BE1029278A1

BE1029278A1 - Dispositif pour détecter la présence d'au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide

Info

Publication number: BE1029278A1
Application number: BE20215267A
Authority: BE
Inventors: Nicolas Moniotte; Sonia Chatellier; Aline Derenne; François Hubinon
Original assignee: Magnetrap
Priority date: 2021-04-07
Filing date: 2021-04-07
Publication date: 2022-11-07
Also published as: BE1029278B1

Abstract

La présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide.

Description

+ BE2021/5267 Dispositif pour detecter la presence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide La présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide. Plus particulièrement, la présente invention porte sur un dispositif pour détecter la présence d'au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon biologique, en particulier dans un échantillon biologique liquide.

En d’autres termes, la présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour détecter la présence d’au moins un acide nucléique cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide.

Dans le cadre de la présente invention, les termes « acide nucléique » incluent l'acide désoxyribonucléique (ADN) et l'acide ribonucléique cible (ARN). Les différentes formes d’ADN et d’ARN sont également couvertes par les termes « acide nucléique ».

Un dispositif selon l'invention trouve de nombreuses applications dans les domaines de la santé, notamment pour détecter, chez un individu au départ duquel est simplement prélevé un échantillon, la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible indiquant que l'individu souffre d’une ou de plusieurs pathologies ou d’une ou de plusieurs maladies données. Il peut par exemple s'agir d’une pathologie ou d’une maladie virale (hépatites virales, ...) ou d’une pathologie ou d’une maladie bactérienne (méningite, …) ou encore d'une pathologie ou d’une maladie parasitaire (paludisme, …).

Des dispositifs de détection d’ADN cible ou d’ARN cible sont connus dont certains permettent la réalisation d’une amplification d’ADN cible ou d’ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible ou de l'ARN cible (par exemple par amplification isothermique à médiation par boucles [LAMP] ou par amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse [RT-LAMP]), en présence d’un agent présentant des propriétés oxydo-réductrices et étant apte à se lier aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible : on parle alors de mesures électrochimiques utilisant un indicateur redox. Un tel dispositif connu de l’état de la technique peut être constitué d’un réceptacle destiné à contenir un échantillon prétraité et étant associé à des électrodes permettant la réalisation de mesures de type électrochimique au sein de l’échantillon prétraité afin d’y détecter la présence d’ADN cible ou d’ARN cible.

Typiquement, avec les dispositifs actuels de détection d’ADN cible ou d’ARN cible, avant de placer un échantillon prélevé chez un individu dans un tel réceptacle et donc de pouvoir procéder à une mesure de type électrochimique, l'échantillon doit être prétraité, c'est-à-dire qu’il doit être mis en solution en présence de réactifs permettant de réaliser une amplification dudit ADN cible ou dudit ARN cible et en présence d’un agent présentant des propriétés oxydo- réductrices et étant apte à se lier aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible. En pratique, l’agent présentant des propriétés oxydo-réductrices et étant apte à se lier aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible interagit à la fois avec les amplicons obtenus et avec les électrodes pour permettre d’effectuer une mesure électrochimique et de déterminer si l’échantillon prélevé chez l'individu contient ou non PADN cible ou PARN cible et donc de déterminer si l'individu souffre d’une pathologie ou d’une maladie donnée (ciblée). Concrètement, en présence d’amplicons obtenus si de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible est/sont présent(s) dans l’échantillon, une certaine quantité d'agent présentant des propriétés oxydo- réductrices se lie aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible et interagit donc moins / n’interagit plus avec les électrodes, ce qui se traduit par une modification, en particulier par une réduction, du signal mesuré au niveau des électrodes.

Malheureusement, si de tels dispositifs sont adaptés à des analyses réalisées en laboratoire, ils sont peu adéquats voire totalement inadaptés pour une détection d’ADN cible et/ou d’ARN cible devant être effectuée sur le terrain. En effet, puisque le prétraitement/la préparation d’un échantillon prélevé chez un individu requiert toujours la mise en œuvre de nombreux réactifs, l'opérateur doit non seulement disposer de matériel (réactifs, solvants, pipettes, dispositif de chauffage, ...) mais aussi réaliser de nombreuses manipulations délicates comme par exemple des dilutions qui se doivent d’être précises. Il est évident que ceci est particulièrement contraignant sur le terrain et qu’il est même parfois tout simplement impossible d’assurer une préparation correcte de l’échantillon prélevé, ce qui peut mener à des mesures électrochimiques erronées (faux négatifs et/ou présence de contaminants par exemple). Par ailleurs, les réactifs mis en œuvre sont généralement sensibles aux conditions environnementales (températures élevées, humidité, …) et/ou dangereux à manipuler, ce qui rend d'autant plus contraignantes les détections d’ADN cible et/ou d’ARN cible effectuées sur le terrain.

