана е роля на CRF в етиологията и патофизиологията на болестта на Alzheimer, болестта на Parkinson и Huntington’oea болест, анорексия нервоза, прогресива супрануклеарна парализа и амиотрофична латерална склероза, тъй като те са свързани с дисфункцията на CRF неврони в централната нервна система (за обзор виж W.B. Dr Souza, Hosp. Practice 23:59 (1988); G.N. Smagin,
L.A. Howell, D.H.Ryan, E.B. De Souza and R.B.S.Harris Neuroreport 9, 1601-1601, 1998; и J.PharmacoI.Exp. Therap., 293, 700-806, 2000;]. U.S. Patent No. 6,051,578, който е включен тук чрез цитат в неговата цялост, представя (CRF) рецепторен антагонист, който е полезен при лечение и превенция на травма на главата, травма на гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия като мозъчна хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от Alzheimer тип, мултиинфарктна деменция, амиотрофична латерална склероза, химични зависимости и пристрастрявания (например, зависимост и от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и хипогликемия.
U.S.Patent No. 6,001,807, който е включен тук чрез цитат в неговата цялост, представя (CRF) рецепторен антагонист, който е полезен при лечение и превенция на повръщане. Противоповръщащата активност на CRF-антагонистите е указана с проведени експерименти, например както е описано от Ueno et al, Life Sciences 41: 513-518 (1987); и Rudd et al., British Journal of Pharmacology 119: 931-936 (1996).
Също, известен брой публикации представят CRF! рецепторни С антагонисти, например Chen et al., J.Med.Chem. 39: 4354-4357 (1996); Chen et al., J.Med.Chem. 40(11) 1749-1754 (1997); Lundkvist et al., Eur. J.Pharmacology 309, 198-200, 1996; и Mansbach et al.,
Eur.J.Pharmacology 323, 21-26, 1997, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост. По-специално, CRFt рецепторният лиганд DPC904 е представен в Gilligan et al., BioOrganic Medicinal Chem. 8, 181-189, 2000, която е включена тук чрез цитат в нейната цялост.
Също, CRF2 рецепторни лиганди, например sauvagine, урокортин и други CRF2 пептиди, са представени в Но et al., Mol.Brain Res. 6, 11, 1998; Spiess et al., Trends Endocrinology and Metabolism 9, 140-145, 1998 Molecular Properties of the CRF Receptor; и D.P.Behan et al., w Mol.Psychiatry 1, 265-277, 1996, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост.
Докато е показано, че блокада на CRFi рецептори със селективни антагонисти предизвиква анксиолитични (намаляващи страха) и антидепресивни ефекти при животни, функцията на CRF2 рецепторите е по-слабо проучена. In situ хибридизация и експерименти с рецепторна авторадиография показват, че рецепторът е локализиран главно в лимбичната и хипоталамичната области на мозъка, което насочва за роля при медииране на аксиогенните и анорексични ефекти на CRF. Наскоро, е идентифициран един СРР2-селекгивен антагонист (AntiSauvagine-30) (Gulyas J. et al., (1995) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92,
10575-579). Освен това, идентифициран е Астресин (Astressin) един пептид, който има двойна CRF-i и CRF2 активност (Ruhmann, A., Bonk, I., Lin, С. R., Rosenfeld, M.G. & Spiess, J. (1998) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 95, 15264-15269). В отсъствие на специфични агонисти и антагонисти за този рецептор, антисенз супресия на CRF2 рецепторната експресия, може да осигури данни за ролята на рецептора в нормалната физиология.
Антисенз олигонуклеотидите са къси олигонуклеотиди (обикновено от около 15 до около 25 нуклеотиди дължина), които са планирани да бъдат комплементарни на част от една мРНК молекула, която е от С интерес. Хибридизацията на един антисенз олигонуклеотид с неговото мРНК прицелно място чрез Watson-Crick базови-двойки, инициира каскада от събития, които завършват с олигонуклеотиднасочена деградация на прицелната мРНК молекула. Пряко последствие от тази мРНК деградация е потискането синтезата на кодирания белтък. Проучвания проведени в присъствието на значително понижени нива на прицелен белтък, могат да разкрият неговата функция. В отсъствието на нискомолекулни лиганди (както е в случая с CRF2 рецептора), антисенз олигонуклеотидите могат да бъдат изключително полезно средство за белтъчни функционални изследвания. В допълнение, те могат да бъдат използувани за ** диференциране между близко свързани членове на едно семейство белтъци (както е при CRFi и CRF2) по начини, които често не са възможни с нискомолекулни лиганди.
Дизайнът и подборът на мощни антисенз последователности не е тривиално действие. Антисенз олигонуклеотидите широко и непредсказуемо варират в тяхната активност, тъй като техните мРНК прицелни места имат значима вторична и третична структура, което прави големи части от мРНК молекулите недостижими за хибридизация. Само 20-35% от антисенз последователностите имат значима инхибиторна активност (50% или повече). Използувайки една молекулярна техника, ние създадохме (Но et al., Potent antisense ologonucleotides to the human multidrug resistance-1 mRNA are rationally selected by mapping RNA-accessible sites with oligonucleotide libraries. Nucl.Acids Res. 24, 1901-1907, 1996; Ho et al., Mapping of RNA accessible sites for antisense experiments with oligonucleotide libraries. Nature Biotech. 16, 59-63, 1998), множествени достъпни области в CRF2 рецепторна мРНК, които са идентифицирани. Антисенз олигонуклеотиди насочени срещу тези достъпни места инхибират свързването на 125l-sauvagine с CRF2 рецептори in vivo най-малко с 50%.
Съобщени са две антисенз проучвания, които изследват С функцията на CRF2 рецептори. Двете проучвания не намират данни за участието на CRF2 рецептор в медииране на анксиогенните ефекти на CRF. Обаче, в едно проучване (Heinrichs et al., Corticotropin-releasing factor CRF! but not CRF2, receptors mediate anxiogenic-like behavior. Reg.Peptides 71, 15-21, 1997), CRF2 рецептори са били намалени само с 15-20% и използуваните олигонуклеотиди са предизвикали токсични ефекти (значима загуба на тегло), които биха могли да объркат поведенческите експерименти. Малко подробности са предоставени от второто съобщение (Montkowski et al., Biol.Psychiatry 39, 566,1996; и Liebsch, G., Landgraf, R., Engelmann,
M., Lorscher P. & Holsboer, F. (1999) J.Psychiatric Res. 33,153-163.
** Обаче, в едно изследване прилагащо CRF2 антисенз олигонуклеотиди, което е описано в Международна патентна заявка No. PCT/US00/0819 и US Patent Application No. 09/481981, които са включени тук в тяхната цялост, ние открихме, че потискането на CRF! рецепторната експресия предизвиква анксиолитични ефекти при животни.
Освен това, ние открихме, че когато CRF2 рецепторни антисенз олигонуклеотиди са въведени едновременно с CRF! рецепторен лиганд, анксиолитичният ефект е силно повишен.
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящето изобретение се отнася до метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства.
В едно изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, С който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRFi лиганд рецептор е агонистичен на CRFi рецептора.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRFi лиганд рецептор е антагонистичен на CRFi рецептора.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRF2 лиганд рецепторът е агонистичен на CRF2 рецептора.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рцепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRF2 лиганд рецептор е антагонистичен на CRF2 рецептора.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепрорна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или пролекарства, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е С антисенз олигонуклеотид, състоящ се от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или пролекарства, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци , подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитозин фосфоротиоат, 5-(1-пропинил)урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’-фосфорамидат и полиамид нуклеинови киселини и затворени нуклеинови киселини, притежаващи формулата:
ИЛИ
където В е пуринова или пиримидинова база.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRF-ι рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или пролекарства, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци, където олигонуклеотидът е с дължина около 15 до около 25 нуклеотида.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение, свързано с CRF-ι и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, с който се нуждае От такова лечение, терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид или техни фармацевтично приемливи соли или пролекарства, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 60-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци на антисенз олигонуклеотидите са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или пролекарства, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, включващ следните последователности:
(a) TGT ACG TGT TGC GCA AGA GG;
(b) GGT GGG CGA TGT GGG AAT G;
(c) GGATGAAGGTGGTGATGAGG; и (d) TGA CGC AGC GGC ACC AGA CC.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или пролекарства, където нарушението е психично нарушение.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на психично нарушение, свързано с CRF! и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се ** въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където психичното нарушение е подбрано от група състояща се от страхово, маниакално-натрапчиво нарушение, панически състояния, пост-травматично стресово нарушение, фобии, анорексия нервоза и депресия.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRF! рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където нарушението е подбрано от група състояща се от травма на главата, травма на гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия като церебрална хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от типа на Alzheimer, мултиинфаркгна деменция, амиотрофична латерапна склероза, химични зависимости и С пристрастявания (например, зависимости от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и хипогликамия.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRF1 рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където въвеждането на CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е едновременно.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод w за лечение на нарушение, свързано с CRF! и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където въвеждането на CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е последователно.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че ефективно количество CRF!
рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд се поставят в контакт със състав, съдържащ CRFi рецептор и CRF2 рецептор.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на нарушение, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че ефективно количество от CRF! рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид се поставят в контакт със състав, съдържащ CRFi рецептор, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е
антисенз олигонуклеотид съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение се отнася за лечение на нарушение, свързано с CRF2 рецепторна активност, характеризиращо се с поставяне в контакт на ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд със състав съдържащ CRF2 рецептор.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя фармацевтичен състав, съдържащ CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и фармацевтичен носител.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя фармацевтичен кит за лечение и превенция на нарушение свързано с CRF! и CRF2 рецепторна активност, споменатият кит съдържа множество отделни опаковки, където най-малко една от споменатите опаковки съдържа CRF! рецепторен лиганд, или негова фармацевтично приемлива сол или про-лекарство и поне една друга от споменатите опаковки, съдържа CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или негови фармацевтично приемливи соли или пролекарства, и споменатите опаковки по избор съдържат фармацевтичен носител.
В друго изпълнение, изобретението предоставя съединение, притежаващо CRFi рецепторна лигандна активност и CRF2 рецепторна лигандна активност за употреба при лечение на психични нарушения.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя антисенз олигонуклеотиди, насочени срещу мРНК на CRF2 рецептор, които съществено понижават експресията на CRF2 рецептори в мозъка на гризачи. Потискането на CRF2 рецепторната функция, използувайки тези олигонуклеотиди, предизвиква значителни анксиолитични (намаляващи страха) ефекти у животни. Тези резултати предоставят първите функционални данни, че CRF2 рецепторът играе важна роля при медииране на анксиогенните С (предизвикващите страх) ефекти на контикотропин релизинг фактора. Освен това, данните демонстрират потенциала на CRF2 рецепторни антагонисти, включително нискомолекулни, да бъдат ефективни при лечение на широк диапазон от психични нарушения, включително страхови, маниакално-натрапливи нарушения, панически нарушения, пост-травматично стрес нарушение, фобии и депресия.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя метод за лечение на психични нарушения, включително, но не ограничено до, страхово състояние, маниакално-натрапливо нарушение, панически нарушения, пост-травматично стрес нарушение, фобии и депресия у пациент, характеризиращ се с това, w че се въвежда на пациент, нуждаещ се от такова лечение, на терапевтично ефективно количество фармацевтичен състав, включващ антисенз олигонуклеотиди, съдържащи химерни олигонуклеотиди, където 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфортиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
В следващо изпълнение, изобретението предоставя метод за подбор на съединения, за определяне активността за лечение на психични нарушения, включващи, но без да се ограничават до, страх, маниакално-натрапливо нарушение, панически нарушения, посттравматично стресово нарушение, фобии и депресия.
В следващо изпълнение, изобретението предоставя антисенз олигонуклеотиди, съставени от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
КРАТКО ОПИСАНИЕ НА ФИГУРИТЕ
Избрани са някои изпълнения на изобретението с цел илюстрация на описанието, без да се предвижда това да ограничава обсега на изобретението. Тези изпълнения на изобретението са представени в придружаващите фигури описани по-долу.
с
Фигура 1а: Схема за подбор на антисенз последователност.
Фигура 1Ь: Идентичност на химерни, полу-случайни олигонуклеотидни библиотеки.
Фигура 2а: Структура на най-често използуваните нуклеотидни аналози при антисенз проучвания; промяната на фосфоротиоат предизвиква токсични ефекти в централната нервна система (ЦНС).
Фигура 2Ь: Структура на модифицирани олигонуклеотиди и аналози, които запазват мощността, но елиминират токсичността, когато са включени в олигонуклеотиди за приложения при ЦНС.
Фигура 2с: Една от няколко възможни конфигурации за химерни ** олигонуклеотиди.
Фигура За: Ефект на антисенз олигонуклеотиди върху вцепеняващо поведение при плъхове.
Фигура ЗЬ: Инхибиране на 125l-sauvagine свързване в латералния септум на антисенз третирани плъхове при тест с вцепеняване.
Фигура 4а: Ефект от третиране с антисенз върху поведението на гризачи в повдигнат плюс лабиринт.
Фигура 4Ь: Инхибиране свързването на 125l-sauvagine в латералния септум на антисенз третирани плъхове в повдигнат плюс лабиринт тест.
Фигура 5: Ефект на antisauvagine-ЗО върху вцепеняващо поведение при плъхове.
Фигура 6: Ефект от комбиниране на CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид с CRF! антагонист върху вцепеняващо поведение при плъхове.
ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Не всеки антисенз олигонуклеотид е способен на мощна инхибиторна активност и олигонуклеотиди прицелващи CRF2 рецепторна мРНК не са изключение от това правило. Идентификацията на активни антисенз последователности е един от най-важните параметри, които определят успеха на антисенз експреиментите. Факторите, които повлияват мощността на антисенз последователности са комплексни и слабо разгадани; затова само 2035% от тестираните антисенз олигонуклеотиди са достатъчно активни да произвеждат 50% инхибиторен ефект върху синтезата на прицелен белтък.
