"Procédé de synthèse d'acide ursodésoxycholique conjugué avec la taurine et produit ainsi obtenu" "Procédé de synthèse d'acide ursodésoxycholique conjugué avec la taurine et produit ainsi obtenu"
La présente invention est relative à un procédé de synthèse d'acide tauro-ursodésoxycholique qui présente, comme on le sait déjà, une application thérapeutique dans le traitement des affections et des troubles biliaires.
On a isolé dans le passé l'acide tauro-ursodésoxycholique à des fins de recherches à partir d'organes d'animaux et on peut préciser que celui-ci appartient à la classe des acides appelés acides biliaires conjugués. Jusqu'à présent, toutefois, aucun procédé pour sa synthèse n'a jamais été décrit. On a préparé des acides biliaires conjugués dans le passé en suivant la synthèse de Norman classique, basée sur l'utilisation d'anhydrides mixtes. En particulier, dans la technique connue antérieurement, on a décrit la synthèse par cette voie de l'acide taurocholique et de l'acide taurodésoxycholique.
La demanderesse a essayé d'utiliser cette
voie de synthèse pour la préparation du composé susmentionné; toutefois, le produit de la réaction s'est avéré très impur (pureté en acide tauro-ursodésoxycholique d'environ 90%) et il s'est avéré nécessaire d'effectuer une purification par absorption chromatographique sur colon-ne. En plus de cet inconvénient majeur, les deux procédés de synthèse susmentionnés présentent d'autres inconvénients non négligeables, tels que la longueur importante du processus, la nécessité d'éliminer les quantités considérables d'eau à basse température et le fait que la réaction n'est pas complète, lorsque l'on utilise l'eau comme cosolvant qui hydrolyse une partie
de l'anhydride mixte'formé.
Un autre procédé décrit dans la littérature est celui de Bondi et Mueller, selon lesquels la synthèse des acides biliaires conjugués passe par la formation des azothydrures des acides biliaires. Ce procédé présente également des inconvénients importants. Tout d'abord, il est nécessaire de travailler à très basse température et celle-ci détermine la vitesse d'addition des réactifs. Enfin, dans ce cas, le produit de réaction est fortement impur (pureté d'environ 90%) du fait de l'hydrolyse des azothydrures en formant ainsi des quantités importantes d'acides libres, ce qui abaisse également sensiblement les rendements de la réaction.
Pour ce qui est de la synthèse peptidique, on décrit dans la littérature un procédé basé sur l'utilisation de N,N-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) comme agent de copulation. Par la suite, on a proposé d'utiliser d'autres agents copulation tels que l'éthyléthoxycarbonyl1,2-dihydroquinoléine (EEDQ) et l'isobutylisobutoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoléine (IIDQ).
L'application du procédé basé sur le DCC comme agent de copulation à l'acide tauro-ursodésoxycholique n'a pas donné de résultats positifs, étant donné que l'on a constaté que cet agent de copulation était privé de tou-te réactivité comparativement à l'acide ursodésoxycholique.
On devait par conséquent s'attendre également à ce qu'avec les autres agents de copulation il
ne soit pas possible d'obtenir la réactivité nécessaire et que, par conséquent, ce procédé de synthèse ne soit pas utilisable.
D'une façon surprenante, on a constaté au contraire que la synthèse de l'acide tauro-ursodésoxycholique était possible et avantageusement réalisable du point de vue industriel en utilisant comme agents de copulation les dérivés quinoléiniques susmentionnés, c'est-à-dire la EEDQ et la IIDQ.
Par conséquent, un but de la présente invention consiste en un procédé de synthèse de l'acide tauroursodésoxycholique, ce procédé étant caractérisé par le fait que l'on fait réagir de l'acide ursodésoxycholique et de la taurine en présence d'un agent de copulation choisi entre l'éthyléthoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoléine et l'isobutylisobutoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoléine, et en présence d'une amine tertiaire.
Suivant une forme de réalisation préférée du procédé de l'invention, on réalise la réaction dans un solvant polaire, de préférence le diméthylformamide ou le tétrahydrofuranne, à 90[deg.]C pendant une période de temps de 45 minutes avec la EEDQ et à 50[deg.]C pendant 30 minutes avec la IIDQ.
A la fin de la réaction, on refroidit le mélange de réaction à la température ambiante et on cristallise le sel de triéthylammonium d'acide tauro-ursodésoxycholique, que l'on transforme alors en sel de so-dium, d'où l'on obtient l'acide libre.
Le procédé de la présente invention est caractérisé par l'obtention de rendements très élevés
(supérieurs à 80%) et par la pureté élevée de l'acide obtenu, qui est également chromatographiquement pur avant la purification obtenue par cristallisation.
L'exemple suivant illustre le procédé de l'invention sans pour autant en constituer une limitat ion.
