AT507364B1 - Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben - Google Patents

Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben Download PDF

Info

Publication number
AT507364B1
AT507364B1 AT0802509A AT80252009A AT507364B1 AT 507364 B1 AT507364 B1 AT 507364B1 AT 0802509 A AT0802509 A AT 0802509A AT 80252009 A AT80252009 A AT 80252009A AT 507364 B1 AT507364 B1 AT 507364B1
Authority
AT
Austria
Prior art keywords
ala
leu
gly
val
arg
Prior art date
Application number
AT0802509A
Other languages
English (en)
Other versions
AT507364A1 (de
Inventor
Wulf-Dieter Dr Moll
Doris Mag Hartinger
Stefan Dr Heinl
Karin Dipl Ing Griessler
Eva Maria Dr Binder
Gerd Dr Schatzmayr
Reingard Dr Grabherr
Original Assignee
Erber Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Erber Ag filed Critical Erber Ag
Priority to AT0802509A priority Critical patent/AT507364B1/de
Publication of AT507364A1 publication Critical patent/AT507364A1/de
Application granted granted Critical
Publication of AT507364B1 publication Critical patent/AT507364B1/de

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/189—Enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1096—Transferases (2.) transferring nitrogenous groups (2.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Bei einem Verfahren zur Herstellung eines Futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen Abbau von Mykotoxinen, insbesondere Fumonisinen, wird wenigstens eine Nukleinsäuresequenz von Genen entsprechend Sequenz ID-Nr. 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 und 24 vorgelegt, die wenigstens eine Nukleinsäuresequenz in prokaryotischen oder eukaryotischen Wirtszellen exprimiert und wenigstens ein dadurch hergestelltes Enzym entsprechend Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23 und 25 oder auch ein kompletter, rekombinanter Wirtsorganismus sowie gegebenenfalls gemeinsam mit einem Cosubstrat in einem Futtermittel eingesetzt.