Селекцията на активни антисенз последователности е била главно емпирична и много продължителна. Създаден е метод за локализиране места в една мРНК молекула, които са най-достъпни за хибридизация с антисенз олигонуклеотиди (Но et al., 1996; Но et al.,
1998). Това е осъществено (Фигура 1а) чрез хибридизация на сонда от РНК транскрипт с библиотека от химически синтезирани, полуслучайни олигонуклеотиди (Фигура 1Ь). Когато са смесени заедно, достъпните области на РНК трябва да хибридизират с комплементарни последователности, които се намират в рамките на библиотеката. Тези области впоследствие са идентифицирани, като е използувана рилобнуклеаза Н (РНаза Н), която катализира хидролитичното разцепване на фосфодиестерния гръбнак само на РНК веригата на хибридния РНК-ДНК дуплекс. Секвенирането на получените РНК фрагменти трябва да позволи идентифициране на онези области в дадена мРНК последователност, които могат да служат като места за прицелно насочване на антисенз олигонуклеотиди. Прилагане на този РНК-картиращ метод към РНК транскрипт, съдържащ цялата кодираща последователност на CRF2 рецепторна мРНК, води до идентификацията на множествени РНК места, които са достъпни за хибридизация с антисенз олигонуклеотиди (Таблица 1).
ТАБЛИЦА 1 ДОСТЪПНИ МЕСТА
А
В
С
D
Е
F
G
Н
I
J
К
ЛОКАЛИЗАЦИЯ
315-338
417-455
608-625
677-731
763-813
859-882
911-941
1018-1031
1161-1185
1238-1258
1385-1417
Таблица 1: Места в CRF2 рецепторната мРНК, които са достъпни за хибридизация на олигонуклеотиди. Информация за последователностите е с цитат за RNU16253.GB_RO (GenBank последователност, ключов номер U16253).
Антисенз олигонуклеотиди с дължина 15 до 25 нуклеотиди могат да бъдат планирани чрез прицелно насочване на 5’-края на антисенз олигонуклеотида към достъпни места, определени от данните предоставени в Таблица 1. Например, антисенз олигонуклеотидът използуван в описаните по-долу проучвания, е бил една 20 нуклеотидна последователност (TGA CGC AGC GGC ACC AGA СС) насочена прицелно към позиции 758-777 на достъпно място Е.
В тестове на базата на клетки, антисенз последователности насочени срещу някои от тези места са инхибирали CRF2 рецепторната синтеза с най-малко 50%. Това е определено чрез CRF2 радиолиганд-свързващ тест използуващ 125l-sauvagine. Антисенз инхибирането е било специфично по отношение на последователността, тъй като 4-базови погрешни сдвоявания на антисенз олигонуклеотидите предизвикват само минимални намаления на 125l-sauvagine свързването. В допълнение, тези С последователности също потискат CRF2 рецепторната синтеза in vivo.
Двете химични версии на олигонуклеотиди, които са най-често използувани при in vivo експерименти в ЦНС са 2’-деоксирибонуклеотид фосфодиестер олигонуклеотиди и 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатни олигонуклеотиди (Фигура 2а). Когато са идентични по химична структура с двойноверижна ДНК в гени, едноверижните фосфодиестерни олигонуклеотиди обаче са чувствителни на екзонуклеолитична и ендонуклеолитична деградация, с полу-живот в серум 20 минути. Дори в “привилегирована” околна среда на мозъка, с неговите по-ниски нива ** на нуклеазна активност, фосфодиестерните олигонуклеотиди са деградирани, макар и по-бавно. Фосфоротиоатни олигонуклеотиди, при които една от не-образуващите мост фосфатни кислородни молекули е заменена със сяра, са далеч по-резистентни на разграждащи ензими. В експерименти със серум и тъканна култура, фосфоротиоатните олигонуклеотиди имат полу-живот за повече от 12 часа и анализ на фосфоротиоати, екстрахирани от мозък на плъх, показва, че тези олигонуклеотиди са химически интакгни за най-малко 24 часа. Обаче, въвеждането на тези олигонуклеотиди в мозъка предизвиква химически-свързани, но неспецифични по отношение на последователността токсични ефекти. Напоследък има съобщения за фебрилни отговори, индукция на възпалителни медиатори, загуба на тегло и различни клинични прояви. В наши експерименти, CRF2 антисенз последователности, съдържащи фосфортиоат са предизвикали обширни инхибиторни ефекти върху CRF2 рецептора, но предизвикват значителна загуба на тегло (сходно с доклада на Heinrichs) и патофизиологични симптоми у третираните животни. Тези ефекти са наблюдавани при много различни последователности, антисенз както и при контролни последователности, изключвайки възможността те да са прицелно свързани ефекти.
Стратегии, които редуцират общото съдържание на фосфоротиоат в тези олигонуклеотиди, са били най-ефективни при подържане олигонуклеотидното действие, като нарушават тези токсични ефекти. Химерни олигонуклеотиди където до 60% от 2’-деоксирибонуклеотидните фосфоротиоатни остатъци са били заменени с модифицирани рибонуклеотидни фосфодиестерни остатъци (виж Фигура 2Ь), елиминират загубата на тегло и всички други признаци на токсичност. Останалите 40% 2’-деоксирибонуклеотидни фосфоротиоатни остатъци присъствуват в съседно пространство за улесняване РНаза Н разцепване на прицелните мРНК видове (Фигура 2с). Включването на други химични аналози като 5-пропинил-2’-деоксицитидин, 5-пропинил-2’-деоксиуридин и 5метил-2’-деоксицитидин (но с фосфоротиоатни връзки, Фигура 2Ь) също значително намаляват тези токсични ефекти. В допълнение към наличието на намалена токсичност, тези модифицирани нуклеотидни остатъци са по-резистентни на клетъчно нуклеазно разграждане в сравнение с 2’-деоксирибонуклеотидните фосфодиестерни остатъци.
Отсъствието на функционални промени, в резултат на малки антисенз инхибиторни ефекти, често води до резултати, които не могат да бъдат интерпретирани. Това се дължи на несигурността, от това дали експериментът дава истински отрицателни резултати или дали антисенз инхибирането е недостатъчно да разкрие една функционална промяна. В допълнение към антисенз последователността, размерът на антисенз инхибиторните ефекти е повлиян от продължителността на антисенз третирането и неговото отношение към полу-живота на прицелния белтък. Докато полуживотът на CRF2 рецептора е неизвестен, полу-животът на други 7трансмембранни рецептори в мозъка на гризачи (на които CRF2 рецепторът е техен член) е от порядъка на 2-3 дни. Максимални инхибиторни ефекти обикновено са наблюдавани след антисенз третиране за най-малко 3 белтъчни полу-живота. Докато въвеждането на CRF2 антисенз за 5 дни предизвиква 40-50% инхибиране на рецептора, повишението продължителността на дозирането за 9 дни С води до 70-80% инхибиторен ефект на рецепторното свързване. В допълнение, количествена in situ хибридизация открива сравними понижения на CRF2 рецепторната мРНК. Четири-базовият погрешно сдвоен контролен олигонуклеотид предизвиква минимални понижения на рецепторното и мРНК свързване при тези условия. Следователно, за разлика от Heinrichs et al., чийто CRF2 антисенз олигонуклеотид предизвиква само 15-20% CRF2 рецепторна редукция, придружена със значима загуба на тегло у третираните животни, ние оптимизирахме антисенз реагентите за изследване на CRF2 рецепторна функция. Подбор на антисенз последователност, прилагайки метод за РНК картиране, комбиниран с оптимизирани С w нуклеотидни химични отнасяния, има за резултат по-мощни антисенз последователности, които когато се въвеждат у гризачи за 8-10 дни, предизвикват голямо (около 70%) понижение на CRF2 рецепторното свързване.
CRF2 антисенз олигонуклеотиди са въвеждани интрацеребровентрикуларно за да се насочват прицелно към латералния септум, една мозъчна област, съдържаща високо ниво на CRF2 рецептор и мРНК. Латералният септум е част от лимбичната мозъчна област, известна с нейното участие в модулирането на страха и емоциите. Плъхове третирани с физиологичен разтвор, антисенз и погрешно-сдвоени контролни олигонуклеотиди, са тестирани в два различни поведенчески модели на тревожност. Гризачи проявяват характерно вцепеняващо поведение, когато изпитват страх и тревожност. При вцепеняващия модел на тревожност, такова поведение се индуцира чрез излагане на кратки електрически фут-шокове. Когато такива плъхове са върнати в шоковата кутия след няколко дни на повлияване, те проявяват вцепеняващо поведение дори в отсъствие на последващо излагане на шок. Въвеждане на анксиолитични лекарствени средства като бензодиазепини и селективни инхибитори на серотониновото обратно поглъщане, ограничава продължителността на вцпеняване, когато предварително третирани със шок животни са върнати в шоковата кутия. В експериментите с антисенз, третирането с олигонуклеотиди започва след два последователни дни на третиране с фут-шок. Два часа след последното въвеждане на олигонуклеотид на 8-ия ден от третирането, плъховете са върнати в шоковата кутия и са наблюдавани за 10 минути. В тази част от експеримента, която изпитва ефекта на фармакологичния агент върху условни страхове, антисенз олигонуклеотидът, но не неговата погрешно сдвоена контрола, намалява продължителността на вцепеняване с 50% (Фигура За). След този начален 10-минутен период, плъховете са получавали два кратки фут-шокове и са наблюдавани за още 10 минути. Отново, антисенз-третираните плъхове проявяват 50% понижение продължителността на вцепеняване в сравнение с третираните с физиологичен разтвор, или с погрешно сдвоен олигонуклеотид животни (Фигура За). Тези данни представляват първата демонстрация на функция при CRF2 рецептори. Рецепторен радиоавтографски анализ на септалната мозъчна област при тези плъхове показва 70% намаление на 1251sauvagine свързване с CRF2 рецептори у третирани с антисенз плъхове (Фигура ЗЬ). Следователно, инхибирането на CRF2 рецептори води до понижени нива на тревожност, което показва, че анксиогенните ефекти на CRF пептида са медиирани не само чрез CRF! рецептори, но също и чрез CRF2 рецептори.
Освен това, силно потискане на CRF2 рецептори предизвиква важни функционални последствия, които могат да не бъдат видими при ниски нива на CRF2 рецепторно инхибиране. Тези резултати включват CRF2 рецептора при модулиране отговорите на страх и тревожност.
Повдигнат плюс лабиринт (ЕРМ) е широко използуван за определяне на анксиолитични и анксиогенни лекарствени ефекти. Апаратът се състои от един +- - виден лабиринт, повдигнат на 50 см над пода. Две противоположни рамена са отворени и изложени на заобикалящата среда, докато другите две рамена са затворени с черни плексигласови страни. При гризачи, излагането на ЕРМ предизвиква избягване на конфликт при приближаване, което общо кара животното да пребивава повече от времето в затворените рамена на лабиринта. Такива избягвания на конфликт при приближаване се считат, че са важни компоненти в основата на появата на някои типове човешки страхови нарушения. Важно е, че лекарствени средства предписвани понастоящем за лечение на страхови разстройства, са ефективни за предизвикване на анксиолитични отговори у гризачи, тестирани в ЕРМ.
При антисенз експеримента, плъховете са третирани за 8 дни и след това са тестирани в ЕРМ 2 часа след последната инжекция с олигонуклеотид. Плъхове третирани с антисенз олигонуклеотид пребивават значително повече време в отворените, изложени рамена на лабиринта (Фигура 4а). Такова поведение е показателно за понижено състояние на тревожност. Третираните с погрешно сдвоен олигонуклеотид плъхове, не бяха статистически различни от третираните с физиологичен разтвор плъхове. Свързването на 125l-sauvagine с CRF2 рецептори в латералния септум е понижено с 60% от антисенз олигонуклеотида в този експеримент (Фигура 4Ь).
Анализ на сумата от влизанията в отворените и затворени рамене на лабиринта разкрива отсъствие на разлики между трите третирани групи (данните не са представени). В допълнение, при теста за локомоторна активност, всичките три третирани групи бяха отново без различия (данните не са представени). Общо, тези данни показват, че моторната функция на плъховете не е значимо променена от третирането с олигонуклеотид.
Показано бе, че антисенз инхибирането на 7-трансмембранни рецепторни системи предизвиква физиологични ефекти, които са сходни с тези получени чрез рецепторна блокада със селективни нискомолекулни антагонисти (Но et al., 1998). Нашите CRF2 антисенз резултати следователно предполагат, че в допълнение на антисенз супресията на CRF2 рецептори, блокадата на този рецептор с нискоС молекулни лиганди, трябва също да има за резултат анксиолитични ефекти. Следователно, нискомолекулни или пептидни антагонисти на CRF2 рецептори, трябва да са ефективни анксиолитични агенти с благоприятна терапевтична стойност.