Exemple
On ajoute 3,44 g (27,5 millimoles) de taurine et 4,5 ml de triéthylamine à une solution d'acide ursodésoxycholique (10 g; 28,5 millimoles) et d'isobutylisobutoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoléine (9,8 g; 32,4 millimoles) dans 50 ml de diméthylformamide. On chauffe la suspension obtenue à 50[deg.]C pendant 30 minutes, on la refroidit ensuite à la température ambiante. On verse lentement la solution sur de l'acétate d'éthyle froid (500 ml). Il se forme une suspension de produit résineux que l'on conserve pendant une nuit au réfrigérateur. Au cours de la matinée suivante, on sépare la liqueur-mère par siphonage, on dissout le résidu avec du CH Cl
(150 ml) et on filtre la suspension pour éliminer la taurine n'ayant réagi. On verse la solution claire sur de l'acétate d'éthyle froid (500 ml) et on la maintient sous
<EMI ID=1.1>
cristallin précipité, qui est du sel de triéthylammonium d'acide tauro-ursodésoxycholique. Ce sel est très hygroscopique et se dissout, par conséquent, très rapidement dans 125 ml d'une solution méthanolique 0,2 N de NaOH. On dilue la solution avec de l'acétate d'éthyle
(250 ml) et on maintient la suspension à 5[deg.]C pendant quelques heures. Ensuite, on filtre et on lave avec de l'acétate d'éthyle. On obtient ainsi le sel sodique brut (avec un rendement de 80% en poids)ayant un point de fusion de 177[deg.]-179[deg.]C, celui-ci ne présentant à la chromatographie sur couche mince qu'une seule tache. En cristallisant dans un mélange d'éthanol et d'acétate d'éthyle, on obtient un produit qui prend à 175[deg.]C et qui fond d'une manière qui n'est pas nette en formant des bulles à 194[deg.]-195[deg.]C.
Pour obtenir l'acide libre, on dissout le sel sodique ainsi obtenu dans du méthanol et on y fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux à 5[deg.]C. Après séparation par filtration du NaCl formé, on verse la solution claire sur de l'acétate d'éthyle. On maintient la suspension pendant 1 heure à 5[deg.]C et on filtre ensuite. On lave à l'acétate d'éthyle, et on obtient l'acide tauro-ursodésoxycholique dans un rendement quantitatif, qui prend à 110[deg.]C et qui fond d'une manière qui n'est pas nette à 133[deg.]-135[deg.]C en formant des bulles.
En répétant l'exemple précédent, mais en utilisant l'éthyléthoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoléine comme agent de copulation et en laissant la réaction se dérouler à 90[deg.]C pendant 45 minutes, on obtient les mêmes produits avec des rendements pratiquement identiques.
Il doit être entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisation ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre du présent brevet.
Par exemple, on pourrait également envisager l'utilisation d'autres dérivés quinoléiniques en plus des agents de copulation susmensionnés.
REVENDICATIONS
1. Procédé de synthèse de l'acide tauroursodésoxycholique, caractérisé en ce que l'on fait réa-
<EMI ID=2.1>
chauffage en présence d'un agent de copulation choisi parmi les dérivés de 1,2-dihydroquinoléine et en présence d'une amine tertiaire.
"Process for the synthesis of ursodeoxycholic acid conjugated with taurine and product thus obtained" "Process for the synthesis of ursodeoxycholic acid conjugated with taurine and product thus obtained"
The present invention relates to a process for the synthesis of taurouresodeoxycholic acid which, as is already known, has a therapeutic application in the treatment of affections and biliary disorders.
Tauro-ursodeoxycholic acid has been isolated in the past for research purposes from animal organs and it can be specified that it belongs to the class of acids called conjugated bile acids. So far, however, no method for its synthesis has ever been described. Conjugated bile acids have been prepared in the past following the classic Norman synthesis, based on the use of mixed anhydrides. In particular, in the previously known technique, the synthesis by this route of taurocholic acid and taurodeoxycholic acid has been described.
The Applicant has attempted to use this
synthetic route for the preparation of the above-mentioned compound; however, the reaction product was found to be very impure (about 90% purity of taurouresodeoxycholic acid) and it was found necessary to perform purification by chromatographic absorption on a colon. In addition to this major drawback, the two abovementioned synthesis methods have other non-negligible drawbacks, such as the long length of the process, the need to eliminate considerable quantities of water at low temperature and the fact that the reaction n is not complete, when water is used as a co-solvent which hydrolyzes part
of the mixed anhydride formed.
Another process described in the literature is that of Bondi and Mueller, according to which the synthesis of conjugated bile acids involves the formation of bile acid azothydrides. This method also has significant drawbacks. First of all, it is necessary to work at very low temperature and this determines the speed of addition of the reagents. Finally, in this case, the reaction product is highly impure (purity of about 90%) due to the hydrolysis of the azothydrides, thereby forming significant amounts of free acids, which also significantly lowers the yields of the reaction. .