Description

österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Beschreibung [0001] Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines Futtermittelzusatzes sowie die Verwendung desselben.
[0002] Verschiedenste Mykotoxine treten auf landwirtschaftlichen Produkten sehr häufig auf und verursachen je nach Art der Mykotoxine schwere wirtschaftliche Schäden, insbesondere in den aus den landwirtschaftlichen Produkten hergestellten Nahrungsmitteln und auch bei Tieren und Menschen, welche derartige Nahrungsmittel verzehren, wobei derartige Schäden äußerst vielfältig sind. Es wurden bereits zahlreiche Methoden entwickelt, um zu versuchen, derartige Mykotoxine zu entgiften bzw. abzubauen oder unschädlich zu machen, um die durch die Mykotoxine verursachten Schäden in den Bereichen von tierischer und menschlicher Ernährung, der Tierzucht, Viehwirtschaft, Verarbeitung von Futter und Lebensmittel und dgl. hintanzuhalten.
[0003] Unter den bekannten Mykotoxinen existiert eine Vielzahl von untereinander strukturell verwandten Mykotoxinen, wie beispielsweise die Fumonisine, von welchen Fumonisin das am häufigsten vorkommende Toxin der Gruppe ist. Jedoch sind zahlreiche Derivate und verwandte Moleküle bekannt, welche ebenfalls giftige Wirkungen bei Tieren aufweisen, wie beispielsweise im Zusammenhang mit der Fütterung von kontaminiertem Mais. Fumonisine sind in diesem Zusammenhang eine nahezu allgegenwärtige Kontamination auf Mais, welche aber auch auf anderen Getreiden, Nüssen und Gemüse einen stark negativen Effekt in bezug auf die Tiergesundheit und Leistung darstellen.
[0004] Der mikrobielle Abbau von Fumonisinen wurde bereits in der EP 1 860 954 beschrieben, gemäß welcher Mikroorganismen zur Entgiftung von Fumonisinen und Fumonisinderivaten eingesetzt werden, bei welchen die detoxifizierenden Bakterien oder Hefen, gewählt aus genau definierten Stämmen zur Entgiftung von Fumonisinen Futtermitteln zugesetzt werden.
[0005] Auch wurden bereits katabolische Stoffwechselwege für den biologischen Abbau von Fumonisinen und die hiefür verantwortlichen Gene und Enzyme beschrieben. So beschreibt beispielsweise die EP 0 988 383 bzw. die WO 2006/053357 A2 Fumonisin entgiftende Zusammensetzungen und Verfahren, wobei die eingesetzten, Fumonisin abbauenden Enzyme in erster Linie in transgenen Pflanzen produziert werden, bei welchen die Entgiftung von Fumonisinen mit Hilfe einer Aminooxidase, welche für ihre enzymatische Aktivität molekularen Sauerstoff benötigt, erfolgt.
[0006] Des Weiteren beschreibt die WO 2004/085624 Transaminasen, Deaminasen und Ami-nomutasen und Zusammensetzungen und Verfahren zur enzymatischen Detoxifizierung, wobei insbesondere aminierte Toxine, beispielsweise Fumonisine, entgiftet werden. In diesem Zusammenhang werden Polypeptide, welche eine Deaminaseaktivität besitzen, zur Entgiftung eingesetzt.
[0007] Bisher bekannten Verfahren ist jedoch gemeinsam, dass sie für eine Detoxifizierung der Mykotoxine molekularen Sauerstoff für die beschriebenen, katabolischen Stoffwechselwege benötigen, wobei die insbesondere erforderlichen Aminooxidasen unter sauerstoffunabhängigen Bedingungen nicht arbeiten können. Ein Einsatz von derartigen Genen und Enzymen zur Detoxifizierung von Futtermitteln, beispielsweise im Verdauungstrakt von Tieren, ist aufgrund des im wesentlichen sauerstofffreien Milieus in dem Verdauungstrakt von Tieren nicht möglich bzw. zeigen die bekannten Gene oder Enzyme keinerlei Wirkung.
[0008] Die Erfindung zielt nun darauf ab, ein Verfahren zur Herstellung eines Futtermittelzusatzes zur Verfügung zu stellen, mit welchem es gelingt, Mykotoxine und insbesondere Fumonisine unabhängig von Sauerstoff sicher und zuverlässig zu entgiften.
[0009] Zur Lösung dieser Aufgaben ist das erfindungsgemäße Verfahren im wesentlichen dadurch gekennzeichnet, dass wenigstens eine Nukleinsäuresequenz von Genen entsprechend Sequenz ID-Nr. 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 und 24 vorgelegt wird, die wenigstens eine Nukleinsäuresequenz in prokaryotischen oder eukaryotischen Wirtszellen exprimiert wird 1 /62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 und wenigstens ein dadurch hergestelltes Enzym entsprechend Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9,11, 13,15,17,19, 21,25 und eine Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst, oder auch ein kompletter, rekombinanter Wirtsorganismus hergestellt wird, wobei das wenigstens eine Enzym gegebenenfalls gemeinsam mit einem Cosubstrat in einem Futtermittel eingesetzt wird. Dadurch, dass wenigstens eine Nukleinsäuresequenz von Genen entsprechend den nachfolgenden Sequenz ID-Nr. 1,2, 4, 6, 8,10, 12,14, 16, 18, 20, 22 und 24 vorgelegt wird, gelingt es, spezifische, Fumonisine bzw. Mykotoxine abbauende Gene zu klonieren und zu produzieren, wobei beispielsweise die Expression in E.coli und Pichia pastoris unter Verwendung von Standardverfahren durchgeführt wird, bei welcher Expression Enzyme entsprechend den Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 25 und eine Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfaßt, oder auch ein kompletter, rekombinanter Wirtsorganismus hergestellt wird, welcher gegebenenfalls gemeinsam mit einem Cosubstrat in einem Futtermittel eingesetzt wird. Mit einem nach einem derartigen Verfahren hergestellten Futtermittelzusatz gelingt es, Mykotoxine im Verdauungstrakt von Tieren auch in einem anaeroben oder einem sauerstoffunabhängigen Milieu vollständig und zuverlässig abzubauen, wobei die spezifischen bei diesem Verfahren exprimierten bzw. produzierten Enzyme den Abbau von Fumonisinen und von Zwischenprodukten des Abbauweges katalysieren. Mit einem derartigen Verfahren gelingt es weiterhin, den Sphingolipidstoffwechsel, der durch eine Wechselwirkung der Fumonisine mit dem Enzym Ceramidsynthase behindert wird, aufrecht zu erhalten und gleichzeitig die Fumonisine biologisch zu nicht toxischen Substanzen abzubauen, welche von dem Tier ohne Schädigung ausgeschieden werden können. Schließlich können technologische Anwendungen der Detoxifi-zierung erzielt werden, da dieses Verfahren auch im größeren technischen Maßstab, entgegen den aus dem Stand der Technik bekannten Verfahren, anwendbar ist, so dass mit dem erfindungsgemäßen Verfahren sicher und zuverlässig ein Futtermittelzusatz hergestellt werden kann, der Mykotoxine und insbesondere Fumonisine im sauerstoffunabhängigen Milieu enzymatisch abbauen kann.
[0010] Die in dem erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzten Nukleinsäuresequenzen bzw. die mittels dieser Nukleinsäuresequenzen in bakteriellen und eukaryotischen Wirtszellen exprimierten, in sauerstoffunabhängigem Milieu sauerstoffunabhängig katalytisch wirkenden Enzyme sind nachfolgend aufgelistet.
[0011] 2/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
NUKLEINSÄUREN SEQUENZEN: >Seq ID 1 (fum (Fumonisinkatabolismus) Gencluster, 15.420 bp) tgtcggcgatcrgtaaacttctaccgtggtcctcgttcgcccacakcatacatcacagäcrtcgggatttccaactgaac
GGGTCCCGeCCTGCCGGCCCACATITCCCGGAACGCCATATGGGTGATTTCGACAATCCGGTTCCAGGCGAAGATGGGTG
CGCCCCATTTAACCGCGGGTCGAAAGAGGTCGATCTGGTCTTGTCCCTGAAAGGTTTTTGGCGTGCAGGGATAAACGACA
CCAAGTTGATGCTGGGACGTTATTGCGACGAAGGGAACCCCTTCGTGGCGTGCCGTCACGACTCCAGGCAGAAGGTTTGC cgtaccgggacccggattcgtgacaatcgcggcgacctgtccggtggtcttgtaaatgccctcggccatataggctgcgg cggcctcgtgccgcaccgggacgaacaatatcccattgtcttcgagcgcagccaggagcggatccacctccggcgacatg aggcogaagacataccggacgccttcgacggccaaacatcgtgccaataattctccgcccgtgaggcgcatgacgatctc cagtacgaaaggtgagtgcccaggttccggcacattcgctgtggttagttgatgcgctgatcggccaaccgactgagtgg agttggatggccgcaccttaccctgtcgcgcataactctcagatccggaaacggaccccgacattaaaatagcggccgac cggatcataggcagagctggtcgggctggaaaaactgctggggtcgttcgtcgctattggcggatctcggtcgaacaaat tattgaccgatagaaacagctgctgcttctggccaaaagccgcgatgtcgaaggtcaatgtcgcgtcggtgtaccaaacc gccggagcgtggttcaaattcgtatcgacgccctccacattgtcggcattgaacaccgatgctgcgatgaagcgctgctg cäcgagaagcgcccaatcgtcggtcgaatatcgcgcctggaagttggccgaccattttggcgtgtccggttgtccgagcg aacggatgggcgccgagccggtcgcgatgcgataggcagaggtatggtgcgttgccagcgcacgaagactgaacgtgccg ccgccgacggggcgtgagtaataggcctcgaagtcaattcccgccgctttctggacagccaggttgagattgggacccgt cactgtgatggtgccgtccggattctccgttatgaggtcgcagaagaaggtgtttcctgcatcgcacgcgtcgatttcct gctggggaaggaggaaatcgatcgcgcccttcaccttcaccacatagcgatcgaccgaaaactgaaaccccggcacgaag gcggggcgtagcaccgcgccgaatgtaaggacgtccgccttttcagggcgcaaatccgcgttgccggcggtaaagaaccg cgtctgcacagcctgtccgccataaattgaattgagcgtcgcctgacggccggggtcgaatagctcgacaaggcttggcc cgcggatatctcgcgaacgggtcgcgcggaacctgaggccgtcgatcggctcatattctccgcccagcttccaggttgtt actccaccggactggctgtaatcggcatatcggacggcgccgtttaagttcagcgaacgtcccagcgcgctgtccttcag aatcgggacgccgatttcgacaaaaccttccttgatgtcatagcttcccgagaagggaagtgggttgtagagattgaagc ctocaggccgacctgcctgcgccgccggagcccccctgattcccgtgatcgaggtcgtcgcctgcgatatcgcgtcggtt
TCCrGCCGGGCCTTCTCCTTGCGATATTCGATACCAGOGGCGACCGAGACCGGGCCCGCGCCGAACGACAGGCTATCGCC
GAGGTCGCCGGAAATCGTGAGTCCCGCCACATATTGCTCAAGCCTCAGCTGAGCGACGCCATCAGCGGTGACATAGTCGA
TGGCCGACGCGCTCGGCGAGCCTGTGCCGAAGAGATTGAGCGGCACGCAATCTTGGTCGAGGCCGGCCAGTGTTGAACGG
CAGACGATATTGCCCGCGGGATCGCGGACCGCATCGACGGCGGCGTAGAGATTGCGGTTGATGGTGAGATTGTTTTCACG aagctcgaggtccgtaaggccaaaggaggccgagccatcgagtttccagccattgccaatgtctgcccggaagccggcag
CGCCGCGGTAGACCTTTGCGAAATTCTCGATTTCGACCAAGGGAAAGTCGCTTGAGAAGCGACCGACAACGATCGAAGCC tgggcatttctgtccatgagcgtcgcgagtggagccggaaggaaggcgttatcacggaagatccggaaattattcqagcc accgacatgcgatattacgaatgcacccaggttggtgtgggaataagcataggtgccctccgcatacacctgcacagtgt cggacacatcatatgcggcgcgtaggaacgcgttgtagcgaagctgatccggggcgaagccgatattcacgcgcggtcca tcgccgccgctctggaacgacgagctcgtaaaattcccgtagtcgaaggtccctaggactcctccgggcaaaaacgcgat gcctttcagagggccggacgtgacaagtccgccgtaggatccgcgagaactgcgaatatcgggcacgäccgtgacgcctg tcgtagcgccgggcacgggatattggccggcggcgatgtcgaaccagcggcgacccgttgcttcatcggcccggattccg tcctgtcgaaaatattcgaagctgccgagcaagtgcaaccggtcgtcggcaaacgaagtgccgaaggcgatcgaaccgcc gtaggacgggaggtcgccgcgggttgaaacacccgactggagctcggccctgatgccttccagatcttcgtcgagcacga agttgatgacgcccgaaacggcatcggäaccgtaggcggccgaggcgccgcccgtcacgacatcgacgcgcttgaccaac gcctgcggcagcacgttgatatcgaccgagcctgtgaaattggtcgcgacgaaacggttgccgttcagcaggacgaggtt ccggtttgacccgaggccgcgcatgttgagcaggttctgaccgctgttccccgttccgggtgtcgtgccagggttggagg tcttcaagctgtcgttgaacacgggcagctggttgagtgcgtcggcaaggttggtcggagatgcctccttcaactgctcg ctggatacggctgtaaccggcgtcggcgaattgaagccgttctggaggcggctgccggtcacgacgatttcgctcgttcc ccggtccgtgtccgcttcgtccggctgacctatcgatgcgggatcgctatcctgagcactggcagagacaggaaatgcga gggtgccgagcgctactgcgccgagcaaactatttgccttgccgggcttttcgattctgaacttccgatacatctgcagt ccctcccgaattgatagggactccgtttgagtccccttgtttcttgacgccgccgtcgctcaccacggtccggtcggagg ctaagcgtcgggcctaaggacccgcaatttgaacatcaaatgcaatgatcggaggcttcattgcacttcgcgcatagacc 3/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
GGCGCGGTAGCTGAAAGTGCCAATAATCAGGGATTTTGCTGAACAGTTGCGGCATGACGTCCGGCATCGGCCACGCGGTT
GGCGGCATCGACGTGGCTTTCGCGTCGCCGCCCCTCAäGCACCGGCGAGTTGCATTAAAATGGGATGAGGCTGGAGAGAC
GCAAAATCTCTGäGGACCGCGCTGAACGCGCGATCCGTCGCCTCGAGGGTCTCCGTTACATCGTCAACTGTATGGGCCGC AGAGAGAAACATATTGTGATAGGGATGAACATAGACGCCGCCCTTCAGGCACGCCGCGGCCCACGCATAGCCGATCCGAä aatcgggatcgtccgcaaagaatatttgcggcatctgcgccgggcccgtctgcttcaactcaagaccatggcgctgagac tgtgcctccaggcctgcccgcagggcggcgccgctggcgatcagcgtttcgagataaggcgtctctcgaatgatcctgag ggtttcgatcgcggccgccatcggtaccgcagagaaccagaaggagccggtcacaaatatatcccgcgccgcatcgcgcg ccttgttcgagcccagcagggcggagatcggatagccattcgcaaagcattttccccagcaactgagatcgggttcgata cccaaatgcgtccagctgcaatcgcgcgccacccggaaacctgcgcgcacatcgtcaacgaccagaagcgcaccggtctc
GTCACAACATTTTCGAGCGGTGCGCGCGAACTCAAGCTGGGCGAGGGCCTGGTCCTGAAATACTTCGTGTCGGAAAGGTG tggcaaagacagccgcaatatcgccatcgtgcgccttgaacgcgtccgataagctttgggcgtcgttataggtatäatat gcgacatgcacgcgatcggaagcgagaatcccggcagtatgcggagtgttccacggggaagcgccatgataggcgccttt ggcgcataatatggttttgcgccccgtatgggcacgcgcgagaaccatcgccgttgaggtggcatcgctgccatttttgc
AGAACATCGCCCAATCCGCATGACGGACCATGCCCACAAAGGCTTCGGCGAGGTTGACCATGATCTCCGäAGGACCGGTC atggtgtcgccgagaagtcgctgcgcatcagccgcggcttcgatttgggattgccggtaaccgagcaaatttggcccata cgcgcacatatagtcgatatagggctgctcgtcggcgtcccaaattcgtgcccccagcgcgcgcctgaagaactggggga attctggcggcagcaaccgtgtcgactcgtggccgtacatcccgcccggaatgacccgttcggcgcgttctctgagatct ttctgccttgttccgttcgccataatgcacctctcgcgataaataatgggtaaaaatccacgaaattcaacgattcgtga tctgaaagagatatatcttgtaatatactgtataattatacacaatgcgcaatcggacgacgggatagcggggcagggag gacggggaaatctatgcggaacgtcagcgacaaggcgccgccccacgagacgctcaccgtagtcgtcgcggcaatgatcg ttggcacggccgccttgatggtgcttggaatacagcccatccttctcggcgcccttgtagaggaggggcgtattcccgcc
GAGGGGTTGGGATCGGCGGCAACGGTGGAAATACTGGCGATCGCGGCGGGAACATGCATCGGACCCGTTCTTATGAAGAC
GGGATATCTGCGGGCGAAATGCGCGGCACTCTGCTTAATGCTCGCCGCAATCAACTTCGGATTGACGTTGCCGGGTTTCG
ATTTGCCCATCGTGGCTTGCCGAGCGGCAGCGGGAGCCCTGGAAGGTCTTTCGCTCAGCGCGGCGATCCTGATCATGACT
CATAATCGGCGGCCGGACCGGCTGAGCGGAATATTTCTGGGCGCGCÄGACGATACCGCÄGGTAATATCTGCTTATTTGCT
CCCGACGGAGATTATTCCGCGCTGGGGGAGCGCAGGCGGCTTCACGATCCTGGGCATTCTCGCGGCGATCGCCGCGATCG
CGGCTCTGTGCCTCGTCGATCGCGTTGAGCTCGATCCGACGACCGTTAACGACGACTTGCAGTGGTCACCCGCGGCGATC
GTCATTTCGATGGCGGCATTCGTTCAATTCTCGGGGGTCGGTGCCGCATGGAGCTATCTGGAGCGACTGGCTGCGCAGCA
CGGATTTTCGGGAGAAACGATCGGTATCGCCATTTCCGGGAGTTTGCTTTGCCAGGTAGGCGGGGCTTGGCTGGCCGCTT ggatcggtgggcxsggtcggatatcgcttcgccttaatcgctgggagcctgcttcaggcgggcaacgtgatcgcattggcg
GTGGCCGATCAGCCAAGCTGGTTTATTTCCGCTTCCTGTGCTTTCGGCCTGTTCTGGTTGGCGATGCAGCCCTTCCAAAT
CCGCTTCGCGATCGCGATAGATAACAGCCGGCAGCTTGCTGTACTGCTGACGCCGATCGCCCTCGTCGGGTTGAGCGCGG ggcccttgttgctctctcgctttgccggggcgaccgacttgcgctggatctttgtggggagttcgaccttgttgctggcc agcgcgcttctgtatctttgcgcttctctgtttcaaccgcgcggaaaggtgatcgctgaaacggtggacgtatgaaaaag acggatcggggttcgcgatgacatcgcaggtcaagcttcgtagcgcggcaaagcggccgcgcagtcctaaaagcgagcga
GGTCTTGCTCGTTACGAGTCCTTGCTTGATGCGACCGACAGGCTGTTGGTCGATCTAGACCCCGATCAGGTC!GGTCTCTA
TCAGATTGCAGAGGAAGCGGGTGCCTCACCGTCGTCCGTCTATCATTTCTTTCCGACCAAGGAAGTGGCTCATCTCGCTC
TGATGCGCCGCTATCTGGAGGGGCTCCGGAATCTCGACGCGATGGAAGTCGACATCGGCCAGCTCGAAAGCTGGCAGGAC ctgatgaagttggatcagatcagggcgcgagactattataatagccacccgcccgccctcaagcttctgttcggcggata tggcggggtcgaggccagaaagcttgacgagcgatactccgaggaaatcgtgagctccatgtatggcagatacaacggca ttttccatatgccgcaaatggagaatgaggctctcatgttcacgatctgcttcgcaattctcgacgcggtatgggccgtc tcctttcgccggttcggtgaaattacgtcggattttcttcgggaggggcaagcggcttgcattgcctattgccgacacta tctgcccgagcgaacgccatcagcgtgaatccgttcaacgatatgcaggaatgtccgttgcgttgagttcggttctgagt tcggtcggttaggaggccccgcgataaaccaacgctcttctgtcgaagggatgtcgcctggttcgaccaggccctgcgaa gtcagccgcaatcaacgaggcagatgtcaacgtggccagcaagttcaactgtgagttactcgatctgcgatcatttgttg cggtgtatgaaacgcgaagttttagccacgccgcgcggcttctgaatcaatcgcagcccgcgctcagccggagaatccag cgcctcgagagtctcgtgggcggtccgttgttcgagcggaccagtcggtcgcttgccgaaacggcgctcggcaaagagtt gctcccggtcgcccaccgagcgttggaacttgtcgatacgtcgctgtttgcgtcgcccaatgtccgggagttccgctgga cagacatcacgattgcctgtgtacagaccgccgccttccatgttctcccgcgagctgcgcgcttgtacatggatcaaaat ccgagggtccgactccgcatccttgacgtgccggcggtcgaggctgcggacctggttgcgagcggcgaggcggagttcgg catcagcattgagagcctgttgccatcaagcctgcggttcgatgcgctccacgaggacccgttcggcctggcatgccacc gaagccatccgctggcgtcgctcgagatccttgaatggacgcaattgaaaggtgaaagcctgatcgccgttcaccgtgcg agccggaaccgcacgttgctcgatgccgaactcgcgcgcaacaatatcgcgctggaatggcggtatgaggtcgcgcatct gacgacggcgctgggattgatcgatgcgcaattgggtgtcgctgttatgccccgcatggttatgccccgctcgggtcggt cggaggtcgtctggcgccccgtcgtcgcgccggtcgtccaacgcacgatcggcatcgttcagcgccgcaccggctcgatg caccctgccgcacagcaattgcttgcgcggctccgcgcggcctggtcgtccgccaatctgggcgacatcgcgtctcgcga agatggggcatcgtgacacgcgttctatgcgcctgcagcatcgatgctcacgatcattgcatttgctgagagacgaacgc gaagataccgctgggtcacaggatatcagtccatcgaggcgggagagaaatgtgtgaaagagcaccaatgccgtggcggc cgggcgtcccccgctgcgcccgccacgtggcttgcgcggatcagcgtttcccggggggcctccgccatcgcctggacctt catgcttggcgcaactgccattcccgtggctgcgcaaactgacgatccgaagctcgttcgtcatacccägtcgggcgccg tcgagggcgtcgagggcgacgtcgagacttttttgggaatacccttcgcggctccgccggtcggcgacctgcgatggcgg ccgccggctccgccgagggcgtgggcgggcaccagggacggccgccgctttgcgcccgattgcatcgggaacgagcggct tagagaggggagccgggctgccgggacgagcgaagactgcctctatctgaatatctggtctcccaaacaggtcggtaagg gggggctccccgtcatgatctgggtttacggcggtgggtttagcggcggttctggcgcggtgccatattatgacggctct gcgctcgcgcagaagggcgtggtggtcgtcacgttcaactatcgcgccgggattctgggctttcttgcccatccggcgct ttcaaaggaaagtccgaatggcgtgtcgggcaactatggtcttctcgacatgctcgcggcgttcaaatgggttcagäaca acataagggagttcggcggagacccgaaccgtgtcacggtctttggcgagtccgccggcgcgagcgcgctcggactgctc ctgacctcgccgctcagtgagagcgccttcaatcaggcgatactgcaaagtccgggtctggccaggccgctcgccacgct 4/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
TTCTGAAAGCGAAGCGAATGGGCTGGAGCTGGGAGCCGATATTTCTGCTCTACGGCGTGCCGATGCGGGCGAATTGACGA
AGATCGCGCAATCGCGAATACCCATGTCGCGCCAGTTCACCAAGCCGCGGCCGATGGGTCCGATTCTGGACGGCTATGTT
TTGCGCACCCTTGACGTCGATGCCTTCGCCAAGGGGGCCTTCCGCAAGATACCCGTTCTGGTCGGCGGAAACGCCGACGA
AGGGCGCGCTTTTACGGATCGCCTGCCGGTCAAAACGGTCCTTGAATATCGAGCCTATCTCACAGAACAATTTGGTGACG
AGGCGGACGCATGGGAGCGTTGTTATCCCGCGAACTCCGACGCCGACGTCCCCGCCGCCGTTGCCCGTCTTTTTGGGGAT
AGTCAGTTCAACAACGGGATCGAGCTGCTCTCGGCAGCCTTCGCGAAATGGCGAACGCCGCTTTGGAGATATCGCTTTAC
GGGCATTCCAGGAGCCGGCCGTCGCCCCGCCACGCATGGAGACGAAATTCCCTATGTCTTCGCAAATCTGGGGCCGTCGT
CCGTATCTATGTTTGGGTCGCTCGAAGGCGGCGCCGGGGCGTCGGACATCAAACTTGCGACCGAAATGTCCGCGGCCTGG
GTGAGCTTCGCGGTGCACGGGGTCCCCGATCAGGGCACGAAATCGCACTGGCCGCGCTTCGAGCGGCGAGGGGAGATCAT gacttttggttcgcaggttggctctggggaaggtcttggagtttcgccgagcaaagcctgccaaccctcaaaatagcgcc
CGGCCTGTGCGTGCTTCAGCACGCCGTCCCGCTTTGCGGGCGACGGGCTGTGCCCTCTGCCTAGAAGGAAGTAAGTTGCG
CTACGACGTCGCGATAATTGGAGGTGGCAACGCTGCATTGACGGCAGCCGTGACGGCGCGTGAAGCGGGGGCCTCGGTTC
TTGTGATCGAGCATGCGCCGCGCGCCATGCGCGGCGGCAACAGTCGTCACACACGCAATATGCGTACGATGCACGAACGT
CCCCTGTCGCCGTTGACCGGTGAATATTCGGCGGACGAATATTGGAATGATCTTGTCCGCGTCACGGGGGGGCGCACCGA
CGAAGAACTCGCGCGGCTCGTTATCCGCAACACCACCGACGCTATTCCCTTCATGACGCGCTGCGGTGTGCGTTTCCAGC
CCTCGCTGTCGGGCACGCTGAGTTTATCGCGAACCAACGCATTCTTCCTTGGCGGCGGGAAGGCGCTTGTAAACGCATAT
TACGCCACGGCCGAACGGCTAGGCGTCGATATTCTCTATGATTCTGAGGTGACCGAGATCAACCTTCAGCAAGGCGTCGT gcagcgtctgcaattgcgcagccggggattccctgtcgaagtggaagccaaggctgccatcgcctcgtccggaggattcc aggcaaatcttgactggctctcaagcgcatgggggcctgctgcggcgaacttcatcgtacggggcacgccatatgcgact ggcacggtgctcaagaacctgttggagcaaggcgtcgcctcggtgggagatccaacccaatgccatgctgtcgcgatcga tgggcgagcgcccaaatacgacggcggcatcgtcacacgactggactgcgttcccttctcgatcgtcgtcaacaaggacg ccttgcgcttctacgatgaaggcgaagatgtgtggccgaagcgttacgccatatggggtcgcttggtggcacagcagcct gatcagatcgctttcagcataatcgatcggcaggccgaagacctcttcatgccgtcagtgttcccccccgtgcaagcgga cacgatcgcgggtctggccgagaaactcggtctgaatcccgtaaccctggaacgcacggtggccgaattcaacgccgcat gcgtgcccggcgaattcggcggccaagatctcgacgacctccacaccgagggaatcgaaccaaagaaatccaactgggcc
CGACCGATTATTGTGCCCCCGTTCAGCGCCTATCCTCTCCGGCCCGGGATCACCTTCACCTATCTCGGCGTCAAGGTAGA
CAGCCGTGCGCGGGTCATCATGGAGACAGGTGAGCCGACAAAAAACCTGTTTGCTTCGGGGGAAATAATGGCGGGCAGCA
TTCTCGGCCAAGGTTATCTCGCTGGATTTGGAATGGCGATTGGTACCGTATTCGGCCGCATCGCGGGTTGGGAGGCCGCA cgtcatgcaggattttgatctcgtaaaaatgctgtctgacttgccgtcggcgccggagctggäagccaggcgcgttatgg aggtgtgcaacgcgtgccgctattgcgaagggttctgcgcggtatttcctgcaatgaccttgcagcgtcatttcgccagc ggcgatctcagccacctcgccaatctctgccactcgtgccaaggttgctattacgcctgccaatacgcccctccgcatga gttcggaataaacgttccaaaggcgctgtcggagttgcggctcgagagctacgagcagcatgottggccccggccggtcg ccgctctctatcgcaagaatgcgctcatcatttccatcttgtcggcggcatgcataaccggcgtccttctgcttgccgcc atcttcaacggggatgcacttttcgcgaaacacgcatcggtgcccggcggcgggttttacaacgttattccttatcaggc gatgattgccgtcgcggcgaccacatttctttattccgcgctggcgctggcgatcagtctcgttcgcttttcgcggacga tcggtctgggaattaaggttctttatcagcacgtgccggttcttcgggcgctacgcgatgcggcgactctgcgatatctc ggcggcagcgacggcgaggggtgtaacgacgcggacgagacattttcgacgacccggcgaaaatttcatcacgcccttgc ctatggcttcggactttgtttcgcggccacagccacgggcacgatctacgatcatatgttcggctggccggcgccctatg cgcttttcagcttgccggtcgtcctagggaccgttggggggatcggaatggtcgtgggcgcgatcggcctactctggctc aagctggccggcgaagacgctcctcgatcaccggcactgcttgggccggatgttgccctgttggtgcttctgcttgccat agcggcaacgggcctcctccttttagcggtccgcagcaccgaagtcatgggcgtcgcgctcgccgtccatctcggcgtcg tcttggccttctttttggtgatgccatacagcaaatttgtccacggtatcttcaggctcacggctctcgtgcgccatcat gctgaccgcgaggcaagtaatggcttcgcctccagccctcccacgaaaaagggttaaacaatggaacatatgaagtccgt tcgcgatcgcagtagcgtcatgcagatcgtgagagtggcgagtggcaactgtctcgagcaatatgatttcttcgtttacg gcttctatgcggcatatattgcgagaagcttttttccgaccggcgataacgcgacatcgctcatgctttcattggccact tttggcgctggtttcctcatgaggcccttgggggcgatttttctcgggtcctacatcgatcgcgtcgggcgtcggaaagg cctgatcgtgacactcgcgatcatggccgtcggaaccctcaccattgcgatgactccaagctatgaggcaattggattac tcgcaccggttatcgtgctcgtcgggcgacttttgcagggtttttccgctggagcagagtcgggtggcgtctcagtgtac ttggcggaaattgcgtcgcccaaatcgagaggcttcttcacctogtggcagtctgccagccagcaggtggccgtcatgat cgccgccgcgatcggtcttgcgctgcaatcaacgctttcaccggagcaaatgaaogactggggatggcgggtgcccttgt tgatcggatgcttgattatccccgtgatactctggctgcgccggtctctcccggaaacgaaagcctatctccacatggag cacaaggcgcattcgatcggcgaatccctccgcgaattgcaacagagctgggggctgatcttgacgggcatggcgatgtc gatcctcacgacgaccaccttttacatgattaccgcctatacgccgacatttggcgagaaagcactcggactgagcccgc aagatgtcctgctggttaccatcatggtcggcgtgtcgaacttcctgtggcttccgatcgggggtgctctctcggatcgt atcggtagaaccccgatcctactggtcgtgccggtcaccgttctcgccatogcctttcccctgatgagctggctcgtcgc ggcaccgacattcggagcgcttgcagctgttctgctgactttctccgcatgctttggactctataatggggcgctcatcg cgagactcaccgagattatgcctcccgccattagaacccttggcttctcgctggcgttcagtctcgcgacctcgctgttc ggcggcttcaccccattggtaagtacggcgctaatccacgcgacgggcagcaattccgcgcctgcaatctggctctgttt tgcggctttcatcagcttcgtcggtgtggccgcatcgacccggctgagccggccaatcgccgaaggcgccagataggaca atcagagaatgcccgtgcggcaatgaagcgagattcgggcggtaggtgcgctggcggcacttcgcgaagagccgttgcgg acggctgaaacgatgatggtatgaatgggctaagacatgagagcagtagtttaccgaaatggcgaacttgtcctgggggc ctatgctgatccgatacccgccgccgggcaggtgctcgtcaagaccagagcatgcggcatctgcggatctgaccttcatt tttgcgatcatgcgcaggcgtttacgaaccttgcatcgcgggcgggtatcgcctctatggaagttgatttgtgtcgagac atcgttctggggcatgaattctgtggcgagattatggagttcgggccctctgcggatcgtcgcttcaaacccggacagct tgtgtgctcgctgccgctggcgatcggtccgaccggagcgcggacgattggctactcggatgagtatcccggcgggctcg gcgaatatatggtcctcacggaagcgctcttgctgcctgttccgaacggccttccggcgacctgcgcggcgttgacggag ccgatggcggtgggatggcatgccgtcgagatcgcgcaggttcaaccacatcacatccctgtggtgatcgggtgcggacc ggtcgggttggcagtcgtcgctgccctgaaacataagcaagttgctccgattattgcgtcggatccatcgcccgatcggc 5/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
GTGCTCTTGCTCTGCGGATGGGCGCCGACGCCGTTGTCGATCCGCGCGAAGAATCACCCTTTCGCCAGGCCGAGAAGATC
GCACGCCCGGTCGGACAAGGTGGGGCCCTGTCCAGCTCATTGCTGTCAAAGTCTCAAATGATATTCGAATGCGTAGGGGT gccgggcatgcttcggcatgcgatggacggcgcgtccgacgggtccgagatcatggtcgttggcgcatgcatgcagccgg acgcgatcgagcccatgatcgggatgtttaaägcgctcacgatcaaattctcgcgaacttacacgggtgaggaattcgcc gcggtgcttcacatgataggtgagggcgcactcgacgtatctccgctcgttaccgatgtgattggcctgtccgatgtccc gtccgcgtttgaggctctacggagtccaggcgcccaagcaaaagtgattgtggacccttggcgctgagcctgaggatgcc aagggtgcgacgttgggcatcgtcaaagaaggcgacgttgacccggtatgtgaacatccccatattcttccgcagctgaa gcagttggtaaacatgccaaaatatgaactgtagtattgcgtcggggttctcattgtggggtttgccattgtcatcgctc gcacccggcgacaaagattagatgtacttccgataatccgtgctctcgacctggccttccttcatatatttcaggacctc tccgaccatgcgtgcggcgcggatcgggatcggcaggcgttggttcatctgggtcgagttccägttgatcttcgtaagag agaacacctcctcggctaactgcgccgcggtactatcgcaggatcgtctcgagcgtycgc >Seq ID 2 (fumA) atgcggaacgtcagcgacaaggcgccgccccacgagacgctcaccgtagtcgtcgcggcaatgatcgttggcacggccgc cttgatggtgcttggaatacagcccatccttctcggcgcccttgtagaggaggggcgtattcccgccgaggggttgggat cggcggcaacggtggaaatactggcgatcgcggcgggaacatgcatcggacccgttcttatgaagacgggatatctgcgg gcgaaatgcgcggcactctgcttaatgctcgccgcaatcaacttcggattgacgttgccgggtttcgatttgcccatcgt ggcttgccgagcggcagcgggagccctggaaggtctttcgctcagcgcggcgatcctgatcatgactcataatcggcggc cggaccggctgagcggaatatttctgggcgcgcagacgataccgcaggtaatatctgcttatttgctcccgacggagatt attccgcgctgggggagcgcaggcggcttcacgatcctgggcattctcgcggcgatcgccgcgatcgcggctctgtgcct cgtcgatcgcgttgagctcgatccgacgaccgttaacgacgacttgcagtggtcacccgcggcgatcgtcatttcgatgg cggcattcgttcaattctcgggggtcggtgccgcatggagctatctggagcgactggctgogcagcacggattttcggga gaaacgatcggtatcgccatttccgggagtttgctttgccaggtaggcggggcttggctggccgcttggatcggtgggcg ggtcggatatcgcttcgccttaatcgctgggagcctgcttcaggcgggcaacgtgatcgcattggcggtggccgatcagc caagctggtttatttccgcttcctgtgctttcggcctgttctggttggcgatgcagcccttccaaatccgcttcgcgatc gcgatagataacagccggcagcttgctgtactgctgacgccgatcgccctcgtcgggttgagcgcggggcccttgttgct ctctcgctttgccggggcgaccgacttgcgctggatctttgtggggagttcgaccttgttgctggccagcgcgcttctgt atctttgcgcttctctgtttcaaccgcgcggaaaggtgatcgctgaaacggtggacgta >Seq ID 4 (fuwB) atgacatcgcaggtcaagcttcgtagcgcggcaaagcggccgcgcagtcctaaaagcgagcgaggtcttgctcgttacga gtccttgcttgatgcgaccgacaggctgttggtcgatotagaccccgatcaggtcggtctctatcagattgcagaggaag cgggtgcctcaccgtcgtccgtctatcatttctttccgaccaaggaagtggctcatctcgctctgatgcgocgctatctg gaggggctccggaatctcgacgcgatggaagtcgacatcggccagctcgaaagctggcaggacctgatgaagttggatca gatcagggcgcgagactattataatagccacccgcccgccctcaagcttctgttcggcggatatggcggggtcgaggcca gaaagcttgacgagcgatactccgäggaaatcgtgagctccatgtatggcagatacaacggcattttccätatgccgcaa atggagaatgaggctctcatgttcacgatctgcttcgcaattctcgacgcggtatgggccgtctcctttcgccggttcgg tgaaattacgtcggattttcttcgggaggggcaagcggcttgcattgcctattgccgacactatctgcccgagcgaacgc
CATCAGCGTGA >Seq ID 6 (fumC) gtggccagcaagttcaactgtgagttactcgatctgcgatcatttgttgcggtgtatgaaacgcgaagttttagccacgc cgcgcggcttctgaatcaatcgcagcccgcgctcagccggagaatccagcgcctcgagagtctcgtgggcggtccgttgt tcgagcggaccagtcggtcgcttgccgaaacggcgctcggcaaagagttgctcccggtcgcccaccgagcgttggaactt gtcgatacgtcgctgtttgcgtcgcccaatgtccgggagttccgctggacagacatcacgattgcctgtgtacagaccgc cgccttccatgttctcccgcgagctgcgcgcttgtacatggatcaaaatccgagggtccgactccgcatccttgacgtgc cggcggtcgaggctgcggacctggttgcgagcggcgaggcggagttcggcatcagcattgagagcctgttgccatcaagc ctgcggttcgatgcgctccacgaggacccgttcggcctggcatgccaccgaagccatccgctggcgtcgctcgagatcct tgaatggacgcaattgaaaggtgaaagcctgatcgccgttcaccgtgcgagccggaaccgcacgttgctcgatgccgaac
TCGCGCGCAACAATATCGCGCTGGAäTGGCGGTATGAGGTCGCGCATCTGACGACGGCGCTGGGATTGATCGATGCGCAA
TTGGGTGTCGCTGTTATGCCCCGCäTGGTTATGCCCCGCTCGGGTCGGTCGGAGGTCGTCTGGCGCCCCGTCGTCGCGCC
GGTCGTCCAACGCACGATCGGCATCGTTCAGCGCCGCACCGGCTCGATGCACCCTGCCGCACäGCAATTGCTTGCGCGGC tccgcgcggcctggtcgtccgccaatctgggcgacatogcgtctcgcgaagatggggcatcgtga >Seq ID 8 (fumD) gtgaaagagcaccaatgccgtggcggccgggcgtcccccgctgcgcccgccacgtggcttgcgcggatcagcgtttcccg gggggcctccgccatcgcctggaccttcatgcttggcgcaactgccattcccgtggctgcgcaaactgacgatccgaagc tcgttcgtcatacccagtcgggcgccgtcgagggcgtcgagggcgacgtcgagacttttttgggaatacccttcgcggct cogccggtcggcgacctgcgatggcggccgccggctccgccgagggcgtgggcgggcaccagggacggccgccgctttgc gcccgattgcatcgggaacgagcggcttagagaggggagccgggctgccgggacgagcgaagactgcctctatctgaata tctggtctcccaaacaggtcggtaagggggggctccccgtcatgatctgggtttacggcggtgggtttagcggcggttct ggcgcggtgccatattatgacggctctgcgctcgcgcagaagggcgtggtggtcgtcacgttcaactatcgcgccgggat tctgggctttcttgcccatccggcgctttcaaaggaaagtccgaatggcgtgtcgggcaactatggtcttctcgacatgc tcgcggcgttcaaatgggttcagaacaacataagggagttcggcggagacccgaaccgtgtcacggtctttggcgagtcc gccggcgcgagcgcgctcggactgctcctgacctcgccgctcagtgagagcgccttcaatcaggcgatactgcaaagtcc 6/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 gggtctggccaggccgctcgccacgctttctgaaagcgaagcgaatgggctggagctgggagccgatatttctgctctac