Терминът “Фармацевтично приемливи про-лекарства” както тук е използуван, означава такива про-лекарства от съединенията, които са полезни съгласно настоящето изобретение, които са в обсега на добрата медицинска преценка, подходящи за приложение в контакт с тъканите на човека и по-нисши животни с неподходяща токсичност, дразнене, алергичен отговор и подобни, съизмерим с едно приемливо полза/риск отношение, и ефективни за тяхната предвидена употреба, w както и цвитерйонните форми, където е възможно, на съединенията на изобретението. Терминът “про-лекарство” означава съединения, които бързо се трансформират in vivo за да дадат съединението източник, например чрез хидролиза в кръвта. Функционални групи, които могат бързо да бъдат трансформирани, чрез метаболитно разцепване, in vivo образуват клас от групи, реактивни с карбоксилната група на съединенията на това изобретение. Те включват, но не се ограничават до такива групи като алканоил (като ацетил, пропионил, бутирил и подобни), незаместен и заместен ароил (като бензоил и заместен бензоил), алкоксикарбонил (като етоксикарбонил), триалкилсилил (като триметил- и триетилсилил), моноестери образувани с дикарбоксилни киселини (като сукцинил) и подобни. Поради леснината, с която тези метаболитно отцепвани групи на съединенията, полезни съгласно това изобретение, са отцепвани in vivo, съединенията носещи такива групи действуват като про-лекарства. Съединенията носещи метаболитно отцепвани групи имат предимството, че те могат да проявяват подобрена бионаличност, в резултат на повишена разтворимост и/или ниво на абсорбция, придадено от съединението източник благодарение наличието на метаболитно отцепваща се група. Основно обсъждане на про-лекарства е предоставено в следните: Design of Prodrugs, С H.Bundgaard, ed., Elsevier, 1985; Methods in Enzymology, KWidder et al., Ed., Academic Press, 42, p.309-396, 1985; A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H.Bundgaard, ed., Chapter 5; “Design and Application of Prodrugs” p. 113-191, 1991; Advanced Drug and Delivery Reviews, H.Bundgard, 8, p.1-38, 1992; Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, p.285, 1988; Chem.Pharm.Bull., N.Nakeya et al., 32, p.692, 1984; Pro-drugs as Novel Delivery Systems, T.Higuchi and V.Stella, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, and Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B.Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, които са включени тук чрез цитат.
j* ** Терминът “Фармацевтично приемливи соли” означава относително не-токсични, адиционни соли с неорганични и органични киселини, и адиционни соли с основи, на съединения на настоящето изобретение. Тези соли могат да бъдат получени in situ по време на крайното изолиране и пречистване на съединенията. По-специално, адиционните соли с киселини могат да бъдат получени чрез отделено взаимодействие на пречистеното съединение в неговата свободна базична форма с подходяща органична или неорганична киселина и изолиране на получената сол. Примерни адиционни соли с киселини включват хидробромидни, хидрохлоридни, сулфатни, бисулфатни, фосфатни, нитратни, ацетатни, оксалатни, валератни, олеатни, палмитатни, стеаратни, лауратни, боратни, бензоатни, лактатни, фосфатни, тозилатни, цитратни, малеатни, фумаратни, сукцинатни, тартаратни, нафтилатни, мезилатни, глюкохептонатни, лакгиобионатни, сулфаматни, малонатни, салицилатни, пропионатни, метилен-бис-Ь-хидроксинафтоатни, гентизатни, изетионатни, ди-ртолуоилтарта ратни, метан-сулфонатни, етансулфонатни, бензолсулфонатни, р-толуолсулфонатни, циклохексилсулфаматни и кинатлаурилсулфонатни соли и подобни. (Виж, например S.M.Berge et al., “Pharmaceutical Salts,” J.Pharm.Sci., 66: p.1-19 (1977), което e включено тук чрез цитат). Адиционни соли с основи могат да бъдат получени чрез отделено взаимодействие на пречистеното съединение и изолиране на получената сол. Адиционни соли с основи включват фармацевтично приемливи метални и аминни соли. Подходящи метални соли включват натриеви, калиеви, калциеви, бариеви, цинкови, магнезиеви и алуминиеви соли. Подходящи адиционни соли с неорганични основи са получени от метални основи, които включват натриев хидрид, натриев хидроксид, калиев хидроксид, калциев хидроксид, алуминиев хидроксид, литиев хидроксид, магнезиев хидроксид, цинков хидроксид. Подходящи адиционни соли с аминни бази са получени от амини, които имат достатъчно базичен характер за да образуват стабилна сол, и предпочитано включват такива амини, които често се използуват в медицинската химия, поради слабата им токсичност и приемливост за медицинска употреба, амоняк, етилендиамин, N-метил-глюкамид, лизин, аргинин, орнитин, холин, Ν,Ν’-дибензилетилендиамин, хлоропрокаин, диетаноламин, прокаин, N-бензилфенетиламин, диетиламин, пиперазин, трис(хидроксиметил)-аминометан, тетраметиламониев хидроксид, триетиламин, дибензиламин, ефенамин, дехидроабиетиламин, N-етилпиперидин, бензиламин, тетраметиламоний, тетраетиламоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, етиламин, базични аминокиселини, например, лизин и аргинин и дициклохексиламин и подобни.
Терминът “CRF2 антисенз олигонуклеотиди”, както тук е използуван, се отнася за къси олигонуклеотиди (обикновено от около 15 до около 25 нуклеотиди дължина), които са планирани да бъдат комплементарни на част от една мРНК на CRF2 рецептора. Хибридизация на един антисенз олигонуклеотид с негово мРНК прицело място, чрез Watson-Crick образуване на чифтове бази, инициира каскада от събития, която завършва в олигонуклеотиднасочено разграждане на прицелната мРНК на CRF2 рецептора.
Терминът “CRF2 рецептор(и)”, както тук е използуван, се отнася за рецептори по клетъчната повърхност, както е описано в U.S. Patent С Number 5,786,203, издаден на 28 юли , 1998, съдържанието, на който тук е включено чрез цитат.
Терминът “определено достъпно място”, както тук е използуван, се отнася за множествени места на CRF2 рецепторна мРНК, които са достъпни за хибридизация с антисенз олигонуклеотиди. Тези места освен това са описани в Таблица 1 по-горе.
Терминът “модифициран нуклеотиден остатък” както тук е използуван, включва, но не се ограничава до 2’- метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1пропинил) цитозин фосфоротиоат, 5-(1-пропинил)урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксиС рибонуклеотид-ИЗ’-Р5’ фосфорамидат, полиамид нуклеинови киселини и затворени нуклеинови киселини с формула:
или кьдето В е пуринова или пиримидинова база.
Едно изпълнение на изобретението предоставя метод за лечение на психични нарушения, включващ, но без да се ограничава до страхово, маниакално-натрапчиво нарушение, фобии, анорксия нервоза и депресия у пациент, чрез въвеждане на пациента, нуждаещ се от такова лечение, терапевтично ефективно количество от фармацевтичен състав, съдържащ антисенз олигонуклеотиди, включващи химерни олигонуклеотиди, където 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъците са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно предпочитано изпълнение, осигурява, че модифицираните нуклеотидни остатъци на антисенз олигонуклеотидите са подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитоцин фосфоротиоат, 5-(1пропинил) урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’ фосфорамидат и полиамид нуклеинови киселини.
Едно по-предпочитано изпълнение предоставя антисенз олигонуклеотид, който е от около 15 до около 25 нуклеотида дължина.
Друго изпълнение предоставя метод за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF рецепторен белтък, характеризиращ се с това, че:
(a) се планира химерен антисенз олигонуклеотид, специфичен за CRF рецепторна мРНК;
(b) се определя състав, който наподобява биологичния ефект на антисенз олигонуклеотида; и (c) се въвежда на пациент състав, който инхибира свързването на ендогенен лиганд с неговия CRF рецептор.
Друго изпълнение предоставя метод за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF рецепторен белтък, характеризиращ се с това, че:
(a) се планира химерен антисенз олигонуклеотид, специфичен за CRF рецепторна мРНК;
(b) се определя състав, който наподобява биологичния ефект на антисенз олигонуклеотида; и (c) се въвежда на пациента състав, който наподобява действието на ендогенен лиганд при CRF рецептора.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя метод за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациента един състав, който ефективно инхибира свързването на CRF, или други близко С свързани пептиди с CRF2 рецептора.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя метод за планиране инхибитор на CRF2 рецептора, характеризиращ се с това, че включва етапи за определяне на три-димензионалната структура на такъв рецептор, за анализиране на тридимензионалната структура за вероятни свързащи места на субстратите, за синтезиране на молекула, който включва предсказано реактивно място, и за определяне на рецептор-инхибиращата активност на молекулата.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от С химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, състоящи се от химерни олигонуклеотиди, където между 15-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъците са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 20-70% от
2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 25-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фософоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 30-70% от 2’-деоксйрибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 35-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 40-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 45-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 50-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 55-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 60-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Следващо предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя антисенз олигонуклеотиди с прицелна база, локализирана в рамките на определено достъпно място, притежаващи начална точка при всяка база локализирана в рамките на определено достъпно място и притежаващи дължина от около 15 до около 25 бази.
Едно най-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя антисенз олигонуклеотиди включващи следните последователности:
(a) TGT ACG TGT TGC GCA AGA GG;
(b) GGTGGGCGA TGT GGG AAT G;
U (c)GGATGA AGG TGG TGATGA GG; и (d) TGA CGC AGC GGC ACC AGA CC.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя тест за скрининг, за определяне съединения, приложими за лечение на психични нарушения включващи, но не ограничаващи се до страх, маниакално-натрапливо нарушение, панически нарушения, посттравматично стрес нарушение, фобии и депресия, използувайки антисенз олигонуклеотиди.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя метод за определяне структурата на свързващата област на CRF2 рецептора.
Въвеждане на CRF! рецепторен лиганд в комбинация с CRF2 рецепторен лиганд, може да има предимство за ефикасността пред CRFi рецепторния лиганд и CRF2 рецепторния лиганд самостоятелно, и може действувайки така да разреши приложението на по-ниски дози от всеки един от двата. По-ниската дозировка минимализира потенциала за страничните ефекти, при което осигурява повишена граница на безопасност. Комбинацията от едно Agfa®*· ν съединение на настоящето изобретение с такива допълнителни терапевтични агенти, предпочитано е една синергична комбинация. Синергизъм, както е описан например от Chou and Talalay, Adv.Enzyme Regul. 22:27-55 (1984), се появява тогава когато терапевтичният ефект на съединението и агент, въведени в комбинация, е по-голям от колкото сумарния ефект на CRFi рецепторния лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, когато са въведени самостоятелно. Общо, синергичен ефект е най-ясно демонстриран на нива, които са (терапевтично) под-оптимални за всеки от CRFi рецепторния лиганд или CRF2 рецепторния лиганд самостоятелно, но които са високо ефективни в комбинация.
CRFj рецепторни лиганди са активни при няколко животински модели на страх (Lundkvist, J., Chai, Z., Teheranian, R., Hasanvan, H., Bartfai, T., Jenck, F., Widmer, U. & Moreau, J.-L. (1996) Eur.J.Pharmacol. 309, 195-200; и Weninger, S. C., Dunn, A.J., Muglia, L.J., Dikkes, P., Miczek, K.A., Swiergiel, A.H., Berridge, C.W. & Majzoub, J.A. (1999) Proc.Natl.Acad.Sci.uSA 96, 8283-8288). DPC904 (Gilligan, P.J., Baldauf, C., Cocuzza, A., Chidester, D., Zaczek, R., Fitzgerald, L., McElroy, J., Smith, M.A., Shen, H.-S.L., Saye, J.A., Christ, D., Trainor, G.L., Robertson, D.W. & Hartig, P.R. (200) Bioorganic Med.Chem. 8, 181-189, 2000), един високо селективен и мощен пиразоло-пиримидинов антагонист на CRFi рецептора е тестиран в условен (кондициониран) страхов тест и е намерено дозо-зависимо намаление на продължителността на вцепеняване (Фиг. 7а). Поради това, че CRFi и CRF2 рецептори не се припокриват значително при тяхното анатомично разпределение (Chalmers, D.T., Lovenberg, T.W. & De Souza, E.B. (1995) J.Neuroscience 15, 6340-6350; и Rominger, D.H., Rominger, C. M., Fitzgerald, L.W., Grzanna, R., Largent, B.L. & Zaczek, R. (1998) J.Pharmacol. Exp.Ther. 286, 459-468), едно проучване е планирано да определи дали едновременно инхибиране на двата рецепторни подтипа, ще произведе по-силно намаление на вцепеняването. Животни са третирани интрацеребровентрикуларно с зз седем дни с физиологичен разтвор или антисенз олигонуклеотид.
Двадесет и четири часа след последната интрацеребровентрикуларна доза, животните са получили едно орално въвеждане на вехикулум (метоцел) или DPC904. Животни, които са получили DPC904 или антисенз олигонуклеотид самостоятелно, проявяват значителни намаления на вцепеняването в сравнение с наблюдаваното по-рано. При животни, които са получавали DPC904 и антисенз олигонуклеотид, вцепеняването е намалено значително под нивото на ОРС904-третираните или антисенз-третираните животни в условния страхов тест (Фиг.7Ь). Въпреки че острото третиране с DPC904 намалява продължителността на вцепеняване при повторноизлагане на шок тест, едновременното инхибиране на два рецептора, не произвежда ефекти, които са различни от тези получени с CRF2 антисенз олигонуклеотид самостоятелно (Фиг. 7b). CRF2 рецепторното съврзване е било намалено в подобна степен при двете антисенз-третирани групи животни (физиологичен разтвор/метоцел: 1.20 + 0.05 nCi/mg, физиологичен разтвор/ОРС904: 1.21 + 0.05 nCi/mg, антисенз олигонуклеотид/метоцел: 0.51 + 0.08 nCi/mg, антисенз олигонуклеотид/ОРС904: 0.45 + 0.04 nCi/mg; р<0.001 за двете антисенз групи, спрямо не-олигонуклеотидтретираните групи).
Разбираемо е, че това изобретение покрива всички подходящи комбинации на отделните и предпочитани групи или изпълнения цитирани тук.
Изобретението може освен това да бъде разбрано със следните примери, в които частите и процентите са в тегло, ако това не е означено по друг начин.
Пример 1
Синтез и пречистване на олигонуклеотиди за in vivo експерименти
Олигонуклеотиди са синтезирани в автоматизиран ABI 394 РНК/ДНК синтезатор, като са използувани стандартни протоколи за синтез. Антисенз и погрешно сдвоените олигонуклеотиди, използувани в експериментите описани във Фигури 3 и 4, се състоят от следните последователности:
Антисенз: TGA CGC age ggc acC AGA CC
Погрешно сдвоени: TGA GGC acc gga acC АСА CC където буквите в горния пример обозначават 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестерни остатъци и буквите в долния пример обозначават 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатни остатъци. 2’-метоксирибонуклеотид фосфорамидити са купени от Chem Genes, пропинил и 5-метил цитидин фосфорамидити са получени от Glen Research и 2’-флуорофосфорамидити са от NeXstar. Beaucage реагент за ситезата на фосфоротиоатните връзки и флуоресцеин фосфорамидит за 5’-белязане на олигонуклеотиди е закупен от Glen Research. Тези реагенти са използувани в съответствие с инструкциите на производителя.