With regard to peptide synthesis, a method is described in the literature based on the use of N, N-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) as a coupling agent. Subsequently, it has been proposed to use other coupling agents such as ethylethoxycarbonyl1,2-dihydroquinoline (EEDQ) and isobutylisobutoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline (IIDQ).
The application of the DCC-based method as a coupling agent to taurourosodeoxycholic acid has not produced positive results, since it has been found that this coupling agent is deprived of all comparatively reactivity. ursodeoxycholic acid.
It should therefore also be expected that with the other copulating agents it
is not possible to obtain the necessary reactivity and that, therefore, this synthesis process is not usable.
Surprisingly, it has been found, on the contrary, that the synthesis of taurourosodeoxycholic acid is possible and advantageously achievable from the industrial point of view by using as coupling agents the quinoline derivatives mentioned above, that is to say the EEDQ and the IIDQ.
Consequently, an object of the present invention consists in a process for the synthesis of tauroursodeoxycholic acid, this process being characterized in that ursodeoxycholic acid and taurine are reacted in the presence of a coupling chosen between ethylethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline and isobutylisobutoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline, and in the presence of a tertiary amine.
According to a preferred embodiment of the process of the invention, the reaction is carried out in a polar solvent, preferably dimethylformamide or tetrahydrofuran, at 90 ° C. for a period of time of 45 minutes with the EEDQ and at 50 [deg.] C for 30 minutes with the IIDQ.
At the end of the reaction, the reaction mixture is cooled to room temperature and the triethylammonium salt of tauroursodeoxycholic acid is crystallized, which is then transformed into the sodium salt, from which obtains free acid.
The process of the present invention is characterized by obtaining very high yields
(greater than 80%) and by the high purity of the acid obtained, which is also chromatographically pure before the purification obtained by crystallization.
The following example illustrates the process of the invention without however constituting a limitation.
Example
3.44 g (27.5 millimoles) of taurine and 4.5 ml of triethylamine are added to a solution of ursodeoxycholic acid (10 g; 28.5 millimoles) and isobutylisobutoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline (9, 8 g; 32.4 millimoles) in 50 ml of dimethylformamide. The suspension obtained is heated to 50 [deg.] C for 30 minutes, then cooled to room temperature. The solution is slowly poured onto cold ethyl acetate (500 ml). A suspension of resinous product is formed which is stored overnight in the refrigerator. During the following morning, the mother liquor is separated by siphoning, the residue is dissolved with CH Cl
(150 ml) and the suspension is filtered to remove unreacted taurine. The clear solution is poured onto cold ethyl acetate (500 ml) and kept under
<EMI ID = 1.1>
precipitated lens, which is the triethylammonium salt of taurouresodeoxycholic acid. This salt is very hygroscopic and therefore dissolves very quickly in 125 ml of a 0.2 N methanolic solution of NaOH. The solution is diluted with ethyl acetate
(250 ml) and the suspension is kept at 5 ° C. for a few hours. Then, it is filtered and washed with ethyl acetate. The crude sodium salt is thus obtained (with a yield of 80% by weight) having a melting point of 177 [deg.] - 179 [deg.] C, the latter having only a thin layer chromatography single spot. By crystallizing from a mixture of ethanol and ethyl acetate, a product is obtained which sets at 175 [deg.] C and which melts in a manner which is not clear, forming bubbles at 194 [deg. .] - 195 [deg.] C.
To obtain the free acid, the sodium salt thus obtained is dissolved in methanol and bubbled with gaseous hydrochloric acid at 5 [deg.] C. After separation of the NaCl formed by filtration, the clear solution is poured onto ethyl acetate. The suspension is maintained for 1 hour at 5 [deg.] C and then filtered. Washed with ethyl acetate, and tauro-ursodeoxycholic acid is obtained in a quantitative yield, which sets at 110 [deg.] C and which melts in a manner which is not clear at 133 [deg .] - 135 [deg.] C by forming bubbles.
By repeating the previous example, but using ethylethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline as a coupling agent and letting the reaction proceed at 90 ° C. for 45 minutes, the same products are obtained with practically yields identical.
It should be understood that the present invention is in no way limited to the above embodiments and that many modifications can be made thereto without departing from the scope of this patent.
For example, one could also consider the use of other quinoline derivatives in addition to the above-mentioned coupling agents.
CLAIMS
1. Process for the synthesis of tauroursodeoxycholic acid, characterized in that the reaction is carried out
<EMI ID = 2.1>
heating in the presence of a coupling agent chosen from 1,2-dihydroquinoline derivatives and in the presence of a tertiary amine.