"Colonne d'extraction et/ou de filtration" La présente invention est relative à une colonne d'extraction et/ou de filtration constituée de plusieurs parties démontables pouvant s'adapter l'une sur l'autre suivant l'axe de la colonne, une première partie présentant un logement destiné à contenir une matière poreuse, telle qu'une matière filtrante et/ou une résine échangeuse d'ions, d'adsorption de partition, polaire et non-polaire, pouvant être traversée par un liquide introduit dans un réservoir situé au-dessus de ce logement, une deuxième partie présentant au moins un réservoir de collection pour le liquide ayant traversé la matière poreuse et pouvant s'adapter en dessous de ladite première partie.
Il s'agit plus particulièrement de colonnes utilisées pour la réalisation de tests analytiques, préparatifs et d'enrichissement d'échantillons de différentes liquides généralement de nature organique, tels que du sang, de l'urine, etc...
Les colonnes d'extraction et de filtration du type précité, utilisé jusqu'à présent, soit ne peuvent pas être utilisées dans une centrifugeuse, soit nécessitent une centrifugeuse particulière d'une construction relativement compliquée et donc relativement coûteuse.
Le but de la présente invention consiste essentiellement à proposer une colonne d'extraction et/ou de filtration pouvant être placée dans n'importe quel type de centrifugeuse connue, notamment pour le traitement de liquides contenus dans des éprouvettes.
A cet effet, suivant l'invention, lorsque les deux parties précitées de la colonne sont adaptées l'une sur l'autre, le logement, destiné à contenir la matière poreuse, se situe à une distance suffisante du fond du réservoir de collection pourque le liquide recueilli dans ce dernier ne mouille pas la matière poreuse contenue dans le logement.
Avantageusement, le logement précité se situe essentiellement au dessus du réservoir de collection lorsque les deux parties précitées sont adaptées l'une sur l'autre.
Suivant une forme de réalisation particulière de l'invention, la matière poreuse est contenue dans au moins une cartouche pouvant être placée dans le logement précité.
Suivant une forme de réalisation préférée de l'invention, les parties démontables précitées, adaptées l'une sur l'autre, forment un ensemble ayant l'allure d'une éprouvette pouvant être placé dans un compartiment correspondant d'une centrifugeuse.
D'autres détails et particularités de l'invention resortiront de la description donnée ci-après, à titre d'exemples non limitatifs de quelques formes de réalisation particulières de l'invention, avec référence aux dessins annexés.
La figure 1 est une vue en élévation d'une colonne d'extraction et/ou de filtration suivant une première forme de réalisation de l'invention. La figure 2 est, à plus grande échelle et avec brisures partielles, une vue à l'état démonté et en coupe longitudinale de cette première forme de réalisation. La figure 3 est une représentation schématique d'une centrifugeuse dans laquelle sont placées des colonnes suivant les figures 1 et 2. La figure 4 est une vue en élévation d'une deuxième forme de réalisation de l'invention. La figure 5 est une vue en élévation suivant cette deuxième forme de réalisation dans un état démonté. La figure 6 est, une vue en élévation, à plus grande échelle, en coupe longitudinale et avec brisures partielles, de la colonne suivant cette deuxième forme de réalisation, également dans un état démonté.
Les figures 7 à 9 concernent des vues en élévation et en coupe longitudinale d'accessoires suivant différentes formes de réalisation pouvant être placées dans la colonne suivant les figures 1, 2 et 4 à 6.
Dans les différentes figures, les mêmes chiffres de référence concernent des éléments identiques ou analogues.
La colonne d'extraction et/ou de filtration qui fait l'objet de la présente invention porte la référence 1 sur les figures annexées et est en particulier destinée pour des tests analytiques de différents types de liquides, tels que des échantillons de solutions organiques, plus particulièrement de sang, d'urine etc...
Les figures 1 et 2 montrent une première forme de la réalisation d'une telle colonne. Celle-ci est constituée de deux parties démontables 2 et 3 pouvant s'adapter l'une sur l'autre suivant l'axe 4 de la colonne.
La première partie 2 présente un logement 5 destiné à contenir une matière poreuse non représentée aux figures, telle qu'une matière filtrante et/ou une résine échangeuse d'ions, d'adsorption de partition, polaire et non-polaire, pouvant être traversée par un liquide introduit dans un réservoir 6 situé au-dessus du logement 5.