Необработени олигонуклеотидни смеси са пречиствани с обратна фаза HPLC на PRP-3 колона (Hamilton Co), като е използуван градиент от ацетонитрил и 0.1М воден триетиламониев ацетат. Фракции събрани от HPLC колоната са лиофилизирани двукратно за отстраняване излишека от триетиламониев ацетат. Воден разтвор на олигонуклеотиди след това е екстрахиран няколко пъти с бутанол. Катйонна обмяна е правена като е използувано утаяване с етанол в присъствието на О.ЗМ натриев ацетат. pH на олигонуклеотидния разтвор след това е доведено до pH 7.0 чрез добавка на 0.01 М натриева основа. След това олигонуклеотидът е пречистен чрез гелово проникване хроматография като са използувани NAP-25 колони (Pharmacia) за отстраняване остатъчния флуоресцеин фосфороамидит реагент. Стерилизация е извършвана чрез филтруване през 0.2 цт целулозо ацетатен филтър (Rainin) и е правено количествено определяне с UV спекгрометрия. Чистотата на олигонуклеотидите е определяна с капилярна гелна електрофореза (РАСЕ2100, Beckman Instruments). Основни разтвори на олигонуклеотид във вода са съхранявани на -20°С.
Пример 2
Животни и операции
Мъжки Sprague Dawley плъхове (Charles River) с тегло 320-360 грама по време на операцията, са отглеждани индивидуално в кафези от неръждаема стомана и са били на свободен достъп до храна и вода. След 4 дни период на адаптация, на плъховете стереотаксично са имплантирани билатерално, под Rompun (100 мг/кг) и ketamin (9 мг/кг) анестезия хронични 26-размер водач канюли, насочени към латералните вентрикули. Стереотаксичните координати са били: острие 3.3 мм под интерауралната линия; 0.2мм зад bregma; +2.7 мм латерално от средната линия; 3.8 мм вентрално на повърхността на черепа и под 24° ъгъл. Инжекторът (33 размер) е насочен под върха на канюлата водач на 0.5мм. Животните са адаптирани чрез ежедневно третиране, започвайки 2 дни след операцията.
Всички описани грижи за животните и използувани процедури са одобрени от Institutional Animal Care и Use Committee (IACUC). DuPomt Pharmaceutical Research Laboratories са акредитирани от
Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC International).
Пример 3 Въвеждане на олигонуклеотид
Началото на олигонуклеотидни инфузии е на 8-ия ден след операцията, когато плъховете са около 20 г над теглата при операцията. Свежи разтвори на олигонуклеотид са изготвяни ежедневно чрез разтваряне на лиофилизирани олигонуклеотидни утайки в стерилен физиологичен разтвор. Плъховете са претегляни ежедневно в 9.00 ч. преди обяд, преди инфузия на олигонуклеотид. Използувайки микропроцесорно контролирана спринцовка-помпа (Stoelting), 1μΙ разтвор е инжектиран в един вентрикул за 2 минути. Инжекторът е оставян в канюлата водач за още една минута. Отделни инжектори за всеки отделен плъх са изплаквани с етанол и стерилна вода и са изсушавани в периода между ежедневните инжектирания.
Пример 4 Вцепеняващ тест за страх
Шоковата кутия се състои от черна плексигласова камера със стени и капак. Вратите на кутията са направени от прозрачен плексиглас, върху които са прикрепени еднопосочни огледала за наблюдение. Подът на кутията съдържа Coulbourn шокова решетка от неръждаема стомана, с прегради на решетката на разстояние 1 см. На 8-ия ден след хирургичната имплантация на конюлите-водач, плъховете са поставяни в кутията и са оставяни да се приспособяват за 2 минути. Общо 3 шифровани, рандомизирани, без избягване футшокове (1тА, 1 секунда продължителност) са подавани на 20 секундни интервали на пода на решетката. Плъхът е наблюдаван за вцепеняващо поведение в продължение на 15 минути преди да бъде върнат в неговата клетка за отглеждане.
Третирането с олигонуклеотид е започвало в деня след шоковото третиране. Животните са дозирани за седем последователни дни. Двадесет и четири часа след като плъховете са върнати в шоковата кутия, те са наблюдавани за вцепеняващо поведение в подължение на 10 минути. Това е последвано от прилагане на 2 фут-шока (1.0 mA, 1 секунда продължителност, 20 секунди интервал), след което плъхът е наблюдаван за вцепеняващо поведение за други 10 минути. Непосредствено след последния 10-минутен период, плъхът е евтаназиран.
Пример 5
Повдигнат плюс лабиринтен тест
Третиране с олигонуклеотид на плъхове е започвало на 8-ия ден след операцията. Плъховете са тестирани в ЕРМ 2 часа след дозирането на 8-ия ден от третирането. В началото на теста, плъхът е поставян в централната площадка на лабиринта и неговото изследователско поведение по време на следващите 10 минути е регистрирано с видео камера. Един наблюдател извън тестираното пространство, регистрира изтеклото време в отворените и затворените рамена, както и броя на влизанията във всяко рамо на лабиринта. Плъховете са евтаназирани непосредствено след завършването на теста.
Пример 6 Обработка на тъканта
Животните са убивани чрез излагане на СО2. Мозъците са изваждани и замразявани в метилбутан охладен на сух лед преди съхранение на -80°С. За рецепторна авторадиография, са правени 20 pm срези през латералния септум, които са рязани на криостат (Kopf Instruments).
Пример 7
CRF? рецепторна авторадиография
След затопляне до стайна температура за 1 час, мозъчните срези са преинкубирани за 5 минути в 50 тМ Трис-HCI (pH 7.5), съдържащ ЮтМ MgCI2, 2тМ EGTA (етилен гликол-бис (β-аминоетил етер) N,N,N’,N”-TeTpao4eTHa киселина), 0.1% яйчен овалбумин, 0.08 TIU апротинин и 0.1 тМ бацитрацин. Общото свързване е определяно като е използуван 0.15 пМ 125l-sauvagine (New England Nuclear). CRF2 специфично свързване е определяно в присъствието на 1μΜ SC-241, който е CRFi селективен рецепторен антагонист (D.H.Rominger et al.
** J.Pharmacol. Exp.Therap., 286, 459-468, 1998). Неспецифичното свързване е определяно с 1μΜ а-спираловиден CRF (American Peptide). Правени са инкубации в буфер за преинкубация, съдържащ радиолиганд и съответни антагонисти за 150 минути. След това тъканните срези са измивани два пъти за 5 минути всяко, в PBS съдържащ 0.01% Тритон-Х-100. След последното изплакване с вода, излишната вода е аспирирана и срезите са сушени на въздух за една нощ. Срезите и 1251 стандартни ивици (Amersham) са експонирани на Hyperfilm μ-Мах (Amersham) за 72 часа.
Количественото определяне на CRF2 специфичното свързване е _ извършвано като е използувана NIH ImageMG 1.44 програма. Отчитания на оптичната плътност са превърнати в nCi лиганд, свързан за мг тъканен белтък като са използувани 1251 стандартни ивици. Определени са количествено между 7 до 9 съседни среза от един плъх.
Пример 8 Комбинирано третиране с CRFi рецепторен антагонист и CRF? антисенз олигонуклеотид
Тридесет и два до четиридесет плъха са били подложени на условен фут-шок третиране, както е описано в Пример 4 (първи параграф). След фут-шока, животните са разделени по равно на 2 групи. Първата група е получавала интрацеребровентрикуларно инжекции с физиологичен разтвор за 7 последователни дни, докато втората група животни са получили интрацеребровентрикуларно инжекции с антисенз олигонуклеотида (2.5 nmol във всеки латерален вентрикул), за седем последователни дни. На осмия ден, всяка група животни е подразделена на 3 групи. Половината от третираните с физиологичен разтвор животни са получили DPC 904 (в метоцел) в доза 10 мг/кг орално (означена като S/R1 група). Другата половина от третираните с физиологичен разтвор животни са получили вехикулума метоцел (означена като S/М група). Плъхове третирани с С антисенз олигонуклеотида са третирани по сходен начин, т.е.
половината от тези животни са получили D 904 (в метоцел) в доза 10 мг/кг орално (означена като R2/R1 група). Другата половина от антисенз третираните животни са получили вехикулум метоцел (означени като R2/M група). Тридесет минути след оралното приемане, животните са тестирани в шокова кутия както е описано в Пример 4 (втори параграф).
Настоящето изобретение може да бъде изпълнено в други специфични форми, без да се излиза извън духа или неговите същностни атрибути.
с

Claims (27)

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ
1. Използване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, при на пациент, който се нуждае от такова лечение.
Хи»
1. Използване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, при на пациент, който се нуждае от такова лечение.
1 “ΙΟ.8+
0.44погрешно сдвоено олиго р<.0001
Фигура ЗЬ
1.2
0.6
0.2-- антисенз олиго
Физиологичен разтвор
1.441.6
1/11
-f- РНаза H
ОЛИГОНУКЛЕОТИДНА БИБЛИОТЕКА
Фигура 1a
1. Метод за лечение на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства.
2. Използване, съгласно претенция 1, където CRF-! рецепторният лиганд е агонист на CRF-i рецептора.
2. Използване, съгласно претенция 1, където CRF-! рецепторният лиганд е агонист на CRF-) рецептора.
2-ДЕОКСИРИБОНУКЛЕОТИД Н3’-Р5’-ФОСФОРАМИДАТ
ПОЛИАМИД НУКЛЕИНОВА КИСЕЛИНА
Фигура 2Ь
2’-ФЛУОРО-РИБОНУКЛЕОТИД ФОСФОДИЕСТЕР
2'-МЕТОКСИ-ЕТОКСИРИБОНУКЛЕОТИД ФОСФОДИЕСТЕР
2’-МЕТ0КСИРИБ0НУКЛЕ0ТИД
ФОСФОДИЕСТЕР
2’-ДЕОКСИРИБОНУКЛЕОТИД ФОСФОРОТИОАТ
Фигура 2а
2-ДЕОКСИРИБОНУКЛЕОТИД ФОСФОДИЕСТЕР
2/11 5'mrnmGNNNmmmm3' 5'mmmANNNmmmm3’ s'mmmCNNNmmmnri3’ s'mmmTN N Nmmmm3'
G библиотека
А библиотека
C библиотека
T библиотека m: рандомизирани 2’-метоксирибонуклеотиди N: рандомизирани 2’-деоксирибонуклеотиди A, G, С, Т : 2’-деоксирибонуклеотиди
Фигура 1Ь
2. Метод съгласно претенция 1, където CRFi рецепторният лиганд е агонист на CRFi рецептора.
3. Използване, съгласно претенция 1, където CRFi рецепторният лиганд е антагонист на CRF-i рецептора.
3. Използване, съгласно претенция 1, където CRFi рецепторният лиганд е антагонист на CRFi рецептора.
3/11
j)·* (а)
3. Метод съгласно претенция 1, където CRFi лиганд е антагонист на CRFf рецептора.
4. Използване, съгласно претенция 1, където CRF2 рецепторният лиганд е агонист на CRF2 рецептора.
4. Използване, съгласно претенция 1, където CRF2 рецепторният лиганд е агонист на CRF2 рецептора.
4/11 (b)
4. Метод съгласно претенция 1, където CRF2 лиганд е агонист на CRF2 рецептора.
5. Използване, съгласно претенция 1, където CRF2 рецепторният лиганд е антагонист на CRF2 рецептора.
5. Използване, съгласно претенция 1, където CRF2 рецепторният лиганд е антагонист на CRF2 рецептора.
5/11 (Ο
I 2’-модифициран рибонуклеотид фосфодиестер iiuiiiimi 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоат
Фигура 2с
5-МЕТИЛ ЦИТОЗИН ФОСФОРОТИОАТ
5-(1 (ПРОПИНИЛ)УРАЦИЛ ФОСФОРОТИОАТ
5-(1-ПРОПИНИЛ)ЦИТОЗИН ФОСФОРОТИОАТ
5. Метод съгласно претенция 1, където CRF2 лиганд е антагонист на CRF2 рецептора.
рецепторният рецепторният рецепторният
6. Използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за приложение на пациент, който се нуждае от такова лечение, където CRF2 лиганд рецептор е антисенз олигонуклеотид, изграден от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Заместваща страница
6. Използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за приложение на пациент, който се нуждае от такова лечение, където CRF2 лиганд рецептор е антисенз олигонуклеотид, изграден от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
Заместваща страница
6/11
Вцепеняващ тест
Тест излагане на шок
Физиологичен погрешно сдвоено аНтисенз разтвор олиго _ олиго
500-400-300-ΖΓ
200-Условен тест
J***’1*'
600
500-400-300-200-Ф ζ ГО m ос х Ф с 8-
Физиологичен разтвор погрешно сдвоено антисенз олиго олиго
Фигура За
6. Метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRF2 лиганд рецептор е антисенз олигонуклеотид, изграден от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
7. Използуване, съгласно претенция 6, където модифицираните нуклеотидни остатъци са подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитозин фосфоротиоат, 5-(1пропинил) урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’ фосфорамидат, полиамид нуклеинови киселини киселини с формула:
и затворени нуклеинови или , където В е една пуринова или пиримидинова база.
7. Използуване, съгласно претенция 6, където модифицираните нукпеотидни остатъци са подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитозин фосфоротиоат, 5-(1пропинил) урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксирибонукпеотид-МЗ’-Р5’ фосфорамидат, полиамид нуклеинови киселини киселини с формула:
и затворени нуклеинови или , където В е една пуринова или пиримидинова база.