Il existe donc actuellement un réel besoin de procurer un dispositif pour détecter la présence d’ADN cible et/ou d’ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, qui permette de s'affranchir au moins partiellement de ces problématiques lorsqu’une détection d’un ou de plusieurs ADN cibles et/ou d’un ou de plusieurs ARN cibles nécessite d’être effectuée, en particulier lorsqu'elle nécessite d’être effectuée sur le terrain.

Pour résoudre ces problèmes, il est prévu, suivant l'invention, un dispositif pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit dispositif comprenant : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles

(LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

En d'autres termes, il est prévu, suivant l'invention, un dispositif pour détecter la présence d’au moins un acide nucléique cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit dispositif comprenant : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un acide nucléique cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un acide nucléique cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un acide nucléique cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un acide nucléique cible ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un acide nucléique cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un acide nucléique cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite

> BE2021/5267 molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un acide nucléique cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.

Selon un mode de réalisation, il est prévu, suivant l'invention, un dispositif pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit dispositif comprenant : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; - un élément chauffant électrique agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP); et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit

© BE2021/5267 au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un acide nucléique cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.

Par définition, le terme « intrinsèquement » signifie « qui est inhérent à quelque chose, qui lui appartient en propre ». Dans le cadre de la présente invention, le terme « intrinsèquement » appliqué au dispositif selon l'invention signifie donc que le dispositif comprend, avant même son utilisation et donc avant introduction d’un échantillon, de façon inhérente et en propre, au moins des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et/ou au moins une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, voire des réactifs pour lyser ledit échantillon.

Par les termes « ADN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, tout type d'ADN, par exemple l'ADN ribosomique et l'ADN mitochondrial.

Par les termes « ARN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, tout type d’ARN, par exemple l'ARN messager (ARNm), l'ARN ribosomique (ARNr) et l'ARN de transfert (ARN).

Par les termes « amplicons d'ADN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, les produits d’une amplification dudit ADN cible, par exemple les produits d’une amplification dudit ADN cible par la technique de l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) ou par la technique de l’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP).

Par les termes « amplicons d'ARN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, les produits d’une amplification dudit ARN cible, en particulier les produits d’une amplification dudit ARN cible après transcription inverse par mise en œuvre d’une transcriptase inverse, par exemple les produits d'une amplification dudit ARN cible par la technique de réaction de polymérase en chaine par transcriptase inverse (RT-PCR) ou par la technique d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).

Par les termes « amplicons d'acide nucléique cible », il est entendu, au sens de la présente invention, les produits d’une amplification dudit acide nucléique cible, par exemple les produits d’une amplification dudit acide nucléique cible par la technique de l'amplification en chaîne par polymérase (PCR), par la technique de l’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP), par la technique de réaction de polymérase en chaine par transcriptase inverse (RT-PCR) ou par la technique d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).

A titre d'exemple et à titre non exhaustif, peuvent être mis en œuvre en tant que réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, une transcriptase inverse ou rétrotranscriptase, une polymérase, une ADN polymérase, des primers, des dNTPs, et/ou des tampons (buffers).

Par les termes « une molécule non intercalante ou un composé non intercalant », il est entendu, au sens de la présente invention, une molécule ou un composé ne s’intercalant pas entre des molécules d’ADN ou d’ARN, en particulier une molécule ou un composé ne s'intercalant pas entre deux paires de base d'ADN.

Avec un tel dispositif de détection d'ADN cible et/ou d’ARN cible selon invention, l'échantillon prélevé chez un individu ne nécessite pas de prétraitement/de préparation, seule une lyse de l’échantillon étant parfois mais non indispensablement nécessaire selon certains modes de réalisation suivant l'invention, le dispositif selon l'invention comprenant intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l’ARN cible, la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, éventuellement un élément chauffant électrique et éventuellement des réactifs pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.

Le dispositif selon l'invention permet ainsi à l’opérateur de se dispenser d’une quantité importante de matériel et de réactifs mais aussi de réduire considérablement les manipulations à effectuer sur le terrain pour détecter un ADN cible et/ou un ARN cible au départ d’un échantillon prélevé chez un individu. Il en résulte notamment que les erreurs de manipulation et les contaminations sont significativement réduites que les mesures électrochimiques réalisées sont d’autant plus fiables et que le temps requis pour réaliser une détection sur le terrain est significativement réduit. En outre, un dispositif de détection d’un ADN cible et/ou d’un ARN cible selon l'invention est peu coûteux et peu encombrant puisqu'il ne nécessite pas d’appareillages imposants tels que ceux utilisés en laboratoire.