GGCGTGCCGATGCGGGCGAATTGACGAAGATCGCGCAATCGCGAATACCCATGTCGCGCCAGTTCACCAAGCCGCGGCCG atgggtccgattctggacggctatgttttgcgcacccttgacgtcgatgccttcgccaagggggccttccgcaagatacc cgttctggtcggcggaaacgccgacgaagggcgcgcttttacggatcgcctgccggtcaaaacggtccttgaatatcgag cctatctcacagaacaatttggtgacgaggcggacgcatgggagcgttgttatcccgcgaactccgacgccgacgtcccc gccgccgttgcccgtctttttggggatagtcagttcaacaacgggatcgagctgctctcggcagccttcgcgaaatggcg aacgccgctttggagatatcgctttacgggcattccaggagccggccgtcgccccgccacgcatggagacgaaattccct atgtcttcgcaaatctggggccgtcgtccgtatctatgtttgggtcgctcgaäggcggcgccggggcgtcggacatcaaa cttgcgaccgaaatgtccgcggcctgggtgagcttcgcggtgcacggggtccccgatcagggcacgaaatcgcactggcc gcgcttcgagcggcgaggggagatcatgacttttggttcgcaggttggctctggggaaggtcttggagtttcgccgagca aagcctgccaaccctcaaaatag >Seq ID 10 (fumE)
TTGGAGTT’TCGCCGAGCAAAGCCTGCCAACCCTCAAAATAGCGCCCGGCCTGTGCGTGCTTCAGCACGCCGTCCCGCTTT gcgggcgacgggctgtgccctctgcctagaaggaagtaagttgcgctacgacgtcgcgataattggaggtggcaacgctg cattgacggcagccgtgacggcgcgtgaagcgggggcctcggttcttgtgatcgagcatgcgccgcgcgccatgogcggc ggcaacagtcgtcacacacgcaatatgcgtacgatgcacgaacgtcccctgtcgccgttgaccggtgaatattcggcgga cgaatattggaatgatcttgtccgcgtcacgggggggcgcaccgacgaagaactcgcgcggctcgttatccgcaacacca ccgacgctattcccttcatgacgcgctgcggtgtgcgtttccagccctcgctgtcgggcacgctgagtttatcgcgaacc
AACGCATTCrTCCTTGGCGGCGGGAAGGCGCTTGTAAACGCATATTACGCCACGGCCGAACGGCTAGGCGTCGATATTCT
CTATGATTCrGAGGTGACCGAGATCAACCTTCAGCAAGGCGTCGTGCAGCGTCTGCAATTGCGCAGCCGGGGATTCCCTG tcgaagtggaagccaaggctgccatcgcctcgtccggaggattccaggcaaatcttgactggctctcaagcgcatggggg cctgctgcggcgaacttcatcgtacggggcacgccatatgcgactggcacggtgctcaagaacctgttggagcaaggcgt cgcctcggtgggagatccaacccaatgccatgctgtcgcgatcgatgggcgagcgcccaaatacgacggcggcatcgtca cacgactggactgcgttcccttctcgatcgtcgtcaacaaggacgccttgcgcttctacgatgaaggcgaagatgtgtgg ccgaagcgttacgccatatggggtcgcttggtggcacagcagcctgatcagatcgctttcagcataatcgatcggcaggc cgaagacctcttcatgccgtcagtgttcccccccgtgcaagcggacacgatcgcgggtctggccgagaaactcggtctga atcccgtaaccctggaacgcacggtggccgaattcaacgocgcatgcgtgcccggcgaattcggcggccaagatctcgac gacctccacaccgagggaatcgaaccaaagaaatccaactgggcccgaccgattattgtgcccccgttcagcgcctatcc tctccggcgcgggatcaccttcacctatctcggcgtcaaggtagacagccgtgcgcgggtcatcatggagacaggtgagc cgacaaaaaacctgtttgcttcgggggaaataatggcgggcagcattctcggccaaggttatctcgctggatttggaatg gcgattggtaccgtattcggccgcatcgcgggttgggaggccgcacgtcatgcaggattttga >Seq ID 12 (fumF) atgcaggattttgatctcgtaaaaatgctgtctgacttgccgtcggcgccggagctggaagccaggcgcgttatggaggt gtgcaacgcgtgccgctattgcgaagggttctgcgcggtatttcctgcaatgaccttgcagcgtcatttcgccagcggcg atctcagccacctcgccaatctctgccactcgtgccaaggttgctattacgcctgccaatacgcccctccgcatgagttc ggaataaacgttccaaaggcgctgtcggagttgcggctcgagagctacgagcagcatgcttggccccggccggtcgccgc tctctatcgcaagaatgogctcatcatttccatcttgtcggcggcatgcataaccggcgtccttctgcttgccgccatct tcaacggggatgcacttttcgcgaaacacgcatcggtgcccggcggcgggttttacaacgttattccttatcaggcgatg attgccgtcgcggcgaccacatttctttattccgcgctggcgctggcgatcagtctcgttcgcttttcgcggacgatcgg tctgggaattaaggttctttatcagcacgtgccggttcttcgggcgctacgcgatgcggcgactctgcgatatctcggcg gcagcgacggcgaggggtgtaacgacgcggacgagacattttcgacgacccggcgaaaatttcatcacgcccttgcctat ggcttcggactttgtttcgcggccacagccacgggcacgatctacgatcatatgttcggctggccggcgccctatgcgct
TTTCAGCTrGCCGGTCGTCCTAGGGACCGTTGGGGGGATCGGAATGGTCGTGGGCGCGATCGGCCTACTCTGGCTCAAGC
TGGCCGGCGAAGACGCTCCTCGATCACCGGCACTGCTTGGGCCGGATGTTGCCCTGTTGGTGCTTCTGCTTGCCATAGCG
GCAACGGGCCTCCTCCTTTTAGCGGTCCGCAGCACCGAAGTCATGGGCGTCGCGCTCGCCGTCCATCTCGGCGTCGTCTT
GGCCTTCTTTTTGGTGATGCCATACAGCAAATTTGTCCACGGTATCTTCAGGCTCACGGCTCTCGTGCGCCATCATGCTG
ACCGCGAGGCAAGTAATGGCTTCGCCTCCAGCCCTCCCACGAAAAAGGGTTAA >Seq ID 14 (fumG) atggaacatatgaagtccgttcgcgatcgcagtagcgtcatgcagatcgtgagagtggcgagtggcaactgtctcgagca atatgatttcttcgtttacggcttctatgcggcatatattgcgagaagcttttttccgaccggcgataacgcgacatcgc tcatgctttcattggccacttttggcgctggtttcctcatgaggcccttgggggcgatttttctcgggtcctacatcgat cgcgtcgggcgtcggaaaggcctgatcgtgacactcgcgatcatggccgtcggaaccctcaccattgcgatgactccaag ctatgaggcaattggattactcgcaccggttatcgtgctcgtcgggcgacttttgcagggtttttccgctggagcagagt cgggtggcgtctcagtgtacttggcggaaattgcgtcgcccaaatcgagaggcttcttcacctcgtggcagtctgccagc cagcaggtggccgtcatgatcgccgccgcgatcggtcttgcgctgcaatcaacgctttcaccggagcaaatgaacgactg gggatggcgggtgcccttgttgatcggatgcttgattatccccgtgatactctggctgcgccggtctctcccggaaacga aagcctatctccacatggagoacaaggcgcattcgatcggcgaatccctccgcgaattgcaacagagctgggggctgatc ttgacgggcatggogatgtcgatcctcacgacgaccaccttttacatgattaccgcctatacgccgacatttggcgagaa agcactcggactgagcccgcaagatgtcctgctggttaccatcatggtcggcgtgtcgaacttcctgtggcttccgatcg ggggtgctctctcggatcgtatcggtagaaccccgatcctactggtcgtgccggtcaccgttctcgccatcgcctttccc ctgatgagctggctcgtcgcggcaccgacattcggagcgcttgcagctgttctgctgactttctccgcatgctttggact ctataatggggcgctcatcgcgagactcaccgagattatgcctcccgccattagaacccttggcttctcgctggcgttca
GTCTCGCGACCTCGCTGTTCGGCGGCTTCACCCCATTGGTAAGTACGGCGCTAATCCACGCGACGGGCAGCAATTCCGCG 7/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
CCTGCAATCTGGCTCTGTTTTGCGGCTTTC&TCAGCTTCeTCGGTGTGGCCGCATCGACCCGGCTGAGCCGGCCAATCGC
CGAAGGCGCCAGATAG >Seq ID 16 (flimH) atgagagcagtagtttaccgaaatggcgaacttgtcctgggggcctatgctgatccgatacccgccgccgggcaggtgct cgtcaagaccagagcatgcggcatctgcggatctgaccttcatttttgcgatcatgcgcaggcgtttacgaaccttgcat cgcgggcgggtatcgcctctatggaagttgatttgtgtcgagacatcgttctggggcatgaattctgtggcgagattatg gagttcgggccctctgcggatcgtcgcttcaaacccggacagcttgtgtgctcgctgccgctggcgatcggtccgaccgg
AGCGCGGACGATTGGCTACTCGGATGAGTATCCCGGCGGGCTCGGCGAATATATGGTCCTCACGGAASCGCTCTTGCTGC ctgttccgaacggccttccggcgacctgcgoggcgttgacggagccgatggcggtgggatggcatgccgtcgagatcgcg caggttcaaccacatcacatccctgtggtgatcgggtgcggaccggtcgggttggcagtcgtcgctgccctgaaacataa gcaagttgctccgattattgcgtcggatccatcgcccgatcggcgtgctcttgctctgcggatgggcgccgacgccgttg tcgatccgcgcgaagaatcaccctttcgccaggccgagaagatcgcacgcccggtcggacaaggtggggccctgtccagc tcattgctgtcaaagtctcaaatgatattcgaatgcgtaggggtgccgggcatgcttcggcatgcgatggacggcgcgtc
CGACGGGTCCGAGATCATGGTCGTTGGCGCATGCATGCAGCCGGACGCGATCGAGCCCATGATCGGGATGTTTAAAGCGC tcacgatcaaattctcgcgaacttacacgggtgaggaattcgccgcggtgcttcacatgataggtgagggcgcactcgac gtatctccgctcgttaccgatgtgattggcctgtccgatgtcccgtccgcgtttgaggctctacggagtccaggcgccca
AGCAAAAGTGATTGTGGACCCTTGGCGCTGA >Seq ID 18 (fuml)
ATGGCGAACGGAACAAGGCAGAAAGATCTCAGAGAACGCGCCGAACGGGTCATTCCGGGCGGGATGTACGGCCACGAGTCGACACGG ttgctgccgccagaattcccccagttcttcaggcgcgcgctgggggcacgaatttgggacgccgacgagcagccctatatcgactat atgtgcgcgtatgggccaaatttgctcggttaccggcaatccgaaatcgaagccgcggctgatgcgcagcgacttctcggcgacacc atgaccggtccttcggagatcatggtcaacctcgccgaagcctttgtgggcatggtccgtcatgcggattgggcgatgttctgcaaa aatggcagcgatgccacctcaacggcgatggttctcgcgcgtgcccatacggggcgcaaaaccatattatgcgccaaaggcgcctat catggcgcttccccgtggaacactccgcatactgccgggattctcgcttccgatcgcgtgcatgtcgcatattatacctataacgac gcccaaagcttatgggacgcgttcaaggcgcacgatggcgatattgcggctgtctttgccacacctttccgacacgaagtatttgag gaccaggccctcgcccagcttgagttcgcgcgcaccgctcgaaaatgttgtgacgagaccggtgcgcttctggtcgttgacgatgtg cgcgcaggtttccgggtggcgcgcgattgcagctggacgcatttgggtatcgaacccgatctcagttgctggggaaaatgctttgcg aatggctatccgatctccgccctgctgggctcgaacaaggcgcgcgatgcggcgcgggatatatttgtgaccggctccttctggttc tctgcggtaccgatggcbgccgcgatcgaaaccctcaggatcattcgagagacgccttatctcgaaacgctgatcgccagcggcgcc gccctgcgggcaggcctggaggcacagtctcagcgccatggtcttgagttgaagcagacgggcccggcgcagatgccgcaaatattc tttgcggacgatcccgattttcggatcggctatgcgtgggccgcggcgtgcctgaagggcggcgtctatgttcatccctatcacaat atgtttctctctgcggcccatacagttgacgatgtaacggagaccctcgaggcgacggatcgcgcgttcagcgcggtcctcagagat tttgcgtctctccagcctcatcccattttaatgcaactcgccggtgcttga >Seq ID 20 (fumJ) atgtatcggaagttcagaatcgaaaagcccggcäaggcäaätägtttgctcggcgcagtagcgctcggcaccctcgcatttcctgtc tctgccagtgctcaggatagcgatcccgcatcgataggtcagccggacgaagcggacacggaccggggaacgagcgaaatcgtcgtg accggcagccgcctccagaacggcttcaattcgccgacgccggttacagccgtatccagcgagcagttgaaggaggcatctccgacc aaccttgccgacgcactcaaccagctgcccgtgttcaacgacagcttgaagacctccaaccctggcacgacacccggaacggggaac agcggtcagaacctgctcaacatgcgcggcctcgggtcaaaccggaacctcgtcctgctgaacggcaaccgtttcgtcgcgaccaat ttcacaggctcggtcgatatcaacgtgctgccgcaggcgttggtcaagcgcgtcgätgtcgtgacgggcggcgcctcggccgcctac ggttccgatgccgtttcgggcgtcatcaacttcgtgctcgacgaagatctggaaggcatcagggccgagctccagtcgggtgtttca acccgcggcgacctcccgtcctacggcggttcgatcgccttcggcacttcgtttgccgacgaccggttgcacttgctcggcagcttc gaatattttcgacaggacggaatccgggccgatgaagcaacgggtcgccgctggttcgacatcgccgccggccaatatcccgtgccc ggcgctacgacaggcgtcacggtcgtgcccgatattcgcagttctcgcggatcctacggcggacttgtcacgtccggccctctgaaa
GGCATCGCGTTTTTGCCCGGAGGAGTCCTAGGüACC-TtCGACtäCGGGAATTTTACGÄGCTCGTCGTTCCAGAGCGGCGGCGATCCA ccgcgcgtgaatatcggcttcgccccggatcagcttcgctacaacgcgttcctacgcgccgcatatgatgtgtccgacactgtgcag gtgtatgcggagggcacctatgcttattcccacaccaacctgggtgcattcgtaatatcgcatgtcggtggctcgaataatttccgg atcttccgtgataacgccttccttccggctccactcgcgacgctcatggacagaaatgcccaggcttcgatcgttgtcggtcgcttc tcaagcgactttcccttggtcgaaatcgagaatttcgcaaaggtctaccgcggcgctgccggcttccgggcagacattggcaatggc tggaaactcgatggctcggcctcctttggccttacggacctcgagcttcgtgaaaacaatctcaccatcaaccgcaatctctacgcc gccgtcgatgcggtccgcgatcccgcgggcaatatcgtctgccgttcaacactggocggcctcgaccaagattgcgtgccgctcaat ctcttcggcacaggctcgccgagcgcgtcggccatcgactatgtcaccgctgatggcgtcgctcagctgaggcttgagcaatatgtg gcgggactcacgatttccggcgacctcggcgatagcctgtcgttcggcgcgggcccggtctcgGtcgccgctggtatcgaatatcgc aaggagaaggcccggcaggaaaccgacgcgatatcgcaggcgacgacctcgatcacgggaatcaggggggctccggcggcgcaggca
GGXCGGCCTGGAGGCTTCAATCTCTACAACCCACTTCCCT'TCTCGGGAAGCTATGACATCAAGGAAGGTTTTGTCGäAATCGGCGTC
CCGATTCTGAAGGACAGCGCGCTGGGACGTTCGCTGAACTTAAACGGCGCCGTCCGATATGCCGATTACAGCCAGTCCGGTGGAGTA acaacctggaagctgggcggagaatatgagccgatcgacggcctcaggttccgcgcgacccgttcgcgagatatccgcgggccaägc cttgtcgagctattcgaccccggccgtcaggcgacgctcaattcaatttatggcggacaggctgtgcagacgcggttctttaccgcc ggcaacgcggatttgcgccctgaaaaggcggacgtccttacattcggcgcggtgctacgccccgccttcgtgccggggtttcagttt tcggtcgatcgctatgtggtgaaggtgaagggcgcgatcgatttcctccttccccagcaggaaatcgacgcgtgcgatgcaggaaac accttcttctgcgacctcataacggagaatccggacggcaccatcacagtgacgggtcccaatctcaacctggctgtccagaaagcg gcgggaattgacttcgaggcctattactcacgccccgtcggcggcggcacgttcagtcttcgtgcgctggcaacgcaccatacctct gcctatcgcatcgcgaccggctcggcgcccatccgttcgctcggacaaccggacacgccaaaatggtcggccaacttccaggcgcga 8/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
TATTCGACCGACGATTGGGCGCTTCTCGTGCAGCAGCGCTTCATCGCAGCATCGGTGTTCAATGCCGACAATGTGGAGGGCGTCGAT
ACGAATTTGAACCACGCTCCGGCGGTTTGGTACACCGACXJCGACÄTTGACCTTCGACATCGCGGCTTTTGGCCAGAAGCAGCAGCTG tttctatcggtcäataatttgttcgaccgagatccgccaatagcgacgaacgaccccagcagtttttccagcccgaccagctctgcc tatgatccggtcggccgctattttaatgtcggggtccgtttccggatctga >Seq ID 22 (fumK) nicht vollständig atgcgcctcacgggcggagaattattggcacgatgtttggccgtcgaaggcgtccggtatgtcttcggcctcatgtcgccggaggtg gatccgctcctggctgcgctcgaagacaatgggatattgttcgtcccggtgcggcacgaggccgccgcagcctatatggccgagggc atttacaagaccaccggacaggtcgccgcgattgtcacgaatccgggtcccggtacggcäaaccttctgcctggagtcgtgacggca cgccacgaaggggttcccttcgtcggaataacgtcccagcatcaacttggtgtcgtttatccctgcacgccaaaaacctttcaggga caagaccagatcgacctctttcgacccgcggttaaatggggcgcacccatcttcgcctggaaccggattgtcgaaatcacccatatg gcgttccgggaaatgtgggccggcaggccgggacccgttcagttggaaatcccgargtctgtgatgtatgktgtgggcgaacgagga ccacggtagaagtttacrgatcgccgaca... >Seq ID 24 atggaattgagccgccaacgagaccaggccttgagggagcgcgcccaagcggtgatcccgggcgggatgtacggtcacgagtcgacc tatctgatgcccgagggcacgccacagttcttcagtcgcggcaaaggcgcccgactttgggacgccgacggcaacgagtatgtcgat tacatgtgcgcctatggccccaacctgctgggttacggcttcgaacccgtcgaagcggccgccgcagcccagcaagcccggggcgat accctgaccgggccgtcggaggtgatggtgcägttggcggaagacttcgtcgcgcaaatcagccacgcggactgggccatgttctgc aagaacggcacagacgccacctcaatggcgatggtcatcgcgcgcgcacacaccggccggaagacgatcctctgcgcgaaaggcgcc tatcatggggccgcgccttggtgcacgccgatcctggccggaacgctaccggaggatcgcgcctttgtagtctactacgactacaat gacgcccaaagcctcgtcgacgccttcgaggcccatcaggacgacgtcgcggcgatcttcgccacccctcaccgtcacgaggtgttc agcgaccagatcgatcctgatccggaatatgcggccagcgtgcgggcgctctgcgacaagagcggcgccctgctcgtcgtcgacgaa gttcgagccgggttcaggatcgcgcgcgactgcagctgggccaagatcggcgtcgctccggatctgagcacctggggcaagtgcttc gccaacggctatccgatctcggcggtcctagggggcgaaaaggtgcgcagcgcggoaaaggccgtctacgtcaccggctcgttctgg ttctcggccacgcccatggccgcagccgtcgaaaccctgaagcaaatccgcgagaccgactatctcgagcggatcaacgcggccggg acccgcctgcgcgagggcctgcagcagcaggctgctcacaacggctttacgttgcgccaaacggggcccgtctccatgccccaagtc ctcttcgaggaagatcccgattttcgggtcggctacggctgggttcgcgaatgcctgaagcgaggggtgtacttcagcccctaccat aacatgttcctgtcggcggcccatagcgaggcggacctggccaagacccttgcggctaccggcgacgccttcgtcgagctacgcgcc aagcttccgagcctagaaatccaccaacccctcctcgccctgagagcggcctaa
Enzyme
Sequenzen: >Seq ID 3 (FumA)
MRNVSDKAPPHETLTVWAAMIVGTAALMVLGIQPILLGALVEEGRIPAEGLGSAATVEI LAIAAGTCIGPVLMKTGYLRAKCAALCLMLAAINFGLTLPGFDLPIVACRAAAGALEGLS LSAAILIMTHNRRPDRLSGIFLGAQTIPQVISAYLLPTEIIPRWGSAGGFTILGILAAIA AIAALCLVDRVELDPTTVNDDLQWSPAAIVISMAAFVQFSGVGAAWSYLERLAAQHGFSG ETIGIAISGSLLCQVGGAWLAAWIGGRVGYRFALIAGSLLQAGNVIALAVADQPSWFISA SCAFGLFWLAMQPFQIRFAIAIDNSRQLAVLLTPIALVGLSAGPLLLSRFAGATDLRWIF VGSSTLLLASALLYLCASLFQPRGKVIAETVDV >Seq ID 5 (FumB)
MT SQVKLRS AAKRPRS PKSERGLAR YESLLDATDRLLVDLDPDQVGL YQIAEEAGAS P S S VYHFFPTKEVAHLALMRRYLEGLRNLDAMEVDIGQLESWQDLMKLDQIRARDYYNSHPPA LKLLFGGYGGVEARKLDERYSEEIVSSMYGRYNGIFHMPQMENEALMFTICFAILDAVWA VSFRRFGEITSDFLREGQAACIAYCRHYLPERTPSA >Seq ID 7 (FumC)
VASKFNCELLDLRSFVAVYETRSFSHAARLLNQSQPALSRRIQRLESLVGGPLFERTSRS
LAETALGKELLPVAHRALELVDTSLFASPNVREFRWTDITIACVQTAAFHVLPRAARLYM
DQNPRVRLRILDVPAVEAADLVASGEAEFGISIESLLPSSLRFDALHEDPFGLACHRSHP
LASLEILEWTQLKGESLIAVHRASRNRTLLDAELARNNIALEWRYEVAHLTTALGLIDAQ
LGVAVMPRMVMPRSGRSEWWRPWAPWQRTIGIVQRRTGSMHPAAQQLLARLRAAWSS
ANLGDIASREDGAS 9/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 >Seq ID 9 (FurnD)
VKEHQCRGGRASPAAPATWLARISVSRGASAIAWTFMLGATAIPVAAQTDDPKLVRHTQS GAVEGVEGDVETFLGIPFAAPPVGDLRWRPPAPPRAWAGTRDGRRFAPDCIGNERLREGS RAAGTSEDCLYLNIWSPKQVGKGGLPVMIWVYGGGFSGGSGAVPYYDGSALAQKGVWVT FNYRAGILGFLAHPALSKESPNGVSGNYGLLDMLAAFKWVQNNIREFGGDPNRVTVFGES AGASALGLLLTSPLSESAFNQAILQSPGLARPLATLSESEANGLELGADISALRRADAGE LTKIAQSRIPMSRQFTKPRPMGPILDGYVLRTLDVDAFAKGAFRKIPVLVGGNADEGRAF TDRLPVKTVLEYRAYLTEQFGDEADAWERCYPANSDADVPAAVARLFGDSQFNNGIELLS AAFAKWRTPLWRYRFTGIPGAGRRPATHGDEIPYVFANLGPSSVSMFGSLEGGAGASDIK LATEMSAAWVS FAVHGVPDQGTKSHWPRFERRGEIMTFGSQVGSGEGLGVSPSKACQPSK >Seq ID 11 (FumE)
LEFRRAKPANPQNSARPVRASARRPALRATGCALCLEGSKLRYDVAIIGGGNAALTAAVT AREAGAS VLVIEHAPRAMRGGNSRHTRNMRTMHERPLSPLTGEYSADEYWNDLVRVTGGR TDEELARLVIRNTTDAIPFMTRCGVRFQPSLSGTLSLSRTNAFFLGGGKALVNAYYATAE RLGVDILYDSEVTEINLQQGWQRLQLRSRGFPVEVEAKAAIASSGGFQANLDWLSSAWG PAAANFIVRGTPYÄTGTVLKNLLEQGVASVGDPTQCHAVAIDGRAPKYDGGIVTRLDCVP FSIWNKDALRFYDEGEDVWPKRYAIWGRLVAQQPDQIAFSIIDRQAEDLFMPSVFPPVQ ADTIAGLAEKLGLNPVTLERTVAEFNAACVPGEFGGQDLDDLHTEGIEPKKSNWARPIIV PPFSAYPLRPGITFTYLGVKVDSRARVIMETGEPTKNLFASGEIMAGSILGQGYLAGFGM AIGTVFGRIAGWEAARHAGF >Seq ID 13 (FumF)
MQDFDLVKMLSDLPSAPELEARRVMEVCNACRYCEGFCAVFPAMTLQRHFASGDLSHLAN LCHSCQGCYYACQYAPPHEFGINVPKALSELRLESYEQHAWPRPVAALYRKNALIISILS AACITGVLLLAAIFNGDALFAKHASVPGGGFYNVIPYQAMIAVAATTFLYSALALAISLV RFSRTIGLGIKVLYQHVPVLRALRDAATLRYLGGSDGEGCNDADETFSTTRRKFHHALAY GFGLCFAATATGTIYDHMFGWPAPYALFSLPWLGTVGGIGMWGAIGLLWLKLAGEDAP RSPALLGPDVALLVLLLAIAATGLLLLAVRSTEVMGVALAVHLGWLAFFLVMPYSKFVH GlFRLTALVRHHADREASNGFAS SPPTKKG >Seq ID 15 (FumG)
MEHMKSVRDRSSVMQIVRVASGNCLEQYDFFVYGFYAAYIARSFFPTGDNATSLMLSLAT FGAGFLMRPLGAIFLGSYIDRVGRRKGLIVTLAIMAVGTLTIAMTPSYEAIGLLAPVIVL VGRLLQGFSAGAESGGVSVYLAEIASPKSRGFFTSWQSASQQVAVMIAAAIGLALQSTLS PEQMNDWGWRVPLLIGCLIIPVILWLRRSLPETKAYLHMEHKAHSIGESLRELQQSWGLI LTGMAMSILTTTTFYMITAYTPTFGEKALGLSPQDVLLVTIMVGVSNFLWLPIGGALSDR IGRTPILLWPVTVLAIAFPLMSWLVAAPTFGALAAVLLTFSACFGLYNGALIARLTEIM PPAIRTLGFSLAFSLATSLFGGFTPLVSTALIHATGSNSAPAIWLCFAAFISFVGVAAST RLSRPIAEGAR >Seq ID 17 (FumH)
MRAWYRNGELVLGAYADPIPAAGQVLVKTRACGICGSDLHFCDHAQAFTNLA3RAGI A3 MEVDLCRDIVLGHEFCGEIMEFGPSADRRFKPGQLVCSLPLAIGPTGARTIGYSDEYPGG LGEYMVLTEALLLPVPNGLPATCAALTEPMAVGWHAVEIAQVQPHHIPWIGCGPVGLAV VAALKHKQVAPIIASDPS PDRRALALRMGADAWDPREESPFRQAEKIARPVGQGGALSS SLLSKSQMIFECVGVPGMLRHAMDGASDGSEIMWGACMQPDAIEPMIGMFKALTIKFSR TYTGEEFAAVLHMIGEGALDVSPLVTDVIGLSDVPSAFEALRSPGAQAKVIVDPWR >Seq ID 19 (Fural) 10/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
MANGTRQKDLRERAERVIPGGMYGHESTRLLPPEFPQFFRRALGARIWDADEQPYIDYMC
AYGPNLLGYRQSEIEAAADAQRLLGDTMTGPSEIMVNLAEAFVGMVRHADWAMFCKNGSD
ATSTAMVLARAHTGRKTIIiCAKGAYHGASPWNTPHTAGILASDRVHVAYYTYNDAQSLSD
AFKAHDGDIAAVFATPFRHEVFEDQALAQLEFARTARKCCDETGALLWDDVRAGFRVAR
DCSWTHLGIEPDLSCWGKCFANGYPISALLGSNKARDAARDIFVTGSFWFSÄVPMAAAIE
TLRIIRETPYLETLIASGAALRAGLEAQSQRHGLELKQTGPAQMPQIFFADDPDFRIGYA
WAAACLKGGVYVHPYHNMFLSAAHTVDDVTETLEATDRAFSAVLRDFASLQPHPILMQLA
GA >Seq ID 21 (FumJ)
MYRKFRIEKPGKANSLLGAVALGTLAFPVSASAQDSDPASIGQPDEADTDRGTSEIWTG
SRLQNGFNSPTPVTAVSSEQLKEASPTNLADALNQLPVFNDSLKTSNPGTTPGTGNSGQN
LLNMRGLGSNRNLVLLNGNRFVATNFTGSVDINVLPQALVKRVDWTGGASAAYGSDAVS
GVINFVLDEDLEGIRAELQSGVSTRGDLPSYGGSIAFGTSFADDRLHLLGSFEYFRQDGI
RADEATGRRWFDIAAGQYPVPGATTGVTWPDIRSSRGSYGGLVTSGPLKGIAFLPGGVL
GTFDYGNFTSSSFQSGGDGPRVNIGFAPDQLRYNAFLRAAYDVSDTVQVYAEGTYAYSHT
NLGAFVISHVGGSNNFRIFRDNAFLPAPLATLMDRNAQASIWGRFSSDFPLVEIENFAK
VYRGAAGFRADIGNGWKLDGSASFGLTDLELRENNLTINRNLYAAVDAVRDPAGNIVCRS
TLAGLDQDCVPLNLFGTGSPSASAIDYVTADGVAQLRLEQYVAGLTISGDLGDSLSFGAG
PVSVAAGIEYRKEKARQETDAISQATTSITGIRGAPAAQAGRPGGFNLYNPLPFSGSYDI
KEGFVEIGVPILKDSALGRSLNLNGAVRYADYSQSGGVTTWKLGGEYEPIDGLRFRATRS
RDIRGPSLVELFDPGRQATLNSIYGGQAVQTRFFTAGNADLRPEKADVLTFGAVLRPAFV
PGFQFSVDRYWKVKGAIDFLLPQQEIDACDAGNTFFCDLITENPDGTITVTGPNLNLAV
QKAAGIDFEAYYSRPVGGGTFSLRALATHHTSAYRIATGSAPIRSLGQPDTPKWSANFQA
RYSTDDWALLVQQRFIAASVFNADNVEGVDTNLNHAPAVWYTDATLTFDIAAFGQKQQLF
LSVNNLFDRDPPIATNDPSSFSSPTSSAYDPVGRYFNVGVRFRI >Seq ID 23 (FumK) nicht vollständig MRLTGGELLARCLAVEGVRYVFGLMSPEVDPLLAALEDNGILFVPVRHEAAAAYMAEGIY KTTGQVAAIVTNPGPGTANLLPGWTARHEGVPFVAITSQHQLGWYPCTPKTFQGQDQI DLFRPAVKWGAPIFAWNRI VE ITHMAFREMWAGRPGPVQLEIPXS VMYWGERGPR - KFX DRR____ >Seq ID 25
MELSRQRDQALRERAQAVIPGGMYGHESTYLMPEGTPQFFSRGKGARLWDADGNEYVDYM
CAYGPNLLGYGFEPVEAAAAAQQARGDTLTGPSEVMVQLAEDFVAQISHADWAMFCKNGT
DATSMAMVIARAHTGRKTILCAKGAYHGAAPWCTPILAGTLPEDRAFWYYDYNDAQSLV
DAFEAHQDDVAAIFATPHRHEVFSDQIDPDPEYAASVRALCDKSGALLWDEVRAGFRIA
RDCSWAKIGVAPDLSTWGKCFANGYPISAVLGGEKVRSAAKAVYVTGSFWFSATPMAAAV
ETLKQIRETDYLERINAAGTRLREGLQQQAAHNGFTLRQTGPVSMPQVLFEEDPDFRVGY
GWVRECLKRGVYFSPYHNMFLSAAHSEADLAKTLAATGDAFVELRAKLPSLEIHQPLLAL RAA- [0012] Gemäß einer bevorzugten Weiterbildung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird das Verfahren so geführt, dass das jeweilige Enzym mittels molekulargenetischer Methoden, Muta-genese oder molekularer Evolution so verändert wird, dass es wenigstens 90 % Sequenzidentität mit wenigstens einem der Enzyme mit der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9,11,13,15,17,19, 21 und 25 sowie der Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst aufweist. Indem das Verfahren so geführt wird, dass das jeweilige Enzym mittels molekulargenetischer Methoden, Mutagenese oder molekularer Evolution so verändert wird, dass es wenigstens 90 % 11 /62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Sequenzidentität mit wenigstens einem der Enzyme mit der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11,13, 15, 17, 19, 21 und 25 sowie der Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst aufweist, gelingt es, die Enzyme in noch stabilerer und an den späteren Einsatzzweck angepasster Form herzustellen, wodurch der sauerstoffunabhängige Abbau von Mykotoxinen, insbesondere Fumonisinen, im Futter noch weiter verbessert bzw. vervollständigt werden kann.
[0013] Indem das erfindungsgemäße Verfahren bevorzugt so geführt wird, dass ein Enzym eingesetzt wird, welches wenigstens 90 % Sequenzidentität mit wenigstens einem der Enzyme der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9,11,13,15,17,19, 21, 23 und 25 aufweist, kann ein noch vollständigerer Abbau der Fumonisine im Magen-Darm-Trakt von Tieren sichergestellt werden, wobei gleichzeitig nicht nur Fumonisine, sondern auch verwandte bzw. strukturell ähnliche Mykotoxine im anaeroben Milieu entgiftet werden können, wie zum Beispiel das AAL Toxin.
[0014] Gemäß einer bevorzugten Weiterbildung des Verfahrens wird das Verfahren so geführt, dass die Enzyme isoliert werden. Durch Isolation der Enzyme kann ein gezielter Einsatz einzelner Enzyme in dem Futtermittel und somit dem Verdauungstrakt von Tieren durchgeführt werden, wodurch ein noch gezielterer Abbau von Mykotoxinen möglich wird.
[0015] Gemäß einer weiteren bevorzugten Weiterbildung des Verfahrens wird das Verfahren so geführt, dass die Enzyme in einer Schutzhülle verkapselt werden. Durch Verkapseln der Enzyme in einer Schutzhülle gelingt es, die Enzyme ohne Veränderung, insbesondere ohne Abbau und Schädigung an ihren Einsatzort, insbesondere in den Verdauungstrakt von Tieren, zu transportieren, so dass erst nach Auflösung der Schutzhülle, beispielsweise im Magen-Darm-Trakt von Tieren, die Enzyme zu wirken beginnen, wodurch ein noch gezielterer, rascherer und vollständiger Abbau der Mykotoxine im sauerstoffunabhängigen bzw. anaeroben Milieu des Magen-Darm-Trakts von Tieren erzielt werden kann.
[0016] Gemäß einer bevorzugten Weiterbildung wird das erfindungsgemäße Verfahren so geführt, dass die Enzyme aus Permease mit der Sequenz ID-Nr. 3, Carboxylesterase mit der Sequenz ID-Nr. 9, Tricarballylat-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 11, Citratverwertungsprotein mit der Sequenz ID Nr. 13, Alkohol-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 17, Ami-notransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder mit der Sequenz ID-Nr. 25 und/oder Acetolactat-Synthase mit der Sequenz ID-Nr. 23 gewählt werden. Durch eine derartige Verfahrensführung können insbesondere Fumonisine vollständig und sauerstoffunabhängig abgebaut werden. In diesem Fall werden aus dem Gencluster der Nukleinsäuresequenz mit der Sequenz ID-Nr. 1 ausgewählte offene Leserahmen in prokaryotischen oder eukaryotischen Wirtszellen zur Expression gebracht. Im bakteriellen Stamm mit der Hinterlegungsnummer DSM16254 erfolgt die Transkription der im Gencluster mit der Sequenz ID-Nr 1 enthaltenen offenen Leserahmen gesteuert bzw. geregelt durch einen bidirektionalen Promotor, der zwischen fumA und fuml, wie dies Abb. 1 entnehmbar ist, angeordnet ist. Die Gene codieren für Proteine, welche in der Regulierung der Genexpression, wie beispielsweise FumB und FumC, bei der Substraterkennung und dem Transport, wie beispielsweise FumA, FumJ, FumG und im Substratkatabolismus, wie beispielsweise FumD, FumE, FumF, FumH, Fuml und FumK involviert sind. Aus den entsprechenden Nukleinsäuresequenzen, welche für spezielle Proteine codieren, wurden gemäß einer bevorzugten Weiterbildung des Verfahrens gemäß der Erfindung die Gene ausgewählt, welche für den Substratkatabolismus verantwortlich sind, wodurch die entsprechenden gebildeten Enzyme das Substrat, nämlich Fumonisine vollständig katabolisieren können.
[0017] In der nachfolgenden Tabelle 1 ist die Bezeichnung der Gene des fumonisinkataboli-schen Genclusters aufgeführt, wobei O die Orientierung, nämlich f forward und r reverse bedeuten. 12/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 TABELLE 1
Gen Sequenz ID O Start Ende Länge Bezeichnung fumA 2 f 5214 6395 1182 Permease fumB 4 f 6418 7068 651 tetR-artiger T ranskriptionsregulator fumC 6 f 7232 8176 945 lysR-artiger T ranskriptionsregulator fuwD 8 f 8294 9916 1623 Carboxylesterase fumE 10 f 9876 11378 1503 T ricarballylatdehydrogenase fumF 12 f 11494 12537 1044 Citratverwertungsprotein B fumG 14 f 12541 13836 1296 T ricarballylatprotonensymport fumH 16 f 13957 15027 1071 Alkoholdehydrogenase fuml 18 r 5063 3795 1269 Aminotransferase fumJ 20 r 3513 679 2835 TonB-abhängiger Rezeptor fumK 22 r 551 9 ? Acetolactatsynthase (teilweise) [0018] Indem das Verfahren bevorzugt so geführt wird, dass bei Einsatz von Aminotransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder der Sequenz ID-Nr. 25 als Cosubstrat ein Keton, insbesondere eine α-Ketosäure, eingesetzt wird, kann insbesondere beim Abbau der Aminogruppe von Fu-monisin und gleichzeitigem Einsatz von einer α-Ketosäure, wie beispielsweise Brenztraubensäure, die Aminogruppe an dem Fumonisinmolekül durch eine Ketogruppe ersetzt werden, wobei als Nebenprodukt dieser Reaktion Alanin entsteht, welches vollständig unschädlich ist, so daß ein vollständiger Abbau von Fumonisinen zu unschädlichen Substanzen sichergestellt ist.
[0019] Die Erfindung zielt weiterhin auf einen Futtermittelzusatz ab, mit welchem es sicher und zuverlässig gelingt, Mykotoxine, insbesondere Fumonisine im Futtermittel und/oder dem Verdauungstrakt von Tieren sauerstoffunabhängig abzubauen bzw. zu detoxifizieren.
[0020] Zur Lösung dieser Aufgaben ist ein derartiger Futtermittelzusatz im wesentlichen dadurch gekennzeichnet, dass wenigstens ein Enzym mit der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 25 und der Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst, oder wenigstens ein kompletter, rekombinanter Wirtsorganismus zur Produktion dieser Enzyme sowie gegebenenfalls zusätzlich wenigstens ein Cosubstrat für wenigstens eines bzw. einige der eingesetzten Enzyme und ein inerter Träger enthalten sind. Ein derartiger Futtermittelzusatz, in dem wenigstens ein Enzym oder ein kompletter, rekombinanter Wirtsorganismus zur Produktion dieses Enzyms sowie gegebenenfalls zusätzlich wenigstens ein Cosubstrat für wenigstens eines bzw. einige der eingesetzten Enzyme und ein inerter Träger enthalten sind, zeichnet sich dadurch aus, dass er zielgerichtet Mykotoxine, insbesondere Fumonisine im Verdauungstrakt von Tieren abbaut und somit detoxifiziert. Durch den Einsatz eines erfindungsgemäßen Futtermittelzusatzes, welcher im wesentlichen aus isolierten Enzymen sowie gegebenenfalls deren Cosubstraten und Trägern bestehen, ergibt sich der Vorteil, dass diese ihre katalytische Aktivität in einer Umgebung und unter Bedingungen beibehalten, in welchem beispielsweise komplette Mikroorganismen nicht oder nur wenig aktiv wären, wobei gleichzeitig eine bedeutend höhere, spezifische Aktivität erzielt werden kann, sowie definierte Reaktionen unter Vermeidung von unerwünschten Nebenreaktionen katalysiert werden können. Darüber hinaus können Probleme, welche gemäß dem Stand der Technik durch den Einsatz vermehrungsfähiger Keime in den Futtermitteln entstanden sind, mit Sicherheit hintangehalten werden und überdies weisen Futtermittelzusätze, welche nur isolierte Enzyme enthalten, sowohl eine 13/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 bessere Eignung zur Formulierung für gezielte und kontrollierte Aktivierung, d.h. beispielsweise an einer bestimmten Stelle des Verdauungstrakts, als auch die Vermeidung von unerwünschtem, erhöhtem Substratverbrauch auf. Um die Spezifität noch weiter zu erhöhen, ist der Futtermittelzusatz gemäß der vorliegenden Erfindung dahingehend bevorzugt weitergebildet, dass durch molekulargenetische Methoden, Mutagenese oder molekulare Evolution veränderte Enzyme eingesetzt sind.
[0021] Gemäß einer bevorzugten Weiterbildung ist der Futtermittelzusatz so ausgebildet, dass ein Enzym eingesetzt ist, welches wenigstens 90 % Sequenzidentität mit einem Enzym der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 25 und der Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst, aufweist. Wenn ein Enzym eingesetzt ist bzw. wird, welches wenigstens 90 % Sequenzidentität mit einem Enzym mit der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9,11, 13,15, 17, 19, 21, 25 sowie der Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst, aufweist, gelingt es, neben den bevorzugt abzubauenden Fumonisinen auch weitere Mykotoxine sicher und zuverlässig im Magen-Darm-Trakt von Tieren sauerstoffunabhängig abzubauen, wodurch eine weitgehende Entgiftung der aufgenommenen Futtermittel erzielt werden kann.
[0022] Indem der Futtermittelzusatz so ausgebildet ist, wie dies einer bevorzugten Weiterbildung der Erfindung entspricht, dass die Enzyme, veränderten Enzyme und/oder zu wenigstens 90 % identen Enzyme mit einer Schutzhülle ummantelt eingesetzt sind, kann sichergestellt werden, dass die Enzyme, die zu wenigstens 90 % identen Enzyme oder veränderten Enzyme vor einem vorzeitigen Aktivitätsverlust gesichert sind und sicher und zuverlässig an der vorgesehenen Stelle des Magen-Darm-Trakts ihre Wirkung entfalten.
[0023] Indem der Futtermittelzusatz bevorzugt so weitergebildet ist, dass die Enzyme aus einer Carboxylesterase mit der Sequenz ID-Nr. 9, Tricarballylat-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 11, einem Citratverwertungsprotein mit der Sequenz ID Nr. 13, Alkohol-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 17, Aminotransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder der Sequenz ID-Nr. 25 und/oder Acetolactat-Synthase mit der Sequenz ID-Nr. 23 gewählt sind, werden im wesentlichen die zum Substratkatabolismus befähigten Enzyme zum Einsatz gebracht, so dass neben einer geringeren Menge an einzusetzenden Enzymen auch sichergestellt werden kann, dass keine unerwünschten Nebenreaktionen im Magen-Darm-Trakt von Tieren auftreten.
[0024] Gemäß einer bevorzugten Weiterbildung der Erfindung ist der Futtermittelzusatz so ausgebildet, dass eine Carboxylesterase mit der Sequenz ID-Nr. 9, eine Aminotransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder der Sequenz ID-Nr. 25, eine α-Ketosäure als Cosubstrat und ein inerter Träger enthalten sind. Indem der Futtermittelzusatz eine Carboxylesterase, eine Aminotransferase und eine α-Ketosäure als Cosubstrat neben einem inerten Träger aufweist, gelingt es insbesondere, Fumonisine, welche in den Futtermitteln enthalten sind, zuerst zu hydrolysieren, indem von den Fumonisinen Tricarballylsäurereste mit Hilfe einer Carboxylesterase abgespalten werden, und das so gebildete hydrolysierte Fumonisin in weiterer Folge unter Einwirkung der Aminotransferase und der α-Ketosäure als Cosubstrat, im vorliegenden Fall bevorzugt Brenztraubensäure, weiter umzusetzen, indem eine Aminogruppe von dem hydrolysierten Fumonisinmolekül durch eine Ketogruppe ersetzt wird, so dass ein für Tiere völlig ungefährliches 2-Keto-hydrolysiertes Fumonisin entsteht, welches unverändert ausgeschieden werden kann, und als Nebenprodukt Alanin gebildet wird, welches ebenfalls keinerlei negative Eigenschaften auf den Organismus ausübt.
[0025] Schließlich zielt die vorliegende Erfindung auf Verwendung eines Futtermittelzusatzes nach einem der Ansprüche 7 bis 11 zum sauerstoffunabhängigen bzw. anaeroben, enzymatischen Abbau von Mykotoxinen, insbesondere Fumonisinen ab.
[0026] Die Erfindung wird nachfolgend anhand von Ausführungsbeispielen sowie Figuren näher dargestellt. In diesen zeigt: [0027] Fig. 1 den Fumonisin-katabolischen Gencluster, [0028] Fig. 2 die Michaelis-Menten-Kurve für Fumonisin-Carboxylesterase FumD, und 14/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 [0029] Fig. 3 eine Abbaukurve von hydrolysiertem Fumonisin B:.
[0030] In Fig. 1 ist ein Fumonisin katabolischer Gencluster als Teilsequenz von 15420 Basenpaaren eines mikrobiellen Stammes mit der Hinterlegungsnummer DSM 16254 dargestellt. In dem fum-Genclu-ster des bakteriellen Stammes DSM 16254 wird die Transkription der offenen Leserahmen durch einen bidirektionalen Promotor gesteuert bzw. geregelt, welcher zwischen fumA und fuml angeordnet ist. Der Cluster codiert Proteine, welche in der Regulierung der Genexpression, wie beispielsweise FumB und FumC, in der Substraterkennung und dem Transport, wie beispielsweise FumJ, FumA und FumG und in einem Substratkatabolismus, wie beispielsweise FumD, FumE, FumF, FumH, Fuml und FumK involviert sind.
BEISPIELE
[0031] Beispiel 1: Die Enzymkinetik von Fumonisin-Carboxylesterase [0032] Das fumD Gen (Sequenz ID-Nr. 8), welches eine Fumonisin-Carboxylesterase codiert, wurde kloniert und in Pichia pastoris unter Verwendung von Standardverfahren exprimiert. Das his-getaggte Enzym wurde rückgewonnen und aus der überstehenden Lösung der Kultur durch Affinitätschromatographie gereinigt. Die Enzymkonzentration wurde bestimmt und die enzymkinetischen Parameter wurden mit sieben unterschiedlichen Substratkonzentrationen im Bereich zwischen 50 pg bis 25 mg FB-! pro Liter und einer Enzymkonzentration von 0,33 ng/ml bestimmt. Die Reaktionen wurden in 20 mM Tris-Cl (pH 8,0) Puffer mit 0,1 mg/ml Rinderserumalbumin gepuffert und bei 30 °C inkubiert. Proben wurden nach 0, 30, 60 120 und 240 Minuten Inkubation genommen und durch HPLC-MS/MS analysiert. Fumonisin Bi (FB-ι) und hydrolysiertes Fumonisin B! wurden quantifiziert basierend auf einer Kalibrierung mit den gereinigten Referenzsubstanzen und einem vollständig 13C markierten, internen FB1 Standard.
[0033] Fig. 2 zeigt die Michaelis-Menten-Kurve für die Transformation von Fumonisin B1 (FB1) durch Fumonisin-Carboxylesterase FumD, welche bei einer Enzymkonzentration von 0,33 ng/ml in Tris-Cl-Puffer (pH 8,0) bestimmt wurde, wobei anfängliche Enzymgeschwindigkeiten gegen die Substratkonzentration aufgetragen wurden. Die Michaelis-Menten-Kurve zeigt einen Abfall bei höheren Substratkonzentrationen, da die Enzymgeschwindigkeit basierend auf dem Produkt, d.h. hydrolysierter FBrBildung berechnet wurde. Da hydrolysiertes FB, aus FB, in einer zweistufigen Reaktion über partiell hydrolysiertes FBi mit lediglich einer Tricarballylsäure-Seitenkette, die zurückbehalten wurde, und einer Seitenkette ausgebildet wird, die abgespalten wurde, war die Endproduktbildung bei hohen Substratkonzentrationen verzögert. Die Michaelis-Menten-Konstante KM wurde als 0,90 pmol/l berechnet, was 650 ppb äquivalent ist, und die Umwandlungszahl war 900 pro Sekunde.
[0034] Aus Fig. 2 ergibt sich, daß Fumonisine mit der Carboxylesterase in den relevanten Konzentrationsbereichen rasch und vollständig hydrolysiert werden können.
[0035] Beispiel 2: Die katalytische Aktivität von hydrolysierter Fumonisinaminotransferase [0036] Sequenz ID-Nr. 18 wurde unter Verwendung von Standardverfahren kloniert und in E. coli exprimiert unter Steuerung bzw. Regelung eines Bakteriophagen T7 Promotors. Die Bakterienzellen wurden gesammelt in 50 mM Natriumphosphatpuffer, neuerlich suspendiert und durch Ultraschall lysiert. Hydrolysiertes Fumonisin wurde hinzugefügt und die Proben wurden bei 25 °C inkubiert. Proben wurden in Zeitintervallen genommen und durch HPLC-MS/MS analysiert. Es wurde keine Reduktion der hydrolysierten FB1 Konzentration beobachtet. Wenn ein Cosubstrat, wie beispielsweise eine α-Ketosäure, wie Brenztraubensäure oder Oxalacetat zu der Reaktion hinzugefügt wurde, konnte ein vollständiger Abbau des hydrolysierten Fumonisins zu 2-Keto-HFB1 beobachtet werden, wie dies in Fig. 3 dargestellt ist. Diese Substanz ist für Tiere vollständig unschädlich.
[0037] Beispiel 3: Enzymaktivität in Darmmilieu [0038] Zur Überprüfung der enzymatischen Aktivität von FUM-Carboxylesterase im Verdauungstrakt wurden schlachtfrische Schweinedärme verwendet und unter Ausschluss von Sauer-15/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Stoff ins Labor transportiert und in einer anaeroben Sterilwerkbank untersucht. Etwa 10cm lange Stücke von Duodenum und Jejunum wurden abgebunden und herausgeschnitten. Mit Kanülen wurde Fumonisin B1 in konzentrierter wäßriger Lösung auf eine Endkonzentration von etwa 10 ppm eingespritzt und mit Darminhalt vermischt. Anschließend wurden 5 pg Fumonisin-Carboxylesterase in wäßriger Lösung, bzw. dasselbe Volumen Wasser in den Negativkontrollen, eingespritzt und eingemischt. Die Darmabschnitte wurden bei 39° C inkubiert. Mit Hilfe von Kanülen wurden Proben gezogen und durch HPLC-MS/MS analysiert. Dabei zeigte sich, daß Fumonisin B1 im Duodenum und Jejunum zum Zeitpunkt der ersten Probenahme nach zwei Stunden bereits vollständig hydrolysiert war.
[0039] Beispiel 4: Ermittlung des Temperaturbereichs der Aktivität von Fumonisin-Carboxyl- esterase [0040] Zur Ermittlung des Temperaturbereichs, in dem Fumonisin-Carboxylesterase aktiv ist, wurden 1,6 ng/ml FUM-Carboxylesterase in 20 mM Tris-Cl Puffer, pH 7,0, mit 0,1 mg/ml BSA und 10 ppm Fumonisin B1 bei unterschiedlichen Temperaturen inkubiert. Dabei zeigte sich, daß das Temperaturoptimum für das Enzym bei 30 °C lag. Auch bei 40 °C und sogar 50 °C wurde enzymatische Aktivität noch eindeutig festgestellt. Somit ist diese FUM-Carboxylesterase zur Anwendung unter den Temperaturbedingungen wie im Verdauungstrakt, oder im Zuge von Prozeßschritten der Lebens- oder Futtermittelherstellung, die bei erhöhter Temperatur stattfinden, geeignet.
[0041] Beispiel 5: Bestimmung des pH-Bereichs der Aktivität von Fumonisin-Carboxylesterase [0042] Zur Bestimmung des pH-Bereichs, in dem Fumonisin-Carboxylesterase aktiv ist, wurde Teorell-Stenhagen-Puffer verwendet.
[0043] Dieser Puffer lässt sich durch die Kombination von Citrat, Phosphat und Borat über einen Bereich von 10 pH Einheiten mit gleicher Pufferkapazität einstellen. FUM-Carboxylesterase wurde in einer Konzentration von 3,3 ng/ml mit 10 ppm Fumonisin B1 bei verschiedenen pH-Werten in diesem Puffer bei 25 °C inkubiert. Die höchste Aktivität zeigte sich bei pH 8,0, aber es konnte im gesamten Bereich von pH 5 bis pH 10 Aktivität festgestellt werden. Durch die Aktivität in diesem breiten pH-Bereich wird die technologische Anwendung des Enzyms als Futtermittelzusatz bzw. in Zuge der Verarbeitung von Lebens- und Futtermitteln ermöglicht.
[0044] Beispiel 6: Fütterungsversuch mit Ferkeln [0045] Der Versuch wurde in einem Versuchsstall mit 12 Buchten für jeweils 10 Tiere durchgeführt. Der Stall war ausgestattet mit Spaltenboden, Schalentränkern und einem computergesteuerten Fütterungssystem. Die Automaten waren entlang der Buchtenwände angeordnet. Das Stallklima wurde täglich automatisch aufgezeichnet und die Temperatur nach den Standardempfehlungen zur Ferkelaufzucht eingestellt.
[0046] 120 gemischt-geschlechtliche Absetzferkel (Alter: ca. 4 Wochen, durchschnittliches Einstellgewicht 8,21 kg) wurden für diesen Versuch eingesetzt. Jedes Ferkel wurde mit einer Ohrmarke versehen und einzeln gewogen. Die 120 Ferkel wurden auf 12 Buchten zufällig verteilt. Alle Ferkel entstammten dem österreichischen Zuchtprogramm ÖHYB (= (Edelschwein x Landrasse) x Pietrain).
[0047] Direkt nach dem Absetzen wurden die Ferkel für 2 Tage mit einem Starterfutter gefüttert, nach dieser Eingewöhnungsphase erfolgte die Umstellung auf das Versuchsfutter. Die Fütterung erfolgte 2-phasig: Absetzphase Tag 1-14, Aufzuchtphase Tag 15-42. Das Versuchsfutter wurde buchtenindividuell über die Spotmix-Fütterungsanlage gemischt und je nach Anzahl der Ferkel, Gewichtsentwicklung und Futterverzehr zweimal täglich trocken zugeteilt. Wasser stand zur Aufnahme ad libitum zur Verfügung. Die 12 Buchten wurden in vier verschiedene Applikationsgruppen zu je drei Wiederholungen geteilt und erhielten die folgenden Einmischungen ins oben beschriebene Futter: 16/62 [0048] [0048] österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Gruppe Negativ-Kontrolle Keine Toxine, kein Enzymzusatz Positiv-Kontrolle 4-5,5 ppm Fumonisin B1 Versuchsgruppe 1 4-5,5 ppm Fumonisin B1 + Enzymmix 1 (Carboxylesterase, Aminotransferase, Pyruvat) 0,5 kg/t Futter Versuchsgruppe 2 4-5,5 ppm Fumonisin B1 + Enzymmix 1 (Carboxylesterase, Aminotransferase, Pyruvat, inerter Carrier) 1 kg/t Futter [0049] In der Positiv-Kontrolle wurden bei fast der Hälfte der Tiere respiratorische Probleme beobachtet, wobei es auch zu einem Ausfall kam. Alle anderen Gruppen erschienen gesund.
LEISTUNGSDATEN
[0050] _____
Gruppe Anzahl der Tiere Anfangsgewicht (Durchschnitt, kg) Endgewicht (Durchschnitt, kg) Ausfälle Negativ-Kontrolle 30 8,34 26,82 Positiv-Kontrolle 30 8,17 24,77 1 Versuchsgruppe 1 30 8,08 26,69 Versuchsgruppe 2 30 8,25 27,03 17/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 SEQUENZPROTOKOLL <110> Erber Aktiengesellschaft <120> verfahren zur Herstellung eines FuttermittelZusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen Abbau von Mykotoxinen sowie Futtermittelzusatz und Verwendung desselben <130> P03926 <140> A8025/2009 <141> 2008-09-18 <160> 25 <170> patentin Version 3.3
<210> 1 <211> 15420 <212> DNA <213> sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID l (fum) <222> (1)..(15420) <300> <308> F1426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(15420) <400> 1 tgtcggcgat crgtaaactt ctaccgtggt cctcgttcgc ccacakcata catcacagac 60 rtcgggattt ccaactgaac gggtcccggc ctgccggccc acatttcccg gaacgccata 120 tgggtgattt cgacaatccg gttccaggcg aagatgggtg cgccccattt aaccgcgggt 180 cgaaagaggt cgatctggtc ttgtccctga aaggtttttg gcgtgcaggg ataaacgaca 240 ccaagttgat gctgggacgt tattgcgacg aagggaaccc cttcgtggcg tgccgtcacg 300 actccaggca gaaggtttgc cgtaccggga cccggattcg tgacaatcgc ggcgacctgt 360 ccggtggtct tgtaaatgcc ctcggccata taggctgcgg cggcctcgtg ccgcaccggg 420 acgaacaata tcccattgtc ttcgagcgca gccaggagcg gatccacctc cggcgacatg 480 aggccgaaga cataccggac gccttcgacg gccaaacatc gtgccaataa ttctccgccc 540 gtgaggcgca tgacgatctc cagtacgaaa ggtgagtgcc caggttccgg cacattcgct 600 gtggttagtt gatgcgctga tcggccaacc gactgagtgg agttggatgg ccgcacctta 660 ccctgtcgcg cataactctc agatccggaa acggaccccg acattaaaat agcggccgac 720 cggatcatag gcagagctgg tcgggctgga aaaactgctg gggtcgttcg tcgctattgg 780 cggatctcgg tcgaacaaat tattgaccga tagaaacagc tgctgcttct ggccaaaagc 840 cgcgatgtcg aaggtcaatg tcgcgtcggt gtaccaaacc gccggagcgt ggttcaaatt 900 cgtatcgacg ccctccacat tgtcggcatt gaacaccgat gctgcgatga agcgctgctg 960 cacgagaagc gcccaatcgt cggtcgaata tcgcgcctgg aagttggccg accattttgg 1020 cgtgtccggt tgtccgagcg aacggatggg cgccgagccg Seite 1 gtcgcgatgc gataggcaga 1080 18/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 ggtatggtgc gttgccagcg cacgaagact gaacgtgccg ccgccgacgg ggcgtgagta 1140 ataggcctcg aagtcaattc ccgccgcttt ctggacagcc aggttgagat tgggacccgt 1200 cactgtgatg gtgccgtceg gattctccgt tatgaggtcg cagaagaagg tgtttcctgc 1260 atcgcacgcg tcgatttcct gctggggaag gaggaaatcg atcgcgccct tcaccttcac 1320 cacatagcga tcgaccgaaa actgaaaccc cggcacgaag gcggggcgta gcaccgcgcc 1380 gaatgtaagg acgtccgcct tttcagggcg caaatccgcg ttgccggcgg taaagaaccg 1440 cgtctgcaca gcctgtccgc cataaattga attgagcgtc gcctgacggc cggggtcgaa 1500 tagctcgaca aggcttggcc cgcggatatc tcgcgaacgg gtcgcgcgga acctgaggcc 1560 gtcgatcggc tcatattctc cgcccagctt ccaggttgtt actccaccgg actggctgta 1620 atcggcatat cggacggcgc cgtttaagtt cagcgaacgt cccagcgcgc tgtccttcag 1680 aatcgggacg ccgatttcga caaaaccttc cttgatgtca tagcttcccg agaagggaag 1740 tgggttgtag agattgaagc ctccaggccg acctgcctgc gccgccggag cccccctgat 1800 tcccgtgatc gaggtcgtcg cctgcgatat cgcgtcggtt tcctgccggg ccttctcctt 1860 gcgatattcg ataccagcgg cgaccgagac cgggcccgcg ccgaacgaca ggctatcgcc 1920 gaggtcgccg gaaatcgtga gtcccgccac atattgctca agcctcagct gagcgacgcc 1980 atcagcggtg acatagtcga tggccgacgc gctcggcgag cctgtgccga agagattgag 2040 cggcacgcaa tcttggtcga ggccggccag tgttgaacgg cagacgatat tgcccgcggg 2100 atcgcggacc gcatcgacgg cggcgtagag attgcggttg atggtgagat tgttttcacg 2160 aagctcgagg tccgtaaggc caaaggaggc cgagccatcg agtttccagc cattgccaat 2220 gtctgcccgg aagccggcag cgccgcggta gacctttgcg aaattctcga tttcgaccaa 2280 gggaaagtcg cttgagaagc gaccgacaac gatcgaagcc tgggcatttc tgtccatgag 2340 cgtcgcgagt ggagccggaa ggaaggcgtt atcacggaag atccggaaat tattcgagcc 2400 accgacatgc gatattacga atgcacccag gttggtgtgg gaataagcat aggtgccctc 2460 cgcatacacc tgcacagtgt cggacacatc atatgcggcg cgtaggaacg cgttgtagcg 2520 aagctgatcc ggggcgaagc cgatattcac gcgcggtcca tcgccgccgc tctggaacga 2580 cgagctcgta aaattcccgt agtcgaaggt ccctaggact cctccgggca aaaacgcgat 2640 gcctttcaga gggccggacg tgacaagtcc gccgtaggat ccgcgagaac tgcgaatatc 2700 gggcacgacc gtgacgcctg tcgtagcgcc gggcacggga tattggccgg cggcgatgtc 2760 gaaccagcgg cgacccgttg cttcatcggc ccggattccg tcctgtcgaa aatattcgaa 2820 gctgccgagc aagtgcaacc ggtcgtcggc aaacgaagtg ccgaaggcga tcgaaccgcc 2880 gtaggacggg aggtcgccgc gggttgaaac acccgactgg agctcggccc tgatgccttc 2940 cagatcttcg tcgageacga agttgatgac gcccgaaacg gcatcggaac cgtaggcggc 3000 cgaggcgccg cccgtcacga catcgacgcg cttgaccaac gcctgcggca gcacgttgat 3060 atcgaccgag cctgtgaaat tggtcgcgac gaaacggttg ccgttcagca ggacgaggtt 3120 Seite 2 19/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 ccggtttgac ccgaggccgc gcatgttgag caggttctga ccgctgttcc ccgttccggg 3180 tgtcgtgcca gggttggagg tcttcaagct gtcgttgaac acgggcagct ggttgagtgc 3240 gtcggcaagg ttggtcggag atgcctcctt caactgctcg ctggatacgg ctgtaaccgg 3300 cgtcggcgaa ttgaagccgt tctggaggcg gctgccggtc acgacgattt cgctcgttcc 3360 ccggtccgtg tccgcttcgt ccggctgacc tatcgatgcg ggatcgctat cctgagcact 3420 ggcagagaca ggaaatgcga gggtgccgag cgctactgcg ccgagcaaac tatttgcctt 3480 gccgggcttt tcgattctga acttccgata catctgcagt ccctcccgaa ttgataggga 3540 ctccgtttga gtccccttgt ttcttgacgc cgccgtcgct caccacggtc cggtcggagg 3600 ctaagcgtcg ggcctaagga cccgcaattt gaacatcaaa tgcaatgatc ggaggcttca 3660 ttgcacttcg cgcatagacc ggcgcggtag ctgaaagtgc caataatcag ggattttgct 3720 gaacagttgc ggcatgacgt ccggcatcgg ccacgcggtt ggcggcatcg acgtggcttt 3780 cgcgtcgccg cccctcaagc accggcgagt tgcattaaaa tgggatgagg ctggagagac 3840 gcaaaatctc tgaggaccgc gctgaacgcg cgatccgtcg cctcgagggt ctccgttaca 3900 tcgtcaactg tatgggccgc agagagaaac atattgtgat agggatgaac atagacgccg 3960 cccttcaggc acgccgcggc ccacgcatag ccgatccgaa aatcgggatc gtccgcaaag 4020 aatatttgcg gcatctgcgc cgggcccgtc tgcttcaact caagaccatg gcgctgagac 4080 tgtgcctcca ggcctgcccg cagggcggcg ccgctggcga tcagcgtttc gagataaggc 4140 gtctctcgaa tgatcctgag ggtttcgatc gcggccgcca tcggtaccgc agagaaccag 4200 aaggagccgg tcacaaatat atcccgcgcc gcatcgcgcg ccttgttcga gcccagcagg 4260 gcggagatcg gatagccatt cgcaaagcat tttccccagc aactgagatc gggttcgata 4320 cccaaatgcg tccagctgca atcgcgcgcc acccggaaac ctgcgcgcac atcgtcaacg 4380 accagaageg caccggtctc gtcacaacat tttcgagcgg tgcgcgcgaa ctcaagctgg 4440 gcgagggcct ggtcctcaaa tacttcgtgt cggaaaggtg tggcaaagac agccgcaata 4500 tcgccatcgt gcgccttgaa cgcgtccgat aagctttggg cgtcgttata ggtataatat 4560 gcgacatgca cgcgatcgga agcgagaatc ccggcagtat gcggagtgtt ccacggggaa 4620 gcgccatgat aggcgccttt ggcgcataat atggttttgc gccccgtatg ggcacgcgcg 4680 agaaccatcg ccgttgaggt ggcatcgctg ccatttttgc agaacatcgc ccaatccgca 4740 tgacggacca tgcccacaaa ggcttcggcg aggttgacca tgatctccga aggaccggtc 4800 atggtgtcgc cgagaagtcg ctgcgcatca gccgcggctt cgatttcgga ttgccggtaa 4860 ccgagcaaat ttggcccata cgcgcacata tagtcgatat agggctgctc gtcggcgtcc 4920 caaattcgtg cccccagcgc gcgcctgaag aactggggga attctggcgg cagcaaccgt 4980 gtcgactcgt ggccgtacat cccgcccgga atgacccgtt cggcgcgttc tctgagatct 5040 ttctgccttg ttccgttcgc cataatgcac ctctcgcgat aaataatggg taaaaatcca 5100 cgaaattcaa cgattcgtga tctgaaagag atatatcttg Seite 3 taatatactg tataattata 5160 20/62 AT507 364B1 2011-05-15 österreichisches
Patentamt cacaatgcgc aatcggacga cgggatagcg gggcagggag gacggggaaa tctatgcgga 5220 acgtcagcga caaggcgccg ccccacgaga cgctcaccgt agtcgtcgcg gcaatgatcg 5280 ttggcacggc cgccttgatg gtgcttggaa tacagcccat ccttctcggc gcccttgtag 5340 aggaggggcg tattcccgcc gaggggttgg gatcggcggc aacggtggaa atactggcga 5400 tcgcggcggg aacatgcatc ggacccgttc ttatgaagac gggatatctg cgggcgaaat 5460 gcgcggcact ctgcttaatg ctcgccgcaa tcaacttcgg attgacgttg ccgggtttcg 5520 atttgcccat cgtggcttgc cgagcggcag cgggagccct ggaaggtctt tcgctcagcg 5580 cggcgatcct gatcatgact cataatcggc ggccggaccg gctgagcgga atatttctgg 5640 gcgcgcagac gataccgcag gtaatatctg cttatttgct cccgacggag attattccgc 5700 gctgggggag cgcaggcggc ttcacgatcc tgggcattct cgcggcgatc gccgcgatcg 5760 cggctctgtg cctcgtcgat cgcgttgagc tcgatccgac gaccgttaac gacgacttgc 5820 agtggtcacc cgcggcgatc gtcatttcga tggcggcatt cgttcaattc tcgggggtcg 5880 gtgccgcatg gagctatctg gagcgactgg ctgcgcagca cggattttcg ggagaaacga 5940 tcggtatcgc catttccggg agtttgcttt gccaggtagg cggggcttgg ctggccgctt 6000 ggatcggtgg gcgggtcgga tatcgcttcg ccttaatcgc tgggagcctg cttcaggcgg 6060 gcaacgtgat cgcattggcg gtggccgatc agccaagctg gtttatttcc gcttcctgtg 6120 ctttcggcct gttctggttg gcgatgcagc ccttccaaat ccgcttcgcg atcgcgatag 6180 ataacagccg gcagcttgct gtactgctga cgccgatcgc cctcgtcggg ttgagcgcgg 6240 ggcccttgtt gctctctcgc tttgccgggg cgaccgactt gcgctggatc tttgtgggga 6300 gttcgacctt gttgctggcc agcgcgcttc tgtatctttg cgcttctctg tttcaaccgc 6360 gcggaaaggt gatcgctgaa acggtggacg tatgaaaaag acggatcggg gttcgcgatg 6420 acatcgcagg tcaagcttcg tagcgcggca aagcggccgc gcagtcctaa aagcgagcga 6480 ggtcttgctc gttacgagtc cttgcttgat gcgaccgaca ggctgttggt cgatctagac 6540 cccgatcagg tcggtctcta tcagattgca gaggaagcgg gtgcctcacc gtcgtccgtc 6600 tatcatttet ttccgaccaa ggaagtggct catctcgctc tgatgcgccg ctatctggag 6660 gggctccgga atctcgacgc gatggaagtc gacatcggcc agctcgaaag ctggcaggac 6720 ctgatgaagt tggatcagat cagggcgcga gactattata atagccaccc gcccgccctc 6780 aagcttctgt tcggcggata tggcggggtc gaggccagaa agcttgacga gcgatactcc 6840 gaggaaatcg tgagctccat gtatggcaga tacaacggca ttttccatat gccgcaaatg 6900 gagaatgagg ctctcatgtt cacgatctgc ttcgcaattc tcgacgcggt atgggccgtc 6960 tcctttcgcc ggttcggtga aattacgtcg gattttcttc gggaggggca agcggcttgc 7020 attgcctatt gccgacacta tctgcccgag cgaacgccat cagcgtgaat ccgttcaacg 7080 atatgcagga atgtccgttg cgttgagttc ggttctgagt tcggtcggtt aggaggcccc 7140 gcgataaacc aacgctcttc tgtcgaaggg atgtcgcctg Seite 4 gttcgaccag gccctgcgaa 7200 21 /62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 gtcagccgca atcaacgagg cagatgtcaa cgatctgcga tcatttgttg cggtgtatga tctgaatcaa tcgcagcccg cgctcagccg cggtccgttg ttcgagcgga ccagtcggtc gctcccggtc gcccaccgag cgttggaact tgtccgggag ttccgctgga cagacatcac tgttctcccg cgagctgcgc gcttgtacat ccttgacgtg ccggcggtcg aggctgcgga catcagcatt gagagcctgt tgccatcaag gttcggcctg gcatgccacc gaagccatcc gcaattgaaa ggtgaaagcc tgatcgccgt cgatgccgaa ctcgcgcgca acaatatcgc gacgacggcg ctgggattga tcgatgcgca tatgccccgc tcgggtcggt cggaggtcgt acgcacgatc ggcatcgttc agcgccgcac gcttgcgcgg ctccgcgcgg cctggtcgtc agatggggca tcgtgacacg cgttctatgc atttgctgag agacgaacgc gaagataccg gggagagaaa tgtgtgaaag agcaccaatg cgccacgtgg cttgcgcgga tcagcgtttc catgcttggc gcaactgcca ttcccgtggc tcatacccag tcgggcgccg tcgagggcgt acccttcgcg gctccgccgg tcggcgacct gtgggcgggc accagggacg gccgccgctt tagagagggg agccgggctg ccgggacgag tcccaaacag gtcggtaagg gggggctccc tagcggcggt tctggcgcgg tgccatatta ggtggtcgtc acgttcaact atcgcgccgg ttcaaaggaa agtccgaatg gcgtgtcggg gttcaaatgg gttcagaaca acataaggga ctttggcgag tccgccggcg cgagcgcgct gagcgccttc aatcaggcga tactgcaaag ttctgaaagc gaagcgaatg ggctggagct cgatgcgggc gaattgacga agatcgcgca cgtggccagc aagttcaact gtgagttact aacgcgaagt tttagccacg ccgcgcggct gagaatccag cgcctcgaga gtctcgtggg gcttgccgaa acggcgctcg gcaaagagtt tgtcgatacg tcgctgtttg cgtcgcccaa gattgcctgt gtacagaccg ccgccttcca ggatcaaaat ccgagggtcc gactccgcat cctggttgcg agcggcgagg cggagttcgg cctgcggttc gatgcgctcc acgaggaccc gctggcgtcg ctcgagatcc ttgaatggac tcaccgtgcg agccggaacc gcacgttgct gctggaatgg cggtatgagg tcgcgcatct attgggtgtc gctgttatgc cccgcatggt ctggcgcccc gtcgtcgcgc cggtcgtcca cggctcgatg caccctgccg cacagcaatt cgccaatctg ggcgacatcg cgtctcgcga gcctgcagca tcgatgctca cgatcattgc ctgggtcaca ggatatcagt ccatcgaggc ccgtggcggc cgggcgtccc ccgctgcgcc ccggggggcc tccgccatcg cctggacctt tgcgcaaact gacgatccga agctcgttcg cgagggcgac gtcgagactt ttttgggaat gcgatggcgg ccgccggctc cgccgagggc tgcgcccgat tgcatcggga acgagcggct cgaagactgc ctctatctga atatctggtc cgtcatgatc tgggtttacg gcggtgggtt tgacggctct gcgctcgcgc agaagggcgt gattctgggc tttcttgccc atccggcgct caactatggt cttctcgaca tgctcgcggc gttcggcgga gacccgaacc gtgtcacggt cggactgctc ctgacctcgc cgctcagtga tccgggtctg gccaggccgc tcgccacgct gggagccgat atttctgctc tacggcgtgc atcgcgaata cccatgtcgc gccagttcac Seite 5 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 8400 8460 8520 8580 8640 8700 8760 8820 8880 8940 9000 9060 9120 9180 9240 22/62 . österreichisches ' Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 caagccgcgg ccgatgggtc cgattctgga cggctatgtt ttgcgcaccc ttgacgtcga 9300 tgccttcgcc aagggggcct tccgcaagat acccgttctg gtcggcggaa acgccgacga 9360 agggcgcgct tttacggatc gcctgccggt caaaacggtc cttgaatatc gagcctatct 9420 cacagaacaa tttggtgacg aggcggacgc atgggagcgt tgttatcccg cgaactccga 9480 cgccgacgtc cccgccgccg ttgcccgtct ttttggggat agtcagttca acaacgggat 9540 cgagctgctc tcggcagcct tcgcgaaatg gcgaacgccg ctttggagat atcgctttac 9600 gggcattcca ggagccggcc gtcgccccgc cacgcatgga gacgaaattc cctatgtctt 9660 cgcaaatctg gggccgtcgt ccgtatctat gtttgggtcg ctcgaaggcg gcgccggggc 9720 gtcggacatc aaacttgcga ccgaaatgtc cgcggcctgg gtgagcttcg cggtgcacgg 9780 ggtccccgat cagggcacga aatcgcactg gccgcgcttc gagcggcgag gggagatcat 9840 gacttttggt tcgcaggttg gctctgggga aggtcttgga gtttcgccga gcaaagcctg 9900 ccaaccctca aaatagcgcc cggcctgtgc gtgcttcagc acgccgtccc gctttgcggg 9960 cgacgggctg tgccctctgc ctagaaggaa gtaagttgcg ctacgacgtc gcgataattg 10020 gaggtggcaa cgctgcattg acggcagccg tgacggcgcg tgaagcgggg gcctcggttc 10080 ttgtgatcga gcatgcgccg cgcgccatgc gcggcggcaa cagtcgtcac acacgcaata 10140 tgcgtacgat gcacgaacgt cccctgtcgc cgttgaccgg tgaatattcg gcggacgaat 10200 attggaatga tcttgtccgc gtcacggggg ggcgcaccga cgaagaactc gcgcggctcg 10260 ttatccgcaa caccaccgac gctattccct tcatgacgcg ctgcggtgtg cgtttccagc 10320 cctcgctgtc gggcacgctg agtttatcgc gaaccaacgc attcttcctt ggcggcggga 10380 aggcgcttgt aaacgcatat tacgccacgg ccgaacggct aggcgtcgat attctctatg 10440 attctgaggt gaccgagatc aaccttcagc aaggcgtcgt gcagcgtctg caattgcgca 10500 gccggggatt ccctgtcgaa gtggaagcca aggctgccat cgcctcgtcc ggaggattcc 10560 aggcaaatct tgactggctc tcaagcgcat gggggcctgc tgcggcgaac ttcatcgtac 10620 ggggcacgcc atatgcgact ggcacggtgc tcaagaacct gttggagcaa ggcgtcgect 10680 cggtgggaga tccaacccaa tgccatgctg tcgcgatcga tgggcgagcg cccaaatacg 10740 acggcggcat cgtcacacga ctggactgcg ttcccttctc gatcgtcgtc aacaaggacg 10800 ccttgcgctt ctacgatgaa ggcgaagatg tgtggccgaa gcgttacgcc atatggggtc 10860 gcttggtggc acagcagcct gatcagatcg ctttcagcat aatcgatcgg caggccgaag 10920 acctcttcat gccgtcagtg ttcccccccg tgcaagcgga cacgatcgcg ggtctggccg 10980 agaaactcgg tctgaatccc gtaaccctgg aacgcacggt ggccgaattc aacgccgcat 11040 gcgtgcccgg cgaattcggc ggccaagatc tcgacgacct ccacaccgag ggaatcgaac 11100 caaagaaatc caactgggcc cgaccgatta ttgtgccccc gttcagcgcc tatcctctcc 11160 ggcccgggat caccttcacc tatctcggcg tcaaggtaga cagccgtgcg cgggtcatca 11220 tggagacagg tgagccgaca aaaaacctgt ttgcttcggg ggaaataatg gcgggcagca 11280
Seite 6 23/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 ttctcggcca aggttatctc gctggatttg gaatggcgat tggtaccgta ttcggccgca 11340 tcgcgggttg ggaggccgca cgtcatgcag gattttgatc tcgtaaaaat gctgtctgac 11400 ttgccgtcgg cgccggagct ggaagccagg cgcgttatgg aggtgtgcaa cgcgtgccgc 11460 tattgcgaag ggttctgcgc ggtatttcct gcaatgacct tgcagcgtca tttcgccagc 11520 ggcgatctca gccacctcgc caatctctgc cactcgtgcc aaggttgcta ttacgcctgc 11580 caatacgccc ctccgcatga gttcggaata aacgttccaa aggcgctgtc ggagttgcgg 11640 ctcgagagct acgagcagca tgcttggccc cggccggtcg ccgctctcta tcgcaagaat 11700 gcgctcatca tttccatctt gtcggcggca tgcataaccg gcgtccttct gcttgccgcc 11760 atcttcaacg gggatgcact tttcgcgaaa cacgcatcgg tgcccggcgg cgggttttac 11820 aacgttattc cttatcaggc gatgattgcc gtcgcggcga ccacatttct ttattccgcg 11880 ctggcgctgg cgatcagtct cgttcgcttt tcgcggacga tcggtctggg aattaaggtt 11940 ctttatcagc acgtgccggt tcttcgggcg ctacgcgatg cggcgactct gcgatatctc 12000 ggcggcagcg acggcgaggg gtgtaacgac gcggacgaga cattttcgac gacccggcga 12060 aaatttcatc acgcccttgc ctatggcttc ggactttgtt tcgcggccac agccacgggc 12120 acgatctacg atcatatgtt cggctggccg gcgccctatg cgcttttcag cttgccggtc 12180 gtcctaggga ccgttggggg gatcggaatg gtcgtgggcg cgatcggcct actctggctc 12240 aagctggccg gcgaagacgc tcctcgatca ccggcactgc ttgggccgga tgttgccctg 12300 ttggtgcttc tgcttgccat agcggcaacg ggcctcctcc ttttagcggt ccgcagcacc 12360 gaagtcatgg gcgtcgcgct cgccgtccat ctcggcgtcg tcttggcctt ctttttggtg 12420 atgccataca gcaaatttgt ccacggtatc ttcaggctca cggctctcgt gcgccatcat 12480 gctgaccgcg aggcaagtaa tggcttcgcc tccagccctc ccacgaaaaa gggttaaaca 12540 atggaacata tgaagtccgt tcgcgatcgc agtagcgtca tgcagatcgt gagagtggcg 12600 agtggcaact gtctcgagca atatgatttc ttcgtttacg gcttctatgc ggcatatatt 12660 gcgagaagct tttttccgac cggcgataac gcgacatcgc tcatgctttc attggccact 12720 tttggcgctg gtttcctcat gaggcccttg ggggcgattt ttctcgggtc ctacatcgat 12780 cgcgtcgggc gtcggaaagg cctgatcgtg acactcgcga tcatggccgt cggaaccctc 12840 accattgcga tgactccaag ctatgaggca attggattac tcgcaccggt tatcgtgctc 12900 gtcgggcgac ttttgcaggg tttttccgct ggagcagagt cgggtggcgt ctcagtgtac 12960 ttggcggaaa ttgcgtcgcc caaatcgaga ggcttcttca cctcgtggca gtctgccagc 13020 cagcaggtgg ccgtcatgat cgccgccgcg atcggtcttg cgctgcaatc aacgctttca 13080 ccggagcaaa tgaacgactg gggatggcgg gtgcccttgt tgatcggatg cttgattatc 13140 cccgtgatac tctggctgcg ccggtctctc ccggaaacga aagcctatct ccacatggag 13200 cacaaggcgc attcgatcgg cgaatccctc cgcgaattgc aacagagctg ggggctgatc 13260 ttgacgggca tggcgatgtc gatcctcacg acgaccacct Seite 7 tttacatgat taccgectat 13320 24/62
aagatgtcct ggggtgctct ttctcgccat ttgcagctgt cgagaetcac gtctcgcgac cgacgggcag tcggtgtggc atcagagaat ttcgcgaaga gagcagtagt ccgccgggca tttgcgatca aagttgattt tcgggccctc cgatcggtcc gcgaatatat cctgcgcggc ttcaaccaca ctgccctgaa gtgctcttgc ttcgccaggc tgctgtcaaa cgatggacgg acgcgatcga acacgggtga ctccgctcgt ggagtccagg aagggtgcga catattcttc gtcggggttc gatgtacttc tccgaccatg ccagttgatc AT 507 364 B1 österreichisches
Patentamt acgccgacat atcatggtcg atcggtagaa ctgatgagct ttctccgcat cctcccgcca ggcggcttca cctgcaatct cggctgagcc caatgaagcg acggctgaaa ggcgaacttg aagaccagag tttacgaacc atcgttctgg cgcttcaaac cggacgattg gaagcgctct ccgatggcgg gtggtgatcg gttgctccga ggcgccgacg gcacgcccgg atattcgaat gggtccgaga gggatgttta gcggtgcttc attggcctgt aaagtgattg cgtcaaagaa gcagttggta gtttgccatt tgctctcgac ggatcgggat ttggcgagaa gcgtgtcgaa ccccgatcct ggctcgtcgc gctttggact ttagaaccct ccccattggt ggctctgttt ggccaatcgc agattcgggc cgatgatggt tcctgggggc catgcggcat ttgcatcgcg ggcatgaatt ccggacagct gctactcgga tgctgcctgt tgggatggca ggtgcggacc ttattgcgtc ccgttgtcga tcggacaagg gcgtaggggt tcatggtcgt aagcgctcac acatgatagg ccgatgtccc tggacccttg ggcgacgttg aacatgccaa gtcatcgctc ctggccttcc cggcaggcgt agcactcgga cttcctgtgg actggtcgtg ggcaccgaca ctataatggg tggcttctcg aagtacggcg tgcggctttc cgaaggcgcc ggtaggtgcg atgaatgggc ctatgctgat ctgcggatct ggcgggtatc ctgtggcgag tgtgtgctcg tgagtatccc tccgaacggc tgccgtcgag ggtcgggttg ggatccatcg tccgcgcgaa tggggccctg gccgggcatg tggcgcatgc gatcaaattc tgagggcgca gtccgcgttt gcgctgagcc acccggtatg aatatgaact gcacccggcg ttcatatatt tggttcatct ctgagcccgc cttccgatcg ccggtcaccg ttcggagcgc gcgctcatcg ctggcgttca ctaatccacg atcagcttcg agataggaca ctggcggcac taagacatga ccgatacccg gaccttcatt gcctctatgg attatggagt ctgccgctgg ggcgggctcg cttccggcga atcgcgcagg gcagtcgtcg cccgatcggc gaatcaccct tccagctcat cttcggcatg atgcagccgg tcgcgaactt ctcgacgtat gaggctctac tgaggatgcc tgaacatccc gtagtattgc acaaagatta tcaggacctc gggtcgagtt Seite 8 gctggttacc ctcggatcgt cgcctttccc tctgctgact cgagattatg ctcgctgttc caattccgcg cgcatcgacc gcccgtgcgg gccgttgcgg ttaccgaaat ggtgctcgtc tgcgcaggcg gtgtcgagac tgcggatcgt gaccggagcg ggtcctcacg gttgacggag tcacatccct acataagcaa tctgcggatg cgagaagatc gtctcaaatg cgcgtccgac gcccatgatc ggaattcgcc taecgatgtg cgcccaagca cgttgggcat cgcagctgaa tcattgtggg cgataatccg cgtgcggcgc ttcgtaagag 2011-05-15 13380 13440 13500 13560 13620 13680 13740 13800 13860 13920 13980 14040 14100 14160 14220 14280 14340 14400 14460 14520 14580 14640 14700 14760 14820 14880 14940 15000 15060 15120 15180 15240 15300 15360 25/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 agaacacctc ctcggctaac tgcgccgcgg tactatcgca ggatcgtctc gagcgtycgc 15420
<210> 2 <211> 1182 <212> DNA <213> Sphi ngopyxi s sp. <220> <221> Seq ID 2 (fumA) <222> CI)..(1182) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(1182) <400> 2 atgcggaacg tcagcgacaa ggcgccgccc cacgagacgc tcaccgtagt cgtcgcggca 60 atgatcgttg gcacggccgc cttgatggtg cttggaatac agcccatcct tctcggcgcc 120 cttgtagagg aggggcgtat tcccgccgag gggttgggat cggcggcaac ggtggaaata 180 ctggcgatcg cggcgggaac atgcatcgga cccgttctta tgaagacggg atatctgcgg 240 gcgaaatgcg cggcactctg cttaatgctc gccgcaatca acttcggatt gacgttgccg 300 ggtttcgatt tgcccatcgt ggcttgccga gcggcagcgg gagccctgga aggtctttcg 360 ctcagcgcgg cgatcctgat catgactcat aatcggcggc cggacegget gageggaata 420 tttctgggcg egeagaegat aeegeaggta atatetgett atttgctccc gaeggagatt 480 attccgcgct gggggagcgc aggeggette acgatcctgg gcattctcgc ggcgatcgcc 540 gegategegg ctctgtgcct cgtcgatcgc gttgageteg atccgacgac egttaaegae 600 gaettgeagt ggtcacccgc ggegategte atttegatgg eggeattegt teaatteteg 660 ggggtcggtg ccgcatggag etatetggag cgactggctg cgcagcacgg atttteggga 720 gaaaegateg gtatcgccat ttccgggagt ttgetttgee aggtaggegg ggcttggctg 780 geegettgga tcggtgggcg ggteggatat cgcttcgcct taategetgg gagcctgctt 840 caggcgggca aegtgatege attggcggtg gccgatcagc caagctggtt tattteeget 900 teetgtgett tcggcctgtt ctggttggcg atgcagccct tccaaatccg cttcgcgatc 960 gegatagata acagccggca gettgetgta ctgctgacgc cgatcgccct cgtcgggttg 1020 agcgcggggc ccttgttgct ctctcgcttt gccggggcga ccgacttgcg ctggatcttt 1080 gtggggagtt cgaccttgtt gctggccagc gegettetgt atetttgege ttctctgttt 1140 caaccgcgcg gaaaggtgat egetgaaaeg gtggacgtat ga 1182
<210> 3 <211> 393 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp.
Seite 9 26/62 <220>
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 <221> Seq ID 3 (FumA) <222> (1).. (393) <300> <308> F3426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(393) <400> 3
Met Arg Asn Val Ser A$P Lys Ala pro pro His Glu Thr Leu Thr val 1 5 10 15 val Val Ala Ala Met Ile val Gly Thr Ala Ala Leu Met Val Leu Gly 20 25 30 Ile Gin pro Ile Leu Leu Gly Ala Leu val Glu Glu Gly Arg ile pro 35 40 45 Ala Glu Gly Leu Gly Ser Ala Ala Thr val Glu He Leu Ala Ile Ala 50 55 60 Ala 65 Gly Thr cys Ile Gly 70 Pro val Leu Met Lys 75 Thr Gly Tyr Leu Arg 80 Ala Lys cys Ala Ala Leu cys Leu Met Leu Ala Ala ile Asn phe Gly 85 90 95 Leu Thr Leu Pro Gly Phe Asp Leu pro Ile val Ala Cys Arg Ala Ala 100 105 110 Ala Gly Ala Leu Glu Gly Leu Ser Leu ser Ala Ala Ile Leu Ile Met 115 120 125 Thr His Asn Arg Arg pro Asp Arg Leu Ser Gly ile Phe Leu Gly Ala 130 135 140 Gin Thr Ile Pro Gin Val Ile Ser Ala Tyr Leu Leu pro Thr Glu ile 145 150 155 160 He Pro Arg Trp Gly Ser Ala Gly Gly Phe Thr Ile Leu Gly ile Leu 165 170 175 Ala Ala Ile Ala 180 Ala Ile Ala Ala Leu 185 Cys Leu val Asp Arg 190 Val Glu Leu Asp pro Thr Thr val Asn Asp Asp Leu Gin Trp Ser Pro Ala Ala 195 200 205 Ile val Ile ser Met Ala Ala Phe val Gin Phe Ser Gly Val Gly Ala 210 215 220 Ala Trp Ser Tyr Leu Glu Arg Leu Ala Ala Gin His Gly Phe Ser Gly 225 230 235 240
Seite 10 27/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Glu Thr Ile Gly Ile Ala ile Ser Gly Ser Leu Leu Cys Gin val Gly 245 250 255 Gly Ala Trp Leu 260 Ala Ala Trp Ile Gly 265 Gly Arg val Gly Tyr 270 Arg Phe Ala Leu Ile Ala Gly Ser Leu Leu Gin Ala Gly Asn Val Ile Ala Leu 275 280 285 Ala Val Ala Asp Gin Pro Ser Trp Phe Ile Ser Ala ser cys Ala Phe 290 295 300 Gly Leu Phe Trp Leu Ala Met Gin pro Phe Gin Ile Arg Phe Ala Ile 305 310 315 320 Ala Ile Asp Asn Ser Arg Gin Leu Ala val Leu Leu Thr pro Ile Ala 325 330 335 Leu Val Gly Leu ser Ala Gly Pro Leu Leu Leu Ser Arg Phe Ala Gly 340 345 350 Ala Thr Asp Leu Arg Trp Ile Phe val Gly Ser ser Thr Leu Leu Leu 355 360 365 Ala Ser Ala Leu Leu Tyr Leu cys Ala Ser Leu Phe Gin pro Arg Gly 370 375 380 Lys Val Ile Ala Glu Thr Val Asp Val 385 390
<210> 4 <211> 651 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 4 (fumß) <222> (1) .. (651) <300> <308> FD426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(651) <400> 4 atgacatcgc aggtcaagct tcgtagcgcg gcaaagcggc cgcgcagtcc taaaagcgag 60 cgaggtcttg ctcgttacga gtccttgctt gatgcgaccg acaggctgtt ggtcgatcta 120 gaccccgatc aggtcggtct ctatcagatt gcagaggaag cgggtgcctc accgtcgtcc 180 gtctatcatt tctttccgac caaggaagtg gctcatctcg ctctgatgcg ccgctatctg 240 gaggggctcc ggaatctcga cgcgatggaa gtcgacatcg gccagctcga aagctggcag 300
Seite 11 28/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 gacctgatga agttggatca gatcagggcg cgagactatt ataatagcca cccgcccgcc 360 ctcaagcttc tgttcggcgg atatggcggg gtcgaggcca gaaagcttga cgagcgatac 420 tccgaggaaa tcgtgagctc catgtatggc agatacaacg gcattttcca tatgccgcaa 480 atggagaatg aggctctcat gttcacgatc tgcttcgcaa ttctcgacgc ggtatgggcc 540 gtctcctttc gccggttcgg tgaaattacg tcggattttc ttcgggaggg gcaagcggct 600 tgcattgcct attgccgaca ctatctgccc gagcgaacgc catcagcgtg a 651
<21Q> 5 <211> 216 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp, <220> <221> Seq ID 5 (FumB) <222> (1)..(216) <300> <308> F3426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(216) <400> 5
Met Thr ser Gin val Lys Leu Arg s er Ala Ala Lys Arg pro Arg Ser 1 5 10 15 Pro Lys ser Glu Arg Gly Leu Ala Arg Tyr Glu ser Leu Leu Asp Ala 20 25 30 Thr Asp Arg Leu Leu val Asp Leu Asp Pro Asp Gin Val Gly Leu Tyr 35 40 45 Gin Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Ser pro Ser Ser val Tyr His phe 50 55 60 Phe Pro Thr Lys Glu val Al a Ui e M'·# Leu Als i eu Met Arg Arg Tyr Leu 65 70 75 80 Glu Gly Leu Arg Asn Leu Asp Ala Met GlU val Asp Ile Gly Gin Leu 85 90 95 Glu Ser Trp Gin Asp Leu Met Lys Leu ASP Gin Ile Arg Ala Arg Asp 100 105 110 Tyr Tyr Asn Ser Hi s pro Pro Ala Leu Lys Leu Leu Phe Gly Gly Tyr 115 120 125 Gly Gly val Glu Ala Arg Lys Leu ASp GlU Arg Tyr Ser Glu Glu Ile 130 135 140 Val Ser Ser Met Tyr Gly Arg Tyr Asn Gly Ile Phe His Met pro Gin 145 150 155 160
Seite 12 29/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Met Glu ASn Glu Ala Leu Met phe Thr Ile Cys Phe Ala Ile Leu Asp 165 170 175 Ala Val Trp Ala Val Ser Phe Arg Arg Phe Gly Glu Ile Thr Ser Asp 180 185 190 Phe Leu Arg Glu Gly Gin Ala Ala cys Ile Ala Tyr Cys Arg His Tyr 195 200 205 Leu Pro Glu Arg Thr pro Ser Ala 210 215
<210> 6 <211> 945 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 6 (fumC) <222> CI)..(945) <300> <308> FD426269 <309> 2009-06-11 <313> CD . · (945) <400> 6 gtggccagea agttcaactg tgagttactc gatctgcgat catttgttgc ggtgtatgaa 60 acgcgaagtt ttagccacgc cgcgcggctt ctgaatcaat cgcagcccgc gctcagccgg 120 agaatccagc gcctcgagag tctcgtgggc ggtccgttgt tcgagcggac cagtcggtcg 180 cttgccgaaa cggcgctcgg caaagagttg ctcccggtcg cccaccgagc gttggaactt 240 gtcgatacgt cgctgtttgc gtcgcccaat gtccgggagt tccgctggac agacatcacg 300 attgcctgtg tacagaccgc cgccttccat gttctcccgc gagctgcgcg cttgtacatg 360 gateaaaatc cgagggteeg actccgcatc cttaacgtgc cggcggtcga ggctgcggac 420 ctggttgcga gcggcgaggc ggagttcggc atcagcattg agagcctgtt gccatcaagc 480 ctgcggttcg atgcgctcca cgaggacccg ttcggcctgg catgccaccg aagccatccg 540 ctggcgtcgc tcgagatcct tgaatggacg caattgaaag gtgaaagcct gatcgccgtt 600 caccgtgcga gccggaaccg cacgttgctc gatgccgaac tcgcgcgcaa caatatcgcg 660 ctggaatggc ggtatgaggt cgcgcatctg acgacggcgc tgggattgat cgatgcgcaa 720 ttgggtgtcg ctgttatgcc ccgcatggtt atgccccgct cgggtcggtc ggaggtcgtc 780 tggcgccccg tcgtcgcgcc ggtcgtccaa cgcacgatcg gcatcgttca gcgccgcacc 840 ggctcgatgc accctgccgc acagcaattg cttgcgcggc tccgcgcggc ctggtcgtcc 900 gccaatctgg gcgacatcgc gtctcgcgaa gatggggcat cgtga 945 <210> 7
Seite 13 30/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
<211> 314 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> seq ID 7 (Fumc) <222> (1)..(314) <300> <30S> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(314) <400> 7
Val Ala Ser Lys Phe Asn cys Glu Leu Leu Asp Leu Arg ser Phe Val 1 5 10 15 Ala val Tyr Glu Thr Arg Ser Phe ser His Ala Ala Arg Leu Leu Asn 20 25 30 Gin Ser Gin Pro Ala Leu Ser Arg Arg Ile Gin Arg Leu Glu Ser Leu 35 40 45 val Gly Gly Pro Leu Phe Glu Arg Thr Ser Arg Ser Leu Ala Glu Thr 50 55 60 Ala Leu Gly Lys Glu Leu Leu pro val Ala His Arg Ala Leu Glu Leu 65 70 75 80 val Asp Thr Ser Leu Phe Ala ser pro Asn val Arg Glu Phe Arg Trp 85 90 95 Thr ASP Ile Thr ile Ala Cys val Gin Thr Ala Ala Phe His val Leu 100 105 110 Pro Arg Ala 115 Ala Arg Leu Tyr Met 120 Asp Gin Asn Pro Arg 125 val Arg Leu Arg Ile Leu Asp val Pro Ala val Glu Ala Ala Asp Leu val Ala Ser 130 135 140 Gly Glu Ala Glu Phe Gly Ile Ser Ile Glu ser Leu Leu pro ser Ser 145 150 155 160 Leu Arg Phe Asp Ala Leu His GlU Asp pro Phe Gly Leu Ala cys His 165 170 175 Arg ser His pro Leu Ala Ser Leu GlU Ile Leu Glu Trp Thr Gin Leu 180 185 190 Lys Gly GlU 195 Ser Leu Ile Ala val 200 His Arg Ala Ser Arg 205 Asn Arg Thr
Seite 14 31 /62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Leu Leu ASp Ala Glu Leu Ala Arg Asn Asn ile Ala Leu Glu Trp Arg 210 215 220 Tyr Glu val Ala His Leu Thr Thr Ala Leu Gly Leu ile Asp Ala Gin 225 230 235 240 Leu Gly val Ala Val Met Pro Arg Met val Met pro Arg ser Gly Arg 245 250 255 ser Glu Val Val Trp Arg Pro Val val Ala Pro Val Val Gin Arg Thr 260 265 270 He Gly He val Gin Arg Arg Thr Gly ser Met His pro Ala Ala Gin 275 280 285 Gin Leu Leu Ala Arg Leu Arg Ala Ala Trp Ser ser Ala Asn Leu Gly 290 295 300 ASp ile Ala Ser Arg Glu Asp Gly Ala ser 305 310
<210> 8 <211> 1623 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 8 (fumD) <222> (1)..(1623) <300> <308> F3426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(1623) <400> 8 gtgaaagagc accaatgccg tggcggccgg gcgtcccccg ctgcgcccgc cacgtggctt 60 gcgcggatca gcgtttcccg gggggcctcc gccatcgcct ggaccttcat gcttggcgca 120 actgccattc ccgtggctgc gcaaactgac gatccgaagc tcgttcgtca tacccagtcg 180 ggcgccgtcg agggcgtcga gggcgacgtc gagacttttt tgggaatacc cttcgcggct 240 ccgccggtcg gcgacctgcg atggcggccg ccggctccgc cgagggcgtg ggcgggcacc 300 agggacggcc gccgctttgc gcccgattgc atcgggaacg agcggcttag agaggggagc 360 cgggctgccg ggacgagcga agactgcctc tatctgaata tctggtctcc caaacaggtc 420 ggtaaggggg ggctccccgt catgatctgg gtttacggcg gtgggtttag cggcggttct 480 ggcgcggtgc catattatga cggctctgcg ctcgcgcaga agggcgtggt ggtcgtcacg 540 ttcaactatc gcgccgggat tctgggcttt cttgcccatc cggcgctttc aaaggaaagt 600 ccgaatggcg tgtcgggcaa ctatggtctt ctcgacatgc tcgcggcgtt caaatgggtt 660 cagaacaaca taagggagtt cggcggagac ccgaaccgtg tcacggtctt tggcgagtcc 720
Seite 15 32/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1623 gccggcgcga gcgcgctcgg actgctcctg acctcgccgc tcagtgagag cgccttcaat caggcgatac tgcaaagtcc gggtctggcc aggccgctcg ccacgctttc tgaaagcgaa gcgaatgggc tggagctggg agccgatatt tctgctctac ggcgtgccga tgcgggcgaa ttgacgaaga tcgcgcaatc gcgaataccc atgtcgcgcc agttcaccaa gccgcggccg atgggtccga ttctggacgg ctatgttttg cgcacccttg acgtcgatgc cttcgccaag ggggccttcc gcaagatacc cgttctggtc ggcggaaacg ccgacgaagg gcgcgctttt acggatcgcc tgccggtcaa aacggtcctt gaatatcgag cctatctcac agaacaattt ggtgacgagg cggacgcatg ggagcgttgt tatcccgcga actccgacgc cgacgtcccc gccgccgttg cccgtctttt tggggatagt cagttcaaca acgggatcga gctgctctcg gcagccttcg cgaaatggcg aacgccgctt tggagatatc gctttacggg cattccagga gccggccgtc gccccgccac gcatggagac gaaattccct atgtcttcgc aaatctgggg ccgtcgtccg tatctatgtt tgggtcgctc gaaggcggcg ccggggcgtc ggacatcaaa cttgcgaccg aaatgtccgc ggcctgggtg agcttcgcgg tgcacggggt ccccgatcag ggcacgaaat cgcactggcc gcgcttcgag cggcgagggg agatcatgac ttttggttcg caggttggct ctggggaagg tcttggagtt tcgccgagca aagcctgcca accctcaaaa tag
<210> 9 <211> 540 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> seq id 9 (FumD) <222> (1)..(540) <300> <308> F3426269 <309> 2009-06-11 <313> CD. (540) <40Q> 9
Val Lys Glu His Gin Cys Arg Gly Gly Arg Ala Ser pro Ala Ala Pro 15 10 15
Ala Thr Trp Leu Ala Arg Ile Ser val Ser Arg Gly Ala Ser Ala ile 20 25 30
Ala Trp Thr Phe Met Leu Gly Ala Thr Ala Ile Pro Val Ala Ala Gin 35 40 45
Thr Asp Asp Pro Lys Leu val Arg His Thr Gin Ser Gly Ala val Glu 50 55 60
Gly Val Glu Gly Asp val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala Ala 70 75 Seite 16 80 33/62
österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 pro pro val Gly Asp 85 Leu Arg Trp Arg Pro 90 Pro Ala pro Pro Arg 95 Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp cys Ile Gly 100 105 110 Asn Glu Ara Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu Asp 115 120 125 Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser pro Lys Gin val Gly Lys Gly Gly 130 135 140 Leu Pro val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe s er Gly Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ala val pro Tyr 165 Tyr ASp Gly ser Ala 170 Leu Ala Gin Lys Gly 175 Val val Val val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu Ala 180 185 190 His pro Ala Leu ser Lys Glu Ser pro Asn Gly Val Ser Gly Asn Tyr 195 200 205 Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gin Asn Asn Ile 210 215 220 Arg GlU Phe Gly Gly Asp pro Asn Arg val Thr Val Phe Gly Glu Ser 225 230 235 240 Ala Gly Ala Ser Ala Leu Gly Leu Leu Leu Thr Ser pro Leu Ser Glu 245 250 255 Ser Ala Phe Asn Gin Ala Ile Leu Gin Ser Pro Gly Leu Ala Arg Pro 260 265 270 Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly Ala 275 280 285 ASp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys Ile 290 295 300 Ala Gin Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gin Phe Thr Lys Pro Arg Pro 30S 310 315 320 Met Gly Pro Ile Leu ASp Gly Tyr val Leu Arg Thr Leu Asp Val Asp 325 330 335 Ala Phe Ala Lys 340 Gly Ala Phe Arg Lys 345 Ile Pro val Leu Val 350 Gly Gly
Seite 17 34/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Asn Ala A$P 355 Glu Gly Arg Ala Phe 360 Thr Asp Arg Leu Pro 365 val Lys Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gin Phe Gly Asp Glu Ala 370 375 380 Asp 385 Ala Trp Glu Arg Cys 390 Tyr Pro Ala Asn Ser 395 Asp Ala Asp val Pro 400 Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gin Phe Asn Asn Gly Ile 405 410 415 Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Ala Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp Arg 420 425 430 Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Ala Gly Arg Arg Pro Ala Thr His 435 440 445 Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser val 450 455 460 Ser 465 Met Phe Gly Ser Leu 470 Glu Gly Gly Ala Gly 475 Ala Ser Asp Ile Wo Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala val His Gly 485 490 495 val pro Asp Gin Gly Thr Lys Ser His Trp pro Arg phe Glu Arg Arg 500 505 510 Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gin val Gly ser Gly Glu Gly Leu 515 520 525 Gly val Ser Pro Ser Lys Ala cys Gin Pro ser Lys 530 535 540
<210> 10 <211> 1503 <212> DNA <213> sphingopyxis sp. <220> <221> seq ID 10 (fumE) <222> (1)..(1503) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(1503) ttggagtttc gccgagcaaa gcctgccaac cctcaaaata gcgcccggcc tgtgcgtgct 60
Seite 18 35/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 tcagcacgcc gtcccgcttt gcgggcgacg ttgcgctacg acgtcgcgat aattggaggt gcgcgtgaag cgggggcctc ggttcttgtg ggcaacagtc gtcacacacg caatatgcgt accggtgaat attcggcgga cgaatattgg accgacgaag aactcgcgcg gctcgttatc acgcgctgcg gtgtgcgttt ccagccctcg aacgcattct tccttggcgg cgggaaggcg cggctaggcg tcgatattct ctatgattct gtcgtgcagc gtctgcaatt gcgcagccgg gccatcgcct cgtccggagg attccaggca cctgctgcgg cgaacttcat cgtacggggc aacctgttgg agcaaggcgt cgcctcggtg atcgatgggc gagcgcccaa atacgacggc ttctcgatcg tcgtcaacaa ggacgccttg ccgaagcgtt acgccatatg gggtcgcttg agcataatcg atcggcaggc cgaagacctc gcggacacga tcgcgggtct ggccgagaaa acggtggccg aattcaacgc cgcatgcgtg gacctccaca ccgagggaat cgaaccaaag cccccgttca gcgcctatcc tctccggccc gtagacagcc gtgcgcgggt catcatggag tcgggggaaa taatggcggg cagcattctc gcgattggta ccgtattcgg ccgcatcgcg tga
<210> 11 <211> 500 <212> PRT <213> sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 11 (FumE) <222> CD . (500) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> CD .(500) <40Q> 11 ggctgtgccc tctgcctaga aggaagtaag ggcaacgctg cattgacggc agccgtgacg atcgagcatg cgccgcgcgc catgcgcggc acgatgcacg aacgtcccct gtcgccgttg aatgatcttg tccgcgtcac gggggggcge cgcaacacca ccgacgctat tcccttcatg ctgtcgggca cgctgagttt atcgcgaacc cttgtaaacg catattacgc cacggccgaa gaggtgaccg agatcaacct tcagcaaggc ggattccctg tcgaagtgga agccaaggct aatcttgact ggctctcaag cgcatggggg acgccatatg cgactggcac ggtgctcaag ggagatccaa cccaatgcca tgctgtcgcg ggcatcgtca cacgactgga ctgcgttccc cgcttctacg atgaaggcga agatgtgtgg gtggcacagc agcctgatca gatcgctttc ttcatgccgt cagtgttccc ccccgtgcaa ctcggtctga atcccgtaac cctggaacgc cccggcgaat tcggcggcca agatctcgac aaatccaact gggcccgacc gattattgtg gggatcacct tcacctatct cggcgtcaag acaggtgagc cgacaaaaaa cctgtttgct ggccaaggtt atctcgctgg atttggaatg ggttgggagg ccgcacgtca tgcaggattt 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1503
Seite 19 36/62
österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Leu Glu phe Arg Arg Ala Lys Pro Ala Asn pro Gin Asn Ser Ala Arg 1 5 10 15 Pro Val Arg Ala Ser Ala Arg Arg Pro Ala Leu Arg Ala Thr Gly cys 20 25 30 Ala Leu cys Leu Glu Gly Ser Lys Leu Arg Tyr Asp val Ala Ile Ile 35 40 45 Gly Gly Gly Asn Ala Ala Leu Thr Ala Ala Val Thr Ala Arg Glu Ala 50 55 60 Gly Ala ser val Leu Val Ile Glu His Ala Pro Arg Ala Met Arg Gly 65 70 75 80 Gly Asn Ser Arg His Thr Arg Asn Met Arg Thr Met His Glu Arg Pro 85 90 95 Leu Ser Pro Leu Thr Gly Glu Tyr ser Ala ASp Glu Tyr Trp Asn Asp 100 105 110 Leu val Arg 115 Val Thr Gly Gly Arg 120 Thr Asp Glu Glu Leu 125 Ala Arg Leu val Ile Arg Asn Thr Thr Asp Ala Ile Pro Phe Met Thr Arg Cys Gly 130 135 140 Val Arg phe Gin pro Ser Leu ser Gly Thr Leu Ser Leu ser Arg Thr 145 150 155 160 Asn Ala Phe Phe Leu Gly Gly Gly Lys Ala Leu val Asn Ala Tyr Tyr 165 170 175 Ala Thr Ala Glu Arg Leu Gly val Asp Ile Leu Tyr ASp Ser Glu val 180 185 190 Thr Glu Ile Asn Leu Gin Gin Gly val Val Gin Arg Leu Gin Leu Arg 195 200 205 ser Arg Gly Phe Pro val Glu val Glu Ala Lys Ala Ala Ile Ala Ser 210 215 220 ser Gly Gly Phe Gin Ala Asn Leu Asp Trp Leu Ser Ser Ala Trp Gly 225 230 235 240 Pro Ala Ala Ala Asn Phe Ile val Arg Gly Thr pro Tyr Ala Thr Gly 245 250 255 Thr val Leu Lys Asn Leu Leu Glu Gin Gly Val Ala Ser val Gly Asp 260 265 270
Seite 20 37/62
österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Pro Thr Gin cys His Ala Val Ala rle Asp Gly Arg Ala Pro Lys Tyr 275 280 285
Asp Gly Gly Ile val Thr Ara Leu Asp cys Val Pro Phe Ser Ile Val 290 295 300 val Asn Lys Asp Ala Leu Arg phe Tyr Asp Glu Gly Glu Asp val Trp 305 310 315 320 pro Lys Arg Tyr Ala Ile Trp Gly Arg Leu Val Ala Gin Gin Pro Asp 325 330 335
Gin Ile Ala Phe ser Ile Ile Asp Arg Gin Ala Glu Asp Leu Phe Met 340 345 350 pro Ser val Phe Pro Pro Val Gin Ala Asp Thr Ile Ala Gly Leu Ala 355 360 365
Glu Lys Leu Gly Leu Asn Pro val Thr Leu Glu Arg Thr Val Ala Glu 370 375 380
Phe Asn Ala Ala Cys Val Pro Gly Glu Phe Gly Gly Gin Asp Leu Asp 385 390 395 400
Asp Leu His Thr Glu Gly Ile Glu Pro Lys Lys Ser Asn Trp Ala Arg 405 410 415 pro ile Ile Val Pro Pro Phe Ser Ala Tyr pro Leu Arg Pro Gly Ile 420 425 430
Thr Phe Thr Tyr Leu Gly val Lys Val Asp ser Arg Ala Arg val ile 435 440 445
Met Glu Thr Gly Glu Pro Thr Lys Asn Leu Phe Ala ser Gly Glu Ile 450 455 460
Met Ala Gly Ser ile Leu Gly Gin Gly Tyr Leu Ala Gly Phe Gly Met 465 470 475 480
Ala Ile Gly Thr val Phe Gly Arg Ile Ala Gly Trp Glu Ala Ala Arg 485 490 495
His Ala Gly Phe 500
<210> 12 <211> 1173 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 12 CfumF)
Seite 21 38/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 <222> (1)..(1173) <300> <308> F3426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(1173) <400> 12 atgcaggatt ttgatctcgt aaaaatgctg tctgacttgc cgtcggcgcc ggagctggaa gccaggcgcg ttatggaggt gtgcaacgcg tgccgctatt gcgaagggtt ctgcgcggta tttcctgcaa tgaccttgca gcgtcatttc gccagcggcg atctcagcca cctcgccaat ctctgccact cgtgccaagg ttgctattac gcctgccaat acgcccctcc gcatgagttc ggaataaacg ttccaaaggc gctgtcggag ttgcggctcg agagctacga gcagcatgct tggccccggc cggtcgccgc tctctatcgc aagaatgcgc tcatcatttc catcttgtcg gcggcatgca taaccggcgt ccttctgctt gccgccatct tcaacgggga tgcacttttc gcgaaacacg catcggtgcc cggcggcggg ttttacaacg ttattcctta tcaggcgatg attgccgtcg cggcgaccac atttctttat tccgcgctgg cgctggcgat cagtctcgtt cgcttttcgc ggacgatcgg tctgggaatt aaggttcttt atcagcacgt gccggttctt cgggcgctac gcgatgcggc gactctgcga tatctcggcg gcagcgacgg cgaggggtgt aacgacgcgg acgagacatt ttcgacgacc cggcgaaaat ttcatcacgc ccttgcctat ggcttcggac tttgtttcgc ggccacagcc acgggcacga tctacgatca tatgttcggc tggccggcgc cctatgcgct tttcagcttg ccggtcgtcc tagggaccgt tggggggatc ggaatggtcg tgggcgcgat cggcctactc tggctcaagc tggccggcga agacgctcct cgatcaccgg cactgcttgg gccggatgtt gccctgttgg tgcttctgct tgccatagcg gcaacgggcc tcctcctttt agcggtccgc agcaccgaag tcatgggcgt cgcgctcgcc gtccatctcg gcgtcgtctt ggccttcttt ttggtgatgc catacagcaa atttgtccac ggtatcttca ggctcacggc tctcgtgcgc catcatgctg accgcgaggc aagtaatggc ttcgcctcca gccctcccac gaaaaagggt taa <210> 13 <211> 390 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 13 (FumF) <222> (1)..(390) <300> <308> F1426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(390) <400> 13 Met Gin Asp Phe Asp Leu val Lys Met Leu Ser Asp Leu Pro Ser Ala 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 96 0 1020 1080 1140 1173 1 5 10 Seite 22 15 39/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Pro Glu Leu Glu Ala Arg Arg Val Met Glu val cys Asn Ala Cys Arg 20 25 30 Tyr Cys Glu Gly Phe Cys Ala Val Phe pro Ala Met Thr Leu Gin Arg 35 40 45 His Phe Ala Ser Gly Asp Leu Ser His Leu Ala Asn Leu cys His Ser 50 55 60 cys Gin Gly cys Tyr Tyr Ala Cys Gin Tyr Ala pro Pro His GlU Phe 65 70 75 80 Gly Ile Asn val Pro Lys Ala Leu Ser Glu Leu Arg Leu Glu Ser Tyr 85 90 95 Glu Gin His Ala Trp Pro Arg pro Val Ala Ala Leu Tyr Arg Lys Asn 100 105 110 Ala Leu ile Ile Ser ile Leu Ser Ala Ala Cys Ile Thr Gly val Leu 115 120 125 Leu Leu Ala Ala Ile Phe Asn Gly Asp Ala Leu Phe Ala Lys His Ala 130 135 140 Ser Val Pro Gly Gly Gly Phe Tyr Asn Val Ile pro Tyr Gin Ala Met 145 150 155 160 Ile Ala val Ala Ala Thr Thr phe Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Leu Ala 165 170 175 Ile Ser Leu Val Arg phe Ser Arg Thr Ile Gly Leu Gly Ile Lys Val 180 185 190 Leu Tyr Gin 195 His val pro Val Leu 200 Arg Ala Leu Arg 33 Ala Ala Thr Leu 33 Tyr Leu Gly Gly Ser 215 Asp Gly Glu Gly cys 220 Asn Asp Ala Asp Glu Thr Phe Ser Thr Thr Arg Arg Lys Phe His His Ala Leu Ala Tyr 225 230 235 240 Gly Phe Gly Leu cys 245 Phe Ala Ala Thr Ala 250 Thr Gly Thr Ile Tyr 255 Asp His Met Phe Gly 260 Trp pro Ala pro Tyr 265 Ala Leu Phe ser Leu 270 pro val Val Leu Gly ?7*\ Thr val Gly Gly Ile 280 Gly Met Val val Gly 285 Ala ile Gly L· f J Seite 23 40/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Leu Leu Trp Leu Lys Leu Ala Gly Glu Asp Ala Pro Arg Ser pro Ala 290 295 300
Leu Leu Gly Pro Asp val Ala Leu Leu val Leu Leu Leu Ala ile Ala 305 310 315 320
Ala Thr Gly Leu Leu Leu Leu Ala Val Arg Ser Thr Glu val Met Gly 325 330 335 val Ala Leu Ala Val His Leu Gly val val Leu Ala Phe Phe Leu val 340 345 350
Met Pro Tyr Ser Lys Phe val His Gly ile Phe Arg Leu Thr Ala Leu 355 360 365 val Arg His His Ala Asp Arg Glu Ala ser Asn Gly Phe Ala 5er ser 370 375 380
Pro Pro Thr Lys Lys Gly 385 390 <210> 14 <211> 1296 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> seq ID 14 (fumG) <222> CD.. (1296) <300> <308> F3426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(1296) <400> 14 atggaacata tgaagtccgt tcgcgatcgc agtagcgtca tgcagatcgt gagagtggcg 60 agtggcaact gtctcgagca atatgatttc ttcgtttacg gcttctatgc ggcatatatt 120 gcgagaagct tttttccgac cggcgataac gcgacatcgc tcatgctttc attggccact 180 tttggcgctg gtttcctcat gaggcccttg ggggcgattt ttctcgggtc ctacatcgat 240 cgcgtcgggc gtcggaaagg cctgatcgtg acactcgcga tcatggccgt cggaaccctc 300 accattgcga tgactccaag ctatgaggca attggattac tcgcaccggt tatcgtgctc 360 gtcgggcgac ttttgcaggg tttttccgct ggagcagagt cgggtggcgt ctcagtgtac 420 ttggcggaaa ttgcgtcgcc caaatcgaga ggcttcttca cctcgtggca gtctgccagc 480 cagcaggtgg ccgtcatgat cgccgccgcg atcggtcttg cgctgcaatc aacgctttca 540 ccggagcaaa tgaacgactg gggatggcgg gtgcccttgt tgatcggatg cttgattatc 600 cccgtgatac tctggctgcg ccggtctctc ccggaaacga aagcctatct ccacatggag 660
Seite 24 41 /62
österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1296 cacaaggcgc attcgatcgg cgaatccctc cgcgaattgc aacagagctg ggggctgatc ttgacgggca tggcgatgtc gatcctcacg acgaccacct tttacatgat taccgcctat acgccgacat ttggcgagaa agcactcgga ctgagcccgc aagatgtcct gctggttacc atcatggtcg gcgtgtcgaa cttcctgtgg cttccgatcg ggggtgctct ctcggatcgt atcggtagaa ccccgatcct actggtcgtg ccggtcaccg ttctcgccat cgcctttccc ctgatgagct ggctcgtcgc ggcaccgaca ttcggagcgc ttgcagctgt tctgctgact ttctccgcat gctttggact ctataatggg gcgctcatcg cgagactcac cgagattatg cctcccgcca ttagaaccct tggcttctcg ctggcgttca gtctcgcgac ctcgctgttc ggcggcttca ccccattggt aagtacggcg ctaatccacg cgacgggcag caattccgcg cctgcaatct ggctctgttt tgcggctttc atcagcttcg tcggtgtggc cgcatcgacc cggctgagcc ggccaatcgc cgaaggcgcc agatag
<210> 15 <211> 431 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 15 CFUmG) <222> (1)..C431) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> CD .. C431) <400» 15
Met Glu His Met Lys Ser Val Arg Asp Arg Ser Ser Val Met Gin Ile 15 10 15
Val Arg val Ala Ser Gly Asn Cys Leu Glu Gin Tyr Asp Phe Phe Val 20 25 30
Tyr Gly Phe Tyr Ala Ala Tyr Ile Ala Arg ser Phe Phe Pro Thr Gly 35 40 45
Asp Asn Ala Thr ser Leu Met Leu Ser Leu Ala Thr Phe Gly Ala Gly 50 55 60
Phe Leu Met Arg Pro Leu Gly Ala Ile Phe Leu Gly Ser Tyr Ile Asp 65 70 75 80
Arg val Gly Arg Arg Lys Gly Leu Ile Val Thr Leu Ala Ile Met Ala 85 90 95 val Gly Thr Leu Thr Ile Ala Met Thr Pro ser Tyr Glu Ala Ile Gly 100 105 110
Seite 25 42/62
österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Leu Leu Ala Pro Val Ile Val Leu Val Gly Arg Leu Leu Gin Gly Phe 115 120 125
Ser Ala Gly Ala Glu Ser Gly Gly Val ser Val Tyr Leu Ala Glu Ile 130 135 140
Ala Ser Pro Lys ser Arg Gly Phe Phe Thr Ser Trp Gin ser Ala ser 145 150 155 160
Gin Gin val Ala Val Met Ile Ala Ala Ala Ile Gly Leu Ala Leu Gin 165 170 175
Ser Thr Leu ser Pro Glu Gin Met Asn asp Trp Gly Trp Arg val Pro 180 185 190
Leu Leu Ile Gly cys Leu Ile Ile Pro val Ile Leu Trp Leu Arg Arg 195 200 205
Ser Leu pro Glu Thr Lys Ala Tyr Leu His Met Glu His Lys Ala His 210 215 220
Ser ile Gly Glu ser Leu Arg Glu Leu Gin Gin ser Trp Gly Leu Ile 225 230 235 240
Leu Thr Gly Met Ala Met Ser Ile Leu Thr Thr Thr Thr Phe Tyr Met 245 250 255
Ile Thr Ala Tyr Thr Pro Thr Phe Gly Glu Lys Ala Leu Gly Leu ser 260 265 270 pro Gin Asp Val Leu Leu val Thr ile Met val Gly val ser Asn Phe 275 280 285
Leu Trp Leu Pro Ile Gly Gly Ala Leu ser Asp Arg ile Gly Arg Thr 290 295 300 pro ile Leu Leu val val pro val Thr val Leu Ala Ile Ala Phe Pro 305 310 315 320
Leu Met ser Trp Leu Val Ala Ala Pro Thr Phe Gly Ala Leu Ala Ala 325 330 335 val Leu Leu Thr Phe Ser Ala Cys Phe Gly Leu Tyr Asn Gly Ala Leu 340 345 350 ile Ala Ara Leu Thr Glu ile Met Pro Pro Ala ile Arg Thr Leu Gly 355 360 365
Phe ser Leu Ala Phe Ser Leu Ala Thr ser Leu Phe Gly Gly Phe Thr 370 375 380
Seite 26 43/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Pro Leu Val Ser Thr Ala Leu Ile His Ala Thr Gly Ser Asn Ser Ala 385 390 395 400 pro Ala ile Trp Leu Cys Phe Ala Ala Phe Ile Ser Phe val Gly Val 405 410 415
Ala Ala Ser Thr Arg Leu Ser Arg Pro Ile Ala Glu Gly Ala Arg 420 425 430
<210> 16 <211> 1071 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 16 (fuiriH) <222> (1).. (1071) <300> <308> F1426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(1071) <400> 16 atgagagcag tagtttaccg aaatggcgaa cttgtcctgg gggcctatgc tgatccgata 60 cccgccgccg ggcaggtgct cgtcaagacc agagcatgcg gcatctgcgg atctgacctt 120 catttttgcg atcatgcgca ggcgtttacg aaccttgcat cgcgggcggg tatcgcctct 180 atggaagttg atttgtgtcg agacatcgtt ctggggcatg aattctgtgg cgagattatg 240 gagttcgggc cctctgcgga tcgtcgcttc aaacccggac agcttgtgtg etcgctgccg 300 ctggcgatcg gtccgaccgg agcgcggacg attggctact cggatgagta tcccggcggg 360 ctcggcgaat atatggtcct cacggaagcg ctcttgctgc ctgttccgaa cggccttccg 420 gcgacctgcg cggcgttgac ggagccgatg gcggtgggat ggcatgccgt cgagatcgcg 480 caggttcaac cacatcacat ccctgtggtg atcgggtgcg gaccggtcgg gttggcagtc 540 gtcgctgccc tgaaacataa gcaagttgct ccgattattg cgtcggatcc atcgcccgat 600 cggcgtgctc ttgctctgcg gatgggcgcc gacgccgttg tcgatccgcg cgaagaatca 660 ccctttcgcc aggccgagaa gatcgcacgc ccggtcggac aaggtggggc cctgtccagc 720 tcattgctgt caaagtctca aatgatattc gaatgcgtag gggtgccggg catgcttcgg 780 catgcgatgg acggcgcgtc cgacgggtcc gagatcatgg tcgttggcgc atgcatgcag 840 ccggacgcga tcgagcccat gatcgggatg tttaaagcgc tcacgatcaa attctcgcga 900 acttacacgg gtgaggaatt cgccgcggtg cttcacatga taggtgaggg cgcactcgac 960 gtatctccgc tcgttaccga tgtgattggc ctgtccgatg tcccgtccgc gtttgaggct 1020 ctacggagtc caggcgccca agcaaaagtg attgtggacc cttggcgctg a 1071
<210> 17 <211> 356 <212> PRT
Seite 27 44/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 17 (FumH) <222> (1)..(356) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> (1),.(356) <400> 17
Met Arg Ala val val Tyr Arg Asn Gly Glu Leu Val Leu Gly Ala Tyr 1 5 10 15 Ala ASp pro Ile Pro Ala Ala Gly Gin Val Leu Val Lys Thr Arg Ala 20 25 30 cys Gly Ile 35 Cys Gly Ser ASP Leu 40 His phe Cys Asp His 45 Ala Gin Ala Phe Thr Asn Leu Ala Ser Arg Ala Gly ile Ala Ser Met Glu Val Asp 50 55 60 Leu cys Arg Asp ile Val Leu Gly His GlU Phe cys Gly Glu Ile Met 65 70 75 80 Glu Phe Gly Pro Ser Ala Asp Arg Arg Phe Lys pro Gly Gin Leu val 85 90 95 cys Ser Leu Pro Leu Ala Ile Gly pro Thr Gly Ala Arg Thr ile Gly 100 105 110 Tyr Ser Asp 115 Glu Tyr Pro Gly Gly 120 Leu Gly Glu Tyr Met 125 val Leu Thr Glu Ala Leu Leu Leu pro val Pro Asn Gly Leu Pro Ala Thr Cys Ala 130 135 140 Ala Leu Thr Glu Pro Met Ala Val Gly Trp His Ala val Glu Ile Ala 145 150 155 160 Gin val Gin pro His His Ile Pro val val Ile Gly cys Gly Pro val 165 170 175 Gly Leu Ala Val Val Ala Ala Leu Lys His Lys Gin val Ala Pro Ile 180 185 190 Ile Ala Ser Asp Pro ser pro ASP Arg Arg Ala Leu Ala Leu Arg Met 195 200 205 Gly Ala ASp Ala val val Asp pro Arg Glu Glu Ser Pro Phe Arg Gin 210 215 220 Seite 28 45/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
Ala Glu Lys ile Ala Arg Pro val 225 230 Ser Leu Leu ser Lys 245 Ser Gin Met Gly Met Leu Ara 260 His Ala Met Asp Met Val val Gly Ala cys Met Gin 275 280 Gly Met Phe Lys Ala Leu Thr Ile 290 295 Glu Glu Phe Ala Ala val Leu His 305 310 val Ser Pro Leu val Thr Asp Val 325
Ala Phe Glu Ala Leu Arg Ser Pro 340
Gly Gin Gly Gly Ala Leu Ser Ser 235 240 Ile Phe Glu cys Val Gly val Pro 250 255 Gly Ala Ser Asp Gly ser Glu Ile 265 270 Pro Asp Ala ile Glu Pro Met Ile 285 Lys Phe Ser Arg 300 Thr Tyr Thr Gly Met ile Gly Glu Gly Ala Leu Asp 315 320 ile Gly Leu ser ASp val Pro Ser 330 335 Gly Ala Gin Ala Lys val ile val 345 350
Asp Pro Trp Arg
<210> 18 <211> 1269 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 18 (fumi) <222> (1)..(1269) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(1269) <400> 18 atggcgaacg gaacaaggca gaaagatctc agagaacgcg ccgaacgggt cattccgggc 60 gggatgtacg gccacgagtc gacacggttg ctgccgccag aattccccca gttcttcagg 120 cgcgcgctgg gggcacgaat ttgggacgcc gacgagcagc cctatatcga ctatatgtgc 180 gcgtatgggc caaatttgct cggttaccgg caatccgaaa tcgaagccgc ggctgatgcg 240 cagcgacttc tcggcgacac catgaccggt ccttcggaga tcatggtcaa cctcgccgaa 300 gcctttgtgg gcatggtccg tcatgcggat tgggcgatgt tctgcaaaaa tggcagcgat 360 gccacctcaa cggcgatggt tctcgcgcgt gcccatacgg ggcgcaaaac catattatgc 420
Seite 29 46/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1269 gccaaaggcg cctatcatgg cgcttccccg tggaacactc cgcatactgc cgggattctc gcttccgatc gcgtgcatgt cgcatattat acctataacg acgcccaaag cttatcggac gcgttcaagg cgcacgatgg cgatattgcg gctgtctttg ccacaccttt ccgacacgaa gtatttgagg accaggccct cgcccagctt gagttcgcgc gcaccgctcg aaaatgttgt gacgagaccg gtgcgcttct ggtcgttgac gatgtgcgcg caggtttccg ggtggcgcgc gattgcagct ggacgcattt gggtatcgaa cccgatctca gttgctgggg aaaatgcttt gcgaatggct atccgatctc cgccctgctg ggctcgaaca aggcgcgcga tgcggcgcgg gatatatttg tgaccggctc cttctggttc tctgcggtac cgatggcggc cgcgatcgaa accctcagga tcattcgaga gacgccttat ctcgaaacgc tgatcgccag cggcgccgcc ctgcgggcag gcctggaggc acagtctcag cgccatggtc ttgagttgaa gcagacgggc ccggcgcaga tgccgcaaat attctttgcg gacgatcccg attttcggat cggctatgcg tgggccgcgg cgtgcctgaa gggcggcgtc tatgttcatc cctatcacaa tatgtttctc tctgcggccc atacagttga cgatgtaacg gagaccctcg aggcgacgga tcgcgcgttc agcgcggtcc tcagagattt tgcgtctctc cagcctcatc ccattttaat gcaactcgcc ggtgcttga
<210> 19 <211> 422 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> seq ID 19 (Fumi) <222> (1)..¢422) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> (1).(422) <400> 19
Met Ala Asn Gly Thr Arg Gin Lys ASp Leu Arg GlU Arg Ala Glu Arg 1 5 10 15 Val He pro Gly Gly Met Tyr Gly His Glu Ser Thr Arg Leu Leu Pro 20 25 30 Pro GlU Phe Pro Gin Phe Phe Arg Arg Ala Leu Gly Ala Arg Ile Trp 35 40 45 ASp Ala Asp GlU Gin Pro Tyr Ile Asp Tyr Met cys Ala Tyr Gly Pro 50 55 60 Asn Leu Leu Gly Tyr Arg Gin Ser Glu ile Glu Ala Ala Ala Asp Ala 65 70 75 80
Seite 30 47/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Gin Arg Leu Leu Gly Asp Thr Met Thr Gly Pro ser Glu Ile Met Val 85 90 95 Asn Leu Ala Glu Ala Phe val Gly Met val Arg His Ala ASp Trp Ala 100 105 110 Met Phe Cys 115 Lys A$n Gly Ser Asp 120 Ala Thr Ser Thr Ala 125 Met val Leu Ala Arg Ala His Thr Gly Arg Lys Thr Ile Leu Cys Ala Lys Gly Ala 130 135 140 Tyr His Gly Ala ser pro Trp Asn Thr Pro His Thr Ala Gly Ile Leu 145 150 155 160 Ala ser ASP Arg Val 165 His Val Ala Tyr Tyr 170 Thr Tyr Asn ASp Ala 175 Gin ser Leu ser ASp Ala Phe Lys Ala His Asp Gly Asp Ile Ala Ala Val 180 185 190 Phe Ala Thr Pro Phe Arg His Glu val Phe Glu Asp Gin Ala Leu Ala 195 200 205 Gin Leu Glu Phe Ala Arg Thr Ala Arg Lys cys cys Asp Glu Thr Gly 210 215 220 Ala Leu Leu Val val ASP ASp val Arg Ala G!y Phe Arg val Ala Arg 225 230 235 240 Asp Cys Ser Trp Thr His Leu Gly Ile Glu Pro Asp Leu ser cys Trp 245 250 255 Gly Lys Cys Phe Ala Asn Gly Tyr Pro Ile Ser Ala Leu Leu Gly ser 260 265 270 Asn Lys Ala Arg Asp Ala Ala Arg Asp Ile Phe val Thr Gly ser Phe 275 280 285 Trp Phe Ser Ala Val pro Met Ala Ala Ala Ile Glu Thr Leu Arg Ile 290 295 300 ile Arg Glu Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Leu ile Ala ser Gly Ala Ala 305 310 315 320 Leu Arg Ala Gly Leu Glu Ala Gin Ser Gin Arg His Gly Leu Glu Leu 325 330 335 Lys Gin Thr Gly Pro Ala Gin Met Pro Gin Ile phe Phe Ala ASP Asp 340 345 350
Seite 31 48/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 pro Asp Phe Arg Ile Gly Tyr Ala Trp Ala Ala Ala cys Leu Lys Gly 355 360 365
Gly val Tyr Val His Pro Tyr His Asn Met Phe Leu Ser Ala Ala His 370 375 380
Thr val Asp Asp Val Thr Glu Thr Leu Glu Ala Thr Asp Arg Ala Phe 385 390 395 r 3 400
Ser Ala val Leu Arg Asp Phe Ala Ser Leu Gin Pro His Pro Ile Leu 405 410 415
Met Gin Leu Ala Gly Ala 420
<21Q> 20 <211> 2835 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 20 (furnD <222> (1)..(2835) <300> <308> Fj426269 <309> 2009-06-11 <313> (1).(2835) <400> 20 atgtatcgga agttcagaat cgaaaagccc gcgctcggca ccctcgcatt tcctgtctct ataggtcagc cggacgaagc ggacacggac agccgcctcc agaacggctt caattcgccg ttgaaggagg catctccgac caaccttgcc gacagcttga agacctccaa ccctggcacg ctgctcaaca tgcgcggcct cgggtcaaac ttcgtcgcga ccaatttcac aggctcggtc aagcgcgtcg atgtcgtgac gggcggcgcc ggcgtcatca acttcgtgct cgacgaagat ggtgtttcaa cccgcggcga cctcccgtcc tttgccgacg accggttgca cttgctcggc cgggccgatg aagcaacggg tcgccgctgg cccggcgcta cgacaggcgt cacggtcgtg ggcggacttg tcacgtccgg ccctctgaaa gggaccttcg actacgggaa ttttacgagc ggcaaggcaa atagtttgct cggcgcagta gccagtgctc aggatagcga tcccgcatcg cggggaacga gcgaaatcgt cgtgaccggc acgccggtta cagccgtatc cagcgagcag gacgcactca accagctgcc cgtgttcaac acacccggaa cggggaacag cggtcagaac cggaacctcg tcctgctgaa cggcaaccgt gatatcaacg tgctgccgca ggcgttggtc tcggccgcct acggttccga tgccgtttcg ctggaaggca tcagggccga gctccagtcg tacggcggtt cgatcgcctt cggcacttcg agcttcgaat attttcgaca ggacggaatc ttcgacatcg ccgccggcca atatcccgtg cccgatattc gcagttctcg cggatcctac ggcatcgcgt ttttgcccgg aggagtccta tcgtcgttcc agagcggcgg cgatggaccg Seite 32 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 49/62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 cgcgtgaata tcggcttcgc cccggatcag cttcgctaca acgcgttcct acgcgccgca 1020 tatgatgtgt ccgacactgt gcaggtgtat gcggagggca cctatgctta ttcccacacc 1080 aacctgggtg cattcgtaat atcgcatgtc ggtggctcga ataatttccg gatcttccgt 1140 gataacgcct tccttccggc tccactcgcg acgctcatgg acagaaatgc ccaggcttcg 1200 atcgttgtcg gtcgcttctc aagcgacttt cccttggtcg aaatcgagaa tttcgcaaag 1260 gtctaccgcg gcgctgccgg cttccgggca gacattggca atggctggaa actcgatggc 1320 tcggcctcct ttggccttac ggacctcgag cttcgtgaaa acaatctcac catcaaccgc 1380 aatctctacg ccgccgtcga tgcggtccgc gatcccgcgg gcaatatcgt ctgccgttca 1440 acactggccg gcctcgacca agattgcgtg ccgctcaatc tcttcggcac aggctcgccg 1500 agcgcgtcgg ccatcgacta tgtcaccgct gatggcgtcg ctcagctgag gcttgagcaa 1560 tatgtggcgg gactcacgat ttccggcgac ctcggcgata gcctgtcgtt cggcgcgggc 1620 ccggtctcgg tcgccgctgg tatcgaatat cgcaaggaga aggcccggca ggaaaccgac 1680 gcgatatcgc aggcgacgac ctcgatcacg ggaatcaggg gggctccggc ggcgcaggca 1740 ggtcggcctg gaggcttcaa tctctacaac ccacttccct tctcgggaag ctatgacatc 1800 aaggaaggtt ttgtcgaaat cggcgtcccg attctgaagg acagcgcgct gggacgttcg 1860 ctgaacttaa acggcgccgt ccgatatgcc gattacagcc agtccggtgg agtaacaacc 1920 tggaagctgg gcggagaata tgagccgatc gacggcctca ggttccgcgc gacccgttcg 1980 cgagatatcc gcgggccaag ccttgtcgag ctattcgacc ccggccgtca ggcgacgctc 2040 aattcaattt atggcggaca ggctgtgcag acgcggttct ttaccgccgg caacgcggat 2100 ttgcgccctg aaaaggcgga cgtccttaca ttcggcgcgg tgctacgccc cgccttcgtg 2160 ccggggtttc agttttcggt cgatcgctat gtggtgaagg tgaagggcgc gatcgatttc 2220 ctccttcccc agcaggaaat cgacgcgtgc gatgcaggaa acaccttctt ctgcgacctc 2280 ataacggaga atccggacgg caccatcaca gtgacgggtc ccaatctcaa cctggctgtc 2340 cagaaagcgg cgggaattga cttcgaggcc tattactcac gccccgtcgg cggcggcacg 2400 ttcagtcttc gtgcgctggc aacgcaccat acctctgcct atcgcatcgc gaccggctcg 2460 gcgcccatcc gttcgctcgg acaaccggac acgccaaaat ggtcggccaa cttccaggcg 2520 cgatattcga ccgacgattg ggcgcttctc gtgcagcagc gcttcatcgc agcatcggtg 2580 ttcaatgccg acaatgtgga gggcgtcgat acgaatttga accacgctcc ggcggtttgg 2640 tacaccgacg cgacattgac cttcgacatc gcggcttttg gccagaagca gcagctgttt 2700 ctatcggtca ataatttgtt cgaccgagat ccgccaatag cgacgaacga ccccagcagt 2760 ttttccagcc cgaccagctc tgcctatgat ccggtcggcc gctattttaa tgtcggggtc 2820 cgtttccgga tctga 2835
<210> 21 <2ll> 944 <212> PRT
Seite 33 50/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> seq ID 21 (Fumi) <222> CI)..(944) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06-11 <313> (D..C944) <400> 21
Met Tyr Arg Lys Phe Arg ile Glu Lys Pro Gly Lys Ala Asn Ser Leu 1 5 10 15 Leu Gly Ala val Ala Leu Gly Thr Leu Ala Phe Pro Val ser Ala Ser 20 25 30 Ala Gin Asp Ser Asp pro Ala Ser ile Gly Gin pro Asp Glu Ala Asp 35 40 45 Thr Asp Arg Gly Thr ser Glu Ile val Val Thr Gly ser Arg Leu Gin 50 55 60 Asn Gly phe Asn Ser pro Thr Pro val Thr Ala val ser ser Glu Gin 65 70 75 80 Leu Lys Glu Ala Ser pro Thr Asn Leu Ala Asp Ala Leu Asn Gin Leu 85 90 95 pro val Phe Asn Asp ser Leu Lys Thr Ser Asn Pro Gly Thr Thr Pro 100 105 110 Gly Thr Gly 115 Asn Ser Gly Gin Asn 120 Leu Leu Asn Met Arg 125 Gly Leu Gly Ser Asn Arg Asn Leu val Leu Leu Asn Gly Asn Arg Phe Val Ala Thr 130 135 140 Asn Phe Thr Gly ser val Asp Ile Asn val Leu Pro Gin Ala Leu val 145 150 155 160 Lys Arg Val Asp Val val Thr Gly Gly Ala ser Ala Ala Tyr Gly ser 165 170 175 Asp Ala val ser Gly val Ile Asn Phe val Leu Asp Glu Asp Leu Glu 180 185 190 Gly Ile Arg 195 Ala Glu Leu Gin Ser 200 Gly Val ser Thr Arg 205 Gly Asp Leu Pro Ser Tyr Gly Gly Ser Ile Ala Phe Gly Thr ser Phe Ala ASp Asp 210 215 220 Seite 34 51 /62
österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15
Arg Leu His Leu Leu Gly Ser phe Glu Tyr Phe Arg Gin Asp Gly Ile 225 230 235 240
Arg Ala Asp Glu Ala Thr Gly Arg Arg Trp Phe Asp Ile Ala Ala Gly 245 250 255
Gin Tyr Pro val Pro Gly Ala Thr Thr Gly Val Thr Val Val pro Asp 260 265 270
Ile Arg Ser ser Arg Gly Ser Tyr Gly Gly Leu Val Thr ser Gly Pro 275 280 285
Leu Lys Gly Ile Ala Phe Leu Pro Gly Gly val Leu Gly Thr Phe Asp 290 295 300
Tyr Gly Asn Phe Thr Ser ser ser Phe Gin ser Gly Gly Asp Gly Pro 305 310 315 320
Arg val Asn ile Gly Phe Ala Pro Asp Gin Leu Arg Tyr Asn Ala Phe 325 330 335
Leu Arg Ala Ala Tyr Asp val Ser Asp Thr val Gin val Tyr Ala Glu 340 345 350
Gly Thr Tyr Ala Tyr ser His Thr Asn Leu Gly Ala Phe val Ile ser 355 360 365
His Val Gly Gly ser Asn Asn Phe Arg Ile Phe Arg Asp Asn Ala phe 370 375 380
Leu Pro Ala Pro Leu Ala Thr Leu Met Asp Arg Asn Ala Gin Ala ser 385 390 395 400
Ile Val val Gly Arg Phe ser ser Asp Phe Pro Leu val Glu Ile Glu 405 410 415
Asn Phe Ala Lys Val Tyr Arg Gly Ala Ala Gly Phe Arg Ala Asp ile 420 425 430
Gly Asn Gly Trp Lys Leu Asp Gly Ser Ala ser Phe Gly Leu Thr Asp 1 435 V 440 445
Leu Glu Leu Arg Glu Asn Asn Leu Thr ile Asn Arg Asn Leu Tyr Ala 450 455 460
Ala Val Asp Ala Val Arg Asp pro Ala Gly Asn ile Val Cys Arg Ser 465 470 475 480
Thr Leu Ala Gly Leu Asp Gin Asp cys val Pro Leu Asn Leu Phe Gly 485 490 Seite 35 495 52/62 österreichisches AT 507 364 B1 2011-05-15 Patentamt
Thr Gly ser pro ser Ala Ser Ala Ile Asp Tyr Val Thr Ala ASp Gly 500 505 510 val Ala Gin Leu Arg Leu Glu Gin Tyr Val Ala Gly Leu Thr Ile Ser 515 520 525 Gly Asp Leu Gly Asp Ser Leu Ser Phe Gly Ala Gly Pro val ser Val 530 535 540 Ala Ala Gly ile Glu Tyr Arg Lys Glu Lys Ala Arg Gin Glu Thr Asp 545 550 555 560 Ala Ile Ser Gin Ala Thr Thr Ser ile Thr Gly ile Arg Gly Ala Pro 565 570 575 Ala Ala Gin Ala Gly Arg Pro Gly Gly Phe Asn Leu Tyr Asn pro Leu 580 585 590 pro Phe Ser Gly ser Tyr Asp Ile Lys Glu Gly Phe val Glu Ile Gly 595 600 605 val Pro 610 Ile Leu Lys Asp Ser 615 Ala Leu Gly Arg ser 620 Leu Asn Leu Asn Ala val Arg Tyr Ala 630 Asp Tyr ser Gin Ser 635 Gly Gly Val Thr Thr 640 Trp Lys Leu Gly Gly 645 Glu Tyr Glu Pro ile 650 ASP Gly Leu Arg Phe 655 Arg Ala Thr Arg ser 660 Arg Asp ile Arg Gly 665 Pro ser Leu val Glu 670 Leu Phe Asp Pro Gly 675 Arg Gin Ala Thr Leu 680 Asn Ser Ile Tyr Gly 685 Gly Gin Ala Val Gin Thr Arg Phe Phe Thr Ala Gly Asn Ala Asp Leu Arg Pro Glu 690 695 700 Lys Ala ASp Val Leu Thr Phe Gly Ala val Leu Arg Pro Ala Phe val 705 710 715 720 Pro Gly Phe Gin phe Ser val Asp Arg Tyr val Val Lys val Lys Gly 725 730 735 Ala ile Asp Phe Leu Leu Pro Gin Gin Glu Ile Asp Ala Cys ASp Ala 740 745 750 Gly Asn Thr Phe Phe cys Asp Leu Ile Thr Glu Asn pro Asp Gly Thr 755 760 765 Seite 36 53/62 österreichisches AT 507 364 B1 2011 -05-15
Patentamt
Ile Thr val Thr Gly pro Asn Leu Asn Leu Ala Val Gin Lys Ala Ala 770 775 780 Gly He Asp Phe Glu Ala Tyr Tyr Ser Arg Pro val Gly Gly Gly Thr 785 790 795 800 Phe Ser Leu Arg Ala Leu Ala Thr His His Thr ser Ala Tyr Arg Ile 805 810 815 Ala Thr Gly ser Ala Pro Ile Arg Ser Leu Gly Gin Pro Asp Thr Pro 820 825 830 Lys Trp Ser Ala Asn Phe Gin Ala Arg Tyr Ser Thr ASp ASp Trp Ala 835 840 845 Leu Leu Val Gin Gin Arg phe Ile Ala Ala Ser val Phe Asn Ala Asp 850 855 860 Asn Val Glu Gly Val ASp Thr Asn Leu Asn His Ala pro Ala Val Trp 865 870 875 880 Tyr Thr ASp Ala Thr Leu Thr Phe Asp Ile Ala Ala Phe Gly Gin Lys 885 890 895 Gin Gin Leu phe Leu Ser Val Asn Asn Leu Phe ASp Arg Asp Pro Pro 900 905 910 Ile Ala Thr Asn Asp pro Ser ser phe ser Ser Pro Thr ser ser Ala 915 920 925 Tyr Asp Pro val Gly Arg Tyr Phe Asn Val Gly val Arg Phe Arg Ile 930 935 940
<210> 22 <211> 417 <212> DNA <213> Sphingopyxis sp. <220> <221> Seq ID 22 (furnK) <222> (1)..(417) <300> <308> FJ426269 <309> 2009-06“11 <313> (1)..(417) <400> 22 atgcgcctca cgggcggaga attattggca cgatgtttgg ccgtcgaagg cgtccggtat 60 gtcttcggcc tcatgtcgcc ggaggtggat ccgctcctgg ctgcgctcga agacaatggg 120 atattgttcg tcccggtgcg gcacgaggcc gccgcagcct atatggccga gggcatttac 180
Seite 37 54/62 österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 aagaccaccg gacaggtcgc cgcgattgtc acgaatccgg gtcccggtac ggcaaacctt 240 ctgcctggag tcgtgacggc acgccacgaa ggggttccct tcgtcgcaat aacgtcccag 300 catcaacttg gtgtcgttta tccctgcacg ccaaaaacct ttcagggaca agaccagatc 360 gacctctttc gacccgcggt taaatggggc gcacccatct tcgcctggaa ccggatt 417
<210> 23 <211> 139 <212> PRT <213> Sphingopyxis sp. <22Q> <221> Seq ID 23 (FumK) <222> (1) .. (139) <300> <308> F3426269 <309> 2009-06-11 <313> (1)..(139) <4Q0> 23
Met Arg Leu Thr Gly Gly Glu Leu Leu Ala Arg cys Leu Ala val Glu 1 5 10 15 Gly Val Arg Tyr val Phe Gly Leu Met ser Pro Glu Val ASp pro Leu 20 25 30 Leu Ala Ala Leu Glu Asp Asn Gly Ile Leu Phe val Pro val Arg His 35 40 45 Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Met Ala Glu Gly Ile Tyr Lys Thr Thr Gly 50 55 60 Glrt val Ala Ala Ile val Thr Asn Pro Gly pro Gly Thr Ala Asn Leu 65 70 75 80 Leu pro Gly Val Val Thr Ala Arg His Glu Gly Val Pro Phe val Ala 85 90 95 Ile Thr 5er Gin His Gin Leu Gly val Val Tyr Pro cys Thr Pro Lys 100 105 110 Thr Phe Gin Gly Gin Asp Gin Ile Asp Leu Phe Arg Pro Ala Val Lys 115 120 125 Trp Gly 130 Ala Pro Ile Phe Ala 135 Trp Asn Arg Ile
<210> 24 <211» 1272 <212> DNA <213> Caulobacter sp.
Seite 38 55/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 <220> <221> seq id 24 <222> (1)..(1272) <300» <308» FJ426269 <309> 2009-06-11 <313» (1)..(1272) <4Q0> 24 atggaattga gccgccaacg agaccaggcc ttgagggagc gcgcccaagc ggtgatcccg 60 ggcgggatgt acggtcacga gtcgacctat ctgatgcccg agggcacgcc acagttcttc 120 agtcgcggca aaggcgcccg actttgggac gccgacggca acgagtatgt cgattacatg 180 tgcgcctatg gccccaacct gctgggttac ggcttcgaac ccgtcgaagc ggccgccgca 240 gcccagcaag cccggggcga taccctgacc gggccgtcgg aggtgatggt gcagttggcg 300 gaagacttcg tcgcgcaaat cagccacgcg gactgggcca tgttctgcaa gaacggcaca 360 gacgccacct caatggcgat ggtcatcgcg cgcgcacaca ccggccggaa gacgatcctc 420 tgcgcgaaag gcgcctatca tggggccgcg ccttggtgca cgccgatcct ggccggaacg 480 ctaccggagg atcgcgcctt tgtagtctac tacgactaca atgacgccca aagcctcgtc 540 gacgccttcg aggcccatca ggacgacgtc gcggcgatct tcgccacccc tcaccgtcac 600 gaggtgttca gcgaccagat cgatcctgat ccggaatatg cggccagcgt gcgggcgctc 660 tgcgacaaga gcggcgccct gctcgtcgtc gacgaagttc gagccgggtt caggatcgcg 720 cgcgactgca gctgggccaa gatcggcgtc gctccggatc tgagcacctg gggcaagtgc 780 ttcgccaacg gctatccgat ctcggcggtc ctagggggcg aaaaggtgcg cagcgcggca 840 aaggccgtct acgtcaccgg ctcgttctgg ttctcggcca cgcccatggc cgcagccgtc 900 gaaaccctga agcaaatccg cgagaccgac tatetcgagc ggatcaacgc ggccgggacc 960 cgcctgcgcg agggcctgca gcagcaggct gctcacaacg getttaegtt gcgccaaacg 1020 gggcccgtct ccatgcccca agtcctcttc gaggaagatc eegatttteg ggtcggctac 1080 ggctgggttc gcgaatgcct gaagegaggg gtgtaettea gcccctacca taacatgttc 1140 ctgtcggcgg cccatagcga ggcggacctg gccaagaccc ttgcggctac cggcgacgcc 1200 ttegtegage taegcgccaa gcttccgagc ctagaaatcc accaacccct cctcgccctg 1260 agagcggcct aa 1272
<210> 25 <211> 423 <212> PRT <213> Caulobacter sp. <220> <221> Seq ID 25 <222> (1)..(423) <300» <308> F3426269 <309> 2009-06-11
Seite 39 56/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15 <513> (1)..(423) <400> 25
Met Glu Leu ser Arg Gin Arg ASp Gin Ala Leu Arg Glu Arg Ala Gin 1 5 10 15 Ala val Ile Pro Gly Gly Met Tyr Gly His Glu Ser Thr Tyr Leu Met 20 25 30 pro Glu Gly Thr Pro Gin Phe Phe Ser Arg Gly Lys Gly Ala Arg Leu 35 40 45 Trp Asp Ala Asp Gly Asn Glu Tyr val Asp Tyr Met Cys Ala Tyr Gly 50 55 60 pro Asn Leu Leu Gly Tyr Gly Phe Glu pro val Glu Ala Ala Ala Ala 65 70 75 80 Ala Gin Gin Ala Arg Gly ASP Thr Leu Thr Gly Pro Ser Glu val Met 85 90 95 Val Gin Leu Ala Glu Asp Phe val Ala Gin Ile Ser His Ala Asp Trp 100 105 110 Ala Met Phe cys Lys Asn Gly Thr Asp Ala Thr ser Met Ala Met val 115 120 125 Ile Ala Arg Ala His Thr Gly Arg Lys Thr Ile Leu cys Ala Lys Gly 130 135 140 Ala Tyr His Gly Ala Ala pro Trp cys Thr Pro Ile Leu Ala Gly Thr 145 150 155 160 Leu pro Glu Asp Arg 165 Ala Phe val val Tyr 170 Tyr Asp Tyr Asn Asp 175 Ala Gin ser Leu Val Asp Ala phe Glu Ala His Gin ASp Asp val Ala Ala 180 185 190 Ile Phe Ala Thr Pro His Arg His Glu val Phe ser ASp Gin ile Asp 195 200 205 Pro Asp Pro Glu Tyr Ala Ala ser val Arg Ala Leu Cys Asp Lys ser 210 215 220 Gly Ala Leu Leu val Val Asp Glu val Arg Ala Gly Phe Arg ile Ala 225 230 235 240 Arg ASp Cys Ser Ϊ5Ι Ala Lys Ile Gly val 250 Ala pro Asp Leu Ser 255 Thr
Seite 40 57/62 AT507 364B1 2011-05-15 österreichisches
Patentamt
Trp Gly uys cys Phe Ala Asn Gly Tyr Pro He Ser Ala val Leu Gly 260 265 270 Gly Glu Lys 275 val Arg Ser Ala Ala 280 Lys Ala val Tyr val 285 Thr Gly Ser Phe Trp Phe Ser Ala Thr Pro Met Ala Ala Ala Val Glu Thr Leu Lys 290 295 300 Gin Ile Arg Glu Thr Asp Tyr Leu Glu Arg Ile Asn Ala Ala Gly Thr 305 310 315 320 Arg Leu Arg Glu Gly Leu Gin Gin Gin Ala Ala His Asn Gly phe Thr 325 330 335 Leu Arg Gin Thr Gly Pro val Ser Met Pro Gin val Leu Phe Glu Glu 340 345 350 Asp Pro Asp Phe Arg val Gly Tyr Gly Trp val Arg Glu Cys Leu Lys 355 360 365 Arg Gly Val Tyr Phe Ser pro Tyr His Asn Met Phe Leu ser Ala Ala 370 375 380 His Ser Glu Ala Asp Leu Ala Lys Thr Leu Ala Ala Thr Gly Asp Ala 385 390 395 400 Phe Val Glu Leu Arg Ala Lys Leu Pro Ser Leu Glu ile His Gin Pro 405 410 415 Leu Leu Ala Leu Arg Ala Ala 420
Seite 41 58/62

Claims (12)

  1. österreichisches Patentamt AT507 364B1 2011-05-15 Patentansprüche 1. Verfahren zur Herstellung eines Futtermittelzusatzes, dadurch gekennzeichnet, dass wenigstens eine Nukleinsäuresequenz von Genen entsprechend Sequenz ID-Nr. 1, 2,4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 und 24 vorgelegt wird, die wenigstens eine Nukleinsäuresequenz in prokaryotischen oder eukaryotischen Wirtszellen exprimiert wird und wenigstens ein Enzym entsprechend Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 25 und eine Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst oder ein kompletter, diese Sequenzen enthaltender, rekombinanter Wirtsorganismus hergestellt wird, wobei das wenigstens eine Enzym gegebenenfalls mit einem Cosubstrat vermischt wird.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das jeweilige Enzym mittels molekulargenetischer Methoden, Mutagenese oder molekularer Evolution so verändert wird, dass es wenigstens 90 % Sequenzidentität mit wenigstens einem der Enzyme mit der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9,11,13,15,17,19, 21 und 25 sowie der Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst aufweist.
  3. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Enzyme isoliert werden.
  4. 4. Verfahren nach Anspruch 1,2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Enzyme in einer Schutzhülle verkapselt werden.
  5. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Enzyme aus Permease mit der Sequenz ID-Nr. 3, Carboxylesterase mit der Sequenz ID-Nr. 9, Tri-carballylat-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 11, Citratverwertungsprotein mit der Sequenz ID Nr. 13, Alkohol-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 17, Aminotransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder der Sequenz ID-Nr. 25 oder Acetolactat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst, gewählt werden.
  6. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Aminotransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder mit der Sequenz ID-Nr. 25 mit einem Keton, insbesondere einer α-Ketosäure als Cosubstrat vermischt wird.
  7. 7. Futtermittelzusatz, dadurch gekennzeichnet, dass wenigstens ein Enzym der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 25 und eine Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst oder wenigstens ein kompletter, diese Sequenzen enthaltender, rekombinanter Wirtsorganismus zur Produktion dieser Enzyme sowie gegebenenfalls zusätzlich wenigstens ein Cosubstrat für wenigstens eines der eingesetzten Enzyme und ein inerter Träger enthalten sind.
  8. 8. Futtermittelzusatz nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass ein Enzym, welches wenigstens 90 % Sequenzidentität mit einem Enzym der Sequenz ID-Nr. 3, 5, 7, 9, 11,13, 15, 17, 19, 21,25 und der Acetolat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst aufweist, enthalten ist.
  9. 9. Futtermittelzusatz nach Anspruch 7 oder 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Enzyme, durch molekulargenetische Methoden, Mutagenese oder molekulare Evolution veränderten Enzyme und/oder zu wenigstens 90 % identen Enzyme mit einer Schutzhülle ummantelt enthalten sind.
  10. 10. Futtermittelzusatz nach Anspruch 7, 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Enzyme aus einer Carboxylesterase mit der Sequenz ID-Nr. 9, Tricarballylat-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 11, einem Citratverwertungsprotein mit der Sequenz ID Nr. 13, Alkohol-Dehydrogenase mit der Sequenz ID-Nr. 17, Aminotransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder mit der Sequenz ID-Nr. 25 und/oder Acetolactat-Synthase, welche die Sequenz ID-Nr. 23 umfasst, gewählt sind. 59/62 österreichisches Patentamt AT 507 364 B1 2011-05-15
  11. 11. Futtermittelzusatz nach einem der Ansprüche 7 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass eine Carboxylesterase mit der Sequenz ID-Nr. 9, eine Aminotransferase mit der Sequenz ID-Nr. 19 oder mit der Sequenz ID-Nr. 25, eine α-Ketosäure als Cosubstrat und ein inerter Träger enthalten sind.
  12. 12. Verwendung eines Futtermittelzusatzes nach einem der Ansprüche 7 bis 11 zum sauerstoffunabhängigen bzw. anaeroben, enzymatischen Abbau von Mykotoxinen, insbesondere Fumonisinen. Hierzu 2 Blatt Zeichnungen 60/62
AT0802509A 2008-09-18 2008-09-18 Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben AT507364B1 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT0802509A AT507364B1 (de) 2008-09-18 2008-09-18 Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT0802509A AT507364B1 (de) 2008-09-18 2008-09-18 Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben

Publications (2)

Publication Number Publication Date
AT507364A1 AT507364A1 (de) 2010-04-15
AT507364B1 true AT507364B1 (de) 2011-05-15

Family

ID=42083870

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
AT0802509A AT507364B1 (de) 2008-09-18 2008-09-18 Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben

Country Status (1)

Country Link
AT (1) AT507364B1 (de)

Also Published As

Publication number Publication date
AT507364A1 (de) 2010-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2326713B1 (de) Verfahren zur herstellung eines zuatzstoffes für den enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie zusatzstoff und verwendung desselben
EP3039134B1 (de) Polypeptid zur hydrolytischen spaltung von zearalenon und/oder zearalenon-derivaten, isoliertes polynukleotid davon sowie einen zusatzstoff enthaltendes polypeptid, verwendung desselben sowie verfahren
AT413540B (de) Mikroorganismus, welcher ochratoxine sowie ochratoxine und zearalenone entgiftet, sowie verfahren und verwendung hiefür
EP1860954B1 (de) Mikroorganismus zur entgiftung von fumonisinen sowie verwendung desselben, verfahren zum entgiften von fumonisinen und futtermittelzusatz, enthaltend den mikroorganismus
EP3262163B1 (de) Fusariumtoxine spaltende polypeptidvarianten, zusatzstoff enthaltend dieselben und verwendung derselben sowie verfahren zur spaltung von fusariumtoxinen
WO2016154640A1 (de) Verwendung einer trichothecene transformierenden alkoholdehydrogenase, verfahren zur transformation von trichothecenen sowie trichothecene transformierender zusatzstoff
EP3215609A2 (de) Polypeptid zur enzymatischen detoxifizierung von zearalenon, sowie isoliertes polynukleotid, sowie zusatzstoff, verwendung und verfahren desselben
WO2014056007A2 (de) Enzympräparation zur transformation von ergopeptinen verfahren hierfür und futtermittel sowie futtermittelzusatzstoff oder silagezusatz enthaltend dieselbe
AT507364B1 (de) Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben
AT513473B1 (de) Enzyme zur Transformation von Ergopeptinen sowie Verfahren hierfür
EP2326714B1 (de) Verfahren zur herstellung eines futtermittelzusatzes zum sauerstoffunabhängigen, enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie futtermittelzusatz und verwendung desselben
AT507363B1 (de) Verfahren zur herstellung eines zusatzstoffes für den enzymatischen abbau von mykotoxinen sowie zusatzstoff und verwendung desselben
CN111820322A (zh) 一种对喷浆玉米皮中黄曲霉毒素的生物降解方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM01 Lapse because of not paying annual fees

Effective date: 20210918