7/11
Инхибиране на CRF2 рецептори при вцепеняващ тест
Рецепторна плътност (nCi/mg тъкан)
7. Метод съгласно претенция 6, където модифицираните нукпеотидни остатъци са подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитозин фосфоротиоат, 5-(1пропинил) урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’ фосфорамидат, полиамид нуклеинови киселини киселини с формула:
и затворени нуклеинови или , където В е една пуринова или пиримидинова база.
8. Използуване, съгласно претенция 6, където олигонуклеотидът е с дължина от около 15 до около 25 нуклеотида.
8. Използуване, съгласно претенция 6, където олигонуклеотидът е с дължина от около 15 до около 25 нуклеотида.
8/11
Повдигнат плюс лабиринт тест
Физиологичен погрешно сдвоено антисенз разтвор олиго олиго
Фигура 4а
8. Метод съгласно претенция 6, където олигонуклеотидът е с дължина от около 15 до около 25 нуклеотида.
9. Използуване, съгласно претенция 6, където между 60-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци на антисензд олигонуклеотидите са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
9. Използуване, съгласно претенция 6, където между 60-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци на антисензд олигонуклеотидите са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
9/11
Инхибиране на CRF2 рецептори тест в повдигнат плюс лабиринт
Физиологичен погрешно одВОено антисенз разтвор олиго олиго
Фигура 4Ь
9. Метод съгласно претенция 6, където между 60-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци на антисензд олигонуклеотидите са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
10. Използуване, съгласно претенция 6, където антисенз олигонуклеотидите включват следните последователности:
(a) TGT ACG TGT TGC GCA AGA GG;
(b) GGT GGG CGA TGT GGG ААТ G;
(c) GGATGAAGG TGG TGATGA GG; и (d) TGA CGC AGC GGC ACC AGA СС. Заместваща страница
10. Използуване, съгласно претенция 6, където антисенз олигонуклеотидите включват следните последователности:
(a) TGT ACG TGT TGC GCA AGA GG;
(b) GGT GGG CGA TGT GGG AAT G;
(c) GGATGAAGGTGGTGATGAGG; и (d) TGA CGC AGC GGC ACC AGA CC. Заместваща страница
10/11
Ефект на Antisauvagine-ЗО върху вцепеняващо поведение при плъхове
Средна + станд.откл. продължителност(сек)
Условен страхов тест Тест повторно излагане на шок
Доза (mg, 20-мин. претретиране, ICV)
Плъхове са третирани със шок на ден 1 и са тестирани на ден 2 с условен страхов тест и тест повторно излагане на шок. AntisauvagineЗО е въвеждан орално на ден 2. Доза отговор анксиолитични ефекти са намерени при условен страхов тест, но не и при тест повторно излагане на шок. (Различни букви над всеки стълб, показват значими разлики, р<0.05 или по-малко).
Фигура 5 и/π
Средна + станд.откл. продължителност(сек)
Третиране
Фигура 6
S = физиологичен р-р
М = метоцел
RL = CRF1 антагонист
R2 = CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид
10. Метод съгласно претенция 6, където антисенз олигонуклеотидите включват следните последователности:
(a) TGT ACG TGT TGC GCA AGA GG;
(b) GGT GGG CGA TGT GGG AAT G;
(c) GGATGAAGGTGGTGATGAGG; и (d) TGA CGC AGC GGC ACC AGA CC.
11. Използуване, съгласно претенция 1 или 6, където разстройството е психично разстройство.
11. Използуване, съгласно претенция 1 или 6, където разстройството е психично разстройство.
11/11
Средна + станд.откл. продължител ност(сек)
Третиране
Фигура 6
S = физиологичен р-р
М = метоцел
RL = CRFj антагонист
R2 = CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид
CRF2 лиганди в комбинирана терапия 2397/02-РС
ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Изобретението се отнася за фармацевтичен състав, съдържащ CRF-f рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства; и за използуване на терапевтично ефективно количество CRFi и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли, или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност на пациент, нуждаещ се от такова лечение, където CRF рецепторни лиганди на това изобретение са агонисти или антагонисти на CRF рецепторите. В допълнение на фармацевтичното прицелно място на изобретението, бидейки CRF рецепторите, настоящето изобретение е насочено също към фармацевтични агенти, които са прицелно насочени към CRFi и CRF2 рецепторна мРНК.
ПРЕДШЕСТВУВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Усилени проучвания са установили важността на картикотропин релизинг фактор (CRF) за контролиране хипофизоадренокортикалната система и медииране поведенческите, автономните и имунни отговори спрямо стрес. Така, счита се, че този пептид участвува в патофизиологията на афективните нарушения. Понастоящем са идентифицирани два 7-трансмембранни рецептори, CRFi и CRF2, които медиират ефектите на CRF. Двата рецептора са широко експресирани в мозъка, въпреки че има малко значимо припокриване между областите с най-висока експресия и двата рецепторни под-типове. Съобщено е, че трансгенни мишки, които свръхекспресират CRF, проявяват повишение на анксиогенното (страх-предизвикващо) поведение (Stenzel-Poore et al., Overproduction of corticotropin-releasing factor in transgenic mice: A genetic model of
Заместваща страница anxiogenic behavior. J.Neuroscience 14, 2579-2584, 1995). От особено значение е въпросът дали тези анксиогенни отговори са медиирани с CRF действие върху CRF! рецептори, CFR2 рецептори или и върху двата.
Кортикотропин-релизинг фактор (CRF) антагонисти са споменати в U.S.Pat. Nos. 4,605,642, 5,874,227, 5,962,479, 5,063,245, 5,861,398 и 6,083,948, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост. Няколко публикувани патентни заявки също представят съединения антагонисти на кортикотропин релизинг фактор, измежду такива са DuPont Merck РСТ заявка US94/11050, Pfizer WO 95/33750, Pfizer WO 95/34563, Pfizer WO 95/33727 и U.S.Pat. No. 5,424,311. Заболявания, които са разглеждани като лечими с CRF антагонисти, са обсъдени в U.S. Pat. No. 5,063,245 и Pharm.Rev., 43: 425-473 (1991).
Постулирана е роля на CRF в етиологията и патофизиологията на болестта на Alzheimer, болестта на Parkinson и Huntington’oea болест, анорексия нервоза, прогресива супрануклеарна парализа и амиотрофична латерална склероза, тъй като те са свързани с дисфункцията на CRF неврони в централната нервна система (за обзор виж W.B. Dr Souza, Hosp. Practice 23:59 (1988); G.N. Smagin,
L.A. Howell, D.H.Ryan, E.B. De Souza and R.B.S.Harris Neuroreport 9, 1601-1601, 1998; и J.Pharmacol.Exp. Therap., 293, 700-806, 2000;]. U.S. r Patent No. 6,051,578, който е включен тук чрез цитат в неговата цялост, представя (CRF) рецепторен антагонист, който е полезен при лечение и превенция на травма на главата, травма на гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия като мозъчна хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от Alzheimer тип, мултиинфаркгна деменция, амиотрофична латерална склероза, химични зависимости и пристрастрявания (например, зависимост и от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и ХИПОГЛИКемия. Заместаща страница
U.S.Patent No. 6,001,807, който е включен тук чрез цитат в неговата цялост, представя (CRF) рецепторен антагонист, който е полезен при лечение и превенция на повръщане. Противоповръщащата активност на CRF-антагонистите е указана с проведени експерименти, например както е описано от Ueno et al, Life Sciences 41: 513-518 (1987); и Rudd et al., British Journal of Pharmacology 119: 931-936(1996).
Също, известен брой публикации представят CRF! рецепторни антагонисти, например Chen et al., J.Med.Chem. 39: 4354-4357 (1996); Chen et al., J.Med.Chem. 40(11) 1749-1754 (1997); Lundkvist et al., Eur. J. Pharmacology 309, 198-200, 1996; и Mansbach et al.,
Eur.J.Pharmacology 323, 21-26, 1997, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост. По-специално, CRF! рецепторният лиганд DPC904 е представен в Gilligan et al., BioOrganic Medicinal Chem. 8, 181-189, 2000, която е включена тук чрез цитат в нейната цялост.
Също, CRF2 рецепторни лиганди, например sauvagine, урокортин и други CRF2 пептиди, са представени в Но et al., Mol.Brain Res. 6, 11, 1998; Spiess et al., Trends Endocrinology and Metabolism 9, 140-145, 1998 Molecular Properties of the CRF Receptor; и D.P.Behan et al., Mol.Psychiatry 1, 265-277, 1996, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост.
Докато е показано, че блокада на CRF! рецептори съ селективни антагонисти предизвиква анксиолитични (намаляващи страха) и антидепресивни ефекти при животни, функцията на CRF2 рецепторите е по-слабо проучена. In situ хибридизация и експерименти с рецепторна авторадиография показват, че рецепторът е локализиран главно в лимбичната и хипоталамичната области на мозъка, което насочва за роля при медииране на аксиогенните и анорексични ефекти на CRF. Наскоро, е идентифициран един CRF2-ceneKTHBeH антагонист (AntiSauvagine-30) (Gulyas J. et al., (1995) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92, 10575-579). Освен това, идентифициран е Астресин (Astressin) един пептид,който има двойна CRF! и CRF2 активност (Ruhmann,A., Bonk,I., Lin, С. R., Rosenfeld, M.G. & Spiess, J. (1998) Proc.Natl.Acad.Sci. USA заместваща страница
95, 15264-15269). В отсъствие на специфични агонисти и антагонисти за този рецептор, антисенз супресия на CRF2 рецепторната експресия, може да осигури данни за ролята на рецептора в нормалната физиология.
Антисенз олигонуклеотидите са къси олигонуклеотиди (обикновено от около 15 до около 25 нукпеотиди дължина), които са планирани да бъдат комплементарни на част от една мРНК молекула, която е от интерес. Хибридизацията на един антисенз олигонуклеотид с неговото мРНК прицелно място чрез Watson-Crick базови-двойки, инициира каскада от събития, които завършват с олигонуклеотиднасочена деградация на прицелната мРНК молекула. Пряко последствие от тази мРНК деградация е потискането синтезата на кодирания белтък. Проучвания проведени в присъствието на значително понижени нива на прицелен белтък, могат да разкрият неговата функция. В отсъствието на нискомолекулни лиганди (както е в случая с CRF2 рецептора), антисенз олигонуклеотидите могат да бъдат изключително полезно средство за белтъчни функционални изследвания. В допълнение, те могат да бъдат използувани за диференциране между близко свързани членове на едно семейство белтъци (както е при CRFi и CRF2) по начини, които често не са възможни с нискомолекулни лиганди.
Дизайнът и подборът на мощни антисенз последователности не е тривиално действие. Антисенз олигонуклеотидите широко и непредсказуемо варират в тяхната активност, тъй като техните мРНК прицелни места имат значима вторична и третична структура, което прави големи части от мРНК молекулите недостижими за хибридизация. Само 20-35% от антисенз последователностите имат значима инхибиторна активност (50% или повече). Използувайки една молекулярна техника, ние създадохме (Но et al., Potent antisense ologonucleotides to the human multidrug resistance-1 mRNA are rationally selected by mapping RNA-accessible sites with oligonucleotide libraries. Nucl.Acids Res. 24, 1901-1907, 1996; Ho et al., Mapping of RNA accessible sites for antisense Заместваща страница experiments with oligonucleotide libraries. Nature Biotech. 16, 59-63, 1998), множествени достъпни области в CRF2 рецепторна мРНК, които са идентифицирани. Антисенз олигонуклеотиди насочени срещу тези достъпни места инхибират свързването на 125l-sauvagine с CRF2 рецептори in vivo най-малко с 50%.
Съобщени са две антисенз проучвания, които изследват функцията на CRF2 рецептори. Двете проучвания не намират данни за участието на CRF2 рецептор в медииране на анксиогенните ефекти на CRF. Обаче, в едно проучване (Heinrichs et al., Corticotropin-releasing factor CRFi but not CRF2, receptors mediate anxiogenic-like behavior. Reg.Peptides 71, 15-21, 1997), CRF2 рецептори са били намалени само с 15-20% и използуваните олигонуклеотиди са предизвикали токсични ефекти (значима загуба на тегло), които биха могли да объркат поведенческите експерименти. Малко подробности са предоставени от второто съобщение (Montkowski et al., Biol.Psychiatry 39, 566,1996; и Liebsch, G., Landgraf, R., Engelmann,
M., Lorscher P. & Holsboer, F. (1999) J.Psychiatric Res. 33, 153-163.
Обаче, в едно изследване прилагащо CRF2 антисенз олигонуклеотиди, което е описано в Международна патентна заявка No. PCT/US00/0819 и US Patent Application No. 09/481981, които са включени тук в тяхната цялост, ние открихме, че потискането на CRFi рецепторната експресия предизвиква анксиолитични ефекти при животни.
Освен това, ние открихме, че когато CRF2 рецепторни антисенз олигонуклеотиди са въведени едновременно с CRFi рецепторен лиганд, анксиолитичният ефект е силно повишен.
Заместваща страница
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящето изобретение се отнася до използуване на терапевтично ефективно количество от CRF-] рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF-f и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство.