Les techniques d'amplification de l'ADN et/ou de l'ARN sont bien connues de l’homme de métier. En particulier et à titre d'exemple, les techniques d'amplification PCR, RT-PCR, LAMP et RT-LAMP sont des techniques bien connues de l’homme de métier qui est dès lors a même de déterminer, pour un ADN cible donné et/ou pour un ARN cible donné, quels réactifs et quelles quantités de réactifs doivent être compris intrinsèquement dans le dispositif selon l'invention (par exemple : tampons, dNTPs, polymérase, ADN polymérase, primers, transcriptase inverse, …).

A titre exemplatif, pour réaliser la détection de la présence d’ARN cible dans un échantillon, en particulier la détection de la présence d’ARNm cible dans un échantillon, les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ARN cible pour obtenir des amplicons dudit ARN cible comprennent une transcriptase inverse ou rétrotranscriptase et/ou une ADN polymérase. La transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est une enzyme utilisée pour réaliser la transcription en sens inverse de la direction standard (transcription inverse ou rétrotranscription) pour obtenir de l'ADN à partir d'ARN. La transcriptase inverse

? BE2021/5267 permet donc, au départ d’ARN, d'utiliser des techniques d’amplification telles que l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) ou l’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) se réalisant classiquement grâce à des brins d'ADN. En d'autres termes, à l'aide de la transcriptase inverse, l'ARN peut être transcrit en ADN, rendant l'analyse des ARN réalisable en recourant à des techniques d'amplification classiques d’ADN. Lorsque la transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est associée à la technique d’amplification PCR, on parle alors de réaction de polymérase en chaine par transcriptase inverse (RT-PCR). Lorsque la transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est associée à la technique d’amplification LAMP, on parle alors d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).

Notons que la transcriptase inverse permet de créer de l'ADN complémentaire (ADNc) à partir d'ARNm. L'ADNc est un simple brin synthétisé à partir d'un ARNm, représentant ainsi la partie codante de la région du génome ayant été transcrit en cet ARNm. L'ADNc est obtenu après une réaction de transcription inverse d'un ARNm et équivaut donc à la copie ADN de l'ARNm. De VADNc double brin peut résulter de la copie d’un premier brin par une ADN polymérase.

Avantageusement, selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible sont sous forme anhydre ou lyophilisée.

Préférentiellement, selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible sont présents sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.

Avantageusement, selon l'invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, est sous forme anhydre ou lyophilisée.

LO BE2021/5267 Préférentiellement, selon l'invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, est présent(e) sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.

De préférence, le dispositif selon l'invention comprend en outre un élément chauffant électrique agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).

Avantageusement, le dispositif selon l'invention comprend en outre un réactif pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.

De préférence, selon l'invention, ledit réactif pour lyser ledit échantillon est sous forme anhydre ou lyophilisée.

Préférentiellement, le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d’une puce microfluidique ou d’un dispositif microfluidique à base de papier.

Selon l'invention, le dispositif comprend ou non un élément chauffant électrique, en particulier comprend ou non intrinsèquement un élément chauffant électrique. Lorsqu’il ne comprend pas d’élément chauffant électrique, le chauffage du dispositif peut être par exemple assurer en mettant le dispositif en contact avec une plaque chauffante ou avec tout autre dispositif permettant d'assurer un chauffage de l'échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et/ou avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non

H BE2021/5267 intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Selon l’invention, de préférence, lesdites électrodes sont en outre agencées pour être accessibles électriquement depuis l’extérieur dudit dispositif. Selon l’invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible est choisi(e) dans le groupe constitué de Os(bpy)s* ; Ru(NHs)e** ; FcCH2N*Me3 ; FcB(OH)2 et leurs mélanges. Cette liste est non exhaustive et toute autre molécule non intercalante ou tout autre composé non intercalant, en particulier toute autre molécule non intercalante ou tout autre composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons d’au moins un ADN cible et/ou aux amplicons d’au moins un ARN cible tombe sous le couvert de la présente invention. De préférence, le dispositif selon l'invention présente : - une première partie ou zone comprenant lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) ; et - une deuxième partie ou zone, en particulier une deuxième partie ou zone séparée de ladite première partie ou zone, comprenant ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. Une distinction entre ces deux parties ou zones permet de séquencer les étapes d’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple par amplification isothermique à médiation par boucles [LAMP] ou par amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse [RT-LAMP]) et de liaison de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ce qui permet au dispositif selon l'invention d’être optimal, des amplicons étant d’abord obtenus avant qu’ils n’entrent en contact avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible .

A titre d'exemple, notamment si le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une puce ou d’une cellule microfluidique, les deux parties ou zones peuvent être des chambres distinctes reliées fluidiquement (comme illustré aux figures 7C et 7D) ou peuvent être des emplacements distincts situés dans un même (micro-)canal d’une puce ou d’une cellule microfluidique (comme illustré à la figure 7F).

