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"Procédé de préparation d'un virus induisant la formation d'un is- terlttrontt.
Un virus induisant la formation, d'un interférons qui sera appelé ci-dessous virus "interférant", est un virus modifié de manière que si on le met en contact avec des cellules sensi- blés, le virus interférant pénètre dans la cellule, ne s'y dirise pas, mais empêche la multiplication d'un virus virulent dans cette cellule, un peut se rapporter a l'article de sehlesinger dans .Viral and Rickettsial Infections of man", paea 161 à 171
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(publié par J.B. Lippincott Co. (1952) où l'on trouve un exposé plus complet concernant l'effet et l'utilisation du virus inter- férant.
Antérieurement à la présente invention, le virus in- terférant était préparé en exposant le virus infectant à l'irra- diation ultraviolette sous de petits volumes (par exemple 5 à
20 al) dans une boîte de Pétri ou un autre récipient semblable, peu profond, ou en exposant le virus infectant, en quantités qui tiendraient dans un tube à essai, à la chaleur. Ces deux procédés relevant de la technique antérieure présentaient le sérieux de- savantabe d'être utilisables seulement pour dé petits volumes de virus infectant, Par conséquent, antérieurement a la présente invention,
il n'y avait pas de procédé industriellement utili- sable pour la préparation du virus Interférant en landes quan- titées. En outre, du fuit de la sensibilité du virus au traite- ment par la lumière ultraviolette ou à la chaleur, un\' telle production à grande échelle n'était pas considérée comme possi- ble.
Par conséquent, la présente invention a pour but de proposer un procédé de production du virus interférant à grande échelle, en quantités industrielles.
Un autre out de la présente invention consiste à proposer un procédé continu de préparution du virus interférant.
Ces buts sont atteints par le procédé selon la pré- tante invention qui comprend fondamentalement l'opération consis- tant a faire passer de manière continue une suspension aqueuse du virus infectant par un tube de quarts en hélice contenant axialement une source de lumière ultraviolette.
Le virus infectant utilisé a la préparation du virus interférant selon la présente invention peut être obtenu a partir d'un certain nomore de virus, comme on le sait dans cette technique. Une des sources d'un tel virus est le virus de la
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grippe, 1-armi les autres virus utilisables à cet effet on trotta les suivants:le virus de la maladie de Hewcestle, le virus des oreillons, la virus de la pneumonie ues souris, le virus de Ilencéll;
alom,yêlitat4uine de l'xat, le virus de l'encéphalite 4,6 ôaint-louia, le vis ,.e la Bencépiialite japonaise, la virus 4e la fièvre jeuae, le virus de la dencue (fièvre rouge), Ht virus du Nil occidental, la virus de la poliomyélite le virus de ioxeucklee le virus 'lhoile Cf.0 VII, le virus de 1 ' encépnalôayoààr dite, le virus ue la corjunémiObite 3,yiapnocytiquet le virus de la. st.oadtitf veaieuluiz e# le vira... de la varicelle, le virus vacci- nal, las virus de la Pei v14 et le virus du papillome de oiiope.
..ntér.euxaaut au pussae du virus par le -tube dot quartz, le virus infectant est suspendu dans un aâlit 4qd*u** ai le virus infeetz-nt a été inocule et a été incube dans une
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matière organique, telle que les oeufs de poule eaoryonoés, 14# ¯¯ liquide vitellin contenant le virus infectant peut être utilitté comme tel en tant quemilieu. àieni ce cage le liquide vitellid est u'abord soumis ci la dialyse à travers une meaorane temipera.a, telle qu'une membrane di,.Iàaa7ate de iiskiii6e pour éliminer les matières étrangère*; dsa.t,, a:.u3,es, t absorbant le reâ.4w ultra- violets. La dialyse jout être effectuée contre une solution sali- ne tampon, telle qu'une isauature tampon de >orenèju' avec un pH 7,2.
Le fluide vitellin uuteilu, contenant le virus infec- tant, peut alors Stre turuinu ou filtre, sa on 1 désire, pour él.Lluiner lën pa.:ticulu- solides ventue-les. .e tujroinabe peut être effectué u. environ levuv tim jusqu'à environ 2*UUU tpa (et, de préférence a environ 4.u,u tpst) pendant en.v.r 5 à a "Il Ir t ro4 environ du m-nutes (et, Je préférence ],,enuant/J.Lu minutra;.
Le flu.4.je surna3,aant, contenant le virus in,ecttai'!^G, 6;4 alors 4.men: passer liai- une .., --lice de tubulure ae qu6ïtâ. Lai
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tubulure a de préférence un diamètre interne d'environ 1 suc à environ 3 ans (et, de préférence, u1 environ d. nua) et un diamè- tre externe .;,'C;r.Vi.1vlJ :> .1. à environ > tnm (et, de préférence ..'environ 4, mm). Une source de lumière ultraviolette, cIeLt- à-dire d'une lumière ayant une longueur d'onde a"envirun 31 la. environ i:/.75j AO, ebt d.st.u.e l.1x.L....lt.:J.<:nt dans l'nclice. pratique, il a été trouvé qu'une luu..e ultraviolette ie huit watts, passant IJnltuaJ.n...11:tn uuxvant l'uxe de l'hélxce, redt préférable.
Un tel tuue ultraviolet émet #nvj.i-on 17 u.x,Cruwutt8 d'intensité ultra Violattt i4 cc:r:4xn:t,ze carré a une lonbueur. d'onde de J..:.Ó7 A* a une uJ.;..tiJ.nco d'un uetro du tuus.