La deuxième partie 3 comprend un réservoir de collection 7 pour le liquide ayant traversé la matière poreuse et peut s'adapter en-dessous de la partie 2.
Suivant l'invention, lorsque les deux parties 2 et 3 de la colonne 1 sont adaptées l'une sur l'autre, comme représentées à la figure 1, le logement 5, destiné à contenir la matière poreuse, se situe à une distance suffisante du fond du réservoir de collection 7 pourque le liquide recueilli dans ce dernier ne mouille pas cette matière poreuse.
Ce logement 5 se situe de préférence essentiellement au dessus du réservoir de collection 7 lorsque les deux parties 2 et 3 sont assemblées, de manière à pouvoir collecter ainsi un volume aussi important que possible dans le réservoir 7.
Le réservoir 7 est surmonté d'un manchon 8 présentant une surface cylindrique intérieure 9 évasée par rapport au réservoir 7 et pouvant glisser sur un embout 10 s'étendant en dessous de la partie 2 de la colonne. Un joint d'étanchéité, formé par un "O-ring" 11, est maintenu dans une rainure circulaire 12 pratiquée dans cet embout 10 de manière à permettre d'adapter le manchon 8 d'une manière immobile et facilement démontable sur celui-ci.
Un orifice 13 d'un diamètre relativement réduit, de l'ordre de 1 mm est prévu à proximité du bord supérieur 14 dans la paroi latérale du réservoir de collection 7 pour permettre l'évacuation de l'air contenu dans ce dernier lorsque du liquide y est recueilli.
Le fond du logement 5 peut présenter un support perméable 15 sur lequel repose alors la matière poreuse.
Cette dernière peut être introduite initialement sous forme d'une suspension ou être contenue, à l'état sec, dans au moins une cartouche 16 (voir figures 7 à 9) pouvant être placée dans le logement 5.
Le cas échéant, cette matière poreuse peut être enfermée dans plusieurs cartouches séparées superposées, communiquant en série l'une avec l'autre. A cet égard, la figure 9 montre deux cartouches
16a et 16b s'emboîtant partiellement l'une dans l'autre.
Les figures 4 à 6 montrent une deuxième forme de réalisation de la colonne d'extraction et/ou de filtration suivant l'invention.
Cette colonne se distingue essentiellement par rapport à celle montrée aux figures 1 et 2 par le fait que le réservoir 6, pour le liquide à faire passer à travers la matière poreuse, est agencé dans une troisième partie démontable 17 s'adaptant par l'intermédiaire d'un manchon 18 sur un embout 19 prévu du côté supérieur de la première partie 2 de la colonne.
Comme pour l'embout 10, situé du côté opposé, l'embout 19 présente une rainure circulaire 20 dans laquelle est logée un O-ring 21 permettant de placer d'une manière étanche le manchon 18 sur cet embout 19.
Dans cette deuxième forme de réalisation, la partie 2 de la colonne ne comprend plus que le logement 5 qui s'étend sur toute la hauteur de celle-ci.
Le fond 22 du réservoir 6 prévu dans la partie
17 de la colonne 1 est conique et présente en son centre une ouverture de sortie pour le liquide, débouchant au dessus du logement 5 ménagé dans la deuxième partie 2.
Le manchon 8 de la deuxième partie 3 de la colonne présente une surface intérieure s'étendant dans le prolongement de celle du réservoir 7, donc contrairement à ce qui est le cas pour la forme de réalisation suivant la figure 2. Cette surface peut éventuellement être légèrement conique pour faciliter la mise en place du manchon 8 sur l'embout 10, ce dernier étant dans ce cas également légèrement conique.
Au moins la deuxième partie 3, formant donc la partie inférieure de la colonne 1, présente une forme extérieure compatible avec des compartiments 24 d'une centrifugeuse classique 25 ( voir figure 3).
Avantageusement, comme montré aux différentes figures, les parties démontables précitées adaptées l'une sur l'autre forment un ensemble ayant l'allure d'une éprouvette pouvant être placé dans un compartiment 24 d'une centrifugeuse 25.