Selon un mode de réalisation, le dispositif suivant l'invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend : - une première partie ou zone comprenant des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une deuxième partie ou zone, en particulier une deuxième partie ou zone séparée de ladite première partie ou zone, comprenant ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; et

- des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Selon un autre mode de réalisation, le dispositif suivant l'invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend :

- une première partie ou zone comprenant des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, lesdits réactifs étant sous une forme anhydre ou lyophilisée; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant étant sous une forme anhydre ou lyophilisée et étant compris (contenu) dans ladite première partie ou zone ou dans une deuxième partie ou zone, en particulier dans une deuxième partie ou zone séparée de ladite première partie ou zone ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Avantageusement, le dispositif selon l'invention comprend une vanne située entre ladite première partie ou zone et ladite deuxième partie ou zone. La présence d’une vanne permet de commander le passage de l'échantillon lysé ou non depuis la première partie ou zone vers la deuxième partie ou zone après une durée déterminée de séjour de l'échantillon dans la première partie ou zone de telle sorte que l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de PADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple par amplification isothermique à médiation par boucles [LAMP] ou par amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse [RT- LAMP]) est optimisée.

Préférentiellement, le dispositif selon l'invention comprend en outre des réactifs pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.

En particulier, le dispositif selon l'invention comprend en outre intrinsèquement des réactifs pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.

Avantageusement, le dispositif selon l'invention présente une partie ou zone additionnelle comprenant lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon ou ladite solution pour lyser ledit échantillon, ladite partie ou zone additionnelle étant située en amont de ladite première partie et de ladite deuxième partie dans un sens d’écoulement/de déplacement de l’échantillon.

Selon le type d’échantillon prélevé au départ d’un individu, il peut s’avérer être utile de procéder à une lyse de l'échantillon. Afin d'éviter que l’opérateur n’ait à effectuer une lyse sur le terrain avec du matériel spécifique et encombrant (pipette, solution de lyse, ...), le dispositif selon l'invention peut avantageusement comprendre une chambre de lyse (partie ou zone additionnelle) dans laquelle l'échantillon est lysé avant de gagner les autres parties ou zones du dispositif.

De préférence, le dispositif selon l'invention comprend une vanne située entre ladite partie ou zone additionnelle et ladite première partie ou zone et/ou ladite deuxième partie ou zone. La présence d’une telle vanne permet de commander le passage depuis la partie ou zone additionnelle où a lieu la lyse de l'échantillon vers la première et/ou la deuxième partie après une durée déterminée de séjour de l'échantillon dans cette partie ou zone additionnelle de telle sorte que la lyse de l’échantillon est optimisée.

Selon un mode de réalisation préféré du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et/ou les réactifs pour lyser ledit échantillon sont sous forme non liquide. Une forme non liquide peut être par exemple un gel, un hydrogel ou encore une cire mais aussi être une forme sèche non aqueuse comme par exemple une poudre.

Selon un mode de réalisation préféré du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et/ou les réactifs pour lyser ledit échantillon sont sous une forme anhydre ou lyophilisée.

En particulier, selon un mode de réalisation avantageux du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, sont sous une forme anhydre ou lyophilisée.

En particulier, selon un autre mode de réalisation avantageux du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, et lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon sont sous une forme anhydre ou lyophilisée.

Au contraire de solutions liquides comprenant les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, et/ou les réactifs pour lyser ledit échantillon, une forme anhydre ou lyophilisée de ces derniers permet de disposer d’un dispositif qui peut être conservé plusieurs mois voire plusieurs années sans dégradations des réactifs permettant la réalisation d’une amplification et/ou de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, et/ou des réactifs pour lyser ledit échantillon, lesquels conservent leurs propriétés au cours du temps, ce qui contribue à une reproductibilité des résultats.

Les dispositifs actuels, recourent systématiquement à une forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou à une forme liquide de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier à une forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou à une forme liquide de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant introduites au sein du dispositif après introduction dans ce dernier d’un échantillon (les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant ne sont donc pas intrinsèquement présent dans le dispositif). Avec les dispositifs actuels, cette forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou cette forme liquide de la molécule non intercalante ou du composé non intercalant est systématiquement utilisée et préconisée pour assurer la disponibilité de ces composés. En particulier, les réactifs doivent pouvoir interagir avec l'ADN cible et/ou VARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant doit pouvoir interagir à la fois avec l'ADN cible et/ou l’ARN cible et avec les électrodes (en particulier avec l’électrode de travail) pour que des mesures électrochimiques correctes et fiables puissent être effectuées.

Au contraire des dispositifs actuels, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible est présent(e) dans un dispositif selon l'invention sous une forme non liquide, en particulier sous une forme anhydre ou lyophilisée, et il a été montré, dans le cadre de la présente invention et à l'encontre de ce qui est préconisé et rencontré avec les dispositifs disponibles aujourd’hui, que cette forme non liquide, en particulier que cette forme anhydre ou lyophilisée, de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, permet bien de réaliser des mesures précises et fiables pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ouledit composé non intercalant, en particulier entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, afin de déduire que ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible est présent ou non dans ledit échantillon et d’assurer une détection dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible avec un dispositif suivant l'invention.