В едно изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRF-! рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRF-i лиганд рецептор е агонистичен на CRF-! рецептора, за лечение на разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF-, и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF-i лиганд рецептор е антагонистичен на CRF-i рецептора.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRF! рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRF1 и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 лиганд рецепторът е агонистичен на CRF2 рецептора.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, за
Заместваща страница лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 лиганд рецептор е антагонистичен на CRF2 рецептора.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-j рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност, за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, състоящ се от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRF-t и CRF2 рецепторна активност, за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци , подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитозин фосфоротиоат, 5-(1-пропинил)урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’-фосфорамидат и полиамид нуклеинови киселини и затворени нуклеинови киселини, притежаващи формулата:
Заместваща страница където В е пуринова или пиримидинова база.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF1 рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци, където олигонуклеотидът е с дължина около 15 до около 25 нуклеотида.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFt и CRF2 рецепторна активност, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 60-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци на антисенз олигонуклеотидите са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за
Заместваща страница лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, включващ следните последователности:
(a) TGT ACGTGT TGC GCA AGA GG;
(b) GGT GGG CGA TGT GGG AAT G;
(c) GGATGAAGGTGGTGATGAGG; и (d) TGA CGC AGC GGC ACC AGA CC.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където нарушението е психично нарушение.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на психично разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност на пациент, страдащ от такова разстройство, където психичното нарушение е подбрано от група състояща се от страхово, маниакално-натрапчиво нарушение, панически състояния, пост-травматично стресово нарушение, фобии, анорексия нервоза и депресия.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-f рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност на пациент, страдащ от такова разстройство, където разстройството е подбрано от група състояща се от травма на главата, травма на
Заместваща страница гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия като церебрална хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от типа на Alzheimer, мултиинфарктна деменция, амиотрофична латерална склероза, химични зависимости и пристрастявания (например, зависимости от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и хипогликамия.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където въвеждането на CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е едновременно.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарстваза лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където въвеждането на CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е последователно.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, при което ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд се поставят в контакт със състав, съдържащ CRFi рецептор и CRF2 рецептор.
Заместваща страница
В друго изпълнение настоящето изобретение предоставя използуване, при което ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид се поставят в контакт със състав, съдържащ CRFi рецептор, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение се отнася до използуване, при което ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав, съдържащ CRF2 рецептор за лечение на разстройство, свързано с CRF2 рецепторна активност.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя фармацевтичен състав, съдържащ CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и фармацевтичен носител.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя фармацевтичен кит за лечение и превенция на нарушение свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, споменатият кит съдържа множество отделни опаковки, където най-малко една от споменатите опаковки съдържа CRFi рецепторен лиганд, или негова фармацевтично приемлива сол или про-лекарство и поне една друга от споменатите опаковки, съдържа CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или негови фармацевтично приемливи соли или пролекарства, и споменатите опаковки по избор съдържат фармацевтичен носител.
В друго изпълнение, изобретението предоставя съединение, притежаващо CRFi рецепторна лигандна активност и CRF2 рецепторна лигандна активност за употреба при лечение на психични нарушения.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя антисенз олигонуклеотиди, насочени срещу мРНК на CRF2
Заместваща страница рецептор, които съществено понижават експресията на CRF2 рецептори в мозъка на гризачи. Потискането на CRF2 рецепторната функция, използувайки тези олигонуклеотиди, предизвиква значителни анксиолитични (намаляващи страха) ефекти у животни. Тези резултати предоставят първите функционални данни, че CRF2 рецепторът играе важна роля при медииране на анксиогенните (предизвикващите страх) ефекти на контикотропин релизинг фактора. Освен това, данните демонстрират потенциала на CRF2 рецепторни антагонисти, включително нискомолекулни, да бъдат ефективни при лечение на широк диапазон от психични нарушения, включително страхови, маниакално-натрапливи нарушения, панически нарушения, посттравматично стрес нарушение, фобии и депресия.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от фармацевтичен състав, включващ антисенз олигонуклеотиди, съдържащи химерни олигонуклеотиди, където 10-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфортиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци за лечение на психични разстройства, включително, но не ограничено до, страхово състояние, маниакално-натрапливо нарушение, панически нарушения, пост-травматично стрес нарушение, фобии и депреся у пациент, при което се въвежда на пациент, нуждаещ се от такова лечение.
В следващо изпълнение, изобретението предоставя метод за подбор на съединения, за определяне активността за лечение на психични нарушения, включващи, но без да се ограничават до, страх, маниакално-натрапливо нарушение, панически нарушения, пост-травматично стресово нарушение, фобии и депресия.
Заместваща страница
Терминът “CRF2 антисенз олигонуклеотиди”, както тук е използуван, се отнася за къси олигонуклеотиди (обикновено от около 15 до около 25 нуклеотиди дължина), които са планирани да бъдат комплементарни на част от една мРНК на CRF2 рецептора. Хибридизация на един антисенз олигонуклеотид с негово мРНК прицело място, чрез Watson-Crick образуване на чифтове бази, инициира каскада от събития, която завършва в олигонуклеотиднасочено разграждане на прицелната мРНК на CRF2 рецептора.
Терминът “CRF2 рецептор(и)”, както тук е използуван, се отнася за рецептори по клетъчната повърхност, както е описано в U.S. Patent w Number 5,786,203, издаден на 28 юли , 1998, съдържанието, на който тук е включено чрез цитат.
Терминът “определено достъпно място”, както тук е използуван, се отнася за множествени места на CRF2 рецепторна мРНК, които са достъпни за хибридизация с антисенз олигонуклеотиди. Тези места освен това са описани в Таблица 1 по-горе.
Терминът “модифициран нукпеотиден остатък” както тук е използуван, включва, но не се ограничава до 2’- метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1пропинил) цитозин фосфоротиоат, 5-(1-пропинил)урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксирибонуклеотид-НЗ’-Р5’ фосфорамидат, полиамид нуклеинови киселини и затворени нуклеинови киселини с формула:
където В е пуринова
Заместваща страница или или пиримидинова база.
Едно изпълнение на изобретението предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от фармацевтичен състав, съдържащ антисенз олигонукпеотиди, включващи химерни олигонуклеотиди, където 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъците са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци, за лечение на психични разстройства, включващи, но без да се ограничават до, страхово, маниакалнонатрапчиво нарушение, фобии, анорексия нервоза и депресия на пациент, нуждаещ се от такова лечение.
Едно предпочитано изпълнение, осигурява, че модифицираните нуклеотидни остатъци на антисенз олигонуклеотидите са подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитоцин фосфоротиоат, 5-(1пропинил) урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’ фосфорамидат и полиамид нуклеинови киселини.
Едно по-предпочитано изпълнение предоставя антисенз олигонуклеотид, който е от около 15 до около 25 нуклеотида дължина.
Друго изпълнение предоставя използуване за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF рецепторен белтък, което включва:
(a) планиране на химерен антисенз олигонуклеотид, специфичен за CRF рецепторна мРНК;
(b) определяне на състав, който наподобява биологичния ефект на антисенз олигонуклеотида; и (c) въвеждане на пациент състав, който инхибира свързването на ендогенен лиганд с неговия CRF рецептор.
Друго изпълнение предоставя използуване за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF рецепторен белтък, което Заместваща страница включва:
(a) планиране на химерен антисенз олигонуклеотид, специфичен за CRF рецепторна мРНК;
(b) определяне на състав, който наподобява биологичния ефект на антисенз олигонуклеотида; и (c) въвеждане на пациента състав, който наподобява действието на ендогенен лиганд при CRF рецептора.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя използуване за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF, което включва въвеждане на пациента на един състав, който ефективно инхибира свързването на CRF, или други близко свързани пептиди cCRF2 рецептора.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя метод за планиране инхибитор на CRF2 рецептора, характеризиращ се с това, че включва етапи за определяне на три-димензионалната структура на такъв рецептор, за анализиране на тридимензионалната структура за вероятни свързащи места на субстратите, за синтезиране на молекула, който включва предсказано реактивно място, и за определяне на рецептор-инхибиращата активност на молекулата.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, състоящи се от химерни олигонуклеотиди, където между 15-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъците са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 20-70% от
Заместваща страница
ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ
11. Метод съгласно претенция 1 или 6, където нарушението е психично нарушение.
12. Използуване, съгласно претенция 11, където психичното разстройство е подбрано от група, включваща страхово, маниакално-натрапчиво разстройство, панически разстройства, пост-травматично стресово разстройство, фобии и депресия.
12. Използуване, съгласно претенция 11, където психичното разстройство е подбрано от група, включваща страхово, маниакално-натрапчиво разстройство, панически разстройства, пост-травматично стресово разстройство, фобии и депресия.
12. Метод съгласно претенция 11, където психичното нарушение е подбрано от група състояща се от страхово, маниакалнонатрапчиво нарушение, панически нарушения, пост-
¢. травматично стресово нарушение, фобии и депресия.
13. Използуване, съгласно претенция 1 или 6, където разстройството е подбрано от група, включваща травма на w главата, травма на гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия, като мозъчна хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от типа на Alzheimer, мултиинфарктна деменция, амиотрофична латерална склероза, химични зависимости и пристрастявнания (например, зависимости от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и хипогликемия.
13. Използуване, съгласно претенция 1 или 6, където разстройството е подбрано от група, включваща травма на главата, травма на гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия, като мозъчна хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от типа на Alzheimer, мултиинфарктна деменция, амиотрофична латерална склероза, химични зависимости и пристрастявнания (например, зависимости от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и хипогликемия.
13. Метод съгласно претенция 1 или 6, където нарушението е подбрано от група състояща се от травма на главата, травма на гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия, като мозъчна хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от типа на Alzheimer, мултиинфарктна деменция, амиотрофична латерална склероза, w химични зависимости и пристрастявнания (например, зависимости от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и хипогликемия.
14. Използуане, съгласно претенция 1, кьдето въвеждането на CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е едновременно.
14. Използуане, съгласно претенция 1, където въвеждането на CRF! рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е едновременно.
14. Метод съгласно претенция 1, където въвеждането на CRF! рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е едновременно.
15. Използуване, съгласно претенция 1, където въвеждането на CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е последователно.
15. Използуване, съгласно претенция 1, където въвеждането на CRF! рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е последователно.
15. Метод съгласно претенция 1, където въвеждането на CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е последователно.
16. Използуване на ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд за лечение разстройство свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, при което
Заместваща страница ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав съдържащ CRF-ι рецептор и CRF2 рецептор.
16. Използуване на ефективно количество CRF-t рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд за лечение разстройство свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, при което
Заместваща страница ефективно количество CRF-ι рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав съдържащ CRF-ι рецептор и CRF2 рецептор.
16. Метод за лечение на нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав съдържащ CRFi рецептор и CRF2 рецептор.
17. Използване на ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд за лечение на нарушение свързано с CRF2 рецепторна активност, при което ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав съдържащ CRF2 рецептор.
17. Използване на ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд за лечение на нарушение свързано с CRF2 рецепторна активност, при което ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав съдържащ CRF2 рецептор.
17. Метод за лечение на нарушение свързано с CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав съдържащ CRF2 рецептор.
18. Фармацевтичен състав, съдържащ CRF1 рецепторен лиганд, един CRF2 рецепторен лиганд или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и фармацевтичен носител.
18. Фармацевтичен състав, съдържащ CRF-ι рецепторен лиганд, един CRF2 рецепторен лиганд или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и фармацевтичен носител.
18. Фармацевтичен състав съдържащ CRFi рецепторен лиганд, един CRF2 рецепторен лиганд или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и фармацевтичен носител.
19. Фармацевтичен кит за лечение или предпазване от разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че съдържа множество отделни опаковки, където най-малко една от споменатите опаковки съдържа CRFi рецепторен лиганд или негова фармацевтично приемлива сол или про-лекарство и най-малко друга от споменатите опаковки съдържа CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и споменатите опаковки по избор съдържат един фармацевтичен носител.
19. Фармацевтичен кит за лечение или предпазване от разстройство, свързано с CRF-ι и CRF2 рецепторна активност, характеризиращ се с това, че съдържа множество отделни опаковки, където най-малко една от споменатите опаковки съдържа CRF-ι рецепторен лиганд или негова фармацевтично приемлива сол или про-лекарство и най-малко друга от споменатите опаковки съдържа CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и споменатите опаковки по избор съдържат един фармацевтичен носител.
19. Фармацевтичен кит за лечение или предпазване от нарушение, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, споменатият кит, съдържащ множество отделни опаковки, където най-малко една от споменатите опаковки съдържа CRFi рецепторен лиганд или негова фармацевтично приемлива сол или про-лекарство и най-малко друга от споменатите опаковки съдържа CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и споменатите опаковки по избор съдържат един фармацевтичен носител.
20. Съединение, притежаващо CRFi рецепторна лигандна активност и CRF2 рецепторна лигандна активност за приложение при лечение на психични разстройства.
20. Съединение, притежаващо CRFi рецепторна лигандна активност и CRF2 рецепторна лигандна активност за приложение при лечение на психични разстройства.
20. Съединение притежаващо CRFi рецепторна лигандна активност и CRF2 рецепторна лигандна активност за приложение при лечение на психични нарушения.
21. Използване, съгласно претенция 1, където CRFi рецепторният лиганд е DPC904 или SC-241.
Заместваща страница
21. Използване, съгласно претенция 1, където CRFi рецепторният лиганд е DPC904 или SC-241.
Заместваща страница
21. Метод съгласно претенция 1, кьдето CRFi рецепторният лиганд е DPC904 или SC-241.
22. Използуване, съгласно претенция 4, където CRF2 рецепторният лиганд е соважин, урокортин или други CRF2 пептиди.
22. Използуване, съгласно претенция 4, където CRF2 рецепторният лиганд е соважин, урокортин или други CRF2 пептиди.
22. Метод съгласно претенция 4, където CRF2 рецепторният лиганд е sauvagine, urocortin или други CRF2 пептиди.
23. Използуване, съгласно претенция 5, където CRF2 рецепторният лиганд е анти-соважин.
23. Използуване, съгласно претенция 5, където CRF2 рецепторният лиганд е анти-соважин.
23. Метод съгласно претенция 5, където CRF2 рецепторният лиганд е анти-sauvagine.
24. Използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд или техни фармацевтичо приемливи соли или про-лекарства за усилване
С' лечението на психично разстройство, при пациент, който се нуждае от такова лечение.
24. Използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд или техни фармацевтичо приемливи соли или про-лекарства за усилване
W V лечението на психично разстройство, при пациент, които се нуждае от такова лечение.
24. Метод за усилване лечението на психично нарушение, характеризиращ се с това, че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства.