Le iJ!J.8ÌJ...e (tu virus l.n.1'cctl.:lnt l:!.1" rël,: de maniésa que conque centi,4,dti-e carr du ,4.Llieu contenant le virus infec- tant tsuaisse une exuitJ.un totale d'environ 5.uuu a environ ll.ûuû ers d'irradiation ultiwxulette (de préférence environ lv.v(...v erz;s/cm). àa dl Lri-,dtatiun suuse est d'impor- tance critique puisque si elle art uenaiulemeat inférieure à 5.GJu erc,s/c,2. le virus virulent suotâute après le traitement et, 81 elle est SeT151U.Gl4calt V..I!;d'Ü-Ure à 20.uu erbs/C1I1, une partie .u virus est détruite ae Unlere lue l'efficacité du virus interférant ;:,e tL'vU le dimiiluut. m l'on utilise une source de lumière ultraviolette de huit watts et si la suapensaùn pusse a un pouce de la source, dans ce cus, pour assurer lu Lrastement convenaule, on r,le le u-'-t,st de lu :...u::>Yf1:
...I.Vll du virus infec- tant i.t environ l,b jusqu'à environ 1,:1 litre par heure (et, de préférence, à envix-ja ï,.r litre par h ure)t --1,.e virus inteivérans. est l.1ÜU'b recueilli en turuinant le milieu aqueux. Le tur'.Ll1ut.e peut être effectué a une vitesse d'environ 1, UuU tpiu et h un Qe,,:l.t d'envuon u,4 li tre/ heure ou, de préféren.-e, ù la v.teau d.'env.I.¯un ;1v.UUU tpta et a un déoit alenvii-on 1,; litrt pur heure. La pelote de virus concen- tré peut alors être ra :,: H'!ldû. dans une saumure .tu!ù1)\,n. telle que cella qui a été an u *6 rlus haut, de préférence uirG cuu-
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centration cent fui±. plu.. forte que celle du niveau initialement utilisé.
La nouvelle auspeûsxoa peut alors être turbinée à 2.000 tpm et le liquide eurna6eant, contenant le virus interférant, peut être traité pir un ngent de conservation, tel que lé mer- thionate.
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Le procéda selon la présente invention permet une. production continua de , ruades quantités de virus Interférant et
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constitue donc un procédé inam-trielleaent applicable de pfépa- ration de cette importante auoatance.
Àilexemple qui suit illustre le procédé selon l'iaven-
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tion.
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r:.CL..NL La souche m-u, du type A du virus de la grippe, est inoculée à des 0 :U1'8 de poule o:arryonnés, à une dilution de 1 x .U ..4 L8 oeufs sont incubés à 36 C pendant 4S à 72 heures. un refroidit les veufs et l'un recueille des oeufs le fluide vl- tellin, contenant le v..ru infectant, sous un titre de 2*000 à 4.(ruG ulitéu d'awblutiUùt...lvn ue ce, Iules routes du ,;aAc8; du poulet (Iii.,U) pur SlIJ.llil1 tre. u ouapen6ion de fluide vitellin est alors dialysée u travers une zeu&LI-4âne (Le umlyae Visin contre un volum do foie plu.: 4rnd de Sé1U",UI'8 tatipun de oorensena A V1W>, tout pi 7, punuant 40 7 heures. La suspension de virus dans le fluiae vitellin dialyse est soumise au turbinage a 2,000 tpa pendant l, minuteb pour 4.à.n¯r les solides ..:trIiUoera.
.Le fluide surnageant, cunieutotle virus infectant, est pompe pur une pompe ....iQltlú '....<;) ou une uucre pompe k proportion, pur un tube de "verre" ue quartz (diamètre interne 2 ma* 41"'- tre externe 4., mu) en ser±.enti...-n de lo spires, les spires du seI'..ent,.....n ; 1 espi.Ioc;tt.nt u 1 enVJ,L'on 1,1 ca. Le serpentin est fixe en pobitati a un p-wuce de lu surface d'une lampe ultraviolette de nuit watts. du type G-bT, quî pusse lon,itud.ttr3,oaet par
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l'axe de l'hélice, e tube ultraviolet émet 2u à 4U microwatte d'intensité ultraviolette/cm sous une longueur d'onde de e*537 A à un mètre de la source* de dédit de la suspension du virus infectant passant dans le serpentin de quurtz est de 1,86 litre par heure.
Le virus interférant, est recueilli dans une turbine
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de charpies fonctionnant .et ..JÙ\.JVV tpm sous un débit de 1,2 litres heure. Lu pelote de V..Lt'Ut> concentré est resuspendue, dans un Volume valant 1/lbuème du volume de la suspension ae virus initiale, de saumure tampon de orenü6ns ,J1 à pu ?ge. Un laisse la suspension sedimenter sous l'effet de la pesanteur
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jusqu'au lendemain à 4 C, on la turbine ex ..Ovv tpin pendant dix minutes et le liquiae surnageant, contenant le virus interférant,
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est recueilli. Un ajoute le à-ertalolute au liquide surnageant à un niveau de 2ú mct;/ml.
Le procédé elon l'exemple permet la transformation du virus infectant en virus interférant sous un dewit u1 environ *litres en i7 heures. Hn outre, des teetu effectués dans des oeufs eubryonnés revoient que le virus interférant produit est dépourvu de virus infectant. la présente invention peut être réalisée autrement de diverses manière, dans le domaine des revendications annexées,
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1S"..#irltJ.i V.i114W d.
1. irooeuf continu ae préparation de YJ.rus induisant la formation d'-nterferon, caractérisé par l'opération conssm- tant a faire passer une suspension aqueuse de virus infectant
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par une tuoulure de t,uartz for00 en hélice, contenant axialement une source de lumière ultraviolette.
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