En d’autres termes, contre toute attente, il a été mis en évidence dans le cadre de la présente invention qu’une forme non liquide de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier qu’une forme anhydre ou lyophilisée de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, présent intrinsèquement dans un dispositif selon l'invention, permet bien de réaliser des mesures précises et fiables pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, afin de déduire, via une mesure électrochimique, que ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible est présent ou non dans ledit échantillon et d'assurer une détection dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible avec un dispositif suivant l'invention.

Selon un mode de réalisation suivant l'invention, le dispositif pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, lesdits réactifs étant sous une forme anhydre ou lyophilisée ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant étant sous une forme anhydre ou lyophilisée ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrnsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible .

Selon un autre mode de réalisation, le dispositif suivant l'invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend : - une première partie ou zone comprenant des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, lesdits réactifs étant sous une forme anhydre ou lyophilisée; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant étant sous une forme anhydre ou lyophilisée et étant compris (contenu) dans ladite première partie ou zone ou dans une deuxième partie ou zone ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

De façon préférentielle selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, et/ou lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon se présentent sous une forme anhydre ou lyophilisée dans le dispositif suivant l'invention.

De façon préférentielle selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, et/ou lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon se présentent sous la forme d’un lyophilisat dans le dispositif suivant l'invention.

Selon un mode de réalisation avantageux du dispositif suivant l'invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), sont présents sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.

Par exemple, des groupements chargés positivement sont associés à un support, en particulier à un support cellulosique, par greffage covalent ou autre.

Alternativement ou complémentairement, des polymères chargés positivement sont associés à un support, en particulier à un support cellulosique, par adsorption.

Alternativement ou complémentairement, des espèces chimiques prédéterminées sont polymérisées en surface d’un support, en particulier en surface d’un support cellulosique, pour que des polymères chargés positivement soient associés à ce support.

Dans le cadre de la présente invention, il a été mis en avant, en particulier pour ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier pour ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, qu’un tel support chargé positivement permet d’en garantir une disponibilité adéquate, en ce sens qu'il ne reste pas accroché au support afin d'assurer une mesure électrochimique adéquate.

Avantageusement, selon l'invention ledit échantillon est choisi parmi un échantillon sanguin, un échantillon salivaire, un échantillon urinaire.

L’échantillon peut se présenter sous forme liquide ou semi-liquide mais aussi sous forme solide ou semi-solide.

De préférence, selon l'invention, ledit élément chauffant électrique comprend une résistance électrique, laquelle est alimentée par une source d'énergie électrique.

Préférentiellement, selon l'invention, lesdites électrodes sont au nombre de trois.

De préférence, le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d’une puce microfluidique ou d’un dispositif microfluidique à base de papier.

Avantageusement, le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une cartouche au travers de laquelle peut s’écouler une solution ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d'une puce microfluidique. Le dispositif selon l'invention peut également se présenter sous forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics ») consistant par exemple en une série de fibres de cellulose ou de nitrocellulose hydrophiles qui guident un liquide d'une entrée à une zone souhaitée par imbibition et/ou par capillarité. Eventuellement, le dispositif microfluidique à base de papier selon l'invention se présente sous la forme d’un origami (« paper-origami based »), c'est-à-dire sous la forme d’un papier microfluidique dont des parties sont prévues pour être pliées l’une sur l’autre ou les unes sur les autres pour être mises en contact. Au sens de la présente invention, le dispositif peut préférentiellement encore se présenter sous la forme d'un « paper-based point-of-care NAATs (Nucleic acid amplification-based tests) ».

La présente invention porte également sur un ensemble comprenant : - un dispositif selon l'invention ; et - un appareil ou un appareillage pouvant être relié électriquement aux électrodes pour effectuer des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées.

Typiquement, pour réaliser des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimigues voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées, l’appareillage comprend un potentiostat pour appliquer une différence de potentiel entre les électrodes et/ou une unité de traitement de signaux émis par le potentiostat ou reçus par le potentiostat.

La présente invention porte également sur un procédé de détection de la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : - une étape d'introduction dudit échantillon dans un dispositif selon l'invention ou dans un dispositif d'un ensemble selon l'invention ; - une première étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, dudit échantillon avec des réactifs intrnsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une deuxième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, pendant ou après ladite première mise en contact, dudit échantillon avec une molécule non intercalante ou avec un composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif, en particulier avec une molécule non intercalante ou avec un composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; - une troisième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, pendant ou après ladite première mise en contact et/ou pendant ou après ladite deuxième mise en contact, dudit échantillon avec des électrodes reliées électriquement à un appareil ou à un appareillage pour réaliser au moins une mesure électrochimique, pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, afin de déduire que ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible est présent ou non dans ledit échantillon et d’assurer une détection dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible.