Dans certains cas, les compartiments de la centrifugeuse pourraient être des supports de dimensions relativement réduites et être formés par exemple par des anneaux dans lesquels la colonne 1 est suspendue par sa partie inférieure 3. Il faudrait alors que cette partie présente de préférence un rebord de retenu avec lequel la colonne peut être posée dans cette anneau. Un tel rebord n'a, toutefois, pas été représenté aux figures.
Grâce à cette possibilité de pouvoir faire usage d'une centrifugeuse pour passer le liquide à traiter à travers la matière poreuse, le diamètre de l'ouverture de sortie 26 du logement 5 ou des cartouches 16 peut être relativement réduite, p.e. de l'ordre de 1 mm. Dans ces conditions, si on fait usage de colonnes contenant déjà de la résine en suspension dans un liquide, il n'est pas nécessaire de prévoir des moyens de fermeture de cette ouverture pour le stockage de ces colonnes.
La façon dont la colonne, suivant l'invention, est utilisée varie essentiellement en fonction de la nature des échantillons de liquide à traiter et des tests à effectuer.
Si par exemple une molécule ou un groupe de molécules doit être dosé dans un échantillon déterminé, on fait usage, comme matière poreuse à introduire dans le logement 5 de la colonne, d'une résine qui permet de capter sélectivement cette molécule ou ce groupe de molécules.
Cette résine peut être introduite dans la colonne à l'état sec, sous forme de cartouches ou non, ou comme suspension
Dans ce dernier cas, une première opération consistera à séparer la phase liquide de la résine en soumettant la colonne, avec ses parties démontables adaptées l'une sur l'autre, à une centrifugation, comme montrée par exemple à la figure 3.
La phase liquide est recueilli dans le réservoir 7 et peut donc être éliminée.
La résine est retenue, pratiquement exempt de liquide, dans le logement 5 grâce à la présence du support perméable 15. De plus, par suite de l'action de la force centrifuge un tassement convenable de la résine a été obtenu et ce qui permet donc d'éviter la formation de passages préférentiels pour l'échantillon à analyser.
Cette première opération peut être évitée en faisant usage de cartouches 16 ou de résines à l'état sec.
L'opération suivante consiste à verser l'échantillon dans le réservoir 6 de la colonne, au-dessus du logement 5 contenant la résine et après avoir fixé à nouveau la partie 3 sur l'embout 10 de la partie 2, à soumettre l'ensemble à une nouvelle centrifugation selon des normes bien définies pour ce qui concerne les différents paramètres, tels que nombres de tours, durée de rotation etc...
Sous l'action de la force centrifuge, l'échantillon est forcé au travers du lit de résine contenu dans le logement 5. Les molécules à extraire de l'échantillon sont alors fixées de manière sélective sur la résine.
Selon le même principe, on procède ensuite à un lavage avec un volume V. bien déterminé et une élution au moyen d'une
<EMI ID=1.1>
Par le lavage, les substances interférentes sont éliminées de la résine et, au moyen de la solution d'élution, les molécules à doser ainsi que leur standard interne sont alors décrochés de la résine et recueillis avec cette solution dans le réservoir 7 de la partie inférieure 3 de la colonne.
Ensuite, les molécules récoltées dans la solution d'élution peuvent être dosées quantitativement, par exemple par la méthode chromatographique suivant une manière connue en soi.
Pour certaines analyses il pourrait être utile de faire usage d'au moins deux types différents de résine présentant des affinités d'adsorption pour des molécules différentes.
On peut ainsi faire usage d'un mélange de ces résines soit dans une suspension, soit dans une même cartouche, soit encore dans des cartouches différentes montées en série dans le logement 5, comme montré à la figure 9.
Les molécules adsorbées sur chacunes des résines peuvent alors être séparées par l'utilisation successive de solutions d'élution suffisamment sélectives.
Grâce à la possibilité d'éliminer par ladite centrifugation pratiquement la totalité de la phase liquide après chaque opération, il est possible d'éviter toute contamination par "carry-over".
Ceci est surtout important si on veut doser dans un même échantillon différents types de molécules. Il est, en effet, possible d'éviter que des molécules fixées sur un type de résine déterminé puissent être entraînées par une solution d'élution destinée à décrocher un autre type de molécule adsorbé par une autre résine contenue également dans le logement 5.
Par ailleurs, parsuite de la possibilité de contrôler rigoureusement les différentes paramètres de la centrifugation les tests analytiques sont parfaitement reproductibles.