25. Използуване на терапевтично ефективно количество от съединение, притежаващо CRF-i лиганд рецепторна активност и CRF2 лиганд рецепторна активност, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за усилване лечението на психично разстройство, при пациент, който се нуждае от такова лечение.
25. Използуване на терапевтично ефективно количество от съединение, притежаващо CRFi лиганд рецепторна активност и CRF2 лиганд рецепторна активност, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за усилване лечението на психично разстройство, при пациент, който се нуждае от такова лечение.
25. Метод за усилване лечението на психично нарушение, характеризиращ се с това , че се въвежда на пациент, който се нуждае от такова лечение, терапевтично ефективно количество от съединение, притежаващо CRFi лиганд рецепторна и CRF2 лиганд рецепторна активност, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства.
26. Използуване, съгласно претенция 25, където съединението * е астресин.
26. Използуване, съгласно претенция 25, където съединението е астресин.
27. Използуване, съгласно претенция 6, където антисенз олигонуклеотидът е насочен към, области описани в таблица 1.
Заместваща страница
CRF2 лиганди в комбинирана терапия
2397/02-РС
ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Изобретението се отнася за фармацевтичен състав, съдържащ CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства; и за използуване на терапевтично ефективно количество CRFi и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли, или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност на пациент, нуждаещ се от такова лечение, w където CRF рецепторни лиганди на това изобретение са агонисти или антагонисти на CRF рецепторите. В допълнение на фармацевтичното прицелно място на изобретението, бидейки CRF рецепторите, настоящето изобретение е насочено също към фармацевтични агенти, които са прицелно насочени към CRFi и CRF2 рецепторна мРНК.
ПРЕДШЕСТВУВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Усилени проучвания са установили важността на картикотропин релизинг фактор (CRF) за контролиране хипофизоадренокортикалната система и медииране поведенческите,
W автономните и имунни отговори спрямо стрес. Така, счита се, че този пептид участвува в патофизиологията на афективните нарушения. Понастоящем са идентифицирани два 7-трансмембранни рецептори, CRFi и CRF2, които медиират ефектите на CRF. Двата рецептора са широко експресирани в мозъка, въпреки че има малко значимо припокриване между областите с най-висока експресия и двата рецепторни под-типове. Съобщено е, че трансгенни мишки, които свръхекспресират CRF, проявяват повишение на анксиогенното (страх-предизвикващо) поведение (Stenzel-Poore et al., Overproduction of corticotropin-releasing factor in transgenic mice: A genetic model of
Заместваща страница anxiogenic behavior. J.Neuroscience 14, 2579-2584, 1995). От особено значение е въпросът дали тези анксиогенни отговори са медиирани с CRF действие върху CRF-ι рецептори, CFR2 рецептори или и върху двата.
Кортикотропин-релизинг фактор (CRF) антагонисти са споменати в U.S.Pat. Nos. 4,605,642, 5,874,227, 5,962,479, 5,063,245, 5,861,398 и 6,083,948, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост. Няколко публикувани патентни заявки също представят съединения антагонисти на кортикотропин релизинг фактор, измежду такива са DuPont Merck РСТ заявка US94/11050, Pfizer WO 95/33750, Pfizer WO 95/34563, Pfizer WO 95/33727 и U.S.Pat. No. 5,424,311. Заболявания, които са разглеждани като лечими с CRF антагонисти, са обсъдени в U.S. Pat. No. 5,063,245 и Pharm.Rev., 43: 425-473 (1991).
Постулирана е роля на CRF в етиологията и патофизиологията на болестта на Alzheimer, болестта на Parkinson и Huntington’oea болест, анорексия нервоза, прогресива супрануклеарна парализа и амиотрофична латерална склероза, тъй като те са свързани с дисфункцията на CRF неврони в централната нервна система (за обзор виж W.B. Dr Souza, Hosp. Practice 23:59 (1988); G.N. Smagin,
L.A. Howell, D.H.Ryan, E.B. De Souza and R.B.S.Harris Neuroreport 9, 1601-1601, 1998; и J.Pharmacol.Exp. Therap., 293, 700-806, 2000;]. U.S. f Patent No. 6,051,578, който е включен тук чрез цитат в неговата цялост, представя (CRF) рецепторен антагонист, който е полезен при лечение и превенция на травма на главата, травма на гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия като мозъчна хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от Alzheimer тип, мултиинфарктна деменция, амиотрофична латерална склероза, химични зависимости и пристрастрявания (например, зависимост и от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и ХИПОГЛИКемия. Заместаща страница
U.S.Patent No. 6,001,807, който е включен тук чрез цитат в неговата цялост, представя (CRF) рецепторен антагонист, който е полезен при лечение и превенция на повръщане. Противоповръщащата активност на CRF-антагонистите е указана с проведени експерименти, например както е описано от Ueno et al, Life Sciences 41: 513-518 (1987); и Rudd et al., British Journal of Pharmacology 119: 931-936(1996).
Също, известен брой публикации представят CRFi рецепторни антагонисти, например Chen et al., J.Med.Chem. 39: 4354-4357 (1996); Chen et al., J.Med.Chem. 40(11) 1749-1754 (1997); Lundkvist et al., Eur. J. Pharmacology 309, 198-200, 1996; и Mansbach et al.,
Eur.J.Pharmacology 323, 21-26, 1997, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост. По-специално, CRFi рецепторният лиганд DPC904 е представен в Gilligan et al., BioOrganic Medicinal Chem. 8, 181-189, 2000, която е включена тук чрез цитат в нейната цялост.
Също, CRF2 рецепторни лиганди, например sauvagine, урокортин и други CRF2 пептиди, са представени в Но et al., Mol.Brain Res. 6, 11, 1998; Spiess et al., Trends Endocrinology and Metabolism 9, 140-145, 1998 Molecular Properties of the CRF Receptor; и D.P.Behan et al., Mol.Psychiatry 1, 265-277, 1996, които са включени тук чрез цитат в тяхната цялост.
Докато е показано, че блокада на CRFi рецептори съ селективни антагонисти предизвиква анксиолитични (намаляващи страха) и антидепресивни ефекти при животни, функцията на CRF2 рецепторите е по-слабо проучена. In situ хибридизация и експерименти с рецепторна авторадиография показват, че рецепторът е локализиран главно в лимбичната и хипоталамичната области на мозъка, което насочва за роля при медииране на аксиогенните и анорексични ефекти на CRF. Наскоро, е идентифициран един СРР2-селективен антагонист (AntiSauvagine-30) (Gulyas J. et al., (1995) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92, 10575-579). Освен това, идентифициран е Астресин (Astressin) един пептид,който има двойна CRFi и CRF2 активност (Ruhmann,A., Bonk.l., Lin, С. R., Rosenfeld, M.G. & Spiess, J. (1998) Proc.Natl.Acad.Sci. USA заместваща страница
95, 15264-15269). В отсъствие на специфични агонисти и антагонисти за този рецептор, антисенз супресия на CRF2 рецепторната експресия, може да осигури данни за ролята на рецептора в нормалната физиология.
Антисенз олигонуклеотидите са къси олигонуклеотиди (обикновено от около 15 до около 25 нуклеотиди дължина), които са планирани да бъдат комплементарни на част от една мРНК молекула, която е от интерес. Хибридизацията на един антисенз олигонуклеотид с неговото мРНК прицелно място чрез Watson-Crick базови-двойки, инициира каскада от събития, които завършват с олигонуклеотиднасочена деградация на прицелната мРНК молекула. Пряко последствие от тази мРНК деградация е потискането синтезата на кодирания белтък. Проучвания проведени в присъствието на значително понижени нива на прицелен белтък, могат да разкрият неговата функция. В отсъствието на нискомолекулни лиганди (както е в случая с CRF2 рецептора), антисенз олигонуклеотидите могат да бъдат изключително полезно средство за белтъчни функционални изследвания. В допълнение, те могат да бъдат използувани за диференциране между близко свързани членове на едно семейство белтъци (както е при CRF-ι и CRF2) по начини, които често не са възможни с нискомолекулни лиганди.
Дизайнът и подборът на мощни антисенз последователности не е тривиално действие. Антисенз олигонуклеотидите широко и непредсказуемо варират в тяхната активност, тъй като техните мРНК прицелни места имат значима вторична и третична структура, което прави големи части от мРНК молекулите недостижими за хибридизация. Само 20-35% от антисенз последователностите имат значима инхибиторна активност (50% или повече). Използувайки една молекулярна техника, ние създадохме (Но et al., Potent antisense ologonucleotides to the human multidrug resistance-1 mRNA are rationally selected by mapping RNA-accessible sites with oligonucleotide libraries. Nucl.Acids Res. 24, 1901-1907, 1996; Ho et al., Mapping of RNA accessible sites for antisense Заместваща страница experiments with oligonucleotide libraries. Nature Biotech. 16, 59-63, 1998), множествени достъпни области в CRF2 рецепторна мРНК, които са идентифицирани. Антисенз олигонуклеотиди насочени срещу тези достъпни места инхибират свързването на 125l-sauvagine с CRF2 рецептори in vivo най-малко с 50%.
Съобщени са две антисенз проучвания, които изследват функцията на CRF2 рецептори. Двете проучвания не намират данни за участието на CRF2 рецептор в медииране на анксиогенните ефекти на CRF. Обаче, в едно проучване (Heinrichs et al., Corticotropin-releasing factor CRFi but not CRF2, receptors mediate anxiogenic-like behavior. Reg.Peptides 71, 15-21, 1997), CRF2 рецептори са били намалени само с 15-20% и използуваните олигонуклеотиди са предизвикали токсични ефекти (значима загуба на тегло), които биха могли да объркат поведенческите експерименти. Малко подробности са предоставени от второто съобщение (Montkowski et al., Biol.Psychiatry 39, 566,1996; и Liebsch, G., Landgraf, R., Engelmann,
M., Lorscher P. & Holsboer, F. (1999) J.Psychiatric Res. 33, 153-163.
Обаче, в едно изследване прилагащо CRF2 антисенз олигонуклеотиди, което е описано в Международна патентна заявка No. PCT/US00/0819 и US Patent Application No. 09/481981, които са включени тук в тяхната цялост, ние открихме, че потискането на CRFi рецепторната експресия предизвиква анксиолитични ефекти при животни.
Освен това, ние открихме, че когато CRF2 рецепторни антисенз олигонуклеотиди са въведени едновременно с CRFi рецепторен лиганд, анксиолитичният ефект е силно повишен.
Заместваща страница
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящето изобретение се отнася до използуване на терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF-ι и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство.
В едно изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, където CRFi лиганд рецептор е агонистичен на CRFi рецептора, за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRFi лиганд рецептор е антагонистичен на CRFi рецептора.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 лиганд рецепторът е агонистичен на CRF2 рецептора.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, за
Заместваща страница лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 лиганд рецептор е антагонистичен на CRF2 рецептора.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност, за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, състоящ се от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства, за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с w модифицирани нуклеотидни остатъци , подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитозин фосфоротиоат, 5-(1-пропинил)урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’-фосфорамидат и полиамид нуклеинови киселини и затворени нуклеинови киселини, притежаващи формулата:
Заместваща страница където В е пуринова или пиримидинова база.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFn рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци, където олигонуклеотидът е с дължина около 15 до около 25 нуклеотида.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF1 и CRF2 рецепторна активност, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 60-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци на антисенз олигонуклеотидите са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за
Заместваща страница лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, включващ следните последователности:
(a) TGT ACGTGT TGC GCA AGA GG;
(b) GGT GGG CGA TGT GGG AAT G;
(c) GGATGAAGGTGGTGATGAGG; и (d) TGA CGC AGC GGC ACC AGA CC.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF1 и CRF2 рецепторна активност за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, където нарушението е психично нарушение.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на психично разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност на пациент, страдащ от такова разстройство, където психичното нарушение е подбрано от група състояща се от страхово, маниакално-натрапчиво нарушение, панически състояния, пост-травматично стресово нарушение, фобии, анорексия нервоза и депресия.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRFt и CRF2 рецепторна активност на пациент, страдащ от такова разстройство, където разстройството е подбрано от група състояща се от травма на главата, травма на
Заместваща страница гръбначния мозък, исхемично невронално увреждане (например, мозъчна исхемия като церебрална хипокампална исхемия), екситотоксично невронално увреждане, епилепсия, инсулт, стрес индуцирани имунни дисфункции, фобии, мускулни спазми, болест на Parkinson, болест на Huntington, уринарна инконтиненция, сенилна деменция от типа на Alzheimer, мултиинфарктна деменция, амиотрофична латерална склероза, химични зависимости и пристрастявания (например, зависимости от алкохол, кокаин, хероин, бензодиазепини или други лекарства) и хипогликамия.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства за лечение на разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където въвеждането на CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е едновременно.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарстваза лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, прилагано на пациент, страдащ от такова разстройство, където въвеждането на CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд е последователно.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на ефективно количество CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд за лечение на разстройство, свързано с CRFi и CRF2 рецепторна активност, за лечение на пациент, страдащ от такова разстройство, при което ефективно количество CRF1 рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд се поставят в контакт със състав, съдържащ CRF-i рецептор и CRF2 рецептор.
Заместваща страница
В друго изпълнение настоящето изобретение предоставя използуване, при което ефективно количество от CRF-i рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид се поставят в контакт със състав, съдържащ CRFi рецептор, където CRF2 рецепторният антисенз олигонуклеотид е антисенз олигонуклеотид, съставен от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци за лечение на разстройство, свързано с CRF-i и CRF2 рецепторна активност.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение се отнася до използуване, при което ефективно количество CRF2 рецепторен лиганд се поставя в контакт със състав, съдържащ CRF2 рецептор за лечение на разстройство, свързано с CRF2 рецепторна активност.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя фармацевтичен състав, съдържащ CRFi рецепторен лиганд и CRF2 рецепторен лиганд, или техни фармацевтично приемливи соли или про-лекарства и фармацевтичен носител.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя фармацевтичен кит за лечение и превенция на нарушение свързано с CRFt и CRF2 рецепторна активност, споменатият кит съдържа множество отделни опаковки, където най-малко една от споменатите опаковки съдържа CRF-i рецепторен лиганд, или негова фармацевтично приемлива сол или про-лекарство и поне една друга от споменатите опаковки, съдържа CRF2 рецепторен антисенз олигонуклеотид, или негови фармацевтично приемливи соли или пролекарства, и споменатите опаковки по избор съдържат фармацевтичен носител.
В друго изпълнение, изобретението предоставя съединение, притежаващо CRFi рецепторна лигандна активност и CRF2 рецепторна лигандна активност за употреба при лечение на психични нарушения.
В друго изпълнение, настоящето изобретение предоставя антисенз олигонуклеотиди, насочени срещу мРНК на CRF2
Заместваща страница рецептор, които съществено понижават експресията на CRF2 рецептори в мозъка на гризачи. Потискането на CRF2 рецепторната функция, използувайки тези олигонуклеотиди, предизвиква значителни анксиолитични (намаляващи страха) ефекти у животни. Тези резултати предоставят първите функционални данни, че CRF2 рецепторът играе важна роля при медииране на анксиогенните (предизвикващите страх) ефекти на контикотропин релизинг фактора. Освен това, данните демонстрират потенциала на CRF2 рецепторни антагонисти, включително нискомолекулни, да бъдат ефективни при лечение на широк диапазон от психични нарушения, включително страхови, маниакално-натрапливи нарушения, панически нарушения, посттравматично стрес нарушение, фобии и депресия.
В следващо изпълнение, настоящето изобретение предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от фармацевтичен състав, включващ антисенз олигонуклеотиди, съдържащи химерни олигонуклеотиди, където 10-70% от 2’деоксирибонуклеотид фосфортиоатните остатъци са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци за лечение на психични разстройства, включително, но не ограничено до, страхово състояние, маниакално-натрапливо нарушение, панически нарушения, пост-травматично стрес нарушение, фобии и депреся у пациент, при което се въвежда на пациент, нуждаещ се от такова лечение.
В следващо изпълнение, изобретението предоставя метод за подбор на съединения, за определяне активността за лечение на психични нарушения, включващи, но без да се ограничават до, страх, маниакално-натрапливо нарушение, панически нарушения, пост-травматично стресово нарушение, фобии и депресия.
Заместваща страница
Терминът “CRF2 антисенз олигонуклеотиди”, както тук е използуван, се отнася за къси олигонуклеотиди (обикновено от около 15 до около 25 нуклеотиди дължина), които са планирани да бъдат комплементарни на част от една мРНК на CRF2 рецептора. Хибридизация на един антисенз олигонуклеотид с негово мРНК прицело място, чрез Watson-Crick образуване на чифтове бази, инициира каскада от събития, която завършва в олигонуклеотиднасочено разграждане на прицелната мРНК на CRF2 рецептора.
Терминът “CRF2 рецептор(и)”, както тук е използуван, се отнася за рецептори по клетъчната повърхност, както е описано в U.S. Patent w Number 5,786,203, издаден на 28 юли , 1998, съдържанието, на който тук е включено чрез цитат.
Терминът “определено достъпно място”, както тук е използуван, се отнася за множествени места на CRF2 рецепторна мРНК, които са достъпни за хибридизация с антисенз олигонуклеотиди. Тези места освен това са описани в Таблица 1 по-горе.
Терминът “модифициран нуклеотиден остатък” както тук е използуван, включва, но не се ограничава до 2’- метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1пропинил) цитозин фосфоротиоат, 5-(1-пропинил)урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’-деокси·* рибонуклеотид-НЗ’-Р5’ фосфорамидат, полиамид нуклеинови киселини и затворени нуклеинови киселини с формула:
където В е пуринова
Заместваща страница или или пиримидинова база.
Едно изпълнение на изобретението предоставя използуване на терапевтично ефективно количество от фармацевтичен състав, съдържащ антисенз олигонуклеотиди, включващи химерни олигонуклеотиди, където 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъците са заменени с модифицирани нуклеотидни остатъци, за лечение на психични разстройства, включващи, но без да се ограничават до, страхово, маниакалнонатрапчиво нарушение, фобии, анорексия нервоза и депресия на пациент, нуждаещ се от такова лечение.
Едно предпочитано изпълнение, осигурява, че модифицираните нуклеотидни остатъци на антисенз олигонуклеотидите са подбрани от следната група: 2’-метоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’метокси-етоксирибонуклеотид фосфодиестери, 2’-флуоро-рибонуклеотид фосфодиестери, 5-(1-пропинил)цитоцин фосфоротиоат, 5-(1пропинил) урацил фосфоротиоат, 5-метил цитозин фосфоротиоат, 2’деоксирибонуклеотид-МЗ’-Р5’ фосфорамидат и полиамид нуклеинови киселини.
Едно по-предпочитано изпълнение предоставя антисенз олигонуклеотид, който е от около 15 до около 25 нуклеотида дължина.
Друго изпълнение предоставя използуване за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF рецепторен белтък, което включва:
(a) планиране на химерен антисенз олигонуклеотид, специфичен за CRF рецепторна мРНК;
(b) определяне на състав, който наподобява биологичния ефект на антисенз олигонуклеотида; и (c) въвеждане на пациент състав, който инхибира свързването на ендогенен лиганд с неговия CRF рецептор.
Друго изпълнение предоставя използуване за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF рецепторен белтък, което ВКЛЮЧВа: Заместваща страница (a) планиране на химерен антисенз олигонуклеотид, специфичен за CRF рецепторна мРНК;
(b) определяне на състав, който наподобява биологичния ефект на антисенз олигонуклеотида; и (c) въвеждане на пациента състав, който наподобява действието на ендогенен лиганд при CRF рецептора.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя използуване за лечение на пациент със заболяване медиирано от CRF, което включва въвеждане на пациента на един състав, който ефективно инхибира свързването на CRF, или други близко свързани пептиди cCRF2 рецептора.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя метод за планиране инхибитор на CRF2 рецептора, характеризиращ се с това, че включва етапи за определяне на три-димензионалната структура на такъв рецептор, за анализиране на тридимензионалната структура за вероятни свързащи места на субстратите, за синтезиране на молекула, който включва предсказано реактивно място, и за определяне на рецептор-инхибиращата активност на молекулата.
Друго изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 10-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъци са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, състоящи се от химерни олигонуклеотиди, където между 15-70% от 2’-деоксирибонуклеотид фосфоротиоатните остатъците са заменени с модифицирани нукпеотидни остатъци.
Едно по-предпочитано изпълнение на настоящето изобретение предоставя последователности на антисенз олигонуклеотиди, изградени от химерни олигонуклеотиди, където между 20-70% от
Заместваща страница
ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ
26. Метод съгласно претенция 25, където съединението е astressin.
27. Метод съгласно претенция 6, където антисенз олигонуклеотидът е прицелен за области описани в таблица 1.
27. Използуване, съгласно претенция 6, където антисенз олигонуклеотидът е насочен към, области описани в таблица 1.
Заместваща страница
BG107364A 2000-07-19 2002-12-09 Crf2 лиганди в комбинирана терапия BG107364A (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21939100P 2000-07-19 2000-07-19
PCT/US2001/022808 WO2002005749A2 (en) 2000-07-19 2001-07-19 Crf2 ligands in combination therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG107364A true BG107364A (bg) 2003-07-31

Family

ID=22819077

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG107364A BG107364A (bg) 2000-07-19 2002-12-09 Crf2 лиганди в комбинирана терапия

Country Status (20)

Country Link
US (2) US20020035083A1 (bg)
EP (1) EP1383460A2 (bg)
JP (1) JP2004513880A (bg)
KR (1) KR20040014926A (bg)
CN (1) CN1501976A (bg)
AU (1) AU2001280632A1 (bg)
BG (1) BG107364A (bg)
BR (1) BR0111937A (bg)
CA (1) CA2416986A1 (bg)
CZ (1) CZ2003159A3 (bg)
EE (1) EE200300025A (bg)
HU (1) HUP0301833A3 (bg)
IL (1) IL153264A0 (bg)
IS (1) IS6673A (bg)
MX (1) MXPA02012721A (bg)
NO (1) NO20030214L (bg)
PL (1) PL365955A1 (bg)
RU (1) RU2003104509A (bg)
WO (1) WO2002005749A2 (bg)
ZA (1) ZA200300088B (bg)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007073149A1 (en) * 2005-12-22 2007-06-28 Keygene N.V. Alternative nucleotides for improved targeted nucleotide exchange
CA2643802A1 (en) * 2006-02-27 2007-09-07 Alexander Michalow Methods for regulating neurotransmitter systems by inducing counteradaptations
EP2167094A2 (en) * 2007-06-13 2010-03-31 Research Development Foundation Methods for treatment and prevention of tauopathies and amyloid beta amyloidosis by modulating crf receptor signaling
CN104231059B (zh) * 2013-06-19 2016-12-28 深圳翰宇药业股份有限公司 一种多肽及其制备方法和用途
KR20190084055A (ko) 2016-10-20 2019-07-15 코르텐 인코포레이티드 부적응 스트레스 반응에서 기인한 질환의 치료 방법

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4605642A (en) * 1984-02-23 1986-08-12 The Salk Institute For Biological Studies CRF antagonists
US5063245A (en) * 1990-03-28 1991-11-05 Nova Pharmaceutical Corporation Corticotropin-releasing factor antagonism compounds
TW530047B (en) * 1994-06-08 2003-05-01 Pfizer Corticotropin releasing factor antagonists
US5786203A (en) * 1994-06-14 1998-07-28 Neurocrine Biosciences, Inc. Isolated nucleic acid encoding corticotropin-releasing factor2 receptors
WO1995034651A2 (en) * 1994-06-14 1995-12-21 Neurocrine Biosciences, Inc. Corticotropin-releasing factor2 receptors
US5663292A (en) * 1994-12-12 1997-09-02 The Salk Institute For Biological Studies Cyclic CRF analogs
US6214797B1 (en) * 1995-06-13 2001-04-10 The Salk Institute For Biological Studies Urocortin peptides, nucleic acid encoding same methods for using same
US6051578A (en) * 1996-02-12 2000-04-18 Pfizer Inc. Pyrazolopyrimidines for treatment of CNS disorders
ZA973884B (en) * 1996-05-23 1998-11-06 Du Pont Merck Pharma Tetrahydropteridines and pyridylpiperazines for treatment of neurological disorders
US5861398A (en) * 1996-08-26 1999-01-19 Alanex Corporation Benzoperimidine-carboxylic acids and derivatives thereof
GB9717087D0 (en) * 1997-08-12 1997-10-15 Ciba Geigy Ag Improvements in or relating to organic compounds

Also Published As

Publication number Publication date
WO2002005749A2 (en) 2002-01-24
US20050059627A1 (en) 2005-03-17
CN1501976A (zh) 2004-06-02
RU2003104509A (ru) 2004-08-27
HUP0301833A2 (hu) 2003-09-29
ZA200300088B (en) 2005-05-09
WO2002005749A3 (en) 2003-11-06
BR0111937A (pt) 2005-04-12
CZ2003159A3 (cs) 2004-02-18
PL365955A1 (en) 2005-01-24
EE200300025A (et) 2005-04-15
IL153264A0 (en) 2003-07-06
AU2001280632A1 (en) 2002-01-30
CA2416986A1 (en) 2002-01-24
KR20040014926A (ko) 2004-02-18
JP2004513880A (ja) 2004-05-13
IS6673A (is) 2003-01-08
MXPA02012721A (es) 2003-04-25
HUP0301833A3 (en) 2005-12-28
NO20030214D0 (no) 2003-01-16
EP1383460A2 (en) 2004-01-28
NO20030214L (no) 2003-01-16
US20020035083A1 (en) 2002-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7662948B2 (en) Antisense oligonucleotides against VR1
JP6126983B2 (ja) 真核細胞におけるエキソンスキッピングの誘導
US20090082297A1 (en) Compositions and Methods for Regulating Gene Expression
JP2015518713A (ja) Ｕｔｒｎ発現を調節するための組成物及び方法
JP2015518712A (ja) Ｍｅｃｐ２発現を調節するための組成物及び方法
JP2015523853A (ja) Ａｔｐ２ａ２発現を調節するための組成物及び方法
US20180312839A1 (en) Methods and compositions for increasing smn expression
JP2015518711A (ja) Ｂｄｎｆ発現を調節するための組成物及び方法
JP2015518710A (ja) ヘモグロビン遺伝子ファミリー発現を調節するための組成物及び方法
JP2021535204A (ja) Ｓｃｎ１ａ脳症の治療のためのｓｃｎ２ａを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド
AU2006345724B2 (en) Compositions and methods for the treatment of muscle wasting
US20200054746A1 (en) Methods for increasing neuronal survival
US6312684B1 (en) Method of inducing resistance to tumor growth
US8178507B2 (en) Method for the modulation of function of transcription factors
BG107364A (bg) Crf2 лиганди в комбинирана терапия
WO2018160356A1 (en) Genetic and pharmacological transcriptional upregulation of the repressed fxn gene as a therapeutic strategy for friedreich ataxia
US20230025878A1 (en) Methods Of Treating A Metabolic Disorder With Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase Kinase 15 (MAP3K15) Inhibitors
CA2457131A1 (en) Oligonucleotides and other modulators of the nk-1 receptor pathway and therapeutic uses thereof
WO2016164977A1 (en) A method of treatment
Wright et al. κ-Opioid receptor antisense oligonucleotide injected into rat hippocampus causes hypertension
WO2000042178A2 (en) Antagonist blockade of crf2 receptors for the treatment of psy chiatric disorders and the use of chimeric antisense oligonucleotides in in vivo cns studies of gene function
EP1485117A2 (en) Methods for therapeutic treatment of benign prostatic hypertrophy (bph)
US20080293653A1 (en) Method of treating autoimmune diseases