De préférence, le procédé selon l'invention comprend un chauffage dudit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible.

Avantageusement, selon l'invention, ladite première étape de mise en contact et/ou ladite deuxième étape de mise en contact consiste en une mise en solution par ledit échantillon desdits réactifs intrinsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou des amplicons dudit au moins un ARN cible, et/ou en une mise en solution par ledit échantillon de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif, en particulier en une mise en solution de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif et présentant des propriétés oxydo-réductrices, pour permettre l’établissement d’une liaison entre lesdits amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou lesdits amplicons dudit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier pour permettre l’établissement d’une liaison entre lesdits amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou lesdits amplicons dudit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.

De préférence, le procédé selon l'invention comprend une étape de lyse dudit échantillon, de préférence une étape de lyse dudit échantillon réalisée en amont de ladite première et/ou de ladite deuxième étape de mise en contact.

La présente invention porte encore sur l’utilisation d’un dispositif selon l'invention ou d’un ensemble selon l’invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon.

D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront des exemples donnés ci-après, à titre non limitatif et en faisant référence aux figures annexées. Généralement, sur les figures, les éléments similaires portent la même référence.

La figure 1 illustre un premier exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.

La figure 2 illustre un second exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.

La figure 3 illustre un troisième exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.

La figure 4 illustre un quatrième exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.

Les figures 5A, 5B et 5C sont des vues éclatées d'exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention et illustrent les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l'invention.

Les figures 6A, 6B, 6C, 6D et 6E sont des vues éclatées d'exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention et illustrent également les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l'invention.

Les figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F illustrent encore des exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention.

Exemples La figure 1 illustre un premier mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention qui, comme illustré comprend une première partie ou zone 1, une deuxième partie ou zone 2, des électrodes 3 et un élément chauffant électrique 4. Optionnellement, comme illustré par les pointillés, ce mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention peut comprendre une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs pour lyser l’échantillon ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. La figure 1 illustre un exemple d’un dispositif selon l'invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATS »).

Le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement dans une première partie ou zone 1, des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible potentiellement contenu dans l’échantillon (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Le dispositif comprend également intrinsèquement dans une deuxième partie ou zone 2 une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. Avec un tel dispositif selon l'invention, l’échantillon prélevé au départ d’un individu est de préférence lysé, c’est-à-dire mis en solution dans une solution de lyse, avant d’être introduit dans le dispositif comme indiqué par la flèche. Lorsque, par exemple sous l’effet de la gravité, l'échantillon lysé gagne la première partie ou zone 1, il entre en contact avec les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de VADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), dans la première partie ou zone 1 sous l'effet d’un chauffage à une température prédéterminée par l'élément chauffant électrique 4. Des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible sont ainsi obtenus à condition que cet ADN cible et/ou que cet ARN cible soit présent dans l’échantillon prélevé au départ de l'individu. Les amplicons obtenus gagnent alors, par exemple sous l’effet de la gravité, la deuxième partie ou zone 2 comprenant une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Selon le mode de réalisation illustré, les électrodes 3 (électrode de travail, contre-électrode ou électrode auxiliaire et électrode de référence) sont en contact avec l’échantillon après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. Les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l'invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant un indicateur redox (Molécule non intercalante ou composé non intercalant), le principe et la mise en œuvre d’une telle mesure électrochimique étant bien connus de l'homme de métier.

Lorsque le mode de réalisation illustré à la figure 1 comprend également une partie ou zone additionnelle 5 comprenant une solution ou des réactifs pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu, l’échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la première partie ou zone 1 puis la deuxième partie ou zone2.

La figure 2 illustre un second mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention. La figure 2 illustre un exemple d’un dispositif selon l'invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou «paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATs »). Les mêmes éléments que ceux illustrés à la figure 1 sont repris. Toutefois, selon le mode de réalisation tel qu'illustré à la figure 2, la première partie ou zone 1 et la deuxième partie ou zone 2 sont situées à un même niveau, c’est-à-dire dans une même zone ou un même compartiment. Par exemple, la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un

ARN cible, situé(e) dans la deuxième partie ou zone 2, peut revêtir les parois latérales d’une zone ou d’un compartiment du dispositif en entourant ainsi la première partie ou zone 1 comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de ADN cible et/ou de l'ARN cible potentiellement contenu dans l’échantillon (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Il n’est pas exclu, selon l'invention, que les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et que ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, soient présents en mélange dans une même zone ou dans un même compartiment, lequel comprendrait alors ladite première et ladite deuxième partie ou zone.