Il existe également la possibilité de conditionner les colonnes en fonction du type de resine choisi , de la vitesse de rotation de la centrifugeuse pour obtenir un tassement approprié.
Un autre avantage encore est le rendement de récupération très élevé des molécules à doser.
L'intérêt de la colonne d'extraction et/ou de filtration suivant l'invention est illustré d'une manière plus concrète par l'exemple donné ci-après.
Exemple
Dosage simultané du pregnandiol et de l'estriol.
1)Prise d'essai - hydrolyse 2ml d'urine filtrée ont été mélangés avec 0,2 ml d'hélicase, 4 ml de tampon
<EMI ID=2.1>
Le mélange a ensuite été placé pendant 1 heure au bain-marie à 56[deg.]C
2) Extraction
L'échantillon ainsi préparé a alors été soumis à une extraction dans une colonne du type montré aux figures 1 et 2.
A cet effet, cette colonne a été remplie avec une suspension de 3 ml de résine échangeuse d'anions fortement basique d'une granulométrie de 50 à
100 mesh du type AG -1-X4 de la société Bio-Rad.
La phase liquide a été éliminée et la résine restante a été tassée dans la colonne en soumettant cette dernière à une centrifugation pendant environ
30 secondes à 2000 tours par minute. Le filtrat a été recueilli dans le réservoir 7 et a été évacué.
La résine a ensuite été lavée avec 4 ml de tampon pH 4,1 et soumise à une nouvelle centrifugation à 2000 tours par minute.
L'eau de lavage recueillie a été à son tour éliminée.
Après ce lavage,, de la résine, l'échantillon d'urine hydrolysé a été versé dans le réservoir supérieur 6 de la colonne qui a alors été soumise à une troisième centrifugation toujours à 2000 tours par minute.
Dans une quatrième étape, la résine a été traversée par une solution d'élution, formée de 5 ml de méthanol, qui a été introduite dans le réservoir 6 de la colonne en soumettant à nouveau cette dernière à une centrifugation à 2000 tours par minute pendant 30 à 40 secondes en fonction de la nature du lit de résine.
L'éluat obtenu dans le réservoir 7 a été transvasé dans un tube en verre et a été évaporé sous atmosphère d'azote.
3) Analyse
<EMI ID=3.1>
dans ce tube qui a été bouché hermétiquement, porté pendant 20 minutes à
65 à 70[deg.]C et refroidi à température ambiante.
Le dosage du pregnandiol et de l'estriol a alors été réalisé par chromatographie gazeuse dans les conditions suivantes :
Sur colonne OV-1 : Température du four isotherme à 250[deg.] C.
Atténuation 32
Range 10
Temps de rétention : Pregnandiol 10 min
Estriol 12 min
Epicoprostanol 14 min
Cet exemple type illustre le principe et les possibilités d'utilisation de la cartouche.
De nombreuses applications sont disponibles comme le dosage de l'acide vanillimandélique (VMA), des Catécholamines, des métanephrines sur matrice urinaire, dosages sériques concernant la toxicologie etc...
Il est bien entendu que l'invention n'est pas limitée aux formes de réalisation décrites ci-dessus de la colonne d'extraction, mais que bien des variantes peuvent être envisagées sans sortir du cadre de l'invention, notamment en ce qui concerne la forme et les dimensions des différentes parties constituantes de la colonne.
REVENDICATIONS
1. Colonne d'extraction et/ou de filtration constituée de plusieurs parties démontables pouvant s'adapter l'une sur l'autre suivant l'axe de la colonne, une première partie présentant un logement destiné à contenir une matière poreuse, telle qu'une matière filtrante et/ou une résine échangeuse d'ions, d'adsorption ou de partition, polaire et non-polaire, pouvant être traversée par un liquide introduit dans un réservoir situé au-dessus de ce logement, une deuxième partie présentant au moins un réservoir de collection pour le liquide ayant traversé la matière poreuse et pouvant s'adapter en dessous de ladite première partie, cette colonne étant caractérisée en ce que, lorsque les deux parties précitées sont adaptées l'une sur l'autre, le logement, destiné à contenir la matière poreuse,
se situe à une distance suffisante du fond du réservoir de collection pourque le liquide recueilli dans ce dernier ne mouille pas la matière poreuse contenue dans le logement.