La figure 3 illustre un troisième mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention. La figure 3 illustre un exemple d’un dispositif selon l'invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATS »). A la différence du mode de réalisation illustré à la figure 1, celui illustré à la figure 3 comprend une partie ou zone 7 supplémentaire située en amont et en contact avec les électrodes 3 dans un sens d'écoulement de l'échantillon.

Le mode de réalisation illustré à la figure 4 est identique à celui de la figure 3 hormis le fait que le chauffage assuré par l’élément chauffant électrique 4 s'effectue au niveau de la partie ou zone 7 supplémentaire située en amont et en contact avec les électrodes 3 dans un sens d'écoulement de l’échantillon plutôt qu’au niveau de la première partie ou zone 1. La figure 4 illustre un exemple d’un dispositif selon l’invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATS »).

Les figures 5A, 5B et 5C illustrent les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l'invention.

Plus particulièrement, les figures 5A, 5B et 5C illustrent les composants d’un dispositif A selon l'invention qui se présente sous la forme d’un cylindre constituant par exemple une cartouche.

A la figure 5A, le dispositif A selon l'invention comprend une première partie constituée par exemple d’un disque perméable 1+2, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Un élément chauffant électrique (non illustré) assure un chauffage du disque perméable 1+2 à une température prédéterminée pour assurer l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou l'ARN cible (par exemple une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Selon le mode de réalisation de la figure 5A, des électrodes 3 au nombre de trois sont en contact avec l’échantillon pendant que ce dernier est en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de VADN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

En outre, les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l'invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant un indicateur redox (molécule non intercalante ou composé non intercalant), le principe et la mise en œuvre d’une telle mesure électrochimique étant bien connus de l'homme de métier. Comme illustré à la figure 5A, les électrodes 3 du dispositif A selon l'invention peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) par l'intermédiaire d’une base B ou d'un socle muni de connecteurs. Par exemple, le dispositif A selon l'invention peut être visé ou clipsé sur le socle ou la base B pour assurer un contact adéquat entre les connecteurs et les électrodes 3.

La figure 5B est identique à la figure 5A mais le dispositif A illustré comprend en plus une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. De la sorte, l'échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la partie constituée par exemple d’un disque perméable 1+2 comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de VADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

La figure 5C est identique à la figure 5B mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l'échantillon depuis la partie ou zone additionnelle 5 où il est lysé vers la partie constituée par exemple d’un disque perméable 1+2 comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Les dispositifs illustrés aux figures 5A, 5B et 5C comprennent intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et, éventuellement des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu.

Les figures 6A, GB, 6C, 6D et 6E illustrent également les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon Pinvention. Plus particulièrement, les figures 6A, 6B, 6C, 6D et GE illustrent les composants d’un dispositif A selon l'invention qui se présente sous la forme d’un cylindre constituant par exemple une cartouche. A la figure GA, le dispositif A selon l'invention comprend : - une première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) ; et - une deuxième partie 2 constituée par exemple d’un disque perméable, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Un élément chauffant électrique (non illustré) assure un chauffage d’au moins le disque perméable 1 à une température prédéterminée pour assurer l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de ARN cible (par exemple pour assurer une amplification isothermique à médiation par boucles ou pour assurer une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Selon le mode de réalisation de la figure GA, des électrodes 3 au nombre de trois sont en contact avec l'échantillon après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec la molécule non intercalante ou avec le composé non intercalant, en particulier avec la molécule non intercalante ou avec le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. En outre, les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l'invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant un indicateur redox (Molécule non intercalante ou composé non intercalant), le principe et la mise en œuvre d’une telle mesure électrochimique étant bien connus de l'homme de métier. Comme illustré à la figure GA, les électrodes 3 du dispositif A selon l'invention peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) par l'intermédiaire d’une base B ou d’un socle muni de connecteurs. Par exemple, le dispositif A selon l'invention peut être visé ou clipsé sur le socle ou la base B pour assurer un contact adéquat entre les connecteurs et les électrodes 3.

La figure 6B est identique à la figure 6A mais une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, sépare la première partie 1 de la deuxième partie 2 et permet de commander le passage de l’échantillon depuis la première partie 1 comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit

ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

La figure 6C est identique à la figure 6A mais le dispositif A illustré comprend en plus une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. De la sorte, l'échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la première partie 1 constituée par exemple d'un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), puis vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. La figure 6D est identique à la figure 6C mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6’, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l'échantillon depuis la partie ou zone additionnelle 5 où il est lysé vers la première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de ADN cible et/ou de ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) puis vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant,

en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

La figure 6E est identique à la figure 6D mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l’échantillon depuis la première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Les dispositifs illustrés aux figures GA, 6B, 6C, 6D et 6E comprennent intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et, éventuellement des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu.

Les figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F illustrent des exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention sous forme de dispositifs microfluidiques (cellules ou puces microfluidiques) présentant une entrée E via laquelle un échantillon peut être introduit. Des éléments identiques à ceux illustrés aux figures précédentes sont repris.

En particulier, la figure 7E illustre un dispositif selon l'invention tel qu'illustré aux figures 7A à 7D à la différence près que les électrodes sont en contact direct avec une zone comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de VADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.

Selon le mode de réalisation d’un dispositif suivant l'invention illustré à la figure 7F, le (micro-)canal C d’une cellule ou puce microfluidique constitue une première zone ou partie du dispositif, cette première zone ou partie comprenant une première sous-zone (délimitée par les pointillés) où se trouvent les réactifs 1 permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de PADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et une deuxième sous-zone (délimitée par les autres pointillés) où se trouve la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, chacune de ces deux sous-zones étant situées dans ladite première zone ou partie du dispositif constituée par ledit (micro-)canal d’un dispositif microfluidique et étant donc en communication fluidique. Les dispositifs illustrés aux figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F comprennent intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et, éventuellement des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. La présente invention a été décrite en relation avec des modes de réalisations spécifiques, qui ont une valeur purement illustrative et ne doivent pas être considérés comme limitatifs. D’une manière générale, il apparaîtra évident pour l’homme du métier que la présente invention n’est pas limitée aux exemples illustrés et/ou décrits ci-dessus.

L’usage des verbes « comprendre », « inclure », « comporter », ou toute autre variante, ainsi que leurs conjugaisons, ne peut en aucune façon exclure la présence d’éléments autres que ceux mentionnés. L’usage de l’article indéfini « un », «une », ou de l’article défini «le», «la» ou « l’ », pour introduire un élément n’exclut pas la présence d’une pluralité de ces éléments.

Claims

Revendications

1. Dispositif pour détecter la présence d'au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit dispositif comprenant : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT- LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible .

2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible sont sous forme anhydre ou lyophilisée.

3. Dispositif selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible sont présents sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.

4. Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, est sous forme anhydre ou lyophilisée.

5. Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, est présent(e) sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements charges positivement et/ou des polymeres charges positivement.

6. Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comprend en outre un élément chauffant électrique agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).

7. Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu’il comprend en outre un réactif pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.

8. Dispositif selon la revendication 7, caractérisé en ce que ledit réactif pour lyser ledit échantillon est sous forme anhydre ou lyophilisée.

9. Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il se présente sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d'une cellule ou d’une puce microfluidique ou d’un dispositif microfluidique à base de papier.

10. Ensemble comprenant : - un dispositif selon l’une quelconque des revendications 1 à 9 ; et - un appareil ou un appareillage pouvant être relié électriquement aux électrodes pour effectuer des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées.

11. Procédé de détection de la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit procédé comprenant les étapes suivantes :

- une étape d'introduction dudit échantillon dans un dispositif selon l’une quelconque des revendications 1 à 9 ou dans un dispositif d’un ensemble selon la revendication 10 ;

- une première étape de mise en contact, au sein dudit dispositif,

dudit échantillon avec des réactifs intrinsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ;

- une deuxième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif,

pendant ou après ladite première mise en contact, dudit échantillon avec une molécule non intercalante ou avec un composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif, en particulier avec une molécule non intercalante ou avec un composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ;

- une troisième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, pendant ou après ladite première mise en contact et/ou pendant ou après ladite deuxième mise en contact, dudit échantillon avec des électrodes reliées électriquement à un appareil ou à un appareillage pour réaliser au moins une mesure électrochimique, pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, afin de déduire que ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible est présent ou non dans ledit échantillon et d'assurer une détection dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible.

12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu’il comprend un chauffage dudit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible.

13. Procédé selon la revendication 11 ou 12, caractérisé en ce que ladite première étape de mise en contact et/ou ladite deuxième étape de mise en contact consiste en une mise en solution par ledit échantillon desdits réactifs intrinsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou des amplicons dudit au moins un ARN cible, et/ou en une mise en solution par ledit échantillon de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif, en particulier en une mise en solution de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif et présentant des propriétés oxydo-réductrices, pour permettre l'établissement d’une liaison entre lesdits amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou lesdits amplicons dudit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier pour permettre l'établissement d’une liaison entre lesdits amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou lesdits amplicons dudit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.

14. Procédé selon l’une quelconque des revendications 11 à 13, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de lyse dudit échantillon, de préférence une étape de lyse dudit échantillon réalisée en amont de ladite première et/ou de ladite deuxième étape de mise en contact.

15. Utilisation d’un dispositif selon l’une quelconque des revendications 1 à 9 ou d'un ensemble selon la revendication 10 pour détecter la présence d'